ES2241030T3 - Preparado farmaceutico para el tratamiento de alteraciones de la coagulacion sanguinea. - Google Patents
Preparado farmaceutico para el tratamiento de alteraciones de la coagulacion sanguinea.Info
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Abstract
SE DESCRIBE UN PREPARADO FARMACEUTICO PARA EL TRATAMIENTO DE TRASTORNOS DE LA COAGULACION SANGUINEA, QUE CONTIENEN FACTORES PROTROMBINASA PURIFICADOS, EN PARTICULAR PROTROMBINA PURIFICADA Y EVENTUALMENTE FACTOR XA PURIFICADO COMO PRINCIPIO ACTIVO
Description
Preparado farmacéutico para el tratamiento de
alteraciones de la coagulación sanguínea.
La presente invención se refiere a un preparado
farmacéutico, en particular para el tratamiento de alteraciones de
coagulación sanguínea, que contiene factores de coagulación
integrantes de protrombinasas o
pro-protrombinasas.
La protrombinasa es un complejo
enzima-sustrato que se forma en una superficie
fosfolipídica y posibilita la activación de la protrombina. La
protrombinasa, de acuerdo con su definición, está constituida por
el factor II (protrombina), el factor X activado (factor Xa), el
cofactor V o Va, fosfolípidos e iones calcio. Estos factores se
encuentran in vivo formando un complejo de transición para la
activación de la protrombina y la formación de la trombina.
De igual forma se define una
pro-protrombinasa como un complejo de factores
modificados o activados, al menos en parte, implicados en la
formación de una protrombinasa. En consecuencia, la
pro-protrombinasa se ha de entender como un
precursor de la protrombinasa y como un complejo en el que uno o más
de sus componentes y precursores se encuentran en forma de cimógenos
o proformas y debe su formación a la afinidad existente entre sus
componentes.
La hemofilia A se debe a una deficiencia
hereditaria recesiva de factor VIII ligada al cromosoma X y se
manifiesta en forma de alteraciones de coagulación sanguínea
graves. Para contener hemorragias agudas, en la mayoría de los casos
se utilizan concentrados de proteínas plasmáticas de efecto
coagulante, principalmente concentrados de factor VIII. Sin
embargo, en el tratamiento clásico de pacientes de hemofilia A con
preparados de factor VIII, aproximadamente en un 20% de los casos
se forman anticuerpos contra el factor VIII que conducen a una
inhibición del efecto de estos preparados administrados. En estos
casos se dice que un paciente ha producido un inhibidor funcional
contra el factor VIII y que ha desarrollado la llamada hemofilia
con desarrollo de inhibidores del factor VIII o hemofilia
adquirida.
Actualmente se utilizan diversos métodos para
tratar pacientes de hemofilia A en los que aparece formación de
inhibidores del factor VIII:
De este modo, el anticuerpo dirigido contra el
factor VIII se neutraliza in vivo y el factor VIII en exceso
puede desarrollar su actividad como cofactor hemostático. Con una
administración reiterada durante un período prolongado, el paciente
afectado se desensibiliza contra el factor VIII y después, en muchos
casos, puede ser sometido a la terapia habitual con concentrado de
factor VIII. Este modo de proceder requiere cantidades sumamente
grandes de factor VIII y mucho tiempo, y al comienzo del tratamiento
puede conllevar efectos secundarios anafilácticos masivos.
Este método terapéutico está siendo actualmente
objeto de una investigación intensiva. Hoy en día no existe ninguna
posibilidad de evaluar de forma concluyente la eficacia de un
tratamiento de este tipo.
Otro método, aunque costoso, para eliminar los
inhibidores del factor VIII consiste en la inmunoadsorción bien en
lectinas, que aglutinan inmunoglobulinas (proteína A, proteína G) o
bien en un factor VIII inmovilizado, al que se une el anticuerpo
formado contra el factor VIII. Este método es complicado para el
paciente, dado que ha de estar conectado a una máquina de aféresis;
al igual que ocurre con los métodos anteriores puede que so se
contenga una hemorragia aguda y además es caro.
La terapia elegida en la actualidad consiste en
la administración de concentrados de complejo de protrombina
activados (APCC), FEIBA®, AUTOPLEX®, que también se pueden utilizar
para contener hemorragias agudas en caso de pacientes que presentan
concentraciones de inhibidor elevadas (véase, por ejemplo,
DE-PS 31 27 318 (2)).
Basándose en los concentrados de factores de
complejo de protrombina activados se propuso un componente que
también aparece en, entre otros, estos concentrados, a saber: el
factor VIIa activado, como principio terapéutico en pacientes que
desarrollan inhibidores del factor VIII por coagulación extrínseca.
Un preparado similar, el factor VIIa recombinante, se encuentra
actualmente bajo experimentación clínica (Hedner y col.,
Transfusion Medicine Reviews 7 (2): 78-83 (1993)).
Sin embargo, las investigaciones preclínicas, por ejemplo en perros
con hemofilia A, han demostrado que el tratamiento con factor VIIa
recombinante es ineficaz. De igual forma, la tasa de éxitos en la
aplicación en humanos es sólo variable. Otra desventaja del factor
VIIa recombinante consiste en que éste, debido a su breve vida
media in vivo, con frecuencia ha de ser administrado en
grandes dosis diarias para poder controlar hemorragias graves, si es
que se puede. En estos casos se intenta administrar el factor VIIa
junto con antifibrinolíticos para reforzar su efecto.
En la literatura (por ejemplo DE 44 16 180 A1)
también se ha propuesto la utilización terapéutica de una
combinación de factor Xa y fosfolípidos para el tratamiento de
pacientes de hemofilia A que desarrollan inhibidores. Los
experimentos in vivo en perros con deficiencia de factor VIII
y con desarrollo de inhibidores muestran que una dosis adecuada de
una combinación de este tipo puede contener una hemorragia aguda.
Sin embargo, la amplitud terapéutica de tal preparado es
relativamente pequeña, ya que la dosis efectiva y la dosis
trombogénica, que se puede deducir por ejemplo en el modelo Wessler
en conejos, están muy cerca una de otra, debido a que los
fosfolípidos en particular representan un elevado riesgo de
trombogenia.
El documento DE 44 30 205 A se refiere a una
composición que sirve como antídoto para anticoagulantes de la
sangre, seleccionándose los anticoagulantes entre el grupo que
incluye, entre otros, glucosaminoglucanos, polisacáridos
sulfatados, hirudinas, etc., y presentando, en resumen, un
concentrado de complejo de protrombinas y como mínimo otro
componente promotor de la coagulación sanguínea. Este componente
promotor de la coagulación sanguínea e, por ejemplo, factor V, Va,
XI, XII, XIII o factor von Willebrand.
Por consiguiente, la presente invención tiene
como objetivo evitar las desventajas de los métodos descritos y
poner a disposición un principio terapéutico para el tratamiento de
alteraciones de coagulación sanguínea, en particular para el
tratamiento de hemofilia con desarrollo de inhibidores de factor
VIII, que posibilite, entre otras cosas, una utilización sencilla,
un efecto rápido eficaz y una vida media prolongada y que permita
evitar efectos secundarios trombogénicos.
Este objetivo se resuelve según la invención con
un preparado farmacéutico para el tratamiento de alteraciones de la
coagulación sanguínea que contiene como mínimo dos factores de
coagulación individuales muy puros, seleccionados entre el grupo
consistente en los factores II, V, Va, X y Xa, que forman parte de
una protrombinasa o pro-protrombinasa, como
componentes activos; en particular con un preparado que contiene
protrombina purificada y factor Xa purificado como componentes
activos, estando activado preferentemente uno de los factores
excepto la protrombina. Preferentemente, los componentes están
purificados hasta tal punto que se presentan libres de fosfolípidos
endógenos, es decir procedentes del material de partida, pero
también principalmente libres de vesículas de fosfolípidos.
De este modo se impide la formación prematura de
trombina y se asegura la estabilidad del preparado farmacéutico y,
por otra parte, se reduce al mínimo el riesgo de efectos
secundarios tromboembólicos.
De acuerdo con la invención, por el concepto
"protrombinasa parcial" se entiende una mezcla o complejo de
como mínimo dos componentes de protrombinasa.
Además de los componentes de protrombinasa o
pro-protrombinasa, el preparado preferentemente
contiene también otros factores de coagulación sanguínea y de
fibrinólisis para lograr un efecto atenuado, en particular un
refuerzo, debilitamiento, aceleración o retraso de la hemostasia.
En consecuencia, también puede contener activadores o
proactivadores de la coagulación sanguínea; entre ellos, factores
de coagulación sanguínea intrínsecos o extrínsecos como cimógenos o
como factores activados, y también sus agonistas o antagonistas o
inhibidores. También se pueden utilizar las combinaciones
correspondientes en forma de preparados individuales. Entre éstas
se encuentra combinaciones con fibrinógeno, adecuada sobre todo para
su administración local.
Sin embargo, de acuerdo con una forma de
realización preferente, el preparado farmacéutico consiste
esencialmente en "protrombinasa parcial", encontrándose
preferentemente los componentes de la protrombinasa o
pro-protrombinasa unidos formando un complejo. Este
complejo se puede purificar y tratar de forma sencilla, en
particular se puede tratar química y/o físicamente para inactivar
elementos patógenos moleculares, microbianos o víricos.
Los factores presentes en el preparado
farmacéutico según la invención lo están de forma que es posible la
activación de al menos un factor o donde al menos un factor ya está
activado. Como factores se incluyen, preferentemente, factores
humanos. En el preparado farmacéutico según la invención, los
factores se eligen de entre el grupo consistente en factores II, V,
Va, X y Xa.
Como preparados farmacéutico de una protrombinasa
parcial o pro-protrombinasa se ponen a disposición,
preferentemente, combinaciones de los factores II y V o Va y
también X y V o Va. Especialmente el preparado farmacéutico consiste
esencialmente en estas combinaciones. Del mismo modo, una
pro-protrombinasa que incluye los factores II y X,
en caso dado en combinación con el factor V o Va, también es una
forma de realización preferente de la presente invención.
En este contexto se pueden utilizar factores
nativos, por ejemplo proteínas obtenidas a partir de plasma o
fracciones de plasma o sus equivalentes codificados por ejemplo a
partir de ácidos nucleicos recombinantes. No obstante, también son
adecuados los derivados correspondientes que incluyen las proteínas
o fragmentos modificados, siempre que sean activables o que
presenten la actividad correspondiente para modular la generación
de trombina.
El preparado según la invención tiene la ventaja
de que, a pesar de su alta estabilidad in vitro, también es
estable in vivo hasta que su efecto se manifiesta mediante
la activación de protrombina y el desarrollo de trombina en la zona
de la herida o hemorragia. Mediante su contacto con los componentes
celulares de la circulación sanguínea, por ejemplo células
sanguíneas o paredes vasculares, en particular con superficies que
contienen fosfolípidos, se genera trombina in situ y se
promueve la hemostasia. Gracias a la actividad local se evitan los
efectos secundarios sistémicos, por ejemplo complicaciones
tromboembólicas.
Para influir de forma controlada en la
hemostasia, preferentemente se utilizan factores altamente
purificados, libres de impurezas, en particular de una actividad de
trombina. Para ello son adecuados esencialmente factores purificados
mediante procedimientos cromatográficos, por ejemplo cromatografía
de intercambio iónico, cromatografía hidrófoba, cromatografía de
afinidad y/o cromatografía de exclusión molecular. De este modo se
pueden lograr, en cada caso, actividades específicas de como mínimo
un 50% de la pureza teórica, en particular como mínimo un 70%,
preferentemente como mínimo un 90% y la pureza teórica para el
factor individual. En consecuencia, también es preferible utilizar
factores que estén esencialmente libres de productos
desnaturalizados y, por tanto, se encuentren en forma de factores
activos purificados, enzimas o cimógenos activables.
También es preferible llevar a cabo un
tratamiento para inactivar posibles agentes patógenos infecciosos,
por ejemplo un tratamiento con sustancias químicas y/o un
tratamiento físico, como tratamiento térmico, irradiación o
filtración, en particular una nanofiltración. De acuerdo con una
variante preferente, los factores del preparado farmacéutico según
la invención están tratados con detergentes, lo que conduce a la
inactivación de virus y, por otra parte, posiblemente solubiliza
fosfolípidos presentes.
Los preparados de factores de la coagulación
sanguínea, por ejemplo de plasma o de fracciones de plasma, o de un
cultivo celular, pueden contener fosfolípidos. El tratamiento
especial de los factores para la separación de los fosfolípidos
presentes de forma natural incluye, por una parte, la solubilización
de éstos y, por otra, su separación mediante los procedimientos de
purificación mencionados.
Si bien el preparado se puede utilizar en
combinación con fosfolípidos exógenos, de acuerdo con otra variante
preferente de los preparados según la invención éstos están libres
de fosfolípidos añadidos y contienen menos de 0,01 mg de
fosfolípidos/U de protrombina, lo que, a causa del posible efecto
trombogénico de los fosfolípidos, conduce a una considerable
reducción adicional del riesgo de trombogenia. De acuerdo con una
forma de realización especialmente preferente, los preparados están
libres de fosfolípidos detectables.
De acuerdo con otra forma de realización, el
preparado según la invención también contiene iones magnesio. Estos
iones compiten con los iones calcio y pueden desplazar dichos iones
calcio en la protrombinasa o pro-protrombinasa. De
este modo se impide una formación prematura de trombina en la
solución de preparado según la invención y, con ello, éste se
estabiliza hasta tal punto que permanece estable en solución
incluso durante horas.
Se ha comprobado que el preparado farmacéutico se
puede poner a disposición incluso en forma de solución para infusión
estable, sobre todo cuando es seguro que no contiene ningún ión
calcio libre. Para la formación de complejos con los iones calcio
también es adecuada la presencia de un formador de quelatos
farmacéuticamente aceptable, por ejemplo EDTA, y estructuras
afines, como citratos.
