EA004790B1 - Композиции на основе слитого белка ов и способы их применения - Google Patents
Композиции на основе слитого белка ов и способы их применения Download PDFInfo
- Publication number
- EA004790B1 EA004790B1 EA199900575A EA199900575A EA004790B1 EA 004790 B1 EA004790 B1 EA 004790B1 EA 199900575 A EA199900575 A EA 199900575A EA 199900575 A EA199900575 A EA 199900575A EA 004790 B1 EA004790 B1 EA 004790B1
- Authority
- EA
- Eurasian Patent Office
- Prior art keywords
- protein
- amino acid
- acid sequence
- mice
- amino acids
- Prior art date
Links
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 title claims abstract description 42
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 title claims abstract description 41
- 238000000034 method Methods 0.000 title description 35
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title description 27
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 claims abstract description 86
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims abstract description 79
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 20
- 101001063991 Homo sapiens Leptin Proteins 0.000 claims abstract description 14
- 125000003588 lysine group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 claims abstract description 14
- 102000049953 human LEP Human genes 0.000 claims abstract description 13
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 claims abstract description 11
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 claims abstract description 10
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 claims abstract description 10
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 claims abstract description 10
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims abstract description 10
- 125000000741 isoleucyl group Chemical group [H]N([H])C(C(C([H])([H])[H])C([H])([H])C([H])([H])[H])C(=O)O* 0.000 claims abstract description 7
- 125000000404 glutamine group Chemical group N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)* 0.000 claims abstract description 4
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims abstract description 3
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 claims abstract description 3
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 claims description 6
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 abstract description 27
- 125000001360 methionine group Chemical group N[C@@H](CCSC)C(=O)* 0.000 abstract description 13
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 164
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 158
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 158
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 79
- 102000016267 Leptin Human genes 0.000 description 61
- 108010092277 Leptin Proteins 0.000 description 57
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 39
- 230000004580 weight loss Effects 0.000 description 27
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 22
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 21
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 19
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 17
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 16
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 14
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 14
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 13
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 13
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 13
- 230000004087 circulation Effects 0.000 description 13
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 13
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 13
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 12
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 12
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 12
- 239000000463 material Substances 0.000 description 12
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 12
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 12
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 12
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 11
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 11
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 11
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 11
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 11
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 10
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 10
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 10
- 239000000047 product Substances 0.000 description 10
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 9
- 238000001212 derivatisation Methods 0.000 description 9
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 9
- 235000018977 lysine Nutrition 0.000 description 9
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 9
- 102000003839 Human Proteins Human genes 0.000 description 8
- 108090000144 Human Proteins Proteins 0.000 description 8
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 8
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 8
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 8
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 8
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 8
- -1 for example Chemical class 0.000 description 8
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 8
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N monopropylene glycol Natural products CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 8
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 8
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 8
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 8
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 8
- 108090000143 Mouse Proteins Proteins 0.000 description 7
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 7
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 7
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 7
- 239000001768 carboxy methyl cellulose Substances 0.000 description 7
- 150000005829 chemical entities Chemical class 0.000 description 7
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 7
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 7
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 7
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 7
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 7
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 7
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 7
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 7
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 7
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 7
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 229920003169 water-soluble polymer Polymers 0.000 description 7
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 6
- 238000009007 Diagnostic Kit Methods 0.000 description 6
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M Potassium chloride Chemical compound [Cl-].[K+] WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 6
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 6
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 6
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 6
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 6
- 125000000151 cysteine group Chemical group N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 description 6
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 6
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 6
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 6
- 229930195712 glutamate Natural products 0.000 description 6
- 235000010979 hydroxypropyl methyl cellulose Nutrition 0.000 description 6
- 239000001866 hydroxypropyl methyl cellulose Substances 0.000 description 6
- 229920003088 hydroxypropyl methyl cellulose Polymers 0.000 description 6
- UFVKGYZPFZQRLF-UHFFFAOYSA-N hydroxypropyl methyl cellulose Chemical compound OC1C(O)C(OC)OC(CO)C1OC1C(O)C(O)C(OC2C(C(O)C(OC3C(C(O)C(O)C(CO)O3)O)C(CO)O2)O)C(CO)O1 UFVKGYZPFZQRLF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 6
- 230000002685 pulmonary effect Effects 0.000 description 6
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 6
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 6
- 229940032147 starch Drugs 0.000 description 6
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 6
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 5
- 125000001433 C-terminal amino-acid group Chemical group 0.000 description 5
- 229920002134 Carboxymethyl cellulose Polymers 0.000 description 5
- ZZSNKZQZMQGXPY-UHFFFAOYSA-N Ethyl cellulose Chemical group CCOCC1OC(OC)C(OCC)C(OCC)C1OC1C(O)C(O)C(OC)C(CO)O1 ZZSNKZQZMQGXPY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 5
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 5
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 5
- 235000010948 carboxy methyl cellulose Nutrition 0.000 description 5
- 239000008112 carboxymethyl-cellulose Substances 0.000 description 5
- 238000007385 chemical modification Methods 0.000 description 5
- 201000001883 cholelithiasis Diseases 0.000 description 5
- 239000007884 disintegrant Substances 0.000 description 5
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 5
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 5
- 238000013116 obese mouse model Methods 0.000 description 5
- 229920001308 poly(aminoacid) Polymers 0.000 description 5
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 5
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 5
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 5
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 102000014914 Carrier Proteins Human genes 0.000 description 4
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 4
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 4
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 4
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 4
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 4
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 4
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 4
- 101100074433 Rattus norvegicus Lep gene Proteins 0.000 description 4
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 4
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 4
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 4
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 4
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 4
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 4
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 4
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 4
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 4
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 4
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 4
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 4
- 208000001130 gallstones Diseases 0.000 description 4
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 4
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 4
- 229940014259 gelatin Drugs 0.000 description 4
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 4
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 4
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 4
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 description 4
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 4
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 4
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 4
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 4
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 4
- 229920000609 methyl cellulose Polymers 0.000 description 4
- 235000010981 methylcellulose Nutrition 0.000 description 4
- 239000001923 methylcellulose Substances 0.000 description 4
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 4
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 4
- 230000017854 proteolysis Effects 0.000 description 4
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 4
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 4
- 230000004044 response Effects 0.000 description 4
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 4
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 4
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 4
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 4
- 238000011191 terminal modification Methods 0.000 description 4
- 229940126585 therapeutic drug Drugs 0.000 description 4
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 4
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- WVDDGKGOMKODPV-UHFFFAOYSA-N Benzyl alcohol Chemical compound OCC1=CC=CC=C1 WVDDGKGOMKODPV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 3
- 239000001856 Ethyl cellulose Substances 0.000 description 3
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 3
- 206010020772 Hypertension Diseases 0.000 description 3
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 3
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 3
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 3
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 208000008589 Obesity Diseases 0.000 description 3
- 239000004372 Polyvinyl alcohol Substances 0.000 description 3
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 3
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 3
- 210000000577 adipose tissue Anatomy 0.000 description 3
- 125000003295 alanine group Chemical group N[C@@H](C)C(=O)* 0.000 description 3
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 3
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 3
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 3
- 108091008324 binding proteins Proteins 0.000 description 3
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 3
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 3
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 3
- 230000008859 change Effects 0.000 description 3
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 3
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 3
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 description 3
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 3
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 3
- 235000019325 ethyl cellulose Nutrition 0.000 description 3
- 229920001249 ethyl cellulose Polymers 0.000 description 3
- 230000029142 excretion Effects 0.000 description 3
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-L glutamate group Chemical group N[C@@H](CCC(=O)[O-])C(=O)[O-] WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-L 0.000 description 3
- 229930195733 hydrocarbon Natural products 0.000 description 3
- 150000002430 hydrocarbons Chemical class 0.000 description 3
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 3
- 229960001375 lactose Drugs 0.000 description 3
- 102000005861 leptin receptors Human genes 0.000 description 3
- 108010019813 leptin receptors Proteins 0.000 description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 3
- 239000007937 lozenge Substances 0.000 description 3
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 3
- 239000004005 microsphere Substances 0.000 description 3
- 239000006199 nebulizer Substances 0.000 description 3
- 235000020824 obesity Nutrition 0.000 description 3
- 230000003204 osmotic effect Effects 0.000 description 3
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 3
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 description 3
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 description 3
- 229920002451 polyvinyl alcohol Polymers 0.000 description 3
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 description 3
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 description 3
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 description 3
- 230000008092 positive effect Effects 0.000 description 3
- 239000001103 potassium chloride Substances 0.000 description 3
- 235000011164 potassium chloride Nutrition 0.000 description 3
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 3
- 230000008569 process Effects 0.000 description 3
- 239000003380 propellant Substances 0.000 description 3
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 3
- 238000006722 reduction reaction Methods 0.000 description 3
- 238000005932 reductive alkylation reaction Methods 0.000 description 3
- 239000007909 solid dosage form Substances 0.000 description 3
- 150000003626 triacylglycerols Chemical class 0.000 description 3
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 3
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 3
- 235000019786 weight gain Nutrition 0.000 description 3
- 230000004584 weight gain Effects 0.000 description 3
- HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N α-D-glucopyranosyl-α-D-glucopyranoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(O)C(O)C(O)C(CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WRIDQFICGBMAFQ-UHFFFAOYSA-N (E)-8-Octadecenoic acid Natural products CCCCCCCCCC=CCCCCCCC(O)=O WRIDQFICGBMAFQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WNXJIVFYUVYPPR-UHFFFAOYSA-N 1,3-dioxolane Chemical compound C1COCO1 WNXJIVFYUVYPPR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VBICKXHEKHSIBG-UHFFFAOYSA-N 1-monostearoylglycerol Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OCC(O)CO VBICKXHEKHSIBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LQJBNNIYVWPHFW-UHFFFAOYSA-N 20:1omega9c fatty acid Natural products CCCCCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O LQJBNNIYVWPHFW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QSBYPNXLFMSGKH-UHFFFAOYSA-N 9-Heptadecensaeure Natural products CCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O QSBYPNXLFMSGKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 2
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 2
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 description 2
- 241000416162 Astragalus gummifer Species 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 2
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 2
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 2
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 2
- 206010022489 Insulin Resistance Diseases 0.000 description 2
- 102000000588 Interleukin-2 Human genes 0.000 description 2
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 2
- 108010041872 Islet Amyloid Polypeptide Proteins 0.000 description 2
- 102000036770 Islet Amyloid Polypeptide Human genes 0.000 description 2
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- 241000282560 Macaca mulatta Species 0.000 description 2
- FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N Magnesium Chemical compound [Mg] FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 2
- 101100181592 Mus musculus Lep gene Proteins 0.000 description 2
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 2
- 239000005642 Oleic acid Substances 0.000 description 2
- ZQPPMHVWECSIRJ-UHFFFAOYSA-N Oleic acid Natural products CCCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O ZQPPMHVWECSIRJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 2
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 2
- 229920003171 Poly (ethylene oxide) Polymers 0.000 description 2
- NBBJYMSMWIIQGU-UHFFFAOYSA-N Propionic aldehyde Chemical compound CCC=O NBBJYMSMWIIQGU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PPBRXRYQALVLMV-UHFFFAOYSA-N Styrene Chemical compound C=CC1=CC=CC=C1 PPBRXRYQALVLMV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229940123464 Thiazolidinedione Drugs 0.000 description 2
- 229920001615 Tragacanth Polymers 0.000 description 2
- HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N Trehalose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N 0.000 description 2
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- TVXBFESIOXBWNM-UHFFFAOYSA-N Xylitol Natural products OCCC(O)C(O)C(O)CCO TVXBFESIOXBWNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 2
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 2
- DPXJVFZANSGRMM-UHFFFAOYSA-N acetic acid;2,3,4,5,6-pentahydroxyhexanal;sodium Chemical compound [Na].CC(O)=O.OCC(O)C(O)C(O)C(O)C=O DPXJVFZANSGRMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000011149 active material Substances 0.000 description 2
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 2
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 2
- 125000003172 aldehyde group Chemical group 0.000 description 2
- 235000010443 alginic acid Nutrition 0.000 description 2
- 229920000615 alginic acid Polymers 0.000 description 2
- HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N alpha,alpha-trehalose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N 0.000 description 2
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 2
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 2
- 239000012736 aqueous medium Substances 0.000 description 2
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000017531 blood circulation Effects 0.000 description 2
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 2
- 125000002091 cationic group Chemical group 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 2
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 2
- 238000013270 controlled release Methods 0.000 description 2
- 210000004351 coronary vessel Anatomy 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 2
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 2
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 2
- 230000037213 diet Effects 0.000 description 2
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 2
- 210000001198 duodenum Anatomy 0.000 description 2
- 238000005538 encapsulation Methods 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 235000013861 fat-free Nutrition 0.000 description 2
- 235000019197 fats Nutrition 0.000 description 2
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 2
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 2
- 239000000945 filler Substances 0.000 description 2
- 239000007888 film coating Substances 0.000 description 2
- 238000009501 film coating Methods 0.000 description 2
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 2
- 210000004051 gastric juice Anatomy 0.000 description 2
