KR20100138908A

KR20100138908A - 안정화된 단백질 조성물

Info

Publication number: KR20100138908A
Application number: KR1020107019902A
Authority: KR
Inventors: 로버타 본크; 밍다 유; 에이미 후인커; 모니카 팔리토; 마가렛 리치; 니콜 스텍하우스
Original assignee: 암젠 인코퍼레이티드
Priority date: 2008-02-07
Filing date: 2009-02-05
Publication date: 2010-12-31
Also published as: JP2011519347A; US20110060290A1; CA2714006A1; SG10201402265YA; CN103720587A; CN102202643A; IL207340A0; WO2009099641A2; ZA201005779B; EP2249801A2; EA201001223A1; JP2015042638A; WO2009099641A3; BRPI0908361A2; MX2010008696A; ZA201109364B; AU2009210741A1

Abstract

용기 내의 RANKL 에 대한 특이적 결합제, TNF 에 대한 특이적 결합제, 및/또는 IL-1R1 에 대한 특이적 결합제의 안정화된 조성물이 제공된다. 그와 같은 조성물의 제조 및 사용 방법이 또한 제공된다.

Description

안정화된 단백질 조성물 {STABILIZED PROTEIN COMPOSITIONS}

본 출원은 2008년 2월 7일자 출원된 미국 특허 가출원 번호 제 61/065,065 호의 장점을 주장하고 있다. 미국 특허 가출원 번호 제 61/065,065 호는 본 명세서에 여러 가지 목적으로 그 내용 그대로 참고 인용하였다.

용기 내의 RANKL에 대한 특이적 결합제, TNF에 대한 특이적 결합제, 및/또는 IL-1R1에 대한 특이적 결합제의 안정화된 조성물이 제공된다. 또한, 이러한 조성물의 제조 방법 및 사용 방법이 제공된다.

특정 치료 조성물은 특이적 결합제를 포함한다. 특정한 경우에, 치료 조성물은 용기 내에, 예를 들면, 저장 및 선적을 위해 배치된다. 특정한 경우에, 이러한 용기는 예를 들면, 피하, 근육내 또는 정맥내 주사를 포함하지만 이들로만 제한되지 않는 투여 모드 뿐만 아니라 저장 및 선적 조건에 적합하다. 특정한 예시적인 용기는 앰플, 미리 충전시키는데 적합한 일회용 주사기를 포함하지만 이것으로만 제한되지 않는 일회용 주사기, 및 유리 또는 플라스틱으로 제조된 다중 용량형 바이알을 포함하지만, 이들로만 제한되지 않는다. 특정한 경우에, 치료 조성물은 미리 충전된 주사기, 예를 들면, 제조업자가 치료 조성물을 미리 배치한 주사기 내에 함유된다.

용기 내의 치료 조성물은 특정한 경우에, 입자를 형성할 수 있고 및/또는 선적 및/또는 저장 조건에 노출됨에 따라 집합체화를 보여준다. 입자 형성 및/또는 집합체화를 나타내는 이러한 조성물은, 특정한 경우에 투여에 적합하지 않고 폐기되어야 한다. 특정한 경우에, 선적 및/또는 저장 조건에 노출되었을 경우 입자 형성 및/또는 집합체화에 덜 민감한 용기 내의 안정화된 치료 조성물을 제공하는 것이 바람직하다.

요약

특정한 구체예에서, 특이적 결합제를 포함하는 조성물이 들어있는 미리 충전된(prefilled) 주사기가 제공되고, 여기서 미리 충전된 주사기에 들어 있는 특이적 결합제는 안정되어 있다.

특정한 구체예에서, 특이적 결합제를 포함하는 조성물이 들어있는 미리 충전된 주사기가 제공되고, 여기서 조성물과 주사기 클로저 사이의 공간 부분은 최소화되고, 미리 충전된 주사기에 들어 있는 특이적 결합제는 안정되어 있다.

조성물과 주사기 클로저 사이의 공간 부분이 최소화되도록 특이적 결합제를 포함하는 조성물을 미리 충전된 주사기 내로 도입하는 단계를 포함하는 미리 충전된 주사기의 제조 방법에 있어서, 상기 미리 충전된 주사기에 들어 있는 특이적 결합제는 안정되어 있는 방법이 제공된다.

특정한 구체예에서, 조성물과 주사기 클로저(closure) 사이의 공간 부분이 최소로 되도록 미리 충전된 주사기 내에 조성물을 위치시키는 것을 포함하며 상기 미리 충전된 주사기에 들어 있는 상기 특이적 결합제는 안정되어 있는, 미리 충전된 주사기에 들어 있는 조성물 중 특이적 결합제를 안정시키는 방법이 제공된다.

도 1은 실시예 1에 고찰된 작업에 따라 4℃에서 24개월 동안 바이알 내에서 인큐베이트되고, 네이티브 SEC-HPLC에 의해 여러 시점에서 분석된 여러 가지 단백질 농도에서 αRANKL-1 조성물의 안정성을 보여준다. (a) 메인 피크 (단량체) %; (b) 집합체 (프리-피크) %.
도 2는 실시예 1에 고찰된 작업에 따라 4℃에서 24주 동안 미리 충전된 유리 루어 락(luer lock) 주사기 또는 미리 충전된 유리 지주 받침된 니들 주사기 내에서 인큐베이팅한 후, 네이티브 SEC-HPLC에 의해 여러 시점에서 분석된 여러 가지 단백질 농도에서 αRANKL-1 조성물의 정상 상태 하의 안정성을 보여준다.
도 3은 실시예 1에 고찰된 작업에 따라 4℃에서 4주, 10주, 22주, 32주, 또는 52주 동안 COP 플라스틱 (Resin CZ^®) 미리 충전된 주사기 내에서 인큐베이팅한 후, 정상 상태 하 또는 선적 후, 및 네이티브 SEC-HPLC에 의해 여러 시점에서 분석된 폴리소르베이트 없는 제형 중의 αRANKL-1 조성물의 메인 피크 (단량체) %를 보여준다.
도 4는 sTNFR:Fc 샘플의 크기 분포를 보여준다. 이 도면은 실시예 2에 고찰된 작업에 따라 여러 가지 미리 충전하는 조건 및 선적 조건에 적용된 sTNFR:Fc 샘플의 세기 가중된 크기 분포로 지시된 바의 부분-가시적 입자 크기를 보여준다.
도 5a는 지주 받침된-니들 주사기 및 주사기 부품들의 개략적 도면이고; 도 5b는 공간 부분이 최소화되지 않은 미리 충전된 주사기의 개략적 도면이다.
도 6은 실시예 2에 고찰된 작업에 따라 αRANKL-1 및 공간 부분, 또는 최소화된 공간 부분을 포함하는 조성물이 들어있는 미리 충전된 주사기를 보여주고, (a) 공간 부분이 최소화되지 않고 4.5 mm의 공간 부분을 보이고; (b) 최소화된 공간 부분을 보이고 (좌측): 메니스커스를 갖고 1.5 mm의 최소화된 공간 부분을 보이고 (우측): 최소화된 공간 부분은 가시적 공기 방울이 보임.
도 7은 αRANKL-1 항체 중쇄를 인코딩하는 cDNA 서열 (SEQ ID NO: 1)을 보여준다. 이 도면은 HindIII 부위에서 시작하여, SalI 부위를 통해 중쇄 발현 플라스미드의 DNA 서열을 보여준다. 시작 코돈은 뉴클레오티드 14에서 시작하고, 종료 코돈은 뉴클레오티드 1415에서 시작한다.
도 8은 αRANKL-1 항체 중쇄의 아미노산 서열 (SEQ ID NO: 2)을 보여준다. IgG2 시그널 펩티드에는 밑줄이 그어져 있고, 가변 영역은 대문자로 되어 있고 밑줄이 그어져 있지 않고, 상수 영역은 소문자로 되어 있다.
도 9는 αRANKL-1 항체 카파 경쇄를 인코딩하는 cDNA 서열 (SEQ ID NO: 3)을 보여준다. 이 도면은 XbaI 부위로부터 SalI 부위를 통해 카파 사슬 발현 플라스미드 서열의 DNA 서열을 보여준다. 시작 코돈은 뉴클레오티드 12에서 시작하고; 종료 코돈은 뉴클레오티드 717에서 시작한다.
도 10은 αRANKL-1 항체 카파 경쇄의 아미노산 서열 (SEQ ID NO: 4)을 보여준다. 이 카파 시그널 펩티드는 밑줄이 그어져 있고, 가변 영역은 대문자로 되어 있고 밑줄이 그어져 있지 않고, 상수 영역은 소문자로 되어 있다.

본원에 사용된 선택된 표제는 단지 조직적 목적을 위한 것이고, 기재된 요지를 제한하는 것으로서 해석되지 않아야 한다. 특허, 특허 출원, 기사, 책 및 논문을 포함하지만, 이들로만 제한되지 않는 본원에 인용된 모든 문서 또는 문서의 일부는 임의의 목적을 위해 본원에 참고 문헌으로서 그의 전문으로 인용된다. 참고 문헌으로서 인용된 1개 이상의 문서, 또는 문서의 일부가 본원에서 용어의 정의와 모순이 되는 용어를 정의하는 경우, 본 출원은 통제된다.

표준 기술이 재조합 DNA, 올리고뉴클레오티드 합성, 및 조직 배양 및 변형 (예, 전기 천공, 리포펙션)을 위해 사용될 수 있다. 효소 반응 및 정제 기술이 제조업자의 설명서에 따라 또는 당업계에서 통상적으로 수행되는 바와 같이 또는 본원에 기재된 바와 같이 수행될 수 있다. 상기 기술 및 절차는 당업계에 잘 공지된 통상적인 방법에 따라 또는 본원 명세서 전반에 걸쳐 인용되고 고찰된 여러 가지 일반적이고 더욱 특정한 참고 문헌들에 기재된 바와 같이 일반적으로 수행될 수 있다. 문헌[예, Sambrook et al. Molecular Cloning: A Laboratory Manual (2d ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y. (1989))] 참조. 특정한 정의가 제공되지 않는 한, 본원에 기재된 분석 화학, 합성 유기 화학, 및 의학 및 제약 화학과 관련하여 이용된 명명법, 및 그의 실험실 절차 및 기술은 당업계에 잘 공지되어 있거나 통상적으로 사용되는 것들이다. 표준 기술은 화학적 합성, 화학적 분석, 약제학적 제조, 제형, 배달, 및 환자의 치료를 위해 사용될 수 있다.

본 출원에서, 단수형의 사용은 달리 특별히 명시하지 않는 한 복수형을 포함한다. 본 출원에서, 단어 "일" 또는 "하나의"는 달리 특별히 명시하지 않는 한 "적어도 하나의"를 의미한다. 본 출원에서, "또는"의 사용은 달리 특별히 명시하지 않는 한 "및/또는"을 의미한다. 다수 종속항의 맥락에서, "또는"의 사용은 단지 대안으로 1개 이상의 선행된 독립항 또는 종속항을 다시 의미한다. 더욱이, 용어 "포함하는" 뿐만 아니라, "포함한다" 및 "포함하였다"와 같은 다른 형태의 사용은 제한적이지 않다. 또한, "요소" 또는 "부품"과 같은 용어는 달리 특별히 명시하지 않는 한 하나의 유니트를 포함하는 요소 또는 부품이나 1개 이상의 유니트를 포함하는 요소 또는 부품들 모두를 의미한다.

사이토킨의 종양 괴사 인자 (TNF) 부류의 구성원인 오스테오프로테게린 리간드 (OPGL)로서 공지되기도 한 NF-κB 리간드(RANKL)의 수용체 활성제는 수용체 RANK에 대한 결합을 통해 파골세포의 형성을 촉진시킨다. 특정한 경우에, 증가된 파골세포 활성은 폐경후 다공증, 파제트병, 용해성 골 전이 및 류머티스성 관절염을 포함하지만, 이들로만 제한되지 않는 다수의 저골밀도성 질환과 관련된다. 따라서, RANKL 활성의 감소는 파골세포 활성의 감소를 초래할 수 있고, 저골밀도성 질환의 중증도를 감소시킬 수 있다. 항체를 포함하지만 이것으로만 제한되지 않는 특정 RANKL에 대한 특이적 결합제는 문헌[예, 2004년 2월 19일자로 공개된 미국 특허 공고 제2004/0033535호, 이는 임의의 목적을 위해 참고 문헌으로 본원에 인용됨] 참조.

인터류킨-1 (IL-1)은 염증 반응과 연관된 사이토킨이다. 특정한 경우에, IL-1은 2개의 막전위 단백질, IL-1 수용체 타입 I (IL-1R1) 및 IL-1 수용체 액세서리 단백질 (IL-1RAcP)로 구성된 헤테로다이머성 수용체 착물과 상호 작용함으로써 세포 반응을 자극한다. IL-1이 먼저 IL-1R1에 결합하고; IL-1RAcP이 다음으로 이 착물에 채용되고 [Greenfeder et al., 1995, J. Biol. Chem. 270:13757-13765; Yoon and Dinarello, 1998, J. Immunology 160:3170-3179; Cullinan et al., 1998, J. Immunology 161:5614-5620], 이어서 시그널 형질 도입이 세포 반응의 유도를 초래하는 것으로 보고되어 왔다. 특정한 경우에, IL-1을 억제함으로써 IL-1 시그널링이 IL-1 수용체, 예를 들면, IL-1R1과 결합하는 것을 방지하는 것은 특정 IL-1 매개 질병을 치료하기 위해 치료적으로 이용될 수 있다는 가설이 있다. 특정한 경우에, IL-1R1에 대한 특이적 결합제는 IL-1 수용체에 대한 IL-1 결합을 억제한다. 항체를 포함하지만, 이들로만 제한되지 않는 특정 IL-1R1에 대한 특이적 결합제가 기재되어 있다. 예, 2004년 5월 20일자로 공개되고, 임의의 목적을 위해 본원에 참고 문헌으로서 인용된 미국 특허 공고 제2004/0097712호를 참조한다.

종양 괴사 인자-α (TNFα, 카켁틴으로 공지되기도 함) 및 종양 괴사 인자-β (TNFβ, 림포톡신으로 공지되기도 함)는 다수의 세포 타입에 대한 광범위한 영향을 유도할 수 있는 상동성의 포유동물 내인성 분비 단백질이다. 이들 2가지 사이토킨의 구조적 및 기능적 특성들의 현저한 유사성은 "TNF"로서 이들의 총체적 묘사를 초래하였다. TNFα(Pennica et al., Nature 312:724, 1984) 및 TNFβ(Gray et al., Nature 312:721, 1984)를 인코딩하는 상보적 cDNA 클론이 단리되었으며, TNF의 추가의 구조적 및 생물학적 특성화를 허용한다.

TNF 단백질은 특정한 경우에, TNF 반응성 세포의 플라즈마 멤브레인 상에 발현된 특이적 TNF 수용체 (TNF-R) 단백질에 결합시킴으로써 세포에 대한 이들의 생물학적 영향을 개시한다. TNF에 대한 세포 표면 수용체 외에, TNF와 결합할 수 있는 인간의 소변으로부터의 가용성 단백질이 역시 확인되었다. 문헌 [Peetre et al., Eur. J. Haematol. 41:414, 1988; Seckinger et al., J. Exp. Med. 167:1511, 1988; Seckinger et al., J. Biol. Chem. 264:11966, 1989; UK Patent Application, Publ. No. 2 218 101 A to Seckinger et al.; Engelmann et al., J. Biol. Chem. 264:11974, 1989] 참조. 또한, 특정 TNF에 대한 특이적 결합제, 및 폴리펩티드, 가용성 융합 폴리펩티드를 포함하지만 이것으로만 제한되지 않는 가용성 폴리펩티드, 및 항체를 포함하지만 이들로만 제한되지 않는 특정 TNF에 대한 특이적 결합제-R이 기재되어 있다. 문헌[예, Mohler et al., J. Immunol. 151:1548-1561, 1993; 미국 특허 제5,945,397호, 임의의 목적을 위해 참고 문헌으로 본원에 인용됨] 참조.

특정 정의

본 명세서에 따라 이용되는 바의 다음 용어들은 달리 지적하지 않는 한, 다음 의미를 갖는 것으로 이해될 수 있다.

용어 "NF-κB 리간드의 수용체 활성제" 또는 "RANKL"은 NF-κB의 수용체 활성제 ("RANK")에 대한 결합을 통해 파골세포의 형성을 촉진하는 폴리펩티드를 의미한다. RANKL은 또한 "오스테오프로테게린 리간드" 또는 "OPGL"이라 칭하기도 한다. 용어 "RANKL"은 RANKL의 단편 뿐만 아니라 대립 형질 변이체, 스플라이스(splice) 변이체, 유도체 변이체, 치환 변이체, 결실 변이체, 및/또는 삽입 변이체, 융합 폴리펩티드, 및 이종간 동족체를 포함하지만 이들로만 제한되지 않는 관련된 폴리펩티드를 포함한다. 특정한 구체예에서, RANKL 폴리펩티드는 리더 서열 잔기, 표적화 잔기, 아미노 말단 메티오닌 잔기, 라이신 잔기, 태그 잔기 및/또는 융합 단백질 잔기를 포함하지만 이들로만 제한되지 않는 말단 잔기를 포함한다.

용어 "인터류킨-1 수용체 타입 1"또는 "IL-1R1"은 인터류킨-1 ("IL-1")로서 공지된 염증 사이토킨에 의해 자극받는 막전위 수용체인 폴리펩티드를 의미한다. 용어 "IL-1R1"은 IL-1R1의 단편 뿐만 아니라, 대립 형질 변이체, 스플라이스(splice) 변이체, 유도체 변이체, 치환 변이체, 결실 변이체, 및/또는 삽입 변이체를 포함하지만 이들로만 제한되지 않는 관련된 폴리펩티드, 융합 폴리펩티드, 및 이종간 동족체를 포함한다. 특정한 구체예에서, IL-1R1 폴리펩티드는 리더 서열 잔기, 표적화 잔기, 아미노 말단 메티오닌 잔기, 라이신 잔기, 태그 잔기 및/또는 융합 단백질 잔기를 포함하지만, 이들로만 제한되지 않는 말단 잔기를 포함한다.

용어 "TNF 수용체" 또는 "TNF-R"은 네이티브 포유류의 TNF 수용체의 아미노산 서열, 또는 그의 단편을 갖는 폴리펩티드 뿐만 아니라 대립 형질 변이체, 스플라이스(splice) 변이체, 유도체 변이체, 치환 변이체, 결실 변이체, 및/또는 삽입 변이체, 융합 폴리펩티드, 및 이종간 동족체를 포함하지만, 이들로만 제한되지 않는 관련된 폴리펩티드를 의미한다. TNF-R의 생물학적 활성을 결정하기 위한 특정한 예시적인 방법 및 분석은 문헌[미국 특허 제5,945,397호; and Mohler et al., J. Immunol. 151:1548-1561 (1993)]에 기재되어 있다. 특정한 구체예에서, TNF 수용체는 리더 서열 잔기, 표적화 잔기, 아미노 말단 메티오닌 잔기, 라이신 잔기, 태그 잔기 및/또는 융합 단백질 잔기를 포함하지만, 이들로만 제한되지 않는 말단 잔기를 포함한다. TNF-R은 TNF 리간드에 결합할 수 있다. 특정한 구체예에서, TNF-R은 세포에 대한 TNF 리간드 결합에 의해 개시된 생물학적 시그널을 형질 도입한다. 특정한 구체예에서, TNF-R은 천연 (즉, 비재조합) 소스로부터 TNF-R에 반하여 제기된 항-TNF-R 항체에 결합할 수 있다. 성숙한 전장(전장) 인간 TNF-R은 약 80 킬로달톤 (kDa)의 분자량을 갖는 당단백질이다. 용어 "TNF 수용체" 또는 "TNF-R"은 적어도 20개의 아미노산을 갖고 TNF-R과 공통인 생물학적 활성을 적어도 일부 나타내는 네이티브 폴리펩티드의 변이체 또는 서브유니트를 포함하지만 이들로만 제한되지 않고, 예를 들면, 가용성 TNF-R 작제물은 막전위 영역은 전혀 없지만 (세포로부터 분비됨), TNF에 결합하는 능력을 보유한다. 가용성 TNF-Rs을 포함하는 여러 가지 예시적인 TNF-Rs는 예를 들면, 문헌[미국 특허 제 5,945,397호 and Mohler et al., J. Immunol. 151:1548-1561 (1993)]에 기재되어 있다. 네이티브 인간 TNF-R은 예를 들면, 문헌 [미국 특허 제5,945,397호, Smith et al., Science 248:1019-1023 (1990), Loetscher et al., Cell 61: 351-359 (1990), and Schall et al., Cell 61: 361-370 (1990)]에 기재되어 있다.

용어 "가용성 TNF-R" 또는 "sTNF-R"은 예를 들면, huTNF-RΔ235, huTNF-RΔ185 및 huTNF-RΔ163을 포함하지만, 이들로만 제한되지 않는 네이티브 TNF-R의 세포외 영역의 전부 또는 일부에 대응하는 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드, 또는 문헌[Smith et al., Science 248:1019-1023 (1990)]에 기재된 바의 네이티브 인간 TNF-R의 아미노산 1-163, 아미노산 1-185, 또는 아미노산 1-235의 변이체를 의미하고, 이들은 TNF 리간드에 결합하는 점에서 생물학적으로 활성이다. 특정한 구체예에서, sTNF-R은 이타너셉트이다. 이타너셉트는 인간 IgG 항체의 Fc 단편에 부착된 p75 sTNF-R의 세포외 도메인을 함유하는 재조합 융합 단백질이다. 이타너셉트의 아미노산 서열은 문헌[Clinical Pharmacology and Therapeutics 66(2):209, 1999, 본원에 참고 문헌으로 인용됨]에 공개되어 있고, 단백질은 상표명 Enbrel^® (Amgen Inc.)로 판매하고 있다.

TNF-R 및 sTNF-R에 대한 명명법은 hu (인간에 대해) 또는 mu (쥐에 대해)가 놓이고 이어서 a (결실을 지정하기 위해) 및 C 말단 아미노산의 번호가 이어짐으로써 단백질을 명명하는 종래 방식에 따른다 (예, TNF-R). 예를 들면, huTNF-RΔ235는 C 말단 아미노산으로서 Asp²³⁵를 갖는 인간 TNF-R (즉, 문헌[Smith et al., Science 248:1019-1023 (1990)]에 기재된 바와 같이 네이티브 인간 TNF-R의 아미노산 1-235의 서열을 갖는 폴리펩티드)을 의미한다. 임의의 인간 또는 쥐 종 지명이 부재하는 경우, TNF-R은 일반적으로 포유류의 TNF-R을 의미한다. 마찬가지로, 결실 돌연변이체에 대한 임의의 특이적 지명이 부재한 경우, 용어 TNF-R은 TNF-R 생물학적 활성을 갖는 변이체를 포함하여 TNF-R의 모든 형태를 의미한다. 특정한 예시적인 TNF-Rs는 1개 이상의 치환, 결실, 또는 첨가에 의해 상기된 서열로부터 변화하고, TNF에 결합하거나 또는 TNF 수용체 단백질에 결합된 세포 표면을 통해 TNF 시그널 형질 도입 활성을 억제하는 능력을 보유하는 폴리펩티드, 예를 들면 huTNF-RΔx(여기서 x는 문헌[Smith et al., Science 248:1019-1023 (1990)]에 기재된 바의 네이티브 인간 TNF-R의 아미노산 163-235 중의 임의의 것으로부터 선택될 수 있음)를 의미한다. 특정한 구체예에서, 유사한 결실이 쥐 TNF-R ("muTNF-R")에 대해 이루어진다. 특정한 구체예에서, TNF 시그널 형질 도입 활성의 억제는 재조합 수용체 발현을 수득하기 위해 재조합 TNF-R DNA로 세포를 형질 감염시킴으로써 결정된다. 그러한 구체예에서, 형질 감염된 세포는 다음으로 TNF와 접촉하고, 결과의 대사 효과가 조사된다. 리간드의 작용에 기여할 수 효과가 초래되는 경우, 재조합 수용체는 시그널 형질 도입 활성을 갖는다. 폴리펩티드가 시그널 형질 도입 활성을 갖는지 여부를 결정하기 위한 특정한 예시적인 절차는 문헌[예, in Idzerda et al., J. Exp. Med. 171:861 (1990); Curtis et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86:3045 (1989); Prywes et al., EMBO J. 5:2179 (1986) and Chou et al., J. Biol. Chem. 262:1842 (1987)]에 기재되어 있다. 대안으로, 특정한 구체예에서, 내인성 TNF 수용체를 발현하고 TNF에 대한 검출가능한 생물학적 반응을 갖는 원시 세포 또는 세포주가 이용된다.

