DE60117615T2

DE60117615T2 - Arzneimittelkombinationen (z.b. chlorpromazin und pentamidin) zur therapie von neoplastischen erkrankungen

Info

Publication number: DE60117615T2
Application number: DE60117615T
Authority: DE
Inventors: Alexis Boston BORISY; Curtis Boston KEITH; A. Michael Chestnut Hill FOLEY; R. Brent Boston STOCKWELL
Original assignee: CombinatoRx Inc
Current assignee: Zalicus Inc
Priority date: 2000-11-06
Filing date: 2001-10-30
Publication date: 2006-11-09
Anticipated expiration: 2021-10-31
Also published as: CN1484525A; TWI259077B; IS2457B; HUP0400529A3; BG107831A; PL362690A1; NO20032036L; CA2436799A1; KR20030048460A; WO2002058684A3; US6569853B1; US7148216B2; AR035500A1; AU2002246636B8; CA2436799C; EE200300212A; HUP0400529A2; DE60117615D1; ATE318590T1; IS6806A

Description

Beschreibung der Erfindung
Die Erfindung bezieht sich auf die Behandlung von Tumorerkrankungen, wie beispielsweise Krebs.
Krebs ist eine Erkrankung, die durch unkontrolliertes Wachstum abnormer Zellen gekennzeichnet ist. Die abnormen Zellen arbeiten nicht mehr wie normale Zellen, sie proliferieren und zerstören gesundes Gewebe.
Lungenkrebs ist die häufigste krebsbedingte Todesursache und die am zweithäufigsten auftretende Krebsart bei Männern und Frauen. Schätzungen zufolge kommt es allein im Jahr 2000 in den USA zu 164.000 Neuerkrankungen. Während die Lungenkrebsrate bei Männern in den USA zurückgeht, steigt sie bei Frauen weiterhin an. Lungenkrebs kann tödlich sein. Laut der American Lung Association ist zu erwarten, dass im Jahr 2000 schätzungsweise 156.900 Amerikaner an dieser Krebserkrankung versterben.
Krebs, der in der Lunge beginnt, wird abhängig vom mikroskopischen Zellbild in zwei Hauptarten unterteilt: nicht-kleinzelliger Lungenkrebs und kleinzelliger Lungenkrebs. Der nicht-kleinzellige Lungenkrebs (Plattenepithelkarzinom, Adenokarzinom und großzellig-anaplastisches Bronchialkarzinom) breitet sich im Allgemeinen langsamer auf andere Organe aus als der kleinzellige Lungenkrebs. Der kleinzellige Lungenkrebs ist nicht so häufig; er ist für etwa 20% aller Lungenkrebserkrankungen verantwortlich.
Zu den weiteren Krebsarten zählen Gehirnkrebs, Brustkrebs, Gebärmutterhalskrebs, Darmkrebs, Magenkrebs, Nierenkrebs, Leukämie, Leberkrebs, Lymphoma, Eierstockkrebs, Bauchspeicheldrüsenkrebs, Prostatakrebs, Mastdarmkrebs, Sarkoma, Hautkrebs, Hodenkrebs und Gebärmutterkrebs. Diese Krebsarten werden genau wie Lungenkrebs manchmal mit Chemotherapie behandelt.
Zu den derzeit verwendeten Chemotherapeutika gehören Paclitaxel, Docetaxel, Tamoxifen, Vinorelbin, Gemcitabin, Cisplatin, Etopsid, Topotecan, Irinotecan, Anastrozol, Rituximab, Trastuzumab, Fludarabin, Cyclophosphamid, Gentuzumab, Carboplatin, Interferon und Doxorubicin. Die am häufigsten eingesetzte antineoplastische Substanz ist Paclitaxel, welches allein oder in Kombination mit anderen Chemotherapeutika wie beispielsweise 5-FU, Doxorubicin, Vinorelbin, Cytoxan und Cisplatin verabreicht wird.
Darstellung der Erfindung
Wir haben erfunden, dass die Kombination des Antipsychotikums Chlorpromazin und der antiprotozoalen Substanz Pentamidin eine bedeutende antiproliferative Aktivität gegen Krebszellen entwickelt. Die Struktur- und funktionellen Analoge beider Verbindungen sind bekannt, und jedes dieser Analoge kann in der antiproliferativen Kombination dieser Erfindung verwendet werden. Auch bekannt sind die Metabolite von Chlorpromazin und Pentamidin. Viele dieser Metabolite haben mit der Ausgangsverbindung eine biologische Aktivität oder mehrere biologische Aktivitäten gemeinsam und können daher entsprechend ebenso in der erfindungsgemäßen antiproliferativen Kombination eingesetzt werden.
Die Erfindung ermöglicht eine Methode zur Behandlung von Patienten mit Krebs oder anderen Tumorarten, indem dem Patienten Chlorpromazin und Pentamidin zusammen oder einzeln in einem Abstand von nicht mehr als 14 Tagen in einer Menge verabreicht werden, die ausreicht, das Wachstum des Tumors zu hemmen.
Vorzugsweise werden die beiden Verbindungen einzeln in einem Abstand von nicht mehr als zehn Tagen gegeben, besser noch in einem Abstand von nicht mehr als fünf Tagen und idealerweise innerhalb von vierundzwanzig Stunden oder sogar gleichzeitig. Bei der entsprechend einer der unten beschriebenen erfindungsgemäßen Methoden behandelten Krebsart kann es sich um Lungenkrebs (Plattenepithelkarzinom, Adenokarzinom oder großzellig-anaplastisches Bronchialkarzinom), Gehirnkrebs, Brustkrebs, Gebärmutterhalskrebs, Darmkrebs, Magenkrebs, Nierenkrebs, Leukämie, Leberkrebs, Lymphoma, Eierstockkrebs, Bauchspeicheldrüsenkrebs, Prostatakrebs, Mastdarmkrebs, Sarkoma, Hautkrebs, Hodenkrebs oder Gebärmutterkrebs handeln.
In jeder der Behandlungen wird jede einzelne Verbindung, die Teil der Kombination ist, dem Patienten vorzugsweise als Teil einer pharmazeutischen Zusammensetzung verabreicht, die auch einen pharmazeutisch akzeptablen Träger enthält. Chlorpromazin wird vorzugsweise in einer Dosierung von 10 bis 2500 Milligramm und Pentamidin vorzugsweise in einer Dosierung von 1 bis 1000 Milligramm gegeben. Die bevorzugten Verabreichungsformen beinhalten die intravenöse und intramuskuläre Route, die Inhalation und die orale Einnahme.
Die antiproliferativen Kombinationen der Erfindung können Teil einer pharmazeutischen Packung sein. Vorzugsweise werden Chlorpromazin und Pentamidin zusammen oder einzeln formuliert und zwar in individuellen Dosierungen.
Für den Fachmann auf diesem Gebiet, versteht es sich, dass die Verbindungen auch nützlich in Formulierungen in Form ihrer Salze sind. Beispielsweise, wie hierin beschrieben, zeigt das Isethionatsalz von Pentamidin synergistische antiproliferative Aktivität, wenn es mit Chlorpromazin kombiniert wird. Weitere Salze von Pentamidin sind: das Platinsalz, das Dihydrochloridsalz und das Dimethansulfonatsalz (siehe, zum Beispiel, Mongiardo et al., Lancet 2:108, 1989). Ähnlich umfassen die Chlorpromazinsalze beispielsweise die Hydrochlorsalze und die Maleatsalze.
Diese Erfindung beinhaltet auch Methoden zur Identifizierung von Verbindungen für die Behandlung eines Patienten mit einem Neoplasma (Tumor). Die Methode umfasst die Schritte der Kontaktaufnahme der Krebszellen in vitro mit (i) Pentamidin oder Chlorpromazin und (ii) einer Testverbindung sowie die Bestimmung, ob die Krebszellen langsamer wachsen als (a) die mit Chlorpromazin oder Pentamidin, aber nicht mit der Testverbindung in Kontakt gebrachten Zellen und (b) Krebszellen, die zwar mit der Testverbindung aber nicht mit Chlorpromazin oder Pentamidin in Kontakt gebracht wurden. Eine Testverbindung, die, wenn sie mit Chlorpromazin oder Pentamidin kombiniert wird, die Zellproliferation senkt, dies aber in Abwesenheit von Chlorpromazin oder Pentamidin nicht bewirkt, ist eine hilfreiche Verbindung für die Behandlung eines Patienten mit einem Neoplasma.