El preparado según la invención presenta una
eficacia biológica comparable a la de la FEIBA® en modelos animales
y puede reducir claramente el tiempo de coagulación de un plasma
con inhibidores del factor VIII. Puede normalizar por completo
tiempos de hemorragia prolongados y la tendencia a la hemorragia en
conejos con inhibidores del factor VIII y de conejos con
inhibidores del factor von Willebrand. La toxicidad del preparado
según la invención en comparación con la de la FEIBA® se reduce
claramente facilitando factores de coagulación sanguínea
purificados, por ejemplo protrombina purificada y factor Xa
purificado. Por ejemplo, la combinación efectiva de factor Xa y
protrombina resulta negativa en el modelo de trombosis Wessler (J.
Appl. Phys. 14 (1959), 943-946); es decir, con esta
combinación no se puede apreciar ningún efecto trombogénico en el
modelo Wessler incluso con dosis mayores que en el caso del
complejo de protrombina activado.
En este modelo de trombogenia se narcotizan
conejos con pentobarbital, después se descubre la vena yugular, bajo
anestesia local adicional, y se le realizan ligaduras sueltas a una
distancia de 2 cm. Por último, la sustancia a ensayar se inyecta en
la vena de la oreja opuesta a la vena yugular en un plazo de 15
segundos. Veinticinco segundos después se cierran las ligaduras y
se espera 10 minutos hasta que se extrae el tramo de vena
estrangulado para cortarlo y evaluarlo en una placa petri que
contiene un tampón citrato. Los criterios de evaluación modificados
según Wessler son: ninguna formación de trombos = 0, algunos
trombos pequeños = 0,5 - 1, algunos trombos de tamaño medio y
muchos trombos pequeños = 2, muchos trombos de tamaño medio = 3,
algunos trombos grandes = 3,5, trombos coherentes
= 4.
= 4.
Preferentemente, los componentes del preparado
farmacéutico según la invención están purificados hasta un grado de
pureza tal que, incluso en caso de una dosis de como mínimo 150 U
de protrombina/kg, el preparado está libre de efectos secundarios
tromboembólicos, expresándose este resultado en el modelo de
trombosis Wessler con una calificación de como máximo 3 puntos,
preferentemente como máximo 2, en particular menos de 2 puntos.
Preferentemente, la protrombina está presente en el preparado
combinado según la invención con una actividad específica de como
mínimo 5 U/mg de proteína, especialmente como mínimo 6, en
particular como mínimo 7, correspondiente a un 50, 60 ó 70% de la
pureza teórica. El preparado de factor X o Xa utilizado debería
presentar, preferentemente, una actividad específica de como mínimo
100 U/mg de proteína, donde el factor Xa preferentemente aparece en
esencia en su forma Xa\beta. El factor V o Va se utiliza como
cofactor en una proporción aproximadamente equimolar con respecto
al factor de coagulación de la protrombinasa parcial o
pro-protrombinasa. La proporción es preferentemente
(0,01-2):1 (mol/mol), en especial de
(0,5-2):1.
A ser posible, el preparado utilizado debería
estar libre de trombina, pudiendo comprobarse esta ausencia de
trombina realizando los ensayos adecuados, preferentemente ensayos
cromógenos (por ejemplo con el sustrato cromógeno
TH-1 de IMMUNO AG.).
Se ha comprobado que cuando el preparado según la
invención contiene los factores de coagulación, por ejemplo
protrombina y factor Xa, en forma de complejos, el preparado
presenta una mayor estabilidad en comparación con otros preparados
convencionales, y además el complejo puede someterse a un
tratamiento adicional de purificación y/o inactivación viral. En
una forma de realización preferente del preparado según la
invención, éste incluye adicionalmente antitrombina III en
cantidades estabilizadoras, dado el caso junto con heparina,
pudiendo demostrarse también en un preparado de este tipo la
ausencia de efectos secundarios tromboembólicos según el ensayo
Wessler en ausencia o también después del desenmascaramiento de la
heparina; es decir, la neutralización y/o separación de la
heparina, en el sentido de que no se alcanza el valor de 3
puntos.
El término "complejo de protrombinasa
parcial" significa básicamente un complejo que consiste en como
mínimo dos factores de coagulación que forman parte de una
protrombinasa o pro-protrombinasa. La actividad de
un preparado basado en este complejo se puede incrementar a un
múltiplo de la misma si están presentes iones calcio, por ejemplo
cloruro de calcio. También se ha comprobado que un preparado que
contiene este complejo y además iones calcio se puede utilizar para
preparar un reactivo con fines diagnósticos. Un reactivo que además
presenta actividad de trombina y en caso dado contiene fosfolípidos
es adecuado, por ejemplo, para determinar la actividad de cofactor
de factor V. Un procedimiento diagnóstico empleando este reactivo
con o sin proteína C activada, un inactivador proteolítico del
factor V, permite además estimar la magnitud de la inactivación del
factor V o una resistencia frente a la proteína C activada
condicionada por mutación.
Preferentemente, la protrombina está purificada
hasta un grado de pureza tal que, incluso en caso de una dosis de
como mínimo 150 U de protrombina/kg, no se producen efectos
secundarios tromboembólicos, poseyendo una calificación en el
modelo de trombosis Wessler de como máximo 3, preferentemente de
como máximo 2, en particular menos de 2 puntos.
El preparado combinado según la invención
contiene, preferentemente, menos de 0,1 U de factor VIII:C o factor
VIII:Ag/U de protrombina, o menos de 0,1 U de factor IX/U de
protrombina, o menos de 0,1 U de factor X/U de protrombina. De este
modo se puede impedir con más eficacia la formación no deseada de
anticuerpos contra estas proteínas o la reacción con dichos
anticuerpos, y reducir el riesgo de efectos secundarios.
La dosificación de los preparados según la
invención se determina según la dosificación de los componentes
equivalentes en FEIBA®. La actividad Factor Eight Inhibitor
Bypassing-Activity (FEIBA) (actividad de derivación
de inhibidor del factor VIII) se define como la actividad de un
preparado de este tipo que reduce al 50% del valor control el
tiempo de coagulación de un plasma con inhibidor del factor VIII en
un ensayo de coagulación, tal como se describe en AT 350726. Las
ventajas de los preparados según la invención en comparación con la
FEIBA consisten en que el paciente recibe una carga menor de
proteínas plasmáticas debido a la alta pureza de los componentes.
En particular, la ausencia de factor VIII:Ag excluye la posibilidad
de efectos secundarios anafilácticos. Por consiguiente, los
preparados según la invención se pueden concentrar hasta tal punto
que se puede administrar una dosis que corresponda, por ejemplo, a
como mínimo 50 U de protrombina/kg de peso corporal, pudiendo
administrarse esta dosis incluso en una inyección por primera vez
en este tipo de preparados, gracias a la ausencia de efectos
secundarios, con lo que se puede evitar la administración prolongada
de este tipo de altas dosis necesaria en otros casos.
Normalmente, en los preparados según la invención
se administra una dosis de, por ejemplo, 50 a 150 U de
protrombina/kg de peso corporal. No obstante, las dosis máximas
también pueden ser muy superiores a 150 U/kg de peso corporal (por
ejemplo hasta 300 o hasta 500) sin que haya posibilidad de efectos
secundarios tromboembólicos.
Por consiguiente, otro objeto de la presente
invención consiste en formas de administración de los preparados
farmacéuticos según la invención que incluyen una dosis de como
mínimo 50 U de protrombina/kg de peso corporal, preferentemente
entre 50 y 500 U/kg de peso corporal.
Estas formas de administración pueden consistir
en ampollas ya listas para su administración directa, inyecciones o
formas de administración similares, directas o indirectas. Entre
ellas se encuentran infusores, administración intramuscular o
subcutánea, o en un conjunto consistente en los principios activos
liofilizados y una solución farmacéuticamente aceptable para
reconstituir el liofilizado. Normalmente, la solución
farmacéuticamente aceptable o el preparado farmacéutico contiene
sales, conservantes, tampones y similares en solución acuosa (véase
Remington's Pharmaceutical Sciences, 15ª edición, Easton: Mack
Publishing Co., pp. 1405-1412 y
1461-1487 (1975) y The National Formulary XIV, 14ª
ed. Washington: American Pharmaceutical Association (1975)).
Soluciones no acuosas son, por ejemplo, propilenglicol,
polietilenglicol, aceites vegetales y ésteres orgánicos inyectables,
como oleato de etilo. Los vehículos acuosos son, por ejemplo, agua,
dado el caso mezclada con alcohol, soluciones salinas (NaCl),
dextrosa Ringer's, etc. Como conservantes se pueden utilizar
sustancias antimicrobianas, antioxidantes, agentes quelantes o
gases inertes.
Los preparados según la invención también son
adecuados para el tratamiento local cuando se eligen formas de
administración que desarrollan su efecto en la zona hemorrágica.
Éstos pueden ser sólidos o líquidos, preferentemente en forma de
polvo, emplasto o compresa para heridas, pomadas, supositorios,
cápsulas, en particular cápsulas resistentes a los jugos gástricos,
pero también gotas o pulverizadores.
Los factores de la coagulación utilizados pueden
ser tanto de origen plasmático como procedentes de proteínas
elaborados mediante tecnología de ADN recombinante. En ambos casos
es esencial que se encuentren en el preparado farmacéutico en forma
purificada, en particular en una forma libre de fosfolípidos
endógenos y exógenos.
Preferentemente, los preparados farmacéuticos
según la invención se ponen a disposición en forma liofilizada, lo
que implica ventajas en lo referente al transporte, almacenamiento
y administración bien conocidas. Como solución reconstitutiva se
puede utilizar una solución farmacéuticamente aceptable que, en caso
dado, contiene ATIII o heparina. Gracias al alto grado de pureza de
los componentes del preparado según la invención, éstos se pueden
recomponer después de un breve tiempo de solución a temperatura
ambiente, preferentemente menos de 5 minutos, en particular menos de
1 minuto, para obtener una solución transparente, por ejemplo, con
como mínimo 10 U de protrombina/ml, pudiendo incluso alcanzarse
concentraciones hasta 200 U de protrombina/ml de solución. En este
contexto, una solución transparente se define mediante un valor
máximo de extinción a 600 nm de 0,1 (para una solución de como
mínimo un 5% en peso de contenido proteínico, con un espesor de capa
de 1 cm), con respecto a la solución pura (solución tampón) como
referencia. Como alternativa también se puede definir como
transparente una solución con menos de 70 Light Scattering Units
(LSU) (unidades de dispersión luminosa), determinado por medición en
nefelómetro a 340 nm y con un espesor de capa de 1 cm.
Al contrario que los preparados conocidos hasta
el momento para el tratamiento de alteraciones de la coagulación
sanguínea, los preparados según la invención son
extraordinariamente estables, es decir, se pueden dejar reposar
durante un mayor tiempo antes de su administración. Por ejemplo, de
acuerdo con la información de producto, la FEIBA® en su estado
listo para la administración no se debe dejar reposar más de 1
hora. En cambio, los preparados según la invención en forma de
solución lista para su uso no muestran ningún tipo de activación de
coagulación o trombogenia durante un período de 3 o más horas a
temperatura ambiente, por lo que los preparados según la invención
también se pueden poner a disposición en forma de una solución de
infusión que también se puede administrar a lo largo de varias
horas. Por el mismo motivo, los preparados según la invención
también se pueden administrar en forma de solución de infusión
durante un período más largo. No obstante, se ha comprobado que en
relación con los efectos secundarios tromboembólicos no se produce
ninguna diferencia esencial entre una inyección de bolo y una
infusión lenta con los preparados según la invención.
De acuerdo con una forma de realización
preferente de la presente invención, los preparados farmacéuticos se
presentan en dispositivos de administración adecuados,
preferentemente como un liofilizado en jeringas, que permiten su
reconstitución in situ con una solución farmacéuticamente
aceptable. En el preparado combinado es recomendable un dispositivo
de administración como el mostrado en la Figura 1, en el que los
liofilizados, por ejemplo de protrombina y factor Xa, se guardan por
separado y en caso necesario se pueden administrar mediante una
jeringa de cámara doble después de su reconstitución in
situ.
Los preparados farmacéuticos según la presente
invención, en particular cuando se obtienen a partir de proteínas
plasmáticas o cultivos celulares, pueden ser sometidos a uno o más
tratamientos de inactivación viral o de reducción de la cantidad de
virus, por ejemplo tratamientos químicos o físicoquímicos,
tratamiento térmico y/o con detergentes según el documento EP 0 159
311, el documento EP 0 519 901 o el documento 0 674 531, o
tratamientos físicos, como nanofiltración.
Los preparados según la invención permiten tratar
de forma segura y sencilla las alteraciones de la coagulación
sanguínea, tratamiento en el que se puede observar un efecto eficaz
en muy poco tiempo.
Se ha comprobado que el inicio del efecto eficaz
tiene lugar más rápidamente en la administración del complejo de
factor II y factor Xa que en el caso de un preparado que contiene
exclusivamente factor II.
Por consiguiente, para el tratamiento de una
complicación hemorrágica en un paciente con hemofilia que desarrolla
inhibidores resulta ventajoso tratar el episodio hemorrágico
mediante la administración del complejo de factor II/Xa para cortar
rápidamente la hemorragia y, con el fin de evitar hemorragias
posteriores, continuando la terapia con dosis de mantenimiento de
un preparado que contiene exclusivamente el factor II.
Además, la larga vida media de los preparados
según la invención y la ausencia de efectos secundarios
trombogénicos, o la falta de aparición de una reacción anafiláctica
que conduzca a un reforzamiento de la inhibición, permiten tratar
al paciente que presenta alteraciones de la coagulación sanguínea de
una forma considerablemente mejor que con los procedimientos
conocidos. Gracias a la alta concentración o dosis del preparado
según la invención, el paciente puede recibir una cierta cantidad de
principio activo, lo que reduce la necesidad de tratamientos
frecuentes. En consecuencia, el paciente también puede permanecer
sin tratamiento durante un período de varios días y, en caso dado,
ser tratado ambulatoriamente administrándose él mismo una inyección,
eventualmente subcutánea.
De acuerdo con otro aspecto, la presente
invención se refiere a la utilización de factores de protrombinasa
purificados, en particular de protrombina purificada y factor Xa
purificado, para la producción de un preparado farmacéutico que
establece concentraciones de protrombina supranormales en la sangre
de un paciente, o para establecer concentraciones de protrombina
normales en la sangre en aquellos estados que presentan niveles
bajos de protrombina.
