DE68923616T2 - Reduzierbare indikatoren, die pyrogallol enthalten und deren verwendung. - Google Patents
Reduzierbare indikatoren, die pyrogallol enthalten und deren verwendung.Info
- Publication number
- DE68923616T2 DE68923616T2 DE68923616T DE68923616T DE68923616T2 DE 68923616 T2 DE68923616 T2 DE 68923616T2 DE 68923616 T DE68923616 T DE 68923616T DE 68923616 T DE68923616 T DE 68923616T DE 68923616 T2 DE68923616 T2 DE 68923616T2
- Authority
- DE
- Germany
- Prior art keywords
- analyte
- composition
- composition according
- pyrogallol
- sample
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Lifetime
Links
- WQGWDDDVZFFDIG-UHFFFAOYSA-N pyrogallol Chemical compound OC1=CC=CC(O)=C1O WQGWDDDVZFFDIG-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims description 8
- 229940079877 pyrogallol Drugs 0.000 title claims description 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 36
- 239000012491 analyte Substances 0.000 claims abstract description 28
- 150000003232 pyrogallols Chemical class 0.000 claims abstract description 21
- 230000008878 coupling Effects 0.000 claims abstract description 11
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 claims abstract description 11
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 claims abstract description 11
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 8
- LNTHITQWFMADLM-UHFFFAOYSA-N gallic acid Chemical group OC(=O)C1=CC(O)=C(O)C(O)=C1 LNTHITQWFMADLM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 24
- 108010015776 Glucose oxidase Proteins 0.000 claims description 9
- ZTHYODDOHIVTJV-UHFFFAOYSA-N Propyl gallate Chemical compound CCCOC(=O)C1=CC(O)=C(O)C(O)=C1 ZTHYODDOHIVTJV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 claims description 7
- 239000004366 Glucose oxidase Substances 0.000 claims description 6
- 229940116332 glucose oxidase Drugs 0.000 claims description 6
- 235000019420 glucose oxidase Nutrition 0.000 claims description 6
- UAIUNKRWKOVEES-UHFFFAOYSA-N 3,3',5,5'-tetramethylbenzidine Chemical compound CC1=C(N)C(C)=CC(C=2C=C(C)C(N)=C(C)C=2)=C1 UAIUNKRWKOVEES-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 235000004515 gallic acid Nutrition 0.000 claims description 5
- 229940074391 gallic acid Drugs 0.000 claims description 5
- FBSFWRHWHYMIOG-UHFFFAOYSA-N methyl 3,4,5-trihydroxybenzoate Chemical compound COC(=O)C1=CC(O)=C(O)C(O)=C1 FBSFWRHWHYMIOG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 claims description 5
- 235000010388 propyl gallate Nutrition 0.000 claims description 4
- 239000000473 propyl gallate Substances 0.000 claims description 4
- 229940075579 propyl gallate Drugs 0.000 claims description 4
- 238000012546 transfer Methods 0.000 claims description 4
- NUIURNJTPRWVAP-UHFFFAOYSA-N 3,3'-Dimethylbenzidine Chemical compound C1=C(N)C(C)=CC(C=2C=C(C)C(N)=CC=2)=C1 NUIURNJTPRWVAP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- PZYGOVGYTRQHCP-UHFFFAOYSA-N 9-(3-aminopropyl)carbazol-3-amine Chemical compound NC1=CC=C2N(CCCN)C3=CC=CC=C3C2=C1 PZYGOVGYTRQHCP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 239000002250 absorbent Substances 0.000 claims description 3
- 230000002745 absorbent Effects 0.000 claims description 3
- IBKQQKPQRYUGBJ-UHFFFAOYSA-N methyl gallate Natural products CC(=O)C1=CC(O)=C(O)C(O)=C1 IBKQQKPQRYUGBJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 235000010387 octyl gallate Nutrition 0.000 claims description 3
- NRPKURNSADTHLJ-UHFFFAOYSA-N octyl gallate Chemical compound CCCCCCCCOC(=O)C1=CC(O)=C(O)C(O)=C1 NRPKURNSADTHLJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 239000000574 octyl gallate Substances 0.000 claims description 3
- UCLHVCFKZSLALE-UHFFFAOYSA-N 2-methylpropyl 3,4,5-trihydroxybenzoate Chemical compound CC(C)COC(=O)C1=CC(O)=C(O)C(O)=C1 UCLHVCFKZSLALE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- YBMTWYWCLVMFFD-UHFFFAOYSA-N 3-methylbutyl 3,4,5-trihydroxybenzoate Chemical compound CC(C)CCOC(=O)C1=CC(O)=C(O)C(O)=C1 YBMTWYWCLVMFFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- RPWFJAMTCNSJKK-UHFFFAOYSA-N Dodecyl gallate Chemical group CCCCCCCCCCCCOC(=O)C1=CC(O)=C(O)C(O)=C1 RPWFJAMTCNSJKK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- XOPOEBVTQYAOSV-UHFFFAOYSA-N butyl 3,4,5-trihydroxybenzoate Chemical compound CCCCOC(=O)C1=CC(O)=C(O)C(O)=C1 XOPOEBVTQYAOSV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 235000010386 dodecyl gallate Nutrition 0.000 claims description 2
- TYCUSKFOGZNIBO-UHFFFAOYSA-N hexadecyl 3,4,5-trihydroxybenzoate Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCOC(=O)C1=CC(O)=C(O)C(O)=C1 TYCUSKFOGZNIBO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- QIQXTHQIDYTFRH-UHFFFAOYSA-N octadecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(O)=O QIQXTHQIDYTFRH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 abstract description 10
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 27
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 27
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 20
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 13
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 10
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 8
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 8
- 239000000306 component Substances 0.000 description 7
- -1 compound 3-methyl-2-sulfonylbenzothiazolone hydrazone Chemical class 0.000 description 7
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 7
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 6
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 6
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 5
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 5
- 239000002800 charge carrier Substances 0.000 description 5
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 5
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 5
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 5
- RLFWWDJHLFCNIJ-UHFFFAOYSA-N 4-aminoantipyrine Chemical compound CN1C(C)=C(N)C(=O)N1C1=CC=CC=C1 RLFWWDJHLFCNIJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 208000021825 aldosterone-producing adrenal cortex adenoma Diseases 0.000 description 4
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 4
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 4
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- LEHOTFFKMJEONL-UHFFFAOYSA-N Uric Acid Chemical compound N1C(=O)NC(=O)C2=C1NC(=O)N2 LEHOTFFKMJEONL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- TVWHNULVHGKJHS-UHFFFAOYSA-N Uric acid Natural products N1C(=O)NC(=O)C2NC(=O)NC21 TVWHNULVHGKJHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 3
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 description 3
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 description 3
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 3
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 3
- 125000004435 hydrogen atom Chemical group [H]* 0.000 description 3
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 3
- 229940116269 uric acid Drugs 0.000 description 3
