BRPI0806308A2 - compostos agonistas de receptor de proteìna-1 similares a glucagon (glp-1r) - Google Patents

compostos agonistas de receptor de proteìna-1 similares a glucagon (glp-1r) Download PDF

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Sukumar Sakamuri
Yanwen Fu
Bryan Oates
Joel Desharnais
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Abstract

COMPOSTOS AGONISTAS DE RECEPTOR DE PROTEìNA-1 SIMILARES A GLUCAGON (GLP-1R). A presente invenção refere-se a compostos de segmentação de receptor de proteína 1 semelhante a glucagon, o qual compreende conjugados de agente ligador de segmentação de receptor de proteína 1 semelhante a glucagon ligado a um sítio de combinação de um anticorpo. Diversos usos dos compostos são proporcionados, incluindo métodos para a prevenção ou tratamento de diabetes e condições relacionadas a diabetes.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "COMPOSTOS AGONISTAS DE RECEPTOR DE PROTEÍNA-1 SIMILARES A GLUCAGON (GLP-1R)".
Pedidos Relacionados
O presente pedido reivindica prioridade ao Pedido Provisório
U.S. N0 60/879.048, depositado em 5 de Janeiro de 2007, Pedido Provisório U.S. N0 60/939.831, depositado em 23 de Maio de 2007 e Pedido Provisório U.S. N0 60/945.319, depositado em 20 de Junho de 2007, as descrições dos quais são incorporadas por referência aqui em sua totalidade.
Campo da Divulgação
A presente invenção refere-se a novos compostos que promovem a secreção de insulina e diminuem os níveis de glicose no sangue e métodos de fabricação e uso desses compostos. Em particular, a presente invenção se refere a compostos que se ligam a e ativam o receptor de proteína 1 similar ao glucagon (GLP-1R).
Antecedentes
O diabetes do tipo II é a forma mais prevalente de diabetes. A doença é causada pela resistência à insulina e falha de células β pancreáticas, o que resulta em secreção de insulina glicose-estimulada diminuída. Incretinas1 as quais são compostos que estimulam a secreção de insulina glicose-dependente e inibem a secreção de glucagon, têm surgido como candidatos atraentes para o tratamento de diabetes do tipo II. Duas incretinas que se descobriu aprimorarem a função de células β in vitro são o polipeptídeo insulinotrópico de glicose (GIP) e amida de peptídeo (7-36) similar ao glucagon (GLP-1). GIP não parece ser um candidato terapêutico atraente, porque as células β diabéticas são relativamente resistentes à sua ação. Contudo, células β diabéticas são sensíveis aos efeitos de GLP-1.
Além de aumentar a secreção de insulina e diminuir a secreção de glucagon, o peptídeo GLP-1 de 30 aminoácidos estimula a transcrição do gene de insulina, diminui o tempo de esvaziamento gástrico e reduz a ingestão de alimento. O GLP-1 exerce seus efeitos fisiológicos através de ligação ao receptor de peptídeo 1 similar ao glucagon (GLP-1 R), um receptor no domínio da transmembrana-sete putativo.
Uma deficiência do uso terapêutico de GLP-1 é sua curta meia- vida in vivo (1-2 minutos). Essa meia-vida curta é o resultado de rápida degradação do peptídeo pela dipeptidil peptidase 4 (DPP-IV). Isso levou à identificação ou desenvolvimento de análogos de GLP-1 que exibem meias- vidas aumentadas, ao mesmo tempo em que mantêm a capacidade de agonizar a atividade de GLP-1 R. Exemplos desses análogos incluem exendina-4 e GLP-1-Gly8.
Embora tenham sido desenvolvidos vários análogos de GLP-1 que mantêm atividades insulinotrópicas ao mesmo tempo em que mostram meias-vidas aumentadas, ainda há uma necessidade por agonistas de GLP- 1R com perfis farmacocinéticos aprimorados.
A referência a qualquer técnica na presente especificação não é e não deverá ser tomada como uma aceitação de qualquer forma ou sugestão de que a técnica mencionada forma parte do conhecimento geral comum. Sumário
São descritas aqui composições formadas através de ligação covalente de um ou mais peptídeos agonistas de GLP-1 R a um sítio de combinação de um ou mais anticorpos e métodos para fazer e usar essas composições. Em determinadas modalidades, compostos agonistas de GLP- 1R (GA) com meias-vidas aprimoradas in vivo são proporcionados. Compostos de direcionamento de GA são formados através de ligação covalente de um agente de direcionamento de GA1 seja diretamente ou via um Iigante interveniente, a um sítio de combinação de um anticorpo. Composições farmacêuticas compreendendo compostos de direcionamento da invenção e um veículo farmaceuticamente aceitável são também proporcionadas.
Em determinadas modalidades, peptídeos agonistas de GLP-1 R (GA) são proporcionados. Em alguns aspectos, a presente invenção proporciona um agente de direcionamento de GA, em que um agente de direcionamento de GA é um agonista peptídico do receptor de GLP-1 compreendendo um peptídeo compreendendo uma seqüência substancialmente homóloga a:
R1- H1 χ2 E3 G4 T5 F6 T7 S8 D9 x10 S11 x12 x13 x14 E15 x16 x17 A18 x19 x20 x21 F22 x23 x24 x25 x26 x27 x28 x29 x30 x31 x32 x33 x34 x35 x36 x37 x38 X39 -R2, em que:
R1 está ausente, é CH3, C(O)CH3, C(O)CH2CH3, C(O)CH2CH2CH3 ou C(O)CH(CH3)CH3;
R2 está ausente, é OH, NH2, NH(CH3), NHCH2CH3, NHCH2CH2CH3l NHCH(CH3)CH3l NHCH2CH2CH2CH3i NHCH(CH3)CH2CH3i NHC6H5, NHCH2CH2OCH3i NHOCH3, NHOCH2CH3, um grupo de proteção carbóxi, um grupo ácido graxo lipídico ou um carboidrato e
χ2 é um grupo de bloqueio, tal como Aib, A, S, Τ, V, L, I ou D-Ala (em que o termo "grupo de bloqueio", no contexto da posição x2, se refere a um resíduo ou grupo que pode bloquear determinadas reações de clivagem, tal como clivagem por DPP-4), x10 é V, L, I ou A, x12 é S ou K, x13 é Q ou Y, x14 é G, C, F, Y, W, M ou L, x16 é K, D, E ou G, x17 é E ou Q, x19 é L, I, V ou A, x20 é Orn, K(SH), R ou K, x21 é L ou E, x23 é I ou L, x24 é A ou E, x25 é W ou F, x26 é L ou I, x27 é I, K ou V, x28 é R, Orn, N ou K, x29 é Aib ou G, x30 é qualquer aminoácido, de preferência G ou R, x31 é P ou está ausente, x32 é S ou está ausente, x33 é S ou está ausente,x34 é G ou está ausente, x35 é A ou está ausente, x36 é P ou está ausente, x37 é P ou está ausente, x38 é P ou está ausente, x39 é S ou está ausente, x40 é um resíduo de ligação ou está ausente e, além disso, em que um de x10, x11, x12, x13, x14, x16, x17, x19, x20, χ21, χ24, χ26, χ27, χ28, χ32, χ33, χ34, χ35, x36, X37, X38, x39 ou x40 é substituído por um resíduo de ligação (-[LR]-) compreendendo uma cadeia lateral nucleofílica covalentemente ligável ao sítio de combinação de um anticorpo via um Iigante intermediário e em que o resíduo de ligação é K(SH). Nessas modalidades, x2 pode ser Aib.
Os compostos da invenção podem compreender um peptídeo compreendendo uma seqüência substancialmente homóloga a um ou mais compostos selecionados do grupo consistindo em: R1-HgegtftsdlskqmeeeavrlfiewlknggpssgapppSk(SH)-R2 (seq id no:172), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPSK(SH)-R2 (SEQ ID NO: 173), R1 -HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPK(SH)S-R2 (SEQ DD NO:99), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAK(SH)PPS-R2 (SEQ ID NO: 100), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSK(SH)APPPS-R2 (SEQ ID N0:101), R1-HAibEGTFTsDLsKQMEEEAvRLFlEWLKNGGPK(SH)SGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 168), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKK(SH)GGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 102), R1HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKÍSHÍNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 170), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWK(SH)KNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID N0:103), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIK(SH)WLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 104), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFK(SH)EWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 105), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRK(SH)FIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 106),
R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVK(SH)LFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 107), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAK(SH)RLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 108), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEK(SH)AVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 109), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEK(SH)EAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO:l 10), R1-HAibEGTFTSDLSKQK(SH)EEEA VRLFIE WLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 111), R1-HAibEGTFTSDLSKK(SH)MEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO:l 12), R1-HAibEGTFTSDLSK(SH)QMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 169), R1-HAibEGTFTSDLK(SH)KQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 113), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGK(SH)-R2 (SEQ ID NO: 114), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRKFIEWLK(SH)NGGPSS-R2 (SEQ ID NO: 115), R1-HAibEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKGRK(SH)-R2 (SEQ IDNO:38), R1-HAibEGTFTSDVSSYLEGQAAK(SH)EFIAWLVKGR-R2 (SEQ ID NO:39), R1-HAibEGTFTSDVSSYLEEQA VK(SH)EFIAWLIKAibRPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO:171), R1-HAibEGTFTSDK(SH)SSYLEEQAVKEFIAWLIKAibR-R2 (SEQ ID NO:l 16), R1-HAibEGTFTSDVSK(SH)YLEEQAVKEFIAWLIKAibR-R2 (SEQ ID NO: 117), R1-HAibEGTFTSDVSSYK(SH)EEQAVKEFIAWLIKAibR-R2 (SEQ ID NO:l 18), R1-HAibEGTFTSDVSSYLEK(SH)QAVKEFIAWLIKAibR-R2 (SEQ ID NO: 119), R1-HAibEGTFTSDVSSYLEEQK(SH)VKEFIAWLIKAibR-R2 (SEQ ID NO: 120), R1-HAibEGTFTSDVSSYLEEQAVK(SH)EKIAWLIKAibR-R2 (SEQ ID NO: 121), R1-HAibEGTFTSDVSSYLEEQAVKEFIK(SH)WLIKAibR-R2 (SEQ ID NO: 122), R1-HAibEGTFTSD VSSYLEEQAVKEFIAWK(SH)IKAibR-R2 (SEQ ID NO: 123), e R1-HAibEGTFTSDVSSYLEEQAVKEFIAWLIKAibRPSSGAPPPSK(SH)-R2 (SEQ ID NO: 124").
Os compostos da invenção podem compreender um peptídeo compreendendo uma seqüência substancialmente homóloga a um ou mais compostos selecionados do grupo consistindo em:
R1-HAibEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLYKGRK(SH)-R2 (SEQ IDNO:38), R1-HAibEGTFTsDVSSYLEGQAAK(SH)EFIAWLVKGR-R2 (SEQ ID NO:3 9), Rl-HAibEGTFTSDK(SH)SSYLEEQAVKEFIAWLIKAibR-R2 (SEQ ID NO: 116), R1-HAibEGTFTsDVSK(SH)YLEEQAVKEFIAWLIKAibR-R2 (SEQ ID NO:l 17), R1-HAibEGTFTSDVSSYK(SH)EEQAVKEFIAWLIKAibR-R2 (SEQ ID NO:l 18), R1-HAibEGTFTsDvSSYLEK(SH)QAVKEFIAWLIKAibR-R2 (SEQ ED NO:l 19), R1-HAibEGTFTSDVSSYLEEQK(SH)VKEFIAWLIKAibR-R2 (SEQ ED N0:120), R1-HAibEGTFTsDvSSYLEEQAVK(SH)EKIAWLIKAibR-R2 (SEQ ID NO: 121), R1-HAibEGTFTSDYSSYLEEQAVKEFIK(SH)WLIKAibR-R2 (SEQ ED NO: 122), e R1-HAibEGTFTSDVSSYLEEQAVKEFIAWK(SH)IKAibR-R2 (SEQ ID NO: 123).
Os compostos da invenção podem compreender um peptídeo compreendendo uma seqüência substancialmente homóloga a um ou mais compostos selecionados do grupo consistindo em:
R1-HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPSK(SH)-R2 (SEQ ID NO: 172), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPSK(SH)-R2 (SEQ ID NO: 173) Rl-HAibEGTFTsDLsKQMEEEAvRLFlEWLKNGGPSSGAPPK(SH)S-R2 (SEQ ID NO:99), Rl-HAibEGTFTsDLsKQMEEEAvRLFlEWLKNGGPSSGAK(SH)PPS-R2 (SEQ ID NO: 100), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSS^SHQAPPPS-R2 (SEQ DD N0:101), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPK(SH)SGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 168), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKK(SH)GGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 102), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLK(SH)NGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID N0:170), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWK(SH)KNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 103), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIK(SH)WLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 104), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFK(SH)EWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ED N0:105), R1 -HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRK(SH)FIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 106), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVK(SH)LFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID N0:107), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAK(SH)RLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 108), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEK(SH)AVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 109), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEKÍSI^EAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 110),
R1-HAibEGTFTSDLSKQK(SH)EEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 111), R1-HAibEGTFTSDLSKKÍSH^MEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 112), R1-HAibEGTFTSDLSK(SH)QMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 169), R1-HAibEGTFTSDLK(SH)KQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 113), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGK(SH)-R2 (SEQ ID NO:l 14), e R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEA VRKFIE WLK(SH)NGGPSS-R2 (SEQ ID NO: 115).
Os compostos da invenção podem compreender um peptídeo compreendendo uma seqüência substancialmente homóloga a um ou mais compostos selecionados do grupo consistindo em:
R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPK(SH)S-R2 (SEQ ID NO:99), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAK(SH)PPS-R2 (SEQ ID NO: 100), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSK(SH)APPPS-R2 (SEQ ID N0:101), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPK(SH)SGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 168), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKK(SH)GGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 102), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLK(SH)NGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 170), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWK(SH)KNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 103), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIK(SH)WLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 104), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEA VRLFK(SH)EWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID N0:105), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEA VRK(SH)FEEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 106), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVK(SH)LFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID N0:107), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAK(SH)RLFIEWLKNGGPSSGAJPPPS-R2 (SEQ ID NO: 108), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEK(SH)AVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 109), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEK(SH)EAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO:l 10), R1-HAibEGTFTSDLSKQK(SH)EEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 111), R1-HAibEGTFTSDLSKK(SH)MEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 112), R1-HAibEGTFTSDLSK(SH)QMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 169), R1-HAibEGTFTSDLK(SH)KQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 113), e R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRKFIEWLK(SH)NGGPSS-R2 (SEQ ID NO:l 15).
Os compostos da invenção podem compreender um peptídeo compreendendo uma seqüência selecionada do grupo consistindo em:
Rl-HAibEGTFTsDLsKQMEEEAvRLFlEWLKNGGPSSGAPPK(SH)S-R2 (SEQID NO: 99), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAK(SH)PPS-R2 (SEQ ID NO: 100), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSK(SH)APPPS-R2 (SEQ ID N0:101), R'-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPK(SH)SGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 168), R'-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKK(SH)GGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 102), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLK(SH)NGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 170), R'-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRK(SH)FIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 106), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVK(SH)LFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 107), R'-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAK(SH)RLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 108), R^HAibEGTFTSDLSKQMEKÍS^EAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 110), R1-HAibEGTFTSDLSKQK(SH)EEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO:l 11), R'-HAibEGTFTSDLSKK(SH)MEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 112), R1-HAibEGTFTSDLSK(SH)QMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 169), Rl-HAibEGTFTsDLK(SH)KQMEEEAvRLFlEwLKNGGpSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 113),e Rl-HAibEGTFTsDLsKQMEEEAVRKFIEWLK(SH)NGGPSS-R2 (SEQ ID NO-.115V
Os compostos da invenção podem compreender um peptídeo compreendendo uma seqüência selecionada do grupo consistindo em:
R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRK(SH)FIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 106), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVK(SH)LFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID N0:107), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAK(SH)RLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 108), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEK(SH)EAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 110), R1-HAibEGTFTSDLSKQK(SH)EEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 111), e
Em determinados aspectos, a presente invenção proporciona um agente de direcionamento de GA1 em que um agente de direcionamento de GA é um agonista peptídico do receptor de GLP-1, compreendendo um peptídeo compreendendo uma seqüência substancialmente homóloga a:
R1- H1 X2 E3 G4 T5 F6 T7 S8 D9 x10 S11 x12 x13 x14 E15 x16 x17 A18 x19 χ20 χ21 F22 χ23 χ24 χ25 x26 X27 X28 x29 X30 X31 X32 X33 X34 X35 x36 X37 x38 X39-R2 em que:
R1 está ausente, é CH3, C(0)CH3, C(O)CH2CH3, C(O)CH2CH2CH3 ou C(O)CH(CH3)CH3; e
R2 está ausente, é OH, NH2, NH(CH3)1 NHCH2CH3, NHCH2CH2CH3, NHCH(CH3)CH3, NHCH2CH2CH2CH3i NHCH(CH3)CH2CH3, NHC6H5, NHCH2CH2OCH3i NHOCH3l NHOCH2CH3l um grupo de proteção carbóxi, um grupo ácido graxo lipídico ou um carboidrato,
χ2 é um grupo de bloqueio, tal como Aib1 A1 S1 T1 V1 L1 I ou D- Ala, x10é V1 L, I ou A1 x12 é S ou K1 x13 é Q ou Y1 x14 é G1 C1 F1 Y1 W1 M ou L1 χ16 é Κ, D, E ou G, χ17 é E ou Q, χ19 é L, I, V ou A, x20 é Orn1 K(SH)1 R ou K, x21 é L ou E, x23 é I ou L, x24 é A ou E, x25 é W ou F, x26 é L ou I, x27 é I, K ou V, x28 é R, Orn, N ou K, x29 é Aib ou G1 x30 é qualquer aminoácido, de preferência G ou R, x31 é P ou está ausente, x32 é S ou está ausente, x33 é S ou está ausente,x34 é G ou está ausente, x35 é A ou está ausente, x36 é P ou está ausente, x37 é P ou está ausente, x38 é P ou está ausente, x39 é S ou está ausente, x40 é um resíduo de ligação ou está ausente, e em que o peptídeo é covalentemente ligado ao sítio de combinação de um anticorpo via um ligante intermediário (L') e L' é covalentemente ligado ao Ο- término ou uma cadeia lateral nucleofílica de um resíduo de ligação (-[LR]-), de modo que -[LR]- é selecionado do grupo compreendendo K, R, Y, C, T, S, homólogos de Iisina (incluindo K(SH)), homocisteína e homosserina e, quando presente, substitui um de x10, x11, x12, x13, x14, x16, x17, x19, x20, x21, χ24, χ26, χ27, χ28, χ32, χ33, χ34, χ35, χ36, χ37, x38, x39 ou x40.
Em determinados aspectos, a invenção proporciona um agente de direcionamento de GA compreendendo um peptídeo compreendendo uma seqüência substancialmente homóloga a:
R1- H1 Aib2 E3 G4 T5 F6 T7 S8 D9 V10 S11 S12 Y13 x14 E15 x16 Q17 A18 x19 x20 E21 F22 I23 A24 x25 L26 x27 x28 x29 R30 -R2 em que x14 é G, C, F, Y, W ou L, x16 é K, D, E ou G, x19 é L, I, V ou A, x20 é Orn, R ou K, x25 é W ou F, x27 é I ou V, x28 é R ou K e x29 é Aib ou G.
Em determinados aspectos, a invenção proporciona um agente de direcionamento de GA compreendendo um peptídeo compreendendo uma seqüência substancialmente homóloga a:
R1- H1 Aib2 E3 G4 T5 F6 T7 S8 D9 L10 S11 K12 Q13 M14 E15 E16 E17 A18 V19 R20 L21 F22 I23 E24 W25 L26 K27 N28 G29 G30 P31 S32 S33 G34 A35 P36 P37 P38 S39 -R2.
Em determinados aspectos, o resíduo de ligação é selecionado do grupo consistindo em Κ, Υ, T e homólogos de lisina (incluindo K(SH)). O resíduo de ligação pode ser K(L), em que K(L) é um resíduo de lisina preso a um ligante L em que L é capaz de formação de uma ligação covalente com uma cadeia lateral de aminoácido em um sítio de combinação de um anticorpo. Por toda a presente especificação, reivindicações e figuras em anexo e listagens de seqüência, "(L)" é empregado para indicar um Iigante covalentemente conectado ao resíduo precedente. Quando de descrição do resíduo de aminoácido leucina, o código de aminoácido único "L" é usado. O uso de parênteses para o ligante: "(L)" e a ausência de parênteses para leucina: "L", bem como o contexto do uso, permitirá que aqueles versados na técnica evitem confusão entre os dois termos.
O resíduo de ligação pode ser selecionado do grupo consistindo em x11, x12, x13, x14, x16, x17, x19, x20, x21, x24, x27, x28, x32, x34, x38 e C-término. O resíduo de ligação pode ser selecionado do grupo consistindo em x11, x12, x13, x14, x16, x19, x20, x21, x27, x28, x32 e x34. O resíduo de ligação pode ser selecionado do grupo consistindo em x11, x12, x13, x14, x16, x19, x20 e x21. O resíduo de ligação pode ser selecionado do grupo consistindo em x13, x14, x16, x19, x20 e x21. x14 pode ser o resíduo de ligação.
Em alguns aspectos da invenção, R1 é C(O)CH3, assim, acetilando o amino término de um agente de direcionamento de GA.
Em alguns aspectos da invenção, R2 é NH2, assim, amidando o carbóxi término de um agente de direcionamento de GA.
Em algumas modalidades, a presente invenção proporciona um composto de direcionamento de GA compreendendo um peptídeo compreendendo uma seqüência substancialmente homóloga a: H x2 E G T F T S D x10 x11 x12 x13 x14 E x16 x17 A x19 x20 x21 F x23 x24 x25 x26 x27
x28 x29 x30 x31 x32 x33 x34 x35 x36 x37 x38 x39 x40 em que:
x2 é um grupo de bloqueio, tal como Aib, A, S, Τ, V, L, I ou D- Ala, x10 é V, L, I ou A, x11 é um resíduo de ligação ou S, x12 é um resíduo de ligação, S ou K, x13 é um resíduo de ligação, Q ou Y, x14 é um resíduo de ligação, G1 C, F, Y, W, M ou L, x16 é um resíduo de ligação, K, D, E ou G, x17 é um resíduo de ligação, E ou Q, x19 é um resíduo de ligação, L, I, V ou A, 30 x20 é um resíduo de ligação, Orn, K(SH), R ou K, x21 é um resíduo de ligação, L ou E, x23 é um resíduo de ligação, I ou L, x24 é um resíduo de ligação, A ou E, x25 é um resíduo de ligação ou resíduo aromático, x26 é um resíduo de ligação, L ou I, x27 é um resíduo de ligação, I, K ou V, x28 é um resíduo de ligação, R, Orn, N ou K, x29 é um resíduo de ligação, Aib ou G, x30 é um resíduo de ligação, qualquer aminoácido ou G, x31 é um resíduo de ligação, P, K(SH) ou está ausente, x32 é um resíduo de ligação, S ou está ausente, x33 é um resíduo de ligação, S ou está ausente, x34 é um resíduo de ligação, G ou está ausente, x35 é um resíduo de ligação, A ou está ausente, x36 é um resíduo de ligação, P ou está ausente, x37 é um resíduo de ligação, P ou está ausente, x38 é um resíduo de ligação, P ou está ausente, x39 é um resíduo de ligação, S ou está ausente, x40 é um resíduo de ligação ou está ausente, de modo que o composto de direcionamento de GA contém um resíduo de ligação compreendendo uma cadeia lateral nucleofílica, o resíduo de ligação sendo selecionado do grupo compreendendo K, R, C, T e S.
O resíduo de ligação pode ser K.
O N-término pode ser sem proteção.
A cadeia lateral do resíduo de ligação pode ser covalentemente ligável ao sítio de combinação de um anticorpo diretamente ou via um ligante intermediário. Em algumas modalidades, a cadeia lateral do resíduo de ligação é covalentemente ligada ao sítio de combinação de um anticorpo diretamente ou via um ligante intermediário
Em algumas modalidades, x26 é L. Em algumas modalidades, x11 é S. Em algumas modalidades, x25 é W ou F. Em algumas modalidades, x25 é W. χ2 pode ser Aib.
Em alguns aspectos da invenção, a invenção compreende um composto de direcionamento de GA compreendendo um peptídeo compreendendo uma seqüência substancialmente homóloga a: H Aib E G T F T S D x10 S x12 x13 x14 E x16 x17 A x19 x20 x21 F x23 x24 x25 L x27 x28 x29 x30 x31 x32 x33 x34 x35 x36 x37 x38 x39
Em alguns aspectos, a invenção compreende um composto de direcionamento de GA compreendendo um peptídeo compreendendo uma seqüência substancialmente homóloga a:
H1 X2 E3 G4 T5 F6 T7 S8 D9 L10 S11 K12 Q13 M14 E15 E16 E17 A18 V19 R20 L21 F22 I23 E24 χ25 L26 K27 N28 G29 G30 P31 S32 S33 G34 A35 P36 P37 P38 S39 χ40 em que:
χ2 é um grupo de bloqueio, tal como Aib1 A, S, Τ, V, L1 I ou D- Ala,
x25 é um resíduo de ligação ou resíduo aromático,
um ou mais dos resíduos P31 a S39 podem estar ausentes,
x40 é um resíduo de ligação ou está ausente e
um dos resíduos S11 a x40 é um resíduo de ligação compreendendo uma cadeia lateral adequado para formação de ligações covalentes, o resíduo de ligação sendo selecionado do grupo compreendendo K, R, C, T e S.
Em algumas modalidades, o agente de direcionamento de GA da invenção compreende uma delimitação trp, compreendendo uma seqüência peptídica substancialmente homóloga compreendendo pelo menos os resíduos P31 S32 S33 G34 A35 P36 P37 P38 e S39. Em outras modalidades, um ou mais dos resíduos compreendendo a delimitação trp ou toda a delimitação trp está ausente do agente de direcionamento de GA.
O resíduo de ligação pode ser substituído por um de S11, K12, Q13, M14, E16, E17, V19, R20, L21, I23, E24, L261 K27, N28, G29eG30 ou um de P31, S32, S33, G34, A35, P36, P371 P38 ou S39 ou X40. Tais modalidades são exemplificadas por: SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 172, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 173, SEQ ID NO: 115, SEQ ID NO: 114, SEQ ID NO: 113, SEQ ID NO: 169 SEQ ID NO: 112, SEQ ID NO: 111, SEQ ID NO: 110, SEQ ID NO: 109, SEQ ID NO: 108, SEQ ID NO: 107, SEQ ID NO: 106, SEQ ID NO: 105, SEQ ID NO: 104, SEQ ID NO: 103, SEQ ID NO: 170, SEQ ID NO: 102, SEQ ID NO: 168, SEQ ID NO: 101, SEQ ID NO: 100, SEQ ID NO: 99, SEQ ID NO: 31, SEQ ID NO: 30, SEQ ID NO: 29, SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 27, SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 25, SEQ ID NO: 24, SEQ ID NO: 23, SEQ ID NO: 22, SEQ ID NO: 21, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 14 e SEQ ID NO: 5.
Tais modalidades são também exemplificadas por SEQ ID NO: 32, SEQ ID NO: 34, SEQ ID NO: 36, SEQ ID NO: 37, SEQ ID NO: 38, SEQ ID NO: 39, SEQ ID NO: 40, SEQ ID NO: 41, SEQ ID NO: 42, SEQ ID NO: 43, SEQ ID NO: 44, SEQ ID NO: 45, SEQ ID NO: 46, SEQ ID NO: 47, SEQ ID NO: 48, SEQ ID NO: 49, SEQ ID NO: 50, SEQ ID NO: 51, SEQ ID NO: 52, SEQ ID NO: 53, SEQ ID NO: 54, SEQ ID NO: 55, SEQ ID NO: 56, SEQ ID NO: 57, SEQ ID NO: 58, SEQ ID NO: 59, SEQ ID NO: 60, SEQ ID NO: 61, SEQ ID NO: 62, SEQ ID NO: 63, SEQ ID NO: 64, SEQ ID NO: 65, SEQ ID NO: 66, SEQ ID NO: 67, SEQ ID NO: 68, SEQ ID NO: 69, SEQ ID NO: 70, SEQ ID NO: 71, SEQ ID NO: 72, SEQ ID NO: 73, SEQ ID NO: 74, SEQ ID NO: 75 e SEQ ID NO: 76.
Em algumas modalidades, o resíduo de ligação pode ser substituído por um de K121 Q13, M141 E16, E171 V19, R20, L211 I231 E24, L261 K27 e N28 Tais modalidades são exemplificadas por: SEQ ID NO: 169, SEQ ID NO: 112, SEQ ID NO: 111, SEQ ID NO: 110, SEQ ID NO: 109, SEQ ID NO: 108, SEQ ID NO: 107, SEQ ID NO: 106, SEQ ID NO: 105, SEQ ID NO: 104, SEQ ID NO: 103, SEQ ID NO: 170, SEQ ID NO: 102, SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 27, SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 25, SEQ ID NO: 24, SEQ ID NO: 23, SEQ ID NO: 22, SEQ ID NO: 21, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 18 e SEQ ID NO: 5.
O resíduo de ligação pode ser substituído por I23. Tais modalidades são exemplificadas por SEQ ID NO: 21 e SEQ ID NO: 105.
O resíduo de ligação pode ser substituído por L26. Tais modalidades são exemplificadas por SEQ ID NO: 19 e SEQ ID NO: 103.
O resíduo de ligação pode ser K12. Tais modalidades são exemplificadas por SEQ ID NO: 5.
Em algumas modalidades, o resíduo de ligação pode ser substituído por um de Q13, M14, E16, E17, V19, R20, L21 e E24. Tais modalidades são exemplificadas por: SEQ ID NO: 112, SEQ ID NO: 111, SEQ ID NO: 110, SEQ ID NO: 109, SEQ ID NO: 108, SEQ ID NO: 107, SEQ ID NO: 106, SEQ ID NO: 104, SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 27, SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 25, SEQ ID NO: 24, SEQ ID NO: 23, SEQ ID NO: 22 e SEQ ID NO: 20.
O resíduo de ligação pode ser substituído por Q13. Tais modalidades são exemplificadas por SEQ ID NO: 28 e SEQ ID NO: 112.
Em algumas modalidades, o resíduo de ligação pode ser substituído por um de M141 E161 E171 V191 R201 L21 e E24. Tais modalidades são exemplificadas por: SEQ ID NO: 111, SEQ ID NO: 110, SEQ ID NO: 109, SEQ ID NO: 108, SEQ ID NO: 107, SEQ ID NO: 106, SEQ ID NO: 104, SEQ ID NO: 27, SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 25, SEQ ID NO: 24, SEQ ID NO: 23, SEQ ID NO: 22 e SEQ ID NO: 20.
O resíduo de ligação pode ser E24. Tais modalidades são exemplificadas por SEQ ID NO: 20 e SEQ ID NO: 104.
Em algumas modalidades, o resíduo de ligação pode ser substituído por um de M14, E16, E171 V19, R20 e L21. Tais modalidades são exemplificadas por: SEQ ID NO: 111, SEQ ID NO: 110, SEQ ID NO: 109, SEQ ID NO: 108, SEQ ID NO: 107, SEQ ID NO: 106, SEQ ID NO: 27, SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 25, SEQ ID NO: 24, SEQ ID NO: 23 e SEQ ID NO: 22.
O resíduo de ligação pode ser substituído por M14. Tais modalidades são exemplificadas por SEQ ID NO: 27 e SEQ ID NO: 111.
O resíduo de ligação pode ser substituído por E16. Tais modalidades são exemplificadas por SEQ ID NO: 26 e SEQ ID NO: 110.
O resíduo de ligação pode ser substituído por E17. Tais modalidades são exemplificadas por SEQ ID NO: 25 e SEQ ID NO: 109.
O resíduo de ligação pode ser substituído por V19. Tais modalidades são exemplificadas por SEQ ID NO: 24 e SEQ ID NO: 108.
O resíduo de ligação pode ser substituído por R20. Tais modalidades são exemplificadas por SEQ ID NO: 23 e SEQ ID NO: 107.
O resíduo de ligação pode ser substituído por L21. Tais modalidades são exemplificadas por SEQ ID NO: 22 e SEQ ID NO: 106.
Em algumas modalidades, o agente de direcionamento de GA da invenção compreende uma delimitação trp, compreendendo uma seqüência peptídica substancialmente homóloga a compreendendo pelo menos os resíduos P31 S32 S33 G34 A35 P36 P37 P38 e S39. Em outras modalidades, uma ou mais ou toda a delimitação trp está ausente do agente de direcionamento de GA.
Em algumas modalidades, a presente invenção proporciona um composto de direcionamento de GA compreendendo um peptídeo compreendendo uma seqüência substancialmente homóloga a:
H1 X2 E3 G4 T5 F6 T7 S8 D9 X1V1 x12 x13 x14 E15 x16 x17 A x19 x20 x21 F22 x23 x24
x25 x26 x27 x28 x29 x30 x31 x32 x33 x34 x35 x36 x37 x38 x39 X401
em que:
χ2 é um grupo de bloqueio, tal como Aib, A, S, Τ, V, L ou I, x10 é V, L, I ou A, x11 é um resíduo de ligação ou S, x12 é um resíduo de ligação, S ou K, x13 é um resíduo de ligação ou Y, x14 é um resíduo de ligação, G, C, F, Y, W ou L, x16 é um resíduo de ligação, K, D, E ou G, x17 é um resíduo de ligação ou Q, x19 é um resíduo de ligação, L, I, V ou A, x20 é um resíduo de ligação, Orn, K(SH), R ou K, x21 é um resíduo de ligação ou E, x23 é um resíduo de ligação ou I, x24 é um resíduo de ligação ou A, x25 é um resíduo de ligação ou resíduo aromático, x26 é um resíduo de ligação ou L, x27 é um resíduo de ligação, I ou V, x28 é um resíduo de ligação, R, Orn ou K, x29 é um resíduo de ligação, Aib ou G, x30 é um resíduo de ligação ou G, x31 é um resíduo de ligação, P, K(SH) ou está ausente, x32 é um resíduo de ligação, S ou está ausente, x33 é um resíduo de ligação, S ou está ausente, x34 é um resíduo de ligação, G ou está ausente, x35 é um resíduo de ligação, A ou está ausente, x36 é um resíduo de ligação, P ou está ausente, x37 é um resíduo de ligação, P ou está ausente, x38 é um resíduo de ligação, P ou está ausente, x39 é um resíduo de ligação, S ou está ausente e x40 é um resíduo de ligação ou está ausente, de modo que o composto de direcionamento de GA contém um resíduo de ligação compreendendo uma cadeia lateral nucleofílica, o resíduo de ligação sendo selecionado do grupo compreendendo K, R, C, T e S.
Em algumas modalidades, x2 é Aib. Em algumas modalidades, x31 é Aib.
Em algumas modalidades, x16 é E. Em algumas modalidades, x19 é V.
Em algumas modalidades, a presente invenção proporciona um composto de direcionamento de GA compreendendo um peptídeo compreendendo uma seqüência substancialmente homóloga a: H1 Aib2 E3 G4 T5 F6 T7 S8 D9 x10x11 x12 x13 x14 E15 E16 χ17 A V19 x20 x21 F22 x23 x24 x25 x26 x27 x28 x29 x30 Aib31 x32 x33 x34 x35 x36 x37 x38 x39 x40
Em algumas modalidades, a invenção compreende um composto de direcionamento de GA compreendendo uma seqüência substancialmente homóloga à seqüência:
H1 Aib2 E3 G4 T5 F6 T7 S8 D9 V10 S11 S12 Y13 L14 E15 E16 Q17 A18 V19 K20 E21 F22
|23A24 W25 L26 |27 K28 G29 R30 Aib31 a S32 S33 G34 A35 P36 P37 P38 S39 χ40
em que um ou mais dos resíduos Aib31 a S39 podem estar ausentes e x40 é um resíduo de ligação ou está ausente e em que um dos resíduos de S11 a x40 é um resíduo de ligação compreendendo uma cadeia lateral adequado para formação de ligações covalentes, o resíduo de ligação sendo selecionado do grupo compreendendo K, R, C, T e S. Tais modalidades são exemplificadas por SEQ ID NO: 57, SEQ ID NO: 64, SEQ ID NO: 65, SEQ ID NO: 66, SEQ ID NO: 67, SEQ ID NO: 68, SEQ ID NO: 69, SEQ ID NO: 70, SEQ ID NO: 71 e SEQ ID NO: 72.
Em algumas modalidades, a invenção compreende um composto de direcionamento de GA compreendendo uma seqüência substancialmente homóloga à seqüência:
H1 X2 E3 G4 T5 F6 T7 S8 D9 V10 S11 S12 Y13 L14 E15 G16 Q17 A18 A19 K20 E21 F22
l23 A24 χ25 L26 V27 K28 G29 R30 P31 S32 S33 G34 A35 P36 P37 P38 S39 χ40 em que:
χ2 é um grupo de bloqueio, tal como Aib, A, S, Τ, V, L ou I,
x25 é um resíduo de ligação ou resíduo aromático, um ou mais dos resíduos P31 to S39 podem estar ausentes, x40 é um resíduo de ligação ou está ausente e em que um dos resíduos de S11 a x40 é um resíduo de ligação compreendendo uma cadeia lateral nucleofílica, o resíduo de ligação sendo selecionado do grupo compreendendo K, R, C1 T e S.
Tais modalidades são exemplificadas por SEQ ID NO: 32, SEQ ID NO: 33, SEQ ID NO: 34, SEQ ID NO: 35, SEQ ID NO: 36 e SEQ ID NO: 37.
Em algumas modalidades, o agente de direcionamento de GA da invenção compreende uma delimitação trp, compreendendo uma seqüência peptídica substancialmente homóloga a uma seqüência compreendendo pelo menos os resíduos P31 S32 S33 G34 A35 P36 P37 P38 e S39. Em outras modalidades, um ou mais dos resíduos compreendendo a delimitação trp ou toda a delimitação trp estão ausentes do agente de direcionamento de GA.
O resíduo de ligação pode ser K.
O N-término pode ser sem proteção.
A cadeia lateral do resíduo de ligação pode ser covalentemente ligável ao sítio de combinação de um anticorpo diretamente ou via um Iigante intermediário. Em algumas modalidades, a cadeia lateral do resíduo de ligação é covalentemente ligado ao sítio de combinação de um anticorpo diretamente ou via um Iigante intermediário.
Em determinadas modalidades, esses peptídeos são
selecionados do grupo consistindo em: um composto de direcionamento de
GA conforme descrito aqui incluindo, mas não limitado a: r'-hgegtftsdlskqmeeea vrlfie wlknggpssgapppsk-r2 (Seq idno:3)
R'-HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPSK(SH)-R2 (SEQ ID NO: 172) R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPSK-R2 (SEQ ID NO:4) R'-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPSK(SH)-R2 (SEQ ID NO:173) R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO:5) R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGG-R2 (SEQ ID NO:6) R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKN-R2 (SEQ ID NO:7) R1-HAibEGTFTSDLSKQLEEEAVRLFIEFLKN-R2 (SEQ ID NO:8) R1-HAibEGTFTSDLSKQLEEEAVRLAIEFLKN-R2 (SEQ ID NO:9) R1-HAibEGTFTSDLSKQLEEEAVRLAIEFLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 10) R1-HAibEGTFTSDLSKQLEEEAVRLFIEFLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 11) R1-HAibEGTFTSDLSK(Ac)QMEEEAVRLFIEWLK(Ac)NGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 12) R'-HAibEGTFTSDLSK(benzoyl)QMEEEAVRLFIEWLK(benzoyl)NGGPSSGAPPPS-R2(SEQID NO: 13)
R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPKS-R2 (SEQ ID NO: 14)
R'-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFffiWLKNGGPSSGAPPK(SH)S-R2 (SEQ ID NO:99) R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAKPPS-R2 (SEQ ID NO: 15) R]-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAK(SH)PPS-R2 (SEQ ID NO: 100) R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSKAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 16) R^HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSKÍS^APPPS-R2 (SEQ ID N0:101) R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPKSGAPPPS-R2 CSEO ED ΝΟ:17ϊ RHAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPKCSHQSGAPPPS-R2 (SEQ IDNO:168)
R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKKGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ED NO: 18)
R1HAibEGITTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKKÍSI^GGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 102)
R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWKKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 19)
R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLK(SH)NGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ LD NO: 170)
R!-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWK(SH)KNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 103)
R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIKWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID N0:20)
R1HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIKÍS^WLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 104)
R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFKEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO:21)
R1HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFKÍS^EWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 105)
R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRKFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ED NO:22)
R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEA VRK(SH)FIE WLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 106)
R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVKLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO:23)
R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVK(SH)LFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 107)
R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAKRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ED NO:24)
R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAK(SH)RLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 108)
R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEKAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ED NO:25)
R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEK(SH)AVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ IDNO:109)
R1HAibEGTFTSDLSKQMEKEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ EDNO:26)
R1-HAibEGTFTSDLSKQMEK(SH)EAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 110)
R1-HAibEGTFTSDLSKQKEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ IDNO:27)
R1HAibEGTFTSDLSKQKíSIÇEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO:l 11)
R1-HAibEGTFTSDLSKKMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ id NO:28)
R1HAibEGTFTSDLSKKÍSHÍMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-r2 (seq ED NO: 112)
R1-HAibEGTFTSDLKKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-r2 (seq IDNO:29)
R1-HAibEGTFTSDLSK(SH)QMEEEA VRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO:169)
R1HAibEGTFTSDLKÍSEQKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ IDNO:113)
R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGK-R2 (SEQ DD N0:30)
R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGK(sh)-R2 (SEQ ID NO:l 14)
Rl-HAibEGTFTsDLsKQMEEEAVRKFIEWLKNGGPss-R2 (SEQ ID NO:31)
R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEA VRKFIEWLK(SH)NGGPSS-R2 (SEQ ID NO:l 15)
R1-HAibEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKGR-r2 (SEQ ID NO:32)
R1-HaegtftsdvssylegqaakefiawlvkgRk-R2 (seq id no:33)
R1-HgegtftsdvssylegqaakefiawlvkgRk-R2 (seq id no-.34)
Rl-HAibEGTFTsDVssYLEGQAAKEFIAWLVKAibR-R2 (SEQ ID n0:35)
Rl-HAibEGlTTsDVssYLEGQAAKEFIAWLVKAibRK-R2 (seq ID no:36)
Rl-HAibEGTFTsDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKGRK-R2 (SEQ ID no:37)
R1-HAibEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKGRK(SH)-R2 (SEQ ID no:38)
Rl-HAibEGTFTsDVSSYLEGQAAK(SH)EFIAWLVKGR-R2 (seq dd no:39)
Rl-HAibEGTFTsDVSSYGEGQAAKEFIAWLVKAibR-R2 (seq ID n0:40)
Rl-HAibEGTFTSDVSSYCEGQAAKEFIAWLVKAibR-R2 (seq ID no:41)
R1-HAibEGTFTSDVSSYFEGQAAKEFIA WLVKAibR-R2 (seq dd no:42)
Rl-HAibEGTFTsDVSSYYEGQAAKEFIAWLVKAibR-R2 (seq ID no:43)
R1-HAibEGTFTSDVSSYWEGQAAKEFIAWLVKAibR-R2 (SEQ ID no:44)
Rl-HAibEGTFTsDVSSYLEEQAAKEFIAWLVKAibR-R2 (SEQ ID no:45)
R1-HAibEGTFTSDVSSYLEDQAAKEFIA WL VKAibR-R2 (SEQ ID no:46)
Rl-HAibEGTFTsDVSSYLEKQAAKEFIAWLVKAibR-R2 (SEQ ID no:47)
R1-HAibEGTFTSDVSSYLEGQA VKEFIA WLVKAibR-R2 (SEQ ID no:48)
R1-HAibEGTFTSDVSSYLEGQAIKEFI AWLVKAibR-R2 (SEQ ID no:49)
Rl-HAibEGTFTSDVSSYLEGQALKEFIAWLVKAibR-R2 (SEQ IDNO:5Q) R R R R R R R R R R R R R R R R R R R R R R R R R R R R R R R R R
-HAibEGTFTSDVSSYLEGQAAREFIAWLVKAibR-R2 (SEQ ID NO:51) -HAibEGTFTSDVSSYLEGQAAOrnEFIAWLVKAibR-R2 (SEQ ID NO: 52) -HAibEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFLAFLVKAibR-R2 (SEQ ID NO:53) -HAibEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLIKAibR-R2 (SEQ ID NO:54) -HAibEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVRAibR-R2 (SEQ ID NO:55) -HAibEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVOrnAibR-R2 (SEQ ID NO:56) -HAibEGTFTSDVSSYLEEQAVKEFIAWLIKAibR-R2 (SEQ ID NO:57) -HAibEGTFTSDVSSYFEEQAVKEFIAWLIKAibR-R2 (SEQ ED NO: 58) -HAibEGTFTSDVSSYYEEQA VKEFLAWLIKAibR-R2 (SEQ ID NO:59) -HAibEGTFTSDVSSYWEEQ AVKEFIAWLIKAibR-R2 (SEQ ID N0:60) -HAibEGTFTSDVSSYLEEQ AVKEFIAWLIRAibR-R2 (SEQ ID NO:61) -HAibEGTFTSDVSSYLEEQAVREFIAWLIRAibR-R2 (SEQ ID NO:62) -HAibEGTFTSDVSSYLEEQAVKEFIA WLDÍAibRPSSGAPPPS-R2 (SEQ IDNO:63) -HAibEGTFTSDVSSYLEEQAVK(SH)EFIA WLIKAibRPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID N0:171) -HAibEGTFTSDKSSYLEEQAVKEFIAWLIKAibR-R2 (SEQ IDNO:64) -HAibEGTFTSDK(SH)SSYLEEQAVKEFIAWLIKAibR-R2 (SEQ ID N0:116) -HAibEGTFTSDVSKYLEEQAVKEFIAWLIKAibR-R2 (SEQ ID NO:65) -HAibEGTFTSDVSK(SH)YLEEQAVKEFIAWLIKAibR-R2 (SEQ ID N0:117) THAibEGTFTSDVSSYKEEQAVKEFIAWLIKAibR-R2 (SEQ DD NO:66) -HAibEGTFTSDVSSYK(SH)EEQAVKEFIAWLIKAibR-R2 (SEQ ED N0:118) -HAibEGTFTSDVSSYLEKQAVKEFIAWLIKAibR-R2 (SEQ ID NO:67) -HAibEGTFTSDVSSYLEK(SH)QAVKEFLAWLIKAibR-R2 (SEQ ID NO:l 19) -HAibEGTFTSDVSSYLEEQKVKEFIAWLIKAibR-R2 (SEQ ID NO:68) -HAibEGTFTSDVSSYLEEQK(SH) VKEFIA WLIKAibR-R2 (SEQ ID NO: 120) -HAibEGTFTSDVSSYLEEQAVKEKIAWLDCAibR-R2 (SEQ ED NO:69) -HAibEGTFTSDVSSYLEEQAVK(SH)EKIAWLIKAibR-R2 (SEQ ID NO: 121) -HAibEGTFTSDVSSYLEEQAVKEFIKWLIKAibR-R2 (SEQ IDNO:70) -HAibEGTFTSD VSSYLEEQAVKEFIK(SH)WLIKAibR-R2 (SEQ ED NO: 122) -HAibEGTFTSDVSSYLEEQA VKEFIA WKIKAibR-R2 (SEQ ID NO:71) -HAibEGTFTSDVSSYLEEQAVKEFIAWK(SH)IKAibR-R2 (SEQ IDNO:123) -HAibEGTFTSDVSSYLEEQAVKEFIAWLIKAibRPSSGAPPPSK-R2 (SEQ EDNO:72) -HAibEGTFTSDVSSYLEEQAVKEFIA WLIKAibRPSSGAPPPSK(SH)-R2 (SEQ ID NO: 124) -HAibEGTFTSDVSSYLEEQAVKEFIAWLIK(Ac)AibR-R2 (SEQ DD NO:73)
R1-HAibEGTFTSDVSSYLEEQAVKEFIAWLIK(benzoil)AibR-R2 (SEQ ID NO: 74) R1-H(Trans 3-hexanoil)AibEGTFTSDVSSYLEEQAVKEFIAWLIKAibR-R2 (SEQ ID NO: 75) R1-H(3-Aminofenilacetil)AibEGTFTSDVSSYLEEQAVKEFIAWLIKAibR-R2 (SEQ ID NO: 76)
R1 está ausente, é CH3, C(0)CH3, C(O)CH2CH3, C(O)CH2CH2CH3 ou C(O)CH(CH3)CH3; e
R2 é OH1 NH2, NH(CH3), NHCH2CH3, NHCH2CH2CH3, NHCH(CH3)CH3l NHCH2CH2CH2CH3, NHCH(CH3)CH2CH3, NHC6H5l NHCH2CH2OCH3, NHOCH3, NHOCH2CH3, um grupo de proteção carbóxi, um grupo ácido graxo lipídico ou um carboidrato.
Em determinadas modalidades, esses peptídeos são selecionados do grupo consistindo em um composto de direcionamento de GA conforme descrito aqui incluindo, mas não limitado a: R1-Haegtftsdvssylegqaakjefiawlvrgr (seq id no:125) R1-Haegtftsdvssylegqaarefiawlvrgrk (seq id no:126) R1-Haegtftsdvssylegqaarefiawlvrgk (seq id no:127) R1-JiAibEGTFTSDVSSYLEAibQAAKEFlAWLVKAibR (SEQ id NO: 128) Rl-HAibEGTFTsDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKAibR (SEQ ID NO:35) R1-HAibEGTFTSDVSSYLEAibQAAKEFIA WLVKGR (SEQ id NO:129) Rl-HAibEGTFTsDVSSYLEAibQAAREFIAWLVRAibRK (SEQ id NO: 130) Rl-HAibEGTFTsDVSSYLEGQAAREFIAWLVRAibRK (SEQ ID NO: 131) Rl-HAibEGTFTsDVSSYLEAibQAAREFIAWLVRGRK (SEQ id NO: 132) Rl-HAibEGTFTsDVSSYLEAibQAAREFIAWLVKAibR (SEQ ID NO: 133) R1-HAibEGTFTSD VSSYLEGQAAREFIAWLVKGRK (SEQ ID NO: 134) Rl-HAibEGTFTsDVSSYLEAibQAAREFIAWLVKGRK (SEQ ID NO: 135) R1-HAibEGTFTSD VSSYLEAibQ AAKEFIAWLVRAibR (SEQ id NO: 136) Rl-HAibEGTFTsDVSSYLEGQAAKEFIAWLVRAibRK (SEQ ED NO: 137) Rl-HAibEGTFTsDVSSYLEAibQAAKEFIAWLVRGRK (SEQ ID NO: 138) Rl-HAibEGTFTsDVSSYLEAibQAAKEFIAWLVKAibRAK (SEQ id NO: 139) Rl-HAibEGTFTsDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKAibRAK (SEQ id NO: 140) Rl-HAibEGTFTsDVSSYLEAibQAAKEFIAWLVKGRAK (SEQ id NO: 141) Rl-HAibEGTFTsDVSSYLEAibQAAKEFIAWLVKAibRK (SEQ id NO: 142) Rl-HAibEGTFTsDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKAibRK (SEQ id NO:36) Rl-HAibEGTFTsDVSSYLEAibQAAKEFIAWLVKGRK (SEQ ID NO: 143) Rl-H(D-Ala)EGTFTsDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKGRK (SEQ ID NO: 144) Rl-HAibEGTFTsDVSSYLEAibQAAibKEFIAWLVKGRK (SEQ ID NO: 145) Rl-HAibEGTFTSDVSSYLEEEAAREFIEWLVRGRK (SEQ id NO: 146)
em que:
R1 está ausente, é CH3, C(0)CH3, C(O)CH2CH3, C(O)CH2CH2CH3 ou C(O)CH(CH3)CH3; e
R2 é OH1 NH2, NH(CH3), NHCH2CH3, NHCH2CH2CH3l NHCH(CH3)CH3l NHCH2CH2CH2CH3i NHCH(CH3)CH2CH3, NHC6H5, NHCH2CH2OCH3i NHOCH3l NHOCH2CH3, um grupo de proteção carbóxi, um grupo ácido graxo lipídico ou um carboidrato.
Em uma modalidade da invenção, o composto de direcionamento de GA compreende uma seqüência com uma homologia de aminoácido de pelo menos 80% com SEQ ID NO 1 ou SEQ ID NO 2:
R1-HAEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKGR (SEQ ID NO: 1) [Glp-1] R1-HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS (SEQ ID NO: 2) [Exendina-4]
O composto de direcionamento de GA pode compreender uma seqüência de aminoácido da fórmula:
X1 X2 E3 G4 T5 F6 T7 S8 D9 X10 S11 X12 X13 X14 E15 X16 X17 A18 X19 X20 X21 F22 123 χ24 yy25 L26 y21 χ28 χ29 χ30 χ31 χ32 χ33 χ34 χ35 χ36 yZ7 χ38 χ39 χ40 em que:
X1 é L-histidina, D-histidina, desamino-histidina, 2-amino-histidina, β- hidróxi-histidina, homo-histidina, Να-acetil-histidina, a-fluorometil-histidina, α-metil-histidina, 3-piridilalanina, 2-piridilalanina ou 4-piridilalanina; X2 é A, D- Ala, G1 V, L, I, K, Aib, ácido (l-aminociclopropil)carboxílico, ácido (1- aminociclobutil)carboxílico, ácido 1-aminociclopentil)carboxílico, ácido (1- aminociclo-hexil)carboxílico, ácido (l-aminociclo-heptil)carboxílico ou ácido (1-aminociclo-octil)carboxílico; X10 é V ou L; X12 é S, K ou R, X13 é Y ou Q; X14 é L ou M; X16 é G1 E ou Aib; X17 é Q, Ε, K ou R; X19 é A ou V; X20 é Κ, E ou A; X21 é E ou L; X24 é A, E ou R; X27 é V ou K; X28 éK, E1N ou R; X29 é G ou R; X30 é R, G ou K; X31 é G, A, Ε, P, K1 amida ou está ausente; X32 é K1 S, amida ou está ausente. X33 é S, K, amida ou está ausente; X34 é G1 amida ou está ausente; X35 é A, amida ou está ausente; X36 é P, amida ou está ausente; X37 é P, amida ou está ausente; X38 é P1 amida ou está ausente; X39 é S, amida ou está ausente; X40 é amida ou está ausente;
contanto que se X321 X33, X341 X351 X36, X371 X381 X39 ou X40 está ausente, então, cada resíduo de aminoácido a jusante também está ausente.
Em outra modalidade da invenção, o composto de direcionamento de GA da invenção podem compreender a seqüência de aminoácido de fórmula:
X1 X2 E3 G4 T5 F6 T7 S8 D9 V10 S11 X12 Y13 L14 E15 X16 X17 A18 A19 X20 E21 F22
I23 χ24 W25 L26 V27 χ28 χ29 χ30 χ31 χ32
em que X1 é L-histidina, D-histidina, desamino-histidina, 2-amino-histidina, β- hidróxi-histidina, homo-histidina, Να-acetil-histidina, a-fluorometil-histidina, α-metil-histidina, 3-piridilalanina, 2-piridilalanina ou 4-piridilalanina; X2 é A, D- Ala1 G, V, L, I, K, Aib, ácido (l-aminociclo-propil)carboxílico, ácido (1- aminociclobutil)carboxílico, ácido 1-aminociclo-pentil)carboxílico ou ácido (1- aminociclo-hexil)carboxílico, ácido (l-aminociclo-heptil)carboxílico ou ácido (1-aminociclo-octil)carboxílico; X12 é S, K ou R; X16 é G, E ou Aib; X17 é Q1 E, K ou R; X20 é Κ, E ou T; X24 é A, E ou R; X28 é Κ, E ou R; X29 é G ou Aib; X30 é R ou K; X31 é G, A, E ou K; X32 é K, amida ou está ausente. Em outra modalidade da invenção, o agente de direcionamento de GA é protegido contra dipeptidil aminopeptidase IV. Em outra modalidade da invenção, o agente de direcionamento de GA é hidrolisado por DPP-IV em uma taxa menor do que a taxa de hidrólise de SEQ ID NO: 1 usando o ensaio de hidrólise de DPP-IV descrito aqui. Em outra modalidade da invenção, A2 do agente de direcionamento de GA foi substituído por outro resíduo de aminoácido (X2). Em algumas modalidades, X2 é Aib. Em outra modalidade da invenção, X1 é selecionado do grupo consistindo em D- histidina, desamino-histidina, 2-amino-histidina, [beta]-hidróxi-histidina, homo-histidina, Na-acetil-histidina, α-fluorometil-histidina, a-metil-histidina, 3-piridilalanina, 2-piridilalanina e 4-piridilalanina.
Em outra modalidade da invenção, o agente de direcionamento de GA compreende não mais do que doze resíduos de aminoácido os quais foram trocados, adicionados ou deletados quando comparado com SEQ ID NO: 1 ou SEQ ID NO: 2. Em outra modalidade da invenção, o agente de direcionamento de GA compreende não mais do que seis resíduos de aminoácido os quais foram trocados, adicionados ou deletados quando comparado com SEQ ID NO: 1 ou SEQ ID NO: 2. Em outra modalidade da invenção, o agente de direcionamento de GA compreende não mais do que quatro resíduos de aminoácido os quais foram trocados, adicionados ou deletados quando comparado com SEQ ID NO: 1 ou SEQ ID NO: 2. Em outra modalidade da invenção, o agente de direcionamento de GA compreende não mais do que dois resíduos de aminoácido os quais foram trocados, adicionados ou deletados quando comparado com SEQ ID NO: 1 ou SEQ ID NO: 2. Em outra modalidade da invenção, o agente de direcionamento de GA compreende não mais do que 4 resíduos de aminoácido os quais não são codificados pelo código genético.
Em outra modalidade da invenção o composto de direcionamento de GA é:
HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPSKKKKKK-amida (SEQ ID NO: 147).
Em algumas modalidades, a invenção proporciona um agente de direcionamento de GA que é substancialmente homóloga ao GLP-1. Os agentes de direcionamento GA da invenção podem ser pelo menos 95% homólogos ao GLP-1 (SEQ ID NO: 1). Os agentes de direcionamento de GA da invenção podem ser pelo menos 90% homólogos ao GLP-1. Os agentes de direcionamento de GA da invenção podem ser pelo menos 80% homólogos ao GLP-1. Os agentes de direcionamento de GA da invenção podem ser pelo menos 70% homólogos ao GLP-1. Os agentes de direcionamento de GA da invenção podem ser pelo menos 60% homólogos ao GLP-1. Os agentes de direcionamento de GA da invenção podem ser pelo menos 53% homólogos ao GLP-1. Os agentes de direcionamento de GA da invenção podem ser pelo menos 50% homólogos ao GLP-1.
Em algumas modalidades, a invenção proporciona um agente de direcionamento de GA que é substancialmente homólogo à Exendina-4 (SEQ ID NO: 2). Os agentes de direcionamento de GA da invenção podem ser pelo menos 95% homólogos à Exendina-4. Os agentes de direcionamento de GA da invenção podem ser pelo menos 90% homólogos à Exendina-4. Os agentes de direcionamento de GA da invenção podem ser pelo menos 80% homólogos à Exendina-4. Os agentes de direcionamento de GA da invenção podem ser pelo menos 70% homólogos à Exendina-4. Os agentes de direcionamento de GA da invenção podem ser pelo menos 60% homólogos à Exendina-4. Os agentes de direcionamento de GA da invenção podem ser pelo menos 53% homólogos à Exendina-4. Os agentes de direcionamento de GA da invenção podem ser pelo menos 50% homólogos à Exendina-4.
Em determinadas modalidades, um conjugado agente de direcionamento de GA-Iigante é proporcionado tendo a Fórmula I:
L - [agente de direcionamento de GA] (I)
em que:
[agente de direcionamento de GA] é um agonista peptídico de GLP-1 R. Em determinadas modalidades, o [agente de direcionamento de GA] é um peptídeo selecionado do grupo consistindo em: um composto de direcionamento de GA conforme descrito aqui incluindo, mas não limitado a:
R1-HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPSK-R2 (SEQ ID NO: 3)
R1-HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPSK(SH)-R2 (SEQ ID NO: 172) R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPSK-R2 (SEQ ID NO: 4)
R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPSK(SH)-R2 (SEQ ID NO: 173)
R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 5)
R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGG-R2 (SEQ ID NO: 6)
R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKN-R2 (SEQ ID NO: 7)
R1-HAibEGTFTSDLSKQLEEEAVRLFIEFLKN-R2 (SEQ ID NO: 8)
R1-HAibEGTFTSDLSKQLEEEAVRLAIEFLKN-R2 (SEQ ID NO: 9)
R1-HAibEGTFTSDLSKQLEEEAVRLAIEFLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 10)
R1-HAibEGTFTSDLSKQLEEEAVRLFIEFLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 11)
R1-HAibEGTFTSDLSK(Ac)QMEEEAVRLFIEWLK(Ac)NGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 12)
R1-HAibEGTFTSDLSK(benzoil)QMEEEAVRLFIEWLK(benzoil)NGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 13)
R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPKS-R2 (SEQ ID NO: 14)
R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPK(SH)S-R2 (SEQ ID NO: 99)
R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAKPPS-R2 (SEQ ID NO: 15)
R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAK(SH)PPS-R2 (SEQ ID NO: 100)
R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSKAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 16)
R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSK(SH)APPPS-R2 (SEQ ID NO: 101)
R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPKSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 17)
R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPK(SH)SGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 168)
R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKKGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 18)
R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKK(SH)GGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 102)
R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWKKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 19)
R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLK(SH)NGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 170)
R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWK(SH)KNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 103)
R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIKWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 20)
R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIK(SH)WLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 104)
R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFKEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 21)
R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFK(SH)EWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 105)
R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRKFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 22)
R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRK(SH)FIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 106)
R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVKLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 23)
R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVK(SH)LFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 107)
R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAKRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 24)
R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAK(SH)RLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 108)
R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEKAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 25)
R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEK(SH)AVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 109)
R1-HAibEGTFTSDLSKQMEKEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 26)
R1-HAibEGTFTSDLSKQMEK(SH)EAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 110)
R1-HAibEGTFTSDLSKQKEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 27) R1-HAibEGTFTSDLSKQK(SH)EEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 111) R1-HAibEGTFTSDLSKKMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 28) R1-HAibEGTFTSDLSKK(SH)MEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 112) R1-HAibEGTFTSDLKKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 29) R1-HAibEGTFTSDLSK(SH)QMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 169) R1-HAibEGTFTSDLK(SH)KQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 113) R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGK-R2 (SEQ ID NO: 30) R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGK(SH)-R2 (SEQ ID NO: 114) R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRKFIEWLKNGGPSS-R2 (SEQ ID NO: 31) R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRKFIEWLK(SH)NGGPSS-R2 (SEQ ID NO: 115) R1-HAibEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKGR-R2 (SEQ ID NO: 32) R1-HAEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKGRK-R2 (SEQ ID NO: 33) R1-HGEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKGRK-R2 (SEQ ID NO: 34) R1-HAibEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKAibR-R2 (SEQ ID NO: 35) R1-HAibEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKAibRK-R2 (SEQ ID NO: 36) R1-HAibEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKGRK-R2 (SEQ ID NO: 37) R1-HAibEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKGRK(SH)-R2 (SEQ ID NO: 38) R1-HAibEGTFTSDVSSYLEGQAAK(SH)EFIAWLVKGR-R2 (SEQ ID NO: 39) R1-HAibEGTFTSDVSSYGEGQAAKEFIAWLVKAibR-R2 (SEQ ID NO: 40) Rl-HAibEGTFTSDVSSYCEGQAAKEFIAWLVKAibR-R2 (SEQ ID NO: 41) R1-HAibEGTFTSDVSSYFEGQAAKEFIAWLVKAibR-R2 (SEQ ID NO: 42) R1-HAibEGTFTSDVSSYYEGQAAKEFiAWLVKAibR-R2 (SEQ ID NO: 43) R1-HAibEGTFTSDVSSYWEGQAAKEFIAWLVKAibR-R2 (SEQ ID NO: 44) R1-HAibEGTFTSDVSSYLEEQAAKEFIAWLVKAibR-R2 (SEQ ID NO: 45) R1-HAibEGTFTSDVSSYLEDQAAKEFIAWLVKAibR-R2 (SEQ ID NO: 46) R1-HAibEGTFTSDVSSYLEKQAAKEFIAWLVKAibR-R2 (SEQ ID NO: 47) R1-HAibEGTFTSDVSSYLEGQAVKEFIAWLVKAibR-R2 (SEQ ID NO: 48) R1-HAibEGTFTSDVSSYLEGQAIKEFIAWLVKAibR-R2 (SEQ ID NO: 49) R1-HAibEGTFTSDVSSYLEGQALKEFIAWLVKAibR-R2 (SEQ ID NO: 50) R1-HAibEGTFTSDVSSYLEGQAAREFIAWLVKAibR-R2 (SEQ ID NO: 51) R1-HAibEGTFTSDVSSYLEGQAAOrnEFIAWLVKAibR-R2 (SEQ ID NO: 52) Rl-HAibEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAFLVKAibR-R2 (SEQ ID NO: 53) R1-HAibEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLIKAibR-R2 (SEQ ID NO: 54) R1-HAibEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVRAibR-R2 (SEQ ID NO: 55) R1-HAibEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVOrnAibR-R2 (SEQ ID NO: 56) R1-HAibEGTFTSDVSSYLEEQAVKEFIAWLIKAibR-R2 (SEQ ID NO: 57) R1-HAibEGTFTSDVSSYFEEQAVKEFIAWLIKAibR-R2 (SEQ ID NO: 58) Rl-HAibEGTFTSDVSSYYEEQAVKEFIAWLIKAibR-R2 (SEQ ID NO: 59) R1-HAibEGTFTSDVSSYWEEQAVKEFIAWLIKAibR-R2 (SEQ ID NO: 60) R1-HAibEGTFTSDVSSYLEEQAVKEFIAWLIRAibR-R2 (SEQ ID NO: 61) R1-HAibEGTFTSDVSSYLEEQAVREFIAWLIRAibR-R2 (SEQ ID NO: 62) R1-HAibEGTFTSDVSSYLEEQAVKEFIAWLIKAibRPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 63) R1-HAibEGTFTSDVSSYLEEQAVK(SH)EFIAWLIKAibRPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 171) R1-HAibEGTFTSDKSSYLEEQAVKEFIAWLIKAibR-R2 (SEQ ID NO: 64) R1-HAibEGTFTSDK(SH)SSYLEEQAVKEFIAWLIKAibR-R2 (SEQ ID NO: 116) R1-HAibEGTFTSDVSKYLEEQAVKEFIAWLIKAibR-R2 (SEQ ID NO: 65) Ri1-HAibEGTFTSÜVSK(SH)YLEEQAVKEFIAWLIKAibR-R2 (SEQ ID NO: 117) R1-HAibEGTFTSDVSSYKEEQAVKEFIAWLIKAibR-R2 (SEQ ID NO: 66) R1-HAibEGTFTSDVSSYK(SH)EEQAVKEFIAWLIKAibR-R2 (SEQ ID NO: 118) R1-HAibEGTFTSDVSSYLEKQAVKEFIAWLIKAibR-R2 (SEQ ID NO: 67) R1-HAibEGTFTSDVSSYLEK(SH)QAVKEFIAWLIKAibR-R2 (SEQ ID NO: 119) Rl-HAibEGTFTSDVSSYLEEQKVKEFIAWLIKAibR-R2 (SEQ ID NO: 68) R1-HAibEGTFTSDVSSYLEEQK(SH)VKEFIAWLIKAibR-R2 (SEQ ID NO: 120) R1-HAibEGTFTSDVSSYLEEQAVKEKIAWLIKAibR-R2 (SEQ ID NO: 69) R1-HAibEGTFTSDVSSYLEEQAVK(SH)EKIAWLIKAibR-R2 (SEQ ID NO: 121) R1-HAibEGTFTSDVSSYLEEQAVKEFIKWLIKAibR-R2 (SEQ ID NO: 70) R1-HAibEGTFTSDVSSYLEEQAVKEFIK(SH)WLIKAibR-R2 (SEQ ID NO: 122) R1-HAibEGTFTSDVSSYLEEQAVKEFIAWKIKAibR-R2 (SEQ ID NO: 71) Rl-HAibEGTFTSDVSSYLEEQAVKEFIAWK(SH)IKAibR-R2 (SEQ ID NO: 123) R1-HAibEGTFTSDVSSYLEEQAVKEFIAWLIKAibRPSSGAPPPSK-R2 (SEQ ID NO: 72) R1-HAibEGTFTSDVSSYLEEQAVKEFIAWLIKAibRPSSGAPPPSK(SH)-R2 (SEQ ID NO: 124) R1-HAibEGTFTSDVSSYLEEQAVKEFIAWLiK(Ac)AibR-R2 (SEQ ID NO: 73) R1-HAibEGTFTSDVSSYLEEQAVKEFIAWLIK(benzoil)AibR-R2 (SEQ ID NO: 74) R1-H(Trans 3-hexanoil)AibEGTFTSDVSSYLEEQAVKEFIAWLIKAibR-R2 (SEQ ID NO: 75) R1-H(3-Aminofenilacetil)AibEGTFTSDVSSYLEEQAVKEFIAWLIKAibR-R2 (SEQ ID NO: 76)
em que:
R1 está ausente, é CH3, C(0)CH3, C(O)CH2CH3, C(O)CH2CH2CH3 ou C(O)CH(CH3)CH3; e
R2 é OH, NH2, NH(CH3)1 NHCH2CH3, NHCH2CH2CH3, NHCH(CH3)CH3, NHCH2CH2CH2CH3, NHCH(CH3)CH2CH3, NHC6H5, NHCH2CH2OCH3, NHOCH3, NHOCH2CH3, um grupo de proteção carbóxi , um grupo ácido graxo lipídico ou um carboidrato;
e qualquer um dos truncamentos de C-término e análogos que podem ser formados a partir desses peptídeos; e
L é uma porção Iigante tendo a fórmula -X-Y-Z, em que:
X está opcionalmente presente e é um polímero biologicamente compatível, copolímero em bloco, C, Η, N, O, P1 S, halogênio (F, Cl, Br, I) ou um sal do mesmo, um grupo alquila, alquenila, alquinila, oxoalquila, oxoalquenila, oxoalquinila, aminoalquila, aminoalquenila, aminoalquinila, sulfoalquila, sulfoalquenila, sulfoalquinila, fosfoalquila, fosfoalquenila ou fosfoalquinila, preso a um dos resíduos que compreende um agente de direcionamento de GA;
Y é um grupo de reconhecimento opcionalmente presente compreendendo pelo menos uma estrutura de anel; e
Z é um grupo reativo que é capaz de ligação covalente a uma cadeia lateral em um sítio de combinação de um anticorpo; e sais, estereoisômeros, tautômeros, solvatos e pró-fármacos farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos.
Em algumas modalidades, X é preso ao carbóxi término, uma cadeia lateral S, uma cadeia lateral K, uma cadeia lateral K(SH), uma cadeia lateral T ou uma cadeia lateral Y de um agente de direcionamento de GA.
Em outros aspectos, a invenção proporciona compostos tendo a fórmula selecionada do grupo consistindo em:
R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLK(L)NGGPSSGAPPPS-R2(SEQ ID NO: 148) R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRK(L)FIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 149) R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVK(L)LFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 150) R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAK(L)RLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 151) R1-HAibEGTFTSDLSKQMEK(L)EAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 164) R1-HAibEGTFTSDLSKQK(L)EEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2(SEQ ID NO: 152 ) R1-HAibEGTFTSDVSSYLEEQAVKEFIAWLIKAibRPSSGAPPPSK(L)-R2 (SEQ ID NO: 153) R1-HAibEGTFTSDVSSYLEEQAVK(L)EFIAWLIKAibRPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 154) R1-HAibEGTFTSDVSSYLEGQAAK(L)EFIAWLVKGR-R2 (SEQ ID NO: 155) em que
R1 está ausente, é CH3, C(O)CH3, C(O)CH2CH3, C(O)CH2CH2CH3 ou C(O)CH(CH3)CH3; e
R2 é OH, NH2, NH(CH3), NHCH2CH3, NHCH2CH2CH3, NHCH(CH3)CH3, NHCH2CH2CH2CH3, NHCH(CH3)CH2CH3, NHC6H5, NHCH2CH2OCH3, NHOCH3, NHOCH2CH3, um grupo de proteção carbóxi, um grupo ácido graxo lipídico ou um carboidrato e
K(L) é um resíduo de Iisina covalentemente ligado a um Iigante L. Em determinadas modalidades, K(L) é:
<formula>formula see original document page 27</formula>
em que u é 1, 2 ou 3;
-L- é uma porção Iigante tendo a fórmula -X-Y-Z-, em que: Xé:
<formula>formula see original document page 27</formula>
em que ν é 0, 1, 2 ou 3; t é 1, 2 ou 3, r é 1 ou 2; s é 0, 1 ou 2;
Rb é hidrogênio, Cmo alquila substituída ou não-substituida, C3-7 cicloalquil-C0-6 alquila substituída ou não-substituida ou aril-C0-6 alquila substituída ou não-substituida;
Y é um grupo de reconhecimento compreendendo pelo menos uma estrutura de anel; e
Z é um grupo reativo que é capaz de formação de uma ligação covalente com uma cadeia lateral de aminoácido em um sítio de combinação de um anticorpo.
Em algumas modalidades, Y tem a estrutura opcionalmente substituída:
<formula>formula see original document page 27</formula>
OU
<formula>formula see original document page 27</formula>
em que a, b, c, d e e são, independentemente, carbono ou nitrogênio; f é carbono, nitrogênio, oxigênio ou enxofre; Y é preso a X e Z independentemente em quaisquer duas posições no anel de valência suficiente; e não mais do que quatro de a, b, c, d, e ou f são simultaneamente nitrogênio.
