DK174729B1 - Fremgangsmåde til fremstilling af S-enantiomere af 2-arylpropionsyrer - Google Patents
Fremgangsmåde til fremstilling af S-enantiomere af 2-arylpropionsyrer Download PDFInfo
- Publication number
- DK174729B1 DK174729B1 DK198900338A DK33889A DK174729B1 DK 174729 B1 DK174729 B1 DK 174729B1 DK 198900338 A DK198900338 A DK 198900338A DK 33889 A DK33889 A DK 33889A DK 174729 B1 DK174729 B1 DK 174729B1
- Authority
- DK
- Denmark
- Prior art keywords
- racemic
- ketoprofen
- μπιοί
- corynebacterium
- acid
- Prior art date
Links
- 239000002253 acid Substances 0.000 title claims abstract description 9
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims description 3
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 title abstract description 4
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims abstract description 13
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 9
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims abstract description 6
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims abstract description 5
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims abstract description 5
- 241000186216 Corynebacterium Species 0.000 claims description 13
- 241000186146 Brevibacterium Species 0.000 claims description 9
- DKYWVDODHFEZIM-NSHDSACASA-N dexketoprofen Chemical compound OC(=O)[C@@H](C)C1=CC=CC(C(=O)C=2C=CC=CC=2)=C1 DKYWVDODHFEZIM-NSHDSACASA-N 0.000 claims description 6
- 235000019260 propionic acid Nutrition 0.000 claims description 4
- XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-N dimethylselenoniopropionate Natural products CCC(O)=O XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- -1 3-benzoylphenyl Chemical group 0.000 claims description 2
- 108010033272 Nitrilase Proteins 0.000 claims description 2
- 238000011065 in-situ storage Methods 0.000 claims description 2
- 125000001997 phenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(*)C([H])=C1[H] 0.000 claims description 2
- YPGCWEMNNLXISK-UHFFFAOYSA-N alpha-phenylpropionic acid Natural products OC(=O)C(C)C1=CC=CC=C1 YPGCWEMNNLXISK-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 7
- DOZZSWAOPDYVLH-UHFFFAOYSA-N 2-phenylpropanamide Chemical compound NC(=O)C(C)C1=CC=CC=C1 DOZZSWAOPDYVLH-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 6
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 abstract description 5
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 abstract description 5
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 24
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 19
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 15
- DKYWVDODHFEZIM-UHFFFAOYSA-N ketoprofen Chemical compound OC(=O)C(C)C1=CC=CC(C(=O)C=2C=CC=CC=2)=C1 DKYWVDODHFEZIM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 12
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 11
- 229960000991 ketoprofen Drugs 0.000 description 11
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 9
- 239000012074 organic phase Substances 0.000 description 9
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 9
- KLWMCJJRUWWDSW-UHFFFAOYSA-N 2-(3-benzoylphenyl)propanamide Chemical compound NC(=O)C(C)C1=CC=CC(C(=O)C=2C=CC=CC=2)=C1 KLWMCJJRUWWDSW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 108700023418 Amidases Proteins 0.000 description 7
- 102000005922 amidase Human genes 0.000 description 7
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 7
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 description 7
- 238000001212 derivatisation Methods 0.000 description 7
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 7
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 6
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 6
- RQEUFEKYXDPUSK-SSDOTTSWSA-N (1R)-1-phenylethanamine Chemical compound C[C@@H](N)C1=CC=CC=C1 RQEUFEKYXDPUSK-SSDOTTSWSA-N 0.000 description 5
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 5
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 5
- RGYOCHMZSLUCNP-UHFFFAOYSA-N 2-(3-benzoylphenyl)propanenitrile Chemical compound N#CC(C)C1=CC=CC(C(=O)C=2C=CC=CC=2)=C1 RGYOCHMZSLUCNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 4
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 4
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 4
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 4
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 4
- 230000000707 stereoselective effect Effects 0.000 description 4
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 3
- 239000008057 potassium phosphate buffer Substances 0.000 description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000002028 Biomass Substances 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 2
- JVTAAEKCZFNVCJ-REOHCLBHSA-N L-lactic acid Chemical compound C[C@H](O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- DKYWVDODHFEZIM-LLVKDONJSA-N (2r)-2-(3-benzoylphenyl)propanoic acid Chemical compound OC(=O)[C@H](C)C1=CC=CC(C(=O)C=2C=CC=CC=2)=C1 DKYWVDODHFEZIM-LLVKDONJSA-N 0.000 description 1
- NVAOLENBKNECGF-UHFFFAOYSA-N 2-phenylpropanenitrile Chemical compound N#CC(C)C1=CC=CC=C1 NVAOLENBKNECGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010023063 Bacto-peptone Proteins 0.000 description 1
- 150000007650 D alpha amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 229910005390 FeSO4-7H2O Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910005444 FeSO4—7H2O Inorganic materials 0.000 description 1
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 1
