DE806667T1 - Immunoassay für H. pylori in Fäkalienproben - Google Patents

Immunoassay für H. pylori in Fäkalienproben

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DE806667T1 DE0806667T DE97303147T DE806667T1 DE 806667 T1 DE806667 T1 DE 806667T1 DE 0806667 T DE0806667 T DE 0806667T DE 97303147 T DE97303147 T DE 97303147T DE 806667 T1 DE806667 T1 DE 806667T1
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Christopher Vance Larka
Ching Sui Arthur Yi
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    • G01N33/50Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/569Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
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Claims (12)

I I «♦ * I♦ Il• aI*I t>··· ·»1I I IIIVt P03 147.9D-Erc tPatentansprüche
1. Verfahren zur Bestimmung von H. pylori in einer Stuhlprobe, umfassend:
(a) Dispergieren einer Stuhlprobe, die im Verdacht steht, H. pylori im enthalten, in einem Probenverdünnungsmittel;
(b) In-Kontakt-Bringen der Stuhlprobe im Verdünnungsmittel mit einem ersten polyklonalen Antikörper gegen H. pylori-Anügaa, so daß ein Komplex aus Antikörper und Antigen gebildet wird;
(c) Trennen von Probe und Komplex;
(d) Exponieren des Komplexes bezüglich eines zweiten polyklonalen Antikörpers gegen besagtes Antigen, wobei ein Teil des Antikörpers mit dem Komplex reagiert, jeweils der erste oder der zweite Antikörper an ein festes Trägermaterial gebunden und der verbleibende mit einem Detektionsagens markiert wird; und
(e) Bestimmen der Menge an markiertem Antikörper und damit Bestimmen der Anwesenheit von H. pylori-Antigen in der Stuhlprobe.
2. Verfahren gemäß Anspruch 1, wobei der erste Antikörper an ein festes Trägermaterial gebunden ist und der zweite Antikörper mit einem Detektionsagens markiert ist.
3. Verfahren gemäß Anspruch 1, wobei der erste Antikörper mit einem Detektionsagens, vorzugsweise ausgewält aus alkalischer Phosphatase und ß-Galaktosidase Meerrettich-Peroxidase, markiert ist, und der zweite an ein festes Trägermaterial gebunden ist.
4. Verfahren gemäß einem der vorstehenden Ansprüche, wobei das Probenverdünnungsmittel ein auf Proteinen basierendes Verdünnungsmittel ist, bevorzugt ein Verdünnungsmittel, das ein Protein enthält, welches aus fetalem Kälberserum, normalem Ziegenserum, Meerschweinchenserum, Pferdeserum, Casein, Albumin, Gelatine und Rinderserumalbumin ausgewählt ist.
":>:,fV::\.fj'-E/iEP O 30 6 8 67
5. Verfahren gemäß einem der vorstehenden Ansprüche, wobei der polyklonale Antikörper durch Sensitivierung eines antikörpe&phgr;roduzierenden Säugetieres mit H. pylori-Zetien erhalten wird.
6. Verfahren gemäß Anspruch 5, wobei die Zellen Zellen von einer Vielzahl von H. /^/ori-Stämmen sind.
7. Verfahren gemäß Anspruch 5, wobei die Zellen Zellen vom ATCC-Stamm 43504 sind.
8. Verfahren gemäß einem der vorstehenden Ansprüche, wobei, nachdem der Komplex bezüglich des zweiten Antikörpers exponiert wurde, der Komplex mit einem Puffer, der die Kreuzreaktivität reduziert oder die Spezifität des Tests auf andere Weise verbessert, gewaschen wird.
9. Verfahren gemäß Anspruch 8, wobei die Waschlösung phosphatgepufferte Salzlösung ist.
10. Verfahren zur Bestimmung von H. pylori in einer Stuhlprobe, umfassend:
(a) Dispergieren einer Stuhlprobe, die im Verdacht steht, H. pylori zu enthalten, in einem Probenverdünnungsmittel;
(b) In-Kontakt-Bringen der Stuhlprobe im Verdünnungsmittel mit einem ersten polyklonalen Antikörper gegen H. pylori-Antigen, der an ein festes Trägermaterial gebunden ist, und einem zweiten markierten Antikörper gegen H. pylori, so daß ein Komplex aus den Antikörpern und dem Antigen gebildet wird;
(c) Trennen von Probe und Komplex;
(d) Bestimmen der Menge an markiertem Antikörper und damit Bestimmen der Anwesenheit von H. pylori-Antigen in der Stuhlprobe.
11. Verfahren zur Bestimmung von H. pylori in einer Stuhlprobe, umfassend:
(a) Dispergieren einer Stuhlprobe, die im Verdacht steht, H. pylori zu enthalten, in einem Probenverdünnungsmittel;
©£··/: EP O dUooB/ I »·
• rc
(b) In-Kontakt-Bringen der Stuhlprobe im Verdünnungsmittel mit einem ersten polyklonalen Antiko^er gegen H. pylori-Antigen, der von einer ersten antikö&phgr;e&phgr;roduzierenden Spezies hergestellt wird und an ein festes Trägermaterial gebunden ist, so daß ein Komplex aus Antikö^er und Antigen gebildet wird;
(c) Trennen von Probe und Komplex;
(d) In-Kontakt-Bringen des in Schritt (b) gebildeten Antikö^er-Antigen-Komplexes mit einem polyklonalen Primärantikörper gegen H. pylori-Antigen, der von einer zweiten antikö&phgr;e&phgr;roduzierenden Spezies erhalten wurde, zur Herstellung eines &Agr;&eegr;&iacgr;&iacgr;^&phgr;&bgr;&Ggr;-Antigen-&Agr;&eegr;&iacgr;&idiagr;^&phgr;&bgr;&Ggr;-&Kgr;&ogr;&igr;&eegr;&rgr;&Igr;&bgr;&khgr;&egr;&bgr;;
(e) Entfernen des nicht im Komplex aus Schritt (d) vorhandenen
(f) In-Kontakt-Bringen des in Schritt (d) gebildeten
&Agr;&eegr;&iacgr;&idigr;^&phgr;&egr;&Ggr;-&Kgr;&ogr;&pgr;&phgr;&Igr;&egr;&khgr;&egr;&egr; mit einem &Bgr;&egr;&Igr;&agr;&pgr;&kgr;&Igr;&agr;&Ggr;&EEgr;&eegr;^&ogr;&phgr;&egr;&Ggr;, wobei der Sekundärantikö&phgr;er ein &Agr;&eegr;&idiagr;&iacgr;&Mgr;&phgr;&bgr;&Ggr; gegen die zweite
Spezies ist und wobei der Sekundärantikö&phgr;er einen Komplex mit dem
Antigen- &Agr;&eegr;&ohacgr;&ohgr;&phgr;&bgr;&Ggr;-&Kgr;&ogr;&igr;&eegr;&rgr;&Igr;&egr;&khgr; bildet; und
(g) Bestimmen der Anwesenheit von H. pylori-Antigen in der Stuhlprobe.
12. Kit zur Bestimmung von H. pylori in einer Stuhlprobe, enthaltend eine Platte mit Vertiefungen, an die ein polyklonaler &Agr;&eegr;&eegr;^&ogr;&phgr;&egr;&Ggr; gegen H. pylori-Antigen gebunden ist, ein auf Proteinen basierendes Probenverdünnungsmittel, ein Enzym/polyklonaler Antikö&phgr;er-Konjugat gegen H. pylori-Antigen, Waschpuffer und eine Substratlösung.
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