FI90988C - Monoklonaaliset vasta-aineet natriumdiureesia lisääviä nisäkkäiden sydäneteisen peptidejä kohtaan - Google Patents
Monoklonaaliset vasta-aineet natriumdiureesia lisääviä nisäkkäiden sydäneteisen peptidejä kohtaan Download PDFInfo
- Publication number
- FI90988C FI90988C FI861128A FI861128A FI90988C FI 90988 C FI90988 C FI 90988C FI 861128 A FI861128 A FI 861128A FI 861128 A FI861128 A FI 861128A FI 90988 C FI90988 C FI 90988C
- Authority
- FI
- Finland
- Prior art keywords
- monoclonal antibodies
- antibodies according
- peptides
- atrial peptides
- anp
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/10—Cells modified by introduction of foreign genetic material
- C12N5/12—Fused cells, e.g. hybridomas
- C12N5/16—Animal cells
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/26—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against hormones ; against hormone releasing or inhibiting factors
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
- G01N33/6893—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids related to diseases not provided for elsewhere
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
- Y10S530/806—Antigenic peptides or proteins
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Hematology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Description
i 90988
Monoklonaaliset vasta-aineet natriumdiureesia lisaaviS nisakkaiden sydaneteisen peptideja kohtaan
Kyseessa oleva keksintd koskee yleisesti uusia hyb-5 ridoomasolulinjoja, erityisesti hybridoomasolulinj oj a, jotka tuottavat monoklonaalisia vasta-aineita (mAK), jotka ovat spesifisia, natriumdiureesia lisaavia sydaneteisen peptideja kohtaan, erityisesti peptideja kohtaan, joita ihminen ja rotta valmistavat, seka niiden kdyttda diag-10 nostisena aineena ja tutkimustarkoituksiin.
Hiiren myeloomasolujen yhdistaminen immunisoitujen hiirien pemasolujen kanssa [Kdhler ja Milstein, Nature 256, 495 - 497 (1975)] oil ensimmainen osoitus mahdolli-suudesta saada jatkuvia solulinjoja, jotka valmistavat 15 tasa-aineisia (ns. "monoklonaalisia") vasta-aineita. Siita lahtien on tehty lukuisia yrityksia erilaisten hybridiso-lujen (ns. "hybridoomien") valmistamiseksi ja niiden muo-dostamien vasta-aineiden kayttamiseksi erilaisiin tieteel-lisiin tutkimuksiin [esim.: Current Topics in Microbiology 20 and Immunology, osa 81 - "Lymphocyte Hybridomas", F. Mel-chers et al., Springer Verlag, 1978, seka viitteet siina; C. Barnstable et al., Cell 14, 9 - 20 (1978); P. Parham, W.F. Bodmer, Nature 276, 397 - 399; Handbook of Experimental Immunology, 3. painos, nidos 2, D.M. Wier, julkai-25 sija Blackwell 1978, luku 25; Chem. Eng. News, 15 - 17 (1979), 9]. Nama tydt kuvaavat periaatteellista tekniikkaa monoklonaalisten vasta-aineiden valmistamiseksi hybridoomien avulla.
Monoklonaalisia vasta-aineita on valmistettu histo-30 kompabiliteettiantigeeneja, hapteeneja ja entsyymeja vas-taan. Ei kuitenkaan tunneta yhtaan monoklonaalista vasta-ainetta, joka reagoi hyvin selektiivisesti natriumdiureesia lisaavien nisakkaiden sydaneteisen peptidien, kuten esimerkiksi ihmisen ja rotan peptidien, kanssa.
35 2
Natriumdiureesia lisaavien sydåneteisen peptidien yhteydessa on kysymys ryhmasta, jolla on erilaisia ketju-pituuksia, jolden pienin tehokas sekvenssi koostuu 23 aminohaposta. Peptidit, joissa on lisaksi N-terminaalises-5 ti ja C-terminaalisesti muita aminohappoja, ovat yhta te-hokkaita. Peptidit syntyvat entsymaattisten vaikutusten kautta sydaneteisessa noin 152 aminohapon suuruisesta esi-astemolekyylista. ANP koodaava geeni on kloonattu ja DNA on sekvensoitu.
10 ANP:t indusoivat lyhytkestoisen, voimakkaan nat- riumdiureesin, jossa yhteydessa ei ole tahan mennessa voi-tu osoittaa aineiden tarkkaa vaikutuspistetta tubuluksis-sa. Lisaksi ANP:t ovat tehokkaita verisuonia laajentavia aineita, jotka mm. voivat vastaanvaikuttaa noradrenalii-15 nin, angiotensiini II:n, histamiinin ja serotoniinin veri-suonivaikutukseen. ANP:n vaikutusta ei lopeteta indometa-siinin avulla, mika tekee epatodennakdiseksi vaikutuksen endogeenisen prostaglandiinisynteesin kautta. On kuvattu ANP:n verenpainetta alentavia vaikutuksia "two-clip"-hy-20 pertoniaa potevilla rotilla seka SH-rotilla.
Eristetyilia soluilla voitiin osoittaa inhiboivaa vaikutusta aldosteronin ja vasopressiinin erittymiseen. Tavanomaisla vasta-aineita kayttamaiia voidaan radioimmu-nologisesti mitata ANP:n plasmapeili, joka riippuu kulloi-25 senkin koe-eiaimen tilavuustilasta. 125J:lla mer ka tul la ANP-johdannaisella voidaan osoittaa spesifinen sitoutu-minen zona glomerulosa -soluihin. Ensimmaiset kokeet viit-taavat kallikreinln vapautumiseen munuaisista ANP:n avulla. Tietyissa olosuhteissa voidaan peptidin munuaisvaiku-30 tus lopettaa Haloperidolilla suoritetun esik&slttelyn avulla (Sagnella ja MacGregor, Nature 399, 666 - 668, 1984). ANP:n vaikutusspektri tekee erittAin todennSkdisek-si tSman peptidin kausaalisen ja oireenmukaisen osallistu-misen verenkiertosairauksiin (hypertonia, hypotonia, val-35 timonkovetustauti), sydansairauksiin (akuutti ja krooninen 90988 3 syd&men vajaatoiminta, sydaninfarkti, syd&men rytmihai-riiSt, sydamen sepelvaltimosairaus) seka munuaissairauksiin (akuutti ja krooninen munuaisvaurio erilaisten perussai-rauksien aikana, uremia). Kaikissa mainituissa sairaus-5 tapauksissa tulee sen tahden olemaan suuri merkitys eri-laisissa kehon nesteissa (esim. veressa, plasmassa, seeru-missa, virtsassa, lymfassa tai selkdydinnesteessa) olevan ANP:n kvantitatiivisella maaritykselia.
