JP2001514050A - フィブリノーゲンに基づく組織接着剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 エラスターゼ阻害剤を含む、フィブリノーゲンに基づく組織接着剤を開示する。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】 本発明はフィブリノーゲンに基づく組織接着剤に関する。

【０００２】 フィブリン接着剤と称することもできる、フィブリノーゲンに基づく組織接着
剤は、その接着作用において、血液凝固の最終段階を模倣する。この例では、そ
のほとんどが接着手順中にフィブリノーゲン溶液に加えられるトロンビンの作用
により、フィブリノーゲンがフィブリン単量体に切断されるが、これはすべての
傷害で起こることである。フィブリン単量体は自然に凝集して、フィブリンと称
される規則的な繊維型構造になる。次いでこのフィブリン単量体の凝集物は、因
子ＸＩＩＩａの作用下、共有結合性の架橋によりさらに安定化される。この時点
で、アミド基転移反応（transamidizing reaction）において、フィブリン単量 体の特定のグルタミンとリジン側鎖の間にペプチド結合が形成される。不活性な
因子ＸＩＩＩからトロンビンによって同様に切断された因子ＸＩＩＩａは活性ト
ランスアミダーゼであり、その作用のため、「フィブリン安定化因子」とも称さ
れる。

【０００３】 組織接着剤を適用する場合、原理的には、「天然の」血液凝固と同じ過程が生
じるが、組織接着剤では、関与する成分および因子が血液中より数倍濃縮されて
いる。これにより、血液の凝固もずっと速く生じ、達成された組織接着またはク
ロットはずっと安全であり、またより安定でもある。

【０００４】 ７０年代末の時点でフィブリン接着剤の成功に前もって必要な条件は、血液凝
固因子の分画化および精製の進歩であった。その後、有効な組織接着に必要なほ
ど純度および濃度の天然の凝固因子を製造することが可能になった。最初の市販
の組織接着剤は７０年代末に市場に登場し、それから多数の適用可能分野、主に
、神経を接着する場合あるいは内臓、例えば肝臓および脾臓を接着する場合、慣
用の外科手術の手法を使用すると、深刻な問題、例えば深刻な出血が繰り返し生
じていた分野において適当であることが証明された。

【０００５】 針と糸を用いて適用される縫合とは反対に、フィブリン接着剤のさらなる利点
は、処置される組織または器官が縫合手順によってさらなる損傷を受けないこと
にあり、したがってフィブリノーゲンに基づく組織接着剤を用いる場合、慣用の
外科的縫合を用いた場合よりずっと簡単であり、傷跡も目立たない。接着の高い
耐荷重量および高い内部強度ならびに傷口または組織表面に対する接着剤の良好
な接着能を含む最適な接着作用以外に、組織接着剤の最適化には、接着直後の過
程がまた不可欠である（ＡＴ−Ｂ−３５９ ６５２および３５９ ６５３）。これ
らには、体内における接着の耐久性の制御ならびに吸収されやすさおよび接着剤
の高い傷害治癒性などが含まれる。

【０００６】 したがって、組織接着剤に関し、速く確実な接着剤の効果のみならず、形成さ
れた接着またはクロットのそれぞれが一定期間内に体内で再溶解し、形成された
クロットが完全に吸収された結果として傷口が完全に再生することが非常に重要
である。

【０００７】 この点に関して、組織接着剤の最適化によって、形成されたクロットの（内因
性）溶解過程、すなわち繊維素溶解を制御することがまた必要である。

【０００８】 繊維素溶解では、形成されたクロット中に存在するフィブリンを分解し、除去
し、これによりクロットを溶解する。まず最初に、内因性または外因性のプラス
ミノーゲンアクチベーター、例えば血液凝固因子ＸＩおよびＸＩＩ、プレカリク
レイン、ウロキナーゼまたはｔ−ＰＡの影響下、不活性プラスミンから繊維素溶
解的にプラスミンが形成され、該プラスミンは、フィブリンに加え、フィブリノ
ーゲンおよび血液凝固因子ＶおよびＶＩＩをも分解する。

【０００９】 内因性の繊維素溶解過程はたいてい、クロットが形成された後すぐに開始され
るので、形成された組織接着が十分接着しないか、または形成されたクロットが
余りに早く不安定化する危険性があるため、プラスミン阻害剤またはプラスミノ
ーゲンアクチベーター阻害剤を添加して、プラスミンの作用を直接または間接に
阻害し、主としてその初期段階における早すぎる繊維素溶解から接着を保護する
ことが組織接着の常法になっている。阻害剤の濃度により、形成されたクロット
または接着それぞれの溶解時間を標的化して制御することが可能である。阻害剤
を大量に用いるほど、クロットが繊維素溶解に対してますます安定になり、すな
わち、このクロットがより長期間安定に維持され、接着剤がより長期間かけて完
全に吸収される。

