JP2000508888A - 低温殺菌したバイオマスからの微生物多不飽和脂肪酸含有オイルの調製 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 この発明はトリグリセリド含有量と酸化安定度の高い多不飽和脂肪酸(ＰＵＦＡ)含有微生物油を開示する。さらに本発明は次の工程を含む、温殺菌ブロスから誘導される微生物バイオマスからこの種の油を回収する方法を開示する:微生物バイオマスを押出して顆粒を形成させ、該顆粒を乾燥させ、次いで適当な溶剤を用いて該乾燥顆粒から該油を抽出する。

Description

【発明の詳細な説明】 低温殺菌したバイオマスからの微生物多不飽和脂肪酸含有オイルの調製 発明の分野 本発明は、多不飽和脂肪酸（ＰＵＦＡ）含有オイル、詳細には少なくとも１つ の多不飽和脂肪酸を含有する純粋で安定な微生物オイルに関する。本発明のオイ ルは、低温殺菌を行ったバイオマスまたは発酵培養液から得ることができる。 発明の背景 種々の食品において、発酵プロセスから得られる多不飽和脂肪酸を含有する脂 質産物が含まれる傾向が益々大きくなっている。重要なことに、多不飽和脂肪酸 を幼児用処方に組み入れることが必要であることが最近確立された。 多不飽和脂肪酸を含有する脂質またはオイルの発酵生産に関する種々の方法が 記載されている。例えば、モルティエレラ（Ｍｏｒｔｉｅｒｅｌｌａ）からのγ −リノレイン酸（ＧＬＡ）含有脂質の生産に関する欧州特許公開公報ＥＰ−Ａ− ０１５５４２０；モルティエレラ（Ｍｏｒｔｉｅｒｅｌｌａ）および／またはピ チウム（Ｐｙｔｈｉｕｍ）からのアラキドン酸（ＡＲＡ）含有オイルの生産に関 する欧州特許公開公報ＥＰ−Ａ−０２２３９６０、同ＥＰ−Ａ−０２７６５４１ および国際特許公開公報ＷＯ−Ａ−９２／１３０８６;クリプテコジニウム・コ ーニイ（Ｃｒｙｐｔｈｅｃｏｄｉｎｉｕｍ ｃｏｈｎｉｉ）またはトラウストキ トリウム（Ｔｈｒａｕｓｔｏｃｈｙｔｒｉｕｍ）からのドコサヘキサエン酸(Ｄ ＨＡ)含有オイルの生産に関する国際特許公開公報ＷＯ−Ａ−９１／０７４９８ および同ＷＯ−Ａ−９１／１１９１８;ニッツシア（Ｎｉｔｚｓｃｈｉａ）から のエイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）含有オイルの生産に関する国際特許公開公報 ＷＯ−Ａ−９１／１４４２７；および微藻類からのＡＲＡおよびＥＰＡの生産に 関する米国特許第５５３９１３３号。 典型的には、所望の多不飽和脂肪酸を含有する脂質を産生する微生物種が適切 な培地中で培養され、次いでバイオマスを集め、前処理の後に適切な溶媒を用い て微生物バイオマスから脂質を抽出することができる。このようにして抽出され た脂質は粗製状態であり、従って多くの場合、いくつかの精製工程に付される。 湿ったバイオマス塊の前処理は、通常、乾燥（例えば、スプレー乾燥または凍 結乾燥など）および／または機械的な破壊（例えば、ホモジネーションまたは粉 砕）による。バイオマスの乾燥は溶媒量を減少させ、そして取り扱いが面倒な乳 化物が防止されるために好ましい。酸化および熱に敏感な脂質（例えば、多不飽 和脂肪酸含有脂質など）を単離することが必要な場合には、酸素によって引き起 こされる分解を高める好ましくない条件にできる限り曝さないように特に注意す ることが必要である。しかし、当該分野で使用されるバイオマスの前処理方法で は、そのような好ましくない条件は避けられない。 Ｙａｍａｄａら（単細胞オイルの工業的応用(Ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌ ａｐｐ ｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｏｆ ｓｉｎｇｌｅ ｃｅｌｌ ｏｉｌｓ)Ｋｙｌｅおよ びＲａｔｌｅｄｇｅ編、１１８〜１３８頁、１９９２年）は、トリグリセリド含 有量が９０％である、モルティエレラ・アルピナ（Ｍｏｒｔｉｅｒｅｌｌａ ａ ｌｐｉｎａ）から精製されるアラキドン酸含有オイルを記載する。回収工程にお いて、集められたバイオマスは乾燥され、そしてボールミルによる破砕の後にヘ キサン抽出される。この方法はまた、好ましくない条件に曝されることを最小限 にしない。 従って、当該分野で公知の方法による微生物バイオマスから単離される多不飽 和脂肪酸含有脂質は、オイルの品質に対して好ましくない影響を与える酸化性条 件に曝されている。 発明の説明 本発明の第１の局面により、少なくとも１つの多不飽和脂肪酸（ＰＵＦＡ）を 含有し、トリグリセリド含有量が９０％より高い微生物オイルが提供される。本 発明のオイルは、従来のＰＵＦＡ含有オイルと比較して特に安定であることが見 出されている。ＰＵＦＡは、１つ以上の微生物によって、適切には発酵プロセス で産生される。ＰＵＦＡは、種々の工程により、本質的には、ＰＵＦＡを産生す る発酵プロセスから得られる物質のバイオマスから回収される。 本発明のオイルは微生物的に得ることができるため、本発明のオイルは合成オ イルを含まないことが理解される。理論により捕らわれたくないが、本出願人は 、本発明のオイルが、本発明以前に記載されたオイルよりも安定である理由につ いて多くの説明がなされるかもしれないと考える。 本発明のオイルは、バイオマス中に存在していた化合物を１つ以上含有する。 一方、これらの化合物の多くは、抗酸化剤として作用し得る。あるいはまたはさ らに、１つ以上のこれらの化合物は、オイル中に存在する酸化性（またはプロオ キシダント）物質の１つ以上を不活性化（部分的に、または少なくとも阻害）し 得る。 多数の物質が、ＰＵＦＡ含有オイルの分解に関与し得る。これらの物質として 、触媒として作用し得る金属、例えば銅、鉄および／または亜鉛が挙げられる。 他に、同様の金属は、ラジカル開始剤として作用し得る。他の分解性の影響因子 は、光と熱である。例えば、これらの金属の１つと錯体を形成し得る物質が１つ 以上存在し得る。すなわち、それらは、ラジカル捕捉剤として作用し得る。 あるいは、本発明のオイルを得る方法は、バイオマス中に最初から存在してい たかもしれない酸化性または酸化を引き起こす物質の１つ以上を除去し得る。 分解は、ＰＵＦＡがＡＲＡである場合に特に高く、従ってオイル中の物質は、 ＰＵＦＡの分解を阻害または防止し得ると考えられる。 本発明のオイルを得る方法（後にその詳細を記載する）は、微粒子の顆粒形態 またはさらには乾燥顆粒を形成する工程を包含し得る。これらは、顆粒または顆 粒化物の内部のＰＵＦＡが大気、特に酸素と接触することを少なくし、それによ り酸化される機会を減少させ得る。 本発明の方法では、ステロール（例えば、５−デスモステロールなど）の最大 量が重量で１．５％であるようにステロール含有量を減少させることができる。 従って、本発明のオイルは、ラジカル阻害剤、ラジカル捕捉剤および／または 抗酸化剤を１つ以上含有する。 上記のように、本発明は、高いトリグリセリド含有量（例えば、少なくとも９ ０％）を有し、そして大きいランシマト（Ｒａｎｃｉｍａｔ）誘導時間（例えば 、８０℃で少なくとも５時間）を有する微生物の多不飽和脂肪酸（ＰＵＦＡ）含 有オイルに関する。多不飽和脂肪酸は、Ｃ１８、Ｃ２０またはＣ２２のω−３多 不飽和脂肪酸、およびＣ１８、Ｃ２０またはＣ２２のω−６多不飽和脂肪酸であ り得る。好ましくは、Ｃ２０またはＣ２２のω−３多不飽和脂肪酸、あるいはＣ ２０のω−６多不飽和脂肪酸である。特に、ＰＵＦＡは、アラキドン酸（ＡＲＡ ）、エイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）、ドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）である。 そのようなオイルの例は、モルティエレラ（Ｍｏｒｔｉｅｒｅｌｌａ）から得ら れるアラキドン酸含有オイル、またはクリプテコジニウム（Ｃｒｙｐｔｈｅｃｏ ｄｉｎｉｕｍ）から得られるドコサヘキサエン酸含有オイルである。 本発明のオイルは、飲食物、食品または食品組成物において都合よくに使用す ることができ、あるいは動物だけでなくヒトに対する栄養補給物として役立ち得 る。さらに、本発明のオイルは、化粧品として使用することができる。顆粒状粒 子または顆粒は、食品または飼料用の組成物または補給物として使用することが できる。 本発明のオイルは、多不飽和脂肪酸を１つ以上含有し、そして高いトリグリセ リド含有量を有し得る。本発明のオイルは、当該分野で記載された微生物の多不 飽和脂肪酸含有オイルよりもさらに高い酸化安定性を有する。 本発明のオイルは、好ましくは以下の特徴を有する。本発明のオイルは、９０ ％を超えるトリグリセリド含有量、好ましくは９３％以上のトリグリセリド含有 量を有する。しかし、適切には、トリグリセリド含有量は９５％以上であり、必 要に応じてトリグリセリド含有量は９７％以上である。本発明のオイルは、さら に、８０℃で５時間以上のランシマト誘導時間、好ましくは８０℃で５〜１６時 間の誘導時間を有する。より適切には８０℃で７〜１６時間の誘導時間、必要に 応じて８０℃で１０〜１６時間の誘導時間を有し得る。ランシマト誘導時間は、 ８０℃の温度で測定される。なぜなら、この温度は、多不飽和脂肪酸を含有する オイルについてよりよく適するからである。１００℃で測定される場合、本発明 のオイルは３〜５時間の誘導時間を有し得る。 本発明のオイルのランシマト誘導時間は、外部から添加された安定化物質（例 えば、抗酸化剤など）の非存在下で測定されることに注意しなければならない。 オイル中に安定化の添加剤が存在すると、そのランシマト誘導時間は明らかに大 きくなる。安定化用添加剤（例えば、抗酸化剤など）は、オイル回収プロセスの 特定の工程、例えば、微生物が培養されている培地への添加またはオイル自身へ の添加に由来する。ランシマト試験は、試験物質に空気を吹き付けながら試験物 質を加熱することを含む。試験物質が酸化された場合、その重量は増大する。通 常、酸化は、特定の時間の後に急速に生じる。従って、この時間を、酸化に対す る試験物質の安定性の指標とすることができる。 本発明のオイルのさらなる特徴は、低いジグリセリド含有量(好ましくは、２ ％未満)および／または低いモノグリセリド含有量（好ましくは、０．１％未満 ）であり得る。本発明のオイルは、わずかに着色し、低いレベルの匂いおよび／ または低いアニシジン値を有し得る（アニシジンは、アルデヒド（酸化による分 解産物）に関する試験である）。 アニシジン値は、典型的には、０．１〜５の範囲、好ましくは０．１〜２の範 囲、より好ましくは０．１〜１の範囲である。本発明のオイルの色は、典型的に は、黄色から薄い黄色である。 本発明の微生物オイルは、典型的には、１つの特定の多不飽和脂肪酸を主とし て（または唯一）含有するオイルであるが、より少ない量の他の多不飽和脂肪酸 をさらに含有し得る。本発明はまた、２つ以上の多不飽和脂肪酸が存在する微生 物オイルを含む。 本発明の微生物オイル中に存在し得る多不飽和脂肪酸は、Ｃ２０ω−３多不飽 和脂肪酸ならびにＣ１８、Ｃ２０およびＣ２２のω−６多不飽和脂肪酸である。 特に、多不飽和脂肪酸として、γ−リノレイン酸（ＧＬＡ）、ジホモ−γ−リノ レイン酸（ＤＬＡ）、アラキドン酸（ＡＲＡ）、エイコサペンタエン酸（ＥＰＡ ）、およびドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）が挙げられる。 本発明のオイルを含み得るか、または本発明のオイルを得ることができる微生 物バイオマス、すなわちＰＵＦＡ含有オイルを産生し得る任意のタイプの微生物 は、例えば、細菌、酵母、菌類または藻類（あるいはそれらの混合）である。 例えば、本発明のオイルは、好ましくは、藻類または菌類から得られるドコサ ヘキサエン酸（ＤＨＡ）を含み得る。藻類として、渦鞭毛藻類（例えば、クリプ テコジニウム（Ｃｒｙｐｔｈｅｃｏｄｉｎｉｕｍ）属の藻類）が挙げられる。菌 類は、ムコラレス（Ｍｕｃｏｒａｌｅｓ）属、例えばトラウストキトリウム（Ｔ ｈｒａｕｓｔｏｃｈｙｔｒｉｕｍ）であり得る。