Se ha comprobado que, con los preparados según la
invención, dichos niveles supranormales de factor II se pueden
mantener incluso de forma permanente, es decir, durante períodos
más largos, lo que se debe atribuir a que la protrombina como
medicamento presenta una vida media muy alta para los factores de la
coagulación sanguínea y, por otra parte, también se debe a la
ausencia de efectos secundarios de los preparados según la
invención, de modo que incluso es posible una administración
subcutánea, por ejemplo mediante administración en depósito. Las
concentraciones supranormales de protrombina en la sangre que se
pueden lograr mediante la administración de protrombina purificada,
y en caso dado factor Xa purificado u otros factores de
protrombinasa, son de como mínimo un 150%, preferentemente incluso
como mínimo un 200%, correspondientes a una actividad de como
mínimo 1,5 U de protrombina/ml de sangre, preferentemente como
mínimo 2,0 a 10 U/ml.
Por último, la invención también se refiere a la
utilización de factores de protrombinasa purificados, en particular
de protrombina purificada y factor Xa purificado, en la producción
de un preparado farmacéutico para el tratamiento de estados donde
se desarrolla una inhibición del factor VIII, la hemofilia A o B y
la enfermedad von Willebrand. Se ha comprobado que los preparados
según la invención permiten un tratamiento rápido, eficaz y exento
de efectos secundarios en modelos animales con todas estas
indicaciones.
Los preparados según la invención se ponen a
disposición, preferentemente, en forma de solución con un pH
fisiológico, que preferentemente no contiene ningún ión calcio
libre. No obstante, también se puede utilizar un tampón ácido
alejado, por ejemplo, del valor óptimo de actividad de factor Xa, en
el intervalo de pH 4,5-6,5, preferentemente
5-6, con lo que se puede retener la activación de
protrombina y, con ello, aumentar una vez más la estabilidad del
preparado combinado. Se entiende que para producir los preparados
según la invención listos para el uso se pueden utilizar todas las
soluciones y aditivos farmacéuticos adecuados para los factores II,
V, Va, X y Xa.
También se ha comprobado sorprendentemente que
con los preparados según la invención también se pueden tratar de
forma eficaz hemorragias agudas, aumentos de la tendencia a la
hemorragia o un incremento del riesgo de hemorragia en caso de
pacientes no hemofílicos. Además de las indicaciones ya mencionadas
de las diferentes formas de hemofilia, es decir, hemofilia A y B y
también hemofilia con desarrollo de inhibidores, los preparados
según la invención también se pueden utilizar en caso de pacientes
no hemofílicos. Entre los pacientes no hemofílicos se cuentan
también aquellos que presentan alteraciones de la coagulación
sanguínea debidas a inhibidores contra factores de la sangre que no
son el factor VIII o el factor IX. También se puede tratar a
pacientes que presentan una alteración en la formación de trombina
debida a un fallo o defecto funcional de uno o más factores de la
coagulación extrínseca o intrínseca, o en caso de formación de
anticuerpos contra uno o más de estos factores, o por la ausencia
del receptor celular para uno o más de estos factores. Después de
la administración de un preparado según la invención se produce
in vivo, en caso dado, un efecto promotor de la coagulación,
lo que posibilita un tratamiento, a saber: una administración
profiláctica o terapéutica.
Por consiguiente, de acuerdo con otro aspecto, la
presente invención se refiere a la utilización de como mínimo 2
factores de coagulación que forman parte de una protrombinasa o
pro-protrombinasa y están libres de fosfolípidos,
seleccionándose los factores de la coagulación de entre el grupo
consistente en los factores II, V, Va, X y Xa, o a la utilización
del preparado según la invención en la producción de un preparado
farmacéutico para el tratamiento de hemorragias agudas, aumentos de
la tendencia a la hemorragia o un incremento del riesgo de
hemorragia en caso de pacientes no hemofílicos.
En particular se pueden tratar estados debidos a
una alteración en el comportamiento de agregación de plaquetas o en
trombopatías, por ejemplo deficiencias de almacenamiento, o estados
condicionados por funciones deficientes o disfunciones de proteínas
asociadas a las plaquetas, pero también estados hemorrágicos
condicionados por deficiencias plaquetarias (trombocitopenia). Un
efecto secundario de una terapia con anticoagulantes consiste en la
trombocitopenia inducida por heparina, que también es una
indicación para el preparado según la invención.
En consecuencia, de acuerdo con una forma de
realización preferente, la presente invención se refiere a la
utilización de como mínimo 2 factores de coagulación que forman
parte de una protrombinasa o pro-protrombinasa y
están libres de fosfolípidos, seleccionándose los factores de
coagulación de entre el grupo consistente en los factores II, V,
Va, X y Xa, en la producción de un preparado farmacéutico para el
tratamiento de hemorragias debidas a una trombocitopenia, en
particular para el tratamiento de trombocitopenias inducidas por
heparina.
En este contexto resulta ventajoso que el
preparado farmacéutico elaborado de acuerdo con la utilización según
la invención presente en determinadas circunstancias una actividad
hemostática primaria. El preparado farmacéutico producido se puede
reforzar combinándolo con proteínas con actividad hemostática
primaria. Para ello es adecuada sobre todo una proteína del factor
von Willebrand o una fracción del factor von Willebrand con una
actividad de unión de colágeno específica.
Otra indicación para el tratamiento de pacientes
con alteraciones de la coagulación sanguínea consiste en evitar o
tratar las hemorragias que aparecen en relación con la enfermedad
de von Willebrand. Esta enfermedad con y sin la prevalencia de
inhibidores de factores de la coagulación implica un aumento de la
tendencia a la hemorragia o un riesgo de hemorragia, y en muchos
casos conduce a hemorragias difícilmente controlables. Las
hemorragias de este tipo se pueden detener rápidamente con ayuda
del preparado según la invención.
Por consiguiente, de acuerdo con la invención se
pone a disposición un sistema para el tratamiento de pacientes con
alteraciones de la coagulación sanguínea, que incluye los
siguientes componentes:
- a)
- un preparado farmacéutico que contiene como mínimo 2 factores de coagulación que forman parte de una protrombinasa o pro-protrombinasa y están libres de fosfolípidos, seleccionándose los factores de coagulación entre el grupo formado por los factores II, V, Va, X y Xa, y
- b)
- una proteína con actividad hemostática primaria, en particular vWF.
Según las circunstancias, las terapias con
inhibidores de la coagulación o anticoagulantes sintéticos,
semisintéticos o biológicos, o con inhibidores de la función
trombocítica, pueden tener como efectos secundarios hemorragias
difícilmente controlables. Estas sustancias actúan directa o
indirectamente en el sistema de coagulación y pueden alterar de
forma no deseable el proceso de coagulación natural. Por
consiguiente existe una necesidad de antagonistas para estas
sustancias. En el estado actual de la técnica se conoce la
utilización de un complejo de protrombina o un preparado FEIBA®
para el tratamiento de hemorragias provocadas por una terapia con
anticoagulantes. Véase Irani M. S. y col., The American Journal of
Cardiology, vol. 75, 15 de febrero de 1995, p. 422; Fareed J. y
col., Haemostasis 1991, vol. 21 (supl. 1) p. 64-72;
y Fareed J. y col., Seminars in Thrombosis and Hemostasis 1991,
vol. 17, nº 2, p.137.
De acuerdo con otra forma de realización de la
presente invención, los factores de coagulación arriba mencionados
se utilizan en la producción de un preparado farmacéutico según la
invención para el tratamiento de hemorragias en el marco de una
terapia con anticoagulantes, en particular para la producción de un
preparado farmacéutico como antídoto para un inhibidor de la
coagulación o anticoagulante, o para un inhibidor de la función
trombocítica. En este contexto es esencial evitar el riesgo de
trombosis ligado a la presencia de fosfolípidos. Precisamente los
pacientes sometidos a una terapia con anticoagulantes presentan un
mayor riesgo de trombosis. Sin embargo, de acuerdo con la
invención, se puede prescindir de la utilización de fosfolípidos,
con lo que sorprendentemente el efecto antídoto se vuelve aún más
específico.
La utilización según la invención se refiere
sobre todo a la actividad antagonista de un inhibidor de la
coagulación o anticoagulante que inhibe directa o indirectamente el
factor Xa o la trombina. De acuerdo con la invención,
preferentemente se antagoniza una sustancia seleccionada de entre el
grupo consistente en APAP (clorhidrato-pentahidrato
de ácido
(2S)-2-[4-[[(3S)-1-acetimidil-3-pirrolidinil]oxi]fenil]-3-(7-amidino-2-naftil)propiónico),
derivado benzamidina, hirudina, heparina, análogos de heparina, en
particular pentasacáricos, complejo AT III-heparina,
AT III, antistasina, "Tick-Anticoagulant
Peptide" (péptido anticoagulante de garrapata), factores de
coagulación inactivos, en particular factores de coagulación
inhibidos "active site" (sitio activo), TFPI, ligandos
competitivos con receptores de superficie de membrana de
trombocitos, en particular anticuerpos contra GP IIb/IIIa y sus
análogos producidos genética o sintéticamente, en particular
péptidos, y también anticoagulantes orales. Entre los factores de
coagulación inactivos se cuentan, principalmente, factores de
coagulación sanguínea intrínseca o extrínseca derivados, mutados,
fragmentados, inactivados o inhibidos química o físicamente, que
pueden interaccionar de forma competitiva con el factor nativo.
La antagonización de un inhibidor de la función
trombocítica está indicada sobre todo en el caso de la ticlopidina
o el ácido acetilsalicílico.
Las hemorragias agudas son muy críticas sobre
todo en el área del cerebro. Por ello existe la necesidad de
impedir o tratar las hemorragias intracraneales, por ejemplo la
hemorragia intraventricular (IVH). Principalmente los pacientes con
una lesión de los vasos sanguíneos o con una alteración de la
formación de trombina presentan un mayor riesgo de hemorragias
intracraneales. El preparado según la invención también es
especialmente adecuado para esta indicación, permitiendo sobre todo
un mejor tratamiento de partos prematuros.
En el marco de la utilización según la invención,
para cada una de las indicaciones arriba mencionadas se pone a
disposición el sistema correspondiente que contiene como uno de sus
componentes el preparado farmacéutico según la invención. También
puede contener sustancias que refuerzan el efecto hemostático, por
ejemplo una proteína con actividad hemostática primaria, en
particular vWF. Evidentemente, un sistema para la terapia con
anticoagulantes contiene además el anticoagulante correspondiente y
el preparado farmacéutico según la invención como antídoto.
La invención se explica más detalladamente
mediante los siguientes ejemplos y los dibujos correspondientes,
sin estar por ello limitada a los mismos.
Figura 1 y Figura 2: muestran posibles formas de
administración de los preparados según la invención;
Figura 3: muestra el diagrama de flujo de una
forma de realización del procedimiento de producción;
Figura 4: muestra la determinación del complejo
de protrombinasa parcial;
Figura 5: muestra el análisis espectroscópico de
un ejemplo de los preparados según la invención (A) en comparación
con preparados patrón [complejo de protrombina activado (B),
complejo de protrombina (C)];
Figura 6: muestra el efecto in vivo de un
preparado de factor II en conejos con desarrollo de inhibidores del
factor VIII;
Figura 7 y Figura 8: muestran el efecto in
vivo de los preparados según la invención en el modelo factor
von Willebrand/inhibidor del factor VIII.
Se elaboró un preparado de factores de complejo
de protrombina liofilizado que contenía los factores II, IX, X y
proteína C y proteína S de acuerdo con el método de Brummelhuis,
H.G.J., Preparation of the Prothrombincomplex. En: Methods of
Plasma Protein Fractionation, Curling, J. M. ed.,
117-128, Academic Press, New York, (1980), y se
sometió a tratamiento térmico para la inactivación viral de acuerdo
con el documento EP 159 311. El liofilizado (1.000 U de factor X/g,
1.200 U de factor II/g) se disolvió en agua destilada, de modo que
contenía 50.000 U de factor X/l, y se ajustó a un pH 7,0. Después
de añadir un 12% v/v de TWEEN 80, la mezcla se agitó durante 1 hora
a temperatura ambiente. A continuación se diluyó 1:5 con un tampón
tris-HCl 20 mM, pH 7,0, y la fracción de proteína
de complejo de protrombina se adsorbió en fosfato de calcio
[Ca_{3}(PO_{4})_{2}] en una concentración de 30
g Ca_{3}(PO_{4})_{2} por l de solución de
complejo de protrombina mediante una hora de agitación a temperatura
ambiente. A continuación, la fase sólida se separó por
centrifugación, 20 minutos a 5.000 r.p.m., y el precipitado se lavó
dos veces con tampón tris-HCl 20 mM, pH 7,0, que
contenía un 10% de sulfato de amonio, mediante resuspensión y nueva
centrifugación. Luego se llevó a cabo de igual manera un tercer
lavado con tampón tris-HCl 20 mM, pH 7,0, que
contenía NaCl 150 mM. La elución de la fracción de complejo de
protrombina se realizó con una solución de fosfato de sodio 1 M, pH
7,0. Veinticinco ml de esta solución por g de fosfato de calcio se
agitaron durante 1 hora a temperatura ambiente y a continuación el
precipitado residual se separó por centrifugación tal como se
describe más arriba. Acto seguido, el sobrenadante se precipitó con
una disolución de sulfato de amonio, 366 g de sulfato de amonio por
l, durante 15 horas a 4ºC con agitación. El precipitado, que
contenía la fracción de complejo de protrombina, se separó por
centrifugación tal como se describe más arriba. El precipitado se
recogió en un tampón de citrato trisódico dihidratado 25 mM, que
contenía NaCl 100 mM, clorhidrato de benzamidina 1 mM, pH 6,0, y se
retamponó en una columna rellena de Sephadex® G-25,
a 4ºC con un flujo lineal de 1 cm/min contra tampón de citrato
trisódico dihidratado 25 mM, que contenía NaCl 100 mM, clorhidrato
de benzamidina 1 mM, pH 6,0, para separar el sulfato de amonio. En
este proceso se midió la absorción UV a 280 nm y la conductividad
eléctrica en la corriente del eluato. Las fracciones que contenían
proteína se reunieron y a continuación se sometieron a una
cromatografía de intercambio iónico a través de
DEAE-Sepharose FF®, firma Pharmacia. Las fracciones
se colocaron en una columna (diámetro interior:altura de lecho de
gel = 1:1,3) con un volumen de gel de 8,2 l, 0,55 g proteína/l de
gel, con un flujo lineal de 0,36 cm/min. La cromatografía tuvo
lugar a 22ºC. Antes de colocar las proteínas, la columna había sido
equilibrada con un tampón de citrato trisódico dihidratado 25 mM,
que contenía NaCl 100 mM, clorhidrato de benzamidina 1 mM, pH 6,0.