- OAKJQQAXSVQMHS-UHFFFAOYSA-N Hydrazine Chemical class NN OAKJQQAXSVQMHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000007649 L alpha amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 102000004882 Lipase Human genes 0.000 description 1
- 108090001060 Lipase Proteins 0.000 description 1
- 239000004367 Lipase Substances 0.000 description 1
- OHLUUHNLEMFGTQ-UHFFFAOYSA-N N-methylacetamide Chemical compound CNC(C)=O OHLUUHNLEMFGTQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000004879 Racemases and epimerases Human genes 0.000 description 1
- 108090001066 Racemases and epimerases Proteins 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L Sodium Sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 150000001371 alpha-amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000008206 alpha-amino acids Nutrition 0.000 description 1
- 230000003110 anti-inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 238000010364 biochemical engineering Methods 0.000 description 1
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- 229910000396 dipotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L disodium hydrogen phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].OP([O-])([O-])=O BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910000397 disodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019800 disodium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- WOFDVDFSGLBFAC-UHFFFAOYSA-N lactonitrile Chemical compound CC(O)C#N WOFDVDFSGLBFAC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000019421 lipase Nutrition 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 229910000402 monopotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- 150000002825 nitriles Chemical class 0.000 description 1
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 1
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Chemical compound OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 1
- 235000013849 propane Nutrition 0.000 description 1
- 230000006340 racemization Effects 0.000 description 1
- 229910052938 sodium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011152 sodium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 1
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 229960000344 thiamine hydrochloride Drugs 0.000 description 1
- 235000019190 thiamine hydrochloride Nutrition 0.000 description 1
- 239000011747 thiamine hydrochloride Substances 0.000 description 1
- DPJRMOMPQZCRJU-UHFFFAOYSA-M thiamine hydrochloride Chemical compound Cl.[Cl-].CC1=C(CCO)SC=[N+]1CC1=CN=C(C)N=C1N DPJRMOMPQZCRJU-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 1
- 239000011592 zinc chloride Substances 0.000 description 1
- 235000005074 zinc chloride Nutrition 0.000 description 1
- JIAARYAFYJHUJI-UHFFFAOYSA-L zinc dichloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Zn+2] JIAARYAFYJHUJI-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
- C12P7/40—Preparation of oxygen-containing organic compounds containing a carboxyl group including Peroxycarboxylic acids
- C12P7/52—Propionic acid; Butyric acids
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P41/00—Processes using enzymes or microorganisms to separate optical isomers from a racemic mixture
- C12P41/006—Processes using enzymes or microorganisms to separate optical isomers from a racemic mixture by reactions involving C-N bonds, e.g. nitriles, amides, hydantoins, carbamates, lactames, transamination reactions, or keto group formation from racemic mixtures
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
- C12P7/40—Preparation of oxygen-containing organic compounds containing a carboxyl group including Peroxycarboxylic acids
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Description
i DK 174729 B1
Den foreliggende opfindelse angår en fremgangsmåde til fremstilling af S-enantiomere af 2-arylpropionsyrer med den almene formel I
5 CH3
Ar - CH - COOH (I) hvor Ar betyder phenyl eller 3-benzoylphenyl, hvilken frem-10 gangsmåde er ejendommelig ved, at de tilsvarende racemiske 2-arylpropionamider, eventuelt fremstillet in situ, hydrolyseres enantioselektivt i nærværelse af en mikroorganisme eller et enzym fra denne mikroorganisme valgt blandt Brevi-bacterium R 312 (CBS 717-73), Corynebacterium N 771 (FERM P 15 4445) og Corynebacterium N 774 (FERM P 4446), hvorefter S- 2-arylpropionsyren adskilles fra R-2-arylpropionamidet.
Opfindelsen angår især fremstillingen af S(+)-enan-tiomeren af 2-(3-benzoylphenyl)-propionsyre (S(+)-ketopro-fen), som har antiinflammatoriske egenskaber.
20 Det er kendt at fremstille S-enantiomere af 2-aryl- propionsyrer ved stereoselektiv oxidation af 2-arylpropaner ved hjælp af mikroorganismer valgt blandt svampe og gærarter (EP-A 205 215) eller ved stereospecifik hydrolyse af racemiske estere ved hjælp af en lipase af ekstracellulær eller 25 mikrobiel oprindelse (EP-A 227 078).
Det er ligeledes kendt (FR 7 901 803/2 447 359) at fremstille optisk aktive α-aminosyrer ved biologisk hydrolyse af α-aminonitriler ved hjælp af et middel indeholdende en generel nitrilase og en L-stereospecifik amidase eller a-30 -aminoamider ved hjælp af et middel indeholdende en L-stereospecif ik amidase. De anvendte midler er bakterier eller cellefri præparater af bakteriel oprindelse, der har en L--stereospecifik amidase, som hidrører fra mutation af stamner indeholdende en generel amidase. Hydrolysen af a-aminonitri-35 ler eller a-aminoamider hører til en blanding af L-a-amino-syre og D-a-aminoamid. D-a-aminoamidet kan hydrolyseres til D-a-aminosyre ved hjælp af et middel, der har en generel amidase og ikke har racemase.
