JP2022547483A - Ｃｄ８結合性作用剤およびその使用 - Google Patents

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Abstract

Figure 2022547483000001
ヒトＣＤ８に特異的に結合するＶＨＨドメインを含むＣＤ８結合性作用剤が提供される。また、そのようなＣＤ８結合性作用剤をコードする核酸、そのような核酸を含むベクター、それらを含む宿主細胞、およびそのようなＣＤ８結合性作用剤を製作するための方法が提供される。また、検出可能な標識にコンジュゲートされたＶＨＨドメインを有するＣＤ８結合性作用剤が提供される。そのようなＣＤ８結合性作用剤を使用して、がん、自己免疫疾患もしくは状態、移植拒絶、または移植片対宿主病を有する対象のＣＤ８＋Ｔ細胞を検出し、疾患進行をモニターし、治療進行をモニターするための方法が提供される。

Description

関連出願の相互参照
本出願は、２０１９年９月４日に出願された米国仮特許出願第６２／８９５，８６５号の優先権を主張するものであり、その内容は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
ＡＳＣＩＩテキストファイル配列表の提出
以下のＡＳＣＩＩテキストファイル提出物の内容は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる：コンピュータ可読形式（ＣＲＦ）の配列表（ファイル名：１４６３９２０４９２４０ＳＥＱＬＩＳＴ．ｔｘｔ、記録日：２０２０年８月１９日、サイズ：１４ＫＢ）。
本出願は、抗ＣＤ８ ＶＨＨドメインに基づくＣＤ８結合性作用剤、およびｉｎ ｖｉｖｏでＣＤ８＋Ｔ細胞を画像化するためにそのようなＣＤ８結合性作用剤を使用するための方法に関する。
腫瘍組織における免疫細胞の数、タイプ、および空間的分布の特徴付けは、がんの診断、予後、療法選択、および療法に対する応答に関する重要な情報を提供することができる。具体的には、ＣＤ８＋細胞傷害性リンパ球は、種々のがんにおいて診断的および予後的な重要性を有することが一貫して報告されている。ＣＤ８＋細胞を検出するための現行方法は、末梢血または目的の組織から細胞を単離することを伴う。そのような試料採取法では、エラーが起きやすく、ＣＤ８＋細胞の数、局在化、および移動をｉｎ ｖｉｖｏで反映する動的な情報が提供されない。免疫細胞をｉｎ ｖｉｖｏで検出するための１つの例示的な非侵襲的方法は、放射性標識トレーサーを使用した陽電子放出断層撮影（ＰＥＴ）である。しかしながら、そのようなトレーサーの使用は、放射性同位元素半減期、およびｉｎ ｖｉｖｏでのプローブ希釈に結び付く細胞***により制限を受ける。このように、当技術分野には、ＣＤ８＋細胞の量および時間的分布の変化をｉｎ ｖｉｖｏでモニターするための方法および試薬に対する必要性が依然として存在する。
本明細書では、重鎖抗体の重鎖の可変ドメイン（ＶＨＨドメイン）を含むＣＤ８結合性作用剤であって、約１ｎＭまたはそれよりも低いＫＤでヒトＣＤ８に特異的に結合するＣＤ８結合性作用剤が提供される。一部の実施形態では、ＣＤ８結合性作用剤は、約５００ｐＭもしくはそれよりも低い、約２５０ｐＭもしくはそれよりも低い、または約１００ｐＭもしくはそれよりも低いＫＤでヒトＣＤ８に特異的に結合する。一部の実施形態では、ＣＤ８結合性作用剤は、約１３２ｐｍまたは約５０ｐＭのＫＤでヒトＣＤ８に特異的に結合する。一部の実施形態では、ＣＤ８結合性作用剤は、約０．００２／秒もしくはそれよりも低い、または約０．００１／秒もしくはそれよりも低いｋｏｆｆでヒトＣＤ８に結合する。一部の実施形態では、ＣＤ８結合性作用剤は、約０．００１８／秒または約０．０００８５／秒のｋｏｆｆでヒトＣＤ８に結合する。一部の実施形態では、ＣＤ８結合性作用剤は、約１ｎＭまたはそれよりも低いＫＤでカニクイザルＣＤ８に結合する。一部の実施形態では、ＣＤ８結合性作用剤は、約５００ｐＭもしくはそれよりも低い、約２５０ｐＭもしくはそれよりも低い、または約１５０ｐＭもしくはそれよりも低いＫＤでカニクイザルＣＤ８に結合する。一部の実施形態では、ＣＤ８結合性作用剤は、約３４４ｐＭまたは約１３７ｐＭのＫＤでカニクイザルＣＤ８に結合する。一部の実施形態では、ＣＤ８結合性作用剤は、約０．００４／秒もしくはそれよりも低い、または約０．００２／秒もしくはそれよりも低いｋｏｆｆでカニクイザルＣＤ８に結合する。一部の実施形態では、ＣＤ８結合性作用剤は、約０．００３７／秒または約０．００１９／秒のｋｏｆｆでカニクイザルＣＤ８に結合する。一部の実施形態では、ＣＤ８結合性作用剤は、少なくとも約１時間、２時間、またはそれよりも長期間など、少なくとも約３０分のＣＤ８結合半減期（例えば、ｉｎ ｖｉｔｒｏ結合アッセイでの）を有する。一部の実施形態では、ＣＤ８結合性作用剤は、約１ｎＭまたはそれよりも低いＫＤでアカゲザルＣＤ８に特異的に結合する。一部の実施形態では、ＣＤ８結合性作用剤は、マウスＣＤ８にもラットＣＤ８にも結合しない。
上記の実施形態のいずれかによる（または適用される）一部の実施形態では、ＣＤ８結合性作用剤は、ＣＤ８＋Ｔ細胞の活性化を刺激も阻害もしない。一部の実施形態では、ＣＤ８結合性作用剤は、ＣＤ８＋Ｔ細胞増殖を誘導しない。一部の実施形態では、ＣＤ８結合性作用剤は、ＣＤ４＋Ｔ細胞に結合しない。
上記の実施形態のいずれかによる（または適用される）一部の実施形態では、ＶＨＨドメインは、ラマＶＨＨなどのラクダ科ＶＨＨである。一部の実施形態では、ＶＨＨドメインはキメラである。一部の実施形態では、ＶＨＨはヒト化されている。一部の実施形態では、ＶＨＨは親和性成熟されている。
上記の実施形態のいずれかによる（または適用される）一部の実施形態では、ＶＨＨドメインは、Ａｒｇ２５、Ｌｙｓ４２、Ｇｌｎ４４、Ｖａｌ４５、Ｌｅｕ４６、Ｌｅｕ４７、Ｓｅｒ４８、Ｐｒｏ５０、Ｔｈｒ５１、Ｓｅｒ５２、Ｇｌｎ７５、Ａｒｇ９３、Ｌｅｕ９４、Ｇｌｙ９５、Ａｓｐ９６、およびＴｈｒ９７を含むヒトＣＤ８αエピトープに特異的に結合し、この場合、アミノ酸付番は配列番号１３による。一部の実施形態では、ヒトＣＤ８αエピトープのアミノ酸残基は、ヒトＣＤ８αに結合したＣＤ８結合性作用剤またはＶＨＨドメインの結晶構造中のＶＨＨドメインの１つまたは複数のアミノ酸残基から約４．５Å以内にある。
上記の実施形態のいずれかによる（または適用される）一部の実施形態では、ＶＨＨドメインは、配列番号６または７のアミノ酸配列を含む相補性決定領域（ＣＤＲ）１；配列番号８または９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；および配列番号１０～１２のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む。
上記の実施形態のいずれかによる（または適用される）一部の実施形態では、ＶＨＨドメインは、配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号１０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む。上記の実施形態のいずれかによる（または適用される）一部の実施形態では、ＶＨＨドメインは、配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む。上記の実施形態のいずれかによる（または適用される）一部の実施形態では、ＶＨＨドメインは、配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む。上記の実施形態のいずれかによる（または適用される）一部の実施形態では、ＶＨＨドメインは、配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む。
上記の実施形態のいずれかによる（または適用される）一部の実施形態では、ＶＨＨドメインはＬ４９Ａを含み、この場合、付番はＫａｂａｔ付番による。一部の実施形態では、ＣＤ８結合性作用剤は、プロテインＡ親和性クロマトグラフィーを使用して精製されていてもよい。
上記の実施形態のいずれかによる（または適用される）一部の実施形態では、ＶＨＨドメインは、Ｖ８９Ｔ置換、Ｔ１１０Ｑ置換、Ｓ１１２Ｑ置換、および１１４位でのＡ付加（以下では「Ａ１１４付加」と呼ばれる）からなる群から選択される１つまたは複数のアミノ酸修飾を含み、この場合、付番はＫａｂａｔ付番による。一部の実施形態では、ＶＨＨドメインは、Ｖ８９Ｔ置換、Ｔ１１０Ｑ置換、Ｓ１１２Ｑ置換、およびＡ１１４付加を含み、この場合、付番はＫａｂａｔ付番による。一部の実施形態では、ＣＤ８結合性作用剤は、ＣＤ８結合性作用剤を受けている対象の既存抗ＶＨＨ抗体には結合しない。
上記の実施形態のいずれかによる（または適用される）一部の実施形態では、ＶＨＨドメインは、配列番号１のアミノ酸配列を含む。上記の実施形態のいずれかによる（または適用される）一部の実施形態では、ＶＨＨドメインは、配列番号２のアミノ酸配列を含む。上記の実施形態のいずれかによる（または適用される）一部の実施形態では、ＶＨＨドメインは、配列番号３のアミノ酸配列を含む。上記の実施形態のいずれかによる（または適用される）一部の実施形態では、ＶＨＨドメインは、配列番号４のアミノ酸配列を含む。
また、本明細書では、上記の実施形態のいずれかによる（または適用される）ＣＤ８結合性作用剤をコードする単離された核酸が提供される。一部の実施形態では、上記の実施形態のいずれかによる（または適用される）核酸を含む発現ベクターが提供される。一部の実施形態では、上記の実施形態のいずれかによる（または適用される）核酸または発現ベクターを含む宿主細胞が提供される。一部の実施形態では、宿主細胞は、哺乳動物細胞、例えば、ＣＨＯ細胞またはＥｘｐｉ２９３細胞などの真核細胞である。一部の実施形態では、宿主細胞は、大腸菌（E. coli）細胞などの原核細胞である。
本明細書では、上記の実施形態のいずれかによる（または適用される）ＣＤ８結合性作用剤を製作するための方法であって、ａ）上記の実施形態のいずれかによる（または適用される）宿主細胞を、作用剤が産生される条件下で培養するステップ；およびｂ）宿主細胞により産生されたＣＤ８結合性作用剤を回収するステップを含む方法がさらに提供される。
上記の実施形態のいずれかによる（または適用される）一部の実施形態では、ＣＤ８結合性作用剤は、標識を含む。標識を含むＣＤ８結合性作用剤は、本明細書では「標識ＣＤ８結合性作用剤」と呼ばれる。
一部の実施形態では、標識ＣＤ８結合性作用剤を調製するための方法であって、キレート部分を、上記の実施形態のいずれかによる（または適用される）ＣＤ８結合性作用剤のＶＨＨドメインにコンジュゲートして、コンジュゲートを提供するステップ、およびコンジュゲートを、１８Ｆを含むフッ化アルミニウム錯体と接触させて、標識ＣＤ８結合性作用剤を提供するステップを含み、キレート部分は、式（Ｉ）：
Figure 2022547483000002
 の化合物である、方法が提供される。一部の実施形態では、コンジュゲートを、メチオニンおよび／またはＮ－アセチル－トリプトファンなどの１つまたは複数の抗酸化化合物の存在下でフッ化アルミニウム錯体と接触させる。
本明細書では、標識にコンジュゲートされた上記の実施形態のいずれかによる（または適用される）抗ＣＤ８ ＶＨＨドメインを含む標識ＣＤ８結合性作用剤が提供される。一部の実施形態では、標識は、蛍光色素、放射性核種、または酵素である。上記の実施形態のいずれかによる（または適用される）一部の実施形態では、標識は、放射性核種である。一部の実施形態では、放射性核種は、１８Ｆ、８９Ｚｒ、９９ｍＴｃ、６７Ｇａ、６８Ｇａ、６４Ｃｕ、５２Ｍｎ、１１１Ｉｎ、または１２４Ｉである。一部の実施形態では、ＶＨＨドメインは、キレート部分を介して標識にコンジュゲートされている。一部の実施形態では、キレート部分は、リジン残基を介してＶＨＨドメインに共有結合で連結されている。一部の実施形態では、標識は、金属と錯体を形成し、錯体は、キレート部分によりキレートされる。一部の実施形態では、標識は１８Ｆであり、金属はアルミニウムである。一部の実施形態では、キレート部分は、式（Ｉ）の化合物である。
本明細書では、配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む抗ＣＤ８ ＶＨＨドメインを含む標識ＣＤ８結合性作用剤であって、ＶＨＨドメインは、キレート部分を介して放射性核種（例えば、１８Ｆ）にコンジュゲートされている、標識ＣＤ８結合性作用剤が提供される。一部の実施形態では、キレート部分は、式（Ｉ）の化合物であり、放射性核種は、アルミニウムと錯体化する１８Ｆである。一部の実施形態では、ＶＨＨドメインは、配列番号３のアミノ酸配列を含む。
本明細書では、配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む抗ＣＤ８ ＶＨＨドメインを含む標識ＣＤ８結合性作用剤であって、ＶＨＨドメインは、キレート部分を介して放射性核種（例えば、１８Ｆ）にコンジュゲートされている、標識ＣＤ８結合性作用剤が提供される。一部の実施形態では、キレート部分は、式（Ｉ）の化合物であり、放射性核種は、アルミニウムと錯体化する１８Ｆである。一部の実施形態では、ＶＨＨドメインは、配列番号４のアミノ酸配列を含む。
また、本明細書では、上記の実施形態のいずれかによる（または適用される）ＣＤ８結合性作用剤（標識ＣＤ８結合性作用剤を含む）および薬学的に許容される担体を含む医薬組成物が提供される。
本明細書では、対象の疾患または状態を治療または診断するための、上記の実施形態のいずれかによる（または適用される）ＣＤ８結合性作用剤（標識ＣＤ８結合性作用剤を含む）の使用、および対象の疾患または状態を治療または診断するための医薬の調製における、上記の実施形態のいずれかによる（または適用される）ＣＤ８結合性作用剤（標識ＣＤ８結合性作用剤を含む）の使用がさらに提供される。
本明細書では、上記の実施形態のいずれかによる（または適用される）ＣＤ８結合性作用剤（標識ＣＤ８結合性作用剤を含む）および１つまたは複数の抗酸化化合物を含む医薬製剤がさらに提供される。一部の実施形態では、１つまたは複数の抗酸化化合物は、メチオニンおよび／またはＮ－アセチルトリプトファンである。一部の実施形態では、医薬製剤は、メチオニンおよびＮ－アセチルトリプトファンを含む。一部の実施形態では、医薬製剤は、ヒスチジンおよびスクロースをさらに含む。
本明細書では、対象のＣＤ８＋細胞を検出するための方法であって、ａ）上記の実施形態のいずれかによる（または適用される）標識ＣＤ８結合性作用剤を対象に投与するステップ；およびｂ）標識ＣＤ８結合性作用剤と対象のＣＤ８＋細胞との結合を検出するステップを含み、結合の検出はＣＤ８＋細胞の存在を示す、方法が提供される。一部の実施形態では、標識ＣＤ８結合性作用剤と対象のＣＤ８＋細胞との結合を検出するステップは、対象のＣＤ８＋細胞を画像化することを含む。一部の実施形態では、対象のＣＤ８＋細胞の画像化は、対象に対して陽電子放出断層撮影（ＰＥＴ）スキャンまたは陽電子放出断層撮影／コンピュータ断層撮影（ＰＥＴ／ＣＴ）スキャンを実施することを含む。一部の実施形態では、ＣＤ８＋細胞は、ＣＤ８＋Ｔ細胞である。一部の実施形態では、ＣＤ８＋細胞は、ＣＤ８＋腫瘍細胞である。一部の実施形態では、検出するステップは、投与後約１日以内またはそれよりも短時間以内（例えば、約６時間、４時間、２時間、９０分、１時間、３０分以内、またはそれよりも短時間以内）に実施される。一部の実施形態では、方法は、年間約１～４回など、１回または複数回繰り返される。一部の実施形態では、方法は、ＣＤ８結合性作用剤の以前の投与後の約１日後に繰り返される。一部の実施形態では、方法は、１年よりも長期間にわたって繰り返される。一部の実施形態では、方法は、約１ｎＭ～約３０ｎＭの感度を有する。一部の実施形態では、対象は、ヒトまたは非ヒト霊長類である。一部の実施形態では、対象は、カニクイザルまたはアカゲザルである。一部の実施形態では、対象はヒトである。一部の実施形態では、対象はがんを有する。一部の実施形態では、対象は、自己免疫疾患もしくは状態、移植拒絶、または移植片対宿主病を有する。
本明細書では、がんを有する対象の、免疫療法剤、細胞療法、またはがんワクチンに対する応答性を予測するための方法であって、ａ）上記の実施形態のいずれかによる（または適用される）標識ＣＤ８結合性作用剤を対象に投与するステップ；およびｂ）標識ＣＤ８結合性作用剤と、対象の腫瘍組織のＣＤ８＋Ｔ細胞との結合を検出するステップを含み、結合の検出は、対象が免疫療法剤、細胞療法、またはがんワクチンに応答する可能性が高いことを示す、方法が提供される。一部の実施形態では、標識ＣＤ８結合性作用剤と対象のＣＤ８＋細胞との結合を検出するステップは、対象のＣＤ８＋細胞を画像化することを含む。一部の実施形態では、対象のＣＤ８＋細胞の画像化は、対象に対して陽電子放出断層撮影（ＰＥＴ）スキャンまたは陽電子放出断層撮影／コンピュータ断層撮影（ＰＥＴ／ＣＴ）スキャンを実施することを含む。一部の実施形態では、方法は、（ｃ）結合が検出された対象に、治療有効量の免疫療法剤、細胞療法、またはがんワクチンを投与するステップをさらに含む。一部の実施形態では、検出するステップは、投与後約１日以内またはそれよりも短時間以内（例えば、約６時間、４時間、２時間、９０分、１時間、３０分以内、またはそれよりも短時間以内）に実施される。一部の実施形態では、方法は、年間約１～４回など、１回または複数回繰り返される。一部の実施形態では、方法は、ＣＤ８結合性作用剤の以前の投与後の少なくとも１日後に繰り返される。一部の実施形態では、方法は、１年よりも長期間にわたって繰り返される。
また、本明細書では、がんを有する対象の疾患進行をモニターするための方法であって、ａ）上記の実施形態のいずれかによる（または適用される）標識ＣＤ８結合性作用剤を対象に投与するステップ、ならびにｂ）第１の時点および第２の時点にて、標識ＣＤ８結合性作用剤と対象の腫瘍組織のＣＤ８＋Ｔ細胞との結合を検出するステップを含む方法が提供される。一部の実施形態では、標識ＣＤ８結合性作用剤と対象のＣＤ８＋細胞との結合を検出するステップは、対象のＣＤ８＋細胞を画像化することを含む。一部の実施形態では、対象のＣＤ８＋細胞の画像化は、対象に対して陽電子放出断層撮影（ＰＥＴ）スキャンまたは陽電子放出断層撮影／コンピュータ断層撮影（ＰＥＴ／ＣＴ）スキャンを実施することを含む。一部の実施形態では、方法は、（ｃ）治療有効量の免疫療法剤、細胞療法、またはがんワクチンを対象に投与するステップをさらに含み、第２の時点における腫瘍組織のＣＤ８＋Ｔ細胞のレベルは、第１の時点における腫瘍組織のＣＤ８＋Ｔ細胞のレベルよりも高い、ステップをさらに含む。一部の実施形態では、検出するステップは、投与後約１日以内またはそれよりも短時間以内（例えば、約６時間、４時間、２時間、９０分、１時間、３０分以内、またはそれよりも短時間以内）に実施される。一部の実施形態では、方法は、年間約１～４回など、１回または複数回繰り返される。一部の実施形態では、方法は、ＣＤ８結合性作用剤の以前の投与後の少なくとも１日後に繰り返される。一部の実施形態では、対象は、１年よりも長期間にわたってモニターされる。
本明細書では、免疫療法剤、細胞療法、またはがんワクチンを受けたかまたは受けている、がんを有する対象の治療進行をモニターするための方法であって、ｉ）免疫療法剤、細胞療法、またはがんワクチンと併せて、上記の実施形態のいずれかによる（または適用される）標識ＣＤ８結合性作用剤を対象に投与するステップ、ならびにｉｉ）第１の時点および第２の時点にて、標識ＣＤ８結合性作用剤と腫瘍組織のＣＤ８＋Ｔ細胞との結合を検出するステップを含む方法が提供される。一部の実施形態では、標識ＣＤ８結合性作用剤と対象のＣＤ８＋細胞との結合を検出するステップは、対象のＣＤ８＋細胞を画像化することを含む。一部の実施形態では、対象のＣＤ８＋細胞の画像化は、対象に対して陽電子放出断層撮影（ＰＥＴ）スキャンまたは陽電子放出断層撮影／コンピュータ断層撮影（ＰＥＴ／ＣＴ）スキャンを実施することを含む。一部の実施形態では、標識ＣＤ８結合性作用剤は、免疫療法剤、細胞療法、またはがんワクチンの前に投与され、第１の時点は、標識ＣＤ８結合性作用剤の投与後だが免疫療法剤、細胞療法、またはがんワクチンの投与前であり、第２の時点は、免疫療法剤、細胞療法、またはがんワクチンの投与後である。一部の実施形態では、免疫療法剤、細胞療法、またはがんワクチンは、標識ＣＤ８結合性作用剤の前に投与され、第１の時点は、免疫療法剤、細胞療法、またはがんワクチンの投与後であり、かつ標識ＣＤ８結合性作用剤の投与後であり、第２の時点は、第１の時点の後である。一部の実施形態では、検出するステップは、投与後約１日以内またはそれよりも短時間以内（例えば、約６時間、４時間、２時間、９０分、１時間、３０分以内、またはそれよりも短時間以内）に実施される。一部の実施形態では、方法は、年間約１～４回など、１回または複数回繰り返される。一部の実施形態では、方法は、ＣＤ８結合性作用剤の以前の投与後の少なくとも１日後に繰り返される。一部の実施形態では、対象は、１年よりも長期間にわたってモニターされる。
上記の予測するための方法またはモニターするための方法のいずれかによる（または適用される）一部の実施形態では、免疫療法剤が対象に投与される。一部の実施形態では、免疫療法剤は、抗ＰＤＬ１抗体、抗ＰＤ１抗体、抗ＴＩＧＩＴ抗体、ＴＩＧＩＴアンタゴニスト、抗ＣＳＦ－１Ｒ抗体、抗ＣＳＦ－１Ｒアンタゴニスト、抗ＣＥＡ抗体、抗ＣＥＡアンタゴニスト、抗ＣＴＬＡ４抗体、ＣＴＬＡ４アンタゴニスト、抗ＯＸ４０抗体、またはＯＸ４０アゴニストである。一部の実施形態では、免疫療法剤は、抗ＰＤ－Ｌ１抗体である。一部の実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、１つまたは複数の療法剤と組み合わせて投与される。一部の実施形態では、１つまたは複数の療法剤は、ＴＡＲＣＥＶＡ（登録商標）（エルロチニブ）、ＺＥＬＢＯＲＡＦ（登録商標）（ベムラフェニブ）、ＧＡＺＹＶＡ（登録商標）（オビヌツズマブ）、ＡＶＡＳＴＩＮ（登録商標）（ベバシズマブ）、ＣＯＴＥＬＬＩＣ（登録商標）（コビメチニブ）、ＺＥＬＢＯＲＡＦ（登録商標）（ベムラフェニブ）およびＣＯＴＥＬＬＩＣ（登録商標）（コビメチニブ）、ＡＬＥＣＥＮＳＡ（登録商標）（アレクチニブ）、ＫＡＤＣＹＬＡ（登録商標）（アドトラスツズマブエムタンシン）、ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標）（トラスツズマブ）、ＰＥＲＪＥＴＡ（登録商標）（ペルツズマブ）、ポラツズマブ、ＩＦＮ－アルファ、抗ＣＤ４０剤、抗ＯＸ４０抗体、ＯＸ４０アゴニスト、抗ＣＳＦ－１Ｒ抗体、抗ＣＥＡ抗体、ＩＤＯ阻害剤、または抗ＴＩＧＩＴ抗体である。一部の実施形態では、免疫療法剤はサイトカインである。一部の実施形態では、サイトカインは、ＩＬ２、遺伝子操作ＩＬ２、ＩＬ１５、または遺伝子操作ＩＬ１５である。一部の実施形態では、免疫療法剤は、ＣＤ３に特異的に結合する二重特異性抗原結合性分子である。一部の実施形態では、二重特異性抗原結合性分子は、抗体またはその抗原結合性断片である。一部の実施形態では、免疫療法剤は、ＣＤ１６に特異的に結合する二重特異性抗原結合性分子である。一部の実施形態では、二重特異性抗原結合性分子は、抗体またはその抗原結合性断片である。一部の実施形態では、二重特異性抗原結合性分子は、ＣＤ１６Ａに特異的に結合する。一部の実施形態では、免疫療法剤は、樹状細胞活性化因子または樹状細胞成長因子などの樹状細胞モジュレーターである。
上記の予測するための方法またはモニターするための方法のいずれかによる（または適用される）一部の実施形態では、がんワクチンが対象に投与される。一部の実施形態では、がんワクチンは、個別化がんワクチン（ＰＣＶ）である。
上記の予測するための方法またはモニターするための方法のいずれかによる（または適用される）一部の実施形態では、細胞療法が対象に投与される。一部の実施形態では、細胞療法は、ＣＡＲ－Ｔである。一部の実施形態では、細胞療法は、ネオ抗原特異的Ｔ細胞である。
本明細書では、自己免疫疾患もしくは状態、移植拒絶、または移植片対宿主病を有する対象の、免疫療法剤に対する応答性を予測するための方法であって、ａ）上記の実施形態のいずれかによる（または適用される）標識ＣＤ８結合性作用剤を対象に投与するステップ；およびｂ）標識ＣＤ８結合性作用剤と、対象の疾患組織のＣＤ８＋Ｔ細胞との結合を検出するステップを含み、結合の検出は、対象が免疫療法剤に応答する可能性が高いことを示す、方法が提供される。一部の実施形態では、標識ＣＤ８結合性作用剤と対象のＣＤ８＋細胞との結合を検出するステップは、対象のＣＤ８＋細胞を画像化することを含む。一部の実施形態では、対象のＣＤ８＋細胞の画像化は、対象に対して陽電子放出断層撮影（ＰＥＴ）スキャンまたは陽電子放出断層撮影／コンピュータ断層撮影（ＰＥＴ／ＣＴ）スキャンを実施することを含む。一部の実施形態では、方法は、（ｃ）結合が検出された対象に、治療有効量の免疫療法剤を投与するステップをさらに含む。一部の実施形態では、検出するステップは、投与後約１日以内またはそれよりも短時間以内（例えば、約６時間、４時間、２時間、９０分、１時間、３０分以内、またはそれよりも短時間以内）に実施される。一部の実施形態では、方法は、年間約１～４回など、１回または複数回繰り返される。一部の実施形態では、方法は、ＣＤ８結合性作用剤の以前の投与後の少なくとも１日後に繰り返される。一部の実施形態では、方法は、１年よりも長期間にわたって繰り返される。
また、本明細書では、自己免疫疾患もしくは状態、移植拒絶、または移植片対宿主病を有する対象の疾患進行をモニターするための方法であって、ａ）上記の実施形態のいずれかによる（または適用される）標識ＣＤ８結合性作用剤を対象に投与するステップ、ならびにｂ）第１の時点および第２の時点にて、標識ＣＤ８結合性作用剤と、対象の疾患組織のＣＤ８＋Ｔ細胞との結合を検出するステップを含み、第１の時点および第２の時点からのＣＤ８＋Ｔ細胞の増加は、自己免疫疾患もしくは状態、移植拒絶、または移植片対宿主病が進行したことを示す、方法が提供される。一部の実施形態では、標識ＣＤ８結合性作用剤と対象のＣＤ８＋細胞との結合を検出するステップは、対象のＣＤ８＋細胞を画像化することを含む。一部の実施形態では、対象のＣＤ８＋細胞の画像化は、対象に対して陽電子放出断層撮影（ＰＥＴ）スキャンまたは陽電子放出断層撮影／コンピュータ断層撮影（ＰＥＴ／ＣＴ）スキャンを実施することを含む。一部の実施形態では、方法は、（ｃ）治療有効量の免疫療法剤を対象に投与するステップをさらに含み、第２の時点における疾患組織のＣＤ８＋Ｔ細胞のレベルは、第１の時点における疾患組織のＣＤ８＋Ｔ細胞のレベルよりも低い、ステップをさらに含む。一部の実施形態では、検出するステップは、投与後約１日以内またはそれよりも短時間以内（例えば、約６時間、４時間、２時間、９０分、１時間、３０分以内、またはそれよりも短時間以内）に実施される。一部の実施形態では、方法は、年間約１～４回など、１回または複数回繰り返される。一部の実施形態では、方法は、ＣＤ８結合性作用剤の以前の投与後の少なくとも１日後に繰り返される。一部の実施形態では、対象は、１年よりも長期間にわたってモニターされる。
本明細書では、免疫療法剤を受けたかまたは受けている、自己免疫疾患もしくは状態、移植拒絶、または移植片対宿主病を有する対象の治療進行をモニターするための方法であって、ｉ）免疫療法剤と併せて、上記の実施形態のいずれかによる（または適用される）標識ＣＤ８結合性作用剤を対象に投与するステップ、ならびにｉｉ）第１の時点および第２の時点にて、標識ＣＤ８結合性作用剤と疾患組織のＣＤ８＋Ｔ細胞との結合を検出するステップを含む方法が提供される。一部の実施形態では、標識ＣＤ８結合性作用剤と対象のＣＤ８＋細胞との結合を検出するステップは、対象のＣＤ８＋細胞を画像化することを含む。一部の実施形態では、対象のＣＤ８＋細胞の画像化は、対象に対して陽電子放出断層撮影（ＰＥＴ）スキャンまたは陽電子放出断層撮影／コンピュータ断層撮影（ＰＥＴ／ＣＴ）スキャンを実施することを含む。一部の実施形態では、標識ＣＤ８結合性作用剤は、免疫療法剤の前に投与され、第１の時点は、標識ＣＤ８結合性作用剤の投与後だが免疫療法剤の投与前であり、第２の時点は、免疫療法剤の投与後である。一部の実施形態では、免疫療法剤は、標識ＣＤ８結合性作用剤の前に投与され、第１の時点は、免疫療法剤の投与後であり、かつ標識ＣＤ８結合性作用剤の投与後であり、第２の時点は、第１の時点の後である。一部の実施形態では、検出するステップは、投与後約１日以内またはそれよりも短時間以内（例えば、約６時間、４時間、２時間、９０分、１時間、３０分以内、またはそれよりも短時間以内）に実施される。一部の実施形態では、方法は、年間約１～４回など、１回または複数回繰り返される。一部の実施形態では、方法は、ＣＤ８結合性作用剤の以前の投与後の少なくとも１日後に繰り返される。一部の実施形態では、対象は、１年よりも長期間にわたってモニターされる。
本明細書では、免疫療法剤による治療に対する応答性に関連付けられる腸内微生物菌株を特定するための方法であって、ａ）がんを有する対象の集団から腸内マイクロバイオーム試料を得るステップであって、集団は、免疫療法剤による治療に応答性である対象および免疫療法剤による治療に応答性でない対象を含む、ステップ；ｂ）治療に応答性である対象の腸内マイクロバイオーム試料および治療に応答性でない対象の腸内マイクロバイオーム試料を分析するステップ；ならびにｃ）治療に応答性である対象に関連付けられる腸内微生物菌株を特定するステップを含み、応答性は、上記の実施形態のいずれかによる（または適用される）標識ＣＤ８結合性作用剤と、対象の腫瘍組織のＣＤ８＋Ｔ細胞との結合を検出することにより決定され、結合の検出は、対象が免疫療法剤に応答性であることを示す、方法が提供される。一部の実施形態では、方法は、免疫療法剤に対する応答性に関連付けられる腸内微生物菌株を含むマイクロバイオームベースの薬物を調製するステップをさらに含む。一部の実施形態では、免疫療法剤は、抗ＰＤ－Ｌ１抗体である。一部の実施形態では、免疫療法剤は、アテゾリズマブなどの抗ＰＤ－Ｌ１抗体である。
本明細書では、標識ＣＤ８結合性作用剤など、上記の実施形態のいずれかによる（または適用される）ＣＤ８結合性作用剤を含むキットおよび製造品がさらに提供される。一部の実施形態では、キットまたは製造品は、上記の方法のいずれかに従ってＣＤ８結合性作用剤を使用するための説明書を含む。
ラマＶＨＨ ｗｔ２Ｃ８（配列番号１）、ヒト化ＶＨＨ ｈｕ２Ｃ８ｖ１３０（配列番号２）、ｈｕ２Ｃ８ｖ１４２（配列番号３）、およびｈｕ２Ｃ８ｖ１４４（配列番号４）、ならびに非結合対照２Ｃ８ｖ１４５（配列番号５）を含む、例示的な抗ＣＤ８ ＶＨＨドメインのアミノ酸配列のアラインメントを提供する図である。 ヒトＣＤ８ａ（配列番号１３）、カニクイザルＣＤ８ａ（配列番号１４）、およびアカゲザルＣＤ８ａ（配列番号１５）のアミノ酸配列のアラインメントを提供する図である。 ＯＫＴ８－Ｆｃと比較した、ＶＨＨ－Ｆｃ変異体のＣＤ８＋細胞特異的結合を評価するために実施した実験の結果を示す図である。 ２Ｃ８ ＶＨＨに結合した、健常志願者の全血細胞試料の染色の例示的な結果を示す図である。ＯＫＴ８は、抗ＣＤ８ ＩｇＧであり、陽性対照としての役目を果たす。３Ｅ８ ＶＨＨは、非結合陰性対照である。 ２Ｃ８ ＶＨＨの結晶構造の概略図である。左側の構造は、ＣＤ８α／８αホモ二量体（黒色、エピトープは白で強調表示されており、二量体は結晶学的対称操作により再構成した）に結合した２Ｃ８ ＶＨＨ（薄灰色）を示す。右側の構造は、２Ｃ８ ＶＨＨ：ＣＤ８α／８α複合体（左側パネルと同じ色）と、ＣＤ８α／βヘテロ二量体（ＰＤＢ ＩＤ：３ＤＭＭ、ＭＨＣ Ｉは薄灰色で示されており、ＣＤ８βは中程度に濃い灰色で示されている）とのＭＨＣクラスＩ複合体の公開構造との重ね合わせを示す。 野生型２Ｃ８および２Ｃ８．ｖ１４４ ＶＨＨと、９６人の健常ドナーの血液試料中の既存抗ＶＨＨ抗体との結合を評価するために実施した実験の結果を示す図である。 ２Ｃ８ｖ１３０、Ｌｙｓ２ ＶＨＨ（非結合対照）、またはＰＢＳ（ビヒクル）の存在下でのＣＤ８＋Ｔ細胞増殖を評価するために実施した実験の結果を提供する図である。 ２Ｃ８ｖ１３０、Ｌｙｓ２ ＶＨＨ（非結合対照）、またはＰＢＳ（ビヒクル）の存在下での抗ＣＤ３および抗ＣＤ２８によるポリクローナルＴ細胞刺激に対するＣＤ８＋Ｔ細胞プロテアーゼ放出応答を評価するために実施した実験の結果を提供する図である。 ＳＥＢ刺激後の２Ｃ８ｖ１３０、Ｌｙｓ２ ＶＨＨ（非結合対照）、またはＰＢＳ（ビヒクル）の存在下でのＣＤ８＋Ｔ細胞増殖を評価するために実施した実験の結果を提供する図である。 ＣＥＦペプチドプールによる刺激後の２Ｃ８ｖ１３０、Ｌｙｓ２ ＶＨＨ（非結合対照）、またはＰＢＳ（ビヒクル）の存在下でのＣＤ８＋Ｔ細胞増殖を評価するために実施した実験の結果を提供する図である。 ＬＰＳ刺激後の２Ｃ８ｖ１３０、Ｌｙｓ２ ＶＨＨ（非結合対照）、またはＰＢＳ（ビヒクル）の存在下でのＣＤ８＋Ｔ細胞増殖を評価するために実施した実験の結果を提供する図である。 ２Ｃ８ｖ１３０、Ｌｙｓ２ ＶＨＨ（非結合対照）、またはＰＢＳ（ビヒクル）の存在下でのＣＤ８＋Ｔ細胞増殖を評価するために実施した実験の結果を提供する図である。実験では１０％ＦＢＳを培養培地として使用した。 ２Ｃ８ｖ１３０、Ｌｙｓ２ ＶＨＨ（非結合対照）、またはＰＢＳ（ビヒクル）の存在下でのＣＤ８＋Ｔ細胞増殖を評価するために実施した実験の結果を提供する図である。実験では１０％自家ドナー血漿を培養培地として使用した。 ＳＥＢ刺激後の２Ｃ８ｖ１３０、Ｌｙｓ２ ＶＨＨ（非結合対照）、またはＰＢＳ（ビヒクル）の存在下でのＣＤ８＋Ｔ細胞増殖を評価するために実施した実験の結果を提供する図である。実験では１０％ＦＢＳを培養培地として使用した。 ＳＥＢ刺激後の２Ｃ８ｖ１３０、Ｌｙｓ２ ＶＨＨ（非結合対照）、またはＰＢＳ（ビヒクル）の存在下でのＣＤ８＋Ｔ細胞増殖を評価するために実施した実験の結果を提供する図である。実験では１０％自家ドナー血漿を培養培地として使用した。 キメラＨＰＢＡＬＬ／Ｄａｕｄｉ腫瘍異種移植マウスにおける１８Ｆ－抗ＣＤ８ ＶＨＨによるＣＤ８画像化能力を評価するために実施した実験の結果を示す図である。 ８９Ｚｒ－ＯＡ ｍＡｂ対照もしくは８９Ｚｒ－ｈｕＯＫＴ８．ｖ１－ＯＡ（左）を注射（第０日）した後の第５日（つまり６日目）の、または１８Ｆ－対照ＶＨＨもしくは１８Ｆ－抗ＣＤ８ ＶＨＨ（右）の注射後９０分後のＴＡＬＬ１腫瘍異種移植マウスのＰＥＴ ＭＩＰを示す図である。 １８Ｆ－抗ＣＤ８ ＶＨＨ（上段）または１８Ｆ－対照ＶＨＨ（下段）を注射した１時間後のアカゲザルのＰＥＴ ＭＩＰ画像を示す図である。
本明細書では、ＶＨＨドメインを含むＣＤ８結合性作用剤（抗ＣＤ８抗体またはそれらの抗原結合性断片を含む）であって、ヒトＣＤ８に高親和性で特異的に結合するが、ＣＤ８＋Ｔ細胞を刺激も阻害もせず、ＣＤ８＋Ｔ細胞増殖を誘導もしないＣＤ８結合性作用剤が提供される。ＣＤ８結合性作用剤は、アカゲザルおよびカニクイザルなどの非ヒト霊長類のＣＤ８に高親和性で結合することが可能である。伝統的な４鎖抗体に基づくＣＤ８結合性作用剤と比較して、本明細書に記載のＣＤ８結合性作用剤は、より高い透過性およびより短い血清半減期を有する。したがって、本明細書に記載のＣＤ８結合性作用剤は、投薬後の短い時間枠内（例えば、１時間以内など、１日以内）にＣＤ８＋細胞（例えば、ＣＤ８＋Ｔ細胞）の存在、局在化、および／または量を検出するのに好適であり、同日読出しすること、反復画像化すること、および他のバイオマーカーと組み合わせて多重画像化することを可能にする。加えて、本明細書に記載のＣＤ８結合性作用剤は、ＣＤ８に対する高い感度、広いダイナミックレンジにわたるＣＤ８レベルとの線形相関性、透過性などの外部要因に対する感受性低減による高い精度、およびマウス異種移植モデルにおける高い腫瘍対血液比に反映される高い画像品質を示す。
本明細書では、ｉｎ ｖｉｖｏにてＣＤ８＋Ｔ細胞を検出するための方法においてＣＤ８結合性作用剤を使用するための方法が提供される。また、疾患（例えば、がん、自己免疫疾患もしくは状態、移植拒絶、または移植片対宿主病）を有する対象の、免疫療法剤による治療に対する応答性を予測するための方法において、本明細書のＣＤ８結合性作用剤を使用するための方法が提供される。加えて、本明細書のＣＤ８結合性作用剤を使用して、免疫療法剤による治療を受けている、疾患（例えば、がん、自己免疫疾患もしくは状態、移植拒絶、または移植片対宿主病）を有する対象の疾患進行および／または治療進行をモニターするための方法が提供される。
定義
本明細書における「ヒトＣＤ８」という用語は、ヒトの表面抗原分類８分子（cluster of differentiation 8 molecule in human）に対応するタンパク質、ポリペプチド、またはそれらの部分を指す。全長ヒトＣＤ８は、Ｔ細胞受容体の共受容体としての役目を果たす膜貫通型糖タンパク質である。ヒトＣＤ８タンパク質は二量体であり、ＣＤ８α鎖およびＣＤ８β鎖を含むＣＤ８鎖の対からなる。「ヒトＣＤ８」という用語は、ＣＤ８α／ＣＤ８αホモ二量体、ＣＤ８α／ＣＤ８βヘテロ二量体、ＣＤ８α鎖、ＣＤ８β鎖、または細胞外ドメインなどの、それらの部分を包含する。「ＣＤ８ａ」および「ＣＤ８α」は本明細書では同義的に使用され、「ＣＤ８ｂ」および「ＣＤ８β」は本明細書では同義的に使用される。ヒトＣＤ８α鎖の例示的な配列は図２に示されている。
本明細書における「ＣＤ８結合性作用剤」という用語は、任意のＣＤ８結合性分子を指す。ＣＤ８結合性作用剤は、ポリペプチド、タンパク質、抗体（４鎖抗体または重鎖抗体を含む）、抗体断片（例えば、ＶＨＨ）、またはヒトＣＤ８、カニクイザルＣＤ８、および／もしくは他の非ヒトＣＤ８タンパク質もしくはペプチドに結合するイムノコンジュゲートであってもよい。また、ＣＤ８結合性作用剤は、小分子標識、例えば放射性核種などの標識を含んでいてもよい。標識を含むＣＤ８結合性作用剤は、本明細書では「標識ＣＤ８結合性作用剤」とも呼ばれる。
本明細書における「抗体」という用語は、最も広い意味で使用され、所望の抗原結合活性、つまりＣＤ８（ヒトＣＤ８、カニクイザルＣＤ８、および／またはアカゲザルＣＤ８など）との結合を呈する限り、これらに限定されないが、モノクローナル抗体、一価抗体（例えば、単アーム抗体（one-armed antibody）、４鎖抗体（ＩｇＧ抗体など）、重鎖抗体、およびそれらの抗体断片を含む種々の抗体構造を包含する。「４鎖抗体」という用語は、本明細書では、２つの重鎖および２つの軽鎖を有する抗体または抗原結合性断片を指すために同義的に使用される。