γ−リノレイン酸（ＧＬＡ）、 ジホモ−γ−リノレイン酸またはアラキドン酸（ＡＲＡ）は、好ましくは、菌類 （例えば、モルティエレラ（Ｍｏｒｔｉｅｒｅｌｌａ）、ピチウム（Ｐｙｔｈｉ ｕｍ）またはエントモフトラ（Ｅｎｔｏｍｏｐｈｔｈｏｒａ）など）から得られ る。エイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）含有オイルは、好ましくは、藻類（例えば 、ポルフィリジウム（Ｐｏｒｐｈｙｒｉｄｉｕｍ）またはニッツシア（Ｎｉｔｚ ｓｃｈｉａ）など）から得られる。典型的には、これらの生物から得られるオイ ルは、主として、１つの特定の多不飽和脂肪酸を含有する。しかし、オイルは、 少量の他の多不飽和脂肪酸をさらに含有し得る。 本発明はまた、本発明の第１の局面である多不飽和脂肪酸含有オイルを、微生 物バイオマスから単離する方法に関する；この場合、微生物バイオマスは、オイ ルの抽出前に前処理することができる。前処理プロセスの比較的穏和な条件によ り、オイル中に存在する熱および酸化に敏感な多不飽和脂肪酸は、分解を引き起 こす条件に曝され得ない。 従って、本発明の第２の局面により、少なくとも１つの多不飽和脂肪酸（ＰＵ ＦＡ）を含むオイルを、（ＰＵＦＡを産生する生物を含む）微生物バイオマスか ら得るための方法が提供される。本方法は、以下の工程を包含する： ａ）乾燥物含有量が２５〜８０％であるバイオマスを提供または得る工程； ｂ）前記バイオマスを顆粒状粒子に造粒する工程； ｃ）前記顆粒状粒子を乾燥し、乾燥顆粒を得る工程；および ｄ）前記乾燥顆粒からオイルを抽出または単離する工程。 好ましくは、微粒子の顆粒形態は、平均して３０〜７０％の乾燥物含有量を有 する。工程（ｃ）から得られる乾燥顆粒は、適切には、平均して少なくとも８０ ％ の乾燥物含有量を有する。 本発明の第３の局面において、微生物バイオマスから１つ以上の化合物を単離 するための方法が提供される。本方法は、以下の工程を包含する： ａ）化合物が（微生物によって）産生されるような条件下で微生物を発酵培養 液中で培養する工程； ｂ）前記発酵培養液、または前記発酵培養液から得られる微生物バイオマスの いずれかを低温殺菌する工程；および ｃ）前記バイオマスから化合物を抽出、単離、または回収する工程。 工程（ｂ）における低温殺菌は、バイオマスまたは培養液中に存在し得る物質 を分解する化合物の１つ以上を少なくとも部分的に不活性化することを意図する 。そのような物質として、酵素（例えば、プロテアーゼ）などのタンパク質を挙 げることができる。特に、リパーゼ、ホスホリパーゼおよび／またはリポキシゲ ナーゼを少なくとも部分的に不活性化することが求められている。 上記の化合物は、好ましくは、トリグリセリド（例えば、前記のＰＵＦＡの１ つなど）を含む。 低温殺菌は、通常、発酵を終了させる。好ましくは、この低温殺菌は、造粒（ あるいは、粉砕または混練）の前に行われる。適切には、低温殺菌は、発酵培養 液で実施されるが、培養液から得られた微生物バイオマスで実施することができ る。 低温殺菌により、化合物（例えば、ＰＵＦＡなど）の分解を引き起こし得る物 質の少なくともいくつかを避けることができると考えられる。この低温殺菌は、 本発明により得ることができる高品質のＰＵＦＡに少なくとも貢献し得る。 このように、低温殺菌は好都合である。なぜなら、微生物を殺すだけでなく、 より重要なことに、化合物に悪影響を及ぼし得る酵素の１つ以上を不活性化する ことができるからである。例えば、低温殺菌は、種々のリパーゼを不活性化する ことができる。リパーゼは、トリグリセリド骨格から脂肪酸を切断し得る。この ことは、高いトリグリセリド含有量が好ましい場合、ＰＵＦＡにとって不利であ る。 低温殺菌後、しかし工程（ｃ）における抽出の前に、本発明の第２の局面での 工程（ｂ）および（ｃ）において上記のように、（顆粒状粒子を得るために）造 粒を行い、顆粒状粒子を乾燥することができる。本発明の１局面の好ましい特徴 は、適切な場合には、他の局面に同等に適用することができる。 本発明の方法において、微生物の発酵が、最初に、産生され得る多不飽和脂肪 酸の産生条件下で行われる。そのような発酵プロセスは、当該分野では周知であ る：微生物には、通常、炭素源および窒素源が、微生物の成育および／またはＰ ＵＦＡの産生を可能にする多数の添加用の化学品または物質とともに与えられる 。適切な発酵条件を実施例２２に示す。 発酵から得られる物質（これは、しばしば、培養液と呼ばれる）は、次いで濾 過され得るか、そうでなければ少なくとも一部の水成分を除くために処理され得 る。適切には、バイオマス塊を得るために、大部分の水が除かれる。この段階で のバイオマスは、好ましくは２５〜８０％の乾燥物含有量を有する。次いで、バ イオマスは、顆粒状粒子に造粒され得る。これは、好ましくは、押し出しによっ て達成される。しかし、造粒のためにどのような技術が選ばれたとしても、細胞 の破壊を防止するかまたは最小限にするいずれかであることが好ましい。次いで 、顆粒状粒子は乾燥され得る。顆粒は、その後の乾燥工程の効率を著しく高め得 る。得られる（乾燥）顆粒は、浸績抽出または濾過抽出に特に適する。顆粒の粒 子サイズは、乾燥および抽出を最適に行うために調節することができる。 造粒条件（例えば、押し出し処理条件）は、好ましくは、微生物細胞の破壊を 最小限にするように選択される。これにより、分解に対する抵抗性を増大させる ことができる。なぜなら、破壊されていない細胞は、多くの場合、細胞内に存在 する多不飽和脂肪酸の酸化的分解に対する保護の最良の形態であるからである。 好ましくは、ＰＵＦＡは、溶媒を用いて乾燥顆粒から抽出される。当業者に公 知の任意の適切な溶媒を用いることができる。しかし、適切には、非極性溶媒が 使用される：例えば、Ｃ_1-6アルカン（例えば、ヘキサン）。同様に、超臨界状 態の溶媒（例えば、液体の二酸化炭素）を使用することも可能である。 本発明のプロセスは、ＰＵＦＡオイルのコスト的に有効で効率的な抽出を可能 にし、そして特に高品質のオイルを提供し得る。例えば、（バイオマスの）乾燥 顆粒の形態は、特に効率的な濾過抽出プロセスの使用を可能にする。さらに、顆 粒は、抽出に比較的低い温度を使用することを可能にする。これにより、ＰＵＦ Ａの収量は必ずしも低下しない。さらに、乾燥顆粒は、少量の溶媒を抽出処理に 必要とし得る。さらなる利点は、使用した溶媒をバイオマスから除くことをより 効率的に行うことができることである（このプロセスは、多くの場合、脱溶媒加 熱と呼ばれる）。 （溶媒）抽出（および脱溶媒加熱）の後に得られる残渣は、（例えば、動物の ）飼料または飼料成分として使用することができる。 抽出されたＰＵＦＡ（オイル）は、さらに処理することなくその状態で使用す ることができるか、あるいは１つ以上のさらなる精製工程に付すことができる。 乾燥顆粒から抽出されるＰＵＦＡオイルは比較的高品質であるので、必要とされ るその後の精製はどれも、容易であるだけでなく、最小限にすることができる。 オイルの精製は、標準的な技術を使用して行うことができる。例えば、オイルは 、ゴム状物質の除去、脱酸、漂白および／または脱臭に付すことができる。本発 明のＰＵＦＡ含有オイルは、高いトリグリセリド含有量および／または高い酸化 安定性を有し得る。これは、栄養物のためには特に適している。従って、本発明 のＰＵＦＡ含有オイルは、食物（最終的な食品または食品の調製中のいずれか） に添加することができる。本発明のＰＵＦＡ含有オイルは、例えば、適切なカプ セル（例えば、ゼラチンカプセル）に包まれた場合、栄養補給物として役立ち得 る。従って、ＰＵＦＡオイルは、ヒトまたは動物のいずれかに対する食物組成物 で使用することができる。例として、ミルク、健康飲料、およびパンが挙げられ る。本発明のオイルは、幼児用処方での含有物に特に適する。さらに、本発明の オイルは、化粧品として使用できる。 従って、本発明の第３の局面は、第１の局面の微生物オイルを含む組成物に関 する。本発明の組成物は、ヒトおよび／または動物のいずれかに対する食物また は飼料あるいは栄養補給物であり得る。そのような組成物は、食物組成物である 場合、好ましくは幼児用に処方されたものである。あるいは、そのような組成物 は、化粧用組成物であり得る。 バイオマスの乾燥顆粒を使用することにより、単離される化合物の予想よりも 高い収量が達成され得る。これは、抽出に使用される溶媒との接触を最大にし得 る顆粒構造のためと考えられる。当然、粒子が大きすぎる場合には、表面積はよ り小さくなり、それに従って収量は低下し得る。しかし、粒子は小さすぎてはな らない。そうでなければ、抽出において使用されるフィルターを詰まらせること がある。このため、本発明のプロセスは、粉砕、フレーク化または粉末化の工程 または段階を包含しない。 種々の段階での水分含有量もまた、収量に影響する。乾燥物含有量が高すぎる 場合には、バイオマスは砕け、細粒または粉末となり得る。このことは、濾過抽 出法を用いる場合には不利である。しかし、水分含有量が高すぎる場合には、水 分が多くて顆粒にすることができないスラリーが得られる。 造粒プロセスは当該分野で公知である。しかし、多くの場合、それらのプロセ スは、上記のような不利をもたらす特定の段階での、粉砕またはフレーク化との 組み合わせである。本発明においては、化合物の抽出に使用されるのは乾燥顆粒 であり、粉砕またはフレーク化された形態ではない。さらに、造粒は、バイオマ ス内の細胞に対する損傷を最小限にすることができる。これは、化合物の収量を 増大させるのに役立ち得る。米国特許第５，３４０，５９４号にはバイオマスの 押し出しが開示されているが、押し出されたものは動物飼料として使用される： 顆粒状形態によって、その顆粒状形態から特定の化合物を抽出した際に高い収量 が得られるということは理解されていなかった。 バイオマスの顆粒状粒子への処理は、乾燥処理を助ける。乾燥は、バイオマス を顆粒状形態に処理した後に、かなり容易に、そして効率よく行うことができる 。 さらに、乾燥顆粒は、特に周囲温度または室温で、とりわけ安定であることが 見出されている。バイオマスは、分解することなく、この形態でかなりの期間貯 蔵することができる。理論により捕らわれたくないが、これは、化合物が顆粒の 内部に存在し、その結果、特定の化合物に関して酸化分解を引き起こし得る環境 から少なくとも部分的に保護されているために生じると考えられる。 乾燥顆粒は、バイオマスの特に安定な形態であることが見出されている。顆粒 は、分解またはその性質での変化をほとんど伴うことなく、（例えば、室温で） 数年間でないとしても数週間貯蔵することができる。このことは、含有される化 合物が同様に、安定に貯蔵（または、さらに輸送）することができることを意味 する。さらに、顆粒は、室温で貯蔵することができる。これにより、従来技術の バイオマス物質の場合に必要な、特に低温での凍結または貯蔵を行う必要がない 。貯蔵条件がかなり低廉になるような安定性は、明らかに有利である。 バイオマスを造粒する好ましい方法は、押し出しによる。これにより、細胞の 破壊を最小限にすることができる。細胞の最小限の破裂によって、バイオマスの 安定性がより良好になることが見出されている。すなわち、本発明の方法を適用 して、無傷のままである多数の細胞を最大限に利用することができる。このこと は、化合物を単離するために細胞を破壊する多くの従来技術の抽出とは対照的で ある。 本発明はまた、バイオマスの顆粒から１つ以上のＰＵＦＡを単離するための方 法に関する。本方法は、以下の工程を包含する： ａ）ＰＵＦＡを産生する微生物を含む微生物バイオマスから得られ、乾燥物含 有量が少なくとも８０％である乾燥顆粒を提供する工程：および ｂ)乾燥顆粒から溶媒抽出によって前記ＰＵＦＡまたは各ＰＵＦＡを抽出また は単離する工程。 好ましい抽出方法は、適切には、化合物が溶解し得る溶媒を用いることである 。好ましい抽出方法は、濾過を使用することである：この場合、溶媒は顆粒床を 通過し得る。この技術に関して、粒子は小さすぎてはならない(例えば、粒子を 粉砕または粉末化してはならない)ことが理解される。そうでなければ、フィル ターを詰まらせる「粉末」（または細粉）があまりにも多く生じる。同様に、大 きな粒子も避けるべきである。