ES2616630T3 - Uso de metilsulfonilmetano (MSM) para modular la actividad microbiana - Google Patents

Uso de metilsulfonilmetano (MSM) para modular la actividad microbiana Download PDF

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Abstract

Un método para potenciar la eficacia de fermentación de un microorganismo para la producción de cerveza, sidra, vino, un biocombustible, pan, un producto lácteo o cualquier combinación de los mismos, comprendiendo el método: proporcionar un medio de fermentación que contiene una fuente de carbono y un microorganismo capaz de fermentar y poner en contacto el medio de fermentación con metilsulfonilmetano (MSM), en donde el MSM se proporciona a una concentración del 0,02 % al 5 % en peso del medio de fermentación o a una concentración del 0,02 % al 5 % en peso del contenido de humedad del medio de fermentación, en donde el MSM aumenta la eficacia de fermentación del microorganismo en comparación con la eficacia de fermentación en ausencia de MSM.

Description

Uso de metilsulfonilmelano (MSM) para modular la actividad microbiana
Campo de la divulgación
La presente divulgación se refiere al campo del metilsulfonilmetano (MSM), específicamente, a metodos de uso de MSM para modificar la actividad biológica, tal como para potenciar o inhibir la actividad microbiana, induyendo el crecimiento bacteriano.
Antecedentes
Los microOfganismos (o microbios) son organismos microscópicos que incluyen bacterias, hongos, arqueas, protistas, plantas (por ejemplo, algas verdes), virus, priones, parásitos, y animales, tales como amebas y microorganismos planctónicos. Dependiendo del contexto, los microorganismos pueden considerarse como perjudiciales o como beneficiosos. En algunos casos, los microOfganismos pueden ser pe~udiciales y dar lugar a afecciones y enfermedades en plantas, animales o seres humanos. Además, además de causar infecciones o enfermedades, tambien puede producirse un crecimiento microbiano no deseado en productos de consumo, tal como contaminación alimentaria. En otros casos, el crecimiento de microorganismos es beneficioso y se aprovecha de manera rutinaria en biotecnología, en modemas tecnologías de desarrollo, en procesos químicos (por ejemplo, fermentación), en la preparación de alimentos y bebidas, en aplicaciones ambientales e industriales, y en el mantenimiento y la promoción de la salud humana.
Sumario
En el presente documento se divulgan metodos para modular la actividad de microorganismos con MSM. El MSM es un compuesto de organoazufre de fórmula (CH3hS02. En particular, en el presente documento se divulga la sorprendente capacidad del MSM para potenciar o inhibir la actividad de microorganismos, tal como el crecimiento o la supervivencia de microorganismos, dependiendo de la concentración de MSM proporcionada al microorganismo (por ejemplo, en el medio en el que se cultiva el microorganismo). El MSM a una concentración de aproximadamente el 0,5 % a aproximadamente el 5 % en peso de medio o en peso de contenido de humedad del medio potencia la actividad microbiana, mientras que MSM a una concentración de aproximadamente el 6 % a aproximadamente el17 % en peso de medio o en peso de contenido de humedad del medio inhibe la actividad microbiana
En el presente documento se divulga el descubrimiento sorprendente de que el MSM puede tanto inhibir como potenciar la actividad microbiana, dependiendo de la concentración de MSM. Por ejemplo, las concentraciones de MSM de enlre aproximadamente el 6 y aproximadamente el 17 por ciento en peso de medio (o de contenido de humedad del medio) inhiben la actividad microbiana reduciendo o de olro modo impactando en el crecimiento, la tasa de supervivencia (por ejemplo, causando o provocando el deterioro o la muerte celular, tal como la muerte celular programada), el metabolismo, la reproducción (por ejemplo, la expresión génica, la expresión de proteínas, la transducción de señales, la transcripción, la traducción, et plegamiento de proteínas, etc.), la proliferación, la vitalidad, la robustez, la acción, ylo la función del microorganismo. Por el contrario, las coocentraciones de MSM de entre aproximadamente un 0,04 % a aproximadamente un 5 % en peso potencian la actividad microbiana, incluyendo el potenciamiento de la eficacia de la fermentación microbiana, el crecimiento microbiano ylo la eficacia del cultivo.
Como tales, en el presente documento se divulgan metodos de uso del MSM para modular la actividad microbiana, tal como para potenciar o inhibir la actividad de los microorganismos
En algunas realizaciones, se divulga un metodo para potenciar la eficacia de la fermentación de un microorganismo. Por ejemplo, el método incluye poner en contaclo con MSM el medio que contiene un microOfganismo capaz de fermentar, en el que el MSM se proporciona a una concentración de aproximadamente el 0,5 % a aproximadamente el 5 % en peso del medio o a una concentración de aproximadamente el 0,5 % a aproximadamente el 5 % en peso del contenido de humedad del medio, en el que el MSM aumenta la eficacia de fermentación del microorganismo en comparación con la eficacia de la fermentación en ausencia de MSM.
En algunas realizaciones, se divulgan métodos in vitre para potenciar el crecimiento de uno o más organismos probióticos. En algunos ejemplos, el metodo comprende poner en contacto uno o más microorganismos probióticos con un medio capaz de soportar el crecimiento de uno o más microorganismos probióticos; y proporcionar MSM al medio a de aproximadamente un 0,4 % a aproximadamente un 5 % en peso del medio o en peso de un contenido de humedad del medio, potenciando de este modo el crecimiento de los uno o más microorganismos {n vitre en comparación con el crecimiento de los uno o más microorganismos in vitre en ausencia de MSM
También se proporcionan metodos para potenciar el crecimiento de un microorganismo en una muestra de ensayo diagnóstica. En algunos ejemplos, el método comprende poner en contacto la muestra de ensayo diagnóstica que comprende uno o más microorganismos con un medio capaz de soportar el crecimiento de los uno o más microorganimos; proporcionar MSM al medio a una concentración de aproximadamente el 0,4 % a aproximadamente
el 5 % en peso del medio o en peso de un contenido de humedad del medio, potenciando de este modo el crecimiento de los uno o más microorganismos en la muestra de ensayo diagnóstica en comparación con el crecimiento de los uno
o más microorganismos en ausencia de MSM
Además, se divulgan métodos para inhibir la actividad microbiana. En algunos ejemplos, el método comprende seleccionar un medio que es susceptible a la contaminación por gripe H 1 N 1; Y poner en contacto el medio con MSM a una concentración de aproximadamente el 10 % a aproximadamente el16 % en peso por volumen, inhibiendo de este modo la actividad microbiana de la gripe H1 N1 .
Las anteriores características de la divulgaciÓfl y otras serán evidentes a partir de la siguiente descripciÓfl detallada de diversas realizaciones
Descripción detallada
l. Visión de conjunto de varias realizaciones
En el presente documento se divulga en descubrimiento sorprendente de que el MSM puede tanto inhibir como potenciar la actividad microbiana, dependiendo de la concentración de MSM. Por ejemplo, las concentraciones de MSM de entre aproximadamente el 6 y aproximadamente el 17 por ciento en peso de medio (o de contenido de humedad del medio) inhiben la actividad microbiana reduciendo o de otro modo impactando en el crecimiento, la tasa de supervivencia (por ejemplo, causando o provocando el deterioro o la muerte celular, tal como la muerte celular programada), el metabolismo, la reproducción (por ejemplo, la expresión gérJica, la expresión de proteínas, la transducción de señales, la transcripción, la traducción, el plegamiento de proteínas, etc.), la proliferación, la vitalidad, la robustez, la acción, y/o la función del microorganismo. Por el contrario, las concentraciones de MSM de entre aproximadamente un 0,04 % a aproximadamente un 5 % en peso potencian la actividad microbiana, incluyendo el potenciamiento de la eficacia de la fermentaciÓfl microbiana, el crecimiento microbiano y/o la eficacia del cultivo.
Como tales, en el presente documento se divulgan métodos de uso del MSM para modular la actividad microbiana, tal como para potenciar o inhibir la actividad de los microorganismos
En algunas realizaciones, se divulga un método para potenciar la eficacia de la fermentación de un microorganismo. Por ejemplo, el método incluye poner en contacto con MSM el medio que contiene un microorganismo capaz de fermentar, en el que el MSM se proporciona a una concentración de aproximadamente el 0,5 % a aproximadamente el 5 % en peso del medio o a una concentración de aproximadamente el 0,5 % a aproximadamente el 5 % en peso del contenido de humedad del medio, en el que el MSM aumenta la eficacia de fermentación del microorganismo en comparación con la eficacia de la fermentación en ausencia de MSM. En algunos ejemplos, el aumento de la eficacia de la fermentaciÓfl comprende un aumento de al menos el 50 % en la producción de alcohol, dióxido de carbono o ácido por el microorganismo en presencia de MSM en comparación con la producción de alcohol o ácido en ausencia de MSM. Por ejemplo, el aumento de la eficacia de fermentación comprende un aumento de al menos el 50 % en la producción de etanol, metanol o una combinaciÓfl de los mismos en comparación con la producción de etanol, metanol
o una combinaciÓfl de los mismos en ausencia de MSM
En algunos ejemplos, el aumento de la eficacia de fermentación comprende un aumento de al menos el 50 % en la producción de dióxido de carbono por el microorganismo en presencia de MSM en comparación con la producción de dióxido de carbono en ausencia de MSM, el microorganismo es levadura y el método para potenciar la fermentación es para la producción de pan.
En algunos ejemplos, el aumento de la eficacia de la fermentación comprende un aumento de al menos el 50 % en la producción de ácido láctico por el microorganismo en presencia de MSM en comparación con la producción de ácido láclico en ausencia de MSM y el método para potenciar la fermentación es para la producción de un producto lácteo.
En algunas realizaciones, el método para potenciar la eficacia de la fermentación es para la producción de cerveza, sidra, vino, un biocombustible, pan, un producto lácteo o cualquier combinación de los mismos. En algunos ejemplos, el microorganismo es levadura y el método para potenciar la fermentación es para la producción de cerveza. En algunos ejemplos, el microorganismo es un alga y el método para potenciar la fennentación es para la producción de biocombustible
En algunas realizaciones, la concentración de MSM es de aproximadamente el 0,5 %. En algunos ejemplos, el medio comprende una concentración de cloruro de sodio de menos del 5 % del contenido de humedad total
También se divulgan métodos in vitre para potenciar el crecimiento de uno o más microorganismos probióticos. En algunas realizaciones, el método comprende poner en contacto uno o más microorganismos probióticos con un medio capaz de soportar el crecimiento de uno o más microorganismos probióticos; y proporcionar MSM al medio a de aproximadamente un 0,4 % a aproximadamente un 5 % en peso del medio o en peso de un contenido de humedad del medio, potenciando de este modo el crecimiento de los uno o más microorganismos in vitre en comparación con el crecimiento de los uno o más microorgan ismos in vitre en ausencia de MSM.
En algunos ejemplos, la concentración de MSM es de aproximadamente el 1 % a aproximadamente el3 %del peso del medio o del contenido de humedad del medio.
En algunos ejemplos, los uno o más microorganismos probióticos comprenden Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus delbrueckii, Bacillus coagulanss, Lactobacillus rhramnosus, Bifidobacterium bifidum o cualquier combinación de los mismos.
En algunos ejemplos, el medio comprende un producto que contiene probióticos, tales como leche, yogur, yogur de arroz, helado de yogur, chocolate, queso, cerveza, vino, vinagre, chucrut o cualquier combinación de los mismos.
También se divulgan métodos para potenciar el crecimiento de un microorganismo en una muestra de ensayo diagnóstica. En algunos ejemplos, el método comprende poner en contacto la muestra de ensayo diagnóstica que comprende uno o más microorganismos con un medio capaz de soportar el crecimiento de los uno o más microorganimos; proporcionar MSM al medio a una concentración de aproximadamente el 0,4 % a aproximadamente el 5 % en peso del medio o en peso de un contenido de humedad del medio, potenciando de este modo el crecimiento de los uno o más microorganismos en la muestra de ensayo diagnóstica en comparación con el crecimiento de los uno
o más microorganismos en ausencia de MSM.
Además, se divulgan métodos para inhibir la actividad microbiana. En algunos ejemplos, el método comprende seleccionar un medio que es susceptible a la contaminación por gripe H 1 N 1; Y poner en contacto el medio con MSM a una concentración de aproximadamente el 1 O% a aproximadamente el 16 % en peso por volumen, inhibiendo de este modo la actividad microbiana de la gripe H1N1 . En algunos ejemplos, el medio comprende un fluido corporal, un tejido corporal, o una superficie. En algunos ejemplos, la puesta en contacto del medio comprende rociar con o añadir MSM al medio susceptible a la contaminación microbiana. En algunos ejemplos, la superficie es una superficie doméstica, ropa de cama, recubrimientos, equipamientos o superficies industriales, sangre, piel o una combinación de los mismos. En algunos ejemplos, el MSM se proporciona en una composición, en los que dicha composición no contiene ni lejía ni alcoholo consiste esencialmente en agua. En algunos ejemplos, el método comprende además esterilizar el medio después de añadir dicho MSM. En algunos ejemplos, el medio no tiene conservantes. En algunos ejemplos, el MSM inhibe la actividad microbiana mediante la reducción de la velocidad del crecimiento de la gripe H1N1 en al menos un 50 % en comparación con la velocidad de crecimiento de la gripe H1 N1 en ausencia de MSM.
11. Abreviaturas y términos
OMEM: Medio Eagle modificado de Dulbecco
OMSO: Dimetilsulfóxido AON: Ácido desoxirribonucleico ElISA: Ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas CI50: Concentración inhibidora al 50
LAB: Bacteria del ácido láctico CIM: Concentración inhibidora minima
MSM: Metilsulfonilmetano PAGE: Electroforesis en gel de paliacrilamida PBS: Suero sa lino tampanado con fosfato POA: Agar dextrosa de patata sos: Dodecilsulfato sódico TNTC: Demasiado numeroso para contar TSB: Caldo de soja triptica
Las siguientes explicaciones de términos y métodos se proporcionan para describir mejor la presente divulgación y para guiar a los expertos habituales en la materia en la puesta en práctica de la presente divulgación. Las formas del singular quot;unquot;, quot;unaquot; y quot;elquot; o quot;laquot; se refieren a uno o a más de uno, a menos que el contexto indique claramente lo contrario. Por ejemplo, la expresión quot;que comprende una célula bacterianaquot; incluye una sola o varias células bacterianas y se considera equivalente a la expresión quot;que comprende al menos una célula bacterianaquot;. El término quot;oquot; se refiere a un solo elemento de elementos alternativos indicados o a una combinación de dos o más elementos, a menos que el contexto indique claramente lo contrario. Tal como se usa en el presente documento, quot;comprendequot; significa quot;incluyequot;. Por lo tanto, quot;que comprende A o Bquot; significa quot;que incluye A, B, o A Y Bquot;, sin excluir elementos ad iciona les.
A menos que se explique de otro modo, todos los términos técnicos y cíentificos utilizados en este documento tienen el mismo significado que el normalmente entendido por un experto habitual en la materia a la cual pertenece esta divulgación. Aunque pueden usarse métodos y materiales similares o equivalentes a los que se describen en el presente documento en práctica o la prueba de la presente divulgación, los métodos y materiales adecuados se describen a continuación. Los materiales, métodos y ejemplos son solo ilustrativos y no pretenden ser limitantes. Por ejemplo, se describen métodos convencionales de sobra conocidos en la técnica a la que pertenece la invención divulgada en diversas referencias generales y más específicas, incluyendo, por ejemplo, Sambrook et al. , Molecular
Cloning: A Labaratory Manual, 28 ed., Cold Spring Harbar Laboratory Press, 1989; Sambrook et al., Molecular Clowning: A LabOfatory Manual, 38 ed., Cold Spring Harbar Press, 2001, Ausubel et al., Current Protocols in Molecular Biology, Greene Publishing Associates, 1992 (y suplementos hasta 2000); Ausubel et al., Short Protocols in Molecular Biology: A Compendium of Methods from Currenl Prolocols in Molecular Biology, 48 ed., Wiley & Sons, 1999; Harlow y Lane, Antibodies: A Labaratory Manual, Cold Spring Harbar Labaratory Press, 1990; y Harlow y Lane, Using Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbar Labaralory Press, 1999; Loudon, Organic Chemistry, Cuarta ediciórJ, Nueva York: Oxford Universily Press, 2002, págs. 360-361, 1084-1085; Smilh y March, March's Advances Organic Chemistry: Reaclions, Mechanisms, and Slruclure, Quinla edición, Wiley-Interscience, 2001; o Vogel, A Teld:book of Practical Organic Chemis1ry, Induding Qualilalive Organic Analyses, Cuarta edición, Nueva Yo!1lt;' Longman, 1978.
Pueden encontrarse términos adicionales usados en genética molecular en Benjamin Lewin, Genres V publicado por Oxford University Press, 1994 (ISBN 87-9); Kendrew et al. (eds.), The Encyclopedia of Molecular Biology, publicado por Blackwell Science Lid., 1994 (ISBN 0--632-02182-9); Y Robert A. Meyers (ed.), Molecular Biology and Biotechnology: a Comprehensive Desk Reference, publicado por VCH Publishers, Inc., 1995 (ISBN 1-56081-569-8).
Pueden encontrarse lérminos adicionales usados en quimica en Leudon, Organic Chemistry, Cuarta edición, Nueva York: Oxford Universily Press, 2002, págs. 360-361,1084-1085; Smith y March, March's Advanced Organic Chemistry: Reaclions, Mechanisms, and Struclure, Quinta edición, Wiley-Inlerscience, 2001, o Vogel, A Teld:book of Practical Organic Chemislry, Including Qualitative Organic Analysis, Cuarta edición, Nueva York: Longman, 1978
Administración: Proporcionar o administrar a un sujeto un compuesto, tal como MSM, por cualquier rula eficaz. Las rutas de administración a modo de ejemplo incluyen, pero sin limitación, inyección (tal como subcutánea, intramuscular, intradérmica, inlraperitoneal, e intravenosa), oral, sublingual, rectal, lransdéfmica (Ial como lópica), intranasal, vaginal y por inhalación. Un tipo de administración lípico es lópica. Patógeno bacteriano: Una bacteria que causa enfermedades (bacteria patógena). Los ejemplos de baclerias patógenas para las que puede usarse MSM para su modificación induyen, sin limilación, uno cualquiera o más de (o cualquier combinación de) Acinetobacter baumanii, Actinobacillus sp., Actinomycetes, Actinomyces sp. (Ia l como Actinomyces israelii y Actinomyces naes/undii), Aeromonas sp. (tal como Aeromonas hydrophila, Aeromonas veronii biovar sobria (Aeromonas sobria), y Aeromonas caviae), Anaplasma phagocytophilum, Alcaligenes xylosoxidans, Acinetobacter baumanii, Actinobacillus actinomycetemcomitans, Bacillus sp. (tal como Bacillus anthracis, Bacillus cereus, Bacillus subtilis, Bacillus thuringiensis, y 8acillus stearothermophilus), 8acteroides sp (Ial como Bacteroides fragilis), Barlonella sp. (tal como Barlonella bacilliformis y Barlonella henselae, Bifidobacterium sp., Bordetella sp. (Ial como Bordetella pertussis, Bordetella parapertussis, y Bordetella bronchiseptica), Borrelia sp. (tal como Borrelia recurrentis, y Borrelia burgdorteri), Brucella sp. (tal como Brucella aborlus, Brucel/a canis, Brucella melintensis y Bruoolla suis), Burkholderia sp. (Ial como Burkho/deria pseudomallei y 8urkho/deria cepacia), Campylobacter sp. (Ial como Campy/obacter jejuni, Campy/obacter coli, Campylobacter lari y Campy/obacter fetus), Capnocytophaga sp., Cardiobacterium hominis, Ch/amydia trachomatis, Ch/amydophila pneumoniae, Chlamydophi/a psittaci, Citrobacter sp. Coxiel/a bumetii, Corynebacterium sp. (Ia l como, Corynebacterium diphtheriae, Corynebacterium jeikeum y Corynebacterium), Clostridium sp. (tal como Clostridium perfrigens, C/ostridium difficile, Clostridium botulinum y C/ostridium tetani), Eikenella corrodens, Enterobacter sp. (tal como Enterobacter aerogenes. Enterobacter agg/omerans. Enterobacter e/oacae y Escherichia coli, incluyendo Escherichia coli oporlunista, lal como E. coli enterotoxigénica, E. coli enteroinvasiva, E. coli enteropatógena, E. coli enterohemoffágica, E. coli enteroagregativa y E. coli uropatogénica) Enterococcus sp (Ial como Enterococcus faecalis y Enterococcus faecium) Ehrlichia sp. (tal como Ehrlichia chafeensia y Ehrlichia canis), Erysipe/othrix rhusiopathiae, Eubacterium sp., Franciselfa tularensis, Fusobacterium nucleatum, Gardnerella vaginalis, Gemella morbillorum, Haemophilus sp. (tal como Haemophilus influenzae, Haemophilus ducreyi, Haemophilus aegyptius, Haemophilus parainfluenzae, Haemophilus haemolyticus y Haemophilus parahaemolyticus, Helicobacter sp. (Ial como Helicobacter pylori, Helicobacter cinaedi y Helicobacter fennelliae), Kingella kingii, Kiebsiella sp. (ta l como Klebsiella pneumoniae, Klebsiella granu/omatis y Klebsiella oxytoca), Lactobacillus sp., Listeria monocytogenes, Leptospira interrogans, Legionella pneumophila, Leptospira interrogans, Peptostreptococcus sp., Moraxella cataffhalis, Morganella sp., Mobiluncus sp., Micrococcus sp., Mycobacterium sp. (ta l como Mycobacteriu leprae, Mycobacterium intracel/u/are, Mycobacterium avium, Mycobacterium bovis, y Mycobacterium marinum) , Mycop/asma sp. (Ial como Mycoplasma pneumoniae, Mycoplasma flominis, y Mycoplasma genitaliumJ, Nocardia sp. (Ial como Noca/dia astelOides, Noca/dia cyrlacigeorgica y Nocardia brasiliensis), Neisseria sp. (tal como Neisseria gonorrhoeae y Neisseria meningitidis), Pasteurella multocida, Plesiomonas shigelloides. Prevotella sp., Porphyromonas sp. , Prevotella me/aninogenica, Proteus sp. (Ial como Proteus vulgaris y Proteus mirabilis), Providencia sp. (ta l como Providencia a/califaciens, Providencia rettgeri y Providencia stuarlii), Pseudomonas aeruginosa, Propionibacterium acnes, Rhodococcus equi, Rickettsia sp. (ta l como Rickettsia rickettsii, Rickettsia akari y Rickettsia prowazekii, Orientia tsutsugamushi (anteriormente: Rickettsia tsutsugamushi) y Rickettsia typhi), Rhodococcus sp., Serratia marcescens, Stenotrophomonas maltophilia, Salmonel/a sp. (tal como Sa/monella enterica, Sa/monel/a typhi, Sa/monella paratyphi, Salmonelfa enteritidis, Salmonella cho/erasuis y Sa/monella typhimurium), Serratia sp. (Ial como Seffatia marcesans y SeffaUa liquifaciens), Shigella sp. (tal como Shigella dysenteriae, Shigella flexneri, Shigefla boydii y Shigella sonnei), Staphylococcus sp (tal como Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis, Staphylococcus hemolyticus, Staphy/ococcus saprophyticus), Streptococcus sp. (tal como Streptococcus
pneumoniae (por ejemplo, Streptococcus pneumoniae de serotipo 4 resistente al c/oranfenico/, Streptococcus pneumoniae de serotipo 68 resistente a la espectinomicina, Streptococcus pneumoniae de serotipo 9Vresistente a la estreptomicina, Streptococcus pneumoniae de serotipo 14 resistente a la eritromicina, Streptococcus pneumoniae de serotipo 14 resistente a la optoquina, Streptococcus pneumoniae de serotipo 18C resistente a la rifampicina, Streptococcus pneumoniae de serotipo 19F resistente a la tetracic/ina, Streptococcus pneumoniae de serotipo 19F resistente a la penicilina, y Streptococcus pneumoniae de serotipo 23F resistente a la trimetoprima, Streptococcus pneumoniae de serotipo 4 resistente al cloranfenicol, Streptococcus pneumoniae de serotipo 68 resistente a la espectinomicina, Streptococcus pneumoniae de serotipo 9V resistente a la estreptomicina, Streptococcus pneumoniae de serotipo 14 resistente a la optoquina, Streptococcus pneumoniae de serotipo 18C resistente a la rifampicina, Streptococcus pneumoniae de serotipo 19F resistente a la penicilina, o Streptococcus pneumoniae de serotipo 23F resistente a la trimetoprima), Streptococcus agalactiae, Streptococcus mutans, Streptococcus pyogenes, estreptococos del grupo A, Streptococcus pyogenes, estreptococos del grupo 8, Streptococcus agalactiae, estreptococos del grupo C, Streptococcus anginosus, Streptococcus equismilis, Estreptococos del grupo D, Streptococcus bovis, estreptococos del grupo F, y Streptococcus anginosus, estreptococos del grupo G), Spirillum minus, Streptobacillus moniliformi, Treponema sp. (tal como Treponema carateum, Treponema petenue, Treponema pallidum y Treponema endemicum, Tropheryma whippelii, Ureaplasma urealyticum, Veillonella sp., Vibrio sp. (tal como Vibrio cholerae, Vibrio parahemolyticus, Vibrio vulnificus, Vibrio parahaemolyticus, Vibrio vulnificus, Vibrio alginolyticus, Vibrio mimicus, Vibrio hollisae, Vibrio fluvialis, Vibrio metchnikovii, Vibrio damsela y Vibrio furnisii), Yersinia sp. (tal como Yersinia enterocolitica, y Yersinia pestis) y Xanthomonas maltophilia, entre otras
En algunas realizaciones, se usa MSM para modificar, tal como para aumentar o reducir la actividad biológica de uno o más de los organismos listados anteriormente.
Antibióticos de beta-Iactama: Una clase de agentes antibióticos que contienen un núcleo de ¡3-lactama en su estructura molecular. Los ejemplos incluyen las familias de antibióticos de la penicilina, cefalosporina, monobactama y carbapenem. La meticilina y la oxacilina son antibióticos de beta-Iactama Actividad biológica: Una expresión que describe los efectos beneficiosos o adversos de una sustancia en la materia viva. Cuando el agente es una mezcla quimica compleja, esta actividad está ejercida por el principio activo de la sustancia o farmacóforo, pero puede modificarse por los demás constituyentes. La actividad es generalmente dependiente de la dosis y no es infrecuente tener efectos que varían desde beneficiosos hasta adveros para una sustancia cuando se pasa de dosis bajas a elevadas. En un ejemplo, MSM allera, tal como aumenta o reduce la actividad biológica de un microorganismo, tal como una bacteria Biocombustible: Un combustible procedente de un producto metabólico de un organismo vivo. Es una fuente de energía renovable, a diferencia de otros recursos naturales, tales como el petróleo, el carbón y los combustibles nucleares. Un combustible de biodiésel es un combustible procesado equivalente al diésel procedente de fuentes biológicas que puede usarse en vehículos con motor diésel no modificados. Los biodiésel son atractivos para combustibles, y para otros usos distintos, debido a que tienen una baja presión de vapor, no son tóxicos, son estables y no se deterioran o detonan tras calentarlos ligeramente. Químicamente, los biodiésel se definen generalmente como los ésteres de monoalquilo de ácidos grasos de cadena larga procedentes de fuentes de lípidos renovables Blanqueante: Una solución de hipoclorito sódico (NaCIO) a aproximadamente el 3-6 %, y blanqueante de oxígeno, que contiene peróxido de hidrógeno o un compuesto que libera peróxido, tal como perborato sódico, percarbonato sódico, persulfato sódico, pirofosfato tetrasódico, o peróxido de urea junto con catalizadores y activadores, por ejemplo, tetraacetiletilenodiamina y/o nonanoiloxibencenosulfonato sódico. El polvo blanqueante es hipoclorito de sodio. Muchos blanqueantes tienen fuertes propiedades bactericidas, y se usan para desinfectar y esterilizar. Condiciones que permiten la producción: Cualesquiera condiciones de fermentación o cultivo que permitan crecer a un microorganismo y/o producir un producto deseado, tal como alcoholes y dióxido de carbono o ácidos orgánicos. Dichas condiciones incluyen normalmente intervalos de temperatura, niveles de aireado, y selección de medios que, cuando se combinan, permiten crecer al microorganismo. Los medios ilustrativos incluyen caldos o geles. Para determinar si las condiciones de cultivo permiten la producción de producto, el microorganismo puede cultivarse durante 2, 4, 6, 8, 12, 24, 36, 48 o 72 y puede obtenerse y analizarse una musetra. Por ejemplo, las células en la muestra o el medio en el que se cultivaron las células pueden ensayarse respecto de la presencia del producto deseado. Cuando se comprueba la presencia de un producto, pueden usarse ensayos, tales como aquellos proporcionados en el presente documento, incluyendo aquellos presentados en los ejemplos más adelante Puesta en contacto: Poner en asociación física directa; incluyendo en forma sólida, líquida y de gas. Poner en contacto incluye el cootacto entre una molécula y otra molécula. La puesta en contacto puede producirse in vitro con células aisladas, tejidos o una superficie sólida (tal como una superficie doméstica o industrial) o in vivo, mediante su administración a un sujeto Control: Muestras que se consideran normales (por ejemplo, representativas de la actividad o función en ausencia de la variable que se esté ensayando) así como valores de laboratorio, aunque puedan haberse establecido de manera arbitraria, teniendo en consideración que dichos valores pueden variar de un laboratorio a otro. Un grupo de control es prácticamente idéntico al grupo de tratamiento, excepto para la variable individual de ínteres cuyos efectos se estén ensayando, que solo se aplica al grupo de tratamiento Cultivo: Mantener una célula en un medio que permite al organismo continuar viviendo. Por ejemplo, el cultivo
incluye incubar un microorganismo en un medio de fermentación, tal como un caldo de fermentación o un gel de fermentación. Un experto habitual en la materia apreciará que el tiempo, la temperatura, y otras condiciones físicas asociadas con el cultivo dependerán del organismo que se esté cultivando y del resultado del cultivo que se desee Por ejemplo, puede colocarse un microorganismo que se cultiva para producir etanol en un caldo de fermentación que contiene una fuente de carbohidratos, diversos minerales y oligoelementos, así como MSM y compuestos útiles para inducir la producción, incluyendo menos del 5 % de NaCI Reducción: Reducir la calidad, cantidad, o fuerza de algo. En un ejemplo, la administración de MSM disminuye o reduce una o más actividades biológicas, tales como el crecimiento, la reproducción la proliferación, la tasa de supervivencia, el metabolismo, la vitalidad, la robustez, la acción, y/o la función de microorganismos en al menos un 10 %, al menos un 20 %, al menos un 50 %, o incluso al menos un 90 %, incluyendo entre un 10 % a un 95 %, un 20 % a un80%, un 30 % a un 70 %, un 40%a un 50 %, tal como un 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70 %,80 %, 85 %, 90 %, 95 %, 98 %, o 100 %. Por ejemplo, la administraciórJ de MSM reduce o inhibe el crecimiento bacteriano, por ejemplo, en al menos un factor de 2, por ejemplo, al menos un factor de 3 o al menos un factor de 4, en comparación con un control (tal como el crecimiento bacteriano en ausencia de MSM o de un valor de referencia que se sabe que es representativo del crecimiento bacteriano en un sujeto afectado por una infección bacteriana). Dichas reducciones pueden medirse usando los métodos divulgados en el presente documento, así como aquellos conocidos para un experto habitual en la materia. En algunas realizaciones, se usa MSM para inhibir el crecimiento de microorganismos específicos. En otras realizaciones, se usa MSM para inhibir el crecimiento de una gran variedad de microorganismos en determinados medios o productos. En algunas realizaciones, se efectúan reducciones a gran escala después de las primeras 24 horas Dimetilsulfóxido (DMSO): Dimetilsulfóxido (DMSO), también conocido como metilsulfinilmetano o sulfóxido de metilo, es un compuesto de organoazufre de fórmula (CH 3)2S0. Este líquido incoloro es un disolvente aprótico polar que disuelve compuestos tanto polares como no polares y es miscible en una gran variedad de disolventes orgánicos, así como en agua. Tiene la propiedad distintiva de penetrar en la piel muy rápidamente, por lo que puede percibirse su sabor poco después de que entre en contacto coo la piel. El DMSO es de sobra conocido como suplemento nutricional y como agente farmacéutico. Un experto en la materia estará familiarizado con estos usos. Haydisponibles comercialmente diversos grados de DMSO (por ejemplo, el producto n.o 472301 de Sigma-Aldrich, Corp., San Luís, MO) y un experto en la matería estará familíarizado con una fuente de DMSO. Potenciación o aumento: Aumentar la calidad, cantidad, o fuerza de algo. En un ejemplo, MSM aumenta o potencia la actividad de un microorganismo, por ejemplo, en relación a la actividad en ausencia de MSM. En un ejemplo particular, MSM aumenta la actividad de un microorganismo, tal como potenciando el crecimiento, la reproducción la proliferación, la tasa de supervivencia, el metabolismo, la vitalidad, la robustez, la acción, y/o la función de un microorganismo en al menos un 10 %, al menos un 20 %, al menos un 50 %, o incluso al menos un 90 %, incluyendo entre un 10 % a un95 %, un 20 % a un80 %, un 30 % a un 70%, un 40% a un 50 %, lal como un 10%, 20 %, 30 %, 40 %, 50 %, 60 %, 70 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 %, 98 %, o 100 %. Los términos actividad y crecimiento se usan de manera intercambiable en algunos contextos. En algunos ejemplos, se usa MSM para potenciar el crecimiento de microorganismos específicos. En otros ejemplos, se usa MSM para potenciar el crecimiento de una gran variedad de microorganismos en determinados medios o productos. En algunos ejemplos, la potenciación de la actividad microbiana incluye potenciar los productos microbianos o los metabolitos microbianos. Por ejemplo, el MSM aumenta o potencia la eficacia de la fermentación o la eficacia del cultivo tal como en al menos un 10 %, al menos un 20 %, al menos un 50 %, o incluso al menos un 90 %, incluyendo entre un 10 % a un 95 %, un 20 % a un 80 %, un 30 %a un 70 %, un 40 % a un 50 %, tal como un 10 %, 20 %, 30 %, 40 %, 50 %, 60 %, 70 %, 80 %, 85%, 90 %, 95 %, 98 %, o 100 %. Dichos aumentos pueden medirse usando los métodos d ivu lgados en el presente documento Fermentación: Un proceso para derivar la energía de la oxidación de compuestos orgánicos, tales como carbohidratos, y usar un aceptor de electrones endógeno, que es normalmente un compuesto orgánico. Durante la fermentación, el piruvato se metaboliza en diversos compuestos diferentes. La fermentación homoláclica es la producción de ácido láctico a partir de piruvato; la fermentación alcohólica es la conversión de pirovato en etanol y dióxido de carbooo; una fermentación heteroláctica es la producción de ácido láctico así como de otros ácidos y alcoholes. La fermentación no tiene que llevarse a cabo necesariamente en un ambiente anaerobio. Por ejemplo, incluso en la presencia de oxígeno abundante, las células de levadura prefieren la fermentación a la fosforilación oxidativa, en tanto que estén fácilmente los azúcares para su consumo. Los azúcares son un sustrato común para la fermentación, y los ejemplos típicos de productos de fermentación son etanol, ácido láctico, e hidrógeno. Sin embargo, pueden producirse compuestos más exóticos mediante fermentación, tales como ácido butírico y acetona. La levadura lleva a cabo la fermentación en la producción del etanol en las cervezas, vinos y otras bebidas alcohólicas, junto con la producción de grandes cantidades de dióxido de carbono Caldo de fermentación: Cualquier medio que soporte la vida de microorganismos (por ejemplo, un microorganismo que está metabolizando carbono de manera activa). Un medio de fermentación contiene normalmente una fuente de carbono. La fuente de carbono puede ser cualquier cosa que pueda utilizarse, con o sin enzímas adícíonales, por el mícroorganísmo para obtener energía Eficacia de la fermentación: Una expresión de qué cantidad de producto de fermentación, tal como alcohol, ácido láctico, microorganismos u otro producto de fermentaciórJ deseado se ha producido en relación a un control (tal como en ausencia de MSM) o a una cantidad que podría haberse producido de manera teórica. Medio de fermentación: Cualquier sustancia usada para cultivar células, tales como células de mamífero y microorganismos. El medio de fermentación incluye cualquier medio de crecimiento (por ejemplo, caldo o gel) que soporta la vida de microorganismos (por ejemplo, un microorganismo que está meta bol izando carbono de manera
activa)_Un medio de fermentación contiene normalmente una fuente de carbono, tal como glucosa, xilosa, material celulósico y similares. La fuente de carbono puede ser cualquier cosa que pueda utilizarse, con o sin enzimas adicionales, por el microorganismo para obtener energía Patógeno fúngico: Un hongo que causa una enfermedad. Los ejemplos de patógenos fúngicos para los que puede usarse MSM para su modificación incluyen, sin limitación, uno cualquiera o más de (o cualquier combinación de) Trichophyton rubrum, T mentagrophytes, Epidermophyton floccosum, Microsporum canis, Pityrosporum orbicu/are (Ma/assezia furfur) , Gandida sp. (tal como Gandida a/bicans), Aspergillus, sp. (tal como Aspergillus fumiga rus, Aspergillus f/avus, Aspergillus, g/aucus, Aspergillus, nidulans, Aspergi//us, oryzae, Aspergillus terreus, Aspergillus ustus, Aspergillus versicolor y Aspergillus c/avatus), Cryptococcus sp_ (tal como Cryptococcus neoformans, Cryptococcus gaftií, Cryptococcus /aurenrii y Cryptococcus a/bidus), Coccidioides sp., Hisrop/asma sp_(tal como HistopJasma capsulatum), Pneumocystis sp _(tal como Pneumocystis jirovecil), Stachybotrys sp_(tal como Stachybotrys chartarum), Paracoccidioides, Blastomyoo, Fusarium, Spororhrix, Trichosporon, Rhizopus, Pseudallescheria, Paecilomyces, Alternarla, Curvulan-a, Exophia/a, Wangiella, Penicillium, y Cepha/osphorium. En algunas realizaciones, se administra MSM para inhibir o prevenir una infección o trastorno asociado con uno o más de los patógenos fúngicos anteriormente mencionados. Incubación: Un plazo que incluye una cantidad de tiempo suficiente para que un agente, tal como MSM, interactúe con una célula o tejido Dispositivo de inhalación: Un dispositivo capaz de suministrar una composición a un sujeto, por ejemplo, al tejido pulmonar de un sujeto. Por ejemplo, un dispositivo de inhalación puede ser un inhalador, un nebulizador o un ventilador. Los dispositivos de inhalación descritos en el presente documento se construyen de un material adaptado para entrar en contacto con DMSO y/o MSM. En algunas realizaciones, un dispositivo de inhalación es desechable o reemplazable. Los dispositivos para inhalación descritos en el presente documento están configurados para suministrar una composición que contiene DMSO o MSM para que entre en contacto directamente con patógenos bacterianos en el tejido pulmonar de un sujeto_ Los dispositivos de inhalación están configurados para generar partículas de una compos ición que varían en cuanto a su tamaño. En algunas realizaciones, un dispositivo de inhalación está configurado para generar partículas de una composición que tienen un tamaño en el intervalo de aproximadamente 0,1 IJm a aproximadamente 10 IJm o de aproximadamente 0,51Jm a aproximadamente 5 IJm Inhibición de la actividad microbiana o inhibición de una infección o enfermedad: La frase quot;inhibir la actividad microbianaquot; se refiere a reducir el crecimiento, la reproducción la proliferación, la tasa de supervivencia, el metabolismo, la vitalidad, la robustez, la acción, ylo la función de microorganismos. La expresión quot;inhibir o tralar una infección, una enfermedad o una afecciónquot; se refiere a prevenir o reducir el desarrollo pleno de una infección, enfermedad o afección, por ejemplo, en un sujeto que se encuentra en riesgo de desarrollar una infección, tal como una infección bacteriana. quot;Tratamientoquot; se refiere a una intervención terapéutica que alivia un signo o síntoma de una enfermedad o patologia después de que haya comenzado a desarrollarse. Tal como se usa en el presente documento, el término quot;mejorarquot; en referencia a una enfermedad, patología o síntoma, se refiere a cualquier efecto beneficioso observable del tratamiento_ El efecto beneficioso puede evidenciarse, por ejemplo, por una apa rición retardad de los sintomas clínicos de la infección/enfermedad en un sujeto susceptible, una reducción en la gravedad de algunos o de todos los síntomas clín icos de la infección/enfermedad, una progresión más lenta de la infección/enfermedad, una reducción en el número de recid ivas de la infecciónfenfermedad, una mejora en la sa lud generala del bienestar del sujeto, o mediante cualesquiera otros parámetros de sobra conocidos en la técnica que son específicos para la infección/enfermedad concreta, tal como una infección bacteriana específica. Medio o medios: Un ambiente que contiene o que es adecuado para soportar microorganismos, incluyendo, pero sin limitación, caldos, agar, cultivos, alimentos, bebidas, suspensiones celulares, tejido biológico, fluidos biológicos, superficies inorgánicas, superficies orgánicas, sustratos, células vivas, células hospedadoras, ensayos diagnósticos, y otros ambientes sólidos, líquidos, de matriz, gelatinosos o gaseosos. Metilsulfonilmetano (MSM): Un compuesto de organoazufre de fórmula (CH-3)2S02. El MSM se ha comercializado y vendido en gran medida como un complemento dietético El MSM también se conoce como DMS02, sulfona de dimetilo y sulfona de metilo.
El MSM está relacionado estructuralmente con el dimetil sulfóxido (DMSO), pero el comportamiento de estos dos es diferente. El DMSO es un disolvente altamente polar y un excelente ligando, con propiedades de disolución similares al agua, mientras que el MSM es menos polar y menos reactivo. El MSM también es un meta bolito del DMSO. El MSM tiene la siguiente estructura:
Microorganismo: Un miembro de las especies microbianas proca riotas o euca riotas de los dominios Archaea, Bacteria, y Eucarya, incluyendo este último levaduras y hongos filamentosos, protozoos, algas, o protistas superiores. Los términos quot;células microbianasquot; y quot;microbiosquot; se usan de manera intercambiable con el término microorganismo_ Los microbios pueden induir organismos de tipo silvestre u organismos diseñados o modificados
por ingenieria genética. Los microorganismos incluyen virus, priones, parásitos, hongos, mohos, levaduras y bacterias. En algunas rea lizaciones, se usa MSM para potenciar la actividad de un amplio espectro de microorganismos, incluyendo, pero sin limitación, virus, priones, parásitos, hongos, mohos, levaduras, algas y bacterias. En otras realizaciones, se usa MSM para inhibir la actividad de los microorganismos, incluyendo, pero sin limitación, hongos, mohos, levaduras, bacterias y virus. Modular o modulación: Ajustar, alterar, regular una actividad, un grado o una velocidad, incluyendo un aumento o una reducción en la actividad biológica de una molécula. En un ejemplo, se administra MSM para modular, ya sea aumentar o reducir, la actividad microbiana, tal como el crecimiento bacteriano Parásito: Un organismo que vive dentro de seres humanos u otros organismos que actúan como hospedadores (para el parásito). Los parásitos dependen de sus hospedadores durante al menos parte de su ciclo vita l. Los parásitos son pe~udiciales para los seres humanos, debido a que coosumen los alimentos necesarios, se alimentan de tejidos y células del cuerpo, y eliminan desechos tóxicos, que hacen enfermar a las personas. Los ejemplos de patógenos fúngicos para su uso de acuerdo con los métodos y composiciones divulgados incluyen, sin limitación, uno cualquiera o más (o cualquier combinación de) Malaria (P/asmodium fa/ciparum, P. vivax, P. ma/ariae), esquistosomas, tripanosomas, Leishmania, nematodos filariales, tricomoniasis, sarcosporidiasis, tenia (T saginata, T sodium), Leishmania, Toxop/asma gondii, triquinosis (Trichinella spiralis) o coccidiosis (Eimeria sp.). El MSM puede usarse para inhibir o prevenir la actividad de uno o más de los organismos enumerados anteriOfmente. Composición farmacéutica: Un compuesto o composición química capaz de inducir un efecto terapéutico o profiláctico deseado cuando se administra de manera adecuada a un sujeto. Una composición farmacéutica puede incluir un agente terapéutico, un agente diagnóstico o un agente farmacéutico. Un agente terapéutico o farmacéutico es uno que solo o junto coo un compuesto adicional induce la respuesta deseada (tal como la inducción de un efeclo terapéutico o profiláctico cuando se administra a un sujeto). En un ejemplo particular, un agente farmacéutico es un agente que reduce de manera significativa uno o más síntomas asociados con una infección, tal como una infección bacteriana o vírica. En algunas realizaciones, un agente terapéutico es un agente antibiótico, tal como meticilina u oxacilina. Portadores o vehículos farmacéuticamente aceptables: Los potadores (vehículos) farmacéuticamente aceptables útiles en la presente divulgación son convencionales. Remington's Pharmaceutical Sciences, por E. W Martin, Mack Publishing Co., Easton, PA, 19quot; Edición (1995), describe compuestos y composiciones adecuadas para el suministro farmacéutico de uno o más compuestos o moléculas terapéuticas, tales como uno o más péptidos proporcionados en el presente documento. En general, la naturaleza del portador dependerá del modo de administración concreto que se esté empleando. Por ejemplo, las composiciones parenterales comprenden normalmente fluidos inyectables que incluyen fluidos farmacéutica y fisiológicamente aceptables, tales como agua, suero salino fisiológico, soluciones salinas equilibradas, dextrosa acuosa, glicerol o similares como vehículo. En una realización particular, el portador es uno que permita al compuesto terapéutico atravesar la barrera hematoencefálica. Para composiciones sólidas (por ejemplo, formas en polvo, píldora, comprimido o cápsula), los portadores sólidos no tóxicos coovencionales pueden incluir, por ejemplo, calidades farmacéuticas de manitol, lactosa, almidón, o estearato de magnesio. Además de portadores biológicamente neutros, las composiciones farmacéuticas para su administración pueden contener cantidades menores de sustancias adyuvantes no tóxicas, tales como agentes humectantes o emulsionantes, conservantes, y agentes tamponadores del pH y similares, por ejemplo, acetato de sodio o monolaurato de sorbitán. Prebiótico: Un ingrediente alimentario no digerible que estimula el crecimiento y/o la actividad de bacterias en el tracto digestivo que soo beneficiosas para la salud del organismo. Normalmente, los prebióticos son carbohidratos (tales como oligosacáridos); sin embargo, los no carbohidratos también son fuentes de dichos ingredientes. Los prebióticos pueden ser de cadena corta, de cadena larga, y/o prebióticos de espectro completo. Los prebióticos de cadena corta (tal como oligofructosa), contienen 2-8 enlaces por molécula de polisacárido, y normalmente se fermentan más rápidamente en el lado derecho del colon, proporciooando nutrición a las bacterias en esa zona Los prebióticos de cadena más larga (tales como inulina) contienen 9-64 enlaces por molécula de sacárido, y tienden a fermentarse más lentamente, nutriendo a las bacterias predominantemente en el colon izquierdo. Los prebióticos de espectro completo proporcionan el intervalo molecular completo de longitudes de enlace de 2-64 enlaces por molécula, y nutren a las bacterias a lo largo de todo el colon (tal como inulina en riquecida con oligofructosa, OEI). En algunos ejemplos, un perbiótico aumenta el número y{o la actividad de bifidobacterias y de bacterias del ácido láctico. Las bifidobacterias y las bacterias del ácido láctico (Lactobacillus o LAS) son bacterias que mejoran la digestión (incluyendo potenciar la absorción de minerales) y la eficacia y la fuerza intrlnseca del sistema inmunitario_ Un producto que estimule a las bifidobacterias, tal como MSM, se considera un factor bifidogénico. Las fuentes dietarias tradicionales de probiólicos incluyen soja, fuentes de inulina (Iales como alcachofa de Jerusalén, jicama, y raíz de achicoria), avena en bruto, trigo no refinado, cebada no refinada, ajo, puerro, cebolla espárrago, plátano y yacón. Los oligosacáridos prebióticos se añaden cada vez más a los alimentos debido a sus beneficios para la salud. Algunos oligosacáridos que se usan de este modo soo los fruclooligosacáridos (FOS), xilooligosacáridos (XOS), polidextrosa y galactooligosacáridos (GOS). Algunos monosacáridos, tales como la la9atosa, en ocasiones también se usan como prebiólicos. Tal como se usa en el presente documento, el MSM es un prebiótico. Probiótico: Un microorganismo que confiere un beneficio para la salud en el hospedador, incluyendo, pero sin limitación, conferir protección frente a o tratar una enfermedad o sus efeclos no deseados. Los probióticos pueden conferir beneficios para la salud a un producto, tales como el aumento de la calidad nutricional de productos comeslibles. Los probiólicos incluyen bacterias beneficiosas, tales
como bacterias del ácido láctico (lales como LactobaciJ/us bulgaricus, Lactobacillus rhamnosus, Lactobacillus casei y LactobaciJ/us johnsonil) y bifidobacterias (ta les como Lactobacillus bifidus) que son los tipos más comunes de microbios usados como probióticos; aunque determinadas levaduras y bacilos también pueden ser probióticos. Los probi6ticos se consumen normalmente como parle de alimentos fermentados; tal como en el yogur, productos de la soja, o como suplementos dietéticos. Los cultivos probióticos vivos están disponibles en productos lácteos fermentados y alimentos reforzados con probiólicos. Sin embargo, también hay disponibles comprimidos, cápsulas, polvos y bolsitas que contienen las bacterias en forma criodesecada. Las cepas de probióticos ilustrativas incluyen, pero sin limitación, Bacilfus coagulans GBI-30, 6086 (Ganeden Biotech), Bifidobacterium LAFTI® 894 (Inslitut-Rosell-Lallemand), LactobacU/us acidophilus LAFTI® L 10 (Institut-Rosell-Lallemand), LactobaciJ/us casei LAFTI® L26 (Institut-Rosell-Lallemand), Bifidobacterium animalis subsp. lactis 88-12 , Bifidobacterium breve (Yakult), Bifidobacferium infantis 35624 (Procter & Gamble), Bifidobacterium animalis subsp lactis HN019 (Danisco), Bifidobacterium longum 88536 (Morinaga Milk Industry), Lactobacillus acidophilus DDS-1 (Nebraska Cultures), Lactobacillus acidophilus LA-5, Lactobacilfus acidophilus NCFM (Danisco), Lactobacillus casei DN114-001 (Danone), Lactobacillus casei 431 , Lactobacillus casei F19 (Aria Foods), Lactobacillus casei (Yaku lt), Lactobacillus paracasei St11 (o NCC2461. NesUe), Lactobacillus johnsonii La1 (Lactobacillus LC1 , LactobaciJ/us johnsonii NCC533, Nestle), Lactococcus lactis L 1A (Norrmejerier), Lactobacillus plantarum 299v (Probi), Lactobacillus reuter; ATIC 55730 (Lactobacillus reuteri SD2112, 8ioGaia Biologics), Lactobacillus rhamnosus ATCC 53013 (Valio), Lactobacillus rhamnosus L821 (Norrmejerier), Bifidobacterium bifidum, LactobaciJ/us gasserí PA16/8, Bifidobacterium bifidum MF20/5, Bifidobacterium longum SP07/3, Streptococcus thermophilus, Lactobacillus salivarius, Bifidobacterium longum Resell-175, Lactococcus lactis Rosel/-105B, Bifidobacterium breve Rosell-70, Lactobacillus rhamnosus Rosell-11, Lactobacil/us acidophilus Rosel/-52, Bifidobacterium bifidum resell-71, Bacillus subtilis var natto, Lactobacillus paracasei, Enterococcus faecium, Bifidobacterium animalis, Lactobacillus delbrueckii, y Saccharomyces cerevisiae. Cuantificación: Determinar o medir una cantidad (tal como una cantidad relativa) de una molécula o de la actividad de una molécula, tal como la cantidad de analito presente en una muestra. Célula madre: Una célula que tiene la capacidad para auto-replicarse de manera indefinida y que, en las condiciones adecuadas, o propOfcionándole las señales adecuadas, puede diferenciarse en algunos o en todos los diferentes tipos celulares que conforman un organismo. Las células madre tienen el potencial de desarrollarse en células maduras diferenciadas, tales como células cardiacas, células cutáneas, o células nerviosas. El óvulo fertilizado es una célula madre ya que tiene el potencial de generar todas las células y tejidos que forman un embrión y que soportan su desarrollo en el útero. Los mamíferos adultos tienen más de 200 tipos de células, por ejemplo, neuronas, miocilos, células epiteliales, eritrocitos, monocilos, linfocitos, osteocitos, y condrocitos. Otras células que son esenciales para el desarrollo embrionario pero que no se incorporan en el embrión incluyen los tejidos extra-embrionarios, la placenta, y el cordón umbilical. Todas estas células se generan a parlir de un solo óvulo fertilizado.
Las células pluripotentes pueden dar lugar a células procedentes de las tres capas germinales embrionarias, mesodermo, endodermo, y eclodermo. Por lo tanto, las células pluripotentes tienen el potencial de dar lugar a cualquier tipo de célula. Las células madre unipotentes son capaces de diferenciarse únicamente en un linaje. Las células madre embrionarias son células pluripotentes derivadas del blastocisto. Las células madre adultas son células no diferenciadas que se encuentran en un tejido diferenciado que pueden replicarse y especializarse para propOfcionar todos los tipos celulares especializados del tejido a parlir del cual se originan. Las células madre adultas son capaces de auto-renovarse durante todo el tiempo de vida del organismo. Se han hallado fuentes de células madre adultas en la médula ósea, el torrente sanguíneo, la cómea, la relina, la pulpa dental, el hígado, la piel, el tracia gastrointestinal, yel páncreas. En el presente documento, se usa MSM para aumentar la eficacia del cultivo, la estabilidad y/o la viabilidad de células madre.
Esterilización: Un proceso que elimina (retira) o mata todas las formas de vida, incluyendo agentes transmisibles (tales como hongos, bacterias, virus, formas de espora, etc.) presentes en una superficie, contenidas en un fluido, en medicaciÓfl, o en un compuesto, tal como medio de cultivo biológico. La esterilización puede lograrse por métodos conocidos para un experto habitual en la materia, incluyendo la aplicación de las combinaciones adecuadas de calor, agentes químicos, irradiación, alta presión, y filtración. Sujeto: Organismos multicelulares vertebrados vivos, una categoria que incluye mamíferos humanos y no humanos. Síntoma y signo: Cualquier evidencia subjetiva de enfermedad o de una afección de un sujeto, por ejemplo, evidencias, lales como las percibidas por el sujeto; un cambio perceptible en la afección de un paciente indicativo de algún estado corporal o mental. Un quot;signoquot; es cualquier anomalía indicativa de enfermedad, que puede descubrirse tras el examen o la evaluación de un sujeto. En general, un signo es una indicación objetiva de enfermedad. Los signos incluyen, pero sin limitación, cualquier parámetro medido, tal como pruebas para detectar un trastomo o enfermedad, tal como una infección bacteriana o vírica. En un ejemplo, la reducción o inhibición de uno o más síntomas o signos asociados con una infección bacteriana o vírica, incluye reducir o inhibir el crecimiento bacteriano o la infección vírica en una cantidad deseada, pOf ejemplo, en al menos un 20 %, al menos un 50 %, al menos un 60 %, al menos un 70 %, al menos un 80 %, al menos un 90 %, al menos un 95 %, al menos un 98 %, o induso al menos un 100 %, en comparación con el crecimiento bacteriano o la infeclividad vírica en ausencia de MSM Cantidad o concentración terapéuticamente eficaz: Una cantidad de una composición que por sí misma, o junto
con uno o más agentes terapéuticos adicionales es suficiente para lograr un efecto deseado en un sujeto, o en una célula, que se esté tratando con el agente. La cantidad eficaz del agente dependerá de varios factOfes, incluyendo, pero sin limitación, el sujeto o las células que se estén tratando, y el modo de administración o la composición terapéutica. En un ejemplo, una cantidad o concentración terapéuticamente eficaz es una que es suficiente para prevenir el avance, retrasar la progresión, o causar la regresión de una enfermedad, o que es capaz de reducir los síntomas causados por una afección o enfermedad
En un ejemplo, un efecto deseado es reducir o inhibir uno o más síntomas asociados con la enfermedad. Los uno o más síntomas no tienen pOf qué eliminarse completamente para que la composición sea eficaz. Por ejemplo, una composición puede reducir el signo o síntoma en una cantidad deseada, por ejemplo, en al menos un 20 %, al menos un 50 %, al menos un 80 %, al menos un 90 %, al menos un 95 %, al menos un 98 %, o incluso al menos un 100 %, en comparación con el signo o síntoma en ausencia de MSM. En un ejemplo particular, una respuesta deseada es reducir
o inhibir la actividad de microorganismos (tal como el crecimiento bacteriano) en una cantidad deseada, por ejemplo,
m~mmM~m,~mmM~~,~mmoo~W,~ __ ~m,~ __ uquot;M,~ __ ~OO,
al menos un 95 %, al menos un 98 %, o incluso al menos un 100 %, en comparación con la actividad del microorganismo en ausencia de MSM.
Puede administrarse una cantidad terapéutica mente eficaz de una composición farmacéutica divulgada en una sola dosis, o en varias dosis, por ejemplo, a diario, durante un ciclo de tratamiento. Sin embargo, la cantidad terapéuticamente eficaz puede depender del sujeto que se esté tratando, de la gravedad y el tipo de la afección que se esté tratando, ydel modo de administración. Una cantidad terapéuticamente eficaz de un agente puede medirse como la concentración (moles por litro o molar, M) del agente en sangre (in vivo) o en un tampón (in vitro) que produce el(los) efecto(s) deseado(s). Como alternativa, puede medirse una cantidad terapéutica mente eficaz de un agente como la cantidad administrada a un sujeto por peso corporal del sujeto, por ejemplo, mg de agentelkg de peso corporal
Célula no tratada: Una célula que no se ha puesto en contacto con un agente deseado, tal como MSM. En un ejemplo, una célula no tratada es una célula que recibe el vehículo en el que se suministró el MSM. Vírus: Un organismo infeccioso microscópico que se reproduce dentro de las células. Un virus consiste esencialmente en un núcleo de ácido nucleico rodeado por una envoltura de proteína, y tiene la capacidad para replicarse únicamente en el interior de una célula viva. La quot;replicación víricaquot; es la producción de virus adicionales mediante la aparición de al menos un ciclo vital vírico. Un virus puede alterar las funciones normales de una célula hospedadora, haciendo que la célula se comporte de un modo determinado por el virus. Por ejemplo, una infección vírica puede dar como resultado que la célula produzca una citocina, o que responda a una citocina, cuando la célula no infectada normalmente no lo hace. En algunos ejemplos, un virus es un patógeno.
Los ejemplos específicos de patógenos víricos que pueden tratarse de acuerdo con los métodos y las composiciones divulgadas incluyen, sin limitación, uno cualquiera o más de (o cualquier combinación de): arenavirus (tales como el virus Guanarito, virus de Lassa, virus de Junin, virus de Machupo y Sabia), arterivirus, ronivirus, astrovirus, buniavirus (tales como el virus de la fiebre hemorrágica de Crimea-Congo y hantavirus), bamavirus, bimavirus, bornavirus (tales como el virus de la enfermedad de 80rna), bfomovirus, calcivirus, crisovirus, coronavirus (tales como el coronavirus y SARS), cistovirus, closterovirus, comovirus, dicislrovirus, flavivirus (tales como el virus de la fiebre amarilla, el virus del nilo occidental, el virus de la hepatitis C, y el virus de la fiebre del dengue), filovirus (tales como el virus del Ébola y el virus de Marburgo), flexivirus, herpesvirus (tales como el virus de la hepatitis E), adenovirus humanos (tales como adenovirus A-F humano), astrovirus humanos, poliomavirus 8K humanos, bocavirus humanos, coronavirus humanos (tales como el coronavirus humano HKU1 , NL63, Y OC43), enterovirus humanos (tales como los enterovirus A-D humanos), eritrovirus V9 humano, virus espumosos humanos, herpesvirus humanos (tales como el herpesvirus 1 humano (virus del herpes simple de tipo 1), herpesvirus 2 humanos (virus del herpes simple de tipo 2), herpesvirus 3 humanos (virus varicela zóster), herpes virus 4 humanos de tipo 1 (virus de Epstein-8arr de tipo 1), herpesvirus 4 humanos de tipo 2 (virus de Epstein-8arr de tipo 2), herpesvirus 5 humano, cepa AD169, herpesvirus humano, cepa Mer1in Strain, herpesvirus 6A humano, herpesvirus 68 humano, herpesvirus 7 humano, herpesvirus 8 humano de tipo M, herpesvirus 8 humano de tipo P Y citomegalovirus humano), virus de la inmunodeficiencia humana (VIH) (tales como VIH 1 y VIH 2), metaneumovirus humanos, papilomavirus humanos (tales como el papilomavirus-1 humano, papilomavirus-18 humano, papilomavirus-2 humano, papilomavirus-54 humano, papilomavirus-61 humano, papilomavirus-cand90 humano, papilomavirus RTR.X7 humano, papilomavirus humano de tipo 10, papilomavirus humano de tipo 101, papilomavirus humano de tipo 103, papilomavirus humano de tipo 107, papilomavirus humano de tipo 16, papilomavirus humano de tipo 24, papilomavirus humano de tipo 26, papilomavirus humano de tipo 32, papilomavirus humano de tipo 34, papilomavirus humano de tipo 4, papilomavirus humano de lipo 41 , papilomavirus humano de tipo 48, papilomavirus humano de tipo 49, papilomavirus humano de tipo 5, papilomavirus humano de tipo SO, papilomavirus humano de tipo 53, papilomavirus humano de tipo 60, papilomavirus humano de tipo 63, papilomavirus humano de tipo 6b, papilomavirus humallO de tipo 7, papiloma virus humano de tipo 71 , papilomavirus humano de tipo 9, papilomavirus humano de tipo 92, Y papilomavirus humano de tipo 96), virus parainftuenza humanos (tales como los virus de para influenza 1-3 humanos), parecovirus humanos, parvovirus humanos (tales como el parvovirus 4 humano y el parvovirus 819 humano), virus sincitial respiratorio humano, rinovirus humanos (tales como rinovirus A humano y rinovirus 8 humano), espumaretrovirus humanos, virus linfotróficos T humanos (tales como el virus 1 linfor1rófico T humano y el virus 2 linfotrófico T humano), virus polioma humanos, hipovirus, levivirus, luteovirus, virus de la coriomeningilis linfocítica (LCM), mamavirus, namavirus, nidivirus, nodavirus, ortomixovirus (tales como los virus de la gripe), partitivirus, paramixovirus (tales como el virus del sarampión y el virus de las paperas), picomavirus (tales como poliovirus, el virus del resfriado común, y el virus de la hepatitis Al, potivirus, poxivurs (tales como el virus de la varicela y de la viruela vacuna), sequivirus, reovirus (tales como rotavirus), rabdovirus (tales como el virus de la rabia), rabdovirus (tales como el virus de la estomatitis vesicular, tetravirus, togavirus (tales como el virus de la rubéola y el virus Ross River), tombusvirus, totivirus, timovirus, y norovirus, entre otros
En algunas realizaciones, se usa MSM para inhibir una actividad biológica de uno o más de los virus enumerados anteriormente.
Levadura: Un microorganismo eucariota clasificado en el reino de los hongos, con aproximadamente 1.500 especies descritas. La mayoría se reproducen asexualmente pOf gemación, aunque algunos se reproducen por bipartición. Las levaduras son generalmente unicelulares, aunque algunas especies pueden llegar a ser multicelulares mediante la formación de una hebra de células en gemación conectadas, conocida como seudohifa, o falsa hifa. Las levaduras ilustrativas que pueden usarse en los métodos y composiciones divulgados incluyen, pero sin limitación Saccharomyces cerevisiae, Gandida albicans, Schizosaccharomyces pamba, Pichia, Gryptococcus, Zygosaccharomyces, Torulopsis, Hansenula, y Debaryomyces.
111. Composiciones de MSM
En el presente documento se divulgan composiciones de MSM para su uso en la modulación de la actividad microbiana, tal como potenciar o reducir la actividad microbiana. En algunas realizaciones, una composición de MSM para su uso en la potenciación de la actividad microbiana incluye de aproximadamente un 0,02 % a aproximadamente un 5 % de MSM por peso del medio (tal como medio de cultivo) o en peso del contenido humedo del medio (tal como medio de cultivo), tal como de aproximadanete un 0,04 % a aproximadamente un 4 %, de aproximadamente un 1 % a aproximadamente un 3 %, incluyendo aproximadamente un 0,02 %, aproximadamente un 0,03 %, aproximadamente un 0,04 %, aproximadamente un 0,05 %, aproximadamente un 0,06 %, aproximadamente un 0,07 %, aproximadamente un 0,08 %, aproximadamente un 0,09 %, aproximadamente un 0,1 %, aproximadamente un 3 %, aproximadamente un 0,5 %, aproximadamente un 1 %, aproximadamente un 2 %, aproximadamente un 2,5 %, aproximadamente un 3 %, aproximadamente un 4 % o aproximadamente un 5 % del peso del medio o del contenido de humedad del medio. En algunos ejemplos, los porcentajes de MSM proporcionados en el presente documento se calculan a partir de la cantidad de un disolvente polar, por ejemplo, agua, en un producto. A modo de ejemplo, una composición con un 5 % de MSM en pesodel medio podria contener 5 gramos de MSM por cada 100 gramos de medio
o una composición con un 5 % de MSM en peso del contenido de humedad del medio podría contener 5 gramos de MSM por cada 100 gramos del disolvente polar en el medio, excluyendo los sólidos.
En algunas realizaciones, las composiciones divulgadas incluyen un medio capaz de soportar el crecimiento de un microorganismo, un microorganismo, y MSM. En algunos ejemplos, un medio incluye uno o más de los siguientes· productos que contienen probióticos, productos lácteos, leche, yogur, yogur de arroz, helado de yogur, chocolate, queso, bebidas fermentadas (tales como cerveza, sidra, vino) yagua. En algunos ejemplos, el medio también incluye otros productos, ya sean comestibles o no, que se benefician de la actividad microbiana potenciada.
En algunas realizaciones, potenciar la actividad microbiana incluye potenciar la fermentación de un microorganismo. Por lo tanto, en ejemplos particulares, una composición incluye un medio capaz de soportar el crecimiento de microorganismos fermentadores, un microOfganismo fermentadOf y MSM. En algunos ejemplos, se proporciona MSM a una concentración de aproximadamente un 0,04 % a aproximadamente un 5 %, tal como de aproximadanete un 0,1 % a aproximadamente un 4 %, de un 0,5 % a aproximadamente un 3 %, de aproximadamente un 1 % a aproximadamente un 2 %, incluyendo aproximadamente un 0,04 %, hasta aproximadamente un 0,05 %, aproximadamente un 0,06 %, aproximadamente un 0,07 %, aproximadamente un 0,08 %, aproximadamente un 0,09 %, aproximadamente un 0,1 %, aproximadamente un 0,3 %, aproximadamente un 0,5 %, aproximadamente un 0,7 %, aproximadamente un 1 %, aproximadamente un 1,5 %, aproximadamente un 2,0 %, aproximadamente un 2,5 %, aproximadamente un 3,0 %, aproximadamente un 4 %, o aproximadamente un 4,5 % de MSM en peso de medio o en peso del contenido de humedad del medio, en el que la concentraciórJ de MSM es eficaz para potenciar la fermentación de los microorganismos. En algunas rea lizaciones, las composiciones divulgadas se usan para producir una bebida fermentada, tal como cerveza, sidra ylo vino. En algunas realizaciones, una composición para potenciar la eficacia de la fermentación incluye MSM añadido a paquetes de levadura para generar una levadura rápida o de activadon rápida para uso doméstico o comercial
En algunas realizaciones, potenciar la actividad microbiana incluye potenciar el crecimiento de probióticos. POf lo tanto, en algunos ejemplos, una composición para potenciar el crecimiento de probióticos incluye un medio capaz de soportar el crecimiento de probióticos y MSM a un aconcentración de aproximadamente un 0,04 % a aproximadamente un 5 % en peso del medio o en peso del contenido húmero del medio, en el que la concentración de MSM es eficaz para potenciar la actividad (por ejemplo, el crecimiento) de los probióticos. Además, una composición para potenciar el crecimiento de los probióticos incluye de aproximadamente un 0,04 % a aproximadamente un 5 % de MSM, tal como de aproximadanete un 0,1 % a aproximadamente un 4 %, de un 0,5 % a aproximadamente un 3 %, de aproximadamente un 1 % a aproximadamente un 2 %, incluyendo aproximadamente un 0,04 %, hasta aproximadamente un 0,05 %, aproximadamente un 0,06 %, aproximadamente un 0,07 %, aproximadamente un 0,08
%, aproximadamente un 0,09 %, aproximadamente un 0,1 %, aproximadamente un 0,3 %, aproximadamente un 0,5 %, aproximadamente un 0,7 %, aproximadamente un 1 %, aproximadamente un 1,5 %, aproximadamente un 2,0 %, aproximadamente un 2,5 %, aproximadamente un 3,0 %, aproximadamente un 4 %, o aproximadamente un 4,5 % de MSM en peso de medio o en peso del contenido de humedad del medio.
En algunas realizaciones, potenciar la actividad microiana incluye potenciar la producción microbiana de biocombustible. Por lo tanto, en algunos ejemplos, una composición para potenciar la producción microbiana de biocombustible incluye un medio capaz de soportar el crecimiento de algas, algas capaces de producir un biocombustible y MSM a una concentración de aproximadamente un 0,04 % a aproximadamente un 5 %, tal como de aproximadanete un 0,1 % a aproximadamente un 4 %, de un 0,5 % a aproximadamente un 3 %, de aproximadamente un 1 % a aproximadamente un 2 %, incluyendo aproximadamente un 0,04 %, hasta aproximadamente un 0,05 %, aproximadamente un 0,06 %, aproximadamente un 0,07 %, aproximadamente un 0,08 %, aproximadamente un 0,09 %, aproximadamente un 0,1 %, aproximadamente un 0,3 %, aproximadamente un 0,5 %, aproximadamente un 0,7 %, aproximadamente un 1 %, aproximadamente un 1,5 %, aproximadamente un 2,0 %, aproximadamente un 2,5 %, aproximadamente un 3,0 %, aproximadamente un 4 %, o aproximadamente un 4,5 % de MSM en peso de medio o en peso del contenido de humedad del medio, en el que la concentración de MSM es eficaz para potenciar la producción del biocombustible a partir de las algas. En otros ejemplos, una composición incluye algas y MSM, y opcionalmente otros ingredientes para potenciar el crecimiento de las algas. En varias realizaciones, la composición es útil para potenciar la actividad de las algas para biocombustible, cultivo de algas, acuicultura, medicamentos, etc. En una realización, el método comprende exponer a las algas a MSM a, por ejemplo, una concentración de aproximadamente un 0,04 % a aproximadamente un 5 % en peso del medio o en peso del contenido de humedad del medio
Se divulgan composiciones de MSM para inhibir la actividad microbiana. En algunos casos, una composición de MSM para inhibir la actividad microbiana incluye de aproximadamente un 6 % a aproximadamente un 17 %, tal como de aproximadanete un 7 % a aproximadamente un 15 %, de aproximadamente un 10 % a aproximadamente un 12 %, tal como aproximadamente un 6 %, aproximadamente un 7 %, aproximadamente un 8 %, aproximadamente un 9 %, aproximadamente un 10 %, aproximadamente un 11 %, aproximadamente un 13 %, aproximadamente un 14 %, aproximadamente un 15 %, o aproximadamente un 16 % de MSM en peso de medio o en peso del contenido de humedad del medio, en el que la concentración de MSM es eficaz para inhibir la actividad microbiana, incluyendo, pero sin limitación, el crecimiento microbiano, la tasa de infección, o una combinación de los mismos.
Se contempla que cualquiera de las composiciones divulgadas que incluyen MSM para modular la actividad microbiana tienen una concentración de cloruro sódico de menos del5 % del contenido de humedad total del medio, tal como de aproximadamente un 1 % a aproximadamente un 3 % de cloruro de sodio, incluyendo un O %. 0,1 %, 0,3 %, 0,5 %, 0,75 %, 1 %, 2 %, 2,5 %, 3 % o 4 %. En algunos ejemplos, una composición de MSM divulgada no tiene conservantes. Por ejemplo, se añade MSM a un alimento, un producto cosmético o una bebida que necesite o en el que se desee una lista de ingredientes totalmente natural. En algunas realizaciones, una composición de MSM consiste o consiste esencialmente en MSM e ingredientes totalmente naturales no tóxicos. En otros ejemplos, una composición de MSM divulgada incluye uno o más conservantes adicionales. Los conservantes incluyen, pero sin limitación, uno o más o una combinación de los siguientes: formaldehído, sorbato de potasio, metilparabeno, metilcloroisotiazolinona, ftalatos, cocamidopropil betaina, parabenos, decil poliglucosa, poliaminopropil biguanida, fenoxietanol, lauril éter sulfato sódico, tetrasodio EDTA, decil glucósido, polietilenglicol, y propilenglicol.
En varios ejemplos, se usa MSM para prolongar la vida útil de productos y es capaz de reducir la actividad microbiana en al menos un factor 2, 3,4,5, 10,25, 50, 100, o 1000 en comparación con productos sin MSM o en comparación con productos con menos agentes antimicrobianos eficaces. En otros ejemplos, MSM es capaz de lograr niveles comparables de actividad antimicrobiana en comparación con agentes que producen efectos secundarios no deseados. Por lo tanto, en un ejemplo, puede usarse MSM en lugar de un conservante no deseado. En varios ejemplos, las composiciones incluyen fonnulaciones sin conservantes o con cantidades reducidas de conservante que comprenden MSM.
En varias realizaciones, se usa MSM en productos (por ejemplo, cosméticos) que tienen un pH ácido, básico o neutro. Debido a que MSM puede inhibir la actividad microbiana, los cosméticos y otros productos pueden tener más flexibilidad en la selección del pH. Por lo tanto, puede seleccionarse un pH que sea óptimo para el producto. En varias realizaciones, los compuestos que comprenden MSM no requieren refrigeración y pueden almacenarse a temperatura ambiente. En otras realizaciones, los productos que comprenden MSM no requieren esterilización, incluyendo, pero sin limitación, esterilización mediante químicos, calentamiento, radiación, filtración o luz ultravioleta.
En varias realizaciones, las composiciones divulgadas incluyen MSM además de uno o más agentes espesantes, emolientes, ylo agentes aromáticos. En algunas realizaciones, se complementa un producto u otro medio con adiciones continuas o periódicas de MSM para, por ejemplo, extender las acciones inhibidoras o estimulantes de MSM
En detenninados ejemplos, la adición de MSM es un agente antimicrobiano eficaz. Por ejemplo, en un ejemplo, una composición que comprende MSM tiene el mismo efecto antimicrobiano o uno potenciado en comparación con una fonnulacián sin MSM. En otros ejemplos, MSM sirve como agente antibacleriano. En detenninados ejemplos, se usa MSM como sustituto de un conservante alimentario químico. En otros ejemplos más, puede usarse MSM en combinación con un conservante. En algunos de estos ejemplos, el uso de MSM reduce la cantidad de, o reemplaza por completo, a los conservantes tradicionales. En algunos ejemplos, MSM puede aumentar la vida útil de un producto, incluyendo productos que tradicionalmente no tendrían un conservante. En otros ejemplos más, MSM sirve como viricida , fungicida ylo bactericida. En ejemplos adicionales, MSM es un bacteriostático. En algunos ejemplos, MSM es un inhibidor de amplio espectro de la actividad microbiana. En otros ejemplos, MSM elimina de manera selectiva a un reino, género o especie determinada. En algunos ejemplos, MSM inhibe de manera selectiva a bacterias aerobias. En otros ejemplos, MSM inhibe de manera selectiva a bacterias anaerobias. En algunos ejemplos, MSM inhibe selectivamente a bacterias grampositivas. En otros ejemplos, MSM inhibe selectivamente a bacterias gramnegativas.
En varios ejemplos, se usa MSM para inhibir el crecimiento de microorganismos, incluyendo aquellos usados en cosméticos, complementos de salud y belleza, parenterales, productos usados por vía tópica, y productos orales. En varios ejemplos, se usa MSM para inhibir el crecimiento de microorganismos en productos envasados en contenedores mono o multidosis. Las formulaciones de MSM de acuerdo con varios de los ejemplos descritos en el presente documento se encuentran en cualquier forma adecuada, incluyendo, pero sin limitación, en forma de polvo, crema, líquido, pasta, sólido o gel.
En varios ejemplos, se añade MSM a productos cosméticos susceptibles a la contaminación microbiana. Los cosméticos pueden incluir, pero sin limitación, barra de labios, bri llo de labios, perfilador de labios, voluminizante de labios, bálsamo labial, acondicionador labial y voluminizantes de labios, bases, polvo, colorete, brillos, bronceador, máscara, perfilador de ojos, sombra para ojos, reflejo para ojos, lápices de brillo para ojos, lápices para cejas, barniz para uñas, corrector, productos para el cuidado de la piel, cremas, lociones, serums, hidratante, protectores solares, productos para reparar la piel (por ejemplo, para el acné, eritrema solar, arrugas, manchas), y filtro solar.
En varios ejemplos, se añade MSM a una matriz de crema cosmética susceptible de contaminación microbiana En algunos ejemplos similares, la crema incluye jojoba, aloe vera, manteca de cacao, manteca de karité, aceite de coco, o combinaciones de los mismos.
En varios ejemplos, se añade MSM a productos para el cuidado personal susceptibles a la contaminación microbiana. Dichos productos incluyen productos para las necesidades de hidratación diarias, productos para tratar la psoriasis o el eccema, productos para tratar la piel seca o con picor, productos para tratar las quemaduras a causa del sol y del viento, productos para antes y después del afeitado, aceites o cremas de masaje, lubricantes personales, productos para el tratamiento del acné y exfoliantes o emolientes. De acuerdo con otros ejemplos, se añade MSM a productos para suavizar la piel, las manos o los pies (tal como callos), productos para el cuidado de la piel después de nadar, desmaquillantes, lociones para la piel infantiles, y crema para el eccema del pañal. En algunos ejemplos, MSM inhibe la contaminación a la vez que simultáneamente confiere un efecto cosmético beneficioso o un beneficio para la salud
En varios ejemplos, se añade MSM a productos o equipos medicinales susceptibles a la contaminación microbiana Los productos medicinales incluyen, pero sin limitación, agentes y tratamiento para la prevención del resfriado o de la gripe, agentes y tratamiento para la prevención de la alergia, irrigaciones nasales, gotas medicinales, gotas para los ojos, inhaladores, tratamientos para el pie de atleta, medicaciones para las erupciones del herpes y el herpes labial, cremas para quemaduras, pomadas para cortes e infecciones, y pulverizadores o lociones bactericidas, fungicidas y virucidas. En algunos ejemplos, se usa MSM para inhibir la actividad microbiana en inhaladores, nebulizadores, ventiladores, catéteres, jeringas, tubos para intubación, equipamiento para habitaciones, muebles y superficies de hospital, equipos diagnósticos, tejidos, ropa de cama, y colchas para pacientes. En varios ejemplos, se usa MSM para desinfectar tejidos y fluidos corporales. Por ejemplo, puede usarse MSM como parte de un sistema de diálisis para inhibir la actividad microbiana en la sangre, lo que puede ser particularmente útil para pacientes con septicemia. En otros ejemplos, se inyecta MSM a un paciente para inhibir la actividad microbiana local o sistémicamente. En otras realizaciones, se aplica tápicamente una composición que incluye MSM a una inección microbiana presentada sobre una superficie dérmica.
En algunos ejemplos, los productos de MSM se usan por vía nasal En otras realizaciones, dichos productos se usan por vía oral ylo en forma de vapor. En otras realizaciones adicionales, el producto es una gota para los ojos u otro producto medicinal para los ojos de uso repetido.
En varios ejemplos, se añade MSM a productos medicinales usados para prevenir o tratar infecciones fúngicas. En algunos ejemplos similares, el producto se usa para prevenir o tratar el pie de alleta. En algunos ejemplos, el producto se usa por vía tópica. En algunos ejemplos similares, el producto es una crema, pomada, pulverizador, gel o polvo. En otros ejemplos, el producto se usa por vía oral.
En varías ejemplos, MSM ínhíbe la activídad de las mícotoxínas, metabolítos tóxícos producidos por un organísmo del reino de los hongos, incluyendo setas, mohos, y levaduras. Los productos que comprenden MSM también son útiles para descontaminar superficies y equipamiento que son susceptibles a la contaminación por dichos organismos ylo metabolitos. En algunos ejemplos, MSM inhibe la actividad de organismos del reino de los hongos (por ejemplo, setas, mohos, y levaduras). En otros ejemplos más, MSM inhibe directa y/o indirectamente las toxinas de microbios inhibiendo la actividad de los microbios En un ejemplo, MSM inhibe la formación ylo la liberación de metabolitos microbianos.
En varios ejemplos, se añade MSM a productos usados para prevenir o tratar infecciones víricas. En un ejemplo, se proporcionan pulverizadores nasales antivíricos que comprenden MSM. Los productos que comprenden MSM también son útiles para descontaminar superficies y equipamiento que son susceptibles a la contaminación por virus. En un ejemplo, se usa MSM para inhibir al virus de la gripe, incluyendo el H1 N1, ya sea en un tejido biológico o en una superficie externa. En algunos ejemplos, se usa MSM para inhibir el virus de la inmunodefidencia humana, el virus del herpes simple, el virus del papiloma, el virus de la para influenza, el virus de la gripe, de la hepatitis y olros
En algunos ejemplos, MSM inhibe a las algas. En un ejemplo, MSM inhibe los brotes de algas. En algunos ejemplos, MSM inhibe la actividad no deseada del fitoplancton. En otros ejemplos, MSM inhibe a las especies macroalgales. En otro ejemplo, MSM inhibe a los dinoflagelados de los géneros Alexandrium y Karenia. En varios ejemplos, MSM inhibe los metabolitos tóxicos (incluyendo subproductos) de algas
En algunos ejemplos, se añade MSM a productos medicinales usados para tratar una quemadura, corte o herida. Las heridas pueden incluir, pero sin limitación, laceraciones, laceraciones abiertas, sobreesliramientos, compresión de molienda, laceraciones por cortes, desgarros, incisiones heridas incisivas, abrasiones, heridas punzantes, heridas penetrantes. En algunos ejemplos, se incorpora MSM en un vendaje usado para cubrir una herida. En otros ejemplos, se añade MSM a una crema o pomada En algunos ejemplos similares, el producto formulado con MSM actúa como antiséptico.
La microflora de la piel (bacterias, hongos, virus, fago, arqueas) desempeñan un papel significativo en las afecciones dermatológicas comunes, lales como la dermatitis atópica (una forma común de eccema). Normalmente, un microbio específico coloniza la piel para alterar el equilibrio de la microflora comensal, o los microbios liberan sustancias tóxicas
o invaden células para inducir directamente una respuesta inflamatoria. Por 10 tanto, en algunos ejemplos, se incorpora MSM en un producto tópico que inhibe el crecimiento de dicha microflora. En otros ejemplos se proporciona la administración subcutánea de MSM.
En otros ejemplos, se añade MSM a productos ópticos susceptibles a la contaminación microbiana ylo a productos ópticos para potenciar su actividad antimicrobiana. Los productos ópticos pueden incluir soluciones para limpiar o desinfectar lentes de contacto. En algunos ejemplos similares, se incorpora MSM en diversos productos aplicados a lentes de contacto, tal como una solución de conservación de lentes de contacto. En algunos ejemplos, se añade MSM a gotas para los ojos usadas en conjunción con lentes de contacto. En otros ejemplos, se añade MSM a soluciones químicas usadas en procedimientos de diagnóstico ocular, tales como solución de dilatación de pupilas multiusos
En varios ejemplos, se añade MSM a productos orales susceptibles a la contaminación microbiana ylo a productos orales para potenciar su actividad antimicrobiana. En algunos ejemplos, dichos productos se utilizan para la higiene dental. En algunos ejemplos, se incorpora MSM en pasta o gel dentífrico. En algunos ejemplos, se incorpora MSM en
o se recubre sobre las cerdas de un cepillo de dientes. En otros ejemplos, las formulaciones de MSM se incorporan en
o se usan para recubrir la seda dental. En otros ejemplos, el producto se usa para limpiar la lengua. En airas ejemplos, el producto es un colutorio, un enjuague bucal o una irrigación para la boca para uso dental doméstico o profesional. En otros ejemplos más, el producto es un chicle o un articulo de confiteria. En algunos ejemplos, se añade MSM a soluciones de almacenamiento o limpieza para implantes dentales, dentaduras, y similares
En algunas realizaciones, se añade MSM a alimentos que contienen organismos probióticos, tales como leche, yogur, yogurde arroz, helado de yogur, kéfir, zumo, vegetales encurtidos, col fermentada, pasta de alubias fermentada, olivas en salmuera, chocolate, quesos y airas productos lácteos, y determinados cereales. En algunas realizaciones, se añade MSM a productos que son complementos dietéticos, incluyendo, pero sin limitación, píldoras, cápsulas y liquidos probióticos. En algunas de dichas realizaciones, se añade MSM a un suplemento para consumo humano. En otras realizaciones, se añade MSM a un suplemento para animales. En algunas rea lizaciones, se añade MSM a un producto que se formula como una cápsula o un comprimido. En algunas realizaciones, se añade MSM a un producto que se formula como un sólido o un liquido. En otras realizaciones, se añade MSM a un alimento durante el proceso de producción, mienlras que, en otras realizaciones, se añade MSM a productos alimentarios terminados
En varios ejemplos, se añade MSM a un producto alimentario que es susceptible a la infección microbiana. En algunos ejemplos, MSM puede mezclarse, premezclarse, componerse, o de otro modo incorporarse en el producto alimentario. En otros ejemplos, MSM se aplica a la superficie de un producto alimentario. Por ejemplo, en algunos ejemplos, puede rociarse MSM sobre un producto alimentario. Dichos productos alimentarios pueden incluir, pero sin limitación, frutas, vegetales, pescados y productos cámicos. En algunos ejemplos, se usa MSM en las instalaciones de procesado o envasado para prolongar la vida útil de los productos alimenta rios. En varios ejemplos, la adición de MSM (por ejemplo, de aproximadamente un 5 % a aproximadamente un 25 %) aumenta el tiempo hasta el deterioro de los productos íngeríbles. Por ejemplo, el MSM puede hornearse en o añadírse a panes, pastas, o masas para aumentar la vida útil de los productos comestibles en aproximadamente un 10 % a un 100 % (por ejemplo, 20 %, 30 %, 40 %, 50 %, 75 %, 150 %, 200 % o más). Por ejemplo, en un ejemplo, en caso de que la vida útil de un producto comestible sea de 10 días, la adición de MSM aumentará la vida útil a al menos 11 días en algunos ejemplos (por ejemplo, 11
días, 14 días, 15 días, 20 días, o 25 días). A modo de ejemplo adicional, en caso de que un producto comestible tenga una vida útil de 14 días a temperatura ambiente ylo de 30 días en la nevera ylo de 3 meses en el congelador, la adición
de MSM aumentará la vida útil a 30 días a temperatura ambiente y/o a 60 días en el refrigerador y/o a 6 meses en el congelador. En ejemplos adicionales, el uso de MSM permitirá el envío y/o almacenamiento de un producto comestible a temperatura ambiente, donde de lo contrario, el producto tendría que enviarse ylo almacenarse a temperaturas más frías. En otros ejemplos más, el uso de MSM obviará la necesidad de esterilización de los productos comestibles.
En algunos ejemplos, cualquiera de las composiciones de MSM divulgadas consiste esencialmente en agua. Por ejemplo, el MSM es particularmente útil cuando se combina con agua u otros componentes líquidos. En algunos ejemplos, una composición de MSM divulgada no contiene blanqueantes, no contiene alcoholes o una combinación de los mismos. En varias realizaciones, una composición para modular la actividad microbiana incluye un compuesto relacionado con el MSM en lugar de o además de MSM. Los compuestos relacionados incluyen, pero sin limitación, DMSO y dimetilsulfuro (DMS)
El MSM usado de acuerdo con cualquiera de las realizaciones proporcionadas en el presente documento puede estar aislado, purificado o procesado. se usa MSM que se designa como GRAS (reconocido generalmente como seguro, por sus siglas en inglés) para varias realizaciones descritas en el presente documento. De acuerdo con varias realizaciones, en el presente documento se proporcionan formulaciones para su consumo por seres humanos, animales domesticados y animales de granja
En algunas rea lizaciones, se combina MSM con uno o más de los siguientes ingredientes (o derivados, metabolitos, precursores, aceites, extractos, ésteres, ácidos, sales, y compuestos relacionados de los mismos): ácido abiético, goma arábiga, goma arábiga de Senegal, extracto de acai, ácido acético, acetona, acetilglucosamina, extracto de Acmella o/eracea, Adenophora strieta, AJaria marginata (vegetal marino), albúmina, alcohol, aldenina, alfalfa, extracto de algas, alquil guanina transferasa, alquiloamidas, alantoina, hidróxido de aluminio, almendra, aloe vera, ácido alfa-lipoico, benzoato de aluminio, cloruro de aluminio, aminoácidos, ácido aminopropano sulfónico 3, glicolato de amonio, lauril sulfato de amonio, extracto de raíz de Anemarrhenae asphode/oides, aceite de anís, antioxidantes, apigenina, albaricoque, hueso de albaricoque, ácido araquidónico, arbutina, aceite de argán, extracto de hoja de Argania spinosa, arginina, argirelina, extracto de arnica, aceite de Artemisia dracuncu/us (estragón), ácido ascórbico, palmitato de ascorbilo, tetraisopalmitato de ascorbilo, fermento de Aspergillus, Aspidosperma quebracho, astaxantina, atelocolágeno, extracto de germen de Avena sativa (avena), avobenzona, ácido azélico, judías adzuki, extracto balsámico de menta, bálsamo perú, extracto de tallo de bambú, extracto de cebada (Hordeum vu/gare), sulfato de bario, cebada, albahaca, polen de abeja, cera de abeja, bentonita, peróxido de benzoílo, extracto de raíz de Beta vu/garis(remolacha), betacaroteno, arándano, biotina, oxicloruro de bismuto, extracto de sargazo vesiculoso, aceite de borraja, ácido bórico, óxido bórico, líquido de placenta bovina, levadura de celVecero, bronopol, acetato de butilo, estearato de butilo, hidroxianisol butilado, hidroxitolueno butilado, butilenglicol, butil parabeno, Butyrospermum parkii, triglicérico ácido C18-36, cafeína, calamina, calcio, extrácto de caléndula, cera camauba, extracto de hoja de Camellia o/eifera, extracto de hoja de Camellia sinenis, canfor, aceite de flor de Canaga adorata (ylang ylang), cera candeli lla, cerca candelilla, esteroles de colza, ácido caprílico, triglicérido capri licolcáprico, caprililglicol, caprililglicol, Capsicum o/eoresin, caramelo, cannín, carotenoides, carragenano, aceite de zanahoria, aceite de semilla de zanahoria, aceite de semilla de Carthamus tinctorius (cártamo), aceite de ricino, celulosa, Centella asiatica, Ca/endu/a officina/is, cera alba, cera camauba, ceramida, cerebrósidos, ferrocianuro de amonio cérico, ceteareth-3, alcohol cetearilico, glucósido cetearilico, olivato cetearílico, alcohol cetilico, alcohol cetilico, aceite de camomila, extracto de flor de Chamomilla recutita (matricaria), castaña, extracto de castaña, cloroxilenol, clorfenesina, colesterol, colina, Chondrus crispus (musgo irlandés), verde de hidróxido de cromo, verdes de óxido de cromo, alcohol cinamílico, ácido cítrico, citronelol, citricos, aceite de Citrus nobilis (mandarina verde), clavo en polvo, extracto de flor de clavo, coconato de glicerilo, cocamidopropil betaína, cacao, manteca de cacao, caprilatolcaprato, aceite de coco, cera de coco, aceite de hígado de bacalao, coenzima q10, colágeno, extracto de consuelda, extracto de equinácea, cera de Copernica cerifera (camauba), cobre, cilantro, aceite de Coriandrum sativum (cilantro), almidón de maíz, extracto de flor de maíz, creatina, extracto de Crithmum maritimum, pepino, ciclometicona, ciclopentasiloxano, dantoína 685, decil glucósido, agua desionizada, diazolidinil urea, fosfato dicálcico deshidratado, carbonato de dicaprililo, dietanolamina, dilaurato, dimeticona, dimetilaminoetanol, extracto de raíz de Dioscorea vil/osa (batata silvestre), glicirrizinato dipotásico, diestirilbifenil disulfonato disódico, edta disódico, dmdm hidantoína, extracto de Echinace angustifolia (equinácea), edta, rosa eijitsu, E/aeis o/eifera, elastina, flor de saúco, emolientes, enzimas, extracto de Epi/obium fleischeri (sauce de la grava), extracto de hoja de Equisetum hiema/e (cola de caba llo), erucate, ácidos grasos esenciales, aceites esenciales, etanol, etoxidiglicol, acetato de etilo, copolímero de etileno/ácido acrílico, pamitato de etilhexilo, etilhexilglicerina, etilparabeno, extracto de eucalipto, eukarion, extracto de fruto de Eutelpe o/eracea, aceite de onagra, exfoliantes, ácidos grasos, alcoholes grasos, aceite de hinojo, óxido férrico, flavanoides, flavonolignano, aceites de pescado, lino, floralozona, fluoruro, formaldehído, ácidos de frutas, extracto de frutas, extractos de frutas, gaba, ácido gamma linolénico, gelatina, geraniol, aceite de geranio, Gigartina papillata (algas salvajes), jengibre, aceite de jengibre, aceite de Ginko biloba, ginseng, glucosamina, glucosa oxidasa, azúcar de glucosa, glicereth, glicereth-26, glicerina, glicerol, eslearalo de glicerol, rosinalo hidrogenado de glicerilo, olealo de glicerilo, eslearalo de glicerilo, diestearato de glicol, ácido glicólico, oro, extracto de hidrastis, semilla de uva, aceite de semilla de uva, pomelo, aceite de pomelo, extracto de semilla de pomelo, té verde, gomas, aceite de avellana, crospolímero de hcjiltrimetilolhexillactona, aceite de semilla de cáñamo, hexamidina, hexilenglicol, homosalalo, miel, extracto de Hordeum distychum, ácido hordihidroguaiarético, honnonas, humectante, extracto de Humulus lupu/us, ácido hialurónico, extracto de Hydrastis canadensis (hidrastis), hidrocortisona, extracto de hidrocotilo, laurato de aceite de colza hidrogenada, poliisobuteno hidrogenado, poliisobuleno hidrogenado, proteína animal hidrolizada, keratina
hidrolizada, goma rizobiana hidrolizada, proteína de soja hidrolizada, proteína de trigo hidrolizada, hidroxiácidos, hidroxietilcelulosa, hidroxietilcelulosa, hidroxiisohexil 3-ciclohexeno carboxaldehído, hidroxipropil-celulosa, hidroxipropiltrimonio miel, hidroquinona, hidroxiestearato, extracto de hipérico, idebenona, imidazolidinil urea, yodo, musgo irlandés, óxidos de hierro, isobutlparabeno, isododecano, isohexadecano, isononanoato de isonooilo, isopentildiol, alcohol isopropí1ico, lanolato isopropílico, linoleato isopropí1ico, miristato de isopropilo, isoestearato, ácido isoesteárico, extracto de hiedra, aceite de jazmín, manteca de jojoba, aceite de jojoba, extracto de enebro, aceite de enebro, caolín, queratina, cetonas, cinerasa, cinetina, ácido kójico, aceite de nuez kukui, ácido láctico, lactoperoxidasa, extracto de hoja de manto de dama, extracto de Laminaria digitata (quelpo), lanolina, extracto de madera de Larix sibirica, laura mida, laurato, laureth, alcohol laurí1ico, glucósido de laurilo, lavanda, aceite de lavanda, lecitina, aceite de limón, regalíz, aceite de lima, limooeno, extracto de tilo, ácido linoleico, ácido linolénico, liposomas, algarroba, extracto de fruto de Lycium barbarum, extracto de fruto de Lycium barbarum (bayas de goji), licopeno, aceite de nuez de macadamia, matcha, silicato de aluminio y magnesio, ascorbil fosfato de magnesio, miristato de magnesio, estearato de magnesio, sulfato de magnesio (sales de Epsom), extracto de fruto de Malpighia punicifolia (acerola), violeta de manganeso, manteca de mango, caléndula, extracto malvavisco, polvo de té matcha, aceite de matricaria, mea, reina de los prados, aceite de melaleuca, extracto de melón, extracto de Mentha piperita (menta orgánica), mentol, acetato de metilo, metil etil cetona, dihidrojasmonato de metilo, metilparabeno, mica, compuestos de microdermoabrasión, proteína láctica, minerales, aceite mineral, mipa, monoetanolamina, monoestearato, mootmorillonita (arcilla verde), extracto de artemisa (Artemisa vulgaris ), mora, extracto de raíz de mora (Morus nigra), murumuru, setas, miristato, miristato, ácido mirístico, miristato de miristilo, aceite de Myrtus communis (mirto verde), n-acetil glucosamina, polvo de nefrita, aceite de neroli, hoja de ortiga, neuropéptidos, niacina, nitrosaminas, nonil nonoxinol-150, ácidos nucleicos, polvo de nuez moscada, nuez, avena, harina de avena, avena, aceite de linalol de Ocimum basi/icum (linalol de albahaca), octinoxato, octsalato, oleato, ácido oleico, alcohol oleílico, oligopéptidos, oligosacáridos, extracto de fruto de la oliva, aceite de oliva, omega-3, aceite de piel de naranja, ácido ortobórico, oxibenzona, ozoquerita, extracto de talo de Padina pavonica, aceite de palma, palmitato, ácido palmítico, palmitoilo, pantetina, pantenol, ácido para-aminobenzoico, parabeno, parafina, extracto de fruto de Passiflora incarnata, fruta de la pasión, pachulí, hueso de melocotón, extracto de turba, pectina, peg, menta, aceite de menta, péptidos, vaselina, extracto de corteza de Phel/odendron amurense, fenoxietanol, fenil trimeticona, fen iletil resorcinol, ácido fosfórico fitoquímicos, derivado de extracto del pino, extracto de pina, extracto de hoja de Plantago lanceo/ata, extracto de hoja de plátano, extracto de polen, extracto de raíz de Polygonum cuspida/um, polipéptidos, polisacáridos, polisilicona, polisorbato, polisorbato, polivinilpirrolidona, progesterona, propilenglicol, caprilato de propilheptilo, propilparabeno, extracto de semilla de calabaza, extracto de Punica granatum (granada), extracto de Punica granatumlPunica grana/um, picnogenol, quatemium-15, extracto de corteza de Quillaja saponaria OaOOn), extracto de quillia, reserveratol, ácido retinoico, retinoides, retinol, palmato de retinilo, extracto de fruto de Ribes rubrum, arroz, cera de salvado de arroz, ricinoleato, aceite de rosa, escaramujos, romero, aceite de romero, agua de rosas, jalea real, extracto de fruto de Rubus vilfosus, Saccharum officinarum (caña de azúcar), ácido salicilico, salvia, aceite de sándalo, saponinas, sasafrás, palo de sierra, extracto de Saxifaga sarmentose, esclareolida, extracto de Scutellaria baica/ensis, algas marinas, extracto de semilla de Seca/e cerea/e (centeno), extracto de Se/aginella tamariscina (espiga de musgo), selenio, aceite de sésamo, sesquioleato, hierba de afeitar, manteca de karité, silibinina, sílice, silicona, sirtuinas, alginato de sodio, ascorbato sódico, bisulfato sódico, borato sódico, carbonato de sodio, cloruro de sodio, citrato de sodio, deshidroacetato de sodio, etilparabeno de sodio, glicirretinato de sodio, hialuronato de sodio, lactobionato de sodio, lauril sulfato sódico, metilparabeno sódico, poliestireno sulfonato de sodio, propilparabeno sódico, estearato sódico, tioglicolato sódico, acrilodimetil laurato sódico, isoestearato de sorbitán, olivato de sorbitán, sesquioleato de sorbitán, estearato de sOrbitán, sorbitol, sOrbitol, soja, cera de soja, aceite de soja, aceite de hierbabuena, escualano, hierba de san Pablo/san Juan, estearato, células madre, estearato de sacarosa, extracto de caña de azúcar, sulfato, aceite de semilla de girasol, aceite de almendras dulces, extracto de hoja de Symphytum officina/e (consuelda), extracto de hoja de Symphytum officina/e, fluorllolopita sintética, extracto de semilla de Tamarindus indica, aceite de árbol de té, extracto de tomillo, óxido de estaño, dióxido de titanio, dióxido de titanio, tocoferol, acetato de tocoferilo, acetato de tocoferilo, tolueno, tomate, tragacanto, tretinoina, tribehenina, tridosano, trimelitato de tridecilo, trietanolamina, trihidroxiestearina, citrato de triisoestearilo, trrisoestearato de trimetilolpropano, trimetilsililoxisilicato, trimiristato, tripéptido, cúrcuma, tirosina, ubiquinona, ultramarinos, undecilenoil fenilalanina, urea, uridina, extracto de fruto de Vaccinium macrocarpon, glicerina vegetal, aceite de vetiver, vitamina A, vitamina 81-812, vitamina e, éster de vitamina e, vitamina D, vitamina E, vitamina K, vitaminas, polvo de cascara de nuez, agua, aceite de germen de trigo, proteína de suero de leche (proteína láctica), extracto de corteza de abedul blanco, corteza de sauce, aceite de gaulteria, hamamelis, goma de xantano, goma de xantano, extracto de milenrama, levaduras, yerba mate, yuca, óxido de cinc , estearato de cinc.
En algunas realizaciooes, la composición comprende, consiste o consiste esencialmente en MSM en combinación con uno, dos, tres, cuatro, cinco o más de los ingredientes anteriormente identificados. En varios ejemplos, MSM inhibie la actividad microbiana en la formulación. En otros ejemplos, MSM ofrece el mismo o un mejor efecto antimicrobiano cuando se usa para reemplazar un conservante en la formulacíón (algunos de los cuales se han ídentíficado anteriormente). En determinados ejemplos, MSM ofrece el mismo o un mejor efecto antimicrobiano cuando se usa con una cantidad reducida de cooservante. En otros ejemplos más, la adición de MSM a una formulación que tiene un conservante potencia los efectos del conservante. Los ingredientes identificados en el presente documento pueden usarse con MSM en una formulación cosmética (por ejemplo, oral, inyectable, o tópica), o en otros tipos de formulaciones (por ejemplo, formulaciones médicas orales, inyectables o tópicas)
En algunas realizaciones, la composición incluye MSM, pero carece de uno o más de los siguientes compuestos· sulfatos, GMO, fragancias sintéticas, colorantes sintéticos, formaldehído, sorbato de potasio, metilparabeno, metilcloroisotiazolinona, cocamidopropilbetaína, parabenos, decil po1iglucosa, poliaminopropil biguanida, fenoxietanol, lauril éter sulfato sódico, tetrasodio EDTA, decil glucósido, polietilenglicol, propilenglic~, ftalatos, y tridasano. En algunas rea lizaciones, el uso de MSM permite la producción de una formulación que carezca de cualquier ingrediente sintético. En otras realizaciones adicionales, el uso de MSM permite la producción de una formulación que carezca de cualquier ingrediente causante de alergias, inmunosupresor yfo inflamatorio.
En varios ejemplos, las propiedades antimicrobianas del MSM reducen o eliminan la necesidad de esterilización, temperaturas reducidas, ambientes estériles, cierres especiales, yfo envasado especial, etc. MSM tiene una función dual o multipropósito de acuerdo con algunas realizaciones. Por ejemplo, MSM no solo inhibe el crecimiento de microorganismos no deseados, MSM también afecta de manera beneficiosa al producto donde se añade en varios ejemplos (por ejemplo, MSM sirve como antioxidante, compuesto regenerador, compuesto anti-arrugas, hidratante, iluminador de la piel, suavizante, estimulante de la circulación, neutralizante, reparador, fortalecedor del pelo/uñas, catalizador de la curación, agente de rejuvenecimiento, etc., o combinaciones de dos o más de los mismos). En varios ejemplos, las propiedades antimicrobianas del MSM aumentan la vida útil, la semivida, la eficacia yfo la estabilidad de la formulación (o un ingrediente especifico identificado en el presente documento). El uso de MSM puede ser particularmente beneficioso en algunos ejemplos para formulaciones cosméticas o de otro tipo que sean compartidas por más de una persona (por ejemplo, cosméticos usados por maquilladores o en mostradores de cosmética).
Los cosméticos pueden incluir, pero sin limitación, barra de labios, brillo de labios, perfilador de labios, voluminizante de labios, bálsamo labial, acondicionador labial y voluminizantes de labios, bases, polvo, colorete, brillos, bronceador, máscara, perfilador de ojos, sombra para ojos, reflejo para ojos, lápices de brillo para ojos, lápices para cejas, barniz para uñas, corrector, productos para el cuidado de la piel (por ejemplo, productos de microdermoabrasión, geles calmantes), cremas, lociones, serums, hidratante, protectores solares, productos para la reparación de la piel (por ejemplo, para el acné, eritrema solar, arrugas, manchas), y cepillos. En varias realizaciones se proporcionan formulaciones para la cara, cabello y cuerpo (por ejemplo, champú, jabones, acoodiciooadores, pulverizadores, geles, serums, tratamientos restauradores, desodorantes, etc.). En varias realizaciones de la invención, se proporcionan cosméticos, tales como productos cosmecéuticos y nutracéuticos. En varias realizaciones, se proporcionan filtros dérmicos y otros productos dermatológicos (tales como ácido hialurónico, waglerina 1, hexapéptido-B de acetilo, tetrapéptido-7 de palmitoílo, oligopéptido de palmitoilo, liposomas, colágeno, hidroxilapatita de calcio, ácido poliláctico y toxina botulínica). En varias realizaciones se proporcionan formulaciones antiarrugas, antiacné, anti-envejecimiento, exfoliantes, hidratantes, y anti-estrias, fragancias, maquillaje mineral, y bases. En algunas realizaciones se proporcionan geles dérmicos, para uso cosmético y médico (por ejemplo, inhibir o prevenir la infección microbiana yfo curación de heridas)
En varios ejemplos, los productos que contienen MSM pueden enviarse yfo almacenarse en cood iciooes de alta temperatura y de humedad elevada que de otro modo serian favorables para la actividad microbiana
En algunos ejemplos, los productos que incluyen MSM se envasan en recipientes adaptados para aplicaciones multiuso y a la exposición a microorganismos extemos, tal como del aire °del contacto con una parte del cuerpo (por ejemplo, los dedos). El uso de MSM es particularmente beneficioso en varios ejemplos, debido a que aumenta la vida útil de dichos productos. En algunos ejemplos, los productos que comprenden MSM también se envasan en recipientes sellados de un solo uso. En un ejemplo, un producto de un solo uso (tal como un paquete de condimento, paquete de sazonado, o paquete de cosméticos de viaje, etc.) tendrá una vida útil más prolongada yfo dejará de necesitar refrigeración en caso de que se use MSM conjuntamente con el producto yfo el envase.
En algunos ejemplos, se incorpora MSM directamente a materiales de envasado para, por ejemplo, mejorar la vida útil Por ejemplo, puede incorporarse MSM en bolsas de almacenamiento de comida para inhibir el crecimiento bacteriano. En otros ejemplos, puede incorporarse MSM en envases yfo tapas para potenciar la vida útil de los alimentos, cosméticos u otros productos inhibiendo el crecimiento bacteriano no deseado. En otros ejemplos más, puede incorporarse MSM en productos de recubrimiento, tales como envoltorios de plástico y adhesivos.
En varios ejemplos, una composición para inhibir la actividad microbiana en una crema o pomada tópica induye MSM, donde el MSM está configurado para afectar a la contaminación microbiana mediante la inhibición de la actividad microbiana. El MSM se proporciona a una concentración de al menos el MSM de acuerdo con un ejemplo (por ejemplo, 5-10 %, 10-16 %, 16-20 %, 20-30 %, 30-40 %, 40-50 %, 50-75 % o mayor, y los intervalos intermedios de los mismos). En algunos ejemplos, la composición es una crema sin conservantes. En un ejemplo, MSM inhibe la actividad microbiana en al menos un 50 % en la crema a temperatura ambiente
En algunos ejemplos, las composiciones farmacéuticas incluyen MSM, DMSO, yfo agentes antimicrobianos, o combinaciones de los mismos, que se formulan para su uso en medicina humana o veterinaria.
Por ejemplo, las composiciones farmacéuticas proporcionadas incluyen de aproximadamente un 0,01 % de MSM en peso a aproximadamente un 20 % de MSM en peso. En algunos ejemplos, una composición farmacéutica contiene entre aproximadamente un 0,01 % a aproximadamente un 5 % de MSM en peso. Otros ejemplos contienen entre aproximadamente un 5 % a aproximadamente un 10 % de MSM, de aproximadamente un 10 % a aproximadamente un 15 % de MSM, o de aproximadamente un 15 % a aproximadamente un 20 % de MSM, tal como aproximadamente un 5 %, aproximadamente un 6 %, aproximadamente un 7 %, aproximadamente un 8 %, aproximadamente un 9 %, aproximadamente un 10 %, aproximadamente un 11 %, aproximadamente un 12 %, aproximadamente un 13 %, aproximadamente un 14 %, aproximadamente un 15 %, aproximadamente un 16 %, aproximadamente un 17 %, aproximadamente un 18 %, aproximadamente un 19 % o aproximadamente un 20 % de MSM. Algunos ejemplos incluyen aproximadamente un 10-16 % de MSM, aproximadamente un 10-14 % de MSM o aproximadamente un 10-12 % deMSM.
Los agentes antimicrobianos adicionales que a modo de ejemplo pueden incluirse en una composición divulgada incluyen, pero sin limitación, derivados de penicilina, cefalosporinas, penems, monobactamas, carbapenem, inhibidores de beta-Iactamasa y combinaciones de los mismos. Los ejemplos de derivados de penicilina incluyen, pero sin limitación, aminopenicilinas (por ejemplo, amoxacilina, ampicilina, y epicilina); carboxipenicilinas (por ejemplo, carbenicilina, ticarcilina, y temocilina); ureidopenicilinas (por ejemplo, azJocilina, piperacilina y mezlocilina); mecilinam, sulbenicilina, benzatina penicilina, penicilina G (bencilpenicilina), penicilina V (fenoximetilpenicilina), penicilina O (alilmercaptometilpenicilina), procaína penici lina, oxacilina, meticilina, nafcilina, cloxacilina, dicloxacilina, f1ucloxacilina, pivampicilina, hetacilina, becampicilina, metampicilina, talampicilina, co-amoxiclav (amoxicilina más ácido clavulánico), y piperacilión. Los ejemplos de cefalosporinas incluyen, pero sin limitación, cefalexina, cefalotina, cefazolina, cefaclOf, cefuroxina, cefamandol, cefotetan, cefoxitina, ceforanida, ceftriaxona, cefotaxina, cefpodoxima proxetilo, ceftazidima, cefepima, cefoperazona, ceftizoxima, cefixima y cefpiroma. Los ejemplos de penems incluyen, sin limitación, faropenem. Los ejemplos de monobactamas incluyen, sin limitación, aztreonam y tigemonam. Los ejemplos de carbapenems incluyen, pero sin limitación, biapenenvdoripenem, ertapenem, imipenem, meropenem, y panipenem. Los ejemplos de inhibidores de beta-Iactamasa incluyen, pero sin limitación, tazobactam (sal de sodio de 4,4-dióxido del ácido [2S-(2alfa ,3beta ,Salfa )]-3-metil-7 -oxo-3-( 1 H-1 ,2, 3-triazol-1-ilmetil}4-tia-1-aza biciclo[3 .2. O] hepta n-2-ca rboxílico l,
su lbactam
sal de sodio de 4,4-dióxido del ácido
(2S ,5R} 3,3-dimetil-7-oxo-4-tia-1-azabiciclo[3.2.0]heptan-2-carboxílico),
y ácido clavulánico (ácido
(2R,5R,Z)-3-(2-hidroxietiliden)-7-oxo-4-oxa-1-aza-biciclo[3.2.0]heptan-2-carboxílico),
u otro antibiótico de
beta-Iactama
Muchos antibióticos tienen una concentración mínima inhibidora establecida (CIMl a la cual son eficaces para reducir o eliminar determinadas bacterias. En algunos ejemplos, una composición farmacéutica divulgada incluye una cantidad de antibiótico de beta-Iactama igual a aproximadamente 0,001 a 100 CIM para los patógenos bacterianos concretos divulgados en el presente documento. En algunos ejemplos, la composición farmacéutica comprende aproximadamente 1-5, 5-10, 10-20, 20-30, 30-40, 40-50, 50-50, 60-70, 70-80, 80-90 o aproximadamente 90-100 CIM de un antibiótico de beta-Iactama. En algunos ejemplos, la composición farmacéutica comprende aproximadamente 0,001 , 0,01 , 0,1 0,5 o 1 CIM de un antibiótico de beta-Iactama
Las composiciones farmacéuticas proporcionadas en el presente documento también incluyen combinaciones de MSM y compuestos antimicrobianos, por ejemplo, una combinación de MSM y un antibiótico de beta-Iactama. En algunos ejemplos, las composiciones farmacéuticas proporcionadas en el presente documento incluyen un 10-16 % de ;S; u ima camtodad de antibiótico de beta-Iactama igual a 1 CIM para un patógeno bacteriano con el que la composición entrará en contacto
Un experto en la materia conocerá la CIM de un antibiótico para un patógeno bacteriano particular, o el experto en la materia sabrá cómo determinar la CIM de un antibiótico para un patógeno bacteriano particular. Los métodos para determinar una CIM de un antibiótico particular para un patógeno particular se describen en el presente documento, por ejemplo, usando el sistema de prueba de antibiótico Etest® (bioMérieux, Durham, NC)
La forma de dosificación de la composición farmacéutica estará influenciada por el modo de administración seleccionado. Por ejemplo, además de fluidos inyectables, pueden emplearse formulaciones para inhalación, tópicas, oftálmicas, peritoneales y orales. Las preparaciones para inhalación pueden incluir aerosoles, partículas, y similares. En general, el objetivo del tamaño de particula para inhalación es de aproximadamente 1 ~m o menos para que el agente farmacéutico alcance la zona alveolar del pulmón para su absorción.
Las composiciones farmacéuticas que incluyen MSM, DMSO, un agente o compuesto terapéutico antimicrobiano tal como se describe en el presente documento, tal como un principio activo, o que incluyen una mezcla de dos o más de los mismos, con o sin agentes adicionales como principios activos, pueden formularse con un portador sólido o líquido adecuado, dependiendo del modo de administración particular elegido. Las formulaciOfles orales pueden ser líquidas (por ejemplo, jarabes, soluciones, o suspensiones), o sólídas (por ejemplo, polvos, píldoras, comprimidos, o cápsulas) Para composiciOfles sólidas, los portadores sólidos no tóxicos convencionales pueden incluir grados farmacéuticos de manitol, lactosa, almidón, o estearato de magnesio. Los métodos reales para preparar dichas formas de dosificación se conocen o serán evidentes para los expertos habituales en la materia.
Para administración oral, las composiciones farmacéuticas pueden adoptar la forma de, por ejemplo, comprimidos o cápsulas preparados por medios convencionales con excipientes farmacéutica mente aceptables, tales como agentes aglutinantes (por ejemplo, almidón de maíz pregelatinizado, polivinilpirro lidona o hidroxipropilmetilcelulosa); cargas (por ejemplo, lactosa, celulosa mícrocrista lina o hidrogenofosfato de calcio); lubricantes (por ejemplo, estearato de magnesio, talco o sílice); disgregantes (por ejemplo, almidón de patata o glicolato sódico de almidón); o agentes humectantes (por ejemplo, lauril sulfato de sodio). Los comprimidos pueden recubrirse mediante métodos de sobra conocidos en la técnica. Las preparaciones liquidas para administración oral pueden adoptar la forma de, por ejemplo, soluciones, jarabes o suspensiones, o pueden presentarse en forma de un producto seco para su constitución con agua u otro vehículo adecuado antes de su uso. Dichas preparaciones líquidas pueden prepararse por medios convencionales con aditivos farmacéuticamente aceptables, tales como agentes de suspensión (por ejemplo, jarabe de sorbitol, derivados de celulosa o grasas comestibles hidrogenadas); agentes emulsionantes (por ejemplo, lecitina o goma arábiga); vehículos no acuosos (por ejemplo, aceite de almendra, ésteres oleosos, alcohol etílico o aceites vegetales fraccionados); y conservantes (por ejemplo, metilo propil-p-hidroxibenzoatos o ácido sórbico). Las preparaciones también pueden contener sales tamponadoras, aromatizantes, colorantes, y agentes edulcorantes, según sea adecuado.
Para su administración por inhalación, los compuestos para su uso de acuerdo con la presente divulgación se suministran de manera conveniente en forma de una presentación en pulverizador de aerosol a partir de envases a presión o de un nebulizador, con el uso de un propulsor adecuado, por ejemplo, diclorodiftuorometano, triclorotrufluorometano, diclorotetraftuoroetano, dióxido de carbono u otro gas adecuado. En el caso de un aerosol a presión, la unidad de dosificación puede determinarse proporcionando una válvula para suministrar una cantidad medida. Pueden formularse cápsulas y cartuchos para su uso en un inhalador o insuftador que contienen una mezcla de polvo del compuesto y una base de polvo adecuada, tal como lactosa o almidón
Para administración tópica, los compuestos pueden, por ejemplo, mezclarse con un agente de suministro líquido para administración local. Los agentes usados terapéutica mente (tales como DMSO, MSM y/u otros compuestos terapéuticos como los descritos en el presente documento) son fácilmente solubles o suspendibles en agua, y como tal, esto podría ser útil para su suministro, ya que el agua no causa efectos adversos en los tejidos biológicos. Esto permite la administración de dosis lo suficientemente altas local o sistémica mente, sin toxicidad secundaria a causa del vehículo de sum inistro.
