JP2012504129A - C型肝炎ウイルス阻害剤 - Google Patents
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Abstract
Description
本出願は、2008年9月29日に出願された米国仮特許出願第61/100,901号の利益を主張する。
nおよびn'は、各々独立して、0、1、2または3であり;
R1は、ヒドロキシまたは-NHSO2R6から選択され;
R2は、水素、アルケニル、アルキル、またはシクロアルキルから選択され、ここで、該アルケニル、該アルキル、および該シクロアルキルは各々、1、2、3、もしくは4個のハロ基で適宜置換されており;
R3は、水素、アルコキシ、アルキルスルファニル、アルキルスルホニル、アルキルスルホキシル、またはヒドロキシから選択され;
各R4およびR4'は、独立して、アルコキシ、アルキル、シアノ、ハロ、ハロアルコキシ、ハロアルキル、ヒドロキシ、または-NRaRbから選択され;
R5は、水素、アルケニル、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、(シクロアルキル)アルキル、ヘテロシクリル、またはヘテロシクリルアルキルから選択され;ここで、該アルキルおよびシクロアルキルは、各々、アルコキシ、ハロアルコキシ、ハロ、ハロアルキル、シアノ、もしくはジアルキルアミノから選択される1個の基で適宜置換されており;
R6は、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、(シクロアルキル)アルキル、ヘテロシクリル、または-NRaRbから選択され;ここで、該アルキルおよびシクロアルキルは、各々、アルキル、アルコキシ、ハロ、ハロアルキル、シアノ、シアノアルキル、もしくはハロアルコキシから選択される1個の基で適宜置換されており;
RaおよびRbは、独立して、水素、アルコキシ、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、(シクロアルキル)アルキル、ハロアルキル、ヘテロシクリル、またはヘテロシクリルアルキルから選択され;
Qは、C4-8飽和もしくは不飽和鎖であり、ここで、該鎖は、アルキル、ハロ、もしくはハロアルキルから独立して選択される1、2、3、もしくは4個の基で適宜置換されており、ここで、該アルキルおよびハロアルキル基は、それらが結合している炭素原子とともに、3-7員環を適宜形成することができ;そして、
Zは、O、CH2、またはNRz(ここで、Rzは水素またはアルキルから選択される)から選択される]
の化合物または医薬的に許容されるその塩を提供する。
(式中、
R1は-NHSO2R6であり;
R2はアルケニル、2個のハロ基で置換されたアルキル、または無置換シクロアルキルから選択され;そして、
R5はアルキルである)
の化合物もしくは医薬的に許容されるその塩を提供する。
[式中、
nおよびn'は各々、0または1であり;
R1は-NHSO2R6であり;ここでR6はシクロアルキルであり;
R2はアルケニル、2個のハロ基で置換されたアルキル、または無置換シクロアルキルから選択され;
R3はアルコキシであり;
R5はアルキルであり;
QはC4-7飽和無置換鎖であり;そして、
ZはOである]
の化合物もしくは医薬的に許容されるその塩を提供する。
表1
2,5-ジオキソピロリジン-1-イル 2-(トリメチルシリル)エチル カーボネート(11.73 g, 45.2 mmol)を、アセトニトリル(240 mL)中の(2S,4R)-メチル 4-ヒドロキシピロリジン-2-カルボキシレート, HCl塩(9.86 g, 54.3 mmol)およびトリエチルアミン(18.9 mL, 136 mmol)の溶液に加え、室温で終夜撹拌した。該反応液を水およびエーテルでクエンチした。有機層を、1.0M HCl(2x)、次いで食塩水で洗浄した。その後、それをMgSO4で乾燥させ、濾過し、エバポレートして、該生成物を得た。 1H NMR (500 MHz, クロロホルム-d) δ ppm 0.05 (s, 9 H) 0.95 (t, J=8.70 Hz, 1 H) 0.98 - 1.13 (m, 1 H) 1.83 (d, J=16.79 Hz, 1 H) 2.11 (ddd, J=13.20, 7.86, 4.88 Hz, 1 H) 2.20 - 2.39 (m, 1 H) 3.58 - 3.71 (m, 1 H) 3.75 (d, J=11.60 Hz, 3 H) 4.08 - 4.27 (m, 2 H) 4.41 - 4.60 (m, 2 H).
オキサリルクロリド(8.9 ml, 93 mmol)を、ジメチルスルホキシド(13.2 ml, 186 mmol)/DCM(180 ml)溶液に-78℃にて滴下した。得られた溶液を、該温度で30分間撹拌した。(2S,4R)-2-メチル 1-(2-(トリメチルシリル)エチル) 4-ヒドロキシピロリジン-1,2-ジカルボキシレート(12.25 g, 42.3 mmol)/DCM(30 mL)溶液を、-78℃にて加えた。得られたスラリーを-78℃で1時間撹拌した後、トリエチルアミン(29.5 ml, 212 mmol)を滴下した。この溶液を室温で30分撹拌し、次いで、1M HClおよび食塩水で洗浄し、MgSO4で乾燥させ、濾過し、エバポレートした。残った薄茶色の油状物を、Biotage(0-33% EtOAc/ヘキサン)でのフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、(S)-2-メチル 1-(2-(トリメチルシリル)エチル) 4-オキソピロリジン-1,2-ジカルボキシレート(中間体2, 9.5 g, 78%収率)をオレンジ色の油状物として得た。 1H NMR (500 MHz, クロロホルム-d) δ ppm -0.04 - 0.12 (m, 9 H) 0.91 - 1.09 (m, 2 H) 2.61 (dd, J=18.77, 2.59 Hz, 1 H) 2.87 - 3.04 (m, 1 H) 3.77 (s, 3 H) 3.92 (br. s., 2 H) 4.19 - 4.26 (m, 2 H) 4.86 (d, J=10.07 Hz, 1 H).
削り状マグネシウム(0.110 g, 4.58 mmol)を、窒素下において30分間、丸底フラスコ中で撹拌して、該マグネシウムの表面をスクラッチした。10mLのTHFを該削り状マグネシウムに加え、さらに30分間撹拌した。4'-ブロモ-2-ビニルビフェニル(中間体1, 1.13 g, 4.36 mmol)/THF(30 mL)を、還流にて、激しく撹拌しながら、滴下した。グリニャール溶液(Grignard solution)(40mL)を、(S)-2-メチル 1-(2-(トリメチルシリル)エチル) 4-オキソピロリジン-1,2-ジカルボキシレート(中間体2, 1.0 g, 3.53 mmol)/トルエン(30 mL)溶液に0℃にて加え、1時間撹拌した後、飽和NH4Cl溶液でクエンチした。水層をDCMで抽出した。有機物を合わせて、食塩水で洗浄し、MgSO4で乾燥させ、濾過し、エバポレートして粗物質を得た。該粗物質をBiotage(20-33% EtOAc:ヘキサン)でのフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、(2S,4R)-2-メチル 1-(2-(トリメチルシリル)エチル) 4-ヒドロキシ-4-(2'-ビニルビフェニル-4-イル)ピロリジン-1,2-ジカルボキシレート(0.5 g, 30%収率)を黄色の油状物として得た。LCMS: 保持時間 = 1.92分. [M+Na]+ = 490; Phenomenex-Luna C-18 (5μ) (3.0x50mm); 溶媒A = 10%アセトニトリル-90%水-0.1%TFA, 溶媒B = 90%アセトニトリル-10%水-0.1%TFA; グラジエント 2分かけて0%〜100%溶媒B、次いで1分間ホールド; 4mL/分; 注入量 = 5μL; 波長 = 220. 1H NMR (500 MHz, クロロホルム-d) δ ppm 0.06 (s, 9 H) 0.88 - 1.14 (m, 2 H) 2.38 - 2.50 (m, 1 H) 2.74 (dd, J=13.58, 10.22 Hz, 1 H) 3.89 (d, J=11.60 Hz, 2 H) 3.76 - 3.84 (m, 1 H) 3.86 (s, 3 H) 4.00 (dd, 1 H) 4.23 (s, 1 H) 4.24 - 4.28 (m, 1 H) 4.55 - 4.66 (m, 1 H) 5.20 (dd, J=10.99, 1.22 Hz, 1 H) 5.71 (dd, J=17.55, 1.07 Hz, 1 H) 6.70 (dd, J=17.40, 10.99 Hz, 1 H) 7.28 (dd, 1 H) 7.34 (dd, J=7.17, 1.68 Hz, 1 H) 7.37 (d, J=8.55 Hz, 2 H) 7.54 (d, J=8.24 Hz, 2 H) 7.65 (d, J=7.32 Hz, 1 H).
水素化ナトリウム(60%/油)(0.08 g, 1.925 mmol)を、DMF中の(2S,4R)-2-メチル 1-(2-(トリメチルシリル)エチル) 4-ヒドロキシ-4-(2'-ビニルビフェニル-4-イル)ピロリジン-1,2-ジカルボキシレート(0.5 g, 1.069 mmol)およびヨウ化メチル(0.12 mL, 1.925 mmol)の溶液(0℃)に加えた。これを0℃で3時間撹拌した。その後、該反応液を飽和NH4Cl溶液およびエーテルでクエンチした。エーテル層を食塩水で洗浄し、MgSO4で乾燥させ、濾過し、エバポレートして粗物質を得た。該粗物質をBiotage(20-40% EtOAc/ヘキサン)でのフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、(2S,4R)-2-メチル 1-(2-(トリメチルシリル)エチル) 4-メトキシ-4-(2'-ビニルビフェニル-4-イル)ピロリジン-1,2-ジカルボキシレート(160 mg, 31%収率)を澄明な油状物として得た。 LCMS: 保持時間 = 2.11分. [M+Na]+ = 504; Phenomenex-Luna C-18 (5μ) (3.0x50mm); 溶媒A = 10%アセトニトリル-90%水-0.1%TFA, 溶媒B = 90%アセトニトリル-10%水-0.1%TFA; グラジエント 2分かけて0%〜100%溶媒B、次いで1分間ホールド; 4mL/分; 注入量 = 5μL; 波長 = 220. 1H NMR (500 MHz, クロロホルム-d) δ ppm -0.04 - 0.13 (m, 9 H) 0.95 - 1.02 (m, 1 H) 1.03 - 1.08 (m, 1 H) 2.55 (dd, J=13.12, 8.85 Hz, 1 H) 2.76 - 2.89 (m, 1 H) 3.00 (s, 3 H) 3.68 - 3.77 (m, 1 H) 3.78 (s, 3 H) 3.96 - 4.09 (m, 1 H) 4.20 - 4.31 (m, 2 H) 4.64 (dd, J=8.70, 1.98 Hz, 1 H) 5.22 (d, J=11.90 Hz, 1 H) 5.72 (d, J=17.40 Hz, 1 H) 6.69 (ddd, J=17.40, 10.99, 2.44 Hz, 1 H) 7.29 (d, J=7.32 Hz, 1 H) 7.32 - 7.45 (m, 6 H) 7.66 (d, J=7.32 Hz, 1 H).
テトラブチルアンモニウムフルオリド(0.830 mL, 0.830 mmol)を、(2S,4R)-2-メチル 1-(2-(トリメチルシリル)エチル) 4-メトキシ-4-(2'-ビニルビフェニル-4-イル)ピロリジン-1,2-ジカルボキシレート(100 mg, 0.208 mmol)/THF(2 mL)溶液に室温で加え、該温度で終夜撹拌した。該反応液をEtOAcで希釈し、水、次いで食塩水で洗浄した。有機層を集め、MgSO4で乾燥させ、濾過し、エバポレートし、(2S,4R)-メチル 4-メトキシ-4-(2'-ビニルビフェニル-4-イル)ピロリジン-2-カルボキシレート(中間体3, 630 mg, 100%収率)を得て、それを精製せずに次の工程でそのまま用いた。 LCMS: 保持時間 = 1.14分. [M+Na]+ = 360; Phenomenex-Luna C-18 (5μ) (3.0x50mm); 溶媒A = 10%アセトニトリル-90%水-0.1%TFA, 溶媒B = 90%アセトニトリル-10%水-0.1%TFA; グラジエント 2分かけて0%〜100%溶媒B、次いで1分間ホールド; 4mL/分; 注入量 = 5μL; 波長 = 220. 1H NMR (500 MHz, クロロホルム-d) δ ppm 2.51 (dd, J=13.58, 9.61 Hz, 1 H) 2.71 (dt, J=13.73, 2.44 Hz, 1 H) 2.99 (s, 3 H) 3.09 (d, J=12.21 Hz, 1 H) 3.30 - 3.43 (m, 1 H) 3.56 (dd, J=12.21, 2.14 Hz, 1 H) 3.81 (s, 3 H) 3.97 (dd, J=9.77, 2.75 Hz, 1 H) 5.21 (dd, J=10.99, 1.22 Hz, 1 H) 5.72 (dd, J=17.70, 1.22 Hz, 1 H) 6.71 (dd, J=17.70, 10.99 Hz, 1 H) 7.27 - 7.31 (m, 1 H) 7.33 - 7.42 (m, 6 H) 7.60 - 7.72 (m, 1 H).
HATU(139 mg, 0.365 mmol)を、DCM(5 mL)中の(S)-2-((ヘキサ-5-エニルオキシ)カルボニルアミノ)-3,3-ジメチルブタン酸(128 mg, 0.498 mmol)、DIEA(0.174 mL, 0.996 mmol)および(2S,4R)-メチル 4-メトキシ-4-(2'-ビニルビフェニル-4-イル)ピロリジン-2-カルボキシレート(112 mg, 0.332 mmol)の溶液に加えた。該反応液を室温で終夜撹拌した。該反応液をエバポレートし、Biotage(10-40% EtOAc/ヘキサン)で精製して、(2S,4R)-メチル 1-((S)-2-((ヘキサ-5-エニルオキシ)カルボニルアミノ)-3,3-ジメチルブタノイル)-4-メトキシ-4-(2'-ビニルビフェニル-4-イル)ピロリジン-2-カルボキシレート(151 mg, 79%収率)を澄明な油状物として得た。 LCMS: 保持時間 = 2.05分. [M+Na]+ = 599; Phenomenex-Luna C-18 (5μ) (3.0x50mm); 溶媒A = 10%アセトニトリル-90%水-0.1%TFA, 溶媒B = 90%アセトニトリル-10%水-0.1%TFA; グラジエント 2分かけて0%〜100%溶媒B、次いで1分間ホールド; 4mL/分; 注入量 = 5μL; 波長 = 220.
(2S,4R)-メチル 1-((S)-2-((ヘキサ-5-エニルオキシ)カルボニルアミノ)-3,3-ジメチルブタノイル)-4-メトキシ-4-(2'-ビニルビフェニル-4-イル)ピロリジン-2-カルボキシレート(151 mg, 0.262 mmol)をDCE(26 mL)中に溶解させ、窒素ガスで15分間バブリングした。ホベイダ-グラブス(Hoveyda-Grubbs)触媒(16 mg, 0.026 mmol)を加え、油浴中において80℃で2時間加熱した後、ロータリーエバポレーターで濃縮した。該粗生成物をBiotage(10-50% EtOAc/ヘキサン)で精製して、生成物(121 mg, 84%収率)を白色の泡状物質として得た。 LCMS: 保持時間 = 1.91分. [M+Na]+ = 571; Phenomenex-Luna C-18 (5μ) (3.0x50mm); 溶媒A = 10%アセトニトリル-90%水-0.1%TFA, 溶媒B = 90%アセトニトリル-10%水-0.1%TFA; グラジエント 2分かけて0%〜100%溶媒B、次いで1分間ホールド; 4mL/分; 注入量 = 5μL; 波長 = 220.
