JP2007223952A

JP2007223952A - アミロイドβ蛋白が蓄積する疾患の画像診断プローブ

Info

Publication number: JP2007223952A
Application number: JP2006047064A
Authority: JP
Inventors: Koji Kudo; 幸司工藤; Hiroyuki Arai; 啓行荒井; Nobuyuki Okamura; 信行岡村; Shozo Furumoto; 祥三古本; Kazuhiko Yanai; 一彦谷内
Original assignee: Tohoku University NUC
Current assignee: Tohoku University NUC
Priority date: 2006-02-23
Filing date: 2006-02-23
Publication date: 2007-09-06

Abstract

【課題】アルツハイマー病をはじめとするアミロイドβ蛋白が蓄積する疾患の画像診断のためのプローブを得る。
【解決手段】放射性標識、好ましくは陽電子放出核種、とりわけ¹¹Ｃで標識された６−［２−（フルオロ）エトキシ］−２−［２−（２−ジメチルアミノチアゾール−５−イル）エテニル］ベンゾキサゾールをアミロイドβ蛋白が蓄積する疾患の画像診断のためのプローブとして使用する。
【選択図】なし

Description

本発明は、放射性核種、好ましくは陽電子放出核種、とりわけ¹¹Ｃで標識された、アミロイドβ蛋白が蓄積する疾患の画像診断プローブ化合物ＢＦ−２２７、ならびにそれを含む画像診断用組成物およびキットに関する。

アミロイドが蓄積する疾患には、体内の種々の器官や組織への不溶性原線維性蛋白（アミロイド）の沈着を特徴とする種々の疾病があり、アルツハイマー病やダウン症候群等が含まれる。このうち、アルツハイマー病（ＡＤ）は現在最も治療の困難な疾病の１つとされており、正確な早期診断が望まれている。

アルツハイマー病（ＡＤ）は現在最も治療の困難な疾病の１つとされており、正確な早期診断が望まれている疾病である。アルツハイマー病は主として初老期から老年期に起こる進行性の認知症を特徴とする疾患である。病理学的には大脳の全体的な萎縮、神経細胞の著しい変性と脱落、神経原線維変化と老人斑の出現を特徴とする。アルツハイマー病に代表される認知症の最大のリスクファクターは加齢であることが知られている。したがって、老齢人口の増加に伴う患者数の増加は、特に、高齢化社会となっている日本、アメリカ、ヨーロッパ諸国において顕著であり、それに対する医療コストはこれらの国の医療システムを危機におとしめている。

なお、我が国においてはアルツハイマー病患者数は約１００万人と推定され、今後人口の高齢化に伴いその患者数は増大することが確実視されている。アルツハイマー病患者にかかわる費用は介護費用を含めると年間患者１人当たり２５０万円を超えると考えられていることから、すでに我が国では２兆５千億円を超える社会経済的コストを払っていることになる。アルツハイマー病において認知症の症状が顕在化する以前ないしはできるだけ早期に治療を加えることは、大きな医療経済的効果をもたらすことはいまや世界の常識となっている。しかし現状ではこれらの段階のアルツハイマー病を正確に診断することは極めて困難である。

現在のアルツハイマー病診断方法は各種あるが、我が国においては長谷川式、ＡＤＡＳ、ＭＭＳＥ等の、アルツハイマー病が疑われる個体の認知機能の低下を定量的に評価する方法が一般的であり、まれに画像診断法（ＭＲＩ、ＣＴ等）が補助的に用いられている。しかしこれらの診断法では病気を確定するには不十分であり、確定診断には生前における脳の生検（バイオプシー）、死後脳の病理組織学的検査が必要である。このように、アルツハイマー病の診断法についても精力的な研究が行われているにもかかわらず、それほどの進歩がみられないでいる。多くの研究の結果、最初の臨床症状が現れるかなり前（長い場合は約４０年前）にはすでにアルツハイマー病特徴的な神経変性が始まっていることが判ってきた。また同病においては患者を取り巻く家族または臨床家が最初の臨床症状に気づいた時には、すでに脳内病理像は取り返しのつかない状態まで進行していることが知られている。上述のような病状の進行特性および患者数の激増を考え合わせると、アルツハイマー病の正確な早期診断の必要性ならびに意義は極めて大きい。

アルツハイマー病の病理組織像は２つの主徴に代表される。すなわち老人斑および神経原線維変化である。前者の主構成成分はβシート構造をとったアミロイドβ（Ａβ）蛋白であり、後者のそれは過剰リン酸化されたアミロイドβ蛋白である。アルツハイマー病の確定診断はこれらの病理学的特徴が患者脳内に出現することをよりどころとしている。

アミロイドβ蛋白はアルツハイマー病を包含するアミロイドが蓄積する疾患に特徴的であり、密接な関連性を有している。したがって、体内、特に脳内でβシート構造をとったアミロイドβ蛋白をマーカーとして検出することが、アミロイドが蓄積する疾患、特にアルツハイマー病の重要な診断方法の１つとなる。アルツハイマー病をはじめとするアミロイドが蓄積する疾患の診断を目的として、体内、特に脳内アミロイドβ蛋白に特異的に結合し、これを染色する物質の検索が従来から行われている。かかる物質としてはコンゴーレッド（非特許文献１参照）およびチオフラビンＳ（非特許文献２参照）、チオフラビンＴ（非特許文献３参照）ならびにクリサミンＧおよびその誘導体（特許文献１および２参照）等が知られているが、アミロイドβ蛋白に対する結合特異性、血液−脳関門透過性、溶解度、毒性等の面から問題が少なくない。

脳内蛋白がβシート構造をとることによって、その蛋白自身が病因となる疾患が知られている。アルツハイマー病においてはアミロイドβ蛋白およびタウ蛋白がβシート構造をとることによって、それらの蛋白自身が病因または病因の一部となっていると考えられている。Yanknerらはアミロイドβ蛋白にβシート構造をとらせることにより神経細胞毒性を発揮することを初めて報告した（非特許文献４参照）。その後、多くの追試が行われ、βシート構造をとったアミロイドβ蛋白が、神経細胞毒性を有することが確認された。このようにβシート構造をとったアミロイドβ蛋白、タウ蛋白に神経細胞毒性がみられることから、これらを早期に検出することが正確な疾病の診断および治療につながる。

これまでアルツハイマー病の研究あるいは生検または剖検試料を用いた診断等には、アルツハイマー患者から脳切片を調製し、これを染色することが行われてきた。しかし、従来の方法は、生前の早期診断には不向きな点が多く、患者への負担も多かった。

