EA029797B1 - Новые производные майтанзиноида с пептидным линкером и их конъюгаты - Google Patents

Новые производные майтанзиноида с пептидным линкером и их конъюгаты Download PDF

Info

Publication number
EA029797B1
EA029797B1 EA201490095A EA201490095A EA029797B1 EA 029797 B1 EA029797 B1 EA 029797B1 EA 201490095 A EA201490095 A EA 201490095A EA 201490095 A EA201490095 A EA 201490095A EA 029797 B1 EA029797 B1 EA 029797B1
Authority
EA
Eurasian Patent Office
Prior art keywords
represented
cancer
independently
alkyl
integer
Prior art date
Application number
EA201490095A
Other languages
English (en)
Other versions
EA201490095A1 (ru
Inventor
Уэйн К. Уиддисон
Original Assignee
Иммуноджен, Инк.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Иммуноджен, Инк. filed Critical Иммуноджен, Инк.
Publication of EA201490095A1 publication Critical patent/EA201490095A1/ru
Publication of EA029797B1 publication Critical patent/EA029797B1/ru

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D207/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom
    • C07D207/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D207/30—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having two double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D207/34—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having two double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D207/36—Oxygen or sulfur atoms
    • C07D207/40—2,5-Pyrrolidine-diones
    • C07D207/416—2,5-Pyrrolidine-diones with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to other ring carbon atoms
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
    • A61K47/65—Peptidic linkers, binders or spacers, e.g. peptidic enzyme-labile linkers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A61K47/68033—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug being a maytansine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6849—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a receptor, a cell surface antigen or a cell surface determinant
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6851—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell
    • A61K47/6863—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell the tumour determinant being from stomach or intestines cancer cell
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6889—Conjugates wherein the antibody being the modifying agent and wherein the linker, binder or spacer confers particular properties to the conjugates, e.g. peptidic enzyme-labile linkers or acid-labile linkers, providing for an acid-labile immuno conjugate wherein the drug may be released from its antibody conjugated part in an acidic, e.g. tumoural or environment
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/18—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for pancreatic disorders, e.g. pancreatic enzymes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/08—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2863—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against receptors for growth factors, growth regulators
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/06—Dipeptides
    • C07K5/06008—Dipeptides with the first amino acid being neutral
    • C07K5/06017—Dipeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic
    • C07K5/06026—Dipeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic the side chain containing 0 or 1 carbon atom, i.e. Gly or Ala
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/06—Dipeptides
    • C07K5/06008—Dipeptides with the first amino acid being neutral
    • C07K5/06017—Dipeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic
    • C07K5/06034—Dipeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic the side chain containing 2 to 4 carbon atoms
    • C07K5/06052—Val-amino acid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/0005—Vertebrate antigens
    • A61K39/0011—Cancer antigens
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/21—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin from primates, e.g. man

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Transplantation (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)

Abstract

Изобретение относится к новому конъюгату клеточносвязывающего агента и цитотоксического средства, имеющему пептидные линкеры, и, более конкретно, к конъюгатам формулы (I). В изобретении представлены также новые цитотоксические средства формулы (II), линкерные соединения, представленные формулой (III), и соединения лекарства и линкера, представленные формулой (IV). В изобретении дополнительно представлены композиции и способы, применимые для замедления патологического клеточного роста или лечения пролиферативного расстройства у млекопитающего с использованием соединений или конъюгатов изобретения.

