JP2016525343A - 抗細胞壁タイコ酸抗体及びコンジュゲート - Google Patents
抗細胞壁タイコ酸抗体及びコンジュゲート Download PDFInfo
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Abstract
Description
本出願は、2013年5月31日に出願された米国仮特許出願第61/829,461号の35USC§119(e)の下での利益を主張する、37CFR§1.53(b)の下で2014年5月22日に出願された非仮出願である米国特許出願第14/284,609号の優先権の利益を主張し、これらはそれらの全体が出典明示により援用されている。
ASCIIテキストファイルでの以下の提出物の内容は、その全体が出典明示により本明細書に援用されている:配列表(ファイル名:P4960R2WO_PCTSequenceListing.txt、データ記録日:2014年5月30日、サイズ:195,240バイト)のコンピュータ読み取り可能な形式(CRF)。
(i)配列番号25のVL及び配列番号26のVH、
(ii)配列番号27のVL及び配列番号28のVH、
(iii)配列番号29のVL及び配列番号30のVH、又は
(iv)配列番号31のVL及び配列番号32のVH
を含む。
(a)L鎖は、KSSQSVLSRANNNYYVA(配列番号1)の配列を含むCDR L1と、WASTREF(配列番号2)の配列を含むCDR L2と、QQYYTSRRT(配列番号3)の配列を含むCDR L3とを含み、H鎖は、DYYMH(配列番号4)の配列を含むCDR H1と、WINPKSGGTNYAQRFQG(配列番号5)の配列を含むCDR H2と、DCGSGGLRDF(配列番号6)の配列を含むCDR H3とを含み、
(b)L鎖は、RSNQNLLSSSNNNYLA(配列番号7)の配列を含むCDR L1と、WASTRES(配列番号8)の配列を含むCDR L2と、QQYYANPRT(配列番号9)の配列を含むCDR L3とを含み、H鎖が、DYYIH(配列番号10)の配列を含むCDR H1と、WINPNTGGTYYAQKFRD(配列番号11)の配列を含むCDR H2と、DCGRGGLRDI(配列番号12)の配列を含むCDR H3とを含み、
(c)L鎖は、KSNQNVLASSNDKNYLA(配列番号13)の配列を含むCDR L1と、WASIRES(配列番号14)の配列を含むCDR L2と、QQYYTNPRT(配列番号15)の配列を含むCDR L3とを含み、H鎖は、DYYIH(配列番号16)の配列を含むCDR H1と、WINPNTGGTNYAQKFQG(配列番号17)の配列を含むCDR H2と、DCGNAGLRDI(配列番号18)の配列を含むCDR H3とを含み、又は
(d)L鎖は、KSSQNVLYSSNNKNYLA(配列番号19)の配列を含むCDR L1と、WASTRES(配列番号20)の配列を含むCDR L2と、QQYYTSPPYT(配列番号21)の配列を含むCDR L3とを含み、H鎖は、SYWIG(配列番号22)の配列を含むCDR H1と、IIHPGDSKTRYSPSFQG(配列番号23)の配列を含むCDR H2と、LYCSGGSCYSDRAFSSLGAGGYYYYGMGV(配列番号24)の配列を含むCDR H3とを含む。
(a)L鎖は、RASQTISGWLA(配列番号33)の配列を含むCDR L1と、KASTLES(配列番号34)の配列を含むCDR L2と、QQYKSYSFN(配列番号35)の配列を含むCDR L3とを含み、H鎖は、SYDIN(配列番号36)の配列を含むCDR H1と、WMNANSGNTGYAQKFQG(配列番号37)の配列を含むCDR H2と、SSILVRGALGRYFDL(配列番号38)の配列を含むCDR H3とを含み、
(b)L鎖は、RASQTISGWLA(配列番号39)の配列を含むCDR L1と、KASTLES(配列番号40)の配列を含むCDR L2と、QQYKSYSFN(配列番号41)の配列を含むCDR L3とを含み、H鎖は、SYDIN(配列番号42)の配列を含むCDR H1と、WMNANSGNTGYAQKFQG(配列番号43)の配列を含むCDR H2と、SSILVRGALGRYFDL(配列番号44)の配列を含むCDR H3とを含み、
(c)L鎖は、RASQFVSRTSLA(配列番号45)の配列を含むCDR L1と、ETSSRAT(配列番号46)の配列を含むCDR L2と、HKYGSGPRT(配列番号47)の配列を含むCDR L3とを含み、H鎖は、NYDFI(配列番号48)の配列を含むCDR H1と、WMNPNSYNTGYGQKFQG(配列番号49)の配列を含むCDR H2と、AVRGQLLSEY(配列番号50)の配列を含むCDR H3とを含み、
(d)L鎖は、_RASQSVSSSYLA(配列番号51)の配列を含むCDR L1と、DASSRAT(配列番号52)の配列を含むCDR L2と、QKYGSTPRP(配列番号53)の配列を含むCDR L3とを含み、H鎖は、SYDIN(配列番号54)の配列を含むCDR H1と、WMNPNSGNTNYAQRFQG(配列番号55)の配列を含むCDR H2と、ERWSKDTGHYYYYGMDV(配列番号56)の配列を含むCDR H3とを含み、
(e)L鎖は、RASLDITNHLA(配列番号57)の配列を含むCDR L1と、EASILQS(配列番号58)の配列を含むCDR L2と、EKCNSTPRT(配列番号59)の配列を含むCDR L3とを含み、H鎖は、NYDIN(配列番号60)の配列を含むCDR H1と、WMNPSSGRTGYAPKFRG(配列番号61)の配列を含むCDR H2と、GGGYYDSSGNYHISGLDV(配列番号62)の配列を含むCDR H3とを含み、
(f)L鎖は、RASQSVGAIYLA(配列番号63)の配列を含むCDR L1と、GVSNRAT(配列番号64)の配列を含むCDR L2と、QLYTSSRALT(配列番号65)の配列を含むCDR L3とを含み、H鎖は、AYAMN(配列番号66)の配列を含むCDR H1と、SITKNSDSLYYADSVKG(配列番号67)の配列を含むCDR H2と、LAARIMATDY(配列番号68)の配列を含むCDR H3とを含み、
(g)L鎖は、RASQGIRNGLG(配列番号69)の配列を含むCDR L1と、PASTLES(配列番号70)の配列を含むCDR L2と、LQDHNYPPT(配列番号71)の配列を含むCDR L3とを含み、H鎖は、YYSMI(配列番号72)の配列を含むCDR H1と、SIDSSSRYLYYADSVKG(配列番号73)の配列を含むCDR H2と、DGDDILSVYRGSGRPFDY(配列番号74)の配列を含むCDR H3とを含み、
(h)L鎖は、_RASQGIRNGLG(配列番号75)の配列を含むCDR L1と、PASTLES(配列番号76)の配列を含むCDR L2と、LQDHNYPPS(配列番号77)の配列を含むCDR L3とを含み、H鎖は、YYSMI(配列番号78)の配列を含むCDR H1と、SIDSSSRYRYYTDSVKG(配列番号79)の配列を含むCDR H2と、DGDDILSVYQGSGRPFDY(配列番号80)の配列を含むCDR H3とを含み、
(i)L鎖は、_RASQSVRTNVA(配列番号81)の配列を含むCDR L1と、GASTRAS(配列番号82)の配列を含むCDR L2と、LQYNTWPRT(配列番号83)の配列を含むCDR L3とを含み、H鎖は、TNDMS(配列番号84)の配列を含むCDR H1と、TIIGIDDTTHYADSVRG(配列番号85)の配列を含むCDR H2と、NSGIYSF(配列番号86)の配列を含むCDR H3とを含み、
(j)L鎖は、RASQDIGSSLA(配列番号87)の配列を含むCDR L1と、ATSTLQS(配列番号88)の配列を含むCDR L2と、QQLNNYVHS(配列番号89)の配列を含むCDR L3とを含み、H鎖は、DYAMG(配列番号90)の配列を含むCDR H1と、VVTGHSYRTHYADSVKG(配列番号91)の配列を含むCDR H2と、RIWSYGDDSFDV(配列番号92)の配列を含むCDR H3とを含み、
(k)L鎖は、RASQSIGDRLA(配列番号93)の配列を含むCDR L1と、WASNLEG(配列番号94)の配列を含むCDR L2と、QQYKSQWS(配列番号95)の配列を含むCDR L3とを含み、H鎖は、SYAMN(配列番号96)の配列を含むCDR H1と、YISSIETIYYADSVKG(配列番号97)の配列を含むCDR H2と、DRLVDVPLSSPNS(配列番号98)の配列を含むCDR H3とを含み、
(l)L鎖は、KSSQSIFRTSRNKNLLN(配列番号99)の配列を含むCDR L1と、WASTRKS(配列番号100)の配列を含むCDR L2と、QQYFSPPYT(配列番号101)の配列を含むCDR L3とを含み、H鎖は、SFWMH(配列番号102)の配列を含むCDR H1と、FTNNEGTTTAYADSVRG(配列番号103)の配列を含むCDR H2と、GDGGLDD(配列番号104)の配列を含むCDR H3とを含み、
(m)L鎖は、_RASQFTNHYLN(配列番号105)の配列を含むCDR L1と、VASNLQS(配列番号106)の配列を含むCDR L2と、QQSYRTPYT(配列番号107)の配列を含むCDR L3とを含み、H鎖は、SGYYN(配列番号108)の配列を含むCDR H1と、YILSGAHTDIKASLGS(配列番号109)の配列を含むCDR H2と、SGVYSKYSLDV(配列番号110)の配列を含むCDR H3とを含み、又は
(n)L鎖は、KSSQSIFRTSRNKNLLN(配列番号99)の配列を含むCDR L1と、WASTRKS(配列番号100)の配列を含むCDR L2と、QQYFSPPYT(配列番号101)の配列を含むCDR L3とを含み、H鎖は、SFWMH(配列番号102)の配列を含むCDR H1と、FTNNEGTTTAYADSVRG(配列番号103)の配列を含むCDR H2と、GEGGLDD(配列番号118)の配列を含むCDR H3とを含む。
(a)抗体のVLは、配列番号158のVL配列の全長にわたって少なくとも95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、抗体のVHは、配列番号169のVH配列の全長にわたって少なくとも95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、
(b)抗体のVLは、配列番号159のVL配列の全長にわたって少なくとも95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、抗体のVHは、配列番号170のVH配列の全長にわたって少なくとも95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、
(c)抗体のVLは、配列番号160のVL配列の全長にわたって少なくとも95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、抗体のVHは、配列番号171のVH配列の全長にわたって少なくとも95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、
(d)抗体のVLは、配列番号161のVL配列の全長にわたって少なくとも95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、抗体のVHは、配列番号172のVH配列の全長にわたって少なくとも95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、
(e)抗体のVLは、配列番号162のVL配列の全長にわたって少なくとも95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、抗体のVHは、配列番号173のVH配列の全長にわたって少なくとも95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、
(f)抗体のVLは、配列番号163のVL配列の全長にわたって少なくとも95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、抗体のVHは、配列番号174のVH配列の全長にわたって少なくとも95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、
(g)抗体のVLは、配列番号164のVL配列の全長にわたって少なくとも95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、抗体のVHは、配列番号175のVH配列の全長にわたって少なくとも95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、
(h)抗体のVLは、配列番号165のVL配列の全長にわたって少なくとも95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、抗体のVHは、配列番号176のVH配列の全長にわたって少なくとも95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、
(i)抗体のVLは、配列番号166のVL配列の全長にわたって少なくとも95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、抗体のVHは、配列番号133のVH配列の全長にわたって少なくとも95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、
(j)抗体のVLは、配列番号167のVL配列の全長にわたって少なくとも95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、抗体のVHは、配列番号134のVH配列の全長にわたって少なくとも95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、又は
(k)抗体のVLは、配列番号168のVL配列の全長にわたって少なくとも95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、抗体のVHは、配列番号127のVH配列の全長にわたって少なくとも95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
(a)抗体のVLは、配列番号158のVL配列を含み、抗体のVHは、配列番号169のVH配列を含み、
(b)抗体のVLは、配列番号159のVL配列を含み、抗体のVHは、配列番号170のVH配列を含み、
(c)抗体のVLは、配列番号160のVL配列を含み、抗体のVHは、配列番号171のVH配列を含み、
(d)抗体のVLは、配列番号161のVL配列を含み、抗体のVHは、配列番号172のVH配列を含み、
(e)抗体のVLは、配列番号162のVL配列を含み、抗体のVHは、配列番号173のVH配列を含み、
(f)抗体のVLは、配列番号163のVL配列を含み、抗体のVHは、配列番号174のVH配列を含み、
(g)抗体のVLは、配列番号164のVL配列を含み、抗体のVHは、配列番号175のVH配列を含み、
(h)抗体のVLは、配列番号165のVL配列を含み、抗体のVHは、配列番号176のVH配列を含み、
(i)抗体のVLは、配列番号166のVL配列を含み、抗体のVHは、配列番号133のVH配列を含み、
(j)抗体のVLは、配列番号167のVL配列を含み、VHは、配列番号134のVH配列を含み、
(k)抗体のVLは、配列番号168のVL配列を含み、VHは、配列番号127のVH配列を含み、
(l)抗体のVLは、配列番号113のVL配列を含み、VHは、配列番号114のVH配列を含み、又は
(m)抗体のVLは、配列番号121のVL配列を含み、VHは、配列番号138のVH配列を含む。
Ab−(L−abx)p
(式中、
Abは、抗細胞壁タイコ酸抗体であり、
Lは、式:
−Str−Pep−Y−
(式中、Strは、ストレッチャー単位であり、Pepは、2から12アミノ酸残基のペプチドであり、Yは、スペーサー単位である)
を有するペプチドリンカーであり、
abxは、リファマイシン型抗生物質であり、
pは、1から8の整数である)
を有する。
I
(式中、
破線は、任意選択の結合を示し、
Rは、H、C1−C12アルキル又はC(O)CH3であり、
R1は、OHであり、
R2は、CH=N−(ヘテロシクリル)であり、ヘテロシクリルは、C(O)CH3、C1−C12アルキル、C1−C12ヘテロアリール、C2−C20ヘテロシクリル、C6−C20アリール及びC3−C12カルボシクリルから独立して選択される一又は複数の基で置換されていてもよいか、
あるいはR1及びR2は、5又は6員の縮合ヘテロアリール又はヘテロシクリルを形成し、スピロ又は縮合6員ヘテロアリール、ヘテロシクリル、アリール若しくはカルボシクリル環を形成していてもよく、スピロ又は縮合6員ヘテロアリール、ヘテロシクリル、アリール若しくはカルボシクリル環は、H、F、Cl、Br、I、C1−C12アルキル又はOHで置換されていてもよく、
Lは、R2、又はR1及びR2により形成される縮合ヘテロアリール若しくはヘテロシクリルと結合するペプチドリンカーであり、
Abは、抗細胞壁タイコ酸(WTA)抗体である)
のものである。
(式中、
R3は、H及びC1−C12アルキルから独立して選択され、
nは、1又は2であり、
R4は、H、F、Cl、Br、I、C1−C12アルキル及びOHから選択され、
Zは、NH、N(C1−C12アルキル)、O及びSから選択される)
のものである。
(式中、
R5は、H及びC1−C12アルキルから選択され、
nは、0又は1である)
のものである。
(式中、
R5は、H及びC1−C12アルキルから選択され、
nは、0又は1である)
のものである。
(式中、
R5は、H及びC1−C12アルキルから独立して選択され、
nは、0又は1である)
のものである。
(式中、
R3は、H及びC1−C12アルキルから独立して選択され、
nは、1又は2である)
のものである。
.
