JP2002523435A - アセチルＬ−カルニチンおよびα−リポ酸を含む抗酸化組成物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 特徴的な活性成分としてアセチルＬ-カルニチンおよびα-リポ酸を含む、フリーラジカルにより誘導される種々の変化および病状の予防的および/または治療的処置のための組成物であって、栄養補助食品、糖尿病支持食品または実際薬の形態を取ることができる組成物を開示する。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】 本発明は、環境汚染物質によるフリーラジカルの存在によりもたらされる組織
性疾患;脳または心筋虚血および付随する再潅流の後、フリーラジカルにより誘
導される脳または心筋障害;毒性または糖尿病性神経障害および、グルコース利
用の代謝障害の予防および/または治療のための組成物に関する。 従って該組成物は、該組成物を使用すべき特定の個人に対して該組成物が発揮
することを意図する補助的若しくは予防的作用または、厳密には治療的作用いか
んで、栄養補助食品または実際薬の形態をとり、その作用を発揮することができ
る。

【０００２】 より詳細には本発明は、経口、非経口、直腸、または経皮投与することができ
る組成物であって、 (ａ)任意に少なくとももう一つの「カルニチン」(ここで、「カルニチン」によ
り、Ｌ-カルニチンまたは、プロピオニル-Ｌ-カルニチン、バレリルＬ-カルニチ
ン、イソバレリルＬ-カルニチンから成る群から選択されるアルカノイルＬ-カル
ニチンを意図する)または薬理学上許容されるその塩と組み合わせる、アセチル
Ｌ-カルニチンまたは薬理学上許容されるその塩;および、 (ｂ)α-リポ酸: を組み合わせて含む組成物に関する。

【０００３】 アルカノイルＬ-カルニチン(天然に、至るところに存在する化合物であり、そ
の最大濃度は、とりわけ骨格筋および心筋に見出される)が全身で欠乏すると、
筋肉および機能の欠損に至り、これは、これらの化合物の外来投与により正常ま
で回復し得ることが知られている。 脳レベルおよび末梢神経組織の両方でアセチルＬ-カルニチンの存在が確認さ
れており、その存在は正常の神経伝導に必要である。 カルニチンによるエネルギーの産生は、脂肪酸のミトコンドリア内β-酸化、
ならびに分枝鎖アミノ酸の酸化およびインシュリン活性の調節を経て起こる。 カルニチンの生物活性を特徴付ける目的のために重要なのは、細胞のリン脂質
膜および、赤血球の完全性および変形に対するその安定化効果を示す研究である
。

【０００４】 アセチルＬ-カルニチンは特に、過酸化現象から脳組織を保護する。カルニチ
ンが正常な成長に必要であることが確認されている一方、正常と比較して低いカ
ルニチンレベルが老化の間に認められているのも同様に事実である。 老化に伴う代謝プロセス中、酸化プロセスの増加が、それに伴うフリーラジカ
ルの増加と共に常に認められており、これにより糖尿病障害の発症が促進される
。 ミトコンドリア活性の低下は、細胞の防御力がもはや有効に打ち勝つことので
きない酸化体の増加を導く。

【０００５】 好気性代謝により産生される過酸化物、水酸化物および一重項酸素が増加する
と、マクロ分子(ＤＮＡ、タンパク質および脂質)への損傷に至る可能性があり、
これは、糖尿病を含む、通常老化中に生じる退行性疾患の発症の一因である。老
化と共におこるミトコンドリア活性の低下にはさらに、ミトコンドリア膜構造の
一部を構成し、かつ、特に脂肪酸β酸化プロセスのレベルでミトコンドリア活性
を維持するのに重要な役割を果たすカルジオリピン、ジホスファチル-グリセロ
ール誘導体の低下を伴う。脂肪酸β-酸化プロセスを含むミトコンドリア活性は
、アセチルＬ-カルニチンの投与により再活性化され得、これにより、ミトコン
ドリアにおいて正常のカルジオリピン濃度を回復することも可能となる。

【０００６】 ミトコンドリア活性へのアセチルＬ-カルニチンのポジティブな効果は、ＡＴ
Ｐ産生に関する解糖系の利用を促進するその能力によっても立証される。これら
の効果は神経レベルで特に認められており、アセチルＬ-カルニチンが神経損傷
または慢性神経退化を予防することができることが判明した。 老化進行中の、体内のカルニチン量の低下に加えて、成長因子(ＧＦ-Ｉ)の低
下および、特にＩＧＦ-Ｉ(インシュリン様成長因子)の低下も認められている。 ＩＧＦ-Ｉ、ＩＧＦ-ＩＩおよびリラキシンは、ソマトメジンとも呼ばれるプロ
インシュリンのグループに属するペプチドである。

