DK158672B - Fremgangsmaade til fremstilling af 3-substitueret-methyl-7-methoxy-7beta-(2-substitueret-amido)-3-cephem-4-carboxylsyrer og alkalimetalsalte deraf. - Google Patents

Fremgangsmaade til fremstilling af 3-substitueret-methyl-7-methoxy-7beta-(2-substitueret-amido)-3-cephem-4-carboxylsyrer og alkalimetalsalte deraf. Download PDF

Info

Publication number
DK158672B
DK158672B DK444478A DK444478A DK158672B DK 158672 B DK158672 B DK 158672B DK 444478 A DK444478 A DK 444478A DK 444478 A DK444478 A DK 444478A DK 158672 B DK158672 B DK 158672B
Authority
DK
Denmark
Prior art keywords
cephem
methoxy
carboxylic acid
solution
carbamoyloxymethyl
Prior art date
Application number
DK444478A
Other languages
English (en)
Other versions
DK444478A (da
DK158672C (da
Inventor
Burton Grant Christensen
Meyer Sletzinger
Sandor Karady
Lovji Dadi Cama
Original Assignee
Merck & Co Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Merck & Co Inc filed Critical Merck & Co Inc
Publication of DK444478A publication Critical patent/DK444478A/da
Publication of DK158672B publication Critical patent/DK158672B/da
Application granted granted Critical
Publication of DK158672C publication Critical patent/DK158672C/da

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D501/00—Heterocyclic compounds containing 5-thia-1-azabicyclo [4.2.0] octane ring systems, i.e. compounds containing a ring system of the formula:, e.g. cephalosporins; Such ring systems being further condensed, e.g. 2,3-condensed with an oxygen-, nitrogen- or sulfur-containing hetero ring
    • C07D501/14—Compounds having a nitrogen atom directly attached in position 7
    • C07D501/16—Compounds having a nitrogen atom directly attached in position 7 with a double bond between positions 2 and 3
    • C07D501/20—7-Acylaminocephalosporanic or substituted 7-acylaminocephalosporanic acids in which the acyl radicals are derived from carboxylic acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D501/00—Heterocyclic compounds containing 5-thia-1-azabicyclo [4.2.0] octane ring systems, i.e. compounds containing a ring system of the formula:, e.g. cephalosporins; Such ring systems being further condensed, e.g. 2,3-condensed with an oxygen-, nitrogen- or sulfur-containing hetero ring
    • C07D501/02—Preparation
    • C07D501/04—Preparation from compounds already containing the ring or condensed ring systems, e.g. by dehydrogenation of the ring, by introduction, elimination or modification of substituents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D501/00—Heterocyclic compounds containing 5-thia-1-azabicyclo [4.2.0] octane ring systems, i.e. compounds containing a ring system of the formula:, e.g. cephalosporins; Such ring systems being further condensed, e.g. 2,3-condensed with an oxygen-, nitrogen- or sulfur-containing hetero ring
    • C07D501/14—Compounds having a nitrogen atom directly attached in position 7
    • C07D501/16—Compounds having a nitrogen atom directly attached in position 7 with a double bond between positions 2 and 3
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D501/00—Heterocyclic compounds containing 5-thia-1-azabicyclo [4.2.0] octane ring systems, i.e. compounds containing a ring system of the formula:, e.g. cephalosporins; Such ring systems being further condensed, e.g. 2,3-condensed with an oxygen-, nitrogen- or sulfur-containing hetero ring
    • C07D501/14—Compounds having a nitrogen atom directly attached in position 7
    • C07D501/16—Compounds having a nitrogen atom directly attached in position 7 with a double bond between positions 2 and 3
    • C07D501/20—7-Acylaminocephalosporanic or substituted 7-acylaminocephalosporanic acids in which the acyl radicals are derived from carboxylic acids
    • C07D501/57—7-Acylaminocephalosporanic or substituted 7-acylaminocephalosporanic acids in which the acyl radicals are derived from carboxylic acids with a further substituent in position 7, e.g. cephamycines
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
    • Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
    • Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
    • Y02P20/582—Recycling of unreacted starting or intermediate materials

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Cephalosporin Compounds (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Description