のものである。
−Str−Pep−Y−
(式中、Strは、抗細胞壁タイコ酸(WTA)抗体と共有結合しているストレッチャー単位であり、Pepは、2から12アミノ酸残基のペプチドであり、Yは、リファマイシン型抗生物質と共有結合しているスペーサー単位である)
を有する、抗体−抗生物質コンジュゲート(AAC)化合物が提供される。これらの実施態様の一部では、Strは、式:
(式中、R6は、C1−C10アルキレン−、−C3−C8カルボシクロ、−O−(C1−C8アルキル)−、−アリーレン−、−C1−C10アルキレン−アリーレン−、−アリーレン−C1−C10アルキレン−、−C1−C10アルキレン−(C3−C8カルボシクロ)−、−(C3−C8カルボシクロ)−C1−C10アルキレン−、−C3−C8ヘテロシクロ−、−C1−C10アルキレン−(C3−C8ヘテロシクロ)−、−(C3−C8ヘテロシクロ)−C1−C10アルキレン−、−(CH2CH2O)r−及び−(CH2CH2O)r−CH2−からなる群から選択され、rは、1から10の範囲の整数である)を有する。1つの変動では、R6は、−(CH2)5−である。これらの実施態様の一部では、Pepは、グリシン、アラニン、フェニルアラニン、リジン、アルギニン、バリン及びシトルリンから独立して選択される2から12アミノ酸残基を含む。1つの変動では、Pepは、バリン−シトルリン(val−cit、vc)、フェニルアラニン−リジン(fk)、GGAFAGGG(配列番号126)、tpm−cit、GPImeLFF(配列番号129)、バリン−シトルリン−フェニルアラニン(val−cit−phe)、GGAFA(配列番号131)及びLAFG(配列番号128)から選択される。これらの実施態様の一部では、Yは、パラ−アミノベンジル又はパラ−アミノベンジルオキシカルボニルを含む。
(式中、Ab、Str、Y及びabxは、本明細書で定義するとおりであり、AA1及びAA2は、アミノ酸側鎖から独立して選択される)のものである。これらの実施態様の一部では、アミノ酸側鎖は、H、−CH3、−CH2(C6H5)、−CH2CH2CH2CH2NH2、−CH2CH2CH2NHC(NH)NH2、−CHCH(CH3)CH3及び−CH2CH2CH2NHC(O)NH2から独立して選択される。これらの実施態様の一部では、抗体−抗生物質コンジュゲート化合物は、式:
,
,
,
,
,
, 又は
,
のものである。
,
(式中、R7は、H及びC1−C12アルキルから独立して選択される)のものである。これらの実施態様の一部では、抗体−抗生物質コンジュゲート化合物は、式:
,
,
, 又は
.
のものである。
II
(式中、
破線は、任意選択の結合を示し、
Rは、H、C1−C12アルキル又はC(O)CH3であり、
R1は、OHであり、
R2は、CH=N−(ヘテロシクリル)であり、ヘテロシクリルは、C(O)CH3、C1−C12アルキル、C1−C12ヘテロアリール、C2−C20ヘテロシクリル、C6−C20アリール及びC3−C12カルボシクリルから独立して選択される一又は複数の基で置換されていてもよいか、
あるいはR1及びR2は、5又は6員の縮合ヘテロアリール又はヘテロシクリルを形成し、スピロ又は縮合6員ヘテロアリール、ヘテロシクリル、アリール若しくはカルボシクリル環を形成していてもよく、スピロ又は縮合6員ヘテロアリール、ヘテロシクリル、アリール若しくはカルボシクリル環は、H、F、Cl、Br、I、C1−C12アルキル又はOHで置換されていてもよく、
Lは、R2又はR1及びR2により形成される縮合ヘテロアリール若しくはヘテロシクリルと結合するペプチドリンカーであり、式:
−Str−Pep−Y−
(式中、Strは、ストレッチャー単位であり、Pepは、2から12アミノ酸残基のペプチドであり、Yは、スペーサー単位である)
を有し、
Xは、マレイミド、チオール、アミノ、臭化物、ブロモアセトアミド、ヨードアセトアミド、p−トルエンスルホネート、ヨウ化物、ヒドロキシル、カルボキシル、ピリジルジスルフィド及びN−ヒドロキシスクシンイミドから選択される反応性官能基である
)を有するリンカー−抗生物質中間体である。
又は
.
である。
(式中、
R3は、H及びC1−C12アルキルから独立して選択され、
nは、1又は2であり、
R4は、H、F、Cl、Br、I、C1−C12アルキル及びOHから選択され、
Zは、NH、N(C1−C12アルキル)、O及びSから選択される)
を有する。
又は
.
を有する。
本明細書に記載又は参照する技術及び手順は、例えばSambrookら、Molecular Cloning:A Laboratory Manual第3版(2001)Cold Spring Harbor Laboratory Press、Cold Spring Harbor、N.Y.;Current Protocols in Molecular Biology(F.M.Ausubelら編、(2003));一連のMethods in Enzymology(Academic Press,Inc.):PCR 2:A Practical Approach(M.J.MacPherson、B.D.Hames及びG.R.Taylor編(1995))、Harlow及びLane編(1988)Antibodies,A Laboratory Manual,and Animal Cell Culture(R.I.Freshney編(1987));Oligonucleotide Synthesis(M.J.Gait編、1984);Methods in Molecular Biology、Humana Press;Cell Biology:A Laboratory Notebook(J.E.Cellis編、1998)Academic Press;Animal Cell Culture(R.I.Freshney)編、1987);Introduction to Cell and Tissue Culture(J.P.Mather及びP.E.Roberts、1998)Plenum Press;Cell and Tissue Culture:Laboratory Procedures(A.Doyle、J.B.Griffiths及びD.G.Newell編、1993−8)J.Wiley and Sons;Handbook of Experimental Immunology(D.M.Weir及びC.C.Blackwell編);Gene Transfer Vectors for Mammalian Cells(J.M.Miller及びM.P.Calos編、1987);PCR:The Polymerase Chain Reaction、(Mullisら編、1994);Current Protocols in Immunology(J.E.Coliganら編、1991);Short Protocols in Molecular Biology(Wiley and Sons、1999);Immunobiology(C.A.Janeway及びP.Travers、1997);Antibodies(P.Finch、1997);Antibodies:A Practical Approach(D.Catty.編、IRL Press、1988−1989);Monoclonal Antibodies:A Practical Approach(P.Shepherd及びC.Dean編、Oxford University Press、2000);Using Antibodies:A Laboratory Manual(E.Harlow及びD.Lane(Cold Spring Harbor Laboratory Press、1999);The Antibodies(M.Zanetti及びJ.D.Capra編、Harwood Academic Publishers、1995);並びにCancer:Principles and Practice of Oncology(V.T.DeVitaら編、J.B.Lippincott Company、1993)に記載される広く用いられる方法論のように、当業者により従来の方法論を用いて全般的によく理解され、通常採用されている。
置換基の数を示す場合、用語「一又は複数」は、1つの置換基から可能な限り最高の置換の数、すなわち1つの水素の置き換えから全ての水素の置換基による置き換えまでの範囲のことをいう。用語「置換基」は、親の分子の水素原子を置き換える原子又は原子団を示す。用語「置換された」は、明記された基が一又は複数の置換基を有することを示す。何れの基も複数の置換基を有することができ、多様な可能性のある置換基がある場合、置換基は独立して選択され、同じである必要はない。用語「置換されていない」は、明記された基が置換基を有さないことを意味する。用語「置換されていてもよい」は、明記された基が置換されていないか、又は可能性のある置換基の群から独立して選択される1若しくは複数の置換基で置換されることを意味する。置換基の数を示す場合、用語「一又は複数」は、1つの置換基から可能な限り最高の置換の数、すなわち1つの水素の置き換えから全ての水素の置換基による置き換えまでの範囲のことをいう。
(式中、波線は、反復結合単位又はポリアルジトール−P若しくはペプチドグリカンの結合部位を示し、Xは、D−アラニル又は−Hであり、Yは、α(アルファ)−GlcNHAc又はβ(ベータ)−GlcNHAcである)
の化合物を含む。
GlcNHAc
抗体−抗生物質コンジュゲート(AAC)
本発明のAAC化合物は、ブドウ球菌を含むいくつかのヒト及び獣医学的グラム陽性、グラム陰性病原体に対して効果的な、抗菌活性を有するものを含む。例示的な実施態様では、AAC化合物は、リファマイシン型抗生物質部分にコンジュゲートした、すなわちリンカーにより共有結合した、システイン操作抗体を含む。リファマイシン型抗生物質部分の生物活性は、抗体へのコンジュゲーションによりモジュレートされる。本発明の抗体−抗生物質コンジュゲート(AAC)は、感染部位へ有効用量の抗菌物質を選択的に送達し、そのことにより、治療指数(「治療ウィンドウ」)を増やしながら、より大きい選択性、すなわちより低い有効用量を達成できる。
Ab−(L−abx)p
(式中、
Abは、抗細胞壁タイコ酸抗体であり、
Lは、式:
−Str−Pep−Y−
(式中、Strは、ストレッチャー単位であり、Pepは、2から12アミノ酸残基のペプチドであり、Yは、スペーサー単位である)
を有するペプチドリンカーであり、
abxは、リファマイシン型抗生物質であり、
pは、1から8の整数である)
を有する。
黄色ブドウ球菌を含むいくつかのGm+細菌上で発現されるWTAと結合するある特定の抗WTA Ab及びコンジュゲート抗WTA抗体が、本明細書で開示される。抗WTA抗体は、US8283294;Meijer PJら(2006)J Mol Biol.358(3):764−72;Lantto Jら(2011)J Virol.85(4):1820−33及び以下の実施例21で教示する方法により選択して生成できる。本発明は、これらの抗WTA Abの組成物を提供する。
4461軽鎖可変領域
DIQMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLSRANNNYYVAWYQHKPGQPPKLLIYWASTREFGVPDRFSGSGSGTDFTLTINSLQAEDVAVYYCQQYYTSRRTFGQGTKVEIK(配列番号25)
4461重鎖可変領域
QVQLVQSGAEVRKPGASVKVSCKASGYSFTDYYMHWVRQAPGQGLEWMGWINPKSGGTNYAQRFQGRVTMTGDTSISAAYMDLASLTSDDTAVYYCVKDCGSGGLRDFWGQGTTVTVSS(配列番号26)
4624軽鎖可変領域
DIQMTQSPDSLSVSLGERATINCRSNQNLLSSSNNNYLAWYQQKPGQPLKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQYYANPRTFGQGTKVEIK(配列番号27)
4624重鎖可変領域
QVQLQQSRVEVKRPGTSVKVSCKTSGYTFSDYYIHWVRLAPGQGLELMGWINPNTGGTYYAQKFRDRVTMTRDTSIATAYLEMSSLTSDDTAVYYCAKDCGRGGLRDIWGPGTMVTVSS(配列番号28)
4399軽鎖可変領域
EIVLTQSPDSLAVSLGERATINCKSNQNVLASSNDKNYLAWFQHKPGQPLKLLIYWASIRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLRAEDVAVYYCQQYYTNPRTFGQGTKVEFN(配列番号29)
4399重鎖可変領域
EVQLVQSGAEVKKPGTSVKVSCKASGYTFTDYYIHWVRLAPGQGLELMGWINPNTGGTNYAQKFQGRVTMTRDTSIATAYMELSSLTSDDTAVYYCAKDCGNAGLRDIWGQGTTVTVSS(配列番号30)
6267軽鎖可変領域
DIQLTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQNVLYSSNNKNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQYYTSPPYTFGQGTKLEIE(配列番号31)
6267重鎖可変領域
EVQLVQSGAEVKKPGESLKISCKGSGYSFTSYWIGWVRQMPGKGLEWMGIIHPGDSKTRYSPSFQGQVTISADKSISTAYLQWNSLKASDTAMYYCARLYCSGGSCYSDRAFSSLGAGGYYYYGMGVWGQGTTVTVSS(配列番号32)。
6078軽鎖可変領域(VL)
DIVMTQSPSILSASVGDRVTITCRASQTISGWLAWYQQKPAEAPKLLIYKASTLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFGIYYCQQYKSYSFNFGQGTKVEIK(配列番号111)
6078重鎖可変領域(VH)
XX1QLVQSGAEVKKPGASVKVSCEASGYTLTSYDINWVRQATGQGPEWMGWMNANSGNTGYAQKFQGRVTLTGDTSISTAYMELSSLRSEDTAVYYCARSSILVRGALGRYFDLWGRGTLVTVSS(配列番号112)
(ここで、Xは、Q又はEであり、X1は、M、I又はVである)。
6078軽鎖
DIVMTQSPSILSASVGDRVTITCRASQTISGWLAWYQQKPAEAPKLLIYKASTLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFGIYYCQQYKSYSFNFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(配列番号113)
6078システイン操作軽鎖
DIVMTQSPSILSASVGDRVTITCRASQTISGWLAWYQQKPAEAPKLLIYKASTLESGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPDDFGIYYCQQYKSYSFNFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPCTKSFNRGEC(配列番号115)
6078WT完全長重鎖
QMQLVQSGAEVKKPGASVKVSCEASGYTLTSYDINWVRQATGQGPEWMGWMNANSGNTGYAQKFQGRVTLTGDTSISTAYMELSSLRSEDTAVYYCARSSILVRGALGRYFDLWGRGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG(配列番号114)
6078変異体(v2、v3又はv4)完全長重鎖
EXQLVQSGAEVKKPGASVKVSCEASGYTLTSYDINWVRQATGQGPEWMGWMNANSGNTGYAQKFQGRVTLTGDTSISTAYMELSSLRSEDTAVYYCARSSILVRGALGRYFDLWGRGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG(配列番号116)(ここで、Xは、M、I又はVであり得る)。
6078変異体(v2、v3又はv4)Cys操作重鎖
EXQLVQSGAEVKKPGASVKVSCEASGYTLTSYDINWVRQATGQGPEWMGWMNANSGNTGYAQKFQGRVTLTGDTSISTAYMELSSLRSEDTAVYYCARSSILVRGALGRYFDLWGRGTLVTVSSCSTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG(配列番号117)(ここで、Xは、M、I又はVである)。
4497軽鎖可変領域
DIQLTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSIFRTSRNKNLLNWYQQRPGQPPRLLIHWASTRKSGVPDRFSGSGFGTDFTLTITSLQAEDVAIYYCQQYFSPPYTFGQGTKLEIK(配列番号119)
4497重鎖可変領域
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCSASGFSFNSFWMHWVRQVPGKGLVWISFTNNEGTTTAYADSVRGRFIISRDNAKNTLYLEMNNLRGEDTAVYYCARGDGGLDDWGQGTLVTVSS(配列番号120)
4497.v8重鎖可変領域
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCSASGFSFNSFWMHWVRQVPGKGLVWISFTNNEGTTTAYADSVRGRFIISRDNAKNTLYLEMNNLRGEDTAVYYCARGEGGLDDWGQGTLVTVSS(配列番号156)
4497軽鎖
DIQLTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSIFRTSRNKNLLNWYQQRPGQPPRLLIHWASTRKSGVPDRFSGSGFGTDFTLTITSLQAEDVAIYYCQQYFSPPYTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(配列番号121)
