JP2003073396A - ペプチドの製造方法 - Google Patents
ペプチドの製造方法Info
- Publication number
- JP2003073396A JP2003073396A JP2002197549A JP2002197549A JP2003073396A JP 2003073396 A JP2003073396 A JP 2003073396A JP 2002197549 A JP2002197549 A JP 2002197549A JP 2002197549 A JP2002197549 A JP 2002197549A JP 2003073396 A JP2003073396 A JP 2003073396A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- anion
- protecting group
- latent
- amine
- scavenger
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
- C07K1/04—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length on carriers
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
- C07K5/06—Dipeptides
- C07K5/06104—Dipeptides with the first amino acid being acidic
- C07K5/06113—Asp- or Asn-amino acid
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
- C07K1/06—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length using protecting groups or activating agents
- C07K1/08—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length using protecting groups or activating agents using activating agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
- C07K5/06—Dipeptides
- C07K5/06008—Dipeptides with the first amino acid being neutral
- C07K5/06017—Dipeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic
- C07K5/06034—Dipeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic the side chain containing 2 to 4 carbon atoms
- C07K5/06043—Leu-amino acid
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
- Low-Molecular Organic Synthesis Reactions Using Catalysts (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【課題】 一つまたは複数のアミド結合を含む化合物の
より副生物の少ない製造方法、特に残留カルボキシ成分
がより効率よく除去しうる上記製造方法を開発する。 【解決手段】 本発明は、過剰量の活性化カルボキシル
成分を使用してアミノ成分をアシル化する段階を含むペ
プチドの製造方法であって、アシル化後に残留する活性
化カルボキシル官能基の除去剤として遊離アニオンまた
は潜在アニオンを含むアミンを使用することを特徴とす
る方法に関する。本発明は、オリゴ−及びポリペプチド
の製造、より普遍的には１つまたは複数のアミド結合を
含む化合物の製造に有用である。
より副生物の少ない製造方法、特に残留カルボキシ成分
がより効率よく除去しうる上記製造方法を開発する。 【解決手段】 本発明は、過剰量の活性化カルボキシル
成分を使用してアミノ成分をアシル化する段階を含むペ
プチドの製造方法であって、アシル化後に残留する活性
化カルボキシル官能基の除去剤として遊離アニオンまた
は潜在アニオンを含むアミンを使用することを特徴とす
る方法に関する。本発明は、オリゴ−及びポリペプチド
の製造、より普遍的には１つまたは複数のアミド結合を
含む化合物の製造に有用である。
Description
【０００１】本発明は、１つまたは複数のアミド結合を
含む化合物、特にペプチドの製造を目的とする新規な汎
用方法、特に溶液中で行われる方法に関する。
含む化合物、特にペプチドの製造を目的とする新規な汎
用方法、特に溶液中で行われる方法に関する。
【０００２】ペプチドは溶液中で合成されるかまたは固
体支持体上で合成される。いずれの合成方法でも、結合
段階と脱保護段階とを交互に繰り返し、双方の段階の間
に断続的な精製を行ってもよい。各結合段階ではアミノ
成分に対する定量的な結合を確保するために好ましくは
過剰量の活性化カルボキシル成分を使用する。これによ
って最終生成物中に欠失配列が生じることを防止でき
る。固相ペプチド合成では、残留する活性化カルボキシ
ル成分を通常は各結合段階が終了したときに濾過によっ
て除去する。溶液相合成では、残留する活性化カルボキ
シル成分が断続的な水性処理中に破壊されて除去される
ということが通常は想定されている。しかしながら溶液
相合成ではしばしば、挿入ペプチド配列が最終ペプチド
の不純物として存在している。その理由は、結合段階後
に残留する（活性化）カルボキシル成分が不完全にしか
除去されないので、脱保護後に結合が生じるからであ
る。このような副反応の発生を回避するために、残留す
る活性化カルボキシル官能基を除去（scavenge）する
（失活させる）除去段階を結合段階の直後に導入し得
る。通常は除去剤（scavenger）としてアミンを使用す
る。除去剤としてポリアミンを使用するとき、除去され
た化合物はそれぞれの極性に依存して、好ましくは酸性
の水相に活発に抽出され得る［例えば、Ｋｉｓｆａｌｕ
ｄｙ，Ｌ．ら（１９７４）Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌ
ｅｔｔ．１９，１７８５−１７８６］。伸長中のペプチ
ドが水相中に失われることを避けるために、この抽出は
通常は脱保護段階の前に行う。しかしながら多くの場合
にこの手順では、除去された化合物の疎水性が原因で断
続的な精製が不完全になることが知見された。カルボキ
シル成分のアミノアシル部分に固有の疎水性は、まだ存
在しているアミノ保護基によって強化される。従って水
性抽出が完全に有効ではない。
体支持体上で合成される。いずれの合成方法でも、結合
段階と脱保護段階とを交互に繰り返し、双方の段階の間
に断続的な精製を行ってもよい。各結合段階ではアミノ
成分に対する定量的な結合を確保するために好ましくは
過剰量の活性化カルボキシル成分を使用する。これによ
って最終生成物中に欠失配列が生じることを防止でき
る。固相ペプチド合成では、残留する活性化カルボキシ
ル成分を通常は各結合段階が終了したときに濾過によっ
て除去する。溶液相合成では、残留する活性化カルボキ
シル成分が断続的な水性処理中に破壊されて除去される
ということが通常は想定されている。しかしながら溶液
相合成ではしばしば、挿入ペプチド配列が最終ペプチド
の不純物として存在している。その理由は、結合段階後
に残留する（活性化）カルボキシル成分が不完全にしか
除去されないので、脱保護後に結合が生じるからであ
る。このような副反応の発生を回避するために、残留す
る活性化カルボキシル官能基を除去（scavenge）する
（失活させる）除去段階を結合段階の直後に導入し得
る。通常は除去剤（scavenger）としてアミンを使用す
る。除去剤としてポリアミンを使用するとき、除去され
た化合物はそれぞれの極性に依存して、好ましくは酸性
の水相に活発に抽出され得る［例えば、Ｋｉｓｆａｌｕ
ｄｙ，Ｌ．ら（１９７４）Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌ
ｅｔｔ．１９，１７８５−１７８６］。伸長中のペプチ
ドが水相中に失われることを避けるために、この抽出は
通常は脱保護段階の前に行う。しかしながら多くの場合
にこの手順では、除去された化合物の疎水性が原因で断
続的な精製が不完全になることが知見された。カルボキ
シル成分のアミノアシル部分に固有の疎水性は、まだ存
在しているアミノ保護基によって強化される。従って水
性抽出が完全に有効ではない。
【０００３】最近では、Ｃａｒｐｉｎｏ，Ｌ．Ａ．ら
［（１９９９）Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．６４，４３２４
−４３３８］が除去法の改良を報告した。該方法では、
ポリアミンを除去剤として使用することに加えて、アミ
ノ保護基１，１−ジオキソベンゾ［ｂ］チオフェン−２
−イルメトキシカルボニル（Ｂｓｍｏｃ）を使用した。
Ｂｓｍｏｃ官能基は塩基に対して極めて高い置換活性を
有している。その結果として、ポリアミンを使用する単
一段階で、残留する活性化カルボキシル官能基が除去さ
れかつＢｓｍｏｃ官能基が除去される。