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 2
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 2
- 229920001519 homopolymer Polymers 0.000 description 2
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 2
- 229940060367 inert ingredients Drugs 0.000 description 2
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 2
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 2
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 2
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 2
- QXJSBBXBKPUZAA-UHFFFAOYSA-N isooleic acid Natural products CCCCCCCC=CCCCCCCCCC(O)=O QXJSBBXBKPUZAA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000001909 leucine group Chemical group [H]N(*)C(C(*)=O)C([H])([H])C(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 2
- 239000011777 magnesium Substances 0.000 description 2
- 229910052749 magnesium Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 2
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- HEBKCHPVOIAQTA-UHFFFAOYSA-N meso ribitol Natural products OCC(O)C(O)C(O)CO HEBKCHPVOIAQTA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000000465 moulding Methods 0.000 description 2
- ZQPPMHVWECSIRJ-KTKRTIGZSA-N oleic acid Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(O)=O ZQPPMHVWECSIRJ-KTKRTIGZSA-N 0.000 description 2
- 230000006320 pegylation Effects 0.000 description 2
- 239000000816 peptidomimetic Substances 0.000 description 2
- XNGIFLGASWRNHJ-UHFFFAOYSA-N phthalic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC=C1C(O)=O XNGIFLGASWRNHJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000006187 pill Substances 0.000 description 2
- 239000000244 polyoxyethylene sorbitan monooleate Substances 0.000 description 2
- 229940068968 polysorbate 80 Drugs 0.000 description 2
- 229920001343 polytetrafluoroethylene Polymers 0.000 description 2
- 239000004810 polytetrafluoroethylene Substances 0.000 description 2
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 2
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 2
- 230000009145 protein modification Effects 0.000 description 2
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 2
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 2
- 238000012552 review Methods 0.000 description 2
- QZAYGJVTTNCVMB-UHFFFAOYSA-N serotonin Chemical compound C1=C(O)C=C2C(CCN)=CNC2=C1 QZAYGJVTTNCVMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910052710 silicon Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000010703 silicon Substances 0.000 description 2
- 235000019812 sodium carboxymethyl cellulose Nutrition 0.000 description 2
- 229920001027 sodium carboxymethylcellulose Polymers 0.000 description 2
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 2
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 2
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 2
- 238000013268 sustained release Methods 0.000 description 2
- 239000012730 sustained-release form Substances 0.000 description 2
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 2
- 150000001467 thiazolidinediones Chemical class 0.000 description 2
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 2
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 2
- 235000010487 tragacanth Nutrition 0.000 description 2
- 239000000196 tragacanth Substances 0.000 description 2
- 229940116362 tragacanth Drugs 0.000 description 2
- 238000002604 ultrasonography Methods 0.000 description 2
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 2
- 239000000811 xylitol Substances 0.000 description 2
- HEBKCHPVOIAQTA-SCDXWVJYSA-N xylitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO HEBKCHPVOIAQTA-SCDXWVJYSA-N 0.000 description 2
- 235000010447 xylitol Nutrition 0.000 description 2
- 229960002675 xylitol Drugs 0.000 description 2
- JIAARYAFYJHUJI-UHFFFAOYSA-L zinc dichloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Zn+2] JIAARYAFYJHUJI-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- IZUAHLHTQJCCLJ-UHFFFAOYSA-N (2-chloro-1,1,2,2-tetrafluoroethyl) hypochlorite Chemical compound FC(F)(Cl)C(F)(F)OCl IZUAHLHTQJCCLJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N (2S,3S,4S,5R,6R)-6-[(2S,3R,4R,5S,6R)-3-Acetamido-2-[(2S,3S,4R,5R,6R)-6-[(2R,3R,4R,5S,6R)-3-acetamido-2,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-2-carboxy-4,5-dihydroxyoxan-3-yl]oxy-5-hydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-3,4,5-trihydroxyoxane-2-carboxylic acid Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O3)C(O)=O)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)NC(C)=O)[C@@H](C(O)=O)O1 KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N 0.000 description 1
- LNAZSHAWQACDHT-XIYTZBAFSA-N (2r,3r,4s,5r,6s)-4,5-dimethoxy-2-(methoxymethyl)-3-[(2s,3r,4s,5r,6r)-3,4,5-trimethoxy-6-(methoxymethyl)oxan-2-yl]oxy-6-[(2r,3r,4s,5r,6r)-4,5,6-trimethoxy-2-(methoxymethyl)oxan-3-yl]oxyoxane Chemical compound CO[C@@H]1[C@@H](OC)[C@H](OC)[C@@H](COC)O[C@H]1O[C@H]1[C@H](OC)[C@@H](OC)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](OC)[C@H](OC)O[C@@H]2COC)OC)O[C@@H]1COC LNAZSHAWQACDHT-XIYTZBAFSA-N 0.000 description 1
- LVGUZGTVOIAKKC-UHFFFAOYSA-N 1,1,1,2-tetrafluoroethane Chemical compound FCC(F)(F)F LVGUZGTVOIAKKC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IXPNQXFRVYWDDI-UHFFFAOYSA-N 1-methyl-2,4-dioxo-1,3-diazinane-5-carboximidamide Chemical compound CN1CC(C(N)=N)C(=O)NC1=O IXPNQXFRVYWDDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CXCHEKCRJQRVNG-UHFFFAOYSA-N 2,2,2-trifluoroethanesulfonyl chloride Chemical compound FC(F)(F)CS(Cl)(=O)=O CXCHEKCRJQRVNG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OHMHBGPWCHTMQE-UHFFFAOYSA-N 2,2-dichloro-1,1,1-trifluoroethane Chemical compound FC(F)(F)C(Cl)Cl OHMHBGPWCHTMQE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CDOUZKKFHVEKRI-UHFFFAOYSA-N 3-bromo-n-[(prop-2-enoylamino)methyl]propanamide Chemical compound BrCCC(=O)NCNC(=O)C=C CDOUZKKFHVEKRI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000030507 AIDS Diseases 0.000 description 1
- 244000215068 Acacia senegal Species 0.000 description 1
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 1
- 101100065699 Arabidopsis thaliana ETC1 gene Proteins 0.000 description 1
- 201000001320 Atherosclerosis Diseases 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 208000010392 Bone Fractures Diseases 0.000 description 1
- 208000006386 Bone Resorption Diseases 0.000 description 1
- 101100310222 Caenorhabditis briggsae she-1 gene Proteins 0.000 description 1
- 101100324465 Caenorhabditis elegans arr-1 gene Proteins 0.000 description 1
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004215 Carbon black (E152) Substances 0.000 description 1
- 108010078791 Carrier Proteins Proteins 0.000 description 1
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 1
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 1
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 1
- 102000016928 DNA-directed DNA polymerase Human genes 0.000 description 1
- 108010014303 DNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- 239000004338 Dichlorodifluoromethane Substances 0.000 description 1
- 208000032928 Dyslipidaemia Diseases 0.000 description 1
- 102400000686 Endothelin-1 Human genes 0.000 description 1
- 101800004490 Endothelin-1 Proteins 0.000 description 1
- 241000402754 Erythranthe moschata Species 0.000 description 1
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VGGSQFUCUMXWEO-UHFFFAOYSA-N Ethene Chemical compound C=C VGGSQFUCUMXWEO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005977 Ethylene Substances 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 description 1
- 102000004269 Granulocyte Colony-Stimulating Factor Human genes 0.000 description 1
- 108010017080 Granulocyte Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 1
- 229920000084 Gum arabic Polymers 0.000 description 1
- 101001120470 Haemophilus influenzae (strain ATCC 51907 / DSM 11121 / KW20 / Rd) Peptidoglycan-associated lipoprotein Proteins 0.000 description 1
- 208000017604 Hodgkin disease Diseases 0.000 description 1
- 208000021519 Hodgkin lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 208000010747 Hodgkins lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 101001133932 Homo sapiens Prolyl 3-hydroxylase 3 Proteins 0.000 description 1
- 102000002265 Human Growth Hormone Human genes 0.000 description 1
- 108010000521 Human Growth Hormone Proteins 0.000 description 1
- 239000000854 Human Growth Hormone Substances 0.000 description 1
- 102000008100 Human Serum Albumin Human genes 0.000 description 1
- 108091006905 Human Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 239000004354 Hydroxyethyl cellulose Substances 0.000 description 1
- 229920000663 Hydroxyethyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 229920001479 Hydroxyethyl methyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 229920002153 Hydroxypropyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 208000031226 Hyperlipidaemia Diseases 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 description 1
- 102000008070 Interferon-gamma Human genes 0.000 description 1
- 102000003814 Interleukin-10 Human genes 0.000 description 1
- 108090000174 Interleukin-10 Proteins 0.000 description 1
- 229910021578 Iron(III) chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- OYHQOLUKZRVURQ-HZJYTTRNSA-N Linoleic acid Chemical compound CCCCC\C=C/C\C=C/CCCCCCCC(O)=O OYHQOLUKZRVURQ-HZJYTTRNSA-N 0.000 description 1
- 208000017170 Lipid metabolism disease Diseases 0.000 description 1
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 description 1
- 241000282553 Macaca Species 0.000 description 1
- 241000282567 Macaca fascicularis Species 0.000 description 1
- 229910021380 Manganese Chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- GLFNIEUTAYBVOC-UHFFFAOYSA-L Manganese chloride Chemical compound Cl[Mn]Cl GLFNIEUTAYBVOC-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 208000006670 Multiple fractures Diseases 0.000 description 1
- 108090000189 Neuropeptides Proteins 0.000 description 1
- 102000003797 Neuropeptides Human genes 0.000 description 1
- 208000001132 Osteoporosis Diseases 0.000 description 1
- 206010033307 Overweight Diseases 0.000 description 1
- 238000012408 PCR amplification Methods 0.000 description 1
- 108091006006 PEGylated Proteins Proteins 0.000 description 1
- 229920001363 Polidocanol Polymers 0.000 description 1
- 229920000954 Polyglycolide Polymers 0.000 description 1
- 229920002701 Polyoxyl 40 Stearate Polymers 0.000 description 1
- 229920000037 Polyproline Polymers 0.000 description 1
- 229920001219 Polysorbate 40 Polymers 0.000 description 1
- 229920001214 Polysorbate 60 Polymers 0.000 description 1
- 229920002642 Polysorbate 65 Polymers 0.000 description 1
- GOOHAUXETOMSMM-UHFFFAOYSA-N Propylene oxide Chemical compound CC1CO1 GOOHAUXETOMSMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 1
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 description 1
- 206010040070 Septic Shock Diseases 0.000 description 1
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000007562 Serum Albumin Human genes 0.000 description 1
- 108010071390 Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 229920001800 Shellac Polymers 0.000 description 1
- XUIMIQQOPSSXEZ-UHFFFAOYSA-N Silicon Chemical compound [Si] XUIMIQQOPSSXEZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000004141 Sodium laurylsulphate Substances 0.000 description 1
- 239000004147 Sorbitan trioleate Substances 0.000 description 1
- PRXRUNOAOLTIEF-ADSICKODSA-N Sorbitan trioleate Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OC[C@@H](OC(=O)CCCCCCC\C=C/CCCCCCCC)[C@H]1OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)CCCCCCC\C=C/CCCCCCCC PRXRUNOAOLTIEF-ADSICKODSA-N 0.000 description 1
- 235000021355 Stearic acid Nutrition 0.000 description 1
- 235000015125 Sterculia urens Nutrition 0.000 description 1
- 240000001058 Sterculia urens Species 0.000 description 1
- 208000000389 T-cell leukemia Diseases 0.000 description 1
- 208000028530 T-cell lymphoblastic leukemia/lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 1
- 239000013504 Triton X-100 Substances 0.000 description 1
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 1
- 108060008683 Tumor Necrosis Factor Receptor Proteins 0.000 description 1
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 description 1
- 235000010489 acacia gum Nutrition 0.000 description 1
- 239000000205 acacia gum Substances 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 description 1
- 235000010419 agar Nutrition 0.000 description 1
- 239000000783 alginic acid Substances 0.000 description 1
- 229960001126 alginic acid Drugs 0.000 description 1
- 150000004781 alginic acids Chemical class 0.000 description 1
- 102000015395 alpha 1-Antitrypsin Human genes 0.000 description 1
- 108010050122 alpha 1-Antitrypsin Proteins 0.000 description 1
- 229940024142 alpha 1-antitrypsin Drugs 0.000 description 1
- 229960004977 anhydrous lactose Drugs 0.000 description 1
- 238000005571 anion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 description 1
- 239000002260 anti-inflammatory agent Substances 0.000 description 1
- 229940121363 anti-inflammatory agent Drugs 0.000 description 1
- 239000002518 antifoaming agent Substances 0.000 description 1
- 239000003831 antifriction material Substances 0.000 description 1
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 1
- 235000006708 antioxidants Nutrition 0.000 description 1
- 239000002830 appetite depressant Substances 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 208000021328 arterial occlusion Diseases 0.000 description 1
- 210000001367 artery Anatomy 0.000 description 1
- 235000010323 ascorbic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229960005070 ascorbic acid Drugs 0.000 description 1
- 239000011668 ascorbic acid Substances 0.000 description 1
- 238000000889 atomisation Methods 0.000 description 1
- 235000021053 average weight gain Nutrition 0.000 description 1
- 239000000440 bentonite Substances 0.000 description 1
- 229910000278 bentonite Inorganic materials 0.000 description 1
- SVPXDRXYRYOSEX-UHFFFAOYSA-N bentoquatam Chemical compound O.O=[Si]=O.O=[Al]O[Al]=O SVPXDRXYRYOSEX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960000686 benzalkonium chloride Drugs 0.000 description 1
- 229960001950 benzethonium chloride Drugs 0.000 description 1
- UREZNYTWGJKWBI-UHFFFAOYSA-M benzethonium chloride Chemical compound [Cl-].C1=CC(C(C)(C)CC(C)(C)C)=CC=C1OCCOCC[N+](C)(C)CC1=CC=CC=C1 UREZNYTWGJKWBI-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 235000019445 benzyl alcohol Nutrition 0.000 description 1
- CADWTSSKOVRVJC-UHFFFAOYSA-N benzyl(dimethyl)azanium;chloride Chemical compound [Cl-].C[NH+](C)CC1=CC=CC=C1 CADWTSSKOVRVJC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000013361 beverage Nutrition 0.000 description 1
- 239000003833 bile salt Substances 0.000 description 1
- 229940093761 bile salts Drugs 0.000 description 1
- 230000036772 blood pressure Effects 0.000 description 1
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 1
- 230000024279 bone resorption Effects 0.000 description 1
- KGBXLFKZBHKPEV-UHFFFAOYSA-N boric acid Chemical compound OB(O)O KGBXLFKZBHKPEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZTQSAGDEMFDKMZ-UHFFFAOYSA-N butyric aldehyde Natural products CCCC=O ZTQSAGDEMFDKMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 1
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 159000000007 calcium salts Chemical class 0.000 description 1
- 229910000394 calcium triphosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 1
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000002915 carbonyl group Chemical group [*:2]C([*:1])=O 0.000 description 1
- 238000007675 cardiac surgery Methods 0.000 description 1
- 239000002327 cardiovascular agent Substances 0.000 description 1
- 229940125692 cardiovascular agent Drugs 0.000 description 1
- 239000004359 castor oil Substances 0.000 description 1
- 235000019438 castor oil Nutrition 0.000 description 1
- 238000005277 cation exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000003729 cation exchange resin Substances 0.000 description 1
- 229940023913 cation exchange resins Drugs 0.000 description 1
- 229920002301 cellulose acetate Polymers 0.000 description 1
- WZNRVWBKYDHTKI-UHFFFAOYSA-N cellulose, acetate 1,2,4-benzenetricarboxylate Chemical compound OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(CO)OC(O)C(O)C1O.OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(CO)OC(O)C(O)C1O.CC(=O)OCC1OC(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C1OC1C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C(COC(C)=O)O1.CC(=O)OCC1OC(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C1OC1C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C(COC(C)=O)O1.OC(=O)C1=CC(C(=O)O)=CC=C1C(=O)OCC1C(OC2C(C(OC(=O)C=3C(=CC(=CC=3)C(O)=O)C(O)=O)C(OC(=O)C=3C(=CC(=CC=3)C(O)=O)C(O)=O)C(COC(=O)C=3C(=CC(=CC=3)C(O)=O)C(O)=O)O2)OC(=O)C=2C(=CC(=CC=2)C(O)=O)C(O)=O)C(OC(=O)C=2C(=CC(=CC=2)C(O)=O)C(O)=O)C(OC(=O)C=2C(=CC(=CC=2)C(O)=O)C(O)=O)C(OC(=O)C=2C(=CC(=CC=2)C(O)=O)C(O)=O)O1 WZNRVWBKYDHTKI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 229920001429 chelating resin Polymers 0.000 description 1
- KYKAJFCTULSVSH-UHFFFAOYSA-N chloro(fluoro)methane Chemical compound F[C]Cl KYKAJFCTULSVSH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- GVPFVAHMJGGAJG-UHFFFAOYSA-L cobalt dichloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Co+2] GVPFVAHMJGGAJG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000003086 colorant Substances 0.000 description 1
- 238000004040 coloring Methods 0.000 description 1
- 238000004891 communication Methods 0.000 description 1
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- 229910000365 copper sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- ARUVKPQLZAKDPS-UHFFFAOYSA-L copper(II) sulfate Chemical compound [Cu+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] ARUVKPQLZAKDPS-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000002537 cosmetic Substances 0.000 description 1
- 238000002316 cosmetic surgery Methods 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 1
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 1
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 1
- 230000008021 deposition Effects 0.000 description 1
- PXBRQCKWGAHEHS-UHFFFAOYSA-N dichlorodifluoromethane Chemical compound FC(F)(Cl)Cl PXBRQCKWGAHEHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000019404 dichlorodifluoromethane Nutrition 0.000 description 1
- 238000009792 diffusion process Methods 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 238000006471 dimerization reaction Methods 0.000 description 1
- AIUDWMLXCFRVDR-UHFFFAOYSA-N dimethyl 2-(3-ethyl-3-methylpentyl)propanedioate Chemical compound CCC(C)(CC)CCC(C(=O)OC)C(=O)OC AIUDWMLXCFRVDR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000019329 dioctyl sodium sulphosuccinate Nutrition 0.000 description 1
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 1
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N dithiothreitol Chemical compound SC[C@@H](O)[C@H](O)CS VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N 0.000 description 1
- MOTZDAYCYVMXPC-UHFFFAOYSA-N dodecyl hydrogen sulfate Chemical compound CCCCCCCCCCCCOS(O)(=O)=O MOTZDAYCYVMXPC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940043264 dodecyl sulfate Drugs 0.000 description 1
- 229940029980 drug used in diabetes Drugs 0.000 description 1
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 1
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 1
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 1
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 1
- 229920001038 ethylene copolymer Polymers 0.000 description 1
- SFNALCNOMXIBKG-UHFFFAOYSA-N ethylene glycol monododecyl ether Chemical compound CCCCCCCCCCCCOCCO SFNALCNOMXIBKG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000007941 film coated tablet Substances 0.000 description 1
- 239000000796 flavoring agent Substances 0.000 description 1
- 238000011010 flushing procedure Methods 0.000 description 1
- 235000013355 food flavoring agent Nutrition 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 230000006870 function Effects 0.000 description 1
- 210000000232 gallbladder Anatomy 0.000 description 1
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 1
- 230000002496 gastric effect Effects 0.000 description 1
- 238000012239 gene modification Methods 0.000 description 1
- 230000005017 genetic modification Effects 0.000 description 1
- 235000013617 genetically modified food Nutrition 0.000 description 1
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 1
- YQEMORVAKMFKLG-UHFFFAOYSA-N glycerine monostearate Natural products CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC(CO)CO YQEMORVAKMFKLG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 1
- SVUQHVRAGMNPLW-UHFFFAOYSA-N glycerol monostearate Natural products CCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OCC(O)CO SVUQHVRAGMNPLW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZEMPKEQAKRGZGQ-XOQCFJPHSA-N glycerol triricinoleate Natural products CCCCCC[C@@H](O)CC=CCCCCCCCC(=O)OC[C@@H](COC(=O)CCCCCCCC=CC[C@@H](O)CCCCCC)OC(=O)CCCCCCCC=CC[C@H](O)CCCCCC ZEMPKEQAKRGZGQ-XOQCFJPHSA-N 0.000 description 1
- 229960000789 guanidine hydrochloride Drugs 0.000 description 1
- PJJJBBJSCAKJQF-UHFFFAOYSA-N guanidinium chloride Chemical compound [Cl-].NC(N)=[NH2+] PJJJBBJSCAKJQF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000035876 healing Effects 0.000 description 1
- 229920002674 hyaluronan Polymers 0.000 description 1
- 229960003160 hyaluronic acid Drugs 0.000 description 1
- 235000019447 hydroxyethyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 235000010977 hydroxypropyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 239000001863 hydroxypropyl cellulose Substances 0.000 description 1
- 229920003132 hydroxypropyl methylcellulose phthalate Polymers 0.000 description 1
- 229940031704 hydroxypropyl methylcellulose phthalate Drugs 0.000 description 1
