WO2017064558A1

WO2017064558A1 - 新規免疫賦活化剤

Info

Publication number: WO2017064558A1
Application number: PCT/IB2016/001543
Authority: WO
Inventors: 和孝宮寺; 智史深谷; 芳美青柳
Original assignee: 大鵬薬品工業株式会社
Priority date: 2015-10-14
Filing date: 2016-10-28
Publication date: 2017-04-20
Also published as: WO2017064558A8

Abstract

この発明は、下記の式（Ｉ）で表される（Ｓ）－Ｎ（４－アミノ－５－（キノリン－３－イル）－６，７，８，９－テトラヒドロピリミド［５，４－ｂ］インドリジン－８－イル）アクリルアミドまたはその塩を有効成分として含有する免疫賦活化剤、および免疫賦活化により改善することができる疾患を予防または治療するための医薬組成物に関する。

Description

新規免疫賦活化剤

　本発明は、（Ｓ）−Ｎ−（４−アミノ−５−（キノリン−３−イル）−６，７，８，９−テトラヒドロピリミド［５，４−ｂ］インドリジン−８−イル）アクリルアミド（本明細書では、以下、この化合物を「化合物（Ｉ）」とも称する）またはその塩を有効成分として含有する、免疫賦活化により改善することができる疾患を予防または治療するための医薬組成物に関する。

　免疫系は、生体内外から起因する様々な疾患に対し、自己を防御する重要なメカニズムである。免疫系の機能低下により、細菌やウイルスによる感染症発生、腫瘍発生、傷病回復の遅延等、疾患への悪影響がもたらされる。従って、免疫系を賦活化する事は、様々な疾患の予防や治療に非常に重要である。従来、免疫賦活化の方法としては、古くは、死菌や抗原投与によるワクチンが知られており、その他にも、ペプチドグリカン、リポ多糖類、キチン、ラクトフェリン、シクロフォスファミド等を用いる方法も知られている。また、近年では、ＩＬ−６やＴＮＦ、ＩＦＮなどのタンパク質を投与することにより免疫系を賦活化するサイトカイン療法、免疫細胞を採取してその活性を惹起した後に生体に戻す免疫細胞療法などが存在する。これらは、特定の感染症や腫瘍の予防または治療に対して効果を発揮している。
　上皮成長因子受容体（Ｅｐｉｄｅｒｍａｌ　Ｇｒｏｗｔｈ　Ｆａｃｔｏｒ　Ｒｅｃｅｐｔｏｒ；ＥＧＦＲ）は、腫瘍の増殖において非常に大きい役割を担っている。現在、様々なＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤が開発され、臨床で利用されている。ＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤の具体例としては、ゲフィチニブ（商品名イレッサ）、エルロチニブ（商品名タルセバ）、アファチニブ（商品名ジオトリフ）等が知られている。これらはＥＧＦＲチロシンキナーゼに高い選択的な阻害作用を有し、特にＥＧＦＲ遺伝子変異を有する被験体において腫瘍選択的に抗腫瘍効果を発揮し、被験体の予後の改善に貢献すると考えられている。さらに最近においては耐性機序のひとつであるＴ７９０Ｍ変異に対して効果を有し、且つ変異型ＥＧＦＲに対して選択性を高めたＡＺ９２９１を代表例とする第三世代型のＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤が開発されている。それら化合物の抗腫瘍効果は、高選択的ＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害のみにより、腫瘍細胞に直接作用することに基づいているといっても過言ではない（非特許文献１および２）。
　化合物（Ｉ）およびその塩は、ＥＧＦＲチロシンキナーゼを高選択的に阻害し、腫瘍の増殖を抑制する効果があることが知られている（特許文献１）。しかし、本発明の化合物、および前述の既知のＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤のいずれについても、免疫賦活化作用を有することは知られていない。

国際公開第２０１３／１２５７０９号

Ｎａｔｕｒｅ　Ｒｅｖ．Ｃａｎｃｅｒ，ｖｏｌ．６，ｐｐ．８０３−８１１（２００６）Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｔｈｏｒａｃｉｃ　Ｏｎｃｏｌｏｇｙ・Ｖｏｌ．３，Ｎｏ．６，Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ　２，Ｊｕｎｅ　２００８