しかし、これらの両極端の間で、好ましくは、粒 子がフィルターの孔よりも大きくなるように表面積を最適にすることができる。 粒子は、好ましくは、抽出され得る化合物に溶媒が容易に接触できるように十分 に多孔性である。 微生物バイオマス塊の前処理による顆粒状粒子の形成は、その後の乾燥処理を 著しく改善し得る。得られる乾燥顆粒状のバイオマスは、浸績抽出または濾過抽 出のいずれかに特に適し得る。粒子サイズは、乾燥条件および抽出条件を最適に するために特別に調節することができる。本発明に従って前処理されたバイオマ スを使用することによって、所望の化合物が、抽出に先立って細胞を破壊する必 要もなく都合良く抽出される。 本発明のプロセスを使用して、顆粒状粒子または乾燥顆粒を、ほとんど任意の タイプの微生物から調製することができる。微生物は、菌類または特定の細菌の ような糸状形態であり得るか、または酵母、藻類および細菌のような単細胞のよ うであり得る。従って、本発明のバイオマスは、酵母、菌類、細菌または藻類で ある微生物を含むことができる。好ましくは、ムコラレス(Ｍｕｃｏｒａｌｅｓ) 目の菌類である。例えば、モルティエレラ（Ｍｏｒｔｉｅｒｅｌｌａ）属、フィ コマイセス（Ｐｈｙｃｏｍｙｃｅｓ）属、ブラケスレア（Ｂｌａｋｅｓｌｅａ） 属、またはアスペルギルス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）属の菌類であり得る。好 ましくは、モルティエレラ・アルピナ(Ｍｏｒｔｉｅｒｅｌｌａ ａｌｐｉｎａ) 種、ブラケスレア・トリスポラ（Ｂｌａｋｅｓｌｅａ ｔｒｉｓｐｏｒａ）種お よびアスペルギルス・テレウス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｔｅｒｒｅｕｓ）種 の菌類である。 酵母に関する限り、好ましくは、ピキア（Ｐｉｃｈｉａ）属の酵母、例えばピ キア・シフェリイ（Ｐｉｃｈｉａ ｃｉｆｅｒｒｉｉ）種などの酵母である。 細菌は、プロピオニバクテリウム（Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属 であり得る。 バイオマスが藻類を含む場合、藻類は、好ましくは、渦鞭毛藻および／または クリプテコジニウム（Ｃｒｙｐｔｈｅｃｏｄｉｎｉｕｍ）属に属する。好ましく は、クリプテコジニウム・コーニイ（Ｃｒｙｐｔｈｅｃｏｄｉｎｉｕｍ ｃｏｈ ｎｉｉ）種の藻類である。 本発明に従って調製された微生物バイオマスから単離され得る化合物は、細胞 内に存在し得るか、細胞膜または細胞壁に結合し得るか、あるいは細胞外に産生 され得る（従って、化合物は水に不溶であり得る）。 単離され得る化合物は、親水性または疎水性（例えば、親油性）のいずれかで あり得る。そのような化合物の例として、細胞内のタンパク質または酵素、脂質 、ビタミン（例えば、ビタミンＢ₁₂）のような二次代謝産物、マクロライドまた はポリエンの抗生物質、風味提供物質、またはカロチノイドがある。好ましくは 、微生物バイオマスから単離され得る化合物は、親油性化合物である。 本発明に従って処理されたバイオマスから抽出される化合物は、高品質であり 得る。なぜなら、処理プロセスにおいて使用される穏和な条件により、品質の劣 化にさらされることは、あったとしてもほとんどないからである。従って、本発 明は、熱および／または酸化に敏感な化合物を単離する必要がある微生物バイオ マスの調製に特に適する。 本発明の第２の局面は、高い不飽和度を有する化合物（例えば、多不飽和脂肪 酸（ＰＵＦＡ）を含有する脂質など）を単離するための微生物バイオマスの調製 に適する。好ましくは、ＰＵＦＡは、Ｃ１８、Ｃ２０またはＣ２２のω−３また はω−６の多不飽和脂肪酸である。例えば、そのような化合物は、（渦鞭毛藻の クリプテコジニウム（Ｃｒｙｐｔｈｅｃｏｄｉｎｉｕｍ）または菌類のトラウス トキトリウム（Ｔｈｒａｕｓｔｏｃｈｙｔｏｒｉｕｍ）などの藻類または菌類か ら得られる）ドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）、（モルティエレラ（Ｍｏｒｔｉｅ ｒｅｌｌａ）、ピチウム（Ｐｉｔｈｉｕｍ）またはエントモフトラ（Ｅｎｔｏｍ ｏｐｈｔｈｏｒａ）などの菌類から得られる）γ−リノレイン酸（ＧＬＡ）、ジ ホモ−γ−リノレイン酸またはアラキドン酸（ＡＲＡ）、あるいは（ポルフィリ ジウム（Ｐｏｒｐｈｙｒｉｄｉｕｍ）またはニッツシア（Ｎｉｔｚｓｈｉａ）な どの藻類から得られる）エイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）であり得る。これらの ＰＵＦＡはいずれも、独自に、またはより通常的には脂質の形態のいずれかで単 離することができる。 本発明（の第４の局面）に従って単離され得る化合物のさらなる例として、例 えばムコラレス（Ｍｕｃｏｒａｌｅｓ）目由来の菌類の属（例えば、フィコマイ セス（Ｐｈｙｃｏｍｙｃｅｓ）またはブラケスレア（Ｂｌａｋｅｓｌｅａ））か ら得られるβ−カロチン、酵母ファフィア・ロードジマ（Ｐｈａｆｆｉａ ｒｈ ｏｄｏｚｙｍａ）から得られるアスタキサンチン、酵母ピキア・シフェリイ(Ｐ ｉｃｈｉａ ｃｉｆｅｒｒｉｉ)から得られるテトラアセチルフィトスフィンゴ シン（ＴＡＰＳ）、および／またはプロピオニックバクテリアから得られるビタ ミンＢ１２が挙げられる。 抽出され得る他の化合物として、ロバスタチン、シクロスポリンおよびライド ロマイシンなどの親油性／非極性の化合物が挙げられる。これらの中で、最初の ２つは、細胞外に産生されるか、または細胞壁に結合しているかのいずれかであ る。従って、適切な溶媒として、ヘプタン、ヘキサン、アセトン、メタノールお よびトルエン、ならびにエタノールが挙げられる。しかし、後者の２つの化合物 に関して、イソプロピルアルコールまたは酢酸ブチルがシクロスポリンに、そし てエタノールまたはメタノールがライドロマイシンに使用され得る。一般に、ヘ キサンは、可溶性の抗生物質（例えば、ストレプトマイセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍ ｙｃｅｓ）属の微生物によって産生される抗生物質など）に適する。 他の化合物として、ポリケチドまたはポリケチド由来の代謝産物が挙げられる 。これらは、多くの抗生物質を含む。好ましいポリケチドは、窒素を含有せず、 芳香族性であり得、好ましくは少なくとも１つの６員環を含有するポリケチドで ある。好ましいポリケチドは、ロバスタチン、シムバスタチン、プラバスタチン およびコンパクチンを含むスタチンである。他の好ましい化合物は、ＨＭＧ−Ｃ ｏＡレダクターゼ阻害剤である。これは、血中のコレステロール値を低下させる ことができる。 抽出され得る別の種類の化合物として、ステロイドおよびステロール(例えば 、エルゴステロールなど)が挙げられる。これらは、酵母およびカビにより産生 される。 本発明の方法に従って単離される化合物および本発明の組成物は、ヒトまたは 動物用の食物（例えば、幼児用の処方）あるいは他の食用の組成物において、そ して化粧品、健康管理用の組成物または補給物あるいは薬学的組成物において使 用することに適する。 本発明の方法において、選択された微生物の発酵を最初に行い、その後の化合 物の抽出に十分な量のバイオマスを得ることができる。発酵条件は、使用する微 生物に依存し、得られるバイオマス中に高い含有量の化合物を得るために最適化 することができる。 発酵プロセスが終了した後、単離され得る化合物のタイプに依存して、発酵培 養液の低温殺菌を行って、産生生物を殺し、そして望ましくない酵素を不活性化 することができる。所望すれば、凝集剤および／または他の処理補助剤を培養液 に添加して、その濾過性を改善することができる。 適切な凝集剤として、ＣａＣｌ₂、Ａｌ₂（Ｓ０₄）₃、および極性のカチオン性 ポリアミドが挙げられる。これらは、重量で０．１〜２％で存在し得る。 好ましくは、バイオマス（または培養液）の低温殺菌を行う。発酵後の低温殺 菌は、衛生的な方法で処理され得るスラリーを得るために必要とされ得る。発酵 糟内でのバイオマスの低温殺菌は、いくつかの点で有利であり得る。第１に、産 生生物は環境に曝されない。さらに、目的化合物の品質に影響する不要な酵素活 性を不活性化することができる。 低温殺菌は、産生生物の種に依存して６０〜１００℃の温度で実施される。低 温殺菌は、発酵糟内への蒸気による（直接的な）加熱によって、あるいは壁を通 すか、または冷却コイルもしくは外部の熱交換器（例えば、公知のプレート型熱 交換器または他の適切な熱交換器）によるかのいずれかにより、熱交換器を介し て媒体を使用する（間接的な）加熱によって実施することができる。 以下の好ましい低温殺菌条件が、特にモルティエレラ（Ｍｏｒｔｉｅｒｅｌｌ ａ）属の生物に用いることができる。 発酵培養液（またはバイオマス）を低温殺菌して、微生物を殺し、そして酵素 活性を不活性化する。これは、主発酵糟への接種の約１４４時間後であり得る。 バイオマス（または培養液）は、適切には５０〜９５℃で、好ましくは６０〜７ ５℃で、最適には６３〜６８℃の間で低温殺菌される。これは、３０〜９０分間 、好ましくは５０〜７５分間、最適には５５〜６５分間であり得る。この低温殺 菌は、任意の適切な加熱手段によって行うことができるが、好ましくは、例えば 主発酵糟への蒸気の直接導入による。 低温殺菌の後に培養液は冷却される。これは、約４時間かけて、適切には約２ ５℃にすることができる。 異なるバイオマスまたは発酵培養液からの２種類以上の生物がかかわる場合、 各バイオマス（または培養液）を個々に低温殺菌することができる。あるいは、 混合後に低温殺菌することができる。しかし、生物が異なると、異なる殺菌条件 が用いられ得るために、前者が好ましい。 通常、低温殺菌は、発酵が行われる発酵糟内で行われる。しかし、いくつかの 生物（例えば、細菌など）に関しては、多くの場合、最初に微生物を発酵糟から 取り出し、次いで（例えば、集塊化処理においてスプレー乾燥を行う前に）低温 殺菌を行うことが好ましい。 理解されているように、低温殺菌は、通常、すべてではないが、大部分の微生 物を殺す。従って、乾燥顆粒では、少なくとも９５％（例えば、９５％でない場 合、少なくとも９８％）の微生物が殺されている（すなわち、生存していない） 。 特定の生物（例えば、ピキア（Ｐｉｃｈｉａ））については、好ましくは、低 温殺菌は行われない。 その後の処理工程の中で、低温殺菌されたバイオマスの再汚染を防止するため に、増殖の危険性を減らす条件を考えることができる。１つの可能なことは、適 切な酸で培養液を酸性化することである。多くの微生物種の増殖を防止するため には、低い処理温度との組み合わせで、３〜４のｐＨ範囲で十分である。 さらに、アルコール、ソルビン酸塩などのような他の生物静止（ｂｉｏｓｔａ ｔｉｃ）剤が、この目的に使用することができる。 熱に安定な産物については、より高温（６０〜１００℃）で処理することがで きる。 好ましい酸性化条件（例えば、モルティエレラ（Ｍｏｒｔｉｅｒｅｌｌａ）属 の生物について）は、以下の通りである。 低温殺菌した培養液のｐＨを２〜５に、好ましくは３〜４の範囲のｐＨに、最 適には約３．５のｐＨに調節して、微生物学的安定性を向上させる。 （低温殺菌の前およびその後での）培養液の酸性化は、さらなる利点を有し得 る。化合物がポリケチド（例えば、スタチン）である場合、化合物は、酸性化に より沈澱し得る。多くの化合物、特に水溶性化合物については、培養液を濾過し て水を除くときに化合物が失われないように、その後の処理工程の前に沈澱させ ることは好ましい。従って、低温殺菌の前およびその後で、（当業者に公知の他 の任意の手段を用いることができるが、酸性化などにより）化合物を沈澱させる ことができる。 ｐＨは、任意の適切な手段、例えば、８５％リン酸、好ましくは５５％の希釈 リン酸、最適には３３％の希釈リン酸で調節することができる。 この段階で、培養液の低温殺菌を行うことができる。次の段階で、微生物を周 りの培地から分離することによりバイオマスを得ることができる。 