JP2016527305A - Ｐｉｍキナーゼ阻害剤の組合せ - Google Patents

Abstract

本発明は、単独でまたは医薬的組合せで使用することができるＰｉｍキナーゼ阻害剤化合物に関する。このような１つの組合せは、同時の使用、別の使用または逐次使用のための、特に、骨髄性新生物または白血病の処置のための、（ａ）ＪＡＫ阻害剤化合物、（ｂ）Ｐｉｍキナーゼ阻害剤化合物、および場合によって、少なくとも１種の薬学的に許容される担体を含む；このような組合せを含む医薬組成物；骨髄性新生物または白血病の処置のための医薬品の調製のためのこのような組合せの使用；同時の使用、別の使用または逐次的使用のための、組み合わせた調製物としてこのような組合せを含む商業ベースのパッケージまたは製品；ならびに哺乳動物、特にヒトの処置の方法。

Description

発明の背景
がんは、米国における２番目に多い死因である。「がん」は多くの異なるタイプのがん、例えば、乳がん、前立腺がん、肺がん、結腸がん、および膵臓がんなどについて記載するために使用されているが、各タイプのがんは、表現型レベルおよび遺伝子レベルの両方において異なる。がんの無秩序な増殖の特徴は、１種または複数の遺伝子の発現が突然変異により調節不全となった場合に生じ、細胞増殖はもはや制御不能となり得る。

骨髄増殖性新生物（ＭＰＮ）は、骨髄に血液細胞（血小板、白血球および赤血球）の過剰産生を引き起こす疾患である。ＭＰＮとして、真性赤血球増加症（ＰＶ）、原発性または本態性血小板血症（ＥＴ）、原発性または特発性骨髄線維症、慢性骨髄性（骨髄の）白血病（ＣＭＬ）、慢性好中球性白血病（ＣＮＬ）、若年性骨髄単球性白血病（ＪＭＬ）および慢性好酸球性白血病（ＣＥＬ）／好酸球増加症（ＨＥＳ）が挙げられる。これらの障害は一緒にグループ化することができる。なぜなら、これらは以下の特徴の一部またはすべてを共有するからである：多分化能造血前駆細胞の関与、非形質転換造血前駆細胞に対する形質転換クローンの優性、確定可能な刺激の不在下での１種または複数の造血系の過剰産生、ｉｎ ｖｉｔｒｏでの増殖因子非依存性コロニー形成、骨髄の細胞過多、巨核球過形成および異形成、主に染色体１、８、９、１３、および２０を含めた異常、血栓性および出血性の体質、豊富な髄外造血巣、ならびに急性白血病への自然な変換または骨髄線維症の発症（ただし、ＣＭＬの速度と比較して低速）。ＭＰＮの発生率は広く異なり、ＪＭＬの発生率が生まれたばかりから１４歳までの小児１００，０００人当たり年間０．１３人であるのに対して、ＣＭＬの発生率は、６０歳超の個人１００，０００人当たり年間およそ３人の範囲である（Vardiman JW et al., Blood 100 (7): 2292-302, 2002）。したがって、ＭＰＮ、ならびに固形腫瘍などの他のがんの新規処置に対する必要性が依然として存在する。

発明の簡単な概要
化合物Ａとして以下に示され、ＷＯ２０１０／０２６１２４に開示されたＮ−（４−（（１Ｒ，３Ｓ，５Ｓ）−３−アミノ−５−メチルシクロヘキシル）ピリジン−３−イル）−６−（２，６−ジフルオロフェニル）−５−フルオロピコリンアミドに対する組合せおよび使用。

本発明の一実施形態では、ＪＡＫ阻害剤である化合物と、Ｐｉｍ阻害剤である化合物とを含む医薬的組合せ、より具体的には、化合物Ａまたはこれに対する薬学的に許容される塩と、ルキソリチニブまたはこれに対する薬学的に許容される塩とを含む医薬的組合せが存在する。

本発明の別の有用な組合せは、Ｐｉｍ阻害剤化合物とＰＩ３Ｋ阻害剤化合物の組合せである。

化合物Ａはまた、以下に化合物Ｂとして示されているアルファ−アイソフォームの特異的ホスファチジルイノシトール３−キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）阻害剤と組み合わせることもできる。

化合物Ｂは、化学名（Ｓ）−ピロリジン−１，２−ジカルボン酸２−アミド１−（｛４−メチル−５−［２−（２，２，２−トリフルオロ−１，１−ジメチル−エチル）−ピリジン−４−イル］−チアゾール−２−イル｝−アミド）またはブパルリシブとして公知である。化合物Ｂおよびその薬学的に許容される塩、これらを含有するこれらの調製物および適切な医薬製剤は、その全体が参照により本明細書に援用されているＷＯ２０１０／０２９０８２に記載されている。化合物Ｂの合成は、実施例１５としてＷＯ２０１０／０２９０８２に記載されている。

化合物Ａおよび組合せに対する他の使用もまた開示されている。

ＷＯ２０１０／０２９０８２に示されているように、化合物Ｂはアルファ−アイソフォームのホスファチジルイノシトール３−キナーゼ（またはＰＩ３Ｋ）に対する有意な阻害活性を有することが判明した。化合物Ｂは、ＰＩ３Ｋ阻害剤として有利な薬理学的特性を有し、ベータおよび／またはデルタおよび／またはガンマアイソフォームと比較してＰＩ３−キナーゼアルファアイソフォームに対して高い選択性を示す。

ＭＰＮの細胞株操作したモデル（ＢＡ／Ｆ３−ＥｐｏＲ−ＪＡＫ２^{Ｖ６１７Ｆ}）における、単剤およびルキソリチニブと化合物Ａの組合せの発光性細胞生存度アッセイを示す図である。 −ＩＶＩＳ Ｓｐｅｃｔｒｕｍ Ｐｒｅｃｌｉｎｉｃａｌのｉｎ ｖｉｖｏ画像化システム（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）による、ネズミＭＰＮモデル、ＢＡ／Ｆ３−ＥｐｏＲ−ＪＡＫ２^{Ｖ６１７Ｆ}における疾病負荷の減少を示す図である。 ネズミＭＰＮモデルＢＡ／Ｆ３−ＥｐｏＲ−ＪＡＫ２^{Ｖ６１７Ｆ}における研究エンドポイントでの脾臓サイズの減少を示す図である。 化合物Ａおよびミドスタウリンは、相乗作用を発揮することによって、ＡＭＬ細胞株Ｍｏｌｍ−１３におけるアポトーシスの増加を促進することを示す図である。 化合物Ａおよびミドスタウリンは、相乗作用を発揮することによって、ＡＭＬ細胞株Ｍｏｌｍ−１３においてｍＴＯＲ経路を阻害することを示す図である。

