MXPA00001945A - Adhesivo para tejidos a base de fibrinogeno - Google Patents

Abstract

Se describe un adhesivo de tejidos a base de fibrinógeno, que contiene un un inhibidor de elastasa.

Description

ADHESIVO PARA TEJIDOS A BASE DE FIBRINOGENO Descripción de la invención: La invención se refiere a un adhesivo para tejidos a base de fibrinógeno. Los adhesivos a base de fibrinógeno, gue también se llaman adhesivos de fibrina, imitan en su efecto adhesivo a la última fase de la coagulación sanguínea. Aguí el fibrinógeno se disocia en monómeros de fibrina por efecto de la trombina, gue en el proceso de adhesión utiliza mayoritariamente la solución de fibrinógeno, pero gue también se encuentra presente en cada herida. Los monómeros de fibrina se acumulan espontáneamente en estructuras en forma de fibras ordenadas, que se denominan como fibrina. Esos agregados monoméricos de fibrina se estabiliza posteriormente por el efecto del factor XlIIa por medio de la reticulación transversal covalente. Así se forman entre las cadenas laterales específicas de glutamina y lisina de los monómeros de fibrina en una reacción de transamidación,los enlaces de péptidos. El factor XlIIa, gue igualmente se disocia del factor XIII inactivo por medio de trombina, es una transamidasa activa y se denomina en razón de su efecto como "factor estabilizante de fibrina" . Aunque con el uso de un adhesivo de tejido, en principio se realizan los mismos procesos que en el caso de la coagulación sanguínea "natural", en un adhesivo de tejidos REF.: 32780 los componentes y factores participantes se encuentran mucho mas concentrados que en la sangre . Por lo tanto , la coagulación sanguínea transcurre mucho mas rápido y la adhesión de tejidos obtenida o el coágulo formado son mucho mas seguros y también estables .

Las condiciones para el surgimiento de los adhesivos de fibrina a finales de los años 79 fueron los avances en el fraccionamiento y la purificación de los factores de coagulación sanguínea. Por lo tanto, era posible el preparar los factores de coagulación naturales de manera tan pura y concentrada, como la que se requiere para la adhesión de tejidos eficiente. Los primeros adhesivos de tejidos obtenidos comercialmente llegaron a finales de los años 70 al mercado y desde entonces han ofrecido muchas posibilidades de uso; sobre todo en los campos en los cuales con las técnicas quirúrgicas habituales siempre se presentaban grandes problemas, por ejemplo en el caso de hemorragias fuertes, en la adhesión entre nervios o en desgarren en órganos como hígado y bazo. Otra ventaja del adhesivo de fibrina,en comparación a coser con aguja e hilo .consiste en que el tejido u órgano a tratar no es dañado adicionalmente por el proceso de costura, por lo tanto con el uso del adhesivo para tejidos a base de fibrinógeno existen muchas menos complicaciones y cicatrices mas imperceptibles que con la costura quirúrgica habitual. Además del óptimo efecto adhesivo, que representa una alta resistencia a la carga y resistencia interna de las adhesiones así como fuerte adherencia del adhesivo a la herida o superficies de tejido, los procesos siguientes a la adhesión directa son esenciales para optimizar la adhesión de tejidos (ver AT-B 359 652 y 359 653) . A estos pertenecen el manejo y control de la adhesión entre las adhesiones en el cuerpo así como la capacidad de reabsorción y las propiedades promotoras de la cicatrización del adhesivo. Por esto para un adhesivo de tejidos tiene una importancia decisiva no solo el efecto adhesivo , sino también que la adhesión o el coágulo gue se formaron se disuelve otra vez en el cuerpo después de un período de tiempo determinado y la herida como consecuencia de la completa reabsorción del coágulo formado, sane completamente . Para esto es necesario controlar los procesos (propios del cuerpo) de disolución del coágulo sanguíneo formado, de la fibrinolísis, igualmente por la optimización del adhesivo de tejidos. En la fibrinolísis la fibrina presente en el coágulo sanguíneo formado es destruida o retirada y así el coágulo sanguíneo se disuelve. Para esto primero bajo la influencia de los activadores de plasminógenos intrínsecos o extrínsecos, como los factores de coagulación sanguínea XI y XII, precalicreina, urocinasa o t-PA, se