DK 174729 B1 2
Det har ifølge den foreliggende opfindelse vist sig, at de racemiske 2-arylpropionamider kan hydrolyseres enantio-selektivt til 2-arylpropionsyrer med den almene formel I i S-form ved hjælp af mikroorganismer eller enzymer fra mikro-5 organismer valgt blandt Brevibacterium R 312 (CBS 717.73) og Corynebacterium N 771 (FERM P 4445) eller Corynebacterium N 774 (FERM P 4446), der gør det muligt at opnå S-2-aryl-pro-pionsyrerne med et enantiomer-overskud af S-isomer på over 90%.
10 Det er overraskende, at blandt disse mikroorganismer giver Brevibacterium R 312, som beskrives i FR 7 901 803/-2 447 359 og i Advances in Biochemical Engineering, bind 14, s. 1-32 (1980) som havende en ikke-stereospecifik generel amidase, en stereospecifik hydrolyse af racemiske 2-aryl-15 propionamider, medens dens mutant A4, som har en L-stereo-specifik amidase, ikke hydrolyserer racemiske 2-arylpropionamider stereoselektivt.
Det skal bemærkes, at Corynebacterium N 771 og Corynebacterium N 774, som beskrives i EP 187 680, f.eks. hydro-20 lyserer lactonitril til D, L-mælkesyre og cy-amino-phenylpro-pionitril til D,L-phenylalanin, uden at der observeres stereoselektivitet .
Fremgangsmåden ifølge opfindelsen gennemføres i almindelighed i vandigt eller vandigt-organisk, homogent eller 25 heterogent medium under bestemte temperatur- og pH-værdibe-tingelser afhængigt af naturen af mikroorganismen og enzymet, idet en suspension af celler eller celleekstrakt af mikroorganismen og racemisk 2-arylpropionamid omrøres.
Fremgangsmåden fører til en blanding af S-2-aryl-30 -propionsyre og R-2-arylpropionamid. R-2-arylpropionamidet kan racemiseres ifølge kendte metoder til dannelse af racemisk 2-arylpropionamid, som kan hydrolyseres på ny til dannelse af S-2-arylpropionsyre under de ovenfor anførte betingelser.
35 F.eks. kan racemiseringen af R-2-arylpropionamid gennemføres ved opvarmning med ammoniak til en temperatur DK 174729 B1 3 mellem 80 og 160°C.
Når den anvendte mikroorganisme både kan hydrolysere nitriler og enantioselektivt hydrolysere 2-arylpropionamid, er det muligt at fremstille en S-2-arylpropionsyre ud fra 5 enten racemisk 2-arylpropionitril eller ud fra racemisk 2-arylpropionamid.
Fremgangsmåden ifølge den foreliggende opfindelse er særlig egnet til fremstilling af S(+)-ketoprofen ud fra racemisk 2-(3-benzoylphenyl)-propionamid og eventuelt race-10 misk 2-(3-benzoylphenyl)-propionitril.
Opfindelsen illustreres ved de følgende eksempler.
Eksempel 1 a) Stammen Brevibacterium R 312 (CBS 717.73) dyrkes 15 i rystekolbe ved 28°C i 14 timer i et medium med følgende sammensætning: glucose 10 g (NH4)2S04 5 g kh2po4 1,01 g 20 Na2HP04·12H20 1,64 g k2hpo4 0,82 g
CaCl22H20 0,012 g
ZnCl2 0,0012 g
FeS04·7H20 0,0012 g 25 MnS04-H20 0,0012 g
MgS04-7H20 0,5 g thiamin-hydrochlorid 0,002 g vand, op til 1000 ml.
Denne forkultur anvendes til podning af et kultur-30 medium, der har den samme sammensætning, men desuden indeholder N-methylacetamid i en koncentration på 20 mM. Dyrkningen gennemføres i rystekolbe i 24 timer ved 28°C. Den fremkomne biomasse fraskilles ved centrifugering og vaskes derefter to gange med en natriumchloridopløsning (9 g/liter) .
35 b) Et centrifugeringsbundfald indeholdende 13 mg celler af Brevibacterium R 312, udtrykt som tørstof, suspen- DK 174729 B1 4 deres i 2 ml phosphatpuffer (50 mM) ved en pH-værdi på 7.
Der tilsættes 25 mg racemisk 2-phenylpropionitril (190 μπιοί) .
Efter 24 timers omrøring ved 25°C fortyndes reaktionsblandingen ved tilsætning af 23 ml af en blanding af acetonitril 5 og 1 N saltsyre i volumenforholdet 90:10. Bakterierne fjernes ved centrifugering. Sammensætningen af den ovenstående væske bestemmes ved højydelses-væskechromatografi (HPLC).
Den ovenstående væske indeholder: 119 μπιοί 2-phenylpropionamid 10 62 μπιοί 2-phenylpropionsyre .
Der tilsættes natriumchlorid for at fremme adskillelsen af den vandige og den organiske fase. Efter inddampning til tørhed af den organiske fase optages remanensen med 20 ml af en blanding af chloroform og 0,1 N natriumhydroxidop-15 løsning i volumenforholdet 1:1.
Den basiske fase gøres sur og ekstraheres derefter med chloroform.
En måling af drejningsevnen viser, at enantiomer-over-skuddet af S(+)-isomer er 100%.