2.0M 水酸化リチウム(0.33 mL, 0.662 mmol)をTHF(2 mL)およびメタノール(2 mL)中の工程2からの生成物(121 mg, 0.221 mmol)の溶液に室温で加え、終夜撹拌した。該反応液をジエチルエーテルで希釈し、1M HCl、および食塩水で洗浄した。有機層を集め、MgSO4で乾燥させ、濾過し、エバポレートして粗生成物を得た。 LCMS: 保持時間 = 1.69分. [M+Na]+ = 557; Phenomenex-Luna C-18 (5μ) (3.0x50mm); 溶媒A = 10%アセトニトリル-90%水-0.1%TFA, 溶媒B = 90%アセトニトリル-10%水-0.1%TFA; グラジエント 2分かけて0%〜100%溶媒B、次いで1分間ホールド; 4mL/分; 注入量 = 5μL; 波長 = 220.
10%パラジウム炭素(25 mg, 0.023 mmol)を、工程3からの生成物(124 mg, 0.232 mmol)/EtOAc(3 mL)に加え、水素雰囲気下において終夜撹拌した。該反応液を、Milliporeマイレクス-HV 0.45μmフィルターを通して濾過し、エバポレートして、中間体4(121 mg, 97%収率)を得た。 LCMS: 保持時間 = 1.68分. [M+Na]+ = 559; Phenomenex-Luna C-18 (5μ) (3.0x50mm); 溶媒A = 10%アセトニトリル-90%水-0.1%TFA, 溶媒B = 90%アセトニトリル-10%水-0.1%TFA; グラジエント 2分かけて0%〜100%溶媒B、次いで1分間ホールド; 4mL/分; 注入量 = 5μL; 波長 = 220.
4-ブロモ-2-メチルビフェニル(5 g, 20.23 mmol)を、ピリジン(23 mL)および水(35 mL)中において懸濁させた。過マンガン酸カリウム(16 g, 101 mmol)を、20分間かけて、数回に分けて加えた。該混合液を終夜還流した。該反応混合液を冷却し、MnO2を濾過して除いた。生成物が析出するまで、該濾液に濃HClを加えた。該生成物をDCMで抽出し、水および食塩水で洗浄し、集め、乾燥させ(MgSO4)、濾過し、エバポレートして、4-ブロモビフェニル-2-カルボン酸(5g, 18.04 mmol, 89%収率)を白色の固形物として得た。 LCMS: 保持時間 = 1.39分.; Phenomenex-Luna C-18 (5μ) (3.0x50mm); 溶媒A = 10%アセトニトリル-90%水-0.1%TFA, 溶媒B = 90%アセトニトリル-10%水-0.1%TFA; グラジエント 2分かけて0%〜100%溶媒B、次いで1分間ホールド; 4mL/分; 注入量 = 5μL; 波長 = 220.
4-ブロモビフェニル-2-カルボン酸(5.71 g, 20.61 mmol)をTHF(50 mL)に溶解させ、0℃に冷却した。1.0M ボランテトラヒドロフラン錯体(41.2 mL, 41.2 mmol)を15分かけて滴下し、終夜、室温まで昇温させた。該反応液をEtOAcで希釈し、水、飽和塩化アンモニウム、次いで食塩水で洗浄した。有機層を集め、MgSO4で乾燥させ、濾過し、エバポレートして、粗生成物を得た。該粗生成物を、Biotage(5-35% EtOAc:ヘキサン)でのフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、(4-ブロモビフェニル-2-イル)メタノール(3.5 g, 13.30 mmol, 65%収率)を薄オレンジ色の油状物として得た。 LCMS: 保持時間 = 1.43分.; Phenomenex-Luna C-18 (5μ) (3.0x50mm); 溶媒A = 10%アセトニトリル-90%水-0.1%TFA, 溶媒B = 90%アセトニトリル-10%水-0.1%TFA; グラジエント 2分かけて0%〜100%溶媒B、次いで1分間ホールド; 4mL/分; 注入量 = 5μL; 波長 = 220. 1H NMR (400 MHz, クロロホルム-d) δ ppm 4.60 (d, J=5.77 Hz, 2 H) 7.15 (d, J=8.28 Hz, 1 H) 7.29 - 7.35 (m, 2 H) 7.36 - 7.46 (m, 3 H) 7.48 (dd, J=8.28, 2.01 Hz, 1 H) 7.75 (d, J=2.01 Hz, 1 H).
IBX(7.45 g, 26.6 mmol)を(4-ブロモビフェニル-2-イル)メタノール(3.5 g, 13.30 mmol)/dmso(40 mL)に加え、60℃で2時間撹拌した。該反応液を氷浴中で冷却し、水およびジエチルエーテルで希釈した。エーテル層を食塩水で洗浄し、MgSO4で乾燥させ、濾過し、エバポレートして、4-ブロモビフェニル-2-カルバルデヒド(3.32 g, 12.71 mmol, 96%収率)をオレンジ色の油状物として得た。 LCMS: 保持時間 = 1.66分.; Phenomenex-Luna C-18 (5μ) (3.0x50mm); 溶媒A = 10%アセトニトリル-90%水-0.1%TFA, 溶媒B = 90%アセトニトリル-10%水-0.1%TFA; グラジエント 2分かけて0%〜100%溶媒B、次いで1分間ホールド; 4mL/分; 注入量 = 5μL; 波長 = 220. 1H NMR (400 MHz, クロロホルム-d) δ ppm 7.29 - 7.39 (m, 3 H) 7.43 - 7.58 (m, 3 H) 7.76 (dd, J=8.16, 2.13 Hz, 1 H) 8.15 (d, J=2.01 Hz, 1 H) 9.91 (s, 1 H).
水素化ナトリウム(2.034 g, 50.9 mmol)を、メチルトリフェニルホスホニウムブロミド(9.1 g, 25.4 mmol)/THF(60 mL)溶液に加えた。該混合液を0℃で1時間撹拌した。4-ブロモビフェニル-2-カルバルデヒド(3.32 g, 12.71 mmol)/THF(60 mL)溶液を0℃にて滴下した。該混合液を、0℃から室温まで、終夜撹拌した。該反応液を濾過し、エバポレートした。残渣をジエチルエーテルで希釈し、水、次いで食塩水で洗浄した。エーテル層を乾燥させ(MgSO4)、濾過し、エバポレートして、粗物質を得た。該生成物を、Biotage(100%ヘキサン)でのフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、4-ブロモ-2-ビニルビフェニル(中間体7, 2.5 g, 9.65 mmol, 76%収率)を薄オレンジ色の液状物として得た。 1H NMR (500 MHz, クロロホルム-d) δ ppm 5.24 (d, J=11.90 Hz, 1 H) 5.71 (d, J=17.40 Hz, 1 H) 6.64 (dd, J=17.40, 10.99 Hz, 1 H) 7.17 (d, J=8.24 Hz, 1 H) 7.29 - 7.34 (m, 2 H) 7.34 - 7.39 (m, 1 H) 7.42 (d, J=7.63 Hz, 2 H) 7.45 (dd, J=8.09, 1.98 Hz, 1 H) 7.77 (d, J=1.83 Hz, 1 H).
1当量の削り状マグネシウム/THFとともに中間体7を還流することによって製造された、(2-ビニルビフェニル-4-イル)マグネシウムブロミド(2.66 g, 9.38 mmol)溶液を、(S)-2-メチル 1-(2-(トリメチルシリル)エチル) 4-オキソピロリジン-1,2-ジカルボキシレート(2.7 g, 9.38 mmol)/トルエン(75 mL)溶液に0℃にて加え、1時間撹拌した後、飽和NH4Cl溶液を用いてクエンチした。水層をDCMで抽出し、有機物を合わせて乾燥させ、濾過し、エバポレートして、粗物質を得た。該粗物質を、Biotage(20-33% EtOAc:ヘキサン)でのフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、(2S,4R)-2-メチル 1-(2-(トリメチルシリル)エチル) 4-ヒドロキシ-4-(2-ビニルビフェニル-4-イル)ピロリジン-1,2-ジカルボキシレート(800 mg, 1.711 mmol, 18%収率)を得た。 LCMS: 保持時間 = 1.85分. [M+Na]+ = 490; Phenomenex-Luna C-18 (5μ) (3.0x50mm); 溶媒A = 10%アセトニトリル-90%水-0.1%TFA, 溶媒B = 90%アセトニトリル-10%水-0.1%TFA; グラジエント 2分かけて0%〜100%溶媒B、次いで1分間ホールド; 4mL/分; 注入量 = 5μL; 波長 = 220.
NaH(60%/油)(0.239 g, 5.97 mmol)を、DMF中の(2S,4R)-2-メチル 1-(2-(トリメチルシリル)エチル) 4-ヒドロキシ-4-(2-ビニルビフェニル-4-イル)ピロリジン-1,2-ジカルボキシレート(1.55 g, 3.31 mmol)とヨウ化メチル(0.373 mL, 5.97 mmol)の溶液(0℃)に加え、この温度で3時間撹拌した。次いで、該反応液を飽和NH4Cl溶液およびエーテルを用いてクエンチした。エーテル層を食塩水で洗浄し、乾燥させ、濾過し、エバポレートして、粗物質を得た。該粗物質を、Biotage(20-40% EtOAc/ヘキサン)でのフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、(2S,4R)-2-メチル 1-(2-(トリメチルシリル)エチル) 4-メトキシ-4-(2-ビニルビフェニル-4-イル)ピロリジン-1,2-ジカルボキシレート(0.5 g, 1.038 mmol, 31%収率)を澄明な油状物として得た。 LCMS: 保持時間 = 2.11分. [M+Na]+ = 504; Phenomenex-Luna C-18 (5μ) (3.0x50mm); 溶媒A = 10%アセトニトリル-90%水-0.1%TFA, 溶媒B = 90%アセトニトリル-10%水-0.1%TFA; グラジエント 2分かけて0%〜100%溶媒B、次いで1分間ホールド; 4mL/分; 注入量 = 5μL; 波長 = 220.
TBAF(1.0M/THF, 4.1 mL, 4.1 mmol)を、(2S,4R)-2-メチル 1-(2-(トリメチルシリル)エチル) 4-メトキシ-4-(2-ビニルビフェニル-4-イル)ピロリジン-1,2-ジカルボキシレート(500 mg, 1.038 mmol)/THF(5 mL)溶液に加え、室温で終夜撹拌した。該反応液をEtOAcで希釈し、水、次いで食塩水で洗浄した。有機層を集め、MgSO4で乾燥させ、濾過し、ロータリーエバポレーターでエバポレートして、(2S,4R)-メチル 4-メトキシ-4-(2-ビニルビフェニル-4-イル)ピロリジン-2-カルボキシレート(中間体8, 360 mg, 1.067 mmol, 100%収率)を得た。 LCMS: 保持時間 = 2.03分. [M-MeOH] = 305; Phenomenex-Luna C-18 (5μ) (3.0x50mm); 溶媒A = 10%アセトニトリル-90%水-0.1%TFA, 溶媒B = 90%アセトニトリル-10%水-0.1%TFA; グラジエント 2分かけて0%〜100%溶媒B、次いで1分間ホールド; 4mL/分; 注入量 = 5μL; 波長 = 220.
(S)-2-((ブタ-3-エニルオキシ)カルボニルアミノ)-3,3-ジメチルブタン酸(117 mg, 0.511 mmol)、DIEA(0.179 mL, 1.022 mmol)およびHATU(143 mg, 0.375 mmol)を、(2S,4R)-メチル 4-メトキシ-4-(2-ビニルビフェニル-4-イル)ピロリジン-2-カルボキシレート(115 mg, 0.341 mmol)/DCM(4 mL)溶液に加えた。該反応液を室温で終夜撹拌した。該反応液をエバポレートし、Biotage(0-40% EtOAc:ヘキサン)でのフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、(2S,4R)-メチル 1-((S)-2-((ブタ-3-エニルオキシ)カルボニルアミノ)-3,3-ジメチルブタノイル)-4-メトキシ-4-(2-ビニルビフェニル-4-イル)ピロリジン-2-カルボキシレート(150 mg, 0.273 mmol, 80%収率)を白色の泡状物質として得た。 LCMS: 保持時間 = 1.89分. [M+Na]+ = 571; Phenomenex-Luna C-18 (5μ) (3.0x50mm); 溶媒A = 10%アセトニトリル-90%水-0.1%TFA, 溶媒B = 90%アセトニトリル-10%水-0.1%TFA; グラジエント 2分かけて0%〜100%溶媒B、次いで1分間ホールド; 4mL/分; 注入量 = 5μL; 波長 = 220.
(2S,4R)-メチル 1-((S)-2-((ブタ-3-エニルオキシ)カルボニルアミノ)-3,3-ジメチルブタノイル)-4-メトキシ-4-(2-ビニルビフェニル-4-イル)ピロリジン-2-カルボキシレート(150 mg, 0.273 mmol)をDCE(29 mL)中に溶解させ、窒素ガスで15分間バブリングした。ホベイダ-グラブス触媒(第二世代)(17 mg, 0.027 mmol)を加え、油浴中において80℃で2時間加熱した。該粗生成物を、Biotage(10-50%EtOAc/ヘキサン)でのフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、生成物(123 mg, 0.236 mmol, 86%収率)を白色の泡状物質として得た。 LCMS: 保持時間 = 1.78分. [M+Na]+ = 543; Phenomenex-Luna C-18 (5μ) (3.0x50mm); 溶媒A = 10%アセトニトリル-90%水-0.1%TFA, 溶媒B = 90%アセトニトリル-10%水-0.1%TFA; グラジエント 2分かけて0%〜100%溶媒B、次いで1分間ホールド; 4mL/分; 注入量 = 5μL; 波長 = 220.
工程2からの生成物(123 mg, 0.236 mmol)/酢酸エチル(4 mL)を、10%パラジウム炭素(25 mg, 0.024 mmol)で処理し、水素のバルーン下において終夜撹拌した。該反応液を、Milliporeマイレクス-HV 0.45um プラグを通して濾過し、エバポレートして、生成物(113 mg, 0.216 mmol, 92%収率)を得た。 LCMS: 保持時間 = 1.83分. [M+Na]+ = 545; Phenomenex-Luna C-18 (5μ) (3.0x50mm); 溶媒A = 10%アセトニトリル-90%水-0.1%TFA, 溶媒B = 90%アセトニトリル-10%水-0.1%TFA; グラジエント 2分かけて0%〜100%溶媒B、次いで1分間ホールド; 4mL/分; 注入量 = 5μL; 波長 = 220.
2.0M 水酸化リチウム溶液(0.324 mL, 0.649 mmol)を、THF(1 mL)およびMeOH(1.000 mL)中の工程3からの生成物(113 mg, 0.216 mmol)の溶液に加え、室温で終夜撹拌した。該反応液をEtOAcで希釈し、1M HCl、次いで食塩水で洗浄した。有機層を集め、MgSO4で乾燥させ、濾過し、エバポレートして、中間体9(103 mg, 0.203 mmol, 94%収率)を得た。 LCMS: 保持時間 = 1.60分. [M+Na]+ = 531; Phenomenex-Luna C-18 (5μ) (3.0x50mm); 溶媒A = 10%アセトニトリル-90%水-0.1%TFA, 溶媒B = 90%アセトニトリル-10%水-0.1%TFA; グラジエント 2分かけて0%〜100%溶媒B、次いで1分間ホールド; 4mL/分; 注入量 = 5μL; 波長 = 220.
DME(75 mL)および水(15 mL)中の、1,4-ジブロモベンゼン(5.11 g, 21.67 mmol)、炭酸カリウム(6.91 g, 50.0 mmol)および2-ホルミル-4-メトキシフェニルボロン酸(3 g, 16.67 mmol)の溶液(圧力容器中)を、窒素で15分間スパージした。Pd(Ph3P)4(0.578 g, 0.500 mmol)を加えた後、該反応液を、終夜、90℃まで加熱した。該反応液を室温に冷却し、ロータリーエバポレーターでエバポレートした。残渣をEtOAcで希釈し、水、次いで食塩水で洗浄し、MgSO4で乾燥させ、濾過し、エバポレートして粗物質を得た。該粗物質を、Biotage(5-15%EtOAc:ヘキサン)でのフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、4'-ブロモ-4-メトキシビフェニル-2-カルバルデヒド(2.72 g, 9.34 mmol, 56%収率)を白色の固形物として得た。 1H NMR (500 MHz, クロロホルム-d) δ ppm 3.91 (s, 3 H) 7.18 - 7.26 (m, 3 H) 7.34 (d, J=8.24 Hz, 1 H) 7.52 (d, J=2.75 Hz, 1 H) 7.54 - 7.70 (m, 2 H) 9.94 (s, 1 H).