　本発明は、免疫賦活化剤および免疫賦活化により改善することができる疾患を予防または治療するための医薬組成物を提供することを目的とする。
　本発明はまた、医薬組成物による免疫賦活化剤および免疫賦活化により改善することができる疾患を予防または治療する方法を提供することを目的とする。
　本発明者らは、化合物（Ｉ）の薬理作用の検討を重ねてきた結果、同化合物が免疫系を賦活化する作用を有することを見出し、本発明を完成した。本発明の要旨は以下のとおりである。
（１）（Ｓ）−Ｎ−（４−アミノ−５−（キノリン−３−イル）−６，７，８，９−テトラヒドロピリミド［５，４−ｂ］インドリジン−８−イル）アクリルアミドまたはその塩を含む、免疫賦活化剤。
（２）Ｔ細胞を賦活化する、（１）に記載の免疫賦活化剤。
（３）ＩＬ−２産生を誘導する、（１）に記載の免疫賦活化剤。
（４）ＩＦＮ産生を誘導する、（１）に記載の免疫賦活化剤。
（５）免疫細胞の遊走を誘導する、（１）に記載の免疫賦活化剤。
（６）免疫細胞の病変部への浸出・集積を誘導する、（１）に記載の免疫賦活化剤。
（７）（Ｓ）−Ｎ−（４−アミノ−５−（キノリン−３−イル）−６，７，８，９−テトラヒドロピリミド［５，４−ｂ］インドリジン−８−イル）アクリルアミドまたはその塩を含む医薬組成物を被験体に投与することを含む、被験体において免疫を賦活化する方法。
（８）（Ｓ）−Ｎ−（４−アミノ−５−（キノリン−３−イル）−６，７，８，９−テトラヒドロピリミド［５，４−ｂ］インドリジン−８−イル）アクリルアミドまたはその塩を含む、免疫賦活化により感染症を予防または治療するための医薬組成物。
（９）感染症が寄生虫感染である、（８）に記載の医薬組成物。
（１０）寄生虫が、トリパノソーマ原虫、マラリア原虫、およびトキソプラズマからなる群から選択される、（９）に記載の医薬組成物。
（１１）感染症が細菌感染である、（８）に記載の医薬組成物。
（１２）細菌が、肺炎球菌、結核菌、黄色ブドウ球菌、炭疽菌、コレラ菌、およびピロリ菌からなる群から選択される、（１１）に記載の医薬組成物。
（１３）感染症がウイルス感染である、（８）に記載の医薬組成物。
（１４）ウイルスが、ヒトＴ細胞白血病ウイルス、パピローマウイルス、エプスタインバールウイルス、サイトメガロウイルス、インフルエンザウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、およびＣ型肝炎ウイルスからなる群から選択される、（１３）に記載の医薬組成物。
（１５）（Ｓ）−Ｎ−（４−アミノ−５−（キノリン−３−イル）−６，７，８，９−テトラヒドロピリミド［５，４−ｂ］インドリジン−８−イル）アクリルアミドまたはその塩を含む医薬組成物を被験体に投与することを含む、被験体において免疫賦活化することによる、感染症を予防または治療する方法。
（１６）（Ｓ）−Ｎ−（４−アミノ−５−（キノリン−３−イル）−６，７，８，９−テトラヒドロピリミド［５，４−ｂ］インドリジン−８−イル）アクリルアミドまたはその塩を含む、免疫賦活化により免疫不全疾患を治療するための医薬組成物。
（１７）免疫不全疾患がＨＩＶ感染によるものである、（１６）に記載の医薬組成物。
（１８）（Ｓ）−Ｎ−（４−アミノ−５−（キノリン−３−イル）−６，７，８，９−テトラヒドロピリミド［５，４−ｂ］インドリジン−８−イル）アクリルアミドまたはその塩を含む医薬組成物を被験体に投与することを含む、被験体において免疫賦活化することによる、免疫不全疾患を治療する方法。
（１９）（Ｓ）−Ｎ−（４−アミノ−５−（キノリン−３−イル）−６，７，８，９−テトラヒドロピリミド［５，４−ｂ］インドリジン−８−イル）アクリルアミドまたはその塩を含む、免疫賦活化により、加齢に伴う免疫機能減弱に起因する疾患を予防または治療するための医薬組成物。
（２０）免疫機能減弱に起因する疾患が肺炎である、（１９）に記載の医薬組成物。
（２１）（Ｓ）−Ｎ−（４−アミノ−５−（キノリン−３−イル）−６，７，８，９−テトラヒドロピリミド［５，４−ｂ］インドリジン−８−イル）アクリルアミドまたはその塩を含む医薬組成物を被験体に投与することを含む、被験体において免疫賦活化することによる、加齢に伴う免疫機能減弱に起因する疾患を予防または治療する方法。
（２２）（Ｓ）−Ｎ−（４−アミノ−５−（キノリン−３−イル）−６，７，８，９−テトラヒドロピリミド［５，４−ｂ］インドリジン−８−イル）アクリルアミドまたはその塩を含む、免疫賦活化によりウイルス関連腫瘍を予防または治療するための医薬組成物。
（２３）ウイルス関連腫瘍が、バーキットリンパ腫、肝細胞癌、子宮頸癌、成人Ｔ細胞白血病、カポジ肉腫、頭頸部がんである、（２２）に記載の医薬組成物。
（２４）（Ｓ）−Ｎ−（４−アミノ−５−（キノリン−３−イル）−６，７，８，９−テトラヒドロピリミド［５，４−ｂ］インドリジン−８−イル）アクリルアミドまたはその塩を含む医薬組成物を被験体に投与することを含む、被験体において免疫賦活化することによる、ウイルス関連腫瘍を予防または治療する方法。
（２５）（Ｓ）−Ｎ−（４−アミノ−５−（キノリン−３−イル）−６，７，８，９−テトラヒドロピリミド［５，４−ｂ］インドリジン−８−イル）アクリルアミドまたはその塩を含む、免疫に作用することにより疾病を予防または治療する医薬の作用を増強するための医薬組成物。
（２６）感染症予防ワクチンの作用を増強するための、（２５）に記載の医薬組成物。
（２７）抗ウイルス剤の作用を増強するための、（２５）に記載の医薬組成物。
（２８）抗ＰＤ−１抗体または抗ＰＤ−Ｌ１抗体の作用を増強するための、（２５）に記載の医薬組成物。
（２９）がんワクチンの作用を増強するための、（２５）に記載の医薬組成物。
（３０）抗腫瘍免疫応答誘導剤の作用を増強するための、（２５）に記載の医薬組成物。
（３１）抗腫瘍免疫応答誘導剤が抗ＰＤ−１抗体または抗ＰＤ−Ｌ１抗体である、（３０）に記載の医薬組成物。
（３２）抗腫瘍免疫応答誘導剤が抗ＰＤ−１抗体である、（３１）に記載の医薬組成物。
（３３）抗腫瘍免疫応答誘導剤が抗ＰＤ−Ｌ１抗体である、（３１）に記載の医薬組成物。
（３４）（Ｓ）−Ｎ−（４−アミノ−５−（キノリン−３−イル）−６，７，８，９−テトラヒドロピリミド［５，４−ｂ］インドリジン−８−イル）アクリルアミドまたはその塩を含む医薬組成物を被験体に投与することを含む、被験体において免疫に作用することにより疾病を予防または治療する医薬の作用を増強する方法。
　本発明により、（Ｓ）−Ｎ−（４−アミノ−５−（キノリン−３−イル）−６，７，８，９−テトラヒドロピリミド［５，４−ｂ］インドリジン−８−イル）アクリルアミドまたはその塩を有効成分として含有する、免疫賦活化剤、および免疫賦活化により改善することができる疾患を予防または治療するための新規医薬組成物が提供される。また、本発明により、各種感染症、免疫不全疾患、および腫瘍などの新たな治療法が提供される。
　本明細書は本願の優先権の基礎となる日本国特許出願番号２０１５−２０３２８２号および日本国特許出願番号２０１６−１４８８５４号の開示内容を包含する。

実施例１における、抗ＣＤ３抗体および抗ＣＤ２８抗体添加濃度を一定とし、化合物（Ｉ）添加濃度を可変させたときの、マウス脾細胞が産生した培養上清中のＩＬ−２の濃度を示す。実施例１における、抗ＣＤ３抗体添加濃度を可変させ、抗ＣＤ２８抗体添加濃度を一定としたときの、化合物（Ｉ）添加の有無による、マウス脾細胞が産生した培養上清中のＩＬ−２の濃度を示す。実施例２における、化合物（Ｉ）を添加したとき、またはＡＺＤ９２９１を添加したときの、ヒト末梢血単核球細胞が産生した培養上清中のＩＬ−２の濃度の推移を示す。実施例３における、化合物（Ｉ）、ＡＺＤ９２９１またはエルロチニブを添加したときの、混合リンパ球反応を誘導した際の３Ｈ−Ｔｈｄ取り込み量を示す。実施例４における、各化合物を添加したときの、ＣＤ４およびＣＤ８のそれぞれが陽性である細胞のＣＦＳＥ量をフローサイトメトリーにより解析した結果を示す。実施例５における、抗ＰＤ−１抗体または化合物（Ｉ）を添加したときの、ＣＤ４陽性細胞、ＣＤ８陽性細胞、およびＣＤ４およびＣＤ８陰性かつＮＫ１．１陽性の細胞の相対数を算出した結果を示す。実施例６における、抗ＰＤ−１抗体および／または化合物（Ｉ）を添加したときの、ＣＤ４陽性かつＣＤ６９陽性の細胞、およびＣＤ４陽性かつＣＤ４４陽性かつＣＤ６２Ｌ陰性の細胞の相対数を算出した結果を示す。実施例６における、抗ＰＤ−１抗体および／または化合物（Ｉ）を添加したときの、ＣＤ４陽性細胞のＣＤ４４発現量およびＣＤ４陽性細胞のＣＤ６２Ｌ発現量を算出した結果を示す。実施例７における、各化合物を添加した群の、無処置群に対するヒト末梢血単核球が産生したサイトカイン濃度の相対比を示す。実施例８における、化合物（Ｉ）を投与したときのマウスメラノーマの移植１４日目（投薬１５日目）の各投与群の肺転移結節数を示す。実施例９における、抗ＰＤ−１抗体または化合物（Ｉ）を投与したときの、ＭＣ３８腫瘍株の各投与群の腫瘍容積の経時変化を示す。実施例１０における、抗ＰＤ−１抗体、抗ＰＤ−Ｌ１抗体もしくは化合物（Ｉ）を単独で、または抗ＰＤ−１抗体と抗ＰＤ−Ｌ１抗体のいずれかと化合物（Ｉ）を組み合わせて投与したときの、Ｋ１７３５Ｍ２腫瘍株の各個体の腫瘍容積の経時変化を示す。実施例１１における、抗ＰＤ−１抗体もしくは化合物（Ｉ）、またはそれらの組み合わせを投与したときの、ＭＣ３８腫瘍株の各投与群の腫瘍容積の経時変化を示す。実施例１１においてサンプリングした腫瘍における、ＣＤ３、ＣＤ４およびＣＤ８遺伝子の発現の相対比を示す。実施例１１においてサンプリングした腫瘍における、ＮＫ１．１、ＩＬ−２およびＩＦＮ−γ遺伝子の発現の相対比を示す。実施例１１においてサンプリングした腫瘍における、Ｐｅｒｆｏｒｉｎ、Ｇｒａｎｚｙｍｅ　ＢおよびＣＤ６９遺伝子の発現の相対比を示す。