固液分離技術を用いて、バイオマスを発酵培養液から分離することができる。 この（集められた）バイオマスは、通常、微生物のタイプに依存して、２０〜３ ５％の範囲の乾燥物含有量を有する。しかし、押し出し（およびその後の乾燥） のためには、バイオマスは、典型的は、２５％〜８０％の範囲の乾燥物含有量を 有するはずである。 バイオマスの水分含有量が（例えば、押し出しおよび／または乾燥に）高すぎ る場合には、脱水を行うこと、および／またはその乾燥物含有量を増加させるこ とができる。これは、多数の方法により達成することができる。最初に、バイオ マスは、（さらなる）脱水に付すことができる。当業者に公知の任意の脱水方法 を使用することができる；所望の乾燥物含有量は、２５または３０〜８０％であ り得る。 好ましくは、機械的な脱水方法が使用される。しかし、機械的な脱水によって 達成され得る最大の乾燥物含有量は、微生物のタイプに依存して変化する。特定 の微生物（例えば、酵母）については、機械的な脱水後のバイオマスの乾燥物含 有量は、３５〜４０％のレベルを超え得ない。その一方で、脂質に富む特定の微 生物のバイオマスに対して同じ処理を行うことにより、４５〜６０％のより高い 乾燥物含有量を得ることができる。 好ましい方法は、メンブランフィルタープレス(圧搾用メンブランによるプレ ー トおよびフレームフィルタープレス)を使用することである。これは、固液分離 を機械的な脱水と組み合わせることができ、所望の乾燥物含有量を得るためには 特に適する。 あるいはまたはさらに、微生物バイオマスの所望の乾燥物含有量は、粘稠性増 加（または乾燥）剤を添加することにより高めることができる。このような粘稠 性増加剤は、適切には乾燥しており、そして好ましくは、抽出工程および／また は化合物の性質に好ましくない影響を与えない。例えば、粘稠性増加剤は、でん ぷんおよび／または植物繊維（例えば、オートムギまたは小麦のぬかあるいはセ ルロースなど）を含み得る。（低い水分含有量の）別のバイオマスさえも、使用 することができる。そのような物質は、押し出し性を改善する場合、自由に添加 することができる。 場合により、例えば、固液分離および／または機械的な脱水の後に、バイオマ スを、大きな塊から成形することができる。これは、造粒（例えば、押し出し） には適し得ない。造粒を可能にし得るサイズ（例えば、押し出し機への供給に十 分なサイズ）にバイオマスを小さくするために、バイオマスは、適切には、粉砕 、混練および／または混合される。この粉砕および／混練は、高いせん断性の混 合機で（短時間の）処理により達成することができる。必要に応じて、上記の粘 稠増加剤または各粘稠増加剤を、この処理において添加することができる。 次いで、（必要に応じて、粉砕または混練された）バイオマスは、引き続いて 造粒処理に付されて、顆粒状粒子に形成され得る。造粒は、多数の異なる方法で 達成することができる。 水分含有量を減少させる（すなわち、乾燥物含有量を増大させる）別の方法は 、例えば、洗浄濾過を行うなどして塩（例えば、塩水）の洗浄（バイオマスの洗 浄、または（好ましくは）培養液からバイオマスを分離した後での洗浄のいずれ か）を行うことである。 本発明の好ましい態様において、所望の粒子構造および粒子サイズが、押し出 し処理により得られる。粒子構造および粒子サイズなどの粒子特性は、乾燥処理 および／または抽出処理を最適にするために重要であり得る。乾燥工程において 、 粒子が小さすぎる場合には、粉末や微粉が発生し得るために、多くの問題が生じ 得る。これに対して、大きすぎる粒子は流動化せず、乾燥を能率良く行うことが できない。抽出において、小さすぎるサイズの顆粒は、バイオマス床での圧力低 下が大きすぎるために、濾過処理を行うことができない。あまりにも多すぎる微 粉は、その後の精製工程において問題を生じ得る。大きすぎるサイズは、抽出に おける溶媒の効率的な浸透を妨げ得る。さらに、粒子構造は、乾燥中および抽出 中の崩壊を防止するために、十分に固められていなければならない。しかし、粒 子（乾燥顆粒）は、好ましくは、抽出中の溶媒の（効率的な）通過を可能にする 多孔性を有する。 押し出し条件は、所望の構造およびサイズを有する顆粒状（バイオマス）粒子 を得るために、当業者によって調節することができる。 押し出し条件を調節して、細胞の破壊を最小限にすることができる。細胞の破 壊を最小限にすることによって、酸化によって引き起こされる分解に対する、酸 化に敏感で不安定な化合物の最適な保護を確実なものにすることができる。従っ て、押し出しは、好ましくは、加熱手段を全く用いることなく、より低い温度で 行われる。好ましくは、温度は２０〜３０℃の範囲内（例えば、室温付近）であ る。押し出し中に、顆粒状粒子が自然に成形され得る。「押し出し物」は、それ 自身の重量で重力の影響により金型プレートから離れ、それにより粒子が形成さ れる。しかし、バイオマスが、金型プレートにより押し出された後、押し出しに よりスパゲッティのような長い糸状である場合、スパゲッティを切断して所望の サイズの粒子にすることができる。 バイオマスの温度は、押し出しのときに得られる顆粒状粒子の性質に影響を及 ぼすことが見出されている。好ましくは、バイオマスは、押し出し前は６〜１５ ℃の温度である。しかし、押し出し機の中では、バイオマスの温度は１０〜６０ ℃に上昇し得るが、好ましくは１５〜３０℃である。この温度上昇は、バイオマ スにかけられる圧力および乾燥物含有量に依存する。 押し出しにおいて、バイオマスは、通常、円筒部の中を通って金型プレートに 向かって、多くの場合回転されながら押される。この円筒部は、好ましくは、加 熱されていない。実際には、冷却することが好都合である。適切には、冷却剤（ 例えば、水などの水性溶液）の温度は、１〜４℃（例えば、約２℃）である。 一般に、押し出しは、水分含有量を変化させない。このため、段階（ｂ）にお いては、乾燥物含有量は段階（ａ）と同じである。しかし、理解されているよう に、他の造粒技術（例えば、後に記載される技術など）では、水分含有量が変化 し、水分含有量の減少（すなわち、乾燥物含有量の増加）をもたらし得る。例え ば、ムコラレス（Ｍｕｃｏｒａｌｅｓ）目の菌類（特に、ＰＵＦＡを産生する菌 類）を含有するバイオマスに関して、段階（ａ）でのバイオマスの乾燥物含有量 （通常、造粒（この場合、押し出し）時に作製される顆粒状粒子と同じである） は、適切には３５〜６０％の間、好ましくは５０〜６０％である。乾燥後、乾燥 顆粒は、好ましくは、少なくとも９０％（例えば、少なくとも９５％）の乾燥物 含有量を有する。 好ましい造粒技術は、押し出し機を使用することである。押し出し機の良好な 概略が、Ｗ．Ｐｉｅｔｓｃｈにより示されている（「集塊化によるサイズ拡大( Ｓｉｚｅ Ｅｎｌａｒｇｅｍｅｎｔ ｂｙ Ａｇｇｌｏｍｅｒａｔｉｏｎ)」； Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ、１９９１年、３８５頁）。装置は、バッチ式または 連続式の押し出し機であり得る。連続式押し出し機に関して、(軸方向および半 径方向の両方に送る)上記の単純な単一のスクリュー型押し出し機が存在し得る 。さらに、同方向または反対方向のいずれかに回転する対になったスクリュー型 押し出し機が存在する。押し出され得るバイオマスは送られ、（部分的に）固め られ、そして穿孔された（金型）プレートの中を通して押される。別のグループ の押し出し機として、ペレット化用の機械が挙げられる。シリンダー状の押し出 し具が、穿孔プレート上に堆積した物質層の上を回転しながら進む。 顆粒が押し出しによって得られる場合、バイオマスは、押し出し可能な形態で ある必要がある。水分含有量は、必要ならば、バイオマスの状態、用いられる微 生物および押し出し条件に依存して調節することができる。水は除去され得る。 あるいは乾燥物含有量は、固体（例えば、でんぷん）を添加することによって増 加させることができる。バイオマスは、このようにして適切な粘稠性に調節する ことができる。この粘稠性は、通常は、ペーストの粘稠性である。 顆粒は、化合物の抽出に使用することができるが、さらには、貯蔵可能なバイ オマスの安定な形態である。顆粒は、他の使用法を有し得る：例えば、顆粒は、 幼児用処方の調製において使用することができる（この場合、バイオマスは、１ つ以上の多不飽和脂肪酸（ＰＵＦＡ）を含有する）。 本発明はまた、（顆粒状）粒子の形成を可能にする他の造粒方法を包含する。 例えば、多段階の乾燥処理は、スプレー乾燥および流動化床との組合せを含むこ とができ、それによって同様に顆粒状粒子を得ることができる。 他のタイプの造粒技術を用いることができる。一般的に、造粒は、サイズ拡大 またはサイズ減少のいずれかによって顆粒状形態の固体を得る作用である。通常 はサイズ拡大が用いられる。利用可能な造粒プロセスの良好な概略が、Ｗ．Ｐｉ ｅｔｓｃｈ、「集塊化によるサイズ拡大(Ｓｉｚｅ Ｅｎｌａｒｇｅｍｅｎｔ ｂ ｙ Ａｇｇｌｏｍｅｒａｔｉｏｎ)」（Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ、１９９１年、 上記）に記載されている。この中には、造粒に利用可能な多くの異なる技術が存 在する。これは、後に記載されるいくつかの集塊化方法を含む。集塊化により、 互いに接着する（集塊化する）小さい粒子が生じ、より大きな粒子（この場合、 顆粒状粒子）を形成する。従って、最初の技術によって小さすぎる粒子が生じる 場合、集塊化技術を用いて、より大きな（顆粒状）粒子を得ることができる。 回転による集塊化は、通常、（粒子が一緒に接着するように）接着性を有する 粉末を用いて、回転および循環式のドラム乾燥機またはコーン乾燥機を使用して 達成される。場合によっては、特別な結合剤を添加して、混合することができる 。この機構によって、球状粒子を形成させることができる。 圧力による集塊化は、通常、特定の物質の塊に作用する大きな力によって特徴 づけられる。一般に、この処理は、微細粉末または「可塑性」（非弾性）物質を 用いて実施される。この処理は、通常、粉末化された物質に使用される。（しか し、これはまた、特定の粘稠性の柔らかい塊のための乾燥酵母の生産において使 用される。）成形された粒子は、最適な貯蔵に適切な乾燥物含有量に乾燥するこ とができる。圧力による集塊化は、ピストン、ローラー、静的および／または押 し出し機によるプレスにより達成することができる。このタイプの装置の良好な 説明が、Ｐｉｅｔｓｃｈの前記書籍に記載されている。 押し出しによるプレスは、通常、可塑性物質が、穿孔または端が空いた金型の 中を流れることを妨げる壁摩擦を利用する。特に、スクリュー型押し出し機にお いては、十分な混合が起こり、そして大きなせん断力が負荷される。 一般に、低い融解温度または可塑化温度を有する物質は、直接、集塊化し得る 。 他の集塊化技術が可能である。例えば、流動床の集塊化機と組み合わせたスプ レー乾燥器。最初に、バイオマスは、ノズルを通して粉状にすることにより、あ るいはスプレー乾燥器内の回転盤を使用することによって乾燥することができる 。細かい粒子は、スプレー部に戻される。生成する粘着性粉末は、流動床部でさ らに集塊化される。場合によっては、粉末を再度湿らすことによって、集塊化プ ロセスを改善することができる。記載されたこの技術は、多段乾燥として公知で ある。 多段乾燥をより詳細に説明すると、バイオマスは、最初にスプレー乾燥される 。これにより、細かい粉末が生じる。スプレー乾燥の温度（空気導入部の温度） は、通常、１６０℃〜２６０℃である。空気排出部の温度は７５〜９０℃である 。バイオマスは、小さな粒子を生成させる高速に回転するディスクまたはノズル によって霧状にされる。次いで、粒子は、重力下でスプレー乾燥塔の底の方に落 下する。このときに、熱空気を使用して（適切には、９０〜９５℃で）乾燥を達 成し得る流動床が提供され得る。このときに集塊化が起こり、そして粒子は互い に接着し得る。この後、集塊化（顆粒状）粒子は、例えば、ベルト乾燥床または 準流動化床で乾燥に付される。処理開始時、バイオマスは３０％未満の乾燥物含 有量を有し得る。スプレー乾燥後、乾燥物含有量は７５〜９０％に増加し得る。 