DK157875B - Vandoploeselige rifampicinderivater, fremgangsmaade til fremstilling deraf og farmaceutisk praeparat indeholdende saadanne forbindelser - Google Patents

Description

i

DK 157875 B

Rifarapicin, dvs. 3-[[(4-metyl-l-piperazinyl)-imino]-metyl]-rifamycin er et velkendt antibakterielt middel som udviser bredt antibakterielt spektrum og bruges verden over som det middel der vælges først til behandling af tuberkulose 5 og i mange lande også til behandling af andre infektionssygdomme .

Dosisformer som indeholder rifampicin og står til rådighed på markedet er begrænset til sådanne som er indrettet til oral indgift (kapsler og saft), se Martindale "The Extra-1 q pharmacopeia", 28. udgave, The Pharmacological Press, London 1982, side 1582, og i nogle lande tillige til flebopræpara-ter til intravenøse infusioner (se G. Perna og F. Natale "Intravenous use of rifampicin in tuberculous diseases",

Clin. Ter. 9J), 63-73, 1979). Flebopræparaterne har imidlertid 12 kun været anvendt klinisk til behandling af alvorligt syge patienter og den intravenøse behandling ændres til oral indgift så hurtigt som muligt for at undgå den eventuelle udvikling af uønskede bivirkninger som står i forbindelse med denne indgiftsvej.

2q Der er for tiden ikke noget intramuskulært præparat af dette lægemiddel til rådighed. Opløseligheden af rifampicin i forskellige vandige medier, ved en pH-værdi som er forenelig med de krav der må stilles til at præparaterne kan tåles lokalt (3,5 < pH < 7,5) er faktisk under 20 mg/ml (se 25 K. Florey, Analytical Profiles of Drug Substances, bind 5, side 489, Academic Press, New York, 1976) være sig i nærværelse eller fravær af excipienter og/eller co-opløsningsmid-ler, mens den opløselighed der behøves for et intramuskulært præparat bør være på omkring 100 mg/ml. Muligheden for at 2Q indgive et lægemiddel intramuskulært har imidlertid mange fordele eftersom dette faktisk vil tillade indgift selv når oral terapi ikke er anvendelig (fx når patienten dårligt tåler lægemidlet indgivet ad den gastrointestinale vej, eller i pædiatrien), og ville også give hurtigere og tillige mere pålidelige (fordi der ikke sker påvirkninger i kraft af den forskellige absorption af den gastrointestinale vej) blodkoncentrationer af det indgivne lægemiddel. Betydningen af dis-

DK 157875 B

2 se fordele i det foreliggende tilfælde vil forstås bedre når man tænker på at rifampicin er et livsreddende lægemiddel.

Det har nu vist sig at en bioreversibel kemisk modificering af rifampicinmolekylet, nærmere betegnet udskiftning 2 af 8-hydroxygruppen eller 8- og 4-hydroxygrupperne i rifampi-cin-skelettet med en eller to lavere alkanoyloxygrupper eller lavere alkoxykarbonyloxygrupper fører til hidtil ukendte rif-ampicinderivater som har høj vandopløselighed. På grund af tilstedeværelse i dyriske væv, hovedsageligt i blodet og i 1q leveren, af uspecifikke acylesteraser med evne til at spalte forskellige esterbindinger regenereres disse derivater let til rifampicin in vivo. Vandopløseligheden af disse hidtil ukendte rifampicinderivater gør de omhandlede, hidtil ukendte forbindelser egnede til at indgå i præparater til 12 intramuskulær anvendelse. Skønt vandige præparater af disse hidtil ukendte rifampicinderivater, der har nedenstående formel I, er særlig værdifulde til intramuskulær anvendelse, kan forbindelsen imidlertid også bruges til andre indgiftsveje hvor der behøves et vandoplseligt rifampicin. Som eksem-2Q pel kan nævnes at vandige præparater af disse forbindelser kan bruges med fordel til pædiatriske smådråber til oral indgift eller til intraartikulær indgift ved behandling af rheumatoid arthritis og beslægtede patologiske tilstande. Faktisk er det for nylig blevet rapporteret at nogle rifamycinsalte 25 har vist sig at være meget nyttige ved denne terapi (I. Caruso et al, Annals of Rheumatic Diseases, 1982, bind 4JL, side 232-236) .

Den foreliggende opfindelse angår således hidtil ukendte rifampicinderivater med den almene formel ^ Λ 33 32 31 30 36 35 CH- CH, CH, CH ’coo I 3 I 3 I 3 γ5 24 22 20 j|19

\ e oh Ah I

3 0&» OH H* S" 1 35 \ Γ Ύ T O 3 y28 °v« ^ 3

13 J

DK 157875 B

3 hvor R betegner en C-^_3 alkylgruppe eller C^_3 alkoxygruppe og R·*" et hydrogenatom eller en alifatisk acylgruppe indeholdende 2-4 kulstofatomer.

Opfindelsen angår tillige en fremgangsmåde til frem-5 stilling af disse forbindelser og farmaceutiske præparater indeholdende forbindelserne, navnlig flydende farmaceutiske præparater egnet til intramuskulær, intraartikulær og oral indgift.

I nærværende beskrivelse menes der med udtrykkene alkylgrupper og C^_3 alkoxygrupper ligekædede eller for-1 o grenede alkyl- og alkoxygrupper indeholdende 1-3 kulstofatomer, dvs. metyl, ætyl, propyl, isopropyl, metoxy, ætoxy, pro-poxy og isopropoxy, mens der med benævnelsen en alifatisk acylgruppe med 2-4 kulstofatomer i det væsentlige tænkes på acetyl-, propionyl-, butyryl- og isobutyryl-grupperne.