Unabhängig davon, wo die Chemotherapie erfolgt, kann auch eine Kombinationstherapie angeboten werden: zu Hause, in der Arztpraxis, in der Klinik, in der Ambulanz oder in einem Krankenhaus. Mit der Behandlung wird im Allgemeinen im Krankenhaus begonnen, damit der Arzt die Therapiewirkung eng überwachen und bei Bedarf diese Therapie entsprechend anpassen kann. Die Dauer der Kombinationstherapie hängt von der Art der zu behandelnden Krebsart ab sowie dem Alter und dem Zustand des Patienten, dem Stadium und der Krankheitsart, welche bei dem Patienten vorliegen, und auch davon, wie der Körper des Patienten auf die Therapie reagiert. Die Medikamentenverabreichung kann in unterschiedlichen Intervallen erfolgen (z.B. täglich, wöchentlich oder monatlich), und die Gabe jeder einzelnen Verbindung ist individuell festlegbar. Möglich ist es, die Kombinationstherapie in Zyklen bestehend aus Einnahmezeiten und einnahmefreien Zeiten zu verabreichen, sodass der Körper des Patienten die Chance erhält, gesunde neue Zellen zu bilden und seine Stärke wiederzuerlangen.
Abhängig von der Krebsart und dem Entwicklungsstadium kann die Kombinationstherapie dazu verwendet werden, Krebs zu behandeln, die Metastasierung sowie das Krebszellenwachstum zu verlangsamen, Krebszellen, die sich ausgehend vom ursprünglichen Tumor bereits in andere Körperteile ausgebreitet haben, abzutöten oder zu hemmen, die krebsbedingten Symptome zu verbessern oder Krebs von Anfang an zu verhindern. Auch wird die Kombinationstherapie eingesetzt, um Patienten ein komfortableres Leben zu ermöglichen, indem Krebszellen, die Schmerzen oder Unbehagen hervorrufen, entfernt werden.
Weitere Charakteristika und Vorteile der Erfindung werden durch die nachfolgende detaillierte Beschreibung und aus den Ansprüchen offensichtlich.
Detaillierte Beschreibung der Erfindung
Wir haben erfunden, dass die Kombination des Antipsychotikums Chlorpromazin und der antiprotozoalen Substanz Pentamidin eine bedeutende antiproliferative Aktivität gegen Krebszellen entwickelt. Konzentrationen, die maximale antiproliferative Aktivität gegen Krebszellen zeigten, waren für normale Zellen nicht toxisch. Somit ist diese Medikamentenkombination hilfreich bei der Behandlung von Krebs und anderen Tumorarten.
Basierend auf bekannten Eigenschaften, die sowohl Chlorpromazin als auch Pentamidin und ihren Analogen und Metaboliten gemeinsam sind, ist es wahrscheinlich, dass strukturverwandte Verbindungen durch Chlorpromazin und/oder Pentamidin in der antiproliferativen Kombination der Erfindung ersetzt werden können.
Der am häufigsten verordnete Wirkstoff aus der Phenothiazin-Familie ist Chlorpromazin mit der Struktur:
Chlorpromazin ist derzeit erhältlich in den folgenden Verabreichungsformen: Tabletten, Kapseln, Suppositorien, orale Konzentrate und Sirups und Formulierungen zur Injektion.
Chlorpromazin bewirkt eine starke alpha-Adrenorezeptorenblockade und führt möglicherweise zu orthostatischer Hypotension. Auch weist diese Verbindung eine mäßige anticholinerge Aktivität auf, die sich in gelegentlicher Mundtrockenheit, verschwommener Sicht, Harnretention und Konstipation zeigt. Chlorpromazin erhöht die Prolaktinsekretion aufgrund seiner Dopaminrezeptor-Hemmwirkung in der Hypophyse und dem Hypothalamus.
Chlorpromazin wird leicht über den Gastrointestinaltrakt resorbiert. Seine Bioverfügbarkeit variiert aufgrund des beträchtlichen First-Pass-Metabolismus der Leber. Flüssige Konzentrationen haben vermutlich eine höhere Bioverfügbarkeit als Tabletten. Durch Nahrung wird die Bioverfügbarkeit anscheinend nicht nachhaltig beeinflusst. Mithilfe von i.m.-Gaben wird ein Großteil der First-Pass-Wirkung umgangen und eine höhere Plasmakonzentration erreicht. Der Wirkungseintritt nach einer i.m.-Injektion setzt gewöhnlich nach 15 bis 30 Minuten ein und nach einer oralen Einnahme nach 30 bis 60 Minuten. Bei rektal verabreichtem Chlorpromazin dauert es gewöhnlich länger als bei oral verabreichtem, bis die Wirkung eintritt.
Chlorpromazinmetabolite
Da Chlorpromazin einer extensiven metabolischen Umwandlung zu einer Reihe von Metaboliten unterliegt, die therapeutisch wirksam sein können, ist es möglich, diese Metabolite anstelle von Chlorpromazin in der antiproliferativen Kombination dieser Erfindung einzusetzen. Der Metabolismus für die Erzeugung von Chlorpromazinprodukten, zum Beispiel, die oxidative N-Demethylierung für den Erhalt des entsprechenden primären und sekundären Amins, die aromatische Oxidation für den Erhalt eines Phenols, die N-Oxidation für den Erhalt des N-Oxids, die S-Oxidation für den Erhalt des Sulfoxids oder Sulfons, die oxidative Deaminierung der Aminopropylseitenkette für den Erhalt von Phenothiazinkernen und die Glucuronidation der phenolischen Hydroxygruppen und der tertiären Aminogruppe, um ein quartäres Ammoniumglucuronid zu erhalten.
In weiteren Beispielen für Chlorpromazinmetabolite, die nützlich in der antiproliferativen Kombination der Erfindung sind, kann jede der Positionen 3, 7 und 8 von Phenothiazin unabhängig mit einem Hydroxyl- oder Methoxylanteil substituiert werden.
Pentamidin
Pentamidin wird derzeit zur Behandlung von Infektionen mit Pneumocystis carinii, Leishmania donovani, Trypanosoma brucei, T. gambiense und T. rhodesiense verwendet. Die Struktur von Pentamidin ist:
Verfügbar ist es als Formulierung für die Injektion oder Inhalation. Für die Injektion ist Pentamidin als nicht-pyrogenes, lyophilisiertes Produkt verpackt. Nach der Rekonstitution wird es als intramuskuläre oder intravenöse Injektion verabreicht.
Pentamidinisethionat ist ein weißes kristallines Pulver, löslich in Wasser und Glycerin, unlöslich in Ether, Aceton und Chloroform. Chemisch betrachtet handelt es sich um 4,4'-diamidino-diphenoxypentan di(β-hydroxyethansulfonat). Die Molekularformel lautet: C₂₃H₃₆N₄O₁₀S₂; und das Molekulargewicht beträgt 592,68.
Der Wirkmechanismus von Pentamidin ist noch nicht vollständig aufgeklärt. Invitro-Studien mit Säugetiergeweben und der Protozoe Crithidia oncopelti deuten darauf hin, dass der Wirkstoff mit dem Kernmetabolismus interferiert und die Synthese von DNA, RNA, Phopsholipiden und Proteinen hemmt.
Es ist auch nur wenig über die Pharmakokinetik des Wirkstoffes bekannt. Bei sieben Patienten, die mit täglichen Dosen i.m. von 4 mg/kg Pentamidin über 10 bis 12 Tage behandelt wurden, lagen die Plasmakonzentrationen zwischen 0,3 und 0,5 μg/ml. Die Patienten schieden noch weitere sechs bis acht Wochen nach Beendigung der Therapie abnehmende Mengen an Pentamidin mit dem Urin aus.
Die Verteilung von Pentamidin im Gewebe wurde an Mäusen untersucht, denen eine einmalige intraperitoneale Injektion an Pentamidin von 10 mg/kg verabreicht wurde. Am höchsten war die Konzentration in den Nieren, gefolgt von der Konzentration in der Leber. Bei Mäusen wurde Pentamidin unverändert ausgeschieden und zwar primär über die Nieren und in geringen Mengen über den Stuhl. Das Mengenverhältnis der Ausscheidung in Urin und Stuhl (4:1) blieb über den Zeitraum der Studien konstant.