近年、目的物質の検出感度および精度が高く、非侵襲的で患者への負担も軽い診断手段として、放射性核種で標識したプローブを用いる画像診断が用いられるようになってきた。画像診断プローブおよびその検出手段に求められる一般的要件としては、インビボで診断できること、患者へのダメージが少ないこと（特に非侵襲的であること）、検出感度が高いこと、半減期が適当な長さであること（標識プローブ調製時間、診断時間が適当であること）等が挙げられる。そこで、最近では、高い検出感度と物質透過性を示すγ線を利用した陽電子断層撮影法（ＰＥＴ）またはγ線放出核種によるコンピューター断層撮影法（ＳＰＥＣＴ）が用いられるようになってきた。このうち、ＰＥＴは、陽電子放出核種から正反対の方向に放射される２本のγ線を１対の検出器により同時計数法により検出するので、解像力や定量性に優れた情報が得られるので好ましい。
国際特許出願ＰＣＴ／ＵＳ９６／０５９１８明細書国際特許出願ＰＣＴ／ＵＳ９８／０７８８９明細書パチトラー（Puchtler）ら、ジャーナル・オブ・ヒストケミストリー・アンド・サイトケミストリー（Journal of Histochemistry and Cytochemistry）、第１０巻、３５頁、１９６２年パチトラー（Puchtler）ら、ジャーナル・オブ・ヒストケミストリー・アンド・サイトケミストリー（Journal of Histochemistry and Cytochemistry）、第７７巻、４３１ページ、１９８３年レバイン（LeVine）、プロテインサイエンス（Protein Science）、２巻、４０４−４１０ページ、１９９３年ヤンカー（Yankner）ら、サイエンス（Science）、245巻、417-420ページ、1989

したがって、アルツハイマー病をはじめとするアミロイドβ蛋白が蓄積する疾患の画像診断のためのプローブであって、アミロイドβ蛋白に対する特異性が高く、血液−脳関門透過性、溶解度が大きく、毒性が低い等の特徴を有し、適切な標識が付されたプローブを開発することが本発明の課題であった。

本発明者らは、６−［２−（フルオロ）エトキシ］−２−［２−（２−ジメチルアミノチアゾール−５−イル）エテニル］ベンゾキサゾール（以下、「ＢＦ−２２７」と称する）がアミロイドβ蛋白に対する特異性が高く、血液−脳関門透過性（脳移行性）が高く、しかも極めて安全性の高い化合物であり、そのうえ、実際の使用時におけるベースライン変動が小さい等の優れた特性を有することを確認した。さらに本発明者らは、放射性核種、好ましくは陽電子放出核、とりわけ¹¹Ｃで標識されたＢＦ−２２７がＰＥＴによるアミロイドβ蛋白が蓄積する疾患のＰＥＴによる画像診断に極めて好適であることも確認した。なお、ＢＦ−２２７は以下に示す構造を有する化合物である。

したがって、本発明は、
（１）陽電子放出核種で標識された、下式：

で示される、アミロイドβ蛋白が蓄積する疾患の画像診断プローブ化合物；
（２）陽電子放出核種が¹¹Ｃである、（１）記載の化合物；
（３）下式：

で示される、（２）記載の画像診断プローブ化合物；
（４）（１）〜（３）のいずれかに記載の画像診断プローブ化合物を含む、アミロイドβ蛋白が蓄積する疾患の画像診断用組成物；
（５）（１）〜（３）のいずれかに記載の画像診断プローブ化合物を含む、アミロイドβ蛋白が蓄積する疾患の画像診断用キット
に関するものである。

本発明によれば、アルツハイマー病などのアミロイドβ蛋白が蓄積する疾患を、ＰＥＴやＳＰＥＣＴを用いて高い感度および特異度でもって画像診断することができ、しかも患者の負担も軽くてすむ。

本発明のアミロイドβ蛋白が蓄積する疾患のＰＥＴ診断用プローブは、放射性核種、好ましくは陽電子放出核種、とりわけ¹¹Ｃにて標識されたＢＦ−２２７、または存在する場合にはその塩もしくは溶媒和物である。ＢＦ−２２７の塩は医薬上許容される塩であることが好ましい。ＢＦ−２２７の溶媒和物も医薬上許容される溶媒和物であることが好ましい。本明細書において特に断らないかぎり、「ＢＦ−２２７」、「本発明の化合物」または「６−［２−（フルオロ）エトキシ］−２−［２−（２−ジメチルアミノチアゾール−５−イル）エテニル］ベンゾキサゾール」という場合（構造式で表示されている場合も含む）には、ＢＦ−２２７ならびに存在しうる場合にはその塩および溶媒和物を包含する。

本発明の標識されたＢＦ−２２７は当業者に公知の種々の方法により合成することができる。また、実施例に示すように、適当な前駆体を公知の方法により合成し、これに標識を付してもよい。

本発明においては、アミロイドβ蛋白が蓄積する疾患における対象体内のアミロイドβ蛋白（本明細書において「Ａβ蛋白」または「Ａβ」ともいう）にインビボにおいて特異的に結合するＢＦ−２２７またはその塩もしくは溶媒和物を、放射性核種、好ましくは陽電子放出核種、とりわけ¹¹Ｃで標識して使用する。ＢＦ−２２７はＡβ蛋白に対する特異性が極めて高く、老人斑（びまん性老人班を含む）が鮮明に染色される。本明細書における「Ａβが蓄積する疾患」とは、Ａβ蛋白の脳内蓄積を主徴とする疾病をいい、Ａβ蛋白、すなわち老人斑をマーカーとして診断可能な疾病としては、アルツハイマー病、ダウン症候群などがあげられる。

画像診断プローブおよびその検出手段に求められる一般的要件としては、インビボで診断できること、患者へのダメージが少ないこと（特に、毒性が低いかあるいはないこと、非侵襲的であること）、検出感度が高いこと、半減期が適当な長さであること（標識プローブ調製時間、診断時間が適当であること）、実際の測定時にベースラインの変動が小さいこと等が挙げられる。

最近では、高い検出感度と物質透過性を示すγ線を利用したＰＥＴまたはＳＰＥＣＴが種々の診断や検査に用いられるようになってきた。ＰＥＴは、陽電子放出核種から正反対の方向に放射される２本のγ線を１対の検出器により同時計数法により検出するので、解像力や定量性に優れた情報が得られるので好ましい。ＰＥＴ用には¹¹Ｃ、¹³Ｎ、¹⁵Ｏ、¹⁸Ｆ、⁶²Ｃｕ、⁶⁸Ｇａ、⁷⁶Ｂｒ等の陽電子放出核種で標識されたプローブ化合物が用いられている。陽電子放出核種のなかでも、半減期が適当であること、標識しやすさ等の点から¹¹Ｃ、¹³Ｎ、¹⁵Ｏ、¹⁸Ｆが好ましく用いられている。¹¹Ｃ、¹³Ｎ、¹⁵Ｏ、¹⁸Ｆを用いてＢＦ−２２７を標識することができる。特に好ましいＢＦ−２２７の標識は¹¹Ｃである。

