JP2001515047A - コンセンサスインターフェロンを使用する多発性硬化症患者の治療方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 本発明は、治療を要する患者に治療有効量のＩＦＮ−ｃｏｎを単独投与または別の有効物質と併用投与する多発性硬化症の予防及び治療方法を包含する。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】 本発明は、コンセンサスインターフェロン（ＩＦＮ−ｃｏｎ）を使用する多発
性硬化症（ＭＳ）患者の予防及び治療方法に関する。

【０００２】 （発明の背景） 多発性硬化症（ＭＳ）は、再発と寛解との繰り返しを臨床的特徴としており、
しばしば進行性身体障害に至る中枢神経系（ＣＮＳ）の炎症性脱髄疾患である。
ＭＳは極めてよく知られた廃疾性神経障害であり、患者には青年期の白人が多い
。アメリカ人には少なくとも３５０，０００人のＭＳ患者が存在し、女性患者の
数は男性患者の２倍である。ＭＳは概して１５歳から５０歳までの間に発病する
。平均発病年齢は３０歳である。ＭＳの危険性は地域によって違っており、居住
地が赤道から南北に遠ざかるほど危険性が高い。

【０００３】 この疾患の病因及び発生病理はまだ解明されていない。しかしながら、病理学
的、遺伝学的及び免疫学的特徴は同定されており、これらの特徴はこの疾患が自
己免疫に基づくことを示唆している。例えば、Ｗａｋｓｍａｎら，Ｐｒｏｃ．Ｓ
ｏｃ．Ｅｘｐ．Ｂｉｏｌ．Ｍｅｄ．，１７５：２８２−２９４（１９８４）及び
Ｈａｆｌｅｒら，Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖ．，１００：３０７−３３２（１９８
７）参照。ＭＳの経過は様々でしばしば予測できないが、典型的には再発−寛解
（２５％以下の症例）；再発−進行（４０％以下の症例）；慢性−進行（１５％
以下の症例）；及び良性（２０％以下の症例）の４つの形態に大きく識別され、
通常はそのいずれかの形態に分類される。ほぼすべてのＭＳ患者が疾病の経過中
のある時期に、疲労、痙直、振顫、運動機能低下、抑鬱、疼痛、泌尿器合併症及
び認識障害のような症状に苦しむ。

【０００４】 ＭＳは現在では治癒不能であるが、かなりの程度まで治療は可能である。多く
の治療は対症療法である。即ち、これらの治療は症状を軽減または予防するが、
根本的な欠陥である脱髄を治癒することはできない。但し、コルチコステロイド
及び多くの免疫抑制剤は一過性の疾病変質効果を示す。コルチコステロイドは疾
病の再燃期間を短縮し、また、例えばＢｕｒｒｏｕｇｈｓ−Ｗｅｌｌｃｏｍｅの
Ｉｍｕｒａｎ（登録商標）のようなある種の免疫抑制剤はＭＳ患者に生じるこの
ような再燃の回数を少なくすると考えられている。

【０００５】 インターフェロンは、抗ウイルス活性及び抗増殖活性の双方を示すサイトカイ
ンのサブクラスである。天然産生のヒトインターフェロンは生化学的特性及び免
疫学的特性に基づいて３つのクラス、即ちインターフェロンアルファ（白血球）
、インターフェロンベータ（線維芽細胞）及びインターフェロンガンマ（免疫性
）に分類される。アルファ−インターフェロンは現在では、毛状細胞白血病、性
病いぼ、カポジ肉腫（後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）患者に多い癌）及び慢
性の非Ａ非Ｂ肝炎の治療薬として米国及び他の諸国で認可されている。アルファ
−インターフェロンの２つの変種、即ち、商標Ｒｏｆｅｒｏｎ（登録商標−Ａで
市販されているインターフェロン−アルファ−２ａと商標ＩＮＴＲＯＮ（登録商
標）Ａで市販されているインターフェロン−アルファ−２ｂとは治療用に認可さ
れている。Ｒｏｆｅｒｏｎ（登録商標）−ＡとＩＮＴＲＯＮ（登録商標）Ａとの
アミノ酸配列は１つの位置で違っているが、それ以外はアルファ−インターフェ
ロンのサブタイプ２（サブタイプＡ）のアミノ酸配列に等しい。

【０００６】 指定された適応症に加えて、アルファ−インターフェロンは、単独でまたは慢
性骨髄性白血病、多発性骨髄腫、表在性膀胱癌、皮膚癌（基底細胞癌及び悪性黒
色腫）、腎臓癌、卵巣癌、低分化リンパ球性リンパ腫及び皮膚Ｔ細胞性リンパ腫
及び神経膠腫などの種々の細胞増殖障害に対する化学療法剤と併用して使用され
ているかまたは使用できると考えられている。アルファ−インターフェロンは、
肺癌、直腸結腸癌及び乳癌で生じる固形腫瘍を治療するために別の化学療法剤と
の併用が有効であろう（Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇら，“Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎ
ｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃ Ｔｈｅｒａｐｙ”，
ｉｎ Ｃａｎｃｅｒ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅｓ ｏ
ｆ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，３ｒｄ ｅｄ．，Ｄｅｖｉｔａら，ｅｄｓ．ｐｐ．３０
１−５４７（１９８９），Ｂａｌｍｅｒ ＤＩＣＰ，Ａｎｎ Ｐｈａｒｍａｃｏ
ｔｈｅｒ ２４，７６１−７６８（１９９０）参照）。

