JP2013031454A - サブチラーゼ - Google Patents
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Abstract
【解決手段】本発明は、野生型バチルス株、特にバチルス株ZI344, EP655, P203, EP63, ZI120, ZI130, ZI1342 及び ZI140からの新規サブチラーゼ、及びそれらのプロテアーゼの構成及び生成方法に関する。さらに、本発明は、本発明のサブチラーゼの洗剤、例えば洗濯洗剤又は自動皿洗い洗剤への使用にも関する。
【選択図】なし
Description
本出願は次の配列を含む:
配列番号1−バチルスsp.株Zi344からのサブチラーゼをコードするDNA。核酸337−1143は成熟サブチラーゼをコードする。
配列番号2−バチルスsp.株Zi344からのサブチラーゼのアミノ酸配列。成熟サブチラーゼはアミノ酸113−381である。
配列番号4−バチルスsp.株EP655からのサブチラーゼのアミノ酸配列。成熟サブチラーゼはアミノ酸115−383である。
配列番号5−バチルスsp.株p203からのサブチラーゼをコードするDNA。核酸343−1149は成熟サブチラーゼをコードする。
配列番号7−27は、人工プライマーである。
配列番号28−バチルスsp. 株EP63からのサブチラーゼをコードする部分的DNA配列。
配列番号29−バチルスsp. 株EP63からのサブチラーゼの部分的アミノ酸配列。
配列番号30−バチルスsp. 株ZI120からのサブチラーゼをコードする部分的DNA配列。
配列番号32−バチルスsp. 株ZI130からのサブチラーゼをコードする部分的DNA配列。
配列番号33−バチルスsp. 株ZI130からのサブチラーゼの部分的アミノ酸配列。
配列番号34−バチルスsp. 株ZI132からのサブチラーゼをコードする部分的DNA配列。
配列番号35−バチルスsp. 株ZI132からのサブチラーゼの部分的アミノ酸配列。
配列番号36−バチルスsp. 株ZI340からのサブチラーゼをコードする部分的DNA配列。
配列番号37−バチルスsp. 株ZI340からのサブチラーゼの部分的アミノ酸配列。
配列番号29, 31, 33, 35及び37のアミノ酸配列は、C−末端が切断されている成熟サブチラーゼである。
p203として言及される野生型株は、寄託番号DSM17419として、the Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturenに、ブダペスト条件下で2005年6月27日に寄託された。その寄託所は、配列番号5と同一である、本明細書においてp203Aとして言及されるサブチラーゼ遺伝子を含む。
本発明は、バチルスの野生型株からの新規サブチラーゼ、及びそれらのプロテアーゼの構成及び生成方法に関する。さらに、本発明は、洗剤、例えば洗濯洗剤又は自動皿洗い洗剤への本発明のサブチラーゼの使用に関する。
酵素は、30年以上の間、洗浄配合物の一部として洗剤産業内で使用されて来た。プロテアーゼは、商業的観点から、そのような配合物における最も適切な酵素であるが、しかし他の酵素、例えばリパーゼ、アミラーゼ、セルラーゼ、ヘミセルラーゼ又は酵素の混合物もまた使用される。
本発明者は、好都合な性質、例えば低温での洗剤における改良された性能を有するスブチリシンファミリーのPD138様プロテアーゼサブファミリに属する新規プロテアーゼを単離した。
本発明をさらに詳細に論じる前、次の用語及び慣例がまず定義されるであろう。
用語“サブチラーゼ”とは、Siezen など., Protein Engng. 4 (1991) 719-737 及び Siezen など. Protein Science 6 (1997) 501-523によれば、セリンプロテアーゼのサブグループを意味する。セリンプロテアーゼ又はセリンペプチダーゼは、基質と共に供給アダクトを形成する、活性部位にセリンを有することにより特徴づけられるプロテアーゼのサブグループである。さらに、サブチラーゼ(及びセリンプロテアーゼ)は、セリンとは別の2種の活性部位アミノ酸残基、すなわちヒスチジン及びアスパラギン酸残基を有することにより特徴づけられる。サブチラーゼは、6種のサブグループ、すなわちスブチリシン(Subtilisin)ファミリー、サーミターゼ(Thermitase)ファミリー、プロテアーゼK(Proteinase K)ファミリー、ランチビオチック(Lantibiotic)ファミリー、ケキシン(Kexin)ファミリー及びピロリシン(Pyrolysin)ファミリーに分割され得る。