15 En foretrukken gruppe forbindelser ifølge opfindelsen er de forbindelser med formel I hvor R er metyl, ætyl eller 1 ætoxy og R hydrogen eller acetyl. En ganske særlig foretrukken gruppe forbindelser ifølge"opfindelsen er de forbindelser med formel I, hvor R er metyl og R^ hydrogen eller acetyl.

20 Forbindelserne ifølge opfindelsen kan ikke fremstilles i acceptable udbytter og fri for uønskede biprodukter ved direkte acylering af rifampicin, og ingen af de forsøg som udførtes med ændring af acyleringsmidlerne og reaktionsbetingelserne gav de ønskede resultater. Der måtte undersøges en 25 ny syntesevej til fremstilling af disse forbindelser, og det førte til at der blev tilvejebragt en fremgangsmåde som er vist summarisk i nedenstående reaktionsskema I, hvor symbolet Me betegner -CH3, dvs. en metylgruppe: 30 35

DK 157875 B

4 SKEMA I Me Me

Me I Λ I · RCOX v

MeCOO ^>1 OH 0^1Me -;-»

5 „ I OH 0 ( trm A

MeO Me^XjlH

J °^V|1^CH=N-]/ 'n-CH3 0__I 0

Me Ο II

10

Me Me mp T T ll · reduktion -> MeCOO \· > OH 0^ JL Me ->

J^r OCR 0 Y^Me trin B

1 5 MeO Me^O

J 0^γ^'γ^'0Η=Ν-/ \-CH3 0___ 0 ^ ^ I hi

Me 0 20 Me j^e -Ϊ MeCOO OH 0 ———-Ϊ

Me I 9911 9H β trin C

Me0 O> (eventualtrin) 25 X XΧΧΓ αλ ^ CH=N-N N-CH3 0--j OH ^ ^

Me 0 I (R1 =H) 3 0 Me Me

Me · I · -> MeCOO OH 0 >1^

I OCR OH I MeO MeJjjJl^NH

35 J XX /A

0-^^‘*'''>p^CH=N--N N-CH3 0__j OR1 ^ ^

Me 0 I (R1 φ H)

DK 157875B

5 Nærmere betegnet fremstilles forbindelserne ifølge opfindelsen ud fra quinonen (den oxyderede form) af rifampi-cin (forbindelsen med formel II), der i henhold til ovenstående trin A omsættes med et passende udvalgt acylhalogenid 5 med den almene formel RCOX, hvor R har den foran angivne betydning og X betegner klor eller brom. Molforholdet mellem de to reaktanter er ikke nogen kritisk parameter for reaktionen, idet der opnås lige så gode resultater også når de to reaktionsdeltagere bruges i ækvimolære mængder. Det foretræk-1Q kes imidlertid at bruge et svagt overskud af acylhalogenidet i forhold til rifampicin-substratet (et molært overskud på omkring 15-25%).

Reaktionens første trin udføres hensigtsmæssigt i et polært eller ikke-polært aprotisk organisk opløsningsmiddel 12 som ikke indgriber i ugunstig retning i reaktionens forløb. Eksempler på et sådant opløsningsmiddel er tetrahydrofuran, dioxan, metylenklorid, kloroform, kulstoftetraklorid og lignende opløsningsmidler.

Der behøves et hydrogenhalogenid-bindende middel til 2Q at forbinde sig med det hydrogenhalogenid der dannes under reaktionen. Til dette formål bruges der i almindelighed en tertiær organisk nitrogenbase, mindst i ækvimolær mængde med acylhalogenid-reaktanten. Som hydrogenhalogenid-bindende midler kan der hensigtsmæssigt bruges trialkylaminer med korte 22 alkylkæder, fx triætylamin, pyridin, pikoliner, kollidiner og lignende forbindelser. Når der bruges pyridin, pikoliner eller kollidiner kan de bruges i stort overskud og virker dermed også som reaktions-opløsningsmiddel.

Dette reaktionens første trin kan gennemføres ved en 3Q temperatur mellem -25°C og stuetemperatur, men fortrinsvis mellem -20°C og +10°C og særlig foretrukket mellem -5°C og 5°C.

I almindelighed er reaktionen fuldført i løbet af nogle få timer; i alle tilfælde kan reaktionens forløb let over-22 våges ved at man holder øje med at udgangsforbindelsen med formel II forsvinder, hvilket kan ske ved tyndlagskromatogra-fering.

DK 157875 B

6 Når dette første trin er fuldført kan mellemproduktet med formel III udvindes fra reaktionsblandingen ved konventionel teknik, hvilket indebærer fraskillelse af det kvater-nære ammoniumsalt ved filtrering, koncentrering af filtratet 5 til et lille rumfang og udfældning af råproduktet med formel III ved tilsætning af et organisk opløsningsmiddel i hvilket det acylerede mellemprodukt III er langt mindre opløseligt end udgangsquinonen II. Eventuelt kan det dannede mellemprodukt renses yderligere ved krystallisation fra et passende 1 q krystallisations-opløsningsmiddel.

I henhold til reaktionsfølgens andet trin, trin B, reduceres det vundne 8-acylquinon-mellemprodukt med formel III til den tilsvarende hydroquinonform, hvorved man vinder en forbindelse med formel I hvor R har en af de ønskede be-^ tydninger og er et hydrogenatom. Reduktion af quinonen til hydroquinonen udføres ved hjælp af askorbinsyre, der er kendt i rifamycinkemien for at være i stand til at foretage en sådan reduktion uden at påvirke andre grupper i rifamycin-molekylet. Reduktionsreaktionen, som bruger nogle få minutter 2Q til at blive fuldført, udføres hensigtsmæssigt ved stuetemperatur. Reaktionen udføres i almindelighed i nærværelse af vand og et passende organisk opløsningsmiddel som er blandbart eller kun delvis blandbart med vand, men som ikke påvirkes af tilstedeværelsen af det milde reduktionsmiddel. Hvis 2^ der ved reaktionens afslutning er en homogen fase til stede tilsættes der et polært organisk opløsningsmiddel som er u-blandbart med vand for at opnå et tofasesystem, og derefter fraskilles den vandige fase og den vundne forbindelse med formel I. udvindes ved at man koncentrerer den vandige fase 2Q til et ringe rumfang og udfælder slutproduktet derfra ved tilsætning af et ikke-opløsningsmiddel; denne fremgangsmåde kan derefter gentages indtil der er vundet et rent produkt.