Las composiciones farmacéuticas que incluyen una cantidad terapéutica de MSM como se ha descrito en el presente documento como principio activo se formularán normalmente con un portador sólido o líquido adecuado, dependiendo del modo de administración particular elegido. Los portadores y excipientes farmacéutica mente aceptables útiles en la presente divulgación son convencionales. Por ejemplo, las formulaciones parenterales comprenden normalmente fluidos inyectables que son vehículos fluidos farmacéutica y fisiológicamente aceptables, tales como agua, suero salino fisiológico, otras soluciones salinas equilibradas, dextrosa acuosa, glicerol o similares. Los excipientes que pueden incluirse son, por ejemplo, proteínas, tales como albúmina sérica humana o preparaciones de plasma. Si se desea, la composición farmacéutica que se va a administrar también puede contener cantidades menores de sustancias auxiliares no tóxicas, tales como agentes humectantes o emulsionantes, conservantes, y agentes tamponadores del pH y similares, por ejemplo, acetato de sodio o monolaurato de somitán. Los métodos reales para preparar dichas formas de dosificación se conocen o serán evidentes para los expertos en la materia.
Las composiciones farmacéuticas que incluyen una cantidad terapéuticamente eficaz de MSM, en algunas realizaciones, se formularán en forma de dosis unitaria, adecuada para la administración individual de dosis precisas La cantidad de MSM administrada dependerá del sujeto que se esté tratando, de la gravedad de la afección, y del modo de administración, y es preferible que sea según el criterio del médico prescriptor. Dentro de estos limites, la formulación que se va a administrar contendrá una cantidad de los componentes activos en cantidades eficaces para lograr el efecto deseado en el sujeto que se esté tratando
Las preparaciones para su administración pueden formularse de manera adecuada para proporcionar una liberación controlada del agente terapéutico (o los agentes terapéuticos) (por ejemplo, DMSO, MSM, antibiótico de beta-Iactama y así sucesivamente). POf ejemplo, las composiciones farmacéuticas pueden encontrarse en forma de partículas que comprenden un polímero biodegradable y/o un gelificante de polisacárido y/o un polímero bioadhesivo, un polímero anfifilo, un agente que modifica las propiedades interfaciales de las partículas y una sustancia farmacológicamente activa. Estas composiciones muestran determinadas características de biocompatibilidad que permiten una liberación controlada de la sustancia activa. Véase, pOf ejemplo, la Patente de Estados Unidos n.o 5.700.486.
Pueden usarse polímeros para liberación controlada. Se conocen en la técnica varias matrices poliméricas degradables y no degradables para su uso en el suministro de fármacos (Langer, Account Clienl. Res. 26:537, 1993). Por ejemplo, el copolimero de bloque, poloxamer 407, existe en fOfma de un liquido viscoso aunque móvil a bajas temperaturas pero fOfma un gel semísólido a temperatura corporal. Se ha demostrado que es un vehículo eficaz para la fOfmulación y la liberación sostenida de interteucina-2 y ureasa (Johnston et al., Pharm. Res. 9:425, 1992; Pec, J. Parenl. Sci. Tench. 44(2):58, 1990). Como alternativa, se ha usado hidroxiapatita como microportador para la liberación controlada de proteínas (Ijntema et al., Inl. J. Pharm. 112:215, 1994). En otro aspecto más, se usan liposomas para la liberación controlada así como para el direccionamiento del fármaco de compuestos encapsulados con lipidos (Betageri et al., Liposome Drug Delivery Systems, Technomic Publishing Co., Inc., Lancaster, PA, 1993) Se conocen numerosos sistemas adicionales para el suministro controlado de proteínas terapéuticas (por ejemplo,
Patente de Estados Unidos n.o 5.055.303; Patente de Estados Unidos n.o 5.188.837; Patente de Estados Unidos n.o
4.235.871, Patente de Estados Unidos n.o 4.501.728; Patente de Estados Unidos n.o 4.837.028; Patente de Estados Unidos n.o 4.957.735; y la Patente de los Estados Unidos N° 5.019.369; Patente de Estados Unidos n.o 5.055.303; Patente de Estados Unidos n.o 5.514.670; Patente de Estados Unidos n.o 5.413.797; Patente de Estados Unidos n.o 5.268.164; Patente de Estados Unidos n.o 5.004.697; Patente de Estados Unidos n.o 4.902.505; Patente de Estados Unidos n.o 5.506.206; Patente de Estados Unidos n.o 5.271.961; Patente de Estados Unidos n.o 5.254.342; y la Patente de Estados Unidos n.o 5.534.496).
En varios ejemplos, las composiciones farmacéuticas incluyen DMSO ylo MSM, y un agente terapéutico para tratar una enfermedad infecciosa, tal como el H1N1, el virus del herpes simple, o el VIH. En algunos ejemplos, se propOfclonan composiciones que incluyen DMSO ylo MSM en forma de un inhalante para tratar una enfermedad infecciosa. En algunos ejemplos, las composiciones farmacéuticas para tratar una enfermedad infecciosa incluyen DMSO ylo MSM formulados en forma de sólidos, mientras que en varias otras realizaciones, las composiciones que incluyen DMSO y MSM se formulan en forma de liquidas. En algunos ejemplos, las composiciones se consumen por vía oral para tratar la enfermedad infecciosa, mientras que en otras realizaciones, las composiciones se aplican por vía tópica. En un ejemplo particular, las composiciones se suministran en un dispositivo para inhalación que está configurado para generar partículas de la formulación que tienen un tamaño en el intervalo de aproximadamente 0,5 ~m a aproximadamente 5 ~m.
En algunos ejemplos, las composiciones farmacéuticas que incluyen DMSO ylo MSM permiten que los antibióticos (u otros agentes terapéuticos) penetren en el tejido pulmonar infectado por una enfermedad infecciosa. En una realización, dichas composiciones que incluyen DMSO yio MSM: (i) permiten a los antibióticos alcanzar niveles más profundos de tejido infectado; (ii) permiten el contacto directo con el tejido infectado; (iii) prolongan el tiempo de exposición del antibiótico en el tejido infectado; ylo (iv) reducen el tiempo para lograr un efecto antibiótico deseado. En un ejemplo, el DMSO yio el MSM logran uno o más de estos efectos deseados mediante su uso como un inhalante, en el que el inhalante comprende además uno o más antibióticos u otros agentes terapéuticos.
En algunos ejemplos, las composiciones farmacéuticas que incluyen formulaciones de DMSO ylo MSM incluyen además agentes anti-parasíticos que son eficaces para tratar infecciones causadas por parásitos, tales como los nematodos, cestados, trematados, protozoos, o amebas.
En algunos ejemplos, las composiciones farmacéuticas que incluyen formulaciones de DMSO ylo MSM incluyen además agentes antifúngicos que son eficaces para tratar infecciones fúngicas, tales como aquellas causadas por tiña, candidiasis, y Cryptococcus (meningitis criptocócica, por ejemplo).
En algunos ejemplos, las composiciones farmacéuticas que incluyen formulaciones de DMSO yio MSM incluyen además agentes antivíricos que son eficaces para tratar infecciones viricas, En algunos ejemplos, se usan clases específicas de agentes antiviricos para tratar infecciones causadas por tipos de virus particulares. En algunos ejemplos, se usan agentes que se dirigen al VIH, a los herpes virus, a los virus de la hepatitis B o e, y a virus de la gripe, tal como el H1N1 .
En varios ejemplos, las composiciones de DMSO yio MSM incluyen antibióticos que son eficaces para tratar infecciones bacterianas mediante, por ejemplo, la inhibición del crecimiento bacteriano, el metabolismo, la proliferación, la actividad ylo la función. En algunos ejemplos, se usan antibióticos bacteriostáticos, mientras que en otras realizaciones, se usan antibióticos bactericidas. En otros ejemplos más, se incorporan antibióticos tanto bacteriostáticos como bactericidas en una sola formulación que comprende DMSO yio MSM. En algunos ejemplos, se incorporan antibióticos de una o más clases en una composición que incluye DMSO yl o MSM. En determinados ejemplos, una composición incluye uno o más de un: aminoglucósido, ansamicina, carbacefem, carbapenem, cefalosporina (1a, 2a, 3a, 4a, o 5~ generación), glucopéptidos, macrólidos, monobactama, penicilina, polipéptido, quillOlona, sulfonamida, tetraciclina, y similares.
En algunos ejemplos, se usan como diana enfermedades específicas mediante la incorporación de antibióticos específicos en una composición divulgada que incluye DMSO ylo MSM. Por ejemplo, se incorporan macrólidos, tales como azitromicina o eritromicina en formulaciones usadas para tratar infecciones respiratorias o micoplasmáticas. Del mismo modo, se incorporan penicilinas, tales como amoxicílina u oxacilina en las formulaciones usadas para tratar una amplia variedad de infecciones estreptocócicas
En otros ejemplos más, se usan como diana microorganismos específicos causantes de enfermedades por los antibióticos especificos incorporados en una formulación que comprende DMSO ylo MSM. Por ejemplo, se incorporan aminoglucósidos, tales como neomicina, en formulaciones usadas para tratar infecciones por Escherichia eoli. En varios ejemplos, se usan antibióticos usados normalmente para combatir infecciones microbianas. En determinados ejemplos, se incorporan antibióticos que incluyen, pero sin limitación, isoniazida, rifampicina, pirazinamida y etambulol en fOfmulaciones que comprenden uno o más de DMSO y MSM, y se usan para tratar una enfermedad infecciosa, incluyendo una enfermedad infecciosa resistente a fármacos
En varios ejemplos, se proporcionan composiciones que incluyen DMSO, MSM y uno o mÁs de los siguientes agentes terapéuticos: rifampicina, isoniazida, pirazinamida y etambutol. En otros ejemplos, se proporcionan composiciones que incluyen DMSO y al menos uno de rifampicina, isoniazida, pirazinamida y etambutol. En ejemplos adicionales, se proporcionan composiciones que incluyen MSM y al menos uno de rifampicina, isoniazida, pirazinamida y etambutol En varios ejemplos, se proporcionan composiciones que incluyen DMSO ylo MSM en combinación con rifampicina, isoniazida, pirazinamida y etambutol para tratar una enfermedad infecciosa, incluyendo una enfermedad infecciosa resistente a fármacos
En algunos ejemplos, se proporciona rifampicina en una dosis diaria total de aproximadamente 400 mg a aproximadamente 800 mg al día. En algunos ejemplos, se proporciona rifampicina en una dosis diaria total de aproximadamente 500 mg a aproximadamente 700 mg al día, mientras que en otros ejemplos, se proporciona en una dosis diaria tolal en el intervalo de aproximadamente 550 a aproximadamente 650 mg al dia, incluyendo 560,570,580, 590,600,610,620,630, Y 640 mg al día.
En algunos ejemplos, se proporciona isoniazida en una dosis diaria tolal de aproximadamente 100 mg a aproximadamente 500 mg al día. En algunos ejemplos, se proporciona isoniazida en una dosis diaria total de aproximadamente 200 mg a aproximadamente 400 mg al día, mientras que en otros ejemplos, se proporciona en una dosis diaria tolal de aproximadamente 250 mg a aproximadamente 350 mg al dia, incluyendo 260, 270, 280, 290, 300, 310, 320, 330, Y 340 mg al día.
En algunos ejemplos, se proporciona pirazinamida en una dosis diaria total en el intervalo de aproximadamente 1,0 a aproximadamente 4,0 g al dia. En algunos ejemplos, se proporciona pirazinamida en una dosis diaria total en el intervalo de aproximadamente 2,0 a aproximadamente 3,0 g al día, mientras que en otros ejemplos, se proporciona en una dosis diaria total en el intervalo de aproximadamente 2,0 a aproximadamente 2,5 g al día, incluyendo 2,1, 2,2, 2,3, Y2,4 g_
En algunos ejemplos, se proporciona etambutol en una dosis diaria total en el intervalo de aproximadamente 0,5 a aproximadamente 2,5 9 al dia. En algunos ejemplos, se proporciona elambutol en una dosis diaria tolal en el intervalo de aproximadamente 1,0 a 2,0 9 al día, mientras que en otras realizaciones, se proporciona en una dosis diaria total en el intervalo de aproximadamente 1,0 a aproximadamente 1,5 9 al día, incluyendo 1,1, 1,2, 1,3, Y 1,4 9
En algunos ejemplos , se usan composiciones farmacéuticas que incluyen DMSO ylo MSM para pretratar a un paciente que padece una enfermedad infecciosa, tal como H1Nl En algunos ejemplos, la dosis de DMSO ylo MSM usada para pretratar a los pacientes varía de aproximadamente un 10 % a un 50 % en peso a volumen. En algunos ejemplos, la dosis de pretratamiento de DMSO ylo MSM varía de aproximadamente un 20 % a aproximadamente un 40 %, de aproximadamente un 25 % a un 35 %, incluyendo 26, 27, 28, 29, 30, 31,32,33, Y 34 %. En algunos ejemplos, se usa DMSO ylo MSM de aproximadamente un 50 % a aproximadamente un 100 %. En varios ejemplos, el pretralamiento con DMSO ylo MSM potencia la capacidad de un antibiótico para inhibir la actividad bacteriana ylo sensibiliza a una cepa resistente a fármacos frente a un fármaco que previamente era ineficaz
En algunos ejemplos, se prepara una composición farmacéutica en la que se disuelven agentes antimicrobianos en DMSO ylo MSM antes de su administración. Esto es particularmente ventajoso en determinados ejemplos, debido a que el antimicrobiano y el DMSO (y opcionalmente MSM) pueden administrarse a un sujeto por inhalación. Los inhaladores, de acuerdo con algunos ejemplos, proporcionan acceso directo del DMSO ylo el MSM al tejido pulmonar infeclado para sensibilizar a las células bacterianas frente al antibiótico
En un ejemplo, se proporciona un inhalador para usar como diana el sitio de infección (por ejemplo, los pulmones) de varias enfermedades infecciosas. En algunos ejemplos similares, el dispositivo de inhalación comprende un nebulizador. En otros ejemplos, se usa un inhalador. En algunos ejemplos, se usa un inhalador a presión de dosis medida, y la formulación se inhala en forma de aerosol líquido. En otros ejemplos, se usan inhaladores de polvo seco, y la formulación se inhala en una forma de polvo de aerosol. En varias realizaciones, se usa administración oral, intravenosa, intramuscular o subcutánea además de o en lugar de la terapia de inhalación_
La capacidad de administrar agentes antimicrobianos en forma de una inhalación (por ejemplo, en una forma de aerosol en polvo) con DMSO ylo MSM es especialmente ventajosa en algunos ejemplos debido a que permite una mayor estabilidad durante el almacenamiento y dosis pre-empaquetadas. Esto es particularmente útil para individuos en países subdesarrollados o en vías de desarrollo que no tienen acceso regular a instalaciones sanitarias. Pueden administrarse ciclos completos de tratamiento a un sujeto afectado en una sola visita a un profesional sanitario sin necesidad de estancia hospitalaria ovisitas repetidas. En varios ejemplos, las formulaciones divulgadas en el presente documento son adecuadas para su auto-administración (por ejemplo, mediante dispositivos de inhalación) y por lo tanto son especialmente adecuadas para pacientes con un acceso limitado a cuidados sanitarios
En determinados ejemplos, el volumen total de DMSO ylo MSM inhalado es de aproximadamente 2-8 mI. En algunos ejemplos, el volumen total de DMSO ylo MSM inhalado es de aproximadamente 2 mi a aproximadamente 4 mI. En algunos ejemplos, el volumen total de DMSO ylo MSM inhalado es de aproximadamente 6 mi a aproximadamente 8 mI. En otros ejemplos más, el volumen total de DMSO ylo MSM inha lado es de aproximadamente 3 mi a aproximadamente 7 mI. incluyendo 4, 5, Y 6 mI. Por lo tanto, en algunos ejemplos, la concentración de DMSO administrada por inhalación oscila de aproximadamente el 65 % a aproximadamente el 95 %, incluyendo 70, 75, 80, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91,92, 93, Y 94 %.
En varios ejemplos, se incluye MSM con el DMSO y los compuestos antimicrobianos. En determinados ejemplos, la cantidad de MSM inhalada varía de aproximadamente el 0,01 % en peso a aproximadamente el 70 % en peso del inhalante. En otros ejemplos, la formulación inhalada contiene entre aproximadamente un 0,01 % Y un 10 % de MSM en peso. Otros ejemplos contienen entre aproximadamente un 10 y un 20 % de MSM, aproximadamente un 20-30 % de MSM, aproximadamente un 30-40 % de MSM, aproximadamente un 40-50 % de MSM, aproximadamente un 50-60 % de MSM, o aproximadamente un 60-70 % de MSM, incluyendo un 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, Y 70 % de MSM. Otros ejemplos más comprenden una formulación que contiene aproximadamente un 7 y un 15 % de MSM, aproximadamente un 15-25 % de MSM, aproximadamente un 25-35 % de MSM, aproximadamente un 35-45 % de MSM, aproximadamente un 55-60 % de MSM, aproximadamente un 60-65 % de MSM, o aproximadamente un 65-70 % de MSM. Por lo tanto, en algunos ejemplos de la fonnulación inhalada que contiene MSM, la concentración de DMSO administrada oscila de aproximadamente el 50 % a aproximadamente el 95 %, incluyendo 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, Y 94 %.
En varios ejemplos, el uso de MSM reduce la cantidad de DMSO necesaria para lograr un efecto comparable ylo mejora la eficacia del DMSO en al menos un 10 %, 25 %, 50 %, 100 %, 2 veces, 3 veces, 5 veces, 10 veces, 50 veces,
o 100 veces. En otros ejemplos, el uso de MSM reduce la cantidad de un agente terapéutico necesaria para lograr un efecto comparable ylo mejora la eficacia del agente terapéutico en al menos un 10 %, 25 %, 50 %, 100 %, 2 veces, 3 veces, 5 veces, 10fold, 50 veces, o 100 veces. En ejemplos adicionales, el uso de DMSO reduce la cantidad de un agente terapéutico necesaria para lograr un efecto comparable ylo mejora la eficacia del agente terapéutico en al menos un 10 %, 25 %, 50 %, 100 %, 2 veces, 3 veces, 5 veces, 10 veces, 50 veces, o 100 veces. En otros ejemplos más, el uso de DMSO y MSM reduce la cantidad de un agente terapéutico necesaria para lograr un efecto comparable ylo mejora la eficacia del agente terapéutico en al menos un 10 %, 25 %, 50 %, 100 %, 2 veces, 3 veces, 5 veces, 10 veces, 50 veces, o 100 veces en comparación con solo DMSO o MSM ylo el agente terapéutico solo.
En varios ejemplos, se administra a un sujeto una formulación de pretratamiento que incluye DMSO solo o en combinación con MSM por vía intravenosa, intramuscular, tópica u oral para mejorar los efectos de una terapia de inhalación que comprende DMSO ylo MSM con agentes terapéuticos, tales como antibióticos. El pretratamiento con DMSO, solo o en combinación con MSM, mejora los efectos terapéuticos del inahalante en al menos un 10 %, 25 %, 50 %, 100 %, 2 veces, 3 veces, 5fold, 10 veces, 50 veces, o 100 veces
En varios ejemplos, se vuelve a tratar a sujetos que tienen una enfennedad infecciosa con una formulación que comprende, consiste o consiste esencialmente en DMSO, solo o en combinación con MSM, y uno o más agentes terapéuticos, tales como antibióticos. En algunos ejemplos, la formulación incluye además otros agentes terapéuticos, portadores o excipientes. En un ejemplo, la formulación incluye además arginina, vitamina D, antioxidantes, macrólidos, linezolida, tioacetazona, tioridazina, o combinaciones de los mismos
El DMSO altera fácilmente la integridad de muchos materiales (en particular plásticos y polímeros usados en la fabricación de equipamiento médico desechable). Por consiguiente, varios ejemplos comprenden dispositivos para facilitar el almacenamiento y la administración de DMSO. En algunos ejemplos, se almacena DMSO en botellas de vidrio y se administra a través de conductos no reactivos. En otros ejemplos, los dispositivos inhaladores se diseñan específicamente para que sean resistentes al DMSO. En algunos ejemplos, las piezas de los dispositivos inhaladores son desechables o reponibles. De acuerdo con varios ejemplos, las formulaciones que comprenden DMSO se fabrican, almacenan ylo administran usando materiales y dispositivos divulgados en la Solicitud de Patente de los Estados Unidos n.o. 12/066.480 , que es la entrada de fase nacional de la Solicitud Internacional n.o. PCT/US06/35499, presentada el 11 de septiembre de 2006
En determinados ejemplos, el dispositivo de suministro suministra gotas o particulas de la formulación inhalada de un tamaño capaz de alcanzar los bronquiolos de los pulmones de los pacientes. En algunos ejemplos, el dispositivo de suministro se sincroniza con el ritmo respiratorio del paciente para transportar la formulación a los bronquiolos. La terapia de inhalación, de acuerdo con un ejemplo, permite una administración más directa de la formulación inhalada a los tejidos pulmonares diana. El direccionamiento directo es ventajoso en algunos ejemplos debido a que permite la reducción de la cantidad de compuestos antimicrobianos incorporados en la formulación a la vez que se mantiene o se mejora la eficacia de la formulación contra microorganismos infecciosos. En otros ejemplos, la administración directa aumenta la eficacia de un régimen antimicrobiano dado contra una o más cepas del microorganismo resistentes a fármacos. El direccionamiento directo, de acuerdo con otros ejemplos, minimiza los efectos secundarios al minimizar el contacto con el tejido no diana
El pequeño tamaño de la gota o de la partícula que se proporciona de acuerdo con algunos ejemplos reduce el volumen de DMSO ylo MSM que se adminsitra en comparación con la terapia ventilatoria tradicional. Por ejemplo, en un ejemplo, el uso de un dispositivo de inhalación (por ejemplo, nebulizador) será eficaz con de aproximadamente 6 mg a aproximadamente 25 mg de DMSO ylo MSM al día, en comparación con 50-100 mg al día cuando se administra a través de otras vías concretas. Reducir el DMSO es beneficioso en algunos ejemplos debido a que reduce los efectos secundarios no deseados y el olor. En otros ejemplos, se usan y toleran cantidades mayores de DMSO.
En varios ejemplos, la adición de MSM reduce inesperadamente el olor desagradable que normalmente se experimenta con el uso de DMSO. Por ejemplo, en determinados ejemplos, Is formulaciones de DMSO y MSM no producen un olor perceptible tras su uso. En algunos otros ejemplos que tienen concentraciones de DMSO que se aproximan o superan al 50 %, la combinación con MSM en la formulación reduce o elimina el olor causado por el DMSO_ Dicho resultado es inesperado, ya que el uso de DMSO se asocia normalmente con un fuerte olor desagradable.
En algunos ejemplos, el uso de DMSO ylo MSM con agentes terapéuticos (tales como antibióticos) permite la fabricación y/o la administración de pequeñas gotas o tamaños de partícula, reduciendo de este modo la irritación de la mucosa de la boca y la garganta, y las gotas o particulas son transportadas más profundamente al interior de los pulmones del paciente. En algunos ejemplos, la profundidad de transporte de las gotas o partículas aumenta la concentración de los antibióticos disueltos en los pulmones del paciente.
En varios ejemplos, las composiciones de DMSO y/o MSM se combinan con agentes terapéuticos (tales como antibióticos) y se proporcionan en forma de un aerosol para suministrar fármacos activos localmente al sistema respiratorio para tratar una enfermedad respiratoria. En un ejemplo, se ponen en contacto (o se ponen en contacto exclusivamente) las vías respiratorias inferiores con la composición. En otros ejemplos, la composición se usa para tratar enfermedades de manera sistémica. Para los fármacos activos sistémicamente, se confiere a las partículas de aerosol un tamaño tal que alcanza la superficie alveolar en las áreas periféricas del pulmón
En algunos ejemplos, el uso de composiciones de DMSO y/o MSM que comprenden un agente terapéutico (tal como un antibiótico) es particularmente ventajoso debido a que proporciona una rápida aparición de la acción. En un ejemplo, el suministro por inhalación proporciona una gran zona de absorción del pulmón. Para fármacos de acción local, en algunos ejemplos, la aparición de la acción es inmediata. Las formulaciones inhaladas activas sistémicamente, de acuerdo con algunas realizaciones, alcanzan rápidamente el torrente sanguíneo. La terapia por inhalación proporciona, en algunos ejemplos, un efecto terapéutico en aproximadamente 1-90 minutos. En un ejemplo, el DMSO y/o el MSM potencian la biodisponibilidad del agente terapéutico. En un ejemplo adicional, el DMSO y/o el MSM reducen la degradación del agente terapéutico. En otro ejemplo, las formulaciones en aerosol divulgadas en el presente documento reducen los efectos secundarios gastrointestinales o la irritación de la piel que pueden producirse con el tratamiento oral o tópico.
En varios ejemplos, las partículas de inhalante tienen un tamaño que minimiza el depósito de estas partículas por impacto inercial en las vías respiratorias superiores sin alcanzar el sitio de acción. En varios ejemplos, las partículas tienen un tamaño que minimiza el depósito en la boca y la garganta, minimizando de este modo la ingesta y los efectos secundarios locales o sistémicos no deseados. En varios ejemplos, las partículas son menores de 2, 5 o 10 ¡..1m. En un ejemplo, las partículas son de aproximadamente 3-5 ¡..1m y se transportan al interior de las bifurcaciones y las vías respiratorias más pequeñas de los bronquios y bronquiolos. En otro ejemplo, las partículas son menores de 3 ¡..1m y siguen al flujo de aire hasta los alvéolos. En varios ejemplos, el uso de DMSO y/o MSM permite la optimización del tamaño de partícula del agente terapéutico. Por lo tanto, pueden tratarse de manera más eficaz las enfermedades, tales como una enfermedad infecciosa. Además, en varios ejemplos, el uso de DMSO y/o MSM sensibi liza a los microorganismos resistentes a fármacos a los antibióticos.
En varios ejemplos, el DMSO y/o el MSM forman una solución, mezcla, emulsión, suspensión, u otra combinación adecuada con el agente terapéutico. En un ejemplo, se usan homogenización, sonicación, procesamiento de fluidos con alta cizalladura u otros métodos mecánicos para combinar el agente terapéutico con el DMSO y/o el MSM. En otros ejemplos, el agente terapéutico se disuelve fácilmente en DMSO. A diferencia de otros disolventes fuertes, el DMSO no es pe~udicial para el tejido pulmonar. Por lo tanto, el DMSO es especialmente ventajoso en algunos ejemplos debido a que puede tanto disolver al agente terapéutico como suministrar dicho agente sin dañar al tejido pulmona r. En algunos ejemplos, el DMSOdisuelve al menos el 50 %, 75 %, 90 %, 95 %, o 99 % del agente terapéutico, yen un ejemplo, es capaz de prevenir la precipitación no deseada del agente terapéutico
En algunos ejemplos, se proporcionan pulverizadores, geles o toa llitas húmedas que comprenden DMSO solo o en combinación con MSM y agentes antibacterianos para higienizar equipamiento médico, superficies y el cuerpo para minimizar la diseminación de enfermedades infecciosas.
En varios ejemplos, se usa una composición farmacéutica que comprend DMSO y/o MSM y agentes antimicrobianos como tratamiento para una enfermedad infecciosa.
En determínados ejemplos, las composíciones dívulgadas en el presente documento son eficaces para tratar díversas enfermedades infecciosas incluyendo, pero sin limitación, infección por Acinetobacter, actinomicosis, infección por adenovirus, enfermedad del sueño africano (tripanosomiasis africana), SIDA, amebiasis, anaplasmosis, ántrax, infección por Arcanobacterium haemolyticum, fiebre hemorrágica argentina, asca riasis, aspergilosis, infección por astrovirus, babesiosis, infección por Bacillus cereus, neumonía bacteriana, vaginosis bacteriana (VB), infección por Bacterioides, balantidiasis, infección por Baylisascaris , infección por el virus BK, piedra negra, infección por Blastocystis hominis, blastomicosis, fiebre hemorrágica boliviana, infección por Borrelia, botulismo, fiebre hemorrágica
brasileña, brucelosis, infección por Burkholderia , infección por calicivirus, campilobacteriosis, candidiasis (moniliasis; afias), enfermedad del rasguño de gato, celulitis, enfermedad de Chagas, chancroide, varicela, clamidia, infección por Chlamydophila pneumoniae, cólera, cromoblastomicosis, clonorquiasis, infección por Clostridium difficile, coccidioidomicosis, fiebre de Colorado, resfriado común, enfermedad de Creutzfeldt-Jacob, fiebre hemorrágica de Crimea-Congo, criptococosis, criptoesporidiosis, larva migrante cutánea (CLM), cicloesporiasis, cislocercosis, infección por citomegalovirus, fiebre del dengue, dientamoebiasis, difteria, difilobotriasis, dracuncu liasis, fiebre hemorrágica del Ébola, equinococosis, erliquiosis, enterobiasis (infección por lombrices intestinales) infección por Enterococcus, infección por enterovirus, fitus epidémico, eritema infeccioso, exantema súbito, fasciolopsiasis, fasciolosis, insomnio familiar falal (IFF), filariasis, intoxicación alimenta ria, infección por amebas vivas libres, infección por Fusobacterium, gangrena gaseosa (miconecrosis clostridiana), geotricosis, síndrome de Gerslmann-Straussler-Scheinker (GSS), giardiasis, muermo, gnatoestomiasis, gonorrea, granuloma inguinal (donovanosis), infección por estreptococos de grupo A, infección por estreptococos de grupo B, infección por Haemophilus influenzae, enfermedad de la mano, el pie y la boca (HFMO), Hantavirus, infección por Helicobacter pylori, sindrome hemolilico urémico (HUS), fiebre hemorrágica con sindrome renal (HFRS), Hepalisis A, B, C, O, o E, Herpes Simplex, histoplasmosis, infección por anquilostosoma, infección por bocavirus humano, ehrliquiosis ewingii humana, anaplasmosis granulocítica humana (HGA), infección por metaneumovirus humano, ehrliquiosis mooocítica humana, infección por papilomavirus (VPH) humano, infección por el virus parainfluenza humano, e himenolepiasis
En determinados ejemplos, las formulaciones divulgadas en el presente documento también son eficaces para tralar una o más de las siguientes enfermedades infecciosas, mononucleosis infecciosa por virus de Epstein-Barr (mononucleosis), gripe, isoesporiasis, enfermedad de Kawasaki, queratitis, infección por Kingella kingae, Kuru , fiebre de Lassa, legionelosis, leishmaniasis, lepra, leptospirosis, listeriosis, enfermedad de Lyme, filariasis linfática, coriomeningitis linfocítica, malaria, fiebre hemorrágica de Marburgo (MHF), sarampión, melioidosis (enfermedad de Whitmore), meningitis, enfermedad meningoc6cica, metagonimiasis, Microsporidiosis Microsporidia , Molluscum contagiosum (MC), paperas, tifus murino, Mycoplasma pneumonia, micetoma, miasis, conjuntivitis neonatal, oncocerciasis (ceguera de River), paracoccidioidomicosis (blastomicosis sudamericana), paragonimiasis, pasteurelosis, pediculosis capilar (piojos), pediculosis corporal (piojos corporales), pediculosis púbica (piojos púbicos, ladillas), enfermedad inflamatoria pélvica (PIO), tos ferina, peste, infección neumoc6cica, Pneumocystis pneumonia (PCP), neumonía, poliomielitis, poliovirus, meningoencefalitis amebiana primaria (PAM), leucoencefalopatia multifocal progresiva, psitacosis, fiebre Q, rabia, fiebre por mordedura de rata, virus respiratorio sincitial, rinoesporidiosis, infección por rhinovirus. infección por rickettsia, Rickettsialpox, fiebre del valle del Rift (RVF), fiebre punteada de las montañas rocosas (RMSF), infección por rotavirus, rubeola, salmonelosis, SARS (sindrome respiratorio agudo grave), sama, esquistosomiasis, septicemia, shigelosis, herpes (Herpes zóster), viruela, esporotricosis, contaminación alimenta ria por estafilococos, infección estafilocócica, estrongiloidiasis, sífilis, teniasis, tétano (trismo), Tinea barbae (picor del barbero), Tinea capitis (tiña del cuero cabelludo), Tinea corporis (tiña del cuerpo), Tinea cruris (liña inguinal), Tinea manuum (tiña de la mano), Tinea nigra, Tinea pedis (pie de atleta), Tinea unguium (onicomicosis), Tinea versicolor (Pitiriasis versicolor), Toxocariasis (Ocular Larva Migrans (OLM», Toxoca riasis (Visceral Larva Migrans (VLM», toxoplasmosis, triquinelosis, tricomoniasis, lricuriasis (infección por tricocéfalos), tularemia, infección por Ureaplasma urealyticum, encefalitis equina venezolana, fiebre hemorrágica venezolana, neumonía vírica, fiebre del Nilo occidental, piedra blanca, yersiniosis, fiebre amarilla, y zigomicosis.
En varios ejemplos, las composiciones divulgadas en el presente documento son particularmente eficaces para tratar una o más infecciones que son resistentes a las terapias farmacológicas. Además de aquellas enfermedades infecciosas enumeradas anteriormente, que pueden ser o volverse resistente a fármacos en el futuro, determinados ejemplos son eficaces para tratar, entre olros, las siguientes enfermedades reistentes a fármacos: sarampión, tétanos, malaria, infecciones respiratorias superiores e inferiores, hepatitis, fiebre tifoidea, infección por Staphylococcus auerus resistente a vancomicina/intermedio de glucopéplido, enterococos resistentes a vancomicina, Staphylococcus aure us resistente a meticilina (MRSA), y Streptococcus pneumoniae
En algunos ejemplos, el tratamiento de una enfermedad infecciosa comprende el pretratamiento de un paciente con DMSO, seguido de la administración de una composición farmacéutica que comprende DMSO y agentes antimicrobianos. En otros ejemplos, el tratamiento de una enfermedad infecciosa comprende el pretratamiento de un paciente con DMSO, seguido de la administración de una formulación que comprende DMSO, MSM, y agentes antimicrobianos. En algunos ejemplos, el pretratamiento coo DMSO se administra por vía intravenosa a través de un catéter de goteo rápido IV. En otros ejemplos, el DMSO se administra en una inyección de bolo IV. En otros ejemplos más, no se efectúa el pretratamiento con DMSO. Las composiciones de pretralamiento incluyen además MSM, un agente terapéutico o una combinación de los mismos en algunos ejemplos.
En varios ejemplos, las composiciooes que incluyen DMSO y agentes antimicrobianos, o DMSO, MSM y agentes anlimicrobianos se administran por vía oral, intravenosa, intramuscular, o por vía subcutánea. Sin embargo, debido a que el sitio de infección de varias enfermedades infecciosas son los pulmones, en algunos ejemplos, las formulaciones se administran por inhalación. En algunos ejemplos similares, el inhalante comprende un nebulizador. En otro ejemplo, se usa un inhalador.
En varios ejemplos, los sujetos se pretratan con DMSO usando DMSO intravenoso mediante un gotero rápido en, por ejemplo, un periodo de diez minutos. En un ejemplo, se proporcionará DMSO en botellas de vidrio con tubos no
reactivos propios. Después, los sujetos recibirán los antibióticos disueltos en OMSO en dosis de 3 mi mediante un inhalador o un pulverizador para la boca tres veces al día con las comidas. En un ejemplo, se proporciooa el pretratamiento con DMSO en el intervalo de aproximadamente 25 mg a aproximadamente 75 mg (por ejemplo, 30 mg , 40 mg , 50 mg, 60 mg, 70 mg) en 200 mi de dextrosa al 5 % yagua. En un ejemplo, se proporcionan 56 mg de OMSO en 200 mi de dextrosa al 5 % yagua. En un ejemplo, se proporcionan los siguientes anticuerpos: rifampicina, isoniazida, pirazinamida, y etambuloL En una realización, se administan aproximadamente 600 mg de rifampicina, 300 mg de isoniazida, 2,4 g de pirazinamida y 1,2 g de etambutol al día, mediante un inhalador/nebulizador o pulverizador bucal suministrados en dosis de 3 mI. tres veces al día. En un ejemplo, los antibióticos se combinan con OMSO para su suministro por inhalación, con o sin el pretratamiento con OMSO. En varios ejemplos también se proporciona pretratamiento con MSM. El pretratamiento con OMSO, MOM, o la combinación de los dos se proporciona en algunos ejemplos. En algunos ejemplos, las formulaciones de pretratamiento incluyen agentes terapéuticos
En varios ejemplos, se obtienen efectos terapéuticos a las dos semanas del tratamiento, a las dos semanas de tratamiento, y/o a los seis meses de tratamiento. También se proporcionan otras ventanas terapéuticas
En algunos ejemplos, los pacientes pretratados con DMSO muestran una mayor mejoría que aquellos tratados con DMSO inhalado y antibióticos sin pretratamiento intravenoso coo DMSO. En algunos ejemplos, los pacientes tratados con OMSO con DMSO inhalado y antibióticos muestran una mayor mejoría que aquellos tratados solo con antibióticos. En varios ejemplos, la adición de MSM a la formulación mejora los efectos terapéuticos o reduce los efectos secundarios. En un ejemplo, solo se usa MSM como pretratamiento
En varios ejemplos, las composiciones divulgadas en el presente documento se usan no solo para tratar síntomas y enfermedades no deseadas, sino que también pueden actuar como agentes preventivos. Por ejemplo, puede tomarse la formulación de manera regular para prevenir la aparición de enfermedades. En un ejemplo, a los sujetos en riesgo (por ejemplo, familiares o sujetos que están expuestos a pacientes que tienen una enfermedad infecciosa) se les administran dosis menores de OMSO y/o MSM y antibióticos para prevenir la aparición de la infección.
IV. Métodos de uso de MSM
En el presente documento se divulgan métodos para usar cualquiera de las composiciones de MSM divulgadas (tal como se describe en la sección IU) para modular la actividad microbiana, tal como para potenciar o inhibir la actividad de los microorganismos. Por ejemplo, se divulgan métodos para potenciar la actividad microbiana que incluyen métodos para potenciar el crecimiento microbiano, la eficacia de la fermentación, la eficacia del cultivo, la supervivencia microbiana, o cualquier combinación de las mismas. También se divulgan métodos para inhibir la actividad microbiana que incluyen métodos para inhibir el crecimiento o la infección microbiana (tal como el crecimiento bacteriano). En algunas realizaciones, MSM potencia de manera selectiva la actividad (por ejemplo, el crecimiento) de un microorganismo (tal como un microorganismo probiótico) e inhibe la actividad de microbios no deseados (tal como la actividad bacteriana o fúngica no deseada)
A. Métodos para potenciar la actividad microbiana
Se divulgan métodos para potenciar la actividad microbiana. En una realización, un método para potenciar la actividad de un microorganismo incluye proporcionar microorganismos, un medio capaz de soportar el crecimiento de los microorganismos, y MSM en una cantidad suficiente para potenciar la actividad (por ejemplo, la eficacia de la fermentación, el crecimiento, la eficacia del cultivo, y/o la supervivencia microbiana) de los microorganismos y poner en contacto el MSM con el medio, potenciando de este modo el crecimiento de los microorganismos en el medio. Se contempla que pueda añadirse el MSM al medio antes de, de manera concurrente con o después de que se haya puesto en cootacto el medio con los microorganismos. En una realización particular, se proporciooa MSM a una concentración de aproximadamente un 0 ,04 % a aproximadamente un 5 % en peso del medio o en peso del contenido de humedad del medio. Como tales, en algunos ejemplos, se usa MSM (tal como una composición que incluye de aproximadamente un 0,5 % a aproximadamente un 5 % de MSM) para potenciar el crecimiento microbiano. Por ejemplo, se usa MSM para potenciar la eficacia de la fermentación, lal como para potenciar la eficacia de la fermentación asociada con la producción de cerveza, sidra, vino, un biocombustible, un producto lácteo o cualquier combinación de los mismos. En varios ejemplos, MSM potencia la producción de determinados procesos de elaboración de alimentos o bebidas que dependen de microorganismos, tales como la producción de cerveza, la producción de vino, la panaderia, el encurtido, la producción de productos lácteos, y similares. En ejemplos adiciooales, se usa MSM para potenciar el crecimiento de uno o más microorganismos probióticos o de un microorganismo en una muestra de ensayo diagnóstico. En otros ejemplos adicionales, se usa MSM para potenciar la eficacia de cultivo y/o la supervivencia de microorganismos
Métodos para potenciar la eficacia de fermentación de microorganismos con MSM
En varias realizaciones, se usa MSM para facilitar la producción de energía. Por lo tanto, en el presente documento se divulgan métodos para potenciar la producción de energia, induyendo métodos para potenciar la eficacia de la fermentación de microorganismos. Por ejemplo, pueden usarse microorganismos en un proceso de fermentación para producir etanol, yen reactores de biogas para producir metano. La fermentación es un proceso que produce energía
mediante el cual se degradan moléculas orgánicas o sintéticas mediante el metabolismo de los microorganismos Algunas formas de microorganismos, tales como las bacterias o las levaduras pueden usarse para convertir diversas formas de desechos agrícolas y urbanos en combustibles usa bies. Los microorganismos pueden usarse como celdas de combustible microbianas vivas. En algunas realizaciones, el MSM potencia el crecimiento y el metabolismo bacteriano. En algunas realizaciones, el MSM potencia la producción de energia bacteriana. En algunas realizaciones, el MSM potencia el crecimiento y el metabolismo de levaduras. En algunas realizaciones, el MSM potencia la producción de energía de levaduras.
En varias realizaciones, se usa MSM para activar o potenciar uno o más de los siguientes· (i) fermentación de etanol u otra respiración anaerobia usada principalmente por levaduras cuando no hay oxígeno presente en una cantidad suficiente para una respiración celular normal; (ii) producción fermentativa de hidrógeno; (iii) fermentación industrial y otras degradaciones y re-configuraciones de agentes bioquímicos para industrias; (iv) la conversión de carbohidratos en alcoholes o ácidos en condiciones anaerobias usadas para la preparación de alimentos (por ejemplo, panes, productos lácteos, judias, vinagre, chucrut, kimchi, peces, y tofu); (v) fermentación para producir brandy, whisky, vodka, cerveza, vino o sidra, (vi) fermentación para producir glucosamina; y (vii) fermentación para el tratamiento aerobio de hojas de té para descomponer agentes químicos no deseados y producir otros que tienen impacto, por ejemplo, el aroma, ylo los nutrientes del té
En una realización, un método para potenciar la fermentación de un microorganismo incluye poner en contacto un medio que contiene un microorganismo capaz de fermentar con MSM, en el que el MSM se proporciona a una concentración de aproximadamente el 0,04 % a aproximadamente el 5 % en peso del medio o a una concentración de aproximadamente el 0,04 % a aproximadamente el 5 % en peso del contenido de humedad del medio, en el que la concentración de MSM aumenta la eficacia de fermentación del microorganismo en comparación con la eficacia de la fermentación en ausencia de MSM
En una realización, la eficacia potenciada de la fermentación está indicada por un aumento de al menos el10 %, tal como de aproximadamente el 20 % a aproximadamente el 80 %, un aumento de aproximadamente el 30 % a aproximadamente el SO %, incluyendo un aumento de aproximadamente un 10 %, aproximadamente un 20 %, aproximadamente un 30 %, aproximadamente un 40 %, aproximadamente un 50 %, aproximadamente un 60 %, aproximadamente un 70 %, aproximadamente un 80 %, aproximadamente un 90 %, aproximadamente un 100 %, aproximadamente un 150 %, aproximadamente un 200 %, aproximadamente un 300 % en la producción de alcohol, dióxido de carbono o ácido en presencia de MSM por los microorganismos en comparación con la producción de alcohol, dióxido de carbono o ácido en ausencia de MSM. Por ejemplo, el método para potenciar la eficacia de la fermentación es para la producción de cerveza, sidra, vino, un biocombustible, pan, un producto lácteo o cualquier combinación de los mismos. En algunos ejemplos, potenciar la eficacia de la fermentación incluye un aumento de al menos el10 %, tal como de aproximadamente el20 % a aproximadamente el 80 %, un aumento de aproximadamente el 30 % a aproximadamente el 50 %, incluyendo un aumento de aproximadamente un 10 %, aproximadamente un 20 %, aproximadamente un 30 %, aproximadamente un 40 %, aproximadamente un 50 %, aproximadamente un 60 %, aproximadamente un 70 %, aproximadamente un 80 %, aproximadamente un 90 %, aproximadamente un 100 %, aproximadamente un 150 %, aproximadamente un 200 %, aproximadamente un 300 % en la producción de etanol, metanol o una combinación de los mismos en comparación con la producción de etanol, metanol o una combinación de los mismos en ausencia de MSM. En un ejemplo particular, el microorganismo es levadura y el método para potenciar la fermentación es para la producción de cerveza. En otro ejemplo, el microorganismo es un alga y el método para potenciar la fermentación es para la producción de biocombustible.
En algunas realizaciones, potenciar la eficacia de la fermentación incluye un aumento de al menos el10 %, tal como de aproximadamente el 20 % a aproximadamente el 80 %, un aumento de aproximadamente el30 % a aproximadamente el 50 %, incluyendo un aumento de aproximadamente un 10 %, aproximadamente un 20 %, aproximadamente un 30 %, aproximadamente un 40 %, aproximadamente un 50 %, aproximadamente un 60 %, aproximadamente un 70 %, aproximadamente un 80 %, aproximadamente un 90 %, aproximadamente un 100 %, aproximadamente un 150 %, aproximadamente un 200 %, aproximadamente un 300 % en la producción de dióxido de carbono en presencia de MSM por los microorganismos en comparación con la producción de dióxido de carbono en ausencia de MSM. En un ejemplo particular, el microorganismo es levadura y el método para potenciar la fermentación es para la producción de pan.
En realizaciones adicionales, se usa MSM para controlar el proceso de fermentación en la producción de productos lácteos cultivados, tales como yogur, leche, queso y similares. Por ejemplo, los métodos para potenciar la eficacia de la fermentación incluyen un aumento de al menos el10 %, tal como de aproximadamente el 20 % a aproximadamente el 80 %, un aumento de aproximadamente el 30 % a aproximadamente el 50 %, incluyendo un aumento de aproximadamente un 10 %, aproximadamente un 20 %, aproximadamente un 30 %, aproximadamente un 40 %, aproximadamente un 50 %, aproximadamente un 60 %, aproximadamente un 70 %, aproximadamente un 80 %, aproximadamente un 90 %, aproximadamente un 100 %, aproximadamente un 150 %, aproximadamente un 200 %, aproximadamente un 300 % en la producción de ácido láctico en presencia de MSM por los microorganismos en comparación con la producción de ácido láctico en ausencia de MSM En algunas realizaciones, la concentración de MSM es eficaz para potenciar la eficacia de la fermentación es de aproximadamente el 0,04 % a aproximadamente el 5 %, tal como de aproximadanete un 0,1 % a aproximadamente un
4 %, de un 0,5 % a aproximadamente un 3 %, de aproximadamente un 1 % a aproximadamente un 2 %, incluyendo aproximadamente un 0,04 %, hasta aproximadamente un 0,05 %, aproximadamente un 0,06 %, aproximadamente un 0,07 %, aproximadamente un 0,08 %, aproximadamente un 0,09 %, aproximadamente un 0,1 %, aproximadamente un 0,3 %, aproximadamente un 0,5 %, aproximadamente un 0,7 %, aproximadamente un 1 %, aproximadamente un 1,5 %, aproximadamente un 2,0 %, aproximadamente un 2,5 %, aproximadamente un 3,0 %, aproximadamente un 4 %, o aproximadamente un 4,5 % en peso de medio o en contenido de humedad del medio. En algunas realizaciones, se añade MSM a paquetes de levadura para generar levadura rápida o de activación rápida para uso doméstico o comercial.
En algunos ejemplos, el medio para el método para potenciar la eficacia de un microorganismo incluye una concentración de cloruro de sodio de menos deiS % del contenido de humedad total del medio, tal como de aproximadamente un 1 % a aproximadamente un 3 % de cloruro de sodio, incluyendo un O %. 0,1 %,0,3 %, 0,5 %, 0,75 %, 1 %,2 %, 2,5%, 3 % 04%.
En una realización determinada, se usa MSM para producir cerveza. Los cultivos de levaduras están implicados en la producción de cerveza durante el proceso de fermentación para producir etanol y dióxido de carbono. En algunos ejemplos, se usa MSM para acelerar o facilitar la activación del cultivo de levadura, potenciar la fermentación, reducir la potencial contaminación ambiental (tal como por microorganismos no deseados portados por el aire) o una combinación de los mismos. Por ejemplo, un aumento en la eficacia para activar la levadura (tal como un aumento en la eficacia del proceso iniciador), un aumento en la eficacia del proceso de fermentación o una combinaciórl de los mismos está indicado por un aumento del al menos el 10 %, tal como de al menos un 20 % a un 80 %, un aumento de aproximadamente el 30 % a aproximadamente el 50 %, incluyendo un aumento de aproximadamente un 10 %, aproximadamente un 20 %, aproximadamente un 30 %, aproximadamente un 40 %, aproximadamente un 50 %, aproximadamente un 60 %, aproximadamente un 70 %, aproximadamente un 80 %, aproximadamente un 90 %, aproximadamente un 100 %, aproximadamente un 150 %, aproximadamente un 200 %, aproximadamente un 300 % en comparación con un control (tal como la eficacia de estos procesos en ausencia de MSM).
En varias realizaciones, se usa MSM para potenciar la actividad de algas, incluyendo el proceso de fermentación asociado con la generación de biocombustible mediante el uso de algas. En una realización, esto es particularmente beneficioso para el cultivo de algas (granjas de algas) para producir aceite vegetal, biodiésel, bioetanol, biogasolina, biometanol, biobutanol y/u otros biocombustibles. En una realización, la adición de MSM aumenta la velocidad de crecimiento de algas en aproximadamente un 25 %, aproximadamente un 30 %, aproximadamente un 40 %, aproximadamente un 50 %, aproximadamente un 100 %, aproximadamente un 200 %, aproximadamente un 300 %, aproximadamente un 400 %, aproximadamente un 500 % o más. El MSM puede ser particularmente ventajoso porque, al potenciar la actividad de las algas (tal como el crecimiento de las algas), puede hacerse escalable la producción de biocombustibles, hacerse económicamente competitiva y/o comercialmente viable. En una realización, MSM potencia el proceso mediante el cual se recoge el producto de las algas yse convierte en biodiésel. En otras realizaciones, MSM potencia el proceso mediante el cual se fermenta el contenido de carbohidratos de las algas en bioetanol y biobutanol En algunas realizaciones, el MSM potencia el proceso de las algas (i) aumentando el rendimiento de las algas, (ii) formando colonias de algas más robustas, (iii) acortando el tiempo hasta la cosecha, (iv) acortando el tiempo de fermentación, (v) potenciando la fermentación, y/o de otro modo soportando o potenciando el crecimiento, la reproducción la proliferación, la tasa de supervivencia, el metabolismo, la vitalidad, la robustez, la acción, y/o la función de las algas. Las algas, incluyendo, pero sin limitación, Botryococcus braunii, eh/orel/a, Duna/iel/a lertio/ecta, Gracilaria, P/eurochrysis carterae, y Sargassum se potencian por MSM de acuerdo con varias rea lizaciones
ii. Métodos para potenciar e/ crecimiento microbiano con MSM
En algunas realizaciones, la adición de MSM es particularmente ventajosa debido a que el MSM promueve el crecimiento de determinados microorganismos (por ejemplo, probióticos). En algunas realizaciones, los microorganismos cultivados con una composición de medio que comprende MSM tienen una mayor curva de velocidad de crecimiento en comparación con una composición comparable sin MSM. En algunas rea lizaciones, los microorganismos cultivados con una composición que comprende MSM tienen una densidad de población general aumentada en comparación con una composición comparable sin MSM. En determinadas realizaciones, MSM potencia significativamente el crecimiento simultáneo de uno o más microorganismos. En algunas realizaciones, un medio complementado con una composición de MSM para potenciar la actividad microbiana (tal como un intervalo de concentración de aproximadamente el 0,4 % a aproximadamente el 5 % o cualquiera de las composiciones de MSM para potenciar el crecimiento microbiano proporcionadas en la sección 111) potencia el crecimiento de los microorgan ismos.
Algunos microorganismos son organismos anaerobios (anaeróbicos). l os organismos anaerobios no necesitan oxígeno para su crecimiento. Los organismos anaerobios pueden usarse para fermentación y/o cultivo. En algunas realizaciones, MSM tiene un impacto positivo en los organismos anaerobios, tales como Bifidobacterium, entre otros. En algunas de dichas rea lizaciones, MSM tiene un impacto positivo mayor en el crecimiento de organismos anaerobios que en otros microorganismos. En otras realizaciones, MSM tiene un impacto positivo mayor en el crecimiento de bacterias aerobias en comparación con otros microorganismos. En otras realizaciones adicionales, los organismos aerobios y anaerobios se ven afectados positivamente por la presencia de MSM.
Las bacterias pueden clasificarse generalmente como grampositivas o gramnegativas, dependiendo de la estructura de su pared celular. Las bacterias gramnegativas incluyen, pero sin limitación, Escherichia coli, Pseudomonas, Salmonella, Shigella, enterobacterias, Pseudomonas, Moraxella, Helicobacter, Stenotrophomonas, Bdellovibrio, bacterias del ácido acético, Legionella, alfa~proteobacterias, cianobacterias, espiroquetas, bacterias verdes de azufre y verdes no de azufre. Las entéricas son bacterias gramnegativas con forma de varilla; la mayoría aparecen normalmente o patogénicamente en el intestino de los seres humanos y otros animales. En algunas realizaciones, MSM tiene un impacto positivo en el crecimiento de bacterias grampositivas. En otras realizaciones, MSM tiene un impacto positivo en el crecimiento de bacterias gramnegativas. En algunas de dichas realizaciones, MSM tiene un mayor impacto positivo en las bacterias gramnegativas que en las bacterias grampositivas. En otras realizaciones, MSM tiene un mayor impacto en las bacterias grampositivas que en las bacterias gramnegativas. En otras realizaciones adicionales, MSM tiene un impacto positivo en las bacterias tanto gramnegativas como grampositivas.
Los probióticos incluyen microorganismos vivos que se considera que son saludables para el organismo hospedador Las bacterias del ácido láctico (LAS) y las bifidobacterias son tipos comunes de microbios usados como probióticos. También se usan determinadas levaduras y bacilos. En varias realizaciones, se usa MSM para potenciar la supervivencia o el crecimiento de al menos un probiótico. Puede medirse el efecto en la supervivencia de organismos probióticos en tres puntos de acuerdo con algunas realizaciones: capacidad de supervivencia, colonización, y producción de ácido láctico. Para que sean eficaces para mantener la salud del tracto gastrointestinal, las bacterias probióticas tienen que se capaces de sobrevivir. Las bacterias que están muertas al llegar, en la mayoría de los casos, no proporcionan beneficios. Por lo tanto, en algunas realizaciones, MSM afecta de manera positiva a la supervivencia de los probióticos. En determinadas realizaciones, MSM mejora la supervivencia inicial tras la exposición de las bacterias a un nuevo ambiente. POI'quot; lo tanto, en dichas rea lizaciones, un producto que comprende un probiótico y MSM establece una población mayor o más saludable (o ambas) de bacterias probióticas en el intestino en comparación con los productos probióticos solos. En detenninadas realizaciones, el MSM mejora la supervivencia a largo plazo de los probióticos. Por lo tanto, en dichas realizaciones, un producto que comprende un pmbiótico y MSM establece una población más duradera, y basándose en el crecimiento, mayor de bacterias probióticas en el intestino en comparación con solo productos pmbíótícos. De aquellas bacterias probíótícas que llegan vívas al intestino, aquellas que colonízan (que se multiplican en) el intestino proporcionan beneficios Por lo tanto, en varias realizaciones, MSM mejora la velocidad y la frecuencia de la multiplicación de probióticos. En otras realizaciones adicionales, MSM aumenta la producción de ácido láctico.
En algunas realizaciones, MSM tiene un impacto positivo en el crecimiento de probióticos_En algunas realizaciones, MSM tiene un impacto positivo en la flora microbiana del tracto gastrointestinal. En algunas de dichas realizaciones, MSM tiene un impacto positivo en la salud intestinal. En algunas realizaciones, los anticuerpos que contienen probióticos se complementan con MSM, y los niveles de probióticos resultantes logrados en el tracto intestinal son mayores que después de la ingestión únicamente del alimento que contiene probióticos. En algunas de dichas realizaciones, la adición de MSM da como resultado un mayor nivel de organismos probióticos en un espacio de tiempo menor en comparación con la ingestión solamente de un alimento que contiene probiótico. En algunas realizaciones, los probióticos necesitan un tiempo de 24 a 48 hOl'quot;as antes de que se observen efectos y se hacen más eficaces debido a que MSM aumenta su tiempo de vida
El crecimiento bacteriano tiene normalmente una fase de retardo inicial donde las bacterias se ajustan al ambiente, antes de pasar a la fase logarítmica, donde se duplican las células. Después de la fase logarítmica, se produce una fase estacionaria. Durante la fase estacionaria, se reduce la velocidad de crecimiento a consecuencia del agotamiento de nutrientes y de la acumulación de subproductos metabólicos. Esta fase se alcanza a medida que los microbios comienzan a agotar los recursos que tienen disponibles _Esta fase es a un valor relativamente constante ya que la velocidad de crecimiento microbiano es igual a la velocidad de muerte microbiana. En la fase de muerte, las bacterias normalmente han agotado los nutrientes y los números de la población se reducen enormemente.
En algunas realizaciones, MSM tiene impacto en la fase de retardo, la fase logarítmica, la fase estacionaria, la fase de muerte o cualquier combinación de las mismas. En determinadas realizaciones, MSM acorta la fase de retardo, de tal forma que las bacterias, tales como las bacterias probióticas, comienzan la fase logarítmica de manera más temprana. En varias realizaciones, MSM extiende la fase estacionaria. En determinadas realizaciones, la velocidad de muerte se reduce en presencia de MSM. Determinadas realizaciones de la divulgación como se describe en el presente documento afectan a una o más, y en determinadas realizaciones a todas, las fases del crecimiento de bacterias probióticas.
En algunas realizaciones, MSM tiene impacto en el metabolismo de microbios (pOI'quot; ejemplo, probióticos), en la fase de retardo. Durante la fase de retardo, los mícrobíos están madurando (aumentando de tamaño) y aún no son capaces de dividirse (por lo tanto, no aumentan en número). Durante la fase logarítmica del ciclo de crecimiento microbiano, se produce la síntesis de ARN, de enzimas yde otras moléculas. En algunas realizaciones, el MSM reduce la duración de la fase de retardo acelerando la maduración (y la adaptación de los microOfganismos a los factores de estrés ambiental) de los microorganismos, permitiendo de este modo la división microbiana antes que en medio sin MSM
En algunas realizaciones, la complementación con MSM da como resultado un aumento en la fase logarítmica de
crecimiento de microbios (por ejemplo, probióticos). La fase exponencial (en ocasiones denominada fase logaritmica) del crecimiento es un periodo caracterizado por la duplicación celular. El número de nuevos microbios que aparecen por unidad de tiempo es proporcional a la población presente. En caso de no limitar el crecimiento, la duplicación continuará a una velocidad constante, por lo que el número de células y la velocidad de aumento de la población se duplica con cada periodo de tiempo consecutivo. Sin embargo, el crecimiento exponencial llO puede continuar de manera indefinida, debido a que el medio se agota de nutrientes y se enriquece con desechos rápidamente. En algunas realizaciones, MSM aumenta la duración general de la fase exponencial. En otras realizaciones, la presencia de MSM en el medio de crecimiento promueve la entrada microbiana en la fase exponencial más rápidamente que en microorganismos en medio sin MSM. El ambiente de crecimiento inicial con medio complementado con MSM puede dar lugar a la multiplicación y supervivencia celular.
En varias realizaciones, MSM afecta a la fase estaciona ria del crecimiento microbiano (por ejemplo, probiótico). En un ejemplo, la complementación del medio con MSM prolonga la fase estacionaria para los microbios en comparación con el medio sin MSM
En algunas realizaciones, MSM potencia el crecimiento probiótico, que a su vez saturan y privan de nutrientes a los microbios no deseados. En otras rea lizaciones, MSM potencia la actividad probiótica, que a su vez potencia la producción de ácido láctico y acético para reducir el pH ambiental e inhibir la actividad de bacterias no deseadas. En realizaciones adicionales, MSM potencia la actividad probiótica, que a su vez estimula la producción de agentes inmunomoduladores (por ejemplo, citocinas), potenciando de este modo la respuesta inmunitaria. En determinadas realizaciones, MSM potencia la actividad probiótica, que a su vez potencia la actividad bactericida respecto de la contaminación microbiana no deseada. En una realización, MSM potencia el crecimiento probiótico a una mayor velocidad que de los microbios no deseados, permitiendo de este modo que los probióticos colonicen preferentemente un ambiente (por ejemplo, productos comestibles, tracto intestinal)
Sin quedar ligados a teoría alguna, en varias realizaciones, MSM tiene un efecto bioquímico en el metabolismo microbiano. Por ejemplo, en algunas realizaciones, la adición de MSM tiene un efecto positivo en el metabolismo de determinados microorganismos, de tal forma que determinados microorganismos son capaces de adaptarse mejor yfo de recuperarse frente a cambios ambientales. En algunas realizaciones, MSM sirve como sustrato o cofactor para el metabolismo microbiano ylo las rutas bioquímicas anapleuróticas. En algunas realizaciones, MSM tiene un impacto positivo en la fase de crecimiento retardada. En algunas realizaciones, MSM aumenta la fase logarítmica del crecimiento microbiano. En otras rea lizaciones adicionales más, MSM aumenta la duración de la fase estacionaria del crecimiento microbiano. En algunas realizaciones, MSM reduce la velocidad de reducción de la población de determinados microbios. En determinadas realizaciones, MSM proporciona un ambiente de crecimiento selectivo o semi-selectivo, de tal forma que determinadas especies microbianas crecen más rápidamente (o alcanzan un tamaño de población mayor, o ambos) en comparación con otras especies microbianas. En determinadas rea lizaciones, MSM tiene impacto en la actividad metabólica de los microorganismos, mientras que en otras realizaciones, MSM crea un ambiente más propicio para el crecimiento microbiano
Como tales, se proporcionan métodos para potenciar el crecimiento microbiano. En algunas realizaciones, los métodos pa ra potencia r el crecimiento microbiano incluyen métodos in vitro para potenciar el crecimiento de unoo más microorganismos. En un ejemplo, los métodos in vitro para potenciar el crecimiento de uno o más microorganismos incluyen poner en contacto uno o más microorganismos con un medio capaz de soportar el crecimiento de uno o más microorganismos; y proporcionar MSM al medio a de aproximadamente un 0,4 % a aproximadamente un 5 % en peso del medio o en peso de contenido de humedad del medio, potenciando de este modo el crecimiento de los uno o más microorgan ismos in vitro en comparación con el crecimiento de los uno o más microorganismos in vitro en ausencia de MSM. Se contempla que puedan usarse métodos similares para potenciar el crecimiento de microorganismos deseados (tales como probióticos) in vivo. Por ejemplo, un aumento del crecimiento microbiano se indica por un aumento en el peso del microorganismo o en el número de células tal como un aumento de al menos el10 %, tal como de aproximadamente el 20 % al 80 %, un aumento de aproximadamente el 30 % a aproximadamente el 50 %, incluyendo un aumento de aproximadamente un 10 %, aproximadamente un 20 %, aproximadamente un 30 %, aproximadamente un 40 %, aproximadamente un 50 %, aproximadamente un 60 %, aproximadamente un 70 %, aproximadamente un 80 %, aproximadamente un 90 %, aproximadamente un 100 %, aproximadamente un 150 %, aproximadamente un 200 %, aproximadamente un 300 % en comparación con un control (tal como el peso del microorganismo o el número de células en ausencia de MSM). Pueden detectarse aumentos en el crecimiento de microorganismos mediante métodos conocidos por los expertos en la materia, incluyendo aquellos descritos en los ejemplos.
a. Métodos para potenciar (JI crecimifmto de un microorganismo probiótico
Se divulgan métodos para potenciar el crecimiento de ullO o más microorganismos probióticos. Por ejemplo, los métodos para potenciar el crecimiento de uno o más microorganismos probióticos incluyen poner en contacto UIlO o más microorganismos probióticos con un medio capaz de soportar el crecimiento de uno o más microorganismos probióticos; y proporcionar MSM al medio a de aproximadamente un 0,4 % a aproximadamente un 5 % en peso del medio o en peso de contenido de humedad del medio. potenciando de este modo el crecimiento de los uno o más microorganismos en comparación con el crecimiento de los uno o más microorganismos en ausencia de MSM. En un ejemplo, la concentración de MSM es de aproximadamente el 1 % a aproximadamente el 3 % del peso del medio o en peso del contenido de humedad del medio. Un aumento en el crecimiento probiótico está indicado por un aumento de al menos el 10 %, tal como de aproximadamente el 20 % al 80 %, un aumento de aproximadamente el 30 % a aproximadamente el 50 %, incluyendo un aumento de aproximadamente un 10 %, aproximadamente un 20 %, aproximadamente un 30 %, aproximadamente un 40 %, aproximadamente un 50 %, aproximadamente un 60 %, aproximadamente un 70 %, aproximadamente un 80 %, aproximadamente un 90 %, aproximadamente un 100 %, aproximadamente un 150 %, aproximadamente un 200 %, aproximadamente un 300 % en el crecimiento celular en comparación con un control (tal como el crecimiento celular en ausencia de MSM).
En algunos ejemplos, el medio para potenciar el crecimiento microbiano, tal como el crecimiento probiótico, incluye productos que contienen probiótico, tales como leche, yogur, yogur de arroz, helado de yogur, chocolate, queso, cerveza, vino, vinagre, chucrut o cualquier combinación de los mismos.
Se contempla que el método pueda usarse para potenciar el crecimiento de cualquier microorganismo probiótico, incluyendo, pero sin limitación Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus delbrueckii, Bacillus coagulans, Lactobacillus rhamnosus, Bifidobacterium bifidum o cualquier combinación de los mismos. En una realización, los métodos divulgados se usan para potenciar la actividad de la bacteria LactobacilJus rhamnosus. En otras realizaciones, los métodos divulgados se usan para potenciar la actividad de especies dentro del género Lactobacillus. Por ejemplo, un método para potenciar la actividad (por ejemplo, el crecimiento) de Lactobacillus acidophilus incluye poner en contacto Lactobacillus acidophilus con un medio capaz de soportar el crecimiento de Lactobacillus acidophilus; y proporcionar MSM al medio aproximadamente a menos de aproximadamente el 1 % (tal como a aproximadamente el 0,04 %, 0,05 %. 0,1 %, 0,2 %, 0,3 %, 0,4 %, 0,5 %. 0,6 %, 0,75, 0,8 % o 0,9 %) en peso del medio o en peso de un contenido de humedad del medio, potenciando de este modo el crecimiento de Lactobacillus acidophilus en comparación con el crecimiento de Lactobacillus acidophilus en ausencia de MSM
En otras realizaciones los métodos divulgados se usan para potenciar la actividad de Bifidobacterium bifidum. Por ejemplo, un método para potenciar la actividad (por ejemplo, el crecimiento) de Bifidobacterium bifidum incluye poner en contacto Bifidobacterium bifidum con un medio capaz de soportar el crecimiento de Bifidobacterium bifidum; y propOfcionar MSM al medio aproximadamente a menos de aproximadamente el 1 % (tal como a aproximadamente el 0,04 %,0,05 %. 0,1 %,0,2 %, 0,3 %,0,4 %, 0,5 %.0,6 %, 0,75, 0,8 % o 0,9 %) en peso del medio o de un contenido de humedad del medio, potenciando de este modo el crecimiento de Bifidobacterium bifidum en comparación con el crecimiento de Bifidobacferium bifidum en ausencia de MSM
Un aumento en el crecimiento de probióticos está indicado por un aumento en el peso del microorganismo probiótico o el número de células del mismo, incluyendo un aumentode al menos el 10 %, tal como de aproximadamente el20 % al 80 %, un aumento de aproximadamente el 30 % a aproximadamente el 50 %, incluyendo un aumento de aproximadamente un 10 %, aproximadamente un 20 %, aproximadamente un 30 %, aproximadamente un 40 %, aproximadamente un 50 %, aproximadamente un 60 %, aproximadamente un 70 %, aproximadamente un 80 %, aproximadamente un 90 %, aproximadamente un 100 %, aproximadamente un 150 %, aproximadamente un 200 %, aproximadamente un 300 % en comparación con un control (tal como el peso del microorganismo probiótico o el número de células en ausencia de MSM). Pueden detectarse aumentos en el crecimiento de microorganismos probióticos mediante métodos conocidos por los expertos en la materia, incluyendo aquellos descritos en los ejemplos.
b. Métodos para potenciar el creciiento de un microorganismo en una muestra de ensayo diagnóstica o una muestra de ensayo industrial
Se divulgan métodos para potenciar el crecimiento de un microorganismo en una muestra de ensayo diagnóstica o una muestra de ensayo ind usmal. En una realización, se proporciona un método para potenciar el crecimiento de un microorganismo en una muestra de ensayo diagnóstica. En un ejemplo, el método incluye poner en contacto una muestra de ensayo diagnóstica (por ejemplo, sangre, tejido, raspados, fluidos corporales y productos metabólicos, y similares) que comprenden uno o más microorganismos con un medio capaz de soportar el crecimiento de los uno o más microOfganismos; y proporcionar MSM al medio a una concentración suficiente para potenciar el crecimiento microbiano, potenciando de este modo el crecimiento de los uno o más microorganismos en la muestra de ensayo diagnóstica en comparación con el crecimiento de los uno o más microorganismos en ausencia de MSM.
En algunas realizaciones, se propOfciona un método para potenciar el crecimiento de un microorganismo en una muestra de ensayo industrial. En un ejemplo, el método incluye poner en contacto una muestra de ensayo industrial (por ejemplo, muestra de agua, moho doméstico o muestra de bacterias y otras muestras similares) que comprenden uno o más microOfganismos con un medio capaz de soportar el crecimiento de los uno o más microorganismos; y proporcionar MSM al medio a una concentración suficiente para potenciar el crecimiento microbiano, potenciando de este modo el crecimiento de los uno o más microOfganismos en la muestra de ensayo industrial en comparación con el crecimiento de los uno o más microorganismos en ausencia de MSM.
En varias rea lizaciones, se proporciona MSM en una composición para facilitar ensayos diagnósticos o ensayos de muestras industriales, tal como a una concentración de aproximadamente un 0,04 % a aproximadamente un 5 % en peso de la muestra o en peso del contenido de humedad de la muestra. En algunas realizaciones, se proporciona MSM
en una composición para facilitar ensayos diagnósticos o ensayos de muestras de ensayo industriales, tal como cualquiera de las composiciones de MSM capaces de potenciar la actividad microbiana que se describen en la sección
111. En determinadas realizaciones, se añade directamente MSM a la muestra de ensayo diagnóstica o industrial que comprende microorganismos.
De acuerdo con varias realizaciones descritas en el presente documento, el MSM puede acortar el tiempo de detección y/o análisis en un 10 %, 20 %, 30 %, 40 %, 50 %, 60 %, 70 %, 80 % o 90 %. De acuerdo con varias realizaciones descritas en el presente documento, el MSM puede potenciar la actividad microbiana (tal como el crecimiento) en al menos un 10 %, 20 %, 30 %, 40 %, 50 %, 60 %, 70 %, 80 %, 90 %, 100 %, 2 veces, 5 veces, 100 veces, 500 veces o 1000 veces. Por ejemplo, un aumento en el crecimiento microbiano está indicado por un aumento en el peso del microorganismo o el número de células de este, incluyendo un aumento de al menos el 10 %, tal como de aproximadamente el 20 % al 80 %, un aumento de aproximadamente el 30 % a aproximadamente el 50 %, incluyendo un aumento de aproximadamente un 10 %, aproximadamente un 20 %, aproximadamente un 30 %, aproximadamente un 40 %, aproximadamente un 50 %, aproximadamente un 60 %, aproximadamente un 70 %, aproximadamente un 80 %, aproximadamente un 90 %, aproximadamente un 100 %, aproximadamente un 150 %, aproximadamente un 200 %, aproximadamente un 300 % en comparación con un control (tal como el peso del microorganismo o el número de células en ausencia de MSM). Pueden detectarse aumentos en el crecimiento de microorganismos mediante métodos conocidos por los expertos en la materia, incluyendo aquellos descritos en los ejemplos.
En varias rea lizaciones, MSM se usa conjuntamente con pruebas exploratorias médicas y pruebas diagnósticas rápidas, tal como en muestras de orina o sangre. En muchos casos, se efectúan pruebas diagnósticas para identificar posibles infecciones microbianas. Varios grupos de microorganismos, incluyendo bacterias, virus, mohos, y levaduras, pueden causar infecciones. En caso de encontrar un microorganismo, se efectúan más pruebas para determinar qué antibióticos podrian ser eficaces para tratar la infección. Para diagnosticar dichas infecciones tan pronto como sea posible, en algunas realizaciones, se usa MSM para complementar el medio de crecimiento usado en pruebas diagnósticas para aumentar la velocidad de crecimiento de microorganismos en la muestra del paciente, mejorando de este modo el tiempo de detección de la prueba. En algunas realizaciones, el MSM peude potenciar la sensibilidad de detección de una prueba diagnóstica. En algunas realizaciones, la prueba diagnóstica es una prueba de orina. En algunas realizaciones, la prueba diagnóstica es una prueba de sangre. En otras realizaciones, pueden cultivarse otras muestras de pacientes con fines diagnósticos, tales como esputo, saliva, raspados de piel, hisopos dentales, hisopos vaginales o de cuello de útero, y similares. En una realización, el MSM se usa para proporcionar una tira de prueba rápida. Por ejemplo, se añade una muestra de fluido corporal (la muestra de la prueba diagnóstica) a un tubo de ensayo o una placa de cultivo (el medio). El medio soporta el crecimiento de cualquier microbio que pueda existir en el fluido corporal. Al proporcionar un medio al que se le haya dosificado MSM previamente o al añadirle MSM antes o después de añadir el fluido corporal al tubo de ensayo o la placa de cultivo, podrían aumentar los microbios en el fluido corporal (o sus productos o metabolitos analizables), podría ser más fácil de ensayar. Por lo tanto, se facilita el diagnóstico
En varias realizaciones, el uso de MSM faci lita el diagnóstico médico de infecciones víricas soportando el crecimiento de virus para ensayos diagnósticos. Los virus incluyen, pero sin limitación, virus de la inmunodeficiencia humana, el virus del herpes simple, el virus del papiloma, el virus de la parainfluenza, gripe, hepatitis, y otros virus. Del mismo modo, el diagnóstico médico de otras infecciones, tales como aquellas causadas por bacterias, hongos, levaduras y parásitos también se facilita por el MSM de acuerdo con varias realizaciones En una realización, el uso de MSM facilita el desarrollo de vacunas.
En varias realizaciones, se usa MSM para potenciar la detección de microbios en una prueba comercial o industrial. Los microorganismos son un contaminante común del agua. Muchos kits de prueba de la seguridad del agua evalúan la calidad del agua de bebida mediante métodos de ensayo de la Agencia de Protección Ambiental (EPA, por sus siglas en inglés) comprobando, entre otros, la presencia de bacterias. Los mohos encontrados en ambientes domésticos, oficinas y escuelas se han relacionado con trastornos pulmonares, y síntomas alérgicos. Sin embargo, algunas pruebas usadas para detectar bacterias o mohos pueden llevar mucho tiempo para su análisis, mientras que algunas pruebas detectan además únicamente organismos viables (vivos). Por lo tanto, en varias rea lizaciones, se usa MSM para complementar el medio de crecimiento usado en pruebas de detección comerciales. En algunas realizaciones, el medio complementado con MSM mejora el tiempo de detección de las pruebas. En algunas realizaciones, el medio complementado con MSM mejora la sensibilidad de detección de dichas pruebas. En determinadas rea lizaciones, el MSM restaura a las bacterias estresadas ambientalmente que previamente no eran viables. En otras realizaciones adicionales más, se usan kits de ensayo diagnóstico que comprenden medio suplementado con MSM específico para microorganismos para potenciar el tiempo de detección o la sensibilidad de una prueba ideada para detectar un microorganismo concreto. En otras realizaciones, se usa MSM para complementar una gran variedad de medios de cultivo, de tal forma que se detecta diversos de microorganismos más rápidamente o con una mayor sensibilidad.
iii. Métcx:Jos para potenciar la capacidad de supervivencia de microorganismos y células con MSM
Se divulgan métodos para potenciar la capacidad de supervivencia de microorganismos (incluyendo, pero sin limitación, microorganismos probióticos) o células (tales como células madre o células recombinantes). Por ejemplo,
los métodos para potenciar la capacidad de supervivencia de microorganismos o células, tal como en cultivo celular, incluyen poner en contacto a uno o más microorganismos o células seleccionadas coo MSM a de aproximadamente un 0,4 % a aproximadamente un 5 % en peso del medio o en peso de un contenido de humedad del medio, potenciando de este modo la capacidad de supervivencia de los uno o más microorganismos o de la colección de células en comparación con la capacidad de supervivencia de los uno o más microorganismos o de la colección de células en ausencia de MSM. En un ejemplo, la concentración de MSM es de aproximadamente el1 % a aproximadamente el 3 % del peso del medio o del cootenido de humedad del medio. Un aumento en la capacidad de supervivencia está indicado por un aumento de al menos el 10 %, tal como de aproximadamente el 20 % al 80 %, un aumento de aproximadamente el 30 % a aproximadamente el 50 %, incluyendo un aumento de aproximadamente un 10 %, aproximadamente un 20 %, aproximadamente un 30 %, aproximadamente un 40 %, aproximadamente un 50 %, aproximadamente un 60 %, aproximadamente un 70 %, aproximadamente un 80 %, aproximadamente un 90 %, aproximadamente un 100 %, aproximadamente un 150 %, aproximadamente un 200 %, aproximadamente un 300 % en el número de colonias o de células en comparación con un control (tal como el número de colonias o células en ausencia de MSM)
De acuerdo con varias realizaciones, MSM mejOfa la supervivencia inicial de los microorganismos (incluyendo, pero sin limitación, microOfganismos probióticos). En una realización, MSM mejora la supervivencia a largo plazo de los microorganismos. En una realización, MSM prolonga la fase estacionaria de una curva de crecimiento de los microorganismos.
En varias realizaciones, MSM alarga la vida útil de un producto extendiendo el tiempo de vida de las bacterias beneficiosas en comparación con productos sin MSM. Por ejemplo, un producto que contiene probióticos puede tener una vida útil de varias semanas, tras el cual los organismos probióticos comienzan a perder su salud ylo población. Sin embargo, en algunas rea lizaciones, la adición de MSM a un producto que contiene probióticos aumenta el espacio de tiempo desde el envasado del producto hasta la reducción de la salud ylo población del probiótico. En dichas realizaciones, el producto probiótico es funcional (en cuanto al suministro de una población de probióticos sanos y activos al tracto GI del consumidor) durante un periodo de tiempo más prolongado después del envasado.
En varias realizaciones, la adición de MSM aumenta el tiempo hasta el deterioro de los productos ingeribles al soportar
o potenciar la actividad de los microbios beneficiosos, con una reducción resultante en la actividad de los microbios no deseados. Por ejemplo, el MSM puede aumentar la vida útil de productos comestibles, tal como de un producto probiótico, en de aproximadamente un 10 % a un 100 % (por ejemplo, 20 %, 30 %, 40 %, 50 %, 75 %, 150 %, 200 % 0 más). Por ejemplo, en una realización, en caso de que la vida útil de un producto comestible sea de 10 días, la adición de MSM aumentará la vida útil a al menos 11 días en algunas realizaciones (por ejemplo, 11 días, 14 días, 15 días, 20 días, o 25 días). A modo de ejemplo adicional, en otra realización, en caso de que un producto comestible tenga una vida útil de 14 días a temperatura ambiente y/o de 30 días en la nevera ylo de 3 meses en el congelador, la adición de MSM aumentará la vida úti l a 30 dias a temperatura ambiente ylo a 60 dias en el refrigerador y/o a 6 meses en el congelador. En algunas realizaciones, el uso de MSM potencia inesperadamente la actividad de microbios beneficiosos e inhibe (ya sea directa o indirectamente) la actividad de bacterias no deseadas, reduciendo o eliminando de este modo la necesidad de esterilización (pOf ejemplo, por irradiación, filtración, calor, agentes químicos, etc.).
En algunas realizaciones, se proporciona MSM para potenciar la actividad de vectores genéticos, tales como vectores viricos recombinantes en células recombinantes. Esto puede ser beneficoso para agentes diagnósticos así como terapéuticos, tales como la terapia génica. En algunas realizaciones, se usa MSM para potenciar la actividad (por ejemplo, el crecimiento, el cultivo, o la viabilidad) de uno o más vectores plasmidicos, vectores binarios, vectores de clonación, vectores de expresión, vectores lanzadera, y vectores víricos. Como tales, se divulgan métodos para potenciar la terapia génica en los que se potencian o aumentan uno o más procesos asociados con la terapia génica mediante el tratamiento de la célula u organismo recombinante con una concentración de MSM (tal como una concentración de aproximadamente el 0,04 % a aproximadamente el 5 % de MSM) capaz de potenciar uno o más procesos de la terapia génica (tales como la expresión, el crecimiento o la capacidad de supervivencia de las células o microorganismos recombinantes), aumentando de este modo la eficacia de la terapia génica
IV. Métodos para potenciar la eficacia de cuffivo con MSM
En el presente documento se divulgan métodos para potenciar la eficacia de cultivo con MSM. En una realización, se propOfcionan métodos para potenciar varios tipos de cultivo, incluyendo, pero sin limitación, potenciar la eficacia del cultivo de antibióticos, esteroides, células (por ejemplo, recombinantes y de tipo silvestre), microorganismos y fertilizantes. Por ejemplo, en varias realizaciones, se usa MSM para complementar los medios de cultivo usados para el crecimiento o la propagación de organismos microbianos. En varias realizaciones, los medios complementados con MSM potencian la eficacia de cultivo al potenciar el crecimiento de las células
En algunas rea lizaciones, los métodos para potenciar la eficacia de cultivo incluyen potenciarlpromover la actividad microbiana en los campos ambiental e industrial. Los microOfganismos participan en los ciclos de elementos tales como el ciclo del carbono y el ciclo del nitrógeno, asi como en el desempeño de otros papeles vitales en prácticamente todos los ecosistemas, tales como el reciclado de los productos de desecho ylo los restos de otros organismos mediante descomposición. Por lo tanto, en algunas rea lizaciones, el uso de MSM puede potenciar la descomposición
de desechos y la gestión de residuos. Muchos procesos de oxidación biológica para tratar aguas de residuales de procedencia industrial tienen en común el uso de oxígeno (o aire) y la acciórJ microbiana. Se emplean microbios cultivados específicamente en el tratamiento biol6gicode aguas residuales y en efluentes de desechos industriales, un proceso conocido como bioaumentación. La bioaumentación se usa para asegurar que los microorganismos in situ pueden degradar los contaminantes. En algunas realizaciones, el MSM potencia la degradación por ciertos microorganismos de los contaminantes. En algunas realizaciones, se añade MSM a productos de jardineria, tales como sustratos, fertilizantes, y depósitos de compostaje, para potenciar la actividad de microOfganismos beneficiosos. Como tal, el MSM se usa para aumentar la eficacia de los fertilizantes y de las reacciones de compostaje.
En una realización, un método para potenciar la eficacia de un fertilizante incluye aplicar MSM al medio en una cantidad suficiente para potenciar la actividad de un fertilizante, potenciando de este modo la actividad del fertilizante En una rea lización particular, se disuelve MSM en una solución a una concentraciórJ final de aproximadamente el 0,04 % a aproximadamente el 5 %. Después, se rocia esta solución sobre una superficie vegetal antes de, después de o simultáneamente con el fertilizante. Un aumento en la eficacia del fertilizante está indicado por un aumento de al menos el 10 %, tal como de aproximadamente el 20 % al 80 %, un aumento de aproximadamente el 30 % a aproximadamente el 50 %, incluyendo un aumento de aproximadamente un 10 %, aproximadamente un 20 %, aproximadamente un 30 %, aproximadamente un 40 %, aproximadamente un 50 %, aproximadamente un 60 %, aproximadamente un 70 %, aproximadamente un 80 %, aproximadamente un 90 %, aproximadamente un 100 %, aproximadamente un 150 %, aproximadamente un 200 %, aproximadamente un 300 % en el crecimiento de la planta en comparación con un control (tal como el crecimiento de la planta en ausencia de MSM)_
En otra realización, se divulga un método para potenciar la eficacia del compostaje. Este método incluye aplicar MSM al compost en una cantidad suficiente para potenciar la actividad de uno o más microorganismos o sustancias presentes en el compost En una realización particular, se disuelve MSM en una solución a una concentración final de aproximadamente el 0,04 % a aproximadamente el 5 %. Después, se aplica esta solución al compost (tal como vertiendo o rociando la solución) y se deja transcurrir un tiempo suficiente para potenciar la eficacia del compostaje. Un aumento en la eficacia del compostaje está indicado por un aumento de al menos el 10 %, tal como de aproximadamente el 20 % al 80 %, un aumento de aproximadamente el 30 % a aproximadamente el 50 %, incluyendo un aumento de aproximadamente un 10 %, aproximadamente un 20 %, aproximadamente un 30 %, aproximadamente un 40 %, aproximadamente un 50 %, aproximadamente un 60 %, aproximadamente un 70 %, aproximadamente un 80 %, aproximadamente un 90 %, aproximadamente un 100 %, aproximadamente un 150 %, aproximadamente un 200 %, aproximadamente un 300 % en los niveles de nitrato en comparación con un control (tal como los niveles de nitrato en ausencia de MSM). En otros ejemplos, un aumento en la eficacia del compostaje está indicado por un aumento de al menos el 10 %, tal como de aproximadamente el 20 % al 80 %, un aumento de aproximadamente el 30 % a aproximadamente el 50 %, incluyendo una reducción de aproximadamente un 10 %, aproximadamente un 20 %, aproximadamente un 30 %, aproximadamente un 40 %, aproximadamente un 50 %, aproximadamente un 60 %, aproximadamente un 70 %, aproximadamente un 80 %, aproximadamente un 90 %, aproximadamente un 100 %, aproximadamente un 150 %, aproximadamente un 200 %, aproximadamente un 300 % en la cantidad de tiempo que tarda en producirse la descomposición de la materia Ofgánica en comparación con un control (tal como la velocidad de descomposición en ausencia de MSM).
H Métodos para inhibir la actividad microbiana
Se divulgan métodos para inhibir la actividad microbiana. En un ejemplo, un método para inhibir la actividad microbiana incluye seleccionar un medio que sea susceptible a la contaminación; y poner en contacto el medio con MSM a una concentración de aproximadamente el6 % a aproximadamente el16 % en peso por volumen, inhibiendo de este modo la actividad microbiana en comparación con la actividad microbiana en un control (tal como la actividad microbiana en ausencia de MSM), en al menos un 10 %, tal como una reducción de aproximadamente el20 % al 80 %, una reducción de aproximadamente el 30 % al 50 %, incluyendo una reducción de aproximadamente un 10 %, aproximadamente un 20 %, aproximadamente un 30 %, aproximadamente un 40 %, aproximadamente un 50 %, aproximadamente un 60 %, aproximadamente un 70 %, aproximadamente un 80 %, aproximadamente un 90 %, aproximadamente un 100 %, aproximadamente un 150 %, aproximadamente un 200 %, aproximadamente un 300 % en comparación con un control (tal como la actividad microbiana en ausencia de MSM).
En algunos ejemplos, un método para inhibir la actividad microbiana incluye seleccionar un medio que sea susceptible a la contaminación bacteriana; y poner en contacto el medio con MSM a una concentración de aproximadamente el 6 % a aproximadamente el 16 % en peso por volumen, inhibiendo de este modo la actividad bacteriana. En algunos ejemplos, un método para inhibir la actividad microbiana incluye seleccionar un medio que sea susceptible a la contaminación virica (tal como la contaminación por el virus de la inmunodeficiencia humana, H1 N1, el virus del herpes simple, el virus del papiloma, el virus de la parainnuenza, gripe, hepatitis, u otros virus similares); y poner en contacto el medio con MSM a una concentración de aproximadamente el 6 % a aproximadamente el 16 % en peso por volumen, inhibiendo de este modo la actividad vírica.
En un ejemplo particular, un método para inhibir la actividad microbiana incluye seleccionar un medio que sea susceptible a la contaminación por gripe H1 N1 ; Y poner en contacto el medio con MSM a una concentración de aproximadamente el 10 % a aproximadamente el16 % en peso por volumen, inhibiendo de este modo la actividad microbiana de la gripe H 1 N 1_ En algunos ejemplos, el MSM inhibe la actividad microbiana mediante la reducción de la velocidad de crecimiento de la gripe H1 N1 en al menos un 10 %, tal como una reducción de aproximadamente un 20 %, aproximadamente un 30 %, aproximadamente un 40 %, aproximadamente un 50 %, aproximadamente un 60 %, aproximadamente un 70 %, aproximadamente un 80 %, aproximadamente un 90 %, aproximadamente un 100 %, aproximadamente un 150 %, aproximadamente un 200 %, aproximadamente un 300 % en el crecimiento o la infectividad de la gripe Hl NI en comparación con un control (tal como la actividad o infectividad de la gripe H 1 N 1 en ausencia de MSM).
En varias realizaciones, los métodos incluyen MSM a aproximadamente el 8 % (en peso) o más, del peso total del producto o del contenido de humedad. En determinados ejemplos, el MSM es un agente antimicrobiano eficaz cuando se usa a concentraciones de entre aproximadamente el 5 % y aproximadamente el 16 %_En determinados ejemplos, el MSM es un agente antimicrobiano eficaz cuando se usa a concentraciones (basándose en el peso total de un producto o en su contenido de humedad) de entre aproximadamente el 9 % Y aproximadamente el 16 %, entre aproximadamente el lO % y aproximadamente el 16 %, entre aproximadamente el12 % y aproximadamente el 16 %, entre aproximadamente el 9 % Y aproximadamente el13 %, y entre aproximadamente el1 O % Y aproximadamente el 12 %. En determinados ejemplos, el MSM es un agente antimicrobiano eficaz cuando se usa a concentraciones de entre aproximadamente el 5 % y aproximadamente el16 %, induyendo un 6 %_7 %, 8 %,9 %,10 %, 11 %, 12 %,13 %, 14, Y 15 %. En varias rea lizaciones divulgadas en el presente documento, los porcentajes de MSM están basados en el contenido de humedad de un producto. En algunas realizaciones, el MSM es particularmente útil cuando se combina con agua u otros componentes liquidos_En varias realizaciones, los porcentajes de MSM proporcionados en el presente documento están basados en la cantidad de un disolvente polar en un producto u otro medio
En algunos ejemplos, los métodos divulgados para inhibir la actividad microbiana incluyen la inhibición del crecimiento de microorganismos específicos_ En algunos ejemplos, los métodos incluyen inhibir el crecimiento de una gran variedad de microorganismos en determinados medios o productos. En algunos ejemplos, se efectúan reducciones a gran escala después de las primeras 24 horas. En otros ejemplos distintos, se evidencian reduccones en escala logarítmicas significativas a las 24-48 horas. En algunos ejemplos, los métodos divulgados induyen formulaciones de MSM que propOfcionan una reducción en los niveles microbianos (por ejemplo, bacterianos) que varían de aproximadamente 0,5 lag a aproximadamente 5 lag o más en dos semanas_En algunos ejemplos, los métodos divulgados para inhibir la actividad microbiana dan como resultado una reducción logarítmica entre una reducción de aproximadamente 1 log Y reducciones de aproximadamente 3 lag o más. En otros ejemplos, los métodos divulgados para inhibir la actividad microbiana inhiben letalmente el crecimiento de determinados microOfganismos_ En un ejemplo, un método que usa una formulación de MSM a entre aproximadamente el 12 % Y aproximadamente el 16 % elimina letalmente determinados microbios (por ejemplo, bacterias) en aproximadamente 48 horas. En otro ejemplo, una formulación que comprende MSM a entre aproximadamente el 8 % y aproximadamente el12 % elimina letalmente determinados microbios (por ejemplo, bacterias) en aproximadamente tres a siete días. En otros ejemplos, los métodos emplean una formulación de MSM a entre aproximadamente el 5 % Y aproximadamente el 8 %, combinada con una cantidad reducida de conservante convencional, que elimina letal mente a determinados microbios (por ejemplo, bacterias) en aproximadamente 48 horas. Con concentraciones mayores de conservante, pueden reducirse más los niveles de MSM.
En algunos ejemplos, los métodos divulgados para inhibir la actividad bacteriana con MSM (tal como con aproximadamente un 6 % a aproximadamente un 16 % de MSM) tienen impacto en el metabolismo de los microbios en la fase de retardo. Por ejemplo, el método divulgado aumenta la duración de la fase de retardo. Una alteración, tal como un aumento en la fase de retardo, puede detectarse por métodos conocidos para los expertos en la materia, incluyendo aquellos descritos en los ejemplos.
En algunas realizaciones, la complementación con MSM da como resultado una reducción en la fase logarítmica de crecimiento de los microbios. La fase exponencial (en ocasiones denominada fase logarítmica) del crecimiento es un periodo caracterizado por la duplicación celular. El número de nuevos microbios que aparecen por unidad de tiempo es proporcional a la población presente _En caso de no limitar el crecimiento, la duplicación continuará a una velocidad constante, por lo que el número de células y la velocidad de aumento de la población se duplica con cada periodo de tiempo consecutivo. Sin embargo, el crecimiento exponencial no puede continuar de manera indefinida, debido a que el medio se agota de nutrientes y se enriquece con desechos rápidamente. En algunas realizaciones, MSM reduce la duración general de la fase exponencial. En otras realizaciones, la presencia de MSM en el medio de cultivo inhibe la entrada microbiana en la fase exponencial
En varios ejemplos, los métodos divulgados para inhibir la actividad microbiana incluyen modular la fase estacionaria del crecimiento microbiano_ Durante la fase estacionaria, se reduce la velocidad de crecimiento a consecuencia del agotamiento de nutrientes y de la acumulación de subproductos metabólicos_Esta fase se alcanza a medida que los microbios comienzan a agotar los recursos que tienen disponibles. Esta fase es a un valor relativamente constante ya que la velocidad de crecimiento microbiano es igual a la velocidad de muerte microbiana. En un ejemplo, la complementación del medio con MSM a determinadas concentraciones acorta la fase estacionaria para los microbios.
Se contempla que un medio incluya cualquier medio o ambiente que contenga o que sea adecuada para soportar la contaminación, incluyendo, pero sin limitación, cosméticos, caldos, agar, cultivos, alimentos, bebidas, suspensiones
celulares, tejido biológico, fluidos biológicos, superficies inorgánicas, superficies orgánicas, sustratos, células vivas, células hospedadoras, ensayos diagnósticos, y otros ambientes sólidos, líquidos, de matriz, gelatinosos o gaseosos. En algunos ejemplos, el medio es un fluido corporal, un tejido corporal, o una superficie
En algunas realizaciones, la puesta en contacto con el medio incluye la administración tópica, oral, intravenosa, intramuscular o subcutánea de MSM al medio susceptible a la contaminación microbiana. En otras realizaciones, la puesta en contacto del medio incluye rociar o restregar el medio susceptible a la contaminación microbiana con una composiciónlfOfmulación de MSM divulgada. Por ejemplo, una superficie puede incluir cualquier superficie susceptible a la contaminación, incluyendo, pero sin limitación, una superficie doméstica, una super1icie industrial (tales como superficies en aseos públicos, asideros de puertas, suelos, paredes, railes de techos, carTaS de compra y similares), ropa de cama, recubrimientos, equipamientos o superficies industriales, sangre, piel o una combinación de los mismos. Por ejemplo, una superficie doméstica puede incluir un asidero de una puerta, un pomo de una puerta, una papelera, un mostrador, suelo, asiento de retrete o cualquier superficie que nOfmalmente sea tocada o esté expuesta a posibles contaminantes.
Puede producirse un crecimiento microbiano no intencionado en muchos cosméticos, complementos de salud y belleza, productos tópicos, y productos orales. El uso agudo o continuado de productos con contaminación microbiana puede dar lugar a efectos adversos para la salud del usuario. La contaminación puede producirse, por ejemplo, durante la fabricación, envasado, o uso repetido por el consumidor, que incluye la apertura y cierre repetido de los recipientes, el contacto con las manos, la piel, o membranas mucosas, o la extracción/administración repetida de dosis individuales. En ausencia de propiedades antimicrobianas, estos productos pueden permitir el crecimiento no intencionado de muchos microorganismos diferentes, y potencialmente pe~udiciales.
Pueden añadirse conservantes antimicrobianos a los productos para protegerlos frente al crecimiento microbiano Los conservantes antimicrobianos de uso común incluyen propionato de calcio, nitrato de sodio, nitrito de sodio, sulfitos (dióxido de azufre, bisulfito de sodio, hidrogenosulfito de potasio, etc) y EDTA disódico. Los conservantes cosméticos incluyen fonnaldehído, sorbato de potasio, metilparabeno, y metilcloroisotiazolinona.
En muchos casos, se tienen que añadir conservantes a una concentración mínima eficaz, ya que pueden producirse reacciones adversas a determinadas concentraciones o dosis. Por lo tanto, aunque los conservantes puedan inhibir el crecimiento microbiano, también tienen el potenciar de causar quemaduras químicas ylo irritar la piel y las membranas mucosas. Algunos conservantes sintéticos modernos son controvertidos debido a que se ha demostrado que causan problemas respiratorios y de otro tipo para la salud. La adición de determinados conservantes a los productos comerciales puede presentar complicaciones únicas en cuanto a la solubilidad, límites de pH, desactivación por algunos compuestos de polietilenglico (PEG), y un cambio en el color, la consistencia o la fragancia de un producto Algunos conservantes tienen una actividad únicamente limitada contra clases particulares de microorganismos.
También se divulgan métodos para inhibir la actividad microbiana en un producto de consumo. En un ejemplo, el método incluye seleccionar un medio que sea susceptible a la contaminación microbiana, tal como un producto de consumo, y añadir MSM al medio para afectar a la contaminación microbiana mediante la inhibición de la actividad microbiana. De acuerdo con una rea lización, el MSM se proporciona a una concentración de al menos el 10 % (por ejemplo, 10-16 %, 16-20 %, 20-30 %, 30-40 %, 40-50 %, 50-75 % o mayor, y los intervalos intennedios de los mismos). En algunas realizaciones, el medio carece de conservantes
En algunos ejemplos, se proporcionan métodos para inhibir la actividad microbiana en una crema cosmética a temperatura ambiente. En un ejemplo, el método incluye seleccionar un medio que sea susceptible a la contaminación microbiana; y añadir MSM al medio para afectar a la contaminación microbiana mediante la inhibición de la actividad microbiana. El MSM se añade a una concentración de al menos el MSM de acuerdo con un ejemplo (por ejemplo, 5-10 %, 10-16 %, 16-20 %, 20-30 %, 30-40 %, 40-50 %, 50-75 % o mayor, y los intervalos intermedios de los mismos). En algunas rea lizaciones, el medio carece de conservantes. En algunas realizaciones, el medio incluye una crema cosmética. En un ejemplo, el MSM inhibe la actividad microbiana en al menos un 50 % en la crema cosmética a temperatura ambiente.
En algunos ejemplos, el medio incluye uno o más de los siguientes: cosméticos, caldos, agar, cultivos, alimentos, bebidas, suspensiones celulares, tejido biológico, fluidos biológicos, superficies inorgánicas, superficies orgánicas, sustratos, células vivas, células hospedadoras, ensayos diagnósticos, y otros ambientes sólidos, líquidos, de matriz, gelatinosos o gaseosos. Por ejemplo, en una rea lización, el medio incluye un producto óptico o un producto para la higiene o salud oral. El medio también puede incluir un fluido o tejido corporal, tal como sangre. En un ejemplo, el medio se esteriliza antes de añadir MSM ylo después de añadir MSM. En otros ejemplos, no se necesita esterilización En algunos ejemplos, las propiedades antimicrobianas del MSM reducen o eliminan la necesidad de esterilización
En algunos ejemplos, la contaminación microbiana está causada por bacterias, tales como bacterias grampositivas ylo bacterias gramnegativas, hongos, parásitos, levaduras, mohos, virus, o combinaciones de los mismos (por ejemplo, bacterias y mohos, u otras combinaciones). En varias realizaciones, la contaminación microbiana está causada por uno o más de los siguientes géneros: Gandida, Aspergillus, Escherichia, Pseudomonas, staphylococcus, y Streptococcus, o combinaciones de los mismos. En otra rea lización, la contaminación microbiana está causada por una enfermedad infecciosa, incluyendo cualquiera de las enfermedades infecciosas descritas en el presente documento.
En varios ejemplos, se divulgan métodos para tratar una enfermedad infecciosa que incluye, pero sin limitación, el H1N1 , el virus del herpes simple, o el VIH. En un ejemplo, el método incluye administrar una cantidad terapéuticamente eficaz de un agente terapéutico y solo DMSO, solo MSM o una combinación de DMSO y MSM. La concentración de DMSO ylo MSM varía de aproximadamente un 6 % a aproximadamente un 17 % en una composición.
En algunos ejemplos, el MSM inhibe la actividad microbiana al reducir la velocidad de crecimiento de uno o más microbios en más de un 50 %, lo que a su vez aumenta la vida útil del medio. Se contempla que el MSM pueda conferir un beneficio terapéutico ylo estético. En algunos ejemplos, el beneficio terapéutico ylo estético no está relacionado con la inhibición microbiana.
En algunos ejemplos, los métodos divulgados para la inhibición de la actividad microbiana inhiben la actividad microbiana a temperaturas que dan lugar a actividad microbiana, incluyendo a 20-25 QC, 25-30 QC, 30-40 QC, 40-50 QC y mayores (y los intervalos intermedios de las mismas). En algunos ejemplos, el MSM inhibe la actividad microbiana a niveles de humedad favorables para la actividad microbiana, incluyendo del SO %-60 %, 60-70 %, 70-80 %, 80-95 %, Y mayores (y los intervalos intermedios de los mismos).
El MSM es particularmente ventajoso en varios ejemplos debido a que puede usarse a concentraciones mayores que otros cooservantes, que cuando se usan incluso a bajas concentraciones pueden provocar efectos adversos. Por ejemplo, se han relacionado los conservantes con la dermatitis atápica, eccemas, erupciones, dolor abdominal, náuseas, asma, rinitis, dolores musculares, dolores articulares, fatiga, entumecimiento, migrañas, trastomo por déficit de atención e hiperactividad, palpitaciones y arritmias. Por el contrario, se sabe que el MSM no causa dichos efectos a las concentraciones proporcioandas de acuerdo con los ejemplos preferidos del presente documento. Además, el MSM tiene una función dual de acuerdo con algunas realizaciones. El MSM no solo inhibe el crecimiento de microorganismos no deseados, el MSM también afecta de manera beneficiosa al producto donde se añade en varias realizaciones
En algunos ejemplos, los métodos divulgados para inhibir la actividad microbiana no solo inhiben la actividad microbiana, sino que proporcionan uno o más efectos beneficiosos, incluyendo, pero sin limitación, la reducción de los calambres musculares, la irritación de la piel, la reducción del dolor, la lubricación de las articulaciones, la reducción de la inflamación, el tratamiento de la artritis reumatoide y de la artrosis, mejoras cardiovasculares, la lubricación de la piel, la curación mejorada de heridas, y una mejora en el cuero cabelludo, el cabello, las cutículas, y las uñas
En algunos ejemplos, los métodos divulgados para inhibir la actividad microbiana se usan para prevenir o minimizar la formación de nuevos microbios. En otros ejemplos, los métodos se usan para matar o reducir a los microbios existentes. En un ejemplo, el MSM puede convertir un producto no usable contaminado en un producto usable.
De acuerdo con varios ejemplos, los métodos inhiben la actividad microbiana de manera instantánea. En otros ejemplos, los métodos inhiben la actividad microbiana a y hasta 1 día, 2 días, 3 días, 4 días, 5 días, 7 días, 10 días, 14 dias, 1 mes, 3 meses, 6 meses, 1 año, 2 años, 3 años, 4 años, 5 años o más
En varios ejemplos, se añade MSM a agentes de limpieza para potenciar la actividad antimicrobiana (por ejemplo, para inhibir la actividad de los microorganismos). En algunos ejemplos, se añade MSM a una formulación de jabón. En algunos ejemplos, el producto es un jabón seco, mientras que en otras realizaciones, el producto es un jabón liquido En algunos ejemplos, se añade MSM a una formuladón de gel para proporcionar un higienizante. Por ejemplo, los métodos para inhibir la actividad microbiana incluyen métodos para higienizar una superficie, tal como el cuerpo, equipamiento, suelos, materiales, paredes, etc. En determinados ejemplos, el higienizador resultante es un higienizador instantáneo. En otros ejemplos, el higienizador actúa de manera no instantánea (por ejemplo, es eficaz con el paso del tiempo). En algunos ejemplos, el higienizador se aplica al cuerpo. En otras realizaciones adicionales, el producto se aplica a una superficie. Las superficies incluyen, pero sin limitación, superficies comerciales, dispositivos médicos, superficies médicas, equipos de producción, suelos de producción y superficies para la preparación de alimentos. Las superficies pueden incluir, pero sin limitación, superficies domésticas, vehiculos, ordenadores, ropa, y juguetes
En algunos ejemplos adicionales, los metodos para inhibir la actividad microbiana incluyen rociar o incorporar MSM (por ejemplo, a de aproximadamente el 5 % a aproximadamente el 50 % en máscaras faciales o filtros. Los filtros pueden incluir, pero sin limitación, filtros para aire acondicionado, filtros de aire, filtros de agua. Los ambientes con aire reciclado, tales como los aviones, pueden beneficiarse especialmente de los sistemas de filtración con MSM. Las plantas de tratamiento de agua y de filtración de agua también pueden incorporar MSM para inhibir la actividad microbiana. En algunos ejemplos, se proporciona MSM para reducir la contaminación microbiana en ramos de flores y productos de jardineria (talles como fertilizantes y sustratos)
En algunos ejemplos, los métodos para inhibir la actividad microbiana incluyen inhibir la actividad microbiana de un
microorganismo presente en piensos para animales y para prevenir el crecimiento microbiano durante el almacenamiento o procesado del pienso. Los tipos de pienso para animales incluyen, pero sin limitación, piensos compuestos, pastos, o forraje. Los piensos para animales pueden consistir en materiales en crudo ylo aditivos. El pienso en crudo puede proporcionarse en forma de heno o granos. Como alternativa, el material en crudo puede procesarse y propOfcionarse en forma de un alimento, gránulos o copos. En algunos ejemplos, se aplica el MSM a pienso para animales para reducir el crecimiento de mohos. En otras rea lizaciones, se aplica el MSM a pienso para animales para reducir el crecimiento fúngico. En algunos ejemplos, se aplica MSM a materiales alimentarios en crudo y por lo tanto se incorpora en un producto alimentario acabado. En ejemplos adicionales, el producto se aplica al alimento durante o después de su fabricación En algunos ejemplos, el producto se aplica al alimento para su almacenamiento prolongado.
v . Métodos para producir productos que incluyen MSM
En el presente documento se divulgan métodos para producir productos que incluyen MSM En algunas realizaciones, se incorpora MSM en una etapa que reduzca la cristalización del MSM. En una realización, el MSM se incorpora en un producto antes del emulsionado de dicho producto. En otra realización, el MSM se encapsula (por ejemplo, en un lipido, polimero, u otro material) antes de su adición a un producto. El MSM microencapsulado, de acuerdo con algunas realizaciones, puede diseñarse para la liberación temporizada o de dosis de MSM. En otras realizaciones adicionales, se combina MSM con la parte acuosa de un producto antes de mezclar los ingredientes húmedos y secos En una realización, se mezcla MSM en fOfma de polvo seco en una matriz con un líquido polar o acuoso para activar el
MSM
En otra realización más, se añade MSM a un producto a una temperatura elevada (por ejemplo, mayOfde 25 oC, 30 oC, 40 oC, 50 oC, 75 oC, o mayOf). En algunas realizaciones. el MSM se no se ve afectado materialmente por el calor, y puede añadirse antes del calentamiento. Las soluciones que se encuentran a temperaturas mayores de aproximadamente 35 oC soportan concentraciones de MSM mayores del 50 % en algunas realizaciones. En varias realizaciones, el MSM no tiene un impacto sustancial en el pH del producto al que se añade. En una realización, los productos sólidos higroscópicos Y otros productos con bajo contenido de humedad comprenden MSM en el intervalo de aproximadamente el 15 % o más
En el presente documento también se divulgan métodos para fabricar un producto que tenga una concentración de conservantes reducida. En una realización, el método incluye proporcionar un medio que sea susceptible a la contaminación microbiana, en el que el medio comprende un conservante y añadir MSM al medio, en el que el MSM afecta a la contaminación microbiana mediante la inhibición del crecimiento microbiano. De acuerdo con una realización, el MSM se añade a una concentración de al menos aproximadamente el 5 % a aproximadamente el 20 % (pOf ejemplo, 5-8 %, 8-12 %, 12-15 %, 15-20 %, o mayor, y los intervalos intermedios de los mismos). En una realización, el MSM y el conservante inhiben el crecimiento microbiano en al menos un 50 % en el medio a temperatura ambiente, y el MSM complementa o potencia la capacidad del conservante para inhibir el crecimiento microbiano, reduciendo de este modo la concentración de conservante necesaria para inhibir el crecimiento microbiano. En una realización, el medio se emulsiona o mezcla de otro modo. En una realización, se añade MSM al medio antes del emulsionado (o mezclado de otro tipo)
Los siguientes ingredientes se proporcionan para ilustrar determinadas características ylo realizaciones particulares. No debe interpretarse que estos ejemplos limiten la divulgación a las caracteristicas o rea lizaciones particulares descritas
Ejemplos
Ejemplo 1
Modulación de la actividad microbiana basada en MSM
Este ejemplo describe la modulación basada en MSM de la actividad microbiana, tal como la potenciación o inhibición del crecimiento microbiano dependiendo de la concentración de MSM.
Se llevaron a cabo estudios de crecimiento microbiano adyacentes en medios complementados con MSM a una concentración del 0,1 % al 10 % Y una muestra de control que contenía un O % de MSM. Los microorganismos evaluados fuero Aspergillus niger, Gandida albicans, Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa, Escherichia cOIi, y Sa/monella cholerasuis. Todos los microorganismos se cultivaron en caldo de soja tríplica (TSB) y con la excepción de Gandida y Aspergilfus, todos se transfirieron satisfactoriamente a medio reciente cada día durante 4 días consecutivos antes de la inoculación para mantener a los organismos en una fase de crecimiento exponencial. Gandida y Aspergilfus tuvieron 48-58 horas de crecimiento en TSB antes de su inoculación al medio de ensayo. El Aspergillus también se cultivó en múltiples placas de agar con dextrosa de patata (POA) durante 48-58 hOfas. El illÓculo de Aspergillus se preparó extrayendo un enjuague de superficie con TSB de las placas de POA con un carril de Aspergillus, y después se añadió al cultivo de 48-58 horas hasta que se volvió lurbio. Para cada microorganismo de ensayo, se prepararon alícuotas de 90 mi con MSM al10 % o al O %. Una vez que se había emplacado cada conjunto de medios de ensayo por esterilidad, se inocularon a un nivel de 5 1-11 de inoculo pOf cada 10 mi de caldo (dilución del
in6culo a 1 :2000) con cada microOfganismo respectivo. Los Ofganismos bacterianos se incubaron a 30 QC ± 2 QC y los
organismos fúngicos se incubaron a 25 quot;C ± 2 quot;C
5 Los organismos fúngicos se emplacaron a diario en PDA en los días O hasta el día 7 cada 24 horas La preparación y
el emplacado se llevaron a cabo a temperatura ambiente. Las placas de hongos se incubaron a 25 oc ± 2 oc durante al menos 3 días. Las muestras de ensayo se emplacaron por triplicado en cada fecha de ensayo y se indican los promedios. Los datos se expresan como unidades fOfmadoras de colonias recuperadas por mililitro (ufdml).
10 Los efectos del MSM en el crecimiento de Aspergillus nigery en el crecimiento de Gandida albicans se muestran en las tablas 1-1(a) y 1-I(b), respectivamente. MSM al diez por ciento inhibió el crecimiento de Aspergillus niger en el día 4 del tratamiento, tal como se representa por una reducción dramática en la formación de colonias en dicha fecha. También se observó una reducción del crecimiento en las muestras de Gandida albicans tratadas con MSM ; sin embargo, la reducción no fue tan drástica en comparación con Aspergiflus niger. Por ejemplo, el medio
15 complementado con MSM al 10 % dio como resultado una viabilidad reducida de la levadura en comparación con concentraciones menores de MSM tan pronto como a los 2 días (día 2 de emplacado para Gandida). El crecimiento de Gandida se redujo de manera temprana en el estudio, con reducciones sustanciales de la población fúngica en el día 4 Después de estos instantes de tiempo, continuó la divergencia en las curvas de crecimiento durante el estudio para Gandida. Estos datos indican que una concentración de MSM del 10 % proporciona un efecto significativamente
20 negativo en el crecimiento de varios organismos fúngicos con el paso del tiempo
e,
Tabla 1-1 a). Efecto de MSM en el crecimiento de Aspergillus ni
Aspergillus niger
MSMaIO % MSM al 0,1 % MSM al 0,5 % MSM al1 ,O MSM al10 %%
Día O
1,Ox103 9, 1x10~ 7,6 x 10~ a, 9x10~ 1,2x103
Día 1
1,3xl03 2,3 X 103 2,7x 103 2,Oxl03 7,0 X 102
Día 2
4,3 x 103 3,0 x 10~ 4,Ox 103 2,Oxl03 1 , 6xl0~
Día 3
2,0 x 10~ 7,Sxl0¿ 1 , 3xl0~ 1,0 x 10 4,6 X 10¿
Día4
1,4x10 5,0 x 10~ 3,7x 10 3,3 x 10 20
Día 5
1,3x1ct 4,3 x 103 9,7x 103 6,Ox103 10
Día 6
4,4 x 1ct 1,1x104 7,0 X 103 4,7 X 103 3
Día 7
4,1 x 104 1,3x104 7,0 X 103 5,7x103 3
El efecto de MSM en el crecimiento de Staphylococcus aureus se ilustra en la tabla 1-2 Se observó una diferencia en
la viabilidad en presencia de concentraciones mayores de MSM. En particular, MSM al 10 % pareció reducir la
velocidad de crecimiento y el tamaño máximo de la población de Staphylococcus aureus