水素化ナトリウム(60%/油, 1.5 g, 37.4 mmol)を、メチルトリフェニルホスホニウムブロミド(6.67 g, 18.69 mmol)/THF(30 mL)溶液に加えた。該混合液を0℃で1時間撹拌した。4'-ブロモ-4-メトキシビフェニル-2-カルバルデヒド(2.72 g, 9.34 mmol)/THF(30 mL)溶液を0℃にて滴下した。該混合液を、0℃から室温まで、終夜、撹拌した。該反応液を濾過し、エバポレートした。残渣をジエチルエーテルで希釈し、水および食塩水で洗浄した。エーテル層を集め、乾燥させ(MgSO4)、濾過し、エバポレートして粗物質を得た。該粗物質を、Biotage(5-15% EtOAc:ヘキサン)でのフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、4'-ブロモ-4-メトキシ-2-ビニルビフェニル(中間体11, 2.35 g, 8.13 mmol, 87%収率)を澄明な油状物として得た。 1H NMR (400 MHz, クロロホルム-d) δ ppm 3.88 (s, 3 H) 5.23 (dd, J=10.92, 1.13 Hz, 1 H) 5.70 (dd, J=17.44, 1.13 Hz, 1 H) 6.66 (dd, J=17.44, 10.92 Hz, 1 H) 6.90 (dd, J=8.41, 2.63 Hz, 1 H) 7.16 (d, J=2.51 Hz, 1 H) 7.17 - 7.22 (m, 3 H) 7.49 - 7.57 (m, 2 H).
HATU(248 mg, 0.652 mmol)を、DCM(8 mL)中の(2S,4R)-メチル 4-メトキシ-4-(2'-ビニルビフェニル-4-イル)ピロリジン-2-カルボキシレート(200 mg, 0.593 mmol)、(S)-3,3-ジメチル-2-((ペンタ-4-エニルオキシ)カルボニルアミノ)ブタン酸(180 mg, 0.741 mmol)およびDIEA(0.311 mL, 1.778 mmol)の溶液に加え、室温で60時間撹拌した。該反応液をエバポレートし、Biotage(10-40% EtOAc:ヘキサン)で精製して、生成物 (2S,4R)-メチル 1-((S)-3,3-ジメチル-2-((ペンタ-4-エニルオキシ)カルボニルアミノ)ブタノイル)-4-メトキシ-4-(2'-ビニルビフェニル-4-イル)ピロリジン-2-カルボキシレート(251 mg, 0.446 mmol, 75%収率)を白色の固形物として得た。 1H NMR (400 MHz, クロロホルム-d) δ ppm 0.96 - 1.00 (m, 1 H) 1.04 - 1.10 (m, 1 H) 1.11 - 1.21 (m, 7 H) 1.64 - 1.79 (m, 2 H) 2.06 - 2.20 (m, 2 H) 2.52 (dd, J=13.30, 8.78 Hz, 1 H) 2.83 - 3.04 (m, 4 H) 3.72 - 3.82 (m, 3 H) 3.96 - 4.12 (m, 3 H) 4.15 - 4.21 (m, 1 H) 4.31 - 4.41 (m, 1 H) 4.86 - 5.10 (m, 3 H) 5.19 - 5.30 (m, 1 H) 5.41 (d, J=9.79 Hz, 1 H) 5.67 - 5.87 (m, 2 H) 6.61 - 6.76 (m, 1 H) 7.28 - 7.44 (m, 7 H) 7.61 - 7.71 (m, 1 H). LCMS: 保持時間 = 2.18分, [M+H]+ = 563 Phenomenex Luna S10 (3 x50 mm); 溶媒A = 95%水-5%メタノール-10mM 酢酸アンモニウム, 溶媒B = 5%水-95%メタノール-10 mM 酢酸アンモニウム; グラジエント = 2分かけて0%〜100%溶媒B、次いで1分間ホールド; 4 ml/分; 注入量 = 10 μl; 波長 = 220 nm.
(2S,4R)-メチル 1-((S)-3,3-ジメチル-2-((ペンタ-4-エニルオキシ)カルボニルアミノ)ブタノイル)-4-メトキシ-4-(2'-ビニルビフェニル-4-イル)ピロリジン-2-カルボキシレート(251 mg, 0.446 mmol)/DCE(100 mL)溶液を、窒素で30分間スパージした後、ホベイダ-グラブス触媒(第二世代)(28 mg, 0.045 mmol)を加え、該反応液を密封し、100℃まで18時間加熱した。該反応液を濃縮して、粗物質を得た。該粗物質を、Biotage(10-40% EtOAc/ヘキサン)でのフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、生成物(196 mg, 0.367 mmol, 82%収率)を白色の固形物として得た。 1H NMR (400 MHz, クロロホルム-d) δ ppm 1.07 (s, 9 H) 1.63 (dd, J=12.17, 8.66 Hz, 1 H) 1.88 - 2.02 (m, 1 H) 2.20 - 2.30 (m, 2 H) 2.33 (dd, J=12.42, 10.92 Hz, 1 H) 3.05 (s, 3 H) 3.07 - 3.16 (m, 1 H) 3.72 (d, J=10.54 Hz, 1 H) 3.76 - 3.81 (m, 3 H) 3.91 (dt, J=10.35, 3.73 Hz, 1 H) 4.20 - 4.30 (m, 1 H) 4.37 (dd, J=10.79, 8.03 Hz, 1 H) 4.55 (d, J=9.79 Hz, 1 H) 4.87 (d, J=10.54 Hz, 1 H) 5.34 (d, J=9.79 Hz, 1 H) 5.96 - 6.06 (m, 1 H) 6.34 (d, J=15.81 Hz, 1 H) 7.29 - 7.36 (m, 3 H) 7.39 - 7.46 (m, 2 H) 7.48 - 7.58 (m, 3 H). LCMS: 保持時間 = 2.13分, [M+H]+ = 535 Phenomenex Luna S10 (3 x50 mm); 溶媒A = 95%水-5%メタノール-10mM 酢酸アンモニウム, 溶媒B = 5%水-95%メタノール-10 mM 酢酸アンモニウム; グラジエント = 2分かけて0%〜100%溶媒B、次いで1分間ホールド; 4 ml/分; 注入量 = 10 μl; 波長 = 220 nm.
EtOAc(10 mL)中の工程2からの生成物(196 mg, 0.367 mmol)および10% Pd/C(39 mg, 0.037 mmol)の溶液を、水素雰囲気下において16時間撹拌した。該反応液を、ナイロンフィルターを通して濾過し、濃縮して、粗生成物(194 mg, 0.361 mmol, 99%収率)を白色の固形物として得た。 LCMS: 保持時間 = 2.08分, [M+H]+ = 537 Phenomenex Luna S10 (3 x50 mm); 溶媒A = 95%水-5%メタノール-10mM 酢酸アンモニウム, 溶媒B = 5%水-95%メタノール-10 mM 酢酸アンモニウム; グラジエント = 2分かけて0%〜100%溶媒B、次いで1分間ホールド; 4 ml/分; 注入量 = 10 μl; 波長 = 220 nm.
2.0 M 水酸化リチウム(0.90 mL, 1.80 mmol)を、THF(3.00 mL)およびMeOH(3 mL)中の工程3からの生成物(194 mg, 0.361 mmol)の溶液に加え、3時間撹拌した。該反応液を、エーテルおよび1.0 M HClで希釈した。有機層を乾燥させ、濾過し、エバポレートして、粗生成物(180 mg, 0.344 mmol, 95%収率)を得た。 LCMS: 保持時間 = 1.85分, [M+H]+ = 523 Phenomenex Luna S10 (3 x50 mm); 溶媒A = 95%水-5%メタノール-10mM 酢酸アンモニウム, 溶媒B = 5%水-95%メタノール-10 mM 酢酸アンモニウム; グラジエント = 2分かけて0%〜100%溶媒B、次いで1分間ホールド; 4 ml/分; 注入量 = 10 μl; 波長 = 220 nm.
HATU(98 mg, 0.258 mmol)を、ジクロロメタン(5 mL)中の(1S,2R)-2-アミノ-N-(シクロプロピルスルホニル)ビ(シクロプロパン)-2-カルボキサミド、HCl塩(58 mg, 0.207 mmol)、工程4からの生成物(90 mg, 0.172 mmol)およびヒューニッヒ塩基(0.090 mL, 0.517 mmol)の溶液に加え、室温で16時間撹拌した。該反応液を濃縮し、HPLC(Xbridge C18 10u (30 x100 mm); 流速 = 42 ml/分; 溶媒グラジエント = 95:5〜5:95 水/アセトニトリル(10mM 酢酸アンモニウム含有))により精製した。生成物画分を濃縮して、化合物14(40 mg, 0.053 mmol, 31%収率)を白色の固形物として得た。 1H NMR (400 MHz, MeOD) δ ppm 0.27 - 0.39 (m, 2 H) 0.48 - 0.62 (m, 2 H) 0.81 - 0.93 (m, 1 H) 1.03 (s, 9 H) 1.06 - 1.21 (m, 6 H) 1.22 - 1.30 (m, 3 H) 1.41 (br. s., 2 H) 1.51 (br. s., 2 H) 1.76 (dd, J=8.03, 5.52 Hz, 1 H) 2.28 - 2.38 (m, 1 H) 2.43 - 2.55 (m, 2 H) 2.93 - 3.02 (m, 2 H) 3.05 (s, 3 H) 3.59 (br. s., 1 H) 3.91 (d, J=10.29 Hz, 1 H) 4.26 - 4.41 (m, 3 H) 4.45 (d, J=10.04 Hz, 1 H) 7.15 - 7.25 (m, 2 H) 7.28 (d, J=3.51 Hz, 2 H) 7.34 (m, J=8.03 Hz, 2 H) 7.56 (m, J=8.03 Hz, 2 H). LCMS: 保持時間 = 1.99分, [M+H]+ = 749 Phenomenex Luna S10 (3 x50 mm); 溶媒A = 95%水-5%メタノール-10mM 酢酸アンモニウム, 溶媒B = 5%水-95%メタノール-10 mM 酢酸アンモニウム; グラジエント = 2分かけて0%〜100%溶媒B、次いで1分間ホールド; 4 ml/分; 注入量 = 10 μl; 波長 = 220 nm.
HATU(248 mg, 0.652 mmol)を、DCM(8 mL)中の(2S,4R)-メチル 4-メトキシ-4-(2'-ビニルビフェニル-4-イル)ピロリジン-2-カルボキシレート(200 mg, 0.593 mmol)、(S)-2-((2,2-ジメチルペンタ-4-エニルオキシ)カルボニルアミノ)-3,3-ジメチルブタン酸(201 mg, 0.741 mmol)およびDIEA(0.311 mL, 1.778 mmol)の溶液に加え、室温で60時間撹拌した。該反応液をエバポレートし、Biotage(10-40% EtOAc:ヘキサン)で生成して、(2S,4R)-メチル 1-((S)-2-((2,2-ジメチルペンタ-4-エニルオキシ)カルボニルアミノ)-3,3-ジメチルブタノイル)-4-メトキシ-4-(2'-ビニルビフェニル-4-イル)ピロリジン-2-カルボキシレート(235 mg, 0.398 mmol, 67%収率)を白色の固形物として得た。1H NMR (400 MHz, クロロホルム-d) δ ppm 0.83 - 0.94 (m, 6 H) 0.97 - 1.02 (m, 1 H) 1.06 - 1.10 (m, 1 H) 1.12 - 1.19 (m, 7 H) 1.95 - 2.07 (m, 2 H) 2.46 - 2.59 (m, 1 H) 2.88 (d, J=12.80 Hz, 1 H) 2.92 - 3.03 (m, 3 H) 3.65 - 3.74 (m, 1 H) 3.74 - 3.79 (m, 3 H) 3.79 - 3.86 (m, 1 H) 4.00 - 4.09 (m, 1 H) 4.14 - 4.21 (m, 1 H) 4.31 - 4.42 (m, 1 H) 4.85 - 4.92 (m, 1 H) 4.95 - 5.09 (m, 2 H) 5.17 - 5.26 (m, 1 H) 5.38 - 5.49 (m, 1 H) 5.67 - 5.84 (m, 2 H) 6.60 - 6.75 (m, 1 H) 7.25 - 7.30 (m, 1 H) 7.30 - 7.42 (m, 6 H) 7.61 - 7.68 (m, 1 H). LCMS: 保持時間 = 2.25分, [M+H]+ = 591 Phenomenex Luna S10 (3 x50 mm); 溶媒A = 95%水-5%メタノール-10mM 酢酸アンモニウム, 溶媒B = 5%水-95%メタノール-10 mM 酢酸アンモニウム; グラジエント = 2分かけて0%〜100%溶媒B、次いで1分間ホールド; 4 ml/分; 注入量 = 10 μl; 波長 = 220 nm.
(2S,4R)-メチル 1-((S)-2-((2,2-ジメチルペンタ-4-エニルオキシ)カルボニルアミノ)-3,3-ジメチルブタノイル)-4-メトキシ-4-(2'-ビニルビフェニル-4-イル)ピロリジン-2-カルボキシレート(235 mg, 0.398 mmol)/DCE(100 mL)溶液を、窒素で30分間スパージした後、ホベイダ-グラブス触媒(第二世代)(25 mg, 0.040 mmol)を加え、該反応液を密封し、100℃まで18時間加熱した。該反応液を濃縮して、粗物質を得た。該粗物質を、Biotage(10-40% EtOAc/ヘキサン)でのフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、生成物(177 mg, 0.315 mmol, 79%収率)を白色の固形物として得た。 1H NMR (400 MHz, クロロホルム-d) δ ppm 0.95 - 1.01 (m, 3 H) 1.02 - 1.05 (m, 3 H) 1.05 - 1.10 (m, 9 H) 1.82 - 1.92 (m, 1 H) 2.26 - 2.44 (m, 2 H) 3.03 - 3.07 (m, 3 H) 3.14 (ddd, J=12.61, 8.09, 1.63 Hz, 1 H) 3.45 (dd, J=10.04, 1.25 Hz, 1 H) 3.68 - 3.74 (m, 1 H) 3.76 - 3.81 (m, 3 H) 4.01 (d, J=10.04 Hz, 1 H) 4.39 (dd, J=10.79, 8.03 Hz, 1 H) 4.52 (d, J=10.04 Hz, 1 H) 4.85 (dd, J=10.79, 1.51 Hz, 1 H) 5.33 (d, J=10.04 Hz, 1 H) 6.16 (ddd, J=15.56, 10.79, 4.77 Hz, 1 H) 6.29 - 6.39 (m, 1 H) 7.29 - 7.36 (m, 3 H) 7.37 - 7.45 (m, 2 H) 7.47 - 7.53 (m, 2 H) 7.54 - 7.60 (m, 1 H). LCMS: 保持時間 = 2.20分, [M+H]+ = 563 Phenomenex Luna S10 (3 x50 mm); 溶媒A = 95%水-5%メタノール-10mM 酢酸アンモニウム, 溶媒B = 5%水-95%メタノール-10 mM 酢酸アンモニウム; グラジエント = 2分かけて0%〜100%溶媒B、次いで1分間ホールド; 4 ml/分; 注入量 = 10 μl; 波長 = 220 nm.