용어 "포함하는"은 아미노산 서열과 관련하여 사용되는 경우 화합물이 주어진 서열의 N- 또는 C- 말단 중의 하나 또는 둘 다에 대해 추가의 아미노산을 포함할 수 있음을 의미한다.

폴리펩티드의 맥락에서, 2개 이상의 폴리펩티드는 각각의 링크된 폴리펩티드가 그의 의도된 방식으로 기능할 수 있는 경우 "작동가능하게 링크된다". 또 다른 폴리펩티드에 작동가능하게 링크된 경우 그의 의도된 방식으로 기능할 수 있는 폴리펩티드는 또 다른 폴리펩티드에 작동가능하게 링크되지 않은 경우 그의 의도된 방식으로 기능할 수 있거나 또는 기능할 수 없다. 예를 들면, 특정한 구체예에서, 제1 폴리펩티드는 링크되지 않은 경우 그의 의도된 방식으로 기능할 수 없지만, 그의 의도된 방식으로 기능할 수 있게 되도록 제2 폴리펩티드에 링크됨으로써 안정화될 수 있다. 대안으로, 특정한 구체예에서, 제1 폴리펩티드는 링크되지 않은 경우 그의 의도된 방식으로 기능할 수 있고, 제2 폴리펩티드에 작동가능하게 링크된 경우 그러한 능력을 보유할 수 있다.

본원에 사용된 바와 같이, 2개 이상의 폴리펩티드는 2개 이상의 폴리펩티드가 단일 인접성 폴리펩티드 서열로서 이들을 번역함으로써 또는 단일 인접성 폴리펩티드 서열로서 이들을 합성함으로써 링크되는 경우에 "융합된다". 특정한 구체예에서, 2개 이상의 융합된 폴리펩티드는 2개 이상의 작동가능하게 링크된 폴리뉴클레오티드 코딩 서열로부터 생체 내 번역될 수 있었다. 특정한 구체예에서, 2개 이상의 융합된 폴리펩티드는 2개 이상의 작동가능하게 링크된 폴리뉴클레오티드 코딩 서열로부터 시험관 내 번역될 수 있었다.

본원에 사용된 바와 같이, 2개 이상의 폴리펩티드는 각각의 링크된 폴리펩티드가 그의 의도된 방식으로 기능할 수 있는 경우 "작동가능하게 융합된다".

특정한 구체예에서, 2개 이상의 독특한 폴리펩티드 유니트를 함유하는 제1 폴리펩티드는 제1 폴리펩티드의 적어도 하나의 독특한 폴리펩티드 유니트가 제2 폴리펩티드에 링크되는 한 제2 폴리펩티드에 링크될 수 있는 것으로 고려된다.

특정한 구체예에서, "제2 폴리펩티드에 링크된 제1 폴리펩티드"라는 어휘는 다음 상황들: 즉, (a) 제1 폴리펩티드의 단 하나의 분자가 제2 폴리펩티드의 단 하나의 분자에 링크된 경우; (b) 제1 폴리펩티드의 단 하나의 분자가 제2 폴리펩티드의 1개 이상의 분자에 링크된 경우; (c) 제1 폴리펩티드의 1개 이상의 분자가 제2 폴리펩티드의 단 하나의 분자에 링크된 경우; 및 (d) 제1 폴리펩티드의 1개 이상의 분자가 제2 폴리펩티드의 1개 이상의 분자에 링크된 상황들을 포함한다. 특정한 구체예에서, 링크된 분자가 제1 폴리펩티드의 1개 이상의 분자 및 제2 폴리펩티드의 단 하나의 분자를 포함하는 경우, 제1 폴리펩티드의 분자들 모두 또는 그보다 적은 수는 공유적으로 또는 비공유적으로 제2 폴리펩티드에 링크될 수 있다. 특정한 구체예에서, 링크된 분자가 제1 폴리펩티드의 1개 이상의 분자를 포함하는 경우, 제1 폴리펩티드의 1개 이상의 분자는 공유적으로 또는 비공유적으로 제1 폴리펩티드의 다른 분자들에 링크될 수 있다.

본원에 사용된 바와 같이, "가요성 링커"는 3차원 공간에 고정되도록 그의 화학적 구조에 따라 당업계의 숙련자에 의해 예측되지 않는 임의의 링커를 의미한다. 특정한 구체예에서, 3개 이상의 아미노산을 포함하는 펩티드 링커는 가요성 링커이다.

폴리펩티드의 맥락에서, 2개 이상의 폴리펩티드는 제1 폴리펩티드가 1개 이상의 폴리펩티드에 융합되고, 작동가능하게 융합되고, 링크되고 및/또는 작동가능하게 링크된 경우에 "부착된다."

용어 "특이적 결합제"는 표적에 특이적으로 결합하는 천연 또는 비-천연 분자를 의미한다. 특이적 결합제의 예는 단백질, 펩티드, 핵산, 탄수화물, 지질, 및 소분자 화합물을 포함하지만, 이들로만 제한되지 않는다. 특정한 구체예에서, 특이적 결합제는 이뮤노글로불린이다. 특정한 구체예에서, 특이적 결합제는 이뮤노글로불린 단편이다. 특정한 구체예에서, 특이적 결합제는 항체이다. 특정한 구체예에서, 특이적 결합제는 항원 결합 영역이다.

용어 "RANKL에 대한 특이적 결합제"는 RANKL의 임의의 부분에 특이적으로 결합하는 특이적 결합제를 의미한다. 특정한 구체예에서, RANKL에 대한 특이적 결합제는 이뮤노글로불린이다. 특정한 구체예에서, RANKL에 대한 특이적 결합제는 이뮤노글로불린 단편이다. 특정한 구체예에서, RANKL에 대한 특이적 결합제는 RANKL에 대한 항체이다. 특정한 구체예에서, 특이적 결합제는 항원 결합 영역이다.

용어 "IL-1R1에 대한 특이적 결합제"는 IL-1R1의 임의의 부분에 특이적으로 결합하는 특이적 결합제를 의미한다. 특정한 구체예에서, IL-1R1에 대한 특이적 결합제는 이뮤노글로불린이다. 특정한 구체예에서, IL-1R1에 대한 특이적 결합제는 이뮤노글로불린 단편이다. 특정한 구체예에서, IL-1R1에 대한 특이적 결합제는 IL-1R1에 대한 항체이다. 특정한 구체예에서, 특이적 결합제는 항원 결합 영역이다.

용어 "TNF에 대한 특이적 결합제"는 TNF의 임의의 부분에 특이적으로 결합하는 특이적 결합제를 의미한다. 특정한 구체예에서, TNF에 대한 특이적 결합제는 폴리펩티드이다. 특정한 구체예에서, TNF에 대한 특이적 결합제는 가용성 폴리펩티드이다. 특정한 구체예에서, TNF에 대한 특이적 결합제는 제2 폴리펩티드에 작동가능하게 융합된 가용성 폴리펩티드이고, 여기서 제2 폴리펩티드는 TNF에 대한 특이적 결합제가 아니다. 이러한 제2 폴리펩티드 예를 들면 Fc 및 Fc 단편을 포함하지만, 이들로만 제한되지 않는다. 특정한 구체예에서, TNF에 대한 특이적 결합제는 이뮤노글로불린이다. 특정한 구체예에서, TNF에 대한 특이적 결합제는 이뮤노글로불린 단편이다. 특정한 구체예에서, TNF에 대한 특이적 결합제는 TNF에 대한 항체이다. 특정한 구체예에서, 특이적 결합제는 항원 결합 영역이다.

용어 "TNF-R에 대한 특이적 결합제"는 TNF-R의 임의의 부분에 특이적으로 결합하는 특이적 결합제를 의미한다. 특정한 구체예에서, TNF에 대한 특이적 결합제-R은 이뮤노글로불린이다. 특정한 구체예에서, TNF에 대한 특이적 결합제-R은 이뮤노글로불린 단편이다. 특정한 구체예에서, TNF에 대한 특이적 결합제-R은 TNF-R에 대한 항체이다. 특정한 구체예에서, 특이적 결합제는 항원 결합 영역이다.

용어 "특이적으로 결합한다"는 특이적 결합제가 비-표적에 결합하는 것보다 더 큰 친화성으로 표적에 결합하는 능력을 의미한다. 특정한 구체예에서, 특이적 결합은 비-표적에 대한 친화성보다 적어도 10, 50, 100, 250, 500, 또는 1000배 큰 친화성으로 표적에 결합하는 것을 의미한다. 특정한 구체예에서, 친화성은 친화성 ELISA 분석에 의해 결정된다. 특정한 구체예에서, 친화성은 BIAcore^® 분석에 의해 결정된다. 특정한 구체예에서, 친화성은 운동법에 의해 결정된다. 특정한 구체예에서, 친화성은 평형/용액 방법에 의해 결정된다.

용어 "표적"은 특이적 결합제에 의해 결합될 수 있는 분자 또는 분자의 일부를 의미한다. 특정한 구체예에서, 표적은 1개 이상의 에피토프를 가질 수 있다. 특정한 구체예에서, 표적은 항원이다.

용어 "에피토프"는 특이적 결합제에 의해 결합될 수 있는 분자의 일부분을 의미한다. 예시적인 에피토프는 이뮤노글로불린 및/또는 T-세포 수용체에 특이적으로 결합할 수 있는 임의의 폴리펩티드 결정자를 포함할 수 있다. 예시적인 에피토프 결정자는 예를 들면, 아미노산, 당 측쇄, 포스포릴 그룹, 및 술포닐 그룹을 포함하지만 이들로만 제한되지 않는 분자들의 화학적으로 활성인 표면 그룹핑을 포함하지만 이것으로만 제한되지 않는다. 특정한 구체예에서, 에피토프 결정자는 특이적 3차원 구조적 특징, 및/또는 특이적 하전 특징을 가질 수 있다. 특정한 구체예에서, 에피토프는 항체에 의해 결합된 항원의 영역이다. 에피토프는 인접성 또는 비-인접성일 수 있다. 특정한 구체예에서, 에피토프는 이들이 항체를 생성하기 위해 사용된 에피토프와 유사한 3차원 구조를 포함할 수 있지만, 항체를 생성하기 위해 사용된 그 에피토프에서 발견된 아미노산 잔기를 전혀 포함하지 않거나 그의 일부만을 포함하는 점에서 모방적일 수 있다.

"항체" 또는 "항체 펩티드(들)"은 모두 온전한 항체, 또는 그의 단편을 의미한다. 특정한 구체예에서, 이 단편은 온전한 항체의 인접성 부분들을 포함한다. 특정한 구체예에서, 이 단편은 온전한 항체의 비-인접성 부분들을 포함한다. 특정한 구체예에서, 항체 단편은 특이적 결합을 위해 온전한 항체와 경쟁하는 결합 단편일 수 있다. 용어 "항체"는 또한 다클론성 항체 및 단클론성 항체를 포함한다. 특정한 구체예에서, 결합 단편은 재조합 DNA 기술에 의해 생산된다. 특정한 구체예에서, 결합 단편은 온전한 항체의 효소적 또는 화학적 분열에 의해 생산된다. 결합 단편은 Fab, Fab', F(ab')2, Fv, scFv, 맥시바디, 및 단일-쇄 항체를 포함하지만 이들로만 제한되지 않는다. 비-항원 결합 단편은 Fc 단편을 포함하지만, 이들로만 제한되지 않는다.

용어 "다클론성 항체"는 동일한 항원의 상이한 에피토프에 결합하는 항체의 불균일 혼합물을 의미한다.

용어 "단클론성 항체"는 동일한 핵산 분자에 의해 코딩된 항체의 수집을 의미한다. 특정한 구체예에서, 단클론성 항체는 단일 하이브리도마 또는 다른 세포주에 의해, 또는 유전자 이식 포유류에 의해 생산된다. 단클론성 항체는 통상적으로 동일한 에피토프를 인지한다. 용어 "단클론성"은 항체를 제조하는 임의의 특정 방법으로 제한되지 않는다.

"키메라 항체"는 또 다른 분자에 융합된 제1 종의 항체 가변 영역, 예를 들면, 또 다른 제2 종의 항체 상수 영역을 갖는 항체를 의미한다. 문헌[예, 미국 특허 제4,816,567호 and Morrison et al ., Proc Natl Acad Sci ( USA ), 81:6851-6855 (1985)] 참조. 특정한 구체예에서, 제1 종은 제2 종과 상이할 수 있다. 특정한 구체예에서, 제1 종은 제2 종과 동일할 수 있다. 특정한 구체예에서, 키메라 항체는 CDR-그라프트된 항체이다.

용어 "CDR-그라프트된 항체"는 하나의 항체로부터 CDR이 또 다른 항체의 골격 내로 삽입된 항체를 의미한다. 특정한 구체예에서, 그로부터 CDR이 유도되는 항체 및 그로부터 골격이 유도되는 항체는 상이한 종들이다. 특정한 구체예에서, 그로부터 CDR이 유도되는 항체 및 그로부터 골격이 유도되는 항체는 상이한 이소타입들이다.

용어 "다중특이적 항체"는 2개 이상의 가변 영역이 상이한 에피토프에 결합된 항체를 의미한다. 이 에피토프는 동일하거나 또는 상이한 표적 상에 존재할 수 있다. 특정한 구체예에서, 다중특이적 항체는 동일하거나 또는 상이한 표적 상의 2개의 상이한 에피토프를 인지하는 "이-특이적 항체"이다.

용어 "촉매적 항체"는 1개 이상의 촉매적 모이어티가 부착된 항체를 의미한다. 특정한 구체예에서, 촉매적 항체는 세포독성 모이어티를 포함하는 세포독성 항체이다.

용어 "인간화된 항체"는 항체 골격 영역의 전부 또는 일부가 인간으로부터 유도되지만, 1개 이상의 CDR 영역의 전부 또는 일부가 예를 들면, 생쥐를 포함하지만, 이것으로만 제한되지 않는 또 다른 종으로부터 유도되는 항체를 의미한다.

용어 "완전 인간 항체"는 CDR 및 골격 모두가 실질적으로 인간 서열을 포함하는 항체를 의미한다. 특정한 구체예에서, 완전 인간 항체는 생쥐, 쥐, 및 토끼를 포함하지만 이들로만 제한되지 않는 비-인간 포유류 내에서 생산된다. 특정한 구체예에서, 완전 인간 항체는 하이브리도마 세포 내에서 생산된다. 특정한 구체예에서, 완전 인간 항체는 재조합으로 생산된다.

용어 "중쇄"는 표적에 대한 특이성을 부여하기 위해 충분한 가변 영역 서열을 갖는 임의의 폴리펩티드를 포함한다. 전장 중쇄는 하나의 가변 영역 도메인, V_H, 및 3개의 상수 영역 도메인, C_H1, C_H2, 및 C_H3을 포함한다. V_H 도메인은 폴리펩티드의 아미노 말단이고, C_H3 도메인은 카르복시 말단에 있다. 본원에 사용된 바의 용어 "중쇄"는 전장 중쇄 및 그의 단편을 포함한다.

용어 "경쇄"는 표적에 대한 특이성을 부여하기 위해 충분한 가변 영역 서열을 갖는 임의의 폴리펩티드를 포함한다. 전장 경쇄는 가변 영역 도메인, V_L, 및 상수 영역 도메인, C_L를 포함한다. 중쇄와 마찬가지로, 경쇄의 가변 영역 도메인은 폴리펩티드의 아미노 말단에 존재한다. 본원에 사용된 바의 용어 "경쇄"는 전장 경쇄 및 그의 단편을 포함한다.

용어 "Fab 단편"은 하나의 경쇄 및 하나의 중쇄의 C_H1 및 가변 영역을 포함하는 항체를 의미한다. Fab 단편의 중쇄는 또 다른 중쇄와 이황화물 결합을 형성할 수 없다. 특정한 구체예에서, Fab 단편의 중쇄는 Fab 단편의 경쇄와 이황화물 결합을 형성한다.

용어 "Fab' 단편"은 하나의 경쇄, 중쇄의 가변 및 C_H1 영역, 및 중쇄의 C_H1 과 C_H2 도메인 사이의 상수 영역의 일부를 포함하는 항체를 의미한다. 특정한 구체예에서, 사슬간 이황화물 결합이 Fab' 단편의 2개의 중쇄들 사이에 형성되어 F(ab')₂ 분자를 형성할 수 있다.

용어 "F(ab')₂ 분자"는 2개의 중쇄들 사이에 형성된 사슬간 이황화물 결합에 의해 접속된 2개의 Fab' 단편을 포함하는 항체를 의미한다.

"Fv 분자"는 중쇄 및 경쇄 모두로부터 가변 영역을 포함하지만, 상수 영역은 결여되어 있다. 단일-쇄 가변 단편 (scFv)은 중쇄 및 경쇄 모두로부터 가변 영역을 포함하고, 여기서 중쇄 및 경쇄 가변 영역은 항원-결합 영역을 형성하는 단일 폴리펩티드쇄를 형성하기 위해 융합된다. 특정한 구체예에서, scFV는 단일 폴리펩티드쇄를 포함한다. 단일-쇄 항체는 scFV를 포함한다. 특정한 구체예에서, 단일-쇄 항체는 scFv에 결합된 1개 이상의 추가의 폴리펩티드를 포함한다. 예시적인 추가의 폴리펩티드는 1개 이상의 상수 영역을 포함하지만, 이들로만 제한되지 않는다. 예시적인 단일-쇄 항체는 예를 들면 WO88/01649 및 미국 특허 제4,946,778호 및 제5,260,203호에 기재되어 있다.

용어 "맥시바디"는 Fc 또는 Fc 단편에 융합된(링커 또는 직접 부착에 의해 이루어질 수 있음) scFv를 의미할 수 있다. 특정한 구체예에서, 단일-쇄 항체는 맥시바디이다. 특정한 구체예에서, 단일-쇄 항체는 HGF에 결합하는 맥시바디이다. 예시적인 Ig-유사 도메인-Fc 융합은 미국 특허 제6,117,655호에 기재되어 있다.

"Fc 단편"은 중쇄의 C_H2 및 C_H3 도메인을 포함하고 C_H1과 C_H2 도메인 사이에 상수 영역의 일부를 함유함으로써, 사슬간 이황화물 결합이 2개의 중쇄 사이에 형성될 수 있다.

용어 "가변 영역 및 가변 도메인"은 항체의 경쇄 및/또는 중쇄의 일부를 의미하도록 본원에 교환 가능하게 사용된다. 여러 경우에, 가변 도메인은 중쇄 내에 대략적으로 아미노 말단 120 내지 130개의 아미노산을 포함하고, 경쇄 내에 약 100 내지 110개의 아미노 말단 아미노산을 포함한다. 특정한 구체예에서, 상이한 항체의 가변 영역은 동일한 종의 항체들 사이에서조차 아미노산 서열이 광범위하게 상이하다. 항체의 가변 영역은 여러 경우에, 특정 항체의 그의 표적에 대한 특이성을 결정한다.

용어 "항원 결합 단편"은 적어도 이뮤노글로불린 중쇄의 가변 도메인 및 적어도 이뮤노글로불린 경쇄의 가변 도메인을 포함하는 폴리펩티드 단편을 의미한다. 특정한 구체예에서, 항원 결합 단편은 리간드에 결합할 수 있고, 리간드의 그의 수용체에 대한 결합을 방지하고, 그에 의해 수용체에 대한 리간드 결합으로부터 초래되는 생물학적 반응을 방해한다. 특정한 구체예에서, 항원 결합 단편은 수용체에 결합할 수 있고, 리간드의 그의 수용체에 대한 결합을 방지하고, 그에 의해 수용체에 대한 리간드 결합으로부터 초래되는 생물학적 반응을 방해한다. 특정한 구체예에서, 항원 결합 단편은 수용체에 결합할 수 있고 그러한 수용체를 활성화시킬 수 있다. 특정한 구체예에서, 항원 결합 단편은 수용체에 결합할 수 있고 그러한 수용체를 불활성화시킬 수 있다.

대상체에 적용되는 바의 용어 "자연적으로 발생하는"은 대상체가 자연에서 발견된다는 사실을 의미한다. 예를 들면, 유기체 (바이러스 포함) 중에 존재하는 폴리펩티드 또는 폴리뉴클레오티드 서열은 천연 소스로부터 단리될 수 있고, 실험실에서 인간에 의해 의도적으로 변형되지 않거나 또는 그렇지 않으면 천연적으로-발생한다.

용어 "단리된 폴리뉴클레오티드"는 게놈, cDNA, 또는 합성 기원의 폴리뉴클레오티드 또는 이들의 일부 조합을 의미하고, 그의 기원에 의해 "단리된 폴리뉴클레오티드" (1)는 "단리된 폴리뉴클레오티드"가 자연에서 발견되는 경우에 폴리뉴클레오티드의 전부 또는 일부와 연관되지 않고, (2)는 그것이 자연적으로 링크되지 않은 폴리뉴클레오티드에 링크되거나, 또는 (3)은 더 큰 서열의 일부로서 자연에서 발생하지 않는다.

용어 "작동가능하게 링크된"은 부품들이 의도된 방식으로 기능하도록 허용하는 관계에 있는 부품들을 의미한다. 예를 들면, 폴리뉴클레오티드 서열의 맥락에서, 대조 서열은 코딩 서열의 발현이 대조 서열의 기능과 필적하는 조건 하에 달성되는 방식으로 대조 서열 및 코딩 서열이 서로 연관되는 경우 코딩 서열에 "작동가능하게 링크될" 수 있다.

용어 "대조 서열"은 그들이 연관된 코딩 서열의 발현 및 프로세싱에 영향을 미칠 수 있는 폴리뉴클레오티드 서열을 의미한다. 그러한 대조 서열의 특성은 숙주 유기체에 따라 상이할 수 있다. 원핵 생물에 대한 특정 예시적인 대조 서열은 프로모터, 리보솜 결합 부위, 및 전사 종결 서열을 포함하지만, 이들로만 제한되지 않는다. 진핵 생물에 대한 특정한 예시적인 대조 서열은 프로모터, 개선제, 및 전사 종결 서열을 포함하지만, 이들로만 제한되지 않는다. 특정한 구체예에서, "대조 서열"은 리더 서열 및/또는 융합 파트너 서열을 포함할 수 있다.

용어 "단리된 폴리펩티드" 및 "단리된 펩티드"는 (1) 그것이 정상적으로 발견될 수 있는 적어도 일부 단백질이 없거나, (2) 동일한 소스, 예를 들면 동일한 종으로부터 다른 단백질이 본질적으로 없거나, (3) 다른 종으로부터 세포에 의해 발현되거나, 또는 (4) 천연적으로 발생하지 않는 임의의 폴리펩티드를 의미한다.

용어 "폴리펩티드," "펩티드," 및 "단백질"은 본원에서 교환 가능하게 사용되고, 펩티드 결합 또는 개질된 펩티드 결합, 즉, 펩티드 등비선에 의해 서로 결합된 2개 이상의 아미노산의 중합체를 의미한다. 용어는 자연적으로 발생하는 아미노산을 함유하는 아미노산 중합체 뿐만 아니라 1개 이상의 아미노산 잔기가 비-자연적으로 발생하는 아미노산이거나 또는 자연적으로 발생하는 아미노산의 화학적 유사체인 경우의 아미노산 중합체에 적용된다. 아미노산 중합체는 전사후 과정과 같이 1개 이상의 자연적 공정에 의해 개질된 1개 이상의 아미노산 잔기, 및/또는 당업계에 공지된 1개 이상의 화학적 변형 기술에 의해 개질된 1개 이상의 아미노산 잔기를 함유할 수 있다.

본원에 사용된 바와 같이, 20개의 통상의 아미노산 및 이들의 약어는 종래의 용법에 따른다. 문헌[Immunology--A Synthesis (2nd Edition, E. S. Golub and D. R. Gren, Eds., Sinauer Associates, Sunderland, Mass. (1991))] 참조. 특정한 구체예에서, 1개 이상의 색다른 아미노산 폴리펩티드 내로 혼입될 수 있다. 용어 "색다른 아미노산"은 20개의 통상의 아미노산 중의 하나가 아닌 임의의 아미노산을 의미한다. 용어 "비-자연적으로 발생하는 아미노산"은 자연에서 발견되지 않는 아미노산을 의미한다. 비-자연적으로 발생하는 아미노산은 색다른 아미노산의 서브세트이다. 색다른 아미노산은 당업계에 공지된 20개의 통상의 아미노산의 입체 이성체 (예, D-아미노산), 비천연 아미노산, 예를 들면 α-, α-이치환된 아미노산, N-알킬 아미노산, 락트산, 호모세린, 호모시스테인, 4-하이드록시프롤린, γ-카르복시글루타메이트, ε-N,N,N-트리메틸라이신, ε-N-아세틸라이신, O-포스포세린, N-아세틸세린, N-포르밀메티오닌, 3-메틸히스티딘, 5-하이드록시라이신, σ-N-메틸아르기닌, 및 기타 유사한 아미노산 및 이미노산 (예, 4-하이드록시프롤린)을 포함하지만, 이들로만 제한되지 않는다. 본원에 사용된 폴리펩티드 표기법에서, 표준 용법 및 통상에 따라 좌측 방향은 아미노 말단 방향이고, 우측 방향은 카르복시 말단 방향이다.

