CN104650342A

CN104650342A - 多支链聚合药物前体及其应用

Info

Publication number: CN104650342A
Application number: CN201310581715.6A
Authority: CN
Inventors: 钟慧娟; 喻红平; 赵志明; 黄志强; 徐耀昌
Original assignee: Jiangsu Hansoh Pharmaceutical Co Ltd; Shanghai Hansen Biological Medicine Technology Co Ltd
Current assignee: Jiangsu Hansoh Pharmaceutical Group Co Ltd; Shanghai Hansen Biological Medicine Technology Co Ltd
Priority date: 2013-11-18
Filing date: 2013-11-18
Publication date: 2015-05-27
Anticipated expiration: 2033-11-18
Also published as: CN104650342B

Abstract

本发明涉及多支链聚合药物前体及其应用。具体而言，本发明涉及一种具有式（I）结构的多支链聚合药物前体或其药学上可接受的盐，其对于哺乳动物受试者体内与拓扑异构酶I相关的疾病，尤其是哺乳动物受试者体内的实体肿瘤具有非常好的治疗效果。在与抑制癌细胞增殖的体外活性相当的情况下，在体内具有更合理的药物半衰期、滞留时间，大幅降低清除率，更有利于确定药物的给药方式，减少给药次数，有望开发成新一代抗肿瘤药物。

Description

多支链聚合药物前体及其应用

技术领域

本发明属于医药领域，具体涉及一种新的多支链聚合药物前体或其药学上可接受的盐及其应用。

背景技术

喜树碱（Camptothecin，CPT）是1966年从珙桐科植物喜树（Camptothecaacuminata）中提取的一种细胞毒性生物碱，具有明显的抗肿瘤活性，尤其对消化道肿瘤、白血病、膀胱癌等活性更强，后来也发现喜树碱及其衍生物都会对复制和转录等分子活动中DNA旋转和松弛所必需的拓扑异构酶产生抑制作用。喜树碱能稳定并形成一个可逆的酶-喜树碱-DNA三元化合物，即这种可***化合物的形成能防止拓扑异构酶反应***/组合周期过程中的重组步骤，而现有技术已经报道拓扑异构酶I抑制因子对于治疗HIV有效。但是由于其水溶性差而限制了其临床应用，喜树碱及其类似物具有下述结构：

这些具有喜树碱母体结构的衍生化合物均含有一个五元环基团，此五元环所带的内酯环E上有一个不对称中心，内酯环E含有一个20S-的结构。这个五元环基团还含有一个吡咯并[3,4-b]喹啉（环A、B和C）、一个共轭的乙酸吡啶（环D）和一个含有20-羟基的六元内酯（环E）。其中，A环在10-位和/或11-位可以被OH取代，还可以被直链或支链烷基或烷氧基取代，或通过杂原子（即O或S）与环相连。例如，10-羟基喜树碱、11-羟基喜树碱和10,11-二羟基喜树碱类似物都是天然产物，本领域技术人员采用已知方法就可以将其转换成各种含取代基团的喜树碱类似物。B环可以在7-位被直链或支链烷基、取代烷基、环烷基、烷氧基、苄基、氨基，氨基烷基、烷基氨基甲酸酯、烷基卡巴肼、苯基肼衍生物等取代。其它取代可能在C、D和E环中。具有代表性的喜树碱类似物包括喜树碱、拓扑替康（topotecan）、依立替康（CPT-11）、SN38和FL118等。参见US5004758；US4943579；USRE32518，其内容在此引入作为参考。由于这些衍生物大部分都不溶于水，因此，喜树碱最初是以水溶性羧酸酯的形式应用于临床实验的，这种羧酸酯的内酯环打开形成钠盐。尽管相对于喜树碱本身，这种钠盐有较好的水溶性，但它有较强的毒性，而且在机体内的抗癌性也很小，因此这种方法是不可取的。

为了改善喜树碱及其衍生物水溶性较差的缺陷，在保持细胞毒性的同时，本领域技术人员尝试了许多通过修饰A环和/或B环或20-羟基来改善喜树碱及其衍生物的水溶性。例如，拓扑替康（topotecan）（9-二甲基胺甲基-10-羟基CPT）和依立替康（irinotecan）（7-乙基-10[4-(1-哌啶)-1-哌啶]羰基氧CPT）（又称CPT-11）就是两个水溶性CPT衍生物，它们都具备有效的临床效果。但是，还是存在很多的技术难题，例如药物的水溶性较差、毒性、生物可利用性低、不稳定性和在机体内的快速降解等。尽管曾经有很多试图改进给药的方法，但没有一种方法不存在不足之处。例如，针对解决或者至少是改善一个或多个这些不足之处的普遍采用的给药方法包括药物封装，如在脂质体、聚合体基质或单分子胶囊内，与一个水溶性聚合体（如聚乙烯乙二醇）共价键结合，利用基因定位剂，或者与这些相似的方法。多年来，有许多方法被提议用来改进生物活性剂的给药，用脂质体封装常常因为药物负载效率低而导致效率甚低，成本效益不佳。而且，脂质体内的活性剂释放速率取决于脂质体的溶解和分解，或者说活性剂扩散时要通过脂质体层，这就限制了生物***对于活性剂的实际利用率。另外，脂质体的结构常常只能用于脂溶性药物。以聚合体基质为基础的结构通常具有相似的不足，如无法获得良好的给药药物***特性，特别是那些交联的聚合体，再比如那些可能释放出水溶性的可降解的聚合物基质的活性剂的释放速度不稳定。相比之下，一个活性剂与聚合体如聚乙烯乙二醇的共轭会提供一个更明确的备选方法，这是因为这种共轭本身常常，尽管并非总是，可以提供良好的给药特性，特别是在聚合体与活性剂在特定位置上的连接。然而，以蛋白质为基础的化合物包括含有同分异构体的混合物，聚合物链与特定蛋白结合的位置和数量常常有所变化，这将导致制备这些组分时的出现可重复性方面的问题。

因此，迫切需要一种能改善给药方法的需求，这种方法可通过降低清除时间、提高生物活性和效率，以及降低副作用来达到最理想的生物可利用性平衡。

发明内容

为了解决现有技术中存在的问题，发明人在深入研究了喜树碱及其类似物的PEG技术（PEGylation）后，发现经过修饰的PEG后，喜树碱及其类似物具有更高的活性，稳定性和生物利用度均有很大提高，在抑制癌细胞增殖的体外活性相当的情况下在体内具有更合理的药物半衰期、滞留时间，大幅降低清除率，更有利于确定药物的给药方式，减少给药次数，有望开发成新一代抗肿瘤药物。

本发明一方面提供一种具有式（I）结构的多支链聚合药物前体或其药学上可接受的盐，

其中，A选自如下结构：

R₁、R₂、R₃、R₄各自独立地选自羟基、巯基、C_1-8烷氧基、C_1-8烷基硫基、C_3-8环烷氧基、C_3-8环烷硫基、3-8元杂环基氧基、3-8元杂环基硫基、C_5-10芳基氧基、C_5-10芳基硫基、5-10元杂芳基氧基、5-10元杂芳基硫基、-S(O)rR₁₂、-O-C(O)R₁₂、-NR₁₃R₁₄、-N(R₁₂)-C(O)OR₁₂或式（B）取代基，

条件是R₁、R₂、R₃、R₄至少一个选自式(B)取代基;

