NO312973B1 - Lipase-katalysert forestring av marine oljer - Google Patents
Lipase-katalysert forestring av marine oljer Download PDFInfo
- Publication number
- NO312973B1 NO312973B1 NO19990739A NO990739A NO312973B1 NO 312973 B1 NO312973 B1 NO 312973B1 NO 19990739 A NO19990739 A NO 19990739A NO 990739 A NO990739 A NO 990739A NO 312973 B1 NO312973 B1 NO 312973B1
- Authority
- NO
- Norway
- Prior art keywords
- dha
- lipase
- epa
- fatty acids
- esterification
- Prior art date
Links
- 238000005886 esterification reaction Methods 0.000 title claims description 36
- 230000032050 esterification Effects 0.000 title claims description 20
- 239000003921 oil Substances 0.000 title description 29
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 102
- 108090001060 Lipase Proteins 0.000 claims description 68
- 102000004882 Lipase Human genes 0.000 claims description 68
- 239000004367 Lipase Substances 0.000 claims description 67
- 235000019421 lipase Nutrition 0.000 claims description 67
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 46
- 235000021588 free fatty acids Nutrition 0.000 claims description 39
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 33
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 29
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 claims description 25
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 claims description 23
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 claims description 23
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 claims description 23
- 125000005456 glyceride group Chemical group 0.000 claims description 22
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 claims description 13
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 claims description 5
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 claims description 5
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 claims description 5
- 238000000199 molecular distillation Methods 0.000 claims description 5
- 241000235402 Rhizomucor Species 0.000 claims description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 claims description 2
- MBMBGCFOFBJSGT-KUBAVDMBSA-N docosahexaenoic acid Natural products CC\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/CCC(O)=O MBMBGCFOFBJSGT-KUBAVDMBSA-N 0.000 description 74
- 235000020669 docosahexaenoic acid Nutrition 0.000 description 73
- JAZBEHYOTPTENJ-JLNKQSITSA-N all-cis-5,8,11,14,17-icosapentaenoic acid Chemical compound CC\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCC(O)=O JAZBEHYOTPTENJ-JLNKQSITSA-N 0.000 description 68
- 235000020673 eicosapentaenoic acid Nutrition 0.000 description 68
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 description 28
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 22
- 239000000047 product Substances 0.000 description 17
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 14
- 235000021323 fish oil Nutrition 0.000 description 14
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 12
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 9
- 235000020777 polyunsaturated fatty acids Nutrition 0.000 description 9
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 8
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 8
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 125000004494 ethyl ester group Chemical group 0.000 description 7
- 241001125048 Sardina Species 0.000 description 6
- 235000019512 sardine Nutrition 0.000 description 6
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 6
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 5
- 229940013317 fish oils Drugs 0.000 description 5
- 230000007306 turnover Effects 0.000 description 5
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 101001003495 Pseudomonas fluorescens Lipase Proteins 0.000 description 4
- 101001064559 Pseudomonas fluorescens Lipase Proteins 0.000 description 4
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 4
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 4
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 4
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 4
- 235000003441 saturated fatty acids Nutrition 0.000 description 4
- 241000252203 Clupea harengus Species 0.000 description 3
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000589774 Pseudomonas sp. Species 0.000 description 3
- 241000235403 Rhizomucor miehei Species 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 3
- 235000019514 herring Nutrition 0.000 description 3
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 3
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 3
- 150000004671 saturated fatty acids Chemical class 0.000 description 3
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 3
- 150000003626 triacylglycerols Chemical class 0.000 description 3
- LDVVTQMJQSCDMK-UHFFFAOYSA-N 1,3-dihydroxypropan-2-yl formate Chemical compound OCC(CO)OC=O LDVVTQMJQSCDMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000228245 Aspergillus niger Species 0.000 description 2
- 241000222175 Diutina rugosa Species 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 108010048733 Lipozyme Proteins 0.000 description 2
- 241001661345 Moesziomyces antarcticus Species 0.000 description 2
- 241000498617 Mucor javanicus Species 0.000 description 2
- 101000968489 Rhizomucor miehei Lipase Proteins 0.000 description 2
- 101000966371 Rhizopus niveus Lipase Proteins 0.000 description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000061 acid fraction Substances 0.000 description 2
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 2
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 description 2
- 235000019626 lipase activity Nutrition 0.000 description 2
- FCCDDURTIIUXBY-UHFFFAOYSA-N lipoamide Chemical compound NC(=O)CCCCC1CCSS1 FCCDDURTIIUXBY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000020660 omega-3 fatty acid Nutrition 0.000 description 2
- 238000012746 preparative thin layer chromatography Methods 0.000 description 2
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 2
- 238000007670 refining Methods 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 2
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 2
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 2
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 2
- 238000005809 transesterification reaction Methods 0.000 description 2
- 235000021122 unsaturated fatty acids Nutrition 0.000 description 2
- 150000004670 unsaturated fatty acids Chemical class 0.000 description 2
- 241000589540 Pseudomonas fluorescens Species 0.000 description 1
- 240000005384 Rhizopus oryzae Species 0.000 description 1
- 235000013752 Rhizopus oryzae Nutrition 0.000 description 1
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 1
- 230000000593 degrading effect Effects 0.000 description 1
- 230000006866 deterioration Effects 0.000 description 1
- 229940090949 docosahexaenoic acid Drugs 0.000 description 1
- 229960005135 eicosapentaenoic acid Drugs 0.000 description 1
- JAZBEHYOTPTENJ-UHFFFAOYSA-N eicosapentaenoic acid Natural products CCC=CCC=CCC=CCC=CCC=CCCCC(O)=O JAZBEHYOTPTENJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 235000013350 formula milk Nutrition 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 230000011987 methylation Effects 0.000 description 1
- 238000007069 methylation reaction Methods 0.000 description 1
- 235000021281 monounsaturated fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- 239000012299 nitrogen atmosphere Substances 0.000 description 1
- 230000020477 pH reduction Effects 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- BDERNNFJNOPAEC-UHFFFAOYSA-N propan-1-ol Chemical compound CCCO BDERNNFJNOPAEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 1
