ES2276669T3 - Esterificacion de aceite marino catalizada por lipasa. - Google Patents

Esterificacion de aceite marino catalizada por lipasa. Download PDF

Info

Publication number
ES2276669T3
ES2276669T3 ES00906778T ES00906778T ES2276669T3 ES 2276669 T3 ES2276669 T3 ES 2276669T3 ES 00906778 T ES00906778 T ES 00906778T ES 00906778 T ES00906778 T ES 00906778T ES 2276669 T3 ES2276669 T3 ES 2276669T3
Authority
ES
Spain
Prior art keywords
dha
process according
epa
esterification
lipase
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Expired - Lifetime
Application number
ES00906778T
Other languages
English (en)
Inventor
Gudmundur G. Haraldsson
Olav Thorstad
Bjorn Kristinsson
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Pronova Biopharma Norge AS
Original Assignee
Pronova Biocare AS
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Pronova Biocare AS filed Critical Pronova Biocare AS
Application granted granted Critical
Publication of ES2276669T3 publication Critical patent/ES2276669T3/es
Anticipated expiration legal-status Critical
Expired - Lifetime legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
    • C12P7/64—Fats; Fatty oils; Ester-type waxes; Higher fatty acids, i.e. having at least seven carbon atoms in an unbroken chain bound to a carboxyl group; Oxidised oils or fats
    • C12P7/6409—Fatty acids
    • C12P7/6427—Polyunsaturated fatty acids [PUFA], i.e. having two or more double bonds in their backbone
    • C12P7/6434—Docosahexenoic acids [DHA]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C11—ANIMAL OR VEGETABLE OILS, FATS, FATTY SUBSTANCES OR WAXES; FATTY ACIDS THEREFROM; DETERGENTS; CANDLES
    • C11C—FATTY ACIDS FROM FATS, OILS OR WAXES; CANDLES; FATS, OILS OR FATTY ACIDS BY CHEMICAL MODIFICATION OF FATS, OILS, OR FATTY ACIDS OBTAINED THEREFROM
    • C11C3/00—Fats, oils, or fatty acids by chemical modification of fats, oils, or fatty acids obtained therefrom
    • C11C3/02—Fats, oils, or fatty acids by chemical modification of fats, oils, or fatty acids obtained therefrom by esterification of fatty acids with glycerol
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
    • C12P7/64—Fats; Fatty oils; Ester-type waxes; Higher fatty acids, i.e. having at least seven carbon atoms in an unbroken chain bound to a carboxyl group; Oxidised oils or fats
    • C12P7/6409—Fatty acids
    • C12P7/6427—Polyunsaturated fatty acids [PUFA], i.e. having two or more double bonds in their backbone
    • C12P7/6432—Eicosapentaenoic acids [EPA]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
    • C12P7/64—Fats; Fatty oils; Ester-type waxes; Higher fatty acids, i.e. having at least seven carbon atoms in an unbroken chain bound to a carboxyl group; Oxidised oils or fats
    • C12P7/6436—Fatty acid esters
    • C12P7/6445—Glycerides
    • C12P7/6458—Glycerides by transesterification, e.g. interesterification, ester interchange, alcoholysis or acidolysis
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
    • C12P7/64—Fats; Fatty oils; Ester-type waxes; Higher fatty acids, i.e. having at least seven carbon atoms in an unbroken chain bound to a carboxyl group; Oxidised oils or fats
    • C12P7/6436—Fatty acid esters
    • C12P7/6445—Glycerides
    • C12P7/6472—Glycerides containing polyunsaturated fatty acid [PUFA] residues, i.e. having two or more double bonds in their backbone

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Fats And Perfumes (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)

Abstract

Un proceso para esterificar una composición de aceite marino que contiene EPA y DHA como ácidos grasos libres para formar una fracción de ácido graso libre enriquecido en al menos uno de dichos ácidos grasos en comparación con la composición de partida, que comprende el paso de hacer reaccionar dicha composición de aceite marino con glicerol en presencia de un catalizador de lipasa bajo condiciones de presión reducida y básicamente libre de solventes orgánicos, y separar una fracción de ácido graso libre enriquecida en al menos una parte de EPA y DHA mediante destilación molecular.

