HU216652B - Eljárás amidszármazékok előállítására mikroorganizmusok felhasználásával - Google Patents
Eljárás amidszármazékok előállítására mikroorganizmusok felhasználásával Download PDFInfo
- Publication number
- HU216652B HU216652B HU9500298A HU9500298A HU216652B HU 216652 B HU216652 B HU 216652B HU 9500298 A HU9500298 A HU 9500298A HU 9500298 A HU9500298 A HU 9500298A HU 216652 B HU216652 B HU 216652B
- Authority
- HU
- Hungary
- Prior art keywords
- bacterial cells
- bacterial
- activity
- bacillus
- culture
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
- C12N1/205—Bacterial isolates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P13/00—Preparation of nitrogen-containing organic compounds
- C12P13/02—Amides, e.g. chloramphenicol or polyamides; Imides or polyimides; Urethanes, i.e. compounds comprising N-C=O structural element or polyurethanes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
- C12R2001/07—Bacillus
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Virology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
Abstract
A találmány amidvegyületek előállítására szőlgáló eljárásravőnatkőzik. A találmány értelmében eljárva nitrileket alakítanak át amegfelelő amidőkká baktériűmsejt-tenyészet, teljes baktéri msejtek,feltárt baktériűmsejtek, illetve az ezekben lévő enzimek segítségével.A találmány szerinti eljárás immőbilizált készítményekkel iskivitelezhető, melyek előállítása teljes baktériűmsejtek, eltártbaktériűmsejtek, illetve az ezekben lévő enzimek immőbilizálásávaltörténik. A szóban főrgó baktériűmsejtek őlyan termőfilmikrőőrganizműs biőlógiailag tiszta tenyészetéből származnak, amely hdratázaktivitása révén képes nitrilvegyületeket a megfelelő amidőkkáalakítani. Ilyen mikrőőrganizműs példáűl a Bacillűs smithii SC–J05–1(FERM BP–4935) baktériűmtörzs. ŕ
Description
A jelen találmány tárgya eljárás amidvegyületek előállítására olyan mikroorganizmus alkalmazásával, amely hidratázaktivitása révén képes nitrilvegyületet a megfelelő amiddá átalakítani.
Napjainkban a biokatalizátorokat, így például a mikroorganizmusokat széles körben alkalmazzák kémiai reakciók kivitelezésére. Ismeretes például, hogy nitrilvegyületek a megfelelő amidokká alakíthatók bizonyos, hidratázaktivitással rendelkező Bacillus, Bacteridium vagy Brevibacterium (USP 4001 081); Corynebacterium vagy Nocardia (USP 4248968); Pseudomonas (USP 4555487); Rhodococcus vagy Microbacterium (EP 188316); illetve Fusarium (JP-A 64-86889/1989) fajokkal.
A felsorolt mikroorganizmusok mindegyike a mezőül baktériumok közé tartozik, melyek nem képesek 55 °C-nál magasabb hőmérsékleten növekedni. A mezofil baktériumok hidratázaktivitása, melynek révén a nitrilvegyületek megfelelő amidokká való átalakítása történik, nem stabil szobahőmérséklet felett. Az amidvegyületek ilyen, mezofíl baktériumokkal történő előállítását ezért általában alacsonyabb hőmérsékleten végzik. Ebben az esetben hűtőrendszerre van szükség a reaktor hőmérsékletének alacsony értéken tartásához, ami tetemes mennyiségű energiafogyasztással jár, és így jelentős mértékben növeli az előállítási költséget.
Mindezek alapján kutatásokat folytattunk hidrolázaktivitással rendelkező mikroorganizmusok után, melyek képesek nitrilvegyületet a megfelelő amiddá alakítani a szobahőfokot meghaladó hőmérséklet-tartományban is. Ennek eredményeképp sikerült olyan termofil mikroorganizmust izolálnunk egy, az Okayama-ken vidéken lévő hőforrás talajából, amely eleget tesz az említett követelménynek, és így a jelen találmány alapjául szolgál.
Ezek szerint a jelen találmány tárgya eljárás amidvegyületek előállítására oly módon, hogy nitrileket alakítunk át a megfelelő amidokká baktériumsejt-tenyészet, teljes baktériumsejtek, feltárt baktériumsejtek, illetve az ezekben lévő enzimek segítségével. A találmány szerinti eljárás immobilizált készítményekkel is kivitelezhető, melyek előállítása teljes baktériumsejtek, feltárt baktériumsejtek, illetve az ezekben lévő enzimek immobilizálásával történik. A szóban forgó baktériumsejtek olyan termofil mikroorganizmus biológiailag tiszta tenyészetéből származnak, amely hidratázaktivitása révén képes nitrilvegyületeket a megfelelő amidokká alakítani.
A találmány további tárgya a Bacillus smithii SC-J05-1 (FERM BP-4935) jelű, új termofil mikroorganizmus biológiailag tiszta tenyészete, amely hidratázaktivitása révén képes nitrilvegyületet a megfelelő amiddá alakítani.
A találmány szerinti eljárás szerint különféle nitrilvegyületek alakíthatók át a megfelelő amidokká. A szóban forgó nitrilek lehetnek alifásak, így például n-butironitril, n-valeronitril, i-butironitril, acetonitril és pivalonitril; halogéntartalmú nitrilek, így például 2-klórpropionitril; telítetlen alifás nitrilek, így például akrilnitril, krotononitril és metakrilnitril; hidroxinitrilek, így például laktonitril és mandulasavnitril; aminonitrilek, így például 2-fenil-glicinonitril; aromásak, így például benzonitril és a ciano-piridinek; valamint dinitrilek, így például malononitril, szukcinonitril és adiponitril. Előnyös szubsztrátumok az n-butironitril, nvaleronitril, i-butironitril, acetonitril, krotononitril, metakril-nitril, benzonitril, 2-ciano-piridin, 3-ciano-piridin, 4-ciano-piridin, malononitril, szukcinonitril és adiponitril.
A nitrilvegyület átalakítása a megfelelő amiddá baktériumsejt-tenyészet, teljes baktériumsejtek, feltárt baktériumsejtek, illetve az ezekben lévő hidratáz enzimek segítségével történik. A találmány szerinti eljárás immobilizált készítményekkel is kivitelezhető, melyek teljes baktériumsejtek, feltárt baktériumsejtek, illetve az ezekben lévő enzimek immobilizálásával állíthatók elő. A szóban forgó baktériumsejtek olyan termofil mikroorganizmus biológiailag tiszta tenyészetéből származnak, amely hidratázaktivitása révén képes nitrilvegyületet a megfelelő amiddá alakítani.