「抗体断片」は、抗体の部分、好ましくは、抗体の抗原結合または可変領域を含む。抗体断片の例としては、ＶＨＨ、単一ドメイン抗体、Ｆａｂ、Ｆａｂ′、Ｆ（ａｂ′）２、およびＦｖ断片：ダイアボディ；線状抗体（米国特許第５，６４１，８７０号明細書、実施例２；Zapata et al, Protein Eng. 8(10): 1057-1062 [1995]を参照）；単鎖抗体分子；ならびに抗体断片から形成される多特異性抗体が挙げられる。「定常ドメイン」という用語は、抗原結合部位を含有する免疫グロブリンの他の部分、可変ドメインと比較して、より保存されたアミノ酸配列を有する免疫グロブリン分子の部分を指す。定常ドメインは、重鎖のＣＨ１、ＣＨ２、およびＣＨ３ドメイン（総称してＣＨ）ならびに軽鎖のＣＨＬ（またはＣＬ）ドメインを含有する。
本明細書における「Ｆｃ領域」または「断片結晶化可能領域」という用語は、天然配列Ｆｃ領域および変異体Ｆｃ領域を含む、免疫グロブリン重鎖のＣ末端領域を規定するために使用される。免疫グロブリン重鎖のＦｃ領域の境界は様々であり得るが、ヒトＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域は、通常、Ｃｙｓ２２６位のアミノ酸残基から、またはＰｒｏ２３０から、そのカルボキシル末端まで伸長すると規定される。Ｆｃ領域のＣ末端リジン（ＥＵ付番方式による残基４４７）は、例えば、抗体の産生もしくは精製中に、または抗体の重鎖をコードする核酸を組換え的に遺伝子操作することにより除去される場合がある。したがって、インタクト抗体の組成物は、Ｋ４４７残基がすべて除去された抗体集団、Ｋ４４７残基が除去されていない抗体集団、ならびにＫ４４７残基を有する抗体および有しない抗体の混合物を有する抗体集団を含んでいてもよい。本明細書に記載の抗体での使用に好適な天然配列Ｆｃ領域としては、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２（ＩｇＧ２Ａ、ＩｇＧ２Ｂ）、ＩｇＧ３、およびＩｇＧ４が挙げられる。
「モノクローナル抗体」という用語は、本明細書で使用される場合、実質的に均質な抗体の集団から得られる抗体を指し、つまり、集団を構成する個々の抗体は、考え得る天然に存在する突然変異および／または少量で存在する可能性のある翻訳後修飾（例えば、異性化、アミド化）を除き、同一である。モノクローナル抗体は高度に特異的であり、単一の抗原部位へと方向づけられている。典型的には、異なる決定基（エピトープ）へと方向づけられた異なる抗体を含むポリクローナル抗体調製物とは対照的に、各モノクローナル抗体は、抗原にある単一の決定基へと方向づけられている。特異的であることに加えて、モノクローナル抗体は、他の免疫グロブリンにより夾雑されていないハイブリドーマ培養により合成されるという点で有利である。「モノクローナル」という修飾語は、実質的に均質な抗体集団から得られるような抗体の特質を示し、任意の特定の方法による抗体の産生を必要とするとは解釈されるべきではない。例えば、本出願に準拠して使用されるモノクローナル抗体は、以下のものを含む様々な技法により製作することができる：例えば、ハイブリドーマ法（例えば、Kohler and Milstein., Nature, 256:495-97 (1975)；Hongo et al., Hybridoma, 14 (3): 253-260 (1995)、Harlow et al., Antibodies: A Laboratory Manual, (Cold Spring Harbor Laboratory Press, 2nd ed. 1988)；Hammerling et al., in: Monoclonal Antibodies and T-Cell Hybridomas 563-681 (Elsevier, N.Y., 1981)）、組換えＤＮＡ法（例えば、米国特許第４，８１６，５６７号明細書を参照）、ファージディスプレイ技法（例えば、Clackson et al, Nature, 352: 624-628 (1991)；Marks et al., J. Mol. Biol. 222: 581-597 (1992)；Sidhu et al, J. Mol. Biol. 338(2): 299-310 (2004)；Lee et al, J. Mol. Biol. 340(5): 1073-1093 (2004)；Fellouse, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 101(34): 12467-12472 (2004)；およびLee et al, J. Immunol. Methods 284(1-2): 119-132 (2004)を参照）、ならびにヒト免疫グロブリン遺伝子座またはヒト免疫グロブリン配列をコードする遺伝子の一部またはすべてを有する動物においてヒトまたはヒト様抗体を産生するための技術（例えば、国際公開第１９９８／２４８９３号パンフレット；国際公開第１９９６／３４０９６号パンフレット；国際公開第１９９６／３３７３５号パンフレット；国際公開第１９９１／１０７４１号パンフレット；Jakobovits et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90: 2551 (1993)；Jakobovits et al, Nature 362: 255-258 (1993)；Bruggemann et al, Year in Immunol. 7:33 (1993)；米国特許第５，５４５，８０７号明細書；第５，５４５，８０６号明細書；第５，５６９，８２５号明細書；第５，６２５，１２６号明細書；第５，６３３，４２５号明細書；および第５，６６１，０１６号明細書；Marks et al, Bio/Technology 10: 779-783 (1992)；Lonberg et al, Nature 368: 856-859 (1994)；Morrison, Nature 368: 812-813 (1994)；Fishwild et al, Nature Biotechnol. 14: 845-851 (1996)；Neuberger, Nature Biotechnol. 14: 826 (1996)；ならびにLonberg and Huszar, Intern. Rev. Immunol. 13: 65-93 (1995)を参照）。
「可変領域」または「可変ドメイン」という用語は、抗体と抗原との結合に関与する抗体重鎖または軽鎖のドメインを指す。天然抗体の重鎖および軽鎖の可変ドメイン（それぞれＶＨおよびＶＬ）は、一般に類似の構造を有し、各ドメインは、４つの保存されたフレームワーク領域（ＦＲ）および３つの超可変領域（ＨＶＲ）を含む。（例えば、Kindt et al. Kuby Immunology, 6th ed., W.H. Freeman and Co., page 91 (2007)を参照されたい。）抗原結合特異性の付与には、単一のＶＨまたはＶＬドメインで十分であり得る。さらに、特定の抗原に結合する抗体を、抗原に結合する抗体に由来するＶＨまたはＶＬドメインを使用して単離して、それぞれ、相補的なＶＬまたはＶＨドメインのライブラリーをスクリーニングすることができる。例えば、Portolano et al., J. Immunol. 150:880-887 (1993)；Clarkson et al, Nature 352:624-628 (1991)を参照されたい。
「重鎖のみの抗体」または「ＨＣＡｂ」としても知られている「重鎖抗体」という用語は、２つの重鎖を含むが、４鎖抗体に通常見出される２つの軽鎖を欠如する機能的抗体を指す。ラクダ科動物（ラクダ、ラマ、またはアルパカなど）は、ＨＣＡｂを産生することが知られている。
「単一ドメイン抗体」または「ｓｄＡｂ」という用語は、３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）を有する単一の抗原結合性ドメインを指す。ｓｄＡｂは単独で、対応するＣＤＲ含有ポリペプチドと対合することなく抗原に結合することが可能である。一部の場合では、単一ドメイン抗体は、ラクダ科ＨＣＡｂから遺伝子操作され、「ＶＨＨ」（以下で規定される）と呼ばれる。ラクダ科ｓｄＡｂは、最小の既知抗原結合性抗体断片の１つである（例えば、Hamers-Casterman et al., Nature 363:446-8 (1993)；Greenberg et al., Nature 374:168-73 (1995)；Hassanzadeh-Ghassabeh et al., Nanomedicine (Lond), 8: 1013-26 (2013)を参照）。
「ＶＨＨ」または「重鎖抗体の重鎖の可変ドメイン」という用語は、重鎖抗体の単一の重鎖可変ドメインを指す。ＶＨＨ分子は、ラクダ科（Camelidae）種、例えば、ラクダ、ラマ、ビクーニャ、ヒトコブラクダ、アルパカ、およびグアナコで生じる抗体に由来してもよい。基本的なＶＨＨは、Ｎ末端からＣ末端へと以下の構造：ＦＲ１－ＣＤＲ１－ＦＲ２－ＣＤＲ２－ＦＲ３－ＣＤＲ３－ＦＲ４を有し、ＦＲ１～ＦＲ４は、それぞれフレームワーク領域１～４を指し、ＣＤＲ１～ＣＤＲ３は、相補性決定領域１～３を指す。
「超可変領域」または「ＨＶＲ」という用語は、本明細書で使用される場合、配列が超可変性である（「相補性決定領域」または「ＣＤＲ」）、および／または構造的に規定されるループを形成する（「超可変ループ」）、および／または抗原接触残基（「抗原接触」）を含有する、抗体可変ドメインの領域の各々を指す。一般に、４鎖抗体およびそれらの抗原結合性抗体断片は、６つのＨＶＲ：ＶＨに３つ（Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３）、ＶＬに３つ（Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３）を含む。一般に、重鎖抗体は、３つのＨＶＲ（ＨＶＲ１、ＨＶＲ２、ＨＶＲ３）を含む。
幾つかのＨＶＲ画定が使用されており、本明細書に包含されている。本明細書における４鎖抗体およびそれらの抗原結合性抗体断片の例示的なＨＶＲとしては、以下のものが挙げられる：（ａ）アミノ酸残基２６～３２（Ｌ１）、５０～５２（Ｌ２）、９１～９６（Ｌ３）、２６～３２（Ｈ１）、５３～５５（Ｈ２）、および９６～１０１（Ｈ３）に生じる超可変ループ（Chothia and Lesk, J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987)）；（ｂ）アミノ酸残基２４～３４（Ｌ１）、５０～５６（Ｌ２）、８９～９７（Ｌ３）、３１～３５ｂ（Ｈ１）、５０～６５（Ｈ２）、および９５～１０２（Ｈ３）に生じるＣＤＲ（Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD (1991)）；（ｃ）アミノ酸残基２７ｃ～３６（Ｌ１）、４６～５５（Ｌ２）、８９～９６（Ｌ３）、３０～３５ｂ（Ｈ１）、４７～５８（Ｈ２）、および９３～１０１（Ｈ３）に生じる抗原接触（MacCallum et al. J. Mol. Biol. 262: 732-745 (1996)）；ならびに（ｄ）ＨＶＲアミノ酸残基４６～５６（Ｌ２）、４７～５６（Ｌ２）、４８～５６（Ｌ２）、４９～５６（Ｌ２）、２６～３５（Ｈ１）、２６～３５ｂ（Ｈ１）、４９～６５（Ｈ２）、９３～１０２（Ｈ３）、および９４～１０２（Ｈ３）を含む、（ａ）、（ｂ）、および／または（ｃ）の組合せ。
別様に示されていない限り、ＨＶＲ残基および可変ドメインの他の残基（例えば、ＰＲ残基）は、本明細書ではＫａｂａｔ ｅｔ ａｌ．、上記に従って付番されている。
単一ドメイン抗体（ＶＨＨなど）のアミノ酸残基は、Riechmann and Muyldermans, J. Immunol. Methods 2000 Jun. 23; 240 (1-2): 185-195の論文においてラクダ科に由来するＶＨＨドメインに適用されているように、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．("Sequence of proteins of immunological interest", US Public Health Services, NIH Bethesda, Md., Publication No. 91)により付与されるＶＨドメインの基本付番に従って付番することができる。この付番によると、ＶＨＨのＦＲ１は１～３０位のアミノ酸残基を含み、ＶＨＨのＣＤＲ１は３１～３５位のアミノ酸残基を含み、ＶＨＨのＦＲ２は３６～４９位のアミノ酸を含み、ＶＨＨのＣＤＲ２は５０～６５位のアミノ酸残基を含み、ＶＨＨのＦＲ３は６６～９４位のアミノ酸残基を含み、ＶＨＨのＣＤＲ３は９５～１０２位のアミノ酸残基を含み、ＶＨＨのＦＲ４は１０３～１１３位のアミノ酸残基を含む。この点に関して、ＶＨドメインおよびＶＨＨドメインについて当技術分野で周知であるように、ＣＤＲの各々のアミノ酸残基の総数は様々であってもよく、Ｋａｂａｔ付番により示されるアミノ酸残基の総数に対応しない場合がある（つまり、Ｋａｂａｔ付番による１つまたは複数の位置は、実際の配列では占有されていなくともよく、または実際の配列は、Ｋａｂａｔ付番で許されている数より多くのアミノ酸残基を含有していてもよい）ことが留意されるべきである。
「フレームワーク」または「ＦＲ」残基は、本明細書で規定の通りのＨＶＲ残基以外の可変ドメイン残基である。
「キメラ」抗体という用語は、重鎖および／または軽鎖の部分が、特定の供給源または種と同一であるかまたはそれらに由来し、重鎖および／または軽鎖の残部が、別の供給源または種と同一であるかまたはそれらに由来する抗体を指す。
「ヒト化」抗体は、非ヒト抗体に由来する最小限の配列を含有する抗体である。一般に、ヒト化抗体は、レシピエントの超可変領域の残基が、所望の抗体特異性、親和性、および能力を有する、ラクダ、マウス、ラット、ウサギ、または非ヒト霊長類などの非ヒト種（ドナー抗体）の超可変領域の残基により置き換えられているヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）である。ある特定の態様では、「ヒト化」抗体は、非ヒト（例えば、ラクダ）ＣＤＲ由来のアミノ酸残基およびヒトＦＲ由来のアミノ酸残基を含むキメラ抗体を指す。一部の場合では、ヒト免疫グロブリンのフレームワーク領域（ＦＲ）残基は、対応する非ヒト残基により置き換えられている。さらに、ヒト化抗体は、レシピエント抗体にもドナー抗体にも見出されない残基を含んでいてもよい。こうした修飾は、抗体の性能をさらに改良するためになされる。一般に、ヒト化抗体は、少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメインの実質的にすべてを含み、超可変ループのすべてまたは実質的にすべてが、非ヒト免疫グロブリンのものに対応し、ＦＲのすべてまたは実質的にすべてが、ヒト免疫グロブリン配列のものである。さらなる詳細は、Jones et al., Nature 321:522-525 (1986)；Riechmann et al., Nature 332:323-329 (1988)；およびPresta, Curr. Op. Struct. Biol. 2:593-596 (1992)を参照されたい。
「親和性成熟」抗体は、そうした変更を有していない親抗体と比較して、抗原に対する抗体の親和性の向上をもたらす、その１つまたは複数のＣＤＲに１つまたは複数の変更を有するものである。一部の実施形態では、親和性成熟抗体は、標的抗原に対してナノモル濃度またはさらにはピコモル濃度の親和性を有する。親和性成熟抗体は、当技術分野で公知の手順により産生される。例えば、ＣＤＲおよび／またはフレームワーク残基のランダム突然変異誘発は、例えば、Barbas et al. Proc Nat. Acad. Sci. USA 91:3809-3813 (1994)；Schier et al. Gene 169:147-155 (1995)；Yelton et al. J. Immunol. 155:1994-2004 (1995)；Jackson et al., J. Immunol. 154(7):3310-9 (1995)；およびHawkins et al, J. Mol. Biol. 226:889-896 (1992)に記載されている。
本明細書で特定されるポリペプチドおよび抗体配列に関する「アミノ酸配列同一性パーセント（％）」または「相同性」は、任意の保存的置換を配列同一性の一部として考慮して配列をアラインした後で、比較されているポリペプチドのアミノ酸残基と同一である、候補配列のアミノ酸残基のパーセンテージであると規定される。アミノ酸配列同一性パーセントを決定する目的のためのアラインメントは、例えば、ＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ－２、ＡＬＩＧＮ、またはＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェアなどの公的に利用可能なコンピュータソフトウェアを使用して、当技術分野の技術範囲内である種々の方法で達成することができる。当業者であれば、比較されている配列の全長にわたって最大のアラインメントを達成するために必要とされる任意のアルゴリズムを含む、アラインメントを測定するための適切なパラメーターを決定することができる。しかしながら、本明細書の目的では、アミノ酸配列同一性％値は、配列比較コンピュータプログラムＡＬＩＧＮ－２を使用して生成される。ＡＬＩＧＮ－２配列比較コンピュータプログラムは、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．により作成されたものであり、ソースコードは、ユーザー文書と共に米国著作権局、ワシントンＤ．Ｃ．、２０５５９に提出されており、米国著作権登録番号ＴＸＵ５１００８７として登録されている。ＡＬＩＧＮ－２プログラムは、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．、サウスサンフランシスコ、カリフォルニア州から公的に入手可能である。ＡＬＩＧＮ－２プログラムは、ＵＮＩＸ（登録商標）オペレーティングシステム、好ましくはｄｉｇｉｔａｌ ＵＮＩＸ（登録商標） Ｖ４．０Ｄで使用するためにコンパイルされているはずである。すべての配列比較パラメーターは、ＡＬＩＧＮ－２プログラムにより設定されており、変更しない。
特定のポリペプチドまたは特定のポリペプチド標的にあるエピトープに対する「特異的結合」または「特異的に結合する」または「特異的である」という用語は、本明細書で使用される場合、例えば、少なくとも約１０－４Ｍの、その代わりに少なくとも約１０－５Ｍの、その代わりに少なくとも約１０－６Ｍの、その代わりに少なくとも約１０－７Ｍの、その代わりに少なくとも約１０－８Ｍの、その代わりに少なくとも約１０－９Ｍの、その代わりに少なくとも約１０－１０Ｍの、その代わりに少なくとも約１０－１１Ｍの、その代わりに少なくとも約１０－１２Ｍの、またはそれより大きな、標的に対するＫＤを有する分子により示され得るものである。一部の実施形態では、「特異的結合」という用語は、分子が、あらゆる他のポリペプチドまたはポリペプチドエピトープと実質的に結合することなく、特定のポリペプチドまたは特定のポリペプチドにあるエピトープに結合する結合を指す。ＫＤは、ＥＬＩＳＡ、表面プラズモン共鳴法（ＳＰＲ）、蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）分析、または放射性免疫沈降法（ＲＩＡ）などの、当技術分野で公知の方法により決定することができる。特異的結合は、例えば、一般に結合活性を有していない類似構造の分子である対照分子の結合と比較して分子の結合を決定することにより測定することができる。例えば、特異的結合は、標的に類似する対照分子、例えば過剰量の非標識標的との競合により決定することができる。この場合、標識標的とプローブとの結合が、過剰な未標識標的により競合的に阻害される場合、特異的結合であることが示される。
本明細書で使用される場合、「治療」または「治療すること」は、臨床結果を含む有益なまたは所望の結果を得るための手法である。本出願の目的では、有益なまたは所望の臨床結果としては、これらに限定されないが、以下の１つまたは複数が挙げられる：疾患に起因する１つもしくは複数の症状の緩和、疾患の範囲の縮小、疾患の安定化（例えば、疾患悪化の予防または遅延）、疾患の拡散（例えば、転移）の予防もしくは遅延、疾患の再発の予防もしくは遅延、疾患進行の遅延もしくは緩徐、疾患状態の改善、疾患寛解の提供（部分的または全体的）、疾患の治療に必要な１つもしくは複数の他の薬剤の用量の減少、疾患進行の遅延、生活の質の増加もしくは向上、体重増加の増加、および／または生存期間の延長。「治療」には、がんの病理学的帰結（例えば、腫瘍容積など）の低減も包含される。本明細書で提供される方法では、治療のこうした態様のいずれか１つまたは複数が企図される。
本明細書で開示の通りのＣＤ８結合性作用剤または組成物の「有効量」は、具体的に述べられている目的、例えば、ｉｎ ｖｉｖｏでのＣＤ８＋Ｔ細胞の画像化を実施するのに十分な量である。「有効量」は、経験的に、および述べられている目的（ｉｎ ｖｉｖｏでのＣＤ８＋Ｔ細胞の画像化など）に関する公知の方法により決定することができる。
「治療有効量」という用語は、例えば、対象（例えば、ヒトなどの哺乳動物）の疾患または障害を「治療」するのに有効な、例えば、免疫療法剤（本明細書の他所に記載の免疫療法剤など）、細胞療法、またはがんワクチンの量を指す。がんの場合、治療有効量の免疫療法剤、細胞療法、またはがんワクチンは、がん細胞の数を低減することができ、腫瘍サイズもしくは重量を低減することができ、末梢器官へのがん細胞浸潤を阻害する（例えば、ある程度緩徐させ、好ましくは停止させる）ことができ、腫瘍転移を阻害する（例えば、ある程度緩徐させ、好ましくは停止させる）ことができ、腫瘍成長をある程度阻害することができ、および／またはがんに関連付けられる症状の１つもしくは複数をある程度軽減することができる。免疫療法剤、細胞療法、またはがんワクチンは、既存のがん細胞の成長を防止および／または死滅させることができるという点で、細胞増殖抑制性および／または細胞傷害性であり得る。一部の実施形態では、治療有効量は、成長阻害量である。別の実施形態では、治療有効量は、患者の生存を延長させる量である。別の実施形態では、治療有効量は、患者の無増悪生存期間を向上させる量である。
「個体」または「対象」は哺乳類である。哺乳動物としては、これらに限定されないが、飼育動物（例えば、ウシ、ヒツジ、ネコ、イヌ、およびウマ）、霊長類（例えば、ヒトならびにアカゲザルおよびカニクイザルなどの非ヒト霊長類）、ウサギ、およびげっ歯類（例えば、マウスおよびラット）が挙げられる。一部の実施形態では、個体または対象はヒトである。
本明細書で使用される場合、「応答性」は、対象が療法剤（例えば、免疫療法剤）による治療を受けているがまたは受けた際に好ましい応答を発生させることを指す。好ましい応答の例は、療法剤（例えば、免疫療法剤）による治療中にまたは治療後に対象の腫瘍成長が阻害されることであり、好ましくない例は、療法剤（例えば、免疫療法剤）による治療中にまたは治療後に対象の腫瘍が継続的に成長することまたは加速的に成長することである。
本明細書で使用される場合、「疾患進行をモニターする」とは、対象（例えば、がん、自己免疫疾患もしくは状態、移植拒絶、または移植片対宿主病と診断された対象）を、疾患症状が悪化したか否か、安定化したか否か、または改善した（つまり、重症度が低くなった）か否かを判断するために、連続した時間間隔で評価することを指す。例えば、対象のがん進行をモニターするとは、ある特定の場合では、腫瘍の重量もしくはサイズ（腫瘍退縮または腫瘍成長など）、進行するまでの時間、生存期間、無増悪生存期間の長さ、全奏効率、奏効期間、生活の質、疾患マーカーの発現および／もしくは活性（例えば、ある特定の遺伝子および／もしくはタンパク質の発現）、または当技術分野で公知の他の基準の変化をモニターすることを含む。例えば、本明細書の他所でさらに詳細に記載されている画像化技法により、治療に対する応答を測定することを含む、がんを有する患者の疾患進行をモニターするための追加の手法を使用することができる。
本明細書で使用される場合、「治療進行をモニターする」とは、対象（例えば、がん、自己免疫疾患もしくは状態、移植拒絶、または移植片対宿主病と診断された対象）を、治療の結果として疾患症状が悪化したか否か、安定化したか否か、または改善した（つまり、重症度が低くなった）か否かを判断するために、治療（例えば、免疫療法剤による治療）中または治療後の連続した時間間隔で評価することを指す。例えば、対象（例えば、免疫療法剤による治療を受けたかまたは受けている対象）の治療進行は、疾患進行をモニターするために使用されるものと同じ基準を使用してモニターすることができる。
本明細書で使用される場合、「薬学的に許容される」または「薬理学的に適合性である」とは、生物学的にまたは別様に望ましくない訳ではない物質を意味し、例えば、物質は、著しく望ましくない生物学的効果を一切引き起こすことなく、またはそれが含有されている組成物の他の成分のいずれとも有害な様式で相互作用を引き起こすことなく患者に投与される医薬組成物へと組み込むことができる。薬学的に許容される担体または賦形剤は、好ましくは、毒物学的試験および製造試験の必要とされる基準を満たしており、ならびに／または米国食品医薬品局が作成した不活性成分ガイド（Inactive Ingredient Guide）に含まれている。
本明細書で使用される場合、「と併せて」は、第２の作用剤、例えば免疫療法剤または別の診断用画像化剤の投与に対する、例えば本明細書に記載のＣＤ８結合性作用剤の投与のタイミングを指す。例えば、免疫療法剤と併せて本明細書に記載のＣＤ８結合性作用剤を投与するとは、免疫療法剤が投与される前、免疫療法剤が投与された後、免疫療法剤の投与と同時発生的に、または免疫療法剤の投与と同時に、ＣＤ８結合性作用剤を投与してもよいことを意味する。ＣＤ８結合性作用剤および免疫療法剤の投与前または投与後に、追加の作用剤を投与してもよい。追加的または代替的に、ＣＤ８結合性作用剤の連続投与と免疫療法剤との間に他の作用剤を投与してもよい。
「検出すること」という用語は、物質の存在または非存在を決定すること、または物質（ＣＤ８など）の量を定量化することを含むことが意図されている。したがって、この用語は、定性的および定量的決定のための、本出願の物質、組成物、および方法の使用を指す。一般に、検出に使用される特定の技法は、本出願の方法の実施にとって重要ではない。例えば、本明細書に記載の方法による「検出すること」は、ＣＤ８ポリペプチドの存在もしくは非存在またはＣＤ８ポリペプチドのレベルの変化を観察することを含んでいてもよい。一部の実施形態では、「検出すること」は、野生型ＣＤ８レベル（例えば、ｍＲＮＡレベルまたはポリペプチドレベル）を検出することを含んでいてもよい。検出することは、対照と比較して、１０％～９０％の間の任意の値、または３０％～６０％の間の任意の値、または１００％よりも大きな値の変化（増加または減少）を定量化することを含んでいてもよい。検出することは、２倍～１０倍（２倍および１０倍を含む）またはそれよりも大きな任意の値、例えば１００倍の変化を定量化することを含んでいてもよい。
本明細書で使用される場合の「標識」という単語は、抗体（例えば、ＶＨＨ）と直接的にまたは間接的にコンジュゲートされている検出可能な化合物または組成物を指す。標識はそれ自体が検出可能であってもよく（例えば、放射性同位元素標識または蛍光標識）、または酵素標識の場合は、基質化合物または組成物の検出可能な化学的変更を触媒することができる。
本明細書における、「約」値またはパラメーターへの言及は、当業者であれば容易にわかるそれぞれの数値の通常の誤差範囲を指す。本明細書における、「約」値またはパラメーターへの言及は、その値またはパラメーター自体を対象とする態様を含む（および説明する）。例えば、「約Ｘ」を参照する記載は、「Ｘ」の説明を含む。
本出願の態様および実施形態は、態様および実施形態を「含む（comprising）」、「からなる（consisting）」、および「から本質的になる（consisting essentially of）」ことを含むと理解される。
本明細書および添付の特許請求の範囲で使用される場合、単数形「ａ（１つの）」、「ａｎ（１つの）」、および「ｔｈｅ（その）」は、状況が明らかに別様であることを指示しない限り、複数の指示対象を含む。
「および／または」という用語、「Ａおよび／またはＢ」などの語句は、本明細書で使用される場合、ＡおよびＢの両方；ＡまたはＢ；Ａ（単独）；ならびにＢ（単独）を含むことが意図されている。同様に、「および／または」という用語、「Ａ、Ｂ、および／またはＣ」などの語句は、本明細書で使用される場合、以下の実施形態：Ａ、Ｂ、およびＣ；Ａ、Ｂ、またはＣ；ＡまたはＣ；ＡまたはＢ；ＢまたはＣ；ＡおよびＣ；ＡおよびＢ；ＢおよびＣ；Ａ（単独）；Ｂ（単独）；ならびにＣ（単独）の各々を包含することが意図される。
明瞭性のために、別々の実施形態の状況で記載されている本発明のある特定の特徴は、単一の実施形態において組み合わせて提供することもできることが理解される。逆に、簡潔性のために、単一の実施形態の状況で記載されている本発明の種々の特徴は、別々にまたは任意の好適な部分組合せで提供することもできる。ＣＤ８結合性作用剤およびそれらの使用方法に関する実施形態の組合せはすべて、本発明により具体的に包含されており、あたかもありとあらゆる組合せが個々におよび明示的に本明細書で開示されているかの如く本明細書に開示されている。
ＣＤ８結合性作用剤
ａ．機能的特質
本明細書で提供されるＣＤ８結合性作用剤は、ＶＨＨドメイン（例えば、ラクダ科またはヒト化ＶＨＨ）を含み、以下の特質の１つまたは複数を有する：（ａ）ＣＤ８結合性作用剤は、約１ｎＭまたはそれよりも低いＫＤでヒトＣＤ８に特異的に結合すること；（ｂ）ＣＤ８結合性作用剤は、約０．００２／秒またはそれよりも低い（例えば、約０．００１８／秒または約０．０００８５／秒）のｋｏｆｆでヒトＣＤ８に結合すること；（ｃ）ＣＤ８結合性作用剤は、約１ｎＭまたはそれよりも低いＫＤでカニクイザルＣＤ８に結合すること；（ｄ）ＣＤ８結合性作用剤は、約０．００４／秒またはそれよりも低い（例えば、約０．００３７／秒または約０．００１９／秒）のｋｏｆｆでカニクイザルＣＤ８に結合すること；（ｅ）ＣＤ８結合性作用剤は、ＣＤ８＋Ｔ細胞の活性化を阻害も刺激もしないこと；（ｆ）ＣＤ８結合性作用剤は、ＣＤ８＋Ｔ細胞増殖を誘導しないこと；および（ｇ）ＣＤ８結合性作用剤は、ＣＤ４＋細胞に結合しないこと。一部の実施形態では、ＶＨＨドメインは、本明細書に記載のＣＤ８結合性作用剤の１つまたは複数の特質を有する。一部の実施形態では、標識ＶＨＨドメイン（つまり、検出可能な標識にコンジュゲートされたＶＨＨドメイン）は、本明細書に記載のＣＤ８結合性作用剤の１つまたは複数の特質を有する。
本明細書に記載のＣＤ８結合性作用剤は、高い親和性および特異性でＣＤ８に結合する。一部の実施形態では、ＣＤ８結合性作用剤は、これらの値の間の任意の値または範囲を含む、約１ｎＭ、０．５ｎＭ、０．４ｎＭ、０．３ｎＭ、０．２５ｎＭ、０．２ｎＭ、０．１５ｎＭ、０．１ｎＭ、０．０５ｎＭ、０．０２ｎＭ、０．０１ｎＭ、０．００１ｎＭ、またはそれよりも低い（例えば、１０－９Ｍもしくはそれよりも低い、例えば１０－９Ｍ～１０－１３Ｍの、または１０－１０Ｍ～１０－１２Ｍの）ＫＤでヒトＣＤ８に結合する。一部の実施形態では、ＣＤ８結合性作用剤は、これらの値の間の任意の値または範囲を含む、約１ｎＭ、０．５ｎＭ、０．４ｎＭ、０．３ｎＭ、０．２５ｎＭ、０．２ｎＭ、０．１５ｎＭ、０．１ｎＭ、０．０５ｎＭ、０．０２ｎＭ、０．０１ｎＭ、０．００１ｎＭ、またはそれよりも低い（例えば、１０－９Ｍもしくはそれよりも低い、例えば１０－９Ｍ～１０－１３Ｍの、または１０－１０Ｍ～１０－１２Ｍの）ＫＤでアカゲザルＣＤ８に結合する。一部の実施形態では、ＣＤ８結合性作用剤は、これらの値の間の任意の値または範囲を含む、約１ｎＭ、０．５ｎＭ、０．４ｎＭ、０．３ｎＭ、０．２５ｎＭ、０．２ｎＭ、０．１５ｎＭ、０．１ｎＭ、０．０５ｎＭ、０．０２ｎＭ、０．０１ｎＭ、０．００１ｎＭ、またはそれよりも低い（例えば、１０－９Ｍもしくはそれよりも低い、例えば１０－９Ｍ～１０－１３Ｍの、または１０－１０Ｍ～１０－１２Ｍの）ＫＤでカニクイザルＣＤ８に結合する。一部の実施形態では、ＣＤ８結合性作用剤は、（ａ）これらの値の間の任意の値または範囲を含む、約１ｎＭ、０．５ｎＭ、０．４ｎＭ、０．３ｎＭ、０．２５ｎＭ、０．２ｎＭ、０．１５ｎＭ、０．１ｎＭ、０．０５ｎＭ、０．０２ｎＭ、０．０１ｎＭ、０．００１ｎＭ、またはそれよりも低い（例えば、１０－９Ｍもしくはそれよりも低い、例えば１０－９Ｍ～１０－１３Ｍの、または１０－１０Ｍ～１０－１２Ｍの）ＫＤでヒトＣＤ８に結合し；（ｂ）これらの値の間の任意の値または範囲を含む、約１ｎＭ、０．５ｎＭ、０．４ｎＭ、０．３ｎＭ、０．２５ｎＭ、０．２ｎＭ、０．１５ｎＭ、０．１ｎＭ、０．０５ｎＭ、０．０２ｎＭ、０．０１ｎＭ、０．００１ｎＭ、またはそれよりも低い（例えば、１０－９Ｍもしくはそれよりも低い、例えば１０－９Ｍ～１０－１３Ｍの、または１０－１０Ｍ～１０－１２Ｍの）ＫＤでアカゲザルＣＤ８に結合し；および（ｃ）これらの値の間の任意の値または範囲を含む、約１ｎＭ、０．５ｎＭ、０．４ｎＭ、０．３ｎＭ、０．２５ｎＭ、０．２ｎＭ、０．１５ｎＭ、０．１ｎＭ、０．０５ｎＭ、０．０２ｎＭ、０．０１ｎＭ、０．００１ｎＭ、またはそれよりも低い（例えば、１０－９Ｍもしくはそれよりも低い、例えば１０－９Ｍ～１０－１３Ｍの、または１０－１０Ｍ～１０－１２Ｍの）ＫＤでカニクイザルＣＤ８に結合する。一部の実施形態では、ＣＤ８結合性作用剤は、約１５０ｐＭまたはそれよりも低いＫＤでヒトＣＤ８に結合し、ＣＤ８結合性作用剤は、約３５０ｐＭまたはそれよりも低いＫＤでカニクイザルＣＤ８に結合する。一部の実施形態では、ＣＤ８結合性作用剤は、約１３２ｐＭのＫＤでヒトＣＤ８に結合し、ＣＤ８結合性作用剤は、約３４４ｐＭのＫＤでカニクイザルＣＤ８に結合する。一部の実施形態では、ＣＤ８結合性作用剤は、約５０ｐＭまたはそれよりも低いＫＤでヒトＣＤ８に結合し、ＣＤ８結合性作用剤は、約１５０ｐＭまたはそれよりも低いＫＤでカニクイザルＣＤ８に結合する。一部の実施形態では、ＣＤ８結合性作用剤は、約５０ｐＭのＫＤでヒトＣＤ８に結合し、ＣＤ８結合性作用剤は、約１３７ｐＭのＫＤでカニクイザルＣＤ８に結合する。一部の実施形態では、ＣＤ８はＣＤ８αである。一部の実施形態では、ＣＤ８は、ＣＤ８α／ＣＤ８αホモ二量体である。一部の実施形態では、ＣＤ８は、ＣＤ８α／ＣＤ８βヘテロ二量体である。
一部の実施形態では、ＣＤ８結合性作用剤は、こうした値の間の任意の値または範囲を含む、約０．０１／秒、０．００５／秒、０．００４／秒、０．００３／秒、０．００２／秒、０．００１５／秒、０．００１／秒、０．０００５／秒、０．０００２／秒、０．０００１／秒、またはそれよりも低い（例えば、１０－２／秒もしくはそれよりも低い、例えば１０－５／秒～１０－２／秒の、または１０－４～１０－３／秒の）ｋｏｆｆでヒトＣＤ８に結合する。一部の実施形態では、ＣＤ８結合性作用剤は、こうした値の間の任意の値または範囲を含む、約０．０１／秒、０．００５／秒、０．００２／秒、０．００１／秒、０．０００５／秒、０．００４／秒、０．００３／秒、０．００２／秒、０．００１５／秒、０．００１／秒、０．０００５／秒、またはそれよりも低い（例えば、１０－２／秒もしくはそれよりも低い、例えば１０－５／秒～１０－２／秒の、または１０－４～１０－３／秒の）ｋｏｆｆでアカゲザルＣＤ８に結合する。一部の実施形態では、ＣＤ８結合性作用剤は、こうした値の間の任意の値または範囲を含む、約０．０１／秒、０．００５／秒、０．００２／秒、０．００１／秒、０．０００５／秒、０．００４／秒、０．００３／秒、０．００２／秒、０．００１５／秒、０．００１／秒、０．０００５／秒、またはそれよりも低い（例えば、１０－２／秒もしくはそれよりも低い、例えば１０－５／秒～１０－２／秒の、または１０－４～１０－３／秒の）ｋｏｆｆでカニクイザルＣＤ８に結合する。一部の実施形態では、ＣＤ８結合性作用剤は、（ａ）こうした値の間の任意の値または範囲を含む、約０．０１／秒、０．００５／秒、０．００４／秒、０．００３／秒、０．００２／秒、０．００１５／秒、０．００１／秒、０．０００５／秒、０．０００２／秒、０．０００１／秒、またはそれよりも低い（例えば、１０－２／秒もしくはそれよりも低い、例えば１０－５／秒～１０－２／秒の、または１０－４～１０－３／秒の）ｋｏｆｆでヒトＣＤ８に結合し；（ｂ）こうした値の間の任意の値または範囲を含む、約０．０１／秒、０．００５／秒、０．００２／秒、０．００１／秒、０．０００５／秒、０．００４／秒、０．００３／秒、０．００２／秒、０．００１５／秒、０．００１／秒、０．０００５／秒、またはそれよりも低い（例えば、１０－２／秒もしくはそれよりも低い、例えば１０－５／秒～１０－２／秒の、または１０－４～１０－３／秒の）ｋｏｆｆでアカゲザルＣＤ８に結合し；（ｃ）こうした値の間の任意の値または範囲を含む、約０．０１／秒、０．００５／秒、０．００２／秒、０．００１／秒、０．０００５／秒、０．００４／秒、０．００３／秒、０．００２／秒、０．００１５／秒、０．００１／秒、０．０００５／秒、またはそれよりも低い（例えば、１０－２／秒もしくはそれよりも低い、例えば１０－５／秒～１０－２／秒の、または１０－４～１０－３／秒の）ｋｏｆｆでカニクイザルＣＤ８に結合する。一部の実施形態では、ＣＤ８結合性作用剤は、約０．００２／秒またはそれよりも低いＫｏｆｆでヒトＣＤ８に結合し、ＣＤ８結合性作用剤は、約０．００４／秒またはそれよりも低いＫｏｆｆでカニクイザルＣＤ８に結合する。一部の実施形態では、ＣＤ８結合性作用剤は、約０．００１８／秒のＫｏｆｆでヒトＣＤ８に結合し、ＣＤ８結合性作用剤は、約０．００３７／秒のＫｏｆｆでカニクイザルＣＤ８に結合する。一部の実施形態では、ＣＤ８結合性作用剤は、約０．００１／秒のＫｏｆｆでヒトＣＤ８に結合し、ＣＤ８結合性作用剤は、約０．００２／秒のＫｏｆｆでカニクイザルＣＤ８に結合する。一部の実施形態では、ＣＤ８結合性作用剤は、約０．０００８５／秒のＫｏｆｆでヒトＣＤ８に結合し、ＣＤ８結合性作用剤は、約０．００１９／秒のＫｏｆｆでカニクイザルＣＤ８に結合する。一部の実施形態では、ＣＤ８はＣＤ８αである。一部の実施形態では、ＣＤ８は、ＣＤ８α／ＣＤ８αホモ二量体である。一部の実施形態では、ＣＤ８は、ＣＤ８α／ＣＤ８βヘテロ二量体である。