- PHOLIFLKGONSGY-CSKARUKUSA-N (e)-(3-methyl-1,3-benzothiazol-2-ylidene)hydrazine Chemical compound C1=CC=C2S\C(=N\N)N(C)C2=C1 PHOLIFLKGONSGY-CSKARUKUSA-N 0.000 description 2
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- RGHNJXZEOKUKBD-SQOUGZDYSA-N D-gluconic acid Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C(O)=O RGHNJXZEOKUKBD-SQOUGZDYSA-N 0.000 description 2
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 2
- RYYVLZVUVIJVGH-UHFFFAOYSA-N caffeine Chemical compound CN1C(=O)N(C)C(=O)C2=C1N=CN2C RYYVLZVUVIJVGH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CVSVTCORWBXHQV-UHFFFAOYSA-N creatine Chemical compound NC(=[NH2+])N(C)CC([O-])=O CVSVTCORWBXHQV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DDRJAANPRJIHGJ-UHFFFAOYSA-N creatinine Chemical compound CN1CC(=O)NC1=N DDRJAANPRJIHGJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960003681 gluconolactone Drugs 0.000 description 2
- 108010046301 glucose peroxidase Proteins 0.000 description 2
- LHGVFZTZFXWLCP-UHFFFAOYSA-N guaiacol Chemical compound COC1=CC=CC=C1O LHGVFZTZFXWLCP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000002347 octyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 2
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 2
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 2
- 150000002989 phenols Chemical class 0.000 description 2
- 125000001436 propyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 2
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 2
- FSYKKLYZXJSNPZ-UHFFFAOYSA-N sarcosine Chemical compound C[NH2+]CC([O-])=O FSYKKLYZXJSNPZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 2
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 2
- HSINOMROUCMIEA-FGVHQWLLSA-N (2s,4r)-4-[(3r,5s,6r,7r,8s,9s,10s,13r,14s,17r)-6-ethyl-3,7-dihydroxy-10,13-dimethyl-2,3,4,5,6,7,8,9,11,12,14,15,16,17-tetradecahydro-1h-cyclopenta[a]phenanthren-17-yl]-2-methylpentanoic acid Chemical class C([C@@]12C)C[C@@H](O)C[C@H]1[C@@H](CC)[C@@H](O)[C@@H]1[C@@H]2CC[C@]2(C)[C@@H]([C@H](C)C[C@H](C)C(O)=O)CC[C@H]21 HSINOMROUCMIEA-FGVHQWLLSA-N 0.000 description 1
- IXPNQXFRVYWDDI-UHFFFAOYSA-N 1-methyl-2,4-dioxo-1,3-diazinane-5-carboximidamide Chemical compound CN1CC(C(N)=N)C(=O)NC1=O IXPNQXFRVYWDDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KJCVRFUGPWSIIH-UHFFFAOYSA-N 1-naphthol Chemical compound C1=CC=C2C(O)=CC=CC2=C1 KJCVRFUGPWSIIH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JRBJSXQPQWSCCF-UHFFFAOYSA-N 3,3'-Dimethoxybenzidine Chemical compound C1=C(N)C(OC)=CC(C=2C=C(OC)C(N)=CC=2)=C1 JRBJSXQPQWSCCF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PMJHNEFCWLUZBC-UHFFFAOYSA-N 4-(4-amino-3-methylphenyl)-2,6,6-trimethylcyclohexa-1,3-dien-1-amine Chemical group CC1=C(N)C(C)(C)CC(C=2C=C(C)C(N)=CC=2)=C1 PMJHNEFCWLUZBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RGHNJXZEOKUKBD-UHFFFAOYSA-N D-gluconic acid Natural products OCC(O)C(O)C(O)C(O)C(O)=O RGHNJXZEOKUKBD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000021236 Hereditary diffuse leukoencephalopathy with axonal spheroids and pigmented glia Diseases 0.000 description 1
- 208000013016 Hypoglycemia Diseases 0.000 description 1
- LPHGQDQBBGAPDZ-UHFFFAOYSA-N Isocaffeine Natural products CN1C(=O)N(C)C(=O)C2=C1N(C)C=N2 LPHGQDQBBGAPDZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007836 KH2PO4 Substances 0.000 description 1
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 1
- 108010077895 Sarcosine Proteins 0.000 description 1
- 239000011358 absorbing material Substances 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 230000003466 anti-cipated effect Effects 0.000 description 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 1
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 1
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 1
- 125000001797 benzyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 239000012503 blood component Substances 0.000 description 1
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 description 1
- 229960001948 caffeine Drugs 0.000 description 1
- VJEONQKOZGKCAK-UHFFFAOYSA-N caffeine Natural products CN1C(=O)N(C)C(=O)C2=C1C=CN2C VJEONQKOZGKCAK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 239000003638 chemical reducing agent Substances 0.000 description 1
- 229960003624 creatine Drugs 0.000 description 1
- 239000006046 creatine Substances 0.000 description 1
- 229940109239 creatinine Drugs 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L disodium hydrogen phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].OP([O-])([O-])=O BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910000397 disodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019800 disodium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 125000003438 dodecyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 235000020188 drinking water Nutrition 0.000 description 1
- 239000003651 drinking water Substances 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 210000000416 exudates and transudate Anatomy 0.000 description 1
- 210000003608 fece Anatomy 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 235000012208 gluconic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000000174 gluconic acid Substances 0.000 description 1
- 229960001867 guaiacol Drugs 0.000 description 1
- 150000002431 hydrogen Chemical group 0.000 description 1
- 239000000852 hydrogen donor Substances 0.000 description 1
- 230000002218 hypoglycaemic effect Effects 0.000 description 1
- 239000002117 illicit drug Substances 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 1
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 1
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 229910000402 monopotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019796 monopotassium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 125000004108 n-butyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- BRNPAEUKZMBRLQ-UHFFFAOYSA-N octadecyl 3,4,5-trihydroxybenzoate Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCCOC(=O)C1=CC(O)=C(O)C(O)=C1 BRNPAEUKZMBRLQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005580 one pot reaction Methods 0.000 description 1
- 239000007800 oxidant agent Substances 0.000 description 1
- 238000005691 oxidative coupling reaction Methods 0.000 description 1
- 125000000913 palmityl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 150000002978 peroxides Chemical class 0.000 description 1
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 1
- GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M potassium dihydrogen phosphate Chemical compound [K+].OP(O)([O-])=O GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 230000002028 premature Effects 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 238000013094 purity test Methods 0.000 description 1
- 210000004915 pus Anatomy 0.000 description 1
- DNXIASIHZYFFRO-UHFFFAOYSA-N pyrazoline Chemical compound C1CN=NC1 DNXIASIHZYFFRO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000001044 red dye Substances 0.000 description 1
- 229940043230 sarcosine Drugs 0.000 description 1
- 210000000582 semen Anatomy 0.000 description 1
