DE60038386T2

DE60038386T2 - Stabile proteinlösung abgefüllt in einem behältnis aus hydrophobem harz und eine methode zur stabilisierung derselben

Info

Publication number: DE60038386T2
Application number: DE60038386T
Authority: DE
Inventors: Nobuyuki Suzuki; Naoki Mitsui; Takaya Hiraishi; Yoshirou Watanabe
Original assignee: Chugai Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: Chugai Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 1999-09-08
Filing date: 2000-09-08
Publication date: 2009-04-23
Anticipated expiration: 2020-09-09
Also published as: EP1232753B1; DE60038386D1; EP1232753A1; JP6134370B2; JP6076226B2; JP5450508B2; JP2014051502A; EP1232753A4; JP2016056176A; US7253142B1; ATE389414T1; TWI245645B; AU6875900A; WO2001017542A1; JP2011168610A

Description

GEBIET DER ERFINDUNG
Die vorliegende Erfindung betrifft Formulierungen einer Proteinlösung, wobei das Protein Erythropoietin oder Granulocyten-koloniestimulierender Faktor ist, die leicht zu handhaben und über lange Zeiträume stabil sind. Insbesondere betrifft die vorliegende Erfindung Formulierungen einer stabilen Proteinlösung, die zuvor in einem Harzbehälter abgefüllt wurde. Die vorliegende Erfindung betrifft auch Verfahren zur Stabilisierung von Formulierungen einer Proteinlösung.
STAND DER TECHNIK
Mit der Entwicklung der genetischen Rekombinationstechnik werden Formulierungen verschiedener Proteine in beständigen Mengen geliefert. Um die Stabilität sicherzustellen, werden diese Formulierungen in der Darreichungsform eines Puders mit lyophilisiertem Protein als Inhaltsstoff zum Auflösen direkt vor der Verwendung in einem wasserlöslichen Verdünnungsmittel, wobei beide einzeln verpackt sind, oder in der Darreichungsform einer Formulierung einer Proteinlösung geliefert, die Zusätze enthält, die die Stabilität verbessern. Wenn beide Darreichungsformen verglichen werden, erweist sich die Lösungs-Darreichungsform im Hinblick auf die Praktikabilität der Verwendung als vorteilhafter, aber es ist schwierig, ihre Stabilität sicherzustellen.
Üblicherweise wird der Markt mit Formulierungen einer Proteinlösung in einem Behälter wie beispielsweise einem Fläschchen, einer Ampulle oder Einmalspritze beliefert, die aktive Proteine zusammen mit Verdünnungsmitteln, solubilisierenden Agenzien, isotonisierenden Agenzien, Excipienten, pH-Modifizierern, Puffern, reduzierende, Schwefel enthaltende Agenzien, Antioxidantien oder ähnliche enthält. Solch ein Behälter sollte die folgenden Anforderungen erfüllen: (1) er sollte die Formulierung eines Proteins unter Langzeitlagerungsbedingungen stabil halten; (2) er sollte gegenüber Hitze und Druck ausreichend beständig sein, um Bedingungen während der Sterilisation auszuhalten; (3) er sollte chemisch beständig sein; (4) es sollten keine Behälterteile in die Formulierungen der Lösung während der Verwendung gelangen; (5) falls der Behälter eine Spritze ist, sollte ihr Kolben eine gute Gleitfähigkeit haben; (6) er sollte Transparenz haben, um den Nachweis einer Trübung der Lösung oder von Verunreinigungen zu ermöglichen; (7) er sollte leicht zu transportieren sein; und (8) und er sollte beständig gegen Auswaschen sein.
Glasbehälter sind im Hinblick auf Hitzebeständigkeit, Druckbeständigkeit, chemische Beständigkeit und Transparenz vorteilhaft, aber sie erfordern komplexe und teure Prozesse wie beispielsweise die Beschichtung mit Silikon oder ähnlichen Überzugsmitteln und das Backen. Außerdem könnte das Auswaschen aus dem Glasmaterial eine Instabilität des Arzneistoffs bewirken oder es könnte unlösliches Material gebildet werden. Glasbehälter sind wegen ihres Gewichts und ihrer Zerbrechlichkeit auch für den Transport unpassend.
Ein anderes Problem mit Formulierungen einer Proteinlösung stellt der Verlust von Proteingehalt durch Aggregation, Denaturierung oder Degradierung, insbesondere während einer Langzeitlagerung bei Raumtemperaturen, dar.
Dementsprechend gibt es eine Forderung zur Entwicklung von Formulierungen einer Proteinlösung für eine Langzeitlagerung bei Raumtemperaturen, aber es sind keine Formulierungen, die die vorstehend beschriebenen Anforderungen alle erfüllen, entwickelt worden, und es sind bisher keine zuvor in einen Harzbehälter abgefüllten Formulierungen stabiler Proteine dem Markt zur Verfügung gestellt worden.
EP-A-0 909 564 beschreibt die Zubereitung einer Erythropoietinlösung mit einer Aminosäure als Stabilisator, die eine Langzeitlagerungsstabilität hat.
EP-A-0 524 802 verweist auf einen Behälter für einen Hygieneartikel, der aus einem Material besteht, das ein Harz enthält, das aus einer cyclischen Olefinverbindung oder einer polycyclischen Brücken-Kohlenwasserstoffverbindung als eine Polymerverbindung gebildet wird.
US-A-4,992,419 offenbart eine verträgliche, lagerungsstabile EPO-Zubereitung, die EPO, einen physiologisch verträglichen Puffer, 5 bis 50 g/Liter Harnstoff, 1 bis 50 g/Liter Aminosäure und 0,05 bis 5 g/Liter nicht ionisches Benetzungsmittel enthält.
GB-A-2 193 631 verweist auf eine stabile, G-CSF enthaltende pharmazeutische Zubereitung, die zusätzlich zu dem aktiven Agens wenigstens eine Substanz enthält, die aus einem pharmazeutisch verträglichen grenzflächenaktiven Mittel, Saccharid, Protein und einer hochmolekularen Verbindung ausgewählt ist.
EP-A1-0 556 034 verweist auf ein medizinisches Gerät, das medizinische Flüssigkeiten wie beispielsweise Pharmazeutika, Nahrungsmittel in hoher Qualität erhalten und korrekt und hygienisch dosieren kann. Das medizinische Gerät umfasst ein Material, das ein Harz enthält, das aus einer cyclischen Olefinverbindungen oder einer polycyclischen Brücken-Kohlenwasserstoffverbindung als eine Polymerverbindung gebildet wird.
EP-A1-0 559 146 offenbart medizinische Gebrauchsgegenstände wie Spritzen, Ampullen, Flaschen, die aus einem thermoplastischen Norbornenpolymer hergestellt sind.
OFFENBARUNG DER ERFINDUNG
Die Erfinder der vorliegenden Erfindung untersuchten die Reaktivität zwischen Proteinen und Glasoberflächen und kamen zu dem Ergebnis, dass polare Reste, die ursprünglich auf Oberflächen von Glasmaterial vorhanden waren, wie beispielsweise Silanol oder Silyloxy, für den Abbau und die Assoziation physiologisch aktiver Proteine hauptsächlich verantwortlich sein könnten. Es sind einige Mittel vorgeschlagen und verwendet worden, um den Einfluss dieser polaren Reste zu vermindern, zum Beispiel, durch Beschichten von Polysilikon, Alkylsilikon oder ähnlichem auf Glassoberflächen oder durch chemisches Maskieren von Silanolreste, aber die Stabilität konnte nicht wesentlich verbessert werden.
Aus dem Blickwinkel der Affinität zu Behälteroberflächen, die in Kontakt mit einer Proteinlösung, die insbesondere Erythropoietin (EPO) enthält, stehen, stellten die Erfinder die Hypothese auf, dass, wenn die normale Phase der Glasoberflächen, d. h. die stationäre Phase, mit hydrophilen Gruppen belegt ist, die hydrophilen Reste des Proteins auf die Oberflächen in hohem Maße verteilt wären und dass dies die Stabilität herabsetzen würde. Auf der Basis dieser Hypothese erwarteten die Erfinder, dass, wenn die Behälteroberflächen eine reverse hydrophobe Phase frei von polaren Resten im Gegensatz zu Glasoberflächen hätten die Verteilung fettlöslicher Reste des Proteins ansteigen würde und die polaren Reste des Proteins, die für den Abbau oder die Assoziation verantwortlich sind, gegenüber der Behälteroberflächen sein würden und dabei in hohem Maße mitwirken, die Stabilität des Proteins zu verbessern.
Die Erfinder erwarteten auch, dass die vorliegende Erfindung in hohem Maße dazu beitragen würde, die Stabilität von Formulierungen einer Proteinlösung mit Zuckerketten zu verbessern, weil solche Proteine dazu neigen, schnell an Behälter adsorbiert zu werden.
Die Erfinder fanden, dass die Stabilität von Proteinen ohne eine Oberflächenbehandlung des Behälters sichergestellt werden kann, indem ein Behälter ausgewählt wird, der eine hydrophobe, z. B. reverse Phase, hat. Und zwar verwirklichten die Erfinder die vorliegende Erfindung auf der Basis der Entdeckung, dass Aggregation, Denaturierung und Degradierung gehemmt werden können, um einen hohen Proteingehalt über einen langen Zeitraum aufrechtzuerhalten, wenn die Formulierungen der Proteinlösung in einem Harzbehälter abgefüllt werden, der aus einem spezifischen Material gemacht ist.
Dementsprechend liefert die vorliegende Erfindung eine Formulierung einer stabilen Proteinlösung, die in einem Behälter abgefüllt ist, welcher zumindest für den Teil, der in direktem Kontakt mit der Formulierung steht, aus einem hydrophoben Harz gemacht ist, wobei das Protein Erythropoietin oder Granulocytenkoloniestimulierender Faktor ist und wobei das hydrophobe Harz ausgewählt ist aus der Gruppe, bestehend aus