Description

Esterificación de aceite marino catalizada por lipasa.
La invención se refiere a la esterificación catalizada por lipasa de aceites marinos.
Es bien conocido en la técnica que refinar productos de aceite de varios tipos, incluidos los aceites marinos, con la ayuda de catalizadores de lipasa cuya especificidad bajo las condiciones de refinado empleadas mejora la recuperación de un producto deseado.
Por ejemplo, en el documento PCT/WO95/00050 se describe un proceso para tratar una composición de aceite que contiene ácidos grasos saturados e insaturados en la forma de triglicéridos en unas condiciones de reacción de transesterificación con un alcohol C_{1-6} tal como etanol bajo condiciones sustancialmente anhidras en presencia de una lipasa activa para catalizar preferentemente la transesterificación de los ácidos grasos saturados y monoinsaturados. Con las lipasas preferidas, Pseudomonas sp. lipase (PSL) y Pseudomonas fluorescens lipase (PFL) era posible preparar a partir de fuentes de aceite marino concentrados que contenían más del 70% en peso de los terapéuticamente importantes ácidos grasos poliinsaturados omega-3 EPA (ácido eicosapentanoico, C20:5) y DHA (ácido docosahexanoico, C22:6) en forma de glicéridos.
La bibliografía y literatura de patentes describe una serie de ejemplos en los que se describe el uso de lipasas para concentrar EPA y/o DHA en aceite de pescado mediante hidrólisis, incluido el documento W0-A-98/18952.
Una serie de procesos de refinado catalizado por lipasa han utilizado glicerol.
A modo de ejemplo, la patente JP 62-91188 /1987) describe un proceso para preparar glicéridos de ácidos grasos poliinsaturados (AGP) en donde los AGP como ácido o éster libre se hace reaccionar con glicerol en presencia de una lipasa termoestable. La composición de ácidos grasos del producto glicérido resultante es sustancialmente el mismo que en los AGP de partida.
El documento WO91/16443 describe un proceso para convertir los AGP en triglicéridos. Los ácidos grasos libres, por ejemplo mezclas de EPA y DHA, se hacen reaccionar con cantidades estequiométricas de glicerol en presencia de una lipasa, especialmente Candida antarctica, bajo unas condiciones básicamente anhidras, libre de solventes orgánicos y de temperatura elevada con eliminación continuada de agua y alcoholes volátiles. Los autores son conscientes de que en este proceso se produjo poca o ninguna discriminación entre EPA y DHA.
En un escrito en Int. J. Food Sci. Technol. (1992), 27, 73-76, Lie y Molin describen la esterificación de un concentrado de ácido graso de aceite de pescado con glicerol usando tres lipasas diferentes, incluida MML. Bajo las condiciones usadas (5% de agua) obtuvieron una fracción de ácido graso libre de DHA (alrededor del 50% del material de partida) y una fracción de glicérido con el mismo contenido de EPA que en el concentrado de aceite de pescado original. Por lo tanto, se observó cierta selectividad.
Un escrito de Myrnes et al. en JAOCS, Vol. 72, N° 11 (1995), 1339-1344 describe una glicerólisis catalizada por lipasa libre de solventes orgánicos de aceites marinos. Se comprueban una serie de diferentes lipasas, y las reacciones se realizan a temperaturas bajas (12°C o menos) en presencia de cantidades de agua relativamente elevadas (3,6%). Un análisis de la fracción de monoglicérido resultante demostró, en algunos casos, una buena selectividad entre ácidos grasos saturados e insaturados, pero ninguna diferencia significativa entre los AGP individuales.
Moore et al. en JAOCS, Vol. 73, N° 11 (1996), 1409-1414 describió la hidrólisis de un aceite de pescado en presencia de lipasa de Candida rugosa (LCR) para producir fracciones enriquecidas con DHA y enriquecidas con EPA diferentes.
Posteriormente, la fracción de ácido graso libre enriquecido con EPA se reesterifica con glicerol en presencia de lipasa de Rhizomucor miehei (MML).
Un escrito de McNeill et al. en JAOCS, Vol. 73, N° 11 (1996), 1403-1407 describe una esterificación catalizada con MML de un concentrado de AGP n-3 con cantidades estequiométricas de glicerol a 55°C con eliminación continua de agua. La fracción de triglicérido resultante contuvo el mismo nivel de DHA que el producto original.
Finalmente, se hace mención de los documentos WO96/37586 y WO96/37587. En el Ejemplo 3 del documento WO96/37586 se describe un proceso en el que un concentrado de ácido graso libre originado de aceite de pescado chileno, que comprendía (tras fraccionamientos de solvente de sales de sodio) 25% de EPA y 18% de DHA, se esterificó directamente con glicerol usando una lipasa de Candida rugosa (LCR) en presencia de 10% de agua a 35°C. Transcurridas 120 horas, el alcance de la conversión había alcanzado alrededor del 60%. En la mezcla de glicéridos obtenida, los triglicéridos contenían 28,2% de EPA y 3,8% de DHA y la fracción monoglicérido contenía 28,9% de EPA y 4,5% de DHA. Los ácidos grasos libres residuales comprendían 23,2% de EPA y 31,5% de DHA. Esto indicó una buena selectividad entre EPA y DHA.
\newpage
Por contra, en los Ejemplos 1 y 2, la reesterificación catalizada por MML de una fracción de ácido graso libre con glicerol no presentó una selectividad significativa entre EPA y DHA.
Lo que se describe en el documento W096/37587 es similar a lo descrito en el documento W096/37586. Los Ejemplos 1, 4, 6 y 8 muestran la glicerólisis de AGP con MML sin que se produzca discriminación entre EPA y DHA.
De ello resulta aparente el debate, en modo alguno exhaustivo, de la técnica anterior de que se ha realizado una amplia investigación para desarrollar procesos catalizados por lipasa para aislar dichos AGP comercialmente importantes como EPA y DHA de composiciones tales como aceites de pescado que los contienen en concentraciones relativamente bajas.
Los autores han descubierto un proceso catalizado por lipasa para preparar concentrados de EPA y DHA mediante la esterificación directa de ácidos grasos libres de aceite de pescado, los cuales, mediante la selección de la lipasa, permite ajustar el contenido de EPA/DHA del concentrado resultante para satisfacer 
\hbox{los variados  requisitos de los
clientes.}
Más en particular, la presente invención proporciona un proceso para esterificar una composición de aceite marino que contiene EPA y DHA como ácidos grasos libres para formar una fracción de ácido graso libre enriquecido en al menos uno de dichos ácidos grasos en comparación con la composición de partida, que comprende el paso de hacer reaccionar dicha composición de aceite marino con glicerol en presencia de un catalizador de lipasa bajo condiciones de presión reducida y básicamente libre de solventes orgánicos, y recuperar una fracción de ácido graso libre enriquecida en al menos una parte de EPA y DHA.
La presente invención se basa en el descubrimiento de que el glicerol puede actuar como un sustrato excelente para la esterificación directa catalizada por lipasa de ácidos grasos libres de aceite marino, siempre que se produzcan unas condiciones críticas de reacción determinadas. Este descubrimiento no se esperaba en absoluto teniendo en cuenta la investigación anterior usando glicerol descrita anteriormente. La principal reacción de esterificación puede representarse esquemáticamente mediante la siguiente ecuación en donde 
\hbox{el catalizador de lipasa es  Rhizomucor miehei 
(MML):}
1
El producto también contiene otros tipos de glicéridos enriquecidos con EPA, no mostrados en la ecuación esquemática.
Tal y como se describirá a continuación con mayor detalle, e ilustrado en el Ejemplo 8, la selección del catalizador de lipasa puede afectar crucialmente a la naturaleza del producto. En el caso de MML usado en el esquema de reacción ilustrado, el producto es una fracción de ácido graso libre enriquecido con DHA y una fracción de glicérido enriquecido con EPA.
Una característica significativa del presente proceso es que aprovecha el hecho de que la selectividad de una lipasa hacia ácidos grasos individuales es mayor que cuando están en forma de ácidos grasos libres en lugar de glicéridos, puesto que se evitan las complicaciones relacionadas con la regioselectividad de la lipasa o selectividad posicionada. Sorprendentemente, la reacción con glicerol es mucho menos exitosa cuando EPA y DHA están presentes como ésteres en lugar de como ácidos libres, como se muestra en el Ejemplo 10 (comparativo) a continuación.