［（１９９９）Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．６４，４３２４
−４３３８］が除去法の改良を報告した。該方法では、
ポリアミンを除去剤として使用することに加えて、アミ
ノ保護基１，１−ジオキソベンゾ［ｂ］チオフェン−２
−イルメトキシカルボニル（Ｂｓｍｏｃ）を使用した。
Ｂｓｍｏｃ官能基は塩基に対して極めて高い置換活性を
有している。その結果として、ポリアミンを使用する単
一段階で、残留する活性化カルボキシル官能基が除去さ
れかつＢｓｍｏｃ官能基が除去される。
【０００４】新規なペプチド製造方法がここに知見され
た。該方法は、過剰量の活性化カルボキシル成分を使用
してアミノ成分をアシル化する段階から成り、アシル化
後に残留する活性化カルボキシル官能基の除去剤として
遊離アニオンまたは潜在アニオン（即ち、脱保護によっ
て形成されるアニオン）を含むアミンを使用する。この
新規な方法によれば、活性化カルボキシル成分のＮ末端
保護基を本質的に随意に選択できる。何故ならば、Ｃａ
ｒｐｉｎｏの方法と対照的に、過剰量の活性化カルボキ
シル官能基の除去と同じ反応条件下ではＮ末端の脱保護
が必ずしも生じないからである。本発明方法によれば更
に、ポリアミンを除去剤として使用する別の従来技術の
方法に見られる疎水性の問題を伴うことなく、残留する
活性化カルボキシル成分を極めて効率的に除去し得る。
本発明方法は溶液中で行うのが好ましい。しかしなが
ら、方法を固相ペプチド合成に使用することも可能であ
る。本発明方法はまた、１つまたは複数のアミド結合を
含む別の化合物の製造にも適している。好ましい実施態
様では、潜在アニオンを含むアミンを除去剤として使用
する。好ましくは、除去用アミン中の潜在アニオンは一
時保護基を有しており、該一時保護基は伸長中のペプチ
ドに結合したいかなる永久保護基の存在下でも選択的に
除去され得る。特に好ましい実施態様では、除去用アミ
ン中の潜在アニオンの保護基は、伸長中のペプチドのＮ
末端に存在する一時保護基の置換活性と同様の置換活性
を示す。このため、アニオンを生じる除去剤の脱保護と
伸長中のペプチドのＮ末端脱保護とを単一の処理段階で
行うことができる。本発明方法では、伸長中のペプチド
のＮ末端に存在しまた場合によっては除去剤に存在する
一時保護基が水素化分解的に除去可能な基であり、永久
保護基がアシドリシス的に除去可能な基であるのが特に
好ましい。好ましくは、該一時保護基がベンジル型の
基、例えば、（置換）ベンジル及びベンジルオキシカル
ボニル基である。好ましい除去剤は、遊離アニオンまた
は潜在アニオンを含む第一級アミン、特にＣ末端が保護
されたアミノ酸誘導体である。除去用アミンは、カルボ
キシレート以外に、スルホネート、スルフェート、ホス
ホネート、ホスフェートまたはフェノレートなどを非限
定例とする別のアニオン性官能基を含有してもよい。除
去剤として使用し得る極めて好ましいアミノ酸は、β−
アラニンまたはその誘導体（例えば、エステルまたはシ
リルエステル誘導体）である。最も好ましい除去剤はベ
ンジルβ−アラニネートまたはその塩である。
た。該方法は、過剰量の活性化カルボキシル成分を使用
してアミノ成分をアシル化する段階から成り、アシル化
後に残留する活性化カルボキシル官能基の除去剤として
遊離アニオンまたは潜在アニオン（即ち、脱保護によっ
て形成されるアニオン）を含むアミンを使用する。この
新規な方法によれば、活性化カルボキシル成分のＮ末端
保護基を本質的に随意に選択できる。何故ならば、Ｃａ
ｒｐｉｎｏの方法と対照的に、過剰量の活性化カルボキ
シル官能基の除去と同じ反応条件下ではＮ末端の脱保護
が必ずしも生じないからである。本発明方法によれば更
に、ポリアミンを除去剤として使用する別の従来技術の
方法に見られる疎水性の問題を伴うことなく、残留する
活性化カルボキシル成分を極めて効率的に除去し得る。
本発明方法は溶液中で行うのが好ましい。しかしなが
ら、方法を固相ペプチド合成に使用することも可能であ
る。本発明方法はまた、１つまたは複数のアミド結合を
含む別の化合物の製造にも適している。好ましい実施態
様では、潜在アニオンを含むアミンを除去剤として使用
する。好ましくは、除去用アミン中の潜在アニオンは一
時保護基を有しており、該一時保護基は伸長中のペプチ
ドに結合したいかなる永久保護基の存在下でも選択的に
除去され得る。特に好ましい実施態様では、除去用アミ
ン中の潜在アニオンの保護基は、伸長中のペプチドのＮ
末端に存在する一時保護基の置換活性と同様の置換活性
を示す。このため、アニオンを生じる除去剤の脱保護と
伸長中のペプチドのＮ末端脱保護とを単一の処理段階で
行うことができる。本発明方法では、伸長中のペプチド
のＮ末端に存在しまた場合によっては除去剤に存在する
一時保護基が水素化分解的に除去可能な基であり、永久
保護基がアシドリシス的に除去可能な基であるのが特に
好ましい。好ましくは、該一時保護基がベンジル型の
基、例えば、（置換）ベンジル及びベンジルオキシカル
ボニル基である。好ましい除去剤は、遊離アニオンまた
は潜在アニオンを含む第一級アミン、特にＣ末端が保護
されたアミノ酸誘導体である。除去用アミンは、カルボ
キシレート以外に、スルホネート、スルフェート、ホス
ホネート、ホスフェートまたはフェノレートなどを非限
定例とする別のアニオン性官能基を含有してもよい。除
去剤として使用し得る極めて好ましいアミノ酸は、β−
アラニンまたはその誘導体（例えば、エステルまたはシ
リルエステル誘導体）である。最も好ましい除去剤はベ
ンジルβ−アラニネートまたはその塩である。
【０００５】本発明の方法ではまた、遊離アニオンまた
は潜在アニオンを含むアミンの代わりに、遊離アニオン
または潜在アニオンを含むチオールを除去剤として使用
し得る。除去剤は好ましくは、除去が必要な残留活性成
分に対して２倍−６倍のモル過剰量で使用する。
は潜在アニオンを含むアミンの代わりに、遊離アニオン
または潜在アニオンを含むチオールを除去剤として使用
し得る。除去剤は好ましくは、除去が必要な残留活性成
分に対して２倍−６倍のモル過剰量で使用する。
【０００６】本発明の除去剤を使用すると、除去された
親水性化合物が得られる。このような化合物は脱保護段
階後に塩基性水相に活発に抽出され得る。（本発明の除
去剤を使用したとき）脱保護後に、除去された種には遊
離アミノ官能基と遊離カルボキシル官能基との双方が存
在するので親水性が強化される。従って、本発明方法に
よれば、除去された親水性化合物を活発に抽出すること
ができるので断続的な精製が極めて効率的になる。更
に、場合によって存在する活性化されなかった余剰のカ
ルボキシル成分は、脱保護中にその一時的保護基もまた
除去されるので、同時に反応混合物から抽出される。
親水性化合物が得られる。このような化合物は脱保護段
階後に塩基性水相に活発に抽出され得る。（本発明の除
去剤を使用したとき）脱保護後に、除去された種には遊
離アミノ官能基と遊離カルボキシル官能基との双方が存
在するので親水性が強化される。従って、本発明方法に
よれば、除去された親水性化合物を活発に抽出すること
ができるので断続的な精製が極めて効率的になる。更
に、場合によって存在する活性化されなかった余剰のカ
ルボキシル成分は、脱保護中にその一時的保護基もまた
除去されるので、同時に反応混合物から抽出される。
【０００７】本発明の新規な方法はオリゴペプチド及び
ポリペプチドの製造、より一般的には１つまたは複数の
アミド結合を含む化合物の製造に好都合に使用し得る。
ポリペプチドの製造、より一般的には１つまたは複数の
アミド結合を含む化合物の製造に好都合に使用し得る。
【０００８】本発明の好適な方法は、過剰量のカルボキ
シル成分をアミノ成分に結合させる方法であり、該方法
では結合試薬及び所望の場合には添加剤を使用してカル
ボキシル官能基を予め活性化するかまたはｉｎ ｓｉｔ
ｕ活性化する。結合段階後に残留する活性化カルボキシ
ル官能基は、反応混合物に除去剤を添加することによっ
て除去する。引き続いて、当業界で公知の適当な方法を
使用して一時的保護基を除去し、次いで、除去された化
合物を塩基性水性抽出によって除去する。同時に、場合
によっては存在する活性化されなかった余剰のカルボキ
シル成分は、脱保護中にその一時的保護基もまた除去さ
れるので、反応混合物から抽出される。
シル成分をアミノ成分に結合させる方法であり、該方法
では結合試薬及び所望の場合には添加剤を使用してカル
ボキシル官能基を予め活性化するかまたはｉｎ ｓｉｔ
ｕ活性化する。結合段階後に残留する活性化カルボキシ
ル官能基は、反応混合物に除去剤を添加することによっ
て除去する。引き続いて、当業界で公知の適当な方法を
使用して一時的保護基を除去し、次いで、除去された化
合物を塩基性水性抽出によって除去する。同時に、場合
によっては存在する活性化されなかった余剰のカルボキ
シル成分は、脱保護中にその一時的保護基もまた除去さ
れるので、反応混合物から抽出される。
【０００９】アミノ成分という用語は、遊離アミノ官能
基を含む分子を意味する。より特定的には、アミノ成分
は、遊離アミノ官能基を含み別の官能基が所望の結合反
応を妨害しないように保護されている任意のアミン、ア
ミノ酸またはオリゴペプチドでよい。使用されるアミノ
酸またはオリゴペプチドのＣ末端官能基は、置換もしく
は未置換のアミドとしてまたはエステルとして保護され
得る。エステルの非限定例は、メチル、エチル、ｔ−ブ
チル、ベンジル、フェンアシル、３−（３−メチル）ペ
ンチル（Ｍｐｅ）、２−（２−フェニル）プロピル（Ｐ
ｐ）、２−クロロトリチル（Ｃｌｔ）、ジフェニル（４
−ピリジル）メチル（ＰｙＢｚｈ）、ジシクロプロピル
メチル（Ｄｃｐｍ）、９−フルオレニルメチル（Ｆ