Tabla 1-2. Efecto del MSM en el crecimiento de StaDhvlococcus aureus.
Staphylococcus aureus
MSMaIO %
Día O
2,4xl0s
Día 1
3,6x108
Día 2
7,5 x 10
Día 3
9,6 x 108
Día 4
6,4 x 108
Día 7
2,6xl08
MSM al 0,1 %
MSM al 0,5 % MSM a11,0 % MSM al10 %
2,4 x 105
2,Sx 105 2,3x laS. 2,Sxl0S
4,6x108
4,1x 108 6,Ox 108 S,3x107
8,5 x 10
7,8 x 10 8,2 x 10 3,0 x 10
9,1 X 108
8,4 X 108 9,6x 10lt;gt; 5,1 x 108
7,9 X 108
4,7x108 4,5x 10lt;gt; 3,7 x 108
l ,axl08
1,7x 108 3,3x 108 9,0 x 108
El efecto de MSM en el crecimiento de Pseudomonas aeruginosa se ilustra en la tabla 1·3. La complementación del medio con un diez por ciento de MSM dio como resultado una divergencia sustancial en la viabilidad de Pseudomonas aeruginosa con el paso del tiempo. Por ejemplo, el medio complementado con MSM al10 % produjo una reducción de la población que duró durante los 4 primeros días del estudio, pero no persistió pasado dicho tiempo.
Tabla 1-3. Efecto de MSM al10 % en el crecimiento de Pseudomonas aeruginosa
MSM al O 0;'
MSM al10 0;'
Pseudomonas aeruginosa
MSM al 0,1 %
MSM al 0,5 %
MSM a11 ,O%
Día O
4,0 x 10
4,8 x 10
4,8 x 10
4,2 x 10
4,0 x 10
Día 1
4,4 x 108
5,1x108
5,4 x108
5,8x108
1,Ox108
Día 2
1,1x109
6,0 X 108
9,2 X 108
s ,7x108
s,8x 108
Día 3
1,6x10
1,4 x10
1,2x10
1,Ox10
5,3 x 10
Día4
1,6x10
2,0 x 10
1,4 x10
1,9x10
3,7 x 10
Día 7
1,4x10
2,1 x 10
1,6x10
1,2x10
6,0 x 10
El efecto de MSM en el crecimiento de Pseudomonas aeruginosa se ilustra en la tabla 1-4. La complementación del
medio con MSM al diez por ciento dio como resultado un crecimiento sustancialmente menor de E. co/i con el paso del
tiempo_
de Escherichia coli