発明の詳細な記載
ＰＩＭタンパク質（モロニーマウス白血病ウイルスに対するプロウイルス組込部位）は、これらの順序で調節性ドメインを有さない３種のｓｅｒ／ｔｈｒキナーゼファミリーであり、これらの翻訳の際に構成的活性があるとみなされている（Qian, K.C., et al. J. Biol. Chem. 2004, p6130-6137）。これらは、細胞周期、増殖、アポトーシスおよび薬物耐性の調節に関わっているがん遺伝子である（Mumenthaler et al, Mol Cancer Ther. 2009; p2882）。これらの発現は、造血器のがんにおいて特に上昇していることが判明しているが、一部の報告は、膵臓、前立腺および肝臓がんにおけるＰＩＭ１の過剰発現ならびにある特定の固形腫瘍におけるＰＩＭ３発現を示している（Alvarado et al, Expert Rev. Hematol. 2012, p81-96において概説されている）。ＰＩＭキナーゼは、転写、翻訳およびプロテアソームの分解速度により調節されるが、これらの事象を決定づける因子は依然として十分に理解されていない。ＰＩＭ１／２発現を誘発する、確実な、公知の１経路はＪＡＫ／ＳＴＡＴシグナル伝達経路である（Miura et al, Blood. 1994, p4135-4141）。ＳＴＡＴタンパク質は、ＪＡＫチロシンキナーゼの下流でサイトカインなどこれらのリガンドとの細胞表面受容体相互作用により活性化される転写因子である。ＳＴＡＴ３とＳＴＡＴ５の両方はＰＩＭ発現を誘発するＰＩＭ助触媒と結合することが公知である（Stout et al. J Immunol, 2004;173:6409-6417）。ＪＡＫ／ＳＴＡＴに加えて、ＶＥＧＦ経路もまた卵巣の血管新生の間内皮細胞内で、およびヒト臍帯静脈細胞においてＰＩＭ発現を上方調節することが示されている（Zipo et al, Nat Cell Biol. 2007, p932-944）。

ＪＡＫファミリーは、免疫応答に関わる細胞の増殖および機能のサイトカイン依存性調節においてある役割を果たしている。４種の哺乳動物のＪＡＫファミリーメンバーは以下の通りである：ＪＡＫ１（ヤヌスキナーゼ−１としても公知）、ＪＡＫ２（ヤヌスキナーゼ−２としても公知）、ＪＡＫ３（ヤヌスキナーゼ、白血球；ＪＡＫＬ；Ｌ−ＪＡＫおよびヤヌスキナーゼ−３としても公知）およびＴＹＫ２（タンパク質−チロシンキナーゼ２としても公知）。異常なＪＡＫ−ＳＴＡＴシグナル伝達は複数のヒトの病因に関わっている。ＪＡＫ２の遺伝子異常および骨髄増殖性新生物（ＭＰＮ）におけるＳＴＡＴの関連する活性化はヒト腫瘍におけるこの経路の関与の１つの例である。上流トロンボポエチン受容体（ＭＰＬＷ５２５Ｌ）における突然変異およびＬＮＫ（エクソン２）によるＪＡＫ調節の損失は骨髄線維症に関連している（Vainchenker W et al., Blood 2011; 118:1723；Pikman Y et al., Plox Med. 2006, 3: e270）。ＪＡＫ２の構成的活性化をもたらす、主にＪＡＫ２ Ｖ６１７ＦにおけるＪＡＫ２の突然変異は、原発性骨髄線維症を有する患者の大部分において観察されている（Kralovics R et al., N Engl. J Med 2005, 352: 1779；Baxter EJ et al., Lancet 2005, 365: 1054；Levine RL et al., Cancer Cell 2005, 7 : 387）。ＪＡＫ２エクソン１２のさらなる突然変異が真性赤血球増加症および特発性赤血球増加症において同定されている（Scott LM et al., N Engl J Med 2007, 356:459）。さらに、活性化したＪＡＫ−ＳＴＡＴは、ヒトがんに対する生存メカニズムとして示唆されている（Hedvat M et al., Cancer Cell 2009; 16: 487 ）。最近になって、ＪＡＫ２／ＳＴＡＴ５の阻害が転移性乳がんにおけるＰＩ３Ｋ／ｍＴＯＲ遮断に対する耐性を回避することを示すデータが現れた（Britschgi A et al., Cancer Cell 2012; 22: 796）。また、ＩＬ−６−により駆動される乳がん、卵巣がん、および前立腺がんにおけるＪＡＫ１／２阻害剤の使用は、前臨床モデルにおける腫瘍増殖の阻害をもたらした（Sansone P and Bromberg J; J. Clinical Oncology 2012, 30: 1005）。

ホスファチジルイノシトール（ＰＩ）は細胞膜中に見出されるリン脂質である。このリン脂質は、細胞内シグナル形質導入においてもまた重要な役割を果たす。ホスファチジルイノシトール−３キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）は、ホスファチジルイノシトールのイノシトール環の３位をリン酸化する酵素として同定されている。ホスホイノシトール−３キナーゼおよびこのシグナル伝達経路の上流および下流の構成部分の調節解除がヒトがんおよび増殖性疾患に伴う最も一般的な調節解除の１つであることが観察により示されている（Parsons et al., Nature 436: 792 (2005)；Hennessey at el., Nature Rev. Drug Dis. 4:988-1004(2005)）。ＰＩ３Ｋ阻害剤の効力は、例えば、ＰＣＴ国際特許出願ＷＯ２００７／０８４７８６において記載されている。

本発明のＪＡＫ阻害剤とＰｉｍ阻害剤の組合せを投与することにより、血液の増殖性疾患（骨髄性新生物、白血病、他の血液のがんを含むことができる）を処置するための相乗効果が得られ、固体がんの処置にも潜在的に有用となり得ることが発見された。このようなアプローチ、すなわち２種の薬剤の組合せまたは同時投与は、現在使用可能な療法に応答しない、または耐性を有するがんに罹患した個体を処置するのに有用となり得る。本明細書に提供されている併用療法はまた、このような療法に応答する個体に対して現在使用可能ながん療法の効力を改善し、および／または副作用を減少させるのにも有用である。

本明細書で使用されているある特定の用語は以下に記載されている。本発明の化合物は、標準的な命名法を使用して記載されている。特に定義されていない限り、本明細書で使用されているすべての技術的および科学的用語は、本発明が属する技術分野の当業者により一般的に理解されているものと同じ意味を有する。本発明の化合物はこれらのエナンチオマー形態を含む。

本明細書で使用する場合、「薬学的に許容される塩」という用語は、本発明のピリミジン化合物の非毒性の酸またはアルカリ土類金属の塩を指す。これらの塩は、ピリミジン化合物の最終単離および精製の間にインサイチュで、あるいは塩基または酸の官能基を、適切な有機酸もしくは無機酸または有機塩基もしくは無機塩基と別々に反応させることによってそれぞれ調製することができる。代表的な塩として、これらに限定されないが、以下が挙げられる：酢酸塩、アジピン酸塩、アルギン酸塩、クエン酸塩、アスパラギン酸塩、安息香酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、重硫酸塩、酪酸塩、カンファー酸塩、カンファースルホン酸塩、ジグルコン酸塩、シクロペンタンプロピオン酸塩、硫酸ドデシル塩、エタンスルホン酸塩、グルコヘプタン酸塩、グリセロリン酸塩、ヘミ硫酸塩、ヘプタン酸塩、ヘキサン酸塩、フマル酸塩、塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、２−ヒドロキシエタンスルホン酸塩、乳酸塩、マレイン酸塩、メタンスルホン酸塩、ニコチン酸塩、２−ナフト−アレンスルホン酸塩、シュウ酸塩、パモ酸塩、ペクチン酸塩、過硫酸塩、３−フェニルプロピオン酸塩（phenylproionate）、ピクリン酸塩、ピバル酸塩、プロピオン酸塩、コハク酸塩、硫酸塩、酒石酸塩、チオシアン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩、およびウンデカン酸塩。また、塩基性の窒素含有基は、ハロゲン化アルキル、例えば、塩化メチル、塩化エチル、塩化プロピル、および塩化ブチル、臭化メチル、臭化エチル、臭化プロピル、および臭化ブチル、ならびにヨウ化メチル、ヨウ化エチル、ヨウ化プロピル、およびヨウ化ブチルなど；硫酸ジアルキル、例えば、硫酸ジメチル、硫酸ジエチル、硫酸ジブチル、および硫酸ジアミルなど、長鎖ハロゲン化物、例えば、塩化デシル、塩化ラウリル、塩化ミリスチル、および塩化ステアリル、臭化デシル、臭化ラウリル、臭化ミリスチル、および臭化ステアリル、ヨウ化デシル、ヨウ化ラウリル、ヨウ化ミリスチル、およびヨウ化ステアリルなど、ハロゲン化アラルキル、例えば臭化ベンジルおよび臭化フェネチルなどの薬剤で四級化することができる。水溶性もしくは油溶性または分散性の生成物がこれにより得られる。