ｍ）、アリル（Ａｌｌ）、２−（トリメチルシリル）エ
チル（Ｔｍｓｅ）、４−｛Ｎ−［１−（４，４−ジメチ
ル−２，６−ジオキソシクロヘキシリデン）−３−メチ
ルブチル］−アミノ｝ベンジル（Ｄｍａｂ）エステル及
び酵素的に開裂可能なエステルである［Ｒｏｅｓｋｅ，
Ｒ．Ｗ．（１９８１）：Ｔｈｅ Ｐｅｐｔｉｄｅｓ′，
ｖｏｌ．３（Ｇｒｏｓｓ，Ｅ．ａｎｄ Ｍｅｉｅｎｈｏ
ｆｅｒ，Ｊ．ｅｄｓ．）Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓ
ｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ｐｐ．１０１−１３６；Ｍｐｅ
については：Ｋａｒｌｏｓｔｒｏｍ，Ａ．ａｎｄ Ｕｎ
ｄｅｎ，Ａ．（１９９６）Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌ
ｅｔｔ．３７，４３４３−４２４６；Ｐｐについては：
Ｙｕｅ，Ｃ．ら（１９９３）Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ
Ｌｅｔｔ．３４，３２３−３２６；Ｃｌｔについては：
Ａｔｈａｎａｓｓｏｐｏｕｌｏｓ，Ｐ．ら（１９９５）
Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ．３６，５６４５−
５６４８；ＰｙＢｚｈについては：Ｍｅｒｇｌｅｒ，
Ｍ．ら（２００１）Ｐ１５４，２ ｎｄ Ｉｎｔｅｒｎａ
ｔｉｏｎａｌ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ
＆１７ｔｈ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙ
ｍｐｏｓｉｕｍ；Ｄｃｐｍについては：Ｃａｒｐｉｎ
ｏ，Ｌ．Ａ．ら（１９９５）Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．６
０，７７１８−７７１９；Ｆｍについては：Ａｌ−Ｏｂ
ｅｉｄｉ，Ｆ．ら（１９９０）Ｉｎｔ．Ｊ．Ｐｅｐｔｉ
ｄｅ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｒｅｓ．３５，２１５−２１
８；Ａｌｌについては：Ｋｕｎｚ，Ｈ．ら（１９８５）
Ｉｎｔ．Ｊ．Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｒｅ
ｓ．２６，４９３−４９７；Ｔｍｓｅについては：Ｓｉ
ｅｂｅｒ，Ｐ．（１９７７）Ｈｅｌｖ．Ｃｈｉｍ．Ａｃ
ｔａ ６０，２７１１−２７１６；Ｄｍａｂについて
は：Ｃｈａｎ，Ｗ．Ｃ．ら（１９９５）Ｊ．Ｃｈｅｍ．
Ｓｏｃ．，Ｃｈｅｍ．Ｃｏｍｍｕｎ．，２２０９−２２
１０］。アミノ成分中の別の官能基を永久保護するため
にはｔ−ブチル型の官能基または同様の置換活性をもつ
官能基が好ましい。これらの官能基の非限定例として、
Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ及びＴｙｒ側鎖の保護
には−ｔ−ブチル（ｔＢｕ）、Ｌｙｓ及びＴｒｐ側鎖の
保護にはｔ−ブトキシカルボニル（Ｂｏｃ）、Ａｓｎ、
Ｇｌｎ及びＨｉｓ側鎖の保護にはトリチル（Ｔｒｔ）、
Ａｒｇ側鎖の保護には２，２，５，７，８−ペンタメチ
ルクロマン−６−スルホニル（Ｐｍｃ）または２，２，
４，６，７−ペンタメチルジヒドロベンゾフラン−５−
スルホニル（Ｐｂｆ）がある［Ｂａｒａｎｙ，Ｇ．ａｎ
ｄ Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ，Ｒ．Ｂ．（１９８０）：Ｔ
ｈｅ Ｐｅｐｔｉｄｅｓ′，ｖｏｌ．２（Ｇｒｏｓｓ，
Ｅ．ａｎｄ Ｍｅｉｅｎｈｏｆｅｒ，Ｊ．，ｅｄｓ．）
Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ｐ
ｐ．１−２８４；Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）には：Ｆｒａｎｚｅ
ｎ，Ｈ．ら（１９８４）Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｃｈｅ
ｍ．Ｃｏｍｍｕｎ．，１６９９−１７００；Ａｓｎ（Ｔ
ｒｔ）及びＧｌｎ（Ｔｒｔ）には：Ｓｉｅｂｅｒ，Ｐ．
ａｎｄ Ｒｉｎｉｋｅｒ，Ｂ．（１９９１）Ｔｅｔｒａ
ｈｅｄｒｏｎＬｅｔｔ．３２，７３９−７４２；Ｈｉｓ
（Ｔｒｔ）には：Ｓｉｅｂｅｒ，Ｐ．ａｎｄ Ｒｉｎｉ
ｋｅｒ，Ｂ．（１９８７）Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌ
ｅｔｔ．２８，６０３１−６０３４；Ｐｍｃには：Ｒａ
ｍａｇｅ，Ｒ．ａｎｄ Ｇｒｅｅｎ，Ｊ．（１９８７）
Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ．２８，２２８７−
２２９０；Ｐｂｆには：Ｃａｒｐｉｎｏ，Ｌ．Ａ．ら
（１９９３）Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ．３
４，７８２９−７８３２］。
基を含む分子を意味する。より特定的には、アミノ成分
は、遊離アミノ官能基を含み別の官能基が所望の結合反
応を妨害しないように保護されている任意のアミン、ア
ミノ酸またはオリゴペプチドでよい。使用されるアミノ
酸またはオリゴペプチドのＣ末端官能基は、置換もしく
は未置換のアミドとしてまたはエステルとして保護され
得る。エステルの非限定例は、メチル、エチル、ｔ−ブ
チル、ベンジル、フェンアシル、３−（３−メチル）ペ
ンチル（Ｍｐｅ）、２−（２−フェニル）プロピル（Ｐ
ｐ）、２−クロロトリチル（Ｃｌｔ）、ジフェニル（４
−ピリジル）メチル（ＰｙＢｚｈ）、ジシクロプロピル
メチル（Ｄｃｐｍ）、９−フルオレニルメチル（Ｆ
ｍ）、アリル（Ａｌｌ）、２−（トリメチルシリル）エ
チル（Ｔｍｓｅ）、４−｛Ｎ−［１−（４，４−ジメチ
ル−２，６−ジオキソシクロヘキシリデン）−３−メチ
ルブチル］−アミノ｝ベンジル（Ｄｍａｂ）エステル及
び酵素的に開裂可能なエステルである［Ｒｏｅｓｋｅ，
Ｒ．Ｗ．（１９８１）：Ｔｈｅ Ｐｅｐｔｉｄｅｓ′，
ｖｏｌ．３（Ｇｒｏｓｓ，Ｅ．ａｎｄ Ｍｅｉｅｎｈｏ
ｆｅｒ，Ｊ．ｅｄｓ．）Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓ
ｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ｐｐ．１０１−１３６；Ｍｐｅ
については：Ｋａｒｌｏｓｔｒｏｍ，Ａ．ａｎｄ Ｕｎ
ｄｅｎ，Ａ．（１９９６）Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌ
ｅｔｔ．３７，４３４３−４２４６；Ｐｐについては：
Ｙｕｅ，Ｃ．ら（１９９３）Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ
Ｌｅｔｔ．３４，３２３−３２６；Ｃｌｔについては：
Ａｔｈａｎａｓｓｏｐｏｕｌｏｓ，Ｐ．ら（１９９５）
Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ．３６，５６４５−
５６４８；ＰｙＢｚｈについては：Ｍｅｒｇｌｅｒ，
Ｍ．ら（２００１）Ｐ１５４，２ ｎｄ Ｉｎｔｅｒｎａ
ｔｉｏｎａｌ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ
＆１７ｔｈ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙ
ｍｐｏｓｉｕｍ；Ｄｃｐｍについては：Ｃａｒｐｉｎ
ｏ，Ｌ．Ａ．ら（１９９５）Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．６
０，７７１８−７７１９；Ｆｍについては：Ａｌ−Ｏｂ
ｅｉｄｉ，Ｆ．ら（１９９０）Ｉｎｔ．Ｊ．Ｐｅｐｔｉ
ｄｅ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｒｅｓ．３５，２１５−２１
８；Ａｌｌについては：Ｋｕｎｚ，Ｈ．ら（１９８５）
Ｉｎｔ．Ｊ．Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｒｅ
ｓ．２６，４９３−４９７；Ｔｍｓｅについては：Ｓｉ
ｅｂｅｒ，Ｐ．（１９７７）Ｈｅｌｖ．Ｃｈｉｍ．Ａｃ
ｔａ ６０，２７１１−２７１６；Ｄｍａｂについて
は：Ｃｈａｎ，Ｗ．Ｃ．ら（１９９５）Ｊ．Ｃｈｅｍ．
Ｓｏｃ．，Ｃｈｅｍ．Ｃｏｍｍｕｎ．，２２０９−２２
１０］。アミノ成分中の別の官能基を永久保護するため
にはｔ−ブチル型の官能基または同様の置換活性をもつ
官能基が好ましい。これらの官能基の非限定例として、
Ａｓｐ、Ｇｌｕ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ及びＴｙｒ側鎖の保護
には−ｔ−ブチル（ｔＢｕ）、Ｌｙｓ及びＴｒｐ側鎖の
保護にはｔ−ブトキシカルボニル（Ｂｏｃ）、Ａｓｎ、
Ｇｌｎ及びＨｉｓ側鎖の保護にはトリチル（Ｔｒｔ）、
Ａｒｇ側鎖の保護には２，２，５，７，８−ペンタメチ
ルクロマン−６−スルホニル（Ｐｍｃ）または２，２，
４，６，７−ペンタメチルジヒドロベンゾフラン−５−
スルホニル（Ｐｂｆ）がある［Ｂａｒａｎｙ，Ｇ．ａｎ
ｄ Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ，Ｒ．Ｂ．（１９８０）：Ｔ
ｈｅ Ｐｅｐｔｉｄｅｓ′，ｖｏｌ．２（Ｇｒｏｓｓ，
Ｅ．ａｎｄ Ｍｅｉｅｎｈｏｆｅｒ，Ｊ．，ｅｄｓ．）
Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ｐ
ｐ．１−２８４；Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）には：Ｆｒａｎｚｅ
ｎ，Ｈ．ら（１９８４）Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｃｈｅ
ｍ．Ｃｏｍｍｕｎ．，１６９９−１７００；Ａｓｎ（Ｔ
ｒｔ）及びＧｌｎ（Ｔｒｔ）には：Ｓｉｅｂｅｒ，Ｐ．
ａｎｄ Ｒｉｎｉｋｅｒ，Ｂ．（１９９１）Ｔｅｔｒａ
ｈｅｄｒｏｎＬｅｔｔ．３２，７３９−７４２；Ｈｉｓ
（Ｔｒｔ）には：Ｓｉｅｂｅｒ，Ｐ．ａｎｄ Ｒｉｎｉ
ｋｅｒ，Ｂ．（１９８７）Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌ
ｅｔｔ．２８，６０３１−６０３４；Ｐｍｃには：Ｒａ
ｍａｇｅ，Ｒ．ａｎｄ Ｇｒｅｅｎ，Ｊ．（１９８７）
Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ．２８，２２８７−
２２９０；Ｐｂｆには：Ｃａｒｐｉｎｏ，Ｌ．Ａ．ら
（１９９３）Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ．３
４，７８２９−７８３２］。
【００１０】カルボキシル成分という用語は、遊離カル
ボキシル官能基を含む分子を意味する。より特定的に
は、カルボキシル成分は、遊離カルボキシル官能基を有
しており別の官能基が所望の結合反応を妨害しないよう
に保護されている任意のカルボン酸、アミノ酸またはオ
リゴペプチドでよい。好ましい実施態様では、使用され
たアミノ酸またはオリゴペプチドのアミノ基がベンジル
オキシカルボニル（Ｚ）官能基によって一時的に保護さ
れている。官能基の別の非限定例は、Ｂｏｃ、Ｔｒｔ、
フルオレン−９−イルメトキシカルボニル（Ｆｍｏ
ｃ）、２−（メチルスルホニル）エトキシカルボニル
（Ｍｓｃ）、アリルオキシカルボニル（Ａｌｌｏｃ）官
能基、オルトニトロベンゼンスルホニル（ｏ−ＮＢＳ）
のようなアリールスルホニル型の官能基、及び、酵素的
に開裂可能な官能基である［Ｇｅｉｇｅｒ，Ｒ．ａｎ
ｄ，Ｋｏｎｉｇ，Ｗ．（１９８１）：Ｔｈｅ Ｐｅｐｔ
ｉｄｅｓ′，ｖｏｌ．３（Ｇｒｏｓｓ，Ｅ．ａｎｄ Ｍ
ｅｉｅｎｈｏｆｅｒ，Ｊ．，ｅｄｓ．）Ａｃａｄｅｍｉ
ｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ｐｐ．１−９９；
Ａｌｌｏｃには：Ｋｕｎｚ，Ｈ．ａｎｄ Ｕｎｖｅｒｚ
ａｇｔ，Ｃ．（１９８４）Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．９
６，４２６−４２７；アリールスルホニルには：Ｆｕｋ
ｕｙａｍａ，Ｔ．ら（１９９７）Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏ
ｎ Ｌｅｔｔ．３８，５８３１−５８３４］。カルボキ
シル成分中の別の官能基を永久保護するためには、アミ
ノ成分に関して上述したようなｔ−ブチル型の官能基ま
たは同様の置換活性をもつ官能基が好ましい。カルボキ
シル成分を、活性エステル、好ましくは、Ｎ−ヒドロキ
シスクシンイミド、ベンゾトリアゾール−１−イル、ペ
ンタフルオロフェニルまたは４−ニトロフェニルエステ
ル、ハロゲン化物、Ｎ−カルボキシ無水物としてまたは
対称無水物として予め活性化してもよい。あるいは、カ
ルボキシル成分を、混合無水物として、または、好まし
くはＮ，Ｎ′−ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣ
Ｃ）もしくは１−（３′−ジメチルアミノプロピル）−
３−エチルカルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）のようなカ
ルボジイミド、ウロニウムまたはホスホニウム塩などの
結合試薬を、場合によっては結合用添加剤、好ましく
は、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（ＨＯＮＳｕ）、１
−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）、３−ヒ
ドロキシ−４−オキソ−３，４−ジヒドロ−１，２，３
−ベンゾトリアゾール（ＨＯＯＢｔ）、１−ヒドロキシ
−７−アザベンゾトリアゾール（ＨＯＡｔ）または６−
クロロ−１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（Ｃｌ−Ｈ
ＯＢｔ）の存在下、及び、必要な場合には第三級アミン
の存在下で使用して、ｉｎ ｓｉｔｕで活性化してもよ
い［Ｔｈｅ ｐｅｐｔｉｄｅｓ′，ｖｏｌ．１（１９７
９）（Ｇｒｏｓｓ，Ｅ．ａｎｄ Ｍｅｉｅｎｈｏｆｅ
ｒ，Ｊ．，ｅｄｓ．）Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，
Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ；Ｌｉ，Ｐ．ａｎｄ Ｘｕ，Ｊ．−
Ｃ．（２０００）Ｃｈｉｎ．Ｊ．Ｃｈｅｍ．１８，４５
６−４６６］。
ボキシル官能基を含む分子を意味する。より特定的に
は、カルボキシル成分は、遊離カルボキシル官能基を有
しており別の官能基が所望の結合反応を妨害しないよう
に保護されている任意のカルボン酸、アミノ酸またはオ
リゴペプチドでよい。好ましい実施態様では、使用され
たアミノ酸またはオリゴペプチドのアミノ基がベンジル
オキシカルボニル（Ｚ）官能基によって一時的に保護さ
れている。官能基の別の非限定例は、Ｂｏｃ、Ｔｒｔ、
フルオレン−９−イルメトキシカルボニル（Ｆｍｏ
ｃ）、２−（メチルスルホニル）エトキシカルボニル
（Ｍｓｃ）、アリルオキシカルボニル（Ａｌｌｏｃ）官
能基、オルトニトロベンゼンスルホニル（ｏ−ＮＢＳ）
のようなアリールスルホニル型の官能基、及び、酵素的
に開裂可能な官能基である［Ｇｅｉｇｅｒ，Ｒ．ａｎ
ｄ，Ｋｏｎｉｇ，Ｗ．（１９８１）：Ｔｈｅ Ｐｅｐｔ
ｉｄｅｓ′，ｖｏｌ．３（Ｇｒｏｓｓ，Ｅ．ａｎｄ Ｍ
ｅｉｅｎｈｏｆｅｒ，Ｊ．，ｅｄｓ．）Ａｃａｄｅｍｉ
ｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ｐｐ．１−９９；
Ａｌｌｏｃには：Ｋｕｎｚ，Ｈ．ａｎｄ Ｕｎｖｅｒｚ
ａｇｔ，Ｃ．（１９８４）Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．９
６，４２６−４２７；アリールスルホニルには：Ｆｕｋ
ｕｙａｍａ，Ｔ．ら（１９９７）Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏ
ｎ Ｌｅｔｔ．３８，５８３１−５８３４］。カルボキ
シル成分中の別の官能基を永久保護するためには、アミ
ノ成分に関して上述したようなｔ−ブチル型の官能基ま
たは同様の置換活性をもつ官能基が好ましい。カルボキ
シル成分を、活性エステル、好ましくは、Ｎ−ヒドロキ
シスクシンイミド、ベンゾトリアゾール−１−イル、ペ
ンタフルオロフェニルまたは４−ニトロフェニルエステ
ル、ハロゲン化物、Ｎ−カルボキシ無水物としてまたは
対称無水物として予め活性化してもよい。あるいは、カ
ルボキシル成分を、混合無水物として、または、好まし
くはＮ，Ｎ′−ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣ
Ｃ）もしくは１−（３′−ジメチルアミノプロピル）−
３−エチルカルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）のようなカ
ルボジイミド、ウロニウムまたはホスホニウム塩などの
結合試薬を、場合によっては結合用添加剤、好ましく
は、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（ＨＯＮＳｕ）、１
−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）、３−ヒ
ドロキシ−４−オキソ−３，４−ジヒドロ−１，２，３
−ベンゾトリアゾール（ＨＯＯＢｔ）、１−ヒドロキシ
−７−アザベンゾトリアゾール（ＨＯＡｔ）または６−
クロロ−１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（Ｃｌ−Ｈ
ＯＢｔ）の存在下、及び、必要な場合には第三級アミン
の存在下で使用して、ｉｎ ｓｉｔｕで活性化してもよ
い［Ｔｈｅ ｐｅｐｔｉｄｅｓ′，ｖｏｌ．１（１９７
９）（Ｇｒｏｓｓ，Ｅ．ａｎｄ Ｍｅｉｅｎｈｏｆｅ
ｒ，Ｊ．，ｅｄｓ．）Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，
Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ；Ｌｉ，Ｐ．ａｎｄ Ｘｕ，Ｊ．−
Ｃ．（２０００）Ｃｈｉｎ．Ｊ．Ｃｈｅｍ．１８，４５
６−４６６］。
【００１１】一時的保護基は当業界で公知の方法によっ
て除去し得る（上記参照）。Ｚ官能基は、例えば水素ガ
スまたはホルミエート（ｆｏｒｍｉａｔｅ）を水素供与
体として用いた（標準）手順を使用する水素化分解によ
って除去し得る。この処理中に、ベンジル型保護基は完
全に除去され、ｔ−ブチル型の官能基または同様の置換
活性をもつ官能基は保存される。後者は、当業者に公知
のアシドリシスによって除去し得る。
て除去し得る（上記参照）。Ｚ官能基は、例えば水素ガ
スまたはホルミエート（ｆｏｒｍｉａｔｅ）を水素供与
体として用いた（標準）手順を使用する水素化分解によ
