ES2281170T3 - Inhibidores de serina proteasas, particularmente proteasa ns3 del virus de la hepatitis c. - Google Patents

Inhibidores de serina proteasas, particularmente proteasa ns3 del virus de la hepatitis c. Download PDF

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ES2281170T3 ES99915185T ES99915185T ES2281170T3 ES 2281170 T3 ES2281170 T3 ES 2281170T3 ES 99915185 T ES99915185 T ES 99915185T ES 99915185 T ES99915185 T ES 99915185T ES 2281170 T3 ES2281170 T3 ES 2281170T3
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    • C07D241/24—Carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals

Abstract

Compuesto de la **fórmula**, en el que: L es alquilo, en el que cualquier hidrógeno está opcionalmente sustituido por flúor; cada M es independientemente alquilo, cicloalquilo, arilo, aralquilo, heterociclilo, heterociclilalquilo, heteroarilo, o heteroaralquilo, en el que cualquier átomo de carbono puede reemplazarse por un heteroátomo que se selecciona independientemente de O o S, y en el que uno o más hidrógenos en M se reemplazan opcionalmente por 1 a 3 grupos J; J es alquilo, arilo, aralquilo, alcoxilo, ariloxilo, aralcoxilo, cicloalquilo, cicloalcoxilo, heterociclilo, heterocicliloxilo, heterociclilalquilo, oxo, hidroxilo, amino, alquilamino, alcanoilamino, aroilamino, aralcanoilamino, carboxilo, carboxialquilo, carboxamidoalquilo, halógeno, heteroarilo, ciano, nitro, formilo, acilo, sulfonilo, o sulfonamido en el que uno o más hidrógenos se reemplazan opcionalmente por 1-3 grupos J1; y J1 es alquilo, arilo, aralquilo, alcoxilo, ariloxilo, heterociclilo, heterocicliloxilo, oxo, hidroxilo, amino, alcanoilamino, aroilamino, carboxilo, carboxialquilo, carboxamidoalquilo, halógeno, ciano, nitro, formilo, sulfonilo, o sulfonamido; R11 es hidrógeno o alquilo C1-C3.

Description

Inhibidores de serina proteasas, particularmente proteasa NS3 del virus de la hepatitis C.
La presente invención se refiere a compuestos que son útiles como inhibidores de proteasas, particularmente como inhibidores de serina proteasa, y más particularmente como inhibidores de proteasa NS3 de la hepatitis C. Como tales, actúan interfiriendo con el ciclo de vida del virus de la hepatitis C y también son útiles como agentes antivirales.
Esta invención también se refiere a composiciones farmacéuticas que comprenden estos compuestos. Los compuestos y composiciones farmacéuticas de esta invención son particularmente bien adecuados para inhibir la actividad de la proteasa NS3 del VHC y, en consecuencia, pueden usarse ventajosamente como agentes terapéuticos contra el virus de la hepatitis C y otros virus que dependen de una serina proteasa para su proliferación. Esta invención también se refiere a métodos para inhibir la actividad de proteasas, incluyendo proteasa NS3 del virus de la hepatitis C y otras serina proteasas, usando los compuestos de esta invención y compuestos relacionados.
Antecedentes de la invención
La infección por el virus de la hepatitis C ("VHC") es un problema médico humano imperioso. Se reconoce el VHC como el agente causante para la mayoría de los casos de hepatitis que no son A ni B, con una seroprevalencia humana global estimada del 1% [Purcell, R.H., "Hepatitis C virus: Historical perspective and current concepts" FEMS Microbiology Reviews 14, págs. 181-192 (1994); Van der Poel, C.L., "Hepatitis C virus. Epidemiology, Transmission and Prevention in Hepatitis C virus. Current Studies in Hematology and Blood Transfusion, H.W. Reesink, Ed., (Basel: Karger), págs. 137-163 (1994)]. Cuatro millones de individuos pueden estar infectados solo en los Estados Unidos [Alter, M.J. y Mast, E.E., "The Epidemiology of Viral Hepatitis in the United States, Gastroenterol. Clin. North Am. 23, págs. 437-455 (1994)].
Con la primera exposición al VHC sólo aproximadamente el 20% de los individuos infectados desarrollan hepatitis clínica aguda mientras que otros parecen resolver la infección espontáneamente. Sin embargo, en la mayoría de los casos el virus establece una infección crónica que persiste durante décadas [Iwarson, S. "The Natural Course of Chronic Hepatitis" FEMS Microbiology Reviews 14, págs. 201-204 (1994)). Normalmente esto da como resultado una inflamación del hígado recurrente y que empeora progresivamente, que a menudo conduce a estados patológicos más graves tales como cirrosis y carcinoma hepatocelular [Kew, M.C., "Hepatitis C and Hepatocellular Carcinoma", FEMS Microbiology Reviews, 14, págs. 211-220 (1994); Saito, I., et al. "Hepatitis C Virus Infection is Associated with the Development of Hepatocellular Carcinoma" Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87, págs. 6547-6549 (1990)]. Desafortunadamente, no hay tratamientos ampliamente eficaces para la progresión debilitante del VHC crónico.
El genoma del VHC codifica para una poliproteína de 3010-3033 aminoácidos [Choo, Q.-L., et al. "Genetic Organization and Diversity of the Hepatitis C Virus", Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 88, págs. 2451-2455 (1991); Kato, N. et al., Molecular Cloning of the Human Hepatitis C Virus Genome From Japanese Patients with Non-A, Non-B Hepatitis", Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 87, págs. 9524-9528 (1990); Takamizawa, A. et al., "Structure and Organization of the Hepatitis C Virus Genome Isolated From Human Excipientes", J. Virol., 65, págs. 1105-1113 (1991)]. Se presume que las proteínas no estructurales (NS) del VHC proporcionan la maquinaria catalítica esencial para la replicación viral. Las proteínas NS se derivan mediante escisión proteolítica de la poliproteína [Bartenschlager, R. et al., "Nonstructural Protein 3 of the Hepatitis C Virus Encodes a Serine-Type Proteinase Required for Cleavage at the NS3/4 y NS4/5 Junctions", J. Virol., 67, págs. 3835-3844 (1993); Grakoui, A. et al. "Characterization of the Hepatitis C Virus-Encoded Serine Proteinase: Determination of Proteinase-Dependent Poliprotein Cleavage Sites", J. Virol., 67, págs. 2832-2843 (1993); Grakoui, A. et al., Expression and Identification of Hepatitis C Virus Poliprotein Cleavage Products", J. Virol., 67, págs. 1385-1395 (1993); Tomei, L. et al., "NS3 is a serine protease required for processing of hepatitis C virus polyprotein", J. Virol., 67, págs. 4017-4026 (1993)].
La proteína NS 3 (NS3) del VHC contiene una actividad serina proteasa que ayuda al proceso de la mayoría de las enzimas virales, y por tanto se considera esencial para la infectividad y replicación viral. Se sabe que las mutaciones en la proteasa NS3 del virus de la fiebre amarilla disminuyen la infectividad viral [Chambers, T.J. et al., "Evidence that the N-terminal Domain of Nonstructural Protein NS3 From Yellow Fever Virus is a Serine Proteasa Responsible for Site-Specific Cleavages in the Viral Poliprotein", Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 87, págs. 8898-8902 (1990)]. Se ha mostrado que los primeros 181 aminoácidos de NS3 (residuos 1027-1207 de la poliproteína viral) contienen el dominio serina proteasa de NS3 que procesa los cuatro sitios en sentido 3' de la poliproteína del VHC [C. Lin et al., "Hepatitis C Virus NS3 Serine Proteinase: Trans-Cleavage Requirements and Processing Kinetics", J. Virol., 68, págs. 8147-8157 (1994)].
La serina proteasa NS3 del VHC y su cofactor asociado, NS4A, ayuda a procesar todas las enzimas virales, y por tanto se considera esencial para la replicación viral. Este procesamiento parece ser análogo al llevado a cabo por la aspartil proteasa del virus de la inmunodeficiencia humana, que también está implicado en el procesamiento de enzimas virales. Los inhibidores de proteasa de VIH, que inhiben el procesamiento de proteínas virales, son agentes antivirales potentes en el ser humano, lo que indica que interrumpir esta fase del ciclo de vida viral da como resultado principios terapéuticamente activos. En consecuencia, es una diana atractiva para la investigación de fármacos. Desafortunadamente, no hay inhibidores de serina proteasa actualmente disponibles como agentes anti-VHC.
Además, el actual entendimiento del VHC no ha conducido a ningún otro tratamiento o agente anti-VHC. El único tratamiento establecido para la enfermedad del VHC es el tratamiento con interferón. Sin embargo, los interferones tienen efectos secundarios significativos (Janssen et al., 1994; Renault y Hoofnagle, 1989) [Janssen, H. L. A., et al. "Suicide Associated with Alfa-Interferon Therapy for Chronic Viral Hepatitis" J. Hepatol., 21, págs. 241-243 (1994)]; Renault, P.F. y Hoofnagle, J.H., “Side effects of alpha interferon”. Seminars in Liver Disease 9, 273-277. (1989)] e inducen una remisión a largo plazo en tan sólo una fracción (~25%) de los casos [Weiland, O. "Interferon Therapy in Chronic Hepatitis C Virus Infection", FEMS Microbiol.Rev., 14, págs. 279-288 (1994)]. Además, las perspectivas para vacunas anti-VHC eficaces permanecen inciertas.
Por tanto, hay necesidad de tratamientos anti-VHC más eficaces. Tales inhibidores tendrán un potencial terapéutico como inhibidores de proteasa, particularmente como inhibidores de serina proteasa, y más particularmente como inhibidores de proteasa NS3 del VHC. Específicamente, tales compuestos pueden ser útiles como agentes antivirales, particularmente como agentes anti-VHC.
Sumario de la invención
La presente invención proporciona compuestos, y derivados farmacéuticamente aceptables de los mismos, que son útiles como inhibidores de proteasas, particularmente como inhibidores de serina proteasa, y más particularmente como inhibidores de proteasa NS3 del VHC. Estos compuestos pueden usarse solos o en combinación con agentes inmunomoduladores, tales como \alpha, \beta o \gamma-interferones; otros agentes antivirales tales como ribavirina y amantadina; otros inhibidores de proteasa de hepatitis C; inhibidores de otras dianas en el ciclo de vida del VHC incluyendo helicasa, polimerasa, metaloproteasa, o entrada interna de los ribosomas; o combinaciones de los mismos.
La presente invención también proporciona métodos para inhibir proteasas, particularmente serina proteasas, y más particularmente proteasa NS3 del VHC.
La presente invención también proporciona composiciones farmacéuticas que comprenden los compuestos de esta invención, así como composiciones de múltiples componentes que comprenden agentes inmunomoduladores adicionales, tales como \alpha, \beta o \gamma-interferones; otros agentes antivirales tales como ribavirina y amantadina; otros inhibidores de proteasa de la hepatitis C; inhibidores de otras dianas en el ciclo de vida del VHC incluyendo helicasa, polimerasa, metaloproteasa, o entrada interna de los ribosomas; o combinaciones de los mismos. La invención también proporciona métodos para usar los compuestos de esta invención, así como otros compuestos relacionados, para la inhibición del VHC.
Descripción detallada de la invención
Con el fin de que pueda entenderse más completamente la invención descrita en el presente documento, se expone la siguiente descripción detallada. En la descripción, se usan las siguientes abreviaturas:
Designación
Reactivo o fragmento
Abu
ácido aminobutírico
Ac
acetilo
AcOH
ácido acético
Bn
bencilo
Boc
terc-butiloxicarbonilo
Bz
benzoilo
Cbz
carbobenciloxilo
CDI
carbonildiimidazol
DCE
1,2-dicloroetano
DCM
diclorometano
DIEA
diisopropiletilamina
DMA
dimetilacetamida
DMAP
dimetilaminopiridina
DMF
dimetilformamida
DPPA
difenilfosforilazida
DMSO
dimetilsulfóxido
Et
etilo
EtOAc
acetato de etilo
FMOC
9-fluorenilmetoxicarbonilo
HbtU
hexafluorofosfato de O-benzotriazolil-N,N,N',N'-tetrametiluronio
HOBt
N-hidroxibenzotriazol
HPLC
cromatografía de líquidos de alta resolución
Me
metilo
MS
espectrometría de masas
NMP
N-metilpirrolidinona
ND
no determinado
Pip
piperidina
Prz
piperazina
PyBrop
hexafluorofosfato de bromo-tris-pirrolidinofosfonio
Pyr
piridina
THF
tetrahidrofurano
TFA
ácido trifluoroacético
TFE
trifluoroetanol
Tol
tolueno.