新規スブチリシンを生成する株の選択:
新規サブチラーゼを生成するバチルス株についての研究において、本発明者は、16S rDNA類似性に基づいて、バチルス・ギブソニに関連する多くの株を選択した。バチルス株P203, EP655, ZI344, EP63, ZI120, ZI130, ZI132 及び ZI140が、標準のバチルス発酵培地(BP-Xが、pH9に調節された0.1Mの炭酸水素ナトリウムに添加された)において発酵された。
上記のように新規免疫化学的性質を示すプロテアーゼをコードする遺伝子の一部が、利用できる配列から企画されたPCRプライマーとの標準PCR反応により増幅された;例1を参照のこと。
逆PCR:
逆PCRが、適切な細菌株から抽出された部分的プロテアーゼ遺伝子及び染色体DNAのPCR生成物から得られたDNA配列を補足するために企画された特異的DNAプライマーにより行われた。逆PCRが、P203, EP655及びZI344株に対して行われ、そして株EP63, ZI120, ZI130, ZI1342及びZI140はさらに調べられなかった。逆PCR生成物は、遺伝子のN及びC末端部分をコードする領域を得るために配列決定されたヌクレオチドであった。
サブチラーゼ遺伝子が、プラスミドpDG268NeoMCS-PramyQ/Prcrylll/crylllAstab/Sav(アメリカ特許第5,955,310号)のサビナーゼシグナルペプチドとの遺伝子融合を可能にするプライマーの5’末端に制限部位を有する特異的プライマーにより増幅された。プロテアーゼ陽性コロニーが選択され、そして発現構造体からの発現された酵素のコード配列がDNA配列分析により確かめられた。
本発明のサブチラーゼは、それぞれ配列番号2、配列番号4、配列番号6、配列番号29、配列番号31 、配列番号33、配列番号35又は配列番号37で示されるようなバチルス株ZI344, EP655, P203, EP63, ZI120, ZI130, ZI1342 and ZI140からのサブチラーゼを包含する。WO2003/054184号は、ZI344と約85.9%のアミノ酸配列同一性及びEP655及びP203と約87%のアミノ酸配列同一性を有するバチルス・ギブソニDSM14393からのアルカリプロテアーゼを開示する。さらに、バチルス・ギブソニDSM14393からのアルカリプロテアーゼは、それぞれ、ZI120及びZI130(配列番号31及び33)からのサブチラーゼの部分配列と88.2%の同一性;及びEP63, ZI132及びZI340(配列番号29, 35及び37)からのサブチラーゼの部分配列と88.1%, 86.8%及び83.8%の同一性を有する。
ヌクレオチドプローブと相同DNA又はRNA配列との間のハイブリダイゼーションを決定するための適切な実験条件は、5×SSC(塩化ナトリウム/クエン酸ナトリウム、Sambrookなど. 1989)におけるハイブリダイズするDNAフラグメント又はRNAを含むフィルターの10分間のプレソーキング、及び5×SSC、5×Denhardt’s溶液(Sambrookなど. 1989)、0.5%SDS及び100μg/mlの音波処理された変性サケ***DNA(Sambrookなど. 1989)の溶液における前記フィルターのプレハイブリダイゼーション、続いて、10ng/mlの濃度のランダム−感作された(Feinberg, A. P. and Vogelstein, B. (1983) Anal. Biochem. 132:6-13)、32P−dCTP−ラベルされた(比活性>1×109cpm/μg)プローブを含む同じ溶液における、約45℃で12時間のハイブリダイゼーションを包含する。種々の緊縮条件に関しては、次に、フィルターは、2×SSC、0.5%SDSにより、30分間2度、少なくとも55℃(低い緊縮性)、より好ましくは少なくとも60℃(中位の緊縮性)、さらにより好ましくは少なくとも65℃(中位/高い緊縮性)、さらにより好ましくは少なくとも70℃(高い緊縮性)及びさらにより好ましくは少なくとも75℃(非常に高い緊縮性)で洗浄された。
組合された修飾:
本発明はまた、そのアミノ酸配列に対するいずれか他の修飾と組合しての上記サブチラーゼ変異体のいずれかも包含する。特に、酵素に改良された性質を提供するためへの当業界において知られている他の修飾との組合わせが考えられる。