　化合物（Ｉ）である（Ｓ）−Ｎ−（４−アミノ−５−（キノリン−３−イル）−６，７，８，９−テトラヒドロピリミド［５，４−ｂ］インドリジン−８−イル）アクリルアミドは、以下の構造式（Ｉ）により表される化合物である。化合物（Ｉ）は公知化合物であり、その製造方法は、特許文献１として挙げた国際公開第２０１３／１２５７０９号に開示されている。

　化合物（Ｉ）は、遊離形態または塩形態のいずれであってもよい。塩形態である場合は結晶であってもよく、その場合、結晶形は単一であっても多形混合物であってもよく、また溶媒和物（例えば水和物）であっても無溶媒和物であってもよい。塩形態としては酸付加塩が挙げられ、具体例としては、塩酸、硫酸、硝酸、リン酸および過塩素酸塩などの無機酸塩、メタンスルホン酸、イセチオン酸、ベンゼンスルホン酸およびｐ−トルエンスルホン酸などのスルホン酸塩、ならびにギ酸、マレイン酸、フマル酸、酒石酸、クエン酸、アスコルビン酸、トリフルオロ酢酸などのその他の有機酸塩が挙げられる。
　化合物（Ｉ）およびその塩は、被験体としてのヒトおよびその他の哺乳動物、例えばサル、マウス、ラット、ウサギ、イヌ、ネコ、ウシ、ウマ、ブタ、ヒツジなど、好ましくはヒトに対して免疫賦活化作用を有する。本明細書において「免疫賦活化作用」とは、免疫細胞を活性化することを意味し、すなわち、免疫細胞の***や分化を誘導し、各種サイトカインの産生を誘導し、免疫細胞を遊走させ、免疫細胞を病変部（すなわち、病的変化の起こっている部分をいう。たとえば腫瘍組織、感染組織、炎症組織などである。）に浸出及び／又は集積させ、或いは、自己由来の異物的成分または外来性の異物の排除機能の亢進することを意味する。化合物（Ｉ）およびその塩は、免疫細胞の中でも特にＴ細胞を賦活化する作用を有する。誘導されるサイトカインとしては、ＩＬ−１β、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ−１７、ＩＬ−２３、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＦＮ−γ、ＭＣＦＡ、ＭＩＰ−１α、ＭＩＰ−１β、ＴＮＦ−αが挙げられ、特にＩＬ−２である。また、化合物（Ｉ）およびその塩は、特に末梢血単核球に対してサイトカインの産生を誘導する作用を有し、サイトカインの中でも特にＩＬ−２および／またはＩＦＮの産生を誘導する。また、化合物（Ｉ）およびその塩は、免疫細胞を遊走させる。また、化合物（Ｉ）およびその塩は、免疫細胞の遊走・浸出及び／又は集積を誘導する。免疫細胞の遊走、病変部への浸出及び／又は集積は、病変部の組織染色や、病変部組織においての免疫細胞に特徴的な遺伝子（たとえばＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＮＫ１．１、ＩＬ−２、ＩＦＮ−γ、Ｐｅｒｆｏｒｉｎ、Ｇｒａｎｚｙｍｅ　Ｂ、ＣＤ６９等）の発現の変化によって測定できる。本発明は、化合物（Ｉ）またはその塩を含む免疫賦活化剤、および免疫賦活化剤としての化合物（Ｉ）またはその塩、ならびに化合物（Ｉ）またはその塩の有効量を、予防または治療を必要とする被験体に投与することを含む、当該被験体における免疫賦活化法に関する。
　化合物（Ｉ）およびその塩の免疫賦活化作用によれば、化合物（Ｉ）は各種の感染症、免疫不全疾患、加齢に伴う免疫機能減弱に起因する疾患、ウイルス関連腫瘍を予防または治療することができる。
　化合物（Ｉ）およびその塩が予防または治療することができる感染症の具体例としては、寄生虫感染（例えば、トリパノソーマ原虫、マラリア原虫、およびトキソプラズマからなる群から選択される寄生虫による感染）、細菌感染（例えば、肺炎球菌、結核菌、黄色ブドウ球菌、炭疽菌、コレラ菌、マイコプラズマ、およびピロリ菌（ヘリコバクターピロリ）からなる群から選択される細菌による感染）、ならびにウイルス感染（ヒトＴ細胞白血病ウイルス（ＨＴＬＶ−１）、パピローマウイルス（ＨＰＶ）、エプスタインバールウイルス（ＥＢＶ）、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、インフルエンザウイルス（ＦＬＵ）、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）、ヘルペスウイルス、およびＣ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）からなる群から選択されるウイルスによる感染）が挙げられる。本発明は、別の側面において、化合物（Ｉ）またはその塩を含む、免疫賦活化により感染症を予防または治療するための医薬組成物、および免疫賦活化により感染症を予防または治療するための化合物（Ｉ）またはその塩、ならびに化合物（Ｉ）またはその塩の有効量を、予防または治療を必要とする被験体に投与することを含む、当該被験体における感染症を免疫賦活化により予防または治療する方法に関する。
　また、化合物（Ｉ）およびその塩が治療することができる免疫不全疾患の具体例としては、先天性免疫不全疾患および後天性免疫疾患、とりわけヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）感染による後天性免疫不全が挙げられる。従って、本発明は、別の側面において、化合物（Ｉ）またはその塩を含む、免疫賦活化により免疫不全疾患を治療するための医薬組成物、および免疫賦活化により免疫不全疾患を治療するための化合物（Ｉ）またはその塩、ならびに化合物（Ｉ）またはその塩の有効量を、治療を必要とする被験体に投与することを含む、当該被験体における免疫不全疾患を免疫賦活化により治療する方法に関する。