\vskip1.000000\baselineskip
En el presente documento se utilizan los siguientes términos:
A menos que se mencione expresamente lo contrario, los términos "-SO_{2}-" y "-S(O)_{2}-" tal como se usan en el presente documento se refieren a una sulfona o derivado de sulfona (es decir, ambos grupos adjuntos unidos al S), y no a un éster de sulfinato.
El término "sustituido" se refiere al reemplazo de uno o más radicales hidrógeno en una estructura dada por un radical seleccionado a partir de un grupo especificado. Cuando puede reemplazarse más de un radical hidrógeno por un sustituyente seleccionado del mismo grupo especificado, los sustituyentes pueden ser bien iguales o bien diferentes en todas las posiciones.
Tal como se usan en el presente documento, el término "amino" se refiere a un nitrógeno trivalente que puede ser primario o que puede estar sustituido con 1-2 grupos alquilo.
El término "alquilo" o "alcano", solo o en combinación con cualquier otro término, se refiere a un radical de hidrocarburo alifático saturado de cadena lineal o cadena ramificada, que contiene el número especificado de átomos de carbono, o en el que no se especifica ningún número, preferiblemente desde 1-10 y más preferiblemente desde 1-5 átomos de carbono. Ejemplos de radicales alquilo incluyen, pero no se limitan a, metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, n-butilo, isobutilo, sec-butilo, terc-butilo, pentilo, isoamilo, n-hexilo y similares.
El término "alquenilo" o "alqueno", solo o en combinación con cualquier otro término, se refiere a un radical de hidrocarburo alifático mono o poliinsaturado, de cadena lineal o cadena ramificada, que contiene el número especificado de átomos de carbono, o en el que no se especifica ningún número, preferiblemente desde 2-10 átomos de carbono y más preferiblemente, desde 2-5 átomos de carbono. Ejemplos de radicales alquenilo incluyen, pero no se limitan a, etenilo, E- y Z-propenilo, E- y Z-isobutenilo, E- y Z-pentenilo, E- y Z-hexenilo, E,E-, E,Z-, Z,E-, y Z-Z-hexadienilo y similares.
El término "alquinilo" o "alquino", solo o en combinación con cualquier otro término, se refiere a un radical de hidrocarburo alifático mono o poliinsaturado, de cadena lineal o cadena ramificada, que contienen el número especificado de átomos de carbono, o en el que no se especifica ningún número, preferiblemente desde 2-10 átomos de carbono y más preferiblemente, desde 2-5 átomos de carbono, en el que al menos uno de los radicales de hidrocarburo alifático insaturado comprende un triple enlace. Ejemplos de radicales alquinilo incluyen, pero no se limitan a, etinilo, propinilo, isobutinilo, pentinilo, hexinilo, hexeninilo, y similares.
El término "arilo", solo o en combinación con cualquier otro término, se refiere a un radical aromático carbocíclico que contiene el número especificado de átomos de carbono, y que puede estar opcionalmente condensado, por ejemplo benzocondensado, con uno a tres anillos cicloalquilo, aromáticos, heterocíclicos o heteroaromáticos. Los grupos arilo preferidos tienen desde 6-14 átomos de carbono, y grupos más preferidos desde 6-10 átomos de carbono. Ejemplos de radicales arilo incluyen, pero no se limitan a, fenilo, naftilo, antracenilo y similares.
El término "carbociclo", solo o en combinación con cualquier otro término, se refiere a un radical de anillo de de 3 a 8 átomos de carbono no aromático, que puede estar saturado, monoinsaturado o poliinsaturado, y que puede estar opcionalmente condensado, por ejemplo benzocondensado, con uno a tres anillos cicloalquilo, aromáticos, heterocíclicos o heteroaromáticos. El carbociclo puede estar unido por cualquier átomo de carbono endocíclico que dé como resultado una estructura estable.
Los términos "cicloalquilo" o "cicloalcano", solos o en combinación con cualquier otro término, se refieren a un radical de anillo no aromático de 3 a 8 átomos de carbono, estable, que está saturado y que puede estar opcionalmente condensado, por ejemplo benzocondensado, con uno a tres anillos cicloalquilo, aromáticos, heterocíclicos o heteroaromáticos. El cicloalquilo puede estar unido por cualquier átomo de carbono endocíclico que dé como resultado una estructura estable. Los carbociclos preferidos tienen de 5 a 6 átomos de carbono. Ejemplos de radicales carbociclo incluyen, pero no se limitan a, ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo, cicloheptilo, ciclopentenilo, ciclohexenilo, indano, tetrahidronaftaleno y similares.
El término "cicloalquenilo" o "cicloalqueno" solo o en combinación con cualquier otro término, se refiere a un radical de anillo de hidrocarburo cíclico estable, que contiene al menos un doble enlace carbono-carbono endocíclico. El carbociclo puede estar unido por cualquier átomo de carbono del ciclo que dé como resultado una estructura estable. Cuando no se especifica ningún número de átomos de carbono, un radical cicloalquenilo tiene preferiblemente desde 5-7 átomos de carbono. Ejemplos de radicales cicloalquenilo incluyen, pero no se limitan a, ciclopentenilo, ciclohexenilo, ciclopentadienilo, indenilo y similares.
El término "cicloalquilidenilo", solo o en combinación con cualquier otro término, se refiere a un radical de anillo de hidrocarburo cíclico estable, que contiene al menos un doble enlace carbono-carbono exocíclico, en el que el anillo de hidrocarburo cíclico puede estar opcionalmente condensado, por ejemplo benzocondensado, con uno a tres anillos cicloalquilo, aromáticos, heterocíclicos o heteroaromáticos. El carbociclo puede estar unido por cualquier átomo de carbono del ciclo, que dé como resultado una estructura estable. Cuando no se especifica ningún número de átomos de carbono, un radical cicloalquilidenilo tiene preferiblemente desde 5-7 átomos de carbono. Ejemplos de radicales cicloalquilidenilo incluyen, pero no se limitan a, ciclopentilidenilo, ciclohexilidenilo, ciclopentenilidenilo y similares.
El experto constatará que ciertos grupos pueden clasificarse o bien como cicloalcanos o bien como grupos arilo. Ejemplos de tales grupos incluyen grupos indanilo y tetrahidronaftilo.
El término "monociclo" o "monocíclico" solo o en combinación con cualquier otro término, a menos que se defina de otro modo en el presente documento, se refiere a un sistema cíclico de 5-7 miembros.
El término "biciclo" o "bicíclico" solo o en combinación con cualquier otro término, a menos que se defina de otro modo en el presente documento, se refiere a un sistema cíclico de 6-11 miembros.
El término "triciclo" o "tricíclico" solo o en combinación con cualquier otro término, a menos que se defina de otro modo en el presente documento, se refiere a un sistema cíclico de 11-15 miembros.
Los términos "heterociclilo" y "heterociclo", solos o en combinación con cualquier otro término, a menos que se defina de otro modo en el presente documento, se refieren a un anillo heterocíclico, mono, bi o tricíclico, de 5 a 15 miembros, estable, que está o bien saturado o bien parcialmente insaturado, pero no aromático, y que puede estar opcionalmente condensado, por ejemplo benzocondensado, con uno a tres anillos cicloalquilo, aromáticos, heterocíclicos o heteroaromáticos. Cada heterociclo consiste en uno o más átomos de carbono y desde uno hasta cuatro heteroátomos seleccionados del grupo que consiste en nitrógeno, oxígeno y azufre. Tal como se usan en el presente documento, los términos "heteroátomos de nitrógeno y azufre" incluyen cualquier forma oxidada de nitrógeno y azufre, y la forma cuaternizada de cualquier nitrógeno básico. Un heterociclo puede estar unido por cualquier heteroátomo o carbono endocíclico que dé como resultado la creación de una estructura estable.
\newpage
Heterociclos preferidos definidos anteriormente incluyen, por ejemplo, imidazolidinilo, indazolinolilo, perhidropiridazilo, pirrolinilo, pirrolidinilo, piperidinilo, pirazolinilo, piperazinilo, morfolinilo, tiamorfolinilo, \beta-carbolinilo, tiazolidinilo, tiamorfolinilsulfona, oxopiperidinilo, oxopirrolidinilo, oxoazepinilo, azepinilo, furazanilo, tetrahidropiranilo, tetrahidrofuranilo, oxatiolilo, ditiolilo, tetrahidrotiofenilo, dioxanilo, dioxolanilo, tetrahidrofurotetrahidrofuranilo, tetrahidropiranotetrahidrofuranilo, tetrahidrofurodihidrofuranilo, tetrahidropiranodihidrofuranilo, dihidropiranilo, dihidrofuranilo, dihidrofurotetrahidrofuranilo, dihidropiranotetrahidrofuranilo, sulfolanilo y similares.
Los términos "heteroarilo" y "heteroaromático" solos o en combinación con cualquier otro término, a menos que se defina de otro modo en el presente documento, se refieren a un anillo heterocíclico monocíclico de 3 a 7 miembros estable, que es aromático, y que puede estar opcionalmente condensado, por ejemplo, benzocondensado, con uno a tres anillos cicloalquilo, aromáticos, heterocíclicos o heteroaromáticos. Cada anillo heteroaromático consiste en uno o más átomos de carbono y desde uno hasta cuatro heteroátomos seleccionados del grupo que consiste en nitrógeno, oxígeno y azufre. Tal como se usan en el presente documento, los términos "heteroátomos de nitrógeno y azufre" incluyen cualquier forma oxidada de nitrógeno y azufre, y la forma cuaternizada de cualquier nitrógeno básico. Un anillo heteroaromático puede estar unido por cualquier heteroátomo o carbono endocíclico que dé como resultado la creación de una estructura aromática, estable.
Compuestos heteroaromáticos preferidos definidos anteriormente incluyen, por ejemplo, bencimidazolilo, imidazolilo, quinolilo, isoquinolilo, indolilo, indazolilo, piridazilo, piridilo, pirrolilo, pirazolilo, pirazinilo, quinoxolilo, piranilo, pirimidinilo, piridazinilo, furilo, tienilo, triazolilo, tiazolilo, tetrazolilo, benzofuranilo, oxazolilo, benzoxazolilo, isoxazolilo, isotiazolilo, tiadiazolilo, tiofenilo, oxadiazolilo, oxatriazolilo, tiatriazolilo, ditiazolilo, dioxazolilo, oxatiazolilo, triazinilo y similares.
El término "halógeno" se refiere a un radical de flúor, cloro, bromo o yodo. Radicales halógeno preferidos incluyen flúor y cloro.
En las fórmulas químicas, se usan paréntesis en el presente documento para indicar 1) la presencia de más de un átomo o grupo unido al mismo átomo o grupo; o 2) un punto de ramificación en una cadena (es decir, el grupo o átomo inmediatamente antes del paréntesis abierto está unido directamente al grupo o átomo inmediatamente después del paréntesis cerrado). Un ejemplo del primer uso es "N(R^{1})_{2}" representando dos grupos R^{1} unidos al átomo de nitrógeno. Un ejemplo del segundo uso es "-C(O)R_{1}" representando un átomo de oxígeno y un R^{1} unidos al átomo de carbono, tal como en la siguiente estructura:
1
Tal como se usa en el presente documento, "B" indica un átomo de boro.
Los expertos en la técnica constatarán que ciertas combinaciones de selecciones de restos para variables en las estructuras genéricas expuestas a lo largo de esta solicitud producen compuestos químicamente inestables o inviables. No se pretende que tales compuestos formen parte de la presente invención.
La presente invención proporciona compuestos que son útiles como inhibidores de proteasa, particularmente como inhibidores de serina proteasa, y más particularmente como inhibidores de proteasa NS3 del VHC. Como tales, pueden actuar interfiriendo con el ciclo de vida del virus VHC y otros virus que dependen de una serina proteasa para su proliferación. Por tanto, estos compuestos son útiles como agentes antivirales.
Según una realización, la presente invención proporciona un compuesto de la fórmula (I):
2
L es alquilo, en el que cualquier hidrógeno unido a un átomo de carbono está opcionalmente sustituido con flúor.
Cada M es independientemente alquilo, cicloalquilo, arilo, aralquilo, heterociclilo, heterociclilalquilo, heteroarilo, o heteroaralquilo, y está opcionalmente sustituido con 1 a 3 grupos J, en el que cualquier átomo de carbono de alquilo puede reemplazarse por un heteroátomo seleccionado de O o S.
R^{11} es hidrógeno o alquilo C_{1}-C_{3}.
Cada R^{19} es independientemente H o R^{21}-arilo, o 2 R^{19} adyacentes pueden unirse entre sí para formar un anillo aromático de 5-7 miembros, en el que cualquier R^{19} está opcionalmente sustituido con 1 a 4 grupos J independientemente seleccionados. Cuando se unen 2 R^{19} adyacentes entre sí para formar un anillo aromático de 5-7 miembros, se forma un sistema cíclico bicíclico que consiste en el anillo aromático mostrado en la fórmula I y el anillo aromático formado por los dos grupos R^{19} adyacentes. Cuando R^{19} es R^{21}-arilo, esta sustitución opcional puede producirse en uno o más átomos de carbono de R^{21} y/o uno o más átomos de anillo de dicho arilo. Cuando 2 R^{19} adyacentes se unen entre sí para formar un anillo aromático de 5-7 miembros, la sustitución opcional puede producirse en uno o más átomos del anillo aromático resultante.