La elución de las fracciones de proteína se llevó a cabo en varias
etapas con un tampón 1 (citrato trisódico dihidratado 25 mM,
clorhidrato de benzamidina 1 mM, NaCl 245 mM, pH 6,0), un tampón 2
(citrato trisódico dihidratado 25 mM, clorhidrato de benzamidina 1
mM, NaCl 270 mM, pH 6,0) y un tampón 3 (citrato trisódico
dihidratado 25 mM, clorhidrato de benzamidina 1 mM, NaCl 400 mM, pH
6,0). La elución con el tampón 1 se llevó a cabo con 2,4 volúmenes
de columna, separándose en el proceso la proteína inerte. La elución
con el tampón 2 se llevó a cabo con 5,6 volúmenes de columna. En
este caso se recogieron fracciones en las que se analizó el
contenido de factor II, factor X, proteína C y factor IX. Las
fracciones que contenían el factor X y estaban libres de factor II,
IX y proteína C se reunieron. Mediante la elución con el tampón 3
(1,9 volúmenes de columna) se desorbió factor II, y de nuevo se
recogieron fracciones en las que se analizó el contenido de factor
X, factor IX y factor II. Las fracciones que contenían el factor II
se reunieron. Tanto el agrupamiento que contenía el factor II como
el agrupamiento que contenía el factor X pudieron someterse, en
caso dado, a un tratamiento adicional para la inactivación de
impurezas patógenas mediante adición de KSCN 1M e incubación a 22ºC
durante
varias horas.
varias horas.
El agrupamiento de factor II obtenido en el
Ejemplo 1 se ajustó a NaCl 1,8 M mediante la adición de cloruro de
sodio y el valor pH se corrigió a 7,0. A continuación, esta
solución se adsorbió mediante interacción hidrófoba en un gel,
Phenylsepharose High Performance®, firma Pharmacia, uniéndose 3 g
de proteína/l de gel. La fracción de proteína se adsorbió en una
columna con una relación diámetro interior:altura de lecho de gel =
1:1,9, con un flujo lineal de 0,25 cm/min, y a continuación se
liberó de proteína inerte mediante lavado con un tampón
(tris-HCl 25 mM, NaCl 3 M, pH 7,4). El factor II de
la columna se eluyó mediante elución por gradiente con 11,5
volúmenes de columna de NaCl 3 M - 0,9 M con recogida simultánea de
fracciones. Se reunieron las fracciones que presentaban actividad
de factor II pero que estaban libres de factor X y factor IX. A
continuación, las fracciones de factor II reunidas se concentraron a
una décima parte mediante ultrafiltración/diafiltración a través de
una membrana de ultrafiltración con un
"cut-off" de 30 kD y se retamponaron contra un
tampón que contenía 4 g de citrato trisódico dihidratado/1,8 g de
NaCl/l, pH 7,0. El preparado de factor II producido de este modo
presentaba una actividad específica de 6,9 U/mg de proteína. La
actividad de factor II se determinó con un método de una única
etapa, basado en el tiempo de tromboplastina, utilizando un plasma
deficiente en factor II contra el patrón de factor II internacional
con la combinación de reactivos IMMUNO, Viena. Otros factores de la
coagulación sólo eran detectables en trazas o no eran detectables
en absoluto en los análisis de coagulación (factor VII < 0,00002
U/U de factor II, factor IX 0,0002 U/U de factor II, factor X 0,004
U/U de factor II, proteína C 0,003 U/U de factor II y factor VIII
< 0,0002 U/U de factor II).
Como procedimiento alternativo de producción de
un factor II altamente purificado también se utilizó un
procedimiento en el que, a partir de un preparado de factores de
complejo de protrombina liofilizado (véase el Ejemplo 1), primero se
separó el factor IX mediante cromatografía hidrófoba, a
continuación se aisló el factor II y luego éste se sometió a alta
purificación mediante cromatografía en hidroxilapatita.
El preparado de factores de complejo de
protrombina se disolvió como en el Ejemplo 1 y se incubó con
detergentes durante 1 h a temperatura ambiente. A continuación se
aisló una fracción que contenía los factores II, IX y X mediante
cromatografía de intercambio iónico en
DEAE-Sepharose FF®, firma Pharmacia, como en el
Ejemplo 1. A continuación se separó de ésta la fracción que
contenía el factor IX mediante interacción con
Butyl-Toyopearl®, firma Toso Haas. Acto seguido, el
sobrenadante de adsorción se purificó en
Phenyl-Sepharose High Performance®, firma Pharmacia,
mediante otra cromatografía de interacción hidrófoba, con lo que se
pudieron adsorber aproximadamente 4 g de proteína/l de gel. La
fracción de proteína se adsorbió en una columna con una relación
diámetro interior:altura de lecho de gel = 1:1,9, con un flujo
lineal de 0,25 cm/min, y a continuación se separó la proteína inerte
mediante lavado con tris-HCl 20 mM, NaCl 3 M, pH
7,4, y finalmente se aisló la fracción que contenía el factor II
mediante elución, que al disminuir la conductividad se desorbió del
gel a NaCl 1,9 M. A continuación, la fracción que contenía el factor
II se adsorbió directamente en
Ceramik-Hydroxylapatit®, firma Biorad. Esto se
realizó en una columna con una relación diámetro interior:altura de
lecho de gel = 1:4,8. La elución se llevó a cabo con un flujo
lineal de 3 cm/min. El factor II se desorbió de la columna mediante
elución con un gradiente salino. Las fracciones que contenían el
factor II se reunieron y se concentraron mediante
ultrafiltración/diafiltración a través de membranas de polisulfona
con un "cut-off" de 30 kD, hasta que la
concentración de factor II alcanzó un valor de 50 - 100 U/ml. El
preparado de factor II así producido presentaba una actividad
específica de como mínimo 7 U/mg de proteína. Otros factores de
coagulación, en particular el factor IX y el factor VIII, ya sólo
eran detectables en trazas o no eran detectables en absoluto, como
en el preparado del Ejemplo 2. Mediante la elección de un tampón de
diafiltración adecuado, el preparado de factor II se transformó con
un tampón farmacéuticamente compatible (por ejemplo 4 g de citrato
trisódico dihidratado/1,8 g de NaCl/l, pH 7,0).
La fracción de factor X producida como se
describe en el Ejemplo 1 se procesó a continuación tal como se
describe en el documento DE 43 25 872 para obtener factor Xab, y el
preparado de factor Xa altamente purificado así obtenido se
liofilizó en presencia de 1 g/100 ml de albúmina humana. Este
preparado estaba libre de otros factores de coagulación; el factor
Xa obtenido presentaba una actividad específica de 120 U/mg de
proteína antes de la adición de la
albúmina.
albúmina.
El preparado que contenía factor II altamente
purificado descrito en el Ejemplo 3 se liofilizó sin adición de
estabilizadores, manteniéndose después de la liofilización más de
un 80% de su actividad inicial.
Un preparado de factor II producido según el
Ejemplo 3 se introdujo, a una concentración de 100 U/ml, hasta 20
ml, en un frasco de 50 ml y se sometió a congelación ultrarrápida a
-80ºC. A continuación, sobre la solución de factor II congelada se
dosificaron 30 \mul de una solución de un factor Xa altamente
purificado que había sido producida según el documento DE 43 25 852
y presentaba una concentración de 500 U/ml. Mediante la congelación
inmediata del pequeño volumen se evitó que la fase de factor II y
la fase de factor Xa se mezclaran. A continuación se liofilizó. Para
preparar la solución de infusión, el liofilizado se reconstituyó
con 20 ml de agua destilada, se mezcló e inmediatamente se preparó
para la administración.
El factor II altamente purificado, combinado con
el factor Xa y antitrombina III o complejo de antitrombina
III-heparina, se diluyó en un tampón que contenía 4
g de citrato de trisodio dihidratado/l y 8 g de NaCl/l, pH 7,0,
hasta la concentración de empleo. Estas soluciones se liofilizaron,
manteniéndose una actividad de como mínimo un 80% de los
componentes correspondientes.
La formación de un complejo de factor II y factor
Xa en la "protrombinasa parcial" se demostró mediante el
siguiente experimento:
57 U del factor II del Ejemplo 3 y 1,2 U del
factor Xa del Ejemplo 4 se disolvieron en tampón
tris-HCl 20 mM, que contenía NaCl 150 mM, pH 7,4, y
se incubó durante 15 minutos a temperatura ambiente para formar el
complejo. A continuación se cromatografió una parte alícuota de la
solución mediante cromatografía de filtración en gel a través de
Superose 12 (HR10/30) (Pharmacia) con un flujo de 0,25 ml/min. El
volumen de aplicación fue de 200 \mul. El paso por la columna se
midió mediante espectrofotometría UV a 280 nm y se recogió en
fracciones de 0,5 ml. A continuación se midió cuantitativamente el
factor Xa de las fracciones, que había sido determinado con el
método descrito en el documento DE 43 25 872 en un ensayo
fotométrico con sustrato cromógeno. También se determinó la
actividad del factor II en las fracciones individuales como en el
Ejemplo 2. El resultado se muestra en la Figura 4. El factor Xa
[Figura 4: (-\blacksquare-) act. Xa (FII/Xa)] y el factor II
[Figura 4: (-\medbullet-) act. II x 10 (FII/Xa)] se eluyeron
junto con la fracción de proteína [Figura 4: ____A280 nm
(FII/Xa)]. Después se aplicó sólo el factor Xa en la columna bajo
las mismas condiciones, se determinó el perfil de elución tras el
paso por el gel midiendo la absorción UV a 280 nm [Figura
4:\cdot\cdot\cdot\cdot\cdot\cdot\cdot\cdot\cdot\cdot
A280 nm (FXa)] y se determinó la actividad de factor Xa [Figura 4:
(-\ding{115}-) act. Xa x 10 (FXa)] en las fracciones. El pico de
proteína correspondiente al factor Xa era claramente inferior al
factor Xa en el complejo con factor II. Mediante reducción del
tiempo de retención del factor Xa en el complejo en la columna y
relacionando con ello el desplazamiento a una masa molar
aparentemente superior, se pudo demostrar la formación de complejo
de factor II y factor Xa (protrombinasa parcial).
Para simplificar la utilización del sistema de
varios componentes, como por ejemplo mezclas de factor II y factor
Xa, o factor II, factor Xa y antitrombina III, como dispositivo de
administración se puede utilizar un cuerpo de jeringa doble de
cámara doble, tal como se describe en AT 382 783. En caso contrario,
para utilizar clínicamente sistemas de varios componentes
liofilizados habría que reconstituir cada uno de ellos y mezclarlos
entre sí en una proporción definida antes de poder administrárselos
al paciente. La carga de los liofilizados correspondientes en un
sistema de jeringa de cámara doble permite una dosificación exacta
de una actividad predeterminada del preparado para el tratamiento
de la hemofilia que desarrolla inhibidores, por ejemplo en unidades
FEIBA convencionales que se pueden determinar de acuerdo con AT 350
726. Utilización un sistema de este tipo, la mezcla activa se
prepara in situ durante la inyección. En una forma de
realización, en cada uno de los dos cuerpos de jeringa de cámara
doble se encuentra un liofilizado de los principios activos, factor
II y factor Xa, respectivamente, que al adicionar el disolvente,
agua destilada, se disuelven inmediatamente a causa de la gran
solubilidad de las proteínas altamente purificadas y, acto seguido,
al continuar apretando el émbolo de la jeringa, después de
mezclarse en la cabeza de mezcla se administran por infusión al
paciente (véase la Figura 1).
Gracias a la alta estabilidad del factor II en
solución, ésta también es adecuada como disolvente para el factor
Xa en la forma de administración de una jeringa de cámara doble.
Una solución de factor II altamente purificado, producido por
ejemplo según el Ejemplo 2, en un tampón citrato fisiológicamente
compatible (4 g de citrato trisódico dihidratado/l, 8 g de NaCl/l,
pH 7,0) en una concentración de 100 U de factor II/ml se mezcla con
antitrombina III, Immuno Wien (1 mU de antitrombina III/U de factor
II). Esta solución se utiliza en una jeringa de cámara doble (véase
la Figura 2) como disolvente para el polvo liofilizado de un factor
Xa altamente purificado.
El factor II se purificó tal como se describe en
el Ejemplo 2 y se almacenó en forma de solución con una
concentración de 60 U/ml en un tampón que contenía 4 g/l de citrato
trisódico dihidratado, 8 g/l de NaCl, pH 7,0, a 5ºC, a 22ºC, a 37ºC
y a 50ºC. En el caso de temperaturas de almacenamiento de 5ºC y 22ºC
se tomaron muestras cada 24 h. En el caso del almacenamiento a 37ºC
y a 50ºC, las tomas de muestras a lo largo de 24 h se realizaron en
los tiempos 1 h, 2 h, 4 h, 8 h y 24 h. En cada una de las muestras
se determinó actividad de factor II.
En el caso del almacenamiento a 5ºC, 86 días
después del comienzo del almacenamiento todavía se pudo detectar más
de un 80% de la actividad inicial. A 22ºC se detectó más de un 80%
de la actividad inicial a lo largo de 14 días. A 37ºC se pudo
detectar un 95% de la actividad inicial 24 h después del comienzo
del almacenamiento. Incluso a 50ºC se detectó un 94% de la
actividad original 8 h después de ser almacenados.
Se analizaron en un ensayo in vitro las
propiedades protrombóticas de los preparados según el Ejemplo 5
(factor II) y del Ejemplo 6 (complejo de factor II/Xa), en
particular referentes al sistema de coagulación extrínseco, y se
compararon con dos concentrados de complejo de protrombina
comerciales. Antes de su utilización en el ensayo, la heparina
presente en el concentrado de complejo de protrombina se neutralizó
con sulfato de protamina según la concentración, para mostrar
componentes trombogénicos que quedarían enmascarados por la
heparina.