Em algumas modalidades, Z é selecionado do grupo consistindo em 1,3-dicetonas substituídas ou acil beta-lactames.
Em algumas modalidades de compostos,Z tem a strutura:
<formula>formula see original document page 28</formula>
em que q = 0, 1, 2, 3, 4 ou 5. Em outras modalidades, q = 1, 2 ou 3.
Em algumas modalidades de compostos de fórmula I, X é: -R22-P-R23- ou -R22-P-R21-P-R23-
em que:
P e P' são independentemente selecionados do grupo consistindo em oxidos de polioxialquileno, tal como oxido de polietileno, polietiloxazolina, poli-N-vinil pirrolidona, álcool polivinílico, poli-hidroxietil acrilato, poli-hidróxi etilmetacrilato e poliacrilamida, poliaminas tendo grupos amina sobre a estrutura principal polimérica ou as cadeias laterais poliméricas, tais como polilisina, poliornitina, poliarginina e poli-histidina, poliaminas não-peptídicas, tais como poliaminoestireno, poliaminoacrilato, (poli)N-metil aminoacrilato, (poli)N-etilaminoacrilato, (poli)N,N-dimetil aminoacrilato, (poli)N,N-dietilaminoacrilato, (poli)aminometacrilato, (poli)N- metil amino-metacrilato, (poli)N-etil aminometacrilato, (poli)N,N-dimetil aminometacrilato, (poli)N,N-dietil aminometacrilato, (poli)etilenoimina, polímeros de aminas quaternárias, tais como cloreto de (poli)N,N,N- trimetilaminoacrilato, cloreto de (poli)metilacrilamidopropiltrimetil amônio, proteoglicanas, tais como sulfato-A de condroitina (4-sulfato), sulfato-C de condroitina (6-sulfato) e sulfato-B de condroitina, polipeptídeos, tais como poliserina, politreonina, poliglutamina, polissacarídeos naturais ou sintéticos, tais como quitosana, hidróxi etil celulose e lipídios;
R21, R22 e R23 são, cada um independentemente, uma ligação covalente, -O-, -S-, -NRb-, amida, C1-50 alquileno de cadeia reta ou ramificada substituído ou não-substituido ou C1-50 heteroalquileno de cadeia reta ou ramificada substituído ou não-substituido;
Rb é hidrogênio, C1-10 alquila substituída ou não-substituida, C3.7 cicloalquil-C0-6 alquila substituída ou não-substituida ou aril-C0-6 alquila substituída ou não-substituida; e
R21, R22 e R23 são selecionados de modo que o comprimento da estrutura principal de X permaneça cerca de 200 átomos ou menos.
Em algumas modalidades de compostos de fórmula I, X é preso a um resíduo de aminoácido no [agente de direcionamento de GA] e é um - R22-[CH2-CH2-0]t-R23- opcionalmente substituído, -R22-cicloalquil-R23-, -R22- aril-R23- ou -R22-heterociclil-R23-, em que t é 0 a 50.
Em algumas modalidades, X é preso ao término carbóxi, uma cadeia lateral S1 uma cadeia lateral K, uma cadeia lateral K(SH)1 uma cadeia lateral T ou uma cadeia lateral Y de um agente de direcionamento de GA.
Em algumas modalidades de compostos de fórmula I, R22 é - (CH2)v-, -(CH2)u-C(O)-(CH2)v-, -(CH2)u-C(O)-O-(CH2)v-, -(CH2)u-C(S)-NRb- (CH2)v-, -(CH2)u-C(O)-NRb-(CH2)v-, -(CH2)u-NRb-(CH2)v-, -(CH2)u-O-(CH2)v-, - (CH2)u-S(O)0-2-(CH2)v-, -(CH2)u-S(0)o-2-NRb-(CH2)v- ou -(CH2)u-P(O)(ORb)-O- (CH2)v-, em que u e ν são, independentemente, O, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 ou 20.
Em algumas modalidades de compostos de fórmula I, R21 e R23 são, independentemente, -(CH2)s-, -(CH2)r-C(O)-(CH2)s-, -(CH2)r-C(O)-O- (CH2)v-, -(CH2)r-C(S)-NRb-(CH2)s-, -(CH2)r-C(O)-NRb-(CH2)s-, -(CH2)r-NRb- (CH2)s-, -(CH2)r-O-(CH2)s-, -(CH2)r-S(0)o-2-(CH2)s-, -(CH2)r-S(O)0.2-NRb- (CH2)s- ou -(CH2)r-P(O)(ORb)-O-(CH2)s-, em que r, s e ν são, independentemente, O, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 ou 20.
Em algumas modalidades de fórmula I, se t>1 ou se X é -R22- [CH2-CH2-Olt-R23-, -R22-CiCloaIquiI-R23, -R22-aril-R23- ou -R22-heterociclil-R23-, Y está presente.
Compostos exemplificativos de acordo com a Fórmula I são ilustrados nas figuras 1 e 3.
Outro aspecto da invenção, ilustrado na Fórmula II, é um composto de direcionamento de GA compreendendo um agente de direcionamento de GA covalentemente ligado a um sítio de combinação de um anticorpo via um Iigante interveniente L'. A porção de anticorpo de um composto de direcionamento de GA pode incluir um anticorpo de inteiro (comprimento totai), fragmentos de anticorpo únicos ou quaisquer outras formas de um anticorpo, conforme esse termo é usado aqui. Em uma modalidade, o anticorpo é uma versão humanizada de um anticorpo de aldolase de murino compreendendo uma região constante de um anticorpo de IgG, IgA, IgM, IgD ou IgE humano. Em outra modalidade, o anticorpo é um anticorpo quimérico compreendendo a região variável de um anticorpo de aldolase de murino e uma região constante de um anticorpo de IgG1 IgA, IgM, IgD ou IgE humano. Em uma outra modalidade, o anticorpo é uma versão totalmente humana de um anticorpo de aldolase de murino compreendendo uma seqüência polipeptídica de um anticorpo de IgG, IgA, IgM, IgD ou IgE humano natural ou nativo:
Anticorpo-L' - [agente de direcionamento de GA] (II) em que:
[agente de direcionamento de GA] é um agonista peptídico de GLP-1R. Em determinadas modalidades, o [agente de direcionamento de GA] é um peptídeo selecionado do grupo consistindo em um composto de direcionamento de GA conforme descrito aqui incluindo, mas não limitado a: R1-HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPSK-R2 (SEQ ID NO: 3) R1-HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPSK(SH)-R2 (SEQ ID NO: 172) R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPSK-R2 (SEQ ID NO: 4) R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPSK(SH)-R2 (SEQ ID NO: 173) R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 5) R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGG-R2 (SEQ ID NO: 6) R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKN-R2 (SEQ ID NO: 7) R1-HAibEGTFTSDLSKQLEEEAVRLFIEFLKN-R2 (SEQ ID NO: 8) R1-HAibEGTFTSDLSKQLEEEAVRLAIEFLKN-R2 (SEQ ID NO: 9) R1-HAibEGTFTSDLSKQLEEEAVRLAIEFLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 10) R1-HAibEGTFTSDLSKQLEEEAVRLFIEFLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 11) R1-HAibEGTFTSDLSK(Ac)QMEEEAVRLFIEWLK(Ac)NGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 12) R1-HAibEGTFTSDLSK(benzoil)QMEEEAVRLFIEWLK(benzoil)NGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 13)
R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPKS-R2 (SEQ ID NO: 14) R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPK(SH)S-R2 (SEQ ID NO: 99) R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAKPPS-R2 (SEQ ID NO: 15) R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAK(SH)PPS-R2 (SEQ ID NO: 100) R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSKAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 16) R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSK(SH)APPPS-R2 (SEQ ID NO: 101) R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPKSGAPPPS-R2(SEQ ID NO: 17) R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPK(SH)SGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 168) R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKKGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 18) R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKK(SH)GGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 102) R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWKKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 19) R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLK(SH)NGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 170) R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWK(SH)KNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 103) R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIKWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 20) R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIK(SH)WLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 104) R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFKEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 21) R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFK(SH)EWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 105) R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRKFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 22) R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRK(SH)FIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 106) R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVKLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 23) R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVK(SH)LFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 107) R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAKRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 24) R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAK(SH)RLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 108) R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEKAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 25) R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEK(SH)AVRLFlEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 109) R1-HAibEGTFTSDLSKQMEKEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 26) R1-HAibEGTFTSDLSKQMEK(SH)EAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 110) R1-HAibEGTFTSDLSKQKEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 27) R1-HAibEGTFTSDLSKQK(SH)EEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 111) R1-HAibEGTFTSDLSKKMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 28) R1-HAibEGTFTSDLSKK(SH)MEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 112) R1-HAibEGTFTSDLKKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 29) R1-HAibEGTFTSDLSK(SH)QMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 169) R1-HAibEGTFTSDLK(SH)KQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 113) R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGK-R2 (SEQ ID NO: 30) R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGK(SH)-R2 (SEQ ID NO: 114) R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRKFIEWLKNGGPSS-R2 (SEQ ID NO: 31) R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRKFIEWLK(SH)NGGPSS-R2 (SEQ ID NO: 115) R1-HAibEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKGR-R2 (SEQ ID NO: 32) R1-HAEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKGRK-R2 (SEQ ID NO: 33) R1-HGEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKGRK-R2 (SEQ ID NO: 34) R1-HAibEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKAibR-R2 (SEQ ID NO: 35) R1-HAibEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKAibRK-R2 (SEQ ID NO: 36) R1-HAibEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKGRK-R2 (SEQ ID NO: 37) R1-HAibEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKGRK(SH)-R2 (SEQ ID NO: 38) R1-HAibEGTFTSDVSSYLEGQAAK(SH)EFIAWLVKGR-R2 (SEQ ID NO: 39) R1-HAibEGTFTSDVSSYGEGQAAKEFIAWLVKAibR-R2 (SEQ ID NO: 40) R1-HAibEGTFTSDVSSYCEGQAAKEFIAWLVKAibR-R2 (SEQ ID NO: 41) R1-HAibEGTFTSDVSSYFEGQAAKEFIAWLVKAibR-R2 (SEQ ID NO: 42) R1-HAibEGTFTSDVSSYYEGQAAKEFIAWLVKAibR-R2 (SEQ ID NO: 43) R1-HAibEGTFTSDVSSYWEGQAAKEFIAWLVKAibR-R2 (SEQ ID NO: 44) R1-HAibEGTFTSDVSSYLEEQAAKEFIAWLVKAibR-R2 (SEQ ID NO: 45) R1-HAibEGTFTSDVSSYLEDQAAKEFIAWLVKAibR-R2 (SEQ ID NO: 46) R1-HAibEGTFTSDVSSYLEKQAAKEFIAWLVKAibR-R2 (SEQ ID NO: 47) R1-HAibEGTFTSDVSSYLEGQAVKEFIAWLVKAibR-R2 (SEQ ID NO: 48) R1-HAibEGTFTSDVSSYLEGQAIKEFIAWLVKAibR-R2 (SEQ ID NO: 49) R1-HAibEGTFTSDVSSYLEGQALQUEFIAWLVKAibR-R2 (SEQ ID NO: 50) R1-HAibEGTFTSDVSSYLEGQAAREFIAWLVKAibR-R2 (SEQ ID NO: 51) R1-HAibEGTFTSDVSSYLEGQAAOrnEFIAWLVKAibR-R2 (SEQ ID NO: 52) Rl-HAibEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAFLVKAibR-R2 (SEQ ID NO: 53) R1-HAibEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLIKAibR-R2 (SEQ ID NO: 54) R1-HAibEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVRAibR-R2 (SEQ ID NO: 55) R1-HAibEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVOrnAibR-R2 (SEQ ID NO: 56) R1-HAibEGTFTSDVSSYLEEQAVKEFIAWLIKAibR-R2 (SEQ ID NO: 57) R1-HAibEGTFTSDVSSYFEEQAVKEFIAWLIKAibR-R2 (SEQ ID NO: 58) R1-HAibEGTFTSDVSSYYEEQAVKEFIAWLIKAibR-R2 (SEQ ID NO: 59) R1-HAibEGTFTSDVSSYWEEQAVKEFIAWLIKAibR-R2 (SEQ ID NO: 60) R1-HAibEGTFTSDVSSYLEEQAVKEFIAWLIRAibR-R2 (SEQ ID NO: 61) R1-HAibEGTFTSDVSSYLEEQAVREFIAWLIRAibR-R2 (SEQ ID NO: 62) R1-HAibEGTFTSDVSSYLEEQAVKEFIAWLIKAibRPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 63) R1-HAibEGTFTSDVSSYLEEQAVK(SH)EFIAWLIKAibRPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 171) R1-HAibEGTFTSDKSSYLEEQAVKEFIAWLIKAibR-R2 (SEQ ID NO: 64) Rl-HAibEGTFTSDK(SH)SSYLEEQAVKEFIAWLIKAibR-R2 (SEQ ID NO: 116) R1-HAibEGTFTSDVSKYLEEQAVKEFIAWLIKAibR-R2 (SEQ ID NO: 65) R1-HAibEGTFTSDVSK(SH)YLEEQAVKEFIAWLIKAibR-R2 (SEQ ID NO: 117) R1-HAibEGTFTSDVSSYKEEQAVKEFIAWLIKAibR-R2 (SEQ ID NO: 66) R1-HAibEGTFTSDVSSYK(SH)EEQAVKEFIAWLIKAibR-R2 (SEQ ID NO: 118) R1-HAibEGTFTSDVSSYLEKQAVKEFIAWLIKAibR-R2 (SEQ ID NO: 67) R1-HAibEGTFTSDVSSYLEK(SH)QAVKEFIAWLIKAibR-R2 (SEQ ID NO: 119) R1-HAibEGTFTSDVSSYLEEQKVKEFIAWLIKAibR-R2 (SEQ ID NO: 68) R1-HAibEGTFTSDVSSYLEEQK(SH)VKEFIAWLIKAibR-R2 (SEQ ID NO: 120) R1-HAibEGTFTSDVSSYLEEQAVKEKIAWLIKAibR-R2 (SEQ ID NO: 69) R1-HAibEGTFTSDVSSYLEEQAVK(SH)EKIAWLIKAibR-R2 (SEQ ID NO: 121) R1-HAibEGTFTSDVSSYLEEQAVKEFIKWLIKAibR-R2 (SEQ ID NO: 70) R1-HAibEGTFTSDVSSYLEEQAVKEFIK(SH)WLIKAibR-R2 (SEQ ID NO: 122) R1-HAibEGTFTSDVSSYLEEQAVKEFIAWKIKAibR-R2 (SEQ ID NO: 71) R1-HAibEGTFTSDVSSYLEEQAVKEFIAWK(SH)IKAibR-R2 (SEQ ID NO: 123) R1-HAibEGTFTSDVSSYLEEQAVKEFIAWLIKAibRPSSGAPPPSK-R2 (SEQ ID NO: 72) R1-HAibEGTFTSDVSSYLEEQAVKEFIAWLIKAibRPSSGAPPPSK(SH)-R2 (SEQ ID NO: 124) R1-HAibEGTFTSDVSSYLEEQAVKEFIAWLIK(Ac)AibR-R2 (SEQ ID NO: 73) R1-HAibEGTFTSDVSSYLEEQAVKEFIAWLIK(bènzoil)AibR-R2 (SEQ ID NO: 74) R1-HfTrans 3-hexanoil)AibEGTFTSDVSSYLEEQAVKEFIAWLIKAibR-R2 (SEQ ID NO: 75) R1-H(3-Aminofenilacetil)AibEGTFTSDVSSYLEEQAVKEFIAWLIKAibR-R2 (SEQ ID NO: 76)
em que:
R1 está ausente, é CH3, C(O)CH3, C(O)CH2CH3, C(O)CH2CH2CH3 ou C(O)CH(CH3)CH3; e
R2 é OH, NH2, NH(CH3)1 NHCH2CH3, NHCH2CH2CH3, NHCH(CH3)CH3, NHCH2CH2CH2CH3, NHCH(CH3)CH2CH3, NHC6H5, NHCH2CH2OCH3, NHOCH3, NHOCH2CH3, um grupo de proteção carbóxi , um grupo ácido graxo lipídico ou um carboidrato,
e qualquer um dos truncamentos de C-término e análogos que podem ser formados a partir esses peptídeos; e L' é uma porção Iigante tendo a fórmula -X-Y-Z', em que:
X é um polímero biologicamente compatível ou copolímero em bloco preso a um dos resíduos que compreende um agente de direcionamento de GA;
Y é um grupo de reconhecimento opcionalmente presente compreendendo pelo menos uma estrutura de anel; e
Z é um grupo que é covalentemente ligado a uma cadeia lateral em um sítio de combinação de um anticorpo; e sais, estereoisômeros, tautômeros, solvatos e pró-fármacos farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos.
Em algumas modalidades de compostos de fórmula II, X é: -R22-P-R23- ou -R22-P-R21-P'-R23- em que:
PeP' são independentemente selecionados do grupo consistindo em oxidos de polioxialquileno, tal como oxido de polietileno, polietiloxazolina, poli-N-vinil pirrolidona, álcool polivinílico, poli-hidroxietil acrilato, poli-hidróxi etilmetacrilato e poliacrilamida, poliaminas tendo grupos amina sobre a estrutura principal polimérica ou as cadeias laterais poliméricas, tais como polilisina, poliornitina, poliarginina e poli-histidina, poliaminas não-peptídicas, tais como poliaminoestireno, poliaminoacrilato, (poli)N-metil aminoacrilato, (poli)N-etilaminoacrilato, (poli)N,N-dimetil aminoacrilato, (poli)N,N-dietilaminoacrilato, (poli)aminometacrilato, (poli)N- metil amino-metacrilato, (poli)N-etil aminometacrilato, (poli)N,N-dimetil aminometacrilato, (poli)N,N-dietil aminometacrilato, (poli)etilenoimina, polímeros de aminas quaternárias, tais como cloreto de (ροΙ'ι)Ν,Ν,Ν- trimetilaminoacrilato, cloreto de (poli)metilacrilamidopropiltrimetil amônio, proteoglicanas, tais como sulfato-A de condroitina (4-sulfato), sulfato-C de condroitina (6-sulfato) e sulfato-B de condroitina, polipeptídeos, tais como poliserina, politreonina, poliglutamina, polissacarídeos naturais ou sintéticos, tais como quitosana, hidróxi etil celulose e lipídios;
R21, R22 e R23 são, cada um independentemente, uma ligação covalente, -O-, -S-, -NRb-, C1-50 alquileno de cadeia reta ou ramificada substituído ou não-substituido ou C1-50 heteroalquileno de cadeia reta ou ramificada substituído ou não-substituido;
Rb é hidrogênio, C-mo alquila substituída ou não-substituida, C3-7 cicloalquil-C0-6 alquila substituída ou não-substituida ou aril-C0-6 alquila substituída ou não-substituida; e
R21, R22 e R23 são selecionados de modo que o comprimento da estrutura principal de X permaneça cerca de 200 átomos ou menos.
Em algumas modalidades de compostos de fórmula II, X é preso a um resíduo de aminoácido no [agente de direcionamento de GA] e é um - R22-[CH2-CH2-0]t-R23- opcionalmente substituído, -R22-cicloalquil-R23-, -R22- aril-R23- ou -R22-heterociclil-R23-, em que t é 0 a 50.
Em algumas modalidades de compostos de fórmula II, R22 é - (CH2)v-, -(CH2)u-C(O)-(CH2)v-, -(CH2)u-C(O)-O-(CH2)v-, -(CH2)u-C(S)-NRb- (CH2)v-, -(CH2)u-C(O)-NRb-(CH2)v-, -(CH2)u-NRb-(CH2)v-, -(CH2)u-O-(CH2)v-, - (CH2)u-S(O)0-2-(CH2)v-, -(CH2)u-S(0)o-2-NRb-(CH2)v- ou -(CH2)u-P(O)(ORb)-O- (CH2)v-, em que u e ν são, independentemente, O, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 ou 20.
Em algumas modalidades de compostos de fórmula II, R21 e R23 são, independentemente, -(CH2)s-, -(CH2)r-C(O)-(CH2)s-, -(CH2)r-C(O)-O- (CH2)v-, -(CH2)r-C(S)-NRb-(CH2)s-, -(CH2)r-C(O)-NRb-(CH2)s-, -(CH2)r-NRb- (CH2)s-, -(CH2)r-O-(CH2)s-, -(CH2)r-S(0)o-2-(CH2)s-, -(CH2)r-S(O)0-2-NRb- (CH2)s- ou -(CH2)r-P(O)(ORb)-O-(CH2)s-, em que r, s e ν são, independentemente, O, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 ou 20.
Em algumas modalidades de compostos de fórmula II, [agente de direcionamento de GA] é um peptídeo selecionado do grupo consistindo em:
R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFlEWLK(L')NGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 156) R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRK(L')FIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 157) R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVK(L')LFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 158) R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAK(L')RLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 159) R1-HAibEGTFTSDLSKQK(L')EEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 160) R1-HAibEGTFTSDVSSYLEEQAVKEFIAWLIKAibRPSSGAPPPSK(L')-R2 (SEQ ID NO: 161) R1-HAibEGTFTSDVSSYLEEQAVK(L')EFIAWLIKAibRPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 162) R1-HAibEGTFTSDVSSYLEGQAAK(L')EFIAWLVKGR-R2 (SEQ ID NO: 163) em que
R1 está ausente, é CH3, C(0)CH3, C(O)CH2CH3, C(O)CH2CH2CH3 ou C(O)CH(CH3)CH3; e
R2 é OH, NH2, NH(CH3), NHCH2CH3, NHCH2CH2CH3, NHCH(CH3)CH3, NHCH2CH2CH2CH3, NHCH(CH3)CH2CH3, NHC6H5, NHCH2CH2OCH3, NHOCH3, NHOCH2CH3j um grupo de proteção carbóxi , um grupo ácido graxo lipídico ou um carboidrato e
K(L) é um resíduo de Iisina covalentemente ligado to um Iigante L'. Em determinadas modalidades, K(U) é:
<formula>formula see original document page 36</formula>
em que u é 1, 2 ou 3;
-L'- é uma porção Iigante tendo a fórmula -X-Y-Z-, em que: Xé:
<formula>formula see original document page 36</formula>
Rb é hidrogênio, Cmo alquila substituída ou não-substituida, C3-7 cicloalquil-Co-6 alquila substituída ou não-substituida ou aril-Co-6 alquila substituída ou não-substituida;
Y é um grupo de reconhecimento compreendendo pelo menos uma estrutura de anel; e
Z' é uma porção de fixação compreendendo uma ligação covalente a uma cadeia lateral de aminoácido em um sítio de combinação de um anticorpo.
e sais, estereoisômeros, tautômeros, solvatos e pró-fármacos farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos.
Em algumas modalidades Y tem a estrutura opcionalmente substituída:
<formula>formula see original document page 36</formula> em que a, b, c, d e e são, independentemente, carbono ou nitrogênio; f é carbono, nitrogênio, oxigênio ou enxofre; Y é preso a X e Z independentemente em quaisquer duas posições no anel de valência suficiente; e não mais do que quatro de a, b, c, d, e ou f são simultaneamente nitrogênio.
Em algumas modalidades Z' tem a estrutura:
<formula>formula see original document page 37</formula>
em que q = O, 1, 2, 3, 4 ou 5 e -N-Anticorpo refere-se a uma ligação covalente a uma cadeia lateral de aminoácido em um sítio de combinação de um anticorpo trazendo um grupo amino. Em outros aspectos, q = 1, 2 ou 3.
Outro aspecto da invenção, ilustrado na Fórmula III, é um composto de direcionamento de GA no qual dois agentes de direcionamento de GA, os quais podem ser os mesmos ou diferentes são, cada um, covalentemente ligados a um sítio de combinação de um anticorpo. A porção de anticorpo de um composto de direcionamento de GA pode incluir um anticorpo inteiro (comprimento total), fragmentos de anticorpo únicos ou quaisquer outras formas de um anticorpo, conforme esse termo é usado aqui. Em uma modalidade, o anticorpo é uma versão humanizada de um anticorpo de aldolase de murino compreendendo uma região constante de um anticorpo de IgG, IgA, IgM, IgD ou IgE humano. Em outra modalidade, o anticorpo é um anticorpo quimérico compreendendo a região variável de um anticorpo de aldolase de murino e uma região constante de um anticorpo de IgG, IgA, IgM, IgD ou IgE humano. Em uma outra modalidade, o anticorpo é uma versão totalmente humana de um anticorpo de aldolase de murino compreendendo uma seqüência polipeptídica de um anticorpo de IgG1 IgA, IgM1 IgD ou IgE humano natural ou nativo:
Anticorpo[-L'-[agente de direcionamento de GA]k (III)
õ em que o [agente de direcionamento de GA], anticorpo e L' são conforme definido de acordo com a Fórmula II.
Compostos exemplificativos de acordo com a Fórmula I são ilustrados nas figuras 2 e 4.
Em determinadas modalidades, são proporcionados métodos para o tratamento de diabetes ou uma condição relacionada ao diabetes em um indivíduo compreendendo administração, ao indivíduo, de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto de direcionamento de GA ou um derivado farmacêutico do mesmo.
Em determinadas modalidades, são proporcionados métodos para aumento da secreção de insulina em um indivíduo compreendendo administração, ao indivíduo, de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto de direcionamento de GA ou um derivado farmacêutico do mesmo.
Em determinadas modalidades, são proporcionados métodos para diminuição dos níveis de glicose no sangue em um indivíduo compreendendo administração, ao indivíduo, de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto de direcionamento de GA ou um derivado farmacêutico do mesmo.
Em determinadas modalidades, o uso de compostos de direcionamento de GA e derivados farmacêuticos dos mesmos para a geração de um medicamento para o tratamento de diabetes ou uma condição relacionada ao diabetes ou para aumento da secreção de insulina ou diminuição dos níveis de glicose no sangue, é proporcionado.
Alguns compostos de direcionamento de GA da invenção incluem:
R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRKFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 22) R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVKLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 23) R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAKRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 24) R1-HAibEGTFTSDLSKQMEKEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 26) R1-HAibEGTFTSDLSKQKEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 27)
Alguns compostos de direcionamento de GA da invenção δ incluem:
R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRK(SH)FIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 106) R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVK(SH)LFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 107) R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAK(SH)RLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 108) R1-HAibEGTFTSDLSKQMEK(SH)EAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 110) R1-HAibEGTFTSDLSKQK(SH)EEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 111)
Alguns compostos de direcionamento de GA compostos da invenção incluem:
R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRK(L)FIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 149) R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVK(L)LFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 150) R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAK(L)RLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 151) R1-HAibEGTFTSDLSKQMEK(L)EAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 164 R1-HAibEGTFTSDLSKQK(L)EEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 152) em que K(L) é um resíduo de lisina preso a um ligante L em que L é capaz de formação de uma ligação covalente com uma cadeia lateral de aminoácido em um sítio de combinação de um anticorpo.
Alguns compostos da invenção incluem: R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRK(L')FIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 157) R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVK(L')LFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 158) R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAK(L')RLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 159) R1-HAibEGTFTSDLSKQMEK(L')EAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 165) R1-HAibEGTFTSDLSKQK(L')EEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 160) em que K(L') é um resíduo de lisina preso a um ligante L' em que L' é capaz de formação de uma ligação covalente com uma cadeia lateral de aminoácido em um sítio de combinação de um anticorpo. Em determinadas modalidades, K(L') é: <formula>formula see original document page 40</formula>
em que u é 1, 2 ou 3;
-L- é um ligante tendo um da fórmula -X-Y-Z- ou -X-Y-Z' em que: Xé:
<formula>formula see original document page 40</formula>
em que ν é 0,1, 2 ou 3; t é 1, 2 ou 3, r é 1 ou 2; s é 0, 1 ou 2;
Rb é hidrogênio, C1-10 alquila substituída ou não-substituida, C3-7
cicloalquil-C0-6 alquila substituída ou não-substituida ou aril-C0-6 alquila substituída ou não-substituida;
Y é um grupo de reconhecimento opcionalmente presente compreendendo pelo menos uma estrutura de anel; e
Z é um grupo reativo que é capaz de formação de uma ligação covalente com uma cadeia lateral de aminoácido em um sítio de combinação de um anticorpo.
Breve Descrição dos Desenhos
As figura 1a e figura 1b, respectivamente, ilustram uma modalidade de acordo com a Fórmula I e uma modalidade de acordo com a Fórmula Il ou Fórmula III.
As figura 2a e figura 2b, respectivamente, ilustram uma modalidade de acordo com a Fórmula I e uma modalidade de acordo com a Fórmula II ou Fórmula III.
A figura 3 ilustra uma modalidade de acordo com a Fórmula I.
A figura 4 ilustra uma modalidade de acordo com a Fórmula Il ou
Fórmula III. As figuras 5A e 5B ilustram a síntese em fase sólida de conjugados de agente de direcionamento-ligante da presente invenção.
A figura 6 ilustra um alinhamento de seqüência de aminoácido dos domínios variáveis de 38c2 (SEQ ID NOs: 77 e 78), h38c2 (SEQ ID NOs: 79 e 80) e as linhagens germinativas humanas DPK-9 (SEQ ID NO: 81), DP-47 (SEQ ID NO: 82), JK4 (SEQ ID NO: 83) e JH4 (SEQ ID NO: 84). As regiões de estrutura (FR) e regiões de determinação de complementaridade (CDR) são definidas de acordo com Kabat e outros. Os asteriscos marcam diferenças entre m38c2 e h38c2 ou entre h38c2 e as linhagens germinativas humanas.
A figura 7 mostra várias estruturas que podem servir como grupos reativos ligantes. X, na estrutura A, pode ser N, C ou qualquer outro heteroátomo. R'i, R'2, R3 e R4, nas estruturas Α-C, representam substituintes os quais incluem, por exemplo, C, Η, Ν, O, P, S, halogênio (F, Cl, Br, I) ou um sal do mesmo. Esses substituintes podem também incluir um grupo tal como um grupo alquila, alquenila, alquinila, oxoalquila, oxoalquenila, oxoalquinila, aminoalquila, aminoalquenila, aminoalquinila, sulfoalquila, sulfoalquenila, sulfoalquinila, fosfoalquila, fosfoalquenila ou fosfoalquinila. R12 e R3 podem ser parte de uma estrutura cíclica, conforme exemplificado nas estruturas B e C. As estruturas A-C formam ligações covalentes reversíveis com grupos nucleofílicos reativos acessíveis na superfície (por exemplo, cadeias laterais de Iisina ou cisteína) de um sítio de combinação de um anticorpo. Por exemplo, a estrutura A pode formar uma ligação covalente irreversível com um nucleófilo reativo se X é N e se RS e R3 formam parte de uma estrutura cíclica. As estruturas D-G podem formar ligações covalentes não-reversíveis com grupos nucleofílicos reativos em um sítio de combinação de um anticorpo. Nessas estruturas, R"i e Rm2 representam C, O, N, haleto ou grupos de condução, tais como mesila ou tosila.
A figura 8 mostra vários eletrófilos que são adequados para modificação reativa com uma cadeia lateral de aminoácido reativa em um sítio de combinação de um anticorpo e, assim, podem servir como grupos reativos ligantes. Chave: (A) acil beta-lactama; (B) dicetona simples; (C) éster de succinimida ativo; (D) maleimida; (E) haloacetamida com ligante; (F) halocetona; (G) ciclo-hexil dicetona; e (H) aldeído. A linha rabiscada indica o ponto de fixação ao resto do ligante ou agente de direcionamento. X refere- se a um halogênio.
A figura 9 mostra a adição de uma cadeia lateral nucleofílica ("nu") em um sítio de combinação de anticorpo aos compostos A-G na figura 7.
A figura 10 mostra a adição de uma cadeia lateral nucleofílica em um anticorpo combinado aos compostos A-H na figura 8.
A figura 11 mostra a síntese de:
<formula>formula see original document page 42</formula>
A figura 12 mostra uma síntese de:
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A figura 13 mostra uma síntese de:
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A figura 14 mostra uma síntese de:
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A figura 15 mostra uma síntese de: <formula>formula see original document page 43</formula>
A figura 16 mostra uma síntese de:
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A figura 17 mostra uma síntese de:
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A figura 18 mostra uma síntese de:
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A figura 19 mostra uma síntese de:
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A figura 20 mostra uma síntese de:
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A figura 21 mostra uma síntese de:
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A figura 22 mostra uma síntese de: <formula>formula see original document page 44</formula>
A figura 23 mostra uma síntese de:
<formula>formula see original document page 44</formula>
A figura 24 mostra uma síntese de:
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A figura 25 mostra uma síntese de:
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A figura 26 mostra uma síntese de:
<formula>formula see original document page 44</formula>
A figura 27 ilustra o vetor de expressão de mamífero PIGG- h38c2. O vetor de 9 kb compreende os cassetes de expressão de cadeia pesada γ1 e cadeia curta κ acionados por um construto de promotor CM bidirecional.
A figura 28 mostra uma síntese de:
<formula>formula see original document page 44</formula> A figura 29 mostra uma síntese de Iigante de maleimida AZD de 20 átomos:
<formula>formula see original document page 45</formula>
A figura 30 mostra uma síntese de lisina modificada na cadeia lateral para uso em peptídeos de direcionamento de GA.
A figura 31 mostra uma síntese de um conjugado agente de direcionamento de GA-ligante compreendendo o peptídeo de direcionamento de GA de SEQ ID NO: 22 ligado ao ligante de maleimida AZD de 20 átomos apresentado na figura 29 via um resíduo de Lys modificado na cadeia lateral no peptídeo.
A figura 32 mostra uma síntese de um conjugado agente de direcionamento de GA-ligante compreendendo o peptídeo de direcionamento de GA de SEQ ID NO: 32 ligado ao ligante de maleimida AZD de 20 átomos apresentado na figura 29 via um resíduo de Lys modificado na cadeia lateral no peptídeo.
A figura 33 ilustra a seqüência de aminoácido das cadeias leve e pesada de uma modalidade de uma IgGI 38c2 humanizada.
A figura 34 mostra a meia-vida subcutânea (T1/2 SC) e a biodisponibilidade percentual de compostos da invenção compreendendo um peptídeo de acordo com uma das SEQ IDs da invenção como segue: K11: SEQ ID NO: 29, K12: SEQ ID NO: 5, K13: SEQ ID NO: 28, K14: SEQ ID NO: 27, K16: SEQ ID NO: 26, K17: SEQ ID NO: 25, K19: SEQ ID NO: 24, K20: SEQ ID NO: 23, K21: SEQ ID NO: 22, K23: SEQ ID NO: 21, K24: SEQ ID NO: 20, K26: SEQ ID NO: 19, K27: SEQ ID NO: 132, K28: SEQ ID NO: 18, K38: SEQ ID NO: 14, C: SEQ ID NO: 3, C1-30: SEQ ID NO: 30, K21 1- 33:SEQ ID NO: 31, ligada através de um resíduo de Iisina ou um resíduo K(SH) (na posição indicada, por exemplo, K11 significa ligado através de um resíduo K ou K(SH) na posição 11) via o Iigante das figuras 1-4 ao anticorpo h38c2. A T1/2 SC (meia-vida subcutânea) foi obtida através de injeção SC de composto em camundongos e detectando a concentração de composto através de ELISA. A biodisponibilidade SC representa uma proporção entre a área sob a curva de composto a partir de ratos injetados IV e a área sob a curva do mesmo composto a partir de camundongos injetados SC.
A figura 35 mostra os resultados do Teste de Tolerância à Giicose (GTT). Uma única dose SC de 0,3 mg/kg - Compostos da invenção usados nas figuras 35 são referidos como a SEQ ID NO: específica que foi conjugada ao anticorpo de aldolase humanizado h38c2 via as estruturas ligantes mostradas nas figuras 1-4. Os compostos foram dosados conforme indicado acima, a 0,3 mg/kg SC (novamente, ligado através de uma substituição K ou K(SH) na respectiva posição de aminoácido). A: Amalgamação de dados do teste de 48 horas e do teste de 72 horas. B: dados de 48 horas. C: dados de 72 horas.
figuras 36 A-D - Ingestão Diária de Alimento: mostra os resultados de análise de Alteração de Peso Corporal para os mesmos animais, conforme testado na figura 35.
figuras 37 A-D - Alteração de peso corporal cumulativa para os mesmos animais, conforme testado nas figuras 35 e 36.
As figura 38a e figura 38b, respectivamente, ilustram uma modalidade de acordo com a Fórmula I e uma modalidade de acordo com a Fórmula II ou Fórmula III.
As figura 39a e figura 29b, respectivamente, ilustram uma modalidade de acordo com a Fórmula I e uma modalidade de acordo com a Fórmula Il ou Fórmula III.
As figura 40a e figura 40b, respectivamente, ilustram uma modalidade de acordo com a Fórmula I e uma modalidade de acordo com a Fórmula Il ou Fórmula III.
As figura 41a e figura 41b, respectivamente, ilustram uma modalidade de acordo com a Fórmula I e uma modalidade de acordo com a Fórmula Il ou Fórmula III.
AS figura 42a e figura 42b, respectivamente, ilustram uma modalidade de acordo com a Fórmula I e uma modalidade de acordo com a Fórmula Il ou Fórmula III. As figura 43a e figura 43b, respectivamente, ilustram uma modalidade de acordo com a Fórmula I e uma modalidade de acordo com a Fórmula II ou Fórmula III.
As figura 44a e figura 44b, respectivamente, ilustram uma modalidade de acordo com a Fórmula I e uma modalidade de acordo com a Fórmula II ou Fórmula III. Descrição Detalhada Definições
As abreviações, termos e frases a seguir são usados aqui, conforme definido abaixo.
Aminoácido Abreviação com Abreviação com uma letra três letras
<table>table see original document page 47</column></row><table> <table>table see original document page 48</column></row><table>
A menos que de outro modo indicado por um prefixo "D", por exemplo, D-Aia ou N-Me-D-iie, a estereoquímica do alfa-carbono dos aminoácidos e resíduos de aminoacila nos peptídeos descritos aqui é a configuração natural ou "L". As designações "R" e "S" de Cahn-Ingold-Prelog são usadas para especificar a estereoquímica de centros quirais em determinados substituintes alquila no N-término dos peptídeos. A designação "R,S" se destina a indicar uma mistura racêmica das duas formas enantioméricas. Essa nomenclatura segue aquela descrita em R. S. Cahn e colaboradores, Angew. Chem. Int. Ed. Engl., 5: 385-415 (1966).
D-H se refere à D Histidina.
Ácido 2-aminoisobutírico, conforme usado aqui, tem a seguinte estrutura:
<formula>formula see original document page 48</formula>
"Polipeptídeo", "peptídeo" e "proteína" são usados permutavelmente para se referir a um polímero de resíduos de aminoácido. Conforme usado aqui, esses termos podem se aplicar a polímeros de aminoácido nos quais um ou mais resíduos de aminoácido são um análogo químico artificial de um aminoácido que ocorre naturalmente correspondente. Esses termos também aplicam-se a polímeros de aminoácido que ocorrem naturalmente. Aminoácidos podem estar na forma L ou D, na medida e que a função de ligação do peptídeo seja mantida. Peptídeos podem ser cíclicos, tendo uma ligação intramolecular entre dois aminoácidos não-adjacentes dentro do peptídeo, por exemplo, ciclização de estrutura principal a estrutura principal, cadeia lateral a estrutura principal e cadeia lateral a cadeia lateral. Veja, Patente U.S. N0 6.013.625; S. Cheng e colaboradores, J Med. Chem. 37: 1-8 (1994). Todas as seqüências peptídicas são escritas de acordo com a convenção geralmente aceita, pelo que o resíduo de aminoácido alfa-N- terminal está à esquerda e o resíduo de aminoácido alfa-C-terminal está à direita. Conforme usado aqui, o termo "N-término" refere-se ao grupo alfa- amino livre de um aminoácido em um peptídeo e o termo "C-término" refere- se ao término de ácido carboxílico livre de um aminoácido em um peptídeo.
Um peptídeo o qual é N-terminado com um grupo refere-se a um peptídeo trazendo um grupo sobre o nitrogênio de alfa-amino do resíduo de aminoácido N-terminal. Um aminoácido o qual é N-terminado com um grupo refere-se a um aminoácido trazendo um grupo sobre o nitrogênio de alfa- amino.
Em geral, "substituído" refere-se a um grupo conforme definido abaixo no qual uma ou mais ligações a um átomo de hidrogênio contido no mesmo são substituídos por uma ligação a átomos que não são de hidrogênio ou carbono tais como, mas não limitado a, um átomo de halogênio, tal como F, Cl, Br e I; um átomo de oxigênio em grupos tais como grupos hidroxila, alcóxi, arilóxi e éster; um átomo de enxofre em grupos tais como grupos tiol, alquil sulfeto, aril sulfeto, sulfona, sulfonila e sulfoxido; um átomo de nitrogênio em grupos tais como aminas, amidas, alquilaminas, dialquilaminas, arilaminas, alquilarilaminas, diarilaminas, N-oxidos, imidas e enaminas; um átomo de silício em grupos tais como grupos trialquil-silila, dialquilaril-silila, alquildiaril-silila e triaril-silila; e outros heteroátomos em vários outros grupos. Grupos alquila substituídos, grupos cicloalquila substituídos e outros grupos substituídos também incluem grupos nos quais uma ou mais ligações a um átomo de carbono ou hidrogênio são substituídas por uma ligação a um heteroátomo, tal como oxigênio em grupos carbonila, carboxila e éster ou nitrogênio em grupos tais como iminas, oximas, hidrazonas e nitrilos. Conforme empregado aqui, um grupo o qual é "opcionalmente substituído" pode ser substituído ou não-substituido.
Assim, por exemplo, "alquila opcionalmente substituída" refere-se a grupos alquila substituídos e grupos alquila não-substituidos.
A frase "alquila não-substituida" refere-se a grupos alquila que não contêm heteroátomos. Assim, a frase inclui grupos alquila de cadeia reta, tais como metila, etila, propila, butila, pentila, hexila, heptila, octila, nonila, decila, undecila, dodecila e similares. A frase também inclui isômeros de cadeia ramificada de grupos alquila de cadeia reta incluindo, mas não limitado a, os seguintes, os quais são fornecidos à guisa de exemplo: - BH(CH3)2, -CH(CH3)(CH2CH3)1 -CH(CH2CH3)2, -C(CH3)3, -C(CH2CH3)3, - CH2CH(CH3)2, -CH2CH(CH3)(CH2CH3), -CH2CH(CH2CH3)2l -CH2C(CH3)3, - CH2C(CH2CH3)3, -CH(CH3)CH(CH3)(CH2CH3), -CH2CH2CH(CH3)2l CH2CH2CH(CH3)(CH2CH3), -CH2CH2CH(CH2CH3)2, -CH2CH2C(CH3)3, - CH2CH2C(CH2CH3)3, -CH(CH3)CH2CH(CH3)2l -CH(CH3)CH(CH3)CH(CH3)2i - CH(CH2CH3)CH(CH3)CH(CH3)(CH2CH3) e outros. A frase não inclui grupos cicloalquila. Assim, a frase grupo alquila não-substituido inclui grupos alquila primários, grupos alquila secundários e grupos alquila terciários. Grupos alquila não-substituidos podem ser ligados a um ou mais átomo(s) de carbono, átomo(s) de oxigênio, átomo(s) de nitrogênio e/ou átomo(s) de enxofre no composto precursor. Possíveis grupos alquila não-substituidos incluem grupos alquila de cadeia reta e ramificada tendo 1 a 20 átomos de carbono. Alternativamente, tais grupos alquila não-substituidos têm de 1 a átomos de carbono ou são grupos alquila inferior tendo de 1 a cerca de 6 átomos de carbono. Outros grupos alquila não-substituidos incluem grupos alquila de cadeia reta e ramificada tendo de 1 a 3 átomos de carbono e incluem metila, etila, propila e -CH(CH3)2.
A frase "alquila substituída" refere-se a um grupo alquila não- substituido, conforme definido aqui, no qual uma ou mais ligações a (um) carbono(s) ou hidrogênio(s) são substituídas por uma ligação a átomos que não são de hidrogênio e carbono tais como, mas não limitado a, um átomo de halogênio em haletos tais como F, Cl, Br e I; um átomo de oxigênio em grupos tais como grupos hidroxila, alcóxi, arilóxi e éster; um átomo de enxofre em grupos tais como grupos tiol, alquil sulfeto, aril sulfeto, sulfona, sulfonila e sulfoxido; um átomo de nitrogênio em grupos tais como aminas, amidas, alquilaminas, dialquilaminas, arilaminas, alquilarilaminas, diarilaminas, N-oxidos, imidas e enaminas; um átomo de silício em grupos tais como grupos trialquil-silila, dialquilaril-silila, alquildiaril-silila e triaril-silila; e outros heteroátomos em vários outros grupos. Grupos alquila substituídos também incluem grupos nos quais uma ou mais ligações a (um) átomo(s) de carbono ou átomo(s) de hidrogênio são substituídas por uma ligação a um heteroátomo, tal como oxigênio em grupos carboniia, carboxila e éster ou nitrogênio em grupos tais como iminas, oximas, hidrazonas e nitrilos. Grupos alquila substituídos incluem, dentre outros, grupos alquila nos quais uma ou mais ligações a um átomo de carbono ou hidrogênio são substituídas por uma ou mais ligações a átomos de flúor. Um exemplo de um grupo alquila substituído é o grupo trifluorometila e outros grupos alquila que contêm o grupo trifluorometila. Outros grupos alquila incluem aqueles nos quais uma ou mais ligações a um átomo de carbono ou hidrogênio são substituídas por uma ligação a um átomo de oxigênio de modo que o grupo alquila substituído contenha um grupo hidroxila, alcóxi, arilóxi ou heterociclilóxi. Ainda outros grupos alquila incluem grupos alquila que têm um grupo amina, alquilamina, dialquilamina, arilamina, (alquil)(aril)amina, diarilamina, heterociclilamina, (alquil)(heterociclil)amina, (aril)(heterociclil)amina ou diheterociclilamina.
A frase "alquileno não-substituido" refere-se a um grupo alquila divalente não-substituido, conforme definido aqui. Assim, metileno, etileno e propileno são, cada um, exemplos de alquilenos não-substituidos. A frase "alquileno substituído" se refere a um grupo alquila divalente substituído, conforme definido aqui. Grupos alquileno inferior substituídos ou não- substituidos têm de 1 a cerca de 6 carbonos.
A frase "cicloalquila não-substituida" refere-se a grupos alquila cíclicos tais como ciclopropila, ciclobutila, ciclopentila, ciclo-hexila, ciclo- heptila e ciclo-octila e anéis substituídos por grupos alquila de cadeia reta e ramificada, conforme definido aqui. A frase também inclui grupos alquila policíclicos tais como, mas não limitado a, adamantila, norbornila, biciclo[2.2.2]octila e similares, bem como anéis substituídos por grupos alquila de cadeia reta e ramificada, conforme definido aqui. Assim, a frase incluiria grupos metilciclo-hexila, dentre outros. A frase não inclui grupos alquila cíclicos contendo heteroátomos. Grupos cicloalquila não-substituidos podem ser ligados a um ou mais átomos de carbono, átomos de oxigênio, átomos de nitrogênio e/ou átomos de enxofre no composto precursor. Em algumas modalidades, grupos cicloalquila não-substituidos têm de 3 a 20 átomos de carbono. Em outras modalidades, tais grupos alquila não- substituidos têm de 3 a 8 átomos de carbono enquanto que, em outras, tais grupos têm de 3 a 7 átomos de carbono.
A frase "cicloalquila substituída" tem o mesmo significado com relação a grupos cicloalquila não-substituidos que "alquila substituída" tem com relação a grupos alquila não-substituidos. Assim, a frase inclui, mas não está limitada a, grupos oxociclo-hexila, clorociclo-hexila, hidroxiciclopentila e clorometilciclo-hexila.
A frase "arila não-substituida" se refere a grupos arila que não contêm heteroátomos. Assim, a frase inclui, mas não está limitada a, grupos tais como fenila, bifenila, antracenila e naftenila. Embora a frase "arila não- substituida" inclua grupos contendo anéis condensados, tal como naftaleno, ela não inclui grupos arila que têm outros grupos, tais como grupos alquila ou halo, ligados a um dos elementos do anel, uma vez que grupos arila, tal como tolila, são considerados aqui como sendo grupos arila substituídos conforme descrito abaixo. Tipicamente, uma arila não-substituida pode ser uma arila inferior, tendo de 6 a cerca de 10 átomos de carbono. Um grupo arila não-substituido é fenila. Grupos arila não-substituidos podem ser ligados a um ou mais átomos de carbono, átomos de oxigênio, átomos de nitrogênio e/ou átomos de enxofre no composto precursor.
A frase "arila substituída" tem o mesmo significado com relação a grupos arila não-substituidos que "alquila substituída" tem com relação a grupos alquila não-substituidos. Contudo, um grupo arila substituído também inclui grupos arila nos quais um dos carbonos aromáticos é ligado a um dos átomos que não são de carbono ou hidrogênio descritos aqui e também inclui grupos arila nos quais um ou mais carbonos aromáticos do grupo arila são ligados a um grupo alquila, alquenila ou alquinila substituído e/ou não- substituido conforme definido aqui. Isso inclui disposições de ligação nas quais dois átomos de carbono de um grupo arila são ligados a dois átomos de um grupo alquila, alquenila ou alquinila para definir um sistema de anel fundido (por exemplo, di-hidronaftila ou tetra-hidronaftila). Assim, a frase "arila substituída" inclui, mas não está limitada a, tolila e hidroxifenila, dentre outros.
A frase "alquenila não-substituida" refere-se a grupos cíclicos de cadeia reta e ramificada, tais como aqueles descritos com relação a grupos alquila não-substituidos conforme definido aqui, exceto que pelo menos uma ligação dupla existe entre dois átomos de carbono. Exemplos incluem, mas não estão limitados a, vinila, -CH = C(H)(CH3), -CH = C(CH3)2, -C(CH3) = C(H)2, -C(CH3) = C(H)(CH3), -C(CH2CH3) = CH2, ciclo-hexenila, ciclopentenila, ciclo-hexadienila, butadienila, pentadienila e hexadienila, dentre outros. Grupos alquenila não-substituidos têm de 1 a cerca de 6 carbonos.
A frase "alquenila substituída" tem o mesmo significado com relação a grupos alquenila não-substituidos que "alquila substituída" tem com relação a grupos alquila não-substituidos. Um grupo alquenila substituído inclui grupos alquenila nos quais um átomo que não é de carbono ou hidrogênio é ligado a um carbono que é duplamente ligado a outro carbono e aqueles nos quais um dos átomos que não são de carbono ou hidrogênio é ligado a um carbono não-envolvido em uma ligação dupla a outro carbono. Por exemplo, -CH = CH-OCH3 e -CH = CH-CH2-OH são ambos alquenila substituída. Oxoalquenilas em que um grupo CH2 é substituído por uma carbonila, tal como -CH = CH-C(O)-CH3, também são alquenilas substituídas.
A frase "alquenileno não-substituido" refere-se a um grupo alquenila divalente não-substituido conforme definido aqui. Assim, -CH = CH- é um exemplo de um alquenileno não-substituido. A frase "alquenileno substituído" refere-se a um grupo alquenila divalente substituído, conforme definido aqui.
A frase "alquinila não-substituida" refere-se a grupos de cadeia reta e ramificada tais como aqueles descritos com relação a grupos alquila não-substituidos conforme definido aqui, exceto que pelo menos uma ligação tripla existe entre dois átomos de carbono. Exemplos incluem, mas não estão limitados a, -C=C(H)1 -C=C(CH3)1 -C=C(CH2CH3)1 -C(H2)C=C(H)1 - C(H)2C=C(CH3) e -C(H)2C=C(CH2CH3)1 dentre outros. Grupos alquinila 5 inferior não-substituidos têm de 1 a cerca de 6 carbonos.
A frase "alquinila substituída" tem o mesmo significado com relação a grupos alquinila não-substituidos que "alquila substituída" tem com relação a grupos alquila não-substituidos. Um grupo alquinila substituído inclui grupos alquinila nos quais um átomo que não é de carbono ou hidrogênio é ligado a um carbono que é triplamente ligado a outro carbono e aqueles nos quais um átomo que não é de carbono ou hidrogênio é ligado a um carbono não-envolvido em uma ligação tripla a outro carbono. Exemplos incluem, mas não estão limitados a, oxoalquinilas, em que um grupo CH2 é substituído por uma carbonila, tal como em -C(O)-CH=CH-CH3 e -C(O)-CH2- CH=CH1 dentre outros.
A frase "alquinileno não-substituido" refere-se a um grupo alquinila divalente não-substituido, conforme definido aqui. Assim, -C=C- é um exemplo de um alquinileno não-substituido. A frase "alquinileno substituído" refere-se a um grupo alquinila divalente substituído, conforme definido aqui.
A frase "aralquila não-substituida" refere-se a grupos alquila não- substituidos conforme definido aqui nos quais uma ligação de hidrogênio ou carbono do grupo alquila não-substituido são substituídas por uma ligação a um grupo arila conforme definido aqui. por exemplo, metila (-CH3) é um grupo alquila não-substituido. Se um átomo de hidrogênio do grupo metila é substituído por uma ligação a um grupo fenila, tal como se o carbono da metila estiver ligado a um carbono de benzeno, então, o composto é um grupo aralquila não-substituido (isto é, um grupo benzila). Assim, a frase inclui, mas não está limitada a, grupos tais como benzila, difenilmetila e 1- feniletila (-CH(C6H5)(CH3)), dentre outros.
A frase "aralquila substituída" tem o mesmo significado com relação a grupos aralquila não-substituidos que "arila substituída" tem com relação a grupos arila não-substituidos. Contudo, um grupo aralquila substituído também inclui grupos nos quais uma ligação de carbono ou hidrogênio da parte alquila do grupo é substituída por uma ligação a um átomo que não é de carbono ou hidrogênio. Exemplos de grupos aralquila substituídos incluem, mas não estão limitados a, -CH2C( = O)(C6H5) e - CH2(2-metilfenila), dentre outros.
A frase "aralquenila não-substituida" refere-se a grupos alquenila não-substituidos conforme definido aqui nos quais uma ligação de hidrogênio ou carbono do grupo alquenila não-substituido é substituída por uma ligação a um grupo arila, conforme definido aqui. Por exemplo, vinila é um grupo alquenila não-substituido. Se um átomo de hidrogênio do grupo vinila é substituído por uma ligação a um grupo fenila, tal como se um carbono da vinila estiver ligado a um carbono de benzeno, então, o composto é um grupo aralquenila não-substituido (isto é, um grupo estirila). Assim, a frase inclui, mas não está limitada a, grupos tais como estirila, difenilvinila e 1-feniletenila (-C(C6H5)(CH2)), dentre outros.
A frase "aralquenila substituída" tem o mesmo significado com relação a grupos aralquenila não-substituidos que "arila substituída" tem com relação a grupos arila não-substituidos. Contudo, um grupo aralquenila substituído também inclui grupos nos quais uma ligação de carbono ou hidrogênio da parte alquenila do grupo é substituída por uma ligação a um átomo que não é de carbono ou hidrogênio. Exemplos de grupos aralquenila substituídos incluem, mas não estão limitados a, -CH = C(CI)(C6H5) e -CH = CH(2-metilfenila), dentre outros.
A frase "aralquinila não-substituida" refere-se a grupos alquinila não-substituidos, conforme definido aqui, nos quais uma ligação de hidrogênio ou carbono do grupo alquinila não-substituido é substituída por uma ligação a um grupo arila, conforme definido aqui. Por exemplo, acetileno é um grupo alquinila não-substituido. Se um átomo de hidrogênio do grupo acetileno é substituído por uma ligação a um grupo fenila, tal como se um carbono do acetileno estiver ligado a um carbono de benzeno, então, o composto é um grupo aralquinila não-substituido. Assim, a frase inclui, mas não está limitada a, grupos tais como -C^C-fenila e -CH2-CsOfeniIa, dentre outros.
A frase "aralquinila substituída" tem o mesmo significado com relação a grupos aralquila não-substituidos que "arila substituída" tem com relação a grupos arila não-substituidos. Contudo, um grupo aralquinila substituído também inclui grupos nos quais uma ligação de carbono ou hidrogênio da parte alquinila do grupo é substituída por uma ligação a um átomo que não é de carbono ou hidrogênio. Exemplos de grupos aralquinila substituídos incluem, mas não estão limitados a, -CsC-C(Br)(CeH5) e - C=C(2-metilfenila), dentre outros.
A frase "heteroalquila não-substituida" refere-se a grupos alquila não-substituidos, conforme definido aqui, nos quais a cadeia de carbono é interrompida por um ou mais heteroátomos escolhidos de Ν, O e S. Heteroalquilas não-substituidas contendo N podem ter NH ou N(alquila não- substituída) na cadeia de carbono. Assim, heteroalquilas não-substituidas incluem alcóxi, alcoxialquila, alcoxialcóxi, tioéter, alquilaminoalquila, aminoalquilóxi e outros de tais grupos. Tipicamente, grupos heteroalquila não-substituidos contêm 1-5 heteroátomos e, particularmente, 1-3 heteroátomos. Em algumas modalidades, heteroalquilas não-substituidas incluem, por exemplo, grupos alcoxialcoxialcóxi, tal como etiloxietiloxietilóxi.
A frase "heteroarila substituída" tem o mesmo significado com relação a grupos heteroalquila não-substituidos que "alquila substituída" tem com relação a grupos alquila não-substituidos.
A frase "heteroalquileno não-substituido" refere-se a um grupo heteroalquila divalente não-substituido, conforme definido aqui. Assim, - CH2-O-CH2- e -CH2-NH-CH2CH2- são ambos exemplos de heteroalquilenos não-substituidos. A frase "heteroalquileno substituído" refere-se a um grupo heteroalquila divalente substituído, conforme definido aqui.
A frase "heteroalquenila não-substituida" refere-se a grupos alceno não-substituidos conforme definido aqui nos quais a cadeia de carbono é interrompida por um ou mais heteroátomos escolhidos de Ν, O e S. Heteroalquenilas não-substituidas contendo N podem ter NH ou N(alquila ou alceno não-substituido) na cadeia de carbono. A frase "heteroalquenila substituída" tem o mesmo significado com relação a grupos heteroalquenila não-substituidos que "heteroalquila substituída" tem com relação a grupos heteroalquila não-substituidos.
A frase "heteroalquenileno não-substituido" refere-se a um grupo heteroalquenila divalente não-substituido, conforme definido aqui. Assim, - CH2-O-CH = CH- é um exemplo de um heteroalquenileno não-substituido. A frase "heteroalquenileno substituído" refere-se a um grupo heteroalquenila divalente substituído, conforme definido aqui.
A frase "heteroalquinila não-substituida" refere-se a grupos alquinila não-substituidos conforme definido aqui nos quais a cadeia de carbono é interrompida por um ou mais heteroátomos escolhidos de Ν, O e S. Heteroalquinilas não-substituidas contendo N podem ter NH ou N(alquila, alceno ou alcino não-substituido) na cadeia de carbono. A frase "heteroalquinila substituída" tem o mesmo significado com relação a grupos heteroalquinila não-substituidos que "heteroalquila substituída" tem com relação a grupos heteroalquila não-substituidos.
A frase "heteroalquinileno não-substituido" refere-se a um grupo heteroalquinila divalente não-substituido, conforme definido aqui. Assim, - CH2-O-CH2-C=C- é um exemplo de um heteroalquinileno não-substituido. A frase "heteroalquinileno substituído" refere-se a um grupo heteroalquinila divalente substituído, conforme definido aqui.
A frase "heterociclila não-substituida" refere-se a compostos com anel aromático e não aromático, incluindo compostos com anel monocíclico, bicíclico e policíclico tal como, por exemplo, quínuclidila, os quais contêm três ou mais elementos no anel, dos quais um ou mais são um heteroátomo tais como, mas não limitado a, Ν, O e S. Embora a frase "heterociclila não- substituida" inclua anéis heterocíclicos condensados, tal como benzimidazolila, ela não inclui grupos heterociclila que têm outros grupos, tais como grupos alquila ou halo, ligados a um dos elementos no anel, uma vez que compostos tal como 2-metilbenzimidazolila são grupos heterociclila substituídos. Exemplos de grupos heterociclila incluem, mas não estão limitados a: anéis insaturados com 3 a 8 elementos contendo 1 a 4 átomos de nitrogênio tais como, mas não limitado a, pirrolila, pirrolinila, imidazolila, pirazolila, piridila, di-hidropiridila, pirimidila, pirazinila, piridazinila, triazolila (por exemplo, 4H-1,2,4-triazolila, 1H-1,2,3-triazolila, 2H-1,2,3-triazolila, etc.), tetrazoiila, (por exemplo, 1H-tetrazolila, 2H tetrazolila, etc.); anéis saturados com 3 a 8 elementos contendo 1 a 4 átomos de nitrogênio tais como, mas não limitado a, pirrolidinila, imidazolidinila, piperidinila, piperazinila; grupos heterocíclicos insaturados condensados contendo 1 a 4 átomos de nitrogênio tais como, mas não limitado a, indolila, isoindolila, indolinila, indolizinila, benzimidazolila, quinolila, isoquinolila, indazolila, benzotriazolila; anéis insaturados de 3 a 8 elementos contendo 1 a 3 átomos de oxigênio e 1 a 3 átomos de nitrogênio tais como, mas não limitado a, oxazolila, isoxazolila, oxadiazolila (por exemplo, 1,2,4-oxadiazolila, 1,3,4-oxadiazolila, 1,2,5-oxadiazolila, etc.); anéis saturados de 3 a 8 elementos contendo 1 a 2 átomos de oxigênio e 1 a 3 átomos de nitrogênio tais como, mas não limitado a, morfolinila; grupos heterocíclicos condensados insaturados contendo 1 a 2 átomos de oxigênio e 1 a 3 átomos de nitrogênio, por exemplo, benzoxazolila, benzoxadiazolila, benzoxazinila (por exemplo, 2H- 1,4-benzoxazinila etc.); anéis insaturados de 3 a 8 elementos contendo 1 a 3 átomos de enxofre e 1 a 3 átomos de nitrogênio tais como, mas não limitado a, tiazolila, isotiazolila, tiadiazolila (por exemplo, 1,2,3-tiadiazolila, 1,2,4- tiadiazolila, 1,3,4-tiadiazolila, 1,2,5-tiadiazolila, etc.); anéis saturados de 3 a 8 elementos contendo 1 a 2 átomos de enxofre e 1 a 3 átomos de nitrogênio tal como, mas não limitado a, tiazolodinila; anéis saturados e insaturados de 3 a 8 elementos contendo 1 a 2 átomos de enxofre tais como, mas não limitado a, tienila, di-hidroditiinila, di-hidroditionila, tetra-hidrotiofeno, tetra- hidrotiopirano; anéis heterocíclicos insaturados condensados contendo 1 a 2 átomos de enxofre e 1 a 3 átomos de nitrogênio tais como, mas não limitado a, benzotiazolila, benzotiadiazolila, benzotiazinila (por exemplo, 2H-1,4- benzotiazinila, etc.), di-hidrobenzotiazinila (por exemplo, 2H-3,4-di- hidrobenzotiazinila, etc.), anéis insaturados de 3 a 8 elementos contendo átomos de oxigênio tal como, mas não limitado a, furila; anéis heterocíclicos insaturados condensados contendo 1 a 3 átomos de oxigênio, tal como benzodioxolila (por exemplo, 1,3-benzodioxoila, etc.); anéis insaturados de 3 a 8 elementos contendo um átomo de oxigênio e 1 a 2 átomos de enxofre tal como, mas não limitado a, di-hidro-oxati-inila; anéis saturados de 3 a 8 elementos contendo 1 a 3 átomos de oxigênio e 1 a 2 átomos de enxofre, tal como 1,4-oxatiano; anéis condensados insaturados contendo 1 a 2 átomos de enxofre, tais como benzotienila, benzoditi-inila; e anéis heterocíclicos insaturados condensados contendo um átomo de oxigênio e 1 a 3 átomos de oxigênio, tal como benzoxati-inila. Grupos heterociclila também incluem aqueles descritos acima nos quais um ou mais átomos de S no anel são duplamente ligados a um ou dois átomos de oxigênio (sulfoxidos e sulfonas). Por exemplo, grupos heterociclila incluem tetra-hidrotiofeno, oxido de tetra- hidrotiofeno e 1,1-dioxido de tetra-hidrotiofeno. Em algumas modalidades, grupos heterociclila contêm 5 ou 6 elementos no anel. Em outras modalidades, grupos heterociclila incluem morfolina, piperazina, piperidina, pirrolidina, imidazola, pirazola, 1,2,3-triazol, 1,2,4-triazol, tetrazol, tiomorfolina, tiomorfolina na qual o átomo de S da tiomorfolina é ligado a um ou mais átomos de O, pirrol, homopiperazina, oxazolidin-2-ona, pirrolidin-2- ona, oxazol, quinuclidina, tiazol, isoxazol, furano e tetra-hidrofurano.
A frase "heterociclila substituída" se refere a um grupo heterociclila não-substituido conforme definido aqui no qual um dos elementos do anel está ligado a um átomo que não é de hidrogênio, tal como descrito acima com relação a grupos alquila substituídos e grupos arila substituídos. Exemplos incluem, mas não estão limitados a, 2- metilbenzimidazolila, 5-metilbenzimidazolila, 5-clorobenztiazolila, 1-metil piperazinila e 2-cloropiridila, dentre outros.
A frase "heteroarila não-substituida" se refere a grupos heterociclila aromáticos não-substituidos conforme definido aqui. Assim, grupos heteroarila não-substituidos incluem, mas não estão limitados a, furila, imidazolila, oxazolila, isoxazolila, piridinila, benzimidazolila e benzotiazolila. A frase "heteroarila substituída" se refere a grupos heterociclila aromáticos substituídos, conforme definido aqui. A frase "heterociclilalquila não-substituida" se refere a grupos alquila não-substituidos conforme definido aqui, nos quais uma ligação de hidrogênio ou carbono do grupo alquila não-substituido é substituída por uma ligação a um grupo heterociclila conforme definido aqui. Por exemplo, metila (-CH3) é um grupo alquila não-substituido. Se um átomo de hidrogênio do grupo metila é substituído por uma ligação a um grupo heterociclila, tal como se o carbono da metila é ligado ao carbono 2 da piridina (um dos carbonos ligado ao N da piridina) ou carbonos 3 ou 4 da piridina, então, o composto é um grupo heterociclilalquila não-substituido.
A frase "heterociclilalquila substituída" tem o mesmo significado com relação a grupos heterociclilalquila não-substituidos que "aralquila substituída" tem com relação a grupos aralquila não-substituidos. Contudo, um grupo heterociclilalquila também inclui grupos nos quais um átomo que não é de hidrogênio é ligado a um heteroátomo no grupo heterociclila do grupo heterociclilalquila tal como, mas não limitado a, um átomo de nitrogênio no anel de piridina de um grupo piperidinilalquila.
A frase "heterociclilalquenila não-substituida" se refere a grupos alquenila não-substituidos conforme definido aqui nos quais um hidrogênio ou carbono ligado do grupo alquenila não-substituido é substituído por uma ligação a um grupo heterociclila, conforme definido aqui. Por exemplo, vinila é um grupo alquenila não-substituido. Se um átomo de hidrogênio do grupo vinila é substituído por uma ligação a um grupo heterociclila, tal como se o carbono da vinila é ligado ao carbono 2 de piridina ou carbonos 3 ou 4 da piridina, então, o composto é um grupo heterociclilalquenila não-substituido.
A frase "heterociclilalquenila substituída" tem o mesmo significado com relação a grupos heterociclilalquenila não-substituidos que "aralquenila substituída" tem com relação a grupos aralquenila não- substituidos. Contudo, um grupo heterociclilalquenila substituído também inclui grupos nos quais um átomo que não é de hidrogênio está ligado a um heteroátomo no grupo heterociclila do grupo heterociclilalquenila tal como, mas não limitado a, um átomo de nitrogênio no anel de piperidina de um grupo piperidinilalquenila. A frase "heterociclilalquinila não-substituida" se refere a grupos alquinila não-substituidos conforme definido aqui nos quais uma ligação de hidrogênio ou carbono do grupo alquinila não-substituido é substituída por uma ligação a um grupo heterociclila, conforme definido aqui. Por exemplo, acetiieno é um grupo alquinila não-substituido. Se um átomo de hidrogênio do grupo acetiieno é substituído por uma ligação a um grupo heterociclila, tal como se o carbono do acetiieno é ligado ao carbono 2 da piridina ou carbonos 3 ou 4 da piridina, então, o composto é um grupo heterociclilalquinila não-substituido.
A frase "heterociclilalquinila substituída" tem o mesmo significado com relação a grupos heterociclilalquinila não-substituidos que "aralquinila substituída" tem com relação a grupos aralquinila não- substituidos. Contudo, um grupo heterociclilalquinila substituído também inclui grupos nos quais um átomo que não é de hidrogênio está ligado a um heteroátomo no grupo heterociclila do grupo heterociclilalquinila tal como, mas não limitado a, um átomo de nitrogênio no anel de piperidina de um grupo piperidinilalquinila.
A frase "alcóxi não-substituído" se refere a um grupo hidroxila (- OH) no qual a ligação ao átomo de hidrogênio é substituída por uma ligação a um átomo de carbono de um grupo alquila de outro modo não-substituído, conforme definido aqui.
Frase "alcóxi substituído" se refere a um grupo hidroxila (-OH) no qual a ligação ao átomo de hidrogênio é substituída por uma ligação a um átomo de carbono de um grupo alquila de outro modo substituído, conforme definido aqui.
Um "sal farmaceuticamente aceitável" inclui um sal com uma base inorgânica, base orgânica, ácido inorgânico, ácido orgânico ou aminoácido básico ou ácido. Sais de bases inorgânicas incluem, por exemplo, metais alcalinos, tais como sódio ou potássio; metais alcalino- terrosos, tais como cálcio e magnésio ou alumínio; e amônia. Sais de bases orgânicas incluem, por exemplo, trimetilamina, trietilamina, piridina, picolina, etanolamina, dietanolamina e trietanolamina. Sais de ácidos inorgânicos incluem, por exemplo, ácido clorídrico, ácido bromídrico, ácido nítrico, ácido sulfúrico e ácido fosfórico. Sais de ácidos orgânicos incluem, por exemplo, ácido fórmico, ácido acético, ácido trifluoroacético, ácido fumárico, ácido oxálico, ácido tartárico, ácido maleico, ácido cítrico, ácido succínico, ácido málico, ácido metanossulfônico, ácido benzenossulfônico e ácido p- toluenossulfônico. Sais de aminoácidos básicos incluem, por exemplo, arginina, Iisina e ornitina. Aminoácidos ácidos incluem, por exemplo, ácido aspártico e ácido glutâmico.
"Tautômeros" se referem a formas isoméricas de um composto que estão em equilíbrio umas com as outras. As concentrações das formas isoméricas dependerão do ambiente no qual o composto é encontrado e podem ser diferentes dependendo, por exemplo, se o composto é um sólido ou está em uma solução orgânica ou aquosa. Por exemplo, em solução aquosa, cetonas estão, tipicamente, em equilíbrio com suas formas de enol. Assim, cetonas e seus enóis são referidos como tautômeros uns dos outros. Conforme prontamente entendido por aqueles versados na técnica, uma ampla variedade de grupos funcionais e outras estruturas podem exibir tautomerismo e todos os tautômeros de compostos tendo as Fórmulas IlIIe III estão dentro do escopo da presente invenção.
Os compostos de acordo com a invenção podem ser solvatados, especialmente hidratados. Hidratação pode ocorrer durante fabricação dos compostos ou composições compreendendo os compostos ou a hidratação pode ocorrer com o tempo em virtude da natureza higroscópica dos compostos.
Determinadas modalidades são derivados referidos como pró- fármacos. A expressão "pró-fármaco" denota um derivado de um fármaco farmacêutica ou terapeuticamente ativo, por exemplo, ésteres e amidas, em que o derivado tem características de distribuição e valor terapêutico intensificado quando comparado com o fármaco e é transformado no fármaco através de um processo enzimático ou químico. Veja, por exemplo, R.E. Notari, Methods Enzymol. 112: 309-323 (1985); N. Bodor, Drugs of the Future 6: 165-182 (1981); H. Bundgaard, Capítulo 1 em Design of Prodrugs (Η. Bundgaard, ed.), Elsevier, New York (1985); e A.G. Gilman e outros, Goodman and GiIman1S The Pharmacological Basis of Therapeutics, 8a ed., McGraw-HiII (1990). Assim, o pró-fármaco pode ser criado para alterar a estabilidade metabólica ou características de transporte de um fármaco, disfarçar efeitos colaterais ou a toxicidade de um fármaco, melhorar o aroma de um fármaco ou alterar outras características ou propriedades de um fármaco.
Compostos da presente invenção incluem isômeros ópticos enriquecidos ou decompostos em qualquer ou todos os átomos assimétricos, assim como é evidente a partir das representações. Misturas racêmicas e diastereoméricas, bem como os isômeros ópticos individuais, podem ser isolados ou sintetizados de modo a serem substancialmente isentos de seus parceiros enantioméricos ou diastereoméricos. Todos de tais estereoisômeros estão dentro do escopo da invenção.