　また、化合物（Ｉ）およびその塩が予防又は治療できる加齢に伴う免疫機能減弱に起因する疾患の具体例としては、肺炎が挙げられる。従って、本発明は、別の側面において、化合物（Ｉ）またはその塩を含む、免疫賦活化により加齢に伴う免疫機能減弱に起因する疾患を予防または治療するための医薬組成物、および免疫賦活化により加齢に伴う免疫機能減弱に起因する疾患を予防または治療するための化合物（Ｉ）またはその塩、ならびに化合物（Ｉ）またはその塩の有効量を、予防または治療を必要とする被験体に投与することを含む、当該被験体における加齢に伴う免疫機能減弱に起因する疾患を免疫賦活化により予防または治療する方法に関する。
　また、化合物（Ｉ）およびその塩が予防または治療することができるウイルス関連腫瘍、すなわちウイルス感染によって発症する腫瘍の具体例としては、バーキットリンパ腫、肝細胞癌、子宮頸癌、成人Ｔ細胞白血病、カポジ肉腫、頭頸部がんが挙げられる。従って、本発明は、別の側面において、化合物（Ｉ）またはその塩を含む、免疫賦活化によりウイルス関連腫瘍を予防または治療するための医薬組成物、および免疫賦活化によりウイルス関連腫瘍を予防または治療するための化合物（Ｉ）またはその塩、ならびに化合物（Ｉ）またはその塩の有効量を、予防または治療を必要とする被験体に投与することを含む、当該被験体におけるウイルス関連腫瘍を免疫賦活化により予防または治療する方法に関する。
　また、化合物（Ｉ）およびその塩の免疫賦活化作用によれば、免疫に作用することにより疾病を予防または治療する医薬の効果を増強することができる。免疫に作用することにより疾病を予防または治療する医薬の具体例としては、感染症予防ワクチン（例えば、ジフテリア、破傷風、百日咳などの感染症予防ワクチン）、抗ウイルス剤（例えば、インフルエンザワクチン、Ｂ型肝炎ワクチン、インターフェロンα製剤、インターフェロンβ製剤、テラプレビル、リバビリン、シメプレビル、ビダラビン、アシクロビル、ガンシクロビル、バルガンシクロビル、ヌクレオシドアナログ逆転写酵素インヒビター（ＮＲＴＩ）（例えば、ＡＺＴ（ジドブジン）、ｄｄＩ（ジダノシン）、ｄｄＣ（ザルシタビン）、ｄ４Ｔ（スタブジン）、または３ＴＣ（ラミブジン））、非ヌクレオシド逆転写酵素インヒビター（ＮＮＲＴＩ）（例えば、ネビラピンまたはデラビルジン）、プロテアーゼインヒビター（サキナビル、リトナビル、インジナビル、またはネルフィナビル））、抗腫瘍免疫応答誘導剤（例えば、免疫賦活化作用を有するＣＤ２８様ファミリーのメンバーまたはＣＤ２８様ファミリーリガンドのメンバー等の調節剤、具体的には、プログラム細胞死−１（Ｐｒｏｇｒａｍｍｅｄ　Ｄｅａｔｈ−１；ＰＤ−１）抑制剤、プログラム細胞死−Ｌ１（Ｐｒｏｇｒａｍｍｅｄ　Ｄｅａｔｈ−Ｌｉｇａｎｄ１；ＰＤ−Ｌ１）抑制剤、プログラム細胞死−Ｌ２（Ｐｒｏｇｒａｍｍｅｄ　Ｄｅａｔｈ−Ｌｉｇａｎｄ２；ＰＤ−Ｌ２）抑制剤、抗ＣＴＬＡ−４抑制剤、抗ＢＴＬＡ抑制剤、抗ＣＤ２８調節剤、抗ＩＣＯＳ調節剤、抗ＩＣＯＳ−Ｌ調節剤、抗Ｂ７−１調節剤、抗Ｂ７−２調節剤、抗Ｂ７−Ｈ３調節剤、または抗Ｂ７−Ｈ４調節剤、より具体的には、抗ＰＤ−１抗体、ＰＤ−１ペブチド阻害剤、抗ＰＤ−１　ＲＮＡｉ、抗ＰＤ−１アンチセンスＲＮＡ、抗ＰＤ−Ｌ１抗体、ＰＤ−Ｌ１ペプチド阻害剤、抗ＰＤ−Ｌ１ＲＮＡｉ、抗ＰＤ−Ｌ１アンチセンスＲＮＡ、抗ＰＤ−Ｌ２抗体、ＰＤ−Ｌ２ペプチド阻害剤、抗ＰＤ−Ｌ２ＲＮＡｉ、抗ＰＤ−Ｌ２アンチセンスＲＮＡ、抗ＣＴＬＡ４抗体、中でも、抗ＰＤ−１抗体および抗ＰＤ−Ｌ１抗体）、がんワクチン（例えば、シプロイセルＴ）が挙げられる。従って、本発明は、別の側面において、化合物（Ｉ）またはその塩を含む、免疫に作用することにより疾病を予防または治療する医薬の作用を増強するための医薬組成物、および免疫に作用することにより疾病を予防または治療する医薬の作用を増強するための化合物（Ｉ）またはその塩、ならびに化合物（Ｉ）またはその塩の有効量を、免疫に作用することにより疾病を予防または治療する医薬と併用して被験体に投与することを含む、当該医薬の作用の増強方法に関する。
　本発明はまた、上記で挙げた免疫賦活化剤および医薬組成物の製造における、化合物（Ｉ）またはその塩の使用にも関する。
　本発明の免疫賦活化剤および医薬組成物は、必要に応じて製薬上許容される希釈剤もしくは賦形剤、または補助剤を含有していてもよく、投与形態に適した剤型に製剤されていてもよい。剤型の具体例としては、経口剤（例えば、錠剤、丸剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、液剤など）、注射剤、坐剤、軟膏剤、貼付剤などが挙げられる。いずれの剤型も公知の製剤方法により製造することができる。本発明の免疫賦活化剤および医薬組成物は、投与が容易である経口剤であることが好ましい。補助剤の具体例としては、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、着色剤、溶解補助剤、矯味・矯臭剤、懸濁化剤、等張化剤、緩衝剤、無痛化剤などが挙げられる。また、必要に応じて、防腐剤、抗酸化剤、着色剤、甘味剤、安定化剤などの製剤添加物を含有していてもよい。
　本発明の免疫賦活化剤および医薬組成物の投与量は、その投与目的、投与対象である被験体の年齢、性別および体重、ならびに投与経路によっても異なるが、例えば体重５０ｋｇの成人の場合、化合物（Ｉ）またはその塩として、１日あたり０．０５~５０００ｍｇ、特に０．１~１０００ｍｇの範囲の投与量とすることが好ましい。投与頻度は、例えば２日に１回、１日１回、または１日あたり２~３回とすることができる。
　本発明に係る化合物（Ｉ）およびその塩は、後述する実施例により示されるように免疫賦活化作用を有し、ヒトおよび他の哺乳動物における生体機能の調節、保健強壮、自己由来の異物的成分または外来性の異物の排除機能の亢進に寄与する。