【００１０】 したがって、繊維素溶解阻害剤を用いる場合、最適な妥協点は、早すぎる繊維
素溶解の阻害とできるだけ早い傷害治癒の間に見出されなければならない。

【００１１】 市販の組織接着剤では、ウシ塩基性膵臓トリプシン阻害剤（bovine basic pan
creatic trypsin inhibitor）とも称される、アプロチニンをプラスミン阻害剤 として用いる。アプロチニンは多価のプロテイナーゼ（カリクレイン）阻害剤で
あり、凝固因子ＸＩＩａ、ＸＩａ、ＶＩＩＩａおよび主としてプラスミンおよび
プラスミンアクチベーターを阻害し、またトリプシン、キモトリプシンおよびカ
リクレインをも阻害する。

【００１２】 従来、アプロチニンは主としてウシから製造されていた。しかし、ヒトの治療
に用いる薬剤にウシ物質を使用することに関係する問題のせいで、組換え的に製
造されたアプロチニンが用いられることがますます多くなっている。

【００１３】 組織接着では通常、２０〜３０００カリクレイン不活性化ユニット（ＫＩＵ）
／組織接着剤ｍＬの量のアプロチニンを用い、その最適な濃度は各組織の繊維素
溶解活性に依存する。しかし、主として繊維素溶解活性が高い組織では、高濃度
のアプロチニンの使用にもかかわらず、アプロチニンの繊維素溶解阻害作用が非
常に限られた程度にしか制御できず、望ましくない早期の溶解過程が生じ得る。

【００１４】 したがって、本発明の目的は、先行技術の不利益を克服し、主に高いプラスミ
ン活性を示す傷害の組織接着において、成熟前の繊維素溶解に対する十分かつ信
頼できる保護を保証し、しかも接着の質が負の影響を決して受けないような組織
接着剤を提供することである。

【００１５】 本発明では、混合されたエラスターゼ阻害剤を含むことを特徴とする、フィブ
リノーゲンに基づく組織接着剤によってこの目的を達成する。驚くべきことに、
プラスミンを阻害するか、あるいはプラスミノーゲンのプラスミンへの活性化を
阻害することによってだけでなく、エラスターゼの阻害剤、またはその繊維素溶
解阻害作用が主に非プラスミン性繊維素溶解機構に基づいている阻害剤によって
も繊維素溶解過程を妨げることができないことが示された。簡易化のため、この
ような非プラスミノーゲン性繊維素溶解阻害剤は、本発明の目的のための用語「
エラスターゼ阻害剤」に含まれる。プラスミン媒介性の繊維素溶解以外に、プラ
スミンに基づかず（例えば、リソソーム過程（a lysosomal process）；Simon e
t al., BLOOD 82 (8) (1993), pp.2414-2422 を参照のこと）、アプロチニンに よっては実質的に阻害することができないさらなる繊維素溶解過程が存在し得る
ことが推測され、さらに、この非プラスミン性繊維素溶解経路が特異的エラスタ
ーゼ阻害ペプチド、例えばＮ−メトキシ−スクシニル−Ｌ−アラニル−Ｌ−プロ
ピル−Ｌ−バラニルクロロメチルケトン（ＡＡＰＶＣＫ）によっても阻害不能で
あることが示された（Simon et al. を参照のこと）。さらに驚くべきことに、 （実質的な）プラスミン阻害活性またはプラスミノーゲンアクチベーター阻害活
性を全く有さない阻害剤、すなわち本発明のエラスターゼ阻害剤は、インビトロ
およびインビボ両方において形成されたクロットの非常によく制御可能な溶解過
程を保証できることが本発明において見出された。これは特に、高い繊維素溶解
活性を有する組織において適当であり、適度な濃度でさえ、早期の溶解を妨げる
ことができることがわかった。

【００１６】 また成熟前の溶解は、接着の（部分的）分離を生じさせ、再出血を生じさせ得
るため、この成熟前の溶解は主として接着形成後、最初のうちに、高い繊維素溶
解活性を有する組織において役割を担っている。

