KR100869520B1

KR100869520B1 - 펩티드 제조 방법

Info

Publication number: KR100869520B1
Application number: KR1020020041897A
Authority: KR
Inventors: 에겐이보프란치; 텐코르테나르파울루스베르나르두스빌헬무스
Original assignee: 엔.브이.오가논
Priority date: 2001-07-19
Filing date: 2002-07-18
Publication date: 2008-11-19
Also published as: CA2394216A1; JP2003073396A; HUP0202370A2; NO20023445L; DK1277761T3; JP3579038B2; RU2242457C2; IL150600A0; CN1398875A; KR20030009187A; CN1254482C; ZA200205408B; MXPA02006997A; HK1050905A1; ES2374389T3; US20050101764A1; SG120874A1; ATE531724T1; HRP20020608A2; US20030018163A1

Abstract

본 발명은 과량의 활성화된 카르복실 성분을 이용하여 아미노 성분을 아실화켜 펩티드를 제조하는 방법에 관한 것인데, 이때 아실화후 유리 음이온 또는 잠재 음이온을 포함하는 아민은 잔류하는 활성화된 카르복실 작용기의 스캐빈져로서 사용된다. 본 발명의 방법은 올리고펩티드 및 폴리펩티드의 제조에 유용하며, 더 일반적으로는 하나 이상의 아미드 결합을 함유하는 화합물의 제조에 유용하다.

Description

펩티드 제조 방법{PROCESS FOR THE PREPARATION OF PEPTIDES}

본 발명은 하나 이상의 아미드 결합을 함유하는 화합물을 제조하기 위한 신규한 범용의 방법, 특히 용액 내에서 수행되는 방법에 관한 것이다.

펩티드는 용액내 또는 고형 지지체 상에서 합성된다. 상기 두가지 종류의 방법에서, 커플링 단계 및 탈보호 단계는 반복적으로 교대로 수행되며, 그 사이에 간헐적인 정제 단계를 수행할 수 있다. 과량의 활성화된 카르복실 성분은 각각의 커플링 단계에서 바람직하게 사용되어 아미노 성분에 대한 정량적인 커플링을 보장하며, 따라서 최종 생성물내 결실 서열의 출현을 피할 수 있다. 고형상 펩티드 합성에서, 잔류하는 활성화된 카르복실 성분은 일반적으로 각각의 커플링 단계의 말미에 여과에 의해 제거된다. 용액 상 합성에서, 일반적으로 추정되는 사항은 잔류하는 활성화된 카르복실 성분은 파괴되며, 간헐적인 수성 작업중에 제거된다. 그러나, 삽입 펩티드 서열은 종종 용액상 합성에서 최종 펩티드의 불순물로서 조우하게 되는데, 그 이유는 후속적으로 탈보호 단계와 연계되는 커플링 단계후에 잔류하는 (활성화된) 카르복실 성분의 불완전한 제거 때문이다. 이러한 부반응의 출현을 피 하기 위해, 커플링 단계 직후에 스캐빈징 단계를 수행하여 잔류하는 활성화된 카르복실 작용기를 스캐빈징(불활성화)시킬 수 있다. 아민은 일반적으로 스캐빈져로서 사용된다. 스캐빈져로서 폴리아민을 이용하는 것은 그들의 극성에 따라 수성상, 바람직하게는 산성 상으로 활성적으로 추출될 수 있는 스캐빈징된 화합물을 유도한다[참조: 예를 들어, Kisfaludy, L. 등, Tetrahedron Lett. 19, 1785-1786 (1974)]. 이 추출은 일반적으로 탈보호 단계 이전에 수행하여 수성 상내로 성장하는 펩티드가 소실되는 것을 방지한다. 그러나, 상기 방법은 많은 경우 불완전한 간헐적인 정제를 초래하는 것을 밝혀졌는데, 그 이유는 스캐빈징된 화합물의 소수성때문이며; 카르복실 성분의 아미노 아실 부분의 근원적인 소수성은 여전히 존재하는 아미노-보호기에 의해 증강된다. 따라서, 수성 추출은 완전히 효율적인 것은 아니다.

