JP2012184232A - グルカゴン様タンパク質1受容体(glp−1r)アゴニスト化合物 - Google Patents
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Abstract
【課題】抗体中の結合性部位と連結しているグルカゴン様タンパク質1受容体標的化剤−リンカー複合体を含むグルカゴン様タンパク質1受容体標的化化合物を提供する。糖尿病または糖尿病に関連する状態を予防または治療するための方法を含む、化合物の様々な使用を提供する。
【解決手段】インスリン分泌を促進し、血中グルコースレベルを低下させる新規化合物、ならびにこれらの化合物を作製および使用する方法に関する。特に、本発明は、グルカゴン様タンパク質1受容体(GLP−1R)と結合し、該受容体を活性化する化合物を提供する。
【選択図】なし
【解決手段】インスリン分泌を促進し、血中グルコースレベルを低下させる新規化合物、ならびにこれらの化合物を作製および使用する方法に関する。特に、本発明は、グルカゴン様タンパク質1受容体(GLP−1R)と結合し、該受容体を活性化する化合物を提供する。
【選択図】なし
Description
関連出願
本出願は、2007年1月5日に出願された米国仮特許出願第60/879,048号、2007年5月23日に出願された米国仮特許出願第60/939,831号および2007年6月20日に出願された米国仮特許出願第60/945,319号の優先権を主張し、これらの開示は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
本出願は、2007年1月5日に出願された米国仮特許出願第60/879,048号、2007年5月23日に出願された米国仮特許出願第60/939,831号および2007年6月20日に出願された米国仮特許出願第60/945,319号の優先権を主張し、これらの開示は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
本発明は、インスリン分泌を促進し、血中グルコースレベルを低下させる新規化合物、ならびにこれらの化合物を作製および使用する方法に関する。特に、本発明は、グルカゴン様タンパク質1受容体(GLP−1R)と結合し、該受容体を活性化する化合物に関する。
II型糖尿病は、最も多く見られる形態の糖尿病である。この疾患は、インスリン耐性および膵β細胞不全によって引き起こされ、グルコース刺激によるインスリン分泌の減少をもたらす。インクレチンは、グルコース依存性のインスリン分泌を刺激し、グルカゴン分泌を阻害する化合物であり、II型糖尿病の治療のための魅力的な候補として浮上した。β細胞機能をインビトロで改善することがわかっている2種のインクレチンは、グルコースインスリン分泌促進ポリペプチド(GIP)およびグルカゴン様ペプチド(7〜36)アミド(GLP−1)である。糖尿病β細胞はその作用に比較的耐性があるため、GIPは魅力的な治療用候補ではないように思われる。しかしながら、糖尿病β細胞は、GLP−1の効果に対して感受性がある。
インスリン分泌を増大させることおよびグルカゴン分泌を減少させることに加えて、30アミノ酸のGLP−1ペプチドは、プロインスリン遺伝子転写を刺激し、胃内容排出時間を遅くし、食物摂取量を低減する。GLP−1は、推定7回膜貫通型ドメイン受容体であるグルカゴン様ペプチド1受容体(GLP−1R)と結合することにより、その生理学的効果を発揮する。
GLP−1の治療的使用の欠点は、そのインビボ半減期が短い(1〜2分)ことである。このように半減期が短いのは、ジペプチジルペプチダーゼ4(DPP−IV)によるペプチドの迅速な崩壊の結果である。これは、GLP−1R活性を刺激する能力を維持しながら半減期の増大を呈するGLP−1類似体の同定または開発につながった。これらの類似体の例は、エキセンディン−4およびGLP−1−Gly8を含む。
半減期の増大を示しながらインスリン分泌促進活性を維持する数種のGLP−1類似体が開発されたが、薬物動態プロファイルを改善したGLP−1Rアゴニストの必要性は依然としてある。
この明細書におけるいかなる技術の参照も、その参照された技術が共通の一般知識の一部を形成することのいかなる形態または示唆の肯定でもなく、そのように解釈されるべきではない。
本明細書において開示されるのは、1種または複数のGLP−1Rアゴニストペプチドを、1種または複数の抗体中の結合性部位と共有結合させることによって形成される組成物、ならびにこれらの組成物を作製および使用する方法である。いくつかの実施形態において、インビボ半減期を改善したGLP−1Rアゴニスト(GA)化合物が提供される。GA標的化化合物は、GA標的化剤を、直接的にまたは介在リンカーを介して、抗体中の結合性部位と共有結合させることによって形成される。本発明の標的化化合物および薬学的に許容できる担体を含む医薬組成物も提供される。
いくつかの実施形態において、GLP−1Rアゴニスト(GA)ペプチドが提供される。一部の態様において、本発明は、GLP−1受容体のペプチドアゴニストであるGA標的化剤であって、
R1−H1x2E3G4T5F6T7S8D9x10S11x12x13x14E15x16x17A18x19x20x21F22x23x24x25x26x27x28x29x30x31x32x33x34x35x36x37x38x39−R2
と実質的に相同の配列を含むペプチドを含むGA標的化剤を提供し、
ここで、
R1は、存在しないか、CH3、C(O)CH3、C(O)CH2CH3、C(O)CH2CH2CH3またはC(O)CH(CH3)CH3であり、
R2は、存在しないか、OH、NH2、NH(CH3)、NHCH2CH3、NHCH2CH2CH3、NHCH(CH3)CH3、NHCH2CH2CH2CH3、NHCH(CH3)CH2CH3、NHC6H5、NHCH2CH2OCH3、NHOCH3、NHOCH2CH3、カルボキシ保護基、脂質脂肪酸基または炭水化物であり、
x2は、Aib、A、S、T、V、L、I、D−Ala等のブロッキング基であり(ここで、位置x2の文脈における「ブロッキング基」という用語は、DPP−4切断等のいくつかの切断反応をブロックすることができる残基または基を指す)、x10は、V、L、IまたはAであり、x12はSまたはKであり、x13はQまたはYであり、x14は、G、C、F、Y、W、MまたはLであり、x16は、K、D、EまたはGであり、x17はEまたはQであり、x19は、L、I、VまたはAであり、x20は、Orn、K(SH)、RまたはKであり、x21はLまたはEであり、x23はIまたはLであり、x24はAまたはEであり、x25はWまたはFであり、x26はLまたはIであり、x27は、I、KまたはVであり、x28は、R、Orn、NまたはKであり、x29はAibまたはGであり、x30は、任意のアミノ酸、好ましくはGまたはRであり、x31はPであるかまたは存在せず、x32はSであるかまたは存在せず、x33はSであるかまたは存在せず、x34はGであるかまたは存在せず、x35はAであるかまたは存在せず、x36はPであるかまたは存在せず、x37はPであるかまたは存在せず、x38はPであるかまたは存在せず、x39はSであるかまたは存在せず、x40は連結残基であるかまたは存在せず、加えて、ここで、x10、x11、x12、x13、x14、x16、x17、x19、x20、x21、x24、x26、x27、x28、x32、x33、x34、x35、x36、x37、x38、x39またはx40のうちの1つは、抗体中の結合性部位と中間体リンカーを介して共有結合可能な求核性側鎖を含む連結残基(−[LR]−)で置換されており、該連結残基はK(SH)である。これらの実施形態において、x2はAibであってよい。
R1−H1x2E3G4T5F6T7S8D9x10S11x12x13x14E15x16x17A18x19x20x21F22x23x24x25x26x27x28x29x30x31x32x33x34x35x36x37x38x39−R2
と実質的に相同の配列を含むペプチドを含むGA標的化剤を提供し、
ここで、
R1は、存在しないか、CH3、C(O)CH3、C(O)CH2CH3、C(O)CH2CH2CH3またはC(O)CH(CH3)CH3であり、
R2は、存在しないか、OH、NH2、NH(CH3)、NHCH2CH3、NHCH2CH2CH3、NHCH(CH3)CH3、NHCH2CH2CH2CH3、NHCH(CH3)CH2CH3、NHC6H5、NHCH2CH2OCH3、NHOCH3、NHOCH2CH3、カルボキシ保護基、脂質脂肪酸基または炭水化物であり、
x2は、Aib、A、S、T、V、L、I、D−Ala等のブロッキング基であり(ここで、位置x2の文脈における「ブロッキング基」という用語は、DPP−4切断等のいくつかの切断反応をブロックすることができる残基または基を指す)、x10は、V、L、IまたはAであり、x12はSまたはKであり、x13はQまたはYであり、x14は、G、C、F、Y、W、MまたはLであり、x16は、K、D、EまたはGであり、x17はEまたはQであり、x19は、L、I、VまたはAであり、x20は、Orn、K(SH)、RまたはKであり、x21はLまたはEであり、x23はIまたはLであり、x24はAまたはEであり、x25はWまたはFであり、x26はLまたはIであり、x27は、I、KまたはVであり、x28は、R、Orn、NまたはKであり、x29はAibまたはGであり、x30は、任意のアミノ酸、好ましくはGまたはRであり、x31はPであるかまたは存在せず、x32はSであるかまたは存在せず、x33はSであるかまたは存在せず、x34はGであるかまたは存在せず、x35はAであるかまたは存在せず、x36はPであるかまたは存在せず、x37はPであるかまたは存在せず、x38はPであるかまたは存在せず、x39はSであるかまたは存在せず、x40は連結残基であるかまたは存在せず、加えて、ここで、x10、x11、x12、x13、x14、x16、x17、x19、x20、x21、x24、x26、x27、x28、x32、x33、x34、x35、x36、x37、x38、x39またはx40のうちの1つは、抗体中の結合性部位と中間体リンカーを介して共有結合可能な求核性側鎖を含む連結残基(−[LR]−)で置換されており、該連結残基はK(SH)である。これらの実施形態において、x2はAibであってよい。
本発明の化合物は、
本発明の化合物は、
本発明の化合物は、
本発明の化合物は、
本発明の化合物は、
本発明の化合物は、
いくつかの態様において、本発明は、GLP−1受容体のペプチドアゴニストであるGA標的化剤であって、
R1−H1x2E3G4T5F6T7S8D9x10S11x12x13x14E15x16x17A18x19x20x21F22x23x24x25x26x27x28x29x30x31x32x33x34x35x36x37x38x39−R2
と実質的に相同の配列を含むペプチドを含むGA標的化剤を提供し、
ここで、
R1は、存在しないか、CH3、C(O)CH3、C(O)CH2CH3、C(O)CH2CH2CH3またはC(O)CH(CH3)CH3であり、
R2は、存在しないか、OH、NH2、NH(CH3)、NHCH2CH3、NHCH2CH2CH3、NHCH(CH3)CH3、NHCH2CH2CH2CH3、NHCH(CH3)CH2CH3、NHC6H5、NHCH2CH2OCH3、NHOCH3、NHOCH2CH3、カルボキシ保護基、脂質脂肪酸基または炭水化物であり、
x2は、Aib、A、S、T、V、L、IまたはD−Ala等のブロッキング基であり、x10は、V、L、IまたはAであり、x12は、SまたはKであり、x13は、QまたはYであり、x14は、G、C、F、Y、W、MまたはLであり、x16は、K、D、EまたはGであり、x17は、EまたはQであり、x19は、L、I、VまたはAであり、x20は、Orn、K(SH)、RまたはKであり、x21は、LまたはEであり、x23は、IまたはLであり、x24は、AまたはEであり、x25は、WまたはFであり、x26は、LまたはIであり、x27は、I、KまたはVであり、x28は、R、Orn、NまたはKであり、x29は、AibまたはGであり、x30は、任意のアミノ酸、好ましくはGまたはRであり、x31はPであるかまたは存在せず、x32はSであるかまたは存在せず、x33はSであるかまたは存在せず、x34はGであるかまたは存在せず、x35はAであるかまたは存在せず、x36はPであるかまたは存在せず、x37はPであるかまたは存在せず、x38はPであるかまたは存在せず、x39はSであるかまたは存在せず、x40は連結残基であるかまたは存在せず、
ここで、前記ペプチドは、中間体リンカー(L’)を介して抗体中の結合性部位と共有結合しており、L’は、C末端または連結残基(−[LR]−)の求核性側鎖のいずれかと共有結合しており、そのため、−[LR]−は、K、R、Y、C、T、S、リシンの相同体(K(SH)を含む)、ホモシステインおよびホモセリンを含む群から選択され、存在する場合、x10、x11、x12、x13、x14、x16、x17、x19、x20、x21、x24、x26、x27、x28、x32、x33、x34、x35、x36、x37、x38、x39またはx40のうちの1つを置換している。
R1−H1x2E3G4T5F6T7S8D9x10S11x12x13x14E15x16x17A18x19x20x21F22x23x24x25x26x27x28x29x30x31x32x33x34x35x36x37x38x39−R2
と実質的に相同の配列を含むペプチドを含むGA標的化剤を提供し、
ここで、
R1は、存在しないか、CH3、C(O)CH3、C(O)CH2CH3、C(O)CH2CH2CH3またはC(O)CH(CH3)CH3であり、
R2は、存在しないか、OH、NH2、NH(CH3)、NHCH2CH3、NHCH2CH2CH3、NHCH(CH3)CH3、NHCH2CH2CH2CH3、NHCH(CH3)CH2CH3、NHC6H5、NHCH2CH2OCH3、NHOCH3、NHOCH2CH3、カルボキシ保護基、脂質脂肪酸基または炭水化物であり、
x2は、Aib、A、S、T、V、L、IまたはD−Ala等のブロッキング基であり、x10は、V、L、IまたはAであり、x12は、SまたはKであり、x13は、QまたはYであり、x14は、G、C、F、Y、W、MまたはLであり、x16は、K、D、EまたはGであり、x17は、EまたはQであり、x19は、L、I、VまたはAであり、x20は、Orn、K(SH)、RまたはKであり、x21は、LまたはEであり、x23は、IまたはLであり、x24は、AまたはEであり、x25は、WまたはFであり、x26は、LまたはIであり、x27は、I、KまたはVであり、x28は、R、Orn、NまたはKであり、x29は、AibまたはGであり、x30は、任意のアミノ酸、好ましくはGまたはRであり、x31はPであるかまたは存在せず、x32はSであるかまたは存在せず、x33はSであるかまたは存在せず、x34はGであるかまたは存在せず、x35はAであるかまたは存在せず、x36はPであるかまたは存在せず、x37はPであるかまたは存在せず、x38はPであるかまたは存在せず、x39はSであるかまたは存在せず、x40は連結残基であるかまたは存在せず、
ここで、前記ペプチドは、中間体リンカー(L’)を介して抗体中の結合性部位と共有結合しており、L’は、C末端または連結残基(−[LR]−)の求核性側鎖のいずれかと共有結合しており、そのため、−[LR]−は、K、R、Y、C、T、S、リシンの相同体(K(SH)を含む)、ホモシステインおよびホモセリンを含む群から選択され、存在する場合、x10、x11、x12、x13、x14、x16、x17、x19、x20、x21、x24、x26、x27、x28、x32、x33、x34、x35、x36、x37、x38、x39またはx40のうちの1つを置換している。
いくつかの態様において、本発明は、
R1−H1Aib2E3G4T5F6T7S8D9V10S11S12Y13x14E15x16Q17A18x19x20E21F22I23A24x25L26x27x28x29R30−R2
と実質的に相同の配列を含むペプチドを含むGA標的化剤を提供し、
ここで、x14は、G、C、F、Y、WまたはLであり、x16は、K、D、EまたはGであり、x19は、L、I、VまたはAであり、x20は、Orn、RまたはKであり、x25はWまたはFであり、x27はIまたはVであり、x28はRまたはKであり、x29はAibまたはGである。
R1−H1Aib2E3G4T5F6T7S8D9V10S11S12Y13x14E15x16Q17A18x19x20E21F22I23A24x25L26x27x28x29R30−R2
と実質的に相同の配列を含むペプチドを含むGA標的化剤を提供し、
ここで、x14は、G、C、F、Y、WまたはLであり、x16は、K、D、EまたはGであり、x19は、L、I、VまたはAであり、x20は、Orn、RまたはKであり、x25はWまたはFであり、x27はIまたはVであり、x28はRまたはKであり、x29はAibまたはGである。
いくつかの態様において、本発明は、
R1−H1Aib2E3G4T5F6T7S8D9L10S11K12Q13M14E15E16E17A18V19R20L21F22I23E24W25L26K27N28G29G30P31S32S33G34A35P36P37P38S39−R2
と実質的に相同の配列を含むペプチドを含むGA標的化剤を提供する。
R1−H1Aib2E3G4T5F6T7S8D9L10S11K12Q13M14E15E16E17A18V19R20L21F22I23E24W25L26K27N28G29G30P31S32S33G34A35P36P37P38S39−R2
と実質的に相同の配列を含むペプチドを含むGA標的化剤を提供する。
いくつかの態様において、連結残基は、K、Y、Tおよびリシンの相同体(K(SH)を含む)からなる群より選択される。該連結残基はK(L)であってよく、ここで、K(L)は、リンカーLに結合して備わっているリシンであり、ここで、Lは、抗体中の結合性部位においてアミノ酸側鎖と共有結合を形成することができる。
この明細書、特許請求の範囲、ならびに添付の図面および配列表全体を通して、「(L)」は、前述の残基と共有結合的に接続されたリンカーを指示するために用いられる。アミノ酸残基ロイシンを記述する場合、単一のアミノ酸コード「L」が使用される。リンカーを表す括弧の使用「(L)」およびロイシンを表す括弧の不在「L」、ならびに使用法の文脈により、当業者は2つの用語の混同を回避することができる。
連結残基は、x11、x12、x13、x14、x16、x17、x19、x20、x21、x24、x27、x28、x32、x34、x38およびC末端からなる群より選択することができる。連結残基は、x11、x12、x13、x14、x16、x19、x20、x21、x27、x28、x32およびx34からなる群より選択することができる。連結残基は、x11、x12、x13、x14、x16、x19、x20およびx21からなる群より選択することができる。連結残基は、x13、x14、x16、x19、x20およびx21からなる群より選択することができる。x14は連結残基であってよい。
本発明の一部の態様において、R1はC(O)CH3であり、それにより、GA標的化剤のアミノ末端をアセチル化する。
本発明の一部の態様において、R2はNH2であり、それにより、GA標的化剤のカルボキシ末端をアミド化する。
一部の実施形態において、本発明は、
Hx2EGTFTSDx10x11x12x13x14Ex16x17Ax19x20x21Fx23x24x25x26x27x28x29x30x31x32x33x34x35x36x37x38x39x40
と実質的に相同の配列を含むペプチドを含むGA標的化化合物を提供し、
ここで、
x2は、Aib、A、S、T、V、L、IまたはD−Ala等のブロッキング基であり、x10は、V、L、IまたはAであり、x11は連結残基またはSであり、x12は、連結残基、SまたはKであり、x13は、連結残基、QまたはYであり、x14は、連結残基、G、C、F、Y、W、MまたはLであり、x16は、連結残基、K、D、EまたはGであり、x17は、連結残基、EまたはQであり、x19は、連結残基、L、I、VまたはAであり、x20は、連結残基、Orn、K(SH)、RまたはKであり、x21は、連結残基、LまたはEであり、x23は、連結残基、IまたはLであり、x24は、連結残基、AまたはEであり、x25は連結残基または芳香族残基であり、x26は、連結残基、LまたはIであり、x27は、連結残基、I、KまたはVであり、x28は、連結残基、R、Orn、NまたはKであり、x29は、連結残基、AibまたはGであり、x30は、連結残基、任意のアミノ酸またはGであり、x31は、連結残基、P、K(SH)であるかまたは存在せず、x32は、連結残基、Sであるかまたは存在せず、x33は、連結残基、Sであるかまたは存在せず、x34は、連結残基、Gであるかまたは存在せず、x35は、連結残基、Aであるかまたは存在せず、x36は、連結残基、Pであるかまたは存在せず、x37は、連結残基、Pであるかまたは存在せず、x38は、連結残基、Pであるかまたは存在せず、x39は、連結残基、Sであるかまたは存在せず、x40は連結残基であるかまたは存在せず、そのため、GA標的化化合物は、求核性側鎖を含む1個の連結残基であって、K、R、C、TおよびSを含む群から選択される連結残基を含有する。
Hx2EGTFTSDx10x11x12x13x14Ex16x17Ax19x20x21Fx23x24x25x26x27x28x29x30x31x32x33x34x35x36x37x38x39x40
と実質的に相同の配列を含むペプチドを含むGA標的化化合物を提供し、
ここで、
x2は、Aib、A、S、T、V、L、IまたはD−Ala等のブロッキング基であり、x10は、V、L、IまたはAであり、x11は連結残基またはSであり、x12は、連結残基、SまたはKであり、x13は、連結残基、QまたはYであり、x14は、連結残基、G、C、F、Y、W、MまたはLであり、x16は、連結残基、K、D、EまたはGであり、x17は、連結残基、EまたはQであり、x19は、連結残基、L、I、VまたはAであり、x20は、連結残基、Orn、K(SH)、RまたはKであり、x21は、連結残基、LまたはEであり、x23は、連結残基、IまたはLであり、x24は、連結残基、AまたはEであり、x25は連結残基または芳香族残基であり、x26は、連結残基、LまたはIであり、x27は、連結残基、I、KまたはVであり、x28は、連結残基、R、Orn、NまたはKであり、x29は、連結残基、AibまたはGであり、x30は、連結残基、任意のアミノ酸またはGであり、x31は、連結残基、P、K(SH)であるかまたは存在せず、x32は、連結残基、Sであるかまたは存在せず、x33は、連結残基、Sであるかまたは存在せず、x34は、連結残基、Gであるかまたは存在せず、x35は、連結残基、Aであるかまたは存在せず、x36は、連結残基、Pであるかまたは存在せず、x37は、連結残基、Pであるかまたは存在せず、x38は、連結残基、Pであるかまたは存在せず、x39は、連結残基、Sであるかまたは存在せず、x40は連結残基であるかまたは存在せず、そのため、GA標的化化合物は、求核性側鎖を含む1個の連結残基であって、K、R、C、TおよびSを含む群から選択される連結残基を含有する。
連結残基はKであってよい。
N末端はキャップされていなくてよい。
連結残基の側鎖は、抗体中の結合性部位と直接的にまたは中間体リンカーを介して共有結合可能であってよい。一部の実施形態において、連結残基の側鎖は、抗体中の結合性部位と直接的にまたは中間体リンカーを介して共有結合している。
一部の実施形態において、x26はLである。一部の実施形態において、x11はSである。一部の実施形態において、x25はWまたはFである。一部の実施形態において、x25はWである。x2はAibであってよい。
本発明の一部の態様において、本発明は、
HAibEGTFTSDx10Sx12x13x14Ex16x17Ax19x20x21Fx23x24x25Lx27x28x29x30x31x32x33x34x35x36x37x38x39
と実質的に相同の配列を含むペプチドを含むGA標的化化合物を含む。
HAibEGTFTSDx10Sx12x13x14Ex16x17Ax19x20x21Fx23x24x25Lx27x28x29x30x31x32x33x34x35x36x37x38x39
と実質的に相同の配列を含むペプチドを含むGA標的化化合物を含む。
一部の態様において、本発明は、
H1x2E3G4T5F6T7S8D9L10S11K12Q13M14E15E16E17A18V19R20L21F22I23E24x25L26K27N28G29G30P31S32S33G34A35P36P37P38S39x40
と実質的に相同の配列を含むペプチドを含むGA標的化化合物を含み、
ここで、
x2は、Aib、A、S、T、V、L、IまたはD−Ala等のブロッキング基であり、
x25は、連結残基または芳香族残基であり、
残基P31〜S39のうちの1つまたは複数は存在しなくてよく、
x40は連結残基であるかまたは存在せず、
残基S11〜x40のうちの1つは、共有結合を形成するのに適している側鎖を含む連結残基であって、K、R、C、TおよびSを含む群から選択される連結残基である。
H1x2E3G4T5F6T7S8D9L10S11K12Q13M14E15E16E17A18V19R20L21F22I23E24x25L26K27N28G29G30P31S32S33G34A35P36P37P38S39x40
と実質的に相同の配列を含むペプチドを含むGA標的化化合物を含み、
ここで、
x2は、Aib、A、S、T、V、L、IまたはD−Ala等のブロッキング基であり、
x25は、連結残基または芳香族残基であり、
残基P31〜S39のうちの1つまたは複数は存在しなくてよく、
x40は連結残基であるかまたは存在せず、
残基S11〜x40のうちの1つは、共有結合を形成するのに適している側鎖を含む連結残基であって、K、R、C、TおよびSを含む群から選択される連結残基である。
一部の実施形態において、本発明のGA標的化剤は、少なくとも残基P31S32S33G34A35P36P37P38およびS39を含むものと実質的に相同のペプチド配列を含むtrp−cageを含む。その他の実施形態において、trp−cageを含む残基またはすべてのtrp−cageのうちの1つまたは複数は、GA標的化剤中に存在していない。
連結残基は、S11、K12、Q13、M14、E16、E17、V19、R20、L21、I23、E24、L26、K27、N28、G29およびG30のうちの1つ、またはP31、S32、S33、G34、A35、P36、P37、P38もしくはS39のうちの1つ、あるいはX40を置換していてよい。そのような実施形態は、配列番号3、配列番号172、配列番号4、配列番号173、配列番号115、配列番号114、配列番号113、配列番号169配列番号112、配列番号111、配列番号110、配列番号109、配列番号108、配列番号107、配列番号106、配列番号105、配列番号104、配列番号103、配列番号170、配列番号102、配列番号168、配列番号101、配列番号100、配列番号99、配列番号31、配列番号30、配列番号29、配列番号28、配列番号27、配列番号26、配列番号25、配列番号24、配列番号23、配列番号22、配列番号21、配列番号20、配列番号19、配列番号18、配列番号17、配列番号16、配列番号15、配列番号14および配列番号5によって例示されている。
そのような実施形態はまた、配列番号32、配列番号34、配列番号36、配列番号37、配列番号38、配列番号39、配列番号40、配列番号41、配列番号42、配列番号43、配列番号44、配列番号45、配列番号46、配列番号47、配列番号48、配列番号49、配列番号50、配列番号51、配列番号52、配列番号53、配列番号54、配列番号55、配列番号56、配列番号57、配列番号58、配列番号59、配列番号60、配列番号61、配列番号62、配列番号63、配列番号64、配列番号65、配列番号66、配列番号67、配列番号68、配列番号69、配列番号70、配列番号71、配列番号72、配列番号73、配列番号74、配列番号75および配列番号76によって例示されている。
一部の実施形態において、連結残基は、K12、Q13、M14、E16、E17、V19、R20、L21、I23、E24、L26、K27およびN28のうちの1つを置換していてよい。そのような実施形態は、配列番号169、配列番号112、配列番号111、配列番号110、配列番号109、配列番号108、配列番号107、配列番号106、配列番号105、配列番号104、配列番号103、配列番号170、配列番号102、配列番号28、配列番号27、配列番号26、配列番号25、配列番号24、配列番号23、配列番号22、配列番号21、配列番号20、配列番号19、配列番号18および配列番号5によって例示されている。
連結残基はI23を置換していてよい。そのような実施形態は、配列番号21および配列番号105によって例示されている。
連結残基はL26を置換していてよい。そのような実施形態は、配列番号19および配列番号103によって例示されている。
連結残基はK12であってよい。そのような実施形態は、配列番号5によって例示されている。
一部の実施形態において、連結残基は、Q13、M14、E16、E17、V19、R20、L21およびE24のうちの1つを置換していてよい。そのような実施形態は、配列番号112、配列番号111、配列番号110、配列番号109、配列番号108、配列番号107、配列番号106、配列番号104、配列番号28、配列番号27、配列番号26、配列番号25、配列番号24、配列番号23、配列番号22および配列番号20によって例示されている。
連結残基はQ13を置換していてよい。そのような実施形態は、配列番号28および配列番号112によって例示されている。
一部の実施形態において、連結残基は、M14、E16、E17、V19、R20、L21およびE24のうちの1つを置換していてよい。そのような実施形態は、配列番号111、配列番号110、配列番号109、配列番号108、配列番号107、配列番号106、配列番号104、配列番号27、配列番号26、配列番号25、配列番号24、配列番号23、配列番号22および配列番号20によって例示されている。
連結残基はE24であってよい。そのような実施形態は、配列番号20および配列番号104によって例示されている。
一部の実施形態において、連結残基は、M14、E16、E17、V19、R20およびL21のうちの1つを置換していてよい。そのような実施形態は、配列番号111、配列番号110、配列番号109、配列番号108、配列番号107、配列番号106、配列番号27、配列番号26、配列番号25、配列番号24、配列番号23および配列番号22によって例示されている。
連結残基はM14を置換していてよい。そのような実施形態は、配列番号27および配列番号111によって例示されている。
連結残基はE16を置換していてよい。そのような実施形態は、配列番号26および配列番号110によって例示されている。
連結残基はE17を置換していてよい。そのような実施形態は、配列番号25および配列番号109によって例示されている。
連結残基はV19を置換していてよい。そのような実施形態は、配列番号24および配列番号108によって例示されている。
連結残基はR20を置換していてよい。そのような実施形態は、配列番号23および配列番号107によって例示されている。
連結残基はL21を置換していてよい。そのような実施形態は、配列番号22および配列番号106によって例示されている。
一部の実施形態において、本発明のGA標的化剤は、少なくとも残基P31S32S33G34A35P36P37P38およびS39を含むものと実質的に相同のペプチド配列を含むtrp−cageを含む。その他の実施形態において、trp−cageのうちの1つまたは複数またはすべては、GA標的化剤中に存在していない。
一部の実施形態において、本発明は、
H1x2E3G4T5F6T7S8D9x10x11x12x13x14E15x16x17Ax19x20x21F22x23x24x25x26x27x28x29x30x31x32x33x34x35x36x37x38x39x40
と実質的に相同の配列を含むペプチドを含むGA標的化化合物を提供し、
ここで、
x2は、Aib、A、S、T、V、LまたはI等のブロッキング基であり、x10は、V、L、IまたはAであり、x11は連結残基またはSであり、x12は、連結残基、SまたはKであり、x13は、連結残基またはYであり、x14は、連結残基、G、C、F、Y、WまたはLであり、x16は、連結残基、K、D、EまたはGであり、x17は、連結残基またはQであり、x19は、連結残基、L、I、VまたはAであり、x20は、連結残基、Orn、K(SH)、RまたはKであり、x21は、連結残基またはEであり、x23は、連結残基またはIであり、x24は、連結残基またはAであり、x25は連結残基または芳香族残基であり、x26は、連結残基またはLであり、x27は、連結残基、IまたはVであり、x28は、連結残基、R、OrnまたはKであり、x29は、連結残基、AibまたはGであり、x30は、連結残基またはGであり、x31は、連結残基、P、K(SH)であるかまたは存在せず、x32は、連結残基、Sであるかまたは存在せず、x33は、連結残基、Sであるかまたは存在せず、x34は、連結残基、Gであるかまたは存在せず、x35は、連結残基、Aであるかまたは存在せず、x36は、連結残基、Pであるかまたは存在せず、x37は、連結残基、Pであるかまたは存在せず、x38は、連結残基、Pであるかまたは存在せず、x39は、連結残基、Sであるかまたは存在せず、x40は連結残基であるかまたは存在せず、
そのため、GA標的化化合物は、求核性側鎖を含む1個の連結残基であって、K、R、C、TおよびSを含む群から選択される連結残基を含有する。
H1x2E3G4T5F6T7S8D9x10x11x12x13x14E15x16x17Ax19x20x21F22x23x24x25x26x27x28x29x30x31x32x33x34x35x36x37x38x39x40
と実質的に相同の配列を含むペプチドを含むGA標的化化合物を提供し、
ここで、
x2は、Aib、A、S、T、V、LまたはI等のブロッキング基であり、x10は、V、L、IまたはAであり、x11は連結残基またはSであり、x12は、連結残基、SまたはKであり、x13は、連結残基またはYであり、x14は、連結残基、G、C、F、Y、WまたはLであり、x16は、連結残基、K、D、EまたはGであり、x17は、連結残基またはQであり、x19は、連結残基、L、I、VまたはAであり、x20は、連結残基、Orn、K(SH)、RまたはKであり、x21は、連結残基またはEであり、x23は、連結残基またはIであり、x24は、連結残基またはAであり、x25は連結残基または芳香族残基であり、x26は、連結残基またはLであり、x27は、連結残基、IまたはVであり、x28は、連結残基、R、OrnまたはKであり、x29は、連結残基、AibまたはGであり、x30は、連結残基またはGであり、x31は、連結残基、P、K(SH)であるかまたは存在せず、x32は、連結残基、Sであるかまたは存在せず、x33は、連結残基、Sであるかまたは存在せず、x34は、連結残基、Gであるかまたは存在せず、x35は、連結残基、Aであるかまたは存在せず、x36は、連結残基、Pであるかまたは存在せず、x37は、連結残基、Pであるかまたは存在せず、x38は、連結残基、Pであるかまたは存在せず、x39は、連結残基、Sであるかまたは存在せず、x40は連結残基であるかまたは存在せず、
そのため、GA標的化化合物は、求核性側鎖を含む1個の連結残基であって、K、R、C、TおよびSを含む群から選択される連結残基を含有する。
一部の実施形態において、x2はAibである。一部の実施形態において、x31はAibである。
一部の実施形態において、x16はEである。一部の実施形態において、x19はVである。
一部の実施形態において、本発明は、
H1Aib2E3G4T5F6T7S8D9x10x11x12x13x14E15E16x17AV19x20x21F22x23x24x25x26x27x28x29x30Aib31x32x33x34x35x36x37x38x39x40
と実質的に相同の配列を含むペプチドを含むGA標的化化合物を提供する。
H1Aib2E3G4T5F6T7S8D9x10x11x12x13x14E15E16x17AV19x20x21F22x23x24x25x26x27x28x29x30Aib31x32x33x34x35x36x37x38x39x40
と実質的に相同の配列を含むペプチドを含むGA標的化化合物を提供する。
一部の実施形態において、本発明は、配列
H1Aib2E3G4T5F6T7S8D9V10S11S12Y13L14E15E16Q17A18V19K20E21F22I23A24W25L26I27K28G29R30Aib31S32S33G34A35P36P37P38S39x40
と実質的に相同の配列を含むGA標的化化合物を含み、
ここで、残基Aib31〜S39のうちの1つまたは複数は存在しなくてよく、x40は連結残基であるかまたは存在せず、ここで、残基S11〜x40のうちの1つは、共有結合を形成するのに適している側鎖を含む連結残基であって、K、R、C、TおよびSを含む群から選択される連結残基である。そのような実施形態は、配列番号57、配列番号64、配列番号65、配列番号66、配列番号67、配列番号68、配列番号69、配列番号70、配列番号71および配列番号72によって例示されている。
H1Aib2E3G4T5F6T7S8D9V10S11S12Y13L14E15E16Q17A18V19K20E21F22I23A24W25L26I27K28G29R30Aib31S32S33G34A35P36P37P38S39x40
と実質的に相同の配列を含むGA標的化化合物を含み、
ここで、残基Aib31〜S39のうちの1つまたは複数は存在しなくてよく、x40は連結残基であるかまたは存在せず、ここで、残基S11〜x40のうちの1つは、共有結合を形成するのに適している側鎖を含む連結残基であって、K、R、C、TおよびSを含む群から選択される連結残基である。そのような実施形態は、配列番号57、配列番号64、配列番号65、配列番号66、配列番号67、配列番号68、配列番号69、配列番号70、配列番号71および配列番号72によって例示されている。
一部の実施形態において、本発明は、配列
H1x2E3G4T5F6T7S8D9V10S11S12Y13L14E15G16Q17A18A19K20E21F22I23A24x25L26V27K28G29R30P31S32S33G34A35P36P37P38S39x40
と実質的に相同の配列を含むGA標的化化合物を含み、
ここで、
x2は、Aib、A、S、T、V、LまたはI等のブロッキング基であり、
x25は連結残基または芳香族残基であり、
残基P31〜S39のうちの1つまたは複数は存在しなくてよく、
x40は連結残基であるかまたは存在せず、
ここで、残基S11〜x40のうちの1つは、求核性側鎖を含む連結残基であって、K、R、C、TおよびSを含む群から選択される連結残基である。
そのような実施形態は、配列番号32、配列番号33、配列番号34、配列番号35、配列番号36および配列番号37によって例示されている。
H1x2E3G4T5F6T7S8D9V10S11S12Y13L14E15G16Q17A18A19K20E21F22I23A24x25L26V27K28G29R30P31S32S33G34A35P36P37P38S39x40
と実質的に相同の配列を含むGA標的化化合物を含み、
ここで、
x2は、Aib、A、S、T、V、LまたはI等のブロッキング基であり、
x25は連結残基または芳香族残基であり、
残基P31〜S39のうちの1つまたは複数は存在しなくてよく、
x40は連結残基であるかまたは存在せず、
ここで、残基S11〜x40のうちの1つは、求核性側鎖を含む連結残基であって、K、R、C、TおよびSを含む群から選択される連結残基である。
そのような実施形態は、配列番号32、配列番号33、配列番号34、配列番号35、配列番号36および配列番号37によって例示されている。
一部の実施形態において、本発明のGA標的化剤は、少なくとも残基P31S32S33G34A35P36P37P38およびS39を含む配列と実質的に相同のペプチド配列を含むtrp−cageを含む。その他の実施形態において、trp−cageを含む残基またはすべてのtrp−cageのうちの1つまたは複数は、GA標的化剤中に存在していない。
連結残基はKであってよい。
N末端はキャップされていなくてよい。
連結残基の側鎖は、抗体中の結合性部位と直接的にまたは中間体リンカーを介して共有結合可能であってよい。一部の実施形態において、連結残基の側鎖は、抗体中の結合性部位と直接的にまたは中間体リンカーを介して共有結合している。
いくつかの実施形態において、これらのペプチドは、それだけに限らないが、
R1は、存在しないか、CH3、C(O)CH3、C(O)CH2CH3、C(O)CH2CH2CH3またはC(O)CH(CH3)CH3であり、
R2は、OH、NH2、NH(CH3)、NHCH2CH3、NHCH2CH2CH3、NHCH(CH3)CH3、NHCH2CH2CH2CH3、NHCH(CH3)CH2CH3、NHC6H5、NHCH2CH2OCH3、NHOCH3、NHOCH2CH3、カルボキシ保護基、脂質脂肪酸基または炭水化物である。
いくつかの実施形態において、これらのペプチドは、それだけに限らないが、
ここで、
R1は、存在しないか、CH3、C(O)CH3、C(O)CH2CH3、C(O)CH2CH2CH3またはC(O)CH(CH3)CH3であり、
R2は、OH、NH2、NH(CH3)、NHCH2CH3、NHCH2CH2CH3、NHCH(CH3)CH3、NHCH2CH2CH2CH3、NHCH(CH3)CH2CH3、NHC6H5、NHCH2CH2OCH3、NHOCH3、NHOCH2CH3、カルボキシ保護基、脂質脂肪酸基または炭水化物である。
本発明の一実施形態において、GA標的化化合物は、配列番号1または配列番号2のいずれかと少なくとも80%のアミノ酸相同性を有する配列を含む。
R1−HAEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKGR(配列番号1)[Glp−1]
R1−HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS(配列番号2)[エキセンディン−4]
R1−HAEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKGR(配列番号1)[Glp−1]
R1−HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS(配列番号2)[エキセンディン−4]
GA標的化化合物は、式
X1X2E3G4T5F6T7S8D9X10S11X12X13X14E15X16X17A18X19X20X21F22I23X24W25L26X27X28X29X30X31X32X33X34X35X36X37X38X39X40
のアミノ酸配列を含んでよく、
ここで、
X1は、L−ヒスチジン、D−ヒスチジン、デスアミノ−ヒスチジン、2−アミノ−ヒスチジン、β−ヒドロキシ−ヒスチジン、ホモヒスチジン、Nα−アセチル−ヒスチジン、α−フルオロメチル−ヒスチジン、α−メチル−ヒスチジン、3−ピリジルアラニン、2−ピリジルアラニンまたは4−ピリジルアラニンであり、X2は、A、D−Ala、G、V、L、I、K、Aib、(1−アミノシクロプロピル)カルボン酸、(1−アミノシクロブチル)カルボン酸、1−アミノシクロペンチル)カルボン酸、(1−アミノシクロヘキシル)カルボン酸、(1−アミノシクロヘプチル)カルボン酸または(1−アミノシクロオクチル)カルボン酸であり、X10はVまたはLであり、X12は、S、KまたはRであり、X13はYまたはQであり、X14はLまたはMであり、X16は、G、EまたはAibであり、X17は、Q、E、KまたはRであり、X19はAまたはVであり、X20は、K、EまたはAであり、X21はEまたはLであり、X24は、A、EまたはRであり、X27はVまたはKであり、X28は、K、E、NまたはRであり、X29はGまたはRであり、X30は、R、GまたはKであり、X31は、G、A、E、P、K、アミドであるかまたは存在せず、X32は、K、S、アミドであるかまたは存在せず、X33は、S、K、アミドであるかまたは存在せず、X34は、G、アミドであるかまたは存在せず、X35は、A、アミドであるかまたは存在せず、X36は、P、アミドであるかまたは存在せず、X37は、P、アミドであるかまたは存在せず、X38は、P、アミドであるかまたは存在せず、X39は、S、アミドであるかまたは存在せず、X40はアミドであるかまたは存在せず、
ただし、X32、X33、X34、X35、X36、X37、X38、X39またはX40が存在しない場合は、各下流アミノ酸残基も存在しない。
X1X2E3G4T5F6T7S8D9X10S11X12X13X14E15X16X17A18X19X20X21F22I23X24W25L26X27X28X29X30X31X32X33X34X35X36X37X38X39X40
のアミノ酸配列を含んでよく、
ここで、
X1は、L−ヒスチジン、D−ヒスチジン、デスアミノ−ヒスチジン、2−アミノ−ヒスチジン、β−ヒドロキシ−ヒスチジン、ホモヒスチジン、Nα−アセチル−ヒスチジン、α−フルオロメチル−ヒスチジン、α−メチル−ヒスチジン、3−ピリジルアラニン、2−ピリジルアラニンまたは4−ピリジルアラニンであり、X2は、A、D−Ala、G、V、L、I、K、Aib、(1−アミノシクロプロピル)カルボン酸、(1−アミノシクロブチル)カルボン酸、1−アミノシクロペンチル)カルボン酸、(1−アミノシクロヘキシル)カルボン酸、(1−アミノシクロヘプチル)カルボン酸または(1−アミノシクロオクチル)カルボン酸であり、X10はVまたはLであり、X12は、S、KまたはRであり、X13はYまたはQであり、X14はLまたはMであり、X16は、G、EまたはAibであり、X17は、Q、E、KまたはRであり、X19はAまたはVであり、X20は、K、EまたはAであり、X21はEまたはLであり、X24は、A、EまたはRであり、X27はVまたはKであり、X28は、K、E、NまたはRであり、X29はGまたはRであり、X30は、R、GまたはKであり、X31は、G、A、E、P、K、アミドであるかまたは存在せず、X32は、K、S、アミドであるかまたは存在せず、X33は、S、K、アミドであるかまたは存在せず、X34は、G、アミドであるかまたは存在せず、X35は、A、アミドであるかまたは存在せず、X36は、P、アミドであるかまたは存在せず、X37は、P、アミドであるかまたは存在せず、X38は、P、アミドであるかまたは存在せず、X39は、S、アミドであるかまたは存在せず、X40はアミドであるかまたは存在せず、
ただし、X32、X33、X34、X35、X36、X37、X38、X39またはX40が存在しない場合は、各下流アミノ酸残基も存在しない。
本発明の別の実施形態において、本発明のGA標的化化合物は、式
X1X2E3G4T5F6T7S8D9V10S11X12Y13L14E15X16X17A18A19X20E21F22I23X24W25L26V27X28X29X30X31X32
のアミノ酸配列を含んでよく、
ここで、X1は、L−ヒスチジン、D−ヒスチジン、デスアミノ−ヒスチジン、2−アミノ−ヒスチジン、β−ヒドロキシ−ヒスチジン、ホモヒスチジン、Nα−アセチル−ヒスチジン、α−フルオロメチル−ヒスチジン、α−メチル−ヒスチジン、3−ピリジルアラニン、2−ピリジルアラニンまたは4−ピリジルアラニンであり、X2は、A、D−Ala、G、V、L、I、K、Aib、(1−アミノシクロプロピル)カルボン酸、(1−アミノシクロブチル)カルボン酸、1−アミノシクロペンチル)カルボン酸または(1−アミノシクロヘキシル)カルボン酸、(1−アミノシクロヘプチル)カルボン酸または(1−アミノシクロオクチル)カルボン酸であり、X12はS、KまたはRであり、X16はG、EまたはAibであり、X17はQ、E、KまたはRであり、X20はK、EまたはTであり、X24はA、EまたはRであり、X28はK、EまたはRであり、X29はGまたはAibであり、X30はRまたはKであり、X31はG、A、EまたはKであり、X32は、K、アミドであるかまたは存在しない。
X1X2E3G4T5F6T7S8D9V10S11X12Y13L14E15X16X17A18A19X20E21F22I23X24W25L26V27X28X29X30X31X32
のアミノ酸配列を含んでよく、
ここで、X1は、L−ヒスチジン、D−ヒスチジン、デスアミノ−ヒスチジン、2−アミノ−ヒスチジン、β−ヒドロキシ−ヒスチジン、ホモヒスチジン、Nα−アセチル−ヒスチジン、α−フルオロメチル−ヒスチジン、α−メチル−ヒスチジン、3−ピリジルアラニン、2−ピリジルアラニンまたは4−ピリジルアラニンであり、X2は、A、D−Ala、G、V、L、I、K、Aib、(1−アミノシクロプロピル)カルボン酸、(1−アミノシクロブチル)カルボン酸、1−アミノシクロペンチル)カルボン酸または(1−アミノシクロヘキシル)カルボン酸、(1−アミノシクロヘプチル)カルボン酸または(1−アミノシクロオクチル)カルボン酸であり、X12はS、KまたはRであり、X16はG、EまたはAibであり、X17はQ、E、KまたはRであり、X20はK、EまたはTであり、X24はA、EまたはRであり、X28はK、EまたはRであり、X29はGまたはAibであり、X30はRまたはKであり、X31はG、A、EまたはKであり、X32は、K、アミドであるかまたは存在しない。
本発明の別の実施形態において、GA標的化剤は、ジペプチジルアミノペプチダーゼIV保護されている。本発明の別の実施形態において、GA標的化剤は、本明細書において開示されているDPP−IV加水分解アッセイを使用し、配列番号1の加水分解の速度よりも低速で、DPP−IVによって加水分解される。本発明の別の実施形態において、GA標的化剤のA2は、別のアミノ酸残基(X2)によって置換されていた。一部の実施形態において、X2はAibである。本発明の別の実施形態において、X1は、D−ヒスチジン、デスアミノ−ヒスチジン、2−アミノ−ヒスチジン、[ベータ]−ヒドロキシ−ヒスチジン、ホモヒスチジン、Nα−アセチル−ヒスチジン、α−フルオロメチル−ヒスチジン、α−メチル−ヒスチジン、3−ピリジルアラニン、2−ピリジルアラニンおよび4−ピリジルアラニンからなる群より選択される。
本発明の別の実施形態において、GA標的化剤は、配列番号1または配列番号2と比較すると、交換、付加または欠失された12個以下のアミノ酸残基を含む。本発明の別の実施形態において、GA標的化剤は、配列番号1または配列番号2と比較すると、交換、付加または欠失された6個以下のアミノ酸残基を含む。本発明の別の実施形態において、GA標的化剤は、配列番号1または配列番号2と比較すると、交換、付加または欠失された4個以下のアミノ酸残基を含む。本発明の別の実施形態において、GA標的化剤は、配列番号1または配列番号2と比較すると、交換、付加または欠失された2個以下のアミノ酸残基を含む。本発明の別の実施形態において、GA標的化剤は、遺伝子コードによってコードされていない4個以下のアミノ酸残基を含む。
本発明の別の実施形態において、GA標的化化合物は
HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPSKKKKKK−アミド(配列番号147)
である。
HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPSKKKKKK−アミド(配列番号147)
である。