Cada R^{21} es independientemente alquilo C_{1}-C_{3} lineal o ramificado, o O-alquilo (C_{1}-C_{3}) lineal o ramificado.
A^{2} es un enlace o -N(R^{11})-C(H) (M)-C(O)-.
T es -R^{12} o -alquil-R^{12},
Cada R^{12} se selecciona independientemente de hidrógeno, arilo, heteroarilo, cicloalquilo, heterociclilo, cicloalquilidenilo, o heterocicloalquilidenilo, y está opcionalmente sustituido con 1 a 3 grupos J; o un primer R^{12} y un segundo R^{12}, junto con el nitrógeno al que están unidos, forman un sistema cíclico mono o bicíclico opcionalmente sustituido con 1 a 3 grupos J.
Cada J es independientemente alquilo, arilo, aralquilo, alcoxilo, ariloxilo, aralcoxilo, cicloalquilo, cicloalcoxilo, heterociclilo, heterocicliloxilo, heterociclilalquilo, ceto, hidroxilo, amino, alquilamino, alcanoilamino, aroilamino, aralcanoilamino, carboxilo, carboxialquilo, carboxamidoalquilo, halógeno, ciano, nitro, formilo, acilo, sulfonilo, o sulfonamido y está opcionalmente sustituido con 1 a 3 grupos J^{1}.
Cada J^{1} se selecciona independientemente de alquilo, arilo, aralquilo, alcoxilo, ariloxilo, heterociclilo, heterocicliloxilo, ceto, hidroxilo, amino, alcanoilamino, aroilamino, carboxilo, carboxialquilo, carboxamidoalquilo, halógeno, ciano, nitro, formilo, sulfonilo, o sulfonamido.
Preferiblemente, J es alquilo, alcoxilo, ariloxilo, arilo, aralquilo, aralcoxilo, halógeno, heteroarilo, ciano, amino, nitro, heterociclilo, acilo, carboxilo, carboxialquilo, alquilamino, hidroxilo, heterociclilalquilo, aralcanoilamino, aroilamino, alcanoilamino, formilo o ceto.
Más preferiblemente, J es t-butilo, metilo, trifluorometilo, hidroxilo, metoxilo, etoxilo, trifluorometoxilo, carboxilo, fenilo, bencilo, fenoxilo, benciloxilo, flúor, cloro, bromo, isoxazolilo, piridinilo, piperidinilo, carboximetilo, carboxietilo, dialquilamino, morfolinilmetilo, fenilacetilamino, o acilamino.
Preferiblemente, J^{1} es alcoxilo, alquilo, halógeno o arilo.
Más preferiblemente, J^{1} es alcoxilo C_{1-3}, cloro, alquilo C_{1-3}, o fenilo.
L es alquilo.
Más preferiblemente, L es trihalometilo, o alquil sustituido con trihalometilo. Lo más preferiblemente, L es -CH_{2}CH_{3} o-CH_{2}CF_{3}.
Preferiblemente, M es alquilo, heteroaralquilo, arilo, cicloalquilalquilo, aralquilo, o aralquilo, en el que uno de los átomos de carbono de alquilo se reemplaza por O o S.
Más preferiblemente M es isopropilo, propilo, metilo, piridilmetilo, bencilo, naftilmetilo, fenilo, imidazolilmetilo, tiofenilmetilo, ciclohexilmetilo, fenetilo, benciltiometilo, o benciloxietilo. Lo más preferiblemente, M es isopropilo.
Preferiblemente, un R^{19} es R^{21}-arilo y los otros dos R^{19} son H o dos R^{19} se unen juntos para formar un anillo aromático y el otro R^{19} es H. Se prefiere más cuando un R^{19} es -O-(alquil C_{1}-C_{3})-arilo o los dos R^{19} unidos juntos forman un anillo aromático de 6 miembros. Lo más preferido es cuando un R^{19} es -O-bencilo o los dos R^{19} unidos juntos forman fenilo.
Preferiblemente, R^{18} es -N(H)- o -N(CH_{3})-.
Se prefiere que A^{2} sea un enlace o -N(H)-C(M)-C(O)-, en el que M es isopropilo.
Preferiblemente, V es -NH-.
T es -R^{12} o -alquil-R^{12}.
Preferiblemente, R^{12} es aril o heteroarilo y está opcionalmente sustituido con 1-3 grupos J. Más preferiblemente, R^{12} es naftilo, pirazinilo, o piridilo, cualquiera de los cuales está opcionalmente sustituido con un grupo hidroxilo.
Los compuestos más preferidos de esta invención se enumeran en la tabla 1 a continuación.
TABLA 1 Compuestos preferidos de la fórmula
3
4
5
Esta invención anticipa que muchos inhibidores de la proteasa NS3 dirigidos al sitio activo pueden ser de naturaleza peptidomimética y por tanto pueden diseñarse a partir del sustrato natural. Por tanto, los sustituyentes preferidos en los inhibidores peptidomiméticos de esta invención incluyen aquellos que corresponden a la estructura principal o cadenas laterales de sustratos que se producen en la naturaleza o sustratos sintéticos con alta afinidad por la enzima (K_{m} baja).
El experto constatará que algunos grupos determinados pueden clasificarse o bien como heterociclos o bien como compuestos heteroaromáticos, dependiendo del punto de unión.
Los compuestos de esta invención pueden contener uno o más átomos de carbono asimétricos y por tanto pueden producirse como racematos y mezclas racémicas, enantiómeros únicos, mezclas diastereoméricas y diastereómeros individuales. Todas las formas isoméricas de este tipo de estos compuestos se incluyen expresamente en la presente invención. Cada carbono estereogénico puede ser de configuración R o S. Las combinaciones de sustituyentes y variables previstas por esta invención sólo son las que dan como resultado la formación de compuestos estables. El término "estable", tal como se usa en el presente documento, se refiere a compuestos que tienen estabilidad suficiente para permitir la fabricación y que conservan la integridad del compuesto durante un periodo de tiempo suficiente para ser útiles para los fines detallados en el presente documento (por ejemplo, administración terapéutica o profiláctica a un mamífero o para su uso en aplicaciones de cromatografía de afinidad). Normalmente, tales compuestos son estables a una temperatura de 40ºC o inferior, en ausencia de humedad y otras condiciones químicamente reactivas, durante al menos una semana.
Los compuestos de esta invención pueden sintetizarse usando técnicas convencionales. Ventajosamente, estos compuestos se sintetizan convenientemente a partir de materiales de partida fácilmente disponibles.
Tal como se usan en el presente documento, los compuestos de esta invención se definen para incluir profármacos o derivados farmacéuticamente aceptables de los mismos. Un "profármaco o derivado farmacéuticamente aceptable" se refiere a cualquier sal, éster, sal de un éster y otro derivado farmacéuticamente aceptable de un compuesto de esta invención que, al administrarse a un receptor, puede proporcionar (directa o indirectamente) un compuesto de esta invención.
En consecuencia, esta invención también proporciona profármacos de los compuestos de esta invención, que son derivados que se diseñan para potenciar propiedades biológicas tales como absorción oral, aclaramiento, metabolismo o distribución compartimental. Tales derivaciones se conocen bien en la técnica.
Tal como comprenderá el experto, los compuestos de esta invención pueden modificarse añadiendo funcionalidades apropiadas para potenciar propiedades biológicas selectivas. Tales modificaciones se conocen en la técnica e incluyen aquellas que aumentan la penetración biológica dentro de un compartimiento biológico dado (por ejemplo, sangre, sistema linfático, sistema nervioso central), aumentan la disponibilidad oral, aumentan la solubilidad para permitir la administración mediante inyección, alteran el metabolismo y alteran la tasa de excreción.
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El término "protegido" se refiere a cuando el grupo funcional designado está unido a un grupo químico adecuado (grupo protector). Ejemplos de grupos protectores de amino y grupos protectores se describen en T.W. Greene y P.G.M. Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, 2ª Ed., John Wiley and Sons (1991); L. Fieser y M.Fieser, Fieser and Fieser's Reagents for Organic Synthesis, John Wiley and Sons (1994); L. Paquette, ed. Enciclopedia of Reagents for Organic Synthesis, John Wiley and Sons (1995) y se muestran como ejemplos en algunos de los compuestos específicos usados en esta invención.
Profármacos y derivados particularmente favorecidos son aquellos que aumentan la biodisponibilidad de los compuestos de esta invención cuando se administran tales compuestos a un mamífero (por ejemplo, permitiendo que un compuesto administrado por vía oral se absorba más fácilmente dentro de la sangre), tienen perfiles metabólicos o tasas de aclaramiento más favorables, o que potencian la administración del compuesto original a un compartimiento biológico (por ejemplo, el cerebro o sistema linfático) con respecto a la especie original. Profármacos preferidos incluyen derivados en los que se une un grupo que potencia la solubilidad acuosa o transporte activo a través de la membrana intestinal a la estructura de fórmula (I).
Sales farmacéuticamente aceptables de los compuestos de esta invención incluyen aquellas derivadas de bases y ácidos inorgánicos y orgánicos farmacéuticamente aceptables. Ejemplos de sales de ácidos adecuadas incluyen acetato, adipato, alginato, aspartato, benzoato, bencenosulfonato, bisulfato, butirato, citrato, camforato, camforsulfonato, ciclopentanopropionato, digluconato, dodecilsulfato, etanosulfonato, formiato, fumarato, glucoheptanoato, glicerofosfato, glicolato, hemisulfato, heptanoato, hexanoato, clorhidrato, bromhidrato, yodhidrato, 2-hidroxietanosulfonato, lactato, maleato, malonato, metanosulfonato, 2-naftalenosulfonato, nicotinato, nitrato, oxalato, palmoato, pectinato, persulfato, 3-fenilpropionato, fosfato, picrato, pivalato, propionato, salicilato, succinato, sulfato, tartrato, tiocianato, tosilato y undecanoato. Otros ácidos, tales como oxálico, aunque por sí mismos no son farmacéuticamente aceptables, pueden emplearse en la preparación de sales útiles como productos intermedios para obtener los compuestos de la invención y sus sales de adición de ácido farmacéuticamente aceptables.
Las sales derivadas de bases apropiadas incluyen metales alcalinos (por ejemplo, sodio y potasio), metales alcalinotérreos (por ejemplo, calcio y magnesio), sales con bases orgánicas, tales como sales de diciclohexilamina, N-metil-D-glucamina, sales como aminoácidos tales como arginina y lisina, amonio y sales de N-(alquilo C_{1-4})_{4}^{+}.
Esta invención también prevé la cuaternización de cualquier grupo que contenga nitrógeno básico de los compuestos dados a conocer en el presente documento con agentes tales como haluros de alquilo inferiores, tales como cloruro, bromuros y yoduros de metilo, etilo, propilo, y butilo; sulfatos de dialquilo, tales como sulfatos de dimetilo, dibutilo y diamilo, haluros de cadena larga tales como cloruros, bromuros y yoduros de decilo, laurilo, miristilo y estearilo, haluros de aralquilo, tales como bromuros de bencilo y fenetilo y otros. Pueden obtenerse productos solubles o dispersables en agua o aceite mediante tal cuaternización.
En general, los compuestos de fórmula (I) se obtienen por medio de métodos ilustrados en los ejemplos. Sin embargo, tal como puede apreciar el experto no se pretende que los esquemas sintéticos expuestos en el presente documento comprendan una lista completa de todos los medios mediante los cuales pueden sintetizarse los compuestos descritos y reivindicados en esta solicitud. Métodos adicionales resultarán evidentes para los expertos en la técnica. Adicionalmente, las diversas etapas sintéticas descritas anteriormente pueden realizarse en una secuencia u orden alterno para dar los compuestos deseados.
Sin estar limitado por la teoría, se cree que los compuestos de esta invención interaccionan de manera o bien covalente o bien no covalente con el sitio activo de la proteasa NS3 del VHC y otras serina proteasas, inhibiendo la capacidad de tal enzima de escindir sustratos naturales o sintéticos. Las interacciones no covalentes son ventajosas porque confieren especificidad de inhibición relativamente mayor y no inhibirán otras dianas no deseadas, por ejemplo cisteína proteasas. Estos compuestos tendrán por lo tanto un índice terapéutico mayor cuando se administran a mamíferos que inhibidores de proteasa covalentes, que pueden interaccionar con un amplio intervalo de proteasas y causan efectos tóxicos no deseados. Por el contrario, las interacciones covalentes son ventajosas porque confieren mayor potencia inhibidora permitiendo que puedan administrarse dosis inferiores y por lo tanto mejorando cualquier problema de carencia de especificidad.