一部の実施形態では、ＣＤ８結合性作用剤は、こうした値の間の任意の値または範囲を含む、約３０分、１時間、２時間、３時間、４時間、またはそれよりも長い（例えば、少なくとも１５分の、例えば、１５分～６時間の、または３０分～２時間の）ＣＤ８結合半減期で（例えば、ｉｎ ｖｉｔｒｏ結合アッセイでの）ヒトＣＤ８に結合する。一部の実施形態では、ＣＤ８結合性作用剤は、こうした値の間の任意の値または範囲を含む、約３０分、１時間、２時間、３時間、４時間、またはそれよりも長い（例えば、少なくとも１５分の、例えば、１５分～６時間の、または３０分～２時間の）ＣＤ８結合半減期でアカゲザルＣＤ８に結合する。一部の実施形態では、ＣＤ８結合性作用剤は、こうした値の間の任意の値または範囲を含む、約３０分、１時間、２時間、３時間、４時間、またはそれよりも長い（例えば、少なくとも１５分の、例えば、１５分～６時間の、または３０分～２時間の）ＣＤ８結合半減期でカニクイザルＣＤ８に結合する。
ヒトＣＤ８、アカゲザルＣＤ８、および／またはカニクイザルＣＤ８に対する、本明細書で提供されるＣＤ８結合性作用剤のＫＤおよびｋｏｆｆは、これらに限定されないが、例えば、ＥＬＩＳＡ、蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）分析、放射性免疫沈降法（ＲＩＡ）、および表面プラズモン共鳴法（ＳＰＲ）を含む、当技術分野で公知の任意の方法により決定することができる。一部の実施形態では、ヒトＣＤ８、アカゲザルＣＤ８、および／またはカニクイザルＣＤ８に対する、本明細書で提供されるＣＤ８結合性作用剤のＫＤおよび／またはｋｏｆｆは、ＳＰＲにより決定される。一部の実施形態では、本明細書で提供されるＣＤ８結合性作用剤のＫＤおよび／またはｋｏｆｆは、ＣＤ８α／ＣＤ８β－Ｆｃ融合タンパク質を試薬として使用した表面プラズモン共鳴法（ＳＰＲ）により決定される。一部の実施形態では、ＣＤ８α／ＣＤ８β－Ｆｃ融合タンパク質は、単アームヒトＣＤ８α／ヒトＣＤ８β－Ｆｃ融合タンパク質である。一部の実施形態では、ＣＤ８α／ＣＤ８β－Ｆｃ融合タンパク質は、単アームカニクイザルＣＤ８α／カニクイザルＣＤ８β－Ｆｃ融合タンパク質である。一部の実施形態では、単アームＣＤ８α／ＣＤ８β－Ｆｃ融合タンパク質は、Ｆｃの１つのポリペプチド鎖に融合されている、ヒトＣＤ８αおよびヒトＣＤ８βを含む単鎖ポリペプチドを含む。一部の実施形態では、単アームＣＤ８α／ＣＤ８β－Ｆｃ融合タンパク質は、Ｆｃの１つのポリペプチド鎖に融合されている、カニクイザルＣＤ８αおよびカニクイザルＣＤ８βを含む単鎖ポリペプチドを含む。一部の実施形態では、ヒトＣＤ８、アカゲザルＣＤ８、および／またはカニクイザルＣＤ８に対する、本明細書で提供されるＣＤ８結合性作用剤のＫＤは、ＦＡＣＳにより決定される。例示的なヒト、アカゲザル、およびカニクイザルＣＤ８αアミノ酸配列は、図２に示されている。
一部の実施形態では、本明細書で提供されるＣＤ８結合性作用剤は、マウスＣＤ８に結合しない（例えば、特異的に結合しない）。一部の実施形態では、ＣＤ８結合性作用剤は、ラットＣＤ８に結合しない（例えば、特異的に結合しない）。一部の実施形態では、ＣＤ８結合性作用剤は、例えば、ＳＰＲおよび／またはＦＡＣＳにより決定して、マウスＣＤ８にもラットＣＤ８にもいずれにも結合しない（例えば、特異的に結合しない）。
本明細書に記載のＣＤ８結合性作用剤の特質は、周知の方法、例えば、下記の実施例で使用されている方法を使用して評価することができる。一部の実施形態では、ＣＤ８＋Ｔ細胞増殖は、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）および本明細書で提供されるＣＤ８結合性作用剤の存在下にてｉｎ ｖｉｔｒｏで評価される。一部の実施形態では、ＣＤ８＋Ｔ細胞増殖は、ＰＢＭＣ、抗ＣＤ３抗体、抗ＣＤ２８抗体、および本明細書で提供されるＣＤ８結合性作用剤の存在下にてｉｎ ｖｉｔｒｏで評価される。一部の実施形態では、ＣＤ８＋Ｔ細胞増殖は、ブドウ球菌（Staphylococcus）エンテロトキシンＢ（ＳＥＢ）で刺激されたＰＢＭＣおよび本明細書で提供されるＣＤ８結合性作用剤の存在下にてｉｎ ｖｉｔｒｏで評価される。一部の実施形態では、ＣＤ８＋Ｔ細胞増殖は、ＣＥＦペプチドプールで刺激されたＰＢＭＣおよび本明細書で提供されるＣＤ８結合性作用剤の存在下にてｉｎ ｖｉｔｒｏで評価される。一部の実施形態では、ＣＤ８＋Ｔ細胞増殖は、リポポリサッカライド（ＬＰＳ）で刺激されたＰＢＭＣおよび本明細書で提供されるＣＤ８結合性作用剤の存在下にてｉｎ ｖｉｔｒｏで評価される。一部の実施形態では、ｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイは、培地として１０％ＦＢＳを使用して実施される。一部の実施形態では、ｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイは、培地として１０％自家ドナー血漿を使用して実施され、ドナー血漿およびＰＢＭＣは、同じドナーから得られる。
一部の実施形態では、本明細書で提供されるＣＤ８結合性作用剤は、ヒトＣＤ４＋Ｔ細胞に結合しない（例えば、特異的に結合しない）。一部の実施形態では、本明細書で提供されるＣＤ８結合性作用剤は、ヒトＣＤ３－細胞に結合しない（例えば、特異的に結合しない）。一部の実施形態では、本明細書で提供されるＣＤ８結合性作用剤は、ヒトＣＤ４＋ＴにもＣＤ３－細胞にもいずれにも結合しない（例えば、特異的に結合しない）。一部の実施形態では、ヒトＣＤ４＋Ｔ細胞またはヒトＣＤ３－細胞に対する、本明細書で提供されるＣＤ８結合性作用剤による特異的結合の欠如は、実施例で考察されているように、蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）により検出される。
本明細書では、上記の機能的特質の１つまたは複数を有する例示的なＣＤ８結合性作用剤（抗ＣＤ８抗体およびそれらの抗体断片を含む）が提供される。一部の実施形態では、Ａｒｇ２５、Ｌｙｓ４２、Ｇｌｎ４４、Ｖａｌ４５、Ｌｅｕ４６、Ｌｅｕ４７、Ｓｅｒ４８、Ｐｒｏ５０、Ｔｈｒ５１、Ｓｅｒ５２、Ｇｌｎ７５、Ａｒｇ９３、Ｌｅｕ９４、Ｇｌｙ９５、Ａｓｐ９６、およびＴｈｒ９７を含むヒトＣＤ８αエピトープに特異的に結合するＶＨＨドメインを含むＣＤ８結合性作用剤が提供され、この場合、アミノ酸付番は配列番号１３による。また、Ａｒｇ２５、Ｌｙｓ４２、Ｇｌｎ４４、Ｖａｌ４５、Ｌｅｕ４６、Ｌｅｕ４７、Ｓｅｒ４８、Ｐｒｏ５０、Ｔｈｒ５１、Ｓｅｒ５２、Ｇｌｎ７５、Ａｒｇ９３、Ｌｅｕ９４、Ｇｌｙ９５、Ａｓｐ９６、およびＴｈｒ９７を含むヒトＣＤ８αエピトープが提供され、この場合、アミノ酸付番は配列番号１３による。一部の実施形態では、ヒトＣＤ８αエピトープのアミノ酸残基は、ヒトＣＤ８αに結合したＣＤ８結合性作用剤またはＶＨＨドメインの結晶構造中のＶＨＨドメインの１つまたは複数のアミノ酸残基から約４．５Å以内にある。さらに、本明細書に記載のＣＤ８結合性作用剤（例えば、抗ＣＤ８ ＶＨＨ）のいずれか１つと同じヒトＣＤ８αエピトープと競合的に結合する抗ＣＤ８抗体が提供される。
一部の実施形態では、本明細書で提供されるＣＤ８結合性作用剤は、ヒトＣＤ８に特異的に結合するラクダ科ＶＨＨドメインを含む。一部の実施形態では、本明細書で提供されるＣＤ８結合性作用剤は、ヒトＣＤ８に特異的に結合するヒト化ＶＨＨドメインを含む。
一部の実施形態では、配列番号１、配列番号２、配列番号３、または配列番号４に示されているアミノ酸配列の少なくとも１つ、２つ、または３つのＣＤＲを含むＶＨＨドメインを含むＣＤ８結合性作用剤が提供される。
一部の実施形態では、（ａ）配列番号６または配列番号７に示されているアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；（ｂ）配列番号８または配列番号９に示されているアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；および（ｃ）配列番号１０、配列番号１１、または配列番号１２に示されているアミノ酸配列を含むＣＤＲ３から選択される少なくとも１つ、２つ、または３つのＣＤＲを含むＶＨＨドメインを含むＣＤ８結合性作用剤が提供される。
一部の実施形態では、配列番号６または配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；配列番号８または配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；および配列番号１０、配列番号１１、または配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含むＶＨＨドメインを含むＣＤ８結合性作用剤が提供される。
一部の実施形態では、配列番号１のアミノ酸配列のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含むＶＨＨドメインを含むＣＤ８結合性作用剤が提供される。
一部の実施形態では、配列番号２のアミノ酸配列のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含むＶＨＨドメインを含むＣＤ８結合性作用剤が提供される。
一部の実施形態では、配列番号３のアミノ酸配列のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含むＶＨＨドメインを含むＣＤ８結合性作用剤が提供される。
一部の実施形態では、配列番号４のアミノ酸配列のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含むＶＨＨドメインを含むＣＤ８結合性作用剤が提供される。
一部の実施形態では、配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号１０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含むＶＨＨドメインを含むＣＤ８結合性作用剤が提供される。
一部の実施形態では、配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含むＶＨＨドメインを含むＣＤ８結合性作用剤が提供される。
一部の実施形態では、配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含むＶＨＨドメインを含むＣＤ８結合性作用剤が提供される。
一部の実施形態では、配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含むＶＨＨドメインを含むＣＤ８結合性作用剤が提供される。
例示的なＣＤＲ配列は、下記の図１および表１に示されている。
Figure 2022547483000003
一部の実施形態では、ＣＤ８結合性作用剤は、Ｌ４９Ａを含むＶＨＨドメインを含み、この場合、付番は、Ｋａｂａｔ付番による。Ｌ４９Ａ突然変異の例は、図１の配列番号２～４に示されている。一部の実施形態では、Ｌ４９Ａ突然変異は、プロテインＡカラムを使用したＣＤ８結合性作用剤の精製を可能にする。一部の実施形態では、Ｌ４９Ａ突然変異は、ＣＤ８結合性作用剤の収率を、少なくとも約２倍、５倍、１０倍、またはそれよりも大きく増加させる。
一部の実施形態では、ＣＤ８結合性作用剤は、ＶＨＨドメインの免疫原性を低減させる、例えば、ＣＤ８結合性作用剤を受ける対象の既存抗ＶＨＨ抗体に対するＣＤ８結合性作用剤の結合を低減させる１つまたは複数のフレームワーク突然変異を含むＶＨＨドメインを含む。一部の実施形態では、ＣＤ８結合性作用剤は、Ｖ８９Ｔ置換、Ｔ１１０Ｑ置換、Ｓ１１２Ｑ置換、およびＡ１１４付加からなる群から選択される１つまたは複数のアミノ酸修飾を含むＶＨＨドメインを含み、この場合、付番はＫａｂａｔ付番による。一部の実施形態では、ＶＨＨドメインは、Ｖ８９Ｔ置換、Ｔ１１０Ｑ置換、Ｓ１１２Ｑ置換、およびＡ１１４付加を含み、この場合、付番はＫａｂａｔ付番による。こうした突然変異の例は、図１の配列番号２～４に示されている。一部の実施形態では、フレームワーク突然変異は、ＣＤ８結合性作用剤の免疫原性を、少なくとも約２分の１に、１０分の１に、１００分の１に、１０００分の１に、またはそれよりも大きく低減させる。
一部の実施形態では、ＣＤ８結合性作用剤は、配列番号１のアミノ酸配列を有するＶＨＨドメインを含む。一部の実施形態では、ＣＤ８結合性作用剤は、配列番号２のアミノ酸配列を有するＶＨＨドメインを含む。一部の実施形態では、ＣＤ８結合性作用剤は、配列番号３のアミノ酸配列を有するＶＨＨドメインを含む。一部の実施形態では、ＣＤ８結合性作用剤は、配列番号４のアミノ酸配列を有するＶＨＨドメインを含む。
例示的なＶＨＨ配列は、図１に示されている。
一部の実施形態では、本明細書で提供されるＣＤ８結合性作用剤は、腎臓で除去される。一部の実施形態では、本明細書で提供されるＣＤ８結合性作用剤は、腎臓系により除去される（大部分が除去されるなど）。
一部の実施形態では、抗ＣＤ８抗体が提供される。一部の実施形態では、本明細書に記載のＶＨＨドメインのいずれか１つを含む抗ＣＤ８重鎖抗体が提供される。一部の実施形態では、抗ＣＤ８重鎖抗体は、ラクダ科またはヒトＦｃ領域などのＦｃ領域を含む。一部の実施形態では、抗ＣＤ８重鎖抗体は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、もしくはＩｇＧ４、またはそれらの変異体のＦｃを含む。一部の実施形態では、本明細書で提供される抗ＣＤ８抗体は、すべてではないが一部のエフェクター機能を有するＦｃ変異体を含み、それにより、本明細書で提供される抗ＣＤ８抗体は、抗体のｉｎ ｖｉｖｏ半減期は重要であるが、ある特定のエフェクター機能（補体およびＡＤＣＣなど）は不要であるかまたは有害である応用の望ましい候補になる。
一部の実施形態では、抗ＣＤ８単一ドメイン抗体または抗ＣＤ８ＶＨＨなどの抗ＣＤ８抗体断片が提供される。
一部の実施形態では、ＣＤ８結合性作用剤は、Ｆｃ領域を含まない。
一部の実施形態では、本明細書で提供されるＣＤ８結合性作用剤は、１つまたは複数の非タンパク質性部分を含む。抗体の誘導体化に好適な部分としては、これらに限定されないが、水溶性ポリマーが挙げられる。水溶性ポリマーの非限定的な例としては、これらに限定されないが、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、エチレングリコール／プロピレングリコールのコポリマー、カルボキシメチルセルロース、デキストラン、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポリ－１，３－ジオキソラン、ポリ－１，３，６－トリオキサン、エチレン／無水マレイン酸コポリマー、ポリアミノ酸（ホモポリマーまたはランダムコポリマーのいずれでもよい）、およびデキストランまたはポリ（ｎ－ビニルピロリドン）ポリエチレングリコール、プロプロピレングリコールホモポリマー、ポリプロピレン（prolypropylene）オキシド／エチレンオキシドコポリマー、ポリオキシエチル化ポリオール（例えば、グリセロール）、ポリビニルアルコール、およびそれらの混合物が挙げられる。ポリエチレングリコールプロピオンアルデヒドは、水中で安定であるため、製造に有利であり得る。ポリマーは、任意の分子量であってもよく、分枝または非分枝であってもよい。抗体に付着させるポリマーの数は様々であってもよく、１つよりも多くのポリマーが付着している場合、それらは同じ分子であってもよく、または異なる分子であってもよい。一般に、誘導体化に使用されるポリマーの数および／またはタイプは、これらに限定されないが、向上させようとする抗体の特定の特性または機能、抗体誘導体が規定の条件下で療法に使用されることになるか否かを含む考慮事項に基づいて決定することができる。
一部の実施形態では、ＣＤ８結合性作用剤は、作用剤の血清半減期を増加させる非タンパク質性部分を含まない。一部の実施形態では、ＣＤ８結合性作用剤は、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）などの可溶性ポリマーを含まない。
ｂ．変異体および修飾
一部の実施形態では、本明細書に記載のＣＤ８結合性作用剤（例えば、抗ＣＤ８抗体）のアミノ酸配列変異体が企図される。例えば、ＣＤ８結合性作用剤の結合親和性および／または他の生物学的特性を向上させることが望ましい場合がある。ＣＤ８結合性作用剤のアミノ酸配列変異体は、タンパク質をコードするヌクレオチド配列に適切な修飾を導入することにより、またはペプチド合成により調製することができる。そのような修飾としては、例えば、ＣＤ８結合性作用剤のアミノ酸配列（１つもしくは複数のＣＤＲおよび／もしくはフレームワーク配列またはＶＨＨドメインなどにおける）内の残基の欠失および／または挿入および／または置換が挙げられる。最終構築物が所望の特質（例えば、本明細書の他所に記載のような）を有する限り、欠失、挿入、および置換の任意の組合せをなして最終構築物に到達することができる。
「ＣＤ８結合性作用剤変異体」は、ポリペプチドを意味し、例えば、本明細書に記載の所望の特質を有するＣＤ８結合性作用剤は、本明細書に記載のＣＤ８結合性作用剤のＶＨＨと少なくとも約８０％アミノ酸配列同一性を有するＶＨＨを含む。そのようなＣＤ８結合性作用剤変異体としては、例えば、１つまたは複数のアミノ酸残基が、ＶＨＨドメインに付加されているかまたはＶＨＨドメインから欠失されている作用剤が挙げられる。通常は、ＣＤ８結合性作用剤変異体は、本明細書に記載のＣＤ８結合性作用剤と、少なくとも約８０％アミノ酸配列同一性、その代わりに少なくとも約８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％アミノ酸配列同一性のいずれかを有することになる。任意選択で、変異体ＣＤ８結合性作用剤は、本明細書で提供されるＣＤ８結合性作用剤配列と比較して、１つ以下の保存的アミノ酸置換、その代わりに本明細書で提供されるＣＤ８結合性作用剤配列と比較して、約２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個以下の保存的アミノ酸置換のいずれかを有することになる。
一部の実施形態では、１つまたは複数のアミノ酸置換、挿入、および／または欠失を有するＣＤ８結合性作用剤変異体が提供される。置換突然変異誘発の目的となる部位としては、ＨＶＲおよびＦＲが挙げられる。保存的置換は、表２の「保存的置換」という見出し下に示されている。より実質的な変更は、表２の「例示的な置換」の見出し下に提供されており、アミノ酸側鎖クラスに関して下記でさらに説明されている通りである。アミノ酸置換を目的の抗体に導入し、産物を、所望の活性、例えば、抗原結合の保持／向上、免疫原性の減少、またはＡＤＣＣもしくはＣＤＣの向上についてスクリーニングすることができる。
Figure 2022547483000004
ＣＤ８結合性作用剤変異体の生物学的特性の実質的な修飾は、（ａ）置換領域のポリペプチド骨格の構造の、例えばシートもしくはヘリックスコンフォメーションとしての維持、（ｂ）標的部位における分子の電荷もしくは疎水性の維持、または（ｃ）側鎖のかさの維持に対する効果が著しく異なる置換を選択することにより達成することができる。アミノ酸は、それらの側鎖の特性の類似性に従ってグループ化することができる（A. L. Lehninger, Biochemistry second ed., pp.73-75, Worth Publishers, New York (1975)内）：
（１）無極性：Ａｌａ（Ａ）、Ｖａｌ（Ｖ）、Ｌｅｕ（Ｌ）、Ｉｌｅ（Ｉ）、Ｐｒｏ（Ｐ）、Ｐｈｅ（Ｆ）、Ｔｒｐ（Ｗ）、Ｍｅｔ（Ｍ）
（２）非荷電極性：Ｇｌｙ（Ｇ）、Ｓｅｒ（Ｓ）、Ｔｈｒ（Ｔ）、Ｃｙｓ（Ｃ）、Ｔｙｒ（Ｙ）、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｇｌｎ（Ｑ）
（３）酸性：Ａｓｐ（Ｄ）、Ｇｌｕ（Ｅ）
（４）塩基性：Ｌｙｓ（Ｋ）、Ａｒｇ（Ｒ）、Ｈｉｓ（Ｈ）
その代わりに、天然に存在する残基を、一般的な側鎖特性に基づいてグループ化することができる。
（１）疎水性：ノルロイシン、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ；
（２）中性親水性：Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ；
（３）酸性：Ａｓｐ、Ｇｌｕ；
（４）塩基性：Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ；
（５）鎖の向きに影響を及ぼす残基：Ｇｌｙ、Ｐｒｏ；
（б）芳香族：Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ。
非保存的置換では、こうしたクラスの１つのメンバーを別のクラスに交換することを伴うことになる。
一部の実施形態では、本明細書で提供されるＣＤ８結合性作用剤は、配列番号１のアミノ酸配列と、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨＨドメインを含む。一部の実施形態では、本明細書で提供されるＣＤ８結合性作用剤は、配列番号２のアミノ酸配列と、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨＨドメインを含む。一部の実施形態では、本明細書で提供されるＣＤ８結合性作用剤は、配列番号３のアミノ酸配列と、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨＨドメインを含む。一部の実施形態では、本明細書で提供されるＣＤ８結合性作用剤は、配列番号４のアミノ酸配列と、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨＨドメインを含む。一部の実施形態では、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一性を有するＶＨＨ配列は、参照配列と比べて置換（例えば、保存的置換）、挿入、または欠失を含有するが、その配列を含むＣＤ８結合性作用剤は、ＣＤ８（例えば、ヒトＣＤ８、アカゲザルＣＤ８、および／またはカニクイザルＣＤ８）に結合する能力を保持する。一部の実施形態では、配列番号１、配列番号２、配列番号３、または配列番号４において、合計で１～１０個のアミノ酸が、置換、挿入、および／または欠失されている。一部の実施形態では、置換、挿入、または欠失は、ＣＤＲの外側の領域（つまり、ＦＲ）に生じる。一部の実施形態では、ＣＤ８結合性作用剤は、その配列の翻訳後修飾を含む、配列番号１、配列番号２、配列番号３、または配列番号４に示されているＶＨＨ配列を含む。
置換変異体の１つのタイプは、親抗体（例えば、ラマＶＨＨまたはヒト化ＶＨＨ）の１つまたは複数の超可変領域残基を置換することを含む。一般に、さらなる研究のために選択される得られた変異体は、親抗体と比べてある特定の生物学的特性（例えば、親和性の増加、免疫原性の低減）が修飾（例えば、向上）されることになり、および／または親抗体のある特定の生物学的特性を実質的に保持することになる。例示的な置換変異体は、親和性成熟抗体であり、親和性成熟抗体は、例えば、本明細書に記載のものなど、ファージディスプレイベースの親和性成熟技法を使用して、都合よく生成することができる。手短に言えば、１つまたは複数のＨＶＲ残基を突然変異させ、変異体抗体をファージに提示させ、特定の生物学的活性（結合親和性など）についてスクリーニングする。
ＨＶＲに変更（例えば、置換）をなして、例えば、抗体親和性を向上させることができる。そのような変更は、ＨＶＲ「ホットスポット」、つまり、体細胞成熟プロセス中に高頻度で突然変異を起こすコドンによりコードされる残基（例えば、Chowdhury, Methods Mol. Biol. 207:179-196 (2008)を参照）、および／または、ＳＤＲ（ａ－ＣＤＲ）に対して行うことができ、得られた変異体ＶＨＨは結合親和性について試験される。二次ライブラリーから構築および再選択することによる親和性成熟は、例えば、Hoogenboom et al. in Methods in Molecular Biology 178:1-37 (O'Brien et al, ed., Human Press, Totowa, NJ, (2001)）に記載されている。親和性成熟の一部の実施形態では、様々な方法（例えば、エラープローンＰＣＲ、鎖シャッフリング、またはオリゴヌクレオチド指定突然変異誘発）のいずれかにより、成熟のために選択された可変性遺伝子に多様性を導入する。次いで、二次ライブラリーを作出する。次いで、ライブラリーをスクリーニングして、所望の親和性を有する抗体変異体を特定する。多様性を導入するための別の方法は、幾つかのＨＶＲ残基（例えば、一度に４～６個の残基）がランダム化されるＨＶＲ指定手法を含む。抗原結合に関与するＨＶＲ残基は、例えば、アラニンスキャニング突然変異誘発またはモデリングを使用して、特異的に特定することができる。特にＣＤＲ３が標的とされることが多い。
一部の実施形態では、置換、挿入、または欠失は、そのような変更が、ＣＤ８に対するＣＤ８結合性作用剤の能力を実質的に低減させない限り、１つまたは複数のＣＤＲ内に生じてもよい。例えば、結合親和性を実質的に低減させない保存的変更（例えば、本明細書で提供されるような保存的置換）が、ＣＤＲになされてもよい。そのような変更は、ＣＤＲの「ホットスポット」またはＳＤＲの外側にあってもよい。上記で提供された変異体ＶＨＨ配列の一部の実施形態では、各ＨＶＲは、変更されていないか、または１つ、２つ、もしくは３つ以下のアミノ酸置換を含むかのいずれかである。
突然変異誘発の標的にすることができる抗体の残基または領域を特定するための有用な方法は、Cunningham and Wells (1989) Science, 244:1081-1085に記載のように「アラニンスキャニング突然変異誘発」と呼ばれる。この方法では、標的残基のうちの１つの残基または標的残基の群（例えば、Ａｒｇ、Ａｓｐ、Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、およびＧｌｕなどの荷電残基）を特定し、中性または負荷電アミノ酸（例えば、アラニンまたはポリアラニン）に置き換えて、抗体と抗原との相互作用が影響を受けるか否かを決定する。初期置換に対して機能的感受性を示すアミノ酸位置にさらなる置換を導入してもよい。その代わりにまたはそれに加えて、抗原－抗体複合体の結晶構造から、抗体と抗原との接触点を特定する。そのような接触残基および隣接残基を、置換の候補として標的としてもよくまたは排除してもよい。変異体をスクリーニングして、所望の特性を含有するか否かを決定することができる。
アミノ酸配列挿入としては、１つの残基から１００個またはそれよりも多くの残基を含有するポリペプチドまでの範囲の長さのアミノおよび／またはカルボキシル末端融合、ならびに単一のまたは複数のアミノ酸残基の配列内挿入が挙げられる。末端挿入の例としては、Ｎ末端メチオニル残基を有する抗体が挙げられる。抗体分子の他の挿入変異体としては、酵素（例えば、ＡＤＥＰＴの場合）または抗体の血清半減期を増加させるポリペプチドを、抗体のＮ末端またはＣ末端に融合させることが挙げられる。
ｃ．検出可能な標識を含むイムノコンジュゲート
一部の実施形態では、ＣＤ８結合性作用剤は、検出可能な標識にコンジュゲートされた本明細書に記載の抗ＣＤ８抗体（例えば、抗ＣＤ８ ＶＨＨ）のいずれか１つを含むイムノコンジュゲートである。「標識」または「検出可能な標識」という用語は、細胞、組織、および器官などにある標的分子（ＣＤ８など）の位置および／または量の診断、検出、または視覚化／画像化に有用な原子、分子、または化合物を指す。本明細書の実施形態に準拠して使用することができる検出可能な標識としては、これらに限定されないが、放射性物質（例えば、放射性同位元素、放射性核種、放射性標識、または放射性トレーサー）、色素（例えば、インドシアニングリーン（ＩＣＧ））、コントラスト剤、蛍光化合物または分子、生物発光化合物または分子、酵素、および造影剤（例えば、常磁性イオン）が挙げられる。加えて、一部のナノ粒子、例えば、量子ドットおよび金属ナノ粒子は、検出剤としての使用に好適であり得る。
本明細書の実施形態に準拠して検出可能な標識として使用することができる放射性物質としては、これらに限定されないが、１８Ｆ、３２Ｐ、３３Ｐ、４５Ｔｉ、４７Ｓｃ、５２Ｆｅ、５９Ｆｅ、６２Ｃｕ、６４Ｃｕ、６７Ｃｕ、６７Ｇａ、６８Ｇａ、７５Ｓｃ、７７Ａｓ、８６Ｙ、８９Ｓｒ、８９Ｚｒ、９０Ｙ、９０Ｎｂ、９４Ｔｃ、９９Ｔｃ、９９ｍＴｃ、９９Ｍｏ、１０５Ｐｄ、１０５Ｒｈ、１１１Ａｇ、１１１Ｉｎ、１２３Ｉ、１２４Ｉ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、１４２Ｐｒ、１４３Ｐｒ、１４９Ｐｍ、１５３Ｓｍ、１５４～１５８Ｇｄ、１６１Ｔｂ、１６６Ｄｙ、１６９Ｅｒ、１７５Ｌｕ、１７７Ｌｕ、１８６Ｒｅ、１８８Ｒｅ、１８９Ｒｅ、１９４Ｉｒ、１９８Ａｕ、１９９Ａｕ、２１１Ａｔ、２１１Ｐｂ、２１２Ｂｉ、２１２Ｐｂ、２１３Ｂｉ、２２３Ｒａ、および２２５Ａｃが挙げられる。検出可能な標識として使用することができる例示的な常磁性イオン物質としては、これらに限定されないが、遷移金属およびランタニド金属（例えば、原子番号が６～９、２１～２９、４２～４４、または５７～７１の金属）のイオンが挙げられる。そうした金属としては、Ｃｒ、Ｖ、Ｍｎ、Ｆｅ、Ｃｏ、Ｎｉ、Ｃｕ、Ｌａ、Ｃｅ、Ｐｒ、Ｎｄ、Ｐｍ、Ｓｍ、Ｅｕ、Ｇｄ、Ｔｂ、Ｄｙ、Ｈｏ、Ｅｒ、Ｔｍ、Ｙｂ、およびＬｕのイオンが挙げられる。
検出可能な標識が放射性金属または常磁性イオンである場合、一部の実施形態では、標識は、こうしたイオンとの結合のために１つまたは複数のキレート基が長い尾部に付着している、長い尾部を有する試薬と反応させてもよい。長い尾部は、ポリリジン、ポリサッカライド、またはキレート基（つまり、イオンとの結合のための）が結合されていてもよいペンダント基を有する他の誘導体化鎖または誘導体化可能な鎖などのポリマーであってもよい。本明細書の実施形態に従って使用することができるキレート基の例としては、これらに限定されないが、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、ジエチレントリアミン五酢酸（ＤＴＰＡ）、ＤＯＴＡ、ＮＯＩＡ、ＮＯＧＡＤＡ、ＮＥＴＡ、ＮＯＤＡ、ＮＯＴＡ、デフェロキサミン（ＤｆＯ）、ＤＦＯ＊（つまり、ＤＦＯ－ｓｔａｒ）、ＤＦＯ－スクアラミド、ポルフィリン、ポリアミン、クラウンエーテル、ビス－チオセミカルバゾン、ポリオキシム、および類似の基が挙げられる。キレートは、免疫反応性の喪失を最小限に抑え、凝集および／または内部架橋を最小限に抑えつつ分子との結合の形成を可能にする基により、本明細書で提供される抗ＣＤ８抗体（例えば、抗ＣＤ８ ＶＨＨ）に連結することができる。非放射性金属（例えば、マンガン、鉄、およびガドリニウム）と錯体化する場合、同じキレートを本明細書に記載のＣＤ８結合性作用剤と一緒に使用すると、磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）に有用である。ＮＯＩＡ、ＮＯＧＡＤＡ、ＤＯＴＡ、ＮＯＤＡ、ＮＯＴＡ、およびＴＥＴＡなどの大環状キレートは、これらに限定されないが、例えば、ガリウム、イットリウム、および銅の放射性核種を含む、様々な金属および放射性金属と共に使用される。放射性ヨウ素処理用のラジウム－２２３（ＲＡＩＴ）など、放射性核種と安定して結合するために重要な、大環状ポリエーテルなどの他の環状型キレートを使用してもよい。一部の実施形態では、陽電子放出断層撮影（ＰＥＴ）分析で使用するために、キレート部分を使用して、アルミニウム－１８Ｆ錯体などのＰＥＴ画像化剤を、本明細書で提供されるＣＤ８結合性作用剤に付着させてもよい。アルミニウム－１８Ｆ錯体は、式（Ｉ）の化合物などの拘束性錯化剤（restrained complexing agent）（ＲＥＳＣＡ）を介してＶＨＨドメインにコンジュゲートすることができる。
Figure 2022547483000005
 例えば、米国特許出願公開第２０１８０２７３４４１号明細書およびCleeren F. et al. Nature Protocols 13, 2330-2347 (2018)を参照されたい。
一部の実施形態では、１８Ｆなどの放射性核種標識にコンジュゲートされた本明細書に記載の抗ＣＤ８ ＶＨＨドメインのいずれか１つを含むＣＤ８結合性作用剤が提供される。一部の実施形態では、ＶＨＨドメインは、キレート部分を介して標識にコンジュゲートされている。一部の実施形態では、キレート部分は、リジン残基を介してＶＨＨドメインに共有結合で連結されている。一部の実施形態では、放射性核種標識は、金属錯体に含まれる。一部の実施形態では、放射性核種標識は、金属と錯体を形成し、錯体は、キレート部分によりキレートされている。一部の実施形態では、ＣＤ８結合性作用剤は、１８Ｆ標識およびアルミニウムを含む錯体をキレートするキレート部分にコンジュゲートされた抗ＣＤ８ ＶＨＨドメインを含む。一部の実施形態では、キレート部分は、式（Ｉ）の化合物である。
一部の実施形態では、式（Ｉ）の化合物を介して［１８Ｆ］－フッ化アルミニウム錯体にコンジュゲートされた本明細書に記載の抗ＣＤ８ ＶＨＨドメインのいずれか１つを含むＣＤ８結合性作用剤が提供される。
一部の実施形態では、式（Ｉ）の化合物を介して［１８Ｆ］－フッ化アルミニウム錯体にコンジュゲートされたＶＨＨドメインを含むＣＤ８結合性作用剤であって、ＶＨＨドメインは、配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む、ＣＤ８結合性作用剤が提供される。一部の実施形態では、ＶＨＨドメインは、配列番号３のアミノ酸配列を含む。
一部の実施形態では、式（Ｉ）の化合物を介して［１８Ｆ］－フッ化アルミニウム錯体にコンジュゲートされたＶＨＨドメインを含むＣＤ８結合性作用剤であって、ＶＨＨドメインは、配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む、ＣＤ８結合性作用剤が提供される。一部の実施形態では、ＶＨＨドメインは、配列番号４のアミノ酸配列を含む。
本明細書の方法および組成物の実施形態に準拠して検出可能な標識として使用することができる例示的なコントラスト剤としては、これらに限定されないが、以下のものが挙げられる：バリウム、ジアトリゾエート、エチオダイズド油（ethiodized oil）、クエン酸ガリウム、イオカルミン酸、イオセタム酸、ヨーダミド、ヨージパミド、ヨードキサム酸、ヨーグラミド、イオヘキシル、イオパミドール、ヨーパン酸、イオプロセミン酸、イオセファム酸、イオセル酸、イオスラミドメグルミン、イオセメチン酸（iosemetic acid）、ヨータスル、ヨーテトル酸、ヨータラム酸、ヨートロキス酸、ヨーキサグル酸、イオキソトリゾ酸、イポデート、メグルミン、メトリザミド、メトリゾエート（ｍｅｔｒｉｚｏａｔｅ）、プロピリオドン、塩化タリウム、またはそれらの組合せ。
本明細書の方法および組成物に準拠して検出可能な標識として使用することができる生物発光および蛍光化合物または分子および色素としては、これらに限定されないが、以下のものが挙げられる：例えば、フルオレセイン、フルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）、ＯＲＥＧＯＮ ＧＲＥＥＮ（商標）、ローダミン、テキサスレッド、ＩＲＤｙｅ８００ＣＷ、ＡＬＥＸＡ ＦＬＵＯＲ（登録商標）６４７、テトラローダミンイソチオシネート（ＴＲＩＴＣ）、Ｃｙ３、およびＣｙ５など、蛍光マーカー（例えば、緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）およびフィコエリトリンなど）、腫瘍関連プロテアーゼにより活性化される自己消光性蛍光化合物、酵素（例えば、ルシフェラーゼ、西洋ワサビペルオキシダーゼ、およびアルカリホスファターゼなど）、ナノ粒子、ビオチン、ジゴキシゲニン、またはそれらの組合せ。
本明細書の方法および組成物に準拠して検出可能な標識として使用することができる酵素としては、これらに限定されないが、例えば、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、酸性ホスファターゼ、グルコースオキシダーゼ、ベータ－ガラクトシダーゼ、ベータ－グルコロニダーゼ、またはベータ－ラクタマーゼが挙げられる。そのような酵素を、色原体、蛍光発生化合物、または発光化合物と組み合わせて使用して、検出可能なシグナルを発生させることができる。
一部の実施形態では、本明細書で提供されるＣＤ８結合性作用剤は、ナノ粒子、つまり、そのサイズがナノメートルで測定される微視的粒子にコンジュゲートされている。例えば、ナノ粒子は、少なくとも１つの寸法が約１００ｎｍ未満の粒子である。ナノ粒子は、十分に小型であり、可視光を吸収するのではなく散乱させるため、検出可能な物質として使用することができる。例えば、金ナノ粒子は、著しい可視光消衰特性を有し、溶液中では深紅から黒色に見える。結果として、ナノ粒子にコンジュゲートされた本明細書で提供されるＣＤ８結合性作用剤を、対象におけるＴ細胞のｉｎ ｖｉｖｏ画像化に使用することができる。このサイズ範囲の下限では、ナノ粒子はクラスターと呼ばれることが多い。金属、誘電体、半導体ナノ粒子、ならびにハイブリッド構造（コア－シェルナノ粒子など）が形成されている。ナノスフェア、ナノロッド、およびナノカップは、成長した形状のほんの一部である。半導体量子ドットおよびナノ結晶は、追加のタイプのナノ粒子の例である。そのようなナノスケール粒子は、本明細書で提供される抗ＣＤ８抗体（例えば、抗ＣＤ８ ＶＨＨ）にコンジュゲートすると、本明細書に記載のようにＴ細胞をｉｎ ｖｉｖｏ検出するための画像化剤として使用することができる。