【０００７】 ＩＧＦは、特に中枢および末梢神経系レベルの両方で、恒常性および栄養活性
を発揮し、これらのペプチドの臨床使用により、糖尿病性神経障害を含む多くの
退行性神経障害において有益な結果が得られている。 老化と、カルニチンおよび成長因子(ＩＧＦ-Ｉを含む)の低下の間に存在する
関連性および、アセチルＬ-カルニチンの外来投与によるこれらの因子のレベル
の回復により、糖尿病性神経障害を含む神経退行性疾患の予防および治療におけ
るそれらの使用の目的のためのカルニチンの重要性が正当化される。

【０００８】 α-リポ酸が、炭水化物代謝およびインシュリン活性に重要な調節機能を果た
すことも立証されている。α-リポ酸は、植物および動物界の両方に天然に広く
分布しており、食物と共に摂取することができる。多くの微生物の成長因子とし
て最初に認識され、次いで多くの動物タンパク質に結合するとして、牛の肝臓に
おいて単離された。それは、フリーラジカル、とりわけ環境汚染物質から生じる
フリーラジカルの重要なスカベンジャーとして作用する。近年、この化合物がグ
ルコース利用およびインシュリン活性の調節にも非常に有用であり、そのため、
糖尿病性神経障害の予防における重要な因子を構成することが示された。

【０００９】 糖尿病性神経障害において増加する脂質過酸化が、α-リポ酸およびそのエナ
ンチオマーの一つの投与により、脳レベルおよび坐骨神経または目のレンズのレ
ベルの両方でコントロールおよび減じられ得ることが立証されている。さらに、
α-リポ酸は、高血糖により活性化されるアルドースレダクターゼを阻害し、そ
れゆえ、α-リポ酸は糖尿病合併症において重要な治療的役割をも果たし得る。 α-リポ酸は、筋肉のインシュリン誘導性グルコース利用を高め、および、糖
尿病患者において、グルコースへのインシュリンの効果に対する抵抗性を減じる
。α-リポ酸の抗酸化効果に関連して、さらに、虚血により誘導される脳障害に
対するその神経保護能力および、パーキンソン病およびエイズにおけるその仮定
される治療的役割がある。

【００１０】 α-リポ酸の抗酸化効力は、直接的であるか、または、グルタチオンおよびア
スコルビン酸濃度の回復により、間接的であるかのいずれかであり得る。 α-リポ酸の炭水化物代謝における活性は本質的に、ピルビン酸および他のα-
ケト酸の酸化的デカルボヒドロキシレーションにおけるおよび、アセテート経由
の、ＡＴＰの形成に至るトリカルボン酸サイクルの活性化における、補酵素とし
て作用するその能力によるが、この化合物が糖尿病障害の予防に関して有する多
くの好ましい生物効果を説明するためには、α-リポ酸がその保護作用を発揮す
る他の経路も考慮しておかねばならない。 これらの中で、ジヒドロリポ酸への還元後、反応性酸素種(ＲＯＳ)による核転
写因子(ＮＦ-ｋＢ)の活性化を阻害し、次いで神経毒および細胞毒性因子の関連
カスケードを阻害するその能力に存在するメカニズムを特に考慮しておくべきで
ある。

【００１１】 糖尿病に伴う多くの合併症、例えば神経障害および目の白内障にはＲＯＳが介
在するため、核転写因子の活性化の阻害が、α-リポ酸が糖尿病に関連する疾患
の予防に介在し得るメカニズムの構成要素である可能性がある。さらに、糖尿病
患者において、α-リポ酸の濃度は正常値よりも低く、α-リポ酸の投与によりこ
れらのレベルが正常まで回復され得ることも考慮しておくべきである。それはつ
まり、細胞膜へのグルコースの輸送におけるインシュリンの効果に対して付加的
な効果を有する。

【００１２】 高濃度のグルコースへ慢性的に暴露されると、グルコースとタンパク質の間の
非酵素反応および、グリコシル化の最終産物(進行性グリコシル化最終産物＝Ａ
ＧＥｓ)として知られる高反応性タンパク質の自発的形成に至る可能性がある。
これらの中で、グルコースとアルブミン、グルコースとコラーゲンおよびグルコ
ースとヘモグロビンのグリコシル化産物が最もよく研究されているものである。
ＡＧＥが組織および細胞で生じさせる影響は、神経、筋肉および内皮レベルにお
ける糖尿病疾患の大部分に関与する要因である。 ＡＧＥは、実際、細胞外マトリックスの成分の合成を高め、内皮浸透性および
、免疫複合体およびサイトカインの形成を増し、神経および網膜の虚血、ミエリ
ンの蓄積およびミエリンの変性を引き起こす。糖尿病の経過中および老化過程の
両方において多数のこれらの化合物が形成される。