一部の実施形態において、本発明は、GLP−1と実質的に相同であるGA標的化剤を提供する。本発明のGA標的化剤は、GLP−1(配列番号1)と少なくとも95%相同であってよい。本発明のGA標的化剤は、GLP−1と少なくとも90%相同であってよい。本発明のGA標的化剤は、GLP−1と少なくとも80%相同であってよい。本発明のGA標的化剤は、GLP−1と少なくとも70%相同であってよい。本発明のGA標的化剤は、GLP−1と少なくとも60%相同であってよい。本発明のGA標的化剤は、GLP−1と少なくとも53%相同であってよい。本発明のGA標的化剤は、GLP−1と少なくとも50%相同であってよい。
一部の実施形態において、本発明は、エキセンディン−4(配列番号2)と実質的に相同であるGA標的化剤を提供する。本発明のGA標的化剤は、エキセンディン−4と少なくとも95%相同であってよい。本発明のGA標的化剤は、エキセンディン−4と少なくとも90%相同であってよい。本発明のGA標的化剤は、エキセンディン−4と少なくとも80%相同であってよい。本発明のGA標的化剤は、エキセンディン−4と少なくとも70%相同であってよい。本発明のGA標的化剤は、エキセンディン−4と少なくとも60%相同であってよい。本発明のGA標的化剤は、エキセンディン−4と少なくとも53%相同であってよい。本発明のGA標的化剤は、エキセンディン−4と少なくとも50%相同であってよい。
いくつかの実施形態において、式Iを有するGA標的化剤−リンカー複合体が提供され、
L−[GA標的化剤] (I)
式中、
[GA標的化剤]はGLP−1Rのペプチドアゴニストである。いくつかの実施形態において、[GA標的化剤]は、それだけに限らないが、
L−[GA標的化剤] (I)
式中、
[GA標的化剤]はGLP−1Rのペプチドアゴニストである。いくつかの実施形態において、[GA標的化剤]は、それだけに限らないが、
ここで、
R1は、存在しないか、CH3、C(O)CH3、C(O)CH2CH3、C(O)CH2CH2CH3またはC(O)CH(CH3)CH3であり、
R2は、OH、NH2、NH(CH3)、NHCH2CH3、NHCH2CH2CH3、NHCH(CH3)CH3、NHCH2CH2CH2CH3、NHCH(CH3)CH2CH3、NHC6H5、NHCH2CH2OCH3、NHOCH3、NHOCH2CH3、カルボキシ保護基、脂質脂肪酸基または炭水化物であり、
Lは式−X−Y−Z−を有するリンカー部分であり、式中、
Xは、存在していてもよく、GA標的化剤を含む残基のうちの1つに結合している、生物学的に適合するポリマー、ブロックコポリマーC、H、N、O、P、S、ハロゲン(F、Cl、Br、I)もしくはその塩、アルキル、アルケニル、アルキニル、オキソアルキル、オキソアルケニル、オキソアルキニル、アミノアルキル、アミノアルケニル、アミノアルキニル、スルホアルキル、スルホアルケニル、スルホアルキニル、ホスホアルキル、ホスホアルケニルまたはホスホアルキニル基であり、
Yは、少なくとも環構造を含む存在していてもよい認識基であり、
Zは、抗体中の結合性部位において側鎖と共有結合することができる反応基である。
一部の実施形態において、Xは、GA標的化剤の、カルボキシ末端、S側鎖、K側鎖、K(SH)側鎖、T側鎖またはY側鎖に結合している。
その他の態様において、本発明は、
ここで、
R1は、存在しないか、CH3、C(O)CH3、C(O)CH2CH3、C(O)CH2CH2CH3またはC(O)CH(CH3)CH3であり、
R2は、OH、NH2、NH(CH3)、NHCH2CH3、NHCH2CH2CH3、NHCH(CH3)CH3、NHCH2CH2CH2CH3、NHCH(CH3)CH2CH3、NHC6H5、NHCH2CH2OCH3、NHOCH3、NHOCH2CH3、カルボキシ保護基、脂質脂肪酸基または炭水化物であり、
K(L)は、リンカーLと共有結合しているリシン残基である。いくつかの実施形態において、K(L)は
−L−は、式−X−Y−Z−を有するリンカー部分であり、式中、
Xは
Rbは、水素、置換もしくは非置換のC1〜10アルキル、置換もしくは非置換のC3〜7シクロアルキル−C0〜6アルキル、または置換もしくは非置換のアリールC0〜6アルキルである]であり、
Yは、少なくとも環構造を含む認識基であり、
Zは、抗体中の結合性部位においてアミノ酸側鎖と共有結合を形成することができる反応基である。
一部の実施形態において、Yは、置換されていてもよい構造
式中、a、b、c、dおよびeは、独立に、炭素または窒素であり、fは、炭素、窒素、酸素または硫黄であり、Yは、十分な原子価の任意の2つの環位置においてXおよびZに独立に結合しており、a、b、c、d、eまたはfのうちの4つ以下は、同時に窒素である。
一部の実施形態において、Zは、置換1,3−ジケトンまたはアシルβ−ラクタムからなる群より選択される。
一部の実施形態において、Zは、構造
式中、q=0、1、2、3、4または5である。その他の実施形態において、q=1、2または3である。
式Iの化合物の一部の実施形態において、Xは
−R22−P−R23−または−R22−P−R21−P’−R23−
であり、
式中、
PおよびP’は、独立に、ポリエチレンオキシド、ポリエチルオキサゾリン、ポリ−N−ビニルピロリドン、ポリビニルアルコール、ポリヒドロキシエチルアクリレート、ポリヒドロキシエチルメタクリレートおよびポリアクリルアミド等のポリオキシアルキレンオキシド類、ポリマー主鎖またはポリマー側鎖のいずれか上にアミン基を有するポリリシン、ポリオルニチン、ポリアルギニンおよびポリヒスチジン等のポリアミン類、ポリアミノスチレン、ポリアミノアクリレート、ポリ(N−メチルアミノアクリレート)、ポリ(N−エチルアミノアクリレート)、ポリ(N,N−ジメチルアミノアクリレート)、ポリ(N,N−ジエチルアミノアクリレート)、ポリ(アミノメタクリレート)、ポリ(N−メチルアミノ−メタクリレート)、ポリ(N−エチルアミノメタクリレート)、ポリ(N,N−ジメチルアミノメタクリレート)、ポリ(N,N−ジエチルアミノメタクリレート)、ポリ(エチレンイミン)等の非ペプチドポリアミン類、ポリ(N,N,N−トリメチルアミノアクリレートクロリド)、ポリ(メタクリルアミドプロピルトリメチルアンモニウムクロリド)等の第四級アミン類のポリマー、コンドロイチン硫酸−A(4−硫酸)、コンドロイチン硫酸−C(6−硫酸)およびコンドロイチン硫酸−B等のプロテオグリカン類、ポリセリン、ポリスレオニン、ポリグルタミン等のポリペプチド類、キトサン、ヒドロキシエチルセルロース等の天然または合成多糖類、ならびに脂質類からなる群より選択され、
R21、R22およびR23は、それぞれ独立に、共有結合、−O−、−S−、−NRb−、アミド、置換もしくは非置換の直鎖もしくは分岐鎖C1〜50アルキレン、または置換もしくは非置換の直鎖もしくは分岐鎖C1〜50ヘテロアルキレンであり、
Rbは、水素、置換もしくは非置換のC1〜10アルキル、置換もしくは非置換のC3〜7シクロアルキル−C0〜6アルキル、または置換もしくは非置換のアリール−C0〜6アルキルであり、
R21、R22およびR23は、Xの主鎖長が約200個以下の原子となるように選択される。
−R22−P−R23−または−R22−P−R21−P’−R23−
であり、
式中、
PおよびP’は、独立に、ポリエチレンオキシド、ポリエチルオキサゾリン、ポリ−N−ビニルピロリドン、ポリビニルアルコール、ポリヒドロキシエチルアクリレート、ポリヒドロキシエチルメタクリレートおよびポリアクリルアミド等のポリオキシアルキレンオキシド類、ポリマー主鎖またはポリマー側鎖のいずれか上にアミン基を有するポリリシン、ポリオルニチン、ポリアルギニンおよびポリヒスチジン等のポリアミン類、ポリアミノスチレン、ポリアミノアクリレート、ポリ(N−メチルアミノアクリレート)、ポリ(N−エチルアミノアクリレート)、ポリ(N,N−ジメチルアミノアクリレート)、ポリ(N,N−ジエチルアミノアクリレート)、ポリ(アミノメタクリレート)、ポリ(N−メチルアミノ−メタクリレート)、ポリ(N−エチルアミノメタクリレート)、ポリ(N,N−ジメチルアミノメタクリレート)、ポリ(N,N−ジエチルアミノメタクリレート)、ポリ(エチレンイミン)等の非ペプチドポリアミン類、ポリ(N,N,N−トリメチルアミノアクリレートクロリド)、ポリ(メタクリルアミドプロピルトリメチルアンモニウムクロリド)等の第四級アミン類のポリマー、コンドロイチン硫酸−A(4−硫酸)、コンドロイチン硫酸−C(6−硫酸)およびコンドロイチン硫酸−B等のプロテオグリカン類、ポリセリン、ポリスレオニン、ポリグルタミン等のポリペプチド類、キトサン、ヒドロキシエチルセルロース等の天然または合成多糖類、ならびに脂質類からなる群より選択され、
R21、R22およびR23は、それぞれ独立に、共有結合、−O−、−S−、−NRb−、アミド、置換もしくは非置換の直鎖もしくは分岐鎖C1〜50アルキレン、または置換もしくは非置換の直鎖もしくは分岐鎖C1〜50ヘテロアルキレンであり、
Rbは、水素、置換もしくは非置換のC1〜10アルキル、置換もしくは非置換のC3〜7シクロアルキル−C0〜6アルキル、または置換もしくは非置換のアリール−C0〜6アルキルであり、
R21、R22およびR23は、Xの主鎖長が約200個以下の原子となるように選択される。
式Iの化合物の一部の実施形態において、Xは、[GA標的化剤]中のアミノ酸残基に結合しており、置換されていてもよい−R22−[CH2−CH2−O]t−R23−、−R22−シクロアルキル−R23−、−R22−アリール−R23−または−R22−ヘテロシクリル−R23−であり、ここで、tは0〜50である。
一部の実施形態において、Xは、GA標的化剤の、カルボキシ末端、S側鎖、K側鎖、K(SH)側鎖、T側鎖またはY側鎖に結合している。
式Iの化合物の一部の実施形態において、R22は、−(CH2)v−、−(CH2)u−C(O)−(CH2)v−、−(CH2)u−C(O)−O−(CH2)v−、−(CH2)u−C(S)−NRb−(CH2)v−、−(CH2)u−C(O)−NRb−(CH2)v−、−(CH2)u−NRb−(CH2)v−、−(CH2)u−O−(CH2)v−、−(CH2)u−S(O)0〜2−(CH2)v−、−(CH2)u−S(O)0〜2−NRb−(CH2)v−または−(CH2)u−P(O)(ORb)−O−(CH2)v−であり、式中、uおよびvは、独立に、0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19または20である。
式Iの化合物の一部の実施形態において、R21およびR23は、独立に、−(CH2)s−、−(CH2)r−C(O)−(CH2)s−、−(CH2)r−C(O)−O−(CH2)v−、−(CH2)r−C(S)−NRb−(CH2)s−、−(CH2)r−C(O)−NRb−(CH2)s−、−(CH2)r−NRb−(CH2)s−、−(CH2)r−O−(CH2)s−、−(CH2)r−S(O)0〜2−(CH2)s−、−(CH2)r−S(O)0〜2−NRb−(CH2)s−または−(CH2)r−P(O)(ORb)−O−(CH2)s−であり、式中、r、sおよびvは、独立に、0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19または20である。
式Iの一部の実施形態において、t>1である場合、またはXが、−R22−[CH2−CH2−O]t−R23−、−R22−シクロアルキル−R23、−R22−アリール−R23−もしくは−R22−ヘテロシクリル−R23−である場合、Yは存在している。
式Iに従う例示的な化合物は、図1および3に例示されている。
式IIに例示されている本発明の別の態様は、介在リンカーL’を介して抗体中の結合性部位と共有結合しているGA標的化剤を含むGA標的化化合物である。GA標的化化合物の抗体部は、この用語が本明細書で使用される場合、全(全長)抗体、固有の抗体断片またはその他任意の形態の抗体を含み得る。一実施形態において、抗体は、ヒトIgG、IgA、IgM、IgDまたはIgE抗体由来の定常領域を含むマウスアルドラーゼ抗体のヒト化型である。別の実施形態において、抗体は、マウスアルドラーゼ抗体由来の可変領域およびヒトIgG、IgA、IgM、IgDまたはIgE抗体由来の定常領域を含むキメラ抗体である。さらなる実施形態において、抗体は、天然または天然ヒトIgG、IgA、IgM、IgDまたはIgE抗体由来のポリペプチド配列を含むマウスアルドラーゼ抗体の完全ヒト型である。
抗体−L’−[GA標的化剤] (II)
式中、
[GA標的化剤]は、GLP−1Rのペプチドアゴニストである。いくつかの実施形態において、[GA標的化剤]は、それだけに限らないが、
抗体−L’−[GA標的化剤] (II)
式中、
[GA標的化剤]は、GLP−1Rのペプチドアゴニストである。いくつかの実施形態において、[GA標的化剤]は、それだけに限らないが、
ここで、
R1は、存在しないか、CH3、C(O)CH3、C(O)CH2CH3、C(O)CH2CH2CH3またはC(O)CH(CH3)CH3であり、
R2は、OH、NH2、NH(CH3)、NHCH2CH3、NHCH2CH2CH3、NHCH(CH3)CH3、NHCH2CH2CH2CH3、NHCH(CH3)CH2CH3、NHC6H5、NHCH2CH2OCH3、NHOCH3、NHOCH2CH3、カルボキシ保護基、脂質脂肪酸基または炭水化物であり、
L’は式−X−Y−Z’を有するリンカー部分であり、式中、
Xは、GA標的化剤を含む残基のうちの1つと結合している生物学的に適合するポリマーまたはブロックコポリマーであり、
Yは、少なくとも環構造を含む存在していてもよい認識基であり、
Zは、抗体中の結合性部位において側鎖と共有結合している基である。
式IIの化合物の一部の実施形態において、Xは
−R22−P−R23−または−R22−P−R21−P’−R23−
であり、
式中、
PおよびP’は、独立に、ポリエチレンオキシド、ポリエチルオキサゾリン、ポリ−N−ビニルピロリドン、ポリビニルアルコール、ポリヒドロキシエチルアクリレート、ポリヒドロキシエチルメタクリレートおよびポリアクリルアミド等のポリオキシアルキレンオキシド類、ポリマー主鎖またはポリマー側鎖のいずれか上にアミン基を有するポリリシン、ポリオルニチン、ポリアルギニンおよびポリヒスチジン等のポリアミン類、ポリアミノスチレン、ポリアミノアクリレート、ポリ(N−メチルアミノアクリレート)、ポリ(N−エチルアミノアクリレート)、ポリ(N,N−ジメチルアミノアクリレート)、ポリ(N,N−ジエチルアミノアクリレート)、ポリ(アミノメタクリレート)、ポリ(N−メチルアミノ−メタクリレート)、ポリ(N−エチルアミノメタクリレート)、ポリ(N,N−ジメチルアミノメタクリレート)、ポリ(N,N−ジエチルアミノメタクリレート)、ポリ(エチレンイミン)等の非ペプチドポリアミン類、ポリ(N,N,N−トリメチルアミノアクリレートクロリド)、ポリ(メタクリルアミドプロピルトリメチルアンモニウムクロリド)等の第四級アミン類のポリマー、コンドロイチン硫酸−A(4−硫酸)、コンドロイチン硫酸−C(6−硫酸)およびコンドロイチン硫酸−B等のプロテオグリカン類、ポリセリン、ポリスレオニン、ポリグルタミン等のポリペプチド類、キトサン、ヒドロキシエチルセルロース等の天然または合成多糖類、ならびに脂質類からなる群より選択され、
R21、R22およびR23は、それぞれ独立に、共有結合、−O−、−S−、−NRb−、置換もしくは非置換の直鎖もしくは分岐鎖C1〜50アルキレン、または置換もしくは非置換の直鎖もしくは分岐鎖C1〜50ヘテロアルキレンであり、
Rbは、水素、置換もしくは非置換のC1〜10アルキル、置換もしくは非置換のC3〜7シクロアルキル−C0〜6アルキル、または置換もしくは非置換のアリール−C0〜6アルキルであり、
R21、R22およびR23は、Xの主鎖長が約200個以下の原子となるように選択される。
−R22−P−R23−または−R22−P−R21−P’−R23−
であり、
式中、
PおよびP’は、独立に、ポリエチレンオキシド、ポリエチルオキサゾリン、ポリ−N−ビニルピロリドン、ポリビニルアルコール、ポリヒドロキシエチルアクリレート、ポリヒドロキシエチルメタクリレートおよびポリアクリルアミド等のポリオキシアルキレンオキシド類、ポリマー主鎖またはポリマー側鎖のいずれか上にアミン基を有するポリリシン、ポリオルニチン、ポリアルギニンおよびポリヒスチジン等のポリアミン類、ポリアミノスチレン、ポリアミノアクリレート、ポリ(N−メチルアミノアクリレート)、ポリ(N−エチルアミノアクリレート)、ポリ(N,N−ジメチルアミノアクリレート)、ポリ(N,N−ジエチルアミノアクリレート)、ポリ(アミノメタクリレート)、ポリ(N−メチルアミノ−メタクリレート)、ポリ(N−エチルアミノメタクリレート)、ポリ(N,N−ジメチルアミノメタクリレート)、ポリ(N,N−ジエチルアミノメタクリレート)、ポリ(エチレンイミン)等の非ペプチドポリアミン類、ポリ(N,N,N−トリメチルアミノアクリレートクロリド)、ポリ(メタクリルアミドプロピルトリメチルアンモニウムクロリド)等の第四級アミン類のポリマー、コンドロイチン硫酸−A(4−硫酸)、コンドロイチン硫酸−C(6−硫酸)およびコンドロイチン硫酸−B等のプロテオグリカン類、ポリセリン、ポリスレオニン、ポリグルタミン等のポリペプチド類、キトサン、ヒドロキシエチルセルロース等の天然または合成多糖類、ならびに脂質類からなる群より選択され、
R21、R22およびR23は、それぞれ独立に、共有結合、−O−、−S−、−NRb−、置換もしくは非置換の直鎖もしくは分岐鎖C1〜50アルキレン、または置換もしくは非置換の直鎖もしくは分岐鎖C1〜50ヘテロアルキレンであり、
Rbは、水素、置換もしくは非置換のC1〜10アルキル、置換もしくは非置換のC3〜7シクロアルキル−C0〜6アルキル、または置換もしくは非置換のアリール−C0〜6アルキルであり、
R21、R22およびR23は、Xの主鎖長が約200個以下の原子となるように選択される。
式IIの化合物の一部の実施形態において、Xは、[GA標的化剤]中のアミノ酸残基に結合しており、置換されていてもよい−R22−[CH2−CH2−O]t−R23−、−R22−シクロアルキル−R23−、−R22−アリール−R23−または−R22−ヘテロシクリル−R23−であり、ここで、tは0〜50である。
式IIの化合物の一部の実施形態において、R22は、−(CH2)v−、−(CH2)u−C(O)−(CH2)v−、−(CH2)u−C(O)−O−(CH2)v−、−(CH2)u−C(S)−NRb−(CH2)v−、−(CH2)u−C(O)−NRb−(CH2)v−、−(CH2)u−NRb−(CH2)v−、−(CH2)u−O−(CH2)v−、−(CH2)u−S(O)0〜2−(CH2)v−、−(CH2)u−S(O)0〜2−NRb−(CH2)v−または−(CH2)u−P(O)(ORb)−O−(CH2)v−であり、式中、uおよびvは、独立に、0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19または20である。
式IIの化合物の一部の実施形態において、R21およびR23は、独立に、−(CH2)s−、−(CH2)r−C(O)−(CH2)s−、−(CH2)r−C(O)−O−(CH2)v−、−(CH2)r−C(S)−NRb−(CH2)s−、−(CH2)r−C(O)−NRb−(CH2)s−、−(CH2)r−NRb−(CH2)s−、−(CH2)r−O−(CH2)s−、−(CH2)r−S(O)0〜2−(CH2)s−、−(CH2)r−S(O)0〜2−NRb−(CH2)s−または−(CH2)r−P(O)(ORb)−O−(CH2)s−であり、式中、r、sおよびvは、独立に、0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19または20である。
式IIの化合物の一部の実施形態において、[GA標的化剤]は、
ここで、
R1は、存在しないか、CH3、C(O)CH3、C(O)CH2CH3、C(O)CH2CH2CH3またはC(O)CH(CH3)CH3であり、
R2は、OH、NH2、NH(CH3)、NHCH2CH3、NHCH2CH2CH3、NHCH(CH3)CH3、NHCH2CH2CH2CH3、NHCH(CH3)CH2CH3、NHC6H5、NHCH2CH2OCH3、NHOCH3、NHOCH2CH3、カルボキシ保護基、脂質脂肪酸基または炭水化物であり、
K(L)は、リンカーL’と共有結合しているリシン残基である。いくつかの実施形態において、K(L’)は
[式中、uは、1、2または3である]であり、
−L’−は、式−X−Y−Zを有するリンカー部分であり、式中、
Xは
Rbは、水素、置換もしくは非置換のC1〜10アルキル、置換もしくは非置換のC3〜7シクロアルキル−C0〜6アルキル、または置換もしくは非置換のアリールC0〜6アルキルである]であり、
Yは、少なくとも環構造を含む認識基であり、
Z’は、抗体中の結合性部位においてアミノ酸側鎖との共有結合を含む結合部分である。
一部の実施形態において、Yは、置換されていてもよい構造
式中、a、b、c、dおよびeは、独立に、炭素または窒素であり、fは、炭素、窒素、酸素または硫黄であり、Yは、十分な原子価の任意の2つの環位置においてXおよびZに独立に結合しており、a、b、c、d、eまたはfのうちの4つ以下は、同時に窒素である。
一部の実施形態において、Z’は、構造
式中、q=0、1、2、3、4または5であり、−N−抗体は、アミノ基を担持する抗体中の結合性部位におけるアミノ酸側鎖との共有結合を指す。その他の態様において、q=1、2または3である。
式IIIに例示されている本発明の別の態様は、同じであっても異なっていてもよい2種のGA標的化剤が、それぞれ抗体中の結合性部位と共有結合している、GA標的化化合物である。GA標的化化合物の抗体部は、この用語が本明細書で使用される場合、全(全長)抗体、固有の抗体断片またはその他任意の形態の抗体を含み得る。一実施形態において、抗体は、ヒトIgG、IgA、IgM、IgDまたはIgE抗体由来の定常領域を含むマウスアルドラーゼ抗体のヒト化型である。別の実施形態において、抗体は、マウスアルドラーゼ抗体由来の可変領域およびヒトIgG、IgA、IgM、IgDまたはIgE抗体由来の定常領域を含むキメラ抗体である。さらなる実施形態において、抗体は、天然または天然ヒトIgG、IgA、IgM、IgDまたはIgE抗体由来のポリペプチド配列を含むマウスアルドラーゼ抗体の完全ヒト型である。
抗体[−L’−[GA標的化剤]]2 (III)
式中、[GA標的化剤]、抗体およびL’は、式IIに従って定義された通りである。
抗体[−L’−[GA標的化剤]]2 (III)
式中、[GA標的化剤]、抗体およびL’は、式IIに従って定義された通りである。
式Iに従う例示的な化合物は、図2および4に例示されている。
いくつかの実施形態において、対象における糖尿病または糖尿病に関連する状態を治療するための方法であって、治療有効量のGA標的化化合物またはその医薬誘導体を該対象に投与するステップを含む方法が提供される。
いくつかの実施形態において、対象におけるインスリン分泌を増大させるための方法であって、治療有効量のGA標的化化合物またはその医薬誘導体を該対象に投与するステップを含む方法が提供される。
いくつかの実施形態において、対象における血中グルコースレベルを減少させる方法であって、治療有効量のGA標的化化合物またはその医薬誘導体を該対象に投与するステップを含む方法が提供される。
いくつかの実施形態において、糖尿病もしくは糖尿病に関連する状態を治療するため、または、インスリン分泌を増大もしくは血中グルコースレベルを減少させるための薬剤を生み出すための、GA標的化化合物およびその医薬誘導体の使用が提供される。
本発明の一部のGA標的化化合物は、
本発明の一部のGA標的化化合物は、
本発明の一部のGA標的化化合物は、
本発明の一部の化合物は、
ここで、K(L’)は、リンカーL’に結合して備わっているリシンであり、ここで、L’は、抗体中の結合性部位においてアミノ酸側鎖と共有結合を形成することができる。いくつかの実施形態において、K(L’)は
−L−は、式−X−Y−Z−または−X−Y−Z’のうちの一方を有するリンカーであり、
Xは
Rbは、水素、置換もしくは非置換のC1〜10アルキル、置換もしくは非置換のC3〜7シクロアルキル−C0〜6アルキル、または置換もしくは非置換のアリール−C0〜6アルキルである]であり、
Yは、少なくとも環構造を含む存在していてもよい認識基であり、
Zは、抗体中の結合性部位においてアミノ酸側鎖と共有結合を形成することができる反応基である。
定義
下記略号、用語および語句は、本明細書において、以下で定義される通りに使用される。
下記略号、用語および語句は、本明細書において、以下で定義される通りに使用される。
接頭辞「D」による別段の指示(例えば、D−AlaまたはN−Me−D−Ile)がない限り、本明細書に記載されているペプチド中のアミノ酸およびアミノアシル残基のα炭素の立体化学は、天然または「L」配置である。Cahn−Ingold−Prelogの「R」および「S」指定は、ペプチドのN末端のいくつかのアシル置換基におけるキラル中心の立体化学を特定するために使用される。指定「R,S」は、2つの鏡像異性体形態のラセミ混合物を指示することが意図されている。この命名法は、R.S.Cahnら、Angew.Chem.Int.Ed.Engl.、5:385〜415(1966)において記述されているものに追従する。
D−Hは、Dヒスチジンを指す。
2−アミノイソ酪酸は、本明細書で使用される場合、下記構造
「ポリペプチド」、「ペプチド」および「タンパク質」は、アミノ酸残基のポリマーを指すために同義で使用される。本明細書で使用される場合、これらの用語は、1個または複数のアミノ酸残基が、対応する自然発生的なアミノ酸の人工の化学的類似体であるアミノ酸ポリマーに当てはめ得る。これらの用語は、自然発生的なアミノ酸ポリマーにも当てはまる。アミノ酸は、ペプチドの結合機能が維持される限り、L形態であってもD形態であってもよい。ペプチドは、ペプチド中の2種の非隣接アミノ酸の間において、例えば、主鎖と主鎖、側鎖と主鎖、および側鎖と側鎖環化の分子内結合を有する、環状であってよい。環状ペプチドは、当該技術分野において既知の方法によって調製することができる。例えば、米国特許第6,013,625号;S.Chengら、J Med.Chem.37:1〜8(1994)を参照されたい。
すべてのペプチド配列は、一般に認められている慣習に従って記載されており、それにより、α−N末端アミノ酸残基は左側に、α−C末端アミノ酸残基は右側にある。本明細書で使用される場合、「N末端」という用語は、ペプチド中のアミノ酸の遊離α−アミノ基を指し、「C末端」という用語は、ペプチド中のアミノ酸の遊離カルボン酸末端を指す。基によってN−終端されているペプチドは、N末端アミノ酸残基のα−アミノ窒素上に基を担持するペプチドを指す。基によってN−終端されているアミノ酸は、α−アミノ窒素上に基を担持するアミノ酸を指す。
概して、「置換(されている)」は、その中に含有されている水素原子との1つまたは複数の結合が、それだけに限らないが、F、Cl、BrおよびI等のハロゲン原子;ヒドロキシル基、アルコキシ基、アリールオキシ基およびエステル基等の基中の酸素原子;チオール基、アルキルスルフィド基、アリールスルフィド基、スルホン基、スルホニル基およびスルホキシド基等の基中の硫黄原子;アミン類、アミド類、アルキルアミン類、ジアルキルアミン類、アリールアミン類、アルキルアリールアミン類、ジアリールアミン類、N−オキシド類、イミド類およびエナミン類等の基中の窒素原子;トリアルキルシリル基、ジアルキルアリールシリル基、アルキルジアリールシリル基およびトリアリールシリル基等の基中のケイ素原子;ならびに様々な他の基中の他のヘテロ原子等、非水素または非炭素原子との結合によって置き換えられている、以下で定義される通りの基を指す。置換アルキル基、置換シクロアルキル基および他の置換基は、(1つまたは複数の)炭素または(1つまたは複数の)水素原子との1つまたは複数の結合が、カルボニル、カルボキシルおよびエステル基中の酸素またはイミン類、オキシム類、ヒドラゾン類およびニトリル類等の基中の窒素等のヘテロ原子との結合によって置き換えられている基も含む。本明細書で用いられる場合、「置換されていてもよい」基は、置換されていても非置換であってもよい。したがって、例えば「置換されていてもよいアルキル」は、置換アルキル基および非置換アルキル基の両方を指す。
「非置換アルキル」という語句は、ヘテロ原子を含有しないアルキル基を指す。したがって、該語句は、メチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチル、ヘキシル、ヘプチル、オクチル、ノニル、デシル、ウンデシル、ドデシル等の直鎖アルキル基を含む。該語句は、それだけに限らないが、例として提供される下記を含む直鎖アルキル基の分岐鎖異性体も含む:−CH(CH3)2、−CH(CH3)(CH2CH3)、−CH(CH2CH3)2、−C(CH3)3、−C(CH2CH3)3、−CH2CH(CH3)2、−CH2CH(CH3)(CH2CH3)、−CH2CH(CH2CH3)2、−CH2C(CH3)3、−CH2C(CH2CH3)3、−CH(CH3)CH(CH3)(CH2CH3)、−CH2CH2CH(CH3)2、−CH2CH2CH(CH3)(CH2CH3)、−CH2CH2CH(CH2CH3)2、−CH2CH2C(CH3)3、−CH2CH2C(CH2CH3)3、−CH(CH3)CH2CH(CH3)2、−CH(CH3)CH(CH3)CH(CH3)2、−CH(CH2CH3)CH(CH3)CH(CH3)(CH2CH3)他。該語句は、シクロアルキル基を含まない。したがって、非置換アルキル基という語句は、第一アルキル基、第二アルキル基および第三アルキル基を含む。非置換アルキル基は、親化合物中の1個または複数の炭素原子、酸素原子、窒素原子および/または硫黄原子と結合していてよい。考えられる非置換アルキル基は、1〜20個の炭素原子を有する直鎖および分岐鎖アルキル基を含む。あるいは、そのような非置換アルキル基は、1〜10個の炭素原子を有するか、または1〜約6個の炭素原子を有する低級アルキル基である。その他の非置換アルキル基は、1〜3個の炭素原子を有する直鎖および分岐鎖アルキル基を含み、メチル、エチル、プロピルおよび−CH(CH3)2を含む。
「置換アルキル」という語句は、(1つまたは複数の)炭素または(1つまたは複数の)水素との1つまたは複数の結合が、それだけに限らないが、F、Cl、BrおよびI等のハロゲン化物中のハロゲン原子;ヒドロキシル基、アルコキシ基、アリールオキシ基およびエステル基等の基中の酸素原子;チオール基、アルキルスルフィド基、アリールスルフィド基、スルホン基、スルホニル基およびスルホキシド基等の基中の硫黄原子;アミン類、アミド類、アルキルアミン類、ジアルキルアミン類、アリールアミン類、アルキルアリールアミン類、ジアリールアミン類、N−オキシド類、イミド類およびエナミン類等の基中の窒素原子;トリアルキルシリル基、ジアルキルアリールシリル基、アルキルジアリールシリル基およびトリアリールシリル基等の基中のケイ素原子;ならびに様々な他の基中の他のヘテロ原子等、非水素および非炭素原子との結合によって置き換えられている、本明細書において定義されている通りの非置換アルキル基を指す。置換アルキル基は、(1つまたは複数の)炭素または(1つまたは複数の)水素原子との1つまたは複数の結合が、カルボニル、カルボキシルおよびエステル基中の酸素またはイミン類、オキシム類、ヒドラゾン類およびニトリル類等の基中の窒素等のヘテロ原子との結合によって置き換えられている基も含む。置換アルキル基は、数ある中でも、炭素または水素原子との1つまたは複数の結合が、フッ素原子との1つまたは複数の結合によって置き換えられている、アルキル基を含む。置換アルキル基の一例は、トリフルオロメチル基およびトリフルオロメチル基を含有するその他のアルキル基である。その他のアルキル基は、置換アルキル基がヒドロキシル、アルコキシ、アリールオキシ基またはヘテロシクリルオキシ基を含有するように、炭素または水素原子との1つまたは複数の結合が、酸素原子との結合によって置き換えられているものを含む。さらに他のアルキル基は、アミン、アルキルアミン、ジアルキルアミン、アリールアミン、(アルキル)(アリール)アミン、ジアリールアミン、ヘテロシクリルアミン、(アルキル)(ヘテロシクリル)アミン、(アリール)(ヘテロシクリル)アミンまたはジヘテロシクリルアミン基を有するアルキル基を含む。
「非置換アルキレン」という語句は、本明細書において定義されている通りの二価非置換アルキル基を指す。したがって、メチレン、エチレンおよびプロピレンは、それぞれ非置換アルキレンの例である。「置換アルキレン」という語句は、本明細書において定義されている通りの二価置換アルキル基を指す。置換または非置換の低級アルキレン基は、1〜約6個の炭素を有する。
「非置換シクロアルキル」という語句は、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチルおよびシクロオクチル等の環式アルキル基、ならびに本明細書において定義されている通りの直鎖および分岐鎖アルキル基で置換されているそのような環を指す。該語句は、それだけに限らないが、アダマンチルノルボルニル、ビシクロ[2.2.2]オクチル等の多環式アルキル基、ならびに本明細書において定義されている通りの直鎖および分岐鎖アルキル基で置換されているそのような環も含む。したがって、該語句は、数ある中でもメチルシクロヘキシル基を含むであろう。該語句は、ヘテロ原子を含有する環式アルキル基を含まない。非置換シクロアルキル基は、親化合物中の1個または複数の炭素原子、酸素原子、窒素原子および/または硫黄原子と結合していてよい。一部の実施形態において、非置換シクロアルキル基は、3〜20個の炭素原子を有する。その他の実施形態において、そのような非置換アルキル基が3〜8個の炭素原子を有することもあれば、そのような基が3〜7個の炭素原子を有することもある。
「置換シクロアルキル」という語句は、「置換アルキル」が非置換アルキル基に対して有するのと同じ意味を非置換シクロアルキル基に対して有する。したがって、該語句は、それだけに限らないが、オキソシクロヘキシル、クロロシクロヘキシル、ヒドロキシシクロペンチルおよびクロロメチルシクロヘキシル基を含む。
「非置換アリール」という語句は、ヘテロ原子を含有しないアリール基を指す。したがって、該語句は、それだけに限らないが、フェニル、ビフェニル、アントラセニルおよびナフテニル等の基を含む。「非置換アリール」という語句は、ナフタレン等の縮合環を含有する基を含むが、トリル等のアリール基が本明細書において下述の通りの置換アリール基であるとみなされるように、環員のうちの1つと結合しているアルキルまたはハロ基等の他の基を有するアリール基を含まない。典型的には、非置換アリールは、6〜約10個の炭素原子を有する低級アルキルであってよい。1つの非置換アリール基はフェニルである。非置換アリール基は、親化合物中の1個または複数の炭素原子、酸素原子、窒素原子および/または硫黄原子と結合していてよい。
「置換アリール」という語句は、「置換アルキル」が非置換アルキル基に対して有するのと同じ意味を非置換アリール基に対して有する。しかしながら、置換アリール基は、芳香族炭素のうちの1個が、本明細書に記載されている非炭素または非水素原子のうちの1個と結合しているアリール基も含み、アリール基の1個または複数の芳香族炭素が、本明細書において定義されている通りの置換および/または非置換アルキル、アルケニルまたはアルキニル基と結合しているアリール基も含む。これは、アリール基の2個の炭素原子が、アルキル、アルケニルまたはアルキニル基の2個の原子と結合して縮合環系(例えば、ジヒドロナフチルまたはテトラヒドロナフチル)を定義する結合アレンジメントを含む。したがって、「置換アリール」という語句は、数ある中でも、それだけに限らないが、トリルおよびヒドロキシフェニルを含む。
「非置換アルケニル」という語句は、少なくとも1つの二重結合が2個の炭素原子間に実在することを除き、本明細書において定義されている通りの非置換アルキル基に関して記述されたもの等、直鎖および分岐鎖ならびに環式基を指す。例は、数ある中でも、それだけに限らないが、ビニル、−CH=C(H)(CH3)、−CH=C(CH3)2、−C(CH3)=C(H)2、−C(CH3)=C(H)(CH3)、−C(CH2CH3)=CH2、シクロヘキセニル、シクロペンテニル、シクロヘキサジエニル、ブタジエニル、ペンタジエニルおよびヘキサジエニルを含む。低級非置換アルケニル基は、1〜約6個の炭素を有する。
「置換アルケニル」という語句は、「置換アルキル」が非置換アルキル基に対して有するのと同じ意味を非置換アルケニル基に対して有する。置換アルケニル基は、非炭素または非水素原子が別の炭素と二重結合している炭素と結合しているアルケニル基、および非炭素または非水素原子のうちの1個が別の炭素との二重結合に関わっていない炭素と結合しているアルケニル基を含む。例えば、−CH=CH−OCH3および−CH=CH−CH2−OHはいずれも置換アルケニルである。CH2基が−CH=CH−C(O)−CH3等のカルボニルによって置き換えられているオキソアルケニルも、置換アルケニルである。
「非置換アルケニレン」という語句は、本明細書において定義されている通りの二価非置換アルケニル基を指す。したがって、−CH=CH−は非置換アルケニレンの例である。「置換アルケニレン」という語句は、本明細書において定義されている通りの二価置換アルケニル基を指す。
「非置換アルキニル」という語句は、少なくとも1つの三重結合が2個の炭素原子間に実在することを除き、本明細書において定義されている通りの非置換アルキル基に関して記述されたもの等、直鎖および分岐鎖基を指す。例は、数ある中でも、それだけに限らないが、−C≡C(H)、−C≡C(CH3)、−C≡C(CH2CH3)、−C(H2)C≡C(H)、−C(H)2C≡C(CH3)および−C(H)2C≡C(CH2CH3)を含む。非置換低級アルキニル基は、1〜約6個の炭素を有する。
「置換アルキニル」という語句は、「置換アルキル」が非置換アルキル基に対して有するのと同じ意味を非置換アルキニル基に対して有する。置換アルキニル基は、非炭素または非水素原子が別の炭素と三重結合している炭素と結合しているアルキニル基、および非炭素または非水素原子が別の炭素との三重結合に関わっていない炭素と結合しているアルキニル基を含む。例は、それだけに限らないが、CH2基が、数ある中でも、−C(O)−CH≡CH−CH3および−C(O)−CH2−CH≡CH等のカルボニルによって置き換えられているオキソアルキニルを含む。
「非置換アルキニレン」という語句は、本明細書において定義されている通りの二価非置換アルキニル基を指す。したがって、−C≡C−は、非置換アルキニレンの例である。「置換アルキニレン」という語句は、本明細書において定義されている通りの二価置換アルキニル基を指す。
「非置換アラルキル」という語句は、非置換アルキル基の水素または炭素結合が、本明細書において定義されている通りのアリール基との結合で置き換えられている、本明細書において定義されている通りの非置換アルキル基を指す。例えば、メチル(−CH3)は非置換アルキル基である。メチルの炭素がベンゼンの炭素と結合していた場合等、メチル基の水素原子がフェニル基との結合によって置き換えられている場合、化合物は非置換アラルキル基(すなわち、ベンジル基)である。したがって、該語句は、数ある中でも、それだけに限らないが、ベンジル、ジフェニルメチルおよび1−フェニルエチル(−CH(C6H5)(CH3))等の基を含む。
「置換アラルキル」という語句は、「置換アリール」が非置換アリール基に対して有するのと同じ意味を非置換アラルキル基に対して有する。しかしながら、置換アラルキル基は、基のアルキル部分の炭素または水素結合が、非炭素または非水素原子との結合によって置き換えられている基も含む。置換アラルキル基の例は、数ある中でも、それだけに限らないが、−CH2C(=O)(C6H5)および−CH2(2−メチルフェニル)を含む。
「非置換アラルケニル」という語句は、非置換アルケニル基の水素または炭素結合が、本明細書において定義されている通りのアリール基との結合で置き換えられている、本明細書において定義されている通りの非置換アルケニル基を指す。例えば、ビニルは非置換アルケニル基である。ビニルの炭素がベンゼンの炭素と結合していた場合等、ビニル基の水素原子がフェニル基との結合によって置き換えられている場合、化合物は非置換アラルケニル基(すなわち、スチリル基)である。したがって、該語句は、数ある中でも、それだけに限らないが、スチリル、ジフェニルビニルおよび1−フェニルエテニル(−C(C6H5)(CH2))等の基を含む。
「置換アラルケニル」という語句は、「置換アリール」が非置換アリール基に対して有するのと同じ意味を非置換アラルケニル基に対して有する。しかしながら、置換アラルケニル基は、基のアルケニル部分の炭素または水素結合が、非炭素または非水素原子との結合によって置き換えられている基も含む。置換アラルケニル基の例は、数ある中でも、それだけに限らないが、−CH=C(Cl)(C6H5)および−CH=CH(2−メチルフェニル)を含む。
「非置換アラルキニル」という語句は、非置換アルキニル基の水素または炭素結合が、本明細書において定義されている通りのアリール基との結合で置き換えられている、本明細書において定義されている通りの非置換アルキニル基を指す。例えば、アセチレンは非置換アルキニル基である。アセチレンの炭素がベンゼンの炭素と結合していた場合等、アセチレン基の水素原子がフェニル基との結合によって置き換えられている場合、化合物は非置換アラルキニル基である。したがって、該語句は、数ある中でも、それだけに限らないが、−C≡C−フェニルおよび−CH2−C≡C−フェニル等の基を含む。
「置換アラルキニル」という語句は、「置換アリール」が非置換アリール基に対して有するのと同じ意味を非置換アラルキニル基に対して有する。しかしながら、置換アラルキニル基は、基のアルキニル部分の炭素または水素結合が、非炭素または非水素原子との結合によって置き換えられている基も含む。置換アラルキニル基の例は、数ある中でも、それだけに限らないが、−C≡C−C(Br)(C6H5)および−C≡C(2−メチルフェニル)を含む。
「非置換ヘテロアルキル」という語句は、炭素鎖が、N、OおよびSから選定される1個または複数のヘテロ原子によって中断されている、本明細書において定義されている通りの非置換アルキル基を指す。Nを含有する非置換ヘテロアルキルは、炭素鎖中にNHまたはN(非置換アルキル)を有し得る。したがって、非置換ヘテロアルキルは、アルコキシ、アルコキシアルキル、アルコキシアルコキシ、チオエーテル、アルキルアミノアルキル、アミノアルキルオキシおよび他のそのような基を含む。典型的には、非置換ヘテロアルキル基は、1〜5個のヘテロ原子、特に1〜3個のヘテロ原子を含有する。一部の実施形態において、非置換ヘテロアルキルは、例えば、エチルオキシエチルオキシエチルオキシ等のアルコキシアルコキシアルコキシ基を含む。
「置換ヘテロアルキル」という語句は、「置換アルキル」が非置換アルキル基に対して有するのと同じ意味を非置換ヘテロアルキル基に対して有する。
「非置換ヘテロアルキレン」という語句は、本明細書において定義されている通りの二価非置換ヘテロアルキル基を指す。したがって−CH2−O−CH2−および−CH2−NH−CH2CH2−はいずれも非置換ヘテロアルキレンの例である。「置換ヘテロアルキレン」という語句は、本明細書において定義されている通りの二価置換ヘテロアルキル基を指す。
「非置換ヘテロアルケニル」という語句は、炭素鎖が、N、OおよびSから選定される1個または複数のヘテロ原子によって中断されている、本明細書において定義されている通りの非置換アルケン基を指す。Nを含有する非置換ヘテロアルケニルは、炭素鎖中にNHまたはN(非置換アルキルまたはアルケン)を有し得る。「置換ヘテロアルケニル」という語句は、「置換ヘテロアルキル」が非置換ヘテロアルキル基に対して有するのと同じ意味を非置換ヘテロアルケニル基に対して有する。
「非置換ヘテロアルケニレン」という語句は、本明細書において定義されている通りの二価非置換ヘテロアルケニル基を指す。したがって、−CH2−O−CH=CH−は非置換ヘテロアルケニレンの例である。「置換ヘテロアルケニレン」という語句は、本明細書において定義されている通りの二価置換ヘテロアルケニル基を指す。
「非置換ヘテロアルキニル」という語句は、炭素鎖が、N、OおよびSから選定される1個または複数のヘテロ原子によって中断されている、本明細書において定義されている通りの非置換アルキニル基を指す。Nを含有する非置換ヘテロアルキニルは、炭素鎖中にNHまたはN(非置換アルキル、アルケンまたはアルキン)を有し得る。「置換ヘテロアルキニル」という語句は、「置換ヘテロアルキル」が非置換ヘテロアルキル基に対して有するのと同じ意味を非置換ヘテロアルキニル基に対して有する。
「非置換ヘテロアルキニレン」という語句は、本明細書において定義されている通りの二価非置換ヘテロアルキニル基を指す。したがって、−CH2−O−CH2−C≡C−は非置換ヘテロアルキニレンの例である。「置換ヘテロアルキニレン」という語句は、本明細書において定義されている通りの二価置換ヘテロアルキニル基を指す。
「非置換ヘテロシクリル」という語句は、それだけに限らないが、N、OおよびS等、その1個または複数がヘテロ原子である3個以上の環員を含有する、例えば、キヌクリジル等、単環式、二環式および多環式の環化合物を含む、芳香族および非芳香族の環化合物両方を指す。「非置換ヘテロシクリル」という語句は、ベンズイミダゾリル等の縮合複素環を含むが、2−メチルベンズイミダゾリル等の化合物が置換ヘテロシクリル基であるように、環員のうちの1つと結合しているアルキルまたはハロ基等の他の基を有するヘテロシクリル基を含まない。ヘテロシクリル基の例は、それだけに限らないが、ピロリル、ピロリニル、イミダゾリル、ピラゾリル、ピリジル、ジヒドロピリジル、ピリミジル、ピラジニル、ピリダジニル、トリアゾリル(例えば、4H−1,2,4−トリアゾリル、1H−1,2,3−トリアゾリル、2H−1,2,3−トリアゾリル等)、テトラゾリル(例えば、1H−テトラゾリル、2H テトラゾリル等)等の1〜4個の窒素原子を含有する不飽和3〜8員環;それだけに限らないが、ピロリジニル、イミダゾリジニル、ピペリジニル、ピペラジニル等の1〜4個の窒素原子を含有する飽和3〜8員環;それだけに限らないが、インドリル、イソインドリル、インドリニル、インドリジニル、ベンズイミダゾリル、キノリル、イソキノリル、インダゾリル、ベンゾトリアゾリル等の1〜4個の窒素原子を含有する縮合不飽和複素環基;それだけに限らないが、オキサゾリル、イソオキサゾリル、オキサジアゾリル(例えば、1,2,4−オキサジアゾリル、1,3,4−オキサジアゾリル、1,2,5−オキサジアゾリル等)等の1〜2個の酸素原子および1〜3個の窒素原子を含有する不飽和3〜8員環;それだけに限らないが、モルホリニル等の1〜2個の酸素原子および1〜3個の窒素原子を含有する飽和3〜8員環;1〜2個の酸素原子および1〜3個の窒素原子を含有する不飽和縮合複素環基、例えば、ベンゾオキサゾリル、ベンゾオキサジアゾリル、ベンゾオキサジニル(例えば、2H−1,4−ベンゾオキサジニル等);それだけに限らないが、チアゾリル、イソチアゾリル、チアジアゾリル(例えば、1,2,3−チアジアゾリル、1,2,4−チアジアゾリル、1,3,4−チアジアゾリル、1,2,5−チアジアゾリル等)等の1〜3個の硫黄原子および1〜3個の窒素原子を含有する不飽和3〜8員環;それだけに限らないが、チアゾロジニル等の1〜2個の硫黄原子および1〜3個の窒素原子を含有する飽和3〜8員環;それだけに限らないが、チエニル、ジヒドロジチイニル、ジヒドロジチオニル、テトラヒドロチオフェン、テトラヒドロチオピラン等の1〜2個の硫黄原子を含有する飽和および不飽和3〜8員環;それだけに限らないが、ベンゾチアゾリル、ベンゾチアジアゾリル、ベンゾチアジニル(例えば、2H−1,4−ベンゾチアジニル等)、ジヒドロベンゾジアジニル(例えば、2H−3,4−ジヒドロベンゾジアジニル等)等の1〜2個の硫黄原子および1〜3個の窒素原子を含有する不飽和縮合複素環、それだけに限らないが、フリル等の酸素原子を含有する不飽和3〜8員環;ベンゾジオキソリル(例えば、1,3−ベンゾジオキソイル等)等の1〜3個の酸素原子を含有する不飽和縮合複素環;それだけに限らないが、ジヒドロオキサチイニル等の酸素原子および1〜2個の硫黄原子を含有する不飽和3〜8員環;1,4−オキサチアン等の1〜3個の酸素原子および1〜2個の硫黄原子を含有する飽和3〜8員環;ベンゾチエニル、ベンゾジチイニル等の1〜2個の硫黄原子を含有する不飽和縮合環;ならびに、ベンゾオキサチイニル等の酸素原子および1〜3個の酸素原子を含有する不飽和縮合複素環を含む。ヘテロシクリル基は、環中の1個または複数のS原子が、1または2個の酸素原子と二重結合している上述のもの(スルホキシドおよびスルホン)も含む。例えば、ヘテロシクリル基は、テトラヒドロチオフェン、テトラヒドロチオフェンオキシドおよびテトラヒドロチオフェン1,1−ジオキシドを含む。一部の実施形態において、ヘテロシクリル基は、5または6個の環員を含有する。その他の実施形態において、ヘテロシクリル基は、モルホリン、ピペラジン、ピペリジン、ピロリジン、イミダゾール、ピラゾール、1,2,3−トリアゾール、1,2,4−トリアゾール、テトラゾール、チオモルホリン、該チオモルホリンのS原子が1個または複数のO原子と結合しているチオモルホリン、ピロール、ホモピペラジン、オキサゾリジン−2−オン、ピロリジン−2−オン、オキサゾール、キヌクリジン、チアゾール、イソオキサゾール、フランおよびテトラヒドロフランを含む。
「置換ヘテロシクリル」という語句は、環員のうちの1つが、置換アルキル基および置換アリール基に関して上述したもの等の非水素原子と結合している、本明細書において定義されている通りの非置換ヘテロシクリル基を指す。例は、数ある中でも、それだけに限らないが、2−メチルベンズイミダゾリル、5−メチルベンズイミダゾリル、5−クロロベンズチアゾリル、1−メチルピペラジニルおよび2−クロロピリジルを含む。
「非置換ヘテロアリール」という語句は、本明細書において定義されている通りの非置換芳香族ヘテロシクリル基を指す。したがって、非置換ヘテロアリール基は、それだけに限らないが、フリル、イミダゾリル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、ピリジニル、ベンズイミダゾリルおよびベンゾチアゾリルを含む。「置換ヘテロアリール」という語句は、本明細書において定義されている通りの置換芳香族ヘテロシクリル基を指す。
「非置換ヘテロシクリルアルキル」という語句は、非置換アルキル基の水素または炭素結合が、本明細書において定義されている通りのヘテロシクリル基との結合で置き換えられている、本明細書において定義されている通りの非置換アルキル基を指す。例えば、メチル(−CH3)は非置換アルキル基である。メチルの炭素がピリジンの炭素2(ピリジンのNと結合している炭素のうちの1個)またはピリジンの炭素3もしくは4と結合している場合等、メチル基の水素原子がヘテロシクリル基との結合によって置き換えられている場合、化合物は非置換ヘテロシクリルアルキル基である。
「置換ヘテロシクリルアルキル」という語句は、「置換アラルキル基」が非置換アラルキル基に対して有するのと同じ意味を非置換ヘテロシクリルアルキル基に対して有する。しかしながら、置換ヘテロシクリルアルキル基は、非水素原子が、それだけに限らないが、ピペリジニルアルキル基のピペリジン環中の窒素原子等、ヘテロシクリルアルキル基のヘテロシクリル基中のヘテロ原子と結合している基も含む。
「非置換ヘテロシクリルアルケニル」という語句は、非置換アルケニル基の水素または炭素結合が、本明細書において定義されている通りのヘテロシクリル基との結合で置き換えられている、本明細書において定義されている通りの非置換アルケニル基を指す。例えば、ビニルは非置換アルケニル基である。ビニルの炭素がピリジンの炭素2またはピリジンの炭素3もしくは4と結合している場合等、ビニル基の水素原子がヘテロシクリル基との結合によって置き換えられている場合、化合物は非置換ヘテロシクリルアルケニル基である。
