JP2020513019A

JP2020513019A - オリゴマー伸長インスリン−Ｆｃコンジュゲート

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Publication number: JP2020513019A
Application number: JP2019554912A
Authority: JP
Inventors: ティーナ・ムラ・タグモーセ; ペータ・マスン; トマス・バアウロム・ケルスン; ローネ・プリダル; レオナルド・デ・マリア; ジャオシェン・リン; ゼ・ワン; ユアンユアン・ジャン; レナート・リッケ; マーティン・ヴェルネル・ボルクスィーニュス・ムンツェル; ヤノス・ティボル・コドラ
Original assignee: Novo Nordisk AS
Current assignee: Novo Nordisk AS
Priority date: 2017-04-05
Filing date: 2018-04-04
Publication date: 2020-04-30
Also published as: CN110505885A; WO2018185131A3; US20200261595A1; EP3606560A2; US11471537B2; WO2018185131A2; MA49339A

Abstract

本発明はタンパク質コンジュゲートの分野のものである。より詳細には、本発明は、代謝障害または症状の治療に用いる、共有結合したＦｃモノマーポリペプチドをもつオリゴマー伸長インスリン、およびそのようなオリゴマー伸長インスリン−Ｆｃコンジュゲートを生成する方法に関する。本発明はまた、本発明のオリゴマー伸長インスリン−Ｆｃコンジュゲートの合成過程における、新規のＦｃ断片、中間生成物、およびそのような中間生成物の使用に関する。そして本発明は、本発明のオリゴマー伸長インスリン−Ｆｃコンジュゲートを含む医薬組成物を提供し、代謝障害または症状に関連する病状の治療または予防に対するかかる組成物の使用に関する。

Description

本発明はタンパク質コンジュゲートの分野のものである。より詳細には、本発明は、代謝障害または症状の治療に用いる、共有結合したＦｃモノマーポリペプチドをもつオリゴマー伸長インスリン、およびそのようなオリゴマー伸長インスリン−Ｆｃコンジュゲートを生成する方法に関する。

本発明はまた、本発明のオリゴマー伸長インスリン−Ｆｃコンジュゲートの合成過程における、新規のＦｃ断片、中間生成物、およびそのような中間生成物の使用に関する。

そして本発明は、本発明のオリゴマー伸長インスリン−Ｆｃコンジュゲートを含む医薬組成物を提供し、代謝障害または症状に関連する病状の治療または予防に対するかかる組成物の使用に関する。

オリゴマー伸長インスリンは、オリゴマー（アミノ酸残基で構成された）を用いてインスリンのＡ鎖および／またはＢ鎖を伸長することによって生成されるインスリンである。

Ｆｃ融合タンパク質（ペプチボディ（ｐｅｐｔｉｂｏｄｙ）と呼ばれる場合もある）は、典型的には、生物学的に活性なポリペプチドをイムノグロブリンＧの結晶形成断片領域（Ｆｃドメイン）と融合する（すなわち、もともと別個のタンパク質をコードした二つ以上の遺伝子を結合する）ことによって産生されるキメラタンパク質であり、融合タンパク質は多くの場合、例えば新生児Ｆｃ受容体ＦｃＲｎへの結合による長い血清半減期というＩｇＧ様の特性である、それらの構成部分の特性を組み合わる。

一方、タンパク質コンジュゲートは、合成リンカー（例えば、ＰＥＧリンカー）を介して治療的ポリペプチドに共有結合された、「大きな」、典型的には組換え体である、エフェクター分子（例えば、ＩｇＧ−Ｆｃまたはアルブミンなど）を有する化合物である。タンパク質コンジュゲートは複数の状況で有用であり、ますます複雑になる生物学的治療化合物の特定および開発が、こうした化合物を調製するための魅力的な方法への注目を高めている。タンパク質が従来の化学成分ほど安定していないため二つ以上のタンパク質を結合させることに付随して困難が生じ、タンパク質の損傷なしに従来の反応化学を適用することができない。さらに、二つ以上のタンパク質を結合させることは、選択性の問題によって複雑化する。

タンパク質およびペプチドの半減期は、Ｆｃへの融合によって延長されうる。しかしながら、インスリンは二鎖ポリペプチドであって、単鎖類似体として発現後に、酵素的処理することによって得られる二鎖ポリペプチドであるため、インスリンはタンパク質融合には理想的ではない。さらに、融合はＮ末端および／またはＣ末端に限定される。したがって、例えばＦｃの作用によってインスリンの半減期を延長するためには、化学的な結合が必要である。

二つのタンパク質を結合させる場合、リンカーの特性が重要である。短いリンカーは、各タンパク質の活性に影響を与える場合がある。二つのタンパク質を近づけすぎると、分子の生物物理学的な安定性に影響を及ぼす可能性がある。この影響を与える可能性があるリンカー特性としては、例えば、二つめの分子上における結合の位置、リンカーの長さ、リンカーの柔軟性、リンカーの極性があり得る。一部の事例では、柔軟なリンカーが好ましく、他の事例では硬いリンカーが必要となる。分子／タンパク質を二つめの分子と結合させることが、コンジュゲートの生物物理学的特性に悪影響を及ぼす可能性があるが、これはリンカー特性によって解決され得る。

国際公開第２０１１／１２２９２１号には、改善されたｉｎｖｉｖｏ持続時間を有するインスリンコンジュゲートが記載されており、このコンジュゲートは、両端に反応性基（例えば、プロピオンアルデヒドとしてのアルデヒド官能性）を有する、所謂ホモ二官能性リンカーの、親水性非ペプチジル（例えば、ＰＥＧ）リンカーを介してインスリンをイムノグロブリンＦｃ領域と共有結合させることによって調製される。使用されるＰＥＧリンカーは、多分散型であり、サイズが約３．４ＫＤａ〜１０ＫＤａであるため、多分散リンカーの使用により、最終産物の合成および分析に関して課題が生じる。

国際公開第２０１６／１７８９０５号には、ペプチドリンカーの使用を通してヒトＩｇＧＦｃ領域に融合したインスリン受容体作動薬を含む融合タンパク質が記載されている。

国際公開第２０１６／１９３３８０号には、薬剤物質の半減期および安定性を改善するために、主として極性のアミノ酸残基の配列を用いて伸長させた新規のインスリンまたはインスリン類似体が記載されている。

タンパク質とペプチド、小分子ポリマー、またはプロトラクターポリマーとの間で部位特異的コンジュゲートを得る最も一般的な方法は、反応性ハンドルとして、Ｎ末端アミノ酸にあるＣｙｓのチオールおよび第一級アミノ基ならびにＬｙｓ側鎖のイプシロン−ＮＨ_２がもつ固有の求核性を利用することである。リジンは通常、タンパク質中に豊富にあり（Ｆｃは３０個以上のリジン残基を含む）、化学的ハンドルとしてのリジンの使用を制限する。しかし、インスリンの場合、リジンは一つのみ存在する（すなわち、Ｂ２９位に）。一方、システインの場合は、タンパク質における発見頻度が低く、さらにはジスルフィド架橋の形成に通常関与する。システインは遺伝子操作によって導入できる。しかしながら、インスリンの場合、この修飾は、特に低い発現収率および様々なフォールディングの問題に起因して、困難であることが証明されている。

また、二つのタンパク質を一緒に、それらそれぞれのＣｙｓ、Ｎ末端アミノ基、またはＬｙｓ残基を介して、部位特異的に結合することも困難である。ヘテロ二官能性リンカーの使用により、この目的を果たすことができる。またそれによって、還元されたジスルフィド結合に由来する硫黄原子の両方を介して一つのタンパク質が連結されることとなる二つのタンパク質を結合するというタスクを、さらに困難なものにする。

本明細書において最大二つの末端が同一であり、タンパク質の還元されたチオール部分との安定した共有結合を形成することができ、残りの末端がそのタンパク質内のチオールまたはその他の残基の影響を受けないままとなるような三分岐リンカーを開発したので、これを提供する。この方法論は、対象の二つのタンパク質を、それらの天然のジスルフィドを横切って架橋すること（遊離チオールへのそれらの還元に基づく）によって結合するのに特に適している。

本発明のオリゴマー伸長インスリン−Ｆｃコンジュゲートは、同様の非結合のおよび非伸長の類似体と比較して、インスリン受容体親和性が低いことを示す。インスリンは内部に取り入れられて、受容体活性化によって分解されるため、このようにインスリン受容体親和性が低いことが、循環血中でインスリン−Ｆｃコンジュゲートを保護することに寄与する。そのため、本発明のインスリン−Ｆｃコンジュゲートのクリアランスが低減される。このインスリン受容体親和性が低いことは、例えば標準のＨｙｐｅｒｉｎｓｕｌｉｎｅｍｉｃ−ｅｕｇｌｙｃｅｍｉｃ-ｃｌａｍｐ法で測定されるように、効力の損失を引き起こさないものであり、高いＦｃＲｎ結合と低インスリン受容体親和性との組み合わせが、本発明のインスリン−Ｆｃコンジュゲートの長期間にわたる作用を得るのに有益と考えられる。

従って、本発明は、その第一の態様では、以下の一般式Ｉで表される新規のオリゴマー伸長インスリン−Ｆｃコンジュゲートを提供する：
式中、ＯＥＦ、Ｉｎｓ、Ｘ、ＹおよびＦｃ’は以下で規定するとおりである。

別の態様では、本発明は、以下の一般式Ｉ’で表される新規のオリゴマー伸長インスリン−Ｆｃコンジュゲートを提供する：
式中、ＯＥＦ、Ｉｎｓ、Ｘ、Ｕ、ＺおよびＳ−Ｆｃ’は以下で規定するとおりである。

本発明のインスリン−Ｆｃコンジュゲートは、改善された薬物動態および／または薬力学のプロファイルを示す。

本発明の一態様では、本発明の化合物は、薬力学的効力の増加を示す。

本発明の別の態様では、本発明の化合物は、現時点で市販されている長時間作用性インスリンと比較して少なくとも二倍増加した薬力学的効力を示す。

本発明のさらに別の態様では、本発明の化合物は、生理学的ｐＨで高い溶解性を有する。

本発明の別の態様では、本発明の化合物は長い生体内半減期を有する。

さらなる態様において、本発明は、新規の中間体化合物を提供し、本発明のインスリン−Ｆｃコンジュゲートの製造方法でのそのような産物の使用に関する。

一態様では、本発明は、中間体、すなわち以下の一般式ＩＩの中間体化合物として使用するための新規の［ＯＥＦ−インスリン］構築物を提供する：
［ＯＥＦ−Ｉｎｓ］
式中、
ＯＥＦは、インスリンＡ鎖のＣ末端に融合されたまたはインスリンＢ鎖のＮ末端に融合された、極性を有する組換え伸長を表し、当該伸長は、リジン（Ｋ）残基と組み合わせた、Ａｌａ（Ａ）、Ａｓｐ（Ｄ）、Ｇｌｕ（Ｅ）、Ｇｌｙ（Ｇ）、Ｐｒｏ（Ｐ）、Ｇｌｎ（Ｑ）、Ｓｅｒ（Ｓ）、およびＴｈｒ（Ｔ）のアミノ酸残基のうちの一つまたは複数を含み；かつ、
Ｉｎｓはヒトインスリンの類似体を表し、当該インスリン類似体は、Ａ鎖およびＢ鎖を含む二鎖インスリン分子である。

別の態様では、本発明は、本発明のインスリン−Ｆｃコンジュゲートの製造に使用するための新規のＦｃ断片を提供する。

第三の態様では、本発明は、本発明のオリゴマー伸長インスリン−Ｆｃコンジュゲートの調製に使用するための新規の中間体を提供する。この中間体化合物は、以下の一般式Ｖによって特徴付けられ得る：
Ｍ−Ｘ−Ｙ（−ＬＧ）_２
式中、
Ｍは、第一級アミノ基に対して反応する脱離基を表し；
Ｘは、以下の一般式Ｉで規定されるとおりであり、二価結合基を表し；かつ、
Ｙは、以下の一般式Ｉで規定されるとおりであり、二つの脱離基（ＬＧ）_２をＸに連結させる中央三価結合単位を表すか；または、
Ｘは共有結合を表し、かつ、Ｙは、二つの脱離基（ＬＧ）_２を脱離基Ｍに連結させる中央三価結合単位を表し；かつ、
ＬＧ（Ｃｙｓ反応性末端と命名することもありうる）は、チオール反応性基の脱離基を表す。

第四の態様では、本発明は、本発明のオリゴマー伸長インスリン−Ｆｃコンジュゲートの調製の際の中間体として使用するための新規の［ＯＥＦ−Ｉｎｓ−Ｘ−Ｙ（−ＬＧ）_２］構築物を提供する。本発明による中間体化合物は、以下の一般式ＶＩによって特徴付けられ得る：
［ＯＥＦ−Ｉｎｓ］−Ｘ−Ｙ（−ＬＧ）_２
式中、
ＯＥＦは、以下の一般式Ｉで規定されるとおりであり、インスリンＡ鎖のＣ末端に融合されたまたはインスリンＢ鎖のＮ末端に融合された、極性を有する組換え伸長を示すものであって、当該伸長は、リジン（Ｋ）残基と組み合せた、Ａｌａ（Ａ）、Ａｓｐ（Ｄ）、Ｇｌｕ（Ｅ）、Ｇｌｙ（Ｇ）、Ｐｒｏ（Ｐ）、Ｇｌｎ（Ｑ）、Ｓｅｒ（Ｓ）、およびＴｈｒ（Ｔ）のアミノ酸残基のうちの一つまたは複数を含んで、［ＯＥＦ−Ｉｎｓ］構築物を与えるものであって；
該［ＯＥＦ−Ｉｎｓ］構築物は、以下の一般式Ｉで規定されるとおりであり、リジン（Ｋ）残基を介して二価結合基Ｘに連結しており；
Ｘは存在しないか（すなわち、共有結合を表す）、またはＸは以下の一般式Ｉで規定される二価結合基を表し；
Ｙは、以下の一般式Ｉで規定される中央三価結合単位を表し；かつ、
ＬＧは、上記で規定されるようなチオール反応性基の脱離基を表す。

第五の態様では、本発明は、本発明のインスリン−Ｆｃコンジュゲートの製造における中間体化合物として使用するためのＦｃ’ポリペプチドを提供する。

そして本発明は、本発明のインスリン−Ｆｃコンジュゲートを含む医薬組成物を提供し、糖尿病に関連する病状の治療または予防のためのかかるコンジュゲートの使用に関する。

図１は、実施例５．１、５．５、５．７、および５．２１の化合物の血糖低下効果を示す。３０ｎｍｏｌ／ｋｇの用量で（別段の指示がない限り）、化合物をＳＤ系（Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙ）ラットに供給するために投与（皮下）した。図２は、実施例５．６、５．８、５．１２、および５．１３の化合物の血糖低下効果を示す。３０ｎｍｏｌ／ｋｇの用量で、化合物をＳＤ系（Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙ）ラットに供給するために投与（皮下）した。図３は、実施例５．９、５．１４、５．１５、および５．１６の化合物の血糖低下効果を示す。３０ｎｍｏｌ／ｋｇの用量で、化合物をＳＤ系（Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙ）ラットに供給するために投与（皮下）した。図４は、実施例５．２、５．１７、および５．１９の化合物の血糖低下効果を示す。３０ｎｍｏｌ／ｋｇの用量で、化合物をＳＤ系（Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙ）ラットに供給するために投与（皮下）した。図５は、実施例５．２６、５．２３、および５．２７の化合物の血糖低下効果を示す。３０ｎｍｏｌ／ｋｇの用量で、化合物をＳＤ系（Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙ）ラットに供給するために投与（皮下）した。図６は、実施例５．２４、５．２５、５．３３の化合物および担体の血糖低下効果を示す。３０ｎｍｏｌ／ｋｇの用量で、化合物をＳＤ系（Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙ）ラットに供給するために投与（皮下）した。図７は、実施例５．１２の化合物およびインスリンデクルデク（ｉｎｓｕｌｉｎｄｅｃｌｕｄｅｃ）の血糖低下効果を示す。３０ｎｍｏｌ／ｋｇの用量で（別段の指示がない限り）、化合物をＳＤ系（Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙ）ラットに供給するために投与（皮下）した。

タンパク質コンジュゲート
本発明の文脈では、タンパク質コンジュゲートは、化学反応によって共有結合された二つ以上のポリペプチド（本明細書では、それぞれインスリンまたはインスリン類似体、およびＦｃドメインまたはＦｃドメイン類似体）を含む化合物を表す。

インスリン類似体
ヒトインスリンは、二つのポリペプチド鎖、すなわち、Ａ鎖（２１個のアミノ酸ペプチド）およびＢ鎖（３０個のアミノ酸ペプチド）それぞれからなり、二つのシステインのジスルフィド架橋によって相互連結される。第三の鎖内スルフィド架橋はＡ鎖内に存在する。

本明細書では、インスリンの語は、例えばヒトインスリンなどの天然インスリンのみならずその類似体におよぶ。インスリン類似体、インスリンならびにＡ鎖およびＢ鎖におけるアミノ酸位置の番号付けは、ヒトインスリンとの比較で行われる。

本明細書では、インスリン類似体の語は、天然インスリン中で発生する一つ以上のアミノ酸残基を欠失および／もしくは置換（置き換え）することにより、ならびに／または、一つ以上のアミノ酸残基を用いてインスリンを付加（伸長）することにより、例えばヒトインスリンである天然インスリンの構造より正式に引き出すことが可能である分子構造を持つ、改変ヒトインスリンポリペプチドにおよぶ。

本明細書では、Ａ１、Ａ２、Ａ３などの語は、Ｎ末端から数えた場合の、インスリンのＡ鎖内の１位、２位および３位をそれぞれ示す。同様に、Ｂ１、Ｂ２、Ｂ３などの語は、Ｎ末端から数えた場合の、インスリンのＢ鎖内の１位、２位および３位をそれぞれ示す。アミノ酸について確立された一文字コードを使用した、Ａ２１Ａ、Ａ２１ＧおよびＡ２１Ｑなどの語は、Ａ２１位におけるアミノ酸がそれぞれＡ、ＧおよびＱであることを示す。アミノ酸について確立された三文字コードを使用した、これらに対応する表現は、それぞれＡｌａＡ２１、ＧｌｙＡ２１、およびＧｌｎＡ２１である。

本明細書では、ｄｅｓＢ２９およびｄｅｓＢ３０などの語は、それぞれＢ２９またはＢ３０のアミノ酸残基を欠いているインスリン類似体を示す。

本明細書では、「Ａ（−１）」または「Ｂ（−１）」の語は、それぞれＡ１またはＢ１よりＮ末端にあるアミノ酸の位置を示す。この手法で、Ａ（−２）およびＢ（−２）の語は、それぞれＡ（−１）およびＢ（−１）よりＮ末端である一番目のアミノ酸の位置を示す。したがって、Ａ（−３）およびＢ（−３）は、それぞれＡ（−２）およびＢ（−２）よりＮ末端にあるアミノ酸の位置を示し、Ａ（−４）およびＢ（−４）は、それぞれＡ（−３）およびＢ（−３）よりＮ末端にあるアミノ酸の位置を示す等である。

Ａ２２およびＢ３１の語は、それぞれＡ２１およびＢ３０よりＣ末端にあるアミノ酸の位置を示す。この手法で、Ａ２３およびＢ３２の語は、それぞれＡ２２およびＢ３１よりＣ末端である一番目のアミノ酸の位置を示す。したがって、Ａ２４およびＢ３３は、それぞれＡ２３およびＢ３２よりＣ末端にあるアミノ酸の位置を示す等である。この手法で、Ａ２２Ｇ、Ａ２３Ｇは、Ａ２１位よりＣ末端であるグリシン（Ｇ）残基と、それに続けてＡ２２（Ａ２２Ｇ）位のグリシン（Ｇ）残基よりもＣ末端に位置したグリシン（Ｇ）残基とによって、Ａ鎖のＣ末端が伸長しているということを示す。

オリゴマー伸長融合インスリン類似体の命名法
本発明の文脈では、オリゴマー伸長インスリン類似体［ＯＥＦ−Ｉｎｓ］は、アミノ酸の欠失、置換、挿入、および伸長の仕様によってヒトインスリンとの比較で命名される。

この手法で、実施例１の化合物（ＯＥＦ−Ｉｎｓ−１）は、ヒトインスリン類似体（Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０）を表すものであって、Ａ鎖のＡ１４位およびＡ２１位に位置する天然のアミノ酸残基が、グルタミン酸（Ｅ）およびグリシン（Ｇ）でそれぞれ置換されており、かつ、Ｂ２５位およびＢ２９位に位置する天然のアミノ酸残基が、ヒスチジン（Ｈ）およびアルギニン（Ｒ）でそれぞれ置換され、Ｂ３０位が欠失しており、上記類似体は、四つのアミノ酸残基（ＧＱＥＰ）の反復を特定の順で形成することで合計７６個のアミノ酸残基（（ＧＱＥＰ）_１９）と命名される）とそれに続くＫＰとからなる伸長を形成する伸長によって、アミノ酸Ａ２２位で開始されるＡ鎖のＣ末端側への伸長がなされている。伸長全体は、（ＧＱＥＰ）_１９−ＫＰと命名してもよい（またこのためリジンはＡ９８Ｋと呼ばれる）。

この類似体はまた、Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＥＰ）_１９，Ａ９８Ｋ，Ａ９９Ｐ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリンと命名することもあり、この化合物を、以下の化学式１に示す。すなわち、Ａ２２（ＧＱＥＰ）_１９は、Ａ２１に付加した（ＧＱＥＰ）_１９である伸長を示すものであって、該伸長の一番目のアミノ酸（すなわち、この例においてはＧである、Ａ２１に付加したアミノ酸）が、Ａ２２位、すなわちこの例においてはＡ２２Ｇに相当する。

Ｎ末端Ｂ鎖伸長の場合、例えば実施例１の化合物（ＯＥＦ−Ｉｎｓ−４）は、ヒトインスリン類似体（Ａ１４Ｅ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０）を表すものであって、Ａ鎖のＡ１４位に位置する天然のアミノ酸残基がグルタミン酸（Ｅ）で置換されており、かつ、Ｂ２５位およびＢ２９位に位置する天然のアミノ酸残基が、ヒスチジン（Ｈ）およびアルギニン（Ｒ）でそれぞれ置換され、Ｂ３０位は欠失しており、上記類似体は、四つのアミノ酸残基（ＧＱＥＰ）の反復を特定の順で形成することでＫＰで開始される合計７６個のアミノ酸残基（（ＧＱＥＰ）_１９と命名されることもありうる）からなる伸長を形成する伸長によって、アミノ酸Ｂ１位よりＮ末端側ではじまる伸長がなされている。伸長全体は、ＫＰ−（ＧＱＥＰ）_１９と命名されうる。このため、リジン残基はＢ（−７８Ｋ）と呼ばれる。

この類似体はＡ１４Ｅ，Ｂ（−７８Ｋ），Ｂ（−７７Ｐ），Ｂ（−１）（ＧＱＥＰ）_１９，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリンと命名することもあり、この化合物を、以下の化学式２に示す。すなわち、Ｂ（−１）（ＧＱＥＰ）_１９は、Ｂ鎖のＮ末端に付加した（ＧＱＥＰ）_１９である伸長を示すものであって、該伸長の最後のアミノ酸（すなわち、この例においてはＰである、Ｂ１に付加するアミノ酸）が、Ｂ（−１）位、すなわちこの例におけるＢ（−１Ｐ）に相当する。

抗体およびＦｃドメイン
Ｆｃ領域は、ＩｇＧ重鎖のＣ末端領域であり、これは長期間にわたる半減期をもたらすリサイクリングを含む、様々な機能を受けるＦｃ受容体への結合に関与している。Ｆｃ部分は典型的にはＩｇＧに由来し、コンジュゲート部分は多くの場合、ＦｃＲｎ結合部位を含むイムノグロブリン配列の部分を含む。ＦｃＲｎ、サルベージ受容体は、イムノグロブリンのリサイクルリングと、血液中で血液循環にそれらを戻すこととに関与する。特定の性能を得るため、例えば、ＦｃＲｎに対する親和性の増加を得るため、長期間にわたる半減期を得るため、または、他の受容体への結合を増加もしくは低減させるため、免疫エフェクター機能の低減もしくは増加を得るために、イムノグロブリンＦｃ領域の突然変異を導入することがよくある。

抗体アイソタイプＩｇＧは、それらのアミノ酸重鎖配列中におけるさらなるわずかな相違に基づいて、サブクラス（例えば、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、およびＩｇＧ４）にさらに分類される。

本発明により使用するＦｃドメインは、任意のＩｇＧＦｃまたはその断片に由来する場合がある。本発明の文脈では、「Ｆｃ領域」、「Ｆｃ断片」または「Ｆｃドメイン」の語は、抗体の結晶化可能断片を指す。Ｆｃ領域は抗体の尾部である。ＩｇＧ抗体については、Ｆｃ領域は、重鎖の第二および第三の定常ドメイン（ＣＨ２およびＣＨ３）をいずれも含む二つの同一のポリペプチドを含む（すなわち、ホモ二量体である）。Ｆｃドメインはまた、ヒンジシステインがジスルフィド結合を形成しうるときに、非共有結合的に相互作用しおそらく共有結合的にも相互作用する二つのＦｃポリペプチドとして、ダイマーとも呼ばれうる。本発明の文脈では、Ｆｃドメインの一つのＦｃ（単量体の）ポリペプチドを、「Ｆｃ’」またはＦｃ’ポリペプチドと呼ぶ（すなわち、モノマーＦｃ分子はＦｃ＝（Ｆｃ’）_２）。本発明の文脈において、Ｆｃドメインのタンパク質配列はまた、「Ｆｃ’ポリペプチド」と呼び、少なくともＣＨ２ドメインおよびＣＨ３ドメインを含む。

このヒンジ領域は、抗体の定常領域のＣＨ１とＣＨ２との間のタンパク質セグメントである。

ヒト抗体のＦｃ領域はグリコシル化されており、グリコシル化はＣ１ｑ相互作用に関与すると考えられているため、Ｃ１ｑ結合はグリコシル化を除去することによって低減されうる。さらに、アグリコシル化Ｆｃは、それぞれＦｃガンマ受容体Ｉ、ＩＩａ、ＩＩｂおよびＩＩＩａに対して減少したまたは弱い結合を有するが、これもまた、低度の抗体依存性細胞媒介性細胞障害（ＡＤＣＣ）および／または補体依存性細胞障害（ＣＤＣ）を許容する。

グリコシル化は酵素的に除去されうる。大腸菌（Ｅ．Ｃｏｌｉ）におけるＦｃの産生が、アグリコシル化Ｆｃをもたらす。イムノグロブリンＦｃ領域のこうした配列誘導体の調製のための技術は、当技術分野で周知であり、例えば国際公開第９７／３４６３１号および国際公開第９６／３２４７８号に開示されている。

この本発明のＩｇＧ由来Ｆｃは、アグリコシル化を行うことができる。ＩｇＧ由来Ｆｃ断片は、特にアグリコシル化したｈＩｇＧ４Ｆｃ断片であってもよく、これはＦｃガンマ受容体ＩＩＩへの弱い結合を自然に有する。

ＫａｂａｔのＥＵインデックス
（Ｋａｂａｔ）ＥＵ番号付け法は、配列のアライメントに基づいて開発された一貫した方法により抗体内の残基を番号付けするための広く採用されている標準である。本出願の文脈では、Ｆｃ鎖内の残基の番号付けは、ＫａｂａｔのＥＵインデックス（Ｋａｂａｔｅｔａｌ．，ＳｅｑｕｅｎｃｅｓｏｆＰｒｏｔｅｉｎｓｏｆＩｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌＩｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈＥｄ．ＰｕｂｌｉｃＨｅａｌｔｈＳｅｒｖｉｃｅ，ＮａｔｉｏｎａｌＩｎｓｔｉｔｕｔｅｓｏｆＨｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．（１９９１）に記載されている）に従って行われる。

本発明によれば、２２８位で開始され４４７位で終了するヒトＩｇＧ１−Ｆｃのネイティブ配列を、ｈＩｇＧ１−Ｆｃ（２２８−４４７）と命名する。Ｆｃは二つの同一のポリペプチドからなるため、一つのポリペプチドの配列のみを与える（配列番号１を参照）。２２８位のプロリン（Ｐ）がセリン（Ｓ）に突然変異すれば、類似体は２２８ＳｈＩｇＧ１−Ｆｃ（２２８−４４７）と命名される。例えばアラニン（Ａ）およびセリン（Ｓ）による、ネイティブ配列ｈＩｇＧ１−Ｆｃ（２２８−４４７）のＮ末端伸長の場合、この産物は２２６Ａ，２２７ＳｈＩｇＧ１−Ｆｃ（２２８−４４７）と命名される。

同様に、２２８位で開始され４４７位で終了するヒトＩｇＧ４−Ｆｃのネイティブ配列は、ｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７）と命名され、モノマーポリペプチドの配列を与える（配列番号３を参照）。

リンカー
本発明の文脈では、リンカーは、関心のタンパク質を共有結合するために使用される化学部分または残基である。リンカーがタンパク質と反応すると、リンカーラジカルが形成される。そのため、「リンカー」の語は、インスリン−Ｆｃコンジュゲートの化学的単位を意味することを意図するが、これはタンパク質コンジュゲートのポリペプチドの各々のアミノ酸残基と共有結合している。

付加する点によって、リンカー末端の反応性は様々となりうる。リンカーは、関心の産物によって、様々な形態を有してもよい。本発明の一実施形態では、この概念は、リンカーの各末端に異なるタンパク質が付加することを確実にするように順序づけた結合に関連する。

リンカーの末端官能基は、イムノグロブリンＦｃドメインまたは生理学的に活性なポリペプチドのＮ末端、リジン、ヒスチジンもしくはシステインの残基に結合することができる。

反応性末端は、タンパク質のアミノ酸残基へのリンカーの結合に有用な化学部分とする。反応性末端は、Ｎ末端、Ｃ末端または内部アミノ酸の残基との結合に適していてもよい。当技術分野では、アミノ酸残基特異的な化学部分のみならずアミノ酸残基非特異的な部分をはじめとする、様々な形態が公知である。関心の標的タンパク質に応じて、高収率および高均質性の所望の末端産物を得るために、標的特異的アミノ酸残基を使用することが望ましい場合がある。

反応性末端（または反応性基）は、それがどのアミノ酸残基を標的化することを意図しているのかに応じて異なりうる。Ｎ末端アミノ酸またはリジン側鎖の第一級アミノ基は、例えば、アルデヒド、ケトン、または活性化カルボン酸によって標的化されうる。これら反応性末端は、アミノ反応性末端と呼ばれる。一実施形態では、第一級アミノ反応性末端は、アルデヒド基（−ＣＨ（＝Ｏ））、または活性化カルボン酸基（活性エステル）を含む。

チオールによる結合は、様々なシステインまたはチオール反応性末端を使用して得ることができる。本発明により使用するリンカーは、スペーサーで離間した一つ以上のチオール反応性末端またはＣｙｓ反応性末端を含んでもよい。リンカーの反応性末端は、Ｃｙｓ反応性末端またはチオール反応性末端と呼ばれうる。さらに、リンカーはアミノ反応性末端を含む。一実施形態では、チオール反応性末端は、ハロアセトアミドまたはＭｉｃｈａｅｌ受容体を含む。

本明細書では、チオール反応性基の語は、以下に限定されるものではないが、クロロアセトアミド、ヨードアセトアミドおよびブロモアセトアミド基等のハロアセトアミド、Ｍｉｃｈａｅｌ受容体、ハロアリール、および非対称ジスルフィドにおよぶものであって、ヘテロ官能性リンカーは、非対称ジスルフィドにおけるメルカプト官能基および脱離基としてのその他の官能基のうちの一つを提供する。このような非対称ジスルフィドの例には、ピリジルジスルフィド、（メトキシ−またはエトキシカルボニル−）ジスルフィド、および（ｏ−ニトロフェニル）ジスルフィドが含まれる。

本発明によれば、リンカーは、インスリンまたはインスリン類似体のＦｃドメインとの結合に使用される。当該Ｆｃドメインは、ポリペプチド間ジスルフィド結合を含む共有結合および／または非共有結合によって通常一緒に保持される二つのポリペプチドからなる。従来的な二価リンカーを使用した共有結合であれば、タンパク質はＦｃポリペプチドのうちの一つのみと結合することになる。しかしながら、本発明による三価リンカー（三分岐リンカーとも呼ぶ）を用いると、二つのＦｃポリペプチド鎖の両方がインスリン類似体と結合しているタンパク質コンジュゲートが得られる。

本発明のインスリン−Ｆｃコンジュゲートの命名法
本発明の文脈において、また情報の容易性のため、本発明のインスリン−Ｆｃコンジュゲートは、（−Ｘ−Ｙ−）結合基の仕様に加えて、本発明のコンジュゲートを構成するペプチド成分部分（すなわち、インスリン成分およびイムノグロブリンＦｃ成分）に従って命名される。

この手法により、Ａ鎖Ｃ末端伸長を介して結合したコンジュゲートを表す、実施例５．１のインスリン−Ｆｃコンジュゲート（以下に化学式３として示す）は、（Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＥＰ）_１９，Ａ９８Ｋ＾，Ａ９９Ｐ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン）／（２２７Ａ，２３４Ａ，２３５ＫｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７））４−［ビス［２−［（２−アセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイルコンジュゲートと命名されうるが、これはこの化合物が、三価結合基４−［ビス［２−［（２−アセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイル（すなわち、−Ｘ−Ｙ−結合基であって、Ｘはリンカー−Ｃ（Ｏ）−（ＣＨ_２）_２−Ｃ（Ｏ）−を表し、かつ、Ｙは一般式ＩＶの化合物を表し、式中Ｌ１＝Ｌ２＝−（ＣＨ_２）_２−）およびＬ３＝Ｌ４＝−ＣＨ_２−であって−Ｃ（Ｏ）−（ＣＨ_２）_２−Ｃ（Ｏ）−Ｎ（−（ＣＨ_２）_２−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−ＣＨ_２−）_２に相当する、を介して結合したインスリン成分（すなわち、Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＥＰ）_１９，Ａ９８ＫＡ９９Ｐ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン）とＦｃ成分（すなわち、２２７Ａ，２３４Ａ，２３５ＫｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７））とから構成されることと、リンカーがインスリン成分のリジンＡ９８Ｋのイプシロンアミノ基を−Ｃ（Ｏ）−に架橋し、またＦｃ成分のポリペプチドのＣｙｓ２２９のチオールのそれぞれを−Ｃ（Ｏ）−ＣＨ_２−に架橋することとを示している。

なお、Ａ９８Ｋ＾は、インスリンに対するＸ−Ｙ−またはＸ−Ｕ（Ｚ）_２の付加点を示す。すなわち＾は、二価結合基Ｘ（一般式Ｉおよび一般式Ｉ’）が付加している［ＯＥＦ−Ｉｎｓ］内での位置を示しているか、またはＸが共有結合の場合には、＾は、三価結合基Ｙ（一般式Ｉ）または三価結合基Ｕ（一般式Ｉ’）がそれぞれ付加している、［ＯＥＦ−Ｉｎｓ］内での位置を示している。

化学式３では、両Ｆｃ’ポリペプチド配列のうち最初の三つのアミノ酸（すなわち、Ａ−Ｓ−Ｃ）が示されており、三番目のアミノ酸（すなわち、Ｃｙｓ）が伸長されている。Ｆｃ’ポリペプチドの残りの部分（すなわち、２３０〜４４７位）の突然変異は、角括弧内で示している［例えば、２３４Ａ、２３５Ｋ］。

同様に、Ｂ鎖Ｎ末端伸長を介して連結されたコンジュゲート（例えば、以下で化学式４として表す）は、（Ａ１４Ｅ，Ｂ（−７８Ｋ＾），Ｂ（−７７Ｐ），Ｂ（−１）（ＧＱＥＰ）_１９，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン）／（２２７Ａ，２３４Ａ，２３５ＫｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７））４−［ビス［２−［（２−アセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイルコンジュゲート（実施例５．４のインスリン−Ｆｃコンジュゲート）と命名されうるが、これはこの化合物が、結合基４−［ビス［２−［（２−アセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイル（すなわち、−Ｘ−Ｙ₋結合基であって、Ｘはリンカー、−Ｃ（Ｏ）−（ＣＨ_２）_２−Ｃ（Ｏ）−を表し、Ｙは一般式ＩＶの化合物を表し、式中Ｌ３＝Ｌ４＝−ＣＨ_２−およびＬ１＝Ｌ２＝−（ＣＨ_２）_２−であって−Ｃ（Ｏ）−（ＣＨ_２）_２−Ｃ（Ｏ）−Ｎ（−（ＣＨ_２）_２−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−ＣＨ_２−）_２に相当する）を介して結合したインスリン成分（すなわち、Ａ１４Ｅ，Ｂ（−７８Ｋ），Ｂ（−７７Ｐ），Ｂ（−１）（ＧＱＥＰ）_１９，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン）とＦｃ成分（すなわち、２２７Ａ，２３４Ａ，２３５ＫｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７））とから構成されることと、リンカーがインスリン成分のリジンＢ（−７８Ｋ）と、各Ｆｃ成分のポリペプチドのＣｙｓ２２９のチオールとに架橋することとを示している。

なお、Ｂ（−７８Ｋ＾）は、インスリンに対するＸ−Ｙ−またはＸ−Ｕ（Ｚ）_２の付加点を示している。

化学式４では、両Ｆｃ’ポリペプチド配列の最初の三つのアミノ酸（すなわち、Ａ−Ｓ−Ｃ）を示しており、三番目のアミノ酸（すなわち、Ｃｙｓ）が伸長されている。Ｆｃ’ポリペプチドの残りの部分（すなわち、２３０〜４４７位）の突然変異は、角括弧内で示している［例えば、２３４Ａ、２３５Ｋ］。

本発明のインスリン−Ｆｃコンジュゲート
その第一の態様では、本発明は、リンカーを介してインスリンと共有結合した二つのモノマーＦｃポリペプチドを提供する。

より具体的には、本発明は、以下の一般式Ｉで表す新規のインスリン−Ｆｃコンジュゲートを提供する：
式中、
Ｉｎｓはヒトインスリン類似体を表し、当該インスリン類似体は、Ａ鎖およびＢ鎖を含む二鎖インスリン分子であり；
ＯＥＦは、インスリンＡ鎖のＣ末端に融合したまたはインスリンＢ鎖のＮ末端に融合した、極性を有する組換え伸長を示し、当該伸長は、リジン（Ｋ）残基と組み合せた、Ａｌａ（Ａ）、Ａｓｐ（Ｄ）、Ｇｌｕ（Ｅ）、Ｇｌｙ（Ｇ）、Ｐｒｏ（Ｐ）、Ｇｌｎ（Ｑ）、Ｓｅｒ（Ｓ）、およびＴｈｒ（Ｔ）のアミノ酸残基のうちの一つまたは複数を含んで、［ＯＥＦ−Ｉｎｓ］構築物を与えるものであって；
該［ＯＥＦ−Ｉｎｓ］構築物は、リジン（Ｋ）残基を介して三価結合基Ｘ−Ｙに連結しており；またはより具体的には、［ＯＥＦ−Ｉｎｓ］構築物は、リジン（Ｋ）残基のイプシロンアミノ基を介して三価結合基Ｘ−Ｙに連結しており；
Ｘは、［ＯＥＦ−Ｉｎｓ］とＹとを連結させる、共有結合または二価結合基を表し；
Ｙは、Ｆｃのジスルフィド架橋由来の二つの硫黄原子を介して二つのＦｃ’をＸに連結させる三価結合基を表すか；または、Ｘが共有結合を表す場合には、Ｙは、二つの硫黄原子を介して二つのＦｃ’を［ＯＥＦ−Ｉｎｓ］構築物内のリジン残基に連結（またはより具体的には、Ｙは、二つの硫黄原子を介して二つのＦｃ’を［ＯＥＦ−Ｉｎｓ］構築物内のリジン残基のイプシロンアミノ基に連結）させ；かつ、
Ｆｃ’は、モノマーＦｃポリペプチドまたはその断片を表すものである。

別の実施形態では、本発明は、以下の一般式Ｉ’で表す新規のインスリン−Ｆｃコンジュゲートを提供する：
式中、
Ｉｎｓはヒトインスリン類似体を表し、当該インスリン類似体が、Ａ鎖およびＢ鎖を含む二鎖インスリン分子であり；
ＯＥＦは、インスリンＡ鎖のＣ末端に融合したまたはインスリンＢ鎖のＮ末端に融合した、極性を有する組換え伸長を示し、当該伸長は、リジン（Ｋ）残基と組み合わせた、Ａｌａ（Ａ）、Ａｓｐ（Ｄ）、Ｇｌｕ（Ｅ）、Ｇｌｙ（Ｇ）、Ｐｒｏ（Ｐ）、Ｇｌｎ（Ｑ）、Ｓｅｒ（Ｓ）、およびＴｈｒ（Ｔ）のアミノ酸残基のうちの一つまたは複数を含んで、［ＯＥＦ−Ｉｎｓ］構築物を与えるものであって；
該［ＯＥＦ−Ｉｎｓ］構築物は、リジン（Ｋ）残基を介して三価結合基Ｘ−Ｕ（−Ｚ）_２に連結しているか；またはより具体的には、［ＯＥＦ−Ｉｎｓ］構築物は、リジン（Ｋ）残基のイプシロンアミノ基を介して三価結合基Ｘ−Ｕ（−Ｚ）_２に連結しており；
Ｘは、［ＯＥＦ−Ｉｎｓ］とＵとを連結させる、共有結合または二価結合基を表し；
Ｕは、二つのＺ−［Ｓ−Ｆｃ’］基をＸに連結させる、中央三価結合単位を表すか；
または、Ｘが共有結合を表す場合には、Ｕは、二つのＺ−［Ｓ−Ｆｃ’］基を、［ＯＥＦ−Ｉｎｓ］構築物内のリジン残基に連結させ；またはより具体的には、Ｘが共有結合を表す場合には、Ｕは、二つのＺ−［Ｓ−Ｆｃ’］基を、［ＯＥＦ−Ｉｎｓ］構築物内のリジン残基のイプシロンアミノ基に連結させ；
Ｚは、中央結合単位（Ｕ）を、モノマーＦｃポリペプチド（Ｆｃ’）またはその断片のチオール部分（Ｓ）に連結させる二価結合基を表し；かつ、
［Ｓ−Ｆｃ’］は、Ｆｃ’成分内に含まれるシステイン（Ｃ）残基由来の硫黄原子を表し；またはより具体的には、［Ｓ−Ｆｃ’］は、Ｆｃ成分内に含まれるシステイン（Ｃ）残基由来の硫黄原子を表すＳをもつＦｃ’成分（すなわち、モノマーＦｃポリペプチド、またはその断片）を表す。

さらなる実施形態では、本発明は、以下の一般式Ｉ’で表す新規のインスリン−Ｆｃコンジュゲートを提供する：
式中、
Ｉｎｓは、ヒトインスリン類似体を表し、当該インスリン類似体が、Ａ鎖およびＢ鎖を含む二鎖インスリン分子であり；
ＯＥＦは、インスリンＡ鎖のＣ末端に融合したまたはインスリンＢ鎖のＮ末端に融合した、極性を有する組換え伸長を示し、当該伸長は、リジン（Ｋ）残基と組み合わせた、Ａｌａ（Ａ）、Ａｓｐ（Ｄ）、Ｇｌｕ（Ｅ）、Ｇｌｙ（Ｇ）、Ｐｒｏ（Ｐ）、Ｇｌｎ（Ｑ）、Ｓｅｒ（Ｓ）、およびＴｈｒ（Ｔ）のアミノ酸残基のうちの一つまたは複数を含んで、［ＯＥＦ−Ｉｎｓ］構築物を与えるものであって；
該［ＯＥＦ−Ｉｎｓ］構築物は、リジン（Ｋ）残基のイプシロンアミノ基を介して三価結合基Ｘ−Ｕ（−Ｚ）_２に連結し；
Ｘは、［ＯＥＦ−Ｉｎｓ］とＵとを連結させる、共有結合または二価結合基を表し；
Ｕは、二つのＺ−［Ｓ−Ｆｃ’］基をＸに連結させる、中央三価結合単位を表すか；
または、Ｘが共有結合を表す場合には、Ｕは、二つのＺ−［Ｓ−Ｆｃ’］基を、［ＯＥＦ−Ｉｎｓ］構築物内のリジン残基のイプシロンアミノ基に連結し；
Ｚは存在しないか、または中央結合単位（Ｕ）をモノマーＦｃポリペプチド（Ｆｃ’）もしくはその断片のチオール部分（Ｓ）に連結させる二価結合基を表し；かつ、
［Ｓ−Ｆｃ’］は、Ｆｃ’成分内に含まれるシステイン（Ｃ）残基由来の硫黄原子を表すＳをもつＦｃ’成分（すなわち、モノマーＦｃポリペプチド、またはその断片）を表す。

本発明によると、Ｉｎｓは、以下の置換のうちの一つまたは複数を含有するヒトインスリン類似体を表す：Ａ１４ＡもしくはＡ１４Ｅ、Ａ２１ＧもしくはＡ２１Ｑ、Ｂ３ＥもしくはＢ３Ｑ、Ｂ１６ＥもしくはＢ１６Ｈ、Ｂ２５Ｈ、ｄｅｓＢ２７、Ｂ２９Ｒ、および／またはｄｅｓＢ３０。本出願全体を通して、インスリン類似体を記述するために使用される場合、「含有する（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）」は「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」と同じ意味を有する。

一実施形態では、Ｉｎｓは、以下の置換のうちの一つまたは複数を随意に含有するヒトインスリン類似体を表す：Ａ１４ＡもしくはＡ１４Ｅ、Ａ２１ＧもしくはＡ２１Ｑ、Ｂ３ＥもしくはＢ３Ｑ、Ｂ１６ＥもしくはＢ１６Ｈ、Ｂ２５Ｈ、ｄｅｓＢ２７、Ｂ２９Ｒ、および／またはｄｅｓＢ３０。

一実施形態では、Ｉｎｓは、以下の置換のうちの一つまたは複数を含有するヒトインスリン類似体を表す：Ａ１４ＡもしくはＡ１４Ｅ、Ａ２１ＧもしくはＡ２１Ｑ、Ｂ３Ｑ、Ｂ２５Ｈ、Ｂ２９Ｒおよび／またはｄｅｓＢ３０。

さらに別の実施形態では、ＩｎｓはｄｅｓＢ３０欠失を含むヒトインスリン類似体を表す。

第三の実施形態では、ＩｎｓはＢ２９Ｒ置換を含むヒトインスリン類似体を表す。

第四の実施形態では、Ｉｎｓは、以下の置換のうちの一つまたは複数を含有するヒトインスリン類似体を表す：Ａ１４Ｅ、Ａ２１ＧもしくはＡ２１Ｑ、Ｂ３Ｑ、Ｂ２５Ｈ、Ｂ２９Ｒおよび／またはｄｅｓＢ３０。

第五の実施形態では、Ｉｎｓは、Ｂ２９Ｒを含有し、以下の置換のうちの一つまたは複数を含有する、ヒトインスリン類似体を表す：Ａ１４Ｅ、Ａ２１ＧもしくはＡ２１Ｑ、Ｂ３Ｑ、Ｂ２５Ｈおよび／またはｄｅｓＢ３０。

第六の実施形態では、ＩｎｓはＢ２９Ｒを含有し且つｄｅｓＢ３０であり、また以下の置換の一つまたは複数を含有する、ヒトインスリン類似体を表す：Ａ１４Ｅ、Ａ２１ＧもしくはＡ２１Ｑ、Ｂ３Ｑおよび／またはＢ２５Ｈ。

第七の実施形態では、Ｉｎｓは、Ａ２１ＧまたはＡ２１Ｑ、Ｂ２９Ｒを含有し且つｄｅｓＢ３０であり、また以下の置換のうちの一つまたは複数を含有する、ヒトインスリン類似体を表す：Ａ１４Ｅ、Ｂ３Ｑおよび／またはＢ２５Ｈ。

第八の実施形態では、インスリン類似体は、
Ａ１４Ａ，Ａ２１Ｇ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（配列番号５２のＡ鎖；配列番号２６のＢ鎖）；
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ｂ３Ｑ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（配列番号４７のＡ鎖；配列番号２３のＢ鎖）；
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ｂ３Ｑ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（配列番号４７のＡ鎖；配列番号４８のＢ鎖）；
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（配列番号４７のＡ鎖；配列番号２１のＢ鎖）；
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（配列番号４７のＡ鎖；配列番号２６のＢ鎖）；
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｑ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（配列番号４９のＡ鎖；配列番号２１のＢ鎖）；
Ａ１４Ｅ，Ｂ３Ｑ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（配列番号８のＡ鎖；配列番号２３のＢ鎖）；
Ａ１４Ｅ，Ｂ３Ｑ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（配列番号８のＡ鎖；配列番号４８のＢ鎖）；
Ａ１４Ｅ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（配列番号８のＡ鎖；配列番号２１のＢ鎖）；
Ａ１４Ｅ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（配列番号８のＡ鎖；配列番号２６のＢ鎖）；
Ａ２１Ｇ，Ｂ３Ｑ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（配列番号７６のＡ鎖；配列番号４８のＢ鎖）；
Ａ２１Ｇ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（配列番号７６のＡ鎖；配列番号２６のＢ鎖）；
Ｂ３Ｑ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（配列番号５０のＡ鎖；配列番号４８のＢ鎖）；および
Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（配列番号５０のＡ鎖；配列番号２６のＢ鎖）から選択される。

第九の実施形態では、インスリン類似体は、
Ａ１４Ａ，Ａ２１Ｇ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（配列番号５２のＡ鎖；配列番号２６のＢ鎖）；
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ｂ３Ｑ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（配列番号４７のＡ鎖；配列番号２３のＢ鎖）；
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（配列番号４７のＡ鎖；配列番号２１のＢ鎖）；
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（配列番号４７のＡ鎖；配列番号２６のＢ鎖）；
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｑ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（配列番号４９のＡ鎖；配列番号２１のＢ鎖）；
Ａ１４Ｅ，Ｂ３Ｑ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（配列番号８のＡ鎖；配列番号２３のＢ鎖）；および
Ａ１４Ｅ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（配列番号８のＡ鎖；配列番号２１のＢ鎖）から選択される。

第十の実施形態では、インスリン類似体は、
Ａ１４Ａ，Ａ２１Ｇ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（配列番号５２のＡ鎖；配列番号２６のＢ鎖）；
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ｂ３Ｑ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（配列番号４７のＡ鎖；配列番号２３のＢ鎖）；
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ｂ３Ｑ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（配列番号４７のＡ鎖；配列番号４８のＢ鎖）；
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（配列番号４７のＡ鎖；配列番号２１のＢ鎖）；
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（配列番号４７のＡ鎖；配列番号２６のＢ鎖）；
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｑ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（配列番号４９のＡ鎖；配列番号２１のＢ鎖）；
Ａ１４Ｅ，Ｂ３Ｑ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（配列番号８のＡ鎖；配列番号２３のＢ鎖）；
Ａ１４Ｅ，Ｂ３Ｑ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（配列番号８のＡ鎖；配列番号４８のＢ鎖）；
Ａ１４Ｅ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（配列番号８のＡ鎖；配列番号２１のＢ鎖）；
Ａ１４Ｅ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（配列番号８のＡ鎖；配列番号２６のＢ鎖）；
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ｂ１６Ｅ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（配列番号４７のＡ鎖；配列番号２９のＢ鎖）；
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ｂ１６Ｈ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（配列番号４７のＡ鎖；配列番号５１のＢ鎖）；
Ａ２１Ｇ，Ｂ３Ｑ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（配列番号７６のＡ鎖；配列番号４８のＢ鎖）；
Ａ２１Ｇ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（配列番号７６のＡ鎖；配列番号２６のＢ鎖）；
Ｂ３Ｑ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（配列番号５０のＡ鎖；配列番号４８のＢ鎖）；
Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（配列番号５０のＡ鎖；配列番号２６のＢ鎖）；
Ａ２１Ｇ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（配列番号７６のＡ鎖；配列番号２６のＢ鎖）；および
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ｂ１６Ｅ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（配列番号４７のＡ鎖；配列番号２９のＢ鎖）から選択される。

第十一の実施形態では、インスリン類似体は、
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（配列番号４７のＡ鎖；配列番号２１のＢ鎖）；
Ａ１４Ｅ，Ｂ３Ｑ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（配列番号８のＡ鎖；配列番号２３のＢ鎖）；
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ｂ３Ｑ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（配列番号４７のＡ鎖；配列番号２３のＢ鎖）；
Ａ１４Ｅ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（配列番号８のＡ鎖；配列番号２１のＢ鎖）；
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（配列番号４７のＡ鎖；配列番号２６のＢ鎖）；
Ａ１４Ａ，Ａ２１Ｇ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（配列番号５２のＡ鎖；配列番号２６のＢ鎖）；
Ａ２１Ｇ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（配列番号７６のＡ鎖；配列番号２６のＢ鎖）；および
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ｂ１６Ｅ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（配列番号４７のＡ鎖；配列番号２９のＢ鎖）から選択される。

ＯＥＦインスリン構築物
本発明によると、ＯＥＦインスリン構築物の配列全体は、一つのみのリジン（Ｋ）残基を含有する。

また、本発明によれば、構築物ＯＥＦ−Ｉｎｓは、末端リジン（Ｋ）残基を介して（Ａ鎖伸長の場合のみ）、または末端ＫＰ配列内のリジン（Ｋ）残基を介して（Ａ鎖伸長およびＢ鎖伸長の両方に関して）、二価結合基Ｘに連結する。

本発明のＯＥＦ−Ｉｎｓ構築物は、インスリンＡ鎖のＣ末端もしくはインスリンＡ鎖の任意の伸長のＣ末端に導入された、末端リジン（Ｋ）残基を介してまたは末端ＫＰ配列内のリジン（Ｋ）残基を介して、一般式Ｉに記載のまたは一般式Ｉ’に記載の二価結合基Ｘに連結してもよい。

別の方法として、Ｘが共有結合を表す場合、本発明のＯＥＦ−Ｉｎｓ構築物は、インスリンＡ鎖のＣ末端もしくはインスリンＡ鎖の任意の伸長のＣ末端に導入された、末端リジン（Ｋ）残基を介してまたは末端ＫＰ配列内のリジン（Ｋ）残基を介して、一般式Ｉに記載の三価結合基−Ｙまたは一般式Ｉ’に記載の中央三価結合単位Ｕに連結する。

一実施形態では、ＯＥＦは、インスリンＡ鎖よりＣ末端側に融合した極性を有する組換え伸長を示し、当該伸長は、リジン（Ｋ）残基、またはＫＰ配列が末端となる。

別の実施形態では、ＯＥＦは、インスリンＡ鎖よりＣ末端側に融合しており、この伸長は、リジン（Ｋ）残基が末端となる。

第三の実施形態では、ＯＥＦは、インスリンＡ鎖よりＣ末端側に融合しており、この伸長は、ＫＰ配列が末端となる（規定された方向に付加）。

また、本発明の構築物ＯＥＦ−Ｉｎｓは、インスリンＢ鎖のＮ末端もしくはインスリンＢ鎖の任意の伸長のＮ末端に導入された、末端リジン（Ｋ）残基を介してまたはＫＰ配列内のリジン（Ｋ）残基を介して、一般式Ｉまたは一般式Ｉ’に記載の二価結合基Ｘに連結してもよい。

別の方法として、Ｘが共有結合を表す場合、本発明の［ＯＥＦ−Ｉｎｓ］構築物は、インスリンＢ鎖のＮ末端もしくはインスリンＢ鎖の任意の伸長のＮ末端に導入された、末端リジン（Ｋ）残基を介してまたはＫＰ配列内のリジン（Ｋ）残基を介して、一般式Ｉに記載の三価結合基Ｙまたは一般式Ｉ’に記載の中央三価結合単位Ｕに連結する。