【００１３】 α-リポ酸のこの反応を阻害する能力同様、ＡＧＥとＮＦ-ＩＫＢの活性化の間
の関連性が近年立証された。 フリーラジカルと共に、高濃度のグルコースによるタンパク質の糖化およびグ
ルコース酸化はそれゆえ、糖尿病に伴う組織異常-特に神経組織異常の原因であ
るもう一つの原因である可能性がある。α-リポ酸の存在によりさらに、グリコ
シル化またはグルコース酸化反応の進行が阻害または制限される。 α-リポ酸のもう一つの保護効果は、炎症剤に接触させた脾臓細胞でも観察さ
れている。

【００１４】 白内障の予防および治療におけるα-リポ酸の作用に関して、これは、前記の
他のメカニズムのみならず、高血糖によるグルコースのビタミンＣ輸送との競合
により低下した目のビタミンＣ濃度を回復させることによるものでもあり得る。 ビタミンＥの不足およびグルタチオン濃度の増加に加えて、α-リポ酸の、神
経障害の発症に対する保護作用が臨床研究で確認されている。神経障害の低下に
、マロニルアルデヒド濃度の低下により検出される過酸化反応産物の低下が伴う
ことも認められている。他のマルチセンター研究により、糖尿病性神経障害の治
療においてその作用が確証されている。

【００１５】 驚くべきことに、その特徴成分として (ａ)アセチルＬ-カルニチンまたはその薬理学上許容される塩、および、 (ｂ)α-リポ酸 の組み合わせを含む組成物が、環境汚染物質によるフリーラジカルの存在により
もたらされる組織障害;脳または心筋虚血の後および、再潅流の結果として、フ
リーラジカルにより誘導される脳または心筋障害;毒性または糖尿病性神経障害
および、グルコース利用における代謝障害の予防および/または治療に極めて有
効であることが見出された。

【００１６】 好適には、成分(ａ)が、Ｌ-カルニチン、プロピオニルＬ-カルニチン、バレリ
ルＬ-カルニチンおよびイソバレリルＬ-カルニチンから成る群から選択される「
カルニチン」または、薬理学的に許容されるその塩をさらに含んでいてもよいこ
とも見出された。 (ａ):(ｂ)の重量対重量比は、１００:１〜１:１０である。

【００１７】毒性試験 カルニチンもα-リポ酸も、その非常に限られた毒性および良好な耐性が周知
である。カルニチンおよびα-リポ酸のこれらの好ましい毒性を、これらの成分
を組み合わせて、およびそれらを高投与量でラットとマウスの両方に投与するこ
とにより確認した。これらの動物において、実際に、２５０ｍｇ/ｋｇ以上のア
セチルＬ-カルニチンまたは１００ｍｇ/ｋｇのα-リポ酸の非経口投与、ならび
に２５０ｍｇ/ｋｇのカルニチン混合物(各々１:１の重量比で組み合わせたアセ
チルＬ-カルニチン、プロピオニルＬ-カルニチン、イソバレリルＬ-カルニチン)
および５００ｍｇ/ｋｇ以上のアセチルＬ-カルニチン、５００ｍｇ/ｋｇのカル
ニチン混合物および２００ｍｇ/ｋｇのα-リポ酸の経口投与を、こうして処置し
た動物のいずれも死亡させないでできることが判明した。 ラットのグループとマウスのグループの両方において、２００ｍｇ/ｋｇのア
セチルＬ-カルニチンまたは２００ｍｇ/ｋｇのカルニチン混合物の、１００ｍｇ
/ｋｇのα-リポ酸との３０連日の食餌による長期投与も良好に耐性であることが
分かり、毒性の徴候が全く認められなかった。これらの動物で行った体重増加試
験も種々の血液化学試験も両方共、処置の終わりに動物を屠殺した後、主要器官
で行った組織病理試験の知見同様、正常値を示した。