Los compuestos novedosos de la presente invención son excelentes inhibidores de proteasas, particularmente serina proteasas, y más particularmente inhibidores de la proteasa NS3 del VHC. Por consiguiente, estos compuestos son capaces de seleccionar como diana e inhibir proteasas, particularmente serina proteasas, y más particularmente proteasas NS3 de VHC. Como tales, estos compuestos interfieren con el ciclo de vida de los virus, incluyendo VHC y son por tanto útiles como agentes antivirales. La inhibición puede medirse por diversos métodos tales como los métodos del ejemplo 3.
El término "agente antiviral" se refiere a un compuesto o fármaco que tiene actividad inhibidora viral. Tales agentes incluyen inhibidores de la transcriptasa inversa (incluyendo análogos de nucleósidos y no nucleósidos) e inhibidores de proteasas. Preferiblemente el inhibidor de proteasas es un inhibidor de la proteasa del VHC.
El término "tratar" tal como se usa en el presente documento se refiere al alivio de síntomas de un trastorno particular en un paciente o a la mejora de una medición determinada asociada con un trastorno particular. Tal como se usa en el presente documento, el término "paciente" se refiere a un mamífero, incluyendo un ser humano.
Por tanto, según otra realización esta invención proporciona composiciones farmacéuticas que comprenden un compuesto de fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo; un agente adicional seleccionado de, pero que no incluye, un agente inmunomodulador, tal como \alpha, \beta o \gamma-interferón; otros agentes antivirales, tales como ribavarina o amantadina; otros inhibidores de la proteasa del VHC; inhibidores de otras dianas en el ciclo de vida del VHC tales como helicasa, polimerasa, o metaloproteasa; o combinaciones de los mismos y cualquier excipiente, adyuvante o vehículo farmacéuticamente aceptable. Una realización alternativa proporciona composiciones que comprenden un compuesto de fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo; y un excipiente, adyuvante o vehículo farmacéuticamente aceptable. Tal composición puede comprender opcionalmente un agente adicional seleccionado de un agente inmunomodulador, tal como \alpha, \beta, o \gamma-interferón; otros agentes antivirales, tales como ribavirina; otros inhibidores de la proteasa del VHC; inhibidores de la helicasa del VHC; o combinaciones de los mismos.
El término "excipiente o adyuvante farmacéuticamente aceptable" se refiere a un excipiente o adyuvante que puede administrarse a un paciente, junto con un compuestos de esta invención, y que no destruye la actividad farmacológica del mismo y no es tóxico cuando se administra en dosis suficientes para administrar una cantidad terapéutica del compuesto.
Los excipientes, adyuvantes y vehículos farmacéuticamente aceptables que pueden usarse en las composiciones farmacéuticas de esta invención incluyen, pero no se limitan a, intercambiadores iónicos, alúmina, estearato de aluminio, lecitina, sistemas de administración de fármacos auto-emulsionantes (SEDDS) tales como d\alpha-tocoferol, succinato de polietilenglicol 1000, o TPGS, tensioactivos usados en formas de dosificación farmacéuticas tales como Tweens u otras matrices de administración poliméricas similares, proteínas séricas, tales como albúmina sérica humana, gelatina, sustancias tampones tales como fosfatos, glicina, ácido sórbico, sorbato de potasio, mezclas de glicéridos parciales de ácidos grasos vegetales saturados, agua, sales o electrolitos, tales como sulfato de protamina, hidrogenofosfato de disodio, hidrogenofosfato de potasio, cloruro de sodio, sales de zinc, sílice coloidal, trisilicato de magnesio, polivinilpirrolidona, poli(ácido acético), ácido poliacético poliglicólico, ácido cítrico, sustancias basadas en celulosa, tales como HPC y HPMC, polietilenglicol, carboximetilcelulosa de sodio, poliacrilatos, ceras, polímeros de bloque de polietileno-polioxipropileno, polietilenglicol, grasa de lana. También pueden usarse ventajosamente ciclodextrinas tales como \alpha, \beta, y \gamma-ciclodextrina, o derivados químicamente modificados tales como hidroxialquilciclodextrinas, incluyendo 2- y 3-hidroxipropil-\beta-ciclodextrinas, u otros derivados solubilizados, para potenciar la administración de compuestos de fórmula (I).
Las composiciones farmacéuticas de esta invención pueden administrarse por vía oral, parenteral, mediante pulverizador de inhalación, por vía tópica, rectal, nasal, bucal, vaginal o por medio de un depósito implantado. Se prefiere la administración oral o administración por inyección. Las composiciones farmacéuticas de esta invención pueden contener cualquier excipiente, adyuvante o vehículo farmacéuticamente aceptable no tóxico convencional. En algunos casos, el pH de la formulación puede ajustarse con ácidos, bases o tampones farmacéuticamente aceptables para potenciar la estabilidad del compuesto formulado o su forma de administración. El término parenteral, tal como se usa en el presente documento, incluye técnicas de infusión o inyección subcutánea, intracutánea, intravenosa, intramuscular, intra-articular, intrasinovial, intraesternal, intratecal, intralesional e intracraneal.
Las composiciones farmacéuticas pueden estar en forma de una preparación inyectable estéril, por ejemplo, como una suspensión acuosa u oleaginosa inyectable estéril. Esta suspensión puede formularse según técnicas conocidas en la técnica usando agentes de dispersión o humectantes adecuados (tales como, por ejemplo, Tween 80) y agentes de suspensión. La preparación inyectable estéril puede ser también una disolución o suspensión inyectable estéril en un diluyente o disolvente parenteralmente aceptable no tóxico, por ejemplo, una disolución en 1,3-butanodiol. Entre los vehículos y disolventes aceptables que pueden emplearse están el manitol, agua, disolución de Ringer y disolución de cloruro de sodio isotónica. Además, se emplean de manera convencional aceites fijos, estériles como disolvente o medio de suspensión. Para este propósito, puede emplearse cualquier aceite fijo suave incluyendo mono o diglicéridos sintéticos. Ácidos grasos, tales como ácido oleico y sus derivados de glicérido son útiles en la preparación de composiciones inyectables, como lo son los aceites farmacéuticamente aceptables naturales, tales como aceite de oliva o aceite de ricino, especialmente en sus versiones polioxietiladas. Estas disoluciones o suspensiones oleosas también pueden contener un diluyente o dispersante de alcohol de cadena larga tal como los descritos en la farmacopea helvetica (Ph. Helv.) o un alcohol similar, o carboximetilcelulosa o agentes de dispersión similares que se usan comúnmente en la formulación de formas de dosificación farmacéuticamente aceptables tales como emulsiones y/o suspensiones. También pueden usarse para los propósitos de la formulación Otros tensioactivos comúnmente usados tales como Tweens o Spans y/u otros agentes emulsionantes o potenciadores de la biodisponibilidad similares que se usan comúnmente en la fabricación de formas de dosificación sólidas, líquidas u otras farmacéuticamente
aceptables.
Las composiciones farmacéuticas de esta invención pueden administrarse por vía oral en cualquier forma de dosificación oralmente aceptable incluyendo, pero no se limitan a, cápsulas, comprimidos, y suspensiones y disoluciones acuosas. En el caso de comprimidos para uso oral, los excipientes que se usan comúnmente incluyen lactosa, almidón de maíz, fosfato de dicalcio y celulosa microcristalina (Avicel). También se añaden normalmente agentes lubricantes, tales como estearato de magnesio y talco. Para administración oral en forma de cápsula, los diluyentes útiles incluyen lactosa, almidón de maíz seco y TPGS, así como otros diluyentes usados en comprimidos. Para administración oral en una forma de cápsula de gelatina blanda (cargada con una suspensión o una disolución de un compuesto de esta invención), los diluyentes útiles incluyen PEG400, TPGS, propilenglicol, Labrasol, Gelucire, Transcutol, PVP y acetato de potasio. Cuando se administran suspensiones acuosas por vía, el principio activo se combina con agentes emulsionantes y de suspensión, tales como CMC de sodio, metilcelulosa, pectina y gelatina. Si se desea, pueden añadirse ciertos agentes edulcorantes y/o aromatizantes y/o colorantes.
Las composiciones farmacéuticas de esta invención también pueden administrarse en forma de supositorios para administración rectal. Estas composiciones pueden prepararse mezclando un compuesto de esta invención con un excipiente no irritante adecuado que sea sólido a temperatura ambiente pero líquido a la temperatura rectal y por lo tanto se fundirá en el recto para liberar los principios activos. Tales materiales incluyen, pero no se limitan a, manteca de cacao, cera de abeja, gelatina, glicerina y polietilenglicoles.
La administración tópica de las composiciones farmacéuticas de esta invención es especialmente útil cuando el tratamiento deseado implica áreas u órganos fácilmente accesibles mediante aplicación tópica. Para aplicación tópica a la piel, la composición farmacéutica debe formularse con una pomada adecuada que contiene los principios activos suspendidos o disueltos en un excipiente. Los excipientes para administración tópica de los compuestos de esta invención incluyen, pero no se limitan a, aceite mineral, petróleo líquido, petróleo blanco, propilengicol, compuesto de polioxietileno y polioxipropileno, cera emulsionante, ácido esteárico, estearato de cetilo, alcohol cetílico, lanolina, hidróxido de magnesio, caolín y agua. Alternativamente, la composición farmacéutica puede formularse con una loción o crema adecuada que contiene el principio activo suspendido o disuelto en un excipiente. Los excipientes adecuados incluyen, pero no se limitan a, aceite mineral, monoestearato de sorbitano, polisorbato 60, ésteres de cetilo, cera, alcohol cetílico, 2-octildodecanol, alcohol bencílico y agua. Las composiciones farmacéuticas de esta invención también pueden aplicarse por vía tópica en el tracto intestinal inferior mediante formulación de supositorio rectal o en una formulación de enema adecuada. También se incluyen en esta invención parches tópicos-transdérmicos.
Para uso oftálmico, las composiciones farmacéuticas pueden formularse como suspensiones micronizadas en solución salina estéril, con pH ajustado, isotónica, o, preferiblemente, como disoluciones en solución salina estéril con pH ajustado, isotónica, con o sin un conservante tal como cloruro de benzalconio. Alternativamente, para usos oftálmicos, las composiciones farmacéuticas pueden formularse en una pomada tal como vaselina.
Las composiciones farmacéuticas de esta invención pueden administrarse por aerosol nasal o inhalación. Tales composiciones se preparan según técnicas bien conocidas en la técnica de formulación farmacéutica y pueden prepararse como disoluciones en solución salina, empleando alcohol bencílico u otros conservantes adecuados, promotores de la absorción para potenciar la biodisponibilidad, fluorocarbonos, y/u otros agentes solubilizantes o de dispersión conocidos en la técnica.
Los niveles de dosificación de entre aproximadamente 0,01 y aproximadamente 100 mg/kg de peso corporal por día, preferiblemente entre aproximadamente 0,5 y aproximadamente 75 mg/kg de peso corporal por día de los compuestos inhibidores de la proteasa descritos en el presente documento son útiles en una monoterapia para la prevención y tratamiento de enfermedades mediadas por antivirales, particularmente anti-VHC. Normalmente, las composiciones farmacéuticas de esta invención se administrarán desde aproximadamente 1 hasta aproximadamente 5 veces al día o alternativamente, como una infusión continua. Tal administración puede usarse como un tratamiento crónico o agudo. La cantidad de principio activo que puede combinarse con los materiales excipientes para producir una forma de dosificación única variará dependiendo del huésped tratado y del modo particular de administración. Una preparación típica contendrá desde aproximadamente el 5% hasta aproximadamente el 95% de principio activo (p/p). Preferiblemente, tales preparaciones contienen desde aproximadamente el 20% hasta aproximadamente el 80% de principio activo.
Cuando las composiciones de esta invención comprenden una combinación de un compuesto de fórmula (I) y uno o más agentes terapéuticos o profilácticos adicionales, tanto el compuesto como el agente adicional deben estar presentes a niveles de dosificación de entre aproximadamente el 10 y el 100%, y más preferiblemente entre aproximadamente el 10 y el 80% de la dosificación administrada normalmente en un régimen de monoterapia.
Según una realización, las composiciones farmacéuticas de esta invención comprenden un agente inmunomodulador adicional. Los ejemplos de agentes inmunomoduladores adicionales incluyen, pero no se limitan a, \alpha, \beta, y \delta-interferones.
Según una realización alternativa, las composiciones farmacéuticas de esta invención pueden comprender adicionalmente un agente anti-viral. Los ejemplos de agentes anti-virales incluyen ribavirina y amantadita.
Según otra realización alternativa, las composiciones farmacéuticas de esta invención pueden comprender adicionalmente otros inhibidores de la proteasa del VHC.