　以下、実施例を用いて本発明をより詳細に説明するが、本発明はこれら実施例に限定されるものではない。
（実施例１）抗ＣＤ３抗体および抗ＣＤ２８抗体刺激マウス脾細胞における化合物（Ｉ）によるサイトカイン産生誘導
　マウス脾臓を摘出し、フロストスライドグラスで破砕後、溶血処理を行い、脾細胞を調製した。これを完全培地（ＲＰＭＩ−１６４０、１０％熱不活性化ＦＢＳ、１００Ｕ／ｍＬペニシリン、１００μｇ／ｍＬストレプトマイシン、５５μＭ２−メルカプトエタノール）を用いて２×１０^６ｃｅｌｌｓ／ｍＬに調製し、抗ＣＤ３抗体を終濃度３μｇ／ｍＬとなるように、および抗ＣＤ２８抗体を終濃度０．５μｇ／ｍＬとなるようにそれぞれ添加し、さらに化合物（Ｉ）を各終濃度になるように添加した。この培養液を２００μＬ／ｗｅｌｌで９６ウェルプレートへ播種後、３７℃、５％ＣＯ_２のインキュベーター内で２日間培養した。培地上清を回収し、そこに含まれるＩＬ−２の濃度を、抗ｍＩＬ−２抗体を用いたＥＬＩＳＡ法で測定した。
　また、同様にして、抗ＣＤ３抗体の終濃度を可変とし、抗ＣＤ２８抗体を終濃度０．５μｇ／ｍＬとなるように添加し、さらに化合物（Ｉ）を終濃度０．０μＭまたは０．１μＭとなるように添加して培養し、培養上清中のＩＬ−２濃度を測定した。
　図１は、抗ＣＤ３抗体および抗ＣＤ２８抗体の濃度を一定とし、化合物（Ｉ）の濃度を可変とした場合の、培養上清中のマウス脾細胞が産生したＩＬ−２の濃度の推移を示したグラフである。グラフに示されるように、化合物（Ｉ）の添加量の増加に従ってマウス脾細胞が産生したＩＬ−２の濃度が増加した。
　図２は、抗ＣＤ３抗体の濃度を可変とし、抗ＣＤ２８抗体の濃度を一定とした場合の、化合物（Ｉ）の添加の有無による、培養上清中のマウス脾細胞が産生したＩＬ−２の濃度の差を示すグラフである。グラフに示されるように、化合物（Ｉ）を添加した場合では抗ＣＤ３抗体の刺激に伴ってＩＬ−２産生が誘導されたが、化合物（Ｉ）を添加しない場合ではその誘導は弱かった。
　これらの結果から、化合物（Ｉ）がマウス脾細胞においてＩＬ−２産生の誘導を増強することが示され、化合物（Ｉ）が免疫賦活化作用を有することが示された。
（実施例２）ヒト末梢血単核球における化合物（Ｉ）によるサイトカイン産生誘導
　ヒト末梢血単核球を、ヒト完全培地（ＲＰＭＩ−１６４０、１０％熱不活性化ＦＢＳ、１００Ｕ／ｍＬペニシリン、１００μｇ／ｍＬストレプトマイシン）を用いて１×１０^６ｃｅｌｌｓ／ｍＬの細胞懸濁液に調製した。これにフィトヘマグルチニンＭ（ＰＨＡ−Ｍ）を終濃度５μｇ／ｍＬとなるように添加し、さらに化合物（Ｉ）またはＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤であるＡＺＤ９２９１を各終濃度になるように添加した。この培養液を２００μＬ／ｗｅｌｌで９６ウェルプレートへ播種後、３７℃、５％ＣＯ_２のインキュベーター内で３日間培養した。培地上清を回収し、そこに含まれるＩＬ−２濃度を、抗ｈＩＬ−２抗体を用いたＥＬＩＳＡ法で測定した。
　図３は、ヒト末梢血単核球細胞が産生した培養上清中のＩＬ−２の濃度の推移を、化合物（Ｉ）を添加した場合およびＡＺＤ９２９１を添加した場合のそれぞれについて示したグラフである。グラフに示されるように、化合物（Ｉ）はヒト末梢血単核球細胞においてＩＬ−２産生を誘導したのに対し、化合物（Ｉ）と同じＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤であるＡＺＤ９２９１にはそのようなＩＬ−２産生誘導作用はほとんどみられなかった。このことから、化合物（Ｉ）が免疫賦活化作用を有すること、およびその作用はＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤に共通するものではなく、化合物（Ｉ）に固有のものであることが示された。
（実施例３）混合リンパ球反応における化合物（Ｉ）によるＴ細胞の賦活化
　混合リンパ球反応（Ｍｉｘｅｄ　Ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ　Ｒｅａｃｔｉｏｎ；ＭＬＲ）は、例えばＪ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１２７（５）：８７９−９０，１９６８により知られているＴ細胞賦活化の代表的な実験手法である。この反応を用いて化合物（Ｉ）のＴ細胞賦活化への影響を検討した。
　Ｃ５７ＢＬ／６ＮマウスおよびＢＡＬＢ／ｃマウスからそれぞれ脾臓を摘出し、フロストスライドグラスで破砕後、溶血処理を行い、各脾細胞を調製した。調製したＣ５７ＢＬ／６Ｎマウス脾細胞およびＢＡＬＢ／ｃマウス脾細胞を、完全培地（ＲＰＭＩ−１６４０、１０％熱不活性化ＦＢＳ、１００Ｕ／ｍＬペニシリン、１００μｇ／ｍＬストレプトマイシン、５５μＭ２−メルカプトエタノール）を用いて調製した。ＢＡＬＢ／ｃマウス脾細胞については３０ＧｙのＸ線照射を行って増殖活性を失わせた。これら異系マウスの脾細胞を終濃度１×１０^５ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌずつ添加して混合し（Ａｌｌｏｇｅｎｅｉｃ；Ａｌｏ）、さらに各濃度に調製した化合物（Ｉ）、またはＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤であるＡＺＤ０９２９１もしくはエルロチニブを添加した。なお、対照として、Ｃ５７ＢＬ／６Ｎマウス脾細胞同士を混合したもの（Ｓｙｎｇｅｎｅｉｃ；Ｓｙｎ）も併せて用意した。これらの培養液を２００μＬ／ｗｅｌｌで９６ウェルプレートへ播種後、３７℃、５％ＣＯ_２のインキュベーター内で３日間培養した。培養開始２日目にトリチウム標識チミジン（３Ｈ−Ｔｈｄ）を添加した。取り込まれた３Ｈ−Ｔｈｄ量を、液体シンチレーションカウンターを用いて測定した。
　図４は、混合リンパ球反応を誘導した際の３Ｈ−Ｔｈｄ取り込み量を、各化合物および濃度ごとに示したグラフである。取り込まれた３Ｈ−Ｔｈｄの量は、混合リンパ球反応によって増殖したＴ細胞の指標となる。図４のグラフに示されるように、化合物（Ｉ）は、混合リンパ球反応により惹起されるＣ５７ＢＬ／６Ｎマウス由来のＴ細胞の増殖を誘導した。一方、他のＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤にはそのような活性はみられなかった。この結果から、化合物（Ｉ）が免疫賦活化作用を有すること、およびその作用はＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤に共通するものではなく、化合物（Ｉ）に固有のものであることが示された。
（実施例４）化合物（Ｉ）によるＴ細胞の増殖惹起