Totunnaisten antiseerumeiden avulla mitatut ANP:n 10 plasmapeillt ovat osittain hyvin korkeita, mika voidaan selittaa na iden vasta-aineiden ristireaktion tai puuttuvan spesifisyyden avulla. Erittain spesifisia (monoklonaali-sia) vasta-aineita kayttamaiia voidaan sulkea pois vaara maarittaa vaarin natriumdiureesia lisaavien, sydåneteisen 15 peptidien korkea plasmapeili. Taten sellaiset vasta-aineet soveltuisivat ihanteellisesti kaikkien tautien, joihin liittyy muuttunut ANP-peili, taudinmaaritykseen.
Kyseessa oleva keksintO koskee monoklonaalisia vasta-aineita, joille on tunnusomaista, etta ne on valmistet-20 tu natriumdiureesia aiheuttavia nisakkaiden sydaneteisen peptideja vastaan, etta ne elvat rlstireagoi angiotensiini II:n, leu-enkefaliinin, substanssi P:n, aldosteronin, ACTH:n, bradykiniinin, gamma-MSH:n, insuliinin, vasopres-siinin ja reniinin kanssa ja etta ne ovat valmistettavissa 25 viljelemaiia hybridoomasolulinjaa NCACC 850 314/1 tai NCACC 850 314/2 sopivassa viljelyvaiiaineessa ja ottamalla vasta-aineet talteen supematantista. Kyseessa oleva kek-sintb koskee edelleen hybridoomasolulinjoja, jotka synte-tisoivat ja erittavat naita monoklonaalisia vasta-aineita 30 nisakkaiden, erityisesti ihmisen ja rotan, natriumdiureesia lisaavia sydaneteisen peptideja kohtaan. Nama hybri-doomat valmistetaan von KOhlerin ja Milsteinin alussa mai-nittujen menetelmien mukaisesti. Immunogeenin kantajalla, esim. proteiiniin sidotuilla, natriumdiureesia lisaavaiia 35 sydaneteisen peptidilia suoritetun hlirien immunisoinnin 4 jaikeen nåiden hiirien pernasolut sulautuvat yhteen hiiren myeloomasolulinjan solujen kanssa. Tasta syntyvia hybri-doomia tutkitaan systemaattisesti vasta-aineiden suhteen, jotka reagoivat selektiivisesti natriumdiureesia lisaavien 5 sydåneteisen peptidien kanssa. Talla tavalla eristettiin keksinnOn mukaiset hybridoomat, jotka valmistavat mono-klonaalisia vasta-aineita natriumdiureesia lisaavia sydSn-eteisen peptideja vastaan. Hybridoomat talletettiin tal-lennusnumeroilla 850314/1 (hybridoomasolulinja, joka tuot-10 taa mAK:ta 11A-A11) seka 850314/2 (hybridoomasolulinja, joka tuottaa mAKrta 23 M-D9), National Collection of Animal Cell Cultures-talletuslaitokseen, PHLS Centre for Applied Mikrobiology and Research, Porton Down, Salisbury, SP4 OJG, UK.
15 Kyseessa olevan keksinnOn mukaisia vasta-aineita voidaan kayttaa esimerkiksi natriumdiureesia lisaavien sydane teisen peptidien peilin maarittamiseen biologisissa nesteissa, kuten esimerkiksi veressa, plasmassa, seerumis-sa, virtsassa, lymfassa tai aivo-selkaydinnesteessa. Ky-20 seessa olevan keksinnOn mukaiset vasta-aineet soveltuvat erityisen hyvin immunologisten maaritysmenetelmien valmis-tukseen. Mutta niita voidaan kayttaa myOs natriumdiureesia lisaavien sydaneteisen peptidien eristamiseen immuno-adsorptiokromatografian avulla.
25 ANP:n merkityksen tutkimista vårten, erilaisin fy- siologisin ja patofysiologisin edellytyksin, ovat eiain-koetutkimukset ehdottoman tarpeellisia. Naiden tehtavien ja ANP:n farmakologiaa koskevien tdiiden edellytyksena ovat spesifiset ja herkat kokeet kvantitatilvista maaritysta 30 vårten kehonnesteissa.
Kyseessa olevan keksinnOn mukaiset vasta-aineet soveltuvat myOs erittain hyvin fysiologisiin ja farmakolo-gisiin kokeisiin.
Hybridoomien valmistus kasittaa ylipaansa seuraavat 35 vaiheet: 90988 5 A) NisSkkaiden inununisointi immunogeenisella kanta-ja-aineella, erityisesti inununogeeniseen kantaja-ainepro-teiiniin (esim. tulivuorikotilon hemosyaniiniin, KLG) si-dot ul la, natriumdiureesia lisaavaiia sydaneteisen pepti- 5 dilia, joka on peraisin esimerkiksi ihmiselta tai rotalta (KLH-ANP). Naaraspuoliset Balb/c-hiiret osoittautuivat tahan tarkoitukseen kayttOkelpoisiksi. Immunisointisuunni-telma ja KLH-ANP:n konsentraatiot tuli valita siten, etta muodostuu riittava maara antigeenia stimuloivia lymfosyyt-10 teja. Kolme immunisointia, jotka suoritettiin 14 paivan vaiein 100 pg:lla KLH-ANP hiirta kohti, ruiskeena, joka oil fosfaatilla puskuroidussa keittosuolaliuoksessa, osoittautuivat tehokkaiksi.