20 Efter derivatisering af 2-phenylpropionsyre med R- (+)-a-methylbenzylamin viser HPLC-analyse, at enantiomer--overskuddet er 96,4%.
Eksempel 2 25 a} Stammen Corynebacterium N 771 (FERM P 4445) dyrkes i rystekolbe ved 28°C i 14 timer i et medium med følgende sammensætning: gærekstrakt 3 g maltekstrakt 3 g 30 bactopepton 5 g glucose 10 g
FeS04-7H20 0,1 g vand, op til 1 liter, hvis pH-værdi er indstillet til 7,5 ved tilsætning af na-35 triumhydroxid før sterilisationen.
Denne forkultur anvendes i forholdet 1/40 til pod- DK 174729 B1 5 ning af et medium med samme sammensætning, hvortil der sættes 5 ml pr. liter af en opløsning af ketoprofen-nitril i aceto-nitril (0,2 g/ml).
Efter inkubering i 24 timer ved 28°C i rystekolbe 5 fraskilles biomassen ved centrifugering og vaskes derefter to gange med vandig natriumchloridopløsning (9 g/liter).
b) Et centrifugeringsbundfald indeholdende 72 mg celler af Corynebacterium N 771, udtrykt som tørstof, suspenderes i 2 ml phosphatpuffer (50 mM) ved en pH-værdi på 10 7. Der tilsættes 25 mg racemisk 2-phenylpropionamid (167 μτηοΐ) og omrøres derefter i 24 timer ved 25°C. Reaktionsblandingen behandles derefter som beskrevet i eksempel 1.
Den ovenstående væske indeholder: 110 μπιοί 2-phenylpropionamid 15 34 μπιοί 2-phenylpropionsyre .
Enantiomer-overskuddet af 2-phenylpropionsyre målt ved drejningsevnen og efter derivatisering med R(+)-a-meth-ylbenzylamin er hhv. 100 og 95% S(+)-isomer.
20 Eksempel 3
Et centrifugeringsbundfald fremstillet som beskrevet i eksempel 1 a) og indeholdende 13 mg celler af Brevibac-terium R 312, udtrykt som tørstof, suspenderes i 2 ml phosphatpuf fer (50 mM) ved en pH-værdi på 7. Der tilsættes 25 25 mg racemisk 2-phenylpropionamid (167 μπιοί) . Der omrøres i 24 timer ved 25°C. Reaktionsblandingen behandles som beskrevet i eksempel 1.
Den ovenstående væske indeholder: 95,2 μπιοί 2-phenylpropionamid 3 0 56,1 μπιοί 2-phenylpropionsyre.
Enantiomer-overskuddet af 2-phenylpropionsyre målt ved drejningsevnen og efter derivatisering med R(+)-a-meth-ylbenzylamin er hhv. 99 og 95% S(+)-isomer.
DK 174729 B1 6
Eksempel 4
Et centrifugeringsbundfald fremstillet som beskrevet i eksempel 1 a) og indeholdende 66 mg celler af Brevibac-terium R 312, udtrykt som tørstof, suspenderes i 2 ml kalium-5 phosphatpuffer (50 mM) ved en pH-værdi på 7. Der tilsættes 25,9 mg racemisk 2 - (3-benzoylphenyl) -propionamid (102 μπιοί) .
Der omrøres ved 25°C i 72 timer. Reaktionsblandingen fortyndes ved tilsætning af 23 ml af en blanding af acetonitril og 1 N saltsyre i volumenforholdet 90:10. Bakterierne fjernes 10 ved centrifugering. Den ovenstående væske indeholder ifølge analyse ved højydelses-væskechromatografi: 4 6 μπιοί ketoprofen 59 μπιοί ketoprofen-amid.
Der tilsættes natriumchlorid for at fremme adskillel-15 sen af den vandige og den organiske fase. Efter inddampning til tørhed af den organiske fase optages remanensen med 20 ml af en blanding af chloroform og 0,1 N natriumhydroxidopløsning i volumenforholdet 1:1.
Den basiske fase gøres sur og ekstraheres derefter 20 med chloroform. Efter derivaterisering af ketoprofen med R-(+ ) -α-methylbenzylamin viser en analyse ved højydelses-væske-chromatografi af blandingen af de to diastereoisomere, at enantiomer-overskuddet af S(+)-ketoprofen er 93%.
25 Eksempel 5
Et bundfald indeholdende 180 mg celler af Corynebac-terium N 771 fremstillet som beskrevet i eksempel 2 a) , idet vægten er udtrykt som tørstof, suspenderes i 2 ml ka-liumphosphatpuffer (50 mM) ved en pH-værdi på 7. Der tilsæt-30 tes 25,3 mg racemisk ketoprofen-amid (100 μπιοί) . Der omrøres i 48 timer ved 25°C og tilsættes derefter 23 ml af en blanding af acetonitril og 1 N saltsyre i volumenforholdet 90:10. Bakterierne fjernes ved centrifugering. Den ovenstående væske indeholder ifølge analyse ved høj ydelses-væskechromato-35 grafi: DK 174729 B1 7 76,03 μπιοί ketoprofen-amid 24.7 μπιοί ketoprofen.