って除去し得る。この処理中に、ベンジル型保護基は完
全に除去され、ｔ−ブチル型の官能基または同様の置換
活性をもつ官能基は保存される。後者は、当業者に公知
のアシドリシスによって除去し得る。
【００１２】塩基性水性抽出という用語の意味は当業者
に理解されるであろう。しかしながら、塩基性水性抽出
は好ましくは、炭酸水素ナトリウムまたは炭酸ナトリウ
ムの水溶液を使用し、所望の場合には塩化ナトリウムま
たは硝酸カリウムの存在下で行う。活性水性抽出という
用語は、酸性条件下でアミノ成分をプロトン化形態（ア
ンモニウム）で抽出するかまたは塩基性条件下でカルボ
キシル成分を脱プロトン形態（カルボキシレート）で抽
出するような処理を意味する。
に理解されるであろう。しかしながら、塩基性水性抽出
は好ましくは、炭酸水素ナトリウムまたは炭酸ナトリウ
ムの水溶液を使用し、所望の場合には塩化ナトリウムま
たは硝酸カリウムの存在下で行う。活性水性抽出という
用語は、酸性条件下でアミノ成分をプロトン化形態（ア
ンモニウム）で抽出するかまたは塩基性条件下でカルボ
キシル成分を脱プロトン形態（カルボキシレート）で抽
出するような処理を意味する。
【００１３】本発明を以下の実施例でより詳細に説明す
る。本発明がこれらの実施例の記載に限定されないこと
は理解されよう。
る。本発明がこれらの実施例の記載に限定されないこと
は理解されよう。
【００１４】実施例１
Ｈ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−Ｐｈｅ−ＯｔＢｕ
２０℃の酢酸エチルとジクロロメタンとの混合物中に
５．５２ｇのＨ−Ｐｈｅ−ＯｔＢｕ．ＨＣｌを含む撹拌
懸濁液に、７．７６ｇのＺ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−Ｏ
Ｈ、３．２４ｇの１−ヒドロキシベンゾトリアゾール、
４．２０ｇの１−（３′−ジメチルアミノプロピル）−
３−エチルカルボジイミド塩酸塩及び４．６２ｍｌの４
−メチルモルホリンを添加した。得られた溶液を反応が
完了するまで撹拌後、１．２１ｍｌの４−メチルモルホ
リン及び３．５１ｇのベンジルβ−アラニネートｐ−ト
ルエンスルホネート塩を添加した。混合物を更に３０分
間撹拌し、５％Ｎａ２ＣＯ３／１０％ＮａＣｌ、５％Ｋ
ＨＳＯ４／１０％ＮａＣｌ及び５％Ｎａ２ＣＯ３／１０
％ＮａＣｌで抽出した。
５．５２ｇのＨ−Ｐｈｅ−ＯｔＢｕ．ＨＣｌを含む撹拌
懸濁液に、７．７６ｇのＺ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−Ｏ
Ｈ、３．２４ｇの１−ヒドロキシベンゾトリアゾール、
４．２０ｇの１−（３′−ジメチルアミノプロピル）−
３−エチルカルボジイミド塩酸塩及び４．６２ｍｌの４
−メチルモルホリンを添加した。得られた溶液を反応が
完了するまで撹拌後、１．２１ｍｌの４−メチルモルホ
リン及び３．５１ｇのベンジルβ−アラニネートｐ−ト
ルエンスルホネート塩を添加した。混合物を更に３０分
間撹拌し、５％Ｎａ２ＣＯ３／１０％ＮａＣｌ、５％Ｋ
ＨＳＯ４／１０％ＮａＣｌ及び５％Ｎａ２ＣＯ３／１０
％ＮａＣｌで抽出した。
【００１５】保護されたジペプチドＺ−Ａｓｐ（ＯｔＢ
ｕ）−Ｐｈｅ−ＯｔＢｕを含む有機層をパラジウム付着
チャコールの存在下で接触水素化分解処理した。反応の
完了後、５％Ｎａ２ＣＯ３／１０％ＮａＣｌを添加し、
得られた懸濁液を濾過した。残渣を酢酸エチルとジクロ
ロメタンとの混合物で洗浄し、集めた有機濾液を５％Ｎ
ａ２ＣＯ３／１０％ＮａＣｌ、３０％ＮａＣｌ及び水で
抽出した。有機層を蒸発乾固すると、所望のジペプチド
が定量的収率で得られた。逆相ＨＰＬＣによる純度：９
８．４％（２９分で０．１％トリフルオロ酢酸中に２４
％から６８％までのアセトニトリル，２２０ｎｍ，２．
０ｍｌ／分，５ミクロンのＣ１８カラム）。エレクトロ
スプレーＭＳによる同定：ｍ／ｚ３９３．４［Ｍ＋Ｈ］
＋；１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ１．４１（ｓ，９
Ｈ），１．４６（ｓ，９Ｈ），１．６３（ｂｓ，２
Ｈ），２．３９（ｄｄ，１Ｈ），２．７９（ｄｄ，１
Ｈ），３．３９（ｄ，２Ｈ），３．６５（ｍ，１Ｈ），
４．７２（ｍ，１Ｈ），７．１７−７．３２（ｍ，５
Ｈ），７．８１（ｄ，１Ｈ）。
ｕ）−Ｐｈｅ−ＯｔＢｕを含む有機層をパラジウム付着
チャコールの存在下で接触水素化分解処理した。反応の
完了後、５％Ｎａ２ＣＯ３／１０％ＮａＣｌを添加し、
得られた懸濁液を濾過した。残渣を酢酸エチルとジクロ
ロメタンとの混合物で洗浄し、集めた有機濾液を５％Ｎ
ａ２ＣＯ３／１０％ＮａＣｌ、３０％ＮａＣｌ及び水で
抽出した。有機層を蒸発乾固すると、所望のジペプチド
が定量的収率で得られた。逆相ＨＰＬＣによる純度：９
８．４％（２９分で０．１％トリフルオロ酢酸中に２４
％から６８％までのアセトニトリル，２２０ｎｍ，２．
０ｍｌ／分，５ミクロンのＣ１８カラム）。エレクトロ
スプレーＭＳによる同定：ｍ／ｚ３９３．４［Ｍ＋Ｈ］
＋；１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ１．４１（ｓ，９
Ｈ），１．４６（ｓ，９Ｈ），１．６３（ｂｓ，２
Ｈ），２．３９（ｄｄ，１Ｈ），２．７９（ｄｄ，１
Ｈ），３．３９（ｄ，２Ｈ），３．６５（ｍ，１Ｈ），
４．７２（ｍ，１Ｈ），７．１７−７．３２（ｍ，５
Ｈ），７．８１（ｄ，１Ｈ）。
【００１６】実施例２
Ｈ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ−ＮＨ−（ＣＨ２）７−ＣＨ３
２０℃の酢酸エチル中の２．１２ｍｌのｎ−オクチルア
ミンの撹拌溶液に、４．６１ｇのＺ−Ｐｈｅ−ＯＨ、
２．０８ｇの１−ヒドロキシベンゾトリアゾール、２．
７１ｇの１−（３′−ジメチルアミノプロピル）−３−
エチルカルボジイミド塩酸塩及び１．５５ｍｌの４−メ
チルモルホリンを添加した。得られた懸濁液を反応が完
了するまで撹拌後、０．７８ｍｌの４−メチルモルホリ
ン及び２．２６ｇのベンジルβ−アラニネートｐ−トル
エンスルホネート塩を添加した。混合物を更に３０分間
撹拌し、５％Ｎａ２ＣＯ３／１０％ＮａＣｌ、５％ＫＨ
ＳＯ ４／１０％ＮａＣｌ及び５％Ｎａ２ＣＯ３／１０％
ＮａＣｌで抽出した。
ミンの撹拌溶液に、４．６１ｇのＺ−Ｐｈｅ−ＯＨ、
２．０８ｇの１−ヒドロキシベンゾトリアゾール、２．
７１ｇの１−（３′−ジメチルアミノプロピル）−３−
エチルカルボジイミド塩酸塩及び１．５５ｍｌの４−メ
チルモルホリンを添加した。得られた懸濁液を反応が完
了するまで撹拌後、０．７８ｍｌの４−メチルモルホリ
ン及び２．２６ｇのベンジルβ−アラニネートｐ−トル
エンスルホネート塩を添加した。混合物を更に３０分間
撹拌し、５％Ｎａ２ＣＯ３／１０％ＮａＣｌ、５％ＫＨ
ＳＯ ４／１０％ＮａＣｌ及び５％Ｎａ２ＣＯ３／１０％
ＮａＣｌで抽出した。
【００１７】Ｚ−Ｐｈｅ−ＮＨ−（ＣＨ２）７−ＣＨ３
を含む有機層を１−メチル２−ピロリジノンで希釈し、
パラジウム付着チャコールの存在下で接触水素化分解処
理した。反応の完了後、３０％ＮａＣｌを添加し、得ら
れた懸濁液を濾過した。残渣を酢酸エチルで洗浄し、集
めた有機濾液を５％Ｎａ２ＣＯ３／１０％ＮａＣｌ及び
３０％ＮａＣｌで抽出した。
を含む有機層を１−メチル２−ピロリジノンで希釈し、
パラジウム付着チャコールの存在下で接触水素化分解処
理した。反応の完了後、３０％ＮａＣｌを添加し、得ら
れた懸濁液を濾過した。残渣を酢酸エチルで洗浄し、集
めた有機濾液を５％Ｎａ２ＣＯ３／１０％ＮａＣｌ及び
３０％ＮａＣｌで抽出した。
【００１８】Ｈ−Ｐｈｅ−ＮＨ−（ＣＨ２）７−ＣＨ３
を含む２０℃の有機層に、４．０９ｇのＺ−Ｌｅｕ−Ｏ
Ｈ、２．０８ｇの１−ヒドロキシベンゾトリアゾール、
２．７１ｇの１−（３′−ジメチルアミノプロピル）−
３−エチルカルボジイミド塩酸塩、１．５５ｍｌの４−
メチルモルホリン及び１−メチル−２−ピロリジノンを
添加した。得られた懸濁液を反応が完了するまで撹拌し
た後、０．７８ｍｌの４−メチルモルホリン及び２．２
６ｇのベンジルβ−アラニネートｐ−トルエンスルホネ
ート塩を添加した。混合物を更に３０分間撹拌し、３０
％ＮａＣｌ、５％Ｎａ２ＣＯ３／１０％ＮａＣｌ、５％
ＫＨＳＯ４／１０％ＮａＣｌ及び５％Ｎａ２ＣＯ３／１
０％ＮａＣｌで抽出した。 Ｚ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ−ＮＨ
−（ＣＨ ２）７−ＣＨ３を含む有機層を１−メチル−２
−ピロリジノンで希釈し、パラジウム付着チャコールの
存在下で接触水素化分解処理した。反応の完了後、５％
Ｎａ２ＣＯ３／１０％ＮａＣｌを添加し、得られた懸濁
液を４５℃で濾過した。残渣を酢酸エチルで洗浄し、集
めた有機濾液を５％Ｎａ２ＣＯ３／１０％ＮａＣｌ、３
０％ＮａＣｌ及び水で抽出した。有機層を蒸発乾固する
と所望生成物が８５％の収率で得られた。逆相ＨＰＬＣ
による純度：９９．３％（２９分で０．１％トリフルオ
ロ酢酸中に２４％から６８％までのアセトニトリル，２
２０ｎｍ，２．０ｍｌ／分，５ミクロンのＣ１８カラ
ム）によって測定。エレクトロスプレーＭＳによる同
定：ｍ／ｚ３９０．４［Ｍ＋Ｈ］＋，４１２．４［Ｍ＋
Ｎａ］＋，３８８．２［Ｍ＋Ｈ］−，４３４．２［Ｍ＋
ＨＣＯＯ］−；１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ０．８９
（ｍ，９Ｈ），１．１２−１．３９（ｍ．１４Ｈ），
１．５０−１．６０（ｍ，３Ｈ），３．０１−３．２２
（ｍ，４Ｈ），３．３５（ｄｄ，１Ｈ），４．５３（ｄ