Hvis der ønskes en forbindelse med formel I, hvor R"'" er forskellige fra hydrogen, kan den vindes ud fra den tilsvarende 25 forbindelse I, hvor R^ er hydrogen og som er vundet på den ovenfor beskrevne måde, ved behandling med et passende acyl-halogenid med den almene formel R^X', hvor R"*- er en alifatisk acylgruppe med 2-4 kulstofatomer og X' kan være klor eller

DK 157875 B

7 brom.

De reaktionersbetingelser som er egnede til acylerin-gen i trin C svarer mere eller mindre til dem der er beskrevet foran for trin A's vedkommende. Også i dette tilfælde 5 fordrer reaktionen anvendelse af et hydrogenhalogenid-bin-dende middel og et polært aprotisk organisk opløsningsmiddel som ikke indgriber ugunstigt i reaktionens forløb. Derefter udvindes slutproduktet ved konventionel teknik og renses ved krystallisation fra et passende krystallisations-opløsnings-1 q middel.

Nogle eksempler tjener til nærmere belysning af de omhandlede forbindelser og deres fremstilling.

Eksempel 1 1 5 1.4- Dideoxy-l,4-dihydro-3-[[(4-metyl-l-piperazinyl)-imino]- metyl]-1,4-dioxorifamycin-8-acetat_ 3,5 ml (ca. 25 mmol) triætylamin sættes ved 0°C under omrøring til en opløsning af 16,4 g (20 mmol) 1,4-dideoxy- 1.4- dihydro-3-[[(4-metyl-l-piperazinyl)-imino]-metyl]-1,4- 20 dioxorifamycin i 500 ml vandigt tetrahydrofuran. Derefter tilsættes der dråbevis ved -5°C under omrøring en opløsning af 1,78 ml (25 mmol) acetylklorid i 150 ml vandfrit tetrahydrofuran. Reaktionsblandingen henstår derefter i 2 timer ved -50°C og i yderligere 3 timer ved stuetemperatur. Den resul-25 terende suspension filtreres og filtratet koncentreres til et ringe rumfang under vakuum ved 35°C. Ved tilsætning af n-hexan udskiller der sig et fast stof som opløses ved filtrering og opløses i et ringe rumfang ætylacetat. Der tilsættes derefter en blanding af æter og n-hexan 1:4 (rumfang) 30 til ætylacetatopløsningen, og det faste stof som udskiller sig opsamles ved filtrerihg, vaskes med n-hexan og omkrystalliseres fra ætylacetat; der vindes 15,5 g (90% udbytte) af den i overskriften angivne forbindelse. De i omstående tabel I og II anførte IR- og NMR-spektre bekræfter den antagne 35 struktur af forbindelsen.

8

DK 157875B

Eksempel 2 og 3

Ved at gå frem på i det væsentlige samme måde som i eksempel 1, men under anvendelse af vedkommende acylklorid, fremstilles følgende forbindelser: 2) l,4-Dideoxy-l,4-dihydro-3-[[(4-metyl-l-piperazinyl)-imino]-metyl]-1,4-dioxorifamycin-8-propanoat i et udbytte på 82% og 3) 1,4-dideoxy-l,4-dihydro-3-[[(4-metyl-l-piperazinyl)-imino]-metyl]-1,4-dioxorifamycin-8-ætylkarbonat i et udbytte på 65%.

De fysisk-kemiske data for forbindelsen ifølge eksempel 2 og 3, der også er anført i omstående tabel I, II Og III, bekræfter de antagne strukturer.

15 20 25 30 35

DK 157875 B

9 H (I) H· CD H· CD H- DJ 5 ^

tf ?THi ?CHi ?THi Hi Q ØJ

7 cn ® t n ® cn Ό ^ F cr ' · I—1 · I—1 · I—1 Hl tT m w iO κΩ 03 0 Η· ·°.

U U) CD ΙΟφ H CD ti g H

1 & S

F 01 I

H H CD 1

CD H

3 3 3 H

Π) ----CD CD Sti 5 8 ώ å ” I -H i

3 a ΙΟ (jO CD CD

O “n 9 a “ 5

S J _____O S S

m UJ LO U) U) < 0 3 3 H1 n, O to b g co cl ST 00 00 CO "~J K Η 0) (I) ·. Q) S o o o O to H .. rt-

-—--μ- X1 Η· ØJ

CD ΌΌΌΌΟ

n HHHHCO O CD . Qj O

Dj oooou1, to a a II W Hl S 3 , ir o a g 1

LJ. ØJ CD H

--3 —- P, h > •7 co co to to O p.

Ό σ σ σ σ ω ,nn

O O O O U1 O

ØJ JL 3 t) Μ, 9 H- ? A 3 ØJ° CD CO ^2.