- 210000003016 hypothalamus Anatomy 0.000 description 1
- 210000003405 ileum Anatomy 0.000 description 1
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 1
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 229960003130 interferon gamma Drugs 0.000 description 1
- 229940076144 interleukin-10 Drugs 0.000 description 1
- 238000001361 intraarterial administration Methods 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- RBTARNINKXHZNM-UHFFFAOYSA-K iron trichloride Chemical compound Cl[Fe](Cl)Cl RBTARNINKXHZNM-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 210000001630 jejunum Anatomy 0.000 description 1
- 210000002429 large intestine Anatomy 0.000 description 1
- 238000002430 laser surgery Methods 0.000 description 1
- 230000002045 lasting effect Effects 0.000 description 1
- 229950006462 lauromacrogol 400 Drugs 0.000 description 1
- 238000002386 leaching Methods 0.000 description 1
- 229940039781 leptin Drugs 0.000 description 1
- NRYBAZVQPHGZNS-ZSOCWYAHSA-N leptin Chemical compound O=C([C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC(C)C)CCSC)N1CCC[C@H]1C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O NRYBAZVQPHGZNS-ZSOCWYAHSA-N 0.000 description 1
- OYHQOLUKZRVURQ-IXWMQOLASA-N linoleic acid Natural products CCCCC\C=C/C\C=C\CCCCCCCC(O)=O OYHQOLUKZRVURQ-IXWMQOLASA-N 0.000 description 1
- 235000020778 linoleic acid Nutrition 0.000 description 1
- 238000007443 liposuction Methods 0.000 description 1
- 229940057995 liquid paraffin Drugs 0.000 description 1
- 230000004807 localization Effects 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 239000000314 lubricant Substances 0.000 description 1
- 239000010687 lubricating oil Substances 0.000 description 1
- ZLNQQNXFFQJAID-UHFFFAOYSA-L magnesium carbonate Chemical compound [Mg+2].[O-]C([O-])=O ZLNQQNXFFQJAID-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000001095 magnesium carbonate Substances 0.000 description 1
- 229910000021 magnesium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000014380 magnesium carbonate Nutrition 0.000 description 1
- HBNDBUATLJAUQM-UHFFFAOYSA-L magnesium;dodecyl sulfate Chemical compound [Mg+2].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O.CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O HBNDBUATLJAUQM-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000011565 manganese chloride Substances 0.000 description 1
- 235000002867 manganese chloride Nutrition 0.000 description 1
- 229940099607 manganese chloride Drugs 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 1
- 229940071648 metered dose inhaler Drugs 0.000 description 1
- 239000003094 microcapsule Substances 0.000 description 1
- 239000011859 microparticle Substances 0.000 description 1
- 210000004400 mucous membrane Anatomy 0.000 description 1
- 229930014626 natural product Natural products 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- QIQXTHQIDYTFRH-UHFFFAOYSA-N octadecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(O)=O QIQXTHQIDYTFRH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OQCDKBAXFALNLD-UHFFFAOYSA-N octadecanoic acid Natural products CCCCCCCC(C)CCCCCCCCC(O)=O OQCDKBAXFALNLD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 239000006186 oral dosage form Substances 0.000 description 1
- 239000008184 oral solid dosage form Substances 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 229940043515 other immunoglobulins in atc Drugs 0.000 description 1
- 238000006213 oxygenation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 230000035515 penetration Effects 0.000 description 1
- RFWLACFDYFIVMC-UHFFFAOYSA-D pentacalcium;[oxido(phosphonatooxy)phosphoryl] phosphate Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])(=O)OP([O-])(=O)OP([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])(=O)OP([O-])(=O)OP([O-])([O-])=O RFWLACFDYFIVMC-UHFFFAOYSA-D 0.000 description 1
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 1
- 210000001539 phagocyte Anatomy 0.000 description 1
- JTJMJGYZQZDUJJ-UHFFFAOYSA-N phencyclidine Chemical compound C1CCCCN1C1(C=2C=CC=CC=2)CCCCC1 JTJMJGYZQZDUJJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N phenylalanine group Chemical group N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)O COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 1
- 210000002826 placenta Anatomy 0.000 description 1
- 230000007505 plaque formation Effects 0.000 description 1
- 229920000747 poly(lactic acid) Polymers 0.000 description 1
- 239000004633 polyglycolic acid Substances 0.000 description 1
- 239000004626 polylactic acid Substances 0.000 description 1
- 229920005862 polyol Polymers 0.000 description 1
- 150000003077 polyols Chemical class 0.000 description 1
- 235000010483 polyoxyethylene sorbitan monopalmitate Nutrition 0.000 description 1
- 239000000249 polyoxyethylene sorbitan monopalmitate Substances 0.000 description 1
- 235000010989 polyoxyethylene sorbitan monostearate Nutrition 0.000 description 1
- 239000001818 polyoxyethylene sorbitan monostearate Substances 0.000 description 1
- 235000010988 polyoxyethylene sorbitan tristearate Nutrition 0.000 description 1
- 239000001816 polyoxyethylene sorbitan tristearate Substances 0.000 description 1
- 229940099429 polyoxyl 40 stearate Drugs 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 108010026466 polyproline Proteins 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 150000004804 polysaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 229940101027 polysorbate 40 Drugs 0.000 description 1
- 229940113124 polysorbate 60 Drugs 0.000 description 1
- 229940099511 polysorbate 65 Drugs 0.000 description 1
- 229940100467 polyvinyl acetate phthalate Drugs 0.000 description 1
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 235000019833 protease Nutrition 0.000 description 1
- 230000004845 protein aggregation Effects 0.000 description 1
- 230000004853 protein function Effects 0.000 description 1
- 229940024999 proteolytic enzymes for treatment of wounds and ulcers Drugs 0.000 description 1
- 230000001698 pyrogenic effect Effects 0.000 description 1
- 229920005604 random copolymer Polymers 0.000 description 1
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 1
- 235000018770 reduced food intake Nutrition 0.000 description 1
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 1
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 230000036303 septic shock Effects 0.000 description 1
- 229940076279 serotonin Drugs 0.000 description 1
- 239000004208 shellac Substances 0.000 description 1
- 229940113147 shellac Drugs 0.000 description 1
- ZLGIYFNHBLSMPS-ATJNOEHPSA-N shellac Chemical compound OCCCCCC(O)C(O)CCCCCCCC(O)=O.C1C23[C@H](C(O)=O)CCC2[C@](C)(CO)[C@@H]1C(C(O)=O)=C[C@@H]3O ZLGIYFNHBLSMPS-ATJNOEHPSA-N 0.000 description 1
- 235000013874 shellac Nutrition 0.000 description 1
- 230000008054 signal transmission Effects 0.000 description 1
- 235000021309 simple sugar Nutrition 0.000 description 1
- 210000000813 small intestine Anatomy 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000010413 sodium alginate Nutrition 0.000 description 1
- 239000000661 sodium alginate Substances 0.000 description 1
- 229940005550 sodium alginate Drugs 0.000 description 1
- HRZFUMHJMZEROT-UHFFFAOYSA-L sodium disulfite Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S(=O)S([O-])(=O)=O HRZFUMHJMZEROT-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- APSBXTVYXVQYAB-UHFFFAOYSA-M sodium docusate Chemical group [Na+].CCCCC(CC)COC(=O)CC(S([O-])(=O)=O)C(=O)OCC(CC)CCCC APSBXTVYXVQYAB-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 235000019333 sodium laurylsulphate Nutrition 0.000 description 1
- 229940001584 sodium metabisulfite Drugs 0.000 description 1
- 235000010262 sodium metabisulphite Nutrition 0.000 description 1
- 239000011684 sodium molybdate Substances 0.000 description 1
- 235000015393 sodium molybdate Nutrition 0.000 description 1
- TVXXNOYZHKPKGW-UHFFFAOYSA-N sodium molybdate (anhydrous) Chemical compound [Na+].[Na+].[O-][Mo]([O-])(=O)=O TVXXNOYZHKPKGW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 159000000000 sodium salts Chemical class 0.000 description 1
- 239000008109 sodium starch glycolate Substances 0.000 description 1
- 229940079832 sodium starch glycolate Drugs 0.000 description 1
- 229920003109 sodium starch glycolate Polymers 0.000 description 1
- NGDIAZZSCVVCEW-UHFFFAOYSA-M sodium;butyl sulfate Chemical compound [Na+].CCCCOS([O-])(=O)=O NGDIAZZSCVVCEW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 238000005063 solubilization Methods 0.000 description 1
- 230000007928 solubilization Effects 0.000 description 1
- 235000019337 sorbitan trioleate Nutrition 0.000 description 1
- 229960000391 sorbitan trioleate Drugs 0.000 description 1
- 239000008347 soybean phospholipid Substances 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 239000008117 stearic acid Substances 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-L succinate(2-) Chemical compound [O-]C(=O)CCC([O-])=O KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
- BDHFUVZGWQCTTF-UHFFFAOYSA-M sulfonate Chemical compound [O-]S(=O)=O BDHFUVZGWQCTTF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 239000013589 supplement Substances 0.000 description 1
- 230000003319 supportive effect Effects 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 230000001839 systemic circulation Effects 0.000 description 1
- 239000000454 talc Substances 0.000 description 1
- 229910052623 talc Inorganic materials 0.000 description 1
- RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L thimerosal Chemical compound [Na+].CC[Hg]SC1=CC=CC=C1C([O-])=O RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 125000003396 thiol group Chemical group [H]S* 0.000 description 1
- 239000011573 trace mineral Substances 0.000 description 1
- 235000013619 trace mineral Nutrition 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- CYRMSUTZVYGINF-UHFFFAOYSA-N trichlorofluoromethane Chemical compound FC(Cl)(Cl)Cl CYRMSUTZVYGINF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940029284 trichlorofluoromethane Drugs 0.000 description 1
- 125000005591 trimellitate group Chemical group 0.000 description 1
- HRXKRNGNAMMEHJ-UHFFFAOYSA-K trisodium citrate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O HRXKRNGNAMMEHJ-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 1
- 102000003298 tumor necrosis factor receptor Human genes 0.000 description 1
- 208000001072 type 2 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 1
- 125000001493 tyrosinyl group Chemical group [H]OC1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 1
- 235000015112 vegetable and seed oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000008158 vegetable oil Substances 0.000 description 1
- 239000012178 vegetable wax Substances 0.000 description 1
- 239000000080 wetting agent Substances 0.000 description 1
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 1
- 239000011592 zinc chloride Substances 0.000 description 1
- 235000005074 zinc chloride Nutrition 0.000 description 1
- 229930195727 α-lactose Natural products 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/575—Hormones
- C07K14/5759—Products of obesity genes, e.g. leptin, obese (OB), tub, fat
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
- C12N15/62—DNA sequences coding for fusion proteins
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/04—Anorexiants; Antiobesity agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/06—Antihyperlipidemics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
- A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/10—Antimycotics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
- A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K19/00—Hybrid peptides, i.e. peptides covalently bound to nucleic acids, or non-covalently bound protein-protein complexes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
Abstract
Настоящее изобретение относится к композициям слитого белка Fc-OB, способам получения таких композиций и их применения. В частности, настоящее изобретение относится к генетически или химически слитому белку, состоящему из Fc-района иммуноглобулина, его производного или аналога, слитого с N-терминальной областью белка ОВ, его производного или аналога.
Description
Область, к которой относится изобретение
Настоящее изобретение относится к композициям слитого белка Ес-ОВ, способам получения таких композиций и их применения.
Уровень техники
При том, что молекулярные основы ожирения в значительной мере остаются неизвестными, идентификация гена ОВ и кодируемого им белка (белок ОВ или лептин) пролила свет на механизм, регулирующий отложение жира в организме. См. публикацию РСТ XVО 96/05309 (12/22/96), Епебтап е! а1.; Ζ1ιαη§ е! а1., На!иге 372: 425-432 (1994); см. также ТНе Согтесйоп а! На!иге 374: 479 (1995). Белок ОВ активен ίη νίνο как у мутантных мышей оЬ/оЬ (мыши, ожиревшие в силу дефекта образования продукта гена ОВ), так и у нормальных мышей дикого типа. Биологическая активность проявляется, помимо прочего, в снижении веса. См. Ватпада, ОЬезе Рто!ет 8Бт М1се. 8с1епсе 269: 275-456 (1995). Белок ОВ, его производные и применение их в качестве модуляторов для контроля веса и ожирения у животных, включая млекопитающих и человека, были описаны более подробно в публикации РСТ νθ 96/05309 (12/22/96).
Другие биологические эффекты белка ОВ охарактеризованы слабо. Известно, например, что у мутантных мышей оЬ/оЬ введение белка ОВ приводит к снижению уровней инсулина и глюкозы в сыворотке. Известно также, что введение белка ОВ приводит к снижению количества жира в организме. Это наблюдалось как на мутантных мышах оЬ/оЬ, так и на неожиревших нормальных мышах. Ре11еутоип!ег е! а1., 8с1епсе 269: 540-543 (1995); На11аз е! а1., 8с1епсе 269: 543-546 (1995). См. также СатрйеИ е! а1., 8аепсе 269: 546-549 (1995) (периферическое и центральное введение микрограммовых доз белка ОВ снижало потребление пищи и веса тела у мышей оЬ/оЬ и мышей, ожиревших от специальной диеты, но не у ожиревших мышей 6Ь/6Ь). Ни в одной из этих работ не отмечено токсичности, даже при наивысших дозах.
Несмотря на перспективы клинического применения белка ОВ, способ действия белка ОВ ίη νί\Ό не выяснен до конца. Что касается рецептора ОВ, то высокая аффинность связывания белка ОВ, характерная для гипоталамуса крыс, указывает на локализацию рецептора ОВ. 8!ерйепз е! а1., №11иге 377: 530-532. Для мышей 6Ь/6Ь характерен тот же фенотип, что и для мышей оЬ/оЬ, т.е. крайнее ожирение и диабет типа II; считается, что данный фенотип обусловлен дефектным рецептором ОВ, особенно потому, что мыши 6Ь/6Ь не отвечают на введение белка ОВ. См. 8!ерйепз е! а1., зирга.
С прогрессом технологий рекомбинантных ДНК доступность для терапевтического применения рекомбинантных белков обусловила успехи в химической модификации белков и в создании новых фармацевтических форм бел ков. Одной из целей таких модификаций является защита белка и снижение деградации. Слитые белки и химические присоединения могут эффективно предотвращать физический контакт протеолитических ферментов с собственно белковым скелетом, предотвращая тем самым деградацию белка. К дополнительным преимуществам при определенных условиях относится повышение стабильности, времени циркулирования и биологической активности терапевтического белка. Обзорная статья, посвященная слитым белкам и модификациям белков: Егапз1з, Еосиз оп Сто^1й Еас!огз 3: 4-10 (Мау 1992) (опубликовано МеФзспр!, МоипМете Соий, Епегп Вагпе! Бале, Бопбоп N20, ОБЭ, ИК).
Одной из таких модификаций предусматривается использование Ес-района иммуноглобулинов. Антитела состоят из двух функционально независимых частей: вариабельного домена, известного как ЕаЬ, который связывает антиген, и константного домена, известного как Ес, который обеспечивает связь с такими эффекторами, как комплемент или фагоциты. Есрайон иммуноглобулинов имеет продолжительный срок полужизни в плазме, а ЕаЬ - короткоживущ. Сароп, е! а1., №1Шге 337: 525-531 (1989).
Были сконструированы продукты терапевтических белков с использованием Ес-домена с тем, чтобы обеспечить более продолжительный срок полужизни или ввести такие функции, как связывание с Ес-рецептором, связывание с Абелком, фиксация комплемента и перенос через плаценту, которые обусловлены Ес-доменом иммуноглобулинов. Например, Ес-район антитела 1дС1 был слит с Ν-терминальным фрагментом СЭ30-Б, молекулы, которая связывает рецепторы С'Э30. экспрессирующиеся на клетках лимфомы Ходжкина, анапластических лимфомных клетках, Т-клеточных лейкозных клетках и злокачественных опухолевых клетках других типов. См. патент США № 5,480,981. Интерлейкин 10 (1Б-10), агент, подавляющий отторжение пересаженных органов и антивоспалительный агент, был слит с мышиным Есу2а для увеличения исходно непродолжительного времени циркуляции цитокина. Ζΐκπβ, X. е! а1., Тйе 1оитпа1 о£ 1ттипо1оду, 154: 5590-5600 (1995). Проведены также исследования, направленные на оценку применения рецептора фактора некроза опухолей, соединенного с Ес белком 1дС1 человека, для лечения больных с септическим шоком. Е1зйег, С. е! а1., Ν. Епд1. 1. Меб., 334: 1697-1702 (1996); Уап Ζее, К. е! а1., Тйе 1оитпа1 о£ 1ттипо1оду, 156: 2221-2230 (1996). Ес был также слит с рецептором СЭ4 для получения терапевтического белеса для лечения СПИДа. См. Сароп, е! а1., №11иге 337: 525-531 (1989). Кроме того, Ν-терминальный фрагмент интерлейкина 2 также был слит с Ес фрагментом 1дС1 или 1дС3 для того, чтобы преодолеть короткий срок полужизни интерлейкина 2 и его общую токсич3 ность. См. НагуШ с1 а1., 1ттипо1сс11по1оду. 1: 95-105 (1995).
Поскольку белок ОВ был идентифицирован как многообещающий терапевтический белок, имеется потребность в разработке композиций аналогов ОВ для клинического применения в сочетании с введением белка ОВ или же в качестве альтернативы такому введению. Результатом таких разработок должны быть такие композиции аналогов ОВ, в которых благодаря химическим модификациям и соответствующим фармацевтическим формам достигается снижение деградации белка, повышены стабильность и время циркуляции. В настоящем изобретении заявлены такие композиции.
Краткое описание изобретения
Настоящее изобретение относится к композициям слитого белка Рс-ОВ, способам получения таких композиций и их применения. В частности, настоящее изобретение относится к генетически слитому белку, состоящему из Рсрайона (или аналогов) иммуноглобулинов, слитого с Ν-терминальной областью белка ОВ или его аналогов. Слитый белок Рс-ОВ способен к димеризации посредством цистеиновых остатков Рс-района. Неожиданно модификации по генетическому слиянию Рс-района с Ν-концом белка ОВ обладали преимуществами в отношении стабильности, скорости выведения (клиренса) и пониженной деградации, которые не наблюдаются у белка ОВ или у слитого белка Рсрайона с С-концом белка ОВ. Удивительно и важно, что Ν-терминальная модификация обеспечивает неожиданную защиту белка от деградации, повышает время циркулирования и стабильность по сравнению с белком ОВ или Рсмодификацией С-конца белка ОВ. Такие неожиданные преимущества Рс-модификаций белка ОВ будут важны для потребителей белка ОВ, поскольку подобные изменения обусловливают потребность в более низких дозах или более редких введениях. Таким образом, как описано далее более подробно, настоящее изобретение отличается рядом аспектов, относящихся к генетической модификации белков посредством слияния Рс-района с белком ОВ (или его аналогом), а также к специфическим модификациям, препаратам и способам их применения.
Соответственно, в качестве одного из аспектов настоящего изобретения заявлен слитый белок Рс-ОВ, отличающийся тем, что Рс генетически слит с Ν-концом белка ОВ (или его аналога). Кроме того, фрагмент Рс может быть соединен с Ν-концом белка ОВ (или его аналога) посредством пептида или химических линкеров, известных из уровня техники. Как отмечалось выше и будет более подробно описано далее, слитый белок Рс-ОВ неожиданно оказался более защищенным от деградации, что привело к повышению времени циркулирования и стабильности по сравнению с белком ОВ или Рсмодификацией С-конца белка ОВ. Таким обра зом, дополнительным аспектом настоящего изобретения являются не только композиции на основе слитого белка Рс-ОВ, но и последовательности ДНК, кодирующие такие белки, соответствующие векторы и клетки-хозяева, содержащие такие векторы, применяемые для получения слитых белков согласно настоящему изобретению.
В качестве другого аспекта в настоящем изобретении заявлены способы получения слитого белка Рс-ОВ. К этим способам относятся технологии рекомбинантных ДНК, используемые для получения рекомбинантных белков. Кроме того, данный аспект также включает способы ферментации и очистки.
В качестве другого аспекта в настоящем изобретении заявлены способы устранения избыточного веса у больного или животных, включая модуляцию жировых отложений введением слитых белков Рс-ОВ. С учетом характеристик слитого белка Рс-ОВ, рассматриваются способы снижения количества и/или частоты введения белка ОВ путем введения слитых белков Рс-ОВ.
В качестве другого аспекта в настоящем изобретении заявлены терапевтические способы для лечения заболеваний, сопутствующих избыточному накоплению жира, таких как диабет, дис- и гиперлипидемии, атеросклероз, артериальные бляшки, а также для предотвращения образования или снижения вероятности образования желчных камней, повышения чувствительности к инсулину и/или увеличения мышечной массы.
В качестве другого аспекта в настоящем изобретении заявлены соответствующие фармацевтические композиции белков Рс-ОВ, их аналогов и производных, применяемые для такой терапии.
Краткое описание фигур
Фиг. 1 - Рекомбинантная мышиная (двухцепочечная) ДНК теЮВ (8ΕΟ.ΙΩ. Νοβ. 1 и 2) и аминокислотная последовательность (8ΕΟ.ΙΩ. Νο.3).
Фиг. 2 - Рекомбинантная человеческая (двухцепочечная) ДНК аналога теЮВ (8ΕΟ.ΙΩ. Νοδ.4 и 5) и аминокислотная последовательность (δΕρ.ΙΌ. Νο.6).
Фиг. 3 (А-С) - Рекомбинантная человеческая (двухцепочечная) ДНК те1Рс-ОВ (8ΕΟ.ΙΩ. Νοδ.7 и 8) и аминокислотная последовательность (δΕρ.ΙΌ. Νο.9).
Фиг. 4 (А-С) - Рекомбинантная человеческая (двухцепочечная) ДНК варианта те1Рс-ОВ (δΕρ.ΙΌ. Νοβ.10 и 11) и аминокислотная последовательность (8ΕΟ.ΙΩ. Νο.12).