Según aún otra realización alternativa, las composiciones farmacéuticas de esta invención pueden comprender adicionalmente un inhibidor de otras dianas en el ciclo de vida del VHC, tales como helicasa, polimerasa o metaloproteasa.
Tras la mejora del estado de un paciente, puede administrarse, si se desea, una dosis de mantenimiento de un compuesto, composición o combinación de esta invención. Posteriormente, la dosificación o frecuencia de administración, o ambas, puede reducirse, en función de los síntomas, hasta un nivel en el cual se mantiene el estado mejorado cuando los síntomas se han aliviado hasta el nivel deseado, el tratamiento debe cesar. Los pacientes pueden requerir, sin embargo, tratamiento intermitente en base a largo plazo tras cualquier reaparición de los síntomas de la enfermedad.
Como apreciará el experto, pueden requerirse dosis inferiores o superiores a las citadas anteriormente. La dosificación específica y regímenes de tratamiento para cualquier paciente particular dependerán de una diversidad de factores, incluyendo la actividad del compuesto específico empleado, la edad, peso corporal, estado de salud general, sexo, dieta, momento de administración, tasa de excreción, combinación de fármaco, gravedad y curso de la infección, disposición del paciente a la infección y criterio del médico que trata.
Cuando estos compuestos o sus sales farmacéuticamente aceptables se formulan junto con un excipiente farmacéuticamente aceptable, la composición resultante puede administrarse in vivo a mamíferos, tales como el ser humano, para inhibir serina proteasas, particularmente proteasa NS3 del VHC o para tratar o prevenir una infección viral, particularmente infección por virus VHC. Tal tratamiento también puede lograrse usando los compuestos de esta invención en combinación con agentes que incluyen, pero no se limitan a: agentes inmunomoduladores, tales como \alpha, \beta, o \gamma-interferones; otros agentes antivirales tales como ribavirina, amantadina; otros inhibidores de la proteasa NS3 del VHC; inhibidores de otras dianas en el ciclo de vida del VHC tales como helicasa, polimerasa, metaloproteasa, o la entrada interna de ribosomas; o combinaciones de los mismos. Estos agentes adicionales pueden combinarse con los compuestos de esta invención para crear una forma de dosificación única. Alternativamente estos agentes adicionales pueden administrarse por separado a un mamífero como parte de una forma de dosificación múltiple.
Por consiguiente, otra realización de esta invención proporciona métodos para inhibir la actividad de serina proteasa en mamíferos administrando un compuesto de la fórmula (I), en el que los sustituyentes son tal como se definió anteriormente. Preferiblemente, la serina proteasa es NS3 del VHC.
En una realización alternativa, la invención proporciona métodos para inhibir la actividad del VHC o NS3 del VHC en un mamífero, que comprenden la etapa de administrar a dicho mamífero un compuesto de fórmula (I), en el que los sustituyentes son tal como se ha definió anteriormente.
En una realización alternativa, esta invención proporciona métodos para disminuir la actividad de serina proteasa en un mamífero, que comprenden la etapa de administrar a dicho mamífero cualquiera de las composiciones y combinaciones farmacéuticas descritas anteriormente. Si la composición farmacéutica comprende sólo un compuesto de esta invención como el principio activo, tales métodos pueden comprender adicionalmente la etapa de administrar a dicho mamífero un agente seleccionado de un agente inmunomodulador, un agente antiviral, un inhibidor de la proteasa del VHC, o un inhibidor de otras dianas en el ciclo de vida del VHC. Tal agente adicional puede administrarse al mamífero antes, simultánea, o posteriormente a la administración de la composición inhibidora del VHC.
En una realización preferida, estos métodos son útiles para disminuir la actividad de proteasa NS3 del VHC en un mamífero. Si la composición farmacéutica comprende sólo un compuesto de esta invención como el principio activo, tales métodos pueden comprender adicionalmente la etapa de administrar a dicho mamífero un agente seleccionado de un agente inmunomodulador, un agente antiviral, un inhibidor de la proteasa del VHC, o un inhibidor de otras dianas en el ciclo de vida del VHC tales como helicasa, polimerasa, o metaloproteasa. Tal agente adicional puede administrarse al mamífero antes, simultánea, o posteriormente a la administración de las composiciones de esta invención.
En una realización preferida alternativa, estos métodos son útiles para inhibir la replicación viral en un mamífero. Tales métodos son útiles para tratar o prevenir, por ejemplo, enfermedades virales, tales como VHC. Si la composición farmacéutica comprende sólo un compuesto de esta invención como el principio activo, tales métodos pueden comprender adicionalmente la etapa de administrar a dicho mamífero un agente seleccionado de un agente inmunomodulador, un agente antiviral, un inhibidor de la proteasa del VHC o un inhibidor de otras dianas en el ciclo de vida del VHC. Tal agente adicional puede administrarse al mamífero antes, simultánea o posteriormente a la administración de la composición según esta invención.
Los compuestos expuestos en el presente documento también pueden usarse como reactivos de laboratorio. Los compuestos de esta invención también pueden usarse para tratar o prevenir la contaminación viral de materiales y reducir por lo tanto el riesgo de infección viral del personal de laboratorio o médico o pacientes que se pongan en contacto con tales materiales. Estos materiales incluyen, pero no se limitan a, materiales biológicos, tales como sangre, tejido, etc; ropa e instrumentos quirúrgicos; ropa e instrumentos de laboratorio; y aparatos y materiales de recogida de sangre.
Para que esta invención se entienda más completamente, se exponen los siguientes ejemplos. Estos ejemplos tienen sólo el propósito de ilustración y no deben interpretarse como limitantes del alcance de la invención de ninguna forma.
Materiales y métodos generales
Se prepararon los compuestos 101 a 109 usando el esquema 1 de síntesis genérico, descrito a continuación. La síntesis de compuestos específicos se describe en los siguientes ejemplos.
Los iones moleculares (M + H)^{+} y/o (M + Na)^{+} correctos para todos los compuestos expuestos en la tabla 2 se obtuvieron por espectrometría de masas de desorción láser asistida por matrices (Kratos MALDI I) o por espectrometría de masas de electropulverización (MICROMASS Quatro II).
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Pueden adquirirse comercialmente numerosos aminoácidos para usar en la síntesis de compuestos de peptidilo y peptidomiméticos de esta invención de, por ejemplo, Sigma Chemical Company o Bachem Feinchemikalien AG (Suiza). Los aminoácidos que no están disponibles comercialmente pueden prepararse mediante rutas sintéticas conocidas ("Kinetic Resolution of Unnatural and Rarely Occurring Amino Acids: Enantioselective Hydrolysis of N-Acyl Amino Acids Catalyzed by Acylase I", Chenault, H.K. et al., J. Am. Chem. Soc. 111, 6354-6364 (1989) y referencias citadas en el mismo; “Synthesis of \beta-\gamma-Unsaturated Amino Acids by the Strecker Reaction”, Greenlee, W.J., J. Org. Chem. 49, 2632-2634 (1984); "Recent Stereoselective Synthetic Approaches to Beta-amino Acids", Cole, D. Tetrahedron 50: 9517 (1994); "The Chemistry of Cyclic Alpha Imino Acids", Mauger, A.B; Volumen 4 de "Chemistry and Biochemistry of Amino Acids, Peptides, and Proteins", Weinstein, B. editor, Marcel Dekker (1977); "Recent Progress in the Synthesis and Reactions of Substituted Piperidines", Org. Prep. Procedure Int. 24, 585-621 (1992), todos los cuales se incorporan en el presente documento como referencia).
Ciertos compuestos de formula (I) pueden sintetizarse a partir de aminoácidos mediante procedimientos que se conocen bien en la técnica de la síntesis química de péptidos y orgánica. Los ejemplos de tales síntesis se exponen en general en Bodanszky y Bodanszky, "The Practice of Peptide Synthesis", Springer-Verlag, Berlin, Alemania (1984), "The Peptides", Gross y Meinhofer, eds.; Academic Press, 1979, Volúmenes. I-III, y Stewart, J.M. y Young, J.D., "Solid Phase Peptide Synthesis, segunda edición", Pierce Chemical Company, Rockford, IL (1984); y "Recent Advances in the Generation of Molecular Diversity", Moos, W.H., Green, G.D. y Pavia, M.R. en "Annual Reports in Medicinal Chemistry, Volumen 28" páginas 315-324; Bristol, J.A., ed.; Academic Press, San Diego, CA (1993), todos los cuales se incorporan en el presente documento como referencia
Típicamente, para síntesis de péptidos en fase de disolución, la \alpha-amina del aminoácido que debe acoplarse se protege con un uretano tal como Boc, Cbz, Fmoc o Alloc mientras que se activa el carboxilo libre mediante reacción con una carbodiimida tal como DCC, EDC, o DIC, opcionalmente en presencia de un catalizador tal como HOBT, HOAt, HOSu, o DMAP. Otros métodos, que se realizan por la intermediación de ésteres activados, haluros de ácido, aminoácidos activados por enzimas y anhídridos incluyendo reactivos de fosfonio tales como BOP, Py-BOP, N-carboxi-anhídridos, anhídridos simétricos, anhídridos carbónicos mixtos, anhídridos carbonico-fosfínicos y carbonico-fosfóricos, también son adecuados. Después de que se haya formado el péptido, pueden eliminarse los grupos protectores por métodos descritos en las referencias enumeradas anteriormente, tales como mediante hidrogenación en presencia de un catalizador de paladio, platino o rodio, tratamiento con sodio en amoniaco líquido, ácido clorhídrico, fluorhídrico, bromhídrico, fórmico, trifluorometanosulfónico, o trifluoroacético, aminas secundarias, ión fluoruro, haluros de trimetilsililo, incluyendo bromuro y yoduro, o álcali. La automatización del proceso sintético, usando técnicas tales como las expuestas anteriormente, puede lograrse mediante el uso de instrumentos disponibles comercialmente, incluyendo, pero sin limitarse al, Advanced Chemtech 357 FBS y 496 MOS; Tecan CombiTec, y Applied Biosystems 433A entre otros. La aplicación específica de estos métodos y sus equivalentes, dependiendo del compuesto diana, resultará evidente para los expertos en la técnica. Las modificaciones de los procesos químicos y la elección de los instrumentos están dentro de la experiencia del profesional normal.
Aunque algunos de los esquemas descritos a continuación indican estereoquímica particular para ciertos grupos, debe resultar evidente para los expertos en la técnica que los esquemas de síntesis pueden modificarse para permitir el uso de aquellos ciertos grupos que tienen la estereoquímica opuesta. Por lo tanto, la indicación de la estereoquímica en este esquema no pretende limitar la síntesis descrita a ninguna estereoquímica particular de ningún producto intermedio o final.
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Esquema 1
Síntesis general para los ácidos antranílicos 
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Ejemplo 1 Síntesis del compuesto 101
Síntesis de 2. Se añadió en porciones hidruro de sodio (581 mg, 14,5 mmol) a una disolución de ácido Boc-5-hidroxiantranílico (1) (1,5 g, 5,8 mmol) en 45 ml de THF anhidro a temperatura ambiente. Se agitó y se calentó hasta reflujo la mezcla durante 2 horas y se enfrió hasta temperatura ambiente. Entonces se añadió bromuro de bencilo (691 ml, 5,8 mmol) y se calentó hasta reflujo la mezcla de reacción durante 1,5 horas, se enfrió hasta temperatura ambiente y se agitó durante la noche. Se extinguió la reacción con agua helada (40 ml) y se acidificó cuidadosamente hasta pH 3 con HCl 2 N. La extracción con acetato de etilo (100 ml) seguido por un lavado con agua (50 ml) y salmuera (40 ml) dio, después de secar sobre Na_{2}SO_{4} y concentrar a vacío, un residuo sólido. La cromatografía ultrarrápida de la mezcla en bruto (metanol al 10%-diclorometano al 90%) proporcionó 1,42 g (70%) del producto 2 deseado.
Síntesis de 4. Se colocó resina de 4-metil-bencilhidramina (1,05 mmol/g, 20,0 g) en un embudo de cristal sinterizado y se lavó con dimetilformamida (3 X 75 ml), diisopropiletilamina (DIEA) en dimetilformamida al 10% (v/v)(2 X 75 ml) y finalmente con dimetilformamida (4 X 75 ml). Se añadió suficiente dimetilformamida a la resina para obtener una suspensión seguido por:
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(8,0 g, 20,8 mmol, preparado a partir de (2S) 2-(t-butiloxicarbonilamino)-butiraldehído según A.M. Murphy et al. J. Am. Chem. Soc., 114, 3156-3157 (1992)), hidrato de 1-hidroxibenzotriazol (HOBT.H_{2}O; 3,22 g, 21,0 mmol), hexafluorofosfato de O-benzotriazol-N,N,N',N'-tetrametiluronio (HBTU; 8,0 g, 21,0 mmol), y DIEA (11,0 ml, 63 mmol). Se agitó la mezcla de reacción durante la noche a temperatura ambiente usando un agitador de muñeca-brazo (wrist arm). Se aisló la resina en un embudo de cristal sinterizado mediante filtración de succión y se lavó con dimetilformamida (3 X 75 ml). Los grupos amino que no reaccionaron se protegieron haciendo reaccionar la resina con anhídrido acético/dimetilformamida al 20% (v/v) (2 X 50 ml) directamente en el embudo (10 min/lavado). Se lavó la resina con dimetilformamida (3 X 75 ml) y diclorometano (3 X 75 ml) antes de secar durante la noche a vacío para dar una resina intermedia (23,6 g, rendimientos del 81%).