EtOAc(10 mL)中の工程2からの生成物(177 mg, 0.315 mmol)および10% Pd/C(33 mg, 0.031 mmol)の溶液を、水素雰囲気下において16時間撹拌した。該反応液を、ナイロンフィルターを通して濾過し、濃縮して、粗生成物(176 mg, 0.312 mmol, 99%収率)を白色の固形物として得た。 1H NMR (400 MHz, クロロホルム-d) δ ppm 0.79 (s, 3 H) 0.92 - 0.95 (m, 3 H) 1.02 - 1.11 (m, 9 H) 1.22 1.35 (m, 1 H) 1.38 - 1.49 (m, 2 H) 2.26 - 2.41 (m, 2 H) 2.48 - 2.58 (m, 1 H) 3.06 (s, 3 H) 3.07 - 3.12 (m, 1 H) 3.15 (d, J=10.79 Hz, 1 H) 3.76 - 3.81 (m, 4 H) 4.36 (d, J=10.54 Hz, 1 H) 4.44 (d, J=10.04 Hz, 1 H) 4.48 (dd, J=10.54, 8.03 Hz, 1 H) 4.62 - 4.69 (m, 1 H) 5.30 (d, J=9.79 Hz, 1 H) 7.22 (d, J=2.01 Hz, 1 H) 7.24 (d, J=2.51 Hz, 1 H) 7.28 - 7.32 (m, 2 H) 7.32 - 7.37 (m, 3 H) 7.47 (d, J=8.28 Hz, 2 H). LCMS: 保持時間 = 2.13分, [M+H]+ = 565 Phenomenex Luna S10 (3 x50 mm); 溶媒A = 95%水-5%メタノール-10mM 酢酸アンモニウム, 溶媒B = 5%水-95%メタノール-10 mM 酢酸アンモニウム; グラジエント = 2分かけて0%〜100%溶媒B、次いで1分間ホールド; 4 ml/分; 注入量 = 10 μl; 波長 = 220 nm.
2.0 M 水酸化リチウム(0.78 mL, 1.56 mmol)を、THF(2.000 mL)およびMeOH(2 mL)中の工程3からの生成物(176 mg, 0.312 mmol)の溶液に加え、3時間撹拌した。該反応液をエーテルおよび1.0 M HClで希釈した。有機層を乾燥させ、濾過し、エバポレートして、粗生成物(160 mg, 0.291 mmol, 93%収率)を得た。 LCMS: 保持時間 = 1.92分, [M+H]+ = 551 Phenomenex Luna S10 (3 x50 mm); 溶媒A = 95%水-5%メタノール-10mM 酢酸アンモニウム, 溶媒B = 5%水-95%メタノール-10 mM 酢酸アンモニウム; グラジエント = 2分かけて0%〜100%溶媒B、次いで1分間ホールド; 4 ml/分; 注入量 = 10 μl; 波長 = 220 nm.
HATU(83 mg, 0.218 mmol)を、ジクロロメタン(4 mL)中の(1S,2R)-2-アミノ-N-(シクロプロピルスルホニル)ビ(シクロプロパン)-2-カルボキサミド, HCl塩(49 mg, 0.174 mmol)、工程4からの生成物(80 mg, 0.145 mmol)およびヒューニッヒ塩基(0.076 mL, 0.436 mmol)の溶液に加え、室温で16時間撹拌した。該反応液を濃縮し、HPLC(Xbridge C18 10u (30 x100 mm); 流速 = 42 ml/分; 溶媒グラジエント = 95:5〜5:95 水/アセトニトリル(10mM 酢酸アンモニウム含有))により精製した。生成物画分を濃縮して、化合物16(35 mg, 0.044 mmol, 30%収率)を白色の固形物として得た。 1H NMR (400 MHz, MeOD) δ ppm 0.33 - 0.44 (m, 2 H) 0.54 - 0.72 (m, 2 H) 0.86 (s, 3 H) 0.88 - 0.95 (m, 1 H) 1.04 (s, 3 H) 1.10 (s, 9 H) 1.12 - 1.23 (m, 4 H) 1.24 - 1.39 (m, 4 H) 1.41 - 1.54 (m, 2 H) 1.85 (dd, J=8.03, 5.52 Hz, 1 H) 2.30 (t, J=11.80 Hz, 1 H) 2.35 - 2.46 (m, 1 H) 2.47 - 2.59 (m, 1 H) 3.01 - 3.10 (m, 2 H) 3.13 (s, 3 H) 3.24 (d, J=10.29 Hz, 1 H) 3.89 (d, J=10.54 Hz, 1 H) 4.25 (dd, J=10.79, 7.28 Hz, 1 H) 4.37 (d, J=10.29 Hz, 1 H) 4.53 (d, J=10.04 Hz, 1 H) 4.80 (d, J=10.54 Hz, 1 H) 6.90 (d, J=10.04 Hz, 1 H) 7.20 - 7.31 (m, 2 H) 7.31 - 7.38 (m, 2 H) 7.41 (d, J=8.28 Hz, 2 H) 7.60 - 7.68 (m, 2 H). LCMS: 保持時間 = 4.05分, [M-OMe]+ = 745 Phenomenex Luna C18, 50 x 2, 3u; 溶媒A = 10%アセトニトリル-90%水-0.1%TFA, 溶媒B = 90%アセトニトリル-10%水-0.1%TFA; グラジエント = 4分かけて0%〜100%溶媒B、次いで1分間ホールド; 0.8 ml/分; 注入量 = 3 μl; 波長 = 220 nm.
HATU(248 mg, 0.652 mmol)を、DCM(8 mL)中の(2S,4R)-メチル 4-メトキシ-4-(2'-ビニルビフェニル-4-イル)ピロリジン-2-カルボキシレート(200 mg, 0.593 mmol)、(S)-2-((ヘプタ-6-エニルオキシ)カルボニルアミノ)-3,3-ジメチルブタン酸(201 mg, 0.741 mmol)およびDIEA(0.311 mL, 1.778 mmol)の溶液に加え、室温で60時間撹拌した。該反応液をエバポレートし、Biotage(10-40% EtOAc:ヘキサン)で精製して、(2S,4R)-メチル 1-((S)-2-((ヘプタ-6-エニルオキシ)カルボニルアミノ)-3,3-ジメチルブタノイル)-4-メトキシ-4-(2'-ビニルビフェニル-4-イル)ピロリジン-2-カルボキシレート(260 mg, 0.440 mmol, 74%収率)を白色の固形物として得た。1H NMR (400 MHz, クロロホルム-d) δ ppm 0.96 - 1.00 (m, 1 H) 1.06 - 1.10 (m, 1 H) 1.11 - 1.19 (m, 7 H) 1.30 - 1.47 (m, 4 H) 1.55 - 1.64 (m, 2 H) 1.99 - 2.10 (m, 2 H) 2.49 - 2.55 (m, 1 H) 2.89 (d, J=13.05 Hz, 1 H) 2.93 - 3.04 (m, 3 H) 3.73 - 3.80 (m, 3 H) 3.92 - 4.10 (m, 3 H) 4.11 - 4.20 (m, 1 H) 4.31 - 4.41 (m, 1 H) 4.87 - 5.05 (m, 3 H) 5.23 (dd, J=10.92, 1.13 Hz, 1 H) 5.38 - 5.42 (m, 1 H) 5.68 - 5.75 (m, 1 H) 5.75 - 5.86 (m, 1 H) 6.62 - 6.76 (m, 1 H) 7.28 - 7.43 (m, 7 H) 7.63 - 7.69 (m, 1 H). LCMS: 保持時間 = 2.25分, [M+H]+ = 591 Phenomenex Luna S10 (3 x50 mm); 溶媒A = 95%水-5%メタノール-10mM 酢酸アンモニウム, 溶媒B = 5%水-95%メタノール-10 mM 酢酸アンモニウム; グラジエント = 2分かけて0%〜100%溶媒B、次いで1分間ホールド; 4 ml/分; 注入量 = 10 μl; 波長 = 220 nm.
(2S,4R)-メチル 1-((S)-2-((ヘプタ-6-エニルオキシ)カルボニルアミノ)-3,3-ジメチルブタノイル)-4-メトキシ-4-(2'-ビニルビフェニル-4-イル)ピロリジン-2-カルボキシレート(260 mg, 0.440 mmol)/DCE(100 mL)溶液を、窒素で30分間スパージした後、ホベイダ-グラブス触媒(27 mg, 0.044 mmol)を加え、該反応液を密封し、100℃まで18時間加熱した。該反応液を濃縮して、粗物質を得た。該粗物質を、Biotage(10-40% EtOAc/ヘキサン)でのフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、生成物(232 mg, 0.412 mmol, 94%収率)を白色の固形物として得た。 1H NMR (400 MHz, クロロホルム-d) δ ppm 1.08 - 1.15 (m, 9 H) 1.32 - 1.41 (m, 2 H) 1.42 - 1.59 (m, 3 H) 1.69 (d, J=2.76 Hz, 1 H) 2.06 - 2.19 (m, J=14.18, 9.60, 4.80, 4.80 Hz, 1 H) 2.29 - 2.40 (m, 1 H) 2.50 (t, J=11.42 Hz, 1 H) 2.68 (dd, J=11.92, 7.40 Hz, 1 H) 3.08 (s, 3 H) 3.75 (s, 3 H) 3.77 - 3.84 (m, 2 H) 4.25 (dd, J=10.29, 7.53 Hz, 1 H) 4.52 (d, J=10.29 Hz, 1 H) 4.59 (td, J=10.54, 4.02 Hz, 1 H) 4.83 (d, J=10.29 Hz, 1 H) 5.35 (d, J=10.04 Hz, 1 H) 5.98 - 6.12 (m, 1 H) 6.39 (d, J=15.56 Hz, 1 H) 7.28 - 7.33 (m, 3 H) 7.40 - 7.46 (m, 2 H) 7.46 - 7.52 (m, 2 H) 7.56 (d, J=7.03 Hz, 1 H). LCMS: 保持時間 = 2.20分, [M+H]+ = 563 Phenomenex Luna S10 (3 x50 mm); 溶媒A = 95%水-5%メタノール-10mM 酢酸アンモニウム, 溶媒B = 5%水-95%メタノール-10 mM 酢酸アンモニウム; グラジエント = 2分かけて0%〜100%溶媒B、次いで1分間ホールド; 4 ml/分; 注入量 = 10 μl; 波長 = 220 nm.
EtOAc(10 mL)中の工程2からの生成物(232 mg, 0.412 mmol)および10% Pd/C(44 mg, 0.041 mmol)の溶液を、水素雰囲気下において16時間撹拌した。該反応液を、ナイロンフィルターを通して濾過し、濃縮して、生成物(207 mg, 0.367 mmol, 89%収率)を白色の固形物として得た。 LCMS: 保持時間 = 2.18分, [M+H]+ = 565 Phenomenex Luna S10 (3 x50 mm); 溶媒A = 95%水-5%メタノール-10mM 酢酸アンモニウム, 溶媒B = 5%水-95%メタノール-10 mM 酢酸アンモニウム; グラジエント = 2分かけて0%〜100%溶媒B、次いで1分間ホールド; 4 ml/分; 注入量 = 10 μl; 波長 = 220 nm.
2.0 M 水酸化リチウム(0.92 mL, 1.84 mmol)を、THF(2 mL)およびMeOH(2 mL)中の工程3からの生成物(208 mg, 0.368 mmol)の溶液に加え、3時間撹拌した。該反応液を、エーテルおよび1.0 M HClで希釈した。有機層を乾燥させ、濾過し、エバポレートして、生成物(200 mg, 0.363 mmol, 99%収率)を得た。 LCMS: 保持時間 = 2.01分, [M+H]+ = 551 Phenomenex Luna S10 (3 x50 mm); 溶媒A = 95%水-5%メタノール-10mM 酢酸アンモニウム, 溶媒B = 5%水-95%メタノール-10 mM 酢酸アンモニウム; グラジエント = 2分かけて0%〜100%溶媒B、次いで1分間ホールド; 4 ml/分; 注入量 = 10 μl; 波長 = 220 nm.
HATU(104 mg, 0.272 mmol)を、ジクロロメタン(4 mL)中の(1S,2R)-2-アミノ-N-(シクロプロピルスルホニル)ビ(シクロプロパン)-2-カルボキサミド, HCl塩(61 mg, 0.218 mmol)、工程4からの生成物(100 mg, 0.182 mmol)およびヒューニッヒ塩基(0.095 mL, 0.545 mmol)の溶液に加え、室温で64時間撹拌した。該反応液を濃縮し、HPLC(Xbridge C18 10u (30 x100 mm); 流速 = 42 ml/分; 溶媒グラジエント = 95:5〜5:95 水/アセトニトリル(10mM 酢酸アンモニウム含有))により精製した。生成物画分を濃縮して、化合物18(71 mg, 0.085 mmol, 46.8%収率)を白色の固形物として得た。1H NMR (400 MHz, MeOD) δ ppm 0.32 - 0.43 (m, 2 H) 0.53 - 0.68 (m, 2 H) 0.85 - 0.95 (m, 1 H) 1.10 - 1.24 (m, 13 H) 1.24 - 1.41 (m, 8 H) 1.49 - 1.72 (m, 4 H) 1.80 (dd, J=8.03, 5.27 Hz, 1 H) 2.49 - 2.68 (m, 4 H) 3.01 - 3.09 (m, 1 H) 3.13 (s, 3 H) 3.72 - 3.84 (m, 1 H) 4.04 (d, J=10.54 Hz, 1 H) 4.17 (t, J=8.16 Hz, 1 H) 4.47 - 4.59 (m, 2 H) 4.66 (d, J=10.54 Hz, 1 H) 7.21 - 7.31 (m, 2 H) 7.35 (d, J=3.76 Hz, 2 H) 7.40 - 7.46 (m, 2 H) 7.64 (d, J=7.78 Hz, 2 H). LCMS: 保持時間 = 2.13分, [M-OMe]+ = 745 Phenomenex Luna S10 (3 x50 mm); 溶媒A = 95%水-5%メタノール-10mM 酢酸アンモニウム, 溶媒B = 5%水-95%メタノール-10 mM 酢酸アンモニウム; グラジエント = 2分かけて0%〜100%溶媒B、次いで1分間ホールド; 4 ml/分; 注入量 = 10 μl; 波長 = 220 nm.
DME(150 mL)および水(30 mL)中の1,4-ジブロモベンゼン(8.3 g, 35.3 mmol)、炭酸カリウム(11.3 g, 81 mmol)および5-クロロ-2-ホルミルフェニルボロン酸(5 g, 27.1 mmol)の溶液(圧力容器中)を、窒素で15分間スパージした。Pd(PPh3)4(0.94 g, 0.814 mmol)を加え、該反応液を80℃まで終夜加熱した。該反応液を室温に冷却し、ロータリーエバポレーターでエバポレートした。残渣をEtOAc中に希釈し、水、次いで食塩水で洗浄し、MgSO4で乾燥させ、濾過し、エバポレートして、粗物質を得た。該粗物質を、Biotage(0-15%EtOAc:ヘキサン)でのフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、4'-ブロモ-5-クロロビフェニル-2-カルバルデヒド(4.17 g, 14.11 mmol, 52%収率)を白色の固形物として得た。 1H NMR (400 MHz, クロロホルム-d) δ ppm 7.18 - 7.28 (m, 2 H) 7.42 (d, J=2.01 Hz, 1 H) 7.50 (ddd, J=8.41, 2.01, 0.88 Hz, 1 H) 7.59 - 7.69 (m, 2 H) 7.98 (d, J=8.53 Hz, 1 H) 9.92 (s, 1 H).