ｄ，１Ｈ），５．９０（ｔ，１Ｈ），７．１９−７．３
２（ｍ，５Ｈ），７．８３（ｄ，１Ｈ）。
を含む２０℃の有機層に、４．０９ｇのＺ−Ｌｅｕ−Ｏ
Ｈ、２．０８ｇの１−ヒドロキシベンゾトリアゾール、
２．７１ｇの１−（３′−ジメチルアミノプロピル）−
３−エチルカルボジイミド塩酸塩、１．５５ｍｌの４−
メチルモルホリン及び１−メチル−２−ピロリジノンを
添加した。得られた懸濁液を反応が完了するまで撹拌し
た後、０．７８ｍｌの４−メチルモルホリン及び２．２
６ｇのベンジルβ−アラニネートｐ−トルエンスルホネ
ート塩を添加した。混合物を更に３０分間撹拌し、３０
％ＮａＣｌ、５％Ｎａ２ＣＯ３／１０％ＮａＣｌ、５％
ＫＨＳＯ４／１０％ＮａＣｌ及び５％Ｎａ２ＣＯ３／１
０％ＮａＣｌで抽出した。 Ｚ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ−ＮＨ
−（ＣＨ ２）７−ＣＨ３を含む有機層を１−メチル−２
−ピロリジノンで希釈し、パラジウム付着チャコールの
存在下で接触水素化分解処理した。反応の完了後、５％
Ｎａ２ＣＯ３／１０％ＮａＣｌを添加し、得られた懸濁
液を４５℃で濾過した。残渣を酢酸エチルで洗浄し、集
めた有機濾液を５％Ｎａ２ＣＯ３／１０％ＮａＣｌ、３
０％ＮａＣｌ及び水で抽出した。有機層を蒸発乾固する
と所望生成物が８５％の収率で得られた。逆相ＨＰＬＣ
による純度：９９．３％（２９分で０．１％トリフルオ
ロ酢酸中に２４％から６８％までのアセトニトリル，２
２０ｎｍ，２．０ｍｌ／分，５ミクロンのＣ１８カラ
ム）によって測定。エレクトロスプレーＭＳによる同
定：ｍ／ｚ３９０．４［Ｍ＋Ｈ］＋，４１２．４［Ｍ＋
Ｎａ］＋，３８８．２［Ｍ＋Ｈ］−，４３４．２［Ｍ＋
ＨＣＯＯ］−；１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ０．８９
（ｍ，９Ｈ），１．１２−１．３９（ｍ．１４Ｈ），
１．５０−１．６０（ｍ，３Ｈ），３．０１−３．２２
（ｍ，４Ｈ），３．３５（ｄｄ，１Ｈ），４．５３（ｄ
ｄ，１Ｈ），５．９０（ｔ，１Ｈ），７．１９−７．３
２（ｍ，５Ｈ），７．８３（ｄ，１Ｈ）。
【００１９】結論：得られた生成物の純度及び同定は、
本発明の方法を使用したとき、余剰の（活性化）カルボ
キシル成分が完全に除去されており挿入ペプチド配列が
全く形成されなかったことを証明する。
本発明の方法を使用したとき、余剰の（活性化）カルボ
キシル成分が完全に除去されており挿入ペプチド配列が
全く形成されなかったことを証明する。
─────────────────────────────────────────────────────
フロントページの続き
(72)発明者 パウルス・ベルナルドウス・ウイルヘルム
ス・テン・コルテナール
オランダ国、5340・ベー・ハー・オツス、
ペー・オー・ボツクス・20、デイオシン
ス・ベー・フエー
Ｆターム(参考） 4H045 AA20 BA11 EA60 FA20 FA31
FA44 FA58 FA61 HA02
Claims (14)
- 【請求項１】 過剰量の活性化カルボキシル成分を使用
してアミノ成分をアシル化する段階と、アシル化後に残
留する活性化カルボキシル官能基の除去剤として遊離ア
ニオンまたは潜在アニオンを含むアミンを使用する段階
とを含む１つまたは複数のアミド結合を含む化合物の製
造方法。 - 【請求項２】 潜在アニオンを含むアミンを除去剤とし
て使用することを特徴とする請求項１に記載の方法。 - 【請求項３】 除去用アミン中の潜在アニオンが、伸長
中のペプチドに結合したいかなる永久保護基の存在下で
も選択的に除去できる一時保護基を有していることを特
徴とする請求項１に記載の方法。 - 【請求項４】 除去用アミン中の潜在アニオンが、伸長
中のペプチドのＮ末端に存在する一時保護基の置換活性
と同様の置換活性を示す一時保護基を有していることを
特徴とする請求項１から３のいずれか一項に記載の方
法。 - 【請求項５】 一時保護基が水素化分解的に除去可能な
基であり、永久保護基がアシドリシス的に除去可能な基
であることを特徴とする請求項３または４に記載の方
法。 - 【請求項６】 一時保護基がベンジル型の基であること
を特徴とする請求項５に記載の方法。 - 【請求項７】 除去剤が遊離アニオンまたは潜在アニオ
ンを含む第一級アミンであることを特徴とする請求項１
から６のいずれか一項に記載の方法。 - 【請求項８】 第一級アミンがＣ末端で保護されたアミ
ノ酸誘導体であることを特徴とする請求項７に記載の方
法。 - 【請求項９】 アミノ酸がβ−アラニンまたはその誘導
体であることを特徴とする請求項８に記載の方法。 - 【請求項１０】 除去剤がベンジルβ−アラニネートま
たはその塩であることを特徴とする請求項１から９のい
ずれか一項に記載の方法。 - 【請求項１１】 遊離アニオンまたは潜在アニオンを含
むアミンに代えて遊離アニオンまたは潜在アニオンを含
むチオールを除去剤として使用することを特徴とする請
求項１から６のいずれか一項に記載の方法。 - 【請求項１２】 溶液中で処理することを特徴とする請
求項１から１１のいずれか一項に記載の方法。 - 【請求項１３】 ペプチドを製造することを特徴とする
請求項１から１２のいずれか一項に記載の方法。 - 【請求項１４】 請求項１から１３のいずれか一項に記
載の方法から成る方法によって製造されることを特徴と
する１つまたは複数のアミド結合を含む化合物。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| EP01202751.2 | 2001-07-19 | ||
| EP01202751 | 2001-07-19 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2003073396A true JP2003073396A (ja) | 2003-03-12 |
| JP3579038B2 JP3579038B2 (ja) | 2004-10-20 |
Family
ID=8180655
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2002197549A Expired - Lifetime JP3579038B2 (ja) | 2001-07-19 | 2002-07-05 | ペプチドの製造方法 |
Country Status (25)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US6864357B2 (ja) |
| EP (1) | EP1277761B1 (ja) |
| JP (1) | JP3579038B2 (ja) |
| KR (1) | KR100869520B1 (ja) |
| CN (1) | CN1254482C (ja) |
| AR (1) | AR035258A1 (ja) |
| AT (1) | ATE531724T1 (ja) |
| AU (1) | AU2002300166C1 (ja) |
| BR (1) | BRPI0202779B1 (ja) |
| CA (1) | CA2394216C (ja) |
| DK (1) | DK1277761T3 (ja) |
| EC (1) | ECSP024292A (ja) |
| ES (1) | ES2374389T3 (ja) |
| HK (1) | HK1050905A1 (ja) |
| HR (1) | HRP20020608A2 (ja) |
| HU (1) | HUP0202370A2 (ja) |
| IL (1) | IL150600A (ja) |
| MX (1) | MXPA02006997A (ja) |
| NO (1) | NO326377B1 (ja) |
| PE (1) | PE20030215A1 (ja) |
| PL (1) | PL355126A1 (ja) |
| RU (1) | RU2242457C2 (ja) |
| SG (1) | SG120874A1 (ja) |
| TW (1) | TWI243826B (ja) |
| ZA (1) | ZA200205408B (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2007099656A1 (ja) * | 2006-03-01 | 2007-09-07 | Kaneka Corporation | ペプチドの製造方法 |
| WO2021192488A1 (ja) * | 2020-03-27 | 2021-09-30 | 株式会社カネカ | アミド結合含有化合物の製造方法 |
Families Citing this family (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| TWI247012B (en) * | 2001-07-19 | 2006-01-11 | Akzo Nobel Nv | Process for rapid solution synthesis of peptides |
| US7393277B2 (en) * | 2003-08-25 | 2008-07-01 | Igt | Horseshoe payline system and games using that system |
| EP1790656A1 (en) * | 2005-11-25 | 2007-05-30 | Nanokem S.A. | Solution-phase synthesis of leuprolide |