抗体および標識のコンジュゲートは、Ｎ－スクシンイミジル－３－（２－ピリジルジチオ）プロピオネート（ＳＰＤＰ）、スクシンイミジル－４－（Ｎ－マレイミドメチル）シクロヘキサン－１－カルボキシレート（ＳＭＣＣ）、イミノチオラン（ＩＴ）、イミドエステルの二官能性誘導体（ジメチルアジピミデートＨＣｌなど）、活性エステル（スベリン酸ジスクシンイミジルなど）、アルデヒド（グルタルアルデヒドなど）、ビス－アジド化合物（ビス（ｐ－アジドベンゾイル）ヘキサンジアミンなど）、ビス－ジアゾニウム誘導体（ビス－（ｐ－ジアゾニウムベンゾイル）－エチレンジアミンなど）、ジイソシアネート（トルエン２，６－ジイソシアネートなど）、およびビス－活性フッ素化合物（１，５－ジフルオロ－２，４－ジニトロベンゼンなど）などの、様々な二官能性タンパク質カップリング剤を使用して製作することができる。例えば、リシン免疫毒素は、Vitetta et al, Science 238:1098 (1987)に記載のように調製することができる。炭素１４標識１－イソチオシアナトベンジル－３－メチルジエチレントリアミン五酢酸（ＭＸ－ＤＴＰＡ）は、放射性核種を抗体にコンジュゲートするための例示的なキレート剤である。国際公開第９４／１１０２６号パンフレットを参照されたい。リンカーは、細胞での細胞傷害薬の放出を促進する「切断可能なリンカー」であってもよい。例えば、酸不安定リンカー、ペプチダーゼ感受性リンカー、光不安定リンカー、ジメチルリンカー、またはジスルフィド含有リンカー（Chari et al., Cancer Res. 52:127-131 (1992)；米国特許第５，２０８，０２０号明細書）を使用することができる。本明細書のイムノコンジュゲートとしては、これらに限定されないが、ＢＭＰＳ、ＥＭＣＳ、ＧＭＢＳ、ＨＢＶＳ、ＬＣ－ＳＭＣＣ、ＭＢＳ、ＭＰＢＨ、ＳＢＡＰ、ＳＩＡ、ＳＩＡＢ、ＳＭＣＣ、ＳＭＰＢ、ＳＭＰＨ、スルホ－ＥＭＣＳ、スルホ－ＧＭＢＳ、スルホ－ＫＭＵＳ、スルホ－ＭＢＳ、スルホ－ＳＩＡＢ、スルホ－ＳＭＣＣ、およびスルホ－ＳＭＰＢ、ならびにＳＶＳＢ（スクシンイミジル－（４－ビニルスルホン）ベンゾエート）を含むがこれらに限定されない架橋剤試薬を用いて調製されるコンジュゲートが挙げられ、これらは市販されている（例えば、Ｐｉｅｒｃｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．、ロックフォード、イリノイ州、米国から）。一部の実施形態では、本明細書で提供されるＣＤ８結合性作用剤は、デスフェリオキサミン化合物であるリンカーを含む（例えば、Vugts et al. (2017) Eur J Nucl Med Mol Imaging. 44:286-295およびRudd et al. (2016) Chem Commun. 52: 11859-12000を参照）。一部の実施形態では、本明細書で提供されるＣＤ８結合性作用剤は、Ｎ－スクシニル－デスフェリオキサミン（ＤＦＯ）リンカーを含む。一部の実施形態では、本明細書で提供されるＣＤ８結合性作用剤は、デスフェリオキサミン化合物（例えば、Ｎ－スクシニル－デスフェリオキサミン）を介して放射性核種（例えば、これらに限定されないが、８９Ｚｒ、１２４Ｉ、または１８Ｆを含む）にコンジュゲートされた抗ＣＤ８ ＶＨＨを含む。一部の実施形態では、標識は、例えば、酵素、例えばソルターゼまたはトランスグルタミナーゼを使用して、部位特異的な様式で抗ＣＤ８ ＶＨＨドメインにコンジュゲートされている。
一部の実施形態では、本明細書で提供されるＣＤ８結合性作用剤は、検出可能な標識に直接カップリングされた（つまり、リンカーを用いていない）抗ＣＤ８ ＶＨＨドメインを含む。
ＣＤ８結合性作用剤を産生するための方法
また、本明細書では、抗ＣＤ８抗体（例えば、抗ＣＤ８ ＶＨＨ）を産生するための方法、および標識ＣＤ８結合性作用剤を産生するための方法を含む、本明細書に記載のＣＤ８結合性作用剤を産生するための方法が提供される。
本明細書に記載の抗ＣＤ８抗体（例えば、抗ＣＤ８ ＶＨＨ）は、例えば、米国特許第６，０１５，６９５号明細書に記載の通りの組換え法および組成物を使用して産生することができる。一部の実施形態では、本明細書に記載の抗ＣＤ８抗体（例えば、抗ＣＤ８ ＶＨＨ）をコードする単離された核酸が提供される。そのような核酸は、抗ＣＤ８ ＶＨＨドメインを含むアミノ酸配列をコードしてもよい。一部の実施形態では、抗ＣＤ８ ＶＨＨドメインをコードする単離された核酸であって、配列番号１、配列番号２、配列番号３、または配列番号４をコードする核酸配列と、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％配列同一性を有する配列を含む核酸が提供される。
一部の実施形態では、本明細書に記載の核酸を含むベクター（例えば、発現ベクター）が提供される。一部の実施形態では、そのような核酸またはベクターを含む宿主細胞が提供される。一部の実施形態では、宿主細胞は、真核生物、例えば、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、Ｅｘｐｉ２９３細胞、またはリンパ系細胞（例えば、Ｙ０、ＮＳ０、Ｓｐ２０細胞）である。一部の実施形態では、宿主細胞は、原核生物、例えば、大腸菌（E. coli）細胞である。一部の実施形態では、抗ＣＤ８抗体（例えば、抗ＣＤ８ ＶＨＨ）を製作するための方法であって、上記で提供の通りの抗体をコードする核酸を含む宿主細胞を、抗体の発現に好適な条件下で培養するステップ、および任意選択で宿主細胞（または宿主細胞培養培地）から抗体を回収するステップを含む方法が提供される。
標識ＣＤ８結合性作用剤を調製するための方法であって、キレート部分を、本明細書に記載の抗ＣＤ８抗体（例えば、抗ＣＤ８ ＶＨＨ）のいずれか１つにコンジュゲートして、抗ＣＤ８抗体およびキレート部分を含むコンジュゲートを提供するステップ、およびコンジュゲートを、１８Ｆを含むフッ化アルミニウム錯体と接触させて、標識ＣＤ８結合性作用剤を提供するステップを含み、キレート部分は、式（Ｉ）の化合物である、方法がさらに提供される。一部の実施形態では、キレート部分は、抗ＣＤ８抗体のリジン残基にコンジュゲートされている。一部の実施形態では、コンジュゲートを、１つまたは複数の抗酸化化合物の存在下でフッ化アルミニウム錯体と接触させる。一部の実施形態では、１つまたは複数の抗酸化化合物は、メチオニンおよび／またはＮ－アセチル－トリプトファンを含む。一部の実施形態では、コンジュゲートを、メチオニンおよびＮ－アセチル－トリプトファンの存在下でフッ化アルミニウム錯体と接触させる。一部の実施形態では、方法は、標識ＣＤ８結合性作用剤を、コンジュゲートおよびフッ化アルミニウムを含む反応混合物から脱塩カラムにより精製するステップを含む。一部の実施形態では、脱塩カラムは、ヒスチジン、メチオニン、Ｎ－アセチルトリプトファン、および／またはスクロースを含む緩衝液で平衡化される。一部の実施形態では、脱塩カラムは、ヒスチジン、メチオニン、Ｎ－アセチルトリプトファン、およびスクロースを含む緩衝液で平衡化される。
抗ＣＤ８抗体（例えば、抗ＣＤ８ ＶＨＨ）を組換え産生するために、例えば、上記の通りの抗体をコードする核酸を単離し、宿主細胞でのさらなるクローニングおよび／または発現用のベクターに挿入する。そのような核酸は、従来の手順を使用して（例えば、抗体の重鎖および軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合することが可能なオリゴヌクレオチドプローブを使用することにより）容易に単離および配列決定することができる。
抗体をコードするベクターのクローニングまたは発現に好適な宿主細胞としは、本明細書に記載の原核細胞または真核細胞が挙げられる。例えば、抗体は、特に、グリコシル化およびＦｃエフェクター機能が必要ではない場合、細菌で産生させることができる。細菌での抗体断片およびポリペプチドの発現については、例えば、米国特許第５，６４８，２３７号明細書、第５，７８９，１９９号明細書、および第５，８４０，５２３号明細書を参照されたい。（Charlton, Methods in Molecular Biology, Vol. 248 (B.K.C. Lo, ed., Humana Press, Totowa, NJ, 2003), pp. 245-254も参照されたい。この文献には、大腸菌（E. coli）での抗体断片の発現が記載されている。）。発現後、抗体を、細菌細胞ペーストから可溶性画分に単離することができ、さらに精製することができる。
原核生物に加えて、抗体をコードするベクターのクローニングまたは発現宿主としては、グリコシル化経路が「ヒト化」されており、部分的または完全にヒトグリコシル化パターンを有する抗体の産生をもたらす真菌または酵母菌株を含む、糸状菌または酵母などの真核微生物が好適である。Gerngross, Nat. Biotech. 22: 1409-1414 (2004)、およびLi et al., Nat. Biotech. 24: 210-215 (2006)を参照されたい。
また、グリコシル化抗体の発現に好適な宿主細胞は、多細胞生物（無脊椎動物および脊椎動物）に由来する。無脊椎動物細胞の例としては、植物細胞および昆虫細胞が挙げられる。特にスポドプテラ・フルギペルダ（Spodoptera frugiperda）細胞のトランスフェクションには、昆虫細胞と併せて使用することができる数多くのバキュロウイルス菌株が特定されている。
また、植物細胞培養物を宿主として使用することができる。例えば、米国特許第５，９５９，１７７号明細書、第６，０４０，４９８号明細書、第６，４２０，５４８号明細書、第７，１２５，９７８号明細書、および第６，４１７，４２９号明細書（トランスジェニック植物において抗体を産生するためのＰＬＡＮＨＢＯＤＩＥＳ（商標）技術が記載されている）を参照されたい。
また、脊椎動物細胞も宿主として使用することができる。例えば、懸濁中で成長するように適応されている哺乳動物細胞株が有用であり得る。有用な哺乳動物宿主細胞株の他の例は、ＳＶ４０（ＣＯＳ－７）により形質転換されたサル腎臓ＣＶ１株；ヒト胎児腎臓株（例えば、Graham et al, J. Gen Virol. 36:59 (1977)に記載の通りの２９３または２９３細胞；ベビーハムスター腎臓細胞（ＢＨＫ）；マウスセルトリ細胞（例えば、Mather, Biol. Reprod. 23:243-251 (1980)に記載の通りのＴＭ４細胞）；サル腎臓細胞（ＣＶ１）；アフリカミドリザル腎臓細胞（ＶＥＲＯ－７６）；ヒト子宮頸癌細胞（ＨＥＬＡ）；イヌ腎臓細胞（ＭＤＣＫ）；バッファローラット肝細胞（ＢＲＬ ３Ａ）；ヒト肺細胞（Ｗ１３８）；ヒト肝細胞（Ｈｅｐ Ｇ２）；マウス乳腺腫瘍（ＭＭＴ ０６０５６２）；例えば、Mather et al., Annals NY. Acad. Sci. 383:44-68 (1982)に記載の通りのＴＲＩ細胞；ＭＲＣ５細胞；およびＦＳ４細胞である。他の有用な哺乳動物宿主細胞株としては、ＤＨＦＲ－ ＣＨＯ細胞（Urlaub et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77:4216 (1980)）を含むチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞；ならびにＹ０、ＮＳ０、およびＳｐ２／０などの骨髄腫細胞株が挙げられる。抗体産生に好適なある特定の哺乳動物宿主細胞株の総説は、例えば、Yazaki and Wu, Methods in Molecular Biology, Vol. 248 (B.K.C. Lo, ed., Humana Press, Totowa, NJ), pp. 255-268 (2003)を参照されたい。
ＣＤ８結合性作用剤を使用して、ＣＤ８＋細胞を検出、位置特定、および／または画像化するための方法
本明細書では、本明細書に記載のＣＤ８結合性作用剤（例えば、抗ＣＤ８抗体、または抗ＣＤ８抗体および検出可能な標識を含むイムノコンジュゲート）のいずれか１つを使用して、ＣＤ８＋細胞を検出、位置特定、および／または画像化するための方法が提供される。一部の実施形態では、方法は、ｉｎ ｖｉｔｒｏまたはｅｘ ｖｉｖｏ試料中のＣＤ８の存在を検出するステップを含む。一部の実施形態では、方法は、ｉｎ ｖｉｔｒｏまたはｅｘ ｖｉｖｏ試料にＣＤ８結合性作用剤を添加するステップを含む。例えば、これらに限定されないが、ウエスタンブロット、免疫組織化学的分析、およびＥＬＩＳＡアッセイなどを含むそのような方法は、任意選択で、ＣＤ８結合性作用剤をｉｎ ｖｉｔｒｏまたはｅｘ ｖｉｖｏ試料に添加した後で洗浄を実施するステップを含む。一部の実施形態では、ＣＤ８結合性作用剤とＣＤ８との結合を検出するステップは、抗ＣＤ８ ＶＨＨドメインに付着している標識を検出することを含む。一部の実施形態では、方法は、抗ＣＤ８：ＣＤ８複合体に結合する本明細書の検出可能な標識を含む二次作用剤を適用するステップを含み、ＣＤ８結合性作用剤とＣＤ８との結合を検出するステップは、二次作用剤の検出可能な標識を検出することを含む。当業者であれば、二次作用剤は、ＣＤ８との結合をＣＤ８結合性作用剤と競合しないか、またはＣＤ８結合性作用剤との結合をＣＤ８と競合しないことを、容易に理解するだろう。
一部の実施形態では、方法は、ｉｎ ｖｉｖｏにてＣＤ８の存在を検出、位置特定、または画像化するステップを含む。一部の実施形態では、方法は、本明細書に記載のＣＤ８結合性作用剤を対象に投与するステップを含む。一部の実施形態では、対象はヒトである。一部の実施形態では、対象は、非ヒト哺乳動物、例えば、ラット、マウス、モルモット、ハムスター、ウサギ、イヌ、ネコ、ウシ、ウマ、ヤギ、ヒツジ、ロバ、ブタ、サル、類人猿、または他の非ヒト霊長類である。一部の実施形態では、非ヒト霊長類は、アカゲザルマカクまたはカニクイザルマカクである。一部の実施形態では、ＣＤ８結合性作用剤は、経口的に、局部的に、または局所的に対象に投与される。一部の実施形態では、ＣＤ８結合性作用剤は、輸注（静脈内輸注など）により対象に投与される。一部の実施形態では、輸注は腹腔内である。一部の実施形態では、ＣＤ８結合性作用剤は、静脈内注射または皮下注射などの注射により対象に投与される。一部の実施形態では、方法は、ＣＤ８結合性作用剤を対象に投与するステップ、および分析（つまり、ＣＤ８結合性作用剤とＣＤ８との結合の検出）のために対象から試料を取り出すステップを含む。
一部の実施形態では、ＣＤ８＋細胞の検出、位置特定、および／または画像化は、例えば、本明細書の他所でさらに詳細に記載されている技法を使用して、ｉｎ ｖｉｖｏで実施される。
一部の実施形態では、ｉｎ ｖｉｖｏでのＣＤ８の存在を検出するステップは、ＣＤ８（ＣＤ８＋細胞など）を器官または組織に対して位置特定することを含む。一部の実施形態では、方法は、対象の器官または組織、例えば、疾患組織におけるＣＤ８＋細胞の数を決定するステップを含む。一部の実施形態では、対象はがんを有し、ｉｎ ｖｉｖｏでのＣＤ８の存在を検出するステップは、ＣＤ８＋細胞を腫瘍に対して位置特定することを含む。一部の実施形態では、ＣＤ８＋細胞は、ＣＤ８＋Ｔ細胞、例えば、腫瘍浸潤性ＣＤ８＋Ｔ細胞である。一部の実施形態では、方法は、がんを有する対象の腫瘍におけるＣＤ８＋Ｔ細胞の数を決定するステップを含む。一部の実施形態では、方法は、がんを有する対象の腫瘍におけるＣＤ８＋Ｔ細胞の数を、複数の連続した時点で決定するステップを含む。
一部の実施形態では、ＣＤ８＋細胞は、ＣＤ８結合性作用剤の投与後、こうした値の間の任意の値または範囲を含む、約６時間、４時間、３時間、２時間、９０分、１時間、３０分以内、またはそれよりも短時間以内（例えば、約３０分～約６時間、約３０分～約４時間、または約２時間～４時間）など、約１日以内またはそれよりも短時間以内にｉｎ ｖｉｖｏで検出、位置特定、または画像化することができる。
一部の実施形態では、ＣＤ８＋細胞は、本明細書に記載の方法のいずれかを、線量測定ガイドラインを超えることなく、年間１、２、３、４、５回、またはそれよりも多くなど、１回または複数回使用して、ｉｎ ｖｉｖｏで検出、位置特定、または画像化することができる。一部の実施形態では、方法は、ＣＤ８結合性作用剤の第１の投与後の、約７日、６日、５日、４日、３日、２日、１日、またはそれよりも短時間後に繰り返すことができる。
一部の実施形態では、標識ＣＤ８結合性作用剤は、多重画像化のために、１つまたは複数の追加の画像化剤と併せて使用することができる。一部の実施形態では、１つまたは複数の追加の画像化剤は、標識ＣＤ８結合性作用剤を投与してから短期間内に、例えば、第１の画像化剤からの放射線が減衰したら直ぐに、例えば、約４８時間、３６時間、２４時間、１８時間、１２時間、８時間、６時間、４時間、２時間、１時間以内、またはそれより短時間以内のいずれか１つ以内に、対象に投与してもよい。一部の実施形態では、長寿命画像化試薬とは異なり、本明細書に記載の標識ＣＤ８結合性作用剤は、免疫応答の追加の特徴付けのために、ＣＤ８画像化と、標準治療ＰＥＴ画像化（例えば、ＦＤＧ－ＰＥＴ）または新規の分子画像化（例えば、ＣＤ４、グランザイムＢ、ＰＳＭＡ）との組合せを可能にする。一部の実施形態では、方法は、標識ＣＤ８結合性作用剤を使用して、画像化から約４８時間以内に別の画像化スキャン（例えば、ＦＤＧ－ＰＥＴなどのＰＥＴ、ＳＰＥＣＴ、またはシンチグラフィースキャン）を実施するステップをさらに含む。
一部の実施形態では、この方法を使用して、こうした値の間の任意の値または範囲を含む、少なくとも約３か月、６か月、１年、２年、３年、４年、５年、１０年、またはそれよりも長期などの、長期間にわたって、ｉｎ ｖｉｖｏにてＣＤ８＋細胞を検出、位置特定、または画像化することができる。本明細書に記載のＣＤ８結合性作用剤の免疫原性は低いため、ｉｎ ｖｉｖｏでの画像化およびＣＤ８検出のために、ＣＤ８結合性作用剤の繰り返しおよび長期使用が可能である。
一部の実施形態では、方法は、ｉｎ ｖｉｖｏ ＣＤ８検出の感度が、こうした値の間の任意の値または範囲を含む、約１ｎＭ、２ｎＭ、５ｎＭ、１０ｎＭ、１５ｎＭ、２０ｎＭ、２５ｎＭ、３０ｎＭ、４０ｎＭ、または５０ｎＭ（例えば、少なくとも約５０ｎＭ、例えば、約１ｎＭ～約５０ｎＭ、または約１ｎＭ～約３０ｎＭ）のＣＤ８である。一部の実施形態では、方法は、標識からのシグナルとｉｎ ｖｉｖｏでのＣＤ８レベルとの間に線形相関性を有する。一部の実施形態では、方法は、マウスＣＤ８＋腫瘍（例えば、ＴＡＬＬ－１）異種移植モデルにおいて、少なくとも約２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、２０、またはそれよりも高い腫瘍：血液比を有する。
ＣＤ８をｉｎ ｖｉｖｏ検出するための技法
一部の実施形態では、ＣＤ８結合性作用剤とＣＤ８（例えば、ＣＤ８＋細胞、例えば、ＣＤ８＋Ｔ細胞）とのｉｎ ｖｉｖｏでの結合は、免疫ＰＥＴ（陽電子放出断層撮影法）、ＳＰＥＣＴ（単一光子放射コンピュータ断層撮影法）、ＮＭＲ（核磁気共鳴法）としても知られているＭＲＩ（磁気共鳴画像法）、近赤外（ＮＩＲ）、またはセレンコフ発光画像法（Cerenkov luminescence imaging）（ＣＬＩ）の少なくとも１つにより検出される。一部の実施形態では、ＣＤ８結合性作用剤とＣＤ８との結合は、２つまたはそれよりも多くの形態の画像法により検出される。一部の実施形態では、ＣＤ８結合性作用剤とＣＤ８との結合は、近赤外（ＮＩＲ）および／またはＣＬＩにより検出される。一部の実施形態では、ＣＤ８結合性作用剤とＣＤ８との結合は、免疫ＳＰＥＣＴおよび／またはＮＩＲ蛍光により検出される。一部の実施形態では、ＣＤ８結合性作用剤とＣＤ８との結合は、免疫ＳＰＥＣＴおよびコンピュータ断層撮影法により検出される。
免疫ＰＥＴは、１８Ｆ、６４ＣＵ、６８Ｇａ、７６Ｂｒ、８６Ｙ、８９Ｚｒ、および１２４Ｉなどの陽電子放出放射性核種で標識された抗体（本明細書で提供される抗ＣＤ８抗体など）またはその断片の同時検出に基づく。抗ＣＤ８抗体を標識するための好適な放射性核種としては、これらに限定されないが、例えば、１８Ｆ、６４Ｃｕ、６８Ｇａ、７６Ｂｒ、８６Ｙ、８８Ｙ、８９Ｚｒ、９９ｍＴｃ、１１１Ｉｎ、１７７Ｌｕ、１２３Ｉ、１２４Ｉ、１２５Ｉ、および１３１Ｉが挙げられる。放出された陽電子は、初期陽電子エネルギーおよび周囲の密度に応じて、最大で数ミリメートルの距離を移動することになる（例えば、Guus et al. (2007) The Oncologist, 12: 1379-1389の表２を参照）。運動エネルギーを喪失した後、陽電子は電子と一緒になって、いわゆる消滅プロセスを起こし、それにより、各々５１１ｋｅＶのエネルギーを有する２つの光子が産出される。２つの光子は反対方向に同時に放出される。患者における陽電子放出放射性核種標識抗ＣＤ８抗体の分布は、消滅光子対をＰＥＴカメラで検出することによりモニターすることができる。ＰＥＴカメラは、患者身体の周囲に配置された検出器のリングからなる。２つの光子が、身体の両側の検出器により非常に短い時間間隔（通常は５～１５ナノ秒）内に記録される場合、２つの検出器間の直線に沿ったいずれかの地点で消滅事象が生じたと仮定される。すべての直線の交差を計算することにより、放射線源（放射線標識抗体）の位置を決定することができる。定量化に関して、ＰＥＴは、適切な補正を実施すれば、信頼性の高い情報を提供することができる（Verel et al. (2005) J Nucl Med, 46 suppl 1: 164S-171Sを参照）。免疫ＰＥＴに関する追加の詳細は、例えば、van Dongen et al. (2007) The Oncologist, 12(12): 1379-1389；Reddy et al. (2010) Semin Nucl Med. 40(3): 182-189；Boerman et al. (2011) J. Nucl Med. 52(8): 1171-1172；Santangelo et al. (2015) Nature Methods, 12: 427-432に提供されている。
免疫ＳＰＥＣＴ画像法には、ガンマ線放出放射性核種で標識された抗体（本明細書で提供される抗ＣＤ８抗体など）またはその断片を、典型的には、注射により患者の血流へと投与することを伴う。ガンマ線放出放射性核種の例としては、これらに限定されないが、例えば、６７Ｇａ、９９ｍＴｃ、１１１Ｉｎ、１２３Ｉ、１３１Ｉ、１５３Ｓｍ、または１８６Ｒｅが挙げられる。次に、ガンマカメラを使用して、複数の角度から複数の２Ｄ画像を取得する。次いで、コンピュータを使用して、断層撮影再構成アルゴリズムを複数の投影に適用して、３Ｄデータセットを得る。次いで、このデータセットを操作して、他の断層撮影技法から得られるものと同様に、身体の任意の選択軸に沿って薄いスライスを表示することができる。ＳＰＥＣＴ画像を取得するには、ガンマカメラを患者の周囲で回転させる。投影は、回転中の規定地点で、通常は３～６度毎に取得される。ほとんどの場合で、最適な再構成を得るためには、完全な３６０度回転が使用される。また、各投影を得るのにかかる時間は変えることができるが、１５～２０秒が典型的である。その場合、合計スキャン時間は１５～２０分になる。一部の場合では、ＳＰＥＣＴガンマスキャナーは、画像のコレジストレーションを用いて、従来型ＣＴスキャナーで動作するように構築することができる。これにより、ＳＰＥＣＴシンチグラフィーで観察することができる腫瘍または組織の位置特定が可能になるが、他の解剖学的構造に対して正確に位置を特定することは困難である。免疫ＳＰＥＣＴに関する追加の詳細は、例えば、Laverman et al. (2015) J Nucl Med, 56(5): 778-783；Lutje el al. (2014) Cancer Res, 74(21): 6216-6223；およびMuselaers et al. (2013) Eur Urology 64(4): 1101-1106などに見出すことができる。
ＮＭＲ（核磁気共鳴法）としても知られているｉｎ ｖｉｖｏ ＭＲＩ（磁気共鳴画像法）の原理は、患者の身体に存在する原子核に含有される陽子および中性子（最も一般的には、水素原子に見出されるもの）の磁気特性を操作することに基づく。こうした核の運動により、小さな磁気モーメントが生じる。対象の身体をＭＲＩスキャナーの磁場に置くと、こうした核の磁気モーメントは、磁場の方向に整列する。次いで、スキャナー内の対象身体に無線周波数（ＲＦ）パルスを適用すると、核が励起され、低エネルギースピン状態と高エネルギースピン状態との間で遷移が起こる。ＲＦパルスの照射が終わると、核は平衡状態に戻り（緩和と呼ばれるプロセス）、吸収された過剰エネルギーを放出し、ＲＦシグナルを放出する。このシグナルを、スキャナーのＲＦコイルにより検出し、次いでそれを使用して、身体組織の詳細な画像を生成する。ＭＲＩコントラスト剤を使用することにより、この画像のコントラスト、したがって特定の身体構造の視認性を向上させることができる。ＭＲＩにより検出可能な標識の例としては、これらに限定されないが、例えば、超常磁性酸化鉄（Ｍｏｌｄａｙ ＩＯＮ Ｒｈｏｄａｍｉｎｅ－Ｂ Ｃａｒｂｏｘｙｌなどの酸化鉄ナノ粒子を含む）、１９Ｆベースのプローブ、常磁性金属（例えば、ガドリニウム、マンガン、酸化マンガン、ジスプロシウム）、（Ｕ）ＳＰＩＯ、ＰＡＲＡ（ＣＥＳＴ）、ＤＩＡ（ＣＥＳＴ）、およびＰＦＣが挙げられる。ｉｎ ｖｉｖｏ ＭＲＩ用の標識抗体および／またはＭＲＩにより検出可能な標識の使用に関する追加の情報は、例えば、Srivastava (2015) Dis Model Mech. 8(4): 323-336；Zhou et al. (2013) Wiley Interdiscip Rev Nanomed Nanobiotechnol. 5(1): 1-18；Sohn et al. (2015) Nanomedicine. 11(1): 127-135；Bates et al. (2014) PloS ONE 9(5): e97220；Zhu et al. (2015) Int. J. Mol. Sci. 16: 9573-9587；およびZhang et al. (2014) Int J. Medicine. 9: 33-41で考察されている。
ＮＩＲ画像法は、生体組織への近赤外光の深部光子浸透力を活用して、＜１ｃｍの深さの内因性および／または外因性コントラストの画像化を提供する。この分野内のＮＩＲ蛍光画像法では、７００～９００ｎｍの蛍光を放出する外因性コントラスト剤で標識された抗体の検出に焦点が当てられている。典型的な蛍光画像化システムは、他所で詳細に説明されている（De Grand et al. (2003) Technol Cancer Res Treat, 2:553-62；Nakayama et al. (2002) Mol Imaging, 1: 365-77；Ntziachristos et al. (2003) Eur Radiol, 13:195-208；Tanaka et al. (2006) Ann Surg Oncol, 13:1671-81；Themelis et al. (2009) J Biomed Opt, 4:064012；およびTroyan et al. (2009) Ann Surg Oncol, 16:2943-52）。手短に言えば、典型的な蛍光画像化システムは、混濁媒体内でフルオロフォアを励起するスペクトル的に分解された光源（フィルター広帯域光源、発光ダイオード［ＬＥＤ］、またはレーザーダイオード）からなる。次いで、このフルオロフォアから放出された光を、強力な励起光をフィルターで除外するように特別な注意を払って、電荷結合デバイス（ＣＣＤ）カメラで画像化する。赤外色素の例としては、これらに限定されないが、Ｔｒａｃｙ６５２、Ｔｒａｃｙ６４５、ローダミン色素、シアニン色素、Ｃｙ７、Ｃｙ７．５、ＡＬＥＸＡ ＦＬＵＯＲ（登録商標）、ＣＹＤＹＥ（登録商標）、ＩＲＤＹＥ（登録商標）、ＤｙＬｉｇｈｔ、およびＡＴＴＯが挙げられる。約６５０～約９５０ｎｍの近赤外（ＮＩＲ）波長での細胞および組織画像化は、この領域では生物学的分子の吸収が低いため、ｉｎ ｖｉｖｏ画像化に有利である。ｉｎ ｖｉｖｏでのＮＩＲ画像法用の標識抗体およびｉｎ ｖｉｖｏでのＮＩＲ画像法用の検出可能な標識の使用に関するさらなる詳細は、Cillers et al. (2017) Mol Pharmaceuticals 14(5): 1623-1633；Hilderbrand et al. (2010) Curr Opin Chem Biol 14(1): 71-79；Hong et al. (2017) Nat Biomed Eng 1, 0010 DOI: 10.1038/s41551-016-0010；Pansare et al. (2012) Chem Mater. 24(5): 812-827；Hickson (2009) Urol Oncol Semin Orig Invest. 27: 295-297；Zhang et al. (2012) Curr Protoc Cytom. Chapter 12: Unit 12.7；Quek et al. (2012) Nanomaterials. 2: 92-112；Luker et al. (2008) J Nucl Med 49: 1-4；およびLiu et al. (2016) NPG Asia Materials. 8, e295に提供されている。
チェレンコフ発光画像法（ＣＬＩ）は、陽電子放出断層撮影（ＰＥＴ）画像化剤（本明細書の他所に記載ものなど）により放出される光学的チェレンコフ光子の検出に基づく分子光学画像化技法である。他のＣＬＩ画像化剤としては、これらに限定されないが、例えば、１３１Ｉ、１８Ｆ、および９０Ｙが挙げられる。チェレンコフ放射線は、荷電粒子が誘電体媒体（つまり、電界により分極され得る媒体）を、その媒体での光の速度よりも速い速度で移動する際に生み出される。伝播中、荷電粒子（正荷電陽電子または負荷電電子）は、媒体の原子の正電荷および負電荷を変位させることにより局所的な分極を誘導する。例えば、Grootendorst et al. (2016) Clin Transl Imaging. 4(5): 353-366の図1を参照されたい。粒子の速度が光速を超えると、分極は粒子の軌道に沿って非対称になり、粒子からより離れた場所では双極子電場がもたらされる。粒子が通過すると、原子の電子は基底状態に戻り、それにより転移エネルギーが光学的光子として放出される。電子増倍電荷結合デバイス（ＥＭＣＣＤ）カメラなどの超高感度光学カメラを使用してＰＥＴトレーサーからのチェレンコフ光を検出することによりＣＬＩ画像を取得することができる。ＣＬＩ画像は、光子輝度で半定量的に分析することができる。ＣＬＩおよびＰＥＴは、両方とも陽電子放出放射性医薬品により生成される光子を測定する技法であるため、直接的に相関する。ＰＥＴは消滅光子を測定し、ＣＬＩはチェレンコフ光子を測定する。幾つかの研究により、様々な放射性医薬品の場合、ｉｎ ｖｉｔｒｏ、ｅｘ ｖｉｖｏ、およびｉｎ ｖｉｖｏにてＣＬＩとＰＥＴとの間に強い相関性があることが示されており、ＣＬＩによる生体対象の分子画像化の実現可能性が実証されている。ＣＬＩに関するか、またはＣＬＩとＰＥＴとの相関性が詳述されている刊行物としては、例えば、Xu et al. (2012) J Nucl Med, 53(2):312-317；Liu et al. (2010) PLoS ONE. 5(3):e9470；Zhang et al. (2013) PLoS ONE. 8(4):e62007；Hu et al. (2015) Eur Radiol. 25(6): 1814-1822；Robertson et al. (2011) J Nucl Med. 52(11): 1764-1769；Timmermand et al. (2015) J Nucl Med. 56(3):444-449；Cao et al. (2014) Biomed Opt Express. 5(10):3660-3670、およびThorek et al. (2014) J Nucl Med. 55(1):95-98が挙げられる。
がんを有する対象の、免疫療法に対する応答性を予測するための方法
また、がんを有する対象の、免疫療法剤による治療に対する応答性を予測する方法が提供される。一部の実施形態では、方法は、標識ＣＤ８結合性作用剤を投与するステップ、および標識ＣＤ８結合性作用剤と、対象の腫瘍組織のＣＤ８＋Ｔ細胞との結合を検出するステップを含み、結合の検出は、対象が免疫療法剤に応答する可能性が高いことを示す。一部の実施形態では、方法は、本明細書に記載の標識ＣＤ８結合性作用剤を投与するステップ、および標識ＣＤ８結合性作用剤と、対象の腫瘍組織のＣＤ８＋Ｔ細胞との結合を検出するステップを含み、結合の検出は、対象には、免疫療法剤による治療が必要であることを示す。一部の実施形態では、ＣＤ８結合性作用剤は、検出可能な標識（例えば、８９Ｚｒ、１２４Ｉ、１８Ｆ、６８Ｇａなど）で標識されており、標識ＣＤ８結合性作用剤と、腫瘍組織のＣＤ８＋Ｔ細胞との結合は、ＰＥＴまたはＰＥＴ／ＣＴにより検出される。一部の実施形態では、ＣＤ８結合性作用剤は、１８Ｆ標識にコンジュゲートされた抗ＣＤ８ ＶＨＨである。一部の実施形態では、ＣＤ８結合性作用剤は、式（Ｉ）の化合物を介して［１８Ｆ］－フッ化アルミニウム錯体にコンジュゲートされた抗ＣＤ８ ＶＨＨである。一部の実施形態では、抗ＣＤ８ ＶＨＨは、配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む。一部の実施形態では、抗ＣＤ８ ＶＨＨは、配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む。一部の実施形態では、抗ＣＤ８ ＶＨＨは、配列番号３のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、抗ＣＤ８ ＶＨＨは、配列番号４のアミノ酸配列を含む。
一部の実施形態では、方法は、治療有効量の免疫療法剤、細胞療法、またはがんワクチン（例えば、個別化がんワクチンまたは「ＰＣＶ」）を、標識ＣＤ８結合性作用剤と腫瘍組織のＣＤ８＋Ｔ細胞との結合が検出された対象に投与するステップを含む。
一部の実施形態では、ＣＤ８結合性作用剤は、免疫療法剤に対する対象の応答性を繰り返して予測するために１回よりも多く投与される。一部の実施形態では、方法は、そうした値の間の任意の値または範囲を含む、少なくとも約６か月、１年、２年、３年、４年、５年、１０年、またはそれよりも長期など、長期間にわたって繰り返される。
一部の実施形態では、免疫療法剤は、免疫チェックポイント阻害剤である。一部の実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、イピリムマブ（ＹＥＲＶＯＹ（登録商標））などの治療用抗ＣＴＬＡ－４抗体である。一部の実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、治療用抗ＰＤ－１抗体である。一部の実施形態では、治療用抗ＰＤ－１抗体は、ニボルマブ（ＯＰＤＩＶＯ（登録商標））である。一部の実施形態では、治療用抗ＰＤ－１抗体は、ペムブロリズマブ（ＫＥＹＴＲＵＤＡ（登録商標））である。一部の実施形態では、治療用抗ＰＤ－１抗体は、ピジリズマブ（pidlizumab）である。
一部の実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、治療用抗ＰＤ－Ｌ１抗体である。一部の実施形態では、治療用抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、ＢＭＳ－９３６５５９である。一部の実施形態では、治療用抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、アベルマブ（ＢＡＮＶＥＮＣＩＯ（登録商標））である。一部の実施形態では、治療用抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、デュルバルマブ（ＩＭＦＩＮＺＩ（登録商標））である。一部の実施形態では、治療用抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、アテゾリズマブ（ＴＥＣＥＮＴＲＩＱ（登録商標））である。
治療用免疫チェックポイント阻害剤に関するさらなる詳細は、例えば、Byun et al. (2017) Nat Rev Endocrinol. 13: 195-207；La-Beck el al. (2015) Pharmacotherapy. 35(10): 963-976；Buchbinder et al. (2016) Am J Clin Oncol. 39(1): 98-106；Michot et al. (2016) Eur J Cancer. 54: 139-148、およびTopalian et al. (2016) Nat Rev Cancer. 16: 275-287に提供されている。
一部の実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、１つまたは複数の追加の療法剤（化学療法剤など）と組み合わせて対象に投与される。一部の実施形態では、１つまたは複数の追加の療法剤（化学療法剤など）と組み合わせて対象に投与される免疫チェックポイント阻害剤は、抗ＰＤ－Ｌ１抗体（アテゾリズマブなど）である。化学療法剤の例としては、以下のものが挙げられる：
エルロチニブ（ＴＡＲＣＥＶＡ（登録商標）、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ／ＯＳＩ Ｐｈａｒｍ．）、ボルテゾミブ（ＶＥＬＣＡＤＥ（登録商標）、Ｍｉｌｌｅｎｎｉｕｍ Ｐｈａｒｍ．）、ジスルフィラム、没食子酸エピガロカテキン、サリノスポラミドＡ、カルフィルゾミブ、１７－ＡＡＧ（ゲルダナマイシン）、ラディシコール、乳酸デヒドロゲナーゼＡ（ＬＤＨ－Ａ）、フルベストラント（ＦＡＳＬＯＤＥＸ（登録商標）、ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）、スニチニブ（ｓｕｎｉｔｉｂ）（ＳＵＴＥＮＴ（登録商標）、Ｐｆｉｚｅｒ／Ｓｕｇｅｎ）、レトロゾール（ＦＥＭＡＲＡ（登録商標）、Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、イマチニブメシル酸塩（ＧＬＥＥＶＥＣ（登録商標）、ノバルティス）、フィナスネート（finasunate）（ＶＡＴＡＬＡＮＩＢ（登録商標）、Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、オキサリプラチン（ＥＬＯＸＡＴＩＮ（登録商標）、Ｓａｎｏｆｉ）、５－ＦＵ（５－フルオロウラシル）、ロイコボリン、ラパマイシン（シロリムス、ＲＡＰＡＭＵＮＥ（登録商標）、Ｗｙｅｔｈ）、ラパチニブ（ＴＹＫＥＲＢ（登録商標）、ＧＳＫ５７２０１６、Ｇｌａｘｏ Ｓｍｉｔｈ Ｋｌｉｎｅ）、ロナファルニブ（Lonafamib）（ＳＣＨ ６６３３６）、ソラフェニブ（ＮＥＸＡＶＡＲ（登録商標）、Ｂａｙｅｒ Ｌａｂｓ）、ゲフィチニブ（ＩＲＥＳＳＡ（登録商標）、ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）、ＡＧ１４７８、チオテパおよびＣＹＴＯＸＡＮ（登録商標）シクロホスファミド（cyclosphosphamide）などのアルキル化剤；