forma a partir del plasminógeno inactivo la plasmina fibrinolíticamente efectiva, la cual además de la fibrina también disocia al fibrinógeno y a los factores de coagulación V y VIII. Ya que los procesos de fibrinolísis autónomos del cuerpo inician inmediatamente después de la formación del coágulo y con esto existe el peligro de que la adhesión de tejidos formada no permanezca lo suficientemente adhesiva y que el coágulo formado se des-estabilice antes de tiempo. Durante la adhesión de tejidos se provee por lo regular la adición de un inhibidor de plasminógeno un inhibidor del actividador de plasminógeno, para reducir el efecto de plasmina directa o indirectamente y así, entre otras cosas evitar la fibrinolísis prematura en la fase inicial de la adhesión. Con la concentración del inhibidor pueden controlarse a voluntad los tiempos de disolución (tiempos de lísis) del coágulo formado o de la adhesión. Entre mas inhibidor se provee, mas estable será el coágulo contra la fibrinolísis, mas tiempo permanecerá el coágulo estable y por lo tanto tardara en reabsorberse completamente la adhesión. También al utilizar el inhibidor de fibrinolísis puede encontrarse un punto medio óptimo entre la inhibición de la fibrinolísis temprana y un proceso de curación de la herida lo mas rápido posible. Como inhibidor de plasmina se utiliza el adhesivo para tejidos comercial Aportinina, que también se conoce como inhibidor de tripsina pancreática básica bovina. Aprotinina es un inhibidor de proteinasas (calicreina) polivalente e inhibe los factores de coagulación Xlla, Xla, Villa así como también plasmina y "activadores de plasmina, pero también tripsina, quimotripsina y calicreina. La aprotinina se preparaba antes principalmente de res . Debido a los problemas del uso de materiales bovinos en medicamentos, que son utilizados para tratar humanos, se utiliza cada vez mas frecuentemente aprotinina preparada de forma recombinante . Para la adhesión de tejidos se utiliza la aprotinina por lo regular en una cantidad de 20-300 unidades de inactivador de calicreina (KIE) /ml adhesivo de tejido, dependiendo la concentración óptima de la actividad fibrinolítica del tejido en cuestión. Sin embargo se ha mostrado que en los tej idos con alta actividad fibrinolítica, solo puede controlarse el efecto inhibidor de la fibrinolísis de la aprotinina a pesar del uso de altas concentraciones de aprotinina de manera muy limitada y por esto pueden presentarse procesos de lísis prematuros indeseables .

La tarea de la presente solicitud es por lo tanto el presentar un adhesivo para tejidos, con el cual se superen las desventajas de la técnica anterior, con el cual también se garantice en el caso de adhesión de tejidos en heridas con una alta actividad de plasmina, una protección satisfactoria y permanente contra fibrinolísis prematura, sin perjudicar la calidad de la adhesión. Esa tarea se resuelve de acuerdo con la invención por medio de un adhesivo de tejidos a base de fibrinógeno, el cual se caracteriza porque contiene un inhibidor de elastasa adicional. Se ha mostrado sorprendentemente, que el proceso de fibrinolísis no solo puede evitarse por medio de la inhibición de plasmina o la inhibición de la activación de los plasminógenos a plasmina, sino que también por medio de inhibidores de elastasa o por inhibidores cuyo efecto inhibidor de fibrinolísis se base mayoritariamente en un mecanismo de fibrinolísis sin fibrina. Para los fines de la presente invención esos inhibidores de fibrinolísis sin plasminógeno se encuentran por sencillez bajo el concepto "inhibidor de elastasa" . Ciertamente se especuló que además de la fibrinolísis provocada por la plasmina puede habar otros procesos de fibrinolísis, que no se basan en la plasmina (por ejemplo un proceso que transcurre de forma lisosómica; ver Simón et al., BLOOD 82 (8) (1993), páginas 2414-2422) , y que no pueden ser inhibidas por medio de aprotinina, pero también se mostró que esa "vía fibrinolítica sin plasmina" , no puede ser inhibida por medio de péptidos inhibidores de elastasa específicos como N-metoxi-succinil-L-alanil-L-prolil-L-.valanilclorometilcetona (AAPVCK) (ver Simón et al . ) . Mas sorprendentemente fue que en por medio de la presente invención se descubrió que los inhibidores que no