기준 폴리펩티드의 "단편"은 기준 폴리펩티드의 임의의 부분으로부터 아미노산의 인접한 스트레치를 의미한다. 단편은 기준 폴리펩티드의 길이보다 짧은 임의의 길이일 수 있다.

기준 폴리펩티드의 "변이체"는 기준 폴리펩티드에 상대적으로 1개 이상의 아미노산 치환, 결실, 또는 삽입을 갖는 폴리펩티드를 의미한다. 특정한 구체예에서, 기준 폴리펩티드의 변이체는 변경된 전사후 변형 부위 (즉, 글리코실화 부위)를 갖는다. 특정한 구체예에서, 기준 폴리펩티드의 변이체는 변경된 이황화물 연결성을 갖는다. 특정한 구체예에서, 기준 폴리펩티드 및 기준 폴리펩티드의 변이체 모두는 특이적 결합제이다. 특정한 구체예에서, 기준 폴리펩티드 및 기준 폴리펩티드의 변이체 모두는 항체이다.

기준 폴리펩티드의 변이체는 글리코실화 변이체를 포함하지만 이들로만 제한되지 않는다. 글리코실화 변이체는 글리코실화 부위의 수 및/또는 타입이 기준 폴리펩티드에 비교하여 변경된 변이체를 포함한다. 특정한 구체예에서, 글리코실화 기준 폴리펩티드의 변이체는 기준 폴리펩티드보다 더 크거나 또는 더 작은 수의 N-링크된 글리코실화 부위를 포함한다. 특정한 구체예에서, N-링크된 글리코실화 부위는 서열 Asn-X-Ser 또는 Asn-X-Thr에 의해 특성화되고, 여기서 X로 지정된 아미노산 잔기는 프롤린을 제외한 임의의 아미노산 잔기일 수 있다. 특정한 구체예에서, 글리코실화 기준 폴리펩티드의 변이체는 1개 이상의 N-링크된 글리코실화 부위 (전형적으로 자연적으로 발생하는 것들)가 제거되고 1개 이상의 새로운 N-링크된 부위가 생성되는 N-링크된 탄수화물의 재배열을 포함한다.

기준 폴리펩티드의 변이체는 시스테인 변이체를 포함하지만, 이것으로만 제한되지 않는다. 특정한 구체예에서, 시스테인 변이체는 기준 폴리펩티드의 1개 이상의 시스테인 잔기가 1개 이상의 비-시스테인 잔기로 대체되고; 및/또는 기준 폴리펩티드의 1개 이상의 비-시스테인 잔기가 1개 이상의 시스테인 잔기로 대체되는 변이체를 포함한다. 시스테인 변이체는 특정한 구체예에서, 특정 폴리펩티드가 불용성 봉입체의 단리 후 생물학적으로 활성인 형태 내로 다시 접혀져야 하는 경우에 유용할 수 있다. 특정한 구체예에서, 기준 폴리펩티드의 시스테인 변이체는 기준 폴리펩티드보다 더 적은 시스테인 잔기를 갖는다. 특정한 구체예에서, 기준 폴리펩티드의 시스테인 변이체는 짝을 이루지 못한 시스테인으로부터 초래되는 상호 작용을 최소화하기 위해 짝수의 시스테인을 갖는다. 특정한 구체예에서, 시스테인 변이체는 네이티브 단백질보다 더 많은 시스테인 잔기를 갖는다.

특정한 구체예에서, 특정 항체의 중쇄 및 경쇄에 대한 보수적 변형 (및 인코딩되는 뉴클레오티드에 대응하는 변형)은 원래의 항체의 그것들과 유사한 기능적 및 화학적 특징을 갖는 항체를 생산할 것이다. 이와 대조적으로, 특정한 구체예에서, 특정 항체의 기능적 및/또는 화학적 특징의 실질적 변형은 (a) 치환 영역의 분자 골격의 구조를, 예를 들면, 시트 또는 나선형 형태로서, (b) 표적 부위에서 분자의 하전 또는 소수성, 또는 (c) 측쇄의 벌크성을 유지하는데 대한 이들의 영향이 현저히 상이한 중쇄 및 경쇄의 아미노산 서열에서 치환을 선택함으로써 수행될 수 있다.

특정한 바람직한 아미노산 치환 (보수적 또는 비-보수적인지 여부)은 이러한 치환이 바람직한 시점에서 당업계의 숙련자들에 의해 결정될 수 있다. 특정한 구체예에서, 아미노산 치환은 항체의 친화성 또는 항체의 효과기 기능을 증가 또는 감소시킬 수 있는 것들과 같이 특정 항체의 중요한 잔기를 식별하기 위해 사용될 수 있다.

특정한 구체예에서, 항체의 효과는 질병의 증상의 양의 감소를 측정함으로써 평가될 수 있다. 특정한 구체예에서, 관심을 끄는 질병은 병원균에 의해 유발될 수 있다. 특정한 구체예에서, 하나의 질병은 물질 (발암 물질 등)의 도입 및 유전자 조작을 포함하는 다른 방법들에 의해 동물 숙주에서 확인될 수 있다. 특정한 구체예에서, 그 효과는 동물 숙주에서 1개 이상의 부작용을 검출함으로써 평가될 수 있다. 용어 "부작용"은 항체를 수용하지 않은 동물 숙주에서 존재하지 않는 항체를 수용하는 동물 숙주에서 부정적인 반응이다. 특정한 구체예에서, 부작용은 동물 숙주의 열, 항체에 대한 면역 반응, 염증, 및/또는 사망을 포함하지만, 이들로만 제한되지 않는다.

항원에 특이적인 여러 가지 항체는 다수의 방식으로 생산될 수 있다. 특정한 구체예에서, 관심을 끄는 에피토프를 함유하는 항원은 동물 숙주 (예, 생쥐) 내로 도입되고, 그에 따라 그러한 에피토프에 특이적인 항체를 생산할 수 있다. 특정한 경우에, 관심을 끄는 에피토프에 특이적인 항체는 에피토프에 천연적으로 노출된 숙주로부터 취한 생물학적 샘플로부터 입수할 수 있다. 특정한 경우에, 인간 이뮤노글로불린 (Ig) 유전자 자리를 내인성 Ig 유전자가 불활성화된 생쥐 내로의 도입함으로써 인간 단클론성 항체 (MAbs)를 입수할 기회를 제공한다.

용어 "작용제"는 본원에서 화학적 화합물, 화학적 화합물의 혼합물, 생물학적 분자, 생물학적 매크로분자, 또는 생물학적 물질로부터 제조된 추출물을 나타내기 위해 사용된다.

용어 "안정화제"는 조성물 중의 특이적 결합제를 안정화시키는 작용제를 의미한다. 특이적 결합제는 안정화제를 포함하지 않는 조성물에 비교하여 안정화제를 포함하는 조성물에서 특이적 결합제가 그의 물리적 안정성 및/또는 화학적 안정성 및/또는 생물학적 활성을 더 많이 유지하는 경우에 조성물에서 "안정화"된다.

용기, 예, 주사기에 함유된 조성물 중의 특이적 결합제는 이 특이적 결합제가 다음 문헌에 고찰된 선적 조건을 시뮬레이션하는 1개 이상의 실험실 시험에 적용된 후 적어도 동일하거나 또는 유사한 물리적 안정성 및/또는 화학적 안정성 및/또는 생물학적 활성을 보유하는 경우에 "안정화"된다: 문헌[Singh, J., S. P. Singh and G. Burgess, Measurement and Analysis of US Truck Vivration for Leaf Spring and Air Ride Suspensions and Development of Test Tests, Packaging Technology and Science, Vol 19, 2006; International Safe Transit Association (ISTA) Resource Book 2006, Test Procedure 3A; Singh, S. P. and J. Marcondes, "Vibration Levels in Commercial Truck Shipments as a Funcion of Suspension and Payload" Journal of Testing and Evaluation, ASTM, Vol 20, No. 6, 466-469,　 1992; Kipp, William I., Vibration Testing Equivalence, How Many Hours Of Testing Equals How Many Miles Of Transport?, Proceedings of ISTA Con 2000; Rouillard, V., A New Approach to Analyzing and Simulating Shock and Vibration, Proceedings of Dimensions 06, International Safe Transit Association, East Lansing, MI 48823, 2006; Singh, S. P., G. Burgess and P. Rojuckarin, "Test Protocol for Simulating Truck and Rail Vibration and Rail Impacts in Shipments of Automotive Engine Racks",　 Packaging Technology and Science, Vol. 8, 33-41, 1995; Brandenburg and Lee. (2001). Fundamentals of Packaging Dynamics. L.A.B. Equipment Inc.:　 Skaneateles, NY; and Singh, S. P., G. Burgess, Marcondes, Jorge A., and Antle, John R., "Measuring the Package 선적 Environment in Refrigerated Ocean Vessels" Packaging Technology and Science, Vol. 6, 175-181, 1993] 참조. 용기에 함유된 조성물 중의 특이적 결합제는 이 특이적 결합제가 적어도 하나의 시험에 적용된 후 적어도 동일하거나 또는 유사한 물리적 안정성 및/또는 화학적 안정성 및/또는 생물학적 활성을 보유하는 경우에, 심지어 그들 특성 중의 1개 이상이 1개 이상의 시험에 적용된 후 유지되지 않는 경우에조차 "안정화"된다. 특정한 구체예에서, 실험실 시험은 비행 및/또는 차량 운항을 시뮬레이션하기 위해 진동, 충격/강하, 및/또는 압력 변화를 포함한다. 실험실 시험은 또한 대조군을 포함하고, 여기서 용기에 함유된 특이적 결합제는 진동, 충격/강하, 및/또는 압력 변화에 적용되지 않는다. 비행 및/또는 차량 운항을 시뮬레이션하기 위해 진동, 충격/강하, 및/또는 압력 변화 후, 특이적 결합제의 물리적 안정성 및/또는 화학적 안정성 및/또는 생물학적 활성이 결정되어 대조용 특이적 결합제의 물리적 안정성 및/또는 화학적 안정성 및/또는 생물학적 활성과 비교된다. 특정한 구체예에서, 특이적 결합제는 이 특이적 결합제가 인간에서 제약으로서 사용하기 적합한 경우에 적어도 동일하거나 유사한 물리적 안정성 및/또는 화학적 안정성 및/또는 생물학적 활성을 유지하는 것으로 고려된다.

안정화제가 사용되는 경우, 어구 "그의 물리적 안정성을 유지한다"는 조성물 중의 특이적 결합제는 안정화제를 포함하지 않는 조성물에 비교하여 안정화제를 포함하는 조성물에서 더 적은 집합체화 및/또는 침전 및/또는 변성을 나타내는 것을 의미한다. 어구 "그의 물리적 안정성을 유지한다"는 또한 특정한 타입의 용기, 예, 주사기에 함유된 조성물 중의 특이적 결합제가, 선적 조건을 시뮬레이션하는 이전 단락]에서 고찰된 1개 이상의 실험실 시험에 적용된 후 동일하거나 유사하거나 또는 더 적은 집합체화 및/또는 침전 및/또는 변성을 나타냄을 의미한다. 용기에 함유된 조성물 내의 특이적 결합제는 이 특이적 결합제가 적어도 하나의 시험에 적용된 후 동일하거나 유사하거나 또는 더 적은 집합체화 및/또는 침전 및/또는 변성을 나타내는 경우, 심지어 그들 특성들 중의 1개 이상이 1개 이상의 시험의 시험에 적용된 후 동일하지도 유사하지도 또는 더 적지도 않은 경우에 그의 물리적 안정성을 보유하는 것으로 고려된다. 특정한 구체예에서, 특정한 타입의 용기, 예, 주사기에 함유된 조성물은 선적 조건을 시뮬레이션하는 실험실 시험에 적용된 후, 이어서 선적 조건을 시뮬레이션하는 실험실 시험에 적용되지 않는 정상 상태 하에 저장된 동일한 타입의 용기에 함유된 조성물 중의 특이적 결합제로서 정상 상태 하의 후속 저장 후 동일하거나 유사하거나 또는 더 적은 집합체화 및/또는 침전 및/또는 변성을 나타낸다. 특정한 구체예에서, 선적 조건을 시뮬레이션하는 실험실 시험에 적용되고, 이어서 정상 상태 하에 후속 저장되는 용기에 함유된 조성물은 2℃ 내지 8℃의 온도에서 저장된다. 특정한 구체예에서, 선적 조건을 시뮬레이션하는 실험실 시험에 적용되고, 이어서 정상 상태 하에 후속 저장되는 용기에 함유된 조성물은 15℃ 내지 45℃의 온도에서 저장된다. 특정한 구체예에서, 정상 상태 하에 저장되고 선적 조건을 시뮬레이션하는 실험실 시험에 적용되지 않은 용기에 함유된 조성물은 -20℃ 내지 -80℃의 온도에서 냉동고에 저장된다. 특정한 구체예에서, 선적 조건을 시뮬레이션하는 실험실 시험에 적용되고, 이어서 정상 상태 하에 후속 저장되는 용기에 함유된 조성물은 적어도 1개월 내지 적어도 24개월 동안 저장된다. 예시적인 저장 기간은 적어도 1개월, 적어도 3개월, 적어도 6개월, 적어도 9개월, 적어도 12개월, 적어도 18개월, 및 적어도 24개월을 포함하지만, 이들로만 제한되지 않는다. 특이적 결합제의 집합체화 및/또는 침전 및/또는 변성의 양을 결정하는 예시적인 방법은 외관 검사; 예를 들면, HIAC (Royco) 기구를 사용함으로써 광 암흑화에 의한 부분 가시적 입자 카운팅; 미세한 입자 카운팅; 크기-배제 고-성능 액체 크로마토그래피 (SEC-HPLC), 및 SDS-PAGE를 포함하지만, 이들로만 제한되지 않는다. 용기에 함유된 조성물 내의 특이적 결합제는 이 특이적 결합제가 그 결정 방법들 중의 적어도 하나에서 결정되는 바와 동일하거나 유사하거나 또는 더 적은 집합체화 및/또는 침전 및/또는 변성을 나타내는 경우, 심지어 그들 특성들 중의 1개 이상이 그 결정 방법들 중의 적어도 하나에서 결정되는 바와 동일하지도 유사하지도 않거나 또는 더 적지도 않은 경우 그의 물리적 안정성을 보유하는 것으로 고려된다. 특정한 구체예에서, 특이적 결합제는 이 특이적 결합제가 인간에서 제약으로서 사용하기 적합한 경우 동일하거나 유사하거나 또는 더 적은 집합체화 및/또는 침전 및/또는 변성을 나타내는 것으로 고려된다.

안정화제가 사용되는 경우, 어구 "그의 화학적 안정성을 유지한다"는 조성물 중의 특이적 결합제가 안정화제를 포함하지 않는 조성물에 비해 안정화제를 포함하는 조성물에서 더 적은 화학적 변경을 보인다. 어구 "그의 화학적 안정성을 유지한다"는 또한 특정한 타입의 용기, 예, 주사기에 함유된 조성물 중의 특이적 결합제가, 선적 조건을 시뮬레이션하는 전전 단락에서 고찰된 1개 이상의 실험실 시험에 적용된 후 동일하거나 유사하거나 또는 더 적은 화학적 변경을 나타냄을 의미한다. 화학적 변경의 예는 예를 들면, 클리핑을 포함하지만 이것으로 제한되지 않는 크기 변형을 포함하지만 이것으로만 제한되지 않는다. 클리핑은 더 작은 단편을 초래하는 특이적 결합제의 분열을 의미한다. 특정한 구체예에서, 클리핑은 단백질 가수분해의 결과이다. 화학적 변경의 예는 예를 들면, 탈아미드화를 포함하지만 이것으로만 제한되지 않는 전하 변경을 포함하지만 이것으로만 제한되지 않는다. 화학적 변경의 예는 예를 들면, 산화를 포함하지만 이것으로만 제한되지 않는 친수성/소수성 변경을 포함하지만 이것으로만 제한되지 않는다. 화학적 변경의 예는 이성체화를 포함하지만 이것으로만 제한되지 않는다. 용기에 함유된 조성물 내의 특이적 결합제는 이 특이적 결합제가 적어도 하나의 시험에 적용된 후 동일하거나 유사하거나 또는 더 적은 임의의 타입의 화학적 변경을 나타내는 경우, 심지어 1개 이상의 타입의 화학적 변경이 1개 이상의 시험에 적용된 후 동일하지도 유사하지도 또는 더 적지도 않은 경우 그의 화학적 안정성을 유지하는 것으로 고려된다. 특정한 구체예에서, 특정한 타입의 용기, 예, 주사기에 함유된 조성물은 선적 조건을 시뮬레이션하는 실험실 시험에 적용된 후, 이어서 선적 조건을 시뮬레이션하는 실험실 시험에 적용되지 않는 정상 상태 하에 저장된 동일한 타입의 용기에 함유된 조성물 중의 특이적 결합제로서 정상 상태 하의 후속 저장 후 동일하거나 유사하거나 또는 더 적은 화학적 변경을 나타낸다. 특정한 구체예에서, 선적 조건을 시뮬레이션하는 실험실 시험에 적용되고, 이어서 정상 상태 하에 후속 저장되는 용기에 함유된 조성물은 2℃ 내지 8℃의 온도에서 저장된다. 특정한 구체예에서, 선적 조건을 시뮬레이션하는 실험실 시험에 적용되고, 이어서 정상 상태 하에 후속 저장되는 용기에 함유된 조성물은 15℃ 내지 45℃의 온도에서 저장된다. 특정한 구체예에서, 정상 상태 하에 저장되고 선적 조건을 시뮬레이션하는 실험실 시험에 적용되지 않은 용기에 함유된 조성물은 -20℃ 내지 -80℃의 온도에서 냉동고에 저장된다. 특정한 구체예에서, 선적 조건을 시뮬레이션하는 실험실 시험에 적용되고, 이어서 정상 상태 하에 후속 저장되는 용기에 함유된 조성물은 적어도 1개월 내지 적어도 24개월 동안 저장된다. 예시적인 저장 기간은 적어도 1개월, 적어도 3개월, 적어도 6개월, 적어도 9개월, 적어도 12개월, 적어도 18개월, 및 적어도 24개월을 포함하지만, 이들로만 제한되지 않는다. 특이적 결합제의 화학적 변경의 양을 결정하는 예시적인 방법은 양이온-교환 HPLC, 역상 HPLC, SDS-PAGE, 및 펩티드 매핑을 포함하지만 이들로만 제한되지 않는다. 용기에 함유된 조성물 내의 특이적 결합제는 이 특이적 결합제가 그 결정 방법들 중의 적어도 하나에서 결정되는 바와 동일하거나 유사하거나 또는 더 적은 화학적 변경을 나타내는 경우, 심지어 화학적 변경의 1개 이상의 타입이 그 결정 방법들 중의 적어도 하나에서 결정되는 바와 동일하지도 유사하지도 않거나 또는 더 적지도 않은 경우 그의 화학적 안정성을 보유하는 것으로 고려된다. 특정한 구체예에서, 특이적 결합제는 이 특이적 결합제가 인간에서 제약으로서 사용하기 적합한 경우 동일하거나 유사하거나 또는 더 적은 화학적 변경을 나타내는 것으로 고려된다.

안정화제가 사용되는 경우, 어구 "그의 생물학적 활성을 유지한다"는 안정화제를 포함하지 않는 조성물에 비해 안정화제를 포함하는 조성물에서 당해 조성물이 제조된 후에 주어진 시점에 조성물 중의 특이적 결합제가 더 큰 생물학적 활성을 보이는 것을 의미한다. 어구 "그의 생물학적 활성을 유지한다"는 또한 특정한 타입의 용기, 예, 주사기에 함유된 조성물 중의 특이적 결합제가, 선적 조건을 시뮬레이션하는 3번째 전 단락에서 고찰된 1개 이상의 실험실 시험에 적용된 후 조성물이 제조된 후의 임의의 시점에 적어도 동일하거나 유사한 생물학적 활성을 나타냄을 의미한다. 용기에 함유된 조성물 내의 특이적 결합제는 조성물이 제조된 후 및 적어도 하나의 시험에 적용된 후 주어진 시점에서 이 특이적 결합제가 동일하거나 유사한 임의의 타입의 생물학적 활성을 나타내는 경우, 심지어 조성물이 제조된 후 및 1개 이상의 시험에 적용된 후 주어진 시점에서 1개 이상의 타입의 생물학적 활성이 적어도 동일한 경우 그의 생물학적 활성을 유지하는 것으로 고려된다. 특정한 구체예에서, 특정한 타입의 용기, 예, 주사기에 함유된 조성물은 이 조성물이 제조된 후 및 선적 조건을 시뮬레이션하는 실험실 시험에 적용된 후, 이어서 선적 조건을 시뮬레이션하는 실험실 시험에 적용되지 않는 정상 상태 하에 저장된 동일한 타입의 용기에 함유된 조성물 중의 특이적 결합제로서 정상 상태 하의 후속 저장 후 주어진 시점에 동일하거나 유사한 생물학적 활성을 나타낸다. 특정한 구체예에서, 선적 조건을 시뮬레이션하는 실험실 시험에 적용되고, 이어서 정상 상태 하에 후속 저장되는 용기에 함유된 조성물은 2℃ 내지 8℃의 온도에서 저장된다. 특정한 구체예에서, 선적 조건을 시뮬레이션하는 실험실 시험에 적용되고, 이어서 정상 상태 하에 후속 저장되는 용기에 함유된 조성물은 15℃ 내지 45℃의 온도에서 저장된다. 특정한 구체예에서, 정상 상태 하에 저장되고 선적 조건을 시뮬레이션하는 실험실 시험에 적용되지 않은 용기에 함유된 조성물은 -20℃ 내지 -80℃의 온도에서 냉동고에 저장된다. 특정한 구체예에서, 선적 조건을 시뮬레이션하는 실험실 시험에 적용되고, 이어서 정상 상태 하에 후속 저장되는 용기에 함유된 조성물은 적어도 1개월 내지 적어도 24개월 동안 저장된다. 예시적인 저장 기간은 적어도 1개월, 적어도 3개월, 적어도 6개월, 적어도 9개월, 적어도 12개월, 적어도 18개월, 및 적어도 24개월을 포함하지만, 이들로만 제한되지 않는다. 특정한 구체예에서, 생물학적 활성은 생물학적 활성을 결정하기에 적합한 분석에 의해 결정된다. 특이적 결합제의 생물학적 활성을 결정하는 예시적인 분석은 항원 결합 분석 및 수용체 포스포릴화 분석을 포함하지만 이들로만 제한되지 않는다. 예시적인 항원 결합 분석은 ELISA 분석, 면역침전 분석, 및 예를 들면, BIAcore^®분석을 포함하지만 이것으로만 제한되지 않는 친화성 분석을 포함하지만, 이들로만 제한되지 않는다. RANKL에 대한 특이적 결합제의 생물학적 활성을 결정하기 위한 특정한 예시적인 방법 및 분석은 2004년 2월 19일자로 공개된 미국 특허 공고 제2004/0033535호에 기재되어 있다. IL-1R1에 대한 특이적 결합제의 생물학적 활성을 결정하는 특정한 예시적인 방법 및 분석은 2004년 5월 20일자로 공개된 미국 특허 공고 제2004/0097712호에 기재되어 있다. TNF에 대한 특이적 결합제 및 TNF에 대한 특이적 결합제-R의 생물학적 활성을 결정하는 특정한 예시적인 방법 및 분석은 예를 들면 미국 특허 제5,945,397호에 기재되어 있다. 용기에 함유된 조성물 내의 특이적 결합제는 조성물이 적어도 하나의 분석에서 결정된 바와 같이 제조된 후 주어진 시점에 이 특이적 결합제가 적어도 동일하거나 유사한 임의의 타입의 생물학적 활성을 나타내는 경우, 심지어 조성물이 제조된 후 주어진 시점에 1개 이상의 타입의 생물학적 활성이 1개 이상의 분석에서 결정된 바와 동일하지도 유사하지도 않은 경우 그의 생물학적 활성을 유지하는 것으로 고려된다. 특정한 구체예에서, 특이적 결합제는 이 특이적 결합제가 인간에서 제약으로서 사용하기 적합한 경우 조성물이 제조된 후 주어진 시점에 적어도 동일하거나 유사한 생물학적 활성을 나타내는 것으로 고려된다.