Según la presente invención, el uso de glicerol como sustrato tiene la ventaja adicional de que ayuda en la separación de las fracciones de glicérido y producto de ácido graso libre mediante destilación molecular. Se considera que el motivo para ello es que los ésteres de un alcohol trióico tal como glicerol son menos volátiles que ésteres similares de alcoholes de cadena corta tales como metanol, etanol y propanol.
Se ha descubierto que las cantidades relativas de glicerol son importantes para que la reacción de esterificación tenga éxito. Preferiblemente, debe usarse una relación molar de glicerol respecto a ácidos grasos libres en la composición de partida de 1:1,5 a 1:3, más preferiblemente de 1:1,5 a 1:2,5. En el trabajo experimental realizado hasta la fecha por los autores, se ha descubierto que resulta óptima una relación molar de alrededor de 1:2 de glicerol respecto a ácidos grasos (correspondiente a una relación de grupos de hidroxilo disponibles respecto a ácidos grasos libres de 1,5:1).
Es básico que la reacción de esterificación se lleve a cabo bajo presión reducida, a fin de eliminar el agua del sistema de reacción a medida que se forma. Esto es necesario para que la reacción sea no reversible, haciendo que resulte imposible obtener recuperaciones elevadas de los productos EPA/DHA deseados. De ese modo, la esterificación se llevará a cabo generalmente a una presión inferior a 6665 Pa, y normalmente inferior a 1333 Pa, por ej. de 133,3-1333 Pa, a pesar de que los autores han observado sorprendentemente que las condiciones de presión reducida para una actividad óptima de la lipasa depende en cierta medida de la lipasa determinada usada. Así, en algunos casos resultará ventajoso usar una presión que va desde 1.333 a 133,3 Pa, y en los Ejemplos que siguen los autores presentan unos resultados excelentes con presiones tan bajas como 1.333 - 13,33 Pa. Las condiciones óptimas de baja presión para la lipasa determinada usada pueden, por supuesto, determinarse mediante experimentos rutinarios.
Los solventes orgánicos no deben estar presentes en este proceso, a diferencia de muchos sistemas basados en lipasa de la técnica anterior, ya que los solventes orgánicos son volátiles y se evaporarán bajo condiciones de
vacío.
La temperatura a la que se conduce la reacción de esterificación dependerá de la composición de aceite marino que se esté tratando así como de las lipasas usadas. Si se desea que la viscosidad de la composición de aceite marino sea suficientemente baja para permitir agitar adecuadamente la composición durante la reacción, y por este motivo a menudo es necesario usar temperaturas de al menos 20°C. Por otro lado, no se desea alcanzar temperaturas demasiado elevadas ya que las temperaturas elevadas actúan contra la resolución cinética sobre la que se basa la discriminación de lipasa de los ácidos grasos, y también porque EPA y DHA pueden ser destruidos por la exposición prolongada a temperaturas elevadas, y tampoco las lipasas toleran temperaturas elevadas. Teniendo en cuenta factores como estos, por lo general se prefiere operar dentro del intervalo de 20-40°C, con frecuencia y más preferiblemente a 37-40°C, a pesar de que pueden usarse temperaturas de 0-20°C en el caso de composiciones de aceite de pescado con un contenido elevado de EPA y/o DHA en donde la composición permanece suficientemente líquida a estas temperaturas tan bajas y por otro lado temperaturas más elevadas, del intervalo de 40-70°C pueden ser posibles para dichas lipasas inmovilizadas estables como MML y CAL.
El material de partida para el presente proceso puede ser una composición de una fuente marina que contiene EPA y DHA en forma de ácido libre. Dicha composición puede obtenerse mediante saponificación de aceites de pescado crudo, por ej. con hidróxido de sodio, seguida por acidificación con, por ej., ácido sulfúrico, según procedimientos estándar bien conocidos por aquellos próximos al sector del procesado de aceite de pescado. Normalmente, las composiciones incluirán contenidos totales de EPA y DHA en forma de ácido libre de 15-35% en peso, preferiblemente 25-35%. Los aceites de pescado que son ricos en DHA, tales como el aceite de atún que contiene alrededor de 5% de EPA y 25% de DHA en peso son especialmente adecuadas para preparar concentrados de DHA mediante el proceso de la presente invención, mientras que los aceites de pescado ricos en EPA (por ej., aceite de sardina con alrededor de 18% de EPA y 12% de DHA en peso) y los aceite de pescado de chileno (20% de EPA y 7% de DHA en peso) son materias primas especialmente adecuadas para elaborar concentrados de EPA. Sin embargo, es una ventaja de la presente invención el hecho de que puedan usarse como materias primas aceites de pescado más baratos con contenidos totales de EPA y DHA inferiores tales como el aceite de arenque (alrededor del 6% de EPA y alrededor del 8% de DHA en peso) para la preparación de fracciones enriquecidas con EPA y/o DHA mediante el proceso de esta invención, como se muestra en los Ejemplos incluidos a continuación en esta especificación.
Como se ha mencionado anteriormente en la presente especificación, es una característica de este proceso que es posible variar la naturaleza de las fracciones enriquecidas mediante la selección de la lipasa usada. Por ejemplo, se observaron los siguientes efectos con las lipasas conocidas:
i. con Rhizomucor meihei lipasa (MML), Mucor javanicus lipasa (MJL), y Aspergillus niger lipasa (ANL) se obtiene una fracción de ácido graso libre enriquecido con DHA y una fracción de glicérido enriquecida con EPA; y
ii. con Pseudomonas sp. - Amano AK (PSL), Pseudomonas fluorescens - Arcano PS (PFL), Rhizopus oryzae - Arcano F (ROL) y Humicula Lanuginosa - Arcano CE (HLL) se obtiene una fracción de ácido graso libre enriquecido con EPA/DHA y una fracción de glicérido enriquecido con ácidos grasos saturados.
La capacidad de variar la naturaleza del producto mediante la selección adecuada del catalizador de lipasa posee la ventaja que el funcionamiento del proceso puede adaptarse a los requisitos particulares del cliente. Por ejemplo, un cliente puede requerir un concentrado de DHA para complementar la alimentación infantil, mientras que otro cliente puede requerir un concentrado mixto de EPA/DHA para fabricar un producto sanitario, pero los requisitos de ambos clientes pueden cumplirse sencillamente cambiando los catalizadores de lipasa usados.
Por supuesto, puede haber más posibilidades para adaptar la composición del producto final realizando el proceso en dos o más etapas distintas, usando diferentes catalizadores tipo lipasa diferentes en cada una de las etapas.
Las lipasas preferidas para el presente proceso son Rhizomucor miehei (MML), que discrimina fuertemente entre EPA y DHA; y Pseudomonas sp. (PSL), que discrimina entre EPA y DHA, por un lado, y los ácidos grasos restantes del aceite de pescado por otro.
Se prefiere, al menos a escala industrial, usar una forma inmovilizada de la lipasa seleccionada, puesto que se ha descubierto que la inmovilización no solo aumenta con frecuencia la actividad de la enzima, especialmente a presiones muy bajas, del orden de 1.333 a 133,3 Pa, sino que también mejora su estabilidad y ayuda a su recuperación, todos ellos factores que afectan a la economía del proceso.
Debe usarse suficiente lipasa para efectuar la reacción de esterificación deseada. En el trabajo realizado por los autores con MML inmovilizada usaron alrededor de 10% en peso del producto inmovilizado, en base al contenido de ácidos grasos en la composición marina tratada, lo cual corresponde a una concentración de MML de alrededor de 1% en peso (teniendo la MML inmovilizada disponible comercialmente alrededor de 10% de lipasa y 90% de portador).
En cambio, al usar lipasas no inmovilizadas, los inventores utilizaron concentraciones de lipasa de 10% en peso del contenido de ácido graso.