O termo "grupo de proteção carbóxi ", conforme usado aqui, se refere a um grupo éster de proteção de ácido carboxílico empregado para bloquear ou proteger a funcionalidade do ácido carboxílico enquanto as reações envolvendo outros sítios funcionais do composto são realizadas. Grupos de carbóxi proteção são descritos, por exemplo, em Greene, Protective Groups in Organie Synthesis, pp 152-186, John Wiley & Sons, New York (1981), o qual é aqui incorporado por referência. Além disso, um grupo de proteção carbóxi pode ser usado como um pró-fármaco, pelo que o grupo de proteção carbóxi pode ser prontamente clivado in vivo, por exemplo, através de hidrólise enzimática, para liberar o agente biologicamente ativo. T. Higuchi e V. Stella proporcionam uma discussão completa do conceito de pró-fármaco em "Pro-drugs as Novel Delivery Systems", Vol .14 da Série A.C.S. Symposium, American Chemical Society (1975), o qual é aqui incorporado por referência. Tais grupos de proteção de carbóxi são bem-conhecidos por aqueles versados na técnica, tendo sido extensivamente usados na proteção de grupos carboxila nos campos de penicilina e cefalosporina, conforme descrito nas Patentes U.S. N— 3.840.556 e 3.719.667, S. Kukolja, J. Am. Chem. Soe. 93: 6267-6269 (1971) e G.E. Gutowski, Tetrahedron Lett. 21: 1779-1782 (1970), as descrições dos quais são aqui incorporadas por referência. Exemplos de ésteres úteis como pró-fármacos para compostos contendo grupos carboxila podem ser encontrados, por exemplo, nas páginas 14-21 em Bioreversible Carriers in Drug Design: Theory and Application (E.B. Roche, ed.), Pergamon Press, New York (1987), o qual é aqui incorporado por referência. Grupos de proteção carbóxi representativos são Ci a C8 alquila (por exemplo, metila, etila ou butila terciária e similares); haloalquila; alquenila; cicloalquila e derivados substituídos da mesma, tais como ciclo-hexila, ciclopentila e similares; cicloalquilalquila e derivados substituídos da mesma, tais como ciclo-hexilmetila, ciclopentilmetila e similares; arilalquila, por exemplo, fenetila ou benzila e derivados substituídos das mesmas, tais como grupos alcoxibenzila ou nitrobenzila e similares; arilalquenila, por exemplo, feniletenila e similares; arila e derivados substituídos da mesma, por exemplo, 5-indanila e similares; dialquilamínoalquila (por exemplo, dimetilaminoetila e similares); grupos alcanoiloxialquila, tais como acetoximetila, butiriloximetila, valeritoximetila, isobutiriloximetila, isovaleriloximetila, 1-(propionilóxi)-1-etila, 1-(pivaloiloxil)-1-etila, 1-metil-1- (propionilóxi)-l-etila, pivaloiloximetila, propioniloximetila e similares; grupos cicloalcanoiloxialquila, tais como cíclopropilcarbonoiloximetila, ciclobutilcarboniloximetila, ciclopentilcarboniloximetila, ciclo- hexilcarboniloximetila e similares; aroiloxialquila, tal como benzoiloximetila, benzoiloxietila e similares; arilalquilcarboniloxialquila, tal como benzilcarboniloximetila, 2-benzilcarboniloxietila e similares; alcoxicarbonilalquila, tal como metoxicarbonilmetila, ciclo- hexiloxicarbonilmetila, 1-metoxicarbonil-1 -etila e similares; alcoxicarboniloxialquila, tal como metoxicarboniloximetila, t- butiloxicarboniloximetila, 1-etoxicarbonilóxi-1-etila, 1-ciclo-hexiloxicarbonilóxi- 1-etila e similares; alcoxicarbonilaminoalquila, tal como t- butiloxicarbonilaminometila e similares; alquilaminocarbonilaminoalquila, tal como metilaminocarbonilaminometila e similares; alcanoilaminoalquila, tal como acetilaminometila e similares; carboniloxialquila heterocíclica, tal como 4-metilpiperazinilcarboniloximetila e similares; dialquilaminocarbonilalquila, tal como dimetilaminocarbonilmetila, dietilaminocarbonilmetila e similares; (5- (alquil)-2-oxo-1,3-dioxolen-4-il)alquila, tal como (5-t-butil-2-oxo-1,3-dioxolen- 4-il)metila e similares; e (5-fenil-2-oxo-1,3-dioxolen-4-il)alquila, tal como (5- fenil-2-oxo-1,3-dioxoleri-4-il)metila e similares.
O termo "grupo de N-proteção" ou "N-protegido", conforme usado aqui, se refere àqueles grupos destinados a proteger o N-término de um aminoácido ou peptídeo ou proteger um grupo amino contra reações indesejáveis durante procedimentos sintéticos. Grupos de N-proteção comumente usados são descritos, por exemplo, em Greene, Protective Groups in Organic Synthesis, John Wiley & Sons, New York (1981), o qual é incorporado aqui por referência. Grupos de N-proteção compreendem grupos acila, tais como formila, acetila, propionila, pivaloíla, t-butilacetila, 2- cloroacetila, 2-bromoacetila, trifluoroacetila, tricloroacetila, ftalila, o- nitrofenoxiacetila, a-clorobutirila, benzoíla, 4-clorobenzoíla, 4-bromobenzoíla, 4-nitrobenzoila e similares; grupos sulfonila, tais como benzenossulfonila, p- tolueno-sulfonila e similares; grupos de formação de carbamato, tais como benziloxicarbonila, p-clorobenziloxicarbonila, p-metoxibenziloxicarbonila, p- nitrobenziloxicarbonila, 2-nitrobenziloxicarbonila, p-bromobenziloxicarbonila, 3,4-dimetoxibenziloxicarbonila, 3,5-dimetoxibenziloxicarbonila, 2,4- dimetoxibenziloxicarbonila, 4-metoxibenziloxicarbonila, 2-nitro-4,5- dimetoxibenziloxicarbonila, 3,4,5-trimetoxibenziloxicarbonila, 1 -(p-bifenilil)-l - metiletoxicarbonila, a,a-dimetil-3,5-dimetoxibenziloxicarbonila, Benz- hidriloxicarbonila, t-butiloxicarbonila, di-isopropilmetoxicarbonila, isopropiloxicarbonila, etoxicarbonila, metoxicarbonila, aliloxicarbonila, 2,2,2,- tricloroetoxicarbonila, fenoxicarbonila, 4-nitrofenoxicarbonila, fluorenil-9- metoxicarbonila, ciclopentiloxicarbonila, adamantiloxicarbonila, ciclo- hexiloxicarbonila, feniltiocarbonila e similares; grupos alquila tais como benzila, trifenilmetila, benziloximetila e similares; e grupos silila, tal como trimetil-silila e similares. Em algumas modalidades, grupos de N-proteção são formila, acetila, benzoila, pivaloila, t-butilacetila, fenil-sulfonila, benzila, 9-fluorenilmetiloxicarbonila (Fmoc), t-butiloxicarbonila (Boc) e benziloxicarbonila (Cbz).
Conforme usado aqui, "halo", "halogênio" ou "haleto" se refere a F, Cl, Brou I.
Conforme usado aqui, as abreviações para quaisquer grupos de proteção, aminoácidos ou outros compostos estão, a menos que de outro modo indicado, de acordo com seu uso comum, abreviações conhecidas ou a IUPAC-IUB Commission on Biochemical Nomenclature, Biochem. 11: 942- 944(1972).
Conforme usado aqui, "substancialmente puro" significa suficientemente homogêneo para parecer isento de impurezas prontamente detectáveis, conforme determinado através de métodos padrão de análise, tais como cromatografia em camada fina (TLC), eletroforese em gel e cromatografia líquida de alto desempenho (HPLC), usados por aqueles versados na técnica para avaliar tal pureza ou suficiente pureza de modo que purificação adicional não altere detectavelmente as propriedades físicas e químicas, tais como atividades enzimáticas e biológicas, da substância. Métodos para purificação de compostos para produzir compostos substancialmente puros quimicamente são conhecidos por aqueles versados na técnica. Um composto substancialmente puro quimicamente pode, contudo, ser uma mistura de estereoisômeros. Em tais casos, purificação adicional pode aumentar a atividade específica do composto.
Conforme usado aqui, "atividade biológica" se refere às atividades in vivo de um composto, composição ou outra mistura ou respostas fisiológicas que resultam quando de administração in vivo de um composto, composição ou outra mistura. Atividade biológica, assim, abrange efeitos terapêuticos e atividade farmacêutica de tais compostos, composições e misturas.
Conforme usado aqui, "farmacocinética" se refere à concentração de um composto administrado no soro com o tempo. Farmacodinâmica se refere à concentração de um composto administrado a tecidos-alvo e não-alvo com o tempo e aos efeitos sobre o tecido-alvo (eficácia) e o tecido não-alvo (toxicidade). Aprimoramentos, por exemplo, na farmacocinética ou farmacodinâmica, podem ser criados para um agente biológico ou agente de direcionamento em particular, tal como usando ligações instáveis ou modificando a natureza química de qualquer Iigante (alteração de solubilidade, carga, etc.).
Conforme empregado aqui, as frases "uma quantidade eficaz" e
"quantidade terapeuticamente eficaz" se referem a uma dose suficiente para proporcionar concentrações altas o bastante para conferir um efeito benéfico, por exemplo, um alívio dos sintomas, sobre o recipiente da mesma. O nível de dose terapeuticamente eficaz específico para qualquer indivíduo em particular dependerá de uma variedade de fatores, incluindo o distúrbio que está sendo tratado, a gravidade do distúrbio, a atividade do composto específico, a via de administração, a taxa de eliminação do composto, a duração de tratamento, os fármacos usados em combinação ou coincidentes com o composto, a idade, peso corporal, sexo, dieta e saúde geral do indivíduo e fatores similares bem conhecidos na técnica e ciência médica. Várias considerações gerais levadas em conta na determinação da "quantidade terapeuticamente eficaz" são conhecidas por aqueles versados na técnica e são descritas, por exemplo, em Gilman, A.G. e similares, Goodman and GiIman1S The Pharmacological Basis of Therapeutics, 8a ed., McGraw-HiII (1990); e Remington's Pharmaceutical Sciences, 17a ed., Mack Publishing Co., Easton, PA (1990).
Em um aspecto, a presente invenção proporciona vários compostos de direcionamento nos quais agentes de direcionamento de GA são covalentemente ligados a um sítio de combinação de anticorpo.
Em outro aspecto, a presente invenção inclui métodos de alteração de pelo menos uma característica física ou biológica de um agente de direcionamento de GA. Os métodos incluem ligação covalente de um agente de direcionamento de GA a um sítio de combinação de um anticorpo, seja diretamente ou através de um ligante. Características de um agente de direcionamento de GA que podem ser modificadas incluem, mas não estão limitadas a, afinidade de ligação, suscetibilidade à degradação (por exemplo, através de proteases), farmacocinética, farmacodinâmica, imunogenicidade, solubilidade, lipofilicidade, hidrofilicidade, hidrofobicidade, estabilidade (mais ou menos estável, bem como degradação planejada), rigidez, flexibilidade, modulação de ligação de anticorpo e similares. Também, a potência biológica de um agente de direcionamento de GA em particular pode ser aumentada pela adição da(s) íunção(ões) efetuadora(s) fornecida(s) pelo anticorpo. Por exemplo, um anticorpo proporciona funções efetuadoras, tais como funções efetuadoras mediadas por complemento. Sem desejar estar preso a qualquer teoria, a porção de anticorpo de um composto de direcionamento de GA pode, em geral, prolongar a meia-vida de um agente de direcionamento de GA de menor tamanho in vivo. Assim, em um aspecto, a invenção proporciona um método para aumento da meia-vida efetiva em circulação de um agente de direcionamento de GA.
Em outro aspecto, a presente invenção proporciona métodos para modulação da atividade de ligação de um anticorpo através de fixação covalente de um agente de direcionamento de GA a um sítio de combinação do anticorpo. Embora não desejando estar preso a qualquer teoria, ligação substancialmente reduzida de anticorpo a um antígeno pode resultar do(s) agente(s) de direcionamento de GA ligado impedindo estericamente o antígeno de contatar o sítio de combinação de anticorpo. Alternativamente, ligação substancialmente reduzida a antígeno pode resultar se a cadeia lateral de aminoácido do sítio de combinação de anticorpo que é modificada através de ligação covalente é importante para ligação ao antígeno. Em contraste, ligação substancialmente reduzida de anticorpo a um antígeno pode resultar quando um agente de direcionamento de GA não impede estericamente o antígeno de contatar o sítio de combinação de anticorpo e/ou quando a cadeia lateral de aminoácido do sítio de combinação de anticorpo modificada através de ligação covalente não é importante para ligação ao antígeno.
Em outro aspecto, a presente invenção inclui métodos de modificação de um sítio de combinação de um anticorpo para gerar especificidade de ligação pelo GLP-1R. Tais métodos incluem ligação covalente a uma cadeia lateral de aminoácido reativa em um sítio de combinação de um anticorpo a uma porção química sobre um Iigante de um composto de agente de direcionamento de GA-Ligante conforme descrito aqui, onde o agente de direcionamento de GA é específico para GLP-1R. A porção química do Ligante está suficientemente distanciada do agente de direcionamento de GA, de modo que o agente de direcionamento de GA pode se ligar ao GLP-1 R quando o composto de agente de direcionamento de GA-Ligante está covalentemente ligado ao sítio de combinação de anticorpo. Em uma modalidade, o anticorpo, antes de ligação covalente, teria uma afinidade pelo GLP-1 R de menos de cerca de 1χ10~5 moles/litro. Contudo, após o anticorpo ser covalentemente ligado ao composto de agente de direcionamento de GA-ligante, o anticorpo modificado tem, de preferência, uma afinidade pela molécula-alvo de pelo menos cerca de 1x10" 6 moles/litro, alternativamente, pelo menos cerca de 1x10"7 moles/litro, alternativamente, pelo menos 1χ10"8 moles/litro, alternativamente pelo menos 1x10"9 moles/litro ou, alternativamente, pelo menos cerca de 1x10"10 moles/litro.
Agentes de direcionamento de GA
Em uma modalidade, um agente de direcionamento de GA é:
R1-HAEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKGR-R2 (SEQ ID NO: 1), em que:
R1 está ausente, é CH3, C(0)CH3, C(O)CH2CH3, C(O)CH2CH2CH3 ou C(O)CH(CH3)CH3; e
R2 é OH1 NH2, NH(CH3), NHCH2CH3, NHCH2CH2CH3, NHCH(CH3)CH3, NHCH2CH2CH2CH3) NHCH(CH3)CH2CH3, NHC6H5, NHCH2CH2OCH3, NHOCH3, NHOCH2CH3, um grupo de proteção carbóxi, um grupo de ácido graxo lipídico ou um carboidrato.
SEQ ID NO: 1 é o GLP-1 de 30 aminoácidos (7-36) gerado através de clivagem de GLP-1 pela dipeptidil peptidase IV (DPP-IV) na alanina na posição 2. D.J. Drucker. Endocrinology 142: 521-527 (2001). GLP-1 (7-36) funciona como um agonista de GLP-1 R1 resultando em secreção de insulina glicose-dependente aumentada. Contudo, a meia-vida do GLP-1 (7-36) é de apenas alguns minutos. Em outra modalidade, um agente de direcionamento de GA é: R1-HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 2); em que
R1 está ausente, é CH3, C(G)CH3, C(O)CH2CH3, C(O)CH2CH2CH3 ou C(O)CH(CH3)CH3; e
R2 é OH1 NH2, NH(CH3)1 NHCH2CH3, NHCH2CH2CH3, NHCH(CH3)CH3, NHCH2CH2CH2CH3, NHCH(CH3)CH2CH3, NHC6H5, NHCH2CH20CH3, NHOCH3, NHOCH2CH3, um grupo de proteção carbóxi , um grupo de ácido graxo lipídico ou um carboidrato.
SEQ ID NO: 2 é o peptídeo de 39 aminoácidos exendina-4. Assim como o GLP-1 (7-36), a exendina-4 funciona como um agonista de GLP-1R e estimula a secreção de insulina glicose-dependente. Diferente do GLP-1 (7-36), contudo, a exendina-4 é resistente à clivagem pela DPP-IV. As regiões N-terminais do GLP-1 (7-36) e exendina-4 são quase idênticas, com a diferença perceptível sendo o segundo resíduo de aminoácido. Esse resíduo é uma alanina em GLP-1 (7-36), mas uma glicina em exendina-4. Esse único aminoácido na região N-terminal é responsável pela resistência da exendina-4 à digestão com DPP-IV. Outra diferença notável entre a exendina-4 e DLP-1 (7-36) é a presença de nove resíduos de aminoácido adicionais no C-término da exendina-4, os quais formam uma delimitação trp.
Além dos peptídeos de SEQ ID NO: 1 ou SEQ ID NO: 2, os agentes de direcionamento de GA conforme descrito aqui podem ser análogos dessas seqüências. Tais análogos podem possuir características vantajosas adicionais tais como, por exemplo, biodisponibilidade aumentada, estabilidade aumentada, perfil de tratamento diabético aprimorado, controle de apetite aprimorado, controle de peso corporal aprimorado, tolerância à glicose aprimorada, reatividade no ensaio de células de ilhota e/ou reconhecimento imune reduzido pelo hospedeiro. Conforme usado aqui, um análogo de SEQ ID NO: 1 ou SEQ ID NO: 2 é um peptídeo tendo essencialmente a seqüência de SEQ ID NO: 1 ou SEQ ID NO: 2, mas com uma ou mais substituições, inserções ou deleções de aminoácido ou uma combinação dos mesmos.
Em determinadas modalidades, agentes de direcionamento de GA1 conforme fornecido aqui, compreendem SEQ ID NO: 1 ou SEQ ID NO: 2, mas com uma ou mais substituições de aminoácido. Uma possível classe de substituições de aminoácido em agentes de direcionamento de GA incluiria aquelas alterações de aminoácido que são previstas como estabilizando a estrutura de SEQ ID NO: 1 ou SEQ ID NO: 2. Utilizando SEQ ID NO: 1 ou SEQ ID NO: 2, aqueles versados na técnica podem compilar prontamente seqüências de consenso e determinar, a partir dessas seqüências de consenso, resíduos conservados de aminoácido representando substituições de aminoácido preferidas. As substituições de aminoácido podem ser de uma natureza conservada ou não-conservada. Substituições de aminoácido conservadas consistem em substituição de um ou mais aminoácidos de SEQ ID NO: 1 ou SEQ ID NO: 2 por aminoácidos com características de carga, tamanho e/ou hidrofobicidade similares tais como, por exemplo, uma substituição de um aminoácido ácido glutâmico (E) por ácido aspártico (D). Substituições não-conservadas consistem em substituição de um ou mais aminoácidos de SEQ ID NO: 1 ou SEQ ID NO: 2 por aminoácidos possuindo características de carga, tamanho e/ou hidrofobicidade dissimilares tais como, por exemplo, uma substituição de ácido glutâmico (E) por valina (V). Em determinadas modalidades, agentes de direcionamento de GA, conforme fornecido aqui, compreendem análogos de SEQ ID NO: 1 ou SEQ ID NO: 2, mas com ácido 2-aminoisobutírico (Aib2) substituído pelo resíduo de glicina na posição 2 (ou alanina, conforme apropriado). Em determinadas modalidades, agentes de direcionamento de GA, conforme fornecido aqui, compreendem SEQ ID NO: 1 ou SEQ ID NO: 2, mas com um ou mais resíduos substituídos por uma lisina.
Em determinadas modalidades, agentes de direcionamento de GA, conforme fornecido aqui, compreendem SEQ ID NO: 1 ou SEQ ID NO: 2, mas com uma ou mais inserções de aminoácido. Inserções de aminoácido podem consistir em resíduos de um único aminoácido ou trechos de resíduos. As inserções podem ser feitas na extremidade carbóxi terminal do peptídeo ou em uma posição interna ao peptídeo. Tais inserções geralmente oscilarão de 2 a 10 aminoácidos de comprimento. Considera-se que inserções feitas no carbóxi término do peptídeo de interesse podem ser de uma faixa de maior tamanho, com cerca de 2 a cerca de 20 aminoácidos sendo possível. Uma ou mais de tais inserções podem ser introduzidas em SEQ ID NO: 1 ou SEQ ID NO: 2, na medida em que tais inserções resultem em peptídeos os quais ainda exibirão atividade agonista de GLP-1R.
Em determinadas modalidades, um peptídeo de direcionamento de GA1 conforme fornecido aqui, compreende a seqüência de aminoácido de SEQ ID NO: 2, mas com um ou mais resíduos de Iisina inseridos. Por exemplo, em uma modalidade, um agente de direcionamento de GA é: R1-HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPSK-R2 (SEQ ID NO: 3);
em que:
R1 está ausente, é CH3, C(0)0H3, C(O)CH2CH3, C(O)CH2CH2CH3 ou C(O)CH(CH3)CH3; e
R2 é OH, NH2, NH(CH3), NHCH2CH3, NHCH2CH2CH3, NHCH(CH3)CH3, NHCH2CH2CH2CH3, NHCH(CH3)CH2CH3, NHC6H5, NHCH2CH2OCH3, NHOCH3, NHOCH2CH3, um grupo de proteção carbóxi , um grupo de ácido graxo lipídico ou um carboidrato.
O agente de direcionamento de GA de SEQ ID NO: 3 é idêntico à SEQ ID NO: 2, exceto quanto à adição de um resíduo extra de Iisina no término carbóxi.
Em uma modalidade similar, um agente de direcionamento de GA é:
R1- HAEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKGRK-R2 (SEQ ID NO: 33); em que:
R1 está ausente, é CH3, C(0)CH3, C(O)CH2CH3, C(O)CH2CH2CH3 ou C(O)CH(CH3)CH3; e
R2 é OH, NH2, NH(CH3), NHCH2CH3, NHCH2CH2CH3, NHCH(CH3)CH3, NHCH2CH2CH2CH3, NHCH(CH3)CH2CH3, NHC6H5, NHCH2CH2OCH3, NHOCH3, NHOCH2CH3, um grupo de proteção carbóxi, um grupo de ácido graxo lipídico ou um carboidrato.
O agente de direcionamento de GA de SEQ ID NO: 33 é idêntico à SEQ ID NO: 1, exceto quanto à adição de um resíduo de extra lisina no término carbóxi.
Em determinadas modalidades, agentes de direcionamento de GA1 conforme fornecido aqui, compreendem SEQ ID NO: 1 ou SEQ ID NO: 2, mas com uma ou mais deleções de aminoácido. Tais deleções podem compreender truncamentos do término carbóxi do peptídeo ou elas podem compreender a remoção de um ou mais aminoácidos de uma posição interna ao peptídeo. Tais deleções podem envolver uma deleção de um único ponto, uma deleção contínua de dois ou mais resíduos consecutivos ou uma combinação de deleções de ponto e contínuas. Uma ou mais de tais deleções podem ser introduzidas em SEQ ID NO: 1 ou SEQ ID NO: 2, na medida em que tais deleções resultem em peptídeos que exibirão atividades agonistas de GLP-1R. Em determinadas modalidades, um peptídeo de direcionamento de GA, conforme fornecido aqui, compreende a seqüência de aminoácido de SEQ ID NO: 2, mas com um ou mais aminoácidos deletados do término carbóxi do peptídeo.
Análogos de SEQ ID NO: 1 e SEQ ID NO: 2 exemplificativos adequados são apresentados na Tabela I, abaixo, e descritos aqui no formato de fórmula geral. As seqüências peptídicas na Tabela I são listadas ao término amino (esquerdo) para o carbóxi (direito).
Tabela I
ANÁLOGOS DE SEQ ID NO: 1 E SEQ ID NO: 2
R1-HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPSK-R2 (SEQ ID NO: 3)
R1-HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPSK(SH)-R2 (SEQ ID NO: 172)
R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPSK-R2 (SEQ ID NO: 4)
R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPSK(SH)-R2 (SEQ ID NO: 173)
R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 5)
R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGG-R2 (SEQ ID NO: 6)
R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKN-R2 (SEQ ID NO: 7)
R1-HAibEGTFTSDLSKQLEEEAVRLFIEFLKN-R2 (SEQ ID NO: 8) R1-HAibEGTFTSDLSKQLEEEAVRLAlEFLKN-R2 (SEQ ID NO: 9)
R1-HAibEGTFTSDLSKQLEEEAVRLAIEFLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 10)
R1-HAibEGTFTSDLSKQLEEEAVRLFIEFLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 11)
R1-HAibEGTFTSDLSK(Ac)QMEEEAVRLFIEWLK(Ac)NGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 12)
R1-HAibEGTFTSDLSK(benzoil)QMEEEAVRLFIEWLK(benzoil)NGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ NO: 13)
R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPKS-R2(SEQ ID NO: 14)
R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEW LKNGGPSSGAPPK(SH)S-R2 (SEQ ID NO: 99)
R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAKPPS-R2 (SEQ ID NO: 15)
R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAK(SH)PPS-R2 (SEQ ID NO: 100)
R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSKAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 16)
R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSK(SH)APPPS-R2 (SEQ ID NO: 101)
R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPKSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 17)
R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPK(SH)SGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 168)
R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKKGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 18)
R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKK(SH)GGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 102)
R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWKKNGGPSSGAPPPS-R2(SEQ ID NO: 19)
R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLK(SH)NGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 170)
R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWK(SH)KNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 103)
R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIKWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 20)
R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIK(SH)WLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 104)
R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFKEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 21)
R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFK(SH)EWLKNGGPSSGAPPPS-R2(SEQ ID NO: 105)
R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRKFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 22)
R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRK(SH)FIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2(SEQ ID NO: 106)
R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVKLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 23)
R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVK(SH)LFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 107)
R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAKRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 24)
R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAK(SH)RLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 108)
R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEKAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 25)
R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEK(SH)AVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 109)
R1-HAibEGTFTSDLSKQMEKEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 26)
R1-HAibEGTFTSDLSKQMEK(SH)EAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 110)
R1-HAibEGTFTSDLSKQKEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 27)
R1-HAibEGTFTSDLSKQK(SH)EEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2(SEQ ID NO: 111)
R1-HAibEGTFTSDLSKKMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 28)
R1-HAibEGTFTSDLSKK(SH)MEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 112)
R1-HAibEGTFTSDLKKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 29) R1-HAibEGTFTSDLSK(SH)QMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 169) R1-HAibEGTFTSDLK(SH)KQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 113) R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGK-R2 (SEQ ID NO: 30) R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGK(SH)-R2 (SEQ ID NO: 114) R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRKFIEWLKNGGPSS-R2 (SEQ ID NO: 31) R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRKFIEWLK(SH)NGGPSS-R2 (SEQ iD NO: 115) R1-HAibEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKGR-R2 (SEQ ID NO: 32) R1-HAEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKGRK-R2 (SEQ ID NO: 33) R1-HGEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKGRK-R2 (SEQ ID NO: 34) R1-HAibEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKAibR-R2 (SEQ ID NO: 35) R1-HAibEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKAibRK-R2 (SEQ ID NO: 36) R1-HAibEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKGRK-R2 (SEQ ID NO: 37) R1-HAibEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKGRK(SH)-R2 (SEQ ID NO: 38) R1-HAibEGTFTSDVSSYLEGQAAK(SH)EFIAWLVKGR-R2 (SEQ ID NO: 39) R1-HAibEGTFTSDVSSYGEGQAAKEFIAWLVKAibR-R2 (SEQ ID NO: 40) R1-HAibEGTFTSDVSSYCEGQAAKEFIAWLVKAibR-R2 (SEQ ID NO: 41) R1-HAibEGTFTSDVSSYFEGQAAKEFIAWLVKAibR-R2 (SEQ ID NO: 42) R1-HAibEGTFTSDVSSYYEGQAAKEFIAWLVKAibR-R2 (SEQ ID NO: 43) R1-HAibEGTFTSDVSSYWEGQAAKEFIAWLVKAibR-R2 (SEQ ID NO: 44) R1-HAibEGTFTSDVSSYLEEQAAKEFIAWLVKAibR-R2 (SEQ ID NO: 45) R1-HAibEGTFTSDVSSYLEDQAAKEFIAWLVKAibR-R2 (SEQ ID NO: 46) R1-HAibEGTFTSDVSSYLEKQAAKEFIAWLVKAibR-R2 (SEQ ID NO: 47) R1-HAibEGTFTSDVSSYLEGQAVKEFIAWLVKAibR-R2 (SEQ ID NO: 48) R1-HAibEGTFTSDVSSYLEGQAIKEFIAWLVKAibR-R2 (SEQ ID NO: 49) R1-HAibEGTFTSDVSSYLEGQALQUEFIAWLVKAibR-R2 (SEQ ID NO: 50) R1-HAibEGTFTSDVSSYLEGQAAREFIAWLVKAibR-R2 (SEQ ID NO: 51) R1-HAibEGTFTSDVSSYLEGQAA0mEFIAWLVKAibR-R2 (SEQ ID NO: 52) Rl-HAibEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAFLVKAibR-R2 (SEQ ID NO: 53) R1-HAibEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLIKAibR-R2 (SEQ ID NO: 54) R1-HAibEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVRAibR-R2 (SEQ ID NO: 55) R1-HAibEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVOrnAibR-R2 (SEQ ID NO: 56) R1-HAibEGTFTSDVSSYLEEQAVKEFIAWLIKAibR-R2 (SEQ ID NO: 57) R1-HAibEGTFTSDVSSYFEEQAVKEFIAWLIKAibR-R2 (SEQ ID NO: 58) R1-HAibEGTFTSDVSSYYEEQAVKEFIAWLIKAibR-R2 (SEQ ID NO: 59) R1-HAibEGTFTSDVSSYWEEQAVKEFIAWLIKAibR-R2 (SEQ ID NO: 60) R1-HAibEGTFTSDVSSYLEEQAVKEFIAWLIRAibR-R2 (SEQ ID NO: 61) R1-HAibEGTFTSDVSSYLEEQAVREFIAWLIRAibR-R2 (SEQ ID NO: 62) R1-HAibEGTFTSDVSSYLEEQAVKEFIAWLIKAibRPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 63) R1-HAibEGTFTSDVSSYLEEQAVK(SH)EFIAWLIKAibRPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 171) R1-HAibEGTFTSDKSSYLEEQAVKEFIAWLIKAibR-R2 (SEQ ID NO: 64) R1-HAibEGTFTSDK(SH)SSYLEEQAVKEFIAWLIKAibR-R2 (SEQ ID NO: 116) R1-HAibEGTFTSDVSKYLEEQAVKEFIAWLIKAibR-R2 (SEQ ID NO: 65) R1-HAibEGTFTSDVSK(SH)YLEEQAVKEFIAWLIKAibR-R2 (SEQ ID NO: 117) R1-HAibEGTFTSDVSSYKEEQAVKEFIAWLIKAibR-R2 (SEQ ID NO: 66) R1-HAibEGTFTSDVSSYK(SH)EEQAVKEFIAWLIKAibR-R2 (SEQ ID NO: 118) R1-HAibEGTFTSDVSSYLEKQAVKEFIAWLIKAibR-R2 (SEQ ID NO: 67) R1-HAibEGTFTSDVSSYLEK(SH)QAVKEFIAWLIKAibR-R2 (SEQ ID NO: 119) R1-HAibEGTFTSDVSSYLEEQKVKEFIAWLIKAibR-R2 (SEQ ID NO: 68) R1-HAibEGTFTSDVSSYLEEQK(SH)VKEFIAWLIKAibR-R2 (SEQ ID NO: 120) R1-HAibEGTFTSDVSSYLEEQAVKEKIAWLIKAibR-R2 (SEQ ID NO: 69) R1-HAibEGTFTSDVSSYLEEQAVK(SH)EKIAWLIKAibR-R2 (SEQ ID NO: 121) R1-HAibEGTFTSDVSSYLEEQAVKEFIKWLIKAibR-R2 (SEQ ID NO: 70) R1-HAibEGTFTSDVSSYLEEQAVKEFIK(SH)WLIKAibR-R2(SEQ ID NO: 122) R1-HAibEGTFTSDVSSYLEEQAVKEFIAWKIKAibR-R2 (SEQ ID NO: 71) R1-HAibEGTFTSDVSSYLEEQAVKEFIAWK(SH)IKAibR-R2 (SEQ ID NO: 123) R1-HAibEGTFTSDVSSYLEEQAVKEFIAWLIKAibRPSSGAPPPSK-R2 (SEQ ID NO: 72) R1-HAibEGTFTSDVSSYLEEQAVKEFIAWLIKAibRPSSGAPPPSK(SH)-R2 (SEQ ID NO: 124) R1-HAibEGTFTSDVSSYLEEQAVKEFIAWLIK(Ac)AibR-R2 (SEQ ID NO: 73) R1-HAibEGTFTSDVSSYLEEQAVKEFIAWLIK(benzoil)AibR-R2 (SEQ ID NO: 74) R1-H(Trans 3-hexanoil)AibEGTFTSDVSSYLEEQAVKEFIAWLIKAibR-R2 (SEQ ID NO: 75) R1-H(3-Aminofenilacetil)AibEGTFTSDVSSYLEEQAVKEFIAWLIKAibR-R2 (SEQ ID NO: 76)
K(SH)1 conforme usado aqui, se refere a:
<formula>formula see original document page 76</formula>
K(benzoila), conforme usado aqui, se refere a um resíduo de lisina ligado a uma extremidade de benzoila tendo a seguinte estrutura:
<formula>formula see original document page 76</formula>
"Trans-3-hexanoila", conforme usado aqui, se refere a uma extremidade ligada ao peptídeo de direcionamento de GA e tendo a seguinte estrutura:
"3-aminofenil acetila", conforme usado aqui, se refere a uma extremidade ligada ao peptídeo de direcionamento de GA e tendo a seguinte estrutura:
Um composto de direcionamento de GA pode ser preparado usando métodos bem-conhecidos na técnica. Tipicamente, a síntese do agente de direcionamento de GA de peptidila é a primeira etapa e é realizada conforme descrito aqui. O agente de direcionamento é, então, derivatizado para ligação a um componente de conexão (o ligante) o qual é, então, combinado com o anticorpo. Aqueles versados na técnica apreciarão prontamente que as etapas sintéticas específicas usadas dependem da natureza exata dos três componentes. Assim, os conjugados de agente de direcionamento de GA-Iigante e compostos de agente de direcionamento de GA descritos aqui podem ser prontamente sintetizados.
Agentes de direcionamento de GA peptídicos podem ser sintetizados através de muitos métodos que são conhecidos por aqueles versados na técnica. Para síntese de peptídeo em fase sólida, um sumário de muitas técnicas pode ser encontrado em Chemical Approaches to the Synthesis of Peptides and Proteins (Williams e outros, eds.), CRC Press, Boca Raton, FL (1997).
Tipicamente, o agente de direcionamento de GA peptídico desejado é sintetizado seqüencialmente sobre uma fase sólida de acordo com procedimentos bem-conhecidos na técnica. Veja, por exemplo, Pedido de Patente U.S. N0 10/205.924 (Publicação N0 2003/0045477A1). O ligante pode ser preso ao peptídeo em parte ou completamente sobre a fase sólida ou pode ser adicionado usando técnicas de fase em solução após a remoção do peptídeo da resina (veja figuras 5A e 5B). Por exemplo, uma porção ligante contendo ácido carboxílico e amino N-protegida pode ser presa a uma resina, tal como 4-hidroximetil-fenoximetil-poli(estireno- divinilbenzeno a 1%). O grupo de N-proteção pode ser removido através do ácido (por exemplo, TFA para Boc) ou base (por exemplo, piperidina para Fmoc) apropriada e a seqüência do peptídeo desenvolvida do modo normal do C-término para o N-término (veja figura 5A). Alternativamente, a seqüência peptídica pode ser sintetizada primeiro e o Iigante adicionado ao peptídeo sobre a coluna (veja figura 5B). Ainda outro método requer desproteção de uma cadeia lateral apropriada durante síntese e derivatização com um Iigante adequadamente reativo. Por exemplo, uma cadeia lateral de Iisina pode ser desprotegida e reagida com um Iigante tendo um éster ativo. Alternativamente, um derivado de aminoácido com uma porção Iigante adequadamente protegida presa a uma cadeia lateral ou, em alguns casos, o nitrogênio de alfa-amino, pode ser adicionada como parte da seqüência peptídica em crescimento.
Ao final da síntese em fase sólida, o conjugado de agente de direcionamento-ligante é removido da resina e desprotegido, quer em sucessão ou em uma única operação. Remoção e desproteção do conjugado de agente de direcionamento-ligante podem ser realizadas em uma única operação através de tratamento do conjugado de peptídeo-ligante resina-ligado com um reagente de clivagem, por exemplo, removedores contendo ácido trifluoroacético, tais como tioanisol, água ou etanoditiol. Após desproteção e liberação do agente de direcionamento, derivatização adicional do agente de direcionamento peptídico pode ser realizada.
O conjugado de agente de direcionamento-ligante totalmente desprotegido é purificado através de uma seqüência de etapas cromatográficas empregando qualquer um dos seguintes tipos: troca de íons sobre uma resina fracamente básica na forma de acetato; cromatografia por adsorção hidrofóbica sobre poliestireno-divinilbenzeno não derivatizado (por exemplo, AMBERLITE XAD); cromatografia por adsorção em sílica-gel; cromatografia de troca de íons sobre carboxietilmetil celulose; cromatografia por divisão, por exemplo, sobre SEPHADEX G-25, LH-20 ou distribuição contracorrente; cromatografia líquida de elevado desempenho (HPLC), especialmente HPLC de fase reversa sobre uma coiuna de fase ligada à sílica/octil- ou octadecil-silila de acondicionamento.
Anticorpos
"Anticorpo", conforme usado aqui, inclui imunoglobulinas as quais são o produto de células B e variantes das mesmas, bem como o receptor de células T (TcR), o qual é o produto de células T e variantes das mesmas. Uma imunoglobulina é uma proteína compreendendo um ou mais polipeptídeos substancialmente codificados pelos genes de região constante kappa e lambda, alfa, gama, delta, epsilon e mu de imunoglobulina, bem como uma miríade de genes de região variável de imunoglobulina. Cadeias curtas são classificadas como kappa ou lambda. Cadeias pesadas são classificadas como gama, mu, alfa, delta ou epsilon as quais, por sua vez, definem as classes de imunoglobulina, IgG, IgM, IgA, IgD e IgE, respectivamente. Subclasses de cadeias pesadas também são conhecidas. Por exemplo, cadeias pesadas de IgG em seres humanos podem ser de qualquer uma das subclasses IgGI, lgG2, lgG3 e lgG4.
Uma unidade estrutural de imunoglobulina típica é conhecida como compreendendo um tetrâmero. Cada tetrâmero é composto de dois pares idênticos de cadeias polipeptídicas, cada par tendo uma cadeia "leve" (cerca de 25 kD) e uma cadeia "pesada" (cerca de 50-70 kD). O N-término de cada cadeia define uma região variável de cerca de 100 a 110 ou mais aminoácidos primariamente responsáveis pelo reconhecimento de antígeno. Os termos cadeia curta variável (Vl) e cadeia pesada variável (Vh) se referem a essas cadeias leve e pesada, respectivamente. Os aminoácidos de um anticorpo podem ser naturais ou não naturais.
Anticorpos que contêm duas cadeias pesadas e duas cadeias curtas são bivalentes pelo fato de que eles têm dois sítios de combinação. Um anticorpo bivalente natural típico é uma IgG. Anticorpos podem ser multivalentes, conforme no caso de formas diméricas de IgA e a molécula pentamérica de IgM. Anticorpos também podem ser univalentes tais como, por exemplo, no caso de fragmentos Fab ou Fab'.
Anticorpos existem como anticorpos intactos de comprimento total ou como uma série de fragmentos bem caracterizados produzidos através de digestão com várias peptidases ou produtos químicos. Assim, por exemplo, a pepsina digere um anticorpo abaixo das ligações de dissulfeto na região de dobradiça para produzir F(ab')2, um dímero de Fab o qual, em si, é uma cadeia curta unida a VH-CH1 através de uma ligação de dissulfeto. O F(ab')2 pode ser reduzido sob condições suaves para romper a ligação de dissulfeto na região de dobradiça, desse modo, convertendo o dímero F(ab')2 em um monômero Fab'. O monômero Fab' é essencialmente um fragmento Fab com parte da região de dobradiça (veja, por exemplo, Fundamental Immunology (W. E. Paul, ed.), Raven Press, N.Y. (1993) para uma descrição mais detalhada de outros fragmentos de anticorpo). Embora vários fragmentos de anticorpo sejam definidos em termos da digestão de um anticorpo intacto, aqueles versados na técnica apreciarão que qualquer um de uma variedade de fragmentos de anticorpo pode ser sintetizado de novo quimicamente ou utilizando a metodologia de DNA recombinante. Assim, o termo anticorpo, conforme usado aqui, também inclui fragmentos de anticorpo produzidos através da modificação de anticorpos inteiros, sintetizados de novo ou obtidos a partir de metodologias de DNA recombinante. Fragmentos de anticorpo produzidos através de técnicas recombinantes podem incluir fragmentos conhecidos através de processamento proteolítico ou podem ser fragmentos únicos não disponíveis ou previamente desconhecidos através de processamento catalítico. Embora o anticorpo e fragmentos de anticorpo possam conter aminoácidos naturais, bem como não naturais, aqueles versados na técnica reconhecerão que existem circunstâncias nas quais é vantajoso usar fragmentos de anticorpo ao invés de anticorpos inteiros. Por exemplo, o menor tamanho dos fragmentos de anticorpo permite eliminação rápida e pode levar a acesso aprimorado a tumores sólidos. O receptor de células T (TcR) é um heterodímero dissulfeto- ligado composto de duas cadeias. As duas cadeias são, em geral, dissulfeto- ligadas exatamente fora da membrana plasmática da célula T em um curto trecho estendido de aminoácidos que compõem a região de dobradiça do anticorpo. Caaa cadeia de TcR é composta de um domínio variávei simiiar a anticorpo e um domínio constante. O TcR completo tem uma massa molecular de cerca de 95 kD, com as cadeias individuais variando, quanto ao tamanho, de 35 a 47 kD. Também abrangidas dentro do significado de TcR são porções do receptor tais como, por exemplo, a região variável, a qual pode ser produzida como uma proteína solúvel usando métodos bem- conhecidos na técnica. Por exemplo, a Patente U.S. N0 6.080.840 e A.E. Slanetz e A.L. Bothwell, Eur. J. Immunol. 21: 179-183 (1991) descrevem um receptor de célula T solúvel preparado através de splicing dos domínios extracelulares de um TcR a seqüências de Thy-1 de âncora na membrana de glicosil fosfatidilinositol (GPI). A molécula é expressa na ausência de CD3 sobre a superfície celular e pode ser clivada da membrana através de tratamento com fosfolipase C fosfatidilinositol-específica (PI-PLC). O TcR solúvel também pode ser preparado através de acoplamento dos domínios variáveis de TcR aos domínios CH2 ou CH3 de uma cadeia pesada de anticorpo, essencialmente conforme descrito na Patente U.S. N0 5.216.132 e G.S. Basi e outros, J. Immunol. Metods 155: 175-191 (1992) ou como cadeias únicas de TcR solúvel, conforme descrito por E.V. Shusta e outros, Nat. Biotechnol. 18: 754-759 (2000) ou P.D. Holler e outros, Proc. Natl. Acad. Sei. U.S.A. 97: 5387-5392 (2000). Uma modalidade da invenção usa "anticorpos de TcR" como um anticorpo solúvel. O sítio de combinação do TcR pode ser identificado através de referência às regiões de CDR e outros resíduos de estrutura usando os mesmos métodos discutidos acima para anticorpos.
Anticorpos recombinantes podem ser anticorpos de comprimento total, fragmentos de anticorpo conhecidos a partir de digestão proteolítica, fragmentos de anticorpo tais como Fv ou Fv com uma única cadeia (scFv), fragmentos com um único domínio, tais como Vh ou Vl, diacorpos, anticorpos com domínio deletado, minicorpos e similares. Um anticorpo Fv tem cerca de 50 kD de tamanho e compreende as regiões variáveis das cadeias leve e pesada. As cadeias leve e pesada podem ser separadamente expressas em bactérias, onde elas se montam em um fragmento Fv.
Alternativamente, as duas cadeias podem ser manipuladas para formar uma ligação dissulfeto intercadeia para proporcionar um dsFv. Um Fv com uma única cadeia ("scFv") é um único polipeptídeo compreendendo os domínios de seqüência Vh e Vl ligados através de uma seqüência Iigante interveniente de modo que, quando o polipeptídeo se duplica, a estrutura terciária resultante imita a estrutura do sítio de ligação a antígeno. Veja J.S. Huston e outros, Proc. Nat. Acad. Sei. U.S.A. 85: 5879-5883 (1988). Anticorpos com um único domínio são as menores unidades de ligação funcionais de anticorpos (aproximadamente 13 kD de tamanho), correspondendo às regiões variáveis das cadeias pesada Vh ou leve VL. Veja Patente U.S. 6.696.245, W004/058821, W004/003019 e W003/002609. Anticorpos com um único domínio são bem expressos em sistemas de expressão de bactéria, Ievedo e outros eucariotas inferiores. Anticorpos com domínio deletado têm um domínio, tal como CH2, deletado com relação ao anticorpo de comprimento total. Em muitos casos, tais anticorpos com domínio deletado, particularmente anticorpos com CH2 deletado, oferecem eliminação aprimorada com relação à suas contrapartes de comprimento total. Diacorpos são formados através da associação de uma primeira proteína de fusão compreendendo dois domínios Vh com uma segunda proteína de fusão compreendendo dois domínios VL. Diacorpos, tais como anticorpos de comprimento total, são bivalentes. Minicorpos são proteínas de fusão compreendendo uma VH, Vl ou scFv ligado ao CH3, seja diretamente ou via uma dobradiça de IgG interveniente. Veja T. Olafsen e outros, Protein Eng. Des. Sei. 17: 315-323 (2004). Minicorpos, tais como anticorpos com domínio deletado, são manipulados para preservar a especificidade de ligação de anticorpos de comprimento total, mas com eliminação aperfeiçoada em virtude de seu menor peso molecular.
Várias técnicas foram desenvolvidas para a produção de fragmentos de anticorpo. Tradicionalmente, esses fragmentos foram derivados via digestão proteolítica de anticorpos intactos (veja, por exemplo, K. Morimoto e K. Inouye, J. Biochem. Biophys. Methods 24: 107-117 (1992); M. Brennan e outros, Science 229: 81-83 (1985)). Contudo, esses fragmentos podem ser agora produzidos diretamente através de células hospedeiras recombinantes. Fragmentos de anticorpo Fab, Fv e scFv podem ser todos expressos em e secretados de E. coli, assim, permitindo a produção fácil de grandes quantidades desses fragmentos. Fragmentos de anticorpo podem ser isolados das bibliotecas de fago de anticorpo discutidas acima. Alternativamente, fragmentos Fab1-SH podem ser diretamente recuperados de E. coli e quimicamente acoplados para formar fragmentos F(ab')2 (P. Carter e outros, Biotechnology 10: 163-167 (1992)). De acordo com outra abordagem, fragmentos F(ab')2 podem ser isolados diretamente a partir de culturas de células hospedeiras recombinantes. Fragmentos Fab e F(ab')2 com meia-vida aumentada in vivo compreendendo um epitopo de ligação a receptor de salvamento são descritos na Patente U.S. N° 5.869.046. Outras técnicas para a produção de fragmentos de anticorpo serão evidentes para aqueles versados.
O sítio de combinação se refere à parte de uma molécula de anticorpo que participa na ligação a antígeno. O sítio de ligação a antígeno é formado pelos resíduos de aminoácido das regiões variáveis ("V") N- terminais das cadeias pesada ("H") e leve ("L"). As regiões variáveis de anticorpo compreendem três trechos altamente divergentes referidos como "regiões hipervariáveis" ou "regiões de determinação de complementaridade" (CDRs), as quais são interpostas entre trechos de flanqueamento mais conservadas conhecidas como "regiões de estrutura" (FRs). Em uma molécula de anticorpo, as três regiões hipervariáveis de uma cadeia curta (LCDR1, LCDR2 e LCDR3) e as três regiões hipervariáveis de uma cadeia pesada (HCDR1, HCDR2 e HCDR3) estão dispostas umas com relação às outras no espaço tridimensional para formar uma superfície ou bolsa de ligação a antígeno. O sítio de combinação de anticorpo, portanto, representa os aminoácidos que compõem as CDRs de um anticorpo e quaisquer resíduos de estrutura que compõem a bolsa do sítio de ligação.
A identidade de resíduos de aminoácido em um anticorpo particular que compõem um sítio de combinação pode ser determinada usando métodos bem-conhecidos na técnica. Por exemplo, CDRs de anticorpo podem ser identificadas como as regiões hipervariáveis originalmente definidas por Kabat e outros. Veja E.A. Kabat e outros, Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5a ed., Public Health Service, NIH1 Washington D.C. (1992). As posições das CDRs também podem ser identificadas como as estruturas de Ioop estrutural originalmente descritas por Chothia e outros. Veja, por exemplo, C. Chothia e A.M. Lesk, J. Mol. Biol. 196: 901-917 (1987); C. Chothia e outros, Nature 342: 877-883 (1989); e A. Tramontano e outros, J. Mol. Biol. 215: 175-182 (1990). Outros métodos incluem a "definição AbM", a qual é um compromisso entre Kabat e Chotia e é derivada usando o software de modelamento de anticorpo Molecular's Oxford AbM (agora Accelrys) ou a "definição de contato" de CDRs apresentada em R.M. MacCaIIum e outros, J. Mol. Biol. 262: 732-745 (1996). A tabela a seguir identifica CDRs baseado em várias definições conhecidas:
CDR Kabat AbM
L1 L24-L34 L24-L34
L2 L50-L56 L50-L56
L3 L89-L97 L89-L97
H26-H35B
H1 (numeração H31-H35B de Kabat)
H1 (numeração H31-H35 de Chothia)
H2 H50-H56
H3 H95-H102
Chothia
L24-L34 L50-L56 L89-L97 H26-H32..H34
Contato
L30-L36 L46-L55 L89-L96 H30-H35B
H26-H35
H26-H32
H30-H35
H50-H58 H52-H56 H47-H58
H95-H102 H95-H102 H93-H101
Diretrizes gerais pelas quais se pode identificar as CDRs em um anticorpo a partir da seqüência apenas são como seguem:
LCDR1:
Início - aproximadamente o resíduo 24. O resíduo anterior é sempre uma Cys.
O resíduo posterior é sempre um Trp1 tipicamente seguido por Tyr-Gln1 mas também seguido por Leu-Gln, Phe-Gln ou Tyr-Leu.
O comprimento é 10 a 17 resíduos.
LCDR2:
Início - 16 resíduos após o final de L1.
A seqüência anterior é geralmente Ile-Tyr1 mas também pode ser Val-Tyr1 Ile-Lys ou Ile-Phe.
O comprimento é geralmente de 7 resíduos.
LCDR3:
Início - 33 resíduos após o final de L2.
O resíduo anterior é uma Cys.
A seqüência posterior é Phe-Gly-X-Gly.
O comprimento é 7 a 11 resíduos.
HCDR1:
Início - aproximadamente o resíduo 26, quatro resíduos após uma Cys sob as definições de Chothia/AbM; o início é 5 resíduos depois sob a definição de Kabat.
A seqüência anterior é Cys-X-X-X.
O resíduo posterior é um Trp1 tipicamente seguido por Vai, mas também seguido por Ile ou Ala.
O comprimento é 10 a 12 resíduos sob a definição AbM; a definição de Chothia exclui os 4 últimos resíduos.
HCDR2:
Início -15 resíduos após o final da definição de Kabat /AbM de CDR-H1.
A seqüência anterior é, tipicamente, Leu-Glu-Trp-Ile-Gly, mas uma série de variações são possíveis.
A seqüência posterior é Lys/Arg-Leu/lleA/al/Phe/Thr/Ala- Thr/Ser/lle/Ala.
O comprimento é 16 a 19 resíduos sob a definição de Kabat; a definição AbM exclui os 7 últimos resíduos. HCDR3:
Início -33 resíduos após o final da CDR-H2 (dois resíduos após uma Cys).
A seqüência anterior é Cys-X-X (tipicamente Cys-Ala-Arg).
A seqüência posterior é Trp-Gly-X-Gly.
O comprimento é 3 a 25 resíduos.
A identidade dos resíduos de aminoácido em um anticorpo em particular que estão fora das CDRs mas, todavia, compõem parte do sítio de combinação por terem uma cadeia lateral que é parte do revestimento do sítio de combinação (isto é, que está disponível para ligação através do sítio de combinação) pode ser determinada usando métodos bem-conhecidos na técnica, tais como modelamento molecular e cristalografia de raios X. Veja, por exemplo, L. Riechmann e outros, Nature 332: 323-327 (1988).
Conforme discutido, anticorpos que podem ser usados no preparo de compostos de direcionamento de GA baseados em anticorpo requerem uma cadeia lateral reativa no sítio de combinação do anticorpo. Uma cadeia lateral reativa pode estar presente naturalmente ou pode ser colocada em um anticorpo através de mutação. O resíduo reativo do sítio de combinação do anticorpo pode estar associado ao anticorpo, tal como quando o resíduo é codificado por um ácido nucleico presente na célula linfóide primeiro identificada como compondo o anticorpo. Alternativamente, o resíduo de aminoácido pode se originar através de mutação proposital do DNA de modo a codificar o resíduo em particular (veja, por exemplo, WO 01/22922). O resíduo reativo pode ser um resíduo não natural que se origina, por exemplo, através de incorporação biossintética usando um códon único, tRNA e aminoacil-tRNA, conforme discutido aqui. Em outra abordagem, o resíduo de aminoácido ou seus grupos funcionais reativos (por exemplo, um grupo amino nucleofílico ou grupo sulfidrila) pode ser preso a um resíduo de aminoácido no sítio de combinação de anticorpo. Assim, ligação covalente com o anticorpo que ocorre "através de um resíduo de aminoácido em um sítio de combinação de um anticorpo", conforme usado aqui, significa que a ligação pode ser diretamente a um resíduo de aminoácido de um sítio de combinação de anticorpo ou através de uma porção química que é ligada à cadeia lateral de um resíduo de aminoácido de um sítio de combinação de anticorpo.
Anticorpos catalíticos são uma fonte de anticorpos com sítios de combinação que compreendem uma ou mais cadeias laterais de aminoácido reativas. Tais anticorpos incluem anticorpos de aldolase, anticorpos de beta- lactama, anticorpos de esterase, anticorpos de amidase e similares.
Uma modalidade compreende um anticorpo de aldolase, tal como o anticorpo monoclonal de camundongo mAb 38C2 ou mAb 33F12, bem como versões quiméricas e adequadamente humanizadas de tais anticorpos. O mAb 38C2 de camundongo tem uma Iisina reativa proximo, mas externamente à HCDR3 e é o protótipo de uma nova classe de antibióticos catalíticos que foram gerados através de imunização reativa e imitam mecanisticamente as enzimas aldolase naturais. Veja C.F. Barbas 3o e outros, Science 278: 2085-2092 (1997)). Outros anticorpos catalíticos de aldolase que podem ser usados incluem os anticorpos produzidos pelo hibridoma 85A2, tendo número de acesso à ATCC PTA-1015; hibridoma 85C7, tendo número de acesso à PTA-1014; hibridoma 92F9, tendo número de acesso à PTA-1017; hibridoma 93F3, tendo número de acesso à ATCC PTA-823; hibridoma 84G3, tendo número de acesso à PTA-824; hibridoma 84G11, tendo número de acesso à PTA-1018; hibridoma 84H9, tendo número de acesso à PTA-1019; hibridoma 85H6, tendo número de acesso à PTA-825; hibridoma 90G8, tendo número de acesso à PTA-1016. Através de uma Iisina reativa, esses anticorpos catalisam reações de aldol e retro-aldol usando o mecanismo de enamina de aldolases naturais. Veja, por exemplo, J. Wagner e outros, Science 270: 1797-1800 (1995); C.F. Barbas 3o e outros, Science 278: 2085-2092 (1997); G. Zhong e outros, Angew. Chem. Int. Ed. Engl. 38: 3738-3741 (1999); A. Karlstrom e outros, Proc. Natl. Acad. Sei. U.S.A., 97: 3878-3883 (2000). Anticorpos de aldolase e métodos de geração de anticorpos de aldolase são descritos nas Patentes U.S. N— 6.210.938, 6.368.839, 6.326.176, 6.589.766, 5.985.626 e 5.733.757.
Compostos de direcionamento de GA podem também ser formados através de ligação de um agente de direcionamento de GA a uma cisteína reativa, tal como aquela encontrada nos sítios de combinação de anticorpos catalíticos de tioesterase e esterase. Anticorpos catalíticos de tioesterase adequados são descritos por K.D. Janda e outros, Proc. Natl. Acad. Sei. U.S.A. 91: 2532-2536 (1994). Anticorpos catalíticos de esterase adequados são descritos por P. Wirsching e outros, Science 270: 1775-1782 (1995). Anticorpos contendo aminoácido reativo podem ser preparados através de meios bem-conhecidos na técnica, incluindo mutação de um resíduo do sítio de combinação do anticorpo para codificar o aminoácido reativo ou derivatização química de uma cadeia lateral de aminoácido em um sítio de combinação de anticorpo com um Iigante que contém o grupo reativo.
Anticorpos adequados para uso aqui podem ser obtidos através de imunização convencional, imunização reativa in vivo ou através de seleção reativa in vitro, tal como com phage display. Anticorpos podem ser produzidos em seres humanos ou outras espécies animais. Anticorpos de uma espécie animal podem ser modificados para refletir outra espécie animal. Por exemplo, anticorpos quiméricos humanos são aqueles nos quais pelo menos uma região do anticorpo é de uma imunoglobulina humana. Um anticorpo quimérico humano é, tipicamente, entendido como tendo regiões variáveis de um animal não-humano, por exemplo, um roedor, com as regiões constantes de um ser humano. Em contraste, um anticorpo humanizado usa CDRs do anticorpo não-humano com a maioria ou todas as regiões de estrutura variáveis e todas as regiões constantes de uma imunoglobulina humana. Anticorpos quiméricos e humanizados podem ser preparados através de métodos bem-conhecidos na técnica, incluindo abordagens de enxertagem de CDR (veja, por exemplo, N. Hardman e colaboradores, Int. J. Câncer 44: 424-433 (1989); C. Queen e outros, Proc. Natl. Acad. Sei. U.S.A. 86: 10029-10033 (1989)), estratégias de embaralhamento de cadeia (veja, por exemplo, Rader e outros, Proc. Natl. Acad. Sei. U.S.A. 95: 8910-8915 (1998), estratégias de modelamento molecular (veja, por exemplo, M.A. Roguska e outros, Proc. Natl. Acad. Sei. U.S.A. 91: 969-973 (1994)) e similares.
Métodos para humanização de anticorpos não-humanos foram descritos na técnica. De preferência, um anticorpo humanizado tem um ou mais resíduos de aminoácido introduzidos no mesmo a partir de uma fonte a õ qual é não-humana. Esses resíduos de aminoácido não-humanos são, freqüentemente, referidos como resíduos "importados" os quais são, tipicamente, tomados de um domínio variável "importado". Humanização pode ser essencialmente realizada seguindo os métodos de Winter e colaboradores (veja, por exemplo, P.T. Jones e outros, Nature 321: 522-525 (1986); L. Riechmann e outros, Nature 332: 323-327 (1988); M. Verhoeyen e outros, Science 239: 1534-1536 (1988)) através de substituição de seqüências da região hipervariável pelas seqüências correspondentes de um anticorpo humano. Consequentemente, tais anticorpos "humanizados" são anticorpos quiméricos (S. Cabilly e outros, Proc. Natl. Acad. Sei. U.S.A. 81: 3273-3277 (1984)), em que substancialmente menos do que um domínio variável humano intacto foi substituído pela seqüência correspondente de uma espécie não-humana. Na prática, anticorpos humanizados são, tipicamente, anticorpos humanos nos quais alguns resíduos da região variável e possivelmente alguns resíduos da estrutura (FR) são substituídos por resíduos de sítios análogos em anticorpos de roedor.
A escolha de domínios variáveis humanos, leve e pesado, a serem usados na fabricação de anticorpos humanizados é muito importante para reduzir a antigenicidade e resposta de antianticorpo de anticamundongo humano (HAMA) quando o anticorpo se destina a uso terapêutico humano. De acordo com o assim denominado método de "melhor adaptação", o domínio variável humano utilizado para humanização é selecionado de uma biblioteca de domínios conhecidos baseado em um alto grau de homologia com a região variável de roedor de interesse (M.J. Sims e outros, J. Immunol., 151: 2296-2308 (1993); M. Chotia e A.M. Lesk, J. Mol. Biol. 196: 901-917 (1987)). Outro método usa uma região de estrutura derivada da seqüência de consenso de todos os anticorpos humanos de um subgrupo particular de cadeias curtas ou pesadas. A mesma estrutura pode ser usada para vários anticorpos humanizados diferentes (veja, por exemplo, P. Carter e outros, Proc. Natl. Acad. Sei. U.S.A. 89: 4285-4289 (1992); L.G. Presta e colaboradores, J. Immunol., 151: 2623-2632(1993)).
É ainda importante que anticorpos sejam humanizados com retenção da alta afinidade de ligação pelo grupo Z. Para obter esse objetivo, de acordo com um método, anticorpos humanizados são preparados através de análise das seqüências precursoras e vários produtos humanizados conceituais usando modelos tridimensionais das seqüências precursora e humanizada. Modelos de imunoglobulina tridimensionais estão comumente disponíveis e são familiares para aqueles versados na técnica. Programas de computador estão disponíveis, os quais ilustram e visualizam prováveis estruturas conformacionais tridimensionais das seqüências de imunoglobulina candidatas selecionadas. Inspeção dessas visualizações permite análise de papéis simultâneos dos resíduos no funcionamento da seqüência de imunoglobulina candidata com relação à ligação ao grupo Z. Dessa forma, resíduos de FR podem ser selecionados e combinados a partir das seqüências recipientes e importadas, de modo que a característica desejada do anticorpo, tal como afinidade aumentada pelo(s) antígeno(s)- alvo, seja obtida.
Várias formas de anticorpos de aldolase de murino humanizados são consideradas. Uma modalidade usa o anticorpo catalítico de aldolase humanizado IgGI h38c2 ou Fab e h38c2 com os domínios constantes humanos Ck e Cy11. C. Rader e colaboradores, J. Mol. Bio. 332: 889-899 (2003) divulgam as seqüências gênicas e vetores que podem ser usados para produzir o Fab de h38c2 e IgGI h38c2. As seqüências de cadeia curta e pesada de IgGI h38c2 são mostradas na figura 33. A figura 6 ilustra um alinhamento de seqüência entre as cadeias variáveis leve e pesada no m38c2 (SEQ ID NO: 77 e 78, respectivamente), h38c2 (SEQ ID NOs: 79 e 80, respectivamente) e linhagens germinativas humanas. O gene de linhagem germinativa de Vk humana DPK-9 (SEQ ID NO: 81) e o gene de Jk JK4 humano (SEQ ID NO: 83) foram usados como as estruturas para a humanização do domínio variável de cadeia curta kappa e o gene de linhagem germinativa humana DP-47 (SEQ ID NO: 82) e o gene de Jh JH4 humano (SEQ ID NO: 84) foram usados como as estruturas para a humanização do domínio variável de cadeia pesada do m38c2. h38c2 pode também usar os domínios constantes de lgG2, lgG3 ou lgG4, incluindo qualquer um dos alótipos das mesmas. Uma modalidade de IgGI h38c2 usa o alotipo G1m(f). Outra modalidade usa um anticorpo quimérico compreendendo os domínios variáveis (VL e Vh ) de h38c2 e os domínios constantes de uma IgGI, lgG2, lgG3 ou lgG4.
Várias formas de fragmentos de anticorpo de aldolase são também consideradas. Uma modalidade usa h38c2 F(ab')2. h38c2 F(ab')2 pode ser produzido através da digestão proteolítica de IgGI h38c2. Outra modalidade usa um scFv de h38c2 compreendendo os domínios Vl e Vh de h38c2, os quais são opcionalmente conectados pelo Iigante interveniente. (GIy4Ser)3.
Como uma alternativa à humanização, anticorpos humanos podem ser gerados. Por exemplo, agora é possível produzir animais transgênicos (por exemplo, camundongos) que são capazes, quando de imunização (ou imunização reativa no caso de anticorpos catalíticos), de produzir um repertório completo de anticorpos humanos na ausência de produção de imunoglobulina endógena. Por exemplo, foi descrito que a deleção homozigótica do gene da região de união de cadeia pesada de anticorpo (Jh) em arranjo de gene de imunoglobulina de linhagem germinativa e quimérico em tais camundongos com linhagem germinativa mutante resultará na produção de anticorpos humanos quando de estímulo com antígeno. Veja, por exemplo, A. Jakobovits e colaboradores, Proc. Natl. Acad. Sei. U.S.A. 90: 2551-2555 (1993); A. Jakobovits e colaboradores, Nature 362: 255-258 (1993); M. Bruggemann e colaboradores, Year Immunol. 7: 33-40 (1993); L.D. Taylor e colaboradores, Nucleic Acids Res. 30 20: 6287-6295 (1992); M. Bruggemann e colaboradores, Proc. Natl. Acad. Sei. U.S.A. 86: 6709-6713 (1989)); e WO 97/17852.
Diferente da derivatização química típica de anticorpo, aqueles derivatizados a partir de imunização podem ser especificamente rotulados em seu sítio de ligação em uma posição definida, facilitando a preparação rápida e controlada de um produto homogêneo. Além disso, diferente da derivatização química de anticorpos, aqueles derivados a partir de imunização com 1,3-dicetonas são reversíveis. Em virtude dessa reversibilidade, um derivado de dicetona de um composto de direcionamento de GA ligado ao mAb 38C2 pode ser liberado do anticorpo através de competição com o hapteno de ligação covalente JW (veja J. Wagner e colaboradores, Science 270: 1797-1800 (1995)) ou compostos relacionados. Isso permite neutralizar imediatamente o conjugado in vivo no caso de reação adversa. Alternativamente, ligação covalente não-reversível é possível, tal como com anticorpos de aldolase e derivados de beta-lactama do composto de direcionamento. Diferente dos anticorpos anti-hapteno típicos, anticorpos com ligação covalente de dicetona têm a vantagem de que a ligação covalente que é formada entre a dicetona e o anticorpo tem um pH entre 3 e 11. A estabilidade adicionada de anticorpos covaIentemente ligados a seu agente de direcionamento proporcionará vantagens adicionais em termos de formulação, distribuição e armazenamento a longo prazo.
Alternativamente, a tecnologia de expor o fago (veja, por exemplo, J. McCafferty e colaboradores, Nature 348: 552-553 (1990)) pode ser usada para produzir anticorpos humanos e fragmentos de anticorpo in vitro usando repertórios de gene de domínio variável (V) de imunoglobulina a partir de doadores não-imunizados. De acordo com essa técnica, os genes de domínio V de anticorpo são clonados em-rede em um gene de proteína de envoltório principal ou não de um bacteriófago filamentoso, tal como M13 ou fd, e visualizados como fragmentos de anticorpo funcionais sobre a superfície da partícula de fago. Em virtude do fato de a partícula filamentosa conter uma cópia do DNA de fita simples do genoma do fago, seleções baseadas nas propriedades funcionais do anticorpo também resultam em seleção do gene que codifica o anticorpo exibindo essas propriedades. Assim, o fago imita algumas das propriedades da célula B. Phage display pode ser realizado em uma variedade de formatos e é revisto, por exemplo, em K.S. Johnson e D.J. Chiswell, Curr. Opin. Struct. Biol. 3: 564-571 (1993). Várias fontes de segmentos de gene-V podem ser usadas para phage display. T. Clackson e colaboradores, Nature 352: 624-628 (1991) isolaram uma série diversa de anticorpos antioxazolona a partir de uma pequena biblioteca combinatorial aleatória de genes V derivados dos baços de camundongos imunizados. Um repertório de genes V de doadores humanos não-imunizados pode ser construído e anticorpos a uma série diversa de antígenos (incluindo autoantígenos) podem ser isolados seguindo essencialmente as técnicas descritas por J.D. Marks e colaboradores, J. Mol. Biol. 222: 581-597 (1991) ou A.D. Griffiths e colaboradores, EMBO J. 12: 725-734 (1993). Veja também Patentes U.S. N2s 5.565.332 e 5.573.905; f, e L.S. Jespers e colaboradores, Biotechnology 12: 899-903 (1994).
Conforme indicado acima, anticorpos humanos também podem ser gerados por células B ativadas in vitro. Veja, por exemplo, Patentes U.S. N— 5.567.610 e 5.229.275; e C.A.K. Borrebaeck e colaboradores, Proc. Natl. Acad. Sei. U.S.A. 85: 3995-3999 (1988).
Modificações da seqüência de aminoácido dos anticorpos descritos aqui são consideradas. Por exemplo, pode ser desejável melhorar a afinidade de ligação e/ou outras propriedades biológicas do anticorpo. Variantes de seqüência de aminoácido de um anticorpo são preparadas através de introdução de alterações de nucleotídeo apropriadas no ácido nucleico do anticorpo ou através de síntese de peptídeo. Tais modificações incluem, por exemplo, deleções de, inserções em e/ou substituições de resíduos dentro da seqüência de aminoácido do anticorpo. Qualquer combinação de deleção, inserção e substituição é feita para chegar ao construto final, contanto que o construto final possua as características desejadas. As alterações de aminoácido também podem alterar processos pós-traducionais do anticorpo, tal como alteração do número ou posição de sítios de glicosilação.
Um método útil para a identificação de determinados resíduos ou regiões de um anticorpo que são locais preferidos para mutagênese é denominado "mutagênese por exame de alanina", conforme descrito em B.C. Cunningham e J.A. Wells, Science 244: 1081-1085 (1989). Aqui, um resíduo ou grupo de resíduos-alvo é identificado (por exemplo, resíduos carregados tais como Arg1 Asp1 His, Lys e Glu) e substituído por um aminoácido neutro ou negativamente carregado (mais preferivelmente Ala ou Polialanina) para realizar interação dos aminoácidos com o grupo Z do ligante. Aqueles locais de aminoácido que demonstram sensibilidade funcional às substituições são, então, refinados através de introdução dessas e outras variantes em ou para os sítios de substituição. Assim, embora o sítio para introdução de uma variação de seqüência de aminoácido seja predeterminado, a natureza da mutação per se não precisa ser determinada. Por exemplo, para analisar o desempenho de uma I mutação em um determinado local, mutagênese aleatória ou por exploração de alanina é conduzida no códon ou região-alvo e variantes de anticorpo expressas são selecionadas com relação à capacidade de formar uma ligação covalente com Z.
Inserções de seqüência de aminoácido incluem fusões amino- e/ou carboxila-terminais no comprimento a partir de um resíduo em polipeptídeos contendo cem ou mais resíduos, bem como inserções intrassequências de um único ou múltiplos resíduos de aminoácido. Exemplos de inserções terminais incluem um anticorpo com um resíduo de metionila N-terminal ou o anticorpo fundido a um polipeptídeo citotoxico. Outras variantes insercionais de uma molécula de anticorpo incluem a fusão, ao N- ou C-término de um anticorpo, de uma enzima ou um polipeptídeo o qual aumenta a meia-vida no soro do anticorpo.
Outro tipo de variante é uma variante com substituição de aminoácido. Essas variantes têm pelo menos um resíduo de aminoácido em um molécula de anticorpo substituída por um resíduo diferente. Os sítios de maior interesse para mutagênese por substituição incluem as regiões hipervariáveis, mas alterações de FR são também consideradas. Substituições conservativas são mostradas na tabela abaixo sob o cabeçalho "substituições preferidas". Se tais substituições resultam em uma alteração na atividade biológica, então, alterações mais substanciais, denominadas "substituições exemplificativas", conforme ainda descrito abaixo em referência às classes de aminoácido, podem ser introduzidas e os produtos selecionados.
Modificações substanciais nas propriedades biológicas do anticorpo são realizadas selecionando substituições que diferem significativamente quanto a seu efeito sobre a manutenção de (a) a estrutura da estrutura principal polipeptídica na área da substituição, por exemplo, como uma conformação em folha ou helicoidal, (b) a carga ou hidrofobicidade da molécula no sítio-alvo ou (c) o volume da cadeia lateral. Resíduos que ocorrem naturalmente são divididos em grupos baseados nas propriedades comuns da cadeia lateral:
(1) hidrofóbicos: Nle, Met, Ala, Vai, Leu, lie;
(2) hidrofílicos neutros: Cys, Ser, Thr;
(3) ácidos: Asp, Glu;
(4) básicos: Asn1 Gln1 His, Lys1 Arg;
(5) resíduos que influenciam a orientação de cadeia: Gly1 Pro; e
(6) aromáticos: Trp, Tyr, Phe.
Substituições não-conservativas requererão a troca de um membro de uma dessas classes por um membro de outra classe.
Qualquer resíduo de cisteína não envolvido em manutenção da conformação apropriada do anticorpo pode ser substituído, geralmente por serina, para melhorar a estabilidade oxidativa da molécula e prevenir reticulação anormal. Inversamente, ligação(ões) de cisteína pode(m) ser adicionada(s) ao anticorpo para melhorar sua estabilidade (particularmente onde o anticorpo é um fragmento de anticorpo, tal como um fragmento Fv).
Um tipo de variante com substituição envolve substituição de um ou mais resíduos de região hipervariável de um anticorpo precursor (por exemplo, um anticorpo humanizado ou humano). Geralmente, a(s) variante(s) resultante(s) selecionada(s) para desenvolvimento adicional terá(ão) propriedades biológicas aperfeiçoadas com relação ao anticorpo precursor do qual ela(s) é(são) gerada(s). Uma forma conveniente para a geração de tais variantes com substituição envolve maturação por afinidade usando phage display. Resumidamente, vários sítios de região hipervariável (por exemplo, 6-7 sítios) sofrem mutação para gerar todas as possíveis substituições de aminoácido em cada sítio. As variantes de anticorpo assim geradas são visualizadas de um modo monovalente a partir de partículas de fago filamentosas como fusões ao produto do gene !!! de Ml 3 acondicionado dentro de cada partícula. As variantes visualizadas em fago são, então, selecionadas com relação à sua atividade biológica (por exemplo, afinidade de ligação) conforme divulgado aqui. De forma a identificar sítios da região hipervariável candidatos para modificação, mutagênese por exploração de alanina pode ser realizada para identificar resíduos da região hipervariável que contribuem significativamente para a ligação de antígeno. Alternativa ou adicionalmente, pode ser benéfico analisar uma estrutura do complexo de conjugado de anticorpo para identificar pontos de contato entre o anticorpo e o grupo Z. Tais resíduos de contato e resíduos vizinhos são candidatos para substituição de acordo com as técnicas elaboradas aqui. Uma vez que tais variantes são geradas, o painel de variantes é submetido à seleção conforme descrito aqui e anticorpos com propriedades superiores em um ou mais ensaios relevantes podem ser selecionados para desenvolvimento adicional.