최근, 문헌[참조: Carpino, L.A. 등, J. Org. Chem. 64: 4324-4338 (1999)]을 통해 개선된 스캐빈징 방법이 소개되었다. 스캐빈져로서 폴리아민을 사용하는 것 이외에 아미노-보호기인 1,1-디옥소벤조[b]-티오펜-2-일메톡시카르보닐(Bsmoc)을 상기 방법에 적용하였다. 상기 Bsmoc 작용기는 염기에 대해 매우 높을 불안정성을 나타낸다. 그 결과, 잔류하는 활성화된 카르복실산 작용기는 스캐빈징되고, Bsmoc 작용기는 폴리아민을 이용하는 하나의 동일한 단계에서 제거된다.

본 발명의 방법은 펩티드의 제법을 제공하는데, 이때 과량의 활성화된 카르복실 성분을 사용하여 아미노 성분을 아실화하고, 아실화후, 유리 음이온 또는 잠 재 음이온(즉, 탈보호시 형성 음이온)을 포함하는 아민은 잔류하는 활성화된 카르복실 작용기의 스캐빈져로서 사용된다. 이 신규한 방법은 필요적으로 활성화된 카르복실 성분의 N-말단에서 보호기의 임의 선택을 가능하게 하는데, 그 이유는 카프리노법(Caprino process)과는 대조적으로, 이의 탈보호는 필수적으로 과량의 활성화된 카르복실 작용기의 스캐빈징 조건과 동일한 조건 하에서 일어나지는 않기 때문이다. 또한, 본 발명의 방법은 폴리아민이 스캐빈져로서 사용되는 다른 기존의 방법에서 조우하게 되는 소수성 문제를 일으키지 않고 잔류하는 활성화된 카르복실 성분의 매우 효율적인 제거를 가능하게 한다. 본 발명의 방법은 용액 내에서 수행하는 것이 바람직하다. 그러나, 본 발명의 방법은 고체 상 펩티드 합성에 적용할 수도 있다. 또한, 본 발명의 방법은 하나 이상의 아미드 결합을 함유하는 다른 화합물의 제조에도 적합하다.

바람직한 구체예에서, 잠재 음이온을 포함하는 아민이 스캐빈져로서 사용된다. 스캐빈징 아민에서 잠재 음이온은 성장하는 펩티드에 부착된 임의의 영속적인 보호기의 존재 하에서 선택적으로 제거될 수 있는 일시적인 보호기를 보유한다. 특히 바람직한 구체예에서, 스캐빈징 아민내 잠재 음이온의 보호기는 성장하는 펩티드의 N-말단에 존재하는 일시적인 보호기의 불안정성과 유사한 불안정성을 나타낸다. 이는 음이온을 산출하는 스캐빈져의 탈보호와 성장하는 펩티드의 N-말단 탈보호가 단일 단계에서 수행되는 것을 가능하게 한다. 본 발명의 방법은, 성장하는 펩티드의 N-말단 및 필요에 따라 스캐빈져 내에 존재하는 일시적인 보호기는 수소분해적으로 제거될 수 있는 기인 반면, 영속적인 보호기는 산분해적으로 제거될 수 있는 보호기인 것이 특히 바람직하다. 이러한 일시적인 보호기는 벤질형인 것이 바람직한데, 예를 들어 (치환된) 벤질 및 벤질옥시카르보닐기이다. 바람직한 스캐빈져는 유리 음이온 또는 잠재 음이온을 포함하는 일차 아민이며, 구체적으로 C 말단 보호된 아미노산 유도체이다. 카르복실레이트 이외에, 스캐빈징 아민은 다른 음이온 작용기, 예를 들어 설포네이트, 설페이트, 포스포네이트, 포스페이트 또는 페놀레이트(이들로 제한되는 것은 아님)를 포함할 수 있다. 스캐빈져로 사용하기에 매우 바람직한 아미노산은 β-알라닌 또는 이의 유도체(예를 들어, 에스테르 또는 실릴 에스테르 유도체)이다. 가장 바람직한 스캐빈져는 벤질 β-알라니네이트 또는 이의 염이다.