【０００７】 １型インターフェロン類（例えば、インターフェロンアルファ及びインターフ
ェロンベータ）は、正常細胞及び異常細胞の双方でＤＮＡ複製並びにＲＮＡ及び
タンパク質の合成のような多様な細胞機能に影響を与えることが知られている。
従って、インターフェロンの細胞障害性効果は腫瘍細胞またはウイルス感染細胞
に限定されるものでなく、健康な正常細胞中でも示される。その結果として、イ
ンターフェロン療法中には、特に高い用量が必要な場合、望ましくない副作用が
生じる。インターフェロンの投与によって骨髄抑制が生じ、その結果として、赤
血球、白血球及び血小板のレベルが低下する。もっと高い用量のインターフェロ
ンは多くの場合、インフルエンザ様症状（例えば、発熱、疲労、頭痛及び悪寒）
、胃腸障害（例えば、食欲不振、嘔吐及び下痢）、眩暈、咳などを生じさせる。
インターフェロン療法の治療効果を低下させることなく望ましくない副作用を軽
減または除去することは有益であろう。

【０００８】 Ｂｅｔａｓｅｒｏｎ（登録商標）（Ｓｃｈｅｒｉｎｇ社の組換えインターフェ
ロンベータ−１ｂ）は適応対象をＭＳ治療であると特定した最初の薬剤であった
。Ｂｅｒａｓｅｒｏｎ（登録商標）はＭＳ患者の再燃または再発の回数または重
篤度を低減しまた磁気共鳴映像（ＭＲＩ）に現れる脳内のＭＳ活動の証拠を減少
させるために有効であることが多くの臨床試験で知見された。但し、被験サンプ
ル中に他の形態のＭＳが存在しなかったので、試験の結果が再発−寛解を繰り返
す患者グループのみに関するということに留意すべきである。試験は更に、最終
的廃疾に至ったＭＳに対しては２年から３年にわたる治験でも有益な効果がなか
ったこと、及び、薬剤の効果がその副作用によって有意に低下することを示した
。

【０００９】 米国特許第４，６９５，６２３号、第４，８９７，４７１号及び第５，５４１
，２９３号は、天然産生アルファインターフェロンサブタイプポリペプチドの各
位置に見出される共通または優勢なアミノ酸を有しておりコンセンサスインター
フェロン（ＩＦＮ−ｃｏｎ）と命名された新規なヒトインターフェロンポリペプ
チドを開示している。開示されたＩＦＮ−ｃｏｎアミノ酸配列は、ＩＦＮ−ｃｏ
ｎ１、ＩＦＮ−ｃｏｎ２及びＩＦＮ−ｃｏｎ３と命名されている。ＩＦＮ−ｃｏ
ｎをコードする人工遺伝子の製造及び大腸菌中でのこれらの遺伝子の発現も開示
されている。組換えＩＦＮ−ｃｏｎと白血球インターフェロンまたは他の組換え
型インターフェロンとの抗ウイルス活性、抗増殖活性及びナチュラルキラー活性
を相対比較するｉｎ ｖｉｔｒｏ試験は、質量基準で比較したときにＩＦＮ−ｃ
ｏｎのほうがかなり高い活性を示すことを証明した。Ｏｚｅｓら，Ｊ Ｉｎｔｅ
ｒｆｅｒｏｎ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，１２：５５−５９，１９９２。

【００１０】 米国特許第５，３７２，８０８号は、コンセンサスインターフェロンを使用す
る疾病の治療方法を開示している。該特許は、アルファインターフェロンによる
治療に感受性の疾病の治療に使用されたとき、ＩＦＮ−ｃｏｎはアルファインタ
ーフェロンと同程度の副作用を患者に生じさせないことが示されている。更に、
３倍から５倍の高い用量でＩＦＮ−ｃｏｎを使用すると治療効果を増進できるが
、これに対応して望ましくない副作用の頻度が増加したりまたはいっそう重篤に
なったりすることは実質的に全くないことが示されている。

【００１１】 （発明の概要） 本発明は、治療を要する患者に治療有効量のＩＦＮ−ｃｏｎを投与することか
ら成る多発性硬化症の治療方法を包含する。本発明は、ＩＦＮ−ｃｏｎ１がＣＮ
Ｓ（モルモット）ホモジェネートで免疫感作したＥＡＥ（実験的アレルギー性脳
脊髄炎）の臨床的重篤度を用量依存的に顕著に軽減し得るという知見に基づく。
更に、ＩＦＮ−ｃｏｎ１と他の治療薬、例えばＩＬ−１ｒａとの併用はＥＡＥの
臨床的徴候を軽減するためによりいっそう有効である。