Description

Изобретение относится к новому конъюгату клеточносвязывающего агента и цитотоксического средства, имеющему пептидные линкеры, и, более конкретно, к конъюгатам формулы (Ι). В изобретении представлены также новые цитотоксические средства формулы (ΙΙ), линкерные соединения, представленные формулой (ΙΙΙ), и соединения лекарства и линкера, представленные формулой (Ιν). В изобретении дополнительно представлены композиции и способы, применимые для замедления патологического клеточного роста или лечения пролиферативного расстройства у млекопитающего с использованием соединений или конъюгатов изобретения.
029797 Β1
029797
Ссылка на родственные заявки
В заявке на данное изобретение испрашивается приоритет по дате подачи заявки согласно Кодексу законов США, раздел 35, §119(е), предварительной заявки на патент США № 61/499548, поданной 21 июня 2011 г., полное содержание которой, включая все графические материалы, включено в настоящий документ путем ссылки.
Уровень техники
Конъюгаты антител с лекарственными препаратами (ΑΏΟ) перспективны в качестве сильнодействующего класса противоопухолевых средств с эффективностью во всем диапазоне видов рака. ΑΏΟ обычно состоят из трех отдельных элементов: клеточно-связывающий агент; линкер; и цитотоксическое средство. Линкерный компонент ΑΏΟ представляет собой важный элемент в разработке целевых противораковых средств, которые обладают оптимальным терапевтическим окном, т. е. высокой активностью при низких, нетоксичных дозах.
В заявке ЕР 0425235 А2, 02.05.1991, описываются цитотоксические средства, содержащие Ν-метилаланин-содержащий сложный эфир майтанзинола или аналога майтанзинола, Ν-метил-аланинсодержащий сложный эфир, содержащий связывающую группу, способную к связыванию Ν-метилаланин-содержащего сложного эфира майтанзиноида с химическим фрагментом; и Ν-метил-цистеинсодержащий сложный эфир майтанзинола или аналога майтанзинола.
Также в уровне техники описываются конъюгаты антитело-лекарственное средство (ΑΏΟδ), которые объединяют в себе специфичность моноклональных антител (ιη.ΑΒδ) с активностью цитотоксических молекул (ΕΑϋΚΕΝΤ ΏϋΟΚΥ ЕТ Α1,.: "ΑηΐιΒοί1ν-Ι)ιτιρ Сопщда1ез: Ттктц Ογίοίοχίο Рау1оабз ίο Мопос1опа1 Αη^^^δ^ ΒΙΟί'ΌΧ.ΙΙ.ΌΑΤΗ "ΗΕΜΙδΤΚΥ, уо1. 21, по. 1, 20 .Тапиагу 2010).
В заявке ΤΌ 2006/113623 Α2, 26.10.2006, предложен способ киллинга опухоли, состоящей из гетерогенных или смешанных популяций клеток, путем селективного нацеливания на уникальный лиганд, такой как антиген, эпитоп или рецептор, который экспрессируется на конкретной клеточной популяции, чтобы также убить клеточную популяцию, в которой отсутствует уникальный лиганд.
Следовательно, существует необходимость в ΑΙΧ'", содержащих новый класс линкерных компонентов.
Сущность изобретения
Изобретение относится к конъюгату клеточно-связывающего агента и цитотоксического средства, представленному следующей структурной формулой:
СВ^—1_2—А Ζ-X— Ц— ϋ I
МП
или его фармацевтически приемлемой соли, где
СВ представляет собой антитело и включает -ΝΗ-группу, которая ковалентно связана с Ь2;
Ь2 представляет следующей структурной формулой:
где Кх, Ку, Кх и Ку, все, представляют собой Н;
1 и к, каждый независимо, представляют собой 0 или целое число от 1 до 10; ς представляет собой целое число от 1 до 20;
-Ζ-Χ-Ώχ-Ώ представлен одной из следующих структурных формул:
- 1 029797
при этом Мау представлен следующей структурной формулой:
Κι, К2, Ка и Кь, каждый независимо, представляют собой Н или С1-4алкил; т2 и п2, каждый независимо, представляют собой целое число от 1 до 6.
В некоторых вариантах осуществления изобретения А представляет собой пептид, расщепляемый протеазой, которая экспрессируется в опухолевой ткани.
В некоторых вариантах осуществления изобретения А выбран из группы, состоящей из
Уа1-Сй, Уа1-Ьуз, Рйе-Ьуз, Ьуз-Ьуз, А1а-Ьуз, Рйе-Сй, Ьеи-Сй, Ые-Сй, Тгр, Сй, Рйе-А1а,
РЬе-1Ч9-тозил-Агд, ΡΗβ-Ν9-Ηπτρο-ΑΓ§, Рйе-РЬе-Ьуз, О-Рйе-РЬе-Ьуз, СНу-РЬе-Ьуз, Ьеи-А1аЬеи, 11е-А1а-Ьеи, Уа1-А1а-Уа1, А1а-Ьеи-А1а-Ьеи (ЗЕф ГО ΝΟ: 1), 3-А1а-Теи-А1а-Ьеи (ЗЕ(3 ГО N0: 2), О1у-РЬе-Теи-О1у (ЗЕф ГО N0: 3), Уа1-Агд, Агд-Уа1, Агд-Агд, Уа1ГО-Сй, Уа1ГО-Ьуз, Уа1ГО-Агд, О-Уа1-Сй, В-Уа1-Ьуз, О-Уа1-Аг«. О-Уа1ГО-Сй, В-Уа1ГО-Ьуз, Э-УаГО-Агд, ϋАгдГО-Агд, А1а-А1а, А1аГО-А1а, О-А1а-А1а и ϋ-А1аГО-А1а.
В некоторых вариантах осуществления изобретения оба Ка и Кь представляют собой метил; оба К1 и
К2 представляют собой Н и п равен 1 или оба К1 и К2 представляют собой метил и п равен 2.
В некоторых вариантах осуществления изобретения конъюгат представлен любой из следующих
структурных формул:
- 2 029797
или его фармацевтически приемлемой солью, где ΌΜ представлен следующей структурной формулой:
- 3 029797
Изобретение относится также к соединению, представленному следующей структурной формулой: ζ--х-ь-о(П),
или его соли, где соединение формулы (II) представлено одной из следующих структурных формул:
при этом Мау представлен следующей структурной формулой:
т2 и п2, каждый независимо, представляют собой целое число от 1 до 10.
В другом варианте реализации настоящее изобретение относится к соединению, представленному следующей структурной формулой:
где 1Св' представляет собой -СООН или -СОЕ, при этом -СОЕ представляет собой реакционноспособный сложный эфир, выбранный из Ν-гидроксисукцинимидного эфира,
Ν-гидроксисульфосукцинимидного эфира, нитрофенилового эфира, динитрофенилового эфира, сульфотетрафторфенилового эфира и пентафторфенилового эфира;
Кх, Ку, Кх и Ку, все, представляют собой Н;
1 и к, каждый независимо, представляют собой 0 или целое число от 1 до 10;
А представляет собой аминокислоту или пептид, содержащий от 2 до 20 аминокислот;
-Ζ-Χ-ΙС представлен одной из следующих структурных формул:
14—
н ' 'т2 (Ь1’а);или
- 4 029797
где 1О' представляет собой -5Н, -5-5(=О)-Ка, 5-5(=О)2К, -55К, при этом Ка выбран из фенила, нитрофенила, динитрофенила, карбоксинитрофенила, пиридила или нитропиридила; и
т2 и п2, каждый независимо, представляют собой целое число от 1 до 6.
Изобретение относится также к соединению, представленному следующей структурной формулой: ь2—Α—ζ—X—ι_-σ (IV),
или его соль, где
Ь2' представлен одной из следующих структурных формул:
где 1Св' представляет собой -СООН или -СОЕ, при этом -СОЕ представляет собой реакционноспособный сложный эфир, выбранный из Ν-гидроксисукцинимидного эфира, Ν-гидроксисульфосукцинимидного эфира, нитрофенилового эфира, динитрофенилового эфира, сульфо-тетрафторфенилового эфира и пентафторфенилового эфира;
Кх, Ку, Кх и Ку, все, представляют собой Н;
1 и к, каждый независимо, представляют собой 0 или целое число от 1 до 10;
А представляет собой аминокислоту или пептид, включающий от 2 до 20 аминокислот;
-Ζ-Χ-Ε1-Ώ представлен одной из следующих структурных формул:
при этом Мау представлен следующей структурной формулой:
К.1, К2, Ка и Кь, каждый независимо, представляют собой Н или С1-4алкил; и т2 и п2, каждый независимо, представляют собой целое число от 1 до 6.
В некоторых вариантах осуществления изобретения оба Ка и Кь представляют собой метил; оба К1 и К2 представляют собой Н и т2 или п2 равен 1 или оба К1 и К2 представляют собой метил и т2 или п2 равен 2.
В некоторых вариантах осуществления изобретения А представляет собой пептид, расщепляемый протеазой, которая экспрессируется в опухолевой ткани.
В некоторых вариантах осуществления изобретения А выбран из группы, состоящей из
- 5 029797
Уа1-Сй, Уа1-Буз, РЬе-Буз, Буз-Буз, Ак-Буз, РЬе-Сй, Беи-Сй, Ые-Сй, Тгр, Сй, Рйе-Ак, РНе-Х9-тозил-Аг«. РНе-Х9-нитро-Аг«. Рйе-РЬе-Буз, Ο-Рйе-РЬе-Буз, СНу-РЬе-Еуз, Беи-АкБеи, 11е-А1а-Беи, Уа1-А1а-Уа1, А1а-Беи-А1а-Беи (8ЕЦ ГО ΝΟ: 1), β-Ак-Беи-Ак-Беи (8ЕЦ ГО N0: 2), О1у-РЬе-Беи-О1у (8ЕЦ ГО N0: 3), УаЕАгд, Агд-Уак Аг§-Аг§, Уа1ГО-Сй, УаЕО-Буз,
Уа1ГО-Аг§, О-УаЕСй, О-УаЕЕуз, О-УаЕУаЕСй, УаЕЕуз, РЬе-Буз, Буз-Буз, Ак-Буз, РЬе-Сй,
Ьеи-Сй. Е1е-Сй, Тгр, Сй. Рйе-Ак. РИе-У-тозил-Ап’. РИе-ЬЕ-нитро-Ап’. РИе-РНе-Ьуз. Э-РНеРЬе-Еуз, СНу-РЬе-Еуз, Ееи-А1а-Ееи, Пе-Ак-Беи, Уа1-А1а-Уа1, Ак-Беи-Ак-Беи (8ЕЦ ГО N0:
1), β-Ак-Беи-Ак-Беи (8 Ер ГО N0: 2), О1у-Рйе-Беи-О1у (8ЕЦ ГО N0: 3), УаЕАгд, Агд-Уа1,
Агд-Агд, Уа1ГО-Сй, Уа1ГО-Буз, Уа1ГО-Аг§, ϋ-УаЕСй, О-УаЕЕуз, ϋ-УаЕАгд, О-Уа1ГО-Сй, ЭУа1ГО-Бу8, О-Уа1ГО-Аг§, ϋ-АгдГО-Агд, Ак-Ак, А1аГО-А1а, ϋ-Ак-Ак, и О-Ак-Э-АкАг». ϋУа1ГО-СД, О-Уа1ГО-Бу8, О-Уа1ГО-Аг§, ϋ-АгдГО-Агд, Ак-Ак, А1аГО-А1а, ϋ-Ак-Ак, и ϋ-Акϋ-Ак.
Настоящее изобретение относится также к фармацевтической композиции для лечения рака, содержащей конъюгат формулы (I) и фармацевтически приемлемый носитель.
Настоящее изобретение включает также способ лечения рака у млекопитающего (например, человека), включающий введение указанному млекопитающему терапевтически эффективного количества конъюгата формулы (I) отдельно или в комбинации с химиотерапевтическим средством.
В некоторых вариантах осуществления изобретения рак выбран из рака молочной железы, рака толстой кишки, рака головного мозга, рака простаты, рака почки, рака поджелудочной железы, рака яичников, рака головы и шеи, меланомы, колоректального рака, рака желудка, плоскоклеточного рака, мелкоклеточного рака легких, немелкоклеточного рака легких, рака яичек, карциномы Меркеля, глиобластомы, нейробластомы и раковых заболеваний лимфатических органов.
Конъюгаты (например, конъюгат формулы (I)) и соединения (например, соединение формулы (II), (III) или (IV)) настоящего изобретения применимы для лечения или ослабления тяжести расстройств, таких как расстройства, характеризующиеся патологическим ростом клеток (например, рак).
Краткое описание чертежей
На фиг. 1-4 изображены синтетические схемы получения иллюстративных цитотоксических соединений настоящего изобретения;
на фиг. 5 и 6 - синтетические схемы получения иллюстративных линкеров настоящего изобретения; на фиг. 7-9 - синтетические схемы получения иллюстративных соединений лекарственного средства
и линкера настоящего изобретения;
на фиг. 10 - двухстадийный и однореакторный способ получения иллюстративных конъюгатов настоящего изобретения;
на фиг. 11 - одностадийный способ получения иллюстративных конъюгатов настоящего изобретения;
на фиг. 12 - одностадийный способ получения иллюстративных конъюгатов настоящего изобретения, включающий предварительное образование соединений лекарственного средства и линкера;
на фиг. 13 - схема расщепления конъюгата 3а протеазой катепсин В;
на фиг. 14 - ίη νίίτο цитотоксичность конъюгата ЕОБК-7К-3а по сравнению с ненагруженным антителом;
на фиг. 15 - ίη νίνο противоопухолевая активность конъюгата ЕОБК-7К-3а по сравнению с ненагруженным антителом;
на фиг. 16 - ίη νίίίο цитотоксичность иллюстративных цитотоксических соединений настоящего изобретения по сравнению с ΌΜ4-Μβ;
на фиг. 17 - ίη νίίίο цитотоксичность соединения 5 (продукт протеазного расщепления конъюгата ЕОБК-7К-3а) по сравнению с ΌΜ4-Μβ;
на фиг. 18 - схема синтеза иллюстративных соединений лекарственного средства и линкера настоящего изобретения, и соответствующих конъюгатов;
на фиг. 19 - схема синтеза соединений Ак-Ак-РАВ-ϋΜ!, содержащих природные (Б-А1а) и/или неприродные (Ό-Ак) аминокислоты, например Ό-аминокислоту в любом из двух положений дипептида А1а-А1а;
на фиг. 20-22 - различные синтетические схемы получения анъюгатов антител АЬ-3с и АЬ-34, содержащих фрагмент Α1а-Α1а-ΡΑΒ-^Μ1;
на фиг. 23 - данные ίη νίίίο цитотоксичности конъюгата ЬиСО20-7-3а по сравнению с ненагруженным антителом и конъюгатами с другими линкерами; "йиСП20-7 (АЬ)" представляет собой анти-СО20 антитело человека без конъюгированного цитотоксического средства ΌΜ1; "ЬиIдО-δΜСС-^Μ1" представляет собой конъюгат отрицательного контроля с !дО человека (неспецифическим для СО20), сопря- 6 029797
женным с ΌΜ1 линкерным фрагментом типа 8МСС; СгаШс 519 представляет собой клеточную линию лимфомы мантийных клеток, а Рагаде представляет собой клеточную линию диффузной крупноклеточной неходжкинской лимфомы (ПБСЕ);
на фиг. 24 - данные ίη νΐνο цитотоксичности конъюгата 1шСО2()-7-3а по сравнению с ненагруженным антителом и конъюгатами с другими линкерами; Средний объем опухоли нанесен на график в зависимости от количества дней после инокуляции клетки опухоли. Получение нескольких конъюгатов с 3 а представлено в примере 11, включая использование анти-ЕСРК антитела человека "1шЕСРВ-7Р" в качестве клеточно-связывающего агента;
на фиг. 25 - общая структура конъюгатов 1υΕΟΡΚ-7Κ-(Ό/Ρ)Α(Ό/Ρ)Α-ΡΑΒ-ΌΜ1 (АЬ-3с), содержащих фрагмент человеческого анти-ЕСР-рецепторного антитела (йиЕСРК-7К) в качестве клеточносвязывающего агента, Ь2 линкерный фрагмент, дипептидный фрагмент А1а-А1а (любой или оба А1а могут быть О-А1а). РАВ (Г4) линкерный фрагмент и цитотоксическое средство ΌΜ1;
на фиг. 26А-26Р - данные ίη νΐνο цитотоксичности конъюгатов, содержащих фрагмент А1а-А1аΡΛΒ-ΩΜ1. В частности, фракции выживших клеток нанесли на график в зависимости от концентраций различных исследуемых конъюгатов в клетках аденокарциномы легких человека РС9 (фиг. 26А), клеточной линии плоскоклеточной карциномы §А§ головы и шеи (§ССНЫ) (фиг. 26В), клеточной линии плоскоклеточной карциномы полости рта человека Н8С2 (фиг. 26С), клеточной линии эрлотинибрезистентного немелкоклеточного рака легких (Ы§СЕС) Н1975 (фиг. 26Ό), клетках плоскоклеточной карциномы, происходящей из нижней десны, СА922 (фиг. 26Е) и клеточной линии плоскоклеточной карциномы О8С-19 (фиг. 26Р). "6А" стоит для Э-А1а. "1А" стоит для Ь-А1а.
Подробное описание изобретения
Определения.
"Алкил", используемый в настоящем документе, относится к насыщенному алифатическому линейному или разветвленному одновалентному углеводородному радикалу, имеющему от одного до двадцати углеродных атомов. Примеры алкила включают, но не ограничиваясь этим, метил, этил, 1-пропил, 2пропил, 1-бутил, 2-метил-1-пропил, -СН2СН(СН3)2, 2-бутил, 2-метил-2-пропил, 1-пентил, 2-пентил, 3пентил, 2-метил-2-бутил, 3-метил-2-бутил, 3-метил-1-бутил, 2-метил-1-бутил, 1-гексил, 2-гексил, 3гексил, 2-метил-2-пентил, 3-метил-2-пентил, 4-метил-2-пентил, 3-метил-3-пентил, 2-метил-3-пентил, 2,3диметил-2-бутил, 3,3-диметил-2-бутил, 1-гептил, 1-октил и т.п. Предпочтительно алкил имеет от одного до десяти углеродных атомов, упоминаемый также как "С1.10алкил". Более предпочтительно алкил имеет от одного до шести углеродных атомов, упоминаемый также как "С1-6алкил". Еще более предпочтительно алкил имеет от одного до четырех углеродных атомов, упоминаемый также как "С1-4алкил".
"Алкенил", используемый в настоящем документе, относится к алифатическому линейному или разветвленному одновалентному углеводородному радикалу, содержащему от двух до двадцати углеродных атомов, по меньшей мере с одним центром ненасыщенности, т. е. двойной углерод-углеродной связью, при этом алкениловый радикал включает радикалы, имеющие "цис" и "транс" ориентации, или, по альтернативной номенклатуре, "Е" и "Ζ" ориентации. Примеры включают, но не ограничиваясь этим, этиленил или винил (--СН=СН2), аллил (--СН2СН=СН2) и т.п. Предпочтительно алкенил имеет от одного до десяти углеродных атомов, упоминаемый также как "С2-10алкенил". Более предпочтительно алкенил имеет от одного до четырех углеродных атомов, упоминаемый также как "С2-4алкенил".
"Алкинил", используемый в настоящем документе, относится к алифатическому линейному или разветвленному одновалентному углеводородному радикалу, содержащему от двух до двадцати углеродных атомов, по меньшей мере с одной тройной углерод-углеродной связью. Примеры включают, но не ограничиваясь этим, этинил, пропинил, 1-бутинил, 2-бутинил, 1-пентинил, 2-пентинил, 3-пентинил, гексинил и т.п.
Предпочтительно алкинил имеет от одного до десяти углеродных атомов, упоминаемый также как "С2-10алкинил". Более предпочтительно алкинил имеет от одного до четырех углеродных атомов, упоминаемый также как "С2-4алкинил".
Термин "алкилен" относится к насыщенному алифатическому линейному или разветвленному двухвалентному углеводородному радикалу, имеющему от одного до двадцати углеродных атомов. Предпочтительно алкилен имеет от одного до десяти углеродных атомов. Более предпочтительно алкилен имеет от одного до четырех углеродных атомов.
Термины "карбоцикл", "карбоциклил", "карбоциклический" и "карбоциклическое кольцо" относятся к одновалентному неароматическому, насыщенному или частично насыщенному кольцу, имеющему от 3 до 12 углеродных атомов в виде моноциклического кольца или от 7 до 12 углеродных атомов в виде бициклического кольца. Бициклические карбоциклы, имеющие от 7 до 12 атомов, могут быть расположены, например, в виде бициклических [4,5], [5,5], [5,6] или [6,6] систем, а бициклические карбоциклы, имеющие 9 или 10 кольцевых атомов могут быть расположены в виде бициклических [5,6] или [6,6] систем, или в виде мостиковых систем, таких как бицикло [2.2.1] гептан, бицикло[2.2.2]октан и бицикло[3.2.2]нонан. Примеры моноциклических карбоциклов включают, но не ограничиваясь этим, циклопропил, циклобутил, циклопентил, 1-циклопент-1-енил, 1-циклопент-2-енил, 1-циклопент-3-енил, циклогексил, 1-циклогекс-1-енил, 1-циклогекс-2-енил, 1-циклогекс-3-енил, циклогексадиенил, циклогептил,
- 7 029797
циклооктил, циклононил, циклодецил, циклоундецил, циклододецил и т.п.
Термины "циклический алкил" и "циклоалкил" могут быть использованы взаимозаменяемо. Они относятся к одновалентному насыщенному карбоциклическому кольцевому радикалу. Предпочтительно циклоалкил представляет собой 3-7-членный моноциклический кольцевой радикал. Более предпочтительно циклоалкил представляет собой циклогексил.
Термин "циклоалкилалкил" относится к циклоалкиловой группе, которая связана с другой группой при помощи алкиленовой группы. Примеры циклоалкилалкилов включают, но не ограничиваясь этим, циклогексилметил, циклогексилэтил, циклопентилметил, циклопентилэтил и т.п. Предпочтительно циклоалкилалкил представляет собой циклогексилметил.
"Арил", при использовании в настоящем документе, означает одновалентный моноциклический или полициклический (например, бициклический или трициклический) ароматический углеводородный радикал из 6-18 углеродных атомов, полученный удалением одного атома водорода от одного атома углерода исходной ароматической кольцевой системы. Некоторые ариловые группы представлены в иллюстративных структурах как "Аг". Арил включает бициклические радикалы, содержащие ароматическое кольцо, конденсированное с насыщенным, частично ненасыщенным кольцом или ароматическим карбоцикличическим или гетероциклическим кольцом. Типичные ариловые группы включают, но не ограничиваясь этим, радикалы, полученные из бензола (фенил), насыщенных бензолов, нафталина, антрацена, инденила, инданила, 1,2-дигидронафталина, 1,2,3,4-тетрагидронафтила, и т.п. Предпочтительно арил представляет собой фениловую группу.
"Арилалкил" относится к ариловой группе, которая связана с другой группой при помощи алкиленовой группы. Примеры арилалкиловых групп включают, но не ограничиваясь этим, бензил, фенилэтил, нафт-3-ил-метил и т.п. Предпочтительно арилалкил представляет собой бензил.
Термины "гетероцикл", "гетероциклил", "гетероциклический" и "гетероциклическое кольцо" используются в настоящем документе взаимозаменяемо и относятся к насыщенному или частично ненасыщенному (наприме, имеющему одну или более двойных и/или тройных связей в кольце) карбоциклическому радикалу из 3-18 кольцевых атомов, в которых по меньшей мере один кольцевой атом представляет собой гетероатом, выбранный из азота, кислорода, фосфора и серы, а остальные кольцевые атомы представляют собой С, где один или более кольцевых атомов необязательно независимо замещены одним или более заместителями, описанными ниже. Гетероцикл может быть моноциклом, имеющим от 3 до 7 кольцевых членов (2-6 углеродных атомов и 1-4 гетероатома, выбранных из Ν, О, Р и 8), или бициклом, имеющим от 7 до 10 кольцевых членов (4-9 углеродных атомов и 1-6 гетероатомов, выбранных из Ν, О, Р и 8), например бицикло [4,5], [5,5], [5,6] или [6,6] система. Гетероциклы описаны в публикациях Расщепе, Бсо А.; "Рг1пс1р1с5 οί Мобетп НеЮгосусПс СНеттгу" (\У.А. Вещатш, Нью-Йорк, 1968), в частности в главах 1, 3, 4, 6, 7 и 9; "ТНс СНетШгу οί Не1егосусПс Сотроипбк, А 5епе5 οί Моподгарйк" (1оНп \УПеу & 8оп8, Нью-Йорк, 1950 до н.в.), в частности в томах 13, 14, 16, 19 и 28; и в публикации 1. Ат. СНет. 8ос. (1960), 82:5566. "Гетероциклил" включает также радикалы, в которых гетероциклические радикалы конденсированы с насыщенным, частично ненасыщенным кольцом или ароматическим карбоциклическим или гетероциклическим кольцом. Примеры гетероциклических колец включают, но не ограничиваясь этим, пирролидинил, тетрагидрофуранил, дигидрофуранил, тетрагидротиенил, тетрагидропиранил, дигидропиранил, тетрагидротиопиранил, пиперидино, морфолино, тиоморфолино, тиоксанил, пиперазинил, гомопиперазинил, азетидинил, оксетанил, тиетанил, гомопиперидинил, оксепанил, тиепанил, оксазепинил, диазепинил, тиазепинил, 2-пирролинил, 3-пирролинил, индолинил, 2Н-пиранил, 4Нпиранил, диоксанил, 1,3-дикосоланил, пиразолинил, дитианил, дитиоланил, дигидропиранил, дигидротиенил, дигидрофуранил, пиразолидинилимидазолинил, имидазолидинил, 3-азабицикло[3.1.0]гексанил,
3- азабицикло[4.1.0]гептанил и азабицикло[2.2.2]гексанил. В это определение включены также спирофрагменты. Примеры гетероциклической группы, в которой кольцевые атомы замещены фрагментами оксо (=0), представляют собой пиримидинонил и 1,1-диоксо-тиоморфолинил.
Термин "гетероциклилалкил" относится к гетероциклилу, который присоединен к другой группе при помощи алкиленовой группы.
Термин "гетероарил" относится к одновалентному ароматическому радикалу из 5- или 6-членных колец и включает системы конденсированных колец (по меньшей мере одно из которых является ароматическим) из 5-18 атомов, содержащие один или более гетероатомов, независимо выбранных из азота, кислорода и серы. Примеры гетероариловых групп представляют собой пиридинил (включая, например, 2-гидроксипиридинил), имидазолил, имидазопиридинил, пиримидинил (включая, например,
4- гидроксипиримидинил), пиразолил, триазолил, пиразинил, тетразолил, фурил, тиенил, изоксазолил, тиазолил, оксазолил, изотиазолил, пирролил, хинолинил, изохинолинил, индолил, бензимидазолил, бензофуранил, циннолинил, индазолил, индолизинил, фталазинил, пиридазинил, триазинил, изоиндолил, птеридинил, пуринил, оксадиазолил, триазолил, тиадиазолил, фуразанил, бензофуразанил, бензотиофенил, бензотиазолил, бензоксазолил, хиназолинил, хиноксалинил, нафтиридинил и фуропиридинил.
Гетероциклические или гетероариловые группы могут быть присоединены, где это возможно, по атому углерода (углерод-связанные) или по атому азота (азот-связанные). В качестве примера, но не ограничения, углерод-связанные гетероциклы или гетероарилы связаны в положении 2, 3, 4, 5 или 6 пири- 8 029797
дина, положении 3, 4, 5 или 6 пиридазина, положении 2, 4, 5 или 6 пиримидина, положении 2, 3, 5 или 6 пиразина, положении 2, 3, 4 или 5 фурана, тетрагидрофурана, тиофурана, пиррола или тетрагидропиррола, положении 2, 4 или 5 оксазола, имидазола или тиазола, положении 3, 4 или 5 изоксазола, пиразола или изотиазола, положении 2 или 3 азиридина, положении 2, 3 или 4 азетидина, положении 2, 3, 4, 5, 6, 7 или 8 хинолина или положении 1, 3, 4, 5, 6, 7 или 8 изохинолина.
В качестве примера, но не ограничения, азотсвязанные гетероциклы или гетероарилы связаны в положении 1 азиридина, азетидина, пиррола, пирролидина, 2-пирролина, 3-пирролина, имидазола, имидазолидина, 2-имидазолина, 3-имидазолина, пиразола, пиразолина, 2-пиразолина, 3-пиразолина, пиперидина, пиперазина, индола, индолина, 1Н-индазола, положении 2 изоиндола или изоиндолина, положении 4 морфолина и положении 9 карбазола или О-карболина.
Гетератомы, присутствующие в гетероариле или гетероциклиле, могут включать окисленные формы, такие как N0, 80 и §02.
Термин "гетероарилалкил" относится к гетероарилу, который присоединен к другой группе при помощи алкиленовой группы.
Термин "гало" или "галоген" относится к Р, С1, Вг или I.
Алкил, алкенил, циклоалкил, карбоциклил, арил, гетероциклил и гетероарил, описанные выше, могут быть необязательно замещены одним или более (например, 2, 3, 4, 5, 6 или более) соответствующими заместителями. В одном варианте реализации алкил, алкенил, циклоалкил, карбоциклил, арил, гетероциклил и гетероарил, описанные выше, являются незамещенными. В другом варианте реализации алкил, алкенил, циклоалкил, карбоциклил, арил, гетероциклил и гетероарил, описанные выше, замещены одним или более (например, 2, 3, 4, 5, 6 или более) соответствующими заместителями.
Такие соответствующие заместители в неограничивающих примерах могут быть выбраны из алкила, алкенила или алкинила, имеющего от 1 до 10 углеродных атомов, циклоалкила, арила, гетероарила, гетероциклила, галогена, гуанидиния |-ΝΗ(ί'.’=ΝΗ)ΝΗ2|. -0Κ100, ΝΚ101Κ102, -Ν02, -ΝΚ.|0ΐί'.ΌΚ.102. -§Κ100, сульфоксида, представленного формулой -§0Κ101, сульфона, представленного формулой -§02Κ101, сульфоната -§03М, сульфата -0§03М, сульфонамида, представленного формулой -§02ΝΚ101Κ102, циано, азидо, -С0К101, -0С0К101, -0ί.ΌΝΚ101Κ102 и полиэтиленгликолевого звена (-0СН2СН2)пК101, при этом М представляет собой Н или катион (такой как Να' или К'); Κ100, Κ101, Κ102 и Κ103, каждый независимо, выбраны из Н, алкила, алкенила или алкинила, имеющего от 1 до 10 углеродных атомов, полиэтиленгликолевого звена (-0СН2СН2)п-К104, при этом п представляет собой целое число от 1 до 24, арила, имеющего от 6 до 10 углеродных атомов, гетероциклического кольца, имеющего от 3 до 10 углеродных атомов, и гетероарила, имеющего от 5 до 10 углеродных атомов; и Κ104 представляет собой Н или линейный или разветвленный алкил, имеющий от 1 до 4 углеродных атомов, при этом указанный алкил, алкенил, алкинил, арил, гетероарил и гетероциклил в группах, представленных формулами Κ100, Κ101, Κ102, Κ103 и Κ104, необязательно замещены одним или более (например, 2, 3, 4, 5, 6 или более) заместителями, независимо выбранными из галогена, -ОН, С^ Ν02 и незамещенного линейного или разветвленного алкила, имеющего от 1 до 4 углеродных атомов. Предпочтительно заместители для необязательно замещенного алкила, алкенила, алкинила, циклического алкила, циклического алкенила, циклического алкинила, карбо102 103
циклила, арила, гетероциклила и гетероарила, описанных выше, включают галоген, С^ ΝΚ Κ , СР3, 0Κ101, арил, гетероарил, гетероциклил, §Κ101, §0Κ101, §02Κ101 и -§03М. Предпочтительно соответствующий заместитель выбран из группы, состоящей из -галогена, -ОН, -Ν02, -С^ С1-4 алкила, -0Κ100, ΝΚ101Κ102, -ΝΚ10Τ0Κ102, -§Κ100, -§02Κ101, -§02ΝΚ101Κ102, -С0К101, -0С0К и -0(ΌΝΚ Κ\ при этом Κ100, κ101 и Κ102, каждый независимо, представляют собой -Н или С1-4 алкил.
Термин "соединение" и "цитотоксическое соединение" используются взаимозаменяемо. Они предназначены для включения соединений или любых их производных, для которых в настоящем изобретении описана структура или формула, или соединений или любых их производных, структура или формула которых включены путем ссылки. Соединения настоящего изобретения могут содержать асимметричные или хиральные центры и, таким образом, существовать в различных стереоизомерных формах. Предполагается, что все стереоизомерные формы соединений настоящего изобретения, включая, но не ограничиваясь этим, диастереомеры, энантиомеры и атропизомеры, а также их смеси, такие как рацемические смеси, являются частью настоящего изобретения. Этот термин включает также сольваты, гидраты, полиморфы или соли (например, фармацевтически приемлемые соли) соединений всех формул, описанных в настоящем изобретении. Конкретное перечисление "стереоизомеров", "геометрических изомеров", "таутомеров", "сольватов", "солей", "конъюгатов", "солей конъюгатов", "сольвата", "гидрата" или "полиморфа", в некоторых аспектах настоящего изобретения, описанных в настоящей заявке, не следует толковать как намеренное упущение этих форм в других аспектах настоящего изобретения, где используется термин "соединение" без перечисления этих других форм.
Термин "конъюгат", используемый в настоящем документе, относится к соединению, описанному в настоящем документе, или его производному, которое связано с клеточно-связывающим агентом.
Термин "связываемый с клеточно-связывающим агентом", используемый в настоящем документе, относится к соединениям, описанным в настоящем документе, или их производным, содержащим по меньшей мере одну химически активную группу или ее предшественник, пригодный для связывания
- 9 029797
этих соединений или их производных с клеточно-связывающим агентом.
Термин "предшественник" данной группы относится к любой группе, которая может привести к получению этой группы при помощи какой-либо реакции снятия защиты, химической модификации или реакции связывания.
Термин "пролекарство", используемый в настоящей заявке, относится к предшественнику или производной форме соединения настоящего изобретения, которое может быть ферментативно или гидролитически активировано или преобразовано в более активную исходную форму. См., например, Убтап, "Ргобгид8 ίη Сапсег СЬетоШегару" ВюсЬетюа1 δοοίοίν Ттап8ас1юп8, 14, сс. 375-382, 615* МееОпд Ве1Га8! (1986) и §!е11а е! а1., "Ргобгид8: А СЬетюа1 Арртоасй 1о Тагде!еб Эгид ПеЬуету," Эиеиеб Эгид ПеИуету, ВотсЬатб! е! а1., (ред.), с. 247-267, Нитапа Рге88 (1985). Термин "пролекарство" также включает производное соединения, которое может гидролизоваться, окисляться или иным образом реагировать в биологических условиях (ίη уйто или ίη у1уо) с образованием соединения настоящего изобретения. Пролекарства могут становиться активными только при протекании таких реакций в биологических условиях, или могут быть активными в не прореагировавшей форме.
Термин "аминокислота" относится к природным и синтетическим аминокислотам, а также к аналогам аминокислот и миметикам аминокислот, которые действуют таким же образом, как и природные аминокислоты. Природные аминокислоты представляют собой те, которые кодируются генетическим кодом, а также те аминокислоты, которые модифицируются позже, например гидроксипролин, γкарбоксиглутамат, селеноцистеин и О-фосфосерин. "Аналоги аминокислот" относится к соединениям, которые имеют такую же базовую химическую структуру, что и природная аминокислота, т.е. а-углерод, который связан с водородом, карбоксильной группой, аминогруппой и группой К, например гомосерин, норлейцин, метионин сульфоксид, метионин-метил-сульфоний. Такие аналоги имеют модифицированные группы К (например, норлейцин) или модифицированные пептидные скелеты, но сохраняют такую же основную химическую структуру, как у природной аминокислоту. Одна аминокислота, которая может быть использована в особенности, представляет собой цитруллин, который является производным аргинина и участвует в образовании мочевины в печени. "Миметики аминокислот" относится к химическим соединениям, которые имеют структуру, отличную от общей химической структуры аминокислоты, но действуют так же, как и природная аминокислота. Термин "неприродная аминокислота" представляет собой "Ό" стереохимическую форму двадцати природных аминокислот, описанных выше. Дополнительно следует понимать, что термин "неприродная аминокислота" включает гомологи природных аминокислот или их Ό-изомеры, а также синтетически модифицированные формы природных аминокислот. Синтетически модифицированные формы включают, но не ограничиваясь этим, аминокислоты, имеющие боковые цепи, укороченные или удлиненные на отрезок, содержащий до двух углеродных атомов, аминокислоты, содержащие необязательно замещенные ариловые группы, и аминокислоты, содержащие галогенированные группы, предпочтительно галогенированные алкиловые и ариловые группы, а также Ν-замещенные аминокислоты, например Ν-метил-аланин. Аминокислота или пептид может быть присоединен к линкеру/спейсеру или клеточно-связывающему агенту через концевой амин или концевую карбоновую кислоту указанной аминокислоты или пептида. Аминокислота также может быть присоединена к линкеру/спейсеру или клеточно-связывающему агенту через химически активную группу боковой цепи, такой как, но не ограничиваясь этим, тиоловая группа цистеина, эпсилон-амин лизина или гидроксильные группы боковой цепи серина или треонина.
Аминокислоты и пептиды могут быть защищены блокирующими группами. Блокирующая группа представляет собой атом или химический фрагмент, который защищает Ν-окончание аминокислоты или пептида от нежелательных реакций, и может быть использована при синтезе конъюгата лекарственного вещества и лиганда. Она должна сохраняться присоединенной к Ν-окончанию в ходе синтеза, и может быть удалена после завершения синтеза лекарственного конъюгата при химических или других условиях, при которых селективно достигается ее удаление. Блокирующие группы, применимые для защиты Νокончания, хорошо известны в области химии пептидов. Иллюстративные блокирующие группы включают, но не ограничиваясь этим, метиловые эфиры, трет-бутиловые эфиры, 9-флуоренилметил карбамат (Ртос) и карбобензокси (СЬ/).
Термин "пептид, расщепляемый протеазой", относится к пептидам, содержащим последовательность протеазы для распознавания расщепления. Последовательность распознавания расщепления для протеазы представляет собой специфическую аминокислотную последовательность, распознаваемую протеазой при протеолитическом расщеплении. В данной области техники известны многие протеазные сайты расщепления, и эти и другие сайты расщепления могут быть включены в линкерный фрагмент. См., например, Ма1ауо8Ы е! а1. 8с1епсе 247: 954 (1990); Όικιπ е! а1. Ме1Ь. Еп/уто1. 241: 254 (1994); §е1баЬ е! а1. Ме!Ь. Еп/уто1. 244: 175 (1994); ТЬогпЬепу, Ме1Ь. Еп/уто1. 244:615 (1994); УеЬег е! а1. Ме!Ь. Еп/уто1. 244:595 (1994); §тйЪ е! а1. Ме1Ь. Еп/уто1. 244: 412 (1994); Воиу1ег е! а1. Ме!Ь. Еп/уто1. 248: 614 (1995), Нагбу е! а1., в книге АМУЪОГО ΡΚΟΤΈΙΝ РКЕСИК8ОК ΙΝ ИЕУЕЬОРМЕет, ΑΟΙΝΟ, ΑΝΌ ΑΌΖНЕ1МЕК'8 И1§ЕА§Е, еб. Ма8!ег8 е! а1. сс. 190-198 (1994).
- 10 029797
Пептидную последовательность выбирают на основании ее способности расщепляться протеазой, неограничивающие примеры которой включают катепсины В, С, Б, Н, Ь и 8, а также фурин. Предпочтительно пептидная последовательность способна расщепляться соответствующей выделенной протеазой ίη νίίτο, которая может быть испытана с использованием ίη νίίτο анализов расщепления протеазой, известных в данной области.
В другом варианте реализации пептидную последовательность выбираю на основе ее способности расщепляться лизосомальной протеазой. Лизосомальная протеаза представляет собой протеазу, расположенную, в основном, в лизосомах, но она может также находиться в эндосомах. Примеры лизосомальной протеазы включают, но не ограничиваясь этим, катепсины В, С, Б, Н, Ь и 8, а также фурин.
В другом варианте реализации пептидную последовательность выбирают на основе ее способности расщепляться связанной с опухолью протеазой, такой как протеаза, которая находится на поверхности раковой клетки или вне клетки вблизи опухолевых клеток, не ограничивающие примеры таких протеаз включают тимет-олигопептидазу (ТОР), СБ10 (неприлизин), матриксную металлопротеазу (такую как ММР2 или ММР9), трансмембранную серин-протеазу типа II (такую как гепсин, тестисин, ТМРК884 или матриптаза/МТ-8Р1), легумейн и ферменты, описанные в следующей ссылке (СиггсШ Τορίοδ ίη Ос\'с1ортсп1а1 Βίοίοβν: Се11 8шТасе Рго1са5С5. том 54 2искет 8. 2003, Бостон, штат Массачусетс). Способность пептида расщепляться связанной с опухолью протеазой может быть испытана с использованием ίη νίίτο анализов расщепления протеазой, известных в данной области.
Выражение "фармацевтически приемлемая соль", используемое в настоящем документе, относится к фармацевтически приемлемым органическим или неорганическим солям соединения настоящего изобретения. Иллюстративные соли включают, но не ограничиваясь этим, сульфатные, цитратные, ацетатные, оксалатные, хлоридные, бромидные, йодидные, нитратные, бисульфатные, фосфатные, гидрофосфатные, изоникотинатные, лактатные, салицилатные, гидроцитратные, тартратные, олеатные, таннатные, пантотенатные, битартратные, аскорбатные, сукцинатные, малеатные, гентизинатные, фумаратные, глюконатные, глюкуронатные, сахаратные, формиатные, бензоатные, глутаматные, метансульфонатные "мезилатные", этансульфонатные, бензолсульфонатные, п-толуолсульфонатные, памоатные (т.е. 1,1'-метилен-бис-(2-гидрокси-3-нафтоатные)) соли, соли щелочных металлов (например, натрия и калия), соли щелочно-земельных металлов (например, магния) и соли аммония. Фармацевтически приемлемая соль может включать другую молекулу, такую как ацетат-ион, сукцинат-ион или другой противоион. Противоионом может быть любой органический или неорганический фрагмент, стабилизирующий заряд исходного соединения. Кроме того, фармацевтически приемлемая соль может иметь более одного заряженного атома в своей структуре. В случаях, где частью фармацевтически приемлемой соли являются многозарядные атомы, может быть несколько противоионов. Поэтому фармацевтически приемлемая соль может иметь один или более заряженных атомов и/или один или более противоионов.
Если соединение настоящего изобретения содержит один или более основных фрагментов, то заданные фармацевтически приемлемые соли могут быть получены любым подходящим способом, доступным в данной области техники, например обработкой свободного основания неорганической кислотой, такой как хлороводородная кислота, бромоводородная кислота, серная кислота, азотная кислота, метансульфоновая кислота, фосфорная кислота, и тому подобными, или органической кислотой, такой как уксусная кислота, малеиновая кислота, янтарная кислота, миндальная кислота, фумаровая кислота, малоновая кислота, пировиноградная кислота, щавелевая кислота, гликолевая кислота, салициловая кислота, пиранозидиловая кислота, такая как глюкуроновая кислота или галактуроновая кислота, альфагидрокси кислота, такая как лимонная кислота или винная кислота, аминокислота, такая как аспарагиновая кислота или глутаминовая кислота, ароматическая кислота, такая как бензойная кислота или коричная кислота, сульфоновая кислота, такая как п-толуолсульфоновая кислота или этансульфоновая кислота, и т. п.
Если соединение настоящего изобретения содержит один или более кислотных фрагментов, то заданные фармацевтически приемлемые соли могут быть получены любым подходящим способом, например обработкой свободной кислоты неорганическим или органическим основанием, таким как амин (первичный, вторичный или третичный), гидроксидом щелочного металла или гидроксидом щелочноземельного металла или т. п. Иллюстративные примеры соответствующих солей включают, но не ограничиваясь этим, органические соли, полученные из аминокислот, таких как глицин и аргинин, аммиака, первичных, вторичных и третичных аминов, циклических аминов, таких как пиперидин, морфолин и пиперазин, и неорганические соли, полученные из натрия, кальция, калия, магния, марганца, железа, меди, цинка, алюминия и лития.
При использовании в настоящем документе термин "сольват" означает соединение, которое дополнительно содержит стехиометрическое или нестехиометрическое количество растворителя, такого как вода, изопропанол, ацетон, этанол, метанол, ДМСО, этилацетат, уксусная кислота и этаноламин, дихлорметан, 2-пропанол или тому подобного, связанного не ковалентными межмолекулярными силами. Сольваты или гидраты соединений легко получают добавлением по меньшей мере 1 мол. экв. гидроксильного растворителя, такого как метанол, этанол, 1-пропанол, 2-пропанол или вода, к соединению, в результате чего происходит сольватация или гидратация иминогруппы.
- 11 029797
Термин "цитотоксическое средство", используемый в настоящем документе, относится к любому соединению, которое приводит к гибели клетки, вызывает гибель клетки или снижает жизнеспособность клетки. Соответствующие цитотоксические агенты включают, например, майтанзиноиды и майтанзиноидные аналоги, доксарубицин, таксоиды, СС-1065 и аналоги СС-1065, тубулизин, калихеамицин, производные дуокарицина, доластатин и доластатиновые аналоги, например ауристатины, в том числе ауристатин Е и ауристатин Р. В предпочтительно варианте реализации настоящего изобретения цитотоксическое средство представляет собой майтанзиноид, в том числе майтанзинол, аналоги майтанзинола, ансамитоцин и аналоги ансамитоцина. Майтанзиноиды представляют собой соединения, которые ингибируют образование микротрубочек и являются высокотоксичными для клеток млекопитающих. Примеры соответствующих аналогов майтанзинола включают те, которые имеют модифицированное ароматическое кольцо, и те, которые имеют модификации в других положениях. Такие майтанзиноиды описаны, например, в патентах США 4256746, 4294757, 4307016, 4313946, 4315929, 4322348, 4331598, 4361650, 4362663, 4364866, 4424219, 4371533, 4450254, 5475092, 5585499, 5846545 и 6333410.
Термины "патологический клеточный рост" и "пролиферативное расстройство" используются в настоящей заявке взаимозаменяемо. Термин "патологический клеточный рост" при использовании в настоящем документе, если не указано иное, относится к клеточному росту, который не зависит от нормальных регуляторных механизмов (например, снижения контактного ингибирования). Это включает, например, патологический рост: (1) опухолевых клеток (опухолей), которые разрастаются за счет экспрессии мутированной тирозинкиназы или сверхэкспрессии рецепторной тирозинкиназы; (2) доброкачественных и злокачественных клеток других пролиферативных заболеваний, в которых возникает аберрантная активация тирозинкиназы; (3) любых опухолей, которые разрастаются за счет рецепторных тирозинкиназ; (4) любых опухолей, которые разрастаются за счет аберрантной активации серин/треонинкиназы; и (5) доброкачественных и злокачественных клеток других пролиферативных заболеваний, в которых возникает аберрантная активация серин/треонинкиназы.
Термины "рак" и "раковый" относятся или описывают физиологическое состояние млекопитающего, которое обычно характеризуется нерегулируемым клеточным ростом. "Опухоль" содержит одну или более раковых клеток. Примеры рака включают, но не ограничиваясь этим, карциному, лимфому, бластому, саркому и лейкоз или лимфолейкоз. Более конкретные примеры таких раковых заболеваний включают плоскоклеточный рак (например, эпителиальный плоскоклеточный рак), рак легких, включая мелкоклеточный рак легких, немелкоклеточный рак легких ("Ы§СЬС"), аденокарциному легких и плоскоклеточную карциному легких, рак брюшины, гепатоцеллюлярный рак, гастральный или рак желудка, включая гастроинтестинальный рак, рак поджелудочной железы, глиобластому, рак шейки матки, рак яичников, рак печени, рак мочевого пузыря, гепатому, рак молочной железы, рак толстой кишки, рак прямой кишки, колоректальный рак, внутриматочный или рак матки, карциному слюнной железы, почечный или ренальный рак, рак простаты, рак вульвы, рак щитовидной железы, карциному печени, анальную карциному, пенильный рак, острый лейкоз, а также рак головы/головного мозга и шеи.
Термин "терапевтическое средство" включает как биологический агент, такой как антитело, пептид, белок или фермент, так и химиотерапевтическое средство.
"Химиотерапевтическое средство" представляет собой соединение, применимое для лечения рака.
"Метаболит" представляет собой продукт, вырабатываемый в процессе метаболизма в организме определенного соединения, его производного, его конъюгата или его соли. Метаболиты соединения, его производного или его конъюгата могут быть идентифицированы при помощи стандартных приемов, известных в данной области техники, а их активности определяют при помощи таких анализов, как описаны в настоящем документе. Такие продукты могу образовываться, например, в результате окисления, гидроксилирования, восстановления, гидролиза, амидирования, деамидирования, эстерификации, деэстерификации, ферментативного расщепления и тому подобного, введенного соединения. Соответственно, настоящее изобретение включает метаболиты соединений настоящего изобретения, их производных или их конъюгатов, включая соединения, их производные или их конъюгаты, полученные в процессе, включающем приведение в контакт соединения настоящего изобретения, его производного или его конъюгата с организмом млекопитающего в течение периода времени, достаточного для получения его метаболического продукта.
Выражение "фармацевтически приемлемый" показывает, что вещество или композиция должна быть совместима, химически и/или токсикологически, с другими ингредиентами, входящими в состав композиции, и/или с организмом млекопитающего, подлежащим лечению.