presentan efectos inhibidores de plasmina o del activador plasminógeno, también los inhibidores de elastasa de acuerdo con la invención en el caso de adhesivos de plasmina tanto _ut? vitro como en vivo pueden garantizar un procesos de lísis muy controlable del coágulo formado. Esto es especialmente ventajoso en tejidos con alta actividad fibrinolítica, en los cuales ya con concentraciones moderadas puede evitarse una lísis prematura. La lísis prematura tiene un papel en tejidos con alta actividad fibrinolítica en el transcurso del primer momento después de la adhesión, ya que allí en el caos de una lísis prematura puede obtenerse una disolución (parcial) de la adhesión y con esto un renovado proceso de sangrado ("Rebleeding") . Se mostró además que el inhibidor de elastasa de acuerdo con la invención a utilizar en el adhesivo de tejidos de acuerdo con la invención, presenta el efecto fibrinolítico no solo en combinación con inhibidores que actúan sobre la plasmina, sino también puede garantizar por si solo toda la inhibición de fibrinolísis del inhibidor de elastasa. Una forma de realización especial de la presente invención consiste en que el adhesivo de tejidos además de fibrinógeno, el inhibidor de elastasa y eventualmente el factor XIII no contiene otros compuestos activos . La concentración de fibrinógeno en el presente adhesivo corresponde a los adhesivos de tejido conocidos y debe ser por lo regular de cuando menos mayor a 50 mg, en especial mayor a 70-80 mg fibrinógeno/ml, también cuando menos 20 veces la concentración de fibrinógeno en la sangre (2-4 mg/ml) . Preferentemente se encuentra el fibrinógeno en comparación con el crioprecipitado en una forma mas purificada. Los inhibidores de elastasa preferidos se seleccionan, en el marco de ía presente invención del grupo de eglina, inhibidor de proteinasa elastasa <xx , antiproteasa o?l f elafina, inhibidor de proteasa de leucocitos, en especial una fracción de leucocitos, preferentemente una fracción derivada de granulocitos, o inhibidor de leucoproteasa de secreciones, o sus mezclas. Como fracción de leucocitos puede utilizarse por ejemplo un lisato celular, en especial uno derivado de células humanas. Otros inhibidores de elastasa o de fibrinolísis que no actúan sobre la plasmina, pueden ser deducidos fácilmente por el técnico por medio del sistema de prueba presentado en los ejemplos, al buscar su adecuación en adhesivos de tejidos de acuerdo con la invención o utilizando la prueba de inhibición de elastasa conocida en el estado de la técnica. A los inhibidores de elastasa preferidos se suman también diferentes derivados de los inhibidores de acuerdo con la invención, por ejemplo fragmentos o formar modificadas químicamente o por medio de diseño de proteínas (recombinante) de esos inhibidores, debiendo de presentar esos derivados por supuesto la propiedad cualititativa de inhibidor de elastasa del inhibidor básico. Preferentemente el adhesivo de tejidos de acuerdo con la invención consiste exclusivamente de proteínas humanas, en donde bajo proteínas humanas también se deben entender las proteínas humanas preparadas de forma recombinante. Preferentemente las proteínas utilizadas en el adhesivo de tejidos se preparan ya sea a partir de sangre, plasma, crioprecipitado o de un cultivo celular recombinante. Una adhesivo de tejidos especialmente preferido se caracteriza porque consiste esencialmente de proteínas de sangre o plasma humano. La proporción de inhibidor de elastasa a mg de fibrinógeno es preferentemente de 1:100 a 1:150 000, preferentemente 1:500 a 1:110 00. Expresado en unidades de inhibidor a g de fibrinógeno, se agregan al adhesivo de tejidos, preferentemente 10"6 U/g fibrinógeno. Especialmente se prefiere en el rango entre 10"3 y 10 U/g fibrinógeno. La cantidad del inhibidor adicionado al adhesivo de acuerdo con la invención, inhibidor que puede encontrarse de forma natural también en la sangre o el plasma, es preferentemente cuando menos 20 veces, en especial cuando menos 50 veces mayor, que su concentración fisiológica en la sangre o el plasma. El adhesivo de tejidos de acuerdo con la invención puede tener por ejemplo la siguiente composición: 75-115 mg/ml proteína aglutinable, de estos 50-110 mg/ml, preferentemente 70-110 mg/ml fibrinógeno; eventualmente 