「置換ヘテロシクリルアルケニル」という語句は、「置換アラルケニル」が非置換アラルケニル基に対して有するのと同じ意味を非置換ヘテロシクリルアルケニル基に対して有する。しかしながら、置換ヘテロシクリルアルケニル基は、非水素原子が、それだけに限らないが、ピペリジニルアルケニル基のピペリジン環中の窒素原子等、ヘテロシクリルアルケニル基のヘテロシクリル基中のヘテロ原子と結合している基も含む。
「非置換ヘテロシクリルアルキニル」という語句は、非置換アルキニル基の水素または炭素結合が、本明細書において定義されている通りのヘテロシクリル基との結合で置き換えられている、本明細書において定義されている通りの非置換アルキニル基を指す。例えば、アセチレンは非置換アルキニル基である。アセチレンの炭素がピリジンの炭素2またはピリジンの炭素3もしくは4と結合している場合等、アセチレン基の水素原子がヘテロシクリル基との結合によって置き換えられている場合、化合物は非置換ヘテロシクリルアルキニル基である。
「置換ヘテロシクリルアルキニル」という語句は、「置換アラルキニル」が非置換アラルキニル基に対して有するのと同じ意味を非置換ヘテロシクリルアルキニル基に対して有する。しかしながら、置換ヘテロシクリルアルキニル基は、非水素原子が、それだけに限らないが、ピペリジニルアルキニル基のピペリジン環中の窒素原子等、ヘテロシクリルアルキニル基のヘテロシクリル基中のヘテロ原子と結合している基も含む。
「非置換アルコキシ」という語句は、水素原子との結合が、本明細書において定義されている通りの別様の非置換アルキル基の炭素原子との結合によって置き換えられている、ヒドロキシル基(−OH)を指す。
「置換アルコキシ」という語句は、水素原子との結合が、本明細書において定義されている通りの別様の置換アルキル基の炭素原子との結合によって置き換えられている、ヒドロキシル基(−OH)を指す。
「薬学的に許容できる塩」は、無機塩基、有機塩基、無機酸、有機酸、または塩基性もしくは酸性アミノ酸との塩を含む。無機塩基の塩は、例えば、ナトリウムまたはカリウム等のアルカリ金属;カルシウムおよびマグネシウムまたはアルミニウム等のアルカリ土類金属;ならびにアンモニアを含む。有機塩基の塩は、例えば、トリメチルアミン、トリエチルアミン、ピリジン、ピコリン、エタノールアミン、ジエタノールアミンおよびトリエタノールアミンを含む。無機酸の塩は、例えば、塩酸、ヒドロホウ酸、硝酸、硫酸およびリン酸を含む。有機酸の塩は、例えば、ギ酸、酢酸、トリフルオロ酢酸、フマル酸、シュウ酸、酒石酸、マレイン酸、クエン酸、コハク酸、リンゴ酸、メタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸およびp−トルエンスルホン酸を含む。塩基性アミノ酸の塩は、例えば、アルギニン、リシンおよびオルニチンを含む。酸性アミノ酸は、例えば、アスパラギン酸およびグルタミン酸を含む。
「互変異性体」は、互いに平衡状態にある化合物の異性体形態を指す。異性体形態の濃度は、化合物が見られる環境に依存することになり、例えば、化合物が固体であるか、有機または水溶液であるかに応じて異なり得る。例えば、水溶液中において、ケトンは、典型的には、そのエノール形態と平衡状態にある。したがって、ケトンおよびそのエノールを、互いの互変異性体と称する。当業者であれば容易に了解するように、多種多様な官能基およびその他の構造が互変異性を呈し得、式I、IIおよびIIIを有する化合物の互変異性体はすべて本発明の範囲内である。
本発明に従う化合物は、溶媒和、とりわけ水和されていてよい。水和は、化合物もしくは化合物を含む組成物の製造中に発生し得るか、または、水和は、化合物の吸湿性により経時的に発生し得る。
いくつかの実施形態は、プロドラッグと称される誘導体である。「プロドラッグ」という表現は、薬学的または治療的に活性な薬物の誘導体、例えばエステル類およびアミド類の名称であり、ここで、誘導体は、薬物と比較して増強された送達特徴および治療的価値を有し、酵素的または化学的過程によって薬物に転換される。例えば、R.E.Notari、Methods Enzymol.、112:309〜323(1985);N.Bodor、Drugs of the Future 6:165〜182(1981);H.Bundgaard、Design of Prodrugs(H.Bundgaard編)の第1章、Elsevier、New York(1985);およびA.G.Gilmanら、Goodman And Gilman’s The Pharmacological Basis of Therapeutics、第8版、McGraw−Hill(1990)を参照されたい。したがって、プロドラッグは、薬物の代謝安定性もしくは輸送特徴を変更する、薬物の副作用もしくは毒性を遮断する、薬物の香味を改良する、または薬物の他の特徴もしくは特性を変更するように設計することができる。
本発明の化合物は、描写から明らかなように、任意またはすべての不斉原子における富化または分解された光学異性体を含む。ラセミおよびジアステレオマー混合物の両方、ならびに個々の光学異性体は、その鏡像異性的またはジアステレオ異性的パートナーが実質的にないように、単離または合成することができる。そのような立体異性体はすべて本発明の範囲内である。
「カルボキシ保護基」という用語は、本明細書で使用される場合、化合物の他の官能部位を巻き込む反応が行われる間、カルボン酸官能性をブロックまたは保護するために用いられるカルボン酸保護エステル基を指す。カルボキシ保護基は、例えば、参照することにより本明細書に組み込まれる、Greene、Protective Groups in Organic Synthesis、152〜186ページ、John Wiley & Sons、New York(1981)において開示されている。加えて、カルボキシ保護基はプロドラッグとして使用することができ、これにより、カルボキシ保護基を、例えば酵素加水分解によってインビボで容易に切断し、生物学的に活性な親を放出することができる。T.HiguchiおよびV.Stellaは、参照することにより本明細書に組み込まれる、「Pro−drugs as Novel Delivery Systems」、A.C.S.Symposium Seriesの第14巻、American Chemical Society(1975)においてプロドラッグ概念の徹底した考察を提供している。そのようなカルボキシ保護基は当業者に既知であり、その開示が参照することにより本明細書に組み込まれる、米国特許第3,840,556号および第3,719,667号、S.Kukolja、J.Am.Chem.Soc.、93:6267〜6269(1971)、ならびにG.E.Gutowski、Tetrahedron Lett.、21:1779〜1782(1970)に記述されている通り、ペニシリンおよびセファロスポリン分野におけるカルボキシル基の保護に広く使用されている。カルボキシル基を含有する化合物のプロドラッグとして有用なエステル類の例は、例えば、参照することにより本明細書に組み込まれる、Bioreversible Carriers in Drug Design:Theory and Application(E.B.Roche編)の14〜21ページ、Pergamon Press、New York(1987)において見ることができる。代表的なカルボキシ保護基は、C1〜C8アルキル(例えば、メチル、エチルまたは第三ブチル等);ハロアルキル;アルケニル;シクロアルキルおよびシクロヘキシル、シクロペンチル等のその置換誘導体;シクロアルキルアルキルおよびシクロヘキシルメチル、シクロペンチルメチル等のその置換誘導体;アリールアルキル、例えばフェネチルまたはベンジルおよびアルコキシベンジルまたはニトロベンジル基等のその置換誘導体;アリールアルケニル、例えばフェニルエテニル等;アリールおよびその置換誘導体、例えば5−インダニル等;ジアルキルアミノアルキル(例えば、ジメチルアミノエチル等);アセトキシメチル、ブチリルオキシメチル、バレリトキシメチル、イソブチリルオキシメチル、イソバレリルオキシメチル、1−(プロピオニルオキシ)−1−エチル、1−(ピバロイルオキシル)−1−エチル、1−メチル−1−(プロピオニルオキシ)−1−エチル、ピバロイルオキシメチル、プロピオニルオキシメチル等のアルカノイルオキシアルキル基;シクロプロピルカルボニルオキシメチル、シクロブチルカルボニルオキシメチル、シクロペンチルカルボニルオキシメチル、シクロヘキシルカルボニルオキシメチル等のシクロアルカノイルオキシアルキル基;ベンゾイルオキシメチル、ベンゾイルオキシエチル等のアロイルオキシアルキル;ベンジルカルボニルオキシメチル、2−ベンジルカルボニルオキシエチル等のアリールアルキルカルボニルオキシアルキル;メトキシカルボニルメチル、シクロヘキシルオキシカルボニルメチル、1−メトキシカルボニル−1−エチル等のアルコキシカルボニルアルキル;メトキシカルボニルオキシメチル、t−ブチルオキシカルボニルオキシメチル、1−エトキシカルボニルオキシ−1−エチル、1−シクロヘキシルオキシカルボニルオキシ−1−エチル等のアルコキシカルボニルオキシアルキル;t−ブチルオキシカルボニルアミノメチル等のアルコキシカルボニルアミノアルキル;メチルアミノカルボニルアミノメチル等のアルキルアミノカルボニルアミノアルキル;アセチルアミノメチル等のアルカノイルアミノアルキル;4−メチルピペラジニルカルボニルオキシメチル等の複素環カルボニルオキシアルキル;ジメチルアミノカルボニルメチル、ジエチルアミノカルボニルメチル等のジアルキルアミノカルボニルアルキル;(5−t−ブチル−2−オキソ−1,3−ジオキソレン−4−イル)メチル等の(5−(アルキル)−2−オキソ−1,3−ジオキソレン−4−イル)アルキル;ならびに、(5−フェニル−2−オキソ−1,3−ジオキソレン−4−イル)メチル等の(5−フェニル−2−オキソ−1,3−ジオキソレン−4−イル)アルキルである。
「N保護基」または「N保護された」という用語は、本明細書で使用される場合、アミノ酸もしくはペプチドのN末端を保護すること、または合成手順中の望ましくない反応に対してアミノ基を保護することを意図されている基を指す。よく使用されるN保護基は、例えば、参照することにより本明細書に組み込まれる、Greene、Protective Groups in Organic Synthesis、John Wiley & Sons、New York(1981)において開示されている。N保護基は、ホルミル、アセチル、プロピオニル、ピバロイル、t−ブチルアセチル、2−クロロアセチル、2−ブロモアセチル、トリフルオロアセチル、トリクロロアセチル、フタリル、o−ニトロフェノキシアセチル、a−クロロブチリル、ベンゾイル、4−クロロベンゾイル、4−ブロモベンゾイル、4−ニトロベンゾイル等のアシル基;ベンゼンスルホニル、p−トルエンスルホニル等のスルホニル基;ベンジルオキシカルボニル、p−クロロベンジルオキシカルボニル、p−メトキシベンジルオキシカルボニル、p−ニトロベンジルオキシカルボニル、2−ニトロベンジルオキシカルボニル、p−ブロモベンジルオキシカルボニル、3,4−ジメトキシベンジルオキシカルボニル、3,5−ジメトキシベンジルオキシカルボニル、2,4−ジメトキシベンジルオキシカルボニル、4−メトキシベンジルオキシカルボニル、2−ニトロ−4,5−ジメトキシベンジルオキシカルボニル、3,4,5−トリメトキシベンジルオキシカルボニル、1−(p−ビフェニリル)−1−メチルエトキシカルボニル、α,α−ジメチル−3,5−ジメトキシベンジルオキシカルボニル、ベンズヒドリルオキシカルボニル、t−ブチルオキシカルボニル、ジイソプロピルメトキシカルボニル、イソプロピルオキシカルボニル、エトキシカルボニル、メトキシカルボニル、アリルオキシカルボニル、2,2,2,−トリクロロエトキシカルボニル、フェノキシカルボニル、4−ニトロフェノキシカルボニル、フルオレニル−9−メトキシカルボニル、シクロペンチルオキシカルボニル、アダマンチルオキシカルボニル、シクロヘキシルオキシカルボニル、フェニルチオカルボニル等のカルバメート形成基;ベンジル、トリフェニルメチル、ベンジルオキシメチル等のアルキル基;および、トリメチルシリル等のシリル基を含む。一部の実施形態において、N保護基は、ホルミル、アセチル、ベンゾイル、ピバロイル、t−ブチルアセチル、フェニルスルホニル、ベンジル、9−フルオレニルメチルオキシカルボニル(Fmoc)、t−ブチルオキシカルボニル(Boc)およびベンジルオキシカルボニル(Cbz)である。
本明細書で使用される場合、「ハロ」「ハロゲン」または「ハロゲン化物」は、F、Cl、BrまたはIを指す。
本明細書で使用される場合、任意の保護基、アミノ酸または他の化合物の略号は、別段の指示がない限り、それらの一般的用法、認識されている略号またはIUPAC−IUB Commission on Biochemical Nomenclature、Biochem.、11:942〜944(1972)と一致する。
本明細書で使用される場合、「実質的に純粋」は、薄層クロマトグラフィー(TLC)、ゲル電気泳動および高速液体クロマトグラフィー(HPLC)等、そのような純度を評価するために当業者によって使用される標準的な分析方法によって測定した際に、容易に検出可能な不純物がないように思われるほどに十分に均質であること、または、さらなる精製が、物質の酵素的および生物学的活性等の物理的および化学的特性を検出可能に変更しないように実質的に純粋であることを意味する。実質的に化学的に純粋な化合物を生成するための、化合物の精製の方法は、当業者に既知である。しかしながら、実質的に化学的に純粋な化合物は、立体異性体の混合物であってよい。そのような事例において、さらなる精製により、化合物の特異的活性を増大させることができる。
本明細書で使用される場合、「生物学的活性」は、化合物、組成物または他の混合物のインビボ投与に帰する、化合物、組成物もしくは他の混合物のインビボ活性または生理学的応答を指す。したがって、生物学的活性は、そのような化合物、組成物および混合物の治療効果および薬学的活性を包含する。
本明細書で使用される場合、「薬物動態」は、血清中における投与された化合物の経時的な濃度を指す。薬力学は、標的および非標的組織中における投与された化合物の経時的な濃度ならびに標的組織(効能)および非標的組織(毒性)に対する効果を指す。例えば、薬物動態または薬力学における改良は、不安定な結合を使用すること、または任意のリンカーの化学的性質を改変すること(溶解度、電荷等を変化させること等)等により、特定の標的化剤または生物学的剤用に設計することができる。
本明細書で用いられる場合、「有効量」および「治療有効量」という語句は、そのレシピエントに対して有益な効果、例えば、症状の寛解を与えるのに十分高い濃度を提供するのに十分な用量を指す。任意の特定の対象のための特異的な治療有効用量レベルは、治療されている障害、障害の重症度、特定化合物の活性、投与経路、化合物の浄化速度、治療の持続期間、化合物と合わせてまたは同時発生的に使用される薬物、対象の年齢、体重、性別、食生活および全体的な健康、ならびに医療技術および科学において既知の同様の要因を含む種々の要因に依存することになる。「治療有効量」を決定する際に考慮される様々な概論は、当業者に既知であり、例えば、Gilman,A.G.ら、Goodman And Gilman’s The Pharmacological Basis of Therapeutics、第8版、McGraw−Hill(1990);およびRemington’s Pharmaceutical Sciences、第17版、Mack Publishing Co.、Easton、PA(1990)において記述されている。
一態様において、本発明は、GA標的化剤が抗体中の結合性部位と共有結合している様々な標的化化合物を提供する。
別の態様において、本発明は、GA標的化剤の少なくとも1つの物理的または生物学的特徴を変更する方法を含む。該方法は、直接的にまたはリンカーを介してのいずれかで、GA標的化剤を抗体中の結合性部位と共有結合させるステップを含む。修飾することができるGA標的化剤の特徴は、それだけに限らないが、結合親和性、崩壊(例えば、プロテアーゼによる)に対する脆弱性、薬物動態、薬力学、免疫原性、溶解度、親油性、親水性、疎水性、安定性(より安定またはより不安定のいずれか、および計画された崩壊)、剛性、柔軟性、抗体結合の調節等を含む。また、特定のGA標的化剤の生物学的潜在能は、抗体によって提供される(1つまたは複数の)エフェクター機能の添加によって増大させることができる。例えば、抗体は、補体媒介性エフェクター機能等のエフェクター機能を提供する。いかなる理論にも束縛されることは望まず、GA標的化化合物の抗体部は、概して、よりサイズの小さいGA標的化剤の半減期をインビボで延長することができる。したがって、一態様において、本発明は、GA標的化剤の有効循環半減期を増大させるための方法を提供する。
別の態様において、本発明は、GA標的化剤を、抗体中の結合性部位に共有結合的に結合させることによって、抗体の結合活性を調節するための方法を提供する。いかなる理論にも束縛されることを望まないが、抗原との抗体結合の実質的な低減は、抗原が抗体中の結合性部位に接触することを、連結している(1つまたは複数の)GA標的化剤が立体的に妨げていることに起因する場合がある。あるいは、抗体結合の実質的な低減は、共有結合によって修飾された抗体中の結合性部位のアミノ酸側鎖が、抗原との結合のために重要である場合に生じ得る。対照的に、抗原との抗体結合の実質的な増大は、抗原が抗体中の結合性部位に接触することを、連結している(1つまたは複数の)GA標的化剤が立体的に妨げていない場合、および/または共有結合によって修飾された抗体中の結合性部位のアミノ酸側鎖が、抗原との結合のために重要でない場合に生じ得る。
別の態様において、本発明は、GLP−1Rに対する結合特異性を生み出すために抗体中の結合性部位を修飾する方法を含む。そのような方法は、抗体中の結合性部位における反応性アミノ酸側鎖を、本明細書において記述されている通りのGA標的化剤−リンカー化合物のリンカー上の化学的部分と共有結合させるステップを含み、ここで、GA標的化剤は、GLP−1Rに特異的である。リンカーの化学的部分は、GA標的化剤−リンカー化合物が抗体中の結合性部位と共有結合している場合、GA標的化剤がGLP−1Rに結合することができるように、GA標的化剤から十分に離れている。一実施形態において、抗体は、共有結合前にはGLP−1Rに対して約1×10−5モル/リットル未満の親和性を有するであろう。しかしながら、抗体がGA標的化剤−リンカー化合物と共有結合した後、修飾された抗体は、好ましくは、標的分子に対して、少なくとも約1×10−6モル/リットル、または、少なくとも約1×10−7モル/リットル、または、少なくとも1×10−8モル/リットル、または少なくとも1×10−9モル/リットル、または、少なくとも約1×10−10モル/リットルの親和性を有する。
GA標的化剤
一実施形態において、GA標的化剤は
R1−HAEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKGR−R2(配列番号1)であり、
ここで、
R1は、存在しないか、CH3、C(O)CH3、C(O)CH2CH3、C(O)CH2CH2CH3またはC(O)CH(CH3)CH3であり、
R2は、OH、NH2、NH(CH3)、NHCH2CH3、NHCH2CH2CH3、NHCH(CH3)CH3、NHCH2CH2CH2CH3、NHCH(CH3)CH2CH3、NHC6H5、NHCH2CH2OCH3、NHOCH3、NHOCH2CH3、カルボキシ保護基、脂質脂肪酸基または炭水化物である。
一実施形態において、GA標的化剤は
R1−HAEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKGR−R2(配列番号1)であり、
ここで、
R1は、存在しないか、CH3、C(O)CH3、C(O)CH2CH3、C(O)CH2CH2CH3またはC(O)CH(CH3)CH3であり、
R2は、OH、NH2、NH(CH3)、NHCH2CH3、NHCH2CH2CH3、NHCH(CH3)CH3、NHCH2CH2CH2CH3、NHCH(CH3)CH2CH3、NHC6H5、NHCH2CH2OCH3、NHOCH3、NHOCH2CH3、カルボキシ保護基、脂質脂肪酸基または炭水化物である。
配列番号1は、2位のアラニンにおけるジペプチジルペプチダーゼIV(DPP−IV)によるGLP−1の切断によって生み出された30アミノ酸GLP−1(7〜36)である。D.J.Drucker、Endocrinology、142:521〜527(2001)。GLP−1(7〜36)はGLP−1Rアゴニストとして機能し、グルコース依存性のインスリン分泌の増大をもたらす。しかしながら、GLP−1(7〜36)の半減期はわずか数分間である。
別の実施形態において、GA標的化剤は
R1−HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS−R2(配列番号2)であり、
ここで、
R1は、存在しないか、CH3、C(O)CH3、C(O)CH2CH3、C(O)CH2CH2CH3またはC(O)CH(CH3)CH3であり、
R2は、OH、NH2、NH(CH3)、NHCH2CH3、NHCH2CH2CH3、NHCH(CH3)CH3、NHCH2CH2CH2CH3、NHCH(CH3)CH2CH3、NHC6H5、NHCH2CH2OCH3、NHOCH3、NHOCH2CH3、カルボキシ保護基、脂質脂肪酸基または炭水化物である。
R1−HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS−R2(配列番号2)であり、
ここで、
R1は、存在しないか、CH3、C(O)CH3、C(O)CH2CH3、C(O)CH2CH2CH3またはC(O)CH(CH3)CH3であり、
R2は、OH、NH2、NH(CH3)、NHCH2CH3、NHCH2CH2CH3、NHCH(CH3)CH3、NHCH2CH2CH2CH3、NHCH(CH3)CH2CH3、NHC6H5、NHCH2CH2OCH3、NHOCH3、NHOCH2CH3、カルボキシ保護基、脂質脂肪酸基または炭水化物である。
配列番号2は、39アミノ酸ペプチドエキセンディン−4である。GLP−1(7〜36)と同様に、エキセンディン−4はGLP−1Rアゴニストとして機能し、グルコース依存性のインスリン分泌を刺激する。しかしながら、GLP−1(7〜36)とは異なり、エキセンディン−4はDPP−IVによる切断に耐性がある。GLP−1(7〜36)およびエキセンディン−4のN末端領域は、ほぼ同一であり、顕著な差異は2番目のアミノ酸残基である。この残基は、GLP−1(7〜36)中ではアラニンであるが、エキセンディン−4中ではグリシンである。N末端領域中のこの単一のアミノ酸は、エキセンディン−4のDPP−IV消化に対する耐性に関与する。エキセンディン−4とDLP−1(7〜36)との間の別の顕著な差異は、Trp−cageを形成する、エキセンディン−4のC末端における9個の追加のアミノ酸残基の存在である。
配列番号1または配列番号2のペプチドに加えて、本明細書で開示されている通りのGA標的化剤は、これらの配列の類似体であってよい。そのような類似体は、例えば、バイオアベイラビリティの増大、安定性の増大、糖尿病治療プロファイルの改善、食欲制御の改善、体重制御の改善、グルコース耐性の改善、膵島細胞アッセイ反応性および/または宿主免疫認識の低減等、追加の有利な特色を有し得る。本明細書で使用される場合、配列番号1または配列番号2のペプチドの類似体は、本質的に配列番号1または配列番号2の配列を有するが、1つまたは複数のアミノ酸置換、挿入もしくは欠失、またはそれらの組合せを伴うペプチドである。
いくつかの実施形態において、本明細書で提供される通りのGA標的化剤は、配列番号1または配列番号2を含むが、1つまたは複数のアミノ酸置換を伴う。GA標的化剤中のアミノ酸置換の1つの考えられる分類は、配列番号1または配列番号2の構造を安定化することが予測されるアミノ酸変化を含むであろう。配列番号1または配列番号2を利用して、当業者は、コンセンサス配列を容易にまとめ、これらのコンセンサス配列から、好ましいアミノ酸置換を表す保存アミノ酸残基を解明することができる。アミノ酸置換は、保存性質であってもよく、また非保存性質であってもよい。保存アミノ酸置換は、例えば、グルタミン酸(E)からアスパラギン酸(D)へのアミノ酸置換等、配列番号1または配列番号2の1種または複数のアミノ酸を、同様の電荷、サイズおよび/または疎水性の特徴のアミノ酸で置き換えることからなる。非保存置換は、例えば、グルタミン酸(E)からバリン(V)への置換等、配列番号1または配列番号2の1種または複数のアミノ酸を、異種の電荷、サイズおよび/または疎水性の特徴を有するアミノ酸で置き換えることからなる。いくつかの実施形態において、本明細書で提供される通りのGA標的化剤は、配列番号1または配列番号2の類似体を含むが、2位の2−アミノイソ酪酸(Aib2)がグリシン残基(または、必要に応じてアラニン)を置換している。いくつかの実施形態において、本明細書で提供される通りのGA標的化剤は、配列番号1または配列番号2を含むが、1個または複数の残基がリシンで置換されている。
いくつかの実施形態において、本明細書で提供される通りのGA標的化剤は、配列番号1または配列番号2を含むが、1つまたは複数のアミノ酸挿入を伴う。アミノ酸挿入は、単一のアミノ酸残基または残基の伸長部からなってよい。挿入は、ペプチドのカルボキシ末端またはペプチド内部の位置で為され得る。そのような挿入は、概して、長さ2〜10アミノ酸の範囲となる。関心対象のペプチドのカルボキシ末端において為される挿入は、より広いサイズ範囲のものであってよく、約2〜約20アミノ酸が可能であると考えられる。そのような挿入が、GLP−1Rアゴニスト活性を依然として呈するペプチドをもたらす限り、1つまたは複数のそのような挿入を配列番号1または配列番号2に導入してよい。
いくつかの実施形態において、本明細書で提供される通りのGA標的化ペプチドは、配列番号2のアミノ酸配列を含むが、1個または複数のリシン残基が挿入されている。例えば、一実施形態において、GA標的化剤は
R1−HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPSK−R2(配列番号3)
であり、ここで、
R1は、存在しないか、CH3、C(O)CH3、C(O)CH2CH3、C(O)CH2CH2CH3またはC(O)CH(CH3)CH3であり、
R2は、OH、NH2、NH(CH3)、NHCH2CH3、NHCH2CH2CH3、NHCH(CH3)CH3、NHCH2CH2CH2CH3、NHCH(CH3)CH2CH3、NHC6H5、NHCH2CH2OCH3、NHOCH3、NHOCH2CH3、カルボキシ保護基、脂質脂肪酸基または炭水化物である。
R1−HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPSK−R2(配列番号3)
であり、ここで、
R1は、存在しないか、CH3、C(O)CH3、C(O)CH2CH3、C(O)CH2CH2CH3またはC(O)CH(CH3)CH3であり、
R2は、OH、NH2、NH(CH3)、NHCH2CH3、NHCH2CH2CH3、NHCH(CH3)CH3、NHCH2CH2CH2CH3、NHCH(CH3)CH2CH3、NHC6H5、NHCH2CH2OCH3、NHOCH3、NHOCH2CH3、カルボキシ保護基、脂質脂肪酸基または炭水化物である。
配列番号3のGA標的化剤は、カルボキシ末端における余分なリシン残基の付加以外は配列番号2と同一である。
同様の実施形態において、GA標的化剤は
R1−HAEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKGRK−R2(配列番号33)
であり、ここで、
R1は、存在しないか、CH3、C(O)CH3、C(O)CH2CH3、C(O)CH2CH2CH3またはC(O)CH(CH3)CH3であり、
R2は、OH、NH2、NH(CH3)、NHCH2CH3、NHCH2CH2CH3、NHCH(CH3)CH3、NHCH2CH2CH2CH3、NHCH(CH3)CH2CH3、NHC6H5、NHCH2CH2OCH3、NHOCH3、NHOCH2CH3、カルボキシ保護基、脂質脂肪酸基または炭水化物である。
R1−HAEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKGRK−R2(配列番号33)
であり、ここで、
R1は、存在しないか、CH3、C(O)CH3、C(O)CH2CH3、C(O)CH2CH2CH3またはC(O)CH(CH3)CH3であり、
R2は、OH、NH2、NH(CH3)、NHCH2CH3、NHCH2CH2CH3、NHCH(CH3)CH3、NHCH2CH2CH2CH3、NHCH(CH3)CH2CH3、NHC6H5、NHCH2CH2OCH3、NHOCH3、NHOCH2CH3、カルボキシ保護基、脂質脂肪酸基または炭水化物である。
配列番号33のGA標的化剤は、カルボキシ末端における余分なリシン残基の付加以外は配列番号1と同一である。
いくつかの実施形態において、本明細書で提供される通りのGA標的化剤は、配列番号1または配列番号2を含むが、1つまたは複数のアミノ酸欠失を伴う。そのような欠失は、ペプチドのカルボキシ末端からのトランケーションを含み得るか、またはペプチド内部の位置からの1個または複数のアミノ酸の除去を含み得る。そのような欠失には、単一の点欠失、2個以上の連続する残基の連続欠失または点および連続欠失の組合せが関与し得る。そのような欠失が、GLP−1Rアゴニスト活性を依然として呈するペプチドをもたらす限り、1つまたは複数のそのような欠失を配列番号1または配列番号2に導入してよい。いくつかの実施形態において、本明細書で提供される通りのGA標的化ペプチドは、配列番号2のアミノ酸配列を含むが、1個または複数のアミノ酸がペプチドのカルボキシ末端から欠失されている。
適切な例示的な配列番号1および配列番号2の類似体を、以下の表Iに記載し、一般式フォーマットで本明細書に記述する。表I中のペプチド配列は、アミノ(左)からカルボキシ(右)末端へ列挙されている。
K(SH)は、本明細書で使用される場合、
K(ベンゾイル)は、本明細書で使用される場合、下記構造
「トランス−3−ヘキサノイル」は、本明細書で使用される場合、GA標的化ペプチドと連結しており、下記構造
「3−アミノフェニルアセチル」は、本明細書で使用される場合、GA標的化ペプチドと連結しており、下記構造
GA標的化化合物は、当該技術分野において既知の技能を使用して調製することができる。典型的には、ペプチジルGA標的化剤の合成が第1のステップであり、本明細書において記述されている通りに行われる。その後、標的化剤は、接続成分(リンカー)との連結のために誘導体化され、続いてこれが抗体と合わせられる。当業者であれば、使用される特異的な合成ステップは3種の成分の厳密な性質に依存することを容易に理解するであろう。したがって、本明細書において記述されているGA標的化剤−リンカー複合体およびGA標的化化合物は、容易に合成することができる。
GA標的化剤ペプチドは、当業者に既知である多くの技能によって合成することができる。固相ペプチド合成のための、多くの技能の概要は、Chemical Approaches to the Synthesis of Peptides and Proteins(Williamsら編)、CRC Press、Boca Raton、FL(1997)において見ることができる。
典型的には、所望のペプチド性GA標的化剤ペプチドは、当該技術分野において既知の手順に従って固相上で順次合成される。例えば、米国特許出願第10/205,924号(公開番号第2003/0045477A1号を参照されたい。)リンカーは、固相上の一部または全部においてペプチドに結合させてもよく、また樹脂からのペプチドの除去後、液相技能を使用して添加してもよい(図5Aおよび5Bを参照)。例えば、N保護されたアミノおよびカルボン酸含有連結部分は、4−ヒドロキシメチル−フェノキシメチル−ポリ(スチレン−1%ジビニルベンゼン)等の樹脂に結合していてよい。N保護基は、適当な酸(例えば、BocではTFA)または塩基(例えば、Fmocではピペリジン)によって除去することができ、ペプチド配列は、正常なC末端からN末端への方式で発生することができる(図5Aを参照)。あるいは、ペプチド配列を最初に合成し、リンカーをカラム上のペプチドに添加してもよい(図5B参照)。また別の方法は、合成中に適当な側鎖を脱保護するステップと、適切に反応性のリンカーによって誘導体化するステップとを伴う。例えば、リシン側鎖は、脱保護してもよく、また活性エステルを有するリンカーと反応させてもよい。あるいは、既に側鎖に結合している適切に保護されたリンカー部分を持つアミノ酸誘導体、またはいくつかの事例において、α−アミノ窒素を、成長ペプチド配列の一部として添加してよい。
固相合成の終了時、標的化剤−リンカー複合体は、遷移または単一動作のいずれかで、樹脂から除去され、脱保護される。標的化剤−リンカー複合体の除去および脱保護は、樹脂結合ペプチド−リンカー複合体を、切断試薬、例えば、チアニソール、水またはエタンジチオール等のトリフルオロ酢酸含有スカベンジャーで処理することにより、単一動作で遂行することができる。標的化剤の脱保護および放出後、標的化剤ペプチドのさらなる誘導体化を行ってよい。
完全に脱保護された標的化剤−リンカー複合体は、下記種類:酢酸形態の弱塩基性樹脂上でのイオン交換;非誘導体化ポリスチレン−ジビニルベンゼン(例えば、AMBERLITE XAD)上での疎水性吸着クロマトグラフィー;シリカゲル吸着クロマトグラフィー;カルボキシメチルセルロース上でのイオン交換クロマトグラフィー;例えば、SEPHADEX G−25、LH−20または向流分配上での分配クロマトグラフィー;高速液体クロマトグラフィー(HPLC)、とりわけ、オクチル−またはオクタデシルシリル−シリカ結合相カラムパッキング上での逆相HPLCのうちのいずれかまたはすべてを用いる一連のクロマトグラフステップによって精製される。
抗体
本明細書で使用される場合、「抗体」は、B細胞の産物である免疫グロブリンとその変異体、ならびにT細胞の産物であるT細胞受容体(TcR)とその変異体を含む。免疫グロブリンは、免疫グロブリンκおよびλ、α、γ、δ、ε、およびμ定常領域遺伝子、ならびに無数の免疫グロブリン可変領域遺伝子によって実質的にコードされる、1つまたは複数のポリペプチドを含むタンパク質である。軽鎖は、κまたはλのいずれかに分類される。重鎖は、γ、μ、α、δ、またはεとして分類され、これらはそれぞれ、免疫グロブリンクラスである、IgG、IgM、IgA、IgD、およびIgEを定義する。重鎖のサブクラスも知られている。例えば、ヒトのIgG重鎖は、IgG1、IgG2、IgG3、およびIgG4サブクラスのいずれかとなり得る。
本明細書で使用される場合、「抗体」は、B細胞の産物である免疫グロブリンとその変異体、ならびにT細胞の産物であるT細胞受容体(TcR)とその変異体を含む。免疫グロブリンは、免疫グロブリンκおよびλ、α、γ、δ、ε、およびμ定常領域遺伝子、ならびに無数の免疫グロブリン可変領域遺伝子によって実質的にコードされる、1つまたは複数のポリペプチドを含むタンパク質である。軽鎖は、κまたはλのいずれかに分類される。重鎖は、γ、μ、α、δ、またはεとして分類され、これらはそれぞれ、免疫グロブリンクラスである、IgG、IgM、IgA、IgD、およびIgEを定義する。重鎖のサブクラスも知られている。例えば、ヒトのIgG重鎖は、IgG1、IgG2、IgG3、およびIgG4サブクラスのいずれかとなり得る。
典型的な免疫グロブリン構造単位は、四量体を含むことが知られている。各四量体は、ポリペプチド鎖の2つの同一の対から構成され、各対は、1本の「軽」鎖(約25kD)と1本の「重」鎖(約50〜70kD)を有する。各鎖のN末端は、主に抗原認識に関与する、約100から110またはそれ以上のアミノ酸の可変領域を画定する。用語可変軽鎖(VL)および可変重鎖(VH)は、それぞれこれらの軽鎖および重鎖を指す。抗体のアミノ酸は、天然であっても非天然であってもよい。
2つの重鎖および2つの軽鎖を含有する抗体は、これらが2つの結合部位を有するという点で二価である。典型的な天然の二価の抗体はIgGである。抗体は、IgAの二量体形態および五量体IgM分子の場合のように、多価となることができる。抗体は、例えば、FabまたはFab’断片の場合などのように一価となることもできる。
抗体は、全長のインタクトな抗体として、または様々なペプチダーゼもしくは化学物質で消化することによって生成された、いくつかのよく特徴付けられた断片として存在する。したがって、例えば、ペプシンは、ヒンジ領域中のジスルフィド結合の下方で抗体を消化することによって、Fabの二量体であるF(ab’)2を生成し、これ自体は、ジスルフィド結合によってVH−CH1に連結された軽鎖である。F(ab’)2は、温和な条件下で還元されることによって、ヒンジ領域中のジスルフィド結合を切断することができ、これによってF(ab’)2二量体をFab’単量体に転換する。Fab’単量体は、本質的にヒンジ領域の一部を有するFab断片である(他の抗体断片のより詳細な説明については、例えば、Fundamental Immunology(W.E.Paul編)、Raven Press、N.Y.(1993)を参照されたい)。インタクトな抗体の消化の観点から様々な抗体断片が定義されるが、当業者は、任意の様々な抗体断片を、化学的に、または組換えDNA法を利用することによって、新規に合成することができることを理解するであろう。したがって、本明細書で使用される場合、用語抗体には、全抗体の修飾によって生成された抗体断片、新規に合成された抗体断片、または組換えDNA法から得た抗体断片も含まれる。組換え技術によって生成された抗体断片は、タンパク質プロセシングによってわかっている断片を含んでもよく、利用可能でないまたはタンパク質プロセシングによってこれまでわかっていない独特の断片であってもよい。抗体全体および抗体断面は、天然のアミノ酸も非天然のアミノ酸も含有することができる。当業者は、全抗体よりも抗体断片を使用するほうが有利である状況があることを認識するであろう。例えば、より小さいサイズの抗体断片により、急速なクリアランスが可能になり、固形腫瘍へのアクセスを改善することができる。
T細胞受容体(TcR)は、2本の鎖から構成される、ジスルフィドで連結されたヘテロ二量体である。この2本の鎖は、抗体ヒンジ領域に類似している、短く拡張された一続きのアミノ酸中で、T細胞原形質膜のちょうど外側で一般にジスルフィド結合されている。各TcR鎖は、1つの抗体様可変ドメインと1つの定常ドメインから構成されている。全TcRは、約95kDの分子質量を有し、個々の鎖は、35から47kDまでサイズが変動している。例えば、可変領域などの受容体の部分も、TcRの意味の範囲内に包含されており、これは、当技術分野で周知の方法を使用して可溶性タンパク質として生成することができる。例えば、米国特許第6,080,840号、ならびにA.E.SlanetzおよびA.L.Bothwell、Eur.J.Immunol.21:179〜183(1991)には、Thy−1のグリコシルホスファチジルイノシトール(GPI)膜アンカー配列に、TcRの細胞外ドメインをスプライスすることによって調製される可溶性T細胞受容体が記載されている。この分子は、細胞表面上にCD3が存在しない中で発現され、ホスファチジルイノシトール特異的ホスホリパーゼC(PI−PLC)での処理によって膜から切断することができる。可溶性TcRは、本質的に米国特許第5,216,132号およびG.S.Basiら、J.Immunol.Methods 155:175〜191(1992)に記載されているように、TcR可変ドメインを抗体重鎖CH2もしくはCH3ドメインにカップリングすることによって、またはE.V.Shustaら、Nat.Biotechnol.18:754〜759(2000)もしくはP.D.Hollerら、Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.97:5387〜5392(2000)に記載されているように、可溶性TcR単鎖としても調製することができる。本発明の一実施形態では、TcR「抗体」を可溶性抗体として使用する。TcR中の結合性部位は、抗体について上記で考察した同じ方法を使用して、CDR領域および他のフレームワーク残基を参照することによって同定することができる。
組換え抗体は、従来の全長抗体、タンパク分解消化からわかっている抗体断片、Fvまたは単鎖Fv(scFv)などの抗体断片、VHまたはVLなどの単一ドメイン断片、ダイアボディ、ドメイン欠失抗体、ミニボディなどとすることができる。Fv抗体は、サイズが約50kDであり、軽鎖および重鎖の可変領域を含む。軽鎖および重鎖は、細菌中で別個に発現することができ、そこでこれらは集合してFv断片を構築する。あるいは、2本の鎖は、操作することによって鎖間ジスルフィド結合を形成してdsFvを得ることができる。単鎖Fv(「scFv」)は、介在リンカー配列によって連結されたVHおよびVL配列ドメインを含む単一のポリペプチドであり、このポリペプチドが折り重なると、得られる3次構造は抗原結合部位の構造を模倣するようになっている。J.S.Hustonら、Proc.Nat.Acad.Sci.U.S.A.85:5879〜5883(1988)を参照されたい。単一ドメイン抗体は、抗体の最小機能性結合単位(サイズが約13kD)であり、重VH鎖または軽VL鎖のいずれかの可変領域に対応する。米国特許第6,696,245号、WO04/058821、WO04/003019およびWO03/002609を参照されたい。単一ドメイン抗体は、細菌、酵母、および他の下等真核生物発現系において十分に発現される。ドメイン欠失抗体は、CH2など、全長抗体と比べて欠失したドメインを有する。多くの場合、そのようなドメイン欠失抗体、特にCH2欠失抗体は、全長の対応物に比べてクリアランスを改善する。ダイアボディは、2つのVHドメインを含む第1の融合タンパク質を、2つのVLドメインを含む第2の融合タンパク質と会合させることによって形成される。全長抗体と同様に、ダイアボディは二価である。ミニボディは、CH3に直接または介在IgGヒンジによって連結したVH、VL、またはscFvを含む融合タンパク質である。T.Olafsenら、Protein Eng.Des.Sel.17:315〜323(2004)を参照されたい。ドメイン欠失抗体と同様に、ミニボディは、操作されることによって全長抗体の結合特異性を保存するが、そのより小さな分子量のためにクリアランスが改善されている。
抗体断片を生成するために、様々な技法が開発されてきた。従来では、これら断片は、インタクトな抗体のタンパク分解消化によって得られた(例えば、K.MorimotoおよびK.Inouye、J.Biochem.Biophys.Methods 24:107〜117(1992);M.Brennanら、Science 229:81〜83(1985)を参照されたい)。しかし、こうした断片は、現在では、組換え宿主細胞によって直接生成することができる。Fab、Fv、およびscFv抗体断片はすべて、大腸菌中で発現し、大腸菌から分泌することができ、したがって、大量のこれらの断片の容易な生成を可能にしている。抗体断片は、上記に考察した抗体ファージライブラリーから単離することができる。あるいは、Fab’−SH断片は、大腸菌から直接回収し、化学的にカップリングさせてF(ab’)2断片を形成することができる(P.Carterら、Biotechnology 10:163〜167(1992))。別の手法によれば、F(ab’)2断片は、組換え宿主細胞培養物から直接単離することができる。インビボ半減期が延長された、サルベージ受容体結合エピトープを含むF(ab’)2断片およびFab断片は、米国特許第5,869,046号に記載されている。抗体断片を生成するための他の技術も当業者には明らかである。
結合性部位は、抗原結合に関与する抗体分子の一部を指す。抗原結合部位は、重(「H」)鎖および軽(「L」)鎖のN末端可変(「V」)領域のアミノ酸残基によって形成される。抗体可変領域は、「高頻度可変領域」または「相補性決定領域」(CDR)と呼ばれる、3つの高度に分岐したストレッチを含み、これらは、「フレームワーク領域」(FR)として知られる、より保存されたフランキングストレッチ同士間に介在している。抗体分子において、軽鎖の3つの高頻度可変領域(LCDR1、LCDR2、およびLCDR3)と重鎖の3つの高頻度可変領域(HCDR1、HCDR2、およびHCDR3)は、3次元空間内に互いに関連して配置されることによって、抗原結合表面またはポケットを形成する。したがって、抗体中の結合性部位は、抗体のCDRを構成するアミノ酸および結合部位ポケットを構成する任意のフレームワーク残基を表す。
結合性部位を構成する、特定の抗体中のアミノ酸残基の素性は、当技術分野で周知の方法を使用して求めることができる。例えば、抗体CDRは、Kabatらによって最初に定義された高頻度可変領域として同定することができる。E.A.Kabatら、Sequences of Proteins of Immunological Interest、5版、Public Health Service、NIH、Washington D.C.(1992)を参照されたい。CDRの位置も、Chothiaらによって最初に記述された構造的ループ構造として同定することができる。例えば、C.ChothiaおよびA.M.Lesk、J.Mol.Biol.196:901〜917(1987);C.Chothiaら、Nature 342:877〜883(1989);ならびにA.Tramontanoら、J.Mol.Biol.215:175〜182(1990)を参照されたい。他の方法には、KabatとChothiaの折衷案であり、Oxford Molecular(現在はAccelrys)のAbM抗体モデル化ソフトウェアを使用して得られる「AbM定義」、またはR.M.MacCallumら、J.Mol.Biol.262:732〜745(1996)に示されている、CDRの「接触定義」が含まれる。下記チャートに、様々な既知の定義に基づいてCDRを同定する。
配列単独から抗体中のCDRを同定することができる一般的なガイドラインは、以下の通りである。
LCDR1:
開始 − 約残基24。
前の残基は常にCysである。
後の残基は常にTrpであり、典型的にはTyr−Glnが続くが、Leu−Gln、Phe−Gln、またはTyr−Leuも続く。
長さは10から17残基である。
LCDR2:
開始 − L1の末端後の16残基。
前の配列は、一般にIle−Tyrであるが、Val−Tyr、Ile−Lys、またはIle−Pheであってもよい。
長さは一般に7残基である。
LCDR3:
開始 − L2の末端後の33残基。
前の残基はCysである。
後の配列はPhe−Gly−X−Glyである。
長さは7から11残基である。
HCDR1:
開始 − 約残基26、Chothia/AbM定義下でCys後の4残基;開始は、Kabat定義下で5残基後である。
前の配列はCys−X−X−Xである。
後の残基はTrpであり、典型的にはValが続くがIleまたはAlaも続く。
長さは、AbM定義下で10から12残基であり、Chothia定義では、最後の4残基が除外される。
HCDR2:
開始 − CDR−H1のKabat/AbM定義の末端後の15残基。
前の配列は、典型的にはLeu−Glu−Trp−Ile−Glyであるが、いくつかの変形も可能である。
後の配列は、Lys/Arg−Leu/Ile/Val/Phe/Thr/Ala−Thr/Ser/Ile/Alaである。
長さは、Kabat定義下で16から19残基であり、AbM定義では、最後の7残基が除外される。
HCDR3:
開始 − CDR−H2の末端後の33残基(Cys後の2残基)。
前の配列はCys−X−X(典型的にはCys−Ala−Arg)である。
後の配列はTrp−Gly−X−Glyである。
長さは3から25残基である。
LCDR1:
開始 − 約残基24。
前の残基は常にCysである。
後の残基は常にTrpであり、典型的にはTyr−Glnが続くが、Leu−Gln、Phe−Gln、またはTyr−Leuも続く。
長さは10から17残基である。
LCDR2:
開始 − L1の末端後の16残基。
前の配列は、一般にIle−Tyrであるが、Val−Tyr、Ile−Lys、またはIle−Pheであってもよい。
長さは一般に7残基である。
LCDR3:
開始 − L2の末端後の33残基。
前の残基はCysである。
後の配列はPhe−Gly−X−Glyである。
長さは7から11残基である。
HCDR1:
開始 − 約残基26、Chothia/AbM定義下でCys後の4残基;開始は、Kabat定義下で5残基後である。
前の配列はCys−X−X−Xである。
後の残基はTrpであり、典型的にはValが続くがIleまたはAlaも続く。
長さは、AbM定義下で10から12残基であり、Chothia定義では、最後の4残基が除外される。
HCDR2:
開始 − CDR−H1のKabat/AbM定義の末端後の15残基。
前の配列は、典型的にはLeu−Glu−Trp−Ile−Glyであるが、いくつかの変形も可能である。
後の配列は、Lys/Arg−Leu/Ile/Val/Phe/Thr/Ala−Thr/Ser/Ile/Alaである。
長さは、Kabat定義下で16から19残基であり、AbM定義では、最後の7残基が除外される。
HCDR3:
開始 − CDR−H2の末端後の33残基(Cys後の2残基)。
前の配列はCys−X−X(典型的にはCys−Ala−Arg)である。
後の配列はTrp−Gly−X−Glyである。
長さは3から25残基である。
CDRの外側にあるにもかかわらず、結合性部位のライニングの一部である側鎖を有することによって結合性部位の一部を構成する(すなわち、結合性部位による連鎖に利用可能である)、特定の抗体中のアミノ酸残基の素性は、分子モデル化およびX線結晶学などの、当技術分野で周知の方法を使用して求めることができる。例えば、L.Riechmannら、Nature 332:323〜327(1988)を参照されたい。
考察したように、抗体ベースのGA標的化化合物を調製するのに使用することができる抗体は、抗体中の結合性部位において反応性側鎖を必要とする。反応性側鎖は天然に存在することができ、または突然変異によって抗体中に配置することができる。抗体中の結合性部位の反応性残基は、抗体を作製するために最初に同定されるリンパ球中に存在する核酸によって残基がコードされる場合などには、抗体と付随することができる。あるいは、アミノ酸残基は、特定の残基をコードするようにDNAを意図的に突然変異させることによって生じることができる(例えば、WO01/22922を参照されたい)。反応性残基は、例えば、本明細書に考察したような、ユニークコドン、tRNA、およびアミノアシル−tRNAを使用して、生合成で組み込むことによって生じる非天然の残基とすることができる。別の手法では、アミノ酸残基またはその反応性官能基(例えば、求核性アミノ基またはスルフヒドリル基)は、抗体中の結合性部位におけるアミノ酸残基に結合させてもよい。したがって、本明細書で使用される場合、「抗体中の結合性部位におけるアミノ酸残基を通じて」起こる抗体との共有結合連鎖は、抗体中の結合性部位のアミノ酸残基に直接とするか、または抗体中の結合性部位のアミノ酸残基の側鎖に連結された化学部分を通じてとすることができることを意味する。
触媒抗体は、1つまたは複数の反応性アミノ酸側鎖を含む結合性部位を有する抗体の一供給源である。そのような抗体として、アルドラーゼ抗体、βラクタマーゼ抗体、エステラーゼ抗体、アミダーゼ抗体などが挙げられる。