Термин "уходящая группа" относится к заряженному или незаряженному фрагменту, который уходит в реакции замещения или вытеснения. Такие уходящие группы хорошо известны в данной области и включают, но не ограничиваясь этим, галогены, алкокси, тозилаты, трифлаты, мезилаты, азид, карбамат, одну тио-группу дисульфида, сложные тиоэфиры и диазониевые соединения.
"Химически активная группа" или "химически активный фрагмент", описанные в настоящем документе, относится к функциональной группе, которая может образовывать химическую связь с клеточносвязывающим агентом или цитотоксическим средством. Соответствующие химические связи хорошо известны в данной области техники и включают дисульфидные связи, тиоэфирные связи, кислото- 12 029797
неустойчивые связи, фотонеустойчивые связи, пептидаза-неустойчивые связи и эстераза-неустойчивые связи (см., например, патенты США 5208020; 5475092; 6441163; 6716821; 6913748; 7276497; 7276499; 7368565; 7388026 и 7414073). Предпочтительными являются дисульфидные связи, тиоэфирные и пептидаза-неустойчивые связи.
В одном варианте реализации химически активная группа выбрана из группы, состоящей из малеимида, галоацетамидо, -8Н, -88К, -СЩЗН, -СН(Ме)8Н, -С(Ме>>5Н, -ΝΗΚ6, -СН.-ХНН". -ΝΚ8ΝΗ2, -СООН, химически активного сложного эфира, аминокислоты или пептида, имеющего от 2 до 10 аминокислот, при этом Кг выбран из фенила, нитрофенила (например, 2- или 4-нитрофенила), динитрофенила (например, 2- или 4-нитрофенила), карбоксинитрофенила (например, 3-карбокси-4-нитрофенила), пиридила или нитропиридила (например, 4-нитропиридила), а К6 представляет собой -Н или С1-4 алкил.
Термин "связывающий фрагмент", используемый в настоящем документе, относится к оставшемуся химическому фрагменту химически активной группы после ковалентного связывания указанной химически активной группы с клеточно-связывающим агентом или цитотоксическим средством. Например, если связывающая группа Ν-гидроксисукцинимидного эфира химически связана с аминогруппой клеточносвязывающего агента, то соответствующий связывающий фрагмент представляет собой -С(=О)-. В другом примере, если связывающая группа малеимидной группы химически связана с тиогруппой (-8Н) клеточно-связывающего агента, то связывающий фрагмент представляет собой °
"Химически активный сложный эфир", используемый в настоящем документе, относится к сложноэфирной группе, имеющей уходящую группу, которая легко вытесняется аминогруппой или гидроксильной группой. Примеры химически активного сложного эфира включают, но не ограничиваясь этим, Ν-гидроксисукцинимидный эфир, Ν-гидроксисульфосукцинимидный эфир, нитрофениловый (например, 2- или 4-нитрофениловый) эфир, динитрофениловый (например, 2,4-динитрофениловый) эфир, сульфотетрафторфениловый (например, 4-сульфо-2,3,5,6-тетрафторфениловый) эфир и пентафторфениловый
эфир.
Термин "терапевтически эффективное количество" обозначает такое количество активного соединения или конъюгата, которое вызывает заданную биологическую реакцию у субъекта. Такая реакция включает облегчение симптомов заболевания или расстройства, подлежащего лечению, предупреждение, замедление или отсрочку рецидива симптома заболевания или самого заболевания, увеличение продолжительности жизни субъекта по сравнению с отсутствием лечения, или предупреждение, замедление или отсрочку прогрессирования симптома заболевания или самого заболевания. Определение эффективного количества входит в возможности специалиста в данной области, особенно в свете подробного описания, представленного в настоящем документе. Токсичность и терапевтическая эффективность соединения I могут быть определены стандартными фармацевтическими приемами в клеточных культурах и на подопытных животных. Эффективное количество соединения или конъюгата настоящего изобретения или другого терапевтического средства, подлежащего введению субъекту, зависит от стадии, категории и статуса множественной миеломы и характеристик субъекта, таких как общее состояние здоровья, возраст, пол, вес тела и переносимость лекарств. Эффективное количество соединения или конъюгата настоящего изобретения или другого терапевтического средства, подлежащего введению, зависит также от способа введения и лекарственной формы. Количество дозы и интервал введения могут быть подобраны индивидуально для обеспечения уровней активного соединения в плазме, достаточных для поддержания заданного терапевтического эффекта.
Значения и предпочтительные значения для переменных.
Настоящее изобретение относится к новым цитотоксическим средствам (например, соединениям структурной формулы (II), их производным (например, соединениям структурной формулы (III) и (IV)) и конъюгатам клеточно-связывающего агента и цитотоксического средства, содержащим клеточносвязывающий агент, ковалентно связанный с цитотоксическими средствами, или их производным, описанным в настоящем документе (например, конъюгатам структурной формулы (I)).
В одном варианте реализации значения и предпочтительные значения для переменных, изображенных на структурных формулах (I), (II), (III) и (IV) являются такими, как описано ниже.
- 13 029Ί9Ί
Значения и предпочтительные значения для I).
□ представляет собой цитотоксическое средство. В одном варианте реализации, I) представляет собой майтанзиноид. В другом варианте реализации I) представлен следующей структурной формулой:
где Υ' отсутствует или представляет собой -С(=О)(СК7К8)11(СК9=СК10)р1(С=С)д1А'г1(СК5К6)т1П'и1 (СК11=СК.12)Г1(С=С)81В'11(СК3К4)п1СК1К28-, при этом
К1 и К-2, каждый независимо, представляют собой Н, линейный или разветвленный алкил или алкенил, имеющий от 1 до 10 углеродных атомов, циклоалкил или циклоалкенил, имеющий от 3 до 10 углеродных атомов, фенил, замещенный фенил, замещенный по меньшей мере одним алкилом, имеющим 1-4 углеродных атома, алкокси, галоген или нитро, или гетероарил или гетероциклил;
А', В', □' представляют собой циклоалкил или циклоалкенил, имеющий 3-10 углеродных атомов, необязательно замещенный арил, гетероарил или гетероциклил;
К3, К4, К5, Кб, К7, К8, К9, К11 и К12, каждый независимо, представляют собой Н, линейный или разветвленный алкил или алкенил, имеющий от 1 до 10 углеродных атомов, циклоалкил или циклоалкенил, имеющий от 3 до 10 углеродных атомов, фенил, замещенный фенил, замещенный по меньшей мере одним алкилом, имеющим 1-4 углеродных атома, алкокси, галоген или нитро, или гетероарил или гетероциклил;
11, т1, η1, о1, р1, ς1, г1, з1 и 11, каждый независимо, представляют собой 0 или целое число от 1 до 5, при условии, что по меньшей мере два из 11, т1, п1, о1, р1, ς1, г1, з1 и 11 не равны нулю одновременно.
В другом варианте реализации I) представлен следующей формулой:
где Υ' отсутствует или представляет собой -С(=О)(СК7К8)11(СК5К6)т1(СК3К4)п1СК1К2§-, при этом
К1 и К2, каждый независимо, представляют собой Н, линейный или разветвленный алкил или алкенил, имеющий от 1 до 10 углеродных атомов, циклоалкил или циклоалкенил, имеющий от 3 до 10 углеродных атомов, фенил, замещенный фенил, замещенный по меньшей мере одним алкилом, имеющим 1-4 углеродных атома, алкокси, галоген или нитро, или гетероарил или гетероциклил;
К3, К4, К5, Кб, К7 и К8, каждый независимо, представляют собой Н, линейный или разветвленный алкил или алкенил, имеющий от 1 до 10 углеродных атомов, циклоалкил или циклоалкенил, имеющий от 3 до 10 углеродных атомов, фенил, замещенный фенил, замещенный по меньшей мере одним алкилом, имеющим 1-4 углеродных атома, алкокси, галоген или нитро, или гетероарил или гетероциклил;
11, т1 и η1, каждый независимо, представляют собой 0 или целое число от 1 до 5;
Мау'ОН представляет собой майтазинол или аналог майтанзинола.
Примеры соответствующих аналогов майтанзинола включают те, которые имеют модифицированное ароматическое кольцо, и те, которые имеют модификации в других положениях. Такие майтанзиноиды описаны, например, в патентах США № 4256746, 4294757, 4307016, 4313946, 4315929, 4322348, 4331598, 4361650, 4362663, 4364866, 4424219, 4371533, 4450254, 5475092, 5585499, 5846545 и 6333410.
Примеры аналогов майтанзинола, имеющих модифицированное ароматическое кольцо, включают: (1) С 19-дехлоро (патент США №4256746) (получен восстановлением анзамитоцина Р2 с использованием ЬАН), (2) С-20-гидрокси (или С-20-деметил)+/-С-19-дехлоро (патенты США №4361650 и 4307016) (получен деметилированием с использованием 81гер1отусез или АсВпотусез, или дехлорированием с использованием ЬАН), и (3) С-20-деметокси, С-20-ацилокси (--ОСОК), +/-дехлоро (патент США № 4294757) (получен ацилированием с использованием ацилхлоридов).
Примеры аналогов майтанзинола, имеющих модификации в других положениях, а не в ароматическом кольце, включают: (1) С-9-8Н (патент США № 4424219) (получен взаимодействием майтанзинола с
- 14 029797
Η2δ или Ρ2δ5), (2) С-14-алкоксиметил (деметокси/СН2ОК) (патент США № 4331598), (3) С-14гидроксиметил или ацилоксиметил (СН2ОН или СН2ОАс) (патент США № 4450254) (получен из КосагФа), (4) С-15-гидрокси/ацилокси (патент США №4364866) (получен превращением майтанзинола с использованием 81гер1отусез), (5) С-15-метокси (патенты США № 4313946 и 4315929) (выделен из Тге\\за пиФПога), (6) С-18-К-деметил (патенты США № 4362663 и 4322348) (получен деметилированием майтанзинола с использованием 81гер1отусез), и (7) 4,5-дезокси (патент США № 4371533) (получен восстановлением майтанзинола с использованием трихлорида титана/ЬАН).
В другом варианте реализации В представляет собой производное анзамитоцина, описанное в предварительной заявке на патент США № 61/409831, поданной 3 ноября 2010 года, полное описание которой включено в настоящий документ путем ссылки в полном объеме.
В другом варианте реализации В представлен следующей структурной формулой:
где Υ1 отсутствует или представляет собой -С(=О)(СК7К8)11(СК5К6)т1(СК3К4)п1(СК1К2(8)ч1)ч2-,
Κι, К2, К3, К4, К5, Кб, К7 и К8, каждый независимо, представляют собой Н, алкил, алкенил, циклоалкил, гетероарил, гетероциклил или арил; ς1 равен 0 или 1; с]2 равен 0 или 1, и
11, т1 и п1, каждый независимо, представляют собой 0 или целое число от 1 до 5.
Предпочтительно оба с]1 и с]2 равны 1.
В другом варианте реализации В представлен следующей структурной формулой:
- 15 029797
Значения и предпочтительные значения для Ь1ф
В одном варианте реализации Ь1 представлен следующей структурной формулой:
—дх—κΑ1—νη—ννη—κΒ1—νί—гсС1—б0-5
где каждый ΚΑ1, КВ1 и КС1 отсутствует, представляет собой алкил, алкенил, алкинил, циклоалкил, арил, гетероарил или гетероциклил, при этом указанный алкил, алкенил, алкинил, циклоалкил, арил, гетероарил и гетероциклил необязательно замещены;
1Х и 'Ψμ каждый независимо, отсутствуют, представляют собой -О-, -О-С(=О)-, -С(=О)-О-, -3-, -30-, -302-, -302ΝΗ-, -СКпК12-3-, -СКпК12-0-, -СКцКпЖ6-, -0-(С=0)0-, -0-(С=0)МКе)-, -Ν(Κ)-, -Ν(Κ)-
аминокислоту или пептид, имеющий от 2 до 8 аминокислот, при условии, что если Ζ представляет собой -ΚΗ-, 1Х и ν1 отсутствуют и КА1 представляет собой -СК11К12-, то Ψ1 не является -О-С(=О)-.
% отсутствует, представляет собой -С(=О)-, -3-,
-О-, -О-С(=О)-, -С(=О)-О-, -30-, -302-, -302ΝΗ-, -0-(С=0)-, -Ν(Κβ)-, -Ν(Κ®)-0(=Θ)- или -Ν(0(=Θ)Κ®)0(=0)-, или -Ν(0(=Θ)Κ®)-;
ν1 и ν1', каждый независимо, представляют собой -(0-СН2-СН2)р1-, -(СН2-СН2-0)р1-, -ЩКт-СН2-СН2)рГ- или -(СЩ-СЩ-ЖЦрг-;
Ке представляет собой Н, алкил, алкенил, алкинил или -(СН2-СН2-0)П'-Кк;
Кк и Кт, каждый независимо, представляют собой Н или алкил;
К11 и К12, каждый независимо, представляют собой Н или алкил; п' представляет собой целое число от 1 до 24;
р1 представляет собой 0 или целое число от 1 до 1000; р1' представляет собой 0 или целое число от 1 до 10.
Предпочтительно оба К11 и К12 представляют собой Н.
В другом варианте реализации Ь1 представлен структурой
-(ск9к10)т—ννΓκΒ1-υ0где К9 и К.10, каждый независимо, представляют собой Н или С1-4 алкил;
т представляет собой целое число от 1 до 10, а Ψ1, КВ1 и 1о являются такими, как описано выше, при условии, что если Ζ представляет собой -ΝΉ-, и т равен 1, то Ψ1 не является -О-С(=О)-.
В одном варианте реализации КА1, КВ1 и КС1, каждый независимо, отсутствуют или представляют собой алкил. Предпочтительно каждый КА1, КВ1 и КС1 отсутствует или представляет собой С1-6 алкил.
В другом варианте реализации КА1 отсутствует или представляет собой алкил, предпочтительно С1-6алкил; КВ1 представляет собой циклоалкил, предпочтительно циклогексил; и КС1 представляет собой алкил, предпочтительно С1-6алкил, более предпочтительно -СН2-.
В одном варианте воплощения 1Х отсутствует.
В одном варианте реализации Ψ1 отсутствует, представляет собой ^Н-С(=0)-, -С(=0^Н-, -С(=О)О- или -О-С(=О)-. Предпочтительно Ψ1 отсутствует или представляет собой -№Н-С(=0)-.
одном варианте реализации 1о отсутствует,
представляет собой -С(=О)-,
-КН-С(=0)-СН2- или -3-. Предпочтительно % отсутствует, представляет собой -С(=О)- или
В одном варианте реализации оба К9 и К10 представляют собой Н. Предпочтительно т равен 1, 2
или 3.
- 16 029797
В одном варианте реализации Щ представляет собой -СН2-8-КВ1-С(=О)-, при этом К61 представляет собой С1-10 алкил. Предпочтительно КВ1 представляет собой -СН2-СН2-.
Значения и предпочтительные значения для X.
X представляет собой необязательно замещенный арил или необязательно замещенный гетероарил. В одном варианте реализации X представляет собой необязательно замещенный арил. В другом варианте реализации X представляет собой необязательно замещенный фенил, такой как представлен следующими формулами:
при этом К11, К18, К19 и К20, каждый независимо, представляют собой Н, алкил, галоген, -ОН, -О-алкил, -ΝΟ2, -С(=О)ОК30, -(С=О)К30 или -СК, при этом К30 представляет собой Н или алкил, предпочтительно Н или С1-4 алкил. Предпочтительно все К17, К18, К19 и К20 представляют собой Н.
В другом варианте реализации X представляет собой необязательно замещенный шестичленный гетероарил. Предпочтительно указанный гетероарил выбран из группы, состоящей из пиридина, пиридазина, пиримидина, пиразина, триазина и тетразина. В некоторых вариантах реализации гетероарил присоединен к группе -ΝΗ и группе -Ь1 у атомов углерода указанного гетероарила.
В другом варианте реализации X представляет собой необязательно замещенный пятичленный гетероарил. Предпочтительно X выбран из группы, состоящей из
при этом К21, К22 и К23, каждый независимо, представляют собой Н или алкил.
Значения или предпочтительные значения для Ζ и Ζ'.
Ζ представляет собой -ΝΗ- или -С(=О). Предпочтительно Ζ представляет собой -ΝΗ-.
Ζ' представляет собой -ΝΗ2 или -С(=О)ОН. Предпочтительно Ζ' представляет собой -ΝΗ2.
Значения или предпочтительные значения для А.
А представляет собой аминокислоту или пептид, содержащий от 2 до 20 аминокислот. В одном варианте реализации А представляет собой пептид, расщепляемый протеазой. Предпочтительно А представляет собой пептид, расщепляемый протеазой, которая экспрессируется в опухолевой ткани. В другом предпочтительном варианте реализации А представляет собой пептид, расщепляемый лизосомальной протеазой.
В одном варианте реализации А представляет собой пептид, имеющий аминокислоту, которая ковалентно связана с -Ζ^Π^Ό, таким как -NН-X-^1-^, выбранную из группы, состоящей из А1а, Агд, Азп, Азр, СП, Суз, селено-Суз, О1п, О1и, О1у, Из, Не, Ьеи, Ьуз, Ме1, РЬе, Рго, 8ег, ТЬг, Тгр, Туг и Уа1, каждая независимо в виде Ь или Ό изомеров.
В одном варианте реализации А представляет собой Суз или пептид, содержащий Суз, который ковалентно связан с Ь2, при этом Суз связан с Ь2 через группу -8Н боковой цепи Суз.
В другом варианте реализации А выбран из группы, состоящей из
Уа1-Сй, Уа1-Ьуз,
РЬе-Ьуз, Ьуз-Еуз, А1а-Ьуз, РЬе-СЬ, Ьеи-Сй, Ые-Сй, Тгр, Сй, РЬе-А1а, РЬе-ГУ-тозил-Агд, РЬеТУ-нитро-Агд, РЬе-РЬе-Ьуз, О-РЬе-РЬе-Ьуз, СНу-РЬе-Ьуз, Теи-А1а-Ьеи, 11е-А1а-Ьеи, Уа1-А1аУа1, А1а-Теи-А1а-Ьеи (8ЕЦ ГО ΝΟ: 1), р-А1а-Ееи-А1а-Ееи (8ЕЦ ГО N0: 2) и 01у-РИе-Ьеи-01у (8ЕЦ ГО N0: 3), Уа1-Агд, Агд-Уа1, Агд-Агд, Уа1ГО-Сй, УаЮ-Ьуз, Уа1ГО-Агд, О-Уа1-Сй, ϋУа1-Ьуз, О-Уа1-Агд, О-Уа1ГО-Сй, О-УаЬО-Ьуз, О-Уа1ГО-Агд, ϋ-Агд-О-Агд, А1а-А1а, О-А1аА1а, А1аГО-А1а и О-А1аГО-А1а.
Предпочтительно А представляет собой Уа1-Сй, Уа1-Еуз, Уа1-0-Сй или Уа1-0-Еуз.
- 17 029797
Значения и предпочтительные значения для Ь2.
Ь2 отсутствует или представляет собой спейсер. В одном варианте реализации Ь2 представлен следующей формулой:
где К_А2, К_в2 и К_С2, каждый независимо, отсутствует, представляет собой алкил, алкенил, алкинил, циклоалкил, арил, гетероарил, гетероциклил, циклоалкилалкил, арилалкил, гетероарилалкил или гетероциклоалкил, при этом указанный алкил, алкенил, алкинил, циклоалкил, арил, гетероарил, гетероциклил, циклоалкилалкил, арилалкил, гетероарилалкил и гетероциклоалкил необязательно замещены;
ν2 и ν2', каждый независимо, представляют собой -(О-СН2-СН2)р2-, -(СН2-СН2-О)р2-, -(\1\"'-С112СН2)р2'- или -(СН2-СН2-тт)р2'-;
Ш2 отсутствует, представляет собой -О-, -О-С(=О)-, -С(=О)-О-, -8-, -8О-, -8О2-, -СК11К12-8-, -СК11К12-О-, -СКпК12-те-, -О-(С=О)О-, -О-(С=О)М/К_е)-, -Ν(Κ6)-, -\(1\е)-С’( О)-, -С( О)-\(1\е)-, -Ν(Κ6)С(=О)О-, ^(С(=О)К_е)С(=О)-, -Х(С(=О)К_е)-, -(О-СН2-СН2)П'-, -88-, -С(=О)-, аминокислоту, пептид, содержащийот 2 до 8 аминокислот,
,1св представляет собой -С(=О)-, -С(=О)-ККе-, -С(=О)-О- -С(=КН)-, -С(=КН)-ККе-, -8-, -МЕ
-ΜΙ-ΜΕ-, ~ ’ -С(=ККе)-, =ΝΝκ-, -СН2-С(=О)- или -СН2-С(=О)-ХКе-;
1А представляет собой -ΝΚ®-, -С(=О)-, =Ν-, -МК_е-С(=О)-,
-8-,
-О-С(=О)-8О2
К11 и К_12, каждый независимо, представляют собой Н или алкил; р2 представляет собой 0 или целое число от 1 до 1000; р2' представляет собой 0 или целое число от 1 до 10.
В одном варианте реализации оба К11 и К_12 представляют собой Н. В другом варианте реализации ,1Св представляет собой -С(=О)-,
СН2-С(=О)- или -СН2-С(=О)-КН-.
В одном варианте реализации К_А2 представляет собой алкил, предпочтительно С1-6 алкил. В другом варианте реализации К_А2 представляет собой необязательно замещенный фенил, предпочтительно незамещенный фенил. В другом варианте реализации К_А2 представляет собой циклоалкилалкил. Предпочтительно К_А2 представляет собой циклогексилметил.
В одном варианте реализации К_в2 отсутствует или представляет собой алкил, предпочтительно С1.6алкил.
В одном варианте реализации К_С2 отсутствует или представляет собой алкил, предпочтительно С1-6 лкил.
В другом варианте реализации один из К_в2 и К_С2 отсутствует, а другой представляет собой алкил, предпочтительно С1.6алкил.
В другом варианте реализации оба К_в2 и К_С2 отсутствуют.
В одном варианте реализации Ш2 отсутствует, представляет собой
-8-8-, -ХН-С(=О)- или -С(=О)-ХН-.
В одном варианте реализации р2 и р2' равны 0. В другом варианте реализации один из р2 и р2' равен 0; а другой представляет собой целое число от 2 до 24.
- 18 029797
В другом варианте реализации Ь2 представлен одной из следующих формул:
- 19 029797
где Кх, Ку, Кх, Ку, Кх и Ку, для каждого случая, каждый независимо представляют собой Н, -ОН, галоген, -О-(С1-4алкил), -8О3-, -ΝΚ40Κ4ιΚ42+ или С^алкил, необязательно замещенный -ОН, галогеном, 8О3 - или ΝΚ40Κ4ιΚ42+, при этом К40, Кц и К42, каждый независимо, представляют собой Н или С^алкил;
К16, для каждого случая независимо представляет собой Н, алкил, галоген, -ОН, -О-алкил, -ΝΟ2 или
<Ν;
ν2 представляет собой -(СН2-СН2-О)р2- или -(О-СН2-СН2)р2-;
1, к и Ιι, каждый независимо, представляют собой целое число от 0 до 10, и р2 представляет собой целое число от 1 до 24.
В одном варианте реализаци Кх, Ку, Кх, Ку, Кх и Ку представляют собой Н или С1-4алкил. Предпочтительно Кх, Ку, Кх, Ку, Кх и Ку представляют собой Н. В одном варианте реализации К16 представляет собой Н или См алкил. Предпочтительно К16 представляет собой Н.
В одном варианте реализации 1 и к, каждый независимо, представляют собой целое число от 1 до 6.
В одном варианте реализации р2 представляет собой целое число от 2 до 24. В одном варианте реализации Ь2 представлен следующей структурной формулой:
—с>С2_ι —
где 1Св представляет собой
\ί2—νν2-κΒ2—ν2·—
-С(=О)-, -8-, -СН2-С(=О)- или-СН2-С(=О)-МКе)-;
- 20 029797
А? —КА2 ^)~\/24ζ2Υ(Ο^^\
-КА2-У2-^2-КВ2-У2-КС2-1л- представляет собой '01 к '01
где КА2 представляет собой -(СКхКу)г или -Су-(СКхКу)г;
Су представляет собой циклоалкил (например, циклогексил);
У2 представляет собой -(СН2-СН2-О)р2- или -(О-СН2-СН2)р2-;
Ζ1 представляет собой -С(=О)-Ы(К6)-, -Ы(Ке)-С(=О)- или
при условии, что Ζ1-ν2 не содержит связи Ν-Ο; Ζ2 представляет собой
при условии, что ν2-Ζ2 не содержит связи Ο-Ν;
1 представляет собой целое число от 0 до 10; р2 представляет собой целое число от 0 до 200; Ζ представляет собой -ΝΉ-.
В одном варианте реализации Ь2 представлен структурой
р2 представляет собой целое число от 0 до 200.
Значения и предпочтительные значения для Ь1'.
Ь1' представляет собой спейсер, содержащий химически активный фрагмент, который может образовывать ковалентную связь с цитотоксическим средством.
В одном варианте реализации Ь1' представлен следующей формулой:
—их—κΑ1—V-,—νν — ρΒ1—V!—ЕС1-и0'?
где Ιπ' представляет собой -С(=О)-ОН, -СОЕ, -8Н, -δ-δ(=Ο)-Κά, δ-δ(=Ο)2Κά, -δδΚά,
-ОН, -О-С(=О)Х', -δ(=Ο)Χ'-, -δθ2Χ', -№(Ке)Н, -№(Ке)-С(=О)-Х' или -^С(=О)Ке)С(=О)Х',
-С(=О)МН(С(=О)Ке), или -ΝΙ Ι(С( О)Ке), при этом СОЕ представляет собой химически активный сложный эфир;
Χ' представляет собой галоген;
Κά выбран из фенила, нитрофенила (например, 2- или 4-нитрофенила), динитрофенила (например, 2- или 4-нитрофенила), карбоксинитрофенила (например, 3-карбокси-4-нитрофенила), пиридила или нитропиридила (например, 4-нитропиридила); и значения и предпочтительные значения для остальных переменных являются такими, как описано выше для Ь1.
- 21 029797
В другом варианте реализации Ь1' представлен следующей формулой:
при этом .()' является таким, как описано выше, а значения и предпочтительные значения для остальных переменных являются такими, как описано выше для Ь1.
В одном варианте реализации 1О' представляет собой -С(=О)ОН, -СОЕ или Значения и предпочтительные значения для Ь2'.
Ь2' отсутствует или представляет собой спейсер, содержащий химически активный фрагмент, который может образовывать ковалентную связь с клеточно-связывающим агентом.
В одном варианте реализации Ь2' представлен следующей формулой:
-ν2—νν2-ГСВ2 —ν2—Κε2-άΑ—
где 1СВ' представляет
άοΒ1
собой
-С(=О)ОН, -СОЕ, -Х(Ке)-С(=О)-Х', -О-С(=О)Х', -С(=ХИ)Х',
-С(=Же)Х', -Ν^ΝΗ, Х’-СК1К2-С(=О)- или
-ΝΚβ-Ο(=ΝΗ)Χ, -δΗ, -δδΚα, -ΝΚΉ, -ΝΗ-ΝΚΉ,
Х-СК!К2-С(=О)-Же-,
при этом СОЕ представляет собой химически активный сложный эфир, Х' представляет собой галоген; и Ка выбран из фенила, нитрофенила (например, 2- или 4-нитрофенила), динитрофенила (например, 2- ил 4-нитрофенила), карбоксинитрофенила (например, 3-карбокси-4-нитрофенила), пиридилаилинитропиридила (например, 4-нитропиридила); и значения и предпочтительные значения для остальных переменных являются такими, как описано выше для Ь2.
В другом варианте реализации Ь2' представлен формулой, выбранной из группы, состоящей из формулы (Е2'а)-(Ь2'и), описанной ниже.
Конъюгаты клеточно-связывающего агента и цитотоксического соединения.
В настоящем изобретении представлены конъюгаты клеточно-связывающего агента и цитотоксического соединения, содержащие клеточно-связывающий агент, связанный с одним или более цитотоксическими соединениями настоящего изобретения пептидаза-неустойчивым линкером.
В одном варианте реализации конъюгаты клеточно-связывающего агента и цитотоксического соединения представлены структурной формулой (I)
или их фармацевтически приемлемые соли, при этом значения переменных являются такими, как описано выше для структурной формулы (I).
В одном варианте реализации конъюгаты структурной формулы (I) являются такими, как описано выше, при условии, что если Ζ представляет собой -ΝΗ-, то К не содержит один из следующих фрагментов, напрямую присоединенных к X:
при этом ΐ равен 0 или представляет собой целое число от 1 до 5; О представляет собой -О-, -ΝΚ15, δ или -СК11К12-;
Х2 представляет собой арил или гетероарил; и К11, К12, К13, К14 и К15, каждый независимо, представляют собой Н или алкиловую группу.
Предпочтительно ΐ равен 0, и все К11, К12, К13, К14 и К15 представляют собой Н.
В 1-м конкретном варианте реализации для конъюгатов, представленных структурной формулой (I) или их фармацевтически приемлемых солей, описанных выше
К представлен следующей формулой:
—ύχ—κΑ1—V!—κΒ1—V!—гсС1-и0-,
Ь2 представлен следующей формулой:
—исв—κΑ2~ν2—νν2-κΒ2—ν2·—кС2-иА—.
каждый ΚΑ1, КВ1 и КС1 отсутствует, представляет собой алкил, алкенил, алкинил, циклоалкил, арил, гетероарил или гетероциклил, при этом указанный алкил, алкенил, алкинил, циклоалкил, арил, гетероарил и гетероциклил необязательно замещены;
1Х и ^1, каждый независимо, отсутствуют, представляют собой, -О-, -О-С(=О)-, -С(=О)-О-, -δ-, -δθ-, -δθ2-, -(СКцК^-, -(СКцКЩ-О-, -(СКпКЩ-ЫКЧ -О-(С=О)О-, -О-(С=О)^Ке)-, -Ν(ΙΉ’)-, ^(Ке)-С(=О)-,
- 22 029797
-"(=Ο)-Ν(Κ)-, -Ν(Κίί)-"(=Ο)Ο-, -Ν/ΓΓΟΧ^ΓΟ)-, -Ν("(=Ο)Κ)-, -δδ-, -С(=О)-,
аминокислоту или пептид, имеющий от 2 до 8 аминокислот, при условии, что если Ζ представляет собой -ΝΗ-, 1х и У1 отсутствуют, а КА1 представляет собой -СК11К12-, то ^1 не является -О-С(=О)-;
1О отсутствует, представляет собой -С(=О)-, -δ-, ’ ’ 11 , -О-,
-О-С(=О)-, -С(=О)-О-, -δΟ-, -δΟ2-, -Ο-("=Ο)-, -Ν(Κ)-, -Ν(Κίί)-"(=Ο)-, или -Ν("(=ΟΚ)"(=Ο)-, или -Ν("(=Ο)Κ)-;
ν1 и ν1', каждый независимо, представляют собой -(Ο-"Η2-"Η2)ρ1-, -("Η2-"Η2-Ο)ρ1-, -(ΝΚ"’-ΟΙ2СН2)рГ- или -("Η2-"Η2-ΝΚ™)ρ1'-;
Ке представляет собой Н, алкил, алкенил, алкинил или -("Η^Η^Ο^-Κ^;
Кк и Кт, каждый независимо, представляют собой Н или алкил; п' представляет собой целое число от 1 до 24; р1 представляет собой 0 или целое число от 1 до 1000; р1' представляет собой 0 или целое число от 1 до 10;
А О ТЭТ ("Ώ
К , К и К , каждый независимо, отсутствует, представляет собой алкил, алкенил, алкинил, циклоалкил, арил, гетероарил, гетероциклил, циклоалкилалкил, арилалкил, гетероарилалкил или гетероциклилалкил, при этом указанный алкил, алкенил, алкинил, циклоалкил, арил, гетероарил, гетероциклил, циклоалкилалкил, арилалкил, гетероарилалкил и гетероциклилалкил необязательно замещены;
ν2 и ν2', каждый независимо, представляют собой -(Ο-"Η2-"Η2)ρ2-, -("Η2-"Η2-"Η2-Ο)ρ2-, -(ΝΚ111"Η2-"Η2)ρ2'- или -(СС Ь-СИ-МГ).-:
Ш2 отсутствует, представляет собой -О-, -О-С(=О)-, -С(=О)-О-, -δ-, -δΟ-, -δΟ2-, -"Κ11Κ12-δ-, -"ΚΠΚ12-Ο-, -СК КАК-. -Ο-("=Ο)Ο-, -Ο-("=Ο)Ν(Κ)-, -Ы(Ке)-, -Ν(Κίί)-"(=Ο)-, -"(=Ο)-Ν(Κ)-, -Ν(Κίί)-"(=Ο)Ο-, -Ν("(=Ο)Κ)"(=Ο)-, -Ν^ΓΟχ2)-, -(Ο-"^-"^)11'-, -δδ-, -"(=Ο)-, аминокислоту, пептид,
аминокислот,
содержащийот
2
до
8
1св представляет собой -2(=Ο)-, -"(=Ο)-ΝΚ\ -"(=Ο)-Ο- -"(=ΝΗ)-, -"(=ΝΗ)-ΝΚ\ -δ-, -ΝΚ-, -ΝΗΑΑ
ΝΚ\ 0 , -С(=МКе)-, =ΝΝΚ\ -"Η2-"(=Ο)- или -"Η2-"(=Ο)-ΝΚ\
Ια представляет собой -ΝΚ\ -"(=Ο)-, =Ν-, -ΝΚ-"(=Ο)-, -Ο-"(=Ο)- , -δΟ2-, -δ-,
/М Λ,\ <
Κ11 и Κ12, каждый независимо, представляют собой Н или алкил; р2 представляет собой 0 или целое число от 1 до 1000; р2' представляет собой 0 или целое число от 1 до 10;
А представляет собой пептид, расщепляемый пептидазой; а значения и предпочтительные значения для остальных переменных являются такими, как описано выше для структурной формулы (I).
В предпочтительном варианте реализации Э представляет собой майтанзиноид; а значения и предпочтительные значения для остальных переменных являются такими, как описано в 1-м конкретном варианте реализации.
В другом предпочтительном варианте реализации Ζ представляет собой -ΝΗ-; а значения и предпочтительные значения для остальных переменных являются такими, как описано в 1-м конкретном варианте реализации. Более предпочтительно Э представляет собой майтанзиноид.
В другом предпочтительном варианте реализации Ш2 отсутствует, представляет собой
- 23 029797
-δ-δ-, -КН-С(=О)- или -С(=О)-ЫН-;
а значения и предпочтительные значения для остальных переменных являются такими, как описано в 1-м конкретном варианте реализации.
Более предпочтительно Ζ представляет собой -ΝΉ-; а Ώ представляет собой майтанзиноид.
В другом предпочтительном варианте реализации оба ν2 и ν2' отсутствуют (т.е. оба р2 и р2' равны
0);
а значения и предпочтительные значения для остальных переменных являются такими, как описано в 1-м конкретном варианте реализации. Более предпочтительно Ш2 отсутствует, представляет собой
-δ-δ-, -ЫН-С(=О)- или -С(=О)-ЫН-.
Еще более предпочтительно Ζ представляет собой -ΝΉ-, а Ώ представляет собой майтанзиноид.
В другом предпочтительном варианте реализации КА2 представляет собой алкил, а значения и предпочтительные значения для остальных переменных являются такими, как описано выше в 1-м конкретном варианте реализации. Более предпочтительно Ш2 отсутствует, представляет собой
0 ; о ; ' 12 11 12 ; -δ-δ-, -ЫН-С(=О)- или -С(=О)-ЫН-.
Еще более предпочтительно Ζ представляет собой -ΝΉ-, а Ώ представляет собой майтанзиноид.
В другом предпочтительном варианте реализации один из КВ2 и КС2 отсутствует, а другой представляет собой алкил; а значения и предпочтительные значения для остальных переменных являются такими, как описано выше в 1-м конкретном варианте реализации. Более предпочтительно Ш2 отсутствует, пред-
ставляет собой о ’ о ; 1X11 |Х12 гл12 · -δ-δ-, -КН-С(=О)- или
-С(=О)-ЫН-. Еще более предпочтительно Ζ представляет собой -ΝΉ-, а Ώ представляет собой майтанзиноид.
В другом предпочтительном варианте реализации оба КВ2 и КС2 отсутствуют; а значения и предпочтительные значения для остальных переменных являются такими, как описано выше в 1-м конкретном
варианте реализации. Более предпочтительно
отсутствует, представляет собой
(I)
- -δ-δ-, -ЫН-С(=О)- или -С(=О)-ЫН-.
Еще более предпочтительно Ζ представляет собой -ΝΉ-, а Ώ представляет собой майтанзиноид.
Во 2-м конкретном варианте реализации для конъюгатов, представленных структурной формулой
Б2 представлен одной из следующих структурных формул:
- 24 029797
- 25 029797
галоген, -О-(С1_4алкил), -8О3 -, -ΝΚωΚπΚΥ или С1-4алкил, необязательно замещенный -ОН, галогеном, 8О3" или ΝΚ40Κ41Κ42+, при этом К40, К41 и К42, каждый независимо, представляют собой Н или С1-4 алкил;
К16, для каждого случая независимо представляет собой Н, алкил, галоген, -ОН, -О-алкил, -Ν02 или
<Ν;
ν2 представляет собой -(СН2-СН2-О)р2- или -(О-СН2-СН2)р2-;
1, к и Ь, каждый независимо, представляют собой целое число от 1 до 10;
Ζ представляет собой -ЫН-;
А представляет собой пептид, расщепляемый пептидазой; а значения и предпочтительные значения для остальных переменных являются такими, как описано выше в 1-м конкретном варианте реализации.
В предпочтительном варианте реализации Ό представляет собой майтанзиноид; а значения и предпочтительные значения для остальных переменных являются такими, как описано во 2-м конкретном варианте реализации.
В другом предпочтительном варианте реализации для формул (1,2а)-(1,2с), (Ь2г) и (Β2δ), все Кх, Ку, Кх и Ку представляют собой Н; а для структурных формул (1.24)-(1,2р), все Кх, Ку, Кх, Ку, Кх и Ку пред- 26 029797
ставляют собой Н.
В другом предпочтительном варианте реализации для формул (Ь2а)-(Ь2с), (Ь2г) и (Ь2з), все Кх, Ку, Кх и Ку представляют собой Н; р2 представляет собой целое число от 2 до 24; а 1 и к, каждый независимо, представляют собой целое число от 1 до 6. Для формул (Ь2б)-(Е2р), все Кх, Ку, Кх, Ку, Кх и Ку представляют собой Н; К-16 представляет собой Н; р2 представляет собой целое число от 2 до 24; 1, к и к, каждый независимо, представляют собой целое число от 1 до 6.
В родственном конкретном варианте реализации для конъюгатов, представленных структурной формулой (I), Ь2 представлен следующей структурной формулой:
— пВ2-ι — г>С2_
-ΡΤ£-ν2"бсв о
где .1СВ представляет собой
кА
-С(=О)-, -8-, -СН2-С(=О)- или-СН;-С( О)А(Ке)-;
-Ка:-\';-А';-К1!:-\А-Кс:-.|а- представляет собой где КА2 представляет собой -(СКхКу)1- или -Су-(СКхКу)1-;
Су представляет собой циклоалкил (например, циклогексил); ν2 представляет собой -(СН2-СН2-О)р2- или -(О-СН2-СН2)р2-;
Ζ1 представляет собой -С( Ο)-Ν(ΙΚ:)-, -Ν(ΙΚ’)-(''( О)- или при условии, что Ζι-ν2 не содержит связи Ν-О;
Ζ2 представляет собой
при условии, что ν2-Ζ2 не содержит связи О-Ν;
1 представляет собой целое число от 0 до 10; р2 представляет собой целое число от 0 до 200; и Ζ представляет собой -КН-.
В одном варианте реализации Ь2 представлен структурой
р2 представляет собой целое число от 0 до 200.
В 3-м конкретном варианте реализации для конъюгатов, представленных структурной формулой (I), Щ представлен следующей формулой:
-(СК9К10)т—МГКВ1-40- (ы)
где К9 и К.10, каждый независимо, представляют собой Н или СВ4 алкил; т представляет собой целое число от 1 до 10;
- 27 029797
отсутствует, представляет собой -ИН-С(=О)-, -С(=О)-ИН-, -С(=О)-О- или -О-С(=О)-, при условии, что если Ζ представляет собой -ΝΗ- и т равен 1, то ^1 не является -О-С(=О)-; КВ1 отсутствует или представляет собой С1-10 алкил;
.Ь отсутствует, представляет собой -С(=О)-, 0 - -МН-С(=О)-СН2- или -8-;
Ζ представляет собой -ΝΗ-;
А представляет собой пептид, расщепляемый пептидазой; а значения и предпочтительные значения для остальных переменных являются такими, как описано в 1-м конкретном варианте реализации.
В другом предпочтительном варианте реализации 1с отсутствует, представляет собой -С(=О)- или
В другом варианте реализации оба К9 и К.10 представляют собой Н и т равен 1, 2 или 3.
В другом предпочтительном варианте реализации ^1 отсутствует или представляет собой -ЯН-С(=О)-, а КВ1 отсутствует или представляет собой -(СН2)т'-, при этом т' равен 1, 2 или 3.
В другом предпочтительном варианте реализации Б представляет собой майтанзиноид.
Во 4-м конкретном варианте реализации конъюгаты настоящего изобретения представлены структурной формулой (I), при этом
Ь1 представлен формулой (Ь1), описанной в 3-м конкретном варианте реализации;
Ь2 представлен одной из структурных формул (Ь2а)-(Ь28), описанных во 2-м конкретном варианте реализации;
Ζ представляет собой -ΝΗ-;
А представляет собой пептид, расщепляемый протеазой;
Б представляет собой майтанзиноид; а значения и предпочтительные значения для остальных переменных являются такими, как описано выше для структурной формулы (I) во 2- и 3-м конкретных вариантах реализации.
В 5-м конкретном варианте реализации, для конъюгатов, представленных формулой (I)
Ь2 представлен любой из структурных формул (Ь2а)-(Ь28), описанных во 2-м конкретном варианте реализации;
А представляет собой пептид, расщепляемый протеазой;
-Ζ-Χ-Ц-Б представлен одной из следующих структурных формул:
- 28 029Ί9Ί
при этом Мау представлен следующей структурной формулой:
Κι, К2, Ка, Кь и Кс, каждый независимо, представляют собой Н или С^алкил;
т2, т2' и п2, каждый независимо, представляют собой целое число от 1 до 10; и значения и предпочтительные значения для остальных переменных являются такими, как описано выше для структурной формулы (I).
В предпочтительном варианте реализации для структурной формулы (I), описанной в 1-, 2-, 3-, 4или 5-м вариантах реализации, включая любые родственные конкретные варианты реализации, А пред- 29 029797
ставляет собой пептид, расщепляемый лизосомальной протеазой. В другом предпочтительном варианте реализации А представляет собой пептид, расщепляемый протеазой, которая экспрессируется в опухолевой ткани.
В более предпочтительном варианте реализации для структурной формулы (I), описанной в 1-, 2-, 3-, 4- или 5-м вариантах реализации, включая любые родственные конкретные варианты реализации, А представляет собой пептид, имеющий аминокислоту, которая ковалентно связана с -Ζ-Χ-Ц-О, выбранную из группы, состоящей из А1а, Агд, Азп, Азр, СН, Суз, селено-Суз, О1п, О1и, О1у, Из, Не, Ьеи, Ьуз, МеД РДе, Рго, 8ег, ТДг, Тгр, Туг и Vа1, каждая независимо, в виде Т или Ό изомеров.
В другом более предпочтительно варианте реализации, для структурной формулы (I), описанной в
1- , 2-, 3-, 4- или 5-м вариантах реализации, включая любые родственные конкретные варианты реализации, А выбран из группы, состоящей из
Уа1-СД, УаТБуз, РДеТуз. Туз-Туз, А1а-Туз, РДе-СД, Теи-СД, Т1е-СД, Тгр, СД, РДе-А1а, РДе-У-тозил-Агд. РДе-Ν9нитро-Аг§, РДе-РДе-Туз, ϋ-РДе-РДе-Туз, СНу-РДе-Туз, Теи-А1а-Теи, 11е-А1а-Теи, Уа1-А1а-Уа1, А1а-Теи-А1а-Теи (ЗЕЦ ГО ΝΟ: 1), Р-А1а-Теи-А1а-Теи (ЗЕЦ ГО N0: 2) и О1у-РДе-Ееи-О1у (ЗЕЦ ГО N0: 3), УаТАгд, Аг§-Уа1, Агд-Агд, Уа1ГО-СД, УаЮ-Ьуз, Уа1ГО-Агд, О-Уа1-СД, О-Уа1Еуз, Э-УаТАгд. О-Уа1ГО-СД, Э-УаТЭ-Туз. О-УаТЭ-Агд. Э-Агд-Э-Агд. А1а-А1а, О-А1а-А1а,
А1аГО-А1а и О-А1аГО-А1а.
В еще более предпочтительном варианте реализации, для структурной формулы (I), описанной в 1-,
2- , 3-, 4- или 5-м вариантах реализации, включая любые родственные конкретные варианты реализации, А представляет собой Vа1-С^ΐ, Vа1-^уз, Vа1-^-С^ΐ или Vа1-^-^уз.
В другом предпочтительном варианте реализации для структурной формулы (I), описанной в 1-, 2-,
3- или 4-м вариантах реализации, включая любые родственные конкретные варианты реализации, Ό представлен структурной формулой (А) или (В)
где Υ1 отсутствует или представляет собой -С(=О)(СК7К8)11(СК5К6)т1(СК3К4)п1СК1К28-, К1, К2, К3, К4, К5, К6, К7 и К8, каждый независимо, представляют собой Н, алкил, алкенил, циклоалкил, гетероарил, гетероциклил или арил;
11, т1 и п1, каждый независимо, представляют собой 0 или целое число от 1 до 5.
Более предпочтительно для структурной формулы (I), описанной в 1-, 2-, 3- или 4-м конкретном вариантах реализации, включая любые родственные конкретные варианты реализации, Ό представлен одной из следующих структурных формул:
- 30 029797
В другом предпочтительном варианте реализации для структурной формулы (I) X представляет собой необязательно замещенный фенил; а значения и предпочтительные значения для остальных переменных являются такими, как описано выше в 1-, 2-, 3-, 4- или 5-м конкретном вариантах реализации. Более предпочтительно X представлен любой из следующих структурных формул:
при этом Κ17, Κ18, Κ19 и Κ20, каждый независимо, представляет собой Н, алкил, Н, алкил, галоген, -ОН, -О-алкил, -Ν02 или -СК Предпочтительно все Κ17, Κ18, Κ19 и Κ20 представляют собой Н.
В другом предпочтительном варианте реализации для структурной формулы (I), X представляет собой необязательно замещенный шестичленный гетероарил, выбранный из группы, состоящей из пиридина, пиридазина, пиримидина, пиразина, триазина и тетразина, при этом указанный гетероарил связан с группой -Ν I и группой -Ь1 по атомам углерода указанного гетероцикла; а значения и предпочтительные значения для остальных переменных являются такими, как описано выше в 1-, 2-, 3-, 4- или 5-м конкретном варианте реализации.
В другом предпочтительном варианте реализации для структурной формулы (I), X представляет собой необязательно замещенный пятичленный гетероарил; а предпочтительные значения для остальных переменных являются такими, как описано выше в 1-, 2-, 3-, 4- или 5-м конкретном варианте реализации. Более предпочтительно X выбран из группы, состоящей из
- 31 029797
при этом К21, К22 и К23, каждый независимо, представляют собой Н или алкил. Предпочтительно все К21, К22 и К23 представляют собой Н.
В 6-м конкретном варианте реализации для конъюгатов, представленных структурной формулой (I) й2 представлен любой из структурных формул (Й2а)-(Й28), описанных во 2-м конкретном варианте
реализации;
А представляет собой Уа1-Сй, Уа1-Еух, Υ;ι1-Ι)-('ίΐ или Уа1-О-Еух;
-Ζ-Χ-Ц-О представлен одной из следующих структурных формул (Г1а)-(й1к), описанных в 3-м конкретном варианте реализации.
В предпочтительном варианте реализации оба Ка и Кь представляют собой метил; Кс представляет собой Н; а остальные переменные являются такими, как описано выше в 6-м конкретном варианте реализации. Более предпочтительно т2 и т2', каждый независимо, представляют собой целое число от 1 до 3.
В другом предпочтительном варианте реализации оба Ка и Кь представляют собой метил; Кс представляет собой Н; оба К1 и К2 представляют собой Н,и п равен 1; а остальные переменные являются такими, как описано выше в 6-м конкретном варианте реализации. Более предпочтительно т2 и т2', каждый независимо, представляют собой целое число от 1 до 3.
В одном варианте реализации конъюгаты клеточно-связывающего агента и цитотоксического средства представлены следующими структурными формулами:
- 32 029797
при этом ц представляет собой целое число из 1-20, из 1-10, из 2-6, из 3-5.
В некоторых вариантах реализации каждый конъюгированный клеточно-связывающий агент содержит в среднем 3,5, 3-5, 2-6, 1-10 или 1-20 молекул цитотоксического агента.
В одном варианте реализации конъюгаты клеточно-связывающего агента и цитотоксического средства настоящего изобретения могут расщепляться при вхождении в клетки и/или внутри клеток с высвобождением цитотоксического средства, его производного или метаболита. Расщепляемые конъюгаты могут обладать более высокой эффективностью, чем цитотоксическое средство, благодаря их способности доставлять цитотоксическое средство в заданные клетки (т.е. клетки опухоли). В одном варианте реализации соединения-метаболиты могут быть соединением, представленный структурной формулой (II), описанной ниже.
Цитотоксические соединения.
Настоящее изобретение относится также к цитотоксическому соединению, представленному структурной формулой (II)
или его соли (например, фармацевтически приемлемой соли), при этом значения и предпочтительные значения являются такими, как описано выше.
В 7-м конкретном варианте реализации для соединения структуры (II), Ц представлен следующей формулой:
—6Х—κΑ1-ν— ХЛЦ—КВ1—У-|—кС1-ц0-5
где каждый КА , ΚΒ1 и КС1 отсутствует, представляет собой алкил, алкенил, алкинил, циклоалкил, арил, гетероарил или гетероциклил, при этом указанный алкил, алкенил, алкинил, циклоалкил, арил, гетероарил и гетероциклил необязательно замещены;
1Х и Ж каждый независимо, отсутствуют, представляют собой -О-, -О-С(=О)-, -С(=О)-О-, -δ-, -8О-, -8О2-, -СК„К12-8-, -СКПК12-О-, -СК„К12Же-, -О-(С=О)О-, -О-(С=О)ЖКе)-, -Ν(Κ>, -Ν(Κ>Ο=Ο)-, -С(=О)-МКе)-, -^Ке)-С(=О)О-, -^С(=О)Ке)С(=О)-, -^С(=О)Ке)-, -88-, -С(=О)-,
с о о 5
УУн нУУ
О ; О ;
- 33 029Ί9Ί
аминокислоту или пептид, имеющий от 2 до 8 аминокислот, при условии, что если Ζ' представляет собой ΝΗ2, 1х и ν1 отсутствуют, и КА1 представляет собой -СК11К12-, то ^1 не является -О-С(=О)-;
отсутствует, представляет собой -С(=О)-, -8-,
-О-С(=О)-, -С(=О)-О-, -8О-, -8О2-, -О-(С=О)-, -ΝΧ)-, -ЖКе)-С(=О)-, или -ЖС(=О)Ке)С(=О)-, или -^С(=О)Ке)-;
ν1 и ν1', каждый независимо, представляют собой -(О-СН2-СН2)р1-, -(СН2-СН2-О)р1-, -(\К"'-( Ή;-(Ί 1л..- или -(СН2-СН2-Жт)рГ-;
Ке представляет собой Н, алкил, алкенил, алкинил или -(СН2-СН2-О)П'-Кк;
Кк и Кт, каждый независимо, представляют собой Н или алкил; п' представляет собой целое число от 1 до 24;
р1 представляет собой 0 или целое число от 1 до 1000;
р1' равен 0 или представляет собой целое число от 1 до 10; а значения и предпочтительные значения для остальных переменных являются такими, как описано выше для формулы (II).
В 8-м конкретном варианте реализации для соединения структурной формулы (II) Ζ' представляет собой -ΝΗ2, а остальные переменные являются такими, как описано в 7-м конкретном варианте реализации.
В 9-м конкретном варианте реализации для соединения структурной формулы (II), Ь1 представлен следующей формулой:
где К9 и К10, каждый независимо, представляют собой Н или С1-4 алкил;
т представляет собой целое число от 1 до 10;
1 отсутствует, представляет собой ^Н-С(=О)-, -С(=О)^Н-, -С(=О)-О- или -О-С(=О)-,
при условии, что если Ζ' представляет собой -ΝΗ2, т равен 1, то ^1 не является -О-С(=О)-; КВ1 отсутствует или представляет собой С1-10 алкил;
.Е отсутствует, представляет собой -С(=О)-, о > -ΝΗ-Ο(=Θ)-ΟΗ2- или -8-; а значения и
предпочтительные значения являются такими, как описано выше для структурной формулы (II).
В предпочтительном варианте реализации 1о отсутствует, представляет собой -С(=О)- или
В другом варианте реализации оба К9 и К10 представляют собой Н; и т равен 1, 2 или 3.
В другом предпочтительном варианте реализации ^1 отсутствует или представляет собой
^Н-С(=О)-, а КВ1 отсутствует или представляет собой -(СН2)т'-, при этом т' равен 1, 2 или 3.
В 10-м конкретном варианте реализации Ζ' представляет собой -КН2, а остальные переменные являются такими, как описано в 9-м конкретном варианте реализации.
В 11-м конкретном варианте реализации для соединения структурной формулы (II), О представлен
структурной формулой (А) или (В):
- 34 029797
где Υ1 отсутствует или представляет собой -С(=0)(СК7К8)11(СК5К6)т1(СКзК4)п1СК1К2§-,