4497 v.8重鎖
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCSASGFSFNSFWMHWVRQVPGKGLVWISFTNNEGTTTAYADSVRGRFIISRDNAKNTLYLEMNNLRGEDTAVYYCARGEGGLDDWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG(配列番号122)
4497−Cys軽鎖
DIQLTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSIFRTSRNKNLLNWYQQRPGQPPRLLIHWASTRKSGVPDRFSGSGFGTDFTLTITSLQAEDVAIYYCQQYFSPPYTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(配列番号123)
4497.v8−重鎖
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCSASGFSFNSFWMHWVRQVPGKGLVWISFTNNEGTTTAYADSVRGRFIISRDNAKNTLYLEMNNLRGEDTAVYYCARGEGGLDDWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG(配列番号157;配列番号122と同様)。
4497.v8−Cys重鎖
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCSASGFSFNSFWMHWVRQVPGKGLVWISFTNNEGTTTAYADSVRGRFIISRDNAKNTLYLEMNNLRGEDTAVYYCARGEGGLDDWGQGTLVTVSSCSTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG(配列番号124)
重鎖(IgG1)定常領域、野生型
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
(配列番号148)
重鎖(IgG1)定常領域、A118C「チオMab」
CSTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
(配列番号149)
軽鎖は、以下のものに対して少なくとも95%の配列同一性を有する:
軽鎖(カッパ)定常領域、野生型
RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
(配列番号150)
軽鎖(カッパ)定常領域、V205C「チオMab」
RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPCTKSFNRGEC
(配列番号151)
本発明の抗体−抗生物質コンジュゲート(AAC)の抗生物質部分(abx)は、細胞傷害又は細胞***停止の効果を有するリファマイシン型抗生物質又は基である。リファマイシンは、細菌ノカルジア・メディテラーネイ(Nocardia mediterranei)、アミコラプトシス・メディテラーネイ(Amycolatopsis mediterranei)により自然に、又は人工的に得られる抗生物質の群である。これらは、細菌RNAポリメラーゼを阻害するより大きいアンサマイシンファミリーのサブクラスであり(Fujiiら(1995) Antimicrob. Agents Chemother. 39:1489-1492; Feklistovら(2008) Proc Natl Acad Sci USA, 105(39): 14820-5)、グラム陽性及び選択的グラム陰性細菌に対して力価を有する。リファマイシンは、マイコバクテリアに対して特に効果的であり、よって、結核、ハンセン病及びマイコバクテリウム・アビウムコンプレックス(MAC)感染症を治療するために用いられる。リファマイシン型の基としては、「古典的」リファマイシン薬物、並びにリファマイシン誘導体であるリファンピシン(リファンピン、CA Reg.No.13292−46−1)、リファブチン(CA Reg.No.72559−06−9;US2011/0178001)、リファペンチン及びリファラジル(CA Reg.No.129791−92−0、Rothsteinら(2003) Expert Opin. Investig. Agents 12(2):255-271; Fujiiら(1994) Antimicrob. Agents Chemother. 38:1118-1122)が挙げられる。多くのリファマイシン型抗生物質は、耐性の発展という有害な特性を共有する(Wichelhausら(2001) J. Antimicrob. Chemother. 47:153-156)。リファマイシンは、ストレプトマイセス・メディテラーネイ(Streptomyces mediterranei)の発酵培養物から1957年に最初に単離された。約7種のリファマイシンが発見され、リファマイシンA、B、C、D、E、S及びSVと命名された(US3150046)。リファマイシンBは、最初に市販され、1960年代に薬物耐性結核の治療において有用であった。リファマイシンは、多くの疾患の治療のために用いられ、最も重要なものはHIV関連結核である。多数の利用可能なアナログ及び誘導体のために、リファマイシンは、通常用いられる抗生物質に対して耐性になった病原性細菌を排除するために広く利用されている。例えば、リファンピシンは、薬物耐性を妨げる有効な効果及び能力があることが知られている。これは、迅速に***する桿菌株とともに、生物学的に不活性なまま長期間残っているため抗生物質活性を逃れることができる「生残菌」細胞を迅速に死滅させる。さらに、リファブチン及びリファペンチンは、ともに、HIV陽性患者で獲得された結核に対して用いられている。
(式中、
破線は、任意選択の結合を示し、
Rは、H、C1−C12アルキル又はC(O)CH3であり、
R1は、OHであり、
R2は、CH=N−(ヘテロシクリル)であり、ヘテロシクリルは、C(O)CH3、C1−C12アルキル、C1−C12ヘテロアリール、C2−C20ヘテロシクリル、C6−C20アリール及びC3−C12カルボシクリルから独立して選択される一又は複数の基で置換されていてもよいか、
あるいはR1及びR2は、5又は6員の縮合ヘテロアリール又はヘテロシクリルを形成し、スピロ又は縮合6員ヘテロアリール、ヘテロシクリル、アリール若しくはカルボシクリル環を形成していてもよく、スピロ又は縮合6員ヘテロアリール、ヘテロシクリル、アリール若しくはカルボシクリル環は、H、F、Cl、Br、I、C1−C12アルキル又はOHで置換されていてもよく、
ペプチドリンカーLは、R2と共有結合する)
を有するリファマイシン型部分である。
(式中、R3は、H及びC1−C12アルキルから独立して選択され、R4は、H、F、Cl、Br、I、C1−C12アルキル及びOHから選択され、Zは、NH、N(C1−C12アルキル)、O及びSから選択され、ペプチドリンカーLは、N(R3)2の窒素原子と共有結合する)
である。
(式中、
R5は、H及びC1−C12アルキルから選択され、ペプチドリンカーLは、NR5の窒素原子と共有結合する)
である。
(式中、R5は、H及びC1−C12アルキルから選択され、ペプチドリンカーLは、NR5の窒素原子と共有結合する)
である。
(式中、R5は、H及びC1−C12アルキルから選択され、ペプチドリンカーLは、NR5の窒素原子と共有結合する)
である。
(式中、R3は、H及びC1−C12アルキルから独立して選択され、ペプチドリンカーLは、N(R3)2の窒素原子と共有結合する)
である。
(式中、ペプチドリンカーLは、N(CH3)2の窒素原子と共有結合する)
である。
「ペプチドリンカー」(L)は、一又は複数の抗生物質部分(abx)及び抗体単位(Ab)と共有結合して式Iの抗体−抗生物質コンジュゲート(AAC)を形成する二官能性又は多官能性部分である。AAC中のペプチドリンカーは、リソソーム条件を含む細胞内プロテアーゼによる切断についての基質である。プロテアーゼとしては、様々なカテプシン及びカスパーゼが挙げられる。細胞内部でのAACのペプチドリンカーの切断は、抗菌効果を有するリファマイシン型抗生物質を放出できる。
−Str−Pep−Y−
(式中、Strは、抗細胞壁タイコ酸(WTA)抗体と共有結合するストレッチャー単位であり、Pepは、2から12アミノ酸残基のペプチドであり、Yは、リファマイシン型抗生物質と共有結合するスペーサー単位である)を有する。このようなリンカーの例示的実施態様は、本明細書に出典明示により明示的に援用されているUS7498298に記載されている。
(式中、R6は、C1−C10アルキレン−、−C3−C8カルボシクロ、−O−(C1−C8アルキル)−、−アリーレン−、−C1−C10アルキレン−アリーレン−、−アリーレン−C1−C10アルキレン−、−C1−C10アルキレン−(C3−C8カルボシクロ)−、−(C3−C8カルボシクロ)−C1−C10アルキレン−、−C3−C8ヘテロシクロ−、−C1−C10アルキレン−(C3−C8ヘテロシクロ)−、−(C3−C8ヘテロシクロ)−C1−C10アルキレン−、−(CH2CH2O)r−及び−(CH2CH2O)r−CH2−からなる群から選択され、rは、1から10の範囲の整数である)を有する。
MC
MP
式II及び表2のリンカー−抗生物質中間体(LA)を、図23−25及び実施例1−17に例示するようにして、リファマイシン型抗生物質部分をペプチド−リンカー試薬とカップリングすることにより調製した。炭酸4−((S)−2−((S)−2−(6−(2,5−ジオキソ−2,5−ジヒドロ−1H−ピロール−1−イル)ヘキサンアミド)−3−メチルブタンアミド)−5−ウレイドペンタンアミド)ベンジル4−ニトロフェニル6
6
6−(2,5−ジオキソ−2,5−ジヒドロ−1H−ピロール−1−イル)−N−((S)−1−((S)−1−(4−(ヒドロキシメチル)フェニルアミノ)−1−オキソ−5−ウレイドペンタン−2−イルアミノ)−3−メチル−1−オキソブタン−2−イル)ヘキサンアミド8
8
N−((S)−1−((S)−1−(4−(クロロメチル)フェニルアミノ)−1−オキソ−5−ウレイドペンタン−2−イルアミノ)−3−メチル−1−オキソブタン−2−イル)−6−(2,5−ジオキソ−2,5−ジヒドロ−1H−ピロール−1−イル)ヘキサンアミド9
9
を含むリンカー試薬は、国際公開第2012/113847号、US7659241、US7498298、US20090111756、US2009/0018086、US6214345、Dubowchikら(2002)Bioconjugate Chem.13(4):855−869に記載される方法により調製した。
S4497抗体を、pipBORと称する表3中のリファマイシン誘導体などと、プロテアーゼにより切断可能なペプチドリンカーを介して結合させた。リンカーは、バリン−シトルリン(val−cit、vc)ジペプチド(Dubowchikら(2002) Bioconj. Chem. 13:855-869)を含むペプチド単位を認識するカテプシンB、Dなどを含むリソソームプロテアーゼにより切断されるように設計する。抗生物質及びMC−vc−PABリンカーなどからなるリンカー−抗生物質中間体の作製は、実施例1−17に詳細に記載する。リンカーは、PAB部分のアミド結合の切断が活性状態の抗生物質から抗体を分離するように設計する。
(式中、AA1及びAA2は、H、−CH3、−CH2(C6H5)、−CH2CH2CH2CH2NH2、−CH2CH2CH2NHC(NH)NH2、−CHCH(CH3)CH3及び−CH2CH2CH2NHC(O)NH2を含むアミノ酸側鎖から独立して選択される)を含み、式:
.
.
.
.
.
を含む。
I
(式中、
破線は、任意選択の結合を示し、
Rは、H、C1−C12アルキル又はC(O)CH3であり、
R1は、OHであり、
R2は、CH=N−(ヘテロシクリル)であり、ヘテロシクリルは、C(O)CH3、C1−C12アルキル、C1−C12ヘテロアリール、C2−C20ヘテロシクリル、C6−C20アリール及びC3−C12カルボシクリルから独立して選択される一又は複数の基で置換されていてもよいか、
あるいはR1及びR2は、5又は6員の縮合ヘテロアリール又はヘテロシクリルを形成し、スピロ又は縮合6員ヘテロアリール、ヘテロシクリル、アリール若しくはカルボシクリル環を形成していてもよく、スピロ又は縮合6員ヘテロアリール、ヘテロシクリル、アリール若しくはカルボシクリル環は、H、F、Cl、Br、I、C1−C12アルキル又はOHで置換されていてもよく、
Lは、R2又はR1及びR2により形成される縮合ヘテロアリール若しくはヘテロシクリルと結合するペプチドリンカーであり、
Abは、抗細胞壁タイコ酸(WTA)抗体である)
を含む。
(式中、R3は、H及びC1−C12アルキルから独立して選択され、nは、1又は2であり、R4は、H、F、Cl、Br、I、C1−C12アルキル及びOHから選択され、Zは、NH、N(C1−C12アルキル)、O及びSから選択される)
を含む。
(式中、R5は、H及びC1−C12アルキルから選択され、nは、0又は1である)
を含む。
(式中、R5は、H及びC1−C12アルキルから選択され、nは、0又は1である)
を含む。
(式中、R5は、H及びC1−C12アルキルから選択され、nは、0又は1である)
を含む。
(式中、R3は、H及びC1−C12アルキルから独立して選択され、nは、1又は2である)
を含む。
.
を含む。
,及び
.
を含む。
抗生物質負荷量は、式Iの分子における抗体あたりの抗生物質(abx)部分の平均数であるpで表す。抗生物質負荷量は、抗体あたり1から20抗生物質部分(D)の範囲であってよい。式IのAACは、1から20までの範囲の抗生物質部分とコンジュゲートした抗体の収集物又はプールを含む。コンジュゲーション反応からのAACの調製物中の抗体あたりの抗生物質部分の平均数は、質量分光分析、ELISAアッセイ及びHPLCのような従来の手段により特徴を明らかにしてよい。pについてのAACの量的分布も決定できる。いくつかの場合では、他の抗生物質負荷量を有するAACから、逆相HPLC又は電気泳動のような手段により、pがある特定の値である均一AACを分離、精製及び特徴づけできる。
式IのAACは、(1)共有結合によりAb−Lを形成するための抗体の求核基と二価リンカー試薬との反応と、その後の抗生物質部分(abx)との反応、及び(2)共有結合によりL−abxを形成するための抗生物質部分の求核基と二価リンカー試薬との反応と、その後の抗体の求核基との反応を含む、当業者に知られる有機化学反応、条件及び試薬を用いるいくつかの経路により調製してよい。後者の経路により式IのAACを調製するための例示的方法は、本明細書に出典明示により明示的に援用されているUS7498298に記載されている。
*AAR=平均の抗生物質/抗体比
野生型(「WT」)、システイン操作変異抗体(「チオ」)、軽鎖(「LC」)、重鎖(「HC」)、6-マレイミドカプロイル(「MC」)、マレイミドプロパノイル(「MP」)、バリン-シトルリン(「val-cit」又は「vc」)、アラニン-フェニルアラニン(「ala-phe」)、p-アミノベンジル(「PAB」)及びp-アミノベンジルオキシカルボニル(「PABC」)
tbd=未決定
HC-A114C(カバット)=HC-A118C(EU)
インビトロ実験により、抗体と抗生物質との間のリンカーがカテプシンBのような適当な酵素により切断された後にのみAACが活性抗生物質を放出することを確認する。MRSAを通常の細菌成長培地で、10μg/mLのAACまで終夜培養した。MRSAをS4497−pipBOR又はS4497−ジメチル−pipBOR AACとインキュベートしても、AACをカテプシンBで前処理して活性抗生物質を放出させるまでは、細菌成長は阻害されなかった。マウスの腹腔マクロファージを用いるインビトロアッセイにより、AACが活性抗生物質を放出し、食作用細胞内部のMRSAを死滅させることが確認された(実施例18)。細胞壁関連タンパク質のファミリーと結合する抗体rF1を含むAACをリファマイシン誘導体にコンジュゲートした。黄色ブドウ球菌(Newman株)を、様々な用量のrF1−AAC又は等価な用量の抗体のみ、リファンピシンのみ若しくは抗体と遊離のリファンピシンとの混合物で処理して、細菌との抗体の結合を可能にし(オプソニン化)、1時間のインキュベーションの後に、オプソニン化した細菌をマクロファージに供給した(図7A)。
マウスにおけるインビボ腹膜炎モデルを確立して、AACの有効性を試験した。このモデルでは、MRSAの腹腔内注射(I.P.)によりマウスを感染させ、細菌負荷を感染の2日後に、腹水及び腎臓においてモニタリングする。腹膜から採集した細菌は、遊離の浮遊細胞外細菌として、又は感染の部位に動員される、主に好中球及びマクロファージの腹膜細胞内部に内部移行されて見出すことができた。このモデルにおいて同定される細胞外細菌は抗生物質処置に対して感受性であるように見受けられたが、細胞内細菌は、リファンピン(Sandbergら(2009) Antimicrobial Agents Chemother)を含む臨床的に意義があるいくつかの抗生物質での処置に対して非応答性であることが示され、よって、我々のAACの有効性を試験するために優れた標的であることがわかった。
S4497抗体を、黄色ブドウ球菌感染患者に由来するB細胞からクローニングした。このことは、正常ヒト血清又はMRSA感染患者に存在する血清が、我々のAACと結合について競合し得る抗MRSA抗体を含む可能性があるという懸念を生じた。このことに対処するために、正常健常ドナー及びMRSA患者のパネルに由来するヒト血清を試験して、AACと同じ抗原を認識する抗MRSA抗体の全体的なレベルを見積もった。MRSAからの細胞壁調製物を用いるELISAベースのアッセイを開発した。これらのアッセイにおける細胞壁調製物との非抗原特異的結合を制限するために、プロテインAについての遺伝子を欠損するMRSAの株を利用した。プロテインAは、IgG抗体のFc領域と結合する。S4497抗原を発現するMRSAとの様々な野生型(WT)血清試料の結合(図10A、WT)を、S4497抗体により認識される糖修飾を欠くMRSA株TarM/TarS DKO(二重ノックアウト)ミュータントとの結合に対して調べた。図10Aは、ヒト血清中の抗黄色ブドウ球菌抗体の普及率を示す。黄色ブドウ球菌感染患者又は正常コントロールは、抗WTA S4497と同じ特異性を有する、高い量のWTA特異的血清抗体を含む。