특정한 구체예에서, 생물학적으로 활성인 TNF 수용체는 nmole 수용체당 0.1 nmole 이상의 TNF로 결합할 수 있다. 특정한 구체예에서, 생물학적으로 활성인 TNF 수용체는 표준 결합 분석에서 nmole 수용체당 0.5 nmole 이상의 TNF로 결합할 수 있다. TNF 및 TNF-R의 결합을 결정하기 위한 특정한 예시적인 결합 분석 및 방법은 예를 들면 미국 특허 제5,945,397호에 기재되어 있다.

"집합체화"는 비-공유 또는 공유 상호 작용을 통해 개별 단백질 분자의 다량체의 형성을 의미한다. 집합체화는 또한 입자의 형성을 의미한다. 입자는 부분 가시적이거나 또는 가시적일 수 있다. 부분 가시적 입자는 2 μM 내지 100 μM의 크기이다. 가시적 입자는 100 μM 이상의 크기이다. 집합체화는 가시적 또는 비가시적일 수 있다. 특정한 경우에, 3차 구조물 또는 부분적 중첩 풀림의 손실이 발생하는 경우, 전형적으로 중첩된 단백질 구조물 내에 숨겨진 소수성 아미노산 잔기가 용액에 노출된다. 특정한 경우에, 이는 개별 단백질 분자들 사이의 소수성-소수성 상호 작용을 촉진시켜, 집합화를 초래한다. 문헌[Srisailam et al., J Am Chem Soc 124 (9):1884-8 (2002)]은 예를 들면, 단백질 동반 집합체화의 특정한 형태적 변화, 및 특이적 단백질의 특정한 영역이 집합체의 형성에 대해 특히 책임있는 것으로 식별될 수 있음을 측정하였다. 특정한 경우에, 단백질 집합체화는 열 (Sun et al., J Agric Food Chem 50(6): 1636-42 (2002)), 유기 용매 (Srisailam et al., supra), 및 SDS 및 리소포스포지질과 같은 시약 (Hagihara et al., Biochem 41(3): 1020-6 (2002))에 의해 유도될 수 있다. 집합체화는 시험관 내 단백질 정제 및 제형에서 현저한 문제점일 수 있다. 특정한 경우에, 집합체의 형성 후, 재생 및 적합한 재중첩이 이어지는 강한 변성 용액에 의한 가용화는 생물학적 활성이 복원되기 전에 필요할 수 있다.

"변성"은 폴리펩티드의 3차원 구조물의 변경을 의미한다. 폴리펩티드의 3차원 구조물은 2차 구조물 및 3차 구조물을 포함하지만, 이들로만 제한되지 않는다. 2차 구조물은 폴리펩티드의 일부의 국소 형태를 의미한다. 특정한 예시적인 2차 구조물은 나선형; 형태, 시트, 및 턴을 포함하지만, 이들로만 제한되지 않는다 3차 구조물은 폴리펩티드 내의 원자들의 전체적인 3차원 배치를 의미한다. 특정한 경우에, 3차 구조물은 선형 서열에서 멀리 떨어져 위치하는 아미노산들 사이의 상호 작용을 포함한다. 특정한 경우에, 3차원 구조물의 변경은 폴리펩티드가 부분적으로 또는 완전히 중첩 풀림되도록 한다. 특정한 경우에, 3차원 구조물의 변경은 기능의 부분적 또는 완전한 손실을 유발하기에 충분하다. 특정한 경우에, 변성은 다음: 즉, 열; pH 극단치; 알콜 및 아세톤을 포함하지만, 이들로만 제한되지 않는 유기 용매; SDS를 포함하지만, 이것으로만 제한되지 않는 세제; 및 요소 및 구아니딘 하이드로클로라이드를 포함하지만, 이들로만 제한되지 않는 차오트로픽 시약 중의 임의의 1개 이상에 폴리펩티드를 노출시킴으로써 유도될 수 있다. 특정한 경우에, 폴리펩티드의 변성은 예를 들면, 유리를 포함하는 용기, 스테인레스 강, 폴리카보네이트, 폴리테트라플루오로에틸렌 (Teflon^®), 폴리우레탄, 실리콘, 폴리비닐 클로라이드, 에틸렌-비닐 아세테이트, 폴리에스테르, 및 폴리올레핀을 포함하지만 이들로만 제한되지 않는 용기의 표면에 폴리펩티드를 노출시킴으로써 유도될 수 있다. 특정한 경우에, 폴리펩티드의 변성은 예를 들면, 실리콘 오일, 부틸 고무, 플루오로카본 및 텅스텐을 포함하는 용기 클로저들을 포함하지만, 이들로만 제한되지 않는 용기 클로저의 표면에 폴리펩티드를 노출시킴으로써 유도될 수 있다. 특정한 경우에, 폴리펩티드의 변성은 예를 들면, 공기/액체 인터페이스, 얼음/액체 인터페이스, 및 수성/오일 인터페이스를 포함하지만 이들로만 제한되지 않는 상 인터페이스에 폴리펩티드를 노출시킴으로써 유도될 수 있다. 특정한 경우에, 유기 용매, 요소, 및 세제에 노출됨에 따른 특정한 폴리펩티드, 예를 들면, 구상 단백질의 변성은 폴리펩티드 내에서 소수성 상호 작용의 단절을 초래한다. 특정한 경우에, 폴리펩티드의 변성은 예를 들면, pH 극단치에 노출됨에 따라 폴리펩티드의 순수한 하전의 변경을 초래하고, 폴리펩티드 내에서 특정한 수소 결합의 정전적 반발 및 단절을 유발한다.

용어 "선적", "배" 또는 "선적됨"은 차량, 비행기, 및/또는 배 내의 용기 중의 조성물을 임의의 경로에 의해 임의의 거리를 위해 임의의 온도에서 수송함을 의미한다.

어구 "정적 상태 하에 저장됨" 또는 "정적 저장 조건"은 선적 없이 일정 거리에서 용기 내에 조성물을 갖는 것을 의미한다.

용어 "공간 부분"은 용기 내의 액체와 용기 클로저 사이의 공간을 의미한다. 예, 도 5b 및 도 6a 및 6b 참조. 특정한 구체예에서, 공간 부분은 육안 또는 광 현미경에 의해 가시적인, 용기 내의 액체에 의해 메니스커스가 형성되게 하는 크기이다. 본원에 사용된 바와 같이, "메니스커스"는 용기 내의 액체의 표면 상의 오목한 부분을 의미한다. 용기가 수직 (직립) 위치에 존재하는 경우, 메니스커스는 용기의 직경을 가로질러 확장하고, 어떤 액체도 용기 클로저의 바닥 표면에 접촉하지 않는다. 특정한 구체예에서, 공간 부분은 메니스커스의 상단과 플런저의 중심 내의 편평한 몸체 부분인 용기 클로저의 바닥 표면 사이의 거리이다. 특정한 구체예에서, 공간 부분은 메니스커스가 형성되지 않도록 하는 크기이지만, 공기 방울이 용기 내의 액체에 의해 형성되고, 이는 육안 또는 광 현미경에 의해 가시적인 크기이다. 본원에 사용된 바와 같이, "공기 방울"은 용기가 수직 위치에 있을 경우 용기의 직경을 가로질러 확장하지 않고, 액체의 전부는 아니고 일부가 용기 클로저의 바닥 표면에 닿는다. 특정한 구체예에서, 공기 방울은 구형 형상이다. 특정한 그들 구체예에서, 공간 부분은 공기 방울의 직경이다. 특정한 구체예에서, 공기 방울은 구형 형상이 아니다. 특정한 그러한 구체예에서, 공기 방울은 타원형 형상이다. 특정한 그들 구체예에서, 공간 부분은 가장 큰 차원의 공기 방울이다. 특정한 구체예에서, 공간 부분은 캘리퍼를 사용하여 측정된다. 특정한 그러한 구체예에서, 10배 확대 렌즈는 인증된 눈금있는 캘리퍼에 의해 사용된다. 예시적인 캘리퍼는 미쓰토요(Mitutoyo) 시리즈 500, MCN 번호 900-GI-222이다. 특정한 구체예에서, 공간 부분은 현미경 및 현미경 자를 사용하여 측정된다. 특정한 그러한 구체예에서, 캘리퍼는 메니스커스의 상단으로부터 캘리퍼를 사용하여 플런저의 편평한 몸체의 바닥까지의 거리를 기록하기 위해 사용된다. 특정한 구체예에서, 미리 충전되고 마개 닫힌 주사기의 공간 부분은 광학 콤퍼레이터에 의해 측정된다. 예시적인 광학 콤퍼레이터는 수평적 광학 콤퍼레이터인 델트로닉(Deltronic) DH 216이다. 특정한 그러한 구체예에서, 측정은 수직 위치의 주사기를 광학 렌즈와 평행하게 배치함으로써 측정된다. 확대된 이미지는 검사를 위해 스크린 상으로 투사된다. 광학 콤퍼레이터 상의 캘리퍼는 메니스커스의 상단으로부터 캘리퍼를 사용하여 플런저의 편평한 몸체의 바닥까지의 거리를 기록하기 위해 사용된다. 특정한 구체예에서, 공간 부분은 메니스커스의 상단으로부터 플런저의 편평한 몸체의 바닥까지의 거리이다.

본원에 사용된 바와 같이, 공간 부분은 이 공간 부분 측정이 상기 단락 [090] 및 아래 실시예 2에 기재된 캘리퍼 및/또는 현미경 측정 방법을 사용하여 3.0 mm 이하인 경우에 "최소화된다" 공간 부분은 이 공간 부분 측정치가 적어도 하나의 측정 방법을 사용하여 3.0 mm 이하인 경우, 심지어 이 측정이 1개 이상의 다른 시험을 사용하여 3.0 mm 초과인 경우에 "최소화된" 것으로 고려된다. 특정한 예시적인 최소화된 공간 부분 측정치는 2.7 mm 이하, 또는 2.5 mm 이하, 또는 2 mm 이하, 또는 1.5 mm 이하, 또는 1 mm 이하, 또는 0.5 mm 이하, 또는 0.2 mm 이하, 또는 0.1 mm 이하를 포함하지만, 이들로만 제한되지 않거나, 또는 공간 부분이 검출되지 않는다. 특정한 구체예에서, 최소화된 공간 부분 측정치는 2.5 mm 내지 3.0 mm, 또는 2.0 mm 내지 2.5 mm, 또는 1.5 mm 내지 2.0 mm, 또는 1.0 내지 1.5 mm이다. 예, 도 6b 참조. 특정한 구체예에서, 공간 부분은 이 공간 부분이 본원에 기재된 캘리퍼 및/또는 현미경 측정 방법을 사용하여 측정될 수 없는 경우에 최소화된다. 특정한 그러한 구체예에서, 육안으로 또는 광 현미경에 의해 가시적인 어떠한 메니스커스도 없다. 특정한 그러한 구체예에서, 육안으로 또는 광 현미경에 의해 가시적인 어떠한 공기 방울도 없다.

"용기 클로저"는 용기를 커버하거나 또는 밀봉하는 용기 또는 용기 어셈블리의 일부를 의미한다. 특정한 구체예에서, 용기 클로저는 용기 내부의 조성물을 지탱한다. 특정한 구체예에서, 용기 클로저는 미생물 입장에 불투과성이다. 예시적인 용기 클로저는 캡, 뚜껑, 플런저, 및 마개를 포함하지만, 이들로만 제한되지 않는다.

"미리 충전된 주사기"는 조성물, 예를 들면, 치료 조성물을 위한 용기를 의미하고, 여기서 용기는 주사기이고, 조성물은 이 조성물을 환자에 투여하기에 앞서 주사기 내에 배치되고, 이 주사기는 예를 들면 플런저를 포함하지만, 이것으로만 제한되지 않는 주사기 클로저로 커버된다. 특정한 구체예에서, 조성물은 제조 충전 설비에서 주사기 내에 배치된다. 특정한 구체예에서, 주사기는 조성물을 이 주사기 내에 배치하기 전에 세척되고 살균된다. 특정한 구체예에서, 미리 충전된 주사기는 조성물을 환자에게 투여하기 전에 적어도 1일, 또는 적어도 7일, 또는 적어도 14일, 또는 적어도 1개월, 또는 적어도 6개월, 또는 적어도 1년, 또는 적어도 2년 동안 조성물을 포함한다. 특정한 구체예에서, 미리 충전된 주사기는 저장 및/또는 선적 조건에 적용된다.

용어 "실리콘"은 구조적 유니트 R₂SiO (여기서 R은 유기 그룹임)에 기초한 반-무기 중합체를 포함하는 윤활제를 의미한다. 특정한 구체예에서, 실리콘은 폴리디메틸실록산이고, 이는 실리콘 오일이라 칭하기도 한다. 특정한 구체예에서, 주사기 배럴의 내부 표면, 주사기 플런저의 표면, 및/또는 주사기 니들의 표면은 실리콘으로 커버된다. 특정한 구체예에서, 멈춤 꼭지를 포함하지만, 이것으로만 제한되지 않는 다른 타입의 용기 및/또는 용기 클로저는 실리콘으로 커버된다. 특정한 예시적인 폴리디메틸실록산은 예를 들면, 350 센티스톡스의 점도를 갖는 Dow Corning^®360 의료용 유체, 1000 센티스톡스의 점도를 갖는 Dow Corning^®360 의료용 유체, 12,500 센티스톡스의 점도를 갖는 Dow Corning^®360 의료용 유체를 포함하지만 이들로만 제한되지 않는 Dow Corning^®360 의료용 유체, 및 Dow Corning^®MDX4-4159 유체를 포함하지만, 이들로만 제한되지 않는다. 특정한 구체예에서, 실리콘 오일은 표면 상에 분무된다. 특정한 구체예에서, 실리콘 오일이 표면 상에서 닦여진다. 특정한 구체예에서, 실리콘 오일이 베이킹(baking)된다. 특정한 구체예에서, 실리콘 오일 가교된다.

"윤활제"는 표면 코팅제로서 도포되는 경우 이동하는 부분들 사이의 마찰을 감소시키는 물질을 의미한다. 특정한 예시적인 윤활제는 실리콘, 폴리테트라플루오로에틸렌 (Teflon^®), 및 TriboGlide^®(TriboFilm Research, Inc., Raleigh, NC)를 포함하지만, 이들로만 제한되지 않는다. 마개의 특정한 예시적인 코팅제는 옴니플렉스(Omniflex) (Helvoet Pharma, Inc., Pennsauken, NJ), 나노스킨(Nanoskin) (Helvovet 마개 [제형 FM457] 상의 플라즈마-코팅된 퍼플루오로폴리에테르 [PFPE], TriboFilm, Raleigh, NC), 및 Flurotec^®(Daikyo Seiko, Ltd., Sumida-Ku, Tokyo)를 포함하지만, 이들로만 제한되지 않는다.

용어 "베이킹된(baked) 실리콘"은 예를 들면, 주사기를 포함하지만, 이것으로만 제한되지 않는 용기에 도포된 후, 열에 의해 처리되고, 그에 따라 실리콘의 용기의 표면으로의 결합을 촉진시키는 실리콘을 의미한다.

용어 "가교된 실리콘"은 가교 치료에 적용된 가교성 실리콘 오일을 의미한다. 가교성 실리콘 오일은 오일의 가교를 가능하게 하는 반응성 및/또는 기능성 화학적 그룹을 갖는 실리콘 오일을 포함하지만, 이들로만 제한되지 않는다. 예시적인 시판중인 가교성 실리콘 오일은 Dow Corning^® MDX4-4159를 포함하지만, 이것으로만 제한되지 않는다. 예시적인 가교 치료법은 예를 들면, 전자, x-선, 또는 -선 소스에 대한 노출을 포함하지만, 이들로만 제한되지 않는 조사에 의한 치료; 및 예를 들면, 산소 플라즈마를 포함하지만, 이것으로만 제한되지 않는 이온화 플라즈마에서 치료를 포함하지만, 이들로만 제한되지 않는다.

용어 "실리콘 없는 물질" 및 "실리콘 결여 물질"은 용기 또는 용기 클로저의 제조시에 표면을 코팅하기 위해 어떠한 실리콘도 첨가되지 않은 물질을 의미한다. 특정한 구체예에서, 실리콘은 다음 시험들 중의 1개 이상에서 결정되는 바와 같이 검출되지 않는다: 실리콘을 추출할 용매에 물질을 노출시키는 것, 및 (1) 질량 분석법 (ICP-MS), 원자 방출 분광학 (ICP-AES), 또는 원자 흡수 (ICP-AA)와 결합된 유도적으로 결합된 플라즈마 (ICP) 분석 (Kennan JJ, Breen LL, Lane TH, Taylor RB.에 기재됨), 생물학적 매트릭스에서 실리콘을 검출하기 위한 방법 (Analytical Chemistry, 71(15):3054-60, 1999; Mundry T, Surmann P, Schurreit T.), 흑연 노 원자 흡수 분광학에 의한 수성 비경구 제형 및 유리 용기 중의 실리콘 오일의 흔적량 분석 (Drugs made in Germany, Vol 44, No 2, 47-56, 2001; Carter, J., L. Ebdon, and E.H. Evans), 섹터 필드 고 분해능 ICP-MS와 결합된 액체 크로마토그래피를 사용한 실리콘 및 인의 종 분화, (Microchemical Journal, 2004, 76(1-2): p. 35-41; 또는 Klemens P, Heumann KG.), 생물학적 및 임상적 샘플에서 실리콘의 흔적량을 정확히 결정하기 위한 ICP-HRIDMS 방법의 개발 (Fresenius J Anal Chem, 371 :758-763, 2001)이나; 또는 (2) 푸리에 변환 적외선 (FTIR) 분광 분석 (Silverstein, R.M., Bassler, G.C., Morrill, T.C. Spectrometric Identification of Organic Compounds, 5th Ed., 1991; 또는 Gungel, H., Menceoglu, Yildiz, B., Akbulut, O., Fourier Transform Infrared And 1H Nuclear Magnetic Resonance Spectroscopic Findings Of Silicone Oil Removed From Eyes And The Relationship Of Emulsification With Retinotomy And Glaucoma, The Journal Of Retinal And Vitreous Diseases, Vol 25, No 3, 332-338, 2005에 기재됨)에 의해 윤활제를 검출하는 것 중의 1개 이상에서 결정되는 바와 같이 검출되지 않는다. 실리콘은 그것이 적어도 하나의 이들 시험에서 검출되지 않는 경우, 심지어 그것이 1개 이상의 다른 시험에서 검출되는 경우 검출될 수 없는 것으로 고려된다.

용어 "윤활제 없는 물질" 및 "윤활제 결여 물질"은 용기 또는 용기 클로저의 제조시에 표면을 코팅하기 위해 어떠한 윤활제도 첨가되지 않은 물질을 의미한다. 특정한 구체예에서, 윤활제는 다음 시험들:즉, 윤활제를 추출할 용매에 물질을 노출시키는 것, 및 (1) 질량 분석법 (ICP-MS), 원자 방출 분광학 (ICP-AES), 또는 원자 흡수 (ICP-AA)와 결합된 유도적으로 결합된 플라즈마 (ICP) 분석 (Kennan JJ, Breen LL, Lane TH, Taylor RB.에 기재됨), 생물학적 매트릭스에서 실리콘을 검출하기 위한 방법 (Analytical Chemistry, 71(15):3054-60, 1999; Mundry T, Surmann P, Schurreit T.), 흑연 노 원자 흡수 분광학에 의한 수성 비경구 제형 및 유리 용기 중의 실리콘 오일의 흔적량 분석 (Drugs made in Germany, Vol 44, No 2, 47-56, 2001; Carter, J., L. Ebdon, and E.H. Evans), 섹터 필드 고 분해능 ICP-MS와 결합된 액체 크로마토그래피를 사용한 실리콘 및 인의 종 분화, (Microchemical Journal, 2004, 76(1-2): p. 35-41; 또는 Klemens P, Heumann KG.), 생물학적 및 임상적 샘플에서 실리콘의 흔적량을 정확히 결정하기 위한 ICP-HRIDMS 방법의 개발 (Fresenius J Anal Chem, 371 :758-763, 2001)이나; 또는 (2) 푸리에 변환 적외선 (FTIR) 분광 분석 (Silverstein, R.M., Bassler, G.C., Morrill, T.C. 유기 화합물의 분광학적 식별, 5th Ed., 1991; 또는 Gungel, H., Menceoglu, Yildiz, B., Akbulut, O., Fourier Transform Infrared And 1H Nuclear Magnetic Resonance Spectroscopic Findings Of Silicone Oil Removed From Eyes And The Relationship Of Emulsification With Retinotomy And Glaucoma, The Journal Of Retinal And Vitreous Diseases, Vol 25, No 3, 332-338, 2005에 기재됨)에 의해 윤활제를 검출하는 것 중의 1개 이상에서 결정되는 바와 같이 검출되지 않는다. 윤활제는 그것이 적어도 하나의 이들 시험에서 검출되지 않는 경우, 심지어 그것이 1개 이상의 다른 시험에서 검출되는 경우 검출될 수 없는 것으로 고려된다.

용어 "고분자량 플라스틱 물질"은 적어도 40,000의 분자량을 갖는 플라스틱 물질을 의미한다. 특정한 구체예에서, 고분자량 플라스틱 물질은 중합된 사이클릭 단량체를 포함한다. 특정한 예시적인 고분자량 플라스틱 물질은 사이클릭 올레핀 공중합체 및 사이클릭 올레핀 중합체를 포함하지만, 이들로만 제한되지 않는다.

"완충 작용제" 또는 "완충제"는 조성물의 pH를 바람직한 범위 내에서 유지하는 작용제를 의미한다.

용어 "저골밀도성 질환" "골 손실" 또는 "골 손실 상태"는 폐경기후 골다공증, 내분비 골다공증 (갑상선기능항진증, 부감상선기능항진증, 쿠싱 증후군 및 말단비대증을 포함하지만, 이들로만 제한되지 않음), 골다공증의 유전적 및 선천적인 형태 (골형성부전증, 호모시스틴뇨증, 멘케스 증후군, 및 릴리-데이 증후군); 및 사지의 부동화로 인한 골다공증을 포함하지만, 이들로만 제한되지 않는 골다공증; 성인 및 청소년에서 뼈의 페이젯병 (변형성 골염); 골수염, 또는 골 손실을 유도하는 뼈 내의 감염성 병변; 고형 종양 (유방암, 폐암, 신장암으로 포함하지만 이들로만 제한되지 않음) 및 혈액학적 악성 종양 (다발성 골수종, 림프종 및 백혈병을 포함하지만 이들로만 제한되지 않음)로부터 초래되는 고칼슘혈증, 특발성 고칼슘혈증, 및 갑상선 기능 항진증 및 신장 기능 장애와 연관된 고칼슘혈증; 글루코코르티코이드 등의 스테로이드 사용과 연관되고, 소장 및 대장 질환 및 만성 간 및 신장병과 연관된 수술 후 골감소증; 외상성 부상 또는 비외상성 괴사와 연관된 골괴사증, 또는 골세포 사멸; 빈혈 또는 전신 홍반성 낭창 및 류머티스성 관절염과 같은 염증 또는 자가 면역 조건, 및 치주 질환과 연관된 골 손실을 포함하지만, 이들로만 제한되지 않는다.

그들 골 손실 조건 외에, 골로 전이되거나 또는 뼈에 상주하는 특정한 암은 파골세포 활성을 증가시키고 골 재흡수를 유도하는 것으로 공지되어 있다. 그러한 암은 유방암, 전립선암, 및 다발성 골수종을 포함하지만, 이들로만 제한되지 않는다. 특정한 경우에, 이들 암은 뼈에서 RANKL의 과-발현을 초래하고, 파골세포수 및 활성을 유도하는 인자들을 생산하는 것으로 공지되어 있다. 따라서, 골 손실 질환은 유방암, 전립선암, 및 뼈로 전이되었거나 또는 뼈로 전이될 수 있는 고형 종양; 다발성 골수종; 및 뼈의 거대세포종을 포함하지만, 이들로만 제한되지 않는다. 다른 골 손실 조건은 유방암 및 전립선암을 포함하지만, 이들로만 제한되지 않는 전이성 및 비-전이성 암을 갖는 환자들에서 화학요법 유도된 골 손실을 포함하지만, 이들로만 제한되지 않는다. 특정한 경우에, 골 손실은 예를 들면 보조제 아로마타제 억제제(이것으로만 제한되지 않음)에 의한 호르몬 탈피 요법 동안에 발생한다.