Κ1, Κ2, Κ3, Кд, Κ5, Κ6, Κ7 и Κ8, каждый независимо, представляют собой Н, алкил, алкенил, циклоалкил, гетероарил, гетероциклил или арил;
11, т1 и п1, каждый независимо, равны 0 или представляют собой целое число от 1 до 5; а значения и предпочтительные значения для остальных переменных являются такими, как описано выше в 7-, 8-, 9или 10-м конкретном варианте реализации.
В предпочтительном варианте реализации, для структурной формулы (II), X представляет собой необязательно замещенный фенил; а значения и предпочтительные значения для остальных переменных являются такими, как описано выше в 7-, 8-, 9-, 10- или 11-м конкретном варианте реализации. Более предпочтительно X представлен любой из следующих структурных формул:
при этом К11, К18, К19 и К20, каждый независимо, представляют собой Н, алкил, Н, алкил, галоген, -ОН, -О-алкил, -С(=0)К30, -С(=0)К30, -Ν02 или -ΟΝ, при этом К30 представляет собой Н или алкил, предпочтительно Н или С1-4 алкил. Предпочтительно все К11, К18, К19 и К20 представляют собой Н.
В другом предпочтительном варианте реализации для структурной формулы (II), X представляет собой необязательно замещенный шестичленный гетероарил, выбранный из группы, состоящей из пиридина, пиридазина, пиримидина, пиразина, триазина и тетразина, при этом указанный гетероарил связан с группой -ΝΙ I и группой -Ь1 по атомам углерода указанного гетероарила; а значения и предпочтительные значения для остальных переменных являются такими, как описано выше в 7-, 8-, 9-, 10- или 11-м конкретном варианте реализации.
В другом предпочтительном варианте реализации для структурной формулы (II), X представляет собой необязательно замещенный пятичленный гетероарил; а предпочтительные значения для остальных переменных являются такими, как описано выше в 7-, 8-, 9-, 10- или 11-м конкретном варианте реализации. Более предпочтительно X выбран из группы, состоящей из
при этом К21, К22 и К23, каждый независимо, представляют собой Н или алкил. Предпочтительно все К21, К22 и К23 представляют собой Н.
- 35 029797
В 12-м конкретном варианте реализации соединения формулы (II) представлены одной из следующих структурных формул:
или их фармацевтически приемлемые соли,
при этом Мау представлен следующей структурной формулой:
К.1, К2, Ка, Кь и Кс, каждый независимо, представляют собой Н или С1-4 алкил; т2, т2' и п2, каждый независимо, представляют собой целое число от 1 до 10.
В предпочтительном варианте реализации оба Ка и Кь представляют собой метил и Кс представляет собой Н; а значения и предпочтительные значения для остальных переменных являются такими, как опи- 36 029797
сано в 12-м конкретном варианте реализации.
В другом предпочтительном варианте реализации т2 и т2', каждый независимо, представляют собой целое число от 1 до 3; а значения и предпочтительные значения для остальных переменных являются такими, как описано в 12-м конкретном варианте реализации.
В другом предпочтительном варианте реализации оба К1 и К2 представляют собой Н, и п равен 1; а значения и предпочтительные значения для остальных переменных являются такими, как описано в 12-м конкретном варианте реализации. Более предпочтительно оба Ка и Кь представляют собой метил и Кс представляет собой Н. Еще более предпочтительно т2 и т2', каждый независимо, представляют собой целое число от 1 до 3.
В другом предпочтительном варианте реализации оба К1 и К2 представляют собой метил, и п равен 2; а значения и предпочтительные значения для остальных переменных являются такими, как описано в 12-м конкретном варианте реализации. Более предпочтительно оба Ка и Кь представляют собой метил и Кс представляет собой Н. Еще более предпочтительно т2 и т2', каждый независимо, представляют собой целое число от 1 до 3.
Линкерное соединение.
Настоящее изобретение относится также к линкерному соединению, которое способно ковалентно связываться с клеточно-связывающим агентом и цитотоксическим средством. В одном варианте реализации линкерное соединение представлено формулой (III)
или его соль,
при этом значения и предпочтительные значения для переменных являются такими, как описано выше.
В одном варианте реализации если Ζ представляет собой -НН-, то Ь1' не содержит один из следующих фрагментов, напрямую связанных с X:
где ΐ равен 0 или представляет собой целое число от 1 до 5;
О представляет собой -О-, -ΝΚ15, δ или -СК11К12-;
Х2 представляет собой арил или гетероарил; и К11, К12, К13, К14 и К15, каждый независимо, представляют собой Н или алкиловую группу.
В 13-м конкретном варианте реализации для соединений структурной формулы (III)
Ь1' представлен формулой (ЬГ)
—ΰ,-Α’-ν— νν,— ΡΒ1—ν,—гсС1-ив· (Ы
Ь2' представлен формулой (Ь2')
бсв' РА2—ν2 νν2-πΒ2 ν2 КС2_бА (Ь2’);
каждый КА1, КВ1 и КС1 отсутствует, представляет собой алкил, алкенил, алкинил, циклоалкил, арил, гетероарил или гетероциклил, при этом указанный алкил, алкенил, алкинил, циклоалкил, арил, гетероарил и гетероциклил необязательно замещены;
и ^1, каждый независимо, отсутствуют, представляют собой -О-, -О-С(=О)-, -С(=О)-О-, -δ-, ^О-, ^О2-, -εΚπΚ12-δ-, -СК11К12-О-, -СКцК^КЧ -О-(С=О)О-, -О-^^)^^)-, -МКе)-, -МКе)-С(=О)-, -С(=О)-МКе)-, -МКе)-С(=О)О-, -МС(=О)Ке)С(=О)-, -МС(=О)Ке)-, -δδ-, -С(=О)-,
аминокислоту или пептид, имеющий от 2 до 8 аминокислот,
при условии, что если Ζ представляет собой -МН-, .1Х и ν1 отсутствуют и КА1 представляет собой -СК11К12-, то не является -О-С(=О)-;
-С(=О)-ОН, -СОЕ, -8Н, -8-8(=О)·^ δ-δ(=О)2Κά, -δδΚ'1,
представляет
собой
0 , Ν* *11 *12, ^11 *12, -ОН, -О-С(=О)Х', -δ(=Θ)Χ1-, ^О2Х', -МКе)Н, -МКе)-С(=О)-Х' или
-МС(=О)Ке)С(=О)Х', -С^О^ЩС^ОЖ6), или -МН(С(=О)Ке), при этом СОЕ представляет собой химически активный сложный эфир;
Х' представляет собой уходящую группу (например, галоген, мезилат или тозилат);
Κά выбран из фенила, нитрофенила (например, 2- или 4-нитрофенила), динитрофенила (например,
2- или 4-нитрофенила), карбоксинитрофенила (например, 3-карбокси-4-нитрофенила), пиридила или нитропиридила (например, 4-нитропиридила);
- 37 029797
ν1 и ν1', каждый независимо, представляют собой -(О-СН2-СН2)р1-, -(СН2-СН2-О)р1-, -(ККт-СН2-СН2)рГ- или -(СН2-СН2-ККт)р1'-;
Ее представляет собой Н, алкил, алкенил, алкинил или -(СН2-СН2-О)п'-Кк;
Ек и К"1, каждый независимо, представляют собой Н или алкил; п' представляет собой целое число от 1 до 24; р1 представляет собой 0 или целое число от 1 до 1000; р1' представляет собой 0 или целое число от 1 до 10;
КА2, ЕВ2 и ЕС2, каждый независимо, отсутствуют, представляют собой алкил, алкенил, алкинил, циклоалкил, арил, гетероарил, гетероциклил, циклоалкилалкил, арилалкил, гетероарилалкил или гетероциклилалкил;
ν2 и ν2', каждый независимо, представляют собой -(О-СН2-СН2)р2-, -(СН2-СН2-О)р2-, -(Жт-СН2-СН2)рт- или -(СН2-СН2-Жт)р2'-;
А2 отсутствует, представляет собой -О-, -О-С(=О)-, -С(=О)-О-, -8-, -80-, -8О2-, -СЕ11Е12-8-, -СК11К12-О-, -СК„К12-Же-, -О-(С=О)О-, -О-(С=О)Ы(Ее)-, -Ν(Κ®)-, -Ν(Ι%)-ί'( О)-, -С( (.))-Ν(Κ%-, -Ы(Ее)-С(=О)О-, -ы(с(=О)Ке)с(=О)-, -ы(с(=О)Ке)-, -(О-СН2-СН2)п'-, -88-, -С(=о)-, аминокислоту, пептид, содержащий от 2 до 8 аминокислот,
1св' представляет собой -С(=О)ОН, -СОЕ, -^Ке)-С(=О)-Х', -О-С(=О)Х', -С(=Щ)Х -ΝΕΛ^Ν^Χ, -8Н, -88Εά, -ΝΕΉ, -ΝΒ-ΝΚΉ
-С(=ХЕе)Х', -ИЕХН, Х'-СЕ1Е2-С(=О)- или Х'-СК4Е2-С(=О)-№Ее-, при этом СОЕ представляет собой химически активный сложный эфир,
Х' представляет собой галоген;
К1 выбран из фенила, нитрофенила (например, 2- или 4-нитрофенила), динитрофенила (например, 2-ил 4-нитрофенила), карбоксинитрофенила (например, 3-карбокси-4-нитрофенила), пиридилаилинитропиридила (например, 4-нитропиридила);
1а представляет собой -ΝΕ\ -С(=О)-, =Ν-, -ЫЕе-С(=О)-, -О-С(=О)- , -8О2-, -8-,
р2 представляет собой 0 или целое число от 1 до 1000; р2' представляет собой 0 или целое число от 1 до 10; и А представляет собой пептид, расщепляемый пептидазой.
В другом предпочтительном варианте реализации Ζ представляет собой -КН-; а значения и предпочтительные значения для остальных переменных являются такими, как описано в 13-м конкретном варианте реализации.
В другом предпочтительном варианте реализации А2 отсутствует, представляет собой
-8-8-, -ХН-С(=О)- или -С(=О)-ХН-; а значения и предпочтительные значения для остальных переменных являются такими, как описано выше в 13-м конкретном варианте реализации.
Более предпочтительно Ζ представляет собой -ΝΙ Ι-.
В другом предпочтительном варианте реализации оба р2 и р2' равны 0; а значения и предпочтительные значения для остальных переменных являются такими, как описано выше в 13-м конкретном варианте реализации. Более предпочтительно А2 отсутствует, представляет собой
-8-8-, -ЫН-С(=О)- или -С(=О)-МН-.
Еще более предпочтительно Ζ представляет собой -ХН-. В другом предпочтительном варианте реа- 38 029797
лизации К42 представляет собой алкил, а значения и предпочтительные значения для остальных переменных являются такими, как описано выше в 13-м конкретном варианте реализации. Более предпочтительно \У2 отсутствует, представляет собой
-8-8-, -ЫН-С(=О)- или -€(=Ο)-ΝΗ-.
Еще более предпочтительно Ζ представляет собой -ΝΗ-.
В другом предпочтительном варианте реализации один из К и К отсутствует, а другой представляет собой алкил; а значения и предпочтительные значения для остальных переменных являются такими, как описано выше в 13-м конкретном варианте реализации.
Более предпочтительно \У2 отсутствует, представляет собой
-8-8-, -ЫН-С(=О)- или -€(=Ο)-ΝΗ-.
Еще более предпочтительно Ζ представляет собой -ΝΗ-.
В другом предпочтительном варианте реализации оба КВ2 и КС2 отсутствуют; а остальные переменные являются такими, как описано выше в 13-м конкретном варианте реализации. Более предпочтительно \У2 отсутствует, представляет собой
-8-8-, -ЫН-С(=О)- или -ε<=Ο)-ΝΗ-.
Еще более предпочтительно Ζ представляет собой -ΝΗ-, а Ώ представляет собой майтанзиноид. В
14-м конкретном варианте реализации для соединений структурной формулы (III), Ь2' представлен одной из следующих структурных формул:
- 39 029797
- 40 029797
где Лев' для структурной формулы (Е2'а)-(Ь2'с) представляет собой -СООН или -СОЕ, а Лев' для структурной формулы (Ь2'1) и (Ь2'о) представляет собой -ЗН или -ЗЗКа, при этом -СОЕ представляет собой химически активный сложный эфир, выбранный из Ν-гидроксисукцинимидного эфира, Ν-гидроксисульфосукцинимидного эфира, нитрофенилового (например, 2- или 4-нитрофенилового) эфира, динитрофенилового (например, 2,4-динитрофенилового) эфира, сульфо-тетрафторфенилового (например, 4-сульфо-2,3,5,6-тетрафторфенилового) эфира и пентафторфенилового эфира; и фенила, нитрофенила (например, 2- или 4-нитрофенила), динитрофенила (например, 2- или 4-нитрофенила), карбоксинитрофенила (например, 3-карбокси-4-нитрофенила), пиридила или нитропиридила (например,
4-нитропиридила);
Кх, Ку, Кх, Ку, Кх и Ку для каждого случая независимо представляют собой Н, -ОН, галоген, -О-(С1-4алкил), -ЗО3-, -ΝΚ40Κ41Κ42+ или С1-4алкил, необязательно замещенный -ОН, галогеном, ЗО3 - или ΝΚ40Κ41Κ42+, при этом К40, К41 и Ко, каждый независимо, представляют собой Н или С1-4 алкил;
ν2 представляет собой -(СН2-СН2-О)р2- или -(О-СН2-СН2)р2-;
К16 для каждого случая независимо представляет собой Н, алкил, галоген, -ОН, -О-алкил, -ΝΟ2 или -С^ и
1, к и И, каждый независимо, равны 0 или представляют собой целое число от 1 до 10; а значения и
- 41 029797
предпочтительные значения для остальных переменных являются такими, как описано в 13-м конкретном варианте реализации.
В другом предпочтительном варианте реализации для структурных формул (Ь2'а)-(Ь2'с), все Кх, Ку, Кх и Ку представляют собой Н; а для структурных формул (Κ2'ό)-(Κ2'ρ), все Кх, Ку, Кх, Ку, Кх и Ку представляют собой Н; а значения и предпочтительные значения для остальных переменных являются такими, как описано в 14-м конкретном варианте реализации.
В другом предпочтительном варианте реализации для структурных формул (Ь2'а)-(Ь2'с), все Кх, Ку, Кх и Ку представляют собой Н; р2 представляет собой целое число от 2 до 24; а 1 и к, каждый независимо, представляют собой целое число от 1 до 6. Для структурных формул (Ь2'б)-(Е2'р), все Кх, Ку, Кх, Ку, Кх и Ку представляют собой Н; Κί6 представляет собой Н; р2 и р2', каждый независимо, равны от 2 до 24; 1, к и И, каждый независимо, представляют собой целое число от 1 до 6; а значения и предпочтительные значения для остальных переменных являются такими, как описано в 14-м конкретном варианте реализации.
В родственном конкретном варианте реализации для соединений структурной формулы (III), Ь2' представлен одной из следующих структурных формул:
ΰ0Β--ρ>Α2-ν2—νν2-κΒ2—ν2'—ρ?02-ΰΑ—·
где .Ια·,' представляет собой ο , -С(=О)ОН, -СОЕ, -8Н, -88Ка, Х'-СК.1К2-С(=О)- или х'-Ск.1К2-С(=О)-те-,
при этом СОЕ представляет собой химически активный сложный эфир, X' представляет собой галоген; и Ка выбран из фенила, нитрофенила (например, 2- или 4-нитрофенила), динитрофенила (например, 2- или 4-нитрофенила), карбоксинитрофенила (например, 3-карбокси-4-нитрофенила), пиридила или нитропиридила (например, 4-нитропиридила);
,В2
,С2
-КА2-У2-^2-КВ2-У2'-КС2-1а- представляет собой где КА2 представляет собой -(СКхКу)г или -Су-(СКхКу)г;
Су представляет собой циклоалкил (например, циклогексил); У2 представляет собой -(СН2-СН2-О)р2- или -(О-СН2-СН2)р2-;
Ζ1 представляет собой -С(=О)-И(Ке)-, -Ν(Τ)-("( О)- или при условии, что Ζι-Υ2 не содержит связи Ν-О;
Ζ2 представляет собой
при условии, что ν2-Ζ2 не содержит связи О-Ν;
1 представляет собой целое число от 0 до 10; р2 представляет собой целое число от 0 до 200;
Ζ представляет собой -ИН-.
В одном варианте реализации Ь2' представлен структурой
- 42 029797
где р2 представляет собой целое число от 0 до 200;
1св' представляет собой -СООН или -СОЕ, при этом -СОЕ представляет собой химически активный сложный эфир, выбранный из Ν-гидроксисукцинимидного эфира, Ν-гидроксисульфосукцинимидного эфира, нитрофенилового (например, 2- или 4-нитрофенилового) эфира, динитрофенилового (например, 2,4-динитрофенилового) эфира, сульфо-тетрафторфенилового (например, 4-сульфо-2,3,5,6тетрафторфенилового) эфира и пентафторфенилового эфира;
Кх, Ку, Кх, и Ку, для каждого случая, каждый независимо представляют собой Н, -ОН, галоген, -О-(С1-4алкил), -8СЬ", -ХК40К41К42+ или С1-4алкил, необязательно замещенный -ОН, галогеном, 8О3 - или Ж40К41К42+, при этом К40, К41 и К42, каждый независимо, представляют собой Н или С1-4алкил;
1 и к, для каждого случая независимо представляют собой целое число от 1 до 10.
В 15-м конкретном варианте реализации для соединений формулы (III), Ь1' представлен следующей формулой:
(С1 ),
где К9 и К10, каждый независимо, представляют собой Н или С1-4алкил; т представляет собой целое число от 1 до 10;
\\/ отсутствует, представляет собой -ХН-С(=О)-, -С(=О)-ХН-, -С(=О)-О- или -О-С(=О)-,
при условии, что если Ζ представляет собой -ΝΠ-, 1х и ν1 отсутствуют и КА1 представляет собой
-СК11К12-, то \1 не является -О-С(=О)-;
Кв1 отсутствует или представляет собой С1-10 алкил;
1О' отсутствует, представляет собой -С(=О)ОН, СОЕ, > -ХН-С(=О)-СН2-Х', -8Н или -88К ;
Χ' представляет собой уходящую группу (например, галоген); а значения и предпочтительные значения для остальных переменных являются такими, как описано выше в 13-м конкретном варианте реализации.
В предпочтительном варианте реализации, 1О' представляет собой -С(=О)ОН, -СОЕ или
а значения и предпочтительные значения для остальных переменных являются такими, как описано в 15-м конкретном варианте реализации.
В другом варианте реализации оба К9 и К10 представляют собой Н; и т равен 1, 2 или 3.
В другом предпочтительном варианте реализации \1 отсутствует или представляет собой -ХН-С(=О)-, а Кв1 отсутствует или представляет собой -(СН2)т'-, при этом т' равен 1, 2 или 3; а значения и предпочтительные значения для остальных переменных являются такими, как описано в 15-м конкретном варианте реализации.
В 16-м конкретном варианте реализации для соединений, представленных формулой (III), Ь1 представлен формулой (Ь1'), описанной в 15-м конкретном вариант реализации;
Ь2 представлен одной из структурных формул (Ь2'а)-(Ь2'р), описанных в 14-м конкретном варианте реализации;
Ζ представляет собой -Ν4-;
А представляет собой пептид, расщепляемый протеазой; а значения и предпочтительные значения для остальных переменных являются такими, как описано выше для структурной формулы (III) в 14- и
15-м конкретном варианте реализации.
В 17-м конкретном варианте реализации, для соединений формулы (III)
Ь2' представлен любой из структурных формул (Ь2'а)-(Ь2'р), описанных в 14-м конкретном варианте реализации;
А представляет собой пептид, расщепляемый протеазой;
-Ζ-Χ-Ь/ представлен одной из следующих структурных формул:
- 43 029797
при этом Кс представляет собой Н или Сх-4 алкил; а т2 и т2', каждый независимо, представляют собой целое число от 1 до 10.
Предпочтительно Кс представляет собой Н. В другом предпочтительном варианте реализации т2 и т2', каждый независимо, представляют собой целое число от 1 до 3.
В предпочтительном варианте реализации, для формулы (III), описанной в 13-, 14-, 15-, 16- или 17-м вариантах реализации, включая любые родственные конкретные варианты реализации, А представляет собой пептид, расщепляемый лизосомальной протеазой. В другом предпочтительном варианте реализации А представляет собой пептид, расщепляемый протеазой, которая экспрессируется в опухолевой ткани.
В более предпочтительном варианте реализации, для формулы (III), описанной в 13-, 14-, 15-, 16или 17-м вариантах реализации, включая любые родственные конкретные варианты реализации, А представляет собой пептид, имеющий аминокислоту, которая ковалентно связана с -Ζ-Χ-Τχ-Ό, выбранную из группы, состоящей из А1а, Агд, Азп, Азр, СП, Суз, селено-Суз, О1п, О1и, О1у, Из, Не, Ьеи, Ьуз, Ме1, Рйе, Рго, δе^, Иг, Тгр, Туг и Уа1, каждая независимо в виде I. или Ό изомеров.
В другом более предпочтительно варианте реализации, для формулы (I), описанной в 13-, 14-, 15-,
16- или 17-м вариантах реализации, включая любые родственные конкретные варианты реализации, А
- 44 029797
выбран из группы, состоящей из
Уа1-Сй, Уа1-Ьуз, РйеЬуз, Ьуз-Ьуз, А1а-Ьуз, Рйе-Сй, Ьеи-Сй, Ые-Сй, Тгр, Сй, Рйе-А1а, Рйе-ТУ-тозил-Агд, Рйе-Ν9нитро-Агц. Рйе-Рйе-Ьуз, О-Рйе-Рйе-Ьуз, С1у-РНе-йуз. Ьеи-Ак-Ьеи, 11е-А1а-Ьеи, Уа1-А1а-Уа1, Ак-Ьеи-Ак-Ьеи (8ЕЦ ГО ΝΟ: 1), Р-А1а-Ьеи-А1а-Ьеи (8ЕЦ ГО N0: 2) и О1у-Рйе-Ьеи-О1у (8ЕЦ ГО N0: 3), Уа1-Аг§, Аг§-Уа1, Απ’-Ап·. Уа1ГО-Сй, Уа1ГО-Ьуз, Уа1ГО-Аг§, Ц-Уа1-Сй, О-Уа1йуз. О-Уа1-Аг«. О-Уа1ГО-Сй, О-Уа1-О-йуз. О-Уа1ГО-Аг§, ϋ-АгдГО-Агд, А1а-А1а, О-А1а-А1а,
А1аГО-А1а и О-А1аГО-А1а.
В еще более предпочтительном варианте реализации для формулы (III), описанной в 13-, 14-, 15-, 16- или 17-м вариантах реализации, включая любые родственные конкретные варианты реализации, А представляет собой Уа1-Сй, УаМл'з, Уа1-0-Сй или Уа1-0-Ъуз.
В другом предпочтительном варианте реализации для формулы (III), описанной в 13-, 14-, 15- или 16-м вариантах реализации, включая любые родственные конкретные варианты реализации, Χ представляет собой необязательно замещенный фенил. Более предпочтительно X представлен любой из следующих структурных формул:
при этом К11, К18, К19 и К20, каждый независимо, представляет собой Н, алкил, Н, алкил, галоген, -ОН, -О-алкил, -Ν02 или -СК
Предпочтительно все К17, К18, К19 и К20 представляют собой Н.
В другом предпочтительном варианте реализации для структурной формулы (III), X представляет собой необязательно замещенный шестичленный гетероарил, выбранный из группы, состоящей из пиридина, пиридазина, пиримидина, пиразина, триазина и тетразина, при этом указанный гетероарил связан с группой -ΝΗ и группой -Ь1 по атому углерода указанного гетероарила; а значения и предпочтительные значения для остальных переменных являются такими, как описано выше в 13-, 14-, 15- или 16-м конкретном варианте реализации.
В другом предпочтительном варианте реализации для структурной формулы (III), X представляет собой необязательно замещенный пятичленный гетероарил; а предпочтительные значения для остальных переменных являются такими, как описано выше в 13-, 14-, 15- или 16-м конкретном варианте реализации. Более предпочтительно X выбран из группы, состоящей из
при этом К21, К22 и К23, каждый независимо, представляют собой Н или алкил. Предпочтительно все К21, К22 и К23 представляют собой Н.
Соединения лекарственного средства и линкера.
Настоящее изобретение относится также к соединению лекарственного средства и линкер, представленному формулой (IV)
где Ь2' представляет собой спейсер, содержащий химически активный фрагмент, который может образовывать ковалентную связь с клеточно-связывающим агентом, Н или -ОН;
А представляет собой аминокислоту или пептид, содержащий от 2 до 20 аминокислот;
Ζ представляет собой -ΝΗ- или -С(=О)-;
Ό представляет собой цитотоксическое средство;
Ь] отсутствует или представляет собой спейсер,
X представляет собой необязательно замещенный арил или гетероарил.
- 45 029797
В одном варианте реализации для соединений формулы (IV), если X представляет собой -ΝΙ I-, то Ь1 не содержит один из следующих фрагментов, напрямую связанных с X:
при этом ΐ равен 0 или представляет собой целое число от 1 до 5;
С) представляет собой -О-, -ΝΚ15, § или -СК11К12-;
X2 представляет собой арил или гетероарил;
К11, К12, К13, К14 и К15, каждый независимо, представляют собой Н или алкиловую группу.
В 18-м конкретном варианте реализации, для соединений формулы (IV)
Ь1 представлен следующей формулой:
—ΰχ—ΡΑ1—ν.,— ννή—κΒ1—V!—Ρ01-ΰ0—?
Ь2' представлен следующей формулой:
Лев1' ?
где каждый КА1, КВ1 и КС1 отсутствует, представляет собой алкил, алкенил, алкинил, циклоалкил, арил, гетероарил или гетероциклил, при этом указанный алкил, алкенил, алкинил, циклоалкил, арил, гетероарил и гетероциклил необязательно замещены;
1Х и ^1, каждый независимо, отсутствуют, представляют собой -О-, -О-С(=О)-, -С(=О)-О-, -§-, -§0-, -§02-, -СК„К12-§-, -СК11К12-0-, ^Κ„Κ12ΝΚ6-, -О-(С=О)О-, -ОДСТО^К6)-, -Ν(Κ6)-, -Ν(Κ6)^(=0)-, ^(=0)-Ν(Κ6)-, -Ν(Κ6)^(=0)0-, -ΝΥ(=0)Κ6^(=0)-, -Ν(0(=0)Κ6)-, -§§-, -С(=0)-,
ιΑ2_\/_ — \λ/_—ηΒ2-\/_ι—иС2_ ι —
аминокислоту или пептид, имеющий от 2 до 8 аминокислот,
при условии, что если Ζ представляет собой -Ν^-, 1Х и ν1 отсутствуют и КА1 представляет собой -СК11К12-, то не является -О-С(=О)-;
1О отсутствует, представляет собой -С(=О)-, -§-,
-О-С(=О)-, -С(=О)-О-, -§0-, -§02-, -О-(С=О)-, -Ν(Κ6)-, -Ν(Κ6)^(=0)-, или -Ν(0(=0)Κβ)€(=0>, или -Ν^(=0)Κ6)-;
ν1 и ν1', каждый независимо, представляют собой -(0-СН2-СН2)р1-, -(СН2-СН2-0)р1-, -(ΝΚΑ^-^ν- или -(^-^-ΝΚ^ρρ-;
Ке представляет собой Н, алкил, алкенил, алкинил или -(СН2-СН2-0)п'-Кк;
Кк и Кт, каждый независимо, представляют собой Н или алкил; п' представляет собой целое число от 1 до 24; р1 представляет собой 0 или целое число от 1 до 1000;
р1' представляет собой 0 или целое число от 1 до 10;
А2 В2 С2
К , К и К , каждый независимо, отсутствуют, представляют собой алкил, алкенил, алкинил, циклоалкил, арил, гетероарил, гетероциклил, циклоалкил, арилалкил, гетероарилалкил или гетероциклилалкил;
ν2 и ν2', каждый независимо, представляют собой -(0-СН2-СН2)р2-, -(СН2-СН2-О)р2-, -(МКт-СН2СН2)р2'- или -(^-^-ΝΚ^-;
отсутствует, представляет собой -О-, -О-С(=О)-, -С(=О)-О-, -§-, -§0-, -§02-, -СК11К12-§-, -СК11К12-0-, ^Κ„Κ12-ΝΚ\ -О-(С=О)О-, -0-^=0)Ν(Κ^-, -Ν(Κ^-, -ΝζΚ^-Ο^Θ)-, ^(=0)-Ν(Κ^-, -Ν(Κ^-^=0)0-, -Ν^(=0)Κ^(=0)-, -Ν^(=0)Κ^-, -(0-СН2-СН2Д-, -§§-, -С(=0)-, аминокислоту, пептид, 6%
содержащий от 2 до 8 аминокислот,
1св' представляет собой -С(=О)ОН, -СОЕ, -^^)-^=0)-^, -0-С(=0)К, -^ΝΉχ -ΝΚΛ^ΝΉ^', о .
, А
-§Н, -§§Κά, -ΝΚΉ, -ΝΉ-ΝΚΉ, ο , -С(=NΚе)X', -ΝΚΝΉ, Х-СК^-С^)- или ВДК2-С(=0)Же-, при этом СОЕ представляет собой химически активный сложный эфир, X' представляет собой галоген; и Ка выбран из фенила, нитрофенила (например, 2- или 4-нитрофенила), динитрофенила (например, 2- или
- 46 029797
4-нитрофенила), карбоксинитрофенила (например, 3-карбокси-4-нитрофенила), пиридилаилинитропиридила (например, 4-нитропиридила);
1А представляет собой -ΝΚ®-, -С(=0)-, =Ν-, -ЫКе-С(=0)-, -0-С(=0)-, -302-, -3-,
р2 представляет собой 0 или целое число от 1 до 1000;
р2' равен 0 или представляет собой целое число от 1 до 10; а значения и предпочтительные значения для остальных переменных являются такими, как описано выше для формулы (IV).
В предпочтительном варианте реализации Ό представляет собой майтанзиноид; а значения и предпочтительные значения для остальных переменных являются такими, как описано в 18-м конкретном варианте реализации.
В другом предпочтительном варианте реализации Ζ представляет собой -ЫН-; а значения и предпочтительные значения для остальных переменных являются такими, как описано в 18-м конкретном варианте реализации. Более предпочтительно Ό представляет собой майтанзиноид.
В другом предпочтительном варианте реализации Ψ2 отсутствует, представляет собой
-3-3-, -НН-С(=0)- или -С(=0)-НН-; а значения и предпочтительные значения для остальных переменных являются такими, как описано в 18-м конкретном варианте реализации.
Более предпочтительно Ζ представляет собой -КН-; а Ό представляет собой майтанзиноид.
В другом предпочтительном варианте реализации р2 для обоих ν2 и ν2' равен 0; а значения и предпочтительные значения для остальных переменных являются такими, как описано выше в 18-м конкретном варианте реализации. Более предпочтительно Ψ2 отсутствует, представляет собой
-3-3-, -НН-С(=0)- или -С(=0)-НН-.
Еще более предпочтительно Ζ представляет собой -МН-, а Ό представляет собой майтанзиноид.
В другом предпочтительном варианте реализации КА2 представляет собой алкил, а значения и предпочтительные значения для остальных переменных являются такими, как описано выше в 18-м конкретном варианте реализации. Более предпочтительно Ψ2 отсутствует, представляет собой
-3-3-, -НН-С(=0)- или
-С(=0)-НН-.
Еще более предпочтительно Ζ представляет собой -ХН-, а Ό представляет собой майтанзиноид.
В другом предпочтительном варианте реализации один из К и К отсутствует, а другой представляет собой алкил; а значения и предпочтительные значения для остальных переменных являются такими, как описано выше в 18-м конкретном варианте реализации. Более предпочтительно Ψ2 отсутствует, представляет собой
-3-3-, -НН-С(=0)- или
-С(=0)-НН-.
Еще более предпочтительно Ζ представляет собой -Ν^, а Ό представляет собой майтанзиноид.
В другом предпочтительном варианте реализации оба КВ2 и КС2 отсутствуют; а значения и предпочтительные значения для остальных переменных являются такими, как описано выше в 18-м конкретном варианте реализации. Более предпочтительно Ψ2 отсутствует, представляет собой
-3-3-, -НН-С(=0)- или
- 47 029797
<(=Ο)-ΝΗ-.
Еще более предпочтительно Ζ представляет собой -ΝΗ-, а Ό представляет собой майтанзиноид.
В 19-м конкретном варианте реализации для соединений формулы (IV), Ь2' представлен одной из
следующих структурных формул:
- 48 029797
- 49 029797
галоген, -О-(С1-4алкил), -δΟ3", -ΝΚ40Κ41Κ42 + или С1-4алкил, необязательно замещенный -ОН, галогеном, δΟ3" или ΝΚ40Κ41Κ42 , при этом К40, К41 и К42, каждый независимо, представляют собой Н или С1-4 алкил;
К16, для каждого случая независимо представляет собой Н, алкил, галоген, -ОН, -О-алкил, -ΝΟ2 или
-ΟΝ;
У2 представляет собой -(СН2-СН2-О)р2- или -(О-СН2-СН2)р2-;
1, к и к, каждый независимо, представляют собой целое число от 1 до 10;
Ζ представляет собой -Ν4-;
А представляет собой пептид, расщепляемый пептидазой; а значения и предпочтительные значения для остальных переменных являются такими, как описано выше в 18-м конкретном варианте реализации.
В предпочтительном варианте реализации Ό представляет собой майтанзиноид; а значения и предпочтительные значения для остальных переменных являются такими, как описано в 19-м конкретном варианте реализации.
В другом предпочтительном варианте реализации для структурных формул (Ь2'а)-(Ь2'с) и (Е2'р)-(Ь2'и), все Кх, Ку, Кх и Ку представляют собой Н; а для структурных формул (Ь2'0)-(Ь2'р), все Кх, Ку, Кх, Ку, Кх и Ку представляют собой Н.
В другом предпочтительном варианте реализации для структурных формул (Ь2'а)-(Ь2'с) и (Ь2'р)-(Ь2'и), все Кх, Ку, Кх и Ку представляют собой Н; р2 представляет собой целое число от 2 до 24; а 1 и к, каждый независимо, представляют собой целое число от 1 до 6. Для структурных формул (Ь2'0)-(Ь2'р), все Кх, Ку, Кх, Ку, Кх и Ку представляют собой Н; К16 представляет собой Н; р2 для каждого случая независимо равен от 2 до 24; 1, к и к, каждый независимо, представляют собой целое число от 1 до 6.
- 50 029797
В родственном варианте реализации для соединений формулы (IV), Ь2' представлен одной из следующих структурных формул:
бсв1'
-ν2—\л/2-кВ2—ν2'
где .Гсв представляет собой
-С(=О)ОН, -СОЕ, -8Н, -88К, К-СК^-С^О)- или X'-СК1К2-С(=Ο)-NКе-, при этом СОЕ представляет собой химически активный сложный эфир, X' представляет собой галоген; и Ка выбран из фенила, нитрофенила (например, 2- или 4-нитрофенила), динитрофенила (например, 2- или 4-нитрофенила), карбоксинитрофенила (например, 3-карбокси-4-нитрофенила), пиридила или нитропиридила (например, 4-нитропиридила);
-КЛ2-\\-\\¥-КВ2-\'2'-КС2-.1Л- представляет собой
-КА2где КА2 представляет собой -(СКхКу)1- или -Су-(СКхКу)1-;
Су представляет собой циклоалкил (например, циклогексил); ν2 представляет собой -(СН2-СН2-О)р2- или -(О-СН2-СН2)р2-;
Ζ1 представляет собой -С(=О)-У(Ке)-, -У(Ке)-С(=О)- или
при условии,
что Ζ1-ν2 не содержит связи Ν-О; Ζ2 представляет сс-'·”
при условии, что ν2-Ζ2 не содержит связи О-Ν;
1 представляет собой целое число от 0 до 10; р2 представляет собой целое число от 0 до 200;
Ζ представляет собой -ΝΉ-.
В одном варианте реализации Е2' представлен структурой
р2 представляет собой целое число от 0 до 200;
- 51 029797
.Гев' представляет собой -СООН или -СОЕ, при этом -СОЕ представляет собой химически активный сложный эфир, выбранный из Ν-гидроксисукцинимидного эфира, Ν-гидроксисульфосукцинимидного эфира, нитрофенилового (например, 2- или 4-нитрофенилового) эфира, динитрофенилового (например, 2,4-динитрофенилового) эфира, сульфо-тетрафторфенилового (например, 4-сульфо-2,3,5,6тетрафторфенилового) эфира и пентафторфенилового эфира;
Кх, Ку, Кх , и Ку, для каждого случая, каждый независимо представляют собой Н, -ОН, галоген, -О-(С1-4алкил), -8О3-, -КК40К41К42+ или С1-4алкил, необязательно замещенный -ОН, галогеном, 8О3 - или ЫК4оК41К42+, при этом К40, К41 и К42, каждый независимо, представляют собой Н или С1-4алкил;
1 и к, для каждого случая независимо представляют собой целое число от 1 до 10.
В 20-м конкретном варианте реализации, для соединений формулы (IV), Ь1 представлен следующей формулой:
-(ск9к10)т—\л/гкВ1-ц0- (ы)
где К9 и К10, каждый независимо, представляют собой Н или С1-4 алкил; т представляет собой целое число от 1 до 10;
отсутствует, представляет собой -ЫН-С(=О)-, -С(=О)-НН-, -С(=О)-О- или -О-С(=О)-, при условии, что если Ζ представляет собой -ЫН-, и т равен 1, то ^1 не является -О-С(=О)-;
Кв1 отсутствует или представляет собой С1-10 алкил; и
1О отсутствует, представляет собой -С(=О)-, 0 , -ЫН-С(=О)-СН2- или -8-;
Ζ представляет собой -ЫН-;
А представляет собой пептид, расщепляемый пептидазой; а значения и предпочтительные значения для остальных переменных являются такими, как описано в 18-м конкретном варианте реализации.
В предпочтительном варианте реализации 1о отсутствует, представляет собой -С(=О)- или
В другом варианте реализации оба К9 и К10 представляют собой Н; и т равен 1, 2 или 3.
В другом предпочтительном варианте реализации ^1 отсутствует или представляет собой -ЫН-С(=О)-, а Кв1 отсутствует или представляет собой -(СН2)т'-, при этом т' равен 1, 2 или 3.
В другом предпочтительном варианте реализации Ό представляет собой майтанзиноид.
В 21-м конкретном варианте реализации для соединений, представленных формулой (IV), где
Ь1 представлен формулой (Ь1), описанной в 20-м конкретном варианте реализации;
Ь2' представлен одной из структурных формул (Ь2'а)-(Ь2'о), описанных в 19-м конкретном варианте реализации;
Ζ представляет собой -ЫН-;
А представляет собой пептид, расщепляемый протеазой;
Ό представляет собой майтанзиноид; а значения и предпочтительные значения для остальных переменных являются такими, как описано выше для структурной формулы (I) в 19- и 20-м конкретном варианте реализации.
В 22-м конкретном варианте реализации, для соединений формулы (IV)
Ь2' представлен любой из структурных формул (Ь2'а)-(Ь2'р), описанных в 19-м конкретном варианте реализации;
А представляет собой пептид, расщепляемый протеазой;
-Ζ-Χ-Ц-О представлен одной из следующих структурных формул:
- 52 029797
при этом Мау представлен следующей структурной формулой:
Κι, К2, Ка, Кь и Кс, каждый независимо, представляют собой Н или С1-4 алкил;
т2, т2' и п2, каждый независимо, представляют собой целое число от 1 до 10;
значения и предпочтительные значения для остальных переменных являются такими, как описано
выше для формулы (IV).
В предпочтительном варианте реализации для формулы (IV), описанной в 18-, 19-, 20-, 21- или 22-м вариантах реализации, включая любые родственные конкретные варианты реализации, А представляет
- 53 029797
собой пептид, расщепляемый лизосомальной протеазой. В другом предпочтительном варианте реализации А представляет собой пептид, расщепляемый протеазой, которая экспрессируется в опухолевой ткани. В более предпочтительном варианте реализации для формулы (IV), описанной в 18-, 19-, 20-, 21- или 22-м вариантах реализации, включая любые родственные конкретные варианты реализации, А представляет собой пептид, имеющий аминокислоту, которая ковалентно связана с -Ζ-Χ-Ι,ρΙ), выбранную из группы, состоящей из А1а, Агд, Азп, Азр, СН, Суз, селено-Суз, С1п, С1и, С1у, Н13, Не, Ьеи, Ьуз, Μеί, РНе, Рго, 8ег, ТНг, Тгр, Туг и Vа1, каждая независимо в виде Н или Ώ изомеров.
В другом более предпочтительно варианте реализации для формулы (IV), описанной в 18-, 19-, 20-, 21- или 22-м вариантах реализации, включая любые родственные конкретные варианты реализации, А выбран из группы, состоящей из
Уа1-Сй,
УаЕЬуз, Рйе-Ьуз, Ьуз-Ьуз, А1а-Ьуз, РЬе-Сй, Ьеи-Сй, Ые-Сй, Тгр, Сй, Рйе-А1а, Рйе-ХР-тозилАг§, РНе-ХР-нитро-Агц. Рйе-РЬе-Ьуз, О-РЬе-РЬе-Ьуз, СНу-Рйе-Ьуз, Теи-А1а-Теи, 11е-А1а-Ьеи,
Уа1-А1а-Уа1, А1а-Ьеи-А1а-Ьеи (ЗЕЦ ГО ΝΟ: 1), Р-А1а-Ьеи-А1а-Ьеи (ЗЕЦ ГО N0: 2) и О1у-РЬеЙеи-С1у (ЗЕЦ ГО N0: 3), Уа1-Аг§, Аг§-Уа1, Агд-Агд, Уа1ГО-Сй, УаЕО-Ьуз, Уа1ГО-Агд, О-Уа1Сй. О-УаЕЬуз, О-Уа1-Агд, О-Уа1ГО-Сй, О-УаЕО-Ьуз, О-Уа1ГО-Агд, ϋ-Агд-Э-Агд. А1а-А1а,
О-А1а-А1а, А1аГО-А1а и О-А1аГО-А1а.
В еще более предпочтительном варианте реализации для формулы (IV), описанной в 18-, 19-, 20-, 21- или 22-м вариантах реализации, включая любые родственные конкретные варианты реализации, А представляет собой Vа1-Сй, Уа1-Нуз, Vа1-^-Сй или Vа1-^-^уз.
В 23-м конкретном варианте реализации для соединений формулы (IV)
Ь2' представлен любой из структурных формул (Н2'а)-(Н2'р), описанных в 19-м конкретном варианте реализации;
А представляет собой Vа1-Сй, Уа1-Нуз, Vа1-^-Сй или Vа1-^-^уз;
-Ζ-Χ-Ι,ρΙ) представлен одной из следующих структурных формул (Е1а)-(Ь1к), описанных в 22-м конкретном варианте реализации.
В предпочтительном варианте реализации оба Ка и КЬ представляют собой метил; Кс представляет собой Н; а остальные переменные являются такими, как описано выше в 23-м конкретном варианте реализации. Более предпочтительно т2 и т2', каждый независимо, представляют собой целое число от 1 до 3.
В другом предпочтительном варианте реализации оба Ка и КЬ представляют собой метил; Кс представляет собой Н; оба Κι и К2 представляют собой Н, и η равен 1; а остальные переменные являются такими, как описано выше в 23-м конкретном варианте реализации. Более предпочтительно т2 и т2', каждый независимо, представляют собой целое число от 1 до 3.
В другом предпочтительном варианте реализации для соединений формулы (IV), описанной в 18-, 19-, 20- или 21-м вариантах реализации, включая любые родственные конкретные варианты реализации, I) представлен структурной формулой (А) или (В)
где Υ1 отсутствует или представляет собой -С(=О)(СК7К8)ц(СК5К6)т1(СКзК4)П1СК1К28-,
К1, К2, К3, К4, К5, К6, К7 и К8, каждый независимо, представляют собой Н, алкил, алкенил, циклоал- 54 029797
кил, гетероарил, гетероциклил или арил;
11, т1 и п1, каждый независимо, представляют собой 0 или целое число от 1 до 5.
Более предпочтительно для структурной формулы (IV), описанной в 18-, 19-, 20- или 21-м конкретном варианте реализации, включая любые родственные конкретные варианты реализации, Ό представлен одной из следующих структурных формул:
В другом предпочтительном варианте реализации для формулы (IV), описанной в 18-, 19-, 20- или 21-м вариантах реализации, включая любые родственные конкретные варианты реализации, X представляет собой необязательно замещенный фенил. Более предпочтительно X представлен любой из следующих структурных формул:
при этом К17, К18, К19 и К20, каждый независимо, представляют собой Н, алкил, Н, алкил, галоген, -ОН, -О-алкил, -С(=О)ОК30, -С(=О)К30, -ΝΟ2 или -СН, при этом К30 представляет собой Н или алкил. Предпочтительно все К17, К18, К19 и К20 представляют собой Н.
В другом предпочтительном варианте реализации для структурной формулы (IV), X представляет собой необязательно замещенный шестичленный гетероарил, выбранный из группы, состоящей из пиридина, пиридазина, пиримидина, пиразина, триазина и тетразина, при этом указанный гетероарил связан с группой -ΝΗ и группой -Ь1 по атомам углерода указанного гетероарила; а значения и предпочтительные значения для остальных переменных являются такими, как описано выше в 18-, 19-, 20- или 21-м конкретном вариантах реализации.
В другом предпочтительном варианте реализации для структурной формулы (IV), X представляет собой необязательно замещенный пятичленный гетероарил; а предпочтительные значения для остальных переменных являются такими, как описано выше в 18-, 19-, 20- или 21-м конкретном вариантах реализации. Более предпочтительно X выбран из группы, состоящей из
- 55 029797
при этом К21, К22 и К23, каждый независимо, представляют собой Н или алкил. Предпочтительно все К21, К22 и К23 представляют собой Н.
Клеточно-связывающие агенты.
Эффективность конъюгатов настоящего изобретения как терапевтических средств зависит от тщательного выбора и соответствующего клеточно-связывающего агента. Клеточно-связывающие агенты могут быть любого известного в настоящее время типа, или становящегося известным типа, включая пептиды и непептидные соединения. Как правило, они могут быть антителами (особенно моноклональными антителами), лимфокинами, гормонами, факторами роста, витаминами (такими как фолат и так далее, которые могут связываться с его рецептором клеточной поверхности, например фолатным рецептором), молекулами, транспортирующими питательные вещества (такими как трансферрин), или любыми другими клеточно-связывающими молекулами или веществами.
В некоторых вариантах реализации клеточно-связывающие агенты представляют собой белки или полипептиды, или соединения, содержащие белки или полипептиды.
Предпочтительно белки или полипептиды содержат один или более остатков Ьуз с группами -ΝΗ2 в боковой цепи. Альтернативно или дополнительно, белки или пептиды содержат один или более остатков Суз. Группы -δΗ в боковой цепи остатков Суз могут быть интактными или могут быть в дисульфидной связи, которая может быть восстановлена. Предпочтительно восстановление дисульфидной связи(ей) не оказывает существенного отрицательного воздействия на клеточно-связывающую функцию белков или полипептидов (например, в случае связывания их части с антителом или антигеном, восстановление дисульфидных связей существенно не повышает диссоциацию легких цепей/тяжелых цепей).
Группы -ΝΗ2 в боковой цепи Ьуз и/или группы -δΗ в боковой цепи Суз могут быть ковалентно связаны с линкерами, которые, в свою очередь, связаны с соединениями настоящего изобретения, объединяя клеточно-связывающие агенты с соединениями настоящего изобретения. Каждый белковый клеточносвязывающий агент может содержать множество групп ΝΗ2 в боковой цепи Ьуз и/или групп -δΗ в боковой цепи Суз, способных связываться с соединениями настоящего изобретения.
Более конкретные примеры клеточно-связывающих агентов, которые могут быть использованы, включают
поликлональные антитела; моноклональные антитела;
фрагменты антител, такие как РаЬ, РаЬ' и Р(аЬ')2, Ρν, миниантитела, диатела, триотела, тетратела, нанотела, проантитела, доменные тела, унитела и т.п. (РагЬат, 1. ХшшипоЕ 131:2895-2902 (1983); δρτίη§ е£ а1. 1. !шшипо1. 113:470-478 (1974); №зопо££ е£ а1. АгсЬ. ВюсЬет. ВюрЬуз. 89:230-244 (1960), Ктш е£ а1., Мо1., Сапсег ТЬег., 7 :2486-2497 (2008), СаИег, \атге Кетз., 6 :343-357 (2006),
К. Коп£егтапп & δ. ЭиЬе1, 2001 АппЬоск Епдтееппд, δρ^^η§е^-Уе^1а§, 11ек1е1Ьегу-Хе\\· Уогк);
биспецифические антитела (Могпзоп δ.Γ №1иге Ью£есЬпо1о§у, 25 (11): 1233-4 (2007)); нанотела, проантитела, диатела, миниантитела, центирины;
белки с анкириновым повтором (ЭАКРтз; ΖаЬηά е£ а1., I. Вю1. СЬет., 281, 46, 35167-35175, (2006); Βοζ Η.Κ., Атз£и12 Р. & Р1иск£Ьип А. (2005) №1иге Вю£есЬпо1о§у, 23, 1257-1268) или белки с анкиринподобными повторами, или синтетические пептиды, описанные, например, в публикации патента США № 20070238667; патенте США № 7101675 и \ΥΌ 2007/147213; \ΥΌ 2007/062466);
интерфероны (например, б, в, г); лимфокины, такие как ΣΕ-2, ΣΕ-3, ΣΕ-4, ΣΕ-6;
гормоны, такие как инсулин, ΤΚΗ (рилизинг-гормон тиротропина), ΜδΗ (меланоцитстимулирующий гормон), стероидные гормоны, такие как эндрогены и эстрогены;
факторы роста и колониестимулирующие факторы, такие как ЕСТ, ТОР-альфа, РОТ, УЕСТ, Ο-('δΡ, Μ-ί'δΡ и ΟΜ-ί'δΡ (Вигдезз, Σттиηо1оду Тобау, 5:155-158 (1984));
трансферрин (ОКее£е е! а1. Σ. Вю1. СЬет. 260:932-937 (1985)); витамины, такие как фолат.
Повторы белковых структур, основанных на консенсусной последовательности фибронектина типа Ш (ΡΝ3) (известные также как центирины; см. публикацию патента США 2010/0255056, включенную в
- 56 029797
настоящий документ путем ссылки);
белки с заданным анкириновым повтором (БАКРшк; заявки на патент США №20040132028; 20090082274; 20110118146; 20110224100, включенные в настоящий документ путем ссылки), С. 2айиб е! а1. 2010, Саисег Ке8., 70; 1595-1605, включенный в настоящий документ путем ссылки);
белки со структурой домена фибронектина (Абиесйик: заявки на патент США № 20070082365; 20080139791, включенные в настоящий документ путем ссылки). Технологии моноклональных антител позволяют создавать чрезвычайно специфичные клеточно-связывающие агенты в форме специфичных моноклональных антител. Особенно хорошо известны в данной области техники приемы создания моноклональных антител, получаемых за счет иммунизации мышей, крыс, хомяков или любых других млекопитающих целевым антигеном, таким как здоровые клетки-мишени, антигены, выделенные из клетокмишеней, цельный вирус, аттенуированный цельный вирус и вирусные белки, такие как белки вирусной оболочки. Могут быть также использованы сенсибилизированные клетки человека. Другой способ создания моноклональных антител заключается в использовании фаговой библиотеки ксΡν (одноцепочечная вариабельная область), в частности, ксΡν человека (см., например, ОпГГйНк е! а1., патенты США № 5885793 и 5969108; Μ^γιΓΙογΙυ е! а1., XVО 92/01047; Ыттд е! а1., XVО 99/06587). Кроме того, могут быть использованы также антитела с измененной поверхностью, описанные в патенте США № 5639641, химерные антитела и гуманизированные антитела. Выбор соответствующего клеточно-связыващего агента является предметом выбора, зависящим от конкретной клеточной популяции, являющейся мишенью, но в целом предпочтительны моноклональные антитела человека, если соответствующие антитела доступны.