本発明の酵素を発現するためには、本発明の酵素をコードをする核酸配列を含んで成るベクターにより形質転換されるか又はトランスフェクトされた、上記に言及される宿主細胞が、典型的には、所望する分子の生成を可能にする条件下で適切な栄養培地において培養され、この後、それらは細胞、又は培養ブイヨンから回収される。
本発明の酵素は、添加され得、そして従って、洗剤組成物の成分を得る。
本発明の洗剤組成物は、手動又は機械用洗濯洗剤組成部物、例えば染色された布の前処理のために適切な選択用添加剤組成物、及びすすぎに添加される布用ソフトナー組成物として配合され得るか、又は一般的な家庭用硬質表面清浄操作への使用のための洗剤組成物として配合され得るか、又は手動又は機械用皿洗い操作、特に自動皿洗い(ADW)のために配合され得る。
適切なプロテアーゼは、動物、植物又は微生物起源のものを包含する。微生物起源が好ましい。化学的に修飾された、又はタンパク質構築された変異体が含まれる。プロテアーゼは、セリンプロテアーゼ又は金属プロテアーゼ、好ましくはアルカリ微生物プロテアーゼ又はトリプシン−様プロテアーゼであり得る。アルカリプロテアーゼの例は、スブチリシン、特にバチルスに由来するそれらのもの、例えばスブチリシンNovo、スブチリシンCarlsberg、スブチリシン309、スブチリシン147及びスブチリシン168(WO89/06279号に記載される)である。トリプシン−様プロテアーゼの例は、トリプシン(例えば、ブタ又はウシ起源のもの)、及びWO89/06270号及びWO94/25583号に記載されるフサリウムプロテアーゼである。
適切なリパーゼは、細菌又は菌類起源のそれらのものを包含する。化学的に修飾された又はタンパク質構築された変異体が包含される。有用なリパーゼの例は、ヒューミコラ(別名、サーモミセス)、例えばヨーロッパ特許第258068号及び第305216号に記載のようなヒューミコラ・ラウギノサ(T.ラウギノサ)、又はWO96/13580号に記載のようなヒューミコラ・インソレンス、プソイドモナスリパーゼ、例えばP.アルカリゲネス又はP.プソイドアルカリゲネス(ヨーロッパ特許第218272号)、P.セパシア(ヨーロッパ特許第331376号)、P.スツゼリ(P.stutzeri)(イギリス特許第1,372,034号)、P.フルオレセンス、プソイドモナスsp. SD705株(WO95/06720号及びWO96/27002号)、P.ウイスコンシネンシス(WO96/12012号)からのリパーゼ、バチルスリパーゼ、例えばB.スブチリス(Dartoisなど. (1993), Biochemica et Biophysica Acta, 1131, 253-360)、B. ステアロサーモフィラス(日本特許64/744992)又はB.プミラス(WO91/16422号)からのリパーゼを包含する。
好ましい市販のリパーゼ酵素は、LipolaseTM 及びLipolase UltraTM (Novozymes A/S) を包含する。
適切なアミラーゼ(α−及び/又はβ)は、細菌又は菌類起源のそれらのものを包含する。化学的に修飾された又はタンパク質構築された変異体が包含される。アミラーゼは、バチルス、例えばイギリス特許第1,296,839号により詳細に記載される、B.リケニルホルミスの特許株から得られるα−アミラーゼを包含する。
市販のアミラーゼは、Duramyl(商標), Termamayl(商標), Stainzyme(商標) ,Fungamyl(商標)及びBAN(商標)(Novozymes A/S), RapidaseTM ,PurastarTM 及びPurastar OxAmTM(Genencor International Inc.)である。
適切なセルラーゼは、細菌又は菌類起源のそれらのものを包含する。化学的に修飾された又はタンパク質構築された変異体が包含される。適切なセルラーゼは、バチルス、プソイドモナス、ヒューミコラ、フサリウム、チエラビア、アクレモニウム属からのセルラーゼ、例えばアメリカ特許第4,435,307号、アメリカ特許第5,648,263号、アメリカ特許第5,691,178号、アメリカ特許第5,776,757号及びWO89/09259号に開示されるヒューミコラ・インソレンス、マイセリオプソラ・サーモフィラ及びフサリウム・オキシスポラムから生成される菌類セルラーゼを包含する。