Tabla 14 Efecto de MSM al10 % en el crecimiento
Escheríchia coli
MSMaIO % MSM al 0,1 % MSM al 0,5 % MSM a11 ,0 % MSM al10 %
Día O
6,9 x 105 6,4 x 105 7,0 X 105 6,7 X 105 6,8x 105
Día 1
9,2x108 1,Ox109 1,4x109 1,2x109 3,Ox 104
Día 2
1,3x109 1,4 x109 1,6x109 3,2x 109 1 , 2x10~
Día 3
1,6x109 2,0 X 109 1,9x109 1,8x109 3,9 x 10
Día4
1,4x10~ 1 , 4 x10~ 1,4x10'quot; 1,4x10'quot; 1,2x108
Día 7
1,3x106 1,2x109 2,8x 109 1,5x109 7,0 x 10
El efecto de MSM en el crecimiento de Sa/monelta cho/erasuis se ilustra en la tabla 1-5. El medio complementado con MSM al10 % redujo el crecimiento de Sa/monelta cho/erasuis en la mayoria de los instantes de tiempo del estudio.
25 Este ejemplo describe los resultados de las pruebas de eficacia anlimicrobiana de medios complementados con MSM.
Los compuestos o los productos formulados que tienen actividad antimicrobiana pueden evaluarse con la prueba de eficacia antimicrobiana (AET, por sus siglas en inglés) de la Farmacopea de los Estados Unidos (USP, por sus siglas en inglés). La AET implica la adición de microorganismos especificos (Gandida a/bicans, Aspergillus nigef, Escherlehia 30 eoli, Pseudomonas aeruginosa y Staphy/ococeus aUfeus) directamente a un producto de ensayo a concentraciones relativamente elevadas para estimular ta contaminación. El producto se mantiene durante un mes, analizándose semanalmente los niveles de microorganismos. Dependiendo de la ruta de administración de un producto, para cumplir la AET se requiere una reducción de 1 a 3 lag en las baclerias respecto de los niveles iniciales, que debe producirse en una a dos semanas, sin aumentos posteriores en las bacterias después de dos semanas. Para 35 levaduras y mohos, se permite la falla de aumento respecto del nivel de in6culos inicial. Al cumplir satisfactoriamente los criterios de la AET se demuestra que un producto, complementado opcionalmente con un compuesto anlimicriobiano que se esté evaluando, puede soportar una inoculación de hasta un millón de microorganismos por gramo de producto sin que este se contamine. La AET demuestra la eficacia de un sistema conservante en un
producto y/o puede usarse como parte de un estudio de estabilidad para determinar si un conservante afectará a la vida útil de un producto.
La AET se llevó a cabo añadiendo los microorganismos especificados directamente al medio de prueba
5 complementado con MSM a concentraciones que simulan la contaminación microbiana. Se añadieron a los medios complementados con MSM cultivos activos recientes estandarizados a una concentración entre 100.000 y 1.000.000 de células por mi del producto de ensayo. Las inoculaciones se efectuaroo usando Gandida albicans, Aspergillus niger, Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa y Staphylococcus aureus. Se usó caldo de soja triptica (TSB) como medio de cultivo. Se diluyó MSM a 1/1, 1/5, 1f1 O, 11100, Y 1/1000 Y se usó cada una para complementar el medio. El medio
10 inoculado se mantuvo durante un mes, tiempo durante el cual se enumeraron semanalmente los microorganismos añadidos para determinar si estaban creciendo, muriendo, o permanecian próximos al nivel inicial de inoculación. Se midieron puntos de datos por triplicado a las 48 horas, 3, 5, 14, 20, 28, Y30 días. Los resultados de estos estudios se muestran en las tablas 2-1 a 2-8. Los criterios de aceptación para la eficacia antimicrobiana se describen en detalle en la USP
20 Tabla 2-3. Resultados de la prueba AET Dara la dilución 1:5 de MSM.
Inoculo
Organismo de ensayo 3 días 5 días 14 días 20 días 28 días 30 días inicial
h
4,0 lt;10 lt;10
lt;10 105
Aspergiflus Niger
3 x 105 X 4,2 X 105
3,8x 105
3 x 103

Tabla 2-1. Resultados de la prueba AET para la dilución 1:1 de MSM.
Organismo de ensayo
Inóculo inicial 48 h 3 días 5 días 14 días 20 días 28 días 30 días
Aspergiflus Niger
3 x 105 3,5 X 105 3,2x105 3,1x105 2,3x103 lt;10 lt;10 lt;10
Candida Afbicans
2,5x 105 2,8 X 10' 2,6x105 2,4x1 05 1,2x1 03 lt;10 lt;1 0 lt;1 0
scherichia cofi
1,3x105 1,3 X 10' 1,2x105 1,1x105 1,8x103 lt;10 lt;10 lt;10
Pseudomonas eruginosa
1,5x105 1,8 X 105 1,9x105 1,6x105 4 ,0 X 103 lt;10 lt;10 lt;10
Staphylococcus ureus
5,5x 105 5,4 X 105 5,6x105 5,2x105 3,7 X 103 lt;10 lt;10 lt;10
Safmonella typhimurium
4,6x 105 4,9 X 105 5,1 X 105 4,7x105 2,5 X 103 lt;10 lt;10 lt;10
Tabla 2-2. Reducción logarítmica respecto del inoculo de microorganismos inicial con una dilución 1: 1 de MSM.
Organismo de ensayo Aspergillus Niger Candida Albicans Escherichia cofi Pseudomonas aeruginosa Staphyfococcus aureus Salmonelfa typhimurium
14 días 3,4 3,0 3,3 3,6 3,6 3,4 28 días 4,5 4,4 4,1 4,2 4,7 4,7
Candida Albicans
2,5xl05 2,9 X 105 3,1 x 105 3,2x 105 2 X 103 lt;1 0 lt;10 lt;10
Eseheriehia eoli
1,3x105 1,4 X 10' 1,7xl05 2 X 105 1 X 103 lt;10 lt;10 lt;10
Pseudomonas eruginosa
1,5xl05 1,6 X 105 2,Oxl05 2,2x 105 1,2xl03 lt;10 lt;10 lt;10
Staphyfoeoccus ureus
5,5x 105 5,7 X 105 6,0 X 105 5,9x 105 2,3x103 lt;10 lt;10 lt;10
Safmonelfa typhimurium
4,6 x 105 5,0 X 105 5,2 X 105 5,4xl05 3,2xl03 lt;10 lt;10 lt;10

Tabla 2-4. R d ·ó I d l· óc I de microorganismos IniCIa con una d·1 ·ó 15 de MSM.
e UCCI n oQanlmlca respecto u o IUCI n
e 'quot;
¡Organismo de ensayo
14 días 28 días
IAspergilfus Niger
3,5 4,5
Candida Afbieans
3,3 4,4
~seheriehia eoJi
3,0 4,1
IPseudomonas aeruginosa
3,2 4,2
Staphyloeoeeus aureus
3,4 4,7
Salmonefla typhimurium
3,5 4,7

Tabla 2-5. Resultados de la orueba AET oara la dilución 1:10 de MSM
Organismo de ensayo
Inóculo inicial 48 h 3 días 5 días 14 días 20 días 28 días 30 días
Aspergiflus Niger
3 x 105 5 x 10 5,2 X 105 5,4x 105 2 x 104 lt;10 lt;10 lt;10
Candida Albicans
2,5x 105 3 x 10 3,4 X 105 4 X 105 1,5xl04 lt;10 lt;10 lt;10
Escherichia cofi
1,3xl05 2 x 10 2,3xl05 3,2x 105 2,5x 103 lt;10 lt;10 lt;10
Pseudomonas eruginosa
1,5x105 1,9 X 105 2,2 X 105 2,9x 105 4 x 105 lt;10 lt;10 lt;10
Staphylococcus ureus
5,5x 105 5,9 X 10' 6,1 X 105 6,3x 105 2,9xl04 lt;10 lt;10 lt;10
Salmoneffa typhimurium
4,6 x 105 5,0 X 105 5,2 X 105 5,5x 105 3,2 x 103 lt;10 lt;10 lt;10

Tabla 2-6 Reducción logarítmica respecto del illÓculo de microorganísmos inicial con una dilución 1:1 ode MSM
Oraanismo de ensayo
14 días 28 días
Aspergiflus Niger
4,3 4,5
Candida Afbicans
4,2 4,4
Escherichia coU
3,4 4,1
Pseudomonas aeruginosa
3,6 4,2
Staphylococcus aureus
4,5 4,7
Salmonella typhimurium
3,5 4,7
Tabla 2-7_ Resultados de la prueba AET para la dilución 1:100 de MS M
Organismo de ensayo
Aspergillus Niger
Candida Albicans
Escherichia coli
seudomonas aeruginosa
Staphylococcus aureus
Salmonella typhimurium
Inóculo inicial
3 x 105
2,5x 105
1,3x105
1,5x105
5,5x 105
4,6x 105
48 h
TNTC·
TNTC
TNTC
TNTC
TNTC
TNTC
• Colonias demasiado numerosas para contar (TNTC)
Tabla 2-8_ Resultados de la prueba AET para la dilución 1 1000 de MS M
¡Organismo de ensayo
Inóculo inicial 48 h
IAspergillus Niger
3 x 105 TNTC·
Candida Albicans
2,5x 105 TNTC
scherichia coli
1,3x105 TNTC
fseudomonas aeruginosa
1,5x105 TNTC
Staphyfococcus aureus
5,5x 10$ TNTC
Salmonelfa typhimurium
4,6x 10$ TNTC
Las diluciones 1:1, 1:5 y 1 :10 de MSM (tablas 2·1 a 2·6, anteriores), indican que estas concentraciones de MSM en los medios eliminaron a los organismos y no tienen simplemente un efecto estático en el crecimiento. Basándose en las poblaciones de cultivo en el día 5, los efectos bactericidas fueron inesperados, ya que las poblaciones de cultivo fueron estables o mostraron signos de aumento del crecimiento. Sin embargo, a los 14 días, se observaron reducciones en 10 los niveles de inoculación iniciales, ya los 20 días, se observó una eliminación total de los microorganismos usando
MSM a al menos el10 %_Estos resultados se confirmaron añadiendo un blanco de 90 mi de TSB con 10 mi de la matriz de dilución ensayada (por ejemplo, el medio que se considera que ya no contiene microorganismos vivos)_Ninguno de los microorganismos pudo cultivarse y no se observó contaminación Estos resultados demuestran que MSM, a determinadas concentraciones, es bactericida para estos organismos.
Ejemplo 3
Efectos bactericidas de MSM estéril y no estéril en Escherichia coU
20 Este ejemplo describe los efectos bactericidas de MSM estéril y no estéril en el crecimiento de E. coli.
La metodología de ensayo AET lt;51gt; de la USP descrita en el ejemplo 2 se usó como base para evaluar la leta lidad para Escherichia coli (cepa ATCC 8739) de varias concentraciones de MSM en el intervalo del 5 al 16 % en TSB o suero salino. La AET lt;51 gt; de la USP (Farmacopea de los Estados Unidos) es un compendio de un método de ensayo 25 para la eficacia antimicrobiana para determinar si un conservante es eficaz basándose en una metodología verificada y validada_ Los parámetros de la AET se han descrito anteriormente _ En este estudio, después del periodo de incubación designado, se evaluaron visualmente los cultivos y después se sembraron por estrías y cultivaron en agar MacConkey selectivo para el análisis cua litativo de los efectos de las diversas concentraciones de MSM. Este estudio evaluó también el efecto de la esterilización previa del MSM (mediante autoclavado pOf vapor a 121 °C durante 15
30 minutos) antes de la preparación del medio. Se prepararon medios de ensayo pesando una cantidad adecuada de MSM y añadiéndola a 25 mi de medio TSB o de suero salino Las composiciones de medio se codificaron tal como se proporciona en la tabla 3-1
Tabla 3-1 Composiciones de medios ensayados contra E col'
Código del medio
Preparación
NS
Suero salino estéril añadido a MSM no estéril
NSA
Salino + MSM, después esteril izado
SB
SB estéril añad ido a MSM no estéril
SBA
SB + MSM, después esterilizado
SBe
SB sin MSM, sembrado con E. coli
-) TSBC
control negativo (sin E. coli)
NSe
Salino sin MSM, sembrado con E col i
-) NSC
control negativo (sin E. coli)
Todos los tubos excepto los controles negativos se sembraron con 250 ~I de un cultivo de 1,2 x 108, que proporciona una densidad de población inicial de E. col; de 1,2 x 106/ml. Los tubos se incubaron a 25 QC.
5 A las 24 horas, se observaron sigIlOs visibles de crecimiento en el medio TSBfTSBA con MSM al 5-9 % (véase la tabla 3-2 a continuación). Por el contra rio, no se observaron sigIlOs de crecimiento en los tubos con el medio TSBrrSBA con MSM a110-16 % (véase la tabla 3-2 a continuación). Los tubos con salino no mostraron signos de crecimiento. Cuando se sembraron en medio MacConkey, se obtuvo un resultado de fuerte crecimiento en todos los medios que contenían
10 MSM al 5-9 %, mientras que se detectaron menos colonias en las placas sembradas a partir del medio TSBrTSBA con MSM al10 %. Se obtuvo un crecimiento escaso o nulo de la siembra de los medios TSBrrSBA con MSM a111-16 %. Se detectó crecimiento en el control positivo de TSB y salino (TSB o salino sin MSM, sembrado coo E. coll), mientras que no se detectó crecimiento en las placas sembradas a partir del medio sin adición.
,
15 Tabla 3 2 Perfil d e crecimiento e colen MSM1 que contiene me espué s de 24 horas
dE" '0
Concentración de MSM TSB 5% Elevado 6% Elevado 7 % Elevado 8% Elevado 9 % Elevado 10 % Moderado 11 % Escaso 12 % Escaso 13 % Escaso 14 % Escaso 15% Escaso 16 % Escaso
TSBA Elevado Elevado Elevado Elevado Elevado Moderado Escaso Escaso Escaso Escaso Escaso Escaso NS Elevado Elevado Elevado Elevado Elevado Elevado Elevado Moderado Moderado Moderado Moderado Moderado NSA Elevado Elevado Elevado Elevado Elevado Elevado Elevado Moderado Moderado Moderado Moderado Moderado
Tal como se muestra en la tabla 3-3, a las 48 horas se observaron sigIlOs de fuerte crecimiento en los tubos de cultivo
de TSBrTSBA con MSM al 5-10 %. Se observó un crecimiento evidente en los tubos de cultivo con TSBrrSBA con
MSM al11 %. De manera similar al instante de 24 horas, se observaron signos escasos o nulos de crecimiento en los
20 tubos de cultivo de TSBrTSBA con MSM al 12-15 %. Después de la siembra, se produjo un crecimiento bacteriano fuerte en todos los medios que contenían MSM al 5-10 %. TSBrrSBA coo MSM al 11 % permitió un crecimiento mooerado, mientras que la misma concentración de MSM añadida a suero salino permitió un crecimiento elevado. A concentraciones del 12-16 % de MSM en TSBrTSBA, se detectó un crecimiento de escaso a nulo en las placas. Se observó un crecimiento moderado a partir de coocenlraciones similares de MSM en medio salino
Tabla 3-3_
Después de 72 horas de cultivo, se observaron signos de fuerte crecimiento en los tubos de cultivo de TSBrTSBA con MSM al 5-10 % (tabla 3-4). Se observó un crecimiento evidente en los tubos de cultivo con TSBfTSBA con MSM al 11 5 %_De manera similar al instante de 24 horas, se observaron signos escasos o nulos de crecimiento en los tubos de cu ltivo de TSBfTSBA con MSM al 12-15 %_Después de la siembra, se produjo un crecimiento bacteriano fuerte en todos los medios que contenían MSM al 5-10 %. TSBrrSBA con MSM al 11 % permitió un crecimiento moderado, mientras que la misma concentración de MSM añadida a suero salino permitió un crecimiento elevado_ A concentraciones del 12-16 % de MSM en TSBfTSBA, se detectó un crecimiento de escaso a nulo en las placas. Se
10 observó un crecimiento moderado a partir de concentraciones similares de MSM en medio salino
Tabla 3-4. Perfil de crecimiento de E. coli en MSM que contiene medio después de 72 h oras.
Concentración de MSM
TSB TSBA NS NSA
5%
Elevado Elevado Elevado Elevado
6 %
Elevado Elevado Elevado Elevado
7%
Elevado Elevado Elevado Elevado
8 %
Elevado Elevado Elevado Elevado
9 %
Elevado Elevado Elevado Elevado
10 %
Elevado Elevado Elevado Elevado
11 %
Moderado Moderado Elevado Elevado
12 %
Escaso Escaso Moderado Moderado
13 %
Escaso Escaso Moderado Moderado
14 %
Escaso Escaso Moderado Moderado
15 %
Escaso Escaso Moderado Moderado
16 %
Escaso Escaso Moderado Moderado
Estos resultados demuestran que las concentraciones de MSM de aproximadamente el 10-16 % son eficaces pa ra
15 eliminar bacterias en determinados instantes. A las 24 horas, el MSM al 10 % redujo la población bacteriana viable, mientras que a las 48-72 horas las concentraciones más elevadas fueron eficaces para eliminar la mayoría de la población bacteriana _Las concentraciones al 10-16 % de MSM en TSBfTSBA fueron más eficaces que la misma concentración en medio basado en salino Los datos sugieren además que la esterilización por vapor no tiene un impacto inherente en la eficacia del MSM.
Ejemplo 4
Comparación de la eficacia bactericida de MSM en medio basado en salino o en caldo de soja triptica (TSB)
5 Este ejemplo compara la eficacia bactericida de MSM en medio basado en salino y en TSB.
Tal como se ha presentado en los ejemplos 2 y 3, la metodología de ensayo AET lt;51 gt; de la USP se usó como base para evaluar la leta lidad para E. coli de diversas concentraciones de MSM (en copos o Microprili) en el intervalo deiS al 16 % en TSB o salino. Cada composición de medio se inoculó con 1,25 x 106fml, de E cofi y después se cultivó durante
10 siete días a 35 ac. Al final del periodo de incubación, se evaluaron visualmente los cultivos y después se cultivaron en tripto-soja agar a concentraciones diluidas en serie para asegurar el crecimiento bacteriano (en caso de haber1o) a una densidad que podía cuantificarse. Los cultivos emplacados se cultivaron durante 24 horas a 35 ac antes de su análisis. Las composiciones de medio se codificaron tal como se muestra en la tabla 4-1 y se proporcionan los resultados de estos estudios en la tabta 4-2
15 Tabla 4-1 . Composiciones de medio
Código del medio PS FS PTSB FTSB SBe -) TSBC NSe -) NSe
Preparació n Microprill MSM añadido a salino MSM en copos añadido a salino Microprill MSM añadido a TSB MSM en copos añadido a TSB S8 sin MSM, sembrado con E. coli control negativo (sin E. coli) Salino sin MSM, sembrado con E coli control negativo (sin E. coli)

Tabla 4-2 . Crecimiento logarítmico de E. coli en diferentes medios con diversas concentraciones de MSM.
Concentración de MSM 16 % 15 % 14 % 13 % 12 % 11 % 10 % 9 % 8 % 7 % 6 % 5 %
FTSB 1 2,6 2,9 2,6 2,7 3,6 6 6 6 6 6 6 FS 4,5 4,8 4,9 5,5 5,1 5,4 5,5 5,6 5,7 5,9 5,9 5,7 PTSB 1 2,3 2,1 3 3 3,3 6 6 6 6 6 6 PS 4,8 5,1 5,6 5,6 5,8 5,9 5,8 5,9 6 6 6,2 6,4
20 Las concentraciones de MSM en el intervalo del 11-16 % tienen un impacto negativo en el crecimiento de E. cofi en cultivo durante 7 días. A medida que la concentración de MSM aumenta por encima del 10 % en los medios FTSB o PTSB, se redujo el crecimiento de E. coli. Ambas formas de MSM mostraron eficacia para inhibir el crecimiento bacteriano
25 Ejemplo 5
Efecto del medio sin cloruro de sodio en el efecto bactericida del MSM
5 Este ejemplo muestra el efecto del medio sin cloruro de sodio en los efectos bactericidas del MSM
Se llevó a cabo un estudio que empleaba medio de caldo de Müller-Hinton, que no contiene NaCI. Se comparó el medio de Müller-Hinton estándar con el medio de Müller-Hinton complementado con NaCI al mismo nivel que el medio basado en salino del ejemplo 4_ Se añadió MSM a cada medio a concentraciones en el intervalo de15-16 %_Después
10 de la inoculación de cada tipo de medio que contenía MSM oon 1, x 101ufclml de E. eoli, los cultivos se incubaron a 35 oc durante siete dias _ Se tomaron alicuotas de cada cultivo a las 24 y 48 horas, así como a los 7 días_ Después, se cultivaron las alícuotas en tripto-soja agar a concentraciones diluidas en serie para asegurar el crecimiento bacteriano (en caso de haberlo) a una densidad que podía cuantificarse. Los cu ltivos emplacados se cultivaron durante 24 horas a 35 oc antes de su análisis_ Las composiciones de medio se codificaron tal como se proporciona en la tabla 5-1 Los
15 resultados de estos estudios se proporcionan en las tablas de 5-2 a 5-4.
Código del medio Preparación