【００１８】 実験的脳虚血における神経保護活性試験 脳虚血による障害が、フリーラジカルおよび一酸化二窒素の産生に関連してい
ることおよび、カルニチンとα-リポ酸の両方により、フリーラジカルの毒性作
用に対する保護が提供されるという事実を考慮して、これらの試験では、Schark
ey(Scharkey, Y., Nature 371-336, 1994)に記載の方法に従い、麻酔したラット
に、定位的に置いたマイクロカニューレを用いて梨型皮質(piriform cortex)に
中脳動脈のレベルでエンドセリン-１(３ｎｌ中１２０ｐｍｏｌ)を３分間注射す
ることにより中脳動脈（ＭＣＡ）を閉塞することにより脳虚血を誘導した。動脈
の閉塞を誘導し、生じた虚血はこの処置の３日後、パラホルムアルデヒド(ＰＢ
Ｓ中４％)の溶液による心臓の潅流(transcardiac perfusion)により確認するこ
とができる。

【００１９】 脳を取り出した後、それを１０％スクロース含有固定液に入れ、クレシルバイ
オレットで固定した凍結切片(２０ｎｍ)を光学顕微鏡下で試験した。アセチルＬ
-カルニチン(５０ｍｇ/ｋｇ)またはカルニチン混合物(５０ｍｇ/ｋｇのアセチル
Ｌ-カルニチン、プロピオニルＬ-カルニチンおよびイソバレリルＬ-カルニチン
の各々１:１重量比の混合物)またはα-リポ酸(２０ｍｇ/ｋｇ)を、エンドセリン
注射の５分後に静脈内投与した。 梗塞領域の体積を、Park(Park C.K., Anns. Neurol., 20-150, 1989)により開
示される方法に従い計測した。これらの試験の結果により、アセチルＬ-カルニ
チン、カルニチン混合物およびリポ酸がすべて、虚血領域を減らすことができる
が、驚くべきことに、最大かつ最も顕著な結果は、これらの生成物の組み合わせ
、および特に、アセチルＬ-カルニチンとα-リポ酸の組み合わせを用いて得られ
得ることが立証される。

【００２０】

【表１】 ＭＣＡの閉塞による虚血の程度(体積ｍｍ^３)(コントロールと比較した、体積の
低下パーセント)

【００２１】 実験的糖尿病性高血糖試験 タンパク質グリコシル化生成物(ＡＧＥｓ)の形成によるものであろうと、代謝 性低酸素症によるものであろうと、高血糖は、糖尿病および、特に糖尿病性神経
障害の原因である基本的要因の一つである。 血清グルコースを制御することはそれゆえ、糖尿病に関連する疾患を予防する
最も重要な方法の一つである。これらの試験では、実験的糖尿病をラットに誘導
し、次いで、誘導した高血糖が、アセチルＬ-カルニチンまたはカルニチン混合
物、またはα-リポ酸、またはこれらの生成物の組み合わせの投与により減じら
れ得るかどうかを確認するために試験を行った。ラットにアロキサン(１００ｍ
ｇ/ｋｇ)を皮下注射することにより高血糖を誘導し、アロキサン注射の７日後に
４５０ｍｇ/ｄｌを越す血清グルコースレベルを示すラットを高血糖であるとみ
なした。

【００２２】 試験物質を用いた処置を経口で３週間施した。この期間の終わりに、血清グル
コースを、ラットの種々のグループ、高血糖ラットと処置ラットの両方で測定し
た。 得られた結果により、カルニチンおよびα-リポ酸の両方が、単独では高い初
期血清グルコース値をわずかに下げ得るのみであるが、最も顕著な結果は、α-
リポ酸と組み合わせたカルニチンの投与後に現れることが立証される。この場合
、特にアセチルＬ-カルニチンおよびα-リポ酸の組み合わせを用いた場合に２つ
の生成物の顕著な共同活性が見られ、血清グルコース値をほとんど正常まで下げ
ることができる。

【００２３】

【表２】 ラットにおける実験的高血糖試験 アセチルＬ-カルニチン＝２００ｍｇ/ｋｇ カルニチン混合物＝各々１:１の比のアセチルＬ-カルニチン+プロピオニルＬ-カ
ルニチン+イソバレリルＬ-カルニチン α-リポ酸＝５０ｍｇ/ｋｇ

【００２４】 糖尿病ラットの目のレンズおよび坐骨神経中のソルビトール含量に関する試験
糖尿病性高血糖により誘導される障害および、それに関連する目または末梢神
経疾患の最もよくある原因の一つは、結果的に浸透力および細胞完全性の低下を
伴うソルビトールの細胞内蓄積にある。 これらの試験を、５０ｍｇ/ｋｇのストレプトゾトシンの静脈内投与により糖
尿病を誘導したラットのグループで行った。注射の１週間後、血清グルコースを
試験し、４５０ｍｇ/ｄｌを越す血清グルコース値を示すラットを糖尿病とみな
した。次いでこれらの動物に、８日間続けてアセチルＬ-カルニチン(１００ｍｇ
/ｋｇ)またはカルニチン混合物(各々１:１の重量比のアセチルＬ-カルニチン+プ
ロピオニルＬ-カルニチン+イソバレリルＬ-カルニチン)(１００ｍｇ/ｋｇ)また
はα-リポ酸(２５ｍｇ/ｋｇ)を、単独または種々の組み合わせのいずれかで腹腔
内注射した。