- 238000004064 recycling Methods 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 238000007127 saponification reaction Methods 0.000 description 1
- 239000004460 silage Substances 0.000 description 1
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 1
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 1
- 159000000000 sodium salts Chemical class 0.000 description 1
- 150000003509 tertiary alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 108010072641 thermostable lipase Proteins 0.000 description 1
- UFTFJSFQGQCHQW-UHFFFAOYSA-N triformin Chemical compound O=COCC(OC=O)COC=O UFTFJSFQGQCHQW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000002268 wool Anatomy 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
- C12P7/64—Fats; Fatty oils; Ester-type waxes; Higher fatty acids, i.e. having at least seven carbon atoms in an unbroken chain bound to a carboxyl group; Oxidised oils or fats
- C12P7/6409—Fatty acids
- C12P7/6427—Polyunsaturated fatty acids [PUFA], i.e. having two or more double bonds in their backbone
- C12P7/6434—Docosahexenoic acids [DHA]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C11—ANIMAL OR VEGETABLE OILS, FATS, FATTY SUBSTANCES OR WAXES; FATTY ACIDS THEREFROM; DETERGENTS; CANDLES
- C11C—FATTY ACIDS FROM FATS, OILS OR WAXES; CANDLES; FATS, OILS OR FATTY ACIDS BY CHEMICAL MODIFICATION OF FATS, OILS, OR FATTY ACIDS OBTAINED THEREFROM
- C11C3/00—Fats, oils, or fatty acids by chemical modification of fats, oils, or fatty acids obtained therefrom
- C11C3/02—Fats, oils, or fatty acids by chemical modification of fats, oils, or fatty acids obtained therefrom by esterification of fatty acids with glycerol
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
- C12P7/64—Fats; Fatty oils; Ester-type waxes; Higher fatty acids, i.e. having at least seven carbon atoms in an unbroken chain bound to a carboxyl group; Oxidised oils or fats
- C12P7/6409—Fatty acids
- C12P7/6427—Polyunsaturated fatty acids [PUFA], i.e. having two or more double bonds in their backbone
- C12P7/6432—Eicosapentaenoic acids [EPA]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
- C12P7/64—Fats; Fatty oils; Ester-type waxes; Higher fatty acids, i.e. having at least seven carbon atoms in an unbroken chain bound to a carboxyl group; Oxidised oils or fats
- C12P7/6436—Fatty acid esters
- C12P7/6445—Glycerides
- C12P7/6458—Glycerides by transesterification, e.g. interesterification, ester interchange, alcoholysis or acidolysis
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
- C12P7/64—Fats; Fatty oils; Ester-type waxes; Higher fatty acids, i.e. having at least seven carbon atoms in an unbroken chain bound to a carboxyl group; Oxidised oils or fats
- C12P7/6436—Fatty acid esters
- C12P7/6445—Glycerides
- C12P7/6472—Glycerides containing polyunsaturated fatty acid [PUFA] residues, i.e. having two or more double bonds in their backbone
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Fats And Perfumes (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
Description
Denne oppfinnelsen vedrører en fremgangsmåte for å isolere en fettsyrefraksjon som er anriket i minst en av fettysrene EPA of DHA sammenlignet med innholdet i en marin oljesammensetning i hvilken EPA og DHA foreligger som frie fettsyrer ved hjelp av lipase-katalysert forestring av marine oljer.
Det er velkjent innen dette fagområdet å raffinere oljeprodukter av ulike slag, deriblant marine oljer, ved hjelp av lipase-katalysatorer der disses spesifisitet under raffineringsbetingelsene forbedrer utbyttet av et ønsket produkt.
I PCT/NO95/00050 omtalte vi for eksempel en prosess for å behandle en oljesammensetning som inneholder mettede og umettede fettsyrer av triglyserider ved trans-forestrings reaksjonsbetingelser med en Ci.6 alkohol som etanol under vesentlig vannfrie betingelser sammen med en lipase som fortrinnsvis er aktivt for å katalyserer trans-forestringen av de mettede og mono-umettede fettsyrene. Med de foretrukne lipasene, Pseudomonas sp. lipase (PSL) og Pseudomonas fluorescens lipase (PFL) var det mulig å fremstille konsentrater fra marine oljekilder, og disse konsentratene inneholder mer enn 70 vekt% av de kommersielt - og terapeutisk viktige omega-3 flerumettede fettsyrer EPA (eicosapentaensyre, C20:5) og DHA (docosaheksaensyre, C22:6) i form av glyserider.
En rekke lipase-katalyserte raffineringsprosesser har brukt glyserol.
For eksempel viser JP 62-91188 (1987) en prosess for å fremstille glyserider av flerumettede fettsyrer (PUFA), der PUFA som fri syre eller ester reageres med glyserol sammen med en termostabil lipase. Fettsyresammensetningen til det resulterende glyseridproduktet er vesentlig det samme som i utgangs-PUFA.
W091/16443 beskriver en prosess for å omsette PUFA til triglyserider. De frie fettsyrene, for eksempel blandinger av EPA og DHA, reageres med omtrent støkiometriske mengder glyserol sammen med en lipase, spesielt Candida antarctica, under betingelser som vesentlig vannfrie, organisk løsningsmiddel-frie, der det er høy temperatur, og med kontinuerlig fjerning av vann og flyktige alkoholer. Vi er klar over at det var lite eller ikke noe skille mellom EPA og DHA i denne prosessen.
I en artikkel i Int. J. Food Sei. Technol. (1992), 27, 73-76, beskriver Lie og Molin forestringen av et fettsyre konsentrat fra fiskeolje med glyserol ved å bruke tre ulike lipaser, inkludert Rhizomucor miehei lipase (MML). Under betingelsene som ble brukt (5 % vann) fikk de en DHA-utarmet fri syrefraksjon (omtrent 50 % av utgangsmaterialet) og en glyserid fraksjon med det samme EPA innholdet som i det opprinnelige fiskeolje konsentratet. Således observerte de noe selektivitet
En artikkel av Myrnes m.fl. i JAOCS, Vol. 72, No. 11 (1995), 1339-1344 beskriver en organisk løsningsmiddelfri, lipase-katalysert glyserolyse av marine oljer. En rekke ulike lipaser er testet, og reaksjonene utføres ved lave temperaturer (12 °C eller lavere) sammen med relativt store (3.6 %) mengder vann. Analysen av den resulterende monoglyserid fraksjonen viste i noen tilfeller god selektivitet mellom umettede og mettede fettsyrer, men ingen betydelige forskjeller mellom enkelte PUFA.
Moore m.fl. i JAOCS, Vol. 73, No. 11 (1996), 1409-1414, beskriver hydrolysen av en fiskeolje sammen med Candida rugosa lipase (CRL) for å fremstille separate DHA-anrikede og EPA-anrikede fraksjoner. Deretter re-forestres den EPA anrikede frie fettsyrefraksjonen med glyserol sammen med MML.
En artikkel av McNeill m.fl. i JAOCS, Vol. 73, No. 11 (1996), 1403-1407 beskriver en MML-katalysert forestring av et n-3 PUFA konsentrat med støkiometriske mengder glyserol ved 55 °C med kontinuerlig fjerning av vann. Den resulterende triglyserid fraksjonen hadde det samme DHA nivået som utgangsmaterialet.
Til slutt nevnes WOS6/37586 og W096/37587. Eksempel 3 i W096/37586 omhandler en prosess der et fritt fettsyre konsentrat som stammer fra chilensk fiskeolje, som omfatter (etter løsningsmiddel fraksjoneringer av natrium salter) 25 % EPA og 18 % DHA, ble direkte forestret med glyserol ved å bruke en immobilisert Candida rugosa lipase (CRL) sammen med 10 % vann ved 35 °C. Etter 120 timer hadde omfanget av omsettingen nådd omtrent 60 %. I den fremstilte glyseridblandingen inneholdt triglyseridene 28.2 % EPA og 3.8 % DHA og monoglyserid fraksjonen hadde 28.9 % EPA og 4.5 % DHA. De gjenværende frie fettsyrene omfattet 23.2 % EPA og 31.5 % DHA. Dette indikerer en god selektivitet mellom EPA og DHA. Derimot viste ikke den MML katalyserte re-forestringen av en fri fettsyrefraksjon med glyserol i Eksemplene 1 og 2 betydelig selektivitet mellom EPA og DHA.