DK 158672B
Den foreliggende opfindelse angår en særlig fremgangsmåde til fremstilling af hidtil ukendte 7-acylaminocepha-losporansyre-derivater med den i krav l’s indledning angivne almene formel. Fremgangsmåden ifølge opfindelsen 5 er ejendommelig ved det i krav l's kendetegnende del anførte. Forbindelserne fremstillet ifølge opfindelsen er antibiotisk aktive.
Fremkomsten af penicillin har givet stødet til en omfat-10 tende forskning i forbindelse med antibiotiske stoffer.
Som resultat heraf har man fundet andre antibiotiske stoffer, såsom streptomycin, tetracyclinerne og novobiocin, og disse har muliggjort en effektiv behandling af infektioner, som skyldes forskellige patogener.
15
Desværre har anvendelsen af disse antibiotiske stoffer givet anledning til udvikling af patogene stammer, der er resistente over for de kendte antibiotiske stoffer.
Endvidere lider de kendte antibiotiske stoffer af den 20 ulempe, at de kun er effektive over for visse typer mikroorganismer, medens de er ineffektive over for et stort antal patogener. Det er derfor af betydning at fortsætte forskningen for at finde andre antibiotiske stoffer.
25
Den foreliggende opfindelse har til formål at angive en særlig fremgangsmåde til fremstilling af hidtil ukendte cephalosporinforbindelser med antibiotisk aktivitet.
30 Ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen foregår en trans-acylering, hvorved acylgruppen i 7-stillingen udskiftes med en anden acylgruppe, uden at der først fremstilles 7-amino-3-cephemforbindelsen. Processen kan udføres med den frie syre, men det har sædvanligvis vist sig hen-35 sigtsmæssigt at blokere eller beskytte carboxygruppen ved dannelse af en egnet ester, som let kan fjernes ef-
DK 158672 B
2 ter processens afslutning.
Første trin af denne proces består i en omsætning af ce-phalosporin-forbindelsen eller et derivat deraf, hvor 5 carboxylgruppen er blokeret, med et acyleringsmiddel med den i krav 1 angivne formel i nærvær af en silylforbin-delse til dannelse af 7-diacylamido-forbindelsen. Dette produkt omsættes derefter til fjernelse af den oprindelige acyl-substituent og dannelse af cephalosporin-for-10 bindeisen med den nye 7-acylamido-substituent.
Første trin ved dannelsen af det diacylerede produkt udføres bedst ved intim behandling af cephalosporin-for-bindelsen med acyleringsmidlet i et egnet opløsningsmid-15 del i nærværelse af det tri-substituerede silylderivat. Reaktionstemperaturen er ikke særlig kritisk, og der kan benyttes temperaturer mellem -20 °C og 100 °C, men det foretrækkes at udføre reaktionen ved temperaturer fra 25 °C til 40 °C. Til denne reaktion egner sig opløsnings-20 midler, der ikke indeholder noget aktivt hydrogen, såsom chloroform, acetonitril, methylenchlorid, dioxan, benzen, hælogenbenzen, carbontetrachlorid eller diethyl-efcher„ 25 Fraspaltningen af den oprindelige acylgruppe kan udføres på flere måder, nemlig ved at forlænge reaktionstiden, ved tilsætning af en alkohol, såsom en alkanol eller en alkylthiol, eller ved hydrolyse i en vandig opløsning, indeholdende en lille mængde af en syre eller en base. I 30 nogle tilfælde udføres fraspaltningen således ved tilsætning af en alkanol eller en alkylthiol indeholdende 1-6 carbonatomer, en aralkanol, såsom benzylalkohol, eller den tilsvarende thiol. Fraspaltningen.resulterer i den ønskede monoacylerede cephalosporin-forbindelse el-35 ler kan også resultere i dannelse af en blanding af de monoacylerede forbindelser. I sidstnævnte tilfælde ud- 3
DK 1S8672B
vindes den ønskede monoacylerede cephalosporin-forbin-delse på kendt måde, f.eks. ved kromatografi.
Når den beskyttende gruppe af amino-substituenten af 5 aminoadipoyldelen/ såsom en trichlorethoxycarbonyl- eller en p-butoxycarbonylgruppe, fjernes på passende måde, sker en selektiv fraspaltning af aminoadipoyl-gruppen.
Fremgangsmåden ifølge opfindelsen skal i det efterføl- 10 gende beskrives i enkeltheder. Således kan 7-(D-5'- amino-51-carboxyvaleramido)-3-carbamoyloxymethyl~7-meth- oxy-3-cephem-4-carboxylsyre omdannes til den tilsvarende 7-(2-thienylacetamido)-forbindelse i overensstemmelse me* ende reaktionsskema: 15 0 E 00¾ ,2 „ , 5 s K-C-(CH2)3C-K—^——f > CD03 ^-il J—C^OCO^
20 o eOOH
COOHjCClj V
HH 0 H OCF
t It »
E-C—(es2)3c-!T--—S X
25 C00H ^——CHgOCOlTHg
T
COOH
0 30 C-0CH2C013 ψ 2 ? OCHj
H-C-(CEg)30-lt--S N
C00CE02 ^-ji -CH20C0NH2
35 0 I
coochø2
V
4
DK 1 58672 B
o Π Π »' il l! C~0CE-, CCIU s^' m 0 1 2 ?CK3 -r
« " .c-0 1 ^ /SN
H-C -(CH2),C-r - i f I
» ^ J---1 Λ --CH^QCOHHo C00CH02 cr C00CH02 \/ -- O Η OOH, I " ' 3 .s \s/—OHg-C-H^ -f "l i , _CHo0C0ITE.p ^2 2 C00CH02 N/ -. o H OCH, li " *
^s^J-gh2-c-n--S N
^,-jy -CH20 COliHg
CO OH
»
DK 158672B
5
Ved ovennævnte proces acyleres udgangsmaterialet ved omsætning med trichlorethoxycarbonylchlorid til dannelse af N-trichlorethoxy-carbonyl-derivatet, som ved alkylering med diphenyldiazomethan omdannes til dibenzhydrylesteren.
5 Ved omsætning af den dannede cephalosporin-forbindelse med trimethylsilyl-fluoracetamid og 2-ethienylacetylchlo-rid fås 7-[(D-5'-trichlorethoxycarbonylamino-5'-carboxy-valeryl)-(2-thienylacetylamino)]-forbindelsen. Denne ami-noadipoyl-gruppe fraspaltes derefter ved reaktion med 10 zink i nærværelse af en syre til dannelse af benz- hydrylesteren af 3-carbamoyloxymethyl-7-(2-ethienylacet-amido)decephalosporansyre, som derefter deblokeres til fjernelse af benzhydrylgruppen, hvorved fås den frie syre. Dette produkt kan omdannes til et alkalimetalsalt 15 ved neutralisering med en alkalimetalbase på i og for sig kendt måde.
Fremgangsmåden ifølge opfindelsen illustreres i det efterfølgende ved hjælp af nogle udførelseseksempler.
20 EKSEMPEL 1 3-carbamoyloxymethyl-7-methoxy-70-phenylacetamido-3-cephem-4-carboxylsyre 25
Trin A: 70-(D-51-trichlorethoxycarbonylamino-51-carboxy-valeramido)-3-carbamoyloxymethyl-7-methoxy-3-cephem-4-carboxylsyre 30 Mononatriumsaltet af 7/3-( D-5-amino-5-carboxyvaleramido) - 3-carbamoyl-oxymethy1-7-methoxy-3-cephem-4-carboxylsyre (20,5 g) opløses i blandingen af acetone (80 ml) og vandig 10% dikaliumhydrogenphosphat (240 ml). Til denne opløsning tildryppes trichlorethoxycarbonylchlorid (25 g, 35 118 mmol) i acetone (80 ml). Under tilsætningen holdes pH-værdien af opløsningen på 9,1 ved gradvis tilsætning af 2,5 N natriumhydroxidopløsning. Efter 30 minutter eks- 6
DK 158672B
traheres blandingen med ethylacetat, ethylacetatlaget bortkastes, og det vandige lag gøres surt til en pH-værdi på 2,5 med koncentreret saltsyre. Det udfældede produkt ekstraheres i ethylacetat. Efter tørring over natri-5 umsulfat og udvinding af opløsningsmidlet i vakuum fås den ovennævnte forbindelse som en olie.
UV: (CH-OH) λ . 262,5 nm, e = 5450 O ΙΠ3Χ NMR: (Opløsningsmiddel DMSO, dg) 6 = 3,43 (0-CHg, s), 10 4,73 (2-H2, delvis synlig), 4,81 CCl^ CH2~0, s), 5,12 (6-H, s), ”4,74 (10-H2, delvis synlig).
Trin B: Dibenzhydrylester af 7fl-(D-5'-trichlorethoxycar-bonylamino-5f-carboxy-valeramido)-3-carbamo-15 yloxymethyl-7-methoxy-3-cephem-4-carboxylsyre
Til opløsningen af ovennævnte 7Æ-(D-5-trichlorethoxycar-bonylamino-5'-carboxyvaleramido)-3-carbamoyloxymethyl-7-methosy-3-cephem-4-carboxylsyre i ethylacetat (500 ml) 20 sættes diphenyldiazomethan (17 g) i 200 ml ether. Efter omrøring af blandingen i 18 timer ekstraheres den i rækkefølge med natriumbicarbonat- og natriumchloridopløsnin-ger. Opløsningen tørres og inddampes til dannelse af et urent produkt, der renses ved kromatografi på silicagel.
25 En blanding af chloroform og ethylacetat i forholdet 2:1 anvendes til eluering. Dette stof udviser en enkelt plet ved TLC-kromatografi.
UV: (CH-OH) K . 2650 nm, e = 7000 o _ max 30 NMR: (Opløsningsmiddel CDCl^) δ = 3,45 (O-CHg, s), 3,35 (2-H2, delvis synlig), 4,69 (CCl^ CH2-0, s), 5,03 (6-H, s), ”4,88 (10-H2, delvis synlig).
35
DK 158672 B
7
Trin C: Dibenzhydrylester-7/5-[(D-51-trichlorethoxycarbo-nylamino-51-carboxy-valeryl)-phenylacetylamino]- 3-carbamoyloxymethy1-7-methoxy-3-cephem-4-carboxylsyre 5
En blanding af dibenzhydrylester af 7/5-(D-5' -trichloreth-oxycarbonylamino-5'-carboxyvaleramido)-3-carbamoyloxy-methyl-7-methoxy-3-cephem-4-carboxylsyre (1,1 g, 1,18 mmol) acetonitril (5 ml) og bis-trimethylsilyltrifluor-10 acetamid (3 ml) henstilles ved stuetemperatur i 6 timer.
Efter dette tidsrum fjernes flygtige stoffer i højvakuum, og remanensen opløses i 3 ml methylenchlorid. Til denne opløsning sættes phenylacetylchlorid (0,23 ml, 1,79 mmol) og blandingen henstilles ved stuetemperatur i 65 timer.
15 Derefter inddampes opløsningen, og remanensen opløses i 5 ml tetrahydrofuran og 0,7 ml 2,5 N saltsyre. Efter 20 minutters reaktion inddampes opløsningen, og remanensen fordeles mellem methylenchlorid og natriumbicarbonat-opløsning. Det organiske lag vaskes med natriumchlo-20 ridopløsning, tørres og inddampes til tørhed. Det således dannede urene produkt renses ved kromatografi på si-licagel, idet der anvendes chloroform:ethylacetat i forholdet 95:5 som elueringsmiddel. Den ovennævnte forbindelse viser sig at være homogen ved tyndtlagskromatogra-25 fi.
UV: (CH-OH) λ . 2640 nm, e = 6650 3 max NMR: (Opløsningsmiddel CDClg) 6 = 3,50 (O-CHg, s), 3,31 (2-H2, delvis synlig), 4,67 (CCl^ CH^-O, s), 5,04 30 (6-H, s), ”4,96 (10-H2, synlig), 395 (13-H2, s).
35 8
DK 158672 B
Trin D: Benzhydrylester af 3-carbamoyloxymethyl-7-meth-oxy-7 0-phenylacetamido-3-cephem-4-carboxylsyre
Opløsningen af di-benzhydrylester af 70-[(D-5’-trichlor-5 ethoxycarbonylamino-51-carboxyvaleryl)-phenylacetylami- no]-3-carbamoyloxymethyl-7-methoxy-3-cephem-4-carboxyl-syre (104 mg) i 90% eddikesyre-vand (1 ml) omrøres med 100 mg zinkstøv i 5 timer. Derefter filtreres opløsningen, og den afdampes i vakuum. Remanensen fordeles mellem 10 methylenchlorid og vand, og methylenchloridlaget ekstra- heres med natriumhydrogencarbonat- og natriumchlorid-opløsninger. Efter tørring og inddampning fås et urent produkt, som renses ved tyndtlagskromatografi ved hjælp af silicagel-plader og en 3:2 blanding af chloroform og 15 ethylacetat. Produktet karakteriseres ved dets IR og NMR spektreo IR: (CHC13) 1780, 1730 og 1680 cm-1 UV s (Opløsningsmiddel CDCl^) δ = 3,40 (O-CHg, s), 3,33 20 (2-H2, delvis synlig), 5,01 (6-H, s), ~4,88 (10-H2, delvis synlig), 3,60 (13-H2, s).
Trin E: 3-carbamoyloxymethyl-7-methoxy-70-phenylacetami-do-3-cephem-4-carboxylsyre 25
Benzhydrylester af 3-carbamoyloxymethyl-7-methoxy-70-phe-nylacetamido-3-cephem-4-carboxylsyre (17 mg) opløses i anisol (0,2 ml) og behandles med trifluoreddikesyre (0,5 ml) i 5 minutter. Efter dette tidsrum inddampes blan-30 dingen hurtigt i kraftigt vakuum og fortyndes med ethylacetat. Produktet fjernes fra ethylacetatopløsningen ved ekstraktion ved en pH-værdi på 7,5 med en natrium-phosphophatpuffer. Pufferopløsningen gøres sur til en pH-værdi på 2,5 med fortyndet saltsyre, og den ovennævnte 35 forbindelse udvindes ved ekstraktion med ethylacetat.
Efter tørring og inddampning af opløsningen fås produktet. En analytisk prøve fås ved omkrystallisation af 9
DK 158672B
ethylacetat, smp. 159-161 °C.
UV; (pH 7 puffer) λ e . 2670 ran, e = 8650 max IR: (CHgCN) 1780, 1735 og 1700 5 NMR: (Opløsningsmiddel CD^CN + D2O) δ = 3,42 (O-CHg, s), 3,35 (2-H2, delvis synlig), 5,01 (6-H, s), 4,83 (10-H2, d), 301 (13-H2, s).
Elementaranalyse for C^gH^gO^NgS: 10 C 51,29, H 4,54
Fundet; C 51,47, H 4,73 2 mg af ovennævnte syre opløses i en dråbe methanol og behandles med en opløsning af 2 mg dibenzylethylendiamin-15 diacetat i ethylacetat. Dibenzylethylendiaminsaltet af den ovennævnte forbindelse udfældes efter henstand i form af nåleformede krystaller, smp. 140-143 °C.
UV: (CHo0H) λ . 263 ran, e = 8600 3 max 20
Fremstilling af mononatriumsalt af 7fl-(D-5-amino-5-carb-oxyvaleramido)-3-carbamoyloxymethyl)-7-methoxy-3-cephem- 4-carboxylsyre 25 Modificeret fermenteringsproces:
Trin 1: Skråkulturer
Et lyofiliseret glas med Streptomyces lactamdurans kultur 30 (MA-2908) åbnes aseptisk, og organismen overføres til et medium med følgende sammensætning: 35
DK 158672 B
10
Medium XI; 1 % Blackstrap melasse 1 % National Brewers gær 5 2,5% Difco agar pH = 7,0
Vand til opfyldning
Skråkulturerne podes i 7 dage ved 28 °C. Når skråkulturerne opbevares i kulden, er de stabile i mere end 13 10 uger.
Trin 2; Podetrin: Totrinssystem Første podning: 15
Podematerialet fra skråkulturen fra trin 1 føres direkte over i 40 ml 1% primaart tørret gær N.F., pH = 7,0 (stammende fra Yeast Product Corporation) i 250 ml pufret konisk kolbe. Kolberne rystes derefter i et roterende 20 rysteapparat med 220 omdrejninger pr. minut med en slaglængde på 50 mm ved 28 "C i et tidsrum fra 2 til 3 dage.
Anden podning: 25 Et 2,5% podemateriale fra første podetrin sættes til en kolbe indeholdende en 2% Fleischmann S-150 gærautolysat, pH = 7,0. Væksten i dette trin er typisk lys, og dyrkningen udførtes ligesom ved første trin i ikke over 48 timer.
30
Trin 3: Produktionsmedium