질병 또는 의료적 상태는 자연적으로 발생하는 또는 실험에 의해 유도되는 질병 또는 의료적 상태가 체액 또는 조직에서 의료적 상태 IL-1와 연관되거나 또는 신체로부터 취한 세포 또는 조직이 배양액 중에서 의료적 상태 IL-1을 생산하는 경우에 "인터류킨-1 (IL-1) 매개 질병"인 것으로 고려된다. 상승된 레벨의 IL-1은 예를 들면, 특정 세포 또는 조직에서 통상적으로 발견되는 것들을 초과하는 레벨; 및 검출 가능한 레벨의 IL-1을 통상적으로 발현하지 않는 세포 또는 조직 내의 임의의 검출 가능한 레벨의 IL-1을 포함하지만, 이들로만 제한되지 않는다. 특정한 경우에, IL-1 매개 질병은 또한 다음 추가의 2가지 조건:즉, (1) IL-1의 투여에 의해 또는 IL-1 발현의 상향 조절을 초래하는 실험실 조건에 의해 동물에서 실험실적으로 모방되는 질병 또는 의료적 상태와 연관된 병리학적 발견치; 및 (2) IL-1의 작용을 억제하는 작용제에 의한 치료에 의해 억제되거나 또는 폐지되는 질병 또는 의료적 상태의 실험실 동물 모델에서 유도된 병인론 중의 하나 또는 모두에 의해 인지된다. 특정한 IL-1 매개 질병에서, 3가지 조건들 중의 적어도 2가지가 부합된다. 특정한 IL-1 매개 질병에서, 3가지 조건 모두가 부합된다.

예시적인 급성 및 만성 IL-1 매개 질병은 다음: 즉, 급성 췌장염; 증근위축성 축삭 경화증 (ALS); 알츠하이머병; AIDS 유도된 악액질을 포함하지만, 이것으로만 제한되지 않는 악액질/거식증; 천식 및 기타 폐 질환; 아테롬성 동맥경화증; 자가 면역 혈관염; 만성 피로 증후군; 클로스트리듐-연관된 설사증을 포함하지만, 이것으로만 제한되지 않는 클로스트리듐 연관된 질병; 울혈성 심부전, 관상 동맥 재협착, 심근 경색, 심근 기능 장애 (예, 패혈증과 관련됨), 및 관상 동맥 우회술을 포함하지만, 이들로만 제한되지 않는 관상 동맥 상태 및 증상; 다발성 골수종 및 골수성 (예, AML 또는 CML) 및 다른 백혈병을 포함하지만, 이들로만 제한되지 않는 암 뿐만 아니라 종양 전이; 당뇨병 (예, 인슐린-의존성 당뇨병); 자궁내막증; 열; 섬유근육통; 사구체신염; 이식편 대 숙주 질병/이식 거부; 출혈성 쇼크; 통각과민; 염증성 장질환; 골관절염, 건선성 관절염 및 류머티스성 관절염을 포함하지만, 이들로만 제한되지 않는 관절의 염증 상태; 예, 각막 이식과 연관될 수 있는 염증성 눈병; 뇌의 허혈 (예, 각각 신경 퇴화를 유도할 수 있는 외상, 간질, 출혈 또는 뇌졸중의 결과로서 뇌부상)을 포함하는 허혈; 가와사키병; 학습 장애; 폐질환 (예, ARDS); 다발성 경화증; 근병증 (예, 근육 단백질 대사, 특히 패혈증에서); 신경독성 (예, HIV에 의해 유도된 바); 골다공증; 암-관련된 통증을 포함하지만, 이것으로만 제한되지 않는 통증; 파킨슨병; 치주 질환; 조기진통; 건선; 재관류 부상; 패혈성 쇼크; 방사선 치료로부터의 부작용; 일시적 턱관절 질병; 수면 장애; 염좌, 삐기, 연골 손상, 외상, 정형외과적 수술, 감염증 또는 다른 질병 과정으로부터 초래되는 포도막염 및 염증 상태를 포함하지만, 이들로만 제한되지 않는다.

질병 또는 의료적 상태는 자연적으로 발생하는 또는 실험에 의해 유도되는 질병 또는 의료적 상태가 체액 또는 조직에서 상승된 레벨의 TNF와 연관되거나 또는 신체로부터 취한 세포 또는 조직이 배양액 중에서 상승된 레벨의 TNF을 생산하는 경우에 "TNF 매개 질병"인 것으로 고려된다. 상승된 레벨의 TNF는 예를 들면, 특정 세포 또는 조직에서 통상적으로 발견되는 것들을 초과하는 레벨; 및 검출 가능한 레벨의 TNF를 통상적으로 발현하지 않는 세포 또는 조직 내의 임의의 검출 가능한 레벨의 TNF를 포함하지만, 이들로만 제한되지 않는다. 특정한 경우에, TNF 매개 질병은 또한 다음 추가의 2가지 조건:즉, (1) 다음 추가의 2가지 조건:즉, (1) TNF의 투여에 의해 또는 TNF 발현의 상향 조절을 초래하는 실험실 조건에 의해 동물에서 실험실적으로 모방되는 질병 또는 의료적 상태와 연관된 병리학적 발견치; 및 (2) TNF의 작용을 억제하는 작용제에 의한 치료에 의해 억제되거나 또는 폐지되는 질병 또는 의료적 상태의 실험실 동물 모델에서 유도된 병인론 중의 하나 또는 모두에 의해 인지된다. 특정한 경우에, IL-1 매개 질병은 또한 특정한 TNF 매개 질병에서, 3가지 조건 중의 적어도 2가지가 부합된다. 특정한 TNF 매개 질병에서, 3가지 조건 모두가 부합된다.

예시적인 급성 및 만성 TNF 매개 질병은 악액질, 패혈성 쇼크, AIDS, 심근증, 자가 면역 질병, 및 류머티스성 관절염, 건선성 관절염, 청소년 류머티스성 관절염, 강직성 척추염, 및 플라크 건선을 포함하지만, 이들로만 제한되지 않는 염증성 질병을 포함하지만, 이들로만 제한되지 않는다.

특이적 결합제는 과량의 특이적 결합제가 리간드에 결합된 수용체의 정량을 적어도 약 20%, 40%, 60%, 80%, 85% 이상 (시험관 내 경쟁적 결합 분석에서 측정한 바) 감소시키는 경우 리간드의 수용체에 대한 "결합을 실질적으로 억제한다". 특정한 구체예에서, 특이적 결합제는 항체이다. 특정한 그러한 구체예에서, 항체는 RANKL의 RANK에 대한 결합을 실질적으로 억제하거나, 또는 IL-1의 IL-1R1에 대한 결합을 실질적으로 억제한다. 특정한 구체예에서, 특이적 결합제는 가용성 융합 폴리펩티드이다. 특정한 그러한 구체예에서, 가용성 융합 폴리펩티드는 TNF의 TNF-R에 대한 결합을 실질적으로 억제한다.

용어 "암"은 고형 종양 및 혈액학적 악성 종양을 포함하지만, 이들로만 제한되지 않는다. 예시적인 암은 유방암, 대장암, 위 암종, 신경교종, 머리 및 목의 편평 상피 세포 암종, 유전적 및 산발적 유두 신장 암종, 백혈병, 림프종, 리프라우메니 증후군, 악성 늑막 중피종, 흑색종, 다발성 골수종, 비-소세포 폐 암종, 골육종, 난소암, 췌장암, 전립선암, 소세포 폐암, 활액막 육종, 갑상선 암종, 거대세포종, 및 방광의 전이 세포 암종을 포함하지만, 이들로만 제한되지 않는다.

본원에 사용된 바의 용어 "약제학적 작용제 또는 약물"은 환자에게 적절히 투여된 경우 바람직한 치료 효과를 유도할 수 있는 화학적 화합물 또는 조성물을 의미한다. 본원에 사용된 바와 같이, 치료 효과는 효과 예방적 효과를 포함하거나 또는 포함하지 않을 수 있다.

본원에 사용된 바와 같이, 용어 "조절자"는 분자의 활성 또는 기능 변화시키거나 또는 변경시키는 화합물이다. 예를 들면, 조절자는 조절자의 부재하에 관찰된 활성 또는 기능의 크기와 비교하여 분자의 특정한 활성 또는 기능의 증가 또는 감소를 유발할 수 있다. 특정한 구체예에서, 조절자는 분자의 적어도 하나의 활성 또는 기능의 크기를 감소시키는 억제제이다. 분자의 특정한 예시적인 활성 및 기능은 결합 친화성, 효소적 활성, 및 시그널 형질 도입을 포함하지만, 이들로만 제한되지 않는다. 특정한 예시적인 억제제는 단백질, 펩티드, 항체, 펩티바디, 탄수화물 또는 작은 유기 분자들을 포함하지만, 이들로만 제한되지 않는다. 펩티바디는 예, 미국 특허 제6,660,843호 및 PCT 공고 제WO 01/83525호에 기재되어 있다.

본원에 사용된 바와 같이, "실질적으로 순수한"은 대상체 종이 존재하는 지배적인 종임을 의미한다 (즉, 몰 기준으로 그것은 조성물 중의 어떠한 다른 개별적인 종보다 더 풍부하다). 특정한 구체예에서, 실질적으로 정제된 부분은 대상체 종이 존재하는 모든 거대분자 종의 적어도 약 50%를 (몰 기준으로) 포함하는 조성물이다. 특정한 구체예에서, 실질적으로 순수한 조성물은 이 조성물 중에 존재하는 모든 거대분자 종의 약 80%, 85%, 90%, 95%, 또는 99% 이상을 포함할 것이다. 특정한 구체예에서, 대상체 종은 필수적인 동질성으로 정제되고 (오염물 종은 종래 검출 방법에 의해 조성물 중에서 검출될 수 없음), 여기서 조성물은 반드시 단일 거대분자 종으로 구성된다.

용어 "환자"는 인간 및 동물 피험자를 포함한다.

특정한 예시적인 특이적 결합제

특정한 경우에, TNF는 활성화된 마크로파지 및 T 세포에 의해 방출되어, 많은 수의 세포 타입에 대한 광범위한 효과를 유도한다. 특정한 경우에, TNF는 정상적인 면역 반응을 조절하는데 있어서, 뿐만 아니라 다양한 병리학적 및 질병 상태에 있어서 일 역할을 한다. 특정한 그러한 병리학적 및 질병 상태는 패혈증과 연관된 전신 독성, AIDS의 발병, 및 류머티스성 관절염, 청소년의 류머티스성 관절염, 강직성 척추염, 및 플라크 건선을 포함하지만, 이들로만 제한되지 않는 다양한 자가 면역 및 염증성 질병을 포함하지만, 이들로만 제한되지 않는다.

TNF 단백질은 특정한 경우에, TNF 반응성 세포의 플라즈마 멤브레인 상에 발현된 특이적 TNF 수용체 (TNF-R) 단백질에 대한 결합에 의해 세포에 대한 이들의 생물학적 효과를 개시한다. 따라서, 특정한 경우에, TNF 매개된 세포 반응의 감소는 관절염, 면역, 자가 면역, 및/또는 염증성 질환의 중증도를 감소시킬 수 있다. 특정한 구체예에 따라, TNF에 대한 특이적 결합제는 상기한 것들을 포함하지만, 이들로만 제한되지 않는 면역, 자가 면역, 및/또는 염증성 질환을 치료하기 위해 사용된다.

특정한 구체예에서, TNF에 대한 특이적 결합제는 가용성 TNF-R이다. 특정한 구체예에서, 가용성 TNF-R을 인코딩하는 뉴클레오티드 서열, 및 대응하는 아미노산 서열이 제공된다. 특정한 구체예에서, 가용성 TNF-R은 huTNF-RΔ235, huTNF-RΔ185 및 huTNF-RΔ163으로부터 선택된다. 미국 특허 제5,945,397호 참조. 특정한 구체예에서, 가용성 TNF-R은 1가이다. 1가 가용성 TNF-R은 TNF 리간드에 대해 단일 TNF-R 결합 부위를 갖는다. 특정한 구체예에서, 가용성 TNF-R은 다가이다. 다가 가용성 TNF-R은 TNF 리간드에 대해 다수의 TNF-R 결합 부위를 갖는다. 특정한 그러한 구체예에서, 가용성 TNF-R은 2가이다. 특정한 그러한 구체예에서, 2가 가용성 TNF-R은 링커 영역에 의해 분리되는 huTNF-RΔ235의 2개의 병렬 반복 단위를 포함한다. 특정한 구체예에서, 결합 TNF에 결합할 수 있는 정제된 인간 가용성 TNF-R이 제공된다.

특정한 구체예에서, TNF에 대한 특이적 결합제는 가용성 TNF-R 융합 폴리펩티드이다. 특정한 구체예에서, 가용성 TNF-R 융합 폴리펩티드는 다가이다. 특정한 그러한 구체예에서, 가용성 TNF-R 융합 폴리펩티드는 2가이다 (또한 이량체성으로 언급됨). 특정한 구체예에서, 가용성 TNF-R 융합 폴리펩티드는 Fc에 융합된 가용성 TNF-R을 포함한다.

특정한 예시적인 가용성 TNF-R 및 가용성 TNF-R 융합 폴리펩티드 및 그러한 폴리펩티드를 제조하고 사용하는 방법은 미국 특허 제5,945,397호 및 문헌[Mohler et al., J. Immunol. 151:1548-1561 (1993)]에 기재되어 있다. 특정한 그러한 구체예에서, 정제된 가용성 인간 TNF-R 융합 폴리펩티드가 제공된다. 특정한 그러한 구체예에서, 정제된 가용성 인간 TNF-R 융합 폴리펩티드는 문헌[Mohler et al., J. Immunol. 151:1548-1561 (1993)]에 기재된 바의 sTNFR:Fc, 또는 아래 실시예에서 고찰되는 바의 상표명 Enbrel^®로 시판중인 이타너셉트이다.

특정한 경우에, RANKL은 파골세포의 형성에 연루된다. 특정한 경우에, RANKL은 수용체 RANK에 결합되어 파골세포 활성을 증가시킨다. 특정한 경우에, 증가된 파골세포 활성은 폐경후 골다공증, 파이젯병, 용해성 골 전이, 및 류머티스성 관절염을 포함하는 특정한 저골밀도성 질환과 관련된다. 따라서, 특정한 경우에, RANKL 활성의 감소는 파골세포 활성의 감소를 초래할 수 있고 저골밀도성 질환의 중증도를 감소시킬 수 있다. 특정한 구체예에 따라, RANKL에 대한 특이적 결합제는 상기한 것들을 포함하지만, 이들로만 제한되지 않는 저골밀도성 질환을 치료하기 위해 사용된다.

특정한 구체예에서, RANKL에 대한 특이적 결합제는 완전 인간 단클론성 항체이다. 특정한 구체예에서, 중쇄 및 경쇄 이뮤노글로불린 분자를 인코딩하는 뉴클레오티드 서열, 및 대응하는 아미노산 서열, 특히 가변 영역에 대응하는 서열이 제공된다. 특정한 구체예에서, 특히 CDR1 내지 CDR3의 상보적 결정 영역 (CDR)에 대응하는 서열이 제공된다. 특정한 구체예에 따라, 그러한 이뮤노글로불린 분자를 발현하는 하이브리도마 세포주가 제공된다. 특정한 구체예에 따라, 그러한 단클론성 항체를 발현하는 하이브리도마 세포주가 제공된다. 특정한 구체예에 따라, 단클론성 항체를 발현하는 중국 햄스터 난소 (CHO) 세포주가 제공된다. 특정한 구체예에서, 인간 RANKL에 대한 정제된 인간 단클론성 항체가 제공된다.

RANKL에 대한 특정한 예시적인 항체 (또한 OPGL로서 언급됨) 및 그러한 항체를 제조하고 사용하는 방법은 2004년 2월 19일자로 공개된 미국 특허 공고 제2004/0033535호에 기재되어 있다. 특정한 그러한 구체예에서, 인간 RANKL에 대한 정제된 인간 단클론성 항체가 제공된다. 예, 미국 특허 공고 제2004/0033535호 참조. 특정한 그러한 구체예에서, 인간 RANKL에 대한 정제된 인간 단클론성 항체는 아래 실시예에서 고찰되는 αRANKL-1이다.

특정한 경우에, 사이토킨인 IL-1은 염증 반응에 연루된다. 특정한 경우에, IL-1은 수용체 IL-1R1에 결합하고, 이어서 IL-1RAcP에 결합한다. 그러한 사건들에는 세포 반응의 유도를 초래하는 시그널 형질 도입이 따르고, 이는 특정한 경우에 염증을 유도한다. 특정한 경우에, 염증은 기계적 손상으로 초래되는 부상, 감염, 또는 항원성 자극과 연관된다. 특정한 경우에, 염증성 반응은 병리학적으로 발현된다. 그러한 상태는 특정한 경우에, 염증이 과장된 방식으로 발현되고, 부적절하게 자극되거나, 또는 손상을 주는 작용제가 제거된 후에도 지속되는 경우에 발생한다. IL-1에 의해 매개된 예시적인 병리학적 상태는 류머티스성 관절염 및 골관절염을 포함하지만, 이들로만 제한되지 않는다. 따라서, 특정한 경우에, IL-1 매개된 시그널 형질 도입 활성의 감소는 염증을 유도하는 세포 반응의 감소를 초래할 수 있고 관절염 및 다른 염증성 질환의 중증도를 감소시킬 수 있다. 특정한 구체예에 따라, IL-1R1에 대한 특이적 결합제는 상기한 것들을 포함하지만, 이들로만 제한되지 않는 염증성 질환을 치료하기 위해 사용된다.

특정한 구체예에서, IL-1R1에 대한 특이적 결합제는 완전 인간 단클론성 항체이다. 특정한 구체예에서, 중쇄 및 경쇄 이뮤노글로불린 분자를 인코딩하는 뉴클레오티드 서열, 및 대응하는 아미노산 서열, 특히 가변 영역에 대응하는 서열이 제공된다. 특정한 구체예에서, 특히 CDR1 내지 CDR3의 상보적 결정 영역 (CDR)에 대응하는 서열이 제공된다. 특정한 구체예에 따라, 그러한 이뮤노글로불린 분자를 발현하는 하이브리도마 세포주가 제공된다. 특정한 구체예에 따라, 그러한 단클론성 항체를 발현하는 하이브리도마 세포주가 제공된다. 특정한 구체예에 따라, 단클론성 항체를 발현하는 중국 햄스터 난소 (CHO) 세포주가 제공된다. 특정한 구체예에서, 단클론성 항체는 15C4, 26F5, 및 27F2 중의 적어도 하나로부터 선택된다. 특정한 구체예에서, 인간 IL-1R1에 대한 정제된 인간 단클론성 항체가 제공된다.

IL-1R1에 대한 특정한 예시적인 항체 및 그러한 항체를 제조하고 사용하는 방법은 2004년 5월 20일자로 공개된 미국 특허 공고 제2004/0097712호에 기재되어 있다. 특정한 그러한 구체예에서, 인간 IL-1R1에 대한 정제된 인간 단클론성 항체가 제공된다. 특정한 그러한 구체예에서, 인간 IL-1R1에 대한 정제된 인간 단클론성 항체는 미국 특허 공고 제2004/0097712호에 나타낸 바와 같이 SEQ ID NO:12의 경쇄 가변 영역 및 SEQ ID NO:10의 중쇄 가변 영역; 또는 대안으로 미국 특허 공고 제2004/0097712호에 나타낸 바와 같이 SEQ ID NO:12의 경쇄 가변 영역 및 SEQ ID NO:14의 중쇄 가변 영역; 또는 대안으로 미국 특허 공고 제2004/0097712호에 나타낸 바와 같이 SEQ ID NO:18의 경쇄 가변 영역 및 SEQ ID NO:16의 중쇄 가변 영역을 갖는다.

특정한 구체예에서, 인간 RANKL에 대한 인간 단클론성 항체 및/또는 IL-1R1에 대한 인간 단클론성 항체는 완전 인간 단클론성 항체이다. 특정한 완전 인간 단클론성 항체는 다음과 같이 조작된 생쥐 균주로부터 획득될 수 있다. 누구나 생쥐들이 생쥐 항체의 부재 하에 인간 항체를 생산할 수 있다는 예상으로 인간 Ig 유전자 자리의 큰 단편들에 의해 생쥐 항체 생산에서 결핍된 생쥐 균주를 조작할 수 있다. 큰 인간 Ig 단편은 큰 가변 유전자 다양성 뿐만 아니라 항체 생산 및 발현의 적합한 조절을 보존할 수 있다. 항체 다양화 및 선택 및 인간 단백질에 대한 면역학적 내성의 결핍에 대한 생쥐 기계류를 탐험함으로써, 이들 생쥐 균주에서 재생된 인간 항체 레퍼토리는 인간 항원을 포함하여 관심을 끄는 임의의 항원에 반하여 높은 친화성 완전 인간 항체를 생산할 수 있다. 하이브리도마 기술을 사용함으로써, 바람직한 특이성을 갖는 항원-특이적 인간 MAbs가 생산되고 선택될 수 있다. 특정한 예시적인 방법은 WO 98/24893, U.S. 특허 제5,545,807호, EP 546073B1, 및 EP 546073A1에 기재되어 있다.

특정한 구체예에서, 누구나 인간 가변 영역(들)과 함께 인간 이외의 종으로부터 상수 영역을 사용할 수 있다. 특정한 구체예에서, 누구나 인간 이외의 종으로부터 가변 영역(들)과 함께 인간으로부터 상수 영역을 사용할 수 있다.

특정한 예시적인 항체 구조물

자연적으로 발생하는 항체 구조적 유니트는 통상적으로 테트라머를 포함한다. 각각의 그러한 테트라머는 통상적으로 2가지 동일한 쌍의 폴리펩티드 사슬로 구성되고, 각각의 쌍은 하나의 전장 경쇄 (특정한 구체예에서, 약 25 kDa) 및 하나의 전장 중쇄 (특정한 구체예에서, 약 50-70 kDa)를 갖는다.

각각의 사슬의 아미노 말단 부분은 통상적으로 항원 인지에 대한 책임이 있는 약 100 내지 110개 이상의 아미노산의 가변 영역 (중쇄에서 V_H 및 경쇄에서 V_L)을 포함한다. 각각의 사슬의 카르복시 말단 부분은 통상적으로 효과기 기능을 책임질 수 있는 상수 영역 (중쇄에서 C_H 도메인 및 경쇄에서 C_L)을 한정한다. 항체 효과기 기능은 옵소닌 식균 작용의 보충 및 자극의 활성화를 포함한다. 인간 경쇄는 통상적으로 κ 및 λ 경쇄로서 분류된다. 중쇄는 통상적으로 μ, δ, γ, α, 또는 ε으로서 분류되고, 항체의 이소타입을 각각 IgM, IgD, IgG, IgA, 및 IgE로서 한정한다. IgG는 IgG1, IgG2, IgG3, 및 IgG4를 포함하지만, 이들로만 제한되지 않는 여러 서브클래스를 갖는다. IgM은 IgM1 및 IgM2를 포함하지만, 이들로만 제한되지 않는 서브클래스를 갖는다. IgA는 마찬가지로 IgA1 및 IgA2를 포함하지만, 이들로만 제한되지 않는 서브클래스로 세분된다. 전장 경쇄 및 중쇄 내에서, 통상적으로, 가변 영역 및 상수 영역은 약 12개 이상의 아미노산의 "J" 영역에 의해 연결되고, 단, 중쇄는 약 10개 이상의 아미노산의 "D" 영역을 포함하기도 한다. 문헌[예, Fundamental Immunology Ch. 7 (Paul, W., ed., 2nd ed. Raven Press, N.Y. (1989))] 참조. 각각의 경쇄/중쇄 쌍의 가변 영역은 통상적으로 항원 결합 부위를 형성한다.

가변 영역은 통상적으로 3개의 극가변 영역에 의해 연결되고, 또한 상보적 결정 영역 또는 CDRs이라 칭하는 비교적 보호된 골격 영역 (FR)의 동일한 일반적 구조물을 나타낸다. 각각의 쌍의 중쇄 및 경쇄로부터 CDR은 통상적으로 골격 영역에 의해 할당되고, 이는 특이적 에피토프에 대한 결합을 가능하게 할 수 있다. N 말단으로부터 C 말단까지, 경쇄 및 중쇄 가변 영역 모두는 통상적으로 도메인 FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, 및 FR4를 포함한다. 각각의 도메인에 아미노산을 할당하는 것은 통상적으로 면역학적 관심을 끄는 단백질의 Kabat 서열의 정의에 따라 이루어진다. 문헌[(National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1987 and 1991)), 또는 Chothia & Lesk J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987); Chothia et al. Nature 342:878-883 (1989)] 참조.

상기 "특정 정의" 섹션에 고찰된 바와 같이, 여러 가지 타입의 항체 단편이 존재한다. 예시적인 항체 단편은 Fab 단편, Fab' 단편, F(ab')₂ 분자, Fv 분자, scFv, 맥시바디, 및 Fc 단편을 포함하지만, 이들로만 제한되지 않는다.

