JP2000507812A - 造血細胞培養栄養補充成分 - Google Patents
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Abstract
Description
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 1.1つ以上の抗酸化剤、1つ以上のアルブミンまたはアルブミン代替物、1 つ以上の脂質薬剤、1つ以上のインスリンまたはインスリン代替物、1つ以上の トランスフェリンまたはトランスフェリン代替物、1つ以上の微量元素、および 1つ以上のグルココルチコイドからなる群より選択される1つ以上の成分を含む 、無血清の真核生物細胞培養培地補充成分であって、 ここで、該補充成分を補充した基本細胞培養培地が、CD34+造血細胞の拡大を 支持し得る、 無血清の真核生物細胞培養培地補充成分。 2.1つ以上の抗酸化剤、ならびに、1つ以上のアルブミンまたはアルブミン 代替物、1つ以上の脂質薬剤、1つ以上のインスリンまたはインスリン代替物、 1つ以上のトランスフェリンまたはトランスフェリン代替物、1つ以上の微量元 素、および1つ以上のグルココルチコイドからなる群より選択される1つ以上の 成分を含む、無血清の真核生物細胞培養培地補充成分であって、 ここで、該補充成分を補充した基本細胞培養培地が、CD34+造血細胞の拡大を 支持し得る、 無血清の真核生物細胞培養培地補充成分。 3.前記抗酸化剤が、N-アセチル-L-システイン、2-メルカプトエタノール、 およびD,L-酢酸トコフェロール、あるいはその誘導体または混合物からなる群よ り選択される、請求項1に記載の無血清の真核生物細胞培養培地補充成分。 4.前記アルブミンが、ヒト血清アルブミンである、請求項1に記載の無血清 の真核生物細胞培養培地補充成分。 導体および混合物からなる群より選択される、請求項1に記載の無血清の真核生 物細胞培養培地補充成分。 6.前記インスリンが、ヒト亜鉛インスリンである、請求項1に記載の無血清 の真核生物細胞培養培地補充成分。 7.前記トランスフェリンが、ヒト鉄飽和トランスフェリンである、請求項1 に記載の無血清の真核生物細胞培養培地補充成分。 8.前記微量元素が、Se4+である、請求項1に記載の無血清の真核生物細胞 培養培地補充成分。 9.前記グルココルチコイドが、ヒドロコルチゾンである、請求項1に記載の 無血清の真核生物細胞培養培地補充成分。 10.前記補充成分が濃縮される、請求項1に記載の無血清の真核生物細胞培 養培地補充成分。 11.前記補充成分が、約2倍から約100倍に濃縮される、請求項10に記載 の無血清の真核生物細胞培養培地補充成分。 12.前記補充成分が、約40×処方物である、請求項11に記載の無血清の真 核生物細胞培養培地補充成分。 13.請求項1に記載の1つ以上の成分を組み合わせることによって得られる 、無血清の真核生物細胞培養培地補充成分。 14.前記成分が、N-アセチル-L-システイン、ヒト血清アルブミン、Human E ン、Se4+、ヒドロコルチゾン、D,L-酢酸トコフェロール、および2-メルカプト エタノールからなる群より選択される、請求項13に記載の無血清の真核生物細 胞培養培地補充成分。 15.無血清の真核生物細胞培養培地補充成分を製造する方法であって、水を 請求項1に記載の1つ以上の成分と混合する工程を包含する、方法。 16.前記成分が、水、N-アセチル-L-システイン、ヒト血清アルブミン、Hum フェリン、Se4+塩、ヒドロコルチゾン、D,L-酢酸トコフェロール、および2-メル カプトエタノールを含む、請求項15に記載の方法。 17.キャリア手段を含むキットであって、該キャリア手段が、その中に1つ 以上の容器手段を密接した制限で受けるために仕切られれており、ここで、第1 の容器手段が請求項1に記載の補充成分を含み、そして必要に応じて第2の容器 手段は基本培地を含む、キット。 18.請求項1に記載の無血清培養補充成分を補充した基本細胞培養培地を含 む無血清の真核生物細胞培養培地であって、 ここで、該補充された培養培地が、CD34+造血細胞の拡大を支持し得る、 無血清の真核生物細胞培養培地。 19.前記基本培地が、Iscove's Modified Dulbecco's Medium、RPMI-1640、 α-MEMからなる群より選択される、請求項18に記載の無血清の真核生物細胞培 養培地。 