Der tilsætces nogle mg natriumchlorid. Den vandige og den organiske fase adskilles. Efter inddampning til tørhed 5 af den organiske fase optages remanensen med 20 ml af en blanding af chloroform og 0,1 N natriumhydroxidopløsning i volumenforholdet 1:1. Den vandige fase gøres sur og ekstra-heres derefter med chloroform. Efter derivatisering af ketoprofen med R( + )-α-methylbenzylamin viser analyse ved høj -10 ydelses-væskechromatografi af blandingen af de to diastereo-isomere, at enantiomer-overskuddet af S(+)-ketoprofen er 94%.
Eksempel 6
Et centrifugeringsbundfald fremstillet som beskrevet 15 i eksempel 1 a) og indeholdende 24 mg celler af Brevibac-terium R 312, udtrykt som tørstof, suspenderes i 2 ml kalium-phosphatpuffer (50 mM) ved en pH-værdi på 7. Der tilsættes 23,5 mg racemisk 2-(3-benzoylphenyl)-propionitril (ketopro-fen-nitril) , dvs. 100 μπιοί. Der omrøres i 65 timer ved 25°C 20 og tilsættes derefter 23 ml af en blanding af acetonitril og 1 N saltsyre i volumenforholdet 90:10. Bakterierne fjernes ved centrifugering. Den ovenstående væske indeholder ifølge analyse ved højydelses-væskechromatografi: 2,2 μπιοί ketoprofen-nitril 25 53 μπιοί ketoprofen-amid 44.7 μπιοί ketoprofen.
Der tilsættes nogle mg natriumchlorid. Den vandige og organiske fase adskilles. Efter inddampning til tørhed af den organiske fase optages remanensen med 2 0 ml af en 30 blanding af chloroform og 0,1 N natriumhydroxidopløsning i volumenforholdet 1:1. Efter dekantering inddampes den organiske fase til tørhed. Remanensen (13,5 mg) indeholdende ketoprofen-amid fortyndes i 2 ml chloroform. Måling af drejningsevnen af denne opløsning viser, at enantiomer-overskud-35 det af R(-)-ketoprofen-amid er 84%.
Den basiske vandige fase gøres sur og ekstraheres DK 174729 B1 8 derefter med chloroform. Efter derivaterisering af ketoprofen med R (+ ) -or-methylbenzylamin viser analyse ved højydelses--væskechromatografi af blandingen af de to diastereoisomere, at enantiomer-overskuddet af S(+)-ketoprofen er 96%.
5
Eksempel 7
Et cellebundfald af Corynebacterium N 774 (FERM P 4446) fremstilles som beskrevet i eksempel 2 a) for fremstillingen af et cellebundfald af Corynebacterium N 771.
10 Et cellebundfald indeholdende 176 mg celler, udtrykt som tørstof, suspenderes i 2 ml kaliumphosphatpuffer (50 mM) ved en pH-værdi på 7. Der tilsættes 25,3 mg racemisk ketoprofen-amid (100 μπιοί) . Der omrøres i 48 timer ved 25°C, hvorefter reaktionsblandingen behandles som beskrevet i 15 eksempel l.
En analyse af reaktionsblandingen viser, at den indeholder : 78,6 μπιοί ketoprofen-amid 22,4 μπιοί ketoprofen.
20 Enantiomer-overskuddet af ketoprofen som S(+)-isomer bestemt efter derivatisering er 95%.
Eksempel 8 X en autoklav på 5 cm3 indeholdende 1 cm3 28%'s 25 (vægt/volumen) ammoniak anbringes 20 mg optisk aktivt, rent ketoprofen (79 μπιοί) . Efter lukning anbringes autoklaven i 2 timer i en ovn ved 150°C. Efter afkøling hældes autoklavens indhold i 5 ml vand. pH-værdien indstilles til 1 ved tilsætning af 1 N saltsyre. Den vandige fase ekstraheres med chlo-30 roform. Chloroformfasen tørres over natriumsulfat. Efter filtrering indstilles volumenet til 2 ml ved koncentrering.
Drejningsevnen af denne chloroformopløsning er nul.
HPLC-analyse viser, at denne opløsning indeholder 72,2 μπιοί ketoprof en-amid og 4,1 μπιοί ketoprofen.
Claims (4)
1. Fremgangsmåde til fremstilling af S-enantiomere af 2-arylpropionsyrer med den almene formel
5 CH3 Ar - CH - COOH (I) hvori Ar betyder phenyl eller 3-benzoylphenyl, kendetegnet ved, at de tilsvarende racemiske 2-arylpropion-10 amider, eventuelt fremstillet in situ, hydrolyseres enan-tioselektivt i nærværelse af en mikroorganisme eller et enzym fra denne mikroorganisme valgt blandt Brevibacterium R 312 (CBS 717-73), Corynebacterium N 771 (FERM P 4445) og Corynebacterium N 774 (FERM P 4446), hvorefter S-2-arylpro-15 pionsyren adskilles fra R-2-arylpropionamidet.
2. Fremgangsmåde ifølge krav 1, kendetegnet ved, at mikroorganismen har en nitrilase-aktivitet knyttet til evnen til enantioselektivt at hydrolysere det racemiske 2-arylpropionamid til 2-arylpropionsyre.