【００１７】 さらに、本発明で用いる、組織接着剤中のエラスターゼ阻害剤は、プラスミン
に対して作用する慣用の阻害剤と組み合わせてその繊維素溶解活性を示すだけで
なく、エラスターゼ阻害剤単独でも繊維素溶解を完全に阻害できることが示され
た。本発明の具体的態様の１つは、組織接着剤がフィブリノーゲン、エラスター
ゼ阻害剤および場合により因子ＸＩＩＩ以外の別の活性成分を全く含まないこと
に存する。

【００１８】 本発明の接着剤中、フィブリノーゲン濃度は既知の組織接着剤のものに対応し
、通常、フィブリノーゲンが少なくとも５０ｍｇ以上／ｍＬ、特に７０−８０ｍ
ｇ以上／ｍＬ、すなわち、血液中のフィブリノーゲン濃度（２−４ｍｇ／ｍＬ）
の少なくとも約２０倍にすべきである。フィブリノーゲンは、クリオ沈降物と比
べてさらに精製された形態で存在するのが好ましい。

【００１９】 本発明の範囲内の好ましいエラスターゼ阻害剤は、エグリン（eglin）、エラ スターゼ−α₁−プロテイナーゼ阻害剤、α₁−抗プロテアーゼ、エラフィン（el
afin）、白血球プロテアーゼ阻害剤、特に白血球画分、好ましくは顆粒性白血球
から誘導された画分、またはヒト分泌性白血プロテアーゼ阻害剤（human secret
ory leukoprotease inhibitor）、またはその混合物の群から選択される。白血 球画分として、例えば細胞溶解物、特にヒト細胞から誘導されたものを用いるこ
とができる。当業者であれば、他のエラスターゼ阻害剤またはプラスミンに対し
て作用しない他の繊維素溶解阻害剤を、本発明の組織接着剤でのその有用性につ
いて、実施例に開示するアッセイ系によって、あるいは先行技術から既知のエラ
スターゼ阻害アッセイを適用することによって簡単にアッセイすることができる
。また好ましいエラスターゼ阻害剤には、本発明のエラスターゼ阻害剤の種々の
誘導体、例えば化学的に、あるいは（組換え）タンパク質設計によって修飾され
たこれらの阻害剤の断片または形態が含まれるが、もちろんこれらの誘導体は常
に、性質上、基本的（basic）阻害剤のエラスターゼ阻害剤特性を有している必 要がある。

【００２０】 本発明の組織接着剤はヒトタンパク質のみからなるのが好ましく、ここでは組
換え生産されたヒトタンパク質もまた「ヒトタンパク質」と理解すべきである。
したがって、組織接着剤中で用いるタンパク質は、血液、血漿、クリオ沈降物ま
たは組換え細胞培養物から調製するのが好ましい。

【００２１】 特に好ましい組織接着剤はヒト血液または血漿タンパク質のみから構成されて
いることを特徴とする。

【００２２】 フィブリノーゲンに対するエラスターゼ阻害剤量の比は重量比（ｍｇ）で、１
：１００〜１：１５０，０００であるのが好ましく、さらに好ましくは１：５０
０〜１：１１０，０００であるのが好ましい。フィブリノーゲンのｇに対する阻
害剤の単位量（ユニット）で表すと、少なくとも１０^-6Ｕ／フィブリノーゲンｇ
を組織接着剤に混合するのが好ましい。１０^-3から１０Ｕ／フィブリノーゲンｇ
の範囲が特に好ましい。本発明の組織接着剤中で混合する、血液または血漿中に
天然に存在し得る阻害剤の量は、血液または血漿中のその生理的濃度より少なく
とも２０倍、特には少なくとも５０倍であるのが好ましい。本発明の組織接着剤
は例えば以下のものから構成することができる：７５−１１５ｍｇ／ｍＬ凝固可
能タンパク質、５０−１１０ｍｇ／ｍＬ、好ましくは７０−１１０ｍｇ／ｍＬの
フィブリノーゲン；場合により、因子ＸＩＩＩ １−５０、好ましくは１０−５ ０ ＩＵ／ｍＬ。阻害剤として、例えば１−１００μｇ／ｍＬ量のエグリンまた は０．０１−１Ｕ／ｍＬのα₁−抗プロテアーゼを混合してもよい。通常、既知 の組織接着剤中のアプロチニンの繊維素溶解阻害活性に相当する量のエラスター
ゼ阻害剤を混合すれば十分であるだろう。