| DE602007005349D1 (de) * | 2006-01-17 | 2010-04-29 | Organon Nv | SELEKTIVE ENZYMATISCHE HYDROLYSE VON C-TERMINALEN tert-BUTYL-PEPTIDESTERN |
| JP4684124B2 (ja) * | 2006-02-16 | 2011-05-18 | 富士通株式会社 | 移動局装置及び同装置における送信電力制御方法 |
| US7601062B2 (en) * | 2006-11-06 | 2009-10-13 | Igt | Gaming device and method including moving paylines |
| US8124372B2 (en) * | 2007-06-25 | 2012-02-28 | N.V. Organon | Selective enzymatic amidation of C-terminal esters or acids of peptides |
| EP2755690B1 (en) | 2011-08-04 | 2020-04-01 | Merck Sharp & Dohme B.V. | Kisspeptide-pentasaccharide conjugates |
| US9177447B2 (en) | 2012-09-25 | 2015-11-03 | Igt | Gaming system and method for providing a symbol matrix with a moveable symbol display window |
| ES2700973T3 (es) * | 2014-02-14 | 2019-02-20 | Corden Pharma Int Gmbh | Proceso sin base para la preparación de compuestos intermedios de cetona que se pueden usar para fabricar nebivolol |
Family Cites Families (14)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5221754A (en) * | 1989-06-09 | 1993-06-22 | Research Corporation Technologies, Inc. | Reagents for rapid peptide synthesis |
| US5101059A (en) * | 1989-12-05 | 1992-03-31 | Research Corporation Technologies, Inc. | Amino acid protecting groups |
| US5516892A (en) * | 1992-12-28 | 1996-05-14 | Indiana University Foundation | Polymer-bound mixed carboxylic anhdrides as a stable form of activated carboxylic acids |
| US6310180B1 (en) * | 1993-06-21 | 2001-10-30 | Vanderbilt University | Method for synthesis of proteins |
| US5516639A (en) * | 1993-07-22 | 1996-05-14 | Mayo Foundation For Medical Education And Research | Antibodies specific for human prostate glandular kallkrein |
| US5849954A (en) * | 1996-01-18 | 1998-12-15 | Research Corporation Technologies, Inc. | Method of peptide synthesis |
| CA2251700A1 (en) * | 1996-05-03 | 1997-11-13 | Warner-Lambert Company | Rapid purification by polymer supported quench |
| US6121488A (en) * | 1997-09-24 | 2000-09-19 | Warner-Lambert Company | Quenching reagents for solution phase synthesis |
| JPH11217397A (ja) * | 1997-11-27 | 1999-08-10 | Saburo Aimoto | ペプチドチオールエステルの製造方法 |
| FR2780061B1 (fr) * | 1998-06-22 | 2001-09-07 | Rhone Poulenc Rorer Sa | Nouveau procede de preparation de derives de cyclosporine |
| WO2000071567A2 (en) * | 1999-05-06 | 2000-11-30 | Human Genome Sciences, Inc. | Fibroblast growth factor 13 |
| WO2000071569A1 (en) * | 1999-05-26 | 2000-11-30 | Abbott Laboratories | Minimal isolation peptide synthesis process using ion-exchange resins as scavenging agents |
| US20020127219A1 (en) * | 1999-12-30 | 2002-09-12 | Okkels Jens Sigurd | Lysosomal enzymes and lysosomal enzyme activators |
| WO2002006306A2 (en) * | 2000-07-19 | 2002-01-24 | Pharmacia & Upjohn Company | SUBSTRATES AND ASSAYS FOR β-SECRETASE ACTIVITY |
-
2002
- 2002-07-04 IL IL15060002A patent/IL150600A/xx unknown
- 2002-07-04 TW TW091114833A patent/TWI243826B/zh active
- 2002-07-05 JP JP2002197549A patent/JP3579038B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 2002-07-05 ZA ZA200205408A patent/ZA200205408B/xx unknown
- 2002-07-15 EP EP02077875A patent/EP1277761B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2002-07-15 SG SG200204299A patent/SG120874A1/en unknown
- 2002-07-15 AT AT02077875T patent/ATE531724T1/de active
- 2002-07-15 DK DK02077875.9T patent/DK1277761T3/da active
- 2002-07-15 ES ES02077875T patent/ES2374389T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2002-07-17 MX MXPA02006997A patent/MXPA02006997A/es active IP Right Grant
- 2002-07-18 HU HU0202370A patent/HUP0202370A2/hu unknown
- 2002-07-18 CN CNB021261903A patent/CN1254482C/zh not_active Expired - Lifetime
- 2002-07-18 RU RU2002119631/04A patent/RU2242457C2/ru not_active IP Right Cessation
- 2002-07-18 PE PE2002000640A patent/PE20030215A1/es not_active Application Discontinuation
- 2002-07-18 AR ARP020102686A patent/AR035258A1/es active IP Right Grant
- 2002-07-18 CA CA002394216A patent/CA2394216C/en not_active Expired - Lifetime
- 2002-07-18 BR BRPI0202779A patent/BRPI0202779B1/pt active IP Right Grant
- 2002-07-18 NO NO20023445A patent/NO326377B1/no not_active IP Right Cessation
- 2002-07-18 KR KR1020020041897A patent/KR100869520B1/ko not_active IP Right Cessation
- 2002-07-18 AU AU2002300166A patent/AU2002300166C1/en not_active Expired