薬学的に許容される酸付加塩を形成するために利用することができる酸の例として、このような無機酸、例えば、塩酸、ヒドロホウ酸、硝酸、硫酸およびリン酸ならびに有機酸、例えば、ギ酸、酢酸、トリフルオロ酢酸、フマル酸、酒石酸、シュウ酸、マレイン酸、メタンスルホン酸、コハク酸、リンゴ酸、メタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、およびｐ−トルエンスルホン酸、クエン酸、および酸性アミノ酸、例えば、アスパラギン酸およびグルタミン酸などが挙げられる。

塩基性付加塩は、ピリミジン化合物の最終単離および精製の間にインサイチュで、またはカルボン酸部分を、適切な塩基、例えば、水酸化物、薬学的に許容される金属カチオンのカーボネートまたはバイカーボネートなど、あるいはアンモニア、または有機の第一級、第二級もしくは第三級アミンと反応させることによって、別々に調製することができる。薬学的に許容される塩として、これらに限定されないが、アルカリおよびアルカリ土類金属に基づくカチオン、例えば、ナトリウム、リチウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム、アルミニウムの塩など、ならびに非毒性アンモニウム、第四級アンモニウム、およびアミンカチオン、これらに限定されないが、アンモニウム、テトラメチルアンモニウム、テトラエチルアンモニウム、メチルアミン、ジメチルアミン、トリメチルアミン、トリエチルアミン、エチルアミンなどを含めたものが挙げられる。塩基付加塩の形成に対して有用な他の代表的な有機アミンとして、ジエチルアミン、エチレンジアミン、エタノールアミン、ジエタノールアミン、ピペラジン、ピリジン、ピコリン、トリエタノールアミンなど、および塩基性アミノ酸、例えば、アルギニン、リシンおよびオルニチンなどが挙げられる。

組合せの投与は、単一製剤または単位剤形の組合せの投与、組合せの個々の薬剤の同時ではあるが、別々の投与、または任意の適切な経路による組合せの個々の薬剤の逐次的な投与を含む。組合せの個々の薬剤の投薬は、組合せの中の他の薬剤と比較して、薬剤のうちの１種のより頻繁な投与を必要とし得る。したがって、適当な投薬を可能とするために、パッケージ化された医薬品は、薬剤の組合せを含有する１種または複数の剤形、および薬剤の組合せのうちの１種を含有するが、組合せの他の薬剤を含有しない１種または複数の剤形を含有し得る。

「単一製剤」という用語は、本明細書で使用する場合、両方の治療剤の有効量を患者に送達するために製剤化された単一の担体またはビヒクルを指す。単一のビヒクルは、薬剤のそれぞれの有効量を、任意の薬学的に許容される担体または賦形剤と共に送達するように作られている。一部の実施形態では、ビヒクルは、錠剤、カプセル剤、丸剤、またはパッチ剤である。他の実施形態では、ビヒクルは溶液または懸濁液である。

「単位用量」という用語は、処置している患者へ、１つの剤形中の両方の薬剤を一緒に同時投与することを意味するように本明細書で使用されている。一部の実施形態では、単位用量は単一の製剤である。ある特定の実施形態では、単位用量は、各ビヒクルが薬学的に許容される担体および賦形剤と共に少なくとも１種の薬剤の有効量を含むように、１種または複数のビヒクルを含んでいる。一部の実施形態では、単位用量は、患者に同時に投与される１種または複数の錠剤、カプセル剤、丸剤、またはパッチ剤である。

「処置する」という用語は、対象における疾患の少なくとも１種の症状を緩和、減少または軽減させることを意味するように本明細書で使用されている。本発明の意味の範囲内で、「処置する」という用語はまた、停止する、開始を遅延させる（すなわち、疾患の臨床徴候または疾患の症状の前の期間）および／または疾患の症状を発症もしくは悪化させるリスクを減少させることを意味する。

「対象」という用語は、動物を含むことを意図する。対象の例として、哺乳動物、例えば、ヒト、イヌ、雌ウシ、ウマ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、ネコ、マウス、ウサギ、ラット、および遺伝子組み換えの非ヒト動物が挙げられる。ある特定の実施形態では、対象はヒト、例えば、がん、例えば、骨髄増殖性新生物または固形腫瘍などに罹患した、罹患したリスクが高い、または罹患したことが潜在的に可能であるヒトである。

「約」または「およそ」という用語は、与えられた値または範囲の２０％以内、より好ましくは１０％以内、さらに最も好ましくは５％以内を意味する。代わりに、特に生体系において、「約」という用語は、１ログ（すなわち、１桁）、好ましくは与えられた値の２の因数以内であることを意味する。

本明細書に記載されている薬剤の組合せは相乗効果を示す。「相乗効果」という用語は、本明細書で使用する場合、これらだけで投与された各薬物の効果の単純な足し算より大きい効果を生じる２種の薬剤の作用を指す。

薬剤の組合せの「有効量」とは、組合せで処理した抑うつ障害の臨床的に観察可能な徴候および症状のベースラインよりも上の観察可能な改善を提供するのに十分な量である。

「経口投与剤形」は経口投与に対して処方されたまたは意図される単位剤形を含む。

化合物Ａまたは化合物ＡとＪＡＫ阻害剤、ＰＩ３Ｋ阻害剤もしくは他の阻害剤との組合せを使用した処置方法
化合物Ａを単独でまたは併用療法で使用して、がん、骨髄増殖性新生物および固形腫瘍を処置する方法が本明細書に提供されている。

化合物Ａを単独でまたは組み合わせて使用することによって、がんを処置することができる。本明細書で使用する場合、「がん」とは、不適切に高レベルの細胞***、不適切に低レベルのアポトーシス、または両方により引き起こされる、またはこれらをもたらす任意の疾患を指す。がんの例として、制限なしで、白血病（例えば、急性白血病、急性リンパ性白血病、急性骨髄性白血病（acute myelocytic leukemia）とも呼ばれる急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、急性骨髄芽球性白血病、急性前骨髄球性白血病、急性骨髄単球性白血病、急性単球性白血病、急性赤白血病、慢性白血病、慢性の骨髄の（rnyelocytic）白血病とも呼ばれる慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、慢性好酸球性白血病、慢性骨髄単球性白血病、ＣＤ１９＋白血病（ＣＤ１９＋ＡＬＬおよびＣＬＬを含む）、マントル細胞白血病（ＭＣＬ））、若年性骨髄単球性白血病、好酸球増加症候群、全身性肥満細胞症、侵襲性全身性肥満細胞症（ＡＳＭ）、非定型慢性骨髄性白血病、真性赤血球増加症、リンパ腫（ホジキン病、非ホジキン病、またホジキンリンパ腫または非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）としても公知であり、ＮＨＬまたは濾胞性リンパ腫（ＦＬ）の中で最も一般的なびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）を含む）、ワルデンシュトレーム型マクログロブリン血症、重鎖病、および固形腫瘍が挙げられる。化合物Ａは、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）の処置のために単独でまたは組み合わせて使用することができる。