A jelen találmány szerinti eljárás során alkalmazható mikroorganizmusok köre nincs különösebben korlátozva, minden olyan mikroba szóba jöhet, amely a termofil mikroorganizmusok közé tartozik, és hidratázaktivitása révén képes nitrilvegyületet a megfelelő amiddá alakítani. A „termofil mikroorganizmus” kifejezés értelmezésünk szerint olyan mikroorganizmusra vonatkozik, amely képes 55 °C-nál magasabb hőmérsékleten is növekedni.
Az alkalmas mikroorganizmushoz például az alábbi módon juthatunk. Első lépésként talajmintát gyűjtünk a természetből, és a talajminta, vagy az ebből készített vizes szuszpenzió felülúszójának megfelelő mennyiségével ismert, a mikroorganizmusok tenyésztésére használatos táptalajt - például fő komponensként glicerint, polipeptont, élesztőkivonatot és malátakivonatot tartalmazó folyékony, vagy agarral szilárdított tápközeget beoltunk, és 55 °C-nál magasabb hőmérsékleten inkubáljuk 24 óra és 3 hónap közötti időn át. Az így kapott tenyészetet, vagy az abból nyert baktériumsejteket az ismertetett komponenseket tartalmazó szilárd táptalajra szélesztjük, és tovább inkubáljuk. A kinőtt egyedi telepekről a termofil mikroorganizmus már egyszerűen izolálható.
A természetből a fentiek szerint izolált, illetve valamely törzsgyűjteményből származó termofil mikroorganizmust 55 °C-nál magasabb hőmérsékleten inkubáljuk megfelelő, például 12 óra és 7 nap közötti időn át kémcsőben vagy lombikban lévő folyékony tápközegben, amely az ismertetett táptalaj komponenseken kívül nitril-, vagy amidvegyületet, így például i-valeronitrilt, krotononitrilt vagy krotonamidot tartalmaz. A kinőtt tenyészetet nitrilvegyület, így propionitril vagy akril-nitril vizes oldatához adva a reakciót például 30 °C-on, 10-60 perc alatt végrehajtjuk. Ezután a reakcióelegyet megvizsgáljuk, hogy keletkezett-e amidvegyület. Ezzel a módszerrel megtalálhatjuk azt a termofil mikroorganizmust, amely hidratázaktivitása révén képes a nitrilvegyületet a megfelelő amiddá alakítani. Az amidvegyületek kimutatására például a ké2
HU 216 652 Β sőbbiekben ismertetendő gázkromatográfiás módszer alkalmazható.
Jellemző példaként Bacillus smithii SC-J05-1 törzs használható a találmány szerinti eljárás kivitelezése során. Ezt a baktériumtörzset, amely a Bacillus nemzetséghez tartozó termofil mikroorganizmus, és amelyet a jelen találmány szerzői izoláltak magas nitril-hidratáz-aktivitása alapján, a National Institute of Bioscience and Humán Technology (Agency of Industrial Science and Technology, Japan) törzsgyűjteményében FERM P-14037 nyilvántartási számon deponáltuk 1993. december 24-én. A Budapesti Egyezménynek megfelelően a törzs 1994. december 24-én átkerült a nemzetközi törzsgyűjteménybe, ahol a FERM BP-4935 nyilvántartási számot kapta.
A Bacillus smithii SC-J05-1 törzs bakteriológiai jellemzői az alábbiak:
(a) Morfológia
1. A sejtek alakja és mérete Alak: pálca
Méret: 0,5-0,8χ0,8-2 mm
2. Polimorfizmus: nincs
3. Motilitás: aktív, peritrich ostorok
4. Spóraképzés: van
5. Gram-festés: változó
6. Saválló festés: negatív (b) Növekedési tulajdonságok
1. Nutrient agar lemezen: kerek, domború, matt, világosbarna telepek
2. Nutrient agar ferde tenyészet: matt, világosbarna
3. Nutrient broth folyadéktenyészet: egyenletesen zavaros növekedés
4. Zselatinelfolyósítás: negatív
5. Lakmusz tej: negatív (c) Élettani tulajdonságok
1. Nitrátredukció: 2. Denitrifikálás: 3. Metilvörös-(MR) próba: +
4. Vosges-Proskauer-(VP) próba: 5. Indolképzés: 6. Kénhidrogénképzés: +
7. Keményítőhidrolízis: 8. Citráthasznosítás Kóser táptalaj: ±
9. Szervetlennitrogénforrás-hasznosítás:
NaNO3: (NH4)2SO4: +
10. Pigmentképzés King A táptalaj: King B táptalaj: 11. Ureázaktivitás: 12. Oxidázaktivitás: +
13. Katalázaktivitás: - és ± között
14. Növekedési tartomány pH: 4,1-7,5 Hőmérséklet: 30-60 °C
15. Oxigénigény: gyengén aerob
16. O-F próba: F
17. Sav- és gázképzés cukorból
| Sav | Gáz | |
| L-Arabinóz | - | - |
| D-Xilóz | + | - |
| D-Glükóz | + | - |
| D-Mannóz | + | - |
| D-Fruktóz | + | - |
| D-Galaktóz | + | - |
| Maltóz | + | - |
| Szaharóz | + | - |
| Laktóz | - | - |
| Trehalóz | + | - |
| D-Szorbit | - | - |
| D-Mannit | + | |
| Inozit | + | - |
| Glicerin | + | - |
| Keményítő | - | - |
(d) Egyéb tulajdonságok
DNS G+C tartalma: 40,6 mol%
Átvizsgáltuk a szakirodalmat a fenti tulajdonságokat mutató mikroorganizmusra vonatkozóan, és azt találtuk, hogy a Bacillus smithii megfelel ennek a követelménynek [Nakamura, L. K. et al., International Journal of Systematic Bacteriology, 38, 63-73 (1988)]. Az eredmények alapján a jelen találmány szerzői által izolált SC-J05-1 jelű baktériumtörzset a Bacillus smithii fajhoz tartozó törzsként azonosítottuk.
Arra vonatkozó közlés, hogy a Bacillus smithii fajhoz tartozó törzsek hidratázaktivitásuk révén képesek volnának nitrilvegyületet a megfelelő amiddá alakítani, nem ismeretes. Ebből a szempontból tehát a Bacillus smithii SC-J05-1 (FERM BP-4935) új baktériumtörzsnek tekinthető. Ezen túlmenően a Bacillus smithii SC-J05-1 (FERM BP-4935) törzs variánsai, azaz a belőle származó mutánsok, fúziós, illetve rekombináns törzsek, szintén alkalmasak a jelen találmány szerinti eljárás kivitelezésére.