また、ＳＰＥＣＴ用には^99mＴｃ、¹¹¹Ｉｎ、⁶⁷Ｇａ、²⁰¹Ｔｌ、¹²³Ｉ、¹³³Ｘｅ等のγ線放出核種が標識として用いられている。これらの標識によりＢＦ−２２７を標識することができる。

一般的には、これらの核種はサイクロトロンまたはジェネレーターと呼ばれる装置により産生される。当業者は、産生核種に応じた産生方法および装置が選択可能である。そのようにして産生された核種を用いてＢＦ−２２７を標識することができる。半減期が適度に短い¹¹Ｃなどの核種を用いる場合、病院等の施設内の設置された（超）小型サイクロトロンから所望核種を得て、当該分野にて公知の方法によりＢＦ−２２７を所望位置で標識して、即座に診断、検査、治療等に使用することが可能である。

ＢＦ−２２７のいずれの位置に上記標識を導入してもかまわない。１１Ｃを標識として用いる場合には、ＢＦ−２２７のいずれの炭素を¹¹Ｃで置換してもよく、好ましくはジメチルアミノ基の２個のメチル基の炭素の１つを¹¹Ｃとする。また例えば¹⁸Ｆを標識として用いる場合には、ＢＦ−２２７の末端のフッ素を¹⁸Ｆとすることができる。

放射性核種にて標識されたＢＦ−２２７、好ましくは陽電子放出核種、とりわけ¹¹Ｃにて標識されたＢＦ−２２７を対象に投与して、アミロイドβ蛋白への結合および崩壊のための十分な時間経過後、ＰＥＴやＳＰＥＣＴにて検査部位を調べることができる。アミロイドβ蛋白への結合および崩壊のための十分な時間は疾病の種類、対象の状態、検査部位等の要因により様々であるが、当業者はこれを容易に決定することができる。標識されたＢＦ−２２７の対象への投与は局所的であってもよく、あるいは全身的であってもよい。投与経路としては、皮内、腹腔内、静脈、動脈、または脊髄液への注射または輸液等があるが、疾病の種類、使用核種、使用化合物、対象の状態、検査部位等の要因により選択できる。そのための手段・方法は公知のものを用いることができ、疾病の種類、対象の状態、検査部位等の要因に応じて適宜選択できる。

放射性核種により標識されたＢＦ−２２７の用量は、疾病の種類、対象の年齢、身体的状態、性別、疾病の程度、検査部位等により様々である。特に、対象の被曝量については十分に注意する必要がある。ちなみに¹¹Ｃにより標識されたＢＦ−２２７の放射能量は、通常には、３．７メガベクレルないし３．７ギガベクレル、好ましくは、１８メガベクレルないし７４０メガベクレルの範囲である。

また本発明は、放射性核種により標識されたＢＦ−２２７を含む、アミロイドβ蛋白が蓄積する疾患の画像診断用組成物を提供する。好ましくは、本発明の組成物は、陽電子放核種、とりわけ¹¹Ｃにより標識されたＢＦ−２２７および医薬上許容される担体を含む。本発明の画像診断用組成物の形態は、その目的からすれば注射あるいは輸液可能な形態であることが好ましい。したがって、医薬上許容される担体は液体であるものが好ましく、リン酸カリウム緩衝液、生理食塩水、リンゲル液、蒸留水等のごとき水性溶媒、あるいはポリエチレングリコール、植物性油脂、エタノール、グリセリン、ジメチルスルホキサイド、プロピレングリコール等のごとき非水性溶媒があるが、これらに限らない。担体と放射性核種により標識されたＢＦ−２２７との配合比率は、適用部位、検出手段等に応じて適宜選択できるが、通常には１０万対１ないし２対１の比率であり、好ましくは１万対１ないし１０対１の比率である。また、本発明の組成物はさらに公知の抗菌剤（例えば、抗生剤等）、局所麻酔剤（例えば、塩酸プロカイン、塩酸ジブカイン等）、バッファー（例えば、トリス−塩酸バッファー、ヘペスバッファー等）、浸透圧調節剤（例えば、グルコース、ソルビトール、塩化ナトリウム等）等を含有していてもよい。

さらに本発明は、放射性核種、好ましくは陽電子放出核種、とりわけ¹¹Ｃにより標識されたＢＦ−２２７を必須の構成成分として含む、アミロイドβ蛋白が蓄積する疾患の画像診断用キットを提供する。通常には、キットは、標識されたＢＦ−２２７、それを溶解する溶剤、バッファー、浸透圧調節剤、抗菌剤、局所麻酔剤等の各成分を別個に、あるいはいくつかを一緒にしてそれぞれの容器に入れたものをひとまとめにしたものである。

上記キットにおいて、標識されたＢＦ−２２７は凍結乾燥粉末等の固形物として提供してもよく、あるいは適当な溶媒中に溶解して提供してもよい。溶剤としては上述の本発明の組成物に用いられる担体と同様のものであってよい。また、バッファー、浸透圧調節剤、抗菌剤、局所麻酔剤等の各成分も上述の本発明の組成物に使用するものと同様のものであってよい。各成分を入れる容器は種々のものを適宜選択でき、例えば遮光性の材質のものとしてもよく、あるいは患者への投与に便利なようにバイアル、または注射器等の形状とすることもできる。また、キットは診断に必要な器具類、例えば注射器、輸液セット、あるいは使用する画像診断装置に使用する器具類等を適宜含んでいてもよい。キットには説明書を添付するのが一般的である。

さらに本発明は、放射性核種、好ましくは陽電子放出核種、とりわけ¹¹Ｃにより標識されたＢＦ−２２７またはその塩もしくは溶媒和物をプローブとして用いることを特徴とする、アミロイドβ蛋白が蓄積する疾患の画像診断方法を提供する。

上述のごとく、従来から研究・開発されているコンゴーレッドまたはチオフラビンＳ等ではアミロイドβ蛋白および神経原線維変化の両方を染色するが、ＢＦ−２２７はアミロイドβ蛋白に特異性が高い。したがって、ＢＦ−２２７は、例えば、アミロイドβ蛋白が蓄積する疾患の画像診断やかかる疾病の研究に有用である。さらに、コンゴーレッドまたはチオフラビンＳ等のごとき従来の多くの化合物はびまん性老人斑には特異的に結合しないが、ＢＦ−２２７はこれに結合する。アルツハイマー病における老人斑の主成分であるアミロイドβ（Ａβ）蛋白は同病が発症する（認知症の症状が顕性化する）かなり以前（少なくとも１０年以上前）に蓄積が始まると考えられており、この初期の蓄積像がびまん性老人斑と考えられている。ＢＦ−２２７はびまん性老人斑にも結合するので、画像診断法と組み合わせることにより、アルツハーマー病などのアミロイドβ蛋白が蓄積する疾患の早期発見・診断に極めて有用である。