Se eliminó el grupo protector t-Boc de la resina intermedia usando el sintetizador de péptidos múltiples Advanced ChemTech 396 mediante el siguiente procedimiento. Se hinchó la resina intermedia (0,05 mol) lavando con diclorometano (3 X 1 ml) seguido por escisión del grupo protector t-Boc con TFA/diclorometano al 50% (v/v) (1,0 ml) durante 10 minutos (con agitación) seguido por reactivo nuevo (1 ml) durante 30 minutos. Entonces se lavó la resina con diclorometano (3 X 1 ml) seguido por DMF (3 X 1 ml), después DIEA/dimetilformamida al 10% (v/v) (2 X 1 ml), y finalmente con N-metilpirrolidona (3 X 1 ml) para dar la resina 4.
Síntesis de 5. Se colocó la resina 4 (554 mg, 0,36 mmol) en una jeringa Nalgene equipada con un filtro en la parte inferior y se acopló a 2 (251 mg, 0,72 mmol) con HOBt (110 mg, 0,72 mmol), HBTU (273 mg, 0,72 mmol) y DIEA (376 ml, 2,16 mmol) en 4 ml de NMP (con agitación) durante 72 horas. Se eliminó el disolvente por succión y se lavó la resina secuencialmente con NMP (3 X 4 ml) y diclorometano (3 X 4 ml) para proporcionar la resina 5.
Síntesis de 6. Se eliminó el grupo protector t-Boc de la resina 5 (en la jeringa Nalgene) con TFA/diclorometano al 50% (v/v) (6 ml) durante 20 min. (con agitación). Se lavó la resina con diclorometano (3 X 5 ml), seguido por DIEA/diclorometano al 10% (3 X 5 ml) y finalmente con diclorometano (3 X 5 ml). Se añadió a la resina resultante anhídrido Fmoc-valina-N-carboxílico (526 mg, 1,44 mmol) y 6 ml de NMP. Se agitó la mezcla de reacción durante 72 horas a temperatura ambiente y se eliminó el disolvente por succión. Se lavó la resina 6 secuencialmente con NMP (3 X 5 ml) y diclorometano (3 X 5 ml) y se usó directamente para la siguiente etapa.
Síntesis de 8. Se preparó este compuesto a partir de la resina 6 (0,1 mmol) usando un sintetizador de péptidos modelo 433A de Applied Biosystems. Se añadieron secuencialmente aminoácido protegido con N^{\alpha}-Fmoc y ácido pirazina-2-carboxílico a la resina 6 con ciclos de acoplamiento habituales usando HBTU con HOBt como agentes de acoplamiento en NMP para dar la resina 8.
Síntesis del compuesto 101. Se escindió el aldehído de la resina 8 mediante tratamiento con 10 ml de una disolución de THF/formalina al 30%/AcOH/HCl 0,1 N 5:1:1:1 (v:v:v:v) durante 1 hora a temperatura ambiente. Tras lavar la resina con reactivo de escisión (5 ml), se diluyeron con agua (15 ml) los filtrados combinados y se purificaron 5 ml de esa mezcla mediante RP-HPLC con una columna Waters DeltaPak 300 A C18 (15 m, 30 X 300 mm) eluyendo con un gradiente lineal de acetonitrilo que contenía TFA al 0,1% (v/v) a lo largo de 45 min a 20 ml/min. Se combinaron las fracciones que contenían el producto deseado y se liofilizaron para proporcionar 101.
M + H = 617,3.
Ejemplo 2 Síntesis del compuesto 102
Los productos intermedios 1 a 4 se prepararon tal como en el ejemplo 1.
Síntesis de 5. Se colocó la resina 4 (WS = CF_{3}) (1,2 g, 0,384 mmol) en una jeringa Nalgene equipada con un filtro en la parte inferior y se acopló a 2 (267 mg, 0,768 mmol) con HOBt (118 mg, 0,768 mmol), HBTU (291 mg, 0,768 mmol) y DIEA (401 ml, 2,3 mmol) en 4 ml de NMP (con agitación) durante 72 horas. Se eliminó el disolvente por succión y se lavó la resina secuencialmente con NMP (3 X 4 ml) y diclorometano (3 X 4 ml) para proporcionar la resina 5.
Síntesis de 6. Se eliminó el grupo protector t-Boc de la resina 5 (en la jeringa Nalgene) con TFA/diclorometano al 50% (v/v) (6 ml) durante 20 minutos (con agitación). Se lavó la resina con diclorometano (3 X 5 ml), seguido por DIEA/diclorometano al 10% (3 X 5 ml) y finalmente con diclorometano (3 X 5 ml). Se añadió a la resina resultante anhídrido Fmoc-valina-N-carboxílico (526 mg, 1,54 mmol) y 8 ml de NMP. Se agitó la mezcla de reacción durante 72 horas a temperatura ambiente y se eliminó el disolvente por succión. Se lavó la resina 6 secuencialmente con NMP (3 X 6 ml) y diclorometano (3 X 6 ml) y se usó directamente para la siguiente etapa.
Síntesis de 8. Se preparó este compuesto a partir de la resina 6 (0,1 mmol) usando un sintetizador de péptidos modelo 433A de Applied Biosystems. Se añadieron secuencialmente aminoácido protegido con N_{a}-Fmoc y ácido pirazina-2-carboxílico a la resina 6 con ciclos de acoplamiento habituales usando HBTU con HOBt como agentes de acoplamiento en NMP para dar la resina 8.
Síntesis de 102. Se escindió el aldehído de la resina 8 mediante tratamiento con 10 ml de una disolución de THF/formalina al 30%/AcOH/HCl 0,1 N 5:1:1:1 (v:v:v:v) durante 1 hora a temperatura ambiente. Tras lavar la resina con reactivo de escisión (5 ml), se diluyeron con agua (15 ml) los filtrados combinados y se purificaron 5 ml de esa mezcla mediante RP-HPLC con una columna Waters DeltaPak 300 A C18 (15 m, 30 X 300 mm) eluyendo con un gradiente lineal de acetonitrilo que contenía TFA al 0,1% (v/v) a lo largo de 45 min a 20 ml/min. Se combinaron las fracciones que contenían el producto deseado y se liofilizaron para proporcionar 102.
M + H = 671,2.
Ejemplo 3 Síntesis del compuesto 103
Síntesis de 3 (R_{2} = Me). Se añadió en porciones NaH (100 mg, 0,0025 mol) a una disolución de 2 (350 mg, 0,001 mol) en 10 ml de DMF anhidro a temperatura ambiente. Se agitó la mezcla durante 40 minutos, después se añadió yoduro de metilo (0,175 ml, 0,0028 mol) y se agitó la mezcla de reacción durante la noche. Se extinguió la reacción con agua y se extrajo con acetato de etilo. Se secó la fase orgánica (Na_{2}SO_{4}) y se concentró a vacío para proporcionar 335 mg (89%) de un aceite que se usó directamente para la siguiente etapa.
Se añadieron 2,2 ml de NaOH 2 N a una disolución del aceite anterior (335 mg, 0,0089 mol) en 8 ml de metanol a temperatura ambiente. Se agitó la reacción durante la noche a temperatura ambiente después de lo cual se eliminó el metanol a vacío. Se diluyó la fase acuosa resultante con agua, después se acidificó lentamente hasta pH 3 con HCl 1 N. Se extrajo la fase acuosa con acetato de etilo y se secó la fase orgánica (Na_{2}SO_{4}) y se concentró a vacío para dar 300 mg (93%) de 3 que se usó directamente para la siguiente etapa.
Síntesis de 6. Se eliminó el grupo protector t-Boc de la resina 5 (en la jeringa Nalgene) con TFA/diclorometano al 50% (v/v) (6 ml) durante 20 min. (con agitación). Se lavó la resina con diclorometano (3 X 5 ml), seguido por DIEA/diclorometano al 10% (3 X 5 ml) y finalmente con diclorometano (3 X 5 ml). Se añadió a la resina resultante anhídrido Fmoc-valina-N-carboxílico (606 mg, 1,66 mmol) y 10 ml de NMP. Se agitó la mezcla de reacción durante 72 horas a temperatura ambiente y se eliminó el disolvente por succión. Se lavó la resina 6 secuencialmente con NMP (3 X 6 ml) y diclorometano (3 X 6 ml) y se usó directamente para la siguiente etapa.
Síntesis de 8. Se preparó este compuesto a partir de la resina 6 (0,1 mmol) usando un sintetizador de péptidos modelo 433A de Applied Biosystems. Se añadieron secuencialmente aminoácido protegido con N_{a}-Fmoc y ácido pirazina-2-carboxílico a la resina 6 con ciclos de acoplamiento habituales usando HBTU con HOBt como agentes de acoplamiento en NMP para dar la resina 8.
Síntesis de 103. Se escindió el aldehído de la resina 8 mediante tratamiento con 10 ml de una disolución de THF/formalina al 30%/AcOH/HCl 0,1 N 5:1:1:1 (v:v:v:v) durante 1 hora a temperatura ambiente. Tras lavar la resina con reactivo de escisión (5 ml), se diluyeron con agua (15 ml) los filtrados combinados y se purificaron 5 ml de esa mezcla mediante RP-HPLC con una columna Waters DeltaPak 300 A C18 (15 m, 30 X 300 mm) eluyendo con un gradiente lineal de acetonitrilo que contenía TFA al 0,1% (v/v) a lo largo de 45 min a 20 ml/min. Se combinaron las fracciones que contenían el producto deseado y se liofilizaron para proporcionar 103.
M + H = 631,3.
Ejemplo 4 Síntesis del compuesto 104
Los productos intermedios 1 a 6 se prepararon tal como en el ejemplo 1.
Síntesis de 7. Se preparó este compuesto a partir de la resina 6 (0,1 mmol) usando un sintetizador de péptidos modelo 433A de Applied Biosystems. Se añadió ácido 2-hidroxinaftoico a la resina 6 con ciclos de acoplamiento habituales usando HBTU con HOBt como agentes de acoplamiento en NMP para dar la resina 7.
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Síntesis de 104. Se escindió el aldehído de la resina 7 mediante tratamiento con 3 ml de una disolución de THF/formalina al 30%/AcOH/HCl 0,1 N 5:1:1:1 (v:v:v:v) durante 1 hora a temperatura ambiente. Tras lavar la resina con reactivo de escisión (1,5 ml), se diluyeron con agua (4,5 ml) los filtrados combinados y se purificaron 5 ml de esa mezcla mediante RP-HPLC con una columna Waters DeltaPak 300 A C18 (15 m, 30 X 300 mm) eluyendo con un gradiente lineal de acetonitrilo que contenía TFA al 0,1% (v/v) a lo largo de 45 min a 20 ml/min. Se combinaron las fracciones que contenían el producto deseado y se liofilizaron para proporcionar 104.
M + H = 582,2.
Ejemplo 5 Síntesis del compuesto 105
Los productos intermedios 1 a 6 se prepararon tal como en el ejemplo 1.
Síntesis de 7. Se preparó este compuesto a partir de la resina 6 (0,1 mmol) usando un sintetizador de péptidos modelo 433A de Applied Biosystems. Se añadió ácido 2-hidroxi-4-nicotínico a la resina 6 con ciclos de acoplamiento habituales usando HBTU con HOBt como agentes de acoplamiento en NMP para dar la resina 7.
Síntesis de 105. Se escindió el aldehído de la resina 8 mediante tratamiento con 3 ml de una disolución de THF/formalina al 30%/AcOH/HCl 0,1 N 5:1:1:1 (v:v:v:v) durante 1 hora a temperatura ambiente. Tras lavar la resina con reactivo de escisión (1,5 ml), se diluyeron con agua (4,5 ml) los filtrados combinados y se purificaron 5 ml de esa mezcla mediante RP-HPLC con una columna Waters DeltaPak 300 A C18 (15 m, 30 X 300 mm) eluyendo con un gradiente lineal de acetonitrilo que contenía TFA al 0,1% (v/v) a lo largo de 45 min a 20 ml/min. Se combinaron las fracciones que contenían el producto deseado y se liofilizaron para proporcionar 105.