プロテアーゼにより切断可能なリンカーは、本明細書において、分泌黄色ブドウ球菌エンドペプチダーゼであるスタホパインBにより切断されると記載する。黄色ブドウ球菌の細菌により特異的に切断されるリンカーを設計するために、FRETペプチドライブラリーを用いて、黄色ブドウ球菌培養上清のプロテアーゼ活性の特徴を明らかにした。このスクリーニングから、独特の基質特異性を同定した。この基質を用いて、活性を担う酵素を培養上清から精製し、スタホパインBと同定した。この同定に基づいて、スタホパインB最適化リンカーを作製し、ピペラジノ−リファマイシン:
と結合させた。
黄色ブドウ球菌エンドペプチダーゼにより容易に切断される基質を同定するために、Wood46株黄色ブドウ球菌の終夜培養物からの上清を、市販のFRETペプチドライブラリーとインキュベートした。Wood46株は、構成的に活性なagr遺伝子座を有するため、Wood46株は、野生型と比較してプロテアーゼ発現の増加を示す。FRETペプチドライブラリーRapidエンドペプチダーゼプロファイリングライブラリー又はPepSets(商標)REPLi(Mimotopes、Victoria、Australia)は、96ウェルプレートフォーマットにおいてウェルあたり8の内部で消光された蛍光発生ペプチドを含む512ウェルからなる。ペプチドは、切断により蛍光を発し、リアルタイムでのタンパク質分解性活性のモニタリングを可能にする。各ペプチドは、両側を一連のグリシン残基で挟まれたトリペプチド可変コアと、溶解性のためにC末端にてさらに2つのリジン残基とを有する。Wood46培養物からの上清をライブラリーに加え、プレートを37℃にて終夜インキュベートした。15倍を超える蛍光の増加を示すウェル(合計512ウェルのうち12)をLC−MS(Agilent Q−TOF)により分析して、切断生成物を決定した。切断部位を頻度に基づいて順位付けした(表4)。上位のヒットのうち、基質特異性のパターン、具体的には、P2位のPhe及びTyrのかさ高い疎水性側鎖への優先性が観察された。
P1、P2及びP3についての特異性の情報を用いて、REPLiスクリーニングから切断されるペプチドにおいて最も頻繁な残基を用いてペプチドを設計して合成した。ペプチドは、配列GGAFAGGG(配列番号126)を有し、切断はGGAFA(配列番号131)とGGGとの間で予測された。ペプチドは、蛍光性色素テトラメチルローダミン(TAMRA)及びフルオレセインをFRET対(図26)として組み込む固体相合成を用いて合成し、マレイミド−プロピオン酸をN末端に付加して抗体システイン残基へのコンジュゲーションを可能にした。得られたmal−FRET−ペプチド、マレイミド−プロピオン酸(MP)−Lys(TAMRA)−Gly−Gly−Ala−Phe−Ala−Gly−Gly−Gly−Lys(フルオレセイン)(配列番号125として開示する「コアペプチド」)を、システイン操作チオMab抗体であるチオ−S4497にコンジュゲートした。mal−FRET−ペプチドは、非結合コントロールであるシステイン操作抗Her2チオMabトラスツズマブにもコンジュゲートした。
リンカー−抗生物質中間体LA−59,MC−GGAFAGGG−(pipBOR)(配列番号126として開示する「コアペプチド」)は、P1位、P2位及びP3位について最適化された基質残基を有する。REPLiスクリーニングからの結果を用いて、P4について残基優先性を組み込んだ2つの新しいリンカーを設計して、合成した(図30)。マレイミド−プロピオン酸−Leu−Ala−Phe−Ala−Ala(配列番号136として開示する「コアペプチド」)及びマレイミド−プロピオン酸−Leu−Ala−Phe−Gly−Ala(配列番号135として開示する「コアペプチド」)は、固体相合成を用いて合成した。イソロイシン及びロイシンは、REPLiスクリーニングにおいてP4における最も頻繁な残基であった(グリシン以外で)。1つの残基、ロイシンだけを選択して、合成するリンカーの数を制限した。Ala及びGlyをP1位にて交互にして、切断に対する影響を調べた。P1’の残基、Alaも含めた。QSY(登録商標)7(キサンチリウム、9−[2−[[4−[[(2,5−ジオキソ−1−ピロリジニル)オキシ]カルボニル]−1−ピペリジニル]スルホニル]フェニル]−3,6−ビス(メチルフェニルアミノ)−NHSエステル塩化物、CAS Reg.No.304014−12−8、Life Technologies)を両方のリンカーのC末端に付加して、抗生物質代替物として作用させた(図30)。QSY(登録商標)7を組み込むことにより、これらのリンカーの切断性を、高価で大きな労働力を有する抗生物質を消費することなく評価できた。
試験した実験的リンカーの切断アッセイから、mal−LAFGA(配列番号135として開示する「コアペプチド」)を抗生物質との結合のために選択した。タンパク質分解性切断による遊離の抗生物質放出を達成するために、このリンカーをさらに最適化することが必要であった。このことを達成するために、P1’におけるAlaを、p−アミノベンジル(PAB)又はp−アミノベンジルオキシカルボニル(PABC)で置き換えた。ピペラジノ−リファマイシンをこのリンカーのC末端に付加して、リンカー−抗生物質中間体LA−88 MC−LAFG−PAB−(ジメチルアミノ−3−ピロロBOR)(配列番号128として開示する「コアペプチド」)及びLA−104,MP−LAFG−PABC−(ピペラジノBOR)(配列番号128として開示する「コアペプチド」)を完成した。P1位のGlyの後での切断により、PAB及びPABC基は、自壊するように設計され、遊離の抗生物質を放出する。LA−88をコンジュゲートして、チオ−S4497−v8−LCV205C−MC−LAFG−PAB−(ジメチルアミノ−3−ピロロBOR)AAC−163(配列番号128として開示する「コアペプチド」)を形成した(表3)。LA−104をコンジュゲートして、AAC−193、AAC−215及びAAC−222を形成した。スタホパインA、スタホパインB及びカテプシンBを用いるAAC193の切断アッセイを、pH7.2及びpH5で行った。これらのpHの値は、血漿(pH7.2)又はファゴリソソームの環境(pH5)の何れかを模倣するために選択した。スタホパインBは、pH5及び7.2の両方で100%の切断を達成した。スタホパインAは、pH5にて100%の切断、及びpH7.2にて64%の切断を示した。
本発明のAACは、ブドウ球菌、例えば黄色ブドウ球菌、S.サプロフィチカス(S.saprophyticus)及びS.シミュランス(S.simulans)、リステリア(Listeria)、例えばリステリア・モノサイトゲネス(Listeria monocytogenes)、腸球菌(Enterococci)、例えばフェカリス菌(E.faecalis)、連鎖球菌(Streptococci)、例えば肺炎球菌(S.pneumoniae)、クロストリジウム(Clostridium)、例えばC.ディフィシル(C.difficile)を含むいくつかのヒト及び獣医学的グラム陽性細菌に対して効果的な抗微生物剤として有用である。
先行する態様の何れでも、感染患者の治療において、AACの投与量は、通常、約0.001から1000mg/kg/日である。一実施態様では、細菌感染症の患者は、約1mg/kgから約100mg/kg、典型的に約5mg/kgから約90mg/kg、より具体的には10mg/kgから50mg/kgの範囲のAACの用量で治療される。AACは、毎日(例えば5から50mg/kg/日の単回用量)以下の頻度(例えば5、12.5又は25mg/kg/週の単回用量)で与えることができる。1用量は、2日にわたって、例えばある日に25mg/kg及び次の日に25mg/kgに分けることができる。患者は、1−8週間の期間にわたって3日ごと(q3D)、週1回から隔週(qOW)で投与を受けることができる。一実施態様では、患者に本発明のAACをIVにより週1回、2−6週にわたって標準治療(SOC)とともに投与して、staph A感染症のような細菌感染症を治療する。治療の長さは、患者の状態又は感染の程度により、例えば無併発の菌血症について2週間又は心内膜炎を併発する菌血症について6週間要求される。
細菌感染症を治療するために、本発明のAACは、上記の投与量の何れかで、静脈内(i.v.)又は皮下投与できる。一実施態様では、WTA−AACは、静脈内投与される。具体的な実施態様では、i.v.により投与されるWTA−AACは、WTA−ベータAACであり、より具体的には、WTA−ベータ抗体は、図14、図15A、図15B、図16A及び図16Bに開示するアミノ酸配列を有するAbの群から選択されるものである。
AACは、患者を治療する医師が決定して適切である一又は複数のさらなる、例えば第2の治療剤又は予防剤とともに投与してよい。
本発明は、AACを含む薬学的組成物、及びAACを含む薬学的組成物を用いる細菌感染症を治療する方法も提供する。このような組成物は、適切な賦形剤、例えば、バッファー、酸、塩基、糖類、希釈剤、流動促進剤、保存剤などを含む、当該技術分野で公知であり本明細書に記載される薬学的に許容される賦形剤(担体)をさらに含んでよい。本発明の方法及び組成物は、単独又は感染性疾患を治療するための他の従来の方法及び/又は薬剤と組み合わせて用いてよい。一態様では、本発明は、本発明の少なくとも1つの抗体及び/又はその少なくとも1つの抗体−抗生物質コンジュゲート(AAC)を含む医薬製剤をさらに提供する。一部の実施態様では、医薬製剤は、1)本発明の抗体及び/又はそのAACと、2)薬学的に許容される担体とを含む。一部の実施態様では、医薬製剤は、1)本発明の抗体及び/又はそのAACと、任意選択的に2)少なくとも1種のさらなる治療剤とを含む。
ある特定の実施態様では、本明細書に示す何れの抗体も、生物学的試料中のMRSAの存在を検出するために有用である。用語「検出する」は、本明細書で用いる場合、定量的及び定性的検出を包含する。「生物学的試料」は、例えば血液、血清、血漿、組織、痰、吸引液、ふき取り検体などを含む。
本発明の別の態様では、上記の障害の治療、予防及び/又は診断のために有用な物質を含む製品が提供される。製品は、容器と、容器上又は容器に付随するラベル又は添付文書とを含む。適切な容器としては、例えば、瓶、バイアル、シリンジ、IV溶液バッグなどが挙げられる。容器は、様々な材料、例えばガラス又はプラスチックでできていてよい。容器は、それ自体又は障害を治療、予防及び/若しくは診断するために効果的な別の組成物と混合されている組成物を保持し、滅菌アクセスポート(例えば容器は、皮下注射針で穿刺可能なストッパーを有する静脈内溶液バッグ又はバイアルであってよい)を有していてよい。組成物中の少なくとも1つの活性薬剤は、本発明の抗体又はイムノコンジュゲートである。ラベル又は添付文書は、組成物が選択された状態を治療するために用いられることを示す。さらに、製品は、(a)組成物を含む第1の容器であって、組成物が本発明の抗体又はイムノコンジュゲートを含む第1の容器と、(b)組成物を含む第2の容器であって、組成物が、さらなる細胞傷害性薬剤又は治療剤を含む第2の容器とを含んでよい。本発明のこの実施態様の製品は、特定の状態を治療するために組成物を用いることができることを示す添付文書をさらに含んでよい。あるいは又はさらに、製品は、薬学的に許容されるバッファー、例えば静菌性の注射用水(BWFI)、リン酸緩衝生理食塩水、リンゲル液又はデキストローズ溶液を含む第2の(又は第3の)容器をさらに含んでよい。これは、他のバッファー、希釈剤、フィルタ、針及びシリンジを含む市販及びユーザの観点から望ましい他の物質をさらに含んでよい。
2−ニトロベンゼン−1,3−ジオール1を、水素ガスの下で、エタノール溶媒中のパラジウム/炭素触媒を用いて水素化して、2−アミノベンゼン−1,3−ジオール2を塩酸塩として単離した(図23A及び23B)。ジクロロメタン/テトラヒドロフラン中のtert−ブチルジメチルシリルクロリド及びトリエチルアミンで2をモノ保護することにより、2−アミノ−3−(tert−ブチルジメチルシリルオキシ)フェノール3を得た。室温にてトルエン中で酸化マンガン又は酸素ガスを用いる酸化的縮合によりリファマイシンS(ChemShuttle Inc.、Fremont、CA、US7342011;US7271165;US7547692)を3と反応させて、TBS−保護ベンゾキサジノリファマイシン4を得た。ピペリジン−4−アミン及び酸化マンガンを4と反応させることにより、ピペリジルベンゾキサジノリファマイシン(pipBOR)5を得た。
実施例1の手順に従って、6−(2,5−ジオキソ−2,5−ジヒドロ−1H−ピロール−1−イル)−N−((S)−1−((S)−5−グアニジノ−1−(4−(ヒドロキシメチル)フェニルアミノ)−1−オキソペンタン−2−イルアミノ)−1−オキソ−3−フェニルプロパン−2−イル)ヘキサンアミド12を炭酸4−((S)−2−((S)−2−(6−(2,5−ジオキソ−2,5−ジヒドロ−1H−ピロール−1−イル)ヘキサンアミド)−3−フェニルプロパンアミド)−5−グアニジノペンタンアミド)ベンジル4−ニトロフェニル13に変換した。
実施例1の手順に従って、6−(2−(2−(2−(2,5−ジオキソ−2,5−ジヒドロ−1H−ピロール−1−イル)エトキシ)エトキシ)アセトアミド)−N−((S)−1−((S)−1−(4−(ヒドロキシメチル)フェニルアミノ)−1−オキソ−5−ウレイドペンタン−2−イルアミノ)−3−メチル−1−オキソブタン−2−イル)ヘキサンアミド14を炭酸4−((17S,20S)−1−(2,5−ジオキソ−2,5−ジヒドロ−1H−ピロール−1−イル)−17−イソプロピル−8,15,18−トリオキソ−20−(3−ウレイドプロピル)−3,6−ジオキサ−9,16,19−トリアザヘニコサンアミド)ベンジル4−ニトロフェニル15に変換した。
N,N−ジメチルピペリジン−4−アミンとTBS−保護ベンゾキサジノリファマイシン4とを反応させることにより、ジメチルピペリジルベンゾキサジノリファマイシン(ジメチルpipBOR)7を得た(図24)。
実施例1の手順に従って、N−メチルピペリジン−4−アミンとTBS−保護デスアセチル,ベンゾキサジノリファマイシンとを酸化マンガンと反応させて、モノメチルピペリジルベンゾキサジノリファマイシン(pipBOR)16を得た。
実施例1の手順に従って、N−メチルピペリジン−4−アミンとTBS−保護ベンゾキサジノリファマイシン4とを酸化マンガンと反応させて、モノメチルピペリジルベンゾキサジノリファマイシン(pipBOR)17を得た。
実施例1の手順に従って、ピペリジン−4−アミンとTBS−保護デスアセチル,ベンゾキサジノリファマイシン18とを酸化マンガンと反応させて、ピペリジル,デスアセチルベンゾキサジノリファマイシン(pipデスアセチルBOR)19を得た。
実施例1の手順に従って、マレイミドペプチド21をピペリジルベンゾキサジノリファマイシン(pipBOR)5と標準的なアミド結合形成条件の下でカップリングさせて、MC−GGAFAGGG−pipBOR(配列番号126として開示する「コアペプチド」)59を得た。M/Z=1626.0。収率13%
小さいバイアル中で、実施例4の手順により調製した0.05mLのN−((S)−1−((S)−1−(4−(クロロメチル)フェニルアミノ)−1−オキソ−5−ウレイドペンタン−2−イルアミノ)−3−メチル−1−オキソブタン−2−イル)−6−(2,5−ジオキソ−2,5−ジヒドロ−1H−ピロール−1−イル)ヘキサンアミド9の0.6M溶液を0℃まで冷却し、1equiv.のベンゾキサジノリファマイシン22を加え、混合物を5分間撹拌した。この0℃の溶液に、K2CO3(15eq)を加え、バイアルの側面を0.05mLのDMFで洗浄した。反応物を空気開放下で室温まで1−4時間撹拌した。全ての9が消費されたときに、固体を濾別し、回収した濾液をDMFで希釈した。HPLCによる精製により、MC−vc−PAB−rif 60を11%収率で得た(M/Z=1356.9)。
バイアル中に、炭酸4−((S)−2−((S)−2−(6−(2,5−ジオキソ−2,5−ジヒドロ−1H−ピロール−1−イル)ヘキサンアミド)−3−メチルブタンアミド)−5−ウレイドペンタンアミド)ベンジル4−ニトロフェニル6(1.56g、2.11mmol、100質量%)をDMF(55equiv.、116mmol、55.0、8.5g)に取り、RTにて撹拌した。この濁った黄色の混合物に、(4−アミノフェニル)メタノール(PAB、1.1equiv.、2.33mmol、1.10、286mg)及び1−ヒドロキシベンゾトリアゾール(0.37equiv.、0.782mmol、0.370、106mg)を加えた後に、N,N’−ジイソプロピルエチルアミン(1equiv.、2.11mmol、1.00、276mg)を加えた。反応物を2時間撹拌し、LC/MSによりモニタリングした。さらに1等量のN,N’−ジイソプロピルエチルアミン(Hunigs塩基)及び100mgの(4−アミノフェニル)メタノールを加えた。反応物を終夜RTにて密閉して撹拌した。約0.5Lのジエチルエーテルを滴下添加して、生成物を沈殿させた。エーテルをデカンテーションし、固体をDMFに再溶解し、いくつかのバッチでHPLCで直接精製して、構造:
を有する4−(ヒドロキシメチル)フェニルカルバミン酸4−((S)−2−((S)−2−(6−(2,5−ジオキソ−2,5−ジヒドロ−1H−ピロール−1−イル)ヘキサンアミド)−3−メチルブタンアミド)−5−ウレイドペンタンアミド)ベンジル28(0.435g)を28%の全体的な単離収率で得た(M/Z:722.5)。
を有する4−(クロロメチル)フェニルカルバミン酸4−((S)−2−((S)−2−(6−(2,5−ジオキソ−2,5−ジヒドロ−1H−ピロール−1−イル)ヘキサンアミド)−3−メチルブタンアミド)−5−ウレイドペンタンアミド)ベンジル29を47%の単離収率で得た(M/Z:740.4)。