Outro tipo de variante de aminoácido do anticorpo altera o padrão original de glicosilação do anticorpo através de deleção de uma ou mais porções carboidrato encontradas no anticorpo e/ou a adição de um ou mais sítios de glicosilação que não estão presentes no anticorpo.
A glicosilação de anticorpos é, tipicamente, N-Iigada ou O-ligada. N-ligada se refere à fixação da porção carboidrato à cadeia lateral de um resíduo de asparagina. As seqüências tripeptídicas Asn-X-Ser e Asn-X-Thr, onde X é qualquer aminoácido exceto prolina, são as seqüências de reconhecimento para fixação enzimática da porção carboidrato à cadeia lateral de asparagina. Assim, a presença dessas seqüências tripeptídicas em um polipeptídeo cria um sítio de glicosilação potencial. Glicosilação O- ligada se refere à fixação de um dos açúcares N-acetilgalactosamina, galactose ou xilose a um hidróxi aminoácido, mais comumente serina ou treonina, embora 5-hidroxiprolina ou 5-hidroxilisina também possam ser usadas.
A adição de sítios de glicosilação ao anticorpo é, convenientemente, realizada alterando a seqüência de aminoácido, de modo que ela contenha uma ou mais das seqüências tripeptídicas acima descritas (para sítios de glicosilação N-ligados). A alteração também pode ser feita através da adição de ou substituição por um ou mais resíduos de serina ou treonina à seqüência do anticorpo original (para sítios de glicosilação O- ligados).
Também pode ser desejável modificar um anticorpo da invenção com relação à função efetuadora, por exemplo, para intensificar ou diminuir a citotoxicidade célula-mediada anticorpo-dependente (ADCC) e/ou citotoxicidade complemento-dependente (CDC) do anticorpo. Isso pode ser obtido introduzindo uma ou mais substituições de aminoácido em uma região Fc do anticorpo. Alternativamente, um anticorpo pode ser manipulado, o qual tem duplas regiões e pode, desse modo, ter lise de complemento e capacidades de ADCC intensificadas. Veja G.T. Stevenson e colaboradores, Anticancer Drug Des. 3: 219-230 (1989).
Para aumentar a meia-vida no soro de um anticorpo, pode-se incorporar um epitopo de ligação a receptor de salvamento no anticorpo (especialmente um fragmento de anticorpo), conforme descrito na Patente U.S. N° 5.739.277, por exemplo. Conforme usado aqui, o termo "epitopo de ligação a receptor de salvamento" se refere a um epitopo da região Fc de uma molécula de IgG (por exemplo, IgG1, IgG2, IgG3 ou IgG/j) que é responsável por aumento da meia-vida no soro in vivo da molécula de IgG.
Substituições de aminoácido
<table>table see original document page 97</column></row><table> <table>table see original document page 98</column></row><table>
Um agente de direcionamento de GA1 conforme descrito aqui, pode ser covalentemente ligado a um sítio de combinação em um anticorpo diretamente ou via um ligante. Um Iigante apropriado pode ser escolhido para proporcionar distância suficiente entre o agente de direcionamento e o anticorpo. O design geral de uma modalidade de um ligante para uso na preparação de compostos de direcionamento de GA é mostrado na fórmula: X - Y - Z, em que X é uma cadeia de conexão, Y é um grupo de reconhecimento e Z é um grupo reativo. O ligante pode ser linear ou ramificado e inclui, opcionalmente, um ou mais grupos carbocíclicos ou heterocíclicos. O comprimento do ligante pode ser encarado em termos do número de átomos lineares, com porções cíclicas, tais como anéis aromáticos e similares, sendo contadas tomando-se a via mais curta em torno do anel. Em determinadas modalidades, o ligante tem um trecho linear de entre 5-15 átomos, em outras modalidades 15-30 átomos, em ainda outras modalidades 30-50 átomos, em ainda outras modalidades 50-100 átomos e, em ainda outras modalidades, 100-200 átomos. Outras considerações quanto ao ligante incluem o efeito sobre as propriedades físicas ou farmacocinéticos do composto de direcionamento de GA ou agente de direcionamento de GA-ligante, solubilidade, lipofilicidade, hidrofilicidade, hidrofobicidade, estabilidade (mais ou menos estável, bem como degradação planejada), rigidez, flexibilidade, imunogenicidade, modulação de ligação de anticorpo, a capacidade de ser incorporado em uma micela ou Iipossoma e similares.
A cadeia de conexão X do Iigante inclui qualquer átomo do grupo C, Η, Ν, O, P, S, halogênio (F, Cl, Br, I) ou um sal do mesmo. X também pode incluir um grupo tal como um grupo alquila, alquenila, alquinila, oxoalquila, oxoalquenila, oxoalquinila, aminoalquila, aminoalquenila, aminoalquinila, sulfoalquila, sulfoalquenila, sulfoalquinila, fosfoalquila, fosfoalquenila ou fosfoalquinila. Em algumas modalidades, X pode incluir uma ou mais estruturas de anel. Em algumas modalidades, o ligante é um polímero de repetição, tal como polietileno glicol compreendendo 2-100 unidades.
O grupo de reconhecimento Y do ligante é opcional e, se presente, está localizado entre o grupo reativo e a cadeia de conexão. Em algumas modalidades, está localizado de 1-20 átomos de Z. Embora não desejando estar preso por qualquer teoria, acredita-se que o grupo de reconhecimento atua para posicionar adequadamente o grupo reativo no sítio de combinação de anticorpo, de modo que ele reaja com uma cadeia lateral de aminoácido reativa. Grupos de reconhecimento exemplificativos incluem anéis carbocíclicos e heterocíclicos, de preferência tendo cinco ou seis átomos. Contudo, estruturas de anel maiores também podem ser usadas. Em algumas modalidades, um agente de direcionamento de GA é ligado diretamente a Y sem o uso de um Iigante interveniente.
Z é capaz de formação de uma ligação covalente com uma cadeia lateral reativa em sítio de combinação de um anticorpo. Em algumas modalidades, Z inclui um ou mais grupos C = O dispostos para formar uma dicetona, um acil beta-lactama, um éster ativo, uma halocetona, um grupo ciclo-hexil dicetona, um aldeído, uma maleimida, um alceno ativado, um alcino ativado ou, em geral, uma molécula compreendendo um grupo de saída suscetível a deslocamento nucleofílico ou eletrofílico. Outros grupos podem incluir uma lactona, um anidrido, uma alfa-haloacetamida, uma imina, uma hidrazida ou um epóxido. Grupos reativos eletrofílicos Iigantes exemplificativos que podem ser covalentemente ligados a um grupo nucleofílico reativo (por exemplo, uma cadeia lateral de Iisina ou cisteína) em um sítio de combinação de um anticorpo incluem acil beta-lactama, dicetona simples, éster ativo de succinimida, maleimida, haloacetamida com ligante, halocetona, ciclo-hexil dicetona, aldeído, amidina, guanidina, imina, enamina, fosfato, fosfonato, epóxido, aziridina, tioepoxido, uma dicetona disfarçada ou protegida (cetal, por exemplo), lactama, sulfonato e similares, grupos C=O disfarçados, tais como iminas, cetais, acetais e qualquer outro grupo eletrofílico conhecido. Em uma modalidade, o grupo reativo inclui um ou mais grupos C=O dispostos para formar uma acil beta-lactama, dicetona simples, éster ativo de succinimida, maleimida, haloacetamida com ligante, halocetona, ciclo-hexil dicetona ou aldeído.
O grupo reativo ligante ou grupo reativo similar é escolhido para uso com um resíduo reativo em um sítio de combinação em particular. Por exemplo, uma porção química para modificação através de um anticorpo de aldolase pode ser uma cetona, dicetona, beta lactama, halocetona de éster ativo, lactona, anidrido, maleimida, alfa-haloacetamida, ciclo-hexil dicetona, epóxido, aldeído, amidina, guanidina, imina, enamina, fosfato, fosfonato, epóxido, aziridina, tioepoxido, dicetona disfarçada ou protegida (cetal, por exemplo), lactama, halocetona, aldeído e similares.
Uma porção química de grupo reativo ligante adequada para modificação covalente através de um grupo sulfidrila reativo em um anticorpo pode ser um dissulfeto, haleto de arila, maleimida, alfa- haloacetamida, isocianato, epóxido, tioéster, éster ativo, amidina, guanidina, imina, enamina, fosfato, fosfonato, epóxido, aziridina, tioepoxido, dicetona disfarçada ou protegida (cetal, por exemplo), lactama, halocetona, aldeído e similares.
Aqueles versados na técnica apreciarão prontamente que cadeias laterais de aminoácido reativas em sítios de combinação de anticorpo podem possuir um grupo eletrofílico que reage com um grupo nucleofílico sobre um agente de direcionamento de GA ou seu Iigante enquanto que, em outras modalidades, um grupo nucleofílico reativo em uma cadeia lateral de aminoácido reage com um grupo eletrofílico em um agente de direcionamento de GA ou ligante.
Um composto de direcionamento de GA pode ser preparado através de várias abordagens. Em uma abordagem, um composto de agente de direcionamento de GA-Iigante é sintetizado com um ligante que inclui um ou mais grupos reativos criados para reação covalente com uma cadeia lateral de um aminoácido em um sítio de combinação de um anticorpo. O agente de direcionamento-composto ligante e anticorpo são combinados sob condições onde o grupo reativo ligante forma uma ligação covalente com a cadeia lateral de aminoácido.
Em outra abordagem, a ligação pode ser obtida através de síntese de um anticorpo-composto ligante compreendendo um anticorpo e um ligante, em que o ligante inclui um ou mais grupos reativos criados para reação covalente com uma porção química apropriada de um agente de direcionamento de GA. Um agente de direcionamento de GA pode precisar ser modificado para proporcionar a porção apropriada para reação com o grupo reativo ligante. O anticorpo-ligante e agente de direcionamento de GA são combinados sob condições onde o grupo reativo ligante se liga covalentemente ao agente de direcionamento e/ou biológico.
Uma outra abordagem para formação de um composto de direcionamento de GA-anticorpo usa um design de ligante duplo. Em uma modalidade, um agente de direcionamento de GA-composto ligante é sintetizado, o qual compreende um agente de direcionamento de GA e um ligante com um grupo reativo. Um anticorpo-composto ligante é sintetizado, o qual compreende um anticorpo e um ligante com um grupo químico suscetível de reatividade com o grupo reativo do agente de direcionamento de GA-Iigante da primeira etapa. Esses dois Iigantes contendo compostos são, então, combinados sob condições pelas quais os Iigantes se ligam covalentemente, formando o anticorpo-composto de direcionamento de GA.
Grupos funcionais exemplificativos que podem estar envolvidos na ligação incluem, por exemplo, ésteres, amidas, éteres, fosfatos, amino, ceto, amidina, guanidina, iminas, enaminas, fosfatos, fosfonatos, epoxidos, aziridinas, tioepoxidos, dicetonas disfarçadas ou protegidas (cetais por exemplo), lactamas, halocetonas, aldeídos, tiocarbamato, tioamida, tioéster, sulfeto, dissulfeto, fosforamida, sulfonamida, uréia, tioureia, carbamato, carbonato, hidroxilamina e similares.
O ligante inclui qualquer átomo do grupo C, Η, Ν, O, P, S, halogênio (F, Cl, Br, I) ou um sal do mesmo. O Iigante também pode incluir um grupo tal como um grupo alquila, alquenila, alquinila, oxoalquila, oxoalquenila, oxoalquinila, aminoalquila, aminoalquenila, aminoalquinila, sulfoalquila, sulfoalquenila, sulfoalquinila, fosfoalquila, fosfoalquenila ou fosfoalquinila. O Iigante também pode incluir uma ou mais estruturas de anel. Conforme usado aqui, uma "estrutura de anel" inclui anéis carbocíclicos saturados, insaturados e aromáticos e anéis heterocíclicos saturados, insaturados e aromáticos. As estruturas de anel podem ser mono-, bi- ou policíclicas e incluem anéis fundidos ou não fundidos. Ainda, as estruturas de anel são opcionalmente substituídas por grupos funcionais bem conhecidos na técnica incluindo, mas não limitado a um grupo halogênio, oxo, -OH, -CHO, -COOH, -NO2, -CN, -NH2, -C(O)NH2, C^6 alquila, C2-6 alquenila, C2-6 alquinila, C^6 oxoalquila, oxoalquenila, oxoalquinila, aminoalquila, aminoalquenila, aminoalquinila, sulfoalquila, sulfoalquenila, sulfoalquinila, fosfoalquila, fosfoalquenila ou fosfoalquinila. Combinações dos grupos e anéis acima também podem estar presentes nos ligantes de compostos de direcionamento de GA.
Um aspecto da invenção é um agente de direcionamento de GA- conjugado Iigante tendo a Fórmula I:
L - [agente de direcionamento de GA] (I) em que [agente de direcionamento de GA] é um agente de direcionamento de GA peptídico. Agentes de direcionamento de GA peptídicos adequados incluem, mas não estão limitados a, SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2 e análogos de SEQ ID NO: 1 ou SEQ ID NO: 2 incluindo, por exemplo, truncamentos ou mutações de carbóxi e compostos de direcionamento de GA1 conforme descrito aqui.
A porção Iigante L pode ser presa ao carbóxi término ou qualquer cadeia lateral eletrofílica ou nucleofílica de uma cadeia lateral de aminoácido de um agente de direcionamento de GA. O ponto de fixação de L a um agente de direcionamento de GA é referido aqui como o "ponto de união".
Em determinadas modalidades, L é ligado à cadeia lateral nucleofílica ou eletrofílica de um aminoácido em um agente de direcionamento de GA. Cadeias laterais nucleofílicas exemplificativas são Lys1 Cys1 Ser, Thr e Tyr. Naquelas modalidades em que L é ligado a uma cadeia lateral nucleofílica, L compreenderá um grupo eletrofílico suscetível de reação covalente com a cadeia lateral nucleofílica. Cadeias laterais eletrofílicas exemplificativas são Asp e Glu. Naquelas modalidades em que L é ligado a uma cadeia lateral eletrofílica, L compreenderá um grupo nucleofílico suscetível de reação covalente com a cadeia lateral eletrofílica.
Em determinadas modalidades em que L é ligado a uma cadeia lateral nucleofílica de um aminoácido (o resíduo de ligação) em um agente de direcionamento de GA1 L é ligado a uma cadeia lateral nucleofílica de um resíduo de Lys. Em algumas dessas modalidades, o resíduo de Lys é o resíduo 20 ou 28 de SEQ ID NO: 1 ou o resíduo 12 ou 27 de SEQ ID NO: 2. Em algumas outras modalidades, um resíduo de Lys é inserido no carbóxi término de um agente de direcionamento de GA de SEQ ID NO: 1 ou SEQ ID NO: 2 ou um análogo dos mesmos e o Iigante L é covalentemente preso à cadeia lateral desse aminoácido adicional. Por exemplo, em uma modalidade, um agente de direcionamento de GA é:
HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPSK (SEQ ID NO: 3) ou HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPSK (SEQ ID NO: 4).
SEQ ID NO: 3 é idêntica a SEQ ID NO: 2, exceto quanto à inserção de um resíduo de Lys no carbóxi término do peptídeo. SEQ ID NO: 4 é idêntica a SEQ ID NO: 3, exceto quanto à substituição do resíduo de Gly na posição 2 por Aib2.
Exemplos de compostos de fórmula I compreendendo agentes de direcionamento baseados em SEQ ID NO: 3- ou SEQ ID NO: 4- incluem, mas não estão limitados a:
HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPSK(L) (SEQ ID NO: 166); HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPSK(L) (SEQ ID NO: 167); e R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGK-R2 (SEQ ID NO: 30).
Em algumas outras modalidades, um resíduo de Lys é inserido ou substituído em uma posição interna à SEQ ID NO: 1 ou SEQ ID NO: 2 ou um análogo das mesmas e o Iigante L é covalentemente preso à cadeia lateral desse aminoácido adicional. Exemplos dessas modalidades são apresentadas na Tabela II, abaixo. Resíduos de Lys inseridos, os quais servem como pontos de união para fixação do Iigante L, estão sublinhados. TABELA II:
SEQ ID NO: 1 e SEQ ID NO: 2-AGENTES DE DIRECIONAMENTO DE GA BASEADOS COM SUBSTITUIÇÕES DE LISINA
R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPKS-R2 (SEQ ID NO: 14) R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAKPPS-R2 (SEQ ID NO: 15) R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSKAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 16) R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPKSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 17) R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKKGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 18) R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWKKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 19) R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIKWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 20) R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFKEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 21) R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRKFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 22) R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVKLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 23) R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAKRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 24) R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEKAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 25) R1-HAibEGTFTSDLSKQMEKEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 26) R1-HAibEGTFTSDLSKQKEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 27) R1-HAibEGTFTSDLSKKMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 28) R1-HAibEGTFTSDLKKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 29) R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRKFIEWLKNGGPSS-R2 (SEQ ID NO: 31) R1-HAibEGTFTSDVSSYLEKQAAKEFIAWLVKAibR-R2 (SEQ ID NO: 47) R1-HAibEGTFTSDKSSYLEEQAVKEFIAWLIKAibR-R2 (SEQ ID NO: 64) R1-HAibEGTFTSDVSKYLEEQAVKEFIAWLIKAibR-R2 (SEQ ID NO: 65) R1-HAibEGTFTSDVSSYKEEQAVKEFIAWLIKAibR-R2 (SEQ ID NO: 66) R1-HAibEGTFTSDVSSYLEKQAVKEFIAWLIKAibR-R2 (SEQ ID NO: 67) R1-HAibEGTFTSDVSSYLEEQKVKEFIAWLIKAibR-R2 (SEQ ID NO: 68) R1-HAibEGTFTSDVSSYLEEQAVKEKIAWLIKAibR-R2 (SEQ ID NO: 69) R1-HAibEGTFTSDVSSYLEEQAVKEFIKWLIKAibR-R2 (SEQ ID NO: 70) R1-HAibEGTFTSDVSSYLEEQAVKEFIAWKIKAibR-R2 (SEQ ID NO: 71)
Naquelas modalidades em que o ligante L é covalentemente preso a um resíduo de Lys no peptídeo de direcionamento de GA, o resíduo de Lys pode ser uma Lys modificada na cadeia lateral. Em algumas dessas modalidades, a Lys modificada na cadeia lateral é:
<formula>formula see original document page 105</formula>
Em compostos de fórmula I1 L é uma porção Iigante tendo a fórmula -X-Y-Z, em que:
X é um polímero biologicamente compatível ou copolímero em bloco preso a um dos resíduos que compreende um agente de direcionamento de GA;
Y é um grupo de reconhecimento opcionalmente presente compreendendo pelo menos uma estrutura de anel; e
Z é um grupo reativo que é capaz de ligação covalente a uma cadeia lateral em um sítio de combinação de um anticorpo.
Em algumas modalidades dos compostos na Fórmula I, X é: -R22-P- R2-- ou -R22-P-R21-P'-R23-
em que:
P e P'são independentemente selecionados do grupo consistindo em oxidos de polioxialquileno tais como oxido de polietileno, polietiloxazolina, poli-N-vinil pirrolidona, álcool polivinílico, acrilato de poli- hidroxietil a, poli-hidróxi metacrilato de etila e poliacrilamida, poliaminas tendo grupos amina sobre a estrutura principal polimérica ou as cadeias laterais poliméricas, tais como polilisina, poliornitina, poliarginina e poli- histidina, poliaminas não-peptídicas tais como poliaminoestireno, poliaminoacrilato, aminoacrilato de (poli)N-metil aminoacrilato, (poli)N- etilaminoacrilato, (poli)N,N-dimetila aminoacrilato, (poli)N,N- dietilaminoacrilato, (poli)aminometacrilato, amino-metacrilato de (poli)N- metila, aminometacrilato de (poli)N-etila, aminometacrilato de (poli)N,N- dimetila, aminometacrilato de (poli)N,N-dietila, (poli)etilenoimina, polímeros de aminas quaternárias, tais como cloreto de (poli)N,N,N- trimetilaminoacrilato, cloreto de (poli)metilacrilamidopropiltrimetil amônio, proteoglicanos tais como sulfato-A de condroitina (4-sulfato), sulfato-C de condroitina (6-sulfato) e sulfato-B de condroitina, polipeptídeos tais como polisserina, politreonina, poliglutamina, polissacarídeos naturais ou sintéticos, tais como quitosano, hidróxi etil celulose e lipídios;
R21, R22, e R23 são, cada um independentemente, uma ligação covalente, -O-, -S-, -NRb-, C1-50 alquileno de cadeia reta ou ramificada substituída ou não-substituída ou C1-50 heteroalquileno de de cadeia reta ou ramificada substituída ou não-substituída;
Rb é hidrogênio, Cmo alquila substituída ou não-substituída, C3-7 cicloalquil-C0-6 alquila substituída ou não-substituída ou aril-Co-6 alquila substituída ou não-substituída; e
R21, R22, e R23 são selecionados de modo que o comprimento da estrutura principal de X permaneça cerca de 200 átomos ou menos.
Em algumas modalidades dos compostos da Fórmula I, R22 é — (CH2)v-, -(CH2)u-C(O)-(CH2)v-, -(CH2)u-C(O)-O-(CH2)v-, -(CH2)u-C(S)-NRb- (CH2)v-, -(CH2)u-C(O)-NRb-(CH2)v-, -(CH2)u-NRb-(CH2)v-, -(CH2)u-O-(CH2)v-, - (CH2)u-S(O)0.2-(CH2)v-, -(CH2)u-S(0)o-2-NRb-(CH2)v- ou -(CH2)u-P(O)(ORb)-O- (CH2)v-, em que u e ν são, cada um independentemente, O, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 ou 20.
Em ainda outras modalidades dos compostos da Fórmula I, R22 é -(CH2)v-, -(CH2)u-C(O)-(CH2)v-, -(CH2)u-C(O)-O-(CH2)v-, -(CH2)u-C(O)-NRb- (CH2)v- ou -(CH2)u-NRb-(CH2)v. Em ainda outras modalidades, R-2 é -(CH2)u- C(O)-NRb-(CH2)v-.
Em algumas modalidades dos compostos da Fórmula I, R21 e R23 são, cada um independentemente, -(CH2)s-, -(CH2)r-C(O)-(CH2)s-, - (CH2)r-C(O)-O-(CH2)v-, -(CH2)r-C(S)-NRb-(CH2)s-, -(CH2)r-C(O)-NRb-(CH2)s-, - (CH2)r-NRb-(CH2)s-, -(CH2)r-O-(CH2)s-, -(CH2)r-S(O)0-2-(CH2)s-, -(CH2)r-S(O)0- 2-NRb-(CH2)s- ou -(CH2)r-P(O)(ORb)-O-(CH2)s-, em que r, s, e ν são, cada um independentemente, O, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 ou 20.
Em ainda outras modalidades, R21 e R23 são, cada um independentemente, -(CH2)s-, -(CH2)r-C(O)-(CH2)s-, -(CH2)r-C(O)-O-(CH2)s-, - (CH2)r-C(O)-NRb-(CH2)s- ou -(CH2)r-NRb-(CH2)s, e -(CH2)r-C(O)-NRb-(CH2)s-.
Em ainda outras modalidades, R21 e R23 têm, cada um independentemente, a estrutura:
<formula>formula see original document page 107</formula>
em que ρ é 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33,34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44 ou 45; w, r, e s são, cada um independentemente, O, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 ou 20; e Rb em cada ocorrência é, independentemente, hidrogênio, C1-10 alquila substituída ou não-substituída, C3-7 cicloalquil-C0-6 alquila substituída ou não-substituída ou aril-C0-6 alquila substituída ou não-substituída. Em determinadas modalidades dos compostos da Fórmula I, X tem a estrutura:
<formula>formula see original document page 108</formula>
em que H1 e H1 em cada ocorrência são, independentemente, N, O, S ou CH2; r e s são, cada um independentemente, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 ou 20; t e t' são, cada um independentemente, 0, 1,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49 ou 50; e Rb é hidrogênio, C1-10 alquila substituída ou não-substituída, C3-7 cicloalquil-C0-6 alquila substituída ou não-substituída ou aril-C0-6 alquila substituída ou não-substituída.
Em determinadas modalidades dos compostos da Fórmula I, X têm a estrutura:
<formula>formula see original document page 108</formula>
em que H1 e H1 em cada ocorrência são, independentemente, N, O, S ou CH2; re s são, cada um independentemente, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 ou 20; t e t' são, cada um independentemente, 0, 1,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49 ou 50; e Rb em cada ocorrência é, independentemente, hidrogênio, C1-10 alquila substituída ou não-substituída, C3-7 cicloalquil-C0-6 alquila substituída ou não-substituída ou aril-Co-6 alquila substituída ou não-substituída.
Em determinadas modalidades dos compostos da Fórmula I, X tem a estrutura:
<formula>formula see original document page 108</formula> em que H1 e H1 em cada ocorrência são, independentemente, N, O, S ou CH2; re s são, cada um independentemente, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 ou 20; t e t' são, cada um independentemente, 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49 ou 50; e Rb em cada ocorrência é, independentemente, hidrogênio, Cmo alquila substituída ou não-substituída, C3-7 cicloalquil-C0-6 alquila substituída ou não-substituída ou aril-C0-6 alquila substituída ou não-substituída.
Em determinadas modalidades dos compostos da Fórmula I, X têm a estrutura:
<formula>formula see original document page 109</formula>
em que H1 e H1 em cada ocorrência são, independentemente, N, O, S ou CH2; r e s são, cada um independentemente, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 ou 20; t e t' são, cada um independentemente, 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49 ou 50; e Rb em cada ocorrência é, independentemente, hidrogênio, C1-10 alquila substituída ou não-substituída, C3-7 cicloalquil-C0-6 alquila substituída ou não-substituída ou aril-Co-6 alquila substituída ou não-substituída.
Em determinadas modalidades dos compostos da Fórmula I, X têm a estrutura:
<formula>formula see original document page 109</formula>
em que H1 e H1 em cada ocorrência são, independentemente, N, O, S ou CH2; r e s são, cada um independentemente, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 ou 20; t e t' são, cada um independentemente, 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49 ou 50; e Rb em cada ocorrência é, independentemente, hidrogênio, Cmo alquila substituída ou não-substituída, C3-7 cicloalquil-C0-6 alquila substituída ou não-substituída ou aril-C0-6 alquila substituída ou não-substituída.
Em determinadas modalidades dos compostos da Fórmula I, X tem a estrutura:
<formula>formula see original document page 110</formula>
em que H1 e H1 em cada ocorrência são, independentemente, N, O, S ou CH2; re s são, cada um independentemente, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 ou 20; t e t' são, cada um independentemente, 0, 1,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49 ou 50; e Rb é hidrogênio, Cmo alquila substituída ou não-substituída, C3-7 cicloalquil-C0-6 alquila,substituída ou não-substituída ou aril-C0-6 alquila substituída ou não-substituída.
Em determinadas modalidades dos compostos da Fórmula I, X tem a estrutura:
<formula>formula see original document page 110</formula>
em que H1 e H1 em cada ocorrência são, independentemente, N, O, S ou 20 CH2; r e s são, cada um independentemente, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 ou 20; t e t' são, cada um independentemente, 0, 1,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11,12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49 ou 50; e Rb é hidrogênio, C1
-10 alquila substituída ou
não-substituída, C3-7 cicloalquil-C0-6 alquila substituída ou não-substituída ou aril-C06 alquila substituída ou não-substituída.
Em determinadas modalidades dos compostos da Fórmula I, X tem a estrutura:
<formula>formula see original document page 111</formula>
em que ν e w são, cada um independentemente, 1, 2, 3, 4 ou 5 e Rb é hidrogênio, Cmo alquila substituída ou não-substituída, C3- cicloalquil-C0-6 alquila substituída ou não-substituída ou aril-Co-6 alquila substituída ou não- substituída. Em algumas dessas modalidades, ν é 1, 2 ou 3, w é 1, 2 ou 3, e Rb é hidrogênio.
Em determinadas modalidades da Fórmula I, L é uma porção Iigante tendo a fórmula -X-Y-Z, em que:
X é unido a um dos resíduos que compreende um agente de direcionamento de GA e é um -R22-[CH2-CH2-0]t-R23- opcionalmente substituído, -R22-CiCloaIquiI-R23-, -R22-aril-R23- ou -R22-heterociclil-R23-, em que;
R22 e R23 são, cada um independentemente, uma ligação covalente, -O-, -S-, -NRb-, C1-50 alquileno de cadeia reta ou ramificada substituído ou não-substituído, C1-50 heteroalquileno de cadeia reta ou ramificada substituído ou não-substituído, C2-50 alquenileno de cadeia reta ou ramificada substituído ou não-substituído, ou C2-50 heteroalquenileno substituído ou não-substituído;
Rb é hidrogênio, Cmo alquila substituída ou não-substituída, C3-7 cicloalquil-Co-6 alquila substituída ou não-substituída ou aril-Co-6 alquila substituída ou não-substituída;
té 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49 ou 50;
e o tamanho dos R22 e R23 são de modo que o comprimento da estrutura principal de X permaneça cerca de 200 átomos ou menos; Y é um grupo de reconhecimento opcionalmente presente compreendendo pelo menos uma estrutura de anel; e
Z é um grupo reativo que é capaz de ligação covalente a uma cadeia lateral em um sítio de combinação de um anticorpo.
Em algumas modalidades dos compostos da Fórmula 1, se t > 1 ou se -X é -R22-cicloalquil-R23-, -R22-aril-R23- ou -R22-heterociclil-R23-, Y está presente.
Em algumas modalidades dos compostos da Fórmula I, X é: -R22-[CH2-CH2-0]rR23-,
em que:
R22 é -(CH2)v-, -(CH2)u-C(O)-(CH2)v-, -(CH2)u-C(O)-O-(CH2)v-, - (CH2)u-C(O)-NRb-(CH2)v-, -(CH2)u-C(S)-NRb-(CH2)v-, -(CH2)u-NRb-(CH2)v-, - (CH2)u-O-(CH2)v-, -(CH2)u-S(O)0-Z-(CH2)V-. -(CH2)u-S(O)0.2-NRb-(CH2)v- ou - (CH2)u-P(O)(ORb)-O-(CH2)v-;
u e ν são, cada um independentemente, O, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19ou 20 e t é O a 50.
R23 tem a estrutura:
<formula>formula see original document page 112</formula>
em que:
ρ é 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33,34, 35, 36, 37, 38, 39, 40,41,42,43, 44 ou 45;
w e r são, cada um independentemente, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 ou 20;
s é 0, 1,2,3,4,5,6,7,8,9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 ou 20; e
Rb em cada ocorrência é, independentemente, hidrogênio, Cmo alquila substituída ou não-substituída, C3-7 cicloalquil-C0-6 alquila substituída ou não-substituída ou aril-C0-6 alquila substituída ou não-substituída; e os valores de t, u, w, p, v, r e s são de modo que o comprimento da estrutura principal de X permaneça cerca de 200 átomos ou menos.
Em uma modalidade dos compostos da Fórmula I, X tem a fórmula:
<formula>formula see original document page 113</formula>
em que os valores de v, t, w, e ρ são selecionados de modo que o comprimento da estrutura principal de X seja menos de 200 átomos, alternativamente, seja menos de 100 átomos, alternativamente, seja menos de 75 átomos ou, alternativamente, seja menos de 50 átomos.
Em outra modalidade dos compostos da Fórmula I, X tem a fórmula:
<formula>formula see original document page 113</formula>
em que os valores de v, t, r, e s são selecionados de modo que o comprimento da estrutura principal de X seja menos de 200 átomos, alternativamente, seja menos de 100 átomos, alternativamente, seja menos de 75 átomos ou alternativamente, seja menos de 50 átomos.
Em outra modalidade dos compostos da Fórmula I, X tem a fórmula:
<formula>formula see original document page 113</formula>
em que os valores de u, v, t, w, e ρ são selecionados de modo que o comprimento da estrutura principal de X seja menos de 200 átomos, alternativamente, seja menos de 100 átomos, alternativamente, seja menos de 75 átomos ou alternativamente, seja menos de 50 átomos.
Em outra modalidade dos compostos da Fórmula I, X tem a fórmula:
<formula>formula see original document page 114</formula
em que os valores de u, v, t, r, e s são selecionados de modo que o comprimento da estrutura principal de X seja menos de 200 átomos, alternativamente, seja menos de 100 átomos, alternativamente, seja menos de 75 átomos ou alternativamente, seja menos de 50 átomos.
Em outra modalidade dos compostos da Fórmula I, X tem a fórmula:
<formula>formula see original document page 114</formula>
em que os valores de u, v, t, w, e ρ são selecionados de modo que o comprimento da estrutura principal de X seja menos de 200 átomos, alternativamente, seja menos de 100 átomos, alternativamente, seja menos de 75 átomos ou alternativamente, seja menos de 50 átomos.
Em outra modalidade dos compostos da Fórmula I, X tem a fórmula:
<formula>formula see original document page 114</formula>
em que os valores de u, v, t, r, e s são selecionados de modo que o comprimento da estrutura principal de X seja menos de 200 átomos, alternativamente, seja menos de 100 átomos, alternativamente, seja menos de 75 átomos ou alternativamente, seja menos de 50 átomos.
Em determinadas modalidades dos compostos da Fórmula I, X tem a estrutura: <formula>formula see original document page 115</formula>
em que os valores de u, v, t, w, e s são selecionados de modo que o comprimento da estrutura principal de X seja menos de 200 átomos, alternativamente, seja menos de 100 átomos, alternativamente, seja menos de 75 átomos, alternativamente, seja menos de 50 átomos, alternativamente, seja menos de 25 átomos ou alternativamente, seja menos de 15 átomos.
Em determinadas modalidades dos compostos da Fórmula I, X tem a estrutura:
<formula>formula see original document page 115</formula>
em que os valores de u, v, t, r, e s são selecionados de modo que o comprimento da estrutura principal de X seja menos de 200 átomos, alternativamente, seja menos de 100 átomos, alternativamente, seja menos de 75 átomos, alternativamente, seja menos de 50 átomos, alternativamente, seja menos de 25 átomos ou alternativamente, seja menos de 15 átomos.
Em determinadas modalidades dos compostos da Fórmula I, X tem a estrutura:
<formula>formula see original document page 115</formula>
em que os valores de u, v, t, w, e ρ são selecionados de modo que o comprimento da estrutura principal de X seja menos de 200 átomos, alternativamente, seja menos de 100 átomos, alternativamente, seja menos de 75 átomos, alternativamente, seja menos de 50 átomos, alternativamente, seja menos de 25 átomos ou alternativamente, seja menos de 15 átomos.
Em determinadas modalidades dos compostos da Fórmula I, X tem a estrutura:
<formula>formula see original document page 116</formula>
em que os valores de u, v, t, r, e s são selecionados de modo que o comprimento da estrutura principal de X seja menos de 200 átomos, alternativamente, seja menos de 100 átomos, alternativamente, é de menos de 75 átomos, alternativamente, seja menos de 50 átomos, alternativamente, seja menos de 25 átomos ou alternativamente, seja menos de 15 átomos.
Em outra modalidade dos compostos da Fórmula I, X tem a fórmula:
<formula>formula see original document page 116</formula>
em que os valores de u, v, t, w, e ρ são selecionados de modo que o comprimento da estrutura principal de X seja menos de 200 átomos, alternativamente, seja menos de 100 átomos, alternativamente, seja menos de 75 átomos ou, alternativamente, seja menos de 50 átomos.
Em outra modalidade dos compostos da Fórmula I, X tem a fórmula:
<formula>formula see original document page 116</formula>
em que os valores de u, v, t, r, e s são selecionados de modo que o comprimento da estrutura principal de X seja menos de 200 átomos, alternativamente, seja menos de 100 átomos, alternativamente, seja menos de 75 átomos ou alternativamente, seja menos de 50 átomos.
Em compostos tendo a Fórmula I, em que L tem a fórmula -X-Y- Z, a estrutura de anel de Y inclui anéis carbocíclicos aromáticos saturados e insaturados e anéis heterocíclicos aromáticos saturados e insaturados. A(s) estrutura(s) de anel pode(m) ser mono-, bi- ou poíicícíica(s) e inclui(em) anéis fundidos ou não-fundidos. Ainda, a(s) estrutura(s) de anel é (são) opcionalmente substituída(s) por grupos funcionais bem conhecidos por àqueles versados na técnica, incluindo, mas não limitados a, grupos halogênio, oxo, -OH, -CHO, -COOH, -NO2, -CN, -NH2, amidina, guanidina, hidroxilamina, -C(O)NH2, amidas secundária e terciária, sulfonamidas, alquila substituída ou não-substituída, alquenila substituída ou não- substituída, alquinila substituída ou não-substituída, oxoalquila, oxoalquenila, oxoalquinila, aminoalquila, aminoalquenila, aminoalquinila, sulfoalquila, sulfoalquenila, sulfoalquinila, fosfoalquila, fosfoalquenila, e fosfoalquinila.
Em algumas modalidades dos compostos tendo a Fórmula I, a estrutura de anel de Y tem a fórmula opcionalmente substituída:
<formula>formula see original document page 117</formula>
em que:
a, b, c, d, e e são independentemente carbono ou nitrogênio; e
f é carbono, nitrogênio, oxigênio ou enxofre;
Y é unido a X e Z independentemente em quaisquer duas posições no anel de valência suficiente; e
não mais do que quatro de a, b, c, d, e ou f são, simultaneamente, nitrogênio.
Quaisquer valências abertas restantes sobre os átomos que constituem a estrutura de anel podem ser preenchidas por hidrogênio ou outros substituintes ou pelas fixações covalentes a X e Z. Por exemplo, se b é carbono, a valência pode ser preenchida por hidrogênio, um substituinte tal como halogênio, uma fixação covalente a X ou uma fixação covalente a Z. Em algumas modalidades, a, b, c, d, e e são, cada um, carbono enquanto que, em outras, a, c, d e f são, cada um, carbono. Em outras modalidades, pelo menos um de a, b, c, d ou e é nitrogênio e, em ainda outras, f é oxigênio ou enxofre. Em ainda outra modalidade, a estrutura de anel de Y é não-substituída. Em uma modalidade, Y é fenila.
Em determinadas modalidades dos compostos da Fórmula !, X-Y tem a estrutura:
<formula>formula see original document page 118</formula>
Em algumas dessas modalidades, ν é 1, 2, 3, 4 ou 5; w é 1, 2, 3, 4 ou 5; e Rb é hidrogênio, C-mo alquila substituída ou não-substituída, C3-7 cicloalquil-Co-6 alquila substituída ou não-substituída ou aril-Co-6 alquila substituída ou não-substituída. Em algumas outras modalidades, ν é 1, 2 ou 3 e w é 1, 2 ou 3. Em ainda outras modalidades, ν é 1 ou 2 e w é 1 ou 2.
Em determinadas modalidades dos compostos da Fórmula I, X-Y tem a estrutura:
<formula>formula see original document page 118</formula>
em que H1 e H1 são, cada um independentemente, N, O, S ou CH2; r e s são, cada um independentemente, 1, 2, 3, 4 ou 5; e t e t' são, cada um independentemente, 0, 1, 2, 3, 4 ou 5. Em algumas dessas modalidades, H1 e H1 são, cada um independentemente, O ou CH2; r e s são, cada um independentemente, 1 ou 2; e t e t' são, cada um independentemente, 0 ou 1.
Em determinadas modalidades dos compostos da Fórmula I, X-Y tem a estrutura:
<formula>formula see original document page 118</formula>
em que H1 e H1 são, cada um independentemente, N1 O, S ou CH2; r e s são, cada um independentemente, 1, 2, 3, 4 ou 5; t e t' são, cada um independentemente, 0, 1, 2, 3, 4 ou 5, e Rb em cada ocorrência é, independentemente, hidrogênio, Cwo alquila substituída ou não-substituída, C3-7 cicloalquil-Co-6 alquila substituída ou não-substituída ou aril-Co-6 alquila substituída ou não-substituída. Em algumas dessas modalidades, H1 e H1 são, cada um independentemente, O ou CH2; r e s são, cada um independentemente, 1 ou 2; e t e t' são, cada um independentemente, 0 ou 1.
Em determinadas modalidades dos compostos da Fórmula I, X-Y tem a estrutura:
<formula>formula see original document page 119</formula>
em que H1 e H1 são, cada um independentemente, N, O, S ou CH2; r e s são, cada um independentemente, 1, 2, 3, 4 ou 5; t e f são, cada um independentemente, 0, 1, 2, 3, 4 ou 5, e Rb em cada ocorrência é, independentemente, hidrogênio, Cwo alquila substituída ou não-substituída, C3-7 cicloalquil-C0-6 alquila substituída ou aril-C0-6 alquila substituída ou não- substituída. Em algumas dessas modalidades, H1 e H1 são, cada um independentemente, O ou CH2; r e s são, cada um independentemente, , 1 ou 2; e t e t' são, cada um independentemente, 0 ou 1.
Em determinadas modalidades dos compostos da Fórmula I, X-Y tem a estrutura:
<formula>formula see original document page 119</formula>
em que H1 e H1 são, cada um independentemente, N, O, S ou CH2; r e s são, cada um independentemente, 1, 2, 3, 4 ou 5; t e t' são, cada um independentemente, 0, 1, 2, 3, 4 ou 5, e Rb em cada ocorrência é, independentemente, hidrogênio, Cm0 alquila substituída ou não-substituída, C3-7 cicloalquil-C0-6 alquila substituída ou não-substituída ou aril-C0-6 alquila substituída ou não-substituída. Em algumas dessas modalidades, H1 e H1 são, cada um independentemente, O ou CH2; r e s são, cada um independentemente, , 1 ou 2; e t e f são, cada um independentemente, 0 ou 1.
Em determinadas modalidades dos compostos da Fórmula I, X-Y tem a estrutura:
<formula>formula see original document page 120</formula>
em que H1 e H1 são, cada um independentemente, N, O, S ou CH2; r e s são, cada um independentemente, 1, 2, 3, 4 ou 5; t e t' são, cada um independentemente, 0, 1, 2, 3, 4 ou 5, e Rb em cada ocorrência é, independentemente, hidrogênio, C1-10 alquila substituída ou não-substituída, C3-7 cicloalquil-C0-6 alquila substituída ou não-substituída ou aril-C0-6 alquila substituída ou não-substituída. Em algumas dessas modalidades, H1 e H1 são, cada um independentemente, O ou CH2; r e s são, cada um independentemente, 1 ou 2; e t e t' são, cada um independentemente, 0 ou 1.
Em determinadas modalidades dos compostos da Fórmula I, X-Y tem a estrutura:
<formula>formula see original document page 120</formula>
em que H1 e H1 são, cada um independentemente, N, O, S ou CH2; r e s são, cada um independentemente, 1, 2, 3, 4 ou 5; t e t' são, cada um independentemente, 0, 1, 2, 3, 4 ou 5, e Rb é hidrogênio, C1-10 alquila substituída ou não-substituída, C3-7 cicloalquil-C0-6 alquila substituída ou não- substituída ou aril-C0-6 alquila substituída ou não-substituída. Em algumas dessas modalidades, H1 e H1 são, cada um independentemente, O ou CH2; r e s são, cada um independentemente, 1 ou 2; e t e t' são, cada um independentemente, 0 ou 1.
Em determinadas modalidades dos compostos da Fórmula I, X-Y tem a estrutura: <formula>formula see original document page 121</formula>
em que H1 e H1 são, cacia um independentemente, N, O, S ou CH2; r e s são, cada um independentemente, 1, 2, 3, 4 ou 5; e t e t' são, cada um independentemente, 0, 1, 2, 3, 4 ou 5. Em algumas dessas modalidades, H1 e H1 são, cada um independentemente, O ou CH2; r e s são, cada um independentemente, 1 ou 2; e t e t' são, cada um independentemente, 0 ou 1.
Em algumas dessas modalidades dos compostos da Fórmula I, X-Y tem a estrutura:
<formula>formula see original document page 121</formula>
Em algumas dessas modalidades, ν é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; w é 1, 2, 3, 4 ou 5; ρ é 1, 2, 3, 4 ou 5, e Rb em cada ocorrência é, independentemente, hidrogênio, Cmo alquila substituída ou não- substituída, C3.7 cicloalquil-Co-6 alquila substituída ou não-substituída ou aril- C0-6 alquila substituída ou não-substituída. Em determinadas modalidades, ν é 0; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; w é 1; e ρ é 3. Em algumas modalidades, ν é 0; t é 1, 2 ou 3, w é 1; e ρ é 1 ou 2.
Em determinadas modalidades dos compostos da Fórmula I, X-Y tem a estrutura:
<formula>formula see original document page 121</formula>
Em algumas dessas modalidades, ν é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; r é 1, 2, 3, 4 ou 5; s é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; e Rb é hidrogênio, C1-10 alquila substituída ou não-substituída, C3-7 cicloalquil-C0-6 alquila substituída ou não-substituída ou aril-C0-6 alquila substituída ou não-substituída. Em determinadas modalidades, ν é 0; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; r é 1 ou 2; e s é 3. Em algumas modalidades, ν é 0; t é 1, 2 ou 3, r é 1; e s é 1 ou 2.
Em determinadas modalidades dos compostos da Fórmula I, X-Y tem a estrutura:
<formula>formula see original document page 122</formula>
Em algumas dessas modalidades, u é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; ν é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; w é 1, 2, 3, 4 ou 5; ρ é 1, 2, 3, 4 ou 5; e Rb em cada ocorrência é, independentemente, hidrogênio, Cmo alquila substituída ou não-substituída, C3.7 cicloalquil-C0-6 alquila substituída ou não- substituída ou aril-C0-6 alquila substituída ou não-substituída. Em determinadas modalidades, u é 0; ν é 0; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; w é 1; e ρ é 3. Em algumas modalidades, u é 0 ou 1; ν é 0; t é 1 ou 2; w é 1; e ρ é 1 ou 2.
Em determinadas modalidades dos compostos da Fórmula I, X-Y tem a estrutura:
<formula>formula see original document page 122</formula>
Em algumas dessas modalidades, u é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; ν é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; r é 1, 2, 3, 4 ou 5; s é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; e Rb é hidrogênio, Cmo alquila substituída ou não-substituída, C3-7 cicloalquil-C0-6 alquila substituída ou não-substituída ou aril-Co-6 alquila substituída ou não- substituída. Em determinadas modalidades, u é 0; ν é 0; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; r é 1 ou 2; e s é 3. Em algumas modalidades, u é 0 ou 1; ν é 0; t é 1, 2 ou 3; ré 1; e s é 1 ou 2.
Em determinadas modalidades dos compostos da Fórmula I, X-Y tem a estrutura:
<formula>formula see original document page 122</formula> Em algumas dessas modalidades, u é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; v é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; w é 1, 2, 3, 4 ou 5; p é 1, 2, 3, 4 ou 5; e Rb em cada ocorrência é, independentemente, hidrogênio, C1-10 alquila substituída ou não-substituída, C3-7 cicloalquil-C0-6 alquila substituída ou não- substituída ou aril-C0-6 alquila substituída ou não-substituída. Em determinadas modalidades, u é 0; v é 0; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; w é 1; e p é 3. Em algumas modalidades, u é 0 ou 1; v é 0; t é 1 ou 2; w é 1; e ρ é 1 ou 2. Em determinadas modalidades dos compostos da Fórmula I, X-Y tem a estrutura:
<formula>formula see original document page 123</formula>
Em algumas dessas modalidades, u e 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; v e 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; r é 1, 2, 3, 4 ou 5; s é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; e Rb é hidrogênio, Cmo alquila substituída ou não-substituída, C3-7 cicloalquil-C0-6 alquila substituída ou não-substituída ou aril-C0-6 alquila substituída ou não- substituída. Em determinadas modalidades, u é 0; v é 0; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; r é 1 ou 2; e s é 3. Em algumas modalidades, u é 0 ou 1; v é 0; t é 1, 2 ou 3, ré 1; e s é 1 ou 2.
Em determinadas modalidades dos compostos da Fórmula I, X-Y tem a estrutura:
<formula>formula see original document page 123</formula>
Em algumas dessas modalidades, u é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; ν é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; w é 1, 2, 3, 4 ou 5; p é 1, 2, 3, 4 ou 5; e Rb em cada ocorrência é, independentemente, hidrogênio, C1-10 alquila substituída ou não-substituída, C3-7 cicloalquil-C0-6 alquila substituída ou não- substituída ou aril-C0-6 alquila substituída ou não-substituída. Em determinadas modalidades, u é 0; v é 0; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; w é 1; e p é 3. Em algumas modalidades, ué0ou1;vé0;té1 ou2;wé1;epé1 ou 2. Em determinadas modalidades dos compostos da Fórmula I, X-Y tem a estrutura:
<formula>formula see original document page 124</formula>
Em algumas dessas modalidades, u é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; ν é 0, 1,
2, 3, 4 ou 5; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; r é 1, 2, 3, 4 ou 5; s é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; e Rb em cada ocorrência é, independentemente, hidrogênio, C1-10 alquila substituída ou não-substituída, C3-7 cicloalquil-C0-6 alquila substituída ou não- substituída ou aril-C0-6 alquila substituída ou não-substituída. Em determinadas modalidades, u é 0; ν é 0; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; r é 1 ou 2; e s é
3. Em algumas modalidades, u é 0 ou 1; ν é 0; t é 1, 2 ou 3, r é 1; e s é 1 ou 2.
Em determinadas modalidades dos compostos da Fórmula I, X-Y tem a estrutura:
<formula>formula see original document page 124</formula>
Em algumas dessas modalidades, u é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; ν é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; w é 1, 2, 3, 4 ou 5; ρ é 1, 2, 3, 4 ou 5; e Rb
em cada ocorrência é, independentemente, hidrogênio, C1-10 alquila substituída ou não-substituída, C3-7 cicloalquil-C0-6 alquila substituída ou não- substituída ou aril-C0-6 alquila substituída ou não-substituída. Em determinadas modalidades, u é 0; ν é 0; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; w é 1; e ρ é 3.
Em algumas modalidades, u éOou 1; véO; té 1 ou2; wé 1; ep é 1 ou2.
Em determinadas modalidades dos compostos da Fórmula I, X-Y tem a estrutura:
<formula>formula see original document page 124</formula> Em algumas dessas modalidades, u é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; v é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; r é 1, 2, 3, 4 ou 5; s é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; e Rb em cada ocorrência é, independentemente, hidrogênio, C1-10 alquila substituída ou não-substituída, C3-7 cicloalquil-C0-6 alquila substituída ou não- substituída ou aril-C0-6 alquila substituída ou não-substituída. Em determinadas modalidades, u é 0; v é 0; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; r é 1 ou 2; e s é
3. Em algumas modalidades, u é 0 ou 1; ν é 0; t é 1, 2 ou 3, ré 1; esé 1 ou
2. Em determinadas modalidades dos compostos da Fórmula I, X-Y tem a estrutura:
<formula>formula see original document page 125</formula>
Em algumas dessas modalidades, u é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; ν é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; w é 1, 2, 3, 4 ou 5; ρ é 1, 2, 3, 4 ou 5; e Rb em cada ocorrência é, independentemente, hidrogênio, C1-10 alquila substituída ou não-substituída, C3-7 cicloalquil-C0-6 alquila substituída ou não- substituída ou aril-C0-6 alquila substituída ou não-substituída. Em determinadas modalidades, u é 0; v é 0; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; w é 1; e ρ é 3. Em algumas modalidades, u é 0 ou 1; v é 0; t é 1 ou 2; w é 1; e ρ é 1 ou 2.
Em determinadas modalidades dos compostos da Fórmula I, X-Y tem a estrutura:
<formula>formula see original document page 125</formula>
Em algumas dessas modalidades, u é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; ν é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; r é 1, 2, 3, 4 ou 5; s é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; e Rb é hidrogênio, C1-10 alquila substituída ou não-substituída, C3-7 cicloalquil-C0-6 alquila substituída ou não-substituída ou aril-C0-6 alquila substituída ou não- substituída. Em determinadas modalidades, u é 0; v é 0; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; r é 1 ou 2; e s é 3. Em algumas modalidades, u é 0 ou 1; v é 0; t é 1, 2 ou 3, r é 1;esé1ou2. Em uma modalidade, X-Y tem a fórmula:
<formula>formula see original document page 126</formula>
Em algumas dessas modalidades, ν é O, 1, 2, 3, 4 ou 5; í é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; r é 1, 2, 3, 4 ou 5; s é O, 1, 2, 3, 4 ou 5;; e Rb é hidrogênio, Cmo alquila substituída ou não-substituída, C3.7 cicloalquil-Co-6 alquila substituída ou não-substituída ou aril-C0-6 alquila substituída ou não-substituída. Em determinadas modalidades, ν é 0; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; r é 1 ou 2; s é O ou 1. Em compostos tendo a Fórmula I em que L tem a fórmula -X-Y-Z, o grupo reativo Z contém uma porção capaz de formação de uma ligação covalente com um aminoácido em um sítio de combinação de um anticorpo. Por exemplo, Z pode ser alquila substituída, cicloalquila substituída, arila substituída, alquilarila substituída, heterocicloalquila substituída ou heterociclila substituída, em que pelo menos um substituinte é uma porção 1,3-dicetona, um acil beta-lactama, um éster ativo, um alfa-halocetona, um aldeído, uma maleimida, uma lactona, um anidrído, uma alfa-haloacetamida, uma amina, uma hidrazida ou um epóxido. Em algumas de tais modalidades, Z é alquila substituída.
Z pode ser um grupo que forma uma ligação covalente reversível ou irreversível. Em algumas modalidades, a ligação covalente pode ser formada usando grupos Z dicetona, tais como aqueles mostrados na figura 7. Assim, as estruturas A-C podem formar ligações covalentes reversíveis com grupos nucleofílicos reativos (por exemplo, cadeias laterais de Iisina ou cisteína) em um sítio de combinação de um anticorpo. R'i, R12, R3 e R4 nas estruturas A-C da figura 7 representam substituintes os quais podem ser C, Η, N, O, P1 S, halogênio (F, Cl, Br, I) ou um sal dos mesmos. Esses substituintes podem também incluir um grupo, tal como um grupo alquinila, alquenila, alquinila, oxoalquila, oxoalquenila, oxoalquinila, aminoalquila, aminoalquenila, aminoalquinila, sulfoalquila, sulfoalquenila ou sulfoalquinila, fosfoalquila, fosfoalquenila, fosfoalquinila. R12 e R3 também poderiam formar uma estrutura de anel conforme exemplificado nas estruturas B e C. X na figura 7 poderia ser um heteroátomo. Outros grupos Z que formam ligações covalentes reversíveis incluem a amidina, imina e outros grupos reativos abrangidos pela estrutura G da figura 7. A figura 8 inclui as estruturas de outros grupos Iigantes reativos que formam ligações covalentes reversíveis, por exemplo, as estruturas B, G, H e em que X não é um grupo de condução, EeF.
Grupos reativos Z que formam uma ligação covalente irreversível com um sítio de combinação de um anticorpo incluem as estruturas D-G na figura 7 (por exemplo, quando G é um imidato) e as estruturas A, C, e D da figura 8. Quando X é um grupo de condução, as estruturas E e F da figura 8 podem também formar ligações covalentes irreversíveis. Tais estruturas são úteis para fixação irreversível a um agente de direcionamento-ligante a um grupo nucleofílico reativo em um sítio de combinação de um anticorpo.
Em outras modalidades, Z é uma porção 1,3-dicetona. Em ainda outras modalidades, Z é alquila substituída por uma porção 1,3-dicetona. Em uma modalidade, Z tem am estrutura:
<formula>formula see original document page 127</formula>
em que q = 0 a 5. Em outra modalidade, Z tem a estrutura:
<formula>formula see original document page 127</formula>
Um Iigante para uso em compostos de direcionamento GA e para preparo de compostos de direcionamento de GA-Iigante inclui um grupo 1,3-dicetona reativo, tal como Z. Em uma modalidade da Fórmula I, L têm a estrutura:
o o /=\ o o Em algumas dessas modalidades, ν é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; w é 1, 2, 3, 4 ou 5; ρ é 1, 2, 3, 4 ou 5; q é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; e Rb em cada ocorrência é, independentemente, hidrogênio, C1-10 alquila substituída ou não-substituída, C3-7 cicloalquil-Co-6 alquila substituída ou aril- C0-6 alquila não-substituída ou substituída ou não-substituída. Em determinadas modalidades ν é 0; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; w é 1; ρ é 3; e q é 0, 1, 2 ou 3. Em algumas modalidades, ν é 0; t é 1 ou 2; w é 1; ρ é 1 ou 2; e q é 1 ou 2.
Em determinadas modalidades da Fórmula I, L têm a estrutura:
<formula>formula see original document page 128</formula>
Em algumas dessas modalidades, ν é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; w é 1, 2, 3, 4 ou 5; ρ é 1, 2, 3, 4 ou 5; q é 0, 1, 2 ou 3; e Rb em cada ocorrência é, independentemente, hidrogênio, C1-10 alquila substituída ou não-substituída, C3-7 çicloalquil-C0-6 alquila substituída ou não-substituída ou aril-C0-6 alquila substituída ou não-substituída. Em determinadas modalidades, ν é 0; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; w é 1; ρ é 3; e q é 0, 1, 2 ou 3. Em algumas modalidades, ν é 0; t é 1 ou 2; w é 1; ρ é 1 ou 2; e q é 2 ou 3.
Em determinadas modalidades da Fórmula I, L têm a estrutura:
<formula>formula see original document page 128</formula>
Em algumas dessas modalidades, ν é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; w é 1, 2, 3, 4 ou 5; ρ é 1, 2, 3, 4 ou 5; q é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; e Rb em cada ocorrência é, independentemente, hidrogênio, C1-10 alquila substituída ou não-substituída, C3-7 cicloalquil-C0-6 alquila substituída ou não- substituída ou aril-C0-6 alquila substituída ou não-substituída. Em determinadas modalidades, ν é 0; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; w é 1; ρ é 3; e q é 0, 1, 2 ou 3. Em algumas modalidades, v é 0;t é 1 ou 2;w é 1;p é 1 ou 2;e q é 1 ou 2.
Em determinadas modalidades da Fórmula I, L têm a estrutura: <formula>formula see original document page 129</formula>
3, 4, 5 ou 6; r é 1, 2, 3, 4 ou 5; s é O1 1, 2, 3, 4 ou 5; q é Ο, 1, 2, 3, 4 ou 5; e Rb é hidrogênio, C-M0 alquila substituída ou não-substituída, C3.7 cicloalquil- C0-6 alquila substituída ou não-substituída ou aril-C0-6 alquila substituída ou não-substituída. Em determinadas modalidades, ν é 0; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; r é 1 ou 2; s é 3; e q é 0, 1, 2 ou 3. Em algumas modalidades, ν é 0; t é 1, 2 ou 3, r é 1; s é 1 ou 2; e q é 1 ou 2.
Em determinadas modalidades da Fórmula I, L têm a estrutura:
<formula>formula see original document page 129</formula>
3, 4, 5 ou 6; r é 1, 2, 3, 4 ou 5; s é O, 1, 2, 3, 4 ou 5; q é O, 1, 2, 3, 4 ou 5; e Rb é hidrogênio, Cmo alquila substituída ou não-substituída, C3-7 cicloalquil- C0-6 alquila substituída ou não-substituída ou aril-C0-6 alquila substituída ou não-substituída. Em determinadas modalidades, ν é 0; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; r é 1 ou 2; s é 3; e q é O, 1, 2 ou 3. Em algumas modalidades, ν é 0; t é 1, 2 ou 3, r é 1; s é 1 ou 2; e q é 1 ou 2.
Em determinadas modalidades da Fórmula I, L têm a estrutura:
<formula>formula see original document page 129</formula>
3, 4, 5 ou 6; r é 1, 2, 3, 4 ou 5; s é O, 1, 2, 3, 4 ou 5; q é O, 1, 2 ou 3; e Rb é hidrogênio, C-M0 alquila substituída ou não-substituída, C3-7 cicloalquil-C0-6 alquila substituída ou não-substituída ou aril-Co-6 alquila substituída ou não- substituída. Em determinadas modalidades, ν é 0; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; r é 1 ou 2; s é 3; e q é O, 1, 2 ou 3. Em algumas modalidades, ν é 0; t é 1, 2 ou 3, r é 1; s é 1 ou 2; e q é 2 ou 3.
Em determinadas modalidades da Fórmula I, L têm a estrutura:
<formula>formula see original document page 130</formula>
Em algumas dessas modalidades, u é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; ν é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; w é 1, 2, 3, 4 ou 5; ρ é 1, 2, 3, 4 ou 5; q é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; e Rb em cada ocorrência é, independentemente, hidrogênio, C-MO alquila substituída ou não-substituída, C3-7 cicloalquil-C0-6 alquila substituída ou não-substituída ou aril-Co-6 alquila substituída ou não- substituída. Em determinadas modalidades, u é 0; ν é 0; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; w é 1; ρ é 3; e q é 0, 1, 2 ou 3. Em algumas modalidades, u é 0 ou 1; ν é 0; t é 1 ou 2; w é 1; ρ é 1 ou 2; e q é 1 ou 2.
Em determinadas modalidades da Fórmula I, L têm a estrutura:
<formula>formula see original document page 130</formula>
Em algumas dessas modalidades, u é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; ν é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; w é 1, 2, 3, 4 ou 5; ρ é 1, 2, 3, 4 ou 5;q é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; e Rb em cada ocorrência é, independentemente, hidrogênio, C-mo alquila substituída ou não-substituída, C3-7 cicloalquil-C0-6 alquila substituída ou não-substituída ou aril-Co-6 alquila substituída ou não- substituída. Em determinadas modalidades, u é 0; ν é 0; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; w é 1; ρ é 3; e q é 0, 1, 2 ou 3. Em algumas modalidades, ν é 0; t é 1 ou 2; w é 1; ρ é 1 ou 2; e q é 1 ou 2.
Em determinadas modalidades da Fórmula I, L têm a estrutura:
<formula>formula see original document page 130</formula>
Em algumas dessas modalidades, u é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; ν é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; w é 1, 2, 3, 4 ou 5; ρ é 1, 2, 3, 4 ou 5; q é 0, 1, 2 ou 3; e Rb em cada ocorrência é, independentemente, hidrogênio, C-mo alquila substituída ou não-substituída, C3-7 cicloalquil-C0-6 alquila substituída ou não-substituída ou aril-C0-6 alquila substituída ou não-substituída. Em determinadas modalidades, u é 0; v é 0; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; w é 1; ρ é 3; e q é 0, 1, 2 ou 3. Em algumas modalidades, v é 0; t é 1 ou 2; w é 1; ρ é 1 ou 2; e q e 2 ou 3.
Em determinadas modalidades da Fórmula I, L têm a estrutura:
<formula>formula see original document page 131</formula>
Em algumas dessas modalidades, u e 0, 1, 2, 3, 5 ou 5; v e 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; r é 1, 2, 3, 4 ou 5; s é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; q é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; e Rb é hidrogênio, C1-10 alquila substituída ou não- substituída, C3-7 cicloalquil-C0-6 alquila substituída ou não-substituída ou aril- C0-6 alquila substituída ou não-substituída. Em determinadas modalidades, u é 0; v é 0; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; r é 1 ou 2; s é 3; e q é 0, 1, 2 ou 3. Em algumas modalidades, ué0ou1;vé0;té1 ou 2; w é 1; ρ é 1 ou 2; e q é 1 ou 2.
Em determinadas modalidades da Fórmula I, L têm a estrutura:
<formula>formula see original document page 131</formula>
Em algumas dessas modalidades u e 0, 1, 2, 3, 5 ou 5; v e 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; r é 1, 2, 3, 4 ou 5; s é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; q é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; e Rb é hidrogênio, C-M0 alquila substituída ou não- substituída, C3-7 cicloalquil-Co-6 alquila substituída ou não-substituída ou aril- C0-6 alquila substituída ou não-substituída. Em determinadas modalidades, u é 0; ν é 0; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; r é 1 ou 2; s é 3; e q é 0, 1, 2 ou 3. Em algumas modalidades, uéOou 1; véO; té 1, 2 ou 3, ré 1; sé 1 ou 2; eq é 1 ou 2.
Em determinadas modalidades da Fórmula I, L têm a estrutura: <formula>formula see original document page 132</formula>
Em algumas dessas modalidades, u é O, 1, 2, 3, 4 ou 5; v é O, 1, 2, 3, 4 ou 5; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; r é 1, 2, 3, 4 ou 5; s é Ο, 1, 2, 3, 4 ou 5; q é 0, 1, 2 ou 3; e Rb é hidrogênio, C1-10 alquila substituída ou não-substituída, C3-7 cicloalquil-C0-6 alquila substituída ou não-substituída ou aril-C0-6 alquila substituída ou não-substituída. Em determinadas modalidades, u é 0; v é 0; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; r é 1 ou 2; s é 3; e q é 0, 1, 2 ou 3. Em algumas modalidades, u é 0 ou 1; v é 0; t é 1, 2 ou 3, r é 1; s é 1 ou 2; e q é 2 ou 3.
Em determinadas modalidades da Fórmula II L têm a estrutura:
<formula>formula see original document page 132</formula>
Em algumas dessas modalidades, u e 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; v e 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; w é 1, 2, 3, 4 ou 5; p é 1, 2, 3, 4 ou 5; q é O, 1, 2, 3, 4 ou 5; e Rb em cada ocorrência é, independentemente, hidrogênio, C1-10 alquila substituída ou não-substituída, C3-7 cicloalquil-C0-6 alquila substituída ou não-substituída ou aril-C0-6 alquila substituída ou não- substituída. Em determinadas modalidades, u é 0; v é 0; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; w é 1; p é 3; e q é O, 1, 2 ou 3. Em algumas modalidades, u é O ou 1; v é 0; t é 1 ou 2; w é 1; p é 1 ou 2; e q é 1 ou 2.
Em determinadas modalidades da Fórmula I, L têm a estrutura:
<formula>formula see original document page 132</formula>
Em algumas dessas modalidades, u e 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; v e 0,1, 2, 3, 4 ou 5; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; w é 1, 2, 3, 4 ou 5; p é 1, 2, 3, 4 ou 5; q é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; e Rb em cada ocorrência é, independentemente, hidrogênio, C1-10 alquila substituída ou não-substituída, C3-7 cicloalquil-C0-6 alquila substituída ou não-substituída ou aril-C0-6 alquila substituída ou não- substituída. Em determinadas modalidades, u é 0; v é 0; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; w é 1; ρ é 3; e q é Ο, 1, 2 ou 3. Em algumas modalidades, uéOou1; v é O;t é 1 ou 2; w é 1; ρ é 1 ou 2; e q é 1 ou 2.
Em determinadas modalidades da Fórmula I, L têm a estrutura:
<formula>formula see original document page 133</formula>
Em algumas dessas modalidades, u e 0,1,2,3,4, ou 5; v e 0,1, 2, 3, 4 ou 5; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; w é 1, 2, 3, 4 ou 5; ρ é 1, 2, 3, 4 ou 5; q é O, 1, 2 ou 3; e Rb em cada ocorrência é, independentemente, hidrogênio, Cmo alquila substituída ou não-substituida, C3.7 cicloalquil-Co-β alquila substituída ou não-substituída ou aril-Co-6 alquila substituída ou não-substituída. Em determinadas modalidades, u é 0; ν é 0; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; w é 1; ρ é 3; e q é O, 1, 2 ou 3. Em algumas modalidades, ué Oou 1; véO; té 1 ou 2; w é 1; ρ é 1 ou 2; e q é 2 ou 3.
Em determinadas modalidades da Fórmula I, L têm a estrutura:
<formula>formula see original document page 133</formula>
Em algumas dessas modalidades, u e 0, 1, 2, 3, 5 ou 5; v e 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; r é 1, 2, 3, 4 ou 5; s é O, 1, 2, 3, 4 ou 5; q é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; e Rb é hidrogênio, Cm0 alquila substituída ou não- substituída, C3-7 cicloalquil-Co-6 alquila substituída ou não-substituída ou aril- C0-6 alquila substituída ou não-substituída. Em determinadas modalidades, u é 0; ν é 0; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; r é 1 ou 2; s é 3; e q é O, 1, 2 ou 3. Em algumas modalidades, u é O ou 1; ν é 0; t é 1, 2 ou 3, r é 1; s é 1 ou 2; e q é 1 ou 2.
Em determinadas modalidades da Formula I, L tem a estrutura:
<formula>formula see original document page 133</formula>
Em algumas dessas modalidades, u e 0, 1, 2, 3, 5 ou 5; v e 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; r é 1, 2, 3, 4 ou 5; s é O, 1, 2, 3, 4 ou 5; q é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; e Rb é hidrogênio, C1-I0 alquila substituída ou não- substituída, C3-7 cicloalquil-Co-6 alquila substituída ou não-substituída ou aril- C0-6 alquila substituída ou não-substituída. Em determinadas modalidades, u é 0; ν é 0; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; r é 1 ou 2; s é 3; e q é O, 1, 2 ou 3. Em algumas modalidades, ué Oou 1; véO; t é 1, 2 ou 3, ré 1; s é 1 ou 2; e q é 1 ou 2.
Em determinadas modalidades da Fórmula I, L têm a estrutura:
<formula>formula see original document page 134</formula>
Em algumas dessas modalidades, u é O, 1, 2, 3, 4 ou 5; ν é O, 1, 2, 3, 4 ou 5; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; r é 1, 2, 3, 4 ou 5; s é O, 1, 2, 3, 4 ou 5; q é 0, 1, 2 ou 3; e Rb é hidrogênio, Cm0 alquila substituída ou não-substituída, C3-7 cicloalquil-Co-6 alquila substituída ou não-substituída ou aril-Co-6 alquila substituída ou não-substituída. Em determinadas modalidades, u é 0; ν é 0; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; r é 1 ou 2; s é 3; e q é O, 1, 2 ou 3. Em algumas modalidades, u é O ou 1; ν é 0; t é 1, 2 ou 3, r é 1; s é 1 ou 2; e q é 2 ou 3.
Em determinadas modalidades da Fórmula I, L têm a estrutura:
<formula>formula see original document page 134</formula>
Em algumas dessas modalidades, u é O, 1, 2, 3, 4 ou 5; ν é O, 1, 2, 3, 4 ou 5; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; w é 1, 2, 3, 4 ou 5; ρ é 1, 2, 3, 4 ou 5; q é O, 1, 2, 3, 4 ou 5; e Rb em cada ocorrência é, independentemente, hidrogênio, C1-10 alquila substituída ou não-substituída, C3.7 cicloalquil-C0-6 alquila substituída ou não-substituída ou aril-C0-6 alquila substituída ou não- substituída. Em determinadas modalidades, u é 0; v é 0; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; w é 1; p é 3; e q é O, 1, 2 ou 3. Em algumas modalidades, u é O ou 1; v é 0; t é 1 ou 2; w é 1; p é 1 ou 2; e q é 1 ou 2.
Em determinadas modalidades da Fórmula I, L têm a estrutura: <formula>formula see original document page 135</formula>
Em algumas dessas modalidades, u é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; ν é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; w é 1, 2, 3, 4 ou 5; ρ é 1, 2, 3, 4 ou 5; q é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; e Rb em cada ocorrência é, independentemente, hidrogênio, C1-10 alquila substituída ou não-substituída, C3-7 cicloalquil-Co-6 alquila substituída ou não-substituída ou aril-C0-6 alquila substituída ou não- substituída. Em determinadas modalidades, u é 0; ν é 0; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; w é 1; ρ é 3; e q é 0, 1, 2 ou 3. Em algumas modalidades, u é 0 ou 1; ν é 0; t é 1 ou 2; w é 1; ρ é 1 ou 2; e q é 1 ou 2.
Em determinadas modalidades da Fórmula I, L têm a estrutura:
<formula>formula see original document page 135</formula>
Em algumas dessas modalidades, u é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; ν é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; w é 1, 2, 3, 4 ou 5; ρ é 1, 2, 3, 4 ou 5; q é 0, 1, 2 ou 3; e Rb em cada ocorrência é, independentemente, hidrogênio, C1-10 alquila substituída ou não-substituída, C3-7 cicloalquil-C0-6 alquila substituída ou não-substituída ou aril-C0-6 alquila substituída ou não-substituída. Em determinadas modalidades, u é 0; ν é 0; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; w é 1; ρ é 3; e q é 0, 1, 2 ou 3. Em algumas modalidades, u é 0 ou 1; ν é 0; t é 1 ou 2; w é 1; ρ é 1 ou 2; e q é 2 ou 3.
Em determinadas modalidades da Fórmula I, L têm a estrutura:
<formula>formula see original document page 135</formula>
Em algumas dessas modalidades, u é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; ν é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; r é 1, 2, 3, 4 ou 5; s é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; q é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; e Rb em cada ocorrência é, independentemente, hidrogênio, C1-10 alquila substituída ou não-substituída, C3-7 cicloalquil-C0-6 alquila substituída ou não-substituída ou aril-C0-6 alquila substituída ou não- substituída. Em determinadas modalidades, u é 0; ν é 0; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; r é 1 ou 2; s é 3; e q é 0, 1, 2 ou 3. Em algumas modalidades, u é 0 ou 1; ν é 0; t é 1, 2 ou 3, r é 1; s é 1 ou 2; e q é 1 ou 2.