【００２３】 接着剤の目的に応じて、本発明の接着剤にプラスミノーゲンを含ませるか、あ
るいはプラスミノーゲンを含ませなくてもよい。プラスミノーゲンを含ませる場
合、フィブリノーゲンｍｇあたり、少なくとも０．０００１ｍｇ、好ましくは０
．００１ｍｇ以上、特には０．０１ｍｇ以上の量含ませるべきである。組織接着
剤中にプラスミノーゲンが存在する場合、そのプラスミンに対する活性に基づき
、組織接着剤の繊維素溶解性をさらにより明確にすることもできる。

【００２４】 一方、さらに好ましい態様では、組織接着剤はプラスミノーゲンを全く含まな
いか、あるいはそれを少量しか含まない。

【００２５】 すでに述べたが、驚くべきことに、組織接着剤中、エラスターゼ阻害剤が単一
の繊維素溶解阻害剤として存在すれば、本発明の接着剤の機能性に十分である。
しかし、エラスターゼ阻害剤に加え、溶解、吸収および傷害治癒のより良好な制
御に貢献するプラスミン阻害剤またはプラスミンアクチベーター阻害剤を用いる
のもまた好ましい。好ましいプラスミン阻害剤またはプラスミノーゲンアクチベ
ーター阻害剤は、主にアプロチニン、またはα₂−マクログロブリン、α₁−抗ト
リプシン、ε−アミノ−カプロン酸、トラネキサム酸（tranexaminic acid）、 またはこれらの物質の混合物である。α₁−抗トリプシンにエラスターゼに対す るある種の作用を帰属する著者もいるが、この作用はこれらの物質が示す主要な
活性であることから、これらの物質は当該技術分野においてプラスミンまたはプ
ラスミンアクチベーターとみなされている。もちろんこれは本発明の目的に適用
される。さらに、抗接着剤である添加剤、例えばヒアルロン酸を加えることもで
きる。

【００２６】 本発明の組織接着剤のさらに好ましい態様は、ＡＴ−Ｂ−３６９，９９０です
でに提示されているように、接着剤中に抗生物質を含ませることである。特に好
ましい抗生物質は、アミノグリコシド、ベータラクタム（betalactams）、ポリ ペプチド、ホスホマイシン（phosphomycin）、テトラサイクリンまたはその混合
物の群から選択される。さらに好ましい態様では、抗生物質はほとんど不溶性の
誘導体形態で存在する。

【００２７】 また、因子ＸＩＩＩを本発明の組織接着剤に含ませ、クロットの内部強度およ
び接着の強度および耐久性を向上させるのが好ましい。この目的には、１−５０
ユニット／ｍＬ、好ましくは約１０Ｕ／ｍＬ量の因子ＸＩＩＩを用いるのが好ま
しい。フィブリノーゲンを基準にして、最小濃度０．００１Ｕ／フィブリノーゲ
ンｍｇ、特に少なくとも０．１Ｕ／フィブリノーゲンｍｇの因子ＸＩＩＩを存在
させるのが好ましい。しかし当業者であれば、接着のタイプまたは組織のタイプ
に応じて、最適な因子ＸＩＩＩ濃度を容易に活用することができる。組織接着剤
中に抗生物質を存在させる場合、基本的に、やや多めの因子ＸＩＩＩを含ませる
のが推奨される（ＡＴ−Ｂ−３６９，９９０を参照のこと）。

【００２８】 本発明の組織接着剤は、キニノゲンタンパク質（kininogenic proteins、例え
ば、カリクレインなど）を含まず、妨害副作用の開始を予防可能にするのが好ま
しい。

【００２９】 好ましい態様では、本発明の組織接着剤を、不織物（non-woven）としての固 形表面と組み合わせて存在させ、これにより、主として大きな範囲の傷害に対し
、最適な傷害閉塞および最適な被覆が達成される。このような不織物の例は、Ａ
Ｔ−Ｂ ３７４，３６７に列記されている。したがって、不織物の固形表面は、 コラーゲン、ゼラチンまたはポリサッカライド表面であるのが好ましく、もちろ
ん、場合により特定の使用目的のために含ませることもできる医薬的にさらに適
当な表面を用いてもよい。