A jelen találmány szerinti eljárás kivitelezésére szolgáló mikroorganizmus-tenyészet előállítása különféle, szén- és nitrogénforrásokat, valamint szerves és/vagy ásványi sókat tartalmazó, szokásos, baktériumtenyészetek előállítására széles körben alkalmazott táptalajon történhet.
Szénforrásként felhasználhatunk például glükózt, glicerint, dextrint, szaharózt, szerves savakat, állati és növényi zsiradékokat, valamint melaszt.
Nitrogénforrásként alkalmazhatunk szerves vagy szervetlen nitrogénforrásokat, például húskivonatot, peptont, élesztőkivonatot, malátakivonatot, szójalisztet, kukoricalekvárt, gyapotmaglisztet, élesztőport, kazeinhidrolizátumot, nátrium-nitrátot, valamint karbamidot.
Szerves és szervetlen sóként használhatjuk például az olyan elemek kloridjait, szulfátjait, acetátjait, karbonátjait és foszfátjait, mint a kálium, a nátrium, a magnézium, a vas, a mangán, a kobalt és a cink. Előnyösen alkalmazható sók például a kálium-klorid, a nátriumklorid, a magnézium-szulfát, a vas(II)-szulfát, a rézszulfát, a nátrium-acetát, a kalcium-karbonát, a nátrium-karbonát, a dikálium-hidrogén-foszfát, a káliumdihidrogén-foszfát, a dinátrium-hidrogén-foszfát és a nátrium-dihidrogén-foszfát.
HU 216 652 Β
A jelen találmány szerinti eljárás egy előnyös kiviteli módja során a táptalajhoz nitrilvegyületet - amilyen például az i-valeronitril és a krotononitril - vagy amidvegyületet - milyen például a krotonamid adunk, az alkalmazott mikroorganizmus nitril-hidratázaktivitásának fokozására. Ezeket a vegyületeket például literenként 0,1 és 10 grammnyi mennyiségben juttathatjuk a táptalajba.
A jelen találmány szerinti eljárás során a mikroorganizmus-tenyészetet az egyéb baktériumok esetében szokásosan alkalmazott módon állíthatjuk elő. A tenyészet készülhet szilárd vagy folyékony tápközegben egyaránt. Utóbbi esetben például rázott kémcsőtenyészetet vagy lombiktenyészetet állíthatunk elő sík-, vagy rotációs rázógéppel, illetve üvegfermentorban vagy tankfermentorban készíthetjük el a tenyészetet.
A mikroorganizmus tenyészetét általában aerob körülmények között inkubáljuk. Abban az esetben, ha például üvegfermentort használunk, úgy aszeptikus levegő átáramoltatása szükséges, melynek mennyisége a tenyészet térfogatára vonatkoztatva általában 0,1-2,0 térfogat/perc.
Az inkubálás hőmérsékletét abban a tartományban választhatjuk meg, amelyben az adott mikroorganizmus életképes a tenyészetben. Az inkubálást így például 30 és 100 °C közötti hőmérsékleten végezhetjük. A közeg pH-ját szabályozzuk, például 2 és 11 közötti értéken.
Abban az esetben, ha a tenyésztett mikroorganizmus Bacillus smithii, úgy az inkubálást 30 és 100 °C közötti hőmérséklet-tartományban, előnyösen 40 és 55 °C közötti hőmérsékleten végezzük, a táptalaj pHértékét pedig 5 és 7 között tartjuk.
Az inkubáció időtartama a körülményektől függően változhat, de általában a tenyészetet 1 és 7 nap közötti időn át inkubáljuk.
A jelen találmány szerinti eljárás kivitelezése például az alábbi módon történhet.
A fentiekben ismertetett módon előállított baktériumsejt-tenyészetet, teljes baktériumsejteket, illetve a baktériumsejtek kezelésével kapott anyagokat vízben, vagy vizes oldatban, például foszfátpufferban szuszpendáljuk, és a szuszpenziót a reakció lefolytatása céljából a nitrilvegyülethez adjuk.
A „baktériumsejtek kezelésével kapott anyagok” kifejezés értelmezésünk szerint a feltárt baktériumsejtekre, valamint a sejtekben lévő enzimekre vonatkozik, melyekhez hagyományos módszerekkel, így például homogenizálással, illetve ultrahangos kezeléssel vagy fagyasztva sajtolással (French press) végzett sejtfeltárással juthatunk. A szóban forgó kifejezés azokra az immobilizált készítményekre is vonatkozik, amelyek a teljes baktériumsejtek, a feltárt baktériumsejtek, valamint a bennük lévő enzimek immobilizálásával egyszerűen kinyerhető alakban állíthatók elő. Az immobilizálás történhet hordozón való rögzítéssel - melynek során a rögzítést a megfelelő hordozóhoz kovalens kötés, ionkötés, adszorpció stb. biztosítja -, vagy bezárásos módszerrel - midőn az immobilizálandó objektumokat valamely polimer térhálós szerkezetébe záijuk be.
A baktériumsejteket és a baktériumsejtek kezelésével kapott anyagokat általában 0,01 és 20 tömegszázalék közötti, előnyösen 0,01 és 10 tömegszázalék közötti koncentrációban használjuk. Enzimek, illetve immobilizált készítmények esetében a biokatalizátor koncentrációja a tisztaságától, valamint az alkalmazott immobilizálási módszertől függ. Az enzimek, illetve az immobilizált készítmények például előnyösen úgy készülhetnek, hogy nitril-hidratáz-aktivitásuk hasonló legyen a baktériumsejtekéhez, valamint a baktériumsejtek kezelésével kapott anyagokéhoz. A baktériumsejt-tenyészet minden további kezelés nélkül hozzáadható a nitrilvegyülethez, előnyösen azonban a tenyészetet hígítjuk vagy koncentráljuk olyan mértékben, hogy nitril-hidratáz-aktivitása hasonló legyen a baktériumsejtekéhez, valamint a baktériumsejtek kezelésével kapott anyagokéhoz.