W096/37587 ligner W096/37586. Eksemplene 1, 4, 6 og 8 viser glyserolysen av PUFA med MML uten noe skille mellom EPA og DHA.
Det vil fremgå av denne på ingen måtte uttømmende drøftingen av teknikkens stand at omfattende forskning er utført for å utvikle lipase-katalyserte prosesser for å isolere kommersielt viktige PUFA som EPA og DHA fra sammensetninger som fiskeoljer som inneholder dem i relativt lave konsentrasjoner.
Vi har nå funnet en lipase-katalysert prosess for å fremstille konsentrater av EPA og DHA ved hjelp av direkte forestring av fri fettsyre fra fiskeolje som, ved at man velger lipasen, gjør det mulig å spesialtilpasse EPA/DHA innholdene i det resulterende konsentratet slik at man kan oppfylle kunders ulike behov. De vesentlige trekk ved denne prosessen er angitt i de vedheftede patentkravene.
Mer spesifikt fremskaffer den foreliggende oppfinnelsen en prosess for å forestre en marin oljesammensetning som inneholder EPA og DHA som frie fettsyrer for å danne en fri fettsyrefraksjon anriket i minst en av disse fettsyrene sammenlignet med utgangssammensetningen, og der denne prosessen omfatter trinnet der omtalte marine oljesammensetning reageres med glyserol sammen med en lipase-katalysator under redusert trykk og vesentlig organisk løsningsmiddel-fri betingelser, og å utvinne en fri fettsyrefraksjon anriket i minst en av EPA og DHA.
Den foreliggende oppfinnelsen bygger på at det er funnet at glyserol kan virke som et utmerket substrat for en lipase-katalysert direkte forestring av frie fettsyrer i marin olje, forutsatt at visse kritiske reaksjonsbetingelser følges. Dette kunne man slett ikke forvente på bakgrunn av tidligere forskning ved å bruke glyserol som omtalt ovenfor. Den viktigste forestringsreaksjonen kan skjematisk fremstilles ved følgende ligning der lipase-katalysatoren er Rhizomucor miehei (MML):
Produktet inneholder også andre typer EPA-anrikede glyserider, som ikke vises i den skjematiske ligningen.
Som det vil forklares i nærmere detalj nedenfor og illustreres i Eksempel 8, kan valget av lipase-katalysatoren på en avgjørende måte påvirke produktets beskaffenhet. I tilfellet der MML er brukt i det illustrerte reaksjonsskjemaet, er produktet en DHA-anriket fri fettsyrefraksjon og en EPA-anriket glyserid fraksjon.
Et viktig trekk i den foreliggende prosessen er at den drar fordel av at en lipases selektivitet overfor enkelte fettsyrer er større når disse finnes i form av frie syrer enn når de finnes som glyserider, siden man da unngår komplikasjoner på grunn av lipase-regioselektivitet eller posisjonert selektivitet. Det er overraskende at reaksjonen med glyserol er mye mindre vellykket når EPA og DHA finnes som estere enn når de finnes som frie syrer, som vist i Eksempel 10 (sammenlignende) nedenfor.
Bruken av glyserol som substratet i henhold til den foreliggende oppfinnelsen har også den fordelen at den bidrar til separasjon av glyseridet og fri fettsyre produktfraksjoner ved for eksempel molekylær destillasjon. Man antar at grunnen til dette er at esteren av et tertiært alkohol som glyserol er mindre flyktig enn estere av kortkjede alkoholer, som metanol, etanol og propanol. Molekylær destillasjon utføres for å separere glyseridet og fri fettsyrefraksjoner fordi det er enkelt.
Det er blitt funnet at relative mengder glyserol er viktige for å få en vellykket forestringsreaksjonen. Fortrinnsvis bør det brukes et molforhold mellom glyserol og frie fettsyrer i utgangssammensetningen på fra 1:1.5 til 1:3, helst fra 1:1.5 til 1:2.5. I vårt eksperimentelle arbeid fram til i dag har vi funnet at et molforhold på omtrent 1:2 mellom glyserol og fettsyrer er optimalt (tilsvarende et forhold mellom tilgjengelige hydroksylgrupper og frie fettsyrer på 1.5:1).
Det er helt vesentlig at forestringsreaksjonen utføres under redusert trykk for å fjerne vann fra reaksjonssystemet etter hvert som det dannes. Dette er nødvendig for å gjøre reaksjonen ikke-reversibel, og dermed å gjøre det mulig å oppnå høy grad av utvinning av de ønskede EPA/DHA produktene. Forestringen vil derfor generelt utføres ved et trykk lavere enn 50 torr, og normalt under 10 torr, f.eks. fra 1-10 torr, selv om vi overraskende har observert at betingelsene for redusert trykk for optimal lipase aktivitet i noen grad avhenger av den bestemte lipasen som er brukt. I noen tilfeller kan det derfor være gunstig å bruke et trykk på fra 0.01 til 1 torr, og i eksemplene som følger viser vi utmerkede resultater med trykk så lavt som 0.01-0.1 torr. Optimalt lavt trykk for en bestemt lipase kan selvfølgelig enkelt bestemmes ved rutinemessige eksperimenter.
Organiske løsningsmidler bør ikke være tilstede i den foreliggende prosessen, til forskjell fra mange allerede kjente lipase baserte systemer, fordi organiske løsningsmidler er flyktige og vil fordampe under vakuum.
Temperaturen som brukes under forestringsreaksjonen vil avhenge av marin olje-sammensetningen som behandles og også av lipasen som brukes. Det er ønskelig at viskositeten til marin olje-sammensetningen bør være tilstrekkelig lav slik at sammensetningen kan bli tilstrekkelig blandet under reaksjonen, og derfor er det ofte nødvendig å bruke temperaturer på minst 20 °C. På den annen side er for høye temperaturer uønskelige fordi høye temperaturer motarbeider den kinetiske oppløsning som fettsyre-lipase-atskillelse baseres på, og også fordi EPA og DHA kan ødelegges ved å utsettes for høye temperaturer over lengre tid, mens lipaser heller ikke tåler høye temperaturer. Når vi tar disse faktorene i betraktning, foretrekkes det vanligvis å operere innenfor område 20 °-40 °C, ofte helst ved 37 °-40 °C, selv om temperaturer på 0 °-20 °C kan brukes for fiskeolje sammensetninger med høye EPA og/eller DHA innhold der sammensetningen forblir tilstrekkelig flytende ved disse lave temperaturene og omvendt kan høyere temperaturer, i området 40 °-70 °C være mulige for stabile immobiliserte lipaser som MML og CAL.