1+ ui g ^ ι-r) ~~~~~——————— ~ CD H·

Jr uiuiwwo F <l 2 to co to CO 2 F n

3 ooooffi CD OM

F O O O O 3 F O

p. QJ ID ( J

a p h -—---— H- c+ co

l-rt I—1 1—1 I—’ I—1 & & μ. I

ra σ σ σ σ 3 ι Γ, ό Η VO^OUDOOHP- (Dj a otnuiOiF CD Μ Ό i®--— H s ® £ £ £ £ h| g g tn σ cn on ui H F· *JJ 3 1¾ uiuimuipj 3 H· CD Pi 3 £ -—---(¾ ^ 7 I I | CO CO <l , F ui o Q 0

3 0 0 US

η OO 0) Hi H, __I___rt 0 O HMHI οΟΛ- F ό ^0 —) Q 00 3 ι. .ι

O O'i'j-J II 1 Q t*1 F

a uioui O0J3 00 S -__---O 0 a t-i 2. HHHieJCH1 0* F to η μ» OHO μμ· CD 4^ to vo I 3 £ £

t-i 000 O F F

ι iQ a g P__øj cd

Ο Η Η Η H <: 3 Hi in rrT

f tjtjCilonQd ‘S S? CD ^^wuiJian 22 |_1 OOUlOOflJ ^3 in F F F Η p. μ- μ· rl σ σ σι σι O c-hHi o° ~o -ο σι σ *c=*M 0 0 oocnuijl 3h

--- Ό iQ

Η Η Η Η < μ· CD

σι σ< σι σ Π ο ό ό σ (ο η rj. m ο ο υι ο II £ 2.

Ο 3 F

-- I 0)

HH HH HH HH ο iQCD

σσσσσσσσ Q da

^^ic^oott^ooj^^o II i S

οοοσοσοο Ο «Η a hj

03 0 CD

I I 1 f _ Id

Ο I

Η K 1

Ui

DK 157875 B

10

Tabel II

UV-VIS-spektraldata for forbindelserne ifølge eksempel 2 og eksempel 3 i vandig puffer pH 7,38 i sammenligning med de tilsvarende data for udgangs-rifampicin-quinonen med formel g II er angivet i nedenstående tabel II hvor br står for bred og sh for skulder. Disse spektre opnåedes med et Perkin-Elmer ‘ spektrofotometer model 320.

1%

Forbindelse R λ (nm), E, ° lem____________ 10 formel II 220(382) 260(341) 332(343) 385(sh) 530(71) eksempel 2 -CH^ 220(307) 265(314) 332(281) 445(80) 550(br) eksempel 3 -O-CELjCE^ 220(312) 265(309) 332(261) 440(79) 550(br) 15 20 25 30 35

DK 157875 B

11 a οι tr ti fæ a a a a a a a] /Ta 1 r+ η η h a h 1-3 en 11111a 3/0 ro a h 3· o a ro to to Η Η H O 0/3 3 I H iQ (jQ IC?

æ 01 yi B vi O r+ / O' 3 2 p H 2 (D

II II H H O / · _ g S H- CD 2 H

p / 3 a Φ 3 a

ha fD I CL ι£) Η I H

I Hi oi ro a οι h α οι σ tr —-------ro 73 3 3 i ό h 33-33 o' s w. n j, « ® z æ o' 3 ro ro cl & o« cl oi 3 o ro o cl g i* hiQQjOj Λ H 3 33-3 a rt (D H ft 3 O 3 · CL· I 3 et- ro oi · ro ro ro ro øi ro rt η· ___—— H 3 □ pi p hhi ro ro r+ r+ iQ UlHCTiCTicnO OJ H o> 3 3' Dl

μ-ι **«*«·«* s s so? Η O H

ro o * Η O0 f> οι to II 73 3 01 3- ft Ό to H >£· O M 3 CL <!

o O < D> O

—-=--^ ft h· 3 a h hhi ih ro oi ro o

MHUICTIH ' 3 ro 3 H

, , οι ro oi £i oj

Ui Ui Qj CD I

________ii ro η- o ft 3 Dj Cl ' — 01 CL 73 aøi aa-aaOiD· ros w 2 ^ ro h

QjQjQjQj Oi 3 iV 73 <! Φ rt © ^5 H ro 3 ro fu ro rt 0) ' & oi 3

Il II ,11 . II —-1=-I 3 3· Hi 3-

Ui H Dn σι σ\ O to O 73 C| to IQ o 3

.....- - O, æ ro II -J P 3 iQ

H oj oo σι to oo m ci h ffion- ft 3 CL Qi σι H 00 Ul 00 H O N Hl C Hl

3 3 3 0 ___H — S 3: O* O

Η Η O' C? --- · m ^ rQ 3 73 rt H O' H HHI IH Niuro HH-rorotOMUlttiH 3 3 tt\ (1) 73 rt H 3 (t rQ 0 (-fi—ifton ro ro oi 3 ro ro —-— o* i o'

ft Hl pi PPPPPO,rt3Z M htiOH

3 Qi CL CL CL 01 3 iK ro o 3· 3

CL O' iQ H 01 rt 3 Mi QL

Oh rt ro oi fu ro

O' ro · i 3 tø π 3 H

„ H rt _______— O 73 3 ro Ό 01 ro h aro 3 h 3- ro rt LnHCifticTiOHto ton ?? Η Ω 3 rt- 07 co ro ro h· 3

CD HCiooaifooowco a to ι-i 3 CD

3 ^ Ol si O W (Ji i>H Cl Hl 2 Λ 3- pj ____ a ** 3 hj h, i ro 3· s H Η Η I I I H to 3 3 h

X to Η <-Π σ\ Η H 3- O iQ

<j o oi p ro

Qj U1 r? η _____. o ro 3 ro rt 3 ro λ* ro pppdi&ffft3S M 35 01 O, 01

rt O] Qj Qj pi 01 3 a O ** CD

rt jQ H 01 01 3· Hl 3 ro r+ ro 73 Hi O 73

w ' · I 3 ro rt 3 H

-P o Ό x ro 3 ro

UiHt-ΠΟ'ισ'ιΟΗιΠ 0(1) rt3(D3 .. ,Msisisss,07aH 3 H 3 HCiosoitO'-jJ^it^to O Οι ro '