1) Cycloolefin-Copolymer, bestehend aus einem Copolymer aus einem cyclischen Olefin und einem Olefin,
2) Cycloolefin-Polymeren mit geöffnetem Ring, und
3) hydrierten Cycloolefin-Polymeren mit geöffnetem Ring.

Die vorliegende Erfindung liefert die Formulierung der Proteinlösung, wobei der Behälter aus einem Harz hergestellt ist.
Die vorliegende Erfindung liefert die Formulierung der Proteinlösung, wobei die Cycloolefin-Polymere mit geöffnetem Ring Norbornen- oder Tetracyclododecen-Polymere mit geöffnetem Ring sind.
Die vorliegende Erfindung liefert die Formulierung der Proteinlösung, wobei die hydrierten Cycloolefin-Polymere mit geöffnetem Ring hydrierte Norbornen- oder Tetracyclododecen-Polymere mit geöffnetem Ring sind.
Die vorliegende Erfindung liefert die Formulierung der Proteinlösung, wobei das Harz ein Cycloolefin-Copolymer ist, bestehend aus einem Copolymer eines cyclischen Olefins und Olefins.
Die vorliegende Erfindung liefert die Formulierung der Proteinlösung, wobei das Cycloolefin-Copolymer ein Copolymer aus Norbornen oder Tetracyclododecen oder einem Derivat davon und Ethylen oder Propylen ist.
Die vorliegende Erfindung liefert die Formulierung der Proteinlösung, wobei das Cycloolefin-Copolymer ein Copolymer aus Norbornen oder Tetracyclododecen und Ethylen ist.
Die vorliegende Erfindung liefert die Formulierung der Proteinlösung, wobei das Harz ein thermoplastisches Norbornenharz oder ein thermoplastisches Tetracyclododecenharz ist.
Die vorliegende Erfindung liefert die Formulierung der Proteinlösung, wobei der Behälter in der Form vorliegt, ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus einem Fläschchen, einer Ampulle, einer Spritze und einer Flasche.
Die vorliegende Erfindung liefert die Formulierung der Proteinlösung, wobei das Protein ein Protein eines rekombinanten Gens ist.
Die vorliegende Erfindung liefert die Formulierung der Proteinlösung, wobei das Protein Erythropoietin ist.
Die vorliegende Erfindung liefert die Formulierung der Proteinlösung, wobei das Protein Granulocyten-koloniestimulierender Faktor ist.
Die vorliegende Erfindung liefert die Formulierung der Proteinlösung, wobei das Protein ein Protein ist, das eine Zuckerkette hat.
Die vorliegende Erfindung liefert ein Verfahren zum Stabilisieren einer Formulierung einer Proteinlösung, umfassend das Aufbewahren der Formulierung der Proteinlösung abgefüllt in einem Behälter, der zumindest für den Teil, der in direktem Kontakt mit der Formulierung steht, aus einem hydrophoben Harz hergestellt ist, wobei das Protein Erythropoietin oder Granulocyten-koloniestimulierender Faktor ist, und wobei das hydrophobe Harz aus der vorstehend beschriebenen Gruppe ausgewählt ist.
DIE BESONDERS BEVORZUGTEN AUSFÜHRUNGEN DER ERFINDUNG
Geeignete Harze als Behältermaterialien zur Verwendung in der vorliegenden Erfindung umfassen bekannte Harze dargestellt durch Cycloolefin-Polymere mit geöffnetem Ring wie beispielsweise Norbornen oder Tetracyclododecen oder Derivate davon und hydrierte Produkte davon; oder Copolymere, die einen Cyclopentylrest oder substituierte Cyclopentylreste haben, die in eine molekulare Kette durch Polymerisation eines Cycloolefins wie beispielsweise Norbornen oder Tetracyclododecen oder von einem Derivat davon und Ethylen oder Propylen inseriert wurden. Cycloolefine umfassen hier monocyclische und polycyclische Verbindungen. Bevorzugt werden thermoplastische Norbornenharze oder thermoplastische Tetracyclododecenharze. Thermoplastische Norbornenharze umfassen Polymere mit geöffnetem Ring aus Norbornen-Monomeren und hydrierten Produkten davon, zusätzliche Polymere aus Norbornen-Monomeren und zusätzliche Polymere aus Norbornen-Monomeren und Olefinen. Thermoplastische Tetracyclododecenharze umfassen Polymere mit geöffnetem Ring aus Tetracyclododecen-Monomeren und hydrierten Produkten davon, zusätzliche Polymere aus Tetracyclododecen-Monomeren und zusätzliche Polymere aus Tetracyclododecen-Monomeren und Olefinen. Thermoplastische Norbornenharze werden zum Beispiel in JPA Nr. 14882/91, JPA Nr. 122137/91 und JPA Nr. 63807/92 beschrieben.
Besonders bevorzugt werden Cycloolefin-Copolymere (COCs) wie beispielsweise Copolymere aus Norbornen und einem Olefin wie beispielsweise Ethylen und Copolymere aus Tetracyclododecen und einem Olefin wie beispielsweise Ethylen. Cycloolefin-Polymere (COPs), die durch eine Ringöffnungspolymerisation und Hydrierung von Norbornen erhalten werden, werden ebenfalls bevorzugt. Solche COCs und COPs werden zum Beispiel in JPA Nr. 300939/93 oder JPA Nr. 317411/93 beschrieben. Bevorzugte Strukturen solcher COCs und COPs werden nachstehend gezeigt.