- 235000010413 sodium alginate Nutrition 0.000 description 1
- 229940005550 sodium alginate Drugs 0.000 description 1
- 239000000661 sodium alginate Substances 0.000 description 1
- FTWCSAMTIKSPAT-UHFFFAOYSA-M sodium;nonyl sulfate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O FTWCSAMTIKSPAT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 125000004079 stearyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 210000001138 tear Anatomy 0.000 description 1
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 1
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 1
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 1
- 238000001429 visible spectrum Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/26—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving oxidoreductase
- C12Q1/28—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving oxidoreductase involving peroxidase
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
- G01N21/75—Systems in which material is subjected to a chemical reaction, the progress or the result of the reaction being investigated
- G01N21/77—Systems in which material is subjected to a chemical reaction, the progress or the result of the reaction being investigated by observing the effect on a chemical indicator
- G01N21/78—Systems in which material is subjected to a chemical reaction, the progress or the result of the reaction being investigated by observing the effect on a chemical indicator producing a change of colour
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N31/00—Investigating or analysing non-biological materials by the use of the chemical methods specified in the subgroup; Apparatus specially adapted for such methods
- G01N31/22—Investigating or analysing non-biological materials by the use of the chemical methods specified in the subgroup; Apparatus specially adapted for such methods using chemical indicators
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/52—Use of compounds or compositions for colorimetric, spectrophotometric or fluorometric investigation, e.g. use of reagent paper and including single- and multilayer analytical elements
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/52—Use of compounds or compositions for colorimetric, spectrophotometric or fluorometric investigation, e.g. use of reagent paper and including single- and multilayer analytical elements
- G01N33/525—Multi-layer analytical elements
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2326/00—Chromogens for determinations of oxidoreductase enzymes
- C12Q2326/10—Benzidines
- C12Q2326/12—3,3',5,5'-Tetramethylbenzidine, i.e. TMB
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Pathology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Plasma & Fusion (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Investigating Or Analysing Materials By The Use Of Chemical Reactions (AREA)
- Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
- Materials For Medical Uses (AREA)
Description
- Diese Erfindung betrifft Zusammensetzungen, die brauchbar sind zur Bestimmung eines Analyten in einer Probe, analytische Vorrichtungen, die diese Zusammensetzungen enthalten, sowie Methoden zur Bestimmung eines Analyten.
- Das Gebiet der analytischen und diagnostischen Chemie hat in den letzten Jahren gewaltig an Umfang zugenommen. Das Gebiet betrifft die Analyse von Körperflüssigkeiten wie etwa Blut, Serum, Urin und dergleichen, Lebensmittelsubstanzen wie etwa Milch, Trinkwasser und anderen flüssigen Substanzen. Zu den Anwendungen dieses Gebiets gehören die medizinische Diagnose, Reinheitsprüfungen, die forensischen Wissenschaften etc..
- Bei der in der analytischen Chemie eingesetzten Vorrichtung des hier erörterten Typs handelt es sich im allgemeinen um eine Vorrichtung, die bisweilen als Teststreifen, als "dipstick" oder mit anderen Begriffen bezeichnet wird, die Fachleuten geläufig sind. Die Vorrichtung enthält verschiedene, darin eingearbeitete Substanzen, die mit einem spezieilen Analyten oder einer zu bestimmenden Substanz reagieren, wobei ein bestimmbares oder erfaßbares Signal erzeugt wird. Häufig - aber nicht immer - ist dies eine Farbe. Die Bildung einer Farbe oder die Änderung einer Farbe ermöglicht es, eine "Ja/Nein" -Antwort auf die Frage zu geben, ob eine Substanz oder ein Analyt in einer Testprobe vorhanden ist. Die Intensität der erzeugten Farbe oder die konkrete Farbe kann als Angabe dafür verwendet werden, wieviel Analyt vorhanden ist.
- In der Praxis kann die Probe auf die Testvorrichtung aufgebracht werden oder die Vorrichtung selbst kann in die Testprobe eingetaucht oder auf andere Weise mit ihr in Berührung gebracht werden.
- Ein sehr verbreiteter Test, der als beispielhaft für den Assay-Typ vorgestellt wird, welcher mit Testvorrichtungen und Trockenchemie durchführbar ist, ist die Bestimmung des Blut-Glucose-Spiegels. Dies ist natürlich bei vielen Gelegenheiten wichtig, etwa bei der Überwachung von Diabetesund Hypoglykämie-Patienten. Es wird ein Teststreifen hergestellt, der die Enzyme Glucoseoxidase und Peroxidase sowie den Indikator 3,3',5,5'-Tetramethylbenzidin enthält, der auch als "TMB" bezeichnet wird. Ist Glucose in der Probe vorhanden, so reagiert diese in Gegenwart von Glucoseoxidase mit Sauerstoff, unter Bildung von Gluconsäure und Wasserstoffperoxid. In Gegenwart von Peroxidase reagiert das Peroxid wiederum mit dem TMB. In der nichtoxidierten Form ist TMB farblos. Wird es oxidiert, so bildet es eine Farbe im Bereich von blau bis purpur. Durch das Beobachten einer Farbbildung läßt sich somit bestimmen, ob Glucose vorhanden ist und in welcher Konzentration. Das System ist analytenspezifisch, da Wasserstoffperoxid kein normaler Bestandteil der Probe ist und sich nur dann bildet, wenn das Glucosespezifische Enzym Glucoseoxidase auf sein Substrat einwirkt.
- Das oben beschriebene System ist natürlich nur ein Beispiel für die verschiedenen Assays, die mit Hilfe trockenchemischer Methoden durchgeführt werden können. Durch Verändern des analytenspezifischen Enzyms und des Indikators lassen sich mit Hilfe des skizzierten Systems natürlich auch andere Analyten bestimmen.
- Dem klinischen Chemiker stehen viele verschiedene Typen von Indikatoren zur Verfügung. Eine umfangreiche Klasse derartiger Indikatoren oder Indikatorsysteme beruht auf der oxidativen Kupplung zweier unterschiedlicher Komponenten, unter Bildung eines Indikators oder Farbstoffs. Beispielhaft für diese Systeme ist das sogenannte "Trinder-Reagens", wie es von Trinder, Ann. Clin. Biochem 6 24 (1969), gelehrt wird. Dieses System wird verwendet, um Glucose, Cholesterin und Harnsäure in Körperflüssigkeiten wie etwa Serum und Plasma zu bestimmen.
- Bei den Trinder-Reagenzien werden substituierte oder unsubstituierte Phenole mit 4-Aminoantipyrin (4-AAP) gekuppelt, unter Bildung eines roten Farbstoffs. Diese Reaktion:
- ist beschrieben bei Acguati et al., US-Patent Nr. 4 291 121, dessen Offenbarung hierin durch Zitat mit einbezogen sei. Acquati et al. lehren, daß verschiedene substituierte Phenole als kuppelnde Verbindung für das Indikatorsystem verwendet werden können.