(jOHOCTi-OtOUld O Cl 3thH

a ro η h --——“H ft CL -7- Η Η H ro CD Mi

ΓΟΗΟΐσιΗΙΌΐΗ 3 HjfO

- ro ro

Ln 3 3 3 0

_ J (D & li iQ

Q, H ff« ro 3 η i-3 S 73 ff 3· 01 3 Mi O 01 oi rt rt fu 0 O Dl 3 3 3 O' 3 ro ro ro 3- 3 H 3

3 · I

12

DK 157875B

Eksempel 4 3-[[(4-Metyl-l-piperazinyl)-imino]-metyl]-rifamycin-8-acetat En opløsning af 3,52 g (20 mmol) L-(+)-askorbinsyre i 800 ml vand sættes ved stuetemperatur under omrøring til en opløsning af 8,6 g (10 mmol) af forbindelsen ifølge eksempel 1 i 800 ml ætylacetat. Reaktionsblandingen holdes på stuetemperatur i 30 minutter hvorefter det vandige lag fraskilles og den organiske fase genekstraheres med 800 ml vand. De vandige lag forenes og vaskes med 400 ml ætylacetat og behandles 10 = derpå med 0,5M fosfatpuffer pH 7,38 op til pH 7,2, og ekstra-heres med 3 x 500 ml metylenklorid. Metylenkloridlagene forenes, vaskes med 1000 ml vand, tøres over CaC^ og koncentreres til et lille rumfang. Efter tilsætning af petroleumsæter udskiller der sig et fast stof som opsamles ved filtrering 15 og opløses i 260 ml ætylacetat. Derpå tilsættes der 750 ml æter til ætylacetatopløsningen, og det derved udskilte faste stof frafiltreres. Den tilbageværende opløsning henstår ved stuetemperatur i 3 dage og de røde krystaller som udskiller sig udvindes ved filtrering; der vindes 7,35 g (85%) 3—[[(4— 20 metyl-l-piperazinyl)-imino]-metyl]-rifamycin-8-acetat som en ren forbindelse. IR, UV-VIS og ^H-NMR=data, der fremgår af omstående tabel IV, V og VI, bekræfter den antagne struktur.

25

Eksempel 5 3-[[(4-Metyl-l-piperazinyl)-imino]-metyl]-rifamycin-8-propa- noat_

Den i overskriften angivne forbindelse fremstilles 30 på i alt væsentligt samme måde som beskrevet i eksempel 4, men ud fra forbindelsen ifølge eksempel 2. Udbytte 62%. IR, UV-VIS og ^H-NMR-data for den vundne forbindelse fremgår af tabellerne IV, V og VI.

35

DK 157875B

13

Eksempel 6 3-[[(4-Metyl-l-piperazinyl)-imino]-metyl]-rifamycin-8-ætyl-karbonat__ 0,7 g (4 mmol) L-(+)-askorbinsyre sættes portionsvis 5 ved stuetemperatur til en under omrøring værende opløsning af 3,57 g (4 mmol) af forbindelsen ifølge eksempel 3 i 175 ml metanol. Reaktionsblandingen holdes på stuetemperatur i 30 minutter og koncentreres derefter til det halve rumfang.

Efter afkøling udskiller der sig et fast stof som opsamles 10 ved filtrering og opløses i 50 ml metylenklorid. Der sættes 80 ml metanol til den dannede opløsning og metylenkloridet afdampes under vakuum ved 20°C. Ved henståen natten over ved stuetemperatur udskiller den i overskriften angivne forbindelse sig som orangefarvede krystaller der opsamles og vaskes 15 med æter og derpå tørres i vakuum ved stuetemperatur. Udbytte 56% .

Fysisk-kemiske data for den i overskriften angivne forbindelse er anført i tabellerne IV, V og VI.

20 Eksempel 7 3-[[(4-Metyl-l-piperazinyl)-imino]-metyl]-rifamycin-4,8-di-acetat_ 0,28 ml (ca. 2 mmol) triætylamin sættes ved 0°C til 25 en omrørt opløsning af 1,73 g (2 mmol) af forbindelsen ifølge eksempel 4 i 170 ml metylenklorid. Derefter tilsættes der dråbevis ved -20°C og under omrøring en opløsning af 0,14 ml (2 mmol) acetylklorid i 1,5 ml vandfrit tetrahydrofuran. Reaktionsblandingen holdes i 1 time på 0°C og 3 timer på stue-2g temperatur hvorpå den udrystes med 200 ml vand. Det organiske lag fraskilles, tørres over CaC^ og koncentreres til et ringe rumfang. Efter tilsætning af n-hexan udskiller der sig et fast stof som opsamles og krystalliseres fra en blanding af lige rumfangsdele ætylacetat og æter, hvorved der vindes 25 1,29 g (71%) af den i overskriften angivne forbindelse som orangefarvede krystaller.

Fysisk-kemiske data for den i overskriften angivne forbindelse, der bekræfter den antagne struktur, fremgår af nedenstående tabeller.