(1) Beispiele von COC (Copolymere von Tetracyclododecen und Ethylen)
(2) Beispiele von COC (Copolymere aus Norbomen und einem Olefin wie beispielsweise Ethylen)
(3) Beispiele von COP (hydrierte Norbornen-Polymere mit geöffnetem Ring

n: Polymerisationsgrad; m, m': Molares Verhältnis des Copolymer-Gehaltes
R: Niederalkylgruppe; R, R'': Identische oder verschiedene Niederalkylgruppen.

COCs sind im Handel unter zum Beispiel Apel^® von Mitsui Chemicals erhältlich, und COPs sind im Handel unter zum Beispiel Zeonex^® oder Zeonor^® von Nippon Zeon oder unter Daikyo Resin CZ^® von Daikyo Seiko erhältlich.
COCs und COPs sind die besonders bevorzugten Materialien, weil sie typisch sind für Polyolefin-Harze, die chemische Eigenschaften wie beispielsweise Beständigkeit gegen Hitze und Licht und chemische Beständigkeit zeigen, während sie auch für amorphe Harze im Hinblick auf ihre physikalischen Eigenschaften wie beispielsweise mechanische Eigenschaften, Schmelzflusseigenschaften und Dimensionsgenauigkeit typisch sind.
Formulierungen einer Proteinlösung der vorliegenden Erfindung betreffen Formulierungen einer Lösung, die ein physiologisch aktives Protein enthalten und die zuvor in einem Behälter abgefüllt sind, welcher zumindest für den Teil, der in direktem Kontakt mit der Formulierung steht, aus einem hydrophoben Harz gemacht ist, wobei sie für einen langen Zeitraum aufbewahrt werden können.
Der Behälter, in den die Formulierungen einer Proteinlösung gemäß der vorliegenden Erfindung abgefüllt werden, kann abhängig vom Verwendungszweck ausgewählt werden und kann in einer Form sein, die ein definiertes Volumen hat, wie beispielsweise ein Fläschchen, eine Ampulle, eine Spritze oder ein großes Volumen wie beispielsweise eine Flasche. Die besonders bevorzugte Form ist diejenige einer Spritze, besonders einer Einmalspritze. Lösungen werden zuvor in solch eine Spritze abgefüllt und als Formulierungen einer zuvor abgefüllten Spritzenlösung zur Verfügung gestellt, um einem ärztlichen Behandlungsfehler vorzubeugen und eine Auflösung oder ein Ansaugen der Arzneistofflösungen zu verhindern und somit einen schnellen Arbeitsgang bereitzustellen.
Physiologisch aktive Proteine, die als aktive Inhaltsstoffe in der vorliegenden Erfindung verwendet werden, sind aus Granulocyten-koloniestimulierenden Faktoren (G-CSF) und Erythropoietin (EPO) ausgewählt.
Physiologisch aktive Proteine, die als aktive Inhaltsstoffe in der vorliegenden Erfindung verwendet werden, können natürlichen Quellen entstammen oder können vorzugsweise mittels genetischer Rekombination erhalten werden, so weit sie im Wesentlichen dieselbe biologische Aktivität haben wie jene der physiologisch aktiven Proteine der Säuger, besonders des Menschen. Proteine eines rekombinanten Gens können dieselbe Aminosäuresequenz haben wie jene der natürlichen Proteine, oder sie können Deletion, Substitution oder Addition einer oder mehrerer Aminosäuren in der Aminosäuresequenz einschließen, während die biologische Aktivität beibehalten wird. Physiologisch aktive Proteine können auch chemisch mit PEG modifiziert sein.
Besonders bevorzugte physiologisch aktive Proteine, die in der vorliegenden Erfindung als aktive Inhaltsstoffe verwendet werden, sind G-CSF oder EPO mit einer Zuckerkette. Die Zuckerkette kann einer beliebigen Quelle entstammen, aber besonders jener, die Säugerzellen zugeführt wird. Säugerzellen schließen zum Beispiel Zellen aus den Ovarien chinesischer Hamster (CHO), BHK-Zellen, COS-Zellen, menschliche Zellen etc. ein, unter welchen die CHO-Zellen besonders bevorzugt werden.
Wenn das als ein aktiver Inhaltsstoff in der vorliegenden Erfindung verwendete physiologisch aktive Protein EPO ist, kann EPO durch einen beliebigen Prozess erzeugt werden, es kann z. B. aus menschlichem Urin extrahiert und isoliert und mittels verschiedener Techniken gereinigt werden oder es kann durch Gentechnik (siehe zum Beispiel JPA Nr. 12288/86) aus Zellen der Ovarien chinesischer Hamster (CHO), BHK-Zellen, COS-Zellen, menschlichen Zellen oder ähnlichen hergestellt und dann extrahiert und isoliert und durch verschiedene Techniken gereinigt werden. EPO, das chemisch mit PEG modifiziert wurde, wird auch eingeschlossen (siehe Internationale Veröffentlichung WO90/12874 ). EPO, das keine Zuckerketten hat und chemisch mit PEG oder ähnlichem modifiziert wurde, ist auch eingeschlossen. EPO-Analoga, bei denen EPO modifiziert worden ist, um die Anzahl einer oder mehrerer Glycosylierungstellen an der N-verknüpften Kohlenhydratketten-Bindungsstelle oder der O-verknüpften Kohlenhydratbindungsstelle in der Aminosäuresequenz von EPO zu erhöhen (siehe zum Beispiel JPA Nr. 151398/96 und JPA Nr. 506023/96), sind auch eingeschlossen oder die Menge der Zuckerketten ist durch das Erhöhen des Gehalts von Sialsäure ohne eine Veränderung der Anzahl der Zuckerketten-Bindungsstellen erhöht worden.
Wenn das als ein aktiver Inhaltsstoff in der vorliegenden Erfindung verwendete physiologisch aktive Protein G-CSF ist, kann jeder beliebige hochreine menschliche G-CSF verwendet werden. Der G-CSF der vorliegenden Erfindung kann durch einen beliebigen Prozess erzeugt werden, sie können z. B. aus Kulturen einer menschlichen Tumorzelllinie extrahiert und isoliert und durch verschiedene Techniken gereinigt werden, oder sie können durch Gentechnik in bakteriellen Zellen wie beispielsweise E. coli; Hefezellen; Tierzellen in Kultur wie beispielsweise aus Ovarien chinesischer Hamster (CHO), C127- oder COS-Zellen hergestellt und dann extrahiert und isoliert und durch verschiedene Techniken gereinigt werden. G-CSF wird bevorzugt durch genetische Rekombination in E. coli, Hefe oder CHO-Zellen hergestellt, besonders bevorzugt durch genetische Rekombination in CHO-Zellen. Der mit PEG chemisch modifizierte G-CSF ist auch eingeschlossen (siehe Internationale Veröffentlichung WO90/12874 ).
Formulierungen einer Proteinlösung der vorliegenden Erfindung können Verdünnungsmittel, solubilisierende Agenzien, isotonisierende Agenzien, Excipienten, pH-Modifizierer, Beruhigungsagenzien ("soothing agents"), Puffer, reduzierende, Schwefel enthaltende Agenzien, Antioxidantien oder ähnliche enthalten. Zum Beispiel umfassen isotonisierende Agenzien Polyethylenglycol; und Zucker wie beispielsweise Dextran, Mannit, Sorbit, Inosit, Glucose, Fructose, Lactose, Xylose, Mannose, Maltose, Saccharose, Raffinose. Schwefel enthaltende, reduzierende Agenzien umfassen N-Acetylcystein, N-Acetylhomocystein, Thioctsäure, Thiodiglycol, Thioethanolamin, Thioglycerin, Thiosorbit, Thioglycolsäure und Salze davon, Natriumthiosulfat, Glutathion und Sulfhydryl enthaltende Verbindungen wie beispielsweise Thioalkansäure, die 1 bis 7 Kohlenstoffatome hat.
Antioxidantien umfassen Isoascorbinsäure, Dibutylhydroxytoluol, Butylhydroxyanisol, α-Tocopherol, Tocopherolacetat, L-Ascorbinsäure und Salze davon, L-Ascorbylpalmitat, L-Ascorbylstearat, Natrium-Bisulfit, Natriumsulfit, Triamylgallat, Propylgallat oder chelatbildende Agenzien wie beispielsweise Dinatriumethylendiamintetraacetat (EDTA), Natriumpyrophosphat, Natriummetaphosphat. Andere üblicherweise zu Formulierungen einer Lösung zugesetzte Bestandteile können auch enthalten sein, z. B. anorganische Salze wie beispielsweise Natriumchlorid, Kaliumchlorid, Calciumchlorid, Natriumphosphat, Kaliumphosphat, Natriumbicarbonat; und organische Salze wie beispielsweise Natriumcitrat, Kaliumcitrat, Natriumacetat.