適切なペルオキシダーゼ/オキシダーゼは、植物、細菌又は菌類起源のそれらのものを包含する。化学的に修飾された又はタンパク質構築された変異体が包含される。有用なペルオキシダーゼの例は、コプリナス、例えばコプリナス・シネレウス、及びWO93/24618 号、WO95/10602号及びWO98/15257号に記載されるそれらのようなそれらの変異体からのペルオキシダーゼを包含する。
市販のペルオキシダーゼは、GuardzymeTM (Novozymes A/S) を包含する。
適切なヘミセルラーゼは、細菌又は菌類起源のそれらを包含する。化学的に修飾された又はタンパク質構築された変異体が包含される。適切なヘミセルラーゼは、WO95/35362号に記載されるように、マンナナーゼ、リケナーゼ、キシラナーゼ、アラビナーゼ、ガラクタナーゼ、アセチルキシランエステラーゼ、グルコルニダーゼ、フェルラ酸エステラーゼ、クマル酸エステラーゼ及びアラビノフラノシダーゼを包含する。適切なマンナナーゼは、WO99/64619号に記載される。
洗剤組成物は、非イオン性、例えば半−極性及び/又はアニオン性及び/又はカチオン性及び/又は両性イオンであり得る1又は複数の界面活性剤を含んで成る。界面活性剤は典型的には、0.1〜60重量%のレベルで存在する。
洗剤組成物においては、いずれかの酵素、特に本発明の酵素は、洗浄液体1L当たり0.01−100mgの酵素タンパク質、好ましくは洗浄液体1L当たり0.05−5mgの酵素タンパク質、特に洗浄液体1L当たり0.1−1mgの酵素タンパク質に対応する量で添加され得ることが、現在企画される。
自動皿洗いのための典型的な粉末洗剤組成物は、次の成分を包含する:
13)マンガン触媒をさらに含む、1)〜6)に記載されるような自動皿洗い組成物。前記マンガン触媒は、例えば“Efficient manganese catalysts for low-temporature bleaching”、Nature 369, 1994, pp.637-639に記載される化合物の1つであり得る。
サブチラーゼ変異体の生成方法:
本発明は、本発明の単離された酵素の生成方法を提供し、ここで前記酵素をコードするDNA配列により形質転換された適切な宿主細胞が前記酵素の生成を可能にする条件下で培養され、そして得られる酵素が培養物から、回収される。
形質転換された宿主細胞を培養するために使用される培地は、問題の宿主細胞を増殖するために適切ないずれかの従来の培地であり得る。発現されたサブチラーゼは便利には、培養培地中に分泌され得、そして良く知られている方法、例えば遠心分離又は濾過により培地から細胞を分離し、培地のタンパク質成分を、塩、例えば硫酸アンモニウムにより沈殿せしめ、続いてクロマトグラフィー方法、例えばイオン交換クロマトグラフィー、親和性クロマトグラフィー、等の方法により、前記分泌された培養物から回収され得る。
PD138グループの新規サブチラーゼを生成するバチルス株についての研究において、本発明者は、16S rDNA類似性に基づいて、バチルス・ギブソニに関連する多くの株を選択した。多くのそのようなバチルス株を、標準のバチルス発酵培地(BP-Xを0.1Mの炭酸水素ナトリウムに添加し、pHを9に調節した)において発酵した。
PD138AO(配列番号7)/PD138A2(配列番号9)は、約900ntのPCR生成物を付与した;
PD138A1(配列番号8)/PD138A2(配列番号9)は、約450ntのPCR生成物を付与した;
ZI344F(配列番号10)/PD138A2(配列番号9)は、約800ntのPCR生成物を付与した。
AGTTAGCAGATATAAATAATTCAA (配列番号8)、
GTGGAGTAGCCATAGATGTACCA (配列番号9)、
TGCAAACGAGGTTGAACAGG (配列番号10)。
PCR反応は、50U/mlのAmpli-TaqTM DNAポリメテーゼ(Perkin Elmer)、10X Amplitaq緩衝液(MgCl2の最終の濃度は1.5mMである)、0.2mMの個々のdNTP(dATP, dCTP, dTTP及びdGTP)、0.2pモル/μlの前記プライマー及び1μlのDNA鋳型を含んだ。
逆PCR:
菌類EP655, P203及びZI344の染色体DNAの3種の消化を、制限酵素Mlu1, EcoR1及びSac1を用いて行った。消化の後、DNAを、QiaquickTMPCR精製キット(art. 28106, Qiagen, Germany)を用いて、制限酵素から分離した。消化物を再連結し、そしてすでに得られているPCR生成物の配列を認識するよう企画されたプライマー(PCRプライマー配列番号11−16)を用いて、PCR反応にゆだねた。次のPCRプロトコールを適用した:94℃、2分、30サイクルの[94℃、15秒、52℃、30秒、72℃、2分]、72℃、20分。PCRにおいては、プライマー、DNAポリメラーゼ及び緩衝液の量は、例1におけるのと同じであった。
逆PCRプライマー:
P203A-PCR-R (配列番号11) ACACGAGTAATACCCCAAGG
P203A-PCR-F (配列番号12) GCTAATGCAATGGCAGTAGG
ZI344-PCR-R (配列番号13) ACTCTTTGAATGCCCCAAGG
ZI344-PCR-F (配列番号14) AGGTGTACTTGTTGTGGCAG
EP655-PCR-R (配列番号15) AGTAATACCCCAAGGCACCG
EP655-PCR-F (配列番号16) GCGGCTTCAGGTAATAACGG
P203A-seq-R (配列番号17) CAACTCAACTGATAATACGG
P203A-seq-F (配列番号18) TTCTCTCAATATGGTGCAGG
EP655-seq-R (配列番号19) AATGCATCAACATCTTCAGG
EP655-seq-F (配列番号20) GGATATCCTGCACGTTATGC
ZI344-seq-R (配列番号21) AGTGCTTCTACATCCTCAGG
ZI344-seq-F (配列番号22) AACGTTGGCTACCCTGCACG
菌株P203, EP655及びZI344のサブチラーゼを生成するために、プロテアーゼ遺伝子を、野生型株の染色体DNAから増幅した。P203に関しては、株DSM17419の染色体DNAを使用することができる。プロテアーゼ遺伝子を、約1200nt(ヌクレオチド)のPCR生成物として増幅した。P203プライマーに関しては、P203A-Sac1/P203A-BamH1、ZI344プライマーに関しては、ZI344-Sac1/ZI344-Mlu1、及びEP655プライマーに関しては、P203A-Sac1/EP655-MLu1を使用した。鋳型DNAは、それぞれの野生型バチルス株の染色体DNAであった。
P203A-Sac1 : TTATGGAGCTCCTAAAAATGAGGAGGCGACC (配列番号23)
P203A-BamH1 : TGTATGGATCCAAATAGAGACGAAACCGCCC (配列番号24)
EP655-MLU1 : GATTAACGCGTCTGCTCTTATCGACTAGCGG (配列番号25)
ZI344-Sac1 : TTATGGAGCTCGATCAATACAAGGAGGCGAC (配列番号26)
ZI344-MLU1 : GATTAACGCGTGTTCTTTTATCGTGTAGCTG (配列番号27)
EP655-Sac1 : P203A-Sac1を使用すること。
精製:
この方法は、バチルス宿主細胞における本発明のサブチラーゼの生成のための2L規模の発酵物の精製に関する。約1.6Lの発酵ブイヨンを、1Lのビーカーにおいて5000rpmで35分間、遠心分離した。上清液を、10%酢酸を用いて、pH6.5に調節し、そしてSeitz Supra(商標)S100フィルタープレート上で濾過した。
Sephadex(商標)G25カラムからのタンパク質分解活性を有する画分を組合し、そして0.01Mのジメチルグルタル酸、0.2Mの硼酸及び0.002Mの塩化カルシウムを含む、pH6.5に調節された緩衝液により平衡化された150mlのCM Sepharose(商標)CL 6Bカチオン交換カラム(5cmの直径)に適用した。
最終精製段階においては、CM Sepharose(商標)カラムからのサブチラーゼ含有画分を組合し、そしてGR81PP膜(Danish Supar Factories Incからの)を備えたAmicon(商標)限外濾過セルにおいて濃縮した。
本発明のサブチラーゼの安定性を、実験的に添加されたサブチラーゼ以外の他の酵素を有さない標準の西ヨーロッパ皿洗い錠剤洗剤において評価することができる。サブチラーゼの安定性を、洗剤におけるサブチラーゼのインキュベーションの後、残留タンパク質分解活性として決定できる。
タンパク質分解活性はカゼインで基質として決定される。1カゼインプロテアーゼ単位(CPU)は、標準条件、すなわち約25℃、pH9.5で約30分間のインキュベーション下で、1分当たり約1μMの一次アミノ基(セリン標準との比較により決定される)を生成するプロテアーゼの量として定義される。