Utgangsmaterialet i den foreliggende prosessen kan være en hvilken som helst sammensetning fra en marin kilde som inneholder EPA og DHA i fri syreform. En slik sammensetning kan fås ved forsåpning av rå-fiskeoljer, f.eks. med natrium hydroksid, fulgt av surgjøring med f.eks. svovelsyre, i henhold til standard prosedyrer som er velkjent for folk i fiskeolje prosessindustrien. Typisk vil sammensetningene ha totale innhold av EPA og DHA i fri syreform på 15-35 % basert på vekt, fortrinnsvis 25-35 %. Fiskeoljer som er rike på DHA, som tunfiskolje som inneholder omtrent 5 % EPA og 25 % DHA basert på vekt, egner seg spesielt godt for å fremstille DHA konsentrater med prosessen i den foreliggende oppfinnelsen, mens fiskeoljer som er rike på EPA (f.eks. sardinolje med omtrent 18 % EPA og 12 % DHA basert på vekt og chilensk fiskeolje med 20 % EPA og 7 % DHA basert på vekt) er spesielt godt egnede råstoffer for å fremstille EPA konsentrater. Det er imidlertid en fordel at den foreliggende oppfinnelsen kan bruke billigere fiskeoljer med lavere totale EPA og DHA innhold, som sildolje (omtrent 6 % EPA og omtrent 8 % DHA i vekt), som utgangsmaterialer for å fremstille EPA og/eller DHA-anrikede fraksjoner i prosessen til denne oppfinnelsen, som vist i eksemplene nedenfor i denne beskrivelsen.
Som nevnt tidligere i denne spesifikasjonen, er det en egenskap ved den foreliggende prosessen at det er mulig å variere beskaffenheten til de anrikete fraksjonene ved å velge å bruke en bestemt lipase. For eksempel observeres følgende virkninger med de angitte lipasene: (i) en DHA-anriket fri fettsyrefraksjon og en EPA-anriket glyserid fraksjon fås med Rhizomucor meihei lipase (MML), Mucor javanicus lipase (MJL), og Aspergillus niger lipase (ANL); og (ii) en EPA/DHA-anriket fri fettsyre fraksjon og en glyserid fraksjon anriket jned mettede fettsyrer fås med Pseudomonas sp. - Amano AK (PSL), Pseudomonas fluorescens - Amano PS (PFL), Rhizopus oryzae - Amano F (ROL) og Humicula Lanuginosa - Amano CE
(ULL).
Muligheten til å variere produktets beskaffenhet ved et egnet valg av lipase-katalysatoren er gunstig fordi prosessen kan spesialtilpasses for oppfylle kunders spesielle krav. For eksempel kan en kunde ønske et DHA konsentrat for morsmelkerstatning, mens en annen kunde kan ønske et blandet EPA/DHA konsentrat for å fremstille et helseprodukt, og kravene fra begge kunder kan oppfylles ved ganske enkelt å bytte lipase-katalysatorene som brukes.
Selvfølgelig kan man få enda flere muligheter for å spesialtilpasse sammensetningen av sluttproduktet ved å utføre prosessen i to eller flere adskilte trinn med ulike lipase-katalysatorer som brukes i de ulike trinnene.
De foretrukne lipasene i den foreliggende prosessen er Rhizomucor miehei (MML), som skiller skarpt mellom EPA og DHA; og Pseudomonas sp. (PSL), som skiller mellom EPA og DHA, på den ene siden og de resterende fettsyrene i fiskeolje på den annen side.
Det foretrekkes, i det minste i industriell målestokk, å bruke en immobilisert form av den utvalgte lipasen siden det er oppdaget at immobilisering ikke bare øker enzymets aktivitet, spesielt ved svært lavt trykk, i området 0.01 til 1 torr, men også forbedrer dets stabilitet og bidrar til gjenvinningen av det. Alle disse faktorene innvirker på prosessens økonomi.
Tilstrekkelig mengde av lipasen bør brukes for å utføre den ønskete forestringsreaksjonen. I vårt arbeid med immobilisert MML har vi brukt omtrent 10 vekt% av det immobiliserte produktet, basert på innholdet av fettsyrer i den marine sammensetningen som behandles, som tilsvarer en konsentrasjon av MML på omtrent 1 vekt% (det kommersielt tilgjengelig immobiliserte MML består av omtrent 10 % lipase og 90 % bærer).
Ved å bruke ikke-immobiliserte lipaser, har vi derimot brukt lipase konsentrasjoner på 10 vekt% av fettsyreinnholdet.
>
Etter at forestringsreaksjonen er fullført, kan produktet behandles videre, for eksempel for å separere den frie fettsyren og glyserid fraksjonene. Denne separasjonen utføres med molekylær destillasjon. Selvfølgelig kan produktet fra en første lipase-katalysert forestring senere konsentreres ytterligere i en eller flere påfølgende lipase-katalyserte forestringer, ved å bruke den samme - eller en annen lipase.
Den frie syrefraksjonen som fås ved slutten av prosessen kan enten brukes slik den er, eller dersom et produkt i fri syreform ikke kan godtas for den tiltenkte bruken, kan det først omsettes til etylester, glyserid eller andre mer akseptable former med en hvilken som helst egnet metode.
På samme måte kan fraksjonen, der den separerte glyserid fraksjonen inneholder EPA eller DHA i økonomisk interessante konsentrasjoner, behandles videre, for eksempel med hydrolyse med vannholdige baser for å danne frie syrer, eller med forestring med etanol for å danne etylestere av fettsyrene. Den frie fettsyren eller etylester fraksjonen som dannes på denne måten kan deretter konsentreres ytterligere om ønskelig, f.eks. ved molekylærdestillasjon.
Forestringsprosessen i den foreliggende oppfinnelsen har en rekke fordeler som gjør den spesielt egnet for industriell bruk. Muligheten til å spesialtilpasse sammensetningen av produktene, spesielt av lipase-katalysatoren, er allerede nevnt, men andre fordeler som kan gjøre prosessen kommersielt attraktiv omfatter: (i) de høye utbyttene av svært konsentrerte EPA, DHA eller EPA- + DHA-produkter som kan oppnås, (ii) fraværet av alle slags organiske løsningsmidler, noe som ikke bare forebygger renseproblemer som ofte kan forårsakes av slike løsningsmidler, men også reduserer prosessens omfang, hvilket er økonomisk viktig (lavere energibehov osv.), (iii) muligheten til gjenbruk av immobiliserte lipase-katalysatorer i flere -, kanskje inntil 20 eller flere, påfølgende ganger, noe som igjen bidrar til å holde kostnadene lave. (iv) muligheten til å bruke en hvilken som helst egnet marin olje-sammensetning som inneholder de interessante flerumettede fettsyrene, og (v) den generelle enkelheten i forestringsprosessen og de påfølgende separasjonsprosessene.
Oppfinnelsen illustreres av eksemplene som følger, og der arealprosent-andeler fås ved GLC analyse.