【００１２】 ＩＦＮ−ｃｏｎは抗増殖活性及び抗ウイルス活性を有する天然産生でないポリ
ペプチドである。好ましくは、ＩＦＮ−ｃｏｎは、ＩＦＮ−ｃｏｎ１、ＩＦＮ−
ｃｏｎ２またはＩＦＮ−ｃｏｎ３のアミノ酸配列を有するポリペプチドである。
極めて好ましくは、ＩＦＮ−ｃｏｎはＩＦＮ−ｃｏｎ１のアミノ酸配列を有して
いる。

【００１３】 上記の一般的記載及び下記の詳細な記載は単なる例示的な説明であり、特許請
求の範囲に記載された本発明の範囲を制限しないことを理解されたい。

【００１４】 （詳細な説明） 上述のように、本発明は、多発性硬化症を予防し多発性硬化症患者を治療する
方法に関する。方法は、治療有効量のインターフェロンコンセンサスをＭＳ患者
に投与する処置から成る。本発明は更に、インターフェロンコンセンサスを別の
有効物質、例えばＩＬ−１ｒａと併用して投与するＭＳの予防または治療方法に
関する。

【００１５】 本文中で使用されたヒトインターフェロンコンセンサス（ＩＦＮ−ｃｏｎ）な
る用語は、天然に産生する多くのヒト白血球インターフェロンサブタイプの配列
を表すＩＦＮ−αのサブセットに共通するアミノ酸残基を主として含み、全部の
サブタイプに共通のアミノ酸が存在しない１つまたは複数の位置にはこの位置に
優勢に生じるアミノ酸を含み、少なくとも１つの天然産生サブタイプのこの位置
に存在しないアミノ酸残基を決して含まない天然産生でないポリペプチドを意味
する。ＩＦＮ−ｃｏｎは、共有の米国特許第４，６９５，６２３号、第４，８９
７，４７１号及び第５，５４１，２９３号に開示されているＩＦＮ−ｃｏｎ１、
ＩＦＮ−ｃｏｎ２及びＩＦＮ−ｃｏｎ３と命名されたアミノ酸配列を包含するが
、これらのアミノ酸配列に限定はされない。上記の特許の記載内容全部が参照に
よって本発明に含まれるものとする。ＩＦＮ−ｃｏｎをコードするＤＮＡ配列は
上記特許に記載の手順または他の標準方法で合成され得る。

【００１６】 ＩＦＮ−ｃｏｎポリペプチドは好ましくは、細菌宿主、特に大腸菌にトランス
ホームまたはトランスフェクトされた人工ＤＮＡ配列の発現産物である。即ち、
ＩＮＦ−ｃｏｎは組換えＩＦＮ−ｃｏｎである。ＩＦＮ−ｃｏｎは好ましくは大
腸菌中で産生され、Ｋｌｅｉｎら，Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇ．４５４：２５４−
２１５（１９８８）に概説されている当業者に公知の手順によって精製され得る
。このようにして精製されたＩＦＮ−ｃｏｎ１は、Ｔ９８Ｇヒト細胞系を用いる
細胞変性効果阻害アッセイで測定すると３×１０^９単位／ｍｇの比活性を有する
と報告されている。Ｆｉｓｈら，Ｊ．Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ Ｒｅｓ．９，９７
−１１４（１９８９）。

【００１７】 ＩＦＮ−ｃｏｎは単独使用されてもよくまたは他のＭＳ治療用有効物質と併用
されてもよい。使用が考察される有効物質は、生命体に導入されると生物学的効
果を発揮する合成または天然の化合物であり、例えばペプチド、小分子、糖質、
核酸、脂質及びタンパク質などである。使用が考察されるタンパク質としては、
顆粒球−コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）、ケラチノサイト増殖因子（ＫＧＦ）
、幹細胞因子（ＳＣＦ）、巨核球増殖分化因子（ＭＧＤＦ）、顆粒球マクロファ
ージ−コロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）のような種々の造血因子、インターフ
ェロン類（アルファ、ベータ及びガンマ）、インターロイキン類（２−１２）、
エリトロポエチン（ＥＰＯ）、線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）、幹細胞因子（Ｓ
ＣＦ）、神経成長因子（ＮＧＦ）、脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）、神経栄養
因子−３（ＮＴ３）、血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）、腫瘍増殖因子（アルフ
ァ、ベータ）、インターロイキン−１受容体アンタゴニスト（ＩＬ−１ｒａ）、
オステオプロテジェリン（ＯＰＧ）、グリア細胞系由来神経栄養因子（ＧＤＮＦ
）、ｐ３８インヒビター及び肥満症タンパク質（ＯＢタンパク質）などの有効な
サイトカインがある。ＭＳ治療の好ましい実施態様では、ＩＦＮ−ｃｏｎを治療
有効量のＩＬ−１ｒａと併用する。