DK 157875 B

14 CD CD CD CD H t ^ Η H 1-3

£ a a a P- Q HidWOJ

en en ω en hi 2. cd c i σ

ffiffiffiffig H. H en in CD

I |§ I ig ^ S H t5 Ή H

ft CD CD CD W- O· CD CD CD

I—" I—1 I—1 I—1 O CD a a H

£ ί ί i <

' PJ CD

—------- Cn h S 8 S Λ 50 » ϋοω g n£ S £ to n u) Λ o> o a o - a co in __U)_______ ø o a a a a o Η Γ+

o H- H

a h: to __en a ---- a r+ eo co co co co _ 3 o π g 3 H· eo oo oo oo oo own Φ 0 o o o o anen a o et*? H 3

----------p. * Η· I

^ H eQ H

J—> I—1 1—1 I—1 I—1 CoOCD M-O

-o -o -o -o -o en CO g .X

HHHHH jlcnHi .2 10 enenenoo OH .

____- ·“ S c

& I

HH’HHH CO CD

cofototoco I H r+ en en en en <n O H- enenooo 1 Hi h· M g - en 3 0 *d *d

------ Η- H

O S

coeocoeocoeotoeotoeo < Lim mu ωω ωω οω uu g La

oo oo oo oo oo a PP

OO OO OO OO OO Dj H· 1 I I I I F Hl 3

--—- ffi H iQ

o en a & a 2 Η Η Η H Η O a O p § en en σι σι ojliQ^P· P- Φ Λ

σι en σι en to O CD (D Qj Dj a° O

en en o o en - H CDj h £ H O

^ 2, DM

-------- — Hi ω 09 en a a MHHHH QJQP r+ s s s a sg'StSg & » en o o o Ο'-'Η^η

iQ h H

_ Hi coeocoeocoeotoeococjo o P32 uiei ωω wu ow eou Q n 2, OOOOOOOOOO a · σ OOOOOOOOOO Η· i i i i i___ a Η* H1 I—1 I—1 H p. Π Ω ^ g1 -0-0 ~J -O O Q 30 P p σι σι σι σι l 11 l „ y P^ enenenenen O a Q 3 en

' ,Q Φ 0 CD

--£ ^ H, H

< m 2 p

1—i 1—1 I—1 1—1 O Η H CD

i—> to i—1 i— 10 eo it* co vo i OH u.

o en o o i m

----- H

HHMHH ^HH) iQ

-o σ\ σι cn cn Q O g CD

oo en en en II 3 R

ooooen O a ^ --- a η η η η m £ en

en en en en en Q CD

cn cn o σι 11 s o en o o en__OJ_|___J ^

DK 157875 B

15

Tabel V

UV-VIS-spektre af forbindelsen ifølge eksemplerne 4, 5 og 6 blev opnået i vandig fosfatpufferopløsning med pH 7,38 i sam-menligning med rifampicin. Spektraldata (λ χ og E^°m) frem-3 går af nedenstående tabel V, hvor sh står for skulder.

1 Ί9-

Forbindelse R' R λ (nm), E-^ rifampicin 237(403) 255(380) 334(328) 475(187) ekserrpel 4 CH3 H 236(404) 260(sh) 328(286) 425(sh) 445(221) 10 ekserrpel 5 CH2CH3 H 236(366) 260(sh) 328(269) 425(sh) 445(229) eksempel 6 00^0^ H 236(361) 260(sh) 330(268) 425(sh) 445(218) 15 20 25 30 35

16 DK 157875 B

~si o o æ æ æ a δ δ o o o δ λαΓδ- σ, η z η η læmiiia- id id id a / cd ο h o id pi fOIIHHHO ΙΙΐΟ/ΗΐϊΟΦιαίσ m ίο w ιο oo vj ο oorf^H (+ / CD O' (Q 3 Η Z ro ω Η Ο /¾ CD Η- Η- Π> g Η 3 /-Γ 3 -J 3 id / SO I iQ Hl I < /1-' o 0)0 CD Η •ϋ 3 Ό & ο. & a ο. & οι i ι σ co σ s id h ro cd ro o* a a ο η- $ a a- w Λ H Hi CD iQ r+ (+ 0) rt Η 3 li • 3 ro η· η· ro - ----- Ό (I) Hl Hl H Η Η H p. (UH· H 00 00 ΟΠ σι CTi tO CO 00 to OH· 3;^ I |->.·. Oa (-1. Opj U 01 fe ID 01 O Ul(—‘t-Π 3 O H 3 O 00 CO O CO H DOr+ ’-- -----—--- o η· ro

Η Η I I I 1 I I C-I HP

Η (Ο Η Ό 0Π O 00 H

Vi _ _ M Ml ffi a ff t? a a a μ i co i cd cd s id m ro ro z & a a 0 11 wags Λ η Π ro tn lQ id r+ tu ro 0)° i • u> g Hi a a, --- " .......—-- Ή 0 0) H H h ro 1+ 0) (+ H u> u> on σι σι h to ro h id H a Hi pj > ^ ^ | -· | > «* Ch - p.

to .fe. .t* CO σι 00 H CO .fc. II P (+ Hi 00 totoooui -j 00 co a a 0) 0 -—-- ro o' a II Η Η I I 1111 Ch Hro H 0Π On o CD H Hi 7n ro 0 -i£l-—---a < a ai aaaiiiOr+iiiSid m ho* a a a d n w h- · h >Q Η Π CD Hi a (+ eb ro s id a . to g h a- ro

---Π Ό iQ Hi H

id ro ro ro cd Η σι ~j σι tot-· 00 h gro " 11-- - 11-. - III e*> CD ΐ) Η to η m fe σι to idmWH-p

to Cototo Ό to - CD O CD

II ro a- 11 i—1 i—1 i i i i i i i aid g 3 Μ Η σι σι η Ό Hi Τη ro ο © ----Η c£) Η aacDaaaroiiQt+icDCD s id m cq Οι a a 0 11 w 01 Hi ro λ h o ω o (+0 ro o a ro • id g ό cr w