Eksempel 1
I dette eksperimentet ble et hydrolyseprodukt av sildolje (SO) som inneholder 5.5 areal% av EPA og 8.0 areal% DHA (i begge tilfeller som den frie syren) reagert med glyserol sammen med Rhizomucor miehei lipase (MML; Novo's Lipozyme). Forestringsbetingelsene var: MML: 10 vekt% dosering, basert på
fettsyresubstratet
Glyserol: 1 ekvivalent per to ekvivalenter frie fettsyrer (1.5 støkiometrisk overskudd av hydroksylgrupper)
Temperatur: 40 °C
Trykk: 0.01 til 0.1 torr
Organisk løsningsmiddel: Ingen
Den eksperimentelle fremgangsmåten var som følger. To frie fettsyrer fra sildolje (10 g; M.vekt ca. 290 g/mol; ca. 34.5 mmol) og glyserol (1.56 g; M.vekt 92.1 g/mol; 17.3 mmol) ble tilsatt immobilisert Mucor miehei lipase (Novo's Lipozyme, 1.0 g). Blandingen ble lett omrørt ved 40 °C på en varmeplate med magnetisk røreverk ved kontinuerlig vakuum på 0.01-0.1 torr. Det flyktige vannet som ble produsert under reaksjonsforløpet ble kontinuerlig kondensert i en kjøler avkjølt med flytende nitrogen. Titrering ble brukt for å overvåke reaksjonsforløpet. Etter en bestemt tid ble reaksjonen stanset ved å separere enzymet ved hjelp av filtrering. Fraksjonering ble utført med preparativ TLC på silika gel og hver lipidfraksjon ble deretter fettsyre-analysert med GLC etter metylering med standard fremgangsmåter.
Resultatene vises i Tabell 1 under:
Etter 7 t ved 80 % omsetting var DHA til EPA forholdet 6.6:1 med DHA som omfatter 31 % og EPA mindre enn 5 % av de gjenværende frie fettsyrene. DHA gjenvinningen var 83 %. Etter 12 t hadde dette forholdet øket til 13:1 og etter 24 t ved 89 % omsetting til 27:1 med gjenvinning av DHA var det ennå nær 70 %. Over dette nivået hadde det klart oppnådd likevekt.
Dette eksperimentet viser at ved å bruke MML som lipasen, gjør den foreliggende oppfinnelsen det mulig å fremstille et DHA konsentrat med en høy omsettingshastighet.
Eksempel 2 ( Sammenlignende)
Eksempel 1 ble gjentatt men med en redusert konsentrasjon av glyserol (3 ekvivalenter av frie fettsyrer per ekvivalent glyserol). Resultatene vises i Tabell 2 under:
Som man vil legge merke til, er resultatene i dette eksperimentet langt mindre tilfredsstillende enn de man fikk med 2:1 forholdet som ble brukt i Eksempel 1. Det er ikke lett å forklare grunnen til denne endringen. Det kan ha sammenheng med utilstrekkelig tilgjengelighet av hydroksylgrupper eller en overskuddsmengde av fettsyrer, når man tar i betraktning at midtposisjonen til glyserol er langt mindre tilgjengelig eller, i det minste, mye langsommere i sin medvirkning. Konsekvensen er at likevekt nås alt for tidlig og det er ingen effektiv separasjon mellom EPA og DHA.
Eksempel 3
Eksempel 1 ble gjentatt, men temperaturen under forestringsreaksjonen ble variert mellom 30 ° og 60 °C. Resultatene vises i Tabell 3 under:
Resultatene fastslår at 40 °C er den beste temperaturen under disse spesielle reaksjonsbetingelsene. Ved 30 °C var røring vanskelig, noe som forklarer de dårlige resultatene ved denne temperaturen. Imidlertid kan man legge merke til det gunstige forholdet mellom DHA og EPA, 8.6:1 ved 60 °C, sammenlignet med 8.0:1 ved 40 °C, siden det ved den temperaturen kunne forventes en lavere selektivitet.
Eksempel 4
Eksempel 1 ble gjentatt men ved å variere forholdet mellom glyserolet og de frie fettsyrene ved både 40 °C og 60 °C. Resultatene vises i Tabell 4 under:
Disse resultatene bekrefter det som tidligere var funnet, nemlig at et gunstig DHA/EPA forhold, og en høy grad av gjenvinning av DHA kan oppnås ved 40 °C med 1:2 molforhold mellom glyserol og frie fettsyrer.
Eksempel 5
Dette eksperimentet viser den direkte forestringen av en fri fettsyresammensetning oppnådd ved hydrolyse fra chilensk fiskeolje (sardinolje) ved å bruke MML som katalysator.
Den chilenske oljen (sardinolje) inneholdt 16.8 område % EPA og 12.3 område
% DHA.
Betingelsene under forestringsreaksjonen var de samme som i Eksempel 1. Resultatene vises i Tabell 5 under:
Tabell 5
Forløpet til den direkte forestringsreaksjonen av frie fettsyrer fra sardinolje og glyserol med MML.
Tid % Omsett. Glyserider Gjenværende frie fettsyrer
Areal% Vekt% Areal% Vekt%
EPA DHA EPA DHA EPA DHA EPA DHA
"Tt Ta6 Tzi To Tzo Ti 204 i4~3 sao 9ai
2t 39.4 14.3 1.2 31.4 4.0 20.4 18.7 68.7 96.0
3t 48.3 13.4 1.2 38.2 4.9 21.7 22.4 61.8 95.1
5t 53.6 16.3 1.4 45.4 5.5 22.1 28.1 54.6 94.4
7t 68.0 16.7 1.9 60.9 11.0 22.7 32.0 39.1 89.0
281 80.0 20.1 3.5 85.9 21.6 13.2 50.0 14.1 78.4
Resultatene i Tabell 5 viser at sardinoljen er et egnet råmateriale for å separere både EPA og DHA effektivt med MML. Etter 28 t reaksjonstid hadde eksempelvis 86 % av det opprinnelige EPA blitt separert til glyserid fraksjonen, og 78 % av DHA forblir i den gjenværende fettsyrefraksjonen som omfatter 50 % DHA og 13 % DHA.
Eksempel 6
Eksempel 1 ble gjentatt ved å bruke rå tunfiskolje som omfatter 5.0 % EPA og 18.2 % DHA, som utgangsmateriale. Resultatene er gitt i Tabell 6 under:
Når man tar i betraktning at det ble brukt rå tunfiskolje som inneholdt relativt små mengder DHA, var de oppnådde resultatene utmerkede.
Eksempel 7
Eksempel 1 ble gjentatt i større (100 g) målestokk. De samme betingelsene som tidligere ble brukt, med et 1:2 molforhold mellom glyserol og frie fettsyrer under vakuum ved 40 °C. 10 % dosering av MML ble brukt og hver reaksjon ble stanset etter 16 timer. Etter hver kjøring ble lipasen filtrert bort med en sintret glasstrakt i en strøm med nitrogen atmosfære. Når det var nødvendig ble lipasen mellom kjøringer lagret i nitrogen ved værelsestemperatur. Resultatene fra tyve påfølgende kjøringer er vist i Tabell 7.
Som man vil legge merke til i Tabell 7, beholdt lipasen sin aktivitet under tyve påfølgende kjøringer uten noen betydelig forringelse.
Eksempel 8
Formålet med dette eksperimentet var å vise at andre lipaser enn MML kan brukes i prosessen i henhold til den foreliggende oppfinnelsen.
