ES2402791T3

ES2402791T3 - Forma cristalina de la sal diclorhidrato de ((1S)-1-(((2S)-2-(5-(4'-(2-((2S)-1-((2S)-2-((metoxicarbonil)amino)-3-metilbutanoil)-2-pirrolidinil)-1H-imidazol-5-il)-4-bifenilil)-1H-imidazol-2-il)-1-pirrolidinil)carbonil)-2-metilpropil)carbamato de metilo

Info

Publication number: ES2402791T3
Application number: ES08796938T
Authority: ES
Inventors: Soojin Kim; Qi Gao; Fukang Yang
Original assignee: Bristol Myers Squibb Co
Current assignee: Bristol Myers Squibb Co
Priority date: 2007-08-08
Filing date: 2008-07-31
Publication date: 2013-05-09
Anticipated expiration: 2028-07-31
Also published as: JP5244179B2; CO6160327A2; BRPI0815142B1; EA201000196A1; AU2008284100A1; CN101778840B; MX2010001368A; US8629171B2; KR20100042641A; EA018152B1; CA2695729C; CA2695729A1; JP2010535785A; IL203684A; HK1144089A1; NZ583148A; BRPI0815142B8; CN101778840A; BRPI0815142A2; EP2183244A1

Abstract

La forma N-2 de **Fórmula** caracterizada por uno La forma N-2 de **Fórmula** caracterizada por uno o más de los siguientes parámetros: a) una celda uo más de los siguientes parámetros: a) una celda unitaria con parámetros sustancialmente iguales a lnitaria con parámetros sustancialmente iguales a lo siguiente: Dimensiones de celda: a >= 7,5680 Å bo siguiente: Dimensiones de celda: a >= 7,5680 Å b>= 9,5848 Å c >= 16,2864 Å - >= 74,132 grados >= 8>= 9,5848 Å c >= 16,2864 Å - >= 74,132 grados >= 84,132 grados - >= 70,646 grados grupo espacial P1 4,132 grados - >= 70,646 grados grupo espacial P1 moléculas/celda unitaria 1 en la que la medida de moléculas/celda unitaria 1 en la que la medida de dicha forma cristalina es a una temperatura entre dicha forma cristalina es a una temperatura entre aproximadamente 20ºC yaproximadamente 25ºC. b) picaproximadamente 20ºC yaproximadamente 25ºC. b) picos característicos en el patrón de difracción de ros característicos en el patrón de difracción de rayos X en polvo a valores de dos teta de 10,30,1, ayos X en polvo a valores de dos teta de 10,30,1, 12,4 0,1, 12,8 0,1, 13,3 0,1, 13,6 0,1, 15,5 0,1, 12,4 0,1, 12,8 0,1, 13,3 0,1, 13,6 0,1, 15,5 0,1, 20,3 0,1, 21,2 0,1, 22,4 0,1, 22,7 0,1 y 23,7 0,1 20,3 0,1, 21,2 0,1, 22,4 0,1, 22,7 0,1 y 23,7 0,1 a una temperatura entre aproximadamente 20ºC y apra una temperatura entre aproximadamente 20ºC y aproximadamente 25ºC; y/oc) una mezcla fundida con enoximadamente 25ºC; y/oc) una mezcla fundida con endotermia de descomposición con inicio típicamente dotermia de descomposición con inicio típicamente en elintervalo de 225-245 C. en elintervalo de 225-245 C.

Description

Forma cristalina de la sal diclorhidrato de ((1S)-1-(((2S)-2-(5-(4’-(2-((2S)-1-((2S)-2-((metoxicarbonil)amino)-3metilbutanoil)-2-pirrolidinil)-1H-imidazol-5-il)-4-bifenilil)-1H-imidazol-2-il)-1-pirrolidinil)carbonil)-2-metilpropil) carbamato de metilo

La presente divulgación se refiere, en general, a una forma cristalina de sal diclorhidrato de ((1S)-1-(((2S)-2-(5-(4'-(2((2S)-1-((2S)-2-((metoxicarbonil)amino)-3-metilbutanoil)-2-pirrolidinil)-1H-imidazol-5-il)-4-bifenilil)-1H-imidazol-2-il)-1pirrolidinil)carbonil)-2-metilpropil)carbamato de metilo. La presente divulgación se refiere también, en general, a una composición farmacéutica que comprende una forma cristalina, así como al uso de una forma cristalina en el tratamiento del virus de la hepatitis C (HCV) y a procedimientos para obtener dicha forma cristalina.

El virus de la hepatitis C (HCV) es un patógeno humano importante que se estima que infecta a 170 millones de personas en el mundo, aproximadamente cinco veces el número de infectados por el virus de inmunodeficiencia humana de tipo 1. Una fracción sustancial de estos individuos infectados por HCV desarrollan una enfermedad hepática progresiva, grave, incluyendo cirrosis y carcinoma hepatocelular.

Actualmente, la terapia para HCV más eficaz emplea una combinación de interferón alfa y ribavirina, que conduce a una eficacia sostenida en el 40% de los pacientes. Estudios clínicos recientes demuestran que el interferón alfa pegilado es superior al interferón alfa no modificado como monoterapia. Sin embargo, incluso con regímenes terapéuticos experimentales que implican combinaciones de interferón alfa pegilado y ribavirina, una fracción sustancial de los pacientes no tiene una reducción sostenida de la carga vírica. Por tanto, hay una necesidad clara e insatisfecha de desarrollar productos terapéuticos eficaces para el tratamiento de infección por HCV.

El compuesto ((1S)-1-(((2S)-2-(5-(4'-(2-((2S)-1-((2S)-2-((metoxicarbonil)-amino)-3-metilbutanoil)-2-pirrolidinil)-1Himidazol-5-il)-4-bifenilil)-1H-imidazol-2-il)-1-pirrolidinil)carbonil)-2-metilpropil)carbamato de metilo es útil para el tratamiento de la infección por HCV. Debido a la dificultad de cristalización de este compuesto, la formación de producto puro no ha sido reproducible. Se ha encontrado que la sal diclorhidrato, representada por la fórmula (I) y designada en la presente memoria como compuesto (I), puede cristalizarse repetidamente en un polimorfo particular, designado en la presente memoria como forma N-2, que ofrece una alta solubilidad acuosa y una excelente capacidad de purificación.

H3CO NH HO O

N NN

NN

N O OH HN

. 2HCl OCH3

Compuesto (I)

La presente divulgación proporciona la forma N-2 de

H3CO NH HO O

N NN

NN

N O OH HN

. 2HCl OCH3

.

caracterizada por uno o más de lo siguiente parámetros:

a) Una celda unitaria con parámetros sustancialmente iguales a lo siguiente::

Dimensiones de celda: a = 7,5680 Å b= 9,5848 Å c = 16,2864 Å

α = 74,132 grados

= 84,132 grados

γ = 70,646 grados

grupo espacial P1 moléculas/celda unitaria 1

en la que la medida de dicha forma cristalina es a una temperatura entre aproximadamente 20ºC y aproximadamente 25ºC.

b) picos característicos en el patrón de difracción de rayos X en polvo a valores de dos teta de 10,3 5 0,1, 12,4 0,1, 12,8 0,1, 13,3 0,1, 13,6 0,1, 15,5 0,1, 20,3 0,1, 21,2 0,1, 22,4 0,1, 22,7 0,1 y 23,7 0,1 a una temperatura entre aproximadamente 20ºC y aproximadamente 25ºC, en

base a un patrón de alta calidad recogido con un difractómetro (CuKα) con capilaridad por

centrifugado con 2 calibrado con un patrón del NIST u otro adecuado; y/o

c) una mezcla fundida con endotermia de descomposición con inicio típicamente en el intervalo de 10 225-245 C.

En otro aspecto, la presente divulgación proporciona la forma N-2 sustancialmente pura de

H3CO NH

H

O O

NN

N

O O

H

HN

. 2HCl OCH3

. En una primera realización de este aspecto, dicha forma N-2 tiene una pureza de al menos un 95% en peso. En una segunda realización del sexto aspecto, dicha forma N-2 tiene una pureza de al menos un 99% en peso. 15 En otro aspecto, la presente divulgación proporciona una composición farmacéutica que comprende la forma N-2 de H3CO

NH

H

O O

NN

N

O O

H HN

. 2HCl OCH3

y un portador o diluyente farmacéuticamente aceptables. En otro aspecto, la presente divulgación proporciona una composición farmacéutica que comprende la forma N-2 sustancialmente pura de H3CO

NH

H

O O

NN

N

O O

H HN

20 . 2HCl OCH3

y un portador o diluyente farmacéuticamente aceptables. En una primera realización de este aspecto, dicha forma N2 tiene una pureza de al menos un 95% en peso. En una segunda realización de este aspecto, dicha forma N-2 tiene una pureza de al menos un 99% en peso.