さらに、本明細書に提供されている療法は、単独または併用療法での抗腫瘍有効用量の化合物Ａを含む、ヒトを含めた温血動物における固体または液体腫瘍の処置に関する。

化合物Ａの使用は、固形腫瘍、例えば、肉腫および癌など、例えば、線維肉腫、粘液肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫、骨原性肉腫、脊索腫、血管肉腫、内皮肉腫、リンパ管肉腫、リンパ管内皮肉腫、悪性滑膜腫、中皮腫、ユーイング腫瘍、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、結腸癌、膵臓がん、乳がん、卵巣がん、前立腺がん、扁平上皮癌、基底細胞癌、腺癌、汗腺癌、脂腺癌、乳頭状癌、乳頭状腺癌、嚢胞腺癌、髄様癌、気管支原性肺癌、腎細胞癌、肝癌、胆管癌（nile duct carcinoma）、絨毛癌、精上皮腫、胎児性癌、ウィルムス腫瘍、子宮頸がん、子宮がん、精巣がん、肺癌、小細胞肺癌、膀胱癌、上皮癌、グリア細胞腫、星状細胞腫、髄芽腫、頭蓋咽頭腫（crailiopharyngioma）、上衣細胞腫、松果体腫、血管芽腫、聴神経腫瘍、乏突起神経膠腫、シュワン細胞腫（schwamioma）、髄膜腫、黒色腫、ニューロブラストーマ、および網膜芽腫を含めたものなどの処置のために、単独であっても、または併用療法であってよい。

ある特定の実施形態では、本明細書に提供されている化合物Ａを単独でまたは組み合わせて使用して処置することができるがんは、骨髄増殖性疾患または骨髄性新生物である。現在一般的に骨髄増殖性（meyloproliferative）新生物（ＭＰＮ）と呼ばれる骨髄増殖性疾患（ＭＰＤ）は、造血前駆体のクローン障害である血液系悪性腫瘍のクラスに入る。Tefferi, A. and Vardiman, J. W., Classification and diagnosis of myeloproliferative neoplasms: The 2008 World Health Organization criteria and point-of-care diagnostic algorithms, Leukemia, September 2007, 22: 14-22は、参照により本明細書に援用されている。これらは、増強された増殖および１種または複数の成熟した骨髄細胞系列細胞型の生存により特徴付けられる。このカテゴリーとして、これらに限定されないが、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、真性赤血球増加症（ＰＶ）、本態性血小板血症（ＥＴ）、骨髄線維症（ＭＦ）（原発性骨髄線維症（ＰＭＦ）または特発性骨髄線維症を含む、慢性好中球性白血病、慢性好酸球性白血病、慢性骨髄単球性白血病、若年性骨髄単球性白血病、好酸球増加症候群、全身性肥満細胞症、および非定型慢性骨髄性白血病が挙げられる。Tefferi, A. and Gilliland, D. G., Oncogenes in myeloproliferative disorders, Cell Cycle. March 2007, 6(5): 550-566は、すべての目的のために、その全体が参照により本明細書に完全に援用されている。

本発明の化合物Ａは、難治性または再発性の形態の疾患、例えば、再発性、難治性ＡＭＬ、再発性、難治性多発性骨髄腫など、ならびにハイリスクのＭＤＳ患者を含むＭＤＳ患者を処置するために、単独でまたは組み合わせて使用することができる。

投薬量
最適な用量の化合物Ａまたは化合物Ａとの組合せは公知の方法を使用して各個体に対して経験的に求めることができ、これらに限定されないが、疾患の進展の程度；個体の年齢、体重、全般的な健康状態、性別および食事；投与の時間および経路；ならびに個体が服用している他の医薬品を含む様々な因子に依存することになる。最適な投薬量は、当技術分野で周知である所定の試験および手順を使用して確立することができる。化合物Ａは、単独でまたは組み合わせて、２５ｍｇ、５０ｍｇ、７０ｍｇ、７５ｍｇ、１００ｍｇ、１５０ｍｇ、２００ｍｇ、２５０ｍｇ、３００ｍｇ、３５０ｍｇ ４００ｍｇ、４５０ｍｇまたは５００ｍｇを投薬することができる。

本発明の１つの組合せにおいて、ルキソリチニブは、２５ｍｇ、５０ｍｇ、７０ｍｇ、７５ｍｇ、１００ｍｇ、１５０ｍｇ、２００ｍｇ、２５０ｍｇ、３００ｍｇ、３５０ｍｇ ４００ｍｇ、４５０ｍｇまたは５００ｍｇが投薬される化合物Ａと組み合わせて、５ｍｇ、１０ｍｇ、１５ｍｇ、２０ｍｇ ２５ｍｇを投薬することができる。化合物Ａと組み合わせた投薬範囲に対して、ルキソリチニブは、０．２５ｍｇ〜２５ｍｇ、より好ましくは１ｍｇ〜２５ｍｇとすることができ、化合物Ａは５ｍｇ〜８００ｍｇ、より好ましくは２０ｍｇ〜２００ｍｇとすることができる。１日１回の投薬が好ましい。

化合物Ａと化合物Ｂの組合せにおいて、例えば、化合物Ａを２００ｍｇ、３００ｍｇ、４００ｍｇまたは５００ｍｇの標準的用量で与え、化合物Ｂを１００ｍｇ、２００ｍｇまたは３００ｍｇの用量で与えることができる。場合によっては、患者の結果に応じて、化合物Ａは、より低い用量の１００ｍｇまたは７０ｍｇで与えることができる。化合物Ａと化合物Ｂの組合せにより示されている前臨床相乗効果により、一緒に投与される各組合せの臨床用量と比較して、各化合物のより低い臨床用量を投与することができる。ＰＫＣ４１２は、例えば、２５〜２５０ｍｇの間で投薬することができ、１００ｍｇがこの範囲の具体例である。

単一剤形を生成するために担体材料と組み合わせることができる薬剤の組合せの量は、処置する個体および特定の投与モードに応じて異なることになる。一部の実施形態では、本明細書中に記載されているような薬剤の組合せを含有する単位剤形は、薬剤が単独で投与される場合通常投与される組合せの各薬剤の量を含有することになる。

投薬の頻度は、使用されている化合物および処置している、または予防している特定の状態に応じて異なり得る。一般的に、有効な療法を得るのに十分な最低限の投薬量の使用が好ましい。患者は一般的に、処置しているまたは予防している状態に対して適切なアッセイ（当業者であれば熟知している）を使用して治療有効性についてモニターすることができる。

剤形は、薬物製剤の化学に熟練した者には容易に明らかな様々な従来の混合、粉砕および製作技術により調製することができる。

薬剤の組合せまたは薬剤の組合せの個々の薬剤を含有する経口投与剤形は、カプセル剤の内側に封入されたミクロ錠剤、例えば、ゼラチンカプセル剤の形態であってよい。これに対して、医薬製剤において利用されているようなゼラチンカプセル剤は、例えば、Ｐｆｉｚｅｒから入手可能なＣＡＰＳＵＧＥＬとして公知の硬ゼラチンカプセルなどを使用することができる。