Sytten (17) ulike lipaser eller lipase preparater ble testet under de samme reaksjonsbetingelsene som i Eksempel 1 men ved høyere trykk, i området fra 1 til 20 torr, ved å bruke den samme sildoljen som i Eksempel 7 og med en fastsatt reaksjonstid på 16 timer. Titrering ble brukt for å overvåke omsettingens omfang. Glyseridblandingen ble separert fra de gjenværende frie fettsyrene ved hjelp av preparativ TLC i tilfeller som oppviste en viss aktivitet, og fettsyresammensetningen fra de to resulterende fraksjonene ble bestemt med GLC. Resultatene er gitt i Tabell 8 under.
Ut fra tabellen er det interessant å legge merke til at Mucor javanicus lipasen (MJL) fra Amano synes å skille skarpt mellom EPA og DHA under disse betingelsene og viste høy aktivitet. En lignende aktivitet som skiller mellom EPA og DHA til fordel for EPA ble også vist av Aspergillus niger lipasen (ANL), og også av Rhizopus niveus lipasen (RNL), men aktiviteten var mye lavere. PSL og PFL viste aktivitet under disse betingelsene uten å skille betydelig mellom EPA og DHA. Disse lipasene egner seg derfor for å konsentrere både EPA og DHA sammen fra fiskeolje under disse betingelsene. LNL, ROL og HLL har også vist seg egnet til å konsentrere både EPA og DHA i fiskeolje siden de viser en høy aktivitet.
Candida antarctica lipasen, derimot, skilte ikke mellom EPA og DHA. Selv om den viste høy aktivitet, som var sammenlignbar med MML, viste denne lipasen ikke noe skarpt skille mellom disse og andre fettsyrer som fantes i fiskeoljen. CAL egner seg derfor ikke til bruk under disse betingelsene.
Eksempel 9 ( Sammenlignende)
Eksempel 8 ble gjentatt for flere av lipasene men ved å bruke et betraktelig høyere vakuum på 0.01-0.1 torr. Resultatene vises i Tabell 9 under:
Resultatene i Tabell 9 står i ganske sterk kontrast til resultatene i Tabell 8 for de samme lipasene.
Omsettingens omfang var dermed mye mindre for alle lipasene unntatt for CAL, og for ingen av lipasene var det noen tydelig skille mellom EPA og DHA. Man antar at den lavere aktiviteten til alle lipasene unntatt CAL sannsynligvis skriver seg fra det svært høye vakuumet som var brukt for å fjerne det vesentlige vanninnholdet i lipasen med en svært forringende virkning på lipasens aktivitet.
Eksempel 10 ( Sammenlignende)
I dette eksperimentet ble sardinolje etylestere direkte forestret med glyserol ved å bruke en rekke ulike lipaser. Reaksjonene ble utført under røring ved 40 °C for 24 timer under vakuum ved å bruke lipasen med en konsentrasjon på 10 % og to ekvivalenter av etylesterene per ekvivalent av glyserol. Resultatene vises i Tabell 10 under. Omsettingens omfang var basert på mengden av gjenværende etylestere i reaksjonsblandingen.
Det går fram av Tabell 10 at glyserolyse reaksjonen forløp mye langsommere hva angår omsetting sammenlignet med den direkte forestringen av frie fettsyrer med glyserol. Bare MML viste merkbar omsetting, og de andre lipasene viste svært liten - eller ingen aktivitet.
Dette forsøket viser at etylestere, selv om de er gunstigere og lettere tilgjengelige som råstoff, ikke utgjør et foretrukket utgangsmateriale i denne oppfinnelsen.
Eksempel 11
Eksempel 1 ble gjentatt ved å bruke som en semi-raffinert tunfiskolje som inneholder 5.2 % EPA og 24.5 % DHA som utgangsmateriale. Resultatene er gitt i Tabell 11 under.
Man ser at det ble oppnådd god omsetting med effektivt skille av EPA og DHA.
Eksempel 12
Eksempel 1 ble gjentatt ved å bruke en rå fiskeolje som inneholder 20.0 % EPA og 7.2 % DHA som utgangsmateriale. Resultatene vises i Tabell 12.
Det går klart fram av resultatene i Tabell 12 at glyserider med et svært gunstig forhold mellom EPA og DHA ble oppnådd med en høy omsettingshastighet. Den illustrerte prosessen kan derfor danne grunnlag for en prosess for å fremstille et konsentrat av EPA.
Claims (16)
1 .Fremgangsmåte for å isolere en fettsyrefraksjon som er anriket i minst en av fettsyrene EPA og DHA sammenlignet med innholdet i en marin oljesammensetning i hvilken EPA og DHA foreligger som frie fettsyrer
karaktersert ved
kombinasjonen av de følgende trinn: (i) å forestre nevnte marine oljesammensetning med glycerol i nærvær av en lipase-katalysator ved redusert trykk og i det vesentlige løsningsmiddelt rie betingelser , slik at de fettsyrer som ikke skal anrikes i det vesentlige går over på glyceridform, hvorved det oppnås en blanding av fettsyrer på glyceridform og fri fettsyreform,
og (ii) å separere fraksjoner av fettsyrer på glyceridform og fri fettsyre-form ved molekylær destillasjon.
2. Fremgangsmåte i henhold til krav 1 der molforholdet mellom glyserol og frie fettsyrer i utgangssammensetningen er fra 1:1.5 til 1:3.
3. Fremgangsmåte i henhold til krav 2 der molforholdet mellom glyserol og frie fettsyrer i utgangssammensetningen er fra 1:1.5 til 1:2.5.
4. Fremgangsmåte i henhold til krav 3 der molforholdet mellom glyserol og frie fettsyrer i utgangssammensetningen er omtrent 1:2.
5. Fremgangsmåte i henhold til et hvilket som helst av de foregående kravene der forestringsreaksjonen utføres ved et trykk på under 50 torr.
6. Fremgangsmåte i henhold til krav 5 der forestringsreaksjonen utføres ved et trykk lavere enn 10 torr.
7. Fremgangsmåte i henhold til krav 6 der forestringsreaksjonen utføres ved et trykk på fra 1 til 10 torr.
8. Fremgangsmåte i henhold til et hvilket som helst av kravene 1-6 der
>
forestringsreaksjonen utføres ved et trykk på fra 0.01 til 1 torr.
9. Fremgangsmåte i henhold til krav 8 der forestringsreaksjonen utføres ved et trykk på fra 0.01-0.1 torr.
10. Fremgangsmåte i henhold til et hvilket som helst av de foregående kravene der forestringsreaksjonen utføres ved en temperatur på 20 °- 40 °C.
11. Fremgangsmåte i henhold til et hvilket som helst av de foregående kravene der omtalte lipase-katalysator immobiliseres på en bærer.
12. Fremgangsmåte i henhold til et hvilket som helst av de foregående kravene der omtalte lipase-katalysator er Rhizomucor meihei.
13. Fremgangsmåte i henhold til et hvilket som helst av de foregående kravene der omtalte lipase fortrinnsvis katalyserer forestringen av EPA, sammenlignet med DHA.
14. Fremgangsmåte i henhold til et hvilken som helst av kravene 1-12 der omtalte lipase fortrinnsvis katalyserer forestringen av DHA, sammenlignet med EPA.