このアッセイにおいては、洗剤の存在下でのプロテアーゼによる、変性された卵タンパク質の消化に続いて、96ウェルマイクロタイタープレートにプレートする。卵タンパク質の加熱は、眼に見える変化及び物理化学的性質の変化を生成する。半透明の材料が乳白色の物質の転換される。これは、一部、変性されたタンパク質のスルフヒドリル−ジスルフィド相互交換のためである。例えば、加熱は、オボアルブミンのスルフヒドリル基を暴露し、そしてその暴露された基がジスルフィド結合を形成する。プロテアーゼによる前記変性された卵タンパク質の消化は、卵タンパク質を変性する酵素の能力に依存して、乳白色の卵溶液を、より透明な溶液に転換する。
a)200mgの卵粉末(Sanovo International AS)を、93.7mlの水(16°dHに硬度を調節する)に溶解することにより、卵溶液を調製する。その卵溶液を、温度を85℃に8分間にわたって高めることにより変性する。
b)サブチラーゼ酵素を、琥珀酸緩衝液(10mMの琥珀酸+2mMのCaCl2+0.02%の非イオン性界面活性剤(例えば、Brij35)(pH6.5に調節されている)において320nMに希釈する。
分光計上ですぐに(時間0分)、OD410nmを測定する。55℃で正確に20分間インキュベートし、そして次にOD410nmを再び測定する。ΔODを計算し、そして対照サブチラーゼ、例えばNovozyme A/SからのSavinase(商標)又はAlcalase(商標)の性能と変異体とを比較する。対照の性能を、ΔOD=100%に設定する。
Claims (16)
- a)配列番号2、配列番号4、配列番号6、配列番号29、配列番号31 、配列番号33、配列番号35又は配列番号37で示され;
b)配列番号2、配列番号4、配列番号6、配列番号29、配列番号31 、配列番号33、配列番号35又は配列番号37の配列と少なくとも90%同一であるか;又は
c)寄託されたDSM17419に含まれるヌクレオチド配列によりコードされるアミノ酸配列を有する、サブチラーゼ活性を有する単離されたポリペプチド。 - a)配列番号1、配列番号3、配列番号5、配列番号28、配列番号30、配列番号32、配列番号34又は配列番号36と少なくとも81%同一である核酸配列によりコードされるポリペプチド;又は
b)配列番号1、配列番号3、配列番号5、配列番号28、配列番号30、配列番号32、配列番号34又は配列番号36の核酸配列又はその相補的鎖と、中位い/高い緊縮条件下でハイブリダイズすることができる核酸配列によりコードされるポリペプチドから成る群から選択された、サブチラーゼ活性を有する単離されたポリペプチド。 - a)配列番号1、配列番号3、配列番号5、配列番号28、配列番号30、配列番号32、配列番号34又は配列番号36で示され;
b)配列番号1、配列番号3、配列番号5、配列番号28、配列番号30、配列番号32、配列番号34又は配列番号36で示される配列と少なくとも81%同一であるか;又は
c)寄託された株DSM17419に含まれる、サブチラーゼ活性を有するポリペプチドをコードする核酸配列。 - 適切な発現宿主において前記ポリペプチドの発現を指図できる1又は複数の制御配列に操作可能的に結合される請求項3記載の核酸配列を含んで成る核酸構造体。
- 請求項4記載の核酸構造体、プロモーター、及び転写及び翻訳停止シグナルを含んで成る組換え発現ベクター。
- 選択マーカーをさらに含んで成る請求項5記載のベクター。
- 請求項4記載の核酸構造体を含んで成る組換え宿主細胞。
- 前記核酸構造体がベクター上に含まれる請求項7記載の細胞。
- 前記核酸構造体が、前記宿主細胞ゲノム中に組込まれる請求項8記載の細胞。
- 前記核酸配列が、配列番号2、配列番号4、配列番号6、配列番号29、配列番号31 、配列番号33、配列番号35又は配列番号37で示されるアミノ酸配列をコードする請求項9記載の細胞。
- 前記核酸配列が、配列番号1、配列番号3、配列番号5、配列番号28、配列番号30、配列番号32、配列番号34又は配列番号36で示される請求項10記載の細胞。
- 請求項1記載のポリペプチドの生成方法であって、(a)前記ポリペプチドを含んで成る上清液を生成するためにバチルス株を培養し;そして(b)前記ポリペプチドを回収することを含んで成る方法。