一実施形態は、マウスモノクローナル抗体mAb 38C2またはmAb 33F12などのアルドラーゼ抗体、ならびにそのような抗体の適切にヒト化した型およびキメラ型を含む。マウスmAb 38C2は、HCDR3付近であるがその外側に反応性リシンを有し、反応性免疫化によって生成され、天然アルドラーゼ酵素を機構的に模倣する新規クラスの触媒抗体のプロトタイプである。C.F.Barbas三世ら、Science 278:2085〜2092(1997)を参照されたい。使用することができる他のアルドラーゼ触媒抗体には、ATCCアクセション番号PTA−1015を有するハイブリドーマ85A2、ATCCアクセション番号PTA−1014を有するハイブリドーマ85C7;ATCCアクセション番号PTA−1017を有するハイブリドーマ92F9;ATCCアクセション番号PTA−823を有するハイブリドーマ93F3;ATCCアクセション番号PTA−824を有するハイブリドーマ84G3;ATCCアクセション番号PTA−1018を有するハイブリドーマ84G11;ATCCアクセション番号PTA−1019を有するハイブリドーマ84H9;ATCCアクセション番号PTA−825を有するハイブリドーマ85H6;ATCCアクセション番号PTA−1016を有するハイブリドーマ90G8によって産生される抗体が含まれる。反応性リシンを介して、これらの抗体は、天然アルドラーゼのエナミン機構を使用するアルドール反応および逆アルドール反応を触媒する。例えば、J.Wagnerら、Science 270:1797〜1800(1995);C.F.Barbas三世ら、Science 278:2085〜2092(1997);G.Zhongら、Angew.Chem.Int.Ed.Engl.38:3738〜3741(1999);A.Karlstromら、Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.、97:3878〜3883(2000)を参照されたい。アルドラーゼ抗体およびアルドラーゼ抗体を生成する方法は、米国特許第6,210,938号、同第6,368,839号、同第6,326,176号、同第6,589,766号、同第5,985,626号、および同第5,733,757号に開示されている。
GA標的化化合物は、チオエステラーゼおよびエステラーゼ触媒抗体中の結合性部位に見出されるものなど、GA標的化剤を反応性システインに連結することによっても形成することができる。適当なチオエステラーゼ触媒抗体は、K.D.Jandaら、Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.91:2532〜2536(1994)によって記載されている。適当なエステラーゼ抗体は、P.Wirschingら、Science 270:1775〜1782(1995)によって記載されている。反応性アミノ酸含有抗体は、反応性アミノ酸をコードするために抗体中の結合性部位残基を突然変異させること、または反応性基を含有するリンカーを含む抗体中の結合性部位におけるアミノ酸側鎖を化学的に誘導体化することを含めて、当技術分野で周知の手段によって調製することができる。
本発明で使用するのに適した抗体は、従来の免疫化、インビボでの反応性免疫化によって、またはファージディスプレイを用いてなどの、インビトロでの反応選択によって得ることができる。抗体は、ヒトまたは他の動物種において産生することができる。1つの種の動物由来の抗体は、修飾することによって別の種の動物を反映することができる。例えば、ヒトキメラ抗体は、抗体の少なくとも1つの領域がヒト免疫グロブリン由来のものである。ヒトキメラ抗体は、ヒト由来の定常領域とともに、非ヒト動物、例えば、げっ歯類由来の可変領域を有すると典型的には理解される。対照的に、ヒト化抗体には、ヒト免疫グロブリン由来の可変フレームワーク領域のほとんどまたはすべてと、すべての定常領域とともに、非ヒト抗体由来のCDRが使用される。キメラおよびヒト化抗体は、CDR移植手法(例えば、N.Hardmanら、Int.J.Cancer 44:424〜433(1989);C.Queenら、Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.86:10029〜10033(1989)を参照されたい)、鎖シャッフリング法(例えば、Raderら、Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.95:8910〜8915(1998)を参照されたい)、分子モデル化法(例えば、M.A.Roguskaら、Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.91:969〜973(1994)を参照されたい)などを含めた、当技術分野で周知の方法によって調製することができる。
非ヒト抗体をヒト化するための方法は、当技術分野で記載されている。ヒト化抗体は、非ヒトである供給源から、その中に導入された1つまたは複数のアミノ酸残基を有することが好ましい。これらの非ヒトアミノ酸残基は、「移入」残基と呼ばれることが多く、これらは、典型的には「移入」可変ドメインから取得される。ヒト化は、本質的に、ヒト抗体の対応配列を高頻度可変領域配列で置換することによる、Winterらの方法に従って実施することができる(例えば、P.T.Jonesら Nature 321:522〜525(1986);L.Riechmannら、Nature 332:323〜327(1988);M.Verhoeyenら、Science 239:1534〜1536(1988)を参照されたい)。したがって、そのような「ヒト化」抗体は、インタクトなヒト可変ドメインより実質的に少ないドメインが、非ヒト種由来の対応配列によって置換されたキメラ抗体である(S.Cabillyら、Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.81:3273〜3277(1984))。実際には、ヒト化抗体は、典型的には、いくつかの高頻度可変領域残基と、場合によりいくつかのフレームワーク(FR)残基が、げっ歯類抗体の類似部位由来の残基によって置換されているヒト抗体である。
ヒト化抗体を作製するのに使用される、軽鎖および重鎖の両方のヒト可変ドメインの選択は、抗体がヒトの治療用途を意図されている場合、抗原性およびヒト抗マウス抗体(HAMA)応答を低減するために非常に重要である。いわゆる「最良適合」法によれば、ヒト化に利用されるヒト可変ドメインは、対象とするげっ歯類可変領域との高度の相同性に基づく既知のドメインのライブラリーから選択される(M.J.Simsら、J.Immunol.、151:2296〜2308(1993);M.ChothiaおよびA.M.Lesk、J.Mol.Biol.196:901〜917(1987))。別の方法では、軽鎖または重鎖の特定のサブグループのヒト抗体すべてのコンセンサス配列に由来するフレームワーク領域が使用される。同じフレームワークを、いくつかの異なるヒト化抗体に使用することができる(例えば、P.Carterら、Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.89:4285〜4289(1992);L.G.Prestaら、J.Immunol.、151:2623〜2632(1993)を参照されたい)。
抗体は、Z基に対する高い連結親和性を保持してヒト化されることがさらに重要である。この目的を達成するために、一方法によれば、ヒト化抗体は、親配列およびヒト化配列の3次元モデルを使用して、親配列および様々な概念的ヒト化産物を分析することによって調製される。3次元免疫グロブリンモデルは、一般に利用可能であり、当業者によく知られている。選択された候補免疫グロブリン配列の有望な3次元コンホメーション構造を例示し、提示するコンピュータープログラムが利用可能である。これらのディスプレイの検査により、Z基への連結に関する候補免疫グロブリン配列の機能における、残基のあり得る役割の分析が可能になる。このようにして、FR残基は、レシピエントから選択し、組み合わせ、配列を移入することができ、その結果、(1つまたは複数の)標的抗原に対する増大した親和性などの所望の抗体特性が達成される。
様々な形態のヒト化マウスアルドラーゼ抗体が企図されている。一実施形態では、ヒト定常ドメインCκおよびCγ11を有する、ヒト化アルドラーゼ触媒抗体h38c2 IgG1またはh38c2 Fabを使用する。C.Raderら、J.Mol.Bio.332:889〜899(2003)には、h38c2 Fabおよびh38c2 IgG1を生成するのに使用することができる遺伝子配列およびベクターが開示されている。h38c2 IgG1の軽鎖および重鎖の配列は、図33に示す。図6は、m38c2(それぞれ配列番号77および78)と、h38c2(それぞれ配列番号79および80)と、ヒト生殖細胞系の可変軽鎖および重鎖配列間の配列アラインメントを示す。ヒト生殖系列Vk遺伝子DPK−9(配列番号81)およびヒトJk遺伝子JK4(配列番号83)は、κ軽鎖可変ドメインのヒト化のためのフレームワークとして使用され、ヒト生殖系列遺伝子DP−47(配列番号82)およびヒトJH遺伝子JH4(配列番号84)は、m38c2の重鎖可変ドメインのヒト化のためのフレームワークとして使用された。h38c2は、任意のそのアロタイプを含めたIgG1、IgG2、IgG3、またはIgG4定常ドメインを利用することができる。h38c2 IgG1の一実施形態は、G1m(f)アロタイプを使用する。別の実施形態では、h38c2の可変ドメイン(VLおよびVH)ならびにIgG1、IgG2、IgG3、またはIgG4由来の定常ドメインを含むキメラ抗体を使用する。
様々な形態のヒト化アルドラーゼ抗体断片も企図されている。一実施形態では、h38c2 F(ab’)2を使用する。h38c2 F(ab’)2は、h38c2 IgG1のタンパク質分解消化によって生成することができる。別の実施形態では、介在リンカー(Gly4Ser)3によって場合によって接続されているh38c2由来のVLおよびVHドメインを含むh38c2 scFvを使用する。
ヒト化に代わるものとして、ヒト抗体を生成することができる。例えば、免疫化(または触媒抗体の場合、反応性免疫化)すると、内在性免疫グロブリン産生のない状態で、ヒト抗体の全レパートリーを産生することができるトランスジェニック動物(例えば、マウス)を現在では作製することが可能である。例えば、そのような生殖細胞系列突然変異マウス中への、キメラおよび生殖細胞系列免疫グロブリン遺伝子アレイ中の抗体重鎖連結領域(JH)遺伝子のホモ接合型欠失は、抗原チャレンジの後にヒト抗体の産生をもたらすと説明された。例えば、A.Jakobovitsら、Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.90:2551〜2555(1993);A.Jakobovitsら、Nature 362:255〜258(1993);M.Bruggemannら、Year Immunol.7:33〜40(1993);L.D.Taylorら Nucleic Acids Res.20:6287〜6295(1992);M.Bruggemannら、Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.86:6709〜6713(1989);およびWO97/17852を参照されたい。
抗体の典型的な化学誘導体化とは異なり、免疫に由来する抗体は、その結合性部位の所望の位置を特異的に標識することができ、均質な生成物の迅速かつ制御された調製を容易にしている。加えて、抗体の化学誘導体化とは異なり、1,3−ジケトンによる反応性免疫に由来する抗体は可逆的である。この可逆性により、mAb 38C2と結合したGA標的化化合物のジケトン誘導体は、共有結合ハプテンJW(J.Wagnerら、Science、270:1797〜1800(1995)を参照)または関連化合物との競合により、抗体から放出できる。これは、有害反応の事例において複合体をインビボで直ちに中和することを可能にする。あるいは、アルドラーゼ抗体および標的化化合物のβラクタム誘導体等との非可逆的な共有結合が可能である。典型的な抗ハプテン抗体とは異なり、ジケトン共有結合抗体(covalent diketone binding antibodies)は、ジケトンと抗体との間に形成される共有結合がpH3〜pH11であるという利点を有する。その標的化剤と共有結合している抗体の付加された安定性は、配合、送達および長期保管の観点から追加の利点を提供するはずである。
あるいは、ファージディスプレイ技術(例えば、J.McCaffertyら、Nature 348:552〜553(1990)を参照されたい)を使用することによって、未免疫ドナー由来の免疫グロブリン可変(V)ドメイン遺伝子レパートリーを使用して、インビトロでヒト抗体および抗体断片を生成することができる。この技法によれば、抗体Vドメイン遺伝子は、M13またはfdなどの繊維状バクテリオファージの主要または微量コートタンパク質遺伝子のいずれかの中にインフレームでクローン化され、ファージ粒子表面上の機能性抗体断片として提示される。繊維状粒子は、ファージゲノムの一本鎖DNAコピーを含有するので、抗体の機能的特性に基づく選択により、これらの特性を呈する抗体をコードする遺伝子の選択ももたらされる。したがって、このファージは、B細胞のいくつかの特性を模倣する。ファージディスプレイは、様々な形式で実施することができ、例えば、K.S.JohnsonおよびD.J.Chiswell、Curr.Opin.Struct.Biol.3:564〜571(1993)に概説されている。V遺伝子セグメントのいくつかの供給源を、ファージディスプレイのために使用することができる。T.Clacksonら、Nature352:624〜628(1991)は、免疫化マウスの脾臓に由来するV遺伝子の小さなランダムコンビナトリアルライブラリーからの抗オキサゾロン抗体の多様なアレイを単離した。未免疫ヒトドナー由来のV遺伝子のレパートリーを構築することができ、抗原(自己抗原を含めて)の多様なアレイに対する抗体は、本質的にJ.D.Marksら、J.Mol.Biol.222:581〜597(1991)またはA.D.Griffithsら、EMBO J.12:725〜734(1993)に記載されている技法に従って単離することができる。米国特許第5,565,332号および同第5,573,905号;ならびにL.S.Jespersら、Biotechnology 12:899〜903(1994)も参照されたい。
上記に示したように、ヒト抗体は、インビトロで活性化されたB細胞によっても生成することができる。例えば、米国特許第5,567,610号および同第5,229,275号;ならびにC.A.K.Borrebaeckら、Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.85:3995〜3999(1988)を参照されたい。
本明細書に記載される抗体のアミノ酸配列の(1つまたは複数の)修飾は企図されている。例えば、抗体の結合親和性および/または他の生物学的特性を改善することが望ましい場合がある。抗体のアミノ酸配列変異体は、抗体核酸中に適切なヌクレオチド変化を導入することによって、またはペプチド合成によって調製される。そのような修飾には、例えば、抗体のアミノ酸配列内の残基からの欠失、この残基中への挿入、および/またはこの残基の置換が含まれる。欠失、挿入、および置換の任意の組合せが行われることによって、最終のコンストラクトに達し、ただしこの最終コンストラクトは所望の特徴を有する。グリコシル化部位の数または位置を変化させることなどのアミノ酸変化も、抗体の翻訳後プロセスを変更することができる。
突然変異誘発に好ましい位置である、抗体のある特定の残基または領域を同定するための有用な方法は、B.C.CunninghamおよびJ.A.Wells、Science 244:1081〜1085(1989)に記載されているように、「アラニン走査突然変異誘発」と呼ばれる。ここでは、標的残基の残基または基が同定され(例えば、Arg、Asp、His、Lys、およびGluなどの荷電残基)、中性または負に荷電したアミノ酸(Alaまたはポリアラニンであることが最も好ましい)により置換されることによって、リンカーのZ基とのアミノ酸の相互作用に影響する。次いで、置換に対して機能的感受性を示すこれらのアミノ酸位置は、置換部位で、または置換部位の代わりに、さらなるまたは他の変異体を導入することによって洗練される。したがって、アミノ酸配列変異を導入するための部位はあらかじめ決められるが、突然変異自体の性質はあらかじめ決める必要はない。例えば、所与の部位での突然変異の性能を分析するために、標的コドンまたは領域でアラニン走査またはランダム突然変異誘発が行われ、発現された抗体変異体は、Zと共有結合を形成する能力についてスクリーニングされる。
アミノ酸配列挿入には、長さが1個の残基から100個以上の残基を含有するポリペプチドの範囲のアミノ末端融合および/またはカルボキシル末端融合、ならびに1個または複数個のアミノ酸残基の配列内挿入が含まれる。末端挿入の例には、N末端メチオニル残基を有する抗体、または細胞毒性ポリペプチドに融合した抗体が含まれる。抗体分子の他の挿入変異体には、抗体の血清中半減期を増大させる酵素またはポリペプチドに対する抗抗体のN末端またはC末端への融合物が含まれる。
別の種類の変異体は、アミノ酸置換変異体である。これらの変異体は、異なる残基によって置換された、抗体分子中の少なくとも1個のアミノ酸残基を有する。置換突然変異誘発に関して最も興味ある部位には、高頻度可変領域が含まれるが、FR変化も企図されている。同類置換は、以下の表で、「好ましい置換」の表題の下に示されている。そのような置換によって生物学的活性の変化がもたらされる場合、アミノ酸クラスを参照して以下にさらに記載されるように、「例示的置換」と称されるより多くの置換変化を導入することができ、産物をスクリーニングすることができる。
抗体の生物学的特性における実質的な修飾は、(a)例えば、シートもしくはらせんコンホメーションのような、置換範囲内のポリペプチド主鎖の構造、(b)標的部位での分子の電荷または疎水性、または(c)側鎖のバルクを維持することへの、その効果が著しく異なる置換を選択することによって達成される。天然に存在する残基は、共通の側鎖の特性に基づいてグループに分けられる。
(1)疎水性:Nle、Met、Ala、Val、Leu、Ile;
(2)中性親水性:Cys、Ser、Thr;
(3)酸性:Asp、Glu;
(4)塩基性:Asn、Gln、His、Lys、Arg;
(5)鎖配向に影響する残基:Gly、Pro;および
(6)芳香族:Trp、Tyr、Phe。
非同類置換は、これらのクラスの1つのメンバーを別のクラスのメンバーと交換することを伴うことになる。
(1)疎水性:Nle、Met、Ala、Val、Leu、Ile;
(2)中性親水性:Cys、Ser、Thr;
(3)酸性:Asp、Glu;
(4)塩基性:Asn、Gln、His、Lys、Arg;
(5)鎖配向に影響する残基:Gly、Pro;および
(6)芳香族:Trp、Tyr、Phe。
非同類置換は、これらのクラスの1つのメンバーを別のクラスのメンバーと交換することを伴うことになる。
抗体の適切なコンホメーションを維持することに関与していない任意のシステイン残基は、一般にセリンと置換することによって、分子の酸化安定性を改善し、異常な架橋を防止することができる。逆に、(1つまたは複数の)システイン結合は、抗体に加えることによってその安定性を改善することができる(特に、抗体がFv断片などの抗体断片である場合)。
置換変異体の1つの種類は、親抗体(例えば、ヒト化またはヒト抗体)の1つまたは複数の高頻度可変領域残基を置換することを伴う。一般に、さらに展開するために選択される、(1つまたは複数の)得られた変異体は、これらが生成される親抗体と比べて、改善された生物学的特性を有することになる。そのような置換変異体を生成するのに好都合な方法は、ファージディスプレイを使用する親和性成熟を伴う。簡単に言えば、いくつかの高頻度可変領域部位(例えば、6〜7個の部位)は突然変異されて、各部位ですべての可能なアミノ置換が生じる。こうして生成された抗体変異体は、繊維状ファージ粒子から、各粒子内に詰められたM13の遺伝子III産物への融合物として一価の様式で提示される。次いでファージディスプレイ変異体は、本明細書に開示されるように、その生物活性(例えば、結合親和性)についてスクリーニングされる。修飾のための候補高頻度可変領域部位を同定するために、アラニン走査突然変異誘発を実施することによって、抗原結合に大きく寄与する高頻度可変領域残基を同定することができる。あるいは、またはさらに、抗体コンジュゲート複合体の構造を分析することによって、抗体とZ基の接触点を同定することは有益となり得る。そのような接触残基および隣接残基は、本明細書で詳述される技法による置換の候補である。そのような変異体が生成された場合、変異体のパネルは、本明細書に説明されるようにスクリーニングにかけられ、1つまたは複数の関連するアッセイにおいて優れた特性を有する抗体を、さらなる展開のために選択することができる。
抗体の別の種類のアミノ酸変異体は、抗体中に見出される1つまたは複数の炭水化物部分を欠失させる、かつ/または抗体中に存在していない1つまたは複数のグリコシル化部位を添加することによって、抗体の最初のグリコシル化パターンを変更する。
抗体のグリコシル化は、典型的には、N結合型かO結合型のいずれかである。N結合型は、アスパラギン残基の側鎖への炭水化物部分の結合を指す。X”がプロリンを除く任意のアミノ酸である、トリペプチド配列のAsn−X”−SerおよびAsn−X”−Thrは、アスパラギン側鎖への炭水化物部分の酵素的結合のための認識配列である。したがって、ポリペプチド中にこれらのトリペプチド配列のいずれかが存在することにより、潜在的なグリコシル化部位が作り出される。O結合型グリコシル化は、ヒドロキシアミノ酸、すなわち、5−ヒドロキシプロリンまたは5−ヒドロキシリジンも使用することができるが、最も一般的にはセリンまたはスレオニンへの、糖であるN−アセチルガラクトサミン、ガラクトース、またはキシロースのうちの1つの結合を指す。
抗体へのグリコシル化部位の添加は、抗体が、上述したトリペプチド配列の1つまたは複数を含有するように(N結合型グリコシル化部位に関して)、アミノ酸配列を変更することによって達成されることが好都合である。最初の抗体の配列への1つまたは複数のセリンまたはスレオニン残基の添加、またはこれらの残基による置換によっても変更することができる(O結合型グリコシル化部位に関して)。
例えば、抗体の抗原依存細胞媒介細胞毒性(ADCC)および/または補体依存細胞毒性(CDC)を増強または低減するために、エフェクター機能に関して本発明の抗体を修飾することが望ましい場合がある。これは、抗体のFc領域中に1つまたは複数のアミノ酸置換を導入することによって達成することができる。あるいは、二重Fc領域を有し、それによって増強された補体溶解およびADCC能を有することができる抗体を操作することができる。G.T.Stevensonら、Anticancer Drug Des.3:219〜230(1989)を参照されたい。
抗体の血清中半減期を増加させるために、例えば、米国特許第5,739,277号に記載されているように、抗体(特に抗体断片)中にサルベージ受容体結合エピトープを組み込むことができる。本明細書で使用される場合、用語「サルベージ受容体結合エピトープ」は、IgG分子のインビボ血清中半減期を増加させることに関与するIgG分子(例えば、IgG1、IgG2、IgG3、またはIgG4)のFc領域のエピトープを指す。
リンカーおよび連結された化合物
本明細書に記載されているGA標的化剤は、直接的にまたはリンカーを介して、抗体中の結合性部位と共有結合していてよい。適当なリンカーは、標的化剤と抗体との間に十分な距離を提供するように選定することができる。GA標的化化合物を調製する際に使用するためのリンカーの実施形態の一般設計は、式X−Y−Zで示され、ここで、Xは接続鎖であり、Yは認識基であり、Zは反応基である。リンカーは、線形であっても分岐していてもよく、1個または複数の炭素環基または複素環基を場合により含む。リンカー長は、環周囲の最短経路をとることによって計数される芳香環等の環式部分を持つ線形原子の数の観点から見ることができる。いくつかの実施形態において、リンカーは、5〜15個の原子、その他の実施形態において、15〜30個の原子、さらに他の実施形態において、30〜50個の原子、さらに他の実施形態において、50〜100個の原子、さらに他の実施形態において、100〜200個の原子の線形伸縮を有する。その他のリンカーの考慮事項は、結果として生じたGA標的化化合物またはGA標的化剤−リンカーの物理学的または薬物速度論的特性に対する効果、溶解度、親油性、親水性、疎水性、安定性(より安定またはより不安定のいずれか、および計画された崩壊)、剛性、柔軟性、免疫原性、抗体結合の調節、ミセルまたはリポソームに組み込まれる能力等を含む。
本明細書に記載されているGA標的化剤は、直接的にまたはリンカーを介して、抗体中の結合性部位と共有結合していてよい。適当なリンカーは、標的化剤と抗体との間に十分な距離を提供するように選定することができる。GA標的化化合物を調製する際に使用するためのリンカーの実施形態の一般設計は、式X−Y−Zで示され、ここで、Xは接続鎖であり、Yは認識基であり、Zは反応基である。リンカーは、線形であっても分岐していてもよく、1個または複数の炭素環基または複素環基を場合により含む。リンカー長は、環周囲の最短経路をとることによって計数される芳香環等の環式部分を持つ線形原子の数の観点から見ることができる。いくつかの実施形態において、リンカーは、5〜15個の原子、その他の実施形態において、15〜30個の原子、さらに他の実施形態において、30〜50個の原子、さらに他の実施形態において、50〜100個の原子、さらに他の実施形態において、100〜200個の原子の線形伸縮を有する。その他のリンカーの考慮事項は、結果として生じたGA標的化化合物またはGA標的化剤−リンカーの物理学的または薬物速度論的特性に対する効果、溶解度、親油性、親水性、疎水性、安定性(より安定またはより不安定のいずれか、および計画された崩壊)、剛性、柔軟性、免疫原性、抗体結合の調節、ミセルまたはリポソームに組み込まれる能力等を含む。
リンカーの接続鎖Xは、基C、H、N、O、P、S、ハロゲン(F、Cl、Br、I)またはその塩由来の任意の原子を含む。Xは、アルキル、アルケニル、アルキニル、オキソアルキル、オキソアルケニル、オキソアルキニル、アミノアルキル、アミノアルケニル、アミノアルキニル、スルホアルキル、スルホアルケニル、スルホアルキニル、ホスホアルキル、ホスホアルケニルまたはホスホアルキニル基等の基も含み得る。一部の実施形態において、Xは、1つまたは複数の環構造を含み得る。一部の実施形態において、リンカーは、2〜100単位を含むポリエチレングリコール等の繰り返しポリマーである。
リンカーの認識基Yは任意選択であり、存在する場合、反応基と接続鎖との間に位置付けられている。一部の実施形態において、Yは、Zから原子1〜20個のところに位置付けられている。いかなる理論にも束縛されることを望まないが、認識基は、反応基が反応性アミノ酸側鎖と反応することができるよう、反応基を抗体中の結合性部位に正しく位置決めするように作用すると考えられている。例示的な認識基は、好ましくは5または6個の原子を有する炭素環基および複素環基を含む。しかしながら、より大きい環構造を使用してもよい。一部の実施形態において、GA標的化剤は、介在リンカーを使用することなく、直接的にYと連結されている。
Zは、抗体中の結合性部位において反応性側鎖と共有結合を形成することができる。一部の実施形態において、Zは、ジケトン、アシルβ−ラクタム、活性エステル、ハロケトン、シクロヘキシルジケトン基、アルデヒド、マレイミド、活性アルケン、活性アルキン、または、概して、求核または求電子転位の影響を受けやすい離脱基を含む分子を形成するように並べられた1個または複数のC=O基を含む。その他の基は、ラクトン、無水物、α−ハロアセトアミド、イミン、ヒドラジドまたはエポキシドを含み得る。抗体中の結合性部位において反応性求核基(例えば、リシンまたはシステイン側鎖)と共有結合することができる例示的なリンカー求電子性反応基は、アシルβ−ラクタム、単純ジケトン、スクシンイミド活性エステル、マレイミド、リンカーを持つハロアセトアミド、ハロケトン、シクロヘキシルジケトン、アルデヒド、アミジン、グアニジン、イミン、エネアミン(eneamine)、ホスフェート、ホスホネート、エポキシド、アジリジン、チオエポキシド、遮断または保護されているジケトン(例えばケタール)、ラクタム、スルホネート等、イミン類、ケタール類、アセタール類およびその他任意の既知の求電子基等の遮断されたC=O基を含む。一実施形態において、反応基は、アシルβ−ラクタム、単純ジケトン、スクシンイミド活性エステル、マレイミド、リンカーを持つハロアセトアミド、ハロケトン、シクロヘキシルジケトンまたはアルデヒドを形成するように並べられた1個または複数のC=O基を含む。
リンカー反応基または同様のそのような反応基は、特定の結合性部位において反応性残基とともに使用するために選定される。例えば、アルドラーゼ抗体による修飾のための化学的部分は、ケトン、ジケトン、βラクタム、活性エステルハロケトン、ラクトン、無水物、マレイミド、α−ハロアセトアミド、シクロヘキシルジケトン、エポキシド、アルデヒド、アミジン、グアニジン、イミン、エネアミン、ホスフェート、ホスホネート、エポキシド、アジリジン、チオエポキシド、遮断または保護されているジケトン(例えばケタール)、ラクタム、ハロケトン、アルデヒド等であってよい。
抗体中の反応性スルフヒドリル基による共有結合修飾に適したリンカー反応基化学的部分は、ジスルフィド、ハロゲン化アリール、マレイミド、α−ハロアセトアミド、イソシアネート、エポキシド、チオエステル、活性エステル、アミジン、グアニジン、イミン、エネアミン、ホスフェート、ホスホネート、エポキシド、アジリジン、チオエポキシド、遮断または保護されているジケトン(例えばケタール)、ラクタム、ハロケトン、アルデヒド等であってよい。
当業者であれば、抗体中の結合性部位中の反応性アミノ酸側鎖が、GA標的化剤またはそのリンカー上で求核基と反応する求電子基を有し得る一方、その他の実施形態において、アミノ酸側鎖中の反応性求核基が、GA標的化剤またはリンカー中の求電子基と反応することを容易に理解するであろう。
GA標的化化合物は、数種のアプローチによって調製することができる。1つのアプローチにおいて、GA標的化剤−リンカー化合物は、抗体中の結合性部位におけるアミノ酸の側鎖との共有結合反応用に設計された1個または複数の反応基を含むリンカーを用いて合成される。標的化剤−リンカー化合物および抗体を、リンカー反応基がアミノ酸側鎖と共有結合を形成する条件下で合わせる。
別のアプローチにおいて、連結は、抗体およびリンカーを含む抗体−リンカー化合物を合成することによって実現でき、ここで、該リンカーは、GA標的化剤の適当な化学的部分との共有結合反応用に設計された1個または複数の反応基を含む。GA標的化剤は、リンカー反応基との反応のために適当な部分を提供するように修飾されることが必要な場合がある。抗体−リンカーおよびGA標的化剤を、リンカー反応基が標的化および/または生物学的剤と共有結合する条件下で合わせる。
抗体−GA標的化化合物を形成するためのさらなるアプローチでは、二元リンカー設計(dual linker design)を使用する。一実施形態において、GA標的化剤と反応基を持つリンカーとを含むGA標的化剤−リンカー化合物が合成される。第1のステップのGA標的化剤−リンカーの反応基との反応度の影響を受けやすい、抗体と化学基を持つリンカーとを含む抗体−リンカー化合物が合成される。その後、これらの2種のリンカー含有化合物を、リンカーが共有結合する条件下で合わせ、抗体−GA標的化化合物を形成する。
連結に関わることができる例示的な官能基は、例えば、エステル類、アミド類、エーテル類、ホスフェート類、アミノ、ケト、アミジン、グアニジン、イミン類、エネアミン類、ホスフェート類、ホスホネート類、エポキシド類、アジリジン類、チオエポキシド類、遮断または保護されているジケトン類(例えばケタール類)、ラクタム類、ハロケトン類、アルデヒド類、チオカルバメート、チオアミド、チオエステル、スルフィド、ジスルフィド、ホスホルアミド、スルホンアミド、尿素、チオ尿素、カルバメート、カーボネート、ヒドロキサミド等を含む。
リンカーは、基C、H、N、O、P、S、ハロゲン(F、Cl、Br、I)またはその塩由来の任意の原子を含む。リンカーは、アルキル、アルケニル、アルキニル、オキソアルキル、オキソアルケニル、オキソアルキニル、アミノアルキル、アミノアルケニル、アミノアルキニル、スルホアルキル、スルホアルケニル、スルホアルキニル基、ホスホアルキル、ホスホアルケニルまたはホスホアルキニル基等の基も含み得る。リンカーは、1つまたは複数の環構造も含み得る。本明細書で使用される場合、「環構造」は、飽和、不飽和および芳香族の炭素環、ならびに飽和、不飽和および芳香族の複素環を含む。環構造は、単環式、二環式または多環式であってよく、縮合または非縮合環を含み得る。その上、環構造は、それだけに限らないが、ハロゲン、オキソ、−OH、−CHO、−COOH、−NO2、−CN、−NH2、−C(O)NH2、C1〜6アルキル、C2〜6アルケニル、C2〜6アルキニル、C1〜6オキソアルキル、オキソアルケニル、オキソアルキニル、アミノアルキル、アミノアルケニル、アミノアルキニル、スルホアルキル、スルホアルケニル、スルホアルキニル、ホスホアルキル、ホスホアルケニルまたはホスホアルキニル基を含む、当該技術分野において既知の官能基で置換されていてもよい。上記の基および環の組合せは、GA標的化化合物のリンカー中に存在してもよい。
本発明の一態様は、式Iを有するGA標的化剤−リンカー複合体であり、
L−[GA標的化剤] (I)
式中、[GA標的化剤]はGA標的化剤ペプチドである。適切なGA標的化剤ペプチドは、それだけに限らないが、配列番号1、配列番号2、および、例えばカルボキシトランケーションまたは突然変異を含む配列番号1または配列番号2の類似体、ならびに、本明細書に記載されているGA標的化化合物を含む。
L−[GA標的化剤] (I)
式中、[GA標的化剤]はGA標的化剤ペプチドである。適切なGA標的化剤ペプチドは、それだけに限らないが、配列番号1、配列番号2、および、例えばカルボキシトランケーションまたは突然変異を含む配列番号1または配列番号2の類似体、ならびに、本明細書に記載されているGA標的化化合物を含む。
リンカー部分Lは、GA標的化剤の、カルボキシ末端またはアミノ酸側の任意の求核性もしくは求核性側鎖に結合していてよい。LとGA標的化剤との結合点を、本明細書においては「接合点(tethering point)」と称する。
いくつかの実施形態において、Lは、GA標的化剤中のアミノ酸の求核性または求電子性側鎖と連結している。例示的な求核性側鎖は、Lys、Cys、Ser、ThrおよびTyrである。Lが求核性側鎖と連結している実施形態において、Lは、求核性側鎖との共有結合反応の影響を受けやすい求電子基を含むはずである。例示的な求電子性側鎖は、AspおよびGluである。Lが求電子性側鎖と連結している実施形態において、Lは、求電子性側鎖との共有結合反応の影響を受けやすい求核基を含むはずである。
LがGA標的化剤中のアミノ酸(連結残基)の求核性側鎖と連結しているいくつかの実施形態において、Lは、Lys残基の求核性側鎖と連結している。これらの実施形態のいくつかにおいて、Lys残基は、配列番号1の残基20もしくは28、または配列番号2の残基12もしくは27である。その他いくつかの実施形態において、Lys残基は、配列番号1もしくは配列番号2またはその類似体のGA標的化剤のカルボキシ末端に挿入され、リンカーLは、この追加のアミノ酸の側鎖に共有結合している。例えば、一実施形態において、GA標的化剤は
HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPSK(配列番号3)、または
HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPSK(配列番号4)
である。
HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPSK(配列番号3)、または
HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPSK(配列番号4)
である。
配列番号3は、ペプチドのカルボキシ末端におけるLys残基の挿入以外は配列番号2と同一である。配列番号4は、2位におけるGly残基のAib2による置換以外は配列番号3と同一である。
配列番号3または配列番号4ベースの標的化剤を含む式Iの化合物の例は、それだけに限らないが、
HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPSK(L)(配列番号166);
HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPSK(L)(配列番号167);および
R1−HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGK−R2(配列番号30)
を含む。
HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPSK(L)(配列番号166);
HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPSK(L)(配列番号167);および
R1−HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGK−R2(配列番号30)
を含む。
その他いくつかの実施形態において、Lys残基は、配列番号1もしくは配列番号2またはその類似体の内部の位置に挿入または置換され、リンカーLは、この追加のアミノ酸の側鎖に共有結合している。これらの実施形態の例を、以下の表IIに記載する。リンカーLの結合のための接合点としての役割を果たす挿入されたLys残基には下線が引かれている。
リンカーLがGA標的化ペプチド中のLys残基に共有結合している実施形態において、Lys残基は、側鎖修飾Lysであってよい。これらの実施形態のいくつかにおいて、側鎖修飾Lysは
式Iの化合物において、Lは式−X−Y−Z−を有するリンカー部分であり、式中、
Xは、GA標的化剤を含む残基のうちの1つに結合している、生物学的に適合するポリマーまたはブロックコポリマーであり、
Yは、少なくとも環構造を含む存在していてもよい認識基であり、
Zは、抗体中の結合性部位において側鎖と共有結合することができる反応基である。
Xは、GA標的化剤を含む残基のうちの1つに結合している、生物学的に適合するポリマーまたはブロックコポリマーであり、
Yは、少なくとも環構造を含む存在していてもよい認識基であり、
Zは、抗体中の結合性部位において側鎖と共有結合することができる反応基である。
式Iの化合物の一部の実施形態において、Xは
−R22−P−R2−−または−R22−P−R21−P’−R23−
であり、
式中、
PおよびP’は、独立に、ポリエチレンオキシド、ポリエチルオキサゾリン、ポリ−N−ビニルピロリドン、ポリビニルアルコール、ポリヒドロキシエチルアクリレート、ポリヒドロキシエチルメタクリレートおよびポリアクリルアミド等のポリオキシアルキレンオキシド類、ポリマー主鎖またはポリマー側鎖のいずれか上にアミン基を有するポリリシン、ポリオルニチン、ポリアルギニンおよびポリヒスチジン等のポリアミン類、ポリアミノスチレン、ポリアミノアクリレート、ポリ(N−メチルアミノアクリレート)、ポリ(N−エチルアミノアクリレート)、ポリ(N,N−ジメチルアミノアクリレート)、ポリ(N,N−ジエチルアミノアクリレート)、ポリ(アミノメタクリレート)、ポリ(N−メチルアミノ−メタクリレート)、ポリ(N−エチルアミノメタクリレート)、ポリ(N,N−ジメチルアミノメタクリレート)、ポリ(N,N−ジエチルアミノメタクリレート)、ポリ(エチレンイミン)等の非ペプチドポリアミン類、ポリ(N,N,N−トリメチルアミノアクリレートクロリド)、ポリ(メタクリルアミドプロピルトリメチルアンモニウムクロリド)等の第四級アミン類のポリマー、コンドロイチン硫酸−A(4−硫酸)、コンドロイチン硫酸−C(6−硫酸)およびコンドロイチン硫酸−B等のプロテオグリカン類、ポリセリン、ポリスレオニン、ポリグルタミン等のポリペプチド類、キトサン、ヒドロキシエチルセルロース等の天然または合成多糖類、ならびに脂質類からなる群より選択され、
R21、R22およびR23は、それぞれ独立に、共有結合、−O−、−S−、−NRb−、置換もしくは非置換の直鎖もしくは分岐鎖C1〜50アルキレン、または置換もしくは非置換の直鎖もしくは分岐鎖C1〜50ヘテロアルキレンであり、
Rbは、水素、置換もしくは非置換のC1〜10アルキル、置換もしくは非置換のC3〜7シクロアルキル−C0〜6アルキル、または置換もしくは非置換のアリール−C0〜6アルキルであり、
R21、R22およびR23は、Xの主鎖長が約200個以下の原子となるように選択される。
−R22−P−R2−−または−R22−P−R21−P’−R23−
であり、
式中、
PおよびP’は、独立に、ポリエチレンオキシド、ポリエチルオキサゾリン、ポリ−N−ビニルピロリドン、ポリビニルアルコール、ポリヒドロキシエチルアクリレート、ポリヒドロキシエチルメタクリレートおよびポリアクリルアミド等のポリオキシアルキレンオキシド類、ポリマー主鎖またはポリマー側鎖のいずれか上にアミン基を有するポリリシン、ポリオルニチン、ポリアルギニンおよびポリヒスチジン等のポリアミン類、ポリアミノスチレン、ポリアミノアクリレート、ポリ(N−メチルアミノアクリレート)、ポリ(N−エチルアミノアクリレート)、ポリ(N,N−ジメチルアミノアクリレート)、ポリ(N,N−ジエチルアミノアクリレート)、ポリ(アミノメタクリレート)、ポリ(N−メチルアミノ−メタクリレート)、ポリ(N−エチルアミノメタクリレート)、ポリ(N,N−ジメチルアミノメタクリレート)、ポリ(N,N−ジエチルアミノメタクリレート)、ポリ(エチレンイミン)等の非ペプチドポリアミン類、ポリ(N,N,N−トリメチルアミノアクリレートクロリド)、ポリ(メタクリルアミドプロピルトリメチルアンモニウムクロリド)等の第四級アミン類のポリマー、コンドロイチン硫酸−A(4−硫酸)、コンドロイチン硫酸−C(6−硫酸)およびコンドロイチン硫酸−B等のプロテオグリカン類、ポリセリン、ポリスレオニン、ポリグルタミン等のポリペプチド類、キトサン、ヒドロキシエチルセルロース等の天然または合成多糖類、ならびに脂質類からなる群より選択され、
R21、R22およびR23は、それぞれ独立に、共有結合、−O−、−S−、−NRb−、置換もしくは非置換の直鎖もしくは分岐鎖C1〜50アルキレン、または置換もしくは非置換の直鎖もしくは分岐鎖C1〜50ヘテロアルキレンであり、
Rbは、水素、置換もしくは非置換のC1〜10アルキル、置換もしくは非置換のC3〜7シクロアルキル−C0〜6アルキル、または置換もしくは非置換のアリール−C0〜6アルキルであり、
R21、R22およびR23は、Xの主鎖長が約200個以下の原子となるように選択される。
式Iの化合物の一部の実施形態において、R22は、−(CH2)v−、−(CH2)u−C(O)−(CH2)v−、−(CH2)u−C(O)−O−(CH2)v−、−(CH2)u−C(S)−NRb−(CH2)v−、−(CH2)u−C(O)−NRb−(CH2)v−、−(CH2)u−NRb−(CH2)v−、−(CH2)u−O−(CH2)v−、−(CH2)u−S(O)0〜2−(CH2)v−、−(CH2)u−S(O)0〜2−NRb−(CH2)v−または−(CH2)u−P(O)(ORb)−O−(CH2)v−であり、式中、uおよびvは、それぞれ独立に、0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19または20である。
式Iの化合物のまた他の実施形態において、R22は、−(CH2)v−、−(CH2)u−C(O)−(CH2)v−、−(CH2)u−C(O)−O−(CH2)v−、−(CH2)u−C(O)−NRb−(CH2)v−または−(CH2)u−NRb−(CH2)vである。さらに他の実施形態において、R−2は、−(CH2)u−C(O)−NRb−(CH2)v−である。
式Iの化合物の一部の実施形態において、R21およびR23は、それぞれ独立に、−(CH2)s−、−(CH2)r−C(O)−(CH2)s−、−(CH2)r−C(O)−O−(CH2)v−、−(CH2)r−C(S)−NRb−(CH2)s−、−(CH2)r−C(O)−NRb−(CH2)s−、−(CH2)r−NRb−(CH2)s−、−(CH2)r−O−(CH2)s−、−(CH2)r−S(O)0〜2−(CH2)s−、−(CH2)r−S(O)0〜2−NRb−(CH2)s−または−(CH2)r−P(O)(ORb)−O−(CH2)s−であり、式中、r、sおよびvは、それぞれ独立に、0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19または20である。
また他の実施形態において、R21およびR23は、それぞれ独立に、−(CH2)s−、−(CH2)r−C(O)−(CH2)s−、−(CH2)r−C(O)−O−(CH2)s−、−(CH2)r−C(O)−NRb−(CH2)s−または−(CH2)r−NRb−(CH2)sおよび−(CH2)r−C(O)−NRb−(CH2)s−である。
さらに他の実施形態では、R21およびR23は、それぞれ独立に、構造
式中、pは、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、32、43、44または45であり、w、rおよびsは、それぞれ独立に、0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19または20であり、Rbは、各出現時、独立に、水素、置換もしくは非置換のC1〜10アルキル、置換もしくは非置換のC3〜7シクロアルキル−C0〜6アルキル、または置換もしくは非置換のアリール−C0〜6アルキルである。
式Iの化合物のいくつかの実施形態において、Xは構造
式Iの化合物のいくつかの実施形態において、Xは構造
式中、H1およびH1’は、各出現時、独立に、N、O、SまたはCH2であり、rおよびsは、それぞれ独立に、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19または20であり、tおよびt’は、それぞれ独立に、0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、32、43、44、45、46、47、48、49または50であり、Rbは、各出現時、独立に、水素、置換もしくは非置換のC1〜10アルキル、置換もしくは非置換のC3〜7シクロアルキル−C0〜6アルキル、または置換もしくは非置換のアリール−C0〜6アルキルである。
式Iの化合物のいくつかの実施形態において、Xは構造
式中、H1およびH1’は、各出現時、独立に、N、O、SまたはCH2であり、rおよびsは、それぞれ独立に、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19または20であり、tおよびt’は、それぞれ独立に、0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、32、43、44、45、46、47、48、49または50であり、Rbは、各出現時、独立に、水素、置換もしくは非置換のC1〜10アルキル、置換もしくは非置換のC3〜7シクロアルキル−C0〜6アルキル、または置換もしくは非置換のアリール−C0〜6アルキルである。
式Iの化合物のいくつかの実施形態において、Xは構造
式中、H1およびH1’は、各出現時、独立に、N、O、SまたはCH2であり、rおよびsは、それぞれ独立に、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19または20であり、tおよびt’は、それぞれ独立に、0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、32、43、44、45、46、47、48、49または50であり、Rbは、各出現時、独立に、水素、置換もしくは非置換のC1〜10アルキル、置換もしくは非置換のC3〜7シクロアルキル−C0〜6アルキル、または置換もしくは非置換のアリール−C0〜6アルキルである。
式Iの化合物のいくつかの実施形態において、Xは構造
式中、H1およびH1’は、各出現時、独立に、N、O、SまたはCH2であり、rおよびsは、それぞれ独立に、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19または20であり、tおよびt’は、それぞれ独立に、0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、32、43、44、45、46、47、48、49または50であり、Rbは、各出現時、独立に、水素、置換もしくは非置換のC1〜10アルキル、置換もしくは非置換のC3〜7シクロアルキル−C0〜6アルキル、または置換もしくは非置換のアリール−C0〜6アルキルである。
式Iの化合物のいくつかの実施形態において、Xは構造
式中、H1およびH1’は、各出現時、独立に、N、O、SまたはCH2であり、rおよびsは、それぞれ独立に、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19または20であり、tおよびt’は、それぞれ独立に、0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、32、43、44、45、46、47、48、49または50であり、Rbは、水素、置換もしくは非置換のC1〜10アルキル、置換もしくは非置換のC3〜7シクロアルキル−C0〜6アルキル、または置換もしくは非置換のアリール−C0〜6アルキルである。
式Iの化合物のいくつかの実施形態において、Xは構造
式中、H1およびH1’は、各出現時、独立に、N、O、SまたはCH2であり、rおよびsは、それぞれ独立に、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19または20であり、tおよびt’は、それぞれ独立に、0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、32、43、44、45、46、47、48、49または50であり、Rbは、水素、置換もしくは非置換のC1〜10アルキル、置換もしくは非置換のC3〜7シクロアルキル−C0〜6アルキル、または置換もしくは非置換のアリール−C0〜6アルキルである。
式Iの化合物のいくつかの実施形態において、Xは構造
式中、vおよびwは、それぞれ独立に、1、2、3、4または5であり、Rbは、水素、置換もしくは非置換のC1〜10アルキル、置換もしくは非置換のC3〜7シクロアルキル−C0〜6アルキル、または置換もしくは非置換のアリール−C0〜6アルキルである。これらの実施形態のいくつかにおいて、vは1、2または3であり、wは1、2または3であり、Rbは水素である。
式Iのいくつかの実施形態において、Lは、式−X−Y−Zを有するリンカー部分であり、ここで、
Xは、GA標的化剤を含む残基のうちの1つに結合しており、置換されていてもよい−R22−[CH2−CH2−O]t−R23−、−R22−シクロアルキル−R23−、−R22−アリール−R23−または−R22−ヘテロシクリル−R23−であり、ここで、