1-50, preferentemente 10-50 IU factor XlII/ml. Como inhibidor puede usarse eglina en una cantidad de entre 1-100 µg/ml o antiproteasa r?x con 0.01-1 U/ml. Como regla es suficiente, el utilizar el inhibidor de elastasa en una cantidad, que corresponda al efecto inhibidor de fibrinolísis de la aprotinina en los adhesivos de tejidos conocidos. El adhesivo de acuerdo con la invención, dependiendo de la finalidad de la adhesión, puede contener plasminógeno o estar libre de plasminógeno. Cuando contiene plasminógeno, debe encontrarse esto en una cantidad de cuando menos 0.0001 mg/mg fibrinógeno, preferentemente mas de 0.001, en especial mas de 0.01. Con la presencia de plasminógeno en el adhesivo de tejidos debido a su activación a plasmina existe igualmente la posibilidad de definir mas claramente las propiedades fibrinolíticas del adhesivo de tejidos. Por otro lado el adhesivo de tejido en una forma de realización preferida no contiene nada de plasminógeno o lo contienen solo en una cantidad muy reducida. Como se menciona antes la presencia del inhibidor de elastasa como único inhibidor de fibrinolísis en el adhesivo de tej ido * sorprendentemente es suficiente para la funcionalidad del adhesivo de acuerdo con la invención. Preferentemente además del inhibidor de elastasa se utiliza también un inhibidor de plasmina o un inhibidor de activador de plasmina, lo que igualmente contribuye a mejorar el control de la lísis de la reabsorbción y con esto a la curación de la herida . Inhibidores de plasmina o inhibidores de activador de plasminógeno preferidos con sobre todo aprotinina, pero también macroglobulina a-2, antitripsina a^, ácido e-amino-caprónico, ácido tranexámico o mezclas de esas substancias . Aunque algunos autores le atribuyen también por ejemplo a la a -antitripsina ciertos efectos sobre la elastasa, se consideran las substancias mencionadas aquí como activadores de plasmina o plasminógeno, ya que esta es la actividad primaria que presentan esas substancias en el presente campo de aplicación. Esto se aplica obviamente también para la presente invención. Además pueden estar contenidos otros aditivos anti-adhesivos, como por ejemplo ácido hialurónico. Otra forma de realización preferida del adhesivo de tejido de acuerdo con la invención consiste en proveer un antibiótico en el adhesivo, como ya fue propuesto en AT-B-369 990. Los antibióticos especialmente preferidos se seleccionan del grupo de aminoglicosidos, betalactamas, polipéptidos, fosfomicina, tetraciclina o sus mezclas. En otra forma de realización preferida se encuentra el antibiótico en forma de un derivados difícilmente soluble. Mas preferentemente en el adhesivo de tejido de acuerdo con la invención se provee también factor XIII, de tal forma que se influye positivamente sobre la resistencia interna del coágulo y la fuerza y fijación de la adhesión. El factor XIII se utiliza preferentemente en una cantidad de 1-50 unidades/ml, preferentemente aproximadamente 10 U/ml. En relación al fibrinógeno se encuentra el factor XIII preferentemente en una concentración mínima de 0.001 U/mg fibrinógeno, en especial cuando menos 0.1 U/mg fibrinógeno. Dependiendo del tipo de adhesión o del tipo de tejido puede optimizarse la concentración óptima de factor XIII por cada técnico. Si está presente un antibiótico en el adhesivo para tejidos, se recomienda básicamente proveer un poco mas de factor XIII (ver AT-B-369-990) . De manera mas preferida el adhesivo de tejidos de acuerdo con la invención está libre de proteínas de quininogenas (como por ejemplo calicreina, etc) , con lo cual pueden evitarse las reacciones secundarias problemáticas de antes . De acuerdo con una forma de realización preferida el adhesivo de tejidos de acuerdo con la invención puede presentarse en combinación con una superficie sólida en forma de aposito, con lo cual para heridas de gran superficie se obtiene un cierre óptimo de la herida y un recubrimiento óptimo. Ejemplos de esos apositos se mencionan en AT-B 374 367. La superficie sólida del aposito es por lo tanto preferentemente una superficie de colágeno, gelatina o pslisacárido, pudiéndose utilizar otras superficies medicinales adecuadas, que eventualmente también pueden estar impregnadas para los fines de uso especiales . Se ha