ブスルファン、インプロスルファン、およびピポスルファンなどのスルホン酸アルキル；
ベンゾドパ（benzodopa）、カルボコン、メツレドパ（meturedopa）、およびウレドパ（uredopa）などのアジリジン；
アルトレタミン、トリエチレンメラミン、トリエチレンホスホルアミド、トリエチレンチオホスホルアミド、およびトリメチロメラミンを含むエチレンイミンおよびメチルアメラミン（methylamelamine）；
アセトゲニン（特にブラタシンおよびブラタシノン）；カンプトテシン（トポテカンおよびイリノテカンを含む）；ブリオスタチン；カリスタチン；ＣＣ－１０６５（そのアドゼレシン、カルゼレシン、およびビセレシン合成アナログを含む）；クリプトフィシン（特にクリプトフィシン１およびクリプトフィシン８）；副腎皮質ステロイド（プレドニゾンおよびプレドニゾロンを含む）；酢酸シプロテロン；フィナステリドおよびデュタステリドを含む５α－リダクターゼ；ボリノスタット、ロミデプシン、パノビノスタット、バルプロ酸、モセチノスタット ドラスタチン；アルデスロイキン、タルクデュオカルマイシン（合成アナログ、ＫＷ－２１８９およびＣＢ１－ＴＭ１を含む）；エリュテロビン；パンクラチスタチン；サルコジクチイン；スポンギスタチン；
クロラムブシル、クロマファジン（chlomaphazine）、クロロホスファミド(chlorophosphamide)、エストラムスチン、イホスファミド、メクロレタミン、メクロレタミンオキシド塩酸塩、メルファラン、ノブエンビキン、フェネステリン、プレドニムスチン、トロホスファミド、ウラシルマスタードなどのナイトロジェンマスタード；
カルムスチン、クロロゾトシン、ホテムスチン、ロムスチン、ニムスチン、およびラニムスチン（ranimnustine）などのニトロソ尿素；
エンジイン抗生物質（例えば、カリチアマイシン、特にカリチアマイシンγＩＩおよびカリチアマイシンωＩＩ（Angew Chem. Intl. Ed. Engl. 1994, 33:183-186）；ジネミシンＡを含むジネミシン；クロドロネートなどのビスホスホネート；エスペラミシン；ならびに
ネオカルチノスタチン発色団および関連色素タンパク質エンジイン抗生物質発色団）などの抗生物質、アクラシノマイシン（aclacinomysin）、アクチノマイシン、アントラマイシン（authramycin）、アザセリン、ブレオマイシン、カクチノマイシン、カラビシン(carabicin)、カミノマイシン（caminomycin）、カルジノフィリン、クロモマイシニス（chromomycinis）、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デトルビシン、６－ジアゾ－５－オキソ－Ｌ－ノルロイシン、ＡＤＲＩＡＭＹＣＩＮ（登録商標）（ドキソルビシン）、モルホリノドキソルビシン、シアノモルホリノ－ドキソルビシン、２－ピロリノ－ドキソルビシン、およびデオキシドキソルビシン、エピルビシン、エソルビシン、イダルビシン、マルセロマイシン、ミトマイシンＣなどのミトマイシン、ミコフェノール酸、ノガラマイシン、オリボマイシン、ペプロマイシン、ポルフィロマイシン、ピューロマイシン、クエラマイシン、ロドルビシン、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、ツベルシジン、ウベニメクス、ジノスタチン、ゾルビシン；
メトトレキサートおよび５－フルオロウラシル（５－ＦＵ）などの抗代謝物質；デノプテリン、メトトレキサート、プテロプテリン、トリメトレキサートなどの葉酸アナログ；フルダラビン、６－メルカプトプリン、チアミプリン、チオグアニンなどのプリンアナログ；アンシタビン、アザシチジン、６－アザウリジン、カルモフール、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、エノシタビン、フロクスウリジンなどのピリミジンアナログ；
カルステロン、プロピオン酸ドロモスタノロン、エピチオスタノール、メピチオスタン、テストラクトンなどのアンドロゲン；アミノグルテチミド、ミトタン、トリロスタンなどの抗副腎剤；フロリン酸（frolinic acid）などの葉酸補充剤；
アセグラトン；アルドホスファミドグリコシド；アミノレブリン酸；エニルウラシル；アムサクリン；ベストラブシル；ビサントレン；エダトレキセート（edatraxate）；デフォファミン（defofamine）；デメコルチン；ジアジクオン；エルフォミチン（elfomithine）；エリプチニウムアセテート；エポチロン；エトグルシド；硝酸ガリウム；ヒドロキシ尿素；レンチナン；ロニダミン（lonidainine）；マイタンシンおよびアンサミトシンなどのマイタンシノイド；ミトグアゾン；ミトキサントロン；モピダムノール（mopidamnol）；ニトラエリン（nitraerine）；ペントスタチン；フェナメット；ピラルビシン；ロソキサントロン；ポドフィリン酸；２－エチルヒドラジド；プロカルバジン；ＰＳＫ（登録商標）ポリサッカライド複合体（ＪＨＳ Ｎａｔｕｒａｌ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ、ユージーン、オレゴン州）；ラゾキサン；リゾキシン；シゾフラン（sizofuran）；スピロゲルマニウム；テヌアゾン酸；トリアジクオン；２，２’，２’’－トリクロロトリエチルアミン；トリコテセン（特に、Ｔ－２毒素、ベラクリンＡ、ロリジンＡ、およびアングイジン）；ウレタン；ビンデシン；ダカルバジン；マンノムスチン；ミトブロニトール；ミトラクトール；ピポブロマン；ガシトシン（gacytosine）；アラビノシド（「Ａｒａ－Ｃ」）；シクロホスファミド；チオテパ；タキソイド、例えば、ＴＡＸＯＬ（パクリタキセル；Ｂｒｉｓｔｏｌ－Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ、プリンストン、ニュージャージー州）、ＡＢＲＡＸＡＮＥ（登録商標）（クレモフォール非含有）、パクリタキセルのアルブミン操作ナノ粒子製剤（albumin-engineered nanoparticle formulations of paclitaxel）（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｐａｒｔｎｅｒｓ、シャンバーグ、イリノイ州）、およびＴＡＸＯＴＥＲＥ（登録商標）（ドセタキセル、ドキセタキセル（doxetaxel）；Ｓａｎｏｆｉ－Ａｖｅｎｔｉｓ）；クロラムブシル；ＧＥＭＺＡＲ（登録商標）（ゲムシタビン）；６－チオグアニン；メルカプトプリン；メトトレキサート；シスプラチンおよびカルボプラチンなどの白金アナログ；ビンブラスチン；エトポシド（ＶＰ－１６）；イホスファミド；ミトキサントロン；ビンクリスチン；ＮＡＶＥＬＢＩＮＥ（登録商標）（ビノレルビン）；ノバントロン；テニポシド；エダトレキサート；ダウノマイシン；アミノプテリン；カペシタビン（ＸＥＬＯＤＡ（登録商標））；イバンドロネート；ＣＰＴ－１１；トポイソメラーゼ阻害剤ＲＦＳ２０００；ジフルオロメチルオルニチン（ＤＭＦＯ）；レチノイン酸などのレチノイド；ならびに上記のいずれかの薬学的に許容される塩、酸、および誘導体。
また、化学療法剤としては、以下のものが挙げられる：
（ｉ）例えば、タモキシフェン（ＮＯＬＶＡＤＥＸ（登録商標）；クエン酸タモキシフェン）、ラロキシフェン、ドロロキシフェン、ヨードキシフェン（iodoxyfene）、４－ヒドロキシタモキシフェン、トリオキシフェン、ケオキシフェン、ＬＹ１１７０１８、オナプリストン、およびＦＡＲＥＳＴＯＮ（登録商標）（クエン酸トレミフェン（toremifine citrate））を含む、抗エストロゲンおよび選択的エストロゲン受容体修飾因子（ＳＥＲＭ）などの、腫瘍に対するホルモン作用を調節または阻害するように作用する抗ホルモン作用剤；
（ｉｉ）例えば、４（５）－イミダゾール、アミノグルテチミド、ＭＥＧＡＳＥ（登録商標）（酢酸メゲストロール）、ＡＲＯＭＡＳＩＮ（登録商標）（エキセメスタン；Ｐｆｉｚｅｒ）、ホルメスタニ（formestanie）、ファドロゾール、ＲＩＶＩＳＯＲ（登録商標）（ボロゾール）、ＦＥＭＡＲＡ（登録商標）（レトロゾール；Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、およびＡＲＩＭＩＤＥＸ（登録商標）（アナストロゾール；ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）などの、副腎でのエストロゲン産生を調節する酵素アロマターゼを阻害するアロマターゼ阻害剤；
（ｉｉｉ）フルタミド、ニルタミド、ビカルタミド、ロイプロリド、およびゴセレリンなどの抗アンドロゲン；ブセレリン、トリプトレリン（tripterelin）、酢酸メドロキシプロゲステロン、ジエチルスチルベストロール、プレマリン、フルオキシメステロン、すべてのｔｒａｎｓ－レチオン酸(transretionic acid)、フェンレチニド、ならびにトロキサシタビン（１，３－ジオキソランヌクレオシドシトシンアナログ）；
（ｉｖ）プロテインキナーゼ阻害剤；
（ｖ）脂質キナーゼ阻害剤；
（ｖｉ）アンチセンスオリゴヌクレオチド、特に、例えば、ＰＫＣ－アルファ、Ｒａｌｆ、およびＨ－Ｒａｓなどの、異常細胞増殖に関与が示唆されるシグナル伝達経路の遺伝子の発現を阻害するもの；
（ｖｉｉ）ＶＥＧＦ発現阻害剤（例えば、ＡＮＧＩＯＺＹＭＥ（登録商標））およびＨＥＲ２発現阻害剤などのリボザイム；
（ｖｉｉｉ）遺伝子療法ワクチン、例えば、ＡＬＬＯＶＥＣＴＮ（登録商標）、ＬＥＵＶＥＣＴＩＮ（登録商標）、およびＶＡＸＩＤ（登録商標）などのワクチン；ＰＲＯＬＥＵＫＩＮ（登録商標）、ｒＩＬ－２；ＬＵＲＴＯＴＥＣＡＮ（登録商標）などのトポイソメラーゼ１阻害剤；ＡＢＡＲＥＬＩＸ（登録商標）ｒｍＲＨ；ならびに
（ｉｘ）上記のいずれかの薬学的に許容される塩、酸、および誘導体。
また、化学療法剤としては、以下のものなどの抗体が挙げられる：アレムツズマブ（Ｃａｍｐａｔｈ）、ベバシズマブ（ＡＶＡＳＴＩＮ（登録商標）、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）；セツキシマブ（ＥＲＢＩＴＵＸ（登録商標）、Ｉｍｃｌｏｎｅ）；パニツムマブ（ＶＥＣＴＩＢＩＸ（登録商標）、Ａｍｇｅｎ）、リツキシマブ（ＲＩＴＵＸＡＮ（登録商標）、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ／Ｂｉｏｇｅｎ Ｉｄｅｃ）、ペルツズマブ（ＯＭＮＩＴＡＲＧ（登録商標）、２Ｃ４、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、トラスツズマブ（ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標）、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、トシツモマブ（Ｂｅｘｘａｒ、Ｃｏｒｉｘｉａ）、および抗体薬物コンジュゲートであるゲムツズマブオゾガマイシン（ＭＹＬＯＴＡＲＧ（登録商標）、Ｗｙｅｔｈ）。本出願の化合物と組み合わせて作用剤としての療法能力を有する追加のヒト化モノクローナル抗体としては、以下のものが挙げられる：アポリズマブ、アセリズマブ、アトリズマブ、バピネオズマブ、ビバツズマブメルタンシン、カンツズマブメルタンシン、セデリズマブ、セルトリズマブペゴール、シドフシツズマブ（cidfusituzumab）、シドツズマブ（cidtuzumab）、ダクリズマブ、エクリズマブ、エファリズマブ、エプラツズマブ、エルリズマブ、フェルビズマブ、フォントリズマブ、ゲムツズマブオゾガマイシン、イノツズマブオゾガマイシン、イピリムマブ、ラベツズマブ、リンツズマブ、マツズマブ、メポリズマブ、モタビズマブ、モトビズマブ（motovizumab）、ナタリズマブ、ニモツズマブ、ノロビズマブ（nolovizumab）、ヌマビズマブ（numavizumab）、オクレリズマブ、オマリズマブ、パリビズマブ、パスコリズマブ、ペクフシツズマブ（pecfusituzumab）、ペクツズマブ（pectuzumab）、ペキセリズマブ、ラリビズマブ（ralivizumab）、ラニビズマブ、レスリビズマブ（reslivizumab）、レスリズマブ、レシビズマブ（resyvizumab）、ロベリズマブ（rovelizumab）、ルプリズマブ（ruplizumab）、シブロツズマブ（sibrotuzumab）、シプリズマブ、ソンツズマブ（sontuzumab）、タカツズマブテトラキセタン（tacatuzumab tetraxetan）、タドシズマブ（tadocizumab）、タリズマブ、テフィバズマブ（tefibazumab）、トシリズマブ、トラリズマブ（toralizumab）、ツコツズマブセルモロイキン（tucotuzumab celmoleukin）、ツクシツズマブ(tucusituzumab)、ウマビズマブ(umavizumab)、ウルトキサズマブ、ウステキヌマブ、ビジリズマブ、およびインターロイキン－１２ ｐ４０タンパク質を認識するように遺伝子改変された組換え完全ヒト配列全長ＩｇＧ１λ抗体である抗インターロイキン１２（ＡＢＴ－８７４／Ｊ６９５、Ｗｙｅｔｈ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ａｎｄ Ａｂｂｏｔｔ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）。
また、化学療法剤としては、「ＥＧＦＲ阻害剤」が挙げられ、これは、ＥＧＦＲと直接的に結合するかまたは別様に相互作用し、そのシグナル伝達活性を防止または低減し、「ＥＧＦＲアンタゴニスト」とも呼ばれる化合物を指す。そのような作用剤の例としては、ＥＧＦＲに結合する抗体および小分子が挙げられる。ＥＧＦＲに結合する抗体の例としては、以下のものが挙げられる：ＭＡｂ５７９（ＡＴＣＣ ＣＲＬ ＨＢ８５０６）、ＭＡｂ４５５（ＡＴＣＣ ＣＲＬ ＨＢ８５０７）、ＭＡｂ２２５（ＡＴＣＣ ＣＲＬ ８５０８）、ＭＡｂ５２８（ＡＴＣＣ ＣＲＬ ８５０９）（米国特許第４，９４３，５３３号明細書、Ｍｅｎｄｅｌｓｏｈｎ ｅｔ ａｌ．を参照）、ならびにキメラ化２２５（Ｃ２２５またはセツキシマブ；ＥＲＢＵＴＩＸ（登録商標））、および形態を変更したヒト２２５（Ｈ２２５）（国際公開第９６／４０２１０号パンフレット、Ｉｍｃｌｏｎｅ Ｓｙｓｔｅｍｓ Ｉｎｃ．を参照）などの、それらの変異体；ＩＭＣ－１１Ｆ８、完全ヒトＥＧＦＲ標的化抗体（Ｉｍｃｌｏｎｅ）；ＩＩ型突然変異体ＥＧＦＲに結合する抗体（米国特許第５，２１２，２９０号明細書）；米国特許第５，８９１，９９６号明細書に記載の通りの、ＥＧＦＲに結合するヒト化およびキメラ抗体；ならびにＡＢＸ－ＥＧＦまたはパニツムマブなどの、ＥＧＦＲに結合するヒト抗体（国際公開第９８／５０４３３号パンフレット、Ａｂｇｅｎｉｘ／Ａｍｇｅｎを参照）；ＥＭＤ５５９００（Stragliotto et al. Eur. J Cancer 32A:636-640 (1996)）；ＥＭＤ７２００（マツズマブ）、ＥＧＦＲ結合に対してＥＧＦおよびＴＧＦ－アルファの両方と競合する、ＥＧＦＲに対するヒト化ＥＧＦＲ抗体（ＥＭＤ／Ｍｅｒｃｋ）；ヒトＥＧＦＲ抗体であるＨｕＭａｘ－ＥＧＦＲ（ＧｅｎＭａｂ）；Ｅ１．１、Ｅ２．４、Ｅ２．５、Ｅ６．２、Ｅ６．４、Ｅ２．１１、Ｅ６．３、およびＥ７．６．３として知られており、米国特許第６，２３５，８８３号明細書に記載されている完全ヒト抗体；ＭＤＸ－４４７（Ｍｅｄａｒｅｘ Ｉｎｃ）；ならびにｍＡｂ８０６またはヒト化ｍＡｂ８０６（Johns et al, J. Biol. Chem. 279(29):30375-30384 (2004)）。抗ＥＧＦＲ抗体を、細胞傷害剤とコンジュゲートして、したがってイムノコンジュゲートを生成することができる（例えば、欧州特許出願公開第６５９４３９号明細書、Ｍｅｒｃｋ Ｐａｔｅｎｔ ＧｍｂＨを参照）。ＥＧＦＲアンタゴニストとしては、米国特許第５，６１６，５８２号明細書；第５，４５７，１０５号明細書；第５，４７５，００１号明細書；第５，６５４，３０７号明細書；第５，６７９，６８３号明細書；第６，０８４，０９５号明細書；第６，２６５，４１０号明細書；第６，４５５，５３４号明細書；第６，５２１，６２０号明細書；第６，５９６，７２６号明細書；第６，７１３，４８４号明細書；第５，７７０，５９９号明細書；第６，１４０，３３２号明細書；第５，８６６，５７２号明細書；第６，３９９，６０２号明細書；第６，３４４，４５９号明細書；第６，６０２，８６３号明細書；第６，３９１，８７４号明細書；第６，３４４，４５５号明細書；第５，７６０，０４１号明細書；第６，００２，００８；および第５，７４７，４９８号明細書；ならびに以下のＰＣＴ公報：国際公開第９８／１４４５１号パンフレット、国際公開第９８／５００３８号パンフレット、国際公開第９９／０９０１６号パンフレット、および国際公開第９９／２４０３７号パンフレットに記載の化合物などの小分子が挙げられる。特定の小分子ＥＧＦＲアンタゴニストとしては、以下のものが挙げられる：ＯＳＩ－７７４（ＣＰ－３５８７７４、エルロチニブ、ＴＡＲＣＥＶＡ（登録商標）Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ／ＯＳＩ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）；ＰＤ１８３８０５（ＣＩ１０３３、２－プロペンアミド、Ｎ－［４－［（３－クロロ－４－フルオロフェニル）アミノ］－７－［３－（４－モルホリニル）プロポキシ］－６－キナゾリニル］－、二塩酸塩、Ｐｆｉｚｅｒ Ｉｎｃ．）；ＺＤ１８３９、ゲフィチニブ（ＩＲＥＳＳＡ（登録商標）４－（３’－クロロ－４’－フルオロアニリノ）－７－メトキシ－６－（３－モルホリノプロポキシ）キナゾリン、ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）；ＺＭ１０５１８０（（６－アミノ－４－（３－メチルフェニル－アミノ）－キナゾリン、Ｚｅｎｅｃａ）；ＢＩＢＸ－１３８２（Ｎ８－（３－クロロ－４－フルオロ－フェニル）－Ｎ２－（１－メチル－ピペリジン－４－イル）－ピリミド［５，４－ｄ］ピリミジン－２，８－ジアミン、Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｉｎｇｅｌｈｅｉｍ）；ＰＫＩ－１６６（（Ｒ）－４－［４－［（１－フェニルエチル）アミノ］－１Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン－６－イル］－フェノール）；（（Ｒ）－６－（４－ヒドロキシフェニル）－４－［（１－フェニルエチル）アミノ］－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン）；ＣＬ－３８７７８５（Ｎ－［４－［（３－ブロモフェニル）アミノ］－６－キナゾリニル］－２－ブチンアミド）；ＥＫＢ－５６９（Ｎ－［４－［（３－クロロ－４－フルオロフェニル）アミノ］－３－シアノ－７－エトキシ－６－キノリニル］－４－（ジメチルアミノ）－２－ブテンアミド）（Ｗｙｅｔｈ）；ＡＧ１４７８（Ｐｆｉｚｅｒ）；ＡＧ１５７１（ＳＵ５２７１；Ｐｆｉｚｅｒ）；ラパチニブ（ＴＹＫＥＲＢ（登録商標）、ＧＳＫ５７２０１６、またはＮ－［３－クロロ－４－［（３フルオロフェニル）メトキシ］フェニル］－６［５［［［２メチルスルホニル）エチル］アミノ］メチル］－２－フラニル］－４－キナゾリンアミン）などの、２重ＥＧＦＲ／ＨＥＲ２チロシンキナーゼ阻害剤。
また、化学療法剤としては、以下のものが挙げられる：前述の段落に記されているＥＧＦＲ標的化薬を含む「チロシンキナーゼ阻害剤」；武田薬品工業株式会社から入手可能なＴＡＫ１６５などの小分子ＨＥＲ２チロシンキナーゼ阻害剤；ＣＰ－７２４，７１４、ＥｒｂＢ２受容体チロシンキナーゼの経口選択的阻害剤（ＰｆｉｚｅｒおよびＯＳＩ）；ＥＧＦＲに優先的に結合するが、ＨＥＲ２およびＥＧＦＲ過剰発現細胞を両方とも阻害するＥＫＢ－５６９（Ｗｙｅｔｈから入手可能）などの二重ＨＥＲ阻害剤；ラパチニブ（ＧＳＫ５７２０１６；Ｇｌａｘｏ－ＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅから入手可能）、経口ＨＥＲ２およびＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤；ＰＫＩ－１６６（Ｎｏｖａｒｔｉｓから入手可能）；カネルチニブ（ＣＩ－１０３３；Ｐｈａｒｍａｃｉａ）などの汎ＨＥＲ阻害剤；Ｒａｆ－１シグナル伝達を阻害する、ＩＳＩＳ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓから入手可能なアンチセンス剤ＩＳＩＳ－５１３２などのＲａｆ－１阻害剤；イマチニブメシル酸塩（ＧＬＥＥＶＥＣ（登録商標）、Ｇｌａｘｏ ＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅから入手可能）などの非ＨＥＲ標的化ＴＫ阻害剤；スニチニブ（ＳＵＴＥＮＴ（登録商標）、Ｐｆｉｚｅｒから入手可能）などの多標的化チロシンキナーゼ阻害剤；バタラニブ（ＰＴＫ７８７／ＺＫ２２２５８４、Ｎｏｖａｒｔｉｓ／Ｓｃｈｅｒｉｎｇ ＡＧから入手可能）などのＶＥＧＦ受容体チロシンキナーゼ阻害剤；ＭＡＰＫ細胞外調節キナーゼＩ阻害剤ＣＩ－１０４０（Ｐｈａｒｍａｃｉａから入手可能）；ＰＤ１５３０３５、４－（３－クロロアニリノ）キナゾリンなどのキナゾリン；ピリドピリミジン；ピリミドピリミジン；ＣＧＰ５９３２６、ＣＧＰ６０２６１、およびＣＧＰ６２７０６などのピロロピリミジン；ピラゾロピリミジン、４－（フェニルアミノ）－７Ｈ－ピロロ［２，３－ｄ］ピリミジン；クルクミン（ジフェルロイルメタン、４，５－ビス（４－フルオロアニリノ）フタルイミド）；ニトロチオフェン部分を含有するチロホスチン（tyrphostine）；ＰＤ－０１８３８０５（Ｗａｒｎｅｒ－Ｌａｍｂｅｒｔ）；アンチセンス分子（例えば、ＨＥＲをコードする核酸に結合する分子）；キノキサリン（米国特許第５，８０４，３９６号明細書）；トリホスチン（tryphostin）（米国特許第５，８０４，３９６号明細書）；ＺＤ６４７４（Ａｓｔｒａ Ｚｅｎｅｃａ）；ＰＴＫ－７８７（Ｎｏｖａｒｔｉｓ／Ｓｃｈｅｒｉｎｇ ＡＧ）；ＣＩ－１０３３（Ｐｆｉｚｅｒ）などの汎ＨＥＲ阻害剤；アフィニタック（Affinitac）（ＩＳＩＳ３５２１；Ｉｓｉｓ／Ｌｉｌｌｙ）；イマチニブメシル酸塩（ＧＬＥＥＶＥＣ（登録商標））；ＰＫＩ１６６（Ｎｏｖａｒｔｉｓ；ＧＷ２０１６（Ｇｌａｘｏ ＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ）；ＣＩ－１０３３（Ｐｆｉｚｅｒ）；ＥＫＢ－５６９（Ｗｙｅｔｈ）、セマキシニブ（Ｐｆｉｚｅｒ）；ＺＤ６４７４（ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）；ＰＴＫ－７８７（Ｎｏｖａｒｔｉｓ／Ｓｃｈｅｒｉｎｇ ＡＧ）；ＩＮＣ－１Ｃ１１（Ｉｍｃｌｏｎｅ）、ラパマイシン（シロリムス、ＲＡＰＡＭＵＮＥ（登録商標））；または
以下の特許公報のいずれかに記載されているもの：米国特許第５，８０４，３９６号明細書；国際公開第１９９９／０９０１６号パンフレット（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｃｙａｎａｍｉｄ）；国際公開第１９９８／４３９６０号パンフレット（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｃｙａｎａｍｉｄ）；国際公開第１９９７／３８９８３号パンフレット（Ｗａｒｎｅｒ Ｌａｍｂｅｒｔ）；国際公開第１９９９／０６３７８号パンフレット（Ｗａｒｎｅｒ Ｌａｍｂｅｒｔ）；国際公開第１９９９／０６３９６号パンフレット（Ｗａｒｎｅｒ Ｌａｍｂｅｒｔ）；国際公開第１９９６／３０３４７号パンフレット（Ｐｆｉｚｅｒ，Ｉｎｃ）；国際公開第１９９６／３３９７８号パンフレット（Ｚｅｎｅｃａ）；国際公開第１９９６／３３９７号パンフレット（Ｚｅｎｅｃａ）、および国際公開第１９９６／３３９８０号パンフレット（Ｚｅｎｅｃａ）。
また、化学療法剤としては、以下のものが挙げられる：デキサメタゾン、インターフェロン、コルヒチン、メトプリン、シクロスポリン、アムホテリシン、メトロニダゾール、アレムツズマブ、アリトレチノイン、アロプリノール、アミホスチン、三酸化ヒ素、アスパラギナーゼ、生ＢＣＧ、ベバシズマブ（bevacuzimab）、ベキサロテン、クラドリビン、クロファラビン、ダーベポエチンアルファ、デニロイキンジ、デクスラゾキサン、エポエチンアルファ、エルロチニブ（elotinib）、フィルグラスチム、酢酸ヒストレリン、イブリツモマブ、インターフェロンアルファ－２ａ、インターフェロンアルファ－２ｂ、レナリドマイド、レバミソール、メスナ、メトキサレン、ナンドロロン、ネララビン、ノフェツモマブ（nofetumomab）、オプレルベキン、パリフェルミン、パミドロネート、ペガデマーゼ、ペグアスパルガーゼ、ペグフィルグラスチム、ペメトレキセド二ナトリウム、プリカマイシン、ポルフィマーナトリウム、キナクリン、ラスブリカーゼ、サルグラモスチム、テモゾロミド、ＶＭ－２６、６－ＴＧ、トレミフェン、トレチノイン、ＡＴＲＡ、バルルビシン、ゾレドロネート、およびゾレドロン酸、なrらびにそれらの薬学的に許容される塩。
また、化学療法剤としては、ヒドロコルチゾン、酢酸ヒドロコルチゾン、酢酸コルチゾン、ピバル酸チキソコルトール、トリアムシノロンアセトニド、トリアムシノロンアルコール、モメタゾン、アムシノニド、ブデソニド、デソニド、フルオシノニド、フルオシノロンアセトニド、ベタメタゾン、リン酸ベタメタゾンナトリウム、デキサメタゾン、リン酸デキサメタゾンナトリウム、フルオコルトロン、ヒドロコルチゾン－１７－ブチレート、ヒドロコルチゾン－１７－バレレート、アルクロメタゾンジプロピオネート（aclometasone dipropionate）、吉草酸ベタメタゾン、ジプロピオン酸ベタメタゾン、プレドニカルベート、クロベタゾン－１７－ブチレート、クロベタゾール－１７－プロピオネート、カプロン酸フルオコルトロン、フルオコルトロンピバラート、および酢酸フルプレドニデン；フェニルアラニン－グルタミン－グリシン（ＦＥＧ）およびそのＤ異性体形態（ｆｅＧ）（ＩＭＵＬＡＮ ＢｉｏＴｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，ＬＬＣ）などの免疫選択的抗炎症ペプチド（ＩｍＳＡＩＤ）；アザチオプリン、シクロスポリン（シクロスポリンＡ）、Ｄ－ペニシラミン、金塩、ヒドロキシクロロキン、レフルノミデミノサイクリン（leflunomideminocycline）、スルファサラジンなどの抗リューマチ薬、エタネルセプト（Ｅｎｂｒｅｌ）、インフリキシマブ（Ｒｅｍｉｃａｄｅ）、アダリムマブ（Ｈｕｍｉｒａ）、セルトリズマブペゴール（Ｃｉｍｚｉａ）、ゴリムマブ（Ｓｉｍｐｏｎｉ）などの腫瘍壊死因子アルファ（ＴＮＦα）遮断剤、アナキンラ（Ｋｉｎｅｒｅｔ）などのインターロイキン１（ＩＬ－１）遮断剤、アバタセプト（Ｏｒｅｎｃｉａ）などのＴ細胞共刺激遮断剤、トシリズマブ（ＡＣＴＥＭＥＲＡ（登録商標））などのインターロイキン６（ＩＬ－６）遮断剤；レブリキズマブなどのインターロイキン１３（ＩＬ－１３）遮断剤；ロンタリズマブ（Rontalizumab）などのインターフェロンアルファ（ＩＦＮ）遮断剤；ｒｈｕＭＡｂベータ７などのベータ７インテグリン遮断剤；抗Ｍ１プライム（Anti-M1 prime）などのＩｇＥ経路遮断剤；抗リンホトキシンアルファ（ＬＴａ）などの、分泌性ホモ三量体ＬＴａ３および膜結合性ヘテロ三量体ＬＴａ１／β２遮断剤；放射性同位体（例えば、Ａｔ２１１、Ｉ１３１、Ｉ１２５、Ｙ９０、Ｒｅ１８６、Ｒｅ１８８、Ｓｍ１５３、Ｂｉ２１２、Ｐ３２、Ｐｂ２１２、およびＬｕの放射性同位体）；チオプラチン（thioplatin）、ＰＳ－３４１、フェニルブチレート、ＥＴ－１８－ＯＣＨ３、またはファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤（Ｌ－７３９７４９、Ｌ－７４４８３２）などの多岐にわたる治験剤；ケルセチン、レスベラトロール、ピセタノール、没食子酸エピガロカテキン、テアフラビン、フラバノール、プロシアニジン、ベツリン酸、およびそれらの誘導体などのポリフェノール；クロロキンなどのオートファジー阻害剤；デルタ－９－テトラヒドロカンナビノール（ドロナビノール、ＭＡＲＩＮＯＬ（登録商標））；ベータ－ラパコン；ラパコール；コルヒチン；ベツリン酸；アセチルカンプトテシン、スコポレチン（scopolectin）、および９－アミノカンプトセシン；ポドフィロトキシン；テガフール（ＵＦＴＯＲＡＬ（登録商標））；ベキサロテン（ＴＡＲＧＲＥＴＩＮ（登録商標））；クロドロネート（例えば、ＢＯＮＥＦＯＳ（登録商標）またはＯＳＴＡＣ（登録商標））、エチドロネート（ＤＩＤＲＯＣＡＬ（登録商標））、ＮＥ－５８０９５、ゾレドロン酸／ゾレドロネート（ＺＯＭＥＴＡ（登録商標））、アレンドロネート（ＦＯＳＡＭＡＸ（登録商標））、パミドロネート（ＡＲＥＤＩＡ（登録商標））、チルドロネート（ＳＫＥＬＩＤ（登録商標））、またはリセドロネート（ＡＣＴＯＮＥＬ（登録商標））などのビスホスホネート；ならびに上皮増殖因子受容体（ＥＧＦ－Ｒ）；ＴＨＥＲＡＴＯＰＥ（登録商標）ワクチンなどのワクチン；ペリホシン、ＣＯＸ－２阻害剤（例えば、セレコキシブまたはエトリコキシブ）、プロテアソーム（proteosome）阻害剤（例えば、ＰＳ３４１）；ＣＣＩ－７７９；ティピファニブ（Ｒ１１５７７）；オラフェニブ（orafenib）、ＡＢＴ５１０；オブリメルセンナトリウム（ＧＥＮＡＳＥＮＳＥ（登録商標））などのＢｃｌ－２阻害剤；ピクサントロン；ロナファーニブ（ＳＣＨ６６３６、ＳＡＲＡＳＡＲ（商標））などのファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤；ならびに上記のいずれかの薬学的に許容される塩、酸、または誘導体；ならびにシクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチン、およびプレドニゾロンの併用療法の略語であるＣＨＯＰ；ならびに５－ＦＵおよびロイコボリンと組み合わせたオキサリプラチン（ＥＬＯＸＡＴＩＮ（商標））による治療レジメンの略語であるＦＯＬＦＯＸなどの、上記の２つまたはそれよりも多くの組合せ。
また、化学療法剤としては、鎮痛効果、解熱効果、および抗炎症効果を有する非ステロイド系抗炎症薬が挙げられる。ＮＳＡＩＤとしては、酵素シクロオキシゲナーゼの非選択的阻害剤が挙げられる。ＮＳＡＩＤの特定の例としては、以下のものが挙げられる：アスピリン、イブプロフェン、フェノプロフェン、ケトプロフェン、フルルビプロフェン、オキサプロジン、およびナプロキセンなどのプロピオン酸誘導体、インドメタシン、スリンダク、エトドラク、ジクロフェナクなどの酢酸誘導体、ピロキシカム、メロキシカム、テノキシカム、ドロキシカム、ロルノキシカム、およびイソキシカムなどのエノール酸（enolic acid）誘導体、メフェナム酸、メクロフェナム酸、フルフェナム酸、トルフェナム酸などのフェナム酸誘導体、ならびにセレコキシブ、エトリコキシブ、ルミラコキシブ、パレコキシブ、ロフェコキシブ、ロフェコキシブ、およびバルデコキシブなどのＣＯＸ－２阻害剤。
一部の実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体（アテゾリズマブなど）は、以下の化学療法剤の１つまたは複数と組み合わせて投与される：抗ＨＥＲ２抗体（例えば、トラスツズマブ（ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標）、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）またはペルツズマブ（ＰＥＲＪＥＴＡ（登録商標）、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ））、ＰＤ１結合性アンタゴニスト（例えば、ＭＤＸ－１１０６（ニボルマブ）、ＭＫ－３４７５（ペムブロリズマブ、ランブロリズマブ）、ＣＴ－０１１（ピディリズマブ）、またはＡＭＰ－２２４）、およびＰＤ－Ｌ２結合性アンタゴニスト。
一部の実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体（アテゾリズマブなど）は、成長阻害性作用剤と組み合わせて投与される。「成長阻害性作用剤」は、本明細書で使用される場合、ｉｎ ｖｉｔｒｏまたはｉｎ ｖｉｖｏのいずれかで細胞の成長を阻害する化合物または組成物を指す。例示的な成長阻害性作用剤としては、以下のものが挙げられる：例えば、ビンカ（ビンクリスチンおよびビンブラスチン）、タキサン（ドセタキセル（ＴＡＸＯＴＥＲＥ（登録商標）、Ｒｈｏｎｅ－Ｐｏｕｌｅｎｃ Ｒｏｒｅｒ）、およびパクリタキセル（ＴＡＸＯＬ（登録商標）、Ｂｒｉｓｔｏｌ－Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ））、ならびにドキソルビシン、エピルビシン、ダウノルビシン、エトポシド、およびブレオマイシンなどのトポイソメラーゼＩＩ阻害剤。例えば、タモキシフェン、プレドニゾン、ダカルバジン、メクロレタミン、シスプラチン、メトトレキサート、５－フルオロウラシル、およびａｒａ－ＣなどのＤＮＡアルキル化剤など、Ｇ１を停止させるそうした作用剤はまたＳ期停止にも波及する。さらなる情報は、Mendelsohn and Israel, eds., The Molecular Basis of Cancer, Chapter 1, entitled "Cell cycle regulation, oncogenes, and antineoplastic drugs" by Murakami et al. (W.B. Saunders, Philadelphia, 1995)、例えば、１３頁に見出すことができる。
一部の実施形態では、免疫療法剤は、樹状細胞活性化因子または樹状細胞成長因子である。一部の実施形態では、免疫療法剤はワクチンアジュバントである。一部の実施形態では、免疫療法剤は、Ｔ細胞刺激因子または成長因子である。一部の実施形態では、免疫療法剤は、抑制性免疫細胞、サイトカイン、および／または酵素を中和または阻害する作用剤である。
一部の実施形態では、方法は、抗ＴＩＧＩＴ抗体、ＴＩＧＩＴアンタゴニスト、抗ＣＳＦ－１Ｒ抗体、抗ＣＳＦ－１Ｒアンタゴニスト、抗ＣＥＡ抗体、抗ＣＥＡアンタゴニスト、抗ＣＴＬＡ４抗体、ＣＴＬＡ４アンタゴニスト、抗ＯＸ４０抗体、ＯＸ４０アゴニスト、１つまたは複数の化学療法剤と組み合わせた任意の抗ＰＤＬ１抗体、１つまたは複数の化学療法剤と組み合わせた任意の抗ＰＤ１抗体、および１つまたは複数の化学療法剤と組み合わせたアテゾリズマブからなる群から選択される免疫療法剤を投与するステップを含む。一部の実施形態では、抗ＰＤ１抗体または抗ＰＤＬ１抗体を、ＴＡＲＣＥＶＡ（登録商標）（エルロチニブ）、ＺＥＬＢＯＲＡＦ（登録商標）（ベムラフェニブ）、ＧＡＺＹＶＡ（登録商標）（オビヌツズマブ）、ＡＶＡＳＴＩＮ（登録商標）（ベバシズマブ）、ＣＯＴＥＬＬＩＣ（登録商標）（コビメチニブ）、ＺＥＬＢＯＲＡＦ（登録商標）（ベムラフェニブ）およびＣＯＴＥＬＬＩＣ（登録商標）（コビメチニブ）、ＡＬＥＣＥＮＳＡ（登録商標）（アレクチニブ）、ＫＡＤＣＹＬＡ（登録商標）（アドトラスツズマブエムタンシン）、ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標）（トラスツズマブ）、ＰＥＲＪＥＴＡ（登録商標）（ペルツズマブ）、ポラツズマブ、ＩＦＮ－アルファ、抗ＣＤ４０剤、抗ＯＸ４０抗体（例えば、ＯＸ４０アゴニスト）、抗ＣＳＦ－１Ｒ抗体、抗ＣＥＡ抗体、ＩＤＯ阻害剤、または抗ＴＩＧＩＴ抗体の１つまたは複数と組み合わせる。一部の実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体はアテゾリズマブであり、アテゾリズマブを、ＴＡＲＣＥＶＡ（登録商標）（エルロチニブ）、ＺＥＬＢＯＲＡＦ（登録商標）（ベムラフェニブ）、ＧＡＺＹＶＡ（登録商標）（オビヌツズマブ）、ＡＶＡＳＴＩＮ（登録商標）（ベバシズマブ）、ＣＯＴＥＬＬＩＣ（登録商標）（コビメチニブ）、ＺＥＬＢＯＲＡＦ（登録商標）（ベムラフェニブ）およびＣＯＴＥＬＬＩＣ（登録商標）（コビメチニブ）、ＡＬＥＣＥＮＳＡ（登録商標）（アレクチニブ）、ＫＡＤＣＹＬＡ（登録商標）（アドトラスツズマブエムタンシン）、ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標）（トラスツズマブ）、ＰＥＲＪＥＴＡ（登録商標）（ペルツズマブ）、ポラツズマブ、ＩＦＮ－アルファ、抗ＣＤ４０剤、抗ＯＸ４０抗体（例えば、ＯＸ４０アゴニスト）、抗ＣＳＦ－１Ｒ抗体、抗ＣＥＡ抗体、ＩＤＯ阻害剤、抗ＣＴＬＡ４抗体、または抗ＴＩＧＩＴ抗体の１つまたは複数と組み合わせる。一部の実施形態では、免疫療法剤はサイトカインである。一部の実施形態では、サイトカインは、ＩＬ２、遺伝子操作ＩＬ２、ＩＬ１５、または遺伝子操作ＩＬ１５である。一部の実施形態では、免疫療法剤は、樹状細胞活性化因子または樹状細胞成長因子などの樹状細胞モジュレーターである。
一部の実施形態では、細胞療法は、キメラ抗原受容体Ｔ細胞（ＣＡＲ－Ｔ）療法である。一部の実施形態では、細胞療法は、遺伝子操作Ｔ細胞受容体Ｔ細胞（ＴＣＲ－Ｔ）療法である。一部の実施形態では、細胞療法は、ネオ抗原特異的Ｔ細胞療法である。
がんを有する対象の進行をモニターするための方法