Tabla 5-1 Composiciones de medio
PMHS
Microprill MSM añadido a medio de Müller-Hinton más NaCI
FMHS
MSM en copos añadido a medio de Mü ller-Hinton más NaCI
PMH
Microprill MSM añadido a medio de Mü ller-Hinton
FMH
MSM en copos añadido a medio de Mü ller-Hinton
MHC
Medio de Müller-H inton sin MSM, sembrado con E col i
-) MH C
ontrol negativo (sin E_ coli)
MHNSC
Medio de Müller-Hinton más NaCI sin MSM, sembrado con E. ooli
-) MHNSC
ontrol negativo (sin E. coli)
Después de 24 horas en cultivo, se detectó una reducción de aproximadamente 1 log respecto del inoculo inicial en
20 todos los medios que tenían concentraciones de MSM mayores del 13 % (tabla 5-2)_ Además, a un 12 % de MSM, todas las composiciones de medio redujeron el crecimiento de E. eoli, excepto la composición PMHS. A un 11 % de MSM, solo el medio FMH redujo el crecimiento de E. eoli.
Tabla 5-2. Crecimiento logarímicode E. col; en medio de Müller-Hinton complementado con MSM o Müller-Hinton (más
Concentración de MSM
PMHS
FMHS PMH FMH
16 %
6,2 6,1 6,1 6,2
15 %
6,0 6,1 6,0 6,2
14 %
6,0 6,0 5,9 6,3
13 %
6,3 6,2 5,8 5,9
12 %
7,2 5,7 5,8 5,9
11 %
7,9 7,8 7,4 5,9
10 %
8,7 8,2 7,9 7,8
9 %
8,3 8,3 8,3 8,2
8 %
8,2 8,4 8,4 8,4
7 %
8,3 8,4 8,4 8,5
6 %
8,1 8,4 8,5 8,5
5 %
8,2 8,4 8,6 8,6
NaCI) des
ués de 24 horas
Después de 48 horas en cultivo, las composiciones de medio con concentraciones de MSM mayOfes del 13 % redujeron el crecimiento de E. eoli e 1-2 lag. Determinadas concentraciones de MSM son eficaces para reducir el
crecimiento bacteriano, lo que es sorprendente ya que otras concentraciones de MSM son eficaces para soportar la actividad bacteriana aumentada.
Tabla 5-3. Crecimiento logarímicode E. col; en medio de Müller-Hintoo complementado con MSM o Müller-Hinton (más
Concentración de MSM
16 %
15 %
14 %
13 %
12 %
11 %
10 %
9%
8%
7%
6%
5%
NaCI) des
ués de 48 horas
PMHS
FMHS
PMH
FMH
6,0
5,9
6,0
5,9
6,0
5,9
5,8
4,6
5,7
5,9
5,4
5,3
5,9
5,9
5,4
5,2
6,7
6,9
5,6
5,3
7,8
7,8
7,2
7,1
7,9
8,0
7,9
8,2
8,2
8,1
8,1
8,2
8,1
8,1
8,2
8,3
8,2
8,2
8,0
8,4
8,1
8,2
8,4
8,4
8,4
8,3
8,3
8,4
Después de 7 dias en cultivo, las composiciones de medio que contenían tan poco como un 12 % de MSM inhibieron
sustancialmente el crecimiento de E. coli (tabla 54). El medio FMHS fue el más eficaz con MSM al 12 %,
proporcionando una reducción de 3 lag en E. coli
Tabla 54 . Crecimiento logarímicode E. col; en medio de Müller-Hintoo complementado con MSM o Müller-Hinton (más
después de 7 días
NaCI
Concentración de MSM
16 %
15 %
14 %
13 %
12 %
11 %
10 %
9%
8%
7%
6%
5%
PMHS
4,4
4,7
4,9
3,9
6,0
6,8
6,8
6,9
7,2
7,5
8,0
8,0
FMHS
4,7
4,7
4,7
4,4
4,1
6,2
6,9
7,0
7,0
6,8
8,0
8,1
PMH
3,9
3,8
3,3
3,2
6,0
6,6
7,0
7,0
7,8
6,7
7,5
8,0
FMH
7,8
7,9
7,6
7,2
6,5
7,0
7,0
6,5
7,2
7,6
7,6
7,8
Ejemplo 6 Efecto bactericida de MSM en el medio bajo en proteínas y sin cloruro de sodio Este ejemplo muestra el efecto bactericida de MSM en el medio bajo en proteínas y sin doruro de sodio
20 En este experimento se usó como medio caldo de lactosa sin NaCI ni proteínas. Se añadió MSM al caldo de lactosa a
concentraciones en el intervalo del 5-16 %. Se complementó un conjunto duplicado de medios que contenían MSM con
DMSO a una concentración final del1 %. Cada composición de medio se inoculó inicialmente con 6,75 x 106 ufcJml de
Concentración de MSM
LBM LBMO
16%
4 4
15%
3,9 3,6
14 %
4 3,6
13 %
3,3 3,2
12 %
3,4 2,9
11 %
2,5 3,1
10 %
6,9 4,2
9 %
7,9 7,9
8%
8,2 8,4
7 %
8,4 8,6
6%
8,4 8,6
E coli. Los cultivos se inocularon a 25 oC durante siete días. Se tomaron alícuotas de cada cultivo después de 24 horas de cultivo y al final de los siete días en cultivo. Las alícuotas se diluyeron en serie (con diluyente de Letheen modificado) y se emplacaron en placas de tripto-soja agar. Las placas cultivadas se cultivaron durante 24 a 35 oC y después se analizaron. Las composiciones de medio se codificaron tal como se muestra en la tabla 6-1 . Los resultados de estos estudios se muestran en las tablas 6--2 y 6--3

Tabla 6-1 . Composiciones de medio
C6di LBM LBMD LB -LB
o del medio P,e araci6n MSM añad ido a caldo de lactosa MSM añad ido a caldo de lactosa complementado con DMSO al1 % aldo de lactosa sin MSM sembrado con E coli ntrol ne ativo sin E eoll
El ca ldo de lactosa que contenía MSM al 11-16 % redujo el crecimiento bacteriano desde aproximadamente 1 log (16 10 % de MSM) a un máximo de 2,2 lag (11 % de MSM) tal como se muestra en la tabla 6-2 La inhibición del crecimiento bacteriano se redujo en 1 log o más a partir de MSM al 9-16 %.
Tabla 6-2 Lag de crecimiento de E coli a las 24 horas en MSM-caldo de lactosa con o sin DMSO
Concentración de MSM
LBM LBMD
16 %
5,8 5,3
15 %
5,6 5,5
14 %
5,5 5,3
13 %
5,1 5
12%
5,5 4,9
11 %
4,6 5,6
10 %
7 4,8
9%
7,1 5,7
8%
8 7,8
7%
8 9,2
6 %
8,1 8,4
5%
8,4 8,8

Tabla 6-3 Loq de crecimiento de E coli a los 7 días en M sM-caldo de lactosa con o sin DMSO
15 Después de 7 días de cultivo, fue evidente un patrón más definido de inhibición del crecimiento bacteriano (tabla 6--3) MSM al10 % en caldo de lactosa mantuvo la población de E. coli aproximadamente equivalente al inóculo inicia l.
5 % 8,5 8,6
Ejemplo 7
Evaluación del efecto bactericida de MSM en cosméticos
Este ejemplo muestra el efecto bactericida de MSM en cosméticos.
Se efectuó una evaluación inicial del efeclo bactericida de MSM en una matriz cosmética La matriz cosmética fue una base de crema Uojoba) que se usa en muchos produclos cosméticos. Se incorporó MSM en la crema a
10 concentraciones en el intervalo del 5-16 % de MSM. Después, se sembró en cada una de estas concentraciones E. coli a un nivel de 4,6 x 105 ufc/ml y se incubó a 25 oC durante 48 horas. Después de 48 horas, se diluyeron allcuotas de cada cultivo y se emplacaron en soja triptica agar, que después se incubó a 35 oC durante 24 hOfas antes de cOfltar. Los resultados de estos estudios se muestran en la tabla 7-1
15 Tabla 7-1 . Lag de cu ltivo de 48 horas de E. col; en matriz cosmética que contiene MSM
Concentración de MSM
Crema
16 %
1
15 %
1
14 %
1
13 %
1
12 %
1
11 %
0,78
10 %
1,5
9 %
1,9
8 %
1,8
7 %
2,5
6 %
2
5%
3,16
Estos datos indican que las bacterias que crecen en una crema cosmética son particularmente sensibles al MSM.
Sorprendentemente, concentraciones menOfes de MSM (por ejemplo, el intervalo de concentración del 5-9 %)
inhibieron sustancialmente el crecimiento bacteriano en este estudio. Por lo tanto, en varias realizaciones, se usa MSM
20 en concentraciones mayores del 5 % para inhibir la actividad microbiana.
Ejemplo 8
Evaluación de la actividad bactericida de MSM al10 % en una base cosmética con o sin conservante durante 25 28 días
Este ejemplo muestra la actividad bactericida de MSM al10 % en una base cosmética con o sin conservante durante un periodo de 28 dias
30 Para evaluar la capacidad del MSM para funcionar como un agente antimicrobiano de acción prolongada en una base cosmética, se incorporó MSM al 10 % en una matriz de crema cosmética sembrada con E. coli, que se evaluó durante un periodo de tiempo de 28 dias usando el protocolo de AET lt;51gt; de la USP. La matriz de crema cosmética en la que se incorporó el MSN no tenia conservantes. También se sembró con E. coli y se evaluó una crema adicional, con un conservante. Los resultados de estos estudios se muestran en las tablas 8-1 a 84
Tabla 81-Efecto de MSM al 10 % en el crecimiento microbiano en una crema cosmética sin conservante ¡Organismo de ensayo
Inóculo inicial 48 h 7 días 14 días 28 días
~spergillus Niger
1,1x105 8 x 103 8 X 103 6 X 103
5 X 102 5
Candida Albicans
2,1x10
lt;10 lt;10 lt;10 lt;10
~scherichia cofi fSeUdOmOnaS aeruginosa Staphylococcus aureus
4,8x106 1,89x106 4,Ox106 lt;10 lt;10 lt;10 lt;10 lt;10 lt;10 lt;10 lt;10 lt;10 lt;10 lt;10 lt;10

Tabla 8-2. Reducción logarítmica respecto del inóculo de microorganismo inicial con MSM al10 % en dilución de MSM
en cosmético de jojoba sin conservantes
p rganismo de ensayo
14 días 28 días
~spergiffus Niger
1,2 2,3
Candida Afbicans
4,3 4,3
jEscheriChia cofi
5,7 5,7
fseudomonas aeruginosa
5,3 5,3
Staphylococcus aureus
5,6 5,6

Tabla 8-3. Crecimiento microbiano en una crema cosmética Que contiene un conservante
Organismo de ensayo Aspergillus Niger Candida Albicans Escherichia cofi Pseudomonas aeruginosa Staphyfococcus aureus
Inóculo inicial 1,1x105 2,1x105 4,8x106 1,89x106 4,0 x 106 48 h 7 días 14 días 2 x 106 1,6 X 102 18 X 101 lt;10 lt;10 lt;10 lt;10 lt;10 lt;10 lt;10 lt;10 lt;10 3 X 104 1,6 X 104 lt;10 28 días 3 X 101 lt;10 lt;10 lt;10 lt;10

Tabla 8-4 ReducciÓn logarítmica respecto del inóculo de microorganismo inicial en crema cosmética de jojoba que contiene un conservante
Organismo de ensayo
14 días 28 días
Aspergiflus Niger
2,7 3,5
Candida Afbicans
4,3 4,3
Escherichia coli
5,7 5,7
Pseudomonas aeruginosa
5,3 5,3
Staphyfococcus aureus
5,6 5,6
10 Estos estudios demuestran que una base de crema cosmética que contiene MSM es eficaz para inhibir sustancialmente el crecimiento microbiano durante un periodo de 28 días. Además, estos estudios demostraron que en ciertas condiciones, MSM es un agente antimicrobiano más eficaz que un conservante cosmético convencional. Por ejemplo, MSM al10 % redujo la carga microbiana en un grado mayor a las 48 horas en comparación con una crema que contiene conservante. Además, el S. aureus se redujo a niveles prácticamente indetectables a las 48 horas en la
15 crema que contenía MSM. Por el contrario, la crema que contenía conservante mostró una modesta población bacteriana de 3 x 104 bacterias después de 48 horas. A pesar de una fase inicial menos robusta, la carga bacteriana de la crema que contenía conservante se redujo en la misma medida al final del estudio, en comparación con la crema que contenía conservante.
20 Ejemplo 9
Evaluación de la actividad antimicrobiana de MSM en dos composiciones cosméticas sin conservantes
Este ejemplo describe la actividad anlimicrobiana de MSM en dos composiciones cosméticas sin conservantes 25 representativas
Tal como se describe en el ejemplo 8, anterior, se incorporó MSM al 10 % en las matrices cosméticas, que se sembraron con diversas inoculaciones iniciales de microbios. De acuerdo con la prueba AET lt;51gt; de la USP, estos cultivos sembrados con microbios se incubaron durante 28 días, retirándose muestras a las 48 horas, 7 días, 14 días, 30 y 28 días para su emplacado y posterior recuento de colonias. Los resultados de estos estudios se muestran en las
labias 9-1 a 9-4 a continuación -ecto
Tabl a 9 1 Ef de MSM a110 % en e crecimiento b actenano en a composlcl n cosmeUca sin conservantes Organismo de ensayo
Inóculo inicial 48 h 7 días 14 días 28 días
lt;10
jAspergilfus Niger
8,Ox10s 9,Ox103 4,0 x 103 5,0 X 101
lt;10 lt;10
Candida Albicans
2,Ox106 2,1 x 103 lt;10
Escherichia col;
lt;10 lt;10 lt;10
5,8x106
5,4x104
lt;10 lt;10
Pseudomonas aeruginosa
5,7x106 7,3x103 lt;10
lt;10 lt;10 lt;10
Staphylococcus aureus
5,3x106
1,9x104
Tabla 9-2 Reducción logarítmica respecto del in6culo de microorganismo inicial con MSM al10 % en la composición cosmética sin conservantes n o 1
Organismo de ensayo
14 días 28 días
~spergiflus Niger
4,2 4,9
Candida Afbicans
5,3 5,3
Escherichia coli
5,8 5,8
Pseudomonas aeruginosa
5,8 5,8
Staphylococcus aureus
5,7 5,7
Tabla 93-Efecto de MSM a110 % en e crecimiento b actenano en a composlcl n cosmetlca sin conservantes Organismo de ensayo
Inóculo inicial 48 h 7 días 14 días 28 días
8,Ox10s 9,0 x 103 3,O x103 1,3x103 6,0 X 101
IAspergiffus Niger
lt;10 lt;10
Candida Afbicans
2,Ox106 9,0 x 102 lt;10
Escherichia col;
lt;10 lt;10
5,8 x 106
1,7x105 lt;10
lt;10 lt;10
Pseudomonas aeruginosa
5,7x106 2,1 x 103 lt;10
lt;10 lt;10
Staphylococcus aureus
5,3x106 1,5x10s lt;10
10 Tabla 9-4. Reducción logarítmica respecto del in6culo de microorganismo inicial con MSM al10 % en la composición
cosmética sin conservantes n o 2
Organismo de ensayo
14 días
28 días
jAspergiflus Niger
2,8
5,1
Candida Afbicans
5,3
5,3
Escherichia coli
5,8
5,8
Pseudomonas aeruginosa
5,8
5,8
Staphylococcus aureus
5,7
5,7
Estos estudios demuestran que MSM mostró propiedades antimicrobianas eficaces en ausencia de un conservante.
15 Ejemplo 10
Concentraciones seleccionadas de MSM soportan la actividad microbiana
Este ejemplo demuestra que concentraciones seleccionadas de MSM soportan la actividad microbiana.
20 Se compararon estudios de crecimiento adyacentes en medio fortificado con MSM a una concentración de MSM del O, 0,04, 0,1, 0,2, 0,4 Y 1 % con la curva de crecimiento de varios microorganismos con una muestra de control con una concentración de MSM del O %. Cada Ofganismo (Lactobacillus rhamnosus, Lactobacillus acidophilus, y Bifidobacterlum bifidum) se cultivó en medio de crecimiento bacteriano MRS (caldo) y se emplacó en MRS agar a
25 diferentes intervalos de tiempo. Los resultados se expresan en unidades formadoras de colonias por mililitro (ufdml).
Para cada organismo de ensayo, se prepararon alícuotas de 100 mi de caldo MRS con la concentración respectiva de MRS según se indique. Inicialmente, se preparó una soluciórJ de prueba al 1 %, 0,4 %, Y 0,2 % de MSM (+/-0,01 %) añadiendo 1 9 o 0,45 9 de MSM en 110 g de caldo MRS y 0,20 9 de MSM en 100 g, respectivamente. Las concentraciones de ensayo del 0,1 % Y 0,04 % se prepararon preparando una dilución 1:10 de las soluciooes de
5 ensayo al 1 % y 0,4 %. Una vez que se había emplacado cada conjunto de medios de ensayo por esterilidad, se inocularon a un nivel de 100 ~I de ináculo por cada 100 g o mi de caldo de ensayo(diluciones del inoculo a 1 :1000) con cada microorganismo respectivo. Todos los organismos bacterianos se incubaron a 35 QC +/-2 QC durante toda la duración del estudio.
10 Todas las muestras se emplacaron en MRS agar en tiempo 0,12,36,48,60 Y 72 horas (+/-45 minutos). Todas las preparaciones y el emplacado se llevaron a cabo a temperatura ambiente. Todos los eventos de emplacado se incubaron a 35 QC +/-2 QC durante al menos 2 días o 3 días para Biñdobacterium. Las muestras de ensayo se emplacaron por triplicado en cada fecha de ensayo y se indican los promedios. Los resultados de estos estudios se propOfcionan en las tablas 10-1 a 10-3
15 Para las muestras de Lactobacillus rhamnosus (tabla 10-1), en las primeras 12 hOfas, todas las muestras de MSM se habían recuperado al menos un 12 % o más que el control del O %. Las concentraciones del 0,2 % Y del1 % fueron un 41 % Y un 47 % mayores, respectivamente, en las primeras 12 horas. Todos los valOfes de ensayo estaban en línea 24 horas antes de nivelarse, los cultivos estaban elevada mente turbios, lo que sugería que el organismo había entrado en
20 fase estacionaria. Sin embargo, después de nivelarse ligeramente a las 36 y las 48 horas, los recuentos en las muestras con MSM continuaron aumentando mientras que el control del O % comenzó a descender
-

Tabla 10 1 Crecimiento de Lactobacillus rhamnosus
friempo (horas)
MSMaIO % MSM al 0,04 % MSM al 0,1 % MSM al 0,2 % MSM al 0,4 % MSMall quot;!.
O
1,4xl06 1,7xl06 1,7xl06 l ,9xl06 2,2x 106 l,5xl06
12
1,7x107 2,1x107 l,9x107 2,4 X 107 2,2x 107 2,5x 107
24
1,4xl09 l,5xl09 1,3xl09 1,4xl09 1,4 X 109 1,4xl09
36
2,Oxl09 l,8xl09 1,8xl09 2,Oxl09 2,lx l 09 2,7 x 109
48
2,Oxl09 2,1 x 109 2 ,3x 109 2,3xl09 2,lx l 09 2,4 x 109
60
3,Oxl09 2,6xl09 3 ,Ox 109 2,3 X 109 2,8x 109 2,6x109
72
2,7xl09 2,6xl09 3 ,Ox 109 3,2xl09 3,Ox 109 3,8xl09
25 Estos estudios sugieren que las concentraciones de MSM de aproximadamente el 0,1 % a aproximadamente el 1 % potencian el crecimiento/función de Lactobacillus rhamnosus, con niveles microbianos en el intervalo del11 % al41 % mayores al pasar 72 horas
Para las muestras de Lacfobacillus acidophilus (tabla 10-2), las concentraciones de MSM al 0,04 % Y el 0,1 % fueron
30 las primeras para proporcionar crecimiento, seguido de MSM al 0,2 % Y al 0,4 % a las 36 horas y la muestra de MSM al 1 % a las 48 horas. El crecimiento no se recuperó a partir del control al O %, lo que sugiere que MSM tuvo un impacto positivo en la recuperación. Las concentraciones de MSM menores revelaron un tiempo de recuperación más corto que las concentraciones mayores de MSM. Las muestras de MSM al 0,04 % Y al 0,4 % dieron como resultado altos niveles de crecimiento para Lacfobaciflus acidophilus. Estos estudios indican que MSM afecta al metabolismo
35 microbiano de un modo que promueve la adaptabilidad y la recuperación microbiana.
Tabla 10-2. Crecimiento de Lacfobacillus acidoDhilus MSM al 0,04
MSM al 0,1
MSM al 0,2 MSM al 0,4
friempo (horas) MSMaIO % MSMall quot;!.
%
%
%
% O
l,Ox103 l,Ox103
l,Ox103
1,Ox103 1,0 X 103
l,Ox103
l ,Oxl03
l,Oxl03
1,Oxl03
l ,Oxl03 1,0 X 103
l,Oxl03
1,Ox103
1,5x104
l,2x104
1,Ox105
1,0 X 105 1,Ox105
105 106
l ,Ox103
B,7x107
3,4x 107
7,3 X 1,6 X
l,Oxl03
l ,Oxl03
2,2xl06
2 ,1 X 106
7,4xl06
2,2x 106
4,7 x 104
1,Ox105 3,4 x 108
l,7x108
1,7x107
3,1x l 08
2,8x101 5
8 8 6 8 8
1,Oxl0
4,7 x 10
2 ,7x 10
8,9 x 10
3,6x 101,6x10
El Bifidobacterium bifidum, un microbio común usado en probióticos, también se ensayó. Todas las muestras de Bifidobacterium se incubaron en condiciones anaerobias. Se usaron indicadores de oxígeno para verificar las condiciones anaerobias entre los intervalos de emplacado para las muestras de ensayo de Bifidobacterium y los eventos de emplacado.
A las 48 horas, las muestras de MSM al 0,04 % Y al 0,2 % fueron 1 lag mayores que el control de MSM al O %. La muestra de MSM al 0,2 % tuvo el nivel más alto de crecimiento para Bifidobacterium bifidum, seguido de la muestra de MSM al 0,04 %.
Tal como se observa con el Lactobacillus rhamnosus (tabla 10-2), las muestras de MSM del 0,1 % al 1 % continuaron creciendo mientras que el control se vio abocado a una fase de crecimiento estacionario decreciente (tabla 10-3). Se observaron aumentos de uno y 2 lag de Bificfobacterium con las concentraciones de MSM al 0,04 % Y al 0,2 %, respectivamente (tabla 10-3).

Tabla 10 3 Crecimiento de Bificfobacterium bifidum
iempo (horas) O 12 2. 36 48 60 72
MSMaIO % 8,7 X 104 2,Ox103 1,4x105 2,4x105 2,6x105 3,3x105 1,6x106 MSM al 0,04 % 6,6x104 3,5x1 03 1,2x105 2,3x105 5,2x106 3,4x107 8,Ox101 MSM al 0,1 % 7 ,0 X 104 4,4x 104 1,3x105 2 ,Ox 105 2 ,3x 105 4,7x 105 5 ,3x 105 MSM al 0,2 % 7,Ox104 3,1 x 104 1,3x105 2,3 X 105 5,8 x 106 4,8 x 107 1,2x108 MSM al 0,4 % 1,1 X 105 2,Ox 103 1,0 X 105 2,3x 105 4,Ox 105 8,7 x 105 1,2 X 106 MSM al1 quot;!. 6,8x104 2,3x104 2,Ox105 4,0 x 105 3,1x105 3,7x105 5,7x105
También se ensayaron por observación las características de crecimiento generales de organismos probióticos en medio complementado como MSM y sin MSM. Se compararon los tamaños de colon ias de Bacillus coagulans cultivado en medio que contenía MSM al O % Y al 5 % (véase el ejemplo 13 para una descripción detallada).
Ejemplo 11
Evaluación de la influencia del MSM en la vida útil
Este ejemplo describe el efecto del MSM en la vida útil de la leche
Se ha demostrado que MSM como aditivo aumenta el crecimiento y la recuperación de microorganismos beneficiosos en un producto. Este ejemplo examinó si MSM modificó los microorganismos que afectan a la estabilidad de vida útil de un producto basándose en el recuento microbiano. La leche, que tiene un tiempo de vida relativamente corto, se usó como producto a evaluar en este estudio. Se analizó leche con concentraciones de grasa para estudiar los efectos de cómo la concentración de sólidos en el producto puede afectar al MSM. La vida útil convencional para la leche es de 18 a 21 días, el estudio se llevó a cabo hasta 28 días. Se llevó a cabo un estudio de la vida útil en productos lácteos fortificados con MSM al 0,0 %, 0,5 %, 1,0 %, 2,5 %, 5,0 % Y 10 %. Los intervalos de tiempo para la siembra de las soluciones en días fueron en el día O, 7, 14, 21,24 Y 28. Se evaluaron las influencias del porcentaje de sólidos en las concentraciones de MSM en los siguientes porcentajes: 0,0 %, 1,0 %, 2 %, 10,5 % Y 40 %. Se compararon las curvas de crecimiento de las unidades formadoras de colonias por mililitro (ufclml) de los microorganismos entre las concentraciones de MSM, con la concentración de MSM al O % como muestra de control. La reserva de MSM en polvo fue suministrada por Bergstrom Nutrition con certificado de análisis. El polvo fue la fórmula Microprill, lote n.o 0806809, con fecha de caducidad 31/10/13. Todos los medios, agua y reserva de polvo de MSM fueron comprobados respecto de esterilidad antes del estudio. Se prepararon las concentraciones de trabajo de MSM a partir de una sola solución de MSM al 10,0 % y se diluyeron consecuentemente con leche embotellada para obtener la coocentración final deseada de MSM. El producto fue suministrado por una planta de procesado de leche local. Se recogieron las muestras y el estudio comenzó en el día de procesado. El producto incluyó dos botellas de cada producto para concentración de MSM para cada día de análisis. El total de las botellas para un tipo de producto fue de 72 para el experimento completo. Todas las botellas del mismo tipo de producto provinieron de un lote de producción
Los microorganismos analizados fueron la flora normal en el producto después de su procesado. Las muestras de producto se mantuvieron a 4 quot;c durante la duración del estudio. Toda la preparación y la siembra se llevó a cabo a temperatura ambiente. Cada concentración de MSM se llevó a cabo por duplicado. Cada dilución se emplacó por duplicado para intervalo de tiempo muestreado. Para capturar las colonias adecuadas por mililitro, se emplacó cada organismo en cada intervalo de tiempo en tres diluciones. Todas las placas se incubaron a 37 quot;C±0,5quot; e durante 48 horas antes del examen. Se usó la placa de dilución adecuada para la enumeración y se promedió para el informe. La placa adecuada para enumeración contenía entre 25 y 250 ufclml
La muestra mad re de MSM y todos los medios preparados con MSM se ensayaron respecto de los niveles de fondo de microorganismos en agar de soja tríptica. La reserva de MSM fue lt;10 ufdg y todos los medios de ensayo fueron negativos en todos los casos antes de la inoculación. Todos los intervalos de tiempo para la siembra incluyeron placas de control negativo durante el vertido con fines de control de calidad. Todas las placas de control negativo carecían de crecimiento de microorganismos. Los resultados de estos estudios se muestran en las tablas 11.1· 15.1 a continuación

Tabla 11 .1. Crecimiento logarítmico en leche desgrasada
Conc. de MSM 0 % 0,5% 1 % 2,5 % 5 % 10 %
O 1,50 0,00 0,74 0,74 0,00 0,92 7 2,05 1,00 0,70 0,70 0,70 0,70 Tiempo (días) ,. 21 0,94 4,40 0, 70 4,41 0,00 4,56 1,65 4,37 0, 00 1,15 0,59 0,00 2. 1,44 4,68 1,28 3,69 3,20 0,00 28 2,20 3,79 2,02 0,00 0,00 0,00
Tabla 12.1. Crecimiento logarítmico en leche con grasa al 1 %
Conc. de MSM 0,0 % 0,5% 1,0 % 2,5 % 5,0 % 10,0 %
O 0,35 1,05 0,35 0,00 0,00 0,70 7 1,36 0,50 1,23 0,00 2,55 0,00 Tiempo (días} ,. 21 0,00 4,44 0,70 4,37 0,70 4,37 0,00 4,28 0,59 0,59 0,50 0,85 2. 4,44 3,27 5,27 4,28 1,28 0,50 28 5,74 6,09 5,36 2,53 0,00 0,00

Tabla 13.1. Crecimiento loqarítmico en leche con qrasa al 2 %
Conc. de MSM
Tiempo (días}
O
7 ,. 21 2. 28
0,0 %
1,90 1,60 2,44 4,45 4,44 4,93
0,5 %
1,26 1,59 2,09 4,43 3,27 5,48
1,0 %
1,04 3,21 0,00 4,07 5,27 6,56
2,5%
1,06 0,00 0,70 2,96 4,28 5,81
5,0 %
1,39 0,35 0,00 3,97 1,28 0,59
10,0 %
0,35 0,50 0,70 1,97 0,50 1,66

Tabla 14.1. Crecimiento loqarítmico en leche con qrasa al10 5 %
Conc. de MSM
Tiempo ¡días
O
7 ,. 21 2. 28
0,0 %
0,35 0,42 1,98 4,'3 2,94 4,7
0,5 %
0,00 1,09 0,00 4,36 2,73 3,84
1,0 %
0,50 0,00 0,94 3,30 2,24 3,91
2,5%
0,35 0,35 0,00 2,34 3,14 1,84
5,0 %
0,00 0,85 0,00 0,35 1,99 0,00
50 10,0 % 1,00 0,85 0,35 2,14 0,35 0,00

Tabla 15.1 Crecimiento looarítmico en leche con orasa al 40 %
Cone. de MSM
Tiempo (díasl
O
7 14 21 24 28
0,0 %
0,00 1,89 2,08 4,47 4,23 4,75
0,5 %
0,00 0,35 2,32 4,46 4,02 1,95
1,0 %
0,74 0,00 2,37 4,35 3,33 3,86
2,5%
0,00 0,00 0,00 2,16 3,79 0,95
5,0%
0,00 0,80 0,50 1,25 1,03 0,35
10,0 %
0,00 0,00 1,95 4,45 0,85 0,35
Cuando se evalúa la leche sin el MSM, hubo un aumento en los recuentos en el día 21 Este es un pico convencional en los productos lácteos. El aumento en la flora normal alcanza un punto 2 log Y hay un comienzo para la degradación del producto. A 4 lag, la vida útil del producto es cuestionable y los factores sensoriales hacen que el producto no sea deseable
El estudiode evaluación toma en consideración la naturaleza del producto que se esté usando. El producto se tomó del lote de producción de un dia. Los recuentos microbianos de un solo lote de productos lácteos pueden variar en 0,5 a 1,510g_ Observando el crecimiento en el día O, los intervalos para cada producto son de 1,510g entre sí.
El día 7 muestra que para el control y las concentraciones de MSM hubo un ligero aumento en los recuentos microbianos. Hubo un recuento microbiano que era mayor que el otro para cada muestra, excepto para el producto con leche grasa al 10,5 %. Los recuentos microbianos del producto al 10,5 % fueron todos de entre 0,75 lag entre si, (coocentraciones de control y de MSM)_ Los productos al 40 % Y sin grasa tuvieron un aumento en la muestra de control. Aunque el producto lácteo al1 % tuvo un aumento en la muestra de MSM al 5 % Y el producto de leche al 2 % tuvo un aumento en la muestra de MSM al 1 %.
En el día 14, los productos muestran recuentos microbianos y velocidades de crecimiento normales. No se observa crecimiento anormal en los productos. Los productos con menor grasa de leche se encuentran entre las variabilidades de carga microbiana esperadas, cuando se compara el blanco con las concentraciones de MSM. El producto de leche al 40 % demuestra un recuento microbiano menor para las concentraciones de MSM al 5,00 % Y al 2,50 %, aunque el blanco y todas las demás concentraciooes de MSM son de entre 0,40 lag en los recuentos microbianos. El producto lácteo al 10,5 % demuestra que el blanco es 1 lag mayor que las concentraciones de MSM, siendo el MSM al 1,00 % y al 10,0 % las únicas dos con un recuento microbiano.
En el dia 21 , los recuentos de los productos microbianos se separaron con referencia al blanco y a las concentraciones de MSM. Los productos de leche al 1 % Y sin grasa indicaron que el MSM en las mayores concentraciones (5,0 % y 10,0 %) frenó el crecimiento de la flora normal. Mientras que los recuentos microbianos de las concentraciones de control y las menores de MSM aumentaron a 4 lag. En el producto de leche al 2 %, la concentración de MSM al 10,0 % y la concentración de MSM al 2,50 % frenó la velocidad de crecimiento de la flora normal. los recuentos microbianos de MSM al 0,50 %, 1,00 %, 5,00 % y el control de blanco fueron de 4 lag. El producto lácteo al 10,5 % mostró el MSM al 5,00 % a 0,35 lag, mostrando la velocidad de crecimiento comparada con el control, que fue de 4,43 lag. La concentración de MSM al 0,50 % fue de 4,36 lag, MSM al 1,00 % fue de 3,30 lag, MSM al 2,50 % fue de 2,34 y MSM al 10,0 % fue de 2,1 4 lag. Coo el aumento en las concentraciones de MSM, los recuentos microbianos se redujeron, con la excepción de MSM al 5,00 %. La carga microbiana del producto lácteo al 40 % fue relativamente igual en su recuento para el MSM de control, al 0,5 %, al1 ,O % y al 10 %. La concentración de MSM al 2,5 % fue dos lag menor que el control a 2,16 lag, mientras que el MSM al 5,0 % fue menor en 3,22 lag
En el día 24, el control y el MSM al 1,0 % para el producto lácteo sin grasa se redujo a aproximadamente 1,3 lag, mientras que el MSM al 0,50 % mantuvo los recuentos microbianos. Los recuentos microbianos de MSM al 2,50 % se redujeron, mientras que el MSM al5,O % aumentó. No se observó crecimiento en el MSM al 10,O %. El producto lácteo al1 % tuvo un recuento microbiano reducido en el MSM al 0,50 %, aumentó en el MSM al 1,00 %, y no hubo alteración en el control y el MSM al 2,5 %. El MSM al 5,0 % aumentó y el MSM al 10,0 % se redujo. Estas dos concentraciones de MSM mayores se mantuvieron en un recuento microbiano bajo. Para el producto lácteo al 2 %, todas las concentraciones de MSM y el control continuaron aumentando en la carga microbiana. El MSM al 10 % continuó retrasándose en el recuento microbiano. El producto lácteo al 10,5 % demostró una reducción en el control y las concentraciones de MSM; 0,5 %,1,0 %, y 10,0 %. El MSM al 2,5 % y el MSM al5,O% continuaron aumentando. El producto lácteo al 40 % mostraroo una ligera reducción en el crecimiento para el contro l, MSM al 5,0 % Y las dos
concentraciones menores de MSM. Los recuentos microbianos de MSM al 2,5 % aumentaron a las 24 hOfas, mientras que el MSM a110,0 % tuvo una reducción significativa en el crecimiento microbiano. MSM al 5,0 % y MSM al 10,0 % tuvieron un recuento próximo a las cargas microbianas del día O
En el dla 28, los productos lácteos sin grasa fueron mayores de 2 lag de carga microbiana La concentración de MSM al 0,5 % fue de 3,79 lag_ Las concentraciones mayores de MSM; 2,SO %, 5,0 % y 10,0 % no tenian crecimiento para el día 28. El producto lácteo al1 % muestra un aumento para el control, MSM al 0,5 % Y al1 ,O %. La muestra de MSM al 2,5 % tuvo una reducción en la carga microbiana, mientras que el MSM a15,0 % y a110,0 % no tuvieron crecimiento. El producto lácteo al2 % tuvo un aumento para el MSM al1 ,O %, una ligera reducción para el control, MSM al O,SO % y al 2,5 %. El MSM al 5,0 % Y MSM al 10,0 % se redujeron a 0,59 lag y 1,66 lag, respectivamente. Los productos lácteos con más grasa, 10,5 % y 40 %, muestran que el control continúa aumentando en los recuentos microbianos. Ambos productos tienen aumento con MSM a11,0 %, mientras que el producto al 10,5 % tuvo también el aumento de MSM al 0,5 % en los recuentos microbianos, el producto al 40 % tuvo una reducción de MSM al 0,5 %. El MSM al 2,5 % redujo la carga microbiana para ambos productos. Al 5,0 % y al 10 % no hubo crecimiento para el producto lácteo al 10,5 % El producto al 40 % tuvo un recuento microbiano de 0,35 lag para las concentraciones de MSM al 5,0 % y al 10,0 %.
Estos estudios indican que el uso de MSM como aditivo a la leche no afecta adversamente a la vida útil de la leche. En particular, en el día 21 no hubo concentración de MSM que tuviera un recuento microbiano mayor que el control. Además, estos estudios indican que en determinados productos lácteos, una coocentración de MSM al 5,0 % o de MSM al 10,0 % mantuvo realmente la carga microbiana significativamente menor que la del control. Estos estudios sugieren que MSM a dichas coocenlraciones puede usarse para aumentar la vida útil de un producto, tal como la leche.
Ejemplo 12
Crecimiento de Acidophilus de la leche y de Bacillus coagulans en ácido gastrico simulado complementado con MSM
Este ejemplo describe el crecimiento de Acidophilus de la leche y de Bacillus coagulans en ácido gástrico simulado complementado con MSM.
Para analizar los efectos del metilsulfonilmetano (MSM) en el crecimiento de microorganismos probióticos en medio fortificado con MSM en un fluido estomacal simulado. Los estudios previos han demostrado que la adición de MSM al medio de cultivo, ayuda en la velocidad de crecimiento de los microOfganismos. El estudio medirá el efecto del crecimiento probiótico fortificado con MSM en un fluido de ácido gástrico simulado
Los estudios de crecimiento microbiano se efectuaron en presencia de un O %, 0,25 %, 2,0 % Y 5 % Los intervalos de tiempo de emplacado se emplearon cada 3 horas durante 15 horas, después a las 24 y las 48 horas. Se compararon las curvas de crecimiento de unidades fOfmadOfas de colonias por mililitro (ufcJml) de los microorganismos entre las concentraciones de MSM con la concentración de MSM al O % como muestra de control para cada microorganismo. La reserva de MSM en polvo fue suministrada por Bergstrom Nutrition con certificado de análisis. El polvo fue la fórmula Micropri ll, lote n.o 0806809, con fecha de caducidad 31 /10f13. Todos los medios y la reserva de polvo de MSM fueron comprobados respecto de esterilidad antes del estudio. El estudio se efectuó en dos organismos durante un periodo de dos semanas. Los microorganismos analizados incluyeron Lactobacillus acidophilus de la leche y Bacillus coagulans (15BB lote n.o 90BC004A1 MZ suministrado por Ganeden)
Para la leche de Laclobacillus acidophilus, 11 mi de leche con un recuento de 81 .000 ufcJml, se le añadieron 99 mi de ácido gástrico simulado. Para el Bacillus coagulans, se añadió 1 gramo de polvo a 99 mi de un caldo de soja tríptica (TSB) para obtener un recuento de 108.000 ufc por mi de Bacillus coagulans. Se añadieron once mililistros del TSB de Bacillus coagulans a 99 mi de ácido gástrico simulado. Se prepararon las concentraciones de trabajo de MSM a partir de una sola solución de MSM al 5,0 % y se diluyeron consecuentemente con leche o TSB para obtener la concentración final deseada de MSM. Se verificó la esterilidad de todas las soluciones antes de proceder con el estudio. El ácido gástrico simulado de trabajo se incubó a 35,0±0,2QC durante el estudio. El pH del ácido gástrico simulado fue de 1,2.
Se inoculó leche de Lactobacillus acidophilus en MRS agar y los tiempos listados anteriormente Se inoculó 8acillus coagulans en soja tríptica agar (TSA) en los tiempos listados anteriormente. Toda la preparación y la siembra se llevó a cabo a temperatura ambiente. Cada concentración de MSM en el ácido gástrico simulado se efectuó por duplicado. Cada d ilución para cada organismo se emplacé por triplicado para cada intervalo de tiempo muestreado. Para capturar las colonias adecuadas por mililitro, se emplacé cada organismo en cada intervalo de tiempo en seis diluciones diferentes. Todas las placas se incubaron a 35 QC±O,5 QC durante 72 horas para todos los organismos, excepto para Bacillus que se incubó durante 48 horas, antes del examen. Se usó la placa de dilución adecuada para la enumeración y se promedió para el informe. La placa adecuada para enumeración cootiene entre 25 y 250 ufcJml.
La muestra madre de MSM y todos los medios preparados con MSM se ensayaron respecto de los niveles de fondo de microorganismos en MRS agar yTSA. La reserva de MSM fue lt;10 ufcJg y todos los medios de ensayo fueron lt;1 ufcJml en todos los casos antes de la inoculación (véase la tabla a continuación). Todos los intervalos de tiempo para la siembra incluyeron placas de control negativo durante el vertido con fines de control de ca lidad. Todas las placas de control negativo carecían de crecimiento de microorganismos Los resultados de estos estudios se proporcionan en las tablas 16.1 a 18.2.

Tabla 16 1 Números de control de cultivo de reserva antes de la inoculación de la muestra de ensayo
Leche de Lactobacillus acidophilus
Bacillus coagulans
ufcfml, ináculo
8,1 x 104 1,08x105
ufc añadidas a 99 mi
8,1 x 105 1,08x106
ufd ml en medio en tiempo O
8,1 x 103 1,08x104
Los números de control se derivan del crecimiento de organismos específicos en el medio adecuado. Los líquidos de inoculación se emplacaron para la enumeración en el medio adecuado. Para capturar las colonias adecuadas por
10 mililitro, cada líquido se emplacé por triplicado a catorce diluciones diferentes. Se usó la placa de dilución adecuada para la enumeración y se promedió para el informe. La placa adecuada para enumeración contiene entre 25 y 250 ufclml

Tabla 17.1. Crecimiento logarítmico de L. acidophilus en leche por duplicado
Concentración en
orcentaje de MSM
Tiempo en (horas)
O O 0,25 0,25 2,5 2,5 5 5
O
O
O
O
O
O
O
O
0,82
3
O O O O 1,3 1 O 0,82
•
O O 0,52 0, 52 O O 0,82 1
9
O O 0,82 O 0,82 O 0,52 0,52
12
O 1,00 1,00 O 1,22 0,82 0,82 1,37
15
0,52 1,42 1,56 1,3 1,3 1,37 1,43 1,43
24
0,52 0,82 1,37 1,27 1,67 1,. 1,67 1,64
48
O O O O 1,3 1,22 1,22 1,43
Tabla 17.2. Media de crecimiento logarímico de L. acidophilus en la leche Concentración en porcentaje de MSM
iempo en (horas)
O
~
!l
•e
•
E
.~
ü
48 O
O
O
O
O
0,5
0,98
0,67
O
0,25
O
O
0,52
0,41
0,5
1,43
1,32
O 2,5
O
1,15
O
0,41
1,02
1,34
1,64
1,26
0,41
0,41
0,91
0,52
1,10
1,43
1,66
1,33
La leche de Acidophifus colocada en ácido gástrico simulado se vio ayudada por MSM en la recuperación del Lactobacillus acidophilus. La recuperación inicial fue menor que el límite de detección del método. MSM al 5,0 % tuvo una recuperación inicial de 0,41 La hora 3 mostró un aumento en la recuperación para MSM al 2,5 %, a la vez que se
25 mantiene el crecimiento logaritmico con MSM a15,0 %. En la hora 6, el MSM al 0,25 % tuvo una recuperación de 0,52 lag, MSM al 5,0 % mostró una recuperación de 0,91 lag. MSM a12,5 % tuvo una reducción en el crecimiento hasta no detectable. En la hora 9, hubo una detección significativa para todas las concentraciones de MSM. El control al O % permaneció por debajo del limite detectable. En la hora 12, el control creció a 0,5 log coincidiendo con MSM al 0,25 % Las muestras de MSM al 2,5 % Y al 5,0 % tenian velocidades de crecimiento a 1,02 Y 1,10 lag, respectivamente. La
30 hora 15 demostró un crecimiento continuo con las concentraciones de MSM a 1,43, 1,34, Y 1 ,43 lag. El control de MSM al O% aumentó de 0,48 lag a 0,98109. El MSM al O % Y MSM al 0,25 % a las 24 horas redujo el crecimiento en 0,31 lag Y 0,11 log, respectivamente. El MSM al 0,25 % aumentó en 0,30 lag Y el MSM a15,0 % aumentó en 0,23 lag. En la hora
Concentracion en Tiempo en (horas) O O O O 0,52 J O O 6 O O 9 O O 12 O O 15 O O 2. O O 48 O O
0,25 0,52 0,52 052 O 1,12 O O O 0,25 O O 0,52 O 0,52 O O O 2,5 O O O O O O O O 2,5 O O O O O O O O 5 0,52 O O O O 0,52 O O 5 O O O O O O O O

Tabla 18.2. Media de crecimiento logaritmico de Bacillus coagulans
48, el MSM al 0,25 % Y el control de MSM al O % se redujo por debajo de los limites detectables El MSM al 2,5 % redujo en 0,38 log Y el MSM al 5,0 % redujo en 0,33 lag. Tabla 18.1. Crecimiento logarítmico de Bacillus coagulans por duplicado orcenta·e de MSM
Concentración en porcentaje de MSM iempo en
(horas)
O 0,25 2,5 5
O
O
0,26 O 0,26
J
O 0,26 O O
6
O 0,52 O O
9
O O O O
12
O 0,82 O O
15
O O O 0,26
2.
O O O O
.8
O O O O
La recuperación inicial de Bacillus coagulans no indicó recuperación. Sin embargo, las muestras de MSM al 0,25 % Y al
15 5.0 % tuvieron una media de 0.26 lag. Se observó una baja recuperación a lo largo del estudio para MSM al 0.25 % Y en la hora 15 para el MSM a15,0 %. La recuperación fue demasiado baja para extaer una conclusión acerca del estudio de ácido gástrico para Bacillus coagulans. Es posible que la exposición inicial de 3 horas eliminase los organismos
Estos estudios revelan que en lo referente a la leche de Acidophilus, se produjo un impacto positivo en el crecimiento
20 bacteriano con la leche que contiene MSM. En las primeras 3 a 6 horas, hubo un ligero aumento en el crecimiento de fase lag de cada L. acidophilus en las concentraciones de MSM al 0,25 %, 2,5 % Y 5,0 %. En la hora 9, hay una recuperación significativa del L. acidophilus de la leche en las concentraciones de MSM frente al control. La hora 12 es cuando se produjo la primera indicación de recuperación de L. acidophilus en la leche de control a 0,5 109, coincidiendo con MSM al 0,25 %. Las concentraciones de MSM del 2,5 % Y el 5,0 % se encuentran a una velocidad de crecimiento
25 de recuperación de 1 log. En la hora 15, el cootrol maximiza su crecimiento a 0,9810g. La concentración de MSM al 0,25 % se maximiza a 1,4310g. MSM a12,5 % y a15,0 % maximiza en la hora 24 a 1,64 y 1 ,66 lag, respectivamente. La hora 24 muestra una muerte para el control y MSM al 0,25 %. A las 48 horas, el cootrol y MSM al 0,25 % se encuentran por debajo del límite detectable para el método y MSM al 2,5 % Y al 5,0 % siguen por encima de 1 log de organismo MSM parece ayudar a este proceso acelerando la adaptación y permite que los microorganismos se adapten más
30 rápido a los factores de estrés ambientales
Las muestras tratadas con MSM mostraron un aumento en la fase logarítmica de crecimiento Este aumento en la fase logarítmíca se observa más fácilmente en la concentracíÓfl de MSM al 5,0 %. El MSM al 5,0 % es 0,45 log mayor que el control en la hora 15, que es la máxima recuperación del crecimiento para el control. El MSM al 5,0 % alcanzó un
35 máximo de 1,66 Ig o 0,68 log mayor que el control Esto indica una tasa de supervivencia de las células hijas a un mayor porcentaje que la muestra de control al O % Por lo tanto, sugiriendo que el ambiente con MSM da lugar a la multiplicación y supervivencia celular.
MSM también afectó a la fase estacionaria y a la fase de muerte La fase estacionaria de control fue más corta que la
fase estacionaria del MSM al 2,5 % Y al 5,0 %. Desde la hora 15 hasta la 24, las muestras no solo mantuvieron la velocidad de crecimiento, sino que continuaron aumentando en lag en un mínimo de 0,24 lag. Estos resultados indican que MSM como aditivo permitió que el L acidophilus prosperase durante más tiempo, permitiendo que el organismo se estableciese por sí mismo para obtener un mejor beneficio para la salud. El control no fue detectable en la hora 48. El crecimiento con MSM al 2,5 % Y al 5,0 % se encontraba aún por encima de 1 log. Esto indica que la capacida de supervivencia del L acidophilus en la leche fue mayor con el ad itivo de MSM
El estudio de Bacillus coagulans no indicó recuperación. Esto se debió posiblemente al tiempo de exposición en el fluido gástrico. Podria ser beneficioso un tiempo de exposición más corto para la capacidad de supervivencia del Bacillus coagulans. La diferencia entre el estudio de Lacfobacillus acidophilus y el de Bacilfus coagulans fue la matriz. La leche proporcionó un tampón suficiente para permitir la supervivencia del L acidophilus en el fluido gástrico
Ejemplo 13
Medición de la viabilidad de Bacillus coagulans complementado con MSM
Este ejemplo describe el efecto de MSM en la viabilidad y la formación de colonias de Bacillus coagulans
Se llevaron a cabo estudios de formación de colonias microbianas robustos en presencia de MSM al O %, 1,0 %, 2,0 % Y 5 %. Los microorganismos se cultivaron durante 72 horas en 30 mililitros de caldo de soja tríplica. Al final de las 72 horas, se midió el caldo para la formación de colonias, con documentación fotográfica de la formación de colonias en agar de soja tríptica. También se midió el porcentaje de transmitancia en un área de 25 mm x 25 mm del agar de soja triptica colocado entre dos portaobjetos para microscopio en un espectrofotómetro.
Se compararon las curvas de crecimiento de unidades formadoras de colonias por mililitro (ufcJml) de los microorganismos entre las concentraciones de MSM con la concentración de MSM al O % como muestra de control para cada microorganismo. La reserva de MSM en polvo fue suministrada por Bergstrom Nutrition con certificado de análisis. El polvo fue la fórmula Microprill, lote n.o 0806809, con fecha de caducidad 31110113. Todos los medios y la reserva de polvo de MSM fueron comprobados respecto de esterilidad antes del estudio. Los microorganismos analizados incluyeron Bacillus coagulans 9BB, n.o de lote 0109E002 suministrado por Ganeden.
Para el 8acillus coagulans, el organismo se aisló y cultivó durante 24 horas antes de la cosecha El microorganismo recogido se colocó eu una botella de 100 mi estéril denominada dilución A. La dilución A se diluyó adicionalmente en una solución de trabajo, con un recuento de 210 8acillus coagulans por cada 1 mi, denominada dilución B. Se usó un mililitro de dilución B para inocular los 30 mi de concentraciones de TSB indicadas anteriormente. Se prepararon las concentraciones de trabajo de MSM a partir de una sola solución de MSM al 5,0 % Y se diluyeron consecuentemente con TSB para obtener la concentración final deseada de MSM Se verificó la esterilidad de todas las soluciones antes de proceder con el estudio
Se inoculó 8acillus coagufans en agar de soja triptica (TSA) a 35 quot;e±O,5 oC durante 72 horas para la verificación de las colonias y la densidad de población. Toda la preparación y la siembra se llevó a cabo a temperatura ambiente. Cada concentración de MSM en el estudio se llevó a cabo por duplicado. Cada dilución para el microorganismo se emplacó por triplicado para cada muestra. Para capturar las colonias adecuadas por mililitro, el microorganismo se emplacó a seis diluciones diferentes. Todas las placas se incubaron a 35 quot;C±O,5 quot;c durante 48 horas para el microorganismo. Se usó la placa de dilución adecuada para la enumeración y se promedió para el informe La placa adecuada para enumeración contenía entre 25 y 250 ufd ml.
La muestra madre de MSM y todos los medios preparados con MSM se ensayaron respecto de los niveles de fondo de microorganismos en MRS agar yTSA. La reserva de MSM fue lt;10 ufcJg y todos los medios de ensayo fueron lt;1 ufcJml en todos los casos antes de la inoculación. Todos los intervalos de tiempo para la siembra incluyeron placas de control negativo durante el vertido con fines de control de calidad. Todas las placas de control negativo carecían de crecimiento de microorganismos. Los resultados de estos estudios se proporcionan a continuación.
Tabla 19.1. Números de control de cultivo de reserva antes de la inoculación de la muestra de ensayo
8acillus coagulans
ufcJml, inóculo
2,1 x 104
ufc añadidas a 99 mi
2,1 x 104
ufcJml en medio en tiempo O
2,1x102
Los números de control se derivan del crecimiento de organismos específicos en el medio adecuado. Los Ilquidos de inoculación se emplacaron para la enumeración en el medio adecuado. Para capturar las colonias adecuadas por mililitro, cada líquido se emplac6 por triplicado a catorce diluciones diferentes. Se usó la placa de dilución adecuada para la enumeración y se promedió para el infoone. La placa adecuada para enumeración contiene entre 25 y 250 ufe/ml
Tabla 20 _1 Tabla de población de Bacillus coagulans Concentración en porcentaje de MSM Promedio de recuento de población O 4,3 x 10'0
1,0 1,01x10quot;
2,5 3,3 x 10'1
5,0 2,8 X 10'1
5 El recuento de la población se basó en la dilución del caldo de soja triptica después de 72 horas y la inoculación en las placas de agar de soja triptica. Las placas se incubaron durante 48 horas y se enumeraron.
Tabla 21 _1 Peso de Bacilluscoagulans Concentración en porcentaje de MSM Media de peso de la población
O 0,0586 1,0 0,1363 2,5 0,9828 5,0 0,1260
10 El caldo de soja triptica se centrifugó 72 horas después en un vial cónico. Se retiró el sobrenadante y se lavó el sedimento. La centrifugación y el lavado se repitió tres veces. Al final del tercer lavado, se pesaron los viales con sedimento_Cada vial se pesó vacio y se registró_ Después, se restó el peso del vial correspondiente del peso final del sedimento y el vial, para obtener el peso de la población de Bacillus coagulans. Se cortó de cada placa una sección de 25 x 25 mm al final del periodo de 72 horas y se colocó entre dos portaobjetos para microscopio_Los viales se sellaron
15 para prevenir que el tapón de agar se desprendiese. La longitud de onda se ajustó a 546 nm, y se usaron dos portaobjetos vacios como blanco. Cuando se examinaron las placas, se observó una colonia de Bacillus coagulans, observándose la mayor y más robista con el MSM a15,0 lt;gt;/0 en comparación con el MSM al O % _Los pesos indicaron un mayor crecimiento de una colonia que era de mayor tamaño añadiendo al peso de la biomasa.
20 Tabla 22 _1_ porcentaje de transmitancia de Bacillus coagulans Concentración en porcentaje de MSM Porcentaje de transmitancia Agar 61,1 %
0,0 52,3 % 1,0 51,5% 2,5 49,8 % 5,0 45,6 %
El porcentaje de transmitancia se usó para indicar el tamaño de las colonias de Bacillus coagulans, en el que una reducción de la transmitancia indica un aumento el tamaño de las colonias ya que la colonia inhibió el paso de la luz a través del agar. La adición de MSM del 1 al 5 % pareció causar una reducción en el porcentaje de transmitancia. Se
25 observó que el resultado del porcentaje de transmitancia podría estar influenciado por el tamaño de la muestra, la localización de la muestra y las variables del agar.
A partir de una observación visual, se observó que las colonias tenían un tamaño mayor después del tratamiento con MSM en comparación con el control de blanco_ Las colonias también dieron como resultado un mayor peso total
30 cuando se midió la biomasa de las muestras tratadas con MSM en comparación con el control de blanco. Estos dos resultados combinados con el porcentaje de transmitancia medido indican que el MSM como aditivo (a determinadas concentraciones) influencia positivamente la viabilidad, salud y tamaño de Bacillus coagulans
Ejemplo 14
Efecto de MSM en el crecimiento y recuperación de Lacfobaciflus acidophilus en un ambiente de tracto intestinal simulado
Este ejemplo describe el efecto del MSM en el crecimiento de Lactobacillus acidophilus en un ambiente de tracto 40 intestinal simulado.
Los estudios de crecimiento microbiano fortificado con MSM se llevaron a cabo a las siguientes concentraciones: O %, 0,25 %, 2,0 % Y 5 %. Los intervalos de tiempo para la siembra de las soluciones en horas fueron a las O, 3, 8, 24, 30, 36, 48, 54, 60 Y 72_ Se compararon las curvas de crecimiento de unidades formadoras de colonias por mililitro (ufe/ml) 45 de los microorganismos entre las concentraciones de MSM con la concentración de MSM al O % como muestra de control para cada microorganismo. La reserva de MSM en polvo fue suministrada por Bergstrom Nutrition con certificado de análisis. El polvo fue la fórmula Microprill, lote n.o 0806809, con fecha de caducidad 31/10/13. Todos los
medios, agua y reserva de polvo de MSM fueron comprobados respecto de esterilidad antes del estudio. El pH del ácido gástrico simulado fue de 1,2. El pH del fluido intestinal simulado fue de 6,8. Los microorganismos analizados incluyeron Lactooocillus acidophilus, ATCC n.o 4356
Para el Lactobacillus acidophilus, se usó como producto leche embotellada Se colocó un mililitro de una solución 9 log en 99 mi de leche embotellada y se mezclaron mediante agitación manual. Esto se repitió para cada concentración de MSM. La suspensión se enumeró para cada concentración de MSM y esto se cita como el inóculo de inicio. Se colocaron diez mililitros de cada concentración de MSM y leche con Laclobacillus acidophilus en 90 mi de ácido gástrico simulado durante 20 minutos. El ácido gástrico se precalentó a 35 QC y se mantuvo a 35 QC durante el transcurso de 20 minutos. Al final del periodo de 20 minutos, 10 mi de la mezcla de ácido gástrico simulado, Lactobacillus acidophilus y leche se colocaron en 90 mi de fluido intestinal simulado. Este fluido intestinal simulado se precalentó a 35 oC y se mantuvo a 35 QC durante la duración del estudio. Se prepararon las concentraciones de trabajo de MSM a partir de una sola solución de MSM al 5,0 % Y se diluyeron consecuentemente con leche embotellada para obtener la concentración final deseada de MSM. Se verificó la esterilidad de todas las soluciones antes de proceder con el estudio. Se inoculó solución intestinal de Lactobacillus acidophilus en MRS agar a los tiempos lisiados anteriormente. Toda la preparación y la siembra se llevó a cabo a temperatura ambiente. Cada concentración de MSM se llevó a cabo por duplicado. Cada dilución para cada organismo se emplacó por triplicado para cada intervalo de tiempo muestreado. Para capturar las colonias adecuadas por mili litro, se emplacó cada organismo en cada intervalo de tiempo en cuatro diluciones. Todas las placas se incubaron a 37 QC t 0,5 QC durante 72 horas en un ambiente de C02, antes del examen. Se usó la placa de dilución adecuada para la enumeración y se promedió para el informe. La placa adecuada para enumeración contenía entre 25 y 250 ufclmL
La muestra madre de MSM Y todos los medios preparados con MSM se ensayaron respecto de los niveles de fondo de microorganismos en MRS agar y agar de soja tríptica. La reserva de MSM fue lt;10 ufclg y todos los medios de ensayo fueron negativos en todos los casos antes de la inoculación. Todos los intervalos de tiempo para la siembra induyeron placas de control negativo durante el vertido con fines de control de calidad. Todas las placas de control negativo carecían de crecimiento de microorganismos. Los resultados de estos estudios se proporcionan en las tablas a continuación.

Tabla 23.1 Crecimiento loaaritmico de Laclobacillus acidoDhilus
Concentración de MSM
Tiempo
MSM al O % MSM al 0,25 % MSM aI 2,5 % MSM al 5,0 %
Inóculo de inicio
6,83 6,86 6,86 7,02
20 min gástrico
lt;1,00 lt;1 ,00 lt;1 ,00 lt;1,00
Hora 3
1,33 1,30 1,46 1,62
Hora 8
2,22 2,18 2,30 2,33
Hora 24
4,47 4,40 5,94 6 ,39
Hora 30
4,10 4,66 5,39 6,63
Hora 36
4,00 4,38 5,32 8 ,65
Hora 48
4,59 8,03 11 ,17 10,17
Hora 54
8,97 8,02 13,23 13,33
Hora 60
9,23 9,14 11 ,27 12,76
Hora 72
9,21 9,34 12,87 12,78
Revisando los datos, existe un beneficio con la adición de MSM al producto en el crecimiento y la recuperación de Lactobacillus acidophilus. Comparando el control de MSM al O % frente a MSM al 5,0 %, se produce un aumento significativo en la fase logarítmica de crecimiento sin Lactobacillus acidophilus. En las primeras 24, el MSM al5,O % fue 1,81 109 mayor que el control. En las siguientes 12 horas el control, el 0,25 % y el 2,5 % se redujeron. MSM al 5, 0 % continuó aumentado durante el mismo periodo de tiempo. Al final del espacio de tiempo, el MSM al 5,0 % fue de 8,65 lag, 4,65 lag mayor que el control. De la hora 36 a la hora 48, las concentraciones de MSM crecieron a una velocidad más rápida que el control de blanco. MSM al 0,25 % aumentó en 3,65 lag y MSM al 2,5 % aumentó en 5 ,85 lag en comparación con 0,59 lag para el MSM al 0,0 %. Esta tendencia cambió en las siguientes 8 horas, con el control aumentando en 4,38 I09s. El MSM al 0,25 % se redujo, mientras que el MSM al 2,5 % y 5,0 % no aumentó tan significativamente como el control, hubo un aumento de 2,07 y 3, 16 lag. Desde la hora 60 hasta la hora 72 el control de
blanco se redujo a medida que aumentaban las concentraciones de MSM_
Analizando los datos, otro periodo de 24 horas de ensayo podría haber ayudado a predecir mejor un estadio de muerte. A las 72 horas, la gráfica indica que el Lactobacillus acidophilus alcanza la fase estacionaria. Sin indicación de un estadio de muerte, es difícil predecir si la concentración de MSM podría prolongar la vida de la población más que el control. Lo que se observa es un aumento en la velocidad de crecimiento, lográndose una mayor población con el MSM al 2,5 % Y5,0 %. MSM como aditivo a los productos de Lactobacillus acidophilus podría aumentar la probabilidad del organismo para establecerse por sí misma en el tracto intestinal. Más organismos y más rápido podrian aumentar el beneficio de tomar un probiótico
Con la adición de MSM hay un beneficio en la recuperación de Lactobacillus acidophilus después de una reducción en el crecimiento de la población. De la hora 24 a la hora 36, se produce una reducción del crecimiento para el MSM al 0,25 %, el MSM al 2,5 % Yel MSM al 0,0 %. Mientras que el MSM al 0,25 % Yel MSM al 2,5 % recuperaron en doce horas con un aumento significativo de la velocidad de crecimiento, el MSM al 0,0 % tardó doce horas más para mostrar una velocidad de crecimiento significativo. Para el MSM a15,0 %, no hubo una reducción en la recuperación para este marco, solamente una ligera reducción en la velocidad de crecimiento. El MSM al 5,0 % tardó 6 horas en producir un aumento de la velocidad de crecimiento sustancial después de la ligera reducción en la velocidad de crecimiento en la hora 24. Esto demuestra que el MSM influencia el tiempo de recuperación para Lactobacillus acidophilus. El aumento del tiempo de recuperación para Lactobacillus acidophilus podría ser un beneficio para ayudarto a establecer más temprano una colonia intestinal, aumentando los beneficios para la salud
El estudio necesita prolongarse a 96 horas y más para observar si MSM como aditivo puede prolongar la población de Lactobacillus acidophilus más tiempo. Una población que pueda establecerse por si misma durante un tiempo más prolongado en el tracto intestinal podría ser un beneficio añadido para productos probióticos y para las personas que los consumen.
MSM como suplemento con Lactobacillus acidophilus ayuda al microorganismo a establecerse más rápido, crecer a una mayor velocidad y alcanzar una población mayor. Estos atributos podrían beneficiar a personas que consumen Lactobacillus acidophilus como probiótico
Ejemplo 15
Efecto de MSM en el crecimiento de h ierba y el valor nutritivo
Este ejemplo describe el efecto de MSM en el crecimiento de hierba y en el valOf nutritivo de dicha hierba
Se evaluó el efecto de MSM en el crecimiento de hierba y el valor nutritivo controlando el crecimiento de la hierba en las siguientes condiciones: (1) solo fertilizante; (2) solo MSM (OptiMSI\I1® GNC· n.o de lote 0922904, tasa de 1 :500 o 2 libras por cada 1.000 pies cuadrados); y (3) fertilizante y MSM (MSM a la tasa de 1 :500 o 2 libras por cada 1.000 pies cuadrados en presencia de fertilizante) aplicado al mismo campo, pero mediante una aplicación separada. El fertilizante probado fue urea (45-0-0) y el tipo de paso incluyó la siguiente mezda de hierbas (festuca alta, hierba de centeno perenne, hierba de huerta, Timoteo, trébol blanco, trébol medio rojo y hierba de centeno intermedia; las semillas para dicha fonnulación están disponibles en el comercio en la WOfld Wide Web en la dirección web oregroseeds.comlalinatdairy.html). Se midió el campo a ensayar y después se marcó para indicar diferentes niveles de aplicación de MSM y control. Usando un difusor para difusión controlada, se aplicaron MSM y/o fertilizante. El campo se irrigó de manera convencional (irrigación con aspersor cada cuatro días). Se dejó crecer la hierba durante siete semanas y tres días de cortarse para ensayos. La hierba muestreada se cortó a 2,5 cm desde el suelo y se colocó en bolsas de plástico para su secado antes del envío Los resultados de estas pruebas en valor nutritivo se muestran en la tabla 23.2 más adelante.