Produktionsmediet indeholder pr. liter destilleret vand: 30 g bærme, 7,5 g primært tørret gær N.F. og 0,25 vægt-% 35 Mobilpar-S antiskummemiddel. Mediet indstillet til pH = 7,0 med en lille mængde koncentreret natriumhydroxidopløsning, overføres til koniske kolber og autoklaveres i
DK 158672 B
11 15-20 minutter ved 121 °C. Efter afkøling sættes til mediet 2,5% podemateriale fra ovennævnte trin 2. Inkubationstiden kan variere fra 50 timer til 100 timer, men en dyrkningstid på 72 timer foretrækkes. Rumfanget af mediet 5 i hver kolbe kan variere fra 30 til 50 ml, men rutinemæssigt benyttes 40 ml. Mængden af podemateriale kan variere fra 1% til 5%, men i praksis anvendes generelt 2,5%.
10 Trin 4: Afprøvninger
Efter afsluttet gæring fracentrifugeres cellerne, og væsken fortyndes med phosphatpuffer, pH = 7,0. Koncentrationen af 70-(D-5-amino-5-carboxyvaleramido)-3-(carbamo-15 yloxymethyl)-7-methoxy-3-cephem-4-carboxylsyre i gærings
væsken bestemmes ved standardbiologiske skive-prøver. Den anvendte prøveorganisme var Vibrio percolans (ATCC 8461). Filtrerpapir-skiver neddykkes i den fortyndede væske og anbringes på overfladen af agarholdige Petri-skåle, som 20 er podet med prøveorganismen Vibrio percolans (ATCC
8461). I disse Petri-skåle anbringes ligeledes skiver, der i forvejen er dyppet i standardopløsninger indeholdende kendte koncentrationer af 70-(D-5-amino-5-carb-oxyvaleramido)-3-carbamoyloxymethyl)-7-methoxy-3-cephem-25 4-carboxylsyre. Skiverne dyrkes i 18 timer ved 28 °C, og zonediametrene for inhiberingen iagttages. Koncentrationen af produktet og gæringsvæsken beregnes ved inter-plation af standardkurver, der har relation til zonediameteren, med kendte koncentrationer af standardop-30 løsninger af produktet. Ved denne fremgangsmåde beregnes Streptomyces lactamdurans MB-2908 at producere 78,6 μg/ml Tb -(D-5-amino-5-carboxyvaleramido)-3-carbamoyl-oxymethyl- 7-methoxy-3-cephem-4-carboxylsyre ved den modificerede fermenteringsproces.
35 f
DK 158672 B
12
Trin 5: Isolation
Den filtrerede væske indstilles på pH = 7,0 med fortyndet saltsyre, og 2900 ml føres gennem en kolonne indeholdende 5 en stærk basisk anionbytterharpiks (100 g) med et skelet af styren-divinylbenzen (Dowex 1x2 chlorid-form) ved 10 ml/minut. Det forbrugte opløsningsmiddel opsamles i 500 ml fraktioner. Harpikskolonnen vaskes med vand og fortyndes med 3% ammoniumchlorid i 90% methanol. Eluatet 10 opsamles i 100 ml fraktioner. De forbrugte fraktioner forenes, pH-værdien indstilles på 7,2-8,0 med fortyndet natriumhydroxid og absorberes på en stærk basisk anionbytterharpiks (100 g) med et skelet af styren-di-vinylbenzen (Dowex 1x2 chloridform) ved 14 ml/minut.
15 Kolonnen vaskes med vand og elueres med 5% vandig natri-umchlorid. Eluatet opsamles i 50 ml fraktioner og indampes. Koncentratet fortyndes til 500 ml, indstilles på en pH-værdi på 8,8-2,0 med fortyndet saltsyre og adsorberes på 25 ml stærk sur kationbytterharpiks af sulfonattypen 20 med et skelet af styren-divinylbenzen (Dowex 50 x 2 hydrogenform) ved 2,5 ml/minut. Kolonnen vaskes med 25 ml vand, elueres derefter med 2% pyridin, indtil pH-værdien af kolonneaf løbet er steget til 7 (54 ml). Det således dannede eluat indstilles på en pH-værdi på 8,0 med for-25 tyndet natriumhydroxid og inddampes under vakuum til fjernelse af pyridinet, hvorved fås natriumsalt af 70-(D- 5-amino-5-carboxyvaleramido)-3-carbamoyloxymethyl-7-meth-oxy-3-cephem-4-carboxylsyre.
30 Elementaranalyse for ci6H2iN4S09SNa: C 41,0, H 4,5, N 12,0, S 6,8 Fundet: C 39,31, H 4,76, N 11,16, S 6,46 35 3-Carbamoyloxymethy1-7-methoxy-7 0-phenylacetamido-3- cephem-4-carboxylsyre 5
DK 158672 B
13 EKSEMPEL 2
Trin A: Dibenzhydrylester af 70-[(D-51-trichlorethoxycar-bonylamino-5'-carboxyvaleryl)-phenylacetylamino]- 3-carbamoyloxymethy1-7-methoxy-3-cephem-4-carboxylsyre 10
En opløsning af dibenzhydrylester af 70-(D-5-trichlor-ethoxycarbonylamino-5-carboxyvaleramido)-3-carbamoyloxy-methyl-7-methoxy-3-cephem-4-carboxylsyre (9,3 g, 10 mmol), N-trimethylsilylphthalimid (7,8 g, 40 mmol) og 15 phenylacetylchlorid (5,3 ml, 40 mmol) i 50 ml acetonitril opvarmes ved 40 °C i 20 timer. Efter dette tidsrum afkøles blandingen til stuetemperatur og filtreres. Filtratet inddampes til tørhed og udrives med hexan. Den uopløselige remanens indeholdende di-benzhydrylester af 70-20 [(D-5’-trichlorethoxycarbonylamino-5'-carboxyvaleryl)- phenylacetylamino]-3-carbamoyloxymethyl-7-methoxy-3-cephem-4-carboxylsyre anvendes uden rensning i næste trin.
25 Trin B: Benzhydrylester af 3-carbamoyloxymethyl-7-meth-oxy-70-phenylacetamido-3-cephem-4-carboxylsyre
Det urene produkt fra trin A opløses i en blanding af ethylacetat (50 ml), eddikesyre (45 ml) og vand (5 ml).
30 Til denne opløsning sættes 20 g zinkpulver, og blandingen omrøres ved stuetemperatur i 4 timer. Derefter frafil-treres overskud af zink, og filtratet fordeles mellem ethylacetat og vand. Det organiske lag vaskes med en natri umhydrogencarbona topløsning og vand, tørres og inddam-35 pes. Det således dannede urene produkt renses ved kromatografi på 1 kg silicagel, idet der anvendes en blanding af chloroform, hexan og methanol (47:47:6) til elue-
Trin C: 3-Carbamoyloxymethyl-7-methoxy-70-phenylacetami- i do-3-cephem-4-carboxylsyre 5
DK 158672 B
14 ring.
Ovennævnte forbindelse fremstilles ved hydrolyse af den i trin B fremstillede forbindelse. Forbindelsen har samme j fysiske egenskaber som forbindelsen fremstillet i eksempel 1, trin E.
10 EKSEMPEL 3 3-Carbamoyloxymethyl-7-methoxy-7 g-(2-thienylacetamido) -3 -cephem-4-carboxylsyre 15
Trin A; Dibenzhydrylester af 70-[(D-51-trichlorethoxycar-bonylamino-51 carboxylvaleryl)-2-thienylacetyl-amino]-3-carbamoyloxymethyl-7-methoxy-3-cephem-4-carboxylsyre 20
En blanding af 6,0 g (6,3 mmol) dibenzhydrylester af 70-(D-5'-trichlorethoxycarbonylamino-5'carboxylvaleramido)- 3-carbamoyloxymethyl-7-methoxy-3-cephem-4-carboxylsyre, 4,7 g (40 mmol) N-trimethylsilyl-trifluoracetamid, 3,42 25 ml (25 mmol) 2-thienylacetylchlorid og 50 ml chloroform opvarmes til 47 °C i 16 timer. Efter afdampning af opløsningsmidlet ekstraheres den urene reaktionsblanding med hexan, og yderligere rensning ved kromatografi på 1 kg silicagel med 10% ethylacetat i chloroform som eluent.
30 UV: (CHU0H) λ . 265 nm, e = 5810 o max NMR: (Opløsningsmiddel CDClg) δ = 3,53 (-OCHg, s), "3,4 (2-H2, d), 4,74 (CC13 CH2-0, s), 5,05 (6-H, s), "5,0 (10-H2, delvis synlig), 4,15 (13-H2, s).
35
DK 158672 B
15
Trin B: Benzhydrylester af 3-carbamoyloxymethyl-7-meth-oxy-70-(2-thienylacetamido)-3-cephem-4-carboxyl-syre 5 Dibenzhydrylesteren af 70-[D-5'-trichlorethoxycarbonyl-amino-5'-carboxyvaleryl)- 2 -thienylacetylamino]-3-carbamo-yloxymethyl-7-methoxy-3-cephem-4-carboxylsyre (4,2 g, 3,8 mmol) opløses i 30 ml ethylacetat og sættes til 30 ml 90% vandig eddikesyre og 17 g zinkstøv. Blandingen omrøres •JO kraftigt i 5% time ved stuetemperatur. Efter fra-filtrering af zink fjernes overskud af eddikesyre ved vask af ethylacetatopløsningen med vand. Ovennævnte forbindelse isoleres på samme måde som beskrevet i eksempel 1, trin E. Det karakteriseres ved TLC (7% CH^OH i 1:1 15 CHClg:n-hexan) som en enkelt plet.
IR: (CHC13) 1740, 1800 cm-1 UV: λ . 263 am, e = 5800 max NMR: (Opløsningsmiddel CDCl^) 6 = 3,45 (-OCH^, s), ”3,4 20 (2-H2, d), 5,02 (6-H, s), ”4,92 (10-H2, delvis synlig), 3,85 (13-H2, s).
Trin C: 3-Carbamoyloxymethyl-7-methoxy-70-(2-thienyl-acetamido)-3-cephem-4-carboxylsyre 25
En kold opløsning af benzhydrylesteren af 3-carbamoyloxy- methyl-7-methoxy-70-(2-thienylacetamido)-3-cephem-4-car- boxylsyre (1,36 g) i 10,88 ml anisol omrøres med 5,44 ml trifluoreddikesyre ved 0 °C i h time. De flygtige stoffer 30 fjernes i kraftigt vakuum, og produktet omkrystalliseres af ethylacetat, smp. 165-167 °C. UV: (pH = 7 puffer) λ _ 263 am, e = 8840 max [«]D (C=l, CH3OH)= + 199° 236 am, e = 14000 35
DK 158672 B
16 NMR: (opløsningsmiddel CD^CN + D^O) 6 = 3,48 (-OCH^, s) ~3,4 (2-H2, delvis synlig), 5,05 (6-H, s), 4,91 (10-H2, d), 3,86 (13-H2, s).
5 Elementaranalyse for cigHi7N3°7S2 C 44,96, H 4,01, N 9,83
Fundet: C 44,86, H 3,99, N 9,21, S 15,00
Trin D: Natrium-3 -carbamoyloxymethyl-7-methoxy-70-(2-10 thienylacetamido)-3-cephem-4-carboxylat
En suspension af 1 g 3-carbamoyloxymethyl-7-methoxy-70-(2-thienylacetamido)-3-cephem-4-carboxylsyre i 100 ml destilleret vand omrøres ved stuetemperatur, medens der 15 gradvis tilsættes 0,2 g natriumbicarbonat. Efter dannelse af en opløsning indstilles pH-værdien på neutral reaktion (pH = 6-7), og opløsningen filtreres i en lyophiliseret kolbeo Filtratet lyofiliseres.
20 Derved fås 1 g amorft natrium-3-carbamoyloxymethyl-7-me-thoxy-70-(2-thienylacetamid)-3-cephem-4-carboxylat, svarende til et udbytte på 99%. UV (pH = 7 puffer): E% 198 ved 262 nm, 315 ved 236 nm. IR (KBr): 1760 (lactam).
[ø]D s 183,1° (c = 1, pH 7 puffer).
25 30 35 3-Carbamoyloxymethyl-70-(2-furylacetamido)-7-methoxy-3- cephem-4-carboxylsyre 5
DK 158672 B
17 EKSEMPEL 4
Trin A: Dibenzhydrylester af 7/?- [ (D-5 * -trichlorethoxycar-bonylamino-51-carboxyvaleryl)-2-furylacetylamino] -3-carbamoyloxymethyl-7-methoxy-3-cephem-4-carboxylsyre 10
En blanding af dibenzhydrylester af 70-(D-5'-trichlor-ethoxycarbonylamino-51 -carboxyvaleramido)-3-carbamoyloxy-methoxy-7-methoxy-3-cephem-4-carboxylsyre (9,3 g), bis-(trimethylsilyl)-trifluoracetamid (7,0 ml), 2-furylace-15 tylchlorid (4,7 ml) og dichlormethan (50 ml) opvarmes til 47 °C i 16 timer. Opløsningen inddampes, og den rå reaktionsblanding ekstraheres med hexan, og remanensen anvendes uden rensning i næste trin.
20 NMR: (Opløsningsmiddel CDCl^) δ = 3,48 (-OCH^, s), 3,08 (2-H2, d), cd3 4,63 (CH2, s), 5,02 (6-H, s), "4,88 (10-H2, d),
25 I
0- 3,72 (13-H2, s).
Trin B: Benzhydrylester af 70-(2-furylacetamido)-3-carba-30 moyloxymethy1-7-methoxy-3-cephem-4-carboxylsyre
Dibenzhydrylesteren fra trin A omsættes med zinkstøv og eddikesyre ved fremgangsmåden ifølge eksempel 3, trin B.
Efter omkrystallisation af chloroform-hexan har produktet 35 følgende egenskaber:
DK 158672 B
18
Smp.: 168-171 °C
IR: (CHC13) 1800, 1720, 1700 UV: λ . 265 urn, e = 7200 max NMR: (Opløsningsmiddel CD^CN) 6 = 3,43 (-OCH^, s), 3,39 5 (2-H2, delvis synlig), 5,0 (6-H, s), 4,75 (10-H2, d), 3,64 (13-H2, s).
Trin C: 3-Carbamoyloxymethyl-7-methoxy-7g-(2-furylacet-amido)-3-cephem-4-carboxylsyre 10 3-Carbamoyloxymethyl-7-methoxy-7 d—(2-furylacetamido)-3-cephem-4-carboxylsyre fremstilles ud fra produktet ifølge trin B ved hydrolyse som angivet i eksempel 3, trin C. Produktet har efter omkrystallisation af ethylacetat et 15 smp. på 156-161 °C.
UV: (pH = 7 puffer) λ 265 um, e = 7200 ΏΙαΧ UV: er i overensstemmelse med strukturen NMR: (Opløsningsmiddel CDgCN+ D20) 6 = 3,44 (-OCHg, s), 20 “3,38 (2-H2, delvis synlig), 5,2 (6-H, s), 4,82 (10-H2, d), 3,66 (13-H2, s).
EKSEMPEL 5 25 3-Carbamoyloxymethy1-7-methoxy-7 g-thiophenoxyacetamido-3- cephem-4-carboxylsyre
Trin å: Dibenzhydrylester af 7g [(D-5-trichlorethoxycar-bonylamino-5-carboxyvaleryl)-thiophenoxyacet-30 amido]-3-carbamoyloxymethyl-7-methoxy-3-cephem-4- carboxylsyre
Ved at følge den i eksempel 4, trin A, beskrevne fremgangsmåde og ved i stedet for 2-furylacetylchlorid at an-35 vende en ækvimolær mængde phenylthioacetylchlorid fås dibenzhydrylesteren af β-[(D-5-trichlorethoxycarbonylami-no-5-carboxyvaleryl)-thiophenoxy-acetamido]-3-carbamo-
DK 158672 B
19 yloxymethy1-7-methoxy-3-cephem-4-carboxy1syre.
NMR: (Opløsningsmiddel CDClg) 6 = 3,33 (-OCHg, s), '3,23 (2-H2, delvis synlig), 5 CClg 4,87 (CH2, u), 5,0 (6-H, s), 4,87 (10-H2, u), 0- 10 3,68 (13-H2, s).
Trin B; Benzhydrylester af 3-carbamoyloxymethyl-7-meth-oxy-7fl-thiophenoxyacetamido-3-cephem-4-carboxyl-syre 15
Ved at følge fremgangsmåden ifølge eksempel 4, trin B, og ved at anvende dibenzhydrylesteren af 70-[(D-5-trichlor-ethoxycarbonylamino-5-carboxyvaleryl)-thiophenoxyacet-amido]-3-carbamoyloxymethyl-7-methoxy-3-cephem-4-carb-20 oxylsyre i stedet for dibenzhydrylesteren af 70-[(D-5’-trichlorethoxycarbonylamino-5'-carboxyvaleryl)-2-furyl-acetylamino]-3-carbamoyloxymethyl-7-methoxy-3-cephem-4-carboxylsyre, fås efter kromatografisk rensning i det væsentlige rent produkt, der udviser en enkelt plet ved 25 tyndtlagskromatografi (TLC). Et infrarødt spektrum er i overensstemmelse med strukturen.
UV: λ 274 am, e = 11350 max NMR: (Opløsningsmiddel CDCl^) δ = 3,34 (-OCH^, s), 3,24 30 (2_H2, delvis synlig), 5,0 (6-H, s), 4,88 (10-H2, d), 3,68 (13-H2, s).
35
DK 158672B
20
Trin C; 3-Carbamoyloxymethyl-7-methoxy-70-thiophenoxy-acetamido-3-cephem-4-carboxylsyre
Ovennævnte forbindelse fremstilles ud fra produktet iføl-5 ge trin B ovenfor efterfulgt af fremgangsmåden ifølge eksempel 3, trin C. Produktet udviser en enkelt plet ved TLC, smp. 119-123 °C.
UV: (pH = 7 puffer) λ . 247 μπι, ε = 10400 ΠΙαΧ 10 NMR: (Opløsningsmiddel CD^CN + D20) « = 3,38 (-OCH^, s), 3,34 (2-H^, delvis synlig), 5,0 (6-H, s), 4,82 (10-H2, d), 3,71 (13-H2, s).