本実施例は、MRSAが細胞内でインビボにて生存できることの証拠を提供する。感染すると、細胞内MRSAは、抗生物質治療(例えばSOCバンコマイシン)から保護され、生存して、ある細胞から別の細胞に感染を移動できる。
腹膜炎モデル。7週齢の雌性A/Jマウス(Jackson Laboratories)を、5×107CFUのUSA300での腹腔注射により感染させた。マウスを感染の2日後に屠殺し、腹膜を5mLの冷リン酸緩衝生理食塩水溶液(PBS)でさっと流した。腎臓を5mLのPBS中で、静脈内感染モデルについて以下に記載するようにしてホモジナイズした。腹腔洗浄液を5分間、1,000rpm、4℃にて卓上遠心分離機で遠心分離した。上清を細胞外細菌として回収し、腹膜細胞を含む細胞ペレットを細胞内画分として回収した。細胞を50μg/mLのリゾスタフィンで20分間、37℃にて処理して、夾雑細胞外細菌を死滅させた。腹膜細胞を3回、氷冷PBSで洗浄して、分析前にリゾスタフィンを除去した。細胞内CFUを計数するために、0.1%Triton−Xを含むHB(10mM HEPES及び0.1%ウシ血清アルブミンを補ったHanks平衡塩類溶液)中で腹膜細胞を溶解し、0.05%Tween−20を含むPBS中で溶解物の系列希釈を作製した。
カテプシンBでの処置の後にAACから放出される活性抗生物質の量を定量するために、カテプシンバッファー(20mM酢酸ナトリウム、1mM EDTA、5mM L−システイン)でAACを200μg/mLに希釈した。このアッセイの目的のために出典明示により援用されるDubowchikら(2002)Bioconj.Chem.13:855−869の863頁を参照されたい。カテプシンB(ウシ脾臓から、SIGMA C7800)を10μg/mLで加え、試料を1時間、37℃にてインキュベートした。コントロールとして、AACをバッファー単独中でインキュベートした。10容積の細菌成長培地であるトリプシン大豆ブロスpH7.4(TSB)を加えることにより、反応を停止した。活性抗生物質の全放出量を見積もるために、反応混合物の系列希釈を96ウェルプレートにおいてTSB中で1点につき4つの検体で作製し、黄色ブドウ球菌のUSA300株を各ウェルに2×103CFU/mLの最終密度で加えた。培養物を終夜、3℃にて振盪しながらインキュベートし、プレートリーダーを用いて630nMにて吸光度を読み取ることにより、細菌成長を測定した。
抗体作製、スクリーニング及び選択
略語:MRSA(メチシリン耐性黄色ブドウ球菌)、MSSA(メチシリン感受性黄色ブドウ球菌)、VISA(バンコマイシン中間体耐性黄色ブドウ球菌)、LTA(リポタイコ酸)、TSB(トリプシン大豆ブロス)、CWP(細胞壁調製物)。
このライブラリー内の各mAbを3つの選択基準について検索した:(1)高い抗生物質送達に好ましい可能性がある、対応する同族抗原の高い発現を示す、MRSA表面とのmAb結合の相対的強度、(2)感染中のインビボでのMRSA表面での同族抗原の安定発現を示す、多様な感染組織から単離されたMRSAとのmAb結合の一貫性、及び(3)同族表面抗原の発現の保存を示す、臨床的黄色ブドウ球菌株のパネルとのmAb結合能力。このために、フローサイトメトリーを用いて、様々な感染組織から及び異なる黄色ブドウ球菌株からの黄色ブドウ球菌との反応性について、ライブラリー中のmAbのこれらの予め選択された培養上清の全てを試験した。
i)AbのWTA特異性の確認
40mgのペレットにした黄色ブドウ球菌株を、30%ラフィノース、100μg/mlのリゾスタフィン(Cell Sciences、Canton、MA)及びEDTAフリープロテアーゼ阻害剤カクテル(Roche、Pleasanton、CA)を補った1mLの10mMトリス−HCl(pH7.4)と30分間、37℃にてインキュベートすることにより、黄色ブドウ球菌野生型(WT)株及びWTAを欠く黄色ブドウ球菌ミュータント株(ΔTagO;WTA−ヌル株)からの細胞壁調製物(CWP)を作製した。溶解物を11,600×gで5分間遠心分離し、細胞壁成分を含む上清を回収した。イムノブロット分析のために、タンパク質を4−12%トリス−グリシンゲルで分離し、ニトロセルロース膜(Invitrogen、Carlsbad、CA)に移した後に、WTAに対する記載する試験抗体又はPGN及びLTAに対するコントロール抗体を用いてブロッティングした。
感染組織からの全細菌上の表面抗原発現を、以下のプロトコールを用いるフローサイトメトリーにより分析した。感染マウス組織からの細菌の抗体染色のために、6−8週齢の雌性C57Bl/6マウス(Charles River、Wilmington、MA)に、PBS中の108CFUの対数期増殖USA300を静脈内注射した。マウス器官を感染の2日後に採集した。Tattevin P.らAntimicrobial agents and chemotherapy 54:610−613(2010)に以前に記載されたようにして、ウサギ感染性心内膜炎(IE)を確立した。ウサギに、5×107CFUの定常期増殖MRSA株COLを静脈内注射し、心臓疣贅を18時間後に採集した。30mg/kgのバンコマイシンでの処置は、7×107CFUの定常期での感染の18h後に、b.i.d.、静脈内で与えた。
表8は、Newman−ΔSPA株と結合するMRSA抗体の平衡結合分析、及び細菌上の抗原密度を示す。
まとめると、抗WTAベータAbのそれぞれのVH領域をクローニングし、ヒトH鎖ガンマ1定常領域と結合させ、VLをカッパ定常領域と結合させて、IgG1としてAbを発現させた。いくつかの場合では、以下に記載するようにある特定の位置で野生型配列を改変して、抗体安定性を改善した。システイン操作Ab(チオMab)を、次いで、作製した。
上記のヒト抗体ライブラリーから同定されたWTAベータAbのVH領域をヒトγ1定常領域と結合させて、完全長IgG1 Abを作製した。L鎖は、カッパL鎖であった。
図14(特に図15A、15B、16A、16Bを参照されたい)中のWTA Abを操作して、ある特定の特性(例えば脱アミド、アスパラギン酸異性化、酸化又はN−結合型糖鎖付加を回避する)を改善し、アミノ酸置き換え後の抗原結合の保持及び化学安定性について試験した。重鎖又は軽鎖をコードするクローンの一本鎖DNAを、大腸菌CJ236細胞で成長したM13KO7ファージ粒子から、QIAprep Spin M13キット(Qiagen)を用いて精製した。配列:
5’−CCCAGACTGCACCAGCTGGATCTCTGAATGTACTCCAGTTGC−3’(配列番号152)
5’−CCAGACTGCACCAGCTGCACCTCTGAATGTACTCCAGTTGC−3’(配列番号153)
5’CCAGGGTTCCCTGGCCCCAWTMGTCAAGTCCASCWKCACCTCTTGCACAGTAATAGACAGC−3’(配列番号154)、及び
5’−CCTGGCCCCAGTCGTCAAGTCCTCCTTCACCTCTTGCACAGTAATAGACAGC−3’(配列番号155)(IUPACコード)
を有する5’リン酸化合成オリゴヌクレオチドを用いて、Kunkel,T.A.(1985).Rapid and efficient site−specific mutagenesis without phenotypic selection.Proceedings of the National Academy of Sciences USA 82(2):488-492に記載されるような方法に従う部位特異的突然変異誘発により記載されるようなオリゴヌクレオチド特異的部位突然変異誘発により、抗体をコードするクローンを変異させた。変異DNAを用いて大腸菌XL1−Blue細胞(Agilent Technologies)を形質転換し、50μg/mlカルベニシリンを含むルリアブロスプレートにプレーティングした。コロニーを個別に採取し、50μg/mlカルベニシリンを含む液体ルリアブロス培地で成長させた。ミニプレップDNAを配列決定して、変異の存在を確認した。
6078抗体ミュータントの分析のために、1×109細菌/mlからなるリゾスタフィン処理USA300ΔSPA黄色ブドウ球菌細胞調製物(WT)を0.05炭酸ナトリウムpH9.6中で1/100に希釈し、384ウェルELISAプレート(Nunc;Neptune、NJ)を4℃にて終夜のインキュベーション中にコーティングした。プレートをPBS+0.05%Tween−20で洗浄し、PBS+0.5%ウシ血清アルブミン(BSA)での2時間のインキュベーション中にブロックした。この及び後続の全てのインキュベーションは、穏やかに撹拌しながら室温で行った。抗体試料を試料/標準物質希釈バッファー(PBS、0.5%BSA、0.05%Tween20、0.25%CHAPS、5mM EDTA、0.35M NaCl、15ppmプロクリン(pH7.4))で希釈し、洗浄したプレートに加え、1.5−2時間インキュベートした。プレートと結合した抗黄色ブドウ球菌抗体を、アッセイバッファー(PBS、0.5%BSA、15ppmプロクリン、0.05%Tween20)で40ng/mLに希釈したペルオキシダーゼ−コンジュゲートヤギ抗ヒトIgG(Fc)F(ab’)2断片(Jackson ImmunoResearch;West Grove、PA)との1時間のインキュベーション中に検出した。最終洗浄の後に、テトラメチルベンジジン(KPL、Gaithersburg、MD)を加え、5−10分間発色させ、1Mリン酸を用いて反応を停止した。マイクロプレートリーダーを用いて、プレートを620nmの参照とともに450nmで読み取った。
以前に教示され、以下に記載するようにして、H鎖(CH1において)又はL鎖(Cκ)に所定の位置にてシステインを導入することにより完全長チオMabを生成して、抗体のリンカー−抗生物質中間体へのコンジュゲーションを可能にした。H及びL鎖を、次いで、別々のプラスミドにクローニングし、H及びLをコードするプラスミドを293細胞にコトランスフェクトし、該細胞においてH及びKを発現してインタクトなAbを組み立てた。H及びL鎖はともに、同じ発現プラスミドにクローニングすることもできる。H鎖のそれぞれに1つずつ2つの操作されたCys、若しくはL鎖のそれぞれに1つずつ2つの操作されたCysを有するIgG1を作製するか、又はcysミュータント鎖と野生型鎖の所望の組み合わせを発現させることによりそれぞれ操作されたCysを有する2つのH鎖と2つのL鎖との組み合わせ(HCLCCys)を作製した。
抗細胞壁タイコ酸抗体−抗生物質コンジュゲート(AAC)表3を、表2からのものを含むリンカー−抗生物質中間体に抗WTA抗体をコンジュゲートすることにより調製した。コンジュゲーションの前に、国際公開第2004/010957号(その教示は、この目的のために出典明示により援用されている)に記載される方法に従う標準的な方法を用いて、抗WTA抗体をTCEPで部分的に還元した。部分的に還元した抗体を、例えばDoroninaら(2003)Nat.Biotechnol.21:778−784及びUS2005/0238649A1に記載される方法に従う標準的な方法を用いて、リンカー−抗生物質中間体にコンジュゲートした。簡単に述べると、部分的に還元した抗体をリンカー−抗生物質中間体と混合して、抗体の還元されたシステイン残基へのリンカー−抗生物質中間体のコンジュゲーションを可能にした。コンジュゲーション反応を終了させ、AACを精製した。各AACの抗生物質負荷量(抗体あたりの抗生物質部分の平均数)を決定し、これは、単一システインミュータント部位で操作された抗細胞壁タイコ酸抗体について、約1から約2の間であった。
Wood46の3リットルの終夜培養物からの上清を濃縮し、TFF(10kDa)を用いて50mMリン酸ナトリウムpH7にバッファー交換した。試料をQ Sepharose FFに載せ、50mMリン酸ナトリウムpH7中の0−300mM NaClの勾配を用いて、タンパク質をクロマトグラフィーにより分離した。図27のチオFAB S4497−MC−GGAFAGGG−(pipBOR)(配列番号126として開示する「コアペプチド」)とインキュベートし、LC−MS分析により予期される部位でのリンカーの切断を評価することにより、活性画分を同定した。活性画分をプールし、2Mの濃度まで硫酸アンモニウムを補った。タンパク質は、50mMトリスpH7.5中の2−0M硫酸アンモニウムの勾配を用いて、フェニルSepharose上で疎水性相互作用クロマトグラフィーによりさらに精製した。ここでもまた、ツール化合物を用いて活性画分を同定した。これらの画分をプールし、50mM酢酸ナトリウムpH5.5中、0−1M NaClの塩勾配を用いてモノQでさらに精製した。このクロマトグラフィー工程からの活性画分を以前と同様にして同定し、プールし、PBS中のサイズ排除クロマトグラフィーに供した。活性画分を同定し、SDS−PAGEにより目的の単一タンパク質を含むことを決定した。
5μMのチオFAB 4497 MP−LAFGA−QSY7(配列番号135として開示する「コアペプチド」)及びチオFAB 4497 MP−LAFAA−QSY7(配列番号136として開示する「コアペプチド」)(図30)を、PBS pH 7.2、4mM L−Cys、2.5mM EDTA中の50nMのプロテアーゼと2時間、37℃にてインキュベートした。2時間にて、1%TFAを用いて1:1に希釈することにより、切断反応を停止した。試料をその後、LC−MSに供して、パーセントリンカー切断を決定した。試験した全てのプロテアーゼは、2つのリンカーを切断したが、程度及び場所は様々であった(表4)。スタホパインA及びスタホパインBは、同じ部位:MP−LAFG↓A−QSY7(配列番号135として開示する「コアペプチド」)及びMP−LAFA↓A−QSY7(配列番号136として開示する「コアペプチド」)にてリンカーを切断した。スタホパインBは、試験した濃度にて両方のリンカーの100%切断を達成する。カテプシンBも、これらの条件下で両方のリンカーについて100%切断を達成したが、切断部位は混合していた。カテプシンBは、mal−LAFGA−QSY7(配列番号135として開示する「コアペプチド」)をMP−LAFG↓A−QSY7(配列番号135として開示する「コアペプチド」)でのみ切断したが、これは、mal−LAFAA−QSY7(配列番号136として開示する「コアペプチド」)をMP−LAFA↓A−QSY7(配列番号136として開示する「コアペプチド」)及びMP−LAFAA↓−QSY7(配列番号136として開示する「コアペプチド」)の両方で切断した。スタホパインAによるMP−LAFAA−QSY7(配列番号136として開示する「コアペプチド」)切断は23%であったが、m MP−LAFGA−QSY7(配列番号135として開示する「コアペプチド」)の切断は、38%であった。
1×108定常期Wood46細菌を、100μg/mLのチオ−S4497 LC v8−MP−LAFG−PABC−(ピペラジノBOR)(配列番号128として開示する「コアペプチド」)AAC−215又はチオ−S4497−HC−A118C−MC−vc−PABC−(piperazBOR)AAC−126を含む10μLのHBバッファー(0.1%ウシ血清アルブミンを補ったHanks平衡塩類溶液)に懸濁した。後者は、バリン−シトルリン(vc)カテプシンB切断可能リンカーを用いて、同じ抗生物質を送達する。
黄色ブドウ球菌のUSA300株を、様々な用量(100μg/mL、10μg/mL、1μg/mL又は0.1μg/mL)のS4497抗体単独、チオ−S4497 HC WT(v8)(配列番号137)、LC V205C−MC−vc−PAB−(ジメチルpipBOR)(配列番号128として開示する「コアペプチド」)AAC−192、又はチオ−S4497 HC v1−MP−LAFG−PABC−(ピペラジノBOR)AAC−193とインキュベートして、細菌とのAACの結合を可能にした(図31)。
S4497 HC WT(v8) 446aa
EVQ LVE SGG GLV QPG GSL RLS CSA SGF SFN SFW MHW VRQ VPG KGL VWI SFT NNE GTT TAY
ADS VRG RFI ISR DNA KNT LYL EMN NLR GED TAV YYC ARG DGG LDD WGQ GTL VTV SSA STK
GPS VFP LAP SSK STS GGT AAL GCL VKD YFP EPV TVS WNS GAL TSG VHT FPA VLQ SSG LYS
LSS VVT VPS SSL GTQ TYI CNV NHK PSN TKV DKK VEP KSC DKT HTC PPC PAP ELL GGP SVF
LFP PKP KDT LMI SRT PEV TCV VVD VSH EDP EVK FNW YVD GVE VHN AKT KPR EEQ YNS TYR
VVS VLT VLH QDW LNG KEY KCK VSN KAL PAP IEK TIS KAK GQP REP QVY TLP PSR EEM TKN
QVS LTC LVK GFY PSD IAV EWE SNG QPE NNY KTT PPV LDS DGS FFL YSK LTV DKS RWQ QGN
VFS CSV MHE ALH NHY TQK SLS LSP GK(配列番号137)
黄色ブドウ球菌のWood46株を選択した。なぜなら、これは、IgG抗体のFc領域と結合する分子であるプロテインAを発現しないからである。黄色ブドウ球菌のWood46株を、10μg/mL又は0.5μg/mLのS4497抗体、カテプシンBにより切断可能なリンカーを含むアイソタイプコントロール−AAC、チオ−トラスツズマブHC A118C−MC−vc−PAB−(ジメチル−pipBOR)AAC−101、チオ−S4497 HC WT(v8),LC V205C−MC−vc−PAB−(ジメチルpipBOR)AAC−192、スタホパインにより切断可能なリンカーを含むアイソタイプコントロール−AAC、チオ−トラスツズマブHC A118C−MP−LAFG−PABC−(ピペラジノBOR)(配列番号128として開示する「コアペプチド」)、又はチオ−S4497 HC v1−MP−LAFG−PABC−(ピペラジノBOR)(配列番号128として開示する「コアペプチド」)AAC−193と1時間インキュベートして、細菌とのAACの結合を可能にした(図32)。AACの非特異的結合を制限するために、オプソニン化した細菌を遠心分離し、1回洗浄し、バッファーに再懸濁した後にマウスのマクロファージに供給した。食作用が完了した後に、50μg/mLのゲンタマイシンを補った通常成長培地に感染ミックスを置き換えて、何れの残存細胞外細菌も死滅させ、生存細胞内細菌の総数を、マクロファージ溶解物の系列希釈をトリプシン大豆寒天プレートにプレーティングすることにより2日後に決定した(図32)。スタホパインにより切断可能なリンカーを含むAAC、AAC−193は、全て検出可能な細胞内細菌を死滅させることができたが、アイソタイプコントロールAACは、活性を示さなかった。マクロファージアッセイは、スタホパインにより切断可能なAACが細胞内細菌を死滅させることができることを証明する。抗体−抗生物質コンジュゲート、チオ−S4497 LC v8−MP−LAFG−PABC−(ピペラジノBOR)(配列番号128として開示する「コアペプチド」)AAC−215は、MRSA感染モデルにおいてインビボで有効である:
黄色ブドウ球菌株Wood46(ATCC10832)を、トリプシン大豆ブロス(TSB)中で振盪しながら終夜、37℃にて培養した。培養物を10,000×gで10分間遠心分離した。上清を回収し、2つの0.22umフィルタを通した。
図26のマレイミドFRETペプチド、(MP−Lys(TAMRA)−Gly−Gly−Ala−Phe−Ala−Gly−Gly−Gly−Lys(フルオレセイン)(配列番号125として開示する「コアペプチド」)を、PS3ペプチド合成機(Protein Technologies,Inc.)を用いて標準的なFmoc固相化学により合成した。0.1mmolのFmoc−Lys(Boc)−Rinkアミド樹脂(Novabiochem)を用いてC末端カルボキサミドを作製した。Fmoc−Lys(Mtt)−OH(Novabiochem)を最初のN末端残基に付加して、Mtt基の除去の後にさらなる側鎖化学を可能にした。3%トリイソプロピルシラン(TIS)を含むジクロロメタン中の1%TFAでの30分間の3回連続の洗浄によりMtt基を除去した後に、蛍光性アクセプター、5(6)−カルボキシテトラメチルローダミン又はTAMRA(Novabiochem)を、樹脂上のこの側鎖アミンと結合させた。20時間反応させた。この工程の後に、DMF中の20%ピペリジンにより末端Fmoc基を除去し、HBTUによりマレイミド−プロピオン酸(Bachem AG)とカップリングさせた。95:2.5:2.5トリフルオロ酢酸(TFA)/TIS/水(v/v/v)を用いて2時間、室温にて穏やかに振盪しながら、TAMRA標識された中間体ペプチドを樹脂から切断した。切断溶液を濾過し、窒素流の下でエバポレートして、TFAを除去した。水とアセトニトリルとの混液に溶解した粗中間体を、PhenomenexからのJupiter 5μ C4カラム(5μm、10mm×250mm)を用いる逆相HPLCによるさらなる精製に供した。凍結乾燥の後に、精製中間体を、次いで、10eq.のNHS−フルオレセイン(Thermo Scientific)と、50/50リン酸緩衝生理食塩水(PBS)/ジメチルホルムアミド(DMF)(v/v)中で20時間反応させて、C末端リジンでの遊離のアミンを標識した。FRETペプチドを次いで精製し、上記のようにして凍結乾燥させた。全ての反応混合物及び最終生成物は、LC−MSにより分析して確認した。
Wood46及びUSA300の培養物は、TSB中の1:200希釈の終夜培養物(20ml中に0.1ml)を接種し、振盪しながら37℃にてインキュベートした。株を対数増殖期まで培養し、トリプシン大豆ブロス(TSB)に108細胞/ml及び107細胞/mlの細胞密度でプレーティングした。2μMの最終FRETペプチド濃度でチオMAB FRETペプチドコンジュゲートをウェルに加えた。プレートを37℃にてインキュベートし、蛍光を経時的に、励起λ495nm/放出λ518nmで210分間モニタリングした。
Claims (107)
- 軽(L)鎖及び重(H)鎖を含む単離抗WTA(細胞壁タイコ酸)モノクローナル抗体であって、
(a)L鎖が、KSSQSVLSRANNNYYVA(配列番号1)の配列を含むCDR L1と、WASTREF(配列番号2)の配列を含むCDR L2と、QQYYTSRRT(配列番号3)の配列を含むCDR L3とを含み、H鎖が、DYYMH(配列番号4)の配列を含むCDR H1と、WINPKSGGTNYAQRFQG(配列番号5)の配列を含むCDR H2と、DCGSGGLRDF(配列番号6)の配列を含むCDR H3とを含み、
(b)L鎖が、RSNQNLLSSSNNNYLA(配列番号7)の配列を含むCDR L1と、WASTRES(配列番号8)の配列を含むCDR L2と、QQYYANPRT(配列番号9)の配列を含むCDR L3とを含み、H鎖が、DYYIH(配列番号10)の配列を含むCDR H1と、WINPNTGGTYYAQKFRD(配列番号11)の配列を含むCDR H2と、DCGRGGLRDI(配列番号12)の配列を含むCDR H3とを含み、
(c)L鎖が、KSNQNVLASSNDKNYLA(配列番号13)の配列を含むCDR L1と、WASIRES(配列番号14)の配列を含むCDR L2と、QQYYTNPRT(配列番号15)の配列を含むCDR L3とを含み、H鎖が、DYYIH(配列番号16)の配列を含むCDR H1と、WINPNTGGTNYAQKFQG(配列番号17)の配列を含むCDR H2と、DCGNAGLRDI(配列番号18)の配列を含むCDR H3とを含み、又は
(d)L鎖が、KSSQNVLYSSNNKNYLA(配列番号19)の配列を含むCDR L1と、WASTRES(配列番号20)の配列を含むCDR L2と、QQYYTSPPYT(配列番号21)の配列を含むCDR L3とを含み、H鎖が、SYWIG(配列番号22)の配列を含むCDR H1と、IIHPGDSKTRYSPSFQG(配列番号23)の配列を含むCDR H2と、LYCSGGSCYSDRAFSSLGAGGYYYYGMGV(配列番号24)の配列を含むCDR H3とを含む、
単離抗WTA(細胞壁タイコ酸)モノクローナル抗体。 - 重鎖可変領域(VH)を含む単離抗WTAモノクローナル抗体であって、VHが、配列番号26、配列番号28、配列番号30及び配列番号32から選択されるVH配列の全長にわたって少なくとも95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、単離抗WTAモノクローナル抗体。
- L鎖可変領域(VL)をさらに含み、VLが、配列番号25、配列番号27、配列番号29及び配列番号31から選択されるVL配列の全長にわたって少なくとも95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項2に記載の抗体。
- 軽鎖可変領域(VL)を含む単離抗WTAモノクローナル抗体であって、VLが、配列番号25、配列番号27、配列番号29及び配列番号31から選択されるVL配列の全長にわたって少なくとも95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、単離抗WTAモノクローナル抗体。
- (i)配列番号25の配列を含むVL及び配列番号26の配列を含むVH、
(ii)配列番号27の配列を含むVL及び配列番号28の配列を含むVH、
(iii)配列番号29の配列を含むVL及び配列番号30の配列を含むVH、又は
(iv)配列番号31の配列を含むVL及び配列番号32の配列を含むVH
を含む、請求項3に記載の抗体。 - Fc領域を欠く抗原結合断片である、請求項1から5の何れか一項に記載の抗体。
- F(ab)又はF(ab’)2である、請求項6に記載の抗体。
- 重鎖定常領域及び/又は軽鎖定常領域をさらに含み、重鎖定常領域及び/又は軽鎖定常領域が、システイン残基で置換された一又は複数のアミノ酸を含む、請求項1から7の何れか一項に記載の抗体。
- 重鎖定常領域が、アミノ酸置換A118Cを含み、かつ/又は軽鎖定常領域が、アミノ酸置換V205Cを含み、番号付けが、EU番号付けに従う、請求項8に記載の抗体。
- 配列番号149のアミノ酸配列を含む重鎖定常領域及び/又は配列番号151のアミノ酸配列を含む軽鎖定常領域をさらに含む、請求項1から5の何れか一項に記載の抗体。
- 配列番号149のアミノ酸配列を含む重鎖定常領域及び配列番号150のアミノ酸配列を含む軽鎖定常領域をさらに含む、請求項1から5の何れか一項に記載の抗体。
- 配列番号148のアミノ酸配列を含む重鎖定常領域及び配列番号151のアミノ酸配列を含む軽鎖定常領域をさらに含む、請求項1から5の何れか一項に記載の抗体。
- WTAアルファと結合する、請求項1から12の何れか一項に記載の抗体。
- 軽(L)鎖及び重(H)鎖を含む単離抗WTA(細胞壁タイコ酸)モノクローナル抗体であって、
(a)L鎖が、RASQTISGWLA(配列番号33)の配列を含むCDR L1と、KASTLES(配列番号34)の配列を含むCDR L2と、QQYKSYSFN(配列番号35)の配列を含むCDR L3とを含み、H鎖が、SYDIN(配列番号36)の配列を含むCDR H1と、WMNANSGNTGYAQKFQG(配列番号37)の配列を含むCDR H2と、SSILVRGALGRYFDL(配列番号38)の配列を含むCDR H3とを含み、
(b)L鎖が、RASQTISGWLA(配列番号39)の配列を含むCDR L1と、KASTLES(配列番号40)の配列を含むCDR L2と、QQYKSYSFN(配列番号41)の配列を含むCDR L3とを含み、H鎖が、SYDIN(配列番号42)の配列を含むCDR H1と、WMNANSGNTGYAQKFQG(配列番号43)の配列を含むCDR H2と、SSILVRGALGRYFDL(配列番号44)の配列を含むCDR H3とを含み、
(c)L鎖が、RASQFVSRTSLA(配列番号45)の配列を含むCDR L1と、ETSSRAT(配列番号46)の配列を含むCDR L2と、HKYGSGPRT(配列番号47)の配列を含むCDR L3とを含み、H鎖が、NYDFI(配列番号48)の配列を含むCDR H1と、WMNPNSYNTGYGQKFQG(配列番号49)の配列を含むCDR H2と、AVRGQLLSEY(配列番号50)の配列を含むCDR H3とを含み、
(d)L鎖が、_RASQSVSSSYLA(配列番号51)の配列を含むCDR L1と、DASSRAT(配列番号52)の配列を含むCDR L2と、QKYGSTPRP(配列番号53)の配列を含むCDR L3とを含み、H鎖が、SYDIN(配列番号54)の配列を含むCDR H1と、WMNPNSGNTNYAQRFQG(配列番号55)の配列を含むCDR H2と、ERWSKDTGHYYYYGMDV(配列番号56)の配列を含むCDR H3とを含み、
(e)L鎖が、RASLDITNHLA(配列番号57)の配列を含むCDR L1と、EASILQS(配列番号58)の配列を含むCDR L2と、EKCNSTPRT(配列番号59)の配列を含むCDR L3とを含み、H鎖が、NYDIN(配列番号60)の配列を含むCDR H1と、WMNPSSGRTGYAPKFRG(配列番号61)の配列を含むCDR H2と、GGGYYDSSGNYHISGLDV(配列番号62)の配列を含むCDR H3とを含み、
(f)L鎖が、RASQSVGAIYLA(配列番号63)の配列を含むCDR L1と、GVSNRAT(配列番号64)の配列を含むCDR L2と、QLYTSSRALT(配列番号65)の配列を含むCDR L3とを含み、H鎖が、AYAMN(配列番号66)の配列を含むCDR H1と、SITKNSDSLYYADSVKG(配列番号67)の配列を含むCDR H2と、LAARIMATDY(配列番号68)の配列を含むCDR H3とを含み、
(g)L鎖が、RASQGIRNGLG(配列番号69)の配列を含むCDR L1と、PASTLES(配列番号70)の配列を含むCDR L2と、LQDHNYPPT(配列番号71)の配列を含むCDR L3とを含み、H鎖が、YYSMI(配列番号72)の配列を含むCDR H1と、SIDSSSRYLYYADSVKG(配列番号73)の配列を含むCDR H2と、DGDDILSVYRGSGRPFDY(配列番号74)の配列を含むCDR H3とを含み、
(h)L鎖が、_RASQGIRNGLG(配列番号75)の配列を含むCDR L1と、PASTLES(配列番号76)の配列を含むCDR L2と、LQDHNYPPS(配列番号77)の配列を含むCDR L3とを含み、H鎖が、YYSMI(配列番号78)の配列を含むCDR H1と、SIDSSSRYRYYTDSVKG(配列番号79)の配列を含むCDR H2と、DGDDILSVYQGSGRPFDY(配列番号80)の配列を含むCDR H3とを含み、
(i)L鎖が、_RASQSVRTNVA(配列番号81)の配列を含むCDR L1と、GASTRAS(配列番号82)の配列を含むCDR L2と、LQYNTWPRT(配列番号83)の配列を含むCDR L3とを含み、H鎖が、TNDMS(配列番号84)の配列を含むCDR H1と、TIIGIDDTTHYADSVRG(配列番号85)の配列を含むCDR H2と、NSGIYSF(配列番号86)の配列を含むCDR H3とを含み、
(j)L鎖が、RASQDIGSSLA(配列番号87)の配列を含むCDR L1と、ATSTLQS(配列番号88)の配列を含むCDR L2と、QQLNNYVHS(配列番号89)の配列を含むCDR L3とを含み、H鎖が、DYAMG(配列番号90)の配列を含むCDR H1と、VVTGHSYRTHYADSVKG(配列番号91)の配列を含むCDR H2と、RIWSYGDDSFDV(配列番号92)の配列を含むCDR H3とを含み、
(k)L鎖が、RASQSIGDRLA(配列番号93)の配列を含むCDR L1と、WASNLEG(配列番号94)の配列を含むCDR L2と、QQYKSQWS(配列番号95)の配列を含むCDR L3とを含み、H鎖が、SYAMN(配列番号96)の配列を含むCDR H1と、YISSIETIYYADSVKG(配列番号97)の配列を含むCDR H2と、DRLVDVPLSSPNS(配列番号98)の配列を含むCDR H3とを含み、
(l)L鎖が、KSSQSIFRTSRNKNLLN(配列番号99)の配列を含むCDR L1と、WASTRKS(配列番号100)の配列を含むCDR L2と、QQYFSPPYT(配列番号101)の配列を含むCDR L3とを含み、H鎖が、SFWMH(配列番号102)の配列を含むCDR H1と、FTNNEGTTTAYADSVRG(配列番号103)の配列を含むCDR H2と、GDGGLDD(配列番号104)の配列を含むCDR H3とを含み、
(m)L鎖が、_RASQFTNHYLN(配列番号105)の配列を含むCDR L1と、VASNLQS(配列番号106)の配列を含むCDR L2と、QQSYRTPYT(配列番号107)の配列を含むCDR L3とを含み、H鎖が、SGYYN(配列番号108)の配列を含むCDR H1と、YILSGAHTDIKASLGS(配列番号109)の配列を含むCDR H2と、SGVYSKYSLDV(配列番号110)の配列を含むCDR H3とを含み、又は
(n)L鎖が、KSSQSIFRTSRNKNLLN(配列番号99)の配列を含むCDR L1と、WASTRKS(配列番号100)の配列を含むCDR L2と、QQYFSPPYT(配列番号101)の配列を含むCDR L3とを含み、H鎖が、SFWMH(配列番号102)の配列を含むCDR H1と、FTNNEGTTTAYADSVRG(配列番号103)の配列を含むCDR H2と、GEGGLDD(配列番号118)の配列を含むCDR H3とを含む、
単離抗WTA(細胞壁タイコ酸)モノクローナル抗体。 - 重鎖可変領域(VH)を含む単離抗WTAモノクローナル抗体であって、VHが、配列番号112のVH配列の全長にわたって少なくとも95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、配列番号112の1位のXaaが、Q又はEであり、配列番号112の2位のXaaが、M、I又はVである、単離抗WTAモノクローナル抗体。
- 軽鎖可変領域(VL)をさらに含み、VLが、配列番号111のVL配列の全長にわたって少なくとも95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項11に記載の抗体。
- 軽鎖可変領域(VL)を含む単離抗WTAモノクローナル抗体であって、VLが、配列番号111のVL配列の全長にわたって少なくとも95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、単離抗WTAモノクローナル抗体。
- VHが、配列番号112の配列を含み、VLが、配列番号111の配列を含み、配列番号112の1位のXaaが、Q又はEであり、配列番号112の2位のXaaが、M、I又はVである、請求項15に記載の抗体。
- 重鎖可変領域(VH)を含む単離抗WTAモノクローナル抗体であって、VHが、配列番号120又は配列番号156のVH配列の全長にわたって少なくとも95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、単離抗WTAモノクローナル抗体。
- 軽鎖可変領域(VL)をさらに含み、VLが、配列番号119のVL配列の全長にわたって少なくとも95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項17に記載の抗体。
- 軽鎖可変領域(VL)を含む単離抗WTAモノクローナル抗体であって、VLが、配列番号119のVL配列の全長にわたって少なくとも95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、単離抗WTAモノクローナル抗体。
- 軽鎖可変領域(VL)及び重鎖可変領域(VH)を含む単離抗WTAモノクローナル抗体であって、VLが、配列番号119の配列を含み、VHが、配列番号120又は配列番号156の配列を含む、単離抗WTAモノクローナル抗体。
- 軽鎖可変領域(VL)を含む単離抗WTAモノクローナル抗体であって、VLが、配列番号158、配列番号159、配列番号160、配列番号161、配列番号162、配列番号163、配列番号164、配列番号165、配列番号166、配列番号167、及び配列番号168のVL配列から選択されるVL配列の全長にわたって少なくとも95%の配列同一性を有する配列を含む、単離抗WTAモノクローナル抗体。