Tabla 23 2
Resu ltados a 1 :500 ind icados en base seca
Porcentaj e de MSM/Fert
Porcentaj e de MSM Porcentaj e de fertilizante Método AOAC
Materia seca
43 ,26 39,57 44,62 934,02
Humedad
56 ,74 60,43 55,33 934,02
Proteína en bruto
20 ,03 24,36 22 ,26 2001 ,11
Fibra detergente ácida
30 ,95 25,77 29,44 973,18
Fibra detergente neutra
52 ,84 35,23 48,44 2002,04
Células solubles
47 ,16 64,71 51 ,56 Calcio
lignina
4,21 4,62 3,98 973,18
Ceniza
10,89 11 ,25 11 ,26 942,05
TDNIDDM estimada
64 ,47 68,39 65,61 Cálcu lo
Energía neta de lacl -(Mcalflb)
0,66 0,71 0,67 NFTA ca lc
Energía neta est. (Mcalflb)
0,55 0,6 0,57 NFTA ca lc
Calcio
0,47 0,96 0,55 968,08
Fósforo
0,46 0,43 0,42 964,06
Magnesio
0,16 0,28 0,17 968,08
Potasio
3,97 3,48 4,09 968,08
Sodio
0,03 0,3 0,05 983,04
Cobre
14,57 8,82 8,18 968,08
Hierro
94 ,51 157,77 128,15 968,08
Cinc
25,75 24,79 25,76 968,08
Manganeso
40 ,23 33,08 33,73 968,08
Selenio
2,61 3,23 2,87 996,17
Nitrato cuantitativo
0,3 0,05 0,64 968,07
Valor de alimentación relativo
114,06 181 ,73 126,68 NFTA ca lc
RFV-ceniza corregida es
191 ,08 132 Cálcu lo
Cloruro
0,94 0,62 0,34 915,01
Azufre
0,32 0,25 0,36 923,01
Solubilidad de proteína
46,48 59,52 52 ,56 923,04
Carbono no estructural
12,74 25,66 14,54 Cálculo
Asimismo, se observó que aunque todas las hierbas evaluadas crecieron a velocidades iguales, la hierba de centeno creció de 5 a 8 cm más alta en las zonas tratadas con MSM. Además, se observó que no hubo una variación visible del color entre la hierba tratada con MSM y no tratada con MSM. Además, se observó que los caballos preferían la hierba de pasto tratada con MSM frente a la hierba no tratada con MSM.
Estos estudios indican que el MSM puede alterar el valor nutritivo de la hierba (por ejemplo, puede aumentar el valor alimenticio relativo en comparación con solo fertilizante), posiblemente el sabor de la hierba así como la altura de la hierba, dependiendo del tipo de hierba
Ejemplo 16
Efecto de MSM al 0,5 % en la eficacia de fermentación en relación con la producción de cerveza (cerveza escocesa)
Este ejemplo describe el efecto de MSM al 0,5 % en la eficacia de fermentación en relación con la producción de cerveza, en particular, cerveza escocesa
En el presente documento se ha demostrado que MSM a determinadas concentraciones tiene un efecto positivo en los microorganismos, induyendo el crecimiento de microorganismos. Este impacto positivo incluye organismos tales como hongos, levaduras, y bacterias. Los cultivos de levaduras están implicados en la producción de cerveza durante el proceso de fermentación para producir etanol y dióxido de carbono. Este estudio determinó si MSM al 0,5 % en peso tenía un impacto positivo, tal como aumentar la eficacia del proceso de fermentación. Se añadió MSM al cebador de levadura (1000 mi de H20, 100 g de extracto de malta seca, 1 vial de levadura Edimburg Ale de White Labs) y al mosto. El mosto es el líquido extra ido del proceso de maceración durante la fermentación de la cerveza o el whisky El mosto contiene los azúcares que se fermentan por la levadura de fermentación para producir alcohol
En primer lugar, se preparó el iniciador de levadura de acuerdo con métodos conocidos por los expertos en la materia salvo MSM añadido al 0,5 % a un grupo de tratamiento y sin adición de MSM a un grupo de control. Este proceso de
detalla a continuación. Los materiales incluyeron lo siguiente: 2, jarras de vidrio de 1900 mi; embudo; 2 cierres para cerveza de tipo estándar; 5,0 gramos de MSM; 2000 mi de agua; 200 gramos de extracto de malta seca (DME); 2-viales de extracto de levadura WLP028 Edinburgh Ale de White Labs; e higienizante de fermentación (San Star)
La preparación del lote de inicio de tratamiento induyó las siguientes etapas: (1) las jarras de vidrio, los cierres y el embudo se lavaron exhaustivamente y después se enjuagaron con higieniza dar para cerveza; (2) se hirvieron 1000 mi de agua y después se añadieron 100 gramos de DME; (3) la muestra de hirvió durante 10 minutos; (4) la muestra se retiró del calor y se añadieron 5,0 gramos de MSM; y (5) se dejó enfriar la solución hasta 22 oC. El lote de inicio de tratamiento se colocó después en una jarra de vidrio de 1900 mi usando para esto vial de levadura Edinburgh Ale de White Labs. Se aplicó el cierre y el vaso entero se colocó en una sala oscura a temperatura ambiente durante 48 horas.
La preparación del lote de inicio de control incluyó las siguientes etapas: (1) las jarras de vidrio, los cierres y el embudo se lavaron exhaustivamente y después se enjuagaron con higienizador para cerveza; (2) se hirvieron 1000 mi de agua y después se añadieron 100 gramos de DME; (3) la muestra de hirvió durante 10 minutos; (4) la muestra se retiró del calor; y (5) se dejó enfriar la solución hasta 22 quot;C. El lote de inicio de tratamiento se colocó después en una jarra de vidrio de 1900 mi usando para esto vial de levadura Edinburgh Ale de White Labs. Se aplicó el cierre y el vaso entero se colocó en una sala oscura a temperatura ambiente durante 48 hOfas
El inicio de tratamiento de MSM mostró signos de actividad (burbujeo a través de la trampa) aproximadamente a las 2 horas después de haber florecido la levadura. El iniciador de control no mostró signos de actividad hasta aproximadamente 10 horas después de florecer la levadura.
En el día de la elaboración (2 días después de preparar la levadura iniciadora) se preparó la masa. Los materiales para preparar la masa incluyeron los siguientes: 8,16 kg de grano base American 2-Row; 1,36 Ig de grano especial Crystal Malt 40L; 0,45 kg de grano especial Cara-Pils Malt; yagua. Se limpiaron un tonel de macerado (un vaso usado en el proceso de maceración para convertir los almidones en los granos triturados en azúcares para fermentación) y el calentador de fermentación con lavado de cervecero en polvo y se enjuagaron exhaustivamente. Después, se higienizó la cuba de macerado (higienizadorde maceración San Star). Se trituraron los siguientes granos y se molieron para su maceración: 8,16 kg de grano base American 2-Row; 1,36 Ig de grano especial Crystal Malt 40L; y 0,45 kg de grano especial Cara-Pils Mal!. Se calentaron 26 litros de agua a 72 quot;C y después se combinaron coo la cuba de masa precalentada. Posteriormente, se añadieron los granos triturados y se mezcló la solución exhaustivamente. Se acopló la tapa y se dejó macerar la solución durante 60 minutos. Después de 60 minutos, se drenaron 16 litros de trabajode la cuba de masa en el calentador de fermentación. Se precalentó el agua a 75 oC, se añadió a la cuba de masa y se mezcló exhaustivaente con grano. La mezcla se dejó incubar durante 10 minutos. Este proceso se repitió dos veces más hasta que se obtuvo un volumen antes de hervir de 48 litros en el calentador de fermentación
Después de preparar la masa, se inició el proceso de fermentación. Se usaron los siguientes materiales para el proceso de fermentación: 85 mi de Cascade hops; 2 cucharadas de musgo irtandés; 105 gramos de MSM; calentador de fermentación que contiene 48 litros de caldo; enfriadOf de mosto; 2 vasos de fermentación; refractrómetro; higienizador de fermentación, lavado de cervecero en polvo (PBW); y una piedra de aire filtrada. El equipo se limpió exhaustivamente con PBW. El enfriador del mosto y la piedra de aire filtrada se higienizaron con higienizador de cervecero (Higienizador de cervecero San Star). El mosto (48 litros) se llevó a ebullición en un calentadOf de fermentación y se añadió una la alícuota de Cascade hops (44 mililitros) a la solución. A los 30 minutos de ebu llición, se añadió una segunda alícuota (14,7 mi) de Cascade hops. A los 40 minutos de ebullición, se añadió una tercera alícuosa (14,7 mi) de Cascade hops así como 2 cucharadas de musgo irlandés. A los 50 minutos de ebullición, se añadió una cuarta alícuota (14,7 mi) de Cascade hops. El mosto se decantó del calentador de fermentación al enfriador del mosto y se enfrió a 23 oC. Después, se dividió el mosto en dos fermentadores (cada uno de 21 litros de volumen) Se añadió MSM al 0,5 % (105 gramos) al fermentador de tratamiento. Se registró la lectura de Brix de ambos fermentadores y se registró el punto basal (Fermentador de tratamiento =15 Brix; fermentadOf de control =14,75 Brix). Cada fermentador se ensayó para Brix cada 24 horas durante 21 días. Se airearon ambos fermentadores durante 25 minutos con piedra de a ire filtrada higienizada. Se añadió levadura infusionada con MSM en el vaso de fermentadOf de tratamiento mientras que se añadió levadura no alterada al vaso fermentador de control. Se acoplaron tubos de soplado a ambos fermentación y se dejó producirse la fermentación durante 21 días Los resultados de estos estudios se propOfcionan en la tabla 23.3 a continuación.
a 233
T bl a
Día
F.G. de MSM (Ajustada para Ale y Temp) F.G. de control (Ajustada para Ale y Temp)
1
1,026 1,028
2
1,0 18 1,020
3
1,016 1,018
4
1,016 1,017
5
1,015 1,017
6
1,015 1,015
7
1,015 1,015
8
1,015 1,015
9
1,015 1,015
10
1,015 1,015
11
1,015 1,015
12
1,015 1,015
13
1,015 1,015
,.
1,015 1,015
15
1,015 1,015
16
1,015 1,015
17
1,015 1,015
18
1,015 1,015
19
1,015 1,015
20
1,015 1,015
21
1,015 1,015
Cuando se prepara un iniciador de levadura, cuando más rápido se produzca la activación del cultivo de levadura mejor será la eficacia y se minimizará al máximo la contaminación ambiental polencial frente a microorganismos del aire no deseados. El lote de inicio de MSM mostró actividad un 80 % más rápido que el conlrol (2 horas en 5 comparación con 10 horas). El estudio también indicó que MSM ayudó al proceso de fermentación. Al igual que en el iniciador de levadura, cuanto más rápida fuese la activación del proceso de fermentación de la levadura mejor será la eficacia y más se minimizará la cootaminación ambiental frente a microOfganismos del aire no deseados. El fermentador tratado con MSM mostró actividad un 58 % más rápido que el control (3,5 horas en comparación con 9 horas). El lote de tratamiento de MSM también alcanzó un máximo de fermentación en 5 dlas, mientras que el lote de
10 control tardó 6 días (un tiempo de compleción un 17-25 % más temprano).
Estos resultados indican que MSM es útil en el proceso de fermentación de cerveza.
Ejemplo 17
Crecimiento de Lactobacillus acidophifus en leche de A cidophifus complementada con MSM
Este ejemplo describe el crecimiento de Lactobacillus acidophilus en leche de Acidophilus complementada con MSM
20 Se lIevaroo a cabo estudios de crecimiento microbiano en leche de Acidophilus fortificada con MSM al O %, 0,5 %,2,5 % Y 5 %. Los intervalos de tiempo para la evaluación fueron a las 8 y las 16 horas durante un total de 104 horas Después, se evaluaroo muestras cada 7 días durante un total de 28 días. Se compararon las curvas de crecimiento de las unidades fOfmadoras de colonias por mililitro (ufe/ml) de los microorganismos entre la leche de Acidophilus con concentraciones de MSM con leche de Acidophilus con concentración de MSM al O % como muestra de control. La
25 reserva de MSM en polvo fue suministrada por Bergstrom Nutrition con certificado de análisis. El polvo fue la fórmula Microprill, lote n.o 0806809, con fecha de caducidad 31/10/13. Las leches se adquirieron en una tienda local. La leche de Acidophilus era baja en grasa (Darigold). La leche de Acidophilus más Bifidus contenía grasa de leche al 2 % (Lucerne). La leche de Acidophilus más Bifidus se ejecutó sumultáneamente coo una concentración de MSM de12,5 % y el O% en fOfma de un producto que contiene dos microorganismos. Las soluciones de trabajo se mantuvieron a 4 oC
30 durante el estudio. Las soluciones de tra bajo de leche de MSM se ejecutaron por duplicado.
Toda la preparación y la siembra se llevó a cabo a temperatura ambiente. Todas las diluciones para todas las soluciones se emplacaron por triplicado para todos los intervalos de tiempo muestreados. Para capturar las colonias adecuadas por mililitro, todos los organismos en todos los intervalos de tiempo se emplacaron en tres diluciones
35 diferentes. Todas las placas se incubaron a 35 oc ± 0,5 oc en e02durante 72 hOfas para todas las soluciones. Se usó la placa de dilución adecuada para la enumeración y se promedió para el infOfme. La placa adecuada para enumeración contiene entre 25 y 250 ufclml
La muestra madre de MSM Y todos los medios preparados con MSM se ensayaron respecto de los niveles de fondo de microorganismos en MRS agar yTSA La reserva de MSM fue lt;10 ufcJg y todos los medios de ensayo fueron lt;1 ufcJml en todos los casos antes de la inoculación. Todos los intervalos de tiempo para la siembra incluyeron placas de control negativo durante el vertido con fines de control de calidad. Todas las placas de control estaban limpias de crecimiento de microorganismos. A las 72 horas, se verificó que las concentraciones de MSM y las soluciones de control negativo eran negativas para contaminación. Los resultados de estos estudios se proporcionan en la tabla 24 a continuación.
Concentración de MSM en porcentaje en leche de A cidophilus
Tiempo
Ácido leche AlBO AlB 2,5 % 0,50 % 0,50 % 2,50 % 2,50 % 5% 5%
O
8,82 5,33 6,41 7,33 6,62 6,67 6,7 6,56 6,47
8
9,08 8,36 8,67 9,06 9,00 9,06 8,97 8,73 9,08
20
9,17 8,19 9,16 9,41 9,35 9,24 9,01 9,32 9,26
32
8,85 8,73 8,87 9,2 9,12 9,06 9,11 9,33 9,19
08
8,54 8,15 8,3 8,55 8,69 8,93 8,77 8,78 8,72
56
8,46 8,51 8,56 8,77 8,69 8,7 8,81 8,88 8,7
72
8,65 8,45 8,45 8,56 8,67 8,71 8,6 8,75 8,63
80
10,09 9,66 9,82 9,92 9,51 9,52 9,96 9,87 9,71
96
10,02 9,68 8,61 9,93 10,25 10,18 10,31 10,1 4 10,26
100
9,45 8,83 8,92 9,47 9,52 9,8 9,45 9,74 9,38
Día 7
10,29 10,1 10,42 10 ,64 10,72 10,4 10,59 10,89 10,52
Día 14
6,96 6,83 5,70 6,81 5,63 8,00 6,66 7,82 8,26
Día 21
5,30 5,60 5,37 5,37 5,37 5,56 5,37 5,64 5,48
Día 28
4,00 3,82 3,94 2,52 3,48 3,43 3,22 2,52 2,52
En la hora O, hubo un crecimiento 1 lag mayor de Lactobacillus acidophilus en la leche sin MSM en comparación con leche fortificada con MSM. El significado es, en la hora 8, que la leche fortificada con MSM mostró un mínimo de un aumento de 1,73 lag en el crecimiento, mientras que la leche sin MSM mostró un aumento de 0,26 en la velocidad de crecimiento. El MSM en las primeras 8 horas de crecimiento proporcionó un aumento significativo en comparación con el control. El aumento máximo del control es el MSM al 5 % con un aumento lag medio de 2,39, mientras que el MSM al2,5 % tuvo un aumento medio de 2,33 lag. La hora 24 muestra una velocidad de crecimiento que se equilibró entre el control y las concentraciones de MSM. El control tuvo una reducciÓfl de 0,32 lag en el crecimiento en la hora 32. Las concentraciones de MSM del 2,5 % y del 5 % tuvieron una reducción de 0,04 y 0,03 lag en el crecimiento, mientras que al 0,5 % se redujo en un 0,22 lag en la hora 32. En la hora 48, el control tiene una reducción de 0,31 lag, mientras que la reducción de MSM es de 0,54 lag para el 0,5 %, 0,24 lag para el2,5 % y de 0,51 lag para el5 %. Las concentraciones de MSM mantuvieron una tasa de recuperación mayor en comparación con el control. La concentración de MSM del 2,5 % era de media 0,31 lag mayor ydel 5 % fue un 0,21 lag mayor. La hora 56 no mostró un cambio significativo en el aumento o la reducción del crecimiento. En la hora 72, el control aumento en 0,19 lag, mientras que las concentraciones de MSM eran estables. La hora 80 tuvo un aumento significativo en el crecimiento. El control mostró un aumento de 1,44 lag. Las muestras tratadas con MSM mostraron un aumento del crecimiento al 0,5 % (1 ,1 lag), 2,5 % (1,09 lag), Y 5 % (1,1 lag). A las 96 horas el control se estabilizó. Todas las concentraciones de MSM aumentaron de media (0,5 %, 0,38 lag; 2,5 %,0,51 lag; y 5,0 %, 0,41 lag) para la hora 96. En la hora 96, la concentración de MSM al 2,5 % fue 0,23 lag mayor que el control. En la hora 104, la reducción en el crecimiento lagaritmicofue comparable entre el control y las concentraciones de MSM (el control se redujo 0,57 lag; MSM al 0,5 % se redujo 0,60 lag; MSM al 2,5 % se redujo 0,62 lag; y MSM al5,O % se redujo 0,64 lag). Al comparar la recuperación del crecimiento final entre el control y las concentraciones de MSM, el estudio mostró el MSM al 0,5 % a 0,05109 mayor que el control, el MSM al2,5 % fue 0,18 lag mayor que el control, y MSM al 5 % fue 0,11 lag mayor que el control.
El día 7 mostró un aumento del crecimiento desde la hora 104 para todas las soluciones de trabajo El control aumentó 0,84 lag, MSM al 0,5 % aumentó 1,19 lag, MSM a12,5 % aumentó 0,87 lag y MSM al 5,0 % aumentó1 ,1510g. MSM al 0,5 % fue 0,39 lag mayor que el control, MSM al 2,5 % fue 0,21 lag mayor que el control y MSM al 5,0 % fue 0,42 lag mayor que el control. El día 14 mostró una reducción en el crecimiento significativa. l a mayor reducción en el crecimiento fue MSM al 0,5 % a 4,46 lag. El control estaba a continuación con una reducción de 3,33 lag, MSM al2,5 % a 3,17 y MSM al 5 % a 2,67 lag. MSM al 0,5 % fue 0,74 log menor que el control, mientras que MSM al 2,5 % fue 0,37 lag mayor. La muestra de MSM al 5,0 % fue un lag competo mayor que el control a 1,08 lag. El día 21 continuó la reducción en el crecimiento. El control fue 1,66 lag menor, MSM al 0,5 % fue 0,85109 menor, el 2,5 % fue 1,87 menor y MSM al 5,O % fue 2,48 log menor. MSM al 0,5 % yel control fueron iguales en el crecimiento logarítmico, siendo MSM al 2,5 % 0,17 lag mayor que el control y MSM al 5,0 % 0,26 lag mayor que el control. En el día 28, el crecimiento reducido continuó con una reducción de 1,3109 para el control, 2,37 109 para MSM al 0,5 %, 2,14 log para MSM al 2,5
Concentración en porcentaje de MSM
Día
Leche de Acido AlBO AlB 2,5 % 0,50 % 0,50 % 2,50 % 2,50% 5% 5%
O
10 300 370 20 30 10 10 10 20
3
20 830 480 10 10 30 10 10 10
5 % Y3,04 lag para MSM al5,O %. El crecimiento para el control negativo en el dia 28 fue 1,00 lag mayor que MSM al 0,5 %, 0,68 lag mayor que MSM al 2,5 % y 1,48 lag mayor que MSM al 5,O %_
La leche de Acidophifus más Bifidus durante el transcurso del estudio demostraron velocidades de crecimiento similares. Desde la hora O hasta la hora 8 mostraron un aumento significativo en el crecimiento. En la hora 24, el 10 control se redujo 0,17 lag, mientras que MSM al 2,5 % aumentó 0,49 log, dando MSM al 2,5 % un recuento 0,97 log mayor que el control. En la hora 32, el MSM al2,5 % redujo 0,29 lag Yel control aumentó 0,54 lag, teniendo MSM al 2,5 % un recuento logarítmico 0,14 mayor que el control. Desde la hora 48 hasta la hora 72 hubo un patrón de aumento continuo y una reducción en el crecimiento, teniendo MSM al 2,5 % un aumento de crecimiento de 0,15 y 0,5 lag frente al control. En la hora 72, el crecimiento fue igual entre el control y MSM al 2,5 %. La hora 80 mostró un aumento del 15 crecimiento de 1,21 lag para el control y de 1 ,37 lag para el MSM al2,5 %, teniendo el MSM a12,5 % un aumento 0,16 lag en el crecimiento. En la hora 96, hubo una reducción significativa en el crecimiento para el MSM al 2,5 % de 1,21 log. El control no mostró una diferencia significativa desde la hora 80, dando como resultado un crecimiento 1,07 lag mayor para el control en comparación con MSM al2,5 %. En la hora 104, el crecimiento de control se redujo en 0,85109 y las muestras de MSM al 2,5 % aumentaron en 0,31 lag. La hora 104 mostró las muestras de MSM al2,5 % a 0,09109 20 mayores que el control. El dia 7 tuvo un aumento de 1,27 lag para la leche y de 1,5 lag para el MSM al 2,5 %, siendo el MSM al2,5 % 0,32 log mayor que la leche. El día 14 mostró una reducción en el crecimiento, 3,27109 para leche, 4,72 lag para MSM al 2,5 %. La leche tuvo un aumento de 1,13 en comparación con MSM al 2,5 %. En el día 21, la reducción se redujo, la leche se redujo en 1,23 lag YMSM al2,5 % en 0,33 lag, siendo la leche 0,23 log mayor en el crecimiento que el MSM. La leche en el día 28 se redujo en 1,78 lag y MSM al2,5 % se redujo en 1,43109, siendo MSM
25 0,12 lag mayor que la leche sin MSM. La tabla 25 muestra los datos promediando los duplicados.
Tabla 25. Media de crecimiento de Laclobacillus acidofJhilus en leche fortificada con MS M.
Concentración de MSM en porcentaje en leche de acidophilus
Tiempo
Leche de Acido AlB AlB 2,5 % 0,50% 2,50% 5,00 %
O
8,82 5,33 6,41 6,98 6,69 6,52
8
9,08 8,36 8,67 9,03 9,02 8,91
24
9,17 8,19 9,16 9,38 9,13 9,29
32
8,85 8,73 8,87 9,16 9,09 9,26
48
8,54 8,15 8 ,3 8,62 8,85 8,75
56
8,46 8,51 8,56 8,73 8,76 8,79
72
8,65 8,45 8,45 8,62 8,66 8,69
80
10,09 9,66 9,82 9,72 9,74 9,79
96
10,02 9,68 8,61 10,09 10,25 10,20
104
9,45 8,83 8,92 9,50 9,63 9,56
Día 7
10,29 10,1 10,42 10,68 10,50 10,71
Dia 14
6,96 6,83 5 ,7 6,22 7,33 8,04
Día 21
5,3 5,. 5,37 5,37 5,465 5,56
Dia 28
4,00 3,82 3,94 3,00 3,325 2,52

Tabla 26 Crecimiento de ufc por mi de organismos no probióticos en leche de Acidophifus. Concentración en 30 pareen t, e de MSM
7
10 1250 570 10 10 20 10 10 20
14
20 2500 1460 20 20 lt;10 lt;10 20 10
21
20 8000 3500 20 40 60 170 20 10
28
650 120000 110000 30 2250 2460 2700 10 10
La labia 26 muestra los datos para recuentos de placas estándar analizadas en las soluciones de trabajo. Esto se efectuó para observar cómo podría afectar el MSM a la flora IlOrmal hallada en la leche. El día O fue el día que las muestras se prepararon para el inicio del estudio. La leche de Acidophilus más Bifidus comenzó con un mayor recuento en el día O que lo que normalmente se esperaba. Esto causó que los valores finales estuviesen elevados. El producto lácteo de Acidophilus en el día O se encontraba a los valores esperados. La leche de Acidophilus mantuvo tasas de crecimiento adecuadas a lo largo del estudio y fueron equivalentes a las velocidades de crecimiento típicas en productos lácteos. El MSM a15,0 % no permitió un crecimiento significatiYo durante el estudio.
El MSM como aditiYo para este producto desempeñó un papel significatiYo para aumentar la población del probiótico, Lactobacillus acidophilus en un producto. En las primeras ocho hOfas tras fortificar un producto con MSM, hubo una influencia significativa en el probiótico en el producto. Hubo un aumento significatiYo en la yelocidad de crecimiento del probiótico. La leche de Acidophilus sin MSM tuvo un aumento de 0.26 lag en el crecimiento en las primeras 8 horas Aunque la leche de Acidophilus con MSM tuvo un mínimo de 1,73 lag de crecimiento. La muestra de leche con MSM al 2,5 % tuvo un aumento de 2,27 y 2,3910g. La muestra con MSM al 5,0 % tUYO un aumento de 2,17 y 2,61 lag.
Durante el estudio, hubo un aumento continuo del crecimiento cuando se compara el control de leche de Acidophiluscon la leche de Acidophilus fortificada con MSM. El aumento de la velocidad de crecimiento varía de 0,04 a 1,08 frente al control. Solo en dos puntos de tiempo hubo datos que mostraron el control de crecimiento mayor que las soluciones de MSM, hora 80 y día 28. Cuando se analizan los datos, la razón para el mayor crecimiento en la hOfa 80 se debió al pico de la curva de crecimiento. La ledle de Acidophi/us sin MSM alcanzó el máximo antes de la leche con MSM. Por lo tanto, el MSM se encontraba aún en la fase de crecimiento, mientras que la leche de Acidophilus habia alcanzado el máximo de su crecimiento. Al deberse el aumento en el crecimiento al MSM, hubo una mayor tasa de mortalidad al final del estudio. Por lo tanto, el día 28 mostró un menor crecimiento para las soluciones de MSM que el control.
El pico de crecimiento se alcanzó con la leche de Acidophilus fortificada con MSM a15,0 %, con un log de 10,89 La leche de Acidophilus alcanzó un pico de crecimiento de 10,29 lag. Cada concentración de MSM superó el crecimiento de la leche de AcidophiJus. MSM al 2,5 % tUYO un pico de crecimiento de 10,59 lag Y MSM al 0,5 % tuvo un pico de velocidad de crecimiento de 10,72 lag. Esto establece además la influencia de MSM en un probiótico. El producto, una vez fortificado con MSM, superó el crecimiento del producto sin MSM. Al ser mayor el pico de crecimiento, se observó un aumento de crecimiento en el día 14, una semana completa después del pico de velocidad de crecimiento. El crecimiento de la leche de Acidophilus fue de 6,9610g; la leche fortificada con MSM fue de 7,82 y 8,26 lag, un aumento de 0,86 y 1,3 lag, respectiYamente.
La eficacia probiótica se basa en tres puntos; capacidad de supervivencia, colonización y producción de ácido láctico El MSM demuestra la capacidad para afectar a la capacidad de supervivencia y colonización de la bacteria probiótica. En las primeras ocho horas, se observó la capacidad de colonizar con el aumento de la velocidad de crecimiento. En el día 14, se observó la capacidad para sobreviYir con el aumento del crecimiento logarímico. La capacidad para aumentar la producción de ácido láctico fue el tercer componente de la eficacia de un probiótico que se vaya a estudiar En este estudio, hubo una reacción observada de producción de espuma aumentada en las soluciones de MSM
La afirmación de que MSM es un complemento dietético beneficioso está soportada por este estudio. La flora microbiana del tracto gastrointestinal puede verse afectada de un modo positiYO con la adición de MSM en la dieta humana. Hubo un aumento en el crecimiento de bacterias probióticas, con un aumento en la capacidad de supervivencia. Aumenta la probabilidad de que MSM, cuando se usa en un producto probiótico, podría aumentar el beneficio para el consumidor.
Ejemplo 18
Recuperación de Lactobacillus acidophilus en leche de Acidophilus complementada con MSM
Este ejemplo muestra la recuperación de Laclobacillus acidoplli/us en leche de acidopllilus complementada con MSM.
Para analizar los efectos de MSM en la recuperación de Lactobacillus acidophilus en leche de Acidophilus, después de un tiempo de incubación especificado se transfirió una porción diluida de las soluciones de crecimiento originales al caldo adecuado y se muestrearon a intervalos de tiempo analizando las tasas de reruperación. El crecimiento microbiano se determinó en leche de Acidophilus fortificada con MSM al O %, 0,5 %, 2,5 % y 5 %. En el día 7, 14, 21 Y 28, las muestras de leche de Acidophilus fortificadas con MSM se diluyeron y transfirieron a los ca ldos adecuados son
MSM para el estudio de recuperación. Los intervalos de tiempo de emplacado se emplearon cada 24 horas durante un periodo de 72 horas. Se compararon las curvas de crecimiento de las unidades formadoras de colonias por mililitro (ufcJml) de los microorganismos entre la leche de Acidophilus con concentraciones de MSM con leche de Acidophilus con concentración de MSM al O % como muestra de cootrol. Todos los medios y la reserva de polvo de MSM fueron comprobados respecto de esterilidad antes del estudio. El estudio se efectuó en cuatro organismos durante un periodo de dos semanas. Los microorganismos se separaron en dos ejecuciones, cada una de una semana de duración analizando dos microorganismos cada semana.
La leche de Acidophilus era baja en grasa (Darigold) La leche de Acidophllus más 8ifidus contenía grasa de leche al 2 % (Lucerne). La leche de Acidophilus más Bifidus se ejecutó sumultáneamente con una concentración de MSM de12,5 % y el O % en forma de un producto que contiene dos microorganismos. Las soluciones de trabajo se mantuvieron a 4 QC durante el estudio. Las soluciones de trabajo de leche de MSM se ejecutaron por duplicado. Toda las preparaciones y la siembra se llevaron a cabo a temperatura ambiente. Todas las diluciones para todas las soluciones se emplacaron por triplicado para todos los intervalos de tiempo muestreados. Para capturar las colonias adecuadas por mililitro, todos los organismos en todos los intervalos de tiempo se emplacaron en tres diluciones diferentes. Todas las placas se incubaron a 35 QC ± 0,5 QC en C02 durante 72 horas para todas las soluciones. Se usó la placa de dilución adecuada para la enumeración y se promedió para el informe La placa adecuada para enumeración contiene entre 25 y 250 ufcJml.
La muestra madre de MSM Y todos los medios preparados con MSM se ensayaron respecto de los niveles de fondo de microorganismos en MRS agar Y TSA. La reserva de MSM fue lt;10 ufclg y todos los medios de ensayo fueron lt;1 ufclml en todos los casos antes de la inoculación. Todos los intervalos de tiempo para la siembra incluyeron placas de control negativo durante el vertido con fines de control de calidad. Todas las placas de control estaban limpias de crecimiento de microorganismos. A las 72 horas, se verificó que las concentraciones de MSM y las soluciones de control negativo eran negativas para contaminación.
El estudio observa el efecto de MSM en la recuperación de Lactobacillus Acidophilus de leche de Acidophilus fortificada con MSM. El estudio de recuperación se ejecutó en paralelo con el estudio efectuado en los efectos de MSM sobre el crecimiento de Lactobacillus acidophilus en leche de Acidophllus fortificada con MSM. La velocidad de recuperación de crecimiento se analizó en el día 7, día 14, día 21 y día 28. Para la tabla 27, se calcula el crecimiento para el día x sin tiempo a partir del estudio de crecimiento inicial con el factor de dilución en el crecimiento logarítmico. Para la tabla 28, se calculó el crecimiento a partir del crecimiento lag el día x sin tiempo restado del crecimiento lag para las fechas analizadas posteriormente, por ejemplo, el dia 28 tuvo un resultado de 4,00 lag, calculando la dilución, el valor del día 28 día O es 2,00 lag para la tabla 27. La tabla 28 toma el valor de 2,00 como valor de partida. Los datos posteriores para las horas analizadas toman las cuentas en log y resta el valor inicial de 2,00, por ejemplo, el día 28 24 es 11 ,29 lag, reslando 2,00 lag, el aumento de velocidad de crecimiento es 9,29 lag
Tabla 27 Recuperación retardada de Lactobacillus acidophilus en leche fortificada con MSM el en dla 7
Concentración en porcentaje de MSM
Día -Hora
0 % AlBO % AlB 2,5 % 0,50% 0,5% 2,50 % 2,5% 5% 5%
Oía 7 -24
11 ,29 12,88 13,44 13,1 12,78 13,16 13,15 12,12 13,29
Oía 7 -48
12,71 13,42 12,5 12,7 12,67 12,04 12,67 13,09 13,25
Oía7-72
12,17 13,47 12,77 12,4 13,74 11 ,92 13,28 13,1 12,87

Tabla 28. Recuperación de Lactobacillus acidophilus en leche fortificada con MSM el día 7 con recuperación media por Dorcentáe de MSM con datos de oartida iniciales
Concentración en porcentaje de MSM
Oía -Hora
Leche de A cid ophilus Leche de AcJB Ac/Bf con MSM aI 2,5% MSM al 0,5% MSM aI 2,5% MSM aI 5,0 %
Día 7
8,29 8,1 8,42 8,68 8,50 8,71
Oía7-24
11 ,29 12,88 13,44 12,94 13,16 12,71
Oía 7 -48
12,71 13,42 12,50 12,69 12,36 13,17
Oía7-72
12,17 13,47 12,77 13,07 12,60 12,99
La recuperación del día 7 muestra que todas las concentraciones de MSM dentro de las primeras 24 horas de crecimiento lienen un aumento de más de 1 lag frente al control, MSM al 0,5 % de 1,65, MSM a12,5 % de 1,87, y MSM al 5,0 % de 1,42. Hora 48, el control era ligeramente más elevado en el crecimiento en comparación con MSM al 0,5 %
a 0,03 lag, Y 0,36 lag mayor que MSM al 2,5 %, pero 0,46 lag menor que MSM al 5,0 %. Hora 72, las concentraciones de MSM superan al crecimiento del cootrol; MSM al 0,5 % a 0,9 lag, MSM al 2,5 % a 0,43 log Y al 5,0 % a 0,82 lag. El control de acidophilus más bifidus en las primeras 24 horas fue a 12,88 lag para crecimiento, mientras que acidophilus más bifidus con MSN al 2,5 % fue a 13,44 lag de crecimiento. La lecho con MSM al 2,5 % fue 0,56 lag mayor que el control. En los siguientes dos periodos de 24 horas, el control de Acidophilus más bifidus tenia un crecimiento de 13,42 lag y 13,47 lag. El acidophilus más bifidus con MSM a12,5 % tenia crecimiento a 12,50 lag y 12,77 lag durante el mismo periodo de tiempo. El control fue 0,92 lag mayor que el MSM a12,5 % en el segundo periodo de 24 horas y fue 0,7 lag mayor en el tercer periodo de 24 horas.

Tabla 29. Recuperación de Lacfobacillus acidophilus en leche fortificada con MSM en el día 7 en aumento lag de la velocidad de crecimiento de recuperación desde el tiempo de inicio de cero
Concentración en porcentaje de MSM
Hora
Leche de Acidophilus Leche de AclB Ac/Bf con MSM aI2,5 % MSM al 0,5% MSM aI2,5 % MSM al 5,0 %
O
0 ,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00
2.
3 ,00 4,78 5,02 4,26 ' ,66 4,00
. 8
1,42 0,54 -0 ,94 -0,26 -0 ,8 0,47
72
-0,54 0,05 0,27 0,39 0,25 -0,19
Analizando la recuperación del día 7 basándose en el aumento en lag de la velocidad de crecimiento, hubo un aumento significativo en las primeras 24 horas de crecimiento. El control aumentó en 3 lag respecto de la inoculación inicial, mientras que las concentraciones de MSM aumentaron en 4,26 lag para MSM al 0,5 %, 4,56 lag para MSM a12,5 %, y 4,00 lag para MSM al 5,0. En las segundas veinticuatro horas, hubo una reducción en el crecimiento con respecto a MSM al 0,5 % Y MSM al 2,5 %. El control de crecimiento aumentó en 1,42 lag Y el crecimiento de MSM al 5,0 % aumentó en 0,47 lag. El tercer periodo de veinticuatro horas, el control de crecimiento se redujo en 0,54 lag y el crecimiento de MSM a15,0 % se redujo en O, 1910g El MSM al 0,5 % y el MSM a12,5 % aumentó en el crecimiento lag, 0,39 Y 0,25 lag, respectivamente
La leche de control de Acidophilus más bifidus mostró un aumento de 4,78 lag en las primeras 24 horas, en comparación con un aumento de 5,02 para la leche de Acidophilus más bifidus fortificada con MSM al 2,5 %. El segundo periodo de 24 horas, el cootrol de acidophilus más bifidus aumentó en 0,54 lag, mientras que la leche con MSM a12,5 % se redujo en 0,94109. En el tercer periodo de 24 horas, el control de Acidophilus más bifidus aumentó en 0,05 log, mientras que la leche con MSM al 2,5 % aumentó en 0,27 log.

Tabla 30 Recuperación retardada de Lactobacillus acidophilus en leche fortificada con MSM el en día 14
Concentración en porcentaje de MSM
Oía -Hora
0 % AJB O%. AlB 2,5 0,5 % 0,5% 2,50 % 2,50 % 5,0 % 5,0 %
Día 14 -24
10,62 13,38 13,35 10,19 10,10 10,00 9,73 9,6 9,6
Día 14 -48
12,37 13,52 13,47 12,95 12,72 12,43 12,2 12,99 13,04
Día14 -72
12,43 13,31 13,43 13,02 12,70 12,51 12,63 12,65 12,21
Tabla 31 . Recuperación de Lactobacillus acidophilus en leche fortificada con MSM el día 14 con recuperac ión media por porcentaje de MSM con datos de partida iniciales
Concentración en porcentaje de MSM
Día -Hora
Leche de Acidophilus Leche de AclB Ac/Bf con MSM aI2,5 % MSM al 0,5 % MSM aI 2,5% MSM al 5,0 %
Día14-0
' ,96 4,83 3,70 4,22 5,33 6 ,04
Día 14 -24
10,62 13,38 13,35 10,15 9,87 9 ,60
Día 14 -48
12,37 13,52 13,47 12,84 12,32 13,02
Día 14 -72
12,43 13,31 13,43 12,86 12,57 12,43
En el dia 14, el control superó el crecimiento de las concentraciones de MSM en las primeras 24 horas. El cootrol fue 0,48 lag mayor que MSM al 0,5 %, 0,75 lag mayor que MSM al 2,5 % Y 1,02 lag mayor que MSM al 5,0 %. A las 48
horas, la solución de control fue 0,05 lag mayor que MSM al 2,5 %. MSM al 0,5 % fue 0,47 lag mayor que el control y
MSM a15,0 % fue 0,65109 mayor que el control. A las 72 horas, el MSM al 0,5 % fue 0,43109 mayor, MSM a12,5 % fue
0,14 lag mayor que el control y MSM al 5,0 % fue igual al control
5 Acidophilus más bifidus fortificado con MSM al 2,5 % fue 0,03 menor que el control de Acidophilus más bifidus a 24 horas. A las 48 horas, el control de Acidophilus más bifidus fue 0,05 lag mayor que el Acidophilus más bifidus con MSM al 2,5 %. A las 72 horas, el Acidophilus más bifidus con MSM a12,5 % fue 0,12 lag mayor que el control de Acidophilus más bifidus.
10 Tabla 32. Recuperación de Lactobacillus acidophilus en leche fortificada con MSM en el dia 14 en aumento lag de la velocidad de crecimiento de recuperación desde eltiemoo de inicio de cero
Concentración en porcentaje de MSM
Hora
lec he de Acidophilus leche de AclB Ac/Bf con MSM aI2,5 % MSM al 0,5 % MSM aI2,5 % MSM al 5,0 %
O
0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00
24
5,66 8,55 9,65 5,93 4,54 3,56
48
1,75 0,14 0,12 2,69 2,45 3,42
72
0,06 -0,21 -0,04 0,03 0,26 -0,59
Analizando la recuperaciórJ del día 14 basándose en el aumento en lag de la velocidad de crecimiento, se observó lo siguiente; el control aumentó en 5,66 109 respecto de la inoculaciórJ inicial, mientras que las concentraciones de MSM
15 aumentaron en 5,93109 para MSM al 0,5 %, 4,54 lag para MSM al 2,5 %, y 3,56 lag para MSM al 5,0. En las segundas veinticuatro horas, el control de crecimiento aumentó en 1 ,7510g mientras que el MSM al 0,5 % aumentó en 2,69Iog, el MSM al 2,5 % aumentó en 2,45 lag Y el MSM al 5,0 % aumentó en 3,42 lag. El tercer periodo de veinticuatro horas, el control de crecimiento aumentó en 0,06 lag y el crecimiento de MSM a15,0 % se redujo en 0,59 lag El MSM al 0,5 % y el MSM a12,5 % aumentó en el crecimiento lag, 0,03 Y 0.26109, respectivamente
20 La leche de control de Acidophilus más bifidus mostrÓ un aumento de 8,55 log en las primeras 24 horas, en comparación con un aumento de 9,65 para la leche de Acidophilus más bifidus fortificada con MSM al 2,5 %. El segundo periodo de 24 horas, el control de acidophilus más bifidus aumentó en 0,14 lag, mientras que la leche con MSM a12,5 % se redujo en 0,1210g. En el tercer periodo de 24 horas, el control de Acidophilus más bifidus se redujo en
25 0,21 lag, mientras que la leche con MSM al 2,5 % se redujo en 0,04 log.

Tabla 33 Recuperación retardada de Lactobacillus acidoDhifus en leche fortificada oon MSM el en dia 21
Concentración en porcentaje de MSM
Día -Hora
OClICI AlBO % AlB 2,5 % 0,50 % 0,50 % 2,50 % 2,SO CI/O 5 % 5,00 %
Día 21 -24
12,94 12,43 13,08 12,89 12,93 10,62 10,95 9,52 9,85
Día 21 -48
13,02 12,16 12,08 12,94 13,1 12,44 13,12 13,08 13,07
Día 21 -72
10,32 10,86 12,33 12,29 10,31 13,14 13,05 13,26 13,04
Tabla 34. Recuperación de Lactobacillus acidophilus en leche fortificada con MSM el día 21 con recuperac ión media 3D por oorcenta·e de MSM con datos de partida iniciales
Concentración en porcentaje de MSM
Día -Hora
l eche de Acidophilus
Día21
3,30
Día 21 -24
12,94
Día 21 -48
13,02
Día 21 -72
10,32
aI2,5%
MSM al 0,5% MSM aI2,5% MSM al 5,0 %
3,60
3,37 3,37 3,47 3,56
12,43
13,08 12,91 10,79 9 ,69
12,16
12,08 13,02 12,78 13,08
10,86
12,33 11 ,30 13,10 13,15
leche de AclB
AclBf con MSM
El día 21, el control de Acidophilus en las primeras 24 horas tuvo un crecimiento lag de 12,94. Para MSM al 0,5 %, el crecimiento fue de 12,91 lag, para MSM al 2,5 % fue de 10,79 lag Y para MSM a15,0 % fye de 9,69. En el siguiente periodo de 24 horas, el control fue igual en crecimiento a leche con MSM al 0,5 %, 0,24 lag mayor que MSM al 2,5 % y 35 0,05 log menor que MSM al 5,0 %. El periodo final de 24 horas muestra un aumento significativo en las
concentraciones de MSM en comparación con el control. MSM al 0,5 % fue 0,98 lag mayor que el control, MSM al 2,5 % fue 2,78 lag mayor que el control y el MSM al 5,0 % fue 2,83 lag mayor que el control. El Acidophilus más bifidus con MSM al 2,5 % fue 0,65 lag mayor que el control de Acidophilus más bifidus en las primeras 24 horas. En la hora 48, el control de acidophilus más bifidus fue 0,08 lag mayor. En las 24 horas finales, el acidophilis más bifidus con MSM al 2,5 % superó el crecimiento del control de Acidophilos más bifidus en 1,47 lag
Tabla 35. Recuperación de Lactobacillus acidophilus en leche fortificada con MSM en el día 21 en aumento lag de la velocidad de crecimiento de recuperación desde el tiempo de inicio de cero.
Concentración en porcentaje de MSM
Hora
Leche de Acidophilus Leche de AclB AclBf con MSM aI2,5 % MSM al 0,5 % MSMaI2,5 % MSM al 5,0 %
O
0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00
24
9,64 8,83 9,71 9,54 7,32 6,13
48
0,08 -0,27 -1,00 0,11 2,00 3,39
72
-2,70 -1,30 0,25 -1,72 0,32 0,08
Al revisar el aumento lag para el día 21 , en las primeras 24 horas la leche de control de acidophilos tenía un aumento de 9,64 lag. MSM al 0,5 % tuvo un aumento de 9,54 lag, MSM al 2,5 % tuvo un aumento de 7,32 lag Y MSM al 5,0 % tuvo un aumento de 6,1310g. En las segundas 24 horas el control aumentó en 0,08 lag. MSM al 0,5 % aumentó en 0,11 lag, MSM al 2,5 % aumentó en 2,00, y MSM al5,O % aumentó en 3,39 lag. Las 24 horas finales muestran que el control se reduce en 2,70 logs. MSM al 0,5 % se redujo en 1,72 lag. MSM al 2,5 % aumentó en 0,32 lag y el MSM al 5,0 % aumentó en O,08 10g.
Acidophilus más bifidus con MSM al 2,5 % aumentó en 9,71 lag y el control de Acidophilus más bifidus aumentó en 8,83 log. En los dos periodos de 24 horas finales, el control de Acidophilus más bifidus tenía una reducción de 0,27109 y 1,30 lag. El Acidophilus más bifidus con MSM al 2,5 % redujo 1,00 lag em el segundo periodo de 24 hOfas y aumentó 0,25 lag en el periodo de 24 horas final.

Tabla 36 Recuperación retardada de Lactobacillus acidoDhilus en leche fortificada con MSM el en dia 28
Concentración en porcentaj e de MSM
Día-Hora
0 % AlBO AlB 2,5 % 0,50 % 0,50 % 2,50 % 2,50 % 5,0 % 5,0 %
Oía28 -24
13,1 13,41 12,67 6,11 6,47 6,37 6,37 5,64 5,48
Oía28 -48
11 ,04 13,42 13,19 13,66 12,99 12,52 12,62 12,58 13,16
Día 28 -72
12,47 10,31 12,00 12,99 13,01 12,98 12,34 12,49 12,47
Tabla 37. Recuperación de Lactobaciffus acidophilus en leche fortificada con MSM el día 28 con recuperación media por oorcenta·e de MSM con datos de oartida iniciales
Concentración en porcentaje de MSM
Día -Hora
Leche de Acidophilus Leche de AclB AclBf con MSM aI 2,5 % MSM al 0,5 % MSM aI2,5 % MSM al 5,0 %
Día 28
2 ,00 1,82 1,94 1,00 1,33 0 ,52
Día 28 -24
13,10 13,41 12,67 6,29 6,37 5,56
Día 28 -48
11 ,04 13,42 13,19 13,33 12,57 12,87
Día 28 -72
12,47 10,31 12,00 13,00 12,66 12,48
Los datos de recuperación del día 28 muestran que en el primer periodo de 24 horas el control de leche de Acidophilus tenía un crecimiento lag de 13,10. Las concentraciones de MSM fueron: 6,29 lag para MSM al 0,5 %, 6,37 lag para MSM al 2,5 %, Y 5,56 lag para MSM al 5,0 %. A las 48 horas, el crecimiento lag de MSM al 0,5 % fue de 13,33, de MSM al 2,5 % fue de 12,57 y de MSM al 5,0 % gue de 12,87 lag. El control a las 48 horas fue de 12,71 lag. El control se redujo hasta 12,17 a las 72 horas. MSM al 0,5 % se redujo a 13,00 lag Y MSM al5,O % se redujo a 12,48109. MSM al 2,5 % mejoró a 12,66109. Esto fue un aumento de 0,53 frente al control.
El control de Acidophilus más bifidus fue 13,41 lag a las 24 horas, 0,74 lag mayor que el Acidophilus más bifidus con
MSM al 2,5 % En la hora 48, la diferencia fue menor, con el control 0,23 lag mayor que el Acidophilus más bifidus con MSM al2,5 %. En la hora 72, el Acidophilus más bifidus con MSM al 2,5 % fue 1,69 logs mayor que el control, que fue de 10,31 lag