B) Immunisoitujen nisakkaiden (esim. hiirien) per-15 nasolujen suspension saanti ja valmistus sopivassa elatus- aineessa. Noin 1 ml elatusainetta/perna on riittava maara. Tahan tarvittavat koetekniikat ovat tunnetut.
C) Lietettyjen pernasolujen liittaminen sopivan so-lulinjan myeloomasolujen kanssa (esim. hiiren myelooma 20 PX63Ag8), missa kaytetaan sopivaa yhteenliittamisen kiih- dytinta (esim. polyetyleeniglykolia). Edullisia sulautumi-sen katalyytteja ovat polyetyleeniglykolit, joiden keski-maarainen molekyylipaino on 1 000 - 4 000 (esim. kaupalli-sesti saatava PEG 1000 jne.). Kuitenkin voidaan kayttaa 25 myOs muita tunnettuja yhteenliittamisen kiihdyttajia. Suhde, jossa on noin 10 pernasolua myeloomasoluja kohti, on edullinen. Sulauttamiselatusaineen kokonaistilavuus noin 0,5 - 1,0 ml on riittava 108 pernasolua vårten. Hiiren monet myeloomasolut ovat tunnettuja ja saatavissa esim.
30 tieteellisista laitoksista tai solujentallennuslaitoksis-ta. Kdytettyjen solulinjojen tulee lahinna osoittaa ge-neettista vauriota, niin etta sulautumattomat myeloomasolut kuolevat tietyssa valintavaiiaineessa, kun taas hybridit jaavat eloon. Useimmiten kaytetaan 8-atsaguanii-35 nin suhteen resistentteja solulinjoja, joilta puuttuu ent- 6 syymi hypoksantiini-guaniini-fosforibosyyli-transferaasi ja jotka sen tahden eivat pysty kasvamaan HAT-elatusai-neessa (hypoksantiini, aminopteriini, tymidiini) (Science 145:709, 1964).
5 K&ytetyn myeloomasolulinjan tulee olla etupaassa myOs "non-secreting"-tyyppia, jotta se ei itse muodosta vasta-aineita tai imraunoglobullinien L-ketjuja. Tietylssa tapauksissa voivat kuitenkin erittavat myeloomasolut olla edullisia.
10 D) Yhteensulautumaseosta (perna- ja myeloomasolut) laimennetaan ja kasvatetaan yksittaislssa putkiloissa, se-lektiivisessa elatusaineessa, niin etta sulautumattomat solut eivat lisaanny ja kuolevat 1-2 viikon kuluessa. Ykslttaiset, yhteensulautuneet solut eristetaan silia ai-15 kaa kun laimennusaineen tilavuus saadetaan siten, etta yksittaiseen putkiloon (esim. mikrotiitterilevyn jokaiseen syvennykseen) tulee tietty maara soluja (noin 1-4).
E) Natriumdiureesia lisaavien sydåneteisen pepti-dien vasta-aineiden lasnaolon tarkastus jokaisesta putki- 20 losta.
F) Toivottuja vasta-aineita valmistavien hybridoo-mien valinta (esim. rajoittavan laimennuksen avulla) ja kloonaus.
Kun kerran haluttu hybridooma on valittu ja kloo-25 nattu, voidaan vasta-aine valmistaa kahdella erilaisella tavalla. Erittéin puhtaita, monoklonaalisia vasta-aineita saadaan, kun hybridooma viljeliaan sopivassa elatusaineessa tietty aika ja vasta-aine otetaan supernatantista. Sopi va elatusaine ja viljelyn optimikesto ovat yksinkertai-30 sesti maaritettavissa. Tama in vitro -tekniikka tuottaa monoklonaalisia vasta-aineita, joissa on epdpuhtautena vain pienia mfiéria heterologisesta seerumista (vasikan sikittn seerumista) peraisin olevia proteiineja.
Oleellisesti korkeampien konsentraatioiden valmis-35 tamiseksi monoklonaalisia vasta-aineita, joiden puhtaus on 90988 7 vain v&h&n v&hSisempi, voidaan valittua hybridoomaa ruis-kuttaa vatsaontelonsisaisesti hiirelle - etupaassa syngee-ni- tai semisyngeenihiirelle. Tama johtaa hiiressa tietyn inkubointlajan jaikeen kasvaimien kehittymiseen, joka va-5 pauttaa koe-eiaimen veressa ja vatsaontelon tulehdusnes-teessa (ascites) korkean vasta-ainekonsentraation (5-20 mg/ml). Siina tapauksessa, etta nailia hiirilia on veressa ja vesivatsassa (ascites) normaaleja vasta-aineita, niin niiden konsentraatio mAK:een verrattuna on hyvln al-10 hainen. Taten saadulla monoklonaalisella vasta-aineella on hyvin korkea tiitteri (se on aktiivinen laimennuksissa 10*3 tai sen alapuolella) ja spesifisen ja epaspesifisen immunoglobuliinin suhde on noin 20:1.
Esimerkki 1 15 Monoklonaalisten vasta-aineiden valmistus natrium- diureesia lisdavia ihmisen ja rotan sydanpeptideja kohtaan Immunisointiin kavtettvlen antlaeenien valmistus Antigeenina kaytettiin ihmisen a-ANP:n tai rotan atriopeptiini II:n (Bachem) ja tulivuorikotilon hemosya-20 niinin (KLH, Pacific Biomarine Supply Company) konjugaat-tia. Valmistusta vårten sekoltettiin KLH ja humaani a-ANP tai atriopeptiini II moollsuhteessa 1:1 ja sekoltettiin konsentraationa 2 mg/ml fosfaatilla puskuroldussa fysiolo-gisessa keittosuolaliuoksessa glutaraldehydin kanssa. Glu-25 taraldehydin loppukonsentraatio reaktioerdssa nousi 0,25 %:iin. Yhden tunnin mittaisen, huoneen lampOtilassa suoritetun inkuboinnin jaikeen dialysoitiin proteiinikon-jugaattia 4 *C:ssa useita kertoja fosfaatilla puskuroitua fysiologista keittosuolaliuosta vastaan.