- 請求項1記載のポリペプチドの生成方法であって、(a)前記ポリペプチドをコードする核酸配列を含んで成る核酸構造体を含んで成る宿主細胞を、前記ポリペプチドの発現の助けとなる条件下で培養し;そして(b)前記ポリペプチドを回収することを含んで成る方法。
- 請求項1記載のサブチラーゼ活性を有するポリペプチドの洗剤への使用。
- 請求項1記載のサブチラーゼ活性を有するポリペプチドを含んで成る洗剤組成物。
- 洗濯洗剤又は自動皿洗い洗剤である請求項15記載の洗剤組成物。
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Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
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GB1590432A (en) | 1976-07-07 | 1981-06-03 | Novo Industri As | Process for the production of an enzyme granulate and the enzyme granuate thus produced |
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EG18543A (en) | 1986-02-20 | 1993-07-30 | Albright & Wilson | Protected enzyme systems |
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NZ221627A (en) | 1986-09-09 | 1993-04-28 | Genencor Inc | Preparation of enzymes, modifications, catalytic triads to alter ratios or transesterification/hydrolysis ratios |
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US5776757A (en) | 1988-03-24 | 1998-07-07 | Novo Nordisk A/S | Fungal cellulase composition containing alkaline CMC-endoglucanase and essentially no cellobiohydrolase and method of making thereof |
GB8915658D0 (en) | 1989-07-07 | 1989-08-23 | Unilever Plc | Enzymes,their production and use |
DE4111321A1 (de) | 1990-04-14 | 1991-10-17 | Kali Chemie Ag | Alkalische bacillus-lipasen, hierfuer codierende dna-sequenzen sowie bacilli, die diese lipasen produzieren |
CA2082279C (en) | 1990-05-09 | 2007-09-04 | Grethe Rasmussen | Cellulase preparation comprising an endoglucanase enzyme |
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KR100294361B1 (ko) | 1992-07-23 | 2001-09-17 | 피아 스타르 | 돌연변이체알파-아밀라제,세정제,접시세척제,및액화제 |
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ATE287946T1 (de) | 1993-04-27 | 2005-02-15 | Genencor Int | Neuartige lipasevarianten zur verwendung in reinigungsmitteln |
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JP2859520B2 (ja) | 1993-08-30 | 1999-02-17 | ノボ ノルディスク アクティーゼルスカブ | リパーゼ及びそれを生産する微生物及びリパーゼ製造方法及びリパーゼ含有洗剤組成物 |