M + H = 533,2.
Ejemplo 6 Síntesis del compuesto 106
Los productos intermedios 1 a 6 se prepararon tal como en el ejemplo 1.
Síntesis de 7. Se preparó este compuesto a partir de la resina 6 (0,1 mmol) usando un sintetizador de péptidos modelo 433A de Applied Biosystems. Se añadió ácido 6-hidroxinaftoico a la resina 6 con ciclos de acoplamiento habituales usando HBTU con HOBt como agentes de acoplamiento en NMP para dar la resina 7.
Síntesis de 106. Se escindió el aldehído de la resina 8 mediante tratamiento con 3 ml de una disolución de THF/formalina al 30%/AcOH/HCl 0,1 N 5:1:1:1 (v:v:v:v) durante 1 hora a temperatura ambiente. Tras lavar la resina con reactivo de escisión (1,5 ml), se diluyeron con agua (4,5 ml) los filtrados combinados y se purificaron 5 ml de esa mezcla mediante RP-HPLC con una columna Waters DeltaPak 300 A C18 (15 m, 30 X 300 mm) eluyendo con un gradiente lineal de acetonitrilo que contenía TFA al 0,1% (v/v) a lo largo de 45 min a 20 ml/min. Se combinaron las fracciones que contenían el producto deseado y se liofilizaron para proporcionar 106.
M + H = 582,2.
Ejemplo 7 Síntesis de Compuesto 107
Síntesis de 2. Se añadió en porciones hidruro de sodio (581 mg, 14,5 mmol) a una disolución de ácido Boc-5-hidroxiantranílico (1) (1,5 g, 5,8 mmol) en 45 ml de THF anhidro a temperatura ambiente. Se agitó y se calentó hasta reflujo la mezcla durante 2 horas y se enfrió hasta temperatura ambiente. Entonces se añadió bromuro de 3,4-diclorobencilo (1,39 g, 5,8 mmol) y se calentó la mezcla de reacción hasta a reflujo durante 1,5 horas, se enfrió hasta temperatura ambiente y se agitó durante la noche. Se extinguió la reacción con agua en hielo (40 ml) y se acidificó cuidadosamente hasta pH 3 con HCl 2 N. La extracción con acetato de etilo (100 ml) seguido por un lavado con agua (50 ml) y salmuera (40 ml) dio, después de secar (Na_{2}SO_{4}) y concentrar a vacío, un residuo sólido. Sometimiento de la mezcla en bruto a cromatografía ultrarrápida (metanol al 10%-diclorometano al 90%) proporcionó 1,37 g (57%) del producto 2 deseado.
Síntesis de 5. Se colocó la resina 4 (1,0 mg, 0,65 mmol) (del ejemplo 1) en una jeringa Nalgene equipada con un filtro en la parte inferior y se acopló a 2 (542 mg, 1,3 mmol) con HOBt (199 mg, 1,3 mmol), HBTU (493 mg, 1,3 mmol) y DIEA (679 ml, 3,9 mmol) en 8 ml de NMP (con agitación) durante 72 horas. Se eliminó el disolvente por succión y se lavó la resina secuencialmente con NMP (3 X 8 ml) y diclorometano (3 X 8 ml) para proporcionar la resina 5.
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Síntesis de 6. Se eliminó el grupo protector t-Boc de la resina 5 (en la jeringa Nalgene) con TFA/diclorometano al 25% (v/v) (10 ml) durante 30 minutos (con agitación). Se lavó la resina con diclorometano (3 X 7 ml), seguido por DIEA/diclorometano al 10% (3 X 7 ml) y finalmente con diclorometano (3 X 7 ml). Se añadió a la resina resultante anhídrido Fmoc-valina-N-carboxílico (950 mg, 2,6 mmol) y 8 ml de NMP. Se agitó la mezcla de reacción durante 72 horas a temperatura ambiente y se eliminó el disolvente por succión. Se lavó la resina 6 secuencialmente con NMP (3 X 7 ml) y diclorometano (3 X 7 ml) y se usó directamente para la siguiente etapa.
Síntesis de 8. Se preparó este compuesto a partir de la resina 6 (0,1 mmol) usando un sintetizador de péptidos modelo 433A de Applied Biosystems. Se añadieron secuencialmente aminoácido protegido con N^{\alpha}-Fmoc y ácido pirazina-2-carboxílico a la resina 6 con ciclos de acoplamiento habituales usando HBTU con HOBt como agentes de acoplamiento en NMP para dar la resina 8.
Síntesis de 107. Se escindió el aldehído de la resina 8 mediante tratamiento con 10 ml de una disolución de THF/formalina al 30%/AcOH/HCl 0,1 N 5:1:1:1 (v:v:v:v) durante 1 hora a temperatura ambiente. Tras lavar la resina con reactivo de escisión (5 ml), se diluyeron con agua (15 ml) los filtrados combinados y se purificaron 5 ml de esa mezcla mediante RP-HPLC con una columna Waters DeltaPak 300 A C18 (15 m, 30 X 300 mm) eluyendo con un gradiente lineal de acetonitrilo que contenía TFA al 0,1% (v/v) a lo largo de 45 minutos a 20 ml/min. Se combinaron las fracciones que contenían el producto deseado y se liofilizaron para proporcionar 107.
M + H = 685,1.
Ejemplo 8 Síntesis del compuesto 108
Síntesis de 5. Se colocó la resina 4 (640 mg, 0,414 mmol) (del ejemplo 1) en una jeringa Nalgene equipada con un filtro en la parte inferior y se acopló a 1 (en el que X, Y y Z son hidrógeno; 200 mg, 0,828 mmol) con HOBt (126 mg, 0,828 mmol), HBTU (314 mg, 0,828 mmol) y DIEA (433 ml, 3,9 mmol) en 6 ml de NMP (con agitación) durante 24 horas. Se eliminó el disolvente por succión y se lavó la resina secuencialmente con NMP (3 X 5 ml) y diclorometano (3 X 5 ml) para proporcionar la resina 5.
Síntesis de 6. Se eliminó el grupo protector t-Boc de la resina 5 (en la jeringa Nalgene) con TFA/diclorometano al 50% (v/v) (6 ml) durante 20 minutos (con agitación). Se lavó la resina con diclorometano (3 X 6 ml), seguido de DIEA/diclorometano al 10% (3 X 6 ml) y finalmente con diclorometano (3 X 6 ml). A la resina resultante se le añadió anhídrido Fmoc-valina-N-carboxílico (605 mg, 1,66 mmol) y 10 ml de NMP. Se agitó la mezcla de reacción durante 72 horas a temperatura ambiente y se eliminó el disolvente mediante succión. Se lavó la resina 6 secuencialmente con NMP (3 X 7 ml) y diclorometano (3 X 7 ml) y se usó directamente para la siguiente etapa.
Síntesis de 8. Este compuesto se preparó a partir de la resina 6 (0,1 mmol) usando un sintetizador de péptidos modelo 433A de Applied Biosystems. Se añadieron secuencialmente aminoácido protegido con N^{a}-Fmoc y ácido pirazina-2-carboxílico a la resina 6 con ciclos de acoplamiento habituales usando HBTU con HOBt como agentes de acoplamiento en NMP para dar la resina 8.
Síntesis de 108. Se escindió el aldehído de la resina 8 mediante tratamiento con 10 ml de una disolución de THF/formalina al 30%/AcOH/HCl 0,1 N 5:1:1:1 (v:v:v:v) durante 1 hora a temperatura ambiente. Tras lavar la resina con reactivo de escisión (5 ml), se diluyeron los filtrados combinados con agua (15 ml) y se purificaron 5 ml de esa mezcla mediante RP-HPLC con una columna Waters DeltaPak 300 A C18 (15 m, 30 X 300 mm) eluyendo con un gradiente lineal de acetonitrilo que contenía TFA al 0,1% (v/v) a lo largo de 45 minutos a 20 ml/minuto. Se combinaron las fracciones que contenían el producto deseado y se liofilizaron para proporcionar 108.
M + H = 511,3.
Ejemplo 9 Síntesis de compuesto 109
Síntesis de 5. Se colocó resina 4 (640 mg, 0,414 mmol) (del ejemplo 1) en una jeringa Nalgene equipada con un filtro en el fondo y se acopló a 1 (238 mg, 0,828 mmol) con HOBt (126 mg, 0,828 mmol), HBTU (314 mg, 0,828 mmol) y DIEA (433 ml, 3,9 mmol) en 6 ml de NMP (con agitación) durante 24 horas. Se eliminó el disolvente mediante succión y se lavó secuencialmente la resina con NMP (3 X 5 ml) y diclorometano (3 X 5 ml) para proporcionar la resina 5.
Síntesis de 6. Se eliminó el grupo protector t-Boc de la resina 5 (en la jeringa Nalgene) con TFA/diclorometano al 50% (v/v) (6 ml) durante 20 minutos (con agitación). Se lavó la resina con diclorometano (3 X 6 ml), seguido por DIEA/diclorometano al 10% (3 X 6 ml) y finalmente con diclorometano (3 X 6 ml). A la resina resultante se le añadió anhídrido Fmoc-valina-N-carboxílico (605 mg, 1,66 mmol) y 10 ml de NMP. Se agitó la mezcla de reacción durante 72 horas a temperatura ambiente y se eliminó el disolvente mediante succión. Se lavó secuencialmente la resina 6 con NMP (3 X 7 ml) y diclorometano (3 X 7 ml) y se usó directamente para la siguiente etapa.
Síntesis de 8. Se preparó este compuesto a partir de la resina 6 (0,1 mmol) usando un sintetizador de péptidos modelo 433A de Applied Biosystems. Se añadieron secuencialmente aminoácido protegido con N^{\alpha}-Fmoc y ácido pirazina-2-carboxílico a la resina 6 con ciclos de acoplamiento habituales usando HBTU con HOBt como agentes de acoplamiento en NMP para dar la resina 8.
Síntesis de 109. Se escindió el aldehído de la resina 8 mediante tratamiento con 10 ml de una disolución de THF/formalina al 30%/AcOH/HCl 0,1 N 5:1:1:1 (v:v:v:v) durante 1 hora a temperatura ambiente. Tras lavar la resina con reactivo de escisión (5 ml), se diluyeron los filtrados combinados con agua (15 ml) y se purificaron 5 ml de esa mezcla mediante RP-HPLC con una columna Waters DeltaPak 300 A C18 (15 m, 30 X 300 mm) eluyendo con un gradiente lineal de acetonitrilo que contenía TFA al 0,1% (v/v) a lo largo de 45 minutos a 20 ml/minuto. Se combinaron las fracciones que contenían el producto deseado y se liofilizaron para proporcionar 109.
M + H = 561,3.
Ejemplo 10 Síntesis de derivados de ácido para-hidroxiantranílico
La síntesis de compuestos de las fórmulas:
9 
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se logra usando las etapas expuestas en el esquema 1 para producir 9 ó 10 y el producto intermedio 1 que contiene un grupo hidroxilo en Y e hidrógenos en X y Z.
Síntesis de 1. Se prepara este compuesto en tres etapas a partir de ácido 2-nitro-4-aminobenzoico. La diazotización de ácido 2-nitro-4-aminobenzoico con, por ejemplo, nitrito de sodio en ácido sulfúrico al 20% proporciona ácido 2-nitro-4-hidroxibenzoico. La reducción de ácido 2-nitro-4-hidroxibenzoico con, por ejemplo, estaño en ácido clorhídrico concentrado proporciona el ácido p-hidroxiantranílico deseado. Entonces se protege el grupo amino, por ejemplo, mediante tratamiento con, por ejemplo, anhídrido de Boc en diclorometano con diisopropiletilamina para
dar 1.
Ejemplo 11
El esquema 2, expuesto a continuación, representa la ruta sintética para obtener compuestos derivados de ácido antranílico alquil-sustituidos de esta invención.
\newpage
Esquema 2
Síntesis general para los ácidos antranílicos
10
11
Síntesis de 12. Se prepara este compuesto en tres etapas a partir del acoplamiento de 11 (en el que X es Br; Y y Z son H) con estireno en una reacción de Heck usando acetato de paladio y trietilamina. Tras la desprotección e hidrogenación del doble enlace con paladio sobre carbono seguido de desprotección del grupo amino como un carbamato con anhídrido de Boc en diclorometano y DIEA, se obtiene el compuesto 12.
Los derivados de ácido antranílico para-alquil-sustituidos se preparan de manera similar usando 11 en el que Y es Br y X y Z son H, similar al método descrito en este ejemplo.
Ejemplo 18 Inhibición de la serina proteasa NS3 del VHC
En la medida en que los compuestos de fórmula (I) pueden inhibir la serina proteasa NS3, son de utilidad clínica evidente para el tratamiento de enfermedades virales, incluyendo el VHC. Estas pruebas son predictivas de la capacidad de los compuestos para inhibir el VHC in vivo.