EKSEMPEL 6 15 7/?-(D, L-a-azidophenylacetylamido) -3-carbamoyloxymethyl-7-methoxy-3-cephem-4-carboxylsyre
Trin A: 7fl-(D-5-tert.-butoxycarbonylamino-5-carboxyvaler-20 amido)-3-carbamoyloxymethyl-7-methoxy-3-cephem-4- carboxylsyre 70-(D-5-amino-5-carboxyvaleramido)-3-carbamoyloxymethyl- 7-methoxy-3-cephem-4-carboxylsyre (50,0 g) opløses i en 25 blanding af 1500 ml vandig 5% dikaliumhydrogenphosphat og 1000 ml acetone og indstilles på en pH-værdi på 9,5 med 2,5 N natriumhydroxidopløsning. Til denne opløsning sættes under omrøring tert.-butoxycarbonylazid (50 ml), og pH-vardien indstilles på 9,5 i løbet af 20 timer. Reak-30 tionsblandingen ekstraheres derefter med ethylacetat, ethylacetatlaget bortkastes, og det vandige lag afkøles til 0 °C, omrøres med 1200 ml ethylacetat og gøres surt til en pH-værdi på 2,5 med koncentreret saltsyre. Ethylacetatlaget fraskilles, tørres over natriumsulfat og ind-35 dampes i vakuum, og det dannede faste stof anvendes uden yderligere rensning.
DK 158672 B
21 IR: 1790 (Ø-lactam), 1700 UV: (pH = 7 puffer), λ . 263, e = 6820 NMR: (Opløsningsmiddel DMSO, dg) & = 3,30 (-OCH^, s), 3,42 (2-H2, delvis synlig), 5,06 (6-H, s), 4,78 5 (10-H2, d), 1,38 (t-bu, s).
Trin B: Dibenzhydrylester af 7 fl-(D-5-tert.-butoxycarbo-nylamino-5-carboxyvaleramido)-3-carbamoyloxyme-thyl-7-methoxy-3-cephem-4-carboxylsyre 10
Til en opløsning af 70-(D-5-butoxycarbonylamino-5-carb-oxyvaleramido) -3-carbamoyloxymethyl-7-methoxy-3-cephem-4-carboxylsyre (15,0 g) i ethylacetat (500 ml) sættes di-phenyldiazomethan (5,5 g) i 70 ml ether. Reaktionsblan-15 dingen opvarmes til 40 °C under omrøring, og efter 30 minutter behandles med yderligere diphenyldiazomethan (5,5 g) i ether (70 ml). Efter 3 timer fjernes opløsningsmidlet i vakuum og erstattes med en blanding af methanol (500 ml) og vand (20 ml). Methanol-vandopløsningen 20 ekstraheres 4 gange med hexan og inddampes derefter i vakuum. Remanensen opløses i ethylacetat, tørres over natriumsulfat og inddampes i vakuum, hvorved fås ovennævnte forbindelse, der anvendes uden yderligere rensning i næste trin.
25 NMR: (Opløsningsmiddel CDCl^) e = 3,60 (-OCH^, s), 3,4 (2-H2, delvis synlig), 5,10 (6-H, s), 4,95 (10-H2, delvis synlig).
30 35
DK 158672 B
22
Trin C: Dibenzhydrylester af 71- [ (D-5'tert. -butoxycarb-oxylamino-5 *-carboxyvaleryl) -D, L-a-azidophenyl-acetylamino] -3 -carbamoy loxymethyl - 7-methoxy-3 -cephem-4-carboxylsyre 5
En blanding af dibenzhydrylesteren af 7Æ-(D-51 -tert. -but-oxy-carbonylamino-5'-carboxyvaleramido)-3-carbamoyloxy-methyl-7-methoxy-5-cephem-4-carboxylsyre (10,8 g), chloroform (100 ml), bis-(trimethylsilyl)-trifluoracetamid 10 (16,2) og D,L-a-azidophenylacetylchlorid opvarmes til 45 °C i 16 timer. Blandingen fortyndes med chloroform (300 ml), vaskes med 2% vandig bicarbonat og mættet, vandig natriumchloridopløsning, tørres over natriumsulfat og inddampes til en olie, der renses ved udfældning af 15 produktet fra en chloroformopløsning med hexan. Det i næste trin anvendte lysegule stof benyttes uden yderligere rensning.
IR: 1790 (Ø-lactam), 1, 1735, 2100 (-Ng) 20 NMR: (Opløsningsmiddel CDClg) 6 = 3,70 (-OCHg, s), 3,2 (2-H2, delvis synlig).
Trin D: 7fl-(D,L-a-azidophenylacetylamido)-3-carbamoyloxy-methy1-7-methoxy-3-cephem-4-carboxylsyre 25
En opløsning af dibenzhydrylester af 7Æ-[(D-5'-tert.-but-oxycarbonylamino-5’-carboxyvaleryl)-D,L-e-azidophenyl-acetylamino]-3-carbamoyloxymethyl-7-methoxy-3-cephem-4-carboxylsyre (13,0 g) i anisol (13 ml) hældes i 65 ml 30 kold (0 °C) trifluoreddikesyre. Efter 5 minutter hældes opløsningen i 1800 ml kold (0 °C) ether under omrøring. Bundfaldet opsamles og fordeles i 10% vandig dinatrium-hydrogenphosphat og ethylacetat. Ethylacetatlaget bortkastes, og det vandige lag iblandes frisk ethylacetat, og 35 blandingen omrøres under indstilling af pH-værdien på 2 i kulden ved hjælp af 60% vandig phosphorsyre. Ethylacetatlaget opsamles, vaskes med mættet, vandig na-
DK 158672 B
23 triumchloridopløsning og tørres derefter over natriumsulfat. Flygtige stoffer fjernes i vakuum, hvorved fås ovennævnte forbindelse.
5 UV: λ 264 am, e = 7537 ° max (pH = 7 puffer) 231 am, e = 13567 IR: 1760 (5-lactam), 1705, 2105 (-N3) 10 NMR: (Opløsningsmiddel CDgCN) δ = 3,36 (-OCH^, s), 3,50 (-OCHg, s), 3,40 (2-H2, delvis synlig), 5,06 (6-H, s), 4,86 (10-H2, d), 5,15 (13-H2, s).
15 EKSEMPEL 7 3-acetoxymethy1-70-(2-thienylacetamido)-3-cephem-4-carb-oxylsyre 20 Trin A: 7 fl-(D-5-1richlorethoxycarbony1amino-5-carboxyva-leramido)-3-cephem-4-carboxylsyre
Til en opløsning af 7 0-(D-5-amino-5-carboxyIvaleramido)- 3-acetoxy-methyl-3-cephem-4-carboxylsyre (2,5 g, 0,53 25 mol) i acetone (13 ml) og vandig 10% dikaliumhydrogen-phosphat (40 ml) dryppes trichlorethoxycarbonylchlorid (3,35 g, 0,159 mol). Under tilsætningen holdes opløsningens pH-værdi i et område mellem 8,5 og 9 ved gradvis tilsætning af en 17% vandig opløsning af natriumhydroxid.
30 Efter 30 minutter vaskes blandingen med ethylacetat, og det vandige lag gøres surt til en pH-værdi på 2,5 med koncentreret saltsyre. Det udfældede produkt ekstraheres i ethylacetat, opløsningen tørres over natriumsulfat, filtreres, og opløsningen inddampes, hvorved fås 2,7 g 35 70-(D-5-trichlorethoxycarbonylamino-5-carboxylvalerami- do)-3-acetylmethyl-3-cephem-4-carboxylsyre.
DK 158672 B
24
Trin B: Dibenzhydrylester af 7-(D-5-trichloethoxycarbo-nylamino-5-carboxylvaleramido) -3-acetoxymethyl-3-cephem-4-carboxylsyre 5 Til en opløsning af 70 - (D-5-trichloethoxycarbonylamino-5-carboxylvaleramido)-3-acetylmethyl-3-cephem-4-carboxyl-syre i ethylacetat (30 ml) sættes diphenyldiazomethan (2,0 g), i ether (25 ml). Blandingen omrøres i 18 timer og inddampes, hvorved fås 4,0 g urent produkt. Dette ren-10 ses ved kromatografi på silicagel, idet der anvendes chloroform som elueringsmiddel, hvorved fås 2,3 g temmelig ren dibenzhydrylester af 7-(D-5-trichlorethoxycarbo-nylamino-5-carboxyvaleramido)-3-acetylmethyl-3-cephem-4-carboxylsyre.
15 NMR: (Opløsningsmiddel CDClg) 6 = 2,0 (methyl, s), 4,9 (10-H2, kvartet), 3,2 (2-H2, kvartet), 4,95 (6-H, d), 5,92 (7-H), 7,0 (benzhydrylprotoner, 2 s).
20 Trin C: Dibenzhydrylester af 7-[D-5-trichlorethoxy-carbo- nylamino-5-carboxylvaleryl)-2-thienylacetylami-no]-3-acetoxymethyl-3-cephem-4-carboxylsyre
En blanding af dibenzhydrylesteren af 70-(D-5-trichlor-25 ethoxycarbonylamino-5-carboxyvaleramido)-3-acetoxymethyl- 3-cephem-4-carboxylsyre (2,0 g, 0,02 mol), N-trimethyl-silyltrifluoracetamid (1,65 g, 0,09 mol), 2-thienylace-tylchlorid (1,31 g, 0,0815 mol) og methylenchlorid (6 ml) opvarmes til 40-45 °C på oliebad under en nitrogenat-30 mosfære i 20 timer. Reaktionsblandingen hældes i hexan (100 ml) og filtreres gennem kiselgur. Ved inddampning af opløsningen fås dibenzhydrylesteren af 7-[D-5-trichlor-ethoxycarbonylamino-5-carboxyvaleryl)-2-thienylacetyl-amino]-3-acetoxymethyl-3-cephem-4-carboxylsyre.
35
DK 158672 B
25
Trin D: Benzhydrylester af 3-acetoxymethyl-7-(2-thienyl-acetamido )-3-cephem-4-carboxylsyre
Dibenzhydrylesteren af 7-[D-5-trichlorethoxycarbonylami-5 no-5-carboxylvaleryl)-2-thienylaetylamino]-3-acetoxyme- thyl-3-cephem-4-carboxylsyre opløses i ethylacetat (10 ml) og sættes til en blanding af 90% vandig eddikesyre (10 ml) og zinkstøv (1,0 g). Blandingen omrøres i 2 timer ved stuetemperatur. Reaktionsblandingen filtreres til 10 fjernelse af zink. Derefter vaskes reaktionsblandingen i rækkefølge med 2 portioner vand, en kold natriumbicar-bonatopløsning og derefter med en mættet natriumchlo-ridopløsning (15,0 ml). Ethylacetatopløsningen tørres over natriumsulfat, filtreres, og opløsningen inddampes, 15 hvorved fås 1,9 g urent produkt, der kromatograferes på silicagel ved hjælp af en blanding af chloroform og ethylacetat (50:1) som elueringsmiddel, hvorved fås 0,380 g produkt, der efter omkrystallisation af ethylacetat har et smp. 141,5-143 °C.
20 UV: (CR-OH) λ . 263, e = 7580
u IQclX
Elementaranalyse for C2gH26N2°6S2 C 61,91, H 4,66, N 4,98 25 Fundet: C 62,14, H 4,84, N 4,91
Trin E: 3-(Acetoxymethyl)-7-2-(thienylacetamido)-3-cephem-4-carboxylsyre 30 En kold opløsning af benzhydrylester af 3-acetoxymethyl- 7-(2-thienylacetamido)-3-cephem-4-carboxylsyre (100 mg) i anisol (1,0 ml) og trifluoreddikesyre (0,5 ml) omrøres ved 0 °C i 35 minutter. 50 ml carbontetrachlorid tilsættes, og reaktionsblandingen inddampes til tørhed. Rema-35 nensen udrives med hexan. Hexanen fjernes ved dekantering, og den dannede remanens opløses i 10 ml ethylacetat, inddampes til 1 ml, og diethylether tilsættes til
DK 158672 B
26 dannelse af et bundfald. Dette omkrystalliseres af en blanding af diethylether og ethylacetat, hvorved fås 0,025 g 3-(acetoxymethyl)-7-(2-thienylacetamido)-3-ce-phem-4-carboxylsyre, smp. 164 °C.
5 EKSEMPEL 8
Dibenzhydrylethylendiaminsalt af 3-methyl-7-methoxy-7fl-(2-thienylacetamido-3-cephem-4-carboxylsyre 10
Trin A: 70-(D-5-amino-5-carboxylvaleramido)-3-methyl-7-methoxy-3-cephem-4-carboxylsyre
En 10% palladium-på-aktive kulkatalysator suspenderes i 15 vand (80 ml) og behandles med hydrogen. Katalysatoren frafiltreres og suspenderes atter i vand (50 ml), og til denne blanding (2,67 g) sættes natriumsaltet af 70-(D-5-amino-5-carboxyvaleramido)-3-carbamoyloxymethyl-7-meth-oxy-3-cephem-4-carboxylsyre i 10 ml vand. Den dannede 20 blanding omrystes i 22 timer ved stuetemperatur. Kataly satoren frafiltreres og vaskes med 50 ml vand. De forenede vaskevæsker og filtratet inddampes til tørhed til dannelse af et 52,8% udbytte af 70-(D-5-amino-5-carboxyva-leramido)-3-methyl-7-methoxy-3-cephem-4-carboxylsyre (528 25 mg).
1% UV: K 265 μπι; E er 100.
max 1 cm 30 35
DK 158672 B
27
Trin B: Dibenzylethylendiaminsalt af 7 0 - (D-tert-butoxy-carbonylamino-5-carboxyvaleramido) - 7-methoxy-3-methyl -- 3 -cephem- 4 -carboxyl syre 5 En opløsning af dinatriumsaltet af 70-(D-amino-5-carboxy-valeramido)-7-methoxy-3-methyl-3-cephem-4-carboxylsyre (11,5 g) fra trin A opløses i 150 ml vand og 50 ml acetone. pH-værdien indstilles på 9-9,1 med natriumhydroxid, og 10 ml tert.-butylazidoformiat tilsættes. Reak-10 tionsblandingen omrøres i 16 timer ved under tilsætning af mere natriumhydroxid til opretholdelse af en pH-værdi på 9-9,1. Reaktionsblandingen ekstraheres med 100 ml ethylacetat, og det organiske lag bortkastes. Bundfaldet udfældes ved sænkning af pH-værdien til 2,5 med fortyndet 15 saltsyre. Bundfaldet opsamles ved centrifugering og omdannes til dibenzylethylendiaminsaltet, som omkrystalliseres af ethylacetat. Derved fås 4,3 g dibenzylethylendiaminsaltet af 7-(D-5-tert.-butoxycarbonyl-amino-5-carboxyvaleramido)-7-methoxy-3-methyl-3-cephem-4-20 carboxylsyre, smp. 177-179 °C (dek.).
1% UV: λ 263 um; 238 E er 98,2, 81,1.
max 1 cm 25
Elementaranalyse for C36H49N5°9S: C 59,42, H 6,74, N 9,63 Fundet: C 60,02, H 6,80, N 9,79 30 Trin C: Dibenzylethylendiaminsalt af 3-methyl-7-methoxy-70-(2-thienylacetamido-3-cephem-4-carboxylsyre 70-(D-5-tert-butoxycarbonylamino-5-carboxyvaleramido)-3-methyl-7-methoxy-3-cephem-4-carboxylsyren behandles med 35 vandig, fortyndet saltsyre (200 ml, 0,1 N) og ethylacetat (100 ml) for at ekstrahere den frie syre. Til en opløsning af 1,33 g (2,74 mmol) af den frie syre i methylen-
DK 158672 B
28 chlorid (10 ml) sættes bis-trimethylsilyltrifluoracetamid (2,2 ml) og mono-trimethylsilyltrifluoracetamid (0,5 ml).
2- thienylacetylchlorid (1,1 ml) tilsættes derefter, og reaktionsblandingen omrøres i 18 timer under en nitro- 5 genatmosfære ved 43 °C. Opløsningen inddampes i vakuum, og remanensen fordeles mellem ethylacetat og vandig phosphat-puffer (pH = 7,5). Det vandige lag gøres surt med fortyndet saltsyre, og bundfaldet ekstraheres med ethylacetat. Tilsætning af dibenzethylendiamin resulterer 10 i udkrystallisation af 250 mg af det ønskede produkt som et salt i forholdet 2 ækvivalenter af produktet til 1 mol dibenzylethylendiamin. Ved omkrystallisation af saltet af ethanol fås i det væsentlige rent produkt, smp, 153-155 °C (dek.) under forudgående farvning.
15
Analyse beregnet for C46H52S4N6°10 C 56,54, H 5,36, N 8,60, S 13,12 Fundet: C 55,75, H 5,16, N 8,37, S 12,16 20 EKSEMPEL 9 7-(2-thienylacetyl)amino-3-acetoxymethyl-3-cephem-4-carboxylsyre 25 7-(Phenylacetyl-2-thienylacetyl)amino-3-acetoxymethyl-3- cephem-4-carboxylsyre (250 mg) opløses i tetrahydrofuran (10 ml) og vand (10 ml). pH-værdien af opløsningen indstilles på 9, og blandingen henstilles i 1 time. Derefter ekstraheres opløsningen med ethylacetat, og ekstrakterne 30 vaskes med en dinatriumhydrogenphosphatopløsning. Efter tørring inddampes opløsningen, hvorved fås en blanding af 7-(2-thienylacetyl)amino-3-acetoxymethyl-3-cephem-4-carb-oxylsyre og udgangsmaterialet. Produktet skilles fra udgangsmaterialet ved kromatografi, hvorved fås i det 35 væsentlige ren 7-(2-thienylacetyl)amino-3-acetoxymethyl- 3- cephem-4-carboxylsyre. Forholdet mellem disse to produkter er 7:3.