【００３０】 本発明では、エラスターゼ阻害剤を含む組織接着剤を用いることによって、高
い繊維素溶解活性を有する環境においてさえ、少なくとも１０時間、好ましくは
１５時間、溶解に対する耐性（抵抗性）を達成することができることが示された
。本発明に記載の溶解に対する耐性とは、それぞれのフィブリンクロットが一定
時間内に分解されず、すなわち存在したままであることを意味する。溶解に対す
る耐性の測定は、例えば時間に応じた光度測定によって行う。したがって、本発
明の好ましい組織接着剤は、高い繊維素溶解活性の環境において、少なくとも１
０時間、好ましくは１５時間溶解に対して耐性であるものである。「高い繊維素
溶解活性」という語句は、例えばプラスミン活性が生理的プラスミンの潜在活性
より高いことを意味する。繊維素溶解能は、例えば、プラスミノーゲン濃度によ
って表される（例えばHenriksson et al., Thrombosis Research 16: 301-312;
1979）。当業者であれば、この溶解に対する耐性を、実施例に記載のように簡単
なアッセイによってチェックすることができる。

【００３１】 本発明の組織接着剤を適用する場合、溶液状態で存在させるのが好ましいが、
保存目的のためには、この溶液の急速冷凍し、組織接着剤を急速凍結物形態で存
在させるか、あるいはこの接着剤を凍結乾燥して、凍結乾燥形態で提供すること
が推奨できる。「凍結乾燥形態」という語句は、もちろん、凍結乾燥によって保
存可能にされた、ただ１つの組織接着調製物が、その次なる再組成過程において
、３７℃で数分の間にほとんど完全に（すなわち少なくとも８０％）再組成する
ことができることを意味する。

【００３２】 本発明の組織接着剤はウイルス不活化形態として存在させるのが好都合である
。

【００３３】 この不活化処理はテンシドおよび／または熱処理、例えば固形状態での熱処理
、特にＥＰ−０ １５９ ３１１またはＥＰ−０ ５１９ ９０１またはＥＰ−０ ６７４ ５３１に記載の蒸気処理によって確実に行うのが好ましい。

【００３４】 ウイルスのさらなる不活化処理はまた、化学的方法または化学／物理的方法に
よる処理、例えばＷＯ９４／１３３２９、ＤＥ ４４ ３４ ５３８またはＥＰ ０
１３１ ７４０（溶媒）に記載のカオトロピック物質または光不活性化による処
理を含む。

【００３５】 ナノフィルトレーションもまた、本発明の範囲内の、ウイルスを涸渇する好ま
しい方法である。

【００３６】 好ましい態様では、本発明にしたがって混合されるエラスターゼ阻害剤もまた
、組換え起源のものであってよい。

【００３７】 さらに本発明は、その一成分としてエラスターゼ阻害剤を含む本発明の組織接
着剤を含む組織接着系に関する。

【００３８】 通常、本発明の組織接着系は、液体形態かあるいは再組成可能な凍結乾燥物で
存在するトロンビン成分をさらなる成分として含み、接着に用いる場合、適用分
野に応じてトロンビン成分は様々な濃度を有し得る。

【００３９】 また、本発明の範囲内には、フィブリノーゲン成分、およびエラスターゼ阻害
剤を含む別の成分を含むことを特徴とする組織接着系も含まれる。しかし通常は
、フィブリノーゲン成分中に繊維素溶解阻害剤成分を含むのが適当である（ＡＴ
−Ｂ−３５９，６５２および３５９，６５３を参照のこと）。しかし、適当な適
用デバイスによって、フィブリノーゲン成分とは別に阻害剤成分を供給すること
もできる。エラスターゼ阻害剤を含む成分が、同時にまたトロンビンを含んでい
ることが好ましく、この成分も凍結乾燥物または（場合により急速冷凍されてい
る）溶液として提供することが可能である。

【００４０】 本発明の組織接着系はさらに、系の成分用の適当な適用デバイスを含む。特に
、ＥＰ ０ ０３７ ３９３、ＥＰ ０ ２１０ １６０またはＥＰ ０ ２９２ ４７ ２に記載の二重シリンジ系、あるいはＥＰ ０ ３１５ ３２２またはＥＰ ０ ６ ６９ １００に記載の適用デバイスは適当であることがわかっている。これらの 特定の適用デバイスを用いると、阻害剤をトロンビン成分中で適用する態様で、
確かな接着結果が得られる。

【００４１】 本接着剤はフィブリン接着剤を適用可能なすべての分野に適当である。しかし
、特に適当なのは、高い繊維素溶解活性を有する分野において接着を提供する場
合であることがわかっている。したがって、本発明の主題はまた、高い繊維素溶
解活性を有する分野、特に泌尿器科学分野における、調製物または適用デバイス
を製造するための、本発明の組織接着剤または本発明の組織接着系それぞれの使
用である。本発明の主題はさらに、高い繊維素溶解活性を有する分野、特に泌尿
器科学分野の手術における、本発明の組織接着剤の使用方法または本発明の組織
接着系の使用方法である。