【００１８】 インターロイキン−１受容体アンタゴニスト（ＩＬ−１ｒａ）はインターロイ
キン−１の天然インヒビターとして作用するヒトタンパク質である。好ましい受
容体アンタゴニストとそれらの製造及び使用方法は、米国特許第５，０７５，２
２２号（本文中では以後 '２２２特許と呼ぶ）；ＷＯ９１／０８２８５；ＷＯ９
１／１７１８４；ＡＵ９１７３６３６；ＷＯ９２／１６２２１；ＷＯ９３／２１
９４６；仮出願提出書の発明の名称“炎症性疾患治療用組成物及び方法（ＣＯＭ
ＰＯＳＩＴＩＯＮ ＡＮＤ ＭＥＴＨＯＤ ＦＯＲ ＴＲＥＡＴＩＮＧ ＩＮＦ
ＬＡＭＭＡＴＯＲＹ ＤＩＳＥＡＳＥＳ）”をもつ１９９６年２月９日出願のＣ
ｏｌｌｉｎｓの仮米国特許出願第６０／０１１，４１９号、仮出願提出書の発明
の名称“炎症性疾患治療用組成物及び方法（ＣＯＭＰＯＳＩＴＩＯＮ ＡＮＤ
ＭＥＴＨＯＤ ＦＯＲ ＴＲＥＡＴＩＮＧ ＩＮＦＬＡＭＭＡＴＯＲＹ ＤＩＳ
ＥＡＳＥＳ）”をもつ１９９６年１２月６日出願のＣｏｌｌｉｎｓ及びＢｅｖｉ
ｌａｃｑｕａの仮米国特許出願第６０／０３２，７８９号；ＷＯ９４／０６４５
７；ＷＯ９４／２１２７５；ＦＲ２７０６７７２；ＷＯ９４／２１２３５／ＤＥ
４２１９６２６；ＷＯ９４／２０５１７；及びＷＯ９６／２２７９３に記載され
ている。これらの特許の記載内容は参照によって本発明に含まれるものとする。
タンパク質はグリコシル化形態及び非グリコシル化形態のＩＬ−１受容体アンタ
ゴニストを包含する。

【００１９】 より詳細には、ＩＬ−１ｒａの有用な３つの形態及びその変異体が′２２２特
許に開示及び記載されている。第一の形態即ちＩＬ−１ｒａαは、等電点約４．
８のＳＤＳ−ＰＡＧＥで２２−２３ｋＤの分子としてキャラクタライズされ、ト
リスバッファ，ｐＨ７．６中の約５２ｍＭのＮａＣｌでＭｏｎｏ Ｑ ＦＰＬＣ
カラムから溶出する。第二の形態即ちＩＬ−１ｒａβは４８ｍＭのＮａＣｌでＭ
ｏｎｏ Ｑカラムから溶出する２２−２３ｋＤのタンパク質としてキャラクタラ
イズされる。ＩＬ−１ｒａα及びＩＬ−１ｒａβはいずれもグリコシル化されて
いる。第三の形態即ちＩＬ−１ｒａｘは４８ｍＭでＭｏｎｏ Ｑカラムから溶出
する２０ｋＤのタンパク質としてキャラクタライズされる非グリコシル化形態で
ある。これらの３つのインヒビターはいずれも同様の機能活性及び免疫活性を有
している。

【００２０】 ＩＬ−１ｒａの製造方法も '２２２特許に開示されている。開示された１つの
方法は、ＩＬ−１ｒａを天然に産生するヒト単球からＩＬ−１ｒａを単離する処
理から成る。開示された第二の方法は、ＩＬ−１ｒａをコードする遺伝子を単離
し、この遺伝子を適当なベクター及び細胞型中でクローニングし、遺伝子を発現
させてインヒビターを産生させ、インヒビターを回収する処理から成る。普遍的
な組換えＤＮＡ法を代表する後者の方法が好ましい方法である。組換えＤＮＡ法
が好ましい理由の１つは、より高い純度のタンパク質を比較的大量に産生できる
ことである。従って、本発明はまた、大腸菌のような原核細胞中で発現された結
果としてＮ−末端メチオニル基を含むＩＬ−１ｒａを包含する。

【００２１】 一般的に本発明は、有効量の本発明のタンパク質またはその誘導産物を、医薬
として許容される希釈剤、安定剤、防腐剤、可溶化剤、乳化剤、アジュバント及
び／または担体と共に含有する医薬組成物を包含する。例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔ
ｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１８ｔｈ Ｅｄ
．（１９９０，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ
１８０４２），ｐｐ．１４３５−１７１２参照。その記載内容は参照によって
本発明に含まれるものとする。有効成分の有効量は、治療的、予防的または診断
的に有効な量であり、体重、年齢、治療または予防または診断の目的、所望の放
出速度、などを考慮して当業者が容易に決定できる。