Pentamidinmetabolite
Pentamidinmetabolite sind auch in der erfindungsgemäßen antiproliferativen Kombination hilfreich. Pentamidin wird im Körper rasch zu mindestens sieben primären Metaboliten verstoffwechselt. Einige dieser Metabolite haben eine oder mehrere Aktivitäten wie Pentamidin. Es ist möglich, dass manche Pentamidinmetabolite eine antiproliferative Wirkung zeigen, wenn sie mit Chlorpromazin oder einem Analog davon kombiniert werden.
Unten sind sieben Pentamidinmetabolite dargestellt.
Therapie
Die Kombinationen von erfindungsgemäßen Verbindungen sind hilfreich bei der Behandlung von Neoplasmen. Die Kombinationstherapie kann allein oder in Verbindung mit einer anderen Therapie (z.B. Chirurgie, Bestrahlung, Chemotherapie, biologische Therapie) eingesetzt werden. Zusätzlich dazu kann eine Person mit einem großen Risiko ein Neoplasma zu entwickeln (z.B. eine Person, die genetisch prädisponiert ist oder kürzlich ein Neoplasma hatte) eine prophylaktische Therapie erhalten, um die Tumorbildung zu hemmen oder zu verzögern.
Die Dosierung und Häufigkeit der Verabreichung einer jeden Komponente kann unabhängig kontrolliert werden. Beispielsweise wird eine Verbindung oral dreimal pro Tag gegeben, während eine zweite Verbindung intramuskulär einmal pro Tag verabreicht wird. Die Verbindungen können auch zusammen formuliert werden, sodass eine Verabreichung beide Substanzen enthält. Formulierungen und Dosierungen sind unten beschrieben.
Formulierung der pharmazeutischen Zusammensetzungen
Die Verabreichung jeder einzelnen der Verbindungen aus der Kombination kann in einer beliebig geeigneten Form erfolgen, die zu einer Konzentration der Verbindung führt, welche kombiniert mit der jeweils anderen Verbindung am Zielort spezifisch antineoplastisch wirkt. Die Verbindung kann in einer beliebigen Menge in jeder geeigneten Trägersubstanz enthalten sein und liegt im Allgemeinen in einer Menge von 1–95 Gew% bezogen auf das Gesamtgewicht der Zusammensetzung vor. Die Zusammensetzung kann in einer Dosierungsform angeboten werden, die für die orale, parenterale (z.B. intravenöse, intramuskuläre), rektale, kutane, nasale, vaginale, Inhalations-, Haut- (Patch) oder Augenverabreichungsroute geeignet ist. Somit ist die Verbindung in Form von z.B. Tabletten, Kapseln, Pillen, Pulvern, Granulaten, Suspensionen, Emulsionen, Lösungen, Gels, einschließlich Hydrogels, Pasten, Salben, Cremes, Pflastern, über Drenches, Zulieferungsvorrichtungen, Suppositorien, Einläufe, Injektionslösungen, Implantate, Sprays oder Aerosole verabreichbar. Die pharmazeutische Zusammensetzung kann gemäß konventioneller pharmazeutischer Praxis (siehe, z.B. Remington: The Science and Practice of Pharmacy, (19th ed.) ed. A.R. Gennaro, 1995, Mack Publishing Company, Easton, PA. und Encyclopedia of Pharmaceutical Technology, eds. J. Swarbrick and J.C. Boylan, 1988–1999, Marcel Dekker, New York, formuliert werden.
Die erfindungsgemäßen pharmazeutischen Zusammensetzungen können so formuliert werden, dass die aktive Verbindung im Wesentlichen sofort nach der Verabreichung freigesetzt wird oder zu einem beliebigen vorbestimmten Zeitpunkt oder einem Zeitabschnitt nach der Verabreichung. Die letzteren Typen der Zusammensetzungen sind allgemein bekannt als Formulierungen mit kontrollierter Freisetzung, welche (i) Formulierungen beinhalten, die eine im Wesentlichen konstante Konzentration des Wirkstoffes im Körper über einen längeren Zeitraum hervorrufen; (ii) Formulierungen, die nach einer vorbestimmten Lag-Zeit zu einer wesentlich konstanten Wirkstoffkonzentration im Köper über einen längeren Zeitraum führen; (iii) Formulierungen, die die Wirkstoffkonzentration über einen vorbestimmten Zeitraum beibehalten, indem sie eine relativ konstante Wirkstoffkonzentration im Körper aufrechterhalten mit begleitender Minimierung der unerwünschten Nebeneffekte assoziiert mit Fluktuationen im Plasmalevel des aktiven Wirkstoffs (sägeblattähnliches kinetisches Muster); (iv) Formulierungen, die die Wirkstoffaktivität lokalisieren durch z.B. räumliche Platzierung der Zusammensetzung mit kontrollierter Freisetzung in der Nähe vom oder im kranken Gewebe oder Organ; und (v) Formulierungen, die die Wirkstoffaktivität zielgerichtet platzieren, durch die Verwendung von Trägerstoffen oder chemischen Derivaten, um so den Wirkstoff an einen bestimmten Zielzelltyp zu liefern.
Die Verabreichung von Verbindungen in der Form von Formulierungen mit kontrollierter Freisetzung wird besonders in den Fällen bevorzugt, in denen die Verbindung entweder allein oder in Kombination, einen (i) engen therapeutischen Index (d.h. der Unterschied zwischen der Plasmakonzentration, die zu schädlichen Nebenwirkungen oder toxischen Reaktionen führt und der Plasmakonzentration, die einen therapeutischen Effekt hervorruft, ist gering; im Allgemeinen ist der therapeutische Index, TI, definiert als das Verhältnis der mittleren letalen Dosis (LD₅₀) zur mittleren effektiven Dosis (ED₅₀)); (ii) ein enges Resorptionsfenster im Gastrointestinaltrakt, oder (iii) eine sehr kurze biologische Halbwertszeit besitzt, sodass eine häufige Dosierung über den Tag verteilt erforderlich ist, um die Plasmakonzentration auf einem therapeutischen Level zu halten.
Es kann eine beliebige Strategie aus einer Reihe von Strategien angewandt werden, um eine Formulierung mit kontrollierter Freisetzung zu erhalten, in welcher die Rate der Freisetzung die Stoffwechselrate der eingesetzten Verbindung übersteigt. In einem Beispiel wird eine kontrollierte Freisetzung erhalten durch die geeignete Auswahl an zahlreichen Formulierungsparametern und Inhaltsstoffen, einschließlich z.B. verschiedener Typen von Zusammensetzungen mit kontrollierter Freisetzung und Coatings. Daher wird die Wirksubstanz mit geeigneten Hilfsstoffen in einer pharmazeutischen Zusammensetzung formuliert, die bei Verabreichung an den Organismus die aktive Substanz auf kontrollierte Weise freisetzt. Zu den Beispielen gehören Tabletten mit einer Einzeleinheit oder mehreren Einheiten oder Kapselzusammensetzungen, Öllösungen, Suspensionen, Emulsionen, Mikrokapseln, Mikrosphären (Mikrokügelchen), Nanopartikel, Patches und Liposomen.