Formulierungen einer Proteinlösung der vorliegenden Erfindung können weiterhin Stabilisatoren enthalten, die für verschiedene Proteine geeignet sind, insbesondere grenzflächenaktive Mittel (zum Beispiel nichtionische grenzflächenaktive Mittel wie beispielsweise Sorbitanfettsäureester, Glycerinfettsäureester, Polyglycerinfettsäureester, Polyoxyethylensorbitanfettsäureester, Polyoxyethylensorbitfettsäureester, Polyoxyethylenglycerinfettsäureester, Polyethylenglycolfettsäureester, Polyoxyethylenalkylether, Polyoxyethylenpolyoxypropylenalkylether, Polyoxyethylenalkylphenylether, mit Polyoxyethylen gehärtete Rhinizinusöle, Polyoxyethylen-Bienenwachs-Derivate, Polyoxyethylen-Lanolin-Derivate, Polyoxyethylenfettsäureamide; kationische grenzflächenaktive Mittel wie beispielsweise Alkylsulfate, Polyoxyethylenalkylethersulfate, Alkylsulfosuccinsäureestersalze; natürliche grenzflächenaktive Mittel wie beispielsweise Lecithin, Glycerophospholipide, Sphingophospholipide, Saccharosefettsäureester; besonders bevorzugt sind Polyoxyethylensorbitanfettsäureester, insbesondere Polyoxyethylensorbitanmonooleat (Polysorbat 80) und Polyoxyethylensorbitanmonolaurat (Polysorbat 20), und Aminosäuren wie beispielsweise D-, L-, und DL-Leucin, Tryptophan, Serin, Glutaminsäure, Arginin, Histidin, Lysin, Methionin, Phenylalanin und Acetyltryptophan und Salze davon, vorzugsweise L-Leucin, L-Tryptophan, L-Glutaminsäure, L-Arginin, L-Histidin und L-Lysin und Salze davon.
Stabile Formulierungen einer Proteinlösung der vorliegenden Erfindung werden normalerweise über parenterale Wege wie beispielsweise eine Injektion (subkutane oder intravenöse Injektion) oder perkutan, auf mucosalem oder nasalem Weg verabreicht, aber sie können auch oral verabreicht werden.
Die Menge der Proteine, die in stabilen Formulierungen einer Proteinlösung der vorliegenden Erfindung enthalten ist, kann abhängig von den verwendeten Proteinen, der Art der zu behandelnden Krankheit, der Schwere der Krankheit, dem Alter des Patienten und anderen Faktoren bestimmt werden.
Im Allgemeinen sind Proteine in einer Menge von 0,01 μg–100 mg/ml, vorzugsweise 0,5 μg–50 mg/ml bezogen auf die Gesamtmenge der Formulierungen der vorliegenden Erfindung oder die injizierbaren Mittel, nachdem die Zucker zugesetzt worden sind, enthalten. EPO ist zum Beispiel üblicherweise in Formulierungen einer Lösung in einer Menge von 100–500.000 IE/ml (etwa 0,5–3000 μg/ml), vorzugsweise 200–100.000 IE/ml (etwa 1–600 μg/ml), stärker bevorzugt 750–72.000 IE/ml (etwa 4–400 μg/ml) enthalten. G-CSF ist üblicherweise in einer Enddosiskonzentration von 1–1000 μg/ml, vorzugsweise 10–800 μg/ml, stärker bevorzugt 50–500 μg/ml enthalten. Antikörper sind üblicherweise in einer Enddosiskonzentration von 0,1–200 mg/ml, vorzugsweise 1 bis 120 mg/ml enthalten.
Formulierungen einer Lösung der vorliegenden Erfindung können durch Lösung dieser Komponenten in einem wässrigen Puffer, der im Fachgebiet von Formulierungen einer Lösung bekannt ist, wie beispielsweise Phosphat und/oder Citratpuffer erzeugt werden. Bevorzugte Phosphatpuffer sind Natriummonohydrogenphosphat-Natriumdihydrogenphosphat-Systeme, und bevorzugte Citratpuffer sind Natriumcitratpuffer.
Wenn Formulierungen einer Proteinlösung der vorliegenden Erfindung Formulierungen einer Erythropoietinlösung sind, enthalten sie vorzugsweise EPO, ein nicht-ionisches grenzflächenaktives Mittel (wie beispielsweise Polysorbat 80, Polysorbat 20), ein isotonisierendes Agens (wie beispielsweise Natriumchlorid) und falls gewünscht einen Stabilisator (wie beispielsweise eine Aminosäure, vorzugsweise L-Histidin) mit einem pH-Wert von 5,0–8,0, vorzugsweise 5,5–7,0.
Wenn Formulierungen einer Proteinlösung der vorliegenden Erfindung Formulierungen einer G-CSF-Lösung sind, enthalten sie vorzugsweise G-CSF, ein nicht-ionisches grenzflächenaktives Mittel (wie beispielsweise Polysorbat 80, Polysorbat 20) und falls gewünscht ein Verdünnungsmittel, ein Solubilisierungsagenz, isotonisierendes Agenz, einem Excipienten, pH-Modifizierer, Beruhigungsagenzien, Puffer, Schwefel enthaltende, reduzierende Agenzien, Antioxidantien bei pH 5,0–8,0, vorzugsweise 6,0–7,0.
Stabile Formulierungen einer in einem hydrophoben Harzbehälter der vorliegenden Erfindung zuvor abgefüllten Proteinlösung zeigen sehr gute Restmengen von EPO verglichen mit Glasbehältern, auch nach einem Schnelltest bei 40°C über 6 Monate, wie durch eine Prüfung an EPO und G-CSF in den Beispielen nachstehend gezeigt wird.
Die vorliegende Erfindung liefert auch ein Verfahren zur Stabilisierung einer Formulierung einer Proteinlösung, die die Lagerung der Formulierung einer Proteinlösung umfasst, die in einem vorstehend festgelegten Harzbehälter abgefüllt ist, wobei das Protein Erythropoietin oder Granulocyten-stimulierender Faktor ist, Der hierin verwendete Begriff Stabilisierung hängt von der Natur des abgefüllten Proteins ab. Im Fall von Formulierungen einer Erythropoietinlösung zum Beispiel bedeutet es, dass der Spiegel des verbleibenden Erythropoietins bei 90% oder mehr, vorzugsweise 95% oder mehr, stärker bevorzugt 98% oder mehr nach einer Lagerung bei 10°C über 2 Jahre oder mehr oder bei 25°C über 6 Monate oder mehr, vorzugsweise ein Jahr oder mehr, stärker bevorzugt zwei Jahre oder mehr oder bei 40°C über zwei Wochen oder mehr gehalten wird.
Die vorliegende Erfindung erlaubt es, Formulierungen einer Proteinlösung bei Raumtemperaturen über einen langen Zeitraum stabil zu lagern.
INDUSTRIELLE ANWENDBARKEIT
Formulierungen einer Proteinlösung, die zuvor in einem hydrophoben Behälter der vorliegenden Erfindung abgefüllt sind, zeigen keinen oder einen geringen Verlust an physiologisch aktivem Proteingehalt und sind somit stabiler als übliche Formulierungen einer Lösung, die zuvor in einem Glasbehälter abgefüllt sind. Die vorliegende Erfindung erlaubt, dass selbst Formulierungen einer Proteinlösung, die üblicherweise bei niedrigen Temperaturen gelagert werden, bei Raumtemperaturen über einen langen Zeitraum gelagert werden. Harzbehälter der vorliegenden Erfindung haben den Vorteil, dass sie durch einen einfacheren Thermoformungsprozess erzeugt werden können. Außerdem können Harzbehälter gut transportiert werden, da sie leichter und weniger zerbrechlich sind als Glasbehälter, und dementsprechend ist die vorliegende Erfindung in höchstem Maße industriell verwendbar.
BEISPIELE
Die folgenden Beispiele zeigen die Ergebnisse von Langzeitstabilitätstesten und Schnelltesten mit Erythropoietin (EPO) oder Granulocyten-koloniestimulierendem Faktor (G-CSF), die als repräsentative Beispiele verwendet werden. Verschiedene Veränderungen und Modifizierungen können von einem Fachmann gemacht werden.
In den folgenden Beispielen wurde die Bewertung der Formulierungen durch die Bestimmung des Gehaltes von EPO oder G-CSF durch RP-HPLC-Analyse gemacht.
Beispiel 1: Prüfung der Langzeitstabilität von bei 10°C und 25°C gelagerten Formulierungen einer EPO-Lösung.
Erzeugung einer Formulierung einer EPO-Lösung
Eine Lösung, die die folgenden Komponenten pro 1 ml der formulierten Lösung enthält, wurde erzeugt und mit 10 mM phosphatgepufferter Kochsalzlösung auf einen pH-Wert von 6,0 eingestellt.