Например, моноклональное антитело ΜΥ9 представляет собой мышиное антитело [дС], которое специфически связывается с антигеном СБ33 (ГБ. Опйш е! а1. 8 Ьеикет1а Кек., 521 (1984)) и может быть использовано, если клетки-мишени экспрессируют СБ33 так же, как при заболевании острым миелогенным лейкозом (ΑΜ^). Клеточно-связывающий агент может быть любым соединением, которое может связываться с клеткой, как специфическим, так и неспецифическим образом. Как правило, это могут быть антитела (особенно моноклональные антитела и фрагменты антител), интерфероны, лимфокины, гормоны, факторы роста, витамины, молекулы, транспортирующие питательные вещества (такие как трансферрин) или любые другие клеточно-связывающие молекулы или вещества. Если клеточносвязывающий агент представляет собой антитело, то он связывается с антигеном, который представляет собой полипептид, и может быть трансмембранной молекулой (например, рецептором) или лигандом, таким как фактор роста. Иллюстративные антигены включают молекулы, такие как ренин; гормон роста, включая человеческий гормон роста и бычий гормон роста; фактор, стимулирующий выделение гормона роста; гормон паращитовидной железы; стимулирующий гормон щитовидной железы; липопротеины; альфа010антитрипсин; А-цепь инсулина; В-цепь инсулина; проинсулин; фолликулостимулирующий гормон; кальцитонин; лютеинизирующий гормон; глюкагон; факторы свертывания крови, такие как фактор νΜΟ фактор IX, тканевый фактор (ТР) и фактор фон Виллебранда; антикоагулирующие факторы, такие как белок С; атриальный натрийвретический фактор; легочный сурфактант; активатор плазминогена, такой как урокиназа или активатор плазминогена из человеческой мочи или тканевого типа (!-РА); бомбезин; тромбин; гемопоэтический фактор роста; альфа- и бета-фактор некроза опухоли; энкефалиназу; КАЫТЕЗ (регулируемый при активации нормально экспрессированных и секретированных Т-клеток); макрофагальный воспалительный белок человека (ΜΣΡ-1 альфа); сывороточный альбумин, такой как сывороточный альбумин человека; ингибирующее вещество Мюллера; А-цепь релаксина; В-цепь релаксина; прорелаксин; гонадотропин-ассоциированный белок мышей; белок микробов, такой как беталактамаза; ДНКазу; ^Е; цитотоксический Т-лимфоцит-ассоциированный антиген (СТЬА), такой как СТЬА-4; ингибин; активны; фактор роста эндотелия сосудов (ХЕОР); рецепторы для гормонов или факторов роста; белок А или Б; ревматоидные факторы; нейротрофный фактор (ВБХР), нейротрофин-3, -4, 5 или -6 (ЫТ-3, ЫТ4, ЫТ-5 или ЫТ-6) или фактор роста нервов, такой как ΝΟΡ-β; тромбоцитарный фактор роста (РБОР); фактор роста фибробластов, такой как аРОР и ЬРОР; рецептор 2 фактора роста фибробластов (РОРК2), эпидермальный фактор роста (ЕОР); трансформирующий фактор роста (ТОР), такой как ТОР-альфа и ТОР-бета, включая ТОР-βϊ Е ТОР-(12. ТОР- β3, ТОР-(14 или ТОР-(15; инсулин-подобный фактор роста-! и -II (ЮР^ и ЮР-П); дез(1-3)-ЮР-1 (ЮР^ головного мозга), инсулин-подобный фактор роста, связывающий белки, ЕрСАМ, ОБ3, РЬТ3, ΡδΜΑ Р8СА, ΜϋΟ, ΜϋΟ6, 8ТЕАР, СЕА, ΊΡΝΒ2, рецепторы ЕрйА, рецепторы ЕрЬВ, рецепторы фолатов, РОЬК1, мезотелин, крипто, альфаубета6, интегрины, VЕΟΡ, VЕΟΡК, ЕОРК, рецептор трансферрина, ГКТА1, ГОТА2, ГОТА3, ГОТА4, ГОТА5; СБ белки, такие как СБ2, СБ3, СБ4, СБ5, СБ6, СБ8, СБ11, СБ14, СБ19, СБ20, СБ21, СБ22, СБ25, СБ26, СБ28, СБ30, СБ33, СБ36, СБ37, СБ38, СБ40, СБ44, СБ52, СБ55, СБ56, СБ59, СБ70, СБ79, СБ80. СБ81, СБ103, СБ105, СБ134, СБ137, СБ138, СБ152 или любое антитело, которое связывается с одним или более опухолевыми антигенами, или рецепторы клеточной поверхности, описанные в публикации США № 20080171040 или публикации США № 20080305044, которые включены в полном объеме путем ссылки; эритропоэтин; остеоиндуктивные факторы; иммунотоксины; костный морфогенетический белок (ΒΜΡ); интерферон, такой как интерферон-альфа, -бета и -гамма; колониестимулирующие факторы
- 57 029797
(С8Р), например, М-С8Р, СМ-С8Р и С-С8Р; интерлейкины (ΪΕ). например, с [Б-1 по [Б-10; супероксиддисмутазу; рецепторы Т-клеток; белки поверхностной мембраны; фактор ускорения распада; вирусный антиген, такой как, например, часть оболочки ВИЧ; транспортные белки; "хоминг"-рецепторы; аддрессины; регулирующие белки; интегрины, такие как СЭ11а, СИНЬ, СЭ11с, СИ18, ЮАМ, νΣΑ-4 и VСΑМ; опухолеассоциированный антиген, такой как рецептор НЕК2, НЕК3 или НЕК4; эндоглин, с-Мер с-кК 1СР1К, Р8СК, ΝΟΕΡ, Р8МА, Р8СА, ЬСК5, В7Н4, ΊΆΟ72 (опухолеассоциированный гликопротеин 72) и фрагменты любых из перечисленных выше полипептидов.
Кроме того, СМ-С8Р, связывающийся с миелоидными клетками, может быть использован в качестве клеточно-связывающего агента для клеток из острого миелогенного лейкоза. ГР-2, который связывается с активированными Т-клетками, может быть использован для предотвращения отторжения трансплантата, для лечения или предупреждения заболевания "трансплантат против хозяина" и для лечения острого лейкоза Т-клеток. М8Н, который связывается с меланоцитами, может быть использован для лечения меланомы, как и антитела, направленные на меланомы. Фолиевая кислота может быть целенаправленно использована для фолат-рецептора, экспрессированного на опухолях яичников и других опухолях. Эпидермальный фактор роста может быть целенаправленно использован для плоскоклеточных видов рака, таких как рак легких, головы и шеи. Соматостатин может быть целенаправленно использован для нейробластом и других типов опухолей.
На рак груди и яичек можно успешно целенаправленно воздействовать эстрогенами (или аналогами эстрогенов) или эндрогенами (или аналогами эндрогенов), соответственно, в качестве клеточносвязывающих агентов.
В одном варианте реализации клеточно-связывающий агент представляет собой гуманизированные моноклональные антитела. В другом варианте реализации клеточно-связывающий агент представляет собой ЬиМу9-6, или другие родственные антитела, которые описаны в патентах США № 7342110 и 7557189 (включенных в настоящий документ путем ссылки). В другом варианте реализации клеточносвязывающий агент представляет собой антитело антифолатного рецептора, описанное в предварительных заявках на патент США № 61/307797, 61/346595, 61/413172 и заявке на патент США № 13/033723 (опубликованной как И8 2012-0009181 А1). Указания всех этих заявок включены в настоящий документ путем ссылки в полном объеме.
В некоторых вариантах реализации клеточно-связывающий агент может быть моноклональным антителом или его антиген-связывающими частями, имеющими общие последовательности, критичные для антиген-связывания с антителом, описанным в настоящем документе, таким как 1шМу9-6 или его родственными антителами, описанными в патентах США № 7342110 и 7557189 (включенных в настоящий документ путем ссылки). Эти производные антитела могут иметь практически одинаковые или идентичные (1) регионы СЭК3 легкой цепи и/или тяжелой цепи; (2) регионы СИК1, СЭК2 и СЭК3 легкой цепи и/или тяжелой цепи или (3) регионы легкой цепи и/или тяжелой цепи, по сравнению с антителом, описанным в настоящем документе. Последовательности в пределах этих регионов могут содержать консервативные аминокислотные замещения, включая замещения в пределах регионов СЭР. Предпочтительно имеется не более 1, 2, 3, 4 или 5 консервативных замещений. В некоторых вариантах реализации производные антитела имеют регион легкой цепи и/или регион тяжелой цепи, который по меньшей мере приблизительно на 90, 95, 99 или 100% идентичен антителу, описанному в настоящем документе. Эти производные антитела могут иметь практически одинаковую связывающую специфичность и/или аффинность к целевому антигену по сравнению с антителом, описанным в настоящем документе. Предпочтительно значения Κ,ι и/или кО££ производных антител находятся в пределах 10-кратного (выше или ниже), 5-кратного (выше или ниже), 3-кратного (выше или ниже) или 2-кратного (выше или ниже) значения для антитела, описанного в настоящем документе. Эти производные антитела могут быть полностью человеческими антителами, или гуманизированными антителами, или химерными антителами. Производные антитела могут быть получены любым известным в данной области способом.
В другом варианте реализации клеточно-связывающий агент представляет собой анти-ЕСРК антитела или их фрагменты. Предпочтительно анти-ЕСРК антитела или их фрагменты являются такими, как описано в предварительных заявках на патент США № 61/408500, поданной 29 октября 2010 г.; 61/436012, поданной 25 января 2011 г.; 61/408497, поданной 29 октября 2010 г. и 61/477086, поданной 19 апреля 2011 г., полные указания которых включены в настоящий документ путем ссылки в полном объеме. В предпочтительном варианте реализации анти-ЕСРК антитело представляет собой ЬиМЬ66. В другом предпочтительном варианте реализации анти-ЕСРК антитело представляет собой ЬиЕСРК-7. Еще более предпочтительно анти-ЕСРК антитело представляет собой ЬиЕСРК-7К, при этом тяжелая цепь указанного антитела содержит аминокислотную последовательность ЬиЕСРК-7 а легкая цепь указанного антитела содержит аминокислотную последовательность 1шЕСРК-7К νί ν. 1.0.
В одном варианте реализации клеточно-связывающий агент представляет собой антитела антиСЭ20. Предпочтительно антитела анти-СИ20 являются такими, как описано в публикации и8 2011/0195021 (например, ЬиСО20-7), полные указания которой включены в настоящий документ путем ссылки в полном объеме.
Получение конъюгатов клеточно-связывающего агента и лекарства.
- 58 029797
Конъюгаты настоящего изобретения могут быть получены любым известным в данной области способом. См., например, ΑΟ 2009/134977, патенты США № 7811572, 6441163, υδ 2006/0182750 и публикацию ХУИЖоп У.С. е(. а1. δет^8уηίНеί^с тау(ап8Й1е апа1одие8 £ог (Не (агде(ей (геа(теп( о£ сапсег. 1. Мей. СНет., 2006, 49 (14), 4392-4408. В одном варианте реализации конъюгаты настоящего изобретения могут быть получены: а) взаимодействием клеточно-связывающего агента с линкерным соединением (например, соединениями формулы III) с образованием модифицированного клеточно-связывающего агента, имеющего линкеры, ковалентно связанные с ним; Ь) необязательной очисткой модифицированного клеточно-связывающего агента; с) связыванием цитотоксического средства с модифицированным клеточно-связывающим агентом с образованием конъюгата клеточно-связывающего агента и цитотоксического средства; и й) очисткой конъюгата клеточно-связывающего агента и цитотоксического средства. Иллюстративные способы показаны на фиг. 10 и 20.
В одном варианте реализации конъюгаты соединений настоящего изобретения с клеточносвязывающими агентами могут быть получены по способам, уже описанным в данной области. Например, в патенте США 7855275 описан способ связывания с антителом, содержащим спроектированные цистеиновые остатки. Альтернативно, тиоловые группы могут быть получены контролируемым восстановлением межцепочечных дисульфидов антител, с последующей обработкой цитотоксическим средством, содержащим малеимидо-группу, как описано в патенте США 7659241. Тиоловые группы могут быть также введены в антитела по реакции с поперечно-сшивающим агентом, таким как 2-иминотиолан (см., например, Со££ апй Сагго11 ВюсопщщКе СНет., 1990, 1 (6), с. 381-386), с последующей реакцией с цитотоксическим средством, содержащим малеимидо-группу с получением конъюгата. В данной области описаны способы получения конъюгата через лизиновые остатки антитела (см., например, патент США 7851432).
В другом варианте реализации конъюгат настоящего изобретения может быть получен смешиванием клеточно-связывающего агента, цитотоксического средства и линкерного соединения. Предпочтительно клеточно-связывающий агент сначала контактирует с цитотоксическим средством с образованием смеси, содержащей клеточно-связывающий агент и цитотоксическое средство, с последующим взаимодействием указанной смеси с линкерным соединением (например, соединениями формулы (III)) с образованием конъюгата клеточно-связывающего агента и цитотоксического средства. Затем конъюгат может быть очищен. Иллюстративные способы показаны на фиг. 11 и 21.
В другом варианте реализации конъюгаты настоящего изобретения могут быть получены взаимодействием клеточно-связывающего агента с соединением лекарства и линкера (например, соединениями формулы (IV)), имеющим химически активный фрагмент, способный образовывать ковалентную связь с клеточно-связывающим агентом с образованием конъюгата клеточно-связывающего агента и цитотоксического средства. Затем конъюгат может быть очищен. Соединение лекарства и линкера может быть образовано ш 8Йи и использовано для реакции с антителом без очистки. Иллюстративные способы показаны на фиг. 12 и 22.
Количество молекул цитотоксического соединения, связанных с одной молекулой клеточносвязывающего агента (например, антитела), может быть определено спектрофотометрически путем измерения степени поглощения при 280 и 252 нм. По способам, описанным в настоящем документе, может быть связано в среднем 1-20 цитотоксичных молекул на одну молекулу антитела. Предпочтительное среднее количество связанных цитотоксических соединений на одну молекулу антитела составляет 1-10, более предпочтительно 2-5 и еще более предпочтительно 2,5-4,0.
Цитотоксичность соединений и конъюгатов настоящего изобретения.
Конъюгаты цитотоксических соединений, клеточно-связывающих агентов и лекарства по настоящему изобретению могут быть оценены на их способность подавлять пролиферацию различных раковых клеточных линий ш уйго. Анализы цитотоксичности ш уйго могут быть выполнены по способам, известным в данной области (например, ХУИШхоп У.С. е(. а1. δет^8уηίНеί^с тауйпзше апа1одие8 £ог (Не (агде(ей (геа(теп( о£ сапсег. 1. Мей. СНет., 2006, 49 (14), 4392-408). Например, клетки, подлежащие оценке, могут быть обработаны соединениями или конъюгатами настоящего изобретения в течение 1-5 дней, а выжившие фракции клеток измеряют прямыми анализами известными способами. Затем по результатам анализов могут быть рассчитаны значения Ю5С1. Примеры ш уйго эффективности конъюгатов антитела и цитотоксического средства настоящего изобретения представлены на фиг. 14. Как показано на фиг. 14, майтанзиноидный конъюгат НиЕСРК-7К-3а существенно усиливает противоопухолевую активность ненагруженного антитела НиЕСРК-7К. Кроме того, этот конъюгат высокоэффективен против различных раковых клеточных линий, даже клеточных линий, слабо экспрессирующих антиген.
Конъюгаты настоящего изобретения эффективны также для замедления роста опухоли у "голых" мышей с опухолью. Примеры ш νί\Ό эффективности представлены на фиг. 15. На фиг. 15 показано, что конъюгат НиЕСРК-7К-3а является значительно более активным, чем ненагруженное антитело, с полной ремиссией у 3 из 6 мышей и Т/С 7%.
- 59 029797
Композиции и способы применения.
Настоящее изобретение включает композицию (например, фармацевтическую композицию), содержащую конъюгаты (например, конъюгаты формулы I)) или цитотоксические соединения, описанные в настоящем документе (например, соединения формулы (II)) и носитель (фармацевтически приемлемый носитель). Настоящее изобретение включает также композицию (например, фармацевтическую композицию), содержащую конъюгаты (например, конъюгаты формулы I)) или цитотоксические соединения, описанные в настоящем документе (например, соединения формулы (II)) и носитель (фармацевтически приемлемый носитель), дополнительно содержащую второе терапевтическое средство. Композиции настоящего изобретения применимы для ингибирования патологического клеточного роста или лечения пролиферативного расстройства у млекопитающего (например, человека). Композиции настоящего изобретения применимы также для лечения депрессии, тревоги, стресса, фобий, паники, дисфории, психиатрических расстройств, боли, воспалительных заболеваний у млекопитающего (например, человека).
Настоящее изобретение включает способ замедления патологического клеточного роста или лечения пролиферативного расстройства у млекопитающего (например, человека), включающий введение указанному млекопитающему терапевтически эффективного количества конъюгатов (например, конъюгатов формулы (I)) или цитотоксических соединений, описанных в настоящем документе (например, соединений формулы (II)), или их композиции, отдельно или в комбинации со вторым терапевтическим средством.
В настоящем изобретении представлены также способы лечения, включающие введение пациенту, нуждающемуся в лечении, эффективного количества любого из описанных выше конъюгатов.
Точно так же в настоящем изобретении представлен способ инициации гибели клеток в выбранных клеточных популяциях, включающий взаимодействие клеток-мишеней или ткани, содержащей клеткимишени, с эффективным количеством конъюгатов настоящего изобретения. Клетки-мишени представляют собой клетки, с которыми может связываться клеточно-связывающий агент конъюгатов.
При необходимости, вместе с конъюгатом настоящего изобретения могут быть введены другие активные агенты, такие как другие противоопухолевые средства.
Соответствующие фармацевтически приемлемые носители, разбавители и формообразующие средства хорошо известны и могут быть определены специалистами в данной области в соответствии с клинической ситуацией.
Примеры применимых носителей, разбавителей и/или формообразующих средств включают: (1) фосфатно-солевой буферный раствор Дульбекко, рН около 7,4, содержащий или не содержащий приблизительно от 1 до 25 мг/мл альбумина сыворотки человека, (2) 0,9% солевой раствор (0,9% вес./об. №С1) и (3) 5% (вес./об.) декстрозы; и может также содержать антиоксидант, такой как триптамин, и стабилизирующий агент, такой как Твин 20.
Способ инициирования гибели клеток в выбранных клеточных популяциях может быть осуществлен ίη νΐΐΓΟ, ίη νΐνο или ех νΐνο.
Примеры использования ίη νΐίτο включают лечение аутологического костного мозга перед его трансплантацией тому же пациенту для уничтожения пораженных или злокачественных клеток: лечение костного мозга перед его трансплантацией для уничтожения конкурирующих Т-клеток и предупреждения заболевания "трансплантат против хозяина" (ΟνΗΌ); обработку клеточных культур для уничтожения всех клеток, за исключением нужных вариантов, не экспрессирующих целевой антиген; или для уничтожения вариантов, экспрессирующих нежелательный антиген.
Условия неклинического использования ίη νΐίτο легко определяются специалистами в данной области.
Примеры клинического использования ех νΐνο заключаются в удалении опухолевых клеток или лимфоидных клеток из костного мозга перед аутологической трансплантацией при лечении рака или при лечении аутоиммунного заболевания, или для удаления Т-клеток и других лимфоидных клеток из аутологического или аллогенного костного мозга или ткани перед трансплантацией для предотвращения заболевания "трансплантат против хозяина". Лечение может быть выполнено следующим образом. Собирают костный мозг пациента или другого индивидуума, а затем инкубируют в среде, содержащей сыворотку, в которую добавлено цитотоксическое средство настоящего изобретения, диапазон концентраций приблизительно от 10 мкМ до 1 пМ, в течение приблизительно от 30 мин приблизительно до 48 ч при температуре приблизительно 37°С. Точные условия концентрации и времени инкубации, т.е. доза, легко определяются специалистами в данной области. После инкубации клетки костного мозга промывают средой, содержащей сыворотку, и возвращают пациенту внутривенно в соответствии с известными способами. Если пациент получает другое лечение, такое как курс аблативной химиотерапии или тотальное облучение всего организма между отбором костного мозга и обратного введения обработанных клеток, то обработанные клетки костного мозга хранят замороженными в жидком азоте при помощи стандартного медицинского оборудования.
Для клинического использования ίη νΐνο цитотоксическое средство или конъюгаты настоящего изобретения поставляют в виде раствора или лиофилизированного порошка, испытанного на стерильность и содержание эндотоксинов. Примеры соответствующих протоколов введения конъюгатов представлены
- 60 029797
ниже. Конъюгаты вводят еженедельно в течение 4 недель в виде внутривенного болюса раз в неделю. Дозы болюса дают в изотоническом растворе объемом 50-1000 мл, в который может быть добавлено 5-10 мл альбумина сыворотки человека. Дозы составляют от 10 мкг до 2000 мг за одно введение, внутривенно (диапазон от 100 нг до 20 мг/кг в день). Через четыре недели лечения пациент может продолжить получать лечение на еженедельной основе. Индивидуальные клинические протоколы, с учетом способа введения, формообразующих средств, разбавителей, доз, интервалов и тому подобного, могут быть определены специалистом в данной области в зависимости от клинической ситуации.
Примеры медицинских состояний, которые можно лечить в соответствии с ш νίνο или ех νίνο способами инициации гибели клеток в выбранных клеточных популяциях, включают злокачественность любого типа, включая, например, рак легких (мелкоклеточный и немелкоклеточный, молочной железы, прямой кишки, головного мозга, простаты, почек, поджелудочной железы, яичников, головы и шеи, кожи (меланому), карциному клеток Меркеля, глиобластому, нейробластому и раковые заболевания лимфатический органов; аутоиммунные заболевания, такие как системная волчанка, ревматоидный артрит и рассеянный склероз; отторжение трансплантата, такое как отторжение почечного трансплантата, отторжение печеночного трансплантата, отторжение легочного трансплантата, отторжение сердечного трансплантата и отторжение трансплантата костного мозга; заболевание "трансплантат против хозяина"; вирусные инфекции, такие как инфекция ЦМВ, инфекция ВИЧ, СПИД и т.п.; и паразитные инфекции, такие как лямблиоз, амебиаз, шистосомоз и другие, определенные специалистом в данной области.
Лечение рака и дозы, способы введения и рекомендуемое применение известны в данной области и описаны в такой литературе как Настольный справочник врача (РЬузУап'з Эезк КеГегепсе (ΡΌΚ)). В книге ΡΌΚ описаны дозы агентов, используемых для лечения различных видов рака. Режим дозирования и дозы этих вышеупомянутых химиотерапевтических лекарств, которые являются терапевтически эффективными, зависят от конкретного вида рака, подлежащего лечению, степени заболевания и других факторов, известных специалистам в данной области, и могут быть определены врачом. Содержание ΡΌΚ в прямой форме включено в настоящий документ в полном объеме путем ссылки. Специалист в данной области может обратиться к ΡΌΚ, используя один или более из следующих параметров, для определения режима дозирования и доз химиотерапевтических агентов и конъюгатов, которые могут быть использованы в соответствии с указаниями настоящего изобретения. Эти параметры включают: общий индекс; производителя; продукты (по маркам компании или по торговым названиям лекарств); индекс категории; общий/химический индекс (общепринятые названия лекарств, не торговые марки); цветовые обозначения лекарственных средств; информацию о продукте, согласующуюся с маркировкой ΡΌΛ; химическую информацию; назначение/действие; показания и противопоказания; пробные испытания, побочные эффекты, предостережения.
Аналоги и производные.
Специалистам в области цитотоксических средств понятно, что каждое из цитотоксических средств, описанных в настоящем документе, может быть модифицировано таким образом, что полученное соединение все еще сохраняет специфичность и/или активность исходного соединения. Опытным специалистам также понятно, что многие из этих соединений могут быть использованы вместо цитотоксических средств, описанных в настоящем документе. Поэтому цитотоксические средства настоящего изобретения включают аналоги и производные соединений, описанных в настоящем документе.
Все приведенные в настоящем документе и в последующих примерах ссылки в явной форме включены в настоящий документ путем ссылки в полном объеме.
Примеры
Материалы и способы.
Все реагенты приобрели у компании §1§та-А16псЬ скет1са1 Со., если не указано иное. Все синтетические реакции провели под атмосферой аргона с магнитным перемешиванием, если не указано иное. Соединение 6 получили так, как описано авторами ОиЬо\ус1иск е! а1., а также так, как описано в настоящем документе (ОиЪотеЫк С.М. е!. а1. СаШерзш В-1аЫ1е ШрерПбе Ьпкегз Гог 1узозота1 ге1еазе оГ бохогиЪют Ггот чИегпаП/тд 1ттипосои)ида1:ез: тобе1 зЮШез оГ еп/утабс бгид ге1еазе апб апбдеп-зресШс ш νίΙΐΌ апбсапсег асЦуЦу. Вюсопщд. СЬет. 2002, 13(4), 855-69). Растворы У-дезацетил-У-^метилаланил)майтанзина в этилацетате получили так, как описано в (патенте США 7598375 В2). Спектры протонного магнитного резонанса (1Н ЯМР) и углеродного магнитного резонанса (13С ЯМР) записали на спектрометре Вгикег Аνаηсе, работающем при 400 и 100 МГц соответственно. ЯМР химические сдвиги записали в значениях δ относительно образца растворителя. Препаративную высокоэффективную жидкостную хроматографию выполнили на приборе Vа^^аη, а аналитическую ВЭЖХ выполнили на ВЭЖХ АдДеп! 1100. Соединения ΌΜ1 и ΌΜ4 получили общепризнанными способами (патенты США 7301019 В2, 7598375 В2).
Ниже перечислены способы препаративной ВЭЖХ.
- 61 029Ί9Ί
Препаративная ВЭЖХ С18, способ 1.
Колонка: 50 мм х 250 мм, Ктотазй, 10 мкм, С18 Скорость потока: 100 мл/мин.
Обнаружение: Обычно при 220 нм, 252 нм или 280 нм
Растворитель А:деионизированная вода, содержащая 0,2% муравьиной кислоты Растворитель В:ацетонитрил
Условия градиента.
Время %В
0 20
7 20
27 95
32 95
33 20
С интервалом в 6 мин для повторного уравновешивания между очистками. Препаративная ВЭЖХ С18, способ 2.
Колонка:21,4 мм х 100 мм С18, 5 мкм, Уапап Оупатах ОтшЗрйеге Скорость потока: 20 мл/мин.
Обнаружение: 282 нм
Растворитель А: Деионизированная вода, содержащая 0,2% муравьиной кислоты Растворитель В:Ацетонитрил
Условия градиента.
Время %В
0 20
5 20
25 95
28 95
29 20
36 20
Препаративная ВЭЖХ С18, способ 3.
Колонка: 22 ммх 150 мм, Кготазй. 10 мкм, С18 Скорость потока: 20 мл/мин.
Обнаружение: Обычно при 220 нм, 252 нм или 280 нм
Растворитель А:деионизированная вода, содержащая 0,2% муравьиной кислоты Растворитель В:ацетонитрил
Условия градиента.
Время %В
0 10
20 95
20.5 10
25 10
При использовании в настоящем документе аббревиатуры Мау, ЭМ, ЭМ 1, 1)М4 и 1)М4-Ме представлены следующими структурами:
- 62 029797
К суспензии соединения 6 (0,96 г, 1,6 ммоль) в безводном диметилформамиде (9,0 мл) добавили триэтиламин (0,36 мл, 2,6 ммоль), а затем мезилхлорид (0,19 мл, 2,4 ммоль). Через 20 мин добавили бромид натрия (0,98 г, 9,6 ммоль). Еще через 4 ч добавили раствор ЭМ1 (490 мг, 0,67 ммоль) в диметилацетамиде (12 мл) и перемешивали реакционную смесь в течение 2 ч. Реакционную смесь очистили препаративным ВЭЖХ способом 1 С18 (К( = 23 мин). Фракции, содержащие заданный чистый продукт, объединили и выпарили растворитель под вакуумом для получения 450 мг соединения 7 (выход 50%).
'Н ЯМР (400 МГц, СЭС1э) δ 10,00 (8, 1Н), 8,10 (б, 1=7,4 Гц, 1Н), 7,86 (б, 1=7,4 Гц, 2Н), 7,74 (!, 1=7,4 Гц, 2Н), 7,53 (б, 1=8,1 Гц, 2Н), 7,46-7,38 (т, 2Н), 7,38-7,30 (т, 3Н), 7,14-7,07 (т, 2Н), 6,80 (8, 1Н), 6,68-6,47 (т, 3Н), 6,09-5,90 (т, 1Н), 5,63 (бб, 1=14,9, 9,1 Гц, 1Н), 5,46-5,33 (т, 2Н), 4,63-4,45 (т, 2Н), 4,414,32 (т, 1Н), 4,32-4,21 (т, 2Н), 4,14 (!, 1=11,4 Гц, 1Н), 4,01 (б, 1=6,7 Гц, 1Н), 3,97 (8, 3Н), 3,67-3,55 (т, 2Н), 3,54 -3,34 (т, 4Н), 3,31 (8, 3Н), 3,17-3,08 (т, 5Н), 3,07-2,95 (т, 1Н), 2,85 (б, 1=9,5 Гц, 1Н), 2,73 (8, 3Н), 2,70-2,63 (т, 1Н), 2,59 (8, 2Н), 2,57-2,50 (т, 3Н), 2,44 (бб, 1=14,9, 7,4 Гц, 1Н), 2,12-1,98 (т, 2Н), 1,84-1,72 (т, 1Н), 1,63 (8, 3Н), 1,56-1,29 (т, 5Н), 1,23 (б, 1=6,6 Гц, 3Н), 1,19 (б, 1=6,1 Гц, 3Н), 0,98-0,86 (т, 6Н), 0,81 (8, 3Н).
13С ЯМР (101 МГц, СОС13) δ 169,54, 168,83, 168,80, 168,70, 166,40, 157,40, 154,42, 153,69, 149,69, 142,16, 142,03, 139,62, 139,50, 139,05, 139,03, 136,64, 135,95, 131,37, 130,92, 127,16, 126,63, 125,84, 125,28, 123,56, 123,47, 119,92, 118,20, 117,40, 115,72, 112,05, 86,74, 78,31, 75,94, 71,56, 65,11, 64,09, 58,55, 58,19, 54,76, 54,46, 51,28, 49,98, 45,10, 43,93, 38,89, 36,17, 34,79, 33,47, 31,75, 30,27, 28,87, 28,06, 27,90, 25,04, 24,35, 17,57, 16,49, 13,37, 12,74, 11,39, 9,84.
НКМ8 (Мч^)*, рассчитанный для С68Н85СЩ8О158, 1343,5441; обнаружено 1343,5378.
Соединение 8.
К раствору соединения 7 (440 мг, 0,33 ммоль) в безводном диметилформамиде (4 мл) добавили морфолин (0,5 мл, 5,7 ммоль). Через 40 мин реакционную смесь очистили препаративным ВЭЖХ способом 1, С18 (К! = 20 мин), фракции, содержащие чистый заданный продукт, объединили, заморозили на бане из сухого льда и ацетона, затем лиофилизиовали для получения 180 мг (выход 49%) соединения 8.
'Н ЯМР (400 МГц, ДМСО) δ 10,10 (8, 1Н), 8,69 (б, 1=7,8 Гц, 1Н), 8,18-8,07 (т, 2Н), 7,49 (б, 1=8,5 Гц, 2Н), 7,06 (б, 1=8,1 Гц, 2Н), 6,71 (8, 1Н), 6,63-6,43 (т, 3Н), 5,58 (бб, 1=15,0, 9,1 Гц, 1Н), 5,32 (бб, 1=13,4,
- 63 029797
6,6 Гц, 1Н), 4,64-4,49 (т, 2Н), 4,16-4,05 (т, 1Н), 3,93 (з, 3Н), 3,78-3,36 (т, 2Н), 3,27 (з, 3Н), 3,07 (з, 3Н), 3,06-2,96 (т, 1Н), 2,80 (ά, 1=9,6 Гц, 1Н), 2,67 (з, 3Н), 2,66 -2,58 (т, 1Н), 2,43-2,30 (т, 1Н), 2,18-2,05 (т, 1Н), 1,99 (ά, 1=11,8 Гц, 1Н), 1,84-1,71 (т, 1Н), 1,71-1,60 (т, 1Н), 1,58 (з, 2Н), 1,55-1,24 (т, 5Н), 1,18 (ά, 1=6,8 Гц, 3Н), 1,14 (ά, 1=6,3 Гц, 3Н), 0,97 (з, 3Н), 0,95 (з, 3Н), 0,76 (з, 3Н).
I ΙΚΥΙδ (М+№)+, рассчитанный для С\311-5('1\8Ο|3δ, 1121,4761; обнаружено 1121,4717.
Соединение 9.
К раствору соединения 8 (160 мг, 0,14 ммоль) и РВА (4-(пиридин-2-илдисульфанил)бутановой кислоты) (97 мг, 0,42 ммоль) в безводном диметилформамиде (2 мл) добавили ЕЭС (108 мг, 0,56 ммоль) и НОВТ (43 мг, 0,28 ммоль).Через минуту реакционную смесь очистили препаративным ВЭЖХ способом 2, С18 (Κΐ = 23), фракции, содежащие чистный заданный продукт, объединили, заморозили на бане из сухого льда и ацетона и лиофилизировали для получения 75 мг (выход 40%) соединения 9.
1Н ЯМР (400 МГц, С1)3С\) δ 8,43-8,35 (т, 3Н), 7,87-7,58 (т, 6Н), 7,50-7,01 (т, 10Н),6,61- 6,40 (т, 2Н), 5,59 (άά, 1=14,1, 9,1 Гц, 1Н), 5,32 (ς, 1=6,8 Гц, 1Н), 4,55 (άά, 1=12,1, 3,0 Гц, 1Н), 4,39 (άά, 1=9,3, 4,7 Гц, 1Н), 4,16-4,04 (т, 2Н), 3,92 (з, 3Н), 3,59 (ά, 1=2,9 Гц, 2Н), 3,53-3,41 (т, 2Н), 3,28 (з, 3Н), 3,08 (з, 3Н), 3,072,99 (т, 3Н), 2,91-2,76 (т, 5Н), 2,68 (з, 3Н), 2,66 -2,50 (т, 4Н), 2,36 (άΐ, 1=7,6, 6,5 Гц, 5Н), 1,91-1,87 (т, 2Н), 1,58 (з, 3Н), 1,49-1,31 (т, 4Н), 1,19 (ά, 1=6,9 Гц, 3Н), 1,15 (ά, 1=6,4 Гц, 3Н), 0,88 (ά, 1=5,0 Гц, 3Н), 0,86 (ά, 1=5,0 Гц, 3Н), 0,75 (з, 3Н).
I ΙΚΥΙδ (М+№)+, рассчитанный для С62Н84СВД9Ох^3, 1332,4886; обнаружено 1332,4828.
К раствору соединения 9 (70 мг, 0,053 ммоль) в 2:1 смеси диметоксиэтана:100 мМ фосфатнокалиевого буфера с рН 7,5, добавили дитиотреитол (41 мг, 0,26 ммоль). Через 30 мин реакционную смесь очистили полупрепаративным ВЭЖХ способом 2, С18 (Κΐ=21 мин). Фракции, содержащие чистый заданный продукт, объединили и заморозили на бане из сухого льда и ацетона, затем лиофилизировали для получения 11 мг (17%) соединения 2.
1Н ЯМР (400 МГц, ДМСО) δ 9,88 (з, 1Н), 8,04 (ά, 1=7,6 Гц, 1Н), 7,85 (ά, 1=8,7 Гц, 1Н), 7,48 (ά, 1=8,2 Гц, 1Н), 7,11-7,04 (т, 2Н), 6,78 (з, 1Н), 6,61-6,45 (т, 2Н), 6,02-5,96 (т, 2Н), 5,91 (з, 1Н), 5,57 (άά, 1=14,8, 8,8 Гц, 2Н), 5,37 (з, 2Н), 5,32 (άά, 1=12,6, 5,7 Гц, 1Н), 4,53 (άά, 1=11,7, 2,1 Гц, 1Н), 4,41 (άά, 1=13,3, 7,8 Гц, 1Н), 4,23-4,16 (т, 1Н), 4,13-4,04 (т, 1Н), 3,93 (з, 3Н), 3,57 (ά, 1=7,4 Гц, 2Н), 3,46 (ά, 1=9,0 Гц, 3Н), 3,26 (з, 3Н), 3,12 (з, 1Н), 3,09 (з, 3н), 3,07-2,93 (т, 2Н), 2,80 (ά, 1=9,6 Гц, 1Н), 2,77-2,70 (т, 1Н), 2,68 (з, 3Н), 2,69-2,53 (т, 2Н), 2,47-2,24 (т, 4Н), 2,10-1,95 (т, 2Н), 1,83-1,69 (т, 2Н), 1,62 (ά, 1=3,5 Гц, 1н), 1,58 (з, 3Н), 1,48-1,35 (т, 4Н), 1,30-1,21 (т, 2Н), 1,17 (ά, 1=6,7 Гц, 3Н), 1,13 (ά, 1=6,2 Гц, 3Н), 0,87 (ά, 1=6,7 Гц, 3Н), 0,85 (ά, 1=6,8 Гц, 3Н), 0,76 (з, 3Н).
I ΙΚΥΙδ (М + №)+, рассчитанный для С57Н8XС1N8ΟX4δ2, 1223,4790; обнаружено 1223,4900.
Пример 2. Способы получения ЕМос-защищенных анилинов
ЕМос-4-аминофенилуксусная кислота 10а (п =1): 4-аминофенилуксусную кислоту (204 мг, 1,35 ммоль) в 10 мл колбе растворили в смеси 10% водного раствора бикарбоната натрия (0,29 мл) и тетрагидрофурана (2,3 мл), затем охладили на бане изо льда и воды. Небольшими частями добавили 9-флуоренилметил хлорформиат (367 мг, 1,42 ммоль) за 3 мин. Через 4 ч охлаждающую баню убрали. Еще через 4 ч при комнатной температуре, реакционную смесь экстрагировали деионизированной водой (2 мл) и этиловым эфиром (2 мл), а водный слой довели до рН 4 разбавленной НС1 и поместили в холодильник. Через 1 ч твердое вещество собрали вакуумной фильтрацией и промыли деионизированной водой, затем высушили под вакуумом для получения 284 мг продукта (выход 56%).
Масс-спектр (М+№)+, рассчитанный для С331 ЦЛ'О.), 396,1; обнаружено 396,1.
- 64 029797
РМос-3-(4-аминофенил)пропионовая кислота 10Ь (п = 2): 3-(4-аминофенил)пропионовую кислоту (250 мг, 1,5 ммоль) в 10 мл колбе растворили в смеси 10% водного раствора бикарбоната натрия (0,32 мл) и тетрагидрофурана (2,2 мл), затем охладили на бане изо льда и воды. Небольшими частями добавили 9-флуоренилметил хлорформиат (422 мг, 1,5 ммоль) за 3 мин. Через 4 ч охлаждающую баню убрали. Еще через 4 ч при комнатной температуре, реакционную смесь экстрагировали деионизированной водой (2 мл) и этиловым эфиром (2 мл), а водный слой довели до рН 4 разбавленной НС1 и поместили в холодильник. Через 1 ч твердое вещество собрали вакуумной фильтрацией и промыли деионизированной водой, затем высушили под вакуумом для получения 470 мг продукта (выход 80%).
Масс-спектр (М + \а)', рассчитанный для С24Н2^О4, 400,1; обнаружено 410,0.
РМос-4-(4-аминофенил)бутановая кислота 10с (п = 3): 4-(4-аминофенил)бутановую кислоту (250 мг, 1,4 ммоль) в 10 мл колбе растворили в смеси 10% водного раствора бикарбоната натрия (0,29 мл) и тетрагидрофурана (2,1 мл), затем охладили на бане изо льда и воды. Небольшими частями добавили 9-флуоренилметил хлорформиат (390 мг, 1,4 ммоль) за 3 мин. Через 4 ч охлаждающую баню убрали. Еще через 4 ч при комнатной температуре, реакционную смесь экстрагировали деионизированной водой (2 мл) и этиловым эфиром (2 мл), а водный слой довели до рН 4 разбавленной НС1 и поместили в холодильник. Через 1 ч твердое вещество собрали вакуумной фильтрацией и промыли деионизированной водой, затем высушили под вакуумом для получения 290 мг продукта (выход 52%). Масс-спектр (М + \а)', рассчитанный для С25Н2зNО4, 424,1; обнаружено 424,0.
Пример 3. Способы связывания карбоновых кислот с \2-дезацетил-\2-(\метилаланил)майтанзином
^'-Дезацетил-Х2'-(РМос-4-аминофенилацетил)майтанзин 11а (п=1): РМос-4-аминофенилуксусную кислоту (соединение 10а) (50 мг, 0,13 ммоль), БОС (84 мг, 0,44 ммоль) и НОАТ (59 мг, 44 ммоль) растворили в минимальном объеме диметилформамида и добавили к этилацетатному раствору Ν2-дезацетил^-^-метилаланил)майтанзина. Через 3 ч растворитель выпарили под вакуумом, а остаток растворили в минимальном объеме диметилсульфоксида и очистили препаративным ВЭЖХ способом 3. Фракции, содержащие чистый продукт (К =16 мин), объединили, а растворитель выпарили под вакуумом для получения 12 мг (выход 14%) заданного продукта.
Масс-спектр (МХа)'. рассчитанный для (%116|С1Х.1О|2, 1027,4; обнаружено 1027,3.
^'-Дезацетил-Х2-[РМос-3-(4-аминофенил)пропионил]майтанзин 11Ь (п=2): РМос-3-(4аминофенил)пропионовую кислоту (соединение 10Ь) (51 мг, 0,13 ммоль), ЕЭС (84 мг, 0,44 ммоль) и НОАТ (60 мг, 0,44 ммоль) растворили в минимальном объеме диметилформамида и добавили к этилацетатному раствору N2-дезацетил-N2-(N-метилаланил)майтанзина. Через 3 ч растворитель выпарили под вакуумом, а остаток растворили в минимальном объеме диметилсульфоксида и очистили препаративным ВЭЖХ способом 3. Фракции, содержащие чистый продукт (К = 16,5 мин), объединили, а растворитель выпарили под вакуумом для получения 20 мг (выход 22%) заданного продукта.
Масс-спектр (^+^)+, рассчитанный для С^НзСШдОп, 1041,4; обнаружено 1041,0.
N2'-Дезацетил-N2'-[ΡМос-4-(4-аминофенил)бутирил]майтанзин 11с (п=3): РМос-4-(4аминофенил)бутановую кислоту (соединение 10с) (53 мг, 0,13 ммоль), ЕЭС (85 мг, 0,45 ммоль) и НОАТ (57 мг, 0,44 ммоль) растворили в минимальном объеме диметилформамида и добавили к этилацетатному раствору N2-дезацетил-N2-(N-метилаланил)майтанзина. Через 3 ч растворитель выпарили под вакуумом, а остаток растворили в минимальном объеме диметилсульфоксида и очистили препаративным ВЭЖХ способом 3. Фракции, содержащие чистый продукт (К = 16,5 мин), объединили, а растворитель выпарили под вакуумом для получения 14 мг (выход 15%) заданного продукта. (К=17 мин).
Масс-спектр (М+№)+, рассчитанный для СетН^СШдОп, 1055,4; обнаружено 1055,3.
Пример 4. Способы снятия РМос защиты
^-Дезацетил-^Ю-аминофенилацети^майтанзин 12а (п=1): ^-дезацетил-^ДРМосМаминофенилацетил)майтанзин (12 мг, 0,012 ммоль) растворили в растворе 10% морфолина в диметилформамиде (0,3 мл). Через 1 ч образец очистили препаративным ВЭЖХ способом 3, а фракции, содер- 65 029797
жащие чистый материал (К(=8,2 мин) перенесли в колбу, затем растворитель удалили под вакуумом для получения 7,5 мг (выход 80%) заданного продукта.
НКМ8 (М + №)', рассчитанный для С40Н51СШ4О10, 805,3135; обнаружено 805,3192. N2-Дезацетил-N2-[3-(4-аминофенил)пропионил]майтанзин 12Ь (п=2): N2'-дезацетил-N2-(РМос-3-(4аминофенил)пропионил)майтанзин (20 мг, 0,2 ммоль) растворили в растворе 10% морфолина в диметилформамиде (0,3 мл). Через 1 ч образец очистили препаративным ВЭЖХ способом 3, а фракции, содержащие чистый материал (Κΐ = 8,4 мин) перенесли в колбу, затем растворитель удалили под вакуумом для получения 5,0 мг (выход 31%) заданного продукта.
НКМ8 (М + №)', рассчитанный для С41Н53СШ4О10, 819,3298; обнаружено 819,3348. ^-Дезацетил-^-^-О-аминофенил^утирил^айтанзин 12с (п=3): ^'-дезацетил-^ДРМосД-Оаминофенил)бутирил)майтанзин (14 мг, 0,14 ммоль) растворили в растворе 10% морфолина в диметилформамиде (0,3 мл). Через 1 ч образец очистили препаративным ВЭЖХ способом 3, а фракции, содержащие чистый материал (К( = 8,5 мин) перенесли в колбу, затем растворитель удалили под вакуумом для получения 5,1 мг (выход 46%) заданного продукта.
НКМ8 (Мт^)*, рассчитанный для С42Н55СШ4Ою, 833,3505; обнаружено 833,3434.
Соединение 13 (ЭМ1) (25 мг, 0,034 ммоль) и 4-(2-аминоэтил)анилин (соединение 15, п=2) (9,22 мг, 0,068 ммоль) растворили в растворе диметилацетамида (1,0 мл) и 100 мМ фосфатно-калиевого буфера с рН 8 (1,0 мл), к которому добавили соединение 14 (9,5 мг, 0,034 мг). Через 2 ч смесь очистили препаративным ВЭЖХ способом 3. Фракции, содержащие чистый продукт, объединили в колбе, затем эту колбу охладили на бане из сухого льда и ацетона до замерзания растворителя. Затем образец лиофилизировали для получения 29 мг (выход 97%) заданного продукта.
Масс-спектр (МГ\а)', рассчитанный для С51Н67СШ6О138, 1061,4; обнаружено 1061,1.
Пример 6. Синтез соединения 18
15
п=2
ЭМ1 (25 мг, 0,034 ммоль) и 4-(2-аминоэтил)анилин (соединение 15) (9,22 мг, 0,068 ммоль) растворили в растворе диметилацетамида (1,0 мл) и 100 мМ фосфатно-калиевого буфера с рН 8 (1,0 мл), к которому добавили соединение 17 (11,32 мг, 0,034 ммоль). Через 2 ч смесь очистили препаративным ВЭЖХ способом 3. Фракции, содержащие чистый продукт, объединили в колбе, затем эту колбу охладили на бане из сухого льда и ацетона до замерзания растворителя. Затем образец лиофилизировали для получения 26 мг (выход 92%) заданного продукта.
Масс-спектр (М + К)+, рассчитанный для С55Н73СШ6О138, 1131,4; обнаружено 1131,3.
Пример 7. Синтез соединения 24
Ρά/С
19 20
4-(4-Аминофенил)бутанол (соединение 20); 4-(4-нитрофенил)бутанол (соединение 19, 1,7 мл, 10,2 ммоль) растворили в метаноле (20 мл), к которому добавили 10% палладий на углероде (0,2 г) и гидрогенировали смесь при помощи газообразного водорода (30 рзД при комнатной температуре в течение 1 ч. Смесь отфильтровали через целитный фильтрующий материал, а растворитель выпарили из фильтрата под вакуумом для получения 1,3 г (выход 77%) неочищенного продукта.
Масс-спектр (М+Н)+, рассчитанный для СюН^О, 166,1; обнаружено 166,1.
- 66 029797
4-(Вос-4-аминофенил)бутанол (соединение 21). Неочищенный 4-(4-аминофенил)бутанол (1,2 г, 7,6 ммоль) растворили в тетрагидрофуране (10,9 мл), к которому добавили раствор бикарбоната натрия (2,4 г, 29 ммоль), растворенного в деионизированной воде (10,9 мл). К полученному раствору добавили Вос ангидрид (1,78 г, 7,6 ммоль) при комнатной температуре. Через 3 ч реакционную смесь экстрагировали деионизированной водой и этилацетатом (мл). Органический слой высушили над безводным сульфатом натрия, отфильтровали, а растворитель удалили из фильтрата под вакуумом. Остаток растворили в минимальном объеме этилацетата и очистили силикагелевой хроматографией, используя гексаны с линейным градиентом этилацетата 0-100%, используя систему СотЫйазЬ. Фракции, содержащие чистый продукт, объединили, а растворитель выпарили под вакуумом для получения 1,5 г (выход 79%) заданного продукта.
НКМЗ (М+№)+, рассчитанный для С^Щ^О^ 288,1576; обнаружено 288,1557.
4-(Вос-4-аминофенил)бутанмалеимид (соединение 22). 4-(Вос-4-аминофенил)бутанол (241 мг, 2,5 ммоль) итрифенилфосфин (641 мг, 2,4 ммоль) растворили в безводном тетрагидрофуране (11,6 мл). Затем добавили 4-(Вос-аминофенил)бутанол (600 мг, 2,26 ммоль), а затем диизопропилазодикарбоксилат (0,53 мл, 2,7 ммоль). Через 12 ч реакционную смесь очистили силикагелевой хроматографией, используя дихлорметан и линейный 0-100% градиентэтилацетата. Фракции, содержащие чистый продукт, объединили, а растворитель выпарили под вакуумом для получения (602 мг) с выходом 77% заданного продукта.
Ίί ЯМР (400 МГц, СОС13) δ 7,27 (ά, 1=10,0 Гц, 2Н), 7,10 (ά, 1=8,3 Гц, 2Н), 6,70 (з, 2Н), 3,55 (ΐ, 1=6,6 Гц, 2Н), 2,60 (ΐ, 1=7,0 Гц, 2Н), 1,68-1,55 (т, 4Н), 1,53 (з, 9Н).
ΗΚΜδ (М + Иа)+, рассчитанный для СщЩ^гО^ 367,1634; обнаружено 367,1606.
4-аминофенилбутанмалеимид (соединение 23). 1М раствор НС1 в этилацетате приготовили пропусканием газообразного НС1 в предварительно тарированную 25 мл колбу, содержащую этилацетат (10 мл) приблизительно в течение 1 мин, и добавляя этилацетат. К этому раствору добавили 4-(Вос-4аминофенил)бутанмалеимид (50 мг, 0,15 ммоль). Через 1 ч растворитель удалили под вакуумом для получения 38 мг (выход 95%) заданного продукта, который использовали без очистки.
ΗΚМδ (М+Н)+, рассчитанный для Сх4Н17СШ2О2, 281,1059; обнаружено 281,1060.
Ν2 -Дезацетил-Ν2 -3-(1-(4-(4-аминофенил)бутил)-2,5 -диоксопирролидин-3-илтио)пропанионилмайтанзин (соединение 24): ΏΜ1 (25 мг, 0,034 ммоль) растворили в диметилацетамиде (1,0 мл), к которому добавили 100 мМ фосфатно-калиевого буфера с рН 8,0 (1,0 мл) и 4-аминофенилбутанмалеимид (9,5 мг, 0,034 ммоль). Через 3 ч реакционную смесь очистили препаративной обращенно-фазовой ВЭЖХ, способ 3. Фракции, содержащие чистый продукт, объединили, а растворитель удалили под вакуумом для получения 9,5 мг (выход 22%) заданного продукта.
ΗΚΜδ (М + Н)+, рассчитанный для С49Н64СШ5О1^, 982,4041; обнаружено 982,4034.
Пример 8. Синтез соединения 5
Синтез соединения 37. 1-(Бромметил)-4-нитробензол (300 мг, 1,4 ммоль) растворили в растворе ΏΜ1 (35 мг, 0,047 ммоль) в диметилформамиде (3,5 мл) и 50 мМ фосфатно-калиевом буфере с рН 7,5
- 67 029797
(1 мл). Через 30 мин реакционную смесь очистили прямой загрузкой на препаративную ВЭЖХ, используя препаративный ВЭЖХ способ 2. Чистые фракции заданного продукта (К!=25 мин) объединили, а растворитель удалили под вакуумом для получения 30 мг (выход 72%) заданного продукта.
1Н ЯМР (400 МГц, СЭС13) δ 8,09-8,03 (т, 2Н), 7,37 (б, 1=8,6 Гц, 2Н), 6,77 (б, 1=1,5 Гц, 1Н), 6,63 (б, 1=11,1 Гц, 1Н), 6,54 (б, 1=1,5 Гц, 1Н), 6,40 (бб, 1=15,2, 11,1 Гц, 1Н), 6,27 (8, 1Н), 5,61 (бб, 1=15,3, 9,1 Гц, 1Н), 5,33 (ς, 1=6,7 Гц, 1Н), 4,73 (бб, 1=12,0, 2,9 Гц, 1Н), 4,23 (бб, 1=16,5, 6,0 Гц, 1Н), 3,98 (8, 3Н), 3,72 (б, 1=2,8 Гц, 2Н), 3,52 -3,43 (т, 2Н), 3,33 (8, 3Н), 3,14 (8, 3Н), 3,02-2,94 (т, 2Н), 2,79 (8, 3Н), 2,77-2,39 (т, 5Н),
2,14 (бб, 1=14,3, 3,0 Гц, 1Н), 1,62 (б, 1=8,6 Гц, 3Н), 1,53 (б, 1=13,5 Гц, 1Н), 1,44 (!б, 1=10,0, 6,5 Гц, 1Н), 1,27 (ΐ, 1=7,3 Гц, 7Н), 0,76 (8, 3Н).
13С ЯМР (101 МНц, СПС13) δ 170,64, 168,79, 156,08, 152,31, 147,03, 146,06, 142,16, 141,04, 139,36, 133,39, 129,61, 127,70, 125,32, 123,80, 122,02, 118,87, 113,06, 88,58, 80,91, 78,15, 74,18, 67,17, 60,03, 56,73, 56,67, 52,46, 46,55, 38,93, 36,42, 36,23, 35,51, 33,63, 32,47, 30,82, 26,68, 15,57, 14,66, 13,45, 12,22.
НКМ8 (МГ\а)', рассчитанный для С42Н53СШ4О128, 895,2967; обнаружено 895,2875.
Синтез соединения 5. Соединение 37 (20 мг, 0,023 ммоль) растворили в растворе тетрагидрофурана (0,8 мл) и деионизированной воды (0,5 мл) в 10 мл колбе и добавили гидросульфит натрия (30 мг, 0,17 ммоль).
Перемешивание продолжали в течение ночи. Заданный продукт очистили обращенно-фазовой ВЭЖХ, способ 2. Заданные фракции (К! = 20) объединили, а растворитель удалили под вакуумом для получешия 8 мг (выход 41%) заданного продукта.
НКМ8 (М + \а)', рассчитанный для С42Н55СШ4О108, 865,3225; обнаружено 865,3165.
Пример 9. Синтез соединений 43а и 43Ь.
Схема синтеза соединений 43а и 43Ь представлена на фиг. 18. В частности, к перемешанному магнитной мешалкой раствору соединения 8 в диметилформамиде добавляют соединение 42а или 42Ь. После перемешивания реакционную смесь очищают С18 препаративным способом. Фракции, содержащие чистое 43а или 43Ь, объединяют, замораживают на бане из сухого льда и ацетона, затем лиофилизируют для получения заданного соединения.