또한, 유리 또는 잠재 음이온을 포함하는 티올을 본 발명의 방법에 따라 유리 음이온 또는 잠재 음이온을 포함하는 아민 대신에 사용할 수 있다.

스캐빈져는 스캐빈징할 필요가 있는 잔류하는 활성 성분에 비해 2배 내지 6배 몰 과량으로 사용하는 것이 바람직하다.

본 발명에 따른 스캐빈져의 이용은 스캐빈징된 친수성 화합물의 생성을 초래하는데, 이는 탈보호 단계 이후에 염기성 수성 상내로 활성적으로 추출될 수 있다: 탈호보(적용가능하다면)시, 친수성은 스캐빈징된 화학종 내에 유리 아미노 작용기 및 유리 카르복실 작용기의 존재에 의해 증강된다. 따라서, 본 발명의 방법은 매우 효과적이면서 간헐적인 정제로 귀결되는데, 그 이유는 스캐빈징된 친수성 화합물을 활성적으로 추출할 수 있는 가능성 때문이다. 또한, 활성화되지 않으며, 일시적인 보호기가 탈보호중 제거되는, 존재할 수 있는 과량의 카르복실 성분은 반응 혼합물로부터 동시에 추출된다.

본 발명의 신규한 방법은 올리고펩티드 및 폴리펩티드의 제조에 편리하게 사용할 수 있으며, 더 일반적으로는 하나 이상의 아미드 결합을 함유하는 화합물의 제조에 사용할 수 있다.

본 발명에 따른 적합한 방법은 아미노 성분에 과량의 카르복실산을 커플링시키는 것인데, 이때 카르복실 작용기는 커플링 시약 및 필요에 따라 첨가제를 이용하여 그 위치에서 예비활성화시키거나 활성화시킨다. 커플링 단계 후, 잔류하는 활성화된 카르복실 작용기는 반응 혼합물에 스캐빈져를 첨가함으로써 스캐빈징시킨다. 이어서, 일시적인 보호기는 당업계에 공지된 적합한 방법을 이용하여 제거하고, 이어서 염기성 수성 추출에 의해 스캐빈징된 화합물을 제거한다. 동시에, 활성화되지 않으며 일시적인 보호기가 탈보호중에 제거되는, 존재할 수 있는 과량의 카르복실 성분은 반응 혼합물로부터 추출한다.