Festdosierungsformen für die orale Verwendung
Zu den Formulierungen für die orale Verwendung gehören Tabletten, die den/die aktiven Inhaltsstoff(e) in einer Mischung mit nicht-toxischen pharmazeutisch akzeptablen Hilfsstoffen enthalten. Bei diesen Hilfsstoffen kann es sich beispielsweise um inerte Verdünner oder Füllstoffe (z.B. Sucrose, Sorbitol, Zucker, Mannitol, mikrokristalline, Stärken, einschließlich Kartoffelstärke, Kalziumcarbonat, Natriumchlorid, Laktose, Kalziumphosphat, Kalziumsulfat oder Natriumphosphat) handeln, granulierende und auflösende Agenzien (z.B. Zellulosederivate, einschließlich mikrokristalline Zellulose, Stärken, einschließlich Kartoffelstärke, Croscarmellose-Natrium, Algiante oder Alginsäure); Bindungsagenzien (z.B. Sucrose, Glucose, Sorbitol, Akazia, Alginsäure, Natriumalginat, Gelatine, Stärke, vorgelierte Stärke, mikrokristalline Zellulose, Magnesium-Aluminium-Silikat, Carboxymethylzellulose-Natrium, Methylzellulose, Hydroxypropylmethylzellulose, Ethylzellulose, Polyvinylpyrrolidon oder Polyethylenglykol) und Lubrikantien, Gleitstoffe und Antiadhäsiva (z.B. Magnesiumstearat, Zinkstearat, Stearinsäure, Siliziumdioxide, hydrogenierte Pflanzenöle oder Talkum). Weitere pharmazeutisch akzeptable Trägerstoffe sind Farb-, Geschmacksstoffe, Weichmacher, Feuchthaltemittel, Puffer und ähnliche.
Die Tabletten können nicht überzogen oder optional mithilfe einer der bekannten Techniken überzogen sein, um den Zerfall und die Resorption im Gastrointestinaltrakt zu verzögern und dadurch eine dauerhafte Wirkung über einen längeren Zeitraum zu gewährleisten. Das Coating kann entsprechend angepasst werden, um die aktive Wirksubstanz nach einem vorbestimmten Muster (z.B. um eine Formulierung mit kontrollierter Freisetzung zu erhalten) freizusetzen, oder es kann so angepasst werden, dass die aktive Substanz erst nach der Magenpassage (darmresistentes Coating) freigesetzt wird. Bei dem Coating kann es sich um einen Zuckerüberzug, einen Filmüberzug (z.B. basierend auf Hydroxypropylmethylzellulose, Methylzellulose, Methylhydroxyethylzellulose, Hydroxypropylzellulose, Carboxymethylzellulose, Acrylatcopolymere, Polyethylenglykole und/oder Polyvinylpyrrolidon) oder ein darmresistentes Coating (z.B. basierend auf Methacrylsäurecopolymer, Zelluloseacetatphthalat, Hydroxypropylmethylzellulosephthalat, Hydroxypropylmethylzelluloseacetatsuccinat, Polyvinylacetatphthalat, Schellack und/oder Ethylzellulose) handeln. Des Weiteren kann ein die Freisetzung zeitlich verzögerndes Material wie z.B. Glycerylmonostearat oder Glyceryldistearat eingesetzt werden.
Die Festtablettenzusammensetzungen können ein Coating enthalten, welches so angepasst ist, dass es die Zusammensetzung vor unerwünschten chemischen Veränderungen (z.B. chemischer Abbau vor der Freisetzung der aktiven Wirksubstanz) schützt. Das Coating kann auf die Festdosierungsform in ähnlicher Weise wie in der Encyplopedia of Phamaceutical Technology, supra, beschrieben, angewandt werden.
Die beiden Wirkstoffe können in einer Tablette zusammen oder getrennt formuliert werden. In einem Beispiel ist der erste Wirkstoff in der Tablette enthalten und der zweite außen auf der Tablette aufgebracht, sodass ein wesentlicher Anteil des zweiten Wirkstoffs vor dem ersten Wirkstoff freigesetzt wird.
Formulierungen für die orale Verwendung können auch als Kautabletten oder als Hartgelatinekapseln angeboten werden, in denen der aktive Inhaltsstoff mit einem inerten festen Verdünner (z.B. Kartoffelstärke, Laktose, mikrokristalline Zellulose, Kalziumcarbonat, Kalziumphosphat oder Kaolin) vermischt wird oder als Weichgelatinekapseln, in denen der aktive Inhaltsstoff mit Wasser oder einem Ölmedium beispielsweise Erdnussöl, flüssigem Paraffin oder Olivenöl gemischt wird. Pulver und Granulate können unter Verwendung der oben unter Tabletten und Kapseln erwähnten Inhaltsstoffe auf konventionelle Weise hergestellt werden, z.B. mit einem Mixer, einer Flüssigbettvorrichtung oder einer Sprühtrockenanlage.
Orale Dosierungsformen mit kontrollierter Freisetzung
Zusammensetzungen mit kontrollierter Freisetzung für die orale Anwendung können z.B. so aufgebaut sein, dass sie die aktive Substanz entsprechend der Kontrolle ihrer Auflösung und Diffusion freisetzen.
Die über Auflösung und Diffusion kontrollierte Freisetzung kann mithilfe eines geeigneten Coatings einer Tabletten-, Kapsel-, Pellet- oder Granulatformulierung der Zusammensetzung oder durch den Einschluss der betreffenden Zusammensetzung in einer geeigneten Matrix erreicht werden. Das Coating einer kontrollierten Freisetzung kann eine oder mehrere der oben erwähnten Coating-Substanzen beinhalten und/oder z.B. Schellack, Bienenwachs, Glycowachs, Castorwachs, Carnaubawachs, Stearylalkohol, Glycerylmonostearat, Glyceryldistearat, Glycerinpalmitostearat, Ethylzellulose, Acrylharz, dl-Polymilchsäure, Zelluloseacetatbutyrat, Polyvinylchlorid, Polyvinylacetat, Vinylpyrrolidon, Polyethylen, Polymethacrylat, Methylmethacrylat, 2-Hydroxymethacraylat, Methacrylat-Hydrogele, 1,3Butylenglycol, Ethylenglycolmethacrylat und/oder Polyethylenglycole. In einer Matrixformulierung mit kontrollierter Freisetzung kann das Matrixmaterial auch z.B. hydrierte Methylzellulose, Carnaubawachs und Stearylalkohol, Carbopol 934, Silikon, Glyceryltristearat, Methylacrylat-methylmethacrylat, Polyvinylchlorid, Polyethylen und/oder halogenierten Fluorkohlenstoff enthalten.
Eine Zusammensetzung mit kontrollierter Freisetzung, die eine oder mehrere Verbindungen der beanspruchten Kombinationen enthält, kann auch in Form einer schwimmenden Tablette oder Kapsel (d.h. eine Tablette oder Kapsel, die nach der Einnahme über einen bestimmten Zeitraum auf dem Mageninhalt schwimmend verbleibt) dargereicht werden. Eine schwimmende Tablettenformulierung der Verbindung(en) kann hergestellt werden durch Granulierung einer Mischung aus einem Wirkstoff(en) mit Hilfsstoffen und 20–75% w/w Hydrokolloiden, wie beispielsweise Hydroxyethylzellulose, Hydroxypropylzellulose und Hydroxypropylmethylzellulose. Die erhaltenen Granulate können dann in Tabletten gepresst werden. Bei Kontakt mit dem Magensaft bildet die Tablette um ihre Oberfläche herum eine beträchtliche wasserundurchdringliche Gelbarriere. Diese Gelbarriere trägt dazu bei, eine Dichte unter eins beizubehalten, weshalb die Tablette auf dem Magensaft schwimmend verbleibt.
Flüssigkeiten für die orale Verabreichung
Pulver, dispergierbare Pulver oder Granulate, die für die Herstellung einer wässrigen Suspension durch Zugabe von Wasser geeignet sind, stellen für die orale Verabreichung bequeme Dosierungsformen dar. Die Formulierung in Form einer Suspension liefert den aktiven Inhaltstoff in einer Mischung mit einem Dispersions- oder Befeuchtungsagens, einem Suspensionsagens und einem oder mehreren Konservierungsstoffen. Geeignete Suspensions- oder Befeuchtungsagenzien sind beispielsweise natürlich vorkommende Phosphatide (z.B. Lecithin oder Kondensationsprodukte von Ethylenoxid mit einer Fettsäure, einem langkettigen aliphatischen Alkohol oder einem partiellen Ester einer Fettsäure) und ein Hexitol oder ein Hexitolanhydrid (z.B. Polyoxyethylenstearat, Polyoxyethylensorbitolmonooleat, Polyoxyethylensorbitanmonooleat und ähnliche). Zu den geeigneten Suspensionsagenzien gehören zum Beispiel Natrium-Carboxymethylzellulose, Methylzellulose, Natriumalginat und ähnliche.