Пример 10. Синтез соединений А1а-А1а-РАВ-ОМ1, которые могут содержать неприродные дипептиды.
Схема синтеза линкеров, содержащих одну или обе неприродные аминокислоты (например, Ό-аминокислоту), представлен на фиг. 19. В качестве примера, на схеме синтеза использовали Ь- или ΌА1а. Однако практически также могут быть использованы любые Ь- или Ό-аминокислоты.
В целом, для соединения А1а-А1а-РАВ-ОМ1 были получены все четыре комбинаци идипептидов, а именно А1а-А1а (Р, Р), А1а-О-А1а (Ρ, Ό), Э-А1а-А1а (Ό, Р) и Э-А1а-О-А1а (Ό, Ό). Этот пример демонстрирует, что могут быть получены майтанзиноид-пептиды с использованием неприродных аминокислот в любом положении дипептидного линкера. Иллюстративные общие схемы синтеза представлены ниже.
См. также фиг. 20-22, на которых представлены несколько схем синтеза для получения конъюгатов антител с использованием соединений А1а-А1а-РАВ-ОМ1.
Общий способ получения (РМос-О-А1а-О-А1а-ОН) и изомеров.
РМос-О-А1а-ОН (3,0 г, 9,6 ммоль), Ν-гидроксисукцинимид (1,6 г, 14,4 ммоль) и 1-этил-3-(3диметиламинопропил)карбодиимид (ЕЭС, 1,85 г, 9,64 ммоль) взвесили в 200 мл колбе, оснащенной магнитной мешалкой. Добавили диметилформамид (25 мл) и перемешивали реакционную смесь при комнатной температуре в течение 1 ч для получения неочищенного активированного сукцинимидного эфира. Ό-аланин (2,5 г, 28 ммоль) растворили в растворе диметилформамида (6 мл) и деионизированной воды (20 мл) в лабораторном стакане объемом 200 мл, оснащенном магнитной мешалкой. Смесь перемешивали и контролировали рН при помощи рН-метра. рН довелидо рН 8,5 добавлением 1 М №ОН, затем медленно добавили раствор неочищенного активированного эфира (1,5 мл). После добавления рН довели до рН 8,5 добавлением 1 М №ОН. Это чередующееся добавление раствора неочищенного активированного эфира с последующим добавлением 1 М №ОН до рН 8,5 повторяли до полного добавления всего объема раствора неочищенного активированного эфира. Затем рН довели до рН 8,5 и оставили реакционную смесь перемешиваться в течение 1 ч. Картридж С18 [ЩегсНет 1200 г, 30 мкм равновесили при 85 мл/мин, при помощи 75:25 смеси деионизированной воды с 0,2% муравьиной кислоты: ацетонитрила
- 68 029797
(1,5 л). На колонку загрузили диметилсульфоксид (6 мл), затем весь объем реакционной смеси. Затем колонку хроматографировали градиентным элюированием при 85 мл/мин деионизированной водой, содержащей 0,2% муравьиной кислоты, и ацетонитрилом при 25%, начиная с 0 до 5 мин, затем линейным градиентом ацетонитрила от 25 до 95% с 5,0 по 40 мин. Фракции, содержащие чистый заданный продукт, объединили, а растворитель выпарили под вакуумом для получения 2,0 г (выход 54%) твердого белого вещества.
1Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-б6) δ 1,19 (άΐ, 1=7,2, 1,9 Гц, 3Н), 1,24 (άΐ, 1=7,3, 2,0 Гц, 3Н), 2,01 (ΐ, 1=2,1 Гц, 1Н), 4,10-4,22 (т, 2Н), 4,23 (ά, 1=6,1 Гц, 2Н), 7,31 (ΐά, 1=1,1, 2,3 Гц, 2Н), 7,39 (ΐά, 1=7,6, 2,5 Гц, 2Н), 7,62-7,71 (т, 2Н), 7,79-7,88 (т, 2Н), 8,11 (ΐ, 1=2,0 Гц, 1Н), 8,10-8,17 (т, 1Н).
13С ЯМР (101 МГц, ДМСО) δ 174,74, 173,26, 163,88, 156,38, 144,31, 144,18, 141,20, 128,34, 127,76, 125,82, 125,79, 120,65, 66,28, 50,32, 48,12, 47,12, 18,53, 17,53.
НКМ3 (т/ζ): |Μ+Να|'. рассчитанный для ^^^Ν^Να 405,1427; обнаружено 405,1409.
РМос-Г-А1а-Ь-А1а-0Н.
1Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-άΟ δ 1,23 (ά, 1=7,1 Гц, 3Н), 1,28 (ά, 1=7,3 Гц, 3Н), 4,02-4,15 (т, 1Н), 4,164,32 (т, 4Н), 7,33 (ΐά, 1=7,4, 1,2 Гц, 2Н), 7,37-7,46 (т, 2Н), 7,50 (ά, 1=7,8 Гц, 1Н), 7,73 (ΐ, 1=7,4 Гц, 2Н), 7,89 (ά, 1=7,5 Гц, 2Н), 8,13 (ά, 1=7,3 Гц, 1Н), 12,53 (5, 1Н).
13С ЯМР (101 МГц, ДМСО) δ 174,04, 172,32, 155,64, 143,93, 143,80, 140,71, 127,63, 0,127, 0,07, 125,30, 125,33, 120,10, 65,60, 49,69, 47,43, 46,66, 18,19, 17,18.
РМос-Ь-А1а-О-А1а-0Н.
ΊI ЯМР (400 МГц, ДМСО-άβ) δ 1,24 (ά, 1=7,2 Гц, 3Н), 1,27 (ά, 1=7,3 Гц, 3Н), 4,14 (ΐ, 1=7,5 Гц, 1Н),
4,19-4,35 (т, 3Н), 7,32 (ΐ, 1=7,5 Гц, 2Н), 7,41 (ΐ, 1=7,5 Гц, 2Н), 7,48 (ά, 1=8,1 Гц, 1Н), 7,74 (ΐ, 1=7,5 Гц, 2Н),
7,87 (ά, 1=7,5 Гц, 2Н), 8,13 (ΐ, 1=8,2 Гц, 1Н), 11,97-13,16 (т, 1Н). 13С ЯМР (101 МГц, МДСО) δ 174,02,
172,25, 155,64, 143,95, 143,83, 140,75, 127,67, 127,11, 125,39, 125,34, 120,12, 65,71, 49,93, 47,53, 46,70, 18,62, 17,51.
РМос-П-А1а-Ь-А1а-0Н.
М3 (т/ζ): [М + Н]+, рассчитанный для С21Н23№05 383,1; обнаружено 383,0.
Общий способ получения (РМос-О-А1а-Э-А1а-РАВ-0Н) и изомеров.
РМосЦ-А1а^-А1а-0Н (1,5 г, 3,92 ммоль) и 4-аминобензиловый спирт (0,97 г, 7,86 ммоль) взвесили в колбу объемом 200 мл, оснащенную магнитной мешалкой, к которому добавили 1:1 смесь дихлорметана: метанола (60 мл), а затем 2-этокси-1-этоксикарбонил-1,2-дигидрохинолин (ΓΕΩΟ, 1,94 г, 7,84 ммоль) и перемешивали реакционную смесь магнитной мешалкой при комнатной температуре в течение 48 ч. Образовался осадок, а растворитель удалили под вакуумом. Добавили этиловый эфир (90 мл) и энергично перемешивали в течение 5 мин, затем обрабатывали ультразвуком в течение 5 мин. Смесь частями перенесли в 20 мл пробирки, закрыли и центрифугировали до образования мелкого осадка в нижней части пробирок, затем декантировали надосадочную жидкость. Добавили этиловый эфир (40 мл), энергично перемешивали в течение 5 мин, смесь выпала осадок, как описано, а надосадочную жидкость удалили. Через влажное твердое вещество пропускали поток азота в течение 2 мин, затем твердый остаток поместили под вакуумом для удаления остаточного растворителя с образованием 1,4 г (выход 73%) заданного продукта в виде твердого белого вещества.
Ίί ЯМР (400 МГц, ДМСО-ά^ δ 1,24 (ά, 1=7,0 Гц, 3Н), 1,31 (ά, 1=7,0 Гц, 3Н), 4,11 (μ, 1=7,1 Гц, 1Н),
4,19-4,33 (т, 3Н), 4,36-4,51 (т, 4Н), 5,10 (ΐ, 1=5,6 Гц, 1Н), 7,23 (ά, 1=8,1 Гц, 2Н), 7,33 (ΐ, 1=7,4 Гц, 2Н), 7,42 (ΐ, 1=7,4 Гц, 2Н), 7,55 (άά, 1=7,8, 4,9 Гц, 3Н), 7,72 (ΐ, 1=8,1 Гц, 2Н), 7,89 (ά, 1=7,5 Гц, 2Н), 8,10 (ά, 1=7,2 Гц, 1Н), 9,88 (5, 1Н).
НКМ3 (т/ζ): [М+№]+, рассчитанный для С28Η29N305Nа; 510,2005; обнаружено 510,1985.
РМос-Г-А1а-Ь-А1а-РАВ-0Н.
Ίί ЯМР (400 МГц, ДМСО-ά^ δ 1,24 (ά, 1=7,1 Гц, 3Н), 1,31 (ά, 1=7,0 Гц, 3Н), 4,11 (μ, 1=7,1 Гц, 1Н), 4,17-4,32 (т, 3Н), 4,42 (άά, 1=11,9, 6,3 Гц, 3Н), 5,10 (ΐ, 1=5,7 Гц, 1Н), 7,24 (ά, 1=8,3 Гц, 2Н), 7,33 (ΐ, 1=7,4 Гц, 2Н), 7,41 (ΐ, 1=7,5 Гц, 2Н), 7,55 (άά, 1=7,7, 4,2 Гц, 3Н), 7,72 (ΐ, 1=8,2 Гц, 2Н), 7,89 (ά, 1=7,5 Гц, 2Н), 8,11 (ά, 1=7,3 Гц, 1Н), 9,88 (5, 1Н).
13С ЯМР (101 МГц, ДМСО) δ 171,02, 170,57, 170,53, 168,09, 155,24, 151,21, 143,85, 143,75, 141,25, 141,23, 140,68, 139,39, 138,30, 137,59, 133,23, 132,56, 128,93, 128,89, 128,45, 127,60, 127,25, 127,05, 125,25, 125,13, 121,35, 120,07, 119,99, 119,02, 117,11, 113,90, 109,69, 88,19, 79,97, 78,62, 77,62, 73,14, 66,74, 59,99, 56,53, 56,09, 51,64, 49,99, 49,96, 48,96, 46,64, 45,40, 37,68, 36,33, 35,16, 34,86, 33,32, 31,91, 29,68, 25,97, 18,14, 15,01, 14,39, 13,04, 11,35.
РМос-Г-А1а-Э-А1а-РАВ-0Н.
М3 (т/ζ): [М+NΗ]+, рассчитанный для С28Н30№05; 487,2; обнаружено 487,0.
- 69 029797
ΡΜοο-Ό-ΑΙα-Β-ΑΙα-ΡΑΒ-ΟΗ.
1Η ЯМР (400 МГц, ДМСО-66) δ 1,27 (6, 1=7,1 Гц, 3Н), 1,34 (6, 1=7,0 Гц, 3Н), 4,14 (ί, 1=7,0 Гц, 1Н),
4,22 (ί, 1=6,9 Гц, 1Η), 4,31 (6, 1=6,2 Гц, 2Н), 4,46 (д, 1=4,4, 3,2 Гц, 3Н), 5,14 (6, 1=5,4 Гц, 1Η), 7,25 (6, 1=8,3 Гц, 2Н), 7,33 (ί, 1=7,4 Гц, 2Н), 7,40 (ί6, 1=7,4, 4,6 Гц, 2Η), 7,62 (6, 1=8,3 Гц, 2Н), 7,64-7,77 (т, 3Н),
7,87 (66, 1=7,5, 2,8 Гц, 2Н), 8,33 (6, 1=7,5 Гц, 1Η), 9,75 (5, 1Η).
13С ЯМР (101 МГц, ДМСО) δ 172,53, 170,86, 156,00, 143,87, 143,74, 140,74, 137,64, 137,40, 127,65,
Общий способ получения (ΈΜοο-Ό-Α1;·ι-0-Α1;·ι-ΡΑΒ-ΌΜ1) и изомеров.
ΡΜοο-6-Α1;·ι-6-Α1;·ι-ΡΑΒ-ΟΗ (135 мг, 0,18 ммоль) растворили в диметилформамиде (0,8 мл) в пробирке, содержащей магнитную мешалку. При перемешивании добавили метансульфонилхлорид (34 мкл, 0,44 ммоль), затем диизопропилэтиламин (77 мкл, 0,44 ммоль). Через 30 мин добавили бромид натрия (263 мг, 2,5 ммоль) и энергично перемешивали смесь в течение 30 мин. Пробирку центрифугировали в течение 5 мин, затем надосадочную жидкость добавили в пробирку, содержащую ΌΜ1 (120 мг). Через 1 ч материал очистили без выделения продукта, при помощи препаративной ВЭЖХ при 100 мл/мин, используя колонку С18, 250x50 мм с градиентным элюированием. Колонку элюировали деионизированной водой, содержащей 0,2% муравьиной кислоты, с 20% ацетонитрила, начиная с 0 до 5,0 мин, затем линейным градиентом до 98% ацетонитрила, начиная с 5,0 по 30 мин. Заданную фракцию элюировали на 27 мин и собрали в 250 мл колбу, которую поместили на баню из сухого льда и ацетона для замораживания растворителя. Колбу убрали с бани, затем замороженный растворитель удалили лиофилизацией для получения 130 мг (выход 59%) заданного продукта в виде твердого белого вещества.
ΡΜοο-Γ-Α1α-Γ-Α1α-ΡΑΒ-ΌΜ1.
!Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-66) δ 0,76 (5, 3Н), 1,12 (6, 1=6,5 Гц, 3Н), 1,16 (6, 1=6,8 Гц, 3Н), 1,24 (6, 1=7,2 Гц, 3Н), 1,31 (66, 1=6,8, 2,4 Гц, 3Н), 1,40-1,49 (т, 2Η), 1,58 (5, 3Н), 2,03 (66, 1=14,5, 2,8 Гц, 1Η), 2,37 (666, 1=16,3, 8,2, 5,8 Гц, 1Η), 2,59-2,65 (т, 1Η), 2,67 (5, 3Н), 2,69-2,76 (т, 1Η), 2,78 (6, 1=9,7 Гц, 1Η), 3,07 (5, 3Н), 3,13 (6, 1=12,7 Гц, 1Η), 3,24 (6, 1=3,1 Гц, 3Н), 3,47 (66, 1=9,0, 3,1 Гц, 1Η), 3,55-3,65 (т, 2Н), 3,93 (6, 1=2,4 Гц, 3Н), 4,03-4,12 (т, 2Н), 4,22 (6, 1=6,8 Гц, 1Η), 4,27 (6, 1=8,1 Гц, 1Η), 4,41 (д, 1=7,1, 6,6 Гц, 1Η), 4,52 (66, 1=11,9, 2,8 Гц, 1Η), 5,30 (д, 1=6,8 Гц, 1Η), 5,55 (66, 1=13,6, 9,1 Гц, Н), 5,93 (5, 1Η), 6,49-6,59 (т, 3Н), 6,87 (5, 1Η), 7,07-7,12 (т, 2Н), 7,15 (6, 1=1,8 Гц, 1Η), 7,30-7,37 (т, 2Н), 7,41 (ί, 1=7,5 Гц, 2Н), 7,47 (66, 1=8,5, 2,7 Гц, 2Н), 7,55 (6, 1=7,5 Гц, 1Η), 7,72 (ί, 1=8,1 Гц, 2Н), 7,84 (6, 1=7,4 Гц, 1Η), 7,88 (6, 1=7,5 Гц, 2Н),
8,14 (6, 1=7,2 Гц, 1Η), 9,94 (5, 1Η).
13С ЯМР (101 МГц, ДМСО) δ 171,02, 170,57, 170,53, 168,09, 155,76, 155,24, 151,21, 143,85, 143,75,
141.25, 141,23, 140,68, 139,39, 138,30, 137,59, 133,23, 132,56, 128,93, 128,89, 128,45, 127,60, 127,25, 127,05,
125.25, 125,13, 121,58, 121,35, 120,07, 119,99, 119,02, 117,11, 113,90, 109,69, 88,18, 79,97, 78,62, 77,62, 73,14, 66,74, 65,64, 59,99, 56,53, 56,09, 51,64, 49,99, 49,96, 48,96, 46,64, 45,40, 37,68, 36,33, 35,16, 34,86, 33,32, 31,91, 29,67, 25,97, 18,14, 15,00, 14,39, 13,04, 11,35.
ΗΚΜδ(ιη/ζ): |Μ+Ν;·ι|'. рассчитанный для С63Н75СШ6О148№, 1229,4649; обнаружено 1229,4614.
ΡΜοο-Ε-Αΐα-ϋ-Αΐα-ΡΑΒ-ϋΜ1.
!Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-66) δ 0,73 (5, 3Н), 1,12 (6, 1=6,3 Гц, 3Н), 1,15 (6, 1=6,7 Гц, 3Н), 1,24 (ί, 1=4,9 Гц, 5Н), 1,31 (6, 1=6,9 Гц, 4Н), 1,40 (66, 1=18,2, 10,5 Гц, 3Н), 1,56 (5, 3Н), 1,98-2,04 (т, 1Η), 2,37 (6ί, 1=15,2, 7,5 Гц, 1Η), 2,59-2,64 (т, 1Η), 2,66 (5, 3Н), 2,78 (6, 1=9,5 Гц, 1Η), 3,06 (5, 3Н), 3,18 (5, 2Η), 3,54-3,64 (т, 2Η), 4,01-4,14 (т, 2Η), 4,20 (6, 1=6,9 Гц, 2Н), 4,26 (ί, 1=5,8 Гц, 2Н), 4,41 (д, 1=7,0, 6,6 Гц, 1Η), 4,51 (66,
- 70 029797
1=12,2, 2,9 Гц, 1Н), 5,29 (ς, 1=6,4 Гц, 1Н), 5,53 (άά, 1=14,7, 9,0 Гц, 1Н), 5,91 (δ, 1Н), 6,50 (ά, 1=10,6 Гц, 2Н), 6,56 (ά, 1=11,0 Гц, 1Н), 6,85 (ά, 1=11,0 Гц, 1Н), 7,04-7,09 (т, 2Н), 7,12-7,16 (т,1Н), 7,31 (ί, 1=7,4 Гц, 2Н), 7,39 (ς, 1=7,0 Гц, 3Н), 7,48 (ά, 1=7,6 Гц, 2Н), 7,64 (ά, 1=6,7 Гц, 1Н), 7,70 (ί, 1=7,8 Гц, 3Н), 7,86 (άά, 1=7,6,
3,7 Гц, 3Н), 8,33 (ί, 1=7,9 Гц, 1Н), 9,77 (ά, 1=10,6 Гц, 1Н).
13С ЯМР (101 МГц, ДМСО) δ 172,47, 170,89, 170,52, 168,06, 155,22, 151,21, 143,82, 143,63, 141,25, 141,20, 140,66, 138,38, 133,29, 132,51, 128,86, 127,59, 127,03, 125,26, 125,19, 121,50, 120,04, 119,15, 117,08, 113,86, 88,17, 79,94, 77,61, 77,57, 73,12, 66,71, 65,72, 59,95, 56,51, 56,00, 51,60, 50,12, 48,98, 46,60, 37,67, 36,32, 35,13, 34,85, 33,26, 31,87, 29,64, 25,90, 18,07, 17,99, 14,98, 14,39, 13,03, 11,33.
НКМ8 (т/ζ): | МГ\а|', рассчитанный для Сбз^СШбОмЗ^ 1229,4649; обнаружено 1229,4622.
РМос-П-Л1а-Е-Л1а-РЛв-ПМ1.
1Н ЯМР (400 МГц, ДМСОО δ 0,72 (ά, 1=6,5 Гц, 3Н), 1,12 (ά, 1=6,3 Гц, 3Н), 1,15 (ά, 1=6,8 Гц, 3Н),
1,24 (άά, 1=7,0, 3,7 Гц, 3Н), 1,29-1,33 (т, 3Н), 1,38-1,46 (т, 2Н), 1,56 (ά, 1=2,5 Гц, 3Н), 2,02 (ά, 1=14,5 Гц, 1Н), 2,32-2,41 (т, 1Н), 2,59-2,64 (т, 1Н), 2,67 (δ, 3Н), 2,78 (ά, 1=9,6 Гц, 1Н), 3,06 (ά, 1=1,4 Гц, 2Н), 3,11 (δ, 1Н), 3,19 (δ, 1Н), 3,24 (δ, 1Н), 3,32 (δ, 5Н), 3,43 (άά, 1=12,3, 9,1 Гц, 1Н), 3,55-3,64 (т, 2Н), 3,93 (δ, 3Н), 4,024,14 (т, 2Н), 4,21 (ί, 1=6,2 Гц, 1Н), 4,24-4,29 (т, 2Н), 4,42 (ί, 1=6,8 Гц, 1Н), 4,51 (άά, 1=11,9, 2,5 Гц, 1Н), 5,29 (ς, 1=6,7 Гц, 1Н), 5,54 (άάά, 1=13,7, 8,9, 3,9 Гц, 1Н), 5,91 (δ, 1Н), 6,45-6,52 (т, 2Н), 6,56 (ά, 1=11,1 Гц, 1Н), 6,86 (ά, 1=10,8 Гц, 1Н), 7,07 (άά, 1=8,3, 2,6 Гц, 2Н), 7,14 (άά, 1=8,1, 1,7 Гц, 1Н), 7,32 (ίά, 1=7,5, 5,7, 3,9 Гц, 3Н), 7,39 (ς, 1=7,1 Гц, 3Н), 7,49 (άά, 1=8,3, 5,3 Гц, 2Н), 7,62 (ά, 1=6,9 Гц, 1Н), 7,70 (ίά, 1=12,1, 10,2, 5,1 Гц, 2Н), 7,87 (άά, 1=7,5, 3,5 Гц, 2Н), 8,27-8,32 (т, 1Н), 9,75 (ά, 1=11,1 Гц, 1Н).
13С ЯМР (101 МГц, ДМСО) δ 172,48, 172,43, 171,09, 170,89, 170,53, 168,08, 155,87, 155,22, 151,21, 143,84, 143,79, 143,71, 143,64, 141,23, 140,67, 138,34, 137,42, 133,35, 132,54, 129,40, 128,89, 128,85, 128,42, 127,61, 127,05, 125,26, 125,20, 121,53, 120,08, 119,15, 117,08, 113,91, 88,16, 82,95, 79,95, 77,60, 73,13, 66,72, 65,69, 59,98, 56,53, 56,08, 51,62, 50,10, 48,89, 46,60, 45,38, 37,67, 36,33, 35,15, 34,84, 33,27, 31,89, 29,66, 25,95, 18,12, 18,02, 14,99, 14,39, 13,04, 11,32.
НКМ8 (т/ζ): | Μ<Νπ|', рассчитанный для е63Н75е1N6Ο148Nа, 1229,4649; обнаружено 1229,4615.
РМос-П-Л1а-П-Л1а-РЛв-ПМ1.
1Н ЯМР (400 МГц, ДМСОО δ 0,76 (δ, 3Н), 1,12 (ά, 1=6,3 Гц, 3Н), 1,16 (ά, 1=6,8 Гц, 3Н), 1,21-1,26 (т, 6Н), 1,31 (άά, 1=7,3, 3,0 Гц, 5Н), 1,44 (άά, 1=15,3, 9,9 Гц, 2Н), 1,57 (δ, 3Н), 2,03 (άά, 1=14,7, 2,4 Гц, 1Н), 2,37 (άάά, 1=16,0, 7,6, 3,5 Гц, 1Н), 2,67 (δ, 3Н), 2,78 (ά, 1=9,7 Гц, 1Н), 3,07 (δ, 3Н), 3,13 (ά, 1=12,5 Гц, 1Н),
3,24 (δ, 3Н), 3,37 (ά, 1=12,4 Гц, 1Н), 3,47 (ά, 1=9,0 Гц, 1Н), 3,55-3,66 (т, 2Н), 3,93 (δ, 3Н), 4,02-4,14 (т, 3Н),
4,19-4,30 (т, 4Н), 4,42 (ά, 1=9,4 Гц, 3Н), 4,52 (άά, 1=11,9, 2,8 Гц, 1Н), 5,30 (ς, 1=6,7 Гц, 1Н), 5,56 (άά, 1=13,7, 9,0 Гц, 1Н), 6,49-6,60 (т, 3Н), 6,87 (δ, 1Н), 7,09 (ά, 1=8,2 Гц, 2Н), 7,15 (ά, 1=1,8 Гц, 1Н), 7,23 (ά, 1=8,2 Гц, 1Н), 7,33 (ί, 1=7,5 Гц, 3Н), 7,41 (ί, 1=7,6 Гц, 2Н), 7,46 (ά, 1=8,2 Гц, 2Н), 7,54 (άά, 1=8,0, 2,9 Гц, 3Н), 7,72 (ί, 1=8,1 Гц, 2Н), 7,89 (ά, 1=7,6 Гц, 2Н), 8,10 (ί, 1=6,4 Гц, 1Н), 9,89 (ά, 1=11,6 Гц, 1Н).
НКМ8 (т/ζ): | ΙΜ<Νπ|', рассчитанный для С63Н75СШ6О148№, 1229,4649; обнаружено 1229,4584.
Общий способ получения (Н-Л1а-Л1а-РЛв-ПМ1) и изомеров.
РМос-П-Л1а-О-Л1а-РЛв-ПМ1 (120 мг, 0,099 ммоль) растворили в диметилформамиде (1,5 мл), к которому добавили 4-метилморфолин (250 мкл, 2,5 ммоль), и перемешивали реакционную смесь магнитной мешалкой при комнатной температуре в течение 2 ч. Смесь очистили без выделения продукта, при помощи препаративной ВЭЖХ при 40 мл/мин, используя колонку С18, 250x30 мм с градиентным элюированием. Колонку элюировали деионизированной водой, содержащей 0,2% муравьиной кислоты, с 20% ацетонитрила, начиная с 0 до 5,0 мин, затем линейным градиентом до 98% ацетонитрила, начиная с 5,0 по 30 мин. Заданный продукт элюировали на 21 мин и собрали в 50 мл колбу, которую поместили на ба- 71 029797
ню из сухого льда и ацетона для замораживания растворителя. Колбу убрали с бани, а замороженный растворитель удалили лиофилизацией для получения 80 мг (выход 82%) заданного продукта в виде твердого белого вещества.
Н-Ь-А1а-Ь-А1а-РАВ-ВМ 1.
!Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-4б) δ 0,77 (8, 3Н), 1,12 (ά, 1=6,3 Гц, 3Н), 1,16 (ά, 1=6,8 Гц, 3Н), 1,24 (ά, 1=12,2 Гц, 1Н), 1,28 (ά, 1=6,9 Гц, 3Н), 1,33 (ά, 1=7,0 Гц, 3Н), 1,40-1,50 (т, 2Н), 1,58 (8, 3Н), 2,03 (άά, 1=14,5,
2,8 Гц, 1Н), 2,37 (άάά, 1=16,1, 8,1, 5,8 Гц, 1Н), 2,54 (ά, 1=2,3Гц, 1Н), 2,62 (άά, 1=13,8, 6,1 Гц, 1Н), 2,67 (8, 3Н), 2,68-2,75 (т, 1Н), 2,78 (ά, 1=9,8 Гц, 1Н), 2,86 (ί, 1=4,8 Гц, ОН), 3,06 (8, 3Н), 3,14 (ά, 1=12,6 Гц, 1Н),
3,25 (8, 3Н), 3,39 (ά, 1=12,5 Гц, 1Н), 3,48 (ά, 1=9,1 Гц, 1Н), 3,60 (ά, 1=7,6 Гц, 2Н), 3,63-3,71 (т, 1Н), 3,93 (8, 3Н), 4,02-4,10 (т, 1Н), 4,45 (ί, 1=6,5 Гц, 1Н), 4,51 (άά, 1=12,1, 2,8 Гц, 1Н), 5,30 (ς, 1=6,8 Гц, 1Н), 5,51-5,59 (т, 1Н), 6,50-6,59 (т, 3Н), 6,88 (8, 1Н), 7,10 (ά, 1=8,4 Гц, 2Н), 7,16 (ά, 1=1,8 Гц, 1Н), 7,46-7,50 (т, 2Н), 8,29 (8, 2Н), 8,62 (ά, 1=7,3 Гц, 1Н), 10,13 (8, 1Н).
3С ЯМР (101 МГц, ДМСО) δ 170,78, 170,62, 170,58, 170,47, 168,14, 165,07, 155,28, 151,27, 141,30, 141,27, 138,34, 137,63, 133,37, 132,60, 128,98, 128,52, 125,19, 121,63, 119,13, 117,16, 113,94, 88,22, 80,01, 77,67, 73,19, 66,79, 64,39, 60,03, 56,57, 56,13, 51,69, 49,23, 48,30, 45,46, 43,26, 37,73, 36,38, 35,19, 34,91, 33,39, 31,96, 29,72, 26,04, 18,23, 18,00, 17,96, 15,05, 14,43, 13,09, 11,38.
НКМ8 (т/ζ): [М+Н]+, рассчитанный для С48Н66СШ6О!28, 985,4148; обнаружено 985,4131.
I Ι-Ι ,-Α1;ι-Ι)-Α1;ι-ΡΑΒ-Ι)\ 1 1.
!Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-άβ) δ 0,76 (8, 3Н), 1,12 (ά, 1=6,3 Гц, 3Н), 1,16 (ά, 1=6,8 Гц, 3Н), 1,21 (ά, 1=6,9 Гц, 3Н), 1,32(ά, 1=7,0 Гц, 3Н), 1,38-1,50 (т, 2Н), 1,58 (8, 3Н), 2,03 (άά, 1=14,4, 2,9 Гц, 1Н), 2,38 (άάά, 1=16,0, 8,1, 5,9 Гц, 1Н), 2,54 (ά, 1=2,4 Гц, 1Н), 2,58 -2,8 (т, 1Н), 2,67 (8, 3Н), 2,79 (ά, 1=9,6 Гц, 1Н), 3,07 (8, 3Н), 3,14 (ά, 1=12,3 Гц, 1Н),3,25 (8, 3Н), 3,38 (ά, 1=12,4 Гц, 1Н), 3,48 (ά, 1=8,9 Гц, 1Н), 3,48-3,60 (т, 2Н), 3,60 (ά, 1=7,5 Гц, 1Н), 3,94 (8, 3Н), 4,01-4,12 (т, 1Н), 4,13-4,38 (т, 2Н), 4,43 (ά, 1=6,4 Гц, 1Н), 4,52 (άά, 1=11,9, 2,8 Гц, 1Н), 5,30 (ς, 1=6,7 Гц, 1Н), 5,56 (άά, 1=13,5, 9,2 Гц, 1Н), 6,48-6,61 (т, 3Н), 6,89 (8, 1Н), 7,10 (ά, 1=8,4 Гц, 2Н), 7,16 (ά, 1=1,9 Гц, 1Н), 7,49 (άά, 1=8,6, 2,5 Гц, 2Н), 8,43 (8, 1Н), 8,45-8,55 (т, 1Н), 10,14 (8, 1Н).
13С ЯМР (101 МГц, ДМСО) δ 173,48, 171,02, 170,58, 170,55, 168,11, 155,27, 151,27, 141,26, 138,32, 137,57, 133,33, 132,58, 128,91, 128,47, 125,15, 121,59, 119,24, 117,14, 113,90, 88,22, 79,99, 77,63, 73,17, 66,77, 66,27, 60,00, 56,55, 56,11, 51,66, 49,39, 48,96, 45,44, 44,99, 37,71, 36,36, 35,17, 34,88, 33,36, 31,92, 29,70, 25,97, 20,05, 18,48, 15,03, 14,40, 13,06, 11,38.
НКМ8 (т/ζ): [М+Н]+, рассчитанный для С48Н66СШ6О!28, 985,4148; обнаружено 985,4134. Н-Э-А1а-Ь-А1а-РАВ-ВМ 1.
М8 (т/ζ): [М+Н]+, рассчитанный для С48Н66СШ6О!28, 984,4; обнаружено 984,2.
Н-Э-А1а-В-А1а-РАВ-ВМ 1.
НКМ8 (т/ζ): [М+Н]+, рассчитанный для С48Н65СШ6Оп8Иа, 1007,3968; обнаружено 1007,3938.
Общий способ получения (8РВВ-А1а-А1а-РАВ-ЭМ1) и изомеров.
Соединение Н-Ь-А1а-Ь-А1а-РАВ-ЭМ1 (64 мг, 0,065 ммоль) растворили в диметилформамиде (1 мл), к которому добавили 8РЭВ (50 мг, 0,153 ммоль). После перемешивания магнитной мешалкой в течение 1 ч образец очистили без выделения продукта при помощи препаративной ВЭЖХ при 40 мл/мин, используя колонку С18, 250x30 мм с градиентным элюированием. Колонку элюировали деионизированной водой, содержащей 0,2% муравьиной кислоты, с 20% ацетонитрила, начиная с 0 до 4,0 мин, затем линейным градиентом до 95% ацетонитрила, начиная с 4,0 по 21 мин. Заданный продукт, который элюировали на 17 мин, собрали в 50 мл колбу и заморозили ее содержимое, поместив колбу на баню из сухого льда и ацетона. Замороженный растворитель затем удалили лиофилизацией для получения 68 мг (выход 85%)
- 72 029797
заданного продукта в виде твердого белого вещества.
1Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-йе) δ 0,77 (5, 3Н), 1,12 (й, 1=6,3 Гц, 3Н), 1,16 (й, 1=6,8 Гц, 3Н), 1,20 (й, 1=7,0 Гц, 3Н), 1,30 (й, 1=7,0 Гц, 3Н), 1,40-1,50 (т, 3Н), 1,58 (5, 3Н), 1,86 (р, 1=7,2 Гц, 2Н), 2,03 (йй, 1=14,4,
2,9 Гц, 1Н), 2,27 (1, 1=1,2 Гц, 2Н), 2,38 (ййй, 1=16,2, 8,2, 5,9 Гц, 1Н), 2,62 (йй, 1=14,8, 7,1 Гц, 2Н), 2,67 (5, 3Н), 2,70-2,77 (т, 2Н), 2,79 (й, 1=9,7 Гц, 1Н), 2,83 (1, 1=7,3 Гц, 2Н), 3,07 (5, 3Н), 3,13 (й, 1=12,6 Гц, 1Н),
3.25 (5, 3Н), 3,38 (й, 1=12,3 Гц, 2Н), 3,48 (й, 1=8,9 Гц, 1Н), 3,55-3,66 (т, 2Н), 3,93 (5, 3Н), 4,02-4,12 (т, 1Н),
4.25 (р, 1=7,0 Гц, 1Н), 4,38 (р, 1=7,0 Гц, 1Н), 4,52 (йй, 1=11,9, 2,9 Гц, 1Н), 5,27-5,34 (т, 1Н), 5,56 (йй, 1=13,6, 9,0 Гц, 1Н), 5,93 (5, 1Н), 6,49-6,64 (т, 2Н), 6,87 (5, 1Н), 7,09 (й, 1=8,4 Гц, 2Н), 7,15 (й, 1=1,7 Гц, 1Н),
7.21 (ййй, 1=7,0, 4,7, 1,2 Гц, 1Н), 7,48-7,53 (т, 2Н), 7,73-7,84 (т, 2Н), 8,10 (йй, 1=7,1, 3,6 Гц, 2Н), 8,41-8,47 (т, 1Н), 9,85 (5, 1Н).
13С ЯМР (101 МГц, ДМСО) δ 172,43, 171,75, 170,93, 170,56, 168,10, 159,28, 155,25, 151,24, 149,50,
141,25, 138,33, 137,69, 137,45, 133,33, 132,59, 128,86, 128,46, 125,14, 121,57, 121,04, 119,21, 119,09, 117,12, 113,89, 88,20, 79,99, 77,63, 73,16, 66,76, 60,00, 56,53, 56,10, 51,65, 48,96, 48,92, 48,74, 45,43, 37,70, 37,38,
36,35, 35,17, 34,87, 33,33, 33,28, 31,92, 29,69, 25,98, 24,51, 17,89, 17,53, 15,02, 14,41, 13,06, 11,37.
НЕМ8 (т/ζ): [М+Н]+, рассчитанный для С57Н74С1N7О1383Nа, 1218,4093; обнаружено 1218,4062.
8РПВ-Ь-А1а-П-А1а-РАВ-ПМ1.
'II ЯМР (400 МГц, ДМСО-йе) δ 0,76 (5, 3Н), 1,12 (й, 1=6,2 Гц, 3Н), 1,16 (й, 1=6,8 Гц, 3Н), 1,20 (й, 1=7,1 Гц, 3Н), 1,24 (й, 1=13,6 Гц, 1Н), 1,31 (й, 1=7,2 Гц, 3Н), 1,39-1,51 (т, 3Н), 1,58 (й, 1=5,7 Гц, 3Н), 1,86 (р, 1=7,2 Гц, 3Н), 2,00-2,08 (т, 1Н), 2,27 (1, 1=7,2 Гц, 2Н), 2,38 (ййй, 1=15,8, 8,0, 5,8 Гц, 1Н), 2,63 (йй, 1=13,8, 6,4 Гц, 1Н), 2,67 (5, 3Н), 2,76-2,86 (т, 4Н), 3,07 (5, 3Н), 3,24 (5, 3Н), 3,48 (й, 1=8,9 Гц, 1Н), 3,54-3,66 (т, 2Н), 3,93 (5, 3Н), 4,02-4,11 (т, 1Н), 4,22 (й1, 1=13,9, 6,8 Гц, 1Н), 4,32-4,40 (т, 1Н), 4,52 (йй, 1=11,9, 2,9 Гц, 1Н), 5,31 (ф 1=6,8 Гц, 2Н), 5,56 (йй, 1=13,7, 9,0 Гц, 1Н), 5,93 (5, 1Н), 6,48-6,61 (т, 2Н), 6,89 (й, 1=6,9 Гц, 1Н), 7,10 (йй, 1=8,6, 2,1 Гц, 2Н), 7,18-7,25 (т, 1Н), 7,56 (т, 2Н), 7,70-7,83 (т, 2Н), 8,21 (й, 1=6,2 Гц, 2Н), 8,38 (й, 1=7,6 Гц, 1Н), 8,41-8,46 (т, 1Н), 9,68 (5, 1Н).
13С ЯМР (101 МГц, ДМСО) δ 172,43, 171,75, 170,93, 170,56, 168,10, 159,28, 155,25, 151,24, 149,50,
141,25, 138,33, 137,69, 137,45, 133,33, 132,59, 128,86, 128,46, 125,14, 121,57, 121,04, 119,21, 119,09, 117,12, 113,89, 88,20, 79,99, 77,63, 73,16, 66,76, 60,00, 56,53, 56,10, 51,65, 48,96, 48,92, 48,74, 45,43, 37,70, 37,38,
36,35, 35,17, 34,87, 33,33, 33,28, 31,92, 29,69, 25,98, 24,51, 17,89, 17,53, 15,02, 14,41, 13,06, 11,37.
НЕМ8 (т/ζ): [М+Н]+, рассчитанный для С57Н74С1N7О1383Nа, 1218,4093; обнаружено 1218,4058.
8РПВ-О-А1а-Ь-А1а-РАВ-ПМ1.
'II ЯМР (400 МГц, ДМСО-йе) δ 0,76 (5, 3Н), 1,12 (й, 1=6,4 Гц, 3Н), 1,16 (й, 1=6,8 Гц, 3Н), 1,20 (й, 1=7,0 Гц, 3Н), 1,22-1,27 (т, 1Н), 1,31 (й, 1=7,1 Гц, 3Н), 1,40-1,50 (т, 2Н), 1,57 (5, 3Н), 1,85 (р, 1=7,3 Гц, 2Н), 2,03 (йй, 1=14,4, 2,9 Гц, 1Н), 2,27 (1, 1=7,2 Гц, 2Н), 2,32-2,44 (т, 1Н), 2,63 (йй, 1=13,7, 6,5 Гц, 1Н), 2,67 (5, 3Н), 2,69-2,77 (т, 1Н), 2,80 (1й, 1=9,5, 8,8, 4,1 Гц, 3Н), 3,07 (5, 3Н), 3,12 (йй, 1=12,9, 4,1 Гц, 1Н), 3,24 (5, 3Н), 3,48 (й, 1=9,1 Гц, 1Н), 3,54-3,66 (т, 2Н), 3,93 (5, 3Н), 4,02-4,11 (т, 1Н), 4,22 (1, 1=6,8 Гц, 1Н), 4,36 (1й, 1=7,4, 1,6 Гц, 1Н), 4,52 (йй, 1=11,9, 2,9 Гц, 1Н), 5,30 (ф 1=6,8 Гц, 1Н), 5,56 (йй, 1=13,4, 9,1 Гц, 1Н), 5,93 (5, 1Н), 6,48-6,54 (т, 2Н), 6,57 (й, 1=11,3 Гц, 2Н), 6,87 (5, 1Н), 7,10 (йй, 1=8,6, 2,1 Гц, 2Н), 7,12-7,17 (т, 1Н), 7,20 (йй, 1=7,2, 4,8 Гц, 1Н), 7,56 (йй, 1=8,5, 2,6 Гц, 2Н), 7,70-7,83 (т, 2Н), 8,22 (й, 1=6,3 Гц, 1Н), 8,38 (йй, 1=7,6, 3,9 Гц, 1Н), 8,41-8,45 (т, 1Н), 9,69 (й, 1=3,5 Гц, 1Н).
13С ЯМР (101 МГц, ДМСО) δ 172,44, 172,42, 171,75, 170,95, 170,59, 170,56, 168,11, 159,28, 155,25, 151,24, 149,51, 141,26, 138,33, 137,71, 137,47, 133,35, 133,34, 132,59, 128,89, 128,87, 128,47, 125,15, 121,58, 121,06, 119,22, 119,10, 117,13, 113,90, 88,20, 79,99, 77,64, 73,16, 66,77, 60,01, 56,54, 56,11, 51,65, 48,96, 48,93, 48,74, 45,43, 37,70, 37,38, 36,35, 35,18, 34,87, 33,34, 33,29, 31,92, 29,69, 26,00, 24,51, 17,90, 17,54, 15,03, 14,41, 13,06, 11,37.
НЕМ8 (т/ζ): [М+Н]+, рассчитанный для С57Н74С1N7О1383Nа, 1218,4093; обнаружено 1218,4062.
8РПВ-О-А1а-О-А1а-РАВ-ЭМ1.
'II ЯМР (400 МГц, ДМСО-йе) δ 0,76 (5, 3Н), 1,12 (й, 1=6,3 Гц, 3Н), 1,16 (й, 1=6,8 Гц, 3Н), 1,20 (й, 1=7,1 Гц, 3Н), 1,30 (й, 1=7,1 Гц, 3Н), 1,44 (йй, 1=15,0, 8,8 Гц, 2Н), 1,57 (5, 3Н), 1,79-1,92 (т, 2Н), 2,03 (й, 1=1 1,9 Гц, 1Н), 2,26 (1, 1=7,2 Гц, 2Н), 2,31-2,43 (т,1Н), 2,67 (5, 5Н), 2,75-2,89 (т, 4Н), 3,07 (5, 3Н), 3,13 (й, 1=12,5 Гц, 1Н), 3,24 (5, 3Н), 3,48 (й, 1=9,0 Гц, 1Н), 3,60 (й, 1=6,9 Гц, 2Н), 3,93 (5, 3Н), 4,06 (1, 1=10,5 Гц, 1Н), 4,19-4,29 (т, 1Н), 4,31-4,43 (т, 1Н), 4,51 (йй, 1=12,0, 2,6 Гц, 1Н), 5,30 (ф 1=6,6 Гц, 1Н), 5,55 (йй, 1=13,5, 9,7 Гц, 1Н), 5,92 (5, 1Н), 6,47-6,61 (т, 3Н), 6,87 (5, 1Н), 7,09 (й, 1=8,5 Гц, 2Н), 7,15 (й, 1=1,4 Гц, 1Н),
7.22 (ййй, 1=7,2, 4,8, 1,2 Гц, 1Н), 7,48 (й, 1=8,5 Гц, 2Н), 7,72-7,86 (т, 2Н), 8,09 (й, 1=7,0 Гц, 2Н), 8,42-8,50 (т, 1Н), 9,82 (5, 1Н).
НЕМ8 (т/ζ): [М+Н]+, рассчитанный для С57Н74С1N7О1383Nа, 1218,4093; обнаружено 1218,4061.
- 73 029Ί9Ί
Общий способ получения (Н8-О-А1а-О-А1а-РАБ-ОМ1) и изомеров.
К 8РОБ-О-А1а-О-А1а-РАБ-ОМ1 (65 мг, 0,054 ммоль) в диметилсульфоксиде (350 мкл) добавили 50 мМ фосфатно-калиевый буфер с рН 7,4 (100 мкл), затем дитиотреитол (ОТТ, 35 мг, 0,227 ммоль). Смесь перемешивали магнитной мешалкой в течение 1 ч, затем очистили без выделения продукта, при помощи препаративной ВЭЖХ при 40 мл/мин, используя колонку С18, 250 ммх30 мм с градиентным элюированием. Колонку элюировали деионизированной водой, содержащей 0,2% муравьиной кислоты, с 20% ацетонитрила, начиная с 0 по 4,0 мин, затем линейным градиентом до 95% ацетонитрила, начиная с 4,0 по 21 мин. Заданный продукт элюировали на 16-й мин и собрали в 50 мл колбу. Колбу быстро поместили на баню из сухого льда и ацетона до замораживания содержимого, затем замороженный растворитель удалили под вакуумом путем лиофилизации, для получения 40 мг (выход 67%) заданного продукта в виде твердого белого вещества.
1Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-Ю δ 3,69 (й, 1=5,8 Гц, 2Н), 3,78 (й, 1=5,4 Гц, 2Н), 3,89 (й, 1=5,7 Гц, 2Н),
4,23 (й, 1=6,2 Гц, 1Н), 4,29 (й, 1=7,0 Гц, 2Н), 4,42 (й, 1=4,3 Гц, 2Н), 5,10 (й, 1=5,0 Гц, 1Н), 7,23 (й, 1=8,3 Гц, 2Н), 7,32 (1, 1=7,4 Гц, 2Н), 7,41 (1, 1=7,4 Гц, 2Н), 7,55 (й, 1=8,3 Гц, 2Н), 7,57-7,64 (т, 1Н), 7,71 (й, 1=7,4 Гц, 2Н), 7,89 (й, 1=7,5 Гц, 2Н), 8,24 (ΐ, 1=5,4 Гц, 2Н), 9,76 (з, 1Н).
НКМ8 (т/ζ): [М+Н]+, рассчитанный для С52Н71СШ6О1382№, 1109,4107; обнаружено 1109,4073.
Н8-Ь-А1а-Ь-А1а-РАБ-ОМ1.
1Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-й6) δ 0,77 (з, 3Н), 1,12 (й, 1=6,3 Гц, 3Н), 1,16 (й, 1=6,8 Гц, 3Н), 1,21 (й, 1=7,2 Гц, 3Н), 1,31 (й, 1=7,0 Гц, 3Н), 1,44 (1й, 1=10,5, 9,9, 4,8 Гц, 2Н), 1,58 (з, 3Н), 1,76 (р, 1=7,2 Гц, 2Н), 2,03 (йй, 1=14,4, 2,7 Гц, 1Н), 2,19-2,28 (т, 3Н), 2,38 (ййй, 1=15,9, 8,1, 5,9 Гц, 1Н), 2,43-2,48 (т, 1Н), 2,62 (ц, 1=7,8, 6,5 Гц, 1Н), 2,67 (з, 3Н), 2,79 (й, 1=9,6 Гц, 1Н), 3,07 (з, 3Н), 3,13 (й, 1=12,5 Гц, 1Н), 3,25 (з, 3Н), 3,303,42 (т, 3Н), 3,48 (й, 1=9,0 Гц, 1Н), 3,54-3,66 (т, 2Н), 3,94 (з, 3Н), 4,02-4,12 (т, 1Н), 4,27 (р, 1=7,1 Гц, 1Н), 4,38 (р, 1=7,1 Гц, 1Н), 4,52 (йй, 1=11,9, 2,8 Гц, 1Н), 5,31 (ц, 1=6,8 Гц, 1Н), 5,56 (йй, 1=13,5, 9,1 Гц, 1Н), 5,92 (з, 1Н), 6,48-6,60 (т, 3Н), 6,87 (з, 1Н), 7,09 (й, 1=8,3 Гц, 2Н), 7,15 (з, 1Н), 7,50 (й, 1=8,3 Гц, 2Н), 8,08 (йй, 1=10,2, 7,1 Гц, 2Н), 9,85 (з, 1Н).
13С ЯМР (101 МГц, ДМСО) δ 172,23, 171,71, 171,00, 170,57, 170,54, 168,09, 155,25, 151,23, 141,26, 141,23, 138,30, 137,59, 133,22, 132,58, 128,92, 128,45, 125,14, 121,58, 119,03, 117,14, 113,89, 88,20, 79,98, 77,63, 73,15, 66,76, 59,98, 56,53, 56,10, 51,64, 48,94, 48,27, 45,42, 37,70, 36,34, 35,17, 34,88, 33,68, 33,33, 31,91, 29,68, 29,52, 25,97, 23,44, 18,04, 17,90, 15,02, 14,40,13,05, 11,37.
НКМ8 (т/ζ): [М+Н]+, рассчитанный для С52Н71СШ6О1382№, 1109,4107; обнаружено 1109,4082.
Н8-Ь-А1а-О-А1а-РАБ-ОМ1.
1Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-й6) δ 0,76 (з, 3Н), 1,12 (й, 1=6,3 Гц, 3Н), 1,16 (й, 1=6,7 Гц, 3Н), 1,21 (й, 1=7,1 Гц, 3Н), 1,31 (й, 1=7,0 Гц, 3Н), 1,39-1,50 (т, 2Н), 1,58 (з, 3Н), 1,75 (р, 1=7,2 Гц, 2Н), 2,03 (йй, 1=14,4,
2.8 Гц, 1Н), 2,19 (1, 1=6,0 Гц, 1Н), 2,24 (1, 1=7,3 Гц, 2Н), 2,33-2568 (т, 3Н), 2,59-2,71 (т, 1Н), 2,79 (й, 1=9,8 Гц, 1Н), 3,08 (з, 3Н), 3,12 (й, 1=12,7 Гц, 1Н), 3,25 (з, 3Н), 3,32-3,42 (т, 2Н), 3,48 (й, 1=9,0 Гц, 1Н), 3,54-3,66 (т,2Н), 3,93 (з, 3Н), 4,06 (1, 1=11,4 Гц, 1Н), 4,23 (р, 1=6,9 Гц, 1Н), 4,36 (р, 1=7,2 Гц, 1Н), 4,52 (йй, 1=11,9,
2.9 Гц, 1Н), 5,30 (ц, 1=6,8 Гц, 1Н), 5,56 (йй, 1=13,5, 9,2 Гц, 1Н), 5,92 (з, 1Н), 6,48 -6,54 (т, 2Н), 6,56 (з, 2Н),
6,87 (з, 1Н), 7,10 (й, 1=8,3 Гц, 2Н), 7,12-7,17 (т, 1Н), 7,56 (йй, 1=8,6, 2,6 Гц, 2Н), 8,18 (й, 1=6,4 Гц, 1Н), 8,36 (1, 1=6,5 Гц, 1Н), 9,68 (з, 1Н).
13С ЯМР (101 МГц, ДМСО) δ 172,48, 172,01, 171,99, 170,93, 170,55, 168,09, 155,25, 151,23, 141,25, 138,34, 137,45, 133,32, 132,59, 128,87, 128,84, 128,44, 125,12, 121,57, 119,23, 117,13, 113,88, 88,22, 79,98, 77,62, 73,16, 66,76, 59,98, 56,52, 56,10, 51,64, 48,95, 48,74, 45,43, 37,71, 36,35, 35,17, 34,86, 33,45, 33,34, 31,91, 29,68, 29,50, 25,96, 23,39, 17,89, 17,53, 15,02, 14,40, 13,06, 11,38.
НКМ8 (т/ζ): [М+Н]+, рассчитанный для С52Н71СШ6О1382№, 1109,4107; обнаружено 1109,4078.
- 74 029797
Н8-0-А1а-Е-А1а-РАВ-ЭМ1.
1Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-бе) δ 0,77 (з, 3Н), 1,12 (б, 1=6,4 Гц, 3Н), 1,16 (б, 1=6,8 Гц, 3Н), 1,21 (б, 1=7,0 Гц, 3Н), 1,31 (б, 1=7,1 Гц, 3Н), 1,44 (!б, 1=10,7, 9,9, 5,6 Гц, 2Н), 1,58 (з, 3Н), 1,75 (р, 1=7,1 Гц, 2Н), 2,03 (бб, 1=14,5, 2,9 Гц, 1Н), 2,24 (ΐ, 1=7,3 Гц, 2Н), 2,31 -2,49 (т, 2Н), 2,58-2,72 (т, 1Н), 2,67 (з, 3Н), 2,78 (б, 1=9,6 Гц, 1Н), 3,07 (з, 3Н), 3,09-3,16 (т, 2Н), 3,25 (з, 3Н), 3,36-3,43 (т, 3Н), 3,48 (б, 1=9,0 Гц, 1Н), 3,533,67 (т, 2Н), 3,93 (з, 3Н), 4,01-4,12 (т, 1Н), 4,24 (ф 1=6,7 Гц, 1Н), 4,36 Щб, 1=7,8, 5,9 Гц, 1Н), 4,52(бб, 1=12,0, 2,9 Гц, 1Н), 5,30 (ф 1=6,7 Гц, 1Н), 5,56 (бб, 1=13,4, 9,0 Гц, 1Н), 5,92 (з, 1Н), 6,47-6,61 (т, 4Н), 6,87 (з, 1Н), 7,10 (бб, 1=8,5, 2,3 Гц, 2Н), 7,14-7,18 (т, 1Н), 7,56 (бб, 1=8,6, 2,4 Гц, 2Н), 8,17 (б, 1=6,4 Гц, 1Н), 8,36 (бб, 1=7,5, 5,1 Гц, 1Н), 9,68 (б, 1=4,7 Гц, 1Н).
13С ЯМР (101 МГц, ДМСО) δ 172,42, 171,95, 170,91, 170,53, 168,08, 155,23, 151,20, 141,23, 138,31, 137,42, 133,35, 132,56, 128,86, 128,44, 125,11, 121,56, 119,20, 117,10, 113,88, 99,50, 88,19, 79,96, 77,61, 73,14, 66,74, 59,98, 56,52, 56,09, 51,62, 48,91, 48,68, 37,68, 35,17, 34,83, 33,44, 31,91, 29,67, 29,48, 25,98,
23,36, 17,90, 17,56, 15,01, 14,39, 13,04, 11,35.
НКМ8 (т/ζ): [М+Н]+, рассчитанный для С52Н71С1К601382Ка, 1109,4107; обнаружено 1109,4078.
Н8-О-А1а-О-А1а-РАВ-ЭМ1.
'Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-б6) δ 3,69 (б, 1=5,8 Гц, 2Н), 3,78 (б, 1=5,4 Гц, 2Н), 3,89 (б, 1=5,7 Гц, 2Н),
4,23 (б, 1=6,2 Гц, 1Н), 4,29 (б, 1=7,0 Гц, 2Н), 4,42 (б, 1=4,3 Гц, 2Н), 5,10 (б, 1=5,0 Гц, 1Н), 7,23 (б, 1=8,3 Гц, 2Н), 7,32 (ΐ, 1=7,4 Гц, 2Н), 7,41 (ΐ, 1=7,4 Гц, 2Н), 7,55 (б, 1=8,3 Гц, 2Н), 7,57-7,64 (т, 1Н), 7,71 (б, 1=7,4 Гц, 2Н), 7,89 (б, 1=7,5 Гц, 2Н), 8,24 (ΐ, 1=5,4 Гц, 2Н), 9,76 (з, 1Н).
НКМ8 (т/ζ): [М+Н]+, рассчитанный для С52Н71С1К601382Ка, 1109,4107; обнаружено 1109,4073.
Пример 11. Получение конъюгата.
Получение конъюгата НиМЬ66-3а.
Приготовили 22 мМ маточный раствор сульфо-ОМВ8 линкера (1а, производство Р|егсе) в диметилацетамиде и 3,7 мМ маточный раствор соединения 2 в диметилацетамиде. Линкер (1,5 мМ) и майтанзиноид-тиол (2,0 мМ) взаимодействовали в 60% диметилацетамиде, 40% 10 мМ сукцината, рН 5, в течение 5 мин при комнатной температуре. Образование тиоэфира подтвердили исчезновением поглощения при ~290 нм в УФ-видимом спектре, соответствующего завершению реакции малеимидной группы линкера.
Добавление 8 мольных эквивалентов ίη зйи приготовленного соединения 40 к 10 мг антитела 1шМЕ66 (2,5 мг/мл) в буфере 50 мМ ЕРР8 (4-(2-гидроксиэтил)пиперазин-1-пропансульфоновой кислоты), рН 8, выполнили при конечной концентрации диметилацетамида, об./об., 10%. Реакция протекала в течение ночи при комнатной температуре, с последующим обессоливанием на колонках КАР (Шиз1га 8ерНабех 0-25 марки ДНК, ОЕ НеаЙЪсаге), уравновешенных в РВ8 с рН 7,4, для удаления не конъюгированного майтанзиноида. Затем выполнили диализ конъюгата в 10 мМ гистидина, 250 мМ глицина, 1% сахарозы с рН 5,5 при 4°С, используя диализные кассеты 81^бе-а-^уζе^ (Тйегто 8аепййс, номинальное отсечение по молекулярной массе 20000).
Очищенный конъюгат имел в среднем 4,5 молекулы майтанзиноида, связанных с одним антителом (по УФ-видимому анализу с использованием молярных коэфициентов экстинкции ε252 нм 3874 см-1М-1 и ε280 нм = 9230 см-1М-1 для соединения 5 и ε280 нм = 205520 см-1М-1 и ε252 нм = 72754 см-1М-1 для антитела йиМЕ66), 97% мономера (по эксклюзионной хроматографии), 1,4% не конъюгированного майтанзиноида (по хроматографии в смешанном режиме Ш8ЕР), конечную концентрацию белка 1,1 мг/мл и общий выход белка 66%.
Получение йиС242-3Ь.
Приготовили 18 мМ маточный раствор линкера 8МСС (Р1егсе) в диметилацетамиде и 3,5 мМ маточный раствор соединения 2 в диметилацетамиде. Линкер (1,5 мМ) и майтанзиноид-тиол (2,0 мМ) взаимодействовали в 60% диметилацетамиде, 40% 10 мМ сукцината, рН 5, в течение 5 мин при комнатной температуре. Образование тиоэфира подтвердили исчезновением поглощения при ~302 нм в УФвидимом спектре, соответствующего завершению реакции малеимидной группы линкера.
Добавление 8 мольных эквивалентов ίη зйи приготовленного соединения 41 к 10 мг антитела 1шС242 (2,5 мг/мл) в буфере 50 мМ ЕРР8 (4-(2-гидроксиэтил)пиперазин-1-пропансульфоновой кислоты), рН 8, выполнили при конечной концентрации диметилацетамида, об./об., 20%. Реакция протекала в течение ночи при комнатной температуре, с последующим обессоливанием на колонках КАР (Шиз1га 8ерНабех 0-25 марки ДНК, ОЕ НеаЙЪсаге), уравновешенных в РВ8 с рН 7,4, для удаления не конъюгированного майтанзиноида. Затем выполнили диализ конъюгата в 10 мМ гистидина, 250 мМ глицина, 1% сахарозы с рН 5,5 при 4°С, используя диализные кассеты 81^бе-а-^уζе^ (Тйегто 8аепййс, номинальное отсечение по молекулярной массе 20000).
Очищенный конъюгат имел в среднем 3,3 молекулы майтанзиноида, связанных с одним антителом (по УФ-видимому анализу с использованием молярных коэфициентов экстинкции ε252 нм 3874 см-1М-1 и ε280 нм=9230 см-1М-1 для соединения 5 и ε280 нм=217560 см-1М-1 и ε252 нм=80062 см-1М-1 для антитела йиМЕ66), 95% мономера (по эксклюзионной хроматографии), <1% не конъюгированного майтанзиноида (по хроматографии в смешанном режиме Ш8ЕР), конечную концентрацию белка 0,9 мг/мл и общий выход белка 54%.
- 75 029797
Получение НиЕСРК-7К-3а.
Приготовили 20 мМ маточный раствор линкера сульфо-СМΒδ (Р1егсе) в диметилацетамиде и 2,3 мМ маточный раствор Ж^С-РАВ-ЭМ1 в диметилацетамиде. Линкер (1,5 мМ) и майтанзиноид-тиол (2,0 мМ) взаимодействовали в 60% диметилацетамиде, 40% 10 мМ сукцината, рН 5, в течение 5 мин при комнатной температуре. Образование тиоэфира подтвердили исчезновением поглощения при ~290 нм в УФ-видимом спектре, соответствующего завершению реакции малеимидной группы линкера.
Добавление 6 мол.экв. (в пересчете на линкер) ГО 81(и приготовленного соединения 89 к 7,5 мг антитела НцЕСРК-7К (2,5 мг/мл) в буфере 50 мМ ΕΡΡδ (4-(2-гидроксиэтил)пиперазин-1-пропансульфоновой кислоты), рН 8, выполнили при конечной концентрации диметилацетамида, об./об., 15%. Реакция протекала в течение 4 ч при комнатной температуре, с последующим обессоливанием на колонках ΝΑΡ (Ши81га δеρНайеχ С-25 марки ДНК, СЕ Иеа1(Нсаге). уравновешенных в ΡΒδ с рН 7,4, для удаления не конъюгированного майтанзиноида. Затем выполнили диализ конъюгата в 10 мМ сукцината, 250 мМ глицина, 0,5% сахарозы, 0,01% ТВИН-20 с рН 5,5 при 4°С, используя диализные кассеты δ1^йе-а-^уζе^ (ТНегто δ^πΗΙΆ номинальное отсечение по молекулярной массе 20000).
Очищенный конъюгат имел в среднем 4,2 молекулы майтанзиноида, связанных с одним антителом (по УФ-видимому анализу с использованием молярных коэфициентов экстинкции ε252 нм=33874 см-1М-1 и ε280 нм=9230 см-1М-1 для соединения 5 и ε280 нм=213445 см-1М-1 и ε252 нм=72521 см-1М-1 для антитела НиМЬ66), 95,5% мономера (по эксклюзионной хроматографии), 1,4% не конъюгированного майтанзиноида (по хроматографии в смешанном режиме ШЖР), конечную концентрацию белка 0,96 мг/мл и общий выход белка 60%.
Пример 12. ГО уйго расщепление конъюгата НиС242-3Ь катепсином В.
Конъюгат НиС242-3Ь (4,6 мкМ) инкубировали с 0,9 мкМ катепсина В (бычья селезенка; ЕМО Вюхаепсех) в буфере с рН 6,0, содержащем 0,6 мМ СаС12/М§С12 и 2 мМ ΌΤΤ (дитиотреитол) при 37°С. В различные временные точки (0,1, 3, 8, 17 и 26 ч) взяли алкивоты по 100 мкл и количественно измерили содержание свободных майтанзиноидов, используя хроматографический способ смешанного режима (Р1етГО§ е( а1., Апа1у(1са1 ВюсНет18(гу, 2005, 340, 272). Вкратце, для анализа конъюгатов АЬ-ЭМ1 использовали ΗIδЕΡ-экранированную гидрофобно-фазовую колонку (размер частиц 5 мкм, длина 4,6x250 мм, δиρе1сο, Беллефонт, штат Пенсильвания, США). Обнаружение выполнили при 252 и 280 нм (выделили из спектра фотодиодной матрицы). Скорость потока составила 0,7 мл/мин. Подвижная фаза А состояла из 100 мМ ацетата аммония (рН 7,0). Подвижной фазой В был 100% ацетонитрил. Колонку уравновесили при 25% В, затем линейным градиентом за 25 мин до 40% В после ввода образца. Неповрежденный конъюгат элюируется между 2- и 5-й мин, тогда как единственный высвобожденный метаболит 5 обнаружили при времени удерживания 21 мин. Последующий анализ фракции пика 21 мин по масс-спектроскопии показал основной ион 865 т/ζ, соответствующий (М+Νη)' для "42Η55"1Ν4Ο10δ. Синтезированное соединение 5 имело такое же время удерживания и масс-спектр, как и этот метаболит.
Пример 13. ГО уйго цитотоксический анализ на опухолевых клетках.
Активность линкера настоящего изобретения испытали при помощи античеловеческого антитела ЕСРК (НиЕСРК-7К (смотри предварительные заявки на патент США №61/408497, поданную 29 октября 2010 года и 61/477086, поданную 19 апреля 2011 года)) в ГО уйго анализе цитотоксичности. Вкратце, клетки-мишени поместили на планшеты в количестве 1500-3000 клеток на лунку в 100 мкл полной среде КРМЕ содержащей 10% ΡΒδ. Исследуемые образцы разбавили в полной среде КРМЕ используя 5-кратные серии разбавлений, и 100 мкл добавили в каждую лунку. Конечная концентрация обычно находилась в диапазоне от 3х10-8 до 8х10-14 М. Клетки инкубировали при 37°С в увлажненном инкубаторе с 5% СО2 в течение 5 дней. Жизнеспособность оставшихся клеток определили колориметрическим анализом νδΤ-8 и измерили поглощение при 450 нм (А450) в многолуночном планшет-ридере. Выжившую фракцию рассчитали, разделив значение каждого обработанного бразца на средний объем не обработанных контрольных образцов. Значение выжившей фракции нанесли на полулогарифмический график зависимости от концентрации конъюгата антитела для каждой обработки. ГО уйго цитотоксичность конъюгатов антитела-майтанзиноида настоящего изобретения сравнили с активностью ненагруженного антитела. Результаты стандартного анализа цитотоксичности показаны на фиг. 14.
В клеточной линии Οδ"-19 плоскоклеточной карциномы головы и шеи (δ""ΗΝ) (фиг. 14А), которая экспрессировала 0,457 миллионов антигенов ЕСРК на клетку (АВС), конъюгаты майтанзиноида существенно усилили противоопухолевую активность ненагруженного антитела НиЕСРК-7К.
Точно так же в клеточных линиях СА-922 и δΑδ δ""ΗΝ, которые экспрессировали 1 и 0,162 миллиона АВС, соответственно (фиг. 14В и 14С), конъюгат НиЕСРК-7К с линкером 3а оказался высокоэффективным со значением ЕС50 0,034 и 0,086 нМ соответственно. Даже в клеточной линии слабо экспрессирующей антиген, такой как Η1975 немелкоклеточного рака легких (№СЬС), которая экспрессировала 49000 РВС (фиг. 14Ό), конъюгат НиЕСРК-7К-3а оказался очень эффективным со значением ЕС50 0,18 нМ. Все вместе эти результаты показывают, что линкер 3 а является высокоэффективным в раковых клеточных линиях δ""ΗΝ и №СЬС, которые являются относительно устойчивыми к другим конъюгатам майтанзиноида.
- 76 029797
Пример 14. Ш υιΙιό анализ цитотоксичности конъюгатов с неприродными аминокислотными линкерами.
Ш υιΙιό цитотоксичность конъюгата ЕСРК-7К-А1а-А1а-РАВ-ОМ1 (ЕСРК-7К-3с) сравнили с аналогичным параметром конъюгатов ЕСРК-7К-3а и ΕΟΡΚ-7Κ-8ΡΏΒ-ΏΜ4. На фиг. 26А-26Р показано, что стереохимия, похоже, в некоторой степени влияет на эффективность и что изомер (Е,Б), кажется, является наиболее эффективным, за ним следует (Ώ,Ε) изомер, затем (Ε,Ώ) изомер и, наконец, (Ώ,Ώ) изомер.
Пептидные линкеры, содержащие Ώ-аминокислоту, и пептидные линкеры, содержащие только [.-изомеры, но с природными или неприродными боковыми цепями могут лучше переноситься т \ί\ό. Поэтому конъюгаты с такими линкерами могут обладать улучшенной переносимостью, сохраняя при этом большую часть (если не всю) цитотоксичность в отношении опухолевых клеток, наблюдаемую в конъюгатах тАЬ-Е-А1а-Е-А1а-РАВ-ПМ1 или тАЬ-ЕЖа1-Е-СД-РАВ-ПМ1 (АЬ-3а).
Пример 15. Ή \ί\ό исследование эффективности.
Для дальнейшего испытания активности конъюгата ЕиЕСРК-7К-3а этот конъюгат сравнили с ненагруженным антителом ЕиЕСРК-7К в экспрессирующем ЕСРК ксенотрансплантате плоскоклеточной карциномы головы и шеи РаОн (фиг. 15). Около 1х107 опухолевых клеток ввели подкожной инъекцией мышам 8СГО. Животных рандомизировали по объему опухоли на группы лечения, когда опухоли достигли среднего объема опухоли приблизительно 100 мм3, и ввели им однократную инъекцию указанной дозы ненагруженного антитела или конъюгатов антитела и майтанзиноида. Средний объем опухоли в каждой группе лечения нанесли на график в зависимости от времени после инокуляции опухолевых клеток (фиг. 15). В табл. 1 показано количество мышей с полной ремиссией (ПР) (отсутствие пальпируемой опухоли) и процент ингибирования роста опухоли (% Т/С), который соответствует среднему объему опухоли в каждой группе лечения, деленному на средний объем опухоли в контрольной группе, когда объем опухоли в контрольной группе достигает заданного размера. Лечение, при котором значение % Т/С составляет менее 42%, считали активным, тогда как лечение, при котором значение % Т/С составляет менее 12%, считали высокоактивным.
Конъюгат Ьи ЕС Р К-7 К-3 а был существенно более активным, чем ненагруженное антитело ЕиЕСРК-7К, с полной ремиссией у 3 из 6 мишей и Т/С 7%. Этот результат демонстрирует высокую эффективность конъюгата ЕиЕСРК-7К-3а при ингибирование роста опухоли РаОн т \г\о.
Таблица 1
Активность ЕСРК АЬ и конъюгатов майтанзиноида в ксенотрансплантате опухоли РаРи
Антитело и конъюгат % Т/С ПР
ΙηιΕΟΡК-7К АЪ 5 мг/кг 44% 0/6
ЪиЕОРК-7К-За 2,5 мг/кг 7% 3/6
В другом эксперименте иллюстративные человеческие анти-СО20 антитела (антитела йиСО20-7) и их конъюгаты испытали в модели ксенотрансплантата, используя клетки фолликулярной лимфомы ООНН-2, имплантированные подкожно мышам 8СГО. Мышей рандомизировали по весу тела на группы лечения и лечили однократно на 11 день после клеточной инокуляции введением 5 мг/кг йиСО20-7, ЕиСП20-7-СХ1-1-ПМ1 или НиСО20-7-3а. Средний объем опухоли в различных группах обработки нанесли на график на фиг. 24. Лечение антителом йиСО20-7 привело к снижению среднего объема опухоли по сравнению с РВ8 контрольным образцом, со значением %Т/С 11%, на 25 день. Существенно более высокую эффективность наблюдали для конъюгатов ЕиСО20-7-3а по сравнению с не конъюгированным антителом, со значением %Т/С 1% на 25 день. На 76 день исследования лечение йиСО20-7 привело к частичной ремиссии у 3 из 8 животных и к полной ремиссии у 1 из 8 животных. Напротив, лечение йиСО20-73а привело к частичной ремиссии у 7 из 8 животных и к полной ремиссии у 5 из 8 животных. Ремиссию не наблюдали в РВ8 контрольной группе. Результаты представлены ниже в табл. 2.
Таблица 2
Активность йиСО20-7 АЬ и его майтанзиноидных конъюгатов в модели ксенотрансплантата
Доза %Т/С 625 РК 676 СК 676 Вывод
Носитель (РВ8) - - -
ЪиСО20-7 5 мг/кг 11% 3/8 1/8 активный
ЪиСО20-7СХ1-1-ОМ1 5 мг/кг 16% 1/8 0/8 активный
ЪиСО20-7-За 5 мг/кг 1% 7/8 5/8 высокоактивный
- 77 029797
ϋΜ
ЧР - частичная ремиссия;
ПР - полная ремиссия;
%Т/С - уменьшение роста опухоли, лечение/контроль;
625 - на 25 день;
676 - на 76 день.
Структура конъюгата ЬиСО20-7-СХ1-1-ПМ1 показана ниже.
АЬ·
*
АЬ-СХ1-1-ОМ1
- 78 029797
Перечень последовательностей
<110> ИММУНОДЖЕН, ИНК.
<120> НОВЫЕ ПРОИЗВОДНЫЕ МАЙТАНЗИНОИДА С ПЕПТИДНЫМ ЛИНКЕРОМ И ИХ КОНЪЮГАТЫ
<130> 121162-00620
<140> РСТ/и312/43488
<141> 2012-06-21
<150> 61/499548
<151> 2011-06-21
<160> 3
<170> Патент, версия 3.5
<210> 1
<211> 4
<212> БЕЛОК
<213> Искусственая последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический пептид
<400> 1
А1а Ьеи А1а Ьеи
1
<210> 2
<211> 4
<212> БЕЛОК
<213> Искусственая последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический пептид
<220> <221> МОБ_КЕБ
<222> <223> (1)..(1) бета-Аланин
<400> 2
ЬА1а : Ееи А1а Ьеи
1
<210> 3
<211> 4
<212> БЕЛОК
<213> Искусственая последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: синтетический пептид
<400> 3
О1у РЬе Ьеи О1у 1
- 79 029797