En otro aspecto, la presente divulgación proporciona una composición farmacéutica que comprende la forma N-2 de

H3CO NH

HO O

N NN

N

NN O O

H HN . 2HCl OCH3

en combinación con uno o dos compuestos adicionales que tienen actividad anti-HCV. En una primera realización de este aspecto, dicha forma N-2 tiene una pureza de al menos un 90% en peso. En una segunda realización de este aspecto, dicha forma N-2 tiene una pureza de al menos un 95% en peso. En una tercera realización de este aspecto, dicha forma N-2 tiene una pureza de al menos un 99% en peso.

En una cuarta realización de este aspecto, al menos uno de los compuestos adicionales que tienen actividad anti-HCV es un interferón o ribavirina. En una quinta realización de este aspecto, el interferón está seleccionado de interferón alfa 2B, interferón alfa pegilado, interferón de consenso, interferón alfa 2A e interferón linfoblastoide tau.

En una sexta realización de este aspecto, la presente divulgación proporciona una composición farmacéutica que comprende la forma N-2 de

H3CO NH HO O N NN

NN

N O O

H HN

. 2HCl OCH3

en combinación con uno o dos compuestos adicionales que tienen actividad anti-HCV, en la que al menos uno de los compuestos adicionales está seleccionado de interleucina 2, interleucina 6, interleucina 12, un compuesto que potencia el desarrollo de una respuesta de linfocito T auxiliar de tipo 1, ARN interferente, ARN antisentido, Imiquimod, ribavirina, un inhibidor de 5’-monofosfato de inosina deshidrogenasa, amantadina y rimantadina.

En otro aspecto, la presente divulgación proporciona dicha forma N-2, para su uso en un procedimiento de tratamiento de infección por HCV en un mamífero que comprende administrar al mamífero una cantidad terapéuticamente eficaz de forma N-2 de

H3CO NH HO O

N NN

NN O O

H HN

. 2HCl OCH3

.

En una primera realización de este aspecto, dicha forma N-2 tiene una pureza de al menos un 90% en peso. En una segunda realización de este aspecto, dicha forma N-2 tiene una pureza de al menos un 95% en peso. En una tercera realización de este aspecto, dicha forma N-2 tiene una pureza de al menos un 99% en peso. En una cuarta realización de este aspecto, el mamífero es un ser humano.

Otras realizaciones de la presente divulgación pueden comprender combinaciones adecuadas de dos o más de las realizaciones y/o aspectos dados a conocer en la presente memoria.

Resultarán evidentes aún otras realizaciones y aspectos de la divulgación según la descripción proporcionada a continuación.

Los compuestos de la presente divulgación existen también en forma de tautómeros; por lo tanto, la presente divulgación comprende también todas las formas tautoméricas.

La FIG. 1 ilustra patrones de difracción de rayos X en polvo experimentales y simulados (CuK =1,54178 Å a T = temperatura ambiente) de la forma cristalina N-2 del compuesto (I).

La FIG. 2 ilustra el patrón de calorimetría de barrido diferencial de la forma cristalina N-2 del compuesto (I). La FIG. 3 ilustra el espectro de RMN en estado sólido de la forma cristalina N-2 del compuesto (I).

Definiciones

Como se usa en la presente memoria, “polimorfo” designa formas cristalinas que tienen la misma composición química pero diferentes disposiciones espaciales de las moléculas, átomos y/o iones que forman el cristal.

El término “farmacéuticamente aceptable”, como se usa en la presente memoria, designa aquellos compuestos, materiales, composiciones y/o formas de dosificación que, dentro del alcance del criterio médico formal, son adecuados para contacto con los tejidos de seres humanos y animales sin una excesiva toxicidad, irritación, respuesta alérgica u otras complicaciones problemáticas proporcionales a una relación de beneficio/riesgo razonable.

El término “sustancialmente puro”, como se usa en la presente memoria, designa la forma N-2 del compuesto (I) que es más de aproximadamente un 90% pura. Esto significa que el polimorfo del compuesto (I) no contiene más de aproximadamente un 10% de cualquier otro compuesto y, en particular, no contiene más de aproximadamente un 10% de cualquier otra forma del compuesto (I).

El término “cantidad terapéuticamente eficaz”, como se usa en la presente memoria, se pretende que incluya una cantidad de las formas cristalinas del compuesto (I) que sea eficaz cuando se administra sola o en combinación para tratar la hepatitis C. Las formas cristalinas del compuesto (I) y las composiciones farmacéuticas del mismo pueden ser útiles en el tratamiento de la hepatitis C. Si se usa el compuesto (I) en combinación con otra medicación, la combinación de compuestos descrita en la presente memoria puede dar como resultado una combinación sinérgica. La sinergia, como se describe, por ejemplo, por Chou y Talalay, Adv. Enzyme Regul. 1984, 22, 27-55, aparece cuando el efecto de los compuestos cuando se administran en combinación es mayor que el efecto de los compuestos cuando se administran solos como agentes individuales.

El término “tratar” se refiere a: (i) evitar que ocurra una enfermedad, trastorno o afección en un paciente que puede estar predispuesto a la enfermedad, trastorno y/o afección pero no se ha diagnosticado todavía que la tiene; (ii) inhibir la enfermedad, trastorno o afección, concretamente, detener su desarrollo; y/o (iii) aliviar la enfermedad, trastorno o afección, concretamente, causar la regresión de la enfermedad, trastorno y/o afección.

En una realización, la divulgación proporciona una forma cristalina del compuesto (I). Esta forma cristalina del compuesto (I) puede emplearse en composiciones farmacéuticas que pueden incluir opcionalmente uno o más componentes distintos seleccionados, por ejemplo, del grupo constituido por excipientes, portadores y uno de otros ingredientes farmacéuticamente activos o entidades químicas de diferente estructura molecular.

En una realización, la forma cristalina tiene una homogeneidad de fase indicada por menos de un 10%, en otra realización, la forma cristalina tiene una homogeneidad de fase indicada por menos de un 5%, y en otra realización, la forma cristalina tiene una homogeneidad de fase indicada por menos de un 2% del área de pico total en el patrón de PXRD medido experimentalmente que surge de los picos extra que están ausentes del patrón de PXRD simulado. En otra realización, la forma cristalina tiene homogeneidad de fase con menos de un 1% del área de pico total en el patrón de PXRD medido experimentalmente que surge de los picos extra que están ausentes del patrón de PXRD simulado.

En una realización, se proporciona una composición constituida esencialmente por la forma cristalina N-2 del compuesto (I). La composición de esta realización puede comprender al menos un 90% en peso de la forma cristalina N-2 del compuesto (I), basada en el peso del compuesto (I) en la composición. El material restante comprende otra(s) forma(s) del compuesto y/o impurezas de reacción y/o impurezas de procesamiento que surgen de su preparación.

La presencia de impurezas de reacción y/o impurezas de procesamiento puede determinarse mediante técnicas analíticas conocidas en la técnica tales como, por ejemplo, cromatografía, espectroscopia de resonancia magnética nuclear, espectrometría de masas o espectroscopia infrarroja.

Preparación general de materiales cristalinos:

Las formas cristalinas pueden prepararse mediante una variedad de procedimientos incluyendo, por ejemplo, cristalización o recristalización a partir de un disolvente adecuado, sublimación, crecimiento a partir de una mezcla fundida, transformación en estado sólido desde otra fase, cristalización a partir de un fluido supercrítico y pulverización por chorro. Las técnicas para cristalización o recristalización de formas cristalinas a partir de una mezcla de disolventes incluyen, por ejemplo, la evaporación del disolvente, reducir la temperatura de la mezcla disolvente, siembra de cristales en una mezcla de disolventes supersaturada de la molécula y/o sal, liofilización de la mezcla de disolventes y adición de antidisolventes (contradisolventes) a la mezcla de disolventes. Pueden emplearse técnicas de alto rendimiento para preparar formas cristalinas incluyendo polimorfos. Los cristales de medicamentos, incluyendo polimorfos, procedimientos de preparación y caracterización de cristales de medicamentos se discuten en “Solid-State Chemistry of Drugs”, S.R. Byrn, R.R. Pfeiffer y J.G. Stowell, 2ª edición, SSCI, West Lafayette, Indiana (1999).