其中所述的C_1-8烷基、C_3-8环烷基、3-8元杂环基、C_5-10芳基或5-10元杂芳基各自独立任选进一步被一个或多个选自卤素、羟基、巯基、氰基、硝基、叠氮基、C_1-8烷基、C_2-8链烯基、C_2-8链炔基、C_3-8环烷基、C_1-8烷氧基、C_1-8烷基硫基、C_3-8环烷氧基、C_3-8环烷硫基、3-8元杂环基、3-8元杂环基氧基、3-8元杂环基硫基、C_5-10芳基、C_5-10芳基氧基、C_5-10芳基硫基、5-10元杂芳基、5-10元杂芳基氧基、5-10元杂芳基硫基、-S(O)rR₁₂、-C_1-8-S(O)rR₁₂、-C(O)R₁₂、-C_1-8-C(O)R₁₂、-C(O)OR₁₂、-C_1-8-C(O)OR₁₂、-O-C(O)R₁₂、-C_1-8-O-C(O)R₁₂、-NR₁₃R₁₄、-C_1-8-NR₁₃R₁₄、-C(O)NR₁₃R₁₄、-C_1-8C(O)NR₁₃R₁₄、-N(R₁₂)-C(O)R₁₂、-N(R₁₂)-C(O)OR₁₂、或-NH-NR₁₃R₁₄的取代基所取代；

本发明中，R₁、R₂、R₃、R₄四个基团均选自式（B）结构取代基的化合物可简称四臂化合物；R₁、R₂、R₃、R₄其中三个基团选自式（B）结构取代基，另一个取代基选自非式（B）结构取代基的化合物可简称三臂化合物；R₁、R₂、R₃、R₄其中二个基团选自式（B）结构取代基，另二个取代基选自非式（B）结构取代基的化合物可简称二臂化合物；R₁、R₂、R₃、R₄其中一个基团选自式（B）结构取代基，另三个取代基选自非式（B）结构取代基的化合物可简称单臂化合物。

R₅、R₆各自独立地选自氢、卤素、羟基、巯基、氰基、硝基、叠氮基、C_1-8烷基、C_2-8链烯基、C_2-8链炔基、C_3-8环烷基、C_1-8烷氧基、C_1-8烷基硫基、C_3-8环烷氧基、C_3-8环烷硫基、3-8元杂环基、3-8元杂环基氧基、3-8元杂环基硫基、C_5-10芳基、C_5-10芳基氧基、C_5-10芳基硫基、5-10元杂芳基、5-10元杂芳基氧基、5-10元杂芳基硫基、-S(O)rR₁₂、-C_1-8-S(O)rR₁₂、-C(O)R₁₂、-C_1-8-C(O)R₁₂、-C(O)OR₁₂、-C_1-8-C(O)OR₁₂、-O-C(O)R₁₂、-C_1-8-O-C(O)R₁₂、-NR₁₃R₁₄、-C_1-8-NR₁₃R₁₄、-C(O)NR₁₃R₁₄、-C_1-8C(O)NR₁₃R₁₄、-N(R₁₂)-C(O)R₁₂、-N(R₁₂)-C(O)OR₁₂、或-NH-NR₁₃R₁₄；

R₇、R₈、R₉各自独立地选自氢、卤素、羟基、巯基、氰基、硝基、叠氮基、C_1-8烷基、C_2-8链烯基、C_2-8链炔基、C_3-8环烷基、C_1-8烷氧基、C_1-8烷基硫基、C_3-8环烷氧基、C_3-8环烷硫基、3-8元杂环基、3-8元杂环基氧基、3-8元杂环基硫基、C_5-10芳基、C_5-10芳基氧基、C_5-10芳基硫基、5-10元杂芳基、5-10元杂芳基氧基、5-10元杂芳基硫基、-S(O)rR₁₂、-C_1-8-S(O)rR₁₂、-C(O)R₁₂、-C_1-8-C(O)R₁₂、-C(O)OR₁₂、-C_1-8-C(O)OR₁₂、-O-C(O)R₁₂、-C_1-8-O-C(O)R₁₂、-NR₁₃R₁₄、-C_1-8-NR₁₃R₁₄、-C(O)NR₁₃R₁₄、-C_1-8C(O)NR₁₃R₁₄、-N(R₁₂)-C(O)R₁₂、-N(R₁₂)-C(O)OR₁₂、或-NH-NR₁₃R₁₄；

R₁₀和R₁₁与相连接的苯基稠合成5-7元环烷基、5-7元杂环基、5-7元芳基或5-7元杂芳基，和相连的苯基共同形成的结构选自如下结构：

其中5-7元环烷基、5-7元杂环基、5-7元芳基或5-7元杂芳基各自独立地任选被一个或多个选自卤素、羟基、巯基、氰基、硝基、叠氮基、C_1-8烷基、C_2-8链烯基、C_2-8链炔基、C_3-8环烷基、C_1-8烷氧基、C_1-8烷基硫基、C_3-8环烷氧基、C_3-8环烷硫基、3-8元杂环基、3-8元杂环基氧基、3-8元杂环基硫基、C_5-10芳基、C_5-10芳基氧基、C_5-10芳基硫基、5-10元杂芳基、5-10元杂芳基氧基、5-10元杂芳基硫基、-S(O)rR₁₂、-C_1-8-S(O)rR₁₂、-C(O)R₁₂、-C_1-8-C(O)R₁₂、-C(O)OR₁₂、-C_1-8-C(O)OR₁₂、-O-C(O)R₁₂、-C_1-8-O-C(O)R₁₂、-NR₁₃R₁₄、-C_1-8-NR₁₃R₁₄、-C(O)NR₁₃R₁₄、-C_1-8C(O)NR₁₃R₁₄、-N(R₁₂)-C(O)R₁₂、-N(R₁₂)-C(O)OR₁₂、或-NH-NR₁₃R₁₄的取代基所取代；

R₁₂、R₁₃、R₁₄选自氢、C_1-4烷基；

L为双功能连接基，选自天然氨基酸残基；

m为0、1、2；

n为正整数；

p、q、t为0、1、2、3或4。

作为进一步优选的方案，双功能连接基L可选自丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、甘氨酸、丝氨酸、苏氨酸、蛋氨酸、半胱氨酸、苯丙氨酸、色氨酸残基和/或其组合；优选丙氨酸或甘氨酸残基；最优选甘氨酸残基。

作为进一步优选的方案，当A为形成式（II）化合物

R₁、R₂、R₃、R₄、R₅、R₆、R₇、R₈、R₁₀、R₁₁、R₁₂、R₁₃、R₁₄、L、m、n、f定义如通式（I）中所述。

作为进一步优选的方案，当R₇、R₈均为氢时，形成式（II-a）化合物：

R₁、R₂、R₃、R₄、R₅、R₆、R₁₀、R₁₁、R₁₂、R₁₃、R₁₄、L、m、n、r定义如通式（I）中所述，条件是当m为1时，R₅、R₆不同时为氢。

作为更进一步优选的方案，当R₅、R₆均为氢、m为2时，形成式（II-a-1）化合物：

R₁、R₂、R₃、R₄、R₁₀、R₁₁、R₁₂、R₁₃、R₁₄、L、n、r定义如通式（I）中所述。

作为更进一步优选的方案，选自如下式（II-a-1-1）化合物：

n定义如通式（I）中所述。

作为更进一步优选的方案，当m为1时，R₅、R₆之一选自氢，另一选自甲基，形成式（II-a-2）化合物：

作为更进一步优选的方案，选自（II-a-2-1）化合物：

n定义如通式（I）中所述。

作为进一步优选的方案，当A为m为1，R₅、R₆、R₇、R₈同时为氢时，形成式（II-b）化合物：

R₁、R₂、R₃、R₄、R₁₀、R₁₁、R₁₂、R₁₃、R₁₄、L、n、r定义如通式（I）中所述，这里的n实际是指n+1，由于n取正整数，n+1数值同样也取正整数，因此，这里将n+1的调整为n，取正整数，下述m为1、R₅为氢、R₆为氢时，n+1同样调整为n，取正整数。