- Acquati et al. weisen auch auf ein Problem bei den Indikatorsystemen hin, d.h., die Störung durch Komponenten der zu prüfenden Probe. Die Störung bei Acquati et al. führt zur Konkurrenz zwischen der Verbindung, die bestimmt wird (Cholesterin, Glucose, Harnsäure etc.), und den Reduktionsmitteln für das Indikatorsystem und zu niedrigeren Werten für den Analyten als tatsächlich vorliegen.
- Klose et al. lehren in US-Patent Nr. 4 101 381 einen anderen Systemtyp, nämlich den eines Indikatorsystems, das ein ladungstragendes oder "reduzierbares" Chromogen erzeugt. Dieses Patent lehrt, daß die Verbindung 3-Methyl-2-sulfonylbenzothiazolonhydrazon (MBTHS) in Gegenwart von Formaldehyd und einem Oxidationsmittel unter Bildung eines reduzierbaren Chromogens reagiert.
- Andere Indikatoren wie etwa 3,3',5,5'-Tetramethylbenzidin (TMB) und dessen Derivate bilden eher Ladungsträgerkomplexe als "gekuppelte Oxide" in der Art von Trinder-Reagenzien. Auch dienen die Ladungsträgerkomplexe insofern als Indikatoren als sie - wenn die Moleküle nicht komplexiert sind - entweder keine Farbe tragen oder eine von der des Komplexes verschiedene Farbe aufweisen.
- Bei der Reduktion bilden diese Indikatoren allerdings keine Farbe. Es sind daher reduzierbare Chromogene. Beispiele neben TMB und MBTH sind o-Dianisidin, Guajacol und o-Tolidin.
- Diese Unterscheidung zwischen Ladungsträgern und Kupplern wurde auch von Katsuyama et al., US-Patent 4 418 037, beschrieben, die die Unterscheidung als eine zwischen "reduzierbaren Chromogenen" und einer "Kombination aus einem Wasserstoff-Donor (Entwickler) und einem Kuppler" beschreiben. Katsuyama et al. lehren, daß ein Problem bei Indikatorsystemen insofern besteht als die darin verwendeten Enzyme oftmals inaktiviert werden, wobei die signalerzeugende Reaktion verlangsamt wird. Um dies zu vermeiden, schlagen sie die Zugabe von Pyrogallol-Derivaten zu Systemen vor, die im oxidierten Zustand "mit einem Kuppler wie etwa Naphthol, einem Phenol, einem Pyrazolin oder N,N-disubstituierten Anilinen kuppeln" (Spalte 6, Zeile 54-60). Bei allen Beispielen von Katsuyama et al. sind kuppelnde Verbindungen erforderlich.
- Katsuyama lehrt, daß das Pyrogallol-Derivat als "Konservierungsmittel" für das Enzym im Testsystem fungiert. Anders ausgedrückt lehrt dieses Patent, daß sich bei Systemen mit Kupplungsindikatoren die Gebrauchsfähigkeitsdauer des Streifens erhöht. Die lndikatorreaktion geht in der gleichen Weise vonstatten wie sie in Abwesenheit des Pyrogallol-Derivats vonstatten ginge.
- Nun wurde jedoch gefunden, daß Pyrogallol-Derivate bei Verwendung in Verbindung mit reduzierbaren Chromogenen in einer von Katsuyama nicht erwarteten Weise wirken. Es wurde gefunden, daß Indikatorsysteme mit reduzierbaren oder ladungstragenden Chromogenen "nach" Zugabe von Pyrogallol anders arbeiten als vorher. Dies ist von Bedeutung, da die Zugabe von Pyrogallol-Derivaten zu dem vorerwähnten Indikatorsystem den Bereich derartiger Systeme erweitert. Dies soll weiter unten ausführlicher erklärt werden.
- Eine Aufgabe dieser Erfindung ist daher die Bereitstellung einer Zusammensetzung, die zur Bestimmung eines Analyten in einer Probe brauchbar ist und die ein Indikatorsystem enthält, das gekennzeichnet ist durch ein einen reduzierbaren Ladungsträger bildendes Chromogen, sowie ein Pyrogallol-Derivat.
- Eine weitere Aufgabe der Erfindung ist die Bereitstellung von Kits, die zur Erfassung von Analyten in Proben verwendet werden können und die die oben angegebenen Komponenten enthalten.
- Eine weitere Aufgabe der Erfindung ist die Bereitstellung analytischer Vorrichtungen, die zur Bestimmung von Analyten verwendet werden können und bei denen die vorstehend angegebenen Zusammensetzungen und Kits verwendet werden.
- Noch eine weitere Aufgabe der Erfindung ist die Bereitstellung eines Verfahrens zur Bestimmung eines Analyten in einer Probe unter Verwendung der obigen Zusammensetzungen, Kits und analytischen Vorrichtungen.
- Wie diese und andere erfindungsgemäße Aufgaben gelöst werden wird nach Durchsicht der folgenden Offenbarung deutlich.
- Gegenstand der Erfindung ist eine Zusammensetzung, die brauchbar ist zur Bestimmung eines Analyten in einer Probe, umfassend ein Indikatorsystem, das in Gegenwart des Analyten ein erfaßbares Signal ergibt, wobei der Indikator ein nichtkuppelndes oder reduzierbares Chromogen und ein Pyrogallol-Derivat enthält, wobei das Pyrogallol-Derivat in einer Menge zwischen 0,0098 - 0,0246 Gew.-% vorhanden ist.
- Ein weiterer Gegenstand ist ein analytisches Element zur Bestimmung eines Analyten in einer Probe, umfassend eine wie vorstehend beschriebene Zusammensetzung, die in einen absorbierenden Träger eingearbeitet ist. Ein zusätzlicher Gegenstand der Erfindung ist ein Verfahren zur Bestimmung eines Analyten in einer Probe, umfassend das Zusammenbringen der Probe mit einer wie oben beschriebenen Zusammensetzung unter Bedingungen, die die Erzeugung eines erfaßbaren Signals begünstigen, und Erfassen des Signals als Angabe für den Analyten.
- Abbildung 1 ist eine graphische Darstellung der prozentualen Remission, aufgetragen gegen die Konzentration eines Analyten (Glucose), ohne Verwendung eines Pyrogallol-Derivats als Hemmsubstanz.
- Die Abbildungen 2-11 zeigen ähnliche graphische Darstellungen unter Verwendung verschiedener Gallat-Derivate mit dem Indikatorsystem.
- Abbildung 12 zeigt die bevorzugten Gallat-Derivate der Erfindung.
- Die erfindungsgemäßen Zusammensetzungen umfassen ein Indikatorsystem, enthaltend ein reduzierbares oder einen Ladungsträgerkomplex bildendes Chromogen und ein Pyrogallol- Derivat. Unter Berücksichtigung der vorangegangenen Erörterung wird klar sein, daß ein Indikatorsystem, das keine kuppelnde Verbindung benötigt, ein solches ist, bei dem ein erfaßbares Signal ohne die Bildung einer gekuppelten Komponente erzeugt wird.