Para las técnicas de cristalización que emplean disolvente, la elección del disolvente o disolventes es típicamente dependiente de uno o más factores tales como la solubilidad del compuesto, la técnica de cristalización y la presión de vapor del disolvente. Pueden emplearse combinaciones de disolventes, por ejemplo, el compuesto puede disolverse en un primer disolvente para proporcionar una solución, seguido de la adición de un antidisolvente para reducir la solubilidad del compuesto en la solución y para proporcionar la formación de cristales. Un antidisolvente es un disolvente en el que el compuesto tiene baja solubilidad.

En un procedimiento para preparar cristales, se suspende y/o agita un compuesto en un disolvente adecuado para proporcionar una suspensión espesa, que puede calentarse para promover la disolución. El término “suspensión espesa”, como se usa en la presente memoria, significa una solución saturada del compuesto que puede contener

también una cantidad adicional del compuesto para proporcionar una mezcla heterogénea del compuesto y un disolvente a una temperatura dada.

Pueden añadirse cristales simientes a cualquier mezcla de cristalización para promover la cristalización. La siembra puede emplearse para controlar el crecimiento de un polimorfo particular o para controlar la distribución del tamaño de partícula del producto cristalino. En consecuencia, el cálculo de la cantidad de simiente necesaria depende del tamaño de la simiente disponible y del tamaño deseado de una partícula de producto media como se describe, por ejemplo, en “Programmed Cooling of Batch Crystallizers,” J.W. Mullin y J. Nyvlt, Chemical Engineering Science, 1971, 26, 369-377. En general, son necesarias simientes de pequeño tamaño para controlar eficazmente el crecimiento de cristales en el lote. Las simientes de pequeño tamaño pueden generarse tamizando, moliendo o micronizando cristales grandes, o mediante microcristalización de soluciones. Debe tenerse cuidado de que el molido o micronización de cristales no dé como resultado ningún cambio en la cristalinidad de la forma cristalina deseada (concretamente, cambio a amorfa u otro polimorfo).

Puede filtrarse a vacío una mezcla de cristalización enfriada, y los sólidos aislados pueden lavarse con un disolvente adecuado tal como disolvente de recristalización fría, y secarse con purga de nitrógeno proporcionando la forma cristalina deseada. Los sólidos aislados pueden analizarse mediante una técnica espectroscópica o analítica adecuada, tal como resonancia magnética nuclear en estado sólido, calorimetría de barrido diferencial, difracción de rayos X en polvo o similares, para asegurar la formación de la forma cristalina preferida del producto. La forma cristalina resultante se produce típicamente en una cantidad de más de aproximadamente un 70% en peso de rendimiento aislado preferiblemente más de un 90% en peso de rendimiento aislado, basado en el peso del compuesto empleado originalmente en el procedimiento de cristalización. El producto puede comolerse o pasarse a través de un tamiz de malla para desagregar el producto, en caso necesario.

Las formas cristalinas pueden prepararse directamente a partir del medio de reacción del proceso final para preparar compuesto (I). Esto puede conseguirse, por ejemplo, empleando en la etapa final del proceso un disolvente o una mezcla de disolventes a partir del cual pueda cristalizarse el compuesto (I). Como alternativa, pueden obtenerse formas cristalinas mediante técnicas de destilación o de adición de disolvente. Los disolventes adecuados con este fin incluyen, por ejemplo, los disolventes no polares y disolventes polares anteriormente mencionados, incluyendo disolventes polares próticos tales como alcoholes y disolventes polares apróticos tales como cetonas.

La presencia de más de un polimorfo en una muestra puede determinarse mediante técnicas tales como difracción de rayos X en polvo (PXRD) o espectroscopía de resonancia magnética nuclear en estado sólido (SSNMR). Por ejemplo, la presencia de picos extra en un patrón de PXRD medido experimentalmente cuando se compara con un patrón de PXRD simulado puede indicar más de un polimorfo en la muestra. Puede calcularse el PXRD simulado a partir de los datos de rayos X en monocristal. Véase Smith, D.K., “A FORTRAN Program for Calculating X-Ray Powder Diffraction Patterns,” Lawrence Radiation Laboratory, Livermore, California, UCRL-7196 (abril de 1963).

Caracterización:

La forma N-2 del compuesto (I) puede caracterizarse usando diversas técnicas cuya operación es bien conocida por los expertos en la técnica. Los ejemplos de procedimientos de caracterización incluyen, pero sin limitación, difracción de rayos X en monocristal, difracción de rayos X en polvo (PXRD), patrones de rayos X en polvo simulados (Yin, S.; Scaringe, R. P.; DiMarco, J.; Galella, M. y Gougoutas, J. Z., American Pharmaceutical Review, 2003, 6, 2, 80), calorimetría de barrido diferencial (DSC), RMN-13C en estado sólido (Earl, W.L. y Van der Hart, D. L., J. Magn. Reson., 1982, 48, 35-54), espectroscopía Raman, espectroscopía infrarroja, isotermas de absorción de humedad, análisis gravimétrico térmico (TGA) y técnicas de placa caliente.Las formas pueden caracterizarse y distinguirse usando difracción de rayos X en monocristal, que está basada en las medidas de celda unitaria de un monocristal de forma N-2. Se proporciona una descripción detallada de las celdas unitarias en Stout y Jensen, “X-Ray Structure Determination: A Practical Guide”, Macmillan Co., Nueva York (1968), capítulo 3, que se incorpora a la presente

memoria por referencia. Como alternativa, la disposición única de átomos en relación espacial en la retícula cristalina puede caracterizarse según las coordenadas atómicas fraccionarias observadas. Es otro medio de caracterización de la estructura cristalina mediante el perfil de difracción de rayos X en polvo, en el que se compara el perfil de difracción con un perfil simulado que representa material en polvo puro, ambos procesados a la misma temperatura analítica, y medidas de la forma en cuestión caracterizadas por una serie de valores de 2

Un experto en la técnica apreciará que puede obtenerse un patrón de difracción de rayos X con una medida de error que depende de las condiciones de medida empleadas. En particular, es generalmente conocido que las intensidades en un patrón de difracción de rayos X pueden fluctuar dependiendo de las condiciones de medida empleadas. Debería entenderse adicionalmente que las intensidades relativas pueden variar también dependiendo de las condiciones experimentales y, en consecuencia, el orden exacto de intensidad no debería tenerse en cuenta. Adicionalmente, es típicamente un error de medida del ángulo de difracción para un patrón de difracción de rayos X convencional de aproximadamente un 5% o menor, y dicho grado de error de medida debería tenerse en cuenta como parte de los ángulos de difracción anteriormente mencionados. En consecuencia, ha de entenderse que las formas cristalinas de la presente divulgación no están limitadas a las formas cristalinas que proporcionan patrones de difracción de rayos X en polvo completamente idénticos a los patrones de difracción de rayos X en polvo descritos en las figuras adjuntas dadas a conocer en la presente memoria. Cualquier forma cristalina que proporcione un patrón de difracción de rayos X, termograma de DSC o espectro de SSNMR sustancialmente idéntico a los dados a conocer en las figuras adjuntas cae dentro del alcance de la presente divulgación. La capacidad de estimar las identidades sustanciales de patrones de difracción de rayos X está dentro del alcance de un experto en la técnica.

Utilidad:

La forma N-2 del compuesto (I), sola o en combinación con otros compuestos, puede usarse para tratar infección por HCV.

La presente divulgación proporciona también composiciones que comprenden una cantidad terapéuticamente eficaz de la forma N-2 del compuesto (I) y al menos un portador farmacéuticamente aceptable.

El ingrediente activo, concretamente la forma N-2 del compuesto (I), comprende típicamente en dichas composiciones de 0,1% en peso a 99,9% en peso de la composición, y a menudo comprende de aproximadamente 5 a 95% en peso. En algunos casos, el pH de la formulación puede ajustarse con modificadores farmacéuticamente aceptables (tales como carbonato de calcio y óxido de magnesio) para potenciar la estabilidad del compuesto formulado o su forma de suministro. Las formulaciones del polimorfo de la presente divulgación pueden contener también aditivos para la potenciación de la absorción y biodisponibilidad.