R22およびR23は、それぞれ独立に、共有結合、−O−、−S−、−NRb−、置換もしくは非置換の直鎖もしくは分岐鎖C1〜50アルキレン、置換もしくは非置換の直鎖もしくは分岐鎖C1〜50ヘテロアルキレン、置換もしくは非置換の直鎖もしくは分岐鎖C2〜50アルケニレン、または置換もしくは非置換のC2〜50ヘテロアルケニレンであり、
Rbは、水素、置換もしくは非置換のC1〜10アルキル、置換もしくは非置換のC3〜7シクロアルキル−C0〜6アルキル、または置換もしくは非置換のアリール−C0〜6アルキルであり、
tは、0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、32、43、44、45、46、47、48、49または50であり、
R22およびR23のサイズは、Xの主鎖長が約200個以下の原子抗体−N−となるようなものであり、
Yは、少なくとも環構造を含む存在していてもよい認識基であり、
Zは、抗体中の結合性部位において側鎖と共有結合することができる反応基である。
式Iの化合物の一部の実施形態において、t>1である場合、または−Xが、−R22−シクロアルキル−R23−、−R22−アリール−R23−もしくは−R22−ヘテロシクリル−R23−である場合、Yは存在している。
Xは、GA標的化剤を含む残基のうちの1つに結合しており、置換されていてもよい−R22−[CH2−CH2−O]t−R23−、−R22−シクロアルキル−R23−、−R22−アリール−R23−または−R22−ヘテロシクリル−R23−であり、ここで、
R22およびR23は、それぞれ独立に、共有結合、−O−、−S−、−NRb−、置換もしくは非置換の直鎖もしくは分岐鎖C1〜50アルキレン、置換もしくは非置換の直鎖もしくは分岐鎖C1〜50ヘテロアルキレン、置換もしくは非置換の直鎖もしくは分岐鎖C2〜50アルケニレン、または置換もしくは非置換のC2〜50ヘテロアルケニレンであり、
Rbは、水素、置換もしくは非置換のC1〜10アルキル、置換もしくは非置換のC3〜7シクロアルキル−C0〜6アルキル、または置換もしくは非置換のアリール−C0〜6アルキルであり、
tは、0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、32、43、44、45、46、47、48、49または50であり、
R22およびR23のサイズは、Xの主鎖長が約200個以下の原子抗体−N−となるようなものであり、
Yは、少なくとも環構造を含む存在していてもよい認識基であり、
Zは、抗体中の結合性部位において側鎖と共有結合することができる反応基である。
式Iの化合物の一部の実施形態において、t>1である場合、または−Xが、−R22−シクロアルキル−R23−、−R22−アリール−R23−もしくは−R22−ヘテロシクリル−R23−である場合、Yは存在している。
式Iの化合物の一部の実施形態において、Xは
−R22−[CH2−CH2−O]t−R23−であり、
ここで、
R22は、−(CH2)v−、−(CH2)u−C(O)−(CH2)v−、−(CH2)u−C(O)−O−(CH2)v−、−(CH2)u−C(O)−NRb−(CH2)v−、−(CH2)u−C(S)−NRb−(CH2)v−、−(CH2)u−NRb−(CH2)v−、−(CH2)u−O−(CH2)v−、−(CH2)u−S(O)0〜2−(CH2)v−、−(CH2)u−S(O)0〜2−NRb−(CH2)v−または−(CH2)u−P(O)(ORb)−O−(CH2)v−であり、
uおよびvは、それぞれ独立に、0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19または20であり、tは0から50である。
−R22−[CH2−CH2−O]t−R23−であり、
ここで、
R22は、−(CH2)v−、−(CH2)u−C(O)−(CH2)v−、−(CH2)u−C(O)−O−(CH2)v−、−(CH2)u−C(O)−NRb−(CH2)v−、−(CH2)u−C(S)−NRb−(CH2)v−、−(CH2)u−NRb−(CH2)v−、−(CH2)u−O−(CH2)v−、−(CH2)u−S(O)0〜2−(CH2)v−、−(CH2)u−S(O)0〜2−NRb−(CH2)v−または−(CH2)u−P(O)(ORb)−O−(CH2)v−であり、
uおよびvは、それぞれ独立に、0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19または20であり、tは0から50である。
R23は構造
式中、
pは、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、32、43、44または45であり、
wおよびrは、それぞれ独立に、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19または20であり、
sは、0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19または20であり、
Rbは、各出現時、独立に、水素、置換もしくは非置換のC1〜10アルキル、置換もしくは非置換のC3〜7シクロアルキル−C0〜6アルキル、または置換もしくは非置換のアリール−C0〜6アルキルであり、
t、u、w、p、v、rおよびsの値は、Xの主鎖長が約200個以下の原子抗体−N−となるようなものである。
式Iの化合物の一実施形態において、Xは式
式Iの化合物の別の実施形態において、Xは式
式Iの化合物の別の実施形態において、Xは式
式Iの化合物の別の実施形態において、Xは式
式Iの化合物の別の実施形態において、Xは式
式Iの化合物の別の実施形態において、Xは式
式Iの化合物のいくつかの実施形態において、Xは構造
式Iの化合物のいくつかの実施形態において、Xは構造
式Iの化合物のいくつかの実施形態において、Xは構造
式Iの化合物のいくつかの実施形態において、Xは構造
式Iの化合物の別の実施形態において、Xは構造
式Iの化合物の別の実施形態において、Xは構造
式Iを有する化合物[式中、Lは式−X−Y−Zを有する]において、Yの環構造は、飽和、不飽和および芳香族の炭素環、ならびに飽和、不飽和および芳香族の複素環を含む。(1つまたは複数の)環構造は、単環式、二環式または多環式であってよく、縮合または非縮合環を含み得る。その上、(1つまたは複数の)環構造は、それだけに限らないが、ハロゲン、オキソ、−OH、−CHO、−COOH、−NO2、−CN、−NH2、アミジン、グアニジン、ヒドロキシルアミン、−C(O)NH2、第二級および第三級アミド、スルホンアミド、置換または非置換のアルキル、置換または非置換のアルケニル、置換または非置換のアルキニル、オキソアルキル、オキソアルケニル、オキソアルキニル、アミノアルキル、アミノアルケニル、アミノアルキニル、スルホアルキル、スルホアルケニル、スルホアルキニル、ホスホアルキル、ホスホアルケニルならびにホスホアルキニル基を含む、当該技術分野において既知の官能基で置換されていてもよい。
式Iを有する化合物の一部の実施形態において、Yの環構造は、置換されていてもよい式
a、b、c、dおよびeは、独立に、炭素または窒素であり、
fは、炭素、窒素、酸素または硫黄であり、
Yは、十分な原子価の任意の2つの環位置においてXおよびZに独立に結合しており、
a、b、c、d、eまたはfのうちの4つ以下は、同時に窒素である。
環構造を構成する原子上に残存している任意の開放原子価(open valences)は、水素もしくは他の置換基によって、またはXおよびZとの共有結合的結合によって満たすことができる。例えば、bが炭素である場合、その原子価は、水素、ハロゲン等の置換基、Xとの共有結合的結合、またはZとの共有結合的結合によって満たすことができる。一部の実施形態において、a、b、c、dおよびeが炭素それぞれ炭素であることもあれば、a、c、dおよびfがそれぞれ炭素であることもある。その他の実施形態において、a、b、c、dまたはeのうちの少なくとも1個が窒素であることもあれば、またfが酸素または硫黄であることもある。また別の実施形態において、Yの環構造は非置換である。一実施形態において、Yはフェニルである。
式Iの化合物のいくつかの実施形態において、X−Yは構造
これらの実施形態のいくつかにおいて、vは、1、2、3、4または5であり、wは、1、2、3、4または5であり、Rbは、水素、置換もしくは非置換のC1〜10アルキル、置換もしくは非置換のC3〜7シクロアルキル−C0〜6アルキル、または置換もしくは非置換のアリール−C0〜6アルキルである。いくつかの他の実施形態において、vは、1、2または3であり、wは、1、2または3である。さらに他の実施形態において、vは1または2であり、wは1または2である。
式Iの化合物のいくつかの実施形態において、X−Yは構造
式Iの化合物のいくつかの実施形態において、X−Yは構造
式Iの化合物のいくつかの実施形態において、X−Yは構造
式Iの化合物のいくつかの実施形態において、X−Yは構造
式Iの化合物のいくつかの実施形態において、X−Yは構造
式Iの化合物のいくつかの実施形態において、X−Yは構造
式Iの化合物のいくつかの実施形態において、X−Yは構造
式Iの化合物のこれらの実施形態のいくつかにおいて、X−Yは構造
これらの実施形態のいくつかにおいて、vは、0、1、2、3、4または5であり、tは、1、2、3、4、5または6であり、wは、1、2、3、4または5であり、pは、1、2、3、4または5であり、Rbは、各出現時、独立に、水素、置換もしくは非置換のC1〜10アルキル、置換もしくは非置換のC3〜7シクロアルキル−C0〜6アルキル、または置換もしくは非置換のアリール−C0〜6アルキルである。いくつかの実施形態において、vは0であり、tは1、2、3、4、5または6であり、wは1であり、pは3である。一部の実施形態において、vは0であり、tは1、2または3であり、wは1であり、pは1または2である。
式Iの化合物のいくつかの実施形態において、X−Yは構造
これらの実施形態のいくつかにおいて、vは、0、1、2、3、4または5であり、tは、1、2、3、4、5または6であり、rは、1、2、3、4または5であり、sは、0、1、2、3、4または5であり、Rbは、水素、置換もしくは非置換のC1〜10アルキル、置換もしくは非置換のC3〜7シクロアルキル−C0〜6アルキル、または置換もしくは非置換のアリール−C0〜6アルキルである。いくつかの実施形態において、vは0であり、tは1、2、3、4、5または6であり、rは1または2であり、sは3である。一部の実施形態において、vは0であり、tは1、2または3であり、rは1であり、sは1または2である。
式Iの化合物のいくつかの実施形態において、X−Yは構造
これらの実施形態のいくつかにおいて、uは、0、1、2、3、4または5であり、vは、0、1、2、3、4または5であり、tは、1、2、3、4、5または6であり、wは、1、2、3、4または5であり、pは、1、2、3、4または5であり、Rbは、各出現時、独立に、水素、置換もしくは非置換のC1〜10アルキル、置換もしくは非置換のC3〜7シクロアルキル−C0〜6アルキル、または置換もしくは非置換のアリール−C0〜6アルキルである。いくつかの実施形態において、uは0であり、vは0であり、tは1、2、3、4、5または6であり、wは1であり、pは3である。一部の実施形態において、uは0または1であり、vは0であり、tは1または2であり、wは1であり、pは1または2である。
式Iの化合物のいくつかの実施形態において、X−Yは構造
これらの実施形態のいくつかにおいて、uは、0、1、2、3、4または5であり、vは、0、1、2、3、4または5であり、tは、1、2、3、4、5または6であり、rは、1、2、3、4または5であり、sは、0、1、2、3、4または5であり、Rbは、水素、置換もしくは非置換のC1〜10アルキル、置換もしくは非置換のC3〜7シクロアルキル−C0〜6アルキル、または置換もしくは非置換のアリール−C0〜6アルキルである。いくつかの実施形態において、uは0であり、vは0であり、tは1、2、3、4、5または6であり、rは1または2であり、sは3である。一部の実施形態において、uは0または1であり、vは0であり、tは1、2または3であり、rは1であり、sは1または2である。
式Iの化合物のいくつかの実施形態において、X−Yは構造
これらの実施形態のいくつかにおいて、uは、0、1、2、3、4または5であり、vは、0、1、2、3、4または5であり、tは、1、2、3、4、5または6であり、wは、1、2、3、4または5であり、pは、1、2、3、4または5であり、Rbは、各出現時、独立に、水素、置換もしくは非置換のC1〜10アルキル、置換もしくは非置換のC3〜7シクロアルキル−C0〜6アルキル、または置換もしくは非置換のアリール−C0〜6アルキルである。いくつかの実施形態において、uは0であり、vは0であり、tは1、2、3、4、5または6であり、wは1であり、pは3である。一部の実施形態において、uは0または1であり、vは0であり、tは1または2であり、wは1であり、pは1または2である。
式Iの化合物のいくつかの実施形態において、X−Yは構造
これらの実施形態のいくつかにおいて、uは、0、1、2、3、4または5であり、vは、0、1、2、3、4または5であり、tは、1、2、3、4、5または6であり、rは、1、2、3、4または5であり、sは、0、1、2、3、4または5であり、Rbは、水素、置換もしくは非置換のC1〜10アルキル、置換もしくは非置換のC3〜7シクロアルキル−C0〜6アルキル、または置換もしくは非置換のアリール−C0〜6アルキルである。いくつかの実施形態において、uは0であり、vは0であり、tは1、2、3、4、5または6であり、rは1または2であり、sは3である。一部の実施形態において、uは0または1であり、vは0であり、tは1、2または3であり、rは1であり、sは1または2である。
式Iの化合物のいくつかの実施形態において、X−Yは構造
これらの実施形態のいくつかにおいて、uは、0、1、2、3、4または5であり、vは、0、1、2、3、4または5であり、tは、1、2、3、4、5または6であり、wは、1、2、3、4または5であり、pは、1、2、3、4または5であり、Rbは、各出現時、独立に、水素、置換もしくは非置換のC1〜10アルキル、置換もしくは非置換のC3〜7シクロアルキル−C0〜6アルキル、または置換もしくは非置換のアリール−C0〜6アルキルである。いくつかの実施形態において、uは0であり、vは0であり、tは1、2、3、4、5または6であり、wは1であり、pは3である。一部の実施形態において、uは0または1であり、vは0であり、tは1または2であり、wは1であり、pは1または2である。
式Iの化合物のいくつかの実施形態において、X−Yは構造
これらの実施形態のいくつかにおいて、uは、0、1、2、3、4または5であり、vは、0、1、2、3、4または5であり、tは、1、2、3、4、5または6であり、rは、1、2、3、4または5であり、sは、0、1、2、3、4または5であり、Rbは、各出現時、独立に、水素、置換もしくは非置換のC1〜10アルキル、置換もしくは非置換のC3〜7シクロアルキル−C0〜6アルキル、または置換もしくは非置換のアリール−C0〜6アルキルである。いくつかの実施形態において、uは0であり、vは0であり、tは1、2、3、4、5または6であり、rは1または2であり、sは3である。一部の実施形態において、uは0または1であり、vは0であり、tは1、2または3であり、rは1であり、sは1または2である。
式Iの化合物のいくつかの実施形態において、X−Yは構造
これらの実施形態のいくつかにおいて、uは、0、1、2、3、4または5であり、vは、0、1、2、3、4または5であり、tは、1、2、3、4、5または6であり、wは、1、2、3、4または5であり、pは、1、2、3、4または5であり、Rbは、各出現時、独立に、水素、置換もしくは非置換のC1〜10アルキル、置換もしくは非置換のC3〜7シクロアルキル−C0〜6アルキル、または置換もしくは非置換のアリール−C0〜6アルキルである。いくつかの実施形態において、uは0であり、vは0であり、tは1、2、3、4、5または6であり、wは1であり、pは3である。一部の実施形態において、uは0または1であり、vは0であり、tは1または2であり、wは1であり、pは1または2である。
式Iの化合物のいくつかの実施形態において、X−Yは構造
これらの実施形態のいくつかにおいて、uは、0、1、2、3、4または5であり、vは、0、1、2、3、4または5であり、tは、1、2、3、4、5または6であり、rは、1、2、3、4または5であり、sは、0、1、2、3、4または5であり、Rbは、各出現時、独立に、水素、置換もしくは非置換のC1〜10アルキル、置換もしくは非置換のC3〜7シクロアルキル−C0〜6アルキル、または置換もしくは非置換のアリール−C0〜6アルキルである。いくつかの実施形態において、uは0であり、vは0であり、tは1、2、3、4、5または6であり、rは1または2であり、sは3である。一部の実施形態において、uは0または1であり、vは0であり、tは1、2または3であり、rは1であり、sは1または2である。
式Iの化合物のいくつかの実施形態において、X−Yは構造
これらの実施形態のいくつかにおいて、uは、0、1、2、3、4または5であり、vは、0、1、2、3、4または5であり、tは、1、2、3、4、5または6であり、wは、1、2、3、4または5であり、pは、1、2、3、4または5であり、Rbは、各出現時、独立に、水素、置換もしくは非置換のC1〜10アルキル、置換もしくは非置換のC3〜7シクロアルキル−C0〜6アルキル、または置換もしくは非置換のアリール−C0〜6アルキルである。いくつかの実施形態において、uは0であり、vは0であり、tは1、2、3、4、5または6であり、wは1であり、pは3である。一部の実施形態において、uは0または1であり、vは0であり、tは1または2であり、wは1であり、pは1または2である。
式Iの化合物のいくつかの実施形態において、X−Yは構造
これらの実施形態のいくつかにおいて、uは、0、1、2、3、4または5であり、vは、0、1、2、3、4または5であり、tは、1、2、3、4、5または6であり、rは、1、2、3、4または5であり、sは、0、1、2、3、4または5であり、Rbは、水素、置換もしくは非置換のC1〜10アルキル、置換もしくは非置換のC3〜7シクロアルキル−C0〜6アルキル、または置換もしくは非置換のアリール−C0〜6アルキルである。いくつかの実施形態において、uは0であり、vは0であり、tは1、2、3、4、5または6であり、rは1または2であり、sは3である。一部の実施形態において、uは0または1であり、vは0であり、tは1、2または3であり、rは1であり、sは1または2である。
一実施形態において、X−Yは構造
これらの実施形態のいくつかにおいて、vは、0、1、2、3、4または5であり、tは、1、2、3、4、5または6であり、rは、1、2、3、4または5であり、sは、0、1、2、3、4または5であり、Rbは、水素、置換もしくは非置換のC1〜10アルキル、置換もしくは非置換のC3〜7シクロアルキル−C0〜6アルキル、または置換もしくは非置換のアリール−C0〜6アルキルである。いくつかの実施形態において、vは0であり、tは1、2、3、4、5または6であり、rは1または2であり、sは0または1である。
式Iを有する化合物[式中、Lは式−X−Y−Zを有する]において、反応基Zは、抗体中の結合性部位においてアミノ酸との共有結合を形成することができる部分を含有する。例えば、Zは、置換アルキル、置換シクロアルキル、置換アリール、置換アリールアルキル、置換ヘテロシクリルまたは置換ヘテロシクリルアルキルであってよく、ここで、少なくとも1個の置換基は、1,3−ジケトン部分、アシルβ−ラクタム、活性エステル、α−ハロケトン、アルデヒド、マレイミド、ラクトン、無水物、α−ハロアセトアミド、アミン、ヒドラジドまたはエポキシドである。一部のそのような実施形態において、Zは置換アルキルである。
Zは、可逆的または不可逆的な共有結合を形成する基であってよい。一部の実施形態において、可逆的な共有結合は、図7に示されているもの等のジケトンZ基を使用して形成することができる。したがって、構造A〜Cは、抗体中の結合性部位において、反応性求核基(例えば、リシンまたはシステイン側鎖)と可逆的な共有結合を形成することができる。図7の構造A〜C中のR’1、R’2、R3およびR4は、C、H、N、O、P、S、ハロゲン(F、Cl、Br、I)またはその塩であってよい置換基を表す。これらの置換基は、アルキル、アルケニル、アルキニル、オキソアルキル、オキソアルケニル、オキソアルキニル、アミノアルキル、アミノアルケニル、アミノアルキニル、スルホアルキル、スルホアルケニルまたはスルホアルキニル基、ホスホアルキル、ホスホアルケニル、ホスホアルキニル基等の基を含んでもよい。R’2およびR3は、構造BおよびCに例示されている通りの環構造を形成することもできる。図7中のXは、ヘテロ原子であってよい。可逆的な共有結合を形成するその他のZ基は、アミジン、イミン、および図7の構造Gによって包含される他の反応基を含む。図8は、可逆的な共有結合を形成する他のリンカー反応基の構造、例えば、構造B、G、Hを含み、ここで、Xは、離脱基、EおよびFではない。
抗体中の結合性部位と不可逆的な共有結合を形成するZ反応基は、図7の構造D〜G(例えば、Gがイミデートである場合)ならびに図8の構造A、CおよびDを含む。Xが離脱基である場合、図8の構造EおよびFは、不可逆的な共有結合を形成することもできる。そのような構造は、抗体中の結合性部位において、反応性求核基に標的化剤−リンカーを不可逆的に結合させるために有用である。
他のそのような実施形態において、Zは1,3−ジケトン部分である。さらに他のそのような実施形態において、Zは、1,3−ジケトン部分により置換されているアルキルである。一実施形態において、Zは構造
GA標的化化合物において使用するため、およびGA標的化剤−リンカー化合物を調製するための1種のリンカーは、1,3−ジケトン反応基をZとして含む。式Iの一実施形態において、Lは構造
これらの実施形態のいくつかにおいて、vは、0、1、2、3、4または5であり、tは、1、2、3、4、5または6であり、wは、1、2、3、4または5であり、pは、1、2、3、4または5であり、qは、0、1、2、3、4または5であり、Rbは、各出現時、独立に、水素、置換もしくは非置換のC1〜10アルキル、置換もしくは非置換のC3〜7シクロアルキル−C0〜6アルキル、または置換もしくは非置換のアリール−C0〜6アルキルである。いくつかの実施形態において、vは0であり、tは1、2、3、4、5または6であり、wは1であり、pは3であり、qは0、1、2または3である。一部の実施形態において、vは0であり、tは1または2であり、wは1であり、pは1または2であり、qは1または2である。
式Iのいくつかの実施形態において、Lは構造
これらの実施形態のいくつかにおいて、vは、0、1、2、3、4または5であり、tは、1、2、3、4、5または6であり、wは、1、2、3、4または5であり、pは、1、2、3、4または5であり、qは、0、1、2または3であり、Rbは、各出現時、独立に、水素、置換もしくは非置換のC1〜10アルキル、置換もしくは非置換のC3〜7シクロアルキル−C0〜6アルキル、または置換もしくは非置換のアリール−C0〜6アルキルである。いくつかの実施形態において、vは0であり、tは1、2、3、4、5または6であり、wは1であり、pは3であり、qは0、1、2または3である。一部の実施形態において、vは0であり、tは1または2であり、wは1であり、pは1または2であり、qは2または3である。
式Iのいくつかの実施形態において、Lは構造
これらの実施形態のいくつかにおいて、vは、0、1、2、3、4または5であり、tは、1、2、3、4、5または6であり、wは、1、2、3、4または5であり、pは、1、2、3、4または5であり、qは、0、1、2、3、4または5であり、Rbは、各出現時、独立に、水素、置換もしくは非置換のC1〜10アルキル、置換もしくは非置換のC3〜7シクロアルキル−C0〜6アルキル、または置換もしくは非置換のアリール−C0〜6アルキルである。いくつかの実施形態において、vは0であり、tは1、2、3、4、5または6であり、wは1であり、pは3であり、qは0、1、2または3である。一部の実施形態において、vは0であり、tは1または2であり、wは1であり、pは1または2であり、qは1または2である。
式Iのいくつかの実施形態において、Lは構造
これらの実施形態のいくつかにおいて、vは、0、1、2、3、4または5であり、tは、1、2、3、4、5または6であり、rは、1、2、3、4または5であり、sは、0、1、2、3、4または5であり、qは、0、1、2、3、4または5であり、Rbは、水素、置換もしくは非置換のC1〜10アルキル、置換もしくは非置換のC3〜7シクロアルキル−C0〜6アルキル、または置換もしくは非置換のアリール−C0〜6アルキルである。いくつかの実施形態において、vは0であり、tは1、2、3、4、5または6であり、rは1または2であり、sは3であり、qは0、1、2または3である。一部の実施形態において、vは0であり、tは1、2または3であり、rは1であり、sは1または2であり、qは1または2である。
式Iのいくつかの実施形態において、Lは構造
これらの実施形態のいくつかにおいて、vは、0、1、2、3、4または5であり、tは、1、2、3、4、5または6であり、rは、1、2、3、4または5であり、sは、0、1、2、3、4または5であり、qは、0、1、2、3、4または5であり、Rbは、水素、置換もしくは非置換のC1〜10アルキル、置換もしくは非置換のC3〜7シクロアルキル−C0〜6アルキル、または置換もしくは非置換のアリール−C0〜6アルキルである。いくつかの実施形態において、vは0であり、tは1、2、3、4、5または6であり、rは1または2であり、sは3であり、qは0、1、2または3である。一部の実施形態において、vは0であり、tは1、2または3であり、rは1であり、sは1または2であり、qは1または2である。
式Iのいくつかの実施形態において、Lは構造
これらの実施形態のいくつかにおいて、vは、0、1、2、3、4または5であり、tは、1、2、3、4、5または6であり、rは、1、2、3、4または5であり、sは、0、1、2、3、4または5であり、qは、0、1、2または3であり、Rbは、水素、置換もしくは非置換のC1〜10アルキル、置換もしくは非置換のC3〜7シクロアルキル−C0〜6アルキル、または置換もしくは非置換のアリール−C0〜6アルキルである。いくつかの実施形態において、vは0であり、tは1、2、3、4、5または6であり、rは1または2であり、sは3であり、qは0、1、2または3である。一部の実施形態において、vは0であり、tは1、2または3であり、rは1であり、sは1または2であり、qは2または3である。
式Iのいくつかの実施形態において、Lは構造
これらの実施形態のいくつかにおいて、uは、0、1、2、3、4または5であり、vは、0、1、2、3、4または5であり、tは、1、2、3、4、5または6であり、wは、1、2、3、4または5であり、pは、1、2、3、4または5であり、qは、0、1、2、3、4または5であり、Rbは、各出現時、独立に、水素、置換もしくは非置換のC1〜10アルキル、置換もしくは非置換のC3〜7シクロアルキル−C0〜6アルキル、または置換もしくは非置換のアリール−C0〜6アルキルである。いくつかの実施形態において、uは0であり、vは0であり、tは1、2、3、4、5または6であり、wは1であり、pは3であり、qは0、1、2または3である。一部の実施形態において、uは0または1であり、vは0であり、tは1または2であり、wは1であり、pは1または2であり、qは1または2である。
式Iのいくつかの実施形態において、Lは構造
これらの実施形態のいくつかにおいて、uは、0、1、2、3、4または5であり、vは、0、1、2、3、4または5であり、tは、1、2、3、4、5または6であり、wは、1、2、3、4または5であり、pは、1、2、3、4または5であり、qは、0、1、2、3、4または5であり、Rbは、各出現時、独立に、水素、置換もしくは非置換のC1〜10アルキル、置換もしくは非置換のC3〜7シクロアルキル−C0〜6アルキル、または置換もしくは非置換のアリール−C0〜6アルキルである。いくつかの実施形態において、uは0であり、vは0であり、tは1、2、3、4、5または6であり、wは1であり、pは3であり、qは0、1、2または3である。一部の実施形態において、vは0であり、tは1または2であり、wは1であり、pは1または2であり、qは1または2である。
式Iのいくつかの実施形態において、Lは構造
これらの実施形態のいくつかにおいて、uは、0、1、2、3、4または5であり、vは、0、1、2、3、4または5であり、tは、1、2、3、4、5または6であり、wは、1、2、3、4または5であり、pは、1、2、3、4または5であり、qは、0、1、2または3であり、Rbは、各出現時、独立に、水素、置換もしくは非置換のC1〜10アルキル、置換もしくは非置換のC3〜7シクロアルキル−C0〜6アルキル、または置換もしくは非置換のアリール−C0〜6アルキルである。いくつかの実施形態において、uは0であり、vは0であり、tは1、2、3、4、5または6であり、wは1であり、pは3であり、qは0、1、2または3である。一部の実施形態において、vは0であり、tは1または2であり、wは1であり、pは1または2であり、qは2または3である。
式Iのいくつかの実施形態において、Lは構造
これらの実施形態のいくつかにおいて、uは、0、1、2、3、5または5であり、vは、0、1、2、3、4または5であり、tは、1、2、3、4、5または6であり、rは、1、2、3、4または5であり、sは、0、1、2、3、4または5であり、qは、0、1、2、3、4または5であり、Rbは、水素、置換もしくは非置換のC1〜10アルキル、置換もしくは非置換のC3〜7シクロアルキル−C0〜6アルキル、または置換もしくは非置換のアリール−C0〜6アルキルである。いくつかの実施形態において、uは0であり、vは0であり、tは1、2、3、4、5または6であり、rは1または2であり、sは3であり、qは0、1、2または3である。一部の実施形態において、uは0または1であり、vは0であり、tは1または2であり、wは1であり、pは1または2であり、qは1または2である。
式Iのいくつかの実施形態において、Lは構造
これらの実施形態のいくつかにおいて、uは、0、1、2、3、5または5であり、vは、0、1、2、3、4または5であり、tは、1、2、3、4、5または6であり、rは、1、2、3、4または5であり、sは、0、1、2、3、4または5であり、qは、0、1、2、3、4または5であり、Rbは、水素、置換もしくは非置換のC1〜10アルキル、置換もしくは非置換のC3〜7シクロアルキル−C0〜6アルキル、または置換もしくは非置換のアリール−C0〜6アルキルである。いくつかの実施形態において、uは0であり、vは0であり、tは1、2、3、4、5または6であり、rは1または2であり、sは3であり、qは0、1、2または3である。一部の実施形態において、uは0または1であり、vは0であり、tは1、2または3であり、rは1であり、sは1または2であり、qは1または2である。
式Iのいくつかの実施形態において、Lは構造
これらの実施形態のいくつかにおいて、uは、0、1、2、3、5または5であり、vは、0、1、2、3、4または5であり、tは、1、2、3、4、5または6であり、rは、1、2、3、4または5であり、sは、0、1、2、3、4または5であり、qは、0、1、2または3であり、Rbは、水素、置換もしくは非置換のC1〜10アルキル、置換もしくは非置換のC3〜7シクロアルキル−C0〜6アルキル、または置換もしくは非置換のアリール−C0〜6アルキルである。いくつかの実施形態において、uは0であり、vは0であり、tは1、2、3、4、5または6であり、rは1または2であり、sは3であり、qは0、1、2または3である。一部の実施形態において、uは0または1であり、vは0であり、tは1、2または3であり、rは1であり、sは1または2であり、qは2または3である。
式Iのいくつかの実施形態において、Lは構造
これらの実施形態のいくつかにおいて、uは、0、1、2、3、4または5であり、vは、0、1、2、3、4または5であり、tは、1、2、3、4、5または6であり、wは、1、2、3、4または5であり、pは、1、2、3、4または5であり、qは、0、1、2、3、4または5であり、Rbは、各出現時、独立に、水素、置換もしくは非置換のC1〜10アルキル、置換もしくは非置換のC3〜7シクロアルキル−C0〜6アルキル、または置換もしくは非置換のアリール−C0〜6アルキルである。いくつかの実施形態において、uは0であり、vは0であり、tは1、2、3、4、5または6であり、wは1であり、pは3であり、qは0、1、2または3である。一部の実施形態において、uは0または1であり、vは0であり、tは1または2であり、wは1であり、pは1または2であり、qは1または2である。
式Iのいくつかの実施形態において、Lは構造
これらの実施形態のいくつかにおいて、uは、0、1、2、3、4または5であり、vは、0、1、2、3、4または5であり、tは、1、2、3、4、5または6であり、wは、1、2、3、4または5であり、pは、1、2、3、4または5であり、qは、0、1、2、3、4または5であり、Rbは、各出現時、独立に、水素、置換もしくは非置換のC1〜10アルキル、置換もしくは非置換のC3〜7シクロアルキル−C0〜6アルキル、または置換もしくは非置換のアリール−C0〜6アルキルである。いくつかの実施形態において、uは0であり、vは0であり、tは1、2、3、4、5または6であり、wは1であり、pは3であり、qは0、1、2または3である。一部の実施形態において、uは0または1であり、vは0であり、tは1または2であり、wは1であり、pは1または2であり、qは1または2である。
式Iのいくつかの実施形態において、Lは構造
これらの実施形態のいくつかにおいて、uは、0、1、2、3、4または5であり、vは、0、1、2、3、4または5であり、tは、1、2、3、4、5または6であり、wは、1、2、3、4または5であり、pは、1、2、3、4または5であり、qは、0、1、2または3であり、Rbは、各出現時、独立に、水素、置換もしくは非置換のC1〜10アルキル、置換もしくは非置換のC3〜7シクロアルキル−C0〜6アルキル、または置換もしくは非置換のアリール−C0〜6アルキルである。いくつかの実施形態において、uは0であり、vは0であり、tは1、2、3、4、5または6であり、wは1であり、pは3であり、qは0、1、2または3である。一部の実施形態において、uは0または1であり、vは0であり、tは1または2であり、wは1であり、pは1または2であり、qは2または3である。
式Iのいくつかの実施形態において、Lは構造
これらの実施形態のいくつかにおいて、uは、0、1、2、3、5または5であり、vは、0、1、2、3、4または5であり、tは、1、2、3、4、5または6であり、rは、1、2、3、4または5であり、sは、0、1、2、3、4または5であり、qは、0、1、2、3、4または5であり、Rbは、水素、置換もしくは非置換のC1〜10アルキル、置換もしくは非置換のC3〜7シクロアルキル−C0〜6アルキル、または置換もしくは非置換のアリール−C0〜6アルキルである。いくつかの実施形態において、uは0であり、vは0であり、tは1、2、3、4、5または6であり、rは1または2であり、sは3であり、qは0、1、2または3である。一部の実施形態において、uは0または1であり、vは0であり、tは1、2または3であり、rは1であり、sは1または2であり、qは1または2である。
式Iのいくつかの実施形態において、Lは構造
これらの実施形態のいくつかにおいて、uは、0、1、2、3、5または5であり、vは、0、1、2、3、4または5であり、tは、1、2、3、4、5または6であり、rは、1、2、3、4または5であり、sは、0、1、2、3、4または5であり、qは、0、1、2、3、4または5であり、Rbは、水素、置換もしくは非置換のC1〜10アルキル、置換もしくは非置換のC3〜7シクロアルキル−C0〜6アルキル、または置換もしくは非置換のアリール−C0〜6アルキルである。いくつかの実施形態において、uは0であり、vは0であり、tは1、2、3、4、5または6であり、rは1または2であり、sは3であり、qは0、1、2または3である。一部の実施形態において、uは0または1であり、vは0であり、tは1、2または3であり、rは1であり、sは1または2であり、qは1または2である。
式Iのいくつかの実施形態において、Lは構造
これらの実施形態のいくつかにおいて、uは、0、1、2、3、5または5であり、vは、0、1、2、3、4または5であり、tは、1、2、3、4、5または6であり、rは、1、2、3、4または5であり、sは、0、1、2、3、4または5であり、qは、0、1、2または3であり、Rbは、水素、置換もしくは非置換のC1〜10アルキル、置換もしくは非置換のC3〜7シクロアルキル−C0〜6アルキル、または置換もしくは非置換のアリール−C0〜6アルキルである。いくつかの実施形態において、uは0であり、vは0であり、tは1、2、3、4、5または6であり、rは1または2であり、sは3であり、qは0、1、2または3である。一部の実施形態において、uは0または1であり、vは0であり、tは1、2または3であり、rは1であり、sは1または2であり、qは2または3である。
式Iのいくつかの実施形態において、Lは構造
これらの実施形態のいくつかにおいて、uは、0、1、2、3、4または5であり、vは、0、1、2、3、4または5であり、tは、1、2、3、4、5または6であり、wは、1、2、3、4または5であり、pは、1、2、3、4または5であり、qは、0、1、2、3、4または5であり、Rbは、各出現時、独立に、水素、置換もしくは非置換のC1〜10アルキル、置換もしくは非置換のC3〜7シクロアルキル−C0〜6アルキル、または置換もしくは非置換のアリール−C0〜6アルキルである。いくつかの実施形態において、uは0であり、vは0であり、tは1、2、3、4、5または6であり、wは1であり、pは3であり、qは0、1、2または3である。一部の実施形態において、uは0または1であり、vは0であり、tは1または2であり、wは1であり、pは1または2であり、qは1または2である。
式Iのいくつかの実施形態において、Lは構造
これらの実施形態のいくつかにおいて、uは、0、1、2、3、4または5であり、vは、0、1、2、3、4または5であり、tは、1、2、3、4、5または6であり、wは、1、2、3、4または5であり、pは、1、2、3、4または5であり、qは、0、1、2、3、4または5であり、Rbは、各出現時、独立に、水素、置換もしくは非置換のC1〜10アルキル、置換もしくは非置換のC3〜7シクロアルキル−C0〜6アルキル、または置換もしくは非置換のアリール−C0〜6アルキルである。いくつかの実施形態において、uは0であり、vは0であり、tは1、2、3、4、5または6であり、wは1であり、pは3であり、qは0、1、2または3である。一部の実施形態において、uは0または1であり、vは0であり、tは1または2であり、wは1であり、pは1または2であり、qは1または2である。
式Iのいくつかの実施形態において、Lは構造
これらの実施形態のいくつかにおいて、uは、0、1、2、3、4または5であり、vは、0、1、2、3、4または5であり、tは、1、2、3、4、5または6であり、wは、1、2、3、4または5であり、pは、1、2、3、4または5であり、qは、0、1、2または3であり、Rbは、各出現時、独立に、水素、置換もしくは非置換のC1〜10アルキル、置換もしくは非置換のC3〜7シクロアルキル−C0〜6アルキル、または置換もしくは非置換のアリール−C0〜6アルキルである。いくつかの実施形態において、uは0であり、vは0であり、tは1、2、3、4、5または6であり、wは1であり、pは3であり、qは0、1、2または3である。一部の実施形態において、uは0または1であり、vは0であり、tは1または2であり、wは1であり、pは1または2であり、qは2または3である。
式Iのいくつかの実施形態において、Lは構造
これらの実施形態のいくつかにおいて、uは、0、1、2、3、5または5であり、vは、0、1、2、3、4または5であり、tは、1、2、3、4、5または6であり、rは、1、2、3、4または5であり、sは、0、1、2、3、4または5であり、qは、0、1、2、3、4または5であり、Rbは、各出現時、独立に、水素、置換もしくは非置換のC1〜10アルキル、置換もしくは非置換のC3〜7シクロアルキル−C0〜6アルキル、または置換もしくは非置換のアリール−C0〜6アルキルである。いくつかの実施形態において、uは0であり、vは0であり、tは1、2、3、4、5または6であり、rは1または2であり、sは3であり、qは0、1、2または3である。一部の実施形態において、uは0または1であり、vは0であり、tは1、2または3であり、rは1であり、sは1または2であり、qは1または2である。
式Iのいくつかの実施形態において、Lは構造
これらの実施形態のいくつかにおいて、uは、0、1、2、3、5または5であり、vは、0、1、2、3、4または5であり、tは、1、2、3、4、5または6であり、rは、1、2、3、4または5であり、sは、0、1、2、3、4または5であり、qは、0、1、2、3、4または5であり、Rbは、各出現時、独立に、水素、置換もしくは非置換のC1〜10アルキル、置換もしくは非置換のC3〜7シクロアルキル−C0〜6アルキル、または置換もしくは非置換のアリール−C0〜6アルキルである。いくつかの実施形態において、uは0であり、vは0であり、tは1、2、3、4、5または6であり、rは1または2であり、sは3であり、qは0、1、2または3である。一部の実施形態において、uは0または1であり、vは0であり、tは1、2または3であり、rは1であり、sは1または2であり、qは1または2である。
式Iのいくつかの実施形態において、Lは構造
これらの実施形態のいくつかにおいて、uは、0、1、2、3、5または5であり、vは、0、1、2、3、4または5であり、tは、1、2、3、4、5または6であり、rは、1、2、3、4または5であり、sは、0、1、2、3、4または5であり、qは、0、1、2または3であり、Rbは、各出現時、独立に、水素、置換もしくは非置換のC1〜10アルキル、置換もしくは非置換のC3〜7シクロアルキル−C0〜6アルキル、または置換もしくは非置換のアリール−C0〜6アルキルである。いくつかの実施形態において、uは0であり、vは0であり、tは1、2、3、4、5または6であり、rは1または2であり、sは3であり、qは0、1、2または3である。一部の実施形態において、uは0または1であり、vは0であり、tは1、2または3であり、rは1であり、sは1または2であり、qは2または3である。
式Iのいくつかの実施形態において、Lは構造
これらの実施形態のいくつかにおいて、uは、0、1、2、3、4または5であり、vは、0、1、2、3、4または5であり、tは、1、2、3、4、5または6であり、wは、1、2、3、4または5であり、pは、1、2、3、4または5であり、qは、0、1、2、3、4または5であり、Rbは、各出現時、独立に、水素、置換もしくは非置換のC1〜10アルキル、置換もしくは非置換のC3〜7シクロアルキル−C0〜6アルキル、または置換もしくは非置換のアリール−C0〜6アルキルである。いくつかの実施形態において、uは0であり、vは0であり、tは1、2、3、4、5または6であり、wは1であり、pは3であり、qは0、1、2または3である。さらに一部の実施形態において、uは0または1であり、vは0であり、tは1または2であり、wは1であり、pは1または2であり、qは1または2である。
式Iのいくつかの実施形態において、Lは構造
これらの実施形態のいくつかにおいて、uは、0、1、2、3、4または5であり、vは、0、1、2、3、4または5であり、tは、1、2、3、4、5または6であり、wは、1、2、3、4または5であり、pは、1、2、3、4または5であり、qは、0、1、2、3、4または5であり、Rbは、各出現時、独立に、水素、置換もしくは非置換のC1〜10アルキル、置換もしくは非置換のC3〜7シクロアルキル−C0〜6アルキル、または置換もしくは非置換のアリール−C0〜6アルキルである。いくつかの実施形態において、uは0であり、vは0であり、tは1、2、3、4、5または6であり、wは1であり、pは3であり、qは0、1、2または3である。一部の実施形態において、uは0または1であり、vは0であり、tは1または2であり、wは1であり、pは1または2であり、qは1または2である。
式Iのいくつかの実施形態において、Lは構造
これらの実施形態のいくつかにおいて、uは、0、1、2、3、4または5であり、vは、0、1、2、3、4または5であり、tは、1、2、3、4、5または6であり、wは、1、2、3、4または5であり、pは、1、2、3、4または5であり、qは、0、1、2または3であり、Rbは、各出現時、独立に、水素、置換もしくは非置換のC1〜10アルキル、置換もしくは非置換のC3〜7シクロアルキル−C0〜6アルキル、または置換もしくは非置換のアリール−C0〜6アルキルである。いくつかの実施形態において、uは0であり、vは0であり、tは1、2、3、4、5または6であり、wは1であり、pは3であり、qは0、1、2または3である。一部の実施形態において、uは0または1であり、vは0であり、tは1または2であり、wは1であり、pは1または2であり、qは2または3である。
式Iのいくつかの実施形態において、Lは構造
これらの実施形態のいくつかにおいて、uは、0、1、2、3、5または5であり、vは、0、1、2、3、4または5であり、tは、1、2、3、4、5または6であり、rは、1、2、3、4または5であり、sは、0、1、2、3、4または5であり、qは、0、1、2、3、4または5であり、Rbは、各出現時、独立に、水素、置換もしくは非置換のC1〜10アルキル、置換もしくは非置換のC3〜7シクロアルキル−C0〜6アルキル、または置換もしくは非置換のアリール−C0〜6アルキルである。いくつかの実施形態において、uは0であり、vは0であり、tは1、2、3、4、5または6であり、rは1または2であり、sは3であり、qは0、1、2または3である。一部の実施形態において、uは0または1であり、vは0であり、tは1、2または3であり、rは1であり、sは1または2であり、qは1または2である。
式Iのいくつかの実施形態において、Lは構造
これらの実施形態のいくつかにおいて、uは、0、1、2、3、5または5であり、vは、0、1、2、3、4または5であり、tは、1、2、3、4、5または6であり、rは、1、2、3、4または5であり、sは、0、1、2、3、4または5であり、qは、0、1、2、3、4または5であり、Rbは、各出現時、独立に、水素、置換もしくは非置換のC1〜10アルキル、置換もしくは非置換のC3〜7シクロアルキル−C0〜6アルキル、または置換もしくは非置換のアリール−C0〜6アルキルである。いくつかの実施形態において、uは0であり、vは0であり、tは1、2、3、4、5または6であり、rは1または2であり、sは3であり、qは0、1、2または3である。一部の実施形態において、uは0または1であり、vは0であり、tは1、2または3であり、rは1であり、sは1または2であり、qは1または2である。
式Iのいくつかの実施形態において、Lは構造
これらの実施形態のいくつかにおいて、uは、0、1、2、3、5または5であり、vは、0、1、2、3、4または5であり、tは、1、2、3、4、5または6であり、rは、1、2、3、4または5であり、sは、0、1、2、3、4または5であり、qは、0、1、2または3であり、Rbは、各出現時、独立に、水素、置換もしくは非置換のC1〜10アルキル、置換もしくは非置換のC3〜7シクロアルキル−C0〜6アルキル、または置換もしくは非置換のアリール−C0〜6アルキルである。いくつかの実施形態において、uは0であり、vは0であり、tは1、2、3、4、5または6であり、rは1または2であり、sは3であり、qは0、1、2または3である。一部の実施形態において、uは0または1であり、vは0であり、tは1、2または3であり、rは1であり、sは1または2であり、qは2または3である。
式Iのいくつかの実施形態において、Lは構造
これらの実施形態のいくつかにおいて、uは、0、1、2、3、4または5であり、vは、0、1、2、3、4または5であり、tは、1、2、3、4、5または6であり、wは、1、2、3、4または5であり、pは、1、2、3、4または5であり、qは、0、1、2、3、4または5であり、Rbは、各出現時、独立に、水素、置換もしくは非置換のC1〜10アルキル、置換もしくは非置換のC3〜7シクロアルキル−C0〜6アルキル、または置換もしくは非置換のアリール−C0〜6アルキルである。いくつかの実施形態において、uは0であり、vは0であり、tは1、2、3、4、5または6であり、wは1であり、pは3であり、qは0、1、2または3である。さらに他の実施形態において、uは0または1であり、vは0であり、tは1または2であり、wは1であり、pは1または2であり、qは1または2である。
式Iのいくつかの実施形態において、Lは構造
これらの実施形態のいくつかにおいて、uは、0、1、2、3、4または5であり、vは、0、1、2、3、4または5であり、tは、1、2、3、4、5または6であり、wは、1、2、3、4または5であり、pは、1、2、3、4または5であり、qは、0、1、2、3、4または5であり、Rbは、各出現時、独立に、水素、置換もしくは非置換のC1〜10アルキル、置換もしくは非置換のC3〜7シクロアルキル−C0〜6アルキル、または置換もしくは非置換のアリール−C0〜6アルキルである。いくつかの実施形態において、uは0であり、vは0であり、tは1、2、3、4、5または6であり、wは1であり、pは3であり、qは0、1、2または3である。一部の実施形態において、uは0または1であり、vは0であり、tは1または2であり、wは1であり、pは1または2であり、qは1または2である。
式Iのいくつかの実施形態において、Lは構造
これらの実施形態のいくつかにおいて、uは、0、1、2、3、4または5であり、vは、0、1、2、3、4または5であり、tは、1、2、3、4、5または6であり、wは、1、2、3、4または5であり、pは、1、2、3、4または5であり、qは、0、1、2または3であり、Rbは、各出現時、独立に、水素、置換もしくは非置換のC1〜10アルキル、置換もしくは非置換のC3〜7シクロアルキル−C0〜6アルキル、または置換もしくは非置換のアリール−C0〜6アルキルである。いくつかの実施形態において、uは0であり、vは0であり、tは1、2、3、4、5または6であり、wは1であり、pは3であり、qは0、1、2または3である。一部の実施形態において、uは0または1であり、vは0であり、tは1または2であり、wは1であり、pは1または2であり、qは2または3である。
式Iのいくつかの実施形態において、Lは構造
これらの実施形態のいくつかにおいて、uは、0、1、2、3、5または5であり、vは、0、1、2、3、4または5であり、tは、1、2、3、4、5または6であり、rは、1、2、3、4または5であり、sは、0、1、2、3、4または5であり、qは、0、1、2、3、4または5であり、Rbは、水素、置換もしくは非置換のC1〜10アルキル、置換もしくは非置換のC3〜7シクロアルキル−C0〜6アルキル、または置換もしくは非置換のアリール−C0〜6アルキルである。いくつかの実施形態において、uは0であり、vは0であり、tは1、2、3、4、5または6であり、rは1または2であり、sは3であり、qは0、1、2または3である。一部の実施形態において、uは0または1であり、vは0であり、tは1、2または3であり、rは1であり、sは1または2であり、qは1または2である。