本明細書で有用な経口投与剤形の多くは、薬剤の組合せまたは薬剤の組合せの個々の薬剤を粒子形態で含有する。このような粒子は、錠剤へと圧縮されるか、コーティングした剤形、例えば、味がマスキングされた剤形、圧縮コーティングした剤形、もしくは腸溶コーティングした剤形などのコア元素中に存在するか、またはカプセル剤、浸透圧ポンプ剤形、もしくは他の剤形中に含有されていてもよい。

本明細書で開示されている、本発明の組合せの薬物、剤形、医薬組成物および医薬製剤は、１００：１〜１：１００の範囲の比率である。

毒性なしに効力を生成する最適の比率、個々のおよび組み合わせた投薬量、ならびに薬物化合物の濃度は、標的部位に対する活性成分の利用可能性の動力学に基づき、当業者に公知の方法を使用して求める。

本発明の医薬的組合せの投与は、例えば、症状を軽減する、症状の進行を遅延させるまたは症状を阻害することに関して、有利な効果、例えば、相乗的治療効果ばかりでなく、本発明の組合せにおいて使用されている薬学的活性成分のうちの１種のみを適用させる単剤療法と比較して、さらに驚くべき有利な効果、例えば、副作用の低下、生活の質の改善または病的状態の低減を結果として生じることができる。

さらなる利点は、本発明の組合せの活性成分のより低い用量を使用することができる、例えば、投薬量がより少量ですむばかりでなく、適用の頻度を少なくすることもでき、これによって、副作用の発生率または重症度を減らすことができる。これは、処置すべき患者の要望および必要条件と合致する。

本発明の１つの目的は、がん、例えば、骨髄増殖性疾患を標的とするまたは予防することに共同で治療的に有効となり得る量を含む医薬組成物を提供することである。この組成物において、式Ｉの化合物および式ＩＩの化合物が、１つの組み合わせた単位剤形でまたは２つの別々の単位剤形で、一緒に、次々にまたは別々に投与され得る。単位剤形はまた固定された組合せであってもよい。

両方の化合物の別々の投与のための、または固定された組合せ、すなわち本発明による両方の化合物を含む単一のガレヌス製剤組成物の投与のための医薬組成物は、それ自体公知の方式で調製することができ、ヒトを含む哺乳動物（温血動物）への、例えば、経口または直腸などの経腸の投与および非経口投与に対して適切なものであり、少なくとも１種の薬理学的活性のある組合せパートナーの治療有効量を、例えば上記に示されているように単独で、または、特に経腸もしくは非経口の適用に対して適切である、１種もしくは複数の薬学的に許容される担体もしくは希釈剤と組み合わせて含む。

本明細書に提供されている医薬組成物または組合せ（すなわち、化合物ＡとＪＡＫ阻害剤、例えば、ルキソリチニブなど、またはＰＩ３Ｋ阻害剤、例えば、化合物Ｂなど）は、臨床研究において試験することができる。適切な臨床研究は、例えば、増殖性疾患を有する患者におけるオープンラベルの、用量漸増試験であってよい。このような試験は特に本発明の組合せの活性成分の相乗作用を証明する。増殖性疾患に対する有利な効果は、当業者にはこうして公知であるこれらの試験の結果を直接介して求めることができる。このような試験は、特に、本発明の活性成分および組合せを使用する単剤療法の効果を比較するのに適切となり得る。一実施形態では、化合物Ａの用量を、最大耐量に到達するまで段階的に増大させ、他の化合物（例えばルキソリチニブまたは化合物Ｂ）は固定された（変化しない）用量で投与する。代わりに、化合物Ａと組み合わせて他の化合物を、用量を変化させずに投与し、化合物Ａの化合物の用量を段階的に増大してもよい。各患者は、毎日または断続的に化合物の用量を受け取ることができる。処置の効力は、例えば、１２、１８または２４週間後、６週間ごとに症状スコアを評価することによるこのような試験において求めることができる。

他の組合せおよび適応症
化合物Ａは、１種もしくは複数の標的療法薬物、レナリドミド、サリドマイド、ポマリドミド、プロテアーゼ阻害剤、ボルテゾミブ、カーフィルゾミブ、コルチコステロイド、デキサメタゾン、プレドニゾン、ダラツムマブ、化学療法薬物、アントラサイクリン、ドキソルビシン、リポソームドキソルビシン、メルファラン、ビスホスホネート、シクロホスファミド、エトポシド、シスプラチン、カルムスチン、幹細胞移植（骨髄移植）および放射線療法を含む他の薬物または処置と組み合わせて、本明細書で開示されている他のがんまたは適応症、例えば多発性骨髄腫および再発性、難治性多発性骨髄腫などを処置するために使用することができる。

化合物Ａは、１種または複数の標的療法薬物、ミドスタウリン（ＰＫＣ４１２）、レナリドミド、サリドマイド、ポマリドミド、ソラフェニブ、チピファルニブ、クイザルチニブ、デシタビン、ＣＥＰ−７０１（Ｃａｐｈａｌｏｎ）、ＳＵ５４１６、ＳＵ１１２４８、ＭＬＮ５１８、Ｌ００００２１６４８（Ｍｅｒｃｋ）、化学療法薬物、デシタビン、アザシチジン、クロファラビン、アントラサイクリン、ドキソルビシン、リポソームドキソルビシン、ダウノルビシン、イダルビシン、シタラビン（cyatarbine）、全トランス型レチノイン酸（ＡＴＲＡ）、三酸化ヒ素、幹細胞移植（骨髄移植）および放射線療法を含む他の薬物または処置と組み合わせて、本明細書で開示されている他のがんまたは適応症、例えば、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）および再発性、難治性ＡＭＬなどを処置するために使用することができる。受容体チロシンキナーゼをコードするＦＭＳ様チロシンキナーゼ３（ＦＬＴ３）遺伝子における突然変異はＡＭＬの症例の約２５％において生じ、ミドスタウリン、ソラフェニブおよびクイザルチニブ（quirzartinib）などの薬物（これらすべてが化合物Ａに対する潜在的な組合せパートナー）の標的となっている。ＡＭＬの変異した他の患者として、ＧＳＫ１１２０２１２が標的とする、ＭＳＣ１９３６３６ＢならびにＪＡＫ２およびリツキシマブ（rutuxonib）が標的とするＲＡＳを有する患者が挙げられる。

製剤
本明細書に提供されている合剤は、医薬製剤の当業者には明らかな様々な方法で製剤化することができる。上に記載されている様々な放出特性は、様々な異なる方式で達成することができる。適切な製剤として、例えば、錠剤、カプセル剤、圧縮コーティング剤、および他の容易に投与される製剤が挙げられる。

適切な医薬製剤は、例えば、約０．１％〜約９９．９％、好ましくは約１％〜約６０％の活性成分を含有し得る。経腸または非経口投与のための併用療法に対する医薬製剤は、例えば、単位剤形のもの、例えば、シュガーコーティングされた錠剤、錠剤、カプセル剤または坐剤、またはアンプルなどである。別途示されていない限り、これらは、それ自体公知の方式、例えば、従来の混合、造粒、糖コーティング、溶解または凍結乾燥プロセスを用いて調製される。各剤形の個々の用量で含有された組合せパートナーの単位含有量は、必要な有効量は複数の投与単位の投与で到達することができるので、それ自体有効量を構成する必要はないことを理解されたい。