- Von besonderem Interesse und auch das bevorzugte Indikatorsystem im folgenden ist 3,3,5,5'-Tetramethylbenzidin ("TMB") sowie 3-Amino-9-(γ-aminopropyl)carbazol und dessen Salze wie etwa das Dihydrochlorid-Salz. TMB ist ein Indikator, der nicht an eine andere Verbindung kuppelt, um sein Signal zu erzeugen, bei dem es sich um eine Farbe im Bereich des sichtbaren Spektrums von blau, rot oder purpur handelt, je nach gebildetem Ladungskomplex.
- TMB wird typischerweise in Nachweissystemen zur Bestimmung von Glucose verwendet. Bei diesen Systemen finden zwei Reaktionen statt. Die Glucose enthaltende Probe wird mit einem System zusammengebracht, welches das Enzym Glucoseoxidase (GOD) enthält, die in Gegenwart von Sauerstoff die Glucose zu γ-D-Gluconolacton und Wasserstoffperoxid oxidiert. Das Wasserstoffperoxid reagiert mit nichtoxidiertem TMB, gewöhnlich in Gegenwart einer Peroxidase (POD), unter Bildung eines Charge-Transfer-Komplexes von TMB, der eine Farbe trägt. Bei der Glucose-Bestimmung ist diese Farbe Blau. Nichtoxidiertes TMB ist farblos. Somit ist das Vorhandensein und/oder die Intensität der blauen Farbe eine Angabe für die Menge an Glucose in einer gegebenen Probe.
- Die vorstehend erörterte Reaktion läßt sich wie folgt angeben: Glucose γ-D-Gluconolacton Charge-Transfer-Komplex
- Zwar ist TMB vorstehend abgebildet und bei den folgenden Beispielen wird dieser Indikator verwendet, doch ist klar, daß es zahlreiche Indikatorsysteme gibt, die über die Bildung von Charge-Transfer-Komplexen und mit anderen Hilfsmitteln als Kuppeln arbeiten. Im allgemeinen kuppeln Benzyl-Derivat-Indikatoren nicht: Zu den Beispielen für diese gehören o-Tolidin, MBTH, MBTHS und deren Derivate sowie Derivate von TMB. Hiernach ist klar, daß TMB beispielhaft für diese Gruppe von Indikatoren steht, aber es ist nicht der einzige Indikator, von dem zu erwarten ist, daß er bei der beschriebenen Erfindung funktioniert.
- TMB arbeitet im beschriebenen System allein. Zwar kann das System visuell überwacht und die Gegenwart und/oder die Konzentration von Glucose in dieser Weise bestimmt werden, doch ist die bevorzugte Art der Bestimmung die mit Hilfe eines Reflexionsphotometers, dessen Arbeitsweise nachstehend beschrieben ist.
- Bei den folgenden Beispielen wird TMB zusammen mit der Verbindung 3-Amino-9-(γ-aminopropyl)carbazol verwendet, das im folgenden mit seinem Handelsnamen "APAC" bezeichnet werden soll.
- Das Problem bei der Verwendung von TMB oder anderen ähnlichen Indikatoren ist in Fig. 1 gezeigt. Fig. 1 zeigt die "prozentuale Remission", die erhalten wird, wenn TMB im vorstehend beschriebenen System bei der Messung der Glucose-Konzentration verwendet wird. "Prozentuale Remission" bezieht sich darauf, wieviel Licht von einem Teststreifen oder einer anderen zur Messung einer Substanz verwendeten Vorrichtung reflektiert wird. Ein hoher Remissionswert bedeutet, daß sich wenig Farbe gebildet hat, und in ähnlicher Weise gibt ein niedriger Wert eine intensivere Farbe an.
- Wendet man sich der Abbildung 1 zu, so ist zu erkennen, daß sich für TMB bis zu einer Konzentration von etwa 100 mg/dl eine stetige Kurve ergibt. An diesem Punkt allerdings wird der Graph flacher und die Remissionswerte sind für alle Werte von 100 mg/dl bis 500 mg/dl nahezu identisch. Ein Wert von 100 mg/dl liegt innerhalb des normalen Bereichs für Glucose im Blut,aber ein Wert von 140 mg/dl oder höher nach dem Fasten ist ein Anzeichen für Diabetes mellitus. Bei Berücksichtigung des Graphen in Fig. 1 ergibt sich, daß eine Diagnose auf Diabetes unter Verwendung von TMB allein kontraindiziert ist.
- Nun wurde jedoch gefunden, daß durch Einbringen eines Pyrogallol-Derivats in das Indikatorsystem "die Kurve geglättet wird" und der Wertebereich, für den eine Diagnose möglich ist, erweitert wird.
- Die bei dieser Erfindung verwendeten Pyrogallol-Derivate werden dargestellt durch die Formel:
- worin X Wasserstoff oder O=COY ist, Y Wasserstoff oder (CH&sub2;)ACHBD ist, A eine ganze Zahl von 0 bis 17 ist, und B und D gleich sind und entweder Wasserstoff oder Methyl sind. Von besonderem Interesse sind Verbindungen, worin X Wasserstoff ist (Pyrogallol); X O=COY ist und Y Wasserstoff ist (Gallussäure); A null ist und B und D Wasserstoff sind (Methylgallat); A 2 ist und B und D Wasserstoff sind (Propylgallat); A 3, 7, 11, 15 oder 17 ist und B und D Wasserstoff sind (Gallussäure-n-butylester; Octylgallat; Laurylgallat, Gallussäurecetylester; Gallussäurestearylester), sowie Verbindungen, worin A 1 oder 2 ist und B und D Methyl sind (Gallussäureisobutylester und Gallussäureisoamylester). Aus Gründen der Zweckmäßigkeit sind diese elf bevorzugten Verbindungen in Fig. 12 abgebildet.
- Die folgenden Beispiele bringen mehr Einzelheiten zur Arbeitsweise der Erfindung, sind aber nicht so anzusehen, als daß sie in irgendeinem Aspekt der Erfindung einschränkend wären.
- Bei diesem Versuch wurde ein Teststreifen verwendet, der nur mit 3,3',5,5'-Tetramethylbenzidin und "APAC" imprägniert war, um die Glucose-Konzentration in Proben zu bestimmen, die bekannte Mengen an Glucose enthielten. Die mit den Reagenzien imprägnierten Teststreifen enthielten auch Glucoseoxidase und Peroxidase, um die Geschwindigkeit der Reaktionen zu erhöhen, die zur Bildung des durch TMB erzeugten Farbsignals führen.
- Glucose-Proben mit den gegebenen Konzentrationen wurden wie beschrieben auf einen Teststreifen aufgebracht und nach 120 Sekunden in einem Reflexionsphotometer abgelesen, das zur Kompensation der durch die Umgebung verursachten Störungen korrigiert worden war.
- In einem Reflexionsphotometer mißt man die Differenz der Intensitäten des Lichts, das von einem nichtabsorbierenden Material (weiß) reflektiert wird, und des Lichts, das von der Probe reflektiert wird.