EPO 1500 IE

Polyoxyethylensorbitanmonooleat (Polysorbat 80) 0,05 mg

Natriumchlorid 8,5 mg

L-Histidin 1,35 mg
Testverfahren
Formulierungen der EPO-Lösung wurden erzeugt, indem 0,5 ml einer Formulierung der Erythropoietin-Lösung, die wie vorstehend erzeugt wurde, in einem Glasbehälter, dessen Oberfläche mit Silikon überzogen war, und einem COP-Behälter (aus einem COP, einem hydrierten Polymer aus Norbornen mit geöffnetem Ring, gemacht; Daikyo Resin CZ^®, hergestellt von Daikyo Seiko) abgefüllt wurden und einer Stabilitätsprüfung bei 10°C über 3 Monate und 9 Monate und bei 25°C über 3 Monate, 6 Monate, 12 Monate und 24 Monate unterworfen.
Das in diesem Beispiel verwendete EPO ist ein rekombinantes Protein, das eine in den CHO-Zellen hergestellte Zuckerkette hat.

Die Ergebnisse (Mittelwert eines Dreifachtests) werden in Tabelle 1 (Lagerung bei 10°C) und Tabelle 2 (Lagerung bei 25°C) nachstehend gezeigt. Die Werte stellen EPO-Gehalte dar, die mittels RP-HPLC-Analyse bestimmt wurden, und die Werte in runden Klammern stellen die verbleibenden Mengen dar, die als prozentuale Anteile auf Basis der verbleibenden Mengen beim Befüllen (anfangs), gesetzt auf 100%, ausgedrückt werden. Tabelle 1: Ergebnisse eines Langzeitstabilitätstestung bei 10°C

Charge	Behältermaterial	Anfang	3 Monate	9 Monate
1	Glas	98.0% (100.0%)	98.6% (100.6%)	96.4% (98.4%)
1	COP	98.0% (100.0%)	98.7% (100.8%)	97.1% (99.0%)
2	Glas	93.4% (100.0%)	93.5% (100.2%)	91.1% (97.6%)
2	COP	92.7% (100.0%)	94.2% (101.6%)	92.0% (99.3%)
3	Glas	97.0% (100.0%)	97.1% (100.0%)	94.1% (96.9%)
3	COP	96.7% (100.0%)	97.8% (101.1%)	95.7% (99.0%)