A reakció kivitelezése általában 0 és 70 °C, előnyösen 0 és 50 °C közötti hőmérsékleten, 5 és 10 közötti, előnyösen 6 és 9 közötti pH-értéken történik, időtartama 10 perc és 72 óra közé esik. Amennyiben a pH-t szabályozzuk a fenti tartományban, úgy a baktériumsejtek nagy mennyiségű amidterméket képesek felhalmozni a reakcióelegyben.
Az így keletkező amidvegyület bármilyen ismert módszerrel kinyerhető a reakcióelegyből. Például a baktériumsejteket, illetve a baktériumsejtek kezelésével kapott anyagokat centrifügálással elkülönítjük a reakcióelegyből, a felülúszót a szennyezések eltávolítása érdekében aktív szénnel vagy ioncserélő gyantával kezeljük. A tisztított felülúszót atmoszferikus nyomáson vagy vákuumban bepároljuk, és az így kapott kristályos terméket szerves oldószerből, például metanolból átkristályosítva megkapjuk a kívánt amidvegyületet.
Az alábbi példák a találmány jobb megértését szolgálják anélkül, hogy annak tárgykörét bármilyen módon korlátoznánk.
1. példa: Baktériumsejtek izolálása
Egy, az Okayama-ken vidéken lévő hőforrásnál talajmintát gyűjtöttünk. A talajmintával 1% glicerint, 0,5% polipeptont, 0,3% élesztőkivonatot és 0,3% malátakivonatot tartalmazó táptalajt (pH=7,2) beoltottunk, melyet síkrázógépen rázatva 21 napon át inkubáltunk 55 °C-on. Az így nyert tenyészet egy részét a fentivel megegyező összetételű, agarral szilárdított táptalajra szélesztettük, és inkubáltuk, hogy egyedi telepeket kapjunk.
A kinőtt telepekről baktériumsejteket izoláltunk, és oltókacsnyi mennyiségükkel 0,1% i-valeronitrillel kiegészített, az előbbiekben ismertetett összetételű folyékony táptalajt oltottunk, melyet 24 órán át 55 °C-on inkubáltunk. Az így kapott tenyészet 1 ml-ét 9 ml térfogatú, 2,78 tömegszázalék akril-nitrilt tartalmazó 0,05 M foszfátpufferhez (pH=7,7) adtuk, és az elegyet 10 °C-on tartottuk. 10 perc elteltével a reakciót 1 ml 2 N sósav hozzáadásával leállítottuk, és a reakcióelegyből alikvot mintát vettünk, melyet gázkromatográfiás analízisnek vetettünk alá. Akril-amid jelenlétének kimutatását tekin4
HU 216 652 Β tettük azon tény igazolásának, hogy az adott baktérium nitril-hidratáz-aktivitással rendelkezik. Ezzel a módszerrel jutottunk el a Bacillus smithii SC-J05-1 baktériumtörzshöz, amely termofil mikroorganizmus, és nitrilhidratáz-aktivitása révén képes nitrilvegyületet a megfelelő amiddá átalakítani.
A gázkromatográfiás analízis körülményei:
Kolonna: töltött kolonna Töltet: Porapak type Q (0,149-0,177 mm) Hosszúság: 1,1 m Kolonna-hőmérséklet: 210 °C Vivőgáz áramlási sebessége: 50 ml/perc Injektált mintatérfogat: 2 ml
2. példa: Baktériumsejtek tenyésztése a termofil tulajdonságok vizsgálatához
Az 1. példa szerint izolált Bacillus smithii SC-J05-1 baktériumtörzs, valamint a Bacillus sp. baktérium [R332 nyilvántartási számú törzs a Genetikai Laboratórium (Ecole National Supérieure des Agriculture, Franciaország) gyűjteményében, és FERM P-2717 nyilvántartási számú törzs a National Institute of Bioscience and Humán Technology (Agency of Industrial Science and Technology, Japán) gyűjteményében; a továbbiakban Bacillus sp. R332] - mely mezofil baktérium, amint az a JP-B 62-21519/1987 számú japán szabadalmi leírásban olvasható - sejtjeit egymástól függetlenül Nutrient agar táptalajra szélesztettük, és különböző hőmérsékleten inkubáltuk, hogy növekedési képességüket megvizsgáljuk. Az eredményeket az 1. táblázat mutatja.
1. táblázat
| Inkubációs hőmérséklet (°C) | Bacillus smithii SC-J05-1 (jelen találmány) | Bacillus sp. R332 (kontroll) |
| 20 | - | + |
| 30 | + | + |
| 40 | + | + |
| 55 | + | - |
| 60 | + | - |
| 70 | - | - |
Magyarázat: (-) nem nőtt; (+) nőtt; (+ +) erőteljesen nőtt
Amint az 1. táblázatban közölt eredményekből látható, a jelen találmányban szereplő Bacillus smithii SC-J05-1 törzs termofil mikroorganizmus, viselkedése eltérő a Bacillus sp. R332 kontroll baktériumtörzsétől.
3. példa: Baktériumsejtek tenyésztése
500 ml térfogatú Sakaguchi- (Erlenmeyer-) lombikban 100 ml táptalajt (pH=7,2) sterileztünk, melynek összetétele 1,0% szaharóz, 0,5% polipepton, 0,3% élesztőkivonat, 0,3% malátakivonat, 0,001% vas(II)-szulfát, 0,001% mangán-szulfát, 0,001% kobalt-klorid és 0,001% cink-szulfát. A lombikot a fentivel azonos összetételű táptalajon nőtt Bacillus smithii SC-J05-1 tenyészet 0,1 ml-ével oltottuk be. A beoltott lombikot síkrázógépen 135 1/perc löketszámmal rázatva 55 °C-on inkubáltuk 24 órán át, hogy Bacillus smithii SC-J05-1 baktériumsejt-tenyészetet kapjunk.
1. referenciapélda: Baktériumsejtek tenyésztése
500 ml térfogatú Sakaguchi- (Erlenmeyer-) lombikban 100 ml táptalajt (pH=7,2) sterileztünk, melynek összetétele 1,0% glicerin, 0,5% polipepton, 0,3% élesztőkivonat, 0,3% malátakivonat, 0,001% vas(II)-szulfát, 0,001% mangán-szulfát, 0,001% kobalt-klorid és 0,001% cink-szulfát. A lombikot a fentivel azonos összetételű táptalajon nőtt Bacillus sp. R332 baktériumtenyészet 0,1 ml-ével oltottuk be. A beoltott lombikot síkrázógépen 135 1/perc löketszámmal rázatva 30 °C-on inkubáltuk 48 órán át, hogy Bacillus sp. R332 baktériumsejt-tenyészetet kapjunk.