mostrado que con el adhesivo de tejidos de acuerdo con la invención, que contiene un inhibidor de elastasa , tanto en un medio con alta actividad fibrinolítica durante un período de cuando menos 10 horas, preferentemente 15 horas, puede lograrse una resistencia a la lísis. Resistencia a la lísis significa de acuerdo con la presente invención, que en el transcurso de un período determinado de tiempo no se ha formado un correspondiente coágulo de fibrina. La determinación de la resistencia a la lísis se realiza por ejemplo por medio de una medición fotometrica dependiendo del tipo. Un adhesivo de tejido preferido de acuerdo con la presente invención presenta así una resistencia a la lísis de cuando menos 10 horas, preferentemente cuando menos 15 horas, en un medio con alta actividad fibrinolítica; Bajo el termino "alta actividad fibrinolítica" se entiende por ejemplo una actividad de plasmina, que se encuentra por encima del potencial fisiológico de plasmina. El potencial fribinolítico puede por ejemplo expresarse por medio de la concentración de plasminógeno (ver por ejemplo Henrikson et al. Thrombosis Research 16: 301-312; 1979) . Esa propiedad de las resistencia a la lísis puede ser verificada por cada técnico por medio de una prueba sencilla, como la que se describe en los ejemplos. En la aplicación el adhesivo de tejidos de acuerdo con la invención se encuentra preferentemente como solución, para el almacenamiento se recomienda ya sea la congelación de la solución, de tal forma que el adhesivo de tejidos se encuentra en forma congelada, o la liofilización del adhesivo, también proveerse en "forma liofilizada" se entiende obviamente solo una preparación de adhesivo de tejidos conservado por medio de secado por congelación, que por la subsecuente reconstitución puede ser reconstituida casi completamente (esto cuando menos en un 80%) en el transcurso de algunos minutos a 37°C.

El adhesivo de acuerdo con la invención se encuentra ventajosamente en una forma inactivada viralmente. Ese tratamiento de inactivación se garantiza preferentemente con un tratamiento térmico o con un tenssactivo, por ejemplo por medio del tratamiento térmico en estado sólido, en especial un tratamiento con vapor de acuerdo con EP-0 159311 , o EP-0 519 901 o EP-0 674 531. Otros tratamientos para la inactivación de virus abarcan también el tratamiento con métodos químicos o guímico/físicos por ejemplo con substancias caotrópicas de acuerdo con 094/13329, DE 44 34 538 O EP-0 131 740 (solvente) o la fotoinactivación. La nanofiltracíón representa igualmente un procedimiento preferido para la reducción de virus en el marco de la presente invención. Los inhibidores de elastasa utilizados de acuerdo con la invención, de acuerdo con una forma de realización preferida, pueden tener un origen recombinante . La presente invención se refiere además a un sistema adhesivo de tejido, el cual contiene como un componente un adhesivo de tejidos de acuerdo con la invención, gue contiene un inhibidor de elastasa. El sistema adhesivo de tejidos de acuerdo con la invención contiene por lo regular como componente adicional, un componente de trombina, en el cual la trombina se encuentra en forma líguida o como liofilizado reconstituible, en donde el componente de trombina en el adhesivo, dependiendo del campo de aplicación, puede presentar diferentes concentraciones . El sistema adhesivo de tejidos, gue se encuentra igualmente bajo la presente invención, se caracteriza porgue abarca un componente de fibrinógeno y un componente separado de este, gue contiene un inhibidor de elastasa. Por lo regularles sin embargo/ventajoso el proveer un componente de inhibidor de fibrinolísis en el componente de fibrinógeno (ver AT-B 359 652 y 359 653) . Por medio de dispositivos de aplicación adecuadas puede aplicarse el componente inhibidor separado del componente de fibrinógeno . Preferentemente el componente gue contiene un inhibidor de elastasa, contiene simultáneamente trombina, pudiendo encontrarse este componente ya sea como liofilizado o como solución (eventualmente congelada) . El sistema adhesivo de tejidos de acuerdo con al invención abarcan además dispositivos de aplicación adecuados para los componentes del sistema. En especial se han recomendado sistemas de inyección