Tabelle 2: Ergebnisse einer Langzeitstabilitätstestung bei 25°C

Charge	Behältermaterial	Anfang	³ Monate	6 Monate	12 Monate	24 Monate
1	Glas	98.0% (100.0%)	97.1% (99.0%)	94.7% (96.6%)	89.4% (91.4%)	85.4% (87.1%)
1	COP	98.0% (100.0%)	98.8% (100.8%)	98.1% (100.1%)	97.2% (99.1%)	96.2% (98.2%)
2	Glas	93.4% (100.0%)	92.1% (98.6%)	89.7% (96.0%)	85.3% (91.4%)	83.3% (89.2%)
2	COP	92.7% (100.0%)	93.7% (101.1%)	92.9% (100.2%)	91.7% (99.0%)	89.4% (96.4%)
3	Glas	97.0% (100.0%)	96.2% (99.2%)	93.8% (96.7%)	87.5% (90.2%)	88.6% (91.3%)
3	COP	96.7% (100.0%)	98.1% (101.5%)	97.5% (100.8%)	96.3% (99.6%)	94.9% (98.1%)

Wie die vorstehenden Tabellen zeigen, wurden die verbleibenden EPO-Mengen sowohl in den Glas- als auch in den COP-Behältern, die bei 10°C über 3 und 9 Monate gelagert wurden, bei etwa 100% der anfänglichen Menge aufrechterhalten. Verbleibende EPO-Mengen in COP-Behältern, die bei 25°C gelagert wurden, wurden zu 100% der anfänglichen Mengen nach über drei Monaten, sechs Monaten und zwölf Monaten und zu etwa 96–98% auch nach 24 Monaten aufrechterhalten, im Unterschied zu der Tendenz zu einer leichten Abnahme in Glasbehältern.
Diese Ergebnisse bestätigten, dass Formulierungen einer Proteinlösung, besonders Formulierungen einer Proteinlösung, die eine Zuckerkette hat, wie beispielsweise EPO, die zuvor in einem Harzbehälter der vorliegenden Erfindung abgefüllt wurde, eine sehr hohe Stabilität, auch nach der Lagerung bei Raumtemperaturen über einen langen Zeitraum, zeigt.
Beispiel 2: Schnelltest bei Formulierungen einer EPO-Lösung bei 40°C
Formulierungen einer EPO-Lösung wurden, indem sie in einem Glasbehälter und einem COP-Behälter, wie in Beispiel 1 beschrieben, abgefüllt wurden, zur Lagerung unter Bedingungen eines Schnelltests bei 40°C über 2 Monate, 4 Monate und 6 Monate erzeugt.

Die Ergebnisse (Mittelwert eines Dreifachtests) werden in Tabelle 3 nachstehend gezeigt. Tabelle 3: Ergebnisse eines Schnelltests bei 40°C

Charge	Behältermaterial	Anfang	2 Monate	4 Monate	6 Monate
1	Glas	98.0% (100.0%)	84.2% (85.9%)	79.8% (81.4%)	72.3% (73.7%)
1	COP	98.0% (100.0%)	94.9% (96.9%)	92.8% (94.7%)	87.5% (89.3%)
2	Glas	93.4% (100.0%)	83.6% (89.6%)	79.4% (85.1%)	67.1% (71.8%)
2	COP	92.7% (100.0%)	89.6% (96.6%)	86.1% (92.9%)	81.2% (87.6%)
3	Glas	97.0% (100.0%)	88.8% (91.5%)	82.8% (85.3%)	73.1% (75.4%)
3	COP	96.7% (100.0%)	92.8% (96.0%)	88.7% (91.8%)	85.7% (88.6%)

Diese Ergebnisse zeigen, dass Formulierungen einer EPO-Lösung, die in einem COP-Behälter abgefüllt sind, bei 40°C für bis zu sechs Monate stabiler waren als jene, die in einem Glasbehälter abgefüllt sind.
Beispiel 3: Schnelltest bei Formulierungen einer EPO-Lösung bei 50°C.
Formulierungen einer EPO-Lösung wurden, indem sie in einem Glasbehälter und einem COP-Behälter, wie in Beispiel 1 beschrieben, abgefüllt wurden, zur Lagerung unter Bedingungen eines Schnelltests bei 50°C über einen Monat, zwei Monate beziehungsweise drei Monate erzeugt.

Die Ergebnisse (Mittelwert eines Dreifachtests) werden in Tabelle 4 nachstehend gezeigt. Tabelle 4: Ergebnisse eines Schnelltests bei 50°C

Charge	Behältermaterial	Anfang	1 Monat	2 Monate	3 Monate
1	Glas	98.0% (100.0%)	68.5% (69.9%)	48.4% (49.4%)	34.5% (35.2%)
1	COP	98.0% (100.0%)	81.6% (83.2%)	65.9% (67.3%)	55.5% (56.7%)
2	Glas	93.4% (100.0%)	60.2% (64.5%)	45.2% (48.4%)	33.4% (35.8%)
2	COP	92.7% (100.0%)	77.3% (83.4%)	62.6% (67.5%)	52.3% (56.4%)
3	Glas	97.0% (100.0%)	65.6% (67.6%)	46.8% (48.3%)	28.6% (29.4%)
3	COP	96.7% (100.0%)	79.4% (82.2%)	65.0% (67.3%)	55.2% (57.1%)

Jede der drei Chargen, die sowohl in Glas- als auch in COP-Behälter abgefüllt sind, zeigten eine gleiche Tendenz zu einer Abnahme bei den verbliebenen Mengen unter den Bedingungen eines Schnelltests bei 50°C, ohne irgendeine Abweichung von Charge zu Charge. Bei dem Schnelltest bei 50°C bis zu drei Monaten waren die Formulierungen einer EPO-Lösung, die in einem COP-Behälter abgefüllt sind, stabiler als jene, die in einem Glasbehälter abgefüllt sind.
Beispiel 4: Schnelltest bei Formulierungen einer EPO-Lösung bei 60°C
Formulierungen einer EPO-Lösung wurden, indem sie in einem Glasbehälter und einem COP-Behälter, wie in Beispiel 1 beschrieben, abgefüllt wurden, zur Lagerung unter Bedingungen eines Schnelltests bei 60°C über eine Woche, zwei Wochen beziehungsweise drei Wochen erzeugt.

Die Ergebnisse (Mittelwert einer Dreifachtests) werden in Tabelle 5 nachstehend gezeigt. Tabelle 5: Ergebnisse des Schnelltests bei 60°C

Charge	Behältermaterial	Anfang	1 Woche	2 Wochen	3 Wochen
1	Glas	98.0% (100.0%)	80.1% (81.7%)	70.2% (71.6%)	55.9% (57.0%)
1	COP	98.0% (100.0%)	87.9% (89.7%)	80.4% (82.0%)	73.2% (74.7%)
2	Glas	93.4% (100.0%)	74.5% (79.8%)	65.6% (70.3%)	51.7% (55.4%)
2	COP	92.7% (100.0%)	83.0% (89.5%)	75.6% (81.5%)	68.5% (73.9%)
3	Glas	97.0% (100.0%)	79.5% (81.9%)	65.1% (67.1%)	54.4% (56.1%)
3	COP	96.7% (100.0%)	86.1% (89.0%)	78.4% (81.1%)	68.6% (70.9%)

Jede der drei Chargen, die sowohl in Glas- als auch in COP-Behälter abgefüllt sind, zeigten eine ähnliche Tendenz zu einem Abfall bei den verbleibenden Mengen unter Schnelltestbedingungen bei 60°C, ohne irgendeine Abweichung von Charge zu Charge. Im Schnelltest bei 60°C für bis zu drei Monaten waren die Formulierungen einer EPO-Lösung, die in einem COP-Behälter abgefüllt sind, stabiler als jene, die in einem Glasbehälter abgefüllt sind.
Beispiel 5: Schnelltest bei Formulierungen einer G-CSF-Lösung bei 40°C
Erzeugung einer Formulierung einer G-CSF-Lösung
Es wurde eine Formulierung, die die folgenden Komponenten pro 1 ml der formulierten Lösung enthielt, hergestellt und mit 1 Mol/l Salzsäure auf einen pH-Wert von 6,5 eingestellt.