放射性核種で標識したＢＦ−２２７を用いてアミロイドβ蛋白が蓄積する疾患を画像診断する場合の手順や方法は当該分野において公知である。対象を安静にさせ、好ましくは液体処方として注射または輸液により標識されたＢＦ−２２７を投与し、Ａβへの結合および崩壊のための時間が経過後に画像データを得る。画像データ解析には当該分野において知られた種々の手段・方法を用いることができる。ＰＥＴを用いる場合には、ＳＵＶ（Standardized Uptake Value）法、ＤＶＲ（Distribution Volume Ratio）法、Ｌｏｇａｎ法を用いたＤＶＲ法などを用いて画像データ解析するのが好ましい。

以下に実施例を示して本発明をさらに詳細かつ具体的に説明するが、実施例は本発明を限定するものと解してはならない。

ＢＦ−２２７の諸性質を調べた。化合物は標識していないものを用いた。試験項目は：（ａ）β構造認識度試験、（ｂ）アルツハイマー病患者脳切片上でのアミロイドβ蛋白の染色試験、（ｃ）急性毒性試験、および（ｄ）脳移行性試験であった。これらの試験方法・手順を以下に説明する。

（ａ）β構造認識度試験
（１）アミロイドβ蛋白（ペプチド研より購入）はリン酸緩衝液（ｐＨ７．４）で溶解し３７℃で４日間放置した。
（２）同緩衝液に溶解したコンゴーレッド５０μｌを９６穴マイクロプレートに分注した（最終濃度０．１μＭ）。
（３）アミロイドβ蛋白１００μｌずつを添加（最終濃度５μＭ）し、３０分間放置した。
（４）同緩衝液に溶解したＢＦ−２２７を１００μｌずつ添加（最終濃度１０マイクロＭ）し、６０分間放置した。
（５）蛍光マイクロプレートリーダー（モレキュラーデバイス社製、ｆｍａｘ）を用いて、あらかじめ測定してあった、最適励起および測定波長で測定した。
（６）ＢＦ−２２７とアミロイドβ蛋白とコンゴーレッド共存下の蛍光度をＡ、被験化合物とコンゴーレッド共存下のそれをＢ、ＢＦ−２２７とアミロイドβ蛋白共存下のそれをＣ、ＢＦ−２２７単独のそれをＤとして、ＢＦ−２２７のβ構造認識度を以下の式で算出した。
ＢＦ−２２７β構造認識度（％）＝｛（Ａ−Ｂ）／（Ｃ−Ｄ）｝×１００
（７）このβ構造認識度が大きいほど化合物のアミロイドβ蛋白に対する結合特異性が高いといえる。

（ｂ）アルツハイマー病患者脳切片上でのアミロイドβ蛋白の染色試験
（１）病理学的にアルツハイマー病と確定診断された患者および正常高齢者の、側頭葉または海馬における脳標本を使用した。
（２）パラフィン包埋された脳組織は厚さ６μｍあるいは８μｍで薄切し、スライドグラス上に伸展、乾燥させた。パラフィン脳切片はキシレン１０分×２、１００％エタノールｌ５分×２、９５％エタノールｌ５分×２、流水洗１０分の順で脱パラフィン化した。
（３）本発明化合物による染色の前処理として、リポフスチンによる自己蛍光を除去する処置を行った。はじめに、脱パラフィン化した切片を１０％ホルマリン溶液に６０分間浸漬し、ＰＢＳで５分間洗浄した後、０．２５％ＫＭｎＯ₄溶液に９０分間浸漬した。ＰＢＳにて２分間×２回洗浄した後、０．１％Ｋ₂Ｓ₂Ｏ₅／シュウ酸溶液中に約３０秒間浸し、さらにＰＢＳにて２分間×３回洗浄を行った。
（４）５０％エタノールに溶解した１００μＭのＢＦ−２２７溶液を約１５０μｌ滴下し、１０分間反応させた。水道水中に５回つけた後、５０％エタノールに３〜５回つけて速やかに分別を行い、その後ＰＢＳに６０分間浸漬した上、Fluor Save Reagent(Calbiochem)で封入し、蛍光顕微鏡（Nikon,Eclips E800）を用いて鏡検した。画像はデジタルカメラ（Plaroid PDMCII）にて撮影した。
対照として、アルツハイマー病患者脳切片上でのアミロイドβ蛋白の免疫染色試験を下記手順で行った。
（１）（ｂ）における脱パラフィン工程後、蒸留水中で２分×２で洗浄を行い、イムノペンにより組織を囲んだ後、蟻酸を約１５０μｌ滴下し、室温で５分間静置した。水道水で５分間洗浄した後、冷ＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎ２０に２分間浸漬し、その後、０．０５％トリプシン溶液を約１５０μｌ滴下して、３７℃、１５分間反応させた。
（２）氷浴中、冷ＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎ２０で５分間×２回洗浄した後、ブロッキング用血清を２滴滴下して、３７℃、３０分間反応させ、余分な水分を除去した後に、アミロイドβ蛋白の特異抗体である６Ｆ／３Ｄ（DAKO社、１：５０希釈）を約１５０μｌ滴下して、３７℃、１時間反応させた。
（３）さらに冷ＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎ２０で２分間×５回洗浄した後、抗マウスＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）、ヤギ、ビオチン結合溶液を２滴滴下して３７℃、１時間反応させ、冷ＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎ２０で２分間×３回洗浄した上でＡＢＣ溶液（ストレプトアビジン−ビオチン−ペルオキシダーゼ複合体溶液）を２滴滴下して、３０分間静置した。再び、冷ＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎ２０で２分間×３回洗浄した後、ＤＡＢ溶液（２０ｍｌの０．０５ｍｏｌ／ｌトリス塩酸緩衝液にＤＡＢ１０ｍｇを溶解し、使用直前に３％過酸化水素水１００μｌを添加）を約１５０μｌ滴下して、十分な発色を得たのち、蒸留水で１分間洗浄し、反応を停止させ、封入後、鏡検した。

（ｃ）急性毒性試験
ＢＦ−２２７の急性毒性を、マウスを用いて静脈内投与で検討した。Ｃｒｊ：ＣＤ１系雄性マウスを一群４匹として使用した（各群の平均体重は３１〜３２ｇであった）。ＢＦ−２２７は１ＮＨＣｌ、ポリエチレングリコール４００、蒸留水の混合液に溶解、またはＤＭＳＯに溶解後、蒸留水にて希釈し、尾静脈を介して投与し、以後７日まで観察した。