　マウス脾臓を摘出し、フロストスライドグラスで破砕後、溶血処理を行い、脾細胞を調製した。これを５ｍＬの染色バッファー（０．５％ＢＳＡ、２ｍＭ　ＥＤＴＡ、ＰＢＳ（−））に懸濁し、５μＭ　ＣＦＳＥ（５−カルボキシフルオレセインスクシンイミジルエステル）で染色した。染色後、氷冷した完全培地（ＲＰＭＩ−１６４０）を用いて洗浄した。このようにＣＦＳＥで染色した脾細胞を、完全培地（ＲＰＭＩ−１６４０、１０％熱不活性化ＦＢＳ、１００Ｕ／ｍＬペニシリン、１００μｇ／ｍＬストレプトマイシン、５５μＭ２−メルカプトエタノール）を用いて１×１０^６ｃｅｌｌｓ／ｍＬに調製し、抗ＣＤ３抗体１μｇ／ｍＬ、および抗ＣＤ２８抗体１μｇ／ｍＬ添加し、さらに各濃度に調製した化合物（Ｉ）、またはＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤であるＡＺＤ０９２９１、エルロチニブ、Ｃｏ１６８６（ロシレチニブ）、イブルチニブ、スニチニブ、もしくはダサチニブを０．１μＭの濃度で添加した。なお、対照としてＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤を加えないものも併せて用意した。これらの培養液を２００μＬ／ｗｅｌｌで９６ウェルプレートへ播種後、３７℃、５％ＣＯ_２のインキュベーター内で３日間培養した。細胞を回収し、抗ＣＤ４抗体および抗ＣＤ８抗体を用いて染色し、ＣＤ４およびＣＤ８のそれぞれが陽性である細胞のＣＦＳＥ量をフローサイトメトリーにより解析した。図５にその解析結果を示す。
　ＣＦＳＥは、一旦細胞内に取り込まれた後は細胞内の量が一定となる性質を有する。従って、細胞***が生じると細胞当たりのＣＦＳＥ量は半減するので、フローサイトメトリーによる解析では、細胞***が進行するほどＣＦＳＥ染色強度が減弱し、グラフが左側（低値側）へシフトする。図５に示されるように、化合物（Ｉ）を添加したサンプルでは、ＣＤ４陽性細胞およびＣＤ８陽性細胞のそれぞれの細胞あたりのＣＦＳＥ量が減少しており、それらの細胞の増殖が増強したことを示していた。一方、他のＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤を添加したサンプルでは、そのような細胞増殖を増強する作用はみられなかった。なお、ダサニチブを添加した群では細胞死が誘導された。この結果から、化合物（Ｉ）が免疫賦活化作用を有すること、およびその作用は他のＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤に共通するものではなく、化合物（Ｉ）に固有のものであることが示された。
（実施例５）ＯＶＡ発現マウス胸腺腫細胞株皮下移植モデルにおける末梢血免疫細胞解析
　ＯＶＡ発現マウス胸腺腫細胞株（ＥＧ．７−ＯＶＡ）の細胞懸濁液を、ＰＢＳ（−）および５０％マトリゲルを用いて調製し、１ｘ１０^４ｃｅｌｌｓ／ｍｏｕｓｅで細胞株と同系のＣ５７ＢＬ／６ｎマウス皮下に注射して移植した。移植後１日目に体重に基づいて群分けした後、化合物（Ｉ）を５０ｍｇ／ｋｇで、または抗ＰＤ−１抗体を１００μｇ／ｍｏｕｓｅで投与した。なお、対照としてそのいずれも投与しない群も併せて用意した。移植後１４日目に末梢血を採取し、免疫細胞表面マーカーに対する抗体を用いてフローサイトメトリーによる解析を行い、全体に含まれるＣＤ４陽性細胞、ＣＤ８陽性細胞、およびＣＤ４およびＣＤ８陰性かつＮＫ１．１陽性の細胞の相対数を算出した。図６にその解析結果を示す。化合物（Ｉ）を投与した群では、いずれの細胞においても、対照群および抗ＰＤ−１抗体投与群と比較して細胞数が増加していた。この結果から、化合物（Ｉ）がｉｎ　ｖｉｖｏにおいても免疫細胞サブセットの数を増加させる活性を有し、免疫賦活化作用を有することが示された。
（実施例６）マウス大腸癌細胞株皮下移植モデルにおける脾細胞中の免疫細胞解析
　マウス大腸癌細胞株（ｃｏｌｏｎ２６）の細胞懸濁液を、ＰＢＳ（−）および５０％マトリゲルを用いて調製し、２×１０^３ｃｅｌｌｓ／ｍｏｕｓｅで細胞株と同系のＢＡＬＢ／ｃマウス皮下に注射して移植した。移植後１日目に体重に基づいて群分けした後、化合物（Ｉ）を５０ｍｇ／ｋｇで、および／または抗ＰＤ−１抗体を１００μｇ／ｍｏｕｓｅで投与した。なお、対照としてそのいずれも投与しない群も併せて用意した。移植後２１日後に脾細胞を採取し、各種免疫細胞表面マーカーに対する抗体を用いてフローサイトメトリーによる解析を行った。
　図７は、ＣＤ４陽性かつＣＤ６９陽性の細胞、およびＣＤ４陽性かつＣＤ４４陽性かつＣＤ６２Ｌ陰性の細胞の相対数を算出した結果を示すグラフである。化合物（Ｉ）を投与した群では、対照群と比較して、ＣＤ４陽性かつＣＤ６９陽性細胞の割合、およびＣＤ４陽性かつＣＤ４４陽性かつＣＤ６２Ｌ陰性細胞の割合が高かった。さらに、化合物（Ｉ）と抗ＰＤ−１抗体を併用した群では、その割合はより顕著に高かった。
　図８は、ＣＤ４陽性細胞におけるＣＤ４４発現量、およびＣＤ４陽性細胞におけるＣＤ６２Ｌ発現量を算出した結果を示すグラフである。ＣＤ４４発現量とＣＤ６２Ｌ発現量は、それぞれの表面マーカーの平均蛍光強度（Ｍｅａｎ　Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ　Ｉｎｔｅｎｓｉｔｙ、ＭＦＩ）で示す。化合物（Ｉ）を投与した群では、対照群と比較して、ＣＤ４陽性細胞におけるＣＤ４４の発現量が増加し、かつＣＤ６２Ｌの発現量が減少した。さらに、化合物（Ｉ）と抗ＰＤ−１抗体を併用した群では、それがより顕著であった。この結果から、化合物（Ｉ）の投与により、ｃｏｌｏｎ２６を認識する脾細胞中のエフェクターメモリーＴ細胞数が増加したことが推察された。
　以上の結果から、化合物（Ｉ）がｉｎ　ｖｉｖｏにおいても免疫細胞の活性化を誘導し、免疫賦活化作用を有することが示された。
（実施例７）ヒト末梢血単核球における化合物（Ｉ）によるサイトカイン産生誘導
　ヒト末梢血単核球を、ヒト完全培地（ＲＰＭＩ−１６４０、１０％熱不活性化ＦＢＳ、１００Ｕ／ｍＬペニシリン、１００μｇ／ｍＬストレプトマイシン）を用いて１×１０^５ｃｅｌｌｓ／ｍＬの細胞懸濁液に調製した。これに化合物（Ｉ）またはＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤であるＡＺＤ９２９１もしくはエルロチニブ、あるいはサイトカインを誘導する陽性対照としてイミキモドを添加した。なお、対照としてＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤などを加えない無処置群も併せて用意した。この培養液を３７℃、５％ＣＯ_２のインキュベーター内で２日間培養した。培地上清を回収し、種々のサイトカインをＢｉｏ−Ｐｌｅｘ　Ｐｒｏヒトサイトカインアッセイキットを用いて測定した。