본원에 사용한 용어 '아미노 성분'은 유리 아미노 작용기를 포함하는 분자를 의미한다. 구체적으로, 아미노 성분은 유리 아미노 작용기를 보유하고, 기타 작용기는 목적하는 커플링 반응을 방해하지 않는 방식으로 보호된 임의의 아민, 이미노산 또는 올리고펩티드일 수 있다. 적용된 아미노산 또는 올리고펩티드의 C-말단 작용기는 치한된 또는 치환되지않은 아미드 또는 에스테르로서 보호될 수 있는데; 상기 에스테르의 예로는 메틸, 에틸, t-부틸, 벤질, 펜아실, 3-(3-메틸)펜틸(Mpe), 2-(2-페닐)프로필)(Pp), 2-클로로트리틸(Clt), 디페닐(4-피리딜)메틸(PyBzh), 디시클로프로필메틸(Dcpm), 9-플루오레닐메틸(Fm), 알릴(All), 2-(트리메틸실릴)에틸(Tmse), 4-{N-[1-(4,4-디메틸-2,6-디옥소시클로헥실리덴)-3- 메틸부틸]-아미노}벤질(Dmab) 에스테르 및 효소적으로 절단가능한 에스테르[참조: Roeske, R.W. in: 'The Peptides', vol. 3(Gross, E. 및 Meienhofer, J., eds.) Academic Press, New York, pp. 101-136 (1981); Mpe에 대해서는 Karlstorm, A. 및 Unden, A., Tetrahedron Lett. 37, 4343-4246 (1996); Pp에 대해서는 Yue, C. 등, Tetrahedron Lett. 34, 323-326 (1993); Clt에 대해서는 Athanassopoulos, P. 등, Tetrahedron Lett. 36, 5645-5648 (1995); PyBzh에 대해서는 Mergler, M. 등, P154, 2차 국제 펩티드 심포지움 및 17차 미국 펩티드 심포지움 (2001); Dcpm에 대해서는 Carpino, L.A. 등, J. Org. Chem. 60, 7718-7719 (1995); Fm에 대해서는 Al-Obeidi, F. 등, Int. J. Peptide Protein Res. 35, 215-218 (1990); All에 대해서는 Kunz, H. 등, Int. J. Peptide Protein Res. 26, 493-497 (1985); Tmse에 대해서는 Sieber, P., Helv. Chim. Acta 60, 2711-2716 (1977); Dmab에 대해서는 Chan, W.C. 등, J. Chem. Soc., Chem. Commun., 2209-2210 (1995)]를 들 수 있으나, 이로 제한되는 것은 아니다. t-부틸 유형의 작용기 또는 유사한 불안정성의 작용기는 아미노 성분내 기타 작용기의 영속적인 보호를 위해 바람직한데; 이의 예로는 Asp, Glu, Ser, Thr 및 Tyr 측쇄의 보호를 위해서는 t-부틸(^tBu) 형 또는 유사한 불안정성 작용기; Lys 및 Trp 측쇄의 보호를 위해서는 t-부톡시카르보닐(Boc); Asn, Gln 및 His 측쇄의 보호를 위해서는 트리틸(Trt); 및 Arg 측쇄의 보호를 위해서는 2,2,5,7,8-펜타메틸크로만-6-설포닐(Pmc) 또는 2,2,4,6,7-펜타메틸디히드로벤조푸란-5-설포닐(Pbf)[참조: Barany, G. 및 Merrifield, R.B. in: 'The Peptides', vol. 2 (Gross, E. 및 Meienhofer, J., eds.) Academic Press, New York, pp. 1-284 (1980); Trp(Boc)에 대해서는 Franzen, H. 등, J. Chem. Soc., Chem. Commun., 1699-1700 (1984); Asn(Trt) 및 Gln(Trt)에 대해서는 Sieber, P. 및 Riniker, B., Tetrahedron Lett. 32, 739-742 (1991); His(Trt)에 대해서는 Sieber, P. 및 Riniker, B. Tetrahedron Lett. 28, 6031-6034 (1987); Pmc에 대해서는 Ramage, R. 및 Green, J., Tetrahedron Lett. 28, 2287-2290 (1987); Pbf에 대해서는 Carpino, L.A. 등, Tetrahedron Lett. 34, 7829-7832 (1993)]을 들 수 있으나, 이로 제한되는 것은 아니다.

본원에 사용한 용어 '카르복실 성분'은 유리 카르복실 작용기를 포함하는 분자를 의미한다. 구체적으로, 카브록실 성분은 유리 카르복실 작용기를 보유하고, 기타 작용기는 목적하는 커플링 반응을 방해하지 않는 방식으로 보호된 임의의 카르복실산, 아미노산 또는 올리고펩티드일 수 있다. 바람직한 구체예에서, 적용된 아미노산 또는 올리고펩티드의 아미노기는 벤질옥시카르보닐(Z) 작용기에 의해 일시적으로 보호되며; 다른 예로는 Boc, Trt, 플루오렌-9-일메톡시카르보닐(Fmoc), 2-(메틸설포닐)에톡시카르보닐(Msc), 알릴옥시카르보닐(Alloc) 작용기, 아릴설포닐 형 작용기, 예를 들어 오르토-니트로벤젠설포닐(o-NBS) 및 효소적으로 절단가능한 작용기[참조: Geiger, R. 및 Konig, W. in: 'The Peptides', vol. 3(Gross, E. 및 Meienhofer, J., eds.) Academic Press, New York, pp. 1-99 (1981); Alloc에 대해서는 Kunz, H. 및 Unverzagt, C., Angew. Chem. 96, 426-427 (1984); 아릴설포닐에 대해서는 Fukuyama, T. 등, Tetrahedron Lett. 38, 5831-5834 (1997)]를 들 수 있으나, 이로 제한되는 것은 아니다. t-부틸 유형의 작용기 또는 유사한 불안정성 작용기는 아미노 성분을 위해 상기한 바와 같은 카르복실 성분내 기타 작용기의 영속적인 보호를 위해 적합하다. 상기 카르복실 성분은 활성 에스테르로서, 바람직하게는 N-히드록시석신이미드, 벤조트리아졸-1-일, 펜타플루오로페닐 또는 4-니트로페닐 에스테르, 할라이드, N-카르복시안하이드라이드 또는 대칭 안하이드라이드로서 예비활성화될 수 있다. 또는, 상기 카르복실 성분은 커플링 첨가제, 바람직하게는 N-히드록시석신이미드(HONSu), 1-히드록시벤조트리아졸(HOBt), 3-히드록시-4-옥소-3,4-디히드로-1,2,3-벤조트리아진(HOOBt), 1-히드록시-7-아자벤조트리아졸(HOAt) 또는 6-클로로-1-히드록시벤조트리아졸(Cl-HOBt) 및 필요에 따라 3차 아민의 존재 하에서[참조: 'The Peptides', vol. 1(Gross, E. 및 Meienhofer, J., eds.) Academic Press, New York (1979); Li, P. 및 Xu, J.-C., Chin. J. Chem. 18, 456-466 (2000)] 그 위치에서 혼합된 안하이드라이드로서 또는 커플링 시약, 예를 들어 카르보디이미드, 바람직하게는 N,N'-디시클로헥실카르보디이미드(DCC) 또는 1-(3'-디메틸아미노프로필)-3-에틸카르보디이미드 히드로클로라이드(EDC), 우로늄 또는 포스포늄 염을 이용하여 활성화될 수 있다.