Tras concluir la reacción de esterificación, el producto se separa en fracciones que contienen principalmente ácidos grasos libres y glicéridos respectivamente, por, destilación molecular.
El paso de destilación molecular para separar la fracción de ácido graso libre de la fracción de glicérido puede realizarse a una temperatura que oscile de 100 a 200°C, aunque normalmente se encontrarán en el intervalo de 140-180°C. Su éxito, en lo relativo a la relación que puede conseguirse de residium/destilado dependerá del vacío. El vacío puede variar en función de factores tales como los componentes volátiles presentes en la mezcla. Generalmente estará dentro del intervalo de 1x10^{-4} - 1x10^{-2} mbar, aunque una persona experta en la técnica puede usar la combinación del vacío que puede conseguirse, lo cual, en algunos casos, puede estar fuera del intervalo mencionado, y una temperatura adecuada para conseguir el resultado final deseado.
Por supuesto, el producto de una primera esterificación catalizada por lipasa puede concentrarse aún más en una o más esterificaciones catalizadas por lipasa posteriores, usando la misma o diferentes lipasas.
La fracción de ácido libre que se obtiene tras concluir el proceso puede o bien usarse como tal, o bien si un producto en forma de ácido libre no fuera aceptable para el uso previsto, puede ser convertido primero en éster de etilo, glicérido u otra forma aceptable mediante cualquier método adecuado.
De igual modo, en el caso en que la fracción de glicérido separada contiene EPA o DHA en concentraciones económicamente importantes, dicha fracción también puede someterse a un ulterior tratamiento, por ejemplo hidrólisis con álcali acuoso para formar ácidos libres, o bien a esterificación con etanol para formar ésteres de etilo de los ácidos grasos. La fracción de ácido graso libre o de éster de etilo así formada puede, si se desea, concentrarse aún más, por ej., mediante destilación molecular.
El proceso de esterificación de la presente invención posee una serie de ventajas que la hacen especialmente adecuada para su industrialización. La capacidad de adaptar la composición de los productos, especialmente mediante la selección del catalizador de lipasa, ya se ha mencionado, pero otras ventajas que hacen que el proceso sea comercialmente atractivo incluyen:
i. la elevada producción de productos de EPA, DHA o EPA + DHA altamente concentrados,
ii. la ausencia de solventes orgánicos, así no solo obviando los problemas de purificación que puede provocar con frecuencia la presencia de dichos solventes, sino también reduciendo la voluminosidad del proceso, que es algo económicamente importante (menos requisitos de energía, etc.),
iii. la capacidad de reutilizar catalizadores lipasa inmovilizados en diversos, tal vez hasta 20 o más, series sucesivas, contribuyendo una vez más a mantener bajos los costes,
iv. la capacidad de usar cualquier composición de aceite marino adecuada que contiene los ácidos grasos poliinsaturados de interés, y
v. la simplicidad general de la esterificación de los procesos de separación posteriores.
La invención se ilustra en los Ejemplos incluidos a continuación, en los cuales los porcentajes de área se obtienen mediante análisis GLC.
Ejemplo 1
En este experimento la hidrólisis de un producto de aceite de arenque que contenía un área de 5,5% de EPA y un área de 8,0% de DHA (en ambos casos como ácido libre) se hizo reaccionar con glicerol en presencia de lipasa Rhizomucor miehei (MML; Lipozima de Novo). Las condiciones de esterificación fueron:
MML:
dosis del 10% en peso, en base al equivalente del substrato de ácido graso
Glicerol:
equivalente a dos equivalentes de ácidos grasos libres (exceso esteoquiométrico 1,5 de grupos de hidroxilo)
Temperatura:
4,0°C
Presión:
1.333 a 13,33 Pa
Disolvente orgánico:
Ninguno
El procedimiento experimental fue el siguiente: A ácidos grasos libres de aceite de sardina (10 g; M. en peso aprox. 290 g/mol; aprox. 34,5 mmol) y glicerol (1,56 g; M. en peso 92,1 g/mol; 17,3 mmol) se añadió lipasa Mucor miehei inmovilizada (Lipozima de Novo, 1,0 g). La mezcla se agitó con cuidado a 40°C en un agitador magnético con placa caliente bajo vacío continuado de 1.333 a 13,33 Pa. El agua volátil producida durante el progreso de la reacción se condensó continuamente en una trampa enfriada con nitrógeno líquido. Se usó la dosis adecuada para controlar el progreso de la reacción. Transcurrido el tiempo seleccionado se detiene la reacción separando la enzima mediante filtración. El fraccionamiento se realizó mediante CCF preparativa sobre gel de sílice y cada fracción de lípido se analizó para detectar ácidos grasos mediante CGL tras la metilación mediante procedimientos
estándar.
Los resultados se muestran a continuación en la Tabla 1:
\vskip1.000000\baselineskip
TABLA 1 
\vskip1.000000\baselineskip
2 
\vskip1.000000\baselineskip
Transcurridas 7 h con un 80% de conversión la relación entre DHA y EPA fue de 6,6:1 comprendiendo DHA el 31% y EPA menos del 5% de los ácidos grasos libres residuales. La recuperación de DHA fue 83%. Transcurridas 12 h dicha relación había aumentado hasta 13:1 y pasadas 24 h a un 89% de la conversión a 27:1, estando la recuperación de DHA aún en el 70%. A partir de dicho nivel se obtuvo un claro equilibrio.
Este experimento demuestra que, al usar MML como la lipasa, la presente invención permite la preparación del concentrado de DHA con una tasa de conversión elevada.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo 2
(Comparativa)
Se repitió el Ejemplo 1 pero con una concentración reducida de glicerol (3 equivalentes de ácidos grasos libres por equivalente de glicerol). Los resultados se muestran a continuación en la Tabla 2:
TABLA 2
4
Como podrá observarse, los resultados de este experimento son mucho menos satisfactorios que los obtenidos para la relación 2:1 usada en el Ejemplo 1. El motivo de este cambio no es fácil de explicar. Puede estar relacionado con una disponibilidad insuficiente de grupos de hidroxilo o con una cantidad excesiva de ácidos grasos, cuando se tiene en cuenta que la posición intermedia del glicerol está mucho menos disponible o es al menos más lenta en su participación. La consecuencia es que se alcanza el equilibrio demasiado rápido y no se produce una separación efectiva entre EPA y DHA.
Ejemplo 3
El Ejemplo 1 se volvió a repetir, aunque la temperatura a la que se condujo la reacción de esterificación se varió entre 30° y 60°C. Los resultados se muestran a continuación en la Tabla 3:
TABLA 3
5
Los resultados establecen que 40°C es la temperatura adecuada para estas condiciones de reacción determinadas. A 30°C la agitación fue difícil lo cual explica los resultados inferiores a dicha temperatura. Sin embargo, la relación favorable entre DHA y EPA, 8,6:1 a 60°C, en comparación con 8,0:1 a 40°C, es destacable, puesto que a esa temperatura se esperaba una selectividad más lenta.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo 4
Volvió a repetirse el Ejemplo 1 aunque variando la relación entre el glicerol y los ácidos grasos libres tanto a 40°C como a 60°C. Los resultados obtenidos se muestran a continuación en la Tabla 4:
\vskip1.000000\baselineskip
TABLA 4 
\vskip1.000000\baselineskip
6 
\vskip1.000000\baselineskip
Estos resultados confirman el descubrimiento previo de que puede obtenerse una relación de DHA/EPA favorable, así como una elevada recuperación de DHA, a 40°C con una relación molar de 1:2 entre el glicerol y los ácidos grasos libres.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo 5
Este experimento muestra la esterificación directa de una composición de ácido graso libre obtenida mediante hidrólisis de aceite de pescado chileno usando MML como catalizador.
El aceite de Chile comprendía un área del 16,8% de EPA y un área de 12,3% de DHA.
Las condiciones de la reacción de esterificación fueron las mismas que las del Ejemplo 1. Los resultados se muestran a continuación en la Tabla 5:
TABLA 5
8