Em determinadas modalidades da Fórmula I, L têm a estrutura:
<formula>formula see original document page 136</formula>
Em algumas dessas modalidades, u é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; ν é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; r é 1, 2, 3, 4 ou 5; s é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; q é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; e Rb em cada ocorrência é, independentemente, hidrogênio, C1-10 alquila substituída ou não-substituída, C3-7 cicloalquil-C0-6 alquila substituída ou não-substituída ou aril-Co-6 alquila substituída ou não- substituída. Em determinadas modalidades, u é 0; ν é 0; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; r é 1 ou 2; s é 3; e q é 0, 1, 2 ou 3. Em algumas modalidades, u é 0 ou 1; ν é 0; t é 1, 2 ou 3, r é 1; s é 1 ou 2; e q é 1 ou 2.
Em determinadas modalidades da Fórmula I, L têm a estrutura:
<formula>formula see original document page 136</formula>
Em algumas dessas modalidades, u é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; ν é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; r é 1, 2, 3, 4 ou 5; s é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; q é 0, 1, 2 ou 3; e Rb em cada ocorrência é, independentemente, hidrogênio, C1- 10 alquila substituída ou não-substituída, C3-7 cicloalquil-C0-6 alquila substituída ou não-substituída ou aril-Co-6 alquila substituída ou não- substituída. Em determinadas modalidades, u é 0; ν é 0; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; r é 1 ou 2; s é 3; e q é 0, 1, 2 ou 3. Em algumas modalidades, u é 0 ou 1; ν é 0; t é 1, 2 ou 3, r é 1; s é 1 ou 2; e q é 2 ou 3.
Em determinadas modalidades da Fórmula I, L têm a estrutura:
<formula>formula see original document page 136</formula> Em algumas dessas modalidades, u é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; ν é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; w é 1, 2, 3, 4 ou 5; ρ é 1, 2, 3, 4 ou 5; q é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; e Rb em cada ocorrência é, independentemente, hidrogênio, C-MO alquila substituída ou não-substituída, C3.7 cicloalquil-Co-6 alquila substituída ou não-substituída ou aril-C0-6 alquila substituída ou não- substituída. Em determinadas modalidades, u é 0; ν é 0; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; w é 1; ρ é 3; e q é 0, 1, 2 ou 3. In still some modalidades, u é 0 ou 1; ν é 0; t é 1 ou 2; w é 1; ρ é 1 ou 2; e q é 1 ou 2.
Em determinadas modalidades da Fórmula I, L têm a estrutura:
<formula>formula see original document page 137</formula>
Em algumas dessas modalidades, u é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; ν é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; w é 1, 2, 3, 4 ou 5; ρ é 1, 2, 3, 4 ou 5; q é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; e Rb em cada ocorrência é, independentemente, hidrogênio, C1-10 alquila substituída ou não-substituída, C3-7 cicloalquil-Co-6 alquila substituída ou não-substituída ou aril-C0-6 alquila substituída ou não- substituída. Em determinadas modalidades, u é 0; ν é 0; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; w é 1; ρ é 3; e q é 0, 1, 2 ou 3. Em algumas modalidades, u é 0 ou 1; ν é 0; t é 1 ou 2; w é 1; ρ é 1 ou 2; e q é 1 ou 2.
Em determinadas modalidades da Fórmula I, L têm a estrutura:
<formula>formula see original document page 137</formula>
Em algumas dessas modalidades, u é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; ν é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; w é 1, 2, 3, 4 ou 5; ρ é 1, 2, 3, 4 ou 5; q é 0, 1, 2 ou 3; e Rb em cada ocorrência é, independentemente, hidrogênio, C-mo alquila substituída ou não-substituída, C3-7 cicloalquil-C0-6 alquila substituída ou não-substituída ou aril-Co-6 alquila substituída ou não-substituída. Em determinadas modalidades, u é 0; ν é 0; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; w é 1; ρ é 3; e q é 0, 1, 2 ou 3. Em algumas modalidades, u é 0 ou 1; ν é 0; t é 1 ou 2; w é 1; ρ é 1 ou 2; e q é 2 ou 3.
Em determinadas modalidades da Fórmula I, L têm a estrutura:
<formula>formula see original document page 138</formula>
Em algumas dessas modalidades, u é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; ν é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; r é 1, 2, 3, 4 ou 5; s é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; q é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; e R^b em cada ocorrência é, independentemente, hidrogênio, C1-10 alquila substituída ou não-substituída, C3-7 cicloalquil-C0-6 alquila substituída ou não-substituída ou aril-C0-6 alquila substituída ou não- substituída. Em determinadas modalidades, u é 0; ν é 0; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; r é 1 ou 2; s é 3; e q é 0, 1, 2 ou 3. Em algumas modalidades, u é 0 ou 1; ν é 0; t é 1, 2 ou 3, r é 1; s é 1 ou 2; e q é 1 ou 2.
Em determinadas modalidades da Fórmula I, L têm a estrutura:
<formula>formula see original document page 138</formula>
Em algumas dessas modalidades, u é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; ν é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; r é 1, 2, 3, 4 ou 5; s é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; q é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; e R^b em cada ocorrência é, independentemente, hidrogênio, C1-10 alquila substituída ou não-substituída, C3-7 cicloalquil-C0-6 alquila substituída ou não-substituída ou aril-Co-6 alquila substituída ou não- substituída. Em determinadas modalidades, u é 0; ν é 0; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; r é 1 ou 2; s é 3; e q é 0, 1, 2 ou 3. Em algumas modalidades, u é O ou 1; ν é 0; t é 1, 2 ou 3, r é 1; s é 1 ou 2; e q é 1 ou 2.
Em determinadas modalidades da Fórmula I, L têm a estrutura:
<formula>formula see original document page 138</formula>
Em algumas dessas modalidades, u é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; ν é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; r é 1, 2, 3, 4 ou 5; s é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; q é 0, 1, 2 ou 3; e R em cada ocorrência é, independentemente, hidrogênio, C-i- io alquila substituída ou não-substituída, C3.7 cicloalquil-Co-6 alquila substituída ou não-substituída ou aril-Co-6 alquila substituída ou não- substituída. Em determinadas modalidades, u é 0; ν é 0; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; r é 1 ou 2; s é 3; e q é 0, 1, 2 ou 3. Em algumas modalidades, u é Q ou 1; ν é 0; t é 1, 2 ou 3, r é 1; s é 1 ou 2; e q é 2 ou 3.
Em determinadas modalidades da Fórmula I, L têm a estrutura:
<formula>formula see original document page 139</formula>
Em algumas dessas modalidades, u é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; ν é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; w é 1, 2, 3, 4 ou 5; ρ é 1, 2, 3, 4 ou 5; q é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; e Rb em cada ocorrência é, independentemente, hidrogênio, Cmo alquila substituída ou não-substituída, C3.7 cicloalquil-Co-6 alquila substituída ou não-substituída ou aril-Co-6 alquila substituída ou não- substituída. Em determinadas modalidades, u é 0; ν é 0; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; w é 1; ρ é 3; e q é 0, 1, 2 ou 3. Em ainda outras modalidades, u é 0 ou 1; ν é 0; t é 1 ou 2; w é 1; ρ é 1 ou 2; e q é 1 ou 2.
Em determinadas modalidades da Fórmula I, L têm a estrutura:
<formula>formula see original document page 139</formula>
Em algumas dessas modalidades, u é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; ν é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; w é 1, 2, 3, 4 ou 5; ρ é 1, 2, 3, 4 ou 5; q é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; e Rb em cada ocorrência é, independentemente, hidrogênio, C1--I0 alquila substituída ou não-substituída, C3.- cicloalquil-C0-6 alquila substituída ou não-substituída ou aril-C0-6 alquila substituída ou não- substituída. Em determinadas modalidades, u é 0; ν é 0; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; w é 1; ρ é 3; e q é 0, 1, 2 ou 3. Em algumas modalidades, u é 0 ou 1; ν é 0; t é 1 ou 2; w é 1; ρ é 1 ou 2; e q é 1 ou 2.
Em determinadas modalidades da Fórmula I, L têm a estrutura: <formula>formula see original document page 140</formula>
2, 3, 4 ou 5; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; w é 1, 2, 3, 4 ou 5; ρ é 1, 2, 3, 4 ou 5; q é Ο, 1, 2 ou 3; e Rb em cada ocorrência é, independentemente, hidrogênio, Cmo alquila substituída ou não-substituída, C3-7 cicloalquil-C0-6 alquila substituída ou não-substituída ou aril-C0-6 alquila substituída ou não-substituída. Em determinadas modalidades, u é 0; ν é 0; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; w é 1; ρ é 3; e q é 0, 1, 2 ou 3. Em algumas modalidades, u é 0 ou 1; ν é 0; t é 1 ou 2; w é 1; ρ é 1 ou 2; e q é 2 ou 3.
Em determinadas modalidades da Fórmula I, L têm a estrutura:
<formula>formula see original document page 140</formula>
2, 3, 4 ou 5; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; r é 1, 2, 3, 4 ou 5; s é O, 1, 2, 3, 4 ou 5; q é O, 1, 2, 3, 4 ou 5; e Rb é hidrogênio, C-mo alquila substituída ou não- substituída, C3-7 cicloalquil-Co-6 alquila substituída ou não-substituída ou aril- C0-6 alquila substituída ou não-substituída. Em determinadas modalidades, u é 0; ν é 0; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; r é 1 ou 2; s é 3; e q é O, 1, 2 ou 3. Em algumas modalidades, u é O ou 1; ν é 0; t é 1, 2 ou 3, r é 1; s é 1 ou 2; e q é 1 ou 2.
Em determinadas modalidades da Fórmula I, L têm a estrutura: 2, 3, 4 ou 5; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; r é 1, 2, 3, 4 ou 5; s é O, 1, 2, 3, 4 ou 5; q é O, 1, 2, 3, 4 ou 5; e Rb é hidrogênio, Cm0 alquila substituída ou não- substituída, C3-7 cicloalquil-C0-6 alquila substituída ou não-substituída ou aril- C0-6 alquila substituída ou não-substituída. Em determinadas modalidades, u é 0; ν é 0; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; r é 1 ou 2; s é 3; e q é 0, 1, 2 ou 3. Em algumas modalidades, u é 0 ou 1; ν é 0; t é 1, 2 ou 3, r é 1; s é 1 ou 2; e q é 1 ou 2.
Em determinadas modalidades da Fórmula I, L têm a estrutura:
Em algumas dessas modalidades, u é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; ν é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; r é 1, 2, 3, 4 ou 5; s é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; q é 0, 1, 2 ou 3; e Rb é hidrogênio, C-mo alquila substituída ou não-substituída, C3-7 cicloalquil-Co-6 alquila substituída ou não-substituída ou aril-Co-6 alquila substituída ou não-substituída. Em determinadas modalidades, u é 0; ν é 0; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; r é 1 ou 2; s é 3; e q é 0, 1, 2 ou 3. Em algumas modalidades, u é 0 ou 1; ν é 0; t é 1, 2 ou 3, r é 1; s é 1 ou 2; e q é 2 ou 3.
Em determinadas modalidades da Fórmula I, L conforme a estrutura:
<formula>formula see original document page 141</formula>
Em algumas dessas modalidades, ν é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; r é 1, 2, 3, 4 ou 5; s é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; q é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; e Rb é hidrogênio, C-M0 alquila substituída ou não-substituída, C3.7 cicloalquil- O0-6 alquila substituída ou não-substituída ou aril-Co-6 alquila substituída ou não-substituída. Em determinadas modalidades, ν é 0; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; r é 1 ou 2; s é 0; e q é 0, 1, 2 ou 3. Em algumas modalidades, ν é 0; t é 1, 2 ou 3, r é 1 ou 2; s é 0; e q é 1 ou 2.
Em determinadas modalidades da Fórmula I, L conforme a estrutura:
<formula>formula see original document page 141</formula> Em algumas dessas modalidades, ν é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; r é 1, 2, 3, 4 ou 5; s é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; q é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; e Rb é hidrogênio, C1-10 alquila substituída ou não-substituída, C3-7 cicloalquil- C0-6 alquila substituída ou não-substituída ou aril-C0-6 alquila substituída ou não-substituída. Em determinadas modalidades, ν é 0; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; r é 1 ou 2; s é 0; e q é 0, 1, 2 ou 3. Em algumas modalidades, ν é 0; t é 1, 2 ou 3, r é 1 ou 2; s é 0; e q é 1 ou 2.
Em determinadas modalidades da Fórmula I, L conforme a estrutura:
<formula>formula see original document page 142</formula>
Em algumas dessas modalidades, ν é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; ré 1, 2, 3, 4 ou 5; s é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; q é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; e R"b é hidrogênio, C1-10 alquila substituída ou não-substituída, C3-7 cicloalquil- C0-6 alquila substituída ou não-substituída ou aril-C0-6 alquila substituída ou não-substituída. Em determinadas modalidades, ν é 0; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; r é 1 ou 2; s é 0; e q é 0, 1, 2 ou 3. Em algumas modalidades, ν é 0; t é 1, 2 ou 3, r é 1 ou 2; s é 0; e q é 1 ou 2.
Determinadas modalidades de acordo com a Fórmula I têm a estrutura:
<formula>formula see original document page 142</formula>
Em algumas dessas modalidades, ν é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; w é 1, 2, 3, 4 ou 5; ρ é 1, 2, 3, 4 ou 5; q é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; e Rb em cada ocorrência é, independentemente, hidrogênio, Cmo alquila substituída ou não-substituída, C3-7 cicloalquil-C0-6 alquila substituída ou não- substituída ou aril-C0-6 alquila substituída ou não-substituída. Em determinadas modalidades, ν é 0; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; w é 1; ρ é 3; e q é 0, 1, 2 ou 3. Em algumas modalidades, V é 0; t é 1 ou 2; w é 1; p é 1 ou 2; e q é 1 ou 2. Determinadas modalidades de acordo com a Fórmula I têm a estrutura:
<formula>formula see original document page 143</formula>
Em algumas dessas modalidades, ν é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; w é 1, 2, 3, 4 ou 5; ρ é 1, 2, 3, 4 ou 5; q é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; e Rb em cada ocorrência é, independentemente, hidrogênio, C-mo alquila substituída ou não-substituída, C3-7 cicloalquil-C0-6 alquila substituída ou não- substituída ou aril-C0-6 alquila substituída ou não-substituída. Em determinadas modalidades, ν é 0; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; w é 1; ρ é 3; e q é O, 1, 2 ou 3. Em algumas modalidades, ν é 0; t é 1 ou 2; w é 1; ρ é 1 ou 2; e q é 1 ou 2.
Determinadas modalidades de acordo com a Fórmula I têm a estrutura:
<formula>formula see original document page 143</formula>
Em algumas dessas modalidades, ν é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; w ê 1, 2, 3, 4 ou 5; ρ é 1, 2, 3, 4 ou 5; q ê 0, 1, 2 ou 3; e Rb em cada ocorrência é, independentemente, hidrogênio, C1-10 alquila substituída ou não-substituída, C3-7 cicloalquil-C0-6 alquila substituída ou não-substituída ou aril-C0-6 alquila substituída ou não-substituída. Em determinadas modalidades, ν é 0; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; w é 1; ρ é 3; e q é 0, 1, 2 ou 3. Em algumas modalidades, ν é 0; t é 1 ou 2; w é 1; ρ é 1 ou 2; e q é 2 ou 3.
Determinadas modalidades de acordo com a Fórmula I têm a estrutura:
<formula>formula see original document page 143</formula>
Em algumas dessas modalidades, ν é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; r é 1, 2, 3, 4 ou 5; s é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; q é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; e Rb em cada ocorrência é, independentemente, hidrogênio, C1-10 alquila substituída ou não-substituída, C3-7 cicloalquil-C0-6 alquila substituída ou não- substituída ou aril-C0-6 alquila substituída ou não-substituída. Em determinadas modalidades, ν é 0; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; r é 1 ou 2; s é 3; e q é 0,1,2 ou 3. Em algumas modalidades, ν é 0; t é 1, 2 ou 3, r é 1; s é 1 ou 2; e q é 1 ou 2.
Determinadas modalidades de acordo com a Fórmula I têm a estrutura:
<formula>formula see original document page 144</formula>
Em algumas dessas modalidades, ν é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; r é 1, 2, 3, 4 ou 5; s é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; q é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; e Rb em cada ocorrência é, independentemente, hidrogênio, C-M0 alquila substituída ou não-substituída, C3-7 cicloalquil-Co-6 alquila substituída ou não- substituída ou aril-Co-6 alquila substituída ou não-substituída. Em determinadas modalidades, ν é 0; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; r é 1 ou 2; s é 3; e q é 0, 1, 2 ou 3. Em algumas modalidades, ν é 0; t é 1, 2 ou 3, r é 1; s é 1 ou 2; e q é 1 ou 2.
Determinadas modalidades de acordo com a Fórmula I têm a estrutura:
<formula>formula see original document page 144</formula>
Em algumas dessas modalidades, ν é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; r é 1, 2, 3, 4 ou 5; s é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; q é 0, 1, 2 ou 3; e Rb em cada ocorrência é, independentemente, hidrogênio, C-mo alquila substituída ou não-substituída, C3.7 cicloalquil-Co-6 alquila substituída ou não-substituída ou aril-Co-6 alquila substituída ou não-substituída. Em determinadas modalidades, ν é 0; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; r é 1 ou 2; s é 3; e q é 0, 1, 2 ou 3. Em algumas modalidades, ν é 0; t é 1, 2 ou 3, r é 1; s é 1 ou 2; e q é 2 ou 3.
Determinadas modalidades de acordo com a Fórmula I têm a estrutura:
<formula>formula see original document page 145</formula>
Em algumas dessas modalidades, ν é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; w é 1, 2, 3, 4 ou 5; ρ é 1, 2, 3, 4 ou 5; q é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; e Rb em cada ocorrência é, independentemente, hidrogênio, Cmo alquila substituída ou não-substituída, C3.7 cicloalquil-C0-6 alquila substituída ou não- substituída ou aril-Co-6 alquila substituída ou não-substituída. Em determinadas modalidades, ν é 0; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; w é 1; ρ é 3; e q é 0, 1, 2 ou 3. Em algumas modalidades, ν é 0; t é 1 ou 2; w é 1; ρ é 1 ou2;eqé 1 ou 2.
Determinadas modalidades de acordo com a Fórmula I têm a estrutura:
<formula>formula see original document page 145</formula>
Em algumas dessas modalidades, ν é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; w é 1, 2, 3, 4 ou 5; ρ é 1, 2, 3, 4 ou 5; q é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; e Rb em cada ocorrência é, independentemente, hidrogênio, C-mo alquila substituída ou não-substituída, C3.7 cicloalquil-Co-6 alquila substituída ou não- substituída ou aril-Co-6 alquila substituída ou não-substituída. Em determinadas modalidades, ν é 0; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; w é 1; ρ é 3; e q é 0, 1, 2 ou 3. Em algumas modalidades, ν é 0; t é 1 ou 2; w é 1; ρ é 1 ou 2; e q é 1 ou 2.
Determinadas modalidades de acordo com a Fórmula I têm a estrutura:
<formula>formula see original document page 145</formula>
Em algumas dessas modalidades, ν é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; w é 1, 2, 3, 4 ou 5; ρ é 1, 2, 3, 4 ou 5; q é 0, 1, 2 ou 3; e Rb em cada ocorrência é, independentemente, hidrogênio, C1-I0 alquila substituída ou não-substituída, C3-7 cicloalquil-Co-6 alquila substituída ou não-substituída ou aril-C0-6 alquila substituída ou não-substituída. Em determinadas modalidades, ν é 0; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; w é 1; ρ é 3; e q é 0, 1, 2 ou 3. Em algumas modalidades, ν é 0; t é 1 ou 2; w é 1; ρ é 1 ou 2; e q é 2 ou 3.
Determinadas modalidades de acordo com a Fórmula I têm a estrutura:
<formula>formula see original document page 146</formula>
Em algumas dessas modalidades, ν é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; r é 1, 2, 3, 4 ou 5; s é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; q é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; e Rb é hidrogênio, C1-10 alquila substituída ou não-substituída, C3-7 cicloalquil- C0-6 alquila substituída ou não-substituída ou aril-C0-6 alquila substituída ou não-substituída. Em determinadas modalidades, ν é 0; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; r é 1 ou 2; s é 3; e q é 0, 1, 2 ou 3. Em algumas modalidades, ν é 0; t é 1, 2 ou 3, r é 1; s é 1 ou 2; e q é 1 ou 2.
Determinadas modalidades de acordo com a Fórmula I têm a estrutura:
<formula>formula see original document page 146</formula>
Em algumas dessas modalidades, ν é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; r é 1, 2, 3, 4 ou 5; s é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; q é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; e Rb é hidrogênio, C1-10 alquila substituída ou não-substituída, C3-7 cicloalquil- C0-6 alquilsubstituída ou não-substituída ou aril-C0-6 alquila substituída ou não-substituída. Em determinadas modalidades, ν é 0; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; r é 1 ou 2; s ê 3; e q é 0, 1, 2 ou 3. Em algumas modalidades, ν é 0; t é 1, 2 ou 3, r é 1; s é 1 ou 2; e q é 1 ou 2.
Determinadas modalidades de acordo com a Fórmula I têm a estrutura:
<formula>formula see original document page 146</formula> Em algumas dessas modalidades, ν é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; r é 1, 2, 3, 4 ou 5; s é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; q é 0, 1, 2 ou 3; e Rb é hidrogênio, C1-10 alquila substituída ou não-substituída, C3-7 cicloalquil-C0-6 alquila substituída ou não-substituída ou aril-C0-6 alquila substituída ou não- substituída. Em determinadas modalidades, ν é 0; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; r é 1 ou 2; s é 3; e q é 0, 1, 2 ou 3. Em algumas modalidades, ν é 0; t é 1, 2 ou 3, r é 1; s é 1 ou 2; e q é 2 ou 3.
Outra modalidade de acordo com a Fórmula I é:
<formula>formula see original document page 147</formula>
em que ν é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; w é 1, 2, 3, 4 ou 5; ρ é 1, 2, 3, 4 ou 5; e q é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5. Em algumas dessas modalidades ν é 0; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; w é 1; ρ é 3; e q é 2.
<formula>formula see original document page 147</formula>
conforme usado aqui, se refere a um agente de direcionamento de GA em que "ΑΑΓ é o primeiro aminoácido em uma seqüência de agente de direcionamento de GA, conforme medido a partir do N-término, "AA2" é o segundo aminoácido em uma seqüência de um agente de direcionamento de GA1 conforme medido a partir do N-término e "AAn" é o n° aminoácido em uma seqüência de um agente de direcionamento de GA1 conforme medido a partir do N-término. O agente de direcionamento ainda compreende um resíduo de Lys na posição arbitrária m+1, conforme medido a partir do N-término. Será apreciado que, além de ligação a uma cadeia lateral de Lys no corpo de um agente de direcionamento de GA1 também é possível ligar a uma cadeia lateral de Lys sobre o N-término ou C-término de um agente de direcionamento de GA.
Determinadas modalidades de acordo com a Fórmula I têm a estrutura: <formula>formula see original document page 148</formula>
Em algumas dessas modalidades, ν é O, 1, 2, 3, 4 ou 5; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; w é 1, 2, 3, 4 ou 5; ρ é 1, 2, 3, 4 ou 5; q é O, 1, 2, 3, 4 ou 5; e Rb em cada ocorrência é, independentemente, hidrogênio, C-mo alquila substituída ou não-substituída, C3-7 cicloalquil-C0-6 alquila substituída ou não- substituída ou aril-Co-6 alquila substituída ou não-substituída. Em determinadas modalidades, ν é 0; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; w é 1; ρ é 3; e q é O, 1, 2 ou 3. Em algumas modalidades, ν é 0; t é 1 ou 2; w é 1; ρ é 1 ou 2; e q é 1 ou 2.
Determinadas modalidades de acordo com a Fórmula I têm a estrutura:
<formula>formula see original document page 148</formula>
Em algumas dessas modalidades, v e 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; t e 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; w é 1, 2, 3, 4 ou 5; ρ é 1, 2, 3, 4 ou 5; q é O, 1, 2, 3, 4 ou 5; e Rb em cada ocorrência é, independentemente, hidrogênio, C1-10 alquila substituída ou não-substituída, C3-7 cicloalquil-C0-6 alquila substituída ou não- substituída ou aril-Co-6 alquila substituída ou não-substituída. Em determinadas modalidades, ν é 0; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; w é 1; ρ é 3; e q é O, 1, 2 ou 3. Em algumas modalidades, ν é 0; t é 1 ou 2; w é 1; ρ é 1 ou 2; e q é 1 ou 2.
Determinadas modalidades de acordo com a Fórmula I têm a estrutura: <formula>formula see original document page 149</formula>
Em algumas dessas modalidades, ν é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; w é 1, 2, 3, 4 ou 5; ρ é 1, 2, 3, 4 ou 5; q é 0, 1, 2 ou 3; e Rb em cada ocorrência é, independentemente, hidrogênio, C-mo alquila substituída ou não-substituída, C3.7 cicloalquil-Co-6 alquila substituída ou não-substituída ou aril-C0-6 alquila substituída ou não-substituída. Em determinadas modalidades, ν é 0; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; w é 1; ρ é 3; e q é O, 1, 2 ou 3. Em algumas modalidades, v é 0; t é 1 ou 2; w é 1; ρ é 1 ou 2; e q é 2 ou 3.
Determinadas modalidades de acordo com a Fórmula I têm a estrutura:
<formula>formula see original document page 149</formula>
Em algumas dessas modalidades, ν é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; r é 1, 2, 3, 4 ou 5; s é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; q é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; e Rb é hidrogênio, Cmo alquila substituída ou não-substituída, C3-7 cicloalquil- O0-6 alquila substituída ou não-substituída ou aril-Co-6 alquila substituída ou não-substituída. Em determinadas modalidades, ν é 0; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; r é 1 ou 2; s é 3; e q é 0, 1, 2 ou 3. Em algumas modalidades, ν é 0; t é 1, 2 ou 3, r é 1; s é 1 ou 2; e q é 1 ou 2.
Determinadas modalidades de acordo com a Fórmula I têm a estrutura:
<formula>formula see original document page 149</formula> Em algumas dessas modalidades, ν é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; r é 1, 2, 3, 4 ou 5; s é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; q é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; e Rb é hidrogênio, Cmo alquila substituída ou não-substituída, C3-7 cicloalquil- C0-6 alquila substituída ou não-substituída ou aril-C0-6 alquila substituída ou não-substituída. Em determinadas modalidades, ν é 0; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; r é 1 ou 2; s é 3; e q é 0, 1, 2 ou 3. Em algumas modalidades, ν é 0; t é 1, 2 ou 3, r é 1; s é 1 ou 2; e q é 1 ou 2.
Determinadas modalidades de acordo com a Fórmula I têm a estrutura:
<formula>formula see original document page 150</formula>
Em algumas dessas modalidades, ν é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; r é 1, 2, 3, 4 ou 5; s é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; q é 0, 1, 2 ou 3; e Rb é hidrogênio, C1-10 alquila substituída ou não-substituída, C3.7 cicloalquil-Co-6 alquila substituída ou não-substituída ou aril-C0-6 alquila substituída ou não- substituída. Em determinadas modalidades, ν é 0; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; r é 1 ou 2; s é 3; e q é 0, 1, 2 ou 3. Em algumas modalidades, ν é 0; t é 1, 2 ou 3, r é 1; s é 1 ou 2; e q é 2 ou 3.
Determinadas modalidades de acordo com a Fórmula Il têm a estrutura:
<formula>formula see original document page 150</formula>
Em algumas dessas modalidades, u é 1, 2, 3, 4 ou 5; ν é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; r é 1, 2, 3, 4 ou 5; s é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; q é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; e Rb é hidrogênio, Cmo alquila substituída ou não-substituída, C3-7 cicloalquil-Co-6 alquila substituída ou não-substituída ou aril-Co-6 alquila substituída ou não-substituída. Em determinadas modalidades, u é 1, 2, 3, 4 ou 5; ν é 0; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; r é 1 ou 2; s é 0; e q é 0, 1, 2 ou 3. Em algumas modalidades, u é 1, 2 ou 3; ν é 0; t é 1, 2 ou 3, r é 1 ou 2; s é 0; e q é 1 ou 2.
Determinadas modalidades de acordo com a Fórmula I têm a estrutura:
<formula>formula see original document page 151</formula>
Em algumas dessas modalidades, u é 1, 2, 3, 4 ou 5; ν é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; r é 1, 2, 3, 4 ou 5; s é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; q é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; e Rb é hidrogênio, Cmo alquila substituída ou não-substituída, C3-7 cicloalquil-Co-6 alquila substituída ou não-substituída ou aril-C0-6 alquila substituída ou não-substituída. Em determinadas modalidades, u é 1, 2, 3, 4 ou 5; ν é 0; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; r é 1 ou 2; s é 0; e q é 0, 1, 2 ou 3. Em algumas modalidades, u é 1, 2 ou 3; ν é 0; t é 1, 2 ou 3, r é 1 ou 2; s é 0; e q é 1 ou 2.
Determinadas modalidades de acordo com a Fórmula I têm a estrutura:
<formula>formula see original document page 151</formula>
Em algumas dessas modalidades, u é 1, 2, 3, 4 ou 5; ν é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; r é 1, 2, 3, 4 ou 5; s é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; q é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; e Rb é hidrogênio, Cmo alquila substituída ou não-substituída, C3-7 cicloalquil-C0-6 alquila substituída ou não-substituída ou aril-C0-6 alquila substituída ou não-substituída. Em determinadas modalidades, u é 1, 2, 3, 4 ou 5; ν é 0; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; r é 1 ou 2; s é 0; e q é 0, 1, 2 ou 3. Em algumas modalidades, u é 1, 2 ou 3; ν é 0; t é 1, 2 ou 3, r é 1 ou 2; s é 0; e q é 1 ou 2.
Determinadas modalidades de acordo com a Fórmula I têm a estrutura:
<formula>formula see original document page 152</formula>
Em algumas dessas modalidades, ν é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; w é 1, 2, 3, 4 ou 5; ρ é 1, 2, 3, 4 ou 5; q é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; e Rb em cada ocorrência é, independentemente, hidrogênio, Cmo alquila substituída ou não-substituída, C3.7 cicloalquil-C0-6 alquila substituída ou não- substituída ou aril-Co-6 alquila substituída ou não-substituída. Em determinadas modalidades, ν é 0; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; w é 1; ρ é 3; e q é 0, 1, 2 ou 3. Em algumas modalidades, ν é 0; t é 1 ou 2; w é 1; ρ é 1 ou 2; e q é 1 ou 2.
Determinadas modalidades de acordo com a Fórmula I têm a estrutura:
<formula>formula see original document page 152</formula>
Em algumas dessas modalidades, ν é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; w é 1, 2, 3, 4 ou 5; ρ é 1, 2, 3, 4 ou 5; q é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; e Rb em cada ocorrência é, independentemente, hidrogênio, Cm0 alquila substituída ou não-substituída, C3.7 cicloalquil-Co-6 alquila substituída ou não- substituída ou aril-Co-6 alquila substituída ou não-substituída. Em determinadas modalidades, ν é 0; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; w é 1; ρ é 3; e q é 0, 1, 2 ou 3. Em algumas modalidades, ν é 0; t é 1 ou 2; w é 1; ρ é 1 ou 2; e q é 1 ou 2.
Determinadas modalidades de acordo com a Fórmula I têm a estrutura:
<formula>formula see original document page 153</formula>
Em algumas dessas modalidades, v é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; w é 1, 2, 3, 4 ou 5; ρ é 1, 2, 3, 4 ou 5; q é 0, 1, 2 ou 3; e Rb em cada ocorrência é, independentemente, hidrogênio, C1-10 alquila substituída ou não-substituída, C3-7 cicloalquil-C0-6 alquila substituída ou não-substituída ou aril-C0-6 alquila substituída ou não-substituída. Em determinadas modalidades, ν é 0; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; w é 1; ρ é 3; e q é 0, 1, 2 ou 3. Em algumas modalidades, ν é 0; t é 1 ou 2; w é 1; ρ é 1 ou 2; e q é 2 ou 3.
Determinadas modalidades de acordo com a Fórmula I têm a estrutura:
<formula>formula see original document page 153</formula>
Em algumas dessas modalidades, ν é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; r é 1, 2, 3, 4 ou 5; s é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; q é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; e Rb é hidrogênio, Cm0 alquila substituída ou não-substituída, C3-7 cicloalquil- C0-6 alquila substituída ou não-substituída ou aril-C0-6 alquila substituída ou não-substituída. Em determinadas modalidades, ν é 0; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; r é 1 ou 2; s é 3; e q é 0, 1, 2 ou 3. Em algumas modalidades, ν é 0; t é 1, 2 ou 3, r é 1; s é 1 ou 2; e q é 1 ou 2.
Determinadas modalidades de acordo com a Fórmula I têm a estrutura: <formula>formula see original document page 154</formula>
Em algumas dessas modalidades, ν é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; r é 1, 2, 3, 4 ou 5; s é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; q é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; e Rb é hidrogênio, Cmo alquila substituída ou não-substituída, C3.7 cicloalquil- C0-6 alquila substituída ou não-substituída ou aril-C0-6 alquila substituída ou não-substituída. Em determinadas modalidades, ν é 0; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; r é 1 ou 2; s é 3; e q é 0, 1, 2 ou 3. Em algumas modalidades, ν é 0; t é 1, 2 ou 3, r é 1; s é 1 ou 2; e q é 1 ou 2.
Determinadas modalidades de acordo com a Fórmula I têm a estrutura:
<formula>formula see original document page 154</formula>
Em algumas dessas modalidades, ν é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; r é 1, 2, 3, 4 ou 5; s é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; q é 0, 1, 2 ou 3; e Rb é hidrogênio, Cmo alquila substituída ou não-substituída, C3.7 cicloalquil-C0-6 alquila substituída ou não-substituída ou aril-Co-6 alquila substituída ou não- substituída. Em determinadas modalidades, ν é 0; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; r é 1 ou 2; s é 3; e q é 0, 1, 2 ou 3. Em algumas modalidades, ν é 0; t é 1, 2 ou 3, r é 1; s é 1 ou 2; e q é 2 ou 3.
Determinadas modalidades de acordo com a Fórmula I têm a estrutura:
<formula>formula see original document page 154</formula> Em algumas dessas modalidades, ν é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; w é 1, 2, 3, 4 ou 5; q é 1, 2, 3, 4 ou 5; q é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; e R"b em cada ocorrência é, independentemente, hidrogênio, Cmo alquila substituída ou não-substituída, C3-7 cicloalquil-C0-6 alquila substituída ou não- substituída ou aril-C0-6 aiquila substituída ou não-substituída. Em determinadas modalidades, ν é 0; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; w é 1; q é 3; e q é 0, 1, 2 ou 3. Em algumas modalidades, ν é 0; t é 1 ou 2; w é 1; q é 1 ou 2; e q é 1 ou 2.
Determinadas modalidades de acordo com a Fórmula I têm a estrutura:
<formula>formula see original document page 155</formula>
Em algumas dessas modalidades, v e 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; t e 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; w é 1, 2, 3, 4 ou 5; q é 1, 2, 3, 4 ou 5; q é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; e R"b em cada ocorrência é, independentemente, hidrogênio, Cm0 alquila substituída ou não-substituída, C3-7 cicloalquil-C0-6 alquila substituída ou não-
ubstituída ou aril-Co-6 alquila substituída ou não-substituída. Em determinadas modalidades ν é 0; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; w é 1; q é 3; e q é 0, 1, 2 ou 3. Em algumas modalidades, ν é 0; t é 1 ou 2; w é 1; q é 1 ou 2; e q é 1 ou 2.
Determinadas modalidades de acordo com a Fórmula I têm a estrutura:
<formula>formula see original document page 155</formula>
Em algumas dessas modalidades, v e 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; t e 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; w é 1, 2, 3, 4 ou 5; q é 1, 2, 3, 4 ou 5; q é 0, 1, 2 ou 3; e R"b em cada ocorrência é, independentemente, hidrogênio, Cmo alquila substituída ou não-substituída, C3-7 cicloalquil-C0-6 alquila substituída ou não-substituída ou aril-Co-6 alquila substituída ou não-substituída. Em determinadas modalidades, ν é 0; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; w é 1; ρ é 3; e q é 0, 1, 2 ou 3. Em algumas modalidades, ν é 0; t é 1 ou 2; w é 1; ρ é 1 ou 2; e q é 2 ou 3.
Determinadas modalidades de acordo com a Fórmula I têm a estrutura:
<formula>formula see original document page 156</formula>
Em algumas dessas modalidades, ν é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; r é 1, 2, 3, 4 ou 5; s é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; q é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; e Rb em cada ocorrência é, independentemente, hidrogênio, C-mo alquila substituída ou não-substituída, C3-7 cicloalquil-C0-6 alquila substituída ou não- substituída ou aril-Co-6 alquila substituída ou não-substituída. Em determinadas modalidades, ν é 0; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; r é 1 ou 2; s é 3; e q é 0, 1, 2 ou 3. Em algumas modalidades, ν é 0; t é 1, 2 ou 3, r é 1; s é 1 ou 2; e q é 1 ou 2.
Determinadas modalidades de acordo com a Fórmula I têm a estrutura:
<formula>formula see original document page 156</formula>
Em algumas dessas modalidades, ν é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; r é 1, 2, 3, 4 ou 5; s é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; q é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; e Rb em cada ocorrência é, independentemente, hidrogênio, C1-I0 alquila substituída ou não-substituída, C3-7 cicloalquil-C0-6 alquila substituída ou não- substituída ou aril-Co-6 alquila substituída ou não-substituída. Em determinadas modalidades, ν é 0; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; r é 1 ou 2; s é 3; e q é 0, 1, 2 ou 3. Em algumas modalidades, ν é 0; t é 1, 2 ou 3, r é 1; s é 1 ou 2; e q é 1 ou 2.
Determinadas modalidades de acordo com a Fórmula I têm a estrutura:
<formula>formula see original document page 157</formula>
Em algumas dessas modalidades, v é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; r é 1, 2, 3, 4 ou 5; s é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; q é 0, 1, 2 ou 3; e Rb em cada ocorrência é, independentemente, hidrogênio, C-M0 alquila substituída ou não-substituída, C3-7 cicloalquil-C0-6 alquila substituída ou não-substituída ou aril-C0-6 alquila substituída ou não-substituída. Em determinadas modalidades, v é 0; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; r é 1 ou 2; s é 3; e q é 0, 1, 2 ou 3. Em algumas modalidades, v é 0; t é 1, 2 ou 3, r é 1; s é 1 ou 2; e q é 2 ou 3.
Em determinadas modalidades, o Iigante L de acordo com a Fórmula 1 é:
<formula>formula see original document page 157</formula>
A administração de um composto de direcionamento de GA a um indivíduo imunocompetente pode resultar na produção de anticorpos contra o conjugado. Tais anticorpos podem ser dirigidos à região variável, incluindo o idiotipo do anticorpo, bem como ao agente de direcionamento ou qualquer Iigante usado para conjugar o agente de direcionamento ao anticorpo. Redução da imunogenicidade de um composto de direcionamento de GA pode ser dirigida através de métodos bem conhecidos na técnica, tal como através de fixação de espaçadores baseados em oxido de polietileno glicol (PEG) de cadeia longa e similares ao composto de direcionamento de GA. PEG de cadeia longa e outros polímeros são conhecidos por sua capacidade de disfarçar epitopos estranhos, resultando na imunogenicidade reduzida de proteínas terapêuticas que mostram epitopos estranhos (N.V. Katre, J. Immunol. 144: 209-213 (1990); G.E. Francis e colaboradores, Int. J. Hematol. 68: 1-18 (1998). Alternativamente ou além disso, ao indivíduo administrado com o conjugado de anticorpo-agente de direcionamento de GA, pode ser administrado um imunossupressor, tais como ciclosporina A, anticorpo anti-CD3 e similares.
Em uma modalidade, um composto de direcionamento de GA é conforme mostrado pela Fórmula Il e inclui estereoisômeros, tautômeros, solvatos, pró-farmacos e sais farmaceuticamente aceitáveis do mesmo. anticorpo - L'- [agente de direcionamento de GA] (II)
Em compostos da Fórmula II, [agente de direcionamento de GA] é definido conforme na Fórmula I, e L' é uma porção Iigante que liga um anticorpo ao direcionamento e tendo a Fórmula -X-Y-Z'-. Em compostos da Fórmula II, X e Y são definidos conforme na Fórmula I e o anticorpo é um anticorpo conforme definido aqui. As figuras 9 e 10, respectivamente, ilustram o mecanismo de adição de uma cadeia lateral nucleofílica reativa em um sítio de combinação de um anticorpo às porções Z ilustradas nas figuras 7 e 8.
Em uma modalidade em que o anticorpo é um anticorpo catalítico aldolase, Z- anticorpo tem a fórmula:
<formula>formula see original document page 158</formula>
Em uma modalidade em que o anticorpo é um anticorpo catalítico aldolase, Z'- anticorpo tem a fórmula:
<formula>formula see original document page 158</formula>
Em uma modalidade em que o anticorpo é um anticorpo catalítico aldolase, Z- anticorpo tem a fórmula:
<formula>formula see original document page 159</formula>
Em uma modalidade em que o anticorpo é um anticorpo catalítico aldolase, Z- anticorpo tem a fórmula:
Anticorpo
Em uma modalidade em que o anticorpo é um anticorpo catalítico aldolase, Z- anticorpo tem a fórmula:
<formula>formula see original document page 159</formula>
Em uma modalidade em que o anticorpo é um anticorpo catalítico aldolase, Z- anticorpo tem a fórmula:
<formula>formula see original document page 159</formula>
Em uma modalidade em que o anticorpo é um anticorpo catalítico aldolase, Z- anticorpo tem a fórmula:
<formula>formula see original document page 159</formula>
Em uma modalidade em que o anticorpo é um anticorpo catalítico aldolase, Z- anticorpo tem a fórmula: <formula>formula see original document page 160</formula>
Em uma modalidade em que o anticorpo é um anticorpo catalítico aldolase, Z'- anticorpo tem a fórmula:
<formula>formula see original document page 160</formula>
Em uma modalidade em que o anticorpo é um anticorpo catalítico aldolase,Z'- anticorpo tem a fórmula:
<formula>formula see original document page 160</formula>
Em uma modalidade em que o anticorpo é um anticorpo catalítico aldolase, Z'- anticorpo tem a fórmula:
<formula>formula see original document page 160</formula>
Em uma modalidade em que o anticorpo é um anticorpo catalítico aldolase, Z'- anticorpo tem a fórmula:
<formula>formula see original document page 160</formula>
Em uma modalidade em que o anticorpo é um anticorpo catalítico aldolase, Z'- anticorpo tem a fórmula:
<formula>formula see original document page 160</formula>
Em uma modalidade em que o anticorpo é um anticorpo Anticorpo catalítico aldolase, Z- anticorpo tem a fórmula:
<formula>formula see original document page 161</formula>
Em uma modalidade em que o anticorpo é um anticorpo catalítico aldolase, Z- anticorpo tem a fórmula:
<formula>formula see original document page 161</formula>
Em compostos tendo a Fórmula II, Z é uma porção de fixação compreendendo uma ligação covalente e 0-20 átomos de carbono aos quais o anticorpo é preso. Isso é mostrado abaixo para o caso onde o Iigante tem uma porção dicetona como o grupo reativo (veja Z da Fórmula I) e a ligação ocorre com o grupo amino da cadeia lateral de um resíduo de Iisina no sítio de combinação de anticorpo. O anticorpo é mostrado esquematicamente como bivalente, com uma cadeia lateral de aminoácido reativa para cada sítio de combinação indicado.
<formula>formula see original document page 161</formula>
Outra modalidade mostrada abaixo é para o caso onde o Iigante tem uma porção beta Iactama como o grupo reativo e a ligação ocorre com o grupo amino da cadeia lateral de um resíduo de lisina no sítio de combinação de anticorpo. O anticorpo é esquematicamente mostrado como bivalente, com uma cadeia lateral de aminoácido reativa para cada sítio de combinação indicado.
<formula>formula see original document page 162</formula>
Determinadas modalidades de acordo com a Fórmula Il têm a estrutura:
<formula>formula see original document page 162</formula>
Em algumas dessas modalidades, v é O, 1, 2, 3, 4 ou 5; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; w é 1, 2, 3, 4 ou 5; ρ é 1, 2, 3, 4 ou 5; q é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; e Rb em cada ocorrência é, independentemente, hidrogênio, C1-10 alquila substituída ou não-substituída, C3-7 cicloalquil-C0-6 alquila substituída ou não- substituída ou aril-Co-6 alquila substituída ou não-substituída. Em determinadas modalidades, v é 0; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; w é 1; p é 3; e q é 0, 1, 2 ou 3. Em algumas modalidades, v é 0; t é 1 ou 2; w é 1; p é 1 ou 2; e q é 1 ou 2.
Determinadas modalidades de acordo com a Fórmula II têm a estrutura:
<formula>formula see original document page 162</formula>
Em algumas dessas modalidades, v é O, 1, 2, 3, 4 ou 5; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; w é 1, 2, 3, 4 ou 5; ρ é 1, 2, 3, 4 ou 5; q é 0, 1, 2 ou 3; e Rb em cada ocorrência é, independentemente, hidrogênio, Cmo alquila substituída ou não-substituída, C3.7 cicloalquil-Co-6 alquila substituída ou não-substituída ou aril-Co-6 alquila substituída ou não-substituída. Em determinadas modalidades, ν é 0; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; w é 1; ρ é 3; e q é 0, 1, 2 ou 3. Em algumas modalidades, ν é 0; t é 1 ou 2; w é 1; ρ é 1 ou 2; e q é 2 ou 3.
Determinadas modalidades de acordo com a Fórmula Il têm a estrutura:
<formula>formula see original document page 163</formula>Anticorpo
Em algumas dessas modalidades, véO, 1, 2, 3, 4 ou 5; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; r é 1, 2, 3, 4 ou 5; s é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; q é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; e Rb é hidrogênio, Cm0 alquila substituída ou não-substituída, C3.7 cicloalquil- Co-6 alquila substituída ou não-substituída ou aril-C0-6 alquila substituída ou não-substituída. Em determinadas modalidades, ν é 0; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; r é 1 ou 2; s é 3 e q é 0, 1, 2 ou 3. Em algumas modalidades, ν é 0; t é 1, 2 ou 3, r é 1; s é 1 ou 2; e q é 1 ou 2.
Determinadas modalidades de acordo com a Fórmula |l têm a estrutura: <formula>formula see original document page 164</formula>
Em algumas dessas modalidades, ν é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; r é 1, 2, 3, 4 ou 5; s ê 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; q é 0, 1, 2 ou 3; e Rb é hidrogênio, C1-10 alquila substituída ou não-substituída, C3-7 cicloalquil-C0-6 alquila substituída ou não-substituída ou aril-C0-6 alquila substituída ou não- substituída. Em determinadas modalidades, ν é 0; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; r é 1 ou 2; s é 3 e q é 0, 1, 2 ou 3. Em algumas modalidades, ν é 0; t é 1, 2 ou 3, r é 1; s é 1 ou 2; e q é 2 ou 3.
Determinadas modalidades de acordo com a Fórmula Il têm a estrutura:
<formula>formula see original document page 164</formula>
Em algumas dessas modalidades, ν é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; r é 1, 2, 3, 4 ou 5; s é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; e Rb é hidrogênio, C1-10 alquila substituída ou não-substituída, C3-7 cicloalquil-C0-6 alquila substituída ou não-substituída ou aril-C0-6 alquila substituída ou não-substituída. Em determinadas modalidades, ν é 0; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; r é 1 ou 2; e s é 3. Em algumas modalidades, ν é 0; t é 1, 2 ou 3, r é 1; e s é 1 ou 2.
Determinadas modalidades de acordo com a Fórmula Il têm a estrutura:
<formula>formula see original document page 164</formula>
Em algumas dessas modalidades, ν é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; w ê 1, 2, 3, 4 ou 5; ρ é 1, 2, 3, 4 ou 5; q é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; e Rb em cada ocorrência é, independentemente, hidrogênio, C1-10 alquila substituída ou não-substituída, C3-7 cicloalquil-C0-6 alquila substituída ou não- substituída ou aril-C0-6 alquila substituída ou não-substituída. Em determinadas modalidades, ν é 0; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; w é 1; ρ é 3; e q é 0, 1, 2 ou 3. Em algumas modalidades, ν é 0; t é 1 ou 2; w é 1; ρ é 1 ou 2; e q é 1 ou 2. Determinadas modalidades de acordo com a Fórmula Il têm a estrutura:
<formula>formula see original document page 165</formula>
Em algumas dessas modalidades, ν é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; w é 1, 2, 3, 4 ou 5; ρ é 1, 2, 3, 4 ou 5; q é 0, 1, 2 ou 3; e Rb em cada ocorrência é, independentemente, hidrogênio, C-mo alquila substituída ou não-substituída, C3-7 cicloalquil-Co-6 alquila substituída ou não-substituída ou aril-C0-6 alquila substituída ou não-substituída. Em determinadas modalidades, ν é 0; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; w é 1; p é 3; e q é 0, 1, 2 ou 3. Em algumas modalidades, ν é 0; t é 1 ou 2; w é 1; p é 1 ou 2; e q é 2 ou 3.
Determinadas modalidades de acordo com a Fórmula Il têm a estrutura:
<formula>formula see original document page 165</formula>
Em algumas dessas modalidades, v é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; w é 1, 2, 3, 4 ou 5; p é 1, 2, 3, 4 ou 5; e Rb em cada ocorrência é, independentemente, hidrogênio, C1-10 alquila substituída ou não- substituída, C3-7 cicloalquil-C0-6 alquila substituída ou não-substituída ou aril- C0-6 alquila substituída ou não-substituída. Em determinadas modalidades, v é 0; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; w é 1; e ρ é 3. Em algumas modalidades, v é 0; t é 1 ou 2; w é 1; e ρ é 1 ou 2.
Determinadas modalidades de acordo com a Fórmula Il têm a estrutura:
<formula>formula see original document page 165</formula>
Em algumas dessas modalidades, ν é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; r é 1, 2, 3, 4 ou 5; s é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; q é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; e Rb em cada ocorrência é, independentemente, hidrogênio, C1-10 alquila substituída ou não-substituída, C3-7 cicloalquil-C0-6 alquila substituída ou não- substituída ou aril-C0-6 alquila substituída ou não-substituída. Em determinadas modalidades, ν é 0; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; r é 1 ou 2; s é 3 e q é 0, 1, 2 ou 3. Em algumas modalidades, ν é 0; t é 1, 2 ou 3, r é 1; s é 1 ou 2; e q é 1 ou 2.
Determinadas modalidades de acordo com a Fórmula Il têm a
estrutura:
<formula>formula see original document page 166</formula>
Em algumas dessas modalidades, ν é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; r é 1, 2, 3, 4 ou 5; s é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; q é 0, 1, 2 ou 3; e Rb em cada ocorrência é, independentemente, hidrogênio, C1-10 alquila substituída ou não-substituída, C3-7 cicloalquil-C0-6 alquila substituída ou não-substituída ou aril-C0-6 alquila substituída ou não-substituída. Em determinadas modalidades, ν é 0; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; r é 1 ou 2; s é 3 e q é 0, 1, 2 ou 3. Em algumas modalidades, ν é 0; t é 1, 2 ou 3, r é 1; s é 1 ou 2; e q é 2 ou 3.
Determinadas modalidades de acordo com a Fórmula Il têm a estrutura:
<formula>formula see original document page 166</formula>
Em algumas dessas modalidades, ν é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; r é 1, 2, 3, 4 ou 5; s é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; e Rb em cada ocorrência é, independentemente, hidrogênio, C1-10 alquila substituída ou não- substituída, C3-7 cicloalquil-C0-6 alquila substituída ou não-substituída ou aril- C0-6 alquila substituída ou não-substituída. Em determinadas modalidades, ν é 0; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; r é 1 ou 2; e s é 3. Em algumas modalidades, ν é 0; t é 1, 2 ou 3, r é 1; e s é 1 ou 2.
Determinadas modalidades de acordo com a Fórmula Il têm a estrutura:
<formula>formula see original document page 166</formula>
Em algumas dessas modalidades, ν é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; w é 1, 2, 3, 4 ou 5; ρ é 1, 2, 3, 4 ou 5; q é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; e Rb em cada ocorrência é, independentemente, hidrogênio, Cmo alquila substituída ou não-substituída, C3-7 cicloalquil-C0-6 alquila substituída ou não- substituída ou aril-C0-6 alquila substituída ou não-substituída. Em determinadas modalidades, ν é 0; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; w é 1; ρ é 3; e q é 0, 1, 2 ou 3. Em algumas modalidades, ν é 0; t é 1 ou 2; w é 1; ρ é 1 ou 2; e q é 1 ou 2.
Determinadas modalidades de acordo com a Fórmula Il têm a estrutura:
<formula>formula see original document page 167</formula>
Em algumas dessas modalidades, ν é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; w é 1, 2, 3, 4 ou 5; ρ é 1, 2, 3, 4 ou 5; q é 0, 1, 2 ou 3; e Rb em cada ocorrência é, independentemente, hidrogênio, Cm0 alquila substituída ou não-substituída, C3-7 cicloalquil-C0-6 alquila substituída ou não-substituída ou aril-Co-6 alquila substituída ou não-substituída. Em determinadas modalidades, ν é 0; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; w é 1; ρ é 3; e q é 0, 1, 2 ou 3. Em algumas modalidades, ν é 0; t é 1 ou 2; w é 1; ρ é 1 ou 2; e q é 2 ou 3.
Determinadas modalidades de acordo com a Fórmula Il têm a estrutura:
<formula>formula see original document page 167</formula>
Em algumas dessas modalidades, ν é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; w é 1, 2, 3, 4 ou 5; ρ é 1, 2, 3, 4 ou 5; e Rb em cada ocorrência é, independentemente, hidrogênio, Cmo alquila substituída ou não- substituída, C3.7 cicloalquil-Co-6 alquila substituída ou não-substituída ou aril- C0-6 alquila substituída ou não-substituída. Em determinadas modalidades, ν é 0; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; w é 1; e ρ é 3. Em algumas modalidades, ν é 0; t é 1 ou 2; w é 1; e ρ é 1 ou 2. Determinadas modalidades de acordo com a Fórmula Il têm a estrutura:
<formula>formula see original document page 168</formula>
Em algumas dessas modalidades, ν é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; r é 1, 2, 3, 4 ou 5; s é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; q é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; e Rb é hidrogênio, C1-10 alquila substituída ou não-substituída, C3-7 cicloalquil- C0-6 alquila substituída ou não-substituída ou aril-C0-6 alquila substituída ou não-substituída. Em determinadas modalidades, ν é 0; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; r é 1 ou 2; s é 3; e q é 0, 1, 2 ou 3. Em algumas modalidades, ν é 0; t é 1, 2 ou 3, r é 1; s é 1 ou 2; e q é 1 ou 2.
Determinadas modalidades de acordo com a Fórmula Il têm a estrutura:
<formula>formula see original document page 168</formula>
Em algumas dessas modalidades, v é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; r é 1, 2, 3, 4 ou 5; s é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; q é 0, 1, 2 ou 3; e Rb é hidrogênio, C1-10 alquila substituída ou não-substituída C1-10 alquila, C3-7 cicloalquil-C0-6 alquila substituída ou não-substituída ou aril-C0-6 alquila substituída ou não-substituída. Em determinadas modalidades, ν é 0; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; r é 1 ou 2; s é 3; e q é 0, 1, 2 ou 3. Em algumas modalidades, v é 0; t ê 1, 2 ou 3, r é 1; s é 1 ou 2; e q é 2 ou 3.
Determinadas modalidades de acordo com a Fórmula II têm a estrutura:
<formula>formula see original document page 168</formula> Em algumas dessas modalidades, ν é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; r é 1, 2, 3, 4 ou 5; s é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; e Rb é hidrogênio, C1-I0 alquila substituída ou não-substituída, C3-7 cicloalquil-C0-6 alquila substituída ou não-substituída ou aril-C0-6 alquila substituída ou não-substituída. Em 5 determinadas modalidades, ν é 0; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; r é 1 ou 2; e s é 3. Em algumas modalidades, ν é 0; t é 1, 2 ou 3, r é 1; e s é 1 ou 2.
Determinadas modalidades de acordo com a Fórmula Il têm a estrutura:
<formula>formula see original document page 169</formula>
Em algumas dessas modalidades, u é 1, 2, 3, 4 ou 5; ν é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; ré 1, 2, 3, 4 ou 5; s é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; q é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; e Rb é hidrogênio, C-M0 alquila substituída ou não-substituída, C3-7 cicloalquil-C0-6 alquila substituída ou não-substituída ou aril-C0-6 alquila substituída ou não-substituída. Em determinadas modalidades, u é 1, 2, 3, 4 ou 5; ν é 0; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; r é 1 ou 2; s é 0; e q é 0, 1, 2 ou 3. Em algumas modalidades, u é 1, 2 ou 3; ν é 0; t é 1, 2 ou 3, r é 1 ou 2; s é 0; e q é 1 ou 2.
Determinadas modalidades de acordo com a Fórmula I têm a estrutura:
<formula>formula see original document page 169</formula>
Em algumas dessas modalidades, u e 1,2,3,4 ou 5; v e 0,1,2, 3, 4 ou 5; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; r é 1, 2, 3, 4 ou 5; s é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; q é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; e Rb é hidrogênio, C-mo alquila substituída ou não-substituída, C3-7 cicloalquil-C0-6 alquila substituída ou não-substituída ou aril-C0-6 alquila substituída ou não-substituída. Em determinadas modalidades, u é 1, 2, 3, 4 ou 5; ν é 0; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; r é 1 ou 2; s é 0; e q é 0, 1, 2 ou 3. Em algumas modalidades, u é 1, 2 ou 3; ν é 0; t é 1, 2 ou 3, r é 1 ou 2; s é 0; e q é 1 ou 2.
Determinadas modalidades de acordo com a Fórmula I têm a estrutura:
<formula>formula see original document page 170</formula>
Em algumas dessas modalidades, u é 1, 2, 3, 4 ou 5; ν é O, 1, 2, 3, 4 ou 5; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; r é 1, 2, 3, 4 ou 5; s é O, 1, 2, 3, 4 ou 5; q é O, 1, 2, 3, 4 ou 5; e Rb é hidrogênio, Cmo alquila substituída ou não-substituída, C3-7 cicloalquil-Co-6 alquila substituída ou não-substituída ou aril-C0-6 alquila substituída ou não-substituída. Em determinadas modalidades, u é 1, 2, 3, 4 ou 5; ν é 0; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; r é 1 ou 2; s é 0; e q é O, 1, 2 ou 3. Em algumas modalidades, u é 1, 2 ou 3; ν é 0; t é 1, 2 ou 3, r é 1 ou 2; s é 0; e q é 1 ou 2.
Determinadas modalidades de acordo com a Fórmula Il têm a estrutura:
<formula>formula see original document page 170</formula>
Em algumas dessas modalidades, ν é O, 1, 2, 3, 4 ou 5; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; w é 1, 2, 3, 4 ou 5; ρ é 1, 2, 3, 4 ou 5; q é O, 1, 2, 3, 4 ou 5; e Rb em cada ocorrência é, independentemente, hidrogênio, Cmo alquila substituída ou não-substituída, s C3-7 cicloalquil-C0-6 alquila substituída ou não-substituída ou aril-Co-6 alquila substituída ou não-substituída. Em determinadas modalidades, ν é 0; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; w é 1; ρ é 3; e q é O, 1, 2 ou 3. Em algumas modalidades, ν é 0; t é 1 ou 2; w é 1; ρ é 1 ou 2; e q é 1 ou 2.
Determinadas modalidades de acordo com a Fórmula Il têm a estrutura: <formula>formula see original document page 171</formula>
Em algumas dessas modalidades, ν é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; w é 1, 2, 3, 4 ou 5; ρ é 1, 2, 3, 4 ou 5; q é 0, 1, 2 ou 3; e Rb em cada ocorrência é, independentemente, hidrogênio, C-M0 alquila substituída ou não-substituída, C3-7 cicloalquil-C0-6 alquila substituída ou não-substituída ou aril-C0-6 alquila substituída ou não-substituída. Em determinadas modalidades, ν é 0; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; w é 1; ρ é 3; e q é 0, 1, 2 ou 3. Em algumas modalidades, ν é 0; t é 1 ou 2; w é 1; ρ é 1 ou 2; e q é 2 ou 3.
Determinadas modalidades de acordo com a Fórmula Il têm a estrutura:
<formula>formula see original document page 171</formula>
Em algumas dessas modalidades, ν é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; w é 1, 2, 3, 4 ou 5; ρ é 1, 2, 3, 4 ou 5; e Rb em cada ocorrência é, independentemente, hidrogênio, C1--I0 alquila substituída ou não- substituída, substituída ou não-substituída ou aril-Co-6 alquila substituída ou não-substituída. Em determinadas modalidades, ν é 0; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; w é 1; e ρ é 3. Em algumas modalidades, ν é 0; t é 1 ou 2; w é 1; e ρ é 1 ou 2.
Determinadas modalidades de acordo com a Fórmula Il têm a estrutura:
<formula>formula see original document page 171</formula>
Anticorpo
Em algumas dessas modalidades, ν é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; r é 1, 2, 3, 4 ou 5; s é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; q é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; e R é hidrogênio, substituída ou não-substituída C1-10 alquila, C3-7 cicloalquil- C0-6 alquila substituída ou não-substituída ou aril-C0-6 alquila substituída ou não-substituída. Em determinadas modalidades, ν é 0; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; r é 1 ou 2; s é 3; e q é 0, 1, 2 ou 3. Em algumas modalidades, ν é 0; t é 1, 2 ou 3, r é 1; s é 1 ou 2; e q é 1 ou 2.
Determinadas modalidades de acordo com a Fórmula II têm a estrutura:
<formula>formula see original document page 172</formula>
Em algumas dessas modalidades, ν é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; r é 1, 2, 3, 4 ou 5; s é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; q é 0, 1, 2 ou 3; e Rb é hidrogênio, C-mo alquila substituída ou não-substituída, C3.7 cicloalquil-Co-6 alquila substituída ou não-substituída ou aril-C0-6 alquila substituída ou não- substituída. Em determinadas modalidades, ν é 0; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; r é 1 ou 2; s é 3; e q é 0, 1, 2 ou 3. Em algumas modalidades, ν é 0; t é 1, 2 ou 3, r é 1; s é 1 ou 2; e q é 2 ou 3.
Determinadas modalidades de acordo com a Fórmula II têm a estrutura:
<formula>formula see original document page 172</formula>
Em algumas dessas modalidades, ν é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; r ê 1, 2, 3, 4 ou 5; s é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; e Rb é hidrogênio, C1-10 alquila substituída ou não-substituída, C3-7 cicloalquil-C0-6 alquila substituída ou não-substituída ou aril-C0-6 alquila substituída ou não-substituída. Em determinadas modalidades, ν é 0; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; r é 1 ou 2; e s é 3. Em algumas modalidades, ν é 0; t é 1, 2 ou 3, r é 1; e s é 1 ou 2.
Determinadas modalidades de acordo com a Fórmula II têm a estrutura:
<formula>formula see original document page 172</formula> <formula>formula see original document page 173</formula>
Em algumas dessas modalidades, v é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; w é 1, 2, 3, 4 ou 5; p é 1, 2, 3, 4 ou 5; q é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; e Rb em cada ocorrência é, independentemente, hidrogênio, C1-10 alquila substituída ou não-substituída, C3-7 cicloalquil-C0-6 alquila substituída ou não- substituída ou aril-C0-6 alquila substituída ou não-substituída. Em determinadas modalidades, v é 0; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; w é 1; p é 3; e q é 0, 1, 2 ou 3. Em algumas modalidades, v é 0; t é 1 ou 2; w é 1; p é 1 ou 2; e q é 1 ou 2.
Determinadas modalidades de acordo com a Fórmula II têm a estrutura:
<formula>formula see original document page 173</formula>
Em algumas dessas modalidades, v é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; w é 1, 2, 3, 4 ou 5; p é 1, 2, 3, 4 ou 5; q é 0, 1, 2 ou 3; e Rb em cada ocorrência é, independentemente, hidrogênio, C1-10 alquila substituída ou não-substituída, C3-7 cicloalquil-C0-6 alquila substituída ou não-substituída ou aril-C0-6 alquila substituída ou não-substituída. Em determinadas modalidades, v é 0; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; w é 1; p é 3; e q é 0, 1, 2 ou 3. Em algumas modalidades, v é 0; t é 1 ou 2; w é 1; p é 1 ou 2; e q é 2 ou 3.
Determinadas modalidades de acordo com a Fórmula II têm a estrutura:
<formula>formula see original document page 173</formula>
Em algumas dessas modalidades, v é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; w é 1, 2, 3, 4 ou 5; p é 1, 2, 3, 4 ou 5; e Rb em cada ocorrência é, independentemente, hidrogênio, C1-10 alquila substituída ou não- substituída, C3-7 cicloalquil-C0-6 alquila substituída ou não-substituída ou aril- Co-6 alquila substituída ou não-substituída. Em determinadas modalidades, ν é 0; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; w é 1; e ρ é 3. Em algumas modalidades, ν é 0; t é 1 ou 2; w é 1; e ρ é 1 ou 2.
Determinadas modalidades de acordo com a Fórmula Il têm a estrutura:
<formula>formula see original document page 174</formula>
Em algumas dessas modalidades, ν é O, 1, 2, 3, 4 ou 5; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; r é 1, 2, 3, 4 ou 5; s é O, 1, 2, 3, 4 ou 5; q é O, 1, 2, 3, 4 ou 5; e Rb em cada ocorrência é, independentemente, hidrogênio, Cmo alquila substituída ou não-substituída, C3-7 cicloalquil-C0-6 alquila substituída ou não- substituída ou aril-C0-6 alquila substituída ou não-substituída. Em determinadas modalidades, ν é 0; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; r é 1 ou 2; s é 3; e q é O, 1, 2 ou 3. Em algumas modalidades, ν é 0; t é 1, 2 ou 3, r é 1; s é 1 ou 2; e q é 1 ou 2.
Determinadas modalidades de acordo com a Fórmula Il têm a estrutura:
<formula>formula see original document page 174</formula>
Em algumas dessas modalidades, ν é O, 1, 2, 3, 4 ou 5; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; r é 1, 2, 3, 4 ou 5; s é O, 1, 2, 3, 4 ou 5; q é O, 1, 2 ou 3; e Rb em cada ocorrência é, independentemente, hidrogênio, C-mo alquila substituída ou não-substituída, C3-7 cicloalquil-Co-6 alquila substituída ou não-substituída ou aril-C0-6 alquila substituída ou não-substituída. Em determinadas modalidades, ν é 0; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; r é 1 ou 2; s é 3; e q é O, 1, 2 ou 3. Em algumas modalidades, ν é 0; t é 1, 2 ou 3, r é 1; s é 1 ou 2; e q é 2 ou 3. Determinadas modalidades de acordo com a Fórmula II têm a estrutura:
<formula>formula see original document page 175</formula>
Em algumas dessas modalidades, v é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; r é 1, 2, 3, 4 ou 5; s é 0, 1, 2, 3, 4 ou 5; e Rb em cada ocorrência é, independentemente, hidrogênio, C1-10 alquila substituída ou não- substituída, C3-7 cicloalquil-C0-6 alquila substituída ou não-substituída ou aril- C0-6 alquila substituída ou não-substituída. Em determinadas modalidades, v é 0; t é 1, 2, 3, 4, 5 ou 6; r é 1 ou 2; e s é 3. Em algumas modalidades, v é 0; t é 1, 2 ou 3, r é 1; e s é 1 ou 2.
Alternativamente, o ligante pode ter uma amida ou hidrazida como o grupo reativo e o anticorpo pode ser manipulado para ter uma porção dicetona. Um aminoácido contendo dicetona não-natural pode ser prontamente incorporado em um sítio de combinação de anticorpo usando métodos bem conhecidos na técnica; proteínas contendo aminoácidos não- naturais foram produzidas em Ievedo e bactérias. Veja, por exemplo, J.W. Chin e colaboradores, Science 301: 964-966 (2003); L. Wang e colaboradores, Science 292: 498-500 (2001); J.W. Chin e colaboradores, J. Am. Chem. Soe. 124: 9026-9027 (2002); L. Wang e colaboradores, J. Am. Chem. Soe. 124: 1836-1837 (2002); J.W. Chin e P.G. Schultz, Chembiochem. 3: 1135-1137 (2002); J.W. Chin e colaboradores, Proc. Natl. Acad. Sei. U.S.A. 99: 11020-11024 (2002); L. Wang e P.G. Schultz, Chem. Commun. (1): 1-11 (2002); Z. Zhang e colaboradores, Angew. Chem. Int. Ed. Engl. 41: 2840-2842 (2002); L. Wang, Proc. Natl. Acad. Sei. U.S.A. 100: 56- 61 (2003). Assim, por exemplo, inserir um aminoácido não-natural contendo uma porção dicetona no levedo Saccharomyces cerevisiae requer a adição de novos componentes à maquinaria biossintética da proteína, incluindo um códon único, tRNA e sintetase de aminoacil-tRNA (aa RS). Por exemplo, o par sintetase de tirosil-tRNA supressora de amber (TyrRS)-tRNAcuA de E. coli pode ser usado, conforme reportado para eucariotas em J.W. Chin e colaboradores, Science 301: 964-966 (2003). O códon amber é usado para codificar o aminoácido não natural de interesse. Bibliotecas de TyrRS e íRNAcua mutantes podem, então, ser produzidas e selecionadas para aqueles pares de aaRS-tRNAcuA nos quais a TyrRS carrega o íRNAcua com o aminoácido não-natural de interesse. Por exemplo, o aminoácido contendo dicetona. Subseqüentemente, anticorpos incorporando o aminoácido contendo dicetona podem ser produzidos através de clonagem e expressão de um gene contendo o códon amber em um ou mais sítios de combinação de anticorpo.
Em algumas modalidades de compostos da Fórmula II, o anticorpo é um anticorpo de comprimento total. Em outras modalidades, o anticorpo é Fab, Fab' F(ab')2, Fv1 VH, Vl ou scFv. Em outras modalidades, o anticorpo é um anticorpo humano, anticorpo humanizado ou anticorpo humano quimérico. Em ainda outras modalidades, o anticorpo é um anticorpo catalítico. Em uma modalidade, o anticorpo é uma versão humanizada do 38c2 de murino compreendendo uma região constante de um anticorpo de IgG, IgA, IgM, IgD ou IgE humano. Em outra modalidade, o anticorpo é um anticorpo quimérico compreendendo a região variável de 38c2 de murino e uma região constante de um anticorpo de IgG, IgA, IgM, IgD ou IgE humano.
Em alguns casos, dois ou mais agentes de direcionamento de GA podem ser ligados a um único anticorpo bivalente de comprimento total. Isso é mostrado abaixo como Fórmula III:
Anticorpo[-L'-[agente de direcionamento de GA]]2 (III) Também proporcionados são estereoisômeros, tautômeros, solvatos, pró-fármacos e sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos.
Em compostos de Fórmula III, [agente de direcionamento de GA], L' e anticorpo são, cada um, definidos conforme na Fórmula II. Compostos de direcionamento, tais como aqueles de Fórmula II,
também podem ser prontamente sintetizados através de ligação covalente de um agente de direcionamento-ligante a um sítio de combinação de um anticorpo multivalente. Por exemplo, um conjugado de agente de direcionamento-ligante, onde o Iigante inclui uma porção reativa de dicetona, pode ser incubado com 0,5 equivalentes de um anticorpo de aldolase, tal como IgGI h38C2, para produzir um composto de direcionamento de GA.
Alternativamente, um composto de direcionamento de GA1 tal como aquele de Fórmula III, pode ser produzido através de ligação covalente de um composto de direcionamento de GA-ligante, conforme descrito aqui, a cada sítio de combinação de um anticorpo bivalente.
Composições farmacêuticas de compostos de direcionamento de GA
Outro aspecto da invenção proporciona composições farmacêuticas de compostos de direcionamento de GA. Compostos de direcionamento de GA podem ser administrados usando métodos bem conhecidos por aqueles habilitados na técnica. De preferência, os agentes são formulados e administrados sistemicamente. Técnicas para formulação e administração podem ser encontradas em Remington1S Pharmaceutical Sciences, 18a Ed., 1990, Mack Publishing Co., Easton1 PA. Para injeção, os compostos de direcionamento de GA podem ser formulados em soluções, emulsões ou suspensões aquosas. Os compostos de direcionamento de GA são, de preferência, formulados em soluções aquosas contendo tampões fisiologicamente compatíveis, tais como citrato, acetato, histidina ou fosfato. Onde necessário, tais formulações também podem conter vários agentes para ajuste de tonicidade, agentes de solubilização e/ou agentes de estabilização (por exemplo, sais, tal como cloreto de sódio, açúcares, tais como sacarose, manitol e trealose, proteínas, tal como albumina, aminoácidos, tais como glicina e histidina, tensoativos, tais como polisorbatos (Tweens) ou cossolventes, tais como etanol, polietileno glicol e propileno glicol).
Métodos de uso de compostos de direcionamento de GA
Um aspecto da invenção é um método para tratamento de diabetes ou uma condição relacionada ao diabetes compreendendo administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto de direcionamento de GA a um indivíduo sofrendo de diabetes ou uma condição relacionada ao diabetes. Para uso terapêutico em seres humanos, um anticorpo humano, humanizado ou quimérico humano é uma forma de anticorpo preferida do composto de direcionamento.
Outro aspecto da invenção é um método para aumento da secreção de insulina em um indivíduo compreendendo administração, ao indivíduo, de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto de direcionamento de GA ou um derivado farmacêutico do mesmo.
Ainda outro aspecto da invenção é um método para diminuição dos níveis de glicose no sangue em um indivíduo compreendendo administração, ao indivíduo, de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto de direcionamento de GA ou um derivado farmacêutico do mesmo.