Фиг. 5 (А-С) - Рекомбинантная человеческая (двухцепочечная) ДНК варианта те1Рс-ОВ (δΕρ.ΙΌ. Νοβ.13 и 14) и аминокислотная последовательность (8ΕΟ.ΙΩ. Νο.15).
Фиг. 6 (А-С) - Рекомбинантная человеческая (двухцепочечная) ДНК варианта те1Рс-ОВ (8ЕЦ.Ш. Νοκ.16 и 17) и аминокислотная последовательность (ЗЕЦ.ГО. Νο.18).
Подробное описание изобретения
Настоящее изобретение относится к композициям слитого белка Ес-ΘΒ, способам получения таких композиций и их применения. В частности, настоящее изобретение относится к генетически или химически слитому белку, состоящему из Ес-района иммуноглобулинов и Νтерминальной области белка ОВ. Неожиданно слияние Ес-района с Ν-концом белка ОВ привело к таким преимуществам, которых лишены белок ОВ или слитые белки Ес-района с Сконцом белка ОВ. Удивительно, но Νтерминальная модификация белка Ес-ΟΒ обеспечивает неожиданную защиту белка от деградации, повышает время циркулирования и стабильность. Соответственно, слитой белок ЕсΟΒ, его аналоги и производные, а также способы их получения и применения описаны далее более подробно.
Композиции
Ес-последовательность в последовательности рекомбинантного белка Ес-ΟΒ человека, приведенная в 8ЕЦ.Ш. Νο.9 (см. фиг. 3), может быть выбрана из тяжелой цепи иммуноглобулина 1дС-1 человека, см. ЕШкои, ЕМ. е! а1., ШсШс Аабк Век. 10: 4071-4079 (1982), или любой другой последовательности Ес, известной из уровня техники (например, других классов 1§С. к которым относятся (без ограничения перечисленными), 1дС-2, [дС-3 и 1дС-4, или других иммуноглобулинов). Могут быть сконструированы варианты, аналоги или производные Ес-компонента, например, производством различных замен остатков или последовательностей.
Остатки цистеина можно делетировать или заменить другими аминокислотами для предотвращения образования дисульфидных связей Ес-последовательностей. В частности, аминокислота в положении 5 БЕЦ.Ш. Νο.9 является цистеиновым остатком. Последовательность рекомбинантного Ес-ΟΒ, 8ЕЦ.Ш. Νο.9, состоит из 378 аминокислот (не считая остатка метионина). Первая аминокислота в последовательности рекомбинантного белка Ес-ΟΒ на фиг. 3 обозначается как +1 с метионином в положении -1.
Можно удалить остаток цистеина в положении 5 или заменить одной или несколькими аминокислотами. Остаток аланина можно заменить остатком цистеина в положении 6 с получением вариантной аминокислотной последовательности, приведенной на фиг. 4 (ЯЕЦ.Ш. Νο.12). Рекомбинантный белок Ес-ΟΒ, приведенный на фиг. 4, состоит из 378 аминокислот (не считая остатка метионина). Первая аминокислота в последовательности рекомбинантного белка Ес-ΟΒ на фиг. 4 обозначается как +1 с метионином в положении -1.
Аналогично, цистеин в положении 5 последовательности БЕЦ.Ш. Νο.9 может быть за менен серином или другим аминокислотным остатком или же делетирован. Можно получить вариант или аналог путем делеции аминокислот в положениях 1, 2, 3, 4 и 5, как в варианте ЗЕЦ.ГО. Νο.15 (см. фиг. 5). Замены, произведенные по этим положениям, также входят в объем настоящего изобретения. Рекомбинантный белок Ес-ΟΒ, приведенный на фиг. 5, состоит из 373 аминокислот (не считая остатка метионина). Первая аминокислота в последовательности рекомбинантного белка Ес-ΟΒ на фиг. 5 обозначается как +1 с метионином в положении -1.
Могут быть произведены модификации путем замены четырех аминокислот для удаления сайта связывания комплемента (С1с|). В этой вариантной модификации последовательности 8ЕО.ГО. Νο.15 лейцин в положении 15 будет заменен глутаматом, глутамат в положении 98 будет заменен аланином и лизин в положениях 100 и 102 будет заменен аланином (см. фиг. 6 и 8ЕЦ.Ш. Νο.18). Рекомбинантный белок Ес-ΟΒ, приведенный на фиг. 6, состоит из 373 аминокислот (не считая остатка метионина). Первая аминокислота в последовательности рекомбинантного белка Ес-ΟΒ на фиг. 6 обозначается как +1 с метионином в положении -1.
Аналогично, один или несколько остатков тирозина можно заменить остатками фенилаланина. Дополнительно рассматриваются также другие вариантные аминокислотные вставки, делеции и/или замены, которые включены в объем настоящего изобретения. Кроме того, изменения могут быть осуществлены в виде введения измененных аминокислот, таких как пептидомиметики или Ό-аминокислоты. Белок Ес может быть также соединен с белками ОВ в белке Ес-ΟΒ посредством химических или аминокислотных линкерных единиц различной длины. Такие химические линкеры хорошо известны из уровня техники. Последовательности аминокислотных линкеров могут включать, без ограничений перечисленными, (а) а1а, а1а, а1а;
(б) а1а, а1а, а1а, а1а;
(в) а1а, а1а, а1а, а1а, а1а;
(г) д1у, д1у;
(д) §1у, §1у, §1у;
(ж) §1у, §1у, §1у, §1у, §1у;
(з) §1у, §1у, §1у, §1у, §1у, §1у, §1у;
(и) §1у-рго-§1у;
(к) д1у, д1у, рго, д1у, д1у и (л) любые комбинации компонентов с (а) до (к).
ОВ-часть слитого белка Ес-ΟΒ может быть выбрана из набора рекомбинантных белков мыши, приведенного в ЗЕЦ.Ш. Νο.3 (см. фиг. 1), или рекомбинантного белка человека, описанного Ζΐιηηβ е! а1., №Щ1ге, кирга (работа, упоминаемая в качестве ссылки), или же такого белка с отсутствующим остатком глутаминила в положении 28 (См. Ζΐιηηβ е! а!., №Щ1ге, кирга, на
Ί стр. 428). Может быть также использован аналог рекомбинантного белка ОВ человека, представленный последовательностью 8ΕΟ.ΙΌ. Νο.6 (см. фиг. 2), который содержит (1) аргинин вместо лизина в положении 35; и (2) лейцин вместо изолейцина в положении 74 (кратким обозначением этого аналога служит рекомбинантный человеческий К^-Ь35, 1^Ь74). Аминокислотные последовательности рекомбинантного человеческого и рекомбинантного мышиного белков или их аналогов, имеющих или не имеющих слитый фрагмент Рс на Ν-конце белка ОВ, приведены ниже с метионильным остатком в положении -1; однако, в случае любого из представленных белков ОВ или их аналогов, метионильный остаток может отсутствовать.
Мышиный белок существенно гомологичен человеческому белку, что в особенности справедливо в отношении зрелого белка, и особенно по Ν-концу. Можно получить аналог рекомбинантного человеческого белка путем изменений (таких, как замена аминокислотных остатков) в рекомбинантной человеческой последовательности. Поскольку рекомбинантный человеческий белок обладает биологической активностью на мышах, такой аналог, скорее всего, будет активен и в отношении человека. Например, при использовании человеческого белка, имеющего лизин в качестве остатка 35 и изолейцин в качестве остатка 74, согласно нумерации 8ΕΟ.ΙΌ. Νο.6, при том, что первая аминокислота является валином, а аминокислота в положении 146 - цистеин, можно заменить другой аминокислотой одну или несколько аминокислот в положениях 32, 35, 50, 64, 68, 71, 74, 77, 89, 97, 100, 105, 106, 107, 108, 111, 118, 136, 138 и 145. Можно выбрать аминокислоту в соответствующем положении мышиного белка (8ΕΟ.ΙΌ. Νο.3) или другую аминокислоту.
Можно также получить консенсусные молекулы на основе последовательности белка ОВ крысы. См. Мигакат1 с1 а1., Вюсйет. Βίοрйуз. Кез. Сотт. 209: 944-952 (1995), работа, цитируемая в качестве ссылки. Крысиный белок ОВ отличается от белка ОВ человека по следующим положениям (с использованием нумерации 8ΕΟ.ΙΌ. Νο.6): 4, 32, 33, 35, 50, 68, 71, 74, 77, 78, 89, 97, 100, 101, 102, 105, 106, 107, 108, 111, 118, 136, 138 и 145. Можно заменить другой аминокислотой одну или несколько аминокислот в этих различающихся положениях. Положения, обозначенные подчеркнутыми цифрами, это те положения, по которым белок ОВ мыши и белок ОВ крысы отличаются от белка ОВ человека, и потому они особенно пригодны для замен. По одному или нескольким положениям аминокислоту соответствующего белка ОВ крысы можно заменить другой аминокислотой.
Положения, которые в крысином и мышином белках ОВ отличаются от таковых в зрелом белке ОВ человека, следующие: 4, 32, 35, 50, 64,
68, 71, 74, 77, 89, 97, 100, 105, 106, 107, 108, 111, 118, 136, 138 и 145. Согласно 8ΕΟ.ΙΌ. Νο.6 белок ОВ, в котором одна или несколько аминокислот заменены другими аминокислотами, такими, например, которые обнаруживаются в соответствующих крысиной и мышиной последовательности, также может быть эффективным.
Аминокислоты, обнаруживаемые в белке ОВ макаки резус и отличающиеся от таковых в зрелом белке ОВ человека, таковы: 8(8), 35(К), 48(У), 53(0), 60(Ι), 66(Ι), 67(Ν), 68(Ь), 100(Ь), 108(Ε), 112(Ό) и 118(Ь) (совпадения указаны в скобках с использованием однобуквенного кода аминокислот). Поскольку рекомбинантный белок ОВ человека активен в отношении обезьян циномолгус, может быть эффективен и белок ОВ человека с последовательностью 8ΕΟ.ΙΌ. Νο.6 (с лизином в положении 35 и изолейцином в положении 74), у которого одна или несколько дивергентных аминокислот заменены другой аминокислотой, такой как аминокислоты в скобках. Необходимо отметить, что отдельные дивергентные аминокислоты такие же, как и обнаруживаемые в мышином белке (положения 35, 68, 89, 100 и 112). Так, можно получить консенсусную молекулу мышь/макака/человек, имеющую (с использованием нумерации 8ΕΟ.ΙΌ. Νο.6, в которой имеются лизин в положении 35 и изолейцин в положении 74) одну или несколько аминокислот, замещенных другой аминокислотой: 4, 8, 32, 33, 35, 48, 50, 53, 60, 64, 66, 67, 68, 71, 74, 77, 78, 89, 97, 100, 102, 105, 106, 107, 108, 111, 112, 118, 136, 138, 142 и 145.
Могут быть получены и другие аналоги путем делеции части аминокислотной последовательности белка. Например, зрелый белок утрачивает лидерную последовательность (от -22 до -1). Можно получить следующие усеченные формы молекул белка ОВ человека (с использованием нумерации 8ΕΟ.ΙΌ. Νο.6):
(а) аминокислоты 98-146 (б) аминокислоты 1-32 (в) аминокислоты 40-116 (г) аминокислоты 1-99 и (соединенные с) 112-146 (д) аминокислоты 1-99 и (соединенные с) 112-146, имеющие одну или несколько аминокислот 100-111, вставленные между аминокислотами 99 и 112.
Усеченные формы могут быть изменены по одной или нескольким аминокислотам, по которым белки ОВ крысы, мыши или макаки резус отличаются от белка ОВ человека. Более того, измерения могут быть произведены в виде вставки измененных аминокислот, таких как пептидомиметики или Ό-аминокислоты.
Таким образом, в объем настоящего изобретения входит такой слитый белок Рс-ОВ, в котором белок ОВ выбран из следующего:
(а) аминокислотная последовательность 1146, приведенная в 8ЕО. ГО. Ыо.3 (ниже) или 8ЕО. ГО. Νο.6;
(б) аминокислотная последовательность 1146, приведенная в 8Е0. ГО. Νο.6, имеющая остаток лизина в положении 35 и остаток изолейцина в положении 74;
(в) аминокислотная последовательность компонента (б), в которой различные аминокислоты заменены в одном или нескольких из следующих положений (с использованием нумерации 8ЕО. ГО. Νο.6): 4, 32, 33, 35, 50, 64, 68, 71, 74, 77, 78, 89, 97, 100, 102, 105, 106, 107, 108, 111, 118, 136, 138, 142 и 145;
(г) аминокислотная последовательность компонентов (а), (б) или (в), в которой дополнительно отсутствует глутаминиловый остаток в положении 28;
(д) аминокислотная последовательность компонентов (а), (б), (в) или (г), имеющая на Νконце метионильный остаток;
(е) усеченный аналог белка ОВ, выбранный из следующего (с использованием нумерации 8ЕО. ГО. Νο.6):
(ΐ) аминокислоты 98-146;
(ίί) аминокислоты 1-32;
(ίίί) аминокислоты 40-116;
(ίν) аминокислоты 1-99 и 112-146;
(ν) аминокислоты 1-99 и 112-146, имеющие одну или несколько аминокислот 100-111, вставленные между аминокислотами 99 и 112;
(νί) усеченный ОВ аналог компонента (ί), в котором одна или несколько из следующих аминокислот: 100, 102, 105, 106, 107, 108, 111, 118, 136, 138, 142 и 145, заменена другой аминокислотой;
(νίί) усеченный аналог компонента (ίί), в котором одна или несколько из следующих аминокислот: 4, 8 и 32, заменена другой аминокислотой;
(νίίί) усеченный аналог компонента (ίίί), в котором одна или несколько из следующих аминокислот: 50, 53, 60, 64, 66, 67, 68, 71, 74, 77, 78, 89, 97, 100, 102, 105, 106, 107, 108, 111 и 122, заменена другой аминокислотой;
(ίχ) усеченный аналог компонента (ίν), в котором одна или несколько из следующих аминокислот: 4, 8, 32, 33, 35, 48, 50, 53, 60, 64, 66, 67, 68, 71, 74, 77, 78, 89, 97, 112, 118, 136, 138, 142 и 145, заменена другой аминокислотой;
(х) усеченный аналог компонента (ν), в котором одна или несколько из следующих аминокислот: 4, 32, 33, 35, 50, 64, 68, 71, 74, 78, 89, 97, 100, 102, 105, 106, 107, 108, 111, 118, 136, 138, 142 и 145, заменена другой аминокислотой;
(χί) усеченный аналог любого из компонентов (1)-(х), имеющий Ν-терминальный метионильный остаток; и (ж) белок ОВ, аналог или производное в виде любого из компонентов от (а) до (е), содержащий химическую сущность, присоединенную к белковой сущности;
(з) производное компонента (ж), при том, что данная химическая сущность представляет собой водорастворимый полимер;
(и) производное компонента (з), при том, что данный водорастворимый полимер представляет собой полиэтиленгликоль;
(к) производное компонента (з), при том, что данный водорастворимый полимер представляет собой полиаминокислотную сущность;
(л) производное любого из компонентов от (р) до (к), при том, что данная сущность присоединена исключительно к Ν-концу данного белка;
(м) белок ОВ, аналог или производное в виде любого из компонентов от (а) до (л) в фармацевтически приемлемом носителе.
Производные
Заявленные слитые белки Ес-ОВ (термин белок включает понятия пептид, Ес, ОВ или аналоги, описываемые в настоящей заявке, если не указано обратное) были дериватизированы присоединением одной или нескольких химических сущностей к слитому белку Ес-ОВ. Эти химически модифицированные производные могут впоследствии вводиться в состав фармацевтических форм, предназначенных для внутриартериального, внутрибрюшинного, внутримышечного, подкожного, внутривенного, орального, назального, пульмонарного, местного и других способов введения, которые обсуждаются далее. Показано, что при определенных условиях химические модификации биологически активных белков обеспечивают дополнительные преимущества, такие как повышенная стабильность и время циркулирования терапевтического белка и пониженная иммуногенность. См. патент США № 4,179,337, Όανίδ е! а1., опубликованный 18 декабря 1979. См. обзор: АЬис1ю\\'5к| е! а1., ίη Еихушез аз Этидз (1.8. Ηο^τЬегд аиб ЕКлЬепк, ебз. рр.367-383 (1981)); Егаис1з е! а1., зирга.
Химические сущности, пригодные для подобной дериватизации, могут быть выбраны из различных водорастворимых полимеров. Выбранный полимер должен быть водорастворимым с тем, чтобы присоединенный к нему белок не преципитировал в водной среде, такой как физиологическое окружение. Для терапевтического применения конечного препарата предпочтительно, чтобы полимер был фармацевтически приемлемым. Квалифицированный специалист способен выбрать нужный полимер с учетом изложенных соображений в зависимости от того, будет ли конъюгат полимер/белок применяться терапевтически, и если будет, то с учетом нужной дозировки, времени циркулирования, устойчивости к протеолизу и других условий. В отношении заявленных в настоящем изобретении белков и полипептидов эффективность дериватизации можно подтвердить введением производного в желаемой форме (например, при помощи осмотического насоса, или, что более предпочтительно, инъекцией или вливанием, или же в виде формы, предназначенной для орального, легочного или назального применения) и отслеживанием биологических эффектов, как описано.
Водорастворимый полимер может быть выбран из группы, включающей, например, полиэтиленгликоль, сополимеры этиленгликоля/пропиленгликоля, карбоксиметилцеллюлозу, декстран, поливиниловый спирт, поливинилпирролидон, поли-1,3-диоксолан, поли-1,3,6триоксан, сополимер этилена/малеинового ангидрида, полиаминокислоты (как гомополимеры, так и случайные сополимеры), декстран или поли(п-винилпирролидон)полиэтиленгликоль, гомополимеры пропиленгликоля, сополимеры пропиленоксида/этиленоксида, полиоксиэтилированные полиолы и поливиниловый спирт. Пропиональдегид-полиэтиленгликоль может иметь преимущества для производства из-за его стабильности в воде. Могут использоваться также сукцинат и стирен.
Белки ОВ или Бе, используемые для получения слитого белка Бс-ОВ, можно модифицировать присоединением полиаминокислот или единичных боковых аминокислот к белку ОВ или Бс (или аналогу). Например, полиаминокислота может служить дополнительным белком-носителем, который, подобно белку Бс, слит с белком ОВ или его аналогом, и служить для увеличения срока циркулирования белка в дополнение к аналогичному эффекту, достигаемому за счет слияния Бс-ОВ. С учетом терапевтических и косметических целей настоящего изобретения, такие полиаминокислоты не должны обладать или не должны индуцировать антигенный ответ или другие нежелательные реакции. Такие полиаминокислоты могут быть выбраны из группы, включающей сывороточный альбумин (такой, как альбумин сыворотки человека), дополнительное антитело или его фрагмент (например, Бс-район) или другие полиаминокислоты, например лизины. Как указывается далее, местом присоединения полиаминокислоты может быть Ν-конец белка Бс-ОВ, или С-конец, или другие места между ними; она может быть также присоединена к белку Бс-ОВ посредством химического линкера.