【００２２】 ＩＦＮ−ｃｏｎ含有製剤の全身デリバリーに特に有効な投与方法は、皮下、筋
肉内、静脈内及び鼻孔内の経路の投与である。また、ＩＦＮ−ｃｏｎの心室内及
び鞘内デリバリーも考えられる。投与方法に関わりなく、個々の用量はほぼ患者
の体重に従って計算される。最適な治療用薬用量を決定するために必要な更に精
密な計算は当業者には定型的な手順であり、特別な実験を要せずに特に本文中に
開示された用量情報及びアッセイを参考にして当業者が定型的に実行し得る作業
の範囲に包含される。ＭＳの治療に特に有効なＩＦＮ−ｃｏｎの用量は例えば週
３回皮下投与される６−１５μｇの範囲であろう。

【００２３】 ＣＮＳの自己免疫炎症性脱髄疾患のネズミモデルである実験的アレルギー性脳
脊髄炎（ＥＡＥ）はヒトＭＳの経過を変質させる介入を評価するための優れたモ
デルを提供すると認められている。ＥＡＥは脊髄タンパク質を注入した動物で進
行し、また、ある種のミエリン抗原（例えばミエリン基底タンパク質）に反応性
にしたＴ細胞クローンの受動転移によって誘発され得る。非経口（ＩＶ）投与し
たラットの天然インターフェロン（１０⁶単位）は雄のルイスラットの急性ＥＡ Ｅを部分的に抑制し（Ａｂｒｅｕら，Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｃｏｍｍｕｎ．，１１：
１−７（１９８２））、免疫原の接種と同日に投与されると受動的超急性局在Ｅ
ＡＥを阻害する（Ａｂｒｅｕら，Ｉｎｔ．Ａｒｃｈ．Ａｌｌｅｒｇｙ Ａｐｐｌ
．Ｉｍｍｕｎｏｌ，７２：３０−３３（１９８３）。非経口投与された他のサイ
トカイン、例えばＴＧＦ−βは、ＥＡＥにおける脳及び脊髄の臨床的異常及び炎
症を軽減し得る。Ｊｏｈｎｓら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４７：１７９２−１
７９６（１９９１）。

【００２４】 以下に与えた実施例１は、ＩＦＮ−ｃｏｎ１が、ＣＮＳ（モルモット）ホモジ
ェネートで免疫感作した後のＥＡＥの臨床的重篤度を用量依存的に著しく軽減す
るために有効であることを示す。実施例２は、ＩＦＮ−ｃｏｎ１とＩＬ−１ｒａ
との併用がＥＡＥの臨床的徴候を軽減するためによりいっそう有効であり、これ
に伴って相乗的な体重増加の改善が得られることを示す。これらの実施例は本発
明をより十分に説明するために与えられたものであるが、本発明の範囲を制限す
ると解釈されてはならない。

【００２５】 （実施例） 実施例１ この実施例は、ＩＦＮ−ｃｏｎ１が、ＣＮＳ（モルモット）ホモジェネートで
免疫感作した後のＥＡＥの臨床的重篤度を用量依存的に著しく軽減するために有
効であることを示す。

【００２６】 Ａ．材料の説明 ＩＦＮ−ｃｏｎ１は米国特許第４，６９５，６２３号及び第４，８９７，４７
１号に記載の方法を使用して大腸菌中で産生させた。Ｋｌｅｉｎら，前出（１９
８８）に概略的に記載された手順でＩＦＮ−ｃｏｎ１を精製した。この試験では
皮下投与のために、ＩＦＮ−ｃｏｎ１を微粒子非含有の無色透明な無菌タンパク
質溶液として調製し、滅菌濾過してバイアルに充填する前に水性バッファに配合
した。組換えＩＦＮ−ｃｏｎ１は９５％以上の純度を有している。

【００２７】 Ｂ．モデルの設計 １３匹の雌モルモット（１７５−２００グラム）に２％のイソフルラン＋Ｏ₂ で麻酔をかけ、０日後に、２４ｍｌのリン酸塩緩衝生理食塩水にいれた同系の脳
＋脊髄のＣＮＳホモジェネート（１２グラム）を含有する０．５ｍｌのエマルジ
ョンと２．５ｍｇ／ｍｌのＭ．Ｔｕｂｅｒｃｌｏｓｉｓ Ｈ３７Ｒａ（Ｄｉｆｃ
ｏ Ｌａｂ，ＭＩ）を含有する２４ｍｌのフロインドアジュバントとを用いて免
疫感作した。エマルジョンをモルモットの頸部領域の４−５箇所の部位に皮内注
射した。