G-CSF 125 μg

Polyoxyethylensorbitanmonooleat (Polysorbat 20) 0,1 mg

Natriumchlorid 7,5 mg
Testverfahren
Formulierungen der G-CSF-Lösung wurden erzeugt, indem 0,5 ml einer Formulierung der G-CSF-Lösung, die wie vorstehend erzeugt wurde, in einem Glasbehälter, dessen Oberfläche nicht mit Silikon überzogen war, einem Glasbehälter, dessen Oberfläche mit Silikon überzogen war, und einem COP-Behälter (aus einem COP, einem hydrierten Polymer aus Norbornen mit geöffnetem Ring, gemacht; Daikyo Resin CZ^®, hergestellt von Daikyo Seiko) abgefüllt wurden, und unter Schnelltestbedingungen bei 40°C über zwei Wochen gelagert.
Der in diesem Beispiel verwendete G-CSF ist ein rekombinantes Protein, das eine in den CHO-Zellen hergestellte Zuckerkette hat.

Die Ergebnisse (Mittelwert eines Dreifachtests) werden in Tabelle 6 nachstehend gezeigt. Die Werte stellen G-CSF-Gehalte dar, die mittels RP-HPLC-Analyse bestimmt wurden, und die Werte in runden Klammern stellen die verbleibenden Mengen dar, die als prozentuale Anteile auf Basis der verbleibenden Mengen beim Befüllen (anfangs), gesetzt auf 100%, ausgedrückt werden. Tabelle 6: Ergebnisse des Schnelltests bei 40°C

Behältermaterial	Anfang	2 Wochen
Glas (nicht mit Silikonöl überzogen)	100.1% (100.0%)	85.4% (85.3%)
Glas (mit Silikonöl überzogen)	100.1% (100.0%)	84.8% (84.7%)
COP	100.1% (100.0%)	94.6% (94.5%)

Ein Vergleich der verbliebenen Mengen mit den anfänglichen Mengen ergab 85,4% (nichtbeschichtet mit Silikonöl) und 84,8% (beschichtet mit Silikonöl) in Glasbehältern im Gegensatz zu 94,6% in COP-Behältern. Diese Ergebnisse zeigen, dass Formulierungen mit G-CSF-Lösung, die in einem COP-Behälter abgefüllt sind, bei 40°C für bis zu zwei Wochen stabiler waren als jene, die in einem Glasbehälter abgefüllt sind.
Beispiel 6: Test auf Auswaschung von Verunreinigungen und Test auf Adsorption an Behälter
Eine Formulierung einer Erythropoietin-Lösung, die 1500 IE oder 48000 IE von EPO pro 1 ml der formulierten Lösung enthält, wurde erzeugt. Die 1500 IE enthaltende Formulierung wurde, wie in Beispiel 1 beschrieben, erzeugt. Die 48000 IE enthaltende Formulierung wurde wie folgt erzeugt.
Eine Formulierung, die die folgenden Komponenten pro 1 ml der formulierten Lösung enthält, wurde hergestellt und mit 25 mM phosphatgepufferter Kochsalzlösung auf einen pH-Wert von 6,0 eingestellt.

EPO 48000 IE

Polyoxyethylensorbitanmonooleat (Polysorbat 80) 0,05 mg

Natriumchlorid 7,0 mg

L-Histidin 1,35 mg
Formulierungen einer EPO-Lösung wurden hergestellt, indem 0,5 ml der Formulierung, die, wie vorstehend beschrieben, erzeugt wurde, in eine Glasspritze, deren Oberfläche mit Silikon überzogen war, eine COP-Spritze, ein COP-Fläschchen (beide aus einem COP, einem hydrierten Polymer aus Norbornen mit einem geöffneten Ring, hergestellt; Daikyo Resin CZ^®, hergestellt von Daikyo Seiko), eine Glasampulle, deren Oberfläche nicht mit Silikon beschichtet war, und ein Glasfläschchen, dessen Oberfläche nicht mit Silikon beschichtet war, abgefüllt wurden.
Test auf Auswaschung von Verunreinigungen
Es wurde eine Beurteilung gemacht, um zu bestimmen, ob oder ob nicht irgendeine Peak von jedem Behälter ausgewaschenen Verunreinigungen neben dem EOP-Peak beobachtet wird, wenn verbliebende Mengen der in verschiedenen Behältern erzeugten Formulierungen einer EPO-Lösung untersucht wurden. Es wurde kein Verunreinigungspeak in einer der Proben beobachtet, was bestätigte, dass keine Verunreinigungen aus den Behältern ausgewaschen wurden.
Test auf Adsorption an Behälter

EPO wurde in jedem Behälter gewonnen und die auf die formulierte EPO-Lösung bezogene Ausbeute (%) wurde bestimmt. Die Ergebnisse (Mittelwert eines Dreifachtests) werden in Tabelle 7 gezeigt. Tabelle 7: Gewinnung bezogen auf die formulierte Lösung

	1500 IE	48,000 IE
Glasspritze (mit Silikon überzogen)	98.7%	99.7%
COP-Spritze	99.3%	99.6%
COP-Fläschchen	99.6%	100.0%
Glasampulle (nicht mit Silikon überzogen)	93.6%	99.7%
Glasfläschchen (mit Silikon überzogen)	94.1%	-