Полимер может иметь любой молекулярный вес и быть разветвленным или неразветвленным. Для полиэтиленгликоля, с учетом удобства в работе и целей производства, предпочтителен средний молекулярный вес от, примерно, 2 кЭа до, примерно, 100 кЭа (термин примерно указывает, что в препаратах полиэтиленгликоля некоторые молекулы имеют больший молекулярный вес, чем указано, а некоторые - меньший). В зависимости от желаемого терапевтического профиля (например, продолжительности поддерживаемого высвобождения, возможных эффектов на биологическую активность, простоты обращения, степени или отсутствия антигенности и других известных воздействий полиэтиленгликоля на терапевтический белок или его аналог), можно применять полиэтиленгликоль другого молекулярного веса.
Количество присоединенных молекул полимера может варьировать, и квалифицированный специалист способен контролировать эффект данного фактора на функцию белка. Может быть осуществлена монодериватизация, или ди-, три-, тетра-, или какая-либо комбинация дериватизаций с одной и той же или другой химической сущностью (например, такими полимерами, как полиэтиленгликоли различных молекулярных весов). Соотношение молекул полимера и молекул белка (или пептида) будет варьировать, так же, как и их концентрация в реакционной смеси. Вообще, оптимальное соотношение (с точки зрения эффективности реакции, в которой нет избытка непрореагировавшего белка или полимера) может определяться такими факторами, как заданная степень дериватизации (например, моно-, ди-, три- и т.д.), молекулярный вес выбранного полимера, является ли полимер разветвленным или линейным, и применяемыми условиями реакции.
Химические сущности должны присоединяться к белку с учетом воздействия на функциональные или антигенные домены белка. Имеется ряд способов присоединения, доступных квалифицированному специалисту. Например, ЕР 0 401 384, упоминаемый в качестве ссылки (присоединение ПЭГа к 6-С8Б), см. также Майк е1 а1., Ехр. Неша1о1. 20:1028-1035 (1992) (описано пэгирование 6М-С8Б при помощи трезил хлорида). Например, полиэтиленгликоль может быть ковалентно связан с белком через реакционноспособную группу, такую как свободная амино- или карбоксильная группа. Реакционноспособными группами являются такие, с которыми может быть связана активированная молекула ПЭГ. Аминокислотные остатки, содержащие свободную аминогруппу, могут включать остатки лизина и Ν-концевой остаток аминокислоты. Таковые, содержащие свободную карбоксильную группу, могут включать остатки аспарагиновой кислоты, глутаминовой кислоты и С-концевой остаток аминокислоты. В качестве реакционноспособной группы для связывания с молекулой(-ами) ПЭГ могут быть использованы сульфгидрильные группы. Для терапевтических целей обычно предпочтительно присоединение по аминогруппе, например присоединение по Ν-концу или группе лизина. Присоединения по остаткам, важным для рецепторного связывания, надо избегать, если требуется рецепторное связывание.
Может возникнуть потребность в получении слитого белка Бс-ОВ, специфически модифицированного по Ν-концу. Используя полиэтиленгликоль для иллюстрации заявленных композиций, исследователь может сделать вы13 бор из разнообразия молекул полиэтиленгликоля (по молекулярному весу, разветвленности и т.д.), определить соотношение молекул полиэтиленгликоля и молекул белка (или пептида) в реакционной смеси, тип проводимой реакции пэгирования и способ получения конкретного Ν-терминально пэгированного белка. Способ получения Ν-терминально пэгированного препарата (например, при необходимости, разделение данной сущности и других монопэгированных сущностей) может включать очистку Νтерминально пэгированного материала из популяции всех пэгированных молекул. Селективная Ν-терминальная химическая модификация может быть достигнута путем восстановительного алкилирования, при котором используется дифференциальная реактивность различных типов первичных аминогрупп (лизиновых против Νтерминальных), доступных для дериватизации в конкретном белке. При соответствующих условиях реакции достигается преимущественно селективная дериватизация белка по Ν-концу полимером, присоединенным через карбонильную группу. Например, можно селективно пэгировать белок по Ν-концу, проводя реакцию при таких значениях рН, которые позволяют использовать различия между рК, еаминогруппой остатков лизина и таковым αаминогруппы Ν-концевого остатка белка. Такой селективной дериватизацией контролируется присоединение водорастворимого полимера к белку: конъюгация с полимером происходит преимущественно по Ν-концу белка и никакой существенной модификации других реакционноспособных групп, таких как аминогруппы боковой цепи, не происходит. При применении восстановительного алкилирования водорастворимый полимер имеет единственную реакционноспособную альдегидную группу для соединения с белком. Можно использовать полиэтиленгликоль пропиональдегид, содержащий одну реакционноспособную альдегидную группу.
Ν-терминально монопэгированное производное является предпочтительным в силу легкости получения терапевтического препарата. Ν-терминальное пэгирование обеспечивает получения гомогенного продукта, поскольку характеристика продукта облегчена по сравнению с ди-, три - или другими мультипэгированными продуктами. Применение описанного выше процесса восстановительного алкилирования для получения пэгированного по Ν-концу продукта является предпочтительным из-за простоты коммерческого производства.
Комплексы
Слитой белок Те-ОВ, его аналог или производное можно назначать в виде комплекса со связывающей композицией. Такие связывающие композиции могут оказывать воздействие на пролонгирование времени циркулирования за те пределы, которые достижимы для слитого белка Ре-ОВ, его аналога или производного. Такой композицией может быть белок (или, синонимично, пептид). Примером связывающего белка служит рецептор белка ОВ или его фрагмент, такой как его растворимый фрагмент. Другие связывающие белки могут быть определены исследованием белка ОВ или белка Рс-ОВ в сыворотке или эмпирическим скринингом на наличие связывания. Используемые связывающие белки обычно не должны интерферировать со способностью белка ОВ, слитых белков РсОВ, их аналогов или производных связываться с эндогенным рецептором белка ОВ и/или влиять на передачу сигнала.
Фармацевтические композиции
В настоящем изобретении также заявлены способы применения фармацевтических композиций слитых белков Рс-ОВ и их производных. Такие фармацевтические композиции могут назначаться для инъекций, оральной, пульмонарной, назальной, трансдермальной и других форм введения. В целом, изобретением охватываются фармацевтические композиции, содержащие эффективные количества белка и его производных, полученные согласно настоящему изобретению, вместе с фармацевтически приемлемыми разбавителями, консервантами, солюбилизаторами, эмульгаторами, адъювантами и/или носителями. Такие композиции содержат растворители с различными буферами (например, Тпк-НСТ ацетат, фосфат), различного рН и ионной силы; такие добавки, как детергенты и солюбилизирующие агенты (например, Твин 80, Полисорбат 80), антиоксиданты (например, аскорбиновая кислота, метабисульфит натрия), консерванты (например, тимерзол, бензиловый спирт) и наполнители (например, лактоза, маннитол). Терапевтический материал может быть введен в конкретные препараты полимерных соединений, таких как полимолочная кислота, полигликоловая кислота и т.д., или в липосомы. Может применяться гиалуроновая кислота, которая способствует поддержанию препарата в циркуляции. Такие композиции могут влиять на физическое состояние, стабильность, скорость высвобождения ίη νίνο и скорость выведения ίη νίνο заявленных белков и их производных. См., например, ЯстшдЮп'к Рйаттасеи11са1 8с1епсек, 181й Ей. (1990, Маск РиЫкЫпд Со., ЕакЮп. РА 18042), стр. 1435-1712, упоминаемую в настоящем описании в качестве ссылки. Композиции могут быть приготовлены в жидком виде или в виде сухого порошка, такого как лиофилизированная форма. Рассматриваются также имплантируемые формы для поддерживаемого высвобождения, так же, как и трансдермальные формы.
Рассматриваются также оральные твердые дозировочные формы, которые описаны в целом в ЯетшдЮпА Р11аппасеиОса1 8аепсе8, 18111 Ей.
1990 (Маск РнЫМипд Со., Еа§!оп, РА 18042) в
Главе 89, работа, упоминаемая в настоящем описании в качестве ссылки. К твердым дозировочным формам относятся таблетки, капсулы, пилюли, пастилки или лепешки. Для создания фармацевтических форм заявленных композиций можно использовать липосомальную или протеиноидную инкапсуляцию (как, например, протеиноидные микросферы, описанные в патенте США № 4,925673). Можно использовать липосомную инкапсуляцию, а липосомы дериватизировать различными полимерами (например, патент США № 5,013,556). Описание возможных твердых дозировочных форм терапевтических средств дано МагзЬа11, К. Ιη: Мобегп РЬагтасеибсз Ебйеб Ьу С.3. Вапкег аиб С.Т. РЬобез. Глава 10, 1979, работа, упоминаемая в настоящем описании в качестве ссылки. В целом, фармацевтическая форма будет включать слитой белок Гс-ОВ, (его аналог или производное) и инертные ингредиенты, создающие защиту от желудочного окружения и высвобождающие биологически активный материал в кишечнике.
Также специально рассматриваются оральные дозировочные формы дериватизированных белков. Слитой белок Гс-ОВ можно так химически модифицировать, что оральное применение производного окажется эффективным. Вообще, под химической модификацией подразумевают присоединение к молекуле белка (или пептида) по меньшей мере одной химической сущности, при том, что данная сущность делает возможным (а) подавление протеолиза и (б) поступление в кровоток из желудка или кишечника. Также желательно повысить общую стабильность белка и повысить время его циркулирования в организме. Примерами таких сущностей служат полиэтиленгликоль, сополимеры этиленгликоля и пропиленгликоля, карбоксиметилцеллюлоза, декстран, поливиниловый спирт, поливинилпирролидон и полипролин. АЬис1ю\\ък| апб Эау1з, 3о1иЬ1е Ро1утег-Епхуте Аббис!з. Ιη: Епхутез аз Эгидз, НосепЬегд апб ВоЬейз, ебз., ^беу-1п1егзс1епсе, Ыете Уогк, ΝΥ, (1981), стр.367-383; №^тагк, е! а1., 1. Арр1. Вюскет. 4: 185-189 (1982). К другим используемым полимерам относятся поли-1,3-диоксолан и поли1,3,6-тиоксокан. Как указывалось выше, для фармацевтического применения предпочтительным является полиэтиленгликоль.
В случае слитого белка Гс-ОВ, его аналога или производного местом высвобождения может быть тонкий кишечник (например, двенадцатиперстная кишка, тощая кишка, подвздошная кишка) или толстый кишечник.
Квалифицированный специалист может выбрать такую конечную лекарственную форму, которая не будет растворяться в желудке, а будет высвобождать действующее начало в двенадцатиперстной кишке или еще где-либо в кишечнике. Предпочтительно при высвобождении избежать неблагоприятного воздействия среды желудка или защитой слитого белка Гс-ОВ, его аналога или производного, или же путем высвобождения биологически активного материала за пределами желудка, например в кишечнике.
Для того чтобы противостоять агрессивному окружению в желудке, покрытие должно быть непроницаемо по меньшей мере при рН 5,0. Примерами наиболее обычных инертных ингредиентов, используемых для создания покрытий, устойчивых к желудочному соку, служат тримеллитат ацетатцеллюлозы (САТ), фталат гидроксипропилметилцеллюлозы (НРМСР), НРМСР 50, НРМСР 55, Асцк-Цепс, фталат поливинилацетата (РУАР), Еибгадй Τ30Ό, Еибгадй Ь, Еибгадй 3 и шеллак. Эти покрытия могут применяться в виде смешанных пленок.
Покрытие или смесь покрытий могут наноситься на таблетки не только для целей защиты от желудочного сока. К таким покрытиям относятся сахарное, а также покрытия, способствующие проглатыванию таблеток. Капсулы могут состоять из твердой оболочки (например, желатиновой) для доставки сухого терапевтического агента, например порошка; для жидких форм можно использовать мягкую желатиновую оболочку. В качестве материала капсул можно использовать крахмал или другой съедобней углевод. Для приготовления пилюль, лепешек, сплавленных таблеток и порошковых таблеток можно использовать способ влажной формовки.
Терапевтический агент может содержаться в конечной лекарственной форме в виде микрочастиц, гранул или чешуек размером около 1 мм. Материал, используемый для заполнения капсул, может иметь вид порошка, слегка спрессованных пробок или даже таблеток. Конечную лекарственную форму можно получить под давлением.
Могут вводиться оцветители и ароматизирующие агенты. Например, белок (или производное) можно ввести в состав конечной формы (например, в липосомы или микросферы), а затем смешать со съедобным продуктом, таким как охлажденный напиток, содержащий оцветители и ароматизаторы.
При необходимости разбавить терапевтический препарат или увеличить его объем, это достигается добавлением инертного материала. К таким наполнителям относятся углеводороды, особенно маннитол, α-лактоза, безводная лактоза, целлюлоза, сахароза, модифицированные декстраны и крахмал. В качестве наполнителей могут применяться некоторые неорганические соли, такие как трифосфат кальция, карбонат магния и хлорид калия. Среди коммерчески доступных наполнителей можно назвать Газ!Г1о, Етбех, ЗТА-Кх 1500, Етсотргезз и Ауюе11.
В твердую дозировочную форму терапевтического препарата могут входить разрыхлители. К материалам, используемым в качестве разрыхлителей, относятся, без ограничения перечисленными, крахмал и коммерческий разрыхлитель на основе крахмала, Ехр1о!аЬ. Можно применять натриевый гликолат крахмала, амберлит, натриевую карбоксиметилцеллюлозу, ультрамилопектин, альгинат натрия, желатин, апельсиновую кожуру, кислую карбоксиметилцеллюлозу, натуральные губки и бентонит. Другим видом разрыхлителей являются нерастворимые катионобменные смолы. Как разрыхлители и связующие применяют такие порошковые смолы, как агар, карайя или трагакант. Альгиновая кислота и ее натриевая соль также используются в качестве разрыхлителей.
Для поддержания препарата в виде твердой таблетки применяются связующие вещества, среди которых такие природные продукты, как гуммиарабик, трагакант, крахмал и желатин. Среди других связующих можно назвать метилцеллюлозу (МС), этилцеллюлозу (ЕС) и карбоксиметилцеллюлозу (СМС). Поливинилпирролидон (РУР) и гидроксипропилметилцеллюлоза (НРМС) могут применяться для гранулирования терапевтического препарата в спиртовых растворах.
Для предотвращения слипания в процессе приготовления конечной лекарственной формы в фармацевтический состав можно включать антифрикционные агенты. Любриканты можно использовать как прослойку между терапевтическим агентом и формовочной ячейкой. К ним относятся, без ограничения перечисленными, стеариновая кислота, включая ее магниевую и кальциевую соли, политетрафторэтилен (РТРЕ), жидкий парафин, растительные масла и воски. Могут применяться такие жидкие любриканты, как лаурилсульфат натрия, лаурилсульфат магния, полиэтиленгликоль различного молекулярного веса, СагЬо^ах 4000 и 6000.
Для повышения текучести препарата в процессе приготовления конечной лекарственной формы и для облегчения формовки под давлением могут применяться глиданты. К ним относятся крахмал, тальк, пирогенный кремний и гидратированный кремнийалюминат.
Для облегчения растворения терапевтического агента в водной среде в качестве увлажняющего агента может быть добавлено поверхностно-активное вещество. К таким поверхностно-активные веществам относятся такие катионные детергенты, как лаурилсульфат, диоктилнатрийсульфосукцинат и диоктилнатрийсульфонат. К используемым катионным детергентам относятся бензалкониумхлорид или бензетониумхлорид. В список возможных неионных детергентов, которые могут включаться в состав конечных форм в качестве поверхностноактивных веществ, входят также лауромакроголь 400, полиоксил 40 стеарат, полиоксиэтилен гидрогенированное касторовое масло 10, 50 и 60, глицерин моностеарат, полисорбат 40, 60, 65 и 80, жирнокислый эфир сахарозы, метилцеллюлоза и карбоксиметилцеллюлоза. Эти поверхностно-активные вещества могут присутствовать в конечной форме белка или производного сами по себе или в смеси в различных пропорциях.
К добавкам, которые значительно усиливают проникновение белка (или производного), относятся, например, такие жирные кислоты, как олеиновая кислота, линолевая кислота и леноленовая кислота.
Могут потребоваться конечные формы для контролируемого высвобождения. Препарат можно заключить в инертный матрикс, который делает возможным высвобождение диффузией или выщелачиванием, например, в смолы или губки.
В конечную форму могут быть также введены медленно дегенерирующие матриксы, например альгинаты, полисахариды. Другой формой контролируемого высвобождения является способ, основанный на терапевтической системе Огок (Αίζα Согр.), согласно которой препарат заключен в полупроницаемую мембрану, через которую проникает вода и в силу осмотического эффекта вымывает препарат через небольшое отверстие.
При получении конечных форм можно использовать и другие покрытия. К ним относятся различные сахара, применяемые для карамелизации. Терапевтический агент может также назначаться в виде покрытых пленкой таблеток, и используемые в этом случае материалы делятся на две группы. В первую входят такие неперевариваемые материалы, как метилцеллюлоза, этилцеллюлоза, гидроксиэтилцеллюлоза, метилгидроксиэтилцеллюлоза, гидроксипропилцеллюлоза, гидроксипропилметилцеллюлоза, натрийкарбоксиметилцеллюлоза, провидон и полиэтиленгликоли. Во вторую группу входят перевариваемые материалы, среди которых эфиры и фталевая кислота.
Для получения оптимального пленочного покрытия можно использовать смесь материалов. Пленочное покрытие можно наносить карамелизацией, жидким способом или под давлением.
Рассматривается также легочный (пульмонарный) способ доставки заявленного белка (или производного). Белок (или производное) попадает в легкие млекопитающего при вдыхании и через эпителиальную выстилку легких проникает в кровоток. (К другим работам на эту тему относятся Аб)е1 е! а1., Рйагтасеи11са1 Кекеагсй 7: 565-569 (1990); Аб)е1 е! а1., 1и1ета!юиа1 1оита1 о! Рйагтасеибск 63: 135-144 (1990) (лепролид ацетат); Вгацие! е! а1., 1оигиа1 о! Сагбюуакси1аг Рйагтасо1оду 13 (кирр1.5): 143-146 (1989) (эндотелин-1); НиЬЬагб е! а1., Аииа1к о! 1и1егиа1 Мебкше 3: 206-212 (1989) (α1антитрипсин); 8тИй е! а1., 1. Сйи. 1иуек!. 84: 1145-1146 (1989) (α-1-протеиназа); Октет е! а1., Αе^окойζаί^ои о! Рго!ешк, Ргосеебшдк о! 8утрокшт ои гекр1га!огу Эгид Эейуегу II, Кеук!оие, Со1огабо, Магсй, 1990 (рекомбинантный гормон роста человека); ЭеЬк е! а1., Тйе 1оигиа1 о! 1ттиио1оду 140: 3482-3488 (1988) (интерферон-γ и фактор некроза опухолей α) и Ρ1;·ιΙζ е! а1., патент
США № 5,284,656 (гранулоцитарный колониестимулирующий фактор).