Los resultados de la Tabla 5 muestran que el aceite chileno es una materia prima adecuada para separar EPA y DHA eficientemente con MML. Por ejemplo, transcurridas 28 h del tiempo de reacción, se había separado un 86% del EPA inicial en la fracción de glicérido, mientras que el 78% del DHA permanece en la fracción de ácido graso residual que comprende un 50% de DHA y un 13% de EPA.
Ejemplo 6
Volvió a repetirse el Ejemplo 1 usando como materia prima aceite de atún crudo que comprendía 5,0% de EPA y 18,2% de DHA. Los resultados se muestran a continuación en la Tabla 6:
TABLA 6
10
Teniendo en cuenta que el aceite de atún usado estaba crudo y que contenía cantidades de DHA relativamente bajas, los resultados obtenidos fueron excelentes.
Ejemplo 7
Se repitió el Ejemplo 1 a una mayor escala (100 g). Se usaron las mismas condiciones de antes con una relación molar de 1:2 entre el glicerol y los ácidos grasos libres bajo vacío a 40°C. Se uso una dosis del 10% de MML y se detuvo cada reacción transcurridas 16 horas. Tras cada serie se filtró la lipasa en un embudo de vidrio sinterizado bajo un flujo de atmósfera de nitrógeno. Cuando fue necesario se almacenó la lipasa entre series bajo nitrógeno a temperatura ambiente. Los resultados de veinte series consecutivas se muestran en la Tabla 7.
TABLA 7 
\vskip1.000000\baselineskip
12
14 
\vskip1.000000\baselineskip
Como podrá observarse en la Tabla 7, la lipasa conservó su actividad durante las veinte series sucesivas 5 sin que se produjera un deterioro significativo.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo 8
El propósito de este experimento fue demostrar que en el proceso pueden usarse otras lipasas diferentes de MML según la presente invención.
Se analizaron diecisiete (17) lipasas o preparados de lipasa diferentes bajo unas condiciones de reacción similares a las usadas en el Ejemplo 1, aunque con presiones más elevadas, en el intervalo de 133,3 a 2666 Pa, usando el mismo aceite de arenque como en el Ejemplo 7 y con un tiempo de reacción fijo de 16 horas. Se usó la dosis adecuada para controlar el alcance de la conversión. Se separó la mezcla de glicéridos de los ácidos grasos libres residuales con la ayuda del CCF en los casos que mostraron cierta actividad y la composición de ácido graso de las dos fracciones resultantes se determinó mediante CLG. Los resultados se muestran a continuación en la Tabla 8:
\vskip1.000000\baselineskip
TABLA 8
15
17
Es interesante observar en la tabla que la lipasa de Mucor javanicus (MJL) de Amano parece discriminar fuertemente entre EPA y DHA bajo estas condiciones y que presentó una actividad elevada. También presentó un comportamiento similar de discriminación entre EPA y DHA a favor de EPA por la lipasa de Aspergillus niger (ANL), y también la lipasa de Rhizopus niveus (RNL), aunque la actividad fue muy inferior. La PSL y PFL presentaron actividad bajo estas condiciones sin que se produjera una discriminación significativa entre EPA y DHA. Por lo tanto, estas lipasas son adecuadas para concentrar EPA y DHA a partir de aceite de pescado bajo estas condiciones. También se sabe que la LNL, ROL y HLL resultan útiles para concentrar tanto el EPA como el DHA de aceite de pescado, ya que presentan una actividad elevada.
Por el contrario, la lipasa de Candida antarctica, a pesar de que presenta una actividad elevada, comparable a la de MML, no discriminó entre EPA y DHA en su acción, tampoco presentaron una fuerte discriminación entre ellas y otros ácidos grasos presentes en el aceite de pescado. Por lo tanto, CAL no es adecuada para su uso bajo estas
condiciones.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo 9
(Comparativa)
Se repitió el Ejemplo 8 en muchas de las lipasas aunque usando un vacío considerablemente más elevado de 1.333-13,33 Pa. Los resultados se muestran a continuación en la Tabla 9:
\vskip1.000000\baselineskip
TABLA 9 
\vskip1.000000\baselineskip
18
19 
\vskip1.000000\baselineskip
Los resultados mostrados en la Tabla 9 contrastan considerablemente con los mostrados en la Tabla 8 para las mismas lipasas.
Por lo tanto, el alcance de la conversión fue mucho inferior en todas las lipasas, excepto CAL, y ninguna de ellas produjo una discriminación significativa entre EPA y DHA. Se considera que la actividad inferior de todas las lipasas excepto CAL puede atribuirse probablemente al muy alto vacío empleado para eliminar el contenido esencial de agua de la lipasa con un efecto perjudicial considerable en la actividad de la lipasa.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo 10
(Comparativa)
En este experimento se esterificaron directamente ésteres de etilo de aceite de sardina con glicerol usando una serie de diferentes lipasas. Las reacciones se condujeron bajo agitación a 40°C durante 24 horas bajo vacío, usando la lipasa a una concentración del 10% y dos equivalentes de los ésteres de etilo por equivalente de glicerol. Los resultados se muestran a continuación en la Table 10: El alcance de la conversión se basó en la cantidad de ésteres de etilo residuales presentes en la mezcla de reacción.
TABLA 10 
\vskip1.000000\baselineskip
20 
\vskip1.000000\baselineskip
Resulta aparente en la Tabla 10 que la reacción de glicerólisis se produjo mucho más lentamente en lo relativo a la conversión en comparación con la esterificación directa de ácidos grasos libres con glicerol. Tan solo MML presentó una conversión apreciable y las lipasas restantes presentaron poca o ninguna actividad.
Este experimento demuestra que los ésteres de etilo, a pesar de ser más ventajosos y más fácilmente disponibles como materia prima, no constituyen una materia prima preferida en esta invención.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo 11
Se repitió el ejemplo 1 usando como materia prima un aceite de atún semirrefinado que contenía 5,2% de EPA y 24,5% de DHA. Los resultados se muestran a continuación en la Tabla 11:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(Tabla pasa a página siguiente)
TABLA 11 
\vskip1.000000\baselineskip
22 
\vskip1.000000\baselineskip
Se podrá observar que se obtuvo una buena conversión, con una discriminación efectiva entre EPA y DHA.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo 12
Se repitió el Ejemplo 1 una vez más usando un aceite de pescado crudo que contenía 20,0% de EPA y 7,2% de DHA como materia prima. Los resultados se muestran a continuación en la Tabla 12.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
TABLA 12
23
24 
\vskip1.000000\baselineskip
Resulta claro de los resultados de la Tabla 12 que se obtuvieron glicéridos con una relación EPA a DHA muy favorable, con una elevada tasa de conversión. Por lo tanto, el proceso ilustrado podría constituir la base de un proceso para preparar un concentrado de EPA.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo 13
Se volvió a repetir el Ejemplo 1 usando ácidos grasos libres de aceite de atún (496 g) que comprendían 7,1% de EPA y 29,4% de DHA. Se obtuvo una conversión del 68,3% transcurridas 4,5 h. La mezcla de glicéridos comprendía 9,0% de EPA y 11,2% de DHA y los ácidos grasos libres residuales comprendían 4,1% de EPA y 54,9% de DHA. La mezcla de reacción se introdujo en una destilación de corto recorrido usando un Leybold KDI, -4 (Leybold AG, Hanau, Alemania) bajo un vacío de 0,3 Pa. Se efectuó la desgasificación a 60°C y una redestilación a 90°C [La destilación a 90°C produjo una pérdida de solo 6,2% de DHA]. Se destiló el residuo de la predestilación a 140°C. Los resultados se muestran a continuación en la Tabla 13:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(Tabla pasa a página siguiente)
\newpage
TABLA 13
25
26
Como puede observarse en la Tabla 13, se destiló la parte principal de los ácidos grasos a 140°C (73,3% en base al contenido total de FFA) y comprendían 52,3% de DHA. Esta fracción se contaminó con un 15% de monoglicéridos con un contenido de DHA del 3,3%. El residuo sigue conteniendo 23,3% de FFA comprendiendo 74,1% de DHA. A pesar de eso, según se desprende de la Tabla 13, puede conseguirse un buen enriquecimiento del contenido de ácido graso libre DHA a través de este proceso al aplicar el paso de destilación molecular.
Se espera un resultado aún mejor si la destilación se realiza a una temperatura más eleva de por ejemplo 150-160°C o a un mejor vacío.