- 配列番号127、配列番号133、配列番号134、配列番号169、配列番号170、配列番号171、配列番号172、配列番号173、配列番号174、配列番号175、及び配列番号176のVH配列から選択されるVH配列の全長にわたって少なくとも95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖可変領域(VH)を含む単離抗WTAモノクローナル抗体。
- 軽鎖可変領域(VL)及び重鎖可変領域(VH)を含む単離抗WTAモノクローナル抗体であって、
(a)抗体のVLが、配列番号158のVL配列の全長にわたって少なくとも95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、抗体のVHが、配列番号169のVH配列の全長にわたって少なくとも95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、
(b)抗体のVLが、配列番号159のVL配列の全長にわたって少なくとも95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、抗体のVHが、配列番号170のVH配列の全長にわたって少なくとも95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、
(c)抗体のVLが、配列番号160のVL配列の全長にわたって少なくとも95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、抗体のVHが、配列番号171のVH配列の全長にわたって少なくとも95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、
(d)抗体のVLが、配列番号161のVL配列の全長にわたって少なくとも95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、抗体のVHが、配列番号172のVH配列の全長にわたって少なくとも95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、
(e)抗体のVLが、配列番号162のVL配列の全長にわたって少なくとも95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、抗体のVHが、配列番号173のVH配列の全長にわたって少なくとも95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、
(f)抗体のVLが、配列番号163のVL配列の全長にわたって少なくとも95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、抗体のVHが、配列番号174のVH配列の全長にわたって少なくとも95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、
(g)抗体のVLが、配列番号164のVL配列の全長にわたって少なくとも95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、抗体のVHが、配列番号175のVH配列の全長にわたって少なくとも95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、
(h)抗体のVLが、配列番号165のVL配列の全長にわたって少なくとも95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、抗体のVHが、配列番号176のVH配列の全長にわたって少なくとも95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、
(i)抗体のVLが、配列番号166のVL配列の全長にわたって少なくとも95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、抗体のVHが、配列番号133のVH配列の全長にわたって少なくとも95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、
(j)抗体のVLが、配列番号167のVL配列の全長にわたって少なくとも95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、抗体のVHが、配列番号134のVH配列の全長にわたって少なくとも95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、又は
(k)抗体のVLが、配列番号168のVL配列の全長にわたって少なくとも95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、抗体のVHが、配列番号127のVH配列の全長にわたって少なくとも95%の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、
単離抗WTAモノクローナル抗体。 - 軽鎖可変領域(VL)及び重鎖可変領域(VH)を含む単離抗WTAモノクローナル抗体であって、
(a)抗体のVLが、配列番号158のVL配列を含み、抗体のVHが、配列番号169のVH配列を含み、
(b)抗体のVLが、配列番号159のVL配列を含み、抗体のVHが、配列番号170のVH配列を含み、
(c)抗体のVLが、配列番号160のVL配列を含み、抗体のVHが、配列番号171のVH配列を含み、
(d)抗体のVLが、配列番号161のVL配列を含み、抗体のVHが、配列番号172のVH配列を含み、
(e)抗体のVLが、配列番号162のVL配列を含み、抗体のVHが、配列番号173のVH配列を含み、
(f)抗体のVLが、配列番号163のVL配列を含み、抗体のVHが、配列番号174のVH配列を含み、
(g)抗体のVLが、配列番号164のVL配列を含み、抗体のVHが、配列番号175のVH配列を含み、
(h)抗体のVLが、配列番号165のVL配列を含み、抗体のVHが、配列番号176のVH配列を含み、
(i)抗体のVLが、配列番号166のVL配列を含み、抗体のVHが、配列番号133のVH配列を含み、
(j)抗体のVLが、配列番号167のVL配列を含み、VHが、配列番号134のVH配列を含み、
(k)抗体のVLが、配列番号168のVL配列を含み、VHが、配列番号127のVH配列を含み、
(l)抗体のVLが、配列番号113のVL配列を含み、VHが、配列番号114のVH配列を含み、又は
(m)抗体のVLが、配列番号121のVL配列を含み、VHが、配列番号138のVH配列を含む、
単離抗WTAモノクローナル抗体。 - Fc領域を欠く抗原結合断片である、請求項14から26の何れか一項に記載の抗体。
- F(ab)又はF(ab’)2である、請求項27に記載の抗体。
- 重鎖定常領域及び/又は軽鎖定常領域をさらに含み、重鎖定常領域及び/又は軽鎖定常領域が、システイン残基で置換された一又は複数のアミノ酸を含む、請求項14から28の何れか一項に記載の抗体。
- 重鎖定常領域が、アミノ酸置換A118Cを含み、かつ/又は軽鎖定常領域が、アミノ酸置換V205Cを含み、番号付けが、EU番号付けに従う、請求項29に記載の抗体。
- 配列番号149のアミノ酸配列を含む重鎖定常領域及び/又は配列番号151のアミノ酸配列を含む軽鎖定常領域をさらに含む、請求項14から26の何れか一項に記載の抗体。
- 配列番号149のアミノ酸配列を含む重鎖定常領域及び配列番号150のアミノ酸配列を含む軽鎖定常領域をさらに含む、請求項14から26の何れか一項に記載の抗体。
- 配列番号148のアミノ酸配列を含む重鎖定常領域及び配列番号151のアミノ酸配列を含む軽鎖定常領域をさらに含む、請求項14から26の何れか一項に記載の抗体。
- 軽鎖及び重鎖を含む単離抗WTAモノクローナル抗体であって、抗体の重鎖が、配列番号114、配列番号116又は配列番号117の配列を含み、抗体の軽鎖が、配列番号113の配列を含み、配列番号116又は配列番号117の2位のアミノ酸Xaaが、M、I又はVである、単離抗WTAモノクローナル抗体。
- 軽鎖及び重鎖を含む単離抗WTAモノクローナル抗体であって、抗体の重鎖が、配列番号114、配列番号116又は配列番号117の配列を含み、抗体の軽鎖が、配列番号115の配列を含み、配列番号116又は配列番号117の2位のアミノ酸Xaaが、M、I又はVである、単離抗WTAモノクローナル抗体。
- 軽鎖及び重鎖を含む単離抗WTAモノクローナル抗体であって、抗体の重鎖が、配列番号139、配列番号140、配列番号141、配列番号142、配列番号143及び配列番号144からなる群から選択される配列を含み、抗体の軽鎖が、配列番号113の配列を含む、単離抗WTAモノクローナル抗体。
- 軽鎖及び重鎖を含む単離抗WTAモノクローナル抗体であって、抗体の重鎖が、配列番号139、配列番号140、配列番号141、配列番号142、配列番号143及び配列番号144からなる群から選択される配列を含み、抗体の軽鎖が、配列番号115の配列を含む、単離抗WTAモノクローナル抗体。
- 重鎖及び軽鎖を含む単離抗WTAモノクローナル抗体であって、重鎖が、配列番号146、配列番号147、配列番号157又は配列番号124の配列を含み、軽鎖が、配列番号121又は配列番号123の配列を含む、単離抗WTAモノクローナル抗体。
- 重鎖及び軽鎖を含む単離抗WTAモノクローナル抗体であって、重鎖が、配列番号146、配列番号147、配列番号157又は配列番号124の配列を含み、軽鎖が、配列番号145の配列を含む、単離抗WTAモノクローナル抗体。
- WTAベータと結合する、請求項14から39の何れか一項に記載の抗体。
- 請求項1から40の何れか一項に記載の抗体と同じエピトープと結合する抗体。
- 細胞培養における宿主細胞で生成される、請求項1から41の何れか一項に記載の抗体。
- 宿主細胞が、チャイニーズハムスター卵巣(CHO)細胞である、請求項42に記載の抗体。
- 請求項1から43の何れか一項に記載の抗体と、薬学的に許容される担体とを含む組成物。
- 請求項1から41の何れか一項に記載の抗体をコードする単離核酸。
- 請求項45に記載の核酸を含むベクター。
- 請求項1から41の何れか一項に記載の抗体をコードする核酸を含む単離宿主細胞。
- 請求項47に記載の宿主細胞を、核酸の発現に適切な条件下で培養することと、細胞により生成される抗体を回収することとを含む、抗体を生成する方法。
- ペプチドリンカーによりリファマイシン型抗生物質と共有結合した請求項1から43の何れか一項に記載の抗細胞壁タイコ酸(WTA)抗体を含む抗体−抗生物質コンジュゲート化合物。
- 抗体が、i)配列番号99−104のL鎖及びH鎖CDR、若しくは配列番号33−38のL鎖及びH鎖CDR、又はii)配列番号120若しくは配列番号156のVHとペアリングした配列番号119若しくは配列番号123のVL、又はiii)配列番号112のVHとペアリングした配列番号111のVLを含む、請求項49に記載の抗体−抗生物質コンジュゲート化合物。
- 抗細胞壁タイコ酸(WTA)抗体が、黄色ブドウ球菌(staphylococcus aureus)と結合する、請求項49又は50に記載の抗体−抗生物質コンジュゲート化合物。
- 抗細胞壁タイコ酸(WTA)抗体が、メチシリン耐性黄色ブドウ球菌(staphylococcus aureus)(MRSA)と結合する、請求項51に記載の抗体−抗生物質コンジュゲート化合物。
- リファマイシン型抗生物質が、リファラジル型抗生物質である、請求項49から52の何れか一項に記載の抗体−抗生物質コンジュゲート。
- リファマイシン型抗生物質が、ペプチドリンカーと結合した第四級アミンを含む、請求項49から53の何れか一項に記載の抗体−抗生物質コンジュゲート。
- ペプチドリンカーが、抗細胞壁タイコ酸(WTA)抗体のシステイン又は操作されたシステインと結合している、請求項49から54の何れか一項に記載の抗体−抗生物質コンジュゲート。
- ペプチドリンカーが、黄色ブドウ球菌(s.aureus)エンドペプチダーゼ又はシステインプロテアーゼにより切断可能なリンカーである、請求項49から55の何れか一項に記載の抗体−抗生物質コンジュゲート。
- ペプチドリンカーが、スタホパインB又はスタホパインAにより切断可能なリンカーである、請求項56に記載の抗体−抗生物質コンジュゲート。
- ペプチドリンカーが、ヒトプロテアーゼカテプシンBにより切断可能なリンカーである、請求項56に記載の抗体−抗生物質コンジュゲート。
- ペプチドリンカーが、val−citジペプチドリンカーである、請求項58に記載の抗体−抗生物質コンジュゲート。
- 式:
Ab−(L−abx)p
(式中、
Abは、抗細胞壁タイコ酸抗体であり、
Lは、式:
−Str−Pep−Y−
(式中、Strは、ストレッチャー単位であり、Pepは、2から12アミノ酸残基のペプチドであり、Yは、スペーサー単位である)
を有するペプチドリンカーであり、
abxは、リファマイシン型抗生物質であり、
pは、1から8の整数である)
を有する、請求項49に記載の抗体−抗生物質コンジュゲート。 - pが、2から4である、請求項60に記載の抗体−抗生物質コンジュゲート。
- 式I:
I
(式中、
破線は、任意選択の結合を示し、
Rは、H、C1−C12アルキル又はC(O)CH3であり、
R1は、OHであり、
R2は、CH=N−(ヘテロシクリル)であり、ヘテロシクリルは、C(O)CH3、C1−C12アルキル、C1−C12ヘテロアリール、C2−C20ヘテロシクリル、C6−C20アリール及びC3−C12カルボシクリルから独立して選択される一又は複数の基で置換されていてもよいか、
あるいはR1及びR2は、5又は6員の縮合ヘテロアリール又はヘテロシクリルを形成し、スピロ又は縮合6員ヘテロアリール、ヘテロシクリル、アリール若しくはカルボシクリル環を形成していてもよく、スピロ又は縮合6員ヘテロアリール、ヘテロシクリル、アリール若しくはカルボシクリル環は、H、F、Cl、Br、I、C1−C12アルキル又はOHで置換されていてもよく、
Lは、R2、又はR1及びR2により形成される縮合ヘテロアリール若しくはヘテロシクリルと結合するペプチドリンカーであり、
Abは、抗細胞壁タイコ酸(WTA)抗体である)
を有する、請求項49に記載の抗体−抗生物質コンジュゲート化合物。 - 式:
(式中、
R3は、H及びC1−C12アルキルから独立して選択され、
nは、1又は2であり、
R4は、H、F、Cl、Br、I、C1−C12アルキル及びOHから選択され、
Zは、NH、N(C1−C12アルキル)、O及びSから選択される)を有する、請求項62に記載の抗体−抗生物質コンジュゲート化合物。 - 式:
(式中、
R5は、H及びC1−C12アルキルから選択され、
nは、0又は1である)を有する、請求項62に記載の抗体−抗生物質コンジュゲート化合物。 - 式:
(式中、
R5は、H及びC1−C12アルキルから選択され、
nは、0又は1である)を有する、請求項62に記載の抗体−抗生物質コンジュゲート化合物。 - 式:
(式中、
R5は、H及びC1−C12アルキルから独立して選択され、
nは、0又は1である)を有する、請求項62に記載の抗体−抗生物質コンジュゲート化合物。 - 式:
(式中、
R3は、H及びC1−C12アルキルから独立して選択され、
nは、1又は2である)を有する、請求項62に記載の抗体−抗生物質コンジュゲート化合物。 - 式:
.
を有する、請求項62に記載の抗体−抗生物質コンジュゲート化合物。 - ペプチドリンカーが、式:
−Str−Pep−Y−
(式中、Strは、抗細胞壁タイコ酸(WTA)抗体と共有結合するストレッチャー単位であり、Pepは、2から12アミノ酸残基のペプチドであり、Yは、リファマイシン型抗生物質と共有結合するスペーサー単位である)を有する、請求項49に記載の抗体−抗生物質コンジュゲート化合物。 - Strが、式:
(式中、R6は、C1−C10アルキレン−、−C3−C8カルボシクロ、−O−(C1−C8アルキル)−、−アリーレン−、−C1−C10アルキレン−アリーレン−、−アリーレン−C1−C10アルキレン−、−C1−C10アルキレン−(C3−C8カルボシクロ)−、−(C3−C8カルボシクロ)−C1−C10アルキレン−、−C3−C8ヘテロシクロ−、−C1−C10アルキレン−(C3−C8ヘテロシクロ)−、−(C3−C8ヘテロシクロ)−C1−C10アルキレン−、−(CH2CH2O)r−及び−(CH2CH2O)r−CH2−からなる群から選択され、rは、1から10の範囲の整数である)を有する、請求項69に記載の抗体−抗生物質コンジュゲート。 - R6が、−(CH2)5−である、請求項70に記載の抗体−抗生物質コンジュゲート。
- Pepが、グリシン、アラニン、フェニルアラニン、リジン、アルギニン、バリン及びシトルリンから独立して選択される2から12アミノ酸残基を含む、請求項69に記載の抗体−抗生物質コンジュゲート。
- Pepが、バリン−シトルリン(val−cit、vc)、フェニルアラニン−リジン(fk)、GGAFAGGG(配列番号126)、tpm−cit、GPImeLFF(配列番号129)、バリン−シトルリン−フェニルアラニン(val−cit−phe)、GGAFA(配列番号131)及びLAFG(配列番号128)から選択される、請求項72に記載の抗体−抗生物質コンジュゲート。
- Yが、パラ−アミノベンジル又はパラ−アミノベンジルオキシカルボニルを含む、請求項69に記載の抗体−抗生物質コンジュゲート。
- 式:
(式中、AA1及びAA2は、アミノ酸側鎖から独立して選択される)
を有する、請求項49に記載の抗体−抗生物質コンジュゲート。 - アミノ酸側鎖が、H、−CH3、−CH2(C6H5)、−CH2CH2CH2CH2NH2、−CH2CH2CH2NHC(NH)NH2、−CHCH(CH3)CH3及び−CH2CH2CH2NHC(O)NH2から独立して選択される、請求項75に記載の抗体−抗生物質コンジュゲート。
- 式:
.
を有する、請求項75に記載の抗体−抗生物質コンジュゲート。 - 式:
.
を有する、請求項75に記載の抗体−抗生物質コンジュゲート。 - 式:
.