Métodos de administração e dosagens
As vias de administração de compostos de direcionamento de GA podem incluir distribuição parenteral, incluindo injeções intramuscular, subcutânea ou intramedular, bem como distribuição intratecal, intraventricular direta, intravenosa e intraperitoneal. Em uma modalidade, a administração é intravenosa. Os compostos de direcionamento de GA podem ser administrados através de qualquer uma das vias parenterais, seja através de injeção direta da formulação ou através de infusão de uma mistura da formulação de composto de direcionamento de GA com uma matriz de infusão, tal como solução salina normal, D5W, solução Iactada de Ringer ou outros meios de infusão comumente usados.
No tratamento de mamíferos, incluindo seres humanos, tendo diabetes ou uma condição relacionada ao diabetes, uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto de direcionamento de GA ou um derivado farmaceuticamente aceitável é administrada. Por exemplo, um composto de direcionamento de GA pode ser administrado como uma infusão intravenosa diária de cerca de 0,1 mg/kg de peso corporal a cerca de 15 mg/kg de peso corporal. Consequentemente, uma modalidade proporciona uma dose de cerca de 0,5 mg/kg de peso corporal. Outra modalidade proporciona uma dose de cerca de 0,75 mg/kg de peso corporal. Outra modalidade proporciona uma dose de cerca de 1,0 mg/kg de peso corporal. Outra modalidade proporciona uma dose de cerca de 2,5 mg/kg de peso corporal. Outra modalidade proporciona uma dose of cerca de 5 mg/kg de peso corporal. Outra modalidade proporciona uma dose of cerca de 10,0 mg/kg de peso corporal. Outra modalidade proporciona uma dose of cerca de 15,0 mg/kg de peso corporal. As doses de composto de direcionamento de GA ou um derivado farmaceuticamente aceitável deverão ser administradas em intervalos de cerca de uma vez por dia a 2 vezes por semana ou, alternativamente, de cerca de uma vez a cada semana a uma vez por mês. Em uma modalidade, uma dose é administrada para obter concentrações de pico no plasma de um composto de direcionamento de GA de acordo com a invenção ou um derivado farmaceuticamente aceitável do mesmo de cerca de 0,002 mg/ml a 30 mg/ml. Isso pode ser obtido através da injeção estéril de uma solução dos ingredientes administrados em uma formulação apropriada (quaisquer soluções de formulação adequadas conhecidas por aqueles habilitados na técnica de química podem ser usadas). Níveis desejáveis no sangue podem ser mantidos através de uma infusão contínua de um composto de direcionamento de GA de acordo com a invenção, conforme determinado pelos níveis no plasma medidos através de uma metodologia analítica validada.
Um método para administração de um composto de direcionamento de GA a um indivíduo compreende administração de um conjugado de agente de direcionamento de GA-Iigante ao indivíduo e deixando-o formar um composto covalente com um sítio de combinação de um anticorpo apropriado in vivo. A porção de anticorpo de um composto de direcionamento de GA que se forma in vivo pode ser administrada ao indivíduo antes, ao mesmo tempo ou após administração do conjugado de agente de direcionamento-ligante. Conforme já discutido, um agente de direcionamento de GA pode incluir uma porção ligante/reativa ou o sítio de combinação de anticorpo pode ser adequadamente modificado para se ligar covalentemente ao agente de direcionamento. Alternativamente ou além disso, um anticorpo pode estar presente na circulação do indivíduo após imunização com um imunogênio apropriado. Por exemplo, anticorpos catalíticos podem ser gerados através de imunização com um intermediário reativo do substrato conjugado a uma proteína veículo. Veja R.A. Lerner e C.F. Barbas 3o, Acta Chem. Scand. 50: 672-678 (1996). Em particular, anticorpos cataííticos de aidoiase podem ser gerados através de administração com hemocianina do caramujo megathura crenulata ligada a uma porção de dicetona, conforme descrito por P. Wirsching e colaboradores, Science 270: 1775-1782 (1995) (comentários em J. Wagner e colaboradores, Science 270: 1797-1800 (1995)).
TerapiasCombinadas
Em outro aspecto da invenção, um composto de direcionamento de GA pode ser usado em combinação com outros agentes terapêuticos usados para tratar diabetes ou condições relacionadas ao diabetes ou aumentar a secreção de insulina ou diminuir os níveis de glicose no sangue. Em uma modalidade, um composto de direcionamento de GA pode ser administrado em combinação com insulina tal como, por exemplo, insulina humana sintética, incluindo insulina de ação rápida, de curta ação ou ação intermediária. Em outras modalidades, compostos de direcionamento de GA podem ser administrados em combinação com compostos pertencendo às famílias de inibidor de α-glicosidase, sulfoniluréia, meglutinida, biguanida ou tiazolidinadiona (TZD). Compostos de direcionamento de GA também podem ser administrados em combinação com proteínas ou peptídeos que modificam o metabolismo, tais como glicoquinase (GK), proteína regulatória de glicoquinase (GKRP), proteínas 2 e 3 de não acoplamento (UCP2 e UCP3), receptor α proliferador de peroxissoma-ativado (PPARa), receptor de Ieptina (OB-Rb), inibidores de DPP-IV, sulfonilureias ou outros peptídeos de incretina. Aqueles habilitados na técnica estarão cientes de uma ampla variedade de agentes que são usados atualmente no tratamento de diabetes ou condições relacionadas ao diabetes.
De forma a avaliar a eficácia potencial de um composto de direcionamento de GA ou um derivado farmaceuticamente aceitável do mesmo em combinação com outros agentes terapêuticos usados para tratar diabetes ou condições relacionadas ao diabetes, secreção de insulina aumentada ou diminuição dos níveis de glicose no sangue, essas combinações podem ser testadas usando métodos conhecidos na técnica. Por exemplo, a capacidade de uma combinação de um composto de direcionamento de GA de acordo com a invenção e outro agente terapêutico para aumentar a secreção de insulina pode ser medida usando um ensaio de secreção de insulina glicose-estimulada in vitro. Em tal ensaio, células β pancreáticas são tratadas com várias concentrações de glicose durante um período de tempo ajustado e os níveis de insulina são medidos usando métodos conhecidos na técnica tais como, por exemplo, um radioimunoensaio. O efeito de composto(s) de direcionamento de GA de acordo com a invenção e outros agentes terapêuticos sobre a secreção de insulina também pode ser medido in vivo, através de administração dos agentes diretamente a um indivíduo e medindo os níveis de insulina em amostras de fluido corporal em vários pontos de tempo. Métodos para administração de agentes terapêuticos conhecidos a um indivíduo para uso em terapias combinadas serão bem conhecidos pelos profissionais de saúde.
As dosagens eficazes de compostos de direcionamento de GA a serem administradas podem ser determinadas através de procedimentos bem conhecidos por aqueles na técnica os quais se dirigem a parâmetros tais como meia-vida biológica, biodisponibilidade e toxicidade. Quantidades eficazes de agentes terapêuticos a serem usadas em combinação com compostos de direcionamento de GA ou derivados farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos são baseadas nas doses recomendadas conhecidas por aqueles habilitados na técnica para esses agentes. Esses níveis recomendados ou conhecidos serão, de preferência, diminuídos em 10% a 50% da dosagem citada após testagem da eficácia dessas dosagens em combinação com um composto de direcionamento de GA de acordo com a invenção ou um derivado farmaceuticamente aceitável. Deverá ser notado que o médico que faz o atendimento saberá como e quando terminar, interromper ou ajustar a terapia para uma dosagem menor em virtude de toxicidade, disfunções da medula óssea, fígado ou rim ou interação fármaco- fármaco adversa. Inversamente, o médico que faz o atendimento também saberá ajustar o tratamento para níveis maiores se a resposta clínica não é adequada (toxicidade exclusiva).
Uma dose terapeuticamente eficaz se refere àquela dose do composto suficiente para resultar em alívio de sintomas ou prolongar a sobrevivência em um paciente. A concentração eficaz in vitro de um agente de direcionamento de GA pode ser determinada através de medição da EC50. A toxicidade e a eficácia terapêutica de tais agentes in vivo podem ser determinadas através de procedimentos farmacêuticos padrões em culturas de células ou animais experimentais, por exemplo, para determinação da LD50 (a dose letal para 50% da população) e da ED50 (a dose terapeuticamente eficaz em 50% da população). A proporção de dose entre efeitos toxícos e terapêuticos é o índice terapêutico e ele pode ser expresso como a proporção LD50/ED50. Compostos os quais exibem grandes índices terapêuticos são preferidos. Os dados obtidos a partir desses ensaios de cultura de célula e estudos com animais podem ser usados na formulação de uma faixa de dosagem para uso em seres humanos. A dosagem de tais compostos repousa, de preferência, em uma faixa de concentrações em circulação que inclui a ED50 com pouca ou nenhuma toxicidade. A dosagem pode variar dentro dessa faixa, dependendo da forma de dosagem empregada e da via de administração utilizada. Para qualquer composto, a dose terapeuticamente eficaz pode ser estimada inicialmente a partir de ensaios de cultura de célula. Uma dose pode ser formulada em modelos com animais para obter uma faixa de concentração em circulação no plasma que inclui a IC5o (isto é, a concentração do composto de teste a qual obtém metade da inibição máxima de produção em RT de células infectadas comparado com o controle não-tratado, conforme determinado em cultura de célula). Tal informação pode ser usada para determinar mais precisamente doses úteis em seres humanos. Os níveis no plasma podem ser medidos, por exemplo, através de cromatografia de líquido de elevado desempenho (HPLC). Naquelas modalidades em que compostos de direcionamento de GA são administrados em combinação com outros agentes terapêuticos, o efeito combinado dos agentes pode ser calculado através do método de análise de múltiplos fármacos de Chou e Talalay (T.C. Chou e P. Talalay1 Adv. Enzyme Regul. 22: 27-55 (1984)) usando a equação:
<formula>formula see original document page 183</formula>
Onde Cl é o índice de combinação, (Dx)1 é a dose de fármaco 1 requerida para produzir um efeito χ percentual sozinho, D1 é a dose de fármaco 1 requerida para produzir o mesmo efeito x percentual em combinação com D2. Os valores de (Dx)2 e (D)2 são similarmente derivados a partir do fármaco 2. O valor de α é determinado a partir da plotagem da curva da dose-efeito usando a equação de efeito de mediana:
<formula>formula see original document page 183</formula>
onde fa é a fração afetada pela dose D, fu é a fração não-afetada, Dm é a dose requerida para um efeito de 50% e m é o declínio da curva de dose- efeito. Para fármacos mutuamente exclusivos (isto é, modos similares de ação), ambos os fármacos, sozinhos e suas linhas paralelas na mediana compõem a plotagem. Fármacos mutuamente não-exclusivos (isto é, modo de ação independente) proporcionarão linhas paralelas na mediana para compor a plotagem mas, em mistura, proporcionarão uma curva ascendente côncava. Se os agentes são mutuamente exclusivos, α é 0 e se eles são mutuamente não-exclusivos, α é 1. Os valores obtidos admitindo não exclusão mútua sempre serão ligeiramente maiores do que fármacos mutuamente exclusivos. Valores de Cl de <1 indicam sinergia, valores >1 indicam antagonismo e valores iguais a 1 indicam efeitos aditivos.
Os efeitos dos fármacos combinados também podem ser calculados usando o pacote de software CaIcuSyn da Biosoft (Cambridge, Reino Unido). Exemplos
EXEMPLO 1: Síntese de HAEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKGR (SEQ ID NO: 1): Síntese de peptídeo em fase sólida do peptídeo modificado em uma escala de 100 μmols é realizada sobre um Symphony Peptide Synthesizer usando química de Fmoc empregando resina PL-Rink Fmoc protegida (0,68 mmol/g, Polymer Laboratories). Os seguintes aminoácidos Na-Fmoc protegidos são usados na síntese: Fmoc-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Gly- OH, Fmoc-Lys(Boc)-OH, Fmoc-VaI-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Trp(Boc)-OH, Fmoc-AIa-OH, Fmoc-lle-OH, Fmoc-Phe-OH, Fmoc-Glu(tBut)-OH, Fmoc-Gln- OH, Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Tyr(tBut)-OH, Fmoc-Ser(tBut)-OH, Fmoc-Asp(tBut)-OH, Fmoc-Thr(tBut)-OH e Fmoc-His(Trt)-OH. Resumidamente, as reações de acoplamento são realizadas em N- Metilpirrolidinona (NMP) usando 10 equivalentes de aminoácidos e 10 equivalentes de agentes de ativação hexafluorofosfato de O-benzotriazol-1- il-N,N,N',N'-tetrametil-urônio (HBTU) ou hexafluorofosfato de 0-(7- Azabenzotriazola-1-il)-N,N,N,N',N'-tetrametilurônio (HATU) junto com N- Hidroxibenzotriazola (HOBT) na presença de 30 equivalentes de N- Metylmorfolina (NMM), com cada acoplamento realizado durante 2 horas. Remoção do grupo de proteção Na-Fmoc é obtida usando uma solução de piperidina a 25% (V/V) em NMP quatro vezes durante cinco minutos cada.
Entre cada acoplamento, a resina é lavada seis vezes com NMP. O peptídeo é clivado da resina usando TFA a 85%/TIS a 5%/tioanisola a 5% e fenol a 5%, seguido por precipitação através de Et2O gelado-gelo seco. O peptídeo bruto é centrifugado e Iiofilizado e o produto é purificado através de HPLC de fase reversa usando uma coluna C1S empregando TFA a 0,1% em acetonitrilo e TFA a 0,1% em água como uma fase móvel, para proporcionar o composto puro como um sólido branco.
Aminoácidos e N-Hidroxibenzotriazola (HOBT) são dissolvidos em NMP e, de acordo com a seqüência, ativados usando HBTU ou hexafluorofosfato de 0-(7-Azabenzotriazola-1-il)-N,N,N,N',N'-tetrametilurônio (HATU). Para ativação com HBTU do aminoácido, HBTU é adicionado a 10 equivalentes com relação à carga de resina e NMM é adicionada a 30 equivalentes. Ativação com HBTU para cada aminoácido é realizada duas vezes durante duas horas cada vez. Para ativação com HATU, o aminoácido e HATU são adicionados a 10 equivalentes com relação à carga de resina e di-isopropiletilamina (DIEA) é adicionada a 20 equivalentes. Ativação com HATU para cada aminoácido é realizada durante três horas. Remoção do grupo de proteção Na-Fmoc é obtida usando uma solução de piperidina a 25% (V/V) em NMP quatro vezes durante cinco minutos cada. Entre cada acoplamento, a resina é lavada seis vezes com NMP. O peptídeo é clivado da resina usando TFA a 85%/TIS a 5%/tioanisola a 5% e fenol a 5%, seguido por precipitação através de EtaO gelado-gelo seco. O peptídeo bruto é centrifugado e Iiofilizado e o produto é purificado através de HPLC de fase reversa usando uma coluna Ci8 empregando TFA a 0,1% em acetonitrilo e TFA a 0,1% em água como uma fase móvel, para proporcionar o composto puro como um sólido branco.
EXEMPLO 2: Síntese de
HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS (SEQ ID NO: 2)
Síntese de peptídeo em fase sólida do peptídeo modificado em uma escala de 100 μίτιοίε é realizada sobre um Symphony Peptide Synthesizer usando química de Fmoc empregando resina PL-Rink Fmoc protegida (0,68 mmol/g, Polymer Laboratories). Os seguintes aminoácidos N^a-Fmoe protegidos são usados na síntese: Fmoc-Ser(tBu)-OH, Fmoc-Pro- OH, Fmoc-AIa-OH, Fmoc-GIy-OH, Fmoc, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc- Lys(Boe)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Trp(Boc)-OH, Fmoc-Glu(tBu)-OH, Fmoc- IIe-OH, Fmoc-Phe-OH, Fmoc-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-VaI-OH1 Fmoc-Met-OH1 Fmoc-GIn(Trt)-OH, Fmoc-Asp(tBu)-OH, Fmoc-Thr(tBut)-OH e Fmoc-His(Trt)- OH. Resumidamente, as reações de acoplamento são realizadas em N- Metilpirrolidinona (NMP) usando 10 equivalentes de aminoácidos e 10 equivalentes de agentes de ativação hexafluorofosfato de O-benzotriazol-1- il-N, Ν, N1, N1-tetrametil-urônio (HBTU) ou hexafluorofosfato de 0-(7- Azabenzotriazola-1-il)-N,N,N,N',N'-tetrametilurônio (HATU) junto com N- Hidroxibenzotriazola (HOBT). Para ativação com HBTU do aminoácido, HBTU é adicionado a 10 equivalentes com relação à carga de resina e NMM é adicionada a 30 equivalentes. Ativação com HBTU para cada aminoácido é realizada duas vezes durante duas horas cada vez. Para ativação com HATU, o aminoácido e HATU são adicionados a 10 equivalentes com relação à carga de resina e di-isopropiletilamina (DIEA) é adicionada a 20 equivalentes. Ativação com HATU para cada aminoácido é realizada durante três horas. Remoção do grupo de proteção Na-Fmoc é obtida usando uma solução de piperidina a 25% (V/V) em NMP quatro vezes durante cinco minutos cada. Entre cada acoplamento, a resina é lavada seis vezes com NMP. O peptídeo é clivado da resina usando TFA a 85%/TIS a 5%/tioanisola a 5% e fenol a 5%, seguido por precipitação através de Et2Ü gelado-gelo seco. O peptídeo bruto é centrifugado e Iiofilizado e o produto é purificado através de HPLC de fase reversa usando uma coluna Ci8 empregando TFA a 0,1% em acetonitrilo e TFA a 0,1% em água como uma fase móvel, para proporcionar o composto puro como um sólido branco. EXEMPLO 3: Síntese de
<formula>formula see original document page 186</formula>
é fornecida na figura 11. EXEMPLO 4: Síntese de:
<formula>formula see original document page 186</formula>
é fornecida na figura 12. EXEMPLO 5: Síntese de
<formula>formula see original document page 186</formula>
é fornecida na figura 13. EXEMPLO 6: Síntese de
<formula>formula see original document page 186</formula> é fornecida na figura 14. EXEMPLO 7: Síntese de
<formula>formula see original document page 187</formula>
é fornecida na figura 15. EXEMPLO 8: Síntese de:
<formula>formula see original document page 187</formula>
é fornecida na figura 16. EXEMPLO 9: Síntese de
<formula>formula see original document page 187</formula>
é fornecida na figura 17. EXEMPLO 10: Síntese de
<formula>formula see original document page 187</formula>
é fornecida na figura 18. EXEMPLO 11: Síntese de:
<formula>formula see original document page 187</formula>
é fornecida na figura 19. EXEMPLO 12: Síntese de
<formula>formula see original document page 187</formula> é fornecida na figura 20.
EXEMPLO 13: Síntese de
<formula>formula see original document page 188</formula>
é fornecida na figura 21.
EXEMPLO 14: Síntese de
<formula>formula see original document page 188</formula>
é fornecida na figura 22.
EXEMPLO 15: Síntese de
<formula>formula see original document page 188</formula>
é fornecida na figura 23.
EXEMPLO 16: Síntese de
<formula>formula see original document page 188</formula>
é fornecida na figura 24. Embora esse exemplo use o composto do exemplo 11, outra síntese também poderia empregar suficientemente os compostos do exemplo 12 na primeira etapa. Ainda, embora esse exemplo mostre ligação ao N-término, o ácdo livre sobre o lado esquerdo dos compostos dos Exemplos 11 e 12 pode também ser ligado a qualquer cadeia nucleofílica sobre um peptídeo, tal como as cadeias laterais C, K, S, T ou Y. Conforme também é mostrado nesse exemplo, o grupo amino Fmoc protegido sobre o lado direito dos compostos dos EXEMPLOS 11 e 12 é usado para ligar o grupo de reconhecimento de anticorpo, G, via uma ligação de amida.
EXEMPLO 17: Síntese de <formula>formula see original document page 189</formula>
é fornecida na figura 25. Embora esse EXEMPLO use o composto do
EXEMPLO 14, outra síntese também poderia empregar suficientemente os
compostos dos EXEMPLOS 13 ou 15 na primeira etapa. Ainda, embora esse
EXEMPLO mostre ligação ao N-término, o ácido livre sobre o lado esquerdo dos compostos dos EXEMPLOS 13-15 podem também ser ligados a qualquer cadeia lateral nucleofílica sobre um peptídeo, tal como as cadeias laterais C1 K1 S, T ou Y. Conforme também é mostrado nesse EXEMPLO, o ácido livre sobre o lado direito dos compostos dos EXEMPLOS 13-15 é usado para ligar o grupo de reconhecimento de anticorpo, G, via uma ligação de amida.
EXEMPLO 18: Síntese de
<formula>formula see original document page 189</formula>
é fornecida na figura 26. Embora esse exemplo use o composto do exemplo 11, outra síntese também poderia empregar suficientemente os compostos do exemplo 12 na primeira etapa. EXEMPLO 19: Síntese de terc-butil éster de ácido 3-{2-[2-(2-{2-[2-(2-terc- Butoxicarbonil-etóxi)-etóxi]-etóxi}-etóxi)-etóxi]etóxi}-propiônico
<formula>formula see original document page 189</formula>
O composto do título foi preparado usando um método relatado (O. Seitz e H. Kunz, J. Org. Chem. 62: 813-826 (1997)). Um pequeno pedaço de metal sódio foi adicionado à solução de tetra(etilenoglicol) (47,5 g, 244 mmols) em THF (200 ml) e agitado até que o sódio tivesse dissolvido completamente. tButiI acrilato (94 g, 730 mmols) foi, então, adicionado e agitado continuamente durante 2 dias em RT. Outro lote de tButiI acrilato (94 g, 730 mmols) foi adicionado e agitado continuamente durante mais 2 dias. A mistura de reação foi neutralizada com umas poucas gotas de HCI a 1N e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi suspenso em água e extraído com acetato de etila (3 X 150 ml). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secas sobre sulfato de sódio. Evaporação dos voláteis sob pressão reduzida proporcionou o composto bruto como um líquido incolor, o qual foi purificado usando uma coluna de sílica-gel (42 g, 51%).
EXEMPLO 20: Síntese de ácido 3-{2-[2-(2-{2-[2-(2-Carbóxi-etóxi)-etóxi]- etóxi}-etóxi)-etóxi]-etóxi}-propiônico
<formula>formula see original document page 190</formula>
Uma solução de terc-butil éster de ácido 3-{2-[2-(2-{2-[2-(2-terc- Butoxicarbonil-etóxi)-etóxi]-etóxi}-etóxi)-etóxi]-etóxi}-propiônico (6 g, 18,6 mmols) em anisola (20 ml) foi esfriada em um banho de gelo e ácido trifluoroacético (65 g) foi adicionado. Após 3 horas em RT, os voláteis foram removidas sob pressão reduzida e o resíduo foi dividido entre acetato de etila (50 ml) e solução de bicarbonato de sódio a 5%. A camada aquosa foi acidificada com HCI a 1N, saturada com NaCI e, então, extraída com acetato de etila (3 X 50 ml). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura e secas sobre sulfato de sódio. Remoção de voláteis sob pressão reduzida proporcionou o produto como um líquido incolor, o qual se solidifica quando de refrigeração (3,8 g, 82%).
EXEMPLO 21: Síntese de Ácido 3-(2-{2-[2-(2-{2-[2-(4-{2-[2-(2-Metil- [1,3]dioxolan-2-ilmetil)-[1,3]dioxolan-2-il]-etil}-fenilcarbamoil)-etóxi]-etóxi}- etóxi)-etóxi]-etóxi}-etóxi)-propiônico
<formula>formula see original document page 190</formula>
Composto do exemplo 20 (0,6 g, 1,8 mmols) foi dissolvido em diclorometano (10 ml) e 4-{2-[2-(2-Metil-[1,3]dioxolan-2-ilmetil)-[1,3]dioxolan- 2-il]-etil}-fenilamina (0,3 g, 1,4 mmols), em seguida EDCI (0,28 g, 1,8 mmols) foram adicionados em RT. Após 1 hora em RT1 a MR foi lavada com água e seca sob sulfato de sódio. Evaporação dos voláteis e purificação sobre uma coluna de sílica-gel com metanol em diclorometano a 1 a 15% proporcionou o composto do título como uma goma (0,47 g, 32%). EXEMPLO 22: Síntese de 4-{2-[2-(2-Metil-[1,3]d ioxola η-2-ilmetif )- [1,3]dioxoian-2-iij-etii}-íenilamina
<formula>formula see original document page 191</formula>
Um frasco seco em forno limpo foi carregado com a 6-(4-nitro- fenil)-hexano-2,4-diona (3,7 g, 15,72 mmols), CH2CI2 seco (20 ml), em seguida bisTMS etileno glicol (38,5 ml, 157,3 ml) foi adicionado ao frasco e a solução resultante foi esfriada para -5°C com agitação sob argônio. TMSOTf (300 μl) foi adicionado à mistura de reação e a solução foi agitada a -5°C durante 6h. A reação foi aquecida com piridina (10 ml) e entornada em NaHCOa saturado. A mistura foi extraída com EtOAc e a camada orgânica foi lavada com água, salmoura, seca (Na2SO^ e concentrada para proporcionar um sólido amarelo. O sólido foi triturado com hexanos para proporcionar um sólido amarelo-claro de fluxo livre (3,5 g, 72%), o qual foi dissolvido em EtOAc (50 ml) e hidrogenado sob um misturador de Parr, iniciando com 344,7 kPa (50 psi) de pressão de hidrogênio. Após duas horas, a reação foi filtrada através de uma almofada de celite, a celite foi lavada completamente com CH2CI2/MeOH e os orgânicos combinados foram concentrados para proporcionar o composto do título (1,46 g, 100%) como um óleo que se solidifica quando de descanso.
EXEMPLO 23: síntese de 2,5-dioxo pirrolidin-1-il éster de ácido 4-[4-(3,5- Dioxo-hexil)-fenilcarbamoil]-butírico (10)
<formula>formula see original document page 191</formula>
Etapa 1: 6-(4-Nitro-fenil)-hexano-2,4-diona (11)
A um vaso de reação (aquecido e seco a vácuo e equipado com uma barra de agitação magnética) foram adicionados tetra-hidrofurano e di- isopropilamida de lítio (heptano a 2M / etilbenzeno / tetra-hidrofurano; 69,4 mL, 138,9 mmols). A solução foi esfriada para -78°C. Pentano-2,4-diona (7,13 mL, 69,4 mmols) foi adicionada gota a gota e a solução foi agitada durante 30 minutos a -78°C. Brometo de 4-nitrobenzila (15,0 g, 69,4 mmols) foi adicionado em uma porção. A solução foi removida do banho de gelo- seco/acetona, deixada aquecer para a temperatura ambiente e agitada durante 16 horas. A solução foi esfriada para aproximadamente 0°C e a reação foi aquecida com HCI a 1M. Tetra-hidrofurano foi removido sob pressão reduzida. O material bruto foi captado em diclorometano e lavado com HCI a 1M e salmoura. A camada aquosa foi lavada novamente com diclorometano. As camadas combinadas de diclorometano foram secas (Na2S04) e removidas sob pressão reduzida, cromatografia rápida em coluna em gradiente (FCC) foi realizada usando acetato de etila/hexanos a 5% a 15% para proporcionar o composto do título (8,5 g, 52%; sólido amarelo). 1H RMN (CDCI3): δ 8,14 (d, J = 9,0 Hz, 2 Η), δ 7,43 (d, J = 8,4 Hz, 2 Η), δ 5,45 (s, 1 Η), δ 3,06 (t, J = 7,5 Hz, 2 Η), δ 2,64 (t, J = 7,8 Hz, 2 Η), δ 2,04 (s, 3 H).
Etapa 2: ácido 4-[4-(3,5-Dioxo-hexil)-fenilcarbamoil]-butírico (12)
200 mL de tetra-hidrofurano, 6-(4-nitro-fenil)-hexano-2,4-diona (8,0 g, 34,0 mmols) e di-hidro-piran-2,6-diona (3,88 g, 34,0 mmols) foram adicionados a um vaso de reação. O vaso de reação foi purgado três vezes com argônio. Aproximadamente 200 mg de paládio (10% em peso sobre carvão ativado) foram adicionados. O vaso de reação foi purgado novamente com argônio e hidrogênio em excesso introduzido através de um balão. A solução foi agitada durante 16 horas em temperatura ambiente. Hidrogênio foi removido sob pressão reduzida e o catalisador removido por meio de filtração através de celite. O tetra-hidrofurano foi removido sob pressão reduzida para proporcionar o composto do título (10,5 g, 97%, sólido amarelo).
Etapa 3: 2,5-dioxo pirrolidin-1-il éster de ácido 4-[4-(3,5-Dioxo-hexil)- fenilcarbamoil]-butírico (10) A um vaso de reação (aquecido e seco a vácuo e equipado com uma barra de agitação magnética) foi adicionado ácido 4-[4-(3,5-dioxo-hexil)- fenilcarbamoil]-butírico (10,53 g, 33,0 mmols), N-hidróxi-succinímida (3,8 g, 33,0 mmols) e cloridrato de 1-[3-(dimetilamino) propil]-3-etilcarbodiimida (6,3 g, 33,0 mmols) e diclorometano (250 mL), A solução foi agitada sob nitrogênio em temperatura ambiente durante 16 horas e, então, lavada com ácido cítrico a 10%, salmoura e seca (Na2SCO4). O diclorometano foi removido sob pressão reduzida. FCC com acetato de etila / hexanos a 70% proporcionou o composto do título (7,4 g, sólido amarelo, 54%). 1H RMN (CDCI3): δ 7,87 (s, 1 Η), δ 7,43 (d, J = 8,4 Hz, 2 Η), δ 7,12 (d, J = 8,4 Hz, 2 Η), δ 5,46 (s, 1 Η), δ 2,89 (t (& m), J = 8,1 Hz (para o t), 7 Η), δ 2,73 (t, J = 6,0 Hz, 2 Η), δ 2,56 (t, J = 7,2 Hz, 2 Η), δ 2,47 (t, J = 6,9 Hz, 2 Η), δ 2,21 (ρ, J = 6,6 Hz, 2 Η), δ 2,04 (s, 3 Η).
EXEMPLO 23: síntese de 2,5-dioxo-pirrolidin-1-il éster de ácido 3-{2-[2-(2-{4- [4-(3,5-Dioxo-hexil)-fenilcarbamoil]-butirilamino}-etóxi)-etóxi]-etóxi}- propiônico (20)
<formula>formula see original document page 193</formula>
Etapa 1: terc-butil éster de ácido 3-{2-[2-(2-Hidróxi-etóxi)-etóxi]-etóxi}- propiônico
Metal Na (catalítico) foi adicionado a uma solução agitada de terc-butil éster de ácido acrílico (6,7 mL, 46 mmols) e 2-[2-(2-hidróxi-etóxi)- etóxi]-etanol (20,7 g, 138 mmols) em THF (100 mL) a 0°C e a mistura foi agitada durante a noite. O solvente foi removido e o óleo restante dissolvido em EtOAc (100 mL). A camada orgânica foi lavada com água (3 χ 50 mL) e seca sobre Na2SO4 e o solvente removido in vácuo para proporcionar um óleo, o qual corresponde ao composto do título que será usado como está na etapa seguinte. (M + 1) = 279.
Etapa 2: terc-butil éster de ácido 3-{2-[2-(2-Tosil-sulfonilóxi-etóxi)-etóxi]- etóxi}-propiônico Cloreto de tosila (22,3 g, 117 mmols) foi adicionado aos poucos a uma solução agitada de terc-butil éster de ácido 3-{2-[2-(2-hidróxi-etóxi)- etóxi]-etóxi}-propiônico (16,3 g, 58,6 mmols) e piridina 60 ml_ em (240 mL) e a mistura foi agitada durante a noite. A reação foi aquecida com água (300 mL) e a camada orgânica foi separada. A camada aauosa foi extraída com água, CH2Cl2 (2x100 mL). A camada orgânica foi lavada com HCl (1N, 100 mL), água (100 mL) e seca sobre Na2SO4 e o solvente foi removido in vácuo para proporcionar um óleo, o qual corresponde ao composto do título que será usado como está na etapa seguinte. (M + 1) = 433. Etapa 3: terc-butil éster de ácido 3-{2-[2-(2-Amino-etóxi)-etóxi]-etóxi}- propiônico
NaN3 (35g, 538 mmols) foi adicionado a uma solução agitada de terc-butil éster de ácido 3-{2-[2-(2-tosil-sulfonilóxi-etóxi)-etóxi]-etóxi}- propiônico (20 g, 46 mmols) em DMF (150 mL) e a reação foi agitada durante a noite. A reação foi diluída com água (200 mL) e extraída com EtOAc (4 x 100 mL). A camada orgânica foi lavada com água (100 mL) e salmoura (100 mL) e seca sob Na2SO4. O solvente foi removido in vácuo para proporcionar um óleo. Cromatografia em coluna com EtOAc/Hex (1:4) proporcionou um óleo, o qual corresponde ao terc-butil éster de ácido 3-{2- [2-(2-azido-etóxi)-etóxi]-etóxi}-propiônico, (M + 1) = 304. Esse óleo foi hidrogenado usando Pd (5% sobre carbono) em EtOAc sob hidrogênio (1 atm.) durante 3 dias. O catalisador foi removido através de filtração e o solvente removido in vácuo para proporcionar um óleo correspondendo ao composto do título, (M + 1) = 278. Etapa 4: terc-butil éster de ácido 3-{2-[2-(2-{4-[4-(3,5-Dioxo-hexil)- fenilcarbamoil]-butirilamino}-etóxi)-etóxi]-etóxi}-propiônico
Uma solução de 2,5-dioxo-pirrolidin-1-il éster de ácido 4-[4-(3,5- dioxo-hexil)-fenilcarbamoil]-butírico (1,5 g, 3,6 mmols), terc-butil éster de ácido 3-{2-[2-(2-amino-etóxi)-etóxi]-etóxi}-propiônico (1,0 g, 3,6 mmols) e DIEA (1,3 μL, 7,2 mmols) em CH2Cl2 (10 mL) foi agitada em temperatura ambiente durante a noite. O solvente foi removido in vácuo e o óleo residual purificado usando cromatografia em coluna com EtOAc/MeOH (95:5) para proporcionar o composto do título como um óleo transparente, (M + 1) = 579. Etapa 5: 2,5-dioxo-pirrolidi-l-il éster de ácido 3-{2-[2-(2-{4-[4-(3,5-Dioxo- hexil)-fenilcarbamoil]-butirilamino}-etóxi)-etóxi]-etóxi}-propiônico
Terc-butil éster de ácido 3-{2-[2-(2-{4-[4-(3,5-Dioxo-hexil)- fenilcarbamoil]-butirilamino}-etóxi)-etóxi]-etóxi}-prop!Ônico (400 mg, 0,692 mmol) foi dissolvido em TFA/CH2CI2 (1:1, 3 mL) e a mistura agitada durante a noite. O solvente foi removido para proporcionar um óleo como o ácido intermediário. Esse óleo foi dissolvido em CH2CI2 (4 mL) contendo DIEA (569 μΙ_, 3,09 mmols), N-hidróxi-succinímida (119 mg, 1,03 mmol) e EDC (197 mg, 1,0 mmol) e a mistura agitada durante a noite. O solvente foi removido e o óleo residual foi purificado usando cromatografia em coluna com EtOAc/MeOH (95:5) para proporcionar um óleo como o composto do título, (M + 1) = 620.
EXEMPLO 24: síntese de um composto de direcionamento de GA baseado em h38c2
Os compostos dos exemplos 16 e 17 podem ser ligados ao h38c2 através do procedimento a seguir: um mL de anticorpo h38c2 em solução salina tamponada com fosfato (10 mg/mL) é adicionado a 12 pL de uma solução de estoque a 10 mg/mL do composto de direcionamento e a mistura resultante mantida em temperatura ambiente durante 2 horas antes de uso. EXEMPLO 25
C. Rader e colaboradores, J. Mol. Biol. 332: 889-899 (2003) detalham um método de fabricação de h38c2. O seguinte detalha os resultados, materiais e métodos nessa referência. Resultados
Humanização. O gene de Vk humano DPK-9 e o gene de Jk humano JK4 foram usados como estruturas para a humanização do domínio variável de cadeia curta kappa e o gene de Vh humano DP-47 e o gene de Jh humano Jh4 foram usados como estruturas para a humanização do domínio variável de cadeia pesada do m38C2. Todos os resíduos da região de determinação de complementaridade (CDR), conforme definido por Kabat é colaboradores, bem como resíduos de estrutura definidos no domínio variável de cadeia curta e cadeia pesada, foram enxertados sobre a estrutura humana. A seleção de resíduos de estrutura enxertados pode ser baseada na estrutura de cristal do Fab de mAb de camundongo 33F12 (PDB 1AXT). O Fab de mAb 33F12 compartilha uma homologia de seqüência de 92% com o m38c2 nos domínios variáveis e comprimentos de CDR idênticos. Além disso, o 33F12 e m38C2 têm atividade catalítica similar. Os resíduos de estrutura enxertados consistiam de cinco resíduos na cadeia curta e sete resíduos na cadeia pesada e abrangem os resíduos que provavelmente participam, direta ou indiretamente, da atividade catalítica do m38C2. Esses incluem a Iisina reativa de m38C2, LysH93, a qual está posicionada na região de estrutura 3 (FR3) da cadeia pesada. Seis resíduos, Serw35, ValH37, TrpH47, Trpm03 e PheL98, os quais são conservados entre os mAbs 33F12 e 38C2 de camundongo, estão dentro de um raio de 5-Â do grupo ε amino de LysH93. Esses resíduos também são conservados na humanização. Lysh93 repousa no fundo de sítios de ligação de substrato altamente hidrofóbico dos mAbs 33F12 e 38C2 de camundongo. Além de resíduos de CDR, uma série de resíduos de estrutura se alinha nessa bolsa. Dentre esses, Leu137, Glnu2, SerL43, VaP5, PheL87, ValH5, Ser"40, GIuh42, Glyhl88, Ileh89 e Thr"94 foram enxertados sobre a estrutura humana.
Expressão. Através de fusão dos domínios variáveis humanizados aos domínios constantes humanos Ck e Cy-|1, o h38C2 foi inicialmente gerado como um Fab expresso em E. coli. Em seguida, IgG h38c2 foi formada a partir do Fab h38c2 usando o vetor PIGG manipulado para expressão de IgGI humana em células de mamífero. Os sobrenadantes de células 293T humanas transitoriamente transfectadas foram submetidos à cromatografia por afinidade sobre proteína A recombinante, proporcionando aproximadamente 1 mg/L de IgGI h38C2. A pureza foi estabelecida através de SDS-PAGE, seguido por coloração com azul Coomassie.
Compostos de β-Dicetona <formula>formula see original document page 197</formula>
Compostos de β-Dicetona - A enaminona formada através da adição covalente de uma β-dicetona com m38c2 tem uma absorbância UV característica a λ^χ = 318 nm. Assim como a IgG m38C2, a IgG h38C2 mostrou a absorbância de enaminona característica após incubação com β- dicetona. Como um controle negativo, o mAb b12 anti-gp120 de HIV humano recombinante com o mesmo isótipo de IgGI que o h38C2, mas sem a Iisina reativa, não revelou absorbância de enaminona após incubação com a- dicetona 2. Para uma comparação quantitativa da ligação de β-dicetonas ao m38C2 e h38C2, os autores usaram um ELISA de competição. Os anticorpos foram incubados com concentrações crescentes de β-dicetonas 2 e 3 e ensaiados contra β-dicetona 1 conjugada a BSA imobilizado. As constantes de dissociação em equilíbrio evidentes foram de 38 μΜ (m38C2) e 7,6 μΜ (h38C2) para a β-dicetona 2 e 0,43 μΜ (m38C2) e 1,0 μΜ (h38C2) para a β-dicetona 3, revelando propriedades de ligação à β-dicetona similares para o anticorpo de camundongo e humanizado.
Materiais e Métodos
Modelamento Molecular - Um modelo molecular do Fab h38C2 foi construído através de modelamento por homologia usando a estrutura de cristal de um anticorpo de aldolase relacionado, o Fab 33F12 de camundongo (ID no Banco de Dados de Proteína: 1AXT), como um padrão. A estrutura de cristal do Fab 33F12 de camundongo foi previamente determinada em uma resolução de 2,15 A.4 Alinhamento das seqüências de aminoácido de 33F12 e 38C2 de camundongo usando o módulo HOMOLOGY dentro do software INSIGHT Il (AcceIrys) confirmou que ambas as seqüências são altamente homólogas. Elas diferem uma da outra por 19 de 226 aminoácidos nos dois domínios variáveis e suas CDRs compartilham os mesmos comprimentos. Além da alta hornologia de seqüência, ambas as estruturas exibem similaridade estrutural considerável, conforme observado através de uma estrutura de cristal em baixa resolução do 38C2. Os resíduos nesse modelo sofreram mutação para se conformar à seqüência de aminoácido de h38C2 e as cadeias laterais foram colocadas baseado em rotâmeros-padrões. Esse modelo foi, então, minimizado com o módulo DISCOVER no INSIGHT Il usando 100 etapas cada de minimização descendente gradual, seguido por minimização em gradiente conjugado.
Construção do Fab h38C2 - As seqüências dos domínios variáveis de cadeia curta e pesada do m38C2, bem como as seqüências das linhagens germinativas humanas DPK-9, JK4, DP-47 e JH4 (V BASE; veja o world wide website, mrc-cpe.cam.ac.uk/vbase) foram usadas para criar oligonucleotídeos em sobreposição para a montagem sintética de Vk e Vh humanizadas, respectivamente. Os sítios de N-glicosilação com a seqüência NXS/T, bem como sítios de restrição internos Hindlll, Xbal1 Saci, Apal e Sfil foram evitados. PCR foi realizada usando o Expand High Fidelity PCR System (Roche Molecular Systems). Os oligonucleotídeos de Vk humanizados foram: flanqueamento L senso (C. Rader e colaboradores, J. Biol. Chem. 275: 13668-13676 (2000)); h38C2L1 (senso; 5'- GAG CTCCAG ATG ACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTG CATCTGTAG GTG ACCGCGTCACCATCACTTG-3') (SEQ. ID. NO: 85); h38C2L2 (antissenso; 5-
ATTCAGATATGGGCTGCCATAAGTGTGCAGGAGGCTCTGACTGGAGCG GCAAGTGATGGTGACGCGGTC-3') (SEQ. ID. NO: 86); h38C2L3 (senso; 5'-
TATGGCAGCCCATATCTGAATTGGTATCTCCAGAAACCAGGCCAGTCTC CTAAGCTCCTGATCTAT-3') (SEQ. ID. NO: 87); h38C2L4 (antissenso; 5'- CTGAAACGTGATGGGACACCACTGAAACGATTGGACACTTTATAGATCA GGAGCTTAGGAGACTG-3') (SEQ. ID. NO: 88); h38C2L5 (senso; 5'- AGTGGTGTCCCATCACGTTTCAGTGGCAGTGGTTCTGGCACAGATTTCA CTCTCACCATCAGCAGTCTGCAACCTGAAGATTTTGCAGTG-3') (SEQ. ID. NO: 89); h38C2L6 (antissenso; 5'-
GATCTCCACCTTGGTCCCTCCGCCGAAAGTATAAGGGAGGTGGGTGCC CTGACTACAGAAGTACACTGCAAAATCTTCAGGTTGCAG-3') (SEQ. ID. NO: 90); e flanqueamento L antissenso (C. Rader e colaboradores, J. Biol. Chem. 275: 13668-13676 (2000)). Os oligonucleotídeos de VH humanizados foram: flanqueamento H senso (C. Rader e colaboradores, J. Biol. Chem. 275: 13668-13676 (2000)); h38C2H1 (senso; 5'- GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGCGGTGGCTTGGTACAGCCTGGCGG TTCCCTGCGCCTCTCCTGTGCAGCCTCTGGCT-3') (SEQ. ID. NO: 91); h38C2H2 (antissenso; 5'-
CTCCAGGCCCTTCTCTGGAGACTGGCGGACCCAGCTCATCCAATAGTT GCTAAAGGTGAAGCCAGAGGCTGCACAGGAGAG-3') (SEQ. ID. NO: 92); h38C2H3 (senso; 5'-
TCTCCAGAGAAGGGCCTGGAGTGGGTCTCAGAGATTCGTCTGCGCAGT GACAACTACGCCACGCACTATGCAGAGTCTGTC-3') (SEQ. ID. NO: 93); h38C2H4 (antissenso; 5-
CAGATACAGCGTGTTCTTGGAATTGTCACGGGAGATGGTGAAGCGGCC CTTGACAGACTCTGCATAGTGCGTG-3') (SEQ. ID. NO: 94); h38C2H5 (senso; 5'-
CAATTCC AAG AACACG CTGTATCTG CAAATG AACAG CCTG CGCG CCG A GGACACGGGCATTTATTACTGTAAAACG-3') (SEQ. ID. NO: 95); h38C2H6 (antissenso; 5'-
TGAGGAGACGGTGACCAGGGTGCCCTGGCCCCAGTAGCTGAAACTGTA GAAGTACGTTTTACAGTAATAAATGCCCGTG-3') (SEQ. ID. NO: 96); flanqueamento H antissenso (C. Rader e colaboradores, J. Biol. Chem. 275: 13668-13676 (2000)). Após montagem, VK e VH humanizadas foram fundidas a Ck e Cy1, respectivamente, e os fragmentos de cadeia pesada e cadeia curta resultantes foram fundidos e Sfil-clonados no vetor de fagemídeo pComb3X, conforme descrito (C. Rader e colaboradores, J. Biol. Chem. 275: 13668-13676 (2000); C.F. Barbas 3o e colaboradores, Phage Display: A Iaboratory manual, Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor N.Y. (2001)). Para enriquecer por clones com a seqüência de h38C2 correta, os Fabs foram visualizados sobre fago e selecionados através de um ciclo de exposição contra a β-dicetona i imobilizada (JW) conjugada a BSA. Fabs solúveis foram produzidos a partir de clones únicos e testados com relação à ligação a JW-BSA imobilizado através de ELISA usando anticorpos policlonais anti-F(ab')2 humano de burro conjugados à peroxidase de armorácia (Jackson ImmunoResearch Laboratories) como anticorpo secundário. As seqüências de codificação de cadeia curta e cadeia pesada de clones positivos foram analisadas através de sequenciamento de DNA usando os primers OMPSEQ e PELSEQ (C.F. Barbas 3o e colaboradores, Phage Display: A laboratory manual, Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor N.Y., (2001)), respectivamente, para confirmar as seqüências de Vk e Vh montadas de h38C2.
Construção, produção e purificação de h38C2 IgGI - O vetor PIGG recentemente descrito (C. Rader e colaboradores, FASEB J., 16: 2000-2002 (2002)) foi usado para expressão em mamífero de IgGI h38C2. O vetor de expressão de mamífero PIGG-h38c2 é ilustrado na figura 23. O vetor de 9 kb compreende os cassetes de expressão de cadeia pesada γ1 e de cadeia curta κ acionados por um construto de promotor CM bidirecional. Usando os primers PIGG-h38C2H (senso; 5'- GAGGAGGAGGAGGAGGAGCTCACTCCGAGGTGCAGCTGGTGGAGTCT G-3') (SEQ. ID. NO: 97) e GBACK (C.F. Barbas 3o e colaboradores, Phage Display: A laboratory manual, Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor N.Y. (2001)), a seqüência de codificação Vh do Fab h38C2 no vetor de fagemídeo pComb3X foi amplificada, digerida com Sacl e Apal e clonada no vetor apropriadamente digerido PIGG. Usando os primers PIGG-h38C2L (senso: 5'-
GAGGAGGAGGAGGAGAAGCTTGTTGCTCTGGATCTCTGGTGCCTACGG GGAGCTCCAGATGACCCAGTCTCC-3') (SEQ. ID. NO: 98) e LEADB (C.F. Barbas 3o e colaboradores, Phage Display: A laboratory manual, Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor Ν.Υ. (2001)), a seqüência de codificação de Vl do Fab h38C2 no vetor de fagemídeo pComb3X foi amplificada, digerida com Hindlll e Xbal e clonada no vetor apropriadamente digerido PIGG, que já continha a cadeia pesada de h38C2. Construtos de vetor PiGG intermediários e finais foram amplificados na cepa SURE de E. coli (Stratagene) e preparados com o QIAGEN Plasmid Maxi Kit. IgGI h38C2 foi produzida a partir do construto de vetor PIGG final preparado por meio de transfecção transitória de células 293T humanas usando Lipofectamine 2000 (Invitrogen). As células transfectadas foram mantidas em FCS com concentração ultrabaixa de IgG (<0,1 %) a 10% GIBCO (Invitrogen) em RPMI 1640 (HycIone) durante 2 semanas. Durante esse l. tempo, o meio foi coletado e substituído três vezes. O meio coletado foi submetido à cromatografia por afinidade sobre uma coluna de Proteína A recombinante HiTrap (Amersham Biosciences). Essa etapa de purificação proporcionou 2,45 mg de IgGI h38C2 a partir de 2.300 ml_ de meio coletado, conforme determinado através de medição da densidade óptica a 280 nm usando um Eppendorf BioPhotometer. Após diálise contra PBS em um cassete de diálise Slide-A-Lyzer 10K (Pierce), o anticorpo foi concentrado para 760 pg/mL usando um Dispositivo de Filtro para Centrífuga Ultrafree-15 (UFV2BTK40; Millipore) e filtrado estéril através de um Filtro para Seringa Acrodisc 13MM S-200 de 0,2 μηι. O rendimento final foi de 2,13 mg (87%). IgGI h38C2 purificada foi confirmada através de SDS-PAGE de não- redução, seguido por coloração com azul Coomassie.
Formação de Enaminona - Anticorpo (lgG1 h38C2 ou IgGI b12) foi adicionado à β-dicetona (ii) em uma concentração final de sítio de ligação de anticorpo a 25 μΜ e α-dicetona a 125 μΜ. Essa mistura foi incubada em temperatura ambiente durante 10 minutos antes que um espectro de UV fosse adquirido sobre um leitor de lâmina SpectraMax Plus 384 UV (Molecular Devices) usando o software SOFTmax Pro (versão 3.1.2).
Ensaios de Ligação - A menos que de outro modo observado, todas as soluções eram solução salina tamponada com fosfato (pH de 7,4). Uma solução a 2 χ de α-dicetona (ii) ou (iii) (50 μL) foi adicionada a 50 μΙ_ do anticorpo (h38C2 ou m38C2) e deixada incubar a 37°C durante 1 hora. As soluções foram misturadas através de pipeteamento. As concentrações finais de anticorpo eram de 0,4 a 8 nM de sítio de ligação de anticorpo e as concentrações finais de β-dicetonas (ii) e (iii) eram de 10"-9 a 10"-2 M e 10"-10 a 10"-4 M1 respectivamente. Cada poço de uma lâmina Costar 3690 com 96 poços (Corning) foi revestida com 100 ng do conjugado de BSA e β-dicetona (i) em TBS. As poços foram, então, bloqueadas com BSA a 3% (peso/v) em TBS. Então, 50 μL da mistura de anticorpo/p-dicetona foram adicionados, seguido por 50 μL de uma diluição a 1:1.000 de anticorpos policlonais de Fc IgG anti humana de cabra (Pierce) ou anticorpos policlonais de Fc IgG anti de camundongo de coelho (Jackson ImmunoResearch Laboratories) conjugados à peroxidase de armorácia. Isso foi seguido por 50 pL de solução de substrato ABTS. Entre cada adição, a lâmina foi coberta, incubada a 37°C durante 1 hora, então, lavada cinco vezes com H2O desionizada. A absorbância a 405 nm foi monitorada conforme descrito acima, até que a reação sem β-dicetona atingisse um valor apropriado (0,5 < A405 < 1,0). Para cada poço, a inibição fracional do sinal de ELISA (v,) foi calculada usando a equação (a):
Vi=(A0-Ai)Z(A0) (a)
onde A0 é a absorbância por ELISA obtida na ausência de β-dicetona e Ai é a absorbância obtida na presença de β-dicetona. Para proteínas de ligação monovalentes, a fração de anticorpo ligada à β-dicetona solúvel (fj) é igual a Vi. Contudo, o anticorpo de IgG é bivalente e o sinal de ELISA é inibido apenas pela presença de anticorpo duplamente ligado e não pela ligação monovalente. Portanto, a correção de Stevens para um anticorpo bivalente foi usada:
f"i = (V"i)1/2 (b)
A seguinte relação foi usada para determinar a constante de dissociação em equilíbrio evidente:
fi = F"min + (f"max - f"min)(1 + K"D/a"0)"-1 (c)
onde a"0 corresponde à concentração de α-dicetona, K"d é a constante de dissociação em equilíbrio e fmjn e Zrmax representam os valores experimentalmente determinados quando os sítios de ligação do anticorpo estão desocupados ou saturados, respectivamente. Em virtude do fato de essa equação ser válida apenas quando os valores de Kd são pelo menos 10 χ maiores do que a concentração de anticorpo, foi verificado se os valores de K0 determinados a partir da equação iii iam de encontro a esse critério. Os dados foram adaptados usando um procedimento de adaptação de mínimos quadrados não-linear de KaIeidaGraph (versão 3.0.5, software Abelbeck) com K0, fmax e fmm como os parêmetros ajustáveis e normalizados usando a equação (d):
fnorm = (fi " fmin) I (fmax " fmin) (d)
EXEMPLO 26:
Síntese do ligante de maleimida AZD de 20 átomos
<formula>formula see original document page 203</formula>
é proporcionada na figura 29.
EXEMPLO 27:
A síntese de uma Lys modificada na cadeia lateral a qual pode ser usada com o ligante mostrado na figura 29 é proporcionada na figura 30.
EXEMPLO 28:
A síntese de um conjugado de agente de direcionamento de GA- ligante compreendendo o peptídeo de direcionamento de GA de SEQ ID NO: 22 ligado ao ligante de maleimida AZD de 20 átomos apresentado na figura 29 através de um resíduo de Lys modificado na cadeia lateral é proporcionada na figura 31.
EXEMPLO 29:
A síntese de um conjugado de agente de direcionamento de GA- ligante compreendendo o peptídeo de direcionamento de GA de SEQ ID NO: 32 ligado ao ligante de maleimida AZD de 20 átomos apresentado na figura 29 via um resíduo de Lys modificado na cadeia lateral no peptídeo é fornecida na figura 32. EXEMPLO 30: caracterização de secreção de insulina mediada por peptídeo de direcionamento de GA in vitro
Análogos de peptídeo de direcionamento de GA tendo as seqüências de aminoácido apresentadas em SEQ ID NOs: 1-76 (veja Tabela I, acima) foram geradas usando os mesmos métodos apresentados nos Exemplos 1 e 2 para os peptídeos de direcionamento de GA de SEQ ID NO: 1 e SEQ ID NO: 2.
A capacidade dos peptídeos de direcionamento de GA de SEQ ID NOs: 1-13, 32, 35 e 40-47, 49-51, 53-55 e 57-63 de estimular a secreção de insulina a partir de células β pancreáticas in vitro foi testada usando um ensaio de secreção de insulina glicose-estimulado (GSIS). Resumidamente, glicose e peptídeo de direcionamento de GA foram adicionados em várias concentrações às culturas de células β pancreáticas e a secreção de insulina foi detectada medindo os níveis de insulina com o tempo. A EC50 foi calculada para cada peptídeo. Os resultados desse ensaio são apresentados na Tabela Ill abaixo.
TABELA Ill
<table>table see original document page 204</column></row><table> SEQ ID NO: 35 <10 SEQ ID NO: 40 <10 SEQ ID NO: 41 <10 SEQ ID NO: 42 <10 SEQ ID NO: 43 <10 SEQ ID NO: 44 <10 SEQ ID NO: 45 <10 SEQ ID NO: 46 <10 SEQ ID NO: 47 <10 SEQ ID NO: 49 <10 SEQ ID NO: 50 <10 SEQ ID NO: 51 <10 SEQ ID NO: 53 <10 SEQ ID NO: 54 <10 SEQ ID NO: 55 <10 SEQ ID NO: 57 <10 SEQ ID NO: 58 <10 SEQ ID NO: 59 <10 SEQ ID NO: 60 <10 SEQ ID NO: 61 <10 SEQ ID NO: 62 <10 SEQ ID NO: 63 <10
EXEMPLO 28: caracterização da secreção de insulina mediada pelo conjugado de peptídeo de direcionamento de GA-ligante in vitro
Os peptídeos de direcionamento de GA de SEQ ID NOs: 1-76 foram ligados a vários ligantes para gerar conjugados de peptídeo de direcionamento de GA-ligante. Os peptídeos de direcionamento de GA de SEQ ID NOs: 3-5, 14-33, 35-37, 57 e 63-72 foram ligados ao ligante de maleimida AZD de 20 átomos ("AZD de 20 átomos") sintetizado no Exemplo 26, o qual tem a seguinte estrutura: <formula>formula see original document page 206</formula>
A reação de ligação do peptídeo a AZD de 20 átomos é ilustrada nas figuras 26 e 27 para os peptídeos de direcionamento de GA de SEQ ID NO: 22 e SEQ ID NO: 32, respectivamente.
Os peptídeos de direcionamento de GA de SEQ ID NOs: 32 e 37 foram ligados ao ligante de maleimida AZD de 10 átomos "AZD de 10 átomos", o qual tem a seguinte estrutura:
<formula>formula see original document page 206</formula>
O peptídeo de direcionamento de GA de SEQ ID NO: 37 foi ligado ao ligante de maleimida AZD de 13 átomos "AZD de 13 átomos", o qual tem a seguinte estrutura:
<formula>formula see original document page 206</formula>
Os peptídeos de direcionamento de GA de SEQ ID N-: 35 e 37 foram ligados ao Iigante de maleimida AZD de 16 átomos "AZD de 16 átomos", o qual tem a seguinte estrutura:
<formula>formula see original document page 206</formula>
O peptídeo de direcionamento de GA de SEQ ID N0: 35 foi ligado ao ligante de maleimida AZD de 26 átomos "AZD de 26 átomos", o qual tem a seguinte estrutura: <formula>formula see original document page 207</formula>
Os peptídeos de direcionamento de GA de SEQ ID NOs: 33 e 37 foram ligados ao Iigante "Gly-AZK," o qual tem a seguinte estrutura:
<formula>formula see original document page 207</formula> Os peptídeos de direcionamento de GA de SEQ ID NOs: 1, 33
34 e 36-37 foram ligados ao Iigante "PEG4-Glu-DK", o qual tem a seguinte estrutura:
<formula>formula see original document page 207</formula>
A capacidade desses conjugados de agente de direcionamento de GA-Iigante de estimular a secreção de glicose in vitro foi medida usando o ensaio GSIS descrito no Exemplo 27. Aqueles conjugados consistindo dos peptídeos de direcionamento de GA de SEQ ID NOs: 4-5 e 14-31 ligados a AZD com 20 átomos foram usados para um experimento de "ação de absorção" para determinar o posicionamento ótimo para ligação do peptídeo de direcionamento de GA ao ligante. Cada um desses peptídeos continha um resíduo de Lys modificado na cadeia lateral de acordo com o esquema ilustrado na figura 30 em uma posição diferente. Os resultados desse experimento são apresentados na Tabela IV, abaixo.
TABELA IV
Conjugado de agente de direcionamento de GA-Iigante EC50 (μΜ)
<table>table see original document page 207</column></row><table> SEQ ID NO: 23-AZD de 20 átomos <10
SEQ ID NO: 24-AZD de 20 átomos <10
SEQ ID NO: 25-AZD de 20 átomos <10
SEQ ID NO: 26 - AZD de 20 átomos <10
SEQ ID NO: 27 - AZD de 20 átomos <10
SEQ ID NO: 28 - AZD de 20 átomos <10
SEQ ID NO: 32-AZD de 20 átomos <10
SEQ ID NO: 37 - AZD de 20 átomos <10
SEQ ID NO: 32-AZD de 10 átomos <10
SEQ ID NO: 37-AZD de 10 átomos <10
SEQ ID NO: 35-AZD de 26 átomos <10
SEQ ID NO: 33 - GIy-AZD <10
SEQ ID NO: 1 - PEG4-Glu-DK <10
SEQ ID NO: 33 - PEG4-Glu-DK <10
SEQ ID NO: 34 - PEG4-Glu-DK (ligado via K20) <10
SEQ ID NO: 34 - PEG4-Glu-DK (ligado no N-término) <10
SEQ ID NO: 36 - PEG4-Glu-DK <10
SEQ ID NO: 37 - PEG4-Glu-DK <10
SEQ ID NO: 74 (ligado à extremidade de benzoila via K28) <10
SEQ ID NO: 75 (ligado à extremidade de trans 3-hexanoila <10 no N-término)
SEQ ID NO: 76 (ligado à extremidade de 3- <10 aminofenilacetila no N-término)
EXEMPLO 29: teste de Tolerância à Glicose (GTT), Alteração de Peso Corporal e Ingestão de Alimento
A eficácia in vivo de compostos de direcionamento de GA exemplificativos e agentes da invenção foi avaliada usando o paradigma de testagem de tolerância à glicose com uma única dose ou dose repetida (figura 35). Camundongos machos jovens adultos ob/ob (Jackson Laboratories, Bar Harbor1 ME) foram dosados com compostos da invenção subcutaneamente (SC) na região escapular mediana usando rápida restrição manual, com volumes de injeção de 0,2-0,3 ml. Camundongos magros de controle da mesma ninhada (n = 8/grupo, Jackson Laboratories, Bar Harbor, ME) foram similarmente dosados com veículo. A ingestão de alimento (figura 36) e alteração cumulativa de peso corporal (figura 37) foram monitoradas diariamente pela manhã (08:00-09:00 H; luzes acessas às 06:00 H e apagadas às 18:00 H).
Os camundongos sofreram testagem de tolerância à glicose oral (OGTT) seguindo um protocolo-padrão. Resumidamente, os camundongos foram submetidos a jejum durante 4-5 horas no início da fase com luzes acessas na colônia. Ao final desse período (logo ao anoitecer), o sangue da cauda dos camundongos foi imediatamente coletado antes de e em intervalos regulares de 15 a 120 minutos após um estímulo com glicose oral (1,5 g/kg). A ração foi retornada às gaiolas após coleta no ponto de tempo de 120 minutos. Os níveis de glicose foram determinados usando medidos de glicose no sangue de auto-teste e a área sob a curva (AUC) para glicose como uma função do tempo após estímulo com glicose oral foi calculada usando uma equação trapezoidal linear (figura 35).
Ligação na posição 23 (SEQ ID NO: 21) não diminui o peso corporal ou alimentação e não melhora a tolerância à glicose a 48 horas. Ligação nas posições 17, 24, 38 e no C-término (SEQ ID NOs: 25, 20, 14, 131, 132) diminuiu o peso corporal e alimentação, mas não melhorou a tolerância à glicose a 72 horas. Ligação na posição 26 (SEQ ID NO: 19) não diminuiu o peso corporal ou alimentação, mas melhorou a tolerância à glicose a 48 horas. Todos os exemplos usaram resíduos K ou K(SH) como o resíduo de ligação. Em alguns aspectos da invenção, compostos que tiveram melhor desempenho sob algumas condições podem ser adequados para determinadas aplicações. Em outros aspectos da invenção, compostos que proporcionam vantagens sob múltiplas condições de teste podem ser vantajosos.
Os dados são representados como a média ± erro padrão e foram analisados através de ANOVA one-way (GraphPad Prism 4.0, GraphPad Software Inc., San Diego, CA) com teste posterior de Dunnett para diferenças entre grupos. A invenção foi, assim, divulgada amplamente e ilustrada em referência à modalidades representativas descritas acima. Aqueles versados na técnica reconhecerão que várias modificações podem ser feitas na presente invenção sem se desviar do espírito e escopo da mesma. Todas as publicacoes, pedidos de patente e patentes emitidas sao aqui incorporados por referência até o mesmo ponto como se cada publicação, pedido de patente ou patente emitida individual fosse específica e individualmente indicada como sendo incorporada por referência em sua totalidade. Definições que estão contidas no texto incorporadas por referência são excluídas, até o ponto em que elas contradizem as definições na presente divulgação.
As palavras "compreende/compreendendo" e as palavras "tendo/incluindo", quando usadas aqui com referência à presente invenção, são usadas para especificar a presença de características, inteiros, etapas ou componentes estabelecidos, mas não excluem a presença ou adição de uma ou mais de outras características, inteiros, etapas, componentes ou grupos dos mesmos.
Será apreciado que determinadas características da invenção as quais são, por clareza, descritas no contexto de modalidades distintas, também podem ser proporcionadas em combinação em uma única modalidade. Inversamente, várias características da invenção as quais são, por brevidade, descritas no contexto de uma única modalidade, também podem ser fornecidas separadamente ou em qualquer subcombinação adequada.
A partir do precedente, será evidente que numerosas modificações e variações podem ser realizadas sem se desviar do verdadeiro espírito e escopo do novo conceito da presente invenção. Será apreciado que a presente divulgação se destina a apresentar as exemplificações da invenção as quais não se destinam a limitar a invenção às modalidades específicas ilustradas. A divulgação se destina a abranger, pelas reivindicações, todas de tais modificações como caindo dentro do escopo das reivindicações. Onde características técnicas mencionadas em qualquer reivindicação são seguida por sinais de referência, esses sinais de referência foram incluídos para a única finalidade de aumentar a inteligibilidade das reivindicações e, consequentemente, tais sinais de referência não têm qualquer efeito iimitaíivo sobre o escopo ae cada elemento identificado à guisa de exemplo por tais sinais de referência. Listagem de Seqüências
<110> Bradshaw, Curt
Sakamuri, Sukumar Fu, Yanwen Oates, Bryan Desharnais, Joel
<120> "COMPOSTOS AGONISTAS DE RECEPTOR DE PROTEÍNA-1 SIMILARES A GLUCAGON (GLP-IR)".