30 Balb/c-hilrien immunisointi
Naaraspuolisia Balb/c-hiiria immunisoitiin vatsaontelonsisaisesti 100 pg:lla KLH-ANP-konjugaattia, joka oil 0,2 ml:ssa Freundin taydellista adjuvanttia. 14 paivaa myOhemmin eiaimet saivat uudelleen 100 pg antigeenia vat-35 saontelonsisaisesti Freundin epataydellisessa adjuvantis- ---- - 1“ _ 8 sa. Kaksi muuta immunisointia tehtiin laskimonsisaisesti 14 paivan vSlein kulloinkin 50 pl:lla antigeenia, joka oli 100 pg:ssa fosfaatilla puskuroitua keittosuola-liuosta, elainta kohti. Kolmen paivan kuluttua viimeisesta antigee-5 nin antamisesta eiaimilta otettiin pernat.
Pernasolususpension valmistus
Keratyista pemoista valmistettiin yksittaissolu-suspensio puristamalla elimet ruostumattomasta terdksesta valmistetun siiviian lapi. Solut siirrettiin Dulbeccon 10 "Minimal Essential" -elatusaineeseen (DMEM), jota oli tay-dennetty glukoosilla (4,5 g/1), penisilliinilia (100 yk-sikkiia/ml) seka streptomysiinilia 100 pg/ml. Solut pes-tiin kolme kertaa DMEMrlia ja lietettiin uudelleen halut-tuna konsentraationa samaan elatusaineeseen. Yleensa saa-15 tiin noin 10® solua/perna.
Mveloomasolulen valmistus
Tassa yhteydessa kaytetty myeloomasolulinja X63Ag8.653 on hiiren myeloomasolulinjan P3-X63-Ag8 ala-klooni, joka ei ilmenna immunoglobuliinien raskaita eika 20 kevyita ketjuja [J. Immunol. 123: 1543-1550 (1980)]. Solut ovat herkkia 8-atsaguaniinin konsentraatiota 20 pg/ml kohtaan eivatka vol kasvaa elatusalneessa, joka sisaitaa hypoksantiinia, amlnopterilnia ja tymidlinia (HAT). Niita viljeltiin DMEM:ssa, jota oli taydennetty glukoosilla (4,5 25 g/1), glutamiinilla (20 mM), penisilliinilia (1 000 yksik- kda/ml), streptomysiinilia (100 pg) ja 10 %:lla vasikan sikiOn seerumia (taydellinen elatusaine). Yhteensulautumi-sen ajankohtana myeloomasolut olivat solun lisaantymisen logaritmisessa vaiheessa.
30 Solulen vhteenliittvminen
Pernasolususpensiot lisattiin myeloomasoluihin DMEM:ssa, josta seerumi puuttul, suhteessa 10:1 ja niita sentrifugoitiln 10 minuutln ajan 200 g:11a pyOreapohjai-sissa kupelssa. Solujen laskeutumisen jaikeen supernatant-35 ti dekantoitiin varovaisesti. Soluja inkuboitiin 2 ml:n kanssa polyetyleeniglykolin, molekyylipaino 2 000, liuok- 90988 9
sessa [laimennettu 30 %:iin (paino/paino) DMEM:lia, pH
7,6], yhden minuutin ajan 37 °C:ssa. TéhSn lisattiin 20 ml DMEM, mlhin solut lletettiln varovalsesti uudelleen muuta-mlen mlnuuttlen alkana. Niita sentrifugoltiin vieia kerran 5 vilden minuutin ajan 200 g:lla ja solusaostuma lletettiln uudelleen HAT-elatusalneeseen konsentraatlona 106 solua/ml, minka jaikeen ne jaettlln 1 ml:n suurulslna erina Costar-levy ille.
Hvbrldooman kasvatus 1a vallnta 10 Solujen yhteensulautumisen jaikeen soluja kasvatet- tlln HAT-elatusaineessa (hypoksantllnl, amlnopterllnl, tymldllnl) 37 °C:ssa 5 %:n kanssa COz kosteassa atmosfaa-rlssa. Muutamlen vllkkojen jaikeen hybridoomasoluvlljel-mlen supernatantlt tutklttlln anti-ANP-aktiivisuuden ole-15 massaolon suhteen vastaavan entsyymi-immunologisen maari-tyksen avulla (ks. alia).
Ne hybridoomasolulinjat, jotka antoivat positiivi-set tulokset anti-ANP-kokeessa, valittiin kloonausta vårten.
20 Taildin hybridoomille suoritettiin "rajalaimennus", jolloin mikrotiitterilevyn 96 syvennykseen siirrostettiin keskimaarln 0,5 solua syvennysta kohti, jolloin "syOttiJso-luina" llsattiin 105 hllren tymosyyttia/syvennys. Taman kloonausmenettelyn jaikeen anti-ANP-vasta-ainetta valmls-25 tavla soluja vieia llsattiin, ne jaahdytettiin ja nllta sailytettlln nestemaisessa typessa taydelllsessa elatusal-neessa, joka slsaisl 25 % vaslkan sikidn seerumla seka 7,5 % dlmetyylisulfoksidla.
Monoklonaalisten vasta-ainelden suuremplen maarien 30 valmistus
Kloonattuja hybrldoomla rulskutettlln vatsaontelon-slsaisestl hiiriin, jolta oil eslkasltelty 0,5 ml:11a "prlstanla", jotta noln 10 - 15 paivan kuluttua voltlin saada vasta-alnetta sisaitavaa ascltes-nestetta. Vasta-35 alneaktllvlsuus maaritettiin ascltes-nesteessa radloaktll-vlsella sitouturn!sen lnhlbltlokokeella (ks. eslmerkkl 3).