3. Fremgangsmåde ifølge krav 2, kendeteg net ved, at racemisk 2-arylpropionitril hydrolyseres direkte til S-2-arylpropionsyre.
4. Fremgangsmåde ifølge et af kravene 1-3 til fremstilling af S(+)-2-(3-benzoylphenyl)-propionsyre.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| FR8800923A FR2626288B1 (da) | 1988-01-27 | 1988-01-27 | |
| FR8800923 | 1988-01-27 |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| DK33889D0 DK33889D0 (da) | 1989-01-26 |
| DK33889A DK33889A (da) | 1989-07-28 |
| DK174729B1 true DK174729B1 (da) | 2003-10-06 |
Family
ID=9362685
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| DK198900338A DK174729B1 (da) | 1988-01-27 | 1989-01-26 | Fremgangsmåde til fremstilling af S-enantiomere af 2-arylpropionsyrer |
Country Status (21)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5089405A (da) |
| EP (1) | EP0330529B1 (da) |
| JP (1) | JP2747310B2 (da) |
| KR (1) | KR890012004A (da) |
| CN (1) | CN1035847A (da) |
| AT (1) | ATE87664T1 (da) |
| AU (1) | AU616933B2 (da) |
| CA (1) | CA1340524C (da) |
| DE (1) | DE68905636T2 (da) |
| DK (1) | DK174729B1 (da) |
| ES (1) | ES2054039T3 (da) |
| FI (1) | FI95397C (da) |
| FR (1) | FR2626288B1 (da) |
| GR (1) | GR3007536T3 (da) |
| HU (1) | HU203792B (da) |
| IE (1) | IE63391B1 (da) |
| IL (1) | IL89089A (da) |
| NZ (1) | NZ227742A (da) |
| PT (1) | PT89553B (da) |
| RU (1) | RU1806201C (da) |
| ZA (1) | ZA89641B (da) |
Families Citing this family (22)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4962124A (en) * | 1987-11-17 | 1990-10-09 | Analgesic Associates | Onset-hastened/enhanced antipyretic response |
| DK314989A (da) * | 1988-06-27 | 1989-12-28 | Asahi Chemical Ind | Fremgangsmaade til fremstilling af optisk aktive alfa-substituerede organiske syrer, samt mikroorganismer og enzymer anvendelige ved fremgangsmaaden |
| US5238828A (en) * | 1988-08-29 | 1993-08-24 | Idemitsu Kosan Company Limited | Method for the preparation of an optically active 2-substituted carboxylic acid |
| EP0356912A3 (en) * | 1988-08-29 | 1991-09-18 | Idemitsu Kosan Company Limited | A method for the preparation of an optically active 2-substituted carboxylic acid |
| DE3910024A1 (de) * | 1989-03-28 | 1990-10-11 | Basf Ag | Verfahren zur fermentativen herstellung von 2-(4-hydroxipenoxi-)propionsaeure |
| FR2655660B1 (fr) * | 1989-12-11 | 1992-03-20 | Rhone Poulenc Sante | Nouveaux polypeptides, sequences d'adn permettant leur expression, procede de preparation et leur utilisation. |
| DK161690D0 (da) * | 1990-07-05 | 1990-07-05 | Novo Nordisk As | Fremgangsmaade til fremstilling af enantiomere forbindelser |
| WO1992005275A1 (en) * | 1990-09-20 | 1992-04-02 | E.I. Du Pont De Nemours And Company | A process for the preparation of enantiomeric 2-alkanoic acids |
| US5593871A (en) * | 1990-09-20 | 1997-01-14 | E. I. Du Pont De Nemours And Company | Process for the preparation of enantiometric 2-alkanoic acid amides from nitriles |
| SG48037A1 (en) * | 1990-11-14 | 1998-04-17 | Nitto Chemical Industry Co Ltd | Biology process for production-alpha-hydroxyamide or alpha-hydroxy acid |
| FR2669643B1 (fr) * | 1990-11-28 | 1995-04-28 | Rhone Poulenc Chimie | Procede de synthese enzymatique d'adipate d'ammonium. |
| US5258305A (en) * | 1991-09-13 | 1993-11-02 | Nitto Chemical Industry Co., Ltd. | Manufacture of optically active 2-phenylpropionic acid and 2-phenylpropionamide from the nitrile using Rhodococcus equi |
| FR2687915B1 (fr) * | 1992-02-28 | 1995-05-05 | Rhone Poulenc Rorer Sa | Composition pharmaceutique utilisable comme analgesique contenant l'acide (benzoyl-3 phenyl)-2 propionique-(r). |
| US5273895A (en) * | 1992-10-26 | 1993-12-28 | Sepracor, Inc. | Enantioselective production of chiral carboxylic acids |