1. összehasonlító példa: Termostabilitás vizsgálata
A 3. példa szerint készített, Bacillus smithii SC-J05-1400 ml térfogatú tenyészetéből a baktériumsejteket centrifugálással (lOOOOxg, 10 perc) kinyertük, 0,05 M foszfátpufferrel (pH=7,7) mostuk, majd 100 ml térfogatú ugyanilyen pufferben szuszpendáltuk. Ezután megvizsgáltuk, hogy az így kapott baktériumsejt-szuszpenzió rendelkezik-e hidratázaktivitással, melynek révén képes nitrilvegyületet a megfelelő amiddá átalakítani.
A hidratázaktivitás méréséhez a vizsgálandó szuszpenzió 1 ml-ét 9 ml térfogatú, 2,78% akril-nitrilt tartalmazó 0,05 M foszfátpufferhez (pH=7,7) adtuk, és a reakcióelegyet 10 °C-on tartottuk. Tíz perc elteltével a reakciót 1 ml 2 N sósav hozzáadásával leállítottuk. A reakcióelegyből vett alikvot mintát gázkromatográfiás analízisnek vetettük alá a képződött akril-amid mennyiségének meghatározására. A gázkromatográfiás elemzést az 1. példában leírtak szerint végeztük.
Egységnyinek (E) tekintettük azt az enzimaktivitást, melynek révén percenként 1 mmól akril-nitril alakul át akril-amiddá. A továbbiakban az így definiált egységet használjuk az enzimaktivitás mérőszámaként.
Az 1. referenciapélda szerint készített, Bacillus sp. R332400 ml térfogatú tenyészetéből a baktériumsejteket centrifugálással (lOOOOxg, 10 perc) kinyertük, 0,05 M foszfátpufferrel (pH=7,7) mostuk, majd 10 ml térfogatú ugyanilyen pufferben szuszpendáltuk. Ezután megvizsgáltuk, hogy az így kapott baktériumsejtszuszpenzió rendelkezik-e hidratázaktivitással, melynek révén képes nitrilvegyületet a megfelelő amiddá átalakítani. A vizsgálatot a korábban leírt módon végeztük. Annak érdekében, hogy az enzimaktivitás termostabilitását meghatározzuk, ugyanazt a baktériumsejt-szuszpenziót meghatározott időn át meghatározott hőmérsékleten tartottuk, majd megvizsgáltuk aktivitását. Az aktivitás mérése a már ismertetett módon történt. A mérési eredmények alapján mindkét törzs esetén kiszámítottuk a kezelés előtti és a kezelés utáni aktivitás hányadosát (melyre mint maradék aktivitásokra hivatkozunk a továbbiakban), és a Bacillus smithii SC-J05-1 maradék aktivitását a Bacillus sp. R332 baktérium maradék aktivitására vonatkoztattuk, utóbbit 100-nak véve.
HU 216 652 Β
2. táblázat
| Kezelési hőmérséklet (°C) | Kezelési idő (óra) | Bacillus smithii SCJ05 1 (jelen találmány) | Bacillus sp. R332 (kontroll) |
| 50 | 0,5 | 6542 | 100 |
| 40 | 1,5 | 280 | 100 |
| 30 | 47 | 212 | 100 |
2. összehasonlító példa: Reakcióstabilitás vizsgálata
A 3. példa szerinti módon készített Bacillus smithii SC-J05-1 tenyészetből a baktériumsejteket centrifugálással (lOOOOxg, 10 perc) kinyertük, 0,05 M foszfátpufferrel (pH=7,7) mostuk, majd ugyanebben a pufferben szuszpendáltuk oly módon, hogy 20 E/ml aktivitású baktériumsejt-szuszpenziót kapjunk.
Másrészről Bacillus sp. R332 baktérium tenyészetéből a baktériumsejteket centrifugálással (lOOOOxg, 10 perc) kinyertük, 0,05 M foszfátpufferrel (pH=7,7) mostuk, majd 100 ml ugyanilyen pufferben szuszpendáltuk oly módon, hogy 20 E/ml aktivitású baktériumsejt-szuszpenziót kapjunk.
Ezután a baktériumsejt-szuszpenziók 1-1 ml-ét 9 ml térfogatú, 2,78% aktil-nitrilt tartalmazó 0,05 M foszfátpufferhez (pH = 7,7) adtuk, jól összekevertük, és a reakcióelegyeket 30, 40, 50, illetve 60 °C-on tartottuk. Tíz perc elteltével a reakciót 1 ml 2 N sósav hozzáadásával leállítottuk. A reakcióelegyböl vett alikvot mintát gázkromatográfiás analízisnek vetettük alá a képződött akril-amid mennyiségének meghatározására. A gázkromatográfiás elemzést az 1. példában leírtak szerint végeztük. Az egyes hőmérsékleteken képződött akril-amid-mennyiségeket a Bacillus sp. R332 baktérium esetében mért értékekre vonatkoztattuk, utóbbit 100-nak tekintve. Az így számított adatokat a 3. táblázat tartalmazza.
3. táblázat
| A reakció hőmérséklete (°C) | Bacillus smithii SC-J05-1 (jelen találmány) | Bacillus sp. R332 (kontroll) |
| 30 | 275 | 100 |
| 40 | 675 | 100 |
| 50 | 5200 | 100 |
| 60 | 6200 | 100 |
4. példa: A baktériumsejt-tenyészetek alkalmazásával végzett reakció
100 ml térfogatú, a 3. példa szerinti módon készített
Bacillus smithii SC-J05-1 baktériumsejt-tenyészethez 2,5 g (47,2 mmól) akril-nitrilt adtunk, és a reakcióelegyet mágneses keverővei kevertük 20 °C-on. Három óra elteltével a reakcióelegyböl 1,0 ml mintát vettünk és ehhez a reakció leállítására 0,1 ml 2 N sósavat adtunk.
A reakcióelegy alikvot mintáját gázkromatográfiás analízisnek vetettük alá, melyet az 1. példában leírt módon végeztünk. Az elemzés eredménye szerint az akril-nitril teljes mennyisége átalakult akril-amiddá, melléktermékeket, így például akrilsavat nem tudtunk kimutatni.