一実施形態では、ＯＥＦは、インスリンＢ鎖よりＮ末端側に融合した極性を有する組換え伸長を示しており、当該伸長は、リジン（Ｋ）残基またはＫＰ配列（規定された方向で）で開始される。

別の実施形態では、ＯＥＦはインスリンＢ鎖よりＮ末端側に融合し、この伸長はリジン（Ｋ）残基で開始される。

第三の実施形態では、ＯＥＦは、インスリンＢ鎖よりＮ末端側に融合し、この伸長は、プロリン（Ｐ）残基が続くリジン（Ｋ）残基で開始される。

本発明によると、ＯＥＦは、極性を有する組換え伸長を示すものであって、当該伸長は、上述の通り、アラニン（Ａ）、アスパラギン酸（Ｄ）、グルタミン酸（Ｅ）、グリシン（Ｇ）、プロリン（Ｐ）、グルタミン（Ｑ）、セリン（Ｓ）およびスレオニン（Ｔ）からなる群から選択されたアミノ酸残基により、リジン（Ｋ）残基（またはＫＰ配列）と組み合わせて、構成される。

本発明に従って導入されたＯＥＦは、本発明のインスリン−Ｆｃコンジュゲートに関して観察される長期にわたる半減期を意図したわけではなくまた該半減期に有意に貢献するものではないが、本発明の文脈において、図らずも、ＯＥＦは適切に離間する基／リンカーを提供し、それによってインスリン類似体の遮蔽を回避し、そしてＯＥＦがより良好な（改善された）溶解性および／または改善された糖動態性能をももたらすということに留意されたい。

一実施形態では、極性を有する組換え伸長は、上述の通り、アラニン（Ａ）、グルタミン酸（Ｅ）、グリシン（Ｇ）、プロリン（Ｐ）、グルタミン（Ｑ）、およびセリン（Ｓ）からなる群から選択されるアミノ酸残基により、リジン（Ｋ）残基（またはＫＰ配列）と組み合わせて、構成される。

その目的を達成するために、極性を有する組換えＯＥＦ伸長は大きすぎるべきではなく、本発明によるＯＥＦの全長は１〜約１３０個のアミノ酸残基であるものとするということが現在考えられている。

一実施形態では、本発明によるＯＥＦの全長は、１〜約１０５個のアミノ酸残基であるものとする。

別の実施形態では、本発明によるＯＥＦの全長は、１〜約９０個のアミノ酸残基であるものとする。

第三の実施形態では、本発明によるＯＥＦの全長は、１〜約８０個のアミノ酸残基であるものとする。

第四の実施形態では、本発明によるＯＥＦの全長は、１５〜１１０個のアミノ酸残基であるものとする。

極性を有する組換えＯＥＦ伸長は、特に、
Ａ）ポリグリシン配列（Ｇｌｙ）_ｘ（グループＡ）であって、ｘは、２〜約１０２の範囲の整数を表し、上述のようなＫまたはＫＰと組み合わせた、ポリグリシン配列（Ｇｌｙ）_ｘ（グループＡ）；
Ｂ）無作為な順序または任意に組み合わせた［Ａ，ＧおよびＱ］_ｘのグループ（グループＢ）であって、ｘは１〜約３０の範囲の整数を表し、上述のようなＫまたはＫＰと組み合わせた、［Ａ，ＧおよびＱ］_ｘのグループ（グループＢ）；
Ｃ）無作為な順序または任意に組み合わせた［Ａ，ＰおよびＳ］_ｘのグループ（グループＣ）であって、ｘは１〜約３０の範囲の整数を表し、上述のようなＫまたはＫＰと組み合わせた、［Ａ，ＰおよびＳ］_ｘのグループ（グループＣ）；
Ｄ）無作為な順序または任意に組み合わせた［Ｅ，ＧおよびＱ］_ｘのグループ（グループＤ）であって、ｘは１〜約３０の範囲の整数を表し、上述のようなＫまたはＫＰと組み合わせた、［Ｅ，ＧおよびＱ］_ｘのグループ（グループＤ）；
Ｅ）無作為な順序または任意に組み合わせた［Ａ，Ｇ，ＰおよびＱ］_ｘのグループ（グループＥ）であって、ｘは１〜約２５の範囲の整数を表し、上述のようなＫまたはＫＰと組み合わせた、［Ａ，Ｇ，ＰおよびＱ］_ｘのグループ（グループＥ）；
Ｆ）無作為な順序または任意に組み合わせた［Ａ，Ｇ，ＰおよびＳ］_ｘのグループ（グループＦ）であって、ｘは１〜約２５の範囲の整数を表し、上述のようなＫまたはＫＰと組み合わせた、［Ａ，Ｇ，ＰおよびＳ］_ｘのグループ（グループＦ）；
Ｇ）無作為な順序または任意に組み合わせた［Ｅ，Ｇ，ＰおよびＱ］_ｘのグループ（グループＧ）であって、ｘは１〜約２５の範囲の整数を表し、上述のようなＫまたはＫＰと組み合わせた、［Ｅ，Ｇ，ＰおよびＱ］_ｘのグループ（グループＧ）；
Ｈ）無作為な順序または任意に組み合わせた［Ｅ，Ｇ，ＰおよびＳ］_ｘのグループ（グループＨ）であって、ｘは１〜約２５の範囲の整数を表し、上述のようなＫまたはＫＰと組み合わせた、［Ｅ，Ｇ，ＰおよびＳ］_ｘのグループ（グループＨ）；
Ｉ）無作為な順序または任意に組み合わせた［Ａ，Ｅ，Ｇ，ＰおよびＱ］_ｘのグループ（グループＩ）であって、ｘは１〜約２０の範囲の整数を表し、上述のようなＫまたはＫＰと組み合わせた、［Ａ，Ｅ，Ｇ，ＰおよびＱ］_ｘのグループ（グループＩ）；および
Ｊ）無作為な順序または任意に組み合わせた［Ａ、Ｅ、Ｇ、Ｐ、ＳおよびＴ］_ｘのグループ（グループＪ）であって、ｘは１〜約２０の範囲の整数を表し、上述のようなＫまたはＫＰと組み合わせた、［Ａ、Ｅ、Ｇ、Ｐ、ＳおよびＴ］_ｘのグループ（グループＪ）；
ならびに／またはグループＡ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、ＩおよびＪの任意の組み合わせ、から選択される隣接するアミノ酸残基で表されうる。

一実施形態では、極性を有する組換えＯＥＦ伸長は、グループＢ〜Ｈのいずれか一つから選択される非繰り返し配列で、すなわち無作為な順序の配列で表される。

別の実施形態では、極性を有する組換えＯＥＦ伸長は、グループＢ〜Ｈから選択されるアミノ酸残基の、繰り返し配列または配列のモチーフ、すなわち特定のモチーフの配列で表される。

さらなる実施形態では、極性を有する組換えＯＥＦ伸長は、グループＢ〜Ｈから選択されるアミノ酸残基の繰り返しモチーフで表されるものであって、当該配列では、末端モチーフは、末端位置に配置されるようになる望ましくないアミノ酸残基（および特にプロリン（Ｐ））を除外するために、切断されうる。

本発明により使用されるこの極性を有する組換えＯＥＦ伸長は、特にグループＡ、すなわちｘが２〜約１０２の範囲の整数であるポリグリシン配列（Ｇｌｙ）_ｘであるグループＡから選択されて、上述のようなＫまたはＫＰと組み合わせた、隣接するアミノ酸残基によって表されうる（すなわち、Ａ鎖伸長の場合は（Ｇｌｙ）_ｘ−ＫＰ、またＢ鎖伸長の場合はＫＰ−（Ｇｌｙ）_ｘ）。

一実施形態では、ｘは、２〜約９０の範囲の整数を表す；またはｘは、２〜約７５の範囲の整数を表す；またはｘは、２〜約５０の範囲の整数を表す；またはｘは、２〜約３５の範囲の整数を表す、またはｘは、２〜約３０の範囲の整数を表す、またはｘは、２〜約２５の範囲の整数を表す、またはｘは、２〜約２０の範囲の整数を表す、またはｘは、２〜約１８の範囲の整数を表す。

別の実施形態では、グループＡの極性を有する組換えＯＥＦ伸長は、（Ｇｌｙ）_１８である。

本発明により使用する極性を有する組換えＯＥＦ伸長はまた、グループＢ、すなわち無作為な順序または任意に組み合わせた、ｘが１〜約３０の範囲の整数を表す［Ａ，ＧおよびＱ］_ｘであるグループＢから選択される隣接するアミノ酸残基によって表されうるものであって、またグループＢの配列は、上述のようなＫまたはＫＰとさらに組み合わせる（すなわち、Ａ鎖伸長の場合は［Ａ，Ｇ，Ｑ］_ｘ−ＫＰ、またＢ鎖伸長の場合はＫＰ−［Ａ，Ｇ，Ｑ］_ｘ）。

一実施形態では、グループＢの極性を有する組換えＯＥＦ伸長は、以下のモチーフのうちの一つまたは複数によってさらに表されうる：（ＡＧＱ）_ｘ、（ＧＡＱ）_ｘ、（ＧＱＡ）_ｘ、（ＡＱＧ）_ｘ、（ＱＧＡ）_ｘ、および（ＱＡＧ）_ｘ、式中、ｘは、１〜約３０の範囲の整数を表し、これらは上述のようなＫまたはＫＰと組み合わせる。

別の実施形態では、ｘは、１〜約３０の範囲の整数を表す。

さらなる実施形態では、ｘは、１〜約２５の範囲の整数を表し；またはｘは、１〜約２０の範囲の整数を表し；またはｘは、１〜約１５の範囲の整数を表し；またはｘは、１〜約１０の範囲の整数を表す。

本発明により使用する極性を有する組換えＯＥＦ伸長はまた、グループＣ、すなわち無作為な順序または任意に組み合わせた、ｘが１〜約３０の範囲の整数を表す［Ａ，Ｐ，Ｓ］_ｘであるグループＣから選択される隣接するアミノ酸残基によって表されうるものであって、またグループＣの配列は、上述のようなＫまたはＫＰとさらに組み合わされる（すなわち、Ａ鎖伸長の場合は［Ａ，Ｐ，Ｓ］_ｘ−ＫＰ、またＢ鎖伸長の場合はＫＰ−［Ａ，Ｐ，Ｓ］_ｘ）。

一実施形態では、グループＣの極性を有する組換えＯＥＦ伸長は、以下のモチーフのうちの一つまたは複数によってさらに表されうる：（ＡＰＳ）_ｘ、（ＰＡＳ）_ｘ、（ＰＳＡ）_ｘ、（ＡＳＰ）_ｘ、（ＳＰＡ）_ｘ、（ＳＡＰ）_ｘ、式中、ｘは、１〜約３０の範囲の整数を表し、これらは上述のようなＫまたはＫＰと組み合わせる。

グループＣのＯＥＦ伸長がモチーフ（ＰＡＳ）_ｘ、（ＰＳＡ）_ｘまたは（ＳＡＰ）_ｘによって表される場合、当該伸長は、プロリン（Ｐ）残基を末端とせず、すなわち、末端モチーフは切断され得（例えばＳＡで例示される）、ＫＰが後に続く二つのアミノ酸残基のＣ末端モチーフ（例えば、ＳＡ−ＫＰで例示される）をもたらす。

本発明により使用する極性を有する組換えＯＥＦ伸長はまた、グループＤ、すなわち無作為な順序または任意に組み合わせた、ｘが１〜約３０の範囲の整数を表す［Ｅ，ＧおよびＱ］_ｘであるようなグループＤから選択される隣接するアミノ酸残基で表されうるものであって、このグループＤの配列は、上述のようなＫまたはＫＰとさらに組み合わされる（すなわち、Ａ鎖伸長の場合は［Ｅ，Ｇ，Ｑ］_ｘ−ＫＰ、またＢ鎖伸長の場合はＫＰ−［Ｅ，Ｇ，Ｑ］_ｘ）。

一実施形態では、グループＤの極性を有する組換えＯＥＦ伸長は、以下のモチーフのうちの一つまたは複数によってさらに表されうる：（ＥＧＱ）_ｘ、（ＧＥＱ）_ｘ、（ＧＱＥ）_ｘ、（ＥＱＧ）_ｘ、（ＱＧＥ）_ｘ、および（ＱＥＧ）_ｘ、式中、ｘは、１〜約３０の範囲の整数を表し、これらは上述のようなＫまたはＫＰと組み合わせる。

本発明により使用する極性を有する組換えＯＥＦ伸長は、グループＥ、すなわち無作為な順序または任意に組み合わせた、ｘが１〜約２５の範囲の整数を表す［Ａ，Ｇ，ＰおよびＱ］_ｘであるグループＥから選択される隣接するアミノ酸残基によって表されうるものであって、グループＥの配列は、上述のようなＫまたはＫＰとさらに組み合わせる（すなわち、Ａ鎖伸長の場合は［Ａ，Ｇ，Ｐ，Ｑ］_ｘ−ＫＰ、またＢ鎖伸長の場合はＫＰ−［Ａ，Ｇ，Ｐ，Ｑ］_ｘ）。

一実施形態では、グループＥの極性を有する組換えＯＥＦ伸長は、以下のモチーフのうちの一つまたは複数によってさらに表されうる：（ＡＧＰＱ）_ｘ、（ＧＡＰＱ）_ｘ、（ＧＰＡＱ）_ｘ、（ＧＰＱＡ）_ｘ、（ＡＰＧＱ）_ｘ、（ＰＡＧＱ）_ｘ、（ＰＧＡＱ）_ｘ、（ＰＧＱＡ）_ｘ、（ＡＱＧＰ）_ｘ、（ＱＡＧＰ）_ｘ、（ＱＧＡＰ）_ｘ、（ＱＧＰＡ）_ｘ、（ＡＰＱＧ）_ｘ、（ＰＡＱＧ）_ｘ、（ＰＱＧＡ）_ｘ、（ＰＱＡＧ）_ｘ、（ＡＧＱＰ）_ｘ、（ＧＡＱＰ）_ｘ、（ＧＱＰＡ）_ｘ、（ＧＱＡＰ）_ｘ、式中、ｘは、１〜約２５の範囲の整数を表し、これらは上述のようなＫまたはＫＰと組み合わせる。

グループＥのＯＥＦ伸長は、モチーフ（ＰＡＧＱ）_ｘ、（ＰＧＡＱ）_ｘ、（ＰＧＱＡ）_ｘ、（ＰＡＱＧ）_ｘ、（ＰＱＧＡ）_ｘ、（ＰＱＡＧ）_ｘ、（ＡＱＧＰ）_ｘ、（ＱＡＧＰ）_ｘ、（ＱＧＡＰ）_ｘ、（ＡＧＱＰ）_ｘ、（ＧＡＱＰ）_ｘ、または（ＧＱＡＰ）_ｘによって表され、当該伸長は、常にプロリン（Ｐ）残基を末端とするとは限らず、すなわち、末端のモチーフは切断され得（例えば、ＡＱＧ、ＱＡＧ、ＱＧＡ、ＡＧＱ、ＧＡＱ、およびＧＱＡによって例示される）、ＫＰが後に続く三つのアミノ酸残基のＣ末端モチーフ（例えば、ＧＱＡ−ＫＰで例示される）をもたらす。

別の実施形態では、グループＥの極性を有する組換えＯＥＦ伸長は（ＧＱＡＰ）_ｘ、（ＧＱＰＡ）_ｘ、（ＧＰＱＡ）_ｘ、（ＧＰＡＱ）_ｘ、（ＧＡＱＰ）_ｘおよび（ＧＡＰＱ）_ｘから選択され、式中、ｘは、１〜約２５の範囲の整数を表し、これらは上述のようなＫまたはＫＰと組み合わせる。

第三の実施形態では、グループＥの極性を有する組換えＯＥＦ伸長は、
（ＧＱＡＰ）_ｘ−ＫＰ；（ＧＱＡＰ）_ｘ−ＧＱＡ−ＫＰ；（ＧＱＰＡ）_ｘ−ＫＰ；（ＧＰＱＡ）_ｘ−ＫＰ；（ＧＰＡＱ）_ｘ−ＫＰ；（ＧＡＱＰ）_ｘ−ＫＰ；（ＧＡＱＰ）_ｘ−ＧＡＱ−ＫＰ；（ＧＡＰＱ）_ｘ−ＫＰ；（ＧＱＡＰ）_Ｘ−ＧＱＡ−ＫＰで表されるＡ鎖伸長；または
ＫＰ−（ＧＱＡＰ）_ｘ；ＫＰ−（ＧＱＰＡ）_ｘ；ＫＰ−（ＧＰＱＡ）_ｘ；ＫＰ−（ＧＰＡＱ）_ｘ；ＫＰ−（ＧＡＱＰ）_ｘ；ＫＰ−（ＧＡＰＱ）_ｘで表されるＢ鎖伸長であり；
式中、ｘは、１〜約２５の範囲の整数を表す。

さらなる実施形態では、ｘは１９を表す。

本発明により使用する極性を有する組換えＯＥＦ伸長はまた、グループＦ、すなわち無作為な順序または任意に組み合わせた、ｘが１〜約２５の範囲の整数を表す［Ａ，Ｇ，ＰおよびＳ］_ｘであるグループＦから選択される隣接するアミノ酸残基によって表されうるものであって、グループＦの配列は、上述のようなＫまたはＫＰとさらに組み合わせる（すなわち、Ａ鎖伸長の場合は［Ａ，Ｇ，Ｐ，Ｓ］_ｘ−ＫＰ、またＢ鎖伸長の場合はＫＰ−［Ａ，Ｇ，Ｐ，Ｓ］_ｘ）。

一実施形態では、グループＦの極性を有する組換えＯＥＦ伸長は、以下のモチーフのうちの一つまたは複数によってさらに表されうる：（ＡＧＰＳ）_ｘ、（ＧＡＰＳ）_ｘ、（ＧＰＡＳ）_ｘ、（ＧＰＳＡ）_ｘ、（ＡＰＧＳ）_ｘ、（ＰＡＧＳ）_ｘ、（ＰＧＡＳ）_ｘ、（ＰＧＳＡ）_ｘ、（ＡＳＧＰ）_ｘ、（ＳＡＧＰ）_ｘ、（ＳＧＡＰ）_ｘ、（ＳＧＰＡ）_ｘ、（ＡＰＳＧ）_ｘ、（ＰＡＳＧ）_ｘ、（ＰＳＧＡ）_ｘ、（ＰＳＡＧ）_ｘ、（ＡＧＳＰ）_ｘ、（ＧＡＳＰ）_ｘ、（ＧＳＰＡ）_ｘ、（ＧＳＡＰ）_ｘ、式中、ｘは、１〜約２５の範囲の整数を表し、これらは上述のようなＫまたはＫＰと組み合わせる。

グループＦのＯＥＦ伸長がモチーフ（ＰＡＧＳ）_ｘ、（ＰＧＡＳ）_ｘ、（ＰＧＳＡ）_ｘ、（ＰＡＳＧ）_ｘ、（ＰＳＧＡ）_ｘ、（ＰＳＡＧ）_ｘ、（ＡＳＧＰ）_ｘ、（ＳＡＧＰ）_ｘ、（ＳＧＡＰ）_ｘ、（ＡＧＳＰ）_ｘ、（ＧＡＳＰ）_ｘ、（ＧＳＡＰ）_ｘで表される場合、当該伸長は、プロリン（Ｐ）残基を末端とせず、すなわち、末端モチーフは切断され得（例えば、ＡＳＧ、ＳＡＧ、ＳＧＡ、ＡＧＳ、ＧＡＳ、およびＧＳＡによって例示される）、ＫＰが後に続く三つのアミノ酸残基のＣ末端モチーフをもたらす（例えば、ＳＡＧ−ＫＰで例示される）。

本発明により使用する極性を有する組換えＯＥＦ伸長はまた、グループＧ、すなわち無作為な順序または任意に組み合わせた、ｘが１〜約２５の範囲の整数を表す［Ｅ，Ｇ，ＰおよびＱ］_ｘであるグループＧから選択される隣接するアミノ酸残基によって表されうるものであって、グループＧの配列は、上述のようなＫまたはＫＰとさらに組み合わせる（すなわち、Ａ鎖伸長の場合は［Ｅ，Ｇ，Ｐ，Ｑ］_ｘ−ＫＰ、またＢ鎖伸長の場合はＫＰ−［Ｅ，Ｇ，Ｐ，Ｑ］_ｘ）。

一実施形態では、グループＧの極性を有する組換えＯＥＦ伸長は、以下のモチーフのうちの一つまたは複数によってさらに表されうる：（ＥＧＰＱ）_ｘ、（ＧＥＰＱ）_ｘ、（ＧＰＥＱ）_ｘ、（ＧＰＱＥ）_ｘ、（ＥＰＧＱ）_ｘ、（ＰＥＧＱ）_ｘ、（ＰＧＥＱ）_ｘ、（ＰＧＱＥ）_ｘ、（ＥＱＧＰ）_ｘ、（ＱＥＧＰ）_ｘ、（ＱＧＥＰ）_ｘ、（ＱＧＰＥ）_ｘ、（ＥＰＱＧ）_ｘ、（ＰＥＱＧ）_ｘ、（ＰＱＧＥ）_ｘ、（ＰＱＥＧ）_ｘ、（ＥＧＱＰ）_ｘ、（ＧＥＱＰ）_ｘ、（ＧＱＰＥ）_ｘ、（ＧＱＥＰ）_ｘ、式中、ｘは、１〜約２５の範囲の整数を表し、これらは上述のようなＫまたはＫＰと組み合わせる。

グループＧのＯＥＦ伸長が、モチーフ（ＰＥＧＱ）_ｘ、（ＰＧＥＱ）_ｘ、（ＰＧＱＥ）_ｘ、（ＰＥＱＧ）_ｘ、（ＰＱＧＥ）_ｘ、（ＰＱＥＧ）_ｘ、（ＥＱＧＰ）_ｘ、（ＱＥＧＰ）_ｘ、（ＱＧＥＰ）_ｘ、（ＥＧＱＰ）_ｘ、（ＧＥＱＰ）_ｘ、または（ＧＱＥＰ）_ｘで表される場合、当該伸長は、常にプロリン（Ｐ）残基を末端とするとは限らず、すなわち、末端モチーフは切断され得（例えば、ＥＱＧ、ＱＥＧ、ＱＧＥ、ＥＧＱ、ＧＥＱおよびＧＱＥによって例示される）、ＫＰが後に続く三つのアミノ酸残基のＣ末端モチーフをもたらす（例えば、ＧＱＥ−ＫＰで例示される）。

別の実施形態では、グループＧの極性を有する組換えＯＥＦ伸長は（ＧＱＥＰ）_ｘ、（ＧＱＰＥ）_ｘ、（ＧＰＱＥ）_ｘ、（ＧＰＥＱ）_ｘ、（ＧＥＱＰ）_ｘ、（ＧＥＰＱ）_ｘから選択され、式中、ｘは、１〜約２５の範囲の整数を表し、これらは上述のようなＫまたはＫＰと組み合わせる。

第三の実施形態では、グループＧの極性を有する組換えＯＥＦ伸長は、
（ＧＱＥＰ）_ｘ−ＫＰ、（ＧＱＥＰ）_ｘ−ＧＱＥ−ＫＰ、（ＧＱＰＥ）_ｘ−ＫＰ、（ＧＰＱＥ）_ｘ−ＫＰ、（ＧＰＥＱ）_ｘ−ＫＰ、（ＧＥＱＰ）_ｘ−ＫＰ、（ＧＥＱＰ）_ｘ−ＧＥＱ−ＫＰ、（ＧＥＰＱ）_ｘ−ＫＰもしくは（ＧＱＥＰ）_Ｘ−ＧＱＥ−ＫＰで表されるＡ鎖伸長；または
ＫＰ−（ＧＱＥＰ）_ｘ、ＫＰ−（ＧＱＰＥ）_ｘ、ＫＰ−（ＧＰＱＥ）_ｘ、ＫＰ−（ＧＰＥＱ）_ｘ、ＫＰ−（ＧＥＱＰ）_ｘおよびＫＰ−（ＧＥＰＱ）_ｘで表されるＢ鎖伸長であり；
式中、ｘは、１〜約２５の範囲の整数を表す。

さらなる実施形態では、ｘは、１〜約２０の範囲の整数を表し、またはｘは、１〜約１５の範囲の整数を表す。

さらなる実施形態では、グループＧの極性を有する組換えＯＥＦ伸長は、
（ＧＱＥＰ）_３−ＧＱＥ−ＫＰ、（ＧＱＥＰ）_６−ＫＰ、（ＧＱＥＰ）_１２−ＫＰもしくは（ＧＱＥＰ）_１９−ＫＰで表されるＡ鎖伸長；
またはＫＰ−（ＧＱＥＰ）_４、ＫＰ−（ＧＱＥＰ）_６もしくはＫＰ−（ＧＱＥＰ）_１９で表されるＢ鎖伸長である。

本発明により使用する極性を有する組換えＯＥＦ伸長はまた、グループＨ、すなわち無作為な順序または任意に組み合わせた、ｘが１〜約２５の範囲の整数を表す［Ｅ，Ｇ，ＰおよびＳ］_ｘであるグループＨから選択される隣接するアミノ酸残基によって表されうるものであって、グループＨの配列は、上述のようなＫまたはＫＰとさらに組み合わせる（すなわち、Ａ鎖伸長の場合は［Ｅ，Ｇ，Ｐ，Ｓ］_ｘ−ＫＰ、またＢ鎖伸長の場合はＫＰ−［Ｅ，Ｇ，Ｐ，Ｓ］_ｘ）。

一実施形態では、グループＨの極性を有する組換えＯＥＦ伸長は、以下のモチーフのうちの一つまたは複数によってさらに表されうる：（ＥＧＰＳ）_ｘ、（ＧＥＰＳ）_ｘ、（ＧＰＥＳ）_ｘ、（ＧＰＳＥ）_ｘ、（ＥＰＧＳ）_ｘ、（ＰＥＧＳ）_ｘ、（ＰＧＥＳ）_ｘ、（ＰＧＳＥ）_ｘ、（ＥＳＧＰ）_ｘ、（ＳＥＧＰ）_ｘ、（ＳＧＥＰ）_ｘ、（ＳＧＰＥ）_ｘ、（ＥＰＳＧ）_ｘ、（ＰＥＳＧ）_ｘ、（ＰＳＧＥ）_ｘ、（ＰＳＥＧ）_ｘ、（ＥＧＳＰ）_ｘ、（ＧＥＳＰ）_ｘ、（ＧＳＰＥ）_ｘおよび（ＧＳＥＰ）_ｘ、式中、ｘは、１〜約２５の範囲の整数を表し、これらは上述のようなＫまたはＫＰと組み合わせる。

グループＨのＯＥＦ伸長が、モチーフ（ＰＥＧＳ）_ｘ、（ＰＧＥＳ）_ｘ、（ＰＧＳＥ）_ｘ、（ＰＥＳＧ）_ｘ、（ＰＳＧＥ）_ｘ、（ＰＳＥＧ）_ｘ、（ＥＳＧＰ）_ｘ、（ＳＥＧＰ）_ｘ、（ＳＧＥＰ）_ｘ、（ＥＧＳＰ）_ｘ、（ＧＥＳＰ）_ｘまたは（ＧＳＥＰ）_ｘで表される場合、当該伸長は、プロリン（Ｐ）残基を末端とせず、すなわち、末端モチーフは切断され得（例えば、ＥＳＧ、ＳＥＧ、ＳＧＥ、ＥＧＳ、ＧＥＳおよびＧＳＥによって例示される）、ＫＰが後に続く三つのアミノ酸残基のＣ末端モチーフをもたらす（例えば、ＳＥＧ−ＫＰで例示される）。

本発明により使用する極性を有する組換えＯＥＦ伸長はまた、グループＩ、すなわち無作為な順序または任意に組み合わせた、ｘが１〜約２０の範囲の整数を表す［Ａ，Ｅ，Ｇ，ＰおよびＱ］_ｘであるグループＩから選択される隣接するアミノ酸残基によって表されうるものであって、グループＩの配列は、上述のようなＫまたはＫＰとさらに組み合わせる（すなわち、Ａ鎖伸長の場合は［Ａ，Ｅ，Ｇ，Ｐ，Ｑ］_ｘ−ＫＰ、またＢ鎖伸長の場合はＫＰ−［Ａ，Ｅ，Ｇ，Ｐ，Ｑ］_ｘ）。

一実施形態では、グループＩの極性を有する組換えＯＥＦ伸長は、以下のモチーフのうちの一つまたは複数によってさらに表されうる：（ＡＥＧＰＱ）_ｘ、（ＥＡＧＰＱ）_ｘ、（ＥＧＡＰＱ）_ｘ、（ＥＧＰＡＱ）_ｘ、（ＥＧＰＱＡ）_ｘ、（ＡＧＥＰＱ）_ｘ、（ＧＡＥＰＱ）_ｘ、（ＧＥＡＰＱ）_ｘ、（ＧＥＰＡＱ）_ｘ、（ＧＥＰＱＡ）_ｘ、_ｘ、（ＡＥＰＧＱ）_ｘ、（ＥＡＰＧＱ）_ｘ、（ＥＰＡＧＱ）_ｘ、（ＥＰＧＡＱ）_ｘ、（ＥＰＧＱＡ）_ｘ、（ＡＥＧＱＰ）_ｘ、（ＥＡＧＱＰ）_ｘ、（ＥＧＡＱＰ）_ｘ、（ＥＧＱＡＰ）_ｘ、（ＥＧＱＰＡ）_ｘ、（ＧＡＰＥＱ）_ｘ、（ＧＡＰＱＥ）_ｘ、（ＧＰＥＡＱ）_ｘ、（ＧＰＡＥＱ）_ｘ、（ＧＰＡＱＥ）_ｘ、（ＧＰＥＱＡ）_ｘ、（ＧＰＱＥＡ）_ｘ、（ＧＰＱＡＥ）_ｘ、（ＰＱＡＥＧ）_ｘ、（ＱＰＡＥＧ）_ｘ、（ＱＡＰＥＧ）_ｘ、（ＱＡＥＰＧ）_ｘ、（ＱＡＥＧＰ）_ｘ、（ＥＰＱＡＧ）_ｘ、（ＰＥＱＡＧ）_ｘ、（ＰＱＥＡＧ）_ｘ、（ＰＱＡＧＥ）_ｘ、（ＡＰＱＥＧ）_ｘ、（ＰＡＱＥＧ）_ｘ、（ＰＱＥＡＧ）_ｘ、（ＰＱＥＧＡ）_ｘ、（ＡＧＱＥＰ）_ｘ、（ＧＡＱＥＰ）_ｘ、（ＧＱＡＥＰ）_ｘ、（ＧＱＥＡＰ）_ｘ、（ＧＱＥＰＡ）_ｘ、式中、ｘは、１〜約２０の範囲の整数を表し、これらは上述のようなＫまたはＫＰと組み合わせる。

グループＩのＯＥＦ伸長が（ＰＱＡＥＧ）、（ＰＥＱＡＧ）、（ＰＱＥＡＧ）、（ＰＱＡＧＥ）、（ＰＡＱＥＧ）、（ＰＱＥＡＧ）、（ＰＱＥＧＡ）、（ＡＥＧＱＰ）_ｘ、（ＥＡＧＱＰ）_ｘ、（ＥＧＡＱＰ）_ｘ、（ＥＧＱＡＰ）_ｘ、（ＱＡＥＧＰ）_ｘ、（ＡＧＱＥＰ）_ｘ、（ＧＡＱＥＰ）_ｘ、（ＧＱＡＥＰ）_ｘまたは（ＧＱＥＡＰ）_ｘで表される場合、当該伸長は、プロリン（Ｐ）残基を末端とせず、すなわち、末端モチーフは切断され得（例えば、ＡＥＧＱ、ＥＡＧＱ、ＥＧＡＱ、ＥＧＱＡ、ＱＡＥＧ、ＡＧＱＥ、ＧＡＱＥ、ＧＱＡＥおよびＧＱＥＡによって例示される）、ＫＰが後に続く四つのアミノ酸残基のＣ末端モチーフをもたらす（例えば、ＥＧＡＱ−ＫＰで例示される）。

別の実施形態では、グループＩの極性を有する組換えＯＥＦ型伸長は（ＧＱＡＰＧＱＥＰ）_ｘ、（ＧＱＡＰＧＱＥＰ）_ｘ−ＧＱＡ−ＫＰ、（ＧＱＡＰＧＱＥＰ）_ｘ−ＧＱＥ−ＫＰ、（ＧＱＡＰＧＱＡＰＧＱＥＰ）_ｘ、（ＧＱＡＰＧＱＡＰＧＱＥＰ）_ｘ−ＧＱＡ−ＫＰ、（ＧＱＡＰＧＱＡＰＧＱＥＰ）_ｘ−ＧＱＥ−ＫＰ、（ＧＱＡＰＧＱＡＰＧＱＡＰＧＱＥＰ）ｘおよび（ＧＱＡＰＧＱＡＰＧＱＡＰＧＱＥＰ）_ｘ−ＧＱＡ−ＫＰ、（ＧＱＡＰＧＱＡＰＧＱＡＰＧＱＥＰ）ｘ−ＧＱＥ−ＫＰから選択され、式中、ｘは、１〜約２０の範囲の整数を表す。

第三の実施形態では、グループＩの極性を有する組換えＯＥＦ伸長は、
（ＧＱＡＰＧＱＥＰ）_６−ＫＰ、（ＧＱＡＰＧＱＡＰＧＱＥＰ）_６−ＫＰ、（ＧＱＡＰＧＱＡＰＧＱＥＰ）_６−ＧＱＡ−ＫＰもしくは（ＧＱＡＰＧＱＡＰＧＱＡＰＧＱＥＰ）_６−ＧＱＡＰ−ＫＰで表されるＡ鎖伸長；
ＫＰ−（ＧＱＡＰＧＱＥＰ）_６もしくはＫＰ−（ＧＱＡＰＧＱＡＰＧＱＥＰ）_６で表されるＢ鎖伸長；または、
（ＧＱＡＰＧＱＡＰＧＱＡＰＧＱＥＰ）_６ＧＱＡＰ−ＫＰもしくは（ＧＱＡＰＧＱＡＰＧＱＡＰＧＱＥＰ）_６−ＧＱＡ−ＫＰで表されるＡ鎖伸長である。

本発明により使用する極性を有する組換えＯＥＦ伸長はまた、グループＪ、すなわち無作為な順序または任意に組み合わせた、ｘが１〜約２０の範囲の整数を表す［Ａ，Ｅ，Ｇ，Ｐ，ＳおよびＴ］_ｘであるグループＪから選択される隣接するアミノ酸残基によって表されうるものであって、グループＪの配列は、上述のようなＫまたはＫＰとさらに組み合わせる（すなわち、Ａ鎖伸長の場合は［Ａ，Ｅ，Ｇ，Ｐ，Ｓ，Ｔ］_ｘ−ＫＰ、またＢ鎖伸長の場合はＫＰ−［Ａ，Ｅ，Ｇ，Ｐ，Ｓ，Ｔ］_ｘ）。

一実施形態では、グループＪの極性を有する組換えＯＥＦ伸長は、以下のモチーフのうちの一つまたは複数によってさらに表されうる：（ＡＥＧＰＳＴ）_ｘ、（ＥＡＧＰＳＴ）_ｘ、（ＥＧＡＰＳＴ）_ｘ、（ＥＧＰＡＳＴ）_ｘ、（ＥＧＰＳＡＴ）_ｘ、（ＥＧＰＳＴＡ）_ｘ、（ＡＧＥＰＳＴ）_ｘ、（ＡＧＰＥＳＴ）_ｘ、（ＡＧＰＳＥＴ）_ｘ、（ＡＧＰＳＴＥ）_ｘ、（ＧＥＡＰＳＴ）_ｘ、（ＧＡＥＰＳＴ）_ｘ、（ＧＡＰＥＳＴ）_ｘ、（ＧＡＰＳＥＴ）_ｘ、（ＧＡＰＳＴＥ）_ｘ、（ＧＥＰＡＳＴ）_ｘ、（ＧＰＥＡＳＴ）_ｘ、（ＧＰＡＥＳＴ）_ｘ、（ＧＰＡＳＥＴ）_ｘ、（ＧＰＡＳＴＥ）_ｘ、（ＧＥＰＳＡＴ）_ｘ、（ＧＰＥＳＡＴ）_ｘ、（ＧＰＳＥＡＴ）_ｘ、（ＧＰＳＡＥＴ）_ｘ、（ＧＰＳＡＴＥ）_ｘ、（ＧＥＰＳＴＡ）_ｘ、（ＧＰＥＳＴＡ）_ｘ、（ＧＰＳＥＴＡ）_ｘ、（ＧＰＳＴＥＡ）_ｘ、（ＧＰＳＴＡＥ）_ｘ、（ＰＳＴＡＥＧ）_ｘ、（ＰＴＳＡＥＧ）_ｘ、（ＰＴＡＳＥＧ）_ｘ、（ＰＴＡＥＳＧ）_ｘ、（ＰＴＡＥＧＳ）_ｘ、（ＳＰＴＡＥＧ）_ｘ、（ＳＴＰＡＥＧ）_ｘ、（ＳＴＡＰＥＧ）_ｘ、（ＳＴＡＥＰＧ）_ｘ、（ＳＴＡＥＧＰ）_ｘ、（ＴＡＥＧＰＳ）_ｘ、（ＴＥＡＧＰＳ）_ｘ、（ＴＥＧＡＰＳ）_ｘ、（ＴＥＧＰＡＳ）_ｘ、（ＴＥＧＰＳＡ）_ｘ、（ＡＴＥＧＰＳ）_ｘ、（ＡＥＴＧＰＳ）_ｘ、（ＡＥＧＴＰＳ）_ｘ、（ＡＥＧＰＴＳ）_ｘ、（ＴＥＡＰＧＳ）_ｘ、（ＴＡＥＰＧＳ）_ｘ、（ＥＴＡＰＧＳ）_ｘ、（ＥＡＴＰＧＳ）_ｘ、（ＥＡＰＴＧＳ）_ｘ、（ＥＡＰＧＴＳ）_ｘ、（ＥＡＰＧＳＴ）_ｘ、（ＴＥＰＡＧＳ）_ｘ、（ＥＴＰＡＧＳ）_ｘ、（ＥＰＴＡＧＳ）_ｘ、（ＥＰＡＴＧＳ）_ｘ、（ＥＰＡＧＴＳ）_ｘ、（ＥＰＡＧＳＴ）_ｘ、（ＴＥＰＧＡＳ）_ｘ、（ＥＴＰＧＡＳ）_ｘ、（ＥＰＴＧＡＳ）_ｘ、（ＥＰＧＴＡＳ）_ｘ、（ＥＰＧＡＴＳ）_ｘ、（ＥＰＧＡＳＴ）_ｘ、（ＴＥＰＧＳＡ）_ｘ、（ＥＴＰＧＳＡ）_ｘ、（ＥＰＴＧＳＡ）_ｘ、（ＥＰＧＴＳＡ）_ｘ、（ＥＰＧＳＴＡ）_ｘ、（ＥＰＧＳＡＴ）_ｘ、（ＴＥＡＳＧＰ）_ｘ、（ＥＴＡＳＧＰ）_ｘ、（ＥＡＴＳＧＰ）_ｘ、（ＥＡＳＴＧＰ）_ｘ、（ＥＡＳＧＴＰ）_ｘ、（ＥＡＳＧＰＴ）_ｘ、（ＴＥＳＡＧＰ）_ｘ、（ＥＴＳＡＧＰ）_ｘ、（ＥＳＴＡＧＰ）_ｘ、（ＥＳＡＴＧＰ）_ｘ、（ＥＳＡＧＴＰ）_ｘ、（ＥＳＡＧＰＴ）_ｘ、（ＴＥＳＧＡＰ）_ｘ、（ＥＴＳＧＡＰ）_ｘ、（ＥＳＴＧＡＰ）_ｘ、（ＥＳＧＴＡＰ）_ｘ、（ＥＳＧＡＴＰ）_ｘ、（ＥＳＧＡＰＴ）_ｘ、（ＴＥＳＧＰＡ）_ｘ、（ＥＴＳＧＰＡ）_ｘ、（ＥＳＴＧＰＡ）_ｘ、（ＥＳＧＴＰＡ）_ｘ、（ＥＳＧＰＴＡ）_ｘ、（ＥＳＧＰＡＴ）_ｘ、（ＴＥＡＰＳＧ）_ｘ、（ＥＴＡＰＳＧ）_ｘ、（ＥＡＴＰＳＧ）_ｘ、（ＥＡＰＴＳＧ）_ｘ、（ＥＡＰＳＴＧ）_ｘ、（ＥＡＰＳＧＴ）_ｘ、（ＴＥＰＡＳＧ）_ｘ、（ＥＴＰＡＳＧ）_ｘ、（ＥＰＴＡＳＧ）_ｘ、（ＥＰＡＴＳＧ）_ｘ、（ＥＰＡＳＴＧ）_ｘ、（ＥＰＡＳＧＴ）_ｘ、（ＴＥＰＳＧＡ）_ｘ、（ＥＴＰＳＧＡ）_ｘ、（ＥＰＴＳＧＡ）_ｘ、（ＥＰＳＴＧＡ）_ｘ、（ＥＰＳＧＴＡ）_ｘ、（ＥＰＳＧＡＴ）_ｘ、（ＴＥＰＳＡＧ）_ｘ、（ＥＴＰＳＡＧ）_ｘ、（ＥＰＴＳＡＧ）_ｘ、（ＥＰＳＴＡＧ）_ｘ、（ＥＰＳＡＴＧ）_ｘ、（ＥＰＳＡＧＴ）_ｘ、（ＴＥＡＧＳＰ）_ｘ、（ＥＴＡＧＳＰ）_ｘ、（ＥＡＴＧＳＰ）_ｘ、（ＥＡＧＴＳＰ）_ｘ、（ＥＡＧＳＴＰ）_ｘ、（ＥＡＧＳＰＴ）_ｘ、（ＴＥＧＡＳＰ）_ｘ、（ＥＴＧＡＳＰ）_ｘ、（ＥＧＴＡＳＰ）_ｘ、（ＥＧＡＴＳＰ）_ｘ、（ＥＧＡＳＴＰ）_ｘ、（ＥＧＡＳＰＴ）_ｘ、（ＴＥＧＳＰＡ）_ｘ、（ＥＴＧＳＰＡ）_ｘ、（ＥＧＴＳＰＡ）_ｘ、（ＥＧＳＴＰＡ）_ｘ、（ＥＧＳＰＴＡ）_ｘ、（ＥＧＳＰＡＴ）_ｘ、（ＴＥＧＳＡＰ）_ｘ、（ＥＴＧＳＡＰ）_ｘ、（ＥＧＴＳＡＰ）_ｘ、（ＥＧＳＴＡＰ）_ｘ、（ＥＧＳＡＴＰ）_ｘ、（ＥＧＳＡＰＴ）_ｘ、（ＰＡＥＧＳＴ）_ｘ、（ＰＥＡＧＳＴ）_ｘ、（ＰＥＧＡＳＴ）_ｘ、（ＰＥＧＳＡＴ）_ｘ、（ＰＥＧＳＴＡ）_ｘ、（ＳＡＥＧＰＴ）_ｘ、（ＳＥＡＧＰＴ）_ｘ、（ＳＥＧＡＰＴ）_ｘ、（ＳＥＧＰＡＴ）_ｘ、（ＳＥＧＰＴＡ）_ｘ、式中、ｘは、１〜約２０の範囲の整数を表し、これらは上述のようなＫまたはＫＰと組み合わせる。

グループＪのＯＥＦ伸長が、モチーフ（ＰＳＴＡＥＧ）_ｘ、（ＰＴＳＡＥＧ）_ｘ、（ＰＴＡＳＥＧ）_ｘ、（ＰＴＡＥＳＧ）_ｘ、（ＰＴＡＥＧＳ）_ｘ、（ＳＴＡＥＧＰ）_ｘ、（ＴＥＡＳＧＰ）_ｘ、（ＥＴＡＳＧＰ）_ｘ、（ＥＡＴＳＧＰ）_ｘ、（ＥＡＳＴＧＰ）_ｘ、（ＥＡＳＧＴＰ）_ｘ、（ＴＥＳＡＧＰ）_ｘ、（ＥＴＳＡＧＰ）_ｘ、（ＥＳＴＡＧＰ）_ｘ、（ＥＳＡＴＧＰ）_ｘ、（ＥＳＡＧＴＰ）_ｘ、（ＴＥＳＧＡＰ）_ｘ、（ＥＴＳＧＡＰ）_ｘ、（ＥＳＴＧＡＰ）_ｘ、（ＥＳＧＴＡＰ）_ｘ、（ＥＳＧＡＴＰ）_ｘ、（ＴＥＡＧＳＰ）_ｘ、（ＥＴＡＧＳＰ）_ｘ、（ＥＡＴＧＳＰ）_ｘ、（ＥＡＧＴＳＰ）_ｘ、（ＥＡＧＳＴＰ）_ｘ、（ＴＥＧＡＳＰ）_ｘ、（ＥＴＧＡＳＰ）_ｘ、（ＥＧＴＡＳＰ）_ｘ、（ＥＧＡＴＳＰ）_ｘ、（ＥＧＡＳＴＰ）_ｘ、（ＥＧＡＳＰＴ）_ｘ、（ＴＥＧＳＡＰ）_ｘ、（ＥＴＧＳＡＰ）_ｘ、（ＥＧＴＳＡＰ）_ｘ、（ＥＧＳＴＡＰ）_ｘ、（ＥＧＳＡＴＰ）_ｘで表される場合、当該伸長は、プロリン（Ｐ）残基を末端とせず、すなわち、末端モチーフは切断され得（例えば、ＳＴＡＥＧ、ＴＥＡＳＧ、ＥＴＡＳＧ、ＥＡＴＳＧ、ＥＡＳＴＧ、ＥＡＳＧＴ、ＴＥＳＡＧ、ＥＴＳＡＧ、ＥＳＴＡＧ、ＥＳＡＴＧ、ＥＳＡＧＴ、ＴＥＳＧＡ、ＥＴＳＧＡ、ＥＳＴＧＡ、ＥＳＧＴＡ、ＥＳＧＡＴ、ＴＥＡＧＳ、ＥＴＡＧＳ、ＥＡＴＧＳ、ＥＡＧＴＳ、ＥＡＧＳＴ、ＴＥＧＡＳ、ＥＴＧＡＳ、ＥＧＴＡＳ、ＥＧＡＴＳ、ＥＧＡＳＴ、ＥＧＡＳＰ、ＴＥＧＳＡ、ＥＴＧＳＡ、ＥＧＴＳＡ、ＥＧＳＴＡ、ＥＧＳＡＴによって例示される）、ＫＰが後に続く五つのアミノ酸残基のＣ末端モチーフをもたらす（例えば、ＳＴＡＥＧ−ＫＰで例示される）。

本発明により使用する極性を有する組換えＯＥＦ伸長はまた、グループＡ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、およびＨの任意の組み合わせによって表されてもよいが、上述したとおり極性を有する組換えＯＥＦ伸長は大きすぎるべきではなく、本発明によるＯＥＦの全長は１〜約１５０個のアミノ酸残基とするものと現在考えられている。

一実施形態では、本発明により使用する極性を有する組換えＯＥＦ伸長は、グループＣおよびＥの組み合わせで表されうる。

別の実施形態では、グループＣとＥの組み合わせで表した本発明により使用する極性を有する組換えＯＥＦ伸長は、（（ＧＱＡＰ）（ＧＱＥＰ））_ｘ、（（ＧＱＡＰ）（ＧＱＡＰ）（ＧＱＥＰ））_ｘ、または（（ＧＱＡＰ）（ＧＱＡＰ）（ＧＱＡＰ）（ＧＱＥＰ））_ｘであり、この組合せ配列は、上述のようなＫまたはＫＰとさらに組み合わせるものであり（すなわち、Ａ鎖伸長の場合は、（（ＧＱＡＰ）（ＧＱＥＰ））_ｘ−ＫＰ、（（ＧＱＡＰ）（ＧＱＡＰ）（ＧＱＥＰ））_ｘ−ＫＰまたは（（ＧＱＡＰ）（ＧＱＡＰ）（ＧＱＡＰ）（ＧＱＥＰ））_ｘ−ＫＰ、またＢ鎖伸長の場合は、ＫＰ−（（ＧＱＡＰ）（ＧＱＥＰ））_ｘ、ＫＰ−（（ＧＱＡＰ）（ＧＱＡＰ）（ＧＱＥＰ））_ｘまたはＫＰ−（（ＧＱＡＰ）（ＧＱＡＰ）（ＧＱＡＰ）（ＧＱＥＰ））_ｘ）、式中、ｘは１〜７の範囲の整数を表す。

第三の実施形態では、グループＣとＥの組み合せで表した極性を有する組換えＯＥＦ伸長は、
（（ＧＱＡＰ）（ＧＱＥＰ））_６−ＫＰもしくは（（ＧＱＡＰ）（ＧＱＡＰ）（ＧＱＥＰ））_６−（ＧＱＡＰ）−ＫＰで表されるＡ鎖伸長、または
ＫＰ−（（ＧＱＡＰ）（ＧＱＥＰ））_６もしくはＫＰ−（（ＧＱＡＰ）（ＧＱＡＰ）（ＧＱＥＰ））_６−（ＧＱＡＰ）で表されるＢ鎖伸長である。

さらなる実施形態では、本発明により使用する極性を有する組換えＯＥＦ伸長は、上述のようなリジン（Ｋ）残基またはＫＰ配列と組み合わせた、（ＧＡＰＱ）、（ＧＥＰＱ）、（ＧＱＡＰ）、（ＧＱＥＰ）、（ＰＱＡＧ）および（ＰＱＥＧ）から選択される繰り返しモチーフ、または、これらのモチーフの混合によって表される。

さらなる実施形態では、ＯＥＦは、インスリンＡ鎖のＣ末端側に融合した極性を有する組換え伸長を示し（すなわち、インスリンＡ鎖伸長）、当該伸長は、以下のモチーフおよび伸長から選択される：
［Ｇ，Ｅ，Ｓ，Ｔ，Ａ，Ｐ］_ｎ−ＫＰ（すなわち、無作為な順序のＧ、Ｅ、Ｓ、Ｔ、Ａ、Ｐ）、および［Ｇ，Ｅ，Ｑ，Ａ，Ｐ］_ｎ−ＫＰ（すなわち、無作為な順序のＧ、Ｅ、Ｑ、Ａ、Ｐ）；
式中、ｎは、１〜約２０の範囲の整数を表す；ならびに
（ＧＡＰＱ）_ｘ−ＫＰ、（ＧＡＱＰ）_ｘ−ＫＰ、（ＧＥＰＱ）_ｘ−ＫＰ、（ＧＥＱＰ）_ｘ−ＫＰ、（ＧＰＡＱ）_ｘ−ＫＰ、（ＧＰＥＱ）_ｘ−ＫＰ、（ＧＰＱＡ）_ｘ−ＫＰ、（ＧＰＱＥ）_ｘ−ＫＰ、（ＧＱＡＰ）_ｘ−ＫＰ、（ＧＱＥＰ）_ｘ−ＫＰ、（ＧＱＰＡ）_ｘ−ＫＰおよび（ＧＱＰＥ）_ｘ−ＫＰ；
式中、ｘは、１〜約２５の範囲の整数を表す；ならびに
（ＧＱＡＰＧＱＥＰ）_ｙ−ＫＰ；
式中、ｙは、１〜約１５の範囲の整数を表す；ならびに
（ＧＱＡＰＧＱＡＰＧＱＥＰ）_ｚ−ＫＰ；
式中、ｚは、１〜約１０の範囲の整数を表す；ならびに
（ＧＱＡＰＧＱＡＰＧＱＡＰＧＱＥＰ）_Ｖ−ＫＰ；
式中、ｖは、１〜約８の範囲の整数を表す。

さらなる実施形態では、ＯＥＦは、インスリンＢ鎖のＮ末端側に融合した極性を有する組換え伸長を示し（すなわち、インスリンＢ鎖伸長）、当該伸長は、以下のモチーフおよび伸長から選択される：
ＫＰ−［Ｇ，Ｅ，Ｓ，Ｔ，Ａ，Ｐ］_ｎ（すなわち、無作為な順序のＧ、Ｅ、Ｓ、Ｔ、Ａ、Ｐ）、およびＫＰ−［Ｇ，Ｅ，Ｑ，Ａ，Ｐ］_ｎ（すなわち、無作為な順序のＧ、Ｅ、Ｑ、Ａ、Ｐ）；
式中、ｎは、１〜約２０の範囲の整数を表す；ならびに
ＫＰ−（ＧＡＰＱ）_ｘ、ＫＰ−（ＧＡＱＰ）_ｘ、ＫＰ−（ＧＥＰＱ）_ｘ、ＫＰ−（ＧＥＱＰ）_ｘ、ＫＰ−（ＧＰＡＱ）_ｘ、ＫＰ−（ＧＰＥＱ）_ｘ、ＫＰ−（ＧＰＱＡ）_ｘ、ＫＰ−（ＧＰＱＥ）_ｘ、ＫＰ−（ＧＱＡＰ）_ｘ、ＫＰ−（ＧＱＥＰ）_ｘ、ＫＰ−（ＧＱＰＡ）_ｘ、およびＫＰ−（ＧＱＰＥ）_ｘ；
式中、ｘは、１〜約２５の範囲の整数を表す；ならびに
ＫＰ−（ＧＱＡＰＧＱＥＰ）_ｙ；
式中、ｙは、１〜１５の範囲の整数を表す；ならびに
ＫＰ−（ＧＱＡＰＧＱＡＰＧＱＥＰ）_ｚ；
式中、ｚは、１〜１０の範囲の整数を表す；ならびに
ＫＰ−（ＧＱＡＰＧＱＡＰＧＱＡＰＧＱＥＰ）_Ｖ；
式中、ｖは、１〜８の範囲の整数を表す。

さらなる実施形態では、本発明により使用する、Ａ鎖の極性を有する組換えＯＥＦ伸長およびＡ鎖の２１位のアミノ酸は、以下のとおりである：
Ａ２１Ｑ，Ａ２２（Ｇ）_１８，Ａ４０Ｋ＊（配列番号５３）；
Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰ）_１８，Ａ９４Ｇ，Ａ９５Ｑ，Ａ９６Ａ，Ａ９７Ｋ＊，Ａ９８Ｐ（配列番号５４）；
Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰ）_１９，Ａ９８Ｋ＊，Ａ９９Ｐ（配列番号５５）；
Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰＧＱＥＰ）_６，Ａ７０Ｋ＊，Ａ７１Ｐ（配列番号５６）；
Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰＧＱＡＰＧＱＥＰ）_６−ＧＱＡＰ，Ａ９８Ｋ＊，Ａ９９Ｐ（配列番号５７）；
Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰＧＱＡＰＧＱＡＰＧＱＥＰ）_６−ＧＱＡＰ，Ａ１２２Ｋ＊，Ａ１２３Ｐ（配列番号５８）；
Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰ）_２４，Ａ１１８Ｇ，Ａ１１９Ｑ，Ａ１２０Ａ，Ａ１２１Ｋ＊，Ａ１２２Ｐ（配列番号５９）；
Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＥＰ）_３，Ａ３４Ｇ，Ａ３５Ｑ，Ａ３６Ｅ，Ａ３７Ｋ＊，Ａ３８Ｐ（配列番号６０）；
Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＥＰ）_６，Ａ４６Ｋ＊，Ａ４７Ｐ（配列番号６１）；
Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＥＰ）_１２，Ａ７０Ｋ＊，Ａ７１Ｐ（配列番号６２）；または
Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＥＰ）_１９，Ａ９８Ｋ＊，Ａ９９Ｐ（配列番号６３）；
式中、＊はＦｃ’結合点を示す。