【００２５】 処置の８日後、適当に単離した後、糖尿病ラットの坐骨神経および目のレンズ
の両方に存在するソルビトール濃度を投与処置の前後で測定した。ソルビトール
濃度は、全処置動物で低下したように思われたが、最も顕著な低下は、α-リポ
酸およびカルニチンの組み合わせを用いて処置した動物において認められ、およ
び、最も低い値は、アセチルＬ-カルニチンおよびα-リポ酸の組み合わせを用い
て処置したグループにおいて示された。 これらの試験の結果も、α-リポ酸とカルニチンの間の驚くべき程度の共同相
乗活性を示す。

【００２６】

【表３】 糖尿病ラットの目のレンズおよび坐骨神経中のソルビトール含量

【００２７】 ＩＧＦ-Ｉ、カルニチンおよびα-リポ酸で処置した神経細胞の生存および成長
に関する試験 インシュリン様成長因子(ＩＧＦ-Ｉ)が、神経細胞機能の完全性を保護するこ
とに関して、特に糖尿病疾患の進行中に現れるもののような毒性障害に対して果
たす重要な役割を考慮して、脳細胞の成長および生存を促進するＩＧＦ-Ｉの活
性が、カルニチンまたはリポ酸または、これらの生成物の組み合わせの培養培地
における存在により助長されるかどうかを考察した。この目的のために、ウイス
ターラットの脳細胞をThanguipon(Thanguipon W., Dev. Brain Res., 11, 177.
1983)により開示される方法に従い単離し、３×１０^５/ｃｍ^２の密度でプレート
上にまいた。非神経細胞の複製を妨げるために、培養培地にシトシンアラビノ-
フラノシド(１０ｍＭ)を添加した。８日後、細胞を洗浄し、それを、血清を５ｍ
ＭのＫＣｌ濃度を含有するＢＭＥ(Basal Eagles Medium, Life Technologies, G
aithersburg, MD)で置き換えた培地で維持した。試験生成物；２５ｎｇ/ｍｌの
アセチルＬ-カルニチン(１００ｎｇ/ｍｌ)またはカルニチン混合物(１００ｎｇ/
ｍｌ)またはα-リポ酸に相当するＩＧＦ-Ｉを、単独または組み合わせのいずれ
かで、こうして調製した血清に直接添加した。

【００２８】 培地中での細胞の生存および成長を、培地へ物質を添加した２４時間後に、Jo
nes(Jones K.H., J. Histochem. Cytochem., 33, 77, 1985)により開示される方
法に従い３５ｍｍのディスク上で、１０ｎｇ/ｍｌのフルオレセインアセテート
に接触させて観察した。細胞の測定は、蛍光顕微鏡を用いて行った。この試験の
結果は、ＩＧＦ-Ｉの、単離脳細胞への成長促進効果が、単独では有意な変化を
生じないカルニチンとα-リポ酸の存在により有意に増強され、最大の成長促進
効果は、カルニチン、および特にアセチルＬ-カルニチンをα-リポ酸と組み合わ
せた場合に誘導されることを示す。

【００２９】

【表４】 アセチルＬ-カルニチン、カルニチン混合物およびα-リポ酸による、ＩＧＦ-１
の単離脳細胞の成長促進に関する増強作用に関する試験

【００３０】 糖尿病ラットにおける坐骨神経再生試験 誘導性糖尿病のラットの坐骨神経を切断した場合、正常のラットに比べて再生
活性が劣る。 糖尿病ラットの坐骨神経の再生が、アセチルＬ-カルニチン、カルニチン混合
物またはα-リポ酸または、これらの生成物の組み合わせにより促進され得るか
どうかを調べるために、これらの試験を行った。これらの試験で用いる方法は、
Fernandez(Fernandez E., Int. J. Clin. Pharmacol. Res., 10, 85, 1990)によ
り開示されるものである。