5. példa: A baktériumsejtek alkalmazásával végzett reakció
100 ml térfogatú, a 3. példa szerinti módon készített Bacillus smithii SC-J05-1 baktériumsejt-tenyészetből a baktériumsejteket centrifugálással (10 000 χ g, 10 perc) kinyertük, 0,05 M foszfátpufferrel (pH=7,7) mostuk, majd 50 ml térfogatú ugyanilyen pufferben szuszpendáltuk. Az így kapott baktériumsejt-szuszpenzióhoz 3,0 g (56,6 mmól) akril-nitrilt adtunk három részletben, és a reakcióelegyet mágneses keverővei kevertük 20 °C-on. Négy óra elteltével a reakcióelegyböl 1,0 ml mintát vettünk és ehhez a reakció leállítására 0,1 ml 2 N sósavat adtunk. A reakcióelegy alikvot mintáját gázkromatográfiás analízisnek vetettük alá, melyet az 1. példában leírt módon végeztünk. Az elemzés eredménye szerint az akril-nitril teljes mennyisége átalakult akril-amiddá, melléktermékeket, így például akrilsavat nem tudtunk kimutatni.
Egy másik vizsgálatban a reakcióelegyböl a baktériumsejteket centrifugálással (10 000 χ g, 10 perc) elkülönítettük, és a felülúszót 50 °C-on bepároltuk. Az így kapott kristályos anyagot metanolból átkristályosítva 3,7 g (52,1 mmól, 92%-os kitermelés) tömegű színtelen, lemezes kristályhoz jutottunk. Az olvadáspontmeghatározása, az elemanalízis eredménye, az IR- és NMR-spektrumok alapján a kristályokat akril-amidként azonosítottuk.
6. példa: Enzimoldat alkalmazásával végzett reakció liter térfogatú, a 3. példa szerinti módon készített Bacillus smithii SC-J05-1 baktériumsejt-tenyészetből a baktériumsejteket centrifugálással (10 000 χ g, 10 perc) kinyertük, mostuk, majd 300 ml térfogatú, 0,05 M koncentrációjú HEPES-KOH pufferben (pH=7,2) szuszpendáltuk. A sejtek feltárására a szuszpenziót French press készülékkel, 1400 bar (20000 psi) nyomás alkalmazásával fagyasztva sajtoltuk. A műveletet kétszer végeztük el, majd a szuszpenzióból centrifugálással (lOOOOxg, 30 perc) eltávolítottuk a sejtmaradványokat. A felülúszót dializálóhüvelybe (Wako Pure Chemical Industries Ltd.) töltve 4 °C-on 24 órán át dializáltuk 10 mM koncentrációjú HEPES-KOH pufferrel (pH=7,2) szemben, a puffért négyszer cserélve. A dializátumot az enzim megkötésére d=50 mm, h=200 mm méretű DEAE- Sepharose FF (Pharmacia) anioncserélő oszlopon engedtük át, melyet előzőleg 0,05 M HEPESKOH pufferrel (pH=7,2) ekvilibráltunk.
Ezután az anioncserélő oszlopot 0,05 M koncentrációjú HEPES-KOH pufferrel (pH=7,2) mostuk, majd grádienselúciót végeztünk ugyanezen pufferrel, 0 és 1,0 M kálium-klorid koncentrációhatárok között. A nitrilvegyületet a megfelelő amiddá alakító hidratázaktivitást mutató frakciót dializálóhüvelybe (Wako Pure
HU 216 652 Β
Chemical Industries Ltd.) töltve 4 °C-on 24 órán át dializáltuk 10 mM koncentrációjú HEPES-KOH pufferrel (pH=7,2) szemben, a puffért négyszer cserélve. A dializátumot anioncserélő kromatografálással tisztítottuk a fentiekben ismertetett módon, azzal az eltéréssel, hogy a grádienselúciót 0,05 M koncentrációjú HEPES-KOH pufferrel (pH = 7,2) végeztük, 0,2 és 0,8 M kálium-klorid koncentrációhatárok között. Az eluátumot a fentiekben leírt módon dializálva nyers enzimoldatot kaptunk.
A nitrilvegyületet a megfelelő amiddá alakító enzimaktivitás meghatározását a következő módon végeztük :
ml nyers enzimoldatot 9 ml térfogatú, 100 mM koncentrációjú vizes propionitril-oldathoz (pH=7,7) adtuk, és az elegyet 10 °C-on tartottuk. Tíz perc elteltével a reakciót 1 ml 2 N sósav hozzáadásával leállítottuk. A reakcióelegy alikvot mintáját gázkromatográfiás analízisnek vetettük alá, hogy meghatározzuk a képződött propionamid mennyiségét.
Egységnyinek (E) tekintettük azt az enzimaktivitást, melynek révén percenként 1 mmól propionitril alakul át propionamiddá. A továbbiakban az így definiált egységet használjuk az enzimaktivitás mérőszámaként.
Az előzőekben kapott nyers enzimoldatot 0,05 M koncentrációjú foszfátpufferrel (pH=7,7) hígítottuk. 100 ml hígított enzimoldathoz 2,5 g (47,2 mmól) akrilnitrilt adtunk és az elegyet mágneses keverővei kevertük 20 °C-on. Három óra elteltével a reakcióelegyből 1,0 ml térfogatú mintát vettünk, melyhez 0,1 ml térfogatú 2 N sósavat adva leállítottuk a reakciót. Az alikvot mintát gázkromatográfiás analízisnek vetettük alá, melyet az 1. példában leírt módon végeztünk. Az elemzés eredménye szerint az akril-nitril teljes mennyisége átalakult akril-amiddá, melléktermékeket, így például akrilsavat nem tudtunk kimutatni.
7. példa: Különböző nitrilvegyületek átalakítása
Ebben a példában a Bacillus smithii SC-J05-1 nitril-hidratáz enzimjeinek a különböző nitril vegyületeket a megfelelő amiddá alakító képességét, azaz szubsztrátspecifitását vizsgáltuk. 60 E aktivitású, a 7. példa szerinti módon készített nyers enzimoldathoz 20 ml térfogatú, 0,05 M koncentrációjú foszfátpuffert (pH=7,7) adtunk. Az enzimreakciót 30 °C-on 3 órán át végezve megkíséreltük átalakítani a 4. táblázatban szereplő nitrilvegyület-szubsztrátumokat. A reakcióelegyet gázkromatográfiás vagy folyadékkromatográfiás analízisnek vetettük alá annak érdekében, hogy meghatározzuk a képződött amidvegyületet, illetve az elfogyasztott nitrilvegyület mennyiségét. A mérési eredmények szerint a Bacillus smithii SC-J05-1 baktériumsejtekből készített nyers enzimkészítmény hidratázaktivitása révén valamennyi kipróbált nitrilvegyületet átalakította a megfelelő amiddá.
