JP2007330271A - 核酸の回収方法 - Google Patents
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Abstract
【解決手段】核酸含有材料から核酸の遊離を促すための第1工程と、遊離した核酸と核酸の固相への結合を促進する物質を混合する第2工程と、混合液と核酸結合性固相とを接触させる第3工程と、固相と液体とを分離する第4工程と、核酸が結合した固相を塩を含む溶液により洗浄する第5工程と、核酸を固相から溶離する第6工程とを備える。本発明により、遺伝子検査或いは遺伝子解析に好適な純度の核酸を、迅速、且つ、簡便に、危険性のある物質を使用することなく回収することが出来る。
【選択図】図1
Description
(1)核酸含有材料からの核酸回収方法であって、カオトロピック物質と核酸含有材料とを含む混合液と、酸化ケイ素含有固相とを接触させ、酸化ケイ素含有固相と混合液とを分離し、酸化ケイ素含有固相を、カオトロピック物質を含む溶液により洗浄し、その後、塩化物を含む水溶液により洗浄し、酸化ケイ素含有固相から核酸を溶離する。
1モル/リットル塩水溶液を利用した洗浄工程を採用した際の核酸の回収
図1のフローチャートに従い、核酸を含む水溶液からの核酸の回収を行った。核酸含有材料としては、市販精製品のpBR322DNAをTE緩衝液(pH7.4)により希釈した。
塩化ナトリウム、塩化カリウム、酢酸ナトリウム、酢酸カリウムを含む溶液を利用した洗浄工程を採用した際の核酸の回収
図2のフローチャートに従い、核酸を含む水溶液からの核酸の回収を行った。なお、この図2のフローチャートにおいて、第1、第2、第3、第4及び第6工程は、図1のフローチャートと同様であり、図1の第5工程が、図2においては、第5a工程と第5b工程とに分かれている。
酢酸ナトリウム、塩化ナトリウムを含む溶液を利用した洗浄工程を採用した際の核酸の回収
図3のフローチャートに従い、核酸を含む水溶液からの核酸の回収を行った。なお、この図3のフローチャートにおいて、第1、第2、第3、第4、第5a及び第6工程は、図2のフローチャートと同様である。したがって、第1工程から第5a工程までは、説明は省略する。
(実施形態4)
エタロールと酢酸ナトリウム、塩化ナトリウム溶液を組み合わせて洗浄工程に利用した際にエタノール濃度が変化したときの核酸の回収
図3のフローチャートに従い、核酸を含む水溶液からの核酸の回収を行った。なお、この図3のフローチャートにおいて、第1、第2、第3、第4、第5a及び第6工程は、図2のフローチャートと同様である。したがって、第1工程から第5a工程までは、その説明は省略する。
(実施形態5)
血清へ添加したDNAの回収
図3のフローチャートに従い、血清へ添加した核酸の回収を行った。
培養した遺伝子組換え大腸菌からのプラスミドDNAの回収
図3のフローチャートに従い、培養した遺伝子組換え大腸菌からのプラスミドDNAの回収を行った。大腸菌HB101株に対して、pBR322DNAを遺伝子工学的に組み込んだ大腸菌を試料とした。大腸菌をLB培地1mリットル中で、37℃で一晩培養した物を遠心分離により集菌し、100μリットルの0.15モル/リットルのNaClに懸濁させた物を試料とした。
自動装置である核酸の回収装置による血清へ添加したDNAの回収
図9に本発明の実施形態7である核酸の回収装置(自動装置)の平面レイアウトを示す。
以上のように、本発明の実施形態7によれば、核酸を含有する材料からの迅速、簡便で精製度の高い核酸を収量を低下させずに回収する核酸の回収装置を実現することができる。なお、この実施形態7において、エタノールを使用しているが、50mモル/リットルKOAcを含む50%エタノール水溶液であるので、従来技術のような問題は生じない。
従来例と同様に、エタノール水溶液のみによる洗浄工程を使用した際の核酸の回収
図4のフローチャートに従い、核酸を含む水溶液からの核酸の回収を行った。核酸含有材料としては、市販精製品のpBR322DNAをTE緩衝液(pH7.4)により希釈した。
なお、本発明は、核酸を含有する材料であれば適応可能であるが、特に、全血、血清、喀痰、尿等の臨床検体、或いは、培養細胞、培養細菌等の生物学的な試料、或いは、電気泳動後のゲルに保持された状態の核酸、等が好適である。
102、103 ピペッタ
104 反応容器移送機構
105 精製品収納容器移送機構
106、113 チップ取り付け位置
107 磁性粒子吸入部
108 洗浄場所
109、111 GuHCl吸入口
110 50%エタノール水溶液吸入口
112 ヒートブロック
114 溶液廃棄位置
115、116 チップ廃棄位置
118、119 ノズル
120 反応容器
121 精製品収納容器
122 永久磁石
Claims (9)
- 核酸含有材料からの核酸回収方法であって、
カオトロピック物質と核酸含有材料とを含む混合液と、酸化ケイ素含有固相とを接触させ、
酸化ケイ素含有固相と混合液とを分離し、
酸化ケイ素含有固相を、カオトロピック物質を含む溶液により洗浄し、その後、塩化物を含む水溶液により洗浄し、
酸化ケイ素含有固相から核酸を溶離することを特徴とする核酸回収方法。 - 請求項1記載の核酸回収方法において、上記塩化物が、塩化ナトリウムであることを特徴とする核酸回収方法。
- 請求項2記載の核酸回収方法において、上記塩化ナトリウムの濃度が、0.2〜1モル/リットルであることを特徴とする核酸回収方法。
- 請求項1記載の核酸回収方法において、上記塩化物が、塩化カリウムであることを特徴とする核酸回収方法。
- 請求項4記載の核酸回収方法において、上記塩化カリウムの濃度が、0.2〜1モル/リットルであることを特徴とする核酸回収方法。
- 請求項1記載の核酸回収方法であって、混合液と酸化ケイ素含有固相とを室温中で攪拌し、混合液と酸化ケイ素含有固相とを接触させることを特徴とする核酸回収方法。
- 請求項1記載の核酸回収方法であって、酸化ケイ素含有固相が、ガラス粒子、酸化ケイ素パウダー、石英濾紙、石英ウール、あるいは、それらの破砕物、ケイソウ土であることを特徴とする核酸回収方法。
- 請求項1記載の核酸回収方法であって、洗浄の際に、酸化ケイ素含有固相から核酸が溶離しないことを特徴とする核酸回収方法。
- 請求項1記載の核酸回収方法であって、酸化ケイ素含有固相が、1〜100μm程度の粒径の粒子であることを特徴とする核酸回収方法。
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