本明細書では、がんを有する対象の疾患進行をモニターするための方法が提供される。このような方法は、標識ＣＤ８結合性作用剤を対象に投与するステップ、ならびに第１の時点および第２の時点にて、標識ＣＤ８結合性作用剤と対象の腫瘍組織のＣＤ８＋Ｔ細胞との結合を検出するステップを含む。一部の実施形態では、方法は、治療有効量の免疫療法剤（例えば、本明細書の他所に記載の免疫療法剤）を対象に投与するステップであって、疾患は対象において進行している、ステップをさらに含む。一部の実施形態では、方法は、（ａ）免疫療法剤を投与する前に、標識ＣＤ８結合性作用剤を対象に投与し、標識ＣＤ８結合性作用剤と腫瘍組織のＣＤ８＋Ｔ細胞との結合を検出するステップ、（ｂ）免疫療法剤を投与するステップ、（ｃ）免疫療法剤投与後の時点で、標識ＣＤ８結合性作用剤を対象に投与し、標識ＣＤ８結合性作用剤と腫瘍組織のＣＤ８＋Ｔ細胞との結合を検出するステップ、および（ｄ）免疫療法剤の投与前後の、腫瘍組織におけるＣＤ８＋Ｔ細胞の標識化の差異を測定するステップを含む。
一部の実施形態では、免疫療法剤は、免疫チェックポイント阻害剤である。一部の実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、抗ＰＤ１抗体（これに限定されないが、本明細書に記載の抗ＰＤ１抗体など）である。一部の実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、抗ＰＤ－Ｌ１抗体（これに限定されないが、本明細書に記載の抗ＰＤ－Ｌ１抗体など）である。一部の実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、アテゾリズマブである。一部の実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体（アテゾリズマブなど）は、第２の療法剤（これらに限定されないが、本明細書の他所に記載の免疫療法剤および／または化学療法剤など）と組み合わせて対象に投与される。一部の実施形態では、第２の療法剤は免疫療法剤である。一部の実施形態では、免疫療法剤は、抗ＰＤ－Ｌ１抗体または抗ＰＤ１抗体であり、これを、抗ＴＩＧＩＴ抗体、ＴＩＧＩＴアンタゴニスト、抗ＣＳＦ－１Ｒ抗体、抗ＣＳＦ－１Ｒアンタゴニスト、抗ＣＥＡ抗体、抗ＣＥＡアンタゴニスト、抗ＯＸ４０抗体、ＯＸ４０アゴニスト、抗ＣＴＬＡ４抗体、ＣＴＬＡ４アンタゴニスト、ＴＡＲＣＥＶＡ（登録商標）（エルロチニブ）、ＺＥＬＢＯＲＡＦ（登録商標）（ベムラフェニブ）、ＧＡＺＹＶＡ（登録商標）（オビヌツズマブ）、ＡＶＡＳＴＩＮ（登録商標）（ベバシズマブ）、ＣＯＴＥＬＬＩＣ（登録商標）（コビメチニブ）、ＺＥＬＢＯＲＡＦ（登録商標）（ベムラフェニブ）およびＣＯＴＥＬＬＩＣ（登録商標）（コビメチニブ）、ＡＬＥＣＥＮＳＡ（登録商標）（アレクチニブ）、ＫＡＤＣＹＬＡ（登録商標）（アドトラスツズマブエムタンシン）、ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標）（トラスツズマブ）、ＰＥＲＪＥＴＡ（登録商標）（ペルツズマブ）、ポラツズマブ、ＩＦＮ－アルファ、抗ＣＤ４０剤、またはＩＤＯ阻害剤の１つまたは複数とさらに組み合わせる。
一部の実施形態では、免疫療法剤はサイトカインである。一部の実施形態では、サイトカインは、ＩＬ２、遺伝子操作ＩＬ２、ＩＬ１５、または遺伝子操作ＩＬ１５である。
一部の実施形態では、免疫療法剤は、樹状細胞モジュレーターである。一部の実施形態では、免疫療法剤は、樹状細胞活性化因子または樹状細胞成長因子である。
一部の実施形態では、免疫療法剤の効果は、第２の時点にて腫瘍組織のＣＤ８＋Ｔ細胞のレベルを検出し、それを第１の時点での腫瘍組織のＣＤ８＋Ｔ細胞のレベルと比較することにより決定される。一部の実施形態では、疾患進行は、第２の時点での腫瘍組織のＣＤ８＋Ｔ細胞のレベルが、第１の時点での腫瘍組織のＣＤ８＋Ｔ細胞のレベルよりも高い場合に検出される。一部の実施形態では、腫瘍組織のＣＤ８＋Ｔ細胞のレベルは、第３、第４、または第５のその後の時点で検出される。一部の実施形態では、時点は、少なくとも１日、３日、１週間、２週間、３週間、４週間、１か月、２か月、３か月、４か月、５か月、６か月、９か月、１２か月、１．５年、２年、２．５年、３年、または３年よりも長期間隔てられている。一部の実施形態では、腫瘍組織のＣＤ８＋Ｔ細胞のレベルは、患者への免疫療法剤の投与後に検出される。
一部の実施形態では、腫瘍組織に対する免疫療法剤の１つまたは複数の投薬レジメンの効果は、第１の時点および第２の時点にてＣＤ８結合性作用剤により測定される、患者の腫瘍組織のＣＤ８＋Ｔ細胞のレベルを比較することにより決定される。一部の実施形態では、免疫療法剤を対象に投与した後の腫瘍組織のＣＤ８＋Ｔ細胞のレベル（または局在化）は、免疫療法剤の投与前の第１の時点にておよび投与後の第２の時点にてＣＤ８結合性作用剤により測定される、腫瘍組織のＣＤ８＋Ｔ細胞のレベルを比較することにより決定される。
一部の実施形態では、ＣＤ８結合性作用剤は、検出可能な標識（例えば、８９Ｚｒ、１２４Ｉ、１８Ｆ、６８Ｇａなど）で標識されており、標識ＣＤ８結合性作用剤と、腫瘍組織のＣＤ８＋Ｔ細胞との結合は、ＰＥＴまたはＰＥＴ／ＣＴにより検出される。一部の実施形態では、ＣＤ８結合性作用剤は、１８Ｆ標識にコンジュゲートされた抗ＣＤ８ ＶＨＨである。一部の実施形態では、ＣＤ８結合性作用剤は、式（Ｉ）の化合物を介して［１８Ｆ］－フッ化アルミニウム錯体にコンジュゲートされた抗ＣＤ８ ＶＨＨである。一部の実施形態では、抗ＣＤ８ ＶＨＨは、配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む。一部の実施形態では、抗ＣＤ８ ＶＨＨは、配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む。一部の実施形態では、抗ＣＤ８ ＶＨＨは、配列番号３のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、抗ＣＤ８ ＶＨＨは、配列番号４のアミノ酸配列を含む。
一部の実施形態では、ＣＤ８結合性作用剤は、対象のがん進行を繰り返してモニターするために、１回よりも多く投与される。一部の実施形態では、対象は、そうした値の間の任意の値または範囲を含む、少なくとも約６か月、１年、２年、３年、４年、５年、１０年、またはそれよりも長期など、長期間にわたってモニターされる。
がんを有する対象の治療進行をモニターするための方法
本明細書では、免疫療法剤（例えば、本明細書の他所に記載の免疫療法剤）による治療を以前に受けたかまたは現在受けている、がんを有する対象の治療進行をモニターするための方法が提供される。このような方法は、免疫療法剤と併せて標識ＣＤ８結合性作用剤を対象に投与するステップ、ならびに第１の時点および第２の時点にて、標識ＣＤ８結合性作用剤と腫瘍組織のＣＤ８＋Ｔ細胞との結合を検出するステップを含む。一部の実施形態では、標識ＣＤ８結合性作用剤は、免疫療法剤前に投与され、第１の時点は、標識ＣＤ８結合性作用剤の投与後だが免疫療法剤の投与前であり、第２の時点は、免疫療法剤の投与後である。一部の実施形態では、第２の時点での腫瘍組織のＣＤ８＋Ｔ細胞のレベルが、第１の時点と比較してより低いことは、肯定的な治療進行（例えば、有益なまたは所望の臨床結果）を示す。一部の実施形態では、第２の時点での腫瘍組織のＣＤ８＋Ｔ細胞のレベルが、第１の時点と比較してより高いことは、治療進行の欠如（例えば、有益なまたは所望の臨床結果の欠如）を示す。一部の実施形態では、免疫療法剤は、標識ＣＤ８結合性作用剤の前に投与され、第１の時点は、免疫療法剤の投与後であり、かつ標識ＣＤ８結合性作用剤の投与後であり、第２の時点は、第１の時点の後である。一部の実施形態では、第２の時点での腫瘍組織のＣＤ８＋Ｔ細胞のレベルが、第１の時点と比較してより低いことは、肯定的な治療進行（例えば、有益なまたは所望の臨床結果）を示す。一部の実施形態では、第２の時点での腫瘍組織のＣＤ８＋Ｔ細胞のレベルが、第１の時点と比較してより高いことは、治療進行の欠如（例えば、有益なまたは所望の臨床結果の欠如）を示す。一部の実施形態では、方法は、治療失敗の機序、例えば、腫瘍ＣＤ８＋細胞の喪失によるか、疲弊によるか、および／または療法効力の喪失によるかを説明するために使用される。一部の実施形態では、腫瘍組織のＣＤ８＋Ｔ細胞のレベルは、第３、第４、または第５のその後の時点で検出される。一部の実施形態では、時点は、少なくとも約１日、３日、１週間、２週間、３週間、４週間、１か月、２か月、３か月、４か月、５か月、６か月、９か月、１２か月、１．５年、２年、２．５年、３年、または３年よりも長期間隔てられている。
一部の実施形態では、免疫療法剤は、免疫チェックポイント阻害剤である。一部の実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、抗ＰＤ－Ｌ１抗体（例えば、本明細書の他所に記載の通りの）である。一部の実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、アテゾリズマブである。一部の実施形態では、抗ＰＤ－Ｌ１抗体（アテゾリズマブなど）は、第２の療法剤（例えば、本明細書の他所に記載の通りの）と組み合わせて対象に投与される。
一部の実施形態では、ＣＤ８結合性作用剤は、検出可能な標識（例えば、８９Ｚｒ、１２４Ｉ、１８Ｆ、６８Ｇａなど）で標識されており、標識ＣＤ８結合性作用剤と、腫瘍組織のＣＤ８＋Ｔ細胞との結合は、ＰＥＴまたはＰＥＴ／ＣＴにより検出される。一部の実施形態では、ＣＤ８結合性作用剤は、１８Ｆ標識にコンジュゲートされた抗ＣＤ８ ＶＨＨである。一部の実施形態では、ＣＤ８結合性作用剤は、式（Ｉ）の化合物を介して［１８Ｆ］－フッ化アルミニウム錯体にコンジュゲートされた抗ＣＤ８ ＶＨＨである。一部の実施形態では、抗ＣＤ８ ＶＨＨは、配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む。一部の実施形態では、抗ＣＤ８ ＶＨＨは、配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む。一部の実施形態では、抗ＣＤ８ ＶＨＨは、配列番号３のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、抗ＣＤ８ ＶＨＨは、配列番号４のアミノ酸配列を含む。
一部の実施形態では、ＣＤ８結合性作用剤は、対象の治療進行を繰り返してモニターするために、１回よりも多く投与される。一部の実施形態では、対象は、そうした値の間の任意の値または範囲を含む、少なくとも約６か月、１年、２年、３年、４年、５年、１０年、またはそれよりも長期など、長期間にわたってモニターされる。
がんを有する対象の、がんワクチンによる治療に対する応答性を予測するための方法、およびがんワクチンが投与されたがんを有する対象の疾患進行をモニターするための方法
本明細書では、がんを有する対象の、がんワクチンによる治療に対する応答性を予測するための方法が提供される。一部の実施形態では、がんワクチンは、個別化がんワクチン（「ＰＣＶ」）である。例示的なＰＣＶは、例えば、Ott et al. (2017) Nature 547, 217-221およびSahin et al. (2017) Nature 547, 222-226に記載されている。一部の実施形態では、方法は、本明細書に記載の標識ＣＤ８結合性作用剤を投与するステップ、および標識ＣＤ８結合性作用剤と、対象の腫瘍組織のＣＤ８＋Ｔ細胞との結合を検出するステップを含み、結合の検出は、対象ががんワクチンに応答する可能性が高いことを示す。一部の実施形態では、方法は、本明細書に記載の標識ＣＤ８結合性作用剤を投与するステップ、および標識ＣＤ８結合性作用剤と、対象の腫瘍組織のＣＤ８＋Ｔ細胞との結合を検出するステップを含み、結合の検出は、対象には、がんワクチンによる治療が必要であることを示す。一部の実施形態では、がんワクチンは、本明細書に記載の１つまたは複数の免疫療法剤および／または化学療法剤と組み合わせて投与される。
また、本明細書では、がんを有する対象の疾患進行をモニターするための方法が提供される。そのような方法は、本明細書に記載のＣＤ８結合性作用剤を対象に投与するステップ、ならびに第１の時点および第２の時点にて、標識ＣＤ８結合性作用剤と対象の腫瘍組織のＣＤ８＋Ｔ細胞との結合を検出するステップを含む。一部の実施形態では、方法は、治療有効量のがんワクチンを投与するステップをさらに含む。一部の実施形態では、がんワクチンは、個別化がんワクチン（「ＰＣＶ」）である。
本明細書では、がんワクチンによる治療を以前に受けたかまたは現在受けている、がんを有する対象の治療進行をモニターするための方法が提供される。一部の実施形態では、がんワクチンは、個別化がんワクチン（「ＰＣＶ」）である。一部の実施形態では、方法は、（ａ）がんワクチン（例えば、ＰＣＶ）を投与する前に、標識ＣＤ８結合性作用剤を対象に投与し、標識ＣＤ８結合性作用剤と腫瘍組織のＣＤ８＋Ｔ細胞との結合を検出するステップ、（ｂ）がんワクチン（例えば、ＰＣＶ）を投与するステップ、（ｃ）がんワクチン（例えば、ＰＣＶ）投与後の時点で、標識ＣＤ８結合性作用剤を対象に投与し、標識ＣＤ８結合性作用剤と腫瘍組織のＣＤ８＋Ｔ細胞との結合を検出するステップ、および（ｄ）がんワクチン（例えば、ＰＣＶ）の投与前後の、腫瘍組織におけるＣＤ８＋Ｔ細胞の標識化の差異を測定するステップを含む。一部の実施形態では、方法は、治療失敗の機序、例えば、腫瘍ＣＤ８＋細胞の喪失によるか、疲弊によるか、および／または療法効力の喪失によるかを説明するために使用される。
一部の実施形態では、ＣＤ８結合性作用剤は、検出可能な標識（例えば、８９Ｚｒ、１２４Ｉ、１８Ｆ、６８Ｇａなど）で標識されており、標識ＣＤ８結合性作用剤と、腫瘍組織のＣＤ８＋Ｔ細胞との結合は、ＰＥＴまたはＰＥＴ／ＣＴにより検出される。一部の実施形態では、ＣＤ８結合性作用剤は、１８Ｆ標識にコンジュゲートされた抗ＣＤ８ ＶＨＨである。一部の実施形態では、ＣＤ８結合性作用剤は、式（Ｉ）の化合物を介して［１８Ｆ］－フッ化アルミニウム錯体にコンジュゲートされた抗ＣＤ８ ＶＨＨである。一部の実施形態では、抗ＣＤ８ ＶＨＨは、配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む。一部の実施形態では、抗ＣＤ８ ＶＨＨは、配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む。一部の実施形態では、抗ＣＤ８ ＶＨＨは、配列番号３のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、抗ＣＤ８ ＶＨＨは、配列番号４のアミノ酸配列を含む。
一部の実施形態では、ＣＤ８結合性作用剤は、対象において繰り返して予測またはモニターするために、１回よりも多く投与される。一部の実施形態では、こうした値の間の任意の値または範囲を含む、少なくとも約６か月、１年、２年、３年、４年、５年、１０年、またはそれよりも長期など、長期間にわたって、方法が繰り返されるか、または対象がモニターされる。
がんを有する対象の、細胞療法による治療に対する応答性を予測するための方法、および細胞療法が投与された、がんを有する対象の疾患進行をモニターするための方法
本明細書では、がんを有する対象の、細胞療法による治療に対する応答性を予測するための方法が提供される。一部の実施形態では、細胞療法は、ＣＡＲ－Ｔまたはネオ抗原特異的Ｔ細胞療法である。例示的な細胞治療は、例えば、June et al. (2018) Science 359, 1361-1365およびGuedan et al. (2019) Annu. Rev. Immunol. 37:145-171に記載されている。一部の実施形態では、方法は、本明細書に記載の標識ＣＤ８結合性作用剤を投与するステップ、および標識ＣＤ８結合性作用剤と対象の腫瘍組織のＣＤ８＋Ｔ細胞との結合を検出するステップを含み、結合の検出は、対象が、細胞治療に応答する可能性が高いことを示す。一部の実施形態では、方法は、本明細書に記載の標識ＣＤ８結合性作用剤を投与するステップ、および標識ＣＤ８結合性作用剤と対象の腫瘍組織のＣＤ８＋Ｔ細胞との結合を検出するステップを含み、結合の検出は、対象には、細胞治療による治療が必要であることを示す。一部の実施形態では、細胞療法は、本明細書に記載の１つまたは複数の免疫療法剤および／または化学療法剤と組み合わせて投与される。
また、本明細書では、がんを有する対象の疾患進行をモニターするための方法が提供される。そのような方法は、本明細書に記載のＣＤ８結合性作用剤を対象に投与するステップ、ならびに第１の時点および第２の時点にて、標識ＣＤ８結合性作用剤と対象の腫瘍組織のＣＤ８＋Ｔ細胞との結合を検出するステップを含む。一部の実施形態では、方法は、治療有効量の細胞療法を投与するステップをさらに含む。
本明細書では、細胞療法による治療を以前に受けたかまたは現在受けている、がんを有する対象の治療進行をモニターするための方法が提供される。一部の実施形態では、細胞療法は、ＣＡＲ－Ｔまたはネオ抗原特異的Ｔ細胞療法である。一部の実施形態では、方法は、（ａ）細胞療法を投与する前に、標識ＣＤ８結合性作用剤を対象に投与し、標識ＣＤ８結合性作用剤と腫瘍組織のＣＤ８＋Ｔ細胞との結合を検出するステップ、（ｂ）細胞治療を投与するステップ、（ｃ）細胞療法投与後の時点で、標識ＣＤ８結合性作用剤を対象に投与し、標識ＣＤ８結合性作用剤と腫瘍組織のＣＤ８＋Ｔ細胞との結合を検出するステップ、および（ｄ）細胞療法の投与前後の、腫瘍組織におけるＣＤ８＋Ｔ細胞の標識化の差異を測定するステップを含む。一部の実施形態では、方法は、治療失敗の機序、例えば、腫瘍ＣＤ８＋細胞の喪失によるか、疲弊によるか、および／または療法効力の喪失によるかを説明するために使用される。
一部の実施形態では、ＣＤ８結合性作用剤は、検出可能な標識（例えば、８９Ｚｒ、１２４Ｉ、１８Ｆ、６８Ｇａなど）で標識されており、標識ＣＤ８結合性作用剤と、腫瘍組織のＣＤ８＋Ｔ細胞との結合は、ＰＥＴまたはＰＥＴ／ＣＴにより検出される。一部の実施形態では、ＣＤ８結合性作用剤は、１８Ｆ標識にコンジュゲートされた抗ＣＤ８ ＶＨＨである。一部の実施形態では、ＣＤ８結合性作用剤は、式（Ｉ）の化合物を介して［１８Ｆ］－フッ化アルミニウム錯体にコンジュゲートされた抗ＣＤ８ ＶＨＨである。一部の実施形態では、抗ＣＤ８ ＶＨＨは、配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む。一部の実施形態では、抗ＣＤ８ ＶＨＨは、配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む。一部の実施形態では、抗ＣＤ８ ＶＨＨは、配列番号３のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、抗ＣＤ８ ＶＨＨは、配列番号４のアミノ酸配列を含む。
一部の実施形態では、ＣＤ８結合性作用剤は、対象において繰り返して予測またはモニターするために、１回よりも多く投与される。一部の実施形態では、こうした値の間の任意の値または範囲を含む、少なくとも約６か月、１年、２年、３年、４年、５年、１０年、またはそれよりも長期など、長期間にわたって、方法が繰り返されるか、または対象がモニターされる。
自己免疫疾患または状態、移植拒絶、および移植片対宿主病のための方法
本明細書に記載のＣＤ８結合性作用剤は、感度が高く免疫原性が低いため、疾患進行をモニターするのに、免疫療法に対する応答性を予測するのに、および／あるいは自己免疫疾患もしくは状態、移植拒絶、または移植片対宿主病を有する対象の治療進行をモニターするのに好適である。一部の実施形態では、免疫療法は、免疫抑制剤である。
本明細書では、自己免疫疾患もしくは状態（例えば、自己免疫性関節炎、大腸炎、セリアック病）、移植拒絶、または移植片対宿主疾患を有する対象の治療進行および疾患進行をモニターするための方法が提供される。そのような疾患にはすべて、損傷性炎症プロセスの一部としてＣＤ８＋Ｔ細胞が伴う。Petrelli & Femke, CD8+ T cells in human autoimmune arthritis: the usual suspects; Nature Reviews Thumatology 12:421-428 (2016)を参照されたい。そのような方法は、介入治療と共にまたは伴わすに、標識ＣＤ８結合性作用剤を対象に投与するステップ、ならびに第１の時点および第２の時点にて、標識ＣＤ８結合性作用剤と組織のＣＤ８＋Ｔ細胞との結合を検出するステップを含む。一部の実施形態では、第１の時点および第２の時点からのＣＤ８＋Ｔ細胞の増加は、自己免疫疾患もしくは状態、移植拒絶、または移植片対宿主病が進行したことを示す。一部の実施形態では、自己免疫疾患もしくは状態、移植拒絶、または移植片対宿主病を治療するための介入療法は、標識ＣＤ８結合性作用剤の前に投与され、第１の時点は、自己免疫疾患もしくは状態、移植拒絶、または移植片対宿主病を治療するための介入療法の投与後であり、かつ標識ＣＤ８結合性作用剤の投与後であり、第２の時点は第１の時点の後である。一部の実施形態では、第２の時点での組織のＣＤ８＋Ｔ細胞のレベルが、第１の時点と比較してより低いことは、肯定的な治療進行（例えば、有益なまたは所望の臨床結果）を示す。一部の実施形態では、第２の時点での疾患組織のＣＤ８＋Ｔ細胞のレベルが、第１の時点と比較してより高いことは、治療進行の欠如（例えば、有益なまたは所望の臨床結果の欠如）を示す。一部の実施形態では、組織のＣＤ８＋Ｔ細胞のレベルは、第３、第４、または第５のその後の時点で検出される。一部の実施形態では、その後の時点での組織のＣＤ８＋Ｔ細胞のレベルが、第１の時点と比較してより低いことは、治療進行の欠如（例えば、有益なまたは所望の臨床結果の欠如）を示す。一部の実施形態では、その後の時点での疾患組織のＣＤ８＋Ｔ細胞のレベルが、第１の時点と比較してより高いことは、治療進行の欠如（例えば、有益なまたは所望の臨床結果の欠如）を示す。一部の実施形態では、方法は、治療失敗の機序を説明するために使用される。一部の実施形態では、時点は、少なくとも約１日、３日、１週間、２週間、３週間、４週間、１か月、２か月、３か月、４か月、５か月、６か月、９か月、１２か月、１．５年、２年、２．５年、３年、または３年よりも長期間隔てられている。
また、本明細書では、自己免疫疾患もしくは状態、移植拒絶、または移植片対宿主病を有する対象の、免疫療法剤（例えば、免疫抑制剤）に対する応答性を予測するための方法が提供される。一部の実施形態では、方法は、本明細書に記載の標識ＣＤ８結合性作用剤を投与するステップ、および標識ＣＤ８結合性作用剤と対象の疾患組織のＣＤ８＋Ｔ細胞との結合を検出するステップを含み、結合の検出は、対象が免疫療法剤に応答する可能性が高いことを示す。一部の実施形態では、方法は、本明細書に記載の標識ＣＤ８結合性作用剤を投与するステップ、および標識ＣＤ８結合性作用剤と、対象の疾患組織のＣＤ８＋Ｔ細胞との結合を検出するステップを含み、結合の検出は、対象には、免疫療法剤による治療が必要であることを示す。一部の実施形態では、方法は、結合が検出された対象に、治療有効量の免疫療法剤を投与するステップをさらに含む。
本明細書では、免疫療法剤を受けたかまたは受けている、自己免疫疾患もしくは状態、移植拒絶、または移植片対宿主病を有する対象の治療進行をモニターするための方法がさらに提供される。一部の実施形態では、方法は、（ａ）免疫療法剤を投与する前に、標識ＣＤ８結合性作用剤を対象に投与し、標識ＣＤ８結合性作用剤と疾患組織のＣＤ８＋Ｔ細胞との結合を検出するステップ、（ｂ）免疫療法剤を投与するステップ、（ｃ）免疫療法剤投与後の時点で、標識ＣＤ８結合性作用剤を対象に投与し、標識ＣＤ８結合性作用剤と疾患組織のＣＤ８＋Ｔ細胞との結合を検出するステップ、および（ｄ）免疫療法剤の投与前後の腫瘍組織におけるＣＤ８＋Ｔ細胞の標識の差異を測定するステップを含む。一部の実施形態では、免疫療法剤の投与後の時点での疾患組織のＣＤ８＋Ｔ細胞のレベルが、免疫療法剤の投与前の時点と比較してより低いことは、肯定的な治療進行（例えば、有益なまたは所望の臨床結果）を示す。一部の実施形態では、免疫療法剤の投与後の時点での疾患組織のＣＤ８＋Ｔ細胞のレベルが、免疫療法剤の投与前の時点と比較してより高いことは、治療進行の欠如（例えば、有益なまたは所望の臨床結果の欠如）を示す。一部の実施形態では、組織のＣＤ８＋Ｔ細胞のレベルは、１回、２回、３回、４回、またはそれより多いその後の時点で検出される。一部の実施形態では、方法は、治療失敗の機序を説明するために使用される。一部の実施形態では、時点は、少なくとも約１日、３日、１週間、２週間、３週間、４週間、１か月、２か月、３か月、４か月、５か月、６か月、９か月、１２か月、１．５年、２年、２．５年、３年、または３年よりも長期間隔てられている。
一部の実施形態では、ＣＤ８結合性作用剤は、検出可能な標識（例えば、８９Ｚｒ、１２４Ｉ、１８Ｆ、６８Ｇａなど）で標識されており、標識ＣＤ８結合性作用剤と腫瘍組織のＣＤ８＋Ｔ細胞との結合は、ＰＥＴまたはＰＥＴ／ＣＴにより検出される。一部の実施形態では、ＣＤ８結合性作用剤は、１８Ｆ標識にコンジュゲートされた抗ＣＤ８ ＶＨＨである。一部の実施形態では、ＣＤ８結合性作用剤は、式（Ｉ）の化合物を介して［１８Ｆ］－フッ化アルミニウム錯体にコンジュゲートされた抗ＣＤ８ ＶＨＨである。一部の実施形態では、抗ＣＤ８ ＶＨＨは、配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む。一部の実施形態では、抗ＣＤ８ ＶＨＨは、配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む。一部の実施形態では、抗ＣＤ８ ＶＨＨは、配列番号３のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、抗ＣＤ８ ＶＨＨは、配列番号４のアミノ酸配列を含む。
一部の実施形態では、方法は、腎臓移植拒絶、肝臓移植拒絶、心臓移植拒絶、または心肺移植拒絶などの移植拒絶に使用される。一部の実施形態では、方法は、肝炎、狼瘡（例えば、ＳＬＥ）、血管炎、および多発性硬化症を含む脱髄を伴う神経炎などの自己免疫疾患または状態に使用される。
一部の実施形態では、免疫療法剤は、免疫抑制剤である。好適な免疫抑制剤としては、これらに限定されないが、プレドニゾン、シクロホスファミド、シクロスポリン、ミコフェノール酸モフェチル、イブルチニブ（ibrutinub）、ルキソリチニブ、ならびにＴＮＦ－アルファ抗体、例えば、アダリムマブ、エタネルセプト、ゴリムマブ、およびインフリキシマブなどの生物製剤が挙げられる。
一部の実施形態では、ＣＤ８結合性作用剤は、対象において繰り返して予測またはモニターするために、１回よりも多く投与される。一部の実施形態では、こうした値の間の任意の値または範囲を含む、少なくとも約６か月、１年、２年、３年、４年、５年、１０年、またはそれよりも長期など、長期間にわたって、方法が繰り返されるか、または対象がモニターされる。
一部の実施形態では、ＣＤ８結合性作用剤は、がん、自己免疫疾患もしくは状態、移植拒絶、または移植片対宿主病に関与するリンパ系組織および器官の連続評価を可能にすることができる。一部の実施形態では、対象においてＣＤ８結合性作用剤から検出されるレベルまたはシグナルを、他の画像化技術（例えば、ＭＲＩ）と相関させることができる。一部の実施形態では、対象においてＣＤ８結合性作用剤から検出されるレベルまたはシグナルを、血液および／または組織バイオマーカー（例えば、組織生検バイオマーカー）と相関させることができる。
一部の実施形態では、ＣＤ８結合性作用剤は、例えば、ＰＥＴ、ＳＰＥＣＴ、またはシンチグラフィースキャンなどの別の画像化スキャンを用いた多重画像化を可能にする。
一部の実施形態では、ＣＤ８結合性作用剤を使用して得られた画像化データを、ＭＲＩ、ＣＴ、超音波、またはｘ線などの他の放射線学的方法からのデータと相関させる。
医薬組成物
また、抗ＣＤ８抗体（例えば、抗ＣＤ８ ＶＨＨ）などのＣＤ８結合性作用剤、または抗ＣＤ８抗体（例えば、抗ＣＤ８ ＶＨＨ）などのＣＤ８結合性作用剤をコードする配列を含むポリヌクレオチドを含む医薬製剤を含む組成物が提供される。一部の実施形態では、組成物は、ＣＤ８に結合する１つもしくは複数のＣＤ８結合性作用剤、またはＣＤ８に結合する１つもしくは複数のＣＤ８結合性作用剤をコードする配列を含む１つもしくは複数のポリヌクレオチドを含む。こうした組成物は、当技術分野で周知である、緩衝液を含む薬学的に許容される賦形剤などの好適な担体をさらに含んでいてもよい。
一部の実施形態では、本明細書に記載のＣＤ８結合性作用剤（例えば、標識ＣＤ８結合性作用剤）のいずれか１つ、および薬学的に許容される担体を含む医薬組成物が提供される。一部の実施形態では、本明細書に記載の標識ＣＤ８結合性作用剤のいずれか１つ、ならびにメチオニンおよび／またはＮ－アセチルトリプトファンなどの１つまたは複数の抗酸化化合物を含む医薬製剤が提供される。一部の実施形態では、医薬製剤は、ヒスチジン、メチオニン、Ｎ－アセチルトリプトファン、および／またはスクロースを含む。一部の実施形態では、医薬製剤は、ヒスチジン、メチオニン、Ｎ－アセチルトリプトファン、およびスクロースを含む。
本明細書に記載の通りのＣＤ８結合性作用剤の医薬製剤は、所望の純度を有するそのような抗体を、１つまたは複数の任意選択の薬学的に許容される担体と混合することにより、凍結乾燥製剤または水性溶液の形態で調製される（Remington's Pharmaceutical Sciences 16th edition, Osol, A. Ed. (1980)）。薬学的に許容される担体は、一般に、使用される投薬量および濃度でレシピエントに対して非毒性であり、薬学的に許容される担体としては、これらに限定されないが、以下のものが挙げられる：リン酸塩、クエン酸塩、および他の有機酸などの緩衝剤；アスコルビン酸、Ｎ－アセチルトリプトファン、およびメチオニンを含む抗酸化剤；保存剤（オクタデシルジメチルベンジルアンモニウムクロリド；ヘキサメトニウムクロリド；ベンザルコニウムクロリド；ベンゼトニウムクロリド；フェノール；ブチルまたはベンジルアルコール；メチルまたはプロピルパラベンなどのアルキルパラベン；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール；３－ペンタノール、およびｍ－クレゾールなど）；低分子量（約１０残基未満の）ポリペプチド；血清アルブミン、ゼラチン、もしくは免疫グロブリンなどのタンパク質；ポリビニルピロリドンなどの親水性ポリマー；グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、もしくはリジンなどのアミノ酸；モノサッカライド、ジサッカライド、およびグルコース、マンノース、もしくはデキストリンを含む他の炭水化物；ＥＤＴＡなどのキレート剤；スクロース、マンニトール、トレハロース、もしくはソルビトールなどの糖；ナトリウムなどの塩形成対イオン；金属複合体（例えば、Ｚｎ－タンパク質錯体）；ならびに／またはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）などの非イオン性界面活性剤。本明細書の例示的な薬学的に許容される担体としては、可溶性中性活性ヒアルロニダーゼ糖タンパク質（ｓＨＡＳＥＧＰ）、例えば、ｒＨｕＰＨ２０（ＨＹＬＥＮＥＸ（登録商標）、Ｂａｘｔｅｒ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ， Ｉｎｃ．）などのヒト可溶性ＰＨ－２０ヒアルロニダーゼ糖タンパク質などの間質性薬物分散剤がさらに挙げられる。ｒＨｕＰＨ２０を含む、ある特定の例示的なｓＨＡＳＥＧＰおよび使用方法は、米国特許出願公開第２００５／０２６０１８６号明細書および第２００６／０１０４９６８号明細書に記載されている。一態様では、ｓＨＡＳＥＧＰを、コンドロイチナーゼなどの１つまたは複数の追加のグリコサミノグリカナーゼと組み合わせる。
例示的な凍結乾燥抗体製剤は、米国特許第６，２６７，９５８号明細書に記載されている。水性抗体製剤としては、米国特許第６，１７１，５８６号明細書および国際公開第２００６／０４４９０８号パンフレットに記載されているものが挙げられ、後者の製剤は、ヒスチジン－アセテート緩衝剤を含む。
また、本明細書の製剤は、必要に応じて、治療される特定の適応症（例えば、がん、自己免疫疾患もしくは状態、移植拒絶、または移植片対宿主病）のための１つよりも多くの活性成分（例えば、免疫療法剤）、好ましくは互いに有害効果を及ぼさない補完的な活性を有するものを含有する。例えば、スタチンをさらに提供することが望ましい場合がある。そのような活性成分は、好適には、意図されている目的のために有効な量で組み合わされて存在する。
活性成分は、例えば、コアセルベーション技法によりまたは界面重合により調製されたマイクロカプセル、例えば、それぞれヒドロキシメチルセルロースまたはゼラチン－マイクロカプセルおよびポリ(メタクリル酸メチル)（poly-(methylmethacylate)）マイクロカプセルに、コロイド状薬物送達系に（例えば、リポソーム、アルブミンマイクロスフェア、マイクロエマルジョン、ナノ粒子、およびナノカプセルに）、またはマクロエマルジョンに封入されていてもよい。このような技法は、Remington's Pharmaceutical Sciences 16th edition, Osol, A. Ed. (1980)に開示されている。
持続放出製剤を調製してもよい。持続放出調製物の好適な例としては、抗体を含有する固体疎水性ポリマーの半透性マトリックスが挙げられ、このマトリックスは、成形品、例えば、フィルムまたはマイクロカプセルの形態である。
ｉｎ ｖｉｖｏ投与に使用される製剤は、一般に無菌である。無菌は、例えば、無菌濾過膜による濾過により容易に達成することができる。
製造品およびキット
一部の実施形態では、疾患（例えば、がん、自己免疫性疾患もしくは状態、移植拒絶、または移植片対宿主疾患）を有する対象の、免疫療法剤に対する応答性を予測するのに、疾患（例えば、がん、自己免疫疾患もしくは状態、移植拒絶、または移植片対宿主疾患）を有する対象の疾患進行をモニターするのに、および／または疾患（例えば、がん、自己免疫性疾患もしくは状態、移植拒絶、または移植片対宿主疾患）を有する対象の、治療進行をモニターするのに有用な材料を含有する製造品またはキットが提供される。
一部の実施形態では、製造品またはキットは、本明細書に記載のＣＤ８結合性作用剤または組成物の１つまたは複数を含有する容器を含む。一部の実施形態では、製造品またはキットは、本明細書に記載のＣＤ８結合性作用剤または組成物の１つ（または複数）をコードする核酸を含有する容器を含む。一部の実施形態では、キットは、本明細書に記載の通りのＣＤ８結合性作用剤（例えば、抗ＣＤ８抗体）を産生する細胞株の細胞を含む。
一部の実施形態では、キットまたは製造品は、抗ＣＤ８ ＶＨＨを含む。一部の実施形態では、キットまたは製造品は、標識ＣＤ８結合性作用剤、例えば、検出可能な標識を含むイムノコンジュゲートを含む。一部の実施形態では、キットは、抗ＣＤ８抗体（例えば、抗ＣＤ８ ＶＨＨ）および標識ＣＤ８結合性作用剤を両方とも含む。一部の実施形態では、キットまたは製造品は、式（Ｉ）のキレート剤および［１８Ｆ］－フッ化アルミニウム錯体などの、標識ＣＤ８結合性作用剤を調製するための試薬をさらに含む。
一部の実施形態では、標識ＣＤ８結合性作用剤は、１８Ｆ標識にコンジュゲートされた抗ＣＤ８ ＶＨＨである。一部の実施形態では、ＣＤ８結合性作用剤は、式（Ｉ）の化合物を介して［１８Ｆ］－フッ化アルミニウム錯体にコンジュゲートされた抗ＣＤ８ ＶＨＨである。一部の実施形態では、抗ＣＤ８ ＶＨＨは、配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む。一部の実施形態では、抗ＣＤ８ ＶＨＨは、配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む。一部の実施形態では、抗ＣＤ８ ＶＨＨは、配列番号３のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、抗ＣＤ８ ＶＨＨは、配列番号４のアミノ酸配列を含む。
一部の実施形態では、キットは、１つまたは複数の陽性対照、例えば、ＣＤ８（またはその断片）またはＣＤ８＋細胞を含む。一部の実施形態では、キットは、陰性対照、例えば、実質的にＣＤ８を含まない表面または溶液を含む。
一部の実施形態では、製造品またはキットは、容器、および容器上のまたは容器に付随したラベルまたは添付文書を含む。好適な容器としては、例えば、ボトル、バイアル、注射器、ＩＶ輸注液バッグなどが挙げられる。容器は、ガラスまたはプラスチックなど、様々な材料で形成することができる。容器は、それ自体が、がんの治療、予防、および／もしくは診断に効果的な別の組成物であるかまたはそれと組み合わせた組成物を保持し、無菌アクセスポートを有してもよい（例えば、容器は、静脈輸注液バッグ、または皮下注射針で穿孔することができるストッパーを有するバイアルであってもよい）。組成物中の少なくとも１つの作用剤は、本明細書に記載のＣＤ８結合性作用剤である。ラベルまたは添付文書は、組成物が、がんを有する対象の、免疫療法剤に対する応答性を予測するために、がんを有する対象の疾患進行をモニターするために、および／またはがんを有する対象の治療進行をモニターするために使用されることを示す。
さらに、製造品またはキットは、（ａ）その中に組成物が含有されている第１の容器であって、組成物は本明細書に記載のＣＤ８結合性作用剤を含む、第１の容器、および（ｂ）その中に組成物が含有されている第２の容器であって、組成物はさらなる細胞傷害剤またはそうでなければ療法剤を含む、第２の容器を含んでいてもよい。一部の実施形態では、療法剤は、本明細書に記載の通りの免疫療法剤である。
本明細書で提供される製造品またはキットは、疾患（例えば、がん、自己免疫性疾患もしくは状態、移植拒絶、または移植片対宿主疾患）を有する対象の、免疫療法剤に対する応答性を予測するために、疾患（例えば、がん、自己免疫疾患もしくは状態、移植拒絶、または移植片対宿主疾患）を有する対象の疾患進行をモニターするために、および／または疾患（例えば、がん、自己免疫疾患もしくは状態、移植拒絶、または移植片対宿主疾患）を有する対象の治療進行をモニターするために、組成物を使用することができることを示す添付文書をさらに含んでいてもよい。加えて、製造品は、注射用静菌性水（ＢＷＦＩ）、リン酸緩衝生理食塩水、リンゲル液、およびデキストロース溶液などの薬学的に許容される緩衝液を含む第２の（または第３の）容器をさらに含んでいてもよい。製造品は、他の緩衝液、希釈剤、フィルター、針、および注射器を含む、商業的観点およびユーザー観点から望ましい他の材料をさらに含んでいてもよい。
例示的な実施形態