作为更进一步优选的方案，选自式（II-b-1）化合物：

n定义如通式（I）中所述。

作为进一步优选的方案，当A为时，形成式（III）化合物：

R₁、R₂、R₃、R₄、R₅、R₆、R₉、R₁₀、R₁₁、R₁₂、R₁₃、R₁₄、L、m、n、p、q、t、r定义如通式（I）中所述。

作为更进一步优选的方案，当m为1时，形成式（III-a）化合物：

R₁、R₂、R₃、R₄、R₅、R₆、R₉、R₁₀、R₁₁、R₁₂、R₁₃、R₁₄、L、n、p、q、t、r定义如通式（I）中所述。

作为更进一步优选的方案，当R₅、R₆均为氢时，形成式（III-a-1）化合物：

R₁、R₂、R₃、R₄、R₉、R₁₀、R₁₁、R₁₂、R₁₃、R₁₄、L、n、p、q、t、r定义如通式（I）中所述。

作为更进一步优选的方案，选自式（III-a-1-1）化合物：

或选自式（III-a-1-2）化合物：

或式（III-a-1-3）化合物：

n定义如通式（I）中所述。

作为进一步优选的方案，当m为0或2，R₅、R₆均为氢时，形成式（III-b）化合物：

作为进一步优选的方案，当p为0时，形成式（III-c）化合物：

R₁、R₂、R₃、R₄、R₅、R₆、R₁₀、R₁₁、R₁₂、R₁₃、R₁₄、L、m、n、q、t、r定义如通式（I）中所述。

作为进一步优选的方案，前述化合物R₁、R₂、R₃、R₄均选自式（B）结构取代基的摩尔百分比为85%以上，即四臂化合物在混合物（包含四臂化合物、三臂化合物、二臂化合物、单臂化合物及R₁、R₂、R₃、R₄均选自非式（B）结构取代基的化合物）中的比例在85%以上，所述摩尔百分比先由高效液相色谱仪（HPLC）检测出质量百分比（检测波长为254nm，固定相：XDB-C18,流动相：乙腈/水：5/95→乙腈/水：95/5)，然后由本领域公知技术计算而得。

作为更进一步优选的方案，前述化合物R₁、R₂、R₃、R₄均为式（B）结构取代基化合物的摩尔百分比为95%以上，其它R₁、R₂、R₃、R₄任1-3个取代基团选自除式（B）结构取代基以外化合物的摩尔百分比小于2.0%，即三臂化合物、二臂化合物、单臂化合物各组分在混合物中的摩尔百分比小于2.0%。

作为进一步优选的方案，如式（I）所示的多支链聚合药物前体或其药学上可接受的盐总的表观相对分子量约20000至约60000道尔顿；优选约35000至约45000道尔顿。

作为更进一步优选的方案，式（II-b-1）化合物摩尔百分比为85%以上，总的表观相对分子量约20000至约60000道尔顿。

作为更进一步优选的方案，式（II-b-1）化合物摩尔百分比为90%以上，总的表观相对分子量约35000至约45000道尔顿。

根据核磁共振氢谱（¹H-NMR）及本领域公知技术先分别确定单一组分是四臂、三臂、二臂或单臂化合物，然后根据所用4臂聚乙二醇双甘油（4arm poly(ethyleneglycol)(diglycerol)的分子量计算出四臂、三臂、二臂或单臂化合物的分子量；

所述总的表观相对分子量是指主要含四臂化合物的混合物的相对分子量。由于所用4臂聚乙二醇双甘油的聚合度（n）的不同，所得混合物的表观相对分子量可呈现不同的情形，例如，本发明实施例采用的4ARM(DG)-PEG-40K，即MW为40000道尔顿的化合物，可计算出聚合度n约为226.3（取正整数为226），实施例相关物质如下表：

如果采用MW为35000道尔顿的4ARM(DG)-PEG-35K，前述各组分化合物的分子量及制备得到的混合物总的表观相对分子量相应减少5000道尔顿，同理可计算出式（I）化合物各取代基不同时的分子量。

本发明另一方面提供一种如式（I）所示的多支链聚合药物前体或其药学上可接受的盐的制备方法，其包括如下制备步骤：

1）化合物1（喜树碱衍生物）在脱水剂存在下和叔丁氧羰基保护的氨基酸反应，然后在酸性条件下脱保护得到化合物2或其酸式盐；

2）一定分子量的化合物3（4臂聚乙二醇双甘油）在催化剂存在下和化合物4进行醚化反应，然后在碱性条件下水解得到化合物5；

3）化合物5根据基团A的不同形成化合物6；

4）化合物6在缩合剂存在下与化合物2缩合得到式（I）化合物，其合成路线如下：

步骤1）中所述脱水剂可选用酯化反应常用脱水剂，优选DCC、DIC、EDC.HCl，也可用其他酯化条件进行操作，例如，甲苯回流蒸出水分或加入分子筛等；所述酸可选自实验室常用有机酸或无机酸，例如常用有机酸为三氟乙酸、三氯乙酸、甲磺酸、三氟甲磺酸、对甲苯磺酸等，常用无机酸为盐酸、氢溴酸、氢氟酸、氢碘酸、硫酸或磷酸等。

步骤2）中醚化反应所用催化剂选自硫酸、磺酸、甲磺酸等酸性物质；所述碱性条件是指由无机碱形成的溶液，常见的为碳酸钠、碳酸钾、碳酸氢钠、碳酸氢钾、氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化锂、醋酸钠或其组合的水溶液等。

步骤4）中所述缩合剂选自DIC、DCC、HOBt、EDC.HCl、PyBOP、PyBroP、HATU、HCTU、DEPBT、EEDQ、CDI或其组合。

作为进一步优选的方案，当A为形成式（II）化合物，其制备方法如下：

或者，

上述第四步反应也可以以化合物5先与化合物7'进行反应，经卤代后和/或根据R₇、R₈的定义不同转换成相应的基团，其制备方法如下：

X、Y各自独立地选自卤素或氢，但不同时为氢。

作为更进一步优选的方案，式（II-b-1）化合物的制备方法如下：

作为更进一步优选的方案，当A为时，式（III）化合物的制备方法如下：

本发明另一方面提供一种药物组合物，其包括治疗有效剂量的如式（I）所示的多支链聚合药物前体或其药学上可接受的盐及可药用的载体。

如式（I）所示的多支链聚合药物前体或其药学上可接受的盐、前述药物组合物可以在制备用于治疗哺乳动物受试者体内与拓扑异构酶I相关的疾病的药物中得到广泛的应用；尤其在制备用于针对哺乳动物受试者体内的实体肿瘤的药物中的应用。

PEG修饰后的药物与修饰前相比，具有如下特点：（1）药物的溶解性大幅提高；（2）半衰期延长；（3）最大血药浓度降低，血药浓度波动较小；（4）酶降解作用减少，免疫原性和抗原性减少；（5）毒性降低。

附图说明

图1为实施例步骤七产物（PEG-FL118）HPLC谱图；

图2为PEG-FL118与FL-118的药代动力学对比曲线。

具体实施方式

发明的详细说明：除非有相反陈述，下列用在说明书和权利要求书中的术语具有下述含义。

“C_1-8烷基”指包括1至8个碳原子的直链烷基和含支链烷基，烷基指饱和的脂族烃基团。例如甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、仲丁基、正戊基、1,1-二甲基丙基、1,2-二甲基丙基、2,2-二甲基丙基、1-乙基丙基、2-甲基丁基、3-甲基丁基、正己基、1-乙基-2-甲基丙基、1,1,2-三甲基丙基、1,1-二甲基丁基、1,2-二甲基丁基、2,2-二甲基丁基、1,3-二甲基丁基、2-乙基丁基、2-甲基戊基、3-甲基戊基、4-甲基戊基、2,3-二甲基丁基、正庚基、2-甲基己基、3-甲基己基、4-甲基己基、5-甲基己基、2,3-二甲基戊基、2,4-二甲基戊基、2,2-二甲基戊基、3,3-二甲基戊基、2-乙基戊基、3-乙基戊基、正辛基、2,3-二甲基己基、2,4-二甲基己基、2,5-二甲基己基、2,2-二甲基己基、3,3-二甲基己基、4,4-二甲基己基、2-乙基己基、3-乙基己基、4-乙基己基、2-甲基-2-乙基戊基、2-甲基-3-乙基戊基或其各种支链异构体等。