Las composiciones farmacéuticas de esta divulgación pueden administrarse por vía oral, parenteral o mediante un depósito implantado. El término parenteral como se usa en la presente memoria incluye inyección subcutánea, intracutánea, intravenosa, intramuscular, intraarticular, intrasinovial, intrasternal, intratecal e intralesional o técnicas de infusión. Las composiciones farmacéuticas pueden estar en forma de una preparación inyectable estéril, por ejemplo, en forma de una suspensión acuosa u oleaginosa inyectable estéril. Esta suspensión puede formularse según técnicas conocidas en la técnica usando agentes dispersantes o humectantes y agentes de suspensión adecuados. Los detalles referentes a la preparación de dichos compuestos son conocidos por los expertos en la técnica.Cuando se administran por vía oral, las composiciones farmacéuticas de esta divulgación pueden administrarse en cualquier forma de dosificación oralmente aceptable incluyendo, pero sin limitación, cápsulas, comprimidos y suspensiones y soluciones acuosas. En el caso de comprimidos para uso oral, los portadores que se usan habitualmente incluyen lactosa y almidón de maíz. Pueden añadirse también agentes lubricantes tales como estearato de magnesio. Para administración oral en forma de cápsula, los portadores/diluyentes útiles incluyen lactosa, polietilenglicol de alto y bajo peso molecular y almidón de maíz secado. Cuando se administran por vía oral suspensiones acuosas, se combina el ingrediente activo con agentes emulsionantes y de suspensión. Si se desea, pueden añadirse ciertos agentes edulcorantes y/o aromatizantes y/o colorantes.

Pueden encontrarse otros portadores adecuados para las composiciones observadas anteriormente en textos farmacéuticos estándar, por ejemplo, en "Remington's Pharmaceutical Sciences", 19ª ed., Mack Publishing Company, Easton, Penn., 1995. Son conocidos por los expertos en la técnica detalles adicionales referentes al diseño y preparación de formas de suministro adecuadas de las composiciones farmacéuticas de la divulgación.Son típicos niveles de dosificación de entre aproximadamente 0,05 y aproximadamente 100 miligramos por kilogramo ("mg/kg") de peso corporal al día, más específicamente entre aproximadamente 0,1 y aproximadamente 50 mg/kg de peso corporal al día de los compuestos de la divulgación en una monoterapia para la prevención y/o el tratamiento de enfermedad mediada por HCV. Típicamente, las composiciones farmacéuticas de esta divulgación se administrarán de aproximadamente 1 a aproximadamente 3 veces al día o, como alternativa, en forma de una infusión continua. Dicha administración puede usarse como terapia crónica o aguda. La cantidad de ingrediente activo que puede combinarse con los materiales portadores para producir una forma de dosificación única variará dependiendo del hospedador tratado y del modo de administración particular.

Como apreciará el experto en la técnica, pueden ser necesarias dosis menores o mayores que las citadas anteriormente. Los regímenes de dosificación y tratamiento específicos para cualquier paciente particular dependerán de una serie de factores, incluyendo la actividad del compuesto específico empleado, la edad, el peso corporal, el estado de salud general, el género, la dieta, el momento de administración, la duración del tratamiento, la tasa de excreción, la combinación de medicamentos, la gravedad y curso de la infección, la predisposición del paciente hacia la infección y el criterio del médico que trata. En una realización, son formulaciones de dosificación unitaria aquellas que contienen una dosis o subdosis diaria, como se cita anteriormente en la presente memoria, o una fracción de la misma, de un ingrediente activo. En general, el tratamiento se inicia con dosificaciones pequeñas sustancialmente menores que la dosis óptima del péptido. Después de ello, se aumenta la dosificación mediante pequeños aumentos hasta alcanzar el efecto óptimo según las circunstancias. En general, el compuesto se administra lo más deseablemente a un nivel de concentración que proporcionará generalmente resultados antivíricos

5 eficaces sin causar efectos secundarios dañinos o perjudiciales.

Cuando las composiciones de esta divulgación comprenden una combinación del polimorfo de la divulgación y uno o más agentes terapéuticos o profilácticos adicionales, tanto el compuesto como el agente adicional están habitualmente presentes a niveles de dosificación de entre aproximadamente 10 y 100%, y más preferiblemente, entre aproximadamente 10 y 80% de la dosificación administrada normalmente en un régimen de monoterapia. La

10 administración de uno o más agentes adicionales puede ocurrir antes, después o simultáneamente al polimorfo de la presente divulgación.

Cuando el polimorfo se formula junto con un portador farmacéuticamente aceptable, la composición resultante puede administrarse in vivo a mamíferos tales como el hombre para inhibir NS5A o para tratar o prevenir infección por el virus HCV. Dicho tratamiento puede conseguirse también usando el polimorfo de esta divulgación en combinación 15 con agentes que incluyen, pero sin limitación: agentes inmunomoduladores tales como interferones; otros agentes antivíricos tales como ribavirina, amantadina; otros inhibidores de NS5A; inhibidores de otras dianas en el ciclo vital del HCV tales como helicasa, proteasa, polimerasa, metaloproteasa o sitio de entrada a ribosoma interno; o combinaciones de las mismas. Los agentes adicionales pueden combinarse con el polimorfo de esta divulgación para crear una forma de dosificación única. Como alternativa, estos agentes adicionales pueden administrarse

20 separadamente a un mamífero como parte de una forma de dosificación múltiple.

La tabla 1 siguiente enumera algunos ejemplos ilustrativos de compuestos que pueden administrarse con los compuestos de esta divulgación. Los compuestos de la divulgación pueden administrarse con otros compuestos con actividad anti-HCV en terapia de combinación, unida o separadamente, o combinando los compuestos en una composición.

25 Tabla 1

Nombre comercial: Clase fisiológica Tipo de inhibidor o diana Compañía fuente

NIM811: Inhibidor de ciclofilina Novartis

Zadaxin: Inmunomodulador Sciclone

Suvus: Azul de metileno Bioenvision

Actilón (CPG10101): Agonista de TLR9 Coley

Batabulina (T67): Anticanceroso Inhibidor de -tubulina Tularik Inc., South San Francisco, CA

ISIS 14803: Antivírico Antisentido ISIS Pharmaceuticals Inc, Carlsbad, CA/Elan Phamaceuticals Inc., Nueva York, NY

Summetrel: Antivírico Antivírico Endo Pharmaceuticals Holdings Inc., Chadds Ford, PA

GS-9132 (ACH-806): Antivírico Inhibidor de HCV Achillion / Gilead

Compuestos de pirazolopirimidina y sales del documento WO-2005047288 26 de mayo de 2005: Antivírico Inhibidores de HCV Arrow Therapeutics Ltd.

Levovirina: Antivírico Inhibidor de IMPDH Ribapharm Inc., Costa Mesa, CA

Merimepodib (VX-497): Antivírico Inhibidor de IMPDH Vertex Pharmaceuticals Inc., Cambridge, MA

XTL-6865 (XTL-002): Antivírico Anticuerpo monoclonal XTL Biopharmaceuticals Ltd., Rehovot, Isreal

Telaprevir (VX-950, LY-570310): Antivírico Inhibidor de serinproteasa NS3 Vertex Pharmaceuticals Inc., Cambridge, MA/ Eli Lilly y Co. Inc., Indianápolis, IN

(continuación) (continuación)

HCV-796: Antivírico Inhibidor de replicasa NS5B Wyeth / Viropharma

NM-283: Antivírico Inhibidor de replicasa NS5B Idenix / Novartis

GL-59728: Antivírico Inhibidor de replicasa NS5B Gene Labs / Novartis

GL-60667: Antivírico Inhibidor de replicasa NS5B Gene Labs / Novartis

2’C MeA: Antivírico Inhibidor de replicasa NS5B Gilead

PSI 6130: Antivírico Inhibidor de replicasa NS5B Roche

R1626: Antivírico Inhibidor de replicasa NS5B Roche

2’C Metiladenosina: Antivírico Inhibidor de replicasa NS5B Merck

JTK-003: Antivírico Inhibidor de RdRp Japan Tobacco Inc., Tokyo, Japón

Levovirina: Antivírico Ribavirina ICN Pharmaceuticals, Costa Mesa, CA

Ribavirina: Antivírico Ribavirina Schering-Plough Corporation, Kenilworth, NJ

Viramidina: Antivírico Profármaco de ribavirina Ribapharm Inc., Costa Mesa, CA

Heptazima: Antivírico Ribozima Ribozyme Pharmaceuticals Inc., Boulder, CO

BILN-2061: Antivírico Inhibidor de serinproteasa Boehringer Ingelheim Pharma KG, Ingelheim, Alemania