<130> 56633.8018.US03 <150> 60/945.319 <151> 20/06/2007 <150> 60/939.831 <151> 23/05/2007 <150> 60/879.048 <151> 05/01/2007 <160> 173
<170> PatentIn versão 3.4
<210> 1
<211> 30 <212> PRT <213> Homo sapiens <4 00> 1
His Ala Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp 1 5
Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp 20 25
<210> 2 <211> 39
<212> PRT
<213> Heloderma suspectum <400> 2
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp
1 5
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp 20 25
Val Ser Ser Tyr Leu Glu Gly 10 15
Leu Val Lys Gly Arg 30
Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu 10 15
Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser 30 Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser 35
<210> 3 <211> 40 <212> PRT
<213> Seqüência artificial <220>
<223> peptideo de exendina-4 com adição de lisina no C-término <400> 3
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu 15 10 15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser
t
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Lys
35 40
<210> 4
<211> 40
<212> PRT
<213> Seqüência artificial <220>
<223> Peptideo de exendina-4 com Substituição de Gly para Aib2 na posição
2 e adição de lisina C-terminal
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2) . . (2)
<223> ácido 2-aminoisobutirico <400> 4
His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu 15 10 15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser 20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Lys 35 40
<210> 5 <211> 39 <212> PRT <213> Seqüência artificial <220>
<223> Peptideo de exendina-4 com Substituição de Gly para Aib2 na posição
<220>
<221> MISC_FEATURE <222> (2) .. (2)
<223> ácido 2-aminoisobutírico <4 00> 5
His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu
1 5 10 15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser 35
<210> 6 <211> 30 <212> PRT
<213> Seqüência artificial <220>
<223> Peptideo de exendina-4 com Substituição de Gly para Aib2 na posição 2 e truncamento carbóxi de 9 aminoácidos <220>
<221> MISC_FEATURE <222> (2)..(2) <223> ácido 2-aminoisobutírico <400> 6
His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu 15 10 15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly 20 25 30
<210> 7 <211> 28 <212> PRT
<213> Seqüência artificial <220>
<223> Peptideo de exendina-4 com Substituição de Gly para Aib2 na posição 2 e truncamento carbóxi de 11 aminoácidos <220>
<221> MISC_FEATURE <222> (2) .. (2)
<223> ácido 2-aminoisobutírico <400> 7
His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu 15 10 15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn 20 25
<210> 8 <211> 28 <212> PRT
<213> Seqüência artificial <220>
<223> Peptideo de exendina-4 com Substituição de Gly para Aib2 na posição 2, Substituição Met para Leu na posição 14, Substituição Trp para Phe na posição 25 e truncamento carbóxi de 11 aminoácidos <220>
<221> MIS C_FEATURE <222> (2)..(2)
<223> ácido 2-aminoisobutírico <400> 8 His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Leu Glu Glu 15 10 15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Xle Glu Phe Leu Lys Asn 20 25
<210> 9 <211> 28 <212> PRT
<213> Seqüência artificial <220>
<223> Peptideo de exendina-4 com Substituição de Gly para Aib2 na posição 2, Substituição Met para Leu na posição 14, substituição Phe para Ala na posição 22, Substituição Trp para Phe na posição 25 e truncamento carbóxi de 11 aminoácidos <220>
<221> MISC_FEATURE <222> (2) .. (2)
<223> ácido 2-aminoisobutírico <400> 9
His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Leu Glu Glu 15 10 15
Glu Ala Val Arg Leu Ala Ile Glu Phe Leu Lys Asn 20 25
<210> 10 <211> 39 <212> PRT
<213> Seqüência artificial <220>
<223> Peptideo de exendina-4 com Substituição de Gly para Aib2 na posição 2, Substituição Met para Leu na posição 14, Substituição Phe para Ala na posição 22 e Substituição Trp para Phe na posição 25 <220>
<221> MISC FEATURE <222> (2)..(2)
<223> ácido 2-aminoisobutírico
<400> 10
His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Leu Glu Glu
1 5 10 15
Glu Ala Val Arg Leu Ala Ile Glu Phe Leu. Lys Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser 35
<210> 11 <211> 39 <212> PRT
<213> Seqüência artificial <220>
<223> Peptideo de exendina-4 com Substituição de Gly para Aib2 na posição 2, substituição Met para Leu na posição 14 e substituição Trp para Phe na posição 25 <220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2) . . (2)
<223> ácido 2-aminoisobutírico <400> 11
His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Leu Glu Glu 1 5 10 15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Phe Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser 20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser 35
<210> 12
<211> 39
<212> PRT
<213> Seqüência artificial <220>
<223> Peptideo de exendina-4 com Substituição de Gly para Aib2 na posição 2, substituição K para K(Ac) na posição 12 e substituição K para K(Ac) na posição 27 <220>
<221> MISC_FEATURE <222> (2) . . (2)
<223> ácido 2-aminoisobutirico <220>
<221> MISC_FEATURE <222> (12) .. (12) <223> Iisina(Ac) <220>
<221> MISC_FEATURE <222> (27) .. (27) <223> Iisina(Ac) <400> 12
His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Xaa Gln Met Glu Glu 15 10 15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Xaa Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser 35
<210> 13 <211> 39 <212> PRT
<213> Seqüência artificial <220>
<223> Peptideo de exendina-4 com Substituição de Gly para Aib2 na posição 2, substituição K para K(benzoila) na posição 12 e substituição K para K(benzoila) na posição 27 <220> <221> MIS C_FEAT U RE
<222> (2) .. (2)
<223> ácido 2-aminoisobutírico <220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (12) .. (12)
<223> Lisina(benzoila) <220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (27) . . (27)
<223> Lisina(benzoila) <400> 13
His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Xaa Gln Met Glu Glu 1 5 10 15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Xaa Asn Gly Gly Pro Ser 20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser 35
<210> 14
<211> 39
<212> PRT
<213> Seqüência artificial <220>
<223> Peptideo de exendina-4 com Substituição de Gly para Aib2 na posição 2, substituição Pro para Lys na posição 38 <220>
<221> MISC_FEATURE <222> (2) . . (2)
<223> ácido 2-aminoisobutirico
<400> 14
His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu 1 5 10 15 Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Lys Ser 35
<210> 15 <211> 39 <212> PRT
<213> Seqüência artificial <220>
<223> Peptideo de exendina-4 com Substituição de Gly para Aib2 na posição 2, substituição Pro para Lys na posição 36 <220>
<221> MISC_FEATURE <222> (2) .. (2) <223> ácido 2-aminoisobutírico <4 00> 15
His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu 15 10 15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Lys Pro Pro Ser 35
<210> 16 <211> 39 <212> PRT
<213> Seqüência artificial <220>
<223> Peptideo de exendina-4 com Substituição de Gly para Aib2 na posição 2, substituição Gly para Lys na posição 34
<220>
<221> MISC_FEATURE <222> (2) . . (2) <223> ácido 2-aminoisobutírico <400> 16
His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu 15 10 15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Lys Ala Pro Pro Pro Ser 35
<210> 17 <211> 39 <212> PRT
<213> Seqüência artificial <220>
<223> Peptideo de exendina-4 com Substituição de Gly para Aib2 na posição 2, substituição Ser para Lys na posição 32 <220>
<221> MISC_FEATURE <222> (2) .. (2)
<223> ácido 2-aminoisobutirico <400> 17
His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu 15 10 15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Lys
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser 35
<210> 18 <211> 39 <212> PRT
<213> Seqüência artificial <220>
<223> Peptideo de exendina-4 com Substituição de Gly para Aib2 na posição 2, substituição Asn para Lys na posição 28 <220>
<221> MISC_FEATURE <222> (2)..(2) <223> ácido 2-aminoisobutírico <400> 18
His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu 15 10 15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Lys Gly Gly Pro Ser
10 20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser 35
<210> 19 <211> 39 <212> PRT
<213> Seqüência artificial <220>
<223> Peptideo de exendina-4 com Substituição de Gly para Aib2 na posição 2, substituição Leu para Lys na posição 26 <220>
<221> MISC_FEATURE <222> (2) .. (2)
<223> ácido 2-aminoisobutírico <400> 19
His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu 15 10 15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Lys Lys Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 20 <211> 39 <212> PRT
<213> Seqüência artificial <220>
<223> Peptideo de exendina-4 com Substituição de Gly para Aib2 na posição 2, substituição Glu para Lys na posição 24 <220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2) .. (2)
<223> ácido 2-aminoisobutírico
<4 00> 20
His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu 1 5 10 15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Lys Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser 20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser 35
<210> 21 <211> 39 <212> PRT <213> Seqüência artificial <220>
<223> Peptideo de exendina-4 com Substituição de Gly para Aib2 na posição 2, substituição Ile para Lys na posição 23 <220>
<221> MISC_FEATURE <222> (2)..(2)
<223> ácido 2-aminoisobutírico <4 00> 21
His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu
1 5 10 15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Lys Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser 20 25 30 Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser 35
<210> 22 <211> 39 <212> PRT
<213> Seqüência artificial <220>
<223> Peptideo de exendina-4 com Substituição de Gly para Aib2 na posição 2, substituição Leu para Lys na posição 21
<220>
<221> MISC, FEATURE <222> (2)..(2)
<223> ácido 2-aminoisobutirico <400> 22
His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu 1 5 10 15
Glu Ala Val Arg Lys Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 23
<211> 39
<212> PRT
<213> Seqüência artificial
<220>
<223> Peptideo de exendina-4 com Substituição de Gly para Aib2 na posição
2, substituição Arg para Lys na posição 20
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)..(2)
<223> ácido 2-aminoisobutirico <400> 23 His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu 1 5 10 15
Glu Ala Val Lys Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser 20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser 35
<210> 24 <211> 39 <212> PRT <213> Seqüência artificial <220>
<223> Peptideo de exendina-4 com Substituição de Gly para Aib2 na posição
2, substituição Val para Lys na posição 19 <220>
<221> MISC_FEATURE <222> (2)..(2)
<223> ácido 2-aminoisobutírico <400> 24
His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu
1 5 10 15
Glu Ala Lys Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser 35
<210> 25
<211> 39
<212> PRT
<213> Seqüência artificial <220>
<223> Peptideo de exendina-4 con\ Substituição de Gly para Aib2 na posição 2, substituição Glu para Lys na posição 17 <220> <221> MISC_FEATURE <222> (2)..(2)
<223> ácido 2-aminoisobutírico <400> 25
His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu 15 10 15
Lys Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser 20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser 10 35
<210> 26
<211> 39
<212> PRT
<213> Seqüência artificial
<220>
<223> Peptideo de exendina-4 com Substituição de Gly para Aib2 na posição 2, substituição Glu para Lys na posição 16 <220>
<221> MISC_FEATURE <222> (2) . . (2)
<223> ácido 2-aminoisobutírico <4 00> 26
His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Lys 15 10 15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser 20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser 35
<210> 27
<211> 39
<212> PRT
<213> Seqüência artificial <220>
<223> Peptídeo de exendina-4 com Substituição de Gly para Aib2 na posição 2, substituição Met para Lys na posição 14 <220>
<221> MISC-FEATURE <222> (2) .. (2)
<223> ácido 2-aminoisobutírico <400> 27
His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Lys Glu Glu
1 5 10 15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser 35
<210> 28
<211> 39 <212> PRT
<213> Seqüência artificial <220>
<223> Peptideo de exendina-4 com Substituição de Gly para Aib2 na posição 2, substituição Gln para Lys na posição 13 <220>
<221> MISC_FEATURE <222> (2) . . (2) <223> ácido 2-aminoisobutírico <4 00> 28
His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Lys Met Glu Glu 15 10 15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser 20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser 35 <210> 29
<211> 39
<212> PRT
<213> Seqüência artificial
<220>
<223> Peptideo de exendina-4 com Substituição de Gly para Aib2 na posição 2, substituição Ser para Lys na posição 11 <220>
<221> MISC_FEATURE <222> (2) . . (2) r <223> ácido 2-aminoisobutírico <4 00> 29
His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Lys Lys Gln Met Glu Glu 10 15
15 Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser 35
<210> 30
20 <211> 31
<212> PRT
<213> Seqüência artificial <220>
<223> Peptideo de exendina-4 com Substituição de Gly para Aib2 na posição 2, substituição Pro para Lys na posição 31 e truncamento carbóxi de 8 aminoácidos <220>
<221> MISC_FEATURE <222> (2)..(2) <223> ácido 2-aminoisobutírico <400> 30
His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu 15 10 15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Lys 20 25 30
<210> 31 <211> 33 <212> PRT
<213> Seqüência artificial <220>
<223> Peptideo de exendina-4 com Substituição de Gly para Aib2 na posição 2, substituição Leu para Lys na posição 21 e truncamento carbóxi de 6 "" aminoácidos <220>
<221> MISC_FEATURE <222> (2) .. (2) <223> ácido 2-aminoisobutírico <4 00> 31
His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu 15 10 15
Glu Ala Val Arg Lys Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
<210> 32
<211> 30
<212> PRT
<213> Seqüência artificial
<220>
<223> Peptideo GLP-I (7-36) com Substituição Ala para Aib2 na posição 2 <220>
<221> MIS C_FEAT U RE
<222> (2)..(2) <223> ácido 2-aminoisobutírico <400> 32
His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Gly 1 5 10 15
Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Arg 20 25 30
<210> 33 <211> 31 <212> PRT
<213> Seqüência artificial <220>
<223> Peptideo GLP-I (7-36) com Adição de lisina C-terminal <400> 33
His Ala Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Gly 1 5 10 15
Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Arg Lys 20 25 30
<210> 34 <211> 31 <212> PRT
<213> Seqüência artificial <220>
<223> Peptideo GLP-I (7 a 36) com Substituição Ala para Gly na posição 2, adição de lisina C-terminal <400> 34
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Gly 1 5 10 15
Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Arg Lys 20 25 30
<210> 35
<211> 30
<212> PRT
<213> Seqüência artificial
<220>
<223> Peptideo GLP-I (7-36) com Substituição Ala para Aib2 na posição 2, Substituição de Gly para Aib2 na posição 29 <220>
<221> MISC_FEATURE <222> (2) . . (2)
<223> ácido 2-aminoisobutírico <220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (29)..(29)
<223> ácido 2-aminoisobutirico
<400> 35
His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Gly 1 5 10 15
Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Xaa Arg
20 25 30
<210> 36
<211> 31
<212> PRT
<213> Seqüência artificial
<220>
<223> Peptideo GLP-I (7-36) com substituição Ala para Aib2 na posição Substituição de Gly para Aib2 na posição 29 e adição de lisina c-terminal <220>
<221> MISC_FEATURE <222> (2) .. (2)
<223> ácido 2-aminoisobutírico <220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (29)..(29)
<223> ácido 2-aminoisobutírico
<400> 36
His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Gly 1 5 10 15 Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Xaa Arg Lys 20 25 30
<210> 37 <211> 31 <212> PRT
<213> Seqüência artificial <220>
<223> Peptideo GLP-I (7-36) com Substituição Ala para Aib2 na posição 2, adição de lisina C-terminal <220>
<221> MISC_FEATURE <222> (2)..(2)
<223> ácido 2-aminoisobutirico <400> 37
His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Gly 15 10 15
Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Arg Lys 20 25 30
<210> 38
<211> 31
<212> PRT
<213> Seqüência artificial <220>
<223> Peptideo GLP-I (7-36) com Substituição Ala para Aib2 na posição 2,
adição de Lys(SH) C-terminal <220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)..(2)
<223> ácido 2-aminoisobutirico
<220>
<221> MISC_FEATURE <222> (31) .. (31) <223> Iisina(SH) <400> 38
His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Gly 1 5 10 15
Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Glv Arg Xaa 20 25 30
<210> 39 <211> 30 <212> PRT <213> Seqüência artificial <220>
<223> Peptideo GLP-I (7-36) com Substituição Ala para Aib2 na posição 2,
substituição Lys para Lys(SH) na posição 20
<220>
15 <221> MISCL.FEATURE <222> (2).. (2) <223> ácido 2-aminoisobutírico <220>
<221> MISC_FEATURE <222> (20) . . (20) <223> Iisina(SH) <400> 39
His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Gly 1 5 10 15
Gln Ala Ala Xaa Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Arg 20 25 30
<210> 40 <211> 30 <212> PRT <213> Seqüência artificial <220>
<223> Peptideo GLP-I (7-36) com Substituição Ala para Aib2 na posição 2, substituição Leu para Gly na posição 14 e Gly para Aib2 na posição 29
<220>
<221> MISCL.FEATURE
<222> (2) . . (2)
<223> ácido 2-aminoisobutírico
<220>
<221> MIS C_FEATURE
<222> (29)..(29)
<223> ácido 2-aminoisobutirico
<400> 40
His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Gly Glu Gly 1 5 10 15
Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Xaa Arg 20 25 30
<210> 41
<211> 30
<212> PRT
<213> Seqüência artificial
<220>
<223> Peptideo GLP-I (7-36) com Substituição Ala para Aib2 na posição 2, substituição Leu para cys na posição 14 e Gly para Aib2 na posição 29
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2) .. (2)
<223> ácido 2-aminoisobutirico
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (29)..(29)
<223> ácido 2-aminoisobutirico
<400> 41
His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Cys Glu Gly 1 5 10 15 Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Xaa Arg 20 25 30
<210> 42 <211> 30
<212> PRT
<213> Seqüência artificial
<220>
<223> Peptideo GLP-I (7 a 36) com Substituição Ala para Aib2 na posição 2, substituição Leu para Phe na posição 14 e Gly para Aib2 na posição 29 <220>
<221> MISC_FEATURE <222> (2) . . (2)
<223> ácido 2-aminoisobutirico <220>
<221> MISC_FEATURE <222> (29) .. (29) <223> ácido 2-aminoisobutirico <400> 42
His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Phe Glu Gly
1 5 10 15
Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Xaa Arg 20 25 30
<210> 43 <211> 30 <212> PRT
<213> Seqüência artificial <220>
<223> Peptideo GLP-I (7 a 36) com substituição Ala para Aib2 na posição 2, substituição Leu para Tyr na posição 14 e Gly para Aib2 na posição 29
<220>
<221> MISC_FEATURE <222> (2) . . (2) <223> ácido 2-aminoisobutírico <220>
<221> MIS C_FEATURE <222> (29)..(29) <223> ácido 2-aminoisobutírico <400> 43
His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Tyr Glu Gly 15 10 15
Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Xaa Arg 20 25 30
<210> 44 <211> 30 <212> PRT
<213> Seqüência artificial
<220>
<223> Peptídeo GLP-I (7 a 36) com Substituição Ala para Aib2 na posição 2,
substituição Leu para Trp na posição 14 e Gly para Aib2 na posição 29
<220>
<221> MISC_FEATURE <222> (2).. (2)
<223> ácido 2-aminoisobutírico <220>
<221> MISC_FEATURE <222> (29)..(29) <223> ácido 2-aminoisobutírico <400> 44
His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Trp Glu Gly 15 10 15
Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Xaa Arg
20 25 30
<210> 45 <211> 30 <212> PRT
<213> Seqüência artificial <220>
<223> Peptideo GLP-I (7 a 36) com substituição Ala para Aib2 na posição 2, substituição Gly para Glu na posição 16 e Gly para Aib2 na posição 29 <220>
<221> MISC_FEATURE <222> (2) . . (2)
<223> ácido 2-aminoisobutírico <220>
' <221> MISC_FEATURE
<222> (29)..(29) <223> ácido 2-aminoisobutirico <400> 45
15 His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Glu 10 15
Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Xaa Arg 25 30
<210> 46
20 <211> 30
<212> PRT
<213> Seqüência artificial <220>
<223> Peptideo GLP-I (7 a 36) com Substituição Ala para Aib2 na posição 2, substituição Gly para Asp na posição 16 e Gly para Aib2 na posição 29 <220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2) . . (2)
<223> ácido 2-aminoisobutirico
<220>
<221> MISC_FEATURE <222> (29) . . (29) <223> ácido 2-aminoisobutírico <400> 46
His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Asp 1 5 10 15
Õ Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Xaa Arg 20 25 30
<210> 47 <211> 30 <212> PRT <213> Seqüência artificial <220>
<223> Peptideo GLP-I (7 a 36) com Substituição Ala para Aib2 na posição 2, substituição Gly para Lys na posição 16 e Gly para Aib2 na posição 29 <220>
<221> MISC_FEATURE <222> (2) . . (2) <223> ácido 2-aminoisobutírico <220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (29)..(29)
<223> ácido 2-aminoisobutírico <400> 47
His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Lys 1 5 10 15
Gln Ala Ala Lys Glu Phe Xle Ala Trp Leu Val Lys Xaa Arg 20 25 30
<210> 48 <211> 30 <212> PRT <213> Seqüência artificial <220>
<223> Peptideo GLP-I (7 a 36) com substituição Ala para Aib2 na posição 2, substituição Ala para Val na posição 19 e Gly para Aib2 na posição 29 <220>
<221> MISC_FEATURE <222> (2) .. (2) <223> ácido 2-arninoisobutírico <220>
<221> MISC_FEATURE <222> (29)..(29) <223> ácido 2-aminoisobutírico <400> 48
His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Gly 15 10 15
Gln Ala Val Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Xaa Arg 20 25 30
<210> 49 <211> 30 <212> PRT
<213> Seqüência artificial <220>
<223> Peptideo GLP-I (7 a 36) com Substituição Ala para Aib2 na posição 2, substituição Ala para Ile na posição 19 e Gly para Aib2 na posição 29 <220>
<221> MISC_FEATURE <222> (2) .. (2) <223> ácido 2-aminoisobutírico <220>
<221> MISC_FEATURE <222> (29)..(29) <223> ácido 2-aminoisobutírico <400> 49
His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Gly 15 10 15 Gln Ala Ile Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Xaa Arg 20 25 30
<210> 50 <211> 30 <212> PRT
<213> Seqüência artificial <220>
<223> Peptideo GLP-I (7 a 36) com Substituição Ala para Aib2 na posição 2 Substituição Ala para Leu na posição 19 e Gly para Aib2 na posição 29 <220>
- <221> MISC_FEATURE
<222> (2) .. (2)
<223> ácido 2-aminoisobutírico <220>
<221> MISC_FEATURE <222> (29)..(29) <223> ácido 2-aminoisobutirico <400> 50
His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Gly 1 5 10 15
Gln Ala Leu Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Xaa Arg 20 25 30
<210> 51 <211> 30 <212> PRT
<213> Seqüência artificial <220>
<223> Peptideo GLP-I (7 a 36) com Substituição Ala para Aib2 na posição 2 substituição Lys para Arg na posição 20 e Gly para Aib2 na posição 29
<220>
<221> MISC_FEATURE <222> (2) . . (2) <223> ácido 2-aminoisobutírico <220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (29) .. (29)
<223> ácido 2-aminoisobutírico
<400> 51
His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Gly 1 5 10 15
Gln Ala Ala Arg Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Xaa Arg 20 25 30
<210> 52 <211> 30 <212> PRT
<213> Seqüência artificial <220>
<223> Peptideo GLP-I (7-36) com Substituição Ala para Aib2 na posição substituição Lys para Orn na posição 20 e Gly para Aib2 na posição 29 <220>
<221> MISC_FEATURE <222> (2) . . (2)
<223> ácido 2-aminoisobutírico <220>
<221> MISC_FEATURE <222> (20)..(20) <223> ornitina <220>
<221> MISC_FEATORE
<222> (29)..(29)
<223> ácido 2-aminoisobutírico
<400> 52
His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Gly 1 5 10 15 Gln Ala Ala Xaa Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Xaa Arg 20 25 30
<210> 53 <211> 30 <212> PRT
<213> Seqüência artificial <220>
<223> Peptideo GLP-I (7-36) com Substituição Ala para Aib2 na posição 2, substituição Trp para Phe na posição 25 e Gly para Aib2 na posição 29 <220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)..(2)
<223> ácido 2-aminoisobutirico <220>
<221> MIS C_FEATURE <222> (29)..(29) <223> ácido 2-aminoisobutirico <400> 53
His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Gly
1 5 10 15
Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Phe Leu Val Lys Xaa Arg 20 25 30
<210> 54 <211> 30 <212> PRT
<213> Seqüência artificial <220>
<223> Peptideo GLP-I (7-36) com Substituição Ala para Aib2 na posição 2, substituição Val para Ile na posição 27 e Gly para Aib2 na posição 29
<220>
<221> MISC_FEATURE <222> (2) .. (2) 2
<223> ácido 2-aminoisobutírico <220>
<221> MISC_FEATURE <222> (29)..(29) <223> ácido 2-aminoisobutírico
<400> 54 -
His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Gly 10 15
Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Xle Lys Xaa Arg
20 25 30
<210> 55
<211> 30
<212> PRT
<213> Seqüência artificial
<220>
<223> Peptideo GLP-I (7-36) com Substituição Ala para Aib2 na posição 2, substituição Lys para Arg na posição 28 e Gly para Aib2 na posição 29 <220>
<221> MISC_FEATURE <222> (2) . . (2)
<223> ácido 2-aminoisobutírico <220>
<221> MISC_FEATURE <222> (29)..(29) <223> ácido 2-aminoisobutírico <400> 55
His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Gly 15 10 15
Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Arg Xaa Arg
30 20 25 30
<210> 56 <211> 30 <212> PRT
<213> Seqüência artificial <220>
<223> Peptideo GLP-I (7-36) com Substituição Ala para Aib2 na posição 2, substituição Lys para Orn na posição 28 e Gly para Aib2 na posição 29 <220>
<221> MISC_FEATURE <222> (Z) .. (2)
<223> ácido 2-aminoisobutirico <220>
<221> MISC_FEATURE <222> (28) .. (28) <223> ornitina <220>
<221> MISC_FEATURE <222> (29)..(29) <223> ácido 2-aminoisobutirico <400> 56
His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Gly
1 5 10 15
Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Xaa Xaa Arg 20 25 30
<210> 57 <211> 30 <212> PRT
<213> Seqüência artificial <220>
<223> Peptideo GLP-I (7-36) com Substituição Ala para Aib2 na posição 2, substituição Gly para Glu na posição 16, substituição Ala para Val na posição 19, substituição Val para Ile na posição 27 e Gly para Aib2 na posição 29 <220> <221> MISC_FEATURE <222> (2)..(2)
<223> ácido 2-aminoisobutirico <220>
<221> MISC_FEATüRE <222> (29) .. (29) <223> ácido 2-aminoisobutirico <400> 57
His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Glu 1 5 10 15
Gln Ala Val Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Ile Lys Xaa Arg 20 25 30
<210> 58 <211> 30 <212> PRT
<213> Seqüência artificial <220>
<223> Peptideo GLP-I (7-36) com Substituição Ala para Aib2 na posição 2, Leu para substituição na posição 14, Substituição Gly para Glu na posição 16, Substituição Ala para Val na posição 19, substituição Val para Ile na posição 27 e Gly para Aib2 na posição 29 <220>
<221> MISC_FEATURE <222> (2)..(2)
<223> ácido 2-aminoisobutirico <220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (29)..(29)
<223> ácido 2-aminoisobutirico
<400> 58
His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Phe Glu Glu 1 5 10 15 Gln Ala Val Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Ile Lys Xaa Arg 20 25 30
<210> 59 <211> 30 <212> PRT
<213> Seqüência artificial <220>
<223> Peptideo GLP-I (7-36) com Substituição Ala para Aib2 na posição 2, substituição Leu para Tyr na posição 14, Substituição Gly para Glu na posição 16, Substituição Ala para Val na posição 19, Substituição Val para Ile na posição 27 e Gly para Aib2 na posição 29 <220>
<221> MISC_FEATURE <222> (2)..(2)
<223> ácido 2-aminoisobutírico <220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (29)..(29)
<223> ácido 2-aminoisobutirico
<4 00> 59
His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Tyr Glu Glu 15 10 15
Gln Ala Val Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Ile Lys Xaa Arg 20 25 30
<210> 60 <211> 30 <212> PRT
<213> Seqüência artificial <220>
<223> Peptideo GLP-I (7-36) com Substituição Ala para Aib2 na posição 2, Substituição Leu para Trp na posição 14, Substituição Gly para Glu na posição 16, Substituição Ala para Val na posição 19, Substituição Val para Ile na posição 27 e Gly para Aib2 na posição 29 <220>
<221> MISC_FEATURE <222> (2) .. (2) <223> ácido 2-aminoisobutírico <220>
<221> MISC_FEATURE <222> (29)..(29) <223> ácido 2-aminoisobutirico <400> 60
His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Trp Glu Glu 1 5 10 15
Gln Ala Val Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Ile Lys Xaa Arg 20 25 30
<210> 61
<211> 30 <212> PRT
<213> Seqüência artificial <220>
<223> Peptideo GLP-I (7-36) com Substituição Ala para Aib2 na posição 2, Substituição Gly para Glu na posição 16, Substituição Ala para Val na posição 19, Substituição Val para Ile na posição 27, Substituição Lys para Arg na posição 28 e Gly para Aib2 na posição 29 <220>
<221> MISC_FEATURE <222> (2) . . (2)
<223> ácido 2-aminoisobutirico <220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (29)..(29)
<223> ácido 2-aminoisobutirico <4 00> 61 His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Glu 1 5 10 15
Gln Ala Val Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Ile Arg Xaa Arg 20 25 30
<210> 62 <211> 30 <212> PRT
<213> Seqüência artificial <220>
<223> Peptideo GLP-I (7-36) com substituições Ala para Aib2, Gly para Glu, Ala para Vai, Lys para Arg, Val para He, Lys para Arg e Gly para Aib2 nas posições 2, 16, 19, 20, 27, 28 e 29, respectivamente <220>
<221> MISC_FEATURE <222> (2)..(2)
<223> ácido 2-aminoisobutírico <220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (29)..(29)
<223> ácido 2-aminoisobutirico
<400> 62
His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Glu 1 5 10 15
Gln Ala Val Arg Glu Phe Ile Ala Trp Leu Ile Arg Xaa Arg 20 25 30
<210> 63 <211> 39 <212> PRT
<213> Seqüência artificial <220>
<223> Peptideo de fusão de GLP-I (7-36)/exendina-4 <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(30)
<223> Peptídeo GLP-I com Substituição Ala para Aib2 na posição 2, Substituição Gly para Glu na posição 16, Substituição Ala para Val na posição 19, Substituição Vai para Ile na posição 27 e Substituição de Glv para Aib2 na posição 29 <220>
<221> MISC_FEATURE <222> (2) .. (2) <223> ácido 2-aminoisobutirico <220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (29)..(29)
<223> ácido 2-aminoisobutirico
<220>
<221> MISC_FEATURE <222> (31)..(39)
<223> Corresponde aos resíduos 31-39 de exendina-4 <400> 63
His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Glu 1 5 10 15
Gln Ala Val Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Ile Lys Xaa Arg Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
25 35
<210> 64
<211> 30
<212> PRT
<213> Seqüência artificial
<220>
<223> Peptídeo GLP-I (7-36) com Substituição Ala para Aib2 na posição 2, Val para Lys na posição 10, Substituição Gly para Glu na posição 16, Substituição Ala para Val na posição 19, Substituição Val para Ile na posição 27 e Gly para Aib2 na posição 29
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2) .. (2)
<223> ácido 2-aminoisobutírico <220>
<221> MISC_FEATURE <222> (29)..(29) <223> ácido 2-aminoisobutírico <4 00> 64
His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Lys Ser Ser Tyr Leu Glu Glu 1 5 10 15
Gln Ala Val Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Ile Lys Xaa Arg
1 5 20 25 30
<210> 65 <211> 30 <212> PRT
<213> Seqüência artificial
<220>
<223> Peptideo GLP-I (7-36) com Substituição Ala para Aib2 na posição 2, Ser para Lys na posição 12, Substituição Gly para Glu na posição 16, Substituição Ala para Val na posição 19, Substituição Val para Ile na posição 27 e Gly para Aib2 na posição 29
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2) .. (2)
<223> ácido 2-aminoisobutírico <220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (29)..(29)
<223> ácido 2-aminoisobutírico <400> 65
His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Lys Tyr Leu Glu Glu 15 10 15
Gln Ala Val Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Ile Lys Xaa Arg 20 25 30
<210> 66 <211> 30 <212> PRT
<213> Seqüência artificial <220>
<223> Peptideo GLP-I (7-36) com Substituição Ala para Aib2 na posição 2, Leu to Lys na posição 14, Substituição Gly para Glu na posição 16, Substituição Ala para Val na posição 19, substituição Val para Ile na posição 27 e Gly para Aib2 na posição 29
<220>
<221> MISC_FEATURE <222> (2).. (2) <223> ácido 2-aminoisobutírico <220>
<221> MISC_FEATURE <222> (29)..(29) <223> ácido 2-aminoisobutirico <400> 66
His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Lys Glu Glu
1 5 10 15
Gln Ala Val Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Ile Lys Xaa Arg 20 25 30
<210> 67 <211> 30 <212> PRT
<213> Seqüência artificial <220> <223> Peptideo GLP-I (7-36) com Substituição Ala para Aib2 na posição 2,
Substituição Gly para Lys na posição 16, Substituição Ala para Val na
posição 19, Substituição Val para Xle na posição 27 e Gly para Aib2 na posição 29
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)..(2)
<223> ácido 2-aminoisobutírico <220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (29)..(29)
<223> ácido 2-aminoisobutirico <400> 67
His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Lys
1 5 10 15
Gln Ala Val Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Ile Lys Xaa Arg 20 25 30
<210> 68 <211> 30 <212> PRT
<213> Seqüência artificial <220>
<223> Peptideo GLP-I (7-36) com Substituição Ala para Aib2 na posição 2, Gly para Glu na posição 16, substituição Ala para Lys na posição 18, Substituição Ala para Val na posição 19, Substituição Val para Ile na posição 27 e Gly para Aib2 na posição 29 <220>
<221> MISC_FEATURE <222> (2)..(2) <223> ácido 2-aminoisobutirico <220>
<221> MISC FEATURE <222> (29)..(29)
<223> ácido 2-aminoisobutírico
<400> 68
His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Glu 1 5 10 15
Gln Lys Val Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Ile Lys Xaa Arg
20 25 30
<210> 69
<211> 30
<212> PRT
<213> Seqüência artificial
<220>
<223> Peptideo GLP-I (7-36) com Substituição Ala para Aib2 na posição 2, Gly para Glu na posição 16, Substituição Ala para Val na posição 19, substituição Phe para Lys na posição 22, Substituição Val para Ile na posição 27 e Gly para Aib2 na posição 29
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)..(2)
<223> ácido 2-aminoisobutírico
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (29)..(29)
<223> ácido 2-aminoisobutírico
<400> 69
His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Glu 15 10 15
Gln Ala Val Lys Glu Lys Ile Ala Trp Leu Ile Lys Xaa Arg 20 25 30
<210> 70
<211> 30
<212> PRT <213> Seqüência artificial
<220>
<223> Peptideo GLP-I (7-36) com Substituição Ala para Aib2 na posição 2, Gly para Glu na posição 16, Substituição Ala para Val na posição 19, substituição Ala para Lys na posição 24, Substituição Val para Ile na posição 27 e Gly para Aib2 na posição 29
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)..(2)
<223> ácido 2-aminoisobutírico
<220>
<221> MIS C_FEATURE
<222> (29)..(29)
<223> ácido 2-aminoisobutirico
<400> 70
His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Glu 1 5 10 15
Gln Ala Val Lys Glu Phe Ile Lys Trp Leu Ile Lys Xaa Arg 20 25 30
<210> 71 <211> 30 <212> PRT
<213> Seqüência artificial <220>
<223> Peptideo GLP-I (7-36) com Substituição Ala para Aib2 na posição 2, Gly para Glu na posição 16, Substituição Ala para Val na posição 19, Substituição Leu para Lys na posição 26, Substituição Val para Ile na posição 27 e Gly para Aib2 na posição 29
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)..(2)
<223> ácido 2-aminoisobutirico <220>
<221> MISC_FEATÜRE <222> (29)..(29) <223> ácido 2-aminoisobutírico <400> 71
His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Glu 15 10 15
Gln Ala Val Lys Glu Phe Ile Ala Trp Lys Ile Lys Xaa Arg 20 25 30
<210> 72
<211> 40 <212> PRT
<213> Seqüência artificial <220>
<223> Peptideo de fusão de GLP-I (7-36)/exendina-4 <220>
<221> MISC_FEATÜRE <222> (1)..(30)
<223> Peptideo GLP-I com Substituição Ala para Aib2 na posição 2, Substituição Gly para Glu na posição 16, Substituição Ala para Val na posição 19, Substituição Val para Ile na posição 27 e Substituição de Gly para Aib2 na posição 29 <220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2) . . (2)
<223> ácido 2-aminoisobutírico <220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (29)..(29)
<223> ácido 2-aminoisobutírico <220>
<221> MISC FEATURE <222> (31)..(39)
<223> Corresponde aos resíduos 31-39 de exendina-4 <400> 72
His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Glu 1 5 10 15
Gln Ala Val Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Ile Lys Xaa Arg Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Lys 35 40
<210> 73
<211> 30 <212> PRT
<213> Seqüência artificial <220>
<223> Peptídeo GLP-I (7-36) com Substituição Ala para Aib2 na posição 2, Gly para Glu na posição 16, Substituição Ala para Val na posição 19, Substituição Val para Ile na posição 27, Substituição Lys para Lys(Ac) na posição 28 e Gly para Aib2 na posição 29 <220>
<221> MISC_FEATURE <222> (2)..(2)
<223> ácido 2-aminoisobutírico <220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (28) . . (28)
<223> Iisina(Ac) <220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (29)..(29)
<223> ácido 2-aminoisobutírico
<400> 73
His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Glu 1 5 10 15
Gln Ala Val Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Ile Xaa Xaa Arg 20 25 30
<210> 74
<211> 30
<212> PRT
<213> Seqüência artificial <220>
<223> Peptideo GLP-I (7-36) com Substituição Ala para Aib2 na posição 2, Gly para Glu na posição 16, Substituição Ala para Val na posição 19, Substituição Val para Ile na posição 27, substituição Lys para
Lys(Benzoila) na posição 28, e Gly para Aib2 na posição 29 <220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2) . . (2)
<223> ácido 2-aminoisobutírico <220>
<221> MISC_FEATÜRE <222> (28)..(28) <223> Lisina(benzoila) <220>
<221> MISC_FEATURE <222> (29)..(29) <223> ácido 2-aminoisobutirico <400> 74
His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Glu 1 5 10 15
Gln Ala Val Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Ile Xaa Xaa Arg 20 25 30
<210> 75
<211> 30 <212> PRT <213> Seqüência artificial <220>
<223> Peptideo GLP-I (7-36) com 3-hexanoila ligada ao N-término via um resíduo de His, Substituição Ala para Aib2 na posição 2, Gly para Glu na posição 16, substituição Ala para Val na posição 19, substituição Val para Ile na posição 27 e Gly para Aib2 na posição 29 <220>
<221> MISC_FEATURE <222> (1)..(1)
<223> Histidina ligada à trans 3-hexanoila <220>
<221> MISC_FEATURE <222> (2) . . (2)
<223> ácido 2-aminoisobutirico <220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (29)..(29)
<223> ácido 2-aminoisobutirico
<400> 75
Xaa Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Glu 15 10 15
Gln Ala Val Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Ile Lys Xaa Arg 20 25 30
<210> 76 <211> 30 <212> PRT
<213> Seqüência artificial <220>
<223> Peptideo GLP-I (7-36) com 3-aminofenilacetila ligada ao N-término via um resíduo de His, Substituição Ala para Aib2 na posição 2, Gly para Glu na posição 16, Substituição Ala para Val na posição 19, Substituição Val para Ile na posição 27 e Gly para Aib2 na posição 29 <220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1) .. (1)
<223> Histidina ligada à 3-aminofenilacetila
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2) . .(2)
<223> ácido 2-aminoisobutirico < 2 2 0 >
<221> MISC_FEATURE
<222> (29)..(29)
<223> ácido 2-aminoisobutirico
<4 00> 76
Xaa Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Glu
1 5 10 15
Gln Ala Val Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Ile Lys Xaa Arg 20 25 30
<210> 77
<211> 112
<212> PRT
<213> Mus musculus <220>
<221> MI SC_FEATURE
<222> (1).. (23)
<223> FRl <220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (24)..(39)
<223> CDRl
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (40)..(54) <223> FR2
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (55)..(61)
<223> CDR2
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (62)..(93)
<223> FR3
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (94)..(102)
<223> CDR3
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (103)..(112)
<223> FR4
<400> 77
Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Arg Leu Gly 15 10 15
Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Thr 20 25 30
Tyr Gly Ser Pro Tyr Leu Asn Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Arg Ile 65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Phe Cys Ser Gln Gly 85 90 95
Thr His Leu Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 78
<211> 118
<212> PRT
<213> Mus musculus
<220>
<221> MISCL.FEATURE
<222> (1) .. (30)
<223> FRl <220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (31)..(35)
<223> CDRl <220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (36) . . (49)
<223> FR2 <220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (50)..(68)
<223> CDR2
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (69) .. (100)
<223> FR3
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (101) .. (107)
<223> CDR3 <220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (108) .. (118)
<223> FR4 <400> 78
Glu Val Lys Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 15 10 15
Thr Met Lys Leu Ser Cys Glu Ile Ser Gly Leu Thr Phe Arg Asn Tyr
20 25 30
Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Ser Pro Glu Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Glu Ile Arg Leu Arg Ser Asp Asn Tyr Ala Thr His Tyr Ala Glu
50 55 60
Ser Val Lys Gly Lys Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Ser Arg 65 70 75 80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Thr Glu Asp Thr Gly Ile Tyr
85 90 95
Tyr Cys Lys Thr Tyr Phe Tyr Ser Phe Ser Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ala
115 <210> 79 <211> 112 <212> PRT <213> Homo sapiens <220>
<221> MISC_FEATURE <222> (1)..(23) <223> FRl <220>
<221> MISC_FEATURE <222> (24)..(39) <223> CDRl <220>
<221> MIS C_FEATURE <222> (40) .. (54) <223> FR2 <220>
<221> MIS C_FEAT URE
<222> (55)..(61)
<223> CDR2 <220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (62) . . (93)
<223> FR3 <220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (94) . . (102)
<223> CDR3 <220>
<221> MISC-FEATURE
<222> (103)..(112)
<223> FR4
<400> 79
Glu Leu Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Thr 20 25 30
Tyr Gly Ser Pro Tyr Leu Asn Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60
Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile 65 70 75 80
Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Phe Cys Ser Gln Gly 85 90 95
Thr His Leu Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 80
<211> 118
<212> PRT
<213> Homo sapiens <220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1) .. (30)
<223> FRl <220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (31) .. (35)
<223> CDRl <220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (36)..(49)
<223> FR2 <220>
<221> MISC-FEATURE
<222> (50) . . (68)
<223> CDR2 <220>
<221> MISC-FEATURE
<222> (69)..(100)
<223> FR3 <220>
<221> MISC-FEATURE
<222> (101) .. (107)
<223> CDR3 <220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (108) .. (118)
<223> FR4 <400> 80
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 15 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr 20 25 30
Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Ser Pro Glu Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Glu Ile Arg Leu Arg Ser Asp Asn Tyr Ala Thr His Tyr Ala Glu 50 55 60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr 65 70 75 80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Gly Ile Tyr
85 90 95
Tyr Cys Lys Thr Tyr Phe Tyr Ser Phe Ser Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 81
<211> 95
<212> PRT
<213> Homo sapiens <220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(23)
<223> FRl <220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (24) .. (34)
<223> CDRl
<220>
<221> MISC_FEATURE <222> (35)..(49) <223> FR2
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (50)..(56)
<223> CDR2
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (57)..(88)
<223> FR3
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (89) ..(95)
<223> CDR3
<400> 81
Val Gly 15
Ser Tyr
Leu Ile
Ser Gly
Gln Pro 80
Pro 95
<210> 82
<211> 98
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<220>
<221> MISC FEATURE
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser 1 5
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys 20
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys 35
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln
50 55
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe 65 70
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr 85
Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser 10
Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser
25 30
Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu 40 45
Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe 60
Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu 75
Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr 90 <222> (1) . . (30)
<223> FRl
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (31) .. (35)
<223> CDRl <220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (36)..(49)
<223> FR 2 <220>
<221> MIS C_FEAT U RE
<222> (50) .. (66)
<223> CDR2
<220>
<221> MISC_FEATURE <222> (67) .. (98) <223> FR3 <400> 82
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 15 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 25 35 40 45
Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80
30 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys <210> 83
<211> 12
<212> PRT
<213> Homo sapiens <220>
<221> MIS C_FEATURE
<222> (1)..(2)
<223> CDR3 <220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (3) . . (12)
<223> FR4
<400> 83
Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 15 10
<210> 84
<211> 15
<212> PRT
<213> Homo sapiens <220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1) . . (4)
<223> CDR3
<220>
<221> MIS C_FEATURE
<222> (5)..(15)
<223> FR4
<400> 84
Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 15 10 15
<210> 85 <211> 68 <212> DNA
<213> Seqüência artificial <220>
<223> Primer de PCR para geração de Vk humanizada <400> 85
gagctccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggtga ccgcgtcacc 60
atcacttg 68
<210> 86 <211> 69
<212> DNA
<213> Seqüência artificial <220>
<223> Primer de PCR para geração de Vk humanizada
<400> 86
attcagatat gggctgccat aagtgtgcag gaggctctga ctggagcggc aagtgatggt 60
gacgcggtc 69
<210> 87 <211> 66 <212> DNA
<213> Seqüência artificial <220>
<223> Primer de PCR para geração de Vk humanizada <400> 87
tatggcagcc catatctgaa ttggtatctc cagaaaccag gccagtctcc taagctcctg 60
atctat 66
<210> 88 <211> 65 <212> DNA <213> Seqüência artificial <220>
<223> Primer de PCR para geração de Vk humanizada <400> 88
ctgaaacgtg atgggacacc actgaaacga ttggacactt tatagatcag gagcttagga 60
gactg 65
<210> 89
<211> 90
<212> DNA
<213> Seqüência artificial
<220>
<223> Primer de PCR para geração de Vk humanizada
<400> 89
f agtggtgtcc catcacgttt cagtggcagt ggttctggca cagatttcac tctcaccatc 60
agcagtctgc aacctgaaga ttttgcagtg 90
<210> 90 <211> 87
<212> DNA
<213> Seqüência artificial
<220>
<223> Primer de PCR para geração de Vk humanizada <400> 90
gatctccacc ttggtccctc cgccgaaagt ataagggagg tgggtgccct gactacagaa 60
gtacactgca aaatcttcag gttgcag 87
<210> 91 <211> 79 <212> DNA <213> Seqüência artificial <220>
<223> Primer de PCR para geração de VH humanizada <400> 91
gaggtgcagc tggtggagtc tggcggtggc ttggtacagc ctggcggttc cctgcgcctc 60
tcctgtgcag cctctggct 79
<210> 92 <211> 81 <212> DNA
<213> Seqüência artificial <220>
<223> Primer de PCR para geração de VH humanizada <400> 92
ctccaggccc ttctctggag actggcggac ccagctcatc caatagttgc taaaggtgaa 60
gccagaggct gcacaggaga g 81
<210> 93 <211> 81 <212> DNA
<213> Seqüência artificial <220>
<223> Primer de PCR para geração de VH humanizada <400> 93
tctccagaga agggcctgga gtgggtctca gagattcgtc tgcgcagtga caactacgcc 60
acgcactatg cagagtctgt c 81
<210> 94 <211> 73 <212> DNA <213> Seqüência artificial <220>
<223> Primer de PCR para geração de VH humanizada <400> 94
cagatacagc gtgttcttgg aattgtcacg ggagatggtg aagcggccct tgacagactc 60
tgcatagtgc gtg 73
<210> 95 <211> 76 <212> DNA
<213> Seqüência artificial
<220>
<223> Primer de PCR para geração de VH humanizada <400> 95 caattccaag aacacgctgt atctgcaaat gaacagcctg cgcgccgagg acacgggcat 60
ttattactgt aaaacg 76
<210> 96
<211> 79
<212> DNA
<213> Seqüência artificial
<220>
<223> Primer de PCR para geração de VH humanizada <400> 96
tgaggagacg gtgaccaggg tgccctggcc ccagtagctg aaactgtaga agtacgtttt 60
acagtaataa atgcccgtg 79
<210> 97 <211> 48 <212> DNA <213> Seqüência artificial <220>
<223> PCR primer para amplificação de seqüência de codificação de VH de
h38c2
<400> 97
gaggaggagg aggaggagct cactccgagg tgcagctggt ggagtctg 48
<210> 98 <211> 72 <212> DNA
<213> Seqüência artificial <220>
<223> PCR primer para amplificação de seqüência de codificação de VL de
h38c2
<400> 98
gaggaggagg aggagaagct tgttgctctg gatctctggt gcctacgggg agctccagat 60 gacccagtct cc 72
<210> 99 <211> 39 <212> PRT
<213> Seqüência artificial <220>
<223> Peptideo de exendina-4 com Substituição de Gly para Aib2 na posição 2, substituição Pro para K(SH) na posição 38 <220>
<221> MISC_FEATURE <222> (2) .. (2)
<223> ácido 2-aminoisobutírico <220>
<221> MIS C_FEATURE <222> (38)..(38) <223> Iisina(SH) <400> 99
His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu 15 10 15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser
25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Xaa Ser
20 35
<210> 100
<211> 39
<212> PRT
<213> Seqüência artificial
<220>
<223> Peptideo de exendina-4 com Substituição de Gly para Aib2 na posição
2, substituição Pro para K(SH) na posição 36
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2).. (2)
<223> ácido 2-aminoisobutírico <220> <221> MISC_FEATURE <222> (36)..(36) <223> Iisina(SH) <400> 100
His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu 1 5 10 15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Xaa Pro Pro Ser
35
<210> 101
<211> 39
<212> PRT
<213> Seqüência artificial
<220>
<223> Peptideo de exendina-4 com Substituição de Gly para Aib2 na posição 2, substituição Gly para K(SH) na posição 34 <220>
<221> MISC_FEATURE <222> (2) . . (2)
<223> ácido 2-aminoisobutírico <220>
<221> MISC_FEATURE <222> (34).. (34) <223> Iisina(SH) <400> 101
His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu 15 10 15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser
30 20 25 30
Ser Xaa Ala Pro Pro Pro Ser 35 <210> 102
<211> 39
<212> PRT
<213> Seqüência artificial
<220>
<223> Peptideo de èxendina-4 com Substituição de Gly para Aib2 na posição
2, substituição Asn para K(SH) na posição 28
<220>
<221> MISC_FEATURE <222> (2) . . (2)
<223> ácido 2-aminoisobutirico <220>
<221> MIS C_FEATURE <222> (28) .. (28) <223> Iisina(SH) <400> 102
His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu 15 10 15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Xaa Gly Gly Pro Ser 20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser 35
<210> 103 <211> 39 <212> PRT
<213> Seqüência artificial <220>
<223> Peptideo de exendina-4 com Substituição de Gly para Aib2 na posição 2, substituição Leu para k(sh) na posição 26
<220>
<221> MISC_FEATURE <222> (2) . . (2) <223> ácido 2-aminoisobutírico <220>
<221> MISC_FEATUEE <222> (26)..(26) <223> iisina(SH) <400> 103
His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu 15 10 15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Xaa Lys Asn Gly Gly Pro Ser 10 20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser 35
<210> 104 <211> 39 <212> PRT
<213> Seqüência artificial <220>
<223> Peptideo de exendina-4 com Substituição de Gly para Aib2 na posição 2, substituição Glu para K(SH) na posição 24 <220>
<221> MISC_FEATURE <222> (2) . . (2)
<223> ácido 2-aminoisobutírico <220>
<221> MISC_FEATURE <222> (24) . . (24) <223> Iisina(SH) <400> 104
His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu
1 5 10 15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Xaa Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser 20 25 30 Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 105 <211> 39 <212> PRT
<213> Seqüência artificial <220>
<223> Peptideo de exendina-4 com Substituição de Gly para Aib2 na posição 2, substituição Ile para K(SH) na posição 23 <220>
<221> MISC_FEATURE <222> (2)..(2)
<223> ácido 2-aminoisobutirico <220>
<221> MISC_FEATURE <222> (23) . . (23) <223> Iisina(SH) <400> 105
His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu
1 5 10 15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Xaa Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser 35
<210> 106
<211> 39
<212> PRT
<213> Seqüência artificial <220>
<223> Peptideo de exendina-4 com Substituição de Gly para Aib2 na posição 2, substituição Leu para K(SH) na posição 21 <220> <221> MISC_FEATURE
<222> (2)..(2)
<223> ácido 2-aminoisobutirico <220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (21)..(21)
<223> Iisina(SH)
<400> 106
His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu
1 5 10 15
Glu Ala Val Arg Xaa Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 107
<211> 39
<212> PRT
<213> Seqüência artificial
<220>
<223> Peptideo de exendina-4 com Substituição de Gly para Aib2 na posição 2, substituição Arg para K(SH) na posição 20
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2).. (2)
<223> ácido 2-aminoisobutírico
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (20) . . (20)
<223> lisina(SH)
<400> 107
His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu 15 10 15 Glu Ala Val Xaa Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser 35
<210> 108
<211> 39 <212> PRT
<213> Seqüência artificial <220>
<223> Peptideo de exendina-4 com Substituição de Gly para Aib2 na posição 2, substituição Val para k(sh) na posição 19 <220>
<221> MISC_FEATURE <222> (2)..(2) <223> ácido 2-aminoisobutirico <220>
<221> MISC_FEATURE <222> (19) .. (19) <223> Iisina(SH) <400> 108
His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu 15 10 15
Glu Ala Xaa Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser 20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser 35
<210> 109 <211> 39 <212> PRT <213> Seqüência artificial <220>
<223> Peptideo de exendina-4 com Substituição de Gly para Aib2 na posição 2, substituição Glu para K(SH) na posição 17 <220>
<221> MISC_FEATURE <222> (2) .. (2) <223> ácido 2-aminoisobutírico <220>
<221> MISC_FEATURE <222> (17)..(17) <223> Iisina(SH) <400> 109
His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu 15 10 15
Xaa Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser 20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser 35
<210> 110 <211> 39 <212> PRT <213> Seqüência artificial <220>
<223> Peptideo de exendina-4 com Substituição de Gly para Aib2 na posição
2, substituição Glu para K(SH) na posição 16
<220> <221> MISC_FEATURE <222> (2) .. (2)
<223> ácido 2-aminoisobutírico <220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (16)..(16)
<223> Iisina(SH) <400> 110 His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Xaa 15 10 15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser 20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser 35
<210> 111
<211> 39
<212> PRT
<213> Seqüência artificial
<220>
<223> Peptideo de exendina-4 com Substituição de Gly para Aib2 na posição
2, substituição Met para K(SH) na posição 14
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2) . . (2)
<223> ácido 2-aminoisobutírico
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (14) . . (14)
<223> Iisina(SH)
<400> 111
His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Xaa Glu Glu 15 10 15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser 20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser 35
<210> 112
<211> 39
<212> PRT
<213> Seqüência artificial <220>
<223> Peptídeo de exendina-4 com Substituição de Gly para Aib2 na posição
2, substituição Gln para K(SH) na posição 13
<220>
<221> MISC_FEATURE <222> (2) . . (2)
<223> ácido 2-aminoisobutirico <220>
<221> MISC_FEATURE <222> (13) . . (13) <223> Iisina(SH) <400> 112
His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Xaa Met Glu Glu 15 10 15
15 Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser 20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser 35
<210> 113 <211> 39
<212> PRT
<213> Seqüência artificial <220>
<223> Peptideo de exendina-4 com Substituição de Gly para Aib2 na posição 2, substituição Ser para K(SH) na posição 11 <220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2) . . (2)
<223> ácido 2-aminoisobutirico
<220>
<221> MISC_FEATURE <222> (11) . . (11) <223> Iisina(SH) <400> 113
His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp 1 5
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp
20 25
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser 35
<210> 114 <211> 31 <212> PRT
<213> Seqüência artificial <220>
<223> Peptideo de exendina-4 com Substituição de Gly para Aib2 na posição 2, substituição Pro para Lys(SH) na posição 31 e truncamento carbóxi de 8 aminoácidos <220>
<221> MISC_FEATURE <222> (2) . . (2)
<223> ácido 2-aminoisobutirico <220>
<221> MISC_FEATURE <222> (31) . . (31) <223> lisina(SH) <400> 114
His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met 1 5 10
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly 20 25 30
<210> 115 <211> 33 <212> PRT
Leu Xaa Lys Gln Met Glu Glu 10 15
Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser 30
Glu Glu
15
Xaa <213> Seqüência artificial <220>
<223> Peptideo de exendina-4 coin Substituição de Gly para Aib2 na posição 2, Substituição Leu para Lys na posição 21, substituição Lys para Lys(SH) na posição 27 e truncamento carbóxi de 6 arninoácidos <220>
<221> MISC_FEATURE <222> (2)..(2)
<223> ácido 2-aminoisobutírico <220>
<221> MISC_FEATURE <222> C27)..(27) <223> Iisina(SH) <400> 115
His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu 15 10 15
Glu Ala Val Arg Lys Phe Ile Glu Trp Leu Xaa Asn Gly Gly Pro Ser 20 25 30
<210> 116 <211> 30 <212> PRT
<213> Seqüência artificial <220>
<223> Peptideo GLP-I (7-36) com Substituição Ala para Aib2 na posição 2, Val para Lys(SH) na posição 10, Substituição Gly para Glu na posição 16, Substituição Ala para Val na posição 19, substituição Val para Ile na posição 27 e Gly para Aib2 na posição 29 <220>
<221> MISC_FEATURE <222> (2).. (2)
<223> ácido 2-aminoisobutírico <220> <221> MISC_FEATURE
<222> (10)..(10)
<223> Iisina(SH) <220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (29)..(29)
<223> ácido 2-aminoisobutirico
<400> 116
His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Xaa Ser Ser Tyr Leu Glu Glu
1 5 10 15
Gln Ala Val Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Ile Lys Xaa Arg 20 25 30
<210> 117 <211> 30 <212> PRT
<213> Seqüência artificial <220>
<223> Peptideo GLP-I (7-36) com substituição Ala para Aib2 na posição 2, Ser para Lys(SH) na posição 12, Substituição Gly para Glu na posição 16, Substituição Ala para Val na posição 19, Substituição Val para Ile na posição 27 e Gly para Aib2 na posição 29 <220>
<221> MISC_FEATURE <222> (2)..(2) <223> ácido 2-aminoisobutirico <220>
<221> MISC_FEATURE <222> (27) .. (27) <223> Iisina(SH) <220>
<221> MISC_FEATURE <222> (29)..(29) <223> ácido 2-aminoisobutírico <400> 117
His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Xaa Tyr Leu Glu Glu 1 5 10 15
Gln Ala Val Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Ile Lys Xaa Ara 20 25 30
<210> 118 <211> 30 <212> PRT <213> Seqüência artificial <220>
<223> Peptideo GLP-I (7-36) com Substituição Ala para Aib2 na posição 2, Leu para Lys(SH) na posição 14, Substituição Gly para Glu na posição 16, Substituição Ala para Val na posição 19, Substituição Val para Ile na posição 27 e Gly para Aib2 na posição 29 <220>
<221> MISC_FEATURE <222> (2) .. (2)
<223> ácido 2-aminoisobutírico <220>
<221> MISC_FEATURE <222> (14) .. (14) <223> Iisina(SH) <220>
<221> MISC_FEATURE <222> (29)..(29) <223> ácido 2-aminoisobutírico <400> 117 <400> 118
His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Xaa Glu Glu 1 5 10 15
Gln Ala Val Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Ile Lys Xaa Arg 20 25 30
<210> 119 <211> 30 <212> PRT <213> Seqüência artificial <220>
<223> Peptideo GLP-I (7-36) com substituição Ala para Aib2 na posição 2, substituição Gly para Lys(SH) na posição 16, substituição Ala para Val na posição 19, Substituição Val para Ile na posição 21 e Gly para Aib2 na posição 29
<220> <221> MISC_FEATURE <222> (2}.. (2) <223> ácido 2-aminoisobutírico
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (16)..(16)
<223> lisina(SH) <220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (29)..(29)
<223> ácido 2-aminoisobutirico
<400> 119
His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Xaa
1 5 10 15
Gln Ala Val Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Ile Lys Xaa Arg 20 25 30
<210> 120 <211> 30 <212> PRT
<213> Seqüência artificial <220> <223> Peptideo GLP-I (7-36) com Substituição Ala para Aib2 na posição 2, Gly para Glu na posição 16, substituição Ala para Lys(SH) na posição 18, Substituição Ala para Val na posição 19, Substituição Val para Ile na posição 27 e Gly para Aib2 na posição 29 <220>
<221> MI SC_FEATURE
<222> (2).. (2)
<223> ácido 2-aminoisobutírico
<220>
<221> MISC_FEATURE <222> (18)..(18) <223> Iisina(SH) <220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (29)..(29)
<223> ácido 2-aminoisobutírico
<400> 120
His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Glu 1 5 10 15
Gln Xaa Val Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Ile Lys Xaa Arg 20 25 30
<210> 121 <211> 30 <212> PRT
<213> Seqüência artificial <220>
<223> Peptideo GLP-I (7-36) com Substituição Ala para Aib2 na posição 2, Gly para Glu na posição 16, Ala para vai na posição 19, Lys para Lys(SH) na posição 20, Phe para Lys na posição 22, Val para Ile na posição 27 e Gly para Aib2 na posição 29 <220>
<221> MISC FEATURE <222> (2) . . (2)
<223> ácido 2-aminoisobutirico <220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (20) .. (20)
<223> Iisina(SH) <220>
<221> MISC_FEATURE <222> (29) .. (29) <223> ácido 2-aminoisobutirico <400> 121
His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Glu vI 5 10 15
Gln Ala Val Xaa Glu Lys Ile Ala Trp Leu Ile Lys Xaa Arg
15 20 25 30
<210> 122 <211> 30 <212> PRT
<213> Seqüência artificial <220>
<223> Peptideo GLP-I (7-36) com substituição Ala para Aib2 na posição 2, Gly para Glu na posição 16, Substituição Ala para Val na posição 19, substituição Ala para Lys(SH) na posição 24, Substituição Val para Ile na posição 27 e Gly para Aib2 na posição 29
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2) . . (2)
<223> ácido 2-aminoisobutírico <220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (24) . . (24)
<223> Iisina(SH) <220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (29)..(29)
<223> ácido 2-aminoisobutírico
<400> 122
His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Glu 1 5 10 15
Gln Ala Val Lys Glu Phe Ile Xaa Trp Leu Ile Lys Xaa Arg 20 25 30
<210> 123 <211> 30 <212> PRT
<213> Seqüência artificial <220>
<223> Peptideo GLP-I (7-36) com Substituição Ala para Aib2 na posição Gly para Glu na posição 16, Substituição Ala para Val na posição 1 substituição Leu para Lys(SH) na posição 26, Substituição Val para Ile posição 27 e Gly para Aib2 na posição 29 <220>
<221> MIS C_FEATURE <222> (2) . . (2)
<223> ácido 2-aminoisobutírico <220>
<221> MISC_FEATURE <222> (26)..(26) <223> Iisina(SH) <220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (29) .. (29)
<223> ácido 2-aminoisobutírico
<400> 123
His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Glu 15 10 15
Gln Ala Val Lys Glu Phe Ile Ala Trp Xaa Ile Lys Xaa Arg 20 25 30
<210> 124 <211> 40 <212> PRT
<213> Seqüência artificial <220>
<223> Peptideo de fusão de GLP-I (7-36)/exendina-4 <220>
<221> MISC_FEATURE <222> (1)..(30) <220>
<223> Peptídeo GLP-I com Substituição Ala para Aib2 na posição 2, Substituição Gly para Glu na posição 16, Substituição Ala para Val na posição 19, Substituição Val para Ile na posição 27 e substituição Gly para Aib2 na posição 29
<221> MISC_FEATURE <222> (2)..(2)
<223> ácido 2-aminoisobutírico <220>
<221> MISC_FEATURE <222> (29)..(29) <223> ácido 2-aminoisobutírico <220>
<221> MISC_FEATURE <222> (31)..(39)
<223> Corresponde aos resíduos 31-39 de exendina-4 <220>
<221> MISC_FEATURE <222> (40)..(40) <223> Iisina(SH) <400> 124
His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Glu 15 10 15
Gln Ala Val Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Ile Lys Xaa Arg Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser )faa
35 40
<210> 125 <211> 30 <212> PRT
<213> Seqüência artificial <220>
<223> Peptideo GLP-I (7-36) com Substituição Lys para Arg na posição 28 <400> 125
His Ala Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Gly 15 10 15
Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Arg Gly Arg 20 25 30
<210> 126 <211> 31 <212> PRT
<213> Seqüência artificial <220>
<223> Peptideo GLP-I (7-36) com Substituição Lys para Arg na posição 20, Substituição Lys para Arg na posição 28 e adição de Lys C-terminal <400> 126
His Ala Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Gly 15 10 15
Gln Ala Ala Arg Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Arg Gly Arg Lys 20 25 30
<210> 127 <211> 30 <212> PRT
<213> Seqüência artificial <220>
<223> Peptideo GLP-I (7-36) com Substituição Lys para Arg na posição 20, Substituição Lys para Arg na posição 28 e substituição Arg para Lys na posição 30 <400> 127
His Ala Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Gly 15 10 15
Gln Ala Ala Arg Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Arg Gly Lys 20 25 30
<210> 128 <211> 30 <212> PRT
<213> Seqüência artificial <220>
<223> Peptideo GLP-I (7-36) com Substituição Ala para Aib2 na posição 2, Substituição de Gly para Aib2 na posição 16 e substituição Gly para Aib2 na posição 29 <220>
<221> MISC_FEATURE <222> (2) .. (2)
<223> ácido 2-aminoisobutirico <220>
<221> MISC_FEATURE <222> (16)..(16) <223> ácido 2-aminoisobutirico <220>
<221> MISC_FEATURE <222> (29) .. (29) <223> ácido 2-aminoisobutirico <400> 128 His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Xaa 1 5 10 15
Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Xaa Arg 20 25 30
<210> 129 <211> 30 <212> PRT
<213> Seqüência artificial <220>
<223> Peptideo GLP-I (7-36) com Substituição Ala para Aib2 na posição 2 e
Substituição de Gly para Aib2 na posição 16
<220>
<221> MISC_FEATURE <222> (2)..(2)
<223> ácido 2-aminoisobutirico <220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (16)..(16)
<223> ácido 2-aminoisobutirico
<4 00> 129
His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Xaa 1 5 10 15
Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Arg 20 25 30
<210> 130 <211> 31 <212> PRT
<213> Seqüência artificial <220>
<223> Peptideo GLP-I (7-36) com Substituição Ala para Aib2 na posição 2, Substituição de Gly para Aib2 na posição 16, Substituição Lys para Arg na posição 20, Substituição Lys para Arg na posição 28, Substituição de Gly para Aib2 na posição 29 e adição de Lys C-terminal <220>
<221> MISC_FEATURE <222> (2) .. (2) <223> ácido 2-aminoisobutírico <220>
<221> MISC_FEATURE <222> (16)..(16) <223> ácido 2-aminoisobutírico <220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (29)..(29)
<223> ácido 2-aminoisobutírico
<400> 130
His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Xaa 15 10 15
Gln Ala Ala Arg Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Arg Xaa Arg Lys 20 25 30
<210> 131
<211> 31
<212> PRT
<213> Seqüência artificial <220>
<223> Peptídeo GLP-I (7-36) com Substituição Ala para Aib2 na posição ; Substituição Lys para Arg na posição 20, Substituição Lys para Arg na posição 28, Substituição de Gly para Aib2 na posição 29 e adição de Lys C- terminal <220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2). . (2)
<223> ácido 2-aminoisobutírico <220> <221> MISC_FEATURE
<222> (29)..(29)
<223> ácido 2-aminoisobutírico
<400> 131
His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Gly 1 5 10 15
Gln Ala Ala Arg Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Arg Xaa Arg Lys 20 25 30
<210> 132
<211> 31
<212> PRT
<213> Seqüência artificial
<220>
<223> Peptideo GLP-I (7-36) com Substituição Ala para Aib2 na posição 2, substituição Gly para Aib2 na posição 16, Substituição Lys para Arg na posição 20, Substituição Lys para Arg na posição 28 e adição de Lys C- terminal
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)..(2)
<223> ácido 2-aminoisobutirico
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (16)..(16)
<223> ácido 2-aminoisobutirico
<400> 132
His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Xaa 1 5 10 15
Gln Ala Ala Arg Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Arg Gly Arg Lys 30 20 25 30
<210> 133
<211> 30 <212> PRT
<213> Seqüência artificial <220>
<223> Peptideo GLP-I (7-36) com Substituição Ala para Aib2 na posição 2, substituição Gly para Aib2 na posição 16, Substituição Lvs para Arg na posição 20 e Substituição de Gly para Aib2t na posição 29 <220>
<221> MISC_FEATURE <222> (2) .. (2) <223> ácido 2-aminoisobutírico <220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (16)..(16)
<223> ácido 2-aminoisobutirico
<220>
<221> MISC_FEATURE <222> (29) .. (29) <223> ácido 2-aminoisobutirico <400> 133
His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Xaa 1 5 10 15
Gln Ala Ala Arg Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Xaa Arg 20 25 30
<210> 134
<211> 31
<212> PRT
<213> Seqüência artificial <220>
<223> Peptideo GLP-I (7-36) com substituição Ala para Aib2 na posição 2, Substituição Lys para Arg na posição 20 e adição de Lys C-terminal <220>
<221> MISC FEATURE <222> (2)..(2)
<223> ácido 2-aminoisobutírico <400> 134
His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Gly 15 10 15
Gln Ala Ala Arg Glu Ehe Ile Ala Trp Leu V§1 Lys Gly Arg Lys 20 25 30
<210> 135 <211> 31 <212> PRT
<213> Seqüência artificial <220>
<223> Peptídeo GLP-I (7-36) com Substituição Ala para Aib2 na posição Substituição de Gly para Aib2 na posição 16, Substituição Lys para Arg posição 20 e adição de Lys C-terminal <220>
<221> MISC_FEATURE <222> (2) .. (2)
<223> ácido 2-aminoisobutirico <220>
<221> MISC_FEATURE <222> (16) .. (16) ácido 2-aminoisobutírico <4 00> 135
His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Xaa 15 10 15
Gln Ala Ala Arg Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Arg Lys 20 25 30
<210> 136 <211> 30 <212> PRT
<213> Seqüência artificial <220>
<223> Peptideo GLP-I (7-36) com Substituição Ala para Aib2 na posição 2, Substituição de Gly para Aib2 na posição 16, Substituição Lys para Arg na posição 28, e Substituição de Gly para Aib2 na posição 29 <220>
<221> MISC_FEATURE <222> (2) . . (2)
<223> ácido 2-aminoisobutirico <220>
<221> MISC_FEATURE <222> (16) .. (16) <223> ácido 2-aminoisobutirico <220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (29) .. (29)
<223> ácido 2-aminoisobutirico
<400> 136
His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Xaa 15 10 15
Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Arg Xaa Arg 20 25 30
<210> 137 <211> 31 <212> PRT
<213> Seqüência artificial <220>
<223> Peptideo GLP-I (7-36) com Substituição Ala para Aib2 na posição 2, Substitui ção Lys para Arg na posição 28, Substituição de Gly para Aib2 na posição 29 e adição de Lys C-terminal <220>
<221> MISC_FEATURE <222> (2) . . (2) <223> ácido 2-aminoisobutírico <220>
<221> MISC_FEATÜRE
<222> (29)..(29)
<223> ácido 2-aininoisobutírico
<400> 137
His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Gly 15 10 15
Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Arg Xaa Arg Lys 20 25 30
<210> 138 <211> 31 <212> PRT
<213> Seqüência artificial <220>
<223> Peptídeo GLP-I (7-36) com Substituição Ala para Aib2 na posição Substituição de Gly para Aib2 na posição 16, Substituição Lys para Arg posição 28 e adição de Lys C-terminal <220>
<221> MISC_FEATURE <222> (2) .. (2)
<223> ácido 2-aminoisobutirico <220>
<221> MISC_FEATURE <222> (16)..(16) <223> ácido 2-aminoisobutirico <400> 138
His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Xaa 15 10 15
Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Arg Gly Arg Lys 20 25 30
<210> 139 <211> 32 <212> PRT
<213> Seqüência artificial <220>
<223> Peptideo GLP-I (7-36) com Substituição Ala para Aib2 na posição 2, Substituição de Gly para Aib2 na posição 16, Substituição de Gly para Aib2 na posição 29 e adição de Ala-Lys C-terminal <220>
<221> MISC_FEATURE <222> (2) .. (2)
<223> ácido 2-aminoisobutírico <220>
<221> MISC_FEATURE <222> (16)..(16) <223> ácido 2-aminoisobutírico <220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (29)..(29)
<223> ácido 2-aminoisobutírico
<400> 139
His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Xaa 1 5 10 15
Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Xaa Arg Ala Lys 20 25 30
<210> 140 <211> 32 <212> PRT
<213> Seqüência artificial <220>
<223> Peptideo GLP-I (7-36) com Substituição Ala para Aib2 na posição 2, Substituição de Gly para Aib2 na posição 29 e adição de Ala-Lys C-terminal <220> <221> MISC_FEATURE <222> (2)..(2)
<223> ácido 2-aminoisobutirico <220>
<221> MISC_FEATURE <222> (29)..(29) <223> ácido 2-arainoisobutírico <400> 140
His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Gly 1 5 10 15
Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Xaa Arg Ala Lys 20 25 30
<210> 141 <211> 32 <212> PRT
<213> Seqüência artificial <220>
<223> Peptideo GLP-I (7-36) com Substituição Ala para Aib2 na posição 2, Substituição de Gly para Aib2 na posição 16 e Ala-Lys C-terminal <220>
<221> MISC_FEATURE <222> (2) . . (2)
<223> ácido 2-aminoisobutirico <220>
<221> MISC_FEATURE <222> (16)..(16) <223> ácido 2-aminoisobutirico <400> 141
His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Xaa
1 5 10 15
Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Arg Ala Lys 20 25 30 <210> 142 <211> 31 <212> PRT
<213> Seqüência artificial <220>
<223> Peptideo GLP-I (7-36) com Substituição Ala para Aib2 na posição 2, Substituição de Gly para Aib2 na posição 16, Substituição de Gly para Aib2 na posição 29 e adição de Lys C-terminal <220>
<221> MIS C_FEATURE <222> (2)..(2)
<223> ácido 2-aminoisobutirico <220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (16) . . (16)
<223> ácido 2-aminoisobutirico
<220>
<221> MIS C_FEAT URE
<222> (29)..(29)
<223> ácido 2-aminoisobutirico
<400> 142
His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Xaa 15 10 15
Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Xaa Arg Lys 20 25 30
<210> 143 <211> 31 <212> PRT
<213> Seqüência artificial <220>
<223> Peptideo GLP-I (7-36) com Substituição Ala para Aib2 na posição 2, Substituição de Gly para Aib2 na posição 16 e adição de Lys C-terminal <220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)..(2)
<223> ácido 2-aminoisobutírico
<220>
<221> MISC_FEATURE <222> (16)..(16) <223> ácido 2-aminoisobutirico <400> 143
His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Xaa 1 5 10 15
Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Arg Lys 20 25 30
<210> 144
<211> 31
<212> PRT
<213> Seqüência artificial <220> <221>
<223> Peptideo GLP-I (7-36) com substituição Ala para D-Ala na posição 2 e adição de Lys C-terminal <220>
<221> MISC_FEATURE <222> (2) .. (2) <223> D-Alanina <400> 144
His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Gly 1 5 10 15
Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Arg Lys 30 20 25 30
<210> 145 <211> 31 <212> PRT
<213> Seqüência artificial
<220>
<223> Peptideo GLP-I (7-36) com Substituição Ala para Aib2 na posição 2, Substituição de Gly para Aib2 na posição 16, Substituição Ala para Aib2 na posição 19 e adição de Lys C-terminal
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)..(2)
<223> ácido 2-aminoisobutirico
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (16)..(16)
<223> ácido 2-aminoisobutirico
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (19)..(19)
<223> ácido 2-aminoisobutirico
<400> 145
His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Xaa 15 10 15
Gln Ala Xaa Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Arg Lys
20 25 30
<210> 146
<211> 31
<212> PRT
<213> Seqüência artificial
<220>
<223> Peptideo GLP-I (7-36) com substituições Ala para Aib2, Gly para Glu, Gln para Glu, Lys para Arg, Ala para Glu e Lys para Arg nas posições 2, 16, 17, 20, 24 e 28, respectivamente e adição de Lys C-terminal
<220> <221> MISC_FEATURE
<222> (2) . . (2)
<223> ácido 2-aminoisobutírico <400> 146
His Xaa Glu Gly Thr Phe Tnr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Glu 1 5 10 15
Glu Ala Ala Arg Glu Phe Ile Glu Trp Leu Val Arg Gly Arg Lys 20 25 30
<210> 147
<211> 45
<212> PRT
<213> Seqüência artificial
<220>
<223> Peptideo de exendina-4 com adição de Lys C-terminal
<400> 147
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu 1 5 10 15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser 20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Lys Lys Lys Lys Lys Lys 35 40 45
<210> 148
<211> 39
<212> PRT
<213> Seqüência artificial
<220>
<223> Peptideo de exendina-4 com Substituição de Gly para Aib2 na posição
2 e Lys na posição 27 preso ao ligante L
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2) . . (2)
<223> ácido 2-aminoisobutírico <220>
<221> MIS C_FEATURE <222> (27) . . (27) <223> Lisina presa ao ligante L <400> 148
His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu 15 10 15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Xaa Asn Gly Gly Pro Ser 20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser 35
<210> 149 <211> 39 <212> PRT <213> Seqüência artificial <220>
<223> Peptideo de exendina-4 com substituição Gly para Aib2 na posição 2 e Substituição Leu para Lys na posição 21, onde Lys na posição 21 é presa ao ligante L <220>
<221> MISC_FEATURE <222> (2)..(2)
<223> ácido 2-aminoisobutírico <220>
25 <221> MISC_FEATURE <222> (21) .. (21) <223> Lisina presa ao ligante L <400> 149
His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu
1 5 10 15
Glu Ala Val Arg Xaa Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser 20 25 30 Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser 35
<210> 150 <211> 39 <212> PRT
<213> Seqüência artificial <220>
<223> Peptídeo de exendina-4 com Substituição de Gly para Aib2 na posição 2 e substituição Arg para Lys na posição 20, onde Lys na posição 20 é presa ao ligante L <220>
<221> MISC_FEATURE <222> (2) . . (2)
<223> ácido 2-aminoisobutírico <220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (20)..(20)
<223> Lisina presa ao ligante L
<400> 150
His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu 15 10 15
Glu Ala Val Xaa Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser 35
<210> 151 <211> 39 <212> PRT
<213> Seqüência artificial <220>
<223> Peptideo de exendina-4 com Substituição de Gly para Aib2 na posição 2 e substituição Val para Lys na posição 19, onde Lys na posição 19 é presa ao ligante L <220>
<221> MISCL.FEATURE <222> (2)..(2) <223> ácido 2-amino.isobutírico <220>
<221> MISC_FEATURE <222> (19)..(19) <223> Lisina presa ao ligante L <400> 151
His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu 15 10 15
Glu Ala Xaa Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser 20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser 35
<210> 152 <211> 39 <212> PRT <213> Seqüência artificial <220>
<223> Peptideo de exendina-4 com Substituição de Gly para Aib2 na posição 2 e substituição Met para Lys na posição 14, onde Lys na posição 14 é presa ao ligante L
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)..(2)
<223> ácido 2-aminoisobutírico <220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (14)..(14)
<223> Lisina presa ao ligante L <400> 152
His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Xaa Glu Glu 15 10 15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser 20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser 35
<210> 153 <211> 40 <212> PRT
<213> Seqüência artificial <220>
<223> Peptideo de fusão de GLP-I (7-36)/exendina-4 <220>
<221> MISC_FEATURE <222> (1)..(30)
<223> Peptideo GLP-I com Substituição Ala para Aib2 na posição 2, Substituição Gly para Glu na posição 16, Substituição Ala para Val na posição 19, substituição Val para Ile na posição 27 e Substituição de Gly para Aib2 na posição 29 <220>
<221> MISC_FEATURE <222> (2)..(2)
<223> ácido 2-aminoisobutírico
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (29) .. (29)
<223> ácido 2-aminoisobutirico <220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (31)..(39)
<223> Corresponde aos resíduos 31-39 de exendina-4 <220>
<221> MISC_FEATURE <222> (40)..(40) <223> Lisina presa ao ligante L <400> 153
His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Glu 15 10 15
Gln Ala Val Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Ile Lys Xaa Arg Pro Ser 20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Xaa 35 40
<210> 154 <211> 39 <212> PRT <213> Seqüência artificial <220>
<223> Peptideo de fusão de GLP-I (7-36)/exendina-4 <220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1) . . (30)
<223> Peptideo GLP-I com Substituição Ala para Aib2 na posição 2, Substituição Gly para Glu na posição 16, Substituição Ala para Val na posição 19, Substituição Val para Ile na posição 27, Substituição de Gly para Aib2 na posição 29, Lys na posição 20 presa ao ligante L
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2) . . (2)
<223> ácido 2-aminoisobutírico <220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (20) . . (20)
<223> Lisina presa ao ligante L <220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (29) .. (29)
<223> ácido 2-aminoisobutirico
<220>
<221> MISC_FEATURE <222> (31) . . (39)
<223> Corresponde aos resíduos 31-39 de exendina-4 <400> 154
His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Glu 15 10 15
Gln Ala Val Xaa Glu Phe Ile Ala Trp Leu Ile Lys Xaa Arg Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 155
<211> 30
<212> PRT
<213> Seqüência artificial <220>
<223> Peptídeo GLP-I (7-36) com Ala to Aib2, Lys na posição 20 presa ao
ligante L
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2) . . (2)
<223> ácido 2-aminoisobutirico <220>
<221> MISC_FEATURE <222> (20)..(20)
<223> Lisina presa ao ligante L <400> 155
His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Gly 15 10 15
Gln Ala Ala Xaa Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Arg 20 25 30
<210> 156
<211> 3S
<212> PRT
<213> Seqüência artificial <220>
<223> Peptideo de exendina-4 coin Substituição de Gly para Aib2 na posição 2 e Lys na posição 27 presa ao ligante L' <220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2) .. (2)
<223> ácido 2-aminoisobutirico
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (27) . . (27)
<223> Lisina presa ao ligante L
<400> 156
His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu 15 10 15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Xaa Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 157
<211> 39
<212> PRT
<213> Seqüência artificial
<220>
<223> Peptideo de exendina-4 com Substituição de Gly para Aib2 na posição 2 e Lys na posição 21 presa ao ligante L' <220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)..(2)
<223> ácido 2-aminoisobutírico
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (21) . . (21)
<223> Lisina presa ao ligante L"
<400> 157
His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu 15 10 15
Glu Ala Val Arg Xaa Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 158
<211> 39
<212> PRT
<213> Seqüência artificial <220>
<223> Peptideo de exendina-4 com Substituição de Gly para Aib2 na posição 2 e Lys na posição 20 presa ao ligante L" <220>
<221> MI SC_FEATURE
<222> (2) . . (2)
<223> ácido 2-aminoisobutírico <220>
<221> MI SC_FEATURE <222> (20)..(20) <223> Lisina presa ao ligante L1 <400> 158
His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu 1 5 10 15
Glu Ala Val Xaa Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 159
<211> 39
<212> PRT
<213> Seqüência artificial <220>
<223> Peptideo de exendina-4 com Substituição de Gly para Aib2 na posição
2 e Lys na posição 19 presa ao ligante L' <220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2) . . (2)
<223> ácido 2-aminoisobutírico <220>
<221> MISC_FEATURE <222> (19)..(19) <223> Lisina presa ao ligante L1 <400> 159
His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu 1 5 10 15
Glu Ala Xaa Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser 35
<210> 160 <211> 39 <212> PRT
<213> Seqüência artificial <220> <223> Peptídeo de exendina-4 com Substituição de Gly para Aib2 na posição 2
e Lys na posição 14 presa ao ligante L'
<220>
<221> MISC_FEATURE <222> (2) . . (2) <223> ácido 2-aminoisobutirico <220>
<221> MISC_FEATURE <222> (14)..(14)
<223> Lisina presa ao ligante L1 <400> 160
His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Xaa Glu Glu 1 5 10 15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser 20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser 35
<210> 161 <211> 40 <212> PRT
<213> Seqüência artificial <220>
<223> Peptideo de fusão de GLP-I (7-36) /exendina-4 <220>
<221> MISC_FEATURE <222> (1)..(30)
<223> Peptideo GLP-I com Substituição Ala para Aib2 na posição 2, Substituição Gly para Glu na posição 16, Substituição Ala para Val na posição 19, Substituição Val para Ile na posição 27 e Substituição de Gly para Aib2 na posição 29 <220>
<221> MISC FEATURE <222> (2).. (2)
<223> ácido 2-aminoisobutírico
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (29)..(29)
<223> ácido 2-aminoisobutirico
<220>
<221> MISC_FEATURE <222> (31)..(39)
<223> Corresponde aos resíduos 31-39 de exendina-4 <220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (40)..(40)
<223> Lisina presa ao ligante L
<400> 161
His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Glu 15 10 15
Gln Ala Val Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Ile Lys Xaa Arg Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Xaa
35 40
<210> 162 <2U> 39 <212> PRT
<213> Seqüência artificial <220>
<223> Peptideo de fusão de GLP-I (7-36)/exendina-4 <220>
<221> MISC_FEATURE <222> (1)..(30)
<223> Peptideo GLP-I com Substituição Ala para Aib2 na posição Substituição Gly para Glu na posição 16, Substituição Ala para Val posição 19, Val para Ile na posição 27, Substituição de Gly para Aib2 na posição 29, Lys na posição 20 presa ao ligante L <220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2) .. (2)
<223> ácido 2-aminoisobutírico <220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (20) .. (20)
<223> Lisina presa ao ligante L1 <220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (29) .. (29)
<223> ácido 2-aminoisobutírico
<220>
<221> MISC_FEATURE <222> (31)..(39)
<223> Corresponde aos resíduos 31-39 de exendina-4 <400> 162
His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Glu 10 15
Gln Ala Val Xaa Glu Phe Ile Ala Trp Leu Ile Lys Xaa Arg Pro Ser
25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 163
<211> 30
<212> PRT
<213> Seqüência artificial
<220>
<223> Peptideo GLP-I (7-36) com Ala para Aib2, Lys na posição 20 presa ao ligante L' <220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2) . . (2)
<223> ácido 2-aminoisobutírico
<220>
<221> MISC_FEATURE <222> (20) . . (20) <223> Lisina presa ao ligante L" <400> 163
His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Gly 1 5 10 15
Gln Ala Ala Xaa Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Arg 20 25 30
<210> 164
<211> 39
<212> PRT
<213> Seqüência artificial <220>
<223> Peptideo de exendina-4 com substituição Gly para Aib2 na posição 2 e substituição Glu para Lys na posição 16, onde Lys na posição 16 é presa ao ligante L <220>
<221> MISC_FEATURE <222> (2) . . (2) <223> ácido 2-aminoisobutírico <220>
<221> MISC_FEATURE <222> (16) . . (16) <223> Lisina presa ao ligante L <400> 164
His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Xaa 1 5 10 15 Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser 35
<210> 165 <211> 39 <212> PRT
<213> Seqüência artificial <220>
<223> Peptideo de exendina-4 com Substituição de Gly para Aib2 na posição 2 e substituição Glu para Lys na posição 16, onde Lys na posição 16 é presa ao ligante L1 <220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2).. (2)
<223> ácido 2-aminoisobutírico <220>
<221> MISC_FEATURE <222> (16)..(16) <223> Lisina presa ao ligante L <400> 165
His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Xaa 15 10 15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser 35
<210> 166 <211> 40 <212> PRT
<213> Seqüência artificial <220> <223> Peptídeo de exendina-4 com adição de Lys no C-término, onde Lys na posição 40 é presa ao ligante L <220>
<221> MIS C_FEATURE
<222> (40)..(40)
<223> Lisina presa ao ligante L
<400> 166
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu 10 15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Xaa
35 40
<210> 167 <211> 40 <212> PRT
<213> Seqüência artificial <220>
<223> Peptideo de exendina-4 com Substituição de Gly para Aib2 na posição 2 e adição de Lys C-terminal, onde Lys na posição 40 é presa ao ligante L <220>
<221> MISC_FEATURE <222> (2) .. (2)
<223> ácido 2-aminoisobutírico <220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (40)..(40)
<223> Lisina presa ao ligante L
<4 00> 167
His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu 15 10 15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser 20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Xaa
35 40
<210> 168 <211> 39 <212> PRT
<213> Seqüência artificial <220>
<223> Peptideo de exendina-4 com Substituição de Gly para Aib2 na posição 2, substituição Ser para K(SH) na posição 32 <220>
<221> MISC_FEATURE <222> (2)..(2)
<223> ácido 2-aminoisobutirico
<220>
<221> MISC_FEATURE <222> (32)..(32) <223> Iisina(SH) <4 00> 168
His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu 15 10 15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Xaa
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 169
<211> 39
<212> PRT
<213> Seqüência artificial
<220>
<223> Peptideo de exendina-4 com Substituição de Gly para Aib2 na posição 2, Lys na posição 12 é K(SH) 322
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)..(2)
<223> ácido 2-aminoisobutirico
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (12)..(12)
<223> Lisina(SH)
<400> 169
His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Xaa Gln Met Glu Glu
15 10 15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 170
<211> 39
<212> PRT
<213> Seqüência artificial
<220>
<223> Peptídeo de exendina-4 com Substituição de Gly para Aib2 na posição
2, Lys na posição 27 é K(SH)
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2) . . (2)
<223> ácido 2-aminoisobutirico
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (27) . . (27)
<223> lisina(SH)
<400> 170
His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu 1 5 10 15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Xaa Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 171 <211> 39 <212> PRT
<213> Seqüência artificial <220>
<223> Peptideo de fusão de GLP-I (7-36)/exendina-4 <220>
<221> MISC_FEATURE <222> (1)..(30)
<223> Peptideo GLP-I com Substituição Ala para Aib2 na posição 2, Substituição Gly para Glu na posição 16, Substituição Ala para Val na posição 19, Substituição Val para Ile na posição 27, Substituição de Gly para Aib2 na posição 29, Lys(SH) na posição 20
<220>
<221> MISC_FEATURE <222> (2) . . (2) <223> ácido 2-aminoisobutírico <220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (20)..(20)
<223> Lisina(SH) <220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (29)..(29)
<223> ácido 2-aminoisobutirico <220>
<221> MISC FEATURE <222> (31)..(39)
<223> Corresponde aos resíduos 31-39 de exendina-4 <400> 171
His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Glu 1 5 10 15
Gln Ala Val Xaa Glu Phe Ile Ala Trp Leu Ile Lys Xaa Arg Pro Ser 20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser 35
<210> 172 <211> 40 <212> PRT <213> Seqüência artificial
<220>
<223> Peptideo de exendina-4 com adição de Lys(SH) no C-término <220>
<221> MISC_FEATURE <222> (40)..(40) <223> Lys(SH) <400> 172
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu 1 5 10 15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser 20 25 30
25 Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Xaa 35 40
<210> 173 <211> 40 <212> PRT <213> Seqüência artificial <220>
<223> Peptideo de exendina-4 com Substituição de Gly para Aib2 na posição 2 e adição de Lys(SH) no C-término <220>
<221> MISC_FEATURE <222> (2) .. (2) <223> ácido 2-aminoisobutírico <220>
<221> MISC_FEATURE <222> (40)..(40) <223> Iisina(SH) <400> 173
His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu 15 10 15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser 20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Xaa 35 40

Claims (103)

1. Agente de direcionamento de GA, em que o agente de direcionamento de GA é um agonista peptídico do receptor GLP-1, compreendendo uma seqüência substancialmente homóloga a: R1- H1 X2 E3 G4 T5 F6 T7 S8 D9 x10 S11 x12 x13 x14 E15 x16 x17 A18 x19 x20 x21 F22 x23 x24 x25 x26 x27 x28 x29 x30 x31 x32 x33 x34 x35 x36 x37 x38 X39-R2 em que: R1 está ausente, é CH3, C(0)CH3, C(O)CH2CH3, C(O)CH2CH2CH3 ou C(O)CH(CH3)CH3; R2 está ausente, é OH1 NH2, NH(CH3), NHCH2CH3, NHCH2CH2CH3, NHCH(CH3)CH3, NHCH2CH2CH2CH3, NHCH(CH3)CH2CH3, NHC6H5, NHCH2CH20CH3, NHOCH3, NHOCH2CH3, um grupo de proteção carbóxi, um grupo de ácido graxo lipídico ou um carboidrato; χ2 é um grupo de bloqueio, tal como Aib, A, S, Τ, V, L, I, D-Ala; x10 éV, L, I ou A; x12 é S ou K; x13 é Q ou Y; x14 éG, C, F, Y, W, M ou L; x16 éK, D, E ou G; x17 é E ou Q; x19 é L, I1 Vou A; x20 é Orn1 K(SH)1 R ou K; x21 é L ou E; x23 é I ou L; x24 é A ou E; x25 é W ou F; x26 é L ou I; x27 é I, K ou V; x28 é R1 Orn, N ou K; x29 é Aib ou G; x30 é qualquer aminoácido, de preferência, G ou R; x31 é P ou está ausente; χ32 é S ou está ausente χ33 é S ou está ausente x34 é G ou está ausente x35 é A ou está ausente x36 é P ou está ausente x37 é P ou está ausente x38 é P ou está ausente x39 é S ou está ausente x40 é um resíduo Iigante ou está ausente; em que um de X101 x11, x12, x13, x14, x16, X171 x19, X201 x21, x24, x26, X271 x28, x32, χ33, χ34, χ35, χ36, χ37, χ38, χ39 ou χ40 é substituído por um resíduo Iigante (-[LR]-) compreendendo uma cadeia lateral nucleofílica covalentemente ligada, diretamente ou através de um Iigante intermediário, ao sítio de combinação de um anticorpo e em que o resíduo Iigante é K(SH)