BuLi(2.5M/ヘキサン, 11.3 mL, 28.2 mmol)を、メチルトリフェニルホスホニウムブロミド(10.1 g, 28.2 mmol)/THF(65 mL)の溶液に加えた。該混合液を0℃で1時間撹拌した。4'-ブロモ-5-クロロビフェニル-2-カルバルデヒド(4.2 g, 14.11 mmol)/THF(65 mL)溶液を、0℃にて滴下した。該混合液を、0℃から室温まで、終夜撹拌した。該反応液を濾過し、エバポレートした。残渣をジエチルエーテルで希釈し、水および食塩水で洗浄した。エーテル層を集め、乾燥させ(MgSO4)、濾過し、エバポレートして、粗物質を得た。該粗物質をBiotage(5-15%EtOAc:ヘキサン)で精製して、4'-ブロモ-5-クロロ-2-ビニルビフェニル(3.43 g, 11.68 mmol, 83%収率)を澄明な油状物として得た。
1H NMR (500 MHz, クロロホルム-d) δ ppm 5.22 (d, J=10.99 Hz, 1 H) 5.67 (dd, J=17.40, 1.22 Hz, 1 H) 6.57 (dd, J=17.40, 10.99 Hz, 1 H) 7.16 - 7.21 (m, 2 H) 7.24 (d, J=2.14 Hz, 1 H) 7.31 (dd, J=8.39, 2.29 Hz, 1 H) 7.50 - 7.58 (m, 3 H).
マグネシウム(0.298 g, 12.27 mmol)を、丸底フラスコ中で、窒素下において15分間撹拌して、該削り状マグネシウムの表面をスクラッチした。10mLのTHFを該削り状マグネシウムに加え、さらに30分間撹拌した。4'-ブロモ-5-クロロ-2-ビニルビフェニル(3.43 g, 11.68 mmol)/THF(60 mL)を、還流にて、激しく撹拌しながら、滴下した。グリニャール溶液を、(S)-2-メチル 1-(2-(トリメチルシリル)エチル) 4-オキソピロリジン-1,2-ジカルボキシレート(3.35 g, 11.67 mmol)/DCM(60 mL)溶液に、室温で加え、1時間撹拌した後、飽和NH4Cl溶液を用いてクエンチした。水層をDCMで抽出し、有機物を合わせて乾燥させ、濾過し、エバポレートして粗物質を得た。該粗物質を、Biotage(10-40% EtOAc:ヘキサン)でのフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、(2S,4R)-2-メチル 1-(2-(トリメチルシリル)エチル) 4-(5'-クロロ-2'-ビニルビフェニル-4-イル)-4-ヒドロキシピロリジン-1,2-ジカルボキシレート(800 mg, 1.593 mmol, 14%収率)を黄色の油状物として得た。 1H NMR (500 MHz, クロロホルム-d) δ ppm 0.04 (s, 9 H) 1.03 (dd, J=9.46, 7.63 Hz, 2 H) 2.30 - 2.48 (m, 1 H) 2.63 - 2.79 (m, 1 H) 3.77 - 3.80 (m, 1 H) 3.82 - 3.86 (m, 3 H) 3.95 - 4.05 (m, 1 H) 4.16 - 4.26 (m, 2 H) 4.51 - 4.67 (m, 1 H) 5.20 (d, J=11.90 Hz, 1 H) 5.67 (d, J=17.40 Hz, 1 H) 6.61 (dd, J=17.40, 10.99 Hz, 1 H) 7.26 - 7.35 (m, 4 H) 7.49 - 7.58 (m, 3 H).
NaH(60%/油)(106 mg, 2.65 mmol)を、DMF中の(2S,4R)-2-メチル 1-(2-(トリメチルシリル)エチル) 4-(5'-クロロ-2'-ビニルビフェニル-4-イル)-4-ヒドロキシピロリジン-1,2-ジカルボキシレート(740 mg, 1.474 mmol)およびヨウ化メチル(0.166 mL, 2.65 mmol)の溶液(0℃)に加え、この温度で撹拌し、終夜、室温まで昇温させた。その後、該反応液を飽和NH4Cl溶液およびエーテルを用いてクエンチした。エーテル層を食塩水で洗浄し、乾燥させ、濾過し、エバポレートして粗物質を得た。該粗物質をBiotage(5-40% EtOAc/ヘキサン)でのフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、半精製(semi purified)の生成物 (2S,4R)-2-メチル 1-(2-(トリメチルシリル)エチル) 4-(5'-クロロ-2'-ビニルビフェニル-4-イル)-4-メトキシピロリジン-1,2-ジカルボキシレート(333 mg, 0.645 mmol, 44%収率)を澄明な油状物として得た。 1H NMR (500 MHz, クロロホルム-d) δ ppm 0.04 (s, 9 H) 1.01 - 1.06 (m, 2 H) 2.52 (dd, J=13.12, 8.85 Hz, 1 H) 2.78 - 2.87 (m, 1 H) 2.97 (d, J=5.19 Hz, 3 H) 3.65 (s, 1 H) 3.67 - 3.75 (m, 3 H) 3.77 (d, J=8.85 Hz, 3 H) 3.96 - 4.08 (m, 1 H) 5.21 (d, J=10.99 Hz, 1 H) 5.68 (d, J=17.40 Hz, 1 H) 6.59 (ddd, J=17.47, 11.06, 2.29 Hz, 1 H) 7.26 (d, J=2.14 Hz, 1 H) 7.29 - 7.35 (m, 3 H) 7.35 - 7.40 (m, 2 H) 7.56 (d, J=8.24 Hz, 1 H).
TBAF(2.58 mL, 2.58 mmol)を、(2S,4R)-2-メチル 1-(2-(トリメチルシリル)エチル) 4-(5'-クロロ-2'-ビニルビフェニル-4-イル)-4-メトキシピロリジン-1,2-ジカルボキシレート(333 mg, 0.645 mmol)/THF(6 mL)溶液に加え、室温で2時間撹拌した。該反応液を水で希釈し、EtOAcで抽出した。有機層を食塩水で洗浄し、MgSO4で乾燥させ、濾過し、ロータリーエバポレーターでエバポレートして、(2S,4R)-メチル 4-(5'-クロロ-2'-ビニルビフェニル-4-イル)-4-メトキシピロリジン-2-カルボキシレート(中間体12, 215 mg, 0.578 mmol, 90%収率)を黄色の油状物として得た。 LCMS: 保持時間 = 1.49分. [M-MeOH]+ = 340; Phenomenex-Luna C-18 (5μ) (3.0x50mm); 溶媒A = 10%アセトニトリル-90%水-0.1%TFA, 溶媒B = 90%アセトニトリル-10%水-0.1%TFA; グラジエント 2分かけて0%〜100%溶媒B、次いで1分間ホールド; 4mL/分; 注入量 = 5μL; 波長 = 220.
(S)-2-((ヘキサ-5-エニルオキシ)カルボニルアミノ)-3,3-ジメチルブタン酸(186 mg, 0.723 mmol)、DIEA(0.303 mL, 1.735 mmol)およびHATU(242 mg, 0.636 mmol)を、(2S,4R)-メチル 4-(5'-クロロ-2'-ビニルビフェニル-4-イル)-4-メトキシピロリジン-2-カルボキシレート(215 mg, 0.578 mmol)/DCM(7 mL)溶液に加えた。該反応液を室温で終夜撹拌した。該反応液をエバポレートし、Biotage(10-50% EtOAc:ヘキサン)で精製して、(2S,4R)-メチル 4-(5'-クロロ-2'-ビニルビフェニル-4-イル)-1-((S)-2-((ヘキサ-5-エニルオキシ)カルボニルアミノ)-3,3-ジメチルブタノイル)-4-メトキシピロリジン-2-カルボキシレート(123 mg, 0.201 mmol, 35%収率)を無色の油状物として得た。 LCMS: 保持時間 = 2.58分. [M+H]+ = 612; Phenomenex-Luna C-18 (5μ) (3.0x50mm); 溶媒A = 10%アセトニトリル-90%水-0.1%TFA, 溶媒B = 90%アセトニトリル-10%水-0.1%TFA; グラジエント 2分かけて0%〜100%溶媒B、次いで1分間ホールド; 4mL/分; 注入量 = 5μL; 波長 = 220.
(2S,4R)-メチル 4-(5'-クロロ-2'-ビニルビフェニル-4-イル)-1-((S)-2-((ヘキサ-5-エニルオキシ)カルボニルアミノ)-3,3-ジメチルブタノイル)-4-メトキシピロリジン-2-カルボキシレート(123 mg, 0.201 mmol)をDCE(25 mL)中に溶解させ、窒素で15分間スパージした。ホベイダ-グラブス触媒(13 mg, 0.020 mmol)を加え、油浴中において、80℃で2時間加熱した。該反応液をエバポレートし、粗生成物をBiotage(10-50% EtOAc/ヘキサン)でのフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、生成物(95 mg, 0.163 mmol, 81%収率)を白色の泡状物質として得た。 LCMS: 保持時間 = 2.44分. [M+H]+ = 584 および [M-MeOH]+ = 551; Phenomenex-Luna C-18 (5μ) (3.0x50mm); 溶媒A = 10%アセトニトリル-90%水-0.1%TFA, 溶媒B = 90%アセトニトリル-10%水-0.1%TFA; グラジエント 2分かけて0%〜100%溶媒B、次いで1分間ホールド; 4mL/分; 注入量 = 5μL; 波長 = 220.
工程2からの生成物(95 mg, 0.163 mmol)を酢酸エチル(3 mL)中に溶解させ、10%パラジウム炭素(17 mg, 0.016 mmol)で処理し、水素のバルーン下において終夜撹拌した。該反応液を、Milliporeマイレクス-HV 0.45μmフィルターを通して濾過し、エバポレートして、生成物(90 mg, 0.154 mmol, 94%収率)を得た。 LCMS: 保持時間 = 2.40分. [M+H]+ = 586 および [M-OMe]+ = 553; Phenomenex-Luna C-18 (5μ) (3.0x50mm); 溶媒A = 10%アセトニトリル-90%水-0.1%TFA, 溶媒B = 90%アセトニトリル-10%水-0.1%TFA; グラジエント 2分かけて0%〜100%溶媒B、次いで1分間ホールド; 4mL/分; 注入量 = 5μL; 波長 = 220.
2M 水酸化リチウム(0.23 mL, 0.46 mmol)を、THF(1 mL)およびメタノール(1 mL)中の工程3からの生成物(90 mg, 0.154 mmol)の溶液に加え、室温で18時間撹拌した。その後、該反応液を5mLの1M HClで希釈し、EtOAcで抽出した。有機層を、水、次いで食塩水で洗浄し、MgSO4で乾燥させ、濾過し、次いでエバポレートして、生成物(74 mg, 0.130 mmol, 84%収率)を白色の固形物として得た。 LCMS: 保持時間 = 2.19分. [M+H]+ = 572; Phenomenex-Luna C-18 (5μ) (3.0x50mm); 溶媒A = 10%アセトニトリル-90%水-0.1%TFA, 溶媒B = 90%アセトニトリル-10%水-0.1%TFA; グラジエント 2分かけて0%〜100%溶媒B、次いで1分間ホールド; 4mL/分; 注入量 = 5μL; 波長 = 220.
DIEA(0.068 mL, 0.389 mmol)、HATU(54 mg, 0.143 mmol)、および(1S,2R)-2-アミノ-N-(シクロプロピルスルホニル)ビ(シクロプロパン)-2-カルボキサミド, HCl塩(44 mg, 0.155 mmol)を、工程4からの生成物(74 mg, 0.130 mmol)/DCM(2 mL)溶液に加えた。該反応液を室温で終夜撹拌した。該反応液をエバポレートし、プレパラティブHPLCにより精製して、化合物20(52 mg, 0.065 mmol, 50%収率)をオフホワイト色の固形物として得た。 1H NMR (500 MHz, クロロホルム-d) δ ppm 0.24 - 0.34 (m, 1 H) 0.40 (br. s., 1 H) 0.56 (t, J=6.41 Hz, 2 H) 0.92 (d, J=12.51 Hz, 2 H) 1.01 (s, 9 H) 1.05 - 1.16 (m, 4 H) 1.16 - 1.21 (m, 1 H) 1.30 - 1.40 (m, 2 H) 1.39 - 1.49 (m, 1 H) 1.73 - 1.81 (m, 1 H) 2.47 (br. s., 1 H) 2.52 - 2.64 (m, 2 H) 2.64 - 2.78 (m, 1 H) 2.90 - 3.01 (m, 1 H) 3.03 (s, 3 H) 3.10 - 3.21 (m, 1 H) 3.60 (d, J=10.38 Hz, 1 H) 3.72 - 3.83 (m, 1 H) 3.92 (d, J=10.38 Hz, 1 H) 3.98 - 4.08 (m, 1 H) 4.13 (d, J=10.07 Hz, 1 H) 4.37 (d, J=9.77 Hz, 1 H) 4.44 (t, J=7.32 Hz, 1 H) 4.47 - 4.56 (m, 1 H) 4.86 (d, J=8.85 Hz, 1 H) 5.45 (br. s., 1 H) 5.76 (br. s., 1 H) 7.10 - 7.21 (m, 2 H) 7.24 (s, 1 H) 7.28 - 7.33 (m, 1 H) 7.37 (d, J=7.63 Hz, 1 H) 7.41 (d, J=5.19 Hz, 2 H) 9.95 (br. s., 1 H). LCMS: 保持時間 = 2.44分. [M-OMe]+ = 765; Phenomenex-Luna C-18 (5μ) (3.0x50mm); 溶媒A = 10%アセトニトリル-90%水-0.1%TFA, 溶媒B = 90%アセトニトリル-10%水-0.1%TFA; グラジエント 2分かけて0%〜100%溶媒B、次いで1分間ホールド; 4mL/分; 注入量 = 5μL; 波長 = 220.
DME(100 mL)および水(20 mL)中の1,3-ジブロモベンゼン(5.3 mL, 43.9 mmol)、炭酸カリウム(14.0 g, 101 mmol)および3-ビニルフェニルボロン酸(5 g, 33.8 mmol)の溶液(圧力容器中)を、窒素で15分間スパージした。Pd(PPh3)3(1.17 g, 1.014 mmol)を加えた後、該反応液を、終夜、80℃まで加熱した。該反応液を室温に冷却し、ロータリーエバポレーターでエバポレートした。残渣をEtOAc中に希釈し、水、次いで食塩水で洗浄し、MgSO4で乾燥させ、濾過し、エバポレートして、粗物質を得た。該粗物質を、Biotage(0-5%EtOAc:ヘキサン)でのフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、3-ブロモ-3'-ビニルビフェニル(5.21 g, 20.10 mmol, 60%収率)を澄明な液状物として得た。 1H NMR (400 MHz, クロロホルム-d) δ ppm 5.33 (d, J=10.79 Hz, 1 H) 5.84 (dd, J=17.57, 0.75 Hz, 1 H) 6.80 (dd, J=17.57, 10.79 Hz, 1 H) 7.32 (t, J=7.78 Hz, 1 H) 7.38 - 7.48 (m, 3 H) 7.51 (dddd, J=13.24, 7.84, 1.76, 1.00 Hz, 2 H) 7.56 - 7.61 (m, 1 H) 7.76 (t, J=1.88 Hz, 1 H).