15. Fremgangsmåte i henhold til et hvilket som helst av kravene 1-12 der omtalte lipase fortrinnsvis katalyserer forestringen av både EPA og DHA, sammenlignet med andre fettsyrer i omtalte marin olje-sammensetning.
16. Fremgangsmåte i henhold til krav 1-15
karakterisert ved
at en eller flere ytterligere trinn, så som lipase eller kjemisk katalysert forestring med alkohol for å danne estere eller hydrolyse for å danne frie fettsyrer, kan utføres etter forestringstrinnet (i) i krav 1.
Priority Applications (12)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
NO19990739A NO312973B1 (no) | 1999-02-17 | 1999-02-17 | Lipase-katalysert forestring av marine oljer |
US09/913,585 US6518049B1 (en) | 1999-02-17 | 2000-02-16 | Lipase-catalysed esterification of marine oil |
AT00906778T ATE348140T1 (de) | 1999-02-17 | 2000-02-16 | Lipasekatalysierte veresterung von fischoel |
ES00906778T ES2276669T3 (es) | 1999-02-17 | 2000-02-16 | Esterificacion de aceite marino catalizada por lipasa. |
EP00906778A EP1153114B1 (en) | 1999-02-17 | 2000-02-16 | Lipase-catalysed esterification of marine oil |
AU28338/00A AU757203B2 (en) | 1999-02-17 | 2000-02-16 | Lipase-catalysed esterification of marine oil |
JP2000599845A JP2002537442A (ja) | 1999-02-17 | 2000-02-16 | 海産油のリパーゼ触媒したエステル化 |
DE60032337T DE60032337T2 (de) | 1999-02-17 | 2000-02-16 | Lipasekatalysierte veresterung von fischoelen |
PCT/NO2000/000056 WO2000049117A1 (en) | 1999-02-17 | 2000-02-16 | Lipase-catalysed esterification of marine oil |
NZ513574A NZ513574A (en) | 1999-02-17 | 2000-02-16 | Lipase-catalysed esterification of marine oil |
CA002362212A CA2362212C (en) | 1999-02-17 | 2000-02-16 | Lipase-catalysed esterification of marine oil |
ZA200106813A ZA200106813B (en) | 1999-02-17 | 2001-08-17 | Lipase-catalysed esterification of marine oil. |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
NO19990739A NO312973B1 (no) | 1999-02-17 | 1999-02-17 | Lipase-katalysert forestring av marine oljer |
Publications (3)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
NO990739D0 NO990739D0 (no) | 1999-02-17 |
NO990739L NO990739L (no) | 2000-08-18 |
NO312973B1 true NO312973B1 (no) | 2002-07-22 |
Family
ID=19902972
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
NO19990739A NO312973B1 (no) | 1999-02-17 | 1999-02-17 | Lipase-katalysert forestring av marine oljer |
Country Status (12)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US6518049B1 (no) |
EP (1) | EP1153114B1 (no) |
JP (1) | JP2002537442A (no) |
AT (1) | ATE348140T1 (no) |
AU (1) | AU757203B2 (no) |
CA (1) | CA2362212C (no) |
DE (1) | DE60032337T2 (no) |
ES (1) | ES2276669T3 (no) |
NO (1) | NO312973B1 (no) |
NZ (1) | NZ513574A (no) |
WO (1) | WO2000049117A1 (no) |
ZA (1) | ZA200106813B (no) |
Families Citing this family (34)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2002293774A (ja) * | 2001-03-29 | 2002-10-09 | Kuraray Co Ltd | 5−(メタ)アクリロイルオキシ−2,6−ノルボルナンカルボラクトンの製造方法 |
EP2295529B2 (en) * | 2002-07-11 | 2022-05-18 | Basf As | Use of a volatile environmental pollutants-decreasing working fluid for decreasing the amount of pollutants in a fat for alimentary or cosmetic use |
SE0202188D0 (sv) * | 2002-07-11 | 2002-07-11 | Pronova Biocare As | A process for decreasing environmental pollutants in an oil or a fat, a volatile fat or oil environmental pollutants decreasing working fluid, a health supplement, and an animal feed product |
NO319194B1 (no) * | 2002-11-14 | 2005-06-27 | Pronova Biocare As | Lipase-katalysert forestringsfremgangsmate av marine oljer |
WO2005084129A2 (en) * | 2004-03-04 | 2005-09-15 | Htl High-Tech Lipids Ltd. | Structured triglycerides and emulsions comprising same |
DE102004015781A1 (de) * | 2004-03-31 | 2005-10-20 | Cognis Ip Man Gmbh | Verfahren zur enzymatischen Synthese von Triglyceriden ungesättigter Fettsäuren |
US20060135610A1 (en) * | 2004-12-22 | 2006-06-22 | Bortz Jonathan D | Cardiovascular compositions |
CA2609341C (en) * | 2005-05-23 | 2011-10-04 | Natural Asa | Concentration of fatty acid alkyl esters by enzymatic reactions with glycerol |
ES2559959T3 (es) * | 2005-06-16 | 2016-02-16 | Dsm Nutritional Products Ag | Enzimas inmovilizadas y métodos para usar las mismas |
ES2292341B1 (es) * | 2006-03-13 | 2009-03-16 | Universidad De Almeria | "procedimiento para la purificacion de acido eicosapentaenoico (epa)". |
EP1978102B1 (de) * | 2007-04-02 | 2010-07-07 | Cognis IP Management GmbH | Ein Gemisch enthaltend Fettsäureglyceride |
EP1978101A1 (de) | 2007-04-02 | 2008-10-08 | Cognis IP Management GmbH | Verfahren zur Anreicherung mehrfach ungesättigter Fettsäuren |
JP2008278781A (ja) * | 2007-05-09 | 2008-11-20 | Osaka City | 2位よりも1,3位のdha含有率が高いトリアシルグリセロールの製造方法 |
CL2008002020A1 (es) | 2007-07-12 | 2008-11-14 | Ocean Nutrition Canada Ltd | Metodo de modificacion de un aceite, que comprende hidrolizar gliceridos con una solucion de lipasa thermomyces lanuginosus, separar la fraccion de acido graso saturado de la fraccion de glicerido hidrolizado y esterificar los gliceridos hidrolizados en la presencia de candida antarctica lipasa b; y composicion de aceite. |
KR101357298B1 (ko) * | 2008-06-20 | 2014-01-28 | 에이케이 앤 엠엔 바이오팜 주식회사 | 오메가-3계 고도불포화 지방산의 고순도 정제방법 |
DK2349250T3 (en) | 2008-10-31 | 2017-07-03 | Lipid Pharmaceuticals Ehf | Fatty acids for use as a medicament |
US8362080B2 (en) | 2008-12-18 | 2013-01-29 | Baylor College Of Medicine | Increasing glutathione levels for therapy |
WO2011067666A1 (en) | 2009-12-03 | 2011-06-09 | Blt Berg Lipidtech As | Processes to generate compositions of enriched fatty acids |
ES2862980T3 (es) | 2009-12-30 | 2021-10-08 | Basf Pharma Callanish Ltd | Composiciones de ácido graso poliinsaturado obtenibles mediante un proceso de separación cromatográfica en lecho móvil simulado |