【００３１】 糖尿病(４５０ｍｇ/ｄｌを越す血清グルコース)を、１００ｍｇ/ｋｇのアロキ
サンの皮下注射によりラットの一グループに誘導した。アセチルＬ-カルニチン
、カルニチン混合物およびα-リポ酸を、一日の摂取が２００ｍｇ/ｋｇのアセチ
ルＬ-カルニチン、２００ｍｇ/ｋｇの(各々１:１の重量比のアセチルＬ-カルニ
チン+プロピオニルＬ-カルニチン+イソバレリルＬ-カルニチンの)カルニチン混
合物および５０ｍｇ/ｋｇのα-リポ酸となる方法で食餌と共に投与した。化合物
は、坐骨神経切断１週間前から切断３０日後まで投与した。

【００３２】 坐骨神経は、麻酔下、その１ｃｍを露出させた後に坐骨小孔のレベルにて切断
した。障害の境界を、神経弓突起縫合を用いてマークした。神経を切断した３０
日後、動物を屠殺した後、坐骨神経の主要節の一つである脛骨神経の組織を試験
した。約４ｍｍの長さの脛骨神経の４つのクロスセクションを次いで、セミオー
トマチックイメージアナライザー(Zeiss Videoplan Image Analyser)を用いて形
態学的および形態計測的試験に供した。 再生軸索数および１００ｎｍ^２当たりのその密度、ならびに変性エレメントを
測定した。こうして、脛骨神経エレメントの糖尿病誘導性変性を検出することが
可能となり、これは、アセチルＬ-カルニチン、カルニチン混合物およびα-リポ
酸を用いた処置により、ほとんど正常値を回復する程度まで修正されることが分
かった。 神経再生に対する糖尿病性障害の予防に関して最も明らかな結果は、アセチル
Ｌ-カルニチンまたはカルニチン混合物の、α-リポ酸と組み合わせた投与を用い
て得られ、こうして、この試験においても、本発明による組み合わせの部分にお
ける懸著な、および思いがけない共同性が立証される。

【００３３】

【表５】 糖尿病ラットで、坐骨神経を切断した後の、脛骨神経変性エレメントの数および
密度

【００３４】 神経筋伝導試験 末梢神経障害および特に、糖尿病性神経障害における最も明らかな異常の一つ
は心筋伝導の鈍化であり、これは、運動活動の変化に反映する。 これらの試験では、実験動物(平均体重が３００ｇのラット)に５０ｍｇ/ｋｇ
のストレプトゾトシンを静脈内注射することにより、ラットに実験的糖尿病を誘
導した。誘導性糖尿病(４５０ｍｇ/ｄｌを越す血清グルコース)の動物で、神経
筋伝導速度(ＮＭＣＶ)を測定した。この目的のために、坐骨神経を単離し(長さ
２ｃｍ)、ひらめ筋を腓腹筋から単離し、その末端の腱を切断し、筋肉の収縮力(
ＭＣＦ)を記録する等尺トランスデューサーに接続した。神経から１０ｍｍの距
離で挿入し、刺激器に接続した２つの電極を用いて、坐骨神経経由で筋肉を刺激
した。

【００３５】 二極の電極を、オシロスコープによる筋電図を表示させるために、筋肉の末端
に置いた。 ＮＭＣＶをｍ/秒で測定し、刺激電極間の距離を、２つの部分で誘発されるＥ
ＣＧ電位の開始間の潜伏期の平均差異で割った。

【００３６】

【表６】 糖尿病ラットにおける神経筋伝導試験(４週間後)

【００３７】 運動協調性異常試験 これらの試験は、「動揺マウス(wobbler mice)」、いわば、不安定、千鳥足、 前肢の位置の異常および動く速さの低下を示す動物において行った。これらの異
常は、特に前肢を侵すような運動神経および筋肉皮膚神経繊維の進行性萎縮に関
連する。試験は、Mitsumoto(Mitsumoto H., Annal. Neurol., 36, 14, 1994)に
より提唱される方法に従い行った。診断後、動揺マウスを経口で、２０日間連続
して、アセチルＬ-カルニチン(２００ｍｇ/ｋｇ)またはカルニチン混合物(２０
０ｍｇ/ｋｇ)、またはα-リポ酸(５０ｍｇ/ｋｇ)またはこれらの生成物の種々の
組み合わせを用いて処置した。処置動物対コントロールに関して、各動物が傾斜
したプラットホームの縁につかまっている時間(ホールディング時間)と、１０ｃ
ｍの距離を走るのにかかる時間(ランニング時間)を評価することにより、試験を
行った。