특정한 구체예에서, 기능성 도메인, C_H1, C_H2, C_H3, 및 개재 서열은 상이한 항체 상수 영역을 생성하도록 섞일 수 있다. 예를 들면, 특정한 구체예에서, 그러한 하이브리드 상수 영역은 항체 테트라머의 어셈블리 및 폴딩을 위해, 및/또는 개선된 효과기 기능을 위해 혈청 중에서 반감기에 대해 최적화될 수 있다. 특정한 구체예에서, 변형된 항체 상수 영역은 이 상수 영역의 아미노산 서열 내로 단일점 돌연변이를 도입하고, 개선된 품질을 위한 결과의 항체를 시험함으로써 예, 상기한 것들 중의 1개 이상에 의해 생산될 수 있다.

특정한 구체예에서, 하나의 이소타입의 항체는 특정 표적 분자에 대한 그의 특이성을 상실함이 없이 이소타입 스위칭에 의해 상이한 이소타입으로 전환된다. 이소타입 스위칭 방법은 무엇보다도 직접적인 재조합 기술 (예, 미국 특허 제4,816,397호 참조) 및 세포-세포 융합 기술 (예, 미국 특허 제5,916,771호 참조)을 포함하지만, 이들로만 제한되지 않는다. 특정한 구체예에서, 항체는 특정 표적 분자에 대한 그의 특이성을 상실함이 없이 상기 기술 또는 그렇지 않으면 당업계에 공지된 기술을 사용하여 하나의 서브클래스로부터 또 다른 서브클래스로 전환될 수 있고, IgG2 서브클래스로부터 IgG1, IgG3, 또는 IgG4 서브클래스로의 전환을 포함하지만, 이들로만 제한되지 않는다.

특정한 이중특이적 또는 이중기능성 항체

이중특이적 또는 이중기능성 항체는 통상적으로 2개의 상이한 중쇄/경쇄 쌍 및 2개의 상이한 결합 부위를 갖는 인공적인 하이브리드 항체이다. 이중특이적 항체는 하이브리도마의 융합 또는 Fab' 단편의 링킹을 포함하지만, 이들로만 제한되지 않는 다양한 방법에 의해 생산될 수 있다. [예, Songsivilai & Lachmann Clin . Exp. Immunol . 79: 315-321 (1990), Kostelny et al. J. Immunol. 148:1547-1553 (1992)] 참조.

항체의 특정한 제조

특정한 구체예에서, 항체는 하이브리도마 세포주 이외의 세포주에서 발현될 수 있다. 특정한 구체예에서, 키메라 항체를 포함하는 특정 항체를 인코딩하는 서열은 적합한 포유류 숙주 세포의 변형을 위해 사용될 수 있다. 특정한 구체예에 따라, 변형은 예를 들면 바이러스 내에 (또는 바이러스성 벡터) 내로 폴리뉴클레오티드를 포장하고, 바이러스에 의해 또는 미국 특허 제4,399,216호; 4,912,040호; 동 제4,740,461호; 및 동 제4,959,455호에 예시된 바와 같이 당업계에 공지된 절차를 사용하여 벡터를 형질 감염시킴으로써 숙주 세포를 형질 도입하는 것을 포함하는, 숙주 세포 내로 폴리뉴클레오티드를 도입하기 위한 임의의 공지된 방법일 수 있다.

특정한 구체예에서, 발현 벡터는 1개 이상의 항체를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드 서열을 포함하지만, 이것으로만 제한되지 않는 본원에 고찰된 1개 이상의 폴리뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특정한 구체예에서, 폴리펩티드를 생산하기 위해 내부에 함유된 폴리뉴클레오티드를 발현하기에 적합한 조건으로 상기 발현 벡터들 중의 임의의 것을 포함하는 세포 내에 폴리펩티드를 생산하는 것을 포함하는 폴리펩티드의 제조 방법이 제공된다.

특정한 구체예에서, 발현 벡터는 항체 중쇄를 발현한다. 특정한 구체예에서, 발현 벡터는 항체 경쇄를 발현한다. 특정한 구체예에서, 발현 벡터는 항체 중쇄 및 항체 경쇄 모두를 발현한다. 특정한 구체예에서, 항체를 생산하기 위해 내부에 함유된 폴리뉴클레오티드를 발현하기에 적합한 조건으로 적어도 하나의 발현 벡터를 포함하는 세포 내에 항체를 생산하는 것을 포함하는 항체의 제조 방법이 제공된다.

특정한 구체예에서, 사용된 형질 감염 절차는 형질 전환되어야 할 숙주에 의존할 수 있다. 포유류의 세포 내로 이형 폴리뉴클레오티드를 도입하기 위한 특정한 방법은 당업계에 공지되어 있고 덱스트란 매개된 형질 감염, 인산 칼슘 침전, 폴리브렌 매개된 형질 감염, 원형질체 융합, 전기 천공, 리포좀 중의 폴리뉴클레오티드(들)의 캡슐화, 및 DNA의 핵 내로의 직접적인 마이크로주사를 포함할 수 있지만, 이들로만 제한되지 않는다.

발현을 위한 숙주로서 이용될 수 있는 특정한 포유류의 세포주는 당업계에 공지되어 있고, ATCC (American Type Culture Collection)로부터 입수할 수 있는 많은 불멸화된 세포주, 예를 들면 중국 햄스터 난소 (CHO) 세포, E5 세포, HeLa 세포, 새끼 햄스터 신장 (BHK) 세포, 원숭이 신장 세포 (COS), 인간 간세포 암종 세포 (예, Hep G2), NS0 세포, SP20 세포, Per C6 세포, 293 세포, 미 다수의 다른 세포주를 포함하지만 이들로만 제한되지 않는다. 특정한 구체예에서, 세포주는 어느 세포주가 높은 발현 레벨을 갖고 구성적 항원 결합 특성을 갖는 항체를 생산하는지를 결정하는 것을 통해 선택될 수 있다.

특정한 구체예에서, 숙주 세포 내로 형질 감염될 수 있는 벡터는 항체를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드에 작동가능하게 링크된 대조 서열을 포함한다. 특정한 구체예에서, 대조 서열은 링크된 폴리뉴클레오티드의 발현을 고무시키고, 그에 따라 링크된 폴리뉴클레오티드에 의해 인코딩된 폴리펩티드의 생산을 초래한다. 특정한 구체예에서, 벡터는 또한 숙주 세포에서 염색체-의존성 복제를 허용하는 폴리뉴클레오티드 서열을 포함한다. 예시적인 벡터는 플라스미드 (예, 블루스크립트(BlueScript), puc, 등), 코스미드, 및 YACS를 포함하지만, 이들로만 제한되지 않는다.

재조합 폴리펩티드의 특정한 발현

특정한 구체예에서, 재조합 발현 벡터는 예를 들면, TNF-R을 포함하지만, 이것으로만 제한되지 않는 폴리펩티드를 인코딩하는 DNA를 증식시키거나 또는 발현시키 위해 사용된다. 특정한 구체예에서, 재조합 발현 벡터는 포유류의 TNF-R을 인코딩하는 합성 또는 cDNA 유도된 DNA 단편 또는 포유류, 미생물, 바이러스 또는 곤충 유전자로부터 유도된 적합한 전사 또는 번역 조절 요소에 작동가능하게 링크된 생물학적 등가의 유사체를 갖는 복제 가능한 DNA 작제물이다. 폴리펩티드를 인코딩하는 합성 또는 cDNA 유도된 DNA 단편의 발현을 위한 여러 가지 재조합 발현 벡터는 당업계의 숙련자에게 잘 공지되어 있다. 특정한 예시적인 재조합 발현 벡터는 미국 특허 제5,945,397호에 기재되어 있다.

특정한 구체예에서, 변형된 숙주 세포는 재조합 DNA 기술을 사용하여 구축된 TNF-R 벡터에 의해 변형되거나 또는 형질 감염된 세포이다. 변형된 숙주 세포는 대개 TNF-R을 발현하지만, TNF-R DNA를 클로닝하거나 또는 증식시킬 목적으로 변형된 숙주 세포는 TNF-R을 발현시킬 필요가 없다. 특정한 구체예에서, 발현된 TNF-R은 선택된 TNF-R DNA에 따라, 세포막 내로 침착되거나 또는 배양 상청액 내로 분비될 것이다. 포유류의 TNF-R의 발현을 위한 예시적인 숙주 세포는 원핵생물, 효모 또는 고등 진핵생물 세포를 포함하지만, 이들로만 제한되지 않고, 여기서 TNF-R의 발현은 적절한 프로모터의 조절 하에 이루어진다. 원핵생물은 그램 음성 또는 그램 양성 유기체, 예를 들면 대장균 또는 바실루스균을 포함한다. 고등 진핵생물 세포는 포유류의 기원의 확립된 세포주를 포함하지만, 이것으로만 제한되지 않는다. 특정한 구체예에서, 세포 없는 번역 시스템은 또한 TNF-R을 함유하는 DNA 작제물로부터 유도된 RNAs를 사용하여 포유류의 TNF-R을 생산하기 위해 사용될 수 있다. 세균, 진균, 효모, 및 포유류의 세포 숙주와 함께 사용하기 위한 특정한 예시적인 클로닝 및 발현 벡터는 문헌[Pouwels et al. (Cloning Vectors: A Laboratory Manual, Elsevier, N.Y., 1985)]에 기재되어 있다.

특정한 구체예에서, 원핵생물 발현 숙주는 TNF-R의 발현을 위해 사용된다. 특정한 구체예에서, 원핵생물 발현 벡터는 일반적으로 1개 이상의 표현형 선택성 마커, 예를 들면 항생제 내성을 수여하고 영영 요구성 요건을 제공하는 단백질을 인코딩하는 유전자, 및 숙주 내의 증식을 보장하기 위해 숙주에 의해 인지된 복제의 기원을 포함한다. 변형을 위한 예시적인 원핵생물 숙주는 대장균, 바실러스 서브틸리스, 살모넬라 티피무리움, 및 슈도모나스 속, 스트렙토마이세스 속, 및 스태필로코쿠스 속의 여러 가지 종을 포함한다. 여러 가지 원핵생물 발현 벡터 및 사용 방법은 당업계의 숙련자들에게 잘 공지되어 있다. 특정한 원핵생물 발현 벡터는 미국 특허 제5,945,397호에 기재되어 있다.

특정한 구체예에서, 재조합 TNF-R 단백질은 효모 숙주, 예를 들면, 사카로마이세스 세레비시아, 및 피키아 또는 클루이베로마이세스 등과 같은 다른 속의 효모에서 발현된다. 여러 가지 효모 발현 벡터 및 사용 방법은 당업계의 숙련자들에게 잘 공지되어 있다. 특정한 예시적인 효모 발현 벡터 및 사용 방법은 문헌[R. Hitzeman et al., 유럽 특허 출원 공고 제0073657호, and in Sherman et al., Laboratory Course Manual for Methods in Yeast Genetics, Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, N.Y., 1986]에 기재되어 있다.

특정한 구체예에서, 포유류 또는 곤충 세포 배양액 시스템은 재조합 단백질을 발현시키기 위해 발현된다. 적합한 포유류 숙주 세포주의 예는 Gluzman (세포 23:175, 1981)에 의해 기재된 바의 원숭이 신장 세포의 COS-7 세포주, 및 적절한 벡터를 발현할 수 있는 세포주, 예를 들면, L 세포, C127, 3T3, 중국 햄스터 난소 (CHO), HeLa 및 BHK 세포주를 포함하지만, 이들로만 제한되지 않는다. 여러 가지 포유류 및 곤충 세포 배양액 시스템 및 사용 방법은 당업계의 숙련자들에게 잘 공지되어 있다. 특정한 그러한 예시적인 시스템은 미국 특허 제5,945,397호에 기재되어 있다.

특정한 구체예에서, TNF-R cDNA를 포함하는 재조합 발현 벡터는 숙주 세포의 DNA 내로 안정하게 통합된다. 특정한 구체예에서, 발현 생성물의 상승된 레벨은 증식된 수의 벡터 DNA를 갖는 세포주에 대해 선택함으로써 달성된다. 특정한 구체예에서, 증식된 수의 벡터 DNA를 갖는 세포주는 예를 들면, 공지된 약물에 의해 억제되는 효소를 인코딩하는 DNA 서열을 포함하는 벡터에 의해 숙주 세포를 변형시킴으로써 선택된다. 특정한 구체예에서, 벡터는 또한 바람직한 단백질, 예, TNF-R을 인코딩하는 DNA 서열을 포함한다. 특정한 구체예에서, 숙주 세포는 바람직한 단백질, 예, TNF-R을 인코딩하는 DNA 서열을 포함하는 제2 벡터에 의해 동시-변형된다. 특정한 구체예에서, 변형된 또는 동시-변형된 숙주 세포는 이어서 증가된 농도의 공지된 약물에서 배양되고, 그에 따라 약물-내성 세포의 선택은 효소를 인코딩하는 벡터의 증식된 카피 뿐만 아니라 숙주 세포의 DNA 내의 바람직한 단백질 (TNF-R)을 인코딩하는 벡터 DNA를 함유할 수 있다.

그러한 동시-증식을 위한 특정한 예시적인 시스템은 약물 메토트렉세이트 (MTX)에 의해 억제될 수 있는 디하이드로폴레이트 리덕타제 (DHFR)에 대한 유전자의 사용; 및 ATP의 ADP로의 가수 분해 및 반응을 유도하기 위한 포스페이트를 사용한 글루타메이트와 암모니아의 합성에 책임이 있는 글루타민 합성 효소 (GS)를 포함하지만, 이들로만 제한되지 않는다. 이들 시스템은 당업계의 숙련자들에게 잘 공지되어 있다. 또한, GS 동시-증식 시스템, 적합한 재조합 발현 벡터 및 세포주는 다음 PCT 출원들: WO 87/04462, WO 89101036, WO 89/10404 및 WO 86/05807에 기재되어 있다.

특정한 구체예에서, 재조합 단백질은 중국 햄스터 난소 (CHO) 세포와 같은 포유류 숙주 세포에서, 또는 대안으로 SP2/0-Ag14 또는 NS0와 같은 쥐 골수종 세포주 또는 YB2/3.0-Ag20과 같은 쥐 골수종 세포주에서 DHFR 또는 GS의 동시-증식에 의해 발현되고, PCT 출원 WO/89/10404 및 WO 86/05807에 기재되어 있다.

벡터, pCAV/NOT를 포함하는 TNF-R DNA의 발현을 위한 특정한 추가의 진핵생물 벡터는 미국 특허 제5,945,397호에 기재되어 있다.

재조합 TNF -R의 정제

특정한 구체예에서, 정제된 포유류 TNF 수용체 또는 유사체는 TNF-R DNA의 재조합 전사 생성물을 발현시키기 위해 적합한 숙주/벡터 시스템을 배양시킴으로써 제조되고, 이어서 배양 배지 또는 세포 추출물로분터 정제된다.

특정한 구체예에서, 재조합 단백질을 배양 배지 내로 분비하는 시스템으로부터의 상청액은 먼저 시판중인 단백질 농도 필터, 예를 들면, 아미콘(Amicon) 또는 밀리포어 펠리콘(Millipore Pellicon) 한외여과 유니트를 사용하여 농축된다. 특정한 구체예에서, 농도 단계 후, 농축물이 적합한 정제 매트릭스에 도포된다. 예시적인 정제 매트릭스는 TNF, 레시틴 또는 적합한 지지체에 결합된 항체 폴리펩티드; 예를 들면, 펜던트 디에틸아미노에틸 (DEAE) 그룹 (여기서 매트릭스는 아크릴아미드임), 아가로스, 덱스트란, 셀룰로스 또는 단백질 정제에 통상적으로 사용된 다른 타입을 포함하는 음이온 교환 수지; 설포프로필 또는 카르복시메틸 그룹을 포함하는 다양한 불용성 매트릭스를 포함하는 양이온 교환 수지를 포함하지만, 이들로만 제한되지 않는다.

특정한 구체예에서, 소수성 RP-HPLC 매질, 예, 펜던트 메틸 또는 다른 지방족 그룹을 갖는 실리카 겔을 사용하는 1개 이상의 역상 고성능 액체 크로마토그래피 (RP-HPLC) 단계는 TNF-R 조성물을 추가로 정제하기 위해 사용된다. 특정한 구체예에서, 상기 정제 단계들의 일부 또는 전부는, 여러 조합으로, 동종 재조합 단백질을 제공하기 위해 사용된다.

특정한 구체예에서, 세균 배양액 중에서 생산된 재조합 단백질은 통상적으로 세포 펠렛으로부터의 초기 추출에 의해, 이어서 1회 이상의 농축, 염석, 수성 이온 교환 또는 크기 배제 크로마토그래피 단계에 의해 단리된다. 특정한 구체예에서, 고성능 액체 크로마토그래피 (HPLC)는 최종 정제 단계를 위해 사용된다. 특정한 구체예에서, 재조합 포유류 TNF-R의 발현에 사용된 미생물 세포는 임의의 편리한 방법, 예를 들면, 동결-해동 주기, 초음파 분해, 기계적 붕괴, 또는 세포 용해제의 사용에 의해 붕괴된다.

특정한 구체예에서, 포유류 TNF-R을 분비된 단백질로서 발현하는 효모 세포가 발효된다. 대규모 발효로 초래되는 분비된 재조합 단백질을 정제하기 위한 예시적인 방법은 문헌 [Urdal et al. (J. Chromatog. 296:171, 1984)]에 기재되어 있다.

특정한 특이적 결합제 조성물

특정한 구체예에서, 적어도 하나의 특이적 결합제, 적어도 하나의 안정화제, 및 완충제를 포함하는 조성물이 제공된다. 특정한 그러한 구체예에서, 이 조성물은 적어도 하나의 추가의 약제학적 작용제를 추가로 포함한다. 특정한 구체예에서, 특이적 결합제는 RANKL에 대한 특이적 결합제, TNF에 대한 특이적 결합제, 및/또는 IL-1R1에 대한 특이적 결합제이다. 특정한 구체예에서, 특이적 결합제는 RANKL에 대한 특이적 결합제이고, 여기서 RANKL에 대한 특이적 결합제는 RANKL에 특이적으로 결합하는 항체이다. 특정한 구체예에서, 항체는 αRANKL-1이다. 특정한 구체예에서, 특이적 결합제는 TNF에 대한 특이적 결합제이고, 여기서 TNF에 대한 특이적 결합제는 가용성 TNF 수용체이다. 특정한 구체예에서, 가용성 TNF 수용체는 sTNFR:Fc이다. 특정한 구체예에서, 특이적 결합제는 IL-1R1에 대한 특이적 결합제이고, 여기서 특이적 결합제는 IL-1R1에 특이적으로 결합하는 항체이다. 특정한 구체예에서, 항체는 미국 특허 공고 제2004/0097712호에 기재된 바와 같이 15C4, 26F5 및 27F2로부터 선택된다.

특정한 구체예에서, 적어도 하나의 RANKL에 대한 특이적 결합제는 1 mg/ml 내지 150 mg/ml의 농도로 존재한다. 특정한 그러한 구체예에서, 적어도 하나의 RANKL에 대한 특이적 결합제는 RANKL에 특이적으로 결합하는 항체이다. 특정한 구체예에서, 항체는 αRANKL-1이다. 적어도 하나의 RANKL에 대한 특이적 결합제의 특정한 예시적인 농도는 30 mg/ml, 60mg/ml, 70 mg/ml, 105 mg/ml, 및 120 mg/ml를 포함하지만, 이들로만 제한되지 않는다. 특정한 구체예에서, 조성물은 1개 이상의 상이한 RANKL에 대한 특이적 결합제를 포함할 것이다. 특정한 그러한 구체예에서, 1개 이상의 RANKL에 대한 특이적 결합제는 1개 이상의 에피토프에 결합한다.

특정한 구체예에서, 적어도 하나의 TNF에 대한 특이적 결합제는 1 mg/ml 내지 150 mg/ml의 농도로 존재한다. 특정한 그러한 구체예에서, 적어도 하나의 TNF에 대한 특이적 결합제는 50 mg/ml의 농도로 존재한다. 특정한 구체예에서, 이 조성물은 1개 이상의 상이한 TNF에 대한 특이적 결합제를 포함할 것이다. 특정한 그러한 구체예에서, 1개 이상의 TNF에 대한 특이적 결합제는 1개 이상의 에피토프에 결합한다. 가용성 TNFR:Fc를 포함하는 TNF에 대한 특이적 결합제에 대한 예시적인 제형은 미국 특허 공고 제2007-0243185호에서 발견할 수 있고, 본원에 참고 문헌으로서 그의 전문으로 인용한다.

특정한 구체예에서, 적어도 하나의 IL-1R1에 대한 특이적 결합제는 1 mg/ml 내지 200 mg/ml의 농도로 존재한다. 특정한 그러한 구체예에서, 적어도 하나의 IL-1R1에 대한 특이적 결합제는 IL-1R1에 특이적으로 결합하는 항체이다. 특정한 구체예에서, 항체는 미국 특허 공고 제2004/0097712호에 기재된 바의 15C4, 26F5 또는 27F2로부터 선택된다. 적어도 하나의 IL-1R1에 대한 특이적 결합제의 특정한 예시적인 농도는 30 mg/ml, 70 mg/ml, 100 mg/ml, 및 150 mg/ml를 포함하지만, 이들로만 제한되지 않는다. 특정한 구체예에서, 이 조성물은 1개 이상의 상이한 IL-1R1에 대한 특이적 결합제를 포함할 것이다. 특정한 그러한 구체예에서, 1개 이상의 IL-1R1에 대한 특이적 결합제는 1개 이상의 에피토프에 결합한다.

특정한 구체예에서, 완충제를 포함하는 조성물의 pH는 6.6 미만이다. 특정한 구체예에서, 완충제를 포함하는 조성물의 pH는 5.5 내지 6.5이다. 특정한 그러한 구체예에서, 그 pH는 6.3이다. 특정한 구체예에서, 완충제를 포함하는 조성물의 pH는 4.5 내지 5.5이다. 특정한 그러한 구체예에서, 그 pH는 5.2이다. 예시적인 완충제는 아세테이트, 히스티딘, 포스페이트, 글루타메이트, 및 프로피오네이트를 포함하지만, 이들로만 제한되지 않는다. 특정한 구체예에서, 완충제의 농도는 1 mM 내지 50 mM 범위이다. 특정한 구체예에서, 완충제의 농도는 25 mM이다. 특정한 구체예에서, 완충제의 농도는 10 mM이다.

특정한 구체예에서, 이 조성물은 적어도 하나의 당을 추가로 포함한다. 본원에 사용된 바와 같이, 용어 "당"은 포도당 및 만노스와 같은 단당류, 또는 자당 및 락토스와 같은 이당류뿐만 아니라 당 알콜 및 당 산을 포함하는 당 유도체를 포함하는 다당류를 의미한다. 당 알콜은 만니톨, 크실리톨, 에리쓰리톨, 쓰레이톨, 소르비톨 및 글리세롤을 포함하지만, 이들로만 제한되지 않는다. 당 산의 비-제한적인 예는 L-글루코네이트이다. 특정한 예시적인 당은 트레할로오스 및 글라이신을 포함하지만, 이들로만 제한되지 않는다. 특정한 구체예에서, 당은 0.5% 내지 9.5%의 농도로 제공된다. 특정한 구체예에서, 당은 1% 자당이다. 특정한 구체예에서, 당은 5.0% 소르비톨이다.

특정한 구체예에서, 이 조성물은 적어도 하나의 계면활성제를 추가로 포함한다. 본원에 사용된 바와 같이, 용어 "계면활성제"는 소수성 부분 및 친수성 부분을 포함하는 표면-활성제를 의미한다. 계면활성제의 예는 세제 및 담즙산 염을 포함하지만, 이들로만 제한되지 않는다. 특정한 경우에, 계면활성제는 이들이 1개 이상의 하전된 그룹을 포함하는지 여부에 의존하여 음이온성, 비이온성, 양성이온성, 또는 양이온성으로서 분류된다. 비이온성 계면활성제는 비-하전된 극성 그룹을 함유하고, 어떠한 전하도 없다. 특정한 예시적인 비이온성 계면활성제는 PEG 8000를 포함하지만, 이것으로만 제한되지 않는 폴리에틸렌 글리콜 (PEG), 및 폴리소르베이트 80 (Tween^®80) 및 폴리소르베이트 20 (Tween^®20)를 포함하지만 이들로만 제한되지 않는 폴리소르베이트, 트리톤 X-100, 폴리옥시프로필렌-폴리옥시에틸렌 에스테르 (Pluronic^®), 및 NP-40를 포함하지만 이들로만 제한되지 않는다. 특정한 구체예에서, 계면활성제는 0.001% 내지 1.0%의 농도로 제공된다. 특정한 구체예에서, 계면활성제는 0.003% 내지 0.3%의 농도로 제공된다. 특정한 구체예에서, 계면활성제는 0.01%의 농도로 제공된다. 특정한 구체예에서, 계면활성제는 계면활성제의 임계적 미셀 농도 (CMC) 미만의 레벨로 제공된다. 특정한 그러한 구체예에서, 이 조성물은 인간 IL-1R1에 대한 인간 단클론성 항체 및 폴리소르베이트 20을 포함하고, 이는 0.007%의 CMC를 갖고, 폴리소르베이트 20의 농도는 0.004%이다. 특정한 구체예에서, 계면활성제는 계면활성제의 CMC 이상의 레벨로 제공된다. 특정한 그러한 구체예에서, 이 조성물은 RANKL-1 및 폴리소르베이트 20을 포함하고, 이는 0.007%의 CMC를 갖고, 폴리소르베이트 20의 농도는 0.01%이다.