Claims (15)

  1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
    1. Конъюгат клеточно-связывающего агента и цитотоксического средства, представленный следующей структурной формулой:
    я (I)
    или его фармацевтически приемлемая соль,
    где СВ представляет собой антитело и включает -ИН-группу, которая ковалентно связана с Б2; Б2 представлен следующей структурной формулой:
    где Кх, Ку, Кх' и Ку', все, представляют собой Н;
    1 и к, каждый независимо, представляют собой 0 или целое число от 1 до 10; ς представляет собой целое число от 1 до 20;
    А представляет собой аминокислоту или пептид, содержащий от 2 до 20 аминокислот; -Ζ-Χ-БгБ представлен одной из следующих структурных формул:
    при этом Мау представлен следующей структурной формулой:
    К1, К2, Ка и Кь, каждый независимо, представляют собой Н или С1-4алкил; т2 и п2, каждый независимо, представляют собой целое число от 1 до 6.
  2. 2. Конъюгат по п.1, отличающийся тем, что А представляет собой пептид, расщепляемый протеазой, которая экспрессируется в опухолевой ткани.
  3. 3. Конъюгат по п.1 или 2, отличающийся тем, что А выбран из группы, состоящей из Уа1-Сй, Уа1Буз, Рке-Буз, Буз-Буз, А1а-Буз, Рке-Сй, Беи-Сй, к1е-Сй, Тгр, Сй, Рке-А1а, Рке-И9-тозил-Агд, Рке-Ν9нитро-Агд, Рке-Рке-Буз, Б-Рке-Рке-Буз, О1у-Рке-Буз, Беи-А1а-Беи, Ие-А1а-Беи, Уа1-А1а-Уа1, А1а-Беи-А1аБеи (δΕς Ю ΝΟ: 1), 3-А1а-Беи-А1а-Беи (δΕς Ю ΝΟ: 2), О1у-Рке-Беи-О1у (δΕς Ю ΝΟ: 3), Уа1-Агд, АгдУа1, Агд-Агд, Уа1-Б-Сй, Уа1-Б-Буз, Уа1-Б-Агд, Б-Уа1-Сй, Б-Уа1-Буз, Б-Уа1-Агд, Б-Уа1-Б-Сй, Б-Уа1-ББуз, Б-Уа1-Б-Агд, Б-Агд-Б-Агд, А1а-А1а, А1а-Б-А1а, Б-А1а-А1а и Б-А1а-Б-А1а.
  4. 4. Конъюгат по любому из пп.1-3, отличающийся тем, что оба Ка и Кь представляют собой метил; оба К1 и К2 представляют собой Н и п равен 1 или оба К1 и К2 представляют собой метил и п равен 2.
  5. 5. Конъюгат по п.1, где конъюгат представлен любой из следующих структурных формул:
    - 80 029797
    - 81 029797
    или его фармацевтически приемлемой солью,
    где ΏΜ представлен следующей структурной формулой:
  6. 6. Соединение, представленное следующей структурной формулой:
    ζ—Х-|_ГО(П),
    или его соль,
    где соединение формулы (II) представлено одной из следующих структурных формул:
    при этом Мау представлен следующей структурной формулой:
    т2 и п2, каждый независимо, представляют собой целое число от 1 до 10.
  7. 7. Соединение, представленное следующей структурной формулой:
    Ь2--Α—Ζ-Χ-ίι'(ΙΙΙ),
    или его соль,
    где Ь2' представлен одной из следующих структурных формул:
    где 1СВ' представляет собой -СООН или -СОЕ, при этом -СОЕ представляет собой реакционноспособный сложный эфир, выбранный из Ν-гидроксисукцинимидного эфира, Νгидроксисульфосукцинимидного эфира, нитрофенилового эфира, динитрофенилового эфира, сульфотетрафторфенилового эфира и пентафторфенилового эфира;
    КХ, Ку, КХ и Ку, все, представляют собой Н;
    1 и к, каждый независимо, представляют собой 0 или целое число от 1 до 10;
    А представляет собой аминокислоту или пептид, содержащий от 2 до 20 аминокислот;
    -Ζ^-Ει' представлен одной из следующих структурных формул:
    - 82 029797
    где Ιο' представляет собой -δί I. -δ-δ(=Θ)-Κά, δ-δ(=О)2Κά. -δδΚά, при этом Κά выбран из фенила, нитрофенила, динитрофенила, карбоксинитрофенила. пиридила или нитропиридила;
    т2 и п2, каждый независимо, представляют собой целое число от 1 до 6.
  8. 8. Соединение, представленное следующей структурной формулой:
    1-2 Α—Ζ-χ-|_-ϋ (IV),
    или его соль,
    где Ь2' представлен одной из следующих структурных формул:
    где 1СВ' представляет собой -СООН или -СОЕ, при этом -СОЕ представляет собой реакционноспособный сложный эфир, выбранный из Ν-гидроксисукцинимидного эфира, Νгидроксисульфосукцинимидного эфира, нитрофенилового эфира, динитрофенилового эфира, сульфотетрафторфенилового эфира и пентафторфенилового эфира;
    КХ, Ку, КХ и Ку, все, представляют собой Н;
    1 и к, каждый независимо, представляют собой 0 или целое число от 1 до 10;
    А представляет собой аминокислоту или пептид, включающий от 2 до 20 аминокислот;
    -Ζ-Χ-Ε|-Ι) представлен одной из следующих структурных формул:
    при этом Мау представлен следующей структурной формулой:
    К1, К2, Ка и Кь, каждый независимо, представляют собой Н или С1-4алкил; т2 и п2, каждый независимо, представляют собой целое число от 1 до 6.
  9. 9. Соединение по любому из пп.6 или 8, отличающееся тем, что оба Ка и Кь представляют собой метил; оба К1 и К2 представляют собой Н и т2 или п2 равен 1 или оба К1 и К2 представляют собой метил и т2 или п2 равен 2.
  10. 10. Соединение по любому из пп.7 или 8, отличающееся тем, что А представляет собой пептид, расщепляемый протеазой, которая экспрессируется в опухолевой ткани.
  11. 11. Соединение по любому из пп.7, 8 или 10, отличающееся тем, что А выбран из группы, состоящей из Vа1-С^ΐ. Vа1-^уз. РЬе-Буз, Буз-Буз, А1а-Буз, РЬе-Сй, ^еи-С^ΐ. В1е-СгС Тгр, Сг£, РИе-Акк Рйе-Ν9тозил-Агд, Ρйе-N9-нитро-А^д. Ρйе-Ρйе-^уз. ^-Ρйе-Ρйе-^уз. Θ1у-Ρйе-^уз. ^еи-А1а-^еи. I1е-А1а-^еи. Vа1- 83 029797
    А1а-Уа1, А1а-Ьеи-А1а-Ьеи (δΕρ II) ^: 1), р-А1а-Ьеи-А1а-Ьеи (δΕρ II) ^: 2), О1у-РЬе-Ьеи-О1у (δΕρ II) ^: 3), Уа1-Агд, Агд-Уа1, Агд-Агд, Уа1-О-Сй, Уа1-О-Ьуз, Уа1-О-Агд, О-Уа1-Сй, О-Уа1-Ьуз, О-Уа1-Агд, I)Уа1-О-Сй, П-Уа1-О-Ьуз, О-Уа1-0-Агд, Ώ-Агд-О-Агд, А1а-А1а, А1а-О-А1а, Э-А1а-А1а и П-А1а-Э-А1а.
  12. 12. Фармацевтическая композиция для лечения рака, содержащая конъюгат по любому из пп.1-5 и фармацевтически приемлемый носитель.
  13. 13. Способ лечения рака у млекопитающего, включающий введение указанному млекопитающему терапевтически эффективного количества конъюгата по любому из пп.1-5.
  14. 14. Способ по п.13, отличающийся тем, что рак выбран из рака молочной железы, рака толстой кишки, рака головного мозга, рака простаты, рака почки, рака поджелудочной железы, рака яичников, рака головы и шеи, меланомы, колоректального рака, рака желудка, плоскоклеточного рака, мелкоклеточного рака легких, немелкоклеточного рака легких, рака яичек, карциномы Меркеля, глиобластомы, нейробластомы и раковых заболеваний лимфатических органов.
  15. 15. Способ по п.13 или 14, отличающийся тем, что способ дополнительно включает введение указанному млекопитающему химиотерапевтического средства.
EA201490095A 2011-06-21 2012-06-21 Новые производные майтанзиноида с пептидным линкером и их конъюгаты EA029797B1 (ru)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201161499548P 2011-06-21 2011-06-21
PCT/US2012/043488 WO2012177837A2 (en) 2011-06-21 2012-06-21 Novel maytansinoid derivatives with peptide linker and conjugates thereof