La carga a analizar consistía en 250 \mul de
Thrombotest® (Nycomed Pharma AS, Oslo, Noruega), un preparado que
contenía tromboplastina de cerebro bovino y plasma bovino
adsorbido, que se preincubó durante 3 min a 37ºC. A continuación se
añadieron 50 \mul de una muestra y se determinó el tiempo de
coagulación con un coagulómetro de bola (KC4, Amelung). Las
tromboplastinas bovinas se consideran especialmente sensibles a
factores de coagulación activados. Igualmente, el sistema de ensayo
puede proporcionar información sobre la trombogenia in vitro
de los preparados analizados. En esta carga de ensayo se utilizó
plasma normal humano no diluido como control. Éste muestra un
tiempo de coagulación de 74 segundos. Los dos preparados según la
invención analizados, utilizados sin diluir, mostraron tiempos de
coagulación de más de 100 segundos, correspondiendo su concentración
a una concentración de utilización posible de 30 U de factor II/ml.
Un concentrado de complejo de protrombina comercial, también
disuelto en la concentración de utilización y diluido a 30 U/ml tuvo
que ser diluido adicionalmente con tampón 1:32 para alcanzar el
tiempo de coagulación del plasma normal (74 segundos). Otro
concentrado de complejo de protrombina activado comercial tuvo que
ser diluido con tampón hasta 1:216 para alcanzar el tiempo de
coagulación de un plasma normal de 74 segundos. A continuación, los
preparados según la invención disueltos se almacenaron hasta 4 h a
temperatura ambiente y una vez a la hora se tomaron muestras y se
determinó de nuevo el tiempo de coagulación con Thrombotest®. En
este proceso no se produjo ningún cambio, es decir, después de 4 h
las muestras utilizadas sin diluir seguían presentando tiempos de
coagulación de más de 100 segundos. De estos ensayos se desprende
que los preparados según la invención presentan un potencial
trombogénico claramente inferior al de los concentrados de complejo
de protrombina comerciales.
En primer lugar se produjo y liofilizó un
preparado que contenía factor II altamente purificado como se
describe en el Ejemplo 5. El liofilizado estaba ajustado de tal
modo que la actividad por volumen después de la reconstitución con
agua destilada era de 50 U/ml. Ésta era una concentración de
utilización típica. No obstante, gracias a la alta pureza del
preparado, también se pudieron lograr concentraciones volumétricas
de 100 y más unidades de factor II por ml. Se determinó el tiempo
de disolución, definido como el tiempo transcurrido desde la
adición del disolvente (agua destilada) hasta la disolución
completa del polvo. En comparación con ello, los liofilizados de dos
preparados comerciales (complejo de protrombina y complejo de
protrombina activado) se reconstituyeron, en cada caso, a las
concentraciones de utilización mediante adición de agua destilada
según las indicaciones del fabricante, y también se determinó el
tiempo de disolución. La siguiente tabla muestra el tiempo de
disolución de los preparados
analizados:
analizados:
Preparado según el Ejemplo 5 | APCC^{1} | PCC^{2} | |
Tiempo de disolución (s) | < 30 | 240 | 300 |
^{1}APCC = Concentrado de complejo de protrombina activado | |||
^{2}PCC = Concentrado de complejo de protrombina. |
Una vez llevada a cabo la disolución de los
preparados correspondientes se midió en cada caso un espectro UV/VIS
entre 280 y 750 nm contra un tampón citrato-sal
común. Los espectros se muestran en las Figuras 5a, b y c (a:
preparado según el Ejemplo 5, b: complejo de protrombina activado,
c: complejo de protrombina). La comparación de los espectros
mostraba que el preparado según el Ejemplo 5 presentaba una
absorción de la luz en la región visible hasta 700 nm claramente
inferior a la de los preparados comparativos. Por consiguiente, el
preparado según el Ejemplo 5 se caracterizaba por una
extraordinaria solubilidad y en estado disuelto se encontraba en
forma de una solución transparente incolora, como es característico
en los preparados farmacéuticos mejorados.
Un plasma con inhibidores de factor VIII de alta
concentración (55 BU/ml) se sometió a enfriamiento previo en un baño
helado y se incubó a 37ºC durante 1 minuto con reactivo PTT
(IMMUNO, Viena) y la muestra a ensayar, ambos también sometidos a
enfriamiento previo en baño helado, en una proporción de 1 + 1 + 1.
A continuación se añadió 1 parte de una solución de CaCl_{2} 0,05
M y se determinó el tiempo de coagulación de la carga de ensayo con
un coagulómetro de bola de la firma Amelung, modelo
KC-4. Los preparados a ensayar se diluyeron
adicionalmente en una proporción 1:10 en un tampón que contenía 7 g
de CaCl/l y 6 g de citrato trisódico dihidratado/l y se utilizaron
en el ensayo a esta concentración. Bajo estas condiciones se ensayó
un factor II altamente purificado, solo o en combinación con factor
Xa altamente purificado, en combinación con antitrombina III y
heparina. La siguiente tabla muestra los tiempos de
coagulación.
Sustancias de ensayo (concentración) | Tiempo de coagulación (segundos) | |||
Factor II | Factor Xa | Antitrombina III | Heparina | |
10 U/ml | - | - | - | 147 |
10 U/ml | 0,1 U/ml | - | - | 63 |
10 U/ml | 0,1 U/ml | 1 U/ml | - | 55 |
10 U/ml | 0,1 U/ml | 1 U/ml | 6 U/ml | 49 |
Como control se determinó el tiempo de
coagulación de la carga de ensayo con tampón cloruro
sódico-citrato trisódico puro. Dicho tiempo de
coagulación fue de 148 segundos. En consecuencia, el tiempo de
coagulación del plasma con inhibidores sólo se pudo reducir
claramente mediante la adición de factor II/Xa con o sin
antitrombina III o heparina. Midiendo un preparado patrón FEIBA
(FEIBA STIM 4, Immuno), que representa el preparado convencional
para el tratamiento de pacientes con desarrollo de inhibidores del
factor VIII, en diferentes concentraciones en la misma carga de
ensayo se pudo determinar que la actividad FEIB del preparado, que
contenía 10 U/ml de factor II y 0,1 U de factor Xa/ml, corresponde
a aproximadamente 35 U de FEIBA/ml.
Para ensayar la eficacia in vivo del
preparado según la invención se utilizó un modelo de conejo con
hemofilia con desarrollo de inhibidores del factor VIII. Unos
conejos de Nueva Zelanda blancos, con un peso de aproximadamente 2
kg, se narcotizaron. Una vez iniciada la narcosis se preparó la
vena femoral derecha en cada caso y se estableció un acceso venoso
permanente. A través de éste se realizó una infusión de 0,5 ml/kg
de peso corporal de un plasma humano con inhibidores del factor
VIII (1.500 BU/ml) a lo largo de 10 minutos. Treinta minutos
después de finalizar la infusión se determinó la característica
hemorrágica utilizando un método modificado de Giles y col., Blood
60: 727-730 (1982). Para ello se rasuró el pelo
alrededor de una uña de la pata trasera del conejo con el fin de
evitar que la sangre que saliera durante la hemorragia posterior
fuera absorbida por el pelo. La piel de la uña se lesionó con un
cortaúñas. Inmediatamente después se dispusieron filtros debajo de
tal modo que la sangre pudiera gotear directamente sobre los
filtros sin ser absorbida por éstos por capilaridad, para evitar
que se destruyeran los coágulos en formación. Las unidades de
filtro se cambiaron cada 2 minutos y la sangre saliente se recogió
en fracciones. La recogida de sangre continuó durante 30 minutos y
después, si la hemorragia no se había detenido, se obliteró la
herida. Para cuantificar la característica hemorrágica, los filtros
se extrajeron, en cada caso, con una disolución de hidróxido
amónico al 0,04% durante 5 h, con lo que se lisaron los eritrocitos
recogidos con la sangre en el filtro. La hemoglobina se extrajo
mediante 10 minutos de tratamiento de ultrasonidos y se determinó
cuantitativamente por fotometría a 416 nm contra una curva patrón.
Ésta se estableció disponiendo con una pipeta entre 10 \mul y 1 ml
de sangre de conejo sobre los filtros, extrayéndolos como se
describe más arriba y determinando la hemoglobina por fotometría a
416 nm. La característica hemorrágica del corte en la uña se
determinó trazando un gráfico de la cantidad de sangre por fracción
de 2 minutos en función del tiempo. Para la evaluación se calculó
la pérdida de sangre acumulada trazando un gráfico del volumen de
las fracciones de sangre individuales en función del tiempo. Como
criterio relevante para la hemorragia se empleó el aumento de la
hemorragia acumulada entre 10 y 20 minutos. Este valor era
independiente de la cantidad de sangre inicial, que variaba de un
conejo a otro en función del corte en la uña. El aumento de la
característica hemorrágica en intervalos de observación de 10 a 20
minutos servía como medida de la intensidad de la hemorragia. Un
aumento igual a cero significaba que la hemorragia se había
detenido. Un aumento > 0 con un coeficiente de correlación >
0,8 indicaba una hemorragia constante. Los conejos sanos
presentaban, bajo las condiciones de ensayo, una intensidad de
hemorragia < 2 \mul de sangre/min. Los conejos con inhibidores
del factor VIII presentaban una intensidad de hemorragia de
aproximadamente 50 \mul de sangre/min (véase la Figura 6). Los
conejos con inhibidores del factor VIII que habían sido tratados con
un preparado de factor II según el Ejemplo 3 en una dosis de 75
U/kg de peso corporal en forma de una infusión a lo largo de 30
minutos, presentaban de promedio (n = 6) una intensidad de
hemorragia de 9,3 \mul/min y, en consecuencia, una reducción
significativa con respecto a los animales con inhibidores
no tratados.
no tratados.
Análogamente al Ejemplo 14 se estableció un
modelo de inhibidor de factor von Willebrand/factor VIII infundiendo
en conejos antiplasma anti-factor von
Willebrand/factor VIII de cabra, que había sido obtenido por
inmunización de cabras con un preparado factor VIII/factor von
Willebrand purificado, en dosis de 1 ml/kg de peso corporal. Los
animales sometidos a este tratamiento previo mostraban un aumento de
la tendencia a la hemorragia (véase la Figura 7). La característica
hemorrágica en estos animales se midió mediante cortes en las uña e
infusión simultánea de la sustancia de ensayo y 30 minutos después
de finalizar la infusión de la sustancia de ensayo. Mediante la
administración de factor II en forma de un bolo de 2,5 ml en una
dosis de 75 U/kg, la intensidad de la hemorragia, inicialmente
incrementada, se pudo reducir de 77 \mul/min a 31 \mul/min
(1^{er} corte de uña) o a 12 \mul/min (2º corte de uña).
Mediante la combinación de factor II (75 U/kg) con un factor Xab
(preparado según el Ejemplo 4) en una dosis de 0,55 U/kg en forma
de un bolo con un volumen de inyección de 2,5 ml, la tendencia a la
hemorragia se pudo reducir del valor inicial a 18 \mul/min en el
1^{er} corte de uña y a 5 \mul/min en el 2º corte de uña. De
este modo, el comportamiento hemorrágico anormalmente incrementado
de los animales con inhibidores se normalizó al nivel de los
animales sanos control (4 \mul/min).
También se examinó en el mismo modelo la
combinación de factor II (75 U/kg), factor Xa (0,55 U/kg) y
antitrombina III, Immuno Wien (75 mU/kg). En el 1^{er} corte de
uña se pudo lograr una reducción a 35 \mul/min y en el 2º corte de
uña una reducción a 7 \mul/min (véase la Figura 8). La adición de
antitrombina III debía evitar la generación de trombina a partir de
protrombina mediante la enzima factor Xa en la solución
administrada.
Los componentes individuales del preparado según
la invención y mezclas de ellos se examinaron en cuanto a su
actividad trombogénica en sangre venosa estasiada de conejos
utilizando el método descrito por Wessler, J. Appl. Phys. 14:
943-946 (1959).
Los conejos se narcotizaron con pentobarbital.
Después se descubrió la vena yugular de los animales y se le
realizaron ligaduras sueltas a una distancia de 1 - 2 cm. Las
sustancias a ensayar se inyectaron en la vena de la oreja opuesta a
la vena yugular descubierta de los animales. La inyección duró 15
segundos. Después de un tiempo de espera de 10 - 15 segundos se
estranguló el tramo de vena. Diez minutos después se extrajo el
trozo de vena y se cortó en una placa petri en tampón citrato, y
los trombos obtenidos se evaluaron mediante una escala del 0 al 4
(véase
la Tabla).
la Tabla).
Grado de trombosis | Evaluación |
Ningún trombo formado | 0 |
Algunos trombos pequeños | 0,5 - 1 |
Algunos trombos de tamaño mediano y muchos trombos pequeños | 2 |
Muchos trombos de tamaño mediano | 3 |
Algunos trombos grandes | 3,5 |
Un trombos coherente | 4 |
Las sustancias se examinaron en seis animales en
cada caso, cada uno de los cuales recibió 75 U de factor II/kg,
0,55 U de factor Xa/kg y 75 mU de antitrombina III/kg,
individualmente o combinados. La siguiente tabla muestra el valor
medio de la calificación Wessler de los seis animales examinados en
cada caso. Como control se utilizó tampón de citrato puro, que
también se empleó como tampón de dilución.
\newpage
Sustancia de ensayo | |||
Factor II | Factor Xa | Antitrombina III | Calificación Wessler |
+ | - | - | 0,17 |
- | + | - | 0,17 |
- | - | + | 0,08 |
+ | + | - | 0,25 |
+ | - | + | 0,08 |
- | + | + | 0,17 |
+ | + | + | 0,17 |
- | - | - | 0,2 |
(Tampón) | (Tampón) | (Tampón) |
Se comprobó que ninguno de los componentes
utilizados, ni individualmente ni combinados, presentaba actividad
trombogénica en el conejo.
Se analizó la eficacia de un preparado que
contenía factor II y factor Xa según el Ejemplo 6, en cada caso, en
6 conejos con hemofilia con desarrollo de inhibidores del factor
VIII inducido (véase Ejemplo 14). La dosis analizada era tal como se
describe en el Ejemplo 15. Como control, los animales fueron
sometidos a una infusión con tampón puro.