20.基本細胞培養培地を請求項1に記載の無血清補充成分と組み合わせるこ とによって得られる無血清の真核生物細胞培養培地であって、 ここで、該培地が、CD34+造血細胞の拡大を支持し得る、 無血清の真核生物細胞培養培地。 21.前記培地が1×培地である、請求項20に記載の無血清の真核生物細胞 培養培地。 22.前記培地が、濃縮された培地処方物である、請求項20に記載の無血清 の真核生物細胞培養培地。 23.前記培地が、約2×から約100×まで濃縮される、請求項22に記載の 無血清の真核生物細胞培養培地。 24.前記濃縮された培地処方物が、約10×処方物である、請求項23に記載 の無血清の真核生物細胞培養培地。 25.前記濃縮された培地処方物が、10×より高く濃縮される、請求項23に 記載の無血清の真核生物細胞培養培地。 26.無血清の真核生物細胞培地を製造する方法であって、基本細胞培養培地 を請求項1に記載の無血清補充成分と混合する工程を包含し、 ここで、該培地が、CD34+造血細胞の細胞の拡大を支持し得る、 方法。 27.1つ以上の抗酸化剤、1つ以上のアルブミンまたはアルブミン代替物、 1つ以上の脂質薬剤、1つ以上のインスリンまたはインスリン代替物、1つ以上 のトランスフェリンまたはトランスフェリン代替物、1つ以上の微量元素、1つ 以上のグルココルチコイド、1つ以上の無機塩、1つ以上のエネルギー供給源、 1つ以上の緩衝化剤、1つ以上のピルビン酸塩、1つ以上のpH指示薬、1つ以上 のアミノ酸、および1つ以上のビタミンからなる群より選択される1つ以上の成 分を含む、無血清の真核生物細胞培養培地であって、 ここで、該培地が、CD34+造血細胞の拡大を支持し得る、 無血清の真核生物細胞培養培地。 28.前記抗酸化剤が、N-アセチル-L-システイン、2-メルカプトエタノール 、およびD,L-酢酸トコフェロール、あるいはその誘導体または混合物からなる群 より選択される、請求項27に記載の無血清の真核生物細胞培養培地。 29.前記アルブミンが、ヒト血清アルブミンである、請求項27に記載の無 血清の真核生物細胞培養培地。 項27に記載の無血清の真核生物細胞培養培地。 31.前記インスリンが、ヒト亜鉛インスリンである、請求項27に記載の無 血清の真核生物細胞培養培地。 32.前記トランスフェリンが、ヒト鉄飽和トランスフェリンである、請求項 27に記載の無血清の真核生物細胞培養培地。 33.前記グルココルチコイドが、ヒドロコルチゾンである、請求項27に記 載の無血清の真核生物細胞培養培地。 34.前記無機塩成分が、1つ以上のカルシウム塩、1つ以上のカリウム塩、 1つ以上のマグネシウム塩、1つ以上のナトリウム塩、1つ以上の炭酸塩、およ び1つ以上のリン酸塩からなる群より選択される1つ以上の無機塩を含む、請求 項27に記載の無血清の真核生物細胞培養培地。 35.前記エネルギー供給源が、D-グルコースである、請求項27に記載の無 血清の真核生物細胞培養培地。 36.前記緩衝化剤が、HEPESである、請求項27に記載の無血清の真核生物 細胞培養培地。 37.前記ピルビン酸塩が、ピルビン酸ナトリウムである、請求項27に記載 の無血清の真核生物細胞培養培地。 38.前記pH指示薬が、フェノールレッドである、請求項27に記載の無血清 の真核生物細胞培養培地。 39.前記アミノ酸成分が、グリシン、L-アラニン、L-アスパラギン、L-シス テイン、L-アスパラギン酸、L-グルタミン酸、L-フェニルアラニン、L-ヒスチジ ン、L-イソロイシン、L-リジン、L-ロイシン、L-グルタミン、L-アルギニンHCL 、L-メチオニン、L-プロリン、L-ヒドロキシプロリン、L-セリン、L-トレオニン 、L-トリプトファン、L-チロシン、およびL-バリン、ならびにその塩および誘導 体からなる群より選択される1つ以上のアミノ酸を含む、請求項27に記載の無 血清の真核生物細胞培養培地。 40.前記ビタミン成分が、ビオチン、D-パントテン酸カルシウム、塩化コリ ン、葉酸、i-イノシトール、ナイアシンアミド、ピリドキサールHCl、リボフラ ビン、チアミンHCl、およびビタミンB12、ならびにその誘導体からなる群より選 択される1つ以上のビタミンを含む、請求項27に記載の無血清の真核生物細胞 培養培地。 41.