--to Ό Η H CO

h HH o ro ® 3 ro H U> OO 0Π σι (Τι H >fe> Η IOH W H CD a 3 ^ N " ·· N · > I ·« - i·.«. o? U) (+0¾

tO Ul U (O Dl ω H tfc*dfe CO 00 <+) CD Η H

CO σι O 00 00 O tH 00 00 id CD CD ro ---- ro a i η h i i i ill a 11 μ- a a H>t>>fe(jio id aro oi Q 1® acrtraaacD cd cdiicd Sid td oo h- - a aa oiiwohi (O HO CD O Si (Jl (+ td ro · h - • to g up — - - ro σ> η h id ro ΗΟοοοοησισιΗίο ro H - h 00

11' cull W(Q

DlfevllDCOfetOW Jfe σι Ο Ό CD

COCOOOOCO^JCOOO Ό Ο O CD Ό --———_— o g II HHII till <H Id *0 H·

to on on 0 00 H

" ro CD

on a ro d g ---—-- ro g ro ή a

- I

DK 157875 B

17

Forbindelserne ifølge opfindelsen udviser udtalt opløselighed i vand såvel som i blandinger af vand med andre farmaceutisk acceptable opløsningsmidler som er blandbare med vand. Specielt blev opløseligheden af forbindelsen iføl-c- ge opfindelsen i sammenligning med rifampicin vurderet i vand indeholdende 2% askorbinsyre (opløsning A) og i vand indeholdende 2% askorbinsyre og 10% propylenglykol (opløsning B),og pH-værdien af de resulterende opløsninger opno-teredes.

1 g De opnåede resultater viser at mens opløseligheden af rifampicin i begge disse opløsninger er under 50 mg/ml med en pH-værdi på omkring 3,5-3,6, så er opløseligheden af forbindelserne ifølge opfindelsen og pH-værdien af de dannede opløsninger langt højere. Som eksempel har forbindelsen ifølge eksempel 4 en opløselighed på 100 mg/ml med en pH-værdi på 4,0 i opløsning A og på 150 mg/ml med en pH-værdi på 4,2 i opløsning B, mens forbindelsen ifølge eksempel 7 har en opløselighed på over 300 mg/ml i opløsning A med en pH-værdi på 4,5.

2g De gode afgivelsesegenskaber for rifampicin in vivo er for de foreliggende forbindelsers vedkommende blevet bedømt ved hjælp af undersøgelser over blodkoncentrationerne hos mus, der viser at en enkelt subkutan dosis på 20 mg/kg af forbindelserne ifølge opfindelsen hos mus giver blodkon-25 centrationer (målt ved serumkoncentrationen af rifampicin afgivet fra estrene), der kun er en smule mindre end dem der opnås ved indgift af rifampicin direkte, og de viser at der opnås maksimal koncentration af rifampicin ca. 1 time efter indgiften. Som ventet afspejler denne svage forsinkelse af 5Q hydrolysen in vivo sig ved en median effektiv dosis (ED,-g) for forbindelsen med den almene formel I, der er noget højere end for rifampicins vedkommende. Specielt blev den antibakte-rielle virkning af forbindelserne ifølge opfindelsen afprøvet hos mus inficeret med Staphylococcus aureus Tour. ED50~vær-25 dierne for forbindelserne ifølge eksemplerne 4, 5, 6 og 7 efter subkutan indgift fremgår af nedenstående tabel VII.

DK 157875 B

18 __Tabel VII_

Forbindelse ED™ (m9/kg) subkutant mod ifølge eksempel Staphylococcus aureus Tour.

4 0,35 (0,31-0,40) 5 1,2 (1,0-1,5) 5 6 0,76 (0,68-0,85) 7 1,5 (1,4-1,7)_

Farmaceutiske flydende præparater til oral, intramus-kulær eller intraartikulær anvendelse indeholdende en forbin- 10 delse med formel I som virksom bestanddel vil indeholde en sådan forbindelse i en mængde som stemmer med en hensigtsmæssig posologi og med opløselighedsegenskaberne hos den særlige forbindelse der er anvendt.

Særlig hensigtsmæssige præparater er imidlertid sådan-1 5 ne der er fremstillet i form af dosisenheder, dvs. afmålte rumfang væskeformige præparater indeholdende fra omkring 50 til omkring 1000 mg og fortrinsvis fra ca. 150 til ca. 500 mg af en forbindelse med formel I pr. enhed.

De opløsningsmidler som kan anvendes til de flydende 20 præparater ifølge opfindelsen er i almindelighed vand eller blandinger af vand og polyvalente alifatiske alkoholer såsom ætylalkohol, polyætylenglykol hørende til den flydende række af sådanne samt propylenglykol. Foruden den antibakterielt virksomme bestanddel kan der være sat yderligere stoffer til præ-25 paratet for at forbedre eller opretholde produktets kvalitet. Specielt kan farmaceutiske flydende præparater ifølge opfindelsen indeholde antioxidanter, typisk askorbinsyre, for at forhindre dannelse af den oxyderede quinoniske form, og desuden kan der indgå konserveringsmidler, dispergeringsmidler 30 eller befugtnmgsmxdler, pufrmgsmidler og andre egnede additiver som vides at være nyttige til fremstilling af den særlig type præparat der ønskes. Desuden kan de flydende præparater ifølge opfindelsen tillige indeholde andre virksomme bestanddele. Som eksempler på sådanne andre virksomme bestand-35 dele kan nævnes andre vandopløselige antibakterielle midler som sammen med rifampicin kan give anledning til en synergi-stisk virkning, og når der ønskes præparater til intramusku-

DK 157875 B

19 lær eller intraartikulær anvendelse kan der indgå lokalanæ-stetika og analgetiske midler. Præparaterne kan fremstilles ved i og for sig kendte teknikker til fremstilling af opløsninger til oral anvendelse eller sterile injicerbare opløsnin-2 ger (se fx Remington's Pharmaceutical Sciences, 13. udgave,

Mack Publishing Co., Easton, Pennsylvania).