En el primer ensayo se llevó a cabo una infusión
de las sustancias de ensayo a lo largo de 30 minutos,
correspondientes a aproximadamente 15 min/kg de peso corporal,
mediante una bomba de infusión automática con una velocidad de
infusión de 1 ml/min. En el segundo ensayo se administró a los
animales la misma dosis, pero en forma de un bolo en un plazo de 30
segundos en un pequeño volumen de inyección de 2,5 ml/kg de peso
corporal. Como en el Ejemplo 14, después se midió la intensidad de
la hemorragia durante la administración de la sustancia y después de
finalizar ésta. Se comprobó que tanto en el caso de una infusión
lenta con un gran volumen de infusión como en el caso de la
inyección rápida de una pequeña dosis volumétrica, pero con dosis
idénticas con respecto al peso corporal, la intensidad de la
hemorragia prolongada patológicamente de 67 \mul/min se pudo
normalizar a aproximadamente 5 \mul/min, lo que correspondía al
comportamiento hemorrágico de los animales comparativos sanos.
Mediante la administración de tampón, igualmente con las dos
modalidades de infusión, no se detectó ninguna variación de la
intensidad de la hemorragia. A pesar de la inyección rápida en forma
de bolo, no se observó ninguna reacción de incompatibilidad en el
caso de la inyección ni en el caso de la infusión lenta. Para
preparados comerciales con una indicación comparable, preparados de
complejo de protrombina (activados), se recomiendan velocidades de
infusión < 0,05 ml/min por kg de peso corporal para evitar
efectos secundarios tromboembólicos. Como demostró el ensayo, el
preparado según la invención, gracias a su alta pureza, se pudo
administrar sin efectos secundarios a una velocidad de 5 ml/min por
kg de peso corporal, es decir, a una velocidad de inyección 100
veces
mayor.
mayor.
Como modelo de trombocitopatía se utilizan ratas
Fawn-Hooded, según se describe en T.B. Tschopp y
M.B. Zucker (Hereditary Defect in Platelet Function in Rats, Blood
1972; 40: 217-226). Esta cepa de ratas, que fue
caracterizada adicionalmente por S.L. Raymon y W.J. Dodds
(Characterization of the Fawn-Hooded Rats as a
Model for Hemostatic Studies, Thrombos Diathes haemorrh. 1975; 33:
361-369), se caracteriza por un tiempo de
hemorragia anormalmente alto y una escasa agregación plaquetaria,
mientras que el tiempo de protrombina, el tiempo de tromboplastina
parcial, el nivel de factor VIII y fibrinógeno en el plasma y la
cantidad de plaquetas se encuentran en el mismo rango que en las
ratas sanas. La trombopatía sufrida por la rata
Fawn-Hooded está relacionada con una liberación
reducida de ATP y ADP inducida por trombina y también con una
liberación reducida de serotonina, por lo que se caracteriza como
deficiencia "storage-pool" (deficiencia de
depósito de almacenamiento), reflejo de la deficiencia
"storage-pool" en humanos.
Las ratas Fawn-Hooded se
narcotizan con cetamina-xilazina (100 mg/kg + 5
mg/kg) i.m. En una vena yugular se introduce un catéter a través del
cual se introducen por infusión las sustancias a ensayar. A
continuación se determina el tiempo de hemorragia, para lo cual se
utilizan agujas desechables R Simplate (Organon, Technica). A una
distancia de aproximadamente 1,5 cm de la base de la cola se
practica primero un corte longitudinal en la parte dorsal y después
otro en la parte ventral, y se mide el tiempo de hemorragia en cada
caso. El valor medio de las dos medidas individuales se considera
el tiempo de hemorragia. Después se administra la sustancia de
ensayo (tampón, factor II según el Ejemplo 2, factor Xa según el
Ejemplo 4 y protrombinasa parcial según el Ejemplo 6); 30 minutos
después se determina de nuevo el tiempo de hemorragia. Como control
se utilizan ratas Sprague-Dawley (Charles River)
sanas.
El análisis se lleva a cabo en grupos de 10
animales cada uno y el complejo de la protrombinasa parcial se
administra en 2 dosis, 75 U/kg de peso corporal de protrombina y
0,55 U/kg de peso corporal de factor Xa, y también 150 U/kg de peso
corporal de protrombina y 1,1 U/kg de peso corporal de factor Xa.
Como control se administran los componentes individuales y el
tampón. La siguiente tabla muestra los tiempos de hemorragia medios
medidos en los grupos de ensayo por separado. Las ratas sanas
presentan, bajo las mismas condiciones de ensayo, un tiempo de
hemorragia de 168 \pm 5 segundos, mientras que las ratas con una
trombopatía presentan un mayor tiempo de hemorragia de 335 \pm 10
segundos. Este tiempo de hemorragia anormalmente alto se puede
reducir a aproximadamente 270 segundos mediante la administración
de la protrombinasa parcial.
Tiempo de hemorragia (seg) | Factor II (U/kg) | |||
Valor medio de 10 animales | 0 | 75 | 150 | |
0 | 335 \pm 10 | 296 \pm 13^{ns} | 307 \pm 11^{ns} | |
FXa (U/kg) | 0,55 | n.d. | 273 \pm 13* | n.d. |
1,1 | 320 \pm 13^{ns} | n.d. | 268 \pm 11*** |
Los datos se indican como valores medios \pm
desviación estándar. Los valores medios de los grupos se compararon
según el test T de Student.
- n.d.
- No determinado.
- ns
- Diferencia no significativa con respecto al grupo de control (0 U/kg FII y 0 U/kg FXa)
- *
- Diferencia significativa con respecto al grupo de control (0 U/kg FII y 0 U/kg FXa) con p \geq 95%.
- ***
- Diferencia significativa con respecto al grupo de control (0 U/kg FII y 0 U/kg FXa) con p \geq 99,9%.
Un perro con deficiencia congénita de factor von
Willebrand con un nivel de actividad de factor von Willebrand y un
nivel antigénico en plasma no mensurables y con una concentración
de factor VIII en plasma reducida un 50% se trata con una
protrombinasa parcial a una dosis de 100 U/kg de peso corporal.
Para ello, el perro se narcotiza y a continuación se administra la
protrombinasa parcial producida según el Ejemplo 6 en forma de un
bolo y por vía intravenosa. Inmediatamente después de la
administración de la sustancia de ensayo y también 15 minutos, 30
minutos, 1 h, 2 h, 3 h, 24 h y 48 h después de la infusión se toman
muestras de sangre, a partir de éstas de produce plasma y se
determina la concentración de protrombina, trombina y factor VIII
en las muestras de plasma.
Antes de la administración de la protrombinasa
parcial y también 3 y 24 h después de la inyección se determina la
característica hemorrágica en piel de la uña. Para ello se aplica
una modificación del método de A.R. Giles, S. Tinlin y R. Greenwood,
A Canine Model of Hemophilic (Factor VIII:C Deficiency) Bleeding,
Blood 1982; 60. El pelo alrededor de la uña se rasura con el fin de
evitar que la sangre que salga durante la hemorragia posterior sea
absorbida por éste. La piel de uña se lesiona con un cortauñas.
Inmediatamente después se colocan filtros (Pipetman
P5000-Schutzfilter, Gilson) debajo de la herida de
tal modo que la sangre pueda gotear directamente sobre ellos sin
ser absorbida por éstos por capilaridad, para evitar que se
destruyan los coágulos en formación. Las unidades de filtro se
cambian cada 2 minutos y la sangre saliente se recoge en
fracciones. La recogida de sangre continúa durante 30 minutos.
Después, si la hemorragia no se ha detenido, se oblitera la herida.
Se pueden utilizar uñas diferentes de un mismo animal.
La calificación de la característica hemorrágica
se realiza por extracción de la sangre recogida en fracciones sobre
los filtros, en cada caso, con 5 ml de una disolución de hidróxido
amónico al 0,04% a lo largo de 5 horas. En este proceso se lisan
los eritrocitos recogidos en el filtro con sangre. La hemoglobina se
extrae con 10 minutos de tratamiento ultrasónico (Sonorex RK 100,
Bandelin electronic, Berlín) y se determina cuantitativamente por
fotometría a 416 nm contra una curva patrón. La curva patrón se
puede determinar colocando con una pipeta volúmenes de sangre de
perro, entre 10 \mul y 1 ml, sobre los filtros, extrayéndolos tal
como se describe más arriba y determinando la hemoglobina por
fotometría a 416 nm. De igual forma se pueden establecer curvas
patrón lineales que posibilitan una conversión directa de la
concentración de hemoglobina a cantidad de sangre por filtro. La
característica hemorrágica del corte en la uña se determina
trazando un gráfico de la cantidad de sangre por fracción de 2
minutos en función del tiempo. Para la evaluación de la
característica hemorrágica se calcula la pérdida de sangre
acumulada trazando un gráfico de las fracciones de sangre
individuales aditivamente en función del tiempo. Como criterio
relevante de hemorragia se emplea el aumento de la hemorragia
acumulada entre 10 y 20 minutos. Este valor es independiente de la
cantidad de sangre inicial, que puede variar debido a las técnicas
de corte de uña difícilmente normalizables. El aumento de la
característica hemorrágica en el intervalo de observación de 10 - 20
minutos sirve como medida de la intensidad de la hemorragia y se
indica en ml de sangre/min. Un aumento igual a cero, correspondiente
a 0 ml/min, significa que la hemorragia se ha detenido; un aumento
mayor de cero con un coeficiente de correlación > 0,8 significa
una hemorragia constante. Los perros normales examinados bajo estas
condiciones no muestran ninguna hemorragia en el período de
observación, es decir, la hemorragia ya se ha detenido previamente
(intensidad de hemorragia:
0,0 ml/min).
0,0 ml/min).
Antes de la administración de la protrombinasa
parcial, la intensidad de hemorragia era de 1,05 ml/min. Después de
3 h se había reducido a 0,35 ml/min e incluso después de 24 h
seguía en 0,47 ml/min.
El nivel de factor VIII en plasma se mantuvo
constante durante todo el período de observación. El antígeno de
factor von Willebrand permaneció por debajo del límite de
determinación. Antes de la administración de la sustancia, el nivel
de protrombina estaba en 0,7 U/ml; después de la inyección de la
protrombinasa parcial aumentó a 2,4 U/ml y con una vida media de
aproximadamente 24 h fue eliminada de la circulación. Una hora
después de la administración de la sustancia de ensayo se pudo
determinar una generación significativa de trombina con un sustrato
cromógeno para trombina Th1 (Immuno). El perro toleró la inyección
de protrombinasa parcial sin efectos
secundarios.
secundarios.
Análogamente al Ejemplo 19, el perro fue tratado
con una protrombinasa parcial, con una dosificación de 100 U/kg de
peso corporal, y un factor von Willebrand purificado con una
dosificación de 60 U de RCoF/kg de peso corporal. Mediante la
administración de esta combinación, después de 24 h se normalizó por
completo el comportamiento hemorrágico anormalmente incrementado
del perro con deficiencias en factor von Willebrand, siendo
comparables los parámetros de plasma en cuanto a protrombina y
trombina a los del Ejemplo 19. Además se produjo un aumento del
factor VIII endógeno a aproximadamente un 200% del valor inicial,
que se mantuvo constante durante un período de más de 48 h y a
continuación retrocedió al valor inicial a lo largo de un período
de aproximadamente 120 h. El factor von Willebrand se eliminó con
una vida media de 20 h. Ya se sabía por la literatura (L. Drouet,
J. Roussi, M. Bonneau, G. A. Pignaud, P. L. Turecek, F. Dorner, U.
Schlokat, F.G. Falkner, B. Fischer, A. Mitterer y H.P. Schwarz, The
effect of recombinant human von Willebrand Factor in pigs with
severe von Willebrand Disease. Blood 1995; 86:
612a-AbsNo2435, (abs)) que la sola administración
de factor von Willebrand únicamente conduce a una normalización
parcial del comportamiento hemorrágico.
Una protrombinasa parcial en una composición de
57 U de factor II y 1,2 U de factor Xa se disolvió en tampón
tris-HCl 20 mM, que contenía 150 mM NaCl, pH 7,4, y
se incubó durante 15 minutos a temperatura ambiente para formar el
complejo. A continuación se tomó una parte alícuota de 50 \mul y
se incubó con 50 \mul de un tampón de
tris-imidazol, pH 8,4, durante 90 segundos a 37ºC.
Acto seguido se mezcló con 100 \mul de una solución del sustrato
cromógeno, hidroacetato de
metoxicarbonil-D-ciclohexil-alanil-glicil-L-arginina-p-nitroanilida,
de modo que la concentración del sustrato cromógeno era de 1
mmol/l. A continuación, se determinó fotométricamente a 405 nm la
cinética de la disociación del sustrato cromógeno, durante 3
minutos a 37ºC. El sustrato cromógeno, hidrolizado tanto por la
trombina como por el factor Xa, presentaba, durante la incubación
con protrombinasa parcial, un \DeltaOD/min de 0,084. Como
comparación, en este ensayo se utilizó factor Xa en la misma
concentración pero sin protrombina, y se observó una tasa de
conversión del sustrato cromógeno de 0,064 \DeltaOD/min. A la
protrombinasa parcial se le añadió hirudina recombinante
(Rhein-Biotech) en una concentración de 0,0025 U/ml
y se examinó igualmente la tasa de conversión del sustrato
cromógeno. Se comprobó que después de terminar la conversión del
sustrato de factor Xa puro (0,064 \DeltaOD/min) no se podía medir
ninguna conversión adicional de sustrato, lo que era atribuible a
una neutralización completa de la hirudina.
Además del inhibidor de trombina efectivo y
específico, la hirudina, también se añadió después una concentración
de 50 \mug/ml de inhibidor de factor Xa selectivo, péptido
anticoagulante de garrapata recombinante, un equivalente
recombinante del inhibidor de serina-proteasa de
Ornithodoros moubata, cuyo efecto anticoagulante in
vivo había sido descrito por G.P. Vlasuk, D. Ramjit, T. Fujita
y col. en Comparison of the In Vivo Anticoagulant Properties
of Standard Heparin and the Highly Selective Factor Xa Inhibitors
Antistasin and Tick Anticoagulant Peptide (TAP) in a Rabbit Model of
Venous Thrombosis. Thrombos Haemostas 1991; 65:
25W-262. Treinta minutos después de la adición del
péptido anticoagulante de garrapata recombinante ya no se pudo medir
ninguna actividad enzimática con el sustrato cromógeno. El ensayo
muestra que la protrombinasa parcial es un antagonista eficaz de
los anticoagulantes peptídicos, hirudina y péptido anticoagulante
de garrapata.