- 2002-07-19 EC EC2002004292A patent/ECSP024292A/es unknown
- 2002-07-19 PL PL02355126A patent/PL355126A1/xx not_active IP Right Cessation
- 2002-07-19 US US10/199,785 patent/US6864357B2/en not_active Expired - Lifetime
- 2002-07-19 HR HR20020608A patent/HRP20020608A2/hr not_active Application Discontinuation
-
2003
- 2003-04-29 HK HK03103038.5A patent/HK1050905A1/xx not_active IP Right Cessation
-
2004
- 2004-12-14 US US11/012,439 patent/US20050101764A1/en not_active Abandoned
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2007099656A1 (ja) * | 2006-03-01 | 2007-09-07 | Kaneka Corporation | ペプチドの製造方法 |
| US8716439B2 (en) | 2006-03-01 | 2014-05-06 | Kaneka Corporation | Method of producing peptide |
| US9346850B2 (en) | 2006-03-01 | 2016-05-24 | Kaneka Corporation | Method of producing peptide |
| WO2021192488A1 (ja) * | 2020-03-27 | 2021-09-30 | 株式会社カネカ | アミド結合含有化合物の製造方法 |
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US6255285B1 (en) | Phenethylamine derivatives | |
| JP4142907B2 (ja) | ペプチドの高速溶液合成方法 | |
| JP2003073396A (ja) | ペプチドの製造方法 | |
| JPH01308297A (ja) | テトラペプチド | |
| JP3296434B2 (ja) | 保護されたアミノ酸構成単位、生産と使用 | |
| JP3436559B2 (ja) | ペプチドの合成方法及び新規な合成中間体 | |
| Li et al. | A facile synthesis of amides from 9-fluorenylmethyl carbamates and acid derivatives | |
| JP4378745B2 (ja) | 新規炭酸エステルおよびこれを用いたアミド化反応 | |
| AU2002300066B2 (en) | Process for Rapid Solution Synthesis of Peptides | |
| JPH06145195A (ja) | ペプチド合成における副反応防止法 | |
| NZ520268A (en) | Process for the preparation of peptides |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20031202 |
|
| A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20040113 |
|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20040408 |
|
| A911 | Transfer to examiner for re-examination before appeal (zenchi) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A911 Effective date: 20040421 |
|
| TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
| A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20040622 |
|
| A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20040714 |
|
| R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 3579038 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
| S111 | Request for change of ownership or part of ownership |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R313113 |
|
| R350 | Written notification of registration of transfer |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R350 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20080723 Year of fee payment: 4 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20090723 Year of fee payment: 5 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20100723 Year of fee payment: 6 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20110723 Year of fee payment: 7 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20110723 Year of fee payment: 7 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20120723 Year of fee payment: 8 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20120723 Year of fee payment: 8 |
|
| S111 | Request for change of ownership or part of ownership |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R313111 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20120723 Year of fee payment: 8 |
|
| R371 | Transfer withdrawn |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R371 |
|
| S111 | Request for change of ownership or part of ownership |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R313111 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20120723 Year of fee payment: 8 |
|
| R350 | Written notification of registration of transfer |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R350 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20120723 Year of fee payment: 8 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20130723 Year of fee payment: 9 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| S111 | Request for change of ownership or part of ownership |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R313111 |
|
| R350 | Written notification of registration of transfer |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R350 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| EXPY | Cancellation because of completion of term |