Claims (17)

1. Un proceso para esterificar una composición de aceite marino que contiene EPA y DHA como ácidos grasos libres para formar una fracción de ácido graso libre enriquecido en al menos uno de dichos ácidos grasos en comparación con la composición de partida, que comprende el paso de hacer reaccionar dicha composición de aceite marino con glicerol en presencia de un catalizador de lipasa bajo condiciones de presión reducida y básicamente libre de solventes orgánicos, y separar una fracción de ácido graso libre enriquecida en al menos una parte de EPA y DHA mediante destilación molecular.
2. Un proceso según la Reivindicación 1, en donde la relación molar de glicerol respecto a ácidos grasos libres en la composición de partida es desde 1:1,5 hasta 1:3.
3. Un proceso según la Reivindicación 2, en donde la relación molar de glicerol respecto a ácidos grasos libres en la composición de partida es desde 1:1,5 hasta 1:2,5.
4. Un proceso según la Reivindicación 3, en donde la relación molar de glicerol respecto a ácidos grasos libres en la composición de partida es de alrededor de 1:2.
5. Un proceso según cualquiera de las Reivindicaciones que preceden, en donde la reacción de esterificación se conduce a una presión inferior a 6665 Pa.
6. Un proceso según la Reivindicación 5, en donde la reacción de esterificación se conduce a una presión inferior a 1333 Pa.
7. Un proceso según la Reivindicación 6, en donde la reacción de esterificación se conduce a una presión que va desde 133,3 hasta 1333 Pa.
8. Un proceso según cualquiera de las Reivindicaciones 1 a 6, en donde la reacción de esterificación se conduce a una presión que va desde 1.333 hasta 133,3 Pa.
9. Un proceso según la Reivindicación 8, en donde la reacción de esterificación se conduce a una presión que va desde 1.333 hasta 13,33 Pa.
10. Un proceso según cualquiera de las Reivindicaciones que preceden, en donde la reacción de esterificación se conduce a una temperatura de 20° a 40°C.
11. Un proceso según cualquiera de las Reivindicaciones que preceden, en donde dicho catalizador de lipasa se inmoviliza en un portador.
12. Un proceso según cualquiera de las Reivindicaciones que preceden, en donde dicho catalizador de lipasa es Rhizomucor meihei.
13. Un proceso según cualquiera de las Reivindicaciones que preceden, en donde dicha lipasa cataliza preferentemente la esterificación de EPA, en comparación con DHA.
14. Un proceso según cualquiera de las Reivindicaciones 1 a 12, en donde dicha lipasa cataliza preferentemente la esterificación de DHA, en comparación con EPA.
15. Un proceso según cualquiera de las Reivindicaciones 1 a 12, en donde dicha lipasa cataliza preferentemente la esterificación tanto de EPA como de DHA, en comparación con los demás ácidos grasos presentes en dicha composición de aceite marino.
16. Un proceso según la Reivindicación 1, en donde la destilación molecular se realiza a 100 - 200ºC, más preferiblemente 140 - 160ºC, con un vacío de 1x10^{4} - 1x10^{-2} mbar.
17. Un proceso según la reivindicación 1, en donde uno o más pasos adicionales del proceso tales como las esterificaciones catalizadas por lipasa, o hidrólisis, para formar ácidos grasos libres, o la esterificación con un alcohol para formar ésteres, puede realizarse después del paso de esterificación de la reivindicación 1.
ES00906778T 1999-02-17 2000-02-16 Esterificacion de aceite marino catalizada por lipasa. Expired - Lifetime ES2276669T3 (es)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
NO19990739 1999-02-17
NO19990739A NO312973B1 (no) 1999-02-17 1999-02-17 Lipase-katalysert forestring av marine oljer