特に、本発明の組合せの組合せパートナーのそれぞれの治療有効量は、同時にまたは逐次的に、および任意の順序で投与することができ、構成部分は別々にまたは固定された組合せとして投与してもよい。例えば、本発明による疾患を処置する方法は、（ｉ）遊離または薬学的に許容される塩形態の第１の薬剤（ａ）を投与すること、および（ｉｉ）遊離または薬学的に許容される塩形態の薬剤（ｂ）を、同時にまたは逐次的に、任意の順序で、共同での治療有効量、好ましくは相乗的有効量で、例えば、本明細書に記載されている量に対応する１日の投薬量または断続的な投薬量で投与することを含み得る。本発明の組合せの個々の組合せパートナーは、療法の過程における異なる時点で別々に、または分割されたもしくは単一の組合せ形態で同時に投与することができる。さらに、投与するという用語はまた、このような組合せパートナーへとｉｎ ｖｉｖｏで変換する組合せパートナーのプロドラッグの使用も包含する。したがって、本発明は、同時または交互の処置のすべてのこのようなレジメンを包含すると理解されるものとし、それに応じて「投与する」という用語が解釈されるものとする。

本発明の組合せに利用される組合せパートナーのそれぞれの有効な投薬量は、利用する特定の化合物または医薬組成物、投与のモード、処置している状態、処置している状態の重症度に応じて異なり得る。したがって、本発明の組合せの投薬レジメンは、投与経路ならびに患者の腎臓および肝臓の機能を含む様々な因子に従って選択される。普通のスキルの臨床医または医師であれば、状態の進行を軽減する、これに対抗する、またはこれを停止するために必要とされる単一の活性成分の有効量を容易に求めるおよび処方することができる。

インビトロアッセイ
Ｂａ／Ｆ３−ＪＡＫ２^{Ｖ６１７Ｆ}をＤＭＥＭ中で１０％ＦＢＳと共に増殖させた。製造業者のプロトコルに従い、ＣＥＬＬＴＩＴＥＲ−ＧＬＯ（登録商標）Ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ Ｃｅｌｌ Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ Ａｓｓａｙ（Ｐｒｏｍｅｇａ＃Ｇ７５７３）（「アッセイ」）を使用して細胞のＡＴＰ含有量を測定することによって、細胞生存度を求めた。アッセイはウェルプレート中に存在するＡＴＰの量を定量的に求め、これが代謝的活性のある細胞の指標となる。

細胞を、９６−ウェルプレートに、３回重複して、成長培地内でプレーティングした。次いで、１０点用量滴定曲線（Ｂａ／Ｆ３−ＪＡＫ２^{Ｖ６１７Ｆ}に対する２．７ｕＭの最高濃度および０．４５ｎＭの最低濃度）において、細胞をルキソリチニブ、化合物Ａまたは化合物Ａとルキソリチニブの組合せで処理し、３７度でインキュベートした。７２時間のインキュベーション後、Ｃｅｌｌ Ｔｉｔｅｒ−Ｇｌｏを加えて細胞を溶解し、ＡＴＰ消費を測定した。Ｅｎｖｉｓｉｏｎプレートリーダーに記録された発光強度を使用してシグナルを測定した。

化合物Ａとルキソリチニブとの間の有意な相乗効果が図１によりＢａ／Ｆ３−ＪＡＫ２^{Ｖ６１７Ｆ}において示されている。ルキソリチニブと化合物Ａの組合せは、いずれかの単剤を単独で使用するよりも、極めて低用量でも細胞の増殖のより大きな阻害を誘発させた。ルキソリチニブ（０．０３３マイクロＭにおいて）と化合物Ａ（０．０３３マイクロＭにおいて）の組合せは、細胞増殖阻害８４％をもたらし、これは、０．３マイクロＭ（８７％）においてルキソリチニブ単独で達成した、または２．７マイクロＭ（８４％）において化合物Ａ単独で達成したものと本質的に同等であった。これは、ルキソリチニブ単独の場合よりもほぼ１桁の改善であり、化合物Ａ単独の場合よりも１桁超の改善である相乗効果を実証している。

ＭＰＮ細胞株であるＳＥＴ２、ＵＫＥ−１およびＡＭＬ細胞株であるＨＥＬ９２およびＣＭＫはまた、この組合せで同様の相乗効果を示した。実際に、極めて低濃度の化合物Ａと、ルキソリチニブ（３３〜１００ナノモル範囲）を組み合わせると、より高い用量において（０．３〜１マイクロＭ範囲近く）、単剤ルキソリチニブ単独での使用と同じ程度の阻害を誘発する。したがって、分子機構分析は、２種の化合物が、リボソームのＳ６タンパク質のリン酸化、４ｅＢＰ１、Ｂａｄ、ＥＲＫ１／２、ＭＣＬ１発現／分解およびＰＡＲＰ切断を含む、ｉｎ ｖｉｔｒｏでの様々なターゲットの阻害に相乗作用を発揮することを示した。

ｉｎ ｖｉｖｏモデル
ルキソリチニブと化合物Ａの組合せを、ＭＰＮのマウスモデルにおいてさらに調査した。このモデルＢａ／Ｆ３細胞は、Ｅｐｏ受容体およびＪＡＫ２Ｖ６１７Ｆ突然変異を持っていた。実験的画像化用にＢａ／Ｆ３−ＥｐｏＲ−ＪＡＫ２^{Ｖ６１７Ｆ}をルシフェラーゼタグで操作した。雌のＳＣＩＤ／ベージュマウスに尾静脈を介して１×１０ｅ６Ｂａ／Ｆ３−ＥｐｏＲ−ＪＡＫ２^{Ｖ６１７Ｆ}細胞を植菌した。全身性疾病負荷をＩＶＩＳ ｘｅｎｏｇｅｎ技術でモニターした。疾病負荷は、背側および腹部のフォトンシグナルの合計として定義されている。３日目に、疾病負荷に基づき、疾患を保持するマウスを処置コホートに無作為抽出した。マウスは、ビヒクル、２５ｍｇ／ｋｇの化合物Ａを毎日（ＱＤ）強制経口投与（ＰＯ）するか、６０ｍｇ／ｋｇのルキソリチニブを毎日２回（ＢＩＤ）ＰＯするか、または両方の薬剤の組合せで処理した。処置の１０日後、研究はエンドポイントに到達した。研究コホートのそれぞれの脾臓重量をエンドポイントにおいて得た。ビヒクル処置を受けたコホートの平均脾臓重量に対して個々の脾臓重量を正常化することにより、相対的な脾臓重量を計算した。ルキソリチニブと化合物Ａの組合せは、疾病負荷および脾臓重量において、２種の化合物の相加効果のみから予想される値よりも明白な減少をもたらした。

図２では、生体発光のレベルにより測定される疾病負荷は、ルキソリチニブ処置により減少した。これは、ルキソリチニブと化合物Ａの組合せにより約３倍さらに減少した。

図３は、ＭＰＮ前臨床のモデルの脾臓サイズ（重量）に対する、ルキソリチニブ（ruxoltinib）およびルキソリチニブと化合物Ａの組合せの効果を示している。ルキソリチニブ単剤療法は、ビヒクル対照の重量に対して、脾臓重量の約６５％の減少をもたらした。ルキソリチニブと化合物Ａの組合せにより、脾臓重量はもう４倍減少し、結果としてビヒクル対照の重量に対する相対的な脾臓重量は８％となる。