【００２８】 ＩＦＮ−ｃｏｎ１及びビヒクルの注入はいずれも皮下注射で行い、ＩＦＮ−ｃ
ｏｎ１を複数の投与計画で試験した。（１）処理（０．０１−０．３ｍｇ／ｋｇ
）を免疫感作の当日に開始し、犠牲日（１４日後）まで毎日継続した。（２）処
理（０．０１−０．３ｍｇ／ｋｇ）を免疫感作の当日に開始し、犠牲日まで隔日
に継続した。（３）処理（０．３ｍｇ／ｋｇ及び０．１ｍｇ／ｋｇ）を免疫感作
の４日後に開始し、犠牲日まで毎日継続した。（４）処理（１ｍｇ／ｋｇ）を免
疫感作の当日に開始し、免疫感作の４日後、７日後及び１１日後に継続した。

【００２９】 臨床的異常の評価は標準的な０−５段階の採点方式に基づき、１４日間の期間
にわたって毎日評価した。採点基準は、正常を０、後趾の能力低下を１、両方の
後趾の不全麻痺または片方の後趾の麻痺を２、両方の後趾の麻痺を３、瀕死を４
、死亡を５とした。生き残ったモルモットを１４日後に殺し、それらの脳及び脊
髄を摘出して組織学的検査を行った。疾病の経過全体にわたる各モルモットの総
合的な臨床的評価を、毎日の臨床的評価を時間の関数で表すグラフの下方の面積
として計算した（任意単位）。マン−ホイットニーテストを使用して、処理グル
ープの値をビヒクル対照グループの値に統計的に比較した。

【００３０】 Ｃ．結果 免疫感作の８−１０日後から臨床的徴候が生じた。概して臨床的徴候の重篤度
は時間に伴って増加した。ビヒクルを注入した動物全部が免疫感作の１１日後ま
でに死亡した。

【００３１】 図１に示すように、ＩＦＮ−ｃｏｎ１（０．０１−０．３ｍｇ／ｋｇ ｓ．ｃ
．）は臨床的徴候を用量依存的に有意に（ｐ＜０．０５；ｐ＜０．０１）低減し
た。この用量依存的効果は隔日投与計画でも観察された（図２）。免疫感作の４
日後から毎日投与したＩＦＮ−ｃｏｎ１（０．３及び０．１ｍｇ／ｋｇ ｓ．ｃ
．）は臨床的重篤度をそれぞれ８７％及び７５％ずつ有意に（ｐ＜０．０１）（
図３）低減した。免疫感作の０日後、４日後、７日後及び１１日後に与えたＩＦ
Ｎ−ｃｏｎ１（１ｍｇ／ｋｇ ｓ．ｃ．）は臨床的重篤度を８０％だけ有意に（
ｐ＜０．００２）低減した（図４）。最後に、ＩＦＮ−ｃｏｎ１で処理した動物
の初期検査は、脊髄組織でＣＮＳ内部の炎症細胞の数がビヒクル処理動物に比較
して減少していることを示した。

【００３２】 実施例２ この実施例は、ＩＦＮ−ｃｏｎ１とＩＬ−１ｒａとを用いる併用治療がＣＮＳ
（モルモット）ホモジェネートで免疫感作後のＥＡＥの臨床的重篤度を用量依存
的に著しく軽減するために有効であることを示す。更に、ＩＦＮ−ｃｏｎ１で処
理することによって生じる体重減少はＩＬ−１ｒａの同時投与によって改善され
ると考えられる。

【００３３】 Ａ．材料の説明 ＩＦＮ−ｃｏｎ１は前述の実施例１に記載の手順で産生させた。ＩＬ−１ｒａ
は例えば米国特許第５，０７５，２２２号に記載の方法のような方法を使用して
大腸菌中で産生させた。この試験では皮下投与のために、ＩＬ−１ｒａを微粒子
非含有の無色透明の無菌タンパク質溶液として調製し、滅菌濾過してバイアルに
充填する前に水性バッファに配合した。組換えＩＬ−１ｒａは９５％以上の純度
を有している。

【００３４】 Ｂ．モデルの設計 １３匹の雌モルモット（１７５−２００グラム）に２％のイソフルラン＋Ｏ₂ で麻酔をかけ、０日後に、２４ｍｌのリン酸塩緩衝生理食塩水に入れた同系の脳
＋脊髄のＣＮＳホモジェネート（１２グラム）を含有する０．５ｍｌのエマルジ
ョンと、２．５ｍｇ／ｍｌのＭ．Ｔｕｂｅｒｃｌｏｓｉｓ Ｈ３７Ｒａ（Ｄｉｆ
ｃｏ Ｌａｂ，ＭＩ）を含有する２４ｍｌのフロインドアジュバントとを用いて
免疫感作した。エマルジョンをモルモットの頸部領域の４−５箇所の部位に皮内
注射した。