マグネシウム(0.513 g, 21.11 mmol)を、窒素下において30分間、丸底フラスコ中で撹拌し、該削り状マグネシウムの表面をスクラッチした。10mLのTHFを該削り状マグネシウムに加え、さらに30分間撹拌した。3-ブロモ-3'-ビニルビフェニル(5.21 g, 20.10 mmol)/THF(100 mL)を、還流にて、激しく撹拌しながら、滴下した。グリニャール溶液を、(S)-2-メチル 1-(2-(トリメチルシリル)エチル) 4-オキソピロリジン-1,2-ジカルボキシレート(5.78 g, 20.11 mmol)/DCM(110 mL)溶液に0℃にて加え、1時間撹拌した後、飽和NH4Cl溶液を用いてクエンチした。水層をDCMで抽出し、有機物を合わせて乾燥させ、濾過し、エバポレートして、粗物質を得た。該粗物質を、Biotage(5-40% EtOAc:ヘキサン)でのフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、(2S,4R)-2-メチル 1-(2-(トリメチルシリル)エチル) 4-ヒドロキシ-4-(3'-ビニルビフェニル-3-イル)ピロリジン-1,2-ジカルボキシレート(2.9 g, 6.20 mmol, 31%収率)を黄色の泡状物質として得た。 1H NMR (500 MHz, クロロホルム-d) δ ppm 0.05 (d, J=2.44 Hz, 9 H) 0.99 (dd, J=9.77, 7.32 Hz, 1 H) 1.04 (dd, J=9.61, 7.17 Hz, 1 H) 1.27 (t, J=7.17 Hz, 1 H) 2.38 - 2.53 (m, 1 H) 2.66 - 2.82 (m, 1 H) 3.67 - 3.83 (m, 1 H) 3.82 - 3.89 (m, 3 H) 3.96 - 4.09 (m, 1 H) 4.17 - 4.32 (m, 2 H) 4.52 - 4.69 (m, 1 H) 5.32 (d, J=10.99 Hz, 1 H) 5.83 (d, J=17.40 Hz, 1 H) 6.80 (dd, J=17.55, 10.83 Hz, 1 H) 7.39 - 7.46 (m, 2 H) 7.46 - 7.52 (m, 3 H) 7.55 (ddd, J=4.58, 2.14, 1.83 Hz, 1 H) 7.61 (br. s., 1 H) 7.73 (s, 1 H). LCMS: 保持時間 = 2.32分. [M+H]+ = 468; Phenomenex-Luna C-18 (5μ) (3.0x50mm); 溶媒A = 10%アセトニトリル-90%水-0.1%TFA, 溶媒B = 90%アセトニトリル-10%水-0.1%TFA; グラジエント 2分かけて0%〜100%溶媒B、次いで1分間ホールド; 4mL/分; 注入量 = 5μL; 波長 = 220.
NaH(60%/油)(0.446 g, 11.16 mmol)を、DMF中の(2S,4R)-2-メチル 1-(2-(トリメチルシリル)エチル) 4-ヒドロキシ-4-(3'-ビニルビフェニル-3-イル)ピロリジン-1,2-ジカルボキシレート(2.9 g, 6.20 mmol)およびヨウ化メチル(0.698 mL, 11.16 mmol)の溶液(0℃)に加え、この温度で3時間撹拌した。次いで、該反応液を飽和NH4Cl溶液およびエーテルを用いてクエンチした。エーテル層を、食塩水で洗浄し、乾燥させ、濾過し、エバポレートして、粗物質を得た。該粗物質を、Biotage(5-45% EtOAc/ヘキサン)でのフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、(2S,4R)-2-メチル 1-(2-(トリメチルシリル)エチル) 4-メトキシ-4-(3'-ビニルビフェニル-3-イル)ピロリジン-1,2-ジカルボキシレート(2.3 g, 4.78 mmol, 77%収率)を澄明な油状物として得た。 1H NMR (400 MHz, クロロホルム-d) δ ppm -0.04 - 0.11 (m, 9 H) 0.89 - 1.12 (m, 2 H) 2.56 (dd, J=13.18, 8.91 Hz, 1 H) 2.86 (t, J=12.67 Hz, 1 H) 2.99 (d, J=3.01 Hz, 3 H) 3.66 - 3.92 (m, 1 H) 3.79 (d, J=7.03 Hz, 3 H) 3.99 - 4.12 (m, 1 H) 4.18 - 4.29 (m, 2 H) 4.44 - 4.70 (m, 1 H) 5.33 (d, J=10.79 Hz, 1 H) 5.84 (d, J=16.82 Hz, 1 H) 6.80 (dd, J=17.57, 11.04 Hz, 1 H) 7.34 (d, J=7.53 Hz, 1 H) 7.39 - 7.52 (m, 4 H) 7.53 - 7.59 (m, 3 H). LCMS: 保持時間 = 2.49分. [M+H]+ = 482; Phenomenex-Luna C-18 (5μ) (3.0x50mm); 溶媒A = 10%アセトニトリル-90%水-0.1%TFA, 溶媒B = 90%アセトニトリル-10%水-0.1%TFA; グラジエント 2分かけて0%〜100%溶媒B、次いで1分間ホールド; 4mL/分; 注入量 = 5μL; 波長 = 220.
TBAF(1.0M/THF, 19 mL, 19 mmol)を、(2S,4R)-2-メチル 1-(2-(トリメチルシリル)エチル) 4-メトキシ-4-(3'-ビニルビフェニル-3-イル)ピロリジン-1,2-ジカルボキシレート(2.3 g, 4.78 mmol)/THF(30 mL)の溶液に加え、室温で終夜撹拌した。該反応液をEtOAcで希釈し、水、次いで食塩水で洗浄した。有機層を集め、MgSO4で乾燥させ、濾過し、エバポレートして、(2S,4R)-メチル 4-メトキシ-4-(3'-ビニルビフェニル-3-イル)ピロリジン-2-カルボキシレート(1.75 g, 5.19 mmol, 100%収率)を黄色の油状物として得た。 LCMS: 保持時間 = 1.42分. [M-OMe]+ = 306; Phenomenex-Luna C-18 (5μ) (3.0x50mm); 溶媒A = 10%アセトニトリル-90%水-0.1%TFA, 溶媒B = 90%アセトニトリル-10%水-0.1%TFA; グラジエント 2分かけて0%〜100%溶媒B、次いで1分間ホールド; 4mL/分; 注入量 = 5μL; 波長 = 220.
(S)-2-((ブタ-3-エニルオキシ)カルボニルアミノ)-3,3-ジメチルブタン酸(255 mg, 1.111 mmol)、DIEA(0.40 mL, 2.223 mmol)およびHATU(310 mg, 0.815 mmol)を、(2S,4R)-メチル 4-メトキシ-4-(3'-ビニルビフェニル-3-イル)ピロリジン-2-カルボキシレート(250 mg, 0.741 mmol)/DCM(3 mL)溶液に加えた。該反応液を室温で2時間撹拌した。該反応液をエバポレートし、Biotage(10-40% EtOAc:ヘキサン)でのフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、(2S,4R)-メチル 1-((S)-2-((ブタ-3-エニルオキシ)カルボニルアミノ)-3,3-ジメチルブタノイル)-4-メトキシ-4-(3'-ビニルビフェニル-3-イル)ピロリジン-2-カルボキシレート(277 mg, 0.505 mmol, 68%収率)を白色の泡状物質として得た。 LCMS: 保持時間 = 2.31分. [M+H]+ = 549; Phenomenex-Luna C-18 (5μ) (3.0x50mm); 溶媒A = 10%アセトニトリル-90%水-0.1%TFA, 溶媒B = 90%アセトニトリル-10%水-0.1%TFA; グラジエント 2分かけて0%〜100%溶媒B、次いで1分間ホールド; 4mL/分; 注入量 = 5μL; 波長 = 220.
(2S,4R)-メチル 1-((S)-2-((ブタ-3-エニルオキシ)カルボニルアミノ)-3,3-ジメチルブタノイル)-4-メトキシ-4-(3'-ビニルビフェニル-3-イル)ピロリジン-2-カルボキシレート(277 mg, 0.505 mmol)をDCE(75 mL)中に溶解させ、窒素で15分間スパージした。ホベイダ-グラブス触媒 第二世代(32 mg, 0.050 mmol)を加え、油浴中において80℃で2時間加熱した。該反応液を冷却し、エバポレートし、Biotage(5-50% EtOAc/ヘキサン)で精製して、最終生成物(140 mg, 0.269 mmol, 53%収率)を白色の泡状物質として得た。 LCMS: 保持時間 = 2.17分. [M+H]+ = 521; Phenomenex-Luna C-18 (5μ) (3.0x50mm); 溶媒A = 10%アセトニトリル-90%水-0.1%TFA, 溶媒B = 90%アセトニトリル-10%水-0.1%TFA; グラジエント 2分かけて0%〜100%溶媒B、次いで1分間ホールド; 4mL/分; 注入量 = 5μL; 波長 = 220.
工程2からの生成物(140 mg, 0.269 mmol)/酢酸エチル(3 mL)を10%パラジウム炭素(29 mg, 0.027 mmol)で処理し、水素のバルーン下において終夜撹拌した。該反応液を、Milliporeマイレクス-HV 0.45μmフィルターを通して濾過し、エバポレートして生成物(139 mg, 0.266 mmol, 99%収率)を得た。 LCMS: 保持時間 = 2.22分. [M+H]+ = 523; Phenomenex-Luna C-18 (5μ) (3.0x50mm); 溶媒A = 10%アセトニトリル-90%水-0.1%TFA, 溶媒B = 90%アセトニトリル-10%水-0.1%TFA; グラジエント 2分かけて0%〜100%溶媒B、次いで1分間ホールド; 4mL/分; 注入量 = 5μL; 波長 = 220.
2M 水酸化リチウム(0.40 mL, 0.80 mmol)を、THF(1.5 mL)およびメタノール(1.5 mL)中の工程3からの生成物(139 mg, 0.266 mmol)の溶液に加え、室温で18時間撹拌した。次いで、該反応液を5mLの1M HClで希釈し、EtOAcで抽出した。有機層を、水、次いで食塩水で洗浄し、MgSO4で乾燥させ、濾過した後、エバポレートして、生成物(130 mg, 0.256 mmol, 96%収率)を白色の固形物として得た。 LCMS: 保持時間 = 1.98分. [M+H]+ = 509; Phenomenex-Luna C-18 (5μ) (3.0x50mm); 溶媒A = 10%アセトニトリル-90%水-0.1%TFA, 溶媒B = 90%アセトニトリル-10%水-0.1%TFA; グラジエント 2分かけて0%〜100%溶媒B、次いで1分間ホールド; 4mL/分; 注入量 = 5μL; 波長 = 220.
DIEA(0.134 mL, 0.767 mmol)、HATU(107 mg, 0.281 mmol)、および(1S,2R)-2-アミノ-N-(シクロプロピルスルホニル)ビ(シクロプロパン)-2-カルボキサミド, HCl塩(86 mg, 0.307 mmol)を、工程4からの生成物(130 mg, 0.256 mmol)/DCM(2.5 mL)溶液に加えた。該反応液を室温で2時間撹拌した。該反応液をエバポレートし、プレパラティブHPLCにより精製して、化合物21(63 mg, 0.084 mmol, 33%収率)をオフホワイト色の固形物として得た。 1H NMR (500 MHz, クロロホルム-d) δ ppm 0.13 - 0.26 (m, 2 H) 0.43 - 0.57 (m, 2 H) 0.79 - 0.89 (m, 2 H) 0.94 - 1.01 (m, 2 H) 1.04 (s, 9 H) 1.20 (dd, J=9.77, 5.49 Hz, 1 H) 1.23 - 1.28 (m, 1 H) 1.29 - 1.37 (m, 1 H) 1.53 - 1.73 (m, 2 H) 1.73 - 1.84 (m, 2 H) 2.30 (dd, J=12.36, 6.87 Hz, 1 H) 2.51 - 2.69 (m, 2 H) 2.71 - 2.81 (m, 1 H) 2.82 - 2.95 (m, 1 H) 3.16 (s, 3 H) 3.78 (td, J=7.40, 3.81 Hz, 1 H) 3.97 (dd, J=9.31, 6.87 Hz, 1 H) 4.02 (d, J=10.38 Hz, 1 H) 4.50 (d, J=9.77 Hz, 1 H) 4.62 - 4.71 (m, 1 H) 4.73 (d, J=10.38 Hz, 1 H) 5.75 (d, J=9.77 Hz, 1 H) 6.52 (s, 1 H) 7.15 (d, J=7.02 Hz, 1 H) 7.29 - 7.42 (m, 4 H) 7.43 - 7.58 (m, 3 H). LCMS: 保持時間 = 2.23分. [M+H]+ = 735; Phenomenex-Luna C-18 (5μ) (3.0x50mm); 溶媒A = 10%アセトニトリル-90%水-0.1%TFA, 溶媒B = 90%アセトニトリル-10%水-0.1%TFA; グラジエント 2分かけて0%〜100%溶媒B、次いで1分間ホールド; 4mL/分; 注入量 = 5μL; 波長 = 220.
DME(120 mL)および水(24 mL)中のメチル 2-ブロモ-5-ニトロベンゾエート(6 g, 23.07 mmol)、炭酸カリウム(9.6 g, 69.2 mmol)および4-ブロモフェニルボロン酸(6.02 g, 30.0 mmol)の溶液(圧力容器中)を、窒素で15分間スパージした。Pd(PPh3)3(0.80 g, 0.692 mmol)を加えた後、該反応液を80℃まで終夜加熱した。該反応液を室温に冷却し、エバポレートした。残渣をEtOAc中に希釈し、水、次いで食塩水で洗浄し、MgSO4で乾燥させ、濾過し、エバポレートして、粗物質を得た。該粗物質を、Biotage(0-15%EtOAc:ヘキサン)でのフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、メチル 4'-ブロモ-4-ニトロビフェニル-2-カルボキシレート(7.2 g, 21.42 mmol, 93%収率)を薄黄色の固形物として得た。 1H NMR (500 MHz, クロロホルム-d) δ ppm 3.75 (s, 3 H) 7.19 (m, 2 H) 7.52 (d, J=8.55 Hz, 1 H) 7.58 (m, 2 H) 8.37 (dd, J=8.24, 2.44 Hz, 1 H) 8.71 (d, J=2.44 Hz, 1 H). ).
塩化アンモニウム(11.5 g, 214 mmol)および亜鉛(14.0 g, 214 mmol)を、メチル 4'-ブロモ-4-ニトロビフェニル-2-カルボキシレート(7.2 g, 21.42 mmol)/MeOH(110 mL)溶液に加え、室温で1時間撹拌した。固形物を濾過し、該濾液をエバポレートした。残渣をジエチルエーテル中に溶解させ、濾過し、濃縮して、メチル 4-アミノ-4'-ブロモビフェニル-2-カルボキシレート(7.8g, 25.5 mmol, 119%収率)を得た。 LCMS: 保持時間 = 1.54分. [M+H]+ = 305および307; Phenomenex-Luna C-18 (5μ) (3.0x50mm); 溶媒A = 10%アセトニトリル-90%水-0.1%TFA, 溶媒B = 90%アセトニトリル-10%水-0.1%TFA; グラジエント 2分かけて0%〜100%溶媒B、次いで1分間ホールド; 4mL/分; 注入量 = 5μL; 波長 = 220.
硫酸ジメチル(7.30 mL, 76 mmol)を、アセトン(150 mL)中のメチル 4-アミノ-4'-ブロモビフェニル-2-カルボキシレート(7.8 g, 25.5 mmol)および炭酸カリウム(10.9 g, 79 mmol)の混合液に加え、終夜、還流加熱した。該反応液を冷却し、水(10 mL)を加え、1時間撹拌を続けて、過剰量の硫酸ジメチルを分解させた(destroy)。該反応混合液を濾過し、エバポレートした後、残渣をDCM中に溶解させ、水で洗浄した。有機物を乾燥させ、濾過し、エバポレートして、粗物質を得た。該粗物質をBiotage(0-20% EtOAc:ヘキサン)で精製して、メチル 4'-ブロモ-4-(ジメチルアミノ)ビフェニル-2-カルボキシレート(1.9 g, 5.69 mmol, 22%収率)をオレンジ色の油状物として得た。 1H NMR (400 MHz, クロロホルム-d) δ ppm 3.03 (s, 6 H) 3.66 (s, 3 H) 6.87 (dd, J=8.66, 2.89 Hz, 1 H) 7.12 - 7.18 (m, 3 H) 7.21 (d, J=8.53 Hz, 1 H) 7.46 - 7.51 (m, 2 H). LCMS: 保持時間 = 1.86分. [M+H]+ = 335; Phenomenex-Luna C-18 (5μ) (3.0x50mm); 溶媒A = 10%アセトニトリル-90%水-0.1%TFA, 溶媒B = 90%アセトニトリル-10%水-0.1%TFA; グラジエント 2分かけて0%〜100%溶媒B、次いで1分間ホールド; 4mL/分; 注入量 = 5μL; 波長 = 220.