doble, como los gue describen en EP 0 037 393, EP 0 210 160 o EP 0 292 472, o también dispositivos de aplicación como los descritos en EP 0 315 322 o EP 0 669 100. Con estos dispositivos de aplicación especiales, también aquella forma de realización en la cual el inhibidor se aplica en el componente de trombina, se pueden obtener resultados de adhesión confiables . El presente adhesivo es adecuado para todas las posibilidades de aplicación conocidas del adhesivo de fibrina. Sin embargo se recomienda en particular para la adhesión en zonas con alta actividad fibrinolítica. El objeto de la presente solicitud es por lo tanto el uso del adhesivo de tejido de acuerdo con la invención o el sistema adhesivo de tejidos de acuerdo con la invención para la producción de una preparación o un dispositivo de aplicación para utilizarse en zonas con alta actividad fibrinolítica, en especial en urología. El objeto de la presente invención es además un procedimiento para utilizar un adhesivo de tejido de acuerdo con la invención o un sistema adhesivo de tejido de acuerdo con la invención en la cirugía en zonas con alta actividad fibrinolítica, en especial en urología. La invención se explicara con la ayuda de los siguientes ejemplos y dibujos, sin que por sea limitada por estos. a donde muestra: La figura 1 la reducción de la extinción correspondiente a la creciente lísis del coágulo, a) adhesivo de fibrina sin aprotinina b) adhesivo de fibrina con aprotinina (1000 U/ml) c) adhesivo de fibrina con alfal-PI (0.01 U/ml) d) adhesivo de fibrina con alfal-PI (0.001 U/ml) d) adhesivo de fibrina con alfal-PI (0.0001 U/ml) La figura 2 la reducción de la extinción correspondiente a la creciente lísis del coágulo. a) adhesivo de fibrina con aprotinina (1000 U/ml) b) adhesivo de fibrina con eglina (1 µg/ml) c) adhesivo de fibrina sin aprotinina; La figura 3: el valor del re-sangrado "Rebleedings" expresado como aumento de peso del isopos previamente pesados, en el medio hiperfibrinolítico, el cual fue inducido por medio de la infusión de t-PA: y La figura 4: el valor del re-sangrado "Rebleedings" expresado como aumento de peso del .isopos previamente pesados, en el medio con actividad fibrinolítica normal, también sin infusión de t-PA. Ejemplos : 1. Prueba en vitro para determinar el efecto inhibidor de fibrinolísis del adhesivo de tejido de acuerdo con la invención (actualmente según el solicitante la mejor modalidad de realización de la invención) En este ejemplo se muestra el bloqueo de la lísis de un coágulo de adhesivo de tejidos por medio de eglina o antiproteasa a^ . Para esto se disuelve en agua el adhesivo para tejidos STIM3 (IMMUNO AG, Viena, AT) (que contiene 70 mg de fibrinógeno/ml) y a continuación se diluye hasta 1:6 con solución de NaCl 0.9M. Efe a solir a-hesiva de tejidos se peze-la ai uia pxpcrcá-?-i 1:1 cm nía solución de trombina diluida en CaCl2 40 mM y subsecuentemente diluida a 0.1 E/ml con una solución(1 :5) de CaCl2 40mM/NaCl 0.9 M y se pipetea sobre una microplaca, colocando 100 µl/pozo. Diferentes concentraciones de los inhibidores se agregaron a sendos 5 µl del adhesivo de tejidos (Eglina l -lOOµg/ml, antiproteasa c^ 0.01-1 U/ml). Para endurecer el adhesivo se incubó la placa de microtitulación aproximadamente 1.5 horas a 37°C. Los reactivos de lísis correspondientes (a: el sobrante libre de células del homogenato de leucocitos (congelar 3 veces/descongelar) de 500 000 leucocitos/µl; b: t-PA 2mg/ml como control positivo; NaCl 0.9% como control negativo) se pipetearon sobre un coágulo (100 µl/pozo) . A continuación se midieron los pozos de microtitulación en un fotómetro de placas a 37°C a una longitud de 405 nm, cinéticamente durante la noche 60x900 s en el fotómetro SLT 340 ATTC. Los resultados se dan en la figura 1 y 2, en donde la reducción de la extinción corresponde a la creciente lísis del coágulo. Se ha mostrado que tanto con >1 µg de englina/ml como también con >.0.01 U antiproteasa a-i/ml es posible en la en el transcurso de 15 horas evitar la lísis del coágulo de fibrina, lo que por un lado permite atribuir el papel central de las proteasas de leucocitos para la destrucción del coágulo de fibrina y muestra el excelente efecto de los inhibidores de elastasa de acuerdo con la invención sobre la inhibición de esa lísis. 