Tabla 38. Recuperación de Lactobacillus acidophilus en leche fortificada con MSM en el dla 28 en aumento lag de la velocidad de crecimiento de recuperación desde el tiempo de inicio de cero
Concentración en porcentaj e de MSM
Tiempo
l eche de Acidophilus l eche de Ac/B Ac/Bf con MSM aI 2,5 % MSM al 0,5 % MSM aI 2,5% MSM al 5,0 %
O
0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00
24
11 ,10 11 ,59 10,73 5,29 5,04 5,04
48
-2,06 0,01 0,52 7,04 6,20 7,31
72
1,43 -3,11 -1,19 -0,32 0,09 -0,39
En el día 28, la velocidad de crecimiento aumentó en la cual el control de leche de Acidophilus en el primer periodo de 24 horas aumentó 11,10 lag, MSM al 0,5 % aumentó 5,29 lag, MSM al 2,5 % aumentó 5,04 lag, y MSM al 5,0 % aumentó 5,04 lag. En el segundo periodo de 24 horas, hubo un cambio, reduciéndose el control en 2,06 lag, mientras que las concentraciones de leche fortificada con MSM aumentaron para MSN al 0,5 % en 7,04 lag, 2,5 % en 6,20 log, Y 5,0 % en 7,31 lag. El periodo final de 24 horas mostró que el control aumentó en 1,43, el MSM al 2,5 % aumentó en 0,09 lag. el MSM al 0,5 % redujo en 0,32 lag y el MSM al 5,0 % redujo en 0,39 lag
El control de leche de Acidophilus más bifidus aumentó 11,59 lag en las primeras 24 horas y Acidophilos más bifidus con MSM al 2,5 % aumentó 10,73 lag. En el segundo periodo de 24 horas, el control de Acidophilus más bifidus aumentó 0,01 log Y Acidophilus más bifidus coo MSM al 2,5 % aumentó 0,52 lag. En el periodo de 24 horas final, el control de Acidophilus más bifidus se redujo en 3,11 lag, mientras que el Acidophilus más bifidus con MSM al 2,5 % se redujo en 1,19 lag
Estos estudios demuestran que MSM como aditivo para este producto desempeñó un papel significativo en la recuperación del probiótico, Lactobacillus acidophilus. En cada caso de recuperación, hubo un aumento en la velocidad de crecimiento de Lactobacillus Acidophilus con producto fortificado con MSM frente al producto sin MSM
Los datos de recuperación del día 7 mostraron en las primeras 24 horas que MSM tenía un aumento de 0,99 lag a 1,66 lag en comparación con el control. En el segundo periodo de 24 horas durante 7 días, la velocidad de crecimiento fue menor que el control, los números de crecimiento general fueron mayores para el MSM al 5,0 %, 0,46 lag mayores. En el tercer periodo de 24 horas para el día 7, la velocidad de crecimiento con MSM fue mayor que el control, en 0,36 lag, 0,79 lag Y 0,93 lag
En el día 14, solo el MSM al 0,5 % superó en crecimiento al control en 0,27 lag de la velocidad de crecimiento en las primeras 24 horas. Las muestras de MSM al 2,5 % y de MSM al 5,0 % fueron de 1,13 y 2,10 lag, respectivamente, menores que el control. Esto es doode el control comenzó a superar en crecimiento las concentraciones de MSM en las primeras 24 horas En los días 21 y 28, el control superó al crecimiento de todas las concentraciones en las primeras 24 horas.
Las segundas 24 horas para cada punto de datos que se recogieron después del día 7 mostraron que las concentraciones de MSM superaban al control. Los datos del segundo periodo del día 14 mostraron velocidades de crecimiento con MSM a 0,70, 0,94, Y 1,67 lag mayores que el control. Los datos del segundo periodo del día 21 mostraron velocidades de crecimiento con MSM 0,03, 1,92, Y 3,31 lag mayores que el conl rol. Los datos del segundo periodo del día 28 mostraron velocidades de crecimiento con MSM a 9,10, 8,26, Y 9,37 lag mayores que el control. Este aumento en la velocidad de crecimiento no se tradujo siempre en una mayor concentración de Lactobacillus acidophilus en el caldo de recuperación. En el día 14, las coocentraciones de MSM al 0,5 % Y al 5,O % fueron mayores que el control, mientras que el MSM al2,5 % fue menor. En el día 21 , únicamente el MSM al 5,O % fue mayor. En el día 28, las tres concentraciones de MSM fueron significativamente mayores que el control, en 2,29, 1,53, Y 1,83 lag.
El tercer periodo de datos para el día 14 demostró que solo la velocidad de crecimiento a la concentración de MSM al 2,5 % fue mayor, en 0,20 log. Incluso con las menores velocidades de crecimiento, se observó un mayor log de crecimiento para las concentraciones de MSM, excepto para MSM al 5,0 %, que fue igual al cootrol. En el día 21 , el tercer periodo de datos mostró que la velocidad de crecimiento de las concentraciones de MSM superó al control en 0,98, 3,02, Y 2,78 lag. Este aumento de velocidad de crecimiento se tradujo en una mayor coocentración de Lactobacillus acidophilus para las muestras fortificadas con MSM. Los recuentos de recuperación de crecimiento fueron 0,98, 2,78, Y 2,83 lag mayores que el control. El control superó a las concentraciones de MSM para la velocidad de crecimiento del día 28 en el tercer periodo. Aunque los recuentos de recuperación del crecimiento para las
concentraciones de MSM de 0,5, 2,5 Y de, 5 % fueron de 0,53, 0,19 Y 0,01 lag, respectivamente, mayores que el control . Con curvas de crecimiento de bacterias se produce una fase de retardo inicial donde las bacterias se ajustan al ambiente, antes de entrar en la fase exponencial o logarítmica, donde se duplican las células. Después de la fase lag, se produce una fase estacionaria donde se frena la velocidad de crecimiento. En esta fase, se observan picos y vales como curvas de crecimiento Finalmente, se produce la fase de muerte, donde las bacerias agotan los nutrientes y mueren.
Este estudio proporciona indicadores de cómo el MSM ayuda en la fase de retardo, la fase logarítmica, la fase estacionaria y la fase de muerte. MSM en diferentes etapas acorta la fase de retardo, de tal fOfma que las bacterias probióticas comienzan la fase logaritmica en un instante más temprano. La fase lag se extendió más allá del control en este estudio, de tal forma que el producto con el aditivo de MSM tuvo un valor de pico mayOf. La fase estacionaria se vio afectada por el MSM ya que hubo una extensión de los valores mayores durante un periodo de tiempo más prolongado. La velocidad de muerte se redujo con MSM. En diferentes puntos, hubo una velocidad de reducción más lenta en el crecimiento. Estas diferentes observaciones muestran que MSM como aditivo afecta positivamente a las bacterias probióticas. El beneficio de ingerir un produclo probi6tico fortificado con MSM podría ser un tiempo de respuesta más rápido con un efecto de mayor duración. El consumidor podría obtener un producto que aumenta sus respuestas corporales a los beneficios añadidos de las bacterias probi6ticas.
MSM ayudó de manera consistente a la recuperación y crecimiento de bacterias probióticas en el producto estudiado En las primeras 24 horas de cultivo, hubo un aumento en la velocidad de recuperación, lo que indica que los microorganismos estresados respondieron mejor a un nuevo ambiente con MSM como aditivo.
Ejemplo 19
Crecimiento de Bifidobacterium bifidum en medio fortificado con MSM
Este ejemplo muestra los efectos de MSM en el crecimiento de Bifidobacterium bifidum en medio de crecimiento microbiano fortificado con MSM
Se llevaron a cabo estudios de crecimiento microbiano en medios fortificados con MSM al O %, 0,125 %, 0,25 %, 0,5 %, 1,0 %, 2,5 % y 5 %. Los intervalos de tiempo de emplacado se emplearon cada 8 horas durante un tota l de 96 horas Se compararon las curvas de crecimiento de unidades formadoras de colonias por mililitro (ufclml) de los microorganismos entre las concentraciones de MSM con la concentración de MSM al O % como muestra de control para cada microOfganismo. La reserva de MSM en polvo fue suministrada por Bergstrom Nutrition con certificado de análisis. El polvo fue la fórmula Microprill, lote n.o 0806809, con fecha de caducidad 31f10f13. Todos los medios y la reserva de polvo de MSM fueron comprobados respecto de esterilidad antes del estudio El microorganismo analizado fue Bifidobacterium bifidum ATCC n.o 29521
Se preparó Bifidobacterlum bifidum (99 mi de caldo MRS con la adición de L-cisteína al 0,05 %) con las respectivas concentraciones de MSM. Se prepararon las concentraciones de trabajo de MSM a partir de una sola solución de MSM al 5 % en caldo MRS y se diluyeron consecuentemente con caldo MRS para obtener la concentración final deseada de MSM. Se verificó la esterilidad de las soluciones antes de proceder con el estudio
Las soluciones de trabajo se inocularon a un nivel de 1,5 a 2 lag de microorganismo por 100 mi de caldo Se incubó Bifidobacterium bifidum en condiciones anaerobias a 35 QC ± 0,5 QC durante 72 hOfas. Se usaron indicadores de oxígeno para verificar las condiciones anaerobias entre los intervalos de emplacado para las muestras de ensayo de
Bifidobacterium
Se inoculó Bifidobacteruim en MRS agar complementado con L-cisteína y los tiempos listados anteriormente para reducir el potencial de oxidación-reducción del medio. Toda la preparación y la siembra se llevó a cabo a temperatura ambiente. Todas las diluciones para todos los organismos se emplacaron por triplicado para todos los intervalos de tiempo muestreados. Para capturar las colonias adecuadas por mililitro, todos los organismos en todos los intervalos de tiempo se emplacaron en seis diluciones diferentes. Todas las placas se incubaron a 35 QC ± 0,5 QC durante 72 horas. Se usó la placa de dilución adecuada para la enumeración y se promedió para el informe. La placa adecuada para enumeración contiene entre 25 y 250 ufclmL La muestra madre de MSM y todos los medios preparados con MSM se ensayaron respecto de los niveles de fondo de microorganismos en MRS agar y TSA. La reserva de MSM fue lt;10 ufdg Y todos los medios de ensayo fueron lt;1 ufclml en todos los casos antes de la inoculación. Todos los intervalos de tiempo para la siembra incluyeron placas de control negativo durante el vertido con fines de control de calidad. Todas las placas de control negativo carecían de crecimiento de microorganismos. A las 72 horas, se verificaron que las concentraciones de MSM y las soluciones de control eran negativas para contaminación por cepas y se verificó que las cepas eran especies originales.
meros de control de cu ltivo de reserva antes de la inoculación de la muestra de ensayo
Tabla 39. Nú
Bifidobacterlum bifidum
ufd ml inóculo
1,48 x 104
Ufc añadidas a 100 mi
1,48 x 104
ufd ml en med io en tiempo O
1,48 x 102
Los números de control se derivaron del crecimiento de organismos específicos en el medio adecuado. Después de la incubación, se retiraron por lavado las células del medio y se capturaron en un vial estéril. El vial se usó como solución
5 de partida para el control de número (reserva). Después, se diluyó la solución madre para obtener una lectura adecuada en un espectrofotómetro, usando una longitud de onda de 420 nm con transmisión porcentual de la luz. Se determinaron las concentraciones bacterianas de acuerdo con el método AOAC 960.09, tabla 960.09A. La preparación de la suspensión de cultivo a partir del cultivo de reserva se determinó mediante lecturas espectrofotométricas o comparación con el patrón de Mc Farland.
Tabla 40. Crecimiento log de Bifidobacteruim bifidum en medio fortificado con MSM. Concentración en porcentaje de
MSM
Concentración en porcentaje de MSM
H
O 0,125 0,25 0,5 1 2,5 5
•
1,22 1,12 1,00 1,00 1,00 1,30 1,12
B
2,55 2,89 2,93 2,64 2,73 2,71 2,04
16
7,16 7,85 8,07 7,45 7,73 7,56 6,10
2.
B,94 9,06 8,49 8,81 8,81 8,64 8,43
32
10,81 11,45 11 ,41 11 ,22 11,49 11 ,56 11 ,13
4.
11 ,03 10,80 10,31 12,09 11 ,19 11 ,73 11 ,78
48
11 ,54 8,22 8,10 9,39 10,43 10,72 10,70
56
10,64 7,25 7,22 9,51 10,57 11 ,34 10,59
6.
9,97 8,86 6,77 10,34 10,66 12,26 14,32
72
8,56 6,59 6,39 8,35 B,34 10,26 8,65
B.
10,56 9,12 8,52 10,38 9,43 9,52 12,20
88
10,64 9,12 8,52 9,70 10,41 10,64 12,31
96
lt;6 ,00 lt;6,00 lt;6,00 8,82 lt;6 ,00 lt;6,00 9,60
El crecimiento observado con Bifidobacterium bifidum muestra un aumento de 0,2 a 0,4 lag en la velocidad de
15 crecimiento para las concentraciones de MSM del 0,125 % al 2,5 % a las 8 horas. Las concentraciones de MSM del 0,125 % al 2,5 % a las 16 horas aumentado a 0,3 a 0,7 log. A las 24 horas se mostraron concentracione de MSM del 0,125 % a12 ,5 % que se reducían para ser iguales a o menores al control. A una concentración de MSM del 5 %, se observó una velocidad de crecimiento más lenta en comparación con el control durante las primeras 24 horas. A la hora 32, hubo un aumento en la velocidad de crecimiento en el intervalo de 0,3 a 0,75 lag para todas las
20 concentraciones de MSM comparadas con el control. A la hora 40, las concentraciones de MSM del 0,125 % Y 0,25 % mostraron una reducción constante en la velocidad de crecimiento, hasta el punto de que se encontraron por debajo del control a partir de la hora 40 hasta la hora 96. La hora 40 mostró la muestra con MSM al 0,5 % un log completo mayor en crecimiento que el control. MSM al 0,5 % de la hora 48 a la hora 96 redujo su velocidad de crecimiento hasta encontrarse a 2 a 310g completos por debajo de la velocidad de crecimiento del control. MSM a una concentración del
25 1 % igualó la velocidad de crecimiento del crecimiento de la hora 40 a la hora 96, excepto por la hora 48 y la hora 80 donde fue un lag completo menor. MSM al 2,5 % en la hora 40 fue 0,7 lag mayor en la velocidad de crecimiento en comparación con el control. La hora 48 mostró una reducción de 0.710g en la velocidad de crecimiento en comparación con el control. De la hora 56 a la hora 72, MSM al 2,5 % tuvo una velocidad de crecimiento que era de 0,7 a 2,29 lag mayor que la del control. La hora 80 mostró una velocidad de crecimiento 1 log menor para la muestra de MSM al 2,5
30 % en comparación con el control y en las horas 88 y 96, la velocidad de crecimiento fue equivalente. MSM al5 % en la hora 40 tuvo una velocidad de crecimiento 0,7 log mayor que la del control. En la hora 48, esta se redujo a 0,7 lag menor que la del control y en la hora 56, la velocidad de crecimiento fue equivalente a la del control. La hora 64 muestra un aumento en la velocidad de crecimiento de 4,3510g para el MSM al5 % frente al control. La hora 72 mostró
una reducción en la velocidad de crecimiento, con un retomo a un aumento de 1,6 lag en la velocidad de crecimiento en la hora 80 y la hOfa 88. La hora 96 mostró una velocidad de crecimiento de MSM al 5 % que fue aproximadamente 3,6 lag mayor que la del control
Bifidobacterlum bifidum mostró un beneficio significativo al tener MSM como aditivo para influenciar el crecimiento Todas las concentraciones aumentaron la velocidad de crecimiento hasta el punto que el Bifidobacterlum bifidum alcanzó el máximo 16 hOfas antes que el control. El control alcanzó un máximo de 11 ,54 lag de crecimiento en la hora
48. Este crecimiento máximo se alcanzó por todas las concentraciones de MSM en la hora 32. Las concentraciones de MSM del 0,125 % Y 0,25 % muestran una reducción en el crecimiento desde la hora 40 hasta la hOfa 96, no volviendo a alcanzar el crecimiento máximo de nuevo. MSM al 0,5 % aumentó el crecimiento a 0,5 lag mayor que el máximo del control. MSM al 0,5 % mostró la reducción de crecimiento desde la hora 48 hasta la hora 96. El MSM al 0,5 % retrasó la etapa de muerte hasta el punto de que en la hOfa 96 hubo una pérdida de crecimiento de 8,82 lag, que fue aproximadamente 2 lag mayor que la del control. MSM al 1 % no aumentó el crecimiento de las bacterias en comparación con el control, pero redujo la etapa de muerte. Desde la hora 40 hasta la hora 64, el MSM al 1 % no mostró una gran reducciÓfl en el crecimiento, hubo una lenta reducción de 0,5 lag para la hora 48, pero no hubo reducción para las horas 56 y 64. En la hora 72, hubo una reducción de 2 lag en el crecimiento, pero en la hora 80, hubo un aumento de 1 lag del crecimiento y en la hora 88 se produjo otro aumento 1 lag de crecimiento. En la hora 96, el crecimiento se encootraba fuera del intervalo cootable y se estimó como menos de 6 lag de crecimiento. Cootinuando durante otras 8 hOfas, puede haberse producido otro aumento ene I crecimiento a más de 6 log. MSM al 2,5 % en la hora 40 alcanzó un crecimiento de 11 ,73 lag, con una reducción de 1 lag en la hora 48. Hubo un aumento paulatino del crecimiento en la hora 56 y la hora 64, alcanzando un máximo de 12,26 lag, 0,72 lag mayor que el control En la hOfa 72, hubo una reducción de 2109, con una caída de 0,7 lag en la hora 80 para el MSM a12,5 %. En la hora 88, el MSM al 2,5 % aumentó el crecimiento en 1 lag, antes de caer por debajo del intervalo contable a la hora 96. MSM a una concentración dei S % tardó más tiempo en aumentar la velocidad de crecimiento en comparación con las otras concentraciones de MSM. En la hora 32, el crecimiento fue 11,13 lag Y en la hora 40, el crecimiento fue de 11,78 lag. En la hora 48, el crecimiento se redujo 1 lag Y en la hora 56, hubo una reducción de 0,1 lag. En la hora 64, el crecimiento alcanzó la mayor de todas las concentraciones de MSM de 14,32 lag para el MSM al 5 %. Hubo una reducción de 6 lag en la ora 72, pero en la hora 80, el crecimiento aumentó 4 lag hasta 12,20. En la hora 88, se observó un aumento de 0,1 lag, antes de caer 9,60 lag de crecimiento en la hora 96. El MSM al5 % frenó la velocidad de muerte de manera considerable, extendiendo la fase estacionaria hasta 40 horas. Una vez que se alcanzó la fase estacionaria, hubo un aumento continuo y una reducción en el crecimiento, con movimiento hacia un patrón de crecimiento menor. Estos estudios indican que MSM conduce a la fase estacionaria más rápido para todas las concentraciones, extendiendo la fase estacionaria para concentraciones por encima de MSM al 0,5 % Y aumentando el crecimiento máximo para las concentraciones al 2,5 % Y 5 % de MSM.
Ejemplo 20
Efecto de la púrpura de bromocresol en E. coli cuando se añade a la matriz MSM
Este ejemplo muestra los efectos de la púrpura de bromocresol en E-coli cuando se añade MSM a la matriz.
Para investigar si MSM funciona como portador/transportador, se evaluó la capacidad de MSM para transportar Bromocresol al interior de E. eoli. El púrpura de bromocresol es un colorante indicador que vira a amarillo en presencia de bacterias de E. eoli. No es tóxico para el organismo. Para minimizar la potencial intel1erencia iónica, se seleccionó el caldo de lactosa como medio preferido para este estudio debido a que carece tanto de NaCI como de proteinas. Se usó la USPlt;51gt; de eficacia antimicrobiana para ensayos como molde para mostrar la CL100 (concentración letal). Se usaron concentraciones de MSM deiS %-16 % en incrementos del 1 % Todas las concentraciones se emplacaron a diluciones de hasta 10.7 para determinar la reducción logarítmica
Los materiales incluyeron los siguientes: número de lote 0604751 de OptiMSM Flake; cepa ATCC 8739 de Escherichia coli lote: 57762704; se usaron tubos de cultivo de vidrio de borosilicato de 30 mi para todo el material OptiMSM; Caldo MacConkey de Accumedia (MB) lote: 100.974A; El diluyente usado fue caldo Letheen modificado de Alpha Biosciences (MLB) lote: 108-09; Soja tríplica agar con lecitina de Alpha Biosciences; y Tween 80 (TSA) lote: F08-42.
Se pesó Flake OptiMSM usando una balanza AG245 de Melller Toledo certificada, NS: 1115210833 y se separó en alícuotas para cada concentración. El material se colocó en tubos de cultivo de borosi licato de vidrio de 30 mI. El material se calculó en un volumen de 10 mI. Se añadió material a cada tubo del modo siguiente: 5 % (O,Sg), 6 % (O,6g), 7 % (0,79), 8 % (0,89), 9 % (0,90), 10 % (1 ,Og), 11 % (1 ,19), 12 % (1 ,29), 13 % (1 ,39), 14 % (1,49), 15 % (1 ,5g), Y 16 % (1,69). Se alicuotó caldo MacConkey en 10ml para cada tubo y después se esterilizó durante 20 minutos a 121 °C. Los tubos se enfriaron a temperatura ambiente, que aparentemente era 20 oC. Después se sembró a todos los tubos con la misma dilución de Eschericia coli que propOfcionó un nivel de 6 unidades formadoras de colonias a 6,0 x 10/ml (6,8). Después, se incubaron los tubos a 25 oC. Se efectuó una observaciÓfl diaria del cambio del color durante los primeros siete días. Los tubos se mezclaron periodicamente para asegurar que el OptiMSM estaba bien equilibrado en todo momento. Se determinó un control positivo y negativo
Los resultados de estos estudios son los siguientes:
(1)
Día uno: mostró el cambio de color del caldo a amarillo para la concentración del 5-7 %; 8 % mostró un ligero aclaramiento del color; y 9-16 % no mostró signos de cambio
(2)
Día dos: mostró los mismos signos que el día uno.
(3)
Día tres: mostró un cambio en la concentración al 8 % que viró al tlpico color amarillo.
(4)
Día 4 a dia 6: no mostró signos significativos de cambio
(5)
Día 7: Mostró viraje del color del 9 % a un color amarillo. Sin cambio de color al 10 %-16 %.
(6)
Día 14: No mostró signos para el intervalo de concentración del10 %-16 %.
Los tubos de concentraciones se sembraron en agar MacConkey para ver si el organismo podía recuperarse. No se observaron microorganismos después de la incubación de 72 hOfas. El día 30 no mostró signos de cambio para el intervalo de concentración del 10-16 %. Se sembró el cootrol positivo para cada instante de tiempo y mostró signos de organismos demostrados por una estría de aislamiento clásica.
Esta prueba cualitativa indica que OptiMSM tiene cierto tipo de efecto portador y reduce o elimina al organismo. Esto se demuestra por la ausencia de color amarillo en las concentraciones de MSM menores que las demostradas en estudios previos usando medio de cultivo. El color mostró una reducción a concentraciones tan bajas como del 8 % frente al11 % en los estudios coo medio de crecimiento.
Ejemplo 21
Estudio antimicrobiano de MSM y DMSO en organismos de Streptococcus
Este ejemplo muestra los efectos de MSM y oMSO en el crecimiento de organismos de Streptococcus.
En el presente documento se ha demostrado que concentraciones específicas de MSM (tales como del 10 % al 16 % de MSM) eliminan microorganismos. También se ha observado que el dimetilsulfóxido elimina microorganismos a concentraciones del 30-50 %. Este estudio evaluó las propiedades bactericidas de ambos compuestos, solos o en combinación, así como su eficacia cuando se usan coo un nivel bajo de penicilina
El Streptococcus pyogenes (grupo A de Lancefield ) tiene una cápsu la de ácido hialur6nico y el Streptococcus pneumoniae (sin grupo de Lancefield identificado hasta la fecha) tiene una cápsula de polisacárido distinta. Estos dos organismos son responsables de muchos tipos de infecciones estreptocócicas humanas y presentan dos tipos de encapsulación diferentes. Estos dos organismos se usaron en este estudio in vitro. En particular, este estudio determinó los efectos antimicrobianos del MSM y el oMSO, tanto de manera individual como en combinación, coo Streptococcus pyogenes y Streptococcus pneumoniae. Este estudio también determinó las concentraciones más eficaces para las propiedades antimicrobianas para ambos compuestos en combinación y si combinar MSM y oMSO reduce las concentraciones de cualquier compuesto necesario para lograr la reducción microbiana. Además, se evaluó la eficacia de usar MSM, oMSO y la combinación de los dos conjuntamente con un agente antibiótico.
Se adquirieron Streptococcus pneumoniae (n.o 1034PM) y Streptococcus pyogenes (Grupo A de Lancefield, n.o 10096™) a través de la ATCC. Se adquirieron MSM (n.0 41631) y oMSO (n .o 08418) en Sigma-Aldrich. La penicilina se compró en Henry Schein. El medio de cultivo bacteriano se compró en Becton-oickinson and Company (n.o 297963) El kit de ensayo de ATP bioluminiscente en Promega (n.o G8230). El Streptococcus Pyogenes se cultivó en caldo de
infusión de cerebro y corazón (Bo 237500, n.o 44 booth) durante una noche. Se usaron cantidades iguales de caldo que contiene bacterias para los estudios. También se cultivó Streptococcus pneumoniae en caldo de infusión de cerebro corazón
Evaluación de la viabilidad bacteriana:
Se usó el kit de ensayo bioluministence para ATP para evaluar la actividad bacteriana, basándose en la siguiente reacción: ATP+o-Luciferina +02 ..... Oxiluciferina +AMP +pirofosfato +C02 + luz (560 nm).
El ATP bacteriano puede medirse mediante lisis directa de las bacterias con un detergente adecuado; después, este ATP liberado es libre para reaccionar con la luciferinalluciferasa y dar lugar a la emisión de luz. La intensidad de la luz emitida es proporcional a la concentración de ATP. La medición de la intensidad de luz usando un luminómetro permite la cuantificación directa del ATP, que es el indicador universal de viabilidad para los microorganismos vivos.
Se cultivaron tanto S. pyogenes como S. pneumoniae en diversas condiciones para detenninar las condiciones óptimas para evaluar el MSM, el oMSO ylo la penicilina. Se diluyeron el MSM, el oMSO y la penicilina en medio de cultivo, de acuerdo con la tabla 45-1. Las bacterias se cultivaron durante 7 horas para Streptococcus pneumoniae y 18 horas para Streptococcus pyogenes, respectivamente. Después, se evaluó la viabi lidad bacteriana por medio del kit de ensayo de ATP bioluminiscente. La prueba se llevó a cabo por triplicado
Tabla 41 Concentraciones de MSM, DMSO y penicilina evaluadas
MSM (%)
DMSO( %)
Penicilina (1-1911)
2,5
2,5
12,5
1,25
1,25
6,25
0,625
0,625
3,125
0,3125
0,3125
1,5625
O
O
O
Se diluyeron el MSM y el DMSO en medio de cultivo, de acuerdo con la tabla 42 (para Streptococcus pneumoniae, inferior izquierda) y la tabla 43 (Streptococcus pyogenes, abajo a la derecha).
Tabla 42 DMSO (%)
MSM (%) O 5
O
10 20 O 5
10 20 O 5
10 20 O 5 20
10 20
Tabla 43 DMSO (%)
MSM (%) O 2,5
O
5 10
o
2,5
2,5 5
10
O
5
2,5 5
10
O
2,5
8
5
10
Para determinar la eficacia de usar MSM, y DMSO conjuntamente con penicilina, se disolvieron el MSM, el DMSO y la penicilina en medio de cultivo de acuerdo con la labia 44-1 (S. pneumoniae) y la labia 44-2 (S. pyogenes)
Tabla 44-1
DMSO
MSM Penicilina (lJg/l)
5
25
5
10
20
5
10
10
20
5
20
10
20
Tabla 44-2
DMSO 2,5 5 8
MSM 2,5 5 10 2,5 5 10 2,5 Penicilina (lJg/l) 3,125 6,25 3,125 6,25 3,125 6,25
La Clso del DMSO, MSM y la penicilina en Streptococcus pneumonia fue del 12,86 %, 15,97 % Y 68,54g11, respectivamente. El DMSO y el MSM tuvieron efectos sinéfgicos a dosis de entre el 5 % al 20 % (para ambos fármacos) para inhibir el crecimiento de Streptococcus pneumoniae. El DMSO y la penicilina también tuvieron un efecto sinérgico a dosis del 10 % al 20 % (para DMSO) y de 25 mgll (para penicilina) para inhibir el crecimiento de
5 Streptococcus pneumoniae. Además, El MSM y la penicilina también tuvieron un efecto sinérgico a dosis del 5 % (para MSM) y de 25 mgll (para penicilina) para inhibir el crecimiento de Streptococcus pneumoniae. Cuando se usaron conjuntamente penicilina, DMSO y MSM, el mayor efecto sinérgico fue el resultado de DMSO + solo MSM en lugar de penicilina + DMSO + MSM.
10 La CI50 del DMSO, del MSM y de la penicilina en Streptococcus pyogenes fue del 9,07 %, 10,26 % Y 15,25 mgll, respectivamente. El DMSO y el MSM tuvieron efectos sinéfgicos a dosis de entre el 2,5 % al 5 % (para ambos fármacos) para inhibir el crecimiento de Streptococcus pyogenes. El DMSO y la penicilina también tuvieron un efecto sinérgioo a dosis del 5 % (para DMSO) y de 6,25 mgll (para penicilina) para inhibir el crecimiento de Streptococcus pyogenes. El MSM y la penicilina tuvieron un efecto sinérgico a dosis entre e12,5 % ak 5 % (para MSM) y de 3,125 a
15 6,25mg/l (para penicilina Penicil1in) para inhibir el crecimiento de Streptococcus Pyogenes. Cuando se usaron conjuntamente penicilina, DMSO y MSM, el efecto sinérgico fue el resultado de DMSO + solo MSM en lugar de penicilina + DMSO + MSM
Tabla 4 5-1. Viabilidad de S. pneumoniae después de la exposición a DMSO
Concentración de DMSC
iabilidad de S. pneumoniae ( %)
5
75,45
10
40,18
20
27,19
Tabla 4 5-2. Viabilidad de S. pneumoniae después de la exposición aMSM
Concentración de MSM
!viabilidad de S. pneumoniae ( %
5
95,34
10
48,57
20
39,08

Tabla 45 3 V· bTd d d S. pneumomae despu s e exposlcl ·ón a d·
-
la 11 a e é d Iversas concentraCiones de MSM en DMSOaI5%
DMSO (%)
MSM (%) Viabilidad de S. pneumoniae ( %)
5
D 75,45
5
5
50,94quot;
5
10 45,40
5
20 27,22
25 Tabla 45-4. Viabilidad de S. pneumoniae después de exposición a diversas coocentraciones de MSM en DMSO al 10
%
DMSO (%)
MSM(%) Viabilidad de S. pneumoniae ( %)
10
O 40,18
10
5 47,81
10
10
37,42
10
20 11,95

Tabla 45-5 Viabilidad de S. pneumoniae después de exposición a diversas coocenlraciones de MSM en DMSO al 20 %
DMSO (%)
MSM(%) Viabilidad de S. pneumoniae ( %)
20
O 27,19
20
5 17 ,60'
20 10 7,76
20 20 5,15
Tabla 45-6. Viabilidad de S. oneumonia9 después de la exposición a diversas concentraciones de penicilina
Penicilina (lJgfl)
Viabilidad de S. pneumoniae ( %)
25
79,82
50
42,70
100
40,93
Tabla 45-7 Viabilidad de S. pneumoniae después de la exposición a 25 mgfl de peniclina con varias concentraciones deDMW
Penicilina (lJglI)
DMSO(%) Viabilidad de S. pneumoniae ( %)
25
O 79,82
25
5 46,13
25
10 39,78
25
20 22,08

Tabla 45-8 Viabilidad de S. pneumoniae después de la exposición a 50 mgfl de peniclina con varias concentraciones de OMSO
Penicilina (lJglI)
DMSO(%) Viabilidad de S. pneumoniae ( %)
50
O 42,70
50
5 46,27
50
10 37,09
50
20 19,14
10 Tabla 45-9. Viabilidad de S. pneumoniae después de la exposición a 100 mgf1 de peniclina con varias concentraciones de OMSO
Penicilina (1J911)
DMSO (%) Viabilidad de S. pneumoniae ( %)
100
O 40,93
100
5 45,09
100
10 35,80
100
20 21,76
La combinación de MSM al 5 % con 25 mgll de penicilina mostró una reducción sinérgica en la viabilidad de S pneumoniae, dando lugar a una viabilidad únicamente del 41 % (véase la tabla 10). La sinergia comparada con los
15 resultados esperados basándose en solo MSM y solo penicilina se indica en las tablas mediante un ...... Por el contrario, solo MSM al 5 % redujo la viabilidad solo en aproximadamente un 5 %, mientras que la penicilina sola a 25 mgll redujo la viabilidad en aproximadamente un 21 %. POIquot; lo tanto, la combinación de MSM al 5 0/0/25 mgll de penicilina fue inesperadamente más eficaz que la esperada basándose en los resutlados obtenidos solo con MSM o penicilina.
20 Además, como en el caso del DMSO, determinadas concentraciones de MSM permitieron menores concentraciones de penicilina para reducir la viabilidad bacteriana de manera prácticamente igual de eficaz que concentraciones mayores. Por ejemplo, MSM al 20 % con 100 mgf1 de penicilina redujo la viabilidad de S. pneumoniae a121 ,37 'Yo, MSM al 20 % con 50 mgll de penicilina redujo la viabilidad de S. pneumoniae al 20,75 'Yo. Por lo tanto, con el uso de MSM al
25 20 %, se redujo la concentración necesaria de penicilina a la mitad. Continuando esta tendencia se encuentra la combinación de MSM al 20 % con 25 mg/l de penicilina, que redujo la viabilidad de S. pneumoniae a aproximadamente el25 %. De manera similar, aunque con una reducción menos robusta en la viabilidad bacteriana, MSM al 5 % permitió que 25 mgll de penicilina tuviese un rendimiento prácticamente idéntico a100 mgll de penicilina (compárense las labias 45-10 a 45-12 para 25 mgfl de penicilina).
Tabla 45-10. Viabilidad de S. pneumoniae después de la exposición a 25 mgl1 de peniclina con varias concentraciones de MSM
Penicilina (1-I9/1)
MSM(%) Viabilidad de S. pneumoniae ( %)
25
O 79,82
25
5 41 ,23·
25
10 41,83
25
20 25,36

Tabla 45-11 . Viabilidad de S. pneumoniae después de la exposición a 50 mgl1 de penic1ina con varias concentraciones 5 de MSM
Penicilina (1-I9/1)
MSM(%) Viabilidad de S. pneumoniae ( %)
50
O 42,70
50
5 41,23
50
10 47,47
50
20 20,75
Tabla 45--12 Viabilidad de S. pneumoniae después de la exposición a 100 mgfl de peniclina con varias concentraciones de MSM
Penicilina (1-1911)
MSM (%) Viabilidad de S. pneumoniae
100
O 40,93
100
5 41 ,75
100
10 36,67
100
20 21,37
10 Basándose en los resultados de sinergia observados en determinadas combinaciones de MSM o DMSO con penicilina, se llevó a cabo el presente estudio para identificar las diversas combinaciones de MSM, DMSO, y penicilina que proporcionaron reducciones sinérgicas en la viabilidad bacteriana en comparación con la combinación de los efectos de combinar DMSO, MSM, y penicilina en la actividad bacteriana. Este estudio también se diseñó para identificar combinaciones de los tres compuestos que permiten ventajosamente reducir uno o más de los compuestos,
15 y aun así, reducir de manera eficaz la viabilidad bacteriana.
Se combinó DMSO al5, 10 y 20 % individualmente con MSM a unode 5, 10 o 20 % Y penicilina a uno de 25, 50 o 100 mgll. La viabilidad se evaluó como se ha descrito anteriormente. Los datos de viabilidad se presentan en la tabla 45-13. El símbolo quot;.. representa resultados sinérgicos en comparación con la combinación correspondiente de DMSO y 20 penicilina. El símbolo quot;41quot; representa resultados sinérgicos en comparación con la combinación correspondiente de MSM y penicilina. Los valores para la reducción de la viabilidad bacteriana se sumaron para determinar el umbral de reducción para la sinergia. Por ejemplo, DMSO al 5 % reduce la viabilidad en aproximadamente un 25 % Y 25 mgll de penicilina reduce la viabilidad en aproximadamente un 21 %, esperándose una reducción total combinada de aproximadamente el 46 %. Esto representa una viabilidad del 64 %. Por lo tanto, en caso de que la combinación de
25 MSM al 5 %, DMSO al 5 %, Y 25 mg/ml de penicilina dé como resultado una viabilidad menor del 64 %, se identifica sinergia entre los compuestos
Varias combinaciones de MSM, DMSO, y penicilina proporcionan mejoras sinérgicas en la reducción bacteriana Por ejemplo, la combinación de DMSO al 5 %, MSM al 5 %, Y 25 mgfl de penicilina reduce la viabilidad bacteriana a 30 aproximadamente el 52 % (véase la tabla 45-13). DMSO al cinco por ciento en combinación con 25 mgfl de penicilina redujo la viabilidad celular a aproximadamente el 64 % (es decir, una reducción de aproximadamente el 46 %, basándose en la reducción individual observada con DMSO al 5 %, véase la tabla 45-1, y la reducción individual observada con 25 mg/l de penicilina). Por lo tanto, la combinación de los tres compuestos redujo la viabilidad bacteriana en aproximadamente un 12 % adicional. De manera similar, la combinación de MSM al 5 % con 25 mgl1 de
35 penicilina dio como resultado una viabilidad de las bacterias de aproximadamente el 74 %, mientras que la combinación de los tres compuestos redujo la viabilida en aproximadamente un 22 % adicional
En algunas combinaciones, se detectaron resultados sinérgicos con respecto tanto a DMSO como penicilina así como a MSM más penicilina. Por ejemplo, DMSO al 10 % en combinación con MSM al 20 % Y 25 mgll de penicilina 40 proporciona una actividad antimicrobiana sinérgica mejorada en comparación con ambas combinaciones de
referencia. En otras combinaciones, se detectó sinergia únicamente respecto a DMSO más penicilina o MSM más penicilina. Por ejemplo, las combinaciones de MSM al 5 % con DMSO al 10 % y 25 mgfl de penicilina fue sinérgica con respecto a MSM más penicilina, pero no con respecto a DMSO más penicilina
5 Además de los efectos sinérgicos descritos anteriormente, existen varios casos en donde las combinaciones específicas de DMSO, MSM y penicilina penniten una reducción en la concentración eficaz de penicilina. Por ejemplo, tal como se muestra en la tabla 45-13, la combinación de DMSO al 5 % con MSM al 20 % proporciona una viabilidad bacteriana general muy similar frente al intervalo de concentraciones de penicilina ensayados (con una viabilidad del ·25 % con 25 mgfl de penicilina al·18 % con 100 mgl1 de penicilina). Además, DMSO al 10 % con MSM al 20 % dio
10 como resultado viabilidad bacterianas prácticamente idénticas a lo largo del intervalo de concentración de penicilina.
Se observan resu ltados similares con DMSO al 20 % en combinación con un S, l O, o 20 % de MSM y cua lqu ier concentración de penicilina. Estos resultados revelan un intervalo de viabilidad bacteriana ligeramente mayor a lo largo de las diferentes concentraciones de penicilina, sin embargo, dado que la reducción en todos los casos es cercana a
15 aproximadamente el 90 al 95 %, estas combinaciones siguien siendo eficaces.
Tabla 45-13. Viabilidad de S. pneumoniae después de la exposición a diversas combinaciones de DMSO, MSM, y penicilina
DMSO (%)
MSM (%) Pen icil ina (~g/l ) V iabilidad de S. pneumoniae ( %)
5
5
25 52, 11 quot;, IV
5
5
50 43,36
5
5
100 53 ,03
5
10 25 51 ,82quot;
5
10 50 44,52
5
10 100 31 ,33
5
20 25 24 ,91 quot;
5
20 50 19,20
5
20 100 18,12
10
5 25 44,41 IV
10
5 50 38 ,24
10
5 100 36 ,19
10
10
25 39,38
10
10
50 33 ,73
10
10
100 25,98
10
20 25 11 ,87quot;, '+'
10
20 50 11 ,03
10
20 100 10,96
20
5 25 12,74 quot;, IV
20
5 50 13,39 '+'
20
5 100 9,2B '+'
20
10 25 7,69quot;, '+'
20
10 50 7,74
20
10 100 5,58
20
20
25 4,93quot;, '+'
20
20
50 5,60
20
20
100 1,80
Tal como se ha descrito anteriormente, la estructura de S. pyogenes difiere de la de S. pneumoniae, y por lo tanto, se
llevaron a cabo experimentos adicionales para evaluar los efectos sinérgicos de diversas concentraciones de DMSO
yMSM, así como combinaciones de DMSO, MSM, y penicilina
5 Se añadió DMSO a cu ltivos de S. pyogenesa concentraciones finales de 0,31 , 0,63, 1,25, 2,50, 5,00, 10,0, o 20,0 A estas concentraciones, el DMSO dio como resultado reducciones en la viabilidad bacteriana de una manera dependiente de la dosis. Véase la tabla 45-14. Se añadión solo MSM a cultivos de S. pyogenes a concentraciones finales de 0,31 , 0,63, 1,25, 2,50, 5,00, 10,0, o 20,0. A estas concentraciones, MSM también dio como resultado reducciones en la viabilidad bacteriana de una manera dependiente de la dosis Véase la tabla 45-15
enes Iras la exposición a DMS o Viabil idad de S. pyogenes (
T abla 45-14. Viabilidad de S. DVO
Concentración de DMSO
%]
0,31
100
0,63
100
1,25
100
2,50
100
5,00
96,66
10,0
14 ,50
20,0
5 ,14
Tabla 45-15. Viabilidad de S. DVO enes tras la exposición a MS M Viabilidad de S. pyogenes (
Concentración de MSM
% )
0,31
100
0,63
100
1,25
100
2,50
100
5,00
95,88
10,0
23,94
20,0
15,18
15 Se evaluaron MSM y DMSO en combinación respecto de sus efectos antibacterianos sobre S. pyogenes. DMSO al2,5 %, 5 %, Y8 % se combinó con MSM al O% (control de solo DMSO), 2,5 %, 5 %, Y10 %. Tal como se muestra en las tablas 16, 17, Y 18 determinadas combinaciones de MSM con DMSO son sinérgicas en comparación con los efectos de DMSO o MSM solos. Los resultados sinérgicos en comparación con solo DMSO o MSM se indican mediante un ~.~. Por ejemplo, la adición de MSM al 2,5 % a DMSO al 2,5 % redujo la viabilidad bacteriana a aproximadamente el 65 %
20 (véase la tabla 16), mientras que no podría esperarse efecto de estas concentraciones de MSM y DMSO, ya que de manera individual, ninguno de los compuestos redujo la viabilidad bacteriana. También se observa el efecto sinérgico con DMSO al 2,5 % Y MSM a, 5 %, donde la viabilidad bacteriana se reduce en aproximadamente un 83 % (en comparación con una reducción esperada del 4 % basándose en los efectos de los compuestos individualmente). También se observa sinergia con DMSO al5 % en combinación con cualquier concentración de MSM. Por lo tanto, en
25 algunas realizaciones, DMSO al 5 % induce reducciones sinérgicas en la viabilidad bacteriana en combinación con cualquier concentración de MSM entre el 2,5 % Y el 10 %. En algunas realizaciones, DMSO al 2,5 % Y MSM a concentraciones entre el 2,5 % Y el 5 % son ventajosa e inesperadamente sinérgicos para reducir la viabilidad bacteriana
30 Tabla 4 5-16. Viabilidad de S. Dvoaenes después de exposición a diversas concentraciones de MSM en DMSO a12,5 %
DMSO ( %]
MSM (%] Viabilidad de S . pyogenes ( %)
2,5
O 100
2,5
2,5
65,06quot;
2,5
5,0 17,71*
2 ,5 10,0 16,37
Tabla 4 5-17. Viabilidad de S. Dvoaenes después de exposición a diversas concentraciones de MSM en DMSOa15 %
DMSO ( %l
MSM( %l Viabilidad de S. Dvooenes ( %)
5,0
O 96,66
5,0
2,5 36,21·
5,0
5,0
7,87*
5,0
10,0 7,64quot;
Tabla 4 5-18 Viabilidad de S. pyogenes después de exposición a diversas concentraciones de MSM en DMSOa18%
DMSO( %l
MSM( %l Viabilidad de S. pVOQenes ( %)
8,0
O 9,96
8,0
2,5 14,37
8,0
5,0 5,97
8,0
10,0 5,60
Se evaluaron varias concentraciones solo de penicilina respecto de su capacidad para reducir la viabilidad de S pyogones. Tal como se muestra en la labia 45-19, la penicilina redujo la viabilidad bacteriana de una manera dependiente de la dosis
10 Tabla 45 -19. Viabil ¡dad de S. pyogenes después de su exposición a diversas concentraciones de p enicilina
Penicilina (1J9f1) 1,56 3,13 6,25 12,5 25,0 50 100
Viabilidad de S. pyogenes ( %) 100 100 100 13,16 9,07 9,57 9,40
Debido a la naturaleza altamente eficaz de las concentraciones de penici lina a o por encima de 25 ~gll, se combinó DMSO con concentraciones de penicilina que eran menos eficaces (en el intervalo de 3,125 a 12,5 ~gfml). Como tales, la identificación de la sinergia entre el DMSO y la penicilina tendría menos probabilidades de estaroscurecida desde el
15 punto de vista matemático.
Tal como se muestra en las tablas 45-20, 45-21 , Y 45-22 (identificadas por ~U) varias combinaciones de DMSO y penicilina proporcionaron resultados sinérgicos. Por ejemplo, DMSO al 5 % en combinación con 3,125 mgfl de penicilina, basándose en la eficacia de solo los dos compuestos, podría esperarse que reduzca la viabilidad bacteriana
20 en aproximadamente un 4 %. Sin embargo, cuando se rombinan, la reducción real fue aproximadamente 10 veces mayor (viabilidad reducida al --61 %, véase la tabla 45-20). Se observaron efectos sinérgicos cuando se combinó DMSO al 5 % con 6,25 mgfl o 12,5 mgfl de penicilina (véanse las tablas 45-21 y 45-22, respectivamente).
Tabla 45-20. Viabilidad de S. pyogenes después de la exposición a 3,13 mgfl de peniclina con varias concentraciones 25 de DMSO
Penicilina (~gfl) 3,13 3,13 3,13 3,13
DMSO ( %) O 2,5 5,0 8,0 Viabilidad de s . pyogenes ( %) 100 100 60,85* 12,90
Tabla 45-21 Viabil idad de S pyogenes después de la exposición a 6,25 mgl1 de peniclina con varias concentraciones de OMSO
Penicil ina (~glJ)
DMSO ( %) Viabilidad de S pyogenes ( %)
6,25
O 100
6,25
2,5 100
6,25
5,0 60,23
6,25
8,0 6,91 '
Tabla 45-22, Viabilidad de S, pyogenes después de la exposición a 12,5 mgl1 de peniclina con varias concentraciones 5 de OMSO
Pen icil ina (~g/l )
DMSO (%) Viabilidad de S, pyogenes ( %)
12,5
O 13,16
12,5
2,5 19,63
12,5
5,0 14,77quot;
12,5
8,0 6,43
Se llevaron a cabo estudios similares a aquellos que usan OMSO combinando MSM como penicilina en el intervalo de 3,125 a 12,5 mg/l. Los resultados se muestran en las tablas 45-23, 45-24, y 45-25, La sinergia se muestra por un quot;-quot;, Como en el caso del OMSO, las concentraciones previas ineficaces de MSM y penicilina fueron eficaces en 10 combinación para reducir la viabilidad bacteriana. Cuando se toman individualmente, no podria esperarse un efecto de 3,13 mgll de penicilina con MSM al 2,5 %, sin embargo, se observó una reducción de la viabilidad del 8 % (véase la tabla 45-23). Estos efectos son más pronunciados con la combinación de 6,25 mgll de penicilina con MSM. Por ejemplo, Podria esperarse que MSM al 5 % con 6,25 mgf1 de penicilina produjesen una población bacteriana viable al 96 % (véase la tabla 45-24). Sin embargo, los datos indican que la viabilidad se redujo hasta aproximadamente el 17
15 %, una reducción de aproximadamente el 80 % respecto de los resultados esperados. No se detectó sinergia cuando se usaron 12,5 mgll de penicilina, debido a la eficacia de esa concentración de penicilina de manera individual
Tabla 45-23. Viabilidad de S pyogenes después de la exposición a 3,13 mgl1 de peniclina con varias concentraciones de MSM
Penicilina (~gl1 )
MSM (%) Viabilidad de S. pyogenes ( %)
3,13
O 100
3,13
2 ,5 92,89
3,13
5 ,0 78,31'
3,13
8 ,0 9,91

Tabla 45-24. Viabilidad de S. pyogenes después de la exposición a 6,25 mgl1 de peniclina con varias concentraciones de MSM
Penicilina (~gl1 )
MSM( %) Viabilidad de S. pyogenes ( %)
6,25
O 100
6,25
2 ,5 90,11
6,25
5 ,0 17,42
6,25
8 ,0 10,77quot;

Tabla 45-25. Viabilidad de S. pyogenes después de la exposición a 12,5 mgl1 de peniclina con varias concentraciones 25 de MSM
Penicilina ( ~gl1 )
MSM (%) Viabi lidad de S. pyogenes ( %)
12,5
O 13,16
12,5
2 ,5 16,33
12,5
5 ,0 12,85
35 12,5 8 ,0 16,02
Al igual que con S. pneumoniae, se evaluaron diversas concentraciones de DMSO, MSM, y penicilina respecto de sus efectos en la viabilidad bacteriana y posible actividad sinérgica en comparación con MSM con penicilina o DMSO con penicilina. Los resultados se muestran en la tabla 45-26. l a sinergia en comparación con DMSO y penicilina se indica por un quot;' O, mientras que la sinergia en comparación con MSM y penicilina se indica por un quot;IVquot; Tal como puede observarse en los datos en la tabla 45-26, se detectó una sinergia sustancial entre las diversas concentraciones de compuestos. La mayoría de las combinaciones de DMSO y MSM mostraron una curva de respuesta a la dosis basada en la concentración de penicilina usada. Basándose en la eficacia de solo 12,5 mgll, no se espera que las combinaciones de esa concentración de penicilina con DMSO y MSM deban ser más eficaces. Interesantemente, las concentraciones anteriOfmente ineficaces de penicilina se hacen eficaces de una manera dependiente de la dosis mediante su combinación con DMSO y MSM. Por ejemplo, pod ria esperarse que DMSO al 2,5 % con MSM al 5 % Y 3,125 mg/l de penicilina redujese la viabilidad bacteriana a entre el 100 % y el 96 % (en comparación con DMSO + penicilina y MSM + penicilina, respectivamente). Sin embargo, la combinación de los tres redujo la viabilidad bacteriana a aproximadamente el 19 %. l os resultados esperados son similares para combinaciones con 6,25 mgll de penicilina, pero la combinación de hecho redujo la viabilidad bacteriana incluso más, hasta aproximadamente el13 %. El aumento de la concentración de los diversos compuestos no da como resultado mayores reducciones en la viabilidad bacteriana. Por ejemplo, la combinación de DMSO al 8 % con MSM al 2,5 % Y3,125 mgll de penicilina parece ser más eficaz que DMSO al 8 % con MSM al 2,5 % Y12,5 mgll de penicilina
Tabla 45-26. Viabilidad de S. pneumoniae después de la exposición a diversas combinaciones de DMSO, MSM, y
enicil ina
DMSO ( %)
MSM( %) Penici lina (~g/l) Viabilidad de S. pyogenes ( %1
2,5
2,5
3,125 91 ,74 quot; IV
2,5
2,5
6,25 60,55 quot; IV
2,5
2,5
12,5 8,08 quot; IV
2,5
5 3,125 18,72 quot; IV
2,5
5 6,25 13,38', IV
2,5
5 12,5 9,41'
2,5
10 3,125 16,05', IV
2,5
10 6,25 11 ,78', IV
2,5
10 12,5 11 ,7r
5
2,5 3,125 14,60 quot; IV
5
2,5 6,25 10,44 quot; '1'
5
2,5 12,5 9,55 quot; '1'
8
2,5 3,125 9,55 quot; '1'
8
2,5 6,25 10,28 '1'
8
2,5 12,5 15,55 '1'
Estos estudios indican que a determinadas concentraciones de MSM, DMSO o una combinación de los mismos se puede inhibir a Streptococcus pyogenes y Streptococcus pneumoniae soportando un posible uso de dichas sustancias para prevenir o inhibir el crecimiento de Streptococcus pyogenes y Streptococcus pneumoniae
Ejemplo 22
Crecim iento probiótico en medio complementado con MSM
Este ejemplo describe el crecimiento probiótico en medio complementado con MSM
Se complementaron medios de crecimiento de Lactobacillus Acidophilus, Biffdobacterium biffdum, Lactobacillus delbrueckii y Bacillus coagulans con MSM al O, 0,125,0,25, 0,5, 1,0,2,5, Y 5 %. Se preparó una sola reserva de caldo MRS con MSM al 5 % Y se usó para preparar cada composición de medio. Se preparó medio para los organismos Lactobacillus añadiendo la cantidad adecuada de MSM a 99 mi de caldo MRS. Para Biffdobacterlum biffdum, se prepararon 99 mi de caldo MRS con las respectivas concentraciones de MSM y L-cisteina al 0,05 % Para Bacillus coagulans, se complementaroo 99 mi de caldo de soja triptica con la cantidad adecuada de MSM.
Estas soluciones de medio se inocularon con cada organismo probi6tico y se incubaron a 35 QC ± 0,5 QC en C02
5 durante un total de 72 horas para todas las soluciones, excepto para Bifidobacterlum bifidum, que se cultivó en condiciones anaerobias. Se recogieron muestras de cada medio a las 0, 8, 16, 24, 32, 40, 48, 56, 64, Y 72 horas. Las muestras de Lacfobacillus se emplacaroo en MRS agar, las muestras de Bifidobacferium bifidum se emplacaron en agar de MRS + L-cisteina, y las muestras de Bacilfus coagulans se emplacaron en agar de soja triptica . Las placas se incubaron a 35 QC ± 0,5 oC en C02 durante un total de 72 horas para todas las soluciones, excepto para Bacillus
10 coagulans, que se cultivó durante 48 horas. Después se contaron las placas. Los controles negativos (medio de reserva y controles de emplacado) estaban libres de crecimiento microbiano. Los datos se presentan en ufcJml. Los resultados de estos estudios se presentan en las tablas a continuación.

Tabla 46. Crecimiento de Lactobacillus acidophilus en medio fortificado con MSM
Tiempo
MSM aIO % MSM al 0,125 % MSM al 0,2 % MSM al 0,50 % MSMaI1 % MSM al 2,5 0;' MSMaI 5%
•
1,48 1,37 1,37 1,30 1,48 1,48 1,52
8
1,48 2,19 1,43 2,01 2,25 2 ,20 1,37
16
4,87 4,83 5,74 3,82 3,79 4 ,24 2,69
24
6,97 7,14 8,19 6,47 6,77 5 ,78 5,36
32
9,47 9,15 9,85 9,15 9,05 9 ,16 8,91
4.
7,08 9,53 9,50 9,58 9,49 9 ,35 9,25
48
10,98
7,27
9,59 9,32 10,45 10,16 10,88
56
10,9 O
7,20
10,16 9,26 9,33 11 ,10 10,01
64
10,34
7,29
11 ,58 8,95
72
7,19 8,56 8,36 8,57 8,68 8,44 6,66
Tabla 47
Crecimiento de Lactobaciflus bulgaricus en m edio fortifica do con MSM
Tiempo
MSMaIO % MSM al 0,125 % MSM al 0,2 o¡, MSM al 0,50 % MSM al1 % MSMal 2,5 % MSM al5 %
•
2,22 2,29 2,25 2,23 2,29 2,26 2,19
8
3,58 4,15 4,08 4,42 4,83 4,57 3,28
16
8,09 8,22 8,34 8,28 8,36 8,09 7,39
24
8,71 9,04 9,10 9,05 9,03 9,01 8,50
32
9,29 8,55 9,60 9,54 9,31 9,15 9,29
40
9,32 9,29 9,11 9,40 9,34 9,27 9,37
48
10,81 10,94 11 ,07 10,82 11 ,23 11,37 10,92
56
7,69 8,00 8,79 9,14 8,11 8,23 10,07
64
8,78 8,59 8,79 8,80 6,50 8,75 10,96
72
6,58 6,74 6,72 6,72 6,45 6,51 8,62

umenme 10 o Ilca ocon MSM
Tiempo
MSM al O % 0,125 % MSM al 0,2 o¡, MSM al 0,50 % MSMaI1 % MSM aI2,5 % MSM al5 %
O
1,67 1,64 1,82 1,85 1,48 1,64 1,00
8
2,30 1,73 2,08 1,99 1,70 1,60 2,29
16
5,33 6,55 5,22 6,53 6,81 6,21 6,71
2.
5,86 2,70 6,15 3,14 2,75 2,52 5,72
32
8,80 3,37 5,03 3,52 3,37 3,37 10,32
.0
9,71 4,19 8,14 4,62 3,48 3,52 12,02
.8
10,60 6,41 8,55 4,51 3,90 3,95 10,54
56
10,42 9,97 9,00 6,05 8,32 8,35 10,92
6.
10,65 11 ,34 10,19 9,55 8,02 8,30 12,04
72
11 ,21 10,00 9,10 7,52 9,52 10,12 12,43