さらなる実施形態では、本発明により使用する、Ｂ鎖の極性を有する組換えＯＥＦ伸長は、以下のとおりである：
Ｂ（−７８Ｋ＊），Ｂ（−７７Ｐ），（ＧＱＡＰＧＱＡＰＧＱＥＰ）_６−ＧＱＡＰ（配列番号６４）；
Ｂ（−７８Ｋ＊），Ｂ（−７７Ｐ），Ｂ（−１）（ＧＱＥＰ）_１９（配列番号６５）；
Ｂ（−７８Ｋ＊），Ｂ（−７７Ｐ），Ｂ（−１）（ＧＱＡＰ）_１９（配列番号６６）；
Ｂ（−２６Ｋ＊），Ｂ（−２５Ｐ），Ｂ（−１）（ＧＱＡＰ）_６（配列番号６７）；
式中、＊はＦｃ’結合点を示す。

結合基
本発明のインスリン−Ｆｃコンジュゲートは、リンカーを介してＯＥＦ−Ｉｎｓ構築物と共有結合した二つのモノマーＦｃポリペプチド（Ｆｃ’）からなるものとして特徴付けることができる。

本発明の特定の特徴は、二つのモノマーＦｃ成分がオリゴマー伸長インスリン類似体に結合するという手法である。このような構築物を獲得するために用いるリンカーは、一般式Ｉに記載のＸおよびＹ、または一般式Ｉ’に記載のＸ、ＵおよびＺによって規定されるような、「トリアーム」リンカーとみなされ得、式中、
Ｘは、［ＯＥＦ−Ｉｎｓ］とＹとを連結させる、共有結合または二価結合基を表し；
Ｙは、二つの硫黄原子を介して二つのＦｃ’をＸに連結させる、一般式Ｉに記載の三価結合基を表すか；または、Ｘが共有結合を表す場合には、Ｙは、二つの硫黄原子を介して二つのＦｃ’を［ＯＥＦ−Ｉｎｓ］構築物内のリジン残基に連結させ；またはより具体的には、Ｙは、二つの硫黄原子を介して二つのＦｃ’を［ＯＥＦ−Ｉｎｓ］構築物内のリジン残基のイプシロンアミノ基に連結させ；かつ
Ｆｃ’は、モノマーＦｃポリペプチドまたはその断片を表すものであり；または、
Ｕは、二つのＺ−［Ｓ−Ｆｃ’］基をＸに連結させる、一般式Ｉ’に記載の中央三価結合単位を表すか；または、Ｘが共有結合を表す場合には、Ｕは、二つのＺ−［Ｓ−Ｆｃ’］基を、［ＯＥＦ−Ｉｎｓ］構築物内のリジン残基に連結させ；またはより具体的には、Ｘが共有結合を表す場合には、Ｕは、二つのＺ−［Ｓ−Ｆｃ’］基を、［ＯＥＦ−Ｉｎｓ］構築物内のリジン残基のイプシロンアミノ基に連結させ；かつ、
一般式Ｉ’に記載のＺは、中央結合単位（Ｕ）をモノマーＦｃポリペプチド（Ｆｃ’）またはその断片のチオール部分（Ｓ）に連結させる二価結合基を表す。

特定の実施形態では、一般式Ｉに記載のＹは、Ｘを二つのモノマーＦｃポリペプチド（Ｆｃ’）の二つのチオール部分に連結させる三価結合基を表し、この三価結合基は、一般式ＩＩＩで表すように、ｓｐ２混成の炭素原子（−（Ｃ＝Ｏ）−）およびメチレン基を含む：
−ＣＯ−ＣＨ_２−
．
他の特定の実施形態では、一般式Ｉ’によれば、Ｚは、中央単位（Ｕ）をモノマーＦｃポリペプチド（Ｆｃ’）またはその断片のチオール部分（Ｓ）に連結させる二価結合基を表し、この二価結合基は、一般式ＩＩＩ’で表すように、ｓｐ２混成の炭素原子（−（Ｃ＝Ｏ）−）およびメチレン基を含み：
−ＣＯ−ＣＨ_２−
式中、Ｆｃ’は、モノマーＦｃポリペプチド（Ｆｃ’）またはその断片を表し、かつ、Ｓは、Ｆｃ’成分内に含まれるシステイン（Ｃ）残基由来の硫黄原子を表す。

一実施形態では、硫黄原子は、Ｆｃのヒンジ領域に位置するシステイン（Ｃ）残基に由来するものであり、このシステイン残基は、ジスルフィド架橋（以下の化学式５によって図示されるような）を形成する能力を有する。

別の実施形態では、本発明のインスリン−Ｆｃコンジュゲートは、一般式Ｉまたは一般式Ｉ’の化合物であり、式中、Ｘは存在しないか（すなわち、共有結合を表す）、またはＸは構造−Ｃ（Ｏ）−（ＣＨ_２）_ｌ−Ｃ（Ｏ）−である二価リンカーを表し、式中、ｌは１〜２０の範囲の整数を表す。

さらなる実施形態では、ｌは、１〜１５の範囲の整数を表し；またはｌは、１〜１０の範囲の整数を表し；またはｌは、１〜６の範囲の整数を表し；またはｌは、１〜５の範囲の整数を表し；またはｌは、１〜４の範囲の整数を表す。

さらなる実施形態では、ｌは、２〜１５の範囲の整数を表し；またはｌは、２〜１０の範囲の整数を表し；またはｌは、２〜６の範囲の整数を表し；またはｌは、２〜５の範囲の整数を表し；またはｌは、２〜４の範囲の整数を表す。

さらなる実施形態において、ｌは２を表し、またはｌを３表し、またはｌは４を表し、またはｌは５を表し、またはｌは６を表す。

さらなる実施形態では、Ｘはリンカー、−ＣＯ−ＣＨ_２−ＣＨ_２−ＣＯ−を表す。

さらなる実施形態では、Ｘはリンカー、−ＣＯ−ＣＨ_２−ＣＨ_２−ＣＨ_２−ＣＨ_２−ＣＯ−を表す。

さらなる実施形態では、Ｘは構造−Ｃ（Ｏ）−（ＣＨ_２）_ｏ−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−の二価リンカーを表し、式中、ｏは１〜２０の範囲の整数を表す。

さらなる実施形態では、ｏは、１〜１５の範囲の整数を表し；またはｏは、１〜１０の範囲の整数を表し；またはｏは、１〜５の範囲の整数を表し；またはｌは、１〜３の範囲の整数を表す。

さらなる実施形態では、Ｘはリンカー、−ＣＯ−ＣＨ_２−ＣＨ_２−ＣＨ_２−ＮＨ−ＣＯ−を表す。

さらなる実施形態では、Ｘは共有結合を表す。

本発明のインスリン−Ｆｃコンジュゲートは、一般式Ｉの化合物であり得、式中、Ｙは、二つの硫黄原子を介して二つのＦｃ’をＸに連結させる三価結合基を表すか；または、Ｘが共有結合を表す場合には、Ｙは、二つの硫黄原子を介して二つのＦｃ’を［ＯＥＦ−Ｉｎｓ］構築物内のリジン残基に連結させ；もしくはより具体的には、Ｙは、二つの硫黄原子を介して二つのＦｃ’を［ＯＥＦ−Ｉｎｓ］構築物内のリジン残基のイプシロンアミノ基に連結させる。

別の実施形態では、本発明のインスリン−Ｆｃコンジュゲートは、一般式Ｉ’の化合物であり、式中、Ｕは、二つのＺ−［Ｓ−Ｆｃ’］基をＸに連結させる中央三価結合単位を表すか；または、Ｘが共有結合を表す場合には、Ｕは、二つのＺ−［Ｓ−Ｆｃ’］基を、［ＯＥＦ−Ｉｎｓ］構築物内のリジン残基に連結させ；もしくはより具体的には、Ｘが共有結合を表す場合には、Ｕは、二つのＺ−［Ｓ−Ｆｃ’］基を、［ＯＥＦ−Ｉｎｓ］構築物内のリジン残基のイプシロンアミノ基に連結させる。

一実施形態では、一般式Ｉ’による中央結合単位（Ｕ）は窒素原子（Ｎ）を表す。

一実施形態では、本発明のインスリン−Ｆｃコンジュゲートは一般式Ｉの化合物であって、中央三価結合単位（Ｙ）は以下の一般式ＩＶで表され、
式中、
Ｎは窒素原子（Ｎ）であり；
＊は、Ｆｃの還元されたジスルフィド架橋由来の硫黄原子への付加点を示し（すなわち、一般式Ｉに記載の［Ｆｃ’］部分）；
Ｎは窒素原子（Ｎ）であり；
＃は、Ｘへの付加点を示し；かつ、
Ｌ^１およびＬ^２は、互いに独立して、−（ＣＨ_２）_ｍ１−を表し；式中、
ｍ１は、１〜６の範囲の整数を表し；かつ、
Ｌ^３およびＬ^４は、互いに独立して、−（ＣＨ_２）_ｎ１−を表し；
式中、ｎ１は、１〜６の範囲の整数を表す。

一実施形態では、Ｌ^１およびＬ^２はそれぞれ、−（ＣＨ_２）_２−、または−（ＣＨ_２）_３−を表し；またＬ^３およびＬ^４はそれぞれ、−（ＣＨ_２）−を表す。

別の実施形態では、本発明のインスリン−Ｆｃコンジュゲートは一般式Ｉ’の化合物であって、中央三価結合単位（Ｕ）および二価結合基（Ｚ）は以下の一般式ＩＶ’で表される：
式中、
Ｎは窒素原子（Ｎ）であり、および、一般式Ｉ’に記載の中央結合単位（Ｕ）を表し；
Ｌ_１−ＮＨ（ＣＯ）−Ｌ_３およびＬ_２−ＮＨ（ＣＯ）−Ｌ_４はそれぞれ、一般式Ｉ’に記載の二価結合基（Ｚ）を表し；
＊は、Ｆｃ（すなわち、一般式Ｉ’に記載の［Ｓ−Ｆｃ’］部分）の、ジスルフィド架橋由来の硫黄原子への付加点を示し；
＃は、Ｘへの付加点を示し；かつ、
Ｌ^１およびＬ^２は、互いに独立して、−（ＣＨ_２）_ｍ１−を表し；式中、
ｍ１は、１〜６の範囲の整数を表し；かつ、
Ｌ^３およびＬ^４は、互いに独立して、−（ＣＨ_２）_ｎ１−を表し；
式中、ｎ１は、１〜６の範囲の整数を表す。

別の実施形態では、一般式Ｉ’に記載の中央結合単位（Ｕ）はベンゼン環を表す。

さらなる実施形態では、中央結合単位（Ｕ）は３，５−二置換安息香酸塩またはベンゾイル部分を表す。

さらなる実施形態では、中央結合単位（Ｕ）は、以下の一般式ＶＩＩで示すような３，５−二置換安息香酸塩またはベンゾイル部分を表す：
式中、
＊は、Ｆｃ（すなわち、一般式Ｉ’に記載の［Ｓ−Ｆｃ’］部分）のジスルフィド架橋由来の硫黄原子への付加点を示し；
＃は、Ｘへの付加点を示すか、またはＸが存在しない場合（すなわち、共有結合を表す）、［ＯＥＦ−Ｉｎｓ］構築物内のリジン残基内の第一級アミノ基への付加点を示し；かつ、
Ｌ^９およびＬ^１０は、互いに独立して、−（ＣＨ_２）_ｎ３−を表し；式中、
ｎ３は、１〜６の範囲の整数を表す
（また一般式Ｉ’に記載のＺは存在しない）。

一実施形態では、Ｌ^９およびＬ^１０はそれぞれ、−（ＣＨ_２）−を表す。

さらなる実施形態では、中央結合単位（Ｕ）は３，５−二置換ベンゼン環を表し、一般式Ｉ’に記載の−Ｕ（−Ｚ）_２は、以下の一般式ＶＩＩ’で示される：
式中、
＊は、Ｆｃ（すなわち、一般式Ｉ’に記載の［Ｓ−Ｆｃ’］部分）のジスルフィド架橋由来の硫黄原子への付加点を示し；
＃は、Ｘへの付加点を示し；かつ、
Ｚは独立してＮＨ（Ｃ＝Ｏ）−Ｌ^９であるかまたはＮＨ（Ｃ＝Ｏ）−Ｌ^１０であり、Ｌ^９およびＬ^１０は、互いに独立して、−（ＣＨ_２）_ｎ３−を表し；式中、
ｎ３は、１〜６の範囲の整数を表す。

第三の実施形態では、一般式Ｉ’に記載の中央結合単位（Ｕ）は、カルボニル（Ｃ＝Ｏ）基に付加したメチル基で表され、かつ、一般式Ｉ’のＵ（−Ｚ）_２は、−（Ｃ＝Ｏ）−ＣＨ（−Ｚ）_２になる。

さらなる実施形態では、Ｘは存在せず（すなわち、共有結合を表し）、一般式Ｉ’に記載のＵ（−Ｚ）_２は、以下の一般式ＶＩＩＩで表される：
式中、
＊は、Ｆｃ（すなわち、一般式Ｉ’に記載の［Ｓ−Ｆｃ’］部分）のジスルフィド架橋由来の硫黄原子への付加点を示し；
＃は、Ｘへの付加点を示すか；またはＸが存在しない場合（すなわち、共有結合を表す）、［ＯＥＦ−Ｉｎｓ］構築物内のリジン残基内の第一級アミノ基への付加点を示し；かつ、
Ｌ^５およびＬ^６は、互いに独立して、−（ＣＨ_２）_ｍ２−を表し；式中、
ｍ２は、０〜６の範囲の整数を表し；かつ、
Ｌ^７およびＬ^８は、互いに独立して、−（ＣＨ_２）_ｎ２−を表し；式中、ｎ２は、１〜６の範囲の整数を表す。

一実施形態では、Ｌ^５は共有結合を表し（すなわち、ｍ２＝０）、Ｌ^６は−（ＣＨ_２）_４を表し（すなわち、ｍ２は４を表す）；かつ、Ｌ^７およびＬ^８のそれぞれは、−（ＣＨ_２）−を表す。

別の実施形態では、一般式Ｉ’に記載の結合基Ｘ−Ｕ（−Ｚ）_２は、−Ｃ（Ｏ）−（ＣＨ_２）_２−Ｃ（Ｏ）−Ｎ［−（ＣＨ_２）_２−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−ＣＨ_２−］_２−；−Ｃ（Ｏ）−（（ＣＨ_２）_３−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−Ｎ［（ＣＨ_２）_２−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−ＣＨ_２−］_２−；−Ｃ（Ｏ）−ＣＨ（ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−ＣＨ_２−）−（ＣＨ_２）_４−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−ＣＨ_２）−；または、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ_６Ｈ_３（ＮＨ（ＣＯ）−ＣＨ_２−）_２を表す。

第三の実施形態では、中央結合単位（Ｕ）は、メチル基および一般式Ｉ’のＹ（−Ｚ）_２で表され、またＸは、上記に規定される通りである。

さらなる実施形態では、Ｕ（−Ｚ）_２は、以下の一般式ＶＩＩＩ’で表される：
式中、
＊は、Ｆｃ（すなわち、一般式Ｉ’に記載の［Ｓ−Ｆｃ’］部分）のジスルフィド架橋由来の硫黄原子への付加点を示し；
＃は、Ｘへの付加点を示し；かつ、
Ｌ^５およびＬ^６は、互いに独立して、−（ＣＨ_２）_ｍ２−を表し；式中、
ｍ２は、０〜６の範囲の整数を表し；かつ、
Ｌ^７およびＬ^８は、互いに独立して、−（ＣＨ_２）_ｎ２−を表し、式中、ｎ２は、１〜６の範囲の整数を表す。

別の実施形態では、結合基Ｘ−Ｕ（−Ｚ）_２は、−Ｃ（Ｏ）−（ＣＨ_２）_２−Ｃ（Ｏ）−Ｎ［−（ＣＨ_２）_２−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−ＣＨ_２−］_２−；−Ｃ（Ｏ）−（（ＣＨ_２）_３−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−Ｎ［（ＣＨ_２）_２−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−ＣＨ_２−］_２−；−Ｃ（Ｏ）−ＣＨ（ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−ＣＨ_２−）−（ＣＨ_２）_４−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−ＣＨ_２）−；または、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ_６Ｈ_３（ＮＨ（ＣＯ）−ＣＨ_２−）_２を表す。

抗体Ｆｃ成分（Ｆｃ’）
上述のように、本発明のインスリン−Ｆｃコンジュゲートは、上述のリンカーを介してインスリンと共有結合した二つのモノマーＦｃポリペプチドとして記述できる。

本発明によると、Ｆｃポリペプチドのヒンジ領域が一つのみの（ネイティブ）システイン（Ｃ）残基を含むように、Ｆｃ成分を修飾（すなわち、切断）する。第一のＦｃモノマーのこのシステインは、例えば、以下の化学式５に示されるように、元の（ホモダイマー）Ｆｃポリペプチドの第二のモノマー上に位置する同様のシステイン残基とのジスルフィド結合を形成する能力を有する。

本発明のＦｃ’ポリペプチドへの連結は、上述のように、Ｆｃポリペプチド内のシステイン残基に由来する硫黄原子（−Ｓ−）を介して発生する。

Ｆｃポリペプチドのヒンジ領域は、ネイティブアミノ酸残基のみを含みうる。一実施形態では、ＦｃポリペプチドはＮ末端においてメチオニンを含まない。別の実施形態では、Ｆｃヒンジのヒンジ配列は、ＩｇＧ１ヒンジ配列ＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰ（配列番号４）に由来する。第三の実施形態では、ヒンジ配列は、ＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰ（配列番号４）、ＡＧＰＣＰ（配列番号６８）、ＡＳＰＣ（配列番号６９）、ＰＰＣＰ（配列番号７０）、ＰＣＰ、及びＣＰからなる群から選択される。

ＩｇＧ１の定常領域は、ネイティブ残基Ｐ２２８（上記で太字にし下線を施し、ＥＵインデックスによって番号付けした）において、セリン残基（Ｐ２２８Ｓ）に置換することによって修飾されうる。

Ｆｃヒンジのヒンジ配列はまた、ＩｇＧ４ヒンジ配列ＳＫＹＧＰＰＣＰＳＣＰ（配列番号６）に由来しうる。一実施形態では、ヒンジ配列は、ＳＫＹＧＰＰＣＰＳＣＰ、ＡＧＳＣＰ（配列番号７３）、ＡＧＰＣＰ（配列番号６８）、ＰＳＣＰ（配列番号７４）、ＳＣＰ、およびＣＰからなる群から選択される。

定常領域は、分子を安定化するように修飾されてもよい。ｌｇＧ４ヒンジ領域では、ネイティブ残基Ｓ２２８（上記で太字にし下線を施し、ＥＵインデックスによって番号付けした）は、プロリン残基（Ｓ２２８Ｐ）で置換されてもよい。一実施形態では、Ｆｃポリペプチドは、Ｓ２２８位に、またはＩｇＧ１由来ヒンジ配列におけるＰ２２８に相当する位置に、プロリン残基を含む。

Ｆｃポリペプチドはそれぞれ、ネイティブ配列のＮ末端伸長を有することができ、当該伸長は、Ａ、ＧおよびＳの群から選択される一つまたは複数のアミノ酸を含む。本発明の一実施形態では、この伸長は、セリン（Ｓ）残基で開始されるものではない。別の実施形態では、ＩｇＧ１のヒンジ配列はＡＳＰＣＰ（配列番号７１）、ＡＧＰＣＰ（配列番号６８）またはＡＳＣＰ（配列番号７２）である。さらなる実施形態では、ＩｇＧ４のヒンジ配列は、ＡＳＣＰ（配列番号７２）、ＡＧＳＣＰ（配列番号７３）、ＡＧＰＣＰ（配列番号６８）、またはＧＡＳＣＰ（配列番号７５）である。

Ｆｃポリペプチドはそれぞれ、ネイティブ配列のＣ末端欠失を有してもよい。本明細書では、ｄｅｓ４４７などの語は、Ｆｃ類似体が、４４７位で（ネイティブ）Ｃ末端アミノ酸残基を欠いていることを示す。

したがって、ＦｃドメインのＦｃポリペプチドは、ジスルフィド架橋によって共有結合されてもよく、または別の方法として、非共有結合していてもよい。

Ｆｃ領域はまた、Ｆｃ領域内に修飾を含むように、典型的には、血清半減期、補体結合、Ｆｃ受容体結合、タンパク質の安定性、および／または抗原依存性細胞障害活性、またはそれらの欠如などであるその機能特性の一つまたは複数が変わるように操作されてもよい。さらに、Ｆｃ領域は、そのグリコシル化を変更するように、さらに抗体の機能特性の一つまたは複数を変えるように、化学的に修飾されてもよい（例えば、一つまたは複数の化学的部分をＦｃ部分に付加できる）。

本発明により使用するＩｇＧ１由来Ｆｃドメインは、以下のアミノ酸置換のうちの一つ以上を含んでもよく、それは特定のＦｃ受容体に対する親和性の減少をもたらすこととなり：Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ｅまたは２３５Ａまたは２３５Ｋ、およびＧ２３７Ａ、ならびに／または以下のＣ１ｑ介在性補体結合の減少をもたらす：それぞれ、Ａ３３０ＳおよびＰ３３１Ｓ。

本発明により使用するＩｇＧ２由来Ｆｃドメインは、以下のアミノ酸置換のうちの一つまたは複数、あるいは全てを含んでもよく、それは特定のＦｃ受容体に対する親和性の減少をもたらすこととなり：Ｖ２３４Ａ、Ａ２３５ＫおよびＰ２３７Ａ、ならびに／または以下のＣ１ｑ介在性補体結合の減少をもたらす：それぞれ、Ａ３３０ＳおよびＰ３３１Ｓ。

本発明により使用するＩｇＧ４由来Ｆｃドメインは、以下のアミノ酸置換のうちの一つまたは複数、あるいは全てを含んでもよく、それは特定のＦｃ受容体に対する親和性の減少をもたらすこととなる：Ｐ２２７Ａ、Ｆ２３４Ａ、およびＬ２３５ＡまたはＬ２３５Ｋ。

ＦｃＲｎへの結合親和性を改善するために、Ｆｃ内の置換を、ＩｇＧ１またはＩｇＧ４アイソタイプのＦｃドメインにおけるＭ４２８Ｌおよび／またはＮ４３４Ｓなどのアミノ酸置換を得るために含めることができる。本発明の別の実施形態では、改善されたＦｃＲｎ結合親和性は、ＩｇＧ１またはＩｇＧ４のＦｃドメインにおけるＭ２５２Ｙおよび／またはＳ２５４Ｔおよび／またはＴ２５６Ｅなどのアミノ酸置換を含むことにより得られうる。

Ｆｃドメインの化学的安定性を改善するために、アミド分解が発生しやすいアスパラギンを、グルタミン、アスパラギン酸またはグルタミン酸で置換してもよい。ＩｇＧ１およびＩｇＧ４両方における、かかるアスパラギンは、例えば、Ｎ２９７、Ｎ３１５およびＮ３８４である。一実施形態では、本発明のＦｃはＮ３１５Ｑ置換およびＮ３８４Ｑ置換を含む。別の実施形態では、本発明のＦｃはＮ２９７Ｑ突然変異またはＮ２９７Ｅ突然変異を含む。

Ｆｃドメインの物理的安定性を改善するために、ＩｇＧ１またはＩｇＧ４由来のＦｃの２３５位をアルギニンまたはリジンで置換してもよい。一実施形態では、本発明のＦｃはＬ２３５ＫまたはＬ２３５Ｒを含む。別の実施形態では、本発明のＦｃはＬ２３５Ｋ突然変異を含む。

さらに、ＩｇＧのＣ末端リジンはヒト血液中で生体内で（ｉｎｖｉｖｏ）切断され、ヒト血液から単離された内因性ＩｇＧは、非常に低いレベルでＣ末端リジンを含有する。したがって、４４７位におけるＣ末端リシンは欠失していてもよく、例えば、Ｆｃ類似体はｄｅｓ４４７を含んでもよい。

一実施形態では、ＦｃはＩｇＧ由来Ｆｃまたはその断片を表し、また本発明のＦｃ’ポリペプチドは、かかるＩｇＧ由来ＦｃまたはＦｃ断片のモノマーを表す。

別の実施形態では、ＦｃはＩｇＧ１またはＩｇＧ４由来Ｆｃまたはその断片を表し、また本発明のＦｃ’ポリペプチドは、かかるＩｇＧ由来ＦｃまたはＦｃ断片のモノマーを表す。

第三の実施形態では、Ｆｃは、ジスルフィド架橋を一つのみ含有する短ヒンジを備えた、ＩｇＧ１またはＩｇＧ４由来Ｆｃまたはその断片を表し、また本発明のＦｃ’ポリペプチドは、かかるＩｇＧ由来Ｆｃの断片のモノマーを表す。

第四の実施形態では、Ｆｃ’モノマー分子またはその断片は、２２９位（２２９Ｃ）にあるＦｃのヒンジ領域における還元されたジスルフィド架橋に由来するシステイン残基を介してＹに連結する。

第五の実施形態では、Ｆｃ’は、２２８位から開始され４４７位で終了するヒトＩｇＧ１由来Ｆｃ配列の断片を表し、またＦｃ’は、かかるＩｇＧ由来Ｆｃ断片のモノマーを表す（すなわち、ｈＩｇＧ１−Ｆｃ（２２８−４４７）；配列番号１）。

この本発明により使用するｈＩｇＧ１−Ｆｃ（２２８−４４７）ポリペプチドは、２２６Ａ、２２７Ａまたは２２７Ｇまたは２２７Ｓ、２２８Ｓ、２３４Ａ、２３５Ｋ、２３５Ｅ、２３５Ａ、２３７Ａ、３３０Ｓ、３３１Ｓ、２９７Ｑ、２９７Ｅ、Ｎ３１５Ｑ、Ｎ３８４Ｑ、およびｄｅｓ４４７の群から選択される、一つまたは複数の伸長および／または置換および／または欠失を含有しうる。

一実施形態では、Ｆｃ’は、
２２６Ａ，２２７ＳｈＩｇＧ１−Ｆｃ（２２８−４４７）（Ｆｃ７）；
２２６Ａ，２２７Ｓ，２３４Ａ，２３５Ｅ，２３７Ａ，３３０Ｓ，３３１ＳｈＩｇＧ１−Ｆｃ（２２８−４４７）（Ｆｃ１３）；
２２６Ａ，２２７Ｓ，２３４Ａ，２３５Ｋ，２３７Ａ，３１５Ｑ，３３０Ｓ，３３１Ｓ，３８４ＱｈＩｇＧ１−Ｆｃ（２２８−４４７）（Ｆｃ１２）；
２２６Ａ，２２７Ｓ，２３４Ａ，２３５Ｋ，２３７Ａ，３３０Ｓ，３３１ＳｈＩｇＧ１−Ｆｃ（２２８−４４７）（Ｆｃ１１）；
２２６Ａ，２２７Ｓ，２３５Ｋ，２３７Ａ，３３０Ｓ，３３１ＳｈＩｇＧ１−Ｆｃ（２２８−４４７）（Ｆｃ１０）；または
２２７Ａ，２２８Ｓ，２３５Ｋ，３１５Ｑ，３８４ＱｈＩｇＧ１−Ｆｃ（２２８−４４７）（Ｆｃ４）を表す。

さらなる実施形態では、Ｆｃ’は、２２８位から開始され４４７位で終了するヒトＩｇＧ４由来Ｆｃ配列の断片を表し、Ｆｃ’は、かかるＩｇＧ４由来Ｆｃ断片のモノマーを表す（すなわち、ｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７）；配列番号３）。

一実施形態では、Ｆｃ’は、２２８位から開始され４４７位で終了するｈＩｇＧ４由来Ｆｃ配列の断片を表し、この配列は、２２６Ａまたは２２６Ｇ、２２７Ａまたは２２７Ｇ、２２８Ｐ、２３４Ａ、２３５Ａ、２３５Ｋ、Ｎ２９７Ｑ、Ｎ２９７Ｅ、３１５Ｑ、３８４Ｑおよびｄｅｓ４４７の群から選択される一つ以上の伸長および／または置換を含みうる。

別の実施形態では、Ｆｃ’は、
２２６Ｇ，２２７ＡｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７）（Ｆｃ３）；
２２７ＡｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７）（Ｆｃ１）；
２２７Ａ，２３４Ａ，２３５ＡｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７）（Ｆｃ６）；
２２７Ａ，２３４Ａ，２３５ＫｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７）（Ｆｃ９）；
２２７Ａ，２３４Ａ，２３５Ｋ，２９７Ｅ，３１５Ｑ，３８４Ｑ，ｄｅｓ４４７ｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７）（Ｆｃ１５）；
２２７Ａ，２３４Ａ，２３５Ｋ，２９７Ｅ，ｄｅｓ４４７ｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７）（Ｆｃ１６）；
２２７Ａ，２３４Ａ，２３５Ｋ，２９７ＱｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７）（Ｆｃ１４）；
２２７Ａ，２３５ＫｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７）（Ｆｃ８）；
２２７Ａ，２３５Ｋ，３１５Ｑ，３８４ＱｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７）（Ｆｃ５）；または
２２７Ａ，３１５Ｑ，３８４ＱｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７）（Ｆｃ２）を表す。

第三の実施形態では、Ｆｃ’は、
２２６Ａ，２２７Ｇ，２２８Ｐ，２３４Ａ，２３５Ｋ，ｄｅｓ４４７ｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７）（Ｆｃ１７）；
２２６Ａ，２２７Ｇ，２３４Ａ，２３５Ｋ，ｄｅｓ４４７ｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７）；
２２６Ｇ，２２７ＡｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７）（Ｆｃ３）；
２２７ＡｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７）（Ｆｃ１）；
２２７Ａ，２３４Ａ，２３５ＡｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７）（Ｆｃ６）；
２２７Ａ，２３４Ａ，２３５ＫｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７）（Ｆｃ９）；
２２７Ａ，２３４Ａ，２３５Ｋ，２９７Ｅ，３１５Ｑ，３８４Ｑ，ｄｅｓ４４７ｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７）（Ｆｃ１５）；
２２７Ａ，２３４Ａ，２３５Ｋ，２９７Ｅ，ｄｅｓ４４７ｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７）（Ｆｃ１６）；
２２７Ａ，２３４Ａ，２３５Ｋ，２９７ＱｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７）（Ｆｃ１４）；
２２７Ａ，２３５ＫｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７）（Ｆｃ８）；
２２７Ａ，２３５Ｋ，３１５Ｑ，３８４ＱｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７）（Ｆｃ５）；または
２２７Ａ，３１５Ｑ，３８４ＱｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７）（Ｆｃ２）を表す。

第四の実施形態では、Ｆｃ’は、
２２７Ａ，２３４Ａ，２３５ＡｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７）（Ｆｃ６）；または
２２７Ａ，２３４Ａ，２３５Ｋ，２９７Ｅ，３１５Ｑ，３８４Ｑ，ｄｅｓ４４７ｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７）（Ｆｃ１５）を表す。

第五の実施形態では、Ｆｃ’は、
２２７Ａ，２３４Ａ，２３５ＫｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７）（Ｆｃ９）；
２２６Ａ，２２７Ｇ，２２８Ｐ，２３４Ａ，２３５Ｋ，ｄｅｓ４４７ｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７）（Ｆｃ１７）；または
２２７Ａ，２３４Ａ，２３５Ｋ，２９７Ｅ，３１５Ｑ，３８４Ｑ，ｄｅｓ４４７ｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７）（Ｆｃ１５）を表す。

本発明のインスリン−Ｆｃコンジュゲート
さらなる実施形態では、本発明のインスリン−Ｆｃコンジュゲートは、以下から選択される：
（Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＥＰ）１９，Ａ９８Ｋ＾，Ａ９９Ｐ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン）／（２２７Ａ，２３４Ａ，２３５ＫｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７））４−［ビス［２−［（２−アセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイルコンジュゲート；
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＥＰ）１９，Ａ９８Ｋ＾Ａ９９Ｐ，Ｂ３Ｑ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン／（２２７Ａ，２３４Ａ，２３５Ｋ，２９７Ｅ，３１５Ｑ，３８４Ｑ，ｄｅｓ４４７ｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７））４−［ビス［２−［（２−アセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイルコンジュゲート；
Ａ１４Ｅ，Ｂ（−７８Ｋ＾）Ｂ（−７７Ｐ），Ｂ（−１）（ＧＱＡＰＧＱＡＰＧＱＥＰ）６−ＧＱＡＰ，Ｂ３Ｑ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン／（２２７Ａ，２３４Ａ，２３５ＫｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７））４−［ビス［２−［（２−ヨードアセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイルコンジュゲート；
Ａ１４Ｅ，Ｂ（−７６Ｋ＾），Ｂ（−７５Ｐ），Ｂ（−１）（ＧＱＥＰ）１９，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン／（２２７Ａ，２３４Ａ，２３５ＫｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２７−４４７））４−［ビス［２−［（２−アセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイルコンジュゲート；
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰＧＱＡＰＧＱＥＰ）６−ＧＱＡＰ，Ａ９８Ｋ＾，Ａ９９Ｐ，Ｂ３Ｑ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン／（２２７Ａ，２３４Ａ，２３５ＫｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７））４−［ビス［２−［（２−アセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイルコンジュゲート；
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＥＰ）１９，Ａ９８Ｋ＾Ａ９９Ｐ，Ｂ３Ｑ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン／（２２７Ａ，２３４Ａ，２３５ＫｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７））４−［ビス［２−［（２−アセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイルコンジュゲート；
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＥＰ）６，Ａ４６Ｋ＾，Ａ４７Ｐ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン／（２２７Ａ，２３４Ａ，２３５ＫｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７））４−［ビス［２−［（２−アセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイルコンジュゲート；
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＥＰ）１２，Ａ７０Ｋ＾，Ａ７１Ｐ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン／（２２７Ａ，２３４Ａ，２３５ＫｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７））４−［ビス［２−［（２−アセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイルコンジュゲート；
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰＧＱＥＰ）６，Ａ７０Ｋ＾，Ａ７１Ｐ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン／（２２７Ａ，２３４Ａ，２３５ＫｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２７−４４７））４−［ビス［２−［（２−アセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイルコンジュゲート；
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＥＰ）３，Ａ３４Ｇ，Ａ３５Ｑ，Ａ３６Ｅ，Ａ３７Ｋ＾，Ａ３８Ｐ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン／（２２７Ａ，２３４Ａ，２３５ＫｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２７−４４７））４−［ビス［２−［（２−アセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイルコンジュゲート；
Ａ１４Ｅ，Ｂ（−７６Ｋ＾），Ｂ（−７５Ｐ），Ｂ（−１）（ＧＱＥＰ）１９，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン／（２２７Ａ，２３４Ａ，２３５Ｋ，２９７Ｅ，３１５Ｑ，３８４Ｑ，ｄｅｓ４４７ｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２７−４４７））４−［ビス［２−［（２−アセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイルコンジュゲート；
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＥＰ）１９，Ａ９８Ｋ＾，Ａ９９Ｐ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン）／（２２７Ａ，２３４Ａ，２３５Ｋ，２９７Ｅ，３１５Ｑ，３８４Ｑ，ｄｅｓ４４７ｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７））４−［ビス［２−［（２−アセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイルコンジュゲート；
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰＧＱＡＰＧＱＥＰ）６−ＧＱＡＰ，Ａ９８Ｋ＾，Ａ９９Ｐ，Ｂ３Ｑ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン／（２２７Ａ，２３４Ａ，２３５Ｋ，２９７Ｅ，３１５Ｑ，３８４Ｑ，ｄｅｓ４４７ｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７））４−［ビス［２−［（２−アセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイルコンジュゲート；
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰＧＱＥＰ）６，Ａ７０Ｋ＾，Ａ７１Ｐ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン／（２２７Ａ，２３４Ａ，２３５Ｋ，２９７Ｅ，３１５Ｑ，３８４Ｑ，ｄｅｓ４４７ｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７））４−［ビス［２−［（２−アセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイルコンジュゲート；
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰ）１９，Ａ９８ＫＡ９９Ｐ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン）／（２２７Ａ，２３４Ａ，２３５Ｋ，２９７Ｅ，３１５Ｑ，３８４Ｑ，ｄｅｓ４４７ｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７））４−［ビス［２−［（２−アセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイルコンジュゲート；
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰ）１９，Ａ９８Ｋ＾，Ａ９９Ｐ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン）／（２２７Ａ，２３４Ａ，２３５Ｋ，２９７Ｅ，３１５Ｑ，３８４Ｑ，ｄｅｓ４４７ｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２７−４４７））４−［ビス［２−［（２−アセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ヘキサノイルコンジュゲート；
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＥＰ）１２，Ａ７０Ｋ＾，Ａ７１Ｐ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン／（２２７Ａ，２３４Ａ，２３５Ｋ，２９７Ｅ，３１５Ｑ，３８４Ｑ，ｄｅｓ４４７ｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２７−４４７））４−［ビス［２−［（２−アセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイルコンジュゲート；
Ａ１４Ｅ，Ｂ（−７６Ｋ＾），Ｂ（−７５Ｐ），Ｂ（−１）（ＧＱＡＰ）１９，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン／（２２７Ａ，２３４Ａ，２３５Ｋ，２９７Ｅ，３１５Ｑ，３８４Ｑ，ｄｅｓ４４７ｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２７−４４７））４−［ビス［２−［（２−アセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイルコンジュゲート；
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰＧＱＡＰＧＱＥＰ）６−ＧＱＡＰ，Ａ９８Ｋ＾，Ａ９９Ｐ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン／（２２７Ａ，２３４Ａ，２３５Ｋ，２９７Ｅ，３１５Ｑ，３８４Ｑ，ｄｅｓ４４７ｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２７−４４７））４−［ビス［２−［（２−アセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイルコンジュゲート；
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰＧＱＡＰＧＱＡＰＧＱＥＰ）６−ＧＱＡＰ，Ａ１２２Ｋ＾，Ａ１２３Ｐ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン／（２２７Ａ，２３４Ａ，２３５Ｋ，２９７Ｅ，３１５Ｑ，３８４Ｑ，ｄｅｓ４４７ｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２７−４４７））４−［ビス［２−［（２−アセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイルコンジュゲート；
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（Ｇ）１７，Ａ４０Ｋ＾，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン／（２２７Ａ，２３４Ａ，２３５ＫｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７））４−［ビス［２−［（２−アセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイルコンジュゲート；
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰ）２４，Ａ１１８Ｇ，Ａ１１９Ｑ，Ａ１２０Ａ，Ａ１２１Ｋ＾，Ａ１２２Ｐ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン／（２２７Ａ，２３４Ａ，２３５Ｋ，２９７Ｅ，３１５Ｑ，３８４Ｑ，ｄｅｓ４４７ｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２７−４４７））３，５−［ビス［（２−アセチル）アミノ］ベンゾイルコンジュゲート；
（Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰ）２４，Ａ１１８Ｇ，Ａ１１９Ｑ，Ａ１２０Ａ，Ａ１２１Ｋ＾，Ａ１２２Ｐ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン）／（２２７Ａ，２３４Ａ，２３５Ｋ，２９７Ｅ，３１５Ｑ，３８４Ｑ，ｄｅｓ４４７ｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２７−４４７））４−［ビス［２−［（２−アセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイルコンジュゲート；
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰＧＱＡＰＧＱＥＰ）６−ＧＱＡＰ，Ａ９８Ｋ＾，Ａ９９Ｐ，Ｂ３Ｑ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン／（２２７Ａ，２３４Ａ，２３５Ｋ，２９７Ｅ，３１５Ｑ，３８４Ｑ，ｄｅｓ４４７ｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２７−４４７））４−［ビス［２−［（２−アセチル）アミノ］エチル］カルバモイルアミノ］−ブタノイルコンジュゲート；および
（Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰ）１８，Ａ９４Ｇ，Ａ９５Ｑ，Ａ９６Ａ，Ａ９７Ｋ＾，Ａ９８Ｐ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン）／（２２７Ａ，２３４Ａ，２３５Ｋ，２９７Ｅ，３１５Ｑ，３８４Ｑ，ｄｅｓ４４７ｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２７−４４７））４−［ビス［２−［（２−アセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイルコンジュゲート。

さらなる実施形態では、本発明のインスリン−Ｆｃコンジュゲートは、以下から選択される：
（Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＥＰ）_１９，Ａ９８Ｋ＾，Ａ９９Ｐ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン）／（２２７Ａ，２３４Ａ，２３５ＫｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７））４−［ビス［２−［（２−アセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイルコンジュゲート；
（Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＥＰ）_１９，Ａ９８Ｋ＾，Ａ９９Ｐ，Ｂ３Ｑ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン）／（２２７Ａ，２３４Ａ，２３５Ｋ，２９７Ｅ，３１５Ｑ，３８４Ｑ，ｄｅｓ４４７ｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７））４−［ビス［２−［（２−アセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイルコンジュゲート；
（Ａ１４Ｅ，Ｂ（−７８Ｋ＾）Ｂ（−７７Ｐ），Ｂ（−１）（ＧＱＡＰＧＱＡＰＧＱＥＰ）_６−ＧＱＡＰ，Ｂ３Ｑ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン）／（２２７Ａ，２３４Ａ，２３５ＫｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７））４−［ビス［２−［（２−ヨードアセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイルコンジュゲート；
（Ａ１４Ｅ，Ｂ（−７６Ｋ＾），Ｂ（−７５Ｐ），Ｂ（−１）（ＧＱＥＰ）_１９，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン）／（２２７Ａ，２３４Ａ，２３５ＫｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７））４−［ビス［２−［（２−アセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイルコンジュゲート；
（Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰＧＱＡＰＧＱＥＰ）_６−ＧＱＡＰ，Ａ９８Ｋ＾，Ａ９９Ｐ，Ｂ３Ｑ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン）／（２２７Ａ，２３４Ａ，２３５ＫｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７））４−［ビス［２−［（２−アセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイルコンジュゲート；
（Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＥＰ）_１９，Ａ９８Ｋ＾Ａ９９Ｐ，Ｂ３Ｑ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン）／（２２７Ａ，２３４Ａ，２３５ＫｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７））４−［ビス［２−［（２−アセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイルコンジュゲート；
（Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＥＰ）_６，Ａ４６Ｋ＾，Ａ４７Ｐ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン）／（２２７Ａ，２３４Ａ，２３５ＫｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７））４−［ビス［２−［（２−アセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイルコンジュゲート；
（Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＥＰ）_１２，Ａ７０Ｋ＾，Ａ７１Ｐ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン）／（２２７Ａ，２３４Ａ，２３５ＫｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７））４−［ビス［２−［（２−アセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイルコンジュゲート；
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰＧＱＥＰ）_６，Ａ７０Ｋ＾，Ａ７１Ｐ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン／（２２７Ａ，２３４Ａ，２３５ＫｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７））４−［ビス［２−［（２−アセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイルコンジュゲート；
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＥＰ）_３，Ａ３４Ｇ，Ａ３５Ｑ，Ａ３６Ｅ，Ａ３７Ｋ＾，Ａ３８Ｐ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン／（２２７Ａ，２３４Ａ，２３５ＫｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７））４−［ビス［２−［（２−アセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイルコンジュゲート；
Ａ１４Ｅ，Ｂ（−７６Ｋ＾），Ｂ（−７５Ｐ），Ｂ（−１）（ＧＱＥＰ）_１９，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン／（２２７Ａ，２３４Ａ，２３５Ｋ，２９７Ｅ，３１５Ｑ，３８４Ｑ，ｄｅｓ４４７ｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７））４−［ビス［２−［（２−アセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイルコンジュゲート；
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＥＰ）_１９，Ａ９８Ｋ＾，Ａ９９Ｐ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン）／（２２７Ａ，２３４Ａ，２３５Ｋ，２９７Ｅ，３１５Ｑ，３８４Ｑ，ｄｅｓ４４７ｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７））４−［ビス［２−［（２−アセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイルコンジュゲート；
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰＧＱＡＰＧＱＥＰ）_６−ＧＱＡＰ，Ａ９８Ｋ＾，Ａ９９Ｐ，Ｂ３Ｑ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン／（２２７Ａ，２３４Ａ，２３５Ｋ，２９７Ｅ，３１５Ｑ，３８４Ｑ，ｄｅｓ４４７ｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７））４−［ビス［２−［（２−アセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイルコンジュゲート；
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰＧＱＥＰ）_６，Ａ７０Ｋ＾，Ａ７１Ｐ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン／（２２７Ａ，２３４Ａ，２３５Ｋ，２９７Ｅ，３１５Ｑ，３８４Ｑ，ｄｅｓ４４７ｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７））４−［ビス［２−［（２−アセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイルコンジュゲート；
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰ）_１９，Ａ９８ＫＡ９９Ｐ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン）／（２２７Ａ，２３４Ａ，２３５Ｋ，２９７Ｅ，３１５Ｑ，３８４Ｑ，ｄｅｓ４４７ｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７））４−［ビス［２−［（２−アセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイルコンジュゲート；
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰ）_１９，Ａ９８Ｋ＾，Ａ９９Ｐ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン）／（２２７Ａ，２３４Ａ，２３５Ｋ，２９７Ｅ，３１５Ｑ，３８４Ｑ，ｄｅｓ４４７ｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７））４−［ビス［２−［（２−アセチル）アミノ］エチル］アミノ］−６−オキソ−ヘキサノイルコンジュゲート；
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＥＰ）_１２，Ａ７０Ｋ＾，Ａ７１Ｐ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン／（２２７Ａ，２３４Ａ，２３５Ｋ，２９７Ｅ，３１５Ｑ，３８４Ｑ，ｄｅｓ４４７ｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７））４−［ビス［２−［（２−アセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイルコンジュゲート；
Ａ１４Ｅ，Ｂ（−７６Ｋ＾），Ｂ（−７５Ｐ），Ｂ（−１）（ＧＱＡＰ）_１９，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン／（２２７Ａ，２３４Ａ，２３５Ｋ，２９７Ｅ，３１５Ｑ，３８４Ｑ，ｄｅｓ４４７ｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７））４−［ビス［２−［（２−アセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイルコンジュゲート；
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰＧＱＡＰＧＱＥＰ）_６−ＧＱＡＰ，Ａ９８Ｋ＾，Ａ９９Ｐ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン／（２２７Ａ，２３４Ａ，２３５Ｋ，２９７Ｅ，３１５Ｑ，３８４Ｑ，ｄｅｓ４４７ｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７））４−［ビス［２−［（２−アセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイルコンジュゲート；
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰＧＱＡＰＧＱＡＰＧＱＥＰ）_６−ＧＱＡＰ，Ａ１２２Ｋ＾，Ａ１２３Ｐ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン／（２２７Ａ，２３４Ａ，２３５Ｋ，２９７Ｅ，３１５Ｑ，３８４Ｑ，ｄｅｓ４４７ｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７））４−［ビス［２−［（２−アセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイルコンジュゲート；
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（Ｇ）_１８，Ａ４０Ｋ＾，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン／（２２７Ａ，２３４Ａ，２３５ＫｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７））４−［ビス［２−［（２−アセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイルコンジュゲート；
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰ）_２４，Ａ１１８Ｇ，Ａ１１９Ｑ，Ａ１２０Ａ，Ａ１２１Ｋ＾，Ａ１２２Ｐ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン／（２２７Ａ，２３４Ａ，２３５Ｋ，２９７Ｅ，３１５Ｑ，３８４Ｑ，ｄｅｓ４４７ｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７））３，５−［ビス［（２−アセチル）アミノ］ベンゾイルコンジュゲート；
（Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰ）_２４，Ａ１１８Ｇ，Ａ１１９Ｑ，Ａ１２０Ａ，Ａ１２１Ｋ＾，Ａ１２２Ｐ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン）／（２２７Ａ，２３４Ａ，２３５Ｋ，２９７Ｅ，３１５Ｑ，３８４Ｑ，ｄｅｓ４４７ｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７））４−［ビス［２−［（２−アセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイルコンジュゲート；
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰＧＱＡＰＧＱＥＰ）_６−ＧＱＡＰ，Ａ９８Ｋ＾，Ａ９９Ｐ，Ｂ３Ｑ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン／（２２７Ａ，２３４Ａ，２３５Ｋ，２９７Ｅ，３１５Ｑ，３８４Ｑ，ｄｅｓ４４７ｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７））４−［ビス［２−［（２−アセチル）アミノ］エチル］カルバモイルアミノ］−ブタノイルコンジュゲート；
（Ａ１４Ａ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰ）_１８，Ａ９４Ｇ，Ａ９５Ｑ，Ａ９６Ａ，Ａ９７Ｋ＾，Ａ９８Ｐ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン）／（２２７Ａ，２３４Ａ，２３５Ｋ，２９７Ｅ，３１５Ｑ，３８４Ｑ，ｄｅｓ４４７ｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７））４−［ビス［２−［（２−アセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイルコンジュゲート；
（Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰ）_１８，Ａ９４Ｇ，Ａ９５Ｑ，Ａ９６Ａ，Ａ９７Ｋ＾，Ａ９８Ｐ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン）／（２２７Ａ，２３４Ａ，２３５Ｋ，２９７Ｅ，３１５Ｑ，３８４Ｑ，ｄｅｓ４４７ｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７））４−［ビス［２−［（２−アセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイルコンジュゲート；
（Ａ１（Ｎ（アルファ）アセチル），Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰ）_１９，Ａ９８Ｋ＾，Ａ９９Ｐ，Ｂ１（Ｎ（アルファ）アセチル），Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン）／（２２７Ａ，２３４Ａ，２３５Ｋ，２９７Ｅ，３１５Ｑ，３８４Ｑ，ｄｅｓ４４７ｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７））４−［ビス［２−［（２−アセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイルコンジュゲート；
（Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰ）_１８，Ａ９４Ｇ，Ａ９５Ｑ，Ａ９６Ａ，Ａ９７Ｋ＾，Ａ９８Ｐ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン）／（２２７Ａ，２３４Ａ，２３５Ｋ，２９７Ｅ，３１５Ｑ，３８４Ｑ，ｄｅｓ４４７ｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７））４−［ビス［２−［（２−アセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイルコンジュゲート；
（Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰ）_２４，Ａ１１８Ｇ，Ａ１１９Ｑ，Ａ１２０Ａ，Ａ１２１Ｋ＾，Ａ１２２Ｐ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン）／（２２７Ａ，２３４Ａ，２３５Ｋ，２９７Ｅ，３１５Ｑ，３８４Ｑ，ｄｅｓ４４７ｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７））３，５−［ビス［（２−アセチル）アミノ］ベンゾイルコンジュゲート；
（Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰ）_１８，Ａ９４Ｇ，Ａ９５Ｑ，Ａ９６Ａ，Ａ９７Ｋ＾，Ａ９８Ｐ，Ｂ１６Ｅ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン）／（２２７Ａ，２３４Ａ，２３５Ｋ，２９７Ｅ，３１５Ｑ，３８４Ｑ，ｄｅｓ４４７ｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７））３，５−［ビス［（２−アセチル）アミノ］ベンゾイルコンジュゲート；
（Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰ）_１８，Ａ９４Ｇ，Ａ９５Ｑ，Ａ９６Ａ，Ａ９７Ｋ＾，Ａ９８Ｐ，Ｂ１６Ｅ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン）／（２２７Ａ，２３４Ａ，２３５Ｋ，２９７Ｅ，３１５Ｑ，３８４Ｑ，ｄｅｓ４４７ｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７））４−［ビス［２−［（２−アセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイルコンジュゲート；
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＥＰ）_６，Ａ４６Ｋ，Ａ４７Ｐ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン／（２２７Ａ，２３４Ａ，２３５Ｋ，２９７Ｅ，３１５Ｑ，３８４Ｑ，ｄｅｓ４４７ｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７））４−［ビス［２−［（２−アセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイルコンジュゲート；および
（Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＥＰ）_１９，９８Ｋ＾，Ａ９９Ｐ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン）／（２２６Ａ，２２７Ｇ，２２８Ｐ，２３４Ａ，２３５Ｋ，ｄｅｓ４４７ＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７））３，５−［ビス［（２−アセチル）アミノ］ベンゾイルコンジュゲート。

中間生成物
［ＯＥＦ−Ｉｎｓ］構築物
さらなる態様において、本発明は、本発明のインスリン−Ｆｃコンジュゲートの製造に使用する中間体化合物を提供する。

この［ＯＥＦ−Ｉｎｓ］構築物は、例えば、国際公開第２０１６／１９３３８０号に記載されているように、当技術分野で公知の方法によって得られうる。

一実施形態では、本発明により使用する中間体化合物は、以下の一般式ＩＩの構築物である：
［ＯＥＦ−Ｉｎｓ］
式中、
ＯＥＦは、インスリンＡ鎖のＣ末端に融合されたまたはインスリンＢ鎖のＮ末端に融合された、極性を有する組換え伸長を表し、当該伸長は、リジン（Ｋ）残基と組み合わせた、Ａｌａ（Ａ）、Ａｓｐ（Ｄ）、Ｇｌｕ（Ｅ）、Ｇｌｙ（Ｇ）、Ｐｒｏ（Ｐ）、Ｇｌｎ（Ｑ）、Ｓｅｒ（Ｓ）、およびＴｈｒ（Ｔ）のアミノ酸残基のうちの一つまたは複数を含み；かつ、
Ｉｎｓは、ヒトインスリンの類似体を表し、当該インスリン類似体は、Ａ鎖およびＢ鎖を含む二鎖インスリン分子である。

さらなる実施形態では、本発明により使用する一般式ＩＩの中間体化合物は、以下の例から選択される。

Ａ鎖伸長を伴うインスリン類似体
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＥＰ）_１９，Ａ９８Ｋ，Ａ９９Ｐ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（ＯＥＦ−Ｉｎｓ−１）；
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰＧＱＡＰＧＱＥＰ）_６，Ａ９４Ｇ，Ａ９５Ｑ，Ａ９６Ａ，Ａ９７Ｐ，Ａ９８Ｋ，Ａ９９Ｐ，Ｂ３Ｑ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（ＯＥＦ−Ｉｎｓ−３）；
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＥＰ）_１９，Ａ９８Ｋ，Ａ９９Ｐ，Ｂ３Ｑ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（ＯＥＦ−Ｉｎｓ−５）；
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＥＰ）_１２，Ａ７０Ｋ，Ａ７１Ｐ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（ＯＥＦ−Ｉｎｓ−６）；
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＥＰ）_６，Ａ４６Ｋ，Ａ４７Ｐ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（ＯＥＦ−Ｉｎｓ−７）；
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＥＰ）_３−ＧＱＥ−ＫＰ，Ａ３８Ｋ，Ａ３９Ｐ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン；
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰＧＱＥＰ）_６，Ａ７０Ｋ，Ａ７１Ｐ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（ＯＥＦ−Ｉｎｓ−９）；
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰ）_１９，Ａ９８Ｋ，Ａ９９Ｐ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（ＯＥＦ−Ｉｎｓ−１３）；
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰＧＱＡＰＧＱＥＰ）_６，Ａ９４Ｇ，Ａ９５Ｑ，Ａ９６Ａ，Ａ９７Ｐ，Ａ９８Ｋ，Ａ９９Ｐ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（ＯＥＦ−Ｉｎｓ−１４）；
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰＧＱＡＰＧＱＡＰＧＱＥＰ）_６，Ａ１１８Ｇ，Ａ１１９Ｑ，Ａ１２０Ａ，Ａ１２１Ｐ，Ａ１２２Ｋ，Ａ１２３Ｐ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン；
Ａ１４Ａ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰ）_１８−ＧＱＡＫＰ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０（ＯＥＦ−Ｉｎｓ−１６）；
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰ）_１８−ＧＱＡＫＰ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０（ＯＥＦ−Ｉｎｓ−１７）；
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰ）_１８−ＧＱＡＫＰ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０（ＯＥＦ−Ｉｎｓ−１８）；
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（Ｇ）_１７，Ａ４０Ｋ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン；および
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰ）_２４−ＧＱＡＫＰ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（ＯＥＦ−Ｉｎｓ−２０）。