集塊化後には９０〜９５％になり得る。乾燥後、乾燥物含有量は少なくとも９５ ％に増加し得る。 別の技術は、流動化床の集塊化機を使用することである。粉末は、ガス流の中 で流動化され得る。粒子床において、流動物は、粉末を湿らしそして集塊化を高 める水とともに噴霧される。 一般に、記載される集塊化処理は、可塑化され得る乾燥粉末に関する。例外は 、多段乾燥器での乾燥である。乾燥後の流動床との組合せでのスプレー乾燥のこ の組合せは、多くの異なるタイプのバイオマスの集塊化に適する。しかし、本方 法は、熱に不安定な産物または（熱）空気による酸化に対して敏感な産物には必 ずしも適切ではない。顆粒化された乾燥バイオマスを得る良好な方法は、機械的 に脱水した濾過塊の押し出し、その後の流動床または準流動化床の乾燥のような 適切な乾燥工程である。 （乾燥）バイオマス集塊化の別の方法が、（スプレー）乾燥された産物を再度 湿らし、その後の押し出し工程、および例えば流動床乾燥器での再乾燥によって 実施され得る。低い融点または低い可塑化温度を有する（または、細胞内オイル の量が多い特定の乾燥バイオマスの場合、押し出し機内の力のために部分的に融 解する）粉末は、押し出すことができる。適切なペレットが金型で形成される。 上記の工程（ｃ）でのように、（押し出されたか、そうでなければ）造粒され たバイオマスは、適切には、粒子を無傷のままであることを可能にする条件下で 乾燥され得る。造粒処理後のバイオマスの粒子構造およびサイズは、バイオマス の効率的な乾燥を可能にすると考えられる。乾燥は、種々の乾燥器（例えば、ベ ルト乾燥器、真空乾燥器または真空ベルト乾燥器、流動化床または準流動化床の 乾燥器）を使用して行うことができる。当業者は、バッチ処理または連続処理と の間で選択することができる。 流動化床または準流動化床の乾燥器を使用することは、本発明の方法において 特に好ましい。乾燥は、空気中または窒素下で行うことができる。流動化床また は準流動化床の乾燥に関して、床内での温度は、所定の値に調節することができ る。この値は、例えば３５℃〜１２０℃（例えば、５０〜９０℃）、必要に応じ て６０〜８０℃の広い範囲であり得る。不安定な化合物をバイオマスから単離す ることが必要である場合、乾燥工程の温度は容易に低い範囲に調節され、酸化ま たは分解の危険性を最小限にすることができる。 あるいはまたはさらに、真空乾燥処理は、例えば１〜２時間行うことができる 。 いくつかの利点が乾燥工程から生じる。第１に、（顆粒を形成するために）バ イオマス粒子を乾燥することによって、長期間安定して貯蔵することができる中 間物質を得ることができる。バイオマスの（比較的）高い乾燥物含有量は、バイ オマスから単離され得る化合物の分解を防止することができる。このように、乾 燥顆粒は、バイオマス中に存在するか、またはバイオマスと結合した化合物の安 定な処方物と見なすことができる。 例えば、顆粒は酵素のキャリアとして機能し得る。それによって、酵素は、適 切量の架橋化剤（例えば、グルタルアルデヒド）を、押し出し前のバイオマスに 混合することにより顆粒内に固定化される。 さらに、本発明に従って調製される乾燥顆粒は、例えば、食品または飼料用の 組成物または添加物として、そのままで、都合よく使用することができる。 （押し出しにより調製された）粒子および／または顆粒は、以下の特性を有し 得る。 顆粒はチョコレートコンフェティの形態であり得る。（押し出された）顆粒の 直径は、０．１〜１２ｍｍ（例えば、０．３〜１０ｍｍ）の範囲であり得る。よ り好ましくは、１．５ｍｍ〜６ｍｍである。最適には、（乾燥時の抽出のために は）直径は２〜３ｍｍである。顆粒の長さは、直径の約２〜５または６倍であり 得る。顆粒は、包装において容易な取り扱いができ、そして（床の透過性を保証 するために）市販の抽出機とともに使用することができる。通常、（実質的はす べてではないが）大部分の顆粒は、同じサイズを有する。実際に、高い均一性ま たは均質性の顆粒を得ることができる。この場合、すべての顆粒の少なくとも８ ０％（例えば、少なくとも９０％）は、定められた範囲内に特定の特性を有し得 る。 第２の局面の組成物（顆粒）は、好ましくは、高い流動性を有する。本組成物 は、概略的に、形状はシリンダー状であり得る。これは、押し出しを使用して達 成することができる。従って、粒子は、（若干大きいかもしれないが）押し出し に使用される金型プレートの穴とほぼ同じの直径であり得る。この処理において 、粒子は、金型プレートから出るときに自動的に形成され得る。その場合、粒子 の長さは変化し得る。しかし、粒子の長さは、例えば、切断手段、例えばナイフ （例 えば、金型プレートに隣接する１つ以上の回転刃）を使用する場合に影響を受け 得る。このとき、（すべてではないが）大部分の粒子は、実質的に同じ長さであ る。そのような粒子の好ましい長さは、少なくとも２ｍｍ（例えば、少なくとも ３ｍｍ）である。最適には、顆粒は、「流し込む」ことを可能にし、貯蔵および 輸送をより容易にするサイズおよび水分含有量である。一般に、大部分の粒子は 、現実には、細長いが、ほぼ球状のものもあり得る。顆粒の好ましい脂質含有量 は、好ましくは重量で３０〜５０％である。 顆粒の嵩密度は、通常、４００〜１１００ｋｇ／ｍ³である。 議論してきたように、顆粒は、抽出され得る化合物に溶媒を接触させるために 、好ましくは多孔性である。好ましくは、顆粒は中空の溝を有する。溝は、顆粒 の中心に向かってそしてその中心に広がる。溝の数は、顆粒の容量で、４０〜６ ０％（例えば、４５〜５５％）、最適には約５０％が中空（空気）であるようで あり得る。溝に関する限り、その長さは、その平均的な直径の１０〜２０倍であ り得る。一般に、顆粒の外側は、本質的に、中心部と同じ物質である点で、顆粒 は組成物において均質である。これは、相対的に固い外側を有するが、相対的に 空気孔を有し得る従来の酵母組成物とは対照的である。 顆粒は、最終的に抽出され得る化合物に最適な温度で安定に貯蔵することがで きる。 乾燥顆粒の好ましい乾燥物含有量は、８０％よりも大きく、好ましくは少なく とも８５％、最も好ましくは少なくとも９０％であり、最適には９３〜９７％の 範囲である。水と混合し得る溶媒が抽出に使用され得る場合、より低い乾燥物含 有量の顆粒を使用することができる。 このように、（乾燥）顆粒は、通常、多孔性であり、従って抽出で使用される 溶媒は、顆粒（の内部）に容易に侵入することができる。従って、押し出し中お よび乾燥中において、粉末量を最小限にすることができ（これにより収量を増大 させる）、そして（溶媒）抽出物をさらに濾過することなく、抽出物の蒸発を行 うことができる。 顆粒の多孔度は、顆粒粒子の（水分または）乾燥物含有量に依存する。多くの 場合、顆粒粒子内の水分は乾燥時に蒸発して、（中空の）孔が残る。乾燥顆粒の 多孔度は、好ましくは１５〜５０％（例えば、２０〜４０％）で、最適には２５ 〜３５％である。 好ましくは、顆粒内の細胞の大部分（実質的にすべてではない）は、無傷であ る（すなわち、破壊されていない）。特に菌類のバイオマスから得られる顆粒は 、全体的には０．３〜１０ｍｍの直径、好ましくは０．７〜５ｍｍの直径、最適 には１〜３ｍｍの直径を有するバイオマス粒子であり得る。普通には、粒子は所 望の長さで自動的に形成される。そうでなければ、粒子は所望の長さに切断する ことができる。造粒を押し出しによって行った場合、押し出し機の金型プレート の穴は、一般に、顆粒の直径に相当し得る。 必要に応じて、抗酸化剤が、造粒処理の前または処理中に添加され得る。抗酸 化剤は、例えば、（重量で）０．１％まで存在するトコフェロールおよびアスコ ビルパルミチテートを含むことができる。 従って、本発明は、化合物のコスト的に有利で効率的な抽出を可能にし得る特 徴を有するバイオマス物質を提供し得る。次いで、存在する化合物を、精製、単 離または（好ましくは）抽出することができる。本発明のプロセスは、濾過抽出 プロセスの使用を可能にし得る。この抽出プロセスによって得られる利点は、構 造およびサイズならびに高い乾燥物含有量によるようである。乾燥した押し出し 物は、価値のある化合物をそこから抽出するために少ない量の溶媒を必要とする 。さらに、脱溶媒化の加熱処理（すなわち、バイオマスからの使用溶媒の放出） は、押し出し物の形態のバイオマスに関して、より良好にそしてより効率的に行 うことができる。 脱溶媒加熱の処理後に得られる押し出し物の残渣は、飼料成分として都合よく 使用することができる。 押し出し物の９０〜９５％を越える乾燥物含有量は、押し出し物の安定な貯蔵 を可能にし得る。一方、８５％を超える乾燥物含有量は、その後の抽出処理にお いて大きな利点をもたらし得る。 抽出は、好ましくは、溶媒を使用して行われる。用いられる溶媒は、抽出され 得る化合物に依存して、特に、Ｃ_1-10アルキルのエステル（例えば、酢酸エチル または酢酸ブチル）、トルエン、Ｃ_1-3アルコール（例えば、メタノール、プロ パノール）、およびＣ_3-6アルカン（例えば、ヘキサン）、および／または超臨 界流体（例えば、液体ＣＯ₂または超臨界プロパン）を挙げることができる。従 来技術においては、溶媒が、培養液中の微生物に対して直接用いられていた。し かし、顆粒に対して抽出を行うことによって、必要とされる溶媒量を著しく減ら すことができる。本出願人のいくつかの実施例では、抽出を実施するために、２ ０〜３０倍少ない溶媒が必要とされた。このことは、より少ない溶媒が使用され るために、著しい経済的な節約をもたらすだけでなく、発散問題を最小限にする 。顆粒を使用することにより、溶媒に対する利用可能な表面積は特に大きくなり 、従って良好な収量が得られる。 抽出され得る化合物が疎水性である場合、好ましくは、非極性溶媒が使用され る。親水性化合物については、適切には、極性溶媒（例えば、アルコールなど） が用いられる。 抽出は、種々の技術を使用して行うことができる。好ましい方法は、フィルタ ーを使用する濾過抽出である。この場合、カラムは、乾燥顆粒を用いて充填され 得る。次いで、溶媒（ヘキサン）を添加して、顆粒を覆う。溶媒は、カラムの中 および乾燥顆粒を一回通過し得るが、好ましくは（閉鎖系または解放系のいずれ かとして）再循環される。適切には、溶媒は、３〜７回（例えば、約５回など） 、適切には０．５〜１．５時間（例えば、約１時間など）の時間再循環される。 図３に、最適な濾過抽出装置を示す。溶媒は容器に保たれ、その後乾燥顆粒を含 有する濾過抽出機に添加される。溶媒は、ポンプにより循環される。ポリッシュ フィルターは、微粉を除去することを目的とする。 他の濾過抽出機を用いることができる。これらは、向流的または交差的に設計 されたものであり得る。前者では、乾燥顆粒は、種々のセクターに分けられた回 転シリンダー（例えば、カルーセル）内に保持され得る。溶媒は、１つのセクタ ー内で一方向に顆粒の中を通過し、次いで別の（例えば、隣接する）セクター内 の顆粒の中を（好ましくは、同じ方向で）通過する。この機械は、多くの場合、 カ ルーセル抽出機と呼ばれ、Ｋｒｉｐｐ社（ドイツ）から入手可能である 別の技術において、顆粒は、例えば、実質的には溶媒と逆の方向に移動する可 動（例えば、多孔性）ベルトまたはコンベヤー上に置くことができる。これは、 既に他の顆粒の中を通過した溶媒によって、新たな顆粒が抽出されること、そし て溶媒による抽出が以前に行われた顆粒に新しい溶媒が加えられることを意味す る。このような配置によって、最大の効率を得ることができる。 交差技術では、個々のバッチの顆粒が、新しい溶媒部分による抽出に付される 。 本発明の方法を使用して、２つ以上の微生物の混合物から顆粒状粒子または顆 粒を調製することによって、２つ以上の化合物の混合物を異なる微生物から得る こともできる。このような微生物の混合物は、発酵終了後、２つ以上の異なる微 生物の発酵培養液を直接混合するか、または造粒（例えば、押し出し処理）の直 前に２つ以上の微生物から得られるバイオマスを合わせることによって得ること ができる。抽出処理に先立って２つ以上の異なる微生物の押し出し物を混合する ことも可能である。 