DE69806024T2 - Erkennung und identifizierung von menschlichem papillomavirus durch pcr und typ-spezifischer reverser hybridisierung - Google Patents

Erkennung und identifizierung von menschlichem papillomavirus durch pcr und typ-spezifischer reverser hybridisierung

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Claims (15)

1. Verfahren zum Nachweis und/oder Identifizierung von HPV in einer biologischen Probe, umfassend die Schritte:
(i) amplifizieren eines Polynukleinsäure-Fragments von HPV unter Verwendung von:
- einem 5'-Primer, der spezifisch mit der A-Region oder der.B-Region des Genoms mindestens eines HPV-Typs hybridisiert, wobei die A-Region oder die B-Region in Fig. 1 dargestellt ist, und
- einem 3'-Primer, der spezifisch mit der C-Region des Genoms mindestens eines HPV-Typs hybridisiert, wobei die C-Region in Fig. 1 dargestellt ist,
(ii) hybridisieren der amplifizierten Fragmente aus Schritt (i) mit mindestens einer Sonde, die in der Lage ist, spezifisch mit der D-Region mindestens eines HPV-Typs zu hybridisieren, wobei die D-Region in Fig. 1 dargestellt ist.
2. Verfahren nach Anspruch 1, ferner dadurch gekennzeichnet, dass:
- das 3'-Ende des spezifisch mit der A-Region des Genoms mindestens eines HPV-Typs hybridisierenden 5'-Primers, an Position 6572 des Genoms von HPV 16 oder an der entsprechenden Position irgendeines anderen HPV-Genoms wie in Fig. 1 dargestellt, lokalisiert ist und/oder
- das 3'-Ende des spezifisch mit der B-Region des Genoms mindestens eines HPV-Typs hybridisierenden 5'-Primers, an Position 6601 des Genoms von HPV 16 oder an der entsprechenden Position irgendeines anderen HPV-Genoms wie in Fig. 1 dargestellt, lokalisiert ist und/oder
- das 3'-Ende des spezifisch mit der C-Region des Genoms mindestens eines HPV-Typs hybridisierenden 3'-Primers, an Position 6624 des Genoms von HPV 16 oder an der entsprechenden Position irgendeines anderen HPV-Genoms wie in Fig. 1 dargestellt, lokalisiert ist.
3. Ein Verfahren nach Anspruch 2, femer dadurch gekennzeichnet, dass:
- der spezifisch mit der A-Region hybridisierende 5'-Primer aus der folgenden Liste ausgewählt ist:
SGP3 (SEQ ID NO 2), SGP3A (SEQ ID NO 3), SGP3B (SEQ ID NO 4), SGP3C (SEQ ID NO 10), SGP3D (SEQ ID NO 11), SGP3E (SEQ ID NO 12), SGP3F (SEQ ID NO 13), SGP3G (SEQ ID NO 14) und/oder
- der spezifisch mit der B-Region hybridisierende 5'-Primer aus der folgenden Liste ausgewählt ist:
SGP1 (SEQ ID NO 6), SGPIA (SEQ ID NO 15), SGPIB (SEQ ID NO 16), SGPIC (SEQ ID NO 17), SGP ID (SEQ ID NO 18) und/oder
der spezifisch mit der C-Region hybridisierende 3'-Primer aus der folgenden Liste ausgewählt ist:
SGP2 (SEQ ID NO 9), SGP2A (SEQ ID NO 8), SGP2B (SEQ ID NO 19), SGP2C (SEQ ID NO 20), SGP2D (SEQ ID NO 21), SGP2E (SEQ ID NO 22), SGP2F (SEQ ID NO 23), SGP2H (SEQ ID NO 98), SGP2I (SEQ ID NO 154), SGP2 J (SEQ ID NO 155), SGP2K (SEQ ID NO 156), SGP2L (SEQ ID NO 157), SGP2M (SEQ ID NO 158), SGP2N (SEQ DD NO 159), SGP2P (SEQ ID NO 160).
4. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 3, femer dadurch gekennzeichnet, dass die in Schritt (ii) erwähnte Sonde in der Lage ist, spezifisch mit der D-Region des Genoms nur eines HPV-Typs zu hybridisieren und daher die spezifische Identifizierung dieses HPV-Typs ermöglicht, wenn dieser Typ in einer biologischen Probe vorliegt.
5. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 3, femer dadurch gekennzeichnet, dass die in Schritt (ii) erwähnte Sonde in der Lage ist, spezifisch mit der D-Region von mehr als einem HPV-Typ zu hybridisieren und daher den Nachweis von irgendeinem des mehr als einem HPV-Typ ermöglicht, wenn irgendeiner der Typen in einer biologischen Probe vorliegt.
6. Verfahren nach Anspruch 4, femer dadurch gekennzeichnet, dass die Sonde, die in der Lage ist, spezifisch mit der D-Region des Genoms nur eines HPV-Typs zu hybridisieren, insbesondere mit der E-Region hybridisiert, wobei die E-Region eine Subregion der D-Region wie in Fig. 1 dargestellt ist.
7. Verfahren nach Anspruch 4, femer dadurch gekennzeichnet, dass die Sonde, die in der Lage ist, spezifisch mit der D-Region des Genoms nur eines HPV-Typs zu hybridisieren, insbesondere mit der 22 Bp-Region hybridisiert, die zwischen der B-Region und der C- Region wie in Fig. 1 dargestellt lokalisiert ist.
8. Verfahren nach Anspruch 7, femer dadurch gekennzeichnet, dass die spezifisch mit der 22 Bp-Region nur eines HPV-Typs hybridisierende Sonde aus der folgenden Liste ausgewählt ist:
HPV6 Pr1, HPV6 Pr2, HPV6 Pr3, HPV6 Pr4, HPV6 Pr5, HPV11 Pr1, HPV11 Pr2, HPV11 Pr3, HPV11 Pr4, HPV11 Pr5, HPV16 Pr1, HPV16 Pr2, HPV16 Pr3, HPV16 Pr4, HPV16 Pr5, HPV18 Pr1, HPV18 Pr2, HPV18 Pr3, HPV18 Pr4; HPV18 Pr5, HPV31 Pr1, HPV31 Pr2, HPV31 Pr3, HPV31 Pr4, HPV31 Pr5, HPV31 Pr21, HPV31 Pr22, HPV31 Pr23, HPV31 Pr24, HPV31 Pr25, HPV31 Pr26, HPV31 Pr31, HPV31 Pr32, HPV33 Pr1, HPV33 Pr2, HPV33 Pr3, HPV33 Pr4, HPV33 Pr5, HPV33 Pr21, HPV33 Pr22, HPV33 Pr23, HPV33 Pr24, HPV33 Pr25, HPV33 Pr26, HPV40 Pr1, HPV45 Pr1 (= SGPP68), HPV45 Pr2, HPV45 Pr3, HPV45 Pr4, HPV45 Pr5, HPV45 Pi-11, HPV45 Pr12, HPV45 Prl3, HPV52 Pr1, HPV52 Pr2, HPV52 Pr3, HPV52 Pr4. HPV52 Pr5, HPV52 Pr6, HPV56 Pr1, HPV56 Pr2, HPV56 Pr3, HPV56 Pr11, HPV56 Pr12, HPV58 Pr1, HPV58 Pr2, HPV58 Pr3, HPV58 Pr4 (SEQ ID NO 24 bis 91), und, SGPP35, SGPP39, SGPP51 (= HPV51 Pr1), SGPP54. SGPP59, SGPP66, SGPP70 ( = HPV70 Pr1), SGPP13, SGPP34, SGPP42, SGPP43, SGPP44, SGPP53, SGPP55. SGPP69, SGPP61, SGPP62, SGPP64, SGPP67, SGPP74 (= HPV74 Prl3), MM4 ( = HPVM4 Pr1 l), mm.7, MM8 (SEQ ID NO 92 bis 115), und, HPV18b Pr1, HPV18b Pr2, HPV31 Vs40-1, HPV31 Vs40-2, HPV31 Vs40-3, HPV34 Pr1, HPV35 Pr1, HPV35 Pr2, HPV35 Pr3, HPV39 Pr1, HPV42 Pr1, HPV42 Pr2, HPV43 