2. Agente de direcionamento de GA de acordo com a reivindicação 1, em que x2 é Aib.
3. Agente de direcionamento de GA de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 e 2, compreendendo um peptídeo compreendendo uma seqüência substancialmente homóloga a: R1- H1 Aib2 E3 G4 T5 F6 T7 S8 D9 V10 S11 S12 Y13 x14 E15 x16 Q17 A18 x19 x20 E21 F22 ,23 A24 χ25 ,_26 χ27 χ28 χ29 R30 _R2 em que: x14 é G, C, F, Y, W ou L; x16 é K, D, E ou G; x19 é L, I, Vou A; x20 é Orn1 R ou K; x25 é W ou F; x27 é I ou V; x28 é R ou K; e x29 é Aib ou G.
4. Agente de direcionamento de GA de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, compreendendo um peptídeo compreendendo uma seqüência substancialmente homóloga a: R1- H1 Aib2 E3 G4 T5 F6 T7 S8 D9 L10 S11 K12 Q13 M14 E15 E16 E17 A18 V19 R20 L21 p22 123 £24 yy25 ^26 ^27 ^28 q29 q30 p31 g32 g33 q34 ^35 p36 p37 p38 539_p2
5. Agente de direcionamento de GA de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, em que o resíduo de ligação é selecionado do grupo consistindo em x11, X121 x13, x14, x16, x17, x19, x20, x21, x24, x27, x28, x32, χ34, x38 e C-término.
6. Agente de direcionamento de GA de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5, em que o resíduo de ligação é selecionado do grupo consistindo em x11, x12, x13, x14, x16, x19, x20, x21, x27, x28, x32 e x34.
7. Agente de direcionamento de GA de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 6, em que o resíduo de ligação é selecionado do grupo consistindo em x11, x12, X131 x14, x16, x19, x20 e x21.
8. Agente de direcionamento de GA de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 7, em que o resíduo de ligação é selecionado do grupo consistindo em x13, x14, x16, x19, x20 e x21.
9. Agente de direcionamento de GA de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 8, em que x14 é o resíduo de ligação.
10. Agente de direcionamento de GA de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 9, em que R1 é C(O)Chh.
11. Agente de direcionamento de GA de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 10, em que R2 é NH2.
12. Agente de direcionamento de GA de acordo com a reivindicação 1, compreendendo um peptídeo compreendendo uma seqüência substancialmente homóloga a um ou mais compostos selecionados do grupo consistindo em: R1-HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPSK(SH)-R2 (SEQ ID NO: 172), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPSK(SH)-R2(SEQ ID NO: 173), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPK(SH)S-R2 (SEQ ID NO: 99), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAK(SH)PPS-R2 (SEQ ID NO: 100), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSK(SH)APPPS-R2 (SEQ ID NO: 101), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPK(SH)SGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 168), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKK(SH)GGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 102), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLK(SH)NGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 170), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWK(SH)KNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 103), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIK(SH)WLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 104), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFK(SH)EWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 105), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRK(SH)FIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 106), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVK(SH)LFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 107), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAK(SH)RLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 108), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEK(SH)AVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 109), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEK(SH)EAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 110), R1-HAibEGTFTSDLSKQK(SH)EEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 111), R1-HAibEGTFTSDLSKK(SH)MEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 112), R1-HAibEGTFTSDLSK(SH)QMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 169), R1-HAibEGTFTSDLK(SH)KQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 113), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGK(SH)-R2 (SEQ ID NO: 114), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRKFIEWLK(SH)NGGPSS-R2 (SEQ ID NO: 115), R1-HAibEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKGRK(SH)-R2 (SEQ ID NO: 38), R1-HAibEGTFTSDVSSYLEGQAAK(SH)EFIAWLVKGR-R2 (SEQ ID NO: 39), R1-HAibEGTFTSDVSSYLEEQAVK(SH)EFIAWLIKAibRPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 171), Rl-HAibEGTFTSDK(SH)SSYLEEQAVKEFIAWLIKAibR-R2 (SEQ ID NO: 116), R1-HAibEGTFTSDVSK(SH)YLEEQAVKEFIAWLIKAibR-R2 (SEQ ID NO: 117), R1-HAibEGTFTSDVSSYK(SH)EEQAVKEFIAWLIKAibR-R2 (SEQ ID NO: 118), R1-HAibEGTFTSDVSSYLEK(SH)QAVKEFIAWLIKAibR-R2(SEQ ID NO: 119), R1-HAibEGTFTSDVSSYLEEQK(SH)VKEFIAWLIKAibR-R2 (SEQ ID NO: 120), R1-HAibEGTFTSDVSSYLEEQAVK(SH)EKIAWLIKAibR-R2 (SEQ ID NO: 121), R1-HAibEGTFTSDVSSYLEEQAVKEFIK(SH)WLIKAibR-R2 (SEQ ID NO: 122), R1-HAibEGTFTSDVSSYLEEQAVKEFIAWK(SH)IKAibR-R2 (SEQ ID NO: 123), e R1-HAibEGTFTSDVSSY.LEEQAVKEFIAWLIKAibRPSSGAPPPSK(SH)-R2 (SEQ ID NO: 124).
13. Agente de direcionamento de GA de acordo com a reivindicação 1, compreendendo um peptídeo compreendendo uma seqüência substancialmente homóloga a um ou mais compostos selecionados do grupo consistindo em: R1-HAibEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKGRK(SH)-R2 (SEQ ID NO: 38), R1-HAibEGTFTSDVSSYLEGQAAK(SH)EFIAWLVKGR-R2 (SEQ ID NO: 39), Rl-HAibEGTFTSDK(SH)SSYLEEQAVKEFIAWLIKAibR-R2 (SEQ ID NO: 116), R1-HAibEGTFTSDVSK(SH)YLEEQAVKEFIAWLIKAibR-R2 (SEQ ID NO: 117), R1-HAibEGTFTSDVSSYK(SH)EEQAVKEFIAWLIKAibR-R2 (SEQ ID NO: 118), R1-HAibEGTFTSDVSSYLEK(SH)QAVKEFIAWLIKAibR-R2 (SEQ ID NO: 119), R1-HAibEGTFTSDVSSYLEEQK(SH)VKEFIAWLIKAibR-R2 (SEQ ID NO: 120), R1-HAibEGTFTSDVSSYLEEQAVK(SH)EKIAWLIKAibR-R2 (SEQ ID NO: 121), R1-HAibEGTFTSDVSSYLEEQAVKEFIK(SH)WLIKAibR-R2 (SEQ ID NO: 122) e R1-HAibEGTFTSDVSSYLEEQAVKEFIAWK(SH)IKAibR-R2 (SEQ ID NO: 123).
14. Agente de direcionamento de GA de acordo com a reivindicação 1, compreendendo um peptídeo compreendendo uma seqüência substancialmente homóloga a um ou mais compostos selecionados do grupo consistindo em: R1-HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPSK(SH)-R2 (SEQ ID NO: 172), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPSK(SH)-R2 (SEQ ID NO: -173), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPK(SH)S-R2 (SEQ ID NO: 99), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAK(SH)PPS-R2 (SEQ ID NO: 100), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSK(SH)APPPS-R2 (SEQ ID NO: 101), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPK(SH)SGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 168), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKK(SH)GGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 102), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLK(SH)NGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 170), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWK(SH)KNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 103), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIK(SH)WLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 104), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFK(SH)EWLKNGGPSSGAPPPS-R2(SEQ ID NO: 105), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRK(SH)FIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 106), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVK(SH)LFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 107), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAK(SH)RLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 108), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEK(SH)AVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 109), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEK(SH)EAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 110), R1-HAibEGTFTSDLSKQK(SH)EEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 111), R1-HAibEGTFTSDLSKK(SH)MEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 112), R1-HAibEGTFTSDLSK(SH)QMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 169), R1-HAibEGTFTSDLK(SH)KQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 113), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGK(SH)-R2 (SEQ ID NO: 114) e R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRKFIEWLK(SH)NGGPSS-R2 (SEQ ID NO: 115).
15. Agente de direcionamento de GA de acordo com a reivindicação 14, compreendendo um peptídeo compreendendo uma seqüência substancialmente homóloga a um ou mais compostos selecionados do grupo consistindo em: R1-HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPSK(SH)-R2 (SEQ ID NO: 172), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPSK(SH)-R2 (SEQ ID NO: 173), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPK(SH)S-R2 (SEQ ID NO: 99), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAK(SH)PPS-R2 (SEQ ID NO: 100), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSK(SH)APPPS-R2 (SEQ ID NO: 101), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPK(SH)SGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 168), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKK(SH)GGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 102), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLK(SH)NGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 170), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWK(SH)KNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 103), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIK(SH)WLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 104), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFK(SH)EWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 105), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRK(SH)FIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 106), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVK(SH)LFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 107), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAK(SH)RLFlEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ IDNO:108), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEK(SH)AVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 109), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEK(SH)EAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 110), R1-HAibEGTFTSDLSKQK(SH)EEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 111), R1-HAibEGTFTSDLSKK(SH)MEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 112), R1-HAibEGTFTSDLSK(SH)QMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 169), R1-HAibEGTFTSDLK(SH)KQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 113), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGK(SH)-R2 (SEQ ID NO: 114) e R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRKFIEWLK(SH)NGGPSS-R2 (SEQ ID NO: 115).
16. Agente de direcionamento de GA de acordo com a reivindicação 1, compreendendo um peptídeo compreendendo uma seqüência selecionada do grupo consistindo em: R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPK(SH)S-R2 (SEQ ID NO: 99), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAK(SH)PPS-R2 (SEQ ID NO: 100), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSK(SH)APPPS-R2 (SEQ ID NO: 101), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPK(SH)SGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 168), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKK(SH)GGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 102), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLK(SH)NGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 170), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRK(SH)FIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 106), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVK(SH)LFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 107), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAK(SH)RLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 108), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEK(SH)EAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 110), R1-HAibEGTFTSDLSKQK(SH)EEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 111), R1-HAibEGTFTSDLSKK(SH)MEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 112), R1-HAibEGTFTSDLSK(SH)QMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 169), R1-HAibEGTFTSDLK(SH)KQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2(SEQ ID NO: 113) e R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRKFIEWLK(SH)NGGPSS-R2 (SEQ ID NO: 115).
17. Agente de direcionamento de GA de acordo com a reivindicação 1, compreendendo um peptídeo compreendendo uma seqüência selecionada do grupo consistindo em: R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRK(SH)FIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 106), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVK(SH)LFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 107), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAK(SH)RLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 108), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEK(SH)EAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2(SEQ ID NO: 110)e R1-HAibEGTFTSDLSKQK(SH)EEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 111).
18. Composto da estrutura: <formula>formula see original document page 334</formula>
19. Composto tendo a fórmula: L - [agente de direcionamento de GA] ou L' - [agente de direcionamento de GA] em que: [agente de direcionamento de GA] é um agente de direcionamento de GA como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 17; L é um Iigante tendo a fórmula -X-Y-Z-; L' é uma porção Iigante tendo a fórmula -X-Y-Z'; L ou L' é covaIentemente ligado ao resíduo de ligação; X está opcionalmente presente é uma cadeia de conexão biologicamente compatível, incluindo qualquer átomo selecionado do grupo consistindo em C, Η, Ν, O, P, S, F, CL, Br, e I e pode compreender um polímero ou copolímero em bloco; Y é um grupo de reconhecimento opcionalmente presente compreendendo pelo menos uma estrutura de anel; Z é um grupo reativo que é capaz de formar uma ligação covalente com uma cadeia lateral de aminoácido em um sítio de combinação de um anticorpo; e Z' é uma porção de fixação compreendendo uma ligação covalente a uma cadeia de aminoácido em um sítio de combinação de um anticorpo.
20. Composto de acordo com a reivindicação 19, em que: X é unido ao resíduo de ligação do agente de direcionamento de GA, é substituído ou não-substituído e é selecionado do grupo consistindo em -R22 - [CH2-CH2-0]t - R23-, -R22-cicloalquil- R23-, -R22-aril- R23-, e R22- heterociclil-R23-, em que: R22 e R23 são, cada um independentemente, selecionados do grupo consistindo em uma ligação covalente, -O-, -S-, -NRb-, C1-50 alquileno de cadeia reta ou ramificada substituído ou não-substituído, C1-50 heteroalquileno de cadeia reta ou ramificada substituído ou não-substituído, C2-50 alquenileno de cadeia reta ou ramificada substituído ou C2-50 heteroalquenileno não-substituído ou substituído ou não-substituído; Rb, em cada ocorrência, é independentemente selecionado do grupo consistindo em hidrogênio, Cmo alquila substituída ou não-substituída, C3-7 cicloalquil-C0-6 alquila substituída ou não-substituída ou aril-C0-6 alquila substituída ou não-substituída; t = 2-50; e o tamanho de R22 e R23 é tal que o comprimento da estrutura principal de X permanece cerca de 200 átomos ou menos.
21. Composto de acordo com a reivindicação 20, em que: R22 é selecionado do grupo consistindo em -(CH2)v-, -(CH2)u- C(O)-(CH2)v-, -(CH2)u-C(O)-O-(CH2)v-, -(CH2)u-C(O)-NRb-(CH2)v-, -(CH2)u- C(S)-NRb-(CH2)v-, -(CH2)u-NRb-(CH2)v-, -(CH2)u-O-(CH2)v-, -(CH2)u-S(O)0-2- (CH2)v-, -(CH2)u-S(O)o-2-NRb-(CH2)v-, e -(CH2)u-P(O)(ORb)-O-(CH2)v-, em que u e ν são independentemente 0-20; R23 é selecionado do grupo consistindo em -O-, -S-, -NRb-, C1-50 alquileno de cadeia reta ou ramificada substituído ou não-substituído, C1-50 heteroalquileno de cadeia reta ou ramificada substituído ou não-substituído, C2-5o alquenileno de cadeia reta ou ramificada substituído ou não-substituído e C2-5o heteroalquenileno substituído ou não-substituído e pode ter a estrutura: <formula>formula see original document page 335</formula> em que ρ é 2-45; w é 1-20; r é 1-20; s é 0-20; e Rb, em cada ocorrência, é independentemente selecionado do grupo consistindo em hidrogênio, C-mo alquila substituída ou não-substituída, C3-7 cicloalquil-C0-6 alquila ou aril-C0-6 alquila substituída e não-substituída; e o tamanho de R22 e R23 é tal que o comprimento da estrutura principal de X permanece cerca de 200 átomos ou menos.
22. Composto de acordo com a reivindicação 21, em que X tem a estrutura selecionada do grupo consistindo em: <formula>formula see original document page 336</formula> em que o comprimento da estrutura principal de X é 1-100 átomos.
23. Composto de acordo com a reivindicação 22, em que o comprimento da estrutura principal de X é 1-50 átomos.
24. Composto de acordo com a reivindicação 23, em que o comprimento da estrutura principal de X é 1-25 átomos.
25. Composto de acordo com a reivindicação 24, em que o comprimento da estrutura principal de X é 1-15 átomos.
26. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações -19 a 21, em que X é: <formula>formula see original document page 337</formula> em que ν e w são selecionados de modo que o comprimento da estrutura principal de X seja de 6-12 átomos.
27. Composto de acordo com a reivindicação 26, em que X-Y é: <formula>formula see original document page 337</formula> em que: V é 1 ou 2; w é 1 ou 2; e Rb é hidrogênio.
28. Composto contendo o agente de direcionamento de GA de acordo com a reivindicação 19, em que a estrutura do resíduo de ligação preso ao Iigante é: <formula>formula see original document page 337</formula>
29. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações -19 a 28, em que a estrutura de anel Y está presente e tem uma estrutura opcionalmente substituída: <formula>formula see original document page 337</formula> em que a, b, c, d, e e são, cada um independentemente, carbono ou nitrogênio; f é carbono, nitrogênio, oxigênio ou enxofre; Y é unido a X e Z ou Z' independentemente em qualquer uma das duas posições no anel de valência suficiente; e não mais do que quatro de a, b, c, d, e ou f são, simultaneamente, nitrogênio e, de preferência, a, b, c, d, e na estrutura de anel são, cada um, carbono.
30. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações -19 a 29, em que a estrutura de anel Y é fenila.
31. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações -19 a 30, em que: Z, se presente, é selecionado do grupo consistindo em alquila substituída, cicloalquila substituída, arila substituída, alquilarila substituída, heterocicloalquila substituída ou heterociclila substituída, em que pelo menos um substituinte é uma porção 1,3-dicetona, um acil beta-lactama, um éster ativo, um alfa-halocetona, um aldeído, uma maleimida, uma lactona, um anidrido, uma alfa-haloacetamida, uma amina, uma hidrazida ou um epóxido; e Z', se presente, é selecionado do grupo consistindo em alquila substituída, cicloalquila substituída, arila substituída, alquilarila substituída, heterocicloalquila substituída ou heterociclila substituída, em que pelo menos um substituinte é uma porção 1,3-dicetona, um acil beta-lactama, um éster ativo, um alfa-halocetona, um aldeído, uma maleimida, uma lactona, um anidrido, uma alfa-haloacetamida, uma amina, uma hidrazida ou um epóxido ou o produto formado através da adição de um grupo amino à cadeia lateral de um aminoácido no sítio de combinação de um anticorpo com uma porção 1,3-dicetona, um acil beta-lactama, um éster ativo, um alfa- halocetona, um aldeído, uma maleimida, uma lactona, um anidrido, uma alfa-haloacetamida, uma amina, uma hidrazida ou um epóxido.
32. Composto de acordo com a reivindicação 31, em que o pelo menos um substituinte é selecionado do grupo consistindo em 1,3-dicetonas substituídas ou acil beta-lactamas o produto formado através da adição de um grupo amino à cadeia lateral de um aminoácido no sítio de combinação de um anticorpo com uma porção 1,3-dicetona ou acil beta-lactama.
33. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações =31 e 32, em que: Z, se presente, é selecionado do grupo consistindo em 1,3- dicetonas substituídas, acil beta-lactamas, 1,3 dicetonas alquila-substituídas e acil beta-lactamas alquila-substituídos; e Z', se presente, é o produto formado através da adição de um grupo amino sobre a cadeia lateral de um aminoácido no sítio de combinação de um anticorpo com uma porção selecionada do grupo consistindo em 1,3-dicetonas substituídas, acil beta-lactamas, 1,3 dicetonas alquila-substituídas e acil beta-lactamas alquila-substituídos.
34. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações -19 a 33, em que Z1 se presente, tem a estrutura: <formula>formula see original document page 339</formula> e em que Z', se presente, tem a estrutura: <formula>formula see original document page 339</formula> OU <formula>formula see original document page 339</formula> em que q = 0-5 e o anticorpo, se presente, é uma ligação covalente a uma cadeia lateral em um combinação de sítio de um anticorpo.
35. Composto de direcionamento de GA de acordo com em qualquer uma das reivindicações 19-34, em que a estrutura L, quando unida a o resíduo de ligação, é: <formula>formula see original document page 340</formula> u é 1, 2 ou 3; ν é 1 ou 2, t é 1, 2 ou 3, r é 1 ou 2; s é O e q é 1 ou 2.
36. Composto de direcionamento de GA de acordo com a reivindicação 35, em que u é 2, v é 2, t é 2, r é 2 e q é 2.
37. Composto da fórmula: <formula>formula see original document page 340</formula>
38. Composto da fórmula: <formula>formula see original document page 340</formula>
39. Composto da fórmula: <formula>formula see original document page 340</formula>
40. Composto da fórmula: <formula>formula see original document page 340</formula>
41. Composto da fórmula: <formula>formula see original document page 341</formula>
42. Composto da fórmula: <formula>formula see original document page 341</formula>
43. Composto da fórmula: <formula>formula see original document page 341</formula>
44. Composto da fórmula: <formula>formula see original document page 341</formula>
45. Composto da fórmula: <formula>formula see original document page 341</formula>
46. Composto da fórmula: <formula>formula see original document page 341</formula>
47. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações -19 a 46, em que o grupo Z está covalentemente ligado ao sítio de combinação de um anticorpo.
48. Agente de direcionamento de GA1 em que um agente de direcionamento de GA é um agonista peptídico do receptor de GLP-1, compreendendo um peptídeo compreendendo uma seqüência substancialmente homóloga a: R1- H1 X2 E3 G4 T5 F6 T7 S8 D9 x10 S11 x12 x13 x14 E15 x16 x17 A18 x19 x20 x21 F22 x23 x24 X25 x26 x27 x28 x29 x30 x31 x32 X33 x34 x35 X36 x37 x38 X39-R21 em que R1 está ausente, é CH3, C(0)CH3, C(O)CH2CH3, C(O)CH2CH2CH3 ou C(O)CH(CH3)CH3; R2 está ausente, é OH, NH2, NH(CH3), NHCH2CH3, NHCH2CH2CH3, NHCH(CH3)CH3, NHCH2CH2CH2CH3, NHCH(CH3)CH2CH3, NHC6H5, NHCH2CH2OCH3i NHOCH3l NHOCH2CH3l um grupo de proteção carbóxi, um grupo de ácido graxo lipídico ou um carboidrato; χ2 é um grupo de bloqueio tal como Aib, A, S, T1 V1 L1 I, D-Ala; x10 é V, L, I ou A; x12 é S ou K; x13 é Q ou Y; x14 é G, C, F1 Y1 W1 M ou L; x16 é K, D, E ou G; x17 é E ou Q; x19 é L, I1 Vou A; x20 é Orn1 K(SH)1 R ou K; x21 é L ou E; x23 é I ou L; x24 é A ou E; x25 é W ou F; x26 é L ou I; x27 é I,K ou V; x28 é R1 Orn, N ou K; x29 é Aib ou G; x30 é qualquer aminoácido, de preferência, G ou R; x31 é P ou está ausente; x32 é S ou está ausente; x33 é S ou está ausente; x34 é G ou está ausente; x35 é A ou está ausente; x36 é P ou está ausente; x37 é P ou está ausente; x38 é P ou está ausente; x39 é S ou está ausente; e x40 é um resíduo Iigante ou está ausente; em que o peptídeo é covalentemente ligado ao sítio de combinação de um anticorpo através de um Iigante intermediário (L') e L' é covalentemente ligado ao C-término ou uma cadeia lateral nucleofílica de um resíduo de ligação (-[LR]-), de modo que -[LR]- é selecionado do grupo compreendendo K, R, Y, C, T, S, homólogos de Iisina (incluindo K(SH)), homocisteína e homoserina e quando presente, substitui um de x10, x11, x12, x13, x14, x16, x17, x19, x20, x21, x24, x26, x27, x28, x32, x33, x34, x35, x36, x37, x38, x39 OU x40.
49. Agente de direcionamento de GA de acordo com a reivindicação 48, em que x2 é Aib.
50. Agente de direcionamento de GA de acordo com qualquer uma das reivindicações 48 ou 49, compreendendo um peptídeo compreendendo uma seqüência substancialmente homóloga a: R1- H1 Aib2 E3 G4 T5 F6 T7 S8 D9 V10 S11 S12 Y13 x14 E15 x16 Q17 A18 x19 x20 E21 F22 I23 A24 x25 L26 x27 x28 x29 R30 -R2, em que x14 é G, C, F, Y, W ou L; x16 é K, D, Eou G; x19 é L, I, V ou A; x20 é Orn, R ou K; x25 é W ou F; χ27 é I ou V; χ28 é R ou Κ; e χ29 é Aib ou G.
51. Agente de direcionamento de GA de acordo com qualquer uma das reivindicações 48 a 50, compreendendo um peptídeo compreendendo uma seqüência substancialmente homóloga a: R1- H1 Aib2 E3 G4 T5 F6 T7 S8 D9 L10 S11 K12 Q13 M14 E15 E16 E17 A18 V19 R20 L21 p22 I23 E24 W25 L26 K27 N28 G29 G30 P31 S32 S33 G34 A35 P36 P37 P38 S39 -R2.
52. Agente de direcionamento de GA de acordo com qualquer uma das reivindicações 48 a 51, em que o resíduo de ligação é selecionado do grupo consistindo em Κ, Υ, T e homólogos de Iisina (incluindo K(SH)).
53. Agente de direcionamento de GA de acordo com a reivindicação 52, em que o resíduo de ligação é K.
54. Agente de direcionamento de GA de acordo com a reivindicação 52, em que o resíduo de ligação é K(SH).
55. Agente de direcionamento de GA de acordo com a reivindicação 52, em que o resíduo de ligação é K(L'), em que K(L') é um resíduo de Iisina unido a um Iigante L o qual formou uma ligação covalente com uma cadeia lateral de aminoácido em um sítio de combinação de anticorpo.
56. Agente de direcionamento de GA de acordo com a reivindicação 55, em que K(L') é <formula>formula see original document page 344</formula> em que u é 1, 2 ou 3; e -L'- é um Iigante tendo a fórmula -X-Y-Z', em que: <formula>formula see original document page 345</formula> em que ν é 0, 1, 2 ou 3; t é 1, 2 ou 3, r é 1 ou 2; s é 0, 1 ou 2; Rb é hidrogênio, C1-10 alquila substituída ou não-substituída, C3-7 cicloalquil-C0-6 alquila substituída ou não-substituída ou aril-C0-6 alquila substituída ou não-substituída; Y é um grupo de reconhecimento opcionalmente presente compreendendo pelo menos uma estrutura de anel; e Z' é uma porção de fixação compreendendo uma ligação covalente a uma cadeia lateral de aminoácido em um sítio de combinação de um anticorpo.
57. Composto tendo a fórmula: L' - [agente de direcionamento de GA] em que: [agente de direcionamento de GA] é um agente de direcionamento de GA como definido em qualquer uma das reivindicações 48 a 56; e L' é uma porção Iigante tendo a fórmula -X-Y-Z', de modo que L' é covalentemente ligado ao resíduo de ligação; em que: X está opcionalmente presente e é uma cadeia de conexão biologicamente compatível incluindo qualquer átomo selecionado do grupo consistindo em C, Η, Ν, O, P, S, F, CL1 Br e I e pode compreender um polímero ou copolímero em bloco; Y é um grupo de reconhecimento opcionalmente presente compreendendo pelo menos uma estrutura de anel; e Z' é uma porção de fixação compreendendo uma ligação covalente a uma cadeia lateral de aminoácido em um sítio de combinação de um anticorpo.
58. Composto de acordo com a reivindicação 57, em que X é unido ao o resíduo de ligação do agente de direcionamento de GA, é substituído ou não-substituído e é selecionado do grupo consistindo em -R22 - [CH2-CH2-O]t - R23-, -R22-cicloalquil- R23-, -R22-aril- R22-, e -R22-heterociclil-R23-;em que: R22 e R23 são independentemente selecionados do grupo consistindo em uma ligação covalente, -O-, -S-, -NRb-, C1-5o alquileno de cadeia reta ou ramificada substituído ou não-substituído, C1-50 heteroalquileno de cadeia reta ou ramificada substituído ou não-substituído, C2-50 alquenileno de cadeia reta ou ramificada substituído ou não-substituído e C2-50 heteroalquenileno substituído ou não-substituído; Rb, em cada ocorrência, é independentemente selecionado do grupo consistindo em hidrogênio, Cmo alquila substituída ou não-substituída, C3-7 cicloalquil-Co-6 alquila substituída ou não-substituída e aril-C0-6 alquila substituída ou não-substituída; t = 2-50; e o tamanho de R22 e R23 é tal que o comprimento da estrutura principal de X permanece cerca de 200 átomos ou menos.
59. Composto de acordo com a reivindicação 58, em que: R22 é selecionado do grupo consistindo em -(CH2)v-, -(CH2)u-C(O)-(CH2√, - (CH2)u-C(O)-O-(CH2)v-, -(CH2)u-C(O)-NRb-(CH2)v-, -(CH2)u-C(S)-NRb-(CH2)v-, -(CH2)u-NRb-(CH2)v-, -(CH2)u-O-(CH2)v-, -(CH2)u-S(O)0-2-(CH2)v-, -(CH2)u- S(0)o-2-NRb-(CH2)v-, e -(CH2)u-P(O)(ORb)-O-(CH2)v-, em que u e ν são independentemente 0-20; R23 é selecionado do grupo consistindo em -O-, -S-, -NRb-, C-i.50 alquileno de cadeia reta ou ramificada substituído ou não-substituído, C1.50 heteroalquileno de cadeia reta ou ramificada substituído ou não-substituído, C2-5o alquenileno de cadeia reta ou ramificada substituído ou não-substituído e C2-5o heteroalquenileno substituído ou não-substituído; e pode ser selecionado de: <formula>formula see original document page 346</formula> em que ρ é 2-45; w é 1-20; r é 1-20; s é 0-20; e Rb, em cada ocorrência, é independentemente selecionado do grupo consistindo em hidrogênio, Cmo alquila substituída ou não-substituída, C3-7 cicloalquil-C0-6 alquila substituída ou não-substituída e aril-C0-6 alquila substituída ou não- substituída; e o tamanho de R22 e R23 é tal que o comprimento da estrutura principal de X permanece cerca de 200 átomos ou menos.
60. Composto de acordo com a reivindicação 59, em que X tem a estrutura selecionada do grupo consistindo em: <formula>formula see original document page 347</formula> em que o comprimento da estrutura principal de X é 1-100 átomos.
61. Composto de acordo com a reivindicação 60, em que o comprimento da estrutura principal de X é 1-50 átomos.
62. Composto de acordo com a reivindicação 61, em que o comprimento da estrutura principal de X é 1-25 átomos.
63. Composto de acordo com a reivindicação 62, em que o comprimento da estrutura principal de X é 1-15 átomos.
64. Composto de acordo com a reivindicação 57, em que X é: <formula>formula see original document page 348</formula> em que ν e w são selecionados de modo que o comprimento da estrutura principal de X seja de 6-12 átomos.
65. Composto de acordo com a reivindicação 64, em que X-Y é: <formula>formula see original document page 348</formula> ν = 1 ou 2; w = 1 ou 2; Rb é hidrogênio.
66. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações -57 a 65, em que a estrutura de anel Y está presente e possui uma estrutura opcionalmente substituída: <formula>formula see original document page 348</formula> em que a, b, c, d, e e são, cada um independentemente, carbono ou nitrogênio; f é carbono, nitrogênio, oxigênio ou enxofre; Y é unido a X, Z ou Z' independentemente em qualquer das duas posições no anel de valência suficiente; e não mais do que quatro de a, b, c, d, e ou f são, simultaneamente, nitrogênio e, de preferência, a, b, c, d, e na estrutura de anel são, cada um, carbono.
67. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações -57 a 66, em que a estrutura de anel Y é fenila.
68. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações -57 a 67, em que Z' é alquila substituída, cicloalquila substituída, arila substituída, alquilarila substituída, heterocicloalquila substituída ou heterociclila substituída, em que pelo menos um substituinte é uma porção -1,3-dicetona, um acil beta-lactama, um éster ativo, um alfa-halocetona, um aldeído, uma maleimida, uma lactona, um anidrido, uma alfa-haloacetamida, uma amina, uma hidrazida ou um epóxido ou o produto formado através da adição de um grupo amino sobre a cadeia lateral de um aminoácido no sítio de combinação de um anticorpo com uma porção 1,3-dicetona, um acil beta- lactama, um éster ativo, um alfa-halocetona, um aldeído, uma maleimida, uma lactona, um anidrido, uma alfa-haloacetamida, uma amina, uma hidrazida ou um epóxido.
69. Composto de acordo com a reivindicação 68, em que Z é o produto formado através da adição de um grupo amino sobre a cadeia lateral de um aminoácido no sítio de combinação de um anticorpo com uma porção 1,3-dicetona ou um acil beta-lactama.
70. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações -68 e 69, em que Z' é o produto formado através da adição de um grupo amino sobre a cadeia lateral de um aminoácido no sítio de combinação de um anticorpo com uma porção selecionada do grupo consistindo em 1,3- dicetonas substituídas, acil beta-lactamas, 1,3 dicetonas alquila-substituídas ou acil beta-lactamas alquila-substituídos.
71. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações -57 a 70, em que Z' tem a estrutura: <formula>formula see original document page 349</formula> e em que q é 0-5 e o anticorpo, se presente, é uma ligação covalente a uma cadeia lateral em um sítio de combinação de um anticorpo.
72. Agente de direcionamento de GA de acordo com qualquer uma das reivindicações 48 ou 71, compreendendo um peptídeo compreendendo uma seqüência substancialmente homóloga a um ou mais compostos selecionados do grupo consistindo em: -HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R (SEQ ID NO: 2) -HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPSK-R2 (SEQ ID NO: 3) -HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 4) -HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWKKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 19) -HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIKWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 20) -HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFKEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 21) -HAibEGTFTSDLSKQMEEKAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 25) -HAibEGTFTSDLKKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 29) - HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGK-R2 (SEQ ID NO: 30) -HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRKFIEWLKNGGPK-R2(SEQ ID NO: 31) -HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWK(SH)KNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 103) -HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIK(SH)WLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 104) -HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFK(SH)EWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 105) -HAibEGTFTSDLSKQMEEK(SH)AVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 109) -HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGK(SH)SSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 114) -HAibEGTFTSDLSK(SH)QMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 169) -HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLK(SH)NGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ IDNO:170) -HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPSK(SH)-R2 (SEQ ID NO: 173) -HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPSK-R2 (SEQ ID NO: 4), -HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 5), -HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGG-R2 (SEQ ID NO: 6), -HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKN-R2 (SEQ ID NO: 7), -HAibEGTFTSDLSKQLEEEAVRLFIEFLKN-R2 (SEQ ID NO: 8), -HAibEGTFTSDLSKQLEEEAVRLAIEFLKN-R2 (SEQ ID NO: 9), -HAibEGTFTSDLSKQLEEEAVRLAIEFLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 10), R -HAibEGTFTSDLSKQLEEEAVRLFIEFLKNGGPSSGAPPPS-R (SEQ ID NO: 11), R1-HAibEGTFTSDLSK(Ac)QMEEEAVRLFIEWLK(Ac)NGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: -12), R1-HAibEGTFTSDLSK(benzoil)QMEEEAVRLFIEWLK(benzoil)NGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 13), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPKS-R2 (SEQ ID NO: 14), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPK(SH)S-R2 (SEQ ID NO: 99), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAKPPS-R2 (SEQ ID NO: 15), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAK(SH)PPS-R2 (SEQ ID NO: 100), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSKAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 16), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSK(SH)APPPS-R2 (SEQ ID NO: 101), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPKSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 17), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSK(SH)APPPS-R2 (SEQ ID NO: 101), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKKGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 18), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKK(SH)GGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 102), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWKKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 19), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWK(SH)KNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 103), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIKWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 20), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIK(SH)WLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 104), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFKEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 21), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFK(SH)EWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 105), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRKFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 22), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRK(SH)FIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 106), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVKLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 23), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVK(SH)LFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 107), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAKRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 24), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAK(SH)RLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 108), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEKAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 25), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEK(SH)AVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 109), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEKEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 26), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEK(SH)EAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 110), R1-HAibEGTFTSDLSKQKEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 27), R1-HAibEGTFTSDLSKQK(SH)EEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 111), R1-HAibEGTFTSDLSKKMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 28), R1-HAibEGTFTSDLSKK(SH)MEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 112), R1-HAibEGTFTSDLKKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 29), R1-HAibEGTFTSDLK(SH)KQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 113), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGK-R2 (SEQ ID NO: 30), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGK(SH)-R2 (SEQ ID NO: 114), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRKFIEWLKNGGPSS-R2 (SEQ ID NO: 31), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRKFIEWLK(SH)NGGPSS-R2 (SEQ ID NO: 115), R1-HAibEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKGR-R2 (SEQ ID NO: 32), R1-HAEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKGRK-R2 (SEQ ID NO: 33), R1-HGEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKGRK-R2 (SEQ ID NO: 34), R1-HAibEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKAibR-R2 (SEQ ID NO: 35), R1-HAibEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKAibRK-R2 (SEQ ID NO: 36), R1-HAibEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKGRK-R2 (SEQ ID NO: 37), R1-HAibEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKGRK(SH)-R2 (SEQ ID NO: 38), R1-HAibEGTFTSDVSSYLEGQAAK(SH)EFIAWLVKGR-R2 (SEQ ID NO: 39), R1-HAibEGTFTSDVSSYGEGQAAKEFIAWLVKAibR-R2 (SEQ ID NO: 40), R1-HAibEGTFTSDVSSYCEGQAAKEFIAWLVKAibR-R2 (SEQ ID NO: 41), R1-HAibEGTFTSDVSSYFEGQAAKEFIAWLVKAibR-R2 (SEQ ID NO: 42), R1-HAibEGTFTSDVSSYYEGQAAKEFIAWLVKAibR-R2 (SEQ ID NO: 43), R1-HAibEGTFTSDVSSYWEGQAAKEFIAWLVKAibR-R2 (SEQ ID NO: 44), R1-HAibEGTFTSDVSSYLEEQAAKEFIAWLVKAibR-R2 (SEQ ID NO: 45), R1-HAibEGTFTSDVSSYLEDQAAKEFIAWLVKAibR-R2 (SEQ ID NO: 46), R1-HAibEGTFTSDVSSYLEKQAAKEFIAWLVKAibR-R2 (SEQ ID NO: 47), R1-HAibEGTFTSDVSSYLEGQAVKEFIAWLVKAibR-R2 (SEQ ID NO: 48), R1-HAibEGTFTSDVSSYLEGQAIKEFIAWLVKAibR-R2 (SEQ ID NO: 49), R1-HAibEGTFTSDVSSYLEGQALKEFIAWLVKAibR-R2 (SEQ ID NO: 50), R1-HAibEGTFTSDVSSYLEGQAAREFIAWLVKAibR-R2 (SEQ ID NO: 51), R1-HAibEGTFTSDVSSYLEGQAAOrnEFIAWLVKAibR-R2 (SEQ ID NO: 52), Rl-HAibEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAFLVKAibR-R2 (SEQ ID NO: 53), R1-HAibEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLIKAibR-R2 (SEQ ID NO: 54), R1-HAibEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVRAibR-R2 (SEQ ID NO: 55), R1-HAibEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVOrnAibR-R2 (SEQ ID NO: 56), R1-HAibEGTFTSDVSSYLEEQAVKEFIAWLIKAibR-R2 (SEQ ID NO: 57), R1-HAibEGTFTSDVSSYFEEQAVKEFIAWLIKAibR-R2 (SEQ ID NO: 58), R1-HAibEGTFTSDVSSYYEEQAVKEFIAWLIKAibR-R2 (SEQ ID NO: 59), R1-HAibEGTFTSDVSSYWEEQAVKEFIAWLIKAibR-R2 (SEQ ID NO: 60), R1-HAibEGTFTSDVSSYLEEQAVKEFIAWLIRAibR-R2 (SEQ ID NO: 61), R1-HAibEGTFTSDVSSYLEEQAVREFIAWLIRAibR-R2 (SEQ ID NO: 62), R1-HAibEGTFTSDVSSYLEEQAVKEFIAWLIKAibRPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 63), R1-HAibEGTFTSDKSSYLEEQAVKEFIAWLIKAibR-R2 (SEQ ID NO: 64), R1-HAibEGTFTSDK(SH)SSYLEEQAVKEFIAWLIKAibR-R2 (SEQ ID NO: 116), R1-HAibEGTFTSDVSKYLEEQAVKEFIAWLIKAibR-R2 (SEQ ID NO: 65), R1-HAibEGTFTSDVSK(SH)YLEEQAVKEFIAWLIKAibR-R2 (SEQ ID NO: 117), R1-HAibEGTFTSDVSSYKEEQAVKEFIAWLIKAibR-R2 (SEQ ID NO: 66), R1-HAibEGTFTSDVSSYK(SH)EEQAVKEFIAWLIKAibR-R2 (SEQ ID NO: 118), R1-HAibEGTFTSDVSSYLEKQAVKEFIAWLIKAibR-R2 (SEQ ID NO: 67), Rl-HAibEGTFTSDVSSYLEK(SH)QAVKEFIAWLIKAibR-R2 (SEQ ID NO: 119), R1-HAibEGTFTSDVSSYLEEQKVKEFIAWLIKAibR-R2 (SEQ ID NO: 68), R1-HAibEGTFTSDVSSYLEEQK(SH)VKEFIAWLIKAibR-R2 (SEQ ID NO: 120), R1-HAibEGTFTSDVSSYLEEQAVKEKIAWLIKAibR-R2 (SEQ ID NO: 69), R1-HAibEGTFTSDVSSYLEEQAVK(SH)EKIAWLIKAibR-R2 (SEQ ID NO: 121), R1-HAibEGTFTSDVSSYLEEQAVKEFIKWLIKAibR-R2 (SEQ ID NO: 70), R1-HAibEGTFTSDVSSYLEEQAVKEFIK(SH)WLIKAibR-R2 (SEQ ID NO: 122), R1-HAibEGTFTSDVSSYLEEQAVKEFIAWKIKAibR-R2 (SEQ ID NO: 71), R1-HAibEGTFTSDVSSYLEEQAVKEFIAWK(SH)IKAibR-R2 (SEQ ID NO: 123), R1-HAibEGTFTSDVSSYLEEQAVKEFIAWLIKAibRPSSGAPPPSK-R2 (SEQ ID NO: 72), R1-HAibEGTFTSDVSS YLEEQAVKEFIAWLIKAibRPSSGAPPPSK(SH)-R2 (SEQ ID NO: 124), R1-HAibEGTFTSDVSSYLEEQAVKEFIAWLIK(Ac)AibR-R2 (SEQ ID NO: 73), R1-HAibEGTFTSDVSSYLEEQAVKEFIAWLIK(benzoil)AibR-R2 (SEQ ID NO: 74), R1-H(Trans 3-hexanoil)AibEGTFTSDVSSYLEEQAVKEFIAWLIKAibR-R2 (SEQ ID NO: 75) e R1-H(3-Aminofenilacetil)AibEGTFTSDVSSYLEEQAVKEFIAWLIKAibR-R2 (SEQ ID NO: 76).
73. Agente de direcionamento de GA de acordo com qualquer uma das reivindicações 48 ou 71, compreendendo um peptídeo compreendendo uma seqüência substancialmente homóloga a um ou mais compostos selecionados do grupo consistindo em: R R R R R R R R R R R R R R R R R R R R R R R R R R R R R R -HAibEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKGR-R2 (SEQ ID NO: 32) -HAEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKGRK-R2 (SEQ ID NO: 33) -HGEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKGRK-R2 (SEQ ID NO: 34) -HAibEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKAibR-R2 (SEQ ID NO: 35) -HAibEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKAibRK-R2 (SEQ ID NO: 36) -HAibEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKGRK-R2 (SEQ ID NO: 37) -HAibEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKGRK(SH)-R2 (SEQ ID NO: 38) -HAibEGTFTSDVSSYLEGQAAK(SH)EFIAWLVKGR-R2 (SEQ ID NO: 39) -HAibEGTFTSDVSSYGEGQAAKEFIAWLVKAibR-R2 (SEQ ID NO: 40) -HAibEGTFTSDVSSYCEGQAAKEFIAWLVKAibR-R2 (SEQ ID NO: 41) -HAibEGTFTSDVSSYFEGQAAKEFIAWLVKAibR-R2 (SEQ ID NO: 42) -HAibEGTFTSDVSSYYEGQAAKEFIAWLVKAibR-R2 (SEQ ID NO: 43) -HAibEGTFTSDVSSYWEGQAAKEFIAWLVKAibR-R2 (SEQ ID NO: 44) -HAÍbEGTFTSDVSSYLEEQAAKEFIAWLVKAibR-R2 (SEQ ID NO: 45) -HAibEGTFTSDVSSYLEDQAAKEFIAWLVKAibR-R2 (SEQ ID NO: 46) -HAíbEGTFTSDVSSYLEKQAAKEFIAWLVKAibR-R2 (SEQ ID NO: 47) -HAibEGTFTSDVSSYLEGQAVKEFIAWLVKAibR-R2 (SEQ ID NO: 48) -HAibEGTFTSDVSSYLEGQAIKEFIAWLVKAibR-R2 (SEQ ID NO: 49) -HAibEGTFTSDVSSYLEGQALKEFIAWLVKAibR-R2 (SEQ ID NO: 50) -HAíbEGTFTSDVSSYLEGQAAREFIAWLVKAibR-R2 (SEQ ID NO: 51) -HAibEGTFTSDVSSYLEGQAAOrnEFIAWLVKAibR-R2 (SEQ ID NO: 52) -HAibEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFlAFLVKAibR-R2 (SEQ ID NO: 53) -HAibEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLIKAibR-R2 (SEQ ID NO: 54) -HAibEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVRAibR-R2 (SEQ ID NO: 55) -HAibEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVOrnAibR-R2 (SEQ ID NO: 56) -HAibEGTFTSDVSSYLEEQAVKEFIAWLIKAibR-R2 (SEQ ID NO: 57) -HAibEGTFTSDVSSYFEEQAVKEFIAWLIKAibR-R2 (SEQ ID NO: 58) -HAibEGTFTSDVSSYYEEQAVKEFIAWLIKAibR-R2 (SEQ ID NO: 59) -HAibEGTFTSDVSSYWEEQAVKEFIAWLIKAibR-R2 (SEQ ID NO: 60) -HAibEGTFTSDVSSYLEEQAVKEFIAWLIRAibR-R2 (SEQ ID NO: 61) -HAibEGTFTSDVSSYLEEQAVREFIAWLIRAibR-R (SEQ ID NO: 62) R1-HAibEGTFTSDVSSYLEEQAVKEFIAWLIKAibRPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 63) R1-HAibEGTFTSDKSSYLEEQAVKEFIAWLIKAibR-R2 (SEQ ID NO: 64) R1-HAibEGTFTSDK(SH)SSYLEEQAVKEFIAWLIKAibR-R2 (SEQ ID NO: 116) R1-HAibEGTFTSDVSKYLEEQAVKEFIAWLIKAibR-R2 (SEQ ID NO: 65) R1-HAibEGTFTSDVSK(SH)YLEEQAVKEFIAWLIKAibR-R2 (SEQ ID NO: 117) R1-HAibEGTFTSDVSSYKEEQAVKEFIAWLIKAibR-R2 (SEQ ID NO: 66) R1-HAibEGTFTSDVSSYK(SH)EEQAVKEFlAWLIKAibR-R2 (SEQ ID NO: 118) R1-HAibEGTFTSDVSSYLEKQAVKEFIAWLIKAibR-R2 (SEQ ID NO: 67) R1-HAibEGTFTSDVSSYLEK(SH)QAVKEFIAWLIKAibR-R2 (SEQ ID NO: 119) R1-HAibEGTFTSDVSSYLEEQKVKEFIAWLIKAibR-R2 (SEQ ID NO: 68) R1-HAibEGTFTSDVSSYLEEQK(SH)VKEFIAWLIKAibR-R2 (SEQ ID NO: 120) R1-HAibEGTFTSDVSSYLEEQAVKEKIAWLIKAibR-R2 (SEQ ID NO: 69) R1-HAibEGTFTSDVSSYLEEQAVK(SH)EKIAWLIKAibR-R2 (SEQ ID NO: 121) R1-HAibEGTFTSDVSSYLEEQAVKEFIKWLIKAibR-R2 (SEQ ID NO: 70) R1-HAibEGTFTSDVSSYLEEQAVKEFIK(SH)WLIKAibR-R2 (SEQ ID NO: 122) R1-HAibEGTFTSDVSSYLEEQAVKEFIAWKIKAibR-R2 (SEQ ID NO: 71) R1-HAibEGTFTSDVSSYLEEQAVKEFIAWK(SH)IKAibR-R2 (SEQ ID NO: 123) R1-HAibEGTFTSDVSSYLEEQAVKEFIAWLIKAibRPSSGAPPPSK-R2 (SEQ ID NO: 72) R1-HAibEGTFTSDVSSYLEEQAVKEFIAWLIKAibRPSSGAPPPSK(SH)-R2 (SEQ ID NO: 124) R1-HAibEGTFTSDVSSYLEEQAVKEFIAWLIK(AcJAibR-R2 (SEQ ID NO: 73) R1-H(Trans 3-hexanoil)AibEGTFTSDVSSYLEEQAVKEFIAWLIKAibR-R2 (SEQ ID NO: 75) R1-H(3-Aminofenilacetil)AibEGTFTSDVSSYLEEQAVKEFIAWLIKAibR-R2 (SEQ ID NO: 76) R1-HAibEGTFTSDVSSYLEEQAVKEFIAWLIK(benzoil)AibR-R2 (SEQ ID NO: 74) R1-HAEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKGR-R2 (SEQ ID NO: 1), R1-HAEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKGRK-R2 (SEQ ID NO: 125), R1-HAibEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKGRK-R2(SEQ ID NO: 126), R1-HAibEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKGR-R2 (SEQ ID NO: 127), R1-HAibEGTFTSDVSSYLEEQAVKEFIAWLIKAibR-R2 (SEQ ID NO: 128) e R1-HAibEGTFTSDVSSYLEEQAVKEFIAWLIKAibRPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 129).
74. Agente de direcionamento de GA de acordo com uma das reivindicações 48 ou 71, compreendendo um peptídeo compreendendo uma seqüência substancialmente homóloga a um ou mais compostos selecionados do grupo consistindo em: R1-HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 2) R1-HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPSK-R2 (SEQ ID NO: 3) R1-HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 4) R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWKKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 19) R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIKWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 20) R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFKEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 21) R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEKAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 25) R1-HAibEGTFTSDLKKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 29) R1- HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGK-R2 (SEQ ID NO: 30) R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRKFIEWLKNGGPK-R2(SEQ ID NO: 31) R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWK(SH)KNGGPSSGAPPPS-R2(SEQ ID NO: 103) R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIK(SH)WLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 104) R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFK(SH)EWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 105) R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEK(SH)AVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 109) R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGK(SH)SSGAPPPS-R2(SEQ ID NO: 114) R1-HAibEGTFTSDLSK(SH)QMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 169) R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLK(SH)NGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 170) R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPSK(SH)-R2 (SEQ ID NO: 173) R1-HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPSK(SH)-R2(SEQ ID NO: 172) R1- HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGG-R2 (SEQ ID NO: 6) R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKN-R2 (SEQ ID NO: 7) R1-HAibEGTFTSDLSKQLEEEAVRLFIEFLKN-R2 (SEQ ID NO: 8) R1-HAibEGTFTSDLSKQLEEEAVRLAIEFLKN-R2 (SEQ ID NO: 9) R1-HAibEGTFTSDLSKQLEEEAVRLAIEFLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 10) R1-HAibEGTFTSDLSKQLEEEAVRLFIEFLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 11) R1-HAibEGTFTSDLSK(Ac)QMEEEAVRLFIEWLK(Ac)NGGPSSGAPPPS-R2(SEQ ID NO: 12) R1-HAibEGTFTSDLSK(benzoil)QMEEEAVRLFIEWLK(benzoil)NGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 13) R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPSK-R2(SEQ ID NO: 132) R1-HAibEGTFTSDLK(SH)KQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPSK(SH)-R2 (SEQ ID NO: 147) R1-HAibEGTFTSDLK(SH)KQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 113) R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 5) R1-HAibEGTFTSDLSKKMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 28) R1-HAibEGTFTSDLSKK(SH)MEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 112) R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 113) R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLK(SH)NGGPSSGAPPPS-R2(SEQ ID NO: 115) R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLK(L')NGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 156) R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKKGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 18) R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKK(SH)GGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 102) R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPKSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 17) R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPK(SH)SGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 168) R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSKAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 16) R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSK(SH)APPPS-R2 (SEQ ID NO: 101) R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAKPPS-R2 (SEQ ID NO: 15) R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAK(SH)PPS-R2 (SEQ ID NO: 100) R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPKS-R2 (SEQ ID NO: 14) R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPK(SH)S-R2 (SEQ ID NO: 99) R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRK(L)FIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 22), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVK(L)LFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 23), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAK(L)RLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 24), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEK(L)EAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 26), R1-HAibEGTFTSDLSKQK(L)EEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 27), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRK(L)FIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2(SEQ ID NO: 106), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVK(L)LFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2(SEQ ID NO: 107), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAK(L)RLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 108), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEK(L)EAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 110), R1-HAibEGTFTSDLSKQK(L)EEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2(SEQ ID NO: 111). R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRK(L)FIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2(SEQ ID NO: 157), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVK(L)LFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 158), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAK(L)RLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2(SEQ ID NO: 159), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEK(L)EAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 165) e R1-HAibEGTFTSDLSKQK(L)EEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 160).
75. Agente de direcionamento de GA de acordo com a reivindicação 74, compreendendo um peptídeo compreendendo uma seqüência substancialmente homóloga a um ou mais compostos selecionados do grupo consistindo em: R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPSK-R2 (SEQ ID NO: 132) R1-HAibEGTFTSDLK(SH)KQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPSK(SH)-R2 (SEQ ID NO: -147) R1-HAibEGTFTSDLK(SH)KQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 113) R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 5) R1-HAibEGTFTSDLSKKMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 28) R1-HAibEGTFTSDLSKK(SH)MEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 112) R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 113) R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLK(SH)NGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 115) R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLK(L')NGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 156) R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKKGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 18) R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKK(SH)GGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 102) R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPKSGAPPPS-R2(SEQ ID NO: 17) R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPK(SH)SGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 168) R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSKAPPPS-R2(SEQ ID NO: 16) R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSK(SH)APPPS-R2 (SEQ ID NO: 101) R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAKPPS-R2 (SEQ ID NO: 15) R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAK(SH)PPS-R2 (SEQ ID NO: 100) R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPKS-R2(SEQ ID NO: 14) R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPK(SH)S-R2 (SEQ ID NO: 99) R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRK(L)FIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 22), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVK(L)LFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 23), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAK(L)RLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 24), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEK(L)EAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 26), R1-HAibEGTFTSDLSKQK(L)EEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 27), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRK(L)FIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 106), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVK(L)LFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 107), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAK(L)RLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 108), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEK(L)EAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 110), R1-HAibEGTFTSDLSKQK(L)EEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 111). R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRK(L)FIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 157), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVK(L)LFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 158), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAK(L)RLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 159), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEK(L)EAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 165), e R1-HAibEGTFTSDLSKQK(L)EEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2(SEQ ID NO: 160). R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPK(SH)S-R2 (SEQ ID NO: 99), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAK(SH)PPS-R2 (SEQ ID NO: 100), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSK(SH)APPPS-R2 (SEQ ID NO: 101), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPK(SH)SGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 168), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKK(SH)GGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 102), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLK(SH)NGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 170), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWK(SH)KNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 103), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIK(SH)WLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 104), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFK(SH)EWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 105), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRK(SH)FIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 106), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVK(SH)LFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 107), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAK(SH)RLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 108), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEK(SH)AVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 109), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEK(SH)EAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 110), R1-HAibEGTFTSDLSKQK(SH)EEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 111), R1-HAibEGTFTSDLSKK(SH)MEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 112), R1-HAibEGTFTSDLSK(SH)QMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 169), R1-HAibEGTFTSDLK(SH)KQMEEEAVRLFIEW LKNGGPSSGAPPPS-FR2 (SEQ ID NO: 113) e R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRKFIEWLK(SH)NGGPSS-R2 (SEQ ID NO: 115).
76. Agente de direcionamento de GA de acordo com a reivindicação 75, compreendendo um peptídeo compreendendo uma seqüência selecionada do grupo consistindo em: R1-HAibEGTFTSDLKKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 29) R1-HAibEGTFTSDLK(SH)KQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 113) R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 5) R1-HAibEGTFTSDLSKKMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 28) R1-HAibEGTFTSDLSKK(SH)MEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ iD NO: 112) R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 113) R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLK(SH)NGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 115) R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLK(L')NGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 156) R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKKGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 18) R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKK(SH)GGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 102) R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPKSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 17) R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPK(SH)SGAPPPS-R2(SEQ ID NO: 168) R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSKAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 16) R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSK(SH)APPPS-R2 (SEQ ID NO: 101) R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAKPPS-R2 (SEQ ID NO: 15) R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAK(SH)PPS-R2 (SEQ ID NO: 100) R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPKS-R2 (SEQ ID NO: 14) R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPK(SH)S-R2 (SEQ ID NO: 99) R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRK(L)FIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 22), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVK(L)LFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 23), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAK(L)RLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 24), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEK(L)EAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 26), R1-HAibEGTFTSDLSKQK(L)EEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 27), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRK(L)FIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 106), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVK(L)LFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 107), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAK(L)RLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 108), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEK(L)EAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2(SEQ ID NO: 110), R1-HAibEGTFTSDLSKQK(L)EEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 111). R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRK(L)FIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 157), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVK(L)LFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 158), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAK(L)RLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 159), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEK(L)EAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 165), e R1-HAibEGTFTSDLSKQK(L)EEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 160), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPK(SH)S-R2 (SEQ ID NO: 99), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAK(SH)PPS-R2 (SEQ ID NO: 100), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSK(SH)APPPS-R2 (SEQ ID NO: 101), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPK(SH)SGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 168), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKK(SH)GGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 102), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLK(SH)NGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 170), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRK(SH)FIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 106), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVK(SH)LFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 107), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAK(SH)RLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 108), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEK(SH)EAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 110), R1-HAibEGTFTSDLSKQK(SH)EEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 111), R1-HAibEGTFTSDLSKK(SH)MEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 112), R1-HAibEGTFTSDLSK(SH)QMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 169), R1-HAibEGTFTSDLK(SH)KQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 113) e R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRKFIEWLK(SH)NGGPSS-R2 (SEQ ID NO: 115).
77. Agente de direcionamento de GA de acordo com a reivindicação 76, compreendendo um peptídeo compreendendo uma seqüência selecionada do grupo consistindo em: R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRK(L)FIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 22), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVK(L)LFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 23), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAK(L)RLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 24), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEK(L)EAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 26), R1-HAibEGTFTSDLSKQK(L)EEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 27), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRK(L)FIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 106), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVK(L)LFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 107), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAK(L)RLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 108), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEK(L)EAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 110), R1-HAibEGTFTSDLSKQK(L)EEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 111). R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRK(L)FIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 157), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVK(L)LFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 158), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAK(L)RLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 159), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEK(L)EAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 165), e R1-HAibEGTFTSDLSKQK(L)EEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 160), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVRK(SH)FIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 106), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAVK(SH)LFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 107), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEEEAK(SH)RLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 108), R1-HAibEGTFTSDLSKQMEK(SH)EAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 110), R1-HAibEGTFTSDLSKQK(SH)EEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 111), e R1-HAibEGTFTSDLSKK(SH)MEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-R2 (SEQ ID NO: 112).
78. Composto da fórmula: <formula>formula see original document page 362</formula> em que - MAb é uma ligação covalente ao sítio de combinação de um anticorpo.
79. Composto da fórmula: <formula>formula see original document page 362</formula> em que -MAb é uma ligação covalente ao sítio de combinação de um anticorpo.
80. Composto da fórmula: <formula>formula see original document page 363</formula> em que -MAb é uma ligação covalente ao sítio de combinação de um anticorpo.
81. Composto da fórmula: <formula>formula see original document page 363</formula> em que -MAb é uma ligação covalente ao sítio de combinação de um anticorpo.
82. Composto da fórmula: <formula>formula see original document page 363</formula> em que -MAb é uma ligação covalente ao sítio de combinação de um anticorpo.
83. Composto da fórmula: <formula>formula see original document page 363</formula> em que -MAb é uma ligação covalente ao sítio de combinação de um anticorpo.
84. Composto da fórmula: <formula>formula see original document page 364</formula> em que -MAb é uma ligação covalente ao sítio de combinação de um anticorpo.
85. Composto da fórmula: <formula>formula see original document page 364</formula> em que -MAb é uma ligação covalente ao sítio de combinação de um anticorpo.
86. Composto da fórmula: <formula>formula see original document page 364</formula> em que -MAb é uma ligação covalente ao sítio de combinação de um anticorpo.
87. Composto da fórmula: <formula>formula see original document page 365</formula> em que -MAb é uma ligação covalente ao sítio de combinação de um anticorpo.
88. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações -47 a 87, em que o anticorpo é um anticorpo catalítico.
89. Composto de acordo com a reivindicação 88, em que o anticorpo é um anticorpo de aldolase.
90. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações -47 a 89, em que o anticorpo é um anticorpo de comprimento total, Fabl Fab', F(ab')2, F^v, dsF^v, scF^v, V^H, diacorpo ou minicorpo compreendendo domínios V^h e V^l de h38c2.
91. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações -47 a 90, em que o referido anticorpo é um anticorpo de comprimento total.
92. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações -47 a 91, em que o anticorpo é um anticorpo compreendendo os domínios Vh e V^l de h38c2 e um domínio constante selecionado do grupo consistindo em IgG1, IgG2, IgG3 e IgG4.
93. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações -47 a 92, em que o anticorpo é h38C2 tendo a seqüência de cadeia curta variável apresentada em SEQ ID NO: 79 e a seqüência de cadeia pesada variável apresentada em SEQ ID NO: 80.
94. Composição farmacêutica compreendendo uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 93.
95. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 94, ainda compreendendo uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto selecionado do grupo consistindo em sulfonilureias, biguanidas, tioazolidinadionas, inibidores de alfa glucosídeo e meglitinidas.
96. Uso de um agente de direcionamento de GA como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 66, ou uma composição farmacêutica como definida em qualquer uma das reivindicações 94 ou 95 em um método para aumento do nível de glicose no sangue de um indivíduo.
97. Método para aumento do nível de glicose no sangue de um indivíduo compreendendo tratamento do indivíduo com uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 93, ou uma composição como definida em qualquer uma das reivindicações 94 a 95.
98. Método para produção de um composto de direcionamento de GA compreendendo ligação covalente de um composto como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 93 com pelo menos um dos sítios de combinação de IgGI h38c2.
99. Peptídeo substancialmente conforme aqui descrito com referência às figuras e listagens de seqüência em anexo.
100. Composto substancialmente conforme aqui descrito com referência às figuras e listagens de seqüência em anexo.
101. Composição farmacêutica substancialmente conforme aqui - 20 descrito com referência às figuras e listagens de seqüência em anexo.
102. Método substancialmente conforme aqui descrito com referência às figuras e listagens de seqüência em anexo.
103. Uso substancialmente conforme aqui descrito com referência às figuras e listagens de seqüência em anexo.
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