Claims (48)
1. Preparado farmacéutico de factores de la
coagulación para el tratamiento de alteraciones de la coagulación
sanguínea, que contiene como mínimo 2 factores de coagulación
individuales altamente purificados que forman parte de una
protrombinasa o pro-protrombinasa y están libres de
fosfolípidos, seleccionándose los factores de la coagulación de
entre el grupo consistente en factores II, V, Va, X y Xa.
2. Preparado según la reivindicación 1,
caracterizado porque como mínimo uno de los factores está
activado.
3. Preparado según la reivindicación 1 ó 2,
caracterizado porque consiste esencialmente en los factores
II y V o Va.
4. Preparado según la reivindicación 1 ó 2,
caracterizado porque consiste esencialmente en los factores X
y V o Va.
5. Preparado según la reivindicación 1 ó 2,
caracterizado porque consiste esencialmente en los factores
II y X o Xa, en caso dado en combinación con factor V o Va.
6. Preparado según una de las reivindicaciones 1
a 5, caracterizado porque los factores de la coagulación se
encuentran en forma de un complejo.
7. Preparado según una de las reivindicaciones 1
a 6, caracterizado porque contiene iones magnesio.
8. Preparado según una de las reivindicaciones 1
a 7, caracterizado porque no contiene ningún ión calcio
libre.
9. Preparado según la reivindicación 8,
caracterizado porque contiene quelante para la formación de
complejos de iones calcio libres.
10. Preparado según una de las reivindicaciones
1, 2 y 5 a 9, caracterizado porque contiene protrombina y
factor Xa purificado como componentes activos y está libre de
fosfolípidos.
11. Preparado según la reivindicación 10,
caracterizado porque esencialmente consiste en protrombina y
factor Xa.
12. Preparado según la reivindicación 10 u 11,
caracterizado porque con una dosis de como mínimo 150 U de
protrombina/kg se está libre de efectos secundarios
tromboembólicos, expresado mediante calificación en el modelo de
trombosis Wessler de como máximo 3 puntos.
13. Preparado según la reivindicación 10 a 12,
caracterizado porque contiene protrombina con una actividad
específica de como mínimo 5 U/mg de proteína.
14. Preparado según una de las reivindicaciones
10 a 13, caracterizado porque contiene factor Xa con una
actividad específica de como mínimo 100 U/mg de proteína.
15. Preparado según una de las reivindicaciones
10 a 14, caracterizado porque contiene el factor Xa
preponderantemente en forma de factor Xa\beta.
16. Preparado según una de las reivindicaciones
10 a 15, caracterizado porque la protrombina y el factor Xa
se encuentran en forma de un complejo.
17. Preparado según una de las reivindicaciones 1
a 16, caracterizado porque además contiene antitrombina III
en cantidades estabilizadoras, dado el caso junto con heparina.
18. Preparado según una de las reivindicaciones
10 a 17, caracterizado porque contiene menos de 0,1 U de
factor VIII:C o factor VIII:Ag/U de protrombina.
19. Preparado según una de las reivindicaciones
10 a 18, caracterizado porque contiene menos de 0,1 U de
factor IX/U de protrombina.
20. Preparado según una de las reivindicaciones
10 a 19, caracterizado porque contiene menos de 0,1 U de
factor X/U de protrombina.
21. Preparado según una de las reivindicaciones
10 a 20, caracterizado porque contiene menos de 0,01 mg de
fosfolípidos/U de protrombina.
22. Preparado según una de las reivindicaciones
10 a 21 en una forma de administración, con una concentración que
posibilita una dosis de como mínimo 50 U de protrombina por kg de
peso corporal y en caso dado permite la administración en forma de
inyección de bolo.
23. Preparado según la reivindicación 22 en una
forma de administración que incluye una dosis de 50 a 500 U de
protrombina por kg de peso corporal.
24. Preparado según una de las reivindicaciones 1
a 23, caracterizado porque los factores de coagulación se
producen mediante técnicas de ADN recombinante.
25. Preparado según una de las reivindicaciones 1
a 24, caracterizado porque se encuentra en forma de un
liofilizado que preferentemente se puede reconstituir en una
solución ópticamente transparente.
26. Preparado según una de las reivindicaciones 1
a 25, caracterizado porque se encuentra en un dispositivo de
administración adecuado, preferentemente como un liofilizado en una
jeringa, que permite una reconstitución in situ con una
solución farmacéuticamente aceptable.
27. Preparado según una de las reivindicaciones 1
a 26, caracterizado porque está inactivado en cuanto a virus
o donde ha sido reducida la cantidad de virus.
28. Complejo consistente en protrombina, factor
Xa y en caso dado factor V o Va.
29. Complejo consistente en protrombina y factor
V o Va.
30. Complejo consistente en factor X y V o
Va.
31. Preparado que contiene un complejo según una
de las reivindicaciones 28 a 30 y además iones calcio.
32. Preparado diagnóstico según la reivindicación
31, caracterizado porque además contiene trombina y en caso
dado fosfolípidos, para uso diagnóstico.
33. Utilización de factores de protrombinasa
purificados, en particular de protrombina purificada y factor Xa
purificado, para la producción de un preparado farmacéutico según
una de las reivindicaciones 1 a 27 para establecer concentraciones
supranormales de protrombina en la sangre de un paciente.
34. Utilización según la reivindicación 33,
siendo la concentración supranormal de como mínimo 1,5 U de
protrombina por ml de sangre, preferentemente de como mínimo 2
U/ml.
35. Utilización de factores de protrombinasa
purificados, en particular de protrombina purificada y factor Xa
purificado, para la producción de un preparado farmacéutico según
una de las reivindicaciones 1 a 27 para el tratamiento de estados
de desarrollo de inhibidores del factor VIII, hemofilia A o B y
enfermedad de von Willebrand.
36. Utilización de como mínimo 2 factores de
coagulación, que forman parte de una protrombinasa o
pro-protrombinasa, en la producción de un preparado
farmacéutico según una de las reivindicaciones 1 a 27 para el
tratamiento de hemorragias agudas, de un aumento de la tendencia a
la hemorragia o de un incremento del riesgo de hemorragia en caso
de pacientes no hemofílicos.
37. Utilización según la reivindicación 36 en la
producción de un preparado farmacéutico para el tratamiento de
hemorragias debidas a trombopatías.
38. Utilización según la reivindicación 36 ó 37
en la producción de un preparado farmacéutico para el tratamiento
de una trombocitopenia inducida por heparina.
39. Utilización según una de las reivindicaciones
36 a 38, caracterizada porque el preparado farmacéutico
presenta una actividad hemostática primaria.
40. Preparado farmacéutico según una de las
reivindicaciones 1 a 27 para el tratamiento de pacientes con
alteraciones de la coagulación sanguínea, que además contiene una
proteína con actividad hemostática primaria, en particular vWF.
41. Sistema para el tratamiento de pacientes con
alteraciones de la coagulación sanguínea, que incluye los
siguientes componentes:
a) un preparado farmacéutico según una de las
reivindicaciones 1 a 27 y
b) una proteína con actividad hemostática
primaria, en particular vWF.
42. Utilización según una de las reivindicaciones
36 a 38 en la producción de un preparado farmacéutico para el
tratamiento de hemorragias en el marco de una terapia con
anticoagulantes.
43. Utilización según la reivindicación 42 para
producir un preparado farmacéutico como antídoto para un inhibidor
de la coagulación o para un anticoagulante o para un inhibidor de
la función trombocítica.
44. Utilización según la reivindicación 43,
caracterizada porque el inhibidor de la coagulación o el
anticoagulante se selecciona de entre el grupo consistente en APAP,
derivados benzamida, hirudina, heparina, análogos de heparina, en
particular pentasacáridos, complejo AT III-heparina,
AT III, antistasina, "Tick-Anticoagulant
Peptide" (péptido anticoagulante de garrapata), factores de
coagulación inactivos, en particular factores de coagulación
inhibidos "active site" (sitio activo), TFPI, ligandos
competitivos por receptores de superficie de membrana de
trombocitos, en particular anticuerpos contra GP IIb/IIIa y sus
análogos producidos genética o sintéticamente, en particular
péptidos, y también anticoagulantes orales.
45. Utilización según la reivindicación 43,
caracterizada porque el inhibidor de la función trombocítica
es ticlopidina o ácido acetilsalicílico.
46. Sistema para tratar con anticoagulantes a
pacientes, que incluye los siguientes componentes:
- a)
- un inhibidor de la coagulación o anticoagulante o un inhibidor de la función trombocítica, y
- b)
- un preparado farmacéutico según una de las reivindicaciones 1 a 32.
47. Utilización según la reivindicación 36 para
producir un preparado farmacéutico para el tratamiento de
hemorragias intracraneales, en particular en caso de alteraciones
de formación de trombina.
48. Utilización según la reivindicación 47 para
el tratamiento de partos prematuros.
Applications Claiming Priority (6)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
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AT409334B (de) * | 1997-09-19 | 2002-07-25 | Immuno Ag | Pharmazeutisches präparat enthaltend vitamin k-abhängige einzelfaktoren |
ATA159597A (de) * | 1997-09-19 | 2000-09-15 | Immuno Ag | Präparat zur behandlung von blutgerinnungsstörungen |
SG74717A1 (en) | 1998-04-10 | 2000-08-22 | Japan Tobacco Inc | Amidine compound |
AT409335B (de) * | 1998-11-10 | 2002-07-25 | Immuno Ag | Pharmazeutisches präparat enthaltend einen rezeptor-antagonisten zur behandlung von blutgerinnungsstörungen |
DE19923027C2 (de) * | 1999-05-19 | 2002-09-19 | Aventis Behring Gmbh | Verfahren zur Inaktivierung von Viren |
DE10012732A1 (de) * | 2000-03-18 | 2001-09-20 | Aventis Behring Gmbh | Thrombin-Zubereitungen und Verfahren zu ihrer Herstellung |
US8914114B2 (en) | 2000-05-23 | 2014-12-16 | The Feinstein Institute For Medical Research | Inhibition of inflammatory cytokine production by cholinergic agonists and vagus nerve stimulation |
US6689615B1 (en) | 2000-10-04 | 2004-02-10 | James Murto | Methods and devices for processing blood samples |
DE60139574D1 (de) * | 2001-01-10 | 2009-09-24 | Us Army Med Res Mat Command | Kombination von aktiviertem factor viia und fibrinogen und verwendung zur behandlung von blutung |
US6825323B2 (en) * | 2001-01-10 | 2004-11-30 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Army | Compositions for treatment of hemorrhaging with activated factor VIIa in combination with fibrinogen and methods of using same |
US7291587B2 (en) * | 2001-11-09 | 2007-11-06 | Novo Nordisk Healthcare A/G | Pharmaceutical composition comprising factor VII polypeptides and TAFI polypeptides |
WO2003039587A1 (en) * | 2001-11-09 | 2003-05-15 | Novo Nordisk Health Care Ag | Pharmaceutical composition comprising factor vii polypeptides and protein s inhibitors |
US20030118580A1 (en) * | 2001-11-09 | 2003-06-26 | Rasmus Rojkjaer | Pharmaceutical composition comprising factor VII polypeptides and thrombomodulin polypeptides |
WO2003039581A1 (en) * | 2001-11-09 | 2003-05-15 | Novo Nordisk Health Care Ag | Pharmaceutical composition comprising factor vii polypeptides and tranexamic acid |
US20030124118A1 (en) * | 2001-11-27 | 2003-07-03 | Rasmus Rojkjaer | Pharmaceutical composition comprising factor VII polypeptides and protein S inhibitors |
JP2005511600A (ja) * | 2001-11-09 | 2005-04-28 | ノボ ノルディスク ヘルス ケア アクチェンゲゼルシャフト | Vii因子ポリペプチドおよびトロンボモジュリンポリペプチドを含む薬学的組成物 |
WO2003039579A1 (en) * | 2001-11-09 | 2003-05-15 | Novo Nordisk Health Care Ag | Pharmaceutical composition comprising factor vii polypeptides and tafi polypeptides |
US20080057059A1 (en) * | 2001-11-09 | 2008-03-06 | Novo Nordisk Healthcare A/G | Pharmaceutical Composition Comprising Factor VII Polypeptides and Protein S Inhibitors |
EP1446148A1 (en) * | 2001-11-09 | 2004-08-18 | Novo Nordisk A/S | Pharmaceutical composition comprising a factor vii polypeptide and epsilon-aminocapronic acid |
JP2005526004A (ja) * | 2001-11-09 | 2005-09-02 | ノボ ノルディスク ヘルス ケア アクチェンゲゼルシャフト | 第vii因子ポリペプチドおよびトラネキサム酸を含む薬学的組成物 |
AU2003217747A1 (en) * | 2002-02-26 | 2003-09-09 | North Shore-Long Island Jewish Research Insitute | Inhibition of inflammatory cytokine production by stimulation of brain muscarinic receptors |