Для осуществления настоящего изобретения возможно применение широкого спектра механических устройств, разработанных для пульмонарного способа доставки терапевтических продуктов, включая, без ограничения перечисленными, распылители, дозирующие ингаляторы, порошковые ингаляторы, которые известны квалифицированным специалистам.
К конкретным примерам коммерчески доступных устройств, приемлемых для осуществления настоящего изобретения, относятся распылитель иИгауегИ. производимый МаШпктгоб!, 1пс., 81. Ьошо, М155оип; распылитель Асогп II, производимый Мащцео! Меб1са1 РгобпсК Епде1етооб, Со1огабо; распылитель Уеп!о1ш, производимый 61ахо 1пс., Веоеагсй Тпапд1е Рагк, №П11 Сагойпа; распылитель 8р1пйа1ег, производимый Б1ооп8 Согр., ВебГогб, Ма55асйи5е15.
Все подобные устройства предусматривают применение таких конечных лекарственных форм, которые приемлемы для дозировки белка (его аналога или производного). Обычно в состав таких конечных лекарственных форм, специфичных для типа используемого устройства, в дополнение к растворителям, адъювантам и/или носителям, необходимым для достижения терапевтического эффекта, входит веществопропеллант.
Белок (или производное) предпочтительно приготавливать в виде диспергированной формы со средним размером частиц менее 10 мкм (или микрон), наиболее предпочтительно - от 0,5 до 5 мкм для наиболее эффективной доставки в отдаленные альвеолы легких.
К носителям относятся такие углеводороды, как трегалоза, маннитол, ксилитол, сахароза, лактоза и сорбитол. К другим ингредиентам, используемым в конечных формах, относятся ЭРРС, ПОРЕ, Э8РС и ЭОРС. Можно применять природные или синтетические поверхностноактивные вещества. Используется полиэтиленгликоль (независимо от его применения для дериватизации белка или аналога). Можно применять декстраны, такие как циклодекстран. Можно применять желчные соли и другие подобные усилители. Можно применять целлюлозу и производные целлюлозы. Применимы аминокислоты, подобно тому, как они входят в состав буферов.
Рассматривается также применение липосом, микрокапсул или микросфер, комплексов включений и других типов носителей.
Конечная лекарственная форма, предназначенная для применения с помощью реактивного или ультразвукового распылителя, будет, как правило, содержать белок Бс-ОВ, его аналоги или производные, растворенные в воде в концентрации от около 0,1 до 25 мг биологически активного белка на мл раствора. Конечная форма может также содержать буфер и простой сахар (например, для стабилизации белка и поддержания осмотического давления). Конечная форма, предназначенная для доставки с помощью распылителя, может содержать поверхностно-активное вещество для предотвращения или снижения поверхностно-индуцированной агрегации белка, вызванной атомизацией раствора при образовании аэрозоля.
Конечные формы, предназначенные для доставки с помощью дозирующего ингалятора, обычно будут включать мелкодисперсный порошок, содержащий белок (или производное), суспендированный в пропелланте при помощи поверхностно-активного вещества. Пропеллантом может быть любой удобный материал, используемый для этой цели, такой как хлорфторкарбон, гидрохлорфторкарбон, гидрофторкарбон или гидрокарбон, включая трихлорфторметан, дихлордифторметан, дихлортетрафторэтанол, и 1,1,1,2-тетрафторэтан или их сочетания. К приемлемым поверхностно-активным веществам относятся сорбитан триолеат и соевый лецитин. В качестве поверхностно-активного вещества может использоваться олеиновая кислота.
Конечные формы, предназначенные для доставки в виде порошка с помощью порошкового ингалятора, будут включать мелкодисперсный сухой порошок, содержащий белок (или производное), а также могут включать наполнитель, такой как лактоза, сорбитол, сахароза, маннитол, трегалоза или ксилитол в таких количествах, которые способствуют диспергированию порошка из дозатора, например, от 50 до 90% по весу.
Рассматривается также назальный способ доставки белка (его аналога или производного). Назальное введение обеспечивает попадание белка в кровоток непосредственно после введения терапевтического препарата в нос, без необходимости депонирования продукта в легких. Формы для назального введения содержат декстран или циклодекстран. Рассматриваются также возможности транспорта через другие слизистые оболочки.
Дозировка
Квалифицированный специалист сможет убедиться в эффективности назначенной дозировки после ее назначения и отслеживания желаемого терапевтического эффекта. В силу Νтерминальной модификации белка ОВ настоящее изобретение обеспечивает неожиданную защиту белка от деградации, повышенное время циркулирования и стабильность по сравнению с белком ОВ или С-терминальной модификацией белка ОВ. Квалифицированный специалист сможет убедиться в том, что вследствие таких изменений эффективные дозировки могут предусматривать меньшие дозы или более редкие введения препарата.
Предпочтительна такая такая конечная форма препарата, чтобы ее дозировка от около
0,10 мкг/кг/день до около 10 мг/кг/день обеспечивала желаемый терапевтический эффект. Эффективные дозировки можно определить при постоянном использовании диагностических тестов. Например, диагностический тест для определения белка ОВ или слитого белка Рс-ОВ в крови (или в плазме, или сыворотке) может быть применен исходно для определения эндогенного уровня белка. Такие диагностические инструменты могут иметь вид антительного теста, такого как сэндвич-тест на основе антител. Исходно оценивается эндогенный уровень белка и определяется его базальный уровень. Терапевтические дозировки назначаются с учетом количественных определений эндогенного и экзогенного белка ОВ или слитого белка РсОВ (т.е. белка, аналога или производного, обнаруживаемого в организме, как уже имеющегося, так и введенного) в ходе лечения. По ходу лечения дозировки могут меняться от относительно высоких в начале курса до достижения положительного эффекта к более низким, поддерживающим дозировкам для сохранения терапевтического эффекта.
Идеально, чтобы в тех ситуациях, когда требуется только снижение количества липидов в крови, поддержание низкого уровня липидов в крови или повышение мышечной массы тела, дозировки были бы недостаточны для потери веса. Так, в начальном курсе терапии ожиревшего больного могут назначаться такие дозировки, которые обеспечивают снижение веса и сопутствующее снижение уровня липидов крови или сопутствующее уменьшение жировой ткани/медленное нарастание массы.
Когда достигается потеря веса, можно назначать дозу, достаточную для предупреждения обратного нарастания веса, достаточную для поддержания желаемых уровней липидов крови, медленного нарастания массы (или предупреждения медленного истощения).
Эти дозировки могут быть определены эмпирически, поскольку эффекты белка ОВ и белка Рс-ОВ обратимы (например, СатрйеИ е1 а1., 8с1епсе 269: 546-549 (1995) на стр. 547). Так, если назначенная дозировка приводит к потере веса в тех случаях, когда она нежелательна, должны назначаться меньшие дозы для достижения нужного уровня липидов в крови или увеличения мышечной массы без потери веса.
Для повышения индивидуальной чувствительности к инсулину должны приниматься во внимание аналогичные соображения. Увеличение мышечной массы без потери веса может быть достаточным для снижения доз инсулина (или, возможно, амилина, тиазолидинедионов или других сильных препаратов для лечения диабета), назначаемых больному для лечения диабета.
Для повышения общей силы могут применяться аналогичные дозировки. Увеличение мышечной массы с сопутствующим повышени ем общей силы может быть достигнуто при применении доз, недостаточных для потери веса. К другим положительным эффектам, достигаемым также без потери веса, относятся увеличение количества красных клеток крови (и, соответственно, оксигенации крови) и снижение резорбции костей или остеопороза.
Сочетания
Заявленные в настоящем изобретении способы могут быть использованы в сочетании с другими препаратами, такими как применяемые для лечения диабета (например, инсулин, возможно, тиазолидинедионы, амилин или их антагонисты), холестерин и медикаменты, снижающие кровяное давление (подобные тем, что снижают количество липидов в крови), или другие сердечно-сосудистые препараты, а также препараты, повышающие активность (например, амфетамины). Могут также применяться препараты, подавляющие аппетит (такие, которые влияют на уровни серотонина или нейропептида Υ). Подобные назначения могут осуществляться одновременно или последовательно.
Кроме того, заявленные способы могут применяться в сочетании с хирургическими методами, такими как косметическая хирургия с целью изменения общего вида тела (например, липосакция или лазерная хирургия для снижения массы тела). Положительные эффекты сердечной хирургии, например аорто-коронарного шунтирования и других операций, направленных на ослабление болезненных состояний, которые вызваны закупоркой кровеносных сосудов жировыми отложениями, такими как артериальные бляшки, могут быть повышены сопутствующим применением заявленных композиций и способов. Такие методы удаления желчных камней, как ультразруковой или лазерный, могут применяться до, во время или после использования заявленных терапевтических подходов. Более того, заявленные способы можно применять как дополнительные при хирургических и терапевтических способах заживления сломанных костей, поврежденных мускулов или в других случаях, когда повышение мышечной массы способствует выздоровлению.
Следующие примеры приведены с целью более полного иллюстрирования изобретения и не ограничивают его объем.
Пример 1. Применение мышиного белка Рс-ОВ для подкожных инъекций.
Данный пример показывает, что подкожные инъекции мышиного белка Рс-ОВ приводят к потере веса у нормальных мышей. Нормальным (неожиревшим) мышам С57 проводили подкожные инъекции мышиного белка Рс-ОВ в течение 22 дней. Дозировка в 10 мг белка/кг веса тела/день приводила к 14%-ной (+/-1,1%) потере веса от исходного значения к 22-му дню инъекций. Введение РВ8 приводило к 3,9%-ной (+/-3,3%) потере веса от исходного значения к 22-му дню инъекций. Потеря веса при дозиров23 ке 10 мг белка/кг веса тела/день у ожиревших мышей 0Ό1 составляла 10% (+/-4,3%) от исходного значения, а введение РВ8 приводило к 8,7%-ной (+/-1,3%) потере, в обоих случаях - к 22-му дню инъекций.
Ниже приведены проценты (%) разницы от исходного значения в весе мышей 0Ό1 (в возрасте 8 недель).
Таблица 1
Снижение веса при подкожном введении
Время, дни | Носитель (РВ8) | Худые/Рекомбинантный слитой белок Ес-ОВ | Ожиревшие/Рекомбинантный слитой белок Ес-ОВ |
1-2 | -0,44+/-1,1 | -3,6+/-0,41 | -1,03+/-1,36 |
3-4 | -1,07+/-0,33 | -6,8+/-1,5 | -2,7+/-1,1 |
5-6 | -0,13+/-1,1 | -9,5+/-1,2 | -4,9+/-0,95 |
7-8 | -0,92+/-0,29 | -12,5+/-1,6 | -7,7+/-2,9 |
9-10 | 1,6+/-1,3 | -12,6+/-1,9 | -8,2+/-2,0 |
11-12 | -1,98+/-1 | -13,6+/-1,96 | -8,6+/-2,9 |
13-14 | -5,2+/-1,3 | -14,6+/-1,7 | -10,1+/-3,6 |
15-16 | -8,6+/-0,1 | -14,5+/-2 | -9,4+/-2,2 |
17-18 | -8,5+/-0,64 | -16,1+/-1,8 | -9,6+/-2,99 |
19-20 | -4,1+/-0,99 | -16+/-1,5 | -10,4+/-3,3 |
21-22 | -3,9+/-3,3 | -14,1+/-1,1 | -10+/-4,3 |
Можно видеть, что к концу 22-дневного срока подкожных введений животные, получавшие белок Ес-ОВ, потеряли более 14,1% веса (худые) и 10% веса (ожиревшие) по сравнению с животными, получавшими только носитель (РВ8), и по сравнению с исходными значениями.
Удивительно, что животные, получавшие Ес-ОВ 22 дня, продолжали терять в весе до 28 дня, т.е. 4 дня спустя после последней инъекции. Нормальные (неожиревшие) мыши 0Ό1. которым подкожно вводили мышиный белок Ес-ОВ в течение 22 дней, потеряли 21% веса к 28-му дню по сравнению с исходными значениями, к 22-му дню эта потеря составляла 14%. Аналогично, ожиревшие мыши 0Ό1, которым вводили мышиный белок Ес-ОВ в течение 22 дней, потеряли 13% веса к 28-му дню по сравнению с исходными значениями, к 22-му дню эта потеря составляла 10%. На 34-й день потеря веса сохранялась на уровне 10% у ожиревших мышей и 5% у худых мышей. В контролях для каждой системы на сроках с 22-го по 34-й день отмечена средняя прибавка в весе, равная 4% для ожиревших мышей и 7% для худых.
Пример 2. Использование белка Ес-ОВ человека для подкожных инъекций мышам С57.
Данный пример показывает, что подкожные инъекции белка Ес-ОВ человека приводят к потере веса у нормальных мышей. Нормальным (неожиревшим) мышам С57 проводили подкожные инъекции белка Ес-ОВ человека в течение 7 дней. Дозировка в 10 мг белка/кг веса тела/день приводила к 12%-ной (+/-1,3%) потере веса от исходного значения к 7-му дню инъекций. Дозировка в 1 мг белка/кг веса тела/день приводила к 8,9%-ной (+/-1,5%) потере веса от исходного значения к 7-му дню инъекций. Потеря веса при дозировке 10 мг белка/кг веса тела/день у ожиревших мышей С57 составляла
1,1% (+/-0,99%) от исходного значения, а при дозировке 1 мг белка/кг веса тела/день - 2,5% (+/-1,1%), в обоих случаях - к 7-му дню инъекций.
Результаты
Ниже приведены проценты (%) разницы от исходного значения в весе мышей С57 (в возрасте 8 недель).
Таблица 2
Снижение веса при подкожном введении
Время, дни | Носитель (РВ8) | Рекомбинантный слитый белок Ес-ОВ | Рекомбинантный белок ОВ |
1-2 | 0,258+/-1,3 | -6,4+/-1,6 | -2,1+/-0,91 |
3-4 | 2,2+/-1,1 | -12,1+/-1,5 | -0,78+/-0,36 |
5-6 | 4,5+/-2 | -11,5+/-1,5 | -1,7+/-0,6 |
7-8 | 7,0+/-2,1 | -11,9+/-1,6 | 0,1+/-1,2 |
9-10 | 9,0+/-1,9 | -11,5+/-1,3 | 7,2+/-2,7 |
11-12 | 10+/-3,8 | -9+/-1,4 | 10,9+/-2,9 |
13-14 | 12,5+/-4,4 | -9,5+/-1,6 | 12,3+/-6,4 |
15-16 | 11,1+/-1,0 | -3,0+/-1,5 | 10,3+/-3,3 |
17-18 | 17,2+/-3,6 | 8,0+/-1,3 | 13,3+/-3,4 |
Можно видеть, что к 17-му дню после 7 дней инъекций в дозе 10 мг/кг/день животные, получавшие белок Ес-ОВ, восстановили 8% веса тела. Животные, получавшие дозировку 1 мг/кг/день в течение 7 дней, восстановили 6,4% веса тела через 12 дней.
Эксперимент показал, что в течение восстановительного периода с 7-го по 22-й день, после последней инъекции на 7-й день, восстановление веса происходит медленнее у мышей, получавших Ес-ОВ, нежели у мышей, получавших ОВ. Следовательно, белок Ес-ОВ выводится не столь быстро, как белок ОВ, обусловливая тем самым более продолжительный эффект снижения веса.
Пример 3. Дозозависимый ответ мышей СЕ7 на введение слитого белка Ес-ОВ.
Дополнительное исследование показывает, что существует дозозависимый ответ на постоянное введение белка Ес-ОВ. В данном эксперименте ожиревшим мышам СЕ7 весом 35-40 г вводили рекомбинантный белок Ес-ОВ человека с использованием метода, описанного в предыдущем примере. Результаты приведены в табл. 3 ниже (% снижения веса тела сравнен с исходным значением, определенным, как описано выше).
Таблица 3
Дозозависимый ответ при постоянном введении
Доза | Время | % снижения веса тела |
0,25 мг/кг/день | День 5 | 4 |
0,5 мг/кг/день | День 5 | 12 |
1 мг/кг/день | День 5 | 16 |
Можно видеть, что повышение дозы с 0,25 до 1 мг/кг/день повышало потерю веса с 4 до
16%. Примечательно также, что на 5-й день дозировка 1 мг/кг/день приводила к снижению веса на 16%. В данном исследовании отмечена низкая скорость восстановления веса до 0%, что свидетельствует о медленном выведении белка
Рс-ОВ, которое обусловливает продолжительный эффект снижения веса.
Пример 4. Фармакокинетика рекомбинантного Рс-ОВ человека у мышей СЭ1 и собак.
Целью настоящего эксперимента было исследование фармакокинетических свойств рекомбинантного теРРс-ОВ белка человека на мышах СЭ1 и собаках. После внутривенных или подкожных введений в дозе 1 мг/кг/день в сыворотках с помощью фермент-связанного иммуносорбентного теста (ЕЫ8А) определяли концентрации рекомбинантного теРРс-ОВ человека.
Для обоих видов отмечено более длительное воздействие по сравнению с рекомбинантным белком теРРс-ОВ человека, которое количественно оценивали по более высоким пикам концентраций в сыворотке и большим площадям под кривыми концентраций (АИС). Рс-ОВ обладал более низким системным клиренсом, чем рекомбинантный теРОВ белок человека. Это видно из низкого клиренса и более продолжительной полу жизни по сравнению с белком ОВ. Это увеличение обусловлено не только увеличением стабильности белка, но также и снижением эффективности почечного клиренса. В результате, Рс-ОВ выводился из системной циркуляции медленнее. Повышенные пиковое время, пиковые концентрации в сыворотке и АИС для белка Рс-ОВ согласуются с низким клиренсом. Белок Рс-ОВ будет обеспечивать значительно более высокое системное воздействие, нежели белок ОВ. Результаты приведены ниже в табл. 4.
Таблица 4
Фармакокинетические свойства
Вид | Мыши СЭ-1 | Мыши СО-1 | Собаки (бигль) | |||
Способ введения | Внутривенно | Подкожно | Подкожно | |||
Белок ОВ | Белок Рс-ОВ | Белок ОВ | Белок Рс-ОВ | Белок ОВ | Белок Рс-ОВ | |
Доза, мг/кг | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 |
Время достижения пика, ч | 0,14 | 6 | 2,8 | 8 | ||
Пиковая концентрация в сыворотке, нг/мл | 1520 | 7550 | 300 | 1120 | ||
АиС, нг/ч/мл | 1470 | 366000 | 1230 | 132000 | 2200 | 52500 |
Полужизнь, ч | 0,491 | 21,4 | 0,388 | 2,13 | 22,9 | |
Клиренс, мл/ч/кг | 681 | 2,73 |
Пример 5.