10
Anti-ANP-aktiivisuuden mSSrltvs villelmaelatusai-neiden supernatanteista 100 μΐ viljelmaelatusaineen supernatanttia pantiin mikrotiitterilevyille, joille oli kolmen tunnin ajan huo-5 neen lampOtilassa adsorboitu konjugaattia, joka oli muo-. dostettu h&r&nseerumin albumiinista ja humaani-α-ΑΝΡ:stft tai rotan atriopeptiinista (5 pg/ml) ja jotka niin olien oli pesty vedelia. Kaniinin anti-hiiri-immunoglobuliini, joka oli kytketty peroksidaasiin, lisattiin levyille; ta-10 man jaikeen levyja inkuboitiin kahden tunnin ajan huoneen lampOtilassa. Tislatulla vedelia suoritetun, 5-kertaisen pesun jaikeen lisattiin entsyymin suhteen soveliasta subs-traattipuskuria ja syntyneen, varjaytyneen tuotteen kon-sentraatio maaritettiin mikrotiitterilevyille soveltuvan 15 fotometrin avulla.
Esimerkki 2
Natriumdiureesia lisaavien sydaneteisen peptidien monoklonaalisten vasta-aineiden karakterisointi
Monoklonaalisten vasta-aineiden twpitvs 20 Kyseessa olevan keksinnOn yhteydessa kuvat tu j en mo noklonaalisten vasta-aineiden luokat ja alaluokat analy-soitiin. Vasta-aine rikastettiin elatusaineen supernatan-tista saostamalla ammoniumsulfaatilla (40-%:inen kylias-tys) ja puhdistettiin osittain. Immunoglobuliiniluokka 25 maaritettiin Ouchterlonyn geelidiffuusiokokeessa kaytta-maiia luokkaspesifisia anti-hiiri-immunoglobuliini-anti-seerumeita. Nonoklonaalinen vasta-aine 23M-D9 ihmisen ANP vastaan kuuluu lgG1-luokkaan. Monoklonaalinen vasta-aine 11A-A11 atriopeptiini II vastaan kuuluu myOs IgGj-luokkaan. 30 Vasta-aineen ristireaktio erilaisten mulden pepti dien kanssa
Humaani-ANP:n monoklonaalisen vasta-aineen risti-reaktilvisuus erilaisten mulden peptidien kanssa havait-tiin radioimmunologisen, sitoutumisen estymista koskevan 35 kokeen avulla. Koe suoritetaan erityisessa maarityspusku-rissa (0,02 M natriumfosfaattia; 0,15 M NaCl; 0,01 % tio- 90988 11 mersaalia; 0,1 % gelatiinia; 0,01 % BSA (haranseerumin albumlinia) ja 0,1 % Triton-X 100, pH 7,4). Radioaktiivi-sestl merkattua Ihrolsen 125jodi-a-humaani-ANP (amlnohapot 1-28) tal rotan 125jodi-atriopeptiini II (Amersham Buch-5 ler) lnkuboltlln yhdessa vasta-aineiden kanssa soplvassa lalmennuksessa 16-48 tunnin ajan 4 °C:ssa. Kokonaistila-vuus nousee 500 pl:aan. Sltoutumlsen inhibointikokeessa koeera sisaitaa samassa tllavuudessa lisaksi merkkaamaton-ta antigeenia tai erilaisia inhibilttoreita vaihtelevina 10 konsentraatioina. Inkuboinnin lopussa adsorboidaan hi i leen vasta-aineeseen sitoutumaton, radioaktiivisesti merkattu 125jodi-antigeeni (humaani-a-ANP, jossa on amlnohapot 1-28 tai rotan atriopeptiini II) aktiivihiilen suspension (0,02 N natriumfosfaatti; 2 % Norit-A-aktiivihiili; 0,02 % Dex-15 tran 60; 0,1 % BSA seka 10 mM Na2-EDTA, pH 7,4) lisayksen ja tata seuraavan, 20 minuutin pituisen, jaiden paaiia suoritetun inkuboinnin jalkeen. Ta.man jaikeen aktiivihii-li sedlmentoidaan sentrifugoimalla 10 minuutin ajan 3 600 g:11a ja radioaktiivisuus maaritetaan supernatantis-20 ta. Mitattiin erilaisten peptidien konsentraatio, joka tarvitaan syrjayttamaan 50 % vasta-aineen 125jodiantigeenis-ta. Kuten kuvioista 1 ja 2 kay selville, vasta-aineet rea-goivat erittain spesifisesti ihmisen ja rotan sydaneteisen peptidien kanssa. Ristireaktiivisuutta mulden suola-vesi-25 talouden saatelyyn osallistuvien vaiittajien kanssa ei voltu osoittaa. Tasmaileen niin tehottomla olivat erilaiset vasoaktiiviset aineet (ks. taulukot 1 ja 2).