【００３５】 ＩＦＮ−ｃｏｎ１、ビヒクルまたはＩＬ−１ｒａの注入はいずれも皮下注射で
行い、３つの処理計画を試験した。（１）ＩＬ−１ｒａについては１００ｍｇ／
ｋｇまたは１０ｍｇ／ｋｇ ｓ．ｃ．で１日３回の投与を０日後に開始し、ＩＦ
Ｎ−ｃｏｎ１については０．０３ｍｇ／ｋｇを１日１回投与した。（２）ＩＬ−
１ｒａ（１００ｍｇ／ｋｇ ｓ．ｃ．を３回／日）＋ＩＦＮ−ｃｏｎ１（０．０
３ｍｇ／ｋｇ ｓ．ｃ．を１回／日）の併用、及び、ＩＬ−１ｒａ（１０ｍｇ／
ｋｇ ｓ．ｃ．を３回／日）＋ＩＦＮ−ｃｏｎ１（０．０３ｍｇ／ｋｇ ｓ．ｃ
．を１回／日）の併用。処理（０．０１−０．３ｍｇ／ｋｇ）を免疫感作の当日
に開始し、犠牲日（１４日後）まで毎日継続した。臨床的異常の評価を前述の実
施例１に記載の手順で行った。

【００３６】 Ｃ．結果 実施例１で前述したように、免疫感作の８−１０日後から臨床的徴候が生じた
。概して臨床的徴候の重篤度は時間に伴って増加した。ビヒクルを注入した動物
全部が免疫感作の１１日後までに死亡した。

【００３７】 図５に示すように、１００ｍｇ／ｋｇまたは１０ｍｇ／ｋｇ ｓ．ｃ．で１日
３回の投与を０日後に開始したＩＬ−１ｒａは、ＩＦＮ−ｃｏｎ１（０．０３ｍ
ｇ／ｋｇで１日１回）の投与で観察された３０％の軽減に比べて臨床的徴候をそ
れぞれ５３％及び４９％軽減した。ＩＬ−１ｒａ（１００ｍｇ／ｋｇ ｓ．ｃ．
を３回／日）＋ＩＦＮ−ｃｏｎ１（０．０３ｍｇ／ｋｇ ｓ．ｃ．を１回／日）
の併用、または、ＩＬ−１ｒａ（１０ｍｇ／ｋｇ ｓ．ｃ．を３回／日）＋ＩＦ
Ｎ−ｃｏｎ１（０．０３ｍｇ／ｋｇ ｓ．ｃ．を１回／日）の併用は臨床的徴候
をそれぞれ７３％及び８４％軽減した（図６）。更に、これらの併用はビヒクル
処理動物に比較して動物の体重増加を有意に改善した（図７）。

【図面の簡単な説明】

【図１】 免疫感作の０日後に開始されるＩＦＮ−ｃｏｎの毎日の投与がモルモットＥＡ
Ｅの臨床的重篤度に与える効果を示す棒グラフである。０．３、０．１、０．０
３及び０．０１ｍｇ／ｋｇのＩＦＮ−ｃｏｎを毎日１回ｓ．ｃ．投与し、処理１
４日後にビヒクルに比較する。

【図２】 免疫感作の０日後に開始されるＩＦＮ−ｃｏｎの隔日の投与がモルモットＥＡ
Ｅの臨床的重篤度に与える効果を示す棒グラフである。０．３、０．１、０．０
３及び０．０１ｍｇ／ｋｇのＩＦＮ−ｃｏｎを１日１回ｓ．ｃ．投与し、処理１
４日後にビヒクルに比較する。

【図３】 免疫感作の４日後に開始されるＩＦＮ−ｃｏｎの毎日の投与がモルモットＥＡ
Ｅの臨床的重篤度に与える効果を示す棒グラフである。０．３及び０．１ｍｇ／
ｋｇのＩＦＮ−ｃｏｎを毎日１回ｓ．ｃ．投与し、処理１４日後にビヒクルに比
較する。

【図４】 免疫感作の０日後、４日後、７日後及び１１日後の１．０ｍｇ／ｋｇのＩＦＮ
−ｃｏｎの投与及び０．０３ｍｇ／ｋｇのＩＦＮ−ｃｏｎの毎日の投与がモルモ
ットＥＡＥの臨床的重篤度に与える効果を示す棒グラフである。ＩＦＮ−ｃｏｎ
サンプルを１日１回ｓ．ｃ．投与し、処理１４日後にビヒクルに比較する。

【図５】 ０．０３ｍｇ／ｋｇのＩＦＮ−ｃｏｎの毎日の投与、１００ｍｇ／ｋｇのＩＬ
−１ｒａの毎日の投与及び１０ｍｇ／ｋｇのＩＬ−１ｒａの毎日の投与がモルモ
ットＥＡＥの臨床的重篤度に与える効果を示す棒グラフである。免疫感作の０日
後に投与を開始した。ＩＦＮ−ｃｏｎは１日１回ｓ．ｃ．投与し、ＩＬ−１ｒａ
は１日３回ｓ．ｃ．投与した。ＩＦＮ−ｃｏｎのサンプル及びＩＬ−１ｒａのサ
ンプルを治療１４日後にビヒクルに比較する。