式Iのいくつかの実施形態において、Lは構造
これらの実施形態のいくつかにおいて、uは、0、1、2、3、5または5であり、vは、0、1、2、3、4または5であり、tは、1、2、3、4、5または6であり、rは、1、2、3、4または5であり、sは、0、1、2、3、4または5であり、qは、0、1、2、3、4または5であり、Rbは、水素、置換もしくは非置換のC1〜10アルキル、置換もしくは非置換のC3〜7シクロアルキル−C0〜6アルキル、または置換もしくは非置換のアリール−C0〜6アルキルである。いくつかの実施形態において、uは0であり、vは0であり、tは1、2、3、4、5または6であり、rは1または2であり、sは3であり、qは0、1、2または3である。一部の実施形態において、uは0または1であり、vは0であり、tは1、2または3であり、rは1であり、sは1または2であり、qは1または2である。
式Iのいくつかの実施形態において、Lは構造
これらの実施形態のいくつかにおいて、uは、0、1、2、3、5または5であり、vは、0、1、2、3、4または5であり、tは、1、2、3、4、5または6であり、rは、1、2、3、4または5であり、sは、0、1、2、3、4または5であり、qは、0、1、2または3であり、Rbは、水素、置換もしくは非置換のC1〜10アルキル、置換もしくは非置換のC3〜7シクロアルキル−C0〜6アルキル、または置換もしくは非置換のアリール−C0〜6アルキルである。いくつかの実施形態において、uは0であり、vは0であり、tは1、2、3、4、5または6であり、rは1または2であり、sは3であり、qは0、1、2または3である。一部の実施形態において、uは0または1であり、vは0であり、tは1、2または3であり、rは1であり、sは1または2であり、qは2または3である。
式Iのいくつかの実施形態において、Lは構造
これらの実施形態のいくつかにおいて、vは、0、1、2、3、4または5であり、tは、1、2、3、4、5または6であり、rは、1、2、3、4または5であり、sは、0、1、2、3、4または5であり、qは、0、1、2、3、4または5であり、Rbは、水素、置換もしくは非置換のC1〜10アルキル、置換もしくは非置換のC3〜7シクロアルキル−C0〜6アルキル、または置換もしくは非置換のアリール−C0〜6アルキルである。いくつかの実施形態において、vは0であり、tは1、2、3、4、5または6であり、rは1または2であり、sは0であり、qは0、1、2または3である。一部の実施形態において、vは0であり、tは1、2または3であり、rは1または2であり、sは0であり、qは1または2である。
式Iのいくつかの実施形態において、Lは構造
これらの実施形態のいくつかにおいて、vは、0、1、2、3、4または5であり、tは、1、2、3、4、5または6であり、rは、1、2、3、4または5であり、sは、0、1、2、3、4または5であり、qは、0、1、2、3、4または5であり、Rbは、水素、置換もしくは非置換のC1〜10アルキル、置換もしくは非置換のC3〜7シクロアルキル−C0〜6アルキル、または置換もしくは非置換のアリール−C0〜6アルキルである。いくつかの実施形態において、vは0であり、tは1、2、3、4、5または6であり、rは1または2であり、sは0であり、qは0、1、2または3である。一部の実施形態において、vは0であり、tは1、2または3であり、rは1または2であり、sは0であり、qは1または2である。
式Iのいくつかの実施形態において、Lは構造
これらの実施形態のいくつかにおいて、vは、0、1、2、3、4または5であり、tは、1、2、3、4、5または6であり、rは、1、2、3、4または5であり、sは、0、1、2、3、4または5であり、qは、0、1、2、3、4または5であり、Rbは、水素、置換もしくは非置換のC1〜10アルキル、置換もしくは非置換のC3〜7シクロアルキル−C0〜6アルキル、または置換もしくは非置換のアリール−C0〜6アルキルである。いくつかの実施形態において、vは0であり、tは1、2、3、4、5または6であり、rは1または2であり、sは0であり、qは0、1、2または3である。一部の実施形態において、vは0であり、tは1、2または3であり、rは1または2であり、sは0であり、qは1または2である。
式Iに従ういくつかの実施形態は、構造
これらの実施形態のいくつかにおいて、vは、0、1、2、3、4または5であり、tは、1、2、3、4、5または6であり、wは、1、2、3、4または5であり、pは、1、2、3、4または5であり、qは、0、1、2、3、4または5であり、Rbは、各出現時、独立に、水素、置換もしくは非置換のC1〜10アルキル、置換もしくは非置換のC3〜7シクロアルキル−C0〜6アルキル、または置換もしくは非置換のアリール−C0〜6アルキルである。いくつかの実施形態において、vは0であり、tは1、2、3、4、5または6であり、wは1であり、pは3であり、qは0、1、2または3である。一部の実施形態において、vは0であり、tは1または2であり、wは1であり、pは1または2であり、qは1または2である。
式Iに従ういくつかの実施形態は、構造
これらの実施形態のいくつかにおいて、vは、0、1、2、3、4または5であり、tは、1、2、3、4、5または6であり、wは、1、2、3、4または5であり、pは、1、2、3、4または5であり、qは、0、1、2、3、4または5であり、Rbは、各出現時、独立に、水素、置換もしくは非置換のC1〜10アルキル、置換もしくは非置換のC3〜7シクロアルキル−C0〜6アルキル、または置換もしくは非置換のアリール−C0〜6アルキルである。いくつかの実施形態において、vは0であり、tは1、2、3、4、5または6であり、wは1であり、pは3であり、qは0、1、2または3である。一部の実施形態において、vは0であり、tは1または2であり、wは1であり、pは1または2であり、qは1または2である。
式Iに従ういくつかの実施形態は、構造
これらの実施形態のいくつかにおいて、vは、0、1、2、3、4または5であり、tは、1、2、3、4、5または6であり、wは、1、2、3、4または5であり、pは、1、2、3、4または5であり、qは、0、1、2または3であり、Rbは、各出現時、独立に、水素、置換もしくは非置換のC1〜10アルキル、置換もしくは非置換のC3〜7シクロアルキル−C0〜6アルキル、または置換もしくは非置換のアリール−C0〜6アルキルである。いくつかの実施形態において、vは0であり、tは1、2、3、4、5または6であり、wは1であり、pは3であり、qは0、1、2または3である。一部の実施形態において、vは0であり、tは1または2であり、wは1であり、pは1または2であり、qは2または3である。
式Iに従ういくつかの実施形態は、構造
これらの実施形態のいくつかにおいて、vは、0、1、2、3、4または5であり、tは、1、2、3、4、5または6であり、rは、1、2、3、4または5であり、sは、0、1、2、3、4または5であり、qは、0、1、2、3、4または5であり、Rbは、各出現時、独立に、水素、置換もしくは非置換のC1〜10アルキル、置換もしくは非置換のC3〜7シクロアルキル−C0〜6アルキル、または置換もしくは非置換のアリール−C0〜6アルキルである。いくつかの実施形態において、vは0であり、tは1、2、3、4、5または6であり、rは1または2であり、sは3であり、qは0、1、2または3である。一部の実施形態において、vは0であり、tは1、2または3であり、rは1であり、sは1または2であり、qは1または2である。
式Iに従ういくつかの実施形態は、構造
これらの実施形態のいくつかにおいて、vは、0、1、2、3、4または5であり、tは、1、2、3、4、5または6であり、rは、1、2、3、4または5であり、sは、0、1、2、3、4または5であり、qは、0、1、2、3、4または5であり、Rbは、各出現時、独立に、水素、置換もしくは非置換のC1〜10アルキル、置換もしくは非置換のC3〜7シクロアルキル−C0〜6アルキル、または置換もしくは非置換のアリール−C0〜6アルキルである。いくつかの実施形態において、vは0であり、tは1、2、3、4、5または6であり、rは1または2であり、sは3であり、qは0、1、2または3である。一部の実施形態において、vは0であり、tは1、2または3であり、rは1であり、sは1または2であり、qは1または2である。
式Iに従ういくつかの実施形態は、構造
これらの実施形態のいくつかにおいて、vは、0、1、2、3、4または5であり、tは、1、2、3、4、5または6であり、rは、1、2、3、4または5であり、sは、0、1、2、3、4または5であり、qは、0、1、2または3であり、Rbは、各出現時、独立に、水素、置換もしくは非置換のC1〜10アルキル、置換もしくは非置換のC3〜7シクロアルキル−C0〜6アルキル、または置換もしくは非置換のアリール−C0〜6アルキルである。いくつかの実施形態において、vは0であり、tは1、2、3、4、5または6であり、rは1または2であり、sは3であり、qは0、1、2または3である。一部の実施形態において、vは0であり、tは1、2または3であり、rは1であり、sは1または2であり、qは2または3である。
式Iに従ういくつかの実施形態は、構造
これらの実施形態のいくつかにおいて、vは、0、1、2、3、4または5であり、tは、1、2、3、4、5または6であり、wは、1、2、3、4または5であり、pは、1、2、3、4または5であり、qは、0、1、2、3、4または5であり、Rbは、各出現時、独立に、水素、置換もしくは非置換のC1〜10アルキル、置換もしくは非置換のC3〜7シクロアルキル−C0〜6アルキル、または置換もしくは非置換のアリール−C0〜6アルキルである。いくつかの実施形態において、vは0であり、tは1、2、3、4、5または6であり、wは1であり、pは3であり、qは0、1、2または3である。一部の実施形態において、vは0であり、tは1または2であり、wは1であり、pは1または2であり、qは1または2である。
式Iに従ういくつかの実施形態は、構造
これらの実施形態のいくつかにおいて、vは、0、1、2、3、4または5であり、tは、1、2、3、4、5または6であり、wは、1、2、3、4または5であり、pは、1、2、3、4または5であり、qは、0、1、2、3、4または5であり、Rbは、各出現時、独立に、水素、置換もしくは非置換のC1〜10アルキル、置換もしくは非置換のC3〜7シクロアルキル−C0〜6アルキル、または置換もしくは非置換のアリール−C0〜6アルキルである。いくつかの実施形態において、vは0であり、tは1、2、3、4、5または6であり、wは1であり、pは3であり、qは0、1、2または3である。一部の実施形態において、vは0であり、tは1または2であり、wは1であり、pは1または2であり、qは1または2である。
式Iに従ういくつかの実施形態は、構造
これらの実施形態のいくつかにおいて、vは、0、1、2、3、4または5であり、tは、1、2、3、4、5または6であり、wは、1、2、3、4または5であり、pは、1、2、3、4または5であり、qは、0、1、2または3であり、Rbは、各出現時、独立に、水素、置換もしくは非置換のC1〜10アルキル、置換もしくは非置換のC3〜7シクロアルキル−C0〜6アルキル、または置換もしくは非置換のアリール−C0〜6アルキルである。いくつかの実施形態において、vは0であり、tは1、2、3、4、5または6であり、wは1であり、pは3であり、qは0、1、2または3である。一部の実施形態において、vは0であり、tは1または2であり、wは1であり、pは1または2であり、qは2または3である。
式Iに従ういくつかの実施形態は、構造
これらの実施形態のいくつかにおいて、vは、0、1、2、3、4または5であり、tは、1、2、3、4、5または6であり、rは、1、2、3、4または5であり、sは、0、1、2、3、4または5であり、qは、0、1、2、3、4または5であり、Rbは、水素、置換もしくは非置換のC1〜10アルキル、置換もしくは非置換のC3〜7シクロアルキル−C0〜6アルキル、または置換もしくは非置換のアリール−C0〜6アルキルである。いくつかの実施形態において、vは0であり、tは1、2、3、4、5または6であり、rは1または2であり、sは3であり、qは0、1、2または3である。一部の実施形態において、vは0であり、tは1、2または3であり、rは1であり、sは1または2であり、qは1または2である。
式Iに従ういくつかの実施形態は、構造
これらの実施形態のいくつかにおいて、vは、0、1、2、3、4または5であり、tは、1、2、3、4、5または6であり、rは、1、2、3、4または5であり、sは、0、1、2、3、4または5であり、qは、0、1、2、3、4または5であり、Rbは、水素、置換もしくは非置換のC1〜10アルキル、置換もしくは非置換のC3〜7シクロアルキル−C0〜6アルキル、または置換もしくは非置換のアリール−C0〜6アルキルである。いくつかの実施形態において、vは0であり、tは1、2、3、4、5または6であり、rは1または2であり、sは3であり、qは0、1、2または3である。一部の実施形態において、vは0であり、tは1、2または3であり、rは1であり、sは1または2であり、qは1または2である。
式Iに従ういくつかの実施形態は、構造
これらの実施形態のいくつかにおいて、vは、0、1、2、3、4または5であり、tは、1、2、3、4、5または6であり、rは、1、2、3、4または5であり、sは、0、1、2、3、4または5であり、qは、0、1、2または3であり、Rbは、水素、置換もしくは非置換のC1〜10アルキル、置換もしくは非置換のC3〜7シクロアルキル−C0〜6アルキル、または置換もしくは非置換のアリール−C0〜6アルキルである。いくつかの実施形態において、vは0であり、tは1、2、3、4、5または6であり、rは1または2であり、sは3であり、qは0、1、2または3である。一部の実施形態において、vは0であり、tは1、2または3であり、rは1であり、sは1または2であり、qは2または3である。
式Iに従う別の実施形態は、
式Iに従ういくつかの実施形態は、構造
これらの実施形態のいくつかにおいて、vは、0、1、2、3、4または5であり、tは、1、2、3、4、5または6であり、wは、1、2、3、4または5であり、pは、1、2、3、4または5であり、qは、0、1、2、3、4または5であり、Rbは、各出現時、独立に、水素、置換もしくは非置換のC1〜10アルキル、置換もしくは非置換のC3〜7シクロアルキル−C0〜6アルキル、または置換もしくは非置換のアリール−C0〜6アルキルである。いくつかの実施形態において、vは0であり、tは1、2、3、4、5または6であり、wは1であり、pは3であり、qは0、1、2または3である。一部の実施形態において、vは0であり、tは1または2であり、wは1であり、pは1または2であり、qは1または2である。
式Iに従ういくつかの実施形態は、構造
これらの実施形態のいくつかにおいて、vは、0、1、2、3、4または5であり、tは、1、2、3、4、5または6であり、wは、1、2、3、4または5であり、pは、1、2、3、4または5であり、qは、0、1、2、3、4または5であり、Rbは、各出現時、独立に、水素、置換もしくは非置換のC1〜10アルキル、置換もしくは非置換のC3〜7シクロアルキル−C0〜6アルキル、または置換もしくは非置換のアリール−C0〜6アルキルである。いくつかの実施形態において、vは0であり、tは1、2、3、4、5または6であり、wは1であり、pは3であり、qは0、1、2または3である。一部の実施形態において、vは0であり、tは1または2であり、wは1であり、pは1または2であり、qは1または2である。
式Iに従ういくつかの実施形態は、構造
これらの実施形態のいくつかにおいて、vは、0、1、2、3、4または5であり、tは、1、2、3、4、5または6であり、wは、1、2、3、4または5であり、pは、1、2、3、4または5であり、qは、0、1、2または3であり、Rbは、各出現時、独立に、水素、置換もしくは非置換のC1〜10アルキル、置換もしくは非置換のC3〜7シクロアルキル−C0〜6アルキル、または置換もしくは非置換のアリール−C0〜6アルキルである。いくつかの実施形態において、vは0であり、tは1、2、3、4、5または6であり、wは1であり、pは3であり、qは0、1、2または3である。一部の実施形態において、vは0であり、tは1または2であり、wは1であり、pは1または2であり、qは2または3である。
式Iに従ういくつかの実施形態は、構造
これらの実施形態のいくつかにおいて、vは、0、1、2、3、4または5であり、tは、1、2、3、4、5または6であり、rは、1、2、3、4または5であり、sは、0、1、2、3、4または5であり、qは、0、1、2、3、4または5であり、Rbは、水素、置換もしくは非置換のC1〜10アルキル、置換もしくは非置換のC3〜7シクロアルキル−C0〜6アルキル、または置換もしくは非置換のアリール−C0〜6アルキルである。いくつかの実施形態において、vは0であり、tは1、2、3、4、5または6であり、rは1または2であり、sは3であり、qは0、1、2または3である。一部の実施形態において、vは0であり、tは1、2または3であり、rは1であり、sは1または2であり、qは1または2である。
式Iに従ういくつかの実施形態は、構造
これらの実施形態のいくつかにおいて、vは、0、1、2、3、4または5であり、tは、1、2、3、4、5または6であり、rは、1、2、3、4または5であり、sは、0、1、2、3、4または5であり、qは、0、1、2、3、4または5であり、Rbは、水素、置換もしくは非置換のC1〜10アルキル、置換もしくは非置換のC3〜7シクロアルキル−C0〜6アルキル、または置換もしくは非置換のアリール−C0〜6アルキルである。いくつかの実施形態において、vは0であり、tは1、2、3、4、5または6であり、rは1または2であり、sは3であり、qは0、1、2または3である。一部の実施形態において、vは0であり、tは1、2または3であり、rは1であり、sは1または2であり、qは1または2である。
式Iに従ういくつかの実施形態は、構造
これらの実施形態のいくつかにおいて、vは、0、1、2、3、4または5であり、tは、1、2、3、4、5または6であり、rは、1、2、3、4または5であり、sは、0、1、2、3、4または5であり、qは、0、1、2または3であり、Rbは、水素、置換もしくは非置換のC1〜10アルキル、置換もしくは非置換のC3〜7シクロアルキル−C0〜6アルキル、または置換もしくは非置換のアリール−C0〜6アルキルである。いくつかの実施形態において、vは0であり、tは1、2、3、4、5または6であり、rは1または2であり、sは3であり、qは0、1、2または3である。一部の実施形態において、vは0であり、tは1、2または3であり、rは1であり、sは1または2であり、qは2または3である。
式IIに従ういくつかの実施形態は、構造
これらの実施形態のいくつかにおいて、uは、1、2、3、4または5であり、vは、0、1、2、3、4または5であり、tは、1、2、3、4、5または6であり、rは、1、2、3、4または5であり、sは、0、1、2、3、4または5であり、qは、0、1、2、3、4または5であり、Rbは、水素、置換もしくは非置換のC1〜10アルキル、置換もしくは非置換のC3〜7シクロアルキル−C0〜6アルキル、または置換もしくは非置換のアリール−C0〜6アルキルである。いくつかの実施形態において、uは1、2、3、4または5であり、vは0であり、tは1、2、3、4、5または6であり、rは1または2であり、sは0であり、qは0、1、2または3である。一部の実施形態において、uは1、2または3であり、vは0であり、tは1、2または3であり、rは1または2であり、sは0であり、qは1または2である。
式Iに従ういくつかの実施形態は、構造
これらの実施形態のいくつかにおいて、uは、1、2、3、4または5であり、vは、0、1、2、3、4または5であり、tは、1、2、3、4、5または6であり、rは、1、2、3、4または5であり、sは、0、1、2、3、4または5であり、qは、0、1、2、3、4または5であり、Rbは、水素、置換もしくは非置換のC1〜10アルキル、置換もしくは非置換のC3〜7シクロアルキル−C0〜6アルキル、または置換もしくは非置換のアリール−C0〜6アルキルである。いくつかの実施形態において、uは1、2、3、4または5であり、vは0であり、tは1、2、3、4、5または6であり、rは1または2であり、sは0であり、qは0、1、2または3である。一部の実施形態において、uは1、2または3であり、vは0であり、tは1、2または3であり、rは1または2であり、sは0であり、qは1または2である。
式Iに従ういくつかの実施形態は、構造
これらの実施形態のいくつかにおいて、uは、1、2、3、4または5であり、vは、0、1、2、3、4または5であり、tは、1、2、3、4、5または6であり、rは、1、2、3、4または5であり、sは、0、1、2、3、4または5であり、qは、0、1、2、3、4または5であり、Rbは、水素、置換もしくは非置換のC1〜10アルキル、置換もしくは非置換のC3〜7シクロアルキル−C0〜6アルキル、または置換もしくは非置換のアリール−C0〜6アルキルである。いくつかの実施形態において、uは1、2、3、4または5であり、vは0であり、tは1、2、3、4、5または6であり、rは1または2であり、sは0であり、qは0、1、2または3である。一部の実施形態において、uは1、2または3であり、vは0であり、tは1、2または3であり、rは1または2であり、sは0であり、qは1または2である。
式Iに従ういくつかの実施形態は、構造
これらの実施形態のいくつかにおいて、vは、0、1、2、3、4または5であり、tは、1、2、3、4、5または6であり、wは、1、2、3、4または5であり、pは、1、2、3、4または5であり、qは、0、1、2、3、4または5であり、Rbは、各出現時、独立に、水素、置換もしくは非置換のC1〜10アルキル、置換もしくは非置換のC3〜7シクロアルキル−C0〜6アルキル、または置換もしくは非置換のアリール−C0〜6アルキルである。いくつかの実施形態において、vは0であり、tは1、2、3、4、5または6であり、wは1であり、pは3であり、qは0、1、2または3である。一部の実施形態において、vは0であり、tは1または2であり、wは1であり、pは1または2であり、qは1または2である。
式Iに従ういくつかの実施形態は、構造
これらの実施形態のいくつかにおいて、vは、0、1、2、3、4または5であり、tは、1、2、3、4、5または6であり、wは、1、2、3、4または5であり、pは、1、2、3、4または5であり、qは、0、1、2、3、4または5であり、Rbは、各出現時、独立に、水素、置換もしくは非置換のC1〜10アルキル、置換もしくは非置換のC3〜7シクロアルキル−C0〜6アルキル、または置換もしくは非置換のアリール−C0〜6アルキルである。いくつかの実施形態において、vは0であり、tは1、2、3、4、5または6であり、wは1であり、pは3であり、qは0、1、2または3である。一部の実施形態において、vは0であり、tは1または2であり、wは1であり、pは1または2であり、qは1または2である。
式Iに従ういくつかの実施形態は、構造
これらの実施形態のいくつかにおいて、vは、0、1、2、3、4または5であり、tは、1、2、3、4、5または6であり、wは、1、2、3、4または5であり、pは、1、2、3、4または5であり、qは、0、1、2または3であり、Rbは、各出現時、独立に、水素、置換もしくは非置換のC1〜10アルキル、置換もしくは非置換のC3〜7シクロアルキル−C0〜6アルキル、または置換もしくは非置換のアリール−C0〜6アルキルである。いくつかの実施形態において、vは0であり、tは1、2、3、4、5または6であり、wは1であり、pは3であり、qは0、1、2または3である。一部の実施形態において、vは0であり、tは1または2であり、wは1であり、pは1または2であり、qは2または3である。
式Iに従ういくつかの実施形態は、構造
これらの実施形態のいくつかにおいて、vは、0、1、2、3、4または5であり、tは、1、2、3、4、5または6であり、rは、1、2、3、4または5であり、sは、0、1、2、3、4または5であり、qは、0、1、2、3、4または5であり、Rbは、水素、置換もしくは非置換のC1〜10アルキル、置換もしくは非置換のC3〜7シクロアルキル−C0〜6アルキル、または置換もしくは非置換のアリール−C0〜6アルキルである。いくつかの実施形態において、vは0であり、tは1、2、3、4、5または6であり、rは1または2であり、sは3であり、qは0、1、2または3である。一部の実施形態において、vは0であり、tは1、2または3であり、rは1であり、sは1または2であり、qは1または2である。
式Iに従ういくつかの実施形態は、構造
これらの実施形態のいくつかにおいて、vは、0、1、2、3、4または5であり、tは、1、2、3、4、5または6であり、rは、1、2、3、4または5であり、sは、0、1、2、3、4または5であり、qは、0、1、2、3、4または5であり、Rbは、水素、置換もしくは非置換のC1〜10アルキル、置換もしくは非置換のC3〜7シクロアルキル−C0〜6アルキル、または置換もしくは非置換のアリール−C0〜6アルキルである。いくつかの実施形態において、vは0であり、tは1、2、3、4、5または6であり、rは1または2であり、sは3であり、qは0、1、2または3である。一部の実施形態において、vは0であり、tは1、2または3であり、rは1であり、sは1または2であり、qは1または2である。
式Iに従ういくつかの実施形態は、構造
これらの実施形態のいくつかにおいて、vは、0、1、2、3、4または5であり、tは、1、2、3、4、5または6であり、rは、1、2、3、4または5であり、sは、0、1、2、3、4または5であり、qは、0、1、2または3であり、Rbは、水素、置換もしくは非置換のC1〜10アルキル、置換もしくは非置換のC3〜7シクロアルキル−C0〜6アルキル、または置換もしくは非置換のアリール−C0〜6アルキルである。いくつかの実施形態において、vは0であり、tは1、2、3、4、5または6であり、rは1または2であり、sは3であり、qは0、1、2または3である。一部の実施形態において、vは0であり、tは1、2または3であり、rは1であり、sは1または2であり、qは2または3である。
式Iに従ういくつかの実施形態は、構造
これらの実施形態のいくつかにおいて、vは、0、1、2、3、4または5であり、tは、1、2、3、4、5または6であり、wは、1、2、3、4または5であり、pは、1、2、3、4または5であり、qは、0、1、2、3、4または5であり、Rbは、各出現時、独立に、水素、置換もしくは非置換のC1〜10アルキル、置換もしくは非置換のC3〜7シクロアルキル−C0〜6アルキル、または置換もしくは非置換のアリール−C0〜6アルキルである。いくつかの実施形態において、vは0であり、tは1、2、3、4、5または6であり、wは1であり、pは3であり、qは0、1、2または3である。一部の実施形態において、vは0であり、tは1または2であり、wは1であり、pは1または2であり、qは1または2である。
式Iに従ういくつかの実施形態は、構造
これらの実施形態のいくつかにおいて、vは、0、1、2、3、4または5であり、tは、1、2、3、4、5または6であり、wは、1、2、3、4または5であり、pは、1、2、3、4または5であり、qは、0、1、2、3、4または5であり、Rbは、各出現時、独立に、水素、置換もしくは非置換のC1〜10アルキル、置換もしくは非置換のC3〜7シクロアルキル−C0〜6アルキル、または置換もしくは非置換のアリール−C0〜6アルキルである。いくつかの実施形態において、vは0であり、tは1、2、3、4、5または6であり、wは1であり、pは3であり、qは0、1、2または3である。一部の実施形態において、vは0であり、tは1または2であり、wは1であり、pは1または2であり、qは1または2である。
式Iに従ういくつかの実施形態は、構造
これらの実施形態のいくつかにおいて、vは、0、1、2、3、4または5であり、tは、1、2、3、4、5または6であり、wは、1、2、3、4または5であり、pは、1、2、3、4または5であり、qは、0、1、2または3であり、Rbは、各出現時、独立に、水素、置換もしくは非置換のC1〜10アルキル、置換もしくは非置換のC3〜7シクロアルキル−C0〜6アルキル、または置換もしくは非置換のアリール−C0〜6アルキルである。いくつかの実施形態において、vは0であり、tは1、2、3、4、5または6であり、wは1であり、pは3であり、qは0、1、2または3である。一部の実施形態において、vは0であり、tは1または2であり、wは1であり、pは1または2であり、qは2または3である。
式Iに従ういくつかの実施形態は、構造
これらの実施形態のいくつかにおいて、vは、0、1、2、3、4または5であり、tは、1、2、3、4、5または6であり、rは、1、2、3、4または5であり、sは、0、1、2、3、4または5であり、qは、0、1、2、3、4または5であり、Rbは、各出現時、独立に、水素、置換もしくは非置換のC1〜10アルキル、置換もしくは非置換のC3〜7シクロアルキル−C0〜6アルキル、または置換もしくは非置換のアリール−C0〜6アルキルである。いくつかの実施形態において、vは0であり、tは1、2、3、4、5または6であり、rは1または2であり、sは3であり、qは0、1、2または3である。一部の実施形態において、vは0であり、tは1、2または3であり、rは1であり、sは1または2であり、qは1または2である。
式Iに従ういくつかの実施形態は、構造
これらの実施形態のいくつかにおいて、vは、0、1、2、3、4または5であり、tは、1、2、3、4、5または6であり、rは、1、2、3、4または5であり、sは、0、1、2、3、4または5であり、qは、0、1、2、3、4または5であり、Rbは、各出現時、独立に、水素、置換もしくは非置換のC1〜10アルキル、置換もしくは非置換のC3〜7シクロアルキル−C0〜6アルキル、または置換もしくは非置換のアリール−C0〜6アルキルである。いくつかの実施形態において、vは0であり、tは1、2、3、4、5または6であり、rは1または2であり、sは3であり、qは0、1、2または3である。一部の実施形態において、vは0であり、tは1、2または3であり、rは1であり、sは1または2であり、qは1または2である。
式Iに従ういくつかの実施形態は、構造
これらの実施形態のいくつかにおいて、vは、0、1、2、3、4または5であり、tは、1、2、3、4、5または6であり、rは、1、2、3、4または5であり、sは、0、1、2、3、4または5であり、qは、0、1、2または3であり、Rbは、各出現時、独立に、水素、置換もしくは非置換のC1〜10アルキル、置換もしくは非置換のC3〜7シクロアルキル−C0〜6アルキル、または置換もしくは非置換のアリール−C0〜6アルキルである。いくつかの実施形態において、vは0であり、tは1、2、3、4、5または6であり、rは1または2であり、sは3であり、qは0、1、2または3である。一部の実施形態において、vは0であり、tは1、2または3であり、rは1であり、sは1または2であり、qは2または3である。
いくつかの実施形態において、式Iに従うリンカーLは
免疫適格個体へのGA標的化化合物の投与は、複合体に対する抗体の生成をもたらし得る。そのような抗体は、抗体イディオタイプを含む可変領域、および標的化剤または標的化剤を抗体と複合するために使用される任意のリンカーに方向付けることができる。GA標的化化合物の免疫原性を低減することは、長鎖ポリエチレングリコール(PEG)ベースのスペーサー等をGA標的化化合物に結合させる等、当該技術分野において既知の方法によって対処することができる。長鎖PEGおよび他のポリマーは、外来エピトープを表示する治療用タンパク質の免疫原性低減をもたらす、外来エピトープを遮断するその能力で知られている(N.V.Katre、J.Immunol.、144:209〜213(1990);G.E.Francisら、Int.J.Hematol.、68:1〜18(1998)。あるいは、または加えて、抗体−GA標的化剤複合体の投与を受けた個体に、シクロスポリンA、抗CD3抗体等の免疫抑制薬を投与してよい。
一実施形態において、GA標的化化合物は式IIによって示され、その立体異性体、互変異性体、溶媒和物、プロドラッグ、および薬学的に許容できる塩を含む。
抗体−L’−[GA標的化剤] (II)
抗体−L’−[GA標的化剤] (II)
式IIの化合物において、[GA標的化剤]は式Iで定義された通りであり、L’は、抗体を標的化剤に連結し、式−X−Y−Z’−を有するリンカー部分である。式IIの化合物において、XおよびYは式Iで定義された通りであり、抗体は、本明細書において定義されている通りの抗体である。図9および10は、それぞれ、図7および8に例示されているZ部分への、抗体中の結合性部位における、反応性の求核性側鎖の付加機構を例示する。
一実施形態において、抗体はアルドラーゼ触媒抗体であり、Z’−抗体は式
一実施形態において、抗体はアルドラーゼ触媒抗体であり、Z’−抗体は式
一実施形態において、抗体はアルドラーゼ触媒抗体であり、Z’−抗体は式
一実施形態において、抗体はアルドラーゼ触媒抗体であり、Z’−抗体は式
一実施形態において、抗体はアルドラーゼ触媒抗体であり、Z’−抗体は式
一実施形態において、抗体はアルドラーゼ触媒抗体であり、Z’−抗体は式
一実施形態において、抗体はアルドラーゼ触媒抗体であり、Z’−抗体は式
一実施形態において、抗体はアルドラーゼ触媒抗体であり、Z’−抗体は式
一実施形態において、抗体はアルドラーゼ触媒抗体であり、Z’−抗体は式
一実施形態において、抗体はアルドラーゼ触媒抗体であり、Z’−抗体は式
一実施形態において、抗体はアルドラーゼ触媒抗体であり、Z’−抗体は式
一実施形態において、抗体はアルドラーゼ触媒抗体であり、Z’−抗体は式
一実施形態において、抗体はアルドラーゼ触媒抗体であり、Z’−抗体は式
一実施形態において、抗体はアルドラーゼ触媒抗体であり、Z’−抗体は式
一実施形態において、抗体はアルドラーゼ触媒抗体であり、Z’−抗体は式
式IIを有する化合物において、Z’は、共有結合と抗体が結合している0〜20個の炭素原子とを含む結合部分である。リンカーが反応基(式IのZ参照)としてジケトン部分を有し、抗体中の結合性部位においてリシン残基の側鎖アミノ基との連結が発生する場合について、これを以下に示す。抗体を、指示されている各結合性部位について、反応性アミノ酸側鎖を持つ二価として図式的に示す。
以下に示す別の実施形態は、リンカーが反応基としてβラクタム部分を有し、抗体中の結合性部位においてリシン残基の側鎖アミノ基との連結が発生する場合のものである。抗体を、指示されている各結合性部位について、反応性アミノ酸側鎖を持つ二価として図式的に示す。
式IIに従ういくつかの実施形態は、構造
これらの実施形態のいくつかにおいて、vは、0、1、2、3、4または5であり、tは、1、2、3、4、5または6であり、wは、1、2、3、4または5であり、pは、1、2、3、4または5であり、qは、0、1、2、3、4または5であり、Rbは、各出現時、独立に、水素、置換もしくは非置換のC1〜10アルキル、置換もしくは非置換のC3〜7シクロアルキル−C0〜6アルキル、または置換もしくは非置換のアリール−C0〜6アルキルである。いくつかの実施形態において、vは0であり、tは1、2、3、4、5または6であり、wは1であり、pは3であり、qは0、1、2または3である。一部の実施形態において、vは0であり、tは1または2であり、wは1であり、pは1または2であり、qは1または2である。
式IIに従ういくつかの実施形態は、構造
これらの実施形態のいくつかにおいて、vは、0、1、2、3、4または5であり、tは、1、2、3、4、5または6であり、wは、1、2、3、4または5であり、pは、1、2、3、4または5であり、qは、0、1、2または3であり、Rbは、各出現時、独立に、水素、置換もしくは非置換のC1〜10アルキル、置換もしくは非置換のC3〜7シクロアルキル−C0〜6アルキル、または置換もしくは非置換のアリール−C0〜6アルキルである。いくつかの実施形態において、vは0であり、tは1、2、3、4、5または6であり、wは1であり、pは3であり、qは0、1、2または3である。一部の実施形態において、vは0であり、tは1または2であり、wは1であり、pは1または2であり、qは2または3である。
式IIに従ういくつかの実施形態は、構造
これらの実施形態のいくつかにおいて、vは、0、1、2、3、4または5であり、tは、1、2、3、4、5または6であり、wは、1、2、3、4または5であり、pは、1、2、3、4または5であり、Rbは、各出現時、独立に、水素、置換もしくは非置換のC1〜10アルキル、置換もしくは非置換のC3〜7シクロアルキル−C0〜6アルキル、または置換もしくは非置換のアリール−C0〜6アルキルである。いくつかの実施形態において、vは0であり、tは1、2、3、4、5または6であり、wは1であり、pは3である。一部の実施形態において、vは0であり、tは1または2であり、wは1であり、pは1または2である。
式IIに従ういくつかの実施形態は、構造
これらの実施形態のいくつかにおいて、vは、0、1、2、3、4または5であり、tは、1、2、3、4、5または6であり、rは、1、2、3、4または5であり、sは、0、1、2、3、4または5であり、qは、0、1、2、3、4または5であり、Rbは、水素、置換もしくは非置換のC1〜10アルキル、置換もしくは非置換のC3〜7シクロアルキル−C0〜6アルキル、または置換もしくは非置換のアリール−C0〜6アルキルである。いくつかの実施形態において、vは0であり、tは1、2、3、4、5または6であり、rは1または2であり、sは3であり、qは0、1、2または3である。一部の実施形態において、vは0であり、tは1、2または3であり、rは1であり、sは1または2であり、qは1または2である。
式IIに従ういくつかの実施形態は、構造
これらの実施形態のいくつかにおいて、vは、0、1、2、3、4または5であり、tは、1、2、3、4、5または6であり、rは、1、2、3、4または5であり、sは、0、1、2、3、4または5であり、qは、0、1、2または3であり、Rbは、水素、置換もしくは非置換のC1〜10アルキル、置換もしくは非置換のC3〜7シクロアルキル−C0〜6アルキル、または置換もしくは非置換のアリール−C0〜6アルキルである。いくつかの実施形態において、vは0であり、tは1、2、3、4、5または6であり、rは1または2であり、sは3であり、qは0、1、2または3である。一部の実施形態において、vは0であり、tは1、2または3であり、rは1であり、sは1または2であり、qは2または3である。
式IIに従ういくつかの実施形態は、構造
これらの実施形態のいくつかにおいて、vは、0、1、2、3、4または5であり、tは、1、2、3、4、5または6であり、rは、1、2、3、4または5であり、sは、0、1、2、3、4または5であり、Rbは、水素、置換もしくは非置換のC1〜10アルキル、置換もしくは非置換のC3〜7シクロアルキル−C0〜6アルキル、または置換もしくは非置換のアリール−C0〜6アルキルである。いくつかの実施形態において、vは0であり、tは1、2、3、4、5または6であり、rは1または2であり、sは3である。一部の実施形態において、vは0であり、tは1、2または3であり、rは1であり、sは1または2である。
式IIに従ういくつかの実施形態は、構造
これらの実施形態のいくつかにおいて、vは、0、1、2、3、4または5であり、tは、1、2、3、4、5または6であり、wは、1、2、3、4または5であり、pは、1、2、3、4または5であり、qは、0、1、2、3、4または5であり、Rbは、各出現時、独立に、水素、置換もしくは非置換のC1〜10アルキル、置換もしくは非置換のC3〜7シクロアルキル−C0〜6アルキル、または置換もしくは非置換のアリール−C0〜6アルキルである。いくつかの実施形態において、vは0であり、tは1、2、3、4、5または6であり、wは1であり、pは3であり、qは0、1、2または3である。一部の実施形態において、vは0であり、tは1または2であり、wは1であり、pは1または2であり、qは1または2である。
式IIに従ういくつかの実施形態は、構造
これらの実施形態のいくつかにおいて、vは、0、1、2、3、4または5であり、tは、1、2、3、4、5または6であり、wは、1、2、3、4または5であり、pは、1、2、3、4または5であり、qは、0、1、2または3であり、Rbは、各出現時、独立に、水素、置換もしくは非置換のC1〜10アルキル、置換もしくは非置換のC3〜7シクロアルキル−C0〜6アルキル、または置換もしくは非置換のアリール−C0〜6アルキルである。いくつかの実施形態において、vは0であり、tは1、2、3、4、5または6であり、wは1であり、pは3であり、qは0、1、2または3である。一部の実施形態において、vは0であり、tは1または2であり、wは1であり、pは1または2であり、qは2または3である。
式IIに従ういくつかの実施形態は、構造
これらの実施形態のいくつかにおいて、vは、0、1、2、3、4または5であり、tは、1、2、3、4、5または6であり、wは、1、2、3、4または5であり、pは、1、2、3、4または5であり、Rbは、各出現時、独立に、水素、置換もしくは非置換のC1〜10アルキル、置換もしくは非置換のC3〜7シクロアルキル−C0〜6アルキル、または置換もしくは非置換のアリール−C0〜6アルキルである。いくつかの実施形態において、vは0であり、tは1、2、3、4、5または6であり、wは1であり、pは3である。一部の実施形態において、vは0であり、tは1または2であり、wは1であり、pは1または2である。
式IIに従ういくつかの実施形態は、構造
これらの実施形態のいくつかにおいて、vは、0、1、2、3、4または5であり、tは、1、2、3、4、5または6であり、rは、1、2、3、4または5であり、sは、0、1、2、3、4または5であり、qは、0、1、2、3、4または5であり、Rbは、各出現時、独立に、水素、置換もしくは非置換のC1〜10アルキル、置換もしくは非置換のC3〜7シクロアルキル−C0〜6アルキル、または置換もしくは非置換のアリール−C0〜6アルキルである。いくつかの実施形態において、vは0であり、tは1、2、3、4、5または6であり、rは1または2であり、sは3であり、qは0、1、2または3である。一部の実施形態において、vは0であり、tは1、2または3であり、rは1であり、sは1または2であり、qは1または2である。
式IIに従ういくつかの実施形態は、構造
これらの実施形態のいくつかにおいて、vは、0、1、2、3、4または5であり、tは、1、2、3、4、5または6であり、rは、1、2、3、4または5であり、sは、0、1、2、3、4または5であり、qは、0、1、2または3であり、Rbは、各出現時、独立に、水素、置換もしくは非置換のC1〜10アルキル、置換もしくは非置換のC3〜7シクロアルキル−C0〜6アルキル、または置換もしくは非置換のアリール−C0〜6アルキルである。いくつかの実施形態において、vは0であり、tは1、2、3、4、5または6であり、rは1または2であり、sは3であり、qは0、1、2または3である。一部の実施形態において、vは0であり、tは1、2または3であり、rは1であり、sは1または2であり、qは2または3である。
式IIに従ういくつかの実施形態は、構造
これらの実施形態のいくつかにおいて、vは、0、1、2、3、4または5であり、tは、1、2、3、4、5または6であり、rは、1、2、3、4または5であり、sは、0、1、2、3、4または5であり、Rbは、各出現時、独立に、水素、置換もしくは非置換のC1〜10アルキル、置換もしくは非置換のC3〜7シクロアルキル−C0〜6アルキル、または置換もしくは非置換のアリール−C0〜6アルキルである。いくつかの実施形態において、vは0であり、tは1、2、3、4、5または6であり、rは1または2であり、sは3である。一部の実施形態において、vは0であり、tは1、2または3であり、rは1であり、sは1または2である。
式IIに従ういくつかの実施形態は、構造
これらの実施形態のいくつかにおいて、vは、0、1、2、3、4または5であり、tは、1、2、3、4、5または6であり、wは、1、2、3、4または5であり、pは、1、2、3、4または5であり、qは、0、1、2、3、4または5であり、Rbは、各出現時、独立に、水素、置換もしくは非置換のC1〜10アルキル、置換もしくは非置換のC3〜7シクロアルキル−C0〜6アルキル、または置換もしくは非置換のアリール−C0〜6アルキルである。いくつかの実施形態において、vは0であり、tは1、2、3、4、5または6であり、wは1であり、pは3であり、qは0、1、2または3である。一部の実施形態において、vは0であり、tは1または2であり、wは1であり、pは1または2であり、qは1または2である。
式IIに従ういくつかの実施形態は、構造
これらの実施形態のいくつかにおいて、vは、0、1、2、3、4または5であり、tは、1、2、3、4、5または6であり、wは、1、2、3、4または5であり、pは、1、2、3、4または5であり、qは、0、1、2または3であり、Rbは、各出現時、独立に、水素、置換もしくは非置換のC1〜10アルキル、置換もしくは非置換のC3〜7シクロアルキル−C0〜6アルキル、または置換もしくは非置換のアリール−C0〜6アルキルである。いくつかの実施形態において、vは0であり、tは1、2、3、4、5または6であり、wは1であり、pは3であり、qは0、1、2または3である。一部の実施形態において、vは0であり、tは1または2であり、wは1であり、pは1または2であり、qは2または3である。
式IIに従ういくつかの実施形態は、構造
これらの実施形態のいくつかにおいて、vは、0、1、2、3、4または5であり、tは、1、2、3、4、5または6であり、wは、1、2、3、4または5であり、pは、1、2、3、4または5であり、Rbは、各出現時、独立に、水素、置換もしくは非置換のC1〜10アルキル、置換もしくは非置換のC3〜7シクロアルキル−C0〜6アルキル、または置換もしくは非置換のアリール−C0〜6アルキルである。いくつかの実施形態において、vは0であり、tは1、2、3、4、5または6であり、wは1であり、pは3である。一部の実施形態において、vは0であり、tは1または2であり、wは1であり、pは1または2である。
式IIに従ういくつかの実施形態は、構造
これらの実施形態のいくつかにおいて、vは、0、1、2、3、4または5であり、tは、1、2、3、4、5または6であり、rは、1、2、3、4または5であり、sは、0、1、2、3、4または5であり、qは、0、1、2、3、4または5であり、Rbは、水素、置換もしくは非置換のC1〜10アルキル、置換もしくは非置換のC3〜7シクロアルキル−C0〜6アルキル、または置換もしくは非置換のアリール−C0〜6アルキルである。いくつかの実施形態において、vは0であり、tは1、2、3、4、5または6であり、rは1または2であり、sは3であり、qは0、1、2または3である。一部の実施形態において、vは0であり、tは1、2または3であり、rは1であり、sは1または2であり、qは1または2である。
式IIに従ういくつかの実施形態は、構造
これらの実施形態のいくつかにおいて、vは、0、1、2、3、4または5であり、tは、1、2、3、4、5または6であり、rは、1、2、3、4または5であり、sは、0、1、2、3、4または5であり、qは、0、1、2または3であり、Rbは、水素、置換もしくは非置換のC1〜10アルキル、置換もしくは非置換のC3〜7シクロアルキル−C0〜6アルキル、または置換もしくは非置換のアリール−C0〜6アルキルである。いくつかの実施形態において、vは0であり、tは1、2、3、4、5または6であり、rは1または2であり、sは3であり、qは0、1、2または3である。一部の実施形態において、vは0であり、tは1、2または3であり、rは1であり、sは1または2であり、qは2または3である。
式IIに従ういくつかの実施形態は、構造
これらの実施形態のいくつかにおいて、vは、0、1、2、3、4または5であり、tは、1、2、3、4、5または6であり、rは、1、2、3、4または5であり、sは、0、1、2、3、4または5であり、Rbは、水素、置換もしくは非置換のC1〜10アルキル、置換もしくは非置換のC3〜7シクロアルキル−C0〜6アルキル、または置換もしくは非置換のアリール−C0〜6アルキルである。いくつかの実施形態において、vは0であり、tは1、2、3、4、5または6であり、rは1または2であり、sは3である。一部の実施形態において、vは0であり、tは1、2または3であり、rは1であり、sは1または2である。
式IIに従ういくつかの実施形態は、構造
これらの実施形態のいくつかにおいて、uは、1、2、3、4または5であり、vは、0、1、2、3、4または5であり、tは、1、2、3、4、5または6であり、rは、1、2、3、4または5であり、sは、0、1、2、3、4または5であり、qは、0、1、2、3、4または5であり、Rbは、水素、置換もしくは非置換のC1〜10アルキル、置換もしくは非置換のC3〜7シクロアルキル−C0〜6アルキル、または置換もしくは非置換のアリール−C0〜6アルキルである。いくつかの実施形態において、uは1、2、3、4または5であり、vは0であり、tは1、2、3、4、5または6であり、rは1または2であり、sは0であり、qは0、1、2または3である。一部の実施形態において、uは1、2または3であり、vは0であり、tは1、2または3であり、rは1または2であり、sは0であり、qは1または2である。
式Iに従ういくつかの実施形態は、構造
これらの実施形態のいくつかにおいて、uは、1、2、3、4または5であり、vは、0、1、2、3、4または5であり、tは、1、2、3、4、5または6であり、rは、1、2、3、4または5であり、sは、0、1、2、3、4または5であり、qは、0、1、2、3、4または5であり、Rbは、水素、置換もしくは非置換のC1〜10アルキル、置換もしくは非置換のC3〜7シクロアルキル−C0〜6アルキル、または置換もしくは非置換のアリール−C0〜6アルキルである。いくつかの実施形態において、uは1、2、3、4または5であり、vは0であり、tは1、2、3、4、5または6であり、rは1または2であり、sは0であり、qは0、1、2または3である。一部の実施形態において、uは1、2または3であり、vは0であり、tは1、2または3であり、rは1または2であり、sは0であり、qは1または2である。
式Iに従ういくつかの実施形態は、構造
これらの実施形態のいくつかにおいて、uは、1、2、3、4または5であり、vは、0、1、2、3、4または5であり、tは、1、2、3、4、5または6であり、rは、1、2、3、4または5であり、sは、0、1、2、3、4または5であり、qは、0、1、2、3、4または5であり、Rbは、水素、置換もしくは非置換のC1〜10アルキル、置換もしくは非置換のC3〜7シクロアルキル−C0〜6アルキル、または置換もしくは非置換のアリール−C0〜6アルキルである。いくつかの実施形態において、uは1、2、3、4または5であり、vは0であり、tは1、2、3、4、5または6であり、rは1または2であり、sは0であり、qは0、1、2または3である。一部の実施形態において、uは1、2または3であり、vは0であり、tは1、2または3であり、rは1または2であり、sは0であり、qは1または2である。
式IIに従ういくつかの実施形態は、構造