2M 水酸化リチウム(8.5 mL, 17.0 mmol)を、THF(20 mL)およびメタノール(20 mL)中のメチル 4'-ブロモ-4-(ジメチルアミノ)ビフェニル-2-カルボキシレート(1.9 g, 5.69 mmol)の溶液に加え、室温で18時間撹拌した。次いで、該反応液を1M HClで希釈し、EtOAcで抽出した。有機層を、水、次いで食塩水で洗浄し、MgSO4で乾燥させ、濾過した後、エバポレートして、4'-ブロモ-4-(ジメチルアミノ)ビフェニル-2-カルボン酸(1.34 g, 4.19 mmol, 74%収率)を白色の固形物として得た。 LCMS: 保持時間 = 1.54分. [M+H]+ = 319および321; Phenomenex-Luna C-18 (5μ) (3.0x50mm); 溶媒A = 10%アセトニトリル-90%水-0.1%TFA, 溶媒B = 90%アセトニトリル-10%水-0.1%TFA; グラジエント 2分かけて0%〜100%溶媒B、次いで1分間ホールド; 4mL/分; 注入量 = 5μL; 波長 = 220.
4'-ブロモ-4-(ジメチルアミノ)ビフェニル-2-カルボン酸(1.34 g, 4.19 mmol)/THF(40 mL)を0℃に冷却した。ボランテトラヒドロフラン錯体(8.37 mL, 8.37 mmol)を15分かけて滴下し、終夜、室温まで昇温させた。該反応液をEtOAcで希釈し、水、飽和塩化アンモニウム、次いで食塩水で洗浄した。有機層をMgSO4で乾燥させ、濾過し、エバポレートして、(4'-ブロモ-4-(ジメチルアミノ)ビフェニル-2-イル)メタノール(1.25 g, 4.08 mmol, 98%収率)を白色の固形物として得た。 1H NMR (500 MHz, クロロホルム-d) δ ppm 2.93 - 3.05 (m, 6 H) 4.58 (s, 2 H) 6.72 (dd, J=8.55, 2.75 Hz, 1 H) 6.90 (d, J=2.75 Hz, 1 H) 7.14 (d, J=8.55 Hz, 1 H) 7.21 - 7.25 (m, 2 H) 7.44 - 7.55 (m, 2 H).
IBX(3.29 g, 11.76 mmol)を、(4'-ブロモ-4-(ジメチルアミノ)ビフェニル-2-イル)メタノール(1.8 g, 5.88 mmol)/dmso(50 mL)溶液に加え、40℃で3時間撹拌した。該反応液を水で希釈し、ジエチルエーテルで抽出した。エーテル層をMgSO4で乾燥させ、濾過し、エバポレートして、粗物質を得た。該粗生成物をBiotage(5-20% EtOAc:ヘキサン)で精製して、4'-ブロモ-4-(ジメチルアミノ)ビフェニル-2-カルバルデヒド(1.25 g, 4.11 mmol, 70%収率)を黄色の固形物として得た。 1H NMR (500 MHz, クロロホルム-d) δ ppm 2.95 - 3.13 (m, 6 H) 7.01 (dd, J=8.55, 3.05 Hz, 1 H) 7.22 (m, 2 H) 7.28 - 7.33 (m, 2 H) 7.57 (m, 2 H) 9.96 (s, 1 H).
BuLi(2.5M/ヘキサン, 2.96 mL, 7.40 mmol)を、メチルトリフェニルホスホニウムブロミド(2.94 g, 8.22 mmol)/THF(20 mL)溶液に加えた。該混合液を0℃で1時間撹拌した。4'-ブロモ-4-(ジメチルアミノ)ビフェニル-2-カルバルデヒド(1.25 g, 4.11 mmol)/THF(20 mL)溶液を0℃にて滴下した。該混合液を、0℃から室温まで、終夜撹拌した。該反応液を濾過し、エバポレートした。残渣をジエチルエーテルで希釈し、水および食塩水で洗浄した。エーテル層を乾燥させ(MgSO4)、濾過し、エバポレートして、粗物質を得た。該粗物質をBiotage(5-15%EtOAc:ヘキサン)で精製して、4'-ブロモ-N,N-ジメチル-2-ビニルビフェニル-4-アミン(725 mg, 2.399 mmol, 58%収率)を黄色の固形物として得た。 1H NMR (500 MHz, クロロホルム-d) δ ppm 2.97 - 3.07 (m, 6 H) 5.20 (d, J=10.99 Hz, 1 H) 5.69 (d, J=17.40 Hz, 1 H) 6.70 (dd, J=17.40, 10.99 Hz, 1 H) 6.76 (dd, J=8.55, 2.75 Hz, 1 H) 6.95 (d, J=2.44 Hz, 1 H) 7.16 (d, J=8.55 Hz, 1 H) 7.21 (m, J=8.24 Hz, 2 H) 7.50 (m, J=8.55 Hz, 2 H).
マグネシウム(62 mg, 2.55 mmol)を、N2下において15分間、丸底フラスコ中で撹拌して、該削り状マグネシウムの表面をスクラッチした。10mLのTHFを該削り状マグネシウムに加え、さらに30分間撹拌した。4'-ブロモ-N,N-ジメチル-2-ビニルビフェニル-4-アミン(735 mg, 2.432 mmol)/THF(20 mL)を、還流にて、激しく撹拌しながら、滴下した。グリニャール溶液を、(S)-2-メチル 1-(2-(トリメチルシリル)エチル) 4-オキソピロリジン-1,2-ジカルボキシレート(699 mg, 2.432 mmol)/DCM(20 mL)溶液に室温で加え、1時間撹拌した後、飽和NH4Cl溶液を用いてクエンチした。水層をDCMで抽出し、有機物を合わせて乾燥させ、濾過し、エバポレートして粗物質を得た。該粗物質を、Biotage(10-40% EtOAc:ヘキサン)でのフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、(2S,4R)-2-メチル 1-(2-(トリメチルシリル)エチル) 4-(4'-(ジメチルアミノ)-2'-ビニルビフェニル-4-イル)-4-ヒドロキシピロリジン-1,2-ジカルボキシレート(330 mg, 0.646 mmol, 27%収率)を黄色の泡状物質として得た。 1H NMR (400 MHz, クロロホルム-d) δ ppm 0.04 (s, 9 H) 0.99 - 1.11 (m, 2 H) 2.34 - 2.52 (m, 1 H) 2.62 - 2.81 (m, 1 H) 3.00 - 3.07 (m, 6 H) 3.68 - 3.81 (m, 1 H) 3.82 - 3.89 (m, 3 H) 4.17 - 4.34 (m, 3 H) 4.49 - 4.68 (m, 1 H) 5.19 (dd, J=11.04, 1.25 Hz, 1 H) 5.70 (dd, J=17.57, 1.25 Hz, 1 H) 6.67 - 6.80 (m, 2 H) 6.96 (d, J=2.26 Hz, 1 H) 7.16 - 7.22 (m, 1 H) 7.34 (m, 2 H) 7.49 (m, J=8.28 Hz, 2 H). LCMS: 保持時間 = 1.71分. [M+H]+ = 511; Phenomenex-Luna C-18 (5μ) (3.0x50mm); 溶媒A = 10%アセトニトリル-90%水-0.1%TFA, 溶媒B = 90%アセトニトリル-10%水-0.1%TFA; グラジエント 2分かけて0%〜100%溶媒B、次いで1分間ホールド; 4mL/分; 注入量 = 5μL; 波長 = 220.
NaH(60%/油)(46 mg, 1.163 mmol)を、DMF中の(2S,4R)-2-メチル 1-(2-(トリメチルシリル)エチル) 4-(4'-(ジメチルアミノ)-2'-ビニルビフェニル-4-イル)-4-ヒドロキシピロリジン-1,2-ジカルボキシレート(330 mg, 0.646 mmol)およびヨウ化メチル(0.073 mL, 1.163 mmol)の溶液(0℃)に加え、この温度で撹拌し、終夜、室温まで昇温させた。次いで、該反応液を飽和NH4Cl溶液およびエーテルを用いてクエンチした。エーテル層を食塩水で洗浄し、乾燥させ、濾過し、エバポレートして、粗物質を得た。該粗物質を、Biotage(5-45% EtOAc/ヘキサン)でのフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、半精製の(2S,4R)-2-メチル 1-(2-(トリメチルシリル)エチル) 4-(4'-(ジメチルアミノ)-2'-ビニルビフェニル-4-イル)-4-メトキシピロリジン-1,2-ジカルボキシレート(231 mg, 0.440 mmol, 68%収率)を澄明な油状物として得た。 LCMS: 保持時間 = 1.86分. [M+H]+ = 525; Phenomenex-Luna C-18 (5μ) (3.0x50mm); 溶媒A = 10%アセトニトリル-90%水-0.1%TFA, 溶媒B = 90%アセトニトリル-10%水-0.1%TFA; グラジエント 2分かけて0%〜100%溶媒B、次いで1分間ホールド; 4mL/分; 注入量 = 5μL; 波長 = 220.
TBAF(1.0M/THF, 1.7 mL, 1.7 mmol)を、(2S,4R)-2-メチル 1-(2-(トリメチルシリル)エチル) 4-(4'-(ジメチルアミノ)-2'-ビニルビフェニル-4-イル)-4-メトキシピロリジン-1,2-ジカルボキシレート(231 mg, 0.440 mmol)/THF(5 mL)溶液に加え、室温で1時間撹拌した。該反応液をエバポレートして、クルードな(2S,4R)-メチル 4-(4'-(ジメチルアミノ)-2'-ビニルビフェニル-4-イル)-4-メトキシピロリジン-2-カルボキシレート(167 mg, 0.439 mmol, 100%収率)をオレンジ色の油状物として得て、精製せずに次の工程でそのまま用いた。 LCMS: 保持時間 = 1.01分. [M-OMe]+ = 349; Phenomenex-Luna C-18 (5μ) (3.0x50mm); 溶媒A = 10%アセトニトリル-90%水-0.1%TFA, 溶媒B = 90%アセトニトリル-10%水-0.1%TFA; グラジエント 2分かけて0%〜100%溶媒B、次いで1分間ホールド; 4mL/分; 注入量 = 5μL; 波長 = 220.
(S)-2-((2,2-ジメチルヘキサ-5-エニルオキシ)カルボニルアミノ)-3,3-ジメチルブタン酸(62 mg, 0.217 mmol)、DIEA(0.076 mL, 0.434 mmol)およびHATU(61 mg, 0.159 mmol)を、(2S,4R)-メチル 4-(4'-(ジメチルアミノ)-2'-ビニルビフェニル-4-イル)-4-メトキシピロリジン-2-カルボキシレート(55 mg, 0.145 mmol)/DCM(3 mL)溶液に加えた。該反応液を室温で2時間撹拌した。該反応液をエバポレートし、Biotage(10-45% EtOAc:ヘキサン)で精製して、(2S,4R)-メチル 4-(4'-(ジメチルアミノ)-2'-ビニルビフェニル-4-イル)-1-((S)-2-((2,2-ジメチルヘキサ-5-エニルオキシ)カルボニルアミノ)-3,3-ジメチルブタノイル)-4-メトキシピロリジン-2-カルボキシレート(61 mg, 0.094 mmol, 65%収率)を黄色の油状物として得た。 LCMS: 保持時間 = 2.00分. [M-OMe]+ = 616および [M+H] = 648; Phenomenex-Luna C-18 (5μ) (3.0x50mm); 溶媒A = 10%アセトニトリル-90%水-0.1%TFA, 溶媒B = 90%アセトニトリル-10%水-0.1%TFA; グラジエント 2分かけて0%〜100%溶媒B、次いで1分間ホールド; 4mL/分; 注入量 = 5μL; 波長 = 220.
(2S,4R)-メチル 4-(4'-(ジメチルアミノ)-2'-ビニルビフェニル-4-イル)-1-((S)-2-((2,2-ジメチルヘキサ-5-エニルオキシ)カルボニルアミノ)-3,3-ジメチルブタノイル)-4-メトキシピロリジン-2-カルボキシレート(61mg, 0.094 mmol)をDCE(15 mL)中に溶解させ、窒素で15分間スパージした。ホベイダ-グラブス触媒(6 mg, 9.42 μmol)を加え、油浴中において、80℃まで終夜加熱した。該反応液を冷却し、エバポレートし、Biotage(10-45%EtOAc/ヘキサン)でのフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、半-精製の生成物(53 mg, 0.086 mmol, 91%収率)を澄明な油状物として得た。 LCMS: 保持時間 = 1.80分. [M+H] = 620; Phenomenex-Luna C-18 (5μ) (3.0x50mm); 溶媒A = 10%アセトニトリル-90%水-0.1%TFA, 溶媒B = 90%アセトニトリル-10%水-0.1%TFA; グラジエント 2分かけて0%〜100%溶媒B、次いで1分間ホールド; 4mL/分; 注入量 = 5μL; 波長 = 220.
工程2からの生成物(53 mg, 0.086 mmol)/MeOH(3 mL)を、10%パラジウム炭素カートリッジに通し、H-Cube装置で90バールのH2下において水素化した。該反応液をエバポレートして、生成物(30 mg, 0.048 mmol, 56%収率)を得た。 LCMS: 保持時間 = 1.74分. [M+H]+ = 622; Phenomenex-Luna C-18 (5μ) (3.0x50mm); 溶媒A = 10%アセトニトリル-90%水-0.1%TFA, 溶媒B = 90%アセトニトリル-10%水-0.1%TFA; グラジエント 2分かけて0%〜100%溶媒B、次いで1分間ホールド; 4mL/分; 注入量 = 5μL; 波長 = 220.
2.0M 水酸化リチウム(0.072 mL, 0.145 mmol)を、THF(1 mL)およびMeOH(1 mL)中の工程3からの生成物(30 mg, 0.048 mmol)の溶液に加え、室温で終夜撹拌した。該反応液を1M HClで希釈し、EtOAcで抽出した。有機層を食塩水で洗浄し、MgSO4で乾燥させ、濾過し、エバポレートして、生成物(26 mg, 0.043 mmol, 89%収率)をオフホワイト色の泡状物質として得た。 LCMS: 保持時間 = 1.55分. [M+H] = 608; Phenomenex-Luna C-18 (5μ) (3.0x50mm); 溶媒A = 10%アセトニトリル-90%水-0.1%TFA, 溶媒B = 90%アセトニトリル-10%水-0.1%TFA; グラジエント 2分かけて0%〜100%溶媒B、次いで1分間ホールド; 4mL/分; 注入量 = 5μL; 波長 = 220.