2. Efecto en vivo de los inhibidores de elastasa utilizados de acuerdo con la invención Para determinar el significado de las proteasas de leucocitos, en especial de inhibidores de elastasa, en el marco de la presente invención, se examinaron para la demostración de hemostasis por medio del adhesivo de tejidos así como el efecto del adhesivo de acuerdo con la invención en sistemas -tiiperfibrinoliticos como también en caso de actividad fibrinolítica normal y se compararon con adhesivos sin inhibidores o con un adhesivo, el cual solo contiene aprotinina como inhibidor de plasmina. 2.a) Hiperfibrinolísis Conejos anestesiados (2-3 kg) se heparinizaron (4000 U/kg) . Media hora después se colocaron pinzas en la parte derecha del hígado y otro parcialmente lejos de las pinzas . Las hemorragias de los vasos grandes se detuvieron por medio de electrocoagulación y el sangrado difuso residual se taponeo -? por medio de la aplicación del adhesivo para tejidos (max 4 ml) en el transcurso de 200 segundos. 10 minutos después se inicio la infusión de t-PA (700 U/kg/h) y se determinó durante 2 horas el valor del "rebleeding" re-sangrado, para lo cual se medio el aumento de peso de isopos previamente pesados . Para esto se probaron tres adhesivos para tejidos. a) adhesivo para tejidos (STIM3) con aprotinina (3000 U/ml) como control negativo b) adhesivo para tejidos (STIM3) sin aprotinina como control positivo c) adhesivo para tejidos (STIM3) sin aprotinina con eglina (10 µg/ml) ; adhesivo de acuerdo con la invención. Ese adhesivo se inactivaron y se aplicaron por medio de una jeringa Duploject® (firma IMMUNO, Viena, AT) . Los resultados obtenidos se dan en la figura 3. b. Actividad fibrinolítica normal Adicionalmente al modelo de hiperfibrinolísis se realizaron los mismos experimentos sin infusión de t-PA, sin embargo con un tiempo de observación prolongado de 4 horas. Los resultados obtenidos se dan en la figura 4. Se ha mostrado que tanto en el modelo de hiperfibinolísis como también en la fibrinolísis normal se hace posible un menor re-sangrado en comparación con los adhesivos comunes, el cual con tiempos de lísis mas largos también presenta propiedades mejoradas frente a la aprotinina.

Los resultados demuestran los excelentes efectos del adhesivo de tejidos de acuerdo con la invención, con el cual pueden evitarse las lísis prematuras del adhesivo de fibrina, con lo cual se evitan los re-sangrados ("Rebleedings") también en zonas con alta actividad fibrinolítica . Se hace constar que con relación a esta fecha, el mejor método conocido por la solicitante para llevar a la práctica la citada invención, es el convencional para la manufactura de los productos a que la misma se refiere.

Claims (28)

1. REIVINDICACIONES Habiéndose descrito la invención como antecede, se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes reivindicaciones: l.- Adhesivo para tejidos a base de fibrinógenos, caracterizado porgue contiene un inhibidor de elastasa adicional .
2. 2.- Adhesivo para tejidos de acuerdo con la reivindicación 1, caracterizado porgue el inhibidor de elastasa se selecciona del grupo consistente de eglina, inhibidor de proteinasa elastasa a1 , antiproteasa a1# inhibidor de protensa de leucocitos elafina y sus mezclas.
3. 3.- Adhesivo para tejidos de acuerdo con la reivindicación 2, caracterizado porque el inhibidor de proteasa de leucocitos se presenta como fracción de leucocitos, en especial de una fracción derivada de granulocitos .
4. 4.- Adhesivo para tejidos de acuerdo con una de las reivindicaciones 1 a 3, caracterizado porque está formado exclusivamente por proteínas humanas .
5. 5.- Adhesivo para te idos de acuerdo con una de las reivindicaciones 1 a 4, caracterizado porque está formado exclusivamente por proteínas sanguíneas o plasmáticas.
6. 6.- Adhesivo para tejidos de acuerdo con una de las reivindicaciones 1 a 5, caracterizado porque el inhibidor de elastasa está contenido en una proporción de 1:100 a 1:150 000, preferentemente 1:500 a 1:110 000, en relación al mg de fibrinógeno .
7. 7.- Adhesivo para tejidos de acuerdo con una de las reivindicaciones 1 a 6, caracterizado porque contiene cuando menos 10"6 U del inhibidor de elastasa por g de fibrinógeno, preferentemente entre 10"3 y 10 U/g de fibrinógeno.