Publications (1)

Publication Number Publication Date
ES2276669T3 true ES2276669T3 (es) 2007-07-01

Family

ID=19902972

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
ES00906778T Expired - Lifetime ES2276669T3 (es) 1999-02-17 2000-02-16 Esterificacion de aceite marino catalizada por lipasa.

Country Status (12)

Country Link
US (1) US6518049B1 (es)
EP (1) EP1153114B1 (es)
JP (1) JP2002537442A (es)
AT (1) ATE348140T1 (es)
AU (1) AU757203B2 (es)
CA (1) CA2362212C (es)
DE (1) DE60032337T2 (es)
ES (1) ES2276669T3 (es)
NO (1) NO312973B1 (es)
NZ (1) NZ513574A (es)
WO (1) WO2000049117A1 (es)
ZA (1) ZA200106813B (es)

Families Citing this family (34)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2002293774A (ja) * 2001-03-29 2002-10-09 Kuraray Co Ltd ５−（メタ）アクリロイルオキシ−２，６−ノルボルナンカルボラクトンの製造方法
SE0202188D0 (sv) * 2002-07-11 2002-07-11 Pronova Biocare As A process for decreasing environmental pollutants in an oil or a fat, a volatile fat or oil environmental pollutants decreasing working fluid, a health supplement, and an animal feed product
EP2295529B2 (en) 2002-07-11 2022-05-18 Basf As Use of a volatile environmental pollutants-decreasing working fluid for decreasing the amount of pollutants in a fat for alimentary or cosmetic use
NO319194B1 (no) * 2002-11-14 2005-06-27 Pronova Biocare As Lipase-katalysert forestringsfremgangsmate av marine oljer
CA2557927A1 (en) * 2004-03-04 2005-09-15 Htl High-Tech Lipids Ltd. Structured triglycerides and emulsions comprising same
DE102004015781A1 (de) * 2004-03-31 2005-10-20 Cognis Ip Man Gmbh Verfahren zur enzymatischen Synthese von Triglyceriden ungesättigter Fettsäuren
US20060135610A1 (en) * 2004-12-22 2006-06-22 Bortz Jonathan D Cardiovascular compositions
CA2609341C (en) * 2005-05-23 2011-10-04 Natural Asa Concentration of fatty acid alkyl esters by enzymatic reactions with glycerol
EP1915443A4 (en) * 2005-06-16 2009-09-23 Ocean Nutrition Canada Ltd IMMOBILIZED ENZYMES AND USE METHOD THEREFOR
ES2292341B1 (es) * 2006-03-13 2009-03-16 Universidad De Almeria "procedimiento para la purificacion de acido eicosapentaenoico (epa)".
EP1978101A1 (de) 2007-04-02 2008-10-08 Cognis IP Management GmbH Verfahren zur Anreicherung mehrfach ungesättigter Fettsäuren
EP1978102B1 (de) * 2007-04-02 2010-07-07 Cognis IP Management GmbH Ein Gemisch enthaltend Fettsäureglyceride
JP2008278781A (ja) * 2007-05-09 2008-11-20 Osaka City ２位よりも１，３位のｄｈａ含有率が高いトリアシルグリセロールの製造方法
CL2008002020A1 (es) 2007-07-12 2008-11-14 Ocean Nutrition Canada Ltd Metodo de modificacion de un aceite, que comprende hidrolizar gliceridos con una solucion de lipasa thermomyces lanuginosus, separar la fraccion de acido graso saturado de la fraccion de glicerido hidrolizado y esterificar los gliceridos hidrolizados en la presencia de candida antarctica lipasa b; y composicion de aceite.
KR101357298B1 (ko) * 2008-06-20 2014-01-28 에이케이 앤 엠엔 바이오팜 주식회사 오메가-3계 고도불포화 지방산의 고순도 정제방법
JP6113954B2 (ja) 2008-10-31 2017-04-12 リピッド ファーマシューティカルズ イーエイチエフ． 医薬として使用するための脂肪酸
US8362080B2 (en) 2008-12-18 2013-01-29 Baylor College Of Medicine Increasing glutathione levels for therapy
WO2011067666A1 (en) 2009-12-03 2011-06-09 Blt Berg Lipidtech As Processes to generate compositions of enriched fatty acids
ES2459951T3 (es) 2009-12-30 2014-05-13 Basf Pharma (Callanish) Limited Proceso de separación cromatográfico de lecho móvil simulado para la purificación de ácidos grasos poliinsaturados
US20120184760A1 (en) 2011-01-14 2012-07-19 Pharma Marine As Removal of monoglycerides from fatty acid concentrates
GB201111601D0 (en) 2011-07-06 2011-08-24 Equateq Ltd New process
GB201111589D0 (en) 2011-07-06 2011-08-24 Equateq Ltd New modified process
GB201111591D0 (en) 2011-07-06 2011-08-24 Equateq Ltd Further new process
GB201111594D0 (en) 2011-07-06 2011-08-24 Equateq Ltd New improved process
GB201111595D0 (en) 2011-07-06 2011-08-24 Equateq Ltd Improved process
EP2753305A1 (en) 2011-09-06 2014-07-16 Lipid Pharmaceuticals Ehf. Coated suppositories
US20150004224A1 (en) 2012-01-06 2015-01-01 Omthera Phrmaceuticals, Inc. Dpa-enriched compositions of omega-3 polyunsaturated fatty acids in free acid form
KR20150028233A (ko) 2012-05-07 2015-03-13 옴테라 파마슈티칼스, 인크. 스타틴 및 오메가-３ 지방산의 조성물
GB201300354D0 (en) 2013-01-09 2013-02-20 Basf Pharma Callanish Ltd Multi-step separation process
US8802880B1 (en) 2013-05-07 2014-08-12 Group Novasep Chromatographic process for the production of highly purified polyunsaturated fatty acids
US9428711B2 (en) 2013-05-07 2016-08-30 Groupe Novasep Chromatographic process for the production of highly purified polyunsaturated fatty acids
EP3118186B1 (fr) 2013-12-11 2022-02-09 Novasep Process Installation chromatographique de production d acides gras polyinsatures
US10975031B2 (en) 2014-01-07 2021-04-13 Novasep Process Method for purifying aromatic amino acids
US10722542B2 (en) 2016-06-16 2020-07-28 Ambo Innovations, Llc Non-winterized, standardized marine source oil products and methods of making thereof