4. táblázat
| A kipróbált nitrilvegyületek | |
| n-Butironitril | Malononitril |
| n-Valeronitril | Szukcinonitril |
| i-Butironitril | Adiponitril |
| 2-Klór-propionitril | Acetonitril |
| Akril-nitril | Pivalonitril |
| Krotononitril | Metakril-nitril |
| 3-Ciano-piridin | Benzonitril |
| 4-Ciano-piridin | 2-Ciano-piridin |
A jelen találmány szerint eljárva a különböző nitrilvegyületek megbízhatóan átalakíthatok a megfelelő amidokká a szobahőmérsékletet meghaladó hőmérséklet-tartományban is, ami lehetővé teszi nagy tisztaságú amidvegyületek igen hatékony előállítását szélesebb hőmérséklet-tartományban, mint a hagyományos eljárások, melyeket általában alacsonyabb hőfokon végeznek.
Claims (5)
- SZABADALMI IGÉNYPONTOK1. Eljárás amidvegyületek előállítására, azzal jellemezve, hogy nitrilvegyületet alakítunk át a megfelelő amiddá a szóban forgó nitril hidratálásával baktériumsejt-tenyészet, teljes baktériumsejtek, feltárt baktériumsejtek vagy az ezekben lévő enzimek, illetve immobilizált készítmények - melyek teljes baktériumsejtek, feltárt baktériumsejtek vagy az ezekben lévő enzimek immobilizálásával kaphatók - jelenlétében, melynek során baktériumsejtekként olyan termofil, Bacillus nemzetségbe tartozó mikroorganizmus biológiailag tiszta tenyészetéből származó sejteket alkalmazunk, amelyek hidratázaktivitása révén képesek nitrilvegyületeket a megfelelő amidokká alakítani.
- 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy termofil mikroorganizmusként a Bacillus smithii fajhoz tartozó baktériumtörzset alkalmazunk.
- 3. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy termofil mikroorganizmusként a Bacillus smithii SC-J05-1 (FERM BP-4935) baktériumtörzset alkalmazunk.
- 4. Termofil, Bacillus nemzetségbe tartozó mikroorganizmus biológiailag tiszta tenyészete, azzal jellemezve, hogy hidratázaktivitással rendelkezik, mely alkalmas nitrilvegyületnek a megfelelő amiddá történő átalakítására.
- 5. Bacillus smithii SC-J05-1 (FERM BP-4935) baktériumtörzs, illetve variánsának biológiailag tiszta tenyészete, amely hidratázaktivitással rendelkezik, mely alkalmas nitrilvegyületnek a megfelelő amiddá történő átalakítására.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP1051894 | 1994-02-01 |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| HU9500298D0 HU9500298D0 (en) | 1995-03-28 |
| HUT70458A HUT70458A (en) | 1995-10-30 |
| HU216652B true HU216652B (hu) | 1999-07-28 |
Family
ID=11752458
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| HU9500298A HU216652B (hu) | 1994-02-01 | 1995-02-01 | Eljárás amidszármazékok előállítására mikroorganizmusok felhasználásával |
Country Status (10)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5563053A (hu) |
| EP (1) | EP0666321B1 (hu) |
| KR (1) | KR100339723B1 (hu) |
| CN (1) | CN1072262C (hu) |
| DE (1) | DE69517062T2 (hu) |
| DK (1) | DK0666321T3 (hu) |
| HU (1) | HU216652B (hu) |
| MY (1) | MY113838A (hu) |
| SG (1) | SG44513A1 (hu) |
| TW (1) | TW422882B (hu) |
Families Citing this family (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5754841A (en) * | 1995-10-20 | 1998-05-19 | Ncr Corporation | Method and apparatus for parallel execution of user-defined functions in an object-relational database management system |
| US6060265A (en) * | 1996-12-18 | 2000-05-09 | Cytec Technology Corporation | Methods for the detoxification of nitrile and/or amide compounds |
| US5863750A (en) * | 1996-12-18 | 1999-01-26 | Cytec Tech Corp | Methods for the detoxification of nitrile and/or amide compounds |
| US5866379A (en) * | 1997-01-28 | 1999-02-02 | Novus International | Enzymatic conversion of α-hydroxynitriles to the corresponding .alpha. |
| US6153415A (en) | 1998-04-29 | 2000-11-28 | Board Of Trustees Operating Michigan State University | Method for producing amide compounds using a nitrile hydratase from a thermophilic bacillus |
| WO2002052027A1 (fr) * | 2000-12-22 | 2002-07-04 | Nippon Soda Co., Ltd. | Procede de production d'une substance a l'aide d'un catalyseur microbien |
| DE10120555A1 (de) * | 2001-04-26 | 2002-10-31 | Stockhausen Chem Fab Gmbh | Verfahren zur Herstellung einer wässrigen Acrylamidlösung mit einem Biokataysator |
| US7816106B2 (en) * | 2003-12-02 | 2010-10-19 | Ciba Specialty Chemicals Water Treatments Ltd. | Manufacture of amides |
| KR100580857B1 (ko) * | 2004-07-26 | 2006-05-17 | 강원대학교산학협력단 | 바실러스 스미스아이 및 고온성 효모의 혼합균주를 이용한쓰레기 처리방법 |
| CN111454935A (zh) * | 2020-04-25 | 2020-07-28 | 北京博泰至淳生物科技有限公司 | 一种用于污水脱氮的固定化酶及其制备方法和应用 |
| CN116042743A (zh) * | 2022-08-11 | 2023-05-02 | 南京师范大学 | 粘着箭菌在生物转化3-氰基吡啶制备烟酰胺中的应用及其应用方法 |
Family Cites Families (16)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR2294999A1 (fr) * | 1974-12-18 | 1976-07-16 | Anvar | Procede de preparation d'amides par hydrolyse biologique |
| IT1162484B (it) * | 1978-03-29 | 1987-04-01 | Nitto Chemical Industry Co Ltd | Procedimento pe produrre acrilammide o metacrilammide impiegando microorganismi |
| JPS561888A (en) * | 1979-06-19 | 1981-01-10 | Nitto Chem Ind Co Ltd | Preparation of concentrated aqueous solution of acrylamide with microorganism |