일시적인 보호기는 당업계에 공지된 방법으로 제거할 수 있다(상기 참조). Z 작용기는 예를 들어 수소 기체 또는 포르미에이트를 수소 공여체로 사용하는 (표준) 기법을 이용하여 수소가수분해시킴으로써 제거할 수 있다. 이 과정중, 모든 벤질형 보호기는 제거되며, t-부틸형 보호기 또는 유사한 불안정성 작용기는 유지된 다. 후자는 당업계에 공지된 방법에 따라 산분해시킴으로써 제거할 수 있다.

당업자는 본원에 사용한 용어 '수성 추출'의 의미를 이해할 수 있을 것이다. 그러나, 염기성 수성 추출은 탄산수소나트륨 또는 탄산나트륨의 수용액을 이용하여 수행하는 것이 바람직하며, 필요에 따라 염화 나트륨 또는 질산 칼륨의 존재 하에서 수행할 수도 있다. 본원에 사용한 용어 '활성 수성 추출'은 아미노 성분이 산성 조건 하에서 양성자화된 형태(암모늄)로 추출되거나, 카르복실 성분이 염기성 조건 하에서 탈양성자화된 형태(카르복실레이트) 추출되는 것을 의미한다.

이하, 본 발명은 후술하는 실시예를 통해 추가 기술한다. 본원에 기재된 실시예를 통해 본 발명을 제한하려는 의도는 없다.

실시예 1

H-Asp(O ^t Bu)-Phe-O ^t Bu

20℃에서 에틸 아세테이트와 디클로로메탄의 혼합물중 H-Phe-O^tBu.HCl 5.52 g의 교반된 현탁액에 Z-Asp-(O^tBu)-OH 7.76 g, 1-히드록시벤조트리아졸 3.24 g, 1-(3'-디메틸아미노프로필)-3-에틸카르보디이미드 히드로클로라이드 4.20 g 및 4-메틸모르폴린 4.62 ml를 첨가하였다. 생성된 용액을 반응이 완료될 때까지 교반한 후, 4-메틸모르폴린 1.21 ml 및 벤질 β-알라니네이트 p-톨루엔설폰네이트염 3.51 g을 첨가하였다. 혼합물은 30분 더 교반하고, 5% Na₂CO₃/10% NaCl, 5% KHSO₄/10% NaCl 및 5% Na₂CO₃/10% NaCl로 추출하였다.