Данный пример показывает, что введение рекомбинантного белка Рс-ОВ человека нормальным, неожиревшим мышам с нормальным уровнем липидов в крови приводит к снижению уровней холестерина, глюкозы и триглицеридов. Кроме того, из данного примера следует, что эти уровни остаются низкими в течение трехдневного восстановительного периода.
Нормальным мышам СЭ1 подкожно вводили рекомбинантный Рс-ОВ белок человека. Образцы крови брали через 24 ч после 23-го дня, последнего для инъекций. Как обсуждалось выше, при используемых дозировках животные теряли в весе. Как видно из табл. 5, у мышей наблюдалось существенное дозозависимое снижение холестерина в сыворотке, глюкозы и триглицеридов по сравнению с контролем.
Таблица 5
Доза | Глюкоза | Холестерин | Триглицериды |
РВ8 | 232,6+/-15,1 | 67,8+/-3,6 | 52,6+/-3,7 |
1 мг/кг/день | 225,8+/- | +/- | +/- |
10 мг/кг/день | +/- | +/- | +/- |
1 мг/кг каждые 2 дня | +/- | +/- | +/- |
10 мг/кг каждые 2 дня | +/- | +/- | +/- |
1 мг/кг каждые 3 дня | +/- | +/- | +/- |
10 мг/кг каждые 3 дня | +/- | +/- | +/- |
Эти данные показывают, что белок Рс-ОВ или его аналоги и производные являются эффективными агентами, снижающими уровень липидов в крови.
Пример 6.
Пациенту, страдающему ожирением, вводили человеческий белок Рс-ОВ, его аналог или производное с целью снижения веса. У данного пациента также отмечено повышенное содержание липидов в крови, включая холестерин, до 200 мг/100 мл. В ходе терапии Рс-ОВ у пациента достигнуто удовлетворительное снижение веса. Похудевшему пациенту вводили поддерживающие дозы белка Рс-ОВ, его аналога или производного для поддержания низких уровней липидов в крови, включая сниженные (менее 200 мг/100 мл) уровни холестерина. Вводимые дозы были недостаточны для дальнейшего снижения веса. Введение препарата было постоянным. Количество циркулирующего белка белка Рс-ОВ, его аналога или производного можно контролировать с помощью диагностического набора, такого как тест на основе антител к белку ОВ (или другого источника антигена, если это было применимо).
Пример 7.
Не страдающий ожирением пациент подвергся операции аорто-коронарного шунтирования или другому инвазивному лечению по поводу продвинутой стадии образования артериальных бляшек. После операции больному вводили поддерживающие дозы белка Рс-ОВ, его аналога или производного для предотвращения повторного образования артериальных бляшек. Вводимые дозы были недостаточны для снижения веса. Введение препарата было постоянным. Количество циркулирующего белка белка РсОВ, его аналога или производного можно контролировать с помощью диагностического набора, такого как тест на основе антител к белку ОВ (или другого источника антигена, если это было применимо).
Пример 8.
Не страдающий ожирением пациент страдал от гипертонии, обусловленной сниженным кровотоком по закупоренным артериям. Больному вводили дозу белка Рс-ОВ, его аналога или производного, достаточную для снижения количества артериальных бляшек, обусловли27 вающих закупорку артерий. Затем состояние больного контролировали в отношении гипертонии и последующего образования артериальных бляшек. Если гипертония возобновлялась, больному опять вводили эффективное количество белка Рс-ОВ, его аналога или производного, достаточное для восстановления кровотока, но недостаточное для снижения веса. Количество циркулирующего белка белка Рс-ОВ, его аналога или производного можно контролировать с помощью диагностического набора, такого как тест на основе антител к белку ОВ (или другого источника антигена, если это было применимо).
Пример 9.
Больной страдал желчекаменной болезнью. Желчные камни или не удаляли и при этом считалось, что удастся избежать образования новых камней, или камни удаляли, но оставляли желчный пузырь (например, при использовании лазерной или ультразвуковой хирургии) и также предполагали, что удастся избежать образования новых камней. Пациенту вводили эффективное количество белка Рс-ОВ, его аналога или производного, что предотвращало накопление желчных камней и образование новых камней, мышечной массы. Количество циркулирующего белка белка Рс-ОВ, его аналога или производного можно контролировать с помощью диагностического набора, такого как тест на основе антител к белку ОВ (или другого источника антигена, если это было применимо).
Пример 10.
Больному диабетом требовалось снижение доз инсулина, применяемых для лечения диабета. Пациенту вводили эффективное количество белка Рс-ОВ, его аналога или производного, что приводило к увеличению мышечной массы. Чувствительность больного к инсулину возрастала, и дозировки инсулина, необходимые для снятия симптомов диабета, можно было снизить как в отношении необходимого количества единиц инсулина, так и в отношении количества инъекций инсулина в день. Количество циркулирующего белка белка Рс-ОВ, его аналога или производного можно контролировать с помощью диагностического набора, такого как тест на основе антител к белку ОВ (или другого источника антигена, если это было применимо).
Пример 11.
Не страдающему ожирением пациенту требовалось увеличение мышечной массы в терапевтических целях, в частности в ходе выздоровления от заболевания, приводящего к потере мышечной массы. Пациенту вводили эффективное количество белка Рс-ОВ, его аналога или производного, что приводило к желаемому увеличению мышечной массы. За увеличением мышечной массы следили при помощи ΌΕΧΑсканирования. Количество циркулирующего белка белка Рс-ОВ, его аналога или производного можно контролировать с помощью диагностического набора, такого как тест на основе антител к белку ОВ (или другого источника антигена, если это было применимо).
Материалы и методы
Животные
В приведенных выше примерах использованы мыши ЭС1 дикого типа и мыши (+/+)С57В16. Возраст мышей в начале эксперимента составлял 8 недель, а их вес был стабилизирован.
Кормление и взвешивание
Мыши получали измельченный корм для грызунов (ΡΜΙ Реебк, Шс.) в кормушках для сухого корма (Α1ΕηΙο\νπ Садтд апб Ес.|шртеп1). Использование такого рациона давало возможность более точных и чувствительных замеров по сравнению с использованием обычного брикетированного корма. Взвешивание проводили в одно и то же время (2 ч дня) ежедневно в течение всего эксперимента. Вес тела за день до инъекции принимали за отправную точку. Вес использованных в экспериментах мышей составлял 18-22 г.
Содержание
Мышей рассаживали по одной в клетки, и их содержание соответствовало гуманитарным нормам.
Введение белка или растворителя
Белок (как описано ниже) или носитель (фосфатный буферный раствор, рН 7,4) вводили подкожными или внутривенными инъекциями. Контроли
Контрольным животным вводили только носитель без слитого белка Ес-ОВ или белка ОВ.
Белок
Последовательности 8ΕΟ.ΙΩ. Νοκ.1, 2 и 3 кодируют рекомбинантные ДНК и белок ОВ мыши (фиг. 1), а последовательности 8ΕΟ.ΙΩ. Νοκ.4, 5 и 6 кодируют аналогичные рекомбинантные ДНК и белок ОВ человека (фиг. 2). Как упоминалось выше, рекомбинантный белок ОВ человека, кодируемый последовательностью 8ΕΟ.ΙΩ. Νο.6, имеет остаток лизина в положении 35 и остаток изолейцина в положении 74. Кроме того, рекомбинантный белок человека описан Ζ1ι;·ιη§ е1 а1., Хайне, кирга, и в публикации, РСТ АО 96/05309, (обе работы включены в качестве ссылок, включая рисунки), а мышиный и человеческий аналоги рекомбинантных белков на фиг. 1 и 2 являются примерами белка ОВ, который можно использовать для получения слитого белка Рс-ОВ описанными способами, применяемыми для получения лекарства и для лечения. Для получения слитого белка Рс-ОВ могут быть использованы другие ОВ или Рс белки, их аналоги или производные.
Соответственно, первая аминокислота в аминокислотной последовательности рекомбинантного белка ОВ обозначается как +1 и является валином, а аминокислота в положении -1 метионин. С-терминальная аминокислота имеет номер 146 (цистеин) (см. фиг. 1 и 2). Первая аминокислота в последовательности рекомбинантного белка Ес-ОВ человека на фиг. 3 обозначается как +1 и является глутаматом, а аминокислота в положении -1 является метионином. С-терминальная 1 аминокислота с номером 378 - цистеин. Первая аминокислота в последовательности вариантного рекомбинантного белка Ес-ОВ человека на фиг. 4 обозначается как +1 и является глутаматом, а аминокислота в положении -1 является метионином. С-терминальная аминокислота имеет номер 378 (цистеин). Первая аминокислота в последовательности вариантного рекомбинантного белка Ес-ОВ человека на фиг. 5 обозначается как +1 и является аспарагиновой кислотой, а аминокислота в положении -1 является метионином. С-терминальная аминокислота имеет номер 373 (цистеин). Первая аминокислота в последовательности вариантного рекомбинантного белка Ес-ОВ человека на фиг. 6 обозначается как +1 и является аспарагиновой кислотой, а аминокислота в положении -1 является метионином. С-терминальная аминокислота имеет номер 373 (цистеин).
Вектор экспрессии и штамм-хозяин
Использовали плазмидный вектор экспрессии рАМС21 (номер доступа в АТСС 98113), который является производным рСЕМ1656 (номер доступа в АТСС 69576) и содержит соответствующие сайты рестрикции для вставки генов ниже промотора 1их РВ (см. патент США № 5,169,318, в котором описана система экспрессии 1их). Была получена ДНК Ес-ОВ, описываемая ниже и показанная на фиг. 3-6, которую лигировали в вектор экспрессии рАМС21, линеаризованный эндонуклеазами рестрикции Νώ;Ι и ВатН1, и полученным лигатом трансформировали клетки-хозяева Е. сой, штамма ЕМ5. Клетки Е. сой ЕМ5 получены в Атдеп 1пс., ТЬоизапб Оакз, СА из штамма Е. сой К-12 (ВасЬтап, е! а1., Вас!епа1. Веν. 40: 116167 (1976)) и содержат интегрированный ген репрессора фага лямбда с1857 ( 8иззтап е! а1., С.В. Асаб. 8с1. 254:1517-1579 (1962)). Получение вектора, трансформацию клеток и отбор колоний осуществляли стандартными методами (например, 8атЬгоок, е! а1., Мо1еси1аг С1ошпд: А ЬаЬога!огу Мапиа1, 2пб Ебйюп, Со1б 8ргтд НагЬог ЬаЬога!огу Ргезз, Со1б 8ргтд НагЬог, Ν.Υ.). Клетки-хозяева выращивали на среде ЕВ.
Конструкция ДНК Ес-ОВ
Плазмида рЕс-А3 (описана ниже) служила источником последовательности тяжелой цепи иммуноглобулина человека 1дС-1 от аминокислоты номер 99 (С1и) до природного карбоксиконца. Последовательность 1дС-1 человека можно получить из СепеЬапк (Р01857).
Последовательность ОВ человека описана выше, а также Ζΐιηπβ е! а1., №!иге, зирга, и в публикации РСТ VО 96/05309, упоминаемых в качестве ссылок, включая рисунки. ДНК ОВ лигировали в вектор экспрессии рСЕМ1656, линеаризованный эндонуклеазами рестрикции ХЬа1 и ВатН1 с использованием стандартных процедур клонирования, например, 8атЬгоок, е! а1., Мо1еси1аг С1ошпд: А ЬаЬога!огу Мапиа1, 2пб Ебйюп, Со1б 8ргтд НагЬог ЬаЬога!огу Ргезз, Со1б 8ргтд НагЬог, Ν.Υ. Плазмида рСЕМ1656, несущая последовательность ДНК ОВ, служила источником последовательности для рекомбинантного гена ОВ человека.
Генетическое слияние двух данных последовательностей осуществляли методом перекрывающейся полимеразной цепной реакции (ПЦР) (Но, 8.Ν. е! а1., 8йе Э|гес1еб Ми!адепез1з Ву Оνе^1ар Ех!епзюп Изтд ТЬе Ро1утегазе СЬаш Веасйоп, Сепе 77:51-59 (1989)). Продукт ПЦР разрезали эндонуклеазой рестрикции Ше1 с получением липкого 5'-конца и эндонуклеазой рестрикции ВатН1 с получением липкого 3'конца. Вектор рАМС21 рестрицировали аналогично. Лигирование проводили со слитым фрагментом и линеаризованным вектором. Лигированной ДНК трансформировали посредством электропорации хозяйский штамм Е. сой. Клоны, выросшие на чашках с агаром (50 мкг/мл), проверяли на экспрессию белка, имеющего размер Ес-ОВ. Выделяли плазмиды из индивидуальных клонов и секвенировали для установления кодирующей области гена.
Когда требовались дополнительные модификации гена Ес-ОВ, для создания таких изменений опять же использовали метод ПЦР. Два набора изменений было осуществлено на Νконце Ес-фрагмента слитого белка (8Е0.Ю. №.9) с получением вариантов 8Е0.Ю. №з.12 и 15. Был получен другой вариант с введением четырех аминокислотных замен с тем, чтобы удалить сайт связывания Ес-рецептора (лейцин в положении 15 заменен глутаматом) и сайт связывания комплемента (С1с.|) (глутамат в положении 98 заменен аланином, лизин в положении 100 заменен аланином, и лизин в положении 102 заменен аланином) (см. Хш Х1ао Ζ^^ е! а1., 1. 1ттипо1. 154:5590-5600 (1995)). Матрицей для данного конструкта служила 8Ер.Ш. №.15, а полученный вариант был обозначен 8Ер.ГО. Ж18.
Конструирование вектора рЕС-А3
Плазмида рЕС-А3, содержащая Есфрагмент тяжелой цепи иммуноглобулина 1дС-1 человека (см. ЕШзоп, IV. е! а1., ШсШс Ас1бз гез. 10: 4071-44079 (1982)) от первой аминокислоты С1и-99 смыслового домена до карбоксиконца плюс 5Ао11 сайт слияния и 3'-8а11 и ХЬа1 сайты, была получена ПЦР-амплификацией кДНКовой библиотеки селезенки человека. ПЦР проводили в конечном объеме 100 мкл с использованием 2 единиц ДНК полимеразы Уеп! в 20 мМ Тпз-НС1 (рН 8,8), 10 мМ КС1, 10 мМ ^4)28О4, 2 мМ Мд8О4, 0,1% Тритон Х-100 с 40 мМ каждого б№ТР и 1 нг кДНКовой библиотеки, которая должна быть амплифицирована, с 1 мкМ каждого праймера. Реакцию начинали с денатурации при 95°С в течение 2 мин, за которой следовали 30 циклов: 95°С 30 с, 55°С 30 с и 73°С 2 мин. 5'-праймер содержал сайт ΝοίΣ в непосредственной близости к первому 5' остатку (61ц-99) основного домена 1§6-1. 3'-праймер содержал сайты 8а11 и ХЬа1. Продукт ПЦР размером 717 пар оснований рестрицировали ΝοίΣ и 8аП, полученный фрагмент ДНК выделяли электрофорезом в 1% агарозе, очищали и клонировали в рестрицированный ΝοίΣ и 8ай вектор Бйюкспрк ΣΣ К8 (81га1адепе). Вставку в полученную плазмиду, рЕС-А3, секвенировали для подтверждения надежности ПЦР.
Методы получения
Описанные ниже методы получения были использованы для продукции биологически активного рекомбинантного метионилированного аналога белка ΟВ мыши и человека, а также слитых белков Ес-ΟΒ. Аналогичные методы можно использовать для получения биологически активного метионилированного белка ΟВ человека.
Процесс ферментации
Использовали прерывистый процесс ферментации. Состав среды приведен ниже.
Ту часть среды, которая содержала в основном источники азота, стерилизовали (поднятием температуры до 120-123°С на 25-35 мин) в ферментере. После охлаждения асептически добавляли углерод, магний, фосфат и микроэлементы (соли металлов). В ферментер вносили 500 мл ночной культуры (выращенной в ΕΒ бульоне) рекомбинантных бактерий, продуцирующих мышиный белок. Когда оптическое поглощение культуры (определенное при 600 нм, оно является показателем плотности культуры) достигало 15-25 единиц поглощения, к культуре добавляли раствор аутоиндуктора (0,5 мг/мл гомосеринлактона) (1 мл/л) для индукции экспрессии рекомбинантного гена. Процесс ферментации продолжали еще 10-16 ч, а затем бульон собирали центрифугированием.
Состав среды:
г/л Дрожжевой экстракт г/л Соевый пептон
0,9 г/л Хлорид калия
5,0 г/л Гексафос
1,7 г/л Лимонная кислота
120 г/л Глицерин
0,5 г/л Μ§8Ο4·7Η2Ο
0,2 мл/л Раствор солей металлов
0,5 мл/л Антивспениватель Р2000
Раствор солей металлов:
Хлорид железа (ЕеС1г6Н2О) 27 г/л
Хлорид цинка ^пС124Н2О) 2 г/л
Хлорид кобальта ^οΟ2·6Η2Ο) 2 г/л
Молибдат натрия (NаΜοΟ4·2Η2Ο) 2 г/л Хлорид кальция (СаС124НЮ) 1 г/л
Сульфат меди (Си8О<5Н2О) 1,9 г/л
Борная кислота (Н3ВО3) 0,5 г/л
Хлорид марганца (МпС124НЮ) 1,6 г/л
Цитрат натрия безводный 73,5 г/л
Процесс очистки слитого человеческого белка Ес-ΟΒ
Очистку слитого белка Ес-ΟΒ человека проводили согласно описанным ниже этапам (все этапы осуществляли при температуре 4°С, если специально не оговорено другое). Очистка белка ОВ мыши и человека описана в публикации РСТ XVΟ 96/05309, кирга, упоминаемой в качестве ссылки.
1. Клеточная паста. Клеточную пасту Е. сой суспендировали в пятикратном объеме дистиллированной воды. Затем суспендированные в воде клетки разрушали двукратным пропусканием через микрогомогенизатор. Разрушенные клетки центрифугировали 1 ч при 4,2 тыс.об./мин в центрифуге Βесктаη ΣΒ-6 с ротором Σ5-4,2.
2. Промывка телец-включений. Полученный супернатант отбрасывали, а осадок суспендировали в 5 объемах дистиллированной воды. Смесь центрифугировали так же, как на этапе 1.
3. Солюбилизация. Осадок срюбилизировали 10 объемами 50 мМ трис, рН 8,5, 8 М гуанидингидрохлорид, 10 мМ дитиотрейтол и премешивали 1 ч при комнатной температуре. В раствор добавляли цистамин дигидрохлорид и перемешивали еще 1 ч.