Das in COP-Behältern erzeugte EPO zeigte eine vergleichbare oder höhere Ausbeute als das in einem mit Silikonöl überzogenen Glasbehälter erzeugte EPO und eine viel höhere als diejenige, die in einem nicht mit Silikonöl überzogenen Glasbehälter erhalten wurde. Somit zeigten COP-Behälter überlegene Charakteristika gegenüber Behältern, bei denen weniger Adsorption an die Behälterwände beobachtet wird.
Beispiel 7: Langzeitstabilitätstestung und Schnelltests mit Formulierungen einer EPO-Lösung in verschiedenen Harzbehältern
Formulierungen einer EPO-Lösung wurden erzeugt, indem 0,5 ml einer Formulierung einer Erythropoietin-Lösung, die 1500 IE EPO pro 1 ml der formulierten Lösung (erzeugt, wie in Beispiel 1 beschrieben) enthielt, in einen Glasbehälter, einen COP-Behälter (gemacht aus einem COP, einem hydrierten Polymer aus Norbornen mit geöffneten Ring; Daikyo Resin CZ^®, hergestellt von Daikyo Seiko), und einen COC-Behälter (ein Copolymer aus Tetracyclododecen und einem Olefin wie beispielsweise Ethylen: Apel^® hergestellt von Mitsui Chemicals) abgefüllt wurden.
Auf diese Weise erzeugte Formulierungen einer EPO-Lösung wurden (1) einer Stabilitätstestung bei 25°C über zwei Monate, drei Monate und sechs Monate unterworfen, und Formulierungen einer EPO-Lösung, die in Glasbehälter und COC-Behälter gefüllt sind, wurden weiterhin (2) Schnelltests bei 40°C über zwei Monate, vier Monate und sechs Monate, (3) Schnelltests bei 50°C über einen Monat, zwei Monate und drei Monate, und (4) Schnelltests bei 60°C über eine Woche, zwei Wochen und drei Wochen unterworfen. Die Ergebnisse (Mittelwert eines Dreifachtests) werden in den Tabellen 8, 9, 10 beziehungsweise 11 nachstehend gezeigt. Die Werte stellen die verbleibenden Mengen dar, die als prozentuale Anteile auf Basis der verbleibenden Mengen beim Befüllen (anfangs), gesetzt auf 100%, ausgedrückt werden. Tabelle 8: Ergebnisse eines Langzeitstabilitättests bei 25°C

Behälter 2 Monate 3 Monate 6 Monate

Glasfäschchen 97.4% 97.8% 95.1%

COP-Fäschchen 100.2% 99.9% 99.9%

COC-Fäschchen 100.1% 100.2% 100.1%

Tabelle 9: Ergebnisse eines Schnelltests bei 40°C

Behälter 2 Monate 4 Monate 6 Monate

Glasfläschchen 86.7% 68.2% 43.5%

COC-Fläschchen 96.8% 87.6% 83.1%

Tabelle 10: Ergebnisse eines Schnelltests bei 50°C

Behälter 1 Monat 2 Monate 3 Monate

Glasfläschchen 62.5% 41.4% 24.0%

COC-Fläschchen 84.9% 71.8% 57.9%

Tabelle 11: Ergebnisse eines Schnelltests bei 60°C

Behälter 1 Woche 2 Wochen 3 Wochen

Glasfläschchen 69.7% 50.3% 32.9%

COC-Fläschchen 82.2% 69.5% 57.8%
In all den Testen zeigten die in den Harzbehältern erzeugten Formulierungen einer EPO-Lösung höhere verbleibende Mengen als diejenigen, die in Glasbehältern erzeugt wurden.

Claims

Formulierung einer stabilen Proteinlösung, die in einem Behälter abgefüllt ist, welcher zumindest für den Teil, der in direktem Kontakt mit der Formulierung steht, aus einem hydrophoben Harz gemacht ist, wobei das Protein Erythropoietin oder Granulocyten-koloniestimulierender Faktor ist, und wobei das hydrophobe Harz ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus 1) Cycloolefin-Copolymer bestehend aus einem Copolymer aus einem cyclischen Olefin und einem Olefin, 2) Cycloolefin-Polymeren mit geöffnetem Ring, und 3) hydrierten Cycloolefin-Polymeren mit geöffnetem Ring.
Formulierung der Proteinlösung nach Anspruch 1, wobei der Behälter aus einem Harz hergestellt ist.
Formulierung der Proteinlösung nach Anspruch 1 oder 2, wobei die Cycloolefin-Polymere mit geöffnetem Ring Norbornen- oder Tetracyclododecen-Polymere mit geöffnetem Ring sind.
Formulierung der Proteinlösung nach Anspruch 1 oder 2, wobei die hydrierten Cycloolefin-Polymere mit geöffnetem Ring hydrierte Norbornen- oder Tetracyclododecen-Polymere mit geöffnetem Ring sind.
Formulierung der Proteinlösung nach Anspruch 1 oder 2, wobei das Cycloolefin-Copolymer ein Copolymer aus Norbornen oder Tetracyclododecen oder einem Derivat davon und Ethylen oder Propylen ist.
Formulierung der Proteinlösung nach Anspruch 5, wobei das Cycloolefin-Copolymer ein Copolymer aus Norbornen oder Tetracyclododecen und Ethylen ist.
Formulierung der Proteinlösung nach Anspruch 1 oder 2, wobei das Harz ein thermoplastisches Norbornenharz oder ein thermoplastisches Tetracyclododecenharz ist.
Formulierung der Proteinlösung nach einem der Ansprüche 1 bis 7, wobei der Behälter in der Form vorliegt, ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus einem Fläschchen, einer Ampulle, einer Spritze und einer Flasche.
Formulierung der Proteinlösung nach Anspruch 8, die eine Formulierung einer zuvor abgefüllten Spritzenlösung ist.
Formulierung der Proteinlösung nach einem der Ansprüche 1 bis 9, wobei das Protein ein Protein eines rekombinanten Gens ist.
Formulierung der Proteinlösung nach Anspruch 10, wobei das Protein Erythropoietin ist.
Formulierung der Proteinlösung nach Anspruch 10, wobei das Protein Granulocyten-koloniestimulierender Faktor ist.
Formulierung der Proteinlösung nach einem der Ansprüche 1 bis 12, wobei das Protein ein Protein ist, das eine Zuckerkette hat.
Formulierung der Proteinlösung nach einem der Ansprüche 1 bis 13, die dazu geeignet ist, bei Raumtemperaturen für einen langen Zeitraum aufbewahrt zu werden.
Verfahren zum Stabilisieren einer Formulierung einer Proteinlösung, umfassend das Aufbewahren der Formulierung der Proteinlösung abgefüllt in einem Behälter, der zumindest für den Teil, der in direktem Kontakt mit der Formulierung steht, aus einem hydrophoben Harz hergestellt ist, wobei das Protein Erythropoietin oder Granulocyten-koloniestimulierender Faktor ist, und wobei das hydrophobe Harz ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus 1) Cycloolefin-Copolymer bestehend aus einem Copolymer aus einem cyclischen Olefin und einem Olefin, 2) Cycloolefin-Polymeren mit geöffnetem Ring, und 3) hydrierten Cycloolefin-Polymeren mit geöffnetem Ring.
Verfahren zum Stabilisieren einer Formulierung einer Proteinlösung bei Raumtemperaturen für einen langen Zeitraum, umfassend das Aufbewahren der Formulierung der Proteinlösung abgefüllt in einem Behälter, der zumindest für den Teil, der in direktem Kontakt mit der Formulierung steht, aus einem hydrophoben Harz hergestellt ist, wobei das Protein Erythropoietin oder Granulocyten-koloniestimulierender Faktor ist, und wobei das hydrophobe Harz ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus 1) Cycloolefin-Copolymer bestehend aus einem Copolymer aus einem cyclischen Olefin und einem Olefin, 2) Cycloolefin-Polymeren mit geöffnetem Ring, und 3) hydrierten Cycloolefin-Polymeren mit geöffnetem Ring.