WO2012095749A1 (en) | 2011-01-14 | 2012-07-19 | Pharma Marine As | Removal of monoglycerides from fatty acid concentrates |
GB201111595D0 (en) | 2011-07-06 | 2011-08-24 | Equateq Ltd | Improved process |
GB201111594D0 (en) | 2011-07-06 | 2011-08-24 | Equateq Ltd | New improved process |
GB201111591D0 (en) | 2011-07-06 | 2011-08-24 | Equateq Ltd | Further new process |
GB201111589D0 (en) | 2011-07-06 | 2011-08-24 | Equateq Ltd | New modified process |
GB201111601D0 (en) | 2011-07-06 | 2011-08-24 | Equateq Ltd | New process |
WO2013035113A1 (en) | 2011-09-06 | 2013-03-14 | Lipid Pharmaceuticals Ehf. | Coated suppositories |
SI2800563T1 (sl) | 2012-01-06 | 2018-11-30 | Omthera Pharmaceuticals Inc. | Z DPA obogateni sestavki omega-3 polinenasičenih maščobnih kislin v obliki proste kisline |
EP2846779A4 (en) | 2012-05-07 | 2015-12-16 | Omthera Pharmaceuticals Inc | STATIN AND OMEGA-3 FATTY ACID COMPOSITIONS |
GB201300354D0 (en) | 2013-01-09 | 2013-02-20 | Basf Pharma Callanish Ltd | Multi-step separation process |
US8802880B1 (en) | 2013-05-07 | 2014-08-12 | Group Novasep | Chromatographic process for the production of highly purified polyunsaturated fatty acids |
US9428711B2 (en) | 2013-05-07 | 2016-08-30 | Groupe Novasep | Chromatographic process for the production of highly purified polyunsaturated fatty acids |
EP3118186B1 (fr) | 2013-12-11 | 2022-02-09 | Novasep Process | Installation chromatographique de production d acides gras polyinsatures |
US10975031B2 (en) | 2014-01-07 | 2021-04-13 | Novasep Process | Method for purifying aromatic amino acids |
US10722542B2 (en) | 2016-06-16 | 2020-07-28 | Ambo Innovations, Llc | Non-winterized, standardized marine source oil products and methods of making thereof |
Family Cites Families (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH02303492A (ja) | 1989-05-19 | 1990-12-17 | Nippon Oil & Fats Co Ltd | 長鎖高度不飽和脂肪酸グリセリドの濃縮法 |
DK95490D0 (da) * | 1990-04-18 | 1990-04-18 | Novo Nordisk As | Fremgangsmaade til fremstilling af triglycerid og triglyceridsammensaetning |
JPH07203979A (ja) | 1994-01-25 | 1995-08-08 | Maruha Corp | 高度不飽和脂肪酸グリセリドの製造方法 |
GB9404483D0 (en) * | 1994-03-08 | 1994-04-20 | Norsk Hydro As | Refining marine oil compositions |
WO1996037586A1 (en) * | 1995-05-24 | 1996-11-28 | Loders Croklaan B.V. | Production method for fats with long chain polyunsaturated fatty acids |
AU6610996A (en) * | 1995-05-24 | 1996-12-11 | Loders Croklaan B.V. | Production of materials high in long chain polyunsaturated f atty acids |
WO1998018952A1 (fr) | 1996-10-30 | 1998-05-07 | Nippon Suisan Kaisha, Ltd. | Procede de production de matieres grasses contenant des acides gras hautement insatures contenant eux-memes un acide docosahexaenoique a concentration selective |
-
1999
- 1999-02-17 NO NO19990739A patent/NO312973B1/no not_active IP Right Cessation
-
2000
- 2000-02-16 AT AT00906778T patent/ATE348140T1/de not_active IP Right Cessation
- 2000-02-16 EP EP00906778A patent/EP1153114B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2000-02-16 DE DE60032337T patent/DE60032337T2/de not_active Expired - Lifetime
- 2000-02-16 CA CA002362212A patent/CA2362212C/en not_active Expired - Lifetime
- 2000-02-16 WO PCT/NO2000/000056 patent/WO2000049117A1/en active IP Right Grant
- 2000-02-16 AU AU28338/00A patent/AU757203B2/en not_active Ceased
- 2000-02-16 ES ES00906778T patent/ES2276669T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2000-02-16 JP JP2000599845A patent/JP2002537442A/ja active Pending
- 2000-02-16 US US09/913,585 patent/US6518049B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2000-02-16 NZ NZ513574A patent/NZ513574A/xx unknown
-
2001
- 2001-08-17 ZA ZA200106813A patent/ZA200106813B/en unknown
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JP2002537442A (ja) | 2002-11-05 |
ES2276669T3 (es) | 2007-07-01 |
NZ513574A (en) | 2002-12-20 |
EP1153114B1 (en) | 2006-12-13 |
CA2362212A1 (en) | 2000-08-24 |
AU757203B2 (en) | 2003-02-06 |
NO990739D0 (no) | 1999-02-17 |
EP1153114A1 (en) | 2001-11-14 |
NO990739L (no) | 2000-08-18 |
CA2362212C (en) | 2009-10-27 |
DE60032337T2 (de) | 2007-07-12 |
ATE348140T1 (de) | 2007-01-15 |
DE60032337D1 (de) | 2007-01-25 |
AU2833800A (en) | 2000-09-04 |
WO2000049117A1 (en) | 2000-08-24 |
US6518049B1 (en) | 2003-02-11 |
ZA200106813B (en) | 2002-08-19 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
NO312973B1 (no) | Lipase-katalysert forestring av marine oljer | |
US7491522B2 (en) | Lipase-catalysed esterification of marine oil | |
JP4236128B2 (ja) | 精油組成物 | |
JP3892463B2 (ja) | アルキルエステルの製造方法 | |
CA2803477C (en) | Process for separating polyunsaturated fatty acids from long chain unsaturated or less saturated fatty acids | |
JP2006506483A5 (no) | ||
ZA200309779B (en) | Method and device for obtaining fatty acid esters from native oils and fats by means of the enzymatic separation thereof | |
Wongsakul et al. | Synthesis of 2‐monoglycerides by alcoholysis of palm oil and tuna oil using immobilized lipases | |
US20030130533A1 (en) | Conjugated fatty acid containing monoglycerides and process for producing them | |
AU708725B2 (en) | Process for the fractionation of fatty acids | |
JP2005287511A (ja) | 不飽和脂肪酸のトリグリセリドを酵素合成するための方法 | |
JPH06116585A (ja) | 油脂の精製方法 | |
JP3734905B2 (ja) | ω−3系高度不飽和脂肪酸の精製方法 | |
JP3995409B2 (ja) | 5,8,11−エイコサトリエン酸及び/又は6,9−オクタデカジエン酸を高濃度に含有するグリセリドの製造方法 | |
JP3853181B2 (ja) | ステリルエステルの分離方法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
CREP | Change of representative |
Representative=s name: ZACCO NORWAY AS, POSTBOKS 765 SENTRUM, OSLO, 0106, |
|
MK1K | Patent expired |