SCH 503034: Antivírico Inhibidor de serinproteasa Schering Plough

Zadazim: Inmuno-modulador Inmuno-modulador SciClone Pharmaceuticals Inc., San Mateo, CA

Ceplene: Inmuno-modulador Inmuno-modulador Maxim Pharmaceuticals Inc., San Diego, CA

CellCept: Inmunosupresor Inmuno-supresor de IgG de HCV F. Hoffmann-La Roche LTD, Basilea, Suiza

Civacir: Inmunosupresor Inmuno-supresor de IgG de HCV Nabi Biopharmaceuticals Inc., Boca Raton, FL

Albuferon-: Interferón IFN2b de albúmina Human Genome Sciences Inc., Rockville, MD

Infergen A: Interferón IFN alfacon-1 InterMune Pharmaceuticals Inc., Brisbane, CA

Omega IFN: Interferón IFN- Intarcia Therapeutics

IFN y EMZ701: Interferón IFN y EMZ701 Transition Therapeutics Inc., Ontario, Canada

Rebif: Interferon IFN-1a Serono, Ginebra, Suiza

Roferon A: Interferon IFN2a F. Hoffmann-La Roche LTD, Basilea, Suiza

Intron A: Interferón IFN2b Schering-Plough Corporation, Kenilworth, NJ

Intron A y Zadaxin: Interferón IFN2b/ 1-timosina RegeneRx Biopharmiceuticals Inc., Bethesda, MD/ SciClone Pharmaceuticals Inc, San Mateo, CA

Rebetron: Interferón IFN2b/ribavirina Schering-Plough Corporation, Kenilworth, NJ

Actimmune: Interferón INF- InterMune Inc., Brisbane, CA

Interferon-: Interferón Interferón--1a Serono

Multiferon: Interferón IFN de larga duración Viragen/Valentis

Wellferon: Interferón IFN-n1 linfoblastoide GlaxoSmithKline plc, Uxbridge, UK

Omniferon: Interferón IFNnatural Viragen Inc., Plantation, FL

Pegasys: Interferón IFN2a pegilado F. Hoffmann-La Roche LTD, Basilea, Suiza

Pegasys y Ceplene: Interferón IFN-2a pegilado/ inmuno-modulador Maxim Pharmaceuticals Inc., San Diego, CA

Pegasys y ribavirina: Interferón IFN-2a PEGilado/ ribavirina F. Hoffmann-La Roche LTD, Basilea, Suiza

PEG-Intron: Interferón IFN2b PEGilado Schering-Plough Corporation, Kenilworth, NJ

PEG-Intron / ribavirina: Interferon IFN-2b PEGilado/ ribavirina Schering-Plough Corporation, Kenilworth, NJ

IP-501: Protección hepática Antifibrótico Indevus Pharmaceuticals Inc., Lexington, MA

IDN-6556: Protección hepática Inhibidor de caspasa Idun Pharmaceuticals Inc., San Diego, CA

ITMN-191 (R-7227): Antivírico Inhibidor de serinproteasa InterMune Pharmaceuticals Inc., Brisbane, CA

GL-59728: Antivírico Inhibidor de replicasa NS5B Genelabs

ANA-971: Antivírico Agonista de TLR-7 Anadys

Otro aspecto de esta divulgación proporciona procedimientos de inhibición de la actividad NS5A de HCV en pacientes mediante la administración del polimorfo de la presente divulgación.

5 En una realización, estos procedimientos son útiles en la reducción de la actividad NS5A de HCV en el paciente. Si la composición farmacéutica comprende sólo el polimorfo de esta divulgación como componente activo, dichos procedimientos pueden comprender adicionalmente la etapa de administrar a dicho paciente un agente seleccionado de un agente inmunomodulatorio, un agente antivírico, un inhibidor de NS5A de HCV o un inhibidor de otras dianas del ciclo vital del HCV tales como, por ejemplo, helicasa, polimerasa, proteasa o metaloproteasa. Dicho agente

10 adicional puede administrarse al paciente antes, simultáneamente o después de la administración de los compuestos de esta divulgación.

En otra realización, estos procedimientos son útiles para inhibir la replicación vírica en un paciente. Dichos procedimientos pueden ser útiles en el tratamiento o prevención de enfermedad por HCV.

El polimorfo de la divulgación puede usarse también como reactivo de laboratorio. El polimorfo puede ser crucial

15 para proporcionar herramientas de investigación para diseñar ensayos de replicación vírica, validación de sistemas de ensayo animales y estudios de biología estructural para potenciar adicionalmente el conocimiento de los mecanismos de enfermedades por HCV.

El polimorfo de esta divulgación puede usarse también para tratar o prevenir la contaminación vírica de materiales y por lo tanto reducir el riesgo de infección vírica de personal de laboratorio o médico que entra en contacto con dichos

20 materiales, por ejemplo, sangre, tejido, instrumental y prendas quirúrgicas, instrumental y prendas de laboratorio y aparatos y materiales de recogida o transfusión de sangre.

Los siguientes ejemplos no limitantes son ilustrativos de la divulgación.

Ejemplos

Preparación del compuesto 2

Se cargó un matraz de fondo redondo de 3 bocas de 1 l equipado con un conducto de nitrógeno, agitador de varilla y

5 termopar con 20 g (83,9 mmol, 1 equiv) de 1,1’-(bifenil-4,4’-diil)dietanona, 200 ml de CH2Cl2 y 8,7 ml (27,1 g, 169,3 mmol, 2,02 equiv) de bromo. Se dejó agitar la mezcla en atmósfera de nitrógeno durante aproximadamente 20 horas en condiciones ambientales. Se cargó la suspensión espesa resultante con 200 ml de CH2Cl2 y se concentró hasta aproximadamente 150 ml mediante destilación a vacío. Se intercambió entonces el disolvente de la suspensión espesa por THF hasta un volumen diana de 200 ml mediante destilación a vacío. Se enfrió la suspensión espesa a

10 20-25ºC durante 1 hora y se dejó agitar a 20-25ºC durante 1 hora adicional. Se filtraron los sólidos cristalinos blanquecinos y se lavaron con 150 ml de CH 2Cl2. Se secó el producto a vacío a 60ºC, proporcionando 27,4 g (69,2 mmol, 82%) del producto deseado: RMN-1H (400 MHz, CDCl3) 7,95-7,85 (m, 4H), 7,60-7,50 (m, 4H), 4,26 (s, 4H); RMN-13C (100 MHz, CDCl3) 191,0, 145,1, 133,8, 129,9, 127,9, 30,8; IR (KBr, cm-1) 3007, 2950, 1691, 1599, 1199; Anal calc. para C16H12Br2O2: C, 48,52; H, 3,05; Br, 40,34. Encontrado: C, 48,53; H, 3,03; Br, 40,53. EMAR calculado

15 para C16H13Br2O2 (M + H; DCI+): 394,9282. Encontrado: 394,9292. P.f.: 224-226ºC.

Preparación del compuesto 3

Se cargó un matraz con camisa de 500 ml equipado con un conducto de nitrógeno, termopar y agitador de varilla con 20 g (50,5 mmol, 1 equiv) de compuesto 2, 22,8 g (105,9 mol, 2,10 equiv) de 1-(terc-butoxicarbonil)-L-prolina y 200

20 ml de acetonitrilo. Se enfrió la suspensión espesa a 20ºC seguido de la adición de 18,2 ml (13,5 g, 104,4 mmol, 2,07 equiv) de DIPEA. Se calentó la suspensión espesa a 25ºC y se dejó agitar durante 3 horas. Se lavó la solución transparente orgánica resultante con 3 x 100 ml de NaCl acuoso al 13% en peso. Se intercambió el disolvente de la solución rica en acetonitrilo por tolueno (volumen diana = 215 ml) mediante destilación a vacío hasta que hubo menos de 0,5% en peso de acetonitrilo.