Præparaterne kan være i form af opløsninger der er parat til anvendelse, eller de kan have form af tørre, opløselige produkter der let kan kombineres med en passende van-1Q dig bærevæske lige forud for anvendelsen. Som eksempler kan passende dosisenheder til uforberedt intramuskulær anvendelse fremstilles ved opløsning af indholdet af en ampul med frysetørret materiale indeholdende 300 mg af forbindelsen ifølge eksempel 4 i 3 ml sterilt vand til injektion indehol-•jtj dende 2% askorbinsyre, eller indholdet af en frysetørret ampul bestående af 500 mg af forbindelsen ifølge eksempel 5 i 4 ml sterilt vand til injektion og indeholdende 15% propy-lenglykol og 2% askorbinsyre.

Andre dosisenheder til uforberedt intramuskulær anven-2g delse kan fremstilles ved opløsning af indholdet af en ampul med frysetørret eller pulveriseret aktivt materiale ifølge opfindelsen (fx 315 mg af forbindelsen ifølge eksempel 4 eller 320 mg af forbindelsen ifølge eksempel 5 i blanding med 10% askorbinsyre) i sterilt vand til injektion (fx 3,5 25 ml til 315 mg af forbindelsen ifølge eksempel 4 eller 4 ml til 320 mg af forbindelsen eksempel 5) eller i sterilt vand til injektion plus 10% polypropylenglykol (fx 3 ml til 315 mg af forbindelsen ifølge eksempel 4 og 3,5 ml til 320 mg af forbindelsen ifølge eksempel 5).

30 35

Claims (8)

1. Rifampicinderivat, kendetegnet ved at det har den almene formel I 5 CH CH, CH, ch3coo I I J I J m \_CH °H O ^ I ° / 3 °CR 0H ? I 1 CH,0—/ CH, i 1 N Jl \ ΤΠ δ 3 Il WiViiH/“A ORx N-N N-CH, W 3

15 CH3 hvor R betegner en C^_3 alkylgruppe eller C^_3 alkoxygruppe og R·*- et hydrogenatom eller en alifatisk acylgruppe indeholdende 2-4 kulstofatomer.

2. Forbindelse ifølge krav 1, kendetegnet ved at R er en metylgruppe, ætylgruppe eller ætoxygruppe og R1 et hydrogenatom eller en acetylgruppe.

3. Forbindelse ifølge krav 1, kendetegnet ved at R er en metylgruppe eller ætylgruppe og R^ et hydrogenatom. 25

4. Fremgangsmåde til fremstilling af de i krav 1 angivne forbindelser med den almene formel I CH, CH, CH, CH3COO I J I J j J 30 y_cH3oH o °h i / OCR OH H jl 1 CH,0_/ CH, JL JL N Jl / o^irDCC:^H3 ! ΤΤΤΓίίΗ^Λ

35 C 0R n-n n-ch, 0χ» 3 DK 157875B hvor R·*· betegner en C^_3 alkylgruppe eller C^_3 alkoxygruppe og R^ et hydrogenatom eller en alifatisk acylgruppe med 2-4 kulstofatomer, kendetegnet ved at man omsætter 1,4-dideoxy-l,4-dihydro-3-[[(4-metyl-l-piperazinyl)-imino]-5 metyl]-l,4-dioxorifamycin med den almene formel II CH, CH CH-, ch3coo I J I J I J \ OK Ah i

10. J OH 0 H j! .II CH3° \ mp

0 N-i/ V-CH, 15 3 med en forbindelse med den almene formel RCOX, hvor R har den ovenfor angivne betydning og X betegner klor eller brom, i nærværelse af en hydrogenhalogenid-acceptor, hvorpå man 20 reducerer det dannede mellemprodukt med den almene formel III CH, CH, CH, ch3coo I J I J I j

25 VCH3°H 9 L III / ° OCR O H j! CIW CH3^p^ ft IL r, V_4. o N-N N-CH,

30 CH^0 \—/ hvor R har den ovenfor angivne betydning, med askorbinsyre til dannelse af en forbindelse med den almene formel I, hvor 35 R har den ovenfor angivne betydning og R-1 er et hydrogenatom, hvorpå man, såfremt der ønskes en forbindelse med den almene formel I hvor er forskellig fra hydrogen, acylerer den DK 157875 B vundne forbindelse med formel I, hvor R^ er hydrogen, ved omsætning med en forbindelse med den almene formel R^X", hvor R1 er en alifatisk acylgruppe med 2-4 kulstofatomer og X' et klor- eller bromatom, i nærværelse af en hydrogenhalo-5 genid-acceptor.

5- Farmaceutisk præparat egnet til intramuskulær indgift, kendetegnet ved at det som virksom bestanddel indeholder en forbindelse med den almene formel I.

6. Flydende farmaceutisk præparat ifølge krav 5, k e n-"*0 detegnet ved at det indeholder en forbindelse ifølge krav 1 som virksom bestanddel og vand eller en blanding af vand og en eller flere polyvalente alifatiske alkoholer som farmaceutisk acceptabelt opløsningsmdidel eller -midler.

7. Flydende farmaceutisk præparat ifølge krav 6, k e n-15 detegnet ved at det indeholder en forbindelse ifølge krav 1 som virksom bestanddel og vand eller en blanding af vand og en eller flere polyvalente alifatiske alkoholer som farmaceutisk acceptable opløsningsmidler og tillige indeholder en antioxidant.

8. Farmaceutisk præparat ifølge krav 1 , kendeteg net ved at det som antioxidant indeholder askorbinsyre. 25 30 35