특정한 구체예에서, 적어도 하나의 특이적 결합제, 적어도 하나의 안정화제, 및 완충제를 포함하는 조성물은 적어도 하나의 특이적 결합제의 안정화를 제공한다. 특정한 구체예에서, 특이적 결합제는 RANKL에 대한 특이적 결합제, TNF에 대한 특이적 결합제, 및/또는 IL-1R1에 대한 특이적 결합제이다. 특정한 구체예에서, 특이적 결합제는 RANKL에 대한 특이적 결합제이고, 여기서 RANKL에 대한 특이적 결합제는 RANKL에 특이적으로 결합하는 항체이다. 특정한 구체예에서, 항체는 αRANKL-1이다. 특정한 구체예에서, 특이적 결합제는 TNF에 대한 특이적 결합제이고, 여기서 TNF에 대한 특이적 결합제는 가용성 TNF 수용체이다. 특정한 구체예에서, 가용성 TNF 수용체는 sTNFR:Fc이다. 특정한 구체예에서, 특이적 결합제는 IL-1R1에 대한 특이적 결합제이고, 여기서 IL-1R1에 대한 특이적 결합제는 IL-1R1에 특이적으로 결합하는 항체이다. 특정한 구체예에서, 항체는 미국 특허 공고 제2004/0097712호에 기재된 바의 15C4, 26F5 및 27F2로부터 선택된다. 특정한 구체예에서, 이 조성물은 더 적은 수의 집합체 및/또는 이량체의 형성에 관한 안정화를 제공한다. 특정한 구체예에서, 이 조성물은 더 적은 수의 화학적으로 변경된 형태의 형성에 관한 안정화를 제공한다.

특정한 구체예에서, 샘플 내에서 특정 단백질 분자의 집합체화 및/또는 화학적으로 변경된 형태의 존재 또는 그 정도는 예를 들면, 겔 여과 크로마토그래피로서 공지되기도 한 크기 배제 크로마토그래피 (SEC) 또는 분자체 크로마토그래피와 같이 당업계에 공지된 적합한 방법에 의해 결정될 수 있다. 특정한 구체예에서, 샘플 내에서 집합체 및/또는 화학적으로 변경된 형태를 결정하기에 적합한 방법은 비-변성 조건 하의 겔 전기이동이다. "겔"은 아가로스 또는 중합된 아크릴아미드와 같은 중합체와 물의 매트릭스를 의미한다. 이들 방법은 겔의 공극의 크기에 비교하여 분자의 크기에 기초하여 분자들을 분리한다. 집합체화 및/또는 화학적으로 변경된 형태를 측정하는 특정한 다른 방법은 소수성 상호작용 크로마토그래피 (HIC) 및 고성능 액체 크로마토그래피 (HPLC)를 포함하지만, 이들로만 제한되지 않는다. HPLC는 흡착, 이온 교환, 크기 배제, HIC, 또는 역상 크로마토그래피 중의 어느 하나에 기초한 분리를 제공한다. HIC는 매트릭스 상에서 단백질의 소수성 모이어티와 불용성의 고정된 소수성 그룹 사이의 이들의 표면 소수성에 기초하여 네이티브 단백질을 분리한다. 일반적으로, 높은 염 완충액에서 단백질 제조는 HIC 칼럼 상에 하중된다. 완충액 중의 염은 물 분자와 상호 작용하여 용액 중의 단백질의 용매화를 감소시키고, 그에 따라 다음으로 매트릭스 상의 소수성 그룹에 의해 흡착되는 단백질에서 소수성 영역을 노출시킨다. 분자가 더 소수성일수록, 결합을 촉진시키기 위해 더 적은 염이 필요하다. 보편적으로, 감소되는 염 구배는 컬럼으로부터 단백질을 용출시키기 위해 사용된다. 이온 강도가 감소함에 따라, 단백질의 친수성 영역의 노출이 증가하고 단백질은 소수성을 증가시키는 순서로 컬럼으로부터 용출한다. 문헌[예를 들면, Prptein Purification, 2d Ed., Springer-Verlag, New York, 176-179 (1988)] 참조. 특정한 구체예에서, 분리는 고해상도 칼럼의 사용 및 감소된 칼럼 지체 시간을 통해 개선된다. 문헌[예를 들면, Chicz et al., Methods in Enzymology 182, pp. 392-421 (1990)] 참조. 단백질 안정성을 모니터링하는 추가의 예시적인 방법은 문헌 [Lee, V., ed. Peptid and Protein Drug Delivery (Marcel Dekker, Inc., New York, New York, 1991)]에서 발견되었다. 특정한 구체예에서, 단백질 안정성은 특정한 시간 동안 특정한 온도에서 측정된다. 특정한 구체예에서, RANKL에 대한 특이적 결합제, TNF에 대한 특이적 결합제, 및/또는 IL-1R1에 대한 특이적 결합제는 실온 (21℃ 내지 29℃)에 저장된 조성물에서 안정화된다. 예시적인 저장 시간은 적어도 1개월, 적어도 3개월, 적어도 6개월, 적어도 9개월, 적어도 12개월, 적어도 18개월, 및 적어도 24개월을 포함하지만, 이들로만 제한되지 않는다. 특정한 구체예에서, RANKL에 대한 특이적 결합제, TNF에 대한 특이적 결합제, 및/또는 IL-1R1에 대한 특이적 결합제는 2℃ 내지 8℃에 저장된 조성물에서 안정화된다. 예시적인 저장 시간은 적어도 6개월, 적어도 9개월, 적어도 12개월, 적어도 18개월, 및 적어도 24개월을 포함하지만, 이들로만 제한되지 않는다.

특정한 구체예에서, RANKL에 대한 특이적 결합제, TNF에 대한 특이적 결합제, 및/또는 IL-1R1에 대한 특이적 결합제는 액체 제약 조성물로서 제조되고, 정제되고, 제형화된다. 특정한 구체예에서, 제조 및 정제 후, RANKL에 대한 특이적 결합제, TNF에 대한 특이적 결합제, 및/또는 IL-1R1에 대한 특이적 결합제는 제형화 전에 저장된다. 특정한 그러한 구체예에서, RANKL에 대한 특이적 결합제, TNF에 대한 특이적 결합제, 및/또는 IL-1R1에 대한 특이적 결합제는 예를 들면, -20℃ 이하에서 동결된다. 특정한 그러한 구체예에서, RANKL에 대한 특이적 결합제, TNF에 대한 특이적 결합제, 및/또는 IL-1R1에 대한 특이적 결합제는 추가의 제형화를 위해 실온에서 해동된다. 특정한 구체예에서, 액체 약제학적 제형은 치료적으로 효과적인 양의 RANKL에 대한 특이적 결합제, TNF에 대한 특이적 결합제, 및/또는 IL-1R1에 대한 특이적 결합제를 포함한다. 특정한 구체예에서, 제형화에서 제형될 RANKL에 대한 특이적 결합제, TNF에 대한 특이적 결합제, 및/또는 IL-1R1에 대한 특이적 결합제의 양은 예를 들면, 투여 경로 및 바람직한 복용량 부피에 좌우되어 당업계의 숙련자들에 의해 결정될 것이다. 특정한 구체예에서, 약제학적 제형은 RANKL에 대한 특이적 결합제를 1 mg/ml 내지 150 mg/ml의 농도로 포함한다. 특정한 그러한 구체예에서, RANKL에 대한 특이적 결합제는 RANKL에 특이적으로 결합하는 항체이다. 특정한 구체예에서, 항체는 αRANKL-1이다. 특정한 구체예에서, 약제학적 제형은 TNF에 대한 특이적 결합제를 1 mg/ml 내지 150 mg/ml의 농도로 포함한다. 특정한 그러한 구체예에서, TNF에 대한 특이적 결합제는 가용성 TNF 수용체이다. 특정한 구체예에서, 가용성 TNF 수용체는 sTNFR:Fc이다. 특정한 구체예에서, 약제학적 제형은 IL-1R1에 대한 특이적 결합제를 1 mg/ml 내지 200 mg/ml의 농도로 포함한다. 특정한 그러한 구체예에서, IL-1R1에 대한 특이적 결합제는 IL-1R1에 특이적으로 결합하는 항체이다. 특정한 구체예에서, 항체는 미국 특허 공고 제2004/0097712호에 기재된 바의 15C4, 26F5, 및 27F2로부터 선택된다. 특정한 구체예에서, 약제학적 제형은 치료적으로 효과적인 양의 RANKL에 대한 특이적 결합제 및 제형의 pH를 6.6 미만으로 유지하는 완충액을 포함한다. 특정한 구체예에서, 완충액은 제형의 pH를 4.5 내지 5.5로 유지한다. 특정한 그러한 구체예에서, 완충액은 제형의 pH를 5.2로 유지한다. 특정한 구체예에서, 약제학적 제형은 치료적으로 효과적인 양의 IL-1R1에 대한 특이적 결합제 및 제형의 pH를 6.6 미만으로 유지하는 완충액을 포함한다. 특정한 구체예에서, 완충액은 제형의 pH를 4.5 내지 5.5로 유지한다. 특정한 그러한 구체예에서, 완충액은 제형의 pH를 5.0으로 유지한다. 특정한 구체예에서, 약제학적 제형은 치료적으로 효과적인 양의 TNF에 대한 특이적 결합제 및 제형의 pH를 5.5 내지 6.5로 유지하는 완충액을 포함한다. 특정한 구체예에서, 완충액은 제형의 pH를 6.3으로 유지한다.

특정한 구체예에서, 항체 및 가용성 폴리펩티드를 포함하지만 이들로만 제한되지 않고, 특정 단백질에 결합하고, 다른 결합 화합물과 블록 상호 작용하는 특이적 결합제는 치료 용도를 가질 수 있다. 본 출원에서, 질병 또는 상태를 치료하기 위해 항체 및 가용성 폴리펩티드의 사용을 고찰하는 경우, 그러한 사용은 항체 또는 가용성 폴리펩티드를 포함하는 조성물의 사용; 및/또는 항체 또는 가용성 폴리펩티드 및 1개 이상의 추가의 활성 성분을 포함하는 병용 요법을 포함한다. 항체 또는 가용성 폴리펩티드가 질병 또는 상태를 "치료"하기 위해 사용되는 경우, 그러한 치료는 질병 또는 상태의 예방을 포함하거나 또는 포함할 수 없다.

특정한 구체예에서, 항체 또는 가용성 폴리펩티드를 포함하지만, 이들로만 제한되지 않는 특이적 결합제가 단독으로 투여된다. 특정한 구체예에서, 항체 또는 가용성 폴리펩티드는 적어도 하나의 다른 치료제의 투여 전에 투여된다. 특정한 구체예에서, 항체 또는 가용성 폴리펩티드는 적어도 하나의 다른 치료제의 투여와 동시에 투여된다. 특정한 구체예에서, 항체 또는 가용성 폴리펩티드는 적어도 하나의 다른 치료제의 투여에 후속하여 투여된다. 예시적인 치료제는 적어도 하나의 암 치료제를 포함하지만, 이것으로만 제한되지 않는다. 예시적인 암 치료제는 방사선 요법 및 화학요법을 포함하지만, 이들로만 제한되지 않는다.

특정한 구체예에서, 특이적 결합제, 예, 항체 또는 가용성 폴리펩티드를 포함하는 제약 조성물은 병용 요법으로, 즉, 다른 작용제들과 조합하여 투여될 수 있다. 예시적인 작용제는 시험관내 합성으로 제조된 화학적 조성물, 항체, 항원 결합 영역, 방사성 핵종, 및 이들의 조합물 및 콘주게이트를 포함하지만, 이들로만 제한되지 않는다. 특정한 구체예에서, 일 작용제는 아고니스트, 길항제, 알로스테릭 조절자, 또는 독소로서 작용할 수 있다. 특정한 구체예에서, 일 작용제는 그의 표적 (예, 수용체 또는 효소 활성화 또는 억제)을 억제하거나 또는 자극하도록 작용할 수 있고, 그에 따라 세포 사멸을 촉진시키거나 또는 세포 성장을 막을 수 있다. 특정한 구체예에서, 병용 요법은 적어도 하나의 항-안지오겐성 작용제와 조합하여 RANKL에 대한 특이적 결합제, TNF에 대한 특이적 결합제, 및/또는 IL-1R1에 대한 특이적 결합제를 포함한다. 특정한 구체예에서, RANKL에 대한 특이적 결합제는 RANKL에 특이적으로 결합하는 항체이다. 특정한 구체예에서, 항체는 αRANKL-1이다. 특정한 구체예에서, TNF에 대한 특이적 결합제는 가용성 TNF 수용체이다. 특정한 구체예에서, 가용성 TNF 수용체는 sTNFR:Fc이다. 특정한 구체예에서, IL-1R1에 대한 특이적 결합제는 IL-1R1에 특이적으로 결합하는 항체이다. 특정한 구체예에서, 항체는 미국 특허 공고 제2004/0097712호에 기재된 바의 15C4, 26F5 및 27F2로부터 선택된다.

예시적인 화학요법 치료는 질소 머스터드를 포함하지만, 이것으로만 제한되지 않는 알킬화제; 니트로소우레아를 포함하지만, 이들로만 제한되지 않는 알킬화제; 에틸렌이민/메틸멜라민; 알킬 설포네이트; 항대사물질; 피리미딘 유사체; 푸린 유사체; 세포분열저지성 약물, 빈카 알카로이드, 포도필로톡신을 포함하지만, 이들로만 제한되지 않는 천연 산물; 항생제; 효소; 생물학적 반응 개질제; 백금 배위 착물을 포함하지만, 이것으로만 제한되지 않는 여러 다양한 작용제; 안트라센디온; 치환된 요소; 메틸히드라진 유도체; 부신 피질 억제제; 호르몬 및 길항질을 포함하지만, 이들로만 제한되지 않는 항종양성 작용제를 포함하지만, 이것으로만 제한되지 않는다.

RANKL에 대한 특이적 결합제, TNF에 대한 특이적 결합제, 및/또는 IL-1R1에 대한 특이적 결합제와 함께 투여될 수 있는 예시적인 암 치료법은 표적화된 치료법을 포함하지만, 이것으로만 제한되지 않는다. 표적화된 치료법의 예는 치료 항체의 사용을 포함하지만, 이것으로만 제한되지 않는다. 예시적인 치료 항체는, 생쥐, 생쥐-인간 키메라, CDR-그라프트된, 인간화된 및 완전 인간 항체, 및 항체 라이브러리를 선별함으로써 선택된 것들을 포함하지만, 이것들로만 제한되지 않는 합성 항체를 포함하지만, 이들로만 제한되지 않는다. 예시적인 항체는 세포 표면 단백질 Her2, CDC20, CDC33, 뮤신-형 당단백질, VEGF, 및 종양 세포 상에 존재하는 상피 성장 인자 수용체 (EGFR)에 결합하고, 임의로 이들 단백질을 나타내는 종양 세포에 대한 세포 증식 억제 및/또는 세포독성 효과를 유도하는 것들을 포함하지만, 이들로만 제한되지 않는다.

특정한 구체예에서, 암 치료제는 신생혈관생성을 억제하는 항혈관생성제이다. 특정한 구체예에서, 암 치료제는 신생혈관생성 억제제이다.

특정한 구체예에서, RANKL에 대한 특이적 결합제, TNF에 대한 특이적 결합제, 및/또는 IL-1R1에 대한 특이적 결합제는 암 치료제에 의한 치료 전에, 그와 동시에, 및 그에 후속하여 투여될 수 있다. 특정한 구체예에서, RANKL에 대한 특이적 결합제, TNF에 대한 특이적 결합제, 및/또는 IL-1R1에 대한 특이적 결합제는 전이성 암에 의한 골 손실의 시작을 방지하거나 또는 완화시키기 위해 예방적으로 투여될 수 있다. 특정한 구체예에서, RANKL에 대한 특이적 결합제, TNF에 대한 특이적 결합제, 및/또는 IL-1R1에 대한 특이적 결합제는 전이로 인한 골 손실의 현재 상태를 치료하기 위해 투여될 수 있다.

예시적인 암은 유방암, 대장암, 위 암종, 신경교종, 머리 및 목의 편평 상피 세포 암종, 유전적 및 산발적 유두 신장 암종, 백혈병, 림프종, 리프라우메니 증후군, 악성 늑막 중피종, 흑색종, 다발성 골수종, 비-소세포 폐 암종, 골육종, 난소암, 췌장암, 전립선암, 소세포 폐암, 활액막 육종, 갑상선 암종, 및 요도의 전이성 세포 암종을 포함하지만, 이들로만 제한되지 않는다.

특정한 구체예에서, RANKL에 대한 특이적 결합제, TNF에 대한 특이적 결합제, 및/또는 IL-1R1에 대한 특이적 결합제는 암의 치료를 위해 단독으로 또는 적어도 하나의 추가의 치료제와 함께 투여될 수 있다. 특정한 구체예에서, RANKL에 대한 특이적 결합제, TNF에 대한 특이적 결합제, 및/또는 IL-1R1에 대한 특이적 결합제는 치료적으로 효과적인 양의 추가의 치료제와 함께 사용된다.

특정한 구체예에서, RANKL에 대한 특이적 결합제, TNF에 대한 특이적 결합제, 및/또는 IL-1R1에 대한 특이적 결합제는 다양한 암을 치료하기 위해 1개 이상의 특정 치료제와 함께 사용된다. 특정한 구체예에서, RANKL에 대한 특이적 결합제, TNF에 대한 특이적 결합제, 및/또는 IL-1R1에 대한 특이적 결합제는 말라리아를 치료하거나 또는 예방하기 위해 1개 이상의 특정 치료제와 함께 사용된다. 특정한 구체예에서, RANKL에 대한 특이적 결합제, TNF에 대한 특이적 결합제, 및/또는 IL-1R1에 대한 특이적 결합제는 증식성의 당뇨 망막병증을 치료하거나 또는 예방하기 위해 1개 이상의 특정 치료제와 함께 사용된다. 특정한 구체예에서, 치료의 상태 및 바람직한 수준의 견지에서, 2개, 3개 또는 그 이상의 작용제가 투여될 수 있다. 특정한 구체예에서, 그러한 작용제는 동일한 제형에 포함시킴으로써 함께 제공될 수 있다. 특정한 구체예에서, 그러한 작용제 및 RANKL에 대한 특이적 결합제, TNF에 대한 특이적 결합제, 및/또는 IL-1R1에 대한 특이적 결합제는 동일한 제형 내에 포함시킴으로써 함께 제공될 수 있다. 특정한 구체예에서, 그러한 작용제는 개별적으로 제형될 수 있고, 치료 키트에 포함시킴으로써 함께 제공될 수 있다. 특정한 구체예에서, 그러한 작용제 및 RANKL에 대한 특이적 결합제, TNF에 대한 특이적 결합제, 및/또는 IL-1R1에 대한 특이적 결합제는 개별적으로 제형될 수 있고, 치료 키트에 포함시킴으로써 함께 제공될 수 있다. 특정한 구체예에서, 그러한 작용제는 개별적으로 제공될 수 있다. 특정한 구체예에서, 유전자 치료법에 의해 투여되는 경우, 유전자 인코딩 단백질 작용제 및/또는 RANKL에 대한 특이적 결합제, TNF에 대한 특이적 결합제, 및/또는 IL-1R1에 대한 특이적 결합제는 동일한 벡터 내에 포함될 수 있다. 특정한 구체예에서, 유전자 인코딩 단백질 작용제 및/또는 RANKL에 대한 특이적 결합제, TNF에 대한 특이적 결합제, 및/또는 IL-1R1에 대한 특이적 결합제는 동일한 프로모터 영역의 조절 하에 존재할 수 있다. 특정한 구체예에서, 유전자 인코딩 단백질 작용제 및/또는 RANKL에 대한 특이적 결합제, TNF에 대한 특이적 결합제, 및/또는 IL-1R1에 대한 특이적 결합제는 별개의 벡터 내에 존재할 수 있다.

상기 약물 치료 또는 병용 요법에 대한 개개의 환자들의 반응은 변화할 수 있고, 각각의 환자에 대한 약물의 적절한 효능있는 조합은 그 또는 그녀의 주치의에 의해 결정될 수 있음을 이해해야 한다.

특정한 구체예에서, RANKL에 대한 특이적 결합제, TNF에 대한 특이적 결합제, 및/또는 IL-1R1에 대한 특이적 결합제를 약제학적으로 허용되는 희석제, 담체, 가용화제, 유화제, 보존제 및/또는 보조제와 함께 포함하는 제약 조성물이 제공된다.

특정한 구체예에서, RANKL에 대한 특이적 결합제, TNF에 대한 특이적 결합제, 및/또는 IL-1R1에 대한 특이적 결합제 및 치료적으로 효과적인 양의 적어도 하나의 추가의 치료제를 약제학적으로 허용되는 희석제, 담체, 가용화제, 유화제, 보존제 및/또는 보조제와 함께 포함하는 제약 조성물이 제공된다.

특정한 구체예에서, RANKL에 대한 특이적 결합제, TNF에 대한 특이적 결합제, 및/또는 IL-1R1에 대한 특이적 결합제 및 적어도 하나의 세린 프로테아제 억제제를 포함하는 치료법, 및 그러한 치료법을 사용한 치료 방법이 제공된다. 특정한 구체예에서, 하나의 치료법은 RANKL에 대한 특이적 결합제, TNF에 대한 특이적 결합제, 및/또는 IL-1R1에 대한 특이적 결합제, 세린 프로테아제 억제제, 및 본원에 기재된 적어도 하나의 추가의 작용제를 포함한다.

특정한 경우에, 프로테아제/프로테아제 억제제 밸런스의 장애는 전이로 유도되는 정상 조직의 종양 침습을 포함하지만, 이것으로만 제한되지 않는 프로테아제 매개된 조직 파괴를 유도할 수 있다.

특정한 구체예에서, RANKL에 대한 특이적 결합제, TNF에 대한 특이적 결합제, 및/또는 IL-1R1에 대한 특이적 결합제는 염증에 대한 적어도 하나의 치료제와 함께 사용될 수 있다. 특정한 구체예에서, RANKL에 대한 특이적 결합제, TNF에 대한 특이적 결합제, 및/또는 IL-1R1에 대한 특이적 결합제는 면역 질환을 위한 적어도 하나의 치료제와 함께 사용될 수 있다. 염증을 위한 특정한 예시적인 치료제는 문헌[예, C.A. Dinarello and L.L. Moldawer Proinflammatory and Anti -inflammatory Cytokines in Rheumatoid Arthritis : A Primer for Clinicians Third Edition (2001) Amgen Inc. Thousand Oaks, CA]에 기재되어 있다.

특정한 구체예에서, 제약 조성물은 1개 이상의 상이한 RANKL에 대한 특이적 결합제, TNF에 대한 특이적 결합제, 및/또는 IL-1R1에 대한 특이적 결합제를 포함한다. 특정한 그러한 구체예에서, 1개 이상의 RANKL에 대한 특이적 결합제는 1개 이상의 에피토프에 결합한다. 특정한 그러한 구체예에서, 1개 이상의 TNF에 대한 특이적 결합제는 1개 이상의 에피토프에 결합한다. 특정한 그러한 구체예에서, 1개 이상의 IL-1R1에 대한 특이적 결합제는 1개 이상의 에피토프에 결합한다.

특정한 구체예에서, 1개 이상의 RANKL에 대한 특이적 결합제, 1개 이상의 TNF에 대한 특이적 결합제, 및/또는 1개 이상의 IL-1R1에 대한 특이적 결합제를 포함하는 액체 조성물이 수용액 또는 비수성 용액으로서 또는 환자에게 후속 투여하기 위한 현탁액으로서 제조된다.

특정한 구체예에서, 조성물을 위한 물질은 사용된 복용량 및 농도에서 수혜자들에게 비독성이다.