보호된 디펩티드 Z-Asp(O^tBu)-Phe-O^tBu를 함유하는 유기층은 탄소상 팔라듐의 존재 하에서 촉매적 수소분해 반응시켰다. 반응이 완결된 후, 5% Na₂CO₃/10% NaCl을 첨가하고, 생성된 현탁액은 여과하였다. 잔류물은 에틸 아세테이트와 디클로로메탄의 혼합물로 세정하고, 합한 유기 여과물은 5% Na₂CO₃/10% NaCl, 30% NaCl 및 물로 추출하였다. 유기층은 증발 건조하여 정량 수율로 목적하는 디펩티드를 산출하였다. 역상 HPLC(220 nm, 2.0 ml/분, 5 미크론 C₁₈ 컬럼에서 29분 이내에 0.1% 트리플루오로아세트산내 24 내지 68% 아세토니트릴)로 측정한 순도는 98.4%였다. 실체: m/z 393.4 [M+H]⁺(전기분무 MS); ¹H NMR(CDCl₃) δ1.41(s,9H), 1.63(bs,2H), 2.39(dd,1H), 2.79(dd,1H), 3.39(d,2H), 3.65(m,1H), 4.72(m,1H), 7.17-7.32(m,5H), 7.81(d,1H).

실시예 2

H-Leu-Phe-NH-(CH ₂ ) ₇ -CH ₃

20℃에서 에틸 아세테이트내 n-옥틸아민 2.12 ml의 교반 용액에 Z-Phe-OH 4.61 g, 1-히드록시벤조트리아졸 2.08 g, 1-(3'-디메틸아미노프로필)-3-에틸카르보디이미드 히드로클로라이드 2.71 g 및 4-메틸모르폴린 1.55 ml를 첨가하였다. 생성된 현탁액은 반응이 완결될 때까지 교반한 후, 4-메틸모르폴린 0.78 ml 및 벤질 β-알라니네이트 p-톨루엔설포네이트 염 2.26 g을 첨가하였다. 혼합물은 30분 더 교반하고, 5% Na₂CO₃/10% NaCl, 5% KHSO₄/10% NaCl 및 5% Na₂CO ₃/10% NaCl로 추출하였다.

Z-Phe-NH-(CH₂)₇-CH₃를 함유하는 유기층은 1-메틸-2-피롤리디논으로 희석하고, 탄소상 팔라듐의 존재 하에서 수소가수분해 반응을 수행하였다. 반응 완결후, 30% NaCl을 첨가하고, 생성된 현탁액은 여과하였다. 잔류물은 에틸 아세테이트로 세정하고, 합한 유기 여과물은 5% Na₂CO₃/10% NaCl 및 30% NaCl로 추출하였다.

20℃에서 H-Phe-NH-(CH₂)⁷ _-CH₃를 함유하는 유기층에 Z-Leu-OH 4.09 g, 1-히드록시벤조트리아졸 2.08 g, 1-(3'-디메틸아미노프로필)-3-에틸카르보디이미드 히드로클로라이드 2.71 g, 4-메틸모르폴린 1.55 ml 및 1-메틸-2-피롤리디논을 첨가하였다. 생성된 현탁액은 반응이 완결될 때까지 교반한 후, 4-메틸모르폴린 0.78 ml 및 벤질 β-알라니네이트 p-톨루엔설포네이트 염 2.26 g을 첨가하였다. 혼합물은 30분 더 교반하고, 30% NaCl, 5% Na₂CO₃/10% NaCl, 5% KHSO₄/10% NaCl 및 5% Na₂CO₃/10% NaCl로 추출하였다.

Z-Leu-Phe-NH-(CH₂)₇-CH₃를 함유하는 유기층은 1-메틸-2-피롤리디논으로 희석하고, 탄소상 팔라듐의 존재 하에서 촉매적 수소분해 반응시켰다. 반응이 완결된 후, 5% Na₂CO₃/10% NaCl을 첨가하고, 생성된 현탁액은 45℃에서 여과하였다. 잔류물은 에틸 아세테이트로 세정하고, 합한 유기 여과물은 5% Na₂CO₃/10% NaCl, 30% NaCl 및 물로 추출하였다. 유기 층은 증발 건조하여 85%의 수율로 목적하는 생성물을 산출하였다.