- Bei diesem und den folgenden Experimenten wird die prozentuale Reflexion gegen die Glucose-Konzentration aufgetragen.
- In Fig. 1 sind die Ergebnisse dieser Experimente dargestellt, und das Problem mit diesem System wird sofort augenfällig. Man beachte, daß bei einer Glucose-Konzentration von 0 die % Reflexion (Remission) mit 70% gegeben ist.
- Im normalen Bereich der Glucose-Konzentrationen (d.h., von 70 bis 110 mg/dl) hat die Kurve etwas Steigung, und diese reicht aus, um eine "niedrige normale" Probe (70 mg/dl) von einer "hohen normalen" (110 mg/dl) zu unterscheiden. Dies vergleiche man jedoch mit den Werten bei 140 mg/dl, was im allgemeinen als der niedrigere Konzentrationsbereich für Diabetes mellitus angesehen wird. Von 110 bis 140 mg/dl ist die Kurve fast linear, wodurch es nahezu unmöglich wird, einen diabetischen Zustand zu diagnostizieren. Die gleiche Abflachung ergibt sich für alle Werte von 140 mg/dl bis 500 mg/dl. Es ist unmöglich, die Werte zu unterscheiden.
- Bei den folgenden Beispielen wurden Assays auf Glucose durchgeführt, dieses Mal unter Verwendung von APAC (vorstehend beschrieben) mit dem TMB sowie in jedem Falle einem Pyrogallol-Derivat (Isoamylester 20 mg, n-Butylester 20 mg, Isobutylester 20 mg, Stearylester 40 mg und Cetylester 40 mg).
- Die Teststreifen wurden aus der folgenden Zusammensetzung hergestellt, die auf eine Polystyrol-Folie aufbeschichtet und auf eine Enddicke von 150 um getrocknet wurde:
- Propiofan 70-D 73 g
- Natriumnonylsulfat 1,6 g
- Natriumalginat 1,5 g
- APAC 0,13 g
- TMB 1,4 g
- KH&sub2;PO&sub4; 5,0 g
- Na&sub2;HPO&sub4; 0,7 g
- GOD 0,20 g
- POD 0,25 g
- Pyrogallol-Derivate wie oben
- Aceton 5 ml
- H&sub2;O 115 ml
- Die Tests wurden in der in Beispiel 1 beschriebenen Weise durchgeführt, und die Ergebnisse sind in den Fig. 2-6, die auch die Farbentwicklung des Indikatorsystems zeigen, graphisch dargestellt. Für jede Konzentration wurden zwei Läufe durchgeführt.
- Aus diesen graphischen Darstellungen ist ersichtlich, daß eine saubere Unterscheidung zwischen verschiedenen Werten der Glucose-Konzentration vorgenommen werden kann. Im Vergleich zu dem System, bei dem kein Pyrogallol-Derivat verwendet wurde und das bereits bei 100 mg/dl linearisierte, setzt die "Linearisierung" erst bei einer Konzentration von etwa 300 mg/dl ein. Es werden stetigere, geradere Kurven erhalten. Im Falle der Cetyl- und Stearylester erreichen die Anfangswerte 90%, und die sich ergebenden Kurven sind sehr gleichmäßig, was dazu führt, daß diesen Verbindungen der Vorzug in den Indikator-Zusammensetzungen gegeben wird.
- Es wurde ein Experiment ähnlich denjenigen in den Beispielen 2-6 durchgeführt, wobei der einzige Unterschied darin bestand, daß das verwendete Gallat-Derivat Gallussäure mit 50 mg war. Die erhaltene Wertekurve ist in Fig. 7 gezeigt.
- Interessant an diesem Experiment ist, daß es mit Gallussäure möglich wird, Unterscheidungen bei sehr hohen Konzentrationen zu treffen, an dem Punkt, wo die in den Beispielen 2-6 verwendeten Gallat-Derivate zu "linearisieren" beginnen. Dies deutet darauf hin, daß man ein System mit zwei Teststreifen verwenden könnte, wenn die angezeigten Glucose-Konzentrationen sehr hoch sind. Mit anderen Worten wird zunächst mit einem der Gallat-Derivate der Beispiele 2-6 geprüft, und wenn sich ein sehr hoher Wert (z.B. 300 mg/dl oder mehr) ergibt, könnte ein zweiter Test unter Verwendung von Gallussäure durchgeführt werden.
- Ebenfalls in ähnlicher Weise wie vorstehend beschrieben wurde eine Reihe von Experimenten unter Verwendung der Derivate Methyl- und Propylgallat durchgeführt. Es wurden zwei unterschiedliche Mengen an Derivat eingesetzt (30 mg bzw. 40 mg), und die Ergebnisse sind in den Fig. 8 und 9 gezeigt.
- Wiederum erkennt man, daß das Gallat-Derivat die gewünschte Gleichmäßigkeit in der Farbbildung bewirkt, wobei die Darstellung unterschiedlicher Konzentrationen augenfällig ist. Man beachte, daß sich durch Verwendung von Propylgallat ein nahezu ideales Resultat ergibt, d.h., eine Linie mit gleichförmiger negativer Neigung.
- Es wurden weitere Beispiele unter Verwendung der Octyl- und Lauryl-Derivate (jeweils 50 mg) durchgeführt. Ansonsten ist die Zusammensetzung identisch mit der vorstehend beschriebenen.
- Die Fig. 10 und 11, in denen die Ergebnisse dieser Experimente dargestellt sind, zeigen die gewünschte stetige Kurve mit zunehmender Glucose-Konzentration. Insbesondere Octylgallat zeigt ein nahezu ideales Bild - eine Linie mit nahezu gleichförmiger negativer Steigung. Dies ist ein Hinweis darauf, daß diese Verbindungen bei der Zusammenstellung der Indikator-Zusammensetzungen ebenfalls bevorzugt sind.
- Die vorhergehenden Beispiele 1-11 zeigen klar, daß die kontrollierte Bildung eines erfaßbaren Signals erreicht wird durch das Einbringen von Gallat-Derivaten in die Indikator- Zusammensetzungen. Zwar sind alle geprüften Gallat-Derivate funktionsfähig, doch sind die Propyl- und Octyl-Derivate die bevorzugten Gallate. All diese Verbindungen, wie auch die übrigen, sind in Fig. 12 dargestellt.