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JPH07143883A (ja) | 1993-11-24 | 1995-06-06 | Showa Denko Kk | リパーゼ遺伝子及び変異体リパーゼ |
KR970701264A (ko) | 1994-02-22 | 1997-03-17 | 안네 제케르 | 지질분해효소의 변이체 제조방법(a method of preparing a viriant of a lipolytic enzyme) |
EP1632557B1 (en) | 1994-03-08 | 2011-02-23 | Novozymes A/S | Novel alkaline cellulases |
DE69528524T2 (de) | 1994-05-04 | 2003-06-26 | Genencor International, Inc. | Lipasen mit verbesserten tensiostabilitaet |
WO1995035362A1 (en) | 1994-06-17 | 1995-12-28 | Genencor International Inc. | Cleaning compositions containing plant cell wall degrading enzymes and their use in cleaning methods |
AU2884595A (en) | 1994-06-20 | 1996-01-15 | Unilever Plc | Modified pseudomonas lipases and their use |
AU2884695A (en) | 1994-06-23 | 1996-01-19 | Unilever Plc | Modified pseudomonas lipases and their use |
DE69535733T2 (de) | 1994-10-06 | 2009-04-23 | Novozymes A/S | Ein enzympräparat mit endoglucanase aktivität |
BE1008998A3 (fr) | 1994-10-14 | 1996-10-01 | Solvay | Lipase, microorganisme la produisant, procede de preparation de cette lipase et utilisations de celle-ci. |
JPH10507642A (ja) | 1994-10-26 | 1998-07-28 | ノボ ノルディスク アクティーゼルスカブ | 脂肪分解活性を有する酵素 |
AR000862A1 (es) | 1995-02-03 | 1997-08-06 | Novozymes As | Variantes de una ó-amilasa madre, un metodo para producir la misma, una estructura de adn y un vector de expresion, una celula transformada por dichaestructura de adn y vector, un aditivo para detergente, composicion detergente, una composicion para lavado de ropa y una composicion para la eliminacion del |
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US6642011B2 (en) * | 1998-04-15 | 2003-11-04 | Genencor International, Inc. | Human protease and use of such protease for pharmaceutical applications and for reducing the allergenicity of non-human proteins |
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