Parenterale Zusammensetzungen
Die pharmazeutische Zusammensetzung kann auch parenteral durch Injektion, Infusion oder Implantation (intravenös, intramuskulär, subkutan oder ähnliche) in Dosierungsformen, Formulierungen oder über geeignete Zufuhrsysteme oder Implantate, die konventionelle nicht toxische pharmazeutisch akzeptable Träger und Adjuvantien enthalten, verabreicht werden. Die Formulierung und Herstellung solcher Zusammensetzungen sind dem Fachmann auf diesem Gebiet der pharmazeutischen Formulierungen gut bekannt. Spezifische Formulierungen finden sich in Remington: The Science and Practice of Pharmacy, supra.
Zusammensetzungen für die parenterale Verwendung werden in Einheiten-Dosierungsformen (z.B. in Einzeldosis-Ampullen) oder in Vials, die verschiedene Dosen enthalten und in denen ein geeignetes Konservierungsmittel zugegeben werden kann (siehe unten), angeboten. Die Zusammensetzung kann in Form einer Lösung, einer Suspension oder einer Emulsion, eines Infusionssystems oder eines Zufuhrsystem über die Implantation sein, oder sie kann in Form eines trockenen Pulvers, das mit Wasser oder einem anderen geeigneten Vehikel vor Gebrauch rekonstituiert werden kann, dargereicht werden. Abgesehen von dem/den aktiven Wirkstoff(en) enthält die Zusammensetzung möglicherweise geeignete parenteral akzeptable Träger und/oder Hilfsstoffe. Der aktive Wirkstoff/die aktiven Wirkstoffe sind in Mikrosphären, Mikrokapseln, Nanopartikeln, Liposomen oder ähnlichen Medien für die kontrollierte Freisetzung einschließbar. Des Weiteren kann die Zusammensetzung Agenzien für die Suspension, Solubilisierung, pH-Einstellung und/oder Dispersion enthalten.
Wie oben angegeben, kann die erfindungsgemäße pharmazeutische Zusammensetzung in einer Form angeboten werden, die für die sterile Injektion geeignet ist. Um eine solche Zusammensetzung herzustellen, wird ein geeigneter aktiver Wirkstoff (oder Wirkstoffe) in einem parenteralen akzeptablen flüssigen Vehikel aufgelöst oder suspendiert. Zu den akzeptablen Vehikeln, die verwendbar sind, zählen Wasser, Wasser, das durch Zugabe einer entsprechenden Menge von Hydrochlorsäure, Natriumhydroxid oder einem entsprechenden Puffer auf einen geeigneten pH-Wert eingestellt wurde, 1,3-Butanediol, Ringer-Lösung und isotonische Natriumchloridlösung. Die wässrige Formulierung kann auch einen oder mehrere Konservierungsstoffe (z.B. Methyl-, Ethyl-, n-Propyl-p-Hydroxybenzoat) enthalten. In Fällen, in denen eine der Verbindungen nur schlecht oder wenig in Wasser löslich ist, besteht die Möglichkeit, ein Agens, das die Auflösung verstärkt oder ein Solubilisierungsmittel beizugeben oder ein Lösungsmittel zu verwenden, das 10–60% w/w Propylenglycol oder ähnliches enthält.
Parenterale Zusammensetzungen mit kontrollierter Freisetzung
Parenterale Zusammensetzungen mit kontrollierter Freisetzung können in Form von wässrigen Suspensionen, Mikrosphären, Mikrokapseln, magnetischen Mikrosphären, Öllösungen oder Suspensionen dargereicht werden. Alternativ dazu wird der aktive Wirkstoff (die aktiven Wirkstoffe) in biokompatible Träger, Liposomen, Nanopartikel, Implantate oder Infusionssysteme eingeschlossen.
Materialien für die Verwendung in der Herstellung von Mikrosphären und/oder Mikrokapseln sind z.B. biologisch abbaubare/erodierbare Polymere wie Polyglaktin, Poly-(isobutylcyanoacrylat), Poly(2-hydroxyethyl-L-Glutamin und Poly(-Milchsäure). Zu den biokompatiblen Trägerstoffen, die zur Formulierung einer parenteralen Formulierung mit kontrollierter Freisetzung eingesetzt werden können, zählen Kohlenhydrate (z.B. Dextrane), Proteine (z.B. Albumin), Lipoproteine oder Antikörper.
Bei den Materialien zur Verwendung in Implantaten kann es sich um nicht biologisch abbaubare (z.B. Polydimethylsiloxan) oder biologisch abbaubare (z.B. Poly(caprolacton), Poly(-Milchsäure), Poly(-Glykolsäure) oder Poly(orthoester) handeln.
Rektale Zusammensetzungen
Zu den geeigneten Dosierungsformen für die rektale Verabreichung einer Zusammensetzung gehören Suppositorien (Emulsions- oder Suspensionsarten) und rektale Gelatinekapseln (Lösungen oder Suspensionen). In einer typischen Suppositorienformulierung ist der aktive Wirkstoff (die aktiven Wirkstoffe) mit einer geeigneten pharmazeutisch akzeptablen Suppositorienbasis wie Kakaobutter, esterifizierten Fettsäuren, glycerinierter Gelatine und verschiedenen wasserlöslichen oder dispergierbaren Basissubstanzen wie Polyethylenglycolen und Polyoxyethylensorbitan-Fettsäureestern kombiniert. Möglich ist es, unterschiedliche Additive, Verstärker oder oberflächenaktive Agenzien mit einzuschließen.
Zusammensetzungen für die Inhalation
Typische Dosierungsformen für die Inhalation beinhalten Nasensprays und Areosole. In einer typischen nasalen Formulierung wird der aktive Inhaltsstoff (die aktiven Inhaltsstoffe) in einem geeigneten Vehikel aufgelöst oder dispergiert. Die pharmazeutisch akzeptablen Vehikel und Hilfsstoffe (ebenso wie andere pharmazeutisch akzeptable Materialien, die in der Zusammensetzung vorliegen, wie beispielsweise Verdünner, Verstärker, Geschmacksstoffe und Konservierungsstoffe) werden gemäß konventioneller pharmazeutischer Praxis ausgewählt, welche dem Fachmann auf dem Gebiet der Formulierung von Pharmazeutika bekannt sind.
Perkutane und topische Zusammensetzungen
Die pharmazeutischen Zusammensetzungen können auch für die perkutane Absorption topisch auf die Haut appliziert werden und zwar in Dosierungsformen oder Formulierungen, die konventionelle nicht toxische pharmazeutisch akzeptable Trägerstoffe und Hilfsstoffe, einschließlich Mikrosphären und Liposomen, enthalten. Die Formulierungen beinhalten Cremes, Salben, Lotionen, Linimente, Gele, Hydrogele, Lösungen, Suspensionen, Sticks (Stifte), Sprays, Pasten, Pflaster und andere Arten transdermaler Zufuhrsysteme. Die pharmazeutisch akzeptablen Trägerstoffe oder Hilfsstoffe können auch Emulgatoren, Antioxidanzien, Puffer, Konservierungsmittel, Feuchthaltemittel, Penetrationsverstärker, Komplexbildner, Gelbildner, Salbenbasen, Parfüms und hautschützende Agenzien umfassen.
Beispiele für Emulgatoren sind natürlich vorkommende Gummis (z.B. Gummi acacia oder Gummi tragacanth) und natürlich vorkommende Phosphatide (z.B. Sojabohnenlecithin und Sorbitanmonooleatderivate). Zu den Beispielen für Antioxidantien gehören butyliertes Hydroxyanisol (BHA) Ascorbinsäure und Derivate davon, Tocopherol und Derivate davon, butyliertes Hydroxyanisol und Cystein. Beispiele für Konservierungsstoffe sind Parabene, wie beispielsweise Methyl- oder Propyl-p-hydroxybenzoat und Benzoalkoniumchlorid. Beispiele für Feuchthaltemittel sind Glycerin, Propylenglycol, Sorbit und Harnstoff. Beispiele für Penetrationsverstärker sind Propylenglycol, DMSO, Triethanolamin, N,N-Dimethylacetamid, N,N,-Dimethylformamid, 2-Pyrrolidon und Derivate davon, Tetrahydrofurfurylalkohol und Azon.RTM. Beispiele für Komplexbildner sind Natrium-EDTA, Zitronensäure und Phophorsäure. Beispiele für Gelbildner sind Carbopol, Zellulosederivate, Bentonite, Alginate, Gelatine und Polyvinylpyrrolidon. Beispiele für Salbenbasen sind Bienenwachs, Paraffin, Cetylpalmitat, Pflanzenöle, Sorbitanester der Fettsäuren (Span), Polyethylenglycole und Kondensationsprodukte von Sorbitanestern von Fettsäuren und Ethylenoxid (z.B. Polyoxyethylensorbitanmonooleat (Tween)).