【００４２】 以下に実施例および図面を挙げ、本発明をさらに詳細に説明するが、これらに
限定されない。

【００４３】 実施例 １．本発明の組織接着剤の繊維素溶解阻害作用をアッセイするためのインビトロ
試験（現時点で発明者らが本発明の最良の実施方法であると考えているもの） この実施例では、エグリンまたはα₁−抗プロテアーゼによって、組織接着ク ロットの溶解を防ぐことを示す。この例では、組織接着剤ＳＴＩＭ３（IMMUNO A
G, Vienna, AT）（フィブリノーゲン７０ｍｇ／ｍＬを含む）を水に溶解させ、 次いで０．９Ｍ ＮａＣｌ溶液で１：６希釈した。

【００４４】 ４０ｍＭ ＣａＣｌ₂に溶解させ、次いで４０ｍＭ ＣａＣｌ₂／０．９Ｍ Ｎａ Ｃｌ（１：５）溶液で希釈して０．１Ｕ／ｍＬにしたトロンビン溶液とこの組織
接着剤溶液を１：１混合し、１００μＬ／ウェルとなるようにマイクロプレート
上に移した。

【００４５】 組織接着剤各５μＬ（エグリン１−１００μｇ／ｍＬ、α₁−抗プロテアーゼ ０．０１−１Ｕ／ｍＬ）に種々の濃度の阻害剤を加えた。

【００４６】 接着を硬化するために、ミクロタイタープレートを３７℃で約１．５時間イン
キュベートした。次いで対応する溶解試薬（ａ：白血球５００，０００／ｍＬの
白血球ホモジネート（３× 凍結／解凍）由来の細胞を含まない上清；ｂ：正の コントロールとしてのｔ−ＰＡ ２ｍｇ／ｍＬ；負のコントロールとしてのＮａ Ｃｌ ０．９％）をクロット上に移した（１００μＬ／ウェル）。次いでミクロ タイターウェルを、プレート光度計、Photometer ＳＬＴ ３４０ ＡＴＴＣにお いて、動力学的に、波長４０５ｎｍ、３７℃で一晩６０×９００ｓ測定した。こ
の結果を図１および図２に示す。消光の減少はクロットの溶解の増加に対応して
いる。

【００４７】 エグリン ＞１μｇ／ｍＬおよびα₁−抗プロテアーゼ＞０．０１Ｕ／ｍＬの両 方とも、それらを用いて、１５時間以内のアッセイ中に生じるフィブリンクロッ
トの溶解を妨げることができることが示されたが、一方でこれは、フィブリンク
ロットの分解に関して白血球プロテアーゼが担う中心的役割に対するヒントであ
り、また他方では、本発明のエラスターゼ阻害剤の、この溶解の阻害に関する優
れた効果を示すものである。

【００４８】 ２．本発明で用いるエラスターゼ阻害剤のインビボ活性 本発明の範囲内の、白血球プロテアーゼ、特にエラスターゼ阻害剤の重要さを
測定するため、高繊維素溶解性および通常の繊維素溶解活性の両系における本発
明の組織接着剤の効果を試験して、組織接着剤による止血を説明し、阻害剤を含
まない接着剤およびプラスミン阻害剤としてアプロチニンのみを含む接着剤それ
ぞれと比較した。

【００４９】 ２．ａ）高い繊維素溶解 麻酔したウサキ（２−３ｋｇ）をヘパリン（４，０００Ｕ／ｋｇ）で凝血防止
した。３０分間後、右の肝葉の一部をクランプし、クランプから遠位の部分を切
除した。大きな血管からの出血を電気凝固法によって止血し、残りの散在する出
血を、２００秒以内の組織接着剤（最大４ｍＬ）の適用によって密閉した。１０
分後、ｔ−ＰＡの注入（７００Ｕ／ｋｇ／時間）を開始し、前もって重量を測っ
ておいたパッドの重量増加を測定することによって再出血の程度を２時間測定し
た。