| WO1994020449A1 (en) * | 1993-03-09 | 1994-09-15 | Dompe'farmaceutici Spa | Salts of 2-(3-benzoylphenyl)propionic acid with achiral and chiral organic bases and pharmaceutical compositions thereof |
| US5476965A (en) * | 1994-02-18 | 1995-12-19 | Genencor International, Inc. | Enzymatic resolution of substituted 2-methyl-propionic acid |
| EP0826032A1 (de) * | 1995-05-08 | 1998-03-04 | Lonza Ag | Biotechnologisches verfahren zur herstellung von r-alpha-piperazincarbonsäure und s-alpha-piperazincarbonsäureamid |
| US5863750A (en) * | 1996-12-18 | 1999-01-26 | Cytec Tech Corp | Methods for the detoxification of nitrile and/or amide compounds |
| US6060265A (en) * | 1996-12-18 | 2000-05-09 | Cytec Technology Corporation | Methods for the detoxification of nitrile and/or amide compounds |
| CN101892283A (zh) * | 2010-06-03 | 2010-11-24 | 华东理工大学 | 红球菌Rhodococcus ruber 4.1187催化制备光学纯(S)-(+)-2-苯基丙酸 |
| CN103789791B (zh) * | 2014-02-12 | 2016-08-17 | 华东师范大学 | 一种电化学合成具有光学活性的2-苯丙酸方法 |
| CN109486897A (zh) * | 2018-12-04 | 2019-03-19 | 湖南理工学院 | 一种立体选择性酶催化水解拆分2-苯基丙酸对映体的方法 |
Family Cites Families (14)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE1157237B (de) * | 1961-09-16 | 1963-11-14 | Bayer Ag | Verfahren zur Herstellung von optisch aktiven Phenoxyessigsaeuren |
| FR1342844A (fr) * | 1961-09-16 | 1963-11-15 | Bayer Ag | Procédé de préparation d'acides phénoxyacétiques substitués, optiquement actifs |
| JPS4913989A (da) * | 1972-05-19 | 1974-02-06 | ||
| FR2245585B1 (da) * | 1973-09-19 | 1976-05-14 | Anvar | |
| JPS5446887A (en) * | 1977-09-19 | 1979-04-13 | Nitto Chem Ind Co Ltd | Preparation of acrylic acid or methacrylic acid |
| FR2447359A1 (fr) * | 1979-01-24 | 1980-08-22 | Anvar | Procede de preparation d'acides a-amines optiquement actifs par hydrolyse biologique de nitriles ou d'amides a-amines |
| US4366250A (en) * | 1980-09-24 | 1982-12-28 | Anvar | Preparation process of optically active α-aminated acids by biological hydrolysis of nitriles |
| NL8400312A (nl) * | 1984-02-02 | 1985-09-02 | Stamicarbon | Optisch aktief gesubstitueerd boterzuuramide alsmede werkwijze voor de optische scheiding van gesubstitueerd boterzuuramide. |
| JPS61162191A (ja) * | 1985-01-11 | 1986-07-22 | Nitto Chem Ind Co Ltd | 微生物による有機酸類の製造法 |
| DK261685A (da) * | 1985-06-11 | 1986-12-12 | Novo Industri As | Fremgangsmaade til fremstilling af optisk aktive, organiske forbindelser |
| HU197942B (en) * | 1985-12-20 | 1989-06-28 | Wisconsin Alumni Res Found | Process for producing (s)-alpha-methyl-aryl-acetic acids |
| GB8600245D0 (en) * | 1986-01-07 | 1986-02-12 | Shell Int Research | Preparation of 2-arylpropionic acids |
| AU599438B2 (en) * | 1986-12-01 | 1990-07-19 | Gist-Brocades N.V. | Process for the preparation of 2-arylpropionic acids |
| AU619249B2 (en) * | 1988-02-25 | 1992-01-23 | Istituto Guido Donegani S.P.A. | Process for the continuous biotechnological preparation of optical isomer s(+) of 2-(6-methoxy-2-naphthyl) propionic acid |
-
1988
- 1988-01-27 FR FR8800923A patent/FR2626288B1/fr not_active Expired - Lifetime
-
1989
- 1989-01-25 DE DE8989400197T patent/DE68905636T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1989-01-25 EP EP89400197A patent/EP0330529B1/fr not_active Expired - Lifetime
- 1989-01-25 ES ES89400197T patent/ES2054039T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1989-01-25 CN CN89101541A patent/CN1035847A/zh active Pending
- 1989-01-25 AT AT89400197T patent/ATE87664T1/de not_active IP Right Cessation
- 1989-01-26 RU SU894613309A patent/RU1806201C/ru active
- 1989-01-26 ZA ZA89641A patent/ZA89641B/xx unknown