Esimerkki 3
Natriumdiureesia lisaavien sydaneteisen peptidien 30 monoklonaalisten vasta-aineiden kayttd ANP-immuunireaktiivisuuden osoittaminen biologisis-sa nesteissa ja kudoksissa monoklonaalisen vasta-aineen avulla_
Suurissa laimennuksissa voidaan antigeenit maarit-35 taa kvantitatiivisesti radioimmunologisen pitoisuusmaari- 12 tyksen avulla. Tata koetta vårten tarvitaan erlttain spe-slflnen vasta-alne seka radioaktiivisesti merkattu anti-geenl. Radioaktiivisesti merkatun antigeenin sitoutuminen vasta-aineeseen voidaan annoksesta riippuen inhiboida ei-5 radioaktiivisella antigeenilia. Jos maarattyja, erilaisia, ei-radioaktiivisia antigeenin konsentraatioita inkuboidaan vasta-aineen ja radioaktiivisesti merkatun antigeenin vakiokonsentraatioiden kanssa, voidaan talla tavalla laa-tia luonteenomainen kalibrointikSyrS. Kuvio 1 esittaa sel-10 laista kalibrointikayraa ja radioaktiivisesti merkatun antigeenin (125jodi-humaani-aA-NP, aminohapot 1-28) syr-jaytymista mAK 23M-D9:sta erilaisten atriopeptiinien tai niiden johdannaisten avulla. Tailbin esitettiin radioak-tiivisen antigeenin sitoutuminen vasta-aineisiin prosent-15 teina merkkaamattoman antigeenin tai sen fragmentin kon-sentraatiota vastaan fmoolina/ml. TdllOin merkltsee _._ Humaani-α-ΑΝΡ (1 - 28) -------- ------ Humaani-ANP-fragmentti (7 - 28) 20__ANP-fragmentti (18 - 28)
Koe suoritettiin ascites-nesteelia, laimennuksella 1:1 500 000, kokeessa kuvatulla tavalla. Viljelmasuperna-tantilla suoritettu koe antaa samanlaisia tuloksia, ai-25 noastaan kaytettava laimennus on tekijan 500 - 1 000 verran pienempi. Tama koe ilmaisee selvasti, etta ANP-fragmentti (aminohapot 18 - 28) el kykene syrjayttamaan radioaktiivisesti merkattua antigeenia vasta-aineesta. Vasta-aineella ei siis ole ristireaktiivisuutta taman fragmentin 30 kanssa. Antigeenin tuntemattomat maarat liuoksessa voidaan maarlttaa taman kallbrolntikayran avulla. Kyseessa olevas-sa keksinnbssa kuvattuun monoklonaaliseen vasta-aineeseen perustuva radioimmunologinen pitoisuusmaaritys ja 125jodi-humaani-α-ΑΝΡ:n (aminohapot 1 - 28) kayttb "tracerina" 35 tekevat mahdolliseksi maarlttaa biologisissa nesteissa ja 90988 13 kudosuutteissa alna konsentraationa 20 pg/ml saakka, mika vastaa maaraa 6 fmol/ml (ks. kuvlo 1).
Kuvlo 2 eslttaa mAK 11A-All:n avulla, joka reagol spesifisesti rotan atriopeptiinin kanssa, suoritettua 5
__ Atrlopeptllnl I
-----1·- ---- Atrlopeptllnl II
--/\- Atrlopeptllnl III
----Ά----- ANP-framgenttia (13 - 28) 10
Kayra on sama kuln kuvlossa 1.
Koe suorltettlln ascltes-nesteelia kayttaen loppu-lalmennusta 1:1 250 000 tekstlssa kuvatulla tavalla. Vil-jelmasupernatantllla suorltettu koe antaa samanlaisia tu-15 loksla, alnoastaan kaytettava laimennus on tekljan 500 -1 000 verran pienempl. Tama koe llmalsee selvasti, etta ANP-fragmentti (aminohapot 13 - 28) el kykene syrjaytta-maan radioaktiivisestl merkattua antigeenia vasta-ainees-ta. Vasta-aineella el myds ole ristireaktiivisuutta ta-20 man fragmentin kanssa. Taman kalibrointlkayrdn avulla vol-daan maarittaa liuoksesta tuntemattomla maaria antigeenia. Radioimmunologinen pitolsuusmaaritys, joka perustuu ky-seessa olevassa keksinnttssa kuvattua monoklonaaliseen vas-ta-aineeseen seka 125jodi-atriopeptiini III :n kayttOOn "tra-25 cerina", tekee mahdolliseksi maarittaa biologisissa nes-teissa ja kudosuutteissa alna konsentraatioon 20 pg/ml saakka, joka vastaa maaraa noin 5 fmol/ml (ks. kuvlo 2). Kyseessa olevassa keksinnOssa kuvattujen monoklonaalisten vasta-aineiden avulla on tassa yhteydessa kuvatun radio-30 immunologisen menetelman rinnalla mahdollista suorittaa myOs muita immunologisen pitolsuusmaarityksen muita muoto-ja (esim. ELISA, kemilximinointiin perustuva maaritys.
14
Taulukko 1 mAK 23M-D9: n ristireaktiivisuuden tutkiminen mulden endogeenisten vaiittajien kanssa, joilla on suonivaikutus-ta tal valkutusta suola-vesitalouteen 5 Aine Maksim, tutkittu Ristireak- kons. (pmol/ml) tiivisuus Angiotensiinl II (humaani) 14
Leu-enkefaliini 26
Substanssi P 10 - 10 Aldosteroni 44 ACTH (sika) 4
Bradykiniini 13 γ-MSH 10
Insuliini (rotta) 3 15 Vasopressiini 15
Kaniinl (sika) 0,5
Taulukko 2 mAK 11A-All:n ristireaktiivisuuden tutkiminen mui-20 den endogeenisten valittåjien kanssa, joilla on suonivai-kutusta tai valkutusta suola-vesitalouteen Aine Maksim, tutkittu Ristireak- kons. (pmol/ml) tiivisuus Angiotensiinl II (humaani) 14 25 Leu-enkefaliini 26
Substanssi P 10 -
Aldosteroni 44 ACTH (sika) 4
Bradykiniini 13 30 γ -MSH 10
Insuliini (rotta) 3
Vasopressiini 15
Reniini (sika) 0,5 li
Claims (9)
1. Monoklonaaliset vasta-aineet, tunnetut siita, etta ne on valmlstettu natrlumdiureesia aiheuttavia 5 nisakkaiden sydSneteisen peptideja vastaan, etta ne eivat ristireagoi angiotensiini II:n, leu-enkefaliinin, substanssi P: n, aldosteronin, ACTH:n, bradykiniinin, gamma-MSH:n, insuliinin, vasopressiinin ja reniinin kanssa ja etta ne ovat valmistettavissa viljelemaiia hybridoomasolu-10 linjaa NCACC 850 314/1 tai NCACC 850 314/2 sopivassa vil- jelyvaiiaineessa ja ottamalla vasta-aineet talteen super-natantista.