Publications (2)

Publication Number Publication Date
EA201490095A1 EA201490095A1 (ru) 2014-05-30
EA029797B1 true EA029797B1 (ru) 2018-05-31

Family

ID=46889411

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA201792652A EA201792652A3 (ru) 2011-06-21 2012-06-21 Новые производные майтанзиноида с пептидным линкером и их конъюгаты
EA201490095A EA029797B1 (ru) 2011-06-21 2012-06-21 Новые производные майтанзиноида с пептидным линкером и их конъюгаты

Family Applications Before (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA201792652A EA201792652A3 (ru) 2011-06-21 2012-06-21 Новые производные майтанзиноида с пептидным линкером и их конъюгаты

Country Status (14)

Country Link
US (2) US9289512B2 (ru)
EP (1) EP2723389A2 (ru)
JP (2) JP6209159B2 (ru)
KR (1) KR20140037208A (ru)
CN (1) CN103648532A (ru)
AU (1) AU2012272930B2 (ru)
BR (1) BR112013032928A2 (ru)
CA (1) CA2836927A1 (ru)
EA (2) EA201792652A3 (ru)
IL (2) IL230043A (ru)
MX (1) MX350954B (ru)
SG (2) SG195172A1 (ru)
WO (1) WO2012177837A2 (ru)
ZA (1) ZA201308703B (ru)

Families Citing this family (44)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2006012527A1 (en) 2004-07-23 2006-02-02 Endocyte, Inc. Bivalent linkers and conjugates thereof
EP2489372A3 (en) 2007-03-14 2013-01-02 Endocyte, Inc. Binding ligand linked drug delivery conjugates of tubulysins
US9877965B2 (en) 2007-06-25 2018-01-30 Endocyte, Inc. Vitamin receptor drug delivery conjugates for treating inflammation
CA2690943A1 (en) 2007-06-25 2008-12-31 Endocyte, Inc. Conjugates containing hydrophilic spacer linkers
CN103648532A (zh) 2011-06-21 2014-03-19 伊缪诺金公司 具有肽连接子的新型美登木素生物碱衍生物及其偶联物
US10080805B2 (en) 2012-02-24 2018-09-25 Purdue Research Foundation Cholecystokinin B receptor targeting for imaging and therapy
US20140080175A1 (en) 2012-03-29 2014-03-20 Endocyte, Inc. Processes for preparing tubulysin derivatives and conjugates thereof
JP6239598B2 (ja) 2012-05-15 2017-11-29 ソレント・セラピューティクス・インコーポレイテッドＳｏｒｒｅｎｔｏ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ， Ｉｎｃ． 薬物複合体、複合体形成方法、およびその使用
WO2014062697A2 (en) 2012-10-16 2014-04-24 Endocyte, Inc. Drug delivery conjugates containing unnatural amino acids and methods for using
US9353150B2 (en) 2012-12-04 2016-05-31 Massachusetts Institute Of Technology Substituted pyrazino[1′,2′:1 ,5]pyrrolo[2,3-b]-indole-1,4-diones for cancer treatment
KR20150119848A (ko) 2012-12-21 2015-10-26 바이오얼라이언스 씨.브이. 친수성 자기-희생 링커 및 그것의 포합체
JP6847388B2 (ja) * 2013-03-15 2021-03-31 レゲネロン ファーマシューティカルス，インコーポレーテッド 生物活性分子、そのコンジュゲート、及び治療用途
US10208125B2 (en) 2013-07-15 2019-02-19 University of Pittsburgh—of the Commonwealth System of Higher Education Anti-mucin 1 binding agents and uses thereof
BR112016004023A2 (pt) 2013-08-26 2022-11-16 Regeneron Pharma Composição, métodos para preparar uma composição e para tratar uma doença, e, composto
CA2934030A1 (en) 2013-10-15 2015-04-23 Sorrento Therapeutics Inc. Drug-conjugates with a targeting molecule and two different drugs
CN106661124A (zh) 2014-06-20 2017-05-10 荷商台医(有限合伙)公司 抗叶酸受体α(FRA)抗体‑药物缀合物及其使用方法
CN106573077B (zh) 2014-06-30 2019-07-30 塔弗达治疗有限公司 靶向缀合物及其颗粒和制剂
RU2741470C9 (ru) 2014-09-02 2021-04-27 Иммьюноджен, Инк. Способы составления композиций конъюгата антитело-лекарственное средство
EP3218009B1 (en) 2014-10-14 2021-04-07 Polytherics Limited Process for the conjugation of a peptide or protein with a reagent comprising a leaving group including a portion of peg
CN107849090A (zh) 2015-01-28 2018-03-27 索伦托医疗有限公司 抗体药物偶联物
CN107995912A (zh) * 2015-03-27 2018-05-04 里珍纳龙药品有限公司 美登素类衍生物、其偶联物和使用方法
CN106380508A (zh) * 2015-07-28 2017-02-08 上海皓元生物医药科技有限公司 一种抗体偶联药物连接子的工业化生产方法
CA3001712A1 (en) 2015-10-28 2017-05-04 Tarveda Therapeutics, Inc. Sstr-targeted conjugates and particles and formulations thereof
KR20180117102A (ko) 2016-01-08 2018-10-26 바이오얼라이언스 씨.브이. 사가 항-psgl-1 항체 및 이들의 용도
AU2017211120C1 (en) 2016-01-25 2021-10-07 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Maytansinoid derivatives, conjugates thereof, and methods of use
AU2017213858A1 (en) * 2016-02-05 2018-08-16 Immunogen, Inc. Efficient process for preparing cell-binding agent-cytotoxic agent conjugates
WO2017197045A1 (en) 2016-05-11 2017-11-16 Movassaghi Mohammad Convergent and enantioselective total synthesis of communesin analogs
EP3515945A1 (en) * 2016-09-23 2019-07-31 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Anti-steap2 antibodies, antibody-drug conjugates, and bispecific antigen-binding molecules that bind steap2 and cd3, and uses thereof
US20180140703A1 (en) * 2016-11-18 2018-05-24 The Regents Of The University California Tumor radiosensitization with antibody conjugates
RU2022101392A (ru) 2017-02-28 2022-03-02 Иммуноджен, Инк. Производные майтанзиноида с саморасщепляющимися пептидными линкерами и их конъюгаты
US11932650B2 (en) 2017-05-11 2024-03-19 Massachusetts Institute Of Technology Potent agelastatin derivatives as modulators for cancer invasion and metastasis
CA3095067A1 (en) * 2017-06-19 2018-12-27 Sichuan Baili Pharm Co. Ltd An antibody-drug conjugate having an acidic self-stabilization junction
US10640508B2 (en) 2017-10-13 2020-05-05 Massachusetts Institute Of Technology Diazene directed modular synthesis of compounds with quaternary carbon centers
KR20240015162A (ko) 2018-12-21 2024-02-02 어비디티 바이오사이언시스 인크. 항트랜스페린 수용체 항체 및 이의 용도
CA3127113A1 (en) 2019-01-30 2020-08-06 Dongxu Sun Anti-gal3 antibodies and uses thereof
CN109939242B (zh) * 2019-03-18 2020-10-09 北京大学 抗体前药偶联物及其制备和应用
US11535634B2 (en) 2019-06-05 2022-12-27 Massachusetts Institute Of Technology Compounds, conjugates, and compositions of epipolythiodiketopiperazines and polythiodiketopiperazines and uses thereof
CN110501495A (zh) * 2019-08-27 2019-11-26 广东菲鹏生物有限公司 活化氨基固相颗粒与免疫氨基固相颗粒及其制备方法和应用及试剂盒
US11555190B2 (en) 2020-03-19 2023-01-17 Avidity Biosciences, Inc. Compositions and methods of treating Facioscapulohumeral muscular dystrophy
KR20220161378A (ko) 2020-03-27 2022-12-06 어비디티 바이오사이언시스 인크. 근이영양증의 치료용 조성물 및 방법
WO2022182415A1 (en) 2021-02-24 2022-09-01 Massachusetts Institute Of Technology Himastatin derivatives, and processes of preparation thereof, and uses thereof
BR112023018676A2 (pt) 2021-03-18 2023-10-10 Seagen Inc Conjugado anticorpo-fármaco, composição farmacêutica, métodos de tratamento de uma doença ou condição e de um câncer, e, composição de conjugado ligante-fármaco
WO2023288252A1 (en) 2021-07-13 2023-01-19 Truebinding, Inc. Methods of preventing protein aggregation
IL311452A (en) 2021-09-16 2024-05-01 Avidity Biosciences Inc Compositions and methods for the treatment of FSHD muscular dystrophy

Citations (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0425235A2 (en) * 1989-10-25 1991-05-02 Immunogen Inc Cytotoxic agents comprising maytansinoids and their therapeutic use
US5208020A (en) * 1989-10-25 1993-05-04 Immunogen Inc. Cytotoxic agents comprising maytansinoids and their therapeutic use
EP0624377A2 (en) * 1993-05-14 1994-11-17 Bristol-Myers Squibb Company Lysosomal enzyme-cleavable antitumor drug conjugates
WO2001024763A2 (en) * 1999-10-01 2001-04-12 Immunogen, Inc. Compositions and methods for treating cancer using immunoconjugates and chemotherapeutic agents
WO2005081711A2 (en) * 2003-11-06 2005-09-09 Seattle Genetics, Inc. Monomethylvaline compounds capable of conjugation to ligands
WO2005101017A1 (en) * 2004-04-07 2005-10-27 Genentech, Inc. Mass spectrometry of antibody conjugates
WO2006113623A2 (en) * 2005-04-15 2006-10-26 Immunogen, Inc. Elimination of heterogeneous or mixed cell population in tumors
US20080226659A1 (en) * 2000-03-16 2008-09-18 Sharon Erickson Methods of treatment using anti-erbb antibody-maytansinoid conjugates

Family Cites Families (57)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4307016A (en) 1978-03-24 1981-12-22 Takeda Chemical Industries, Ltd. Demethyl maytansinoids
US4256746A (en) 1978-11-14 1981-03-17 Takeda Chemical Industries Dechloromaytansinoids, their pharmaceutical compositions and method of use
JPS55102583A (en) 1979-01-31 1980-08-05 Takeda Chem Ind Ltd 20-acyloxy-20-demethylmaytansinoid compound
JPS55162791A (en) 1979-06-05 1980-12-18 Takeda Chem Ind Ltd Antibiotic c-15003pnd and its preparation
JPS5645483A (en) 1979-09-19 1981-04-25 Takeda Chem Ind Ltd C-15003phm and its preparation
EP0028683A1 (en) 1979-09-21 1981-05-20 Takeda Chemical Industries, Ltd. Antibiotic C-15003 PHO and production thereof
JPS5645485A (en) 1979-09-21 1981-04-25 Takeda Chem Ind Ltd Production of c-15003pnd
WO1982001188A1 (en) 1980-10-08 1982-04-15 Takeda Chemical Industries Ltd 4,5-deoxymaytansinoide compounds and process for preparing same
US4450254A (en) 1980-11-03 1984-05-22 Standard Oil Company Impact improvement of high nitrile resins
US4313946A (en) 1981-01-27 1982-02-02 The United States Of America As Represented By The Secretary Of Agriculture Chemotherapeutically active maytansinoids from Trewia nudiflora
US4315929A (en) 1981-01-27 1982-02-16 The United States Of America As Represented By The Secretary Of Agriculture Method of controlling the European corn borer with trewiasine
JPS57192389A (en) 1981-05-20 1982-11-26 Takeda Chem Ind Ltd Novel maytansinoid
US4894348A (en) * 1987-07-01 1990-01-16 Ronald Robert C Fluorescein-conjugated proteins with enhanced fluorescence
GB8801646D0 (en) * 1988-01-26 1988-02-24 Nycomed As Chemical compounds
US5171666A (en) * 1988-04-22 1992-12-15 Eli Lilly And Company Monoclonal antibodies reactive with a cell-surface gylcoprotein expressed on human carcinomas
GB9015198D0 (en) 1990-07-10 1990-08-29 Brien Caroline J O Binding substance
ATE463573T1 (de) 1991-12-02 2010-04-15 Medimmune Ltd Herstellung von autoantikörpern auf phagenoberflächen ausgehend von antikörpersegmentbibliotheken
CA2076465C (en) 1992-03-25 2002-11-26 Ravi V. J. Chari Cell binding agent conjugates of analogues and derivatives of cc-1065
US5639641A (en) 1992-09-09 1997-06-17 Immunogen Inc. Resurfacing of rodent antibodies
US6355780B1 (en) 1995-02-22 2002-03-12 Yeda Research And Development Co. Ltd. Antibodies to the death domain motifs of regulatory proteins
CA2297070A1 (en) 1997-08-01 1999-02-11 Morphosys Ag Novel method and phage for the identification of nucleic acid sequences encoding members of a multimeric (poly)peptide complex
US7115396B2 (en) 1998-12-10 2006-10-03 Compound Therapeutics, Inc. Protein scaffolds for antibody mimics and other binding proteins
JP2003514903A (ja) 1999-11-24 2003-04-22 イムノージェン インコーポレーテッド タキサンを含有する細胞傷害薬とその治療への利用
US6333410B1 (en) 2000-08-18 2001-12-25 Immunogen, Inc. Process for the preparation and purification of thiol-containing maytansinoids
US7417130B2 (en) 2000-09-08 2008-08-26 University Of Zurich Collection of repeat proteins comprising repeat modules
WO2002042259A2 (en) * 2000-11-27 2002-05-30 University Of Maryland, Baltimore Methods of synthesizing and using derivatives of [2-(2-aminoethoxy)ethoxy] acetic acid
US6441163B1 (en) 2001-05-31 2002-08-27 Immunogen, Inc. Methods for preparation of cytotoxic conjugates of maytansinoids and cell binding agents
US20050123536A1 (en) * 2001-11-20 2005-06-09 Che-Leung Law Treatment of immunological disorders using anti-dc30 antibodies
US6716821B2 (en) 2001-12-21 2004-04-06 Immunogen Inc. Cytotoxic agents bearing a reactive polyethylene glycol moiety, cytotoxic conjugates comprising polyethylene glycol linking groups, and methods of making and using the same
WO2003062198A1 (en) * 2002-01-24 2003-07-31 Barnes Jewish Hospital Integrin targeted imaging agents
US6756397B2 (en) 2002-04-05 2004-06-29 Immunogen, Inc. Prodrugs of CC-1065 analogs
DK1545613T3 (da) 2002-07-31 2011-11-14 Seattle Genetics Inc Auristatinkonjugater og deres anvendelse til behandling af cancer, en autoimmun sygdom eller en infektiøs sygdom
CA2494074A1 (en) 2002-08-02 2004-02-12 Immunogen, Inc. Cytotoxic agents containing novel potent taxanes and their therapeutic use
AU2003259163B2 (en) 2002-08-16 2008-07-03 Immunogen, Inc. Cross-linkers with high reactivity and solubility and their use in the preparation of conjugates for targeted delivery of small molecule drugs
JP5354835B2 (ja) 2002-11-07 2013-11-27 イミュノジェン・インコーポレーテッド 抗ｃｄ３３抗体、及びそれを用いた急性骨髄性白血病の治療方法
US8088387B2 (en) 2003-10-10 2012-01-03 Immunogen Inc. Method of targeting specific cell populations using cell-binding agent maytansinoid conjugates linked via a non-cleavable linker, said conjugates, and methods of making said conjugates
US7276497B2 (en) 2003-05-20 2007-10-02 Immunogen Inc. Cytotoxic agents comprising new maytansinoids
BRPI0510883B8 (pt) 2004-06-01 2021-05-25 Genentech Inc composto conjugado de droga e anticorpo, composição farmacêutica, método de fabricação de composto conjugado de droga e anticorpo e usos de uma formulação, de um conjugado de droga e anticorpo e um agente quimioterapêutico e de uma combinação
ES2579805T3 (es) 2004-09-23 2016-08-16 Genentech, Inc. Anticuerpos y conjugados modificados por ingeniería genética con cisteína
EP1817341A2 (en) 2004-11-29 2007-08-15 Seattle Genetics, Inc. Engineered antibodies and immunoconjugates
US7301019B2 (en) 2005-01-21 2007-11-27 Immunogen, Inc. Method for the preparation of maytansinoid esters
US7811572B2 (en) 2005-08-24 2010-10-12 Immunogen, Inc. Process for preparing purified drug conjugates
CA2597407C (en) 2005-02-11 2013-09-10 Immunogen, Inc. Process for preparing stable drug conjugates
US8846577B2 (en) 2005-07-08 2014-09-30 University Of Zurich Phage display using cotranslational translocation of fusion polypeptides
CA2617953C (en) 2005-08-09 2013-12-17 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Method of acylating maytansinol with chiral amino acids
JP5102772B2 (ja) 2005-11-29 2012-12-19 ザ・ユニバーシティ・オブ・シドニー デミボディ：二量体化活性化治療剤
WO2007098611A1 (en) 2006-03-03 2007-09-07 Queen's University At Kingston Compositions for treatment of cancer
WO2007147213A1 (en) 2006-06-22 2007-12-27 Walter And Eliza Hall Institute Of Medical Research Structure of the insulin receptor ectodomain
PE20090481A1 (es) * 2007-07-16 2009-05-18 Genentech Inc Anticuerpos anti-cd79b e inmunoconjugados humanizados y metodos de uso
CA2700391A1 (en) 2007-09-24 2009-04-02 University Of Zuerich Designed armadillo repeat proteins
CN104524590B (zh) * 2008-04-30 2019-06-21 伊缪诺金公司 交联剂和它们的用途
JP5873335B2 (ja) 2009-02-12 2016-03-01 ヤンセン バイオテツク，インコーポレーテツド フィブロネクチンｉｉｉ型ドメインに基づくスカフォールド組成物、方法及び使用
SI2437790T1 (sl) 2009-06-03 2019-07-31 Immunogen, Inc. Konjugacijske metode
AR080154A1 (es) 2010-02-10 2012-03-14 Immunogen Inc Anticuerpos cd20 y su utilizacion
KR102287474B1 (ko) 2010-02-24 2021-08-06 이뮤노젠 아이엔씨 엽산염 수용체 1 항체와 면역접합체 및 이들의 용도
JP5913307B2 (ja) * 2010-07-12 2016-04-27 コヴェックス・テクノロジーズ・アイルランド・リミテッド 多機能性抗体複合体
CN103648532A (zh) 2011-06-21 2014-03-19 伊缪诺金公司 具有肽连接子的新型美登木素生物碱衍生物及其偶联物

Patent Citations (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0425235A2 (en) * 1989-10-25 1991-05-02 Immunogen Inc Cytotoxic agents comprising maytansinoids and their therapeutic use
US5208020A (en) * 1989-10-25 1993-05-04 Immunogen Inc. Cytotoxic agents comprising maytansinoids and their therapeutic use
EP0624377A2 (en) * 1993-05-14 1994-11-17 Bristol-Myers Squibb Company Lysosomal enzyme-cleavable antitumor drug conjugates
WO2001024763A2 (en) * 1999-10-01 2001-04-12 Immunogen, Inc. Compositions and methods for treating cancer using immunoconjugates and chemotherapeutic agents
US20080226659A1 (en) * 2000-03-16 2008-09-18 Sharon Erickson Methods of treatment using anti-erbb antibody-maytansinoid conjugates
WO2005081711A2 (en) * 2003-11-06 2005-09-09 Seattle Genetics, Inc. Monomethylvaline compounds capable of conjugation to ligands
WO2005101017A1 (en) * 2004-04-07 2005-10-27 Genentech, Inc. Mass spectrometry of antibody conjugates
WO2006113623A2 (en) * 2005-04-15 2006-10-26 Immunogen, Inc. Elimination of heterogeneous or mixed cell population in tumors

Non-Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
DORONINA SVETLANA O; ET AL: "Novel peptide linkers for highly potent antibody-auristatin conjugate.", BIOCONJUGATE CHEMISTRY, AMERICAN CHEMICAL SOCIETY, US, vol. 19, no. 10, 1 October 2008 (2008-10-01), US, pages 1960 - 1963, XP008098503, ISSN: 1043-1802, DOI: 10.1021/bc800289a *
LAM L, ET AL.: "RECENT ADVANCES IN DRUG-ANTIBODY IMMUNOCONJUGATES FOR THE TREATMENT OF CANCER", DRUGS OF THE FUTURE, PROUS SCIENCE, ES, vol. 28, no. 09, 1 January 2003 (2003-01-01), ES, pages 905 - 910, XP008040409, ISSN: 0377-8282, DOI: 10.1358/dof.2003.028.09.857378 *
LAURENT DUCRY, BERNHARD STUMP: "Antibody−Drug Conjugates: Linking Cytotoxic Payloads to Monoclonal Antibodies", BIOCONJUGATE CHEMISTRY, AMERICAN CHEMICAL SOCIETY, vol. 21, no. 1, 20 January 2010 (2010-01-20), pages 5 - 13, XP055000588, ISSN: 10431802, DOI: 10.1021/bc9002019 *
SANDERSON RUSSELL J; ALLEY STEPHEN C; JEFFREY SCOTT C; CERVENY CHARLES G; ZABINSKI ROGER F; STONE IVAN; BENJAMIN DENNIS; SENTER PE: "Enhanced in vivo drug-linker stability of an anti-CD70 auristatin immunoconjugate", AMERICAN ASSOCIATION FOR CANCER RESEARCH. PROCEEDINGS OF THE ANNUAL MEETING, AMERICAN ASSOCIATION FOR CANCER RESEARCH, US, vol. 47, 1 April 2006 (2006-04-01) - 5 April 2006 (2006-04-05), US, pages 469, XP009151906, ISSN: 0197-016X *
XIE H, ET AL.: "PHARMACOKINETICS AND BIODISTRIBUTION OF THE ANTITUMOR IMMUNOCONJUGATE, CANTUZUMAB MERTANSINE (HUC242-DM1), AND ITS TWO COMPONENTS IN MICE", JOURNAL OF PHARMACOLOGY AND EXPERIMENTAL THERAPEUTICS, AMERICAN SOCIETY FOR PHARMACOLOGY AND EXPERIMENTAL THERAPEUTICS, US, vol. 308, no. 03, 1 January 2004 (2004-01-01), US, pages 1073 - 1082, XP008040428, ISSN: 0022-3565, DOI: 10.1124/jpet.103.060533 *
XIE HONGSHENG; GARRETT LISA; KOVTUN YELENA; STEEVES RITA; LUTZ ROBERT; GOLDMACHER VICTOR; ERICKSON HANS; LEECE BARBARA; WHITEMAN K: "Selection of a huC242-maytansinoid conjugate with the highest anti-tumor activity in multiple human tumor xenograft models", PROCEEDINGS OF THE ANNUAL MEETING OF THE AMERICAN ASSOCIATION FOR CANCER RESEARCH, AMERICAN ASSOCIATION FOR CANCER RESEARCH, US, vol. 47, 1 April 2006 (2006-04-01) - 5 April 2006 (2006-04-05), US, pages 876 - 877, XP009142749, ISSN: 0197-016x *

Also Published As

Publication number Publication date
EA201792652A3 (ru) 2018-09-28
NZ618262A (en) 2016-03-31
AU2012272930A1 (en) 2013-04-18
MX350954B (es) 2017-09-26
CN103648532A (zh) 2014-03-19
JP6209159B2 (ja) 2017-10-04
EP2723389A2 (en) 2014-04-30
JP2017197560A (ja) 2017-11-02
US20160263238A1 (en) 2016-09-15
AU2012272930B2 (en) 2015-06-11
MX2013015422A (es) 2014-09-22
US9289512B2 (en) 2016-03-22
US10494423B2 (en) 2019-12-03
WO2012177837A3 (en) 2013-07-11
JP6598821B2 (ja) 2019-10-30
BR112013032928A2 (pt) 2017-01-24
US20130029900A1 (en) 2013-01-31
CA2836927A1 (en) 2012-12-27
JP2014520156A (ja) 2014-08-21
EA201490095A1 (ru) 2014-05-30
ZA201308703B (en) 2016-03-30
SG10201605041VA (en) 2016-08-30
IL230043A (en) 2017-11-30
WO2012177837A2 (en) 2012-12-27
KR20140037208A (ko) 2014-03-26
IL255475A (en) 2018-02-28
EA201792652A2 (ru) 2018-05-31
SG195172A1 (en) 2013-12-30

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EA029797B1 (ru) Новые производные майтанзиноида с пептидным линкером и их конъюгаты
TWI740833B (zh) 半胱胺酸工程改造抗體之結合物
US20230035898A1 (en) Cyclodextrin protein drug conjugates
JP2020075912A (ja) 細胞障害性ベンゾジアゼピン誘導体
EP3903826B1 (en) Biomolecule conjugates
JP6782250B2 (ja) Ｃｔｉファーマコフォアを含有する二官能性細胞毒性剤
US9901567B2 (en) Substituted CC-1065 analogs and their conjugates
JP2023520605A (ja) カンプトテシン誘導体およびそのコンジュゲート
KR20240017343A (ko) 화학적 결합 링커 및 그의 용도
CA3198230A1 (en) Conjugate and use thereof
WO2023163234A1 (ja) 抗体・薬物コンジュゲート前駆体およびその合成中間体
AU2015224535B2 (en) Novel maytansinoid derivatives with peptide linker and conjugates thereof
TW202412762A (zh) 奧瑞他汀衍生物及其結合物
NZ618262B2 (en) Novel maytansinoid derivatives with peptide linker and conjugates thereof

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s)

Designated state(s): AM AZ BY KZ KG TJ TM RU