従って、本発明による好ましい方法は、以下の通りであり得る： ａ）１つ以上の微生物を適切な培地中で、所望の化合物を微生物に産生させる 条件下で発酵を行う工程であって、（周りの培地中の微生物の）培養液を得るこ とができる、工程； ｂ）必要に応じて、酸性化などにより化合物を沈澱させるかまたは固体化する 工程； ｃ)バイオマスを得るために、微生物を培養液中の培地から分離する工程であ って、濾過などの固液分離により行うことができる、工程； ｄ）工程（ａ）から得られる培養液または工程（ｃ）から得られるバイオマス のいずれかを低温殺菌する工程； ｅ）必要に応じて、例えば、乾燥物または乾燥物質を添加することによるか、 または例えば、脱水技術または乾燥技術によって水分含有量を減少させることに より、バイオマスの乾燥物含有量を高める工程； ｆ）得られるバイオマスを粉砕および／または混練する工程(および必要に応 じて、１つ以上の乾燥物質を添加することによって乾燥物含有量を高める工程) ； ｇ）押し出しなどによってバイオマスを造粒して、顆粒状粒子を得る工程； ｈ）顆粒状粒子を乾燥させて、乾燥顆粒を得る工程；および ｉ）適切な溶媒の使用などによって１つ以上の化合物を抽出する工程。 本発明に従って単離される化合物は高品質であり、ヒトまたは動物用の栄養物 での使用に適し得る。特に、本発明に従って単離される多不飽和脂肪酸（ＰＵＦ Ａ）含有脂質は、栄養目的、特に幼児用処方での取り込みに適する。 本発明を、実例として提供される以下の実施例に関して、例として説明する。 以下の図面が実施例に添付される。 図１は、時間に対する温度および乾燥物（％）のグラフであり、異なる温度で 押し出された異なる量のバイオマスの乾燥挙動を示す； 図２は、異なる温度で押し出されたバイオマスから得られる、温度に対するオ イル収量のグラフである； 図３は、（公知の）濾過抽出処理の流れ図である； 図４は、時間に対するオイル収量のグラフであり、オイルの抽出量とその抽出 時間との関係を示す。 実施例１〜６ モルティエレラ属の発酵ブロスの処理 予め６８℃で１時間低温殺菌したモルティエレラ・アルピナ(パレット上での 増殖物)の発酵ブロス１６０リットルを標準的なディーフェンバッハプレートと フレームフィルタープレス(クロスタイプ:nycot２７９４)を用いる濾過処理に付 した。該ブロスの濾過処理の最大圧は１.０barとした。２０分以内に１６０リッ トルのブロスはフィルターの全面積４.３５m²の条件下で濾過した(平均流量:約 １１０リットル／m²h)。フィルターケークをその３倍容量(１５０リットル)のプ ロセス水を用いて洗浄した。 約３０kgの湿潤ケークを得た(乾燥分:約２５％)。３種の乾燥を用いた。 (i)真空乾燥法 真空(約５０mbar)棚型乾燥機(乾燥表面積:約１m²)内においてフィルターケー ク １０kgを２５℃で２４時間乾燥させることによって乾燥バイオマス(乾燥分:約９ ４％)を約２.５kg得た。この乾燥バイオマスは粉々のバイオマスと若干の大きな 塊から成るものであった。真空乾燥に多くの時間を要したのはこのような大きな 塊に起因すると考えられる。 (ii)棚型換気乾燥法 棚型換気乾燥機(乾燥表面積:約１m²)内においてフィルターケーク１０kgを３ ５℃で２４時間乾燥させた(窒素雰囲気下)。全体で約２．５kgの乾燥バイオマス を得た(乾燥分:約９３％)。乾燥バイオマスは粉々のバイオマスと若干の大きな 塊から成るものであった。棚型換気乾燥に多くの時間を要したのはこのような大 きな塊に起因すると考えられる。 (iii)流動床乾燥法 実験室規模の流動床乾燥機「ＡＥＲＯＭＡＴＩＣ(ＭＰ−１型)内においてフィ ルターケーク５kgを乾燥させた(流入空気温度:約２００℃)。出口温度は約４０ ℃であった。湿潤バイオマスを約４５分間乾燥させることによって乾燥バイオマ スを約１kg得た(乾燥分:約８１％)。 ６つの異なった温度におけるヘキサンによる油抽出には上記の方法(iii)で得 られた乾燥バイオマスを用いた(実施例１〜６)。乾燥バイオマス１５０gをヘキ サン１５００mlを用いて加熱還流下(窒素雰囲気中)で９０分間抽出した。細胞マ スを濾去し、得られたミセル中の溶剤を回転エバポレーター内において真空下で 蒸発させることによって粗製ＰＵＦＡ油を得た。得られた結果を以下の表−１に 示す。室温での抽出の場合に収率は低下した。良好な収率は昇温下で得られた。表−１ バイオマスからの油抽出 トリグリセリドに富む油分は淡黄色油であり、若干の固形分を含有した。 実施例７および比較の実施例８ モルティエレラ属の発酵ブロスの処理 先の実施例に記載のようにして予め低温殺菌したブロス５００リットルを膜フ ィルタープレス(ＳＣＨＵＬＥ社製)を用いる濾過処理に付した(圧力差:約０.５b ar)。フィルターケークをその１０倍容量のプロセス水を用いて洗浄した後、５. ５barの条件下での圧搾処理に３０分間付した。得られたケークの乾燥分は約４ ６％であった。このようにして得られたケークをパイロット押出機(ＯＤＥＫＥ ＲＫＥ；異形バレルの直径:５０mm)を用いる押出処理に付した。ダイプレートは １０個の穴(直径:１.６mm)を有した。全体で１９kgのフィルターケークを約４５ 分間で押出した。 このようにして得られた押出物をパイロットプラント規模の流動床乾燥機(Ｔ ４ＡＥＲＯＭＡＴＩＣ;乾燥表面積:０.２６ｍ²)を用いて乾燥させた。押出物を ６５℃で約４５分間乾燥させることによって乾燥分が約８５％の乾燥物を得た( 実施例７)。 上記の実験において押出処理をおこなわずに、真空棚型乾燥機内において４０ ℃で乾燥させた(比較の実施例８)。大きな塊に起因して乾燥には非常に長い時間 を必要とした。 上記の２種の乾燥物をヘキサンを用いる抽出処理に付したところ、次の特性が 判明した。 乾燥押出物(実施例７)....主としてプレットから成り、抽出処理は比較的容易 であった。 真空乾燥バイオマス(比較の実施例８)....抽出処理は困難であり、濾過特性は 劣った。 実施例９および１０ 実施例７と同じブロスを用いる押出実験を以下の押出機を用いておこなった。 ＬＡＬＥＳＳＥ社(アルンヘム、オランダ)製: 実施例９においては、「ＬＡＬＥＳＳＥ」(一軸スクリュー万能押出機)を使用し た。この型の押出機は通常はスナック食品の製造に使用されている。粉にしたト ウモロコシ(乾燥分:約９５％)を試験物として押出機へ送給し、加熱加圧下でト ウモロコシを押出した。ダイから出た押出物は膨張した。 この型の押出機のバレルは異形(profiled)バレルであり、処理されたトウモロ コシは移送される。押出用スクリューの型は被処理物の種類によって左右される 。スクリューは万能輸送スクリューまたは圧縮スクリュー(直径:４８mm)を用い た。「ＬＡＬＥＳＳＥ」押出機は最大容量で駆動する７.５Ｋwのパイロット装置 である。この装置の全所要動力は１２．１Ｋwである。この押出機のバレルは加 熱または冷却することができる。バイオマスの押出には直径が１.８mm、２.０mm および２.２mmの穴を１〜４つ有するダイプレートを使用した。 モルティエレラ属のバイオマス処理能(冷却バレル)は約４０Kg／hであった。 ダイプレート中の穴の長さ／直径(Ｌ／Ｄ)比は押出中に変化させた。 ＡＬＭＥＸ社(ズートフェン、オランダ)製: 実施例７と同じモルティエレラ属のバイオマスを用いる実施例１０においては 、ＡＬＭＥＸ社製のエキスパンダー押出機を用いた。この型の押出機はペット用 食品の製造に用いられている。この押出機はバイオマスを輸送させるピンを有す る平滑バレルを具備する。該ピンはＬＡＬＥＳＳＥ社製押出機のバレルのプロフ ィールと同じ機能をする。エキスパンダー押出機のスクリューはモジュールスク リューである。 テクニカルデータ:ＡＬＭＥＸ コンティバール(Contivar)１５０ Ｌ／Ｄ(スクリューの長さと直径の比)：１０ 最大スクリュー速度:１８０rpm 最大容量駆動:２２Ｋw スクリューの直径:１５０mm 冷却媒体:水道水 ダイプレート:直径１.８mmの穴を有するリング３個 バイオマスの温度は処理中に約２５℃まで上昇した。１時間あたりの押出機の 処理能はモルティエレラ属のバイオマス約２５０kgであった。 比較の実施例１１ 異なる方法によっておこなった固体／液体分離の比較 デカンター: モルティエレラ・アルピナの発酵から得られたブロス３５０リットルを「ＦＬ ＯＴＴＷＥＧ」デカンター(Ｚ ２３−３／４４１型)を用いてデカントした。処 理速度は約４０００rpmに調節した。操作中の差速度の範囲は７.５〜２０rpmで 変化した。供給は４００リットル／ｈでおこなった。バイオマスは洗浄しなかっ た。全体で３５０リットルのブロスをデカントした。供給物の温度は８℃とし、 上澄みの温度は１５℃とした。得られたバイオマスの乾燥分は約２５％であった 。 デカンター＋真空ドラムフィルター: 上記のデカンター実験において得られたバイオマス(乾燥分:２５％)２０kgを プロセス水(NaClを１０kg溶解させた水)５００リットルに懸濁させた。得られた スラリーをベルト状ディスチャージ(discharge)を備えた真空ドラムフィルター( ＰＡＸＭＡＮ、クロスタイプ:８６５.９１２Ｋ／５ポリプロプ)を用いて濾過し た。濾過物は洗浄しなかった。ドラムの速度は１rpmとし、最大圧力差は６００m barとした。全体で４００リットルのスラリーを１５分間で濾過した。実効濾過 表面積は約０.３m²で、平均流量は５０００リットル／m²h(濾過表面)とした。濾 過速度は非常に良好であったが、ケークの形成が若干みられた。濾取されたバイ オマスの乾燥分は約３５％であった。 プレート・フレームフィルタープレス: プレート・フレームフィルタープレス(スタンダードＲ＆Ｂ、クロスタイプ:ny cot ２７９４)を用いてブロス５００リットルを濾過した。ブロスは圧力差０.３ barで濾過した。５００リットルのブロスは１５分以内に濾過された（全濾適面 積:５m²、平均流量:±１７５リットル／m²h)。フィルターケークはその約２.５ 倍容量のプロセス水を用いて洗浄した(平均流量:４００リットル／m²h)。このケ ークを３０分間送風乾燥させることによってバイオマスを得た(乾燥分:約２５％ )。 膜フィルタープレス: 膜フィルタープレス(ＳＣＨＵＬＥ社製、クロスタイプ:propex ４６Ｋ２)を用 いてブロス７００リットルを濾過した。ブロスは圧力差０.３barで濾過した。ブ ロス７００リットルは３０分以内に濾過された(全フィルター面積:６.８m²、平 均流量:約２０５リットル／m²h)。 フィルターケークはその３倍容量(約３００リットル)のプロセス水を用いて７ 分間洗浄した(平均流量:３７５リットル／m²h)。 プレート・フレームプレスに比べたときの膜フィルタープレスの利点は、濾過 後のケークを高圧で圧搾できるので、ケークの乾燥分が増加することである。ケ ークを５.５barの圧力下で３０分間圧搾することによってバイオマス(乾燥分:約 ４５％)を得た。 別の実験においては、ブロス１１００リットル膜フィルタープレス(ＳＣＨＵ ＬＥ社製、クロスタイプ:propex ４６Ｋ₂)を用いて濾過した。ブロスは圧力差０ .３barで濾過した。１１００リットルのブロスは４５分以内に濾過された(全フ ィルター面積:１２.３m²、平均流量:約１２０リットル／m²h)。フィルターケー クはその３倍容量(約６００リットル)の１％NaCl溶液を用いて洗浄した(平均流 量:１６２リットル／m²h)。 ケークを６barの圧力下で３０分間圧搾することによってフィルターケークを 得た(乾燥分:約５５％)。 圧搾と１％塩溶液による洗浄はフィルターケークの乾燥分に有意な効果をもた らした。 実施例１２ 乾燥分含有量を異なるバイオマスの押出 実施例７に記載の方法によって得られた乾燥分含有量が異なるバイオマスを押 出した(表−２参照)。押出は異形バレルと万能スクリューを備えた一軸スクリュ ーを用いておこなった。押出には異なる数の穴(直径:２mm)を有するダイプレー トを用いた。 押出によって直径が約２mmの粒子が得られた。 押出性能と押出物の品質は押出に用いたバイオマス中の乾燥分の割合に左右さ れる。乾燥分が２５％のものは最も悪い結果をもたらしたが、他の微生物に対し てはこのような低含有量のものでも許容される。 