【図６】 ＩＦＮ−ｃｏｎ＋ＩＬ−１ｒａの併用療法がモルモットＥＡＥの臨床的重篤度
に与える効果を示す棒グラフである。ＩＦＮ−ｃｏｎは１日１回ｓ．ｃ．投与し
、ＩＬ−１ｒａは１日３回ｓ．ｃ．投与した。０．０３ｍｇ／ｋｇのＩＦＮ−ｃ
ｏｎ＋１００ｍｇ／ｋｇのＩＬ−１ｒａの併用、及び、０．０３ｍｇ／ｋｇのＩ
ＦＮ−ｃｏｎ＋１０ｍｇ／ｋｇのＩＬ−１ｒａの併用を、０．０３ｍｇ／ｋｇの
ＩＦＮ−ｃｏｎ単独及びビヒクルに処理１４日後に比較する。

【図７】 ＩＦＮ−ｃｏｎ、ＩＬ−１ｒａ、ＩＦＮ−ｃｏｎ＋ＩＬ−１ｒａ及びビヒクル
がモルモットＥＡＥの体重増加に与える効果を示す棒グラフである。ＩＦＮ−ｃ
ｏｎ（０．０３及び１．０ｍｇ／ｋｇ）は１日１回ｓ．ｃ．投与し、ＩＬ−１ｒ
ａ（１０及び１００ｍｇ／ｋｇ）は１日３回ｓ．ｃ．投与した。０．０３ｍｇ／
ｋｇのＩＦＮ−ｃｏｎ＋１００ｍｇ／ｋｇのＩＬ−１ｒａの併用、及び、０．０
３ｍｇ／ｋｇのＩＦＮ−ｃｏｎ＋１０ｍｇ／ｋｇのＩＬ−１ｒａの併用も試験し
、処理１４日後に全部の試験サンプルの体重増加を正常モルモットに比較した。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ， ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，Ｋ Ｅ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ) ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ， ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，Ｄ Ｋ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ， ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，Ｌ Ｖ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ， ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，Ｕ Ｚ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＷ Ｆターム(参考） 4C084 AA02 BA44 CA53 DA21 DA59 MA02 MA52 MA59 MA63 MA66 MA67 NA05 NA14 ZA022 ZB022 ZC542

Claims (13)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 治療を要する患者に治療有効量のインターフェロンコンセン
   サスを投与することから成る多発性硬化症の予防または治療方法。
2. 【請求項２】 前記インターフェロンコンセンサスがＩＦＮ−ｃｏｎ１、Ｉ
   ＦＮ−ｃｏｎ２及びＩＦＮ−ｃｏｎ３から成るグループから選択されることを特
   徴とする請求の範囲第１項記載の方法。
3. 【請求項３】 前記インターフェロンコンセンサスがＩＦＮ−ｃｏｎ１であ
   ることを特徴とする請求の範囲第２項記載の方法。
4. 【請求項４】 前記インターフェロンコンセンサスが原核生物による外来Ｄ
   ＮＡ配列の発現産物であることを特徴とする請求の範囲第１項記載の方法。
5. 【請求項５】 前記インターフェロンコンセンサスが医薬として許容される
   担体に入れて投与されることを特徴とする請求の範囲第１項記載の方法。
6. 【請求項６】 治療有効量を、経口、静脈内、筋肉内、皮下、鼻孔内、心室
   内、鞘内または病巣内の経路で投与することを特徴とする請求の範囲第１項記載
   の方法。
7. 【請求項７】 インターフェロンコンセンサスの治療有効量が週３回皮下投
   与される６−１５μｇであることを特徴とする請求の範囲第１項記載の方法。
8. 【請求項８】 更に、ペプチド、小分子及びタンパク質から成るグループか
   ら選択された治療有効量の別の有効物質の投与を含み、前記インターフェロンコ
   ンセンサスと前記有効物質とが別々にまたは組合せて投与されることを特徴とす
   る請求の範囲第１項記載の方法。
9. 【請求項９】 前記有効物質がタンパク質であることを特徴とする請求の範
   囲第８項記載の方法。
10. 【請求項１０】 前記タンパク質がインターロイキン−１受容体アンタゴニ
    スト（ＩＬ−１ｒａ）であることを特徴とする請求の範囲第９項記載の方法。
11. 【請求項１１】 インターフェロンコンセンサスと別の有効物質とから成る
    医薬組成物。
12. 【請求項１２】 前記有効物質がＩＬ−１ｒａである請求の範囲第１１項記
    載の医薬組成物。
13. 【請求項１３】 哺乳動物の多発性硬化症治療薬を製造するためのインター
    フェロンコンセンサスの使用。