　図９は、各化合物を添加した群の、無処置群に対する、サイトカイン濃度の相対比を示したグラフである。データから、化合物（Ｉ）が種々のサイトカイン産生を誘導しているのに対し、同じＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤であるＡＺＤ９２９１もしくはエルロチニブではそのような誘導がみられなかったことがわかる。この結果から、化合物（Ｉ）がサイトカイン産生を誘導し、免疫賦活化作用を有すること、およびその作用はＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤に共通するものではなく、化合物（Ｉ）に固有のものであることが示された。
（参考例１）ｉｎ　ｖｉｔｒｏモデルにおけるマウスメラノーマ細胞株およびマウス大腸がん細胞株の細胞増殖に対する化合物（Ｉ）の影響
　マウスメラノーマ細胞株Ｂ１６Ｆ１０およびＫ１７３５Ｍ２ならびにマウス大腸がん細胞株ＭＣ３８を３×１０^３ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌの濃度で９６ウェルディッシュに播種した。２４時間後、化合物（Ｉ）またはＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤であるエルロチニブ、アファチニブ、ＡＺＤ９２９１もしくはＣｏ１６８６（ロシレチニブ）を所定の濃度に希釈して添加した。その後、３日間培養し、細胞数をＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ２．０（Ｐｒｏｍｅｇａ、Ｇ９２４３）により計測した。化合物（Ｉ）は、いずれの細胞についても、その増殖を抑制しなかった。また、他のＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤も同様に、いずれの細胞についてもその増殖を抑制しなかった。
（実施例８）ｉｎ　ｖｉｖｏモデルにおけるマウスメラノーマ細胞株の細胞増殖に対する化合物（Ｉ）の影響
　マウスメラノーマ細胞株Ｂ１６Ｆ１０の細胞懸濁液をＰＢＳ（−）を用いて調製し、５×１０^５ｃｅｌｌｓ／ｍｏｕｓｅの量でマウス尾部の静脈に注射した。このマウスモデルに対し、化合物（Ｉ）を１２．５ｍｇ／ｋｇまたは５０ｍｇ／ｋｇの用量で、Ｂ１６Ｆ１０移植の前日から経口投与した。移植１４日目（投薬１５日目）に肺転移結節数を評価した。図１０にその結果を示す。化合物（Ｉ）投与群では非投与群（対照）に対して用量依存的に肺転移結節数の減少が認められた。この結果、および参考例１のｉｎ　ｖｉｔｒｏモデルでは腫瘍増殖抑制効果が認められなかったとの結果から、この肺転移結節数の減少は化合物（Ｉ）の免疫賦活化作用によりもたらされたものと推察された。
（実施例９）ｉｎ　ｖｉｖｏモデルにおけるマウス大腸がん細胞株の細胞増殖に対する化合物（Ｉ）の影響
　マウス大腸がん細胞株ＭＣ３８の細胞懸濁液をＰＢＳ（−）および５０％マトリゲルを用いて調製し、１×１０^６ｃｅｌｌｓ／ｍｏｕｓｅの量でマウス皮下に注射した。このマウスを、皮下の腫瘍容積の平均がおよそ５０ｍｍ^３に達したときに群分けを行い、化合物（Ｉ）を５０ｍｇ／ｋｇの用量で、または抗ＰＤ−１抗体を１００μｇ／ｍｏｕｓｅの用量で投与し、経時的に腫瘍容積を測定した。腫瘍容積は、経皮的に測定した腫瘍の長径と短径から以下の式Ａに従って算出した。
　腫瘍容積（ｍｍ^３）＝長径（ｍｍ）×短径（ｍｍ）^２／２　　　…（式Ａ）
　図１１に各群の腫瘍容積の経時変化を示す。化合物（Ｉ）投与群では非投与群（対照）と比較して腫瘍増殖の抑制が認められた。この結果、および参考例１のｉｎ　ｖｉｔｒｏモデルでは腫瘍増殖抑制効果が認められなかったとの結果から、この腫瘍増殖の抑制は化合物（Ｉ）の免疫賦活化作用によりもたらされたものと推察された。
（実施例１０）ｉｎ　ｖｉｖｏモデルにおける化合物（Ｉ）の抗腫瘍免疫応答誘導剤（抗ＰＤ−１抗体または抗ＰＤ−Ｌ１抗体）の増強作用
　マウスメラノーマ細胞株Ｋ１７３５Ｍ２の細胞懸濁液をＰＢＳ（−）および５０％マトリゲルを用いて調製し、１×１０^６ｃｅｌｌｓ／ｍｏｕｓｅの量でマウス皮下に注射した。このマウスを、移植後１日目に体重を用いて群分けした後、化合物（Ｉ）を５０ｍｇ／ｋｇの用量で、または抗ＰＤ−１抗体もしくは抗ＰＤ−Ｌ１抗体を１００μｇ／ｍｏｕｓｅの用量で、それぞれ単独で、あるいは抗ＰＤ−１抗体と抗ＰＤ−Ｌ１抗体のいずれかと化合物（Ｉ）を組み合わせて投与し、経時的に腫瘍容積を測定した。腫瘍容積は、経皮的に測定した腫瘍の長径と短径から上記の式Ａに従って算出した。
　図１２に、各個体の腫瘍容積の経時変化を示す。化合物（Ｉ）単独投与群および抗ＰＤ−１抗体または抗ＰＤ−Ｌ１抗体単独投与群では十分な腫瘍増殖の抑制が認められなかった。一方、化合物（Ｉ）と抗ＰＤ−１抗体または抗ＰＤ−Ｌ１抗体を併用した群では有意な腫瘍増殖の抑制が認められた。この結果から、化合物（Ｉ）が抗ＰＤ−１抗体および抗ＰＤ−Ｌ１抗体の免疫賦活化作用を増強していることが示された。
（実施例１１）ｉｎ　ｖｉｖｏモデルにおける化合物（Ｉ）のマウス大腸がん細胞株の細胞増殖に対する影響及び腫瘍部の免疫細胞への影響
　マウス大腸がん細胞株ＭＣ３８の細胞懸濁液をＰＢＳ（−）および５０％マトリゲルを用いて調製し、１×１０^６ｃｅｌｌｓ／ｍｏｕｓｅの量でマウス皮下に注射した。このマウスを、皮下の腫瘍容積の平均がおよそ５０ｍｍ^３に達したときに群分けを行い、化合物（Ｉ）を５０ｍｇ／ｋｇの用量で、または抗ＰＤ−１抗体を５０μｇ／ｍｏｕｓｅの用量で、それぞれ単独で、あるいは５０ｍｇ／ｋｇの化合物（Ｉ）と５０μｇ／ｍｏｕｓｅの抗ＰＤ−１抗体を組み合わせて投与し、経時的に腫瘍容積を測定した。腫瘍容積は、経皮的に測定した腫瘍の長径と短径から以下の式Ａに従って算出した。
　腫瘍容積（ｍｍ^３）＝長径（ｍｍ）×短径（ｍｍ）^２／２　　　…（式Ａ）
　図１３に各群の腫瘍容積の経時変化を示す。化合物（Ｉ）投与群では非投与群（対照）と比較して腫瘍増殖の抑制が認められた。この結果、および参考例１のｉｎ　ｖｉｔｒｏモデルでは腫瘍増殖抑制効果が認められなかったとの結果から、この腫瘍増殖の抑制は化合物（Ｉ）の免疫賦活化作用によりもたらされたと思われる。また、化合物（Ｉ）が抗ＰＤ−１抗体の免疫賦活化作用を増強していることが示された。
　図１４~１６に、化合物（Ｉ）投与の最終日における各群の腫瘍における免疫関連の遺伝子変動を示す。化合物（Ｉ）投与の最終日に各群の腫瘍をサンプリングし、ｃＤＮＡを調製した。作製したｃＤＮＡから各種免疫関連遺伝子のプローブを用いてｒｅａｌｔｉｍｅＰＣＲで遺伝子発現確認を行い、その結果をプロットした。各プロットはβ−ａｃｔｉｎを対照とし、対照群の１例の値と比較したときの相対的な遺伝子発現割合を示す。化合物（Ｉ）投与群では非投与群と比較してＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＮＫ１．１、ＩＬ−２、ＩＦＮ−γ、Ｐｅｒｆｏｒｉｎ、Ｇｒａｎｚｙｍｅ　ＢおよびＣＤ６９の遺伝子発現上昇が認められた。この結果から、化合物（Ｉ）は免疫賦活化作用により、腫瘍内に浸出する免疫細胞を増加させており、これが腫瘍増殖を抑制していると推察された。