3-Carbamoyloxymethyl-7-methoxy-7g-(2-thienylacetamido)-3- cephem-4-carboxylsyre 5
DK 158672 B
29 EKSEMPEL 10 A. Di-(methoxymethy1)-3-carbamoyloxymethyl-7-methoxy-7fl-(D-5-trichlorethoxycårbonylamino-51-carboxyvaleramido )-3-cephem-4-carboxylat 10 Til en kold suspension af di-(cyclohexylamin)-3-carbamo-yloxymethyl-7-methoxy-7-(2-thienylacetamido)-3-cephem-4-carboxylat (9,85 g) i methylenchlorid (tørret over mole-kylsigter, 170 ml) ved 0 °C tildryppes en opløsning af chlormethylmethylether (1,69 g) i 50 ml methylenchlorid i 15 løbet af 60 minutter under omrøring. Efter tilsætningen omrøres suspensionen ved 0 °C i 2 timer. Blandingen filtreres igennem et lag celit, og laget udvaskes med methylenchlorid (3 x 30 ml). Filtratet inddampes til tørhed i vakuum ved 5-10 °C, og remanensen rystes med 200 ml 20 methylenchlorid og 200 ml isvand. Det organiske lag fraskilles, vaskes yderligere med isvand (200 ml), kold 0,1% natriumbicarbonatopløsning (200 ml), vand (200 ml) og 50 ml vandig natriumchloridopløsning og tørres over magnesiumsulfat. Efter frafiltrering af tørremidlet ind-25 dampes opløsningsmidlet i vakuum, hvorved fås 6,25 g produkt i form af et glasagtigt stof.
30 35
DK 158672 B
30 B. Di-(methoxymethyl)-3-carbamoyloxymethyl-7-methoxy-75-[(D-5-trichlorethoxycarbonylamino-5 *-carboxyvaleryl)-thienyl-acetylamino]-3-cephem-4-carboxylat 5 Til en opløsning af 10 g di-(methoxymethyl)-3-carbamoyl-oxymethyl-7-methoxy-75-(D-5-trichlorethoxycarbonylamino-5,-carboxyvaleramido)-3-cephem-4-carboxylat i 80 ml sig-tetørret methylenchlorid sættes a-pinen (13,5 ml), ethyl-N-trimethylsilylcarbamat (12,1 ml) og 2-thienylace-10 tylchlorid (7,0 ml). Opløsningen hældes i 17 timer under en tør nitrogenatmosfære under svag tilbagesvaling på et 50 °C varmt oliebad. Opløsningen afkøles derefter ved stuetemperatur, behandles med 500 ml af en vandig opløsning indeholdende 10% natriumchlorid og 2,5% natrium-15 bicarbonat, methanol (30 ml) tilsættes, og blandingen omrøres kraftigt i 15 minutter ved stuetemperatur. Lagene adskilles, det vandige lag vaskes tilbage med methylenchlorid (20 ml), de forenede methylenchloridlag vaskes med mættet vandig natriumchlorid (30 ml), natriumchlo-20 ridopløsningen vaskes tilbage med methylenchlorid (30 ml), og de forenede methylenchloridopløsninger tørres over magnesiumsulfat, filtreres, og kagen vaskes med 2 x 3 rumfang i forhold til kagen af methylenchlorid. Den forenede methylenchloridopløsning og vaskevæskerne kon-25 centreres i vakuum til 50 ml, destillationsresten dryppes under kraftig omrøring i isafkølet hexan (500 ml), og efter henstand i 15 minutter dekanteres hexanlaget fra det gummiagtige stof ved filtrering gennem et celitlag.
Det gummiagtige stof og filterlaget vaskes med 50 ml 30 hexan, celitlaget vaskes derefter med 50 ml methylenchlorid, og denne methylenchloridopløsning anvendes til opløsning af gummiagtigt stof. Methylenchlorid-opløsningen føres derefter igen gennem hexan-bundfaldet.
Derved fås 11,8 g di-(methoxymethyl)-3-carbamoyloxyme-35 thyl-7-methoxy-75-[(D-51-trichlorethoxy-carbonylamino-5'-carboxyvaleryl)-thienylacetylamino]-3-cephem-4-carboxy-lat, der opløses i 230 ml ethylacetat og anvendes i næste C. Di-(methoxymethyl)-3-carbamoyloxymethyl-7-methoxy-7<3- (2-thienylacetamido)-3-cephem-4-carboxylsyre 5
DK 158672 B
31 trin,
Ethylacetatopløsningen indføres i en 500 ml 3-halset rundbundet kolbe, der ér udstyret med et termometer, en mekanisk omrører og et nitrogenindføringsrør. Zinkstøv (50,6 g) indføres, og opløsningen omrøres, medens 11,5 ml 10 iseddike tilsættes. Efter at alle reagenserne er indført gennemføres reaktionen under en nitrogenatmosfære ved 25 °C i 1 time. Zinkstøvet frafiltreres og vaskes med ethylacetat (2 x 75 ml). Filtratet vaskes med 2 x 150 ml vand og en gang med kold 2,5% bicarbonatopløsning (150 15 ml) efterfulgt af en vask med 100 ml natriumchlorid- opløsning. Ethylacetatopløsningen tørres over natriumsulfat, filtreres og inddampes til dannelse af produktet i form af en gummi med en vægt på 6,4 g.
20 I en til 0-4 °C afkølet med kappe forsynet kolonne (2,5 cm indvendig diameter) indføres en opslæmning af 64 g si-licagel 60-200 mesh) i methylenchlorid (200 ml. Silica-gelen bringes til at stivne, og overskud af methylenchlorid dekanteres fra, indtil bundfaldet bliver tilbage. Til 25 dette sættes 6,4 g af remanensen i en minimal mængde methylenchlorid (5-10 ml), idet kolben og kolonnevæggene vaskes med methylenchlorid (10 ml), og derefter elueres kolonnen med 2 liter 40% ethylacetat-benzen-opløsning, idet der udtages 60 ml fraktioner. Fraktionerne inddampes 30 til tørhed. Fraktionerne 10-18 indeholdende produktet inddampes, hvorved fås 2,9 g di-(methoxymethyl)-3-carbamoyloxymethyl-7-methoxy-7 & -(2-thienylacetamido)-3-cephem-4-carboxylat. Produktet (2,64 g) opløses i methylenchlorid (150 ml) og filtreres. Til denne opløs-35 ning sættes 20 ml ethanol, blandingen inddampes ved stuetemperatur på en roterende inddamper til et rumfang på ca. 20 ml. Yderligere 20 ml ethanol tilsættes, og bian- 32
DK 158672B
dingen inddampes til ca. 30 ml. Opløsningen podes og bringes til at krystalliseres, hvorved fås 2,1 g ren ester, smp. 151-153 °C.
5 D. 3-Carbamoyloxymethyl-7-methoxy-70-(2-thienylacetami-do)-3-cephem-4-carboxylsyre
En suspension af methoxymethylesteren (920 mg) i 9,2 ml methanol (indeholdende 10% koncentreret saltsyre) omrøres 10 ved stuetemperatur i 50 minutter. Reaktionens afslutning sikres ved tyndtlagskromatografisk analyse, idet der anvendes ethylacetat/benzen 6:4. En kold opløsning af 1,65 g natriumbicarbonat i 40 ml vand tilsættes forsigtigt, og den klare opløsning inddampes til et rumfang 15 på 30-35 ml ved stuetemperatur i vakuum. Den vandige opløsning ekstraheres med ethylacetat til fjernelse af neutrale urenheder, og det organiske lag bortkastes. Det vandige lag afkøles til 0-5 °C, dækkes med ethylacetat (40 mol), og pH-værdien indstilles på 1,8 med kold 10% 20 saltsyre under konstant omrøring. Lagene skilles, og ethylacetatlaget vaskes med 3 x 3 ml isvand. Det vandige lag og vaskevæskerne forenes og genekstraheres med 2 x 20 ml ethylacetat. Den anden ethylacetatekstrakt vaskes 2 gange med koldt vand og forenes med den første ekstrakt.
25 Opløsningen inddampes til tørhed og skylles med 10 ml benzen-methanol (8:2) og tørres til en konstant vægt på 830 mg. Ved omkrystallisation af det urene produkt af methanol/ethylacetat fås 630 mg 3-carbamoyloxymethyl-7-methoxy-7/5 - (2-thienylacetamido) -3-cephem-4-carboxylsyre.
30 35 3-Carbamoyloxymethyl-7-methoxy-7fl-(2-thienylacetamido)-3- cephem-4-carboxylsyre 5
DK 158672 B
33 EKSEMPEL 11 A. 3-carbamoyloxymethyl-7-methoxy-7fl-[D-5-(2-nltrophenyl-sulfenylamino)-5-carboxyvaleramido]-3-cephem-4-carboxylsyre 10 Mononatriumsaltet af 3-carbamoyloxymethyl-7-methoxy-7å-(D-5'-amino-5'-carboxyvaleramido)-3-cephem~4-carboxylsyre (0,37 g) opløses i 15 ml vand. Dioxan (30 ml) tilsættes efterfulgt af tilstrækkeligt natriumhydroxid til indstilling af pH-værdien til 8,5-9,0. 2-nitrophenylsulfe-15 nylchlorid (0,55 g) sættes til reaktionsblandingen i løbet af 20 minutter samtidig med vandig natriumhydroxidopløsning, idet pH-værdien holdes på 8,5-9,0. Efter omrøring af reaktionsblandingen i yderligere 30 minutter tilsættes 40 ml vand, blandingen filtreres, og filtratet 20 ekstraheres med 25 ml ethylacetat. Det vandige lag afkøles til 0-5 °C, gøres surt med koncentreret saltsyre, og produktet ekstraheres i ethylacetat. Ethylacetatlaget vaskes med vand, tørres over natriumsulfat, filtreres og inddampes, hvorved fås ovennævnte produkt, vægt 0,60 g.
25 B. Bis-dicyclohexylaminsalt af 3-carbamoyloxymethyl-7fl-[D-5-(2-nitrophenylsulfenylamino)-5-carboxyvaleramido] -3-cephem-4-carboxylsyre 30 3-Carbamoyloxymethyl-7-methoxy-70-[D-5-(2-nitrophenylsul- fenylamino)-5-carboxyvaleramido]-3-cephem-4-carboxylsyre (0,55 g) opløses i 25 ml ethylacetat, filtreres, og filtratet behandles i 15 minutter med 0,675 g dicyclohexyl-aminacetatsalt opløst i 100 ml ethylacetat. Bundfaldet 35 opsamles på tragt, vaskes med 10 ml ethylacetat efterfulgt af 2 x 10 ml isopropylether og tørres derefter i vakuum, hvorved fås 0,38 g af ovennævnte salt.
DK 158672 B
34 B. Dimethoxymethylester af 3-carbamoyloxymethyl-70-[D-5-(2-nitrophenylsulfenylamino)-5-carboxyvaleramido]-3-cephem-4-carboxylsyre 5 Til en opløsning af 0,25 g bis-cyclohexylaminsalt i 5 ml methylenchlorid under nitrogen sættes 0,045 ml chlordimethylether i 1,5 ml methylenchlorid i løbet af 15 minutter, medens temperaturen af reaktionsblandingen holdes på 5 °C. Efter 4 timer ved 0-5 °C filtreres reak-10 tionsblandingen, og filtratet vaskes med 2 ml vand indeholdende 25 mg natriumbicarbonat. Methylenchloridla-get tørres over natriumsulfat, filtreres og inddampes til 0,155 g urent produkt. Den urene diester opløses i 0,5 ml af en blanding af ethylacetat og benzen (1:1) og 15 kromatograferes på 0,75 g silicagel under anvendelse af samme opløsningsmiddelblanding, hvorved fås 0,114 g af ovennævnte produkt.
D. Dimethoxymethylester af 3-carbamoyloxymethy1-70-[D-5-20 (2-nitrophenylsulfenylamino)-5-carboxyvaleryl)-(2- thienylacetyl)-amino]-3-cephem-4-carboxylsyre
Til en opløsning af 0,345 g dimethoxymethylester af 3-carbamoyloxymethyl-7 0-[D-5-(2-nitrophenylsulfenylamino)-25 5-carboxyvaleramido]-3-cephem-4-carboxylsyre i 3 ml chloroform (alkoholfri) sættes 0,477 ml pinen, 0,430 ml ethyl-N-trimethylsilylcarbamat og 0,248 ml thienylacetyl-chlorid, og blandingen omrøres i 23 timer ved stuetemperatur. Reaktionsblandingen sættes til 50 ml hexan til 30 dannelse af et bundfald. Hexanet fradekanteres, og bundfaldet vaskes med 10 ml hexan og opløses derefter i 3 ml tør methylenchlorid, hvorefter det genudfældes ved tilsætning af 50 ml hexan til dannelse af 0,252 g urent produkt. Dette kromatograferes over 2,5 g silicagel under 35 anvendelse af ethylacetatbenzen (1:1) til dannelse af 0,106 g af ovennævnte produkt.
35
DK 158672B
E. 3-Carbamoyloxymethy1-7-methoxy-7&-(2-thienylacetami-do)-3-cephem-4-carboxylsyre
En opløsning af 10 mg af dimethoxymethylesteren frem-5 stillet i ovennævnte trin D i 0,15 ml methanol behandles med 0,05 ml eddikesyre og 10 mg thioacetamid til dannelse af methoxymethylesteren efter 5 minutter. Når reaktionstiden andrager 30 minutter, dannes ovennævnte produkt ved fraspaltning af methoxymethylester-gruppen.
10 EKSEMPEL 12 3-Carbamoyloxymethyl-7-methoxy-7b-{2-thienylacetamido)-3-cephem-4-carboxylsyre 15 A. Dimethoxymethylester af 3-carbamoyloxymethyl-7-methoxy- 70 -(D-5-trichlorethoxycarbonylamino-5-carboxyva-leramido)-3-cephem-4-carboxylsyre 20 En suspension af 985 mg bis-dicyclohexylaminsalt af 3-carbamoyloxymethyl-7-methoxy-7 β-(D-5-trichlorethoxycarbo-nylamino-5-carboxyvaleramido)-3-cephem-4-carboxylsyre i 17 ml methylenchlorid ved 0-1 °C behandles med 0,294 ml chlormethylbenzylether i 5 ml methylenchlorid ved til-25 sætning i løbet af 52 minutter. Efter 4 timer filtreres reaktionsblandingen, og filtratet behandles med 2 x 5 ml kold mættet natriumbicarbonatopløsning, 2 x 10 ml isvand og tørres derefter over natriumsulfat og filtreres. Filtratet inddampes, og remanensen opslæmmes i 15 ml 30 isopropylether, hvorefter det ønskede produkt opsamles på en tragt (726 mg).
35
DK 158672 B
36 B. Dimethoxymethylester af 3-carbamoyloxymethyl-7-meth-oxy-7fl-CD-5-trichlorethoxycarbonylamino-5-carboxyvale-ryl-(2-thienylacetyl)-amino]-3-cephem-4-carboxylsyre 5 En opløsning af 0,20 g dibenzyloxymethylester i 1,6 ml methylenchlorid behandles med 0,222 ml a-pinen, 0,20 ml ethyl-N-trimethylsilylcarbamat og 0,115 ml 2-thienylace-tylchlorid ved kogepunktet i 23 timer. Reaktionsblandingen ekstraheres med 2 ml af en iskold opløsning indehol-10 dende 2,5% natriumbicarbonat og 10% natriumchlorid, og methylenchloridopløsningen vaskes med 2 ml mættet natri-umchloridopløsning, tørres over magnesiumsulfat, filtreres, og filtratet sættes til 50 ml kold hexan, hvorved fås ovennævnte produkt som et bundfald, vægt 0,161 g.
15 C. Benzyloxymethy1-3-carbamoyloxymethyl-7-methoxy-70 - (2-thienylacetamido-3-cephem-4-carboxylat
En opløsning af imidet fra ovennævnte trin B (0,150 g) i 20 4,1 ml dioxan indeholdende 0,20 ml eddikesyre behandles med 0,86 g aktivt zink i 2% time. Reaktionsblandingen filtreres, og remanensen på filteret vaskes med 20 ml chloroform. Det forenede filtrat vaskes med 2 x 20 ml vand, 10 ml kold mættet bicarbonatopløsning, 10 ml mættet 25 natriumchloridopløsning, hvorefter det tørres over magnesiumsulfat og filtreres. Filtratet inddampes til dannelse af 0,143 g remanens indeholdende benzyloxyme-thylester.
30 D. 3-Carbamoyloxymethy1-7-methoxy-7fl-(2-thienylacetamido )-3-cephem-4-carboxylsyre 25,4 mg benzyloxymethylester opløses i 0,25 ml af en opløsning af 9 ml methanol og 1 ml koncentreret saltsyre.
35 Efter 1 time er reaktionen afsluttet, og produktet isoleres ved inddampning i vakuum. Udbytte 44%.