表−２ 乾燥分含有量が異なるバイオマスの押出実験の結果 実施例１３および１４並びに比較の実施例１５ モルティエレラ・アルピナの常套のバイオマスと押出バイオマスの乾燥 真空乾燥: 常套法によって得られた非押出バイオマス(比較の実施例１５)を真空棚型乾燥 機(４０℃)を用いて約５０時間乾燥させた。塊が存在するために乾燥は非常に遅 延した。この方法によって得られた乾燥バイオマス中の乾燥分は約９２.５％で あった。 比較のために、実施例１１で得られた押出物(粒径:２mm、乾燥分:５５％)約２ ０gを実験室規模の回転エパポレーター(rotarvapor)を用いて乾燥させた（水浴 の温度:６８℃、圧力:４０mbar)。乾燥性能は適性なものであったが、乾燥バイ オマスが器壁に固着し、若干の油成分のにじみがみられた。乾燥後の乾燥分含有 量は９２.３％であった。流動床乾燥: 実施例１３においては、バイオマスを異なる温度で乾燥させた。バイオマスの 前処理をおこなわない場合には、バイオマスの大きな塊は完全に乾燥しなかった 。この場合には、乾燥バイオマスは粒径の点で非常に不均一であった。 バイオマスを乾燥前に押出処理に付すことによって、乾燥性能は実質的に改善 され、バイオマスの粒径はより均一となった。 これらの結果により、流動床乾燥法は異なる形態で単離されたバイオマスに適 用でき、該乾燥法は押出物を用いることによって改善されることが明らかとなっ た。 別の実験(実施例１４)においては、空気を用いる流動床乾燥機(８０００Nm³／ m²h)内において異なる量(１５kgおよび３０kg)の押出物を乾燥させた。乾燥中に 試料を採取して乾燥分の含有量を計算した。図１においては、２種の異なった量 の押出物の乾燥分の含有量と温度との関係を示す。 流動床の温度は８０℃とした。バイオマス押出物の粒径は１.３mmであった。 乾燥後のバイオマス押出物の乾燥分含有量は約９６％であった。 実施例１６ モルティエレラ・アルピナの乾燥押出物からの脂質の抽出 異なる温度下での乾燥押出物の撹拌抽出: 乾燥分含有量が９３.４％および９７.８％である乾燥押出物の試料１００gを ヘキサン５００ml(２Ｏ℃、３５℃および５０℃)またはプロパノール−２ ５０ ０ml(２０℃、４０℃および７０℃）を用いて３時間抽出した。スラリーは４つ 口丸底フラスコ内に装備した２枚羽根撹拌機を用いて撹拌した(加熱はマントル ヒーターを用いておこなった)。蒸発したヘキサンまたはプロパノール−２は還 流クーラーを用いて循環させた。 抽出中、３０分毎に撹拌機を停止させて上澄み試料１５mlをフラスコ内から採 取し、粒子を沈降させ、予め秤量したエッペンドルフ管(２ml)内へ試料１mlをピ ペットを用いて注入した。真空下において４０℃で一夜乾燥させた後、エッペン ドルフ管を秤量し、全油分量を計算した。この実験で得られた結果を図２に示す 。 ヘキサン抽出の結果: i) 抽出される脂質の全量に対する温度の影響はなかった。即ち、比較的低い 抽出温度での脂質の収率は良好であった。 ii) 全脂質が抽出された時間に対する温度の影響は小さかった。 iii)２０℃よりも高温において５倍容量のヘキサンを用いることによって全脂 質はバイオマスから３０分以内に抽出された。 プロパノール−２抽出の結果: i) 抽出される脂質の全量に対する温度の影響は大きかった。 ii) 全脂質が抽出される時間に対する温度の影響は大きかった。 iii)７３℃において５倍容量のプロパノール−２を用いることによって全脂質 は２時間以内に抽出された。 油分の組成は使用する抽出溶剤によって左右された(表−３参照)。抽出溶剤の 極性が強いほどより多くのリン脂質が抽出された。溶剤の極性は油分の組成を最 適化するように選択することができる。 表−３ ２種の異なる溶剤を用いるモルティエレラ属バイオマス の室温での抽出 大規模な実験においては、ミセルの濾過に関する問題が認められたが、これは 抽出過程中の高速撹拌によって押出物が小さな粒子に崩解することに起因する。 このような問題は撹拌抽出法の代わりにパーコレーション抽出法を用いること によって回避された。 乾燥押出物のヘキサンを用いるパーコレーション抽出: いくつかのパーコレーション抽出をパイロット実験規模でおこなった(図３に 示すプロセスのダイヤグラム参照)。乾燥したバイオマス押出物約４０〜４５kg をヘキサンを用いて２０℃で抽出した(最初のヘキサン／バイオマス比＝４.４リ ットル／kg)。歯車ポンプの流動は１.５m³／hとした。約０.１barの保圧容器を 用いて少量の窒素をパージした。 抽出は４時間おこなった(抽出中に温度は１８℃から２５℃に上昇した)。３０ 分毎に試料をミセルから採取した。各々の試料１００mlを回転エパポレーター( 水浴の温度:６４℃)を用いて実験室規模で真空下(約５０mbar)において２０分間 の蒸発処理に付して油分量を測定した。結果を表−４に示す。２時間で平衡に達 した。次いで、抽出されたバイオマスを約０.６床容量のヘキサンを用いて洗浄 した。抽出中、床高は変化しなかった。 ミセルは蒸発前にポリッシュ濾過処理に付した。抽出中、ミセルはより透明に 変化したが、これは粒子床にわたる深部濾過に起因するものである。 実施例１７および比較の実施例１８ ブラケスレア・トリスポラからのβ−カロテン油の回収 予め７５℃で１５分間低温殺菌した真菌ブラケスレア・トリスポラの発酵ブロ ス１０リットルを実験室用濾過装置を用いる採取処理に付した。ブロスの濾過能 を改善するためにCaCl₂を添加した(最終濃度:５g／リットル)。このようにして 回収されたバイオマスを一般的なフルーツプレス(柑橘類用プレス;ＨＡＦＩＣＯ Ｄ.Ｇ.Ｍ.)を用いて実験室規模で機械的に脱水(圧搾)し、乾燥分を４５％とし た。得られたケークを、直径１.８mmの穴を４つ有するダイプレートを具備する ステンレス鋼製シリンジを用いて押出した。得られた押出物は実験室規模の流動 床乾燥機を用いて乾燥させた(空気の温度:４０℃、乾燥時間:９０分間、空気の 流量:１５０Nm³／h;ＡＥＲＯＭＡＴＩＣ ＭＰ−１)。このようにして乾燥した バイオマス中の乾燥分の含有量は約９５％であった。 乾燥押出物の試料約５０gを酢酸エチルを用いるパーコレーション抽出法によ って抽出した(最初の溶剤体積／バイオマスの比＝３０リットル／kg)。５０℃で 抽出を２時間おこなった後、抽出物を真空濾過によって採取した。バイオマスは １床容 量の酢酸エチルを用いて洗浄した。このようにして回収した抽出物は蒸発処理の 前に脱塩水を用いて２回洗浄した(抽出物／水＝５v／v)。酢酸エチルを５０℃( 水浴の温度)で蒸発させることによってβ−カロテンの濃度を8g／リットルとし た。 β−カロテンの結晶は濃厚液からの制御された結晶化とその後の濾過処理によ って回収した。 押出処理に付さないで混合して乾燥したバイオマスを用いて同じ実験をおこな った(実施例１８)。混合乾燥したバイオマスの抽出後の濾過能は乾燥押出物に比 べて劣った。 実施例１９ クリプテコジニウムからのＤＨＡ油の回収 予め６５℃で１時間低温殺菌した藻類クリプテロジニウム・コ−ニイ(Crypthe codinium cohnii)の発酵ブロス７リットルから実験室規模の遠心分離機(ＢＥＣ ＫＭＡＮＮ ＪＭ／６Ｅ型)を用いてバイオマスを採取した。ブロスを８００ml ずつにわけて５０００rpmで２分間の遠心分離処理に付すことによって透明な上 澄みを得た。 全体で２２４gのバイオマス(乾燥分:１３％)を回収した。このことは、発酵ブ ロスの採取におけるバイオマスの濃度が約４g／kgであったことを意味する。回 収したバイオマスにデンプン(ＲＯＱＵＥＴＴＥ、バッチnr．１０ＥＶ００２４) ３００gを添加して乾燥分を増加させた。この方法によって得られたケークは万 能スクリューと異形バレルを備えた実験室用一軸スクリュー押出機を用いて押出 した。ダイプレート中の穴の直径は２mmであり、ダイプレートの厚さは６mmであ り、また、ダイプレートのＬ／Ｄは３であった。得られた平滑押出物を真空下に おいて５０℃で一夜乾燥させることによってひびの入った乾燥押出物を得た。こ のようにして乾燥したバイオマス中の乾燥分は約９４％であった。 乾燥押出物の試料約１８０gをヘキサンを用いて抽出した(最初の溶剤体積／バ イオマスの比＝５リットル／kg)。６０℃での抽出処理を３時間おこなった後、 ミセルをワットマンフィルターを用いて濾過した。得られた抽出バイオマスを精 製直後のヘキサン１０００mlを用いて１回洗浄した。このようにして得られた濾 過ミセル を蒸発処理に付した(水浴温度:６８℃)。得られた油分を含有する粗製ＤＨＡを 得た。ＧＣ分析によれば、油分中のＤＨＡの濃度は３２．６％であった。このよ うにして得られた油分はトリグリセリド約６７％、ジグリセリド１２％、ステロ ール３．７％および消泡剤約０．２％含有した（ＮＭＲ）。油分の他の特性はカ ロテノイドの濃度である(β−カロテン０．１５mg／mlおよびγ−カロテン５mg ／ml)。 実施例２０ プロピオニバクテリウムsp．からのビタミンＢ１２の回収 プロピオニバクテリウムsp．(２８トン）の大規模発酵によるブロス(９０℃で ２分間の熱衝撃処理をおこなった)をＢＲＰＸ−２１３−ＳＧＶ型の清澄機(ＡＬ ＦＡＬＡＶＡＬ社製;３〜７トン／h)を用いて採取した（Ｇ−ファクター:約５０ ００)。このようにして清澄したブロスはポリエチレンスルホン膜(約１５０m²)( カットオフ値:５kD)を螺旋状に巻き付けたＡＢＣＯＲ ＫＯＣＨモジュール(Ｈ ＦＫ １３１−ＶＳＶ型)を用いる限外濾過処理に付した。得られた限外濾液を プロセス水を用いる透析濾液処理に付した(５００％濃縮容積)。得られた透析濾 液は真空蒸発処理によって３分の１に濃縮した。 得られた濃縮液をＮＩＲＯ社製２５０多段乾燥機(流動床噴霧乾燥機／凝集機) を用いて造粒乾燥させた。乾燥機の入口での空気温度は約２５０℃とし、出口で の空気温度は約７０℃とした。空気の流量は約３０００m³／hとした。この条件 下での生成物の温度は約７０〜８０℃であった。乾燥機へ送給した濃縮液の密度 は約１０５０kg／m³であった。 乾燥顆粒の試料約２gをコニカルフラスコ内において約７５％のエタノール(こ の含水量は最適な抽出／技術的性能をもたらす)１２５ml用いて撹拌下、周囲温 度で抽出した(透明な抽出物が得られた)。抽出後、抽出されたバイオマスをワッ トマン紙フィルターを用いて濾過した(濾過は容易におこなわれた)。このように して回収された淡紅色の透明濾液中に含まれるビタミンＢ１２を分析した。得ら れたバイオマスは約７５％のエタノール２５mlを用いて洗浄した。この方法によ り、顆粒化バイオマスから約９０％のビタミンＢ１２が抽出された(表−４参照) 。表−４ 多段凝集されたプロピオンバクテリウムからの ビタミンＢ１２の抽出に関するデータ 実施例２１ Ｃ．コ−ニイとＭ．アルピナの同時押出 真菌モルティエレラ・アルピナの発酵ブロス１０リットルおよびクリプテコジ ニウム・コ−ニイの発酵ブロス１０リットルを混合した。この混合ブロスの濾過 能を改善するためにCaCl₂を添加した(最終濃度:５g／l)。混合ブロスを濾過し、 得られたケークを一般的なフルーツプレス(ＨＡＦＩＣＯ社製の柑橘類用プレス) を用いる機械的脱水処理に付した。 得られたケークを万能輸送スクリュー、異形バレルおよび直径２mmの穴を１つ 有するダイプレートを具備する実験室用一軸スクリュー押出機を用いて押出した 。得られた押出物を実験室用流動床乾燥機(空気温度:４０℃、乾燥時間:約１時 間、空気流動:１５０Nm³／h;ＡＥＲＯＭＡＴＩＣ ＭＰ−１)を用いて乾燥させ た。 乾燥バイオマス中の乾燥分は約９2％であった。 乾燥押出物の試料約１００gをヘキサンを用いて抽出した(最初の溶剤体積／バ イオマスの比:４リットル／kg)。周囲温度での抽出を２時間おこなった後、ミセ ルを真空蒸発処理によって回収した。抽出物中に残存する押出物はその４倍容量 の精製直後のヘキサンを用いて洗浄した(最初の溶剤体積／バイオマスの比:４リ ットル／kg)。洗浄ヘキサンをミセルと混合し、得られたミセルを５０℃(水浴の 温度)で蒸発させた。この方法により、ＡＲＡ(Ｃ２０:４ ω６)およびＤＨＡ( Ｃ２２:６ω３)を含有する粗製ＰＵＦＡ油が得られた。 この粗製油は食用植物油に有用な方法によって精製した。 