　本発明により、免疫賦活化により改善することができる疾患を予防または治療することができる、また、各種感染症、免疫不全疾患、および腫瘍などの新たな治療法が提供される。
　本明細書で引用した全ての刊行物、特許及び特許出願はそのまま引用により本明細書に組み入れられるものとする。

Claims

　（Ｓ）−Ｎ−（４−アミノ−５−（キノリン−３−イル）−６，７，８，９−テトラヒドロピリミド［５，４−ｂ］インドリジン−８−イル）アクリルアミドまたはその塩を含む、免疫賦活化剤。
　Ｔ細胞を賦活化する、請求項１に記載の免疫賦活化剤。
　ＩＬ−２産生を誘導する、請求項１に記載の免疫賦活化剤。
　ＩＦＮ産生を誘導する、請求項１に記載の免疫賦活化剤。
　免疫細胞の遊走を誘導する、請求項１に記載の免疫賦活化剤。
　免疫細胞の病変部への浸出・集積を誘導する、請求項１に記載の免疫賦活化剤。
　（Ｓ）−Ｎ−（４−アミノ−５−（キノリン−３−イル）−６，７，８，９−テトラヒドロピリミド［５，４−ｂ］インドリジン−８−イル）アクリルアミドまたはその塩を含む医薬組成物を被験体に投与することを含む、被験体において免疫を賦活化する方法。
　（Ｓ）−Ｎ−（４−アミノ−５−（キノリン−３−イル）−６，７，８，９−テトラヒドロピリミド［５，４−ｂ］インドリジン−８−イル）アクリルアミドまたはその塩を含む、免疫賦活化により感染症を予防または治療するための医薬組成物。
　感染症が寄生虫感染である、請求項８に記載の医薬組成物。
　寄生虫が、トリパノソーマ原虫、マラリア原虫、およびトキソプラズマからなる群から選択される、請求項９に記載の医薬組成物。
　感染症が細菌感染である、請求項８に記載の医薬組成物。
　細菌が、肺炎球菌、結核菌、黄色ブドウ球菌、炭疽菌、コレラ菌、およびピロリ菌からなる群から選択される、請求項１１に記載の医薬組成物。
　感染症がウイルス感染である、請求項８に記載の医薬組成物。
　ウイルスが、ヒトＴ細胞白血病ウイルス、パピローマウイルス、エプスタインバールウイルス、サイトメガロウイルス、インフルエンザウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、およびＣ型肝炎ウイルスからなる群から選択される、請求項１３に記載の医薬組成物。
　（Ｓ）−Ｎ−（４−アミノ−５−（キノリン−３−イル）−６，７，８，９−テトラヒドロピリミド［５，４−ｂ］インドリジン−８−イル）アクリルアミドまたはその塩を含む医薬組成物を被験体に投与することを含む、被験体において免疫賦活化することによる、感染症を予防または治療する方法。
　（Ｓ）−Ｎ−（４−アミノ−５−（キノリン−３−イル）−６，７，８，９−テトラヒドロピリミド［５，４−ｂ］インドリジン−８−イル）アクリルアミドまたはその塩を含む、免疫賦活化により免疫不全疾患を治療するための医薬組成物。
　免疫不全疾患がＨＩＶ感染によるものである、請求項１６に記載の医薬組成物。
　（Ｓ）−Ｎ−（４−アミノ−５−（キノリン−３−イル）−６，７，８，９−テトラヒドロピリミド［５，４−ｂ］インドリジン−８−イル）アクリルアミドまたはその塩を含む医薬組成物を被験体に投与することを含む、被験体において免疫賦活化することによる、免疫不全疾患を治療する方法。
　（Ｓ）−Ｎ−（４−アミノ−５−（キノリン−３−イル）−６，７，８，９−テトラヒドロピリミド［５，４−ｂ］インドリジン−８−イル）アクリルアミドまたはその塩を含む、免疫賦活化により、加齢に伴う免疫機能減弱に起因する疾患を予防または治療するための医薬組成物。
　免疫機能減弱に起因する疾患が肺炎である、請求項１９に記載の医薬組成物。
　（Ｓ）−Ｎ−（４−アミノ−５−（キノリン−３−イル）−６，７，８，９−テトラヒドロピリミド［５，４−ｂ］インドリジン−８−イル）アクリルアミドまたはその塩を含む医薬組成物を被験体に投与することを含む、被験体において免疫賦活化することによる、加齢に伴う免疫機能減弱に起因する疾患を予防または治療する方法。
　（Ｓ）−Ｎ−（４−アミノ−５−（キノリン−３−イル）−６，７，８，９−テトラヒドロピリミド［５，４−ｂ］インドリジン−８−イル）アクリルアミドまたはその塩を含む、免疫賦活化によりウイルス関連腫瘍を予防または治療するための医薬組成物。
　ウイルス関連腫瘍が、バーキットリンパ腫、肝細胞癌、子宮頸癌、成人Ｔ細胞白血病、カポジ肉腫、頭頸部がんである、請求項２２に記載の医薬組成物。
　（Ｓ）−Ｎ−（４−アミノ−５−（キノリン−３−イル）−６，７，８，９−テトラヒドロピリミド［５，４−ｂ］インドリジン−８−イル）アクリルアミドまたはその塩を含む医薬組成物を被験体に投与することを含む、被験体において免疫賦活化することによる、ウイルス関連腫瘍を予防または治療する方法。
　（Ｓ）−Ｎ−（４−アミノ−５−（キノリン−３−イル）−６，７，８，９−テトラヒドロピリミド［５，４−ｂ］インドリジン−８−イル）アクリルアミドまたはその塩を含む、免疫に作用することにより疾病を予防または治療する医薬の作用を増強するための医薬組成物。
　感染症予防ワクチンの作用を増強するための、請求項２５に記載の医薬組成物。
　抗ウイルス剤の作用を増強するための、請求項２５に記載の医薬組成物。
　抗ＰＤ−１抗体または抗ＰＤ−Ｌ１抗体の作用を増強するための、請求項２５に記載の医薬組成物。
　がんワクチンの作用を増強するための、請求項２５に記載の医薬組成物。
　抗腫瘍免疫応答誘導剤の作用を増強するための、請求項２５に記載の医薬組成物。
　抗腫瘍免疫応答誘導剤が抗ＰＤ−１抗体または抗ＰＤ−Ｌ１抗体である、請求項３０に記載の医薬組成物。
　抗腫瘍免疫応答誘導剤が抗ＰＤ−１抗体である、請求項３１に記載の医薬組成物。
　抗腫瘍免疫応答誘導剤が抗ＰＤ−Ｌ１抗体である、請求項３１に記載の医薬組成物。
　（Ｓ）−Ｎ−（４−アミノ−５−（キノリン−３−イル）−６，７，８，９−テトラヒドロピリミド［５，４−ｂ］インドリジン−８−イル）アクリルアミドまたはその塩を含む医薬組成物を被験体に投与することを含む、被験体において免疫に作用することにより疾病を予防または治療する医薬の作用を増強する方法。