8. 8.- Adhesivo para tejidos de acuerdo con una de las reivindicaciones 1 a 7, caracterizado porque contiene el plasminógeno en una cantidad de cuando menos 0.0001 mg/mg fibrinógeno, preferentemente cuando menos 0.001, y lo mas preferido más de 0.1.
9. 9.- Adhesivo para tejidos de acuerdo con una de las reivindicaciones 1 a 7, caracterizado porque no contiene plasminógeno.
10. 10.- Adhesivo de acuerdo con una de las reivindicaciones 1 a 9, caracterizado porque además contiene un inhibidor de plasmina o un inhibidor de activador de plasmina, el cual preferentemente se selecciona del grupo de aprotinina, macroglobulina a2 , antitripsina ? , ácido e-amino-carprónics, ácido tranexámico o sus mezclas.
11. 11.- Adhesivo de acuerdo con una de las reivindicaciones 1 a 10, caracterizado porque contiene un antibiótico, el cual preferentemente se selecciona del grupo de aminoglicosidos, betalactamas, polipéptidos, fosfomicina, tetraciclina o sus mezclas.
12. 12.- Adhesivo para tejidos de acuerdo con una de las reivindicaciones 1 a 11, caracterizado porque contiene factor XIII, preferentemente en una cantidad de cuando menos 0.001 U/mg fibrinógeno, en especial se prefiere cuando menos 0.1 U/mg.
13. 13.- Adhesivo para tejidos de acuerdo con una de las reivindicaciones 1 a 12, caracterizado porque está libre de proteínas guininogenas .
14. 14.- Adhesivo para tejidos de acuerdo con una de las reivindicaciones 1 a 13, caracterizado porgue en combinación con una superficie sólida, se presenta en forma de aposito.
15. 15.- Adhesivo para tejidos de acuerdo con la reivindicación 14, caracterizado porque la superficie sólida es una superficie de colágeno, gelatina o polisacárido.
16. 16.- Adhesivo para tejidos de acuerdo con las reivindicaciones 1 a 15, caracterizado porque es resistente a la lísis en un medio con alta actividad fibrinolítica durante un período de tiempo de cuando menos 10 horas, preferentemente cuando menos 15 horas .
17. 17.- Adhesivo para tejidos de acuerdo con una de las reivindicaciones 1 a 16, caracterizado porque, es liofilizado.
18. 18.- Adhesivo para tejidos de acuerdo con una de las reivindicaciones 1 a 16, caracterizado porque se encuentra en solución.
19. 19.- Adhesivo para tejidos de acuerdo con la reivindicación 18, caracterizado porque la solución se encuentra congelada .
20. 20.- Adhesivo para tejidos de acuerdo con una de as reivindicaciones 1 a 19, caracterizado porque se encuentra en una forma viralmente inactivada.
21. 21.- Adhesivo para tejidos de acuerdo con una de las reivindicaciones 1 a 20, caracterizado porque el inhibidor de elastasa es de origen recombinante .
22. 22. - Sistema adhesivo caracterizado porque como un componente contiene un adhesivo para tejidos de acuerdo con una de las reivindicaciones 1 a 21.
23. 23.- Sistema adhesivo de acuerdo con la reivindicación 22, caracterizado porque contiene un componente adicional que contiene trombina y eventualmente caicio.
24. 24. - Sistema adhesivo caracterizado porque consiste de un componente de fibrinógeno y un componente que contiene un inhibidor de elastasa .
25. 25. - Sistema adhesivo de acuerdo con la reivindicación 24, caracterizado porque el componente que contiene un inhibidor de elastasa, contiene trombina.
26. 26.- Sistema adhesivo de acuerdo con una de las reivindicaciones 22 a 25, caracterizado porgue consiste además de un dispositivo de aplicación para los componentes del sistema, en especial un sistema de inyección doble.
27. 27.- Uso de un adhesivo para tejidos de acuerdo con una de las reivindicaciones 1 a 19 para producir una preparación para usarse en una zona con alta actividad fibrinolítica, en especial en la urología.
28. 28.- Uso de un sistema de adhesivo de tejidos de acuerdo con una de las reivindicaciones 22 a 26 para la preparación de un dispositivo de aplicación para el uso en una zona con alta actividad fibrinolítica en especial en la urología.