Die oben beschriebenen pharmazeutischen Zusammensetzungen für die topische Applikation auf der Haut sind auch in Verbindung mit einer topischen Applikation auf oder nahe dem zu behandelnden Körperteil möglich. Die Zusammensetzungen können für die direkte Applikation oder für die Einbringung in die relevante(n) Öffnung(en) des Körpers (z.B. rektal, urethral, vaginal oder orale Öffnungen) entsprechend angepasst werden. Sie können auch mittels spezieller Wirkstoffzulieferungssysteme wie Dressings oder alternativ Pflastern, Pads, Schwämmen, Strips oder anderen Formen von geeignetem Material aufgebracht werden.
Perkutane und topische Zusammensetzungen mit kontrollierter Freisetzung
Es gibt verschiedene Methoden zur Kontrolle des Verhältnisses von Freisetzung und transdermaler Wirkstoffpenetration beinhaltend: membranvermittelte Systeme, adhäsive diffusionskontrollierte Systeme, Systeme vom Matrixdispersionstyp und Mikroreservoirsysteme. Eine perkutane und/oder topische Zusammensetzung mit kontrollierter Freisetzung kann durch Verwendung einer geeigneten Mischung aus den oben erwähnten Methoden erhalten werden.
In einem membranvermittelten System befindet sich die aktive Substanz in einem Reservoir, welches vollständig in einem schmalen Bereich eingeschlossen ist, der aus einem für den Wirkstoff undurchdringlichen Laminat, wie beispielsweise einem metallischen Kunststofflaminat und einer das Verhältnis kontrollierenden Polymermembran, wie beispielsweise einer mikroporösen oder nicht-porösen Polymermembran (z.B. Ethylen-vinylacetat-Copolymer) besteht. Die aktive Komponente wird somit nur durch die das Verhältnis kontrollierende Polymermembran freigesetzt. Die aktive Substanz kann in dem Wirkstoffreservoir entweder dispergiert in einer festen Polymermatrix oder suspendiert in einem viskosen flüssigen Medium wie beispielsweise als Silikonflüssigkeit vorliegen. Auf der externen Oberfläche der Polymermembran ist eine dünne Schicht eines adhäsiven Polymers aufgebracht, um einen engen Kontakt zwischen transdermalem System und Hautoberfläche zu erreichen. Bei dem adhäsiven Polymer handelt es sich vorzugsweise um ein hypoallergenes Polymer, welches mit dem aktiven Wirkstoff kompatibel ist.
In einem adhäsiven diffusionskontrollierten System wird ein Reservoir des aktiven Wirkstoffs durch direkte Dispersion des aktiven Wirkstoffs in einem adhäsiven Polymer und anschließendem Ausbreiten des den aktiven Wirkstoff enthaltenden Adhäsivs auf einem flachen Bogen der im Wesentlichen wirkstoffundurchlässigen metallischen Kunststoffgrundlage gebildet, um so eine dünne Wirkstoffreservoirschicht zu formen. Ein Matrixsystem vom Dispersionstyp ist dadurch charakterisiert, dass ein Reservoir der aktiven Substanz gebildet wird durch im Wesentlichen homogene Dispersion der aktiven Substanz in einer hydrophilen oder lipophilen Polymermatrix und anschließendem Formen des den aktiven Wirkstoff enthaltenden Polymers zu einer Scheibe mit einem wesentlich gut definierten Oberflächenbereich und einer gut definierten Dicke. Das adhäsive Polymer wird um die Peripherie verteilt, um so einen Adhäsivstreifen um die Scheibe zu bilden.
In einem Mikroreservoirsystem wird das Reservoir der aktiven Substanz gebildet, indem zuerst die Wirkstoffbestbestandteile in einer wässrigen Lösung eines wasserlöslichen Polymers suspendiert werden und dann die Wirkstoffsuspension in einem lipophilen Polymer dispergiert wird, um eine Vielzahl an mikroskopischen Sphären (Kügelchen) von Wirkstoffreservoiren zu bilden.
Dosierungen
Die Dosierung einer jeden Komponente der beanspruchten Kombination hängt von verschiedenen Faktoren ab, einschließlich der Verabreichungsmethode, der zu behandelnden Krankheit, ob die Krankheit behandelt oder verhindert werden soll sowie dem Alter, dem Gewicht und der Gesundheit der zu behandelnden Person.
Die Verbindungen werden vorzugsweise in einer Menge von etwa 0,1–30 mg/kg Körpergewicht pro Tag verabreicht und idealerweise in einer Menge von 0,5–15 mg/kg Körpergewicht pro Tag. Wie oben beschrieben, kann die in Frage kommende Verbindung oral in Form von Tabletten, Kapseln, Elixieren oder Sirup oder rektal in Form von Suppositorien verabreicht werden. Die parenterale Verabreichung einer Verbindung wird in geeigneter Weise durchgeführt in Form einer Salzlösung oder mit der in Liposomen inkorporierten Verbindung. In Fällen, in denen die Verbindung selbst nicht ausreichend löslich ist, kann ein Lösungsvermittler, wie beispielsweise Ethanol, angewandt werden. Zu Anschauungszwecken sind unten die Dosierungen für Chlorpromazin und Pentamidin beschrieben. Der Fachmann wird erkennen, dass, wenn eine zweite Verbindung als Ersatz für entweder Chlorpromazin oder Pentamidin eingesetzt wird, die korrekte Dosierung sowohl anhand der Untersuchung der Wirksamkeit der Verbindung in den Zellproliferationsassays als auch durch Bestimmung der Toxizität beim Menschen ermittelt werden kann.
Orale Verabreichung
Die Dosierung für Chlorpromazin zur oralen Verabreichung für den systemischen Einsatz beträgt normalerweise etwa 1 mg bis 1000 mg pro verabreichter Dosis (vorzugsweise etwa 5 mg bis 500 mg und idealerweise etwa 10 mg bis 300 mg) ein- bis zehnmal täglich (vorzugsweise ein- bis fünfmal täglich) für einen Tag bis zu einem Jahr, kann aber auch dem Patienten zeitlebens gegeben werden. Da die erfindungsgemäßen Kombinationen primär eher als Zytostatika anstatt als zytotoxische Agenzien fungieren und eine niedrige Toxizität besitzen, kann in vielen Fällen eine Langzeitgabe angezeigt sein. Es können Dosierungen von bis zu 8 g pro Tag erforderlich sein.
Die Dosierung für Pentamidin beträgt normalerweise etwa 0,1 mg bis 300 mg pro verabreichter Dosis (vorzugsweise etwa 1 mg bis 100 mg) ein bis viermal täglich für einen Tag oder ein Jahr und wie Chlorpromazin kann es zeitlebens eingenommen werden. Die Verabreichung kann auch in Zyklen erfolgen, in denen Zeiträume mit eingeschlossen sind, in denen Pentamidin nicht gegeben wird. Dieser Zeitraum kann beispielsweise etwa einen Tag, eine Woche, einen Monat oder ein Jahr und mehr betragen.
Rektale Verabreichung
Für Zusammensetzungen, die für die rektale Anwendung zur Krankheitsprävention angepasst wurden, wird vorzugsweise eine etwas größere Menge einer Verbindung eingesetzt. Somit beträgt die Dosierung für Chlorpromazin normalerweise 5 mg bis 2000 mg pro Dosis (vorzugsweise etwa 10 mg bis 1000 mg, idealerweise etwa 25 mg bis 500 mg), in einer Verabreichung von ein bis viermal täglich. Die Behandlungsdauer ist wie für die orale Einnahme beschrieben. Die Dosierung für Pentamidin entspricht der für oral verabreichtes Pentamidin beschriebenen.