本出願は、以下の実施形態を提供する。
１． 重鎖抗体の重鎖の可変ドメイン（ＶＨＨドメイン）を含むＣＤ８結合性作用剤であって、約１ｎＭまたはそれよりも低いＫＤでヒトＣＤ８に特異的に結合するＣＤ８結合性作用剤。
２． 約０．００２／秒またはそれより低いｋｏｆｆでヒトＣＤ８に結合する、実施形態１に記載のＣＤ８結合性作用剤。
３． ＫＤおよび／またはｋｏｆｆは、単アームヒトＣＤ８α／ヒトＣＤ８β－Ｆｃ融合タンパク質（例えば、Ｆｃの１つのポリペプチド鎖に融合されている、ヒトＣＤ８αおよびヒトＣＤ８βを含む単鎖ポリペプチド）を試薬として使用して表面プラズモン共鳴法により決定される、実施形態１または２に記載のＣＤ８結合性作用剤。
４．約１ｎＭまたはそれよりも低いＫＤでカニクイザルＣＤ８に結合する、実施形態１～３のいずれか１つに記載のＣＤ８結合性作用剤。
５． 約０．００４／秒またはそれより低いｋｏｆｆでカニクイザルＣＤ８に結合する、実施形態１～４のいずれか１つに記載のＣＤ８結合性作用剤。
６． ＫＤおよび／またはｋｏｆｆは、単アームカニクイザルＣＤ８α／カニクイザルＣＤ８β－Ｆｃ融合タンパク質（例えば、Ｆｃの１つのポリペプチド鎖に融合されている、カニクイザルＣＤ８αおよびカニクイザルＣＤ８βを含む単鎖ポリペプチド）を試薬として使用して表面プラズモン共鳴法により決定される、実施形態４または５に記載のＣＤ８結合性作用剤。
７． ＣＤ８＋Ｔ細胞の活性化を刺激も阻害もしない、実施形態１～６のいずれか１つに記載のＣＤ８結合性作用剤。
８． ＣＤ８＋Ｔ細胞増殖を誘導しない、実施形態１～７のいずれか１つに記載のＣＤ８結合性作用剤。
９． ＣＤ４＋Ｔ細胞に結合しない、実施形態１～８のいずれか１つに記載のＣＤ８結合性作用剤。
１０． ＶＨＨドメインがラマＶＨＨである、実施形態１～９のいずれか１つに記載のＣＤ８結合性作用剤。
１１． ＶＨＨドメインがヒト化されている、実施形態１～１０のいずれか１つに記載のＣＤ８結合性作用剤。
１２． ＶＨＨドメインが、Ａｒｇ２５、Ｌｙｓ４２、Ｇｌｎ４４、Ｖａｌ４５、Ｌｅｕ４６、Ｌｅｕ４７、Ｓｅｒ４８、Ｐｒｏ５０、Ｔｈｒ５１、Ｓｅｒ５２、Ｇｌｎ７５、Ａｒｇ９３、Ｌｅｕ９４、Ｇｌｙ９５、Ａｓｐ９６、およびＴｈｒ９７を含むヒトＣＤ８αエピトープに特異的に結合し、アミノ酸付番は配列番号１３による、実施形態１～１１のいずれか１つに記載のＣＤ８結合性作用剤。
１３． ＶＨＨドメインが、配列番号６または７のアミノ酸配列を含む相補性決定領域（ＣＤＲ）１；配列番号８または９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；および配列番号１０～１２のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む、実施形態１２に記載のＣＤ８結合性作用剤。
１４． ＶＨＨドメインが、
（１）配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号１０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３；
（２）配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３；
（３）配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３；または
（４）配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３
を含む、実施形態１３に記載のＣＤ８結合性作用剤。
１５． ＶＨＨドメインが、配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む、実施形態１３に記載のＣＤ８結合性作用剤。
１６． ＶＨＨドメインが、Ｌ４９Ａを含み、付番はＫａｂａｔ付番による、実施形態１～１５のいずれか１つに記載のＣＤ８結合性作用剤。
１７． ＶＨＨドメインが、Ｖ８９Ｔ置換、Ｔ１１０Ｑ置換、Ｓ１１２Ｑ置換、およびＡ１１４付加からなる群から選択される１つまたは複数のアミノ酸修飾を含み、付番はＫａｂａｔ付番による、実施形態１～１６のいずれか１つに記載のＣＤ８結合性作用剤。
１８． ＶＨＨドメインが、配列番号１～４のいずれか１つのアミノ酸配列を含む、実施形態１～１７のいずれか１つに記載のＣＤ８結合性作用剤。
１９． Ｆｃ領域を含まない、実施形態１～１８のいずれか１つに記載のＣＤ８結合性作用剤。
２０． 実施形態１～１９のいずれか１つに記載のＣＤ８結合性作用剤をコードする単離された核酸。
２１． 実施形態２０に記載の核酸を含む発現ベクター。
２２． 実施形態２０に記載の核酸または実施形態２１に記載の発現ベクターを含む宿主細胞。
２３． 真核細胞である、実施形態２２に記載の宿主細胞。
２４． 哺乳動物細胞である、実施形態２３に記載の宿主細胞。
２５． Ｅｘｐｉ２９３細胞である、実施形態２４に記載の宿主細胞。
２６． 原核細胞である、実施形態２２に記載の宿主細胞。
２７． ＣＤ８結合性作用剤を製作するための方法であって、
ａ）実施形態２２～２６のいずれか１つに記載の宿主細胞を、作用剤が産生される条件下で培養するステップ；および
ｂ）宿主細胞により産生されたＣＤ８結合性作用剤を回収するステップ
を含む方法。
２８． ＶＨＨドメインが、標識にコンジュゲートされている、実施形態１～１９のいずれか１つに記載のＣＤ８結合性作用剤。
２９． 標識が、蛍光色素、放射性核種、または酵素である、実施形態２８に記載のＣＤ８結合性作用剤。
３０． 標識が、放射性核種である、実施形態２９に記載のＣＤ８結合性作用剤。
３１． 放射性核種が、１８Ｆ、８９Ｚｒ、９９ｍＴｃ、６７Ｇａ、６８Ｇａ、６４Ｃｕ、５２Ｍｎ，１１１Ｉｎ、または１２４Ｉである、実施形態３０に記載のＣＤ８結合性作用剤。
３２． ＶＨＨドメインが、キレート部分を介して標識にコンジュゲートされている、実施形態２８～３１のいずれか１つに記載のＣＤ８結合性作用剤。
３３． キレート部分が、リジン残基を介してＶＨＨドメインに共有結合で連結されている、実施形態３２に記載のＣＤ８結合性作用剤。
３４． 標識が、金属と錯体を形成し、錯体は、キレート部分によりキレートされている、実施形態３２または３３に記載のＣＤ８結合性作用剤。
３５． 標識が１８Ｆであり、金属がアルミニウムである、実施形態３４に記載のＣＤ８結合性作用剤。
３６． キレート部分が、式（Ｉ）：
Figure 2022547483000006
 の化合物である、実施形態３５に記載のＣＤ８結合性作用剤。
３７． 対象のＣＤ８＋細胞を検出するための方法であって、
ａ）実施形態２８～３６のいずれか１つに記載の標識ＣＤ８結合性作用剤を対象に投与するステップ；および
ｂ）標識ＣＤ８結合性作用剤と対象のＣＤ８＋細胞との結合を検出するステップ
を含み、結合の検出はＣＤ８＋細胞の存在を示す、
方法。
３８． 標識ＣＤ８結合性作用剤と対象のＣＤ８＋細胞との結合を検出するステップが、対象のＣＤ８＋細胞を画像化することを含む、実施形態３７に記載の方法。
３９． 対象のＣＤ８＋細胞の画像化が、対象に対して陽電子放出断層撮影（ＰＥＴ）スキャンまたは陽電子放出断層撮影／コンピュータ断層撮影（ＰＥＴ／ＣＴ）スキャンを実施することを含む、実施形態３８に記載の方法。
４０． ＣＤ８＋細胞が、ＣＤ８＋Ｔ細胞である、実施形態３７～３９のいずれか１つに記載の方法。
４１． ＣＤ８＋細胞が、ＣＤ８＋腫瘍細胞である、実施形態３７～４０のいずれか１つに記載の方法。
４２． 検出するステップが、投与後約１日以内またはそれよりも短時間以内に実施される、実施形態３７～４１のいずれか１つに記載の方法。
４３． １回または複数回繰り返される、実施形態３７～４２のいずれか１つに記載の方法。
４４． ＣＤ８結合性作用剤の以前の投与後の約１日後に繰り返される、実施形態４３に記載の方法。
４５． 年間１～４回繰り返される、実施形態４３または４４に記載の方法。
４６． １年よりも長期間にわたって繰り返される、実施形態４３～４５のいずれか１つに記載の方法。
４７． 約１ｎＭ～約３０ｎＭの感度を有する、実施形態３７～４６のいずれか１つに記載の方法。
４８． 対象が、ヒトまたは非ヒト霊長類である、実施形態３７～４７のいずれか１つに記載の方法。
４９． 非ヒト霊長類が、カニクイザルまたはアカゲザルである、実施形態４８に記載の方法。
５０． 対象がヒトである、実施形態４８に記載の方法。
５１． 対象ががんを有する、実施形態３７～５０のいずれか１つに記載の方法。
５２． 対象が、自己免疫疾患、移植拒絶、または移植片対宿主病を有する、実施形態３７～５０のいずれか１つに記載の方法。
５３． がんを有する対象の、免疫療法剤、細胞療法、またはがんワクチンに対する応答性を予測するための方法であって、
ａ）実施形態２８～３６のいずれか１つに記載の標識ＣＤ８結合性作用剤を対象に投与するステップ；および
ｂ）標識ＣＤ８結合性作用剤と、対象の腫瘍組織のＣＤ８＋Ｔ細胞との結合を検出するステップ
を含み、結合の検出は、対象が免疫療法剤、細胞治療、またはがんワクチンに応答する可能性が高いことを示す、
方法。
５４． （ｃ）結合が検出された対象に、治療有効量の免疫療法剤、細胞療法、またはがんワクチンを投与するステップ
をさらに含む、実施形態５３に記載の方法。
５５． がんを有する対象の疾患進行をモニターするための方法であって、
ａ）実施形態２８～３６のいずれか１つに記載の標識ＣＤ８結合性作用剤を対象に投与するステップ；ならびに
ｂ）第１の時点および第２の時点にて、標識ＣＤ８結合性作用剤と対象の腫瘍組織のＣＤ８＋Ｔ細胞との結合を検出するステップ
を含む方法。
５６． （ｃ）治療有効量の免疫療法剤、細胞療法、またはがんワクチンを対象に投与するステップをさらに含み、第２の時点における腫瘍組織のＣＤ８＋Ｔ細胞のレベルが、第１の時点における腫瘍組織のＣＤ８＋Ｔ細胞のレベルよりも高い、
実施形態５５に記載の方法。
５７． 免疫療法剤、細胞療法、またはがんワクチンを受けたかまたは受けている、がんを有する対象の治療進行をモニターするための方法であって、
ｉ）免疫療法剤、細胞療法、またはがんワクチンと併せて、実施形態２８～３６のいずれか１つに記載の標識ＣＤ８結合性作用剤を対象に投与するステップ、ならびに
ｉｉ）第１の時点および第２の時点にて、標識ＣＤ８結合性作用剤と腫瘍組織のＣＤ８＋Ｔ細胞との結合を検出するステップ
を含む方法。
５８． 標識ＣＤ８結合性作用剤が、免疫療法剤、細胞療法、またはがんワクチンの前に投与され、第１の時点は、標識ＣＤ８結合性作用剤の投与後だが免疫療法剤、細胞療法、またはがんワクチンの投与前であり、第２の時点は、免疫療法剤、細胞療法、またはがんワクチンの投与後である、実施形態５７に記載の方法。
５９． 免疫療法剤、細胞療法、またはがんワクチンが、標識ＣＤ８結合性作用剤の前に投与され、第１の時点は、免疫療法剤、細胞療法、またはがんワクチンの投与後であり、かつ標識ＣＤ８結合性作用剤の投与後であり、第２の時点は、第１の時点の後である、実施形態５７に記載の方法。
６０． 免疫療法剤が、対象に投与される、実施形態５３～５４および５６～５９のいずれか１つに記載の方法。
６１． 免疫療法剤が、抗ＰＤＬ１抗体、抗ＰＤ１抗体、抗ＴＩＧＩＴ抗体、ＴＩＧＩＴアンタゴニスト、抗ＣＳＦ－１Ｒ抗体、抗ＣＳＦ－１Ｒアンタゴニスト、抗ＣＥＡ抗体、抗ＣＥＡアンタゴニスト、抗ＣＴＬＡ４抗体、ＣＴＬＡ４アンタゴニスト、抗ＯＸ４０抗体、またはＯＸ４０アゴニストである、実施形態６０に記載の方法。
６２． 免疫療法剤が、抗ＰＤ－Ｌ１抗体である、実施形態６１に記載の方法。
６３． 抗ＰＤ－Ｌ１抗体が、アテゾリズマブである、実施形態６２に記載の方法。
６４． 抗ＰＤ－Ｌ１抗体が、１つまたは複数の療法剤と組み合わせて投与される、実施形態６２または６３に記載の方法。
６５． １つまたは複数の療法剤が、ＴＡＲＣＥＶＡ（登録商標）（エルロチニブ）、ＺＥＬＢＯＲＡＦ（登録商標）（ベムラフェニブ）、ＧＡＺＹＶＡ（登録商標）（オビヌツズマブ）、ＡＶＡＳＴＩＮ（登録商標）（ベバシズマブ）、ＣＯＴＥＬＬＩＣ（登録商標）（コビメチニブ）、ＺＥＬＢＯＲＡＦ（登録商標）（ベムラフェニブ）およびＣＯＴＥＬＬＩＣ（登録商標）（コビメチニブ）、ＡＬＥＣＥＮＳＡ（登録商標）（アレクチニブ）、ＫＡＤＣＹＬＡ（登録商標）（アドトラスツズマブエムタンシン）、ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標）（トラスツズマブ）、ＰＥＲＪＥＴＡ（登録商標）（ペルツズマブ）、ポラツズマブ、ＩＦＮ－アルファ、抗ＣＤ４０剤、抗ＯＸ４０抗体、ＯＸ４０アゴニスト、抗ＣＳＦ－１Ｒ抗体、抗ＣＥＡ抗体、ＩＤＯ阻害剤、または抗ＴＩＧＩＴ抗体である、実施形態６４に記載の方法。
６６． 免疫療法剤が、サイトカインである、実施形態６０に記載の方法。
６７． サイトカインが、ＩＬ２、遺伝子操作ＩＬ２、ＩＬ１５、または遺伝子操作ＩＬ１５である、実施形態６６に記載の方法。
６８． 免疫療法剤が、ＣＤ３に特異的に結合する二重特異性抗原結合性分子である、実施形態６０に記載の方法。
６９． 免疫療法剤が、ＣＤ１６に特異的に結合する二重特異性抗原結合性分子である、実施形態６０に記載の方法。
７０． 二重特異性抗原結合性分子が、抗体またはその抗原結合性断片である、実施形態６８または６９に記載の方法。
７１． 二重特異性抗原結合性分子が、ＣＤ１６Ａに特異的に結合する、実施形態６９または７０に記載の方法。
７２． 免疫療法剤が、樹状細胞モジュレーターである、実施形態６０に記載の方法。
７３． 免疫療法剤が、樹状細胞活性化因子または樹状細胞成長因子である、実施形態７２に記載の方法。
７４． がんワクチンが、対象に投与される、実施形態５３～５４および５６～５９のいずれか１つに記載の方法。
７５． がんワクチンが、個別化がんワクチン（ＰＣＶ）である、実施形態７４に記載の方法。
７６． 細胞療法が、対象に投与される、実施形態５３～５４および５６～５９のいずれか１つに記載の方法。
７７． 細胞療法が、ＣＡＲ－Ｔまたはネオ抗原特異的Ｔ細胞である、実施形態７６に記載の方法。
７８． 自己免疫疾患、移植拒絶、または移植片対宿主病を有する対象の、免疫療法剤に対する応答性を予測するための方法であって、
ａ）実施形態２８～３６のいずれか１つに記載の標識ＣＤ８結合性作用剤を対象に投与するステップ；および
ｂ）標識ＣＤ８結合性作用剤と、対象の疾患組織のＣＤ８＋Ｔ細胞との結合を検出するステップ
を含み、結合の検出は、対象が、免疫療法剤に応答する可能性が高いことを示す、
方法。
７９． （ｃ）結合が検出された対象に、治療有効量の免疫療法剤を投与するステップ
をさらに含む、実施形態７８に記載の方法。
８０． 自己免疫疾患、移植拒絶、または移植片対宿主病を有する対象の疾患進行をモニターするための方法であって、
ａ）実施形態２８～３６のいずれか１つに記載の標識ＣＤ８結合性作用剤を対象に投与するステップ；ならびに
ｂ）第１の時点および第２の時点にて、標識ＣＤ８結合性作用剤と、対象の疾患組織のＣＤ８＋Ｔ細胞との結合を検出するステップ
を含み、第１の時点および第２の時点からのＣＤ８＋Ｔ細胞の増加は、自己免疫疾患、移植拒絶、または移植片対宿主病が進行したことを示す、
方法。
８１． （ｃ）治療有効量の免疫療法剤を対象に投与するステップ
をさらに含み、第２の時点における疾患組織のＣＤ８＋Ｔ細胞のレベルは、第１の時点での疾患組織のＣＤ８＋Ｔ細胞のレベルよりも低い、
実施形態８０に記載の方法。
８２． 免疫療法剤を受けたかまたは受けている、自己免疫疾患、移植拒絶、または移植片対宿主病を有する対象の治療進行をモニターするための方法であって、
ｉ）免疫療法剤と併せて、実施形態２８～３６のいずれか１つに記載の標識ＣＤ８結合性作用剤を対象に投与するステップ、ならびに
ｉｉ）第１の時点および第２の時点にて、標識ＣＤ８結合性作用剤と疾患組織のＣＤ８＋Ｔ細胞との結合を検出するステップ
を含む方法。
８３． 標識ＣＤ８結合性作用剤が、免疫療法剤の前に投与され、第１の時点は、標識ＣＤ８結合性作用剤の投与後だが免疫療法剤の投与前であり、第２の時点は、免疫療法剤の投与後である、実施形態８２に記載の方法。
８４． 免疫療法剤が、標識ＣＤ８結合性作用剤の前に投与され、第１の時点は、免疫療法剤の投与後であり、かつ標識ＣＤ８結合性作用剤の投与後であり、第２の時点は、第１の時点の後である、実施形態８２に記載の方法。
８５． 標識ＣＤ８結合性作用剤と対象のＣＤ８＋Ｔ細胞との結合を検出するステップは、対象のＣＤ８＋Ｔ細胞を画像化することを含む、実施形態５３～８４のいずれか１つに記載の方法。
８６． 対象のＣＤ８＋Ｔ細胞の画像化が、対象に対して陽電子放出断層撮影（ＰＥＴ）スキャンまたは陽電子放出断層撮影／コンピュータ断層撮影（ＰＥＴ／ＣＴ）スキャンを実施することを含む、実施形態８５に記載の方法。
８７． 標識ＣＤ８結合性作用剤を使用して、画像化から約４８時間以内に別の画像化スキャン（例えば、ＰＥＴ、ＳＰＥＣＴ、またはシンチグラフィースキャン）を実施するステップをさらに含む、実施形態５３～８６のいずれか１つに記載の方法。
８８． 対象が、少なくとも１年間モニターされる、実施形態５５～７７および８０～８７のいずれか１つに記載の方法。
８９． 免疫療法剤による治療に対する応答性に関連付けられる腸内微生物菌株を特定するための方法であって、
ａ）がんを有する対象の集団から腸内マイクロバイオーム試料を得るステップであって、集団は、免疫療法剤による治療に応答性である対象および免疫療法剤による治療に応答性でない対象を含む、ステップ；
ｂ）治療に応答性である対象の腸内マイクロバイオーム試料および治療に応答性でない対象の腸内マイクロバイオーム試料を分析するステップ；ならびに
ｃ）治療に応答性である対象に関連付けられる腸内微生物菌株を特定するステップ
を含み、応答性は、実施形態２８～３６のいずれか１つに記載の標識ＣＤ８結合性作用剤と、対象の腫瘍組織のＣＤ８＋Ｔ細胞との結合を検出することにより決定され、結合の検出は、対象が免疫療法剤に応答性であることを示す、
方法。
９０． 免疫療法剤に対する応答性に関連付けられる腸内微生物菌株を含むマイクロバイオームベースの薬物を調製するステップをさらに含む、実施形態８９に記載の方法。
９１． 免疫療法剤が、抗ＰＤ－１抗体である、実施形態８９または９０に記載の方法。
９２． 免疫療法剤が、抗ＰＤ－Ｌ１抗体である、実施形態８９または９０に記載の方法。
９３． 抗ＰＤ－Ｌ１抗体が、アテゾリズマブである、実施形態９２に記載の方法。
９４． 実施形態２８～３６のいずれか１つに記載の標識ＣＤ８結合性作用剤を含むキット。
９５． 標識ＣＤ８結合性作用剤を調製するための方法であって、キレート部分を、実施形態１～１９のいずれか１つに記載のＣＤ８結合性作用剤のＶＨＨドメインにコンジュゲートして、コンジュゲートを提供するステップ、およびコンジュゲートを、１８Ｆを含むフッ化アルミニウム錯体と接触させて、標識ＣＤ８結合性作用剤を提供するステップを含み、キレート部分は、式（Ｉ）：
Figure 2022547483000007
 の化合物である、方法。
９６． コンジュゲートを、１つまたは複数の抗酸化化合物の存在下でフッ化アルミニウム錯体と接触させる、実施形態９５に記載の方法。
９７． １つまたは複数の抗酸化化合物は、メチオニンおよび／またはＮ－アセチル－トリプトファンを含む、実施形態９６に記載の方法。
９８． 実施形態１～１９および２８～３６のいずれか１つに記載のＣＤ８結合性作用剤、および１つまたは複数の抗酸化化合物を含む医薬製剤。
９９． １つまたは複数の抗酸化化合物は、メチオニンおよび／またはＮ－アセチルトリプトファンを含む、実施形態９８に記載の医薬製剤。
１００． ヒスチジンおよびスクロースをさらに含む、実施形態９８または９９に記載の医薬製剤。
［実施例１］
ヒトＣＤ８に対するＶＨＨの開発および特徴付け
抗ＣＤ８ ＶＨＨの発見および初期スクリーニング
ラマを、２つの抗原：Ｃ末端ｈＦｃタグ化ＣＤ８α受容体（ＣＤ８α－Ｆｃ）またはＣＤ８αがリンカーを介してＣＤ８βに融合されているＣ末端ヒスチジンタグ単鎖タンパク質（ＣＤ８αβ－Ｈｉｓ）のいずれかで免疫した。Ghahroudi et al. FEBS 1997に記載の通りに標準的免疫化プロトコールを実施した（米国特許第６，０１５，６９５号明細書も参照されたい）。標準的ＲＴ－ＰＣＲ法を使用して、ＶＨＨ重鎖レパートリーを増幅し、ファージミドベクターにクローニングして、免疫ファージライブラリーを構築した。次いで、ＣＤ８αβ－ＨｉｓまたはＣＤ８α－Ｆｃのいずれかを、様々な濃度、洗浄時間、および溶出条件で使用して、ファージライブラリーによる数ラウンドのｉｎ ｖｉｔｒｏ選択を実施した。３ラウンドおよび４ラウンドの選択の後、個々のファージクローンを、ＥＬＩＳＡにより特徴付け、サンガー配列決定に供した。
加えて、ヒト（ｈｕＣＤ８ａ－Ｆｃ）ＣＤ８およびカニクイザル（ｃｙｎｏＣＤ８ａ－Ｆｃ）ＣＤ８の両方に対する、選択されたＶＨＨ抗体の結合親和性を、ＳＰＲにより決定した。特に、２Ｃ８．１－Ｈ（本明細書では「ｗｔ２Ｃ８」とも呼ばれる）は、ｈｕＣＤ８＋ ＨＰＢＡＬＬ細胞に対する許容し得る親和性および結合性を示した（図３）。
ＶＨＨの発現および精製
ファージパニングから特定された固有配列を、Ｃ末端Ｈｉｓタグを含有する哺乳動物発現ベクターで発現させた。発現されたＶＨＨを２段階精製に供した：Ｎｉ Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ｅｘｃｅｌヒスチジンタグ化タンパク質精製レジン（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）、続いてサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）。また、タグ無しＶＨＨを哺乳動物細胞で発現させた。タグ無しＶＨＨを、イオン交換精製（ＳＰカラム）または組換えプロテインＡレジン（ＧＯＲＥ）に、続いてＳＥＣに供した。
ＳＰＲ特徴付け
ヒト（単アーム単鎖ｈｕＣＤ８α／ｈｕＣＤ８β－Ｆｃ）およびカニクイザル（単アーム単鎖ｃｙｎｏＣＤ８α／ｃｙｎｏＣＤ８β－Ｆｃ）の両方に対する、各ＶＨＨ変異体の結合親和性を、表面プラズモン共鳴法（ＳＰＲ）により決定した。ＳＰＲ実験は、３７℃にてＨＢＳ－Ｐ＋（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）ランニング緩衝液を使用してＢｉａｃｏｒｅ Ｔ２００（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）で実施した。抗ＨｕＩｇＧ１ Ｆｃ捕捉キット（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用して、１．５μｇ／ｍＬのＣＤ８αβ－Ｆｃを捕捉し、単量体ＶＨＨを溶液中の分析物として１００μＬ／分の流速で添加した。１００～０ｎＭの希釈系列を使用してＶＨＨを滴定した。センサーグラムを１：１ラングミュアモデルにフィッティングして、ＫＤ、ｋｏｎ、およびｋｏｆｆを含む動力学的パラメーターを特定した。
ＣＤ８＋細胞特異的ＶＨＨ変異体の特定
Ｃ末端ｈｕＩｇＧ１ Ｆｃに融合された組換えＶＨＨを発現させ、精製し、ＦＡＣＳにより、ＣＤ８発現ヒトＴ細胞白血病細胞株であるｈｕＣＤ８＋ ＨＰＢＡＬＬ細胞（ＤＳＭＺ、ドイツ）に対してスクリーニングした。ＡＴＣＣから得たヒト胎児腎臓細胞（ＨＥＫ）を、非ＣＤ８発現対照細胞株として用いた。およそ３００，０００個の細胞を、１０％ｖ／ｖウシ胎児血清および１％ｖ／ｖペニシリン－ストレプトマイシン（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）で補完された１００μＬ ＲＰＭＩ培地の存在下で、丸底９６ウェルプレートにプレーティングした。ヒトＩｇＧ Ｆｃに融合されたＶＨＨ変異体を、１０μｇ／ｍＬの濃度で６０分間３７℃にて細胞と共にインキュベートした。その後、未結合ＶＨＨを洗い流し、ＡＬＥＸＡ ＦＬＵＯＲ（登録商標）６４７ヤギ抗ヒトＩｇＧ Ｆｃ抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｉｍｍｕｎｏ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，Ｉｎｃ．）を７．５μｇ／ｍＬの濃度で６０分間３７℃にて細胞に添加した。次いで、細胞を、０．５％ウシ血清アルブミンで補完したリン酸緩衝生理食塩水（ｐＨ７．４）で２回洗浄し、ＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒフローサイトメーター（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で分析した。試料は二重重複で分析した。ヒトＣＤ８ａに結合する４鎖抗体に由来するＯＫＴ８－Ｆｃが、陽性対照としての役目を果たした。
結果は図３に示されている。この図には、２Ｃ８ ＶＨＨ－Ｆｃが、ＯＫＴ８－Ｆｃと同等の、ＨＰＢＡＬＬ細胞に対する親和性および結合性を有することが示されている。
全血細胞およびＰＢＭＣに対する結合性
２Ｃ８ ＶＨＨを、ヒト全血および対応するＰＢＭＣ試料のさらなるＦＡＣＳ分析のために選択した。ＶＨＨをＨｉｓタグ化単量体として発現させ、ＡＬＥＸＡ ＦＬＵＯＲ（登録商標）６４７で直接標識した。
手短に言えば、４人の健常ドナーの全血試料（ヘルスセンター、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）を室温で収集し、採血後３０分未満で処理した。各ドナーについて、１ｍＬの試料を直接染色用に維持し、４ｍＬの試料を、染色前に末梢血単球細胞（ＰＢＭＣ）単離（Ｆｉｃｏｌｌ－Ｐａｑｕｅ分離）に使用した。非特異的結合を回避するため、全血またはＰＢＭＣを、染色前に、それぞれ１０００μＬ当たりまたは細胞１０７個当たり２０μＬのＦｃＲブロッキングヒト試薬（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃｈ）と共にインキュベートした。フローサイトメトリー染色のため、１００μＬの全血または５×１０４個のＰＢＭＣを９６深ウェルプレートに分配した。蛍光標識抗体は、製造業者のプロトコール（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）に従って、ＡＬＥＸＡ ＦＬＵＯＲ（登録商標）６４７（ＡＦ６４７）色素とのＥＤＣ－ＮＨＳ媒介性コンジュゲーションにより調製した。
ＯＫＴ８－ＡＦ６４７またはＶＨＨ－ＡＦ６４７変異体（２０ｎｇ／ｍＬ）、抗ＣＤ１４ ＶｉｏＢｌｕｅ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃｈ；１／２５）、抗ＣＤ１６ ＰｅｒＣＰ Ｃｙ５．５（Ｂｅｃｔｏｎ－Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ；１／２００）、抗ＣＤ４ ＶｉｏＢｒｉｇｈｔ－ＦＩＴＣ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃｈ；１／５０）、抗ＣＤ３ ＡＰＣ－Ｖｉｏ７７０（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃｈ；１／５０）を、プレミックス抗体カクテルとして室温で添加し１０分間おいた。次いで、試料を２ｍＬの赤血球溶解液（Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）に再懸濁し、よく混合して室温で１０分間インキュベートした後、１５００ｒｐｍで５分間遠心分離した。上清を除去した後、ペレットをＰＢＳ １×、ＢＳＡ ０．５％で洗浄した後、ＭａｃｓＱｕａｎｔ１０アナライザー（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃｈ）で細胞取得を行った。
赤血球溶解ステップを実施しなかったことを除いて、同じプロトコールをＰＢＭＣ染色に適用した。
図４には、全血細胞試料を使用した結果が示されている。ＯＫＴ８および２Ｃ８ ＶＨＨは、ＣＤ８＋Ｔ細胞の強力な染色およびＣＤ３－細胞（例えば、ＮＫ細胞）の低レベル染色を含む、同様の染色パターンを示す。ＰＢＭＣ試料を用いた実験でも同様の結果が得られた。２Ｃ８ ＶＨＨは、全血（多核細胞および単核細胞を含有する）およびＰＢＭＣ（単核細胞のみを含有する）の両方において、ＣＤ３＋ＣＤ８＋Ｔ細胞集団にのみ強力に結合する。これにより、ヒトＣＤ８に対する特異性が確認される。
構造的特徴付け
ＣＤ８αに対する２Ｃ８のエピトープを決定するため、ホモ二量体ＣＤ８ααに結合した２Ｃ８の結晶構造を決定した（図５）。２Ｃ８は、ＣＤ８αの頂端に結合し、Ａｒｇ２５、Ｌｙｓ４２、Ｇｌｎ４４、Ｖａｌ４５、Ｌｅｕ４６、Ｌｅｕ４７、Ｓｅｒ４８、Ｐｒｏ５０、Ｔｈｒ５１、Ｓｅｒ５２、Ｇｌｎ７５、Ａｒｇ９３、Ｌｅｕ９４、Ｇｌｙ９５、Ａｓｐ９６、およびＴｈｒ９７と接触している。こうしたＣＤ８αアミノ酸残基は、結晶構造では２Ｃ８の１つまたは複数のアミノ酸残基から、各々約４．５Å以内にある。このエピトープは、ＭＨＣＩと複合体を形成したマウスＣＤ８αβの結合エピトープと重複していない（Wang et al. J Immunol 2009）。
ＶＨＨ ＣＤＲのＮＮＫウォーク（NNK walk）による親和性成熟
２Ｃ８の初期親和性は、Rashidian et al. JEM 2017に記載の通り、ＰＥＧ化などの、いくらかの半減期延長機構を有しないＣＤ８＋細胞の高感度検出には最適ではないとみなされた。親和性が向上した２Ｃ８における突然変異を特定するため、本発明者らは、Koenig, et al. JBC 2015に記載の通り、２Ｃ８のＣＤＲのＮＮＫウォークを実施した。
手短に言えば、各突然変異体が単一の突然変異を含有し、ライブラリー全体が、ＶＨＨのすべてのＣＤＲ位置に２０種すべてのアミノ酸を含むＣＤＲ ＮＮＫスキャンライブラリーを生成した。ライブラリーを、ファージミドベクターにクローニングし、漸減濃度および漸増洗浄時間での、ＣＤ８α－ｈＦｃに対する数ラウンドのファージパニングに供した。初期ライブラリーから、およびラウンド３で選択されたライブラリーからＶＨＨドメインを増幅し、次世代シーケンシング（ＮＧＳ）に供した。ＮＧＳは、ＭｉＳｅｑ（Ｉｌｌｕｍｉｎａ）機器を使用して、増幅ＤＮＡアンプリコンに対して実施した。３ラウンドの選択後の各突然変異の頻度を、初期ライブラリーでの各突然変異の頻度で除算することにより、濃縮率を決定した。
ＮＧＳの結果を分析したところ、本発明者らは、Ａ９９ＧおよびＡ１００ｆＤが強く濃縮されたことを観察した。Ａ９９ＧおよびＡ１００ｆＤ突然変異を有する２Ｃ８の生成は、親クローンと比較して親和性を約１０倍向上させた。
２Ｃ８のヒト化
本発明者らは、ＣＤＲ（３０～３５（Ｈ１）、５０～６５（Ｈ２）、および９４～１０２（Ｈ３））を、ＩＧＨＶ３－２３＊０４に移植することにより、２Ｃ８をヒト化した。ラマに由来するすべてのバーニア位置（Vernier position）も、それらの対応する位置に移植した。本発明者らは、ＶＨＨの結合性、安定性、および可溶性発現を維持するために必要であるため、幾つかのラマ残基（Ｆ３７、Ｒ４５、Ｇ４７、およびＬ４９）をフレームワークに残した。ＳＰＲ特徴付け後、本発明者らは、高親和性結合を維持するために必要なのは、Ｓ７１およびＶ７８バーニア残基（Vernier residue）のみであることを決定した。本発明者らは、ヒト化すると、すべてのプロテインＡ接触部位に好ましい残基を有するにも関わらず、プロテインＡレジンとの結合性が非常に不良であることに気づいた（Henry et al. PLoS One 2016に記載の通り）。本発明者らは、プロテインＡに直接接触する残基の外部にある、プロテインＡ結合に重要なＶＨＨ残基のコンフォメーションを間接的に変更する可能性がある潜在的な残基を調査した。本発明者らは、そのような残基の１つとしてＬ４９を特定した。本発明者らは、Ａｌａに突然変異（Ｌ４９Ａ）させると、プロテインＡ残基（protein A residue）による精製後のＶＨＨ回収率の大幅な増加を観察した（表３）。
Figure 2022547483000008
既存ＡＤＡとの結合の低減
ＶＨＨによる以前の臨床データは、患者には既存の抗ＶＨＨ抗体があることを示している［Cordy et al. Clin Exp Immunol 2015；Holland et al. J Clin Immunol 2013；Papadopoulos et al. Cancer Chemother Pharmacol 2015］。本発明者らは、ＶＨＨ変異体と既存の抗ＶＨＨ抗体との結合を評価し、こうした既存の抗体との結合に関連付けられるリスクを軽減するために、４つのフレームワーク突然変異（Ｖ８９Ｔ、Ｔ１１０Ｑ、Ｓ１１２Ｑ、およびＡ１１４付加）を導入した。
ＶＨＨ抗薬物抗体アッセイを実施するため、ＰＢＳ中２μｇ／ｍＬのＶＨＨ変異体を、４℃にて一晩Ｍａｘｉｓｏｒｐプレートにコーティングした。プレートをＰＢＳ＋０．５％ＢＳＡ＋０．１％Ｔｗｅｅｎ２０（ＰＢＳＢＴ）で洗浄し、２％ＢＳＡで２時間２５℃にてブロッキングした。９６人の異なる健常ドナーの個々の血清試料を１：５０に希釈し、ＶＨＨでコーティングされた空ウェルにて１～２時間２５℃で振盪しながらインキュベートした。洗浄後、抗ヒトＦｃ特異的ＨＲＰ２°抗体（１：１０，０００）を、２５℃で３０分間振盪ながら添加した。ＰＢＳＢＴで洗浄した後、プレートをＴＭＢ基質で１０分間発色させ、６５０ｎｍで検出を行った。
図６に示されているように、フレームワーク突然変異は、抗ＣＤ８ ＶＨＨと、９６人の健常ドナーからプールした既存の抗ＶＨＨ抗体との結合を排除する。
全体として、本発明者らは、ヒトＣＤ８αおよびカニクイザルＣＤ８αの両方と強力に結合する、幾つかのヒト化および最適化されたクローン（ｖ１３０、ｖ１４２、およびｖ１４４）を開発した。図１および表４には、例示的なＶＨＨクローンのアミノ酸配列が示されている。
Figure 2022547483000009
表５および６には、それぞれ、ＳＰＲにより決定された、αβに対する２Ｃ８ｖ１４２および２Ｃ８ｖ１４４の親和性が示されている。２Ｃ８ｖ１４４は、ヒトＣＤ８αおよびカニクイザルＣＤ８αとの親和性が高く、オフレートが比較的遅い。２Ｃ８ｖ１４２クローンは、２Ｃ８ｖ１４４と比較してＣＤＲ３にＷ９８Ｆ突然変異を含有し、それにより２Ｃ８ｖ１４２は、２Ｃ８ｖ１４４と比較して高レベルの放射線に曝されても酸化され難くなる。
Figure 2022547483000010
Figure 2022547483000011
Ｔ細胞機能に対する影響
ＣＤ８＋Ｔ細胞機能に対する２Ｃ８ ＶＨＨ結合の潜在的な影響を評価するために、本発明者らは、２Ｃ８．ｖ１３０の存在下でｉｎ ｖｉｔｒｏ Ｔ細胞増殖アッセイを実施した。
手短に言えば、３人の健常ドナーから新たに単離したＰＢＭＣを、ＰＢＳ １×で洗浄し、ペレットを、１ｍＬ当たり細胞１０×１０６個でＰＢＳ１×に再懸濁した。等量の新たに調製したカルボキシフルオレセインスクシンイミジルエステル（ＣＦＳＥ）２．５ｍＭ作業溶液を添加してから（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅ）、室温で５分間インキュベートした。９容積のＲＰＭＩ、１０％ＦＢＳを添加することにより標識化を停止させてから、１５００ｒｐｍで５分間遠心分離した。ＲＰＭＩ、１０％ＦＢＳ培地でさらに２回の洗浄を実施してから、細胞計数および分配を行った。
１μｇ／ｍＬの抗ＣＤ２８または０．４μｇ／ｍＬのスーパー抗原ブドウ球菌（Staphylococcal）エンテロトキシンＢ（ＳＥＢ）（ＴｒｕＣｕｌｔｕｒｅチューブ；Ｍｙｒｉａｄ ＲＢＭ）を新たに加えた、０．２μｇ／ｍＬの抗ＣＤ３を使用したポリクローナル刺激用の丸底９６ウェルプレート（Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ；プレコートプレート）に、１００，０００個のＣＦＳＥ標識細胞をプレーティングした。抗原特異的刺激のため、５００，０００個のＣＦＳＥ標識細胞を、丸底９６ウェルプレートにプレーティングし、２μｇ／ｍＬのＣＥＦペプチドプール（Ｍａｂｔｅｃｈ）を各ウェルに添加した。１０ｎｇ／ｍＬのリポポリサッカライド（「ＬＰＳ」、Ｓｉｇｍａ）を、先天性細胞活性化因子対照として使用し、培地のみ（ＲＰＭＩ、１０％ＦＢＳ）を、陰性対照として使用した。最後に、すべての条件で、ＰＢＳ １×、２Ｃ８ｖ１３０ ＶＨＨ（最終濃度は１μｇ／ｍＬおよび１０μｇ／ｍＬ）または対照であるＬｙｓ２ ＶＨＨ（１０μｇ／ｍＬ）を、１ウェル当たり２００μＬの最終容量になるように三重重複で添加した。対照であるＬｙｓ２ ＶＨＨは、リゾチームに結合し、De Genst, et al. JBC 2005に記載されていた。
加えて、ＶＨＨ結合の効果に対する循環中ヒト血液分子の潜在的な影響を評価するため、培養培地中のＦＢＳを、未刺激の、またはＳＥＢ０．４μｇ／ｍＬで刺激した１０％自家血漿に置き換えた。分析前にプレートを３７℃で５日間インキュベートした。
プレートを遠心分離した後、上清を除去し、ペレットをＰＢＳ １×で１回洗浄した。１００μＬの希釈固定可能生存色素溶液（diluted fixable viability dye solution）を添加し（Ｌｉｖｅ Ｄｅａｄ Ａｑｕａ、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｃｈｅｒ）、細胞を４℃で１５分間インキュベートしてから、ＰＢＳ、０．５％ＢＳＡで洗浄した。抗ＣＤ４ ＡＰＣ－Ｖｉｏ７７０（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃｈ；１／５０）、抗ＣＤ３ Ｐａｃｉｆｉｃ Ｂｌｕｅ（Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ；１／１００）、抗ＣＤ８α ＡＰＣ（Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ；１／１００）を含有するプレミックス抗体カクテルを、ペレットに添加した。細胞を氷上で２０分間インキュベートしてから、ＰＢＳで洗浄し、ＭａｃｓＱｕａｎｔ１０（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃｈ）を使用してフローサイトメトリー分析を行った。