化合物Ａはその投薬量に対して驚くべきＰＫ曝露（Ｃ_ｍａｘＡＵＣ）特性を示した。５００ｍｇで化合物Ａは、１日目の投薬後３〜８ｈｒｓの範囲でのピーク薬物濃度で吸収され、７０ｍｇ〜２５０ｍｇの範囲の用量ではＰＫ曝露（Ｃ_ｍａｘＡＵＣ）は過比例的であった。１４日目には（定常状態）、ＰＫ曝露は２００ｍｇ〜３５０ｍｇの用量で水平域を形成するようである。５００ｍｇ（定常状態）における曝露は、２００ｍｇ〜３５０ｍｇの用量で観察されたものと比較して約２倍増加した。

１６株の多発性骨髄腫細胞株の拡張した一団における化合物Ａと化合物Ｂの組合せのスクリーニングは、試験したすべての細胞株において相乗効果を示した。さらに、６株の多発性骨髄腫細胞株のサブセットを使用してこの組合せをいくつかの他の組合せと比較すると、これが最も相乗的な組合せであることが判明した。スクリーニングした他の組合せは、化合物ＡとＡＵＹ９２２、ＣＤＺ１７３、ＩＮＣ４２４、ＬＢＨ５８９、ＬＥＥ０１１またはＴＫＩ２５８であった。これらの組合せのスクリーニングが行われた細胞株は、ＫＭＭ−１、ＭＫＳ−１１、ＫＭＳ−２６、ＫＭＳ−３４、ＭＭ１−Ｓ、およびＯＰＭ−２であった。化合物Ａと化合物Ｂの組合せのみがこれらの細胞株のすべて６株において相乗的であることを示した。

マウス異種移植片モデル、ＫＭＳ−１２−ＢＭおよびＫＭＳ−３４のｉｎ ｖｉｖｏ試験は併用療法での化合物Ａと化合物Ｂの相乗的性質をさらに裏付けている。ＫＭＳ−３４モデルにおいて、化合物Ｂ、２０ｍｇ／ｋｇと組み合わせた化合物Ａ、５０ｍｇ／ｋｇまたは化合物Ｂ、１ｍｇ／ｋｇと組み合わせた化合物Ａ、７５ｍｇ／ｋｇは、用量をマッチさせた単剤療法と比べてより大きな抗腫瘍活性を結果として生じた。ＫＭＳ−１２−ＢＭモデルにおいて、化合物Ａ単剤療法（１００、７５および５０ｍｇ／ｋｇ）は有意な抗腫瘍活性をもたらし、その一方で単剤化合物Ｂは抗腫瘍活性を実証しなかった。化合物Ａ（７５および５０ｍｇ／ｋｇ）と化合物Ｂ（２０ｍｇ／ｋｇ）の組合せは、用量をマッチさせた単剤療法により達成した抗腫瘍活性より大きな抗腫瘍活性をもたらした。組合せの効力は、１００ｍｇ／ｋｇでの化合物Ａの単剤療法で達成した効力と同程度であった。結果は、この組合せが、単剤ＰＩ３Ｋ阻害剤に感受性のない多発性骨髄腫において活性を有し得ることを示唆している。これらモデルの両方からのデータはまた、併用療法は低い用量の投与を可能にし、したがって用量の減少または中断の必要性を低減させ、潜在的に、患者に対して改善された薬物耐容性をもたらすことができることを示唆している。

化合物Ａと化合物Ｂの両方を２８日のサイクルで投与する。この用量段階的増大は、２００ｍｇのｑ．ｄ．化合物Ａおよび１００ｍｇのｑ．ｄ．化合物Ｂから開始する。用量レベルを検討する。両方の研究薬物を２８日サイクルで投与する。化合物Ａ単独の投与に対して無作為抽出された患者には、経口用化合物Ｂをｑ．ｄ．で、２８日サイクルで連続的に与える。投薬は経口的に毎日およそ同じ時間に行う。以下の表１は様々な開始用量レベルを示している。

９６−ウェルプレート（Ｃｏｓｔａｒ ＃３９０４）内で、１ウェル当たり８０μｌの培地当たり１０，０００個の細胞という密度で細胞をプレーティングし、化合物の添加前に一晩インキュベートした。化合物ストックを適当な培地内で新たに調製し、電子マルチチャネルピペットで３回繰り返してプレートに手作業で加えた。細胞を化合物単独でまたは化合物ＡとＮＶＰ−ＰＫＣ４１２の組合せで処理した。処置の７２時間後、製造業者のプロトコルに従いＣｅｌｌ Ｔｉｔｅｒ Ｇｌｏ（Ｐｒｏｍｅｇａ ＃Ｇ７５７１）を介した細胞のＡＴＰレベルの定量化により、細胞の生存率を評価した。発光プレートリーダー（Ｖｉｃｔｏｒ Ｘ４、Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）上のプレートを読み取った。Ｃｈａｌｉｃｅソフトウエア（ｈｔｔｐ：／／ｃｈａｌｉｃｅ．ｚａｌｉｃｕｓ．ｃｏｍ／ｄｏｃｕｍｅｎｔａｔｉｏｎ／ａｎａｌｙｚｅｒ／ｉｎｄｅｘ．ｊｓｐ）でデータを分析して、増殖抑制、阻害およびＨＳＡ過剰を計算した（Zimmermann et al., Drug Discov. Today 12: 34-42 (2007)；Lehar et al., Nat. Biotech 27 (7):659-666 (2009)）。

化合物ＡとＮＶＰ−ＰＫＣ４１２の単剤の両方ともＭｏｌｍ−１３およびＭＶ−４−１１において活性があるが、重要なことに２種の薬剤を組み合わせて、相加的規模以上の応答を低い用量で生成した。例えば、Ｍｏｌｍ−１３細胞株において、０．０１１μＭのＮＶＰ−ＰＫＣ４１２は６６％の増殖抑制を生成し、０．３μＭ化合物Ａは４９％増殖抑制を付与しているが，これらの用量での２種の薬剤の組合せは、８０％の増殖抑制を生成している（表３、左上のパネル）。この用量組合せは、表４（左下のパネル）において見られるように、１０に対してＬｏｅｗｅ過剰阻害値を表している。

表３〜６は、１番左端の欄を上から下に読むと、０．１から始まりゼロで終わるマイクロモル（μＭ）の濃度値でＦＬＴ３阻害剤 ＰＫＣ４１２を示しており、１番下の列を右から左に読むと、２．７μＭから始まりゼロで終わる化合物Ａ、ＰＩＭ阻害剤を示している。各化合物は３倍に希釈し、下のダッシュ記号は、各数字間の３倍希釈を表している。