【００３８】 これらの試験の結果は、アセチル-Ｌ-カルニチン、カルニチン混合物およびα
-リポ酸を用いたこれらの動物の処置により、コントロール動物と比較してホー
ルディング時間とランニング時間の両方が改善されるが、最良の効果は、これら
の生成物を組み合わせた、および特にアセチルＬ-カルニチンとα-リポ酸の組み
合わせによる投与を用いて得られることを示す。これらの試験においても、カル
ニチンおよびα-リポ酸の、顕著な思いがけない共同相乗効果が見られる。

【００３９】

【表７】表７ ランニング時間の増加パーセント試験

【００４０】

【表８】表８ ホールディング時間の増加パーセント試験

【００４１】 シスプラチン誘導性感覚神経障害に関する試験 実験動物へのシスプラチンの長期投与により、感覚神経のレベルで障害が引き
起こされ得、プロピオセプティブ認知(propioceptive perception)の顕著な異常
を引き起こし得る。 これらの試験では、１０ｍｇ/ｋｇのシスプラチンの７連日の皮下注射により
誘導される毒性への、３００ｍｇ/ｋｇのアセチルＬ-カルニチンの経口による、
または、３００ｍｇ/ｋｇのカルニチン混合物(各々１:１重量比のアセチルＬ-カ
ルニチン+プロピオニルＬ-カルニチン+イソバレリルＬ-カルニチン)または、５
０ｍｇ/ｋｇのα-リポ酸または、これらの生成物の種々の組み合わせの７連日の
投与が及ぼす保護効果を評価した。 シスプラチンにより誘導されるプロピオセプティブ感覚認知異常を、マウスに
おいて、ロータロッド試験(Apfel, S.C., Ann. Neurol., 29, 89, 1991)を用い
て評価した。

【００４２】 これらの試験で得られた結果は、シスプラチンがコントロール動物と比較して
、シスプラチン処置動物において平衡時間のかなりの低下および、アセチルＬ-
カルニチンまたはα-リポ酸単独で処置した動物において同じオーダーの低下を
引き起こす一方で、アセチルＬ-カルニチンおよびα-リポ酸の組み合わせを用い
て処置した動物のグループは、他方、シスプラチン中毒に供しなかった動物の平
衡能力と事実上同一の平衡能力を示すことを示す。これらの試験においても、カ
ルニチンおよびα-リポ酸の顕著な共同効果が見られる。

【００４３】

【表９】 シスプラチンにより誘導される感覚神経異常に関する試験(ロータロッド試験)

【００４４】 新規組成物が発揮し得る活性を評価するために行った試験により、発明自体の
革新的性質が完全に正当化され、とりわけ、組み合わせで用いた場合にその成分
が誘導することができる思いがけない、驚くべき共同効果が立証される。 その成分の共同相互活性に基き、本明細書中に記載する本発明による組成物は
、急性または慢性の神経障害を引き起こす毒性および代謝障害を予防するのに適
する。特に、それは毒性神経障害、特に糖尿病性末梢神経障害の治療に用いるこ
とが可能である。 その抗酸化能力ゆえに、この組成物は、脳、肝臓、心臓または他の器官および
組織におけるフリーラジカルの放出に関連する毒性および無酸素症起源の異常の
予防または処置にも望ましい。 さらに、該組成物のＩＧＦ-Ｉ活性促進能力ゆえに、その使用により、老化に
関連する病理学的異常、例えば、神経退行性疾患に関して、驚くべき利点も得ら
れ得る。

【００４５】 本発明による製剤を説明する、無制限の例をこれ以下に示す。

【００４６】

【００４７】 Ｌ-カルニチンまたはアルカノイルＬ-カルニチンの薬理学上許容される塩が意
味するのは、望ましくない毒性または副作用を生じない酸とのこれらの活性成分
のいずれかの塩である。これらの酸は、製薬業者には周知である。 適当な塩の無制限の例は次のようである。:クロライド;ブロマイド;ヨーダイ
ド;アスパルテート、酸アスパルテート;シトレート、酸シトレート;タートレー
ト;ホスフェート、酸ホスフェート;フマレート、酸フマレート;グリセロホスフ
ェート;グルコースホスフェート;ラクテート;マレエート、酸マレエート;オロテ
ート;オキサレート、酸オキサレート;スルフェート、酸スルフェート;トリクロ
ロアセテート、トリフルオロアセテートおよびメタンスルホネート。