烷基可以是取代的或未取代的，当被取代时，取代基可以在任何可使用的连接点上被取代，优选为一个或多个以下基团，独立地选自卤素、羟基、巯基、氰基、硝基、叠氮基、C_1-8烷基、C_2-8链烯基、C_2-8链炔基、C_3-8环烷基、C_1-8烷氧基、C_1-8烷基硫基、C_3-8环烷氧基、C_3-8环烷硫基、3-8元杂环基、3-8元杂环基氧基、3-8元杂环基硫基、C_5-10芳基、C_5-10芳基氧基、C_5-10芳基硫基、5-10元杂芳基、5-10元杂芳基氧基、5-10元杂芳基硫基、-S(O)rR₁₂、-C_1-8-S(O)rR₁₂、-C(O)R₁₂、-C_1-8-C(O)R₁₂、-C(O)OR₁₂、-C_1-8-C(O)OR₁₂、-O-C(O)R₁₂、-C_1-8-O-C(O)R₁₂、-NR₁₃R₁₄、-C_1-8-NR₁₃R₁₄、-C(O)NR₁₃R₁₄、-C_1-8C(O)NR₁₃R₁₄、-N(R₁₂)-C(O)R₁₂、-N(R₁₂)-C(O)OR₁₂、或-NH-NR₁₃R₁₄的取代基所取代。

“环烷基”指饱和或部分不饱和单环或多环环状烃取代基，“C_3-8环烷基”指包括3至8个碳原子的环烷基，“5-7元环烷基”指包括5至7个碳原子的环烷基，例如：

单环环烷基的非限制性实施例包含环丙基、环丁基、环戊基、环戊烯基、环己基、环己烯基、环己二烯基、环庚基、环庚三烯基、环辛基等。

多环环烷基包括螺环、稠环和桥环的环烷基。“螺环烷基”指单环之间共用一个碳原子(称螺原子)的多环基团，这些可以含有一个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子***。根据环与环之间共用螺原子的数目将螺环烷基分为单螺环烷基、双螺环烷基基或多螺环烷基，螺环烷基的非限制性实施例包含：

“稠环烷基”指***中的每个环与体系中的其他环共享毗邻的一对碳原子的全碳多环基团，其中一个或多个环可以含有一个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子***。根据组成环的数目可以分为双环、三环、四环或多环稠环烷基，稠环烷基的非限制性实施例包含：

“桥环烷基”指任意两个环共用两个不直接连接的碳原子的全碳多环基团，这些可以含有一个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子***。根据组成环的数目可以分为双环、三环、四环或多环桥环烷基，桥环烷基的非限制性实施例包含：

所述环烷基环可以稠合于芳基、杂芳基或杂环烷基环上，其中与母体结构连接在一起的环为环烷基，非限制性实施例包括茚满基、四氢萘基、苯并环庚烷基等。

环烷基可以是任选取代的或未取代的，当被取代时，取代基优选为一个或多个以下基团，独立地选自卤素、羟基、巯基、氰基、硝基、叠氮基、C_1-8烷基、C_2-8链烯基、C_2-8链炔基、C_3-8环烷基、C_1-8烷氧基、C_1-8烷基硫基、C_3-8环烷氧基、C_3-8环烷硫基、3-8元杂环基、3-8元杂环基氧基、3-8元杂环基硫基、C_5-10芳基、C_5-10芳基氧基、C_5-10芳基硫基、5-10元杂芳基、5-10元杂芳基氧基、5-10元杂芳基硫基、-S(O)rR₁₂、-C_1-8-S(O)rR₁₂、-C(O)R₁₂、-C_1-8-C(O)R₁₂、-C(O)OR₁₂、-C_1-8-C(O)OR₁₂、-O-C(O)R₁₂、-C_1-8-O-C(O)R₁₂、-NR₁₃R₁₄、-C_1-8-NR₁₃R₁₄、-C(O)NR₁₃R₁₄、-C_1-8C(O)NR₁₃R₁₄、-N(R₁₂)-C(O)R₁₂、-N(R₁₂)-C(O)OR₁₂、或-NH-NR₁₃R₁₄的取代基所取代。

“杂环基”指饱和或部分不饱和单环或多环环状烃取代基，其中一个或多个环原子选自氮、氧或S(O)r（其中r是整数0、1、2）的杂原子，但不包括-O-O-、-O-S-或-S-S-的环部分，其余环原子为碳。“5-7元杂环基”指包含5至7个环原子的环基，“3-8元杂环基”指包含3至8个环原子的环基。

单环环烷基的非限制性实施例包含吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、吗啉基、硫代吗啉基、高哌嗪基等。

多环环烷基包括螺环、稠环和桥环的杂环基。“螺杂环基”指单环之间共用一个原子（称螺原子）的多环杂环基团，其中一个或多个环原子选自氮、氧或S(O)r（其中r是整数0、1、2）的杂原子，其余环原子为碳。这些可以含有一个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子***。根据环与环之间共用螺原子的数目将螺环烷基分为单螺杂环基、双螺杂环基或多螺杂环基。螺环烷基的非限制性实施例包含：

“稠杂环基”指***中的每个环与体系中的其他环共享毗邻的一对原子的多环杂环基团，一个或多个环可以含有一个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子***，其中一个或多个环原子选自氮、氧或S(O)r(其中r是整数0至2)的杂原子，其余环原子为碳。根据组成环的数目可以分为双环、三环、四环或多环稠杂环烷基，稠杂环基的非限制性实施例包含：

“桥杂环基”指任意两个环共用两个不直接连接的原子的多环杂环基团，这些可以含有一个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子***，其中一个或多个环原子选自氮、氧或S(O)r(其中r是整数0、1、2)的杂原子，其余环原子为碳。根据组成环的数目可以分为双环、三环、四环或多环桥环烷基，桥环烷基的非限制性实施例包含：

所述杂环基环可以稠合于芳基、杂芳基或环烷基环上，其中与母体结构连接在一起的环为杂环基，非限制性实施例包含：

杂环基可以是任选取代的或未取代的，当被取代时，取代基优选为一个或多个以下基团，独立地选自卤素、羟基、巯基、氰基、硝基、叠氮基、C_1-8烷基、C_2-8链烯基、C_2-8链炔基、C_3-8环烷基、C_1-8烷氧基、C_1-8烷基硫基、C_3-8环烷氧基、C_3-8环烷硫基、3-8元杂环基、3-8元杂环基氧基、3-8元杂环基硫基、C_5-10芳基、C_5-10芳基氧基、C_5-10芳基硫基、5-10元杂芳基、5-10元杂芳基氧基、5-10元杂芳基硫基、-S(O)rR₁₂、-C_1-8-S(O)rR₁₂、-C(O)R₁₂、-C_1-8-C(O)R₁₂、-C(O)OR₁₂、-C_1-8-C(O)OR₁₂、-O-C(O)R₁₂、-C_1-8-O-C(O)R₁₂、-NR₁₃R₁₄、-C_1-8-NR₁₃R₁₄、-C(O)NR₁₃R₁₄、-C_1-8C(O)NR₁₃R₁₄、-N(R₁₂)-C(O)R₁₂、-N(R₁₂)-C(O)OR₁₂、或-NH-NR₁₃R₁₄的取代基所取代。

“芳基”指全碳单环或稠合多环（也就是共享毗邻碳原子对的环）基团，具有共轭的π电子体系的多环（即其带有相邻对碳原子的环）基团，“C_5-10芳基”指含有5-10个碳的全碳芳基，“5-7元芳基”指含有5-7个碳的全碳芳基，例如苯基和萘基。所述芳基环可以稠合于杂芳基、杂环基或环烷基环上，其中与母体结构连接在一起的环为芳基环，非限制性实施例包含：