（ｄ）脳移行性試験
マウスにＢＦ−２２７を静脈内投与し、インビボにおける脳移行性を測定した。
（１）マウスは３０〜４０ｇ（７週齢、ｎ＝３）のＳｌｃ：ＩＣＲ（日本ＳＬＣ）を用いた。
（２）ＢＦ−２２７は１ＮＨＣｌ、ポリエチレングリコール４００、ＤＭＳＯの混合液で溶解、ＤＭＳＯまたはエチルアルコールで溶解後、精製水にて希釈して、尾静脈より注入し、投与より２分後にエーテル麻酔下で腹部大動脈からヘパリン処理注射筒を用いての採血、脳の採材をおこなった。
（３）血液は採血後４℃、１４，０００ｒｐｍで１０分間遠心し、上清を血漿として−８０℃で保存した。脳（小脳を含む）は採材後−８０℃で保存した。
（４）使用時には血漿は溶解後、精製水で希釈した後、コンディショニングしたＣ１８固相抽出カートリッジ（bond elute C18、200 mg、Varian）に添加しメチルアルコールにて溶出した。または溶解後ジエチルエーテル／シクロヘキサン混合液を加え震盪した後、遠心し油層を分注した。
（５）脳は使用時には凍結したまま湿重量を測定し生理食塩水を加え、ホモジェナイズを行った。ホモジェネートを１０分間遠心し、上清をコンディショニングしたＣ１８固相抽出カートリッジに添加し、メチルアルコールにて溶出を行った。または湿重量を測定後ジエチルエーテル／シクロヘキサン混合液を加えホモジネートし震盪した後、遠心し油層を分注した。
（６）高速液体クロマトグラフィを用い、吸光および蛍光を検出した。
（７）血漿、脳それぞれについて、投与量に対する血漿もしくは脳内のＢＦ−２２７含有量（％ＩＤ（injected dose）／ｍｌまたはｇ）を求めた。

上記試験により得られたＢＦ−２２７の諸特性は以下のとおりであった。

（ａ）ＢＦ−２２７のβ構造認識度は、チオフラビンＴ（従来からＡβに特異的とされている）の約１．２倍であり、Ａβに対するＢＦ−２２７の極めて高い特異性が示された。

（ｂ）アルツハイマー病患者脳切片におけるＢＦ−２２７（図１左パネル）と抗Ａβ抗体６Ｆ／３Ｄ免疫染色（図１右パネル＝図１左パネルの隣接切片）の染色性を比較した。ＢＦ−２２７は抗Ａβ抗体６Ｆ／３Ｄによって染色される老人斑（クサビ型矢印）およびびまん性老人斑（破線丸印内）を染色することがわかった。

（ｃ）一般にヒトでのＰＥＴ撮影にはポジトロン標識および未標識化合物の総投与量として、１×１０^-12から１×１０^-5ｍｇ／ｋｇの単回静脈内投与が用いられ、多くの場合、１×１０^-10から１×１０^-7ｍｇ／ｋｇの静脈内投与が用いられる。ＢＦ−２２７の最大耐量は１０ｍｇ／ｋｇまたはそれ以上であり、ＰＥＴ撮影時に必要な総化合物量を考慮すると、両者の間には少なくとも１０万倍以上の開きがあることから、ＢＦ−２２７はＰＥＴ撮影用のプローブとしては極めて安全性の高い化合物と考えられる。

（ｄ）ＢＦ−２２７投与２分後の脳内含有量は、７．９％ＩＤ／ｇであった。中枢神経系を対象としたＰＥＴまたはＳＰＥＣＴ用化合物の脳移行性は、０．５％ＩＤ／ｇ以上あれば十分と考えられている。その意味でＢＦ−２２７は極めての脳移行性の高い化合物である。

このように、ＢＦ−２２７は、アミロイドβ蛋白に対する特異性が高く、血液−脳関門透過性（脳移行性）が高く、しかも極めて安全性の高い化合物であることがわかった。

実施例１ ¹¹Ｃで標識されたＢＦ−２２７（［¹¹Ｃ］ＢＦ−２２７）の合成
下式：

で示される前駆体化合物６−［２−（フルオロ）エトキシ］−２−［２−（２−メチルアミノチアゾール−５−イル）エテニル］ベンゾキサゾール（以下、「ＴＨＫ−００１」と称する）のメチルアミノ基の水素を、以下に説明するメチル化反応により［¹¹Ｃ］ＣＨ₃とすることにより、［¹¹Ｃ］ＢＦ−２２７を得た。

ＴＨＫ−００１は以下に説明するようにして合成した。

（１）３の合成
２（１０．０ｇ，９９．９ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラン（２０ｍｌ）に溶解し、（Ｂｏｃ）_２Ｏ（２７．５ｍｌ，１１９．９ｍｍｏｌ）を加え、室温で１６時間撹拌した。反応液の溶媒を減圧留去し、得られた結晶にｎ−ヘキサンを加えて粉砕し、３（１９．２５ｇ，９６％）を無色結晶として得た。

m.p. : 181.5〜182.5℃、¹H NMR(CDCl₃)δ 1.60(9H, s), 6.88(1H, d, J=3.7Hz), 7.38(1H, d, J=3.7Hz), 11.9(1H, s)、IR (Nujol) 1713 cm^-1、APCI-MS m/z: 201 [M+H]⁺

（２）４の合成
３（１０．０ｇ，４９．９ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラン（１００ｍｌ）に溶解し、０℃で攪拌下、ｔ−ブトキシカリウム（６．７２ｇ，５９．９ｍｍｏｌ）を加え、同温で１０分攪拌し、ヨードメタン（４．６６ｍｌ，７４．９ｍｍｏｌ）を加え、室温で１６時間撹拌した。反応液の不溶物をろ別し、ろ液の溶媒を減圧留去し、残さをシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ｎ−ヘキサン／酢酸エチル＝９、１）で精製し、４（６．５３ｇ，６１％）を無色固体として得た。

m.p. : 51〜52℃、 ¹H NMR(DMSO)δ 1.53(9H, s), 3.47(3H, s), 7.25(1H, d, J=3.5Hz), 7.45(1H, d, J=3.5Hz)、 IR (Neat) 1734 cm^-1、APCI-MS m/z: 215 [M+H]⁺

（３）５の合成
ジイソプロピルアミン（５．１２ｍｌ，３６．４ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフラン（５０ｍｌ）溶液に、アルゴン雰囲気下、−６０℃以下で１．５８Ｍｎ−ブチルリチウム／ｎ−ヘキサン溶液（２３．０ｍｌ，３６．４ｍｍｏｌ）を滴下し、除々に０℃まで昇温した。次に−７０℃以下で４（７．０８ｇ，３３．１ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフラン（１０ｍｌ）溶液を滴下し、−７８℃で１時間撹拌した。同温で、Ｎ−ホルミルモルホリン（４．９８ｍｌ，４９．６ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフラン（１０ｍｌ）溶液を一度に加え、同温で３０分撹拌した。反応液に冷水を加え、酢酸エチルで抽出した。抽出液を水洗後、乾燥し、溶媒を減圧留去した。残さをシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ｎ−ヘキサン／酢酸エチル＝１０〜４）で精製し、５（６．４０ｇ，８０％）を黄色固体として得た。

m.p. : 80〜81℃、 ¹H NMR(DMSO)δ 1.55(9H, s), 3.52(3H, s), 8.38(1H, s), 9.90(1H, s)、 IR (Nujol) 1714, 1659 cm^-1、APCI-MS m/z: 243 [M+H]⁺