ＡＭＬ細胞株Ｍｏｌｍ−１３の薬物治療後のタンパク質免疫ブロットによる生化学物質プロファイルが図４および図５に示されている。８００ｎＭの化合物Ａ（ＰＩＭ ｉ）、５０ｎＭ ＰＫＣ４１２（ＦＬＴ３ｉ）、両方の化合物を組み合わせたもの、またはＤＭＳＯ単独を用いて、ＡＭＬ細胞とインキュベートした。ＰｈｏｓＳｔｏｐホスファターゼ阻害剤カクテル錠剤（Ｒｏｃｈｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ＃０４９０６８３７００１）およびＣｏｍｐｌｅｔｅ Ｐｒｏｔｅａｓｅ阻害剤カクテル錠剤（Ｒｏｃｈｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ ＃１１８３６１４５００１）を含有するＭ−ＰＥＲ哺乳動物のタンパク質抽出緩衝液中での２４時間の処置後、細胞を溶解した。タンパク質を４〜１２％Ｂｉｓ−Ｔｒｉｓ ＮｕＰＡＧＥ ＳＤＳゲル（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ ＃ＷＧ１４０３Ｂｘ１０）上で分離させ、その後ドライブロッティングシステム（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ ｉＢＬＯＴ）を使用してニトロセルロース膜へ移動した。抗ｐ４ＥＢＰ１（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ ＃９４５９）、抗ｐＢＡＤ（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ ＃９２９６）、抗Ｃｌｅａｖｅｄ Ｐａｒｐ（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ ＃５６２５）、抗ＭＣＬ−１（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ ＃５４５３）、抗ｐＡＫＴ−Ｓ４７３（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ ＃４０５８）、抗ｐＡＫＴ−Ｔ３０８（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ ＃４０５６）、抗ｐＳ６（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ ＃４８５８）、抗ＰＩＭ１（Ｎｏｖａｒｔｉｓ自社開発の抗体バッチ＃ＮＯＶ２２−３９−５）、および抗ＧＡＰＤＨ（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ ＃２１１８）の１：１０００希釈を用いてタンパク質を検出した。抗ウサギＨＲＰ二次抗体を使用してすべてのタンパク質を検出し、Ｓｙｎｇｅｎｅ画像化システム上でＳｕｐｅｒＳｉｇｎａｌ Ｗｅｓｔ Ｄｕｒａ Ｃｈｅｍｉｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ Ｓｕｂｓｔｒａｔｅ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ＃３４０７６）を用いて作り出した。

Ｍｏｌｍ−１３細胞株におけるアポトーシスマーカーに対する化合物の処置の生化学的効果が図４で実証されている。いずれかの単剤の単独使用と比較して、化合物Ａ（ＰＩＭｉ）プラスＰＫＣ４１２（ＦＬＴ３ｉ）の組合せは、ＭＣＬ−１およびｐＢＡＤのより大きな分解をもたらす。ｍＴＯＲ経路タンパク質に対する生化学的効果が図５において実証されている。化合物ＡプラスＮＶＰ−ＰＫＣ４１２の組合せは、ｐ−ＡＫＴ−Ｓ４７３、ｐＳ６および４ＥＢＰ１を減らす。

Claims (18)

1. ルキソリチニブまたはこれに対する薬学的に許容される塩と、Ｎ−（４−（（１Ｒ，３Ｓ，５Ｓ）−３−アミノ−５−メチルシクロヘキシル）ピリジン−３−イル）−６−（２，６−ジフルオロフェニル）−５−フルオロピコリンアミド（化合物Ａ）またはこれに対する薬学的に許容される塩とを含む医薬的組合せ。
2. 骨髄性新生物または白血病の処置のための、請求項１に記載の組合せの使用。
3. 前記骨髄性新生物が、骨髄増殖性新生物（ＭＰＮ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性好中球性白血病、真性赤血球増加症（ＰＶ）、骨髄線維症、原発性骨髄線維症（ＰＭ）、特発性骨髄線維症（myleofibrosis）、本態性血小板血症（ＥＴ）、慢性好酸球性急性白血病、肥満細胞症、白血病、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性好酸球性白血病、慢性骨髄単球性白血病、若年性骨髄単球性白血病、好酸球増加症候群、全身性肥満細胞症、および非定型慢性骨髄性白血病である、請求項２に記載の組合せの使用。
4. ルキソリチニブと化合物Ａの同時または逐次的処置を用いた、骨髄性新生物または白血病の処置のための、請求項３に記載の組合せの使用。
5. 骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）の処置のための、請求項１に記載の組合せの使用。
6. 患者に対して骨髄性新生物、白血病またはＭＤＳを処置する方法であって、請求項１に記載の化合物を前記患者に投与することを含む、方法。
7. 前記化合物が化合物Ａである、請求項１に記載の方法。
8. 前記白血病が急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）である、請求項７に記載の方法。
9. 前記ＡＭＬが再発性または難治性である、請求項８に記載の方法。
10. Ｎ−（４−（（１Ｒ，３Ｓ，５Ｓ）−３−アミノ−５−メチルシクロヘキシル）ピリジン−３−イル）−６−（２，６−ジフルオロフェニル）−５−フルオロピコリンアミド（化合物Ａ）および１種または複数の標的療法薬物、レナリドミド、サリドマイド、ポマリドミド、プロテアーゼ阻害剤、ボルテゾミブ、カーフィルゾミブ、コルチコステロイド、デキサメタゾン、プレドニゾン、ダラツムマブ、化学療法薬物、アントラサイクリン、ドキソルビシン、リポソームドキソルビシン、メルファラン、ビスホスホネート、シクロホスファミド、エトポシド、シスプラチン、カルムスチン、幹細胞移植（骨髄移植）、放射線療法または（Ｓ）−ピロリジン−１，２−ジカルボン酸２−アミド１−（｛４−メチル−５−［２−（２，２，２−トリフルオロ−１，１−ジメチル−エチル）−ピリジン−４−イル］−チアゾール−２−イル｝−アミド）（化合物Ｂ）を含む、組合せ。
11. 多発性骨髄腫の処置のための、請求項１０に記載の組合せ。
12. 前記多発性骨髄腫が再発性または難治性である、請求項１１に記載の組合せ。
13. Ｎ−（４−（（１Ｒ，３Ｓ，５Ｓ）−３−アミノ−５−メチルシクロヘキシル）ピリジン−３−イル）−６−（２，６−ジフルオロフェニル）−５−フルオロピコリンアミド（化合物Ａ）および１種または複数の標的療法薬物、ミドスタウリン、レナリドミド、サリドマイド、ポマリドミド、ソラフェニブ、チピファルニブ、クイザルチニブ、デシタビン、化学療法薬物、デシタビン、アザシチジン、クロファラビン、アントラサイクリン、ドキソルビシン、リポソームドキソルビシン、ダウノルビシン、イダルビシン、シタラビン（cyatarbine）、全トランス型レチノイン酸（retonic acid）（ＡＴＲＡ）、三酸化ヒ素、幹細胞移植（骨髄移植）、放射線療法または（Ｓ）−ピロリジン−１，２−ジカルボン酸２−アミド１−（｛４−メチル−５−［２−（２，２，２−トリフルオロ−１，１−ジメチル−エチル）−ピリジン−４−イル］−チアゾール−２−イル｝−アミド）を含む、組合せ。
14. 急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）の処置のための請求項１３に記載の組合せ。
15. 前記ＡＭＬが再発性または難治性である、請求項１４に記載の組合せ。
16. ２００ｍｇ〜３５０ｍｇの用量で投与された（Ｓ）−ピロリジン−１，２−ジカルボン酸２−アミド１−（｛４−メチル−５−［２−（２，２，２−トリフルオロ−１，１−ジメチル−エチル）−ピリジン−４−イル］−チアゾール−２−イル｝−アミド）を含む、ＰＫ曝露水平域の形成を引き起こす、方法。
17. 前記用量が２００ｍｇ、２５０ｍｇ、３００ｍｇ、または３５０ｍｇである、請求項１６に記載の方法。
18. 化合物Ａの用量が、１日１回、７０〜６００ｍｇの間であり、化合物Ｂの用量が、１日１回、１００〜３００ｍｇの間である、請求項１１に記載の組合せ。