EP1550455A1 (en) * | 2002-05-23 | 2005-07-06 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Agent neutralizint tissue factor inhibitor and agent neutralizing activated blood coagulation factor viii preparation |
SE519974C2 (sv) * | 2002-06-03 | 2003-05-06 | Cemvac System Ab | Anordning för utmatning av en monomer till en med en polymer förfylld blandningsanordning för tillredning av bencement |
SE0203552D0 (sv) * | 2002-12-02 | 2002-12-02 | Biovitrum Ab | Thrombin concentration |
SE0203551D0 (sv) * | 2002-12-02 | 2002-12-02 | Biovitrum Ab | Prothrombin purification |
GB0324044D0 (en) * | 2003-10-14 | 2003-11-19 | Astrazeneca Ab | Protein |
JP2007530586A (ja) | 2004-03-25 | 2007-11-01 | ザ ファインスタイン インスティテュート フォー メディカル リサーチ | 神経性止血法 |
US10912712B2 (en) | 2004-03-25 | 2021-02-09 | The Feinstein Institutes For Medical Research | Treatment of bleeding by non-invasive stimulation |
US7214647B2 (en) * | 2004-07-29 | 2007-05-08 | Texas United Chemical Company, Llc. | Method of increasing the low shear rate viscosity of well drilling and servicing fluids containing calcined magnesia bridging solids, the fluids and methods of use |
US11207518B2 (en) | 2004-12-27 | 2021-12-28 | The Feinstein Institutes For Medical Research | Treating inflammatory disorders by stimulation of the cholinergic anti-inflammatory pathway |
CN102793972A (zh) | 2004-12-27 | 2012-11-28 | 范因斯坦医学研究院 | 通过电刺激迷走神经治疗炎症性疾病 |
KR20130140221A (ko) | 2005-04-13 | 2013-12-23 | 아스트라제네카 아베 | 감마 카르복실화를 필요로 하는 단백질 생산용 벡터를 포함하는 숙주 세포 |
EP1935429A1 (en) | 2006-12-22 | 2008-06-25 | CSL Behring GmbH | Synergistic therapeutic use of prothrombin complex concentrates with FVIII concentrates |
US8206967B2 (en) * | 2007-07-06 | 2012-06-26 | Medimmune Limited | Method for production of recombinant human thrombin |
US8391970B2 (en) | 2007-08-27 | 2013-03-05 | The Feinstein Institute For Medical Research | Devices and methods for inhibiting granulocyte activation by neural stimulation |
WO2009146030A1 (en) * | 2008-03-31 | 2009-12-03 | The Feinstein Institute For Medical Research | Methods and systems for reducing inflammation by neuromodulation of t-cell activity |
US9662490B2 (en) | 2008-03-31 | 2017-05-30 | The Feinstein Institute For Medical Research | Methods and systems for reducing inflammation by neuromodulation and administration of an anti-inflammatory drug |
ES2452484T3 (es) | 2008-11-18 | 2014-04-01 | Setpoint Medical Corporation | Dispositivos para optimizar la colocación de electrodos para la estimulación antiinflamatoria |
US9211410B2 (en) | 2009-05-01 | 2015-12-15 | Setpoint Medical Corporation | Extremely low duty-cycle activation of the cholinergic anti-inflammatory pathway to treat chronic inflammation |
US8996116B2 (en) | 2009-10-30 | 2015-03-31 | Setpoint Medical Corporation | Modulation of the cholinergic anti-inflammatory pathway to treat pain or addiction |
FR2946348B1 (fr) * | 2009-06-05 | 2011-08-05 | Lab Francais Du Fractionnement | Procede de preparation d'une composition de complexe prothrombique a haut degre de purete |
EP2440284B1 (en) | 2009-06-09 | 2018-09-12 | Setpoint Medical Corporation | Nerve cuff with pocket for leadless stimulator |
WO2014169145A1 (en) | 2013-04-10 | 2014-10-16 | Setpoint Medical Corporation | Closed-loop vagus nerve stimulation |
US9833621B2 (en) | 2011-09-23 | 2017-12-05 | Setpoint Medical Corporation | Modulation of sirtuins by vagus nerve stimulation |
EP2515996B1 (en) | 2009-12-23 | 2019-09-18 | Setpoint Medical Corporation | Neural stimulation devices and systems for treatment of chronic inflammation |
EP2371857A1 (en) | 2010-04-01 | 2011-10-05 | CSL Behring GmbH | Factor XII inhibitors for treating interstitial lung disease |
EP2624859B1 (en) | 2010-10-06 | 2017-03-01 | Medimmune Limited | Factor ii alone or in combination with further factors for treatment of impaired haemostasis associated with dilutional coagulopathy |
EP2707094B1 (en) | 2011-05-09 | 2016-02-03 | Setpoint Medical Corporation | Single-pulse activation of the cholinergic anti-inflammatory pathway to treat chronic inflammation |
KR101982491B1 (ko) * | 2011-08-30 | 2019-05-27 | 아카데미쉬 메디쉬 센트륨 | 인슐린 저항 예방 및/또는 치료 방법 |
EP2822474B1 (en) | 2012-03-06 | 2018-05-02 | Ferrosan Medical Devices A/S | Pressurized container containing haemostatic paste |
US9572983B2 (en) | 2012-03-26 | 2017-02-21 | Setpoint Medical Corporation | Devices and methods for modulation of bone erosion |
EP2825216B1 (en) | 2012-06-12 | 2015-08-19 | Ferrosan Medical Devices A/S | Dry haemostatic composition |
US10001495B2 (en) * | 2012-07-25 | 2018-06-19 | Bioverativ Therapeutics Inc. | Blood factor monitoring assay and uses thereof |
CN111508557B (zh) * | 2013-06-20 | 2024-03-26 | 武田药品工业株式会社 | 药物动力学药物给药方案设备和方法 |
US9724078B2 (en) | 2013-06-21 | 2017-08-08 | Ferrosan Medical Devices A/S | Vacuum expanded dry composition and syringe for retaining same |
JP6489485B2 (ja) | 2013-12-11 | 2019-03-27 | フェロサン メディカル デバイシーズ エイ/エス | 押し出し増強因子を含んでいる乾燥組成物 |
TWI653047B (zh) * | 2014-03-14 | 2019-03-11 | 百特製藥公司 | 用於在出血性病症的治療中促進止血的人類凝血酶原及活化因子x的組成物 |
JP6726852B2 (ja) | 2014-10-13 | 2020-07-22 | フェッローサン メディカル ディバイス エー/エス | 止血および創傷治癒に使用するための乾燥組成物 |
US11311725B2 (en) | 2014-10-24 | 2022-04-26 | Setpoint Medical Corporation | Systems and methods for stimulating and/or monitoring loci in the brain to treat inflammation and to enhance vagus nerve stimulation |
CN107206165B (zh) | 2014-12-24 | 2020-10-23 | 弗罗桑医疗设备公司 | 用于保持并混合第一和第二物质的注射器 |
US11406833B2 (en) | 2015-02-03 | 2022-08-09 | Setpoint Medical Corporation | Apparatus and method for reminding, prompting, or alerting a patient with an implanted stimulator |
US10066224B2 (en) * | 2015-02-25 | 2018-09-04 | Omrix Biopharmaceuticals Ltd. | Method for purifying and quantifying thrombin and its degradation polypeptides |
JP6747651B2 (ja) | 2015-07-03 | 2020-08-26 | フェロサン メディカル デバイシーズ エイ/エス | 保管状態で真空を保持するための、及び2種の成分を混合するためのシリンジ |
US20180369346A1 (en) * | 2016-01-07 | 2018-12-27 | Eio Biomedical Ltd. | Methods, compositions and kits for reducing tissue adhesions |
US10596367B2 (en) | 2016-01-13 | 2020-03-24 | Setpoint Medical Corporation | Systems and methods for establishing a nerve block |
EP3405107B1 (en) | 2016-01-20 | 2023-04-12 | Setpoint Medical Corporation | Control of vagal stimulation |
WO2017127758A1 (en) | 2016-01-20 | 2017-07-27 | Setpoint Medical Corporation | Implantable microstimulators and inductive charging systems |
US11471681B2 (en) | 2016-01-20 | 2022-10-18 | Setpoint Medical Corporation | Batteryless implantable microstimulators |
US10583304B2 (en) | 2016-01-25 | 2020-03-10 | Setpoint Medical Corporation | Implantable neurostimulator having power control and thermal regulation and methods of use |
EA201892347A1 (ru) | 2016-04-15 | 2019-04-30 | Баксалта Инкорпорейтед | Способ и устройство для предоставления фармакокинетической схемы дозирования лекарственных препаратов |
US10896749B2 (en) | 2017-01-27 | 2021-01-19 | Shire Human Genetic Therapies, Inc. | Drug monitoring tool |
PL3579857T3 (pl) | 2017-02-09 | 2022-07-25 | Csl Behring Gmbh | Produkt zastępujący czynnik krzepnięcia krwi do stosowania w leczeniu lub profilaktyce krwawień |
WO2019036470A1 (en) | 2017-08-14 | 2019-02-21 | Setpoint Medical Corporation | TESTING TEST FOR STIMULATION OF NERVE WAVE |
KR20210008479A (ko) | 2018-05-09 | 2021-01-22 | 훼로산 메디칼 디바이스 에이/에스 | 지혈 조성물을 제조하는 방법 |
US11260229B2 (en) | 2018-09-25 | 2022-03-01 | The Feinstein Institutes For Medical Research | Methods and apparatuses for reducing bleeding via coordinated trigeminal and vagal nerve stimulation |
AU2019477041A1 (en) * | 2019-12-03 | 2022-07-21 | Guangzhou Bioseal Biotech Co., Ltd. | Pro-thrombin purification |
WO2021236977A1 (en) | 2020-05-21 | 2021-11-25 | The Feinstein Institutes For Medical Research | Systems and methods for vagus nerve stimulation |
EP4216928A1 (en) | 2020-09-23 | 2023-08-02 | Omrix Biopharmaceuticals Ltd. | Hemostatic formulations and uses thereof |
Family Cites Families (29)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
DE350726C (de) * | 1922-03-23 | Henry Strauss | Tintenloescher mit Loeschpapierblock | |
DE141262C (es) * | ||||
DE382783C (de) | 1920-01-27 | 1923-12-08 | Gustav Pfarrius | Verfahren zum Wasserabweisendmachen von Holz |
AT350726B (de) * | 1976-08-30 | 1979-06-11 | Immuno Ag | Verfahren zur herstellung einer blut- gerinnungsfoerdernden praeperation aus menschlichem blutplasma |
DD141262B1 (de) * | 1977-06-09 | 1984-02-29 | Bezirks Inst Fuer Blutspende U | Verfahren zur herstellung eines prothrombinkomplexkonzentrates |
US4287180A (en) * | 1980-01-28 | 1981-09-01 | Baxter Travenol Laboratories, Inc. | Method for treating blood clotting factor inhibitors |
EP0041174B1 (en) * | 1980-05-27 | 1985-09-11 | Miles Laboratories, Inc. | Blood coagulation promoting product and process of preparing same |
AT368883B (de) * | 1980-07-22 | 1982-11-25 | Immuno Ag | Verfahren zur herstellung einer neuen blutgerinnungsfoerdernden praeparation auf basis von humanproteinen |
EP0286198B1 (en) * | 1981-04-27 | 1994-12-14 | BAXTER INTERNATIONAL INC. (a Delaware corporation) | Blood clotting enzyme compositions |
CA1181987A (en) * | 1981-06-22 | 1985-02-05 | Walter Crooks | Print head for high resolution electrothermal printing apparatus |
US4382083A (en) * | 1981-06-25 | 1983-05-03 | Baxter Travenol Laboratories, Inc. | Therapeutic method for treating blood-clotting defects with factor VIIa |
US4721618A (en) * | 1983-06-27 | 1988-01-26 | Queen's University At Kingston | Method for controlling bleeding |
US4501731A (en) * | 1983-06-27 | 1985-02-26 | Tishkoff Garson H | Treatment of disparate bleeding disorders with factor X zymogen |
AT389815B (de) * | 1984-03-09 | 1990-02-12 | Immuno Ag | Verfahren zur inaktivierung von vermehrungsfaehigen filtrierbaren krankheitserregern in blutprodukten |
US4965199A (en) * | 1984-04-20 | 1990-10-23 | Genentech, Inc. | Preparation of functional human factor VIII in mammalian cells using methotrexate based selection |
US5028424A (en) * | 1987-10-16 | 1991-07-02 | University Of Georgia Research Foundation | Antibodies to receptor and antigen for natural killer and non-specific cytotoxic cells |
US5120537A (en) * | 1989-06-14 | 1992-06-09 | Oklahoma Medical Research Foundation | Factor xa based anticoagulant compositions |
EP0512011B1 (en) * | 1990-01-26 | 1994-04-06 | IMMUNO Aktiengesellschaft | Recombinantly produced blood factors and process for the expression of said blood factors, as well as vaccinia virus recombinants used in said process |
AT402891B (de) * | 1991-06-20 | 1997-09-25 | Immuno Ag | Verfahren zur herstellung eines inaktivierten blutproduktes |
DE4142908C2 (de) * | 1991-12-24 | 1994-02-10 | Octapharma Ag Glarus | Verfahren zur Herstellung eines virusinaktivierten Prothrombinkomplex-Konzentrats (PPSB) |
IT1262899B (it) * | 1992-03-27 | 1996-07-22 | Sclavo Spa | Processo per l'isolamento di fattore ix, fattore x e fattore ii altamente purificati dal complesso protrombinico o dal plasma umano |
WO1994020535A1 (en) * | 1992-12-11 | 1994-09-15 | Corvas International, Inc. | ECOTIN AS A FACTOR Xa, XIa, AND XIIa INHIBITOR |
DE4325872C1 (de) * | 1993-08-02 | 1994-08-04 | Immuno Ag | Virusinaktivierte Faktor Xa-Präparation |
FR2709227B1 (fr) * | 1993-08-26 | 1995-10-20 | Pellenc Sa | Machine agricole, notamment machine de récolte telle que machine à vendanger. |
DE4416166C2 (de) * | 1994-05-06 | 1997-11-20 | Immuno Ag | Stabiles Präparat zur Behandlung von Blutgerinnungsstörungen |
DE4416180C2 (de) * | 1994-05-06 | 1997-08-14 | Immuno Ag | Stabiles Präparat zur Behandlung von Blutgerinnungsstörungen und Verfahren zur Herstellung dieses Präparats |
DE4430205A1 (de) * | 1994-08-26 | 1996-02-29 | Behringwerke Ag | Zusammensetzungen, die als Gegenmittel für Blut-Antikoagulanzien geeignet sind und deren Verwendung |
DE19531637A1 (de) * | 1995-08-28 | 1997-03-06 | Immuno Ag | Pharmazeutische Zusammensetzung zur Behandlung von Blutgerinnungsstörugnen, Verfahren zur Herstellung derselben und deren Verwendung |
SI0796623T1 (en) * | 1996-03-20 | 2005-10-31 | Baxter Aktiengesellschaft | Pharmaceutical preparation for the treatment of blood coagulation disorders |
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