これらの実施形態のいくつかにおいて、vは、0、1、2、3、4または5であり、tは、1、2、3、4、5または6であり、wは、1、2、3、4または5であり、pは、1、2、3、4または5であり、qは、0、1、2、3、4または5であり、Rbは、各出現時、独立に、水素、置換もしくは非置換のC1〜10アルキル、置換もしくは非置換のC3〜7シクロアルキル−C0〜6アルキル、または置換もしくは非置換のアリール−C0〜6アルキルである。いくつかの実施形態において、vは0であり、tは1、2、3、4、5または6であり、wは1であり、pは3であり、qは0、1、2または3である。一部の実施形態において、vは0であり、tは1または2であり、wは1であり、pは1または2であり、qは1または2である。
式IIに従ういくつかの実施形態は、構造
これらの実施形態のいくつかにおいて、vは、0、1、2、3、4または5であり、tは、1、2、3、4、5または6であり、wは、1、2、3、4または5であり、pは、1、2、3、4または5であり、qは、0、1、2または3であり、Rbは、各出現時、独立に、水素、置換もしくは非置換のC1〜10アルキル、置換もしくは非置換のC3〜7シクロアルキル−C0〜6アルキル、または置換もしくは非置換のアリール−C0〜6アルキルである。いくつかの実施形態において、vは0であり、tは1、2、3、4、5または6であり、wは1であり、pは3であり、qは0、1、2または3である。一部の実施形態において、vは0であり、tは1または2であり、wは1であり、pは1または2であり、qは2または3である。
式IIに従ういくつかの実施形態は、構造
これらの実施形態のいくつかにおいて、vは、0、1、2、3、4または5であり、tは、1、2、3、4、5または6であり、wは、1、2、3、4または5であり、pは、1、2、3、4または5であり、Rbは、各出現時、独立に、水素、置換もしくは非置換のC1〜10アルキル、置換もしくは非置換のC3〜7シクロアルキル−C0〜6アルキル、または置換もしくは非置換のアリール−C0〜6アルキルである。いくつかの実施形態において、vは0であり、tは1、2、3、4、5または6であり、wは1であり、pは3である。一部の実施形態において、vは0であり、tは1または2であり、wは1であり、pは1または2である。
式IIに従ういくつかの実施形態は、構造
これらの実施形態のいくつかにおいて、vは、0、1、2、3、4または5であり、tは、1、2、3、4、5または6であり、rは、1、2、3、4または5であり、sは、0、1、2、3、4または5であり、qは、0、1、2、3、4または5であり、Rbは、水素、置換もしくは非置換のC1〜10アルキル、置換もしくは非置換のC3〜7シクロアルキル−C0〜6アルキル、または置換もしくは非置換のアリール−C0〜6アルキルである。いくつかの実施形態において、vは0であり、tは1、2、3、4、5または6であり、rは1または2であり、sは3であり、qは0、1、2または3である。一部の実施形態において、vは0であり、tは1、2または3であり、rは1であり、sは1または2であり、qは1または2である。
式IIに従ういくつかの実施形態は、構造
これらの実施形態のいくつかにおいて、vは、0、1、2、3、4または5であり、tは、1、2、3、4、5または6であり、rは、1、2、3、4または5であり、sは、0、1、2、3、4または5であり、qは、0、1、2または3であり、Rbは、水素、置換もしくは非置換のC1〜10アルキル、置換もしくは非置換のC3〜7シクロアルキル−C0〜6アルキル、または置換もしくは非置換のアリール−C0〜6アルキルである。いくつかの実施形態において、vは0であり、tは1、2、3、4、5または6であり、rは1または2であり、sは3であり、qは0、1、2または3である。一部の実施形態において、vは0であり、tは1、2または3であり、rは1であり、sは1または2であり、qは2または3である。
式IIに従ういくつかの実施形態は、構造
これらの実施形態のいくつかにおいて、vは、0、1、2、3、4または5であり、tは、1、2、3、4、5または6であり、rは、1、2、3、4または5であり、sは、0、1、2、3、4または5であり、Rbは、水素、置換もしくは非置換のC1〜10アルキル、置換もしくは非置換のC3〜7シクロアルキル−C0〜6アルキル、または置換もしくは非置換のアリール−C0〜6アルキルである。いくつかの実施形態において、vは0であり、tは1、2、3、4、5または6であり、rは1または2であり、sは3である。一部の実施形態において、vは0であり、tは1、2または3であり、rは1であり、sは1または2である。
式IIに従ういくつかの実施形態は、構造
これらの実施形態のいくつかにおいて、vは、0、1、2、3、4または5であり、tは、1、2、3、4、5または6であり、wは、1、2、3、4または5であり、pは、1、2、3、4または5であり、qは、0、1、2、3、4または5であり、Rbは、各出現時、独立に、水素、置換もしくは非置換のC1〜10アルキル、置換もしくは非置換のC3〜7シクロアルキル−C0〜6アルキル、または置換もしくは非置換のアリール−C0〜6アルキルである。いくつかの実施形態において、vは0であり、tは1、2、3、4、5または6であり、wは1であり、pは3であり、qは0、1、2または3である。一部の実施形態において、vは0であり、tは1または2であり、wは1であり、pは1または2であり、qは1または2である。
式IIに従ういくつかの実施形態は、構造
これらの実施形態のいくつかにおいて、vは、0、1、2、3、4または5であり、tは、1、2、3、4、5または6であり、wは、1、2、3、4または5であり、pは、1、2、3、4または5であり、qは、0、1、2または3であり、Rbは、各出現時、独立に、水素、置換もしくは非置換のC1〜10アルキル、置換もしくは非置換のC3〜7シクロアルキル−C0〜6アルキル、または置換もしくは非置換のアリール−C0〜6アルキルである。いくつかの実施形態において、vは0であり、tは1、2、3、4、5または6であり、wは1であり、pは3であり、qは0、1、2または3である。一部の実施形態において、vは0であり、tは1または2であり、wは1であり、pは1または2であり、qは2または3である。
式IIに従ういくつかの実施形態は、構造
これらの実施形態のいくつかにおいて、vは、0、1、2、3、4または5であり、tは、1、2、3、4、5または6であり、wは、1、2、3、4または5であり、pは、1、2、3、4または5であり、Rbは、各出現時、独立に、水素、置換もしくは非置換のC1〜10アルキル、置換もしくは非置換のC3〜7シクロアルキル−C0〜6アルキル、または置換もしくは非置換のアリール−C0〜6アルキルである。いくつかの実施形態において、vは0であり、tは1、2、3、4、5または6であり、wは1であり、pは3である。一部の実施形態において、vは0であり、tは1または2であり、wは1であり、pは1または2である。
式IIに従ういくつかの実施形態は、構造
これらの実施形態のいくつかにおいて、vは、0、1、2、3、4または5であり、tは、1、2、3、4、5または6であり、rは、1、2、3、4または5であり、sは、0、1、2、3、4または5であり、qは、0、1、2、3、4または5であり、Rbは、各出現時、独立に、水素、置換もしくは非置換のC1〜10アルキル、置換もしくは非置換のC3〜7シクロアルキル−C0〜6アルキル、または置換もしくは非置換のアリール−C0〜6アルキルである。いくつかの実施形態において、vは0であり、tは1、2、3、4、5または6であり、rは1または2であり、sは3であり、qは0、1、2または3である。一部の実施形態において、vは0であり、tは1、2または3であり、rは1であり、sは1または2であり、qは1または2である。
式IIに従ういくつかの実施形態は、構造
これらの実施形態のいくつかにおいて、vは、0、1、2、3、4または5であり、tは、1、2、3、4、5または6であり、rは、1、2、3、4または5であり、sは、0、1、2、3、4または5であり、qは、0、1、2または3であり、Rbは、各出現時、独立に、水素、置換もしくは非置換のC1〜10アルキル、置換もしくは非置換のC3〜7シクロアルキル−C0〜6アルキル、または置換もしくは非置換のアリール−C0〜6アルキルである。いくつかの実施形態において、vは0であり、tは1、2、3、4、5または6であり、rは1または2であり、sは3であり、qは0、1、2または3である。一部の実施形態において、vは0であり、tは1、2または3であり、rは1であり、sは1または2であり、qは2または3である。
式IIに従ういくつかの実施形態は、構造
これらの実施形態のいくつかにおいて、vは、0、1、2、3、4または5であり、tは、1、2、3、4、5または6であり、rは、1、2、3、4または5であり、sは、0、1、2、3、4または5であり、Rbは、各出現時、独立に、水素、置換もしくは非置換のC1〜10アルキル、置換もしくは非置換のC3〜7シクロアルキル−C0〜6アルキル、または置換もしくは非置換のアリール−C0〜6アルキルである。いくつかの実施形態において、vは0であり、tは1、2、3、4、5または6であり、rは1または2であり、sは3である。一部の実施形態において、vは0であり、tは1、2または3であり、rは1であり、sは1または2である。
あるいは、リンカーは、反応基としてアミンまたはヒドラジドを有することができ、抗体は、ジケトン部分を有するように操作することができる。非天然ジケトン含有アミノ酸は、当技術分野で周知の技法を使用して抗体中の結合性部位に容易に組み込むことができ、非天然アミノ酸を含有するタンパク質は、酵母および細菌中で産生された。例えば、J.W.Chinら、Science 301:964〜966(2003);L.Wangら、Science 292:498〜500(2001);J.W.Chinら、J.Am.Chem.Soc.124:9026〜9027(2002);L.Wangら、J.Am.Chem.Soc.124:1836〜1837(2002);J.W.ChinおよびP.G.Schultz、Chembiochem.3:1135〜1137(2002);J.W.Chinら、Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.99:11020〜11024(2002);L.WangおよびP.G.Schultz、Chem.Commun.(1):1〜11(2002);Z.Zhangら、Angew.Chem.Int.Ed.Engl.41:2840〜2842(2002);L.Wang、Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.100:56〜61(2003)を参照されたい。したがって、例えば、ジケトン部分を含有する非天然アミノ酸を酵母サッカロミセスセレビシアエ(Saccharomyces cerevisiae)中に挿入するために、タンパク質生合成機構に、ユニークコドン、tRNA、およびアミノアシル−tRNA合成酵素(aa RS)を含めた新規成分を添加する必要がある。例えば、真核生物についてJ.W.Chinら、Science 301:964〜966(2003)に報告されているように、大腸菌由来のアンバーサプレッサーチロシル−tRNA合成酵素(TyrRS)−tRNACUA対を使用することができる。アンバーコドンは、対象とする非天然アミノ酸をコードするのに使用される。次いで、突然変異体TyrRSおよびtRNACUAのライブラリーを作製し、TyrRSがtRNACUAに対象とする非天然アミノ酸、例えば、ジケトン含有アミノ酸をチャージするaaRS−tRNACUA対について選択することができる。引き続いて、ジケトン含有アミノ酸を組み込んでいる抗体は、1つまたは複数の抗体中の結合性部位でアンバーコドンを含有している遺伝子をクローン化し、発現させることによって生成することができる。
式IIの化合物のいくつかの実施形態では、抗体は全長抗体である。他の実施形態では、抗体は、Fab、Fab’F(ab’)2、Fv、VH、VL、またはscFvである。他の実施形態では、抗体は、ヒト抗体、ヒト化抗体、またはキメラヒト抗体である。さらに他の実施形態では、抗体は触媒抗体である。一実施形態では、抗体は、ヒトIgG、IgA、IgM、IgD、またはIgE抗体由来の定常領域を含むマウス38c2のヒト化型である。別の実施形態では、抗体は、マウス38c2由来の可変領域とヒトIgG、IgA、IgM、IgD、またはIgE抗体由来の定常領域を含むキメラ抗体である。
いくつかの場合では、2つ以上のGA標的化剤は、1個の全長二価抗体に連結することができる。これを式IIIとして以下に示す:
抗体[−L’−[GA標的化剤]]2 (III)
その立体異性体、互変異性体、溶媒和物、プロドラッグ、および薬学的に許容できる塩も提供される。
抗体[−L’−[GA標的化剤]]2 (III)
その立体異性体、互変異性体、溶媒和物、プロドラッグ、および薬学的に許容できる塩も提供される。
式IIIの化合物において、[GA標的化剤]、L’および抗体はそれぞれ、式IIに定義されている。
式IIの化合物などの標的化化合物も、標的化剤−リンカーを、多価抗体中の結合性部位に共有結合的に連結することによって容易に合成することができる。例えば、リンカーがジケトン反応性部分を含む、GA標的化剤リンカーコンジュゲートは、0.5当量の、h38C2 IgG1などのアルドラーゼ抗体でインキュベートすることによって、GA標的化化合物を生成することができる。あるいは、式IIIの化合物などのGA標的化化合物は、本明細書に記載されるようなGA標的化剤−リンカー化合物を、二価抗体の各結合性部位に共有結合的に連結することによって生成することができる。
GA標的化化合物の医薬組成物
本発明の別の態様では、GA標的化化合物の医薬組成物を提供する。GA標的化化合物は、当技術分野で周知の技法を使用して投与することができる。薬剤は製剤化され、全身的に投与されることが好ましい。製剤化および投与の技法は、「Remington’s Pharmaceutical Sciences」、18版、1990、Mack Publishing Co.、Easton、PAに見出すことができる。注射用には、GA標的化化合物は、水溶液、エマルジョン、または懸濁液中に製剤化することができる。GA標的化化合物は、生理的に適合した緩衝液、例えば、クエン酸、酢酸、ヒスチジン、またはリン酸などを含有する水溶液中に製剤化されることが好ましい。必要な場合、そのような製剤は、様々な等張化剤、可溶化剤および/または安定化剤(例えば、塩化ナトリウムなどの塩、スクロース、マンニトール、およびトレハロースなどの糖、アルブミンなどのタンパク質、グリシンおよびヒスチジンなどのアミノ酸、ポリソルベート(ツイーン)などの界面活性物質、エタノール、ポリエチレングリコールおよびプロピレングリコールなどの共溶媒)も含有することができる。
本発明の別の態様では、GA標的化化合物の医薬組成物を提供する。GA標的化化合物は、当技術分野で周知の技法を使用して投与することができる。薬剤は製剤化され、全身的に投与されることが好ましい。製剤化および投与の技法は、「Remington’s Pharmaceutical Sciences」、18版、1990、Mack Publishing Co.、Easton、PAに見出すことができる。注射用には、GA標的化化合物は、水溶液、エマルジョン、または懸濁液中に製剤化することができる。GA標的化化合物は、生理的に適合した緩衝液、例えば、クエン酸、酢酸、ヒスチジン、またはリン酸などを含有する水溶液中に製剤化されることが好ましい。必要な場合、そのような製剤は、様々な等張化剤、可溶化剤および/または安定化剤(例えば、塩化ナトリウムなどの塩、スクロース、マンニトール、およびトレハロースなどの糖、アルブミンなどのタンパク質、グリシンおよびヒスチジンなどのアミノ酸、ポリソルベート(ツイーン)などの界面活性物質、エタノール、ポリエチレングリコールおよびプロピレングリコールなどの共溶媒)も含有することができる。
GA標的化化合物の使用の方法
本発明の一態様は、糖尿病または糖尿病に関連する状態を治療するための方法であって、治療有効量のGA標的化化合物を、糖尿病または糖尿病に関連する状態に罹患している対象に投与するステップを含む方法である。ヒトにおける治療的使用には、ヒト、ヒト化またはヒトキメラ抗体が、標的化化合物の好ましい抗体形態である。
本発明の一態様は、糖尿病または糖尿病に関連する状態を治療するための方法であって、治療有効量のGA標的化化合物を、糖尿病または糖尿病に関連する状態に罹患している対象に投与するステップを含む方法である。ヒトにおける治療的使用には、ヒト、ヒト化またはヒトキメラ抗体が、標的化化合物の好ましい抗体形態である。
本発明の別の態様は、対象におけるインスリン分泌を増大させるための方法であって、治療有効量のGA標的化化合物またはその医薬誘導体を該対象に投与するステップを含む方法である。
本発明のまた別の態様は、対象における血中グルコースレベルを減少させるための方法であって、治療有効量のGA標的化化合物またはその医薬誘導体を該対象に投与するステップを含む方法である。
投与の方法および用量
GA標的化化合物の投与経路は、筋肉内、皮下または髄内注射を含む非経口送達、ならびに、髄腔内、直接脳室内、静脈内および腹腔内送達を含み得る。一実施形態において、投与は静脈内である。GA標的化化合物は、製剤の直接注射、または標的化GA化合物製剤と、生理食塩水、D5W、乳酸加リンゲル液もしくは他のよく使用される注入媒体等の注入マトリックスとの混合物の注入のいずれかにより、非経口経路のいずれかを介して投与することができる。
GA標的化化合物の投与経路は、筋肉内、皮下または髄内注射を含む非経口送達、ならびに、髄腔内、直接脳室内、静脈内および腹腔内送達を含み得る。一実施形態において、投与は静脈内である。GA標的化化合物は、製剤の直接注射、または標的化GA化合物製剤と、生理食塩水、D5W、乳酸加リンゲル液もしくは他のよく使用される注入媒体等の注入マトリックスとの混合物の注入のいずれかにより、非経口経路のいずれかを介して投与することができる。
糖尿病または糖尿病に関連する状態を有する、ヒトを含む哺乳動物を治療する際、治療有効量のGA標的化化合物または薬学的に許容できる誘導体が投与される。例えば、GA標的化化合物は、体重1kg当たり0.1mgから体重1kg当たり約15mgの一日の静脈内注入として投与することができる。したがって、一実施形態では、体重1kg当たり約0.5mgの用量を提供する。別の実施形態では、体重1kg当たり約0.75mgの用量を提供する。別の実施形態では、体重1kg当たり約1.0mgの用量を提供する。別の実施形態では、体重1kg当たり約2.5mgの用量を提供する。別の実施形態では、体重1kg当たり約5mgの用量を提供する。別の実施形態では、体重1kg当たり約10.0mgの用量を提供する。別の実施形態では、体重1kg当たり約15.0mgの用量を提供する。GA標的化化合物または薬学的に許容できる誘導体の用量は、1日当たり約1回から1週間当たり2回、または、毎週約1回から1カ月当たり1回の間隔で投与されるべきである。一実施形態では、約.002mg/mlから30mg/mlの、本発明に従うGA標的化化合物または薬学的に許容できるその誘導体のピーク血漿中濃度を達成する用量を投与する。これは、投与される成分の適切な製剤中の溶液(化学分野の当業者に既知の任意の適当な製剤溶液を使用することができる)を滅菌注射することによって達成することができる。望ましい血中レベルは、立証された分析的方法によって測定された血漿中レベルにより確認されるように、本発明に従うGA標的化化合物の連続注入によって維持することができる。
個体にGA標的化化合物を投与するための一方法は、個体にGA標的化剤−リンカーコンジュゲートを投与するステップと、これをインビボで適切な抗体中の結合性部位との共有結合化合物を形成させるステップとを含む。インビボで形成するGA標的化化合物の抗体部分は、標的化剤−リンカーコンジュゲートを投与する前、投与すると同時、または投与した後に個体に投与することができる。既に考察したように、GA標的化剤は、リンカー/反応性部分を含むことができ、または抗体中の結合性部位は、適当に修飾されることによって、標的化剤に共有結合的に連結することができる。あるいは、またはさらに、抗体は、適切な免疫源で免疫化した後に、個体の血液循環中に存在することができる。例えば、触媒抗体は、担体タンパク質にコンジュゲートした基質の反応性中間体で免疫化することによって生成することができる。R.A.LernerおよびC.F.Barbas三世、Acta Chem.Scand.50:672〜678(1996)を参照されたい。特に、アルドラーゼ触媒抗体は、P.Wirschingら、Science 270:1775〜1782(1995)(J.Wagnerら、Science 270:1797〜1800(1995)を論評して)に記載されているように、ジケトン部分に連結したキーホールリンペットヘモシニアンを投与することによって生成することができる。
併用療法
本発明の別の態様において、GA標的化化合物は、糖尿病もしくは糖尿病に関連する状態を治療するため、またはインスリン分泌を増大もしくは血中グルコースレベルを減少させるために使用される他の治療剤と組み合わせて使用してよい。一実施形態において、GA標的化化合物は、例えば、即効型、短時間作用型、中時間作用型または長時間作用型インスリンを含む合成ヒトインスリン等、インスリンと組み合わせて投与してよい。その他の実施形態において、GA標的化化合物は、αグルコシダーゼ阻害剤、スルホニル尿素、メグリチニド、ビグアニドまたはチアゾリジンジオン(TZD)ファミリーに属する化合物と組み合わせて投与してよい。GA標的化化合物は、グルコキナーゼ(GK)、グルコキナーゼ調節タンパク質(GKRP)、脱共役タンパク質2および3(UCP2およびUCP3)、ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体α(PPARα)、レプチン受容体(OB−Rb)、DPP−IV阻害剤、スルホニル尿素、またはその他のインクレチンペプチド等、代謝修飾タンパク質またはペプチドと組み合わせて投与してよい。当業者であれば、糖尿病または糖尿病に関連する状態の治療において現在使用されている多種多様な作用物質について知っているであろう。
本発明の別の態様において、GA標的化化合物は、糖尿病もしくは糖尿病に関連する状態を治療するため、またはインスリン分泌を増大もしくは血中グルコースレベルを減少させるために使用される他の治療剤と組み合わせて使用してよい。一実施形態において、GA標的化化合物は、例えば、即効型、短時間作用型、中時間作用型または長時間作用型インスリンを含む合成ヒトインスリン等、インスリンと組み合わせて投与してよい。その他の実施形態において、GA標的化化合物は、αグルコシダーゼ阻害剤、スルホニル尿素、メグリチニド、ビグアニドまたはチアゾリジンジオン(TZD)ファミリーに属する化合物と組み合わせて投与してよい。GA標的化化合物は、グルコキナーゼ(GK)、グルコキナーゼ調節タンパク質(GKRP)、脱共役タンパク質2および3(UCP2およびUCP3)、ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体α(PPARα)、レプチン受容体(OB−Rb)、DPP−IV阻害剤、スルホニル尿素、またはその他のインクレチンペプチド等、代謝修飾タンパク質またはペプチドと組み合わせて投与してよい。当業者であれば、糖尿病または糖尿病に関連する状態の治療において現在使用されている多種多様な作用物質について知っているであろう。
糖尿病もしくは糖尿病に関連する状態を治療、インスリン分泌を増大または血中グルコースレベルを減少させるために使用される他の治療剤と組み合わせた、GA標的化化合物または薬学的に許容できるその誘導体の潜在的な治療効能を評定するために、当該技術分野において既知の方法を使用してこれらの組合せを試験することができる。例えば、本発明に従うGA標的化化合物(複数可)および別の治療剤の組合せの、インスリン分泌を増大させる能力は、インビトロのグルコース刺激によるインスリン分泌アッセイを使用して計測することができる。そのようなアッセイでは、膵β細胞を、様々な濃度のグルコースで一定期間処理し、例えば放射免疫測定等、当該技術分野において既知の方法を使用して、インスリンレベルを計測する。本発明に従うGA標的化化合物(複数可)および他の治療剤のインスリン分泌に対する効果は、該剤を対象に直接投与し、様々な時点で体液試料中のインスリンレベルを計測することにより、インビボで計測することもできる。併用療法において使用するために、既知の治療剤を対象に投与するための方法は、臨床医療供給業者にはよく知られているであろう。
投与されるGA標的化化合物の有効用量は、生物学的半減期、バイオアベイラビリティおよび毒性等のパラメータに対処する、当業者に既知の手順によって判断することができる。GA標的化化合物または薬学的に許容できるその誘導体と組み合わせて使用される治療剤の有効量は、これらの作用物質について当業者に既知の推奨用量に基づく。これらの推奨または既知のレベルは、本発明に従うGA標的化化合物または薬学的に許容できる誘導体と組み合わせたこれらの用量の有効性を試験した後、挙げられている用量の10%〜50%だけ低下させるのが好ましい。担当医は、毒性、骨髄、肝もしくは腎不全または有害な薬物−薬物相互作用により、どのようにして、およびいつ、治療を終了、中断または用量を低下させるように調整するかを知ることに留意すべきである。反対に、担当医は、臨床応答が適正でない(毒性を排除する)場合、治療をより高いレベルに調整することも知っているであろう。
治療有効用量は、患者において、症状の寛解または生存期間の延長をもたらすのに十分な化合物の量を指す。GA標的化剤の有効なインビトロ濃度は、EC50を計測することによって判断することができる。そのような作用物質のインビボでの毒性および治療効能は、例えばLD50(母集団の50%の致死用量)およびED50(母集団の50%の治療有効用量)を測定するための、細胞培養物または実験動物における標準的な薬学的手順によって測定することができる。毒性効果と治療効果との間の用量比は治療指数であり、これを比率LD50/ED50として表現することができる。大きい治療指数を呈する化合物が好ましい。これらの細胞培養アッセイおよび動物研究から得られたデータを、ヒトにおいて使用するための用量の範囲を定めるのに使用することができる。そのような化合物の用量は、毒性がほとんどまたは全くないED50を含む循環濃度の範囲内にあるのが好ましい。用量は、用いられる剤形および利用される投与経路に応じて、この範囲内で変動し得る。任意の化合物について、細胞培養アッセイから、治療有効用量を最初に推定することができる。用量は、動物モデルにおいて、IC50を含む循環血漿濃度範囲(すなわち、細胞培養物中で測定された際の未処置の対照と比較して、感染細胞からのRT生成の2分の1の最大阻害を実現する試験化合物の濃度)を実現するように定めてよい。そのような情報を使用して、ヒトにおける有用な用量をより正確に判断することができる。血漿中のレベルは、例えば、高速液体クロマトグラフィー(HPLC)によって計測することができる。
GA標的化化合物が他の治療剤と組み合わせて投与される実施形態において、該剤の併用効果は、ChouおよびTalalayの多薬物分析方法(T.C.ChouおよびP.Talalay、Adv.Enzyme Regul.、22、27〜55(1984))により、方程式
式中、CIは併用指数であり、(Dx)1は単独でxパーセントの効果を生成するために必要な薬物1の用量であり、D1はD2と組み合わせて同じxパーセントの効果を生成するために必要な薬物1の用量である。(Dx)2および(D)2の値は、同様に、薬物2に由来する。αの値は、半数効果方程式(median effect equation)
式中、faは用量Dの影響を受けた分画であり、fuは非感染分画であり、Dmは50%効果に必要な用量であり、mは用量−効果曲線の傾斜である。相互排他的な薬物(すなわち、同様の作用機序)については、両方の薬物単独およびそれらの平行線が半数効果プロット中に並んでいる。相互排他的でない薬物(すなわち、独立した作用機序)は半数効果プロット中に平行線を生じさせるが、混合物中では上に凹の曲線を生じさせることになる。作用物質が相互排他的である場合、αは0であり、作用物質が相互排他的でない場合、αは1である。相互排他的でないことを前提として得られる値は、相互排他的な薬物よりも常に若干大きい。1より小さいCI値は相乗作用を指示し、1より大きい値は拮抗作用を指示し、1に等しい値は相加効果を指示する。
併用薬物の効果は、Biosoft(Cambridge、UK)製のCalcuSynソフトウェアパッケージを使用して計算することもできる。
(実施例1)
HAEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKGR(配列番号1)の合成
修飾ペプチドの100μmolスケールでの固相ペプチド合成を、Fmoc保護されたPL−Rink樹脂(0.68mmol/g、Polymer Laboratories)を用いるFmoc化学を使用するSymphonyペプチドシンセサイザーで実施する。合成には、下記のNα−Fmoc保護されたアミノ酸を利用する:Fmoc−Arg(Pbf)−OH、Fmoc−Gly−OH、Fmoc−Lys(Boc)−OH、Fmoc−Val−OH、Fmoc−Leu−OH、Fmoc−Trp(Boc)−OH、Fmoc−Ala−OH、Fmoc−Ile−OH、Fmoc−Phe−OH、Fmoc−Glu(tBut)−OH、Fmoc−Gln−OH、Fmoc−Gly−OH、Fmoc−Leu−OH、Fmoc−Tyr(tBut)−OH、Fmoc−Ser(tBut)−OH、Fmoc−Asp(tBut)−OH、Fmoc−Thr(tBut)−OHおよびFmoc−His(Trt)−OH。手短に述べると、30当量のN−メチルモルホリン(NMM)の存在下、10当量のアミノ酸および10当量の活性化剤O−ベンゾトリアゾール−1−イル−N,N,N1,N1−テトラメチル−ウロニウムヘキサフルオロホスフェート(HBTU)およびN−ヒドロキシベンゾトリアゾール(HOBT)を使用して、N−メチルピロリジノン(NMP)中でカップリング反応を行い、各カップリングは2時間行う。Nα−Fmoc保護基の除去は、NMP中の25%(V/V)ピペリジンの溶液を使用して、4回、各回につき5分間実現する。カップリングごとに、樹脂をNMPで6回洗浄する。85%TFA/5%TIS/5%チオアニソールおよび5%フェノールを使用してペプチドを樹脂から切断し、続いて、ドライアイス冷却Et2Oによって沈殿させる。粗ペプチドを遠心分離し、凍結乾燥し、アセトニトリル中の0.1%TFAおよび水中の0.1%TFAを移動相として用いるC18カラムを使用する逆相HPLCによって生成物を精製し、純粋な化合物を白色固体として産生する。
HAEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKGR(配列番号1)の合成
修飾ペプチドの100μmolスケールでの固相ペプチド合成を、Fmoc保護されたPL−Rink樹脂(0.68mmol/g、Polymer Laboratories)を用いるFmoc化学を使用するSymphonyペプチドシンセサイザーで実施する。合成には、下記のNα−Fmoc保護されたアミノ酸を利用する:Fmoc−Arg(Pbf)−OH、Fmoc−Gly−OH、Fmoc−Lys(Boc)−OH、Fmoc−Val−OH、Fmoc−Leu−OH、Fmoc−Trp(Boc)−OH、Fmoc−Ala−OH、Fmoc−Ile−OH、Fmoc−Phe−OH、Fmoc−Glu(tBut)−OH、Fmoc−Gln−OH、Fmoc−Gly−OH、Fmoc−Leu−OH、Fmoc−Tyr(tBut)−OH、Fmoc−Ser(tBut)−OH、Fmoc−Asp(tBut)−OH、Fmoc−Thr(tBut)−OHおよびFmoc−His(Trt)−OH。手短に述べると、30当量のN−メチルモルホリン(NMM)の存在下、10当量のアミノ酸および10当量の活性化剤O−ベンゾトリアゾール−1−イル−N,N,N1,N1−テトラメチル−ウロニウムヘキサフルオロホスフェート(HBTU)およびN−ヒドロキシベンゾトリアゾール(HOBT)を使用して、N−メチルピロリジノン(NMP)中でカップリング反応を行い、各カップリングは2時間行う。Nα−Fmoc保護基の除去は、NMP中の25%(V/V)ピペリジンの溶液を使用して、4回、各回につき5分間実現する。カップリングごとに、樹脂をNMPで6回洗浄する。85%TFA/5%TIS/5%チオアニソールおよび5%フェノールを使用してペプチドを樹脂から切断し、続いて、ドライアイス冷却Et2Oによって沈殿させる。粗ペプチドを遠心分離し、凍結乾燥し、アセトニトリル中の0.1%TFAおよび水中の0.1%TFAを移動相として用いるC18カラムを使用する逆相HPLCによって生成物を精製し、純粋な化合物を白色固体として産生する。
アミノ酸およびN−ヒドロキシベンゾトリアゾール(HOBT)をNMP中に溶解し、配列に従って、HBTUまたはO−(7−アザベンゾトリアゾール−1−イル)−N,N,N,N’,N’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート(HATU)を使用して活性化させる。HBTU活性化のために、アミノ酸、HBTUを樹脂装填に対して10当量で添加し、NMMを30当量で添加する。各アミノ酸についてのHBTU活性化は、2回、各回につき2時間実施する。HATU活性化のために、アミノ酸およびHATUを、樹脂装填に対して10当量で添加し、ジイソプロピルエチルアミン(DIEA)を20当量で添加する。各アミノ酸についてのHATU活性化は、3時間行う。Fmoc保護基の除去は、NMP中の25%(V/V)ピペリジンの溶液を使用して、4回、各回につき5分間実現する。カップリングごとに、樹脂をNMPで6回洗浄する。85%TFA/5%TIS/5%チオアニソールおよび5%フェノールを使用してペプチドを樹脂から切断し、続いて、ドライアイス冷却Et2Oによって沈殿させる。粗ペプチドを遠心分離し、凍結乾燥し、アセトニトリル中の0.1%TFAおよび水中の0.1%TFAを移動相として用いるC18カラムを使用する逆相HPLCによって生成物を精製し、純粋な化合物を白色固体として産生する。
(実施例2)
HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS(配列番号2)の合成
修飾ペプチドの100μmolスケールでの固相ペプチド合成を、Fmoc保護されたPL−Rink樹脂(0.68mmol/g、Polymer Laboratories)を用いるFmoc化学を使用するSymphonyペプチドシンセサイザーで実施する。合成には、下記のNα−Fmoc保護されたアミノ酸を使用する: Fmoc−Ser(tBu)−OH、Fmoc−Pro−OH、Fmoc−Ala−OH、Fmoc−Gly−OH、Fmoc、Fmoc−Asn(Trt)−OH、Fmoc−Lys(Boc)−OH、Fmoc−Leu−OH、Fmoc−Trp(Boc)−OH、Fmoc−Glu(tBu)−OH、Fmoc−Ile−OH、Fmoc−Phe−OH、Fmoc−Arg(Pbf)−OH、Fmoc−Val−OH、Fmoc−Met−OH、Fmoc−Gln(Trt)−OH、Fmoc−Asp(tBu)−OH、Fmoc−Thr(tBut)−OHおよびFmoc−His(Trt)−OH。手短に述べると、10当量のアミノ酸および10当量の活性化剤O−ベンゾトリアゾール−1−イル−N,N,N1,N1−テトラメチル−ウロニウムヘキサフルオロホスフェート(HBTU)またはO−(7−アザベンゾトリアゾール−1−イル)−N,N,N,N’,N’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート(HATU)をN−ヒドロキシベンゾトリアゾール(HOBT)とともに使用して、N−メチルピロリジノン(NMP)中でカップリング反応を行う。HBTU活性化のために、アミノ酸、HBTUを樹脂装填に対して10当量で添加し、NMMを30当量で添加する。各アミノ酸についてのHBTU活性化は、2回、各回につき2時間実施する。HATU活性化のために、アミノ酸およびHATUを、樹脂装填に対して10当量で添加し、ジイソプロピルエチルアミン(DIEA)を20当量で添加する。各アミノ酸についてのHATU活性化は、3時間行う。Nα−Fmoc保護基の除去は、NMP中の25%(V/V)ピペリジンの溶液を使用して、4回、各回につき5分間実現する。カップリングごとに、樹脂をNMPで6回洗浄する。85%TFA/5%TIS/5%チオアニソールおよび5%フェノールを使用してペプチドを樹脂から切断し、続いて、ドライアイス冷却Et2Oによって沈殿させる。粗ペプチドを遠心分離し、凍結乾燥し、アセトニトリル中の0.1%TFAおよび水中の0.1%TFAを移動相として用いるC18カラムを使用する逆相HPLCによって生成物を精製し、純粋な化合物を白色固体として産生する。
HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS(配列番号2)の合成
修飾ペプチドの100μmolスケールでの固相ペプチド合成を、Fmoc保護されたPL−Rink樹脂(0.68mmol/g、Polymer Laboratories)を用いるFmoc化学を使用するSymphonyペプチドシンセサイザーで実施する。合成には、下記のNα−Fmoc保護されたアミノ酸を使用する: Fmoc−Ser(tBu)−OH、Fmoc−Pro−OH、Fmoc−Ala−OH、Fmoc−Gly−OH、Fmoc、Fmoc−Asn(Trt)−OH、Fmoc−Lys(Boc)−OH、Fmoc−Leu−OH、Fmoc−Trp(Boc)−OH、Fmoc−Glu(tBu)−OH、Fmoc−Ile−OH、Fmoc−Phe−OH、Fmoc−Arg(Pbf)−OH、Fmoc−Val−OH、Fmoc−Met−OH、Fmoc−Gln(Trt)−OH、Fmoc−Asp(tBu)−OH、Fmoc−Thr(tBut)−OHおよびFmoc−His(Trt)−OH。手短に述べると、10当量のアミノ酸および10当量の活性化剤O−ベンゾトリアゾール−1−イル−N,N,N1,N1−テトラメチル−ウロニウムヘキサフルオロホスフェート(HBTU)またはO−(7−アザベンゾトリアゾール−1−イル)−N,N,N,N’,N’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート(HATU)をN−ヒドロキシベンゾトリアゾール(HOBT)とともに使用して、N−メチルピロリジノン(NMP)中でカップリング反応を行う。HBTU活性化のために、アミノ酸、HBTUを樹脂装填に対して10当量で添加し、NMMを30当量で添加する。各アミノ酸についてのHBTU活性化は、2回、各回につき2時間実施する。HATU活性化のために、アミノ酸およびHATUを、樹脂装填に対して10当量で添加し、ジイソプロピルエチルアミン(DIEA)を20当量で添加する。各アミノ酸についてのHATU活性化は、3時間行う。Nα−Fmoc保護基の除去は、NMP中の25%(V/V)ピペリジンの溶液を使用して、4回、各回につき5分間実現する。カップリングごとに、樹脂をNMPで6回洗浄する。85%TFA/5%TIS/5%チオアニソールおよび5%フェノールを使用してペプチドを樹脂から切断し、続いて、ドライアイス冷却Et2Oによって沈殿させる。粗ペプチドを遠心分離し、凍結乾燥し、アセトニトリル中の0.1%TFAおよび水中の0.1%TFAを移動相として用いるC18カラムを使用する逆相HPLCによって生成物を精製し、純粋な化合物を白色固体として産生する。
(実施例3)
以下の合成を図11に提供する。
以下の合成を図11に提供する。
(実施例4)
以下の合成を図12に提供する。
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(実施例5)
以下の合成を図13に提供する。
以下の合成を図13に提供する。
(実施例6)
以下の合成を図14に提供する。
以下の合成を図14に提供する。
(実施例7)
以下の合成を図15に提供する。
以下の合成を図15に提供する。
(実施例8)
以下の合成を図16に提供する。
以下の合成を図16に提供する。
(実施例9)
以下の合成を図17に提供する。
以下の合成を図17に提供する。
(実施例10)
以下の合成を図18に提供する。
以下の合成を図18に提供する。
(実施例11)
以下の合成を図19に提供する。
以下の合成を図19に提供する。
(実施例12)
以下の合成を図20に提供する。
以下の合成を図20に提供する。
(実施例13)
以下の合成を図21に提供する。
以下の合成を図21に提供する。
(実施例14)
以下の合成を図22に提供する。
以下の合成を図22に提供する。
(実施例15)
以下の合成を図23に提供する。
以下の合成を図23に提供する。
(実施例16)
以下の合成を図24に提供する。
以下の合成を図24に提供する。
(実施例17)
以下の合成を図25に提供する。
以下の合成を図25に提供する。
(実施例18)
以下の合成を図26に提供する。
以下の合成を図26に提供する。
(実施例19)
3−{2−[2−(2−{2−[2−(2−tert−ブトキシカルボニル−エトキシ)−エトキシ]−エトキシ}−エトキシ)−エトキシ]エトキシ}−プロピオン酸tert−ブチルエステルの合成
3−{2−[2−(2−{2−[2−(2−tert−ブトキシカルボニル−エトキシ)−エトキシ]−エトキシ}−エトキシ)−エトキシ]エトキシ}−プロピオン酸tert−ブチルエステルの合成
(実施例20)
3−{2−[2−(2−{2−[2−(2−カルボキシ−エトキシ)−エトキシ]−エトキシ}−エトキシ)−エトキシ]−エトキシ}−プロピオン酸の合成
3−{2−[2−(2−{2−[2−(2−カルボキシ−エトキシ)−エトキシ]−エトキシ}−エトキシ)−エトキシ]−エトキシ}−プロピオン酸の合成
(実施例21)
3−(2−{2−[2−(2−{2−[2−(4−{2−[2−(2−メチル−[1,3]ジオキソラン−2−イルメチル)−[1,3]ジオキソラン−2−イル]−エチル}−フェニルカルバモイル)−エトキシ]−エトキシ}−エトキシ)−エトキシ]−エトキシ}−エトキシ)−プロピオン酸の合成
3−(2−{2−[2−(2−{2−[2−(4−{2−[2−(2−メチル−[1,3]ジオキソラン−2−イルメチル)−[1,3]ジオキソラン−2−イル]−エチル}−フェニルカルバモイル)−エトキシ]−エトキシ}−エトキシ)−エトキシ]−エトキシ}−エトキシ)−プロピオン酸の合成
(実施例22)
4−{2−[2−(2−メチル−[1,3]ジオキソラン−2−イルメチル)−[1,3]ジオキソラン−2−イル]−エチル}−フェニルアミンの合成
4−{2−[2−(2−メチル−[1,3]ジオキソラン−2−イルメチル)−[1,3]ジオキソラン−2−イル]−エチル}−フェニルアミンの合成
(実施例23)
4−[4−(3,5−ジオキソ−ヘキシル)−フェニルカルバモイル]−酪酸2,5−ジオキソピロリジン−1−イルエステル(10)の合成
4−[4−(3,5−ジオキソ−ヘキシル)−フェニルカルバモイル]−酪酸2,5−ジオキソピロリジン−1−イルエステル(10)の合成
6−(4−ニトロ−フェニル)−ヘキサン−2,4−ジオン(11)
反応槽(熱および真空乾燥ならびに磁気回転棒装備)に、テトラヒドロフランおよびリチウムジイソプロピルアミド(2Mヘプタン/エチルベンゼン/テトラヒドロフラン;69.4mL、138.9mmol)を添加した。溶液を−78℃まで冷却した。ペンタン−2,4−ジオン(7.13mL、69.4mmol)を滴下添加し、溶液を−78℃で30分間撹拌した。4−ニトロベンジルブロミド(15.0g、69.4mmol)を一度に添加した。溶液をドライアイス/アセトン浴から除去し、室温まで加温させ、16時間撹拌した。溶液を約0℃まで冷却し、反応物を1M HClでクエンチした。テトラヒドロフランを減圧下で除去した。粗材料をジクロロメタン中に溶かし、1M HClおよびブラインで洗浄した。水層をジクロロメタンで再度洗浄した。合わせたジクロロメタン層を乾燥し(Na2SO4)、減圧下で除去した。5%〜15%酢酸エチル/ヘキサンを使用して勾配フラッシュカラムクロマトグラフィー(FCC)を実施し、表題化合物(8.5g、52%;黄色固体)を産生した。1H NMR(CDCl3):δ8.14(d,J=9.0Hz,2H)、δ7.43(d,J=8.4Hz,2H)、δ5.45(s,1H)、δ3.06(t,J=7.5Hz,2H)、δ2.64(t,J=7.8Hz,2H)、δ2.04(s,3H)。
ステップ2
4−[4−(3,5−ジオキソ−ヘキシル)−フェニルカルバモイル]−酪酸(12)
200mLのテトラヒドロフラン、6−(4−ニトロ−フェニル)−ヘキサン−2,4−ジオン(8.0g、34.0mmol)およびジヒドロ−ピラン−2,6−ジオン(3.88g、34.0mmol)を、反応槽に添加した。反応槽をアルゴンで3回パージした。約200mgのパラジウム(活性炭上10wt%)を添加した。反応槽をアルゴンで再度パージし、バルーンを介して過剰水素を導入した。溶液を室温で16時間撹拌した。水素を減圧下で除去し、セライトを通すろ過によって触媒を除去した。テトラヒドロフランを減圧下で除去し、表題化合物(10.5g、97%、黄色固体)を産生した。
4−[4−(3,5−ジオキソ−ヘキシル)−フェニルカルバモイル]−酪酸(12)
200mLのテトラヒドロフラン、6−(4−ニトロ−フェニル)−ヘキサン−2,4−ジオン(8.0g、34.0mmol)およびジヒドロ−ピラン−2,6−ジオン(3.88g、34.0mmol)を、反応槽に添加した。反応槽をアルゴンで3回パージした。約200mgのパラジウム(活性炭上10wt%)を添加した。反応槽をアルゴンで再度パージし、バルーンを介して過剰水素を導入した。溶液を室温で16時間撹拌した。水素を減圧下で除去し、セライトを通すろ過によって触媒を除去した。テトラヒドロフランを減圧下で除去し、表題化合物(10.5g、97%、黄色固体)を産生した。
ステップ3
4−[4−(3,5−ジオキソ−ヘキシル)−フェニルカルバモイル]−酪酸2,5−ジオキソピロリジン−1−イルエステル(10)
反応槽(熱および真空乾燥ならびに磁気回転棒装備)に、4−[4−(3,5−ジオキソ−ヘキシル)−フェニルカルバモイル]−酪酸(10.53g、33.0mmol)、N−ヒドロキシコハク酸イミド(3.8g、33.0mmol)および1−[3−(ジメチルアミノ)プロピル]−3−エチルカルボジイミド塩酸塩(6.3g、33.0mmol)およびジクロロメタン(250mL)を添加した。溶液を、窒素下、室温で16時間撹拌し、その後、10%クエン酸、ブラインで洗浄し、乾燥した(Na2SO4)。ジクロロメタンを減圧下で除去した。70%酢酸エチル/ヘキサンを用いるFCCにより、表題化合物(7.4g、黄色固体、54%)を生じさせた。1H NMR(CDCl3):δ7.87(s,1H)、δ7.43(d,J=8.4Hz,2H)、δ7.12(d,J=8.4Hz,2H)、δ5.46(s,1H)、δ2.89(t(&m)、J=8.1Hz(tについて)、7H)、δ2.73(t,J=6.0Hz,2H)、δ2.56(t,J=7.2Hz,2H)、δ2.47(t,J=6.9Hz,2H)、δ2.21(p,J=6.6Hz,2H)、δ2.04(s,3H)。
4−[4−(3,5−ジオキソ−ヘキシル)−フェニルカルバモイル]−酪酸2,5−ジオキソピロリジン−1−イルエステル(10)
反応槽(熱および真空乾燥ならびに磁気回転棒装備)に、4−[4−(3,5−ジオキソ−ヘキシル)−フェニルカルバモイル]−酪酸(10.53g、33.0mmol)、N−ヒドロキシコハク酸イミド(3.8g、33.0mmol)および1−[3−(ジメチルアミノ)プロピル]−3−エチルカルボジイミド塩酸塩(6.3g、33.0mmol)およびジクロロメタン(250mL)を添加した。溶液を、窒素下、室温で16時間撹拌し、その後、10%クエン酸、ブラインで洗浄し、乾燥した(Na2SO4)。ジクロロメタンを減圧下で除去した。70%酢酸エチル/ヘキサンを用いるFCCにより、表題化合物(7.4g、黄色固体、54%)を生じさせた。1H NMR(CDCl3):δ7.87(s,1H)、δ7.43(d,J=8.4Hz,2H)、δ7.12(d,J=8.4Hz,2H)、δ5.46(s,1H)、δ2.89(t(&m)、J=8.1Hz(tについて)、7H)、δ2.73(t,J=6.0Hz,2H)、δ2.56(t,J=7.2Hz,2H)、δ2.47(t,J=6.9Hz,2H)、δ2.21(p,J=6.6Hz,2H)、δ2.04(s,3H)。
(実施例23)
3−{2−[2−(2−{4−[4−(3,5−ジオキソ−ヘキシル)−フェニルカルバモイル]−ブチリルアミノ}−エトキシ)−エトキシ]−エトキシ}−プロピオン酸2,5−ジオキソ−ピロリジン−1−イルエステル、(20)の合成
3−{2−[2−(2−{4−[4−(3,5−ジオキソ−ヘキシル)−フェニルカルバモイル]−ブチリルアミノ}−エトキシ)−エトキシ]−エトキシ}−プロピオン酸2,5−ジオキソ−ピロリジン−1−イルエステル、(20)の合成
3−{2−[2−(2−ヒドロキシ−エトキシ)−エトキシ]−エトキシ}−プロピオン酸tert−ブチルエステル
Na金属(触媒)を、0℃のTHF(100mL)中のアクリル酸tert−ブチルエステル(6.7mL、46mmol)および2−[2−(2−ヒドロキシ−エトキシ)−エトキシ]−エタノール(20.7g、138mmol)の撹拌溶液に添加し、混合物を終夜撹拌した。溶媒を除去し、残存油をEtOAc(100mL)中に溶解した。有機層を水(3×50mL)で洗浄し、Na2SO4で乾燥し、溶媒を真空除去し、次のステップにそのまま使用されるであろう表題化合物に相当する油を生じさせた。(M+1)=279。
ステップ2
3−{2−[2−(2−トシルスルホニルオキシ−エトキシ)−エトキシ]−エトキシ}−プロピオン酸tert−ブチルエステル
塩化トシル(22.3g、117mmol)を、(240mL)中の3−{2−[2−(2−ヒドロキシ−エトキシ)−エトキシ]−エトキシ}−プロピオン酸tert−ブチルエステル(16.3g、58.6mmol)およびピリジン60mLの撹拌溶液に少量ずつ添加し、混合物を終夜撹拌した。反応物を水(300mL)でクエンチし、有機層を分離した。水層をCH2Cl2(2×100mL)で抽出した。合わせた有機層を、HCl(1N、100mL)、水(100mL)で洗浄し、Na2SO4で乾燥し、溶媒を真空除去し、次のステップにそのまま使用されるであろう表題化合物に相当する油を生じさせた。(M+1)=433。
3−{2−[2−(2−トシルスルホニルオキシ−エトキシ)−エトキシ]−エトキシ}−プロピオン酸tert−ブチルエステル
塩化トシル(22.3g、117mmol)を、(240mL)中の3−{2−[2−(2−ヒドロキシ−エトキシ)−エトキシ]−エトキシ}−プロピオン酸tert−ブチルエステル(16.3g、58.6mmol)およびピリジン60mLの撹拌溶液に少量ずつ添加し、混合物を終夜撹拌した。反応物を水(300mL)でクエンチし、有機層を分離した。水層をCH2Cl2(2×100mL)で抽出した。合わせた有機層を、HCl(1N、100mL)、水(100mL)で洗浄し、Na2SO4で乾燥し、溶媒を真空除去し、次のステップにそのまま使用されるであろう表題化合物に相当する油を生じさせた。(M+1)=433。
ステップ3
3−{2−[2−(2−アミノ−エトキシ)−エトキシ]−エトキシ}−プロピオン酸tert−ブチルエステル