2. Patenttivaatimuksen 1 mukaiset monoklonaaliset vasta-aineet, tunnetut siita, etta ne on valmis- 15 tettu natrlumdiureesia aiheuttavia rotan sydaneteisen peptidej a vastaan.
3. Patenttivaatimuksen 1 mukaiset monoklonaaliset vasta-aineet, tunnetut siita, etta ne on valmis-tettu natrlumdiureesia aiheuttavia ihmisen sydaneteisen 20 peptideja vastaan.
4. Hybridoomasolulinjat, tunnetut siita, etta ne tuottavat jonkln patenttivaatimuksen 1-3 mukal-sia monoklonaalisla vasta-aineita ja etta nillia on NCACC-talletusnumerot 850 314/1 ja 850 314/2.
5. Menetelma jonkin patenttivaatimuksen 1-3 mu- kaisten monoklonaalisten vasta-aineiden valmistamiseksi, tunnettu siita, etta patenttivaatimuksen 4 mukai-sia solulinjoja viljeliaan sopivassa viljelyvaiiaineessa ja vasta-aineet otetaan talteen supernatantista tal etta 30 hybridoomasoluja injektoidaan syngeenisiin tai semisyn- geenisiin hiiriin ja vasta-aineet otetaan talteen veresta tai vatsaontelon askiitesnesteesta.
6. Jonkin patenttivaatimuksen 1-3 mukaisten monoklonaalisten vasta-aineiden kåyttO natrlumdiureesia al-35 heuttavien sydaneteisen peptidien maarittamisessa in vitro biologisista nesteista.
7. Jonkin patenttivaatimuksen 1-3 mukaisten mo-noklonaallsten vasta-aineiden k&yttO natrlumdlureesla ai-heuttavlen sydSneteisen peptidlen maarittamisessa In vitro veresta, plasmasta, seerumiste, virtsasta, Imunes- 5 teesta tal luuydlnnesteesta.
8. Jonkin patenttivaatimuksen 1-3 mukalsten mo-noklonaalIsten vasta-aineiden kayttO immunoanalyysien val-mistuksessa.
9. Jonkin patenttivaatimuksen 1-3 mukaisten mo- 10 noklonaalisten vasta-aineiden kayttd natrlumdlureesla aiheuttavien sydaneteisen peptidien eristamisessa immuno-adsorptlokromatografian avulla. 90988
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE3509958 | 1985-03-20 | ||
| DE19853509958 DE3509958A1 (de) | 1985-03-20 | 1985-03-20 | Monoklonale antikoerper gegen atriale, natriuretische peptide vom menschen |
Publications (4)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| FI861128A0 FI861128A0 (fi) | 1986-03-18 |
| FI861128A FI861128A (fi) | 1986-09-21 |
| FI90988B FI90988B (fi) | 1994-01-14 |
| FI90988C true FI90988C (fi) | 1994-04-25 |
Family
ID=6265723
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| FI861128A FI90988C (fi) | 1985-03-20 | 1986-03-18 | Monoklonaaliset vasta-aineet natriumdiureesia lisääviä nisäkkäiden sydäneteisen peptidejä kohtaan |
Country Status (17)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5156977A (fi) |
| EP (1) | EP0195331B1 (fi) |
| JP (2) | JPH0648994B2 (fi) |
| KR (1) | KR940010021B1 (fi) |
| CN (1) | CN1017349B (fi) |
| AT (1) | ATE75754T1 (fi) |
| AU (1) | AU570838B2 (fi) |
| CA (1) | CA1340391C (fi) |
| DE (2) | DE3509958A1 (fi) |
| DK (1) | DK165955C (fi) |
| ES (1) | ES8801945A1 (fi) |
| FI (1) | FI90988C (fi) |
| GR (1) | GR860732B (fi) |
| IL (1) | IL78172A (fi) |
| NO (1) | NO170692C (fi) |
| PT (1) | PT82215B (fi) |
| ZA (1) | ZA862029B (fi) |
Families Citing this family (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CA1335082C (en) * | 1987-09-01 | 1995-04-04 | Hiroo Imura | Monoclonal antibody recognizing -hanp and a reagent for immunoassay of -hanp |
| JP2724315B2 (ja) * | 1988-02-29 | 1998-03-09 | 塩野義製薬株式会社 | α−ＡＮＰを認識するモノクローナル抗体およびα−ＡＮＰの免疫学的測定法 |
| CA1339210C (en) * | 1988-05-31 | 1997-08-05 | John Lewicki | Recombinant techniques for production of novel natriuretic and vasodilator peptides |
| JP2561513B2 (ja) * | 1988-07-04 | 1996-12-11 | 塩野義製薬株式会社 | γ−ＡＮＰを認識するモノクローナル抗体 |
| JP2665850B2 (ja) * | 1991-11-14 | 1997-10-22 | 塩野義製薬株式会社 | ｈＢＮＰのＣ端を認識するモノクロ−ナル抗体 |
| AU2493499A (en) * | 1998-02-03 | 1999-08-16 | Trustees Of Columbia University In The City Of New York, The | Determination of the amount of hlhbeta core fragment in a sample from a subject and uses thereof |
| IL144062A0 (en) * | 1999-01-29 | 2002-04-21 | Roche Diagnostics Gmbh | METHOD OF IDENTIFYING N-TERMINAL proBNP |
| US6949282B2 (en) | 2000-07-07 | 2005-09-27 | Delphi Technologies, Inc. | Contoured crushable composite structural members and methods for making the same |
| US20170363620A1 (en) | 2016-06-17 | 2017-12-21 | Abbott Laboratories | BIOMARKERS TO PREDICT NEW ONSET HEART FAILURE WITH PRESERVED EJECTION FRACTION (HFpEF) |
Family Cites Families (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4376110A (en) * | 1980-08-04 | 1983-03-08 | Hybritech, Incorporated | Immunometric assays using monoclonal antibodies |