前記成分が、N-アセチル-L-システイン、2-メルカプトエタノール、ヒ ン、ヒト亜鉛インスリン、鉄飽和トランスフェリン、Se4+、ヒドロコルチゾン、 Ca2+、K+、Mg2+、Na+、CO3 2-、PO4 3-、D-グルコース、HEPES、ピルビン酸ナトリ ウム、フェノールレッド、グリシン、L-アラニン、L-アスパラギン、L-システイ ン、L-アスパラギン酸、L-グルタミン酸、L-フェニルアラニン、L-ヒスチジ ン、L-イソロイシン、L-リジン、L-ロイシン、L-グルタミン、L-アルギニンHCL 、L-メチオニン、L-プロリン、L-ヒドロキシプロリン、L-セリン、L-トレオニン 、L-トリプトファン、L-チロシン、およびL-バリン、ビオチン、D-パントテン酸 カルシウム、塩化コリン、葉酸、i-イノシトール、ナイアシンアミド、ピリドキ サールHCl、リボフラビン、チアミンHCl、およびビタミンB12を含む、請求項2 7に記載の無血清の真核生物細胞培養培地。 42.前記培地が、水および請求項46に記載の成分を組み合わせることによ って得られる、請求項41に記載の無血清の真核生物細胞培養培地。 43.請求項41に記載の成分を混合する工程を包含する、無血清の真核生物 細胞培養培地を製造する方法。 44.請求項27に記載の無血清培地中にCD34+造血幹細胞を含む組成物。 45.前記CD34+造血幹細胞が、ヒト、サル、類人猿、マウス、ラット、ハム スター、ウサギ、モルモット、ウシ、ブタ、イヌ、ウマ、ネコ、ヤギ、およびヒ ツジからなる群より選択される動物から得られる、請求項44に記載の組成物。 46.CD34+造血細胞を拡大する方法であって、 (a)該細胞を請求項27に記載の培地と接触させる工程;および (b)該細胞の拡大を容易にするために適切な条件下で該細胞を培養する工程、 を包含する、方法。 47.前記培養する工程が、前記培地に造血細胞増殖因子を添加する工程をさ らに包含する、請求項46に記載の方法。 48.前記増殖因子が、エリスロポエチン、顆粒球−コロニー刺激因子、幹細 胞因子、インターロイキン3、および顆粒球/マクロファージ−コロニー刺激因 子からなる群より選択される1つ以上の増殖因子である、請求項47に記載の方 法。 49.無血清培養物中のCD34+造血細胞を哺乳動物に提供する方法であって、 (a)該CD34+造血細胞を請求項27に記載の培地と接触させる工程; (b)無血清培養物中で該CD34+造血細胞の拡大を容易にするために適切な条件下 で該細胞を培養する工程;および (c)該拡大した細胞を哺乳動物に導入する工程、 を包含する、方法。 50.前記培養する工程が、造血細胞増殖因子を前記培地に添加する工程をさ らに包含する、請求項49に記載の方法。 51.CD34+造血細胞を無血清培養物中で特定の型の細胞に分化させる方法で あって、 (a)該CD34+造血細胞を請求項27に記載の培地と接触させる工程; (b)無血清培養物中で該細胞の拡大を容易にするために適切な条件下で該細胞 を培養する工程;および (c)1つ以上の分化因子を添加する工程あるいは異なる型の造血細胞を形成す るように細胞の分化を誘導するために培養条件を変化させる工程、 を包含する、方法。 52.無血清培養物中で分化した造血細胞を哺乳動物に提供する方法であって 、 (a)該CD34+造血細胞を請求項27に記載の培地と接触させる工程; (b)無血清培養物中で該細胞の拡大を容易にするために適切な条件下で該細胞 を培養する工程; (c)1つ以上の分化因子を添加する工程あるいは異なる型の造血細胞を形成す るように細胞の分化を誘導するために培養条件を変化させる工程;および (d)該分化した細胞を哺乳動物に導入する工程、 を包含する、方法。 53.組換えCD34+造血細胞を拡大する方法であって、 (a)目的のタンパク質をコードする核酸分子を含む組換えCD34+造血細胞を得る 工程;および (b)組換え細胞の集団を形成するために請求項27に記載の培地中で該細胞を 培養する工程、 を包含する、方法。 54.組換えCD34+造血細胞を哺乳動物に提供する方法であって、 (a)目的のタンパク質をコードする核酸分子を含む組換えCD34+造血細胞を得る 工程; (b)組換えCD34+造血幹細胞の集団を形成するために請求項27に記載の培地中 で該細胞を培養する工程;および (c)該組換え細胞を哺乳動物に導入する工程、 を包含する、方法。
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