【００４８】 ＦＤＡが認可する医薬上許容される塩のリストはInt. J. of Pharm. 33, (198
6), 201-217に示されており、この出版物を、本明細書中に引用により組み込む
。 本発明による組成物は、ビタミン、補酵素、ミネラル物質および抗酸化物質を
さらに含んでもよい。 特定の投与経路を考慮して組成物を調製するために用いられる適当な賦形剤は
、製薬業者におよび食品工業の専門家には明らかであろう。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｋ 9/10 Ａ６１Ｋ 9/10 9/16 9/16 9/20 9/20 9/48 9/48 31/385 31/385 Ａ６１Ｐ 3/10 Ａ６１Ｐ 3/10 9/08 9/08 9/10 １０１ 9/10 １０１ 39/06 39/06 (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ， ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，Ｋ Ｅ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＵＧ，ＺＷ)，Ｅ Ａ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＲ， ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，Ｇ Ｄ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＮ ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ， ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，Ｍ Ｋ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ， ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，Ｙ Ｕ，ＺＡ，ＺＷ Ｆターム(参考） 4B018 LE01 LE02 LE05 MD05 MD09 MD23 ME06 4C076 AA09 AA12 AA22 AA31 AA36 AA54 BB01 BB11 BB29 BB31 CC21 DD41 DD51 DD55 DD59 DD60 FF01 4C086 AA01 AA02 BB04 MA02 MA03 MA04 MA07 MA09 MA17 MA22 MA35 MA37 MA41 MA52 MA55 MA60 MA63 NA14 ZA39 ZA45 ZB21 ZC33 ZC35 4C206 AA01 AA02 FA59 MA02 MA03 MA04 MA37 MA42 MA47 MA55 MA57 MA61 MA72 MA75 MA83 NA14 ZA39 ZA45 ZB21 ZC33 ZC35

Claims (13)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 (ａ)アセチルＬ-カルニチンまたは薬理学上許容されるその
   塩;および、 (ｂ)α-リポ酸 を組み合わせて含む組成物。
2. 【請求項２】 成分(ａ)が、Ｌ-カルニチン、プロピオニルＬ-カルニチン、
   バレリルＬ-カルニチン、イソバレリルＬ-カルニチンから成る群から選択される
   「カルニチン」または、薬理学上許容されるその塩またはそれらの混合物をさら
   に含む請求項１記載の組成物。
3. 【請求項３】 重量比(ａ):(ｂ)が１００:１〜１:１０である請求項１また
   は２記載の組成物。
4. 【請求項４】 Ｌ-カルニチンまたはアルカノイルＬ-カルニチンの薬理学上
   許容される塩が、クロライド;ブロマイド;ヨーダイド;アスパルテート、酸アス
   パルテート;シトレート、酸シトレート;タートレート;ホスフェート、酸ホスフ
   ェート;フマレート、酸フマレート;グリセロホスフェート;グルコースホスフェ
   ート;ラクテート;マレエート、酸マレエート;オロテート;酸オキサレート;スル
   フェート、酸スルフェート;トリクロロアセテート;トリフルオロアセテートおよ
   びメタンスルホネートから成る群から選択される前記請求項いずれか一項に記載
   の組成物。
5. 【請求項５】 ビタミン、補酵素、ミネラル物質および抗酸化剤をさらに含
   む前記請求項いずれか一項に記載の組成物。
6. 【請求項６】 経口投与可能な、栄養補助食品の形態の前記請求項いずれか
   一項に記載の組成物。
7. 【請求項７】 経口、非経口、直腸または経皮投与可能な、薬剤の形態の前
   記請求項いずれか一項に記載の組成物。
8. 【請求項８】 環境汚染物質によるフリーラジカルの存在によりもたらされ
   る組織障害の予防のための;脳または心筋虚血および付随的再潅流の後、フリー
   ラジカルにより誘導される脳または心筋障害の予防のための;糖尿病または毒性
   神経障害および、グルコース利用における代謝障害の予防のための請求項６記載
   の栄養補助食品。
9. 【請求項９】 環境汚染物質によるフリーラジカルの存在によりもたらされ
   る疾患;脳または心筋虚血および付随的再潅流の後、フリーラジカルにより誘導
   される脳または心筋障害;アテローム性動脈硬化障害および組織増殖進行;糖尿病
   または毒性神経障害および、グルコース利用における代謝障害の治療的処置のた
   めの請求項７記載の薬剤。
10. 【請求項１０】 固体、半固体または液体形態の請求項６または８記載の栄
    養補助食品。
11. 【請求項１１】 固体、半固体または液体形態の請求項９または１１記載の
    薬剤。
12. 【請求項１２】 錠剤、トローチ剤、ピル、カプセル、顆粒またはシロップ
    の形態の請求項１０記載の栄養補助食品。
13. 【請求項１３】 錠剤、トローチ剤、ピル、カプセル、顆粒、シロップ、バ
    イアルまたはドロップの形態の請求項１１記載の薬剤。