を有する、請求項78に記載の抗体−抗生物質コンジュゲート。 - 式:
.
を有する、請求項75に記載の抗体−抗生物質コンジュゲート。 - 式:
.
を有する、請求項80に記載の抗体−抗生物質コンジュゲート。 - 式:
を有する、請求項75に記載の抗体−抗生物質コンジュゲート。 - 式:
.
を有する、請求項82に記載の抗体−抗生物質コンジュゲート。 - 式:
(式中、R7は、H及びC1−C12アルキルから独立して選択される)
を有する、請求項75に記載の抗体−抗生物質コンジュゲート。 - 式:
.
を有する、請求項75に記載の抗体−抗生物質コンジュゲート化合物。 - 式:
.
を有する、請求項85に記載の抗体−抗生物質コンジュゲート化合物。 - 式:
.
を有する、請求項75に記載の抗体−抗生物質コンジュゲート化合物。 - 式:
.
を有する、請求項87に記載の抗体−抗生物質コンジュゲート化合物。 - 請求項49から88の何れか一項に記載の抗体−抗生物質コンジュゲート化合物と、薬学的に許容される担体、流動促進剤、希釈剤又は賦形剤とを含む薬学的組成物。
- リファマイシン型抗生物質を抗細胞壁タイコ酸(WTA)抗体にコンジュゲートさせることを含む、請求項49から88の何れか一項に記載の抗体−抗生物質コンジュゲート化合物を作製する方法。
- 式II:
II
(式中、
破線は、任意選択の結合を示し、
Rは、H、C1−C12アルキル又はC(O)CH3であり、
R1は、OHであり、
R2は、CH=N−(ヘテロシクリル)であり、ヘテロシクリルは、C(O)CH3、C1−C12アルキル、C1−C12ヘテロアリール、C2−C20ヘテロシクリル、C6−C20アリール及びC3−C12カルボシクリルから独立して選択される一又は複数の基で置換されていてもよいか、
あるいはR1及びR2は、5又は6員の縮合ヘテロアリール又はヘテロシクリルを形成し、スピロ又は縮合6員ヘテロアリール、ヘテロシクリル、アリール若しくはカルボシクリル環を形成していてもよく、スピロ又は縮合6員ヘテロアリール、ヘテロシクリル、アリール若しくはカルボシクリル環は、H、F、Cl、Br、I、C1−C12アルキル又はOHで置換されていてもよく、
Lは、R2又はR1及びR2により形成される縮合ヘテロアリール若しくはヘテロシクリルと結合するペプチドリンカーであり、式:
−Str−Pep−Y−
(式中、Strは、ストレッチャー単位であり、Pepは、2から12アミノ酸残基のペプチドであり、Yは、スペーサー単位である)
を有し、
Xは、マレイミド、チオール、アミノ、臭化物、ブロモアセトアミド、ヨードアセトアミド、p−トルエンスルホネート、ヨウ化物、ヒドロキシル、カルボキシル、ピリジルジスルフィド及びN−ヒドロキシスクシンイミドから選択される反応性官能基である)
を有する抗生物質−リンカー中間体。 - Xが、
又は
.
である、請求項91に記載の抗生物質−リンカー中間体。 - 式:
(式中、
R3は、H及びC1−C12アルキルから独立して選択され、
nは、1又は2であり、
R4は、H、F、Cl、Br、I、C1−C12アルキル及びOHから選択され、
Zは、NH、N(C1−C12アルキル)、O及びSから選択される)
を有する、請求項91に記載の抗生物質−リンカー中間体。 - 式:
.
を有する、請求項93に記載の抗生物質−リンカー中間体。 - 式:
.
を有する、請求項93に記載の抗生物質−リンカー中間体。 - ペプチドリンカーによりリファマイシン型抗生物質と共有結合した抗細胞壁タイコ酸(WTA)抗体を含む治療有効量の抗体−抗生物質コンジュゲート化合物を患者に投与することを含む、細菌感染症を治療する方法。
- 請求項49から88の何れか一項に記載の治療有効量の抗体−抗生物質コンジュゲートを患者に投与することを含む、細菌感染症を治療する方法。
- 患者が、黄色ブドウ球菌(staph aureus)感染症であると診断されている、請求項96又は97に記載の方法。
- 患者における細菌負荷が、治療により低減される、請求項98に記載の方法。
- 請求項49から88の何れか一項に記載の抗WTA−抗生物質コンジュゲートを投与することを含む、宿主細胞を死滅させることなく黄色ブドウ球菌(staph aureus)感染患者の宿主細胞における細胞内黄色ブドウ球菌(staph aureus)を死滅させる方法。
- 生残菌細菌細胞を死滅させる、請求項100に記載の方法。
- 患者がヒトである、請求項96から100の何れか一項に記載の方法。
- 第2の治療剤を投与することをさらに含む、請求項96から102の何れか一項に記載の方法。
- 第2の治療剤が、抗生物質である、請求項103に記載の方法。
- 抗生物質が、(i)アミノ配糖体、(ii)ベータラクタム、(iii)マクロライド/環状ペプチド、(iv)テトラサイクリン、(v)フルオロキノリン/フルオロキノロン、及び(vi)オキサゾリジノンからなる構造クラスから選択される、請求項104に記載の方法。
- 抗生物質が、クリンダマイシン、ノボビオシン、レタパムリン、ダプトマイシン、GSK−2140944、CG−400549、シタフロキサシン、テイコプラニン、トリクロサン、ナフチリドン、ラデゾリド、ドキソルビシン、アンピシリン、バンコマイシン、イミペネム、ドリペネム、ゲムシタビン、ダルババンシン及びアジスロマイシンからなる群から選択される、請求項104に記載の方法。
- a)請求項89に記載の薬学的組成物と、
b)使用説明書と
を含む、細菌感染症を治療するためのキット。
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Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2005081711A2 (en) * | 2003-11-06 | 2005-09-09 | Seattle Genetics, Inc. | Monomethylvaline compounds capable of conjugation to ligands |
JP2006514636A (ja) * | 2002-12-02 | 2006-05-11 | バイオシネクサス インコーポレーテッド | 抗ブドウ球菌療法およびワクチンの標的としての壁テイコイン酸 |
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US4544545A (en) | 1983-06-20 | 1985-10-01 | Trustees University Of Massachusetts | Liposomes containing modified cholesterol for organ targeting |
US4879231A (en) | 1984-10-30 | 1989-11-07 | Phillips Petroleum Company | Transformation of yeasts of the genus pichia |
US4737456A (en) | 1985-05-09 | 1988-04-12 | Syntex (U.S.A.) Inc. | Reducing interference in ligand-receptor binding assays |
US4610919A (en) | 1985-06-14 | 1986-09-09 | Fiber Bond Corporation | Binder for fibrous padding |
GB8610600D0 (en) | 1986-04-30 | 1986-06-04 | Novo Industri As | Transformation of trichoderma |
JP2544375B2 (ja) | 1986-07-14 | 1996-10-16 | 鐘淵化学工業株式会社 | アルキル置換ベンゾキサジノリフアマイシン誘導体 |
IL85035A0 (en) | 1987-01-08 | 1988-06-30 | Int Genetic Eng | Polynucleotide molecule,a chimeric antibody with specificity for human b cell surface antigen,a process for the preparation and methods utilizing the same |
CA1304363C (en) | 1988-11-01 | 1992-06-30 | Takehiko Yamane | 3'-hydroxybenzoxazinorifamycin derivative, process for preparing the same and antibacterial agent containing the same |
EP0402226A1 (en) | 1989-06-06 | 1990-12-12 | Institut National De La Recherche Agronomique | Transformation vectors for yeast yarrowia |
US5013556A (en) | 1989-10-20 | 1991-05-07 | Liposome Technology, Inc. | Liposomes with enhanced circulation time |
ATE255131T1 (de) | 1991-06-14 | 2003-12-15 | Genentech Inc | Humanisierter heregulin antikörper |
US5362852A (en) | 1991-09-27 | 1994-11-08 | Pfizer Inc. | Modified peptide derivatives conjugated at 2-hydroxyethylamine moieties |
US6660267B1 (en) | 1992-12-21 | 2003-12-09 | Promega Corporation | Prevention and treatment of sepsis |
US5545721A (en) | 1992-12-21 | 1996-08-13 | Ophidian Pharmaceuticals, Inc. | Conjugates for the prevention and treatment of sepsis |
US6214345B1 (en) | 1993-05-14 | 2001-04-10 | Bristol-Myers Squibb Co. | Lysosomal enzyme-cleavable antitumor drug conjugates |
US6214388B1 (en) | 1994-11-09 | 2001-04-10 | The Regents Of The University Of California | Immunoliposomes that optimize internalization into target cells |
US5981522A (en) | 1995-09-01 | 1999-11-09 | Kaneka Corporation | Treatment of disease caused by infection of Helicobacter |
JP3963976B2 (ja) | 1995-12-08 | 2007-08-22 | 株式会社カネカ | クラミジア感染症治療剤 |
US6322788B1 (en) | 1998-08-20 | 2001-11-27 | Stanley Arthur Kim | Anti-bacterial antibodies and methods of use |
ES2568898T3 (es) | 1999-04-09 | 2016-05-05 | Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. | Procedimiento para controlar la actividad de una molécula inmunofuncional |
WO2000071585A1 (en) | 1999-05-03 | 2000-11-30 | Medarex, Inc. | Human antibodies to staphylococcus aureus |
EP1229125A4 (en) | 1999-10-19 | 2005-06-01 | Kyowa Hakko Kogyo Kk | PROCESS FOR PRODUCING A POLYPEPTIDE |
US6946292B2 (en) | 2000-10-06 | 2005-09-20 | Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. | Cells producing antibody compositions with increased antibody dependent cytotoxic activity |
US7064191B2 (en) | 2000-10-06 | 2006-06-20 | Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. | Process for purifying antibody |
EA013563B1 (ru) | 2000-10-06 | 2010-06-30 | Киова Хакко Кирин Ко., Лтд. | Трансгенное животное, продуцирующее антитела с измененными углеводными цепями, способ получения антител и содержащее антитела лекарственное средство |
US6884869B2 (en) | 2001-04-30 | 2005-04-26 | Seattle Genetics, Inc. | Pentapeptide compounds and uses related thereto |
WO2003026577A2 (en) | 2001-09-24 | 2003-04-03 | Seattle Genetics, Inc. | P-amidobenzylethers in drug delivery agents |
US7091186B2 (en) | 2001-09-24 | 2006-08-15 | Seattle Genetics, Inc. | p-Amidobenzylethers in drug delivery agents |
MXPA04003798A (es) | 2001-10-25 | 2004-07-30 | Genentech Inc | Composiciones de glicoproteina. |
US20050123536A1 (en) | 2001-11-20 | 2005-06-09 | Che-Leung Law | Treatment of immunological disorders using anti-dc30 antibodies |
US20040093621A1 (en) | 2001-12-25 | 2004-05-13 | Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd | Antibody composition which specifically binds to CD20 |
CA2481925A1 (en) | 2002-04-09 | 2003-10-16 | Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. | Therapeutic agent for patients having human fc.gamma.riiia |
CA2481658A1 (en) | 2002-04-09 | 2003-10-16 | Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. | Method of enhancing of binding activity of antibody composition to fcy receptor iiia |
ES2362419T3 (es) | 2002-04-09 | 2011-07-05 | Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. | Células con depresión o deleción de la actividad de la proteína que participa en el transporte de gdp-fucosa. |
US20040132140A1 (en) | 2002-04-09 | 2004-07-08 | Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. | Production process for antibody composition |
CA2481920A1 (en) | 2002-04-09 | 2003-10-16 | Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. | Antibody composition-containing medicament |
EA200401325A1 (ru) | 2002-04-09 | 2005-04-28 | Киова Хакко Когио Ко., Лтд. | Клетки с модифицированным геномом |
WO2004032828A2 (en) | 2002-07-31 | 2004-04-22 | Seattle Genetics, Inc. | Anti-cd20 antibody-drug conjugates for the treatment of cancer and immune disorders |
SI2357006T1 (sl) | 2002-07-31 | 2016-01-29 | Seattle Genetics, Inc. | Konjugati zdravil in njihova uporaba za zdravljenje raka, avtoimunske bolezni ali infekcijske bolezni |
US7217797B2 (en) | 2002-10-15 | 2007-05-15 | Pdl Biopharma, Inc. | Alteration of FcRn binding affinities or serum half-lives of antibodies by mutagenesis |
EP1556684A4 (en) | 2002-11-01 | 2008-01-23 | Univ Colorado Regents | QUANTITATIVE ANALYSIS OF PROTEIN ISOFORMS USING FLIGHT TIME MASS SPECTROMETRY BY MATRIX ASSISTED LASER DESORPTION / IONIZATION |
PT1572744E (pt) | 2002-12-16 | 2010-09-07 | Genentech Inc | Variantes de imunoglobulina e utilizações destas |
CN1894259A (zh) | 2003-08-22 | 2007-01-10 | 活跃生物工艺学公司 | 利福霉素类似物及其应用 |
JPWO2005035586A1 (ja) | 2003-10-08 | 2007-11-22 | 協和醗酵工業株式会社 | 融合蛋白質組成物 |
WO2005035778A1 (ja) | 2003-10-09 | 2005-04-21 | Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. | α1,6-フコシルトランスフェラーゼの機能を抑制するRNAを用いた抗体組成物の製造法 |
JPWO2005053742A1 (ja) | 2003-12-04 | 2007-06-28 | 協和醗酵工業株式会社 | 抗体組成物を含有する医薬 |
EP1701962A4 (en) | 2003-12-23 | 2008-03-05 | Activbiotics Inc | RIFAMYCIN ANALOGS AND USES THEREOF |
JP5064037B2 (ja) | 2004-02-23 | 2012-10-31 | ジェネンテック, インコーポレイテッド | 複素環式自壊的リンカーおよび結合体 |
TR201808537T4 (tr) | 2004-09-23 | 2018-07-23 | Genentech Inc | Sistein değiştirilmiş antikorlar ve konjugatlar. |
US8871720B2 (en) | 2005-07-07 | 2014-10-28 | Seattle Genetics, Inc. | Monomethylvaline compounds having phenylalanine carboxy modifications at the C-terminus |
ES2708763T3 (es) | 2005-07-07 | 2019-04-11 | Seattle Genetics Inc | Compuestos de monometilvalina que tienen modificaciones de la cadena lateral de fenilalanina en el extremo C |
BRPI0620158A2 (pt) | 2005-12-14 | 2012-04-24 | Activbiotics Pharma Llc | análogos de rifamicina e seus usos |
PL2121920T3 (pl) | 2007-03-01 | 2012-01-31 | Symphogen As | Sposób klonowania pokrewnych przeciwciał |
EP2144628B1 (en) | 2007-05-08 | 2012-10-17 | Genentech, Inc. | Cysteine engineered anti-muc16 antibodies and antibody drug conjugates |
KR101622412B1 (ko) | 2007-10-19 | 2016-05-18 | 제넨테크, 인크. | 시스테인 조작된 항-tenb2 항체 및 항체 약물 접합체 |
WO2009140236A2 (en) | 2008-05-12 | 2009-11-19 | Strox Biopharmaceuticals, Llc | Staphylococcus aureus-specific antibody preparations |
EP2324041A4 (en) | 2008-08-13 | 2012-06-13 | Targanta Therapeutics Corp | PHOSPHONIZED RIFAMYCINS AND ITS APPLICATION FOR THE PREVENTION AND TREATMENT OF BONE AND JOINT INFECTIONS |
JP2012504660A (ja) | 2008-10-06 | 2012-02-23 | ユニバーシティ オブ シカゴ | 細菌eap、empおよび/またはadsaタンパク質に関連する組成物および方法 |
AR077756A1 (es) * | 2009-07-15 | 2011-09-21 | Genentech Inc | Anticuerpos especificos para bacterias gram-positivas |
CN103068406B (zh) | 2010-06-08 | 2017-06-30 | 基因泰克公司 | 半胱氨酸改造的抗体和偶联物 |
EP2678037B1 (en) | 2011-02-25 | 2014-12-03 | Lonza Ltd | Branched linker for protein drug conjugates |
WO2013168965A2 (ko) * | 2012-05-07 | 2013-11-14 | 목암생명공학연구소 | 포도상구균 감염 예방용 백신 조성물 |
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2020
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Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2006514636A (ja) * | 2002-12-02 | 2006-05-11 | バイオシネクサス インコーポレーテッド | 抗ブドウ球菌療法およびワクチンの標的としての壁テイコイン酸 |
WO2005081711A2 (en) * | 2003-11-06 | 2005-09-09 | Seattle Genetics, Inc. | Monomethylvaline compounds capable of conjugation to ligands |
JP2009505974A (ja) * | 2005-08-11 | 2009-02-12 | ターガンタ セラピュティクス,インコーポレイティド | ホスホン化リファマイシン類および骨と関節感染の予防と治療のためのその投与法 |
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