| JPS5937951B2 (ja) * | 1981-11-18 | 1984-09-12 | 秀明 山田 | アミドの生物学的製造法 |
| JPS6019496A (ja) * | 1983-07-12 | 1985-01-31 | Nitto Chem Ind Co Ltd | 微生物によるアミド類の製造法 |
| JPS6083581A (ja) * | 1983-10-13 | 1985-05-11 | Hideaki Yamada | シユ−ドモナス属細菌の培養法 |
| JPS61162193A (ja) * | 1985-01-08 | 1986-07-22 | Nitto Chem Ind Co Ltd | 微生物によるアミド類の製造法 |
| US5200331A (en) * | 1985-06-04 | 1993-04-06 | Asahi Kasei Kogyo Kabushiki Kaisha | Method of producing an amide utilizing a microorganism |
| DD274631A5 (de) * | 1987-09-18 | 1989-12-27 | Kk | Verfahren zur biologischen herstellung von amiden |
| CZ280901B6 (cs) * | 1988-10-06 | 1996-05-15 | Hideaki Yamada | Způsob kultivace bakterií |
| JPH0822221B2 (ja) * | 1988-12-28 | 1996-03-06 | 日東化学工業株式会社 | シュードモナス属細菌の培養法 |
| JPH04144697A (ja) * | 1990-10-05 | 1992-05-19 | Asahi Chem Ind Co Ltd | 光学活性カルボン酸、ニトリル、アミドの製造方法 |
| SG48037A1 (en) * | 1990-11-14 | 1998-04-17 | Nitto Chemical Industry Co Ltd | Biology process for production-alpha-hydroxyamide or alpha-hydroxy acid |
| AU2077392A (en) * | 1991-08-05 | 1993-04-29 | Mitsubishi Kasei Corporation | Process for preparing amides |
| AU3692593A (en) * | 1992-04-28 | 1993-11-04 | Mitsubishi Kasei Corporation | Novel protein having nitrile hydratase activity and the gene encoding the same, and a method for producing amides from nitriles via a transformant containing the gene |
| JP3409353B2 (ja) * | 1992-04-30 | 2003-05-26 | 住友化学工業株式会社 | アミド化合物の製造方法および使用される微生物 |
-
1995
- 1995-01-27 KR KR1019950001543A patent/KR100339723B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1995-01-27 TW TW084100729A patent/TW422882B/zh not_active IP Right Cessation
- 1995-01-28 CN CN95101484A patent/CN1072262C/zh not_active Expired - Fee Related
- 1995-01-30 MY MYPI95000233A patent/MY113838A/en unknown
- 1995-01-31 DK DK95101282T patent/DK0666321T3/da active
- 1995-01-31 EP EP95101282A patent/EP0666321B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1995-01-31 DE DE69517062T patent/DE69517062T2/de not_active Expired - Fee Related
- 1995-01-31 SG SG1996001264A patent/SG44513A1/en unknown
- 1995-02-01 US US08/382,152 patent/US5563053A/en not_active Expired - Fee Related
- 1995-02-01 HU HU9500298A patent/HU216652B/hu not_active IP Right Cessation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP0666321A2 (en) | 1995-08-09 |
| US5563053A (en) | 1996-10-08 |
| MY113838A (en) | 2002-06-29 |
| TW422882B (en) | 2001-02-21 |
| SG44513A1 (en) | 1997-12-19 |
| EP0666321A3 (en) | 1996-07-10 |
| KR950032629A (ko) | 1995-12-22 |
| EP0666321B1 (en) | 2000-05-24 |
| HU9500298D0 (en) | 1995-03-28 |
| CN1111677A (zh) | 1995-11-15 |
| DE69517062T2 (de) | 2001-03-08 |
| KR100339723B1 (ko) | 2002-09-25 |
| DE69517062D1 (de) | 2000-06-29 |
| DK0666321T3 (da) | 2000-08-07 |
| CN1072262C (zh) | 2001-10-03 |
| HUT70458A (en) | 1995-10-30 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EP0093782B1 (en) | Process for biologically producing amide | |
| FI87579B (fi) | Foerfarande foer framstaellning av amider anvaendande mikroorganismer | |
| EP0444640B1 (en) | Process for producing an elevated amount of nitrilase activity from a microbial strain of Rhodococcus | |
| EP0307926A2 (en) | Process for biological production of amides | |
| Tsugawa et al. | Production of l-Glutamic Acid from dl-Hydantoin-5-propionic Acid by Microoganisms: Part I. Screening of l-Glutamic Acid-Producing Microorganisms and Some Optimal Conditions for Production of l-Glutamic Acid | |
| HU216652B (hu) | Eljárás amidszármazékok előállítására mikroorganizmusok felhasználásával | |
| EP1045029A2 (en) | Process for producing optically active 4-hydroxy-2-ketoglutaric acids | |
| EP0568072B1 (en) | Process for production of amide compounds and microorganism for use therein | |
| US5200331A (en) | Method of producing an amide utilizing a microorganism | |
| EP0204555B1 (en) | Method of producing an amide utilizing a microorganism | |
| US20050239165A1 (en) | Method for cultivation of the nitrile-hydratase-producing strain Rhodococcus rhodochrous M33 | |
| JPH03280889A (ja) | グリシンの生物学的製造法 | |
| US6900037B2 (en) | Method for producing amide compounds | |
| JPH04365491A (ja) | ４−ハロ−３−ヒドロキシブチルアミドの製造法 | |
| MXPA00000440A (es) | Procedimiento para la preparacion de amidas | |
| JPS58201992A (ja) | 微生物によるβ−置換プロピオン酸またはそのアミドの製造法 | |
| US7592164B2 (en) | Process for preparing unsaturated amides and carboxylic acids | |
| US5258305A (en) | Manufacture of optically active 2-phenylpropionic acid and 2-phenylpropionamide from the nitrile using Rhodococcus equi | |
| CA2416429A1 (en) | Preparation of dicarboxylic acid monoesters from cyanocarboxylic acid esters | |
| JP3090761B2 (ja) | 光学活性乳酸の製造法 | |
| EP0159866A2 (en) | Process for production of L-amino acids | |
| JP3873512B2 (ja) | Ｄ−３−（２−ナフチル）アラニンの製造方法 | |
| IL101256A (en) | Microbiological process for the production of 6-hydroxycycolic acid from 2-cyanopyridine | |
| JP2006158323A (ja) | 微生物によるアミド化合物の製造方法およびそれに使用する微生物、菌体処理物および酵素 | |
| JPH07255494A (ja) | アミド化合物の製造方法および使用される微生物 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| HMM4 | Cancellation of final prot. due to non-payment of fee |