（４）７の合成
文献法１）により合成した６（１．２０ｇ，８．１ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフラン（３０ｍｌ）溶液に、２−フルオロエタノール（１．０４ｍｌ，１７．７ｍｍｏｌ）およびトリフェニルホスフィン（４．６４ｇ，１７．７ｍｍｏｌ）を加え、室温撹拌下、ジイソプロピルアゾジカルボキシレート（３．４８ｍｌ，１７．７ｍｍｏｌ）を滴下し、室温で１６時間撹拌した。反応液の溶媒を減圧留去し、残さをシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ｎ−ヘキサン／酢酸エチル＝１）で精製し、７（１．５０ｇ，９６％）を無色油状物として得た。

¹H NMR(DMSO)δ 2.56(3H, s), 4.29(2H, dt, J=30.1, 3.7Hz), 4.77(2H, dt, J=47.9, 3.7Hz), 6.96(1H, dd, J=8.7, 2.3Hz), 7.33(1H, d, J=2.3Hz), 7.54(1H, d, J=8.7Hz)、APCI-MS m/z: 196 [M+H]⁺
1) Fujita, S., Koyama, K., Inagaki, Y.; Synthesis, 1982, 68.

（５）８の合成
ジイソプロピルアミン（１．５１ｍｌ，１０．７ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフラン（４０ｍｌ）溶液に、アルゴン雰囲気下、−６０℃以下で１．５８Ｍｎ−ブチルリチウム／ｎ−ヘキサン溶液（６．７８ｍｌ，１０．７ｍｍｏｌ）を滴下し、除々に０℃まで昇温した。次に−７０℃以下で７（１．９０ｇ，９．７ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフラン（１０ｍｌ）溶液を滴下し、−７８℃で１時間撹拌した。同温で、５（３．０６ｇ，１２．６ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフラン（１０ｍｌ）溶液を滴下し、同温で３０分撹拌した。反応液に冷水を加え、酢酸エチルで抽出した。抽出液を水洗後、乾燥し、溶媒を減圧留去した。残さをシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ｎ−ヘキサン／酢酸エチル＝１）で精製し、８（２．２６ｇ，５３％）を淡橙色油状物として得た。

¹H NMR(DMSO)δ 1.51(9H, s), 3.40(3H, s), 4.28 (2H, dt, J=30.0, 3.7Hz), 4.76(2H, dt, J=47.7, 3.7Hz), 5.33(1H, m), 6.02(1H, d, J=5.3Hz), 6.97(1H, dd, J=8.7, 2.3Hz), 7.27(1H, s), 7.34(1H, d, J=2.3Hz), 7.56(1H, d, J=8.7Hz)、APCI-MS m/z: 438 [M+H]⁺

（６）９の合成
８（２．２６ｇ，５．２ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（３０ｍｌ）溶液にトリエチルアミン（４．３３ｍｌ，２０．７ｍｍｏｌ）を加え、氷冷撹拌下、メタンスルホニルクロライド（０．８００ｍｌ，１０．３ｍｍｏｌ）を滴下し、室温で３０分撹拌した。反応液に冷水を加え、酢酸エチルで抽出した。抽出液を水洗後、乾燥し、溶媒を減圧留去した。残さをシリカゲルカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル）で精製後、酢酸エチル／ｎ−ヘキサンで再結晶し、９（１．６１ｇ，７４％）を橙色結晶として得た。

m.p. : 194〜195℃、¹H NMR(DMSO)δ 1.56(9H, s), 3.49(3H, s), 4.33 (2H, dt, J=29.9, 3.5Hz), 4.78(2H, dt, J=47.7, 3.5Hz), 6.77(1H, d, J=16.1Hz), 7.02(1H, dd, J=8.7, 2.2Hz), 7.37(1H, d, J=2.2Hz), 7.62(1H, d, J=8.7Hz), 7.84(1H, d, J=16.1Hz), 7.87(1H, s)、IR (Nujol) 1695, 1632 cm^-1、APCI-MS m/z:420 [M+H]⁺

（７）１（ＴＨＫ−００１）の合成
９（１．００ｇ，２．４ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（２４ｍｌ）に懸濁し、氷冷攪拌下、トリフルオロ酢酸（６ｍｌ）を滴下し、室温で１．５時間撹拌した。反応液に氷片を加え、炭酸カリウム水溶液を加え、ｐＨ＝８とし、酢酸エチルで抽出した。抽出液を水洗後、乾燥し、溶媒を減圧留去した。残さをシリカゲルカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル）で精製後、酢酸エチルで再結晶し、１（６３３ｍｇ，８３％）を黄色結晶として得た。

m.p. : 234〜236℃、¹H NMR(DMSO)δ 2.89(3H, d, J=4.6Hz), 4.30(2H, dt, J=30.2, 3.9Hz), 4.77(2H, dt, J=47.8, 3.9Hz), 6.28(1H, d, J=15.7Hz), 6.97(1H, dd, J=8.7, 2.4Hz), 7.31(1H, d, J=2.4Hz), 7.51(1H, s), 7.54(1H, d, J=8.7Hz), 7.74(1H, d, J=15.7Hz),8.20(1H, q, J=4.6Hz)、IR (Nujol) 3240, 1637, 1618 cm^-1、APCI-MS m/z:320 [M+H]⁺