| US4451570A (en) * | 1981-03-26 | 1984-05-29 | The Regents Of The University Of California | Immunoglobulin-secreting human hybridomas from a cultured human lymphoblastoid cell line |
| US4659678A (en) * | 1982-09-29 | 1987-04-21 | Serono Diagnostics Limited | Immunoassay of antigens |
| JPH0794473B2 (ja) * | 1984-03-02 | 1995-10-11 | サントリー株式会社 | 新規なペプチド及びこれを有効成分とする利尿剤 |
| JPS60184098A (ja) * | 1984-03-02 | 1985-09-19 | Suntory Ltd | 新規なペプチド及びこれを有効成分とする利尿剤 |
| US4596769A (en) * | 1984-03-05 | 1986-06-24 | Temple University | Monoclonal antibodies to peptidoglycan and methods of preparing same |
| ATE120759T1 (de) * | 1984-04-19 | 1995-04-15 | Scios Nova Inc | Atrielle natriumuretische/gefässerweiterende polypeptide. |
| US4666829A (en) * | 1985-05-15 | 1987-05-19 | University Of California | Polypeptide marker for Alzheimer's disease and its use for diagnosis |
-
1985
- 1985-03-20 DE DE19853509958 patent/DE3509958A1/de not_active Withdrawn
-
1986
- 1986-03-04 NO NO860804A patent/NO170692C/no not_active IP Right Cessation
- 1986-03-08 EP EP86103100A patent/EP0195331B1/de not_active Expired - Lifetime
- 1986-03-08 DE DE8686103100T patent/DE3685145D1/de not_active Expired - Lifetime
- 1986-03-08 AT AT86103100T patent/ATE75754T1/de not_active IP Right Cessation
- 1986-03-15 CN CN86101671A patent/CN1017349B/zh not_active Expired
- 1986-03-17 IL IL78172A patent/IL78172A/xx unknown
- 1986-03-18 FI FI861128A patent/FI90988C/fi not_active IP Right Cessation
- 1986-03-18 AU AU54914/86A patent/AU570838B2/en not_active Expired
- 1986-03-18 PT PT82215A patent/PT82215B/pt not_active IP Right Cessation
- 1986-03-18 CA CA000504379A patent/CA1340391C/en not_active Expired - Fee Related
- 1986-03-19 ES ES553154A patent/ES8801945A1/es not_active Expired
- 1986-03-19 KR KR1019860002012A patent/KR940010021B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1986-03-19 GR GR860732A patent/GR860732B/el unknown
- 1986-03-19 DK DK127686A patent/DK165955C/da not_active IP Right Cessation
- 1986-03-19 ZA ZA862029A patent/ZA862029B/xx unknown
- 1986-03-20 JP JP61061055A patent/JPH0648994B2/ja not_active Expired - Lifetime
-
1989
- 1989-03-14 US US07/323,527 patent/US5156977A/en not_active Expired - Lifetime
-
1994
- 1994-01-14 JP JP6014950A patent/JPH0746999B2/ja not_active Expired - Lifetime
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US4628027A (en) | Vitro diagnostic methods using monoclonal antibodies against connective tissue proteins | |
| US5036003A (en) | Antibodies to VPF | |
| US5733549A (en) | Peptides including amino acid sequences selected from lipoprotein (a) and apolipoprotein (a), antibodies recognizing these amino acid sequences, and methods of determination using these antibodies | |
| JPH025893A (ja) | 新規抗体 | |
| JPH05184384A (ja) | ｈＢＮＰのＣ端を認識するモノクロ−ナル抗体 | |
| FI90988C (fi) | Monoklonaaliset vasta-aineet natriumdiureesia lisääviä nisäkkäiden sydäneteisen peptidejä kohtaan | |
| US5051364A (en) | Anti-lipocortin-I and anti-lipocortin-II monoclonal antibodies | |
| US4767843A (en) | Monoclonal antibody to cardiac myosin heavy chain | |
| AU2006213411A1 (en) | Antibody for assay of ADAMTS13 activity and method of activity assay | |
| JPH02238894A (ja) | エンドセリンに対する抗体およびその用途 | |
| DK175750B1 (da) | Monoklonale antistoffer, der genkender gamma-atrialt natriuretisk polypeptid, hybridomceller, der producerer sådanne antistoffer, og fremstilling og anvendelse deraf | |
| WO1995025794A1 (fr) | Anticorps monoclonal anti-igf-i | |
| Dzau et al. | Monoclonal antibodies binding renal renin. | |
| JP4493882B2 (ja) | 抗原およびこの抗原を識別するモノクローナル抗体 | |
| JPH1175839A (ja) | モノクローナル抗体、細胞株及びｎ１，ｎ１２−ジアセチルスペルミンの測定法 | |
| NUSSBERGER et al. | A monoclonal antibody specific for the carboxy-terminus of angiotensin II | |
| US20030228316A1 (en) | Mitochondrial creatine kinase antibody | |
| JPH02152988A (ja) | ペプチド化合物および該ペプチド化合物を使用して得られる抗血清および抗体 | |
| JPS60253871A (ja) | 抗アポａ−１抗体 | |
| JPH0276598A (ja) | 抗ｅｄ−ｂ抗体 | |
| US5141865A (en) | Monoclonal antibodies which bind thromboxane A2 receptor antagonists and diagnostic methods based thereon | |
| JPH08157500A (ja) | Ｆａｓ抗原の定量法 | |
| KR0140365B1 (ko) | 콜레스테롤 에스터라제를 특이적으로 인지하는 단세포군 항체와 이를 분비하는 융합세포주 | |
| JPH02219596A (ja) | 心筋ミオシン重鎖に対する単一クローン抗体 | |
| US5352584A (en) | Monoclonal antibodies which bind (E)-5- (2-bromovinyl)-arabinofuranosyluracil and diagnostic methods based thereon |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| BB | Publication of examined application | ||
| FG | Patent granted |
Owner name: BAYER HEALTHCARE AG |
|
| MA | Patent expired |