Ａ鎖伸長を伴うインスリン類似体
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＥＰ）_１９，Ａ９８Ｋ，Ａ９９Ｐ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（ＯＥＦ−Ｉｎｓ−１）；
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰＧＱＡＰＧＱＥＰ）_６，Ａ９４Ｇ，Ａ９５Ｑ，Ａ９６Ａ，Ａ９７Ｐ，Ａ９８Ｋ，Ａ９９Ｐ，Ｂ３Ｑ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（ＯＥＦ−Ｉｎｓ−３）；
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＥＰ）_１９，Ａ９８Ｋ，Ａ９９Ｐ，Ｂ３Ｑ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（ＯＥＦ−Ｉｎｓ−５）；
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＥＰ）_１２，Ａ７０Ｋ，Ａ７１Ｐ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（ＯＥＦ−Ｉｎｓ−６）；
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＥＰ）_６，Ａ４６Ｋ，Ａ４７Ｐ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（ＯＥＦ−Ｉｎｓ−７）；
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＥＰ）_３−ＧＱＥ−ＫＰ，Ａ３８Ｋ，Ａ３９Ｐ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン；
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰＧＱＥＰ）_６，Ａ７０Ｋ，Ａ７１Ｐ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（ＯＥＦ−Ｉｎｓ−９）；
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰ）_１９，Ａ９８Ｋ，Ａ９９Ｐ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（ＯＥＦ−Ｉｎｓ−１３）；
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰＧＱＡＰＧＱＥＰ）_６，Ａ９４Ｇ，Ａ９５Ｑ，Ａ９６Ａ，Ａ９７Ｐ，Ａ９８Ｋ，Ａ９９Ｐ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（ＯＥＦ−Ｉｎｓ−１４）；
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰＧＱＡＰＧＱＡＰＧＱＥＰ）_６，Ａ１１８Ｇ，Ａ１１９Ｑ，Ａ１２０Ａ，Ａ１２１Ｐ，Ａ１２２Ｋ，Ａ１２３Ｐ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン；
Ａ１４Ａ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰ）_１８−ＧＱＡＫＰ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（ＯＥＦ−Ｉｎｓ−１６）；
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰ）_１８−ＧＱＡＫＰ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（ＯＥＦ−Ｉｎｓ−１７）；
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰ）_１８−ＧＱＡＫＰ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（ＯＥＦ−Ｉｎｓ−１８）；
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｑ，Ａ２２（Ｇ）_１８，Ａ４０Ｋ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（ＯＥＦ−Ｉｎｓ−１９）；
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰ）_２４−ＧＱＡＫＰ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（ＯＥＦ−Ｉｎｓ−２０）；
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰ）_２４，Ａ１１８Ｇ，Ａ１１９Ｑ，Ａ１２０Ａ，Ａ１２１Ｋ，Ａ１２２Ｐ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（ＯＥＦ−Ｉｎｓ−２１）；
Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰ）_１８，Ａ９４Ｇ，Ａ９５Ｑ，Ａ９６Ａ，Ａ９７Ｋ，Ａ９８Ｐ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（ＯＥＦ−Ｉｎｓ−２２）；
Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰ）_１８，Ａ９４Ｇ，Ａ９５Ｑ，Ａ９６Ａ，Ａ９７Ｋ，Ａ９８Ｐ，Ｂ１６Ｅ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（ＯＥＦ−Ｉｎｓ−２３）。

Ｂ鎖伸長を伴うインスリン類似体
Ａ１４Ｅ，Ｂ（−７８Ｋ），Ｂ（−７７Ｐ），Ｂ（−１）（ＧＱＡＰＧＱＡＰＧＱＥＰ）_６−ＧＱＡＰ，Ｂ３Ｑ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（ＯＥＦ−Ｉｎｓ−２）；
Ａ１４Ｅ，Ｂ（−７８Ｋ），Ｂ（−７７Ｐ），Ｂ（−１）（ＧＱＥＰ）_１９，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（ＯＥＦ−Ｉｎｓ−４）；
Ａ１４Ｅ，Ｂ（−２６Ｋ），Ｂ（−２５Ｐ），Ｂ（−１）（ＧＱＥＰ）６，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（ＯＥＦ−Ｉｎｓ−１０）；
Ａ１４Ｅ，Ｂ（−１８Ｋ），Ｂ（−１７Ｐ），Ｂ（−１）（ＧＱＥＰ）_４，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン；および、
Ａ１４Ｅ，Ｂ（−７８Ｋ），Ｂ（−７７Ｐ），Ｂ（−１）（ＧＱＡＰ）_１９，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（ＯＥＦ−Ｉｎｓ−１２）。

Ｆｃ断片
本発明のインスリン−Ｆｃコンジュゲートは、リンカーを介してインスリンと共有結合した二つのモノマーＦｃポリペプチドの使用を含む。

さらなる態様では、本発明は、本発明のインスリン−Ｆｃコンジュゲートの製造において中間体化合物として使用するＦｃ’ポリペプチドを提供する。

一実施形態では、この発明により使用するＦｃ’ポリペプチドは、２２６Ａ、２２７Ａまたは２２７Ｓ、２２８Ｓ、２３４Ａ、２３５Ａまたは２３５Ｅまたは２３５Ｋ、２３７Ａまたは２９７Ｑ、２９７Ｅ、Ｎ３１５Ｑ、３３０Ｓ、３３１Ｓ、Ｎ３８４Ｑおよびｄｅｓ４４７の群から選択される、一つまたは複数の伸長および／または置換および／または欠失を含有するｈＩｇＧ１−Ｆｃ（２２８−４４７）ポリペプチドである。

別の実施形態では、この発明により使用するＦｃ’ポリペプチドは、２２６Ａ、２２７Ａまたは２２７Ｇまたは２２７Ｓ、２２８Ｓ、２３４Ａ、２３５Ａまたは２３５Ｅまたは２３５Ｋ、２３７Ａまたは２９７Ｑ、２９７Ｅ、Ｎ３１５Ｑ、３３０Ｓ、３３１Ｓ、Ｎ３８４Ｑおよびｄｅｓ４４７の群から選択される、一つまたは複数の伸長および／または置換および／または欠失を含有するｈＩｇＧ１−Ｆｃ（２２８−４４７）ポリペプチドである。

別の実施形態では、Ｆｃ’は、
２２６Ａ，２２７ＳｈＩｇＧ１−Ｆｃ（２２８−４４７）（Ｆｃ７）；
２２６Ａ，２２７Ｓ，２３４Ａ，２３５Ｅ，２３７Ａ，３３０Ｓ，３３１ＳｈＩｇＧ１−Ｆｃ（２２８−４４７）（Ｆｃ１３）；
２２６Ａ，２２７Ｓ，２３４Ａ，２３５Ｋ，２３７Ａ，３１５Ｑ，３３０Ｓ，３３１Ｓ，３８４ＱｈＩｇＧ１−Ｆｃ（２２８−４４７）（Ｆｃ１２）；
２２６Ａ，２２７Ｓ，２３４Ａ，２３５Ｋ，２３７Ａ，３３０Ｓ，３３１ＳｈＩｇＧ１−Ｆｃ（２２８−４４７）（Ｆｃ１１）；
２２６Ａ，２２７Ｓ，２３５Ｋ，２３７Ａ，３３０Ｓ，３３１ＳｈＩｇＧ１−Ｆｃ（２２８−４４７）（Ｆｃ１０）；または、
２２７Ａ，２２８Ｓ，２３５Ｋ，３１５Ｑ，３８４ＱｈＩｇＧ１−Ｆｃ（２２８−４４７）（Ｆｃ４）を表す。

さらなる実施形態では、この発明により使用するＦｃ’ポリペプチドは、２２８位から開始され４４６位で終了するｈＩｇＧ２由来Ｆｃ配列の断片であり、当該配列は、２２７Ａ、Ｌ２３４Ａ、２３５Ｋ、および３７７Ａの群から選択される一つまたは複数の伸長および／または置換を含有する。

さらなる実施形態では、この発明により使用するＦｃ’ポリペプチドは、２２８位から開始され４４７位で終了するｈＩｇＧ４由来Ｆｃ配列の断片であり、当該配列は、２２６Ｇ、２２７Ａ、２３４Ａ、２３５Ａまたは２３５Ｋ、Ｎ２９７ＥまたはＮ２９７Ｑ、３１５Ｑ、３８４Ｑおよびｄｅｓ４４７の群から選択される一つまたは複数の伸長および／または置換を含有する。

さらなる実施形態では、この発明により使用するＦｃ’ポリペプチドは、２２８位から開始され４４７位で終了するｈＩｇＧ４由来Ｆｃ配列の断片であり、当該配列は、２２６Ａまたは２２６Ｇ、２２７Ａまたは２２７Ｇ、２２８Ｐ、２３４Ａ、２３５Ａまたは２３５Ｋ、Ｎ２９７ＥまたはＮ２９７Ｑ、３１５Ｑ、３８４Ｑおよびｄｅｓ４４７の群から選択される一つまたは複数の伸長および／または置換を含有する。

一実施形態では、Ｆｃ’は、
２２６Ｇ，２２７ＡｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７）（Ｆｃ３）；
２２７ＡｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７）（Ｆｃ１）；
２２７Ａ，２３４Ａ，２３５ＡｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７）（Ｆｃ６）；
２２７Ａ，２３４Ａ，２３５ＫｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７）（Ｆｃ９）；
２２７Ａ，２３４Ａ，２３５Ｋ，２９７Ｅ，３１５Ｑ，３８４Ｑ，ｄｅｓ４４７ｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７）（Ｆｃ１５）；
２２７Ａ，２３４Ａ，２３５Ｋ，２９７Ｅ，ｄｅｓ４４７ｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７）（Ｆｃ１６）；
２２７Ａ，２３４Ａ，２３５Ｋ，２９７ＱｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７）（Ｆｃ１４）；
２２７Ａ，２３５ＫｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７）（Ｆｃ８）；
２２７Ａ，２３５Ｋ，３１５Ｑ，３８４ＱｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７）（Ｆｃ５）；または
２２７Ａ，３１５Ｑ，３８４ＱｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７）（Ｆｃ２）を表す。

別の実施形態では、Ｆｃ’は、
２２６Ａ，２２７Ｇ，２２８Ｐ，２３４Ａ，２３５Ｋ，ｄｅｓ４４７ｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７）（Ｆｃ１７）；
２２６Ａ，２２７Ｇ，２３４Ａ，２３５Ｋ，ｄｅｓ４４７ｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７）；
２２６Ｇ，２２７ＡｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７）（Ｆｃ３）；
２２７ＡｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７）（Ｆｃ１）；
２２７Ａ，２３４Ａ，２３５ＡｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７）（Ｆｃ６）；
２２７Ａ，２３４Ａ，２３５ＫｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７）（Ｆｃ９）；
２２７Ａ，２３４Ａ，２３５Ｋ，２９７Ｅ，３１５Ｑ，３８４Ｑ，ｄｅｓ４４７ｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７）（Ｆｃ１５）；
２２７Ａ，２３４Ａ，２３５Ｋ，２９７Ｅ，ｄｅｓ４４７ｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７）（Ｆｃ１６）；
２２７Ａ，２３４Ａ，２３５Ｋ，２９７ＱｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７）（Ｆｃ１４）；
２２７Ａ，２３５ＫｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７）（Ｆｃ８）；
２２７Ａ，２３５Ｋ，３１５Ｑ，３８４ＱｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７）（Ｆｃ５）；または
２２７Ａ，３１５Ｑ，３８４ＱｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７）（Ｆｃ２）を表す。

結合基
別の態様において、本発明は、本発明のインスリン−Ｆｃコンジュゲートの製造に使用する中間体化合物を提供する。

より具体的には、三分岐リンカーであって、第一の末端が、一般式Ｉのインスリン成分（Ｉｎｓ）のリジン残基のイプシロンアミノ基と安定に共有結合を形成する能力があり、当該末端が、チオールによって、またはタンパク質内のその他の任意の残基による影響を受けないままであるような三分岐リンカーを提供する。

リンカーの第二および第三の末端は同一であり、一般式ＩのＦｃ’成分のチオール部分（すなわち、−ＳＨ）と安定に共有結合を形成する能力を有する（「Ｃｙｓ−反応性末端」と呼ぶ）。第一の結合事象が生じた後（すなわち、第一の末端のリジンとの結合）、Ｃｙｓ−反応性末端は、直接（例えば、ブロモアセトアミドもしくはヨードアセトアミド、Ｍｉｃｈａｅｌ受容体を用いて、反応することができ、または、第二のタンパク質のチオールに対して反応性をもたせることとなり（例えば、クロロアセトアミドからヨードアセトアミドに変える）、それによって連続する二段階の手法で一般式Ｉの所望のインスリン−Ｆｃコンジュゲートをもたらすような、化学的変換を受け入れ可能である。

それぞれがｓｐ２混成の炭素Ｃ原子、ＣＨ_２基およびハロゲン（Ｈｌｇ）原子を含む二つの反応性末端（（Ｃ＝Ｏ）−ＣＨ_２−Ｈｌｇと表す）を含有する、本発明のリンカーの特定の設計は、他の鎖内ジスルフィドを妨害することなく、Ｆｃ断片の鎖間ジスルフィドを簡単かつ選択的に遊離チオールに還元させながら、Ｆｃ断片の鎖間ジスルフィドを結合するのに特に適している。

本発明の中間生成物は、複素官能性リンカーによる効率的なタンパク質−タンパク質結合を可能にする三分岐リンカーを表す。異なる脱離基を使用することによって、反応物質の連結を制御することができ、また中間体は特に、二つ以上のタンパク質を順序通りに共有結合するための合成方法で有用であり、異なるタンパク質をリンカーの各末端に付加させることができるようにする。

一実施形態では、本発明により使用する中間体化合物は、以下の一般式Ｖによって特徴付けられ得る：
Ｍ−Ｘ−Ｙ（−ＬＧ）_２
式中、
Ｍ（Ｌｙｓ反応性末端と命名することもありうる）は、第一級アミノ基に対して反応性をもつ脱離基を表し；
Ｘは存在しないか（すなわち、共有結合を表す）、またはＸは上記一般式Ｉで規定される二価結合基を表し；
Ｙは、上記一般式Ｉで規定される中央三価結合単位を表し；かつ、
ＬＧ（Ｃｙｓ反応性末端と命名することもありうる）は、チオール反応性基の脱離基を表す。

別の実施形態では、本発明により使用する中間体化合物は、以下の一般式Ｖ’によって特徴付けられ得る：
Ｍ−Ｘ−Ｕ（−Ｚ−ＬＧ）_２
式中、
Ｍ（Ｌｙｓ反応性末端と命名することもありうる）は、第一級アミノ基に対して反応性をもつ脱離基を表し；
Ｘは存在しないか（すなわち、共有結合を表す）、またはＸは上記一般式Ｉ’で規定される二価結合基を表し；
Ｕは、上記一般式Ｉ’で規定される中央三価結合単位を表し；
Ｚは、中央結合単位（Ｕ）を脱離基（ＬＧ）に連結させる二価結合基を表し；かつ、
ＬＧ（Ｃｙｓ反応性末端と命名することもありうる）は、チオール反応性基の脱離基を表す。

本発明の文脈では、Ｍは、通常使用される活性エステルなどの第一級アミノ基に対して反応性をもつ脱離基を表す。かかる脱離基には、従来ペプチド合成で用いられる活性エステルを含むものであって、以下に限定されるものではないが、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）エステル、スルホ−ＮＨＳエステル、ペンタフルオロフェノール（ＰＦＰ）エステル、ｐ−ニトロフェノール（ＰＮＰ）エステル、ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）エステルおよびエチル（ヒドロキシイミノ）シアノ酢酸エステル（Ｏｘｙｍａ）を含む。

一実施形態では、「Ｌｙｓ反応性末端」（Ｍ）は、スクシンイミドエステル（ＯＳｕエステル）活性化カルボン酸部分で表され、「Ｃｙｓ反応性末端」（ＬＧ）_２は、２×ヨードアセトアミド、２×ブロモアセトアミドまたは２×クロロアセトアミドで表される。インスリンの伸長の末端部分（すなわち、第一タンパク質）に位置するＬｙｓのＮ−ｅｐｓとＯＳｕエステルとの反応、及び適切な精製後、得られたコンジュゲートは、直接、鎖間ジスルフィドの還元により形成されたＦｃ断片（すなわち、第二および第三のタンパク質）のチオールと反応させるか、またはクロロアセトアミドの場合には、高濃度のヨウ化物イオンに曝露した後で、所謂「フィンケルシュタイン反応」をもたらし、該反応は、クロロからヨードへの変換をもたらし、それによって２×ヨードアセトアミド部分が生成する。最終的な結果物は、関心の二つのタンパク質間の共有結合性部位特異的コンジュゲート、すなわち一般式Ｉのインスリン−Ｆｃコンジュゲートの形成である。

別の実施形態では、中間生成物は一般式Ｖの化合物であり、式中、ＭはＬｙｓに対して反応性をもつ脱離基を表す。

第三の実施形態では、Ｍは、一般的に使用される、ＨＯＳｕ（Ｎ−スクシンイミジルオキシまたは２，５−ジオキソピロリジン−１−イル−オキシ）、ＨＯＡｔ、ＨＯＢｔ、ベンゾトリアゾール、およびこれに類するものの、活性エステルの脱離基を表す。

一実施形態では、中間生成物は一般式Ｖの化合物であり、式中、チオール反応性基（ＬＧ）は、クロロ、ブロモ、もしくはヨードから選択されるハロゲン原子；ピリジルジスルフィド；メトキシカルボニルジスルフィドもしくはエトキシカルボニルジスルフィド；または、ｏ−ニトロフェニルジスルフィドを表す。

別の実施形態では、ＬＧは、チオール反応性基を表し、クロロ、ブロモ、およびヨードから選択されるハロゲン原子を表す。

第三の実施形態では、中間生成物は、本発明の一般式Ｖの化合物であり、２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）−４−［ビス［２−［（２−ヨードアセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタン酸塩である（化学式６として示す。実施例３．１を参照のこと）：
第四の実施形態では、中間生成物は、本発明の一般式Ｖの化合物であり、（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）−６−［ビス［２−［（２−ヨードアセチル）アミノ］エチル］アミノ］−６−オキソ−ヘキサン酸塩である（化学式７として示す。実施例３．２を参照のこと）：
第五の実施形態では、中間生成物は、本発明の一般式Ｖ’の化合物であり、（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）−（２Ｓ）−２，６−［ビス［（２−ヨードアセチル）アミノ］−ヘキサン酸塩である（化学式８として示す。実施例３．３を参照のこと）：
第五の実施形態では、中間生成物は、本発明の一般式Ｖの化合物であり、４−［ビス［２−［（２−ヨードアセチル）アミノ］エチル］カルバモイルアミノ］ブタン酸である（化学式９として示す。実施例３．４を参照のこと）：
第六の実施形態では、中間生成物は、本発明の一般式Ｖ’の化合物であり、（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）−３，５−［ビス［（２−ブロモアセチル）アミノ］−安息香酸塩である（化学式１０として示す。実施例３．５を参照のこと）：
別の実施形態では、本発明による中間体化合物は、以下の一般式ＶＩによって特徴付けられる化合物である：
［ＯＥＦ−Ｉｎｓ］−Ｘ−Ｙ（−ＬＧ）_２
式中、
ＯＥＦは、上記一般式Ｉで規定されるとおりであり、インスリンＡ鎖のＣ末端に融合されたまたはインスリンＢ鎖のＮ末端に融合された、極性を有する組換え伸長を示すものであって、当該伸長は、リジン（Ｋ）残基と組み合わせた、Ａｌａ（Ａ）、Ａｓｐ（Ｄ）、Ｇｌｕ（Ｅ）、Ｇｌｙ（Ｇ）、Ｐｒｏ（Ｐ）、Ｇｌｎ（Ｑ）、Ｓｅｒ（Ｓ）、およびＴｈｒ（Ｔ）のアミノ酸残基のうちの一つまたは複数を含んで、［ＯＥＦ−Ｉｎｓ］構築物を与えるものであって；
該［ＯＥＦ−Ｉｎｓ］構築物は、上記一般式Ｉで規定されるとおりであり、リジン（Ｋ）残基を介して二価結合基Ｘに連結しているか；またはより具体的には、［ＯＥＦ−Ｉｎｓ］構築物は、上記一般式Ｉで規定されるとおりであり、リジン（Ｋ）残基のイプシロンアミノ基を介して二価結合基Ｘに連結しており；
Ｘは、上記一般式Ｉで規定される二価結合基を表し；
Ｙは、上記一般式Ｉで規定される中央三価結合単位を表し；
またはＸは、共有結合を表し、かつ、Ｙは、二つの脱離基（ＬＧ）_２を［ＯＥＦ−Ｉｎｓ］に連結させる中央三価結合単位を表し；かつ、
ＬＧは、チオール反応性基の脱離基を表す。

別の実施形態では、本発明による中間体化合物は、以下の一般式ＶＩ’によって特徴付けられる化合物である：
［ＯＥＦ−Ｉｎｓ］−Ｘ−Ｕ（−Ｚ−ＬＧ）_２
式中、
ＯＥＦは、上記一般式Ｉ’で規定されるとおりであり、インスリンＡ鎖のＣ末端に融合されたまたはインスリンＢ鎖のＮ末端に融合された、極性を有する組換え伸長を示し、当該伸長は、リジン（Ｋ）残基と組み合せた、Ａｌａ（Ａ）、Ａｓｐ（Ｄ）、Ｇｌｕ（Ｅ）、Ｇｌｙ（Ｇ）、Ｐｒｏ（Ｐ）、Ｇｌｎ（Ｑ）、Ｓｅｒ（Ｓ）、およびＴｈｒ（Ｔ）のアミノ酸残基のうちの一つまたは複数を含んで、［ＯＥＦ−Ｉｎｓ］構築物を与えるものであって；
該［ＯＥＦ−Ｉｎｓ］構築物は、上記一般式Ｉ’で規定されるとおりであり、リジン（Ｋ）残基を介して二価結合基Ｘに連結しているか；またはより具体的には、［ＯＥＦ−Ｉｎｓ］構築物は、上記一般式Ｉ’で規定されるとおりであり、リジン（Ｋ）残基のイプシロンアミノ基を介して二価結合基Ｘに連結しており；
Ｘは、上記一般式Ｉ’で規定される二価結合基を表し；かつ、Ｕは、二つの二価結合基（Ｚ）をＸに連結させる、上記一般式Ｉ’で規定される中央三価結合単位を表すか；または
Ｘは共有結合を表し；かつ、Ｕは、二つの二価結合基（Ｚ）を［ＯＥＦ−Ｉｎｓ］構築物に連結させる、上記一般式Ｉ’で規定される中央三価結合単位を表し；かつ、
ＬＧは、チオール反応性基の脱離基を表す。

一実施形態では、中間生成物は、本発明の一般式ＶＩの化合物であり、
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＥＰ）１９，Ａ９８Ｋ（Ｎ（ｅｐｓ）４−［ビス［（２−アセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイル），Ａ９９Ｐ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（例、実施例４．１）；
Ａ１４Ｅ，Ｂ（−７８Ｋ（Ｎ（ｅｐｓ）４−［ビス［（２−アセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイル）），Ｂ（−７７Ｐ），（ＧＱＡＰＧＱＡＰＧＱＥＰ）６−ＧＱＡＰ，Ｂ３Ｑ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（例、実施例４．２）；
Ａ１４Ｅ，Ｂ（−７８Ｋ（４−［ビス［２−［（２−アセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイル）），Ｂ（−７７Ｐ），Ｂ（−１）（ＧＱＥＰ）１９，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（例、実施例４．３）；
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰＧＱＡＰＧＱＥＰ）６−ＧＱＡＰ，Ａ９８Ｋ（Ｎ（ｅｐｓ）４−［ビス［（２−アセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイル），Ａ９９Ｐ，Ｂ３Ｑ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（例、実施例４．４）；
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＥＰ）１９，Ａ９８Ｋ（Ｎ（ｅｐｓ）４−［ビス［（２−アセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイル），Ａ９９Ｐ，Ｂ３Ｑ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（例、実施例４．５）；
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＥＰ）６，Ａ４６Ｋ（Ｎ（ｅｐｓ）４−［ビス［（２−アセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイル），Ａ４７Ｐ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（例、実施例４．６）；
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＥＰ）１２，Ａ７０Ｋ（Ｎ（ｅｐｓ）４−［ビス［（２−アセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイル），Ａ７１Ｐ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（例、実施例４．７）；
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰＧＱＥＰ）６，Ａ７０Ｋ（Ｎ（ｅｐｓ）４−［ビス［（２−アセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイル），Ａ７１Ｐ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（例、実施例４．８）；
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＥＰ）３，Ａ３４Ｇ，Ａ３５Ｑ，Ａ３６Ｅ，Ａ３７Ｋ（Ｎ（ｅｐｓ）４−［ビス［（２−アセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイル），Ａ３８Ｐ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（例、実施例４．９）；
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰ）１９，Ａ９８Ｋ（Ｎ（ｅｐｓ）４−［ビス［（２−アセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイル），Ａ９９Ｐ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（例、実施例４．１０）；
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰ）１９，Ａ９８Ｋ（Ｎ（ｅｐｓ）４−［ビス［（２−アセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイル），Ａ９９Ｐ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（例、実施例４．１１）；
Ａ１４Ｅ，Ｂ（−７８Ｋ（Ｎ（ｅｐｓ）４−［ビス［（２−アセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ヘキサノイル）），Ｂ（−７７Ｐ），Ｂ（−１）（ＧＱＡＰ）１９，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（例、実施例４．１２）；
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰＧＱＡＰＧＱＥＰ）６−ＧＱＡＰ，Ａ９８Ｋ（Ｎ（ｅｐｓ）４−［ビス［（２−アセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイル），Ａ９９Ｐ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（例、実施例４．１３）；
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰＧＱＡＰＧＱＡＰＧＱＥＰ）６−ＧＱＡＰ，Ａ１２２Ｋ（Ｎ（ｅｐｓ）４−［ビス［（２−アセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイル），Ａ１２３Ｐ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（例、実施例４．１４）；
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｑ，Ａ２２（Ｇ）１７，Ａ４０Ｋ（Ｎ（ｅｐｓ）４−［ビス［（２−アセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイル），Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（例、実施例４．１５）；
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰ）２４，Ａ１１８ＧＡ，１１９Ｑ，Ａ１２０Ａ，Ａ１２１Ｋ（Ｎ（ｅｐｓ）−３，５−ビス［（２−ブロモアセチル）アミノ］ベンゾイル），Ａ１２２Ｐ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（例、実施例４．１６）；
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰ）２４，Ａ１１８ＧＡ，１１９Ｑ，Ａ１２０Ａ，Ａ１２１Ｋ（Ｎ（ｅｐｓ）−４−［ビス［（２−アセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイル），Ａ１２２Ｐ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（例、実施例４．１７）；
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰＧＱＡＰＧＱＥＰ）６−ＧＱＡＰ，Ａ９８Ｋ（Ｎ（ｅｐｓ）４−［ビス［２−［（２−ヨードアセチル）アミノ］エチル］カルバモイルアミノ］ブタノイル，Ａ９９Ｐ，Ｂ３Ｑ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（例、実施例４．１８）；および
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰ）１８，Ａ９４Ｇ，Ａ９５Ｑ，Ａ９６Ａ，Ａ９７Ｋ（Ｎ（ｅｐｓ）４−［ビス［（２−アセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ヘキサノイル），Ａ９８Ｐ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（例、実施例４．１９）の群から選択される。

別の実施形態では、中間生成物は、本発明の一般式ＶＩの化合物であり、
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＥＰ）_１９，Ａ９８Ｋ（Ｎ（ｅｐｓ）４−［ビス［（２−アセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイル），Ａ９９Ｐ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（例、実施例４．１）；
Ａ１４Ｅ，Ｂ（−７８Ｋ（Ｎ（ｅｐｓ）４−［ビス［（２−アセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイル）），Ｂ（−７７Ｐ），（ＧＱＡＰＧＱＡＰＧＱＥＰ）_６−ＧＱＡＰ，Ｂ３Ｑ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（例、実施例４．２）；
Ａ１４Ｅ，Ｂ（−７８Ｋ（４−［ビス［２−［（２−アセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイル）），Ｂ（−７７Ｐ），Ｂ（−１）（ＧＱＥＰ）_１９，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（例、実施例４．３）；
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰＧＱＡＰＧＱＥＰ）_６−ＧＱＡＰ，Ａ９８Ｋ（Ｎ（ｅｐｓ）４−［ビス［（２−アセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイル），Ａ９９Ｐ，Ｂ３Ｑ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（例、実施例４．４）；
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＥＰ）_１９，Ａ９８Ｋ（Ｎ（ｅｐｓ）４−［ビス［（２−アセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイル），Ａ９９Ｐ，Ｂ３Ｑ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（例、実施例４．５）；
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＥＰ）_６，Ａ４６Ｋ（Ｎ（ｅｐｓ）４−［ビス［（２−アセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイル），Ａ４７Ｐ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（例、実施例４．６）；
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＥＰ）_１２，Ａ７０Ｋ（Ｎ（ｅｐｓ）４−［ビス［（２−アセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイル），Ａ７１Ｐ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（例、実施例４．７）；
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰＧＱＥＰ）_６，Ａ７０Ｋ（Ｎ（ｅｐｓ）４−［ビス［（２−アセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイル），Ａ７１Ｐ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（例、実施例４．８）；
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＥＰ）_３，Ａ３４Ｇ，Ａ３５Ｑ，Ａ３６Ｅ，Ａ３７Ｋ（Ｎ（ｅｐｓ）４−［ビス［（２−アセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイル），Ａ３８Ｐ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（例、実施例４．９）；
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰ）_１９，Ａ９８Ｋ（Ｎ（ｅｐｓ）４−［ビス［（２−アセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイル），Ａ９９Ｐ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（例、実施例４．１０）；
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰ）_１９，Ａ９８Ｋ（Ｎ（ｅｐｓ）４−［ビス［（２−アセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ヘキサノイル），Ａ９９Ｐ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（例、実施例４．１１）；
Ａ１４Ｅ，Ｂ（−７８Ｋ（Ｎ（ｅｐｓ）４−［ビス［（２−アセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ヘキサノイル）），Ｂ（−７７Ｐ），Ｂ（−１）（ＧＱＡＰ）_１９，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（例、実施例４．１２）；
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰＧＱＡＰＧＱＥＰ）_６−ＧＱＡＰ，Ａ９８Ｋ（Ｎ（ｅｐｓ）４−［ビス［（２−アセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイル），Ａ９９Ｐ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（例、実施例４．１３）；
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰＧＱＡＰＧＱＡＰＧＱＥＰ）_６−ＧＱＡＰ，Ａ１２２Ｋ（Ｎ（ｅｐｓ）４−［ビス［（２−アセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイル），Ａ１２３Ｐ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（例、実施例４．１４）；
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｑ，Ａ２２（Ｇ）_１８，Ａ４０Ｋ（Ｎ（ｅｐｓ）４−［ビス［（２−アセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイル），Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（例、実施例４．１５）；
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰ）_２４，Ａ１１８Ｇ，Ａ１１９Ｑ，Ａ１２０Ａ，Ａ１２１Ｋ（Ｎ（ｅｐｓ）−３，５−ビス［（２−ブロモアセチル）アミノ］ベンゾイル），Ａ１２２Ｐ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（例、実施例４．１６）；
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰ）_２４，Ａ１１８Ｇ，Ａ１１９Ｑ，Ａ１２０Ａ，Ａ１２１Ｋ（Ｎ（ｅｐｓ）−４−［ビス［（２−アセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイル），Ａ１２２Ｐ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（例、実施例４．１７）；
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰＧＱＡＰＧＱＥＰ）_６−ＧＱＡＰ，Ａ９８Ｋ（Ｎ（ｅｐｓ）４−［ビス［２−［（２−ヨードアセチル）アミノ］エチル］カルバモイルアミノ］ブタノイル），Ａ９９Ｐ，Ｂ３Ｑ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（例、実施例４．１８）；および
Ａ１４Ａ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰ）_１８，Ａ９４Ｇ，Ａ９５Ｑ，Ａ９６Ａ，Ａ９７Ｋ（Ｎ（ｅｐｓ）４−［ビス［（２−アセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ヘキサノイル），Ａ９８Ｐ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（例、実施例４．１９）；
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰ）_１８，Ａ９４Ｇ，Ａ９５Ｑ，Ａ９６Ａ，Ａ９７Ｋ（Ｎ（ｅｐｓ）４−［ビス［（２−アセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイル），Ａ９８Ｐ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（例、実施例４．２０）；
Ａ１（Ｎ（アルファ）アセチル），Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰ）_１９，Ａ９８Ｋ（Ｎ（ｅｐｓ）４−［ビス［（２−アセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイル），Ａ９９Ｐ，Ｂ１（Ｎ（アルファ）アセチル），Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（例、実施例４．２１）；
Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰ）_１８，Ａ９４Ｇ，Ａ９５Ｑ，Ａ９６Ａ，Ａ９７Ｋ（Ｎ（ｅｐｓ）４−［ビス［（２−アセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイル），Ａ９８Ｐ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（例、実施例４．２２）；
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰ）_２４，Ａ１１８Ｇ，Ａ１１９Ｑ，Ａ１２０Ａ，Ａ１２１Ｋ（Ｎ（ｅｐｓ）−３，５−ビス［（２−ブロモアセチル）アミノ］ベンゾイル），Ａ１２２Ｐ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（例、実施例４．２３）；
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰ）_１８，Ａ９４Ｇ，Ａ９５Ｑ，Ａ９６Ａ，Ａ９７Ｋ（Ｎ（ｅｐｓ）−３，５−ビス［（２−ブロモアセチル）アミノ］ベンゾイル），Ａ９８Ｐ，Ｂ１６Ｅ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（例、実施例４．２４）；
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰ）_１８，Ａ９４Ｇ，Ａ９５Ｑ，Ａ９６Ａ，Ａ９７Ｋ（Ｎ（ｅｐｓ）４−［ビス［（２−アセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイル），Ａ９８Ｐ，Ｂ６１Ｅ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（例、実施例４．２５）；
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＥＰ）_１９，Ａ９８Ｋ（Ｎ（ｅｐｓ）−３，５−ビス［（２−ブロモアセチル）アミノ］ベンゾイル），Ａ９９Ｐ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（例、実施例４．２６）の群から選択される。

さらに別の実施形態では、中間生成物は、本発明の一般式ＶＩ’の化合物であり、
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＥＰ）_１９，Ａ９８Ｋ（Ｎ（ｅｐｓ）４−［ビス［２−［（２−ヨードアセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイル），Ａ９９Ｐ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（例、実施例４．１）；
Ａ１４Ｅ，Ｂ（−７８Ｋ（Ｎ（ｅｐｓ）４−［ビス［２−［（２−ヨードアセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイル）），Ｂ（−７７Ｐ），（Ｂ−１）（ＧＱＡＰＧＱＡＰＧＱＥＰ）_６−ＧＱＡＰ，Ｂ３Ｑ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（例、実施例４．２）；
Ａ１４Ｅ，Ｂ（−７８Ｋ（Ｎ（ｅｐｓ）４−［ビス［２−［（２−ヨードアセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイル）），Ｂ（−７７Ｐ），Ｂ（−１）（ＧＱＥＰ）_１９，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（例、実施例４．３）；
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰＧＱＡＰＧＱＥＰ）_６−ＧＱＡＰ，Ａ９８Ｋ（Ｎ（ｅｐｓ）４−［ビス［２−［（２−ヨードアセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイル），Ａ９９Ｐ，Ｂ３Ｑ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（例、実施例４．４）；
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＥＰ）_１９，Ａ９８Ｋ（Ｎ（ｅｐｓ）４−［ビス［２−［（２−ヨードアセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイル），Ａ９９Ｐ，Ｂ３Ｑ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（例、実施例４．５）；
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＥＰ）_６，Ａ４６Ｋ（Ｎ（ｅｐｓ）４−［ビス［２−［（２−ヨードアセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイル），Ａ４７Ｐ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（例、実施例４．６）；
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＥＰ）_１２，Ａ７０Ｋ（Ｎ（ｅｐｓ）４−［ビス［２−［（２−ヨードアセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイル），Ａ７１Ｐ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（例、実施例４．７）；
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰＧＱＥＰ）_６，Ａ７０Ｋ（Ｎ（ｅｐｓ）４−［ビス［２−［（２−ヨードアセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイル），Ａ７１Ｐ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（例、実施例４．８）；
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＥＰ）_３，Ａ３４Ｇ，Ａ３５Ｑ，Ａ３６Ｅ，Ａ３７Ｋ（Ｎ（ｅｐｓ）４−［ビス［２−［（２−ヨードアセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイル），Ａ３８Ｐ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（例、実施例４．９）；
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰ）_１９，Ａ９８Ｋ（Ｎ（ｅｐｓ）４−［ビス［２−［（２−ヨードアセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイル），Ａ９９Ｐ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（例、実施例４．１０）；
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰ）_１９，Ａ９８Ｋ（Ｎ（ｅｐｓ）６−［ビス［２−［（２−ヨードアセチル）アミノ］エチル］アミノ］−６−オキソ−ヘキサノイル），Ａ９９Ｐ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（例、実施例４．１１）；
Ａ１４Ｅ，Ｂ（−７８Ｋ（Ｎ（ｅｐｓ）４−［ビス［２−［（２−ヨードアセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイル）），Ｂ（−７７Ｐ），Ｂ（−１）（ＧＱＡＰ）_１９，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（例、実施例４．１２）；
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰＧＱＡＰＧＱＥＰ）_６−ＧＱＡＰ，Ａ９８Ｋ（Ｎ（ｅｐｓ）４−［ビス［２−［（２−ヨードアセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイル），Ａ９９Ｐ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（例、実施例４．１３）；
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰＧＱＡＰＧＱＡＰＧＱＥＰ）_６−ＧＱＡＰ，Ａ１２２Ｋ（Ｎ（ｅｐｓ）４−［ビス［２−［（２−ヨードアセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイル），Ａ１２３Ｐ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（例、実施例４．１４）；
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｑ，Ａ２２（Ｇ）_１８，Ａ４０Ｋ（Ｎ（ｅｐｓ）４−［ビス［２−［（２−ヨードアセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイル），Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（例、実施例４．１５）；
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰ）_２４，Ａ１１８Ｇ，Ａ１１９Ｑ，Ａ１２０Ａ，Ａ１２１Ｋ（Ｎ（ｅｐｓ）−３，５−ビス［（２−ブロモアセチル）アミノ］ベンゾイル），Ａ１２２Ｐ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（例、実施例４．１６）；
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰ）_２４，Ａ１１８Ｇ，Ａ１１９Ｑ，Ａ１２０Ａ，Ａ１２１Ｋ（Ｎ（ｅｐｓ）４−［ビス［２−［（２−ヨードアセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイル），Ａ１２２Ｐ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（例、実施例４．１７）；
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰＧＱＡＰＧＱＥＰ）_６−ＧＱＡＰ，Ａ９８Ｋ（Ｎ（ｅｐｓ）４−［ビス［２−［（２−ヨードアセチル）アミノ］エチル］カルバモイルアミノ］ブタノイル），Ａ９９Ｐ，Ｂ３Ｑ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（例、実施例４．１８）；
Ａ１４Ａ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰ）_１８，Ａ９４Ｇ，Ａ９５Ｑ，Ａ９６Ａ，Ａ９７Ｋ（Ｎ（ｅｐｓ）４−［ビス［２−［（２−ヨードアセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイル），Ａ９８Ｐ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（例、実施例４．１９）；
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰ）_１８，Ａ９４Ｇ，Ａ９５Ｑ，Ａ９６Ａ，Ａ９７Ｋ（Ｎ（ｅｐｓ）４−［ビス［２−［（２−ヨードアセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイル），Ａ９８Ｐ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（例、実施例４．２０）；
Ａ１（Ｎ（アルファ）アセチル），Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰ）_１９，Ａ９８Ｋ（Ｎ（ｅｐｓ）４−［ビス［２−［（２−ヨードアセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイル），Ａ９９Ｐ，Ｂ１（Ｎ（アルファ）アセチル），Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（例、実施例４．２１）；
Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰ）_１８，Ａ９４Ｇ，Ａ９５Ｑ，Ａ９６Ａ，Ａ９７Ｋ（Ｎ（ｅｐｓ）４−［ビス［２−［（２−ヨードアセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイル），Ａ９８Ｐ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（例、実施例４．２２）；
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰ）_２４，Ａ１１８Ｇ，Ａ１１９Ｑ，Ａ１２０Ａ，Ａ１２１Ｋ（Ｎ（ｅｐｓ）−３，５−ビス［（２−ブロモアセチル）アミノ］ベンゾイル），Ａ１２２Ｐ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（例、実施例４．２３）；
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰ）_１８，Ａ９４Ｇ，Ａ９５Ｑ，Ａ９６Ａ，Ａ９７Ｋ（Ｎ（ｅｐｓ）−３，５−ビス［（２−ブロモアセチル）アミノ］ベンゾイル），Ａ９８Ｐ，Ｂ１６Ｅ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（例、実施例４．２４）；
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰ）_１８，Ａ９４Ｇ，Ａ９５Ｑ，Ａ９６Ａ，Ａ９７Ｋ（Ｎ（ｅｐｓ）４−［ビス［２−［（２−ヨードアセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイル），Ａ９８Ｐ，Ｂ１６Ｅ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（例、実施例４．２５）；および
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＥＰ）_１９，Ａ９８Ｋ（Ｎ（ｅｐｓ）−３，５−ビス［（２−ブロモアセチル）アミノ］ベンゾイル），Ａ９９Ｐ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（例、実施例４．２６）の群から選択される。

中間生成物の調製方法
関心のインスリン類似体及び使用する個々のリンカーに応じて、種々の合成方法が適用され得る。本発明により使用するリンカーは、例えば、以下の実施例に記載されるように、標準技術によって製造されてもよい。

結合しようとするタンパク質同士およびリンカーは、別個に調製および精製されてもよい。

一態様では、本発明は、二つのタンパク質を結合することに注目するものとみなしてもよく、連続反応は、両端が異なる反応性を有するあるリンカーを使用することによって達成される。

別の実施形態では、リンカーの一端は第一級アミノ基の反応性基であり、他端は二つのチオール反応性基を有する。

第三の実施形態において、インスリンの第一級アミノ基は、リンカーと反応し、それに次いで、二つの遊離システインを有するＦｃと反応する。

さらなる実施形態において、Ｆｃは、還元されたジスルフィド結合由来の両硫黄原子を介して連結する。

インスリン−Ｆｃコンジュゲートの調製方法
さらなる態様では、本発明は、本発明のインスリン−Ｆｃコンジュゲートの調製方法を提供する。

本発明の方法は、
Ａ）一般式Ｖである中間体化合物Ｍ−Ｘ−Ｙ（−ＬＧ）_２；または一般式Ｖ’である中間体化合物Ｍ−Ｘ−Ｕ（−Ｚ−ＬＧ）_２を調製することと；
Ｂ）［ＯＥＦ−Ｉｎｓ］構築物を、一般式Ｖである中間体化合物Ｍ−Ｘ−Ｙ（−ＬＧ）_２に、もしくは一般式Ｖ’である中間体化合物Ｍ−Ｘ−Ｕ（−Ｚ−ＬＧ）_２に結合させて、一般式ＶＩである中間体化合物［ＯＥＦ−Ｉｎｓ］−Ｘ−Ｙ（−ＬＧ）_２を得る、または一般式ＶＩ’である中間体化合物［ＯＥＦ−Ｉｎｓ］−Ｘ−Ｕ（−Ｚ−ＬＧ）_２を得ることと；
Ｃ）Ｆｃの鎖間ジスルフィド結合を還元することにより、それぞれが遊離システインを保持する、二つのＦｃ’を得ることと；
Ｄ）二つのＦｃ’を、一般式ＶＩである［ＯＥＦ−Ｉｎｓ］−Ｘ−Ｙ（−ＬＧ）_２に結合するか、もしくは一般式ＶＩ’である［ＯＥＦ−Ｉｎｓ］−Ｘ−Ｕ（−Ｚ−ＬＧ）_２に結合して、一般式Ｉまたは一般式Ｉ’であるインスリン−Ｆｃコンジュゲートを得ることとである、（連続する）ステップを含む。

概して、個々の成分、すなわちインスリン成分、ＯＥＦ−Ｉｎｓ成分、Ｆｃ成分、およびリンカーは、別個に生成されて、適切な反応条件下で一緒に結合される。

本発明によるインスリン−Ｆｃコンジュゲートに組み込むためのインスリン成分は、従来のインスリン、インスリン類似体およびインスリン誘導体の調製方法、例えば国際公開第２００８／０３４８８１号または国際公開第２０１６／１９３３８０号に概説されるような従来の方法で得てもよい。

Ｆｃドメインは、ヒトおよび他の動物から単離された完全長抗体から取得されてもよく、または組換えで製造して、形質転換された哺乳類細胞もしくは微生物から獲得してもよい。Ｆｃドメインを獲得するための複数の技術が当該技術分野で公知である。

Ｆｃドメインは、パパインまたはペプシンなどのタンパク質分解酵素を用いた消化によって完全長抗体から製造することができる。アフィニティクロマトグラフィーおよびＤＥＡＥ陰イオン交換クロマトグラフィーを使用して、結果得られるＦａｂおよびＦ（ａｂ’）_２を、Ｆｃドメインから分離することができる。ＳＥＣ−ＨＰＬＣ解析に基づいて、Ｆｃ断片の純度を確認することができる。

組換え法を使用する場合、所望のポリペプチドを発現させ、その後Ｆｃドメインを精製することが可能である。一実施形態では、Ｆｃドメインは、形質転換された微生物または哺乳類細胞から得られたヒトＩｇＧＦｃドメインなどのヒト由来のＦｃドメインである。

加えて、本発明のＦｃ断片は、天然型と比較して増加した糖鎖もしくは天然型と比較して減少した糖鎖である、天然糖鎖を有する形態であってもよく、または、アグリコシル化した形態であってもよい。Ｆｃ断片の糖鎖の増加、減少または除去は、化学的方法または酵素法などの当技術分野で知られている方法によって達成されうる。そうでなければ、天然グリコシル化部位である２９７位のアスパラギンを、分子工学によって、例えばアラニンに突然変異させることができる。組換えＤＮＡ技術法が微生物である大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）を使用している場合、生成したＦｃはアグリコシル化されていることとなる。

本明細書に記載の方法は、結合しようとするタンパク質の少なくとも一つが遊離システインを含む場合にタンパク質コンジュゲートを調製するのに適している。遊離システインは、チオール反応性結合を介して結合化できるシステイン残基である。遊離Ｃｙｓは通常、タンパク質内ジスルフィド結合に関与しないシステイン残基である。遊離システインは、遊離Ｃｙｓを有するタンパク質が、他の硫黄分子、通常はタンパク質が生成および精製されたときに細胞抽出物中に存在する小さな有機分子と、混合ジスルフィドを形成することができるように、結合化反応の前に遊離している必要がある。

遊離システインはまた、既にあるジスルフィド結合を還元させることによって生成されてもよく、これは、ＴＣＥＰ、ＢＳＰＰなどのトリアルキルホスフィンを含む還元剤を使用して、またはＤＴＴ、メルカプトエタノールなどのチオールとともに、二つの遊離システインを利用可能にさせることとなる。

一実施形態では、二つの等価なシステインは、Ｆｃドメインの二つのモノマーポリペプチド（Ｆｃ’）を隣接させるジスルフィド結合を含むＦｃドメインの還元によって生成されうる。

さらなる実施形態では、Ｆｃドメインは、例えばＩｇＧ１−Ｆｃ’断片またはＩｇＧ４−Ｆｃ’断片の２２９位における、Ｆｃドメインのヒンジ領域における単一の鎖間ジスルフィド結合を含む。こうした断片は、本明細書に記述した方法を使用して、三価リンカーの二つのアーム（一般式ＩＶにおいて＊で示す）と連結されてもよい。結果として得られるタンパク質コンジュゲート（またはコンジュゲート中間体）は、Ｆｃドメイン（Ｆｃ’）との二官能性（必ずしもそうではないが、多くの場合対称的）の結合と、インスリン成分［ＯＥＦ−Ｉｎｓ］と結合した第三のアームとを有することとなる。

本明細書に記載されるように、リンカーは、リジンのイプシロンアミノ基を介してインスリン類似体と共有結合する。リジンは通常、タンパク質に豊富に含まれ、したがって選択的結合に適していない。しかし、本発明により使用するインスリン類似体は、一つのリジン残基のみを保持する。

一実施形態では、Ａ鎖伸長のＣ末端配列Ｌｙｓ−Ｐｒｏ（ＫＰ）の末端に位置するリジン残基が、結合部位として使用される。

別の実施形態では、Ｂ鎖のＮ末端伸長に位置するＮ末端リジン残基が、結合部位として使用される。

医薬組成物
本発明は、医薬として有用なインスリン−Ｆｃコンジュゲートに関し、特に代謝疾患もしくは障害もしくは症状の治療、予防または緩和のために使用される。

本発明のインスリン−Ｆｃコンジュゲートまたは薬剤的に許容可能な塩、アミド、またはそのエステルおよび薬剤的に許容可能な賦形剤を含む医薬組成物は、当該技術分野で公知の方法に従って調製されてもよい。

したがって、別の態様では、本発明は、本発明のインスリン−Ｆｃコンジュゲートの治療有効量を、随意に一種または複数種のアジュバント、賦形剤、担体および／または希釈剤と共に含んだ、新規の医薬組成物を提供する。

「賦形剤」の語は、広く、活性治療成分以外の任意の成分を指す。賦形剤は、非活性物質、不活性物質、および／または医薬的に活性でない物質であってもよい。

従来の技術を用いて、注射可能な組成物を調製してもよく、これは通常、所望の最終産物を得るのに適した成分を、必要であれば等張剤、防腐剤および／または緩衝液を追加して、溶解および混合することと、必要であれば例えば塩酸である酸、または例えば水酸化ナトリウム水溶液である塩基を使用して、溶液のｐＨ値を調節することとを含む。最後に、溶液の体積を水で調節して、所望の濃度の成分を得ることができる。

組成物は安定化された製剤であってもよい。「安定化された製剤」という語は、物理的および／または化学的に安定性が増加、好ましくはこの両方が増加した製剤を指す。概して、製剤は、有効期限に到達するまで、使用中および保管中（推奨される使用条件および保管条件に準拠した）において安定していなければならない。

溶液または懸濁剤は、本発明のインスリン−Ｆｃコンジュゲートを水性溶媒中に溶解することによって作製されうる。

一実施形態では、インスリン−Ｆｃコンジュゲートは、約６００〜約４２００ｎｍｏｌｅ／ｍｌの範囲の濃度で存在する。別の実施形態では、インスリン−Ｆｃコンジュゲートは、約６００〜約３６００ｎｍｏｌｅ／ｍｌの範囲の濃度で存在する。第三の実施形態では、インスリン−Ｆｃコンジュゲートは、約６００〜約３０００ｎｍｏｌｅ／ｍｌの範囲の濃度で存在する。

別の実施形態では、インスリン−Ｆｃコンジュゲートは、約１００〜約４２００ｎｍｏｌｅ／ｍｌの範囲の濃度で存在する。別の実施形態では、インスリン−Ｆｃコンジュゲートは、約１００〜約６００ｎｍｏｌｅ／ｍｌの範囲の濃度で存在する。第三の実施形態では、インスリン−Ｆｃコンジュゲートは、約２００〜約６００ｎｍｏｌｅ／ｍｌの範囲の濃度で存在する。

さらなる実施形態では、本発明の医薬組成物は、一日一回よりも少ない頻度の時間間隔で（すなわち、２４時間より長い時間間隔で）、少なくとも３ヶ月、少なくとも６ヶ月または少なくとも１年の期間の間、それを必要としている対象への投与に用いられる。

一実施形態では、本発明の医薬組成物は、平均で１日おき〜１０日おきの範囲の頻度での対象への投与に用いられる。

別の実施形態では、本発明の医薬組成物は、平均で２日おき〜９日おきの範囲の頻度での対象への投与に用いられる。

第三の実施形態では、本発明の医薬組成物は、平均で３日おき〜８日おきの範囲の頻度での対象への投与に用いられる。

第四の実施形態では、本発明の医薬組成物は、平均で４日おき〜７日おきの範囲の頻度での対象への投与に用いられる。

第五の実施形態では、本発明の医薬組成物は、平均で５日おき〜６日おきの範囲の頻度での対象への投与に用いられる。

第六の実施形態では、本発明の医薬組成物は、少なくとも３ヶ月、少なくとも６ヶ月または少なくとも１年の期間の間、平均で週一回、すなわち６日おきでの対象への投与に用いられる。

治療方法
本発明は、治療用途の薬物に関する。より具体的には、本発明は、ヒトを含めた生体動物体の代謝疾患もしくは障害もしくは症状の治療または予防のための本発明のインスリン−Ｆｃコンジュゲートの使用に関し、この方法は、それを必要とするかかる生体動物体に、治療有効量の本発明によるインスリン−Ｆｃコンジュゲートを投与するステップを含む。

一実施形態では、本発明は、糖尿病に関連する病状を治療または緩和する方法を提供する。

別の実施形態では、本発明は、ヒトを含めた生体動物体の疾患もしくは障害もしくは症状を治療または緩和する方法を提供するものであって、この疾患、障害または症状は、糖尿病、１型糖尿病、２型糖尿病、耐糖能障害、高血糖症、脂質代謝異常、肥満症、低代謝性症候群（代謝Ｘ症候群、インスリン抵抗性症候群）、高血圧症、認知障害、アテローム硬化症、心筋梗塞、脳卒中、心血管障害、冠動脈心疾患、炎症性腸症候群、胃腸障害もしくは胃潰瘍に関連する、疾患、障害または症状から選択され得、上記方法は、治療有効量の本発明のインスリン−Ｆｃコンジュゲートを、それを必要とする対象に投与するステップを含む。

第三の実施形態では、本発明は、ヒトを含めた生体動物体の疾患もしくは障害もしくは症状を治療または緩和する方法を提供するものであって、この疾患、障害または症状は、糖尿病、１型糖尿病、２型糖尿病、耐糖能障害、高血糖症、脂質代謝異常、肥満症、低代謝性症候群（代謝Ｘ症候群、インスリン抵抗性症候群）、高血圧症、認知障害、アテローム硬化症、心筋梗塞、脳卒中、心血管障害、冠動脈心疾患、炎症性腸症候群、胃腸障害もしくは胃潰瘍に関連する、疾患、障害または症状から選択され得、上記方法は、治療有効量の本発明のインスリン−Ｆｃコンジュゲートを、それを必要とする対象に投与することを含む。

第四の実施形態では、本発明は、ヒトを含めた生体動物体の疾患もしくは障害もしくは症状を治療または緩和する方法を提供するものであって、この疾患、障害または症状は、糖尿病、１型糖尿病、２型糖尿病、耐糖能障害、高血糖症、脂質代謝異常、肥満症もしくは低代謝性症候群（代謝Ｘ症候群、インスリン抵抗性症候群）に関連する、疾患、障害または症状から選択されうる。

第五の実施形態では、本発明は、ヒトを含めた生体動物体の疾患もしくは障害もしくは症状を治療または緩和する方法を提供するものであって、この疾患、障害または症状は、糖尿病、特に１型糖尿病または２型糖尿病に関連する、疾患、障害または症状から選択されうる。