【００５０】 このようにして、３つの異なる組織接着剤を試験した： ａ）負のコントロールとして、アプロチニン（３，０００Ｕ／ｍＬ）を含む組織
接着剤（ＳＴＩＭ３） ｂ）正のコントロールとして、アプロチニンを含まない組織接着剤（ＳＴＩＭ３
） ｃ）アプロチニンを含まず、エグリン（１０μｇ／ｍＬ）を含む組織接着剤（Ｓ
ＴＩＭ３）；本発明の接着剤。 これらの接着剤を盲試験し、Duploject（登録商標）シリンジ（IMMUNO, Vienn
a, AT）によって適用した。 得られた結果を図３に示す。

【００５１】 ２．ｂ）正常な繊維素溶解活性 高繊維素溶解性モデルに加え、ｔ−ＰＡ注入を行わず、観察時間を４時間に延
長して同じアッセイを行った。得られた結果を図４に示す。

【００５２】 高繊維素溶解性モデルおよび正常な繊維素溶解性モデル両方において、主とし
て長い溶解時間の場合に、慣用の接着剤と比較して再出血の減少が達成され、ア
プロチニンと比べて改善された性質を有することが示された。

【００５３】 これらの結果は、フィブリン接着の早期の溶解を妨げ、高い繊維素溶解活性を
有する分野においても再出血を妨げることができる、本発明の組織接着剤の優良
な効果を証明する。

【図面の簡単な説明】

【図１】 消光の減少がクロットの溶解の増加に対応することを示す図であ
る。 ａ）アプロチニンを含まないフィブリン接着剤 ｂ）アプロチニン（１，０００Ｕ／ｍＬ）を含むフィブリン接着剤 ｃ）α−１ ＰＩ（０．０１Ｕ／ｍＬ）を含むフィブリン接着剤 ｄ）α−１ ＰＩ（０．００１Ｕ／ｍＬ）を含むフィブリン接着剤 ｅ）α−１ ＰＩ（０．０００１Ｕ／ｍＬ）を含むフィブリン接着剤。

【図２】 消光の減少がクロットの溶解の増加に対応することを示す図であ
る。 ａ）アプロチニン（１，０００Ｕ／ｍＬ）を含むフィブリン接着剤 ｂ）エグリン（１μｇ／ｍＬ）を含むフィブリン接着剤 ｃ）アプロチニンを含まないフィブリン接着剤

【図３】 ｔ−ＰＡの注入によって誘導された、高い繊維素溶解性環境にお
ける、前もって重量を測っておいたパッドの重量の増加で表される再出血の程度
を示す図である。

【図４】 正常な繊維素溶解活性を有する環境、すなわちｔ−ＰＡを注入し
ない環境における、前もって重量を測っておいたパッドの重量の増加で表される
再出血の程度を示す図である。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ， ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，Ｋ Ｅ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ) ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ， ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，Ｄ Ｋ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ， ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，Ｌ Ｖ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ， ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，Ｕ Ｓ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＷ Ｆターム(参考） 4C081 AC04 BB04 CD012 CD082 CD111 CD122 CD152 CD18 CD21 CD23 CD34 CE01 CE02 CE03 DC12