比較の実施例２２ 先の実施例に記載のバイオマスとブロスを得るのに採用した種々の培養条件を 以下の表に示す。 発酵技術に関する参考文献 ｉ)マイスターＨ．Ｇ．、ロゴビンＳ．Ｐ．、ストドラＦ．Ｈ．、ヴッカーハム Ｌ．Ｊ．、「微生物による細胞外スフィンゴ脂質の形成ＩＶ．ハンセヌラ・シフ ェリイによるテトラアセチルフィトスフィンゴシンのパイロットプラント規模で の製造」、Appl．Microbiol．、第１０巻、第４０１頁〜第４０６頁(１９６２年) 。 ii)ズーイ・リー、イングイン・ル、ヤドワドＶ．Ｂ．、ワードＯ．Ｐ．、「モル ティエレラ・アルピナ菌株によるアラキドン酸濃縮物の製造」、Can．J．Biochem ．Eng．、第７３巻、第１３５頁〜第１３９頁(１９９５年)。 iii)フィンケルシュタインＭ．、フアングＣ−Ｃ．、ビングＧ．Ｓ．、ツァウＢ −Ｒ．、リーチＪ．、「β−カロテンの生産を増大させ得るブラケスレア・トリ スポラ交配カルチャー」、米国特許第５,４２２,２４７号(１９９５年)。 iv)コジマＩ．、コウジＫ．、サトウＨ．、オグチＹ．、「発酵技術によるビタミ ンＢ１２の製造法およびビタミンＢ１２生産性微生物」、米国特許第４,５４４, ６３３号(１９８５年)。 v)キールＤ．Ｊ．、レープＳ．Ｅ．、シコッテＶ．Ｊ．、「焔色植物によるデコ サヘキサエノン酸の生産」、米国特許第５,４０７,９５７号(１９９５年)。 実施例２３ 粗製油と精製油の分析 実施例１記載の方法(流動床乾燥およびヘキサン抽出)によって粗製油のバッチ を調製した。 油分についての全ての分析はアメリカン・オイル・ケミスト・ソサイアティ( ＡＯＣＳ)に記載の方法に従っておこなった。トリグリセリド、ジグリセリド、 モノグリセリドおよびリン脂質の含有量はＨ−ＮＭＲ(６００ＭＨｚ)を用いて決 定した。 粗製油は次の組成等を有した。 バッチ ａ ｂ ｃ トリグリセリド (％) ９６．６ ９６．５ ９６．６ 酸価 mg／g １．７ ０．３ ０．２ 過酸化物価 meq／kg ２．７ １．３ １．３ アニシジン価 ＜１．０ ０．３ ０．１ 粗製油は食用油の加工分野において既知の標準的な方法によって精製した。手 短かに言えば次の通りである。 粗製油を取込まれた空気を除去しながら８０〜９０℃まで穏やかに加熱し、こ れにNaOHの希釈溶液を添加した(遊離の脂肪酸の量に対して化学量論量の１２５ ％当量)。反応を３０分間おこなった後、水性相を遠心分離によって分離させ、 油性相はフェノールフタレインの中和反応まで水洗した。この目的のためには、 油分体積の１０％の水で３回洗浄すれば十分である。水性層を遠心分離によって 除去した。最後の水洗が終了後、油分を真空下、７０℃で乾燥させた。漂白性土 類(bleaching earth)「Tonsil Supreme ＦＦ」を２重量％添加することによって 乾燥油を漂白した。漂白性土類は６０℃で１０〜１５mbarの条件下において１時 間接触させた。反応終了後、漂白性土類をリーフフィルターを用いて濾去した( 窒素圧:１bar)。濾過した油分は１８０℃で２〜５mbarの条件下でのバッチ脱臭 処理に２時間付した。ストリッピング媒体としてはスチームを用いた。この場合 のスチームは油分に添加した水分からその場で発生させた。反応終了後、油分を 冷却した。反応容器内の圧力は窒素ガスの導入によって１barにした。 上記方法で得られた透明油は次の組成等を有した。 バッチ ａ ｂ ｃ リン脂質 (％) ＜０．０５ ＜０．０５ ＜０．０５ トリグリセリド (％) ９６．６ ９６．５ ９６．６ ジグリセリド (％) １．６ １．３ １．０ 酸価 mg／g ０．２ ０．１５ ０．１ 過酸化物価 meq／kg １．６ ０．８ ０．４ アニシジン価 ４．１ １．９ ３．１ ランシマート誘導時間: １３０℃ （hours） ２．５ １００℃ （hours） ＞４ ＞４ ＞４ ８０℃ （hours） ＞１０ ＞１０ ＞１０

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ｃ１２Ｎ 1/12 Ｃ１２Ｎ 1/12 Ｚ 1/14 1/14 Ｚ // Ａ６１Ｋ 7/00 Ａ６１Ｋ 7/00 Ｃ (Ｃ１２Ｐ 7/64 Ｃ１２Ｒ 1:645） (Ｃ１２Ｐ 7/64 Ｃ１２Ｒ 1:89） (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ， ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，Ｌ Ｕ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ， ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，Ｓ Ｄ，ＳＺ，ＵＧ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ， ＣＮ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，Ｇ Ｂ，ＧＥ，ＧＨ，ＨＵ，ＩＬ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ， ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，Ｎ Ｏ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ， ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ (72)発明者 スハープ，アルベルト オランダ、エヌエル―2993ベーヘー・バー レントレフト、スミットシューク13番 (72)発明者 フィッセル，ヨハネス・マルティヌス・ヤ コブス オランダ、エヌエル―3823テーイェー・ア ーメルスフォールト、ハングボールト102 番

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １．トリグリセリド含有量が９０％よりも多い多不飽和脂肪酸(ＰＵＦＡ)を少 なくとも１種含有する微生物油。 ２．８０℃におけるランシマート誘導時間が５時間以上である請求項１記載の 油。 ３．多不飽和脂肪酸がＣ１８、Ｃ２０もしくはＣ２２ω−３またはＣ１８、Ｃ ２０もしくはＣ２２ω−６多不飽和脂肪酸である請求項１または２記載の油。 ４．ＰＵＦＡがＣ２０もしくはＣ２２ω−３またはＣ２０ω−６多不飽和脂肪 酸である請求項１または２記載の油。 ５．ＰＵＦＡがアラキドン酸(ＡＲＡ)、エイコサペンタエノン酸(ＥＰＡ)およ び／またはドコサヘキサエノン酸(ＤＨＡ)である請求項１から４いずれかに記載 の油。 ６．ＰＵＦＡがＡＲＡのみである請求項１から５いずれかに記載の油。 ７．ＰＵＦＡが真菌によって生産される請求項１から６いずれかに記載の油。 ８．真菌がモルティエレラ属の真菌である請求項１から７いずれかに記載の油 。 ９．ＰＵＦＡが藻類によって生産される請求項１から５いずれかに記載の油。 １０．藻類がクリプテコジニウム属の藻類である請求項８記載の油。 １１．下記の工程a)〜d)を含む、少なくとも１種の多不飽和脂肪酸(ＰＵＦＡ) を含有する油を微生物バイオマスから入手する方法: a)乾燥分が２５〜８０％のバイオマスを供給し、 b)該バイオマスを顆粒に造粒し、 c)該顆粒を乾燥して乾燥顆粒とし、次いで d)該乾燥顆粒から該油を抽出もしくは分離する。 １２.顆粒中の乾燥分の平均含有量が３０〜７０％である請求項１１記載の方 法。 １３.乾燥顆粒中の乾燥分の平均含有量が少なくとも８０％である請求項１２ または１３記載の方法。 １４.油を適当な溶剤を用いて抽出する請求項１１から１３いずれかに記載の 方法。 １５.抽出油の精製工程をさらに含む請求項１１から１４いずれかに記載の方 法。 １６．工程ｂ)において造粒化をバイオマスの抽出によっておこなう請求項１ １から１５いずれかに記載の方法。 １７．バイオマスを造粒化前に粉々にするか、または練り合わせる請求項１６ 記載の方法。 １８．工程ａ)のバイオマスを発酵ブロスの固体／液体分離によって得る請求 項１１から１７いずれかに記載の方法。 １９．固体／液体分離を機械的脱水処理と併用する請求項１８記載の方法。 ２０．工程ａ)において乾燥分の含有量が２５〜８０％のバイオマスを、バイ オマスへの固体状成分の添加によって得る請求項１１から１９いずれかに記載の 方法。 ２１．工程ｃ)において造粒バイオマスの乾燥によってその乾燥分含有量を少 なくとも８０％にする処理を流動床乾燥または半流動床乾燥によっておこなう請 求項１１から２０いずれかに記載の方法。 ２２．バイオマスが真菌を含有するか、または真菌を起源とする請求項１１か ら２１いずれかに記載の方法。 ２３．真菌がムコラレス目に属する請求項２２記載の方法。 ２４．真菌がモルティエレラ属に属する請求項２２または２３記載の方法。 ２５．真菌がモルティエレラ・アルピナである請求項２２から２４いずれかに 記載の方法。 ２６．バイオマスが藻類を含有するか、または藻類を起源とする請求項１１か ら２１いずれかに記載の方法。 ２７．藻類が焔色植物であるか、および／またはクリプテコジニウム属に属す る請求項２６記載の方法。 ２８．藻類がクリプテコジニウム・コーニイである請求項２６または２７記載 の方法。 ２９．化合物が所望により脂質中に含まれる多不飽和脂肪酸(ＰＵＦＡ)である 請求項１１から２８いずれかに記載の方法。 ３０．多不飽和脂肪酸がＣ１８、Ｃ２０もしくはＣ２２ω−３またはＣ１８、 Ｃ２０もしくはＣ２２ω−６多不飽和脂肪酸である請求項２９記載の方法。 ３１．ＰＵＦＡ化合物がＣ２０もしくはＣ２２ω−３またはＣ２０ω−６多不 飽和脂肪酸である請求項３０記載の方法。 ３２．ＰＵＦＡがアラキドン酸(ＡＲＡ)、エイコサペンタエノン酸(ＥＰＡ)お よび／またはドコサヘキサエノン酸(ＤＨＡ)である請求項１１から３１いずれか に記載の方法。 ３３．食用組成物もしくは化粧用組成物または栄養補給剤の調製のための請求 項１から１０いずれかに記載の微生物油の使用。 ３４．使用組成物が幼児用フォーミュラを含有する請求項３３記載の使用。 ３５．請求項１から１０いずれかの油を含有するヒト用もしくは動物用の食用 組成物もしくは化粧用組成物または栄養補給剤。 ３６．幼児用フォーミュラである請求項３５記載の食用組成物。 ３７．下記の工程ａ)〜ｃ)を含む、微生物バイオマスからの１種もしくは複数 種の化合物の分離法: a)微生物が該化合物を生産する条件下で該微生物を発酵ブロス中で培養させ、 b)該発酵ブロスまたは該発酵ブロスから誘導される微生物バイオマスを低温殺 菌処理に付し、次いで c)該微生物バイオマスから該化合物を抽出、分離もしくは回収する。 ３８．低温殺菌によって、バイオマス中もしくはブロス中に存在する物質を分 解する１種もしくは複数種の化合物を少なくとも部分的に不活性化させる請求項 ３７記載の方法。 ３９．物質がプロテアーゼまたはトリグリセリド分解酵素である請求項３８記 載の方法。 ４０．酵素がリパーゼ、ホスホリパーゼまたはリポキシゲナーゼである請求項 ３９記載の方法。 ４１．低温殺菌処理が５０〜１００℃での加熱を含む請求項３７から４０いず れかに記載の方法。 ４２．加熱が６５〜９５℃での加熱である請求項４１記載の方法。 ４３．加熱を３０〜９０分間おこなう請求項４１または４２記載の方法。 ４４．発酵ブロスを発酵容器内で低温殺菌する請求項３７から４３いずれかに 記載の方法。 ４５．低温殺菌を発酵終了後におこなう請求項３７から４４いずれかに記載の 方法。 ４６．化合物にトリグリセリドが含まれる請求項３７から４５いずれかに記載 の方法。 ４７．化合物に少なくとも１種の多不飽和脂肪酸(ＰＵＦＡ)が含まれる請求項 ３７から４６いずれかに記載の方法。 ４８．低温殺菌後に発酵ブロスを脱水処理および／または濾過処理に付して微 生物バイオマスを製造する請求項３７から４７いずれかに記載の方法。 ４９．所望により、バイオマスをその乾燥分含有量が２５〜８０％になるよう に処理する請求項４８記載の方法。 ５０．得られたバイオマスを顆粒に造粒化し、該顆粒を次いで乾燥処理に付す 請求項４９記載の方法。