Boc N

H NN

N

N H

N Boc

Preparación del compuesto 4

fase orgánica enriquecida con 80 ml de ácido acético acuoso al 5% en vol, 30 ml de ácido acético y 20 ml de nbutanol manteniendo una temperatura > 50ºC. Se dividió la solución bifásica resultante manteniendo una

20-25ºC durante 1 hora y se envejeció a esa temperatura durante 1 hora adicional. Se filtró la suspensión espesa y se lavó la torta con 200 ml de tolueno:metanol 10:3. Se secó el producto a vacío a 70ºC, dando como resultado 19,8 g (31,7 mmol, 63%) del producto deseado: RMN-1H (400 MHz, DMSO-d6)

15 1,87 (m, 6H), 1,60-1,33 (s, 8H), 1,33-1,07 (s, 10H); RMN-13C (100 MHz, DMSO-d6)

1156, 1125; EMAR calculada para C36H45N6O4

(descompuesto).

4 HCl HN H N

N H

N

NN H

Preparación del compuesto 5

Se cargaron 25,0 g de compuesto 4 (40,01 mmol, 1 equiv) en un reactor de 250 ml equipado con un conducto de nitrógeno y agitador de varilla, seguido de 250 ml de metanol y 32,85 ml (400,1 mmol, 10 equiv) de HCl acuoso 6 M. Se aumentó la temperatura a 50ºC y se agitó a 50ºC durante 5 horas. Se enfrió la suspensión espesa resultante a

25 20-25ºC y se mantuvo con agitación durante aproximadamente 18 horas. La filtración de la suspensión espesa proporcionó un sólido que se lavó sucesivamente con 100 ml de 90% de metanol/agua (v/v) y 2 x 100 ml de metanol. Se secó la torta húmeda en una estufa a vacío a 50 C durante una noche, dando 18,12 g (31,8 mmol, 79,4%) del producto deseado.

Recristalización del compuesto 5

30 Se cargaron 17,8 g del compuesto 5 anterior en un reactor de 250 ml equipado con un conducto de nitrógeno y un agitador de varilla, seguido de 72 ml de metanol. Se agitó la suspensión espesa resultante a 50ºC durante 4 horas, se enfrió a 20-25ºC y se mantuvo con agitación a 20-25 C durante 1 hora. La filtración de la suspensión espesa proporcionó un sólido cristalino que se lavó con 60 ml de metanol. Se secó la torta seca resultante en una estufa a vacío a 50ºC durante 4 días, proporcionando 14,7 g (25,7 mmol, 82,6%) del producto purificado: RMN- 1H (400 MHz,

35 DMSO-d6) 10,5-10,25 (a, 2H), 10,1-9,75 (a, 2H), 8,19 (s, 2H), 7,05 (d, J = 8,4, 4H), 7,92 (d, J = 8,5, 4H), 5,06 (m, 2H), 3,5-3,35 (m, 4H), 2,6-2,3 (m, 4H), 2,25-2,15 (m, 2H), 2,18-1,96 (m, 2H); RMN-13C (100 MHz, DMSO-d6) 156,6, 142,5, 139,3, 128,1, 127,5, 126,1, 116,9, 53,2, 45,8, 29,8, 24,3; IR (KBr, cm-1) 3429, 2627, 1636, 1567, 1493, 1428, 1028. Anal calc. para C 26H32N6Cl4: C, 54,75; H, 5,65; Cl, 24,86; ajustado para 1,9% de agua: C, 53,71; H, 5,76; N, 14,46; Cl, 24,39. Encontrado: C, 53,74; H, 5,72; N, 14,50; Cl, 24,49; KF = 1,9. P.f.: 240 C (descompuesto).

H3CO

2 HCl

NH HOO

N

NN

NN N

OOH HN OCH3

Preparación del compuesto (I)

Se cargó secuencialmente un matraz con camisa de 1 l equipado con un conducto de nitrógeno y agitador de varilla con 100 ml de acetonitrilo, 13,69 g (89,4 mmol, 2,5 equiv) de hidrato de hidroxibenzotriazol, 15,07 g (86 mmol, 2,4

equiv) de N-(metoxicarbonil)-L-valina, 16,46 g (85,9 mmol, 2,4 equiv) de clorhidrato de 1-(3-dimetilaminopropil)-3 etilcarbodiimida y 100 ml adicionales de acetonitrilo. Se agitó la solución resultante a 20 C durante 1 hora y se cargó con 20,4 g (35,8 mmol, 1 equiv) de compuesto purificado 5. Se enfrió la suspensión espesa aproximadamente a 0ºC y se añadieron 18,47 g (142,9 mmol, 4 equiv) de diisopropiletilamina durante 30 minutos manteniendo una temperatura inferior a 10ºC. Se calentó lentamente la solución a 15ºC durante 3 horas y se mantuvo a 15ºC durante 12 horas. Se cargó la solución resultante con 120 ml de NaCl acuoso al 13% en peso y se calentó a 50ºC durante 1 hora. Después de enfriar a 20ºC, se añadieron 100 ml de acetato de isopropilo. Se filtró la solución bifásica a través de un filtro de 0,45 μm y se dividió la mezcla. Se lavó la fase orgánica enriquecida con 2 x 240 ml de una solución de NaOH 0,5 N que contenía 13% en peso de NaCl, seguido de 120 ml de NaCl acuoso al 13% en peso. Se intercambió entonces el disolvente de la mezcla por acetato de isopropilo mediante destilación a vacío con un

volumen diana de 400 ml. Se enfrió la solución turbia a 20ºC y se filtró a través de un filtro de 0,45 μm. Se

intercambió entonces el disolvente de la solución transparente por etanol mediante destilación a vacío con un volumen diana de 140 ml. Se añadieron 66,4 ml (82,3 mmol, 2,3 equiv) de HCl 1,24 M en etanol manteniendo una temperatura de 50ºC. Se cargó entonces la mezcla con 33 mg (0,04 mmol, 0,001 equiv) de cristales simientes de compuesto (I) (véase la preparación a continuación) y se agitó la suspensión espesa resultante a 50 C durante 3 horas. Se enfrió la mezcla a 20ºC durante 1 hora y se envejeció a esa temperatura durante 22 horas adicionales. Se filtró la suspensión espesa y se lavó la torta húmeda con 100 ml de acetona:etanol 2:1. Se secaron los sólidos a vacío en una estufa a vacío a 70ºC, dando 22,15 g (27,3 mmol, 76,3%) del producto deseado.

H3CO

O

. 2HCl OCH3

Tratamiento con carbono y recristalización del compuesto (I)

Se preparó una solución del compuesto (I) disolviendo 3,17 g de compuesto (I) anterior en 22 ml de metanol. Se pasó la solución a través de un filtro Cuno Zeta Carbon 53SP de 47 mm a ~34,5 kPa a un caudal de ~58 ml/min. Se aclaró el filtro de carbono con 32 ml de metanol. Se concentró la solución hasta 16 ml mediante destilación a vacío. Se añadieron 15,9 ml de acetona y 5 mg de cristales simientes del compuesto (I) (véase el procedimiento a continuación) manteniendo una temperatura de 40-50ºC. Se cargó entonces la suspensión espesa resultante con 32 ml de acetona durante 30 minutos. Se mantuvo la suspensión espesa a 50ºC durante 2 horas, se enfrió a 20ºC durante aproximadamente 1 hora y se mantuvo a 20ºC durante aproximadamente 20 horas. Se filtraron los sólidos, se lavaron con 16 ml de acetona:metanol 2:1 y se secaron en estufa a vacío a 60 C, dando 2,14 g (67,5%) de compuesto (I) purificado: RMN-1H (400 MHz, DMSO-d6, 80 C): 8,02 (d, J=8,34 Hz, 4H), 7,97 (s, 2H), 7,86 (d, J=8,34 Hz, 4H), 6,75 (s, 2H), 5,27 (t, J=6,44 Hz, 2H), 4,17 (t, J=6,95 Hz, 2H), 3,97-4,11 (m, 2H), 3,74-3,90 (m, 2H), 3,57 (s, 6H), 2,32-2,46 (m, 2H), 2,09-2,31 (m, 6H), 1,91-2,07 (m, 2H), 0,88 (d, J=6,57 Hz, 6H), 0,79 (d, J=6,32 Hz, 6H); RMN13C (75 MHz, DMSO-d6): 170,9, 156,9, 149,3, 139,1, 131,7, 127,1, 126,5, 125,9, 115,0, 57,9, 52,8, 51,5, 47,2, 31,1, 28,9, 24,9, 19,6, 17,7; IR (puro, cm-1): 3385, 2971, 2873, 2669, 1731, 1650. Anal. calc. para C40H52N8O6Cl2: C, 59,18; H, 6,45; N, 13,80; Cl, 8,73. Encontrado: C, 59,98; H, 6,80; N, 13,68; Cl, 8,77. P.f.: 267 C (descompuesto).