特定の実施形態
本発明は、本発明の以下の非限定的実施形態によってさらに説明される：
１．以下の一般式Ｉで表される、オリゴマー伸長インスリン−Ｆｃコンジュゲート：
式中、
Ｉｎｓは、ヒトインスリン類似体を表し、当該インスリン類似体が、Ａ鎖およびＢ鎖を含む二鎖インスリン分子であり；
ＯＥＦは、インスリンＡ鎖のＣ末端に融合したまたはインスリンＢ鎖のＮ末端に融合した、極性を有する組換え伸長を示すものであって、当該伸長は、リジン（Ｋ）残基と組み合せた、Ａｌａ（Ａ）、Ａｓｐ（Ｄ）、Ｇｌｕ（Ｅ）、Ｇｌｙ（Ｇ）、Ｐｒｏ（Ｐ）、Ｇｌｎ（Ｑ）、Ｓｅｒ（Ｓ）、およびＴｈｒ（Ｔ）のアミノ酸残基のうちの一つまたは複数を含んで、［ＯＥＦ−Ｉｎｓ］構築物を与えるものであって；
該［ＯＥＦ−Ｉｎｓ］構築物は、リジン（Ｋ）残基を介して三価結合基Ｘ−Ｙに連結し；
Ｘは、［ＯＥＦ−Ｉｎｓ］とＹとを連結させる、共有結合または二価結合基を表し；
Ｙは、Ｆｃのジスルフィド架橋由来の二つの硫黄原子を介して二つのＦｃ’をＸに連結させる三価結合基を表すか；または、Ｘが共有結合を表す場合には、Ｙは、二つの硫黄原子を介して二つのＦｃ’を［ＯＥＦ−Ｉｎｓ］構築物内のリジン残基と連結させ；かつ、
Ｆｃ’は、モノマーＦｃポリペプチドまたはその断片を表す。

２．以下の一般式Ｉ’で表される、オリゴマー伸長インスリン−Ｆｃコンジュゲート：
式中、
Ｉｎｓは、ヒトインスリン類似体を表し、当該インスリン類似体が、Ａ鎖およびＢ鎖を含む二鎖インスリン分子であり；
ＯＥＦは、インスリンＡ鎖のＣ末端に融合したまたはインスリンＢ鎖のＮ末端に融合した、極性を有する組換え伸長を示すものであって、当該伸長は、リジン（Ｋ）残基と組み合せた、Ａｌａ（Ａ）、Ａｓｐ（Ｄ）、Ｇｌｕ（Ｅ）、Ｇｌｙ（Ｇ）、Ｐｒｏ（Ｐ）、Ｇｌｎ（Ｑ）、Ｓｅｒ（Ｓ）、およびＴｈｒ（Ｔ）のアミノ酸残基のうちの一つまたは複数を含んで、［ＯＥＦ−Ｉｎｓ］構築物を与えるものであって；
該［ＯＥＦ−Ｉｎｓ］構築物は、リジン（Ｋ）残基を介して三価結合基Ｘ−Ｕ（−Ｚ）_２に連結し；
Ｘは、［ＯＥＦ−Ｉｎｓ］とＵとを連結させる、共有結合または二価結合基を表し；
Ｕは、二つのＺ−［Ｓ−Ｆｃ’］基をＸに連結させる中央三価結合単位を表すか；または、Ｘが共有結合を表す場合には、Ｕは、二つのＺ−［Ｓ−Ｆｃ’］基を［ＯＥＦ−Ｉｎｓ］構築物内のリジン残基に連結させ；
Ｚは、中央結合単位（Ｕ）を、モノマーＦｃポリペプチド（Ｆｃ’）またはその断片のチオール部分（Ｓ）に連結させる二価結合基を表し；かつ、
［Ｓ−Ｆｃ’］は、Ｆｃ’成分内に含まれるシステイン（Ｃ）残基由来の硫黄原子を表す。

３．Ｉｎｓが、以下の置換のうちの一つまたは複数を含有するヒトインスリン類似体を表す、実施形態１または実施形態２のオリゴマー伸長インスリン−Ｆｃコンジュゲート：Ａ１４Ｅ、Ａ２１ＧもしくはＡ２１Ｑ、Ｂ３ＥもしくはＢ３Ｑ、Ｂ１６ＥもしくはＢ１６Ｈ、Ｂ２５Ｈ、ｄｅｓＢ２７もしくはｄｅｓＢ２９、Ｂ２９Ｒ、および／またはｄｅｓＢ３０。

４．極性を有する組換えＯＥＦ伸長が、
Ａ）ポリグリシン配列（Ｇｌｙ）_ｘ（グループＡ）であって、ｘは、２〜約１０２の範囲の整数を表し、上述のようなＫまたはＫＰと組み合わせた、ポリグリシン配列（Ｇｌｙ）_ｘ（グループＡ）；
Ｂ）無作為な順序または任意に組み合わせた［Ａ，ＧおよびＱ］_ｘのグループ（グループＢ）であって、ｘは、１〜約３０の範囲の整数を表し、上述のようなＫまたはＫＰと組み合わせた、［Ａ，ＧおよびＱ］_ｘのグループ（グループＢ）；
Ｃ）無作為な順序または任意に組み合わせた［Ａ，ＰおよびＳ］_ｘのグループ（グループＣ）であって、ｘは、１〜約３０の範囲の整数を表し、上述のようなＫまたはＫＰと組み合わせた、［Ａ，ＰおよびＳ］_ｘのグループ（グループＣ）；
Ｄ）無作為な順序または任意に組み合わせた［Ｅ，ＧおよびＱ］_ｘのグループ（グループＤ）であって、ｘは、１〜約３０の範囲の整数を表し、上述のようなＫまたはＫＰと組み合わせた、［Ｅ，ＧおよびＱ］_ｘのグループ（グループ）；
Ｅ）無作為な順序または任意に組み合わせた［Ａ，Ｇ，ＰおよびＱ］_ｘのグループ（グループＥ）であって、ｘは、１〜約２５の範囲の整数を表し、上述のようなＫまたはＫＰと組み合わせた、［Ａ，Ｇ，ＰおよびＱ］_ｘのグループ（グループＥ）；
Ｆ）無作為な順序または任意に組み合わせた［Ａ，Ｇ，ＰおよびＳ］_ｘのグループ（グループＦ）であって、ｘは、１〜約２５の範囲の整数を表し、上述のようなＫまたはＫＰと組み合わせた、［Ａ，Ｇ，ＰおよびＳ］_ｘのグループ（グループＦ）；
Ｇ）無作為な順序または任意に組み合わせた［Ｅ，Ｇ，ＰおよびＱ］_ｘのグループ（グループＧ）であって、ｘは、１〜約２５の範囲の整数を表し、上述のようなＫまたはＫＰと組み合わせた、［Ｅ，Ｇ，ＰおよびＱ］_ｘのグループ（グループＧ）；
Ｈ）無作為な順序または任意に組み合わせた［Ｅ，Ｇ，ＰおよびＳ］_ｘのグループ（グループＨ）であって、ｘは、１〜約２５の範囲の整数を表し、上述のようなＫまたはＫＰと組み合わせた、［Ｅ，Ｇ，ＰおよびＳ］_ｘのグループ（グループＨ）；
Ｉ）無作為な順序または任意に組み合わせた［Ａ，Ｅ，Ｇ，ＰおよびＱ］_ｘのグループ（グループＩ）であって、ｘは、１〜約２０の範囲の整数を表し、上述のようなＫまたはＫＰと組み合わせた、［Ａ，Ｅ，Ｇ，ＰおよびＱ］_ｘのグループ（グループＩ）；および
Ｊ）無作為な順序または任意に組み合わせた［Ａ，Ｅ，Ｇ，Ｐ，ＳおよびＴ］_ｘのグループ（グループＪ）であって、ｘは、１〜約２０の範囲の整数を表し、上述のようなＫまたはＫＰと組み合わせた、［Ａ，Ｅ，Ｇ，Ｐ，ＳおよびＴ］_ｘのグループ（グループＪ）；
ならびに／またはグループＡ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、ＩおよびＪの任意の組み合わせ、から選択される隣接するアミノ酸残基で表される、実施形態１または実施形態２のオリゴマー伸長インスリン−Ｆｃコンジュゲート。

５．Ｘが以下の構造の二価リンカーを表す、実施形態１または実施形態２のオリゴマー伸長インスリン−Ｆｃコンジュゲート：
−Ｃ（Ｏ）−（ＣＨ_２）_ｌ−Ｃ（Ｏ）−
式中、ｌは、１〜２０の範囲の整数を表す。

６．実施形態１のオリゴマー伸長インスリン−Ｆｃコンジュゲートの三価結合基（Ｙ）、または実施形態２のオリゴマー伸長インスリン−Ｆｃコンジュゲートの結合基Ｕ（−Ｚ）_２が、以下の一般式ＩＶによって表される、実施形態１のオリゴマー伸長インスリン−Ｆｃコンジュゲートまたは実施形態２のオリゴマー伸長インスリン−Ｆｃコンジュゲート：
式中、
Ｎは一般式Ｉ’に記載の中央結合単位（Ｕ）を表し；
Ｌ_１−ＮＨ（ＣＯ）−Ｌ_３およびＬ_２−ＮＨ（ＣＯ）−Ｌ_４はそれぞれ、一般式Ｉ’に記載の二価結合基（Ｚ）を表し；
＊は、Ｆｃ（すなわち、一般式Ｉ’に記載の［Ｓ−Ｆｃ’］部分）のジスルフィド架橋由来の硫黄原子への付加点を示し；
＃は、Ｘへの付加点を示し；かつ、
Ｌ^１およびＬ^２は、互いに独立して、−（ＣＨ_２）_ｍ１−を表し；式中、
ｍ１は、１〜６の範囲の整数を表し；かつ、
Ｌ^３およびＬ^４は、互いに独立して、−（ＣＨ_２）_ｎ１−を表し；
式中、ｎ１は、１〜６の範囲の整数を表す。

７．Ｆｃ’は、ＩｇＧ１Ｆｃポリペプチドの、ＩｇＧ２Ｆｃポリペプチドの、ＩｇＧ４Ｆｃポリペプチドのまたはその断片の、モノマーを表す、実施形態１または実施形態２のオリゴマー伸長インスリン−Ｆｃコンジュゲート。

８．Ｆｃ’は、２２６Ａ、２２７Ａまたは２２７Ｓ、２２８Ｓ、２３４Ａ、２３５Ａまたは２３５Ｅまたは２３５Ｋ、２３７Ａまたは２９７Ｑ、２９７Ｅ、Ｎ３１５Ｑ、３３０Ｓ、３３１Ｓ、Ｎ３８４Ｑおよびｄｅｓ４４７の群から選択される、一つまたは複数の伸長および／または置換および／または欠失を含む、ｈＩｇＧ１−Ｆｃ（２２８−４４７）ポリペプチドを表す、実施形態７のオリゴマー伸長インスリン−Ｆｃコンジュゲート。

９．Ｆｃ’は、２２６Ｇ、２２７Ａ、２３４Ａ、２３５Ａまたは２３５Ｋ、Ｎ２９７ＥまたはＮ２９７Ｑ、３１５Ｑ、３８４Ｑおよびｄｅｓ４４７の群から選択される、一つまたは複数の伸長および／または置換および／または欠失を含む、ｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７）ポリペプチドを表す、実施形態７のオリゴマー伸長インスリン−Ｆｃコンジュゲート。

１０．中央結合単位（Ｕ）が、以下の一般式ＶＩＩで示される３，５−二置換安息香酸塩部分を表す、実施形態２の一般式Ｉ’で表されるオリゴマー伸長インスリン−Ｆｃコンジュゲート：
式中、
＊は、Ｆｃ（すなわち、一般式Ｉ’に記載の［Ｓ−Ｆｃ’］部分）のジスルフィド架橋由来の硫黄原子への付加点を示し；
＃は、Ｘへの付加点を示すか、またはＸが存在しない場合（すなわち、共有結合を表す）、［ＯＥＦ−Ｉｎｓ］構築物内のリジン残基内の第一級アミノ基への付加点を示し；かつ、
Ｌ^９およびＬ^１０は、互いに独立して、−（ＣＨ_２）_ｎ３−を表し；式中、
ｎ３は、１〜６の範囲の整数を表す。

１１．Ｘは存在せず（すなわち、共有結合を表す）、かつ、一般式Ｉ’に記載のＵ（−Ｚ）_２は、以下の一般式ＶＩＩＩで表される、実施形態２の一般式Ｉ’で表されるオリゴマー伸長インスリン−Ｆｃコンジュゲート：
式中、
＊は、Ｆｃ（すなわち、一般式Ｉに記載の［Ｓ−Ｆｃ’］部分）のジスルフィド架橋由来の硫黄原子への付加点を示し；
＃は、Ｘへの付加点を示すか、またはＸが存在しない場合（すなわち、共有結合を表す）、［ＯＥＦ−Ｉｎｓ］構築物内のリジン残基内の第一級アミノ基への付加点を示し；
Ｌ^５およびＬ^６は、互いに独立して、−（ＣＨ_２）_ｍ２−を表し；式中、
ｍ２は、０〜６の範囲の整数を表し；かつ、
Ｌ^７およびＬ^８は、互いに独立して、−（ＣＨ_２）_ｎ２−を表し、式中、ｎ２は、１〜６の範囲の整数を表す。

１２．実施形態１または実施形態２のオリゴマー伸長インスリン−Ｆｃコンジュゲートであって、
（Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＥＰ）_１９，Ａ９８Ｋ＾，Ａ９９Ｐ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン）／（２２７Ａ，２３４Ａ，２３５ＫｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７））４−［ビス［２−［（２−アセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイルコンジュゲート；
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＥＰ）_１９，Ａ９８Ｋ＾Ａ９９Ｐ，Ｂ３Ｑ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン／（２２７Ａ，２３４Ａ，２３５Ｋ，２９７Ｅ，３１５Ｑ，３８４Ｑ，ｄｅｓ４４７ｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７））４−［ビス［２−［（２−アセチル）アミノ］エチル］−４−オキソ−ブタノイルコンジュゲート；
Ａ１４Ｅ，Ｂ（−７８Ｋ＾）Ｂ（−７７Ｐ），Ｂ（−１）（ＧＱＡＰＧＱＡＰＧＱＥＰ）_６−ＧＱＡＰ，Ｂ３Ｑ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン／（２２７Ａ，２３４Ａ，２３５ＫｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７））４−［ビス［２−［（２−ヨードアセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイルコンジュゲート；
Ａ１４Ｅ，Ｂ（−７６Ｋ＾），Ｂ（−７５Ｐ），Ｂ（−１）（ＧＱＥＰ）_１９，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン／（２２７Ａ，２３４Ａ，２３５ＫｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２７−４４７））４−［ビス［２−［（２−アセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイルコンジュゲート；
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰＧＱＡＰＧＱＥＰ）_６−ＧＱＡＰ，Ａ９８Ｋ＾，Ａ９９Ｐ，Ｂ３Ｑ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン／（２２７Ａ，２３４Ａ，２３５ＫｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７））４−［ビス［２−［（２−アセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイルコンジュゲート；
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＥＰ）_１９，Ａ９８Ｋ＾Ａ９９Ｐ，Ｂ３Ｑ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン／（２２７Ａ，２３４Ａ，２３５ＫｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７））４−［ビス［２−［（２−アセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイルコンジュゲート；
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＥＰ）_６，Ａ４６Ｋ＾，Ａ４７Ｐ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン／（２２７Ａ，２３４Ａ，２３５ＫｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７））４−［ビス［２−［（２−アセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイルコンジュゲート；
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＥＰ）_１２，Ａ７０Ｋ＾，Ａ７１Ｐ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン／（２２７Ａ，２３４Ａ，２３５ＫｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７））４−［ビス［２−［（２−アセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイルコンジュゲート；
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰＧＱＥＰ）_６，Ａ７０Ｋ＾，Ａ７１Ｐ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン／（２２７Ａ，２３４Ａ，２３５ＫｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２７−４４７））４−［ビス［２−［（２−アセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイルコンジュゲート；
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＥＰ）_３，Ａ３４Ｇ，Ａ３５Ｑ，Ａ３６Ｅ，Ａ３７Ｋ＾，Ａ３８Ｐ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン／（２２７Ａ，２３４Ａ，２３５ＫｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２７−４４７））４−［ビス［２−［（２−アセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイルコンジュゲート；
Ａ１４Ｅ，Ｂ（−７６Ｋ＾），Ｂ（−７５Ｐ），Ｂ（−１）（ＧＱＥＰ）_１９，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン／（２２７Ａ，２３４Ａ，２３５Ｋ，２９７Ｅ，３１５Ｑ，３８４Ｑ，ｄｅｓ４４７ｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２７−４４７））４−［ビス［２−［（２−アセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイルコンジュゲート；
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＥＰ）_１９，Ａ９８Ｋ＾，Ａ９９Ｐ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン）／（２２７Ａ，２３４Ａ，２３５Ｋ，２９７Ｅ，３１５Ｑ，３８４Ｑ，ｄｅｓ４４７ｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７））４−［ビス［２−［（２−アセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイルコンジュゲート；
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰＧＱＡＰＧＱＥＰ）_６−ＧＱＡＰ，Ａ９８Ｋ＾，Ａ９９Ｐ，Ｂ３Ｑ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン／（２２７Ａ，２３４Ａ，２３５Ｋ，２９７Ｅ，３１５Ｑ，３８４Ｑ，ｄｅｓ４４７ｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７））４−［ビス［２−［（２−アセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイルコンジュゲート；
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰＧＱＥＰ）_６，Ａ７０Ｋ＾，Ａ７１Ｐ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン／（２２７Ａ，２３４Ａ，２３５Ｋ，２９７Ｅ，３１５Ｑ，３８４Ｑ，ｄｅｓ４４７ｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７））４−［ビス［２−［（２−アセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイルコンジュゲート；
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰ）_１９，Ａ９８ＫＡ９９Ｐ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン）／（２２７Ａ，２３４Ａ，２３５Ｋ，２９７Ｅ，３１５Ｑ，３８４Ｑ，ｄｅｓ４４７ｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７））４−［ビス［２−［（２−アセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイルコンジュゲート；
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰ）_１９，Ａ９８Ｋ＾，Ａ９９Ｐ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン）／（２２７Ａ，２３４Ａ，２３５Ｋ，２９７Ｅ，３１５Ｑ，３８４Ｑ，ｄｅｓ４４７ｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２７−４４７））４−［ビス［２−［（２−アセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ヘキサノイルコンジュゲート；
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＥＰ）_１２，Ａ７０Ｋ＾，Ａ７１Ｐ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン／（２２７Ａ，２３４Ａ，２３５Ｋ，２９７Ｅ，３１５Ｑ，３８４Ｑ，ｄｅｓ４４７ｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２７−４４７））４−［ビス［２−［（２−アセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイルコンジュゲート；
Ａ１４Ｅ，Ｂ（−７６Ｋ＾），Ｂ（−７５Ｐ），Ｂ（−１）（ＧＱＡＰ）_１９，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン／（２２７Ａ，２３４Ａ，２３５Ｋ，２９７Ｅ，３１５Ｑ，３８４Ｑ，ｄｅｓ４４７ｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２７−４４７））４−［ビス［２−［（２−アセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイルコンジュゲート；
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰＧＱＡＰＧＱＥＰ）_６−ＧＱＡＰ，Ａ９８Ｋ＾，Ａ９９Ｐ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン／（２２７Ａ，２３４Ａ，２３５Ｋ，２９７Ｅ，３１５Ｑ，３８４Ｑ，ｄｅｓ４４７ｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２７−４４７））４−［ビス［２−［（２−アセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイルコンジュゲート；
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰＧＱＡＰＧＱＡＰＧＱＥＰ）_６−ＧＱＡＰ，Ａ１２２Ｋ＾，Ａ１２３Ｐ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン／（２２７Ａ，２３４Ａ，２３５Ｋ，２９７Ｅ，３１５Ｑ，３８４Ｑ，ｄｅｓ４４７ｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２７−４４７））４−［ビス［２−［（２−アセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイルコンジュゲート；
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（Ｇ）_１７，Ａ４０Ｋ＾，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン／（２２７Ａ，２３４Ａ，２３５ＫｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７））４−［ビス［２−［（２−アセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイルコンジュゲート；
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰ）_２４，Ａ１１８Ｇ，Ａ１１９Ｑ，Ａ１２０Ａ，Ａ１２１Ｋ＾，Ａ１２２Ｐ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン／（２２７Ａ，２３４Ａ，２３５Ｋ，２９７Ｅ，３１５Ｑ，３８４Ｑ，ｄｅｓ４４７ｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２７−４４７））３，５−［ビス［（２−アセチル）アミノ］ベンゾイルコンジュゲート；
（Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰ）_２４，Ａ１１８Ｇ，Ａ１１９Ｑ，Ａ１２０Ａ，Ａ１２１Ｋ＾，Ａ１２２Ｐ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン）／（２２７Ａ，２３４Ａ，２３５Ｋ，２９７Ｅ，３１５Ｑ，３８４Ｑ，ｄｅｓ４４７ｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２７−４４７））４−［ビス［２−［（２−アセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイルコンジュゲート；
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰＧＱＡＰＧＱＥＰ）_６−ＧＱＡＰ，Ａ９８Ｋ＾，Ａ９９Ｐ，Ｂ３Ｑ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン／（２２７Ａ，２３４Ａ，２３５Ｋ，２９７Ｅ，３１５Ｑ，３８４Ｑ，ｄｅｓ４４７ｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２７−４４７））４−［ビス［２−［（２−アセチル）アミノ］エチル］カルバモイルアミノ］−ブタノイルコンジュゲート；および
（Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰ）_１８，Ａ９４Ｇ，Ａ９５Ｑ，Ａ９６Ａ，Ａ９７Ｋ＾，Ａ９８Ｐ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン）／（２２７Ａ，２３４Ａ，２３５Ｋ，２９７Ｅ，３１５Ｑ，３８４Ｑ，ｄｅｓ４４７ｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２７−４４７））４−［ビス［２−［（２−アセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイルコンジュゲートである、実施形態１または実施形態２のオリゴマー伸長インスリン−Ｆｃコンジュゲート。

１３．以下の一般式ＩＩの中間体化合物：
［ＯＥＦ−Ｉｎｓ］
式中、
ＯＥＦは、インスリンＡ鎖のＣ末端に融合されたまたはインスリンＢ鎖のＮ末端に融合された、極性を有する組換え伸長を表すものであって、当該伸長は、リジン（Ｋ）残基と組み合わせた、Ａｌａ（Ａ）、Ａｓｐ（Ｄ）、Ｇｌｕ（Ｅ）、Ｇｌｙ（Ｇ）、Ｐｒｏ（Ｐ）、Ｇｌｎ（Ｑ）、Ｓｅｒ（Ｓ）、およびＴｈｒ（Ｔ）のアミノ酸残基のうちの一つまたは複数を含み；かつ、
Ｉｎｓはヒトインスリンの類似体を表し、当該インスリン類似体は、Ａ鎖およびＢ鎖を含む二鎖インスリン分子である。

１４．モノマーＦｃポリペプチド（Ｆ’）またはその断片であることによって特徴付けられる中間体化合物であって、
（ｉ）２２６Ａ、２２７Ａもしくは２２７Ｓ、２２８Ｓ、２３４Ａ、２３５Ａもしくは２３５Ｅもしくは２３５Ｋ、２３７Ａもしくは２９７Ｑ、２９７Ｅ、Ｎ３１５Ｑ、３３０Ｓ、３３１Ｓ、Ｎ３８４Ｑおよびｄｅｓ４４７の群から選択される、一つもしくは複数の伸長および／もしくは置換および／もしくは欠失を含有するｈＩｇＧ１−Ｆｃ（２２８−４４７）ポリペプチド；または
（ｉｉ）２２８位から開始され４４６位で終了するｈＩｇＧ２由来Ｆｃ配列であって、２２７Ａ、Ｌ２３４Ａ、２３５Ｋ、および３７７Ａの群から選択される一つもしくは複数の伸長および／もしくは置換を含有するｈＩｇＧ２由来Ｆｃ配列；または
（ｉｉｉ）２２８位から開始され４４７位で終了するｈＩｇＧ４由来Ｆｃ配列の断片であって、２２６Ｇ、２２７Ａ、２３４Ａ、２３５Ａもしくは２３５Ｋ、Ｎ２９７ＥもしくはＮ２９７Ｑ、３１５Ｑ、３８４Ｑおよびｄｅｓ４４７の群から選択される一つもしくは複数の伸長および／もしくは置換を含有するｈＩｇＧ４由来Ｆｃ配列の断片、であることによって特徴付けられる、中間体化合物。

１５．以下の一般式Ｖによって特徴付けられる中間体化合物：
Ｍ−Ｘ−Ｙ（−ＬＧ）_２
式中、
Ｍ（Ｌｙｓ反応性末端と命名することもありうる）は、第一級アミノ基に対して反応性をもつ脱離基を表し；
Ｘは存在しないか（すなわち、共有結合を表す）、またはＸは上記一般式Ｉで規定される二価結合基を表し；
Ｙは、上記一般式Ｉで規定される中央三価結合単位を表し；かつ、
ＬＧ（Ｃｙｓ反応性末端と命名することもありうる）は、チオール反応性基の脱離基を表す。

１６．以下の一般式Ｖ’によって特徴付けられる中間体化合物：
Ｍ−Ｘ−Ｕ（−Ｚ−ＬＧ）_２
式中、
Ｍ（Ｌｙｓ反応性末端と命名することもありうる）は、第一級アミノ基に対して反応性をもつ脱離基を表し；
Ｘは存在しないか（すなわち、共有結合を表す）、またはＸは上記一般式Ｉ’で規定される二価結合基を表し；
Ｕは、上記一般式Ｉ’で規定される中央三価結合単位を表し；
Ｚは、中央結合単位（Ｕ）を脱離基（ＬＧ）に連結させる二価結合基を表し；かつ、
ＬＧ（Ｃｙｓ反応性末端と命名することもありうる）は、チオール反応性基の脱離基を表す。

１７．以下の一般式ＶＩによって特徴付けられる中間体化合物：
［ＯＥＦ−Ｉｎｓ］−Ｘ−Ｙ（−ＬＧ）_２
式中、
ＯＥＦは、上記一般式Ｉで規定されるとおりであり、インスリンＡ鎖のＣ末端に融合されたまたはインスリンＢ鎖のＮ末端に融合された、極性を有する組換え伸長を示すものであって、当該伸長は、リジン（Ｋ）残基と組み合せた、Ａｌａ（Ａ）、Ａｓｐ（Ｄ）、Ｇｌｕ（Ｅ）、Ｇｌｙ（Ｇ）、Ｐｒｏ（Ｐ）、Ｇｌｎ（Ｑ）、Ｓｅｒ（Ｓ）、およびＴｈｒ（Ｔ）のアミノ酸残基のうちの一つまたは複数を含んで、［ＯＥＦ−Ｉｎｓ］構築物を与えるものであって；
該［ＯＥＦ−Ｉｎｓ］構築物は、上記一般式Ｉで規定されるとおりであり、リジン（Ｋ）残基を介して二価結合基Ｘに連結しており；
Ｘは、上記一般式Ｉで規定される二価結合基を表し；かつ、Ｙは、上記一般式Ｉで規定される中央三価結合単位を表すか；または
Ｘは、共有結合を表し；かつ、Ｙは、二つの脱離基（ＬＧ）_２を［ＯＥＦ−Ｉｎｓ］に連結させる中央三価結合単位を表し；かつ、
ＬＧは、チオール反応性基の脱離基を表す。

１８．以下の一般式ＶＩ’によって特徴付けられる中間体化合物：
［ＯＥＦ−Ｉｎｓ］−Ｘ−Ｕ（−Ｚ−ＬＧ）_２
式中、
ＯＥＦは、上記一般式Ｉ’で規定されるとおりであり、インスリンＡ鎖のＣ末端に融合されたまたはインスリンＢ鎖のＮ末端に融合された、極性を有する組換え伸長を示すものであって、当該伸長は、リジン（Ｋ）残基と組み合わせた、Ａｌａ（Ａ）、Ａｓｐ（Ｄ）、Ｇｌｕ（Ｅ）、Ｇｌｙ（Ｇ）、Ｐｒｏ（Ｐ）、Ｇｌｎ（Ｑ）、Ｓｅｒ（Ｓ）、およびＴｈｒ（Ｔ）のアミノ酸残基のうちの一つまたは複数を含んで、［ＯＥＦ−Ｉｎｓ］構築物を与えるものであって；
該［ＯＥＦ−Ｉｎｓ］構築物は、上記一般式Ｉ’で規定されるとおりであり、リジン（Ｋ）残基を介して二価結合基Ｘに連結しており；
Ｘは、上記一般式Ｉ’で規定される二価結合基を表し；かつ、Ｕは、二つの二価結合基（Ｚ）をＸに連結させる、上記一般式Ｉ’で規定される中央三価結合単位を表すか；または
Ｘは共有結合を表し；かつ、Ｕは、二つの二価結合基（Ｚ）を［ＯＥＦ−Ｉｎｓ］構築物に連結させる、上記一般式Ｉ’で規定される中央三価結合単位を表し；かつ、
ＬＧは、チオール反応性基の脱離基を表す。

１９．実施形態１〜１２のいずれか一つに記載のインスリン−Ｆｃコンジュゲートと、一種または複数種の薬剤的に許容可能な担体もしくは希釈剤とを含む、医薬組成物。

２０．ヒトを含めた生体動物体の代謝疾患もしくは障害もしくは症状を治療、予防または緩和する方法であって、その方法が、治療有効量の実施形態１〜１２のいずれか一つに記載のインスリンＦｃコンジュゲートを、それを必要とするかかる生体動物体に投与するステップを含む、方法。

本発明は、本発明の以下の非限定的実施形態によってさらに説明される：
１．以下の一般式Ｉで表される、オリゴマー伸長インスリン−Ｆｃコンジュゲート：
式中、
Ｉｎｓは、ヒトインスリン類似体を表し、当該インスリン類似体が、Ａ鎖およびＢ鎖を含む二鎖インスリン分子であり；
ＯＥＦは、インスリンＡ鎖のＣ末端に融合したまたはインスリンＢ鎖のＮ末端に融合した、極性を有する組換え伸長を示すものであって、当該伸長は、リジン（Ｋ）残基と組み合せた、Ａｌａ（Ａ）、Ａｓｐ（Ｄ）、Ｇｌｕ（Ｅ）、Ｇｌｙ（Ｇ）、Ｐｒｏ（Ｐ）、Ｇｌｎ（Ｑ）、Ｓｅｒ（Ｓ）、およびＴｈｒ（Ｔ）のアミノ酸残基のうちの一つまたは複数を含んで、［ＯＥＦ−Ｉｎｓ］構築物を与えるものであって；
該［ＯＥＦ−Ｉｎｓ］構築物は、リジン（Ｋ）残基のイプシロンアミノ基を介して三価結合基Ｘ−Ｙに連結し；
Ｘは、［ＯＥＦ−Ｉｎｓ］とＹとを連結させる、共有結合または二価結合基を表し；
Ｙは、Ｆｃのジスルフィド架橋由来の二つの硫黄原子を介して二つのＦｃ’をＸに連結させる三価結合基を表すか；または、Ｘが共有結合を表す場合には、Ｙは、二つの硫黄原子を介して二つのＦｃ’を［ＯＥＦ−Ｉｎｓ］構築物内のリジン残基のイプシロンアミノ基と連結させ；かつ、
Ｆｃ’は、モノマーＦｃポリペプチドまたはその断片を表す。

２．以下の一般式Ｉ’で表される、オリゴマー伸長インスリン−Ｆｃコンジュゲート：
式中、
Ｉｎｓは、ヒトインスリン類似体を表し、当該インスリン類似体が、Ａ鎖およびＢ鎖を含む二鎖インスリン分子であり；
ＯＥＦは、インスリンＡ鎖のＣ末端に融合したまたはインスリンＢ鎖のＮ末端に融合した、極性を有する組換え伸長を示すものであって、当該伸長は、リジン（Ｋ）残基と組み合せた、Ａｌａ（Ａ）、Ａｓｐ（Ｄ）、Ｇｌｕ（Ｅ）、Ｇｌｙ（Ｇ）、Ｐｒｏ（Ｐ）、Ｇｌｎ（Ｑ）、Ｓｅｒ（Ｓ）、およびＴｈｒ（Ｔ）のアミノ酸残基のうちの一つまたは複数を含んで、［ＯＥＦ−Ｉｎｓ］構築物を与えるものであって；
該［ＯＥＦ−Ｉｎｓ］構築物は、リジン（Ｋ）残基のイプシロンアミノ基を介して三価結合基Ｘ−Ｕ（−Ｚ）_２に連結し；
Ｘは、［ＯＥＦ−Ｉｎｓ］とＵとを連結させる、共有結合または二価結合基を表し；
Ｕは、二つのＺ−［Ｓ−Ｆｃ’］基をＸに連結させる中央三価結合単位を表すか；または、Ｘが共有結合を表す場合には、Ｕは、二つのＺ−［Ｓ−Ｆｃ’］基を、［ＯＥＦ−Ｉｎｓ］構築物内のリジン残基のイプシロンアミノ基に連結させ；
Ｚは、中央結合単位（Ｕ）を、モノマーＦｃポリペプチド（Ｆｃ’）またはその断片のチオール部分（Ｓ）に連結させる二価結合基を表し；かつ、
［Ｓ−Ｆｃ’］は、Ｆｃ’成分内に含まれるシステイン（Ｃ）残基由来の硫黄原子を表す。

３．Ｘが、以下の構造の二価リンカーを表す、実施形態１または実施形態２のオリゴマー伸長インスリン−Ｆｃコンジュゲート：
−Ｃ（Ｏ）−（ＣＨ_２）_ｌ−Ｃ（Ｏ）−
式中、ｌは、１〜２０の範囲の整数を表す。

４．三価結合基（Ｙ）が、以下の一般式ＩＶで表される、実施形態１のオリゴマー伸長インスリン−Ｆｃコンジュゲート：
式中、
＊は、Ｆｃの還元されたジスルフィド架橋由来の硫黄原子への付加点を示し（すなわち、一般式Ｉに記載の［Ｆｃ’］部分）；
＃は、Ｘへの付加点を示し；かつ、
Ｌ^１およびＬ^２は、互いに独立して、−（ＣＨ_２）_ｍ１−を表し；式中、
ｍ１は、１〜６の範囲の整数を表し；かつ、
Ｌ^３およびＬ^４は、互いに独立して、−（ＣＨ_２）_ｎ１−を表し；
式中、ｎ１は、１〜６の範囲の整数を表す。

５．Ｆｃ’は、ＩｇＧ１Ｆｃポリペプチドの、ＩｇＧ２Ｆｃポリペプチドの、ＩｇＧ４Ｆｃポリペプチドのまたはその断片の、モノマーを表す、実施形態１または実施形態２のオリゴマー伸長インスリン−Ｆｃコンジュゲート。

６．Ｘが共有結合を表し、中央結合単位（Ｕ）が、以下の一般式ＶＩＩで示される３，５−二置換安息香酸塩部分を表す、実施形態２の一般式Ｉ’で表されるオリゴマー伸長インスリン−Ｆｃコンジュゲート：
式中、
＊は、Ｆｃ（すなわち、一般式Ｉ’に記載の［Ｓ−Ｆｃ’］部分）のジスルフィド架橋由来の硫黄原子への付加点を示し；
＃は、［ＯＥＦ−Ｉｎｓ］構築物内のリジン残基内のイプシロンアミノ基への付加点を示し；かつ、
Ｌ^９およびＬ^１０は、互いに独立して、−（ＣＨ_２）_ｎ３−を表し；式中、
ｎ３は、１〜６の範囲の整数を表す。

７．Ｘは存在せず（すなわち、共有結合を表す）、かつ、一般式Ｉ’に記載のＵ（−Ｚ）_２は、以下の一般式ＶＩＩＩで表される、実施形態２の一般式Ｉ’で表されるオリゴマー伸長インスリン−Ｆｃコンジュゲート：
式中、
＊は、Ｆｃ（すなわち、一般式Ｉに記載の［Ｓ−Ｆｃ’］部分）のジスルフィド架橋由来の硫黄原子への付加点を示し；
＃は、Ｘへの付加点を示すか、またはＸが存在しない場合（すなわち、共有結合を表す）、［ＯＥＦ−Ｉｎｓ］構築物内のリジン残基内のイプシロンアミノ基への付加点を示し；
Ｌ^５およびＬ^６は、互いに独立して、−（ＣＨ_２）_ｍ２−を表し；式中、
ｍ２は、０〜６の範囲の整数を表し；かつ、
Ｌ^７およびＬ^８は、互いに独立して、−（ＣＨ_２）_ｎ２−を表し；式中、ｎ２は、１〜６の範囲の整数を表す。

８．以下の一般式ＩＩの中間体化合物：
［ＯＥＦ−Ｉｎｓ］
式中、
ＯＥＦは、インスリンＡ鎖のＣ末端に融合されたまたはインスリンＢ鎖のＮ末端に融合された、極性を有する組換え伸長を表すものであって、当該伸長は、リジン（Ｋ）残基と組み合わせた、Ａｌａ（Ａ）、Ａｓｐ（Ｄ）、Ｇｌｕ（Ｅ）、Ｇｌｙ（Ｇ）、Ｐｒｏ（Ｐ）、Ｇｌｎ（Ｑ）、Ｓｅｒ（Ｓ）、およびＴｈｒ（Ｔ）のアミノ酸残基のうちの一つまたは複数を含み；かつ、
Ｉｎｓはヒトインスリンの類似体を表し、当該インスリン類似体は、Ａ鎖およびＢ鎖を含む二鎖インスリン分子である。

９．モノマーＦｃポリペプチド（Ｆｃ’）またはその断片であることによって特徴付けられる中間体化合物であって、
（ｉ）２２６Ａ、２２７Ａもしくは２２７Ｓ、２２８Ｓ、２３４Ａ、２３５Ａもしくは２３５Ｅもしくは２３５Ｋ、２３７Ａもしくは２９７Ｑ、２９７Ｅ、Ｎ３１５Ｑ、３３０Ｓ、３３１Ｓ、Ｎ３８４Ｑおよびｄｅｓ４４７の群から選択される、一つもしくは複数の伸長および／もしくは置換および／もしくは欠失を含有するｈＩｇＧ１−Ｆｃ（２２８−４４７）ポリペプチド；または
（ｉｉ）２２８位から開始され４４６位で終了するｈＩｇＧ２由来Ｆｃ配列であって、Ｐ２２７Ａ、ＶＬ２３４Ａ、２Ａ３５Ｋ、およびＰ３３７Ａの群から選択される一つもしくは複数の伸長および／もしくは置換を含有するｈＩｇＧ２由来Ｆｃ配列；または
（ｉｉｉ）２２８位から開始され４４７位で終了するｈＩｇＧ４由来Ｆｃ配列の断片であって、２２６Ｇ、２２７Ａ、２２８Ｐ、２３４Ａ、２３５Ａもしくは２３５Ｋ、Ｎ２９７ＥもしくはＮ２９７Ｑ、３１５Ｑ、３８４Ｑおよびｄｅｓ４４７の群から選択される一つまたは複数の伸長および／もしくは置換を含有するｈＩｇＧ４由来Ｆｃ配列の断片、であることによって特徴付けられる、中間体化合物。

１０．以下の一般式Ｖによって特徴付けられる中間体化合物：
Ｍ−Ｘ−Ｙ（−ＬＧ）_２
式中、
Ｍ（Ｌｙｓ反応性末端と命名することもありうる）は、第一級アミノ基に対して反応性をもつ脱離基を表し；
Ｘは存在しないか（すなわち、共有結合を表す）、またはＸは上記一般式Ｉで規定される二価結合基を表し；
Ｙは、上記一般式Ｉで規定される中央三価結合単位を表し；かつ、
ＬＧ（Ｃｙｓ反応性末端と命名することもありうる）は、チオール反応性基の脱離基を表す。

１１．以下の一般式Ｖ’によって特徴付けられる中間体化合物：
Ｍ−Ｘ−Ｕ（−Ｚ−ＬＧ）_２
式中、
Ｍ（Ｌｙｓ反応性末端と命名することもありうる）は、第一級アミノ基に対して反応性をもつ脱離基を表し；
Ｘは存在しないか（すなわち、共有結合を表す）、またはＸは上記一般式Ｉ’で規定される二価結合基を表し；
Ｕは、上記一般式Ｉ’で規定される中央三価結合単位を表し；
Ｚは、中央結合単位（Ｕ）を脱離基（ＬＧ）に連結させる二価結合基を表し；かつ、
ＬＧ（Ｃｙｓ反応性末端と命名することもありうる）は、チオール反応性基の脱離基を表す。

１２．以下の一般式ＶＩによって特徴付けられる中間体化合物：
［ＯＥＦ−Ｉｎｓ］−Ｘ−Ｙ（−ＬＧ）_２
式中、
ＯＥＦは、上記一般式Ｉで規定されるとおりであり、インスリンＡ鎖のＣ末端に融合されたまたはインスリンＢ鎖のＮ末端に融合された、極性を有する組換え伸長を示すものであって、当該伸長は、リジン（Ｋ）残基と組み合わせた、Ａｌａ（Ａ）、Ａｓｐ（Ｄ）、Ｇｌｕ（Ｅ）、Ｇｌｙ（Ｇ）、Ｐｒｏ（Ｐ）、Ｇｌｎ（Ｑ）、Ｓｅｒ（Ｓ）、およびＴｈｒ（Ｔ）のアミノ酸残基のうちの一つまたは複数を含んで、［ＯＥＦ−Ｉｎｓ］構築物を与えるものであって；
該［ＯＥＦ−Ｉｎｓ］構築物は、上記一般式Ｉで規定されるとおりであり、リジン（Ｋ）残基を介して二価結合基Ｘに連結しており；
Ｘは、上記一般式Ｉで規定される二価結合基を表し；かつ、Ｙは、上記一般式Ｉで規定される中央三価結合単位を表すか；または
Ｘは、共有結合を表し；かつ、Ｙは、二つの脱離基（ＬＧ）_２を［ＯＥＦ−Ｉｎｓ］に連結させる中央三価結合単位を表し；かつ、
ＬＧは、チオール反応性基の脱離基を表す。

１３．以下の一般式ＶＩ’によって特徴付けられる中間体化合物：
［ＯＥＦ−Ｉｎｓ］−Ｘ−Ｕ（−Ｚ−ＬＧ）_２
式中、
ＯＥＦは、上記一般式Ｉ’で規定されるとおりであり、インスリンＡ鎖のＣ末端に融合されたまたはインスリンＢ鎖のＮ末端に融合された、極性を有する組換え伸長を示すものであって、当該伸長は、リジン（Ｋ）残基と組み合せた、Ａｌａ（Ａ）、Ａｓｐ（Ｄ）、Ｇｌｕ（Ｅ）、Ｇｌｙ（Ｇ）、Ｐｒｏ（Ｐ）、Ｇｌｎ（Ｑ）、Ｓｅｒ（Ｓ）、およびＴｈｒ（Ｔ）のアミノ酸残基のうちの一つまたは複数を含んで、［ＯＥＦ−Ｉｎｓ］構築物を与えるものであって；
該［ＯＥＦ−Ｉｎｓ］構築物は、上記一般式Ｉ’で規定されるとおりであり、リジン（Ｋ）残基を介して二価結合基Ｘに連結しており；
Ｘは、上記一般式Ｉ’で規定される二価結合基を表し；かつ、Ｕは、二つの二価結合基（Ｚ）をＸに連結させる、上記一般式Ｉ’で規定される中央三価結合単位を表すか；または
Ｘは、共有結合を表し；かつ、Ｕは、二つの二価結合基（Ｚ）を［ＯＥＦ−Ｉｎｓ］構築物に連結させる、上記一般式Ｉ’で規定される中央三価結合単位を表し；かつ、
ＬＧは、チオール反応性基の脱離基を表す。

１４．実施形態１〜１２のいずれか一つに記載のインスリン−Ｆｃコンジュゲートと、一種または複数種の薬剤的に許容可能な担体もしくは希釈剤とを含む、医薬組成物。

１５．ヒトを含めた生体動物体の代謝疾患もしくは障害もしくは症状を治療、予防または緩和する方法であって、その方法が、治療有効量の実施形態１〜１２のいずれか一つに記載のインスリンＦｃコンジュゲートを、それを必要とするかかる生体動物体に投与するステップを含む、方法。

本発明は、本発明の以下の非限定的実施形態によってさらに説明される：
１．以下の一般式Ｉ’で表される、オリゴマー伸長インスリン−Ｆｃコンジュゲート：
式中、
Ｉｎｓは、ヒトインスリン類似体を表し、当該インスリン類似体が、Ａ鎖およびＢ鎖を含む二鎖インスリン分子であり；
ＯＥＦは、インスリンＡ鎖のＣ末端に融合したまたはインスリンＢ鎖のＮ末端に融合した、極性を有する組換え伸長を示すものであって、当該伸長は、リジン（Ｋ）残基と組み合せた、Ａｌａ（Ａ）、Ａｓｐ（Ｄ）、Ｇｌｕ（Ｅ）、Ｇｌｙ（Ｇ）、Ｐｒｏ（Ｐ）、Ｇｌｎ（Ｑ）、Ｓｅｒ（Ｓ）、およびＴｈｒ（Ｔ）のアミノ酸残基のうちの一つまたは複数を含んで、［ＯＥＦ−Ｉｎｓ］構築物を与えるものであって；
該［ＯＥＦ−Ｉｎｓ］構築物は、リジン（Ｋ）残基のイプシロンアミノ基を介して三価結合基Ｘ−Ｕ（−Ｚ）_２に連結し；
Ｘは、［ＯＥＦ−Ｉｎｓ］とＵとを連結させる、共有結合または二価結合基を表し；
Ｕは、二つのＺ−［Ｓ−Ｆｃ’］基をＸに連結させる中央三価結合単位を表すか；または、Ｘが共有結合を表す場合には、Ｕは、二つのＺ−［Ｓ−Ｆｃ’］基を［ＯＥＦ−Ｉｎｓ］構築物内のリジン残基のイプシロンアミノ基に連結させ；
Ｚは存在しないか、もしくは中央結合単位（Ｕ）をモノマーＦｃポリペプチド（Ｆｃ’）もしくはその断片のチオール部分（Ｓ）に連結させる二価結合基を表すか；または、Ｚが存在しない場合には、Ｕは、［Ｓ−Ｆｃ’］に直接連結し；かつ、
［Ｓ−Ｆｃ’］は、Ｆｃ’成分内に含まれるシステイン（Ｃ）残基由来の硫黄原子を表すＳをもつＦｃ’成分（すなわち、モノマーＦｃポリペプチド、またはその断片）を表す。

２．Ｘが、
共有結合；
構造−Ｃ（Ｏ）−（ＣＨ_２）_ｌ−Ｃ（Ｏ）−であって、式中、ｌが、１〜２０の範囲の整数を表すものである、二価リンカー；または、
構造−Ｃ（Ｏ）−（ＣＨ_２）_ｏ−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−であって、式中、ｏが、１〜２０の範囲の整数を表すものである、二価リンカーを表す、実施形態１のオリゴマー伸長インスリン−Ｆｃコンジュゲート。

３．Ｘが、
構造−Ｃ（Ｏ）−（ＣＨ_２）_ｌ−Ｃ（Ｏ）−であって、式中、ｌが、１〜２０の範囲の整数を表すものである、二価リンカー；または、
構造−Ｃ（Ｏ）−（ＣＨ_２）_ｏ−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−であって、式中、ｏが、１〜２０の範囲の整数を表すものである、二価リンカーを表す、実施形態１〜２のいずれか一つのオリゴマー伸長インスリン−Ｆｃコンジュゲート。

４．ｌが２〜４の範囲の整数を表し、かつ、ｏが３である、実施形態１〜３のいずれか一つのオリゴマー伸長インスリン−Ｆｃコンジュゲート。

５．Ｘが、−ＣＯ−ＣＨ_２−ＣＨ_２−ＣＯ−のリンカーを表す、実施形態１〜４のいずれか一つに記載のオリゴマー伸長インスリン−Ｆｃコンジュゲート。

６．Ｘが、−ＣＯ−ＣＨ_２−ＣＨ_２−ＣＨ_２−ＣＨ_２−ＣＯ−のリンカーを表す、実施形態１〜４のいずれか一つに記載のオリゴマー伸長インスリン−Ｆｃコンジュゲート。

７．Ｘが、−ＣＯ−ＣＨ_２−ＣＨ_２−ＣＨ_２−ＮＨ−ＣＯ−のリンカーを表す、実施形態１〜４のいずれか一つに記載のオリゴマー伸長インスリン−Ｆｃコンジュゲート。

８．中央三価結合単位（Ｕ）および二価結合基（Ｚ）が、以下の一般式ＩＶ’で表される、実施形態１〜７のいずれか一つに記載のオリゴマー伸長インスリン−Ｆｃコンジュゲート：
式中、
Ｎは窒素原子（Ｎ）であり、および、一般式Ｉ’に記載の中央結合単位（Ｕ）を表し；
Ｌ_１−ＮＨ（ＣＯ）−Ｌ_３およびＬ_２−ＮＨ（ＣＯ）−Ｌ_４はそれぞれ、一般式Ｉ’に記載の二価結合基（Ｚ）を表し；
＊は、Ｆｃ（すなわち、一般式Ｉ’に記載の［Ｓ−Ｆｃ’］部分）のジスルフィド架橋由来の硫黄原子への付加点を示し；
＃は、Ｘへの付加点を示し；かつ、
Ｌ^１およびＬ^２は、互いに独立して、−（ＣＨ_２）_ｍ１−を表し；式中、
ｍ１は、１〜６の範囲の整数を表し；かつ、
Ｌ^３およびＬ^４は、互いに独立して、−（ＣＨ_２）_ｎ１−を表し；
式中、ｎ１は、１〜６の範囲の整数を表す。

９．Ｌ^１およびＬ^２は、互いに独立して、−（ＣＨ_２）_ｍ１−を表し、式中、ｍ１は２であり；Ｌ^３およびＬ^４は、互いに独立して、−（ＣＨ_２）_ｎ１−を表し、式中、ｎ１は１である、実施形態８に記載のオリゴマー伸長インスリン−Ｆｃコンジュゲート。

１０．Ｘが共有結合を表し、かつ、Ｕ−（−Ｚ）_２が、以下の一般式ＶＩＩで示される３，５−二置換ベンゾイル部分を表す、実施形態１〜９のいずれか一つに記載のオリゴマー伸長インスリン−Ｆｃコンジュゲート：
式中、
＊は、Ｆｃ（すなわち、一般式Ｉ’に記載の［Ｓ−Ｆｃ’］部分）のジスルフィド架橋由来の硫黄原子への付加点を示し；
＃は、［ＯＥＦ−Ｉｎｓ］構築物内のリジン残基内のイプシロンアミノ基への付加点を示し；かつ、
Ｌ^９およびＬ^１０は、互いに独立して、−（ＣＨ_２）_ｎ３−を表し；式中、
ｎ３は、１〜６の範囲の整数を表す。

１１．ｎ３が１〜３の範囲の整数を表す、実施形態１０に記載のオリゴマー伸長インスリン−Ｆｃコンジュゲート。

１２．ｎ３が１である、実施形態１１に記載のオリゴマー伸長インスリン−Ｆｃコンジュゲート。

１３．Ｉｎｓは、以下の置換のうちの一つまたは複数を含有するヒトインスリン類似体を表す、実施形態１〜１２のいずれか一つのオリゴマー伸長インスリン−Ｆｃコンジュゲート：Ａ１４Ｅ、Ａ２１ＧもしくはＡ２１Ｑ、Ｂ３ＥもしくはＢ３Ｑ、Ｂ１６ＥもしくはＢ１６Ｈ、Ｂ２５Ｈ、ｄｅｓＢ２７もしくはｄｅｓＢ２９、Ｂ２９Ｒ、および／またはｄｅｓＢ３０。

１４．Ｉｎｓは、以下の置換のうちの一つまたは複数を含有するヒトインスリン類似体を表す、実施形態１〜１２のいずれか一つのオリゴマー伸長インスリン−Ｆｃコンジュゲート：Ａ１４ＡまたはＡ１４Ｅ、Ａ２１ＧまたはＡ２１Ｑ、Ｂ３Ｑ、Ｂ１６ＥまたはＢ１６Ｈ、Ｂ２５Ｈ、Ｂ２９ＲおよびｄｅｓＢ３０。

１５．Ｉｎｓは、以下の置換のうちの一つまたは複数を含有するヒトインスリン類似体を表す、実施形態１〜１２のいずれか一つのオリゴマー伸長インスリン−Ｆｃコンジュゲート：Ａ１４Ｅ、Ａ２１ＧまたはＡ２１Ｑ、Ｂ３Ｑ、Ｂ１６ＥまたはＢ１６Ｈ、Ｂ２５Ｈ、Ｂ２９ＲおよびｄｅｓＢ３０。

１６．Ｉｎｓは、以下の置換のうちの一つまたは複数を含有するヒトインスリン類似体を表す、実施形態１〜１２のいずれか一つのオリゴマー伸長インスリン−Ｆｃコンジュゲート：Ａ１４Ｅ、Ａ２１ＧまたはＡ２１Ｑ、Ｂ３Ｑ、Ｂ１６Ｅ、Ｂ２５Ｈ、Ｂ２９ＲおよびｄｅｓＢ３０。

１７．Ｉｎｓは、以下の置換のうちの一つまたは複数を含有するヒトインスリン類似体を表す、実施形態１〜１２のいずれか一つのオリゴマー伸長インスリン−Ｆｃコンジュゲート：Ａ１４Ｅ、Ａ２１Ｇ、Ｂ３Ｑ、Ｂ２５Ｈ、Ｂ２９ＲおよびｄｅｓＢ３０。

１８．Ｉｎｓは、以下の置換のうちの一つまたは複数を含有するヒトインスリン類似体を表す、実施形態１〜１２のいずれか一つのオリゴマー伸長インスリン−Ｆｃコンジュゲート：Ａ１４ＡまたはＡ１４Ｅ、Ａ２１ＧまたはＡ２１Ｑ、Ｂ３Ｑ、Ｂ１６Ｅ、Ｂ２５Ｈ、Ｂ２９ＲおよびｄｅｓＢ３０。

１９．Ｉｎｓは、以下の置換を含有するヒトインスリン類似体を表し：Ａ１４ＡまたはＡ１４Ｅ、Ａ２１ＧまたはＡ２１Ｑ、Ｂ２９Ｒ、およびｄｅｓＢ３０；かつ、当該類似体は、随意に以下の置換のうちの一つまたは複数：Ｂ３Ｑ、Ｂ１６ＥまたはＢ１６Ｈ、およびＢ２５Ｈ、を含む、実施形態１〜１２のいずれか一つのオリゴマー伸長インスリン−Ｆｃコンジュゲート。

２０．Ｉｎｓは、以下の置換を含有するヒトインスリン類似体を表し：Ａ１４Ｅ、Ａ２１ＧまたはＡ２１Ｑ、Ｂ２９Ｒ、およびｄｅｓＢ３０；かつ、当該類似体は、随意に以下の置換のうちの一つまたは複数：Ｂ３Ｑ、Ｂ１６ＥまたはＢ１６Ｈ、およびＢ２５Ｈ、を含む、実施形態１〜１２のいずれか一つのオリゴマー伸長インスリン−Ｆｃコンジュゲート。

２１．Ｉｎｓは、以下の置換を含有するヒトインスリン類似体を表し：Ａ１４Ｅ、Ａ２１ＧまたはＡ２１Ｑ、Ｂ２９Ｒ、およびｄｅｓＢ３０；かつ、当該類似体は、随意に以下の置換のうちの一つまたは複数：Ｂ３Ｑ、Ｂ１６Ｅ、およびＢ２５Ｈ、を含む、実施形態１〜１２のいずれか一つのオリゴマー伸長インスリン−Ｆｃコンジュゲート。