Claims (6)

1. Fremgangsmåde til fremstilling af 3-substitueret-me-5 thyl-7-methoxy-70-(2-substitueret-amido)-3-cephem-4-carb-oxylsyrer med den almene formel: OCH , 3 \ R1-NH -"-] 10 i-N Λ-CH2A Cr COOH 15 i hvori R betyder 2-thienylacetyl, 2-fury1acetyl, phenyl-acetyl, a-azidophenylacetyl eller phenylthioacetyl, A er hydrogen, acetyloxy eller carbamoyloxy eller alkalimetalsalte af de frie syrer, kendetegnet ved, at 20 en forbindelse med formlen: och3 NHR2 0 S H-C-(CH2)3-C-NH--j
25 C00R3 ^_N -CH2A
0 I 4 COOR 4 30 hvor A har den ovenfor angivne betydning, R er hydrogen, 2 et alkalimetalatom eller en esterrest, R er en alkoxy- 3 carbonylgruppe, som eventuelt er halogeneret, og R er en esterrest, behandles med et acylhalogenid med formlen R - X X, hvori R har den ovenfor angivne betydning, og X er 35 halogen, i nærvær af bis-(trimethylsilyl)-trifluoracet-amid, N-trimethylsilyl-trifluoracetamid, N-trimethylsi-lyl-phthalimid, ethyl-N-trimethylsilylcarbamat eller N- DK 158672B trimethylsilyl-benzensulfonamid, hvorefter 5-alkoxycarbo-nylamino-5-carboxyvalerylgruppen i den dannede forbindelse med formlen 5 NHR2 0 OCH- H-C-(CH,),-C-M |l/ \ COOR3 ki I // CV
10 I 4 ' COOR 12 3 4 hvori R , R , R , R og A har den ovennævnte betydning, 15 omsættes til fraspaltning af gruppen NHR2 H-C-(CH2)3-CO- 20 | COOR3 2 3 hvor R og R har den ovenfor angivne betydning, hvorpå om ønsket en dannet ester på kendt måde overføres i den 25 tilsvarende frie syre eller et alkalimetalsalt deraf.
2. Fremgangsmåde ifølge krav 1, kendetegnet ved, at fraspaltning af gruppen
30 NHR2 H-C-(CH2)3-C0- COOR3 35 2 3 hvor R og R har den angivne betydning, sker ved behandling med en trihalogenalkansyre, fortrinsvis trifluor-eddikesyre, eller ved katalytisk hydrogenering.
DK444478A 1970-06-16 1978-10-06 Fremgangsmaade til fremstilling af 3-substitueret-methyl-7-methoxy-7beta-(2-substitueret-amido)-3-cephem-4-carboxylsyrer og alkalimetalsalte deraf. DK158672C (da)