Preparación de cristales simientes del compuesto (I)

Se cargó un matraz de fondo redondo de 250 ml con 6,0 g (10,5 mmol, 1 equiv) de compuesto 5, 3,87g (22,1 mmol, 2,1 equiv) de N-(metoxicarbonil)-L-valina, 4,45g (23,2 mmol, 2,2 equiv) de clorhidrato de 1-(3-dimetilaminopropil)-3etilcarbodiimida, 0,289 g (2,14 mmol, 0,2 equiv) de 1-hidroxibenzotriazol y 30 ml de acetonitrilo. Se cargó entonces la suspensión espesa resultante con 7,33 ml (42,03 mmol, 4 equiv) de diisopropiletilamina y se dejó agitar a 24-30 C durante aproximadamente 18 horas. Se cargó la mezcla con 6 ml de agua y se calentó a 50ºC durante aproximadamente 5 horas. Se enfrió la mezcla y se cargó con 32 ml de acetato de etilo y 30 ml de agua. Se separaron las fases y se lavó la fase orgánica enriquecida con 30 ml de NaHCO3 acuoso al 10% en peso, 30 ml de agua y 20 ml de NaCl acuoso al 10% en peso. Se secó entonces la fase orgánica rica sobre MgSO4, se filtró y se concentró hasta un residuo. Se purificó entonces el material bruto mediante cromatografía ultrarrápida (gel de sílice, 0-10% de metanol en diclorometano), proporcionando la base libre del compuesto (I).

Se disolvió la base libre del compuesto (I) (0,03g) en 1 ml de isopropanol a 20ºC. Se añadió HCl anhidro (70 μl, disuelto en etanol, aproximadamente concentración 1,25 M) y se agitó la mezcla de reacción. Se añadió a la solución metil-terc-butiléter (1 ml) y se agitó vigorosamente la suspensión espesa resultante a 40 C a 50 C durante 12 horas. Se enfrió la suspensión espesa cristalina a 20ºC y se filtró. Se secó al aire la torta seca a 20ºC. Se obtuvo un sólido cristalino blanco (forma N-2 del compuesto (I)).

Se analizó la forma N-2 usando uno o más de los procedimientos de ensayo descritos a continuación.

1. Medidas de rayos X en monocristal

Se usó un difractómetro Bruker APEX2 Kappa CCD equipado con un ánodo giratorio generador de radiación Cu Kα(λ = 1,54178 Å) para recoger los datos de difracción a temperatura ambiente. Se llevaron a cabo la indexación y

procesamiento de los datos de intensidad medidos con el paquete de software/colección de programas APEX2

5 (APEX2 Data collection and processing user interface: APEX2 User Manual, v1.27; BRUKER AXS, INc., 5465 East Cheryl Parkway, Madison, WI 53711, EE.UU.). Los parámetros de celda unitaria finales se determinaron usando el conjunto entero de datos.

Se resolvió la estructura mediante procedimientos directos y se refinó mediante las técnicas de mínimos cuadrados de la matriz completa, usando el paquete de software SHELXTL (Sheldrick, GM. 1997, SHELXTL. Structure 10 Determination Programs. Version 5.10, Bruker AXS, Madison, Wisconsin, EE.UU.). La función minimizada en los refinamientos era w(|Fo| - |Fc|)2. R se define como ||Fo| -|Fc||/ |Fo| mientras que Rw = [ w( |Fo| -|Fc|)2/w |Fo|2]1/2, en la que w es una función de ponderación apropiada basada en los errores de las intensidades observadas. Se examinaron mapas de diferencia de Fourier en todas las etapas del refinamiento. Se refinaron todos los átomos no de hidrógeno con parámetros de desplazamiento térmico anisotrópico. Los átomos de hidrógeno asociados al enlace

15 de hidrógeno se localizaron en los mapas de diferencia de Fourier finales, mientras que las posiciones de los otros átomos de hidrógeno se calcularon a partir de una geometría idealizada con longitudes y ángulos de unión estándar. Se asignaron factores de temperatura isotrópicos y se incluyeron en los cálculos del factor estructural con parámetros fijos.

Se muestran en la Tabla 2 los datos cristalinos de la forma N-2. Se enumeran en la Tabla 3 las coordenadas 20 atómicas fraccionarias. Debe entenderse por cualquier experto en la técnica que son posibles ligeras variaciones en las coordenadas y se considera que están dentro del alcance de la presente divulgación.

Tabla 2. Datos cristalinos de la forma N-2

Temperatura t emperatura ambiente Longitud de onda 1,54178 Ǻ 25 Sistema cristalino, grupo espacial Triclínico, P1

Dimensiones de la celda unitaria a = 7,5680(2) Ǻ alfa = 74,132(2) ° b = 9,5848(3) Ǻ beta = 84,132(2) ° c = 16,2864(5) Ǻ gamma = 70,646(2)°

Volumen 1072,06(5) Ǻ3 30 Z, densidad calculada 1, 1,257 mg/m3

Tabla 3. Coordenadas atómicas (continuación) (continuación)