Family Cites Families (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH02303492A (ja) 1989-05-19 1990-12-17 Nippon Oil & Fats Co Ltd 長鎖高度不飽和脂肪酸グリセリドの濃縮法
DK95490D0 (da) * 1990-04-18 1990-04-18 Novo Nordisk As Fremgangsmaade til fremstilling af triglycerid og triglyceridsammensaetning
JPH07203979A (ja) 1994-01-25 1995-08-08 Maruha Corp 高度不飽和脂肪酸グリセリドの製造方法
GB9404483D0 (en) * 1994-03-08 1994-04-20 Norsk Hydro As Refining marine oil compositions
AU6610996A (en) * 1995-05-24 1996-12-11 Loders Croklaan B.V. Production of materials high in long chain polyunsaturated f atty acids
AU5898896A (en) * 1995-05-24 1996-12-11 Loders Croklaan B.V. Production method for fats with long chain polyunsaturated f atty acids
WO1998018952A1 (fr) 1996-10-30 1998-05-07 Nippon Suisan Kaisha, Ltd. Procede de production de matieres grasses contenant des acides gras hautement insatures contenant eux-memes un acide docosahexaenoique a concentration selective

Also Published As

Publication number Publication date
DE60032337D1 (de) 2007-01-25
EP1153114A1 (en) 2001-11-14
DE60032337T2 (de) 2007-07-12
US6518049B1 (en) 2003-02-11
CA2362212C (en) 2009-10-27
EP1153114B1 (en) 2006-12-13
JP2002537442A (ja) 2002-11-05
ATE348140T1 (de) 2007-01-15
NO990739L (no) 2000-08-18
WO2000049117A1 (en) 2000-08-24
CA2362212A1 (en) 2000-08-24
AU757203B2 (en) 2003-02-06
NO312973B1 (no) 2002-07-22
AU2833800A (en) 2000-09-04
ZA200106813B (en) 2002-08-19
NZ513574A (en) 2002-12-20
NO990739D0 (no) 1999-02-17

Similar Documents

Publication Publication Date Title
ES2276669T3 (es) Esterificacion de aceite marino catalizada por lipasa.
EP2602308B1 (en) Lipase-catalysed esterification of marine oil
DK2172558T3 (en) Process for producing an EPA-enriched oil and DHA-enriched oil
CA2079876C (en) Process for preparing mixtures of 2-acylglycerides and 1,2 or 2,3-diacylglycerides
JP2020513750A (ja) グリセリドの形態におけるｎ−３脂肪酸の酵素的濃縮
US9476008B2 (en) Process for separating polyunsaturated fatty acids from long chain unsaturated or less saturated fatty acids
EP2147088A1 (en) A polyunsaturated fatty acid (pufa) enriched marine oil comprising eicosapentaenoic acid (epa) and docosahexaenoic acid (dha), and a process of production thereof
EP1281750B1 (en) Conjugated fatty acid containing monoglycerides and process for producing them
JP2719667B2 (ja) エステル交換脂の製造法
KR102373368B1 (ko) 효소를 이용한 고농도 팔미톨레산 함유 트리글리세라이드 제조방법
Irimescu et al. Enzymatic synthesis of 1, 3-dicapryloyl-2-eicosapentaenoylglycerol
NZ236466A (en) Highly unsaturated edible oils; their production
WO1991016442A1 (en) Regio and stereoselective synthesis of triglycerides
Wongsakul et al. Lipase‐catalyzed synthesis of structured triacylglycerides from 1, 3‐diacylglycerides
JPH08294394A (ja) ジグリセリドの製造法
EP0576556A1 (en) Regioselective synthesis of 1,3-disubstituted glycerides
JPH08214892A (ja) 高度不飽和脂肪酸含有部分グリセリドの製造方法
JPH08502412A (ja) 酵素的トリグリセリド変換
JPH06116585A (ja) 油脂の精製方法
JP4310387B2 (ja) ω−３系高度不飽和脂肪酸含有部分グリセリド組成物及びその製造方法
JP3734905B2 (ja) ω−３系高度不飽和脂肪酸の精製方法
CN118086414A (zh) 一种酶法制备高含量epa、低含量dha脂肪酸产品的方法
JP2004331607A (ja) 共役脂肪酸のポリグリセリンエステルおよびその製造方法