芳基可以是取代的或未取代的，当被取代时，取代基优选为一个或多个以下基团，独立地选自卤素、羟基、巯基、氰基、硝基、叠氮基、C_1-8烷基、C_2-8链烯基、C_2-8链炔基、C_3-8环烷基、C_1-8烷氧基、C_1-8烷基硫基、C_3-8环烷氧基、C_3-8环烷硫基、3-8元杂环基、3-8元杂环基氧基、3-8元杂环基硫基、C_5-10芳基、C_5-10芳基氧基、C_5-10芳基硫基、5-10元杂芳基、5-10元杂芳基氧基、5-10元杂芳基硫基、-S(O)rR₁₂、-C_1-8-S(O)rR₁₂、-C(O)R₁₂、-C_1-8-C(O)R₁₂、-C(O)OR₁₂、-C_1-8-C(O)OR₁₂、-O-C(O)R₁₂、-C_1-8-O-C(O)R₁₂、-NR₁₃R₁₄、-C_1-8-NR₁₃R₁₄、-C(O)NR₁₃R₁₄、-C_1-8C(O)NR₁₃R₁₄、-N(R₁₂)-C(O)R₁₂、-N(R₁₂)-C(O)OR₁₂、或-NH-NR₁₃R₁₄的取代基所取代。

“杂芳基”指包含1至4个杂原子的杂芳族体系，所述杂原子包括氮、氧和S(O)r(其中r是整数0、1、2)的杂原子，5-7元杂芳基指含有5-7个环原子的杂芳族体系，5-10元杂芳基指含有5-10个环原子的杂芳族体系，例如呋喃基、噻吩基、吡啶基、吡咯基、N-烷基吡咯基、嘧啶基、吡嗪基、咪唑基、四唑基等。所述杂芳基环可以稠合于芳基、杂环基或环烷基环上，其中与母体结构连接在一起的环为杂芳基环，非限制性实施例包含：

杂芳基可以是任选取代的或未取代的，当被取代时，取代基优选为一个或多个以下基团，独立地选自卤素、羟基、巯基、氰基、硝基、叠氮基、C_1-8烷基、C_2-8链烯基、C_2-8链炔基、C_3-8环烷基、C_1-8烷氧基、C_1-8烷基硫基、C_3-8环烷氧基、C_3-8环烷硫基、3-8元杂环基、3-8元杂环基氧基、3-8元杂环基硫基、C_5-10芳基、C_5-10芳基氧基、C_5-10芳基硫基、5-10元杂芳基、5-10元杂芳基氧基、5-10元杂芳基硫基、-S(O)rR₁₂、-C_1-8-S(O)rR₁₂、-C(O)R₁₂、-C_1-8-C(O)R₁₂、-C(O)OR₁₂、-C_1-8-C(O)OR₁₂、-O-C(O)R₁₂、-C_1-8-O-C(O)R₁₂、-NR₁₃R₁₄、-C_1-8-NR₁₃R₁₄、-C(O)NR₁₃R₁₄、-C_1-8C(O)NR₁₃R₁₄、-N(R₁₂)-C(O)R₁₂、-N(R₁₂)-C(O)OR₁₂、或-NH-NR₁₃R₁₄的取代基所取代。

“烯基”指由至少两个碳原子和至少一个碳-碳双键组成的如上述定义的烷基，C_2-8链烯基指含有2-8个碳的直链或含支链烯基。例如乙烯基、1-丙烯基、2-丙烯基、1-，2-或3-丁烯基等。

烯基可以是取代的或未取代的，当被取代时，取代基优选为一个或多个以下基团，独立地选自卤素、羟基、巯基、氰基、硝基、叠氮基、C_1-8烷基、C_2-8链烯基、C_2-8链炔基、C_3-8环烷基、C_1-8烷氧基、C_1-8烷基硫基、C_3-8环烷氧基、C_3-8环烷硫基、3-8元杂环基、3-8元杂环基氧基、3-8元杂环基硫基、C_5-10芳基、C_5-10芳基氧基、C_5-10芳基硫基、5-10元杂芳基、5-10元杂芳基氧基、5-10元杂芳基硫基、-S(O)rR₁₂、-C_1-8-S(O)rR₁₂、-C(O)R₁₂、-C_1-8-C(O)R₁₂、-C(O)OR₁₂、-C_1-8-C(O)OR₁₂、-O-C(O)R₁₂、-C_1-8-O-C(O)R₁₂、-NR₁₃R₁₄、-C_1-8-NR₁₃R₁₄、-C(O)NR₁₃R₁₄、-C_1-8C(O)NR₁₃R₁₄、-N(R₁₂)-C(O)R₁₂、-N(R₁₂)-C(O)OR₁₂、或-NH-NR₁₃R₁₄的取代基所取代。

“炔基”指至少两个碳原子和至少一个碳-碳三键组成的如上所定义的烷基，C_2-8链炔基指含有2-8个碳的直链或含支链炔基。例如乙炔基、1-丙炔基、2-丙炔基、1-，2-或3-丁炔基等。

炔基可以是取代的或未取代的，当被取代时，取代基优选为一个或多个以下基团，独立地选自卤素、羟基、巯基、氰基、硝基、叠氮基、C_1-8烷基、C_2-8链烯基、C_2-8链炔基、C_3-8环烷基、C_1-8烷氧基、C_1-8烷基硫基、C_3-8环烷氧基、C_3-8环烷硫基、3-8元杂环基、3-8元杂环基氧基、3-8元杂环基硫基、C_5-10芳基、C_5-10芳基氧基、C_5-10芳基硫基、5-10元杂芳基、5-10元杂芳基氧基、5-10元杂芳基硫基、-S(O)rR₁₂、-C_1-8-S(O)rR₁₂、-C(O)R₁₂、-C_1-8-C(O)R₁₂、-C(O)OR₁₂、-C_1-8-C(O)OR₁₂、-O-C(O)R₁₂、-C_1-8-O-C(O)R₁₂、-NR₁₃R₁₄、-C_1-8-NR₁₃R₁₄、-C(O)NR₁₃R₁₄、-C_1-8C(O)NR₁₃R₁₄、-N(R₁₂)-C(O)R₁₂、-N(R₁₂)-C(O)OR₁₂、或-NH-NR₁₃R₁₄的取代基所取代。

“烷氧基”指-O-(烷基)，其中烷基的定义如上所述。C_1-8烷氧基指含1-8个碳的烷基氧基，非限制性实施例包含甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基等。

烷氧基可以是任选取代的或未取代的，当被取代时，取代基，优选为一个或多个以下基团，独立地选自卤素、羟基、巯基、氰基、硝基、叠氮基、C_1-8烷基、C_2-8链烯基、C_2-8链炔基、C_3-8环烷基、C_1-8烷氧基、C_1-8烷基硫基、C_3-8环烷氧基、C_3-8环烷硫基、3-8元杂环基、3-8元杂环基氧基、3-8元杂环基硫基、C_5-10芳基、C_5-10芳基氧基、C_5-10芳基硫基、5-10元杂芳基、5-10元杂芳基氧基、5-10元杂芳基硫基、-S(O)rR₁₂、-C_1-8-S(O)rR₁₂、-C(O)R₁₂、-C_1-8-C(O)R₁₂、-C(O)OR₁₂、-C_1-8-C(O)OR₁₂、-O-C(O)R₁₂、-C_1-8-O-C(O)R₁₂、-NR₁₃R₁₄、-C_1-8-NR₁₃R₁₄、-C(O)NR₁₃R₁₄、-C_1-8C(O)NR₁₃R₁₄、-N(R₁₂)-C(O)R₁₂、-N(R₁₂)-C(O)OR₁₂、或-NH-NR₁₃R₁₄的取代基所取代。

“环烷氧基”指和-O-(未取代的环烷基)，其中环烷基的定义如上所述。C_3-8环烷氧基指含3-8个碳的环烷基氧基，非限制性实施例包含环丙氧基、环丁氧基、环戊氧基、环己氧基等。