Átomo: X Y Z Átomo X Y Z

C7: 0,0807 -0,0688 0,0165 H3 0,0264 0,2281 -0,0035

C16: -0,5489 0,4635 -0,1121 H17 -0,7884 0,4046 -0,0848

C4: -0,0807 0,0688 -0,0165 H2 -0,2192 0,4393 -0,0575

C18: -0,7034 0,6975 -0,1863 H5 -0,2549 -0,0380 -0,0365

C13: 0,5516 -0,4628 0,1105 H6 -0,5015 0,1728 -0,0892

C15: 0,7037 -0,6988 0,1841 H9 0,5090 -0,1737 0,0755

C3: -0,0789 0,2157 -0,0218 H14 0,7875 -0,4013 0,0906

C10: 0,3885 -0,3317 0,0771 H12 -0,0376 -0,2264 0,0165

C1: -0,3895 0,3303 -0,0781 H11 0,2109 -0,4403 0,0683

C17: -0,7335 0,4794 -0,1115 H8 0,2590 0,0389 0,0270

C2: -0,2275 0,3428 -0,0531 H19 0,8664 -0,8827 0,2693

C5: -0,2458 0,0584 -0,0412 H20A 0,6721 -0,9411 0,1489

C6: -0,3950 0,1847 -0,0720 H20B 0,8848 -1,0218 0,1745

C9: 0,3978 -0,1858 0,0641 H22A 0,4299 -0,9831 0,2863

Átomo: X Y Z Átomo X Y Z

C14: 0,7330 -0,4774 0,1143 H22B 0,5433 -1,0623 0,3720

C12: 0,0728 -0,2143 0,0290 H24 0,4288 -0,8972 0,4553

C11: 0,2233 -0,3439 0,0597 H29A 0,3610 -0,6896 0,7199

C8: 0,2471 -0,0573 0,0347 H29B 0,5410 -0,6388 0,7042

C19: 0,7480 -0,8565 0,2404 H29C 0,5552 -0,8060 0,7046

C20: 0,7591 -0,9804 0,1959 H26A 0,0099 -0,5669 0,3086

C22: 0,5494 -1,0075 0,3126 H26B 0,2158 -0,5619 0,2923

C24: 0,3932 -0,7895 0,4232 H26C 0,1027 -0,5160 0,3723

C28: 0,4299 -0,7573 0,5628 H25 0,2074 -0,8105 0,3478

C29: 0,4783 -0,7007 0,6895 H21A 0,6629 -1,1660 0,2427

C26: 0,1249 -0,5830 0,3353 H21B 0,8099 -1,1619 0,3036

C25: 0,1972 -0,7461 0,3866 H27A 0,0368 -0,7163 0,4938

C21: 0,7052 -1,0999 0,2661 H27B 0,1093 -0,8874 0,4894

C27: 0,0588 -0,7834 0,4569 H27C -0,0572 -0,7699 0,4319

C23: 0,5435 -0,7711 0,3553 H30 -0,6271 0,8706 -0,2714

C30: -0,7440 0,8547 -0,2454 H31A -0,9249 0,9498 -0,1547

C34: -0,8171 0,7743 -0,3628 H31B -0,7674 1,0278 -0,1856

C31: -0,8522 0,9853 -0,2037 H33A -1,1460 0,9828 -0,2916

C33: -1,0373 1,0092 -0,3191 H33B -1,0659 1,0635 -0,3783

C32: -0,9782 1,1019 -0,2736 H32A -1,0859 1,1679 -0,2499

C38: -0,8340 0,7734 -0,5748 H32B -0,9111 1,1645 -0,3120

C36: -1,1117 0,7288 -0,3922 H36 -1,1758 0,7856 -0,3502

C39: -0,6953 0,7302 -0,7067 H39A -0,7874 0,7037 -0,7301

C37: -1,0485 0,5605 -0,3464 H39B -0,5733 0,6820 -0,7276

C35: -0,9477 0,7893 -0,4312 H39C -0,7221 0,8392 -0,7235

N1: 0,5385 -0,6067 0,1537 H37A -1,1562 0,5276 -0,3279

N4: -0,5358 0,6044 -0,1590 H37B -0,9757 0,5444 -0,2977

N2: 0,8232 -0,6215 0,1585 H37C -0,9736 0,5027 -0,3846

N3: -0,8254 0,6252 -0,1572 H35 -0,9995 0,8976 -0,4608

N6: -0,8719 0,8722 -0,3123 H1 0,4378 -0,6316 0,1597

N5: 0,5974 -0,8687 0,3055 H4 -0,4338 0,6276 -0,1688

N8: -0,8375 0,7087 -0,4913 H2A 0,9413 -0,6576 0,1685

N7: 0,3941 -0,6991 0,4812 H3A -0,9442 0,6631 -0,1654

Átomo: X Y Z Átomo X Y Z

O4: -0,6651 0,6742 -0,3518 H8A -0,7710 0,6146 -0,4726

O1: 0,6094 -0,6663 0,3446 H7 0,3699 -0,6020 0,4611

O2: 0,4413 -0,8890 0,6028 H40A -1,1909 0,7164 -0,5066

O3: 0,4448 -0,6524 0,5991 H40B -1,3113 0,8675 -0,4819

O5: -0,9383 0,8955 -0,6125 H40C -1,3481 0,7128 -0,4362

O6: -0,7001 0,6782 -0,6138

C40: -1,2538 0,7592 -0,4606

Cl1: -0,2486 0,7587 -0,1475

Cl2: 0,2421 -0,7524 0,1377

2.Difracción de rayos X en polvo

ranuras de autodivergencia y antidispersión, ranura receptora: 0,2 mm, centrifugador de muestra: encendido.

Se muestran en la FIG. 1 los resultados del patrón de PXRD y un patrón simulado calculado a partir de los datos en monocristal.

10 La Tabla 4 enumera los picos de PXRD característicos que describen la forma N-2 del compuesto (I).

Tabla 4. Posiciones de pico de difracción característicos (grados 2 0,1) a temperatura ambiente, basados en un patrón de alta calidad recogido con un difractómetro (cuK ) con un capilar giratorio con 2 calibrado con un patrón del NIST u otro adecuado.

Forma N-2

10,3

12,4

12,8

13,3

13,6

15,5

20,3

21,2

22,4

22,7

23,7

15 3 Calorimetría de barrido diferencial

Se realizaron experimentos de calorimetría de barrido diferencial (DSC) en un TA Instruments modelo Q2000, Q1000 o 2920. Se pesó la muestra (aproximadamente de 2-6 mg) en un platillo de aluminio, se registró exactamente a una centésima de miligramo y se transfirió a la DSC. Se purgó el instrumento con gas nitrógeno a 50 ml/min. Se recogieron los datos a entre temperatura ambiente y 300ºC a 10ºC/min de velocidad de calentamiento. Se realizó la

20 representación con los picos endotérmicos apuntando hacia abajo.

Se muestran los resultados en la FIG. 2.

4.RMN en estado sólido (SSNMR)

Se realizaron todas las medidas de RMN-13C en estado sólido con un espectrómetro de RMN Bruker DSX-400, a 400 MHz. Se obtuvieron espectros de alta resolución usando desacoplamiento de protón de alta potencia y la secuencia de impulsos TPPM y polarización cruzada con amplitud en pendiente (RAMP-CP) con rotación en ángulo mágico (MAS) aproximadamente a 12 kHz (A.E. Bennett et al. J. Chem. Phys. 1995, 103, 6951). (G. Metz, X. Wu y

S.O. Smith, J. Magn. Reson. A., 1994, 110, 219-227). Se usaron aproximadamente 70 mg de muestra empaquetada en un rotor de circonio con diseño de bote para cada experimento. Los desplazamientos químicos (δ) se

5 referenciaron a adamantano externo, fijándose la resonancia de alta frecuencia a 38,56 ppm (W.L. Earl y D.L. VanderHart, J. Magn. Reson., 1982, 48, 35-54).

Se muestra el espectro de SSNMR en la FIG. 3.

La Tabla 5 enumera los picos característicos de SSNMR que describen la forma N-2 del compuesto (I).

Tabla 5: Posiciones de pico de SSNMR de la forma N-2 del compuesto (I). δ de posiciones de pico (en ppm) 10 respecto a la escala de TMS.

Forma N-2

14,8

15,3

19,6

20,4

25,1

25,6

28,4

29,3

29,3

30,1

32,3

46,8

51,6

54,3

55,2

57,5

57,8

58,2

111,7

113,1

125,4

127,4

128,5

132,6

133,7

138,8

150,5

151,9

156,7

169,9

Claims

REIVINDICACIONES

1.- La forma N-2 de H3CO

NH

H

O O

N

N

N

N

N

N

O O

H

HN

. 2HCl OCH3

5 caracterizada por uno o más de los siguientes parámetros:

a) una celda unitaria con parámetros sustancialmente iguales a lo siguiente::

Dimensiones de celda: a = 7,5680 Åb= 9,5848 Åc = 16,2864 Å 10 α = 74,132 grados

= 84,132 grados

γ = 70,646 grados

grupo espacial P1 moléculas/celda unitaria 1

15 en la que la medida de dicha forma cristalina es a una temperatura entre aproximadamente 20ºC y aproximadamente 25ºC.

b) picos característicos en el patrón de difracción de rayos X en polvo a valores de dos teta de 10,3 0,1, 12,4 0,1, 12,8 0,1, 13,3 0,1, 13,6 0,1, 15,5 0,1, 20,3 0,1, 21,2 0,1, 22,4 0,1, 22,7 0,1 y 23,7 0,1 a una temperatura entre aproximadamente 20ºC y aproximadamente 25ºC; y/oc)

20 una mezcla fundida con endotermia de descomposición con inicio típicamente en el intervalo de 225-245 C.
2.- La forma de la reivindicación 1 que tiene una pureza de al menos un 90% en peso.
3.- La forma de la reivindicación 2 que tiene una pureza de al menos un 95% en peso.
4.- La forma de la reivindicación 2 que tiene una pureza de al menos un 99% en peso.

25 5.- Una composición farmacéutica que comprende la forma N-2, según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 y un portador o diluyente farmacéuticamente aceptable, opcionalmente en combinación con uno o dos compuestos adicionales que tienen actividad anti-HCV.
6.- La composición farmacéutica de la reivindicación 5, en la que dicha forma N-2, si se combina con uno o dos compuestos adicionales que tienen actividad anti-HCV, tiene una pureza de al menos un 90% en peso.

30 7.- La composición farmacéutica de la reivindicación 6, en la que dicha forma N-2, si se combina con uno o dos compuestos adicionales que tienen actividad anti-HCV, tiene una pureza de al menos un 95% en peso.
8. La composición farmacéutica de la reivindicación 6, en la que dicha forma N-2, si se combina con uno o dos compuestos adicionales que tienen actividad anti-HCV, tiene una pureza de al menos un 99% en peso.
9.- La composición de cualquiera de las reivindicaciones 5 a 8, en la que al menos uno de los compuestos 35 adicionales que tiene actividad anti-HCV es un interferón o ribavirina.
10.- La composición de la reivindicación 9, en la que el interferón está seleccionado de interferón alfa 2B, interferón alfa pegilado, interferón de consenso, interferón alfa 2A e interferón linfoblastoide tau.
11.- La composición de la reivindicación 5, en la que al menos uno de los compuestos adicionales está seleccionado de interleucina 2, interleucina 6, interleucina 12, un compuesto que potencia el desarrollo de una respuesta de 40 linfocitos T auxiliares de tipo 1, ARN interferente, ARN antisentido, Imiquimod, ribavirina, un inhibidor de 5’monofosfato de inosina deshidrogenasa, amantadina y rimantadina.
12.- Un compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 para su uso en un procedimiento de tratamiento

de infección por HCV.