図７Ａ～７Ｅは、高（１０μｇ／ｍＬ）もしくは低（１μｇ／ｍＬ）飽和濃度の２Ｃ８．ｖ１３０、高濃度（１０μｇ／ｍＬ）の非ＣＤ８結合性ＶＨＨ（Ｌｙｓ２）、またはＰＢＳ（ビヒクル）の存在下で、ＣＦＳＥ標識ヒトＰＢＭＣ（ｎ＝３）を使用した増殖アッセイの結果を示す。刺激をしない場合（培養培地、図７Ａ）、２Ｃ８．ｖ１３０もＬｙｓ２－ＶＨＨも、試験した３人のドナーではバックグラウンド増殖を誘導しなかった。これは、ＶＨＨの添加は、ＣＤ８＋細胞との結合を示すかまたは示さないかに関わらず、非特異的なＴ細胞の活性化を誘発しないことを示す。抗ＣＤ３／ＣＤ２８ポリクローナル刺激を行うと（図７Ｂ）、すべてのドナーで最適なＣＤ８＋Ｔ細胞増殖が得られ（希釈ＣＦＳＥの９０％よりも多くの）、２Ｃ８．ｖ１３０の添加もＬｙｓ２ ＶＨＨの添加も、Ｔ細胞活性化に影響を及ぼさなかった。スーパー抗原ＳＥＢは、ＭＨＣ－ＩＩとＴＣＲとの間の架橋を誘導するが、試料に対するＳＥＢの添加は、細胞死が高いため、最適な増殖率をもたらさなかった（ＣＦＳＥｌｏｗの１５％未満）。にもかかわらず、単一ドナーの場合、条件が異なっても有意差は観察されなかった（図７Ｃ）。より生理学的なＭＨＣ－Ｉ／ＴＣＲ／ＣＤ８複合体会合を模倣するために、ＣＥＦペプチドプールを使用して、ＴＣＲ特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞を活性化した。しかしながら、増殖率は、培養培地条件と類似していたため（図７Ｄ）、試験したドナーはいずれも、検出可能な反応性ＣＤ８＋Ｔ細胞を有していなかった。これにより、ＶＨＨ誘導性バックグラウンド増殖の非存在が確認された。同様に、単球に対するＴＬＲ４刺激（ＬＰＳ条件）では、ＶＨＨを添加しても、間接的なＴ細胞増殖は観察されなかった（図７Ｅ）。
図８Ａ～８Ｄでは、培養培地として１０％ＦＢＳまたは自家ドナー血漿を用いた増殖アッセイの結果が比較されている。ＰＢＭＣ単離前に自家ドナー血漿試料を得、生理学的条件を模倣するために増殖アッセイで使用した。刺激しない場合、すべてのドナーで、１０％ＦＢＳ培地または自家ドナー血漿を使用した実験間に差異は観察されなかった（図８Ａおよび８Ｂ）。したがって、可溶性ヒト血漿因子の存在下でも、ＶＨＨは、バックグラウンドＴ細胞増殖を誘導しない。
［実施例２］
分子画像化に関する２Ｃ８ｖ１４４ ＶＨＨの評価
２Ｃ８ ＶＨＨの標識化
１８Ｆ対照ＶＨＨおよび１８Ｆ抗ＣＤ８ ＶＨＨを含むＲＥＳＣＡ（拘束性錯化剤）修飾ＶＨＨおよび１８Ｆ－ＡｌＦ－ＲＥＳＣＡ修飾ＶＨＨの生産手順は、以前に記載のプロトコール（Cleeren F. et al. Nature Protocols 13, 2330-2347 (2018)）に準じた。例示的なＲＥＳＣＡは、式（Ｉ）の化学構造を有する。手短に言えば、ＲＥＳＣＡコンジュゲートＶＨＨを、酢酸ナトリウム、またはメチオニンおよびＮ－アセチル－トリプトファンを伴う酢酸ナトリウムのいずれかからなる反応媒体中の１８Ｆ－フッ化物の混合物に添加した。反応混合物を、ＶＨＨの酸化速度を低下させる、ヒスチジン、メチオニン、Ｎ－アセチルトリプトファン、およびスクロースでコンディショニングされた製剤緩衝液で平衡化した脱塩カラムを使用して精製した。対照として、製剤緩衝液をリン酸緩衝生理食塩水でコンディショニングした。ＲＥＳＣＡからの１８Ｆ－ＡｌＦの解離速度を制限するために、ヒスチジン製剤緩衝液のｐＨおよび温度を注意深く制御した。最終産物のタンパク質濃度、タンパク質純度、および放射化学的純度をＳＥ－ＨＰＬＣにより、ならびに標的結合性（必要に応じて、免疫反応性画分）をＳＥ－ＨＰＬＣおよびＳＰＲによりアッセイした。
２Ｃ８ｖ１４５ ＶＨＨを使用した１８Ｆ対照ＶＨＨおよび２Ｃ８ｖ１４４を使用した１８Ｆ抗ＣＤ８ ＶＨＨを、４０～６０％の放射化学的収率で得た（崩壊補正なし）。最終産物は、３．０～８．０Ｃｉ／μｍｏｌの比活性範囲を呈し、放射化学的純度は９５％を超えており、１８Ｆ抗ＣＤ８ ＶＨＨの場合、免疫反応性画分は９４％を超えていた。
理論にも仮説にも束縛されないが、抗ＣＤ８ ＶＨＨを放射性核種標識にコンジュゲートすると、トリプトファンなどの１つまたは複数のＶＨＨ残基の酸化がもたらされ、ＣＤ８結合能力の縮小に結び付く可能性がある。コンジュゲーション反応緩衝液、精製緩衝液、および／または製剤緩衝液に、メチオニンおよび／またはＮ－アセチルトリプトファンなどの抗酸化化合物を使用することにより、ＶＨＨ残基の酸化を低減し、それにより機能的標識抗ＣＤ８ ＶＨＨの収率を向上させることができる。
マウスにおけるキメラＣＤ８＋腫瘍異種移植片のＰＥＴ画像化
１８Ｆ－抗ＣＤ８ ＶＨＨの感度およびダイナミックレンジを、マウスにおけるキメラＣＤ８＋腫瘍異種移植片のＰＥＴ画像化を実施することにより評価した。
手短に言えば、ＣＤ８を発現するヒトＴ細胞白血病細胞株（ＤＳＭＺ、ドイツ）であるＨＰＢＡＬＬを、ＣＤ８を欠くヒトリンパ腫細胞株（ＤＳＭＺ、ドイツ）であるＤａｕｄｉと様々な比率で混合して、１８Ｆ－抗ＣＤ８ ＶＨＨを使用したＰＥＴ画像化のために様々なＣＤ８濃度のキメラ腫瘍を生成した。手短に言えば、雌ＣＢ１７．ＳＣＩＤ．ｂｇマウスの胸背部に、ＨＢＳＳ：マトリゲルの５０：５０ミックス中の各々１，０００万個の細胞を皮下接種した。腫瘍のサイズがおよそ４００ｍｍ３に達したら、１８Ｆ－抗ＣＤ８ ＶＨＨを尾静脈から動物に注射し、Ｉｎｖｅｏｎ ＰＥＴ／コンピュータ断層撮影（ＣＴ）スキャナー（Ｓｉｅｍｅｎｓ Ｐｒｅｃｌｉｎｉｃａｌ Ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ，Ｉｎｃ．）で動的６０分間ＰＥＴスキャンに供した。
ＣＤ８発現を評価するため、ＰＥＴ画像化完了後に、キメラ腫瘍をマウスから切除し、製造業者のプロトコールに従ってｇｅｎｔｌｅＭＡＣＳ Ｏｃｔｏ Ｄｉｓｓｏｃｉａｔｏｒ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ）を使用して解離させた。次いで、得られた細胞懸濁物を７０μｍのセルストレーナー（Ｃｏｒｎｉｎｇ）に通して、凝集物を除去した。次いで、腫瘍細胞を計数し、３００，０００個の細胞を、１００μＬ ＲＰＭＩ培地の存在下で丸底９６ウェルプレートにプレーティングした。細胞を、２０ｎＭのＡＬＥＸＡ ＦＬＵＯＲ（登録商標）６４７タグ化ＯＫＴ８抗ＣＤ８抗体（６０分、４℃）およびＳｙｔｏｘオレンジ色死細胞染色剤（１５分、４℃）（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）で染色した。細胞を洗浄し、次いでＦＡＣＳ Ｃａｌｉｂｕｒフローサイトメーターで分析して、腫瘍におけるＣＤ８＋細胞のパーセンテージを決定した。
図９に示されているように、１８Ｆ－抗ＣＤ８ ＶＨＨは、１０％という低いＣＤ８＋ＨＰＢＡＬＬ細胞でも、ＰＥＴ画像化によりＣＤ８＋腫瘍細胞の明確な視覚化を可能にした。また、この結果は、ＰＥＴ取込み（ＩＤ％／ｇ）とＣＤ８＋ＨＰＢＡＬＬ細胞の濃度との間に明確な相関関係があることを示す。以前のＦＡＣＳデータに基づき、ＨＰＢＡＬＬ細胞は各々、約５５，０００～８５，０００コピーのＣＤ８分子を有し、ナイーブＣＤ８＋Ｔ細胞は各々、２００，０００～３００，０００コピーのＣＤ８分子を有すると推定した。１８Ｆ－抗ＣＤ８ ＶＨＨは、腫瘍細胞で低レベル（約１～３０ｎＭの感度）のＣＤ８発現を検出することができる高感度画像化剤である。
マウスにおけるＴＡＬＬ１腫瘍異種移植片のＰＥＴ画像化
１８Ｆ－抗ＣＤ８ ＶＨＨおよび８９Ｚｒ－単アーム（「ＯＡ」）－抗ＣＤ８抗体（国際特許出願公開第ＷＯ２０１９／０３３０４３号パンフレットを参照）を使用して、マウスにおけるＴＡＬＬ１腫瘍異種移植片を画像化した。ＴＡＬＬ１は、低ＣＤ８発現白血病細胞株である。以前のＦＡＣＳデータに基づき、ＴＡＬＬ１細胞は各々、約１２，０００～１５，０００コピーのＣＤ８分子を有すると推定した。
手短に言えば、雌ＣＢ１７．ＳＣＩＤ．ｂｇマウスの右脇腹に、ＨＢＳＳ：マトリゲルの５０：５０ミックス中１，０００万個のＴＡＬＬ１細胞を皮下接種した。腫瘍サイズがおよそ４００ｍ３に達したら、ＰＥＴ画像化のために動物をグループ化した。８９Ｚｒ－ＯＡ－抗ＣＤ８抗体を用いた画像化では、動物に尾静脈から注射し、第０、１、２、および５日に静的ＰＥＴスキャンを行った。１８Ｆ－抗ＣＤ８ ＶＨＨを用いた画像化では、動物に尾静脈から注射し、以前と同様に動的６０分間ＰＥＴスキャンを行った。
目的領域（ＲＯＩ）測定は、ＩＲＷソフトウェア（Ｓｉｅｍｅｎｓ Ｐｒｅｃｌｉｎｉｃａｌ Ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ，Ｉｎｃ．）を使用して、組織の複数の軸方向スライスに対してなされた。器官の崩壊補正シグナル強度は、１グラムの軟組織における１ｃｃ当量を想定して、１グラム当たりの注射線量のパーセンテージ（ＩＤ％／ｇ）として測定した。
１８Ｆ－抗ＣＤ８ ＶＨＨは、低ＣＤ８発現ＴＡＬＬ１異種移植腫瘍を１時間以内に迅速に可視化することが可能である。図１０に示されているように、ＣＤ８発現ＴＡＬＬ１異種移植腫瘍は、注射後９０分後に明確に視覚化することができ、１４という高い腫瘍対血液比が達成された。１８Ｆ－抗ＣＤ８ ＶＨＨを使用した画像化は、０．５～４時間以内に完了させることができた。比較すると、８９Ｚｒ－ＯＡ－抗ＣＤ８抗体は、より長期の時点、つまり注射１～５日後の意味がある画像化に好適である。１８Ｆ－抗ＣＤ８ ＶＨＨは、サイズが小さいため、組織へと非常に迅速に浸透し、迅速な腎クリアランスを呈し、同日中の後の時点で同じ患者の追加ＰＥＴスキャン（ＦＤＧ ＰＥＴなど）を行うこと、または早ければ翌日にＣＤ８スキャンを繰り返すことが容易になる。１８Ｆ標識化（または６８Ｇａなどの他の標識）と適合性であるため、患者にもたらされる放射線負荷が比較的低い抗ＣＤ８ ＶＨＨを使用した画像化手順が可能になり、そのためヒト患者の一般的な線量測定ガイドラインの範囲内で、治療経過の全体にわたって追加のスキャンを実施することができる。例えば、１８Ｆ－抗ＣＤ８ ＶＨＨを用いると、典型的には数か月または数年にわたる治療および経過観察の経過にわたって、同じ患者を最大約５回再画像化することが可能になるだろう。
アカゲザルにおけるＰＥＴ画像化研究
アカゲザルにおいて１８Ｆ－抗ＣＤ８ ＶＨＨによる画像化実験を実施して、通常はＣＤ８が豊富である組織における取込みを検出できるか否かを決定した。アカゲザル（２．５ｋｇ）に、１．２ｍＣｉの放射線量を含有する６４マイクログラムの１８Ｆ－抗ＣＤ８ ＶＨＨを注射した。リンパ節、胸腺、および脾臓などのＣＤ８が豊富な組織は、注射から１時間以内に明確に画像化することができた。例えば、図１１の上段の図は、注射１時間後のＰＥＴ ＭＩＰ画像を示す。対照的に、１８Ｆ対照ＶＨＨの注射１時間後のＰＥＴ ＭＩＰ画像では、ＣＤ８が豊富な組織は視認できなかった（図１１下段）。腎臓へのクリアランスのみが顕著だった。
［実施例３］
がん、自己免疫疾患もしくは状態、移植拒絶、または移植片対宿主病に対する免疫療法の有効性を決定するためにＣＤ８画像化を使用するための方法
１８Ｆ－抗ＣＤ８ ＶＨＨなどの、本明細書に記載のＣＤ８結合性作用剤を使用して、ＣＤ８＋細胞による腫瘍およびリンパ節浸潤を評価する。そのような画像化を使用して、患者の予後および／または免疫療法に対する応答を予測する免疫表現型を特定する。そのような画像化を使用して、例えば、疾患組織（例えば、腫瘍）および他のリンパ節におけるＣＤ８＋Ｔ細胞の遍在性を決定する。そのような画像化を使用して、がん、自己免疫疾患もしくは状態（関節炎、大腸炎、またはセリアック病など）、移植拒絶、または移植片対宿主病を有する患者のための、免疫療法剤または１つもしくは複数の免疫療法剤を含む併用療法剤を選択する。
本明細書で開示のすべての実施形態では、がん患者に対する免疫療法は、例えば、がんを治療するためのモノクローナル抗体、Ｔ細胞および腫瘍関連タンパク質に結合する二重特異性抗体、ＮＫ細胞および腫瘍関連タンパク質に結合する二重特異性抗体、サイトカイン、ＣＡＲ－Ｔ細胞療法、非特異的がん免疫療法およびアジュバント、ならびに免疫チェックポイント阻害剤など、本明細書で開示の任意の抗ＰＤ１剤または抗ＰＤＬ１剤である。Ｔ細胞および腫瘍関連タンパク質に結合する二重特異性抗体としては、例えば、抗ＣＤ３二重特異性抗体が挙げられる。ＮＫ細胞および腫瘍関連タンパク質に結合する二重特異性抗体としては、例えば、抗ＣＤ１６（ＦｃｇａｍｍａＲＩＩＩ）二重特異性抗体、抗ＣＤ１６Ａ二重特異性抗体、抗ＣＤ５６二重特異性抗体、抗ＮＫｐ４６二重特異性抗体、および任意の他のＮＫ細胞結合性二重特異性抗体が挙げられる。
一部の実施形態では、ＣＤ８結合性作用剤（例えば、１８Ｆ－抗ＣＤ８ ＶＨＨ）を、本明細書に記載の通り、がん、自己免疫疾患もしくは状態、移植拒絶、または移植片対宿主病などの疾患の治療、診断、予後、コンパニオン診断、および進行／寛解のモニタリングに使用することができる。
一部の実施形態では、ＣＤ８結合性作用剤（例えば、１８Ｆ－抗ＣＤ８ ＶＨＨ）は、免疫療法剤による疾患（がん、自己免疫疾患もしくは状態、移植拒絶、または移植片対宿主病）の治療失敗を経験した対象の画像化に使用することができ、画像化結果により、治療失敗の機序が説明される。例えば、対象は、アテゾリズマブ組合せを受け、治療に応答しない場合がある。画像化結果は、対象が、ＣＤ８＋腫瘍細胞を喪失したか、または依然としてＣＤ８＋腫瘍細胞を有しているが、療法剤が疲弊しているかもしくはＣＤ８＋腫瘍細胞に対してもはや効力がないかを明らかにすることができる。
［実施例４］
マイクロバイオーム研究および免疫表現型特定のためにＣＤ８画像化を使用するための方法
１８Ｆ－抗ＣＤ８ ＶＨＨなどの、本明細書に記載のＣＤ８結合性作用剤を使用して、ＣＤ８＋細胞による腫瘍およびリンパ節浸潤を評価することができる。そのような画像化を使用して、患者の予後および／またはがん免疫療法に対する応答を予測するマイクロバイオームシグネチャの根底にある免疫表現型を特定する。
さらに、１８Ｆ－抗ＣＤ８ ＶＨＨなどの、本明細書に記載のＣＤ８結合性作用剤を使用して、ＣＤ８＋Ｔ細胞の生体内分布における特定の全身パターンに関連付けられるマイクロバイオームシグネチャを特定することができる。そのような画像化を使用して、例えば、腫瘍および他のリンパ節におけるＣＤ８＋Ｔ細胞の遍在性を決定する。このような画像化を使用すると、結果との直接的な関連性が高ノイズ性であるかまたは弱い場合でも、最もロバストなマイクロバイオームバイオマーカーが選択される。
常在性腸内細菌は、がん免疫療法に対する患者応答に影響を及ぼす場合がある。例えば、Gopalakrishnan et al. (2018) Science. 359(6371): 97-103を参照されたい。したがって、がん免疫療法に対する患者応答性に関連付けられる重要な微生物菌株を特定することは、がん患者の適切な治療レジメンの特定に有用であり得る。１８Ｆ－抗ＣＤ８ ＶＨＨなどの、本明細書に記載のＣＤ８結合性作用剤を使用して、免疫療法（例えば、本明細書で考察されている免疫療法）に対する患者応答性と相関するマイクロバイオームプロファイル（例えば、腸内細菌叢組成）を特定することができる。
手短に言えば、腸内マイクロバイオーム試料（例えば、糞便試料）を、免疫療法（例えば、本明細書の他所に記載の免疫療法）を受けることになるがん患者から得る。１８Ｆ－抗ＣＤ８ ＶＨＨなどの、本明細書に記載のＣＤ８結合性作用剤を、がん免疫療法を受ける前の患者の各々に投与し、ＣＤ８＋細胞による各患者の腫瘍およびリンパ節浸潤を評価する。次に、患者は各々、がん免疫療法（例えば、本明細書に記載の免疫療法）を受ける。１８Ｆ－抗ＣＤ８ ＶＨＨなどの、本明細書に記載のＣＤ８結合性作用剤を、がん免疫療法後の患者に再び投与し、もう一度、ＣＤ８＋細胞による各患者の腫瘍およびリンパ節浸潤を評価する。免疫療法後の患者の腫瘍およびリンパ節におけるＣＤ８浸潤レベルを評価し、各患者のマイクロバイオームプロファイル（例えば、腸内マイクロバイオーム試料に存在する微生物のタイプおよび各タイプの微生物の存在量）を決定する。腫瘍およびリンパ節へのＣＤ８＋Ｔ細胞浸潤を示す患者の腸内マイクロバイオーム試料に存在する重要な微生物菌株を特定する。
リンパ節および／または腫瘍へのＣＤ８＋Ｔ細胞浸潤を示す患者の重要な微生物菌株を特定した後、重要な微生物菌株を含むマイクロバイオーム薬を、そのような患者から得られるドナー糞便から製作する。マイクロバイオーム薬を、リンパ節または腫瘍へのＣＤ８＋Ｔ細胞の浸潤を示さない患者に投与する。あるいは、リンパ節および／または腫瘍へのＣＤ８＋Ｔ細胞浸潤を示す患者から収集したドナー糞便を使用して、リンパ節および／または腫瘍へのＣＤ８＋Ｔ細胞浸潤を示さない患者に対して、ＦＭＴ（糞便微生物叢移植）手順を実施する。一部の実施形態では、ＦＭＴまたはマイクロバイオーム薬は、がん免疫療法時にリンパ節および／または腫瘍へのＣＤ８＋浸潤を呈さない患者を、がん免疫療法に応答する患者へと変換する。
一部の実施形態では、ＣＤ８画像化は、ＦＭＴの前またはマイクロバイオーム薬投与の前に、リンパ節および／または腫瘍へのＣＤ８＋浸潤を呈さない患者に対して実施される。患者は、ＦＭＴまたはマイクロバイオーム薬の投与後に免疫療法を受ける。免疫療法後、ＦＭＴまたはマイクロバイオーム薬が、リンパ節および／または腫瘍へのＣＤ８＋浸潤の増加をもたらすか否かを決定するために、患者に対して画像化が実施される。一部の実施形態では、ＦＭＴまたは他のマイクロバイオーム薬後にがん免疫療法治療に応答してＣＤ８＋浸潤の増加が観察される場合、ＦＭＴまたは他のマイクロバイオーム薬は成功したとみなされる。
マイクロバイオーム研究および発見と併せて使用されるＣＤ８画像化剤は、ｗｔ２Ｃ８ ＶＨＨ、２Ｃ８ｖ１３０ ＶＨＨ、２Ｃ８ｖ１４２ ＶＨＨ、または２Ｃ８ｖ１４４ ＶＨＨを使用した１８Ｆ－抗ＣＤ８ ＶＨＨなどの、本明細書に記載の任意のＣＤ８結合性作用剤であってもよい。
一部の実施形態では、がん免疫療法は、免疫チェックポイント阻害剤である。一部の実施形態では、がん免疫療法は、Ｔ細胞標的療法である。一部の実施形態では、Ｔ細胞標的療法は、Ｔ細胞二重特異性、三重特異性、もしくは多特異性抗体、またはそれらの抗原結合性断片である。一部の実施形態では、がん免疫療法は、ＮＫ細胞標的療法である。一部の実施形態では、ＮＫ細胞標的療法は、二重特異性、三重特異性、もしくは多特異性抗体、またはそれらの抗原結合性断片である。
一部の実施形態では、１８Ｆ－抗ＣＤ８ ＶＨＨなどの、本明細書に記載のＣＤ８結合性作用剤を使用したＣＤ８画像化は、チェックポイント阻害剤、またはＣＤ１６もしくはＣＤ３標的指向性部分などの免疫調節分子の投与前、投与中、および投与後に、腫瘍およびリンパ節ＣＤ８＋浸潤を評価するために使用することができる。そのような画像化を使用して、チェックポイント阻害剤、またはＣＤ１６もしくはＣＤ３標的指向性部分などの免疫調節分子の有効性に関連付けられるマイクロバイオームバイオマーカーを決定する。
この例で使用されるチェックポイント阻害剤は、任意のチェックポイント阻害剤であってもよい。一部の実施形態では、チェックポイント阻害剤は、抗ＰＤ１または抗ＰＤＬ１抗体である。一部の実施形態では、チェックポイント阻害剤は、アテゾリズマブ（ＴＥＣＥＮＴＲＩＱ（登録商標））である。
免疫調節分子は、ＣＤ８細胞増殖および浸潤に影響を及ぼす任意の分子であってもよい。例としては、ＣＤ３および腫瘍関連抗原に結合する抗体ならびにＣＤ１６および腫瘍関連抗原に結合する分子などのＴ細胞二重特異性分子が挙げられる。
例示的な実施形態および実施例は、説明のために提供されているに過ぎず、いかなる点でも本出願の範囲を限定することは意図されていない。実際、当業者であれば、本明細書に表示および記載されているものに加えて、種々の改変が前述の記載から明らかであり、添付の特許請求の範囲内に含まれることになる。

Claims (80)

  1. 重鎖抗体の重鎖の可変ドメイン（ＶＨＨドメイン）を含むＣＤ８結合性作用剤であって、約１ｎＭまたはそれよりも低いＫＤでヒトＣＤ８に特異的に結合するＣＤ８結合性作用剤。
  2. 約０．００２／秒またはそれより低いｋｏｆｆでヒトＣＤ８に結合する、請求項１に記載のＣＤ８結合性作用剤。
  3. 約１ｎＭまたはそれよりも低いＫＤでカニクイザルＣＤ８に結合する、請求項１または２に記載のＣＤ８結合性作用剤。
  4. 約０．００４／秒またはそれより低いｋｏｆｆでカニクイザルＣＤ８に結合する、請求項１から３のいずれか一項に記載のＣＤ８結合性作用剤。
  5. ＣＤ８＋Ｔ細胞の活性化を刺激も阻害もしない、請求項１から４のいずれか一項に記載のＣＤ８結合性作用剤。
  6. ＣＤ８＋Ｔ細胞増殖を誘導しない、請求項１から５のいずれか一項に記載のＣＤ８結合性作用剤。
  7. ＣＤ４＋Ｔ細胞に結合しない、実施形態１から６のいずれか一項に記載のＣＤ８結合性作用剤。
  8. 前記ＶＨＨドメインがラマＶＨＨである、請求項１から７のいずれか一項に記載のＣＤ８結合性作用剤。
  9. 前記ＶＨＨドメインがヒト化されている、請求項１から８のいずれか一項に記載のＣＤ８結合性作用剤。
  10. 前記ＶＨＨドメインが、Ａｒｇ２５、Ｌｙｓ４２、Ｇｌｎ４４、Ｖａｌ４５、Ｌｅｕ４６、Ｌｅｕ４７、Ｓｅｒ４８、Ｐｒｏ５０、Ｔｈｒ５１、Ｓｅｒ５２、Ｇｌｎ７５、Ａｒｇ９３、Ｌｅｕ９４、Ｇｌｙ９５、Ａｓｐ９６、およびＴｈｒ９７を含むヒトＣＤ８αエピトープに特異的に結合し、アミノ酸付番は配列番号１３による、請求項１から９のいずれか一項に記載のＣＤ８結合性作用剤。
  11. 前記ＶＨＨドメインはが、配列番号６または７のアミノ酸配列を含む相補性決定領域（ＣＤＲ）１；配列番号８または９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；および配列番号１０～１２のいずれか１つのアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む、請求項１０に記載のＣＤ８結合性作用剤。
  12. 前記ＶＨＨドメインが、
    （１）配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号１０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３；
    （２）配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３；
    （３）配列番号７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３；または
    （４）配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２、および配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３
    を含む、請求項１１に記載のＣＤ８結合性作用剤。
  13. 前記ＶＨＨドメインが、配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１；配列番号９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２；および配列番号１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３を含む、請求項１１に記載のＣＤ８結合性作用剤。
  14. 前記ＶＨＨドメインが、Ｌ４９Ａを含み、付番はＫａｂａｔ付番による、請求項１から１３のいずれか一項に記載のＣＤ８結合性作用剤。
  15. 前記ＶＨＨドメインが、Ｖ８９Ｔ置換、Ｔ１１０Ｑ置換、Ｓ１１２Ｑ置換、およびＡ１１４付加からなる群から選択される１つまたは複数のアミノ酸修飾を含み、付番はＫａｂａｔ付番による、請求項１から１４のいずれか一項に記載のＣＤ８結合性作用剤。
  16. 前記ＶＨＨドメインが、配列番号１～４のいずれか１つのアミノ酸配列を含む、請求項１から１５のいずれか一項に記載のＣＤ８結合性作用剤。
  17. Ｆｃ領域を含まない、請求項１から１６のいずれか一項に記載のＣＤ８結合性作用剤。
  18. 請求項１から１７のいずれか一項に記載のＣＤ８結合性作用剤をコードする単離された核酸。
  19. 請求項１８に記載の核酸を含む発現ベクター。
  20. 請求項１８に記載の核酸または請求項１９に記載の発現ベクターを含む宿主細胞。
  21. 哺乳動物細胞（例えば、Ｅｘｐｉ２９３細胞）などの真核細胞、または原核細胞である、請求項２０に記載の宿主細胞。
  22. ＣＤ８結合性作用剤を製作するための方法であって、
    ａ）請求項２０または２１に記載の宿主細胞を、前記作用剤が産生される条件下で培養するステップ；および
    ｂ）前記宿主細胞により産生された前記ＣＤ８結合性作用剤を回収するステップ
    を含む方法。
  23. 前記ＶＨＨドメインが、標識にコンジュゲートされている、請求項１から１７のいずれか一項に記載のＣＤ８結合性作用剤。
  24. 前記標識が、蛍光色素、放射性核種、または酵素である、請求項２３に記載のＣＤ８結合性作用剤。
  25. 前記標識が、放射性核種である、請求項２４に記載のＣＤ８結合性作用剤。
  26. 前記放射性核種が、１８Ｆ、８９Ｚｒ、９９ｍＴｃ、６７Ｇａ、６８Ｇａ、６４Ｃｕ、５２Ｍｎ、１１１Ｉｎ、または１２４Ｉである、請求項２５に記載のＣＤ８結合性作用剤。
  27. 前記ＶＨＨドメインが、キレート部分を介して標識にコンジュゲートされている、請求項２３から２６のいずれか一項に記載のＣＤ８結合性作用剤。
  28. 前記キレート部分が、リジン残基を介して前記ＶＨＨドメインに共有結合で連結されている、請求項２７に記載のＣＤ８結合性作用剤。
  29. 前記標識が、金属と錯体を形成し、前記錯体は、前記キレート部分によりキレートされている、請求項２７または２８に記載のＣＤ８結合性作用剤。
  30. 前記標識が１８Ｆであり、前記金属がアルミニウムである、請求項２９に記載のＣＤ８結合性作用剤。
  31. 前記キレート部分が、式（Ｉ）：
    Figure 2022547483000012
     の化合物である、請求項３０に記載のＣＤ８結合性作用剤。
  32. 対象のＣＤ８＋細胞を検出するための方法であって、
    ａ）請求項２３から３１のいずれか一項に記載の標識ＣＤ８結合性作用剤を前記対象に投与するステップ；および
    ｂ）前記標識ＣＤ８結合性作用剤と前記対象のＣＤ８＋細胞との結合を検出するステップ
    を含み、前記結合の検出はＣＤ８＋細胞の存在を示す、
    方法。
  33. 前記標識ＣＤ８結合性作用剤と前記対象のＣＤ８＋細胞との結合を検出するステップが、前記対象のＣＤ８＋細胞を画像化することを含む、請求項３２に記載の方法。
  34. 前記対象のＣＤ８＋細胞の画像化が、前記対象に対して陽電子放出断層撮影（ＰＥＴ）スキャンまたは陽電子放出断層撮影／コンピュータ断層撮影（ＰＥＴ／ＣＴ）スキャンを実施することを含む、請求項３３に記載の方法。
  35. 前記ＣＤ８＋細胞が、ＣＤ８＋Ｔ細胞またはＣＤ８＋腫瘍細胞である、請求項３２から３４のいずれか一項に記載の方法。
  36. 前記検出するステップが、前記投与後約１日以内またはそれよりも短時間以内に実施される、請求項３２から３５のいずれか一項に記載の方法。
  37. １回または複数回繰り返される、請求項３２から３６のいずれか一項に記載の方法。
  38. 前記ＣＤ８結合性作用剤の以前の投与後の約１日後に繰り返される、請求項３７に記載の方法。
  39. 年間１～４回繰り返される、請求項３７または３８に記載の方法。
  40. １年よりも長期間にわたって繰り返される、請求項３７から３９のいずれか一項に記載の方法。
  41. 約１ｎＭ～約３０ｎＭの感度を有する、請求項３２から４０のいずれか一項に記載の方法。
  42. 前記対象が、ヒトまたは非ヒト霊長類である、請求項３２から４１のいずれか一項に記載の方法。
  43. 前記非ヒト霊長類が、カニクイザルまたはアカゲザルである、請求項４２に記載の方法。
  44. 前記対象ががんを有する、請求項３２から４３のいずれか一項に記載の方法。
  45. 前記対象が、自己免疫疾患もしくは状態、移植拒絶、または移植片対宿主病を有する、請求項３２から４３のいずれか一項に記載の方法。
  46. がんを有する対象の、免疫療法剤、細胞療法、またはがんワクチンに対する応答性を予測するための方法であって、
    ａ）請求項２３から３１のいずれか一項に記載の標識ＣＤ８結合性作用剤を前記対象に投与するステップ；および
    ｂ）前記標識ＣＤ８結合性作用剤と、前記対象の腫瘍組織のＣＤ８＋Ｔ細胞との結合を検出するステップ
    を含み、前記結合の検出は、前記対象が前記免疫療法剤、前記細胞治療、または前記がんワクチンに応答する可能性が高いことを示す、
    方法。
  47. （ｃ）前記結合が検出された前記対象に、治療有効量の前記免疫療法剤、前記細胞療法、または前記がんワクチンを投与するステップ
    をさらに含む、請求項４６に記載の方法。
  48. がんを有する対象の疾患進行をモニターするための方法であって、
    ａ）請求項２３から３１のいずれか一項に記載の標識ＣＤ８結合性作用剤を前記対象に投与するステップ；ならびに
    ｂ）第１の時点および第２の時点にて、前記標識ＣＤ８結合性作用剤と前記対象の腫瘍組織のＣＤ８＋Ｔ細胞との結合を検出するステップ
    を含む方法。
  49. （ｃ）治療有効量の免疫療法剤、細胞療法、またはがんワクチンを前記対象に投与するステップをさらに含み、前記第２の時点における前記腫瘍組織のＣＤ８＋Ｔ細胞のレベルが、前記第１の時点における前記腫瘍組織のＣＤ８＋Ｔ細胞のレベルよりも高い、
    請求項４８に記載の方法。
  50. 免疫療法剤、細胞療法、またはがんワクチンを受けたかまたは受けている、がんを有する対象の治療進行をモニターするための方法であって、
    ｉ）前記免疫療法剤、前記細胞療法、または前記がんワクチンと併せて、請求項２３から３１のいずれか一項に記載の標識ＣＤ８結合性作用剤を前記対象に投与するステップ、ならびに
    ｉｉ）第１の時点および第２の時点にて、前記標識ＣＤ８結合性作用剤と腫瘍組織のＣＤ８＋Ｔ細胞との結合を検出するステップ
    を含む方法。
  51. 前記標識ＣＤ８結合性作用剤が、前記免疫療法剤、前記細胞療法、または前記がんワクチンの前に投与され、前記第１の時点は、前記標識ＣＤ８結合性作用剤の投与後だが前記免疫療法剤、前記細胞療法、または前記がんワクチンの投与前であり、前記第２の時点は、前記免疫療法剤、前記細胞療法、または前記がんワクチンの投与後である、請求項５０に記載の方法。
  52. 前記免疫療法剤、前記細胞療法、または前記がんワクチンが、前記標識ＣＤ８結合性作用剤の前に投与され、前記第１の時点は、前記免疫療法剤、前記細胞療法、または前記がんワクチンの投与後であり、かつ前記標識ＣＤ８結合性作用剤の投与後であり、前記第２の時点は、前記第１の時点の後である、請求項５０に記載の方法。
  53. 前記免疫療法剤が、前記対象に投与される、請求項４６から４７および４９から５２のいずれか一項に記載の方法。
  54. 前記免疫療法剤が、抗ＰＤＬ１抗体、抗ＰＤ１抗体、抗ＴＩＧＩＴ抗体、ＴＩＧＩＴアンタゴニスト、抗ＣＳＦ－１Ｒ抗体、抗ＣＳＦ－１Ｒアンタゴニスト、抗ＣＥＡ抗体、抗ＣＥＡアンタゴニスト、抗ＣＴＬＡ４抗体、ＣＴＬＡ４アンタゴニスト、抗ＯＸ４０抗体、またはＯＸ４０アゴニストである、請求項５３に記載の方法。
  55. 前記免疫療法剤が、抗ＰＤ－Ｌ１抗体である、請求項５４に記載の方法。
  56. 前記抗ＰＤ－Ｌ１抗体が、アテゾリズマブである、請求項５５に記載の方法。
  57. 前記抗ＰＤ－Ｌ１抗体が、１つまたは複数の療法剤と組み合わせて投与される、請求項５５または５６に記載の方法。
  58. 前記１つまたは複数の療法剤が、ＴＡＲＣＥＶＡ（登録商標）（エルロチニブ）、ＺＥＬＢＯＲＡＦ（登録商標）（ベムラフェニブ）、ＧＡＺＹＶＡ（登録商標）（オビヌツズマブ）、ＡＶＡＳＴＩＮ（登録商標）（ベバシズマブ）、ＣＯＴＥＬＬＩＣ（登録商標）（コビメチニブ）、ＺＥＬＢＯＲＡＦ（登録商標）（ベムラフェニブ）およびＣＯＴＥＬＬＩＣ（登録商標）（コビメチニブ）、ＡＬＥＣＥＮＳＡ（登録商標）（アレクチニブ）、ＫＡＤＣＹＬＡ（登録商標）（アドトラスツズマブエムタンシン）、ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標）（トラスツズマブ）、ＰＥＲＪＥＴＡ（登録商標）（ペルツズマブ）、ポラツズマブ、ＩＦＮ－アルファ、抗ＣＤ４０剤、抗ＯＸ４０抗体、ＯＸ４０アゴニスト、抗ＣＳＦ－１Ｒ抗体、抗ＣＥＡ抗体、ＩＤＯ阻害剤、または抗ＴＩＧＩＴ抗体である、請求項５７に記載の方法。
  59. 前記免疫療法剤が、ＩＬ２、遺伝子操作ＩＬ２、ＩＬ１５、または遺伝子操作ＩＬ１５などのサイトカインである、請求項５３に記載の方法。
  60. 前記免疫療法剤が、樹状細胞活性化因子または樹状細胞成長因子などの樹状細胞モジュレーターである、請求項５３に記載の方法。
  61. 前記免疫療法剤が、ＣＤ３、またはＣＤ１６ＡなどのＣＤ１６に特異的に結合する二重特異性抗原結合性分子である、請求項５３に記載の方法。
  62. 前記がんワクチンが、前記対象に投与される、請求項４６から４７および４９から５２のいずれか一項に記載の方法。
  63. 前記がんワクチンが、個別化がんワクチン（ＰＣＶ）である、請求項６２に記載の方法。
  64. 前記細胞療法が、前記対象に投与される、請求項４６から４７および４９から５２のいずれか一項に記載の方法。
  65. 前記細胞療法が、ＣＡＲ－Ｔまたはネオ抗原特異的Ｔ細胞である、請求項６４に記載の方法。
  66. 自己免疫疾患もしくは状態、移植拒絶、または移植片対宿主病を有する対象の、免疫療法剤に対する応答性を予測するための方法であって、
    ａ）請求項２３から３１のいずれか一項に記載の標識ＣＤ８結合性作用剤を前記対象に投与するステップ；および
    ｂ）前記標識ＣＤ８結合性作用剤と、前記対象の疾患組織のＣＤ８＋Ｔ細胞との結合を検出するステップ
    を含み、前記結合の検出は、前記対象が前記免疫療法剤に応答する可能性が高いことを示す、
    方法。
  67. （ｃ）前記結合が検出された前記対象に、治療有効量の前記免疫療法剤を投与するステップ
    をさらに含む、請求項６６に記載の方法。
  68. 自己免疫疾患もしくは状態、移植拒絶、または移植片対宿主病を有する対象の疾患進行をモニターするための方法であって、
    ａ）請求項２３から３１のいずれか一項に記載の標識ＣＤ８結合性作用剤を前記対象に投与するステップ；ならびに
    ｂ）第１の時点および第２の時点にて、前記標識ＣＤ８結合性作用剤と、前記対象の疾患組織のＣＤ８＋Ｔ細胞との結合を検出するステップ
    を含み、前記第１の時点および前記第２の時点からのＣＤ８＋Ｔ細胞の増加は、自己免疫疾患、移植拒絶、または移植片対宿主病が進行したことを示す、
    方法。
  69. （ｃ）治療有効量の免疫療法剤を前記対象に投与するステップ
    をさらに含み、前記第２の時点における前記疾患組織のＣＤ８＋Ｔ細胞のレベルは、前記第１の時点における前記疾患組織のＣＤ８＋Ｔ細胞のレベルよりも低い、
    請求項６８に記載の方法。
  70. 免疫療法剤を受けたかまたは受けている、自己免疫疾患もしくは状態、移植拒絶、または移植片対宿主病を有する対象の治療進行をモニターするための方法であって、
    ｉ）前記免疫療法剤と併せて、請求項２３から３１のいずれか一項に記載の標識ＣＤ８結合性作用剤を前記対象に投与するステップ、ならびに
    ｉｉ）第１の時点および第２の時点にて、前記標識ＣＤ８結合性作用剤と疾患組織のＣＤ８＋Ｔ細胞との結合を検出するステップ
    を含む方法。
  71. 前記標識ＣＤ８結合性作用剤が、前記免疫療法剤の前に投与され、前記第１の時点は、前記標識ＣＤ８結合性作用剤の投与後だが前記免疫療法剤の投与前であり、前記第２の時点は、前記免疫療法剤の投与後である、請求項７０に記載の方法。
  72. 前記免疫療法剤が、前記標識ＣＤ８結合性作用剤の前に投与され、前記第１の時点は、前記免疫療法剤の投与後であり、かつ前記標識ＣＤ８結合性作用剤の投与後であり、前記第２の時点は、前記第１の時点の後である、請求項７０に記載の方法。
  73. 前記標識ＣＤ８結合性作用剤と前記対象のＣＤ８＋細胞との結合を検出するステップは、前記対象のＣＤ８＋Ｔ細胞を画像化することを含む、請求項４６から７２のいずれか１つに記載の方法。
  74. 前記対象のＣＤ８＋細胞の画像化が、前記対象に対して陽電子放出断層撮影（ＰＥＴ）スキャンまたは陽電子放出断層撮影／コンピュータ断層撮影（ＰＥＴ／ＣＴ）スキャンを実施することを含む、請求項７３に記載の方法。
  75. 前記対象が、少なくとも１年間モニターされる、請求項４８から６５および６８から７４のいずれか１つに記載の方法。
  76. 免疫療法剤による治療に対する応答性に関連付けられる腸内微生物菌株を特定するための方法であって、
    ａ）がんを有する対象の集団から腸内マイクロバイオーム試料を得るステップであって、前記集団は、前記免疫療法剤による治療に応答性である対象および前記免疫療法剤による治療に応答性でない対象を含む、ステップ；
    ｂ）前記治療に応答性である前記対象の前記腸内マイクロバイオーム試料および前記治療に応答性でない前記対象の前記腸内マイクロバイオーム試料を分析するステップ；ならびに
    ｃ）前記治療に応答性である前記対象に関連付けられる腸内微生物菌株を特定するステップ
    を含み、応答性は、請求項２３から３１のいずれか一項に記載の標識ＣＤ８結合性作用剤と、前記対象の腫瘍組織のＣＤ８＋Ｔ細胞との結合を検出することにより決定され、前記結合の検出は、前記対象が前記免疫療法剤に応答性であることを示す、
    方法。
  77. 前記免疫療法剤に対する応答性に関連付けられる腸内微生物菌株を含むマイクロバイオームベースの薬物を調製するステップをさらに含む、請求項７６に記載の方法。
  78. 前記免疫療法剤が、抗ＰＤ－１抗体、またはアテゾリズマブなどの抗ＰＤ－Ｌ１抗体である、請求項７６または７７に記載の方法。
  79. 請求項２３から３１のいずれか一項に記載の標識ＣＤ８結合性作用剤を含むキット。
  80. 標識ＣＤ８結合性作用剤を調製するための方法であって、キレート部分を、請求項１から１７のいずれか一項に記載のＣＤ８結合性作用剤の前記ＶＨＨドメインにコンジュゲートして、コンジュゲートを提供するステップ、および前記コンジュゲートを、１８Ｆを含むフッ化アルミニウム錯体と接触させて、前記標識ＣＤ８結合性作用剤を提供するステップを含み、前記キレート部分は、式（Ｉ）：
    Figure 2022547483000013
     の化合物である、方法。
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