２２．ＯＥＦが、インスリンＡ鎖のＣ末端に融合されたまたはインスリンＢ鎖のＮ末端に融合された極性を有する組換えＯＥＦ伸長を表すものであって、当該伸長は、リジン（Ｋ）残基と組み合わせた、Ａｌａ（Ａ）、Ｇｌｕ（Ｅ）、Ｇｌｙ（Ｇ）、Ｐｒｏ（Ｐ）、およびＧｌｎ（Ｑ）のアミノ酸残基のうちの一つまたは複数を含んで、当該ＯＥＦのアミノ酸残基の総数が１５から１１０の範囲である［ＯＥＦ−Ｉｎｓ］構築物を与えるものである、実施形態１〜２１のいずれか一つのオリゴマー伸長インスリン−Ｆｃコンジュゲート。

２３．ＯＥＦが、極性を有する組換えＯＥＦ伸長を表し、当該伸長は、
（Ｇ）_ｘ−Ｋ、（ＧＱＥＰ）_ｘ−ＫＰ、（ＧＱＥＰ）_３−ＧＱＥ−ＫＰ、（ＧＱＡＰ）_ｘ−ＫＰ；（ＧＱＡＰ）_ｘ−ＧＱＡ−ＫＰ；（ＧＱＡＰＧＱＥＰ）_６−ＫＰ；（ＧＱＡＰＧＱＡＰＧＱＥＰ）_６−ＧＱＡＰ−ＫＰ；もしくは（ＧＱＡＰＧＱＡＰＧＱＡＰＧＱＥＰ）_６−ＧＱＡＰ−ＫＰで表されるＡ鎖伸長；または、
ＫＰ−（ＧＱＡＰ）_ｘ、ＫＰ−（ＧＱＥＰ）_ｘ、もしくはＫＰ−（ＧＱＡＰＧＱＡＰＧＱＥＰ）_６−ＧＱＡＰで表されるＢ鎖伸長であって；
式中、それぞれのｘは、独立に、３〜２４の範囲の整数を表す、実施形態１〜２２のいずれか一つのオリゴマー伸長インスリン−Ｆｃコンジュゲート。

２４．それぞれのｘが、独立に、６〜２４の範囲の整数を表す、実施形態２３のオリゴマー伸長インスリン−Ｆｃコンジュゲート。

２５．それぞれのｘが、独立に、１８〜２４の範囲の整数を表す、実施形態２４のオリゴマー伸長インスリン−Ｆｃコンジュゲート。

２６．Ｆｃ’は、ＩｇＧ１Ｆｃポリペプチドの、ＩｇＧ２Ｆｃポリペプチドの、ＩｇＧ４Ｆｃポリペプチドのまたはその断片の、モノマーを表す、実施形態１〜２５のいずれか一つのオリゴマー伸長インスリン−Ｆｃコンジュゲート。

２７．Ｆｃ’は、２２８Ｓ、２３４Ａ、２３５Ａまたは２３５Ｅもしくは２３５Ｋ、２３７Ａもしくは２９７Ｑ、２９７Ｅ、Ｎ３１５Ｑ、３３０Ｓ、３３１Ｓ、Ｎ３８４Ｑおよびｄｅｓ４４７の群から選択される、一つもしくは複数の置換および／もしくは欠失を含む；ならびに／または、２２６Ａ、２２７Ａもしくは２２７Ｓの群から選択される一つもしくは二つのアミノ酸残基からなる伸長を含んだｈＩｇＧ１−Ｆｃ（２２８−４４７）ポリペプチドを表す、実施形態２６のオリゴマー伸長インスリン−Ｆｃコンジュゲート。

２８．Ｆｃ’は、２２８Ｓ、２３４Ａ、２３５Ｋ、２３７Ａ、３１５Ｑ、３３０Ｓ、３３１Ｓおよび３８４Ｑの群から選択される、一つもしくは複数の置換および／もしくは欠失を含む；ならびに／または、２２６Ａ、２２７Ａもしくは２２７Ｓの群から選択される一つもしくは二つのアミノ酸残基からなる伸長を含んだｈＩｇＧ１−Ｆｃ（２２８−４４７）ポリペプチドを表す、実施形態２６のオリゴマー伸長インスリン−Ｆｃコンジュゲート。

２９．Ｆｃ’は、ＩｇＧ４Ｆｃポリペプチドのまたはその断片の、モノマーを表す、実施形態２６のオリゴマー伸長インスリン−Ｆｃコンジュゲート。

３０．Ｆｃ’は、２３４Ａ、２３５Ａまたは２３５Ｋ、Ｎ２９７ＥまたはＮ２９７Ｑ、３１５Ｑ、３８４Ｑおよびｄｅｓ４４７の群から選択される、一つもしくは複数の置換および／もしくは欠失を含む；ならびに／または、２２６Ｇおよび２２７Ａの群から選択される一つもしくは二つのアミノ酸残基からなる伸長を含んだｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７）ポリペプチドを表す、実施形態２９のオリゴマー伸長インスリン−Ｆｃコンジュゲート。

３１．Ｆｃ’は、２２８Ｐ、２３４Ａ、２３５Ａもしくは２３５Ｋ、Ｎ２９７Ｅもしくは２９７Ｑ、３１５Ｑ、３８４Ｑおよびｄｅｓ４４７の群から選択される、一つもしくは複数の置換および／もしくは欠失を含む；ならびに／または、２２６Ａもしくは２２６Ｇ、２２７Ａもしくは２２７Ｇの群から選択される一つもしくは二つのアミノ酸残基からなる伸長を含んだｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７）ポリペプチドを表す、実施形態２９のオリゴマー伸長インスリン−Ｆｃコンジュゲート。

３２．Ｆｃ’は、２２８Ｐ、２３４Ａ、２３５Ｋ、Ｎ２９７Ｅ、３１５Ｑ、３８４Ｑおよびｄｅｓ４４７の群から選択される、一つもしくは複数の置換および／もしくは欠失を含む；ならびに／または、２２６Ａ、２２７Ａもしくは２２７Ｇの群から選択される一つもしくは二つのアミノ酸残基からなる伸長を含んだｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７）ポリペプチドを表す、実施形態２９のオリゴマー伸長インスリン−Ｆｃコンジュゲート。

３３．実施形態１のオリゴマー伸長インスリン−Ｆｃコンジュゲートであって、当該コンジュゲートは、
（Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＥＰ）_１９，Ａ９８Ｋ＾，Ａ９９Ｐ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン）／（２２７Ａ，２３４Ａ，２３５ＫｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７））４−［ビス［２−［（２−アセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイルコンジュゲート；
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＥＰ）_１９，Ａ９８Ｋ＾，Ａ９９Ｐ，Ｂ３Ｑ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン／（２２７Ａ，２３４Ａ，２３５Ｋ，２９７Ｅ，３１５Ｑ，３８４Ｑ，ｄｅｓ４４７ｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７））４−［ビス［２−［（２−アセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイルコンジュゲート；
Ａ１４Ｅ，Ｂ（−７８Ｋ＾），Ｂ（−７７Ｐ），Ｂ（−１）（ＧＱＡＰＧＱＡＰＧＱＥＰ）_６−ＧＱＡＰ，Ｂ３Ｑ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン／（２２７Ａ，２３４Ａ，２３５ＫｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７））４−［ビス［２−［（２−アセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイルコンジュゲート；
Ａ１４Ｅ，Ｂ（−７８Ｋ＾），Ｂ（−７７Ｐ），Ｂ（−１）（ＧＱＥＰ）_１９，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン／（２２７Ａ，２３４Ａ，２３５ＫｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７））４−［ビス［２−［（２−アセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイルコンジュゲート；
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰＧＱＡＰＧＱＥＰ）_６−ＧＱＡＰ，Ａ９８Ｋ＾，Ａ９９Ｐ，Ｂ３Ｑ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン／（２２７Ａ，２３４Ａ，２３５ＫｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７））４−［ビス［２−［（２−アセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイルコンジュゲート；
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＥＰ）_１９，Ａ９８Ｋ＾，Ａ９９Ｐ，Ｂ３Ｑ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン／（２２７Ａ，２３４Ａ，２３５ＫｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７））４−［ビス［２−［（２−アセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイルコンジュゲート；
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＥＰ）_６，Ａ４６Ｋ＾，Ａ４７Ｐ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン／（２２７Ａ，２３４Ａ，２３５ＫｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７））４−［ビス［２−［（２−アセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイルコンジュゲート；
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＥＰ）_１２，Ａ７０Ｋ＾，Ａ７１Ｐ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン／（２２７Ａ，２３４Ａ，２３５ＫｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７））４−［ビス［２−［（２−アセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイルコンジュゲート；
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰＧＱＥＰ）_６，Ａ７０Ｋ＾，Ａ７１Ｐ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン／（２２７Ａ，２３４Ａ，２３５ＫｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７））４−［ビス［２−［（２−アセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイルコンジュゲート；
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＥＰ）_３，Ａ３４Ｇ，Ａ３５Ｑ，Ａ３６Ｅ，Ａ３７Ｋ＾，Ａ３８Ｐ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン／（２２７Ａ，２３４Ａ，２３５ＫｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７））４−［ビス［２−［（２−アセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイルコンジュゲート；
Ａ１４Ｅ，Ｂ（−７８Ｋ＾），Ｂ（−７７Ｐ），Ｂ（−１）（ＧＱＥＰ）_１９，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン／（２２７Ａ，２３４Ａ，２３５Ｋ，２９７Ｅ，３１５Ｑ，３８４Ｑ，ｄｅｓ４４７ｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７））４−［ビス［２−［（２−アセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイルコンジュゲート；
（Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＥＰ）_１９，Ａ９８Ｋ＾，Ａ９９Ｐ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン）／（２２７Ａ，２３４Ａ，２３５Ｋ，２９７Ｅ，３１５Ｑ，３８４Ｑ，ｄｅｓ４４７ｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７））４−［ビス［２−［（２−アセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイルコンジュゲート；
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰＧＱＡＰＧＱＥＰ）_６−ＧＱＡＰ，Ａ９８Ｋ＾，Ａ９９Ｐ，Ｂ３Ｑ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン／（２２７Ａ，２３４Ａ，２３５Ｋ，２９７Ｅ，３１５Ｑ，３８４Ｑ，ｄｅｓ４４７ｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７））４−［ビス［２−［（２−アセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイルコンジュゲート；
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰＧＱＥＰ）_６，Ａ７０Ｋ＾，Ａ７１Ｐ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン／（２２７Ａ，２３４Ａ，２３５Ｋ，２９７Ｅ，３１５Ｑ，３８４Ｑ，ｄｅｓ４４７ｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７））４−［ビス［２−［（２−アセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイルコンジュゲート；
（Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰ）_１９，Ａ９８Ｋ＾，Ａ９９Ｐ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン）／（２２７Ａ，２３４Ａ，２３５Ｋ，２９７Ｅ，３１５Ｑ，３８４Ｑ，ｄｅｓ４４７ｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７））４−［ビス［２−［（２−アセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイルコンジュゲート；
（Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰ）_１９，Ａ９８Ｋ＾，Ａ９９Ｐ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン）／（２２７Ａ，２３４Ａ，２３５Ｋ，２９７Ｅ，３１５Ｑ，３８４Ｑ，ｄｅｓ４４７ｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７））６−［ビス［２−［（２−アセチル）アミノ］エチル］アミノ］−６−オキソ−ヘキサノイルコンジュゲート；
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＥＰ）_１２，Ａ７０Ｋ＾，Ａ７１Ｐ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン／（２２７Ａ，２３４Ａ，２３５Ｋ，２９７Ｅ，３１５Ｑ，３８４Ｑ，ｄｅｓ４４７ｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７））４−［ビス［２−［（２−アセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイルコンジュゲート；
Ａ１４Ｅ，Ｂ（−７８Ｋ＾），Ｂ（−７７Ｐ），Ｂ（−１）（ＧＱＡＰ）_１９，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン／（２２７Ａ，２３４Ａ，２３５Ｋ，２９７Ｅ，３１５Ｑ，３８４Ｑ，ｄｅｓ４４７ｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７））４−［ビス［２−［（２−アセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイルコンジュゲート；
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰＧＱＡＰＧＱＥＰ）_６−ＧＱＡＰ，Ａ９８Ｋ＾，Ａ９９Ｐ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン／（２２７Ａ，２３４Ａ，２３５Ｋ，２９７Ｅ，３１５Ｑ，３８４Ｑ，ｄｅｓ４４７ｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７））４−［ビス［２−［（２−アセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイルコンジュゲート；
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰＧＱＡＰＧＱＡＰＧＱＥＰ）_６−ＧＱＡＰ，Ａ１２２Ｋ＾，Ａ１２３Ｐ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン／（２２７Ａ，２３４Ａ，２３５Ｋ，２９７Ｅ，３１５Ｑ，３８４Ｑ，ｄｅｓ４４７ｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７））４−［ビス［２−［（２−アセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイルコンジュゲート；
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｑ，Ａ２２（Ｇ）_１８，Ａ４０Ｋ＾，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン／（２２７Ａ，２３４Ａ，２３５ＫｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７））４−［ビス［２−［（２−アセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイルコンジュゲート；
（Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰ）_２４，Ａ１１８Ｇ，Ａ１１９Ｑ，Ａ１２０Ａ，Ａ１２１Ｋ＾，Ａ１２２Ｐ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン）／（２２７Ａ，２３４Ａ，２３５Ｋ，２９７Ｅ，３１５Ｑ，３８４Ｑ，ｄｅｓ４４７ｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７））３，５−ビス［（２−アセチル）アミノ］ベンゾイルコンジュゲート；
（Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰ）_２４，Ａ１１８Ｇ，Ａ１１９Ｑ，Ａ１２０Ａ，Ａ１２１Ｋ＾，Ａ１２２Ｐ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン）／（２２７Ａ，２３４Ａ，２３５Ｋ，２９７Ｅ，３１５Ｑ，３８４Ｑ，ｄｅｓ４４７ｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７））４−［ビス［２−［（２−アセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイルコンジュゲート；
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰＧＱＡＰＧＱＥＰ）_６−ＧＱＡＰ，Ａ９８Ｋ＾，Ａ９９Ｐ，Ｂ３Ｑ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン／（２２７Ａ，２３４Ａ，２３５Ｋ，２９７Ｅ，３１５Ｑ，３８４Ｑ，ｄｅｓ４４７ｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７））４−［ビス［２−［（２−アセチル）アミノ］エチル］カルバモイルアミノ］ブタノイルコンジュゲート；
（Ａ１４Ａ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰ）_１８，Ａ９４Ｇ，Ａ９５Ｑ，Ａ９６Ａ，Ａ９７Ｋ＾，Ａ９８Ｐ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン）／（２２７Ａ，２３４Ａ，２３５Ｋ，２９７Ｅ，３１５Ｑ，３８４Ｑ，ｄｅｓ４４７ｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７））４−［ビス［２−［（２−アセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイルコンジュゲート；
（Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰ）_１８，Ａ９４Ｇ，Ａ９５Ｑ，Ａ９６Ａ，Ａ９７Ｋ＾，Ａ９８Ｐ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン）／（２２７Ａ，２３４Ａ，２３５Ｋ，２９７Ｅ，３１５Ｑ，３８４Ｑ，ｄｅｓ４４７ｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７））４−［ビス［２−［（２−アセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイルコンジュゲート；
（Ａ１（Ｎ（アルファ）アセチル），Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰ）_１９，Ａ９８Ｋ＾，Ａ９９Ｐ，Ｂ１（Ｎ（アルファ）アセチル），Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン）／（２２７Ａ，２３４Ａ，２３５Ｋ，２９７Ｅ，３１５Ｑ，３８４Ｑ，ｄｅｓ４４７ｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７））４−［ビス［２−［（２−アセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイルコンジュゲート；
（Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰ）_１８，Ａ９４Ｇ，Ａ９５Ｑ，Ａ９６Ａ，Ａ９７Ｋ＾，Ａ９８Ｐ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン）／（２２７Ａ，２３４Ａ，２３５Ｋ，２９７Ｅ，３１５Ｑ，３８４Ｑ，ｄｅｓ４４７ｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７））４−［ビス［２−［（２−アセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイルコンジュゲート；
（Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰ）_２４，Ａ１１８Ｇ，Ａ１１９Ｑ，Ａ１２０Ａ，Ａ１２１Ｋ＾，Ａ１２２Ｐ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン）／（２２７Ａ，２３４Ａ，２３５Ｋ，２９７Ｅ，３１５Ｑ，３８４Ｑ，ｄｅｓ４４７ｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７））３，５−ビス［（２−アセチル）アミノ］ベンゾイルコンジュゲート；
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰ）_１８，Ａ９４Ｇ，Ａ９５Ｑ，Ａ９６Ａ，Ａ９７Ｋ＾，Ａ９８Ｐ，Ｂ１６Ｅ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン）／（２２７Ａ，２３４Ａ，２３５Ｋ，２９７Ｅ，３１５Ｑ，３８４Ｑ，ｄｅｓ４４７ｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７））３，５−ビス［（２−アセチル）アミノ］ベンゾイルコンジュゲート；
（Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰ）_１８，Ａ９４Ｇ，Ａ９５Ｑ，Ａ９６Ａ，Ａ９７Ｋ＾，Ａ９８Ｐ，Ｂ１６Ｅ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン）／（２２７Ａ，２３４Ａ，２３５Ｋ，２９７Ｅ，３１５Ｑ，３８４Ｑ，ｄｅｓ４４７ｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７））４−［ビス［２−［（２−アセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイルコンジュゲート；
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＥＰ）_６，Ａ４６Ｋ＾，Ａ４７Ｐ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン／（２２７Ａ，２３４Ａ，２３５Ｋ，２９７Ｅ，３１５Ｑ，３８４Ｑ，ｄｅｓ４４７ｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７））４−［ビス［２−［（２−アセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイルコンジュゲート；または、
（Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＥＰ）_１９，９８Ｋ＾，Ａ９９Ｐ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン）／（２２６Ａ，２２７Ｇ，２２８Ｐ，２３４Ａ，２３５Ｋ，ｄｅｓ４４７ｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７））３，５−ビス［（２−アセチル）アミノ］ベンゾイルコンジュゲートである、実施形態１のオリゴマー伸長インスリン−Ｆｃコンジュゲート。

３４．以下の一般式ＩＩの中間体化合物：
［ＯＥＦ−Ｉｎｓ］
式中、
ＯＥＦは、インスリンＡ鎖のＣ末端に融合されたまたはインスリンＢ鎖のＮ末端に融合された、極性を有する組換え伸長を表すものであって、当該伸長は、リジン（Ｋ）残基と組み合わせた、Ａｌａ（Ａ）、Ａｓｐ（Ｄ）、Ｇｌｕ（Ｅ）、Ｇｌｙ（Ｇ）、Ｐｒｏ（Ｐ）、Ｇｌｎ（Ｑ）、Ｓｅｒ（Ｓ）、およびＴｈｒ（Ｔ）のアミノ酸残基のうちの一つまたは複数を含み；かつ、
Ｉｎｓは、ヒトインスリンの類似体を表し、当該インスリン類似体は、Ａ鎖およびＢ鎖を含む二鎖インスリン分子である。

３５．モノマーＦｃポリペプチド（Ｆｃ’）またはその断片であることによって特徴付けられる中間体化合物であって、
（ｉ）２２８Ｓ、２３４Ａ、２３５Ｋ、２３７Ａ、３１５Ｑ、３３０Ｓ、３３１Ｓおよび３８４Ｑの群から選択される、一つもしくは複数の置換および／もしくは欠失を含む；ならびに／または、２２６Ａ、２２７Ａもしくは２２７Ｓの群から選択される一つもしくは二つのアミノ酸残基からなる伸長を含む、ｈＩｇＧ１−Ｆｃ（２２８−４４７）ポリペプチド；または、
（ｉｉ）２２８位から開始され４４７位で終了するｈＩｇＧ４由来Ｆｃ配列の断片であって、２２８Ｐ、２３４Ａ、２３５Ａもしくは２３５Ｋ、Ｎ２９７Ｅもしくは２９７Ｑ、３１５Ｑ、３８４Ｑおよびｄｅｓ４４７の群から選択される一つもしくは複数の置換、ならびに／または、２２６Ａもしくは２２６Ｇ、２２７Ａもしくは２２７Ｇの群から選択される一つもしくは二つのアミノ酸残基からなる伸長を含有する、ｈＩｇＧ４由来Ｆｃ配列の断片、であることによって特徴付けられる、中間体化合物。

３６．以下の一般式Ｖ’によって特徴付けられる中間体化合物：
Ｍ−Ｘ−Ｕ（−Ｚ−ＬＧ）_２
式中、
Ｍ（Ｌｙｓ反応性末端と命名することもありうる）は、第一級アミノ基に対して反応性をもつ脱離基を表し；
Ｘは存在しないか（すなわち、共有結合を表す）、またはＸは上記一般式Ｉ’で規定される二価結合基を表し；
Ｕは、上記一般式Ｉ’で規定される中央三価結合単位を表し；
Ｚは、中央結合単位（Ｕ）を脱離基（ＬＧ）に連結させる二価結合基を表し；かつ、
ＬＧ（Ｃｙｓ反応性末端と命名することもありうる）は、チオール反応性基の脱離基を表す。

３７．以下の一般式ＶＩ’によって特徴付けられる中間体化合物：
［ＯＥＦ−Ｉｎｓ］−Ｘ−Ｕ（−Ｚ−ＬＧ）_２
式中、
ＯＥＦは、上記一般式Ｉ’で規定されるとおりであり、インスリンＡ鎖のＣ末端に融合されたまたはインスリンＢ鎖のＮ末端に融合された、極性を有する組換え伸長を示すものであって、当該伸長は、リジン（Ｋ）残基と組み合せた、Ａｌａ（Ａ）、Ａｓｐ（Ｄ）、Ｇｌｕ（Ｅ）、Ｇｌｙ（Ｇ）、Ｐｒｏ（Ｐ）、Ｇｌｎ（Ｑ）、Ｓｅｒ（Ｓ）、およびＴｈｒ（Ｔ）のアミノ酸残基のうちの一つまたは複数を含んで、［ＯＥＦ−Ｉｎｓ］構築物を与えるものであって；
該［ＯＥＦ−Ｉｎｓ］構築物は、上記一般式Ｉ’で規定されるとおりであり、リジン（Ｋ）残基を介して二価結合基Ｘに連結しており；
Ｘは、上記一般式Ｉ’で規定される二価結合基を表し；かつ、Ｕは、二つの二価結合基（Ｚ）をＸに連結させる、上記一般式Ｉ’で規定される中央三価結合単位を表すか；または
Ｘは共有結合を表し；かつ、Ｕは、二つの二価結合基（Ｚ）を［ＯＥＦ−Ｉｎｓ］構築物に連結させる、上記一般式Ｉ’で規定される中央三価結合単位を表し；かつ、
ＬＧは、チオール反応性基の脱離基を表す。

３８．実施形態１〜３３のいずれか一つに記載のインスリン−Ｆｃコンジュゲートと、一種または複数種の薬剤的に許容可能な担体もしくは希釈剤とを含む、医薬組成物。

３９．医薬として使用するための実施形態１〜３３のいずれかに記載のオリゴマー伸長インスリン−Ｆｃコンジュゲート。

４０．ヒトを含めた生体動物体の疾患もしくは障害もしくは症状の、治療または緩和に用いる、実施形態１〜３３のいずれかに記載のオリゴマー伸長インスリンＦｃコンジュゲートであって、上記疾患または障害または症状は、糖尿病、１型糖尿病、２型糖尿病、耐糖能障害、高血糖症、脂質代謝異常、肥満症、低代謝性症候群（代謝Ｘ症候群、インスリン抵抗性症候群）、高血圧症、認知障害、アテローム硬化症、心筋梗塞、脳卒中、心血管障害、冠動脈心疾患、炎症性腸症候群、胃腸障害または胃潰瘍から選択され得る、実施形態１〜３３のいずれかに記載のオリゴマー伸長インスリンＦｃコンジュゲート。

４１．ヒトを含めた生体動物体の代謝疾患もしくは障害もしくは症状を治療、予防または緩和する方法であって、その方法が、治療有効量の実施形態１〜３３のいずれか一つに記載のインスリンＦｃコンジュゲートを、それを必要とするかかる生体動物体に投与するステップを含む、方法。

配列情報
ＩｇＧ１−Ｆｃ（２２８−４４７）およびＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７）のＦｃポリペプチド配列（ＥＵ番号付けに従った完全長重鎖のＡＡ２２８−４４７に対応）を配列リストで提供するが、利便性のためここに複製する。

ＩｇＧ１−Ｆｃ（２２８−４４７）（配列番号１）
Ｌ２３４、Ｌ２３５、Ｇ２３７、Ａ３３０およびＰ３３１にそれぞれ対応するアミノ酸残基に、太字および下線を施した。

アミド分解部位のアミノ酸残基は、斜体および下線を施した（すなわち、Ｎ２９７、Ｎ３１４およびＮ３１５）。

本発明によれば、Ｃ末端リジン（Ｋ４４７）残基は欠失していてもよい。

ＩｇＧ２−Ｆｃ（２２０−４４６）（配列番号２）
Ｌ２３４およびＬ２３５に対応するアミノ酸残基に、太字および下線を施した。

本発明によれば、Ｃ末端リジン（Ｋ４４６）残基は欠失していてもよい。

ＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７）（配列番号３）
Ｌ２３４、Ｌ２３５およびＧ２３７にそれぞれ対応するアミノ酸残基に、太字および下線を施した。

本発明によれば、Ｃ末端リジン（Ｋ３７８）残基は欠失していてもよい。

ＩｇＧ１ヒンジ（配列番号４）
この配列は、ＥＵ番号付けに従うヒトＩｇＧ１完全長重鎖のＡＡ２１７−２３０に対応する。

ネイティブＰ２２８残基に対応するアミノ酸残基に、太字および下線を施した。

ＩｇＧ２ヒンジ（配列番号５）
この配列は、ＥＵ番号付けに従うヒトＩｇＧ２完全長重鎖のＡＡ２２０−２３０に対応する。

ＩｇＧ４ヒンジ（配列番号６）
この配列は、ＥＵ番号付けに従うヒトＩｇＧ４完全長重鎖のＡＡ２１８−２２９に対応する。

ＥＵ番号付けに従う完全長ＩｇＧ４重鎖のＳ２２８に対応する残基Ｓに、太字および下線を施した。

この発明について、以下の実施例を参照しながらさらに説明するが、決して請求される本願発明の範囲を限定することを意図するものではない。

以下の実施例および全般的手順は、本明細書および合成スキームで特定された中間体化合物および最終産物に言及する。本発明の化合物の調製について、以下の実施例を使用して詳細に説明しているが、説明した化学反応は、本発明の化合物の調製へのそれらの全般的な適用可能性に関して開示されている。

本発明の開示された範囲内に含まれる各化合物に対して、記載された反応が適用可能でないこともありうる。これが発生する化合物は、当業者によって容易に認識されるだろう。これらの場合、当業者にとって公知の従来的な変形によって、すなわち、干渉する基の適切な保護、他の従来の試薬への変更、または反応条件の通例の変形によって、反応を首尾よく実施することができる。別の方法としては、本明細書に開示されたその他の反応または別の従来の反応が、本発明の対応する化合物の調製に適用されることとなる。すべての調製方法では、すべての出発物質は既知であるか、または既知の出発物質から容易に調製されうる。

すべての温度は摂氏温度で表されており、別段の指示がない限り、収率に言及する場合すべての部および割合は重量によるものであり、また溶媒および溶離液に言及する場合すべての部は体積によるものである。

略語のリスト
酢酸ｄ_４：重水素化酢酸
ＢＳＰＰ：ビス（ｐ−スルホナトフェニル）フェニルホスフィン二水和物二カリウム塩
ＣＴＢ：カルボキシペプチダーゼＢ
ＣＶ：カラム容量
ＤＣＭ：ジクロロメタン
ＤＴＴ：ジチオスレイトール
ＥＤＡＣ：（３−ジメチルアミノプロピル）エチルカルボジイミド
ＥＤＴＡ：エチレンジアミン四酢酸
ＤＩＣ：ジイソプロピルカルボジイミド
ＤＩＰＥＡ：ジイソプロピルエチルアミン
ＥｔＯＨ：エタノール
Ｆｍｏｃ：９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシカルボニル
ＧＡＢＡ：ガンマアミノ酪酸
ＨＡＴＵ：２−（７−アザ−１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロリン酸塩
ＨＢＴＵ：２−（１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロリン酸塩
ＨＯＡＴ：１−ヒドロキシ−７−アザベンゾトリアゾール
ＨＯＢＴ：ヒドロキシベンゾトリアゾール
ＨＰＬＣ：高速液体クロマトグラフィー
ｉｖＤｄｅ：４，４−ジメチル−２，６−ジオキソシクロヘキサ−１−イリデン）−３−メチルブチル
ＬＣＭＳ：液体クロマトグラフィー質量分析
ＭｅＣＮ：アセトニトリル
ＭＱ：ＭｉｌｉＱ水
ＯｔＢｕ：ｔｅｒｔ−ブチルエステル
Ｒｔ：保持時間
ＲＴ：室温
ＲＰ：逆相
ＴＡＴＵ：Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムテトラフルオロホウ酸塩
ＴＢＴＵ：２−（１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロリン酸塩
ＴＣＥＰ：トリス（２−カルボキシエチル）ホスフィン
ＴＣＴＵ：Ｏ−（６−クロロ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムテトラフルオロホウ酸塩
ＴＦＡ：トリフルオロ酢酸
ＴＨＦ：テトラヒドロフラン
Ｔｒｉｓ：トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン、または２−アミノ−２−ヒドロキシメチルプロパン−１，３−ジオール
ＵＰＬＣ：超高速液体クロマトグラフィー

材料および方法
全般的な検出および特徴づけの方法
ＬＣＭＳ法１
システム：ウォーターズ（Ｗａｔｅｒｓ）社ＡＣＱＵＩＴＹＵＰＬＣ
カラム：ウォーターズ（Ｗａｔｅｒｓ）社ＡＣＱＵＩＴＹＢＥＨＣ４カラム、１．７μｍ、１５０×１．０ｍｍ
カラム温度：６０℃
自動サンプラ温度：８℃
検出：ＳｙｎａｐｔＧ２機器およびＵＶ２１５ｎｍ
溶離液：溶媒Ａ：０．０５％（ｖ／ｖ）ＴＦＡのＭＱ水溶液、溶媒Ｂ：０．０５％（ｖ／ｖ）ＴＦＡのＭｅＣＮ溶液
流量：０．１２ｍＬ／分
グラジエント：０〜２４分でＢを２８〜３５％
結果：平均質量（ＭａｘＥｎｔ１）

ＬＣＭＳ法２
システム：アジレント（Ａｇｉｌｅｎｔ）１２９０ｉｎｆｉｎｉｔｙシリーズＵＰＬＣカラム：ＡｅｒｉｓＷＩＤＥＰＯＲＥ３．６μ ＸＢ−Ｃ１８２．１×５０ｍｍ検出器：アジレント・テクノロジー株式会社ＬＣ／ＭＳＤＴＯＦ６２３０（Ｇ６２３０Ａ）；
検出器セットアップ：イオン化法：アジレント（Ａｇｉｌｅｎｔ）ＪｅｔＳｔｒｅａｍソーススキャン範囲：ｍ／ｚｍｉｎ．１００、ｍ／ｚｍａｘ．３２００直線リフレクターモードポジティブモード；
条件：直線グラジエント：５％〜９５％のＢ、グラジェント実行時間：１０分：０〜８分でＢを５〜９５％、８〜９分でＢを９５％、９〜９．５分でＢを９５〜５％、９．５〜１０分でＢを５％流量：０．４０ｍｌ／分固定カラム温度：４０℃；
溶離液：溶媒Ａ：９９．９０％のＨ_２Ｏ、０．０２％のＴＦＡ溶媒Ｂ：９９．９０％のＣＨ_３ＣＮ、０．０２％のＴＦＡ溶媒Ｃ：ＮＡ；
結果の仕様と検証：実測質量（ｍａｓｓｆｏｕｎｄ）は、ＭａｓｓｈｕｎｔｅｒワークステーションソフトウェアバージョンＢ．０５．００Ｂｕｉｌｄ５．０．５１９．１３ＳＰ１（アジレント社）を使用したデコンボリューションの結果として、ｍ＜４０００である化合物に対する化合物のｍ／ｚ（（ｍ＋ｚ）／ｚ）または質量（平均）のいずれかであり；
計算質量（ＣａｌｃｕｌａｔｅｄＭａｓｓ）は、所望の化合物の平均分子量であり；
計算ｍ／ｚは、所望の化合物の分子量（ｍ＋ｚ）／ｚである。

ＬＣＭＳ法３
システム：アジレント（Ａｇｉｌｅｎｔ）１２９０ｉｎｆｉｎｉｔｙシリーズＵＰＬＣカラム：フェノメネックス社（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ）Ａｅｒｉｓｗｉｄｅｐｏｒｅ３．６μ Ｃ４５０×２．１ｍｍ、
検出器：アジレント・テクノロジー株式会社ＬＣ／ＭＳＤＴＯＦ６２３０（Ｇ６２３０Ａ）；
検出器セットアップ：イオン化法：アジレント（Ａｇｉｌｅｎｔ）ＪｅｔＳｔｒｅａｍソーススキャン範囲：ｍ／ｚｍｉｎ．１００、ｍ／ｚｍａｘ．３２００直線リフレクターモードポジティブモード；
条件：ステップグラジエント：Ｂを５％〜９０％、グラジェント実行時間：１０分：０〜１分でＢを５〜２０％、１〜７分でＢを２０〜９０％、７〜８分でＢを９０％、８〜８．５分でＢを９０〜５％、８．５〜１０分でＢを５％流量：０．４０ｍｌ／分固定カラム温度：４０℃；
溶離溶媒Ａ：９９．９０％のＨ_２Ｏ、０．０２％のＴＦＡ溶媒Ｂ：９９．９０％のＣＨ_３ＣＮ、０．０２％のＴＦＡ溶媒Ｃ：ＮＡ；
結果の仕様と検証：実測質量（ｍａｓｓｆｏｕｎｄ）は、ＭａｓｓｈｕｎｔｅｒワークステーションソフトウェアバージョンＢ．０５．００Ｂｕｉｌｄ５．０．５１９．１３ＳＰ１（アジレント社）を使用したデコンボリューションの結果として、ｍ＜４０００である化合物に対する化合物のｍ／ｚ（（ｍ＋ｚ）／ｚ）または質量（平均）のいずれかであり；
計算質量は、所望の化合物の平均分子量であり、計算ｍ／ｚは、所望の化合物の分子量（ｍ＋ｚ）／ｚである。

ＬＣＭＳ法４
システム：ウォーターズ（Ｗａｔｅｒｓ）ＡｃｑｕｉｔｙＵＰＬＣＳＱＤ２０００カラム：ＡｃｑｕｉｔｙＵＰＬＣＢＥＨ１．７μ Ｃ１８１００Å ２．１×５０ｍｍ；
検出器：ＵＶ：ＰＤＡ、ＳＱＤ２０００；
検出器セットアップ：イオン化法：ＥＳ＋スキャン範囲：５００〜２０００コーン電圧：６０Ｖスキャン時間０．５；
条件：直線グラジエント：Ｂを１０％〜９０％グラジエント実行時間：３分合計実行時間：４分流量：０．３ｍｌ／分；カラム温度：４０℃ ＰＤＡ：２１０〜４００ｎｍ、
溶離液：溶媒Ａ：９９．９０％のＨ_２Ｏ、０．１％のＴＦＡ溶媒Ｂ：９９．９０％のＣＨ_３ＣＮ、０．１％のＴＦＡ溶媒Ｃ：ＮＡ；
結果の仕様と検証：実測質量（ｍａｓｓｆｏｕｎｄ）は、化合物の検出された質量であり、実測Ｍ／ｚは、化合物の検出された分子イオン（（Ｍ＋ｚ）／ｚ）であり；
計算質量は、所望の化合物の平均分子量であり；
計算Ｍ／ｚは、所望の化合物の分子量（Ｍ＋ｚ）／ｚである。

ＬＣＭＳ法５
システム：ウォーターズ（Ｗａｔｅｒｓ）ＡｃｑｕｉｔｙＵＰＬＣＳＱＤ２０００カラム：ＡｃｑｕｉｔｙＵＰＬＣＢＥＨ１．７μ Ｃ１８１００Å ２．１×５０ｍｍ；
検出器：ＵＶ：ＰＤＡ、ＳＱＤ２０００；
検出器セットアップ：イオン化法：ＥＳ＋スキャン範囲：１００〜１５００コーン電圧：２５Ｖスキャン時間０．５；
条件：直線グラジエント：Ｂを１０％〜９０％グラジエント実行時間：９分
合計実行時間：１０分流量：０．３ｍｌ／分、
カラム温度：４０℃ ＰＤＡ：２１０〜４００ｎｍ；
溶離液：溶媒Ａ：９９．９０％のＨ_２Ｏ、０．１％のＴＦＡ溶媒Ｂ：９９．９０％のＣＨ_３ＣＮ、０．１％のＴＦＡ溶媒Ｃ：ＮＡ；
結果の仕様と検証：実測質量（ｍａｓｓｆｏｕｎｄ）は、化合物の検出された質量であり、実測Ｍ／ｚは、化合物の検出された分子イオン（（Ｍ＋ｚ）／ｚ）であり；
計算質量は、所望の化合物の分子量であり、計算Ｍ／ｚは、所望の化合物の分子量（Ｍ＋ｚ）／ｚである。

純度：システムソフトウェアによって報告された、溶媒ピークを除外した合計ＡＵＣの割合における、分析物ピークの全イオン電流値（ＴＩＣ）のＡＵＣ；
同定：最大から最小までの、ｍ／ｚとして表わされた各分析物質量ピークの質量。スキャン範囲は、使用する方法でスキャンされる範囲である。検出方法は例えば、直線リフレクターである。

ＬＣＭＳ法６
システム：ウォーターズ（Ｗａｔｅｒｓ）ＡｃｑｕｉｔｙＵＰＬＣＨ−クラスＳＱＤ２２０００
カラム：ＡｃｑｕｉｔｙＵＰＬＣＢＥＨ１．７μ Ｃ１８１００Å ２．１×５０ｍｍ。部品番号：１８６００２３５０
検出器：ＵＶ：ＰＤＡ、ＳＱＤ２０００
検出器セットアップ：イオン化法：ＥＳ＋スキャン範囲：５００〜２０００コーン電圧：６０Ｖスキャン時間：０．５
条件：直線グラジエント：Ｂを１０％〜８０％グラジエント実行時間：２．５０分合計実行時間：４分流量：０．３ｍｌ／分（０〜２．５１分）および０．８ｍｌ／分（２．５１〜４．００分）
カラム温度：４０℃ ＰＤＡ：２１０〜４００ｎｍ
溶離液：溶媒Ａ：９９．９０％のＨ_２Ｏ、０．１％のＴＦＡ溶媒Ｂ：９９．９０％のＣＨ_３ＣＮ、０．１％のＴＦＡ溶媒Ｃ：ＮＡ］
結果の仕様と検証：化合物の実測質量（Ｍａｓｓｆｏｕｎｄ）はＭ／ｚであり、これは化合物の検出された分子イオン（（Ｍ＋ｚ）／ｚ）である。

計算質量は、所望の化合物の分子量であり、計算Ｍ／ｚは、所望の化合物の分子量（Ｍ＋ｚ）／ｚである。純度：システムソフトウェアによって報告された、溶媒ピークを除外した合計ＡＵＣの割合における、分析物ピークの全イオン電流値（ＴＩＣ）のＡＵＣ。

同定：最大から最小までの、ｍ／ｚとして表わされた各分析物質量ピークの質量。

スキャン範囲は、使用する方法でスキャンされる範囲である。

検出方法は例えば、直線リフレクターである。

ＬＣＭＳ法７
システム：アジレント（Ａｇｉｌｅｎｔ）１２９０ｉｎｆｉｎｉｔｙシリーズＵＰＬＣ
カラム：ＥｃｌｉｐｓｅＣ１８＋２．１×５０ｍｍ１．８ｕ。

検出器：アジレント・テクノロジー株式会社ＬＣ／ＭＳＤＴＯＦ６２３０（Ｇ６２３０Ａ）。

イオン化法：アジレント（Ａｇｉｌｅｎｔ）ＪｅｔＳｔｒｅａｍソーススキャン範囲：ｍ／ｚｍｉｎ．１００、ｍ／ｚｍａｘ．３２００直線リフレクターモードポジティブモード；
直線グラジエント：Ｂを５％〜９５％
グラジエント実行時間：６分０〜４．５分でＢを５〜９５％、４．５〜５でＢを９５％、５〜５．５でＢを９５−５％、５．５〜６でＢを５％
流量：０．４０ｍｌ／分固定カラム温度：４０℃
溶媒Ａ：９９．９０％のＨ_２Ｏ、０．０２％のＴＦＡ溶媒Ｂ：９９．９０％ＣＨ_３ＣＮ、０．０２％ＴＦＡ。

実測質量（Ｍａｓｓｆｏｕｎｄ）は、ＭａｓｓｈｕｎｔｅｒワークステーションソフトウェアバージョンＢ．０５．００Ｂｕｉｌｄ５．０．５１９．１３ＳＰ１（アジレント社）を使用したデコンボリューションの結果として、ｍ＜４０００である化合物に対する化合物のｍ／ｚ（（ｍ＋ｚ）／ｚ）または質量（平均）のいずれかである。

計算質量は、所望の化合物の平均分子量である。

計算ｍ／ｚは、所望の化合物の分子量（ｍ＋ｚ）／ｚである。

ＬＣＭＳ法８
システム：ウォーターズ（Ｗａｔｅｒｓ）ＡｃｑｕｉｔｙＵＰＬＣＳＱＤ２０００
カラム：ＡｃｑｕｉｔｙＵＰＬＣＢＥＨ１．７μ Ｃ１８１００Å ２．１×５０ｍｍ
検出器：ＵＶ：ＰＤＡ、ＳＱＤ２０００
検出器セットアップ：イオン化法：ＥＳ＋スキャン範囲：１００〜１５００コーン電圧：２５Ｖスキャン時間０．５
条件：直線グラジエント：Ｂを０％〜５０％グラジエント実行時間：２．５分
合計実行時間：４分
流量：０．３ｍｌ／分
カラム温度：４０℃
ＰＤＡ：２１０〜４００ｎｍ
溶離液：溶媒Ａ：９９，９０％のＨ２Ｏ、０．１％のＴＦＡ溶媒Ｂ：９９．９０％のＣＨ３ＣＮ、０．１％のＴＦＡ溶媒Ｃ：ＮＡ
結果の仕様と検証：実測質量（Ｍａｓｓｆｏｕｎｄ）は、化合物の検出された質量であり、実測Ｍ／ｚは、化合物の検出された分子イオン（（Ｍ＋ｚ）／ｚ）であり、計算質量は、所望の化合物の分子量であり、計算Ｍ／ｚは、所望の化合物の分子量（Ｍ＋ｚ）／ｚである。純度：システムソフトウェアによって報告された、溶媒ピークを除外した合計ＡＵＣの割合における、分析物ピークの全イオン電流値（ＴＩＣ）のＡＵＣ。同定：最大から最小までの、ｍ／ｚとして表わされた各分析物質量ピークの質量。スキャン範囲は、使用する方法でスキャンされる範囲である。検出方法は例えば、直線リフレクターである。

ＬＣＭＳ法９
ＬＣ−システム：ウォーターズ（Ｗａｔｅｒｓ）ＡｃｑｕｉｔｙＵＰＬＣＨクラス
カラム：ウォーターズ（Ｗａｔｅｒｓ）ＡｃｑｕｉｔｙＢＥＨ、Ｃ−１８、１．７μｍ、２．１ｍｍ×５０ｍｍ
検出器：ウォーターズ（Ｗａｔｅｒｓ）ＸｅｖｏＧ２−ＸＳＱＴｏｆ
検出器セットアップ：イオン化法：ＥＳスキャン範囲：５０〜４０００ａｍｕ操作モード：ＭＳレゾリューションモードポジティブ／ネガティブ：ポジティブモード電圧：キャピラリー
３．００ｋＶ；サンプルコーン８０Ｖ、ソース６０Ｖ温度：ソース１５０℃、脱溶媒５００°Ｃ、スキャン時間０．５００秒インタースキャンディレイ（Ｉｎｔｅｒｓｃａｎｄｅｌａｙ）：０．０１４秒
条件：直線グラジエント：Ｂを５％〜９５％グラジエント実行時間：４．０分合計実行時間：７．０分流量：０．４ｍｌ／分、カラム温度：４０℃
溶離液：溶媒Ａ：９９．９０％のＭＱ水、０．１％のギ酸溶媒Ｂ：９９．９０％のアセトニトリル、０．１％のギ酸溶媒Ｃ：９９．９９％のＭＱ水、０．０１％のＴＦＡ
グラジエント：Ａ９０〜０％、Ｂ５〜９５％、Ｃ５％
結果の仕様と検証：実測質量（Ｍａｓｓｆｏｕｎｄ）は、化合物の検出された質量であり、実測Ｍ／ｚは、化合物の検出された分子イオン（（Ｍ＋ｚ）／ｚ）であり、計算質量は、所望の化合物の分子量であり、計算Ｍ／ｚは、所望の化合物の分子量（Ｍ＋ｚ）／ｚである。純度：システムソフトウェアによって報告された、溶媒ピークを除外した合計ＡＵＣの割合における、分析物ピークの全イオン電流値（ＴＩＣ）のＡＵＣ。

同定：最大から最小までの、ｍ／ｚとして表わされた各分析物質量ピークの質量。スキャン範囲は、使用する方法でスキャンされる範囲である。検出方法は例えば、直線リフレクターである。

ＬＣＭＳ法１０
ＬＣ−システム：ウォーターズ（Ｗａｔｅｒｓ）ＡＣＱＵＩＴＹＵＰＬＣＨ
クラスカラム：ウォーターズ（Ｗａｔｅｒｓ）ＡｃｑｕｉｔｙＢＥＨ、Ｃ−１８、１．７μｍ、２．１ｍｍ×５０ｍｍ
検出器：ウォーターズ（Ｗａｔｅｒｓ）ＸｅｖｏＧ２−ＸＳＱＴｏｆ
検出器セットアップ：イオン化法：ＥＳスキャン範囲：５０〜４０００ａｍｕ操作モード：ＭＳレゾリューションモードポジティブ／ネガティブ：ポジティブモード電圧：キャピラリー３．００ｋＶ、サンプルコーン８０Ｖ、ソース６０Ｖ、温度：ソース１５０℃、脱溶媒５００℃、スキャン時間０．５００秒インタースキャンディレイ（Ｉｎｔｅｒｓｃａｎｄｅｌａｙ）：０．０１４秒
条件：直線グラジエント：Ｂを５％〜９５％グラジエント実行時間：４．０分合計実行時間：７．０分流量：０．４ｍｌ／分、カラム温度：４０℃
溶離液：溶媒Ａ：９９．９０％のＭＱ水、０．１％のギ酸溶媒Ｂ：９９．９０％のアセトニトリル、０．１％のギ酸溶媒Ｃ：９９．９９％のＭＱ水、０．０１％のＴＦＡ
グラジエント：Ａを９０〜７０％で１分、７０〜３０％で６分、３０〜０％で０．５分、０％で０．５分、Ｂを５〜２５％で１分、２５〜６５％で６分、６５〜９５％で０．５分、９５％で０．５分、Ｃを５％。

結果の仕様と検証：実測質量（Ｍａｓｓｆｏｕｎｄ）は、化合物の検出された質量であり、実測Ｍ／ｚは、化合物の検出された分子イオン（（Ｍ＋ｚ）／ｚ）であり、計算質量は、所望の化合物の分子量であり、計算Ｍ／ｚは、所望の化合物の分子量（Ｍ＋ｚ）／ｚである。純度：システムソフトウェアによって報告された、溶媒ピークを除外した合計ＡＵＣの割合における、分析物ピークの全イオン電流値（ＴＩＣ）のＡＵＣ。

実施例１：本発明の［ＯＥＦ−Ｉｎｓ］化合物の調製
本発明により使用するオリゴマー伸長融合インスリン化合物は、例えば、国際公開第２０１６／１９３３８０号パンフレットに記載されるように、当技術分野で公知の様々な技術によって製造されてもよい。

インスリンコードＤＮＡは、組み換え型伸長のＤＮＡコードと融合する。このＤＮＡは酵母にクローニングされ、インスリンが発現され、収穫される。伸長したインスリンは、ＡＬＰ酵素（またはトリプシンおよび随意にＣＰＢなど）を使用して、二鎖伸長インスリンに切断される単鎖前駆体として発現される。

ＳＰセファロースでの前駆体の捕捉：
ＳＰカラム（約２００ｍＬ）を０．５ＭのＮａＯＨで再生し、０．１Ｍのクエン酸、ｐＨ３．５で平衡化した。捕捉の実行（カチオン交換）は２０℃で行った。

酵母上清を水と１：１で希釈し、１０〜２０ｍＬ／分の流量でロードした。

０．１Ｍのクエン酸、ｐＨ３．５による洗浄と、６０％ＥｔＯＨによる洗浄とを行った。類似体を０．２ＭのＮａ−酢酸塩ｐＨ５．５／４０％ＥｔＯＨで溶出した。

ＳＰプール（約６００ｍｌ）を水で２回希釈し、５０Ｍｍのグリシンを加えた。ｐＨを９．３に調節し、インスリン１グラム当たり３〜５ｍｇのトリプシンを加えた。ＵＰＬＣで反応を追跡した。

３時間後、クエン酸を加え、ｐＨを３．５に調節して、５０ｍｍの１５μ Ｇｅｍｉｎｉカラムで精製した。

カラム：１０μｍＧｅｍｉｎｉＣ１８５０×２５０ｍｍ２００Å、４７７ｍｌ
緩衝液：
Ａ：１０ｍｌのギ酸／５Ｌの１０％ｗ／ｗアセトニトリル
Ｂ：７０％ｗ／ｗアセトニトリル
グラジエントは１０〜５０％のＢ緩衝液とした。
グラジエント時間／合計ｃｖ１２０分
流量：８０ｍｌ／分

表１．［ＯＥＦ−Ｉｎｓ］化合物

実施例２：Ｆｃの全般的な調製
最初に、ＭＡ−ＩｇＧ４Ｆｃアミノ酸配列（２２６Ｍ，２２７ＡＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７））をコードするＤＮＡ配列を、ｐ３７００−Ａ−ＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７）配列を使用して構築した：
（ＡＳＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ）
次いで、２２７Ａ，ＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７）（Ｆｃ１）を、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）から高濃度で封入体として産生した。

この封入体を蒸留水を用いて２回洗浄し、６Ｍ尿素、１０ｍＭのＤＴＴ、５０ｍＭのＴｒｉｓ、ｐＨ９．０中で１０ｍｇ／ｍで可溶化した。完全に溶解した後、溶液をｐＨ４．５に酸性化し、不純物を除去した。Ｆｃ分子を、以下に詳細に記載されるように、液固相手順を経てリフォールディングした：可溶化された封入体を、リフォールディング溶液（３Ｍ尿素、０．２５アルギニン、１ｍＭシステイン、５０ｍＭのＴｒｉｓ、ｐＨ９．０）に素早く希釈し、２４時間で最終濃度１ｍｇ／ｍＬにした。疎水性相互作用樹脂（ＰｈｅｎｙｌＦａｓｔ−Ｆｌｏｗ）を使用して固相捕捉した後、Ｆｃタンパク質を適切にリフォールディングした。

リフォールディングしたＦｃ分子を、ＣａｐｔｏＭｉｘ−Ｍｏｄｅクロマトグラフィーを用いてさらに精製し、精製されたＦｃ分子を１００ｍＭのＴｒｉｓ、ｐＨ８．０で最終的に可溶化した。

表２．Ｆｃの類似体Ｆｃ類似体は上述のとおり調製した。ＬＣＭＳによって（ＬＣＭＳ法１で）決定されたインタクトな質量が、化合物に対して与えられる。

実施例３：インスリン類似体の誘導体化のためのリンカーの調製
実施例３．１
（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）−４−［ビス［２−［（２−ヨードアセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタン酸塩（化学式６）の合成

ステップ１：４−［ビス［２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタン酸
Ｎ−［２−［２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）エチルアミノ］エチル］カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル（３．０ｇ）をＤＣＭ（５０ｍｌ）中に溶解した。無水コハク酸（１．０８ｇ）を加え、その後モレキュラーシーブ３Å（２．０ｇ）を加えた。混合物を室温（ＲＴ）で攪拌した。１．５時間後、モレキュラーシーブ３Å（２．０ｇ）をさらに加えた。２０時間攪拌した後、反応混合物を濾過し、減圧濃縮して油状物を得た。この油状物を酢酸エチル（１００ｍｌ）に溶解し、５％クエン酸で洗浄し、無水ＭｇＳＯ_４で乾燥させた。濾過後、濾液を減圧濃縮して、透明な気泡として生成物を得た。
ＬＣＭＳ法５：計算ｍ／１：４０４．５；実測ｍ／１：４０４．３；室温、３．６７分

ステップ２：４−［ビス［２−アミノエチル）アミノ］−４−オキソ−ブタン酸
４−［ビス［２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタン酸（４．０ｇ）をジクロロメタン（５０ｍｌ）中に溶解した。ＴＦＡ（１０ｍｌ）を加えた。混合物を室温で２時間攪拌した。ＴＦＡ塩として脱保護された生成物が、油状物として沈殿する。混合物を減圧濃縮して、透明な油状物を得た。アセトニトリルに簡単に溶解させて、再び油状物に濃縮させて、その後トルエンで２回共濃縮した。残渣は、減圧下に一晩放置した。エーテルでの結晶化後、減圧下で乾燥した。白色の結晶が形成した。

ステップ３：４−［ビス［２−［（２−ヨードアセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタン酸
４−［ビス（２−アミノエチル）アミノ］−４−オキソ−ブタノイック（４−［Ｂｉｓ（２−ａｍｉｎｏｅｔｈｙｌ）ａｍｉｎｏ］−４−ｏｘｏ−ｂｕｔａｎｏｉｃ）（６００ｍｇ）を、０．２ＭのＮａ_２ＣＯ_３（３０ｍｌ）およびアセトニトリル（２０ｍｌ）中に溶解した。粉末としてのヨード酢酸ヒドロキシスクシンイミドエステル（９０５ｍｇ）を数回に分けて添加した。添加中、ｐＨを９〜９．５に保持した。反応混合物を室温で３０分間攪拌した。反応物はクエン酸で酸性化し（析出なし）、半分量に濃縮してアセトニトリルを除去し、酢酸エチルで抽出した（３×１００ｍｌ）。黄色の酢酸エチル層を合わせて乾燥し（ＭｇＳＯ_４）、減圧濃縮して黄色の油状物を得て、これをＲＰ−クロマトグラフィーで精製した。

カラム：３０×２５０ｍｍ（Ｇｅｍｉｎｉ−ＮＸ５ｕｍ＿Ｃ１８＿１１０ＡＡＸＩＡ＿３０×２５０ｍｍ）ＣＶ＝１７７ｍｌ
緩衝液Ａ：Ｍｉｌｌｉ−Ｑ水＋０．１％ＴＦＡ
緩衝液Ｂ：８０％アセトニトリルのＭｉｌｌｉ−Ｑ水溶液＋０．１％ＴＦＡ
流量：２５ｍｌ／分
グラジエント：Ｂを０〜７０％−４５分
生成物のフラクションをプールし、凍結乾燥した。
ＬＣＭＳ法５：計算ｍ／１：５４０．１；実測ｍ／１：５４０．０；室温、１．４２分