Claims (28)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 混合されたエラスターゼ阻害剤を含むことを特徴とする、フ
   ィブリノーゲンに基づく組織接着剤。
2. 【請求項２】 エラスターゼ阻害剤が、エグリン、エラスターゼ−α₁−プ ロテイナーゼ阻害剤、α₁−抗プロテアーゼ、白血球プロテアーゼ阻害剤、エラ フィンまたはその混合物の群から選択されることを特徴とする、請求項１に記載
   の組織接着剤。
3. 【請求項３】 白血球プロテアーゼ阻害剤が白血球画分、特に顆粒性白血球
   から誘導された画分として提供されることを特徴とする、請求項２に記載の組織
   接着剤。
4. 【請求項４】 ヒトタンパク質のみから構成されていることを特徴とする、
   請求項１から３のいずれか一項に記載の組織接着剤。
5. 【請求項５】 ヒト血液タンパク質またはヒト血漿タンパク質のみから構成
   されていることを特徴とする、請求項１から４のいずれか一項に記載の組織接着
   剤。
6. 【請求項６】 エラスターゼ阻害剤が、フィブリノーゲンｍｇを基準として
   １：１００から１：１５０，０００の比、好ましくは１：５００から１：１１０
   ，０００の比で含まれることを特徴とする、請求項１から５のいずれか一項に記
   載の組織接着剤。
7. 【請求項７】 フィブリノーゲン１ｇ当たり少なくとも１０^-6Ｕ、好ましく
   は１０^-3から１０Ｕ／フィブリノーゲンｇまでの範囲のエラスターゼ阻害剤が含
   まれることを特徴とする、請求項１から６のいずれか一項に記載の組織接着剤。
8. 【請求項８】 少なくとも０．０００１ｍｇ／フィブリノーゲンｍｇ、好ま
   しくは少なくとも０．００１ｍｇ／フィブリノーゲンｍｇ、最も好ましくは０．
   ０１ｍｇ／フィブリノーゲンｍｇ以上のプラスミノーゲンを含むことを特徴とす
   る、請求項１から７のいずれか一項に記載の組織接着剤。
9. 【請求項９】 プラスミノーゲンを全く含まないことを特徴とする、請求項
   １から７のいずれか一項に記載の組織接着剤。
10. 【請求項１０】 さらに、好ましくはアプロチニン、α₂−マクログロブリ ン、α₁−抗トリプシン、ε−アミノカプロン酸、トラネキサム酸またはその混 合物の群から選択されるプラスミン阻害剤またはプラスミンアクチベーター阻害
    剤を含むことを特徴とする、請求項１から９のいずれか一項に記載の組織接着剤
    。
11. 【請求項１１】 好ましくはアミノグリコシド、ベータラクタム、ポリペプ
    チド、ホスホマイシン、テトラサイクリンまたはその混合物の群から選択される
    抗生物質を含むことを特徴とする、請求項１から１０のいずれか一項に記載の組
    織接着剤。
12. 【請求項１２】 好ましくは少なくとも０．００１Ｕ／フィブリノーゲンｍ
    ｇ、特に好ましくは少なくとも０．１Ｕ／フィブリノーゲンｍｇの量の因子ＸＩ
    ＩＩを含むことを特徴とする、請求項１から１１のいずれか一項に記載の組織接
    着剤。
13. 【請求項１３】 キニノゲンタンパク質を含まないことを特徴とする、請求
    項１から１２のいずれか一項に記載の組織接着剤。
14. 【請求項１４】 不織物としての固形表面とともに存在することを特徴とす
    る、請求項１から１３のいずれか一項に記載の組織接着剤。
15. 【請求項１５】 固形表面がコラーゲン、ゼラチンまたはポリサッカライド
    表面であることを特徴とする、請求項１４に記載の組織接着剤。
16. 【請求項１６】 高い繊維素溶解活性を有する環境において、少なくとも１
    ０時間、好ましくは少なくとも１５時間の間、溶解に対して抵抗性であることを
    特徴とする、請求項１から１５のいずれか一項に記載の組織接着剤。
17. 【請求項１７】 凍結乾燥されていることを特徴とする、請求項１から１６
    のいずれか一項に記載の組織接着剤。
18. 【請求項１８】 溶液中に存在することを特徴とする、請求項１から１６の
    いずれか一項に記載の組織接着剤。
19. 【請求項１９】 溶液が急速冷凍されていることを特徴とする、請求項１８
    に記載の組織接着剤。
20. 【請求項２０】 ウイルス不活化形態で存在することを特徴とする、請求項
    １から１９のいずれか一項に記載の組織接着剤。
21. 【請求項２１】 エラスターゼ阻害剤が組換え起源であることを特徴とする
    、請求項１から２０のいずれか一項に記載の組織接着剤。
22. 【請求項２２】 請求項１から２１のいずれか一項に記載の組織接着剤を、
    その一成分として含むことを特徴とする組織接着系。
23. 【請求項２３】 さらに、トロンビンおよび場合によりカルシウムを含む成
    分を含むことを特徴とする、請求項２２に記載の組織接着系。
24. 【請求項２４】 フィブリノーゲン成分およびエラスターゼ阻害剤を含む成
    分を含むことを特徴とする組織接着系。
25. 【請求項２５】 エラスターゼ阻害剤を含む成分がトロンビンを含むことを
    特徴とする、請求項２４に記載の組織接着系。
26. 【請求項２６】 さらに、系の成分（群）用の適用デバイス、特に二重シリ
    ンジ系を含むことを特徴とする、請求項２２から２５のいずれか一項に記載の組
    織接着系。
27. 【請求項２７】 高い繊維素溶解活性を有する分野、特に泌尿器科学分野に
    おいて適用されるべき調製物を製造するための、請求項１から１９のいずれか一
    項に記載の組織接着剤の使用。
28. 【請求項２８】 高い繊維素溶解活性を有する分野、特に泌尿器科学分野に
    おいて用いられるべき適用デバイスを製造するための、請求項２２から２６のい
    ずれか一項に記載の組織接着系の使用。