Parenterale Verabreichung
Zur intravenösen oder intramuskulären Verabreichung von Chlorpromazin wird eine Dosierung von 0,1 mg/kg bis etwa 100 mg/kg Körpergewicht pro Tag empfohlen, bevorzugt wird eine Dosis von 1 mg/kg bis etwa 25 mg/kg und idealerweise eine Dosis von 1 mg/kg bis 10 mg/kg.
Jede Komponente wird normalerweise täglich für bis zu 6 bis 12 Monate oder länger verabreicht. Es mag wünschenswert sein, eine Verbindung über einen Zeitraum von ein bis drei Stunden zu geben; dieser Zeitraum kann bis auf 24 Stunden oder länger ausgedehnt werden. Wie für die orale Verabreichung beschrieben, kann es dabei Zeitabschnitte von etwa einem Tag bis zu einem Jahr oder länger geben, in denen mindestens einer der Wirkstoffe nicht gegeben wird.
Inhalation
Zur Inhalation wird Chlorpromazin in einer Dosierung von 1 mg bis zu 1000 mg täglich, vorzugsweise in einer Dosierung von etwa 10 mg bis 500 mg täglich gegeben. Die Dosis für Pentamidin beträgt etwa 10 mg bis 1000 mg, vorzugsweise 30 mg bis 600 mg täglich.
Perkutane Verabreichung
Zur topischen Verabreichung einer jeden einzelnen Komponente wird vorzugsweise eine Dosierung von 1 mg bis zu etwa 5 g ein- bis zehnmal täglich über den Zeitraum von einer Woche bis zu 12 Monaten eingesetzt.
Die folgenden Beispiele dienen dazu, die Erfindung zu veranschaulichen. Sie sind nicht dazu gedacht, den Erfindungsgedanken auf irgendeine Weise einzuschränken.
Beispiel 1: Herstellung der Chlorpromazin/Pentamidinisethionat-Verdünnungsmatrix
Es wurden Stocklösungen mit Chlorpromazin- und Pentamidinisethionat (Sigma Katalognummer C8138 beziehungsweise P0547) in Dimethylsulfoxid (DMSO) in Konzentrationen von 11,25 mM beziehungsweise 6,74 mM angesetzt. Eine achtfache Stocklösung (128 μM) einer jeden einzelnen Verbindung wurde in Dulbeco's Modified Eagle Medium (DMEM) (Gibco 11995–040), enthaltend 10% fetales Rinderserum (FBS), 200 mM L-Glutamin und 1 % Antibiotikum/Antimykotikum-Lösung hergestellt. Daraus wurde eine 2-fache Verdünnungsreihe in DMEM erstellt. Diese Reihe ergab 9 Konzentrationsstufen im Bereich von 64 μM bis 240 nM und eine Konzentration von 0 M. Die Matrix mit dem Gemisch der Verbindungen wurde hergestellt durch Befüllen von Spalten (Columns) einer Mikrotiterplatte mit 384 Wells mit der Verdünnungsreihe von Chlorpromazin (erste Spalte: 32 μM, zweite Spalte: 16 μM, dritte Spalte: 8 μM, vierte Spalte: 4 μM, fünfte Spalte: 2 μM, sechste Spalte: 1 μm, siebte Spalte: 500 nM, achte Spalte: 250 nM, neunte Spalte: 125 nM und zehnte Spalte: keine Verbindung) und dem Befüllen der Reihen (Rows) mit der Verdünnungsreihe von Pentamidin (erste Reihe: 32 μM, zweite Reihe: 16 μM, dritte Reihe: 8 μM, vierte Reihe: 4 μM, fünfte Reihe: 2 μM, sechste Reihe: 1 μm, siebte Reihe: 500 nM, achte Reihe: 250 nM, neunte Reihe: 125 nM und zehnte Reihe: keine Verbindung) mit einem 16-Kanal-Pipettor (Finnipette). Die Platte mit der Mischung aus Verbindungen lieferte 4fache Konzentrationen einer jeden Verbindung, die auf die Assayplatten transferiert wird. Die Verdünnungsmatrix enthielt 100 verschiedene Punkte – 81 Wells mit unterschiedlichen Mengen an Chlorpromazin und Pentamidin sowie eine 10-Punkt-Verdünnungsreihe (2fach) für jede einzelne Verbindung.
Beispiel 2: Assay für antiproliferative Aktivität
Die Matrix mit den verdünnten Verbindungen wurde mithilfe der A549 Bromodeoxyuridin (BrdU9)-Cyblot-Methode untersucht. Fünfundvierzig Mikroliter einer Suspension enthaltend A549 Lungenadenokarzinomzellen (ATCC Nr.CCL-185) wurden in eine weiße opaque sterile zellkulturbehandelte 384-Well-Mikrotiterplatte aus Polystyrol (NalgeNunc Nr. 164610) unter Verwendung eines Multidrop (Labsystems) gegeben, um eine Dichte von 3000 Zellen pro Well zu erhalten. Die Matrix mit den verdünnten Verbindungen wurde mithilfe eines 16-Kanal-Pipettors (Finnpipette) transferiert. Zusätzlich wurden zu jeder Platte Kontrollwells mit Paclitaxel (Endkonzentration 4,6 μM), Podophyllotoxin (9,6 μM) und Quinacrin (8,5 μM) angelegt. Jedes der Experimente wurde in dreifacher Ausführung durchgeführt.
Nach einer Inkubation von 48 Stunden bei 37 °C wurde BrdU zu jedem Well in einer Konzentration von 10 μM hinzugegeben. Nach 16 Stunden wurde das Medium abgesaugt und die Zellen durch Zugabe von 70 % Ethanol und Phosphat gepufferter Salzlösung (PBS) bei Raumtemperatur für 1 Stunde fixiert. Das Fixierungmittel wurde abgesaugt und 2N HCL mit Tween 20 (Polyoxyethylensorbitanmonolaurat zu jedem Well hinzugegeben und die Platten für 20 Minuten bei Raumtemperatur inkubiert. Die HCL wurde mit einer Lösung an 2N NaOH neutralisiert und die Zellen zweimal mit Hanks Balanced Salt Solution (HBSS) gewaschen und einmal mit PBS enthaltend 0,5 % Rinderserumalbumin (BSA) und 0,1 % Tween 20. Die Waschlösung wurde entfernt und Maus-Anti-BrdU-Primärantikörper (PharMingen Nr. 555627) 1:1000 in PBS enthaltend BSA, Tween 20 sowie der sekundäre Antikörper 1:2000 (Amersham Nr.NA931) verdünnt. Der sekundäre Antikörper erkennt den Maus-Antikörper und wird mit dem Enzym Meerrettich-Peroxidase (HRP) konjugiert. Nach einer Stunde Inkubation wurde die Lösung entfernt und die Zellen mit PBS gewaschen. Nach dem PBS-Waschvorgang wurde das Substrat HRP (welches Luminol, Wasserstoffperoxid und einen Verstärker wie beispielsweise para-Jodphenol enthält) zu jedem Well hinzugegeben. Die Platten wurden mithilfe eines LJL Analyst gelesen. Alle Absaugvorgänge sowie die Waschungen mit PBS und HBSS wurden mithilfe eines TECAN Power Washer 384 durchgeführt. Die von jedem Well abgegebene Lichtmenge ist ein Hinweis auf das Ausmaß an DNA-Synthese, die in dem Well stattgefunden hat. Die verminderte Lichtabgabe bedeutet somit eine antiproliferative Wirkung der Verbindung.
Die Lumineszenz für jede einzelne Position in der Chlorpromazin/Pentamidin-Verdünnungsmatrix wurde unterteilt in die Lumineszenzwerte für A549 Zellen, die nur mit DMSO behandelt wurden, und lieferten Antiproliferationsverhältnisse für jede Einzelposition in der Chlorpromazin/Pentamidin-Verdünnungsmatrix. Auch für Paclitaxel, Podophyllotoxin und Quinacrin wurden Antiproliferationsverhältnisse berechnet und zu Vergleichzwecken verwendet.