烷氧基可以是任选取代的或未取代的，当被取代时，取代基优选为一个或多个以下基团，独立地选自卤素、羟基、巯基、氰基、硝基、叠氮基、C_1-8烷基、C_2-8链烯基、C_2-8链炔基、C_3-8环烷基、C_1-8烷氧基、C_1-8烷基硫基、C_3-8环烷氧基、C_3-8环烷硫基、3-8元杂环基、3-8元杂环基氧基、3-8元杂环基硫基、C_5-10芳基、C_5-10芳基氧基、C_5-10芳基硫基、5-10元杂芳基、5-10元杂芳基氧基、5-10元杂芳基硫基、-S(O)rR₁₂、-C_1-8-S(O)rR₁₂、-C(O)R₁₂、-C_1-8-C(O)R₁₂、-C(O)OR₁₂、-C_1-8-C(O)OR₁₂、-O-C(O)R₁₂、-C_1-8-O-C(O)R₁₂、-NR₁₃R₁₄、-C_1-8-NR₁₃R₁₄、-C(O)NR₁₃R₁₄、-C_1-8C(O)NR₁₃R₁₄、-N(R₁₂)-C(O)R₁₂、-N(R₁₂)-C(O)OR₁₂、或-NH-NR₁₃R₁₄的取代基所取代。

“卤素”指氟、氯、溴或碘。

“-S(O)rR₁₂”指R₁₂取代的硫、亚硫酰基、硫酰基。

“-C_1-8-S(O)rR₁₂”指R₁₂取代的C_1-8烷基硫、C_1-8烷基亚硫酰基、C_1-8烷基硫酰基。

“-C(O)R₁₂”指R₁₂取代的羰基。

“-C_1-8-C(O)R₁₂”指R₁₂取代的C_1-8烷基羰基。

“-C(O)OR₁₂”指R₁₂取代的羰基氧基。

“-C_1-8-C(O)OR₁₂”指R₁₂取代的C_1-8烷基羰基氧基。

“-O-C(O)R₁₂”指R₁₂取代的氧基羰基。

“-C_1-8-O-C(O)R₁₂”指R₁₂取代的C_1-8烷基氧基羰基。

“-NR₁₃R₁₄”指R₁₃、R₁₄取代的氨基。

“-C_1-8-NR₁₃R₁₄”指R₁₃、R₁₄取代的C_1-8烷基氨基。

“-C(O)NR₁₃R₁₄”指R₁₃、R₁₄取代的酰氨基。

“-C_1-8C(O)NR₁₃R₁₄”指R₁₃、R₁₄取代的C_1-8烷基酰氨基。

“-N(R₁₂)-C(O)R₁₂”指R₁₂取代氨基酰基。

“-N(R₁₂)-C(O)OR₁₂”指R₁₂取代氨基酰基氧基。

“-NH-NR₁₃R₁₄”指R₁₃、R₁₄取代的肼基。

表1.各种缩合剂的简称对应的中文名称

简称	中文名称
		DIC	N,N-二异丙基碳二亚胺
DCC	N,N-二环己基碳二亚胺
		HOBT	1-羟基苯并***
EDC.HCl	1-乙基-3-(3-二甲氨丙基)碳二亚胺盐酸盐
		PyBOP	六氟磷酸苯并***-1-基-氧基三吡咯烷基
PyBroP	三吡咯烷基溴化鏻六氟磷酸盐
		HATU	2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯
HCTU	6-氯苯并三氮唑-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸酯
		DEPBT	3-(二乙氧基磷酰氧基)-1,2,3-苯并三嗪-4-酮
EEDQ	2-乙氧基-1-乙氧碳酰基-1,2-二氢喹啉
		CDI	羰基二咪唑

“双功能连接基”指氨基酸残基，氨基酸的氨基上缺了一个氢，羧基上缺了一个羟基，例如甘氨酸残基为“-NH-CH₂-CO-”。

“任选”或“任选地”意味着随后所描述地事件或环境可以但不必发生，该说明包括该事件或环境发生或不发生地场合。例如，“任选被烷基取代的杂环基团”意味着烷基可以但不必须存在，该说明包括杂环基团被烷基取代的情形和杂环基团不被烷基取代的情形。

“取代的”指基团中的一个或多个氢原子，优选为最多5个，更优选为1～3个氢原子彼此独立地被相应数目的取代基取代。不言而喻，取代基仅处在它们的可能的化学位置，本领域技术人员能够在不付出过多努力的情况下确定（通过实验或理论）可能或不可能的取代。例如，具有游离氢的氨基或羟基与具有不饱和（如烯属）键的碳原子结合时可能是不稳定的。

“药物组合物”表示含有一种或多种本文所述化合物或其生理学上/可药用的盐或前体药物与其他化学组分的混合物，以及其他组分例如生理学/可药用的载体和赋形剂。药物组合物的目的是促进对生物体的给药，利于活性成分的吸收进而发挥生物活性。

以下结合实施例用于进一步描述本发明，但这些实施例并非限制着本发明的范围。

本发明化合物结构是通过核磁共振（NMR）或/和液质联用色谱（LC-MS）来确定的。NMR位移（δ）以百万分之一（ppm）的单位给出。NMR的测定是用BrukerAVANCE-400核磁仪，测定溶剂为氘代二甲基亚砜（DMSO-d₆）、氘代氯仿（CDCl₃）、氘代甲醇（CD3OD），内标为四甲基硅烷（TMS）。

液质联用色谱LC-MS的测定用Agilent1200Infinity Series质谱仪。HPLC的测定使用安捷伦1200DAD高压液相色谱仪（Sunfire C18150×4.6mm色谱柱）。

薄层层析硅胶板使用烟台黄海HSGF254或青岛GF254硅胶板，薄层色谱法（TLC）使用的硅胶板采用的规格是0.15mm～0.2mm，薄层层析分离纯化产品采用的规格是0.4mm～0.5mm。

柱层析一般使用烟台黄海硅胶200～300目硅胶为载体。

本发明的已知的起始原料可以采用或按照本领域已知的方法来合成，或可购买自ABCR GmbH&Co.KG，Acros Organics，Aldrich Chemical Company，韶远化学科技（Accela ChemBio Inc）、达瑞化学品等公司。

氩气氛或氮气氛是指反应瓶连接一个约1L容积的氩气或氮气气球。

氢气氛是指反应瓶连接一个约1L容积的氢气气球。

加压氢化反应使用Parr3916EKX型氢化仪和清蓝QL-500型氢气发生器或HC2-SS型氢化仪。

氢化反应通常抽真空，充入氢气，反复操作3次。

微波反应使用Anton Paar Monowave300型微波反应器。

实施例中无特殊说明，反应在氮气氛或氩气氛下进行。

实施例中无特殊说明，溶液是指水溶液。

实施例中无特殊说明，反应的温度为室温。

室温为最适宜的反应温度，为20℃～30℃。

实施例中的反应进程的监测采用薄层色谱法（TLC），反应所使用的展开剂的体系有：二氯甲烷和甲醇体系，正己烷和乙酸乙酯体系，溶剂的体积比根据化合物的极性不同而进行调节。

纯化化合物采用的柱层析的洗脱剂的体系和薄层色谱法的展开剂体系包括：A：二氯甲烷和甲醇体系，B：正己烷和乙酸乙酯体系。溶剂的体积比根据化合物的极性不同而进行调节，也可以加入少量的三乙胺和醋酸等碱性或酸性试剂进行调节。

4臂聚乙二醇双甘油（4arm poly(ethylene glycol)(diglycerol)）购自JenkemTechnology。本发明实施例采用4ARM(DG)-PEG-40K即MW为40000道尔顿（聚合度n约为226）的化合物为原料。

实施例

步骤一：

500mL圆底烧瓶中加入化合物2-1（5g，0.026mol，1.0当量），铁粉（4.30g，0.078mol，3.0当量），氯化铵（6.96g，0.13mol，5.0当量），水（150mL）和甲醇（50mL），N₂保护下回流2小时。LC-MS监测原料转化完全，停止反应，冷却至室温，过滤，滤饼用乙酸乙酯洗涤，分液，水相用乙酸乙酯萃取（30mL×5），合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，粗产物用柱层析分离（石油醚：乙酸乙酯：5:1）。2.0g，黄色固体，收率50%。

ESI:m/e⁺:166[M+H⁺].