Applications Claiming Priority (23)

Application Number Priority Date Filing Date Title
GB2915870 1970-06-16
GB320473A GB1348985A (en) 1970-06-16 1970-06-16 Esters of cephalosporin compounds
GB2915870 1970-06-16
GB3341570 1970-07-09
GB3341570 1970-07-09
GB4655670 1970-09-30
GB4655670 1970-09-30
GB5873170 1970-12-10
GB5873170 1970-12-10
GB329671 1971-01-27
GB329771 1971-01-27
GB329771 1971-01-27
GB329871 1971-01-27
GB329871 1971-01-27
GB329671 1971-01-27
GB417971 1971-02-08
GB417971 1971-02-08
GB448071 1971-02-11
GB448071 1971-02-11
GB447971 1971-02-11
GB447971 1971-02-11
GB558871 1971-02-26
GB558871 1971-02-26

Publications (3)

Publication Number Publication Date
DK444478A DK444478A (da) 1978-10-06
DK158672B true DK158672B (da) 1990-07-02
DK158672C DK158672C (da) 1991-01-14

Family

ID=57538775

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
DK291871A DK157320C (da) 1970-06-16 1971-06-15 Analogifremgangsmaade til fremstilling af 3-carbamoyloxy-methyl-7alfa-methoxy-7beta-(2-thienylacetamido)-3-cephem-4-carboxylsyre eller salte deraf
DK444478A DK158672C (da) 1970-06-16 1978-10-06 Fremgangsmaade til fremstilling af 3-substitueret-methyl-7-methoxy-7beta-(2-substitueret-amido)-3-cephem-4-carboxylsyrer og alkalimetalsalte deraf.