ステップ４：（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）−４−［ビス［２−［（２−ヨードアセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタン酸塩
４−［ビス［２−［（２−ヨードアセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタン酸（１．５０ｇ）を乾燥ＴＨＦ（１００ｍｌ）中に溶解した。Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（３５１ｍｇ）およびＤＩＣ（０．８６１ｍｌ）を加えた。混合物を室温で一晩、攪拌した。混合物を減圧濃縮した。残渣を５０ｍｌアセトニトリルに溶解し、氷上で冷却し、沈殿物を濾過した。濾液を減圧濃縮した。

残渣をジエチルエーテル中で攪拌し、形成された固体を濾過し、エーテルで洗浄し、減圧乾燥させ、淡黄色の固体として生成物を得た。収量１．７５ｇ（９６％）。
ＬＣＭＳ法５：計算ｍ／１：６３６．２；実測ｍ／１：６３７．０；室温、２．１．２分

実施例３．２
（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）−６−［ビス［２−［（２−ヨードアセチル）アミノ］エチル］アミノ］−６−オキソ−ヘキサン酸塩（化学式７）の合成

ステップ１：メチル６−［ビス［２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）エチル］アミノ］−６−オキソ−ヘキサノアートアジピン酸モノメチル（１．５０ｇ）をＤＣＭ中に溶解した。ＨＯＡＴ（１．２７４ｇ）、ＥＤＣＡ（１．７９５ｇ）およびＤＩＰＥＡ（１．６３２ｍｌ）を加えた。室温で１時間攪拌した後、Ｎ−［２−［２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）エチルアミノ］エチル］カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチル（２．９０ｇ）を加えた。混合物を室温で一晩、攪拌した。混合物をＤＣＭ（１００ｍｌ）で希釈し、２×５０ｍｌの水、５０ｍｌの０．１ＭのＮａ_２ＣＯ_３、および５０ｍｌの５％クエン酸で洗浄した。ＭｇＳＯ_４上で乾燥した。

減圧濃縮して、無色透明な油状物を得た。収量３．９９ｇ（９６％）。
ＬＣＭＳ法５：計算ｍ／１：４４６．６；実測ｍ／１：４４６．５；室温、４．７７分

ステップ２：６−［ビス［２−［（２−メチルプロパン−２−イル）オキシカルボニルアミノ］エチル］アミノ］−６−オキソヘキサン酸
６−［ビス［２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）エチル］アミノ］−６−オキソ−ヘキサン酸メチル（４．１５ｇ）をアセトニトリル（５０ｍｌ）中に溶解した。５ＭのＮａＯＨ（１０ｍｌ）を加えた。混合物を室温で一晩、激しく攪拌した。１０％のクエン酸をｐＨ５．０まで加え、アセトニトリルを減圧下で蒸発させ、残留水相を５０ｍｌの水（ｐＨ４．５）で希釈し、酢酸エチル（２００ｍｌ）で抽出した。有機層をＭｇＳＯ_４上で乾燥し、減圧濃縮して、生成物を得た。収量４．０ｇ（定量）。
ＬＣＭＳ法５：計算ｍ／１：４３２．５；実測ｍ／１：４３２．５；室温、３．９４分

ステップ３：６−［ビス［２−アミノエチル）アミノ］−６−オキソ−ヘキサン酸
６−［ビス［２−［（２−メチルプロパン−２−イル）オキシカルボニルアミノ］エチル］アミノ］−６−オキソヘキサン酸４．０ｇ）をジクロロメタン（５０ｍｌ）中に溶解させ、ＴＦＡ（１５ｍｌ）を加えた。混合物を室温で２時間攪拌した。ＴＦＡ塩として脱保護された生成物を、油状物として分離した。混合物を減圧濃縮して、透明な油状物を得たが、これをアセトニトリル中に溶解させて、再度油状物に濃縮して、トルエンで２回ストリップした。残渣をエーテル中で攪拌した。エーテルをデカンテーションで除き、残渣を一晩減圧乾燥して、硬い油状物を得た。収量４．２ｇ（定量）。

ステップ４：６−［ビス［２−［（２−ヨードアセチル）アミノ］エチル］アミノ］−６−オキソヘキサン酸
６−［ビス（２−アミノエチル）アミノ］−６−オキソ−ヘキサン酸（１．００ｇ）を０．２ＭのＮａ_２ＣＯ_３（３０ｍｌ）およびアセトニトリル（２０ｍｌ）中に溶解し、１ＮのＮａＯＨで、ｐＨを９．３に調節した。粉末としてのヨード酢酸ＯＳｕエステル（１．５３７ｇ）を数回に分けて添加した。添加中および添加後のｐＨは、９〜９．５に保持した。透明な溶液を室温で３０分間攪拌した。反応物を１０％のクエン酸でｐＨ４まで酸性化し、その後、半分量まで濃縮して（アセトニトリルを除去するため）、次いで水で１００ｍｌまで希釈した後、ＲＰクロマトグラフィーで精製した：
カラム：３０×２５０ｍｍ（Ｇｅｍｉｎｉ−ＮＸ５ｕｍ＿Ｃ１８＿１１０ＡＡＸＩＡ＿３０×２５０ｍｍ）ＣＶ＝１７７ｍｌ
緩衝液Ａ：０％アセトニトリルのＭｉｌｌｉ−Ｑ水溶液＋０．１％ＴＦＡ
緩衝液Ｂ：８０％アセトニトリルのＭｉｌｌｉ−Ｑ水溶液＋０．１％ＴＦＡ
流量：２５ｍｌ／分
グラジエント：Ｂの０〜５０％−６０分
生成物プールを減圧濃縮し、アセトニトリルで３回ストリップし、デシケーター（ｅｘｉｃａｔｏｒ）中で減圧乾燥し、純粋な生成物を硬油状の残渣として得た。収量１．２ｇ（９５％）。
ＬＣＭＳ法５：計算ｍ／１：５６８．２；実測ｍ／１：５６８．２；室温、１．８０分

ステップ５：（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）−６−［ビス［２−［（２−ヨードアセチル）アミノ］エチル］アミノ］−６−オキソ−ヘキサン酸塩（化学式７）
６−［ビス［２−［（２−ヨードアセチル）アミノ］エチル］アミノ］−６−オキソヘキサン酸（９７５ｍｇ）を乾燥ＴＨＦ（７５ｍｌ）中に溶解した。Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（２２０ｍｇ）およびＤＩＣ（５３２μＬ）を加えた。混合物を室温で２４時間攪拌した。沈殿物を濾過により除去した。濾液を減圧濃縮した。残渣をアセトニトリル（５０ｍｌ）に溶解し、氷上で冷却した。析出物を濾過した。濾液を減圧濃縮した。残渣をエーテル中で攪拌した。形成された固体を濾過し、エーテルで洗浄し、真空で乾燥させ、淡黄色の固体として生成物を得た。収量１．０３ｇ（９０％）。
ＬＣＭＳ法５：計算ｍ／１：６６５．２；実測ｍ／１：６６５．２；室温、２．５１分

実施例３．３
（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）−（２Ｓ）−２，６−ビス［（２−ヨードアセチル）アミノ］−ヘキサン酸塩（化学式８）の合成

ステップ１：（２Ｓ）−２，６−ビス［（２−クロロアセチル）アミノ］ヘキサン酸
水（２００ｍＬ）中のＬ−リジン一塩酸塩一水和物（Ｌ−ｌｙｓｉｎｅｍｏｎｏｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅｍｏｎｏｈｙｄｒａｔｅ）（５３．２ｇ、２９１ｍｍｏｌ）の水溶液に、水（２００ｍＬ）中の水酸化ナトリウム（６９．８ｇ、１．７５ｍｏｌ）水溶液を加え、この混合物を０℃まで冷却した。ジエチルエーテル（２００ｍＬ）中の塩化クロロアセチル（６９．５ｍＬ、８７４ｍｍｏｌ）の溶液を４５分間にわたって滴下した。反応混合物を０℃で２時間攪拌し、次いで室温で一晩攪拌した。水層を分離し、ジエチルエーテル（２×３００ｍＬ）とジクロロメタン（３×３００ｍＬ）とで洗浄し、次いで濃塩酸を用いてｐＨ２に酸性化し、ジクロロメタンで抽出した（３×４００ｍＬ）。ジクロロメタン抽出物をまとめ、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させた。濾過後、溶媒を減圧下で除去した。水相を凍結乾燥した。生成物２は両相中で検出された。表題化合物（２）を、ＲＰＨＰＬＣ（４ラウンド；カラムＤｅｌｔａｐａｋＣ１８、５０×５００ｍｍ、アセトニトリル／水２：９８〜２０：８０で１８０分、２０：８０〜４０：６０で３０分間＋０．０５％ＴＦＡ）で精製した。凍結乾燥により、無色油状物として（２Ｓ）−２，６−ビス［（２−クロロアセチル）アミノ］ヘキサン酸（２）を得た。
収量：２６．０ｇ（３０％）。
１ＨＮＭＲスペクトル（３００ＭＨｚ、酢酸ｄ_４、ｄＨ）：４．６６（ｄｄ，Ｊ＝８．４および５．０Ｈｚ，１Ｈ）；４．２２（ｓ，２Ｈ）；４．１７（ｓ，２Ｈ）；３．３３（ｔ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，２Ｈ）；２．０２−１．７６（ｍ，２Ｈ）；１．６８−１．５３（ｍ，２Ｈ）；１．５２−１．３７（ｍ，２Ｈ）。
ＬＣ−ＭＳＲｔ（ＫｉｎｅｔｅｘＣ１８、４．６×５０ｍｍ、アセトニトリル／水５：９５〜１００：０＋０．１％ＦＡ）：２．７６分。
ＬＣ−ＭＳｍ／１：２９９．３。

ステップ２：（２Ｓ）−２，６−ビス［（２−ヨードアセチル）アミノ］ヘキサン酸
乾燥アセトニトリル（１０００ｍＬ）中で上記化合物（２６．０ｇ、８６．９ｍｍｏｌ）とヨウ化ナトリウム（６５．２ｇ、４３５ｍｍｏｌ）の混合物を、室温で一晩攪拌した。濾過後、溶媒を減圧除去した。残渣を２％含水アセトニトリルに溶解し、溶液が無色になるまでチオ硫酸ナトリウムを加えた。混合物を、ＲＰＨＰＬＣ（３ラウンド；カラムＤｅｌｔａｐａｋＣ１８、５０×５００ｍｍ、アセトニトリル／水２：９８〜２０：８０で６０分間、次いで２０：８０〜４０：６０で３０分間＋０．０５％ＴＦＡ）で精製した。凍結乾燥により、表題化合物を吸湿性白色固体として得た。
収量：１０．３ｇ（２５％）。
１ＨＮＭＲスペクトル（３００ＭＨｚ、酢酸ｄ_４、８０Ｃ、ｄＨ）：４．６６（ｄｄ，Ｊ＝８．３および５．１Ｈｚ，１Ｈ）；３．９０（ｄｄ，Ｊ＝１２．４および１０．６Ｈｚ，２Ｈ）；３．８３（ｓ，２Ｈ）；３．３２（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，２Ｈ）；２．０４−１．９４（ｍ，１Ｈ）；１．９１−１．７７（ｍ，１Ｈ）；１．７０−１．４７（ｍ，４Ｈ）。
ＬＣ−ＭＳＲｔ（ＫｉｎｅｔｅｘＣ１８、４．６×５０ｍｍ、アセトニトリル／水５：９５〜１００：０＋０．１％ＦＡ）：２．９４分。
ＬＣ−ＭＳｍ／１：４８３．３。

ステップ３：（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）−（２Ｓ）−２，６−ビス［（２−ヨードアセチル）アミノ］ヘキサン酸塩（化学式８）
乾燥ＴＨＦ（１０ｍｌ）中の（２Ｓ）−２，６−ビス［（２−ヨードアセチル）アミノ］ヘキサン酸（５００ｍｇ）の溶液に、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（１５０ｍｇ）およびＤＩＣ（０．２０１ｍｌ）を加えた。混合物を室温で２４時間攪拌し、その後減圧濃縮した。残渣をアセトニトリル（１００ｍｌ）に溶解し、氷冷して濾過した。アセトニトリル相を減圧濃縮した。残渣をエーテル中で攪拌し、形成された固体を濾過し、エーテルで洗浄し、減圧乾燥させ、淡黄色の固体として生成物を得た。
ＬＣＭＳ法４：計算ｍ／１：５８０．１；実測ｍ／１：５８０．１；室温、１．７５分

実施例３．４
（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）−４−［ビス［２−［（２−ヨードアセチル）アミノ］エチル］カルバモイルアミノ］ブタン酸塩（化学式９）の合成

ステップ１：４−［ビス［２−［（２−ヨードアセチル）アミノ］エチル］カルバモイルアミノ］ブタン酸
２−クロロトリチル樹脂１００〜２００メッシュ、１．５ｍｍｏｌ／ｇ（１、９．２２ｇ、１３．８ｍｍｏｌ）を、乾燥ジクロロメタン（５０ｍＬ）中で１時間膨潤させた。乾燥Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３０ｍＬ）および乾燥ジクロロメタン（２０ｍＬ）混合液中のＦｍｏｃ−ＧＡＢＡ−ＯＨ（３．００ｇ、９．２２ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（６．４０ｍＬ、３６．９ｍｍｏｌ）の溶液を樹脂に加え、混合物を一晩振盪させた。樹脂をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３×５０ｍＬ）、２−プロパノール（３×５０ｍＬ）およびジクロロメタン（３×５０ｍＬ）で洗浄した。Ｆｍｏｃ群を、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド中の２０％ピペリジンによる処理（１×５分、１×３０分、２×５０ｍＬ）で除去した。樹脂をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３×５０ｍＬ）、２−プロパノール（３×５０ｍＬ）およびジクロロメタン（３×５０ｍＬ）で洗浄した。

樹脂に、乾燥テトラヒドロフラン／ジクロロメタン混合液（１：１、５０ｍＬ）中のクロロギ酸４−ニトロフェニル（９．２７ｇ、４６．１ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（９．６４ｍＬ、５５．３ｍｍｏｌ）の溶液を加え、混合物を１１０分間振盪した。樹脂を濾過し、ジクロロメタン（３×５０ｍＬ）、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３×５０ｍＬ）およびジクロロメタン（３×５０ｍＬ）で洗浄した。樹脂に、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（５０ｍＬ）中の２−（１−（（２−（（２−（（１−（４，４−ジメチル−２，６−ジオキソシクロヘキシリデン）−３−メチルブチル）アミノ）エチル）アミノ）エチル）アミノ）ブチリデン）−５，５−ジメチルシクロヘキサン−１，３−ジオン（２、１４．３ｇ、２７．７ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（４．８０ｍＬ、２７．７ｍｍｏｌ）の溶液を加え、混合物を９０分間振盪した。樹脂を濾過し、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３×５０ｍＬ）、２−プロパノール（３×５０ｍＬ）およびジクロロメタン（３×５０ｍＬ）で洗浄した。

ＩｖＤｄｅ群を、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド中の２％ヒドラジン一水和物による処理（４×４分、３×４０ｍＬ）で除去した。樹脂をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３×５０ｍＬ）、ジクロロメタン（３×５０ｍＬ）およびＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３×５０ｍＬ）で洗浄した。樹脂に、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（４０ｍＬ）中のヨード酢酸無水物（９．８０ｇ、２７．７ｍｍｏｌ）および２，４，６−コリジン（１．２０ｍＬ、９．２２ｍｍｏｌ）の溶液を加え、混合物を２０分間振盪した。樹脂を濾過し、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（４×５０ｍＬ）およびジクロロメタン（１０×５０ｍＬ）で洗浄した。樹脂を、ジクロロメタン中のトリフルオロ酢酸の２％溶液で処理（２×１．５時間、２×４０ｍＬ）し、次いでジクロロメタン（３×５０ｍＬ）で洗浄した。溶液を合わせて、乾燥状態まで蒸発させた。残渣を、ＲＰＨＰＬＣ（カラムＤｅｌｔａｐａｋＣ１８、５０×５００ｍｍ、アセトニトリル／水＋０．０５％ＴＦＡ、２：９８〜２０：８０で６０分間、次いで２０：８０〜５０：５０で６０分間＋０．０５％ＴＦＡ）で精製した。凍結乾燥により、表題化合物を白色固体として得た。
収量：５６０ｍｇ（１１％）。
１ＨＮＭＲスペクトル（３００ＭＨｚ、酢酸ｄ_４、ｄＨ）：３．８２（ｓ，４Ｈ）；３．４５（ｔ，Ｊ＝６．３Ｈｚ，８Ｈ）；３．３０（ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，２Ｈ）；２．４３（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，２Ｈ）；１．９２−１．８１（ｍ，２Ｈ）。
ＬＣ−ＭＳＲｔ（ＫｉｎｅｔｅｘＣ１８、４．６×５０ｍｍ、アセトニトリル／水５：９５〜１００：０＋０．１％ＦＡ）：２．８９分。
ＬＣ−ＭＳｍ／１：５６９．５。

ステップ２：（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）４−［ビス［２−［（２−ヨードアセチル）アミノ］エチル］カルバモイルアミノ］ブタノアート４−［ビス［２−［（２−ヨードアセチル）アミノ］エチル］カルバモイルアミノ］ブタン酸（化学式９）
４−［ビス［２−［（２−ヨードアセチル）アミノ］エチル］カルバモイルアミノ］ブタン酸（２５０ｍｇ）を乾燥ＴＨＦ（２０ｍｌ）中に溶解した。Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（６２ｍｇ）およびＤＩＣ（０．１５ｍｌ）を加えた。混合物を室温で２４時間攪拌した。沈殿物を濾過し、濾液を減圧濃縮した。残渣をアセトニトリル（５０ｍｌ）に溶解し、氷上で冷却した。沈殿物を濾過し（ジシクロヘキシル尿素（ｄｉｃｙｃｌｏｈｅｘｙｌｕｒｉｎｓｔｏｆ））、濾液を減圧濃縮した。

残渣をエーテル中で攪拌し、形成された固体を濾過し、エーテルで洗浄し、減圧乾燥させ、淡黄色の固体として生成物を得た。収量：２９５ｍｇ。
ＬＣＭＳ法８：計算ｍ／１：６６６．２；実測ｍ／１：６６６．１；室温、２．６１分

実施例３．５
（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）−３，５−ビス［（２−ブロモアセチル）アミノ］安息香酸塩（化学式１０）の合成
３，５−ジアミノ安息香酸（０．５ｇ）を５ｍｌ無水ＤＭＦ中に溶解した。反応物を氷上で冷却し、一方、ＤＭＦ（１．８ｍＬ）中に溶解したブロモ酢酸無水物（１．８ｇ）を＋５℃で反応物に滴下した。氷浴を除去し、反応物を室温で４時間攪拌した。反応物に５０ｍｌの氷冷水を加え、灰色の沈殿物を形成した。混合物を冷蔵庫内で一晩保存した。

沈殿物をろ過し、水で洗浄した。沈殿物を２−メチル−テトラヒドロフラン（２０ｍＬ）中に溶解し、Ｎａ_２ＳＯ_４上で乾燥させ、ろ過し、減圧濃縮した。残渣に、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（４１６ｍｇ）およびＤＩＣ（１．０ｍＬ）を加えた。室温で３時間攪拌した後、混合物を減圧濃縮した。アセトニトリル（２０ｍＬ）を加え、尿素をろ過した。濾液を、約５ｍＬまで減圧下で減少させた。ジエチルエーテルから析出させた。析出物を洗浄し、遠心分離を２回行った。単離された化合物を窒素気流下で減圧乾燥した。
ＬＣＭＳ法９：ｍ／１：計算値４９２．１；実測値４９１．９。

実施例４：インスリン誘導体の調製
代表的なインスリン誘導体の調製は、実施例４．１に与えられる。実施例４．２〜４．２６のインスリン誘導体は、別段の記載がない限り、実施例４．１で提供する方法により調製される。

実施例４．１
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＥＰ） _１９，Ａ９８Ｋ（Ｎ（ｅｐｓ）４−［ビス［２−［（２−ヨードアセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイル），Ａ９９Ｐ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリンの合成
水（１０ｍｌ）およびアセトニトリル（２ｍｌ）中の、Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＥＰ）_１９，Ａ９８Ｋ，Ａ９９Ｐ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（ＯＥＦ−Ｉｎｓ−１）（１３００ｍｇ）の水溶液を、１ＮＮａＯＨでｐＨ１０に調節した。ＣａＣｌ_２，２Ｈ_２Ｏ（２０ｍｏｌ過剰、２８ｍｇ）を加えた。ｐＨを１１．３に再調整した。１：１のＴＨＦ／ＭｅＣＮ（３ｍｌ）中に溶解した実施例３．１の（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）−４−［ビス［２−［（２−ヨードアセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタン酸塩（化学式６）を、激しく攪拌しながら滴下した。ｐＨは１０．６に低下した。混合物を４５分間攪拌し、水で８０ｍｌに希釈し、ｐＨは１ＮＨＣｌで２．５に調節した。ＲＰクロマトグラフィーで精製した。

カラム：フェノメネックス社（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ），Ｇｅｍｉｎｉ−ＮＸ，ＡＸＩＡ，５μ，Ｃ１８，１１０Å，３０×２５０ｍｍ
緩衝液：Ａ：水中の０．１％ＴＦＡ：アセトニトリル中の０．１％ＴＦＡ
グラジエント：６０分間にわたってＢを２０〜４０％
生成物プールを凍結乾燥して、表題化合物を６１％の収率で得た。
ＬＣＭＳ法６：計算ｍ／４：１２９０．６；実測ｍ／４：１２９１．９；室温、１．３７分

実施例４．２
Ａ１４Ｅ，Ｂ（−７８Ｋ（Ｎ（ｅｐｓ）４−［ビス［２−［（２−ヨードアセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイル）），Ｂ（−７７Ｐ），（Ｂ−１）（ＧＱＡＰＧＱＡＰＧＱＥＰ） _６ −ＧＱＡＰ，Ｂ３Ｑ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリンの合成
表題化合物を、Ａ１４Ｅ，Ｂ（−７８Ｋ），Ｂ（−７７Ｐ），（Ｂ−１）（ＧＱＡＰＧＱＡＰＧＱＥＰ）_６−ＧＱＡＰ，Ｂ３Ｑ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（ＯＥＦ−Ｉｎｓ−２）と、実施例３．１の（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）−４−［ビス［２−［（２−ヨードアセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタン酸塩（化学式６）とから、実施例４．１に記載の通常のリンカーとのインスリン結合手順にならって、調製した。
ＬＣＭＳ法４：計算ｍ／１１１２２９．０；実測ｍ／１１：１２３１．９；室温１．６分。

実施例４．３
Ａ１４Ｅ，Ｂ（−７８Ｋ（Ｎ（ｅｐｓ）４−［ビス［２−［（２−ヨードアセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイル）），Ｂ（−７７Ｐ），Ｂ（−１）（ＧＱＥＰ） _１９，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリンの合成
表題化合物を、Ａ１４Ｅ，Ｂ（−７８Ｋ），Ｂ（−７７Ｐ），Ｂ（−１）（ＧＱＥＰ）_１９，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（ＯＥＦ−Ｉｎｓ−４）と、実施例３．１の（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）−４−［ビス［２−［（２−ヨードアセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタン酸塩（化学式６）とから、実施例４．１に記載の通常のリンカーとのインスリン結合手順にならって、調製した。
ＬＣＭＳ法３：計算質量１４２５３．０；実測質量１４２５４．０

実施例４．４
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰＧＱＡＰＧＱＥＰ） _６ −ＧＱＡＰ，Ａ９８Ｋ（Ｎ（ｅｐｓ）４−［ビス［２−［（２−ヨードアセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイル），Ａ９９Ｐ，Ｂ３Ｑ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリンの合成
表題化合物を、Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰＧＱＡＰＧＱＥＰ）_６−ＧＱＡＰ，Ａ９８Ｋ，Ａ９９Ｐ，Ｂ３Ｑ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（ＯＥＦ−Ｉｎｓ−３）と、実施例３．１の（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）−４−［ビス［２−［（２−ヨードアセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタン酸塩（化学式６）とから、実施例４．１に記載の通常のリンカーとのインスリン結合手順にならって、調製した。
ＬＣＭＳ法４：計算ｍ／９１４９６．２；実測ｍ／９：１４９６．２；室温１．５６分。

実施例４．５
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＥＰ） _１９，Ａ９８Ｋ（Ｎ（ｅｐｓ）４−［ビス［２−［（２−ヨードアセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイル），Ａ９９Ｐ，Ｂ３Ｑ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリンの合成
表題化合物を、Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＥＰ）_１９，Ａ９８Ｋ，Ａ９９Ｐ，Ｂ３Ｑ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（ＯＥＦ−Ｉｎｓ−５）と、実施例３．１の（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）−４−［ビス［２−［（２−ヨードアセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタン酸塩（化学式６）とから、実施例４．１に記載の通常のリンカーとのインスリン結合手順にならって、調製した。
ＬＣＭＳ法６：計算ｍ／１０１４２１．１；実測ｍ／１０：１４２２．１；室温１．３５分。

実施例４．６
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＥＰ） _６，Ａ４６Ｋ（Ｎ（ｅｐｓ）４−［ビス［２−［（２−ヨードアセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイル），Ａ４７Ｐ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリンの合成
表題化合物を、Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＥＰ）_６，Ａ４６Ｋ，Ａ４７Ｐ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（ＯＥＦ−Ｉｎｓ−７）と、実施例３．１の（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）−４−［ビス［２−［（２−ヨードアセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタン酸塩（化学式６）とから、実施例４．１に記載の通常のリンカーとのインスリン結合手順にならって、調製した。
ＬＣＭＳ法５：計算ｍ／５１７７０．６；実測ｍ／５：１７７０．６；室温１．３７分。

実施例４．７
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＥＰ） _１２，Ａ７０Ｋ（Ｎ（ｅｐｓ）４−［ビス［２−［（２−ヨードアセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイル），Ａ７１Ｐ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリンの合成
表題化合物を、Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＥＰ）_１２，Ａ７０Ｋ，Ａ７１Ｐ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（ＯＥＦ−Ｉｎｓ−６）と、実施例３．１の（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）−４−［ビス［２−［（２−ヨードアセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタン酸塩（化学式６）とから、実施例４．１に記載の通常のリンカーとのインスリン結合手順にならって、調製した。
ＬＣＭＳ法４：計算ｍ／６１８８７．１；実測ｍ／６：１８８７．２；室温１．６分。

実施例４．８
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰＧＱＥＰ） _６，Ａ７０Ｋ（Ｎ（ｅｐｓ）４−［ビス［２−［（２−ヨードアセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイル），Ａ７１Ｐ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリンの合成
表題化合物を、Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰＧＱＥＰ）_６，Ａ７０Ｋ，Ａ７１Ｐ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（ＯＥＦ−Ｉｎｓ−９）と、実施例３．１の（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）−４−［ビス［２−［（２−ヨードアセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタン酸塩（化学式６）とから、実施例４．１に記載の通常のリンカーとのインスリン結合手順にならって、調製した。
ＬＣＭＳ法３：計算質量：１０９６８；実測質量：１０９６９

実施例４．９
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＥＰ） _３，Ａ３４Ｇ，Ａ３５Ｑ，Ａ３６Ｅ，Ａ３７Ｋ（Ｎ（ｅｐｓ）４−［ビス［２−［（２−ヨードアセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイル），Ａ３８Ｐ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリンの合成
表題化合物を、Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＥＰ）_３，Ａ３４Ｇ，Ａ３５Ｑ，Ａ３６Ｅ，Ａ３７Ｋ，Ａ３８Ｐ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（ＯＥＦ−Ｉｎｓ−８）と、実施例３．１の（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）−４−［ビス［２−［（２−ヨードアセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタン酸塩（化学式６）とから、実施例４．１に記載の通常のリンカーとのインスリン結合手順にならって、調製した。
ＬＣＭＳ法３：計算質量：７９２８；実測質量：７９２８

実施例４．１０
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰ） _１９，Ａ９８Ｋ（Ｎ（ｅｐｓ）４−［ビス［２−［（２−ヨードアセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイル），Ａ９９Ｐ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリンの合成
表題化合物を、Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰ）_１９，Ａ９８Ｋ，Ａ９９Ｐ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（ＯＥＦ−Ｉｎｓ−１３）と、実施例３．１の（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）−４−［ビス［２−［（２−ヨードアセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタン酸塩（化学式６）とから、実施例４．１に記載の通常のリンカーとのインスリン結合手順にならって、調製した。
ＬＣＭＳ法３：計算質量：１３０９３．０；実測質量：１３０９７．８

実施例４．１１
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰ） _１９，Ａ９８Ｋ（Ｎ（ｅｐｓ）６−［ビス［２−［（２−ヨードアセチル）アミノ］エチル］アミノ］−６−オキソ−ヘキサノイル），Ａ９９Ｐ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリンの合成
表題化合物を、Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰ）_１９，Ａ９８Ｋ，Ａ９９Ｐ，Ｂ３Ｑ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（ＯＥＦ−Ｉｎｓ−１３）と、実施例３．２の（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）−６−［ビス［２−［（２−ヨードアセチル）アミノ］エチル］アミノ］−６−オキソ−ヘキサン酸塩（化学式７）とから、実施例４．１に記載の通常のリンカーとのインスリン結合手順ならって、調製した。
ＬＣＭＳ法３：計算質量１３１２２．０；実測質量：１３１２３

実施例４．１２
Ａ１４Ｅ，Ｂ（−７８Ｋ（Ｎ（ｅｐｓ）４−［ビス［２−［（２−ヨードアセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイル）），Ｂ（−７７Ｐ），Ｂ（−１）（ＧＱＡＰ）_１９，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリンの合成
表題化合物を、Ａ１４Ｅ，Ｂ（−７８Ｋ），Ｂ（−７７Ｐ），Ｂ（−１）（ＧＱＡＰ）_１９，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（ＯＥＦ−Ｉｎｓ−１２）と、実施例３．１の（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）−４−［ビス［２−［（２−ヨードアセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタン酸塩（化学式６）とから、実施例４．１に記載の通常のリンカーとのインスリン結合手順にならって、調製した。
ＬＣＭＳ法３：計算質量１３１５１．０；実測質量：１３１５１．３

実施例４．１３
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰＧＱＡＰＧＱＥＰ） _６ −ＧＱＡＰ，Ａ９８Ｋ（Ｎ（ｅｐｓ）４−［ビス［２−［（２−ヨードアセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイル），Ａ９９Ｐ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリンの合成
表題化合物を、Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰＧＱＡＰＧＱＥＰ）_６−ＧＱＡＰ，Ａ９８Ｋ，Ａ９９Ｐ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（ＯＥＦ−Ｉｎｓ−１４）と、実施例３．１の（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）−４−［ビス［２−［（２−ヨードアセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタン酸塩（化学式６）とから、実施例４．１に記載の通常のリンカーとのインスリン結合手順にならって、調製した。
ＬＣＭＳ法７：計算値１３４５２．７；実測値１３４５２

実施例４．１４
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰＧＱＡＰＧＱＡＰＧＱＥＰ） _６ −ＧＱＡＰ，Ａ１２２Ｋ（Ｎ（ｅｐｓ）４−［ビス［２−［（２−ヨードアセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイル），Ａ１２３Ｐ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリンの合成
表題化合物を、Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰＧＱＡＰＧＱＡＰＧＱＥＰ）_６−ＧＱＡＰ，Ａ１２２Ｋ，Ａ１２３Ｐ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（ＯＥＦ−Ｉｎｓ−１５）と、実施例３．１の（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）−４−［ビス［２−［（２−ヨードアセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタン酸塩（化学式６）とから、実施例４．１に記載の通常のリンカーとのインスリン結合手順にならって、調製した。
ＬＣＭＳ法３：計算値１５５６２．４；実測値１５５６２．５

実施例４．１５
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｑ，Ａ２２（Ｇ） _１８，Ａ４０Ｋ（Ｎ（ｅｐｓ）４−［ビス［２−［（２−ヨードアセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイル），Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリンの合成
表題化合物を、Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｑ，Ａ２２（Ｇ）_１８，Ａ４０Ｋ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（ＯＥＦ−Ｉｎｓ−１９）と、実施例３．１の（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）−４−［ビス［２−［（２−ヨードアセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタン酸塩（化学式６）とから、実施例４．１に記載の通常のリンカーとのインスリン結合手順にならって、調製した。
ＬＣＭＳ法４：計算ｍ／４：１８４５．１；実測ｍ／４：１８４５．８；室温１．６６分

実施例４．１６
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰ）_２４，Ａ１１８Ｇ，Ａ１１９Ｑ，Ａ１２０Ａ，Ａ１２１Ｋ（Ｎ（ｅｐｓ）−３，５−ビス［（２−ブロモアセチル）アミノ］ベンゾイル），Ａ１２２Ｐ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリンの合成
表題化合物を、Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰ）_２４，Ａ１１８Ｇ，Ａ１１９Ｑ，Ａ１２０Ａ，Ａ１２１Ｋ，Ａ１２２Ｐ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（ＯＥＦ−Ｉｎｓ−２０）と、実施例３．５の（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）−３，５−ビス［（２−ブロモアセチル）アミノ］安息香酸塩（化学式１０）とから、実施例４．１に記載の通常のリンカーとのインスリン結合手順にならって、調製した。
ＬＣＭＳ法９：計算質量１４９７２；実測質量：１４９７３。

実施例４．１７
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰ） _２４，Ａ１１８Ｇ，Ａ１１９Ｑ，Ａ１２０Ａ，Ａ１２１Ｋ（Ｎ（ｅｐｓ）４−［ビス［２−［（２−ヨードアセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイル），Ａ１２２Ｐ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリンの合成
表題化合物を、Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰ）_２４，Ａ１１８Ｇ，Ａ１１９Ｑ，Ａ１２０Ａ，Ａ１２１Ｋ，Ａ１２２Ｐ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（ＯＥＦ−Ｉｎｓ−２０）と、実施例３．１の（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）−４−［ビス［２−［（２−ヨードアセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタン酸塩（化学式６）とから、実施例４．１に記載の通常のリンカーとのインスリン結合手順にならって、調製した。
ＬＣＭＳ法９：計算ｍ／８：１８９１；実測ｍ／８１８９１。

実施例４．１８
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰＧＱＡＰＧＱＥＰ） _６ −ＧＱＡＰ，Ａ９８Ｋ（Ｎ（ｅｐｓ）４−［ビス［２−［（２−ヨードアセチル）アミノ］エチル］カルバモイルアミノ］ブタノイル），Ａ９９Ｐ，Ｂ３Ｑ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリンの合成
表題化合物を、Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰＧＱＡＰＧＱＥＰ）_６−ＧＱＡＰ，Ａ９８Ｋ，Ａ９９Ｐ，Ｂ３Ｑ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（ＯＥＦ−Ｉｎｓ−３）と、実施例３．４の（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）４−［ビス［２−［（２−ヨードアセチル）アミノ］エチル］カルバモイルアミノ］ブタン酸塩（化学式９）とから、実施例４．１に記載の通常のリンカーとのインスリン結合手順にならって、調製した。
ＬＣＭＳ法７：計算質量１３４８５．２；実測質量１３４８５．７

実施例４．１９
Ａ１４Ａ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰ） _１８，Ａ９４Ｇ，Ａ９５Ｑ，Ａ９６Ａ，Ａ９７Ｋ（Ｎ（ｅｐｓ）４−［ビス［２−［（２−ヨードアセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイル），Ａ９８Ｐ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリンの合成
表題化合物を、Ａ１４Ａ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰ）_１８，Ａ９４Ｇ，Ａ９５Ｑ，Ａ９６Ａ，Ａ９７Ｋ，Ａ９８Ｐ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（ＯＥＦ−Ｉｎｓ−１６）と、実施例３．１の（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）−４−［ビス［２−［（２−ヨードアセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタン酸塩（化学式６）とから、実施例４．１に記載の通常のリンカーとのインスリン結合手順にならって、調製した。
ＬＣＭＳ法７：計算質量１２８４８．８；実測質量：１２９４９．３

実施例４．２０
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰ）_１８，Ａ９４Ｇ，Ａ９５Ｑ，Ａ９６Ａ，Ａ９７Ｋ（Ｎ（ｅｐｓ）４−［ビス［２−［（２−ヨードアセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイル），Ａ９８Ｐ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリンの合成
表題化合物を、Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰ）_１８，Ａ９４Ｇ，Ａ９５Ｑ，Ａ９６Ａ，Ａ９７Ｋ，Ａ９８Ｐ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（ＯＥＦ−Ｉｎｓ−１７）と、実施例３．１の（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）−４−［ビス［２−［（２−ヨードアセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタン酸塩（化学式６）とから、実施例４．１に記載の通常のリンカーとのインスリン結合手順にならって、調製した。
ＬＣＭＳ法１０：計算ｍ／８１６２６．９；実測ｍ／８：１６２７；室温２．１８分。

実施例４．２１
Ａ１（Ｎ（アルファ）アセチル），Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰ） _１９，Ａ９８Ｋ（Ｎ（ｅｐｓ）４−［ビス［２−［（２−ヨードアセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイル），Ａ９９Ｐ，Ｂ１（Ｎ（アルファ）アセチル），Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリンの合成
実施例４．１に記載されるように精製前に無水酢酸（２等量）を添加し、３０分間攪拌することによって、実施例４．１０に記載されるように調製された、Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰ）_１９，Ａ９８Ｋ（Ｎ（ｅｐｓ）４−［ビス［２−［（２−ヨードアセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイル），Ａ９９Ｐ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリンの粗反応混合物から、表題化合物を調製した。
ＬＣＭＳ法７：計算質量１３１７８．０；実測質量：１３１７８．３

実施例４．２２
Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰ） _１８，Ａ９４Ｇ，Ａ９５Ｑ，Ａ９６Ａ，Ａ９７Ｋ（Ｎ（ｅｐｓ）４−［ビス［２−［（２−ヨードアセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイル），Ａ９８Ｐ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリンの合成
表題化合物を、Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰ）_１８，Ａ９４Ｇ，Ａ９５Ｑ，Ａ９６Ａ，Ａ９７Ｋ，Ａ９８Ｐ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（ＯＥＦ−Ｉｎｓ−２２）と、実施例３．１の（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）−４−［ビス［２−［（２−ヨードアセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタン酸塩（化学式６）とから、実施例４．１に記載の通常のリンカーとのインスリン結合手順にならって、調製した。
ＬＣＭＳ法７：計算質量：１３０４０．９；実測質量：１３０４１．５；

実施例４．２３
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰ） _２４，Ａ１１８Ｇ，Ａ１１９Ｑ，Ａ１２０Ａ，Ａ１２１Ｋ（Ｎ（ｅｐｓ）−３，５−ビス［（２−ブロモアセチル）アミノ］ベンゾイル），Ａ１２２Ｐ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリンの合成
表題化合物を、Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰ）_２４，Ａ１１８Ｇ，Ａ１１９Ｑ，Ａ１２０Ａ，Ａ１２１Ｋ，Ａ１２２Ｐ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（ＯＥＦ−Ｉｎｓ−２１）と、実施例３．５の（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）−３，５−ビス［（２−ブロモアセチル）アミノ］安息香酸塩（化学式１０）とから、実施例４．１に記載の通常のリンカーとのインスリン結合手順にならって、調製した。
ＬＣＭＳ法７：計算質量１４９８２．０；実測質量：１４９８２．４。

実施例４．２４
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰ） _１８，Ａ９４Ｇ，Ａ９５Ｑ，Ａ９６Ａ，Ａ９７Ｋ（Ｎ（ｅｐｓ）−３，５−ビス［（２−ブロモアセチル）アミノ］ベンゾイル），Ａ９８Ｐ，Ｂ１６Ｅ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリンの合成
表題化合物を、Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰ）_１８，Ａ９４Ｇ，Ａ９５Ｑ，Ａ９６Ａ，Ａ９７Ｋ，Ａ９８Ｐ，Ｂ１６Ｅ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（ＯＥＦ−Ｉｎｓ−２３）と、実施例３．５の（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）−３，５−ビス［（２−ブロモアセチル）アミノ］安息香酸塩（化学式１０）とから、実施例４．１に記載の通常のリンカーとのインスリン結合手順にならって、調製した。
ＬＣＭＳ法７：計算質量１２８１７．７；実測質量：１４２８２８．２。

実施例４．２５
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰ） _１８，Ａ９４Ｇ，Ａ９５Ｑ，Ａ９６Ａ，Ａ９７Ｋ（Ｎ（ｅｐｓ）４−［ビス［２−［（２−ヨードアセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイル），Ａ９８Ｐ，Ｂ１６Ｅ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリンの合成
表題化合物を、Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰ）_１８，Ａ９４Ｇ，Ａ９５Ｑ，Ａ９６Ａ，Ａ９７Ｋ，Ａ９８Ｐ，Ｂ１６Ｅ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（ＯＥＦ−Ｉｎｓ−２３）と、実施例３．１の（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）−４−［ビス［２−［（２−ヨードアセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタン酸塩（化学式６）とから、実施例４．１に記載の通常のリンカーとのインスリン結合手順にならって、調製した。
ＬＣＭＳ法７：計算質量：１２９６２．７；実測質量：１２９６３．１

実施例４．２６
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＥＰ） _１９，Ａ９８Ｋ（Ｎ（ｅｐｓ）−３，５−ビス［（２−ブロモアセチル）アミノ］ベンゾイル），Ａ９９Ｐ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリンの合成
表題化合物を、Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＥＰ）_１９，Ａ９８Ｋ，Ａ９９Ｐ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（ＯＥＦ−Ｉｎｓ−１）と、実施例３．５の（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）−３，５−ビス［（２−ブロモアセチル）アミノ］安息香酸塩（化学式１０）とから、実施例４．１に記載の通常のリンカーとのインスリン結合手順にならって、調製した。
ＬＣＭＳ法７：計算質量１４０５１．４；実測質量：１４０５２．０。

実施例５
インスリン−Ｆｃコンジュゲートの調製
代表的なインスリン−Ｆｃコンジュゲートの調製は、実施例５．１および５．２に与えられる。実施例５．３〜５．３３のインスリンコンジュゲートは、別段の記載がない限り、実施例５．１または５．２で提供する方法により調製される。

実施例５．１
全般的なインスリンＦｃ結合の手順１
（Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＥＰ） _１９，Ａ９８Ｋ＾，Ａ９９Ｐ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン）／（２２７Ａ，２３４Ａ，２３５ＫｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７））４−［ビス［２−［（２−アセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイルコンジュゲートの調製
２０ｍＭのＴｒｉｓ、２５ｍＭのＮａＣｌ、ｐＨ７．５（１６０ｍｌ）中の１０ｍｇ／ｍｌの２２７Ａ，２３４Ａ，２３５ＫｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７））（Ｆｃ９）（１６００ｍｇ）に、１０ｍＭのＥＤＴＡ（７００ｍｇ）を加えた。１ＮＨＣｌによりｐＨを７．６に調節した。水中に溶解させたＢＳＰＰ（１３７ｍｇ）を添加し、室温で２０時間、穏やかに攪拌した。

４１２ｍｌのＧ−２５ｆｉｎｅｓｅｐｈａｄｅｘ脱塩カラムを使用して、混合物を、２０ｍＭのＴｒｉｓ、１０ｍＭのＥＤＴＡ、ｐＨ７．５にバッファー交換した。

ｐＨ７．６の溶出プール（２００ｍｌ半量Ｆｃおよそ８ｍｇ／ｍｌ）に、水（１３ｍｌ）に溶解させて室温でアセトニトリル（２ｍｌ）を滴下した実施例４．１に記載のとおり調製したＡ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＥＰ）_１９，Ａ９８Ｋ（Ｎ（ｅｐｓ）４−［ビス［２−［（２−ヨードアセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイル），Ａ９９Ｐ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（５４９ｍｇ）を添加した。ｐＨは、１ＮＮａＯＨおよび２ｍｌで７．５に調節し、室温で一晩攪拌した。

反応物をＡ緩衝液で１＋５希釈し、１ＮＮａＯＨでｐＨを８．５に、導電率１．３３ｍＳ／ｃｍに調節し、陰イオン交換により精製した。
カラム：１４０ｍｌＰｏｒｏｓ５０ＨＱ
Ａ緩衝液：ｐＨ９．０の２０ｍＭＴｒｉｓ（０．２７ｍＳ／ｃｍ）
Ｂ緩衝液：ｐＨ９．０の、２０ｍＭＴｒｉｓ、５００ｍＭＮａＣｌ（４８．１ｍＳ／ｃｍ）
流量：６．５ＣＶ／時
グラジエント、ステップ：３ＣＶにわたってＢを０〜４０％、１５ＣＶにわたってＢを４０〜６０％、３ＣＶにわたって６０〜１００％Ｂ、３ＣＶにわたってＢを１００％。
分取：２５ｍＬ／分画
ロード：６．５ＣＶ／時
化合物プールを濃縮し、ＴＦＦでＭｉｌｌｉＱＨ_２Ｏに脱塩した：
システム：ミリポア社ラボスケール
膜：ミリポアペリコン（ＭｉｌｌｉｐｏｒｅＰｅｌｌｉｃｏｎ）ＸＬ
カットオフ：１０ｋＤａ
フィード圧：１．４バール
保持液圧（Ｒｅｔｅｎｔａｔｅｐｒｅｓｓｕｒｅ）：０．６バール
ＴＯＶ：５
次いで、生成物を凍結乾燥した。
全収率：３５％
ＬＣＭＳ法１：計算質量：６３５６２．０；実測質量：６３５６２．０

実施例５．２
全般的なインスリンＦｃ結合（手順２）
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＥＰ） _１９，Ａ９８Ｋ＾，Ａ９９Ｐ，Ｂ３Ｑ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン／（２２７Ａ，２３４Ａ，２３５Ｋ，２９７Ｅ，３１５Ｑ，３８４Ｑ，ｄｅｓ４４７ｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７））４−［ビス［２−［（２−アセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイルコンジュゲートの調製
２０ｍＭのＴｒｉｓ、３０ｍｍのＮａＣｌ、ｐＨ７．６中の２２７Ａ，２３４Ａ，２３５Ｋ，２９７Ｅ，３１５Ｑ，３８４Ｑ，ｄｅｓ４４７ｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７）（Ｆｃ１５）（０．０３３１２ｍｍｏｌ、１６３８ｍｇ、１５６．８ｍｌ）の溶液を、４０ｍＭＮＨ_４ＨＣＯ_３、１０ｍＭＥＤＴＡジナトリウム塩、ｐＨ８．５（１５６ｍｌ）で希釈した。４０ｍＭＮＨ_４ＨＣＯ_３、１０ｍＭＥＤＴＡジナトリウム塩、ｐＨ８．５中の８．８３ｍｇ／ｍｌのＴＣＥＰ溶液（１．０当量、分子量２８６．６２ｇ／ｍｏｌ、９．４９ｍｇ、１．０７ｍｌ）。得られた混合物を、室温、窒素気流下で２時間、穏やかに攪拌した。４０ｍＭＮＨ_４ＨＣＯ_３、１０ｍＭＥＤＴＡジナトリウム塩、ｐＨ８．５、２０％ＭｅＣＮ（１０．６５ｍｌ）中に溶解した、実施例４．５に記載のとおりに調製したＡ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＥＰ）_１９，Ａ９８Ｋ（Ｎ（ｅｐｓ）４−［ビス［２−［（２−ヨードアセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイル），Ａ９９Ｐ，Ｂ３Ｑ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン（４７０ｍｇ）を、ゆっくりと添加した。混合物を室温で一晩放置した。反応物を水（５００ｍｌ）で希釈し、ｐＨを１ＮＮａＯＨで８．８に、導電率１．９５ｍＳ／ｃｍに調節し、陰イオン交換により精製した。
カラム：４０ｍｌＰｏｒｏｓ５０ＨＱ
Ａ緩衝液：ｐＨ９．０の２０ｍＭＴｒｉｓ（１．５ｍＳ／ｃｍ）
Ｂ緩衝液：ｐＨ９．０の、２０ｍＭＴｒｉｓ、５００ｍＭＮａＣｌ（４４ｍＳ／ｃｍ）
流量：３５ｍｌ／分
グラジエント、ステップ：１ＣＶにわたってＢを０〜２５％、１ＣＶにわたってＢを２５％、６ＣＶにわたってＢを２５〜６０％
分取：２８０ｎｍで手動、２５％のＢ緩衝液、１ＣＶで開始
ロード：３５ｍｌ／分
化合物プールを凍結乾燥し、続いて水にバッファー交換した。
カラム：脱塩カラム、４００ｍｌＳｅｐｈａｄｅｘＧ−２５ｆｉｎｅ
生成物プールを凍結乾燥した。収量：１．０ｇ（４７％）
ＬＣＭＳ法３：計算質量：６３４０５．８；実測質量：６３４０６．５

実施例５．３
Ａ１４Ｅ，Ｂ（−７８Ｋ＾），Ｂ（−７７Ｐ），Ｂ（−１）（ＧＱＡＰＧＱＡＰＧＱＥＰ） _６ −ＧＱＡＰ，Ｂ３Ｑ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン／（２２７Ａ，２３４Ａ，２３５ＫｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７））４−［ビス［２−［（２−アセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイルコンジュゲートの調製
表題化合物を、実施例４．２に記載のとおりに調製したＡ１４Ｅ，Ｂ（−７８Ｋ（Ｎ（ｅｐｓ）４−［ビス［２−［（２−ヨードアセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイル）），Ｂ（−７７Ｐ），Ｂ（−１）（ＧＱＡＰＧＱＡＰＧＱＥＰ）_６−ＧＱＡＰ，Ｂ３Ｑ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリンと、実施例２に記載のとおりに調製した２２７Ａ，２３４Ａ，２３５ＫｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７）（Ｆｃ９）とから、実施例５．１に記載される全般的なインスリンＦｃ結合の手順１にならって、合成した。
ＬＣＭＳ法１：計算質量：６２８７８．７；実測質量：６２８７９．３

実施例５．４
Ａ１４Ｅ，Ｂ（−７８Ｋ＾），Ｂ（−７７Ｐ），Ｂ（−１）（ＧＱＥＰ） _１９，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン／（２２７Ａ，２３４Ａ，２３５ＫｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７））４−［ビス［２−［（２−アセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイルコンジュゲートの調製
表題化合物を、実施例４．３に記載のとおりに調製したＡ１４Ｅ，Ｂ（−７８Ｋ（Ｎ（ｅｐｓ）４−［ビス［２−［（２−ヨードアセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイル）），Ｂ（−７７Ｐ），Ｂ（−１）（ＧＱＥＰ）_１９，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリンと、実施例２に記載のとおりに調製した２２７Ａ，２３４Ａ，２３５ＫｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７）（Ｆｃ９）とから、実施例５．１に記載される全般的なインスリンＦｃ結合の手順１にならって、合成した。
ＬＣＭＳ法３：計算質量：６３６１９．１；実測質量：６３６１８．３

実施例５．５
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰＧＱＡＰＧＱＥＰ） _６ −ＧＱＡＰ，Ａ９８Ｋ＾，Ａ９９Ｐ，Ｂ３Ｑ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン／（２２７Ａ，２３４Ａ，２３５ＫｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７））４−［ビス［２−［（２−アセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイルコンジュゲートの調製
表題化合物を、実施例４．４に記載のとおりに調製したＡ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰＧＱＡＰＧＱＥＰ）_６−ＧＱＡＰ，Ａ９８Ｋ（Ｎ（ｅｐｓ）４−［ビス［２−［（２−ヨードアセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイル），Ａ９９Ｐ，Ｂ３Ｑ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリンと、実施例２に記載のとおりに調製した２２７Ａ，２３４Ａ，２３５ＫｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７）（Ｆｃ９）とから、実施例５．１に記載される全般的なインスリンＦｃ結合の手順１にならって、合成した。
ＬＣＭＳ法３：計算質量：６２８２１．６；実測質量：６２８２２．１

実施例５．６
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＥＰ） _１９，Ａ９８Ｋ＾，Ａ９９Ｐ，Ｂ３Ｑ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン／（２２７Ａ，２３４Ａ，２３５ＫｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７））４−［ビス［２−［（２−アセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイルコンジュゲートの調製
表題化合物を、実施例４．５に記載のとおりに調製したＡ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＥＰ）_１９，Ａ９８Ｋ（Ｎ（ｅｐｓ）４−［ビス［２−［（２−ヨードアセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイル），Ａ９９Ｐ，Ｂ３Ｑ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリンと、実施例２に記載のとおりに調製した２２７Ａ，２３４Ａ，２３５ＫｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７）（Ｆｃ９）とから、実施例５．１に記載される全般的なインスリンＦｃ結合の手順１にならって、合成した。
ＬＣＭＳ法３：計算質量：６３５７６．０；実測質量：６３５７５．８

実施例５．７
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＥＰ） _６，Ａ４６Ｋ＾，Ａ４７Ｐ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン／（２２７Ａ，２３４Ａ，２３５ＫｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７））４−［ビス［２−［（２−アセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイルコンジュゲートの調製
表題化合物を、実施例４．６に記載のとおりに調製したＡ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＥＰ）_６，Ａ４６Ｋ（Ｎ（ｅｐｓ）４−［ビス［２−［（２−ヨードアセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイル），Ａ４７Ｐ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリンと、実施例２に記載のとおりに調製した２２７Ａ，２３４Ａ，２３５ＫｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７）（Ｆｃ９）とから、実施例５．１に記載される全般的なインスリンＦｃ結合の手順１にならって合成した。
ＬＣＭＳ法３：計算質量：５８２１３．７；実測質量：５８２１３．２

実施例５．８
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＥＰ） _１２，Ａ７０Ｋ＾，Ａ７１Ｐ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン／（２２７Ａ，２３４Ａ，２３５ＫｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７））４−［ビス［２−［（２−アセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイルコンジュゲートの調製
表題化合物を、実施例４．７に記載のとおりに調製したＡ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＥＰ）_１２，Ａ７０Ｋ（Ｎ（ｅｐｓ）４−［ビス［２−［（２−ヨードアセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイル），Ａ７１Ｐ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリンと、実施例２に記載のとおりに調製した２２７Ａ，２３４Ａ，２３５ＫｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７）（Ｆｃ９）とから、実施例５．１に記載される全般的なインスリンＦｃ結合の手順１にならって、合成した。
ＬＣＭＳ法３：計算質量：６０６８２．１；実測質量：６０６８１．６

実施例５．９
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰＧＱＥＰ） _６，Ａ７０Ｋ＾，Ａ７１Ｐ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン／（２２７Ａ，２３４Ａ，２３５ＫｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７））４−［ビス［２−［（２−アセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイルコンジュゲートの調製
表題化合物を、実施例４．８に記載のとおりに調製したＡ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰＧＱＥＰ）_６，Ａ７０Ｋ（Ｎ（ｅｐｓ）４−［ビス［２−［（２−ヨードアセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイル），Ａ７１Ｐ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリンと、実施例２に記載のとおりに調製した２２７Ａ，２３４Ａ，２３５ＫｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７）（Ｆｃ９）とから、実施例５．１に記載される全般的なインスリンＦｃ結合の手順１にならって、合成した。
ＬＣＭＳ法３：計算質量：６０３３４．０；実測質量：６０３３６．５

実施例５．１０
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＥＰ） _３，Ａ３４Ｇ，Ａ３５Ｑ，Ａ３６Ｅ，Ａ３７Ｋ＾，Ａ３８Ｐ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン／（２２７Ａ，２３４Ａ，２３５ＫｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７））４−［ビス［２−［（２−アセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイルコンジュゲートの調製
表題化合物を、実施例４．９に記載のとおりに調製したＡ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＥＰ）_３，Ａ３４Ｇ，Ａ３５Ｑ，Ａ３６Ｅ，Ａ３７Ｋ（Ｎ（ｅｐｓ）４−［ビス［２−［（２−ヨードアセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイル），Ａ３８Ｐ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリンと、実施例２に記載のとおりに調製した２２７Ａ，２３４Ａ，２３５ＫｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７）（Ｆｃ９）とから、実施例５．１に記載される全般的なインスリンＦｃ結合の手順１にならって、合成した。
ＬＣＭＳ法３：計算質量：５７２９３．７；実測質量：５７２９５．８