次に、ＴＨＫ−００１からの［¹¹Ｃ］ＢＦ−２２７の合成スキームを示す。

サイクロトロンＨＭ１２（住友重機械社製）で加速した１２ＭｅＶの陽子ビームをＮ２ガス（０．５％Ｏ₂ガス含有）に３０分間照射して［¹¹Ｃ］ＣＯ₂を合成した。続いてＭｉｃｒｏＬａｂヨウ化メチル合成システム（ＧＥ社製）を用いて［¹¹Ｃ］ＣＯ₂から［¹¹Ｃ］ＣＨ₃Ｉを合成し、加熱したＡｇＯＴｆ充填カラム（約１９０℃）に通すことで［¹¹Ｃ］ＣＨ₃Ｉを［¹¹Ｃ］ＣＨ₃ＯＴｆに変換した。そして、ＴＨＫ−００１（約１ｍｇ）をＤＭＳＯ（４５０μＬ）に溶解し、２ＭＮａＯＨ水溶液（７μＬ）を添加した溶液中に、室温条件下、［¹¹Ｃ］ＣＨ₃ＯＴｆを含有したヘリウムガスを流し込むことで¹¹Ｃ標識メチル化反応を行った。この反応溶液に５％ＡｃＯＨ（エタノール溶液、１５０μＬ）を加えてよく攪拌し、その混合液をセミ分取ＨＰＬＣ（カラム：ＹＭＣ−ＰａｃｋＰｒｏＣ１８ＲＳ（１０Ｘ２５０ｍｍ）＋ガードカラム（１０Ｘ３０ｍｍ）、移動相：ＥｔＯＨ／ＭｅＣＮ／２０ｍＭＮａＨ₂ＰＯ₄＝１５／４０／４５、流速：６．０ｍＬ／分）にかけて、約９−１０分に溶出する［¹¹Ｃ］ＢＦ２２７由来の放射性ピークを分取した。分取ＨＰＬＣクロマトグラムから求められた放射化学的収率は５０％以上であった。［¹¹Ｃ］ＢＦ−２２７含有フラクションを蒸留水（約３０ｍＬ）で希釈してＳｅｐ−ＰａｋｔＣ１８カートリッジ（Ｗａｔｅｒｓ社製）にロードし、蒸留水でカートリッジを洗浄後、ＥｔＯＨで［¹¹Ｃ］ＢＦ−２２７を溶出した。このＥｔＯＨ溶出液に２５％アスコルビン酸水溶液および５％ポリソルベート８０エタノール溶液を適量加えて８０℃で加熱しながらロータリーエバポレーターで溶媒を留去し、得られた［¹¹Ｃ］ＢＦ−２２７含有放射性残渣を生理食塩液に溶解して０．２２μｍフィルターに通し濾過滅菌した。［¹¹Ｃ］ＢＦ−２２７含有生理食塩液の放射化学的純度は９５％以上、比放射能の平均は約１７０ＧＢｑ／μｍｏｌであった。

実施例２［¹¹Ｃ］ＢＦ−２２７を用いた臨床試験
探索的臨床試験は東北大学医学部・医学系研究科倫理委員会の承認のもとで行われた。同委員会承認番号は正常健常人を用いた試験では２００５−５２（平成１７年６月２０日付け）、またアルツハイマー病患者様を用いた試験では２００５−１８６（平成１７年１０月１８日付け）である。

正常健常者は東北大学医学系研究科機能薬理学講座、またアルツハイマー病患者様は同老年呼吸器内科・先進漢方治療医学講座においてリクルートした。総ての参加者は一般内科的検査として、胸部Ｘ線写真、心電図、血液生化学検査等を施行し異常のないことを確認するとともに脳血管障害の有無、脳萎縮度の評価のため、脳のＭＲＩ撮影を施行した。神経心理学テストによって正常認知機能を有することが確かめられた正常健常人７名、そのうち健常若年者３名および健常高齢者４名、またＮＩＮＣＤＳ−ＡＤＲＤＡ（National Institute of Neurologic and Communicative Disorders and Stroke-Alzheimer's Disease and Related Disorders Association）のクライテリア（McKahann G et al.: Clinical diagnosis of Alzheimer's disease-report of the NINCDS-ADRDA Work Group under the auspieces of Department of Health and Human Services Task Force on Alzheimer's disease-. Neurology 34:939, 1984）を満たし、「probableアルツハイマー病」と診断された患者様４名が探索的臨床試験に参加した（表１）。

括弧内はそれぞれ個々の年齢およびＭＭＳＥスコアを示す。
ＭＭＳＥ：Mini-Mental State Examination（Folstein MF et al.: Mini-mental state". A practical method for grading the cognitive state of patients for the clinician. J Psychiat Res 12 :189-198. 1975）。

なお、平均および標準偏差は以下の式に依って算出した。

探索的臨床試験参加者のＰＥＴ画像撮影は以下の手順で実施した。
ＰＥＴスキャナーは、ＳＥＴ−２４００Ｗ（島津製作所製）を３次元モードで使用した。被検者はＰＥＴスキャナーのベッドに仰臥位になり、頭部をヘッドホルダーに固定した後、吸収補正のための外部線源を用いたトランスミッションスキャンを８分間施行した。引き続き、あらかじめ右上腕静脈に確保しておいた静脈カテーテルから［¹¹Ｃ］ＢＦ−２２７５〜１０ｍＣｉを速やかに静脈内投与し、投与開始から９０分間のダイナミック撮像を施行した。撮像プロトコルは、３０秒Ｘ５フレーム、６０秒Ｘ５フレーム，１５０秒Ｘ５フレーム，３００秒Ｘ１４フレームの計２９フレームとした。また左前腕部を加温し、動脈化した上腕静脈にカテーテルを留置し、撮像開始と同時に連続採血を実施した。採血時間は、投与開始後２０秒、４０秒、１分、１分２０秒、１分４０秒、２分、２分２０秒、２分４０秒、３分、４分、５分、７分３０秒、１０分、１５分、２０分、３０分、４０分、５０分、６０分、７０分、８０分、９０分の計２２回とし、採血量は、５分後・１５分後・３０分後の３回は代謝分析用に５ｍｌ、その他の時間は１．５ｍｌとした。採取した血液サンプルはヘパリン入り採血管へ移し、３０００回転／分で３分間遠心した後、血漿サンプルのみを分離し、その後ガンマカウンターにより各タイムポイントにおける血中放射能を測定した。減衰補正および代謝物補正を加えた後、血漿における時間放射能曲線を算出し、定量計算における入力関数として使用した。

画像解析は以下の手順で施行した。ＳＵＶ（Standardized Uptake Value)画像は島津製作所製のＰＥＴ計測プログラムにより作成した。さらにダイナミック画像データおよび各フレームを加算平均処理した画像を市販のソフトウェアで処理するためにＡＮＡＬＹＺＥフォーマットに変換した。また各個人のＭＲＩＴ１強調画像（横断面、スライス厚２ｍｍ）も同様にフォーマット変換した。次に、ＳＰＭ２ソフトウェア（Welcome Department of Cognitive Neurology, London, UK）のｒｅｇｉｓｔｒａｔｉｏｎ機能を用いて、ＭＲＩＴ１強調画像をＰＥＴ加算画像に一致するよう変換、スライスの切り出しを行った。続いて、変換後のＭＲＩ画像をＤｒ．Ｖｉｅｗ／ＬＩＮＵＸソフトウェア（旭化成情報システム製）に読み込ませ、前頭葉、側頭葉、頭頂葉、後頭葉、前部帯状回、後部帯状回、線条体、視床、内側側頭葉、橋、小脳皮質、白質の各領域に関心領域（ＲＯＩ；Region of Interest）を設定した。その後、ＭＲＩ上で設定したＲＯＩ情報をＰＥＴダイナミック画像上に読み込ませ、Ｄｒ．Ｖｉｅｗ／ＬＩＮＵＸソフトウェアを用いて、各領域、各タイムフレームの放射活性を計測した。上記処理により計測した脳各領域における放射活性と血漿サンプルの入力関数を使用して、定量解析を行った。定量解析にはＬｏｇａｎのグラフ解析法（Logan J et al.: (1990) Graphical analysis of reversible radioligand binding from timeactivity measurements applied to N-11C-methyl]-()-***e PETstudies in human subjects. J Cereb Blood Flow Metab 10:7407,1990 および Logan J . Graphical analysis of PET data applied to reversible and irreversible tracers. Nucl Med Biol 27:661670, 2000）を使用した。老人斑（ないしは線維化したアミロイドβ蛋白）が蓄積しないとされている小脳皮質を参照領域として、各領域のDistribution Volume Ratio（ＤＶＲ）を算出するとともに、Ｌｏｇａｎ法を用いたＤＶＲ計算画像を作成した。