DIEA(0.022 mL, 0.128 mmol)、HATU(18 mg, 0.047 mmol)、および(1S,2R)-2-アミノ-N-(シクロプロピルスルホニル)ビ(シクロプロパン)-2-カルボキサミド, HCl塩(14 mg, 0.051 mmol)を、工程4からの生成物(26 mg, 0.043 mmol)/DCM(1.5 mL)溶液に加えた。該反応液を室温で4時間撹拌した。該反応液をエバポレートし、プレパラティブHPLCにより精製して、化合物22(1 mg, 1.079 μmol, 2.5%収率)を白色の固形物として得た。 1H NMR (500 MHz, クロロホルム-d) δ ppm 0.29 (d, J=4.58 Hz, 2 H) 0.49 - 0.63 (m, 1 H) 0.77 (t, J=8.85 Hz, 6 H) 0.83 - 0.93 (m, 6 H) 1.02 (s, 9 H) 1.11 - 1.19 (m, 2 H) 1.25 (d, J=7.93 Hz, 4 H) 1.33 - 1.46 (m, 4 H) 1.82 (d, J=5.80 Hz, 1 H) 2.31 - 2.53 (m, 1 H) 2.65 (br. s., 2 H) 2.98 (s, 6 H) 3.09 (s, 3 H) 3.89 - 4.04 (m, 1 H) 4.29 (br. s., 1 H) 4.33 - 4.45 (m, 1 H) 5.31 (br. s., 1 H) 6.55 - 6.75 (m, 3 H) 7.07 - 7.17 (m, 1 H) 7.28 - 7.32 (m, 4 H) 7.37 (s, 1 H). LCMS: 保持時間 = 1.86分. [M+H] = 834; Phenomenex-Luna C-18 (5μ) (3.0x50mm); 溶媒A = 10%アセトニトリル-90%水-0.1%TFA, 溶媒B = 90%アセトニトリル-10%水-0.1%TFA; グラジエント 2分かけて0%〜100%溶媒B、次いで1分間ホールド; 4mL/分; 注入量 = 5μL; 波長 = 220.
HCV NS3/4Aプロテアーゼ複合体酵素アッセイおよび細胞ベースのHCVレプリコンアッセイを本発明において用い、下記の通り調製し、実施し、検証した。
BMS株、H77株またはJ4L6S株由来のHCV NS3プロテアーゼ複合体を、下記のとおり産生した。これらの精製した組換えタンパク質を、均一アッセイ(下記参照)において使用するために産生し、HCV NS3タンパク質分解活性の阻害において本発明の化合物がいかに有効であるかを示した。
このin vitroアッセイは、本発明の化合物による、上記のBMS株、H77株もしくはJ4L6S株由来のHCV NS3プロテアーゼ複合体の阻害を測定することを目的とした。このアッセイにより、HCV NS3タンパク質分解活性の阻害において本発明の化合物がいかに有効であるかが示された。
100-[(δFinh/δFcon)x100]
(式中、δFは曲線の線形範囲にわたる蛍光の変化である)を用いて阻害率を算出した。非線形曲線の当てはめを阻害-濃度データに適用し、Excel XLfit ソフトウェアの使用により、式、y=A+((B-A)/(1+((C/x)^D)))を用いて、50%有効濃度(IC50)を算出した。
HCV NS3/4Aプロテアーゼ複合体の阻害における本発明の化合物のin vitro選択性を示すために、他のセリンもしくはシステインプロテアーゼと比較した、特異性アッセイを実施した。
50 mM トリス(ヒドロキシメチル)アミノメタン塩酸塩(トリス-HCl) pH 8、0.5 M 硫酸ナトリウム(Na2SO4)、50 mM NaCl、0.1 mM EDTA、3% DMSO、0.01% Tween-20、ならびに5 μM LLVY-AMCおよび1 nM キモトリプシン。
50 M トリス-HCl、pH 8.0、50 mM NaCl、0.1mM EDTA、3% DMSO、0.02% Tween-20、5 μM succ-AAPV-AMC、および20 nM HNEもしくは8 nM PPE;
100 mM NaOAC(酢酸ナトリウム) pH 5.5、3% DMSO、1 mM TCEP(トリス(2-カルボキシエチル)ホスフィン塩酸塩)、5 nM カテプシンB(酵素ストックは使用の前に20 mM TCEPを含有するバッファー中で活性化させた)、およびH2O中に希釈した2 μM Z-FR-AMC。
[1-((UVinh-UVblank)/(UVctl-UVblank))] x 100
を用いて算出した。
非線形曲線の当てはめを阻害-濃度データに適用し、Excel XLfit ソフトウェアを用いて50%有効濃度(IC50)を算出した。
HCVレプリコン全細胞系(whole cell system)を、Lohmann V, Korner F, Koch J, Herian U, Theilmann L, Bartenschlager R., Science 285(5424):110-3 (1999)による記載のとおり確立した。この系により、本発明者は、HCV RNA複製における本発明のHCVプロテアーゼ化合物の効果を評価することができた。簡単に述べると、Lohmannの論文に記載されたHCV 株1b配列(受託番号:AJ238799)を用いて、HCV cDNAをOperon Technologies, Inc. (Alameda, CA)が合成し、次いで、完全長レプリコンを標準的な分子生物学的技法を用いてプラスミドpGem9zf(+)(Promega, Madison, WI)中に構築した。該レプリコンは、(i)カプシドタンパク質の最初の12個のアミノ酸に融合したHCV 5' UTR、(ii)ネオマイシンホスホトランスフェラーゼ遺伝子(neo)、(iii)脳心筋炎ウイルス(EMCV)からのIRES、ならびに(iv)HCV NS3からNS5B遺伝子およびHCV 3' UTRから成る。プラスミドDNAをScaIで直線化し、RNA転写物を、メーカーの説明書に従ってT7 MegaScript転写キット(Ambion, Austin, TX)を用いて、in vitroで合成した。cDNAのin vitro転写物を、ヒト肝癌細胞株であるHUH-7にトランスフェクトした。HCVレプリコンを恒常的に発現している細胞の選択を、選択マーカーであるネオマイシン(G418)の存在下において行った。得られた細胞株を、経時的な、プラス鎖およびマイナス鎖RNA生成ならびにタンパク質生成についてキャラクタライズした。
HCVレプリコンFRETアッセイを、HCVウイルス複製における本発明に記載の化合物の阻害効果をモニターするために開発した。HCVレプリコンを恒常的に発現するHUH-7細胞を、10%ウシ胎仔血清(FCS)(Sigma)および1 mg/ml G418(Gibco-BRL)を含有するダルベッコ改変イーグル培地(DMEM)(Gibco-BRL)中で増殖させた。細胞を、前夜に、96-ウェル組織培養無菌プレート中に播種した(1.5 x 104細胞/ウェル)。化合物、および化合物を含有しない対照を、希釈プレートにおいて、4% FCS、1:100 ペニシリン/ストレプトマイシン(Gibco-BRL)、1:100 L-グルタミンおよび5% DMSOを含有するDMEM中で調製した(アッセイにおいて0.5% DMSO 最終濃度)。化合物/DMSO混合物を細胞に加え、37℃で4日間インキュベートした。4日後、CC50読み取りのためにアラマーブルー(Trek Diagnotstic Systems)を用いて、まず最初に細胞毒性について細胞を評価した。細胞をインキュベートしている培地に1/10の容量のアラマーブルーを加えることにより、化合物の毒性(CC50)を決定した。4時間後、Cytofluor Series 4000(Perspective Biosystems)を用いて、530 nmの励起波長および580 nmの発光波長で、各ウェルからの蛍光シグナルを読み取った。次いで、プレートをリン酸緩衝生理食塩水(PBS)(3回、150 μl)で完全にすすいだ。該細胞を、HCVプロテアーゼ基質、蒸留水で1倍に希釈した5X細胞ルシフェラーゼ細胞培養溶解試薬(Promega #E153A)、150 mMの最終濃度まで加えたNaCl、100% DMSO中の2 mMストックから10 μMの最終濃度まで希釈したFRETペプチド基質(上記の酵素アッセイについて説明した通り)を含む、25 μlの溶解アッセイ試薬で溶解した。その後、該プレートを、340 nm励起/490 nm発光、21サイクルの自動モードに設定されたCytofluor 4000装置に設置し、プレートを運動モードで読み取った。IC50決定についての記載の通り、EC50決定を行った。
二次アッセイとして、レプリコンFRETアッセイからのEC50決定を、レプリコンルシフェラーゼレポーターアッセイにおいて確認した。レプリコンルシフェラーゼレポーターアッセイの利用は、Kriegerらによって最初に記載された(Krieger N, Lohmann V, and Bartenschlager R, J. Virol. 75(10):4614-4624 (2001))。本発明者らのFRETアッセイに記載のレプリコンコンストラクトを、ウミシイタケルシフェラーゼ遺伝子のヒト化形態およびルシフェラーゼ遺伝子の3'-末端に直接融合しているリンカー配列をコードするcDNAを挿入することによって改変した。この挿入物は、ネオマイシンマーカー遺伝子の直接上流のコア中に位置するAsc1制限部位を用いて、レプリコンコンストラクトに導入された。1179位での適応的変異(セリンからイソロイシン)も導入した(Blight KJ, Kolykhalov, AA, Rice, CM, Science 290(5498):1972-1974)。このHCVレプリコンコンストラクトを恒常的に発現している安定な細胞株を、上記の通り産生した。ルシフェラーゼレポーターアッセイを、以下のとおり改変してHCVレプリコンFRETアッセイについての記載の通り設定した。37℃/5% CO2インキュベーター中で4日間の後、Promega Dual-Gloルシフェラーゼアッセイシステムを使用して、ウミシイタケルシフェラーゼ活性について細胞を分析した。細胞を含有する各ウェルから培地(100 μl)を除去した。残った50 μlの培地に、50 μlのDual-Gloルシフェラーゼ試薬を加え、プレートを室温で10分〜2時間揺動させた。次いで、Dual-Glo Stop & Glo試薬(50 μl)を各ウェルに加え、プレートを室温でさらに10分〜2時間再び揺動させた。発光プログラムを用いて、Packard TopCount NXTにおいて、プレートを読み取った。
%対照= 実験ウェル(+化合物)における平均ルシフェラーゼシグナル
DMSO対照ウェル(−化合物)における平均ルシフェラーゼシグナル
を用いて算出した。
XLfitを用いて値をグラフ化し、分析して、EC50値を得た。
表2
Claims (22)
- 式(I):
nおよびn'は、各々独立して、0、1、2または3であり;
R1は、ヒドロキシまたは-NHSO2R6から選択され;
R2は、水素、アルケニル、アルキル、またはシクロアルキルから選択され、ここで、該アルケニル、該アルキル、および該シクロアルキルは各々、1、2、3、もしくは4個のハロ基で適宜置換されており;
R3は、水素、アルコキシ、アルキルスルファニル、アルキルスルホニル、アルキルスルホキシル、またはヒドロキシから選択され;
各R4およびR4'は、独立して、アルコキシ、アルキル、シアノ、ハロ、ハロアルコキシ、ハロアルキル、ヒドロキシ、または-NRaRbから選択され;
R5は、水素、アルケニル、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、(シクロアルキル)アルキル、ヘテロシクリル、またはヘテロシクリルアルキルから選択され;ここで、該アルキルおよびシクロアルキルは、各々、アルコキシ、ハロアルコキシ、ハロ、ハロアルキル、シアノ、もしくはジアルキルアミノから選択される1個の基で適宜置換されており;
R6は、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、(シクロアルキル)アルキル、ヘテロシクリル、または-NRaRbから選択され;ここで、該アルキルおよびシクロアルキルは、各々、アルキル、アルコキシ、ハロ、ハロアルキル、シアノ、シアノアルキル、もしくはハロアルコキシから選択される1個の基で適宜置換されており;
RaおよびRbは、独立して、水素、アルコキシ、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、(シクロアルキル)アルキル、ハロアルキル、ヘテロシクリル、またはヘテロシクリルアルキルから選択され;
Qは、C4-8飽和もしくは不飽和鎖であり、ここで、該鎖は、アルキル、ハロ、もしくはハロアルキルから独立して選択される1、2、3、もしくは4個の基で適宜置換されており、ここで、該アルキルおよびハロアルキル基は、それらが結合している炭素原子とともに、3-7員環を適宜形成することができ;そして、
Zは、O、CH2、またはNRz(ここで、Rzは水素またはアルキルから選択される)から選択される]
の化合物または医薬的に許容されるその塩。 - R1が-NHSO2R6である、請求項1に記載の化合物または医薬的に許容されるその塩。
- nおよびn'が各々0または1である、請求項2に記載の化合物または医薬的に許容されるその塩。
- QがC4-7飽和無置換鎖であって、ZがOである、請求項3に記載の化合物または医薬的に許容されるその塩。
- R3がアルコキシである、請求項4に記載の化合物または医薬的に許容されるその塩。
- R2がアルケニル、2個のハロ基で適宜置換されたアルキル、または無置換シクロアルキルから選択される、請求項5に記載の化合物または医薬的に許容されるその塩。
- R5がアルキルである、請求項6に記載の化合物または医薬的に許容されるその塩。
- R1が-NHSO2R6であり;
R2がアルケニル、2個のハロ基で適宜置換されたアルキル、または無置換シクロアルキルから選択され;そして、
R5がアルキルである、
請求項1に記載の化合物または医薬的に許容されるその塩。 - nおよびn'が各々0または1であり;
R1が-NHSO2R6であり;ここでR6はシクロアルキルであり;
R2がアルケニル、2個のハロ基で適宜置換されたアルキル、または無置換シクロアルキルアルキルであり;
R3がアルコキシであり;
R5がアルキルであり;
QがC4-7飽和無置換鎖であり;そして、
ZがOである、
請求項1に記載の化合物または医薬的に許容されるその塩。 - 請求項1に記載の化合物もしくは医薬的に許容されるその塩、および医薬的に許容される担体を含有する組成物。
- 抗-HCV活性を有する少なくとも1つのさらなる化合物をさらに含有する、請求項11に記載の組成物。
- 該さらなる化合物の少なくとも1つがインターフェロンまたはリバビリンである、請求項12に記載の組成物。
- 該インターフェロンが、インターフェロンα2B、ペグインターフェロンα、コンセンサスインターフェロン、インターフェロンα2A、またはリンパ芽球インターフェロンタウから選択される、請求項13に記載の組成物。
- 該さらなる化合物の少なくとも1つが、インターロイキン2、インターロイキン6、インターロイキン12、1型ヘルパーT細胞応答の発生を増強する化合物、干渉RNA、アンチセンスRNA、イミキモド、リバビリン、イノシン5'-一リン酸脱水素酵素阻害剤、アマンタジン、またはリマンタジンから選択される、請求項12に記載の組成物。
- 該さらなる化合物の少なくとも1つが、HCV感染症の治療のために、HCVメタロプロテアーゼ、HCVセリンプロテアーゼ、HCVポリメラーゼ、HCVヘリカーゼ、HCV NS4Bタンパク質、HCVエントリー、HCVアセンブリ、HCVイグレス、HCV NS5Aタンパク質、またはIMPDHから選択される標的の機能を阻害するのに有効である、請求項12に記載の組成物。
- 治療上有効な量の請求項1に記載の化合物もしくは医薬的に許容されるその塩を患者に投与することを含む、患者においてHCV感染症を治療する方法。
- 抗-HCV活性を有する少なくとも1つのさらなる化合物を、請求項1に記載の化合物もしくは医薬的に許容されるその塩より前、後、もしくは同時に投与することをさらに含む、請求項17に記載の方法。
- 該さらなる化合物の少なくとも1つがインターフェロンまたはリバビリンである、請求項18に記載の方法。
- 該インターフェロンが、インターフェロンα2B、ペグインターフェロンα、コンセンサスインターフェロン、インターフェロンα2A、またはリンパ芽球インターフェロンタウから選択される、請求項19に記載の方法。
- 該さらなる化合物の少なくとも1つが、インターロイキン2、インターロイキン6、インターロイキン12、1型ヘルパーT細胞応答の発生を増強する化合物、干渉RNA、アンチセンスRNA、イミキモド、リバビリン、イノシン5'-一リン酸脱水素酵素阻害剤、アマンタジン、またはリマンタジンから選択される、請求項18に記載の方法。
- 該さらなる化合物の少なくとも1つが、HCV感染症の治療のために、HCVメタロプロテアーゼ、HCVセリンプロテアーゼ、HCVポリメラーゼ、HCVヘリカーゼ、HCV NS4Bタンパク質、HCVエントリー、HCVアセンブリ、HCVイグレス、HCV NS5Aタンパク質、またはIMPDHから選択される標的の機能を阻害するのに有効である、請求項18に記載の方法。
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