- 1989-01-26 AU AU28828/89A patent/AU616933B2/en not_active Ceased
- 1989-01-26 JP JP1015207A patent/JP2747310B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1989-01-26 NZ NZ227742A patent/NZ227742A/en unknown
- 1989-01-26 CA CA000589237A patent/CA1340524C/fr not_active Expired - Lifetime
- 1989-01-26 IL IL89089A patent/IL89089A/xx unknown
- 1989-01-26 DK DK198900338A patent/DK174729B1/da not_active IP Right Cessation
- 1989-01-26 FI FI890388A patent/FI95397C/fi not_active IP Right Cessation
- 1989-01-26 HU HU89340A patent/HU203792B/hu not_active IP Right Cessation
- 1989-01-26 IE IE23889A patent/IE63391B1/en not_active IP Right Cessation
- 1989-01-26 KR KR1019890000809A patent/KR890012004A/ko not_active Application Discontinuation
- 1989-01-27 PT PT89553A patent/PT89553B/pt not_active IP Right Cessation
- 1989-07-26 US US07/385,084 patent/US5089405A/en not_active Expired - Lifetime
-
1993
- 1993-04-01 GR GR920403076T patent/GR3007536T3/el unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CA1340524C (fr) | 1999-05-04 |
| ZA89641B (en) | 1989-10-25 |
| FR2626288A1 (da) | 1989-07-28 |
| FI95397B (fi) | 1995-10-13 |
| NZ227742A (en) | 1991-10-25 |
| PT89553B (pt) | 1994-02-28 |
| AU2882889A (en) | 1989-08-10 |
| HU203792B (en) | 1991-09-30 |
| IL89089A0 (en) | 1989-08-15 |
| DK33889A (da) | 1989-07-28 |
| IE63391B1 (en) | 1995-04-19 |
| DE68905636T2 (de) | 1993-09-23 |
| JPH01309695A (ja) | 1989-12-14 |
| IE890238L (en) | 1989-07-27 |
| IL89089A (en) | 1992-11-15 |
| FR2626288B1 (da) | 1990-05-18 |
| CN1035847A (zh) | 1989-09-27 |
| GR3007536T3 (da) | 1993-08-31 |
| DE68905636D1 (de) | 1993-05-06 |
| KR890012004A (ko) | 1989-08-23 |
| FI890388A (fi) | 1989-07-28 |
| ATE87664T1 (de) | 1993-04-15 |
| ES2054039T3 (es) | 1994-08-01 |
| PT89553A (pt) | 1989-10-04 |
| JP2747310B2 (ja) | 1998-05-06 |
| EP0330529A1 (fr) | 1989-08-30 |
| HUT52821A (en) | 1990-08-28 |
| FI890388A0 (fi) | 1989-01-26 |
| RU1806201C (ru) | 1993-03-30 |
| EP0330529B1 (fr) | 1993-03-31 |
| DK33889D0 (da) | 1989-01-26 |
| AU616933B2 (en) | 1991-11-14 |
| US5089405A (en) | 1992-02-18 |
| FI95397C (fi) | 1996-01-25 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| DK174729B1 (da) | Fremgangsmåde til fremstilling af S-enantiomere af 2-arylpropionsyrer | |
| KR0147827B1 (ko) | 비대칭 아민의 거울상 이성질 농축 및 입체선택적 합성방법 | |
| JP3717535B2 (ja) | 新規微生物およびＬ−α−アミノ酸の製法 | |
| US5034329A (en) | Process for the preparation of optically active 2-arylalkanoic acids | |
| JP3905575B2 (ja) | 新規の微生物、Ｌ−α−アミノ酸の製法並びに新規の微生物の突然変異株及び変体の培養法、カルバモイラーゼ及び／又はヒダントイナーゼ及び／又はヒダントインラセマーゼをコードする遺伝子の取得法及びカルバモイラーゼ及び／又はヒダントイナーゼ及び／又はヒダントインラセマーゼをコードする遺伝子の微生物又は細胞への挿入法 | |
| HU216652B (hu) | Eljárás amidszármazékok előállítására mikroorganizmusok felhasználásával | |
| JPS62289A (ja) | α−ケト酸からのＬ−α−アミノ酸の酵素学的製造方法 | |
| JPH03280895A (ja) | Ｄ―α―フェニルグリシンの製造法 | |
| JP2670838B2 (ja) | Ｌ―α―アミノ酸類の製造方法 | |
| JPH06506343A (ja) | エナンチオマー性２−アルカン酸類の製造方法 | |
| IE891773L (en) | Process for preparing optically active 2-(aryloxy)- or¹2-(arylthio)alkanoic acids | |
| JPS61274690A (ja) | Ｄ−α−アミノ酸の製造方法 | |
| CH643299A5 (fr) | Procede de preparation de d-alpha-amino-acides. | |
| JP2674078B2 (ja) | Ｄ−α−アミノ酸の製造法 | |
| JP2004057014A (ja) | 芳香族アミノ酸のラセミ化方法、芳香族アミノ酸の光学活性体の製造方法並びに芳香族アミノ酸のラセミ化活性を有する微生物および酵素 | |
| JP2899071B2 (ja) | Ｌ―α―アラニンの製造法 | |
| JPH01228489A (ja) | Ｄ−Ｎ−カルバミル−α−アミノ酸の製造法 | |
| JPS62289194A (ja) | フエニルアラニン又はその誘導体の製造法 | |
| JPWO2008105493A1 (ja) | 光学活性アミノ酸の製造方法 | |
| JPH0870878A (ja) | トロポロニルアラニンの製造法 | |
| JPS5828291A (ja) | Ｎ，ｎ′−ビスカルバモイル−ｄ−シスチンの製造方法 | |
| JPS58209988A (ja) | Ｌ−含硫アミノ酸の製造法 | |
| JPS60172294A (ja) | システインのラセミ化方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PBP | Patent lapsed |
Country of ref document: DK |