역상 HPLC(220 nm, 2.0 ml/분, 5 미크론 C₁₈ 컬럼에서 29분 이내에 0.1% 트리플루오로아세트산내 24 내지 68% 아세토니트릴)로 측정한 순도는 99.3%였다. 실체: m/z 390.4 [M+H]⁺, 412.4[M+Na]⁺, 388.2[M-H]^-, 434.2[M+HCOO]^-(전기분무 MS); ¹H NMR(CDCl₃) δ0.89(m,9H), 1.12-1.39(m,14H), 1.50-1.60(m,3H), 3.01-3.22(m,4H), 3.35(dd,1H), 4.53(dd,1H), 5.90(t,1H), 7.19-7.32(m,5H), 7.83(d,1H).

결론:

얻어진 생성물의 순도 및 실체로부터 확인할 수 있는 바와 같이, 과량의 (활성화된) 카르복실산 화합물은 완전히 제거되었으며, 본 발명의 방법을 이용하여 형성된 삽입 펩티드 서열은 없었다.

본 발명에 따라 유리 음이온 또는 잠재 음이온(즉, 탈보호시 형성 음이온)을 포함하는 아민을 잔류하는 활성화된 카르복실 작용기의 스캐빈져로서 사용하는 신규한 펩디드 제조 방법에 제공되는데, 이 신규한 방법은 필요적으로 활성화된 카르복실 성분의 N-말단에서 보호기의 임의 선택을 가능하게 하며, 폴리아민이 스캐빈져로서 사용되는 다른 기존의 방법에서 조우하게 되는 소수성 문제를 일으키지 않고 잔류하는 활성화된 카르복실 성분의 매우 효율적인 제거를 가능하게 한다. 또 한, 본 발명의 방법은 하나 이상의 아미드 결합을 함유하는 다른 화합물의 제조에도 적합하다.

Claims

과량의 활성화된 카르복실 성분을 이용하여 아미노 성분을 아실화시킴으로써 하나 이상의 아미드 결합을 함유하는 화합물을 제조하는 방법으로서, 상기 아실화후, 탈보호 시 형성 음이온이고 선택적으로 제거될 수 있는 일시적인 탈보호기를 보유하는 잠재 음이온을 포함하는 아민을 잔류하는 활성화된 카르복실 작용기의 스캐빈져로서 사용하고, 탈보호 후 염기성 수성 상 내로 활성적으로 추출될 수 있는 스캐빈징된 친수성 화합물을 생성하는 것인 하나 이상의 아미드 결합을 함유하는 화합물을 제조하는 방법.
삭제
제1항에 있어서, 상기 스캐빈징 아민내 잠재 음이온이, 성장하는 펩티드에 부착된 임의의 영속적인 보호기의 존재 하에서 선택적으로 제거될 수 있는 일시적인 보호기를 보유하는 것인 방법.
제1항 또는 제3항에 있어서, 상기 스캐빈징 아민내 잠재 음이온이 성장하는 펩티드의 N-말단에 존재하는 일시적인 보호기의 불안정성과 유사한 불안정성을 나타내는 일시적인 보호기를 보유하는 것인 방법.
제3항에 있어서, 상기 일시적인 보호기가 수소분해적으로 제거할 수 있는 기인 반면, 상기 영속적인 보호기는 산분해적으로 제거할 수 있는 기인 방법.
제5항에 있어서, 상기 일시적인 보호기가 벤질형인 방법.
제1항 또는 제3항에 있어서, 상기 스캐빈져가 일차 아민인 방법.
제7항에 있어서, 상기 일차 아민이 C-말단 보호된 아미노산 유도체인 방법.
제8항에 있어서, 상기 아미노산이 β-알라닌 또는 이의 유도체인 방법.
제1항 또는 제3항에 있어서, 상기 스캐빈져가 벤질 β-알라니네이트 또는 이의 염인 방법.
제1항 또는 제3항에 있어서, 잠재 음이온을 포함하는 아민 대신에 유리 음이온 또는 잠재 음이온을 포함하는 티올이 스캐빈져로서 사용되는 것인 방법.
제1항 또는 제3항에 있어서, 상기 방법이 용액 내에서 수행되는 것인 방법.
제1항 또는 제3항에 있어서, 펩티드를 제조하는 것인 방법.
삭제