4. Раствор со стадии 3 добавляли к 20-30 объемам следующего раствора для рефолдинга: 50 мМ трис, рН 8,5, 0,8 М аргинина, 2 М мочевины и 4 мМ цистеина. Рефолдинг проводили при помешивании в течение 16 ч при 8°С.
5. Смена буфера. Раствор со стадии 4 концентрировали и подвергали диафильтрации в 10 мМ трис, рН 8,5.
6. Преципитация кислотой. рН раствора со стадии 5 доводили до рН 4,75 50%-ной уксусной кислотой и инкубировали 30 мин при комнатной температуре. Затем раствор фильтровали.
7. Катионобменная хроматография. рН раствора со стадии 6 доводили до рН 7,0 и наносили на колонку СМ 8ерйагоке Еак! Ε1ο\ν при 10°С. Через колонку пропускали 20 объемов градиента от 0 М до 0,1 М №1С1 в 10 мМ фосфата, рН 7,0.
8. Анионобменная хроматография. Пул, элюированный с СМ 8ерйагоке на этапе 7, разводили в 5 раз 5 мМ трис, рН 7,5 и наносили на колонку О 8ерйагоке Еак! Ε1ο\ν. Через колонку пропускали 20 объемов градиента от 0 М до 0,2 М №1С1 в 10 мМ трис, рН 7,5.
9. Хроматография гидрофобного взаимодействия. В собранный с О 8ерйагоке пул добавляли сульфат аммония до 0,75 М и наносили на колонку гидрофобного взаимодействия Масгоргер при комнатной температуре. Через колонку пропускали 20 объемов градиента от 0,75 М до 0 М сульфата аммония в 10 мМ фосфата, рН 7,0.
10. Смена буфера. При необходимости, собранный на этапе 9 пул концентрировали и диализовали против РВ8.
При том, что настоящее изобретение описано в терминах предпочтительных вариантов осуществления, для квалифицированного специалиста очевидно, что возможны определенные изменения и модификации. Поэтому считается, что приведенная ниже формула изобретения включает все подобные эквивалентные вариации, которые входят в объем настоящего изобретения.
Claims (3)
- ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ1. Слитой белок, не обязательно имеющий метионин на Ν-конце, содержащий константный домен антитела или его часть, слитую с Νконцом человеческого белка лептина, который выбран из группы, включающей (а) аминокислотную последовательность 1146, приведенную в 8ЕО.1Б. Νο.6;(б) аминокислотную последовательность 1-146, приведенную в 8ЕО.1Б. Νο.6, имеющую остаток лизина в положении 35 и остаток изолейцина в положении 74;(в) аминокислотную последовательность (а) или (б), в которой отсутствует глутаминовый остаток в положении 28;(г) аминокислотную последовательность (а), (б) или (в), в которой одна или несколько из следующих аминокислот: 32, 33, 35, 50, 64, 68, 71, 74, 77, 78, 89, 97, 100, 102, 105, 106, 107, 108, 111, 118, 136, 138, 142 и 145, заменена соответствующей аминокислотой, приведенной в 8ЕО.1Б. Νο.3, или сохраненной аминокислотой.
- 2. Фармацевтическая композиция, содержащая слитой белок по п.1 и фармацевтически приемлемый носитель.
- 3. Применение фармацевтической композиции по п.2 для лечения от избыточного веса или для повышения чувствительности к инсулину.
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US77097396A | 1996-12-20 | 1996-12-20 | |
PCT/US1997/023183 WO1998028427A1 (en) | 1996-12-20 | 1997-12-11 | Ob fusion protein compositions and methods |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
EA199900575A1 EA199900575A1 (ru) | 2000-02-28 |
EA004790B1 true EA004790B1 (ru) | 2004-08-26 |
Family
ID=25090296
Family Applications (2)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
EA199900575A EA004790B1 (ru) | 1996-12-20 | 1997-12-11 | Композиции на основе слитого белка ов и способы их применения |
EA200100216A EA004791B1 (ru) | 1996-12-20 | 1997-12-11 | Композиции на основе слитого белка ob и способы их применения |
Family Applications After (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
EA200100216A EA004791B1 (ru) | 1996-12-20 | 1997-12-11 | Композиции на основе слитого белка ob и способы их применения |
Country Status (26)
Country | Link |
---|---|
EP (2) | EP1835030A1 (ru) |
JP (2) | JP4175668B2 (ru) |
KR (1) | KR100937550B1 (ru) |
CN (1) | CN1195858C (ru) |
AR (2) | AR009436A1 (ru) |
AT (1) | ATE351910T1 (ru) |
AU (1) | AU5606098A (ru) |
BG (1) | BG64288B1 (ru) |
BR (1) | BR9713755A (ru) |
CA (1) | CA2275183A1 (ru) |
CZ (1) | CZ298203B6 (ru) |
DE (1) | DE69737266T2 (ru) |
DK (1) | DK0954588T3 (ru) |
EA (2) | EA004790B1 (ru) |
ES (1) | ES2280083T3 (ru) |
HK (1) | HK1021388A1 (ru) |
HU (1) | HU227088B1 (ru) |
IL (1) | IL130396A (ru) |
NO (2) | NO324506B1 (ru) |
NZ (1) | NZ514145A (ru) |
PL (1) | PL194159B1 (ru) |
PT (1) | PT954588E (ru) |
RS (1) | RS49927B (ru) |
SK (1) | SK287578B6 (ru) |
WO (1) | WO1998028427A1 (ru) |
ZA (1) | ZA9711239B (ru) |
Families Citing this family (48)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US6936439B2 (en) | 1995-11-22 | 2005-08-30 | Amgen Inc. | OB fusion protein compositions and methods |
CA2358862A1 (en) * | 1995-11-22 | 1997-05-29 | Amgen Inc. | Methods of increasing lean tissue mass using ob protein compositions |
US20030040467A1 (en) | 1998-06-15 | 2003-02-27 | Mary Ann Pelleymounter | Ig/ob fusions and uses thereof. |
US6620413B1 (en) | 1995-12-27 | 2003-09-16 | Genentech, Inc. | OB protein-polymer chimeras |
US6541604B1 (en) | 1996-01-08 | 2003-04-01 | Genentech, Inc. | Leptin receptor having a WSX motif |
US7074397B1 (en) | 1996-01-08 | 2006-07-11 | Genentech, Inc. | Method for enhancing proliferation or differentiation of a cell using ob protein |
ATE223229T1 (de) * | 1997-04-17 | 2002-09-15 | Amgen Inc | Zusammensetzungen aus konjugaten des stabilen, aktiven, menschlichen ob proteins mit der fc kette von immunoglobulinen und damit zusammenhängende verfahren |
US20020019352A1 (en) * | 1997-04-17 | 2002-02-14 | David N. Brems | Stable, active, human ob protein compositions and methods |
JP4394279B2 (ja) | 1998-03-09 | 2010-01-06 | ジーランド ファーマ アクティーゼルスカブ | 酵素加水分解に対する傾向が減少した薬理学的に活性なペプチド複合体 |
US6420339B1 (en) | 1998-10-14 | 2002-07-16 | Amgen Inc. | Site-directed dual pegylation of proteins for improved bioactivity and biocompatibility |
US6660843B1 (en) | 1998-10-23 | 2003-12-09 | Amgen Inc. | Modified peptides as therapeutic agents |
US7488590B2 (en) | 1998-10-23 | 2009-02-10 | Amgen Inc. | Modified peptides as therapeutic agents |
DE69934425T2 (de) | 1998-10-23 | 2007-09-27 | Amgen Inc., Thousand Oaks | Thrombopoietin substitute |
US8106098B2 (en) | 1999-08-09 | 2012-01-31 | The General Hospital Corporation | Protein conjugates with a water-soluble biocompatible, biodegradable polymer |
US6808902B1 (en) | 1999-11-12 | 2004-10-26 | Amgen Inc. | Process for correction of a disulfide misfold in IL-1Ra Fc fusion molecules |
EP1274730A2 (en) * | 2000-04-21 | 2003-01-15 | Amgen, Inc. | Integrin/adhesion antagonists |
US6677136B2 (en) | 2000-05-03 | 2004-01-13 | Amgen Inc. | Glucagon antagonists |
US20020090646A1 (en) * | 2000-05-03 | 2002-07-11 | Amgen Inc. | Calcitonin-related molecules |
EP1366455B1 (en) | 2001-02-19 | 2008-07-02 | MERCK PATENT GmbH | Method for identification of t-cell epitopes and use for preparing molecules with reduced immunogenicity |
WO2002079415A2 (en) | 2001-03-30 | 2002-10-10 | Lexigen Pharmaceuticals Corp. | Reducing the immunogenicity of fusion proteins |
JP2002306163A (ja) * | 2001-04-11 | 2002-10-22 | Chemo Sero Therapeut Res Inst | 大腸菌を宿主とする遺伝子組換えヒトトロンビンの調製方法 |
ATE475094T1 (de) | 2001-10-22 | 2010-08-15 | Amgen Inc | Verwendung von leptin zur behandlung von lipoatrophie im menschen und verfahren zur bestimmmung einer prädisposition gegenüber der behandlung |
ATE486842T1 (de) | 2002-03-12 | 2010-11-15 | Merck Sharp & Dohme | Substituierte amide |
US20030191056A1 (en) | 2002-04-04 | 2003-10-09 | Kenneth Walker | Use of transthyretin peptide/protein fusions to increase the serum half-life of pharmacologically active peptides/proteins |
JP3936673B2 (ja) * | 2003-06-02 | 2007-06-27 | 国立大学法人群馬大学 | Cd47部分ペプチドと抗shps−1モノクロナール抗体 |
AU2005203962C1 (en) | 2004-01-05 | 2012-11-08 | Antisoma Research Limited | Interleukin-12 targeted to oncofoetal fibronectin |
US8076288B2 (en) | 2004-02-11 | 2011-12-13 | Amylin Pharmaceuticals, Inc. | Hybrid polypeptides having glucose lowering activity |
CA2555894A1 (en) | 2004-02-11 | 2005-08-25 | Amylin Pharmaceuticals, Inc. | Pancreatic polypeptide family motifs and polypeptides comprising the same |
MX2007000216A (es) | 2004-07-08 | 2007-03-15 | Amgen Inc | Peptidos terapeuticos. |
WO2006016276A2 (en) | 2004-08-03 | 2006-02-16 | Innate Pharma S.A. | Therapeutic and diagnostic methods and compositions targeting 4ig-b7-h3 and its counterpart nk cell receptor |
US20090156474A1 (en) | 2004-11-01 | 2009-06-18 | Amylin Pharmaceuticals, Inc. | Methods for treating obesity and obesity related diseases and disorders |
US8394765B2 (en) | 2004-11-01 | 2013-03-12 | Amylin Pharmaceuticals Llc | Methods of treating obesity with two different anti-obesity agents |
EA014647B1 (ru) * | 2005-08-11 | 2010-12-30 | Амилин Фармасьютикалз, Инк. | Гибридные полипептиды с селектируемыми свойствами |
US8008453B2 (en) | 2005-08-12 | 2011-08-30 | Amgen Inc. | Modified Fc molecules |
AU2006303440B2 (en) | 2005-10-21 | 2011-09-08 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Method for the recombinant expression of a polypeptide |
US20070179094A1 (en) | 2006-01-31 | 2007-08-02 | Bayer Schering Pharma Ag | Modulation of MDL-1 activity for treatment of inflammatory disease |
WO2009149379A2 (en) | 2008-06-05 | 2009-12-10 | Regents Of The University Of Michigan | Use of leptin for the treatment of fatty liver diseases and conditions |
AU2010238858A1 (en) | 2009-04-22 | 2011-12-08 | Merck Patent Gmbh | Antibody fusion proteins with modified FcRn binding sites |
EP2464377B1 (en) | 2009-08-14 | 2016-07-27 | The Government of the United States of America as represented by The Secretary of the Department of Health and Human Services | Use of il-15 to increase thymic output and to treat lymphopenia |
DK3241558T3 (da) | 2010-09-28 | 2021-04-26 | Aegerion Pharmaceuticals Inc | Højopløselige leptiner |
US20140256621A1 (en) | 2011-07-08 | 2014-09-11 | Astrazeneca Pharmaceuticals Lp | Engineered poypeptides having enhanced duration of action and reduced immunogenicity |
ES2942483T3 (es) | 2011-10-05 | 2023-06-01 | Oned Mat Inc | Materiales activos de nanoestructuras de silicio para baterías de iones de litio y procesos, composiciones, componentes y dispositivos relacionados con los mismos |
HUE040496T2 (hu) | 2012-09-27 | 2019-03-28 | Childrens Medical Ct Corp | Vegyületek elhízás kezelésére és alkalmazási eljárásaik |
HUE042196T2 (hu) | 2013-11-26 | 2019-06-28 | Childrens Medical Ct Corp | Vegyületek elhízás kezelésére és alkalmazási eljárásaik |
US20170209408A1 (en) | 2014-04-03 | 2017-07-27 | The Children's Medical Center Corporation | Hsp90 inhibitors for the treatment of obesity and methods of use thereof |
HRP20231076T1 (hr) | 2016-09-12 | 2023-12-22 | Amryt Pharmaceuticals Inc. | Postupci detektiranja neutralizirajućih protutijela protiv leptina |
CN110183530A (zh) * | 2019-06-21 | 2019-08-30 | 深圳市亚辉龙生物科技股份有限公司 | 瘦素免疫原、杂交瘤细胞、单克隆抗体、多克隆抗体及应用 |
CN112618698B (zh) * | 2019-10-08 | 2021-10-08 | 北京东方百泰生物科技股份有限公司 | 一种人白细胞介素10-Fc融合蛋白的注射制剂 |
Family Cites Families (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4179337A (en) | 1973-07-20 | 1979-12-18 | Davis Frank F | Non-immunogenic polypeptides |
AU3382595A (en) * | 1994-07-29 | 1996-03-04 | Smithkline Beecham Corporation | Novel compounds |
US6309853B1 (en) * | 1994-08-17 | 2001-10-30 | The Rockfeller University | Modulators of body weight, corresponding nucleic acids and proteins, and diagnostic and therapeutic uses thereof |
JPH0870875A (ja) * | 1994-09-05 | 1996-03-19 | Tosoh Corp | 組換えアルカリフォスファタ−ゼ融合タンパク質 |
GB9511935D0 (en) * | 1995-06-13 | 1995-08-09 | Smithkline Beecham Plc | Novel compound |
CA2358862A1 (en) * | 1995-11-22 | 1997-05-29 | Amgen Inc. | Methods of increasing lean tissue mass using ob protein compositions |
RU2178307C2 (ru) * | 1995-12-27 | 2002-01-20 | Джинентех Инк. | Производные ов-протеина |
-
1997
- 1997-12-11 KR KR1019997005618A patent/KR100937550B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1997-12-11 HU HU0000302A patent/HU227088B1/hu not_active IP Right Cessation
- 1997-12-11 EP EP06024946A patent/EP1835030A1/en not_active Withdrawn
- 1997-12-11 PL PL334242A patent/PL194159B1/pl not_active IP Right Cessation
- 1997-12-11 CN CNB971818177A patent/CN1195858C/zh not_active Expired - Fee Related
- 1997-12-11 BR BR9713755-3A patent/BR9713755A/pt active Search and Examination
- 1997-12-11 NZ NZ514145A patent/NZ514145A/en not_active IP Right Cessation
- 1997-12-11 EA EA199900575A patent/EA004790B1/ru not_active IP Right Cessation
- 1997-12-11 WO PCT/US1997/023183 patent/WO1998028427A1/en active IP Right Grant
- 1997-12-11 AU AU56060/98A patent/AU5606098A/en not_active Abandoned
- 1997-12-11 DE DE69737266T patent/DE69737266T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1997-12-11 CZ CZ0203699A patent/CZ298203B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1997-12-11 CA CA002275183A patent/CA2275183A1/en not_active Abandoned
- 1997-12-11 EP EP97952464A patent/EP0954588B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1997-12-11 JP JP52889698A patent/JP4175668B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1997-12-11 PT PT97952464T patent/PT954588E/pt unknown
- 1997-12-11 RS YUP-279/99A patent/RS49927B/sr unknown
- 1997-12-11 AT AT97952464T patent/ATE351910T1/de active
- 1997-12-11 SK SK774-99A patent/SK287578B6/sk not_active IP Right Cessation
- 1997-12-11 EA EA200100216A patent/EA004791B1/ru not_active IP Right Cessation
- 1997-12-11 DK DK97952464T patent/DK0954588T3/da active
- 1997-12-11 IL IL130396A patent/IL130396A/en not_active IP Right Cessation
- 1997-12-11 ES ES97952464T patent/ES2280083T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1997-12-15 ZA ZA9711239A patent/ZA9711239B/xx unknown
- 1997-12-16 AR ARP970105894A patent/AR009436A1/es active IP Right Grant
-
1999
- 1999-06-08 NO NO19992779A patent/NO324506B1/no not_active IP Right Cessation
- 1999-06-23 BG BG103522A patent/BG64288B1/bg unknown
- 1999-11-30 HK HK99105565A patent/HK1021388A1/xx not_active IP Right Cessation
-
2007
- 2007-03-16 AR ARP070101065A patent/AR059907A2/es unknown
- 2007-03-16 NO NO20071415A patent/NO325096B1/no not_active IP Right Cessation
-
2008
- 2008-05-29 JP JP2008140707A patent/JP4659068B2/ja not_active Expired - Fee Related
Also Published As
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
EA004790B1 (ru) | Композиции на основе слитого белка ов и способы их применения | |
US7112659B2 (en) | OB fusion protein compositions and methods | |
JP4227325B2 (ja) | Ob蛋白組成物を用いる非脂肪組織重増加方法 | |
EP0865294B1 (en) | Methods of reducing or maintaining reduced levels of blood lipids using ob protein compositions | |
EP1090645B1 (en) | Oral delivery of chemically modified proteins | |
US7718400B2 (en) | Methods of increasing lean tissue mass using OB protein compositions | |
CA2263826A1 (en) | Methods of increasing sensitivity of an individual to ob protein by upregulating ob protein receptor | |
AU2006201747B2 (en) | Methods of Increasing Lean Tissue Mass Using OB Protein Compositions | |
AU2003201360B2 (en) | Methods of Reducing or Maintaining Reduced Levels of Blood Lipids Using OB Protein Compositions | |
MXPA99001875A (en) | Methods of increasing sensitivity of an individual to ob protein by upregulating ob protein receptor | |
AU7213600A (en) | Methods of increasing lean tissue mass using OB protein compositions |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
MM4A | Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s) |
Designated state(s): AM AZ BY KZ KG MD TJ TM |
|
MM4A | Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s) |
Designated state(s): RU |