- Ein Aspekt der Erfindung ist in Zusammensetzungen zu sehen, die brauchbar sind als Indikatoren. Diese Zusammensetzungen enthalten Indikatormoleküle, die in Gegenwart des nachzuweisenden Analyten keine Kupplungsprodukte (d.h., reduzierbare Chromogene) bilden, sowie ein Gallat-Derivat. Es wurde gezeigt, daß das Gallat-Derivat direkt dem Indikatorsystem zugegeben werden kann, ohne daß die Funktionsfähigkeit des Moleküls beeinträchtigt wird. Der erfahrene Fachmann wird allerdings bemerken, daß "Eintopf"-Reagenzien oder Zusammensetzungen nicht die einzig mögliche Ausführungsform dieser Erfindung sind. Es werden Kits in Betracht gezogen, bei denen verschiedene Komponenten der Zusammensetzung in getrennten Behältern angeboten werden, die dann vor ihrer Verwendung vom Ausführenden der Untersuchung vereinigt werden. Zum Beispiel umfaßt ein typischer Kit eine Probe eines Gallat-Derivats wie etwa den Propyl- oder Octylester, ein nichtkuppelndes Indikatorsystem wie etwa 3,3',5,5'-Tetramethylbenzidin und APAC jeweils in getrennten Behältern und enthält gegebenenfalls Enzyme wie etwa GOD und POD, Kontrollösungen sowie eine analytische Vorrichtung wie etwa einen Teststreifen, der zur Bestimmung des Analyten verwendet wird.
- Ersichtlich ist auch, daß die Erfindung aus einem analytischen Element besteht, etwa Teststreifen, hergestellt aus einem Träger wie etwa saugfähigem Papier, das mit den verschiedenen Komponenten des Indikatorsystems, einschließlich des Gallat-Derivats, imprägniert ist oder diese in sich eingearbeitet aufweist.
- Die Beispiele zeigen auch, daß die Erfindung ein Verfahren zur Bestimmung einer analythaltigen Probe lehrt, die mit dem Indikatorsystem und dem Gallat-Derivat unter Bedingungen zusammengebracht wird, die die Bildung eines erfaßbaren Signals durch das Indikatorsystem begünstigen, wonach das Signal erfaßt oder bestimmt wird. Zwar wurde als Beispiel Glucose als zu bestimmende Substanz vorgegeben, doch können auch andere Analyten bestimmt werden. Wie dem erfahrenen Fachmann bekannt ist, werden unterschiedliche Stoffe wie etwa Körperflüssigkeiten und Exsudate (Blut, Urin, Samen, Fäkalien, Eiter, Tränen etc.) häufig auf verschiedene Substanzen (Pharmazeutika und deren Nebenprodukte, unerlaubte Drogen, Proteine, verschiedene Kohlenhydrate, Toxine etc.) geprüft oder auf die vorstehend beschriebenen Verbindungen, etwa Gallensäure-Derivate, Harnsäure, Cholesterin, HDLS und LDLS, Blutkomponenten, verschiedene Enzyme, Sarkosin und dessen Derivate wie etwa Kreatin und Kreatinin, Koffein und so weiter. Durch Auswahl des passenden Indikatorsystems läßt sich das spezielle Antigen bestimmen. Bei Verwendung nichtkuppelnder Indikatorsysteme kann das Gallat-Derivat zur Unterdrückung der vorzeitigen Erzeugung des gewünschten Signals verwendet werden.
- Es ist klar, daß die Beschreibung und die Beispiele erläuternd und nicht einschränkend für die vorliegende Erfindung sind und daß sich für den Fachmann andere Ausführungsformen in Geist und Umfang der Erfindung von selbst ergeben.
Claims (11)
1. Zusammensetzung, die brauchbar ist zur Bestimmung eines
Analyten in einer Probe, umfassend ein Indikatorsystem,
das in Gegenwart des Analyten ein erfaßbares Signal
ergibt, wobei der Indikator ein nichtkuppelndes oder
reduzierbares Chromogen und ein Pyrogallol-Derivat
enthält, wobei das Pyrogallol-Derivat in einer Menge
zwischen 0,0098-0,0246 Gew.-% in der Zusammensetzung
vorhanden ist.
2. Zusammensetzung nach Anspruch 1, wobei das
Indikatorsystem ein einen Charge-Transfer-Komplex bildendes
Chromogen ist.
3. Zusammensetzung nach Anspruch 1, wobei das Pyrogallol-
Derivat Gallussäure, Methylgallat, Propylgallat,
Octylgallat oder Gallussäureisoamylester ist.
4. Zusammensetzung nach Anspruch 1, wobei das Pyrogallol-
Derivat Laurylgallat, Pyrogallolstearat, Gallussäure-n-
butylester, Gallussäurecetylester oder
Gallussäureisobutylester ist.
5. Zusammensetzung nach Anspruch 1, wobei das
Indikatorsystem 3,3',5,5'-Tetramethylbenzidin umfaßt.
6. Zusammensetzung nach Anspruch 5, wobei das
Indikatorsystem des weiteren Peroxidase und Glucoseoxidase um-
7. Zusammensetzung nach Anspruch 6, wobei das
Indikatorsystem des weiteren 3-Amino-9-(γ-aminopropyl)carbazol
umfaßt.
8. Zusammensetzung nach Anspruch 1, umfassend o-Tolidin.
9. Zusammensetzung nach den Ansprüchen 1-8, wobei die
verschiedenen Komponenten der Zusammensetzung in
getrennten Behältern vorliegen.
10. Analytisches Element zur Bestimmung eines Analyten in
einer Probe, umfassend eine Zusammensetzung nach einem
der Ansprüche 1-9, die in einen absorbierenden Träger
eingearbeitet ist.
11. Verfahren zur Bestimmung eines Analyten in einer Probe,
umfassend das Zusammenbringen der Probe mit einer
Zusammensetzung nach einem der Ansprüche 1-9 unter
Bedingungen, die die Erzeugung eines erfaßbaren Signals
durch diese begünstigen und Erfassen des Signals als
Angabe für den Analyten.