步骤二：

25mL单口烧瓶中加入化合物1-1（0.15g，0.57mmol，1.0当量）和醋酸（4mL），氮气保护下加热到80度，在80度下滴加化合物2-2（0.122g，0.74mmol，1.3当量）的甲苯（4mL）溶液。在氮气下加热过夜，反应结束后，冷却至室温，过滤，滤饼用丙酮洗涤，空气干燥得黄色固体。0.15g，产率:67%。

ESI:m/e⁺:393[M+H⁺].

¹H-NMR[DMSO,400MHz]:δ8.47(s,1H),7.52(s,2H),7.25(s,1H),6.50(s,1H),6.29(s,2H),5.41(s,2H),5.22(s,2H),1.82-1.90(m,2H),0.88(t,J=7.2Hz,3H).

步骤三：

50mL反应瓶中加入化合物1-2（52mg，0.13mmol，1.0当量），N-叔丁氧基甘氨酸（58mg，0.33mmol，2.5当量），无水二氯甲烷50mL，冰浴下搅拌。反应液在冰浴下搅拌10分钟，然后加入DMAP（16mg，0.39mmol，1.0当量）和DCC（80mg，0.39mmol，3.0当量）。然后室温反应过夜，停止反应。过滤，滤液用饱和碳酸氢钠溶液洗涤(10mL×1），盐水（10mL×2）洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，减压旋蒸，粗产物用大板分离（二氯甲烷：甲醇：V/V25:1），32mg，淡黄色固体，收率45%。

ESI:m/e⁺:550[M+H⁺].

步骤四：

50mL反应瓶中加入化合物1-3（40mg，0.07mmol，1.0当量），二氯甲烷（10mL），冰浴下搅拌。冰浴下滴加三氟乙酸（1mL），室温搅拌一小时，LC-MS监测原料转化完全，旋干，粗产物直接用于下一步。得35mg黄色油状物，收率100%。

步骤五：

100mL三口烧瓶中加入化合物3-1(3.125g，0.078mmol，1.0当量)，甲苯(60mL)，N₂保护下共沸除水。干燥结束后将体系冷却至30度，然后滴加叔丁醇钾(105mg，0.936mmol，12当量）的叔丁醇溶液（2mL），搅拌半小时，然后滴加溴乙酸叔丁酯（0.24g，1.248mmol，16当量），30度下搅拌一小时，反应结束冷却至25度。滴加***（40mL），析出白色固体，过滤，白色固体用***洗涤，固体再用二氯甲烷溶液，然后滴加***（90mL），析出白色固体，过滤，***洗涤，空气干燥得白色固体。3.0g，收率96%。

步骤六：

50mL单口瓶中加入化合物3-2(1.20g，0.03mmol，1.0当量)，无水二氯甲烷(12mL)，冰浴下搅拌，然后在冰浴下滴加三氟乙酸(6mL)，室温搅拌三小时，反应结束后，旋干。残留物用二氯甲烷（6mL）溶解，滴加***，白色固体析出，过滤。固体用碳酸氢钠溶液溶解（5mL，0.5%NaHCO₃），二氯甲烷萃取（15mL×2），合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，粗产物用二氯甲烷溶解，滴加***析出白色固体，过滤，固体然后用无水***洗涤，干燥得白色固体。0.70g，收率58%。

¹H-NMR[CDCL₃,400MHz]:δ4.15(s,1H),3.47-3.81(m,415H).

步骤七：

100mL单口烧瓶中加入化合物3-3（124mg，0.0031mmol，1.0当量），无水二氯甲烷（10mL），氮气保护，冰浴下搅拌，冰浴下加入化合物1-4（35mg，0.062mmol，20当量），PPAC（130mg，50重量%的乙酸乙酯溶液，0.409mmol，132当量），DMAP（38mg，0.31mmol），室温搅拌过夜。反应结束后，旋干，粗产物用凝胶柱分离。淡黄色色固体PEG-FL118，90mg，纯度95%（HPLC的具体结果参见图1，固定相：XDB-C18，流动相：乙腈/水：5/95→乙腈/水：95/5），产率70%。

¹H-NMR[CDCl₃,400MHz]:δ8.48(s,1H),8.19(t,J=6.0Hz,1H),7.52(s,1H),7.47(s,1H),7.04(s,1H),6.29(s,2H),5.47(s,2H),5.23(s,2H),4.15-4.21(m,1H),4.05-4.11(m,1H),3.92(s,2H),3.47-3.69(m,1120H),2.11-2.17(m,2H),0.90(t,J=7.2Hz,3H).

生物活性评价

一、PEG-FL118抑制细胞增殖活性测试

以下所述的体外细胞试验可用来测定本发明化合物对于癌细胞的增殖抑制活性，其活性可用IC₅₀值来表示。PEG-FL118所携带的FL-118是一种DNA拓扑异构酶-I的抑制剂,对多种癌细胞有杀伤作用;我们比较了PEG-FL118和FL118对癌细胞的增殖抑制活性。

此类试验的一般方案如下：首先选择多种不同的癌细胞系（购于Institute ofbiochemistry and cell biology），以适宜的细胞浓度（例如，5000个细胞/mL培养液）接种在96孔培养板上，随后向各孔加入用培养基稀释的一系列梯度浓度（一般8到10个浓度）的受试化合物溶液，连续培养72个小时。72小时后，可用细胞计数试剂盒（Luminescent Cell Viability Assay，购于Promega）方法测定化合物抑制细胞增殖的活性。IC₅₀值可通过一系列不同浓度下，受试化合物对细胞增殖的抑制数值进行计算。

本发明化合物的生化学活性通过以上的试验进行测定，测得的IC₅₀值见下表。

结论：PEG-FL118各种癌细胞增殖均有明显的抑制活性，与FL-118的癌细胞增殖抑制活性相当。

药代动力学评价

二、PEG-FL118的药代动力学测试

1、摘要

以大鼠为受试动物，应用HPLC法测定了大鼠静脉给予PEG-FL118或FL-118化合物后不同时间血浆中的FL-118药物浓度。研究PEG-FL118化合物在大鼠体内的药代动力学行为，评价其药代动力学特征。

2、试验方案

2.1试验药品

PEG-FL118和FL-118化合物

2.2试验动物

健康成年SD大鼠6只，雄性，平均分成2组，每组3只，购自上海斯莱克实验动物有限责任公司。

2.3药物配制

PEG-FL-118：称取一定量药物，加生理盐水配制成5.3614mg/ml溶液。

FL-118：称取一定量药物，二甲基亚砜使溶解（二甲基亚砜最终含量为5%），加0.25%羟丙基-β-环糊精配制成0.2mg/mL溶液。

2.4给药

SD大鼠禁食过夜后静脉给药，给药体积均为5.0mL/kg。PEG-FL-118的给药剂量为26.807g/kg，FL-118的给药剂量为1mg/kg；在这种剂量下两者的摩尔浓度相同。

3、操作

大鼠静脉给药PEG-FL118化合物，于给药前及给药后5分钟，15分钟，0.5，1.0，2.0，3.0，6.0，24.0，48.0，72.0，96.0，154.0小时颈静脉采血0.3ml，置于肝素化试管中，4℃、6000转/分钟离心5分钟分离血浆，于-80℃保存，给药后2小时进食。

大鼠静脉给药FL118化合物，于给药前及给药后5分钟，15分钟，0.5，1.0，2.0，3.0，6.0，24.0小时颈静脉采血0.3ml，置于肝素化试管中，4℃、6000转/分钟离心5分钟分离血浆，于-80℃保存，给药后2小时进食。

测定不同浓度的药物静脉给药后大鼠血浆中的FL-118浓度：取给药后各时刻的大鼠血浆80μL，加入160μL含有内标FL-118和0.5%醋酸的乙腈溶液，涡旋混合1分钟，4℃离心10分钟（13000转/分钟），取上清液10μL进行LC/MS/MS。

4、药代动力学参数结果

PEG-FL118和FL-118给药后的FL-118药代动力学参数如下：

结论：与直接注射FL-118相比,PEG-FL118产生的FL-118的半衰期和AUC都高很多倍，大幅降低清除率，具有明显的药代动力学优势。

最后应当说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制本发明，尽管参照较佳实施例对本发明进行了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的精神和范围，其均应涵盖在本发明的权利要求范围内。