Tabelle – Antiproliferationsverhältnisse Pentamidinkonzentrationen (μM)
Chlorpromazinkonzentrationen (μM) (Beschriftung Tabelle links)
In einer Konzentration von 4,0 μM erzielt Pentamidinisethionat allein ein Antiproliferationsverhältnis von 3,9 und dieses steigt bei einer Verdopplung der Konzentration auf 8,0 μM auf 4,9 an. Viermikromolares Chlorpromazin ergibt ein Verhältnis von 2,9, welches durch Verdopplung der Konzentration auf 8,0 μM nicht weiter ansteigt. Wenn 4,0 μM Pentamidin in Kombination mit 4,0 μM Chlorpromazin (8,0 μM Gesamtverbindungsspezies) getestet wird, wird ein Antiproliferationsverhältnis von 9,7 erreicht.
In einer anderen Analyse wird die Potenz der jeweiligen Einzelverbindung durch Anwesenheit einer anderen Verbindung verlagert. Das maximale mit Pentamidin allein erreichte Proliferationsverhältnis betrug 4,9 (bei 8,0 mM); beobachtet wurde dieses, wenn 1 μM Pentamidin mit Chlorpromazin mit einer Konzentration von 125 nM kombiniert wurde, wodurch die Gesamtwirkstoffspezies, die zum Erreichen dieses Effektes erforderlich war, deutlich gesenkt wurde.
Wir zeigten, dass die Kombination von Chlorpromazin- und Pentamidinisethionat das Wachstum von A549-Zellen verhindert ohne diese zu töten. A549-Zellen wurden als Subkonfluenz in 6-Well-Mikrotiterplatten gegeben und mit 4 μM eines jeden Wirkstoffs für 72 Stunden behandelt. Das Medium wurde ausgetauscht und die Zellen für sieben Tage kultiviert (mit einem Mediumwechsel); die Zellen wurden dann ausgezählt und ihre Lebensfähigkeit bestimmt. Während die unbehandelten Zellen nach sieben Tagen bis zur Konfluenz gewachsen sind, wuchsen die mit Chlorpromazin/Pentamidinisethionat behandelten Zellen nicht; ihre Dichte blieb aber nahe dem Wert, zu dem sie eingesetzt wurden. Darüber hinaus waren 95% der mit Chlorpromazin/Pentamidinisethionat behandelten Zellen noch lebensfähig, nur geringfügig weniger als für die unbehandelten Zellen zu beobachten war.
Die Kombinationen haben wenig bis gar keinen Effekt auf die Lebensfähigkeit von normalen Lungenfibroblasten (MRC9). Die Kontrollexperimente, die dies belegen, sind unten beschrieben. MRC9-Zellen wurden in 384-Well-Mikrotiterplatten gegeben, um zu konfluieren. Eine Chlorpromazin/Pentamindisethionat-Verdünnungsmatrix wurde zugegeben, um überlappende 2-fache Verdünnungsreihen in einer 12 × 12 Matrix zu erhalten, wobei 16 μM einer jeden Komponente die Maximaldosis darstellte. Die Zellen wurden mit den Verbindungen für 48 Stunden inkubiert. Danach wurden 6 μl Alamar Blue Vitalitätsfarbstoff zu jedem Well gegeben. Die Zellen wurden für weitere 4 Stunden mit dem Farbstoff inkubiert. Die reduzierte Farbstoffmenge wurde durch Fluoreszenz mithilfe eines Analyst AD bestimmt. Die nicht fluoreszierende (oxidierte) Form der Farbe wird durch die lebenden Zellen zu einer fluoreszierenden Form reduziert. Somit ist das Verhältnis der Fluoreszenz der Wells, in denen keine Verbindung enthalten war, im Vergleich zu denen, die eine Verbindung enthielten, proportional zum Ausmaß des durch die Verbindungen hervorgerufenen Zelltods. In diesem Experiment traten bis zu einer Konzentration von 16 μM jeder Einzelverbindung keine toxischen Effekte auf, wohingegen antiproliferative Effekte bei niedrigeren Konzentrationen beobachtet wurden.
Die antiproliferative Wirkung, die bei A459-Zellen gezeigt wurde, kann in ähnlicher Weise unter Verwendung anderer Krebszelllinien, wie beispielsweise MCF7 Mamma-Adenokarzinom, PA-1 Teratokarzinom des Ovars, HT29 kolorektales Adenokarzinom, H1299 großzelliges Karzinom, U-2 OS Osteosarkom, U-373 MG Glioblastom, Hep-3B hepatozelluläres Karzinom, BT-549 Mammakarzinom, T-24 Blasenkrebs, C-33A Zervixkarzinom, HT-3 metastatisches Zervixkarzinom, SiHa squamöses Zervixkarzinom, CaSki epidermoides Zervixkarzinom, NCI-H292 mukoepidermoides Karzinom, NCI-2030, nicht-kleinzelliges Lungenkarzinom, HeLa epitheliales Zervikaladenokarzinom, KB epitheliales Mundkarzinom, HT 1080 epitheliales Fibrosarkom, Saos-2 epitheliales Osteosarkom, PC3 epitheliales Prostata-Adenokarzinom, SW480 kolorektales Karzinom, CCL-228 und MS-751 epidermoide Zervixkarzinom-Zelllinien demonstriert werden. Die Spezifität kann unter Verwendung von Zellen wie beispielsweise NHLF-Lungenfibroblasten, NHDF dermale Fibroblasten, HMEC Mammaepithelzellen, PrEC Prostataepithelzellen, HRE Nierenepithelzellen, NHBE Bronchialepithelzellen, CoSmC glatte Muskelzellen des Kolons, CoEC Endothelzellen des Kolons, NHEK Epidermiskeratozyten und Knochenmarkszellen als Kontrollzellen getestet werden.

Claims

Verwendung einer Zusammensetzung für die Herstellung eines Medikamentes zur Behandlung von Neoplasmen (Tumoren) umfassend Chlorpromazin oder ein pharmazeutisch akzeptables Salz davon und Pentamidin oder ein pharmazeutisch akzeptables Salz davon.
Verwendung gemäß Anspruch 1, wobei Chlorpromazin in einer Dosierung von 10 bis 2500 Milligramm und genanntes Pentamidin in einer Dosierung von 1 bis 1000 Milligramm verabreicht werden.
Verwendung gemäß Anspruch 1 oder 2, wobei es sich bei dem genannten Neoplasma um eine Krebsart handelt.
Verwendung gemäß Anspruch 3, wobei es sich bei der genannten Krebsart um Lungenkrebs handelt.
Verwendung gemäß Anspruch 4, wobei die genannte Lungenkrebsart zur Gruppe gehört, bestehend aus Plattenepithelkarzinom, Adenokarzinom und großzellig-anaplastisches Bronchialkarzinom.
Verwendung gemäß Anspruch 3, wobei die genannte Krebsart zur Gruppe gehört, bestehend aus Gehirnkrebs, Brustkrebs, Gebärmutterhalskrebs, Darmkrebs, Magenkrebs, Nierenkrebs, Leukämie, Leberkrebs, Lymphoma, Eierstockkrebs, Bauchspeicheldrüsenkrebs, Prostatakrebs, Mastdarmkrebs, Sarkoma, Hautkrebs, Hodenkrebs und Gebärmutterkrebs.
Verwendung gemäß einem der vorhergehenden Ansprüche, wobei die genannte Medikation intravenös, intramuskulär, über Inhalation, rektal oder oral verabreicht wird.
Verwendung gemäß einem der vorhergehenden Ansprüche, wobei genannte Zusammensetzung einen pharmazeutisch akzeptablen Träger umfasst.
Verwendung gemäß Anspruch 7, wobei für die orale Verabreichung die Menge an Chlorpromazin bei 5 bis 500 Milligramm liegt, vorzugsweise 10 bis 300 Milligramm und die Menge für Pentamidin bei 0,1 bis 300 Milligramm, vorzugsweise 1 bis 100 Milligramm.
Eine pharmazeutische Packung umfassend Chlorpromazin oder ein pharmazeutisch akzeptables Salz davon und Pentamidin oder ein pharmazeutisch akzeptables Salz davon.
Pharmazeutische Packung aus Anspruch 10, wobei genanntes Chlorpromazin und genanntes Pentamidin separat und in individuellen Dosierungen formuliert werden.
Pharmazeutische Packung aus Anspruch 10, wobei genanntes Chlorpromazin und genanntes Pentamidin zusammen und in individuellen Dosierungen formuliert werden.