Family Applications Before (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
DK291871A DK157320C (da) 1970-06-16 1971-06-15 Analogifremgangsmaade til fremstilling af 3-carbamoyloxy-methyl-7alfa-methoxy-7beta-(2-thienylacetamido)-3-cephem-4-carboxylsyre eller salte deraf

Country Status (18)

Country Link
US (1) US4297488A (da)
JP (3) JPS5946954B2 (da)
AR (1) AR197864A1 (da)
AT (1) AT321457B (da)
CA (1) CA965089A (da)
CH (1) CH581660A5 (da)
CS (3) CS194155B2 (da)
DE (1) DE2129675C3 (da)
DK (2) DK157320C (da)
EG (1) EG10530A (da)
FI (2) FI56686C (da)
GB (2) GB1348985A (da)
HK (1) HK20878A (da)
IE (1) IE35656B1 (da)
IL (1) IL36989A (da)
NO (2) NO145883C (da)
PH (1) PH11550A (da)
YU (1) YU35602B (da)

Families Citing this family (33)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
SE428022B (sv) * 1972-06-29 1983-05-30 Ciba Geigy Ag 7beta-amino-cefam-3-on-4-karboxylsyraforeningar till anvendning for framstellning av cefalosporinderivat
AR206201A1 (es) * 1972-06-29 1976-07-07 Ciba Geigy Ag Procedimiento para la obtencion de compuestos de acido 7beta-amino-3-cefem-3-01-4-carboxilico0-substituidos
AR206204A1 (es) * 1972-10-16 1976-07-07 Lilly Co Eli Procedimiento para la preparacion de 7-acilamido-7-alcoxicefalosporinas
US3962232A (en) * 1973-11-05 1976-06-08 Eli Lilly And Company 7-methoxycephalosporins
GB1449420A (en) * 1973-11-26 1976-09-15 Sankyo Co 7alpha-methoxycephalosporing derivatives
NL7416665A (nl) * 1973-12-21 1975-06-24 Glaxo Lab Ltd Werkwijze ter bereiding van cefalosporineverbin- dingen.
DK151027C (da) * 1974-08-09 1988-03-07 Takeda Chemical Industries Ltd Analogifremgangsmaade til fremstilling af 7alfa-methoxy-7beta-(2-aminothiazol-4-ylacetamido)cephalosporiner eller farmaceutisk acceptable salte eller estere deraf
AU512383B2 (en) * 1975-11-21 1980-10-09 Merck & Co., Inc. Thinenamycin derivatives
DK523276A (da) * 1975-11-21 1977-05-22 Merck & Co Inc Fremgangsmade til fremstilling af n-acylderivater af thienamycin
CH632508A5 (de) * 1975-11-21 1982-10-15 Merck & Co Inc Verfahren zur herstellung von neuen estern des n-acylierten thienamycins.
US4368198A (en) * 1976-03-03 1983-01-11 Sumitomo Chemical Company Limited Cephalosporins
JPS5321191A (en) * 1976-08-10 1978-02-27 Shionogi & Co Ltd 7-arylmalonamidocephem derivatives
US4101661A (en) 1977-06-03 1978-07-18 Warner-Lambert Novel antibacterial amide compounds and process means for producing the same
JPS6052713B2 (ja) * 1978-04-11 1985-11-20 三共株式会社 ７−メトキシセフアロスポリン化合物、その製法及びその化合物を主成分とする抗菌剤
JPS5583791A (en) * 1978-12-18 1980-06-24 Meiji Seika Kaisha Ltd 7-methoxycephalosporin derivative and its preparation
GB2161803B (en) * 1981-07-25 1986-07-23 Beecham Group Plc Intermediates for b-lactam antibiotics
US4623645A (en) 1983-04-18 1986-11-18 Merck & Co., Inc. Substituted cephalosporin sulfoxides as anti-inflammatory and antidegenerative agents
US5132301A (en) * 1983-05-02 1992-07-21 Merck & Co., Inc. Substituted cephalosporin sulfones as anti-inflammatory and anti-degenerative agents
EP0168177A3 (en) * 1984-06-28 1987-04-01 Pfizer Limited Cephalosporin antibiotics
GB8531202D0 (en) * 1985-12-18 1986-01-29 Pfizer Ltd Cephalosporin antibiotics
JPS6466192A (en) * 1987-09-07 1989-03-13 Meiji Seika Kaisha Beta-lactams and their preparation
JPH04118219U (ja) * 1991-03-27 1992-10-22 石川島播磨重工業株式会社 横押しベンダ−の自動送り装置
US6159706A (en) * 1997-12-23 2000-12-12 Newbiotics, Inc. Application of enzyme prodrugs as anti-infective agents
US7662955B2 (en) * 2003-03-20 2010-02-16 Orchid Chemicals And Pharmaceuticals Ltd. Process for the preparation of cefoxitin
WO2004083217A1 (en) * 2003-03-20 2004-09-30 Orchid Chemicals & Pharmaceuticals Ltd An improved process for the preparation of cefoxitin
WO2006006040A2 (en) * 2004-07-05 2006-01-19 Orchid Chemicals & Pharmaceuticals Limited News diamine salts of cephalosporin antibiotics and their preparation
ITMI20071951A1 (it) * 2007-10-09 2008-01-08 Acs Dobfar Spa Processo per la produzione di 7-metossi-3-desacetilcefalotina
CN101429538B (zh) * 2008-12-12 2011-05-25 河北九派制药有限公司 7-α-甲氧基-3-去乙酰基头孢噻吩苄星盐的制备方法
CN102391290B (zh) * 2011-05-31 2013-01-02 深圳信立泰药业股份有限公司 头孢西丁酸无水结晶物、其制备方法及由其制备头孢西丁钠的方法
CN104230956B (zh) * 2012-04-24 2016-07-06 齐鲁安替（临邑）制药有限公司 一种头孢西丁的制备方法
CN102633819A (zh) * 2012-04-24 2012-08-15 齐鲁安替（临邑）制药有限公司 一种头孢西丁的制备方法
CN105385746A (zh) * 2015-11-02 2016-03-09 四川清山绿水实业发展有限公司 一种头孢西丁酸的合成方法
CN111217836A (zh) * 2020-03-20 2020-06-02 侯二美 一种头孢西丁的制备方法

Family Cites Families (16)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE1960643A1 (de) * 1968-12-12 1970-07-02 Ciba Geigy Verfahren zur Herstellung neuer Derivate der 7-Aminocephalosporansaeure
US4173702A (en) * 1969-08-12 1979-11-06 Eli Lilly And Company 7-(5-Amino-5-carboxyvaler-amido)-3-(carbamoyloxymethyl)-7-methoxy-3-cephem-4-carboxylic acid
BE754693A (fr) 1969-08-12 1971-02-11 Lilly Co Eli Nouvel antibiotique et procede pour le preparer
US3914157A (en) * 1970-03-13 1975-10-21 Merck & Co Inc Preparation of antibiotics by fermentation
US3719563A (en) * 1970-08-03 1973-03-06 Lilly Co Eli Process for producing 7-(5-amino-5-carboxyvaleramido)-7-methoxycephalosporamic acid
US3687947A (en) * 1970-10-29 1972-08-29 Lilly Co Eli Method for recovery of cephaloridine
US3985742A (en) * 1971-12-01 1976-10-12 Merck & Co., Inc. Process for preparing 3-hydroxymethyl cephalosporins
US3801464A (en) * 1972-02-09 1974-04-02 Lilly Co Eli Antibiotic a16886 and process for production thereof
USB526096I5 (da) 1972-06-07 1976-02-03
US3920639A (en) * 1973-04-23 1975-11-18 Squibb & Sons Inc Cyanomethylthioacetyl-7-methoxycephalosporins
US3962232A (en) * 1973-11-05 1976-06-08 Eli Lilly And Company 7-methoxycephalosporins
GB1449420A (en) * 1973-11-26 1976-09-15 Sankyo Co 7alpha-methoxycephalosporing derivatives
US4017487A (en) * 1973-12-01 1977-04-12 Merck & Co., Inc. 7β-(D-5-amino-5-carboxyvaleramido)-7-methoxy-3-substituted-3-cephem-4-carboxylic acid antibiotics
US4036696A (en) * 1975-01-14 1977-07-19 Merck & Co., Inc. Preparation of antibiotics by fermentation
US4005081A (en) * 1975-09-11 1977-01-25 E. R. Squibb & Sons, Inc. 3-Heterothiomethyl-7α-methoxy-7β-tetrazolylmethylthioacetamido-3-cephem derivatives
US4165429A (en) * 1976-06-28 1979-08-21 Yamanouchi Pharmaceutical Co., Ltd. 7α-METHOXY-CEPHALOSPORANIC ACID DERIVATIVES

Also Published As

Publication number Publication date
GB1348984A (en) 1974-03-27
IL36989A (en) 1977-08-31
NO145884B (no) 1982-03-08
JPS5946954B2 (ja) 1984-11-15
DK157320B (da) 1989-12-11
CH581660A5 (da) 1976-11-15
JPS5677284A (en) 1981-06-25
FI57954B (fi) 1980-07-31
PH11550A (en) 1978-03-31
FI56686C (fi) 1980-03-10
FI56686B (fi) 1979-11-30
DK444478A (da) 1978-10-06
NO145884C (no) 1982-06-16
DK158672C (da) 1991-01-14
IL36989A0 (en) 1971-08-25
EG10530A (en) 1976-12-31
CS194155B2 (en) 1979-11-30
AR197864A1 (es) 1974-05-15
JPS5677285A (en) 1981-06-25
CS194177B2 (en) 1979-11-30
GB1348985A (en) 1974-03-27
YU148071A (en) 1980-09-25
YU35602B (en) 1981-04-30
JPS5946956B2 (ja) 1984-11-15
FI57954C (fi) 1980-11-10
DE2129675B2 (de) 1980-10-30
NO145883C (no) 1982-06-16
HK20878A (en) 1978-04-28
NO145883B (no) 1982-03-08
CA965089A (en) 1975-03-25
JPS5677286A (en) 1981-06-25
CS194176B2 (en) 1979-11-30
FI772428A (da) 1977-08-12
DE2129675A1 (de) 1971-12-23
JPS5946955B2 (ja) 1984-11-15
AT321457B (de) 1975-04-10
IE35656L (en) 1971-12-16
DE2129675C3 (de) 1981-07-09
US4297488A (en) 1981-10-27
IE35656B1 (en) 1976-04-14
DK157320C (da) 1990-05-07

Similar Documents

Publication Publication Date Title
DK158672B (da) Fremgangsmaade til fremstilling af 3-substitueret-methyl-7-methoxy-7beta-(2-substitueret-amido)-3-cephem-4-carboxylsyrer og alkalimetalsalte deraf.
DK153324B (da) Analogifremgangsmaade til fremstilling af o-substituerede 7beta-acylamino-3-cephem-3-ol-4-carboxylsyre-forbindelser eller salte deraf
CA1115699A (en) Lithium pseudomonate and its preparation
JPS5934714B2 (ja) ７β−アミノ−セフアム−３−オル−４−カルボン酸化合物または相当する３−θ−エステルの製法
NL192205C (nl) Werkwijze voor het bereiden van 7-amino-3-(Z-1-propenyl)-3-cefem-4 -carbonzuur en esters daarvan.
US3780031A (en) Process for preparing cephalosporin compounds
US4014873A (en) Process for the production of 7-acylamidocephalosporins
US4058661A (en) 7-Diacyl cephalosporins
SU886747A3 (ru) Способ получени цефалоспориновых соединений
FI75165B (fi) Foerbaettrat foerfarande foer framstaellning av penicillansyraklormetylestrar.
NO157143B (no) Fremgangsmaate for fremstilling av karbapen-2-em-derivater.
SU1277897A3 (ru) Способ получени 1,1-диоксо-6-бром(или-6,6-дибром)пеницилланоилоксиметиловых эфиров 6-(2-азидо-2-фенилацетамидо)пенициллановой кислоты
Archer et al. Chemistry of Cephalosporin Antibiotics. VI. 1 Carbamate Formation in Aqueous Bicarbonate Solutions of 7-ACA
SU1575940A3 (ru) Способ получени карбацефалоспориновых соединений
US3157648A (en) Derivatives of 7-aminocephalo-sporanic acid
ITMI991120A1 (it) Processo per la sintesi di derivati beta-lattamici
US3971780A (en) Thio-β-lactam cephalosporins
US4053286A (en) Process for the preparation of cephalosporin antibiotics
US4107432A (en) 7-Diacylimido cephalosporins
US3987040A (en) 3-substituted methyl-7-acylamino-7-methoxy-2-cephem-4-carboxylic acid and its esters
US4119775A (en) 4-Oxo-1-pyridinyl cephalosporin derivatives
EP0135683B1 (en) Method for production of cephalosporin compounds
KR100292568B1 (ko) 축합카르바페넴유도체의제조방법
EP0076066A1 (en) Penicillin derivatives
US3715347A (en) Process for acetylation

Legal Events

Date Code Title Description
AHS Application shelved for other reasons than non-payment
PUP Patent expired