実施例５．１１
Ａ１４Ｅ，Ｂ（−７８Ｋ＾），Ｂ（−７７Ｐ），Ｂ（−１）（ＧＱＥＰ） _１９，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン／（２２７Ａ，２３４Ａ，２３５Ｋ，２９７Ｅ，３１５Ｑ，３８４Ｑ，ｄｅｓ４４７ｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７））４−［ビス［２−［（２−アセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイルコンジュゲートの調製
表題化合物を、実施例４．３に記載のとおりに調製したＡ１４Ｅ，Ｂ（−７８Ｋ（Ｎ（ｅｐｓ）４−［ビス［２−［（２−ヨードアセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイル）），Ｂ（−７７Ｐ），Ｂ（−１）（ＧＱＥＰ）１９，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリンと、実施例２に記載のとおりに調製した２２７Ａ，２３４Ａ，２３５Ｋ，２９７Ｅ，３１５Ｑ，３８４Ｑ，ｄｅｓ４４７ｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７）（Ｆｃ１５）とから、実施例５．１に記載される全般的なインスリンＦｃ結合の手順１にならって、合成した。
ＬＣＭＳ法３：計算質量：６３４４８．９；実測質量：６３４５１．６

実施例５．１２
（Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＥＰ） _１９，Ａ９８Ｋ＾，Ａ９９Ｐ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン）／（２２７Ａ，２３４Ａ，２３５Ｋ，２９７Ｅ，３１５Ｑ，３８４Ｑ，ｄｅｓ４４７ｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７））４−［ビス［２−［（２−アセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイルコンジュゲートの調製
表題化合物を、実施例４．１に記載のとおりに調製したＡ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＥＰ）_１９，Ａ９８Ｋ（Ｎ（ｅｐｓ）４−［ビス［２−［（２−ヨードアセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイル），Ａ９９Ｐ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリンと、実施例２に記載のとおりに調製した２２７Ａ，２３４Ａ，２３５Ｋ，２９７Ｅ，３１５Ｑ，３８４Ｑ，ｄｅｓ４４７ｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７）（Ｆｃ１５）とから、実施例５．１に記載される全般的なインスリンＦｃ結合の手順１にならって、合成した。
ＬＣＭＳ法３：計算質量：６３３９１．８；実測質量：６３３９４．４

実施例５．１３
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰＧＱＡＰＧＱＥＰ） _６ −ＧＱＡＰ，Ａ９８Ｋ＾，Ａ９９Ｐ，Ｂ３Ｑ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン／（２２７Ａ，２３４Ａ，２３５Ｋ，２９７Ｅ，３１５Ｑ，３８４Ｑ，ｄｅｓ４４７ｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７））４−［ビス［２−［（２−アセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイルコンジュゲートの調製
表題化合物を、実施例４．４に記載のとおりに調製したＡ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰＧＱＡＰＧＱＥＰ）_６−ＧＱＡＰ，Ａ９８Ｋ（Ｎ（ｅｐｓ）４−［ビス［２−［（２−ヨードアセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイル），Ａ９９Ｐ，Ｂ３Ｑ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリンと、実施例２に記載のとおりに調製した２２７Ａ，２３４Ａ，２３５Ｋ，２９７Ｅ，３１５Ｑ，３８４Ｑ，ｄｅｓ４４７ｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７）（Ｆｃ１５）とから、実施例５．１に記載される全般的なインスリンＦｃ結合の手順１にならって、合成した。
ＬＣＭＳ法３：計算質量６２６５１．４；実測質量：６２６５３．０

実施例５．１４
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰＧＱＥＰ） _６，Ａ７０Ｋ＾，Ａ７１Ｐ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン／（２２７Ａ，２３４Ａ，２３５Ｋ，２９７Ｅ，３１５Ｑ，３８４Ｑ，ｄｅｓ４４７ｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７））４−［ビス［２−［（２−アセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイルコンジュゲートの調製
表題化合物を、実施例４．８に記載のとおりに調製したＡ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰＧＱＥＰ）_６，Ａ７０Ｋ（Ｎ（ｅｐｓ）４−［ビス［２−［（２−ヨードアセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイル），Ａ７１Ｐ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリンと、実施例２に記載のとおりに調製した２２７Ａ，２３４Ａ，２３５Ｋ，２９７Ｅ，３１５Ｑ，３８４Ｑ，ｄｅｓ４４７ｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７）（Ｆｃ１５）とから、実施例５．１に記載される全般的なインスリンＦｃ結合の手順１にならって、合成した。
ＬＣＭＳ法３：計算質量：６０１６４．０；実測質量：６０１６５．６

実施例５．１５
（Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰ） _１９，Ａ９８Ｋ＾，Ａ９９Ｐ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン）／（２２７Ａ，２３４Ａ，２３５Ｋ，２９７Ｅ，３１５Ｑ，３８４Ｑ，ｄｅｓ４４７ｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７））４−［ビス［２−［（２−アセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイルコンジュゲートの調製
表題化合物を、実施例４．１０に記載のとおりに調製したＡ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰ）_１９，Ａ９８Ｋ（Ｎ（ｅｐｓ）４−［ビス［２−［（２−ヨードアセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイル），Ａ９９Ｐ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリンと、実施例２に記載のとおりに調製した２２７Ａ，２３４Ａ，２３５Ｋ，２９７Ｅ，３１５Ｑ，３８４Ｑ，ｄｅｓ４４７ｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７）（Ｆｃ１５）とから、実施例５．１に記載される全般的なインスリンＦｃ結合の手順１にならって、合成した。
ＬＣＭＳ法３：計算質量：６２２８９．２；実測質量：６２２９２．０

実施例５．１６
（Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰ） _１９，Ａ９８Ｋ＾，Ａ９９Ｐ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン）／（２２７Ａ，２３４Ａ，２３５Ｋ，２９７Ｅ，３１５Ｑ，３８４Ｑ，ｄｅｓ４４７ｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７））６−［ビス［２−［（２−アセチル）アミノ］エチル］アミノ］−６−オキソ−ヘキサノイルコンジュゲートの調製
表題化合物を、実施例４．１１に記載のとおりに調製したＡ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰ）_１９，Ａ９８Ｋ（Ｎ（ｅｐｓ）６−［ビス［２−［（２−ヨードアセチル）アミノ］エチル］アミノ］−６−オキソ−ヘキサノイル），Ａ９９Ｐ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリンと、実施例２に記載のとおりに調製した２２７Ａ，２３４Ａ，２３５Ｋ，２９７Ｅ，３１５Ｑ，３８４Ｑ，ｄｅｓ４４７ｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７）（Ｆｃ１５）とから、実施例５．１に記載される全般的なインスリンＦｃ結合の手順１にならって、合成した。
ＬＣＭＳ法３：計算質量：６２３１７．３；実測質量：６２３２３．８

実施例５．１７
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＥＰ） _１２，Ａ７０Ｋ＾，Ａ７１Ｐ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン／（２２７Ａ，２３４Ａ，２３５Ｋ，２９７Ｅ，３１５Ｑ，３８４Ｑ，ｄｅｓ４４７ｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７））４−［ビス［２−［（２−アセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイルコンジュゲートの調製
表題化合物を、実施例４．７に記載のとおりに調製したＡ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＥＰ）_１２，Ａ７０Ｋ（Ｎ（ｅｐｓ）４−［ビス［２−［（２−ヨードアセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイル），Ａ７１Ｐ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリンと、実施例２に記載のとおりに調製した２２７Ａ，２３４Ａ，２３５Ｋ，２９７Ｅ，３１５Ｑ，３８４Ｑ，ｄｅｓ４４７ｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７）（Ｆｃ１５）とから、実施例５．２に記載される全般的なインスリンＦｃ結合の手順２にならって、合成した。
ＬＣＭＳ法３：計算質量：６０５１１．９；実測質量：６０５１７．７

実施例５．１８
Ａ１４Ｅ，Ｂ（−７８Ｋ＾），Ｂ（−７７Ｐ），Ｂ（−１）（ＧＱＡＰ） _１９，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン／（２２７Ａ，２３４Ａ，２３５Ｋ，２９７Ｅ，３１５Ｑ，３８４Ｑ，ｄｅｓ４４７ｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７））４−［ビス［２−［（２−アセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイルコンジュゲートの調製
表題化合物を、実施例４．１２に記載のとおりに調製したＡ１４Ｅ，Ｂ（−７８Ｋ（Ｎ（ｅｐｓ）４−［ビス［２−［（２−ヨードアセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイル）），Ｂ（−７７Ｐ），Ｂ（−１）（ＧＱＡＰ）_１９，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリンと、実施例２に記載のとおりに調製した２２７Ａ，２３４Ａ，２３５Ｋ，２９７Ｅ，３１５Ｑ，３８４Ｑ，ｄｅｓ４４７ｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７）（Ｆｃ１５）とから、実施例５．１に記載される全般的なインスリンＦｃ結合の手順１にならって、合成した。
ＬＣＭＳ法３：計算質量：６２３４６．３；実測質量：６２３４８

実施例５．１９
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰＧＱＡＰＧＱＥＰ） _６ −ＧＱＡＰ，Ａ９８Ｋ＾，Ａ９９Ｐ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン／（２２７Ａ，２３４Ａ，２３５Ｋ，２９７Ｅ，３１５Ｑ，３８４Ｑ，ｄｅｓ４４７ｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７））４−［ビス［２−［（２−アセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイルコンジュゲートの調製
表題化合物を、実施例４．１３に記載のとおりに調製したＡ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰＧＱＡＰＧＱＥＰ）_６−ＧＱＡＰ，Ａ９８Ｋ（Ｎ（ｅｐｓ）４−［ビス［２−［（２−ヨードアセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイル），Ａ９９Ｐ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリンと、実施例２に記載のとおりに調製した２２７Ａ，２３４Ａ，２３５Ｋ，２９７Ｅ，３１５Ｑ，３８４Ｑ，ｄｅｓ４４７ｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７）（Ｆｃ１５）とから、実施例５．１に記載される全般的なインスリンＦｃ結合の手順１にならって、合成した。
ＬＣＭＳ法３：計算質量６２６４７．４；実測質量：６２６４９．７

実施例５．２０
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰＧＱＡＰＧＱＡＰＧＱＥＰ） _６ −ＧＱＡＰ，Ａ１２２Ｋ＾，Ａ１２３Ｐ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン／（２２７Ａ，２３４Ａ，２３５Ｋ，２９７Ｅ，３１５Ｑ，３８４Ｑ，ｄｅｓ４４７ｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７））４−［ビス［２−［（２−アセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイルコンジュゲートの調製
表題化合物を、実施例４．１４に記載のとおりに調製したＡ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰＧＱＡＰＧＱＡＰＧＱＥＰ）_６−ＧＱＡＰ，Ａ１２２Ｋ（Ｎ（ｅｐｓ）４−［ビス［２−［（２−ヨードアセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイル），Ａ１２３Ｐ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリンと、実施例２に記載のとおりに調製した２２７Ａ，２３４Ａ，２３５Ｋ，２９７Ｅ，３１５Ｑ，３８４Ｑ，ｄｅｓ４４７ｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７）（Ｆｃ１５）とから、実施例５．１に記載される全般的なインスリンＦｃ結合の手順１にならって、合成した。
ＬＣＭＳ法３：計算質量６４７５７．７；実測質量：６４７５７．５

実施例５．２１
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｑ，Ａ２２（Ｇ） _１８，Ａ４０Ｋ＾，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン／（２２７Ａ，２３４Ａ，２３５ＫｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７））４−［ビス［２−［（２−アセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイルコンジュゲートの調製
表題化合物を、実施例４．１５に記載のとおりに調製したＡ１４Ｅ，Ａ２１Ｑ，Ａ２２（Ｇ）_１８，Ａ４０Ｋ（Ｎ（ｅｐｓ）４−［ビス［２−［（２−ヨードアセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイル），Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリンと、実施例２に記載のとおりに調製した２２７Ａ，２３４Ａ，２３５ＫｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７）（Ｆｃ９）とから、実施例５．１に記載される全般的なインスリンＦｃ結合の手順１にならって、合成した。
ＬＣＭＳ法３：計算質量：５６７４６．１；実測質量：５６７５０．１

実施例５．２２
（Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰ） _２４，Ａ１１８Ｇ，Ａ１１９Ｑ，Ａ１２０Ａ，Ａ１２１Ｋ＾，Ａ１２２Ｐ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン）／（２２７Ａ，２３４Ａ，２３５Ｋ，２９７Ｅ，３１５Ｑ，３８４Ｑ，ｄｅｓ４４７ｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７））３，５−ビス［（２−アセチル）アミノ］ベンゾイルコンジュゲートの調製
表題化合物を、実施例４．１６に記載のとおりに調製したＡ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰ）_２４，Ａ１１８Ｇ，Ａ１１９Ｑ，Ａ１２０Ａ，Ａ１２１Ｋ（Ｎ（ｅｐｓ）３，５−ビス［（２−ブロモアセチル）アミノ］ベンゾイル），Ａ１２２Ｐ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリンと、実施例２に記載のとおりに調製した２２７Ａ，２３４Ａ，２３５Ｋ，２９７Ｅ，３１５Ｑ，３８４Ｑ，ｄｅｓ４４７ｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７）（Ｆｃ１５）とから、実施例５．１に記載される全般的なインスリンＦｃ結合の手順１にならって、合成した。
ＬＣＭＳ法１０：計算質量：６４２６１；実測質量：６４２６３。

実施例５．２３
（Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰ） _２４，Ａ１１８Ｇ，Ａ１１９Ｑ，Ａ１２０Ａ，Ａ１２１Ｋ＾，Ａ１２２Ｐ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン）／（２２７Ａ，２３４Ａ，２３５Ｋ，２９７Ｅ，３１５Ｑ，３８４Ｑ，ｄｅｓ４４７ｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７））４−［ビス［２−［（２−アセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイルコンジュゲートの調製
表題化合物を、実施例４．１７に記載のとおりに調製したＡ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰ）_２４，Ａ１１８Ｇ，Ａ１１９Ｑ，Ａ１２０Ａ，Ａ１２１Ｋ（Ｎ（ｅｐｓ）４−［ビス［２−［（２−ヨードアセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイル），Ａ１２２Ｐ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリンと、実施例２に記載のとおりに調製した２２７Ａ，２３４Ａ，２３５Ｋ，２９７Ｅ，３１５Ｑ，３８４Ｑ，ｄｅｓ４４７ｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７）（Ｆｃ１５）とから、実施例５．１に記載される全般的なインスリンＦｃ結合の手順１にならって、合成した。
ＬＣＭＳ法１０：計算質量：６４３１２；実測質量：６４３２２。

実施例５．２４
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰＧＱＡＰＧＱＥＰ） _６ −ＧＱＡＰ，Ａ９８Ｋ＾，Ａ９９Ｐ，Ｂ３Ｑ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン／（２２７Ａ，２３４Ａ，２３５Ｋ，２９７Ｅ，３１５Ｑ，３８４Ｑ，ｄｅｓ４４７ｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７））４−［ビス［２−［（２−アセチル）アミノ］エチル］カルバモイルアミノ］ブタノイルコンジュゲートの調製
表題化合物を、実施例４．１８に記載のとおりに調製したＡ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰＧＱＡＰＧＱＥＰ）_６−ＧＱＡＰ，Ａ９８Ｋ（Ｎ（ｅｐｓ）４−［ビス［２−［（２−ヨードアセチル）アミノ］エチル］カルバモイルアミノ］ブタノイル），Ａ９９Ｐ，Ｂ３Ｑ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリンと、実施例２に記載のとおりに調製した２２７Ａ，２３４Ａ，２３５Ｋ，２９７Ｅ，３１５Ｑ，３８４Ｑ，ｄｅｓ４４７ｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７）（Ｆｃ１５）とから、実施例５．１に記載される全般的なインスリンＦｃ結合の手順１にならって、合成した。
ＬＣＭＳ法３：計算質量６２６８０．４；実測質量：６２６８２．８

実施例５．２５
（Ａ１４Ａ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰ） _１８，Ａ９４Ｇ，Ａ９５Ｑ，Ａ９６Ａ，Ａ９７Ｋ＾，Ａ９８Ｐ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン）／（２２７Ａ，２３４Ａ，２３５Ｋ，２９７Ｅ，３１５Ｑ，３８４Ｑ，ｄｅｓ４４７ｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７））４−［ビス［２−［（２−アセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイルコンジュゲートの調製
表題化合物を、実施例４．１９に記載のとおりに調製したＡ１４Ａ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰ）_１８，Ａ９４Ｇ，Ａ９５Ｑ，Ａ９６Ａ，Ａ９７Ｋ（Ｎ（ｅｐｓ）４−［ビス［２−［（２−ヨードアセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイル），Ａ９８Ｐ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリンと、実施例２に記載のとおりに調製した２２７Ａ，２３４Ａ，２３５Ｋ，２９７Ｅ，３１５Ｑ，３８４Ｑ，ｄｅｓ４４７ｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７）（Ｆｃ１５）とから、実施例５．１に記載される全般的なインスリンＦｃ結合の手順１にならって、合成した。
ＬＣＭＳ法３：計算質量：６２１４４．１；実測質量：６２１４３．９

実施例５．２６
（Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰ） _１８，Ａ９４Ｇ，Ａ９５Ｑ，Ａ９６Ａ，Ａ９７Ｋ＾，Ａ９８Ｐ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン）／（２２７Ａ，２３４Ａ，２３５Ｋ，２９７Ｅ，３１５Ｑ，３８４Ｑ，ｄｅｓ４４７ｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７））４−［ビス［２−［（２−アセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイルコンジュゲートの調製
表題化合物を、実施例４．２０に記載のとおりに調製したＡ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰ）_１８，Ａ９４Ｇ，Ａ９５Ｑ，Ａ９６Ａ，Ａ９７Ｋ（Ｎ（ｅｐｓ）４−［ビス［２−［（２−ヨードアセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイル），Ａ９８Ｐ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリンと、実施例２に記載のとおりに調製した２２７Ａ，２３４Ａ，２３５Ｋ，２９７Ｅ，３１５Ｑ，３８４Ｑ，ｄｅｓ４４７ｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７）（Ｆｃ１５）とから、実施例５．１に記載される全般的なインスリンＦｃ結合の手順１にならって、合成した。
ＬＣＭＳ法１０：計算質量：６２２０２；実測質量：６２２０５

実施例５．２７
（Ａ１（Ｎ（アルファ）アセチル），Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰ） _１９，Ａ９８Ｋ＾，Ａ９９Ｐ，Ｂ１（Ｎ（アルファ）アセチル），Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン）／（２２７Ａ，２３４Ａ，２３５Ｋ，２９７Ｅ，３１５Ｑ，３８４Ｑ，ｄｅｓ４４７ｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７））４−［ビス［２−［（２−アセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイルコンジュゲートの調製
表題化合物を、実施例４．２１に記載のとおりに調製したＡ１（Ｎ（アルファ）アセチル），Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰ）_１９，Ａ９８Ｋ（Ｎ（ｅｐｓ）４−［ビス［２−［（２−ヨードアセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイル），Ａ９９Ｐ，Ｂ１（Ｎ（アルファ）アセチル），Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリンと、実施例２に記載のとおりに調製した２２７Ａ，２３４Ａ，２３５Ｋ，２９７Ｅ，３１５Ｑ，３８４Ｑ，ｄｅｓ４４７ｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７）（Ｆｃ１５）とから、実施例５．１に記載される全般的なインスリンＦｃ結合の手順１にならって、合成した。
ＬＣＭＳ法１０：計算質量：６２３７３．３；実測質量：６２３３７６．５

実施例５．２８
（Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰ） _１８，Ａ９４Ｇ，Ａ９５Ｑ，Ａ９６Ａ，Ａ９７Ｋ＾，Ａ９８Ｐ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン）／（２２７Ａ，２３４Ａ，２３５Ｋ，２９７Ｅ，３１５Ｑ，３８４Ｑ，ｄｅｓ４４７ｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７））４−［ビス［２−［（２−アセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイルコンジュゲートの調製
表題化合物を、実施例４．２２に記載のとおりに調製したＡ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰ）_１８，Ａ９４Ｇ，Ａ９５Ｑ，Ａ９６Ａ，Ａ９７Ｋ（Ｎ（ｅｐｓ）４−［ビス［２−［（２−ヨードアセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイル），Ａ９８Ｐ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリンと、実施例２に記載のとおりに調製した２２７Ａ，２３４Ａ，２３５Ｋ，２９７Ｅ，３１５Ｑ，３８４Ｑ，ｄｅｓ４４７ｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７）（Ｆｃ１５）とから、実施例５．２に記載される全般的なインスリンＦｃ結合の手順２にならって、合成した。
ＬＣＭＳ法３：計算質量：６２２３６．２；実測質量：６２３３８．６

実施例５．２９
（Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰ） _２４，Ａ１１８Ｇ，Ａ１１９Ｑ，Ａ１２０Ａ，Ａ１２１Ｋ＾，Ａ１２２Ｐ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン）／（２２７Ａ，２３４Ａ，２３５Ｋ，２９７Ｅ，３１５Ｑ，３８４Ｑ，ｄｅｓ４４７ｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７））３，５−ビス［（２−アセチル）アミノ］ベンゾイルコンジュゲートの調製
表題化合物を、実施例４．２３に記載のとおりに調製したＡ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰ）_２４，Ａ１１８Ｇ，Ａ１１９Ｑ，Ａ１２０Ａ，Ａ１２１Ｋ（Ｎ（ｅｐｓ）３，５−ビス［（２−ブロモアセチル）アミノ］ベンゾイル），Ａ１２２Ｐ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリンと、実施例２に記載のとおりに調製した２２７Ａ，２３４Ａ，２３５Ｋ，２９７Ｅ，３１５Ｑ，３８４Ｑ，ｄｅｓ４４７ｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７）（Ｆｃ１５）とから、実施例５．２に記載される全般的なインスリンＦｃ結合の手順２にならって、合成した。
ＬＣＭＳ法３：計算質量：６４２７１．３；実測質量：６４２７３．７。

実施例５．３０
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰ） _１８，Ａ９４Ｇ，Ａ９５Ｑ，Ａ９６Ａ，Ａ９７Ｋ＾，Ａ９８Ｐ，Ｂ１６Ｅ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン）／（２２７Ａ，２３４Ａ，２３５Ｋ，２９７Ｅ，３１５Ｑ，３８４Ｑ，ｄｅｓ４４７ｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７））３，５−ビス［（２−アセチル）アミノ］ベンゾイルコンジュゲートの調製
表題化合物を、実施例４．２４に記載のとおりに調製したＡ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰ）_１８，Ａ９４Ｇ，Ａ９５Ｑ，Ａ９６Ａ，Ａ９７Ｋ（Ｎ（ｅｐｓ）３，５−ビス［（２−ブロモアセチル）アミノ］ベンゾイル），Ａ９８Ｐ，Ｂ１６Ｅ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリンと、実施例２に記載のとおりに調製した２２７Ａ，２３４Ａ，２３５Ｋ，２９７Ｅ，３１５Ｑ，３８４Ｑ，ｄｅｓ４４７ｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７）（Ｆｃ１５）とから、実施例５．２に記載される全般的なインスリンＦｃ結合の手順２にならって、合成した。
ＬＣＭＳ法３：計算質量：６２１０７；実測質量：６２１０９。

実施例５．３１
（Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰ） _１８，Ａ９４Ｇ，Ａ９５Ｑ，Ａ９６Ａ，Ａ９７Ｋ＾，Ａ９８Ｐ，Ｂ１６Ｅ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン）／（２２７Ａ，２３４Ａ，２３５Ｋ，２９７Ｅ，３１５Ｑ，３８４Ｑ，ｄｅｓ４４７ｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７））４−［ビス［２−［（２−アセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイルコンジュゲートの調製
表題化合物を、実施例４．２５に記載のとおりに調製したＡ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰ）_１８，Ａ９４Ｇ，Ａ９５Ｑ，Ａ９６Ａ，Ａ９７Ｋ（Ｎ（ｅｐｓ）４−［ビス［２−［（２−ヨードアセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイル），Ａ９８Ｐ，Ｂ１６Ｅ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリンと、実施例２に記載のとおりに調製した２２７Ａ，２３４Ａ，２３５Ｋ，２９７Ｅ，３１５Ｑ，３８４Ｑ，ｄｅｓ４４７ｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７）（Ｆｃ１５）とから、実施例５．２に記載される全般的なインスリンＦｃ結合の手順２にならって、合成した。
ＬＣＭＳ法７：計算質量：６２１５８．１；実測質量：６２１６０．７

実施例５．３２
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＥＰ） _６，Ａ４６Ｋ＾，Ａ４７Ｐ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン／（２２７Ａ，２３４Ａ，２３５Ｋ，２９７Ｅ，３１５Ｑ，３８４Ｑ，ｄｅｓ４４７ｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７））４−［ビス［２−［（２−アセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイルコンジュゲートの調製
表題化合物を、実施例４．６に記載のとおりに調製したＡ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＥＰ）_６，Ａ４６Ｋ（Ｎ（ｅｐｓ）４−［ビス［２−［（２−ヨードアセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイル），Ａ４７Ｐ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリンと、実施例２に記載のとおりに調製した２２７Ａ，２３４Ａ，２３５Ｋ，２９７Ｅ，３１５Ｑ，３８４Ｑ，ｄｅｓ４４７ｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７）（Ｆｃ１５）とから、実施例５．２に記載される全般的なインスリンＦｃ結合の手順２にならって、合成した。
ＬＣＭＳ法３：計算質量：５８２１３．７；実測質量：５８２１３．２

実施例５．３３
（Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＥＰ） _１９，９８Ｋ＾，Ａ９９Ｐ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン）／（２２６Ａ，２２７Ｇ，２２８Ｐ，２３４Ａ，２３５Ｋ，ｄｅｓ４４７ｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７））３，５−ビス［（２−アセチル）アミノ］ベンゾイルコンジュゲートの調製
表題化合物を、実施例４．２６に記載のとおりに調製したＡ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＥＰ）_１９，Ａ９８Ｋ（Ｎ（ｅｐｓ）３，５−ビス［（２−ブロモアセチル）アミノ］ベンゾイル），Ａ９９Ｐ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリンと、実施例２に記載のとおりに調製した２２６Ａ，２２７Ｇ，２２８Ｐ，２３４Ａ，２３５Ｋ，ｄｅｓ４４７ＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７）（Ｆｃ１７）とから、実施例５．２に記載される全般的なインスリンＦｃ結合の手順２にならって、合成した。
ＬＣＭＳ法３：計算質量：６３３８８．８；実測質量：６３３９１．１。

実施例６：インスリン受容体親和性
コンジュゲートのインスリン受容体親和性は、（ＶｉｅｎｂｅｒｇＳ．Ｇ．ｅｔａｌ：Ｒｅｃｅｐｔｏｒ−ｉｓｏｆｏｒｍ−ｓｅｌｅｃｔｉｖｅｉｎｓｕｌｉｎａｎａｌｏｇｕｅｓｇｉｖｅｔｉｓｓｕｅ−ｐｒｅｆｅｒｅｎｔｉａｌｅｆｆｅｃｔｓ；ＢｉｏｃｈｅｍｉｃａｌＪｏｕｒｎａｌ２０１１４４０（３）ｐ．３０１−３０８）に記載のとおりに測定し、表３の結果を参照されたい。インスリン受容体Ａに対するヒトインスリンの親和性（１００％）に対する親和性が、報告されている。

表３．インビトロデータ
データは、本発明の試験された化合物のすべてが、ヒトインスリンと比べて０．５〜１０％の範囲でインスリン受容体に結合することを示す。これらの親和性は、インビボ投与後の血糖下降を促進するために適切と考えられる。さらに、実施例９から分かるように、本発明の化合物はインスリン受容体の作動薬でもある。実施例８から、本発明の化合物は全て強力に、ラットへの皮下投与後の血糖を下げることができることがわかる。

実施例７：ＰＫ試験
インスリン−Ｆｃコンジュゲートについて、ＳＤラットに対して静脈内（ｉｎｔｒａｖｅｎｏｕｓ）および皮下（ｓｕｂｃｕｔａｎｅｏｕｓ）への投与によりインビボで試験した。血液試料を採取し、インスリン−Ｆｃ濃度を免疫アッセイにより測定した。静脈内投与および皮下投与から得られた平均滞留時間および半減期の値を表４に示す。

表４．ラットｉｖ／ｓｃＰＫデータ
本発明のインスリン−Ｆｃコンジュゲートは全て、ラットに投与されたときに非常に長いＰＫプロファイルを示すということが結論付けられる。

実施例８：ＰＤ試験
実施例のインスリンＦｃコンジュゲートの薬力学効果を、試験開始時に体重およそ３５０ｇの正常な雄Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットで調査した。

動物は、実験期間中、食べ物と水を自由に摂取した。動物の頸部に、３０ｎｍｏｌ／ｋｇの用量で（以下の図で別段の記載がない限り）、皮下投与した。血糖および血漿のインスリン分析のための血液試料を、投与後１０日まで舌静脈から採取した。ＢｉｏｓｅｎＳＬｉｎｅ（ＥＫＦ社）を使用して血糖を測定した。

血糖プロファイルを図１〜７に示す。

図に加えて、以下の表５ａ〜ｇにも血糖プロファイルを示す。

表５ａ．別段の記載がない限り用量３０ｎｍｏｌ／ｋｇでの、本発明の化合物のラットへの皮下投与後の平均血糖プロファイル（図１から）。

表５ｂ．別段の記載がない限り用量３０ｎｍｏｌ／ｋｇでの、本発明の化合物のラットへの皮下投与後の平均血糖プロファイル（図２から）。

表５ｃ．別段の記載がない限り用量３０ｎｍｏｌ／ｋｇでの、本発明の化合物のラットへの皮下投与後の平均血糖プロファイル（図３から）。

表５ｄ．別段の記載がない限り用量３０ｎｍｏｌ／ｋｇでの、本発明の化合物のラットへの皮下投与後の平均血糖プロファイル（図４から）。

表５ｅ．別段の記載がない限り用量３０ｎｍｏｌ／ｋｇでの、本発明の化合物のラットへの皮下投与後の平均血糖プロファイル（図５から）。

表５ｆ．別段の記載がない限り用量３０ｎｍｏｌ／ｋｇでの、本発明の化合物のラットへの皮下投与後の平均血糖プロファイル（図６から）。

表５ｇ．別段の記載がない限り用量３０ｎｍｏｌ／ｋｇでの、本発明の化合物のラットへの皮下投与後の平均血糖プロファイル（図７から）。

図１〜図７および表５ａ〜ｇから得られ、示したデータから、本発明のすべての化合物は非常に強力に、ラットにおいて長時間（３〜５日）にわたる血糖の低下が可能であるという結論を得ることができる。比較として、超持効型インスリンとしてＴｒｅｓｉｂａ（登録商標）として上市されているインスリンデグルデクは、３倍高い用量でのみ、半日未満の間、血糖の低下が可能であった。

実施例９：インスリン刺激性脂質生成
インスリン刺激性脂質生成を、１％ＨＳＡの存在下で、単離したラット脂肪細胞において、ＭｏｏｄｙＡＪ，ＳｔａｎＭＡ，ＳｔａｎＭ，ＧｌｉｅｍａｎｎＪ．ＡＳｉｍｐｌｅＦｒｅｅＦａｔＣｅｌｌＢｉｏａｓｓａｙｆｏｒＩｎｓｕｌｉｎ．ＨｏｒｍｏｎｅＡｎｄＭｅｔａｂｏｌｉｃＲｅｓｅａｒｃｈ．１９７４；６（１）：１２−６に記載のとおり測定したが、表６の結果を参照されたい。ヒトインスリンの活性（１００％）と比べた活性を、報告している。

表６：脂質生成データ
脂質生成活性データは、対応するインスリン受容体親和性データと同じ範囲内であること、結果として本発明のインスリン−Ｆｃコンジュゲートは全て、インスリン作動薬活性を有することが結論付けられる。

Claims

以下の一般式Ｉ’で表される、オリゴマー伸長インスリン−Ｆｃコンジュゲート：
式中、
Ｉｎｓは、ヒトインスリン類似体を表し、当該インスリン類似体が、Ａ鎖およびＢ鎖を含む二鎖インスリン分子であり；
ＯＥＦは、インスリンＡ鎖のＣ末端に融合した、またはインスリンＢ鎖のＮ末端に融合した、極性を有する組換え伸長を示すものであって、当該伸長は、リジン（Ｋ）残基と組み合せた、Ａｌａ（Ａ）、Ａｓｐ（Ｄ）、Ｇｌｕ（Ｅ）、Ｇｌｙ（Ｇ）、Ｐｒｏ（Ｐ）、Ｇｌｎ（Ｑ）、Ｓｅｒ（Ｓ）、およびＴｈｒ（Ｔ）のアミノ酸残基のうちの一つまたは複数を含んで、［ＯＥＦ−Ｉｎｓ］構築物を与えるものであって；
該［ＯＥＦ−Ｉｎｓ］構築物は、リジン（Ｋ）残基のイプシロンアミノ基を介して三価結合基Ｘ−Ｕ（−Ｚ）_２に連結し；
Ｘは、［ＯＥＦ−Ｉｎｓ］とＵとを連結させる、共有結合または二価結合基を表し；
Ｕは、二つのＺ−［Ｓ−Ｆｃ’］基をＸに連結させる中央三価結合単位を表すか；または、Ｘが共有結合を表す場合には、Ｕは、二つのＺ−［Ｓ−Ｆｃ’］基を前記［ＯＥＦ−Ｉｎｓ］構築物内のリジン残基のイプシロンアミノ基に連結させ；
Ｚは存在しないか、もしくは中央結合単位（Ｕ）をモノマーＦｃポリペプチド（Ｆｃ’）もしくはその断片のチオール部分（Ｓ）に連結させる二価結合基を表し；または、Ｚが存在しない場合には、Ｕは、［Ｓ−Ｆｃ’］に直接連結し；かつ、
［Ｓ−Ｆｃ’］は、Ｆｃ’成分（すなわち、モノマーＦｃポリペプチド、またはその断片）内に含まれるシステイン（Ｃ）残基由来の硫黄原子を表すＳをもつＦｃ’成分を表す。
Ｘが、
共有結合；
構造−Ｃ（Ｏ）−（ＣＨ_２）_ｌ−Ｃ（Ｏ）−であって、式中、ｌが、１〜２０の範囲の整数を表すものである、二価リンカー；または、
構造−Ｃ（Ｏ）−（ＣＨ_２）_ｏ−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−であって、式中、ｏが、１〜２０の範囲の整数を表すものである、二価リンカーを表す、請求項１記載のオリゴマー伸長インスリン−Ｆｃコンジュゲート。
中央三価結合単位（Ｕ）および二価結合基（Ｚ）が、以下の一般式ＩＶ’で表される、請求項１〜２のいずれか一項に記載のオリゴマー伸長インスリン−Ｆｃコンジュゲート：
式中、
Ｎは窒素原子であり、および、一般式Ｉ’に記載の中央結合単位（Ｕ）を表し；
Ｌ_１−ＮＨ（ＣＯ）−Ｌ_３およびＬ_２−ＮＨ（ＣＯ）−Ｌ_４はそれぞれ、一般式Ｉ’に記載の二価結合基（Ｚ）を表し；
＊は、Ｆｃ（すなわち、一般式Ｉ’に記載の［Ｓ−Ｆｃ’］部分）のジスルフィド架橋由来の硫黄原子への付加点を示し；
＃は、Ｘへの付加点を示し；かつ、
Ｌ^１およびＬ^２は、互いに独立して、−（ＣＨ_２）_ｍ１−を表し；式中、
ｍ１は、１〜６の範囲の整数を表し；かつ、
Ｌ^３およびＬ^４は、互いに独立して、−（ＣＨ_２）_ｎ１−を表し；
式中、ｎ１は、１〜６の範囲の整数を表す。
Ｘが共有結合を表し、かつ、Ｕ−（−Ｚ）_２が、以下の一般式ＶＩＩで示される３，５−二置換ベンゾイル部分を表す、請求項１〜３のいずれか一項に記載のオリゴマー伸長インスリン−Ｆｃコンジュゲート：
式中、
＊は、Ｆｃ（すなわち、一般式Ｉ’に記載の［Ｓ−Ｆｃ’］部分）のジスルフィド架橋由来の硫黄原子への付加点を示し；
＃は、［ＯＥＦ−Ｉｎｓ］構築物内のリジン残基内のイプシロンアミノ基への付加点を示し；かつ、
Ｌ^９およびＬ^１０は、互いに独立して、−（ＣＨ_２）_ｎ３−を表し；式中、
ｎ３は、１〜６の範囲の整数を表す。
Ｉｎｓが、以下の置換：
Ａ１４ＡまたはＡ１４Ｅ、Ａ２１ＧまたはＡ２１Ｑ、Ｂ３Ｑ、Ｂ１６ＥまたはＢ１６Ｈ、Ｂ２５Ｈ、Ｂ２９ＲおよびｄｅｓＢ３０
のうちの一つまたは複数を含有するヒトインスリン類似体を表す、請求項１〜４のいずれか一項に記載のオリゴマー伸長インスリン−Ｆｃコンジュゲート。
ＯＥＦが、インスリンＡ鎖のＣ末端に融合された、またはインスリンＢ鎖のＮ末端に融合された、極性を有する組換えＯＥＦ伸長を表し、当該伸長は、リジン（Ｋ）残基と組み合わせた、Ａｌａ（Ａ）、Ｇｌｕ（Ｅ）、Ｇｌｙ（Ｇ）、Ｐｒｏ（Ｐ）、およびＧｌｎ（Ｑ）のアミノ酸残基のうちの一つまたは複数を含んで、当該ＯＥＦのアミノ酸残基の総数が１５〜１１０の範囲である［ＯＥＦ−Ｉｎｓ］構築物を与えるものである、請求項１〜５のいずれか一項に記載のオリゴマー伸長インスリン−Ｆｃコンジュゲート。
Ｆｃ’は、ＩｇＧ１Ｆｃポリペプチドの、ＩｇＧ２Ｆｃポリペプチドの、ＩｇＧ４Ｆｃポリペプチドの、またはその断片のモノマーを表す、請求項１〜６のいずれか一項に記載のオリゴマー伸長インスリン−Ｆｃコンジュゲート。
（Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＥＰ）_１９，Ａ９８Ｋ＾，Ａ９９Ｐ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン）／（２２７Ａ，２３４Ａ，２３５ＫｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７））４−［ビス［２−［（２−アセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイルコンジュゲート；
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＥＰ）_１９，Ａ９８Ｋ＾，Ａ９９Ｐ，Ｂ３Ｑ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン／（２２７Ａ，２３４Ａ，２３５Ｋ，２９７Ｅ，３１５Ｑ，３８４Ｑ，ｄｅｓ４４７ｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７））４−［ビス［２−［（２−アセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイルコンジュゲート；
Ａ１４Ｅ，Ｂ（−７８Ｋ＾），Ｂ（−７７Ｐ），Ｂ（−１）（ＧＱＡＰＧＱＡＰＧＱＥＰ）_６−ＧＱＡＰ，Ｂ３Ｑ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン／（２２７Ａ，２３４Ａ，２３５ＫｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７））４−［ビス［２−［（２−アセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイルコンジュゲート；
Ａ１４Ｅ，Ｂ（−７８Ｋ＾），Ｂ（−７７Ｐ），Ｂ（−１）（ＧＱＥＰ）_１９，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン／（２２７Ａ，２３４Ａ，２３５ＫｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７））４−［ビス［２−［（２−アセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイルコンジュゲート；
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰＧＱＡＰＧＱＥＰ）_６−ＧＱＡＰ，Ａ９８Ｋ＾，Ａ９９Ｐ，Ｂ３Ｑ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン／（２２７Ａ，２３４Ａ，２３５ＫｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７））４−［ビス［２−［（２−アセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイルコンジュゲート；
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＥＰ）_１９，Ａ９８Ｋ＾，Ａ９９Ｐ，Ｂ３Ｑ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン／（２２７Ａ，２３４Ａ，２３５ＫｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７））４−［ビス［２−［（２−アセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイルコンジュゲート；
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＥＰ）_６，Ａ４６Ｋ＾，Ａ４７Ｐ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン／（２２７Ａ，２３４Ａ，２３５ＫｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７））４−［ビス［２−［（２−アセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイルコンジュゲート；
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＥＰ）_１２，Ａ７０Ｋ＾，Ａ７１Ｐ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン／（２２７Ａ，２３４Ａ，２３５ＫｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７））４−［ビス［２−［（２−アセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイルコンジュゲート；
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰＧＱＥＰ）_６，Ａ７０Ｋ＾，Ａ７１Ｐ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン／（２２７Ａ，２３４Ａ，２３５ＫｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７））４−［ビス［２−［（２−アセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイルコンジュゲート；
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＥＰ）_３，Ａ３４Ｇ，Ａ３５Ｑ，Ａ３６Ｅ，Ａ３７Ｋ＾，Ａ３８Ｐ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン／（２２７Ａ，２３４Ａ，２３５ＫｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７））４−［ビス［２−［（２−アセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイルコンジュゲート；
Ａ１４Ｅ，Ｂ（−７８Ｋ＾），Ｂ（−７７Ｐ），Ｂ（−１）（ＧＱＥＰ）_１９，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン／（２２７Ａ，２３４Ａ，２３５Ｋ，２９７Ｅ，３１５Ｑ，３８４Ｑ，ｄｅｓ４４７ｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７））４−［ビス［２−［（２−アセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイルコンジュゲート；
（Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＥＰ）_１９，Ａ９８Ｋ＾，Ａ９９Ｐ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン）／（２２７Ａ，２３４Ａ，２３５Ｋ，２９７Ｅ，３１５Ｑ，３８４Ｑ，ｄｅｓ４４７ｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７））４−［ビス［２−［（２−アセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイルコンジュゲート；
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰＧＱＡＰＧＱＥＰ）_６−ＧＱＡＰ，Ａ９８Ｋ＾，Ａ９９Ｐ，Ｂ３Ｑ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン／（２２７Ａ，２３４Ａ，２３５Ｋ，２９７Ｅ，３１５Ｑ，３８４Ｑ，ｄｅｓ４４７ｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７））４−［ビス［２−［（２−アセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイルコンジュゲート；
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰＧＱＥＰ）_６，Ａ７０Ｋ＾，Ａ７１Ｐ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン／（２２７Ａ，２３４Ａ，２３５Ｋ，２９７Ｅ，３１５Ｑ，３８４Ｑ，ｄｅｓ４４７ｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７））４−［ビス［２−［（２−アセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイルコンジュゲート；
（Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰ）_１９，Ａ９８Ｋ＾，Ａ９９Ｐ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン）／（２２７Ａ，２３４Ａ，２３５Ｋ，２９７Ｅ，３１５Ｑ，３８４Ｑ，ｄｅｓ４４７ｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７））４−［ビス［２−［（２−アセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイルコンジュゲート；
（Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰ）_１９，Ａ９８Ｋ＾，Ａ９９Ｐ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン）／（２２７Ａ，２３４Ａ，２３５Ｋ，２９７Ｅ，３１５Ｑ，３８４Ｑ，ｄｅｓ４４７ｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７））６−［ビス［２−［（２−アセチル）アミノ］エチル］アミノ］−６−オキソ−ヘキサノイルコンジュゲート；
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＥＰ）_１２，Ａ７０Ｋ＾，Ａ７１Ｐ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン／（２２７Ａ，２３４Ａ，２３５Ｋ，２９７Ｅ，３１５Ｑ，３８４Ｑ，ｄｅｓ４４７ｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７））４−［ビス［２−［（２−アセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイルコンジュゲート；
Ａ１４Ｅ，Ｂ（−７８Ｋ＾），Ｂ（−７７Ｐ），Ｂ（−１）（ＧＱＡＰ）_１９，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン／（２２７Ａ，２３４Ａ，２３５Ｋ，２９７Ｅ，３１５Ｑ，３８４Ｑ，ｄｅｓ４４７ｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７））４−［ビス［２−［（２−アセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイルコンジュゲート；
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰＧＱＡＰＧＱＥＰ）_６−ＧＱＡＰ，Ａ９８Ｋ＾，Ａ９９Ｐ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン／（２２７Ａ，２３４Ａ，２３５Ｋ，２９７Ｅ，３１５Ｑ，３８４Ｑ，ｄｅｓ４４７ｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７））４−［ビス［２−［（２−アセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイルコンジュゲート；
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰＧＱＡＰＧＱＡＰＧＱＥＰ）_６−ＧＱＡＰ，Ａ１２２Ｋ＾，Ａ１２３Ｐ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン／（２２７Ａ，２３４Ａ，２３５Ｋ，２９７Ｅ，３１５Ｑ，３８４Ｑ，ｄｅｓ４４７ｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７））４−［ビス［２−［（２−アセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイルコンジュゲート；
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｑ，Ａ２２（Ｇ）_１８，Ａ４０Ｋ＾，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン／（２２７Ａ，２３４Ａ，２３５ＫｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７））４−［ビス［２−［（２−アセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイルコンジュゲート；
（Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰ）_２４，Ａ１１８Ｇ，Ａ１１９Ｑ，Ａ１２０Ａ，Ａ１２１Ｋ＾，Ａ１２２Ｐ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン）／（２２７Ａ，２３４Ａ，２３５Ｋ，２９７Ｅ，３１５Ｑ，３８４Ｑ，ｄｅｓ４４７ｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７））３，５−ビス［（２−アセチル）アミノ］ベンゾイルコンジュゲート；
（Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰ）_２４，Ａ１１８Ｇ，Ａ１１９Ｑ，Ａ１２０Ａ，Ａ１２１Ｋ＾，Ａ１２２Ｐ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン）／（２２７Ａ，２３４Ａ，２３５Ｋ，２９７Ｅ，３１５Ｑ，３８４Ｑ，ｄｅｓ４４７ｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７））４−［ビス［２−［（２−アセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイルコンジュゲート；
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰＧＱＡＰＧＱＥＰ）_６−ＧＱＡＰ，Ａ９８Ｋ＾，Ａ９９Ｐ，Ｂ３Ｑ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン／（２２７Ａ，２３４Ａ，２３５Ｋ，２９７Ｅ，３１５Ｑ，３８４Ｑ，ｄｅｓ４４７ｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７））４−［ビス［２−［（２−アセチル）アミノ］エチル］カルバモイルアミノ］ブタノイルコンジュゲート；
（Ａ１４Ａ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰ）_１８，Ａ９４Ｇ，Ａ９５Ｑ，Ａ９６Ａ，Ａ９７Ｋ＾，Ａ９８Ｐ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン）／（２２７Ａ，２３４Ａ，２３５Ｋ，２９７Ｅ，３１５Ｑ，３８４Ｑ，ｄｅｓ４４７ｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７））４−［ビス［２−［（２−アセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイルコンジュゲート；
（Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰ）_１８，Ａ９４Ｇ，Ａ９５Ｑ，Ａ９６Ａ，Ａ９７Ｋ＾，Ａ９８Ｐ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン）／（２２７Ａ，２３４Ａ，２３５Ｋ，２９７Ｅ，３１５Ｑ，３８４Ｑ，ｄｅｓ４４７ｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７））４−［ビス［２−［（２−アセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイルコンジュゲート；
（Ａ１（Ｎ（アルファ）アセチル），Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰ）_１９，Ａ９８Ｋ＾，Ａ９９Ｐ，Ｂ１（Ｎ（アルファ）アセチル），Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン）／（２２７Ａ，２３４Ａ，２３５Ｋ，２９７Ｅ，３１５Ｑ，３８４Ｑ，ｄｅｓ４４７ｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７））４−［ビス［２−［（２−アセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイルコンジュゲート；
（Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰ）_１８，Ａ９４Ｇ，Ａ９５Ｑ，Ａ９６Ａ，Ａ９７Ｋ＾，Ａ９８Ｐ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン）／（２２７Ａ，２３４Ａ，２３５Ｋ，２９７Ｅ，３１５Ｑ，３８４Ｑ，ｄｅｓ４４７ｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７））４−［ビス［２−［（２−アセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイルコンジュゲート；
（Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰ）_２４，Ａ１１８Ｇ，Ａ１１９Ｑ，Ａ１２０Ａ，Ａ１２１Ｋ＾，Ａ１２２Ｐ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン）／（２２７Ａ，２３４Ａ，２３５Ｋ，２９７Ｅ，３１５Ｑ，３８４Ｑ，ｄｅｓ４４７ｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７））３，５−ビス［（２−アセチル）アミノ］ベンゾイルコンジュゲート；
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰ）_１８，Ａ９４Ｇ，Ａ９５Ｑ，Ａ９６Ａ，Ａ９７Ｋ＾，Ａ９８Ｐ，Ｂ１６Ｅ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン）／（２２７Ａ，２３４Ａ，２３５Ｋ，２９７Ｅ，３１５Ｑ，３８４Ｑ，ｄｅｓ４４７ｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７））３，５−ビス［（２−アセチル）アミノ］ベンゾイルコンジュゲート；
（Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＡＰ）_１８，Ａ９４Ｇ，Ａ９５Ｑ，Ａ９６Ａ，Ａ９７Ｋ＾，Ａ９８Ｐ，Ｂ１６Ｅ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン）／（２２７Ａ，２３４Ａ，２３５Ｋ，２９７Ｅ，３１５Ｑ，３８４Ｑ，ｄｅｓ４４７ｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７））４−［ビス［２−［（２−アセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイルコンジュゲート；
Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＥＰ）_６，Ａ４６Ｋ＾，Ａ４７Ｐ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン／（２２７Ａ，２３４Ａ，２３５Ｋ，２９７Ｅ，３１５Ｑ，３８４Ｑ，ｄｅｓ４４７ｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７））４−［ビス［２−［（２−アセチル）アミノ］エチル］アミノ］−４−オキソ−ブタノイルコンジュゲート；または、
（Ａ１４Ｅ，Ａ２１Ｇ，Ａ２２（ＧＱＥＰ）_１９，９８Ｋ＾，Ａ９９Ｐ，Ｂ２５Ｈ，Ｂ２９Ｒ，ｄｅｓＢ３０ヒトインスリン）／（２２６Ａ，２２７Ｇ，２２８Ｐ，２３４Ａ，２３５Ｋ，ｄｅｓ４４７ｈＩｇＧ４−Ｆｃ（２２８−４４７））３，５−ビス［（２−アセチル）アミノ］ベンゾイルコンジュゲート
である、請求項１記載のオリゴマー伸長インスリン−Ｆｃコンジュゲート。
以下の一般式ＩＩの中間体化合物：
［ＯＥＦ−Ｉｎｓ］
式中、
ＯＥＦは、インスリンＡ鎖のＣ末端に融合された、またはインスリンＢ鎖のＮ末端に融合された、極性を有する組換え伸長を表すものであって、当該伸長は、リジン（Ｋ）残基と組み合わせた、Ａｌａ（Ａ）、Ａｓｐ（Ｄ）、Ｇｌｕ（Ｅ）、Ｇｌｙ（Ｇ）、Ｐｒｏ（Ｐ）、Ｇｌｎ（Ｑ）、Ｓｅｒ（Ｓ）、およびＴｈｒ（Ｔ）のアミノ酸残基のうちの一つまたは複数を含み；かつ、
Ｉｎｓはヒトインスリンの類似体を表し、当該インスリン類似体は、Ａ鎖およびＢ鎖を含む二鎖インスリン分子である。
モノマーＦｃポリペプチド（Ｆｃ’）またはその断片であることによって特徴付けられる中間体化合物であって、
（ｉ）２２８Ｓ、２３４Ａ、２３５Ｋ、２３７Ａ、３１５Ｑ、３３０Ｓ、３３１Ｓおよび３８４Ｑの群から選択される、一つもしくは複数の置換および／もしくは欠失を含む；ならびに／または、２２６Ａ、２２７Ａもしくは２２７Ｓの群から選択される一つもしくは二つのアミノ酸残基からなる伸長を含む、ｈＩｇＧ１−Ｆｃ（２２８−４４７）ポリペプチド；または、
（ｉｉ）２２８位から開始され４４７位で終了するｈＩｇＧ４由来Ｆｃ配列の断片であって、該配列が、２２８Ｐ、２３４Ａ、２３５Ａもしくは２３５Ｋ、Ｎ２９７Ｅもしくは２９７Ｑ、３１５Ｑ、３８４Ｑおよびｄｅｓ４４７の群から選択される一つもしくは複数の置換および／もしくは欠失、ならびに／または、２２６Ａもしくは２２６Ｇ、２２７Ａもしくは２２７Ｇの群から選択される一つもしくは二つのアミノ酸残基からなる伸長を含有する、ｈＩｇＧ４由来Ｆｃ配列の断片、
であることによって特徴付けられる、中間体化合物。
以下の一般式Ｖ’によって特徴付けられる中間体化合物：
Ｍ−Ｘ−Ｕ（−Ｚ−ＬＧ）_２
式中、
Ｍ（Ｌｙｓ反応性末端と命名することもありうる）は、第一級アミノ基に対して反応性をもつ脱離基を表し；
Ｘは存在しないか（すなわち、共有結合を表す）、またはＸは上記一般式Ｉ’で規定される二価結合基を表し；
Ｕは、上記一般式Ｉ’で規定される中央三価結合単位を表し；
Ｚは、中央結合単位（Ｕ）を脱離基（ＬＧ）に連結させる二価結合基を表し；かつ、
ＬＧ（Ｃｙｓ反応性末端と命名することもありうる）は、チオール反応性基の脱離基を表す。
以下の一般式ＶＩ’によって特徴付けられる中間体化合物：
［ＯＥＦ−Ｉｎｓ］−Ｘ−Ｕ（−Ｚ−ＬＧ）_２
式中、
ＯＥＦは、上記一般式Ｉ’で規定されるとおりであり、インスリンＡ鎖のＣ末端に融合された、またはインスリンＢ鎖のＮ末端に融合された、極性を有する組換え伸長を示すものであって、当該伸長は、リジン（Ｋ）残基と組み合せた、Ａｌａ（Ａ）、Ａｓｐ（Ｄ）、Ｇｌｕ（Ｅ）、Ｇｌｙ（Ｇ）、Ｐｒｏ（Ｐ）、Ｇｌｎ（Ｑ）、Ｓｅｒ（Ｓ）、およびＴｈｒ（Ｔ）のアミノ酸残基のうちの一つまたは複数を含んで、［ＯＥＦ−Ｉｎｓ］構築物を与えるものであって；
該［ＯＥＦ−Ｉｎｓ］構築物は、上記一般式Ｉ’で規定されるものであり、リジン（Ｋ）残基を介して二価結合基Ｘに連結しており；
Ｘは、上記一般式Ｉ’で規定される二価結合基を表し；かつ、Ｕは、二つの二価結合基（Ｚ）をＸに連結させる、上記一般式Ｉ’で規定される中央三価結合単位を表すか；または
Ｘは共有結合を表し；かつ、Ｕは、二つの二価結合基（Ｚ）を前記［ＯＥＦ−Ｉｎｓ］構築物に連結させる、上記一般式Ｉ’で規定される中央三価結合単位を表し；かつ、
ＬＧは、チオール反応性基の脱離基を表す。
請求項１〜８のいずれか一項に記載のインスリン−Ｆｃコンジュゲートと、一種または複数種の薬剤的に許容可能な担体もしくは希釈剤とを含む、医薬組成物。
医薬として使用するための請求項１〜８のいずれか一項に記載のオリゴマー伸長インスリン−Ｆｃコンジュゲート。
ヒトを含めた生体動物体の代謝疾患もしくは障害もしくは症状を治療、予防または緩和する方法であって、その方法が、治療有効量の請求項１〜８のいずれか一項に記載のインスリンＦｃコンジュゲートを、それを必要とするかかる生体動物体に投与するステップを含む、方法。