NaN3(35g、538mmol)を、DMF(150mL)中の3−{2−[2−(2−トシルスルホニルオキシ−エトキシ)−エトキシ]−エトキシ}−プロピオン酸tert−ブチルエステル(20g、46mmol)の撹拌溶液に添加し、反応物を終夜撹拌した。反応物を水(200mL)で希釈し、EtOAc(4×100mL)で抽出した。有機層を水(100mL)およびブライン(100mL)で洗浄し、Na2SO4で乾燥した。溶媒を真空除去し、油を生じさせた。カラムクロマトグラフィーEtOAc/Hex(1:4)により、3−{2−[2−(2−アジド−エトキシ)−エトキシ]−エトキシ}−プロピオン酸tert−ブチルエステル、(M+1)=304に相当する油を生じさせた。EtOAc中のPd(炭素上5%)を使用して、水素(1気圧)下、この油を3日間水素化した。ろ過によって触媒を除去し、溶媒を真空除去し、表題化合物、(M+1)=278に相当する油を生じさせた。
3−{2−[2−(2−アミノ−エトキシ)−エトキシ]−エトキシ}−プロピオン酸tert−ブチルエステル
NaN3(35g、538mmol)を、DMF(150mL)中の3−{2−[2−(2−トシルスルホニルオキシ−エトキシ)−エトキシ]−エトキシ}−プロピオン酸tert−ブチルエステル(20g、46mmol)の撹拌溶液に添加し、反応物を終夜撹拌した。反応物を水(200mL)で希釈し、EtOAc(4×100mL)で抽出した。有機層を水(100mL)およびブライン(100mL)で洗浄し、Na2SO4で乾燥した。溶媒を真空除去し、油を生じさせた。カラムクロマトグラフィーEtOAc/Hex(1:4)により、3−{2−[2−(2−アジド−エトキシ)−エトキシ]−エトキシ}−プロピオン酸tert−ブチルエステル、(M+1)=304に相当する油を生じさせた。EtOAc中のPd(炭素上5%)を使用して、水素(1気圧)下、この油を3日間水素化した。ろ過によって触媒を除去し、溶媒を真空除去し、表題化合物、(M+1)=278に相当する油を生じさせた。
ステップ4
3−{2−[2−(2−{4−[4−(3,5−ジオキソ−ヘキシル)−フェニルカルバモイル]−ブチリルアミノ}−エトキシ)−エトキシ]−エトキシ}−プロピオン酸tert−ブチルエステル
CH2Cl2(10mL)中の、4−[4−(3,5−ジオキソ−ヘキシル)−フェニルカルバモイル]−酪酸2,5−ジオキソ−ピロリジン−1−イルエステル(1.5g、3.6mmol)、3−{2−[2−(2−アミノ−エトキシ)−エトキシ]−エトキシ}−プロピオン酸tert−ブチルエステル(1.0g、3.6mmol)およびDIEA(1.3μL、7.2mmol)の溶液を、室温で終夜撹拌した。溶媒を真空除去し、カラムクロマトグラフィーEtOAc/MeOH(95:5)を使用して残油を精製し、表題化合物を透明油、(M+1)=579として生じさせた。
3−{2−[2−(2−{4−[4−(3,5−ジオキソ−ヘキシル)−フェニルカルバモイル]−ブチリルアミノ}−エトキシ)−エトキシ]−エトキシ}−プロピオン酸tert−ブチルエステル
CH2Cl2(10mL)中の、4−[4−(3,5−ジオキソ−ヘキシル)−フェニルカルバモイル]−酪酸2,5−ジオキソ−ピロリジン−1−イルエステル(1.5g、3.6mmol)、3−{2−[2−(2−アミノ−エトキシ)−エトキシ]−エトキシ}−プロピオン酸tert−ブチルエステル(1.0g、3.6mmol)およびDIEA(1.3μL、7.2mmol)の溶液を、室温で終夜撹拌した。溶媒を真空除去し、カラムクロマトグラフィーEtOAc/MeOH(95:5)を使用して残油を精製し、表題化合物を透明油、(M+1)=579として生じさせた。
ステップ5
3−{2−[2−(2−{4−[4−(3,5−ジオキソ−ヘキシル)−フェニルカルバモイル]−ブチリルアミノ}−エトキシ)−エトキシ]−エトキシ}−プロピオン酸2,5−ジオキソ−ピロリジン−1−イルエステル
3−{2−[2−(2−{4−[4−(3,5−ジオキソ−ヘキシル)−フェニルカルバモイル]−ブチリルアミノ}−エトキシ)−エトキシ]−エトキシ}−プロピオン酸tert−ブチルエステル(400mg、0.692mmol)をTFA/CH2Cl2(1:1、3mL)中に溶解し、混合物を終夜撹拌した。溶媒を除去し、油を酸中間体として生じさせた。DIEA(569μL、3.09mmol)、N−ヒドロキシコハク酸イミド(119mg、1.03mmol)およびEDC(197mg、1.0mmol)を含有するCH2Cl2(4mL)中にこの油を溶解し、混合物を終夜撹拌した。溶媒を除去し、カラムクロマトグラフィーEtOAc/MeOH(95:5)を使用して残油を精製し、油を表題化合物、(M+1)=620として生じさせた。
3−{2−[2−(2−{4−[4−(3,5−ジオキソ−ヘキシル)−フェニルカルバモイル]−ブチリルアミノ}−エトキシ)−エトキシ]−エトキシ}−プロピオン酸2,5−ジオキソ−ピロリジン−1−イルエステル
3−{2−[2−(2−{4−[4−(3,5−ジオキソ−ヘキシル)−フェニルカルバモイル]−ブチリルアミノ}−エトキシ)−エトキシ]−エトキシ}−プロピオン酸tert−ブチルエステル(400mg、0.692mmol)をTFA/CH2Cl2(1:1、3mL)中に溶解し、混合物を終夜撹拌した。溶媒を除去し、油を酸中間体として生じさせた。DIEA(569μL、3.09mmol)、N−ヒドロキシコハク酸イミド(119mg、1.03mmol)およびEDC(197mg、1.0mmol)を含有するCH2Cl2(4mL)中にこの油を溶解し、混合物を終夜撹拌した。溶媒を除去し、カラムクロマトグラフィーEtOAc/MeOH(95:5)を使用して残油を精製し、油を表題化合物、(M+1)=620として生じさせた。
(実施例24)
h38c2ベースのGA標的化化合物の合成
実施例16および17の化合物は、下記手順によってh38c2と連結させることができる。リン酸緩衝溶液(10mg/mL)中の1mLの抗体h38c2を、12μLの標的化化合物の10mg/mL原液に添加し、結果として生じた混合物を、使用前に2時間、室温で維持した。
h38c2ベースのGA標的化化合物の合成
実施例16および17の化合物は、下記手順によってh38c2と連結させることができる。リン酸緩衝溶液(10mg/mL)中の1mLの抗体h38c2を、12μLの標的化化合物の10mg/mL原液に添加し、結果として生じた混合物を、使用前に2時間、室温で維持した。
(実施例25)
C.Raderら、J.Mol.Biol.、332:889〜899(2003)は、h38c2を作製する1つの方法を詳述している。下記は、この参考文献中の結果、材料および方法を詳述するものである。
C.Raderら、J.Mol.Biol.、332:889〜899(2003)は、h38c2を作製する1つの方法を詳述している。下記は、この参考文献中の結果、材料および方法を詳述するものである。
結果
ヒト化
ヒトVκ遺伝子DPK−9およびヒトJκ遺伝子JK4を、カッパ軽鎖可変ドメインのヒト化のためのフレームワークとして使用し、ヒトVH遺伝子DP−47およびヒトJH遺伝子JH4を、m38C2の重鎖可変ドメインのヒト化のためのフレームワークとして使用した。Kabatらによって定義されている通りのすべての相補性決定領域(CDR)残基、ならびに軽鎖および重鎖可変ドメインの両方における所定のフレームワーク残基を、m38C2からヒトフレームワークに移植した。移植されるフレームワーク残基の選択は、マウスmAb 33F12 Fab(PDB 1AXT)の結晶構造に基づき得る。mAb 33F12 Fabは、m38c2と、可変ドメインにおける92%の配列相同性および同一のCDR長を共有する。しかも、33F12およびm38C2は、いずれも同様の触媒活性を有する。移植されるフレームワーク残基は、軽鎖中の5個の残基および重鎖中の7個の残基からなっており、m38C2の触媒活性に直接的または間接的に加担している可能性がある残基を包含している。これらは、重鎖のフレームワーク領域3(FR3)内に位置決めされているm38C2、LysH93の反応性リシンを含む。マウスmAb 33F12と38C2との間に保存される6個の残基、SerH35、ValH37、TrpH47、TrpH103およびPheL98は、LysH93のεアミノ基の5Å半径内にある。これらの残基も、ヒト化中に保存した。LysH93は、マウスmAb 33F12および38C2の高度に疎水性の基質結合性部位の底部に位置する。CDR残基に加えて、多数のフレームワーク残基がこのポケットに並んでいる。これらのうち、LeuL37、GlnL42、SerL43、ValL85、PheL87、ValH5、SerH40、GluH42、GlyH88、IleH89およびThrH94をヒトフレームワークに移植した。
ヒト化
ヒトVκ遺伝子DPK−9およびヒトJκ遺伝子JK4を、カッパ軽鎖可変ドメインのヒト化のためのフレームワークとして使用し、ヒトVH遺伝子DP−47およびヒトJH遺伝子JH4を、m38C2の重鎖可変ドメインのヒト化のためのフレームワークとして使用した。Kabatらによって定義されている通りのすべての相補性決定領域(CDR)残基、ならびに軽鎖および重鎖可変ドメインの両方における所定のフレームワーク残基を、m38C2からヒトフレームワークに移植した。移植されるフレームワーク残基の選択は、マウスmAb 33F12 Fab(PDB 1AXT)の結晶構造に基づき得る。mAb 33F12 Fabは、m38c2と、可変ドメインにおける92%の配列相同性および同一のCDR長を共有する。しかも、33F12およびm38C2は、いずれも同様の触媒活性を有する。移植されるフレームワーク残基は、軽鎖中の5個の残基および重鎖中の7個の残基からなっており、m38C2の触媒活性に直接的または間接的に加担している可能性がある残基を包含している。これらは、重鎖のフレームワーク領域3(FR3)内に位置決めされているm38C2、LysH93の反応性リシンを含む。マウスmAb 33F12と38C2との間に保存される6個の残基、SerH35、ValH37、TrpH47、TrpH103およびPheL98は、LysH93のεアミノ基の5Å半径内にある。これらの残基も、ヒト化中に保存した。LysH93は、マウスmAb 33F12および38C2の高度に疎水性の基質結合性部位の底部に位置する。CDR残基に加えて、多数のフレームワーク残基がこのポケットに並んでいる。これらのうち、LeuL37、GlnL42、SerL43、ValL85、PheL87、ValH5、SerH40、GluH42、GlyH88、IleH89およびThrH94をヒトフレームワークに移植した。
発現
ヒト化可変ドメインをヒト定常ドメインCκおよびCγ11と融合させることにより、大腸菌中に発現するFabとして初めにh38C2が生み出された。次に、哺乳動物細胞中におけるヒトIgG1発現のために操作されたPIGGベクターを使用して、h38c2 Fabからh38c2 IgGを形成した。一過性に形質移入したヒト293T細胞由来の上清を組換えタンパク質A上での親和性クロマトグラフィーに付し、約1mg/Lのh38C2 IgG1を産出した。SDS−PAGE、それに続くクマシーブルー染色によって純度を証明した。
ヒト化可変ドメインをヒト定常ドメインCκおよびCγ11と融合させることにより、大腸菌中に発現するFabとして初めにh38C2が生み出された。次に、哺乳動物細胞中におけるヒトIgG1発現のために操作されたPIGGベクターを使用して、h38c2 Fabからh38c2 IgGを形成した。一過性に形質移入したヒト293T細胞由来の上清を組換えタンパク質A上での親和性クロマトグラフィーに付し、約1mg/Lのh38C2 IgG1を産出した。SDS−PAGE、それに続くクマシーブルー染色によって純度を証明した。
β−ジケトン化合物
β−ジケトンのm38c2との共有結合的付加によって形成されるエナミノンは、λmax=318nmにおいて特徴的なUV吸光度を有する。m38C2 IgGと同じく、h38C2 IgGは、β−ジケトンとのインキュベーション後、特徴的なエナミノン吸光度を示した。陰性対照として、h38C2と同じIgG1アイソタイプを持つが反応性リシンを持たない組換えヒト抗−HIV−1 gp120 mAb b12は、β−ジケトン2とのインキュベーション後、エナミノン吸光度を明らかにしなかった。β−ジケトンのm38C2およびh38C2との結合の定量比較に、著者らは競争ELISAを使用した。β−ジケトン2および3の濃度を増大させて抗体をインキュベートし、固定化BSA複合β−ジケトン1に対してアッセイした。見かけの平衡解離定数は、β−ジケトン2では38μM(m38C2)および7.6μM(h38C2)、β−ジケトン3では0.43μM(m38C2)および1.0μM(h38C2)であり、マウスおよびヒト化抗体と同様のβ−ジケトン結合特性を明らかにした。
材料および方法
分子モデリング
関連アルドラーゼ抗体であるマウス33F12 Fab(Protein Data Bank ID:1AXT)の結晶構造を鋳型として使用するホモロジーモデリングによって、h38C2 Fabの分子モデルを構築した。マウス33F12 Fabの結晶構造は、2.15Å4の分解能であらかじめ測定しておいた。INSIGHT IIソフトウェア(Accelrys)内のHOMOLOGYモジュールを使用するマウス33F12および38C2アミノ酸配列のアラインメントにより、双方の配列が高度に相同であることを確認した。それらは、2つの可変ドメインにおいて、226個のアミノ酸中19個だけ互いに異なっており、そのCDRは、同じ長さを共有する。高い配列相同性に加えて、両構造は、38C2の低分解能結晶構造によって観測されるように、かなりの構造的類似性を呈する。モデル中の残基を、h38C2アミノ酸配列と一致するように突然変異させ、標準的な回転異性体に基づいて側鎖を置いた。その後、それぞれ100ステップの、最急降下最小化、それに続く共役勾配最小化を使用するINSIGHT II内のDISCOVERモジュールにより、このモデルを最小化した。
分子モデリング
関連アルドラーゼ抗体であるマウス33F12 Fab(Protein Data Bank ID:1AXT)の結晶構造を鋳型として使用するホモロジーモデリングによって、h38C2 Fabの分子モデルを構築した。マウス33F12 Fabの結晶構造は、2.15Å4の分解能であらかじめ測定しておいた。INSIGHT IIソフトウェア(Accelrys)内のHOMOLOGYモジュールを使用するマウス33F12および38C2アミノ酸配列のアラインメントにより、双方の配列が高度に相同であることを確認した。それらは、2つの可変ドメインにおいて、226個のアミノ酸中19個だけ互いに異なっており、そのCDRは、同じ長さを共有する。高い配列相同性に加えて、両構造は、38C2の低分解能結晶構造によって観測されるように、かなりの構造的類似性を呈する。モデル中の残基を、h38C2アミノ酸配列と一致するように突然変異させ、標準的な回転異性体に基づいて側鎖を置いた。その後、それぞれ100ステップの、最急降下最小化、それに続く共役勾配最小化を使用するINSIGHT II内のDISCOVERモジュールにより、このモデルを最小化した。
h38C2 Fabの構築
m38C2の可変軽鎖および重鎖ドメインの配列、ならびにヒト生殖細胞系配列DPK−9、JK4、DP−47およびJH4(V BASE;ワールドワイドウェブサイト、mrc−cpe.cam.ac.uk/vbaseを参照)の配列を使用して、それぞれヒト化VκおよびVHの合成的アセンブリのための重複オリゴヌクレオチドを設計した。配列NXS/Tを持つN−グリコシル化部位、ならびに内部制限部位HindIII、XbaI、SacI、ApaIおよびSfiIは回避した。Expand High Fidelity PCRシステム(Roche Molecular Systems)を使用してPCRを行った。ヒト化Vκオリゴヌクレオチドは、Lフランクセンス(flank sense)(C.Raderら、J.Biol.Chem.、275:13668〜13676(2000));
m38C2の可変軽鎖および重鎖ドメインの配列、ならびにヒト生殖細胞系配列DPK−9、JK4、DP−47およびJH4(V BASE;ワールドワイドウェブサイト、mrc−cpe.cam.ac.uk/vbaseを参照)の配列を使用して、それぞれヒト化VκおよびVHの合成的アセンブリのための重複オリゴヌクレオチドを設計した。配列NXS/Tを持つN−グリコシル化部位、ならびに内部制限部位HindIII、XbaI、SacI、ApaIおよびSfiIは回避した。Expand High Fidelity PCRシステム(Roche Molecular Systems)を使用してPCRを行った。ヒト化Vκオリゴヌクレオチドは、Lフランクセンス(flank sense)(C.Raderら、J.Biol.Chem.、275:13668〜13676(2000));
h38C2 IgG1の構築、生成および精製
最近記述されたベクターPIGG(C.Raderら、FASEB J.、16:2000〜2002(2002))を、h38C2 IgG1の哺乳動物発現のために使用した。哺乳動物発現ベクターPIGG−h38c2は、図23に例示されている。9kbベクターは、双方向性CMプロモーター構築物によって駆動される重鎖γ1および軽鎖κ発現カセットを含む。プライマーPIGG−h38C2H(センス;5’−GAGGAGGAGGAGGAGGAGCTCACTCCGAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTG−3’)(配列番号97)およびGBACK(C.F.Barbas三世ら、Phage Display:A laboratory manual、Cold Spring Harbor Laboratory、Cold Spring Harbor N.Y.(2001))を使用して、ファージミドベクターpComb3X中のh38C2 Fab由来のVHコード配列を増幅し、SacIおよびApaIで消化し、適当に消化されたベクターPIGG中にクローン化した。プライマーPIGG−h38C2L(センス:5’−GAGGAGGAGGAGGAGAAGCTTGTTGCTCTGGATCTCTGGTGCCTACGGGGAGCTCCAGATGACCCAGTCTCC−3’)(配列番号98)およびLEADB(C.F.Barbas三世ら、Phage Display:A laboratory manual、Cold Spring Harbor Laboratory、Cold Spring Harbor N.Y.(2001))を使用して、ファージミドベクターpComb3X中のh38C2 Fab由来のVLコード配列を増幅し、HindIIIおよびXbaIで消化し、h38C2重鎖を既に含有する適当に消化されたベクターPIGG中にクローン化した。中間体および最終PIGGベクター構築物を大腸菌株SURE(Stratagene)中で増幅し、QIAGEN Plasmid Maxi Kitを用いて調製した。h38C2 IgG1は、Lipofectamine2000(Invitrogen)を使用するヒト293T細胞の一過性形質移入により、調製された最終PIGGベクター構築物から生成した。形質移入された細胞を、RPMI1640(Hyclone)内のGIBCO10%超低IgG(<0.1%)FCS(Invitrogen)中に2週間維持した。この期間中に、培地を収集し、3回交換した。収集した培地を、組換えタンパク質A HiTrapカラム(Amersham Biosciences)上での親和性クロマトグラフィーに付した。この精製ステップは、Eppendorf BioPhotometerを使用して280nmにおける光学密度を計測することによって測定したところ、2,300mLの収集した培地から2.45mgのh38C2 IgG1を産出した。Slide−A−Lyzer 10K透析カセット(Pierce)中のPBSに対する透析に続いて、Ultrafree−15遠心ろ過デバイス(UFV2BTK40;Millipore)を使用して抗体を760μg/mLまで濃縮し、0.2μmのAcrodisc 13MM S−200シリンジフィルター(Pall)を通して無菌ろ過した。最終収率は2.13mg(87%)であった。非還元SDS−PAGE、それに続くクマシーブルー染色により、精製されたh38C2 IgG1を確認した。
最近記述されたベクターPIGG(C.Raderら、FASEB J.、16:2000〜2002(2002))を、h38C2 IgG1の哺乳動物発現のために使用した。哺乳動物発現ベクターPIGG−h38c2は、図23に例示されている。9kbベクターは、双方向性CMプロモーター構築物によって駆動される重鎖γ1および軽鎖κ発現カセットを含む。プライマーPIGG−h38C2H(センス;5’−GAGGAGGAGGAGGAGGAGCTCACTCCGAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTG−3’)(配列番号97)およびGBACK(C.F.Barbas三世ら、Phage Display:A laboratory manual、Cold Spring Harbor Laboratory、Cold Spring Harbor N.Y.(2001))を使用して、ファージミドベクターpComb3X中のh38C2 Fab由来のVHコード配列を増幅し、SacIおよびApaIで消化し、適当に消化されたベクターPIGG中にクローン化した。プライマーPIGG−h38C2L(センス:5’−GAGGAGGAGGAGGAGAAGCTTGTTGCTCTGGATCTCTGGTGCCTACGGGGAGCTCCAGATGACCCAGTCTCC−3’)(配列番号98)およびLEADB(C.F.Barbas三世ら、Phage Display:A laboratory manual、Cold Spring Harbor Laboratory、Cold Spring Harbor N.Y.(2001))を使用して、ファージミドベクターpComb3X中のh38C2 Fab由来のVLコード配列を増幅し、HindIIIおよびXbaIで消化し、h38C2重鎖を既に含有する適当に消化されたベクターPIGG中にクローン化した。中間体および最終PIGGベクター構築物を大腸菌株SURE(Stratagene)中で増幅し、QIAGEN Plasmid Maxi Kitを用いて調製した。h38C2 IgG1は、Lipofectamine2000(Invitrogen)を使用するヒト293T細胞の一過性形質移入により、調製された最終PIGGベクター構築物から生成した。形質移入された細胞を、RPMI1640(Hyclone)内のGIBCO10%超低IgG(<0.1%)FCS(Invitrogen)中に2週間維持した。この期間中に、培地を収集し、3回交換した。収集した培地を、組換えタンパク質A HiTrapカラム(Amersham Biosciences)上での親和性クロマトグラフィーに付した。この精製ステップは、Eppendorf BioPhotometerを使用して280nmにおける光学密度を計測することによって測定したところ、2,300mLの収集した培地から2.45mgのh38C2 IgG1を産出した。Slide−A−Lyzer 10K透析カセット(Pierce)中のPBSに対する透析に続いて、Ultrafree−15遠心ろ過デバイス(UFV2BTK40;Millipore)を使用して抗体を760μg/mLまで濃縮し、0.2μmのAcrodisc 13MM S−200シリンジフィルター(Pall)を通して無菌ろ過した。最終収率は2.13mg(87%)であった。非還元SDS−PAGE、それに続くクマシーブルー染色により、精製されたh38C2 IgG1を確認した。
エナミノン形成
25μMの抗体中の結合性部位および125μMのβ−ジケトンの最終濃度となるまで、抗体(h38C2 IgG1またはb12 IgG1)をβ−ジケトン(ii)に添加した。この混合物を室温で10分間インキュベートした後、SOFTmax Proソフトウェア(バージョン3.1.2)を使用するSpectraMax Plus384 UVプレートリーダー(Molecular Devices)でUVスペクトルを取得した。
25μMの抗体中の結合性部位および125μMのβ−ジケトンの最終濃度となるまで、抗体(h38C2 IgG1またはb12 IgG1)をβ−ジケトン(ii)に添加した。この混合物を室温で10分間インキュベートした後、SOFTmax Proソフトウェア(バージョン3.1.2)を使用するSpectraMax Plus384 UVプレートリーダー(Molecular Devices)でUVスペクトルを取得した。
結合アッセイ
特に断りのない限り、すべての溶液はリン酸緩衝溶液(pH7.4)であった。β−ジケトン(ii)または(iii)いずれかの2倍溶液(50μL)を50μLの抗体(h38C2またはm38C2のいずれか)に添加し、37℃で1時間インキュベートさせた。ピペッティングにより、溶液を混合した。抗体の最終濃度は0.4〜8nMの抗体中の結合性部位であり、β−ジケトン(ii)および(iii)の最終濃度はそれぞれ10−9〜10−2Mおよび10−10〜10−4Mであった。Costar3690 96−ウェルプレート(Corning)の各ウェルに、TBS中のβ−ジケトン(i)のBSA複合体を100ngコーティングした。その後、TBS中の3%(w/v)BSAでウェルをブロックした。その後、50μLの抗体/β−ジケトン混合物、続いて、西洋ワサビペルオキシダーゼと複合した、ヤギ抗ヒトFc IgGポリクローナル抗体(Pierce)またはウサギ抗マウスFc IgGポリクローナル抗体(Jackson ImmunoResearch Laboratories)いずれかの50μLの1:1,000希釈物を添加した。これに50μLのABTS基質溶液が続いた。各添加の間、プレートを覆い、37℃で1時間インキュベートし、その後、脱イオンH2Oで5回洗浄した。上述の通りにして、405nmにおける吸光度を、β−ジケトンのない反応が適当な値(0.5<A405<1.0)に到達するまでモニターした。各ウェルについて、方程式(a)を使用してELISAシグナル(vi)の分画阻害を計算し、
vi=(Ao−Ai)/(Ao) (a)
ここで、Aoは、β−ジケトンの不在下で得られたELISA吸光度であり、Aiは、β−ジケトンの存在下で得られた吸光度である。一価結合タンパク質について、可溶性β−ジケトン(f)と結合している抗体の分画はviに等しい。しかしながら、IgG抗体は二価であり、ELISAシグナルは一価結合によってではなく2倍リガンド化された(doubly liganded)抗体の存在によってのみ阻害される。したがって、二価抗体のスティーブンス補正(Stevens correction)を使用した。
fi=(vi)1/2 (b)
下記関係を使用して、見かけの平衡解離定数を測定した。
fi=fmin+(fmax−fmin)(1+KD/a0)−1 (c)
ここで、a0は総β−ジケトン濃度に相当し、KDは平衡解離定数であり、fminおよびfmaxは、抗体中の結合性部位が非占有または飽和している場合の実験的に決定した値をそれぞれ表す。この方程式は、KD値が抗体濃度よりも少なくとも10倍高い場合にのみ妥当となるため、方程式iiiによって決定されたKD値はこの基準に合うことが検証された。KaleidaGraph(バージョン3.0.5、Abelbeck software)の非線形最小二乗当てはめ手順を、調整可能なパラメータとしてのKD、fmaxおよびfminとともに使用してデータを当てはめ、方程式(d):
fnorm=(fi−fmin)/(fmax−fmin) (d)
特に断りのない限り、すべての溶液はリン酸緩衝溶液(pH7.4)であった。β−ジケトン(ii)または(iii)いずれかの2倍溶液(50μL)を50μLの抗体(h38C2またはm38C2のいずれか)に添加し、37℃で1時間インキュベートさせた。ピペッティングにより、溶液を混合した。抗体の最終濃度は0.4〜8nMの抗体中の結合性部位であり、β−ジケトン(ii)および(iii)の最終濃度はそれぞれ10−9〜10−2Mおよび10−10〜10−4Mであった。Costar3690 96−ウェルプレート(Corning)の各ウェルに、TBS中のβ−ジケトン(i)のBSA複合体を100ngコーティングした。その後、TBS中の3%(w/v)BSAでウェルをブロックした。その後、50μLの抗体/β−ジケトン混合物、続いて、西洋ワサビペルオキシダーゼと複合した、ヤギ抗ヒトFc IgGポリクローナル抗体(Pierce)またはウサギ抗マウスFc IgGポリクローナル抗体(Jackson ImmunoResearch Laboratories)いずれかの50μLの1:1,000希釈物を添加した。これに50μLのABTS基質溶液が続いた。各添加の間、プレートを覆い、37℃で1時間インキュベートし、その後、脱イオンH2Oで5回洗浄した。上述の通りにして、405nmにおける吸光度を、β−ジケトンのない反応が適当な値(0.5<A405<1.0)に到達するまでモニターした。各ウェルについて、方程式(a)を使用してELISAシグナル(vi)の分画阻害を計算し、
vi=(Ao−Ai)/(Ao) (a)
ここで、Aoは、β−ジケトンの不在下で得られたELISA吸光度であり、Aiは、β−ジケトンの存在下で得られた吸光度である。一価結合タンパク質について、可溶性β−ジケトン(f)と結合している抗体の分画はviに等しい。しかしながら、IgG抗体は二価であり、ELISAシグナルは一価結合によってではなく2倍リガンド化された(doubly liganded)抗体の存在によってのみ阻害される。したがって、二価抗体のスティーブンス補正(Stevens correction)を使用した。
fi=(vi)1/2 (b)
下記関係を使用して、見かけの平衡解離定数を測定した。
fi=fmin+(fmax−fmin)(1+KD/a0)−1 (c)
ここで、a0は総β−ジケトン濃度に相当し、KDは平衡解離定数であり、fminおよびfmaxは、抗体中の結合性部位が非占有または飽和している場合の実験的に決定した値をそれぞれ表す。この方程式は、KD値が抗体濃度よりも少なくとも10倍高い場合にのみ妥当となるため、方程式iiiによって決定されたKD値はこの基準に合うことが検証された。KaleidaGraph(バージョン3.0.5、Abelbeck software)の非線形最小二乗当てはめ手順を、調整可能なパラメータとしてのKD、fmaxおよびfminとともに使用してデータを当てはめ、方程式(d):
fnorm=(fi−fmin)/(fmax−fmin) (d)
(実施例26)
20原子AZDマレイミドリンカー
20原子AZDマレイミドリンカー
(実施例27)
図29に示されているリンカーと一緒に使用することができる、側鎖修飾Lysの合成を図30に提供する。
図29に示されているリンカーと一緒に使用することができる、側鎖修飾Lysの合成を図30に提供する。
(実施例28)
ペプチド中の側鎖修飾Lys残基を介し、図29に記載の20原子AZDマレイミドリンカーと連結している配列番号22のGA標的化ペプチドを含むGA標的化剤−リンカー複合体の合成を図31に提供する。
ペプチド中の側鎖修飾Lys残基を介し、図29に記載の20原子AZDマレイミドリンカーと連結している配列番号22のGA標的化ペプチドを含むGA標的化剤−リンカー複合体の合成を図31に提供する。
(実施例29)
ペプチド中の側鎖修飾Lys残基を介し、図29に記載の20原子AZDマレイミドリンカーと連結している配列番号32のGA標的化ペプチドを含むGA標的化剤−リンカー複合体の合成を図32に提供する。
ペプチド中の側鎖修飾Lys残基を介し、図29に記載の20原子AZDマレイミドリンカーと連結している配列番号32のGA標的化ペプチドを含むGA標的化剤−リンカー複合体の合成を図32に提供する。
(実施例30)
インビトロでのGA標的化ペプチド媒介性インスリン分泌の特性付け
配列番号1〜76で表されるアミノ酸配列(上記表Iを参照)を有するGA標的化ペプチド類似体は、配列番号1および配列番号2のGA標的化ペプチドに関して実施例1および2に記載したのと同じ一般的方法を使用して生み出した。
インビトロでのGA標的化ペプチド媒介性インスリン分泌の特性付け
配列番号1〜76で表されるアミノ酸配列(上記表Iを参照)を有するGA標的化ペプチド類似体は、配列番号1および配列番号2のGA標的化ペプチドに関して実施例1および2に記載したのと同じ一般的方法を使用して生み出した。
配列番号1〜13、32、35、および40〜47、49〜51、53〜55、および57〜63のGA標的化ペプチドの、膵β細胞からのインスリン分泌をインビトロで刺激する能力は、グルコース刺激によるインスリン分泌(GSIS)アッセイを使用して試験した。手短に述べると、グルコースおよびGA標的化ペプチドを、様々な濃度で膵β細胞培養物に添加し、インスリンレベルを経時的に計測することによってインスリン分泌を検出した。EC50を各ペプチドについて計算した。このアッセイの結果を、以下の表IIIに記載する。
(実施例28)
インビトロでのGA標的化ペプチド−リンカー複合体媒介性インスリン分泌の特徴付け
配列番号1〜76のGA標的化ペプチドを様々なリンカーと連結し、GA標的化ペプチド−リンカー複合体を生み出した。配列番号3〜5、14〜33、35〜37、57および63〜72のGA標的化ペプチドを、下記構造
インビトロでのGA標的化ペプチド−リンカー複合体媒介性インスリン分泌の特徴付け
配列番号1〜76のGA標的化ペプチドを様々なリンカーと連結し、GA標的化ペプチド−リンカー複合体を生み出した。配列番号3〜5、14〜33、35〜37、57および63〜72のGA標的化ペプチドを、下記構造
配列番号32および37のGA標的化ペプチドを、下記構造
配列番号37のGA標的化ペプチドを、下記構造
配列番号35および37のGA標的化ペプチドを、下記構造
配列番号35のGA標的化ペプチドを、下記構造
配列番号33および37のGA標的化ペプチドを、下記構造
配列番号1、33、34および36〜37のGA標的化ペプチドを、下記構造
(実施例29)
グルコース耐性試験(GTT)、体重変化および食物摂取量
本発明の例示的なGA標的化化合物および剤のインビボ効能は、単回または反復投薬グルコース耐性試験パラダイムを使用して評価した(図35)。若齢雄ob/obマウス(Jackson Laboratories、Bar Harbor、ME)の肩甲骨間領域に、短時間手動拘束を使用して、本発明の化合物を注射体積0.2〜0.3mlで皮下(SC)投薬した。やせ型同腹仔対照マウス(n=8/群、Jackson Laboratories、Bar Harbor、ME)には、同様にしてビヒクルを投薬した。食物摂取量(図36)および累積体重変化(図37)は、毎日午前中にモニターした(08:00〜09:00時、06:00時に点灯および18:00時に消灯)。
グルコース耐性試験(GTT)、体重変化および食物摂取量
本発明の例示的なGA標的化化合物および剤のインビボ効能は、単回または反復投薬グルコース耐性試験パラダイムを使用して評価した(図35)。若齢雄ob/obマウス(Jackson Laboratories、Bar Harbor、ME)の肩甲骨間領域に、短時間手動拘束を使用して、本発明の化合物を注射体積0.2〜0.3mlで皮下(SC)投薬した。やせ型同腹仔対照マウス(n=8/群、Jackson Laboratories、Bar Harbor、ME)には、同様にしてビヒクルを投薬した。食物摂取量(図36)および累積体重変化(図37)は、毎日午前中にモニターした(08:00〜09:00時、06:00時に点灯および18:00時に消灯)。
マウスに、標準的なプロトコールに続いて、経口グルコース耐性試験(OGTT)を受けさせた。手短に述べると、コロニー中、点灯段階の初期に、マウスを4〜5時間断食させた。この期間の終了時(午後早く)、経口グルコース負荷(1.5g/kg)の直前およびその後15〜120分の一定間隔で、マウスを尾出血させた。120分時点の収集後、食物をケージに戻した。グルコースレベルは、自己試験血中グルコース計量器を使用して測定し、経口グルコース負荷後の時間の関数としてのグルコースの曲線下面積(AUC)は、線形台形公式を使用して計算した(図35)。
23位における連結(配列番号21)は、体重も採食も減少させず、48時間におけるグルコース耐性を改善しなかった。17、24、38位およびC末端における連結(配列番号25、20、14、131、132)は、体重および採食量を減少させたが、72時間におけるグルコース耐性を改善しなかった。26位における連結(配列番号19)は、体重も採食も減少させなかったが、48時間におけるグルコース耐性を改善した。すべての実施例で、KまたはK(SH)残基を連結残基として使用した。本発明の一部の態様において、いくつかの条件下で良い性能を示す化合物は、いくつかの用途に適したものとなり得る。本発明のその他の態様において、複数の試験条件下で利点を提供する化合物が有利となり得る。
データを、平均値±標準誤差として描写し、一方向ANOVA(GraphPad Prism 4.0、GraphPad Software Inc.、San Diego、CA)により、Dunnettのポストホック試験を用いて群間差異について分析した。
このように、本発明を大まかに開示し、上述の代表的な実施形態を参照して例示してきた。当業者であれば、その趣旨および範囲から逸脱することなく、本発明に様々な修正が為され得ることを認識するであろう。すべての刊行物、特許出願および交付済み特許は、参照することにより、各個別の刊行物、特許出願または交付済み特許が、参照することによりその全体が組み込まれることを具体的かつ個々に指示されているかのような場合と同程度まで、本明細書に組み込まれる。参照することにより組み込まれるテキスト中に含有されている定義は、この開示中の定義に矛盾する程度であれば除外される。
「を含む(comprises/comprising)」という語および「を有する/含む(including)」という語は、本発明を参照して本明細書で使用される場合、規定された特色、整数、ステップまたは成分の存在を特定するために使用されるが、1つまたは複数の他の特色、整数、ステップ、成分またはそれらの群の存在または付加を排除しない。
明確にするために別個の実施形態の文脈において記述されている本発明のいくつかの特色を、単一の実施形態において組み合わせて提供してもよいことが理解される。反対に、簡潔にするために単一の実施形態の文脈において記述されている本発明の様々な特色を、別個にまたは任意の適切なサブ組合せで提供してもよい。
前述から、本発明の新規概念の真の趣旨および範囲から逸脱することなく、多数の修正形態および変形形態が成立し得ることが明らかであろう。本開示は、本発明の例示を記載することが意図されており、例示されている特定の実施形態に本発明を限定することは意図していないことが理解されるであろう。本開示は、添付の特許請求の範囲により、そのような修正形態すべてを特許請求の範囲内に入るものとして包括することが意図されている。
いずれかの請求項中で言及されている技術的特色に参照符号が続く場合、これらの参照符号は、特許請求の範囲の明瞭度を増大させることを唯一の目的として含まれたものであり、したがって、そのような参照符号によって一例として特定されている各要素の範囲に対し、そのような参照符号は、いかなる制限効果も有さない。
Claims (45)
- R1-H1Aib2E3G4T5F6T7S8D9L10S11K12Q13M14E15E16E17A18V19R20L21F22I23E24W25L26K27N28G29G30P31S32S33G34A35P36P37P38S39-X40-R2 の配列のペプチドを含む化合物、その立体異性体、互変異性体、溶媒和物、プロドラッグ、または薬学的に許容できる塩
[ここで、
R1は、存在しないか、CH3、C(O)CH3、C(O)CH2CH3、C(O)CH2CH2CH3、またはC(O)CH(CH3)CH3であり、
R2は、存在しないか、OH、NH2、NH(CH3)、NHCH2CH3、NHCH2CH2CH3、NHCH(CH3)CH3、NHCH2CH2CH2CH3、NHCH(CH3)CH2CH3、NHC6H5、NHCH2CH2OCH3、NHOCH3、NHOCH2CH3、カルボキシ保護基、脂質脂肪酸基または炭水化物であり、
また、L10、S11、K12、Q13、M14、E16、E17、V19、R20、L21、E24、L26、K27、N28、S32、S33、G34、A35、P36、P37、P38、S39、またはX40のうちの1つは連結残基(LR)であり、そして
LRはK、R、Y、C、T、S、リシンの相同体(K(SH)を含む)、ホモシステインおよびホモセリンを含む群から選択され、
X40は連結残基であるかまたは存在せず、
連結残基は、式-X-Y-Z’-を有する直鎖または分岐鎖の中間体リンカーL’を介して抗体中の結合性部位に対して共有結合するようになっている
[ここで、Xは存在しないか、C、H、N、O、P、S、F、CL、BrおよびIからなる群より選択される原子を含む生物学的に適合する接続鎖であり、ポリマーまたはブロックコポリマーを含んでよく、
Yは、存在しないか、または少なくとも環構造を含む認識基であり、
Z’は、抗体中の結合性部位においてアミノ酸側との共有結合を含む結合部分である]。]。 - Xが、GA標的化剤の連結残基に結合しており、置換または非置換であり、−R22−[CH2−CH2−O]t−R23−、−R22−シクロアルキル−R23−、−R22−アリール−R23−およびR22−ヘテロシクリル−R23−からなる群より選択され、ここで、
R22およびR23は、それぞれ独立に、共有結合、−O−、−S−、−NRb−、置換もしくは非置換の直鎖もしくは分岐鎖C1〜50アルキレン、置換もしくは非置換の直鎖もしくは分岐鎖C1〜50ヘテロアルキレン、置換もしくは非置換の直鎖もしくは分岐鎖C2〜50アルケニレン、または置換もしくは非置換のC2〜50ヘテロアルケニレンからなる群より選択され、
Rbは、各出現時、独立に、水素、置換もしくは非置換のC1〜10アルキル、置換もしくは非置換のC3〜7シクロアルキル−C0〜6アルキル、または置換および非置換のアリール−C0〜6アルキルからなる群より選択され、
t=2〜50であり、
R22およびR23のサイズは、Xの主鎖長が約200個以下の原子となるようなものである、
請求項1に記載の化合物。 - R22が、−(CH2)v−、−(CH2)u−C(O)−(CH2)v−、−(CH2)u−C(O)−O−(CH2)v−、−(CH2)u−C(O)−NRb−(CH2)v−、−(CH2)u−C(S)−NRb−(CH2)v−、−(CH2)u−NRb−(CH2)v−、−(CH2)u−O−(CH2)v−、−(CH2)u−S(O)0〜2−(CH2)v−、−(CH2)u−S(O)0〜2−NRb−(CH2)v−および−(CH2)u−P(O)(ORb)−O−(CH2)v−からなる群より選択され、ここで、uおよびvは独立に、0〜20であり、
R23が、−O−、−S−、−NRb−、置換または非置換の直鎖または分岐鎖C1〜50アルキレン、置換または非置換の直鎖または分岐鎖C1〜50ヘテロアルキレン、置換または非置換の直鎖または分岐鎖C2〜50アルケニレン、および置換または非置換のC2〜50ヘテロアルケニレンからなる群より選択され、構造
[式中、pは2〜45であり、wは1〜20であり、rは1〜20であり、sは0〜20であり、Rbは、各出現時、独立に、水素、置換もしくは非置換のC1〜10アルキル、置換もしくは非置換のC3〜7シクロアルキル−C0〜6アルキル、または置換および非置換のアリール−C0〜6アルキルからなる群より選択される]
を有することができ、
R22およびR23のサイズは、Xの主鎖長が約200個以下の原子となるようなものである、
請求項2に記載の化合物。 - Xが、
および
からなる群より選択される構造を有する、請求項1に記載の化合物
[式中、Xの主鎖長は、1〜100個の原子である]。 - 環構造Yが存在し、置換あるいは非置換の構造
を有する、請求項1から4のいずれか一項に記載の化合物
[式中、a、b、c、dおよびeは、それぞれ独立に、炭素または窒素であり、fは、炭素、窒素、酸素または硫黄であり、Yは、十分な原子価の2つの環位置においてXおよびZまたはZ’に独立に結合しており、a、b、c、d、eまたはfのうちの4つ以下は、同時に窒素であり、好ましくは、環構造中のa、b、c、dおよびeは、それぞれ炭素である]。 - Yがフェニルである、請求項1から5のいずれか一項に記載の化合物。
- Z’が、存在する場合、置換アルキル、置換シクロアルキル、置換アリール、置換アリールアルキル、置換ヘテロシクリルまたは置換ヘテロシクリルアルキルからなる群より選択され、ここで、少なくとも1個の置換基は、1,3−ジケトン部分、アシルβ−ラクタム、活性エステル、α−ハロケトン、アルデヒド、マレイミド、ラクトン、無水物、α−ハロアセトアミド、アミン、ヒドラジドもしくはエポキシドであるか、または、1,3−ジケトン部分、アシルβ−ラクタム、活性エステル、α−ハロケトン、アルデヒド、マレイミド、ラクトン、無水物、α−ハロアセトアミド、アミン、ヒドラジドもしくはエポキシドを有する、抗体中の結合性部位におけるアミノ酸の側鎖へのアミノ基の付加によって形成される生成物である、
請求項1から6のいずれか一項に記載の化合物。 - 少なくとも1個の置換基が、置換1,3−ジケトンまたはアシルβ−ラクタム、および、1,3−ジケトン部分またはアシルβ−ラクタムを有する、抗体中の結合性部位におけるアミノ酸の側鎖へのアミノ基の付加によって形成される生成物からなる群より選択される、請求項7に記載の化合物。
- Z’が、置換1,3−ジケトン、アシルβ−ラクタム、アルキル置換1,3ジケトンおよびアルキル置換アシルβ−ラクタムからなる群より選択される部分を有する、抗体中の結合性部位におけるアミノ酸の側鎖へのアミノ基の付加によって形成される生成物である、請求項7および8のいずれか一項に記載の化合物。
- Z’が、構造
または
を有する、請求項1から9のいずれか一項に記載の化合物
[式中、q=0〜5であり、抗体は、抗体中の結合性部位における側鎖との共有結合である]。 - 下記からなる群から選ばれる式を含む、請求項1から10に記載の化合物
および
[ここで、AA1-AA2-AAm-CH-CO-AAm+2-AAn、およびA1-AA2-AAn-COO-はペプチドであり、
uは0、1、2、3、4、または5であり、vは0、1、2、3、4、または5であり、rは1、2、3、4、または5であり、sは1、2、3、4、または5であり、tは1、2、3、4、5、または6であり、wは1、2、3、4、または5であり、pは1、2、3、4、または5であり、qは0、1、2、または3であり、
Rbは、各出現時、独立に、水素、置換もしくは非置換のC1〜10アルキル、置換もしくは非置換のC3〜7シクロアルキル−C0〜6アルキル、または置換もしくは非置換のアリール−C0〜6アルキルである。]。 - Xの主鎖長が、1〜50個の原子である、請求項4から11のいずれか一項に記載の化合物。
- Xの主鎖長が、1〜25個の原子である、請求項12に記載の化合物。
- Xの主鎖長が、1〜15個の原子である、請求項13に記載の化合物。
- Xが
である、請求項1から3のいずれか一項に記載の化合物
[式中、vおよびwは、Xの主鎖長が6〜12個の原子となるように選択される]。 - X−Yが
である、請求項15に記載の化合物
[vは1または2であり、wは1または2であり、Rbは水素である]。 - 式
[ここで、AA1-AA2-AAm-CH-CO-AAm+2-AAnはペプチドであり、uは0、1、または2であり、vは1または2であり、rは1または2であり、sは0であり、tは1、2、または3であり、qは1または2であり、そしてRbは水素である。]
を含む、請求項11に記載の化合物。 - uが2、vが2、tが2、rが2、およびqが2である、請求項17に記載の化合物。
- 前記連結残基が、K、Y、Tおよびリシンの相同体(K(SH)を含む)からなる群より選択される、請求項1から10のいずれか一項に記載の化合物。
- 前記連結残基がKである、請求項19に記載の化合物。
- 前記連結残基がK(SH)である、請求項19に記載の化合物。
- リンカーL’と、それに結合する連結残基が、式
[式中、uは、1、2または3である]で表わされる、請求項21に記載の化合物。 - R1がC(O)CH3である、請求項1から22に記載の化合物。
- R2がNH2、である、請求項1から23に記載の化合物。
- S11,
K12, Q13, M14, E16, E17,
V19, R20, L21, E24, L26,
K27, N28, S32, G34, P36,
P38, または X40のうちの1つが連結残基と置換されている、請求項1〜24のいずれか一項に記載の化合物。 - S11,
K12, Q13, M14, E16, E17,
V19, R20, L21, E24, K27,
N28, S32, G34, P36, P38,
または X40のうちの1つが連結残基と置換されている、請求項1〜25のいずれか一項に記載の化合物。 - S11,
K12, Q13, M14, E16, E17,
V19, R20, L21, E24, K27,
N28, P38, または
X40のうちの1つが連結残基と置換されている、請求項1〜26のいずれか一項に記載の化合物。 - K12,
M14, V19, R20, L21, または E24のうちのいずれか1つが連結残基と置換されている、請求項1〜27のいずれか一項に記載の化合物。 - M14,
V19, R20, または L21のうちのいずれか1つが連結残基と置換されている、請求項1〜28のいずれか一項に記載の化合物。 - M14が連結残基と置換されている、請求項1〜29のいずれか一項に記載の化合物。
- 下記からなる群から選ばれる式を含む、請求項1〜30のいずれか一項に記載の化合物。
[式中、−Mbは、抗体中の結合性部位との共有結合である]。 - 前記抗体が、触媒抗体である、請求項1〜31のいずれか一項に記載の化合物。
- 前記抗体が、アルドラーゼ抗体である、請求項32に記載の化合物。
- 抗体が、h38c2由来のVHおよびVLドメインを含む全長抗体、Fab、Fab’、F(ab’)2、Fv、dsFv、scFv、VH、ダイアボディまたはミニボディである、請求項1〜33のいずれか一項に記載の化合物。
- 前記抗体が、全長抗体である、請求項1〜34のいずれか一項に記載の化合物。
- 抗体が、h38c2由来のVHおよびVLドメインならびにIgG1、IgG2、IgG3およびIgG4からなる群より選択される定常ドメインを含む抗体である、請求項1〜35のいずれか一項に記載の化合物。
- 抗体が、配列番号79で表される可変軽鎖配列および配列番号80で表される可変重鎖配列を有するh38C2である、請求項1〜36のいずれか一項に記載の化合物。
- 治療有効量の請求項1〜37のいずれか一項に記載の化合物を含む、医薬組成物。
- スルホニル尿素、ビグアニド、チアゾリジンジオン、αグルコシダーゼ阻害剤およびメグリチニドからなる群より選択される治療有効量の化合物をさらに含む、請求項38に記載の医薬組成物。
- 個体の血中グルコースレベルを減少させる方法における、請求項1〜37のいずれか一項に記載の化合物または請求項38および39のいずれか一項に記載の医薬組成物の使用。
- 個体の血中グルコースレベルを減少させるための、治療有効量の、請求項1〜37のいずれか一項に記載の化合物または請求項38および39のいずれか一項に記載の医薬組成物の使用。
- 個体の糖尿病を治療する方法における、請求項1〜37のいずれか一項に記載の化合物または請求項38および39のいずれか一項に記載の医薬組成物の使用。
- 個体の糖尿病を治療するための、治療有効量の、請求項1〜37のいずれか一項に記載の化合物または請求項38および39のいずれか一項に記載の医薬組成物の使用。
- 個体のインスリン分泌を増大させる方法における、請求項1〜37のいずれか一項に記載の化合物または請求項38および39のいずれか一項に記載の医薬組成物の使用。
- 個体のインスリン分泌を増大させるための、治療有効量の、請求項1〜37のいずれか一項に記載の化合物または請求項38および39のいずれか一項に記載の医薬組成物の使用。
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