Claims

1.一种具有式（I）结构的多支链聚合药物前体或其药学上可接受的盐，

其中，A选自如下结构：

条件是R₁、R₂、R₃、R₄至少一个选自式(B)取代基;

R₁₂、R₁₃、R₁₄选自氢、C_1-4烷基；

L为双功能连接基，选自天然氨基酸残基；

m为0、1、2；

n为正整数；

p、q、t为0、1、2、3或4。

2.根据权利要求1所述的多支链聚合药物前体或其药学上可接受的盐，其特征在于，双功能连接基L选自丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、甘氨酸、苯丙氨酸、色氨酸残基；L优选自丙氨酸或甘氨酸残基。

3.根据权利要求1所述的多支链聚合药物前体或其药学上可接受的盐，其特征在于，A为形成式（II）化合物

R₁、R₂、R₃、R₄、R₅、R₆、R₇、R₈、R₁₀、R₁₁、R₁₂、R₁₃、R₁₄、L、m、n、f如权利要求1所定义。

4.根据权利要求3所述的多支链聚合药物前体或其药学上可接受的盐，其特征在于，R₇、R₈均为氢时，形成式（II-a）化合物：

R₁、R₂、R₃、R₄、R₅、R₆、R₁₀、R₁₁、R₁₂、R₁₃、R₁₄、L、m、n、r如权利要求1所定义，条件是当m为1时，R₅、R₆不同时为氢。

5.根据权利要求4所述的多支链聚合药物前体或其药学上可接受的盐，其特征在于，R₅、R₆均为氢、m为2，形成式（II-a-1）化合物：

R₁、R₂、R₃、R₄、R₁₀、R₁₁、R₁₂、R₁₃、R₁₄、L、n、r如权利要求1所定义。

6.根据权利要求5所述的多支链聚合药物前体或其药学上可接受的盐，其特征在于，选自式（II-a-1-1）化合物：

n如权利要求1所定义。

7.根据权利要求4所述的多支链聚合药物前体或其药学上可接受的盐，其特征在于，m为1，R₅、R₆之一选自氢，另一选自甲基，形成式（II-a-2）化合物：

8.根据权利要求7所述的多支链聚合药物前体或其药学上可接受的盐，其特征在于，选自式（II-a-2-1）化合物：

n如权利要求1所定义。

9.根据权利要求1所述的多支链聚合药物前体或其药学上可接受的盐，其特征在于，A为m为1，R₅、R₆、R₇、R₈同时为氢，形成式（II-b）化合物：

10.根据权利要求9所述的多支链聚合药物前体或其药学上可接受的盐，其特征在于，选自式（II-b-1）化合物：

n如权利要求1所定义。

11.根据权利要求1所述的多支链聚合药物前体或其药学上可接受的盐，其特征在于，A为形成式(III)化合物：

R₁、R₂、R₃、R₄、R₅、R₆、R₉、R₁₀、R₁₁、R₁₂、R₁₃、R₁₄、L、m、n、p、q、t、r如权利要求1所定义。

12.根据权利要求11所述的多支链聚合药物前体或其药学上可接受的盐，其特征在于，m为1，形成式（III-a）化合物：

R₁、R₂、R₃、R₄、R₅、R₆、R₉、R₁₀、R₁₁、R₁₂、R₁₃、R₁₄、L、n、p、q、t、r如权利要求1所定义。

13.根据权利要求12所述的多支链聚合药物前体或其药学上可接受的盐，其特征在于，R₅、R₆均为氢，形成式（III-a-1）化合物：

R₁、R₂、R₃、R₄、R₉、R₁₀、R₁₁、R₁₂、R₁₃、R₁₄、L、n、p、q、t、r如权利要求1所定义。

14.根据权利要求13所述的多支链聚合药物前体或其药学上可接受的盐，其特征在于，选自式（III-a-1-1）化合物：

或式（III-a-1-2）化合物：

或式（III-a-1-3）化合物：

n如权利要求1所定义。

15.根据权利要求11所述的多支链聚合药物前体或其药学上可接受的盐，其特征在于，m为0或2，R₅、R₆均为氢，形成式（III-b）化合物：

16.根据权利要求11所述的多支链聚合药物前体或其药学上可接受的盐，其特征在于，p为0，形成式（III-c）化合物：

R₁、R₂、R₃、R₄、R₅、R₆、R₁₀、R₁₁、R₁₂、R₁₃、R₁₄、L、m、n、q、t、r如权利要求1所定义。

17.根据权利要求1至16中任一项所述的多支链聚合药物前体或其药学上可接受的盐，其特征在于，R₁、R₂、R₃、R₄均选自式（B）结构取代基的摩尔百分比为85%以上。

18.根据权利要求17所述的多支链聚合药物前体或其药学上可接受的盐，其特征在于，R₁、R₂、R₃、R₄均为式（B）结构取代基化合物的摩尔百分比为95%以上，其它R₁、R₂、R₃、R₄任1-3个取代基团选自除式（B）结构取代基以外化合物的摩尔百分比小于2.0%。

19.根据权利要求1至17中任一项所述的多支链聚合药物前体或其药学上可接受的盐，其特征在于，药物前体总的表观相对分子量约20000至约60000道尔顿；优选约35000至约45000道尔顿。

20.根据权利要求10所述的多支链聚合药物前体或其药学上可接受的盐，其特征在于，式（II-b-1）化合物摩尔百分比为85%以上，总的表观相对分子量约20000至约60000道尔顿。

21.根据权利要求20所述的多支链聚合药物前体或其药学上可接受的盐，其特征在于，式（II-b-1）化合物摩尔百分比为90%以上，总的表观相对分子量约35000至约45000道尔顿。

22.一种如式（I）所示的多支链聚合药物前体或其药学上可接受的盐的制备方法，其包括如下制备步骤：

1）化合物1在脱水剂存在下和叔丁氧羰基保护的氨基酸反应，然后在酸性条件下脱保护得到化合物2或其酸式盐；

2）化合物3在催化剂存在下和化合物4进行醚化反应，然后在碱性条件下水解得到化合物5；

3）化合物5根据基团A的不同形成化合物6；

23.根据权利要求22所述的制备方法，其特征在于：

步骤1）中所述脱水剂选自DCC、DIC、EDC.HCl；所述酸为有机酸或无机酸，所述有机酸选自三氟乙酸、三氯乙酸、甲磺酸、三氟甲磺酸或对甲苯磺酸，所述无机酸选自盐酸、氢溴酸、氢氟酸、氢碘酸、硫酸或磷酸；

步骤2）中醚化反应所用催化剂选自硫酸、磺酸或甲磺酸；所述碱性条件是指由无机碱形成的溶液，其选自碳酸钠、碳酸钾、碳酸氢钠、碳酸氢钾、氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化锂、醋酸钠或其组合的水溶液；

24.根据权利要求22所述的制备方法，其特征在于：当A为形成式（II）化合物，其制备方法如下：

或者，

上述第四步反应以化合物5先与化合物7'进行反应，经卤代后和/或根据R₇、R₈的定义不同转换成相应的基团，其制备方法如下：

X、Y各自独立地选自卤素或氢，但不同时为氢。

25.根据权利要求24所述的制备方法，其特征在于：当A为形成式（II-b-1）化合物，其制备方法如下：

26.根据权利要求22所述的制备方法，其特征在于：当A为时，形成式（III）化合物，其制备方法如下：

27.一种药物组合物，其包括治疗有效剂量的根据权利要求1所述的多支链聚合药物前体或其药学上可接受的盐及可药用的载体。

28.根据权利要求1所述的多支链聚合药物前体或其药学上可接受的盐、或根据权利要求27所述的药物组合物在制备用于治疗哺乳动物受试者体内与拓扑异构酶I相关的疾病的药物中的应用。

29.根据权利要求1所述的多支链聚合药物前体或其药学上可接受的盐在制备用于针对哺乳动物受试者内的实体肿瘤的药物中的应用。