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US07/198,765 US4971918A (en) | 1988-05-25 | 1988-05-25 | Reducible indicator compositions containing pyrogallol derivatives |
PCT/US1989/002109 WO1989011643A1 (en) | 1988-05-25 | 1989-05-16 | Reducible indicators containing pyrogallol and use thereof |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
DE68923616D1 DE68923616D1 (de) | 1995-08-31 |
DE68923616T2 true DE68923616T2 (de) | 1996-02-01 |
Family
ID=22734747
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
DE68923616T Expired - Lifetime DE68923616T2 (de) | 1988-05-25 | 1989-05-16 | Reduzierbare indikatoren, die pyrogallol enthalten und deren verwendung. |
Country Status (8)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US4971918A (de) |
EP (1) | EP0420893B1 (de) |
JP (1) | JPH03505628A (de) |
AT (1) | ATE125623T1 (de) |
AU (1) | AU3765989A (de) |
CA (1) | CA1339795C (de) |
DE (1) | DE68923616T2 (de) |
WO (1) | WO1989011643A1 (de) |
Families Citing this family (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5260195A (en) * | 1991-01-03 | 1993-11-09 | Boehringer Mannheim Corporation | Nonaqueous polymeric reagent compositions and applications thereof |
CA2129839A1 (en) * | 1992-02-10 | 1993-08-19 | David J. Gibboni | Method for immobilizing dye on substrates |
US5518891A (en) * | 1993-03-25 | 1996-05-21 | Actimed Laboratories, Inc. | Dye forming composition and detection of hydrogen peroxide therewith |
US5468236A (en) * | 1993-06-09 | 1995-11-21 | Kimberly-Clark Corporation | Disposable absorbent product incorporating chemically reactive substance |
DE102005055633B3 (de) * | 2005-11-22 | 2007-06-21 | Fraunhofer-Gesellschaft zur Förderung der angewandten Forschung e.V. | Organobasierter Sauerstoff-Scavenger/-Indikator |
CN108885207B (zh) * | 2015-11-23 | 2021-06-15 | 豪夫迈·罗氏有限公司 | 用于测定体液中的分析物浓度的方法和装置 |
Family Cites Families (10)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US3413197A (en) * | 1966-06-30 | 1968-11-26 | Miles Lab | Controlled sensitivity galactose test composition and process |
US4042335A (en) * | 1975-07-23 | 1977-08-16 | Eastman Kodak Company | Integral element for analysis of liquids |
US4291121A (en) * | 1979-04-13 | 1981-09-22 | Miles Laboratories, Inc. | Bilirubin-resistant determination of uric acid and cholesterol |
JPS5939307B2 (ja) * | 1980-06-18 | 1984-09-21 | 三菱瓦斯化学株式会社 | プラスチツク物品 |
JPS57174099A (en) * | 1981-04-17 | 1982-10-26 | Fuji Photo Film Co Ltd | Color indicator composition for detecting hydrogen peroxide and quantitative analytical film having reagent layer containing the same |
US4396579A (en) * | 1981-08-06 | 1983-08-02 | Miles Laboratories, Inc. | Luminescence detection device |
US4447542A (en) * | 1983-04-04 | 1984-05-08 | Miles Laboratories, Inc. | Analytical test composition, device and method for the determination of peroxidatively active substances |
GB8410548D0 (en) * | 1984-04-25 | 1984-05-31 | Ciba Geigy Ag | Colourable assembly |
US4680259A (en) * | 1984-09-26 | 1987-07-14 | Eastman Kodak Company | Analytical element and method for colorimetric determination of total cholesterol |
US4857271A (en) * | 1985-02-07 | 1989-08-15 | Eastman Kodak Company | Reducible compounds and analytical compositions, elements and methods utilizing same |
-
1988
- 1988-05-25 US US07/198,765 patent/US4971918A/en not_active Expired - Fee Related
-
1989
- 1989-05-16 EP EP89906929A patent/EP0420893B1/de not_active Expired - Lifetime
- 1989-05-16 AT AT89906929T patent/ATE125623T1/de not_active IP Right Cessation
- 1989-05-16 AU AU37659/89A patent/AU3765989A/en not_active Abandoned
- 1989-05-16 DE DE68923616T patent/DE68923616T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1989-05-16 JP JP1506469A patent/JPH03505628A/ja active Pending
- 1989-05-16 WO PCT/US1989/002109 patent/WO1989011643A1/en active IP Right Grant
- 1989-05-24 CA CA000600547A patent/CA1339795C/en not_active Expired - Lifetime
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
WO1989011643A1 (en) | 1989-11-30 |
US4971918A (en) | 1990-11-20 |
EP0420893A4 (en) | 1991-09-25 |
EP0420893B1 (de) | 1995-07-26 |
CA1339795C (en) | 1998-04-07 |
AU3765989A (en) | 1989-12-12 |
JPH03505628A (ja) | 1991-12-05 |
EP0420893A1 (de) | 1991-04-10 |
DE68923616D1 (de) | 1995-08-31 |
ATE125623T1 (de) | 1995-08-15 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
EP0037056B1 (de) | Verfahren und diagnostische Mittel zum Nachweis von Redox-Reaktionen | |
DE69527361T2 (de) | Farbkuppler zur spektrophotometrischen bestimmung von analyten | |
DE69727579T2 (de) | Trockenreagenz-Teststreifen mit einem Benzindinfarbstoff-Vorläufer und einer Antipyrinverbindung | |
DE69627097T2 (de) | Blutglucose-Teststreifen mit reduzierter Sensitivität für Hämatokrit | |
DE69010143T2 (de) | Testeinrichtung und Verfahren zur Bestimmung von Fructoasminen. | |
EP0068356B1 (de) | Mittel und Verfahren zum Nachweis von Wasserstoffperoxid oder Peroxidasen | |
DE69131126T2 (de) | Kontrollreagenz zur glukosemessung | |
CH640638A5 (de) | Teststreifen zur glukosebestimmung. | |
DE3872998T2 (de) | Test auf okkultes blut im stuhl. | |
DE68914411T2 (de) | Vorrichtung und Verfahren zum Testen einer flüssigen Probe. | |
DE2940165B1 (de) | Glucoseindikator und Testvorrichtung mit dem Glucoseindikator | |
DE60028776T2 (de) | Verfahren zum vorbehandeln von proben und zum quantifizieren von cholesterin in spezifischen lipoproteinen | |
DE68923616T2 (de) | Reduzierbare indikatoren, die pyrogallol enthalten und deren verwendung. | |
DE3125667C2 (de) | Verfahren und Mittel zum Nachweis von Wasserstoffperoxid | |
DE3885048T2 (de) | Testzusammensetzung, Vorrichtung und Verfahren zur visuellen Bestimmung von Wasserstoffperoxyd. | |
DE1598756A1 (de) | Mittel zur Bestimmung von Harnstoff in Fluessigkeiten | |
DE3408062A1 (de) | Verfahren zur bestimmung von ss-hydroxibuttersaeure und eine zusammensetzung zur bestimmung von ss-hydroxibuttersaeure | |
DE69221023T2 (de) | Reagenz zum Nachweis von okkultem Blut | |
DE69014512T2 (de) | Reagens zum Nachweis von Bilirubin in Urin. | |
CH646792A5 (de) | Testvorrichtung fuer die bestimmung von harnsaeure. | |
DE3614470A1 (de) | Verfahren zum messen der kaliumgehalte in biologischen fluessigkeiten | |
EP1344058B1 (de) | Kit und verfahren zur bestimmung des redox-status im urin | |
DE3783285T2 (de) | Indikatorzusammensetzung und verfahren zu ihrer herstellung. | |
DE69111016T2 (de) | Zusammensetzung von Agenzien zum Nachweis einer Redox-Reaktion. | |
DE60027002T2 (de) | Chemilumineszenz redox-assay zur qualifizierung von analyten in biologischen proben |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
8364 | No opposition during term of opposition | ||
8327 | Change in the person/name/address of the patent owner |
Owner name: ROCHE DIAGNOSTICS CORP., INDIANAPOLIS, IND., US |
|
8327 | Change in the person/name/address of the patent owner |
Owner name: ROCHE DIAGNOSTICS OPERATIONS, INC., INDIANAPOLIS, |
|
8328 | Change in the person/name/address of the agent |
Representative=s name: DURM & PARTNER, 76137 KARLSRUHE |