Péptidos y ensayos
Los péptidos EDVVabuCSMSY (Abu designa ácido aminobutírico), DEMEECSQHLPYI, ECTTPCSGSWLRD y EDVV AbuC-p-nitroanilida se compraron de AnaSpec Inc. (San Jose, CA).
Se determinó el contenido en péptidos de péptidos purificados, liofilizados y péptidos internos mediante análisis de nitrógeno cuantitativo y se usaron los valores apropiados para preparar disoluciones de reserva de péptido (Galbreath). Se determinaron las determinaciones de pKa por los Robertson Microlit Laboratories, Inc. (Madison, NJ).
Se realizaron ensayos de escisión HPLC usando enzima de 25 nM a 3,0 \muM en volúmenes de 100 \muL a 30ºC que contenían HEPES-KOH 50 mM (pH 7,8), NaCl 100 mM, glicerol al 20%, DTT 5 mM y la cantidad apropiada de sustrato (en DMSO), con o sin péptido NS4A, de tal manera que la concentración final de DMSO no superó el 4%. Experimentos de control por separado verificaron que este porcentaje de DMSO no afectó a la actividad enzimática. Se extinguieron las reacciones de escisión mediante la adición de un volumen igual de una mezcla de TFA al 10%:acetonitrilo (1:1) y se evaluó la actividad sobre una columna de HPLC de fase inversa (Rainin C18 Microsorb-MV, 5 mm, 4,6 x 250 mm; acetonitrilo al 0-50%, TFA al 0,1% @ 3,33% min) usando un instrumento Hewlett Packard 1050 con autoinyección y detección por red de diodos a 210 nm y 280 nm (cuando era apropiado). Se recogieron los fragmentos de elución de péptidos y se identificaron mediante espectrometría de masas y análisis de secuencia N-terminal. Se verificaron adicionalmente la concentración e identidad de fragmento mediante productos auténticos, sintetizados. Se determinaron las velocidades iniciales de escisión a < 20% de conversión de sustrato y se determinaron los parámetros catalíticos asumiendo una cinética de Michaelis-Menten usando el programa MultiFit (Day Computing, Cambridge, MA).
Se realizaron ensayos espectrofotométricos en una placa de microtitulación de 96 pocillos a 30ºC, usando un lector SpectraMax 250 (Molecular Devices, Sunnyvale, CA) con capacidad cinética. Se realizó la escisión de sustrato EDVV AbuC-p-nitroanilida (5A-pNA) con o sin NS4A en el mismo tampón usado para los ensayos de HPLC a 30ºC, y se monitorizó la liberación de pNA a 405 nm. El coeficiente de extinción de p-nitroanilina es independiente del pH a valores de 5,5 y superiores [Tuppy, H., et al., Hoppe-Seyler's Z. Physiol. Chem., 329, págs. 278-288 (1962)]; Raybuck y Luong, observaciones no publicadas). El porcentaje de DMSO no superó el 4% en estos ensayos.
Se realizó la determinación de la dependencia del pH de V_{max}, K_{m} y V_{max}/K_{m} usando una serie de tampones de concentración iónica constante que contenían MES 50 mM, Tris 25 nM, etanolamina 25 mM y NaCl 0,1 M [Morrison, J.F. y Stone, R.F., Biochemistry, 27, págs. 5499-5506 (1988)]. Se calculó el punto de inflexión para los datos de log V mediante ajuste de mínimos cuadrados no lineal de los datos en la ecuación.
log \ v = log[V_{max}/(1 + H/K_{a})]
[Dixon, M. y Webb, E. C. Enzymes; Academic Press: New York; Vol., págs. 138-164 (1979)]. Se calcularon los puntos de inflexión para los datos de log(V/K) mediante ajuste de mínimos cuadrados no lineal de los datos en la ecuación:
log \ v = log[V_{max}/(1 + H/K_{a} + K_{b}/H)]
[Dixon, M. y Webb, E. C. Enzymes; Academic Press: New York; Vol., págs. 138-164 (1979)]. Se usó el programa KineTic (BioKin Ltd) en ambos casos.
Se determinaron las constantes cinéticas para la reacción de bisustrato con orden de rápido equilibrio a partir de los datos de velocidad frente a [4A], [EDVV AbuC-pNA] mediante ajuste de mínimos cuadrados no lineal en la ecuación 1 [Morrison, J.F. Biochim. Biophys. Acta., 185, págs. 269-286 (1969)] según se describe en el texto. Se determinaron los valores de K_{ii} y K_{is} para inhibidores de peptidilo a partir de los datos de velocidad frente a [inhibidor], [sustrato] y ajustándolos a la ecuación para la inhibición mixta:
velocidad = Vmax[S]/\{Km \ (1 + [I]/Kis) + [S] \ (1 + [I]/Kii)\}
Se usó el programa comercial KinetAsyst (State College, PA) para ambos procedimientos. Se calcularon los valores de Ki a partir de las gráficas de velocidad frente a [inhibidor] mediante un ajuste de mínimos cuadrados no lineal de los datos en la ecuación de Morrison para la inhibición competitiva de la unión ajustada [Morrison, J.F. Biochim. Biophys. Acta., 185, págs. 269-286 (1969)]. Se usó el programa KineTic (BioKin Ltd) para este procedimiento.
Los resultados se muestran en la tabla 2. Los valores de K_{i} se expresan en \muM. La categoría "A" indica < 1 \muM de inhibición; la categoría "B" indica 1-100 \muM de inhibición; la categoría "C" indica > 100 \muM. La designación "ND" indica que el compuesto no se sometió a prueba.
TABLA 2 Datos de inhibición enzimática para los compuestos 1-9
12

Claims (25)

1. Compuesto de la fórmula (I):
13
en el que:
L es alquilo, en el que cualquier hidrógeno está opcionalmente sustituido por flúor;
cada M es independientemente alquilo, cicloalquilo, arilo, aralquilo, heterociclilo, heterociclilalquilo, heteroarilo, o heteroaralquilo, en el que cualquier átomo de carbono puede reemplazarse por un heteroátomo que se selecciona independientemente de O o S, y en el que uno o más hidrógenos en M se reemplazan opcionalmente por 1 a 3 grupos J;
J es alquilo, arilo, aralquilo, alcoxilo, ariloxilo, aralcoxilo, cicloalquilo, cicloalcoxilo, heterociclilo, heterocicliloxilo, heterociclilalquilo, oxo, hidroxilo, amino, alquilamino, alcanoilamino, aroilamino, aralcanoilamino, carboxilo, carboxialquilo, carboxamidoalquilo, halógeno, heteroarilo, ciano, nitro, formilo, acilo, sulfonilo, o sulfonamido en el que uno o más hidrógenos se reemplazan opcionalmente por 1-3 grupos J^{1}; y
J^{1} es alquilo, arilo, aralquilo, alcoxilo, ariloxilo, heterociclilo, heterocicliloxilo, oxo, hidroxilo, amino, alcanoilamino, aroilamino, carboxilo, carboxialquilo, carboxamidoalquilo, halógeno, ciano, nitro, formilo, sulfonilo, o sulfonamido;
R^{11} es hidrógeno o alquilo C_{1}-C_{3};
cada R^{19} es independientemente H o R^{21}-arilo, o 2 R^{19} adyacentes pueden unirse entre sí para formar un anillo aromático de 5-7 átomos de carbono; en el que uno cualquiera o más hidrógenos en R^{19} están opcionalmente sustituidos por 1 a 4 grupos J independientemente seleccionados;
cada R^{21} es independientemente alquilo C_{1}-C_{3} lineal o ramificado o O-alquilo (C_{1}-C_{3}) lineal o ramificado);
A^{2} es un enlace o -N(R^{11})-C(H)(M)-C(O)-; y
T es -R^{12} o -alquil-R^{12}; en el que
cada R^{12} se selecciona independientemente de hidrógeno, arilo, heteroarilo, cicloalquilo, heterociclilo, cicloalquilidenilo, o heterocicloalquilidenilo, y está opcionalmente sustituido con 1 a 3 grupos J en el que J es tal como se definió anteriormente;
siempre que cualquier átomo de nitrógeno o azufre pueda estar en una forma oxidada y cualquier átomo de nitrógeno pueda estar en una forma cuaternizada.
2. Compuesto según la reivindicación 1, en el que J se selecciona de alquilo, alcoxilo, ariloxilo, arilo, aralquilo, aralcoxilo, halógeno, heteroarilo, ciano, amino, nitro, heterociclilo, acilo, carboxilo, carboxialquilo, alquilamino, hidroxilo, heterociclilalquilo, aralcanoilamino, aroilamino, alcanoilamino, formilo o ceto.
3. Compuesto según la reivindicación 2, en el que J se selecciona de t-butilo, metilo, trifluorometilo, hidroxilo, metoxilo, etoxilo, trifluorometoxilo, carboxilo, fenilo, bencilo, fenoxilo, benciloxilo, flúor, cloro, bromo, isoxazolilo, piridinilo, piperidinilo, carboximetilo, carboxietilo, dialquilamino, morfolinilmetilo, fenilacetilamino, o acilamino.
4. Compuesto según la reivindicación 1, en el que cada J^{1} se selecciona independientemente de alcoxilo, alquilo, halógeno o arilo.
5. Compuesto según la reivindicación 4, en el que cada J^{1} se selecciona independientemente de alcoxilo C_{1-3}, cloro, alquilo C_{1-3}, o fenilo.
6. Compuesto según la reivindicación 1, en el que L se selecciona de trihalometilo o alquilo sustituido con trihalometilo.
7. Compuesto según la reivindicación 6, en el que L es -CH_{2}CH_{3} o -CH_{2}CF_{3}.
8. Compuesto según la reivindicación 1, en el que cada M se selecciona independientemente de isopropilo, propilo, metilo, piridilmetilo, bencilo, naftilmetilo, fenilo, imidazolilmetilo, tiofenilmetilo, ciclohexilmetilo, fenetilo, benciltiometilo, o benciloxietilo.
9. Compuesto según la reivindicación 8, en el que cada M es isopropilo.
10. Compuesto según la reivindicación 1, en el que un R^{19} es R^{21}-arilo y los otros dos R^{19} son H, o dos R^{19} se unen juntos para formar un anillo aromático y el otro R^{19} es H.
11. Compuesto según la reivindicación 10, en el que un R^{19} es -O-alquil(C_{1}-C_{3})-arilo.
12. Compuesto según la reivindicación 11, en el que un R^{19} es -O-bencilo.
13. Compuesto según la reivindicación 10, en el que los dos R^{19} que se unen juntos forman un anillo aromático de 6 miembros.
14. Compuesto según la reivindicación 13, en el que los dos R^{19} que se unen juntos forman un fenilo.
15. Compuesto según la reivindicación 1, en el que R^{18} es -N(H)- o -N(CH_{3})-.
16. Compuesto según la reivindicación 1, en el que A^{2} es un enlace o -N(H)-C(H)(M)-C(O)-, en el que M es isopropilo.
17. Compuesto según la reivindicación 1, en el que V es -NH-.
18. Compuesto según la reivindicación 1, en el que R^{12} es arilo o heteroarilo y está opcionalmente sustituido con 1-3 grupos J.
19. Compuesto según la reivindicación 18, en el que R^{12} es naftilo, pirazinilo, o piridilo, cualquiera de los cuales está opcionalmente sustituido con un grupo hidroxilo.
20. Composición farmacéuticamente aceptable que comprende:
a) un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1-19 en una cantidad eficaz para inhibir la proteasa NS3 del VHC; y
b) un excipiente farmacéuticamente adecuado.
21. Uso de un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1-19 o una composición farmacéutica según la reivindicación 20 en la fabricación de un medicamento para inhibir la actividad serina proteasa en un paciente.
22. Uso según la reivindicación 21, en el que la serina proteasa es proteasa NS3 del VHC.
23. Uso de un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1-19 o de una composición farmacéutica según la reivindicación 20 en la fabricación de un medicamento para tratar o prevenir una infección por virus de la hepatitis C en un paciente.
24. Procedimiento para preparar un compuesto de la fórmula (I) según una cualquiera de las reivindicaciones 1-19 que comprende la etapa de:
hacer reaccionar un compuesto de fórmula (II):
14
en el que LG es OH o un grupo saliente apropiado y los otros sustituyentes son tal como se definieron anteriormente;
con un compuesto de fórmula (III):
15
en el que el grupo NH_{2} está opcionalmente protegido y las variables son según las reivindicaciones 1-19;
en presencia de un reactivo de acoplamiento, en el que el compuesto de fórmula (II) o el compuesto de fórmula (III) están opcionalmente unidos a una resina.
25. Compuesto según la reivindicación 1 de la fórmula:
16 
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17
18
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