Pr1, HPV43 Pr2, HPV43 Pr3, HPV44 Pr1, HPV44 Pr2, HPV44 Pr3. HPV44 Pr4, HPV51 Pr2, HPV53 Pr1, HPV54 Pr1, HPV54 Pr11, HPV54 Pr11 as, HPV54 Pr12, HPV55 Pr1, HPV55 Pr11, HPV55 Pr12, HPV55 Pr13, HPV56 Vs74-1, HPV59 Pr1. HPV59 Pril, HPV59 Pr12, HPV59 Pr-13, HPV66 Pr1, HPV67 Pr1, HPV67 Pril, HPV67 Pr12, HPV67 Pr13, HPV67 Pr21, HPV67 Pr22, HPV67 Pr23, HPV68 Pr1, HPV68 Pr2, HPV68 Pr3, HPV68 Vs45-1, HPV68 Vs45-2, HPV70 Pr1, HPV70 Pr12, HPV70 Pr13, HPV74 Pr1, HPV74 Pr11, HPV74 Pr12, HPV74 Pr2, HPV74 Pr3, HPVM4 Pr1, HPVM4 Pr12, HPVM4 Pr21, HPVM4 Pr22 (SEQ ID NO 161 bis 219).
9. Verfahren nach Anspruch 5, femer dadurch gekennzeichnet, dass die Sonde, die in der Lage ist, spezifisch mit der D-Region des Genoms von mehr als einem HPV-Typ zu hybridisieren, insbesondere mit der E-Region hybridisiert, wobei die E-Region eine Subregion der D-Region wie in Fig. 1 dargestellt ist.
10. Verfahren nach Anspruch 9, femer dadurch gekennzeichnet, dass die mit der E-Region von mehr als einem HPV-Typ spezifisch hybridisierende Sonde aus der folgenden Liste ausgewählt ist:
HPVuni1, HPVuni2, HPVuni3, HPVuni4, HPVuni5, HPVuni6, HPVuni7, HPVuni2L2, HPVuni2L3, HPVuni2L4, HPVuni2L5, HPVuni2L6, HPVuni2L7, HPVuni4L1, HPVuni4L2, HPVuni4L3, HPVuni4L4, HPVuni4L5, HPVuni4L6 (SEQ ID NO 116 bis 134), und, HPVuni1A, HPVuni1B, HPVuni1C, HPVuni2A, HPVuni3A (SEQ ID NO 220 bis 224), und, HPV G1, HPV GIA1, HPV GIA2, HPV GIA3, HPV GIA4, HPV G2, HPV G3, HPV G4. HPV G5, HPV G6, HPV R1, HPV R10, HPV R11, HPV R2, HPV R3, HPV R4, HPV R5, HPV R6, HPV R7, HPV R8, HPV R9 (SEQ ID NO 225 bis 245).
11. Ein Primer wie in einem der Ansprüche 1 bis 3 definiert, zur Verwendung zum Nachweis und/oder Identifizierung von HPV in einer biologischen Probe.
12. Eine Primerkombination bestehend aus einem 5'-Primer und einem 3'-Primer, beide wie in einem der Ansprüche 1 bis 3 definiert, zur Verwendung zum Nachweis und/oder Identifizierung von HPV in einer biologischen Probe.
13. Eine Sonde wie in einem der Ansprüche 1 und 4 bis 10 definiert, zur Verwendung zum Nachweis und/oder Identifizierung von HPV in einer biologischen Probe.
14. Ein Diagnostik-Kit zum Nachweis und/oder Identifizierung von möglicherweise in einer biologischen Probe vorliegendem HPV, umfassend die folgenden Bestandteile:
(i) mindestens eine Primerkombination nach Anspruch 12,
(ii) mindestens eine geeignete Sonde, wie sie in einem der Ansprüche 1 und 4 bis 10 definiert ist.
15. Eine isolierte HPV Polynukleinsäure gemäß SEQ ID NO 135 bis 153 oder irgendein Fragment davon, die oder das als Primer oder als Sonde in einem Verfahren zum Nachweis und/oder Identifizierung von HPV in einer Probe verwendet werden kann.
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