Tabla 48. Crecimiento de Bacillus coagulans en medio fortificado con MSM
Tiempo
MSM al O % MSM al 0,125 % MSM al 0,2 % MSM al 0,50 % MSM al1 % MSM al 2,5 01. MSM al5 %
O
1,43 1,52 1,67 1,48 1,30 1,43 1,56
8
5,05 4,81 4,94 4,42 4,98 5 ,13 4,61
16
6,75 6,95 7,19 6,94 7,29 7 ,05 7,56
24
10,34 9,87 10,34 10,29 10,30 10,22 10,48
32
10,70 11 ,06 11 ,25 11 ,05 11 ,42 11 ,70 11 ,55
.0
10,70 11 ,72 11 ,34 10,25 11 ,02 10,55 10,85
.8
11 ,07 11 ,56 9,94 10,40 10,38 10,88 10,22
56
11 ,35 9,60 11 ,45 10,76 10,86 10,86 11 ,1
64
11 ,01 12,13 11 ,37 10,45 10,40 10,97 10,75
72
10,92 10,14 10,94 10,86 10,70 11 ,05 11 ,81
d· f rffi d
Tabla 49 Creamlen o de Bquot;fid ba t
t
cenum bquot;fid
quot; o
5 Estos estudios indican que MSM puede potenciar el crecimiento de organismos probióticos, dependiendo de la concentración de MSM empleada
Ejemplo 23
10 Efecto de MS en H1 N1 Y virus del herpes simple
Este ejemplo demuestra la capacidad de MSM para potenciar o reducir la infectividad de la cepa de virus de la gripe A porcina H1 N1 AlCalifomia/04/2oo9 (ID del CDC n.o 2009712047), rinovirus de tipo 14 (ATCC n.o VR-284), y del virus del herpes simple de tipo 1 (ATCC n.o VR-260). El estudio se llevó a cabo como una prueba previa al tratamiento de
15 ocho concentraciones de MSM. La prueba de reducción/aumento de la producción de virus y la posterior titulación del virus se llevaron a cabo en tres replicados. Las concentraciones inhibidoras de MSM (Cisc o Clgo -la concentración a la cual se inhibe el crecimiento o la actividad en un 50 % o 90 %) también se determinaron en este estudio
La citotoxicidad de MSM se determinó antes de la prueba. Ocho concentraciones de MSM (16 %, 14 %, 12 %, 10 %,
20 8,0 %, 6,0 %, 1,0 %, Y 0,5 %) se ensayaron en células MDCK (ATCC n.o CCL-34). Las concentraciones de MSM del16 0/0 al 8 % fueron tóxicas para las células MDCK y destruyeron completamente las monocapas de células. Las concentraciones del 6 % al 0,5 % no produjeron un efecto citotóxico visible. La CTsc (concentración a la cual el compuesto, solo, elimina al 50 % de las células no infectadas) se determinó que era de aproximadamente el 7 %. Por lo tanto, esta concentración fue la primera dilución no citotóxica más baja usada en el ensayo.
25 Se incluyeron un total de ocho concentraciones de MSM en la prueba: 7 % (-74,365 mM); 6 % (-63,742 mM); 5 % (-53,118mM ); 4 % (-42,494mM); 3 % (-31 ,871mM); 2 % (-21 ,247mM); 1 % (-10,624mM); y 0,5 % (-5,312mM). A continuación se proporciona una descripción detallada de los materiales y métodos.
Células hospedadoras. Las células Madin Darby de riñón canino (MDCK [ATCC n.o CCL-34]), las células MRC-5 (fibmblastos de pulmón humanos; [ATCC n.o CCL-171]), y las células Vero (riñón de mono verde africano [ATCC n.o CCL-81]) se mantuvieron como monocapas en material de laboratorio para cultivo celular desechable y se usaron para el pretratamiento en la prueba antivírica del virus de la gripe A H1 N1 porcina de la cepa NCaliforniaf04f2009, rinovirus de tipo 14 (ATCC n.o VR-284), y VHS-1 (ATCC n.o VR-260), respectivamente. Antes de la prueba, los cultivos de células hospedadoras se sembraron en las placas de cultivo celular adecuadas. Las monocapas de células eran confluentes al 80 al 90 % Y tenían una edad de menos de 48 horas antes de la inoculación con el virus. El medio de cu ltivo (GM) y el med io de mantenimiento (MM) fue EMEM 1X ylo MEM avanzado con los complementos adecuados.
Determinación de la cito toxicidad del producto de ensayo. Se determinó la concentración no citotóxica más alta del producto de ensayo antes de la prueba. El cultivo de células MDCK se lavó con suero salino tamponado con fosfato (PBS) y se incubó con las siguientes diluciones de un producto: 16 %, 14 %, 12 %, 10 %, 8,0 %, 6,0 %, 1,0 %, Y 0,5 %. La incubación fue durante 1 hora a 37 oC ± 2 oC en una incubadora de C02. Después de la incubación, las células tratadas se recubrieron con MM. Las placas se incubaron en una incubadora de C02durante 3 dias a 37 oC ± 2 oC. La toxicidad se controló usando un microscopio complejo invertido. Una prueba de citotoxicidad efectuada como se indica en el protocolo del estudio mostró que las concentraciones de producto del 16 % al 8 % eran tóxicas para las células MDCK y destruyeron las monocapas de células. Las concentraciones de producto del 6 % al 0,5 % no produjeron un efecto citotóxico visible. La CTso (concentración a la cual el compuesto, solo, elimina al 50 % de las células no infectadas) se determinó que era de aproximadamente el 7 %
A Prueba pre-tratamiento. La solución de reserva de producto de ensayo se preparó del modo siguiente Se diluyeron 35,0 gramos de producto en 100 mi de PBS y se calentaron a 40 oC hasta su disolución. La solución al35 % se mantuvo a 40 oC hasta que se prepararon diluciones mayores (véanse las notas del proyecto [Formulario n.o 95--G-001j en el Apéndice VI de este informe final). Los cultivos de células MDCK, MRC-5 y Vero se lavaron con PBS y se incubaron con las siguientes diluciones de producto: 7 %, 6 %, 5 %, 4 %, 3 %, 2 %, 1 %, Y 0,5 %. La incubación fue durante 1 hora a 37 oC ± 2 oC en una incubadora de C02. Después de haberse completado la incubación, se añadieron aproximadamente 300-1000 UI (unidades infecciosas) de cada uno de los virus de ensayo a las células tratadas adecuadas. La prueba se efectuó en tres replicados. Las placas se incubaron en una incubadora de C02 durante 6 dias a la temperatura adecuada para cada virus. Se controló la CPE usando un microscopio complejo invertido. Todos los datos resultantes de la prueba se incluyen en el Apéndice IV de este informe final (Formularios n.o: 95-G-001,91-L-002, y 07-L-002). B Control de tox;cidad para las pruebas pre-tratamiento. Los cultivos de células MDCK, MRC-5 y Vera se lavaron con PBS y se incubaron con las diluciones de producto del 7 % al 0,5 %. La incubación fue durante 1 hora a 37 oC ± 2 quot;C en una incubadora de C02. Después de la incubación, las células tratadas se recubrieron con MM. Las placas se incubaron en una incubadora de C02 durante 6 dias a la temperatura adecuada para cada virus. Se controló la toxicidad usando un microscopio complejo invertido. Los resultados de las pruebas de citotoxicidad se presentan en la tabla 50 C Control de v;rus. Los cultivos de células MDCK, MRC-5 y Vero se lavaron con PBS y se incubaron con MM. La incubación fue durante 1 hora a 37 quot;C ± 2 quot;C en una incubadora de C02. Después de haberse completado la incubación, se añadieron aproximadamente 300-1000 UI (unidades infecciosas) de cada uno de los virus de ensayo a las células. Se practicaron tres replicados de control de virus. Las placas se incubaron en una incubadora de CO, durante 6 días a la temperatura adecuada para cada virus. Se controló la CPE usando un microscopio complejo invertido. O Control negativo. Las monocapas de cultivo celular intactas sirvieron como control negativo. Se cambió el GM por MM en todos los pocillos de control negativos
E. Determinación de la reducción y/o potenciación de la producción de virus. Después de que el control de virus hubiese alcanzado el efecto citopático máximo (destrucción completa de la monocapa), se tomaron muestras de los pocillos de ensayo y de los pocillos de control de virus para su titulación. Se efectuaron diluciones de factor diez en MM y se emplacaron en células susceptibles en cuatro replicados. Los resultados de las pruebas de reducciónfpotenciación de la producción de virus se presentan en las tablas 51 a 91. Anális;s de datos. El título de la población de virus en los cultivos celulares se expresó como el -IOglO del criterio de valoración de titulación al 50 % para la infectividad. Para calcular el título vírico, se aplicó un cálculo de dosis infecciosa para cultivo tisular al 50 % (TCIDso) -la prueba Quantal (método de Spearman-Karber).
lag TCIDso = I -d (s -0,5)
Donde:
I =-log10 de la dilución menor; d =diferencia entre etapas de dilución; s =suma de las proporciones de pocillos positivos.
1.1 La concentración de producto más alta que produce un efecto citotóxico se determinó como un 50 % de la concentración de producto tóxico (CT so)
1.2 El porcentaje de reducción se calculó del modo siguiente: 1_3 Se usó la TCIDso de población de virus recuperada de la prueba y de control de virus para calcular la reducción o potenciación de la infectividad vfrica_La Clso se determinó usando GraphPad Prism S, Inc software_La CI9Q se determinó experimentalmente, cuando estaba presente.
Criterios de aceptación de la prueba_ Una prueba válida requiere que· 1) las células en los pocillos de control negativo sean viable y estén unidas al fondo del pocillo; 2) el medio esté libre de contaminación en todos los pocillos de la placa; y 3) el control de virus muestre presencia de ePE específica del virus
Se observaron reducciones de la población de virus para los tres virus ensayados. MSM a una concentración del 7 % produjo las siguientes reducciones medias: reducción de 1,16 InglO (93,08 % de reducción) del virus de la gripe A H1 N1 porcina; reducción de 2,50 Ing,o (99,68 % de reducción) del virus del herpes simple 1 (VHS-1); reducción de 1,251ngl0 (94,38 % de reducción) del rinovirus de tipo 14. MSM a una concentración del 6 % produjo las siguientes reducciones medias: reducción de 1,00 Ing,o (90,00 % de reducción) del virus de la gripe A H1 N1 porcina; reducción de 1,00 Ing,o (90,00 % de reducción) de VHS-1, reducción de 0,67 IOg10 (78,62 % de reducción) del rinovirus de tipo 14.
MSM a una concentración deiS % produjo las siguientes reducciones medias: reducción de 0,41 Ingl0 (61 ,10 % de reducción) del virus de la gripe A H1 N1 porcina; reducción de 1,34 10glo (95.43 % de reducción) de VHS-1; reducción de 0,09 IOg10 (18,72 % de reducción) del rinovirus de tipo 14. MSM a una concentración del 4 % produjo las siguientes reducciones medias: reducción de 0,1610910 (30,82 % de reducción) del virus de la gripe A H1 N1 porcina; reducción de 1,59 log10 (97,43 % de reducción) de VHS-1; reducción de 0,28 10glO (47,52 % de reducción) del rinovirus de tipo 14 MSM a una concentración del 3 % produjo las siguientes reducciones medias: reducción de 0,00 10910 (00,00 % de reducción) del virus de la gripe A H1 N1 porcina; reducción de 1,00 10glo (90.00 % de reducción) de VHS-1 , reducción de 0,11 IOg10 (22,38 % de reducción) del rinovirus de tipo 14. MSM a una concentración del 2 % produjo las siguientes reducciones medias: reducción de 0,41 109'0 (61,10 % de reducciÓn) del virus de la gripe A H1 N1 porcina; reducción de 0,84 log10 (85_55 % de reducción) de VHS-1; reducción de 0,4210glO (61,98 % de reducción) del rinovirus de tipo 14 MSM a una concentración del 1 % produjo las siguientes reducciones medias: reducción de 0,25 10910 (43,77 % de reducción) del virus de la gripe A H1 N1 porcina; reducción de 0,67 IOg10 (78.62 % de reducción) de VHS-1 , reducción de 0,14 10glO (27,56 % de reducción) del rinovirus de tipo 14_MSM a una concentración del 0,5 % produjo las siguientes reducciones medias: reducción de 0,66 10910 (78,12 % de reducciÓn) del virus de la gripe A H1 N1 porcina; reducción de O,2510g10 (43.77 % de reducción) de VHS-1; reducciÓfl de 0,40 10910 (60,19 % de reducción) del rinovirus de tipo 14.
Se observó potenciaciónfestimulación de la infectividad vírica para el virus de la gripe A H1 N1 porcina tratado con MSM al 3 %_ La potenciación media de la población de virus fue de 0,17 IOg10 (32,39 %)_ Un total de tres concentraciones de MSM potenciaron la infectividad del rinovirus de tipo 14. MSM a una concentración dei S % produjo una potenciación media de 0,053 IOg10 (11 ,49 %)_ MSM al tres por ciento produjo una potenciación media de 0,11 10910 (22,38 %); Y MSM al 1 % produjo una potenciación media de 0,11 IOg10 (22,38 %) Todas las potenciaciones/estimulaciooes de la infectividad vírica determinadas en este estudio se situaron dentro del intervalo de variación normal para la población de virus y no fueroo significativas_Se calculó una concentración inhibidora de MSM a la cual se inhibe el crecimiento o la infectividad en un 50 % (CI50) usando una regresión no lineal de dosis-respuesta (GraphPad Prism S, software)_Se calcularon los valores de mejor ajuste de Clso y Clso de MSM con intervalos de confianza al 95 % para cada virus de ensayo. Para el virus de la gripe A H1 N1 porcina, el valor de mejor ajuste de la Clso de MSM fue 5,114 mM_La Clso coo un intervalo de confianza del 95 % varió de 0,008038 mM a 3253 mM_ Para VHS-1, se determinó el valor de mejor ajuste de la CI50 de MSM a 10,13mM con un intervalo de confianza al 95 % para la ICso que varió de 7,144mM a 14,37mM. Para el rinovirus de tipo 14, el valor de mejor ajuste para la Clso de MSM fue de 38,16mM_La CI50 con un intervalo de confianza del 95 % estaba en el intervalo de 13,07mM a 111,4mM_Las Cloo (reducción 1,0 10910) se determinaron experimentalmente para VHS-1 y el virus de la g ripe A H1 N1 porcina_Sin embargo, debido a la intercepción de múltiples concentraciones de MSM con el eje de reducción al 90 %, no pueden considerarse precisos los valores experimentales de la Cloo
MSM ensayado a cuatro concentraciones diferentes frente a VHS-1, gripe A H1 N1 porcina y rinovirus produjo curvas de respuesta a la dosis en forma de U_Por ejemplo: MSM al 4 % (reducción de 1,00 10glO) fue más eficaz frente a VHS-1 que MSM al 6 % (reducción de 1,59 log10); MSM al 0,5 % (reducción de 0,66 10glO) fue más o igualmente eficaz contra la gripe A H1N1 porcina que MSM al 5 % (reducción del 0,41 log10); las concentraciones del4 % al 0,5 % fueron más o igualmente eficaces contra rinovirus que MSM al 5 %_ Es posible, en caso de que se confirme en investigaciones posteriores, que los efectos de MSM en forma de U representen in evento estable.
Este estudio indica que MSM puede usarse como producto antivírico. Las concentraciones no tóxicas del 7 % Y el 6 % redujeron la población de virus envueltos, tales como VHS-1 y el virus de la gripe A H1N1 porcina en más de 1,0 log,o. Las tablas 50 a 91 incluyen los resultados para los estudios anteriormente mencionados
La tabla 50 presenta la prueba de citotoxicidad para ocho concentraciones de producto efectuadas en paralelo con prueba pretratamiento usando cultivos de células MOCK, MRC-5, y Vero TAB LA 50
Producto de ensayo: Metilsulfonilmetano, n.o de lote 0902951
Denominación de cultivo
Citotoxicidad del prod ucto de ensayo
celular
7 % 6% 5% 4 % 3% 2% 1 % 0,5%
Vero
00 00 00 00 00 00 00 00
MOCK
++ ++ 00 00 00 00 00 00
MRC-5
++ 00 00 00 00 00 00 00
+ =CPE presente O=CPE no presente
Las tablas 51 a 58 presentan la infectividad de control de virus (TCIDso), la infectividad media 1 (TCIDso), y las reducciones 10g1O y porcentuales observadas en la prueba pre-tratamienlo del producto de ensayo, Metilsulfonilmetano
(n.o de lote 0902951 ), y del virus de la gripe A H1N1 porcina de la cepa AlCalifomia/04f2009 (ID del COC n.o 2009712047).
.. d I
e ucclon a
TABLA 51 R d eameclvl
.. d I
e ucclon a
TABLA 52 R d eameclvl
TABLA 53
Reducción lag media
0,41 10910
Porcentaje de Reducción
53,23 % 53,23 % 73,70 %
Porcentaje de reducción mediaquot;
61 ,10 %
=CPE presente
=CPE no detectado
NT =no ensayado
Rep =Replicado
-
Reducción lag =ACIOso media de control de virus -ACIOso del replicado de ensayo quot;-% de reducción media (calculado a partir de la reducción IOg10 media) = 100-(1/ Reducción ACIOsor100
TABLA 54
Reducción de la infectividad Producto de ensayo: Metilsulfon ilmetano, 4 % (n _O de lote 0902951) Virus · virus de la gripe A H1N1 porcina de la cepa AlCalifornia/04/2oo9, ID del COC n.o 2009712047 línea celular hospedadora: línea celular hospedadora de MDCK, ATCC n_oCCL-34
Di luciones (-log10) -2 -3 -4 -5 -6 -7 TCIDso TCID10 media Reducción lagquot; Reducción 109 media
Control de virus Rep_ 1 Rep_2 NT NT ++++ ++++ ++++ ++++ 00·0 ·000 0000 0000 0000 0000 4,7510910 4,75 1091 0 4,83 10g10 Rep_ 3 NT ++++ ++++ +0+0 0000 0000 5,00 10g1O Producto de ensayo Rep_ 1 I Rep_ 2 Rep_ 3 ++++ ++++ ++++ ++++ ++++ ++++ ++++ 0+++ ++++ 00+0 000· 000· 0000 0000 0000 0000 0000 0000 4,75 10910 4,50 10g1O 4,7510910 4,6710g10 0,08 10910 I 0,3310g10 0,0810910 0,1610g10 Control de célu las 0000
Porcentaje de Reducción
16,82 % 53,23 % 16,82 %
Media de Porcentaje de Reducción··
30 ,82 %
-
CPE presente
=CPE no detectado NT =no ensayado Rep =Replicado
-
Reducción lag =TCIOso media de control de virus -TCIDso del replicado de ensayo
• -% de reducción media (calculado a partir de la reducción 10910 media) = 100-(1/ Reducción
CIDso t1oo
TABLA 55
Reducción de la infectividad Produclo de ensayo: Metilsu lfon ilmetano, 3 % (n _O de lote 0902951 ) Virus virus de la gripe A H1 N1 porcina de la cepa AlCalifomia/04/2009, ID del CDC n.o 2009712047 Línea celular hospedadora: línea celu lar hospedadora de MDCK, ATCC n _oCCL-34
Diluciones (-log10)
Control de virus Producto de ensayo Control de células
I Rep. 2 Rep. 1 Rep. 3
I IRep. 1 Rep. 2 Rep. 3
0000
-2
NT NT NT ++++ ++++ ++++
·3
++++ ++++ ++++ ++++ ++++ ++++
-4
++++ ++++ ++++ ++++ ++++ ++++
·5
00+0 ·000 +0+0 00++ ·00· 0++0
·6
0000 0000 0000 0000 0000 0000
-7
DOOO 0000 0000 0000 0000 0000
TCIDso
4,7510910 4,75 10910 5,00 log1O 5,00 log10 5,0010g 1O 5,00 10g10
TCIDso media
4,83 laglO 5,00 1og10
Reducción log
0,00 log10 I O,OOIOg 1O 0,00 10g10
Reducción log media
0,00 10910
Porcentaje de Reducción
00 ,00 % 00 ,00 % 00 ,00 %
Media de Porcentaje de Reducción
00,00 %
=CPE presente =CPE no detectado NT = no ensayado Rep =Replicado -Reducción lag =TCIOso media de control de virus -TCIDso del replicado de ensayo • -% de reducción media (calculado a partir de la reducciórJ 10910 media) = 100-(1 / Reducción TCIOso)*100
TABLA 56
Reducción de la infectividad Produclo de ensayo: Metilsulfonilmetano, 2 % (n_O de lote 0902951 ) Virus virus de la gripe A H1N1 porcina de la cepa AlCalifornia/0412009, ID del CDC n.o 2009712047 Línea celu lar hospedadora: línea celu lar hospedadora de MOCK, ATCC n.o CCL-34
Diluciones (-log10)
Control de virus Producto de ensayo Control de célu las
Rep_ 2 I Rep_3Rep 1
Rep_ 1 Rep_2 Rep_ 3
ODOO
·2
NT NT NT ++++ ++++ ++++
·3
++++ ++++ ++++ ++++ ++++ ++++
-4
++++ ++++ ++++ ++++ ++++ +000
·5
00+0 ·ODO +0+0 0000 ODO· 0+00
-O
DOOO 0000 ODOO 0000 0000 DOOO
·7
DOOO 0000 ODOO 0000 0000 DOOO
TCIDso
4,7510glO 4 ,75 log10 5,00 log10 4,50 1ag10 4,75 1ag10 4,0010g lO
TCIDso med ia
4,831oglO 4,4210g lO
Reducción log'
0,33 1ag10 0,08 1ag10 0,8310g lO
Reducción lag media
0,4110g lO
Porcentaje de Reducción
53,23 % 16,82 % 85,21 %
Porcentaje de reducción mediaquot;
61 ,10 %
=: CPE presente =CPE no detectado NT =: no ensayado Rep =Replicado • Reducción log =: TCIOse media de control de virus · TCIOse del replicado de ensayo • • % de reducción media (calculado a partir de la reducción loglO media) =: 100-(1 f Reducción TCIOse)*100
TAB LA 57 TABLA 58
Reducción de la infectividad Producto de ensayo: Metilsu lfon ilmetano, 1 % (n.o de lote 0902951 ) Virus: virus de la gripe A H1N1 porcina de la cepa A/Ca lifornia/04/2009, 10 del CDC n.o 2009712047 Línea celular hospedadora: linea celular hospedadora de MDCK, ATCC n.o CCL-34
Diluciones (-log10)
Control de virus Producto de ensayo Control de célu las
Rep 1 Rep.2
Rep. 3 Rep. 1 Rep. 2 Rep. 3
0000
-3
++++ ++++ ++++ ++++ ++++ ++++
-4
++++ ++++ ++++ ++0+ ++++ ++++
-5
00+0 +000 +0+0 00+0 000+ 0000
-O
0000 0000 0000 0000 0000 0000
-7
0000 0000 0000 0000 0000 0000
TCIDso
4 ,751aglO 4 ,75 lag10 5,00 lag, o 4,5010g lO 4,7510g lO 4,5010g lO
TCIDse med ia
4,8310g lO 4,581oglO
Reducción log'
0,3310g lO 0,0810g lO 0,3310g lO
Reducción lag media
0,251oglO
Porcentaje de Reducción
53 ,23 % 16,82 % 53,23 %
Porcentaje de reducción mediaquot;
43,77 %
+ =: CPE presente =CPE no detectado NT =: no ensayado Rep =: Replicado -Reducción lag =TCIOse media de control de virus -TCIDse del replicado de ensayo • -% de reducción media (calculado a partir de la reducción 10910 media) = 100-(1 f Reducción TCIOso)'100
Reducción de la infectividad Produ cto de ensayo: Metilsulfonilmetano, 0,5 % (n_Ode lote 0902951 ) Virus' virus de la gripe A H1N1 porcina de la cepa AlCalifomiaf04/2009, ID del COC n.o 2009712047 Línea celular hospedadora: línea celular hospedadora de MoCK, ATCC n.o CCL-34
Diluciones (-log1o)
Control de virus Producto de ensayo Control de célu las
Rep_ 1 I Rep_2 Rep_ 3
Rep_ 1 Rep_ 2 I Rep 3
0000
-2
NT NT NT ++++ ++++ ++++
-3
++++ ++++ ++++ ++++ ++++ ++++
-4
++++ ++++ ++++ ·000 ++++ +++0
-5
00+0 +000 +0+0 0000 0000 0000
-6
0000 0000 0000 0000 0000 0000
-7
0000 0000 0000 0000 0000 0000
TCloso
4,7510glO 4,75 laglO 5,00 log lO 3,7510g,0 4,50log1O 4,25 1og,0
Media de TCloso
4,83 10g1O 4,17loglO
Reducción lag'
1,0810g1O I O,331og1O 0,58 loglO
Reducción log media
0,6610910
Porcentaje de Reducción
91 ,68 % 53,23 % 73,70 %
Media de
78,12 %
Porcentaje de Reducciónquot;
=CPE presente =CPE no detectado NT =no ensayado Rep =Replicado -Reducción lag =TCIDso media de control de virus -TCloso del repl icado de ensayo • -% de reducción media (calculado a partir de la reducción log,o media) = 1DO-{1I Reducción TCloso)*100
Las tablas 59 a 67 presentan la infectividad de control de virus (TCIOso), la infectividad media (TCloso), y las reducciones 10g1O y porcentuales observadas en la prueba pre-tratamiento del producto de ensayo, Metilsulfonilmetano
(n.o de lote 0902951 ), y del virus del herpes simple de tipo 1 (ATCC n.oVR-260).
TABLA 59
Reducción de la infectividad Producto de ensayo: Metilsulfonilmetano, 7 % (n _O de lote 0902951) Virus: Virus del herpes simple, cepa HF ATCC n VR-260 Línea celular hospedadora: Línea celular hospedadora Vera ATCC n.o CCL-81
Diluciones
Control de virus Producto de ensayo Control de
(-IOg lO)
Rep_ 1 Rep_2 Rep_ 3 Rep_1 Rep_ 2 Rep_3 células
0000
-1
NT NT NT ++++ ++++ ++++
-2
NT NT NT ++++ ++++ ++++
-3
NT NT NT ++++ +000 0+0+
-4
++++ ++-++ ++++ 0000 00+0 0000
-5
++++ +++0 ++++ 0000 0000 0000
-6
0000 00+0 +0+0 0000 0000 0000
-7
0000 0000 0000 NT NT NT
-8
0000 0000 0000 NT NT NT
TCID50
5,50 10910 5,50 10910 6,00 10g10 3,501aglO 3,00 10glo 3,00 10910
Media de TC1D50
5 ,67 10glO 3 ,17109 10
Reducción logquot;
2 ,1710910 2,67 10g10 I 2,67 10910
Reducción log media
2 ,5010glO
Porcentaje de Reducción
99,32 % 99 ,79 % 99,79 %
Media de Porcentaje de Reducciónquot;
99,68 %
-ePE presente =ePE no detectado NT =no ensayado Rep =Replicado • Reducción lag 'quot; TelDse media de control de virus · TCIDso del replicado de ensayo • -% de reducción medi~-(calculado a partir de la reducciórJ 109'.0 media) =100-(1 f Reducción TCID~'100
TABLA 60
Porcentaje de
90,00 %
reducción mediaquot;
=CPE presente
=CPE no detectado NT =no ensayado Rep =Replicado
-
Reducción 109 =TCIOso media de control de virus -TCIDso del replicado de ensayo • -% de reducción media (calculado a partir de la reducciórJ 10910 media) =100-(1f Reducción TCIDso)quot;100
TABLA 61
Reducción de la infectividad Producto de ensayo: Metilsulfonilmetano, 5 % (n_O de lote 0902951) Virus· Virus del herpes simple, cepa HF ATCC n_oVR-260 Línea celular hospedadora: Línea celu lar hospedadora Vera ATCC n.o CCL-S1
Diluciones (-10910)
Control de virus Producto de ensayo Control de células
Rep_ 1 Rep_ 2 Rep_ 3
Rep_ 1 Rep_ 2 I Rep 3
0000
-3
NT NT NT ++++ ++++ ++++
-4
++++ ++++ ++++ ++0+ ++++ 000+
-5
++++ +++0 ++++ 0+00 0000 0000
-6
0000 00+0 +0+0 000+ 0000 0000
-7
0000 0000 0000 0000 0000 0000
-8
0000 0000 0000 0000 0000 0000
TCIDso
5,5010910 5,50 10910 6,00 10910 4,7510910 4,5010910 3,7510910
Media de TCIDso
5,67 1og10 4,3310910
Reducción logquot;
0, 9210910 1,1710910 I 1,9210910
Reducción 109 media
1,3410910
Porcentaje de Reducción
87,98 % 93,24 % 98,80
Media de Porcentaje de Reducciónquot;
95,43 %
=CPE presente =CPE no detectado NT =no ensayado Rep =Replicado -Reducción 109 =TCIOso media de control de virus -TCIDso del replicado de ensayo quot; -% de reducción media (calculado a partir de la reducciórJ 10910 media) = 100-(11 Reducción TCIDsot100
.. d I
e ucclon a
TABLA 62 R d eameclvl
Producto de ensayo: Metilsulfon ilmetano, 4 % (n_O de lote 0902951) Virus: Virus del herpes simple, cepa HF ATCC n VR-260 Línea celular hospedadora: Línea celular hospedadora Vera ATCC no CCL-S1
_
Diluciones
Control de virus Producto de ensayo Control de
(-10910)
Rep. 1 Rep.2 Rep.3 Rep. 1 Rep. 2 Rep. 3 célu las
0000
-3
NT NT NT ++++ ++++ ++++
-4
++++ ++++ ++++ 00+0 +0+0 +0+0
-5
++++ +++0 ++++ 0000 +00+ 0000
-6
0000 00+0 +0+0 0000 0000 0000
-7
0000 0000 0000 0000 0000 0000
-8
0000 0000 0000 0000 0000 0000
TelOso
5,50 10g10 5,50 10910 6,00 10910 3,75 109'0 4,50 10910 4,00 109'0
Media de TelOso
5,67 laglO 4,08109 10
Reducción log·
1,92 109'0 1,1710910 1,67 109' 0
Reducción log media
1,5910g10
Porcentaje de Reducción
98,80 % 93,24 % 97,86 %
Media de Porcentaje de Reducción··
97,43 %
= ePE presente =ePE no detectado NT =no ensayado Rep =Replicado • Reducción lag =TeI0 50 media de control de virus · TeI050 del replicado de ensayo • -% de reducción media (calculado a partir de la reducción laglO media) =100-(1f Reducción AC1Dsor100
TABLA 63
Reducción de la infectividad ProduciD de ensayo: Metilsulfonilmetano, 3 % (n.o de lote 0902951) Virus Virus del herpes simple, cepa HF ATCC n VR-260 Línea celular hospedadora: Línea celular hospedadora Vero ATCC n_o CCL-81
Diluciones ( -IOg lO)
Control de virus Producto de ensayo Control de células
Rep_ 1 Rep_ 2 Rep_ 3
Rep 1 Rep_2 Rep_3
0000
-3
NT NT NT ++++ ++++ ++++
-4
++++ ++++ ++++ 00++ ++++ ++++
-5
++++ +++0 ++++ 00+0 0000 00++
-6
0000 00+0 +0+0 0000 0000 0000
-7
0000 0000 0000 0000 0000 000+
-8
0000 0000 0000 0000 0000 0000
TCID50
5,50 10g10 5,50 loglO 6,00 10glo 4,25 1og1O 4,50 10glo 5,25 1og10
Media de TCID50
5,67 log1O 4,6710glO
Reducción lag'
14210g10 1,17 10glo I 0,42 10910
Reducción lag media
1,DO 10g 1O
Porcentaje de Reducción
96,20 % 93,24 % 61,98 %
Media de Porcentaje de Reducciónquot;
90,00 %
=CPE presente =CPE no detectado NT =no ensayado Rep =Replicado -Reducción lag =TCIDso media de control de virus -TCIDso del replicado de ensayo • -% de reducción media (calculado a partir de la reducción laglO media) = 100-(1f Reducción TCIDsot100
TAB LA 64
Reducción de la infectividad Producto de ensayo: Metilsu lfon ilmetano, 2 % (n.o de lote 0902951) Virus: Virus del herpes simple, cepa HF ATCC n. VR-260 Línea celular hosoedadora: Línea celular hosoedadora Vera ATCC n.o CCL-81
Diluciones (-log10)
Control de virus Producto de ensayo Control de células
Rep. 1 Rep. 2 Rep.3
Rep. 1 Rep. 2 I Rep. 3
0000
-3
NT NT NT ++++ ++++ ++++
-4
++++ ++++ ++++ ++++ ++++ ++++
-5
++++ +++0 ++++ 0+++ 0000 00+0
-6
0000 00+0 +0+0 0000 0000 0000
-7
0000 0000 0000 0000 0000 0000
-8
0000 0000 0000 0000 0000 0000
TCIDso
5,5010glO 5,50 1og10 6,00 10g10 5,2510glO 4,50 10g10 4,75 10910
Media de TCIDso
5,67 10g1O 4,8310g10
Reducción lag
0,4210g lO 1,17 IOg10 0,921agl0
Reducción lag media
0,84 IOg10
Porcentaje de Reducción
61 ,98% 93 ,24 % 87,98 %
Media de Porcentaje de Reducción
85,55 %
=CPE presente =CPE no detectado NT =no ensayado Rep =Replicado -Reducción lag =TCIDso media de control de virus -TCIDso del replicado de ensayo • -% de reducción media (calculado a partir de la reducción laglO media) =100-(11 Reducción TCIDso)*100
TABLA 65
Reducción de la infectividad Producto de ensayo: Metilsulfonilmetano, 1 % (n.O de lote 0902951 ) Virus: Virus del herpes simple, cepa HF ATCC n. VR-260 Línea celular hospedadora: Línea celular hospedadora Vero ATCC n.o CCl-81
Diluciones (-log10)
Control de virus Producto de ensayo Control de células
Rep.1 Rep.2 Rep.3
Rep. 1 Rep.2 I Rep.3
0000
-3
NT NT NT ++++ ++++ ++++
-4
++++ ++++ ++++ ++++ ++++ ++++
-5
++++ +++0 ++++ 00++ 00++ 00++
-O
0000 00+0 +0+0 0000 0000 0000
-7
0000 0000 0000 0000 0000 0000
-O
0000 0000 0000 0000 0000 0000
TCIDso
5,50 10g10 5,50 IOg10 6,00 10910 5,0010glO 5,00 10g10 5,0010glO
Media de TCIDso
5,67 log10 5,001oglO
Reducción log
0,6710glO 0,67 10g10 I 0,6710glO
Reducción log media
0,671oglO
Porcentaje de Reducción
78,62 % 78,62 % 78,62 %
Media de Porcentaje de Reducción
78,62 %
=CPE presente =CPE no detectado NT =no ensayado Rep =Replicado -Reducción log =TCIOso media de control de virus -TCIOso del replicado de ensayo • -% de reducción media (calculado a partir de la reducción loglO media) =100-(1 f Reducción TCIOso)*100
TABLA 66
Reducción de la infectividad Produclo de ensayo: Metilsulfonilmetano, 0,5 % (n.o de lote 0902951) Virus: Virus del herpes simple, cepa HF ATCC n.o VR-260 Línea celular hospedadora: Línea celular hospedadora Vero ATCC n.o CCl-81
Diluciones (-log10)
Control de virus Producto de ensayo Control de células
Rep. 1 Rep. 2 I Rep. 3
Rep. 1 I Rep. 2 I Rep. 3
0000
-3
NT NT NT ++++ ++++ ++++
-4
++++ ++++ ++++ ++++ ++++ ++++
-5
++++ +++0 ++++ ++++ ++0+ ++0+
-O
0000 00+0 +0+0 0000 0000 000+
-7
0000 0000 0000 0000 0000 0000
-B
0000 0000 0000 0000 0000 0000
TCIDso
5,50 10g10 5,501aglO 1 6,00 1agl0 5,50 1aglo 1 5,25 10g10 1 5,5010glO
Media de TCIDso
5,6710glO 5,42 10g10
Reducción log
0,17 1agl0 1 0,42 10g10 1 0,1710glO
Reducción lag media
0,25 10g10
Porcentaje de Reducción
32,39 % 61 ,98 % 32,39 %
Media de Porcentaje de Reducción
43,77 %
=CPE presente =CPE no detectado NT =no ensayado Rep =Replicado -Reducción lag =TCIDso media de control de virus -TCIDso del replicado de ensayo • -% de reducción media (calculado a partir de la reducción lagl0 media) =100-(1 f Reducción TCIDso)quot;100
TABLA 67
Reducción de la infectividad Producto de ensayo: Metilsulfonilmelano, 7 % (n.o de lote 0902951 ) Virus: Rinovirus de tipo 14, cepa 1059 ATCC n. VR-284 Línea celular hospedadora: Línea celu lar hospedadora MRC-5 ATCC n.o CCL-171
Diluciones (.laglO)
Control de virus Prcx:lucto de ensayo Control de célu las
Rep.1 Rep. 2 Rep. 3
Rep.1 Rep.2 Rep. 3
-2
NT NT NT ++++ ++++ ++++
-3
++++ ++++ ++++ ++++ ++++ ++++
-4
++++ ++++ ++++ ++0+ ++++ ++++
-5
++++ ++++ ++++ 0000 0000 0000
-6
0000 0000 0+0+ 0000 0000 0000
-7
0000 0000 0000 0000 0000 0000
TCIDso
5,50 10g10 5,501aglO 6,00 10g10 4,2510g10 4,501oglO 4,50 1og10
Media de TCIDso
5,671aglO 4,421aglO
Reducción log
1,4210g10 1,171oglO 1,17 log10
Reducción log media
1,251aglO
Porcentaje de Reducción
96,20 % 93,24 % 93,24 %
Media de Porcentaje de Reducción
94 ,38 %
Reducción de la infectividad
Producto de ensayo: Metilsulfonilmetano, 7 % (n.o de lote 0902951) Virus· Rinovirus de tipo 14, cepa 1059 ATCC n VR-284 Linea celular hospedadora: Linea celular hospedadora MRC-5 ATCC n.o CCL-171
Control de virus
Producto de ensayo
Diluciones
Control de
célu las
(-10910)
Rep. 1 Rep. 2 Rep. 3
Rep. 1 Rep. 2 Rep. 3
I I
I I
+ =CPE presente ~ =CPE no detectado NT =no ensayado Rep =Replicado • -Reducción lag =TCIDso media de control de virus -TCIDso del replicado de ensayo •• -% de reducción media (calculado a partir de la reducción 10910 media) = 100-(11 Reducción TCIDso)quot; 1DO
Las tablas 68 a 74 presentan la infectividad de control de virus (TCIDso), la infectividad media (TCIDso), y las reducciones 10910 y porcentuales observadas en la prueba pre-tratamienlo del producto de ensayo, Melilsulfonilmelano
(n.ode lole 0902951 ), y rinovirus de tipo 14 (ATCC n.o VR-284) TABLA 68
Reducción de la infectividad Produclo de ensayo : Metilsulfonilmetano, 6 % (n.o de lole 0902951 ) Virus Rinovirus de tipo 14, cepa 1059 ATCC n VR-284 linea celular hospedadora: linea celular hospedadora MRC-5 ATCe n.o CCL-171
Diluciones (-lag10)
Control de virus Producto de ensayo Control de célu las
Rep. 1 Rep. 2 Rep. 3
Rep. 1 I Rep. 2 Rep. 3
0000
-2
NT NT NT ++++ ++++ ++++
-3
++++ ++++ ++++ ++++ ++++ ++++
-4
++++ ++++ ++++ ++++ ++++ ++++
-5
+-+++ ++++ ++++ +000 +0+0 +0++
-6
0000 0000 0+0+ 0000 0000 0000
-7
0000 0000 0000 0000 0000 0000
5,5010910
5,50 10910 6,00109 10 4,751og10 5,00 1ag10 5,25 10910
Media de
5,67 10910 5,00 1ag10
Reducción lag
0,921aglO 0,67 1ag10 0,42 10910
Reducción lag media
0,67 1ag10
Porcentaje de Reducción
87,98 % 78,62 % 61 ,98 %
Media de Porcentaje de Reducción
78,62 %
=CPE presente =CPE no detectado NT =no ensayado Rep 'quot; Replicado -Reducción lag =TCIDso media de conlrol de virus -TCIDso del replicado de ensayo • -% de reducción media (calculado a partir de la reducción laglO media) =100-(1 f Reducción TCIDso)quot;100
TABLA 69
Reducción de la infectividad Prod ucto de ensayo: Melilsu lfonilmelano, 5 % (n.o de lote 0902951) Virus · Rinovirus de lipo 14, cepa 1059 ATCC n VR-284 Línea celular hospedadora: Línea celular hospedadora MRC-5 ATCC n.o CCL-171
Diluciones (-lag10)
Conlrol de virus Produclo de ensayo Control de célu las
Rep. 1
Rep. 2 Rep. 3 Rep. 1 Rep. 2 Rep. 3
ODOO
-2
NT NT NT ++++ ++++ ++++
-3
++++ ++++ ++++ ++++ ++++ ++++
-4
++++ ++++ ++++ ++++ ++++ ++++
-5
++++ ++++ ++++ 0+++ ++++ ++++
-6
0000 0000 0+0+ DOOO ODOO +00+
-7
0000 0000 DOOO DOOO ODOO ODOO
TCID50
5,5010910 5,50 1og10 6,00109 10 5,2510910 5,501aglO 6,00 1ag10
Media de TCID50
5,67 1ag10 5,58 1ag10
Reducción lag
0,0910910 0,171aglO I 0,00 1ag10
Reducción lag media
0,09 1ag10
Porcentaje de Reducción
18,72 % 32,39 % 00 ,00 %
Media de Porcentaje de Reducción
18,72 %
=CPE presenle =CPE no deteclado NT =no ensayado Rep =Replicado -Reducción lag =TCI050 media de control de virus -TCI050 del replicado de ensayo • -% de reducción media (calculado a partir de la reducción laglO media) =100-(1 f Reducción TCI050)quot;100
TABLA 70 TABLA 71
Reducción de la infeclividad Producto de ensayo: Melilsu lfonilmelano, 4 % (n.o de lote 0902951) Virus· Rinovirus de tipo 14, cepa 1059 ATCC n VR-284 Línea celular hospedadora: Línea celular hospedadora MRC-5 ATCC n.o CCL-171
Diluciones (-lag10)
Control de virus Producto de ensayo Conlrol de células
Rep. 1 Rep. 2 Rep. 3
Rep. 1 Rep. 2 Rep. 3
0000
-2
NT NT NT ++++ ++++ ++++
-3
++++ ++++ ++++ ++++ ++++ ++++
-4
++++ ++++ ++++ ++++ ++++ ++++
-5
++++ ++++ ++++ DO++ ++++ ++++
-6
0000 0000 0+0+ DOOO ODOO O+DO
-7
0000 0000 DOOO DOOO ODOO 0000
TCIDso
5,5010glO I 5,50log1O I 6,OO log,0 5,OO log,0 5,50 1og,0 5,7510glO
Media de TClDso
5,6710910 5,4210g10
Reducción log
0,67 10910 0,17 10910 0,00 10glo
Reducción log media
O,28 10g10
Porcentaje de Reducción
78,62 % 32,39 % 00,00 %
Media de Porcentaje de Reducción
47,52 %
=CPE presente =CPE no detectado NT ::; no ensayado Rep =Replicado • Reducción log =TCIDso media de control de virus · TCIDso del replicado de ensayo • -% de reducción media (calculado a partir de la reducción loglO media) =100-(1 f Reducción TCIDsot100
=CPE presente
=CPE no detectado
NT =no ensayado
Rep =Replicado
• -Reducción log =TCIOso media de control de virus -TCIDso del replicado de ensayo • -% de reducción media (calculado a partir de la reducción loglO media) =100-(1f Reducción TCIDso)quot;100
TABLA 72
Reducción de la infectividad Producto de ensayo: Metilsu lfon ilmetano, 2 % (n.o de lole 0902951) Virus: Rinovirus de tipo 14, cepa 1059 ATCC n. VR-284 Linea celular hospedadora: Línea celu lar hospedadora MRC-5 ATCC n.o CCL-171
Diluciones (-10910)
Control de virus Producto de ensayo Control de células
Rep. 1 Rep. 2 Rep. 3
Rep. 1 I Rep. 2 Rep. 3
0000
-2
NT NT NT ++++ ++++ ++++
-3
++++ ++++ ++++ ++++ ++++ ++++
-4
++++ ++++ ++++ ++++ ++++ ++++
-5
++++ ++++ ++++ ++++ 0+++ 0000
-6
0000 0000 0+0+ 0000 00+0 00+0
-7
0000 0000 0000 0000 0000 0000
TCIDso
5,5010910 5,50 1og10 6 ,00109 10 5,501oglO 5,50 10910 4,75 loglO O
Media de TCIDso
5,67 1og10 5,25 1og10
Reducción log
O,17loglO 1 0, 1710910 0,9210910
Reducción log media
0,42 1og10
Porcentaje de Reducción
32,39 % 32 ,39 % 87,98 %
Media de Porcentaje de Reducción
61,98 %
=CPE presente =CPE no detectado NT =no ensayado Rep =Replicado -Reducción log =TCIDso media de control de virus -TCIDso del replicado de ensayo • -% de reducción media (calculado a partir de la reducción loglO media) = 100-(11 Reducción TCIDso)quot;100
TABLA 73
Reducción de la infectividad Producto de ensayo: Metilsulfonilmetano, 1 % (n.o de lote 0902951) Virus· Rinovirus de tipo 14, cepa 1059 ATCC n VR-284
Línea celular hospedadora: Línea celular hos edadora MRC-5 ATCC n.o CCL-171
Control de virus Produclo de ensayo
Diluciones
Control de (-loglO)
células Rep. 1 Rep. 2 Rep. 3 Rep.1 Rep. 2 Rep. 3
I I I I
-
2 NT NT NT ++++ ++++ ++++
I I I I I
-3
++++ ++++ ++++ ++++ ++++ ++++
-4
++++ ++++ ++++ ++++ ++++ ++++
-5
++++ ++++ ++++ ++++ ++0+ ++++
-6
0000 0000 0+0+ +0+0 0000 000+
-7
0000 0000 0000 0000 0000 0000
TCIDso
5,50 10g10 5,50 lag1 0 6,00109 10 6,00 IOg10 5,25 1ag10 5,7510910 0
Media de TCIDso
5,67 1ag10 5,6710910
Reducción
0,00 IOg10 0,42 1ag10 0,00 10glO
Reducción lag media
0 ,14109 10
Porcentaje de Reducción
00,00 % 61 ,98 % 00,00 %
Media de Porcentaje de Reducción
27,56 %
=ePE presente =ePE no detectado NT ::; no ensayado Rep =Replicado • Reducción lag =TCIDso media de control de virus · TCIDso del replicado de ensayo • -% de reducción media (calculado a partir de la reducción laglO media) =100-(1 f Reducción TC1Dsot100
TABLA 74
Reducción de la infectividad Producto de ensayo: Metilsulfonilmetano, 0,5 % (n.o de lote 0902951 ) Virus: Rinovirus de tipo 14, cepa 1059 ATCC n.o VR-284 Línea celu lar hospedadora: Línea celular hospedadora MRC-5 ATCC n.o CCL-171
Diluciones (-10910)
Control de virus Producto de ensayo Control de células
Rep. 1 Rep. 2 Rep. 3
Rep. 1 Rep. 2 Rep. 3
0000
-2
NT NT NT ++++ ++++ ++++
-3
++++ ++++ ++++ ++++ ++++ ++++
-4
++++ ++++ ++++ ++++ ++++ ++++
-5
++++ ++++ ++++ ++++ ++++ 0000
-6
0000 0000 0+0+ 0000 +000 0000
-7
0000 0000 0000 0000 0000 0000
TCIDso
5,5010910 5,50 1og10 6,00 10910 5,50 1og10 5,751og10 4,501091 O
Media de TCIDso
5,67 10910 5,2510910
Reducción log
0,17 1og10 O,OOloglO 1,17 10910
Reducción 109 media
0,4010glO
Porcentaje de Reducción
32,39 % 00,00 % 93,24 %
Media de Porcentaje de Reducción
60,19 %
=CPE presente =CPE no detectado NT =no ensayado Rep =Replicado -Reducción 109 =TCIOso media de control de virus -TCIOso del replicado de ensayo • -% de reducción media (calculado a partir de la reducción 10910 media) =100-(1 f Reducción TCIOso)quot;100
la tabla 75 presenta la infectividad del virus de control (TCIOso), la infectividad media (TCIOso), y las mejoras 10910 y porcentuales observadas en la prueba pre-tratamiento del producto de ensayo, Metilsulfonilmetano (n,O de lote 0902951), y del virus de la gripe A H1 N1 porcina de la cepa AfCaliforniaf04f2009 (ID del COC n_o 2009712047)
TABLA 75
Mejora de la infectividad Producto de ensayo: Metilsulfonilmetano, 3 % (n.O de lote 0902951 ) Virus: virus de la gripe A H1N1 porcina de la cepa AfCalifomia/04/2009, ID del COC n.o 2009712047 Línea celular hospedadora: línea celular hospedadora de MOCK, ATCC n _oCCl-34
Diluciones (-log10)
Control de virus Producto de ensayo Control de células
Rep_ 1
Rep_ 2 Rep_3 Rep_1 Rep_2 Rep_3
0000
-2
NT NT NT ++++ ++++ ++++
-3
++++ ++++ ++++ ++++ ++++ ++++
-4
++++ ++++ ++++ ++++ ++++ ++++
-5
00+0 ·000 +0+0 00++ +00+ 0++0
-O
0000 0000 0000 0000 0000 0000
-7
0000 0000 0000 0000 0000 0000
TCIDso
4,7510910 4,75 10910 5,00 laglO 5,00 10g10 5,00 10g10 5,OOlog1O
Media de TCIOso
4,83109 10 5,0010glO
Log de estimulación
0,1710910 0,17 laglO 0,17 10g10
Media de log de estimulación
0,1710glO
Porcentaje de de estimulación
32,39 % 32,39 % 32,39 %
Media de Porcentaje de de estimulación
32,39 %
+ =CPE presente ~._= CPi:=: no detectado NT =no ensayado Rep =Replicado * -Lag de estimulaciÓfl = TCID50 media de la prueba -TCID50 del recplicado del control de virus ** -% de estimulación media (calculado a partir de la estimulación IOg10 media) = 100-(1/ Estimulación TCID50)*100
Las tablas 76 a 78 presentan la infectividad de control de virus (TCID50), la infectividad media (TCID50), y las mejoras 10910 y porcentuales observadas en la prueba pre-tratamiento del producto de ensayo, Metilsulfonilmetano (n.o de lote 0902951), y rinovirus de tipo 14 (ATCC n.o VR-284).
TABLA 76 TABLA 77
Mejora de la infectividad Produclo de ensayo: Metilsu lfon ilmetano, 5 % (n.o de lol e 0902951) Virus· Rinovirus de tipo 14, cepa 1059 ATCC n VR-284 Línea celular hospedadora: Línea celular has edadora MRC-5 ATCC n.o CCL-171
Diluciones (-10910)
Control de virus Producto de ensayo Cell Control
Rep. 1 Rep. 2 Rep. 3
Rep.1 I Rep. 2 I Rep. 3
0000
-2
NT NT NT ++++ ++++ ++++
-3
++++ ++++ ++++ ++++ ++++ ++++
-4
++++ ++++ ++++ ++++ ++++ ++++
-5
++++ ++++ ++++ 0+++ ++++ ++++
-6
0000 0000 0+0+ 0000 0000 +00+
·7
0000 0000 0000 0000 0000 0000
TCID50
5,50 10910, 5,50 10glO 6,00 10g10 5,25 10910, 5,50 lag 10, 6,00 10910
Media de TCID50
5,67 10glO 5,58 10g10
Logde estimulación
0,0810910 0,0810g10 0,00 109'0
Media de 109 de estimulaci6n
0,05310glO
Porcentaje de de eslimulación
16,82 % 16,82 % 00,00 %
Media de Porcentaje de de eslimulación
11,49 %
=CPE presente =CPE no detectado NT = no ensayado Rep =Replicado -Lag de estimulación =TCID50 media de la prueba -TCID50 del recplicado del control de virus * -% de estimulaciÓfl media (calculado a partir de la estimulación 10910 media) = 100-(1/ Estimulación TCID50)*100
Mejora de la infectividad Producto de ensayo: Metilsulfonilmetano, 3 % (n .o de lote 0902951) Virus: Rinovirus de tipo 14, cepa 1059 ATCC n. VR-284 Línea celu lar hospedadora: Línea celular hospedadora MRC-5 ATCC n.o CCL-171
Diluciones (-10910)
Control de virus Producto de ensayo Control de células
Rep. 1 Rep. 2 I Rep. 3
Rep. 1 Rep. 2 Rep. 3
0000
-2
NT NT NT ++++ ++++ ++++
-3
++++ ++++ ++++ ++++ ++++ ++++
-4
++++ ++++ ++++ ++++ ++++ ++++
-5
++++ ++++ ++++ ++0+ ++++ ++++
-6
0000 0000 0+0+ 000+ 0000 000+
-7
0000 0000 0000 0000 0000 +000
TCIDso
5,50 10910 5,5010910 6,00 10910 5,5010910 5,SO 10910 6,00 10910
Media de TCIDso
5,67 10910 5,6710910
L09de estimulación
0,1710910 0,17 109' 0 0,00 109' 0
Media de 109 de estimulaci6n
0,1110910
Porcentaje de de esl imulaci6n
32,39 % 32,39 % 00,00 %
Media de Porcentaje de de estimulación
22,38 %
=CPE presente =CPE no detectado NT =no ensayado Rep =Replicado -L09 de estimulación =TCIDso media de la prueba -TCIDso del recplicado del control de virus • -% de estimulaciÓfl media (calcu lado a partir de la estimulación 10910 media) = 100-(1 f Estimulación TCIDso)quot;100
TABLA 78
Mejora de la infectividad Producto de ensayo: Metilsu lfon ilmetano, 1 % (n.o de lote 0902951 ) Virus: Rinovirus de tipo 14, cepa 1059 ATCC n. VR-284 Línea celu lar hospedadora: Línea celular hospedadora MRC-5 ATCC n.o CCL-171
Di luciones (-10910)
Control de virus Producto de ensayo Control de células
Rep. 1 Rep. 2 I Rep. 3
Rep. 1 I Rep. 2 Rep. 3
0000
-2
NT NT NT ++++ ++++ ++++
-3
++++ ++++ ++++ ++++ ++++ ++++
-4
++++ ++++ ++++ ++++ ++++ ++++
-5
++++ ++++ ++++ ++++ ++0+ ++++
-6
0000 0000 0+0+ +0+0 0000 000+
-7
0000 0000 0000 0000 0000 0000
TCIDso
5,50 10910 1 5,50 10910 1 6,00 1agl0 6,00 10g10 5,2510g lO 1 5,7510910
Media de TCIDso
5,67 10910 5,6710g lO
Lag de estimulaciÓfl
0,17 10g10 O,17loglO O,OOlaglO
Med ia de lag de estimulación
0,1110glO
Porcentaje de de estimulación
32,39 % 32 ,39 % 00,00 %
Media de Porcentaje de de estimulación
22,38 %
=CP E presente =CPE no detectado NT =no ensayado Rep =Replicado -Log de estimu lación =TCIDso media de la prueba -TCIDso del recplicado del cootrol de virus • -% de estimulaciÓfl media (calcu lado a partir de la estimulación log lO media) = 100-(1 f Estimulación TCIDso)quot;100
Regresión no lineal dosis frente a respuesta
Se llevaron a cabo análisis de dosis-respuesta (inhibición) para las concentraciones de producto de ensayo convertidas en mM (peso molecular del producto de ensayo =94,13). Los análisis de regresión no lineal fueron como sigue: log (inhibidor) frente a respuesta normalizada -pendiente variable. Las concentraciones se presentan en la tabla
TABLA 79
Concentración, %
Concentración, mM
7 %
74 ,365
~%
~3, 742
5 %
53 ,118
%
~2,494
3 %
31 ,871
2 %
21 ,247
1 %
10,624
0,5 %
5,312
La tabla 80 presenta la entrada de datos para el virus del herpes simple. TABLA 80
Dosis, mM
Respuesta, % de reducción
74 ,365
99,320 99,790 99,790
63,742
87,980 87,980 93,240
53 ,118
87 ,980 93,240 98,800
42,494
98,800 93,240 97,860
31 ,871
96,200 93,240 61 ,980
21 ,247
61 ,980 93,240 87,980
10,624
78 ,620 78,620 78,620
5,312
32 ,390 61 ,980 32,390
La tabla 81 presenta la transformación (109 de dosis =X=L09(X» de datos para el virus del herpes simple. TABLA 81
Dosis, mM 1,871369 1,804426 1,725242 1,628328 1,503396 1,327298 1,02628 0,7252581
Respuesta, % de reducción 99,320 99,790 99,790 87,980 87 ,980 93 ,240 87,980 93 ,240 98 ,800 98,800 93 ,240 97,860 96,200 93 ,240 61 ,980 61 ,980 93 ,240 87 ,980 78,620 78 ,620 78 ,620 32,390 61 ,980 32 ,390
5
La tabla 82 presenta la transformación de los datos normalizados para el virus del herpes simple. El porcentaje de reducción se normalizó del modo siguiente: 32,39 % se convierte en O % para todo el conjunto de datos; 99,79 % se convierte en 100 % para todo el conjunto de datos.
10
TABLA 82
Dosis, mM 1,871369 1,804426 1,725242 1,628328 1,503396 1,327298 1,02628 0,7252581
Respuesta , % de reducción 99 ,30267 100,000 100,000 82,47775 82,47775 90,2819 82,47775 90,2819 98 ,53116 98 ,53116 90,2819 97,1365 94 ,67358 90,2819 43,90208 43,90208 90,2819 82,47775 68 ,59051 68,59051 68 ,59051 0,000 43,90208 0,000
El cálculo de la Cisc para el virus del herpes simple se presenta en la tabla 83. El valor de mejor ajuste para la Cisc del
virus del herpes simple se determillÓ en 10,13 mM. Sin embargo, debido a la variación significativa en la reducción de
virus, pueden considerarse una aproximación más plausible los valores de Cisc en el intervalo de 7,144mM a 14,37mM
TABLA 83
lag (inhibidor) frente a respuesta normalizad a-Pendiente variable
Valores de mejor ajuste
LogCI50
1,00
Pendiente de Hill
1,52
1.,
10,1
Error típico
LogCI50
0,0731 4
Pendiente de Hill
0,3281
Intervalos de confianza al 95 %
LagCI50
0,8539 a 1,157
Pendiente de Hill
0,8428 a 2,204
1.,
7,144 a 14,37
Bondad del ajuste
Grados de libertad
22
R cuadrada
0,6761
uma absoluta de cuadrados
6312
,.,
16,94
Número de puntos
Ana lizados
24
La tabla 84 presenta la entrada de datos para el virus de la gripe A H1 N1 porcino TABLA 84
Dosis, mM
Respuesta, % de reducción
74,365
91 ,680 91 ,680 85,210
63 ,742
91 ,680 91 ,680 85,210
53,118
53 ,230 53,230 73,700
42,494
16,820 53,230 16,820
31 ,871
0,000 0,000 0,000
21 ,247
53 ,230 16,820 85,210
10,624
53 ,230 16,820 53,230
5,312
91 ,680 53,230 73,700
La tabla 85 presenta la transformación [lag de dosis =X=Lag(X)) de los datos para el virus de la gripe A H1N1 porcino. TABLA 85
Dosis, mM 1,871369 1,804426 1,725242 1,628328 1,503396 1,327298 1,02628 0,7252581
Respuesta, % de reducción 91 ,680 91 ,680 85,210 91 ,680 91 ,680 85,210 53,230 53 ,230 73,700 16,820 53 ,230 16,820 0,000 0,000 0,000 53,230 16,820 85,210 53,230 16,820 53,230 91 ,680 53 ,230 73,700
10 La tabla 86 presenta la transformación de los datos normalizados para el virus de la gripe A H1N1 porcino. El porcentaje de reducción se normalizó del modo siguiente: O % se convierte en O % para todo el conjunto de datos; 91 ,68 % se convierte en 100 % para todo el conjunto de datos.
TABLA 86 Dosis, mM
Respuesta, % de reducción
1,871369 100,000 I 100,000 I 92,94284
Dosis, mM
Respuesta, % de reducción
1,804426
100,000 100,000 92 ,94284
1,725242
58 ,06065 58,06065 80 ,38831
1,628328
18,34642 58,06065 18,34642
1,503396
0,000 0,000 0,000
1,327298
58 ,06065 18,34642 92 ,94284
1,02628
58 ,06065 18,34642 58 ,06065
0,7252581
100,000 58,06065 80 ,38831
El cálculo de la CI50 para el virus de la gripe A H1N1 porcino se presenta en la tabla 87. El valor de mejor ajuste para la CI50 para el virus de la gripe A H1N1 porcino se determinó en 5,114 mM. Los valores de CI50 con intervalos de confianza del 95 % variaron de 0,008038 mM a 3253 mM. En vista de la incoosistencia de la reducción de virus (curva en fOfma de U), se determinaron las CI50 de MSM con una aproximación significativa Los valores de Clgo no pueden calcularse a partir de este conjunto de datos.
TABLAS7
log(inhibidor) frente a respuesta normalizada Pendiente variable
!valores de mejor ajuste
LogCI5O
0,7087
Pendiente de Hill
0,213
elquot;,
5,114
ErrOf típico
LogCI5O
1,352
Pendiente de Hill
0,3534
Interva los de confianza al 95 %
LogCI5O
-2,095 a 3,512
Pendiente de Hill
-0,5194 a 0,9464
elquot;,
0,008038 a 325
Bondad del ajuste
elquot;,
0,008038 a 325
Grados de libertad
22
R cuad rada
0,01810
Suma absoluta de cuadrados
2929
Sy.x
36,4
Número de puntos
!Analizados
24
10 La tabla 88 presenta la entrada de datos para Rinovirus de tipo 14.
TABLA 88
Dosis, mM
Respuesta, % de reducción
74 ,365
96 ,200 93,240 93,240
63,742
87 ,980 78,620 61 ,980
53,118
18,720 32,390 0,000
42 ,494
78,620 32,390 0,000
31 ,871
32,390 32,390 0,000
21 ,247
32,390 32,390 87,980
10,624
0,000 61 ,980 0,000
5,312
32,390 0,000 93,240
La tabla 89 presenta la transformación [lag de dosis =X=Log(X)] de datos para el rinovirus de tipo 14. TABLA 89
Dosis, mM
Respuesta, % de reducción
1,871369
96,200 93 ,240 93,240
1,804426
87,9aO 78 ,620 61 ,980
1,725242
18,720 32 ,390 0 ,000
1,628328
78,620 32 ,390 0 ,000
1,503396
32,390 32 ,390 0,000
1,327298
32,390 32 ,390 87,980
1,02628
0,000 61 ,980 0 ,000
0,7252581
32,390 0,000 93,240
5
La tabla 90 presenta la transformación de los datos normalizados para el rinovirus de tipo 14. El porcentaje de reducci6n se normalizÓ del modo siguiente: O % se convierte en O % para todo el conjunto de datos; 96,20 % se convierte en 100 % para todo el conjunto de datos.
10
TABLA 90
Dosis, mM
Respuesta, % de reducción
1,871369
100,000 96,92308 96,92308
1,804426
91,45531 81 ,72558 64,42828
1,725242
19,45946 33,66944 0,000
1,628328
81 ,72558 33,66944 0,000
1,503396
33 ,66944 33,66944 0,000
1,327298
33,66944 33,66944 91,45531
1,026288
0,000 64,42828 0,000
0,7252581
33,66944 0,000 96,92308
El cálculo de la Cisc para el rinovirus de tipo 14 se presenta en la tabla 91 Se determinó que el valor de mejor ajuste de la Cisc para el rinovirus de tipo 14 era 38,16 mM. Los valores de Cisc con intervalos de confianza del 95 % variaron de 13,07 mM a 111 ,4 mM. En vista de la inconsistencia de la reducción de virus (curva en forma de U), se determinaron
15 las Clso de MSM con una aproximación significativa. Los valores de Clgo no pueden calcularse a partir de este conjunto de datos
TABLA 91
log(inhibidor) frente a respuesta normalizada -Pendiente variable
¡Valores de mejor ajuste
LogCI5O
1,582
Pendiente de Hill
0,6280
log(inhibidor) frente a respuesta normalizada -Pendiente variable
!valores de mejor ajuste
CIquot;,
38,16
Error tipico
LogCI50
0,2244
Pendiente de Hill
0,4179
Inlervalos de confianza al 95 %
LogCI50
1,116a2,04
Pendiente de Hill
-0,2387 a 1,495
CIquot;,
13,07 a 111 ,4
Boodad del ajuste
Grados de libertad
22
R cuadrada
0,1044
Suma absoluta de cuadrados
29118
Sy.x
36,36
Número de puntos
!Analizados
24
Ejemplo 24
Efecto de MSM en algas
Este ejemplo muestra los efectos de MSM en la actividad de las algas.
Se examinó el crecimiento de dos especies de eh/orella, eh/orella sarokin;ana, una especie de agua dulce, y eh/aralia minutíssima una especie marina. El estudio midió el efecto en el crecimiento de las algas en un ambiente de agua 10 dulce yagua salada con la adición de MSM, en el que se añadió MSM a las siguientes concentraciooes: O %, 0,25 %, 2 %, 5 %, 10 % Y 20 %. El crecimiento se midió en el dia O, 1,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 Y 10. Las curvas de crecimiento del porcentaje de Iransmitancia de las algas se compararon entre las concentraciones de MSM, con la concentración de MSM al O % como muestra de contral para cada microorganismo. La reserva de MSM en polvo fue suministrada por Bergstrom Nutrition con certificado de análisis. El polvo fue la fórmula microprill, lote n.o 0806809. Todos los medios,
15 agua y reserva de polvo de MSM fueron comprobados respecto de esterilidad antes del estudio. Se compraron los siguientes medios en UTEX Culture Collection of Algae: Medio de agua salada enriquecido y medio de dextrosa Volvox _
Las algas se cultivaron durante 48 en el medio adecuado Se numeró la suspensión inicial para cada alga y se citan
20 como los inóculos iniciales. eh/orella sorokiniana estaba presente a 381 millones de células por mili litro y eh/aralia minutíssima estaba a 19 millones de células por mililitro. Se colocó un mililitro de la solución de algas en 9 mi de medio y se mezclaron mediante agitación vorticiaL Esto se repitió para cada concentración de mezcla de medio y MSM. Los tubos de algas y MSM se incubaron a temperatura ambiente con exposición a la luz. Se prepararon las concentraciones de trabajo de MSM a partir de una sola solución de MSM a120,0 % y se diluyeron consecuentemente
25 con medio para obtener la concenlración final deseada de MSM. Se verific6la esterilidad de todas las soluciones antes de proceder con el estudio. Se ajustó cada dilución de MSM para cada Ofganismo y se analizó por triplicado para cada intervalo de tiempo medido. Las mueslras se midieroo mediante el porcentaje de transmitancia en un especlrómelro UVNIS a una longitud de onda de 750 nm. Se ensayó la reserva de medio respecto del porcentaje de niveles de fondo de transmitancia en cada intervalo de tiempo medido. Los resultados de estos estudios se proporcionan en las tablas
30 92 Y 93 a cootinuación. El porcentaje menOf de transmitancia indicó un elevado factor de crecimiento Estos estudios demuestran que el tratamiento con MSM puede aumentar el crecimiento de algas
o
O
80,3
50, 6
24,5 29,9
~ 3
,•
25,4
•
E
10,6
~
10,5
i5• 6 7
10,0
10,0
8,5 10
7,'
~
•,
•E
u
i5•

Tabla 92 • Crecimiento de Chlorella sorokiniana Concentraciones de MSM
0,5
I 2,5 5 10
47,3
48,7 40,6 35,6 31 ,2
41 ,8
42,5 43,1 31 ,2 31 ,3
29 ,3
37,5 44,9 27,4 29,7
29 ,6
37,5 43,8 21 ,4 28,4
19,0
17,3 26,1 18,2 29,0
12,4
13,5 10,3 15,7 28,7
12,5
13,0 10,9 15,9 27,1
11 ,9
12,5 11 ,0 16,3 27,6
12,2
12,4 11 ,2 17,0 27,1
7,5
7,8 8,' 13,7 76,4
6,'
6,6 6,0 12,8 93,8
Tabla 93 -Crecimiento de Chlorella minutíssima Porcentaje de MSM
20
Medio
19,3
30,2
21 ,9
40,3
24,1
82,4
28,1
91 ,2
31,4
94,5
33,6
93,3
36,8
97,8
40,6
34,3
40,8
32,2
84,8
30,4
96,7
18,8
0,0
0,5 1,0 2,5 5,0 10,0 20,0 Med io
O
72,4 93,5 91 ,1 82,8 68,9 49,6 30,0 105,1
1
74,6 70 ,1 80,5 75,1 87,4 49,2 33,8 105,1
2
51 ,5 45,4 40,0 59,5 76,5 50 ,8 51 ,1 105,1
3
33,4 32 ,1 31 ,0 45,4 62,0 51 ,9 54,8 105,1
•
28,2 27 ,6 27,9 33,6 52,9 52,0 57,3 105,1
5
26,4 26 ,6 26,5 32,4 52,2 51 ,9 57,5 105,1
6
25,6 25,1 25,4 30,0 50,7 54,9 57,4 105,1
7
24,3 23,6 24,4 28,6 51 ,0 56 ,1 57,1 106,4
8
24,1 22 ,8 23,7 27,7 51 ,9 58 ,6 55,8 107,0
9
18,0 20 ,4 21 ,0 23,3 47,1 41,4 45,1 109,3
10
14,9 18 ,9 19,4 21 ,1 44,1 36,7 30,2 112,0
5 Ejemplo 25
La absorción de MSM en formulaciones tópicas se encuentra dentro de los niveles de seguridad reconocidos
Este ejemplo demuestra que la absorción de MSM en formulaciooes tópicas se encuentra dentro de los niveles de 10 seguridad reconocidos
Los conejos New Zealand White, que son un modelo animal aceptado para estudios de absorción dérmica, se usaron para evaluar la absorción y los niveles en sangre resultantes de MSM. Los conejos se obtuvieron a través de Charles River Canadá (Saint-Constant, Quebec). Cinco conejos macho, con edades de 12-13 semanas y con un peso en el 15 intervalo de 2,6 kg a 2,7kg se usaron para los estudios de absorción dérmica. Se usaron conejos debido a la mayor permeabilidad de su piel en comparación con ratas, cerdos o seres humanos. Por lo tanto, el ensayo en conejos es una estrategia más conservativa para la seguridad de productos tópicos para uso humano. El tamaño de los conejos se basó en la restricción ética de recoger más de 6 mllkg de peso corporal de sangre en un periodo de dos semanas. El volumen total de sangre a extraer durante este estudio fue de 10 mi en un solo día. Se usó un animal por grupo para 20 minimizar el número de animales necesarios. Se alojó individualmente a los animales en jaulas de acero inoxidable con ciclos de luz/oscuridad de 12 horas. El ambiente del animala rio se controló a diario (intervalos objetivo: 18-26 QC y humedad relativa del 25-50 %). Se suministró aire fresco a la sala a una velocidad suficiente para proporcionar aproximadamente 15 a 17 cambios del aire ambiental por hora. Se lIevaroo a cabo observaciones clínicas para todos los animales para asegurar que estuviesen en buen estado de salud antes de la dosificación También se llevaron a
25 cabo observaciones de la mortalidad y morbilidad durante el periodo de estudio
Los grupos de tratamiento fueron como se muestra en la tabla 94
a a eesutd10
Tbl94Dñd l
quot;e o
Grupo
Artículo de ensayo Área superficial expuesta Volumen Aplicado Número de animales iempos de extracción d sangre (min)
A
MSM al10 % + agua al 90 % 6cm2 O,5ml 1 O(antes de la dosis), 10, 30, 120.480 minutos
B
DMSO al 50 % + agua al 50 % 6cm2 O,5ml 1 O(antes de la dosis), 10, 30, 120.480 minutos
e
DMSO al 70 % + agua al 30 % 6cm2 O,5ml 1 O(antes de la dosis), 10, 30, 120, 480 minutos
D
MSM al10 % + DMSO al 50 % +agua al 40 % 6cm2 O,5ml 1 O(antes de la dosis), 10, 30, 120.480 minutos
E
MSM al10 % + DMSO al 70 % +agua al 20 % 6cm2 O,5ml 1 O(antes de la dosis), 10, 30, 120.480 minutos
Un día antes del estudio, se rasuró el lomo de cada conejo usando una maquinilla para cabello. Se midió un área de 6cm2 y se marcó para asegurar la equivalencia en la aplicación de las diversas compeosiciones. Se aplicó cada producto pipeteando 0,5 mi de cada composición en el centro de la zona de prueba y se extendió para cubrir toda la zona de prueba. Después de un tiempo de expeosición de 5 minutos, se retiraron las compeosiciones con una toallita, se enjuagó se secó la zona de prueba
Antes de la extracción de sangre, se tranquilizó a los animales con Acepromazina (1 mg/kg) mediante inyección intramuscular en el músculo de la pata trasera derecha, tras lo cual se aplicó crema EMLA (Iidocainafprilocaina) en ambas orejas a lo largo de la arteria del oido. La sangre se extrajo mediante la inserción de una aguja del calibre 21 (con el cubo retirado) en la arteria del oído. Se extrajeron aproximadamente 2 mi de sangre completa en tubos Vacuutainer de 4 mi (Secton Dicllt;inson, Mississauga, ON) que contenían K2EDTA. Se invirtieron los tubos para mezclarlos con el anticoagulante y se almacenaron en refrigeración hasta que se separó el plasma peor centrifugación El plasma se separó de la sangre completa por centrifugación a 3000 x g durante 10 minutos. Se recogió el plasma, se transfirió y se almacellÓ en un vial de criogenización a -70 oC hasta su procesado posterior para el análisis de MSM
Después del tiempo de exposición de 5 minutos a los diversos productos de ensayo (véase la tabla 1), se extrajo sangre tras 10 minutos, 30 minutos, 2 horas y 8 horas. Antes de las extracciones de sangre a las 2 y 8 horas, se aplicó crema EMLA a las orejas (aproximadamente 30 minutos antes de cada una de estas extracciones de sangre) debido a que los efectos anestésicos de la crema EMLA duran aproximadamente 1 a 2 horas. Se usaron tanto EMLA como Acepromazina debido a las consideraciones éticas y para garantizar el bienestar de los animales usados en el estudio
Se cuantificaron las concentraciones de MSM en plasma mediante cromatografía de gases-espectrometría de masas (GCfMS) basándose en métodos establecidos. Brevemente, se mezclaron 450 ¡JI de muestra de plasma con 50 ¡JI de suero salino fisiológico y se agitaron vorticialmente durante 30 segundos. Después de esto, se añadió 1 mi de acetonitrilo (Fisher, grado HPLC) a la mezcla. La solución se agitó vorticialmente de manera vigorosa durante 30 segundos y se centrifugo a 2000 rpm durante 5 minutos. Se introdujo un microlitro del sobrenadante transparente en el sistema de GCfMS (GC1MS QP20108 El, Shimadzu, Kyoto, Japón). El análisis se efectuó en una columna Shimadzu SHR5XLB (O,25mm DI X 30 m de longitud, película 0,25 um, Kyoto, Japón). El tiempo de retención de MSM fue de 6,1-6,3 minutos. El MSM se detectó con MS y se usó mfz 79 (M+.15) para controlar los perfiles SIM de ión de MSM. Se usó helio gaseoso como gas transportador, la presión de entrada fue de O,25kg/cm2, del gas de reposición fue de 30 mlfmin, la temperatura de la columna fue de 80 oC, la temperatura del inyector de 120 oC, la temperatura del separador de 200 oC y la temperatura de la fuente de ionización de 250 oC. La energia de ionización fue de 70eV. Se preparó una gráfica patrón externa con MSM disuelto en acetonitrilo a las siguientes concentraciones: 62,S IJgfml, 31 ,3 IJgfml, 15,6 IJg/ml, 7,8 IJg/ml, 3,9 IJg/ml, 1,9 IJg/ml, 0,98 ¡Jgfml y 0,49 IJgfml. Se calculó la concentración de MSM en muestras de plasma a partir de la pendiente de la curva patrón. La gráfica mejor ajustada fue lineal, con un valor de R2 de 0,998
Se observó a todos los animales antes del inicio del estudio y se comprobó que todos estaban en buen estado de salud. Durante el transcurso del estudio y después del estudio, todos los animales mostraron buena salud. La morbilidad, la mortalidad y las lesiones se evaluaron dos veces al día. Ninguno de los animales mostró morbilidad, mortalidad o lesiones
Los resultados del estudio de absorción se resumen en la tabla 95. Las concentraciones plasmáticas iniciales de MSM (antes de la exposición a articulos de ensayo) variaron de 4,2 ¡Jg/ml y 104,2 ¡Jg/ml. La variación en el valor inicial se encuentra dentro del intervalo de variación normal de las concentraciones naturales de MSM que se han determinado en estudios anteriores. Después de la exposición a los diversos artículos de ensayo, las concentraciones máximas de MSM en plasma medidas fueron menores que o iguales a aproximadamente 140 ¡Jgfml. Esta concentración máxima es el resultado de la exposición a MSM al 10 % + DMSO al 70 % + agua al 20 %. Cuando se corrigió respecto de la variación natural en las concentraciones basales de MSM, se detectó el cambio mayor en MSM en plasma en el grupo de DMSO al 70 % + agua al 30 %. Estos datos sugieren que las variaciones en MSM, ya sean debidas a la absorción
o al metabolismo del DMSO; se encuentran dentro del intervalo natural de concentraciones de MSM
5 Tabla 95: Concentración de MSM en Dlasma desDués de eXDOsición a MSM DMSO
Tratamiento
Punto temporal (minuto)
Concentración de MSM (mgfml)
O
25,6
17,6
MSM a110 % +agua a19D %
3D
16,3
14,0
15,4
O
4 ,2
6 ,9
DMSO al 50 % + agua al 50 %
3D
6 ,9
7,4
12,6
O
56,7
89,0
98,9 DMSO al 70 % + agua al 30 %
128,7
120,2
O
104,2
116,5 MSM al 10 % + DMSO al 50 % + agua al
127,9
40 % 120
128,4
140,4
O
26,8
37,3 MSM al10 % + DMSO al70 % + agua al
30,9
20 % 120
33,9
44,4
En vista de las diversas realizaciones posibles a las que pueden aplicarse los principios de la invención divulgada, debe recOflocerse que las realizaciones ilustradas son únicamente ejemplos preferidos de la invención y no deben interpretarse como limitantes del alcance de la invención. En cambio, el alcance de la invención se define por las 10 siguientes reivindicaciones. Por lo tanto, los presentes inventores reivindican como su invención todo aquello que se encuentre dentro del alcance de estas reivindicaciones

Claims (9)

  1. REIVINDICACIONES
    Un mélodo para polenciar la eficacia de fermentación de un microorganismo para la producción de cerveza, sidra, vino, un biocombustible, pan, un producto lácteo o cualquier combinación de los mismos, comprendiendo el método:
    proporcionar un medio de fermentación que contiene una fuente de carbono y un microorganismo capaz de fermentar y poner en contacto el medio de fermentación con metilsulfonilmetano (MSM), en donde el MSM se proporciona a una concentración del 0,02 % al 5 % en peso del medio de fermentación o a una concentración del 0,02 % al5 % en peso del contenido de humedad del medio de fermentación, en donde el MSM aumenta la eficacia de fermentación del microorganismo en comparación con la eficacia de fermentación en ausencia de MSM.
  2. 2.
    El método de la reivindicación 1, en el que la potenciación de la eficacia de fermentación comprende un aumento de al menos el 50 % en la producción de alcohol, dióxido de carbono o ácido por el microorganismo en presencia de MSM en comparación con la producción de alcohol, dióxido de carbono o ácido en ausencia de MSM.
  3. 3.
    El método de la reivindicación 2, en el que la potenciación de la eficacia de fermentación comprende un aumento de al menos el 50 % en la producción de etanol, metanol o una combinación de los mismos en comparación con la producción de etanol, metanol o una combinación de los mismos en ausencia de MSM.
  4. 4.
    El método de la reivindicación 2, en el que la potenciación de la eficacia de fermentación comprende un aumento de al menos el 50 % en la producción de dióxido de carbono por el microorganismo en presencia de MSM en comparación con la producción de dióxido de carbono en ausencia de MSM, el microorganismo es levadura y el método para potenciar la fermentación es para la producción de pan.
  5. 5.
    El método de la reivindicación 2, en el que la potenciación de la eficacia de fermentación comprende un aumento de al menos el 50 % en la producción de ácido láctico por el microorganismo en presencia de MSM en comparación con la producción de ácido láctico en ausencia de MSM y el método para potenciar la fermentación es para la producción de un producto lácteo.
  6. 6.
    El método de una cualquiera de las reivindicaciones 1-5, en el que la concentración de MSM es del 0,5 %.
    7 El método de una cualquiera de las reivindicaciones 1-6, en el que el medio de fermentación comprende una concentración de cloruro de sodio de menos del 5 % del contenido de humedad total del medio de fermentación
  7. 8. Un método in vitro para potenciar el crecimiento de uno o más microorganismos probióticos, comprendiendo el método:
    poner en contacto unoo más microorganismos probióticos con un medio capaz de soportar el crecimiento de uno o más microorganismos probióticos; y proporcionar metilsulfonilmetano (MSM) al medio a razón de un 0,02 % a un 5 % en peso del medio o en peso de un contenido de humedad del medio, potenciando de este modo el crecimiento in vitro de los uno o más microorganismos en comparación con el crecimiento in vitro de los uno o más microorganismos en ausencia de
    MSM
    9 El método de la reivindicación 8, en el que la concentración de MSM es del 1 % al 3 % del peso del medio o del contenido de humedad del medio.
  8. 10. El método de las reivindicaciones 8 o 9, en el que los uno o más microorganismos probióticos comprenden
    Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus delbrueckii, Bacillus coagulans, Lactobacillus rhamnosus, Bifidobacterium biffdum o cualquier combinación de los mismos.
  9. 11. Un método para potenciar el crecimiento de un microorganismo en una muestra de ensayo diagnóstica, comprendiendo el método:
    poner en contacto la muestra de ensayo diagnóstica que comprende uno o más microorganismos con un medio capaz de soportar el crecimiento de los uno o más microorganimos; proporcionar metilsulfonilmetano (MSM) al medio a una concentración del 0,02 % al 5 % en peso del medio o en peso de un contenido de humedad del medio, potenciando de este modo el crecimiento de los uno o más microorganismos en la muestra de ensayo diagnóstica en comparación con el crecimiento de los uno o más microorganismos en ausencia de MSM
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