アルツハイマー病において老人斑（ないしはアミロイドβ蛋白）が蓄積しないことが知られている小脳皮質領域におけるＳＵＶを図２に、小脳皮質領域を参照領域（基準）として作成した各領域のＤＶＲ、Ｌｏｇａｎ法を用いた各領域のＤＶＲ（ＬｏｇａｎＤＶＲ）およびＬｏｇａｎ法を用いたＤＶＲ（ＬｏｇａｎＤＶＲ）計算画像を、それぞれ図３、図４および図５に示した。

これまでの多くの研究により、アルツハイマー病における老人斑（ないしはアミロイドβ蛋白）は小脳皮質領域には殆ど蓄積せずに、主として大脳皮質（前頭葉、側頭葉、頭頂葉、後頭葉、前部帯状回、後部帯状回）に蓄積することが知られている（Braak H, Braak E: Neuropthological Stageing of Alzheimer-related changes. Acta Neuropathol .82. 239-259.1991）。

図２に示したように小脳皮質領域における［¹¹Ｃ］ＢＦ−２２７のＳＵＶは健常高齢者とアルツハイマー病患者間で殆ど差がなかった。このことは健常高齢者およびアルツハイマー病患者ともこの領域には老人斑（ないしはアミロイドβ蛋白）が蓄積していないことを示している。

図３に示したように小脳皮質領域を参照領域（基準）として作成した健常若年者および健常高齢者の前頭葉、側頭葉、頭頂葉、後頭葉、前部帯状回、後部帯状回におけるＤＶＲは殆ど１であった。このことは健常若年者および健常高齢者のこれらの領域には老人斑（ないしはアミロイドβ蛋白）が殆ど蓄積していないことを示している。
一方、アルツハイマー病患者の前頭葉、側頭葉、頭頂葉、後頭葉、前部帯状回、後部帯状回におけるＤＶＲは健常若年者および健常高齢者のそれらに比し明らかに高かった。

図４に示したように小脳皮質領域を参照領域（基準）として作成した健常若年者および健常高齢者の前頭葉、側頭葉、頭頂葉におけるＬｏｇａｎＤＶＲは殆ど１であった。このことは健常若年者および健常高齢者のこれら領域には老人斑（ないしはアミロイドβ蛋白）が殆ど蓄積していないことを示している。

一方、アルツハイマー病患者の前頭葉、側頭葉、頭頂葉におけるＬｏｇａｎＤＶＲは健常若年者および健常高齢者のそれらに比し明らかに高かった。前頭葉、側頭葉、頭頂葉におけるＬｏｇａｎＤＶＲの閾値を１．１とすると、アルツハイマー病と診断される感度（Sensitivity）および特異度（Specificity）はともに１００％であった。

図５に示したように小脳皮質領域を参照領域（基準）として作成した健常若年者、健常高齢者、およびアルツハイマー病患者間のＬｏｇａｎＤＶＲ計算画像のそれぞれの代表例を比較すると、健常者間およびアルツハイマー病患者間には差は見られなかった。
一方、健常者−アルツハイマー病患者間では図３および図４で示したように、大脳皮質領域において明らかな両者間の差が認められた。

以上のように［¹¹Ｃ］ＢＦ−２２７をプローブとしてＰＥＴを用いてアミロイドβ蛋白が蓄積する疾患、特にアルツハイマー病を診断する方法、［¹¹Ｃ］ＢＦ−２２７をプローブとしてＰＥＴを用いてＳＵＶ法によってアミロイドβ蛋白が蓄積する疾患、特にアルツハイマー病を診断する方法、［¹¹Ｃ］ＢＦ−２２７をプローブとしてＰＥＴを用いてＤＶＲ法によってアミロイドβ蛋白が蓄積する疾患、特にアルツハイマー病を診断する方法、および［¹¹Ｃ］ＢＦ−２２７をプローブとしてＰＥＴを用いてＬｏｇａｎＤＶＲ法によってアミロイドβ蛋白が蓄積する疾患、特にアルツハイマー病を診断する方法は、高い感度、特異度を得ることができる。

本発明は、診断薬の分野、特にアルツハイマー病のごときアミロイドβ蛋白が蓄積する疾患の診断薬の分野、ならびにアミロイドβ蛋白が蓄積する疾患の研究分野において利用可能である。

図１は、アルツハイマー病患者脳切片におけるＢＦ−２２７（左パネル）と抗Ａβ抗体６Ｆ／３Ｄ免疫染色（右パネル、左パネルの隣接切片）の染色性の比較を示す。クサビ型矢印は抗Ａβ抗体６Ｆ／３Ｄによって染色される老人斑、破線丸印はびまん性老人斑を示す。図２は、健常高齢者およびアルツハイマー病患者の小脳皮質領域における［¹¹Ｃ］ＢＦ−２２７のＳＵＶ（Standardized Uptake Value）を示すグラフである。図３は、小脳皮質を参照領域とした際の健常若年者、健常高齢者およびアルツハイマー病患者の各領域におけるＤＶＲ（Distribution Volume Ratio）を示すグラフである。図４は、小脳皮質を参照領域とした際の健常若年者、健常高齢者およびアルツハイマー病患者の各領域におけるＬｏｇａｎＤＶＲ（Distribution Volume Ratio）を示すグラフである。図５は、小脳皮質を参照領域とした際の健常若年者（３６歳）、健常高齢者（６９歳）およびアルツハイマー病患者のＬｏｇａｎＤＶＲ（Distribution Volume Ratio）計算画像である。

Claims

陽電子放出核種で標識された、下式：

で示される、アミロイドβ蛋白が蓄積する疾患の画像診断プローブ化合物。
陽電子放出核種が¹¹Ｃである、請求項１記載の化合物。
下式：

で示される、請求項２記載の画像診断プローブ化合物。
請求項１〜３のいずれか１項に記載の画像診断プローブ化合物を含む、アミロイドβ蛋白が蓄積する疾患の画像診断用組成物。
請求項１〜３のいずれか１項に記載の画像診断プローブ化合物を含む、アミロイドβ蛋白が蓄積する疾患の画像診断用キット。