특정한 구체예에서, 제약 조성물은 예를 들면, 조성물의 pH, 삼투압농도, 점성, 투명도, 색, 등장성, 냄새, 멸균성, 안정성, 해리 또는 방출 속도, 흡착 또는 침투를 변경, 유지 및 보존하기 위한 제형 물질을 함유한다. 예시적인 제형 물질은 오일, 비타민, 염, 아미노산 (비극성 아미노산 (알라닌, 발린, 류신, 이소류신, 프롤린, 메티오닌, 페닐알라닌, 또는 트립토판을 포함하지만 이들로만 제한되지 않음)을 포함하지만, 이들로만 제한되지 않음); 항균제; 항산화제 (아스코르브산, 아황산 나트륨 또는 아황산수소나트륨을 포함하지만, 이들로만 제한되지 않음); 완충액 (아세테이트, 히스티딘, 포스페이트, 시트레이트, 또는 프로피오네이트를 포함하지만, 이들로만 제한되지 않음); 벌크제 (만니톨 또는 글리세린을 포함하지만, 이들로만 제한되지 않음); 킬레이트제 (에틸렌디아민 테트라아세트산 (EDTA)을 포함하지만, 이들로만 제한되지 않음); 착물화제 (카페인, 폴리비닐피롤리돈, 베타-사이클로덱스트린 또는 하이드록시프로필-베타-사이클로덱스트린을 포함하지만, 이들로만 제한되지 않음); 충전제; 당 또는 당 알콜 (단당류, 이당류, 다당류, 또는 수용성 글리칸을 포함하지만, 이들로만 제한되지 않음); 기타 탄수화물, 예를 들면, 사카라이드 또는 글루칸 (과당, 포도당, 만노스, 소르보스, 크실로스, 말토스, 자당, 락토스, 덱스트란, 풀루란, 덱스트린, 사이클로덱스트린, 가용성 전분, 하이드록시에틸 전분, 카르복시메틸셀룰로스, 또는 이들의 혼합물을 포함하지만, 이들로만 제한되지 않음); 당 알콜 (만니톨 또는 소르비톨을 포함하지만, 이들로만 제한되지 않음); 단백질 (혈청 알부민, 젤라틴 또는 이뮤노글로불린을 포함하지만, 이들로만 제한되지 않음); 착색제, 풍미제 및 희석제; 유화제; 친수성 중합체 (평균 분자량이 2,000 내지 3,000인 폴리비닐피롤리돈을 포함하지만, 이것으로만 제한되지 않는 폴리비닐피롤리돈, 또는 평균 분자량이 3,000 내지 5,000인 폴리에틸렌 글리콜을 포함하지만, 이것으로만 제한되지 않는 폴리에틸렌 글리콜을 포함하지만, 이들로만 제한되지 않음); 저분자량 폴리펩티드; 염-형성 반대이온 (나트륨을 포함하지만, 이들로만 제한되지 않음); 방부제 (벤잘코늄 클로라이드, 벤조산, 살리실산, 티메로살, 페네틸 알콜, 메틸파라벤, 프로필파라벤, 클로로헥시딘, 소르빈산 또는 과산화수소를 포함하지만, 이들로만 제한되지 않음); 용매 (글리세린 또는 프로필렌 글리콜을 포함하지만, 이들로만 제한되지 않음); 현탁제; 계면활성제 또는 보습제 (폴리옥시프로필렌-폴리옥시에틸렌 에스테르 (Pluronic^®), PEG, 소르비탄 에스테르, 폴리소르베이트 20, 폴리소르베이트 80을 포함하지만, 이들로만 제한되지 않는 폴리소르베이트, 트리톤, 트로메타민, 리시틴, 콜레스테롤, 틸록사팔을 포함하지만, 이들로만 제한되지 않음); 안정화제 (비극성 아미노산을 포함하지만, 이것으로만 제한되지 않음); 강장 증진제 (알칼리금속 할로겐화물, 예를 들면, 염화나트륨 또는 염화칼륨, 만니톨 소르비톨을 포함하지만, 이들로만 제한되지 않음); 전달 비히클; 희석제; 부형제 및/또는 약제학적 보조제를 포함하지만, 이들로만 제한되지 않는다. (Remington's Pharmaceutical Sciences, 18^th Edition, A.R. Gennaro, ed., Mack Publishing Company (1990).

특정한 구체예에서, RANKL에 대한 특이적 결합제, TNF에 대한 특이적 결합제, 및/또는 IL-1R1에 대한 특이적 결합제는 당업계에 공지된 반감기 연장 비히클에 링크된다. 그러한 비히클은 Fc 도메인, 폴리에틸렌 글리콜 (PEG), 폴리옥시에틸화된 폴리올, 및 덱스트란를 포함하지만, 이들로만 제한되지 않는다. 그러한 비히클 및 방법은 문헌[예, 미국 특허 제4,179,337호; 동 제4,495,285호; 동 제 4,609,546호; 동 제4,766,106호; 동 제6,660,843호; 및 공개된 PCT 출원 WO 99/25044]에 기재되어 있다. 특정한 경우에, PEG는 실온에서 물에 가용성이고 일반식: R(O-CH₂-CH₂)_nO-R을 갖고 여기서 R은 수소, 또는 알킬 또는 알카노일 그룹을 포함하지만, 이들로만 제한되지 않는 보호 그룹이고, "n"은 양의 정수이다. 특정한 구체예에서, 보호 그룹은 1 내지 8개의 탄소를 갖는다. 특정한 그러한 구체예에서, 보호 그룹은 메틸이다. 특정한 구체예에서, "n"은 1 내지 1,000이다. 특정한 구체예에서, PEG는 1,000 내지 40,000의 평균 분자량을 갖는다. 본원에 고찰된 그들 범위 및 임의의 범위는 종말점 및 종말점들 사이의 모든 값을 포함한다. 특정한 구체예에서, PEG는 적어도 하나의 하이드록시 그룹을 갖는다. 특정한 그러한 구체예에서, 하이드록시 그룹은 말단 하이드록시 그룹이다. 특정한 그러한 구체예에서, 말단 하이드록시 그룹은 공유적으로 콘주게이트된 분자를 형성하도록 RANKL에 대한 특이적 결합제, TNF에 대한 특이적 결합제, 및/또는 IL-1R1에 대한 특이적 결합제 상의 유리 아미노 그룹과 반응하도록 N-하이드록시숙신이미드에 의해 활성화된다. 특정한 구체예에서, 반응성 그룹의 타입 및 양은 공유적으로 콘쥬게이트된 PEG/특이적 결합제를 달성하도록 변화될 수 있다. 콘쥬게이트된 PEG 분자의 제조는 당업계의 기술에서 이루어진다.

특정한 구체예에서, 반감기 연장 비히클은 폴리옥시에틸화된 폴리올이다. 예시적인 폴리옥시에틸화된 폴리올은 폴리옥시에틸화된 소르비톨, 폴리옥시에틸화된 글루코스, 및 폴리옥시에틸화된 글리세롤 (POG)을 포함하지만, 이들로만 제한되지 않는다. 특정한 구체예에서, POG는 1,000 내지 40,000의 평균 분자량을 갖는다. 본원에 기재된 그 범위 및 임의의 범위는 종말점 및 종말점들 사이의 모든 값을 포함한다. POG의 특정한 예시적인 구조물은 예를 들면, 문헌[Knauf et al., J. Biol. Chem. 263:15064-15070 (1988)]에서 발견된다. 특정한 예시적인 POG 콘쥬게이트는 예를 들면, 미국 특허 제4,766,106호에서 발견된다.

특정한 구체예에서, 최적의 제약 조성물은 예를 들면, 의도된 투여 경로, 전달 방식 및 바람직한 복용량에 따라 당업계의 숙련자에 의해 결정될 것이다. 문헌 [예를 들면, Remington's Phamaceutical Sciences, Supra] 참조. 특정한 구체예에서, 그러한 조성물은 본 발명의 항체의 물리적 상태, 안정성, 생체내 방출 속도 및 생체내 클리어런스 속도에 영향을 미칠 수 있다.

특정한 구체예에서, 제약 조성물 중의 기본 비히클 또는 담체는 본래 수성이다. 예를 들면, 특정한 구체예에서, 적합한 비히클 또는 담체는 주사용 물, 생리적 염수 용액 또는 인공 뇌척수액일 수 있고, 가능하게는 비경구 투여용 조성물에서 통상적인 다른 물질로 보충된다. 특정한 구체예에서, 비히클 또는 담체는 살균된다. 특정한 구체예에서, 추가의 성분이 포함된다. 예시적인 추가의 성분은 고정된 오일; 폴리에틸렌 글리콜; 글리세린; 프로필렌 글리콜 및 기타 합성 용매; 벤질 알콜 및 메틸 파라벤을 포함하지만 이들로만 제한되지 않는 항균제; 아스코르브산 및 이황화 나트륨을 포함하지만, 이들로만 제한되지 않는 항산화제; 및 에틸렌디아민테트라아세트산을 포함하지만, 이것으로만 제한되지 않는 킬레이트제를 포함하지만, 이들로만 제한되지 않는다. 특정한 구체예에서, 중성 완충 염수 또는 혈청 알부민과 혼합된 염수가 추가의 예시적인 비히클이다. 특정한 구체예에서, 제약 조성물은 약 pH 7.0 내지 8.5의 트리스 완충액, 또는 약 pH 5.0 내지 5.5의 아세테이트 완충액, 또는 약 pH 5.0 내지 5.5의 글루타메이트 완충액, 또는 약 pH 5.0 내지 5.5의 석시네이트 완충액, 또는 약 pH 5.0 내지 5.5의 히스티딘 완충액, 또는 약 pH 5.0 내지 5.5의 아스파테이트 완충액, 또는 약 pH 6.0 내지 6.5의 포스페이트 완충액을 포함하고, 이들은 자당, 소르비톨 또는 적합한 치환체를 추가로 포함한다. 특정한 구체예에서, 제약 조성물은 자체완충되고 있다. 문헌[예, 2006년 12월 28일자로 공개된 국제 특허 출원 제 PCT/US2006/022599호] 참조. 특정한 구체예에서, 적어도 하나의 추가의 치료제의 존재 또는 부재 하에 RANKL에 대한 특이적 결합제, TNF에 대한 특이적 결합제, 및/또는 IL-1R1에 대한 특이적 결합제를 포함하는 조성물은 수용액 형태의 임의의 제형화제 (Remington's Pharmaceutical Sciences, supra) 와 더불어 바람직한 순도를 갖는 선택된 조성물을 혼합함으로써 저장을 위해 제조될 수 있다. 특정한 구체예에서, 제약 조성물은 용기 내에 봉입된다. 예시적인 용기는 앰플, 재충전에 적합한 일회용 주사기를 포함하지만, 이것으로만 제한되지 않는 일회용 주사기, 및 유리 또는 플라스틱으로 제조된 다중 용량형 바이알을 포함하지만, 이들로만 제한되지 않는다. 특정한 구체예에서, RANKL에 대한 특이적 결합제, TNF에 대한 특이적 결합제, 및/또는 IL-1R1에 대한 특이적 결합제를 포함하는 조성물은 미리 충전된 주사기에 함유된다. 특정한 구체예에서, RANKL에 대한 특이적 결합제는 RANKL에 특이적으로 결합하는 항체이다. 특정한 구체예에서, 항체는 αRANKL-1이다. 특정한 구체예에서, TNF에 대한 특이적 결합제는 가용성 TNF 수용체이다. 특정한 구체예에서, 가용성 TNF 수용체는 sTNFR:Fc이다. 특정한 구체예에서, IL-1R1에 대한 특이적 결합제는 IL-1R1에 특이적으로 결합하는 항체이다. 특정한 구체예에서, 항체는 미국 특허 공고 제2004/0097712호에 기재된 바와 같이 15C4, 26F5 및 27F2로부터 선택된다. 재충전을 위해 적합한 예시적인 주사기는 예를 들면, U.S. 특허 제5,607,400호에 기재되어 있다. 재충전을 위해 적합한 주사기는 여러 소스, 예를 들면, Daikyo Seiko, Ltd (Tokyo, Japan), Becton-Dickinson (Franklin Lakes, NJ), 번더(Bunder) 유리 (Dusseldorf, Germany), 및 Schott-Forma Vitrum (Lebanon, PA)로부터 입수할 수 있다.

특정한 구체예에서, 제약 조성물은 비경구적 전달을 위해 선택될 수 있다. 예시적인 비경구적 전달은 정맥내, 근육내, 피내, 또는 피하 투여를 포함하지만, 이들로만 제한되지 않는다. 특정한 구체예에서, 조성물은 경구적으로 이루어지는 바와 같이 소화관을 통한 전달을 위해 선택될 수 있다. 그러한 약제학적으로 허용되는 조성물의 제조는 당업계의 기술내에서 이루어진다.

특정한 구체예에서, 제형 성분은 투여 부위에 대해 허용되는 농도로 존재한다. 특정한 구체예에서, 제약 조성물은 치료적으로 효과적인 양의 RANKL에 대한 특이적 결합제, TNF에 대한 특이적 결합제, 및/또는 IL-1R1에 대한 특이적 결합제 및 완충액를 포함한다. 특정한 구체예에서, RANKL에 대한 특이적 결합제는 RANKL에 특이적으로 결합하는 항체이다. 특정한 구체예에서, 항체는 αRANKL-1이다. 특정한 구체예에서, TNF에 대한 특이적 결합제는 가용성 TNF 수용체이다. 특정한 구체예에서, 가용성 TNF 수용체는 sTNFR:Fc이다. 특정한 구체예에서, IL-1R1에 대한 특이적 결합제는 IL-1R1에 특이적으로 결합하는 항체이다. 특정한 구체예에서, 항체는 미국 특허 공고 제2004/0097712호에 기재된 바의 15C4, 26F5 및 27F2로부터 선택된다. 특정한 구체예에서, 완충액은 생리적 pH 또는 약간 낮은 pH에서 조성물을 유지하기 위해 사용된다. 특정한 구체예에서, 완충액은 pH 5.5 내지 pH 8.0이다. 특정한 구체예에서, 완충액은 pH 5.5 내지 pH 6.5이다. 특정한 구체예에서, 완충액은 pH 4.5 내지 pH 5.5이다. 예시적인 완충액은 숙신산 또는 숙시네이트, 시트르산 또는 시트레이트, 아세트산 또는 아세테이트, 타르타르산 또는 타르트레이트, 인산 또는 포스페이트, 프로피온산 또는 프로피오네이트, 글루콘산 또는 글로코네이트, 글루탐산 또는 글루타메이트, 히스티딘, 글라이신, 아스파르트산 또는 아스파르테이트, 말레산 또는 말레에이트, 및 말산 또는 말레이트 완충액을 포함하지만, 이들로만 제한되지 않는 산 및/또는 염을 포함하지만, 이들로만 제한되지 않는다. 특정한 경우에, "염"은 산의 음이온과 반대로 하전된 이온 사이에 형성된 전기적으로-중성인 물질을 의미한다. 특정한 그러한 경우에, 반대로 하전된 이온은 "반대이온"이라 칭한다. 예시적인 반대이온은 나트륨, 칼륨, 암모늄, 칼슘 및 마그네슘을 포함하지만, 이들로만 제한되지 않는다. 특정한 구체예에서, 제형 중의 완충액의 농도는 1 mM 내지 50 mM이다. 특정한 구체예에서, 제형 중의 완충액의 농도는 5 mM 내지 30 mM이다. 특정한 구체예에서, 제형 중의 완충액의 농도는 10 mM 내지 25 mM이다. 본원에 고찰된 그들 범위 및 임의의 범위는 종말점 및 종말점들 사이의 모든 값을 포함한다. 특정한 구체예에서, 제형 중의 완충액의 농도는 10 mM이다. 특정한 구체예에서, 제형 중의 완충액의 농도는 25 mM이다.

특정한 구체예에서, 약제학적 제형은 RANKL에 대한 특이적 결합제, TNF에 대한 특이적 결합제, 및/또는 IL-1R1에 대한 특이적 결합제를 1 mg/ml 내지 200 mg/ml의 농도로 및 완충액을 포함한다. 특정한 구체예에서, 완충액은 1 mM 내지 50 mM의 농도로 존재하고, 제형의 pH는 6.6 미만이다. 특정한 그러한 구체예에서, 약제학적 제형은 RANKL에 대한 특이적 결합제를 60 mg/ml의 농도로 및 완충액을 10 mM의 농도로 포함하고, 제형의 pH는 5.2이다. 특정한 구체예에서, RANKL에 대한 특이적 결합제는 RANKL에 특이적으로 결합하는 항체이다. 특정한 구체예에서, 항체는 αRANKL-1이다. 특정한 그러한 구체예에서, 약제학적 제형은 TNF에 대한 특이적 결합제를 50 mg/ml의 농도로 및 완충액을 25 mM의 농도로 포함하고, 제형의 pH는 6.3이다. 특정한 구체예에서, TNF에 대한 특이적 결합제는 가용성 TNF 수용체이다. 특정한 구체예에서, 가용성 TNF 수용체는 sTNFR:Fc이다.

특정한 구체예에서, 약제학적 제형은 치료적으로 효과적인 양의 RANKL에 대한 특이적 결합제, TNF에 대한 특이적 결합제, 및/또는 IL-1R1에 대한 특이적 결합제 및 완충액을 포함한다. 특정한 구체예에서, 완충액은 제형의 pH를 6.6 미만으로 유지하는 농도에서 포스페이트 완충액 또는 아세테이트 완충액이다. 특정한 구체예에서, 제형의 pH는 4.0 내지 6.0이다. 용어 "포스페이트 완충액"은 인산의 염을 포함하는 완충액이다. 용어 "아세테이트 완충액"은 아세트산의 염을 포함하는 완충액이다. 특정한 구체예에서, 포스페이트 또는 아세테이트 반대이온은 나트륨이다. 특정한 그러한 구체예에서, 완충액은 인산 나트륨 또는 아세트산 나트륨이다. 다른 예시적인 반대이온은 칼륨, 암모늄, 칼슘 및 마그네슘을 포함하지만, 이들로만 제한되지 않는다. 특정한 구체예에서, 제형 중의 포스페이트 완충액 또는 아세테이트 완충액의 농도는 1 mM 내지 50 mM이다. 특정한 구체예에서, 제형 중의 포스페이트 완충액 또는 아세테이트 완충액의 농도는 5 mM 내지 30 mM이다. 특정한 구체예에서, 제형 중의 포스페이트 완충액 또는 아세테이트 완충액의 농도는 10 mM 내지 25 mM이다. 본원에 고찰된 그들 범위 및 임의의 범위는 종말점 및 종말점들 사이의 모든 값을 포함한다. 특정한 구체예에서, 제형 중의 포스페이트 완충액 또는 아세테이트 완충액의 농도는 10 mM이다. 특정한 구체예에서, 제형 중의 포스페이트 완충액 또는 아세테이트 완충액의 농도는 25 mM이다. 특정한 구체예에서, 약제학적 제형은 RANKL에 대한 특이적 결합제, TNF에 대한 특이적 결합제, 및/또는 IL-1R1에 대한 특이적 결합제를 1 mg/ml 내지 200 mg/ml의 농도로 및 완충액을 포함한다. 특정한 구체예에서, 완충액 은 포스페이트 완충액 또는 아세테이트 완충액을 1 mM 내지 50 mM의 농도로 포함하고, 제형의 pH는 6.6 미만이다. 특정한 그러한 구체예에서, 약제학적 제형은 RANKL에 대한 특이적 결합제를 60 mg/ml의 농도로 및 아세테이트 완충액을 10 mM의 농도로 포함하고, 제형의 pH는 5.2이다. 특정한 구체예에서, RANKL에 대한 특이적 결합제는 RANKL에 특이적으로 결합하는 항체이다. 특정한 구체예에서, 항체는 αRANKL-1이다. 특정한 구체예에서, 약제학적 제형은 TNF에 대한 특이적 결합제를 50 mg/ml의 농도로 및 포스페이트 완충액을 25 mM의 농도로 포함하고, 제형의 pH는 6.3이다. 특정한 그러한 구체예에서, TNF에 대한 특이적 결합제는 가용성 TNF 수용체이다. 특정한 구체예에서, 가용성 TNF 수용체는 sTNFR:Fc이다.

특정한 구체예에서, 약제학적 제형은 치료적으로 효과적인 양의 RANKL에 대한 특이적 결합제, TNF에 대한 특이적 결합제, 및/또는 IL-1R1에 대한 특이적 결합제; 완충액을 제형의 pH를 6.6 미만으로 유지하는 농도로; 및 등장성인 제형을 제공하기에 충분한 양의 등장화제를 포함한다. 특정한 구체예에서, 완충액은 포스페이트 완충액 또는 아세테이트 완충액이다. "등장성"인 제형은 270 mOsm 내지 370 mOsm의 삼투압농도를 갖는다. 특정한 구체예에서, 제형의 pH는 4.0 내지 6.0이다. 용액의 등장성을 결정하는 특정한 방법은 당업계의 숙련자들의 지식 내에 있다. [예, Setnikar et al., J. Am . Pharm . Assoc . 48:628-30 (1959)] 참조. 예시적인 등장화제는 염화 나트륨; 알라닌, 아르기닌, 발린, 및 글라이신을 포함하지만, 이들로만 제한되지 않는 아미노산; 포도당, 덱스트로스, 과당, 자당, 말토스, 만니톨, 트레할로스, 글리세롤, 소르비톨, 및 크실리톨을 포함하지만 이들로만 제한되지 않는 당 및 당 알콜(폴리올); 아세트산, 다른 유기산 또는 이들의 염, 및 비교적 소량의 시트레이트 또는 포스페이트를 포함하지만, 이들로만 제한되지 않는다. 특정한 구체예에서, 등장화제는 적어도 5%의 농도로 제공된다. 특정한 구체예에서, 등장화제는 9%의 농도로 제공되는 자당이다.

특정한 구체예에서, 약제학적 제형은 치료적으로 효과적인 양의 RANKL에 대한 특이적 결합제, TNF에 대한 특이적 결합제, 및/또는 IL-1R1에 대한 특이적 결합제; 제형의 pH를 6.6 미만으로 유지하는 농도의 완충액; 및 계면활성제를 포함한다. 특정한 구체예에서, 이 완충액은 포스페이트 완충액 또는 아세테이트 완충액이다. 특정한 구체예에서, 제형의 pH는 4.0 내지 6.0이다. 특정한 구체예에서, 계면활성제는 비이온성 계면활성제이다. 특정한 예시적인 비이온성 계면활성제는 폴리옥시에틸렌 소르비탈 에스테르 (폴리소르베이트), 폴리옥시프로필렌-폴리옥시에틸렌 에스테르 (Pluronic^®), 폴리옥시에틸렌 알콜, 시메티콘, 폴리에틸렌 글리콜, 리소포스파티딜콜린, 및 폴리옥시에틸렌-p-t-옥틸페놀을 포함하지만, 이들로만 제한되지 않는다. 특정한 예시적인 계면활성제는 PEG 8000, 폴리소르베이트 80 (Tween^®80), 및 폴리소르베이트 20 (Tween^®20)를 포함하지만, 이들로만 제한되지 않는다. 특정한 구체예에서, 계면활성제는 0.001% 내지 1.0%의 농도로 제공된다. 특정한 구체예에서, 계면활성제는 0.003% 내지 0.3%의 농도로 제공된다. 특정한 구체예에서, 계면활성제는 0.01%의 농도로 제공된다. 본원에 고찰된 그들 범위 및 임의의 범위는 종말점 및 종말점들 사이의 모든 값을 포함한다.

특정한 구체예에서, 비경구 투여가 예상되는 경우, 치료 조성물은 약제학적으로 허용되는 비히클 내에서 추가의 치료제의 존재 또는 부재 하에 바람직한 RANKL에 대한 특이적 결합제, 바람직한 TNF에 대한 특이적 결합제, 및/또는 바람직한 IL-1R1에 대한 특이적 결합제를 포함하는 발열원이 없는 비경구적으로 허용되는 수용액의 형태일 수 있다. 특정한 구체예에서, 비경구 주사용 비히클은 RANKL에 대한 특이적 결합제, TNF에 대한 특이적 결합제, 및/또는 IL-1R1에 대한 특이적 결합제가, 적어도 하나의 추가의 치료제의 존재 또는 부재 하에, 멸균성 등장 용액으로서 제형되고 적절히 보존되는 멸균 증류수이다. 특정한 구체예에서, 당해 제제는 주사 가능한 미소구, 생체-침식성 입자, 중합성 화합물 (폴리락트산 또는 폴리글리콜산 등), 비즈 또는 리포좀과 같은 작용제와 함께 바람직한 분자의 제형을 포함하고, 데포 주사를 통해 전달될 수 있는 생성물의 조절 방출 또는 지연 방출을 제공한다. 특정한 구체예에서, 히알루론산이 또한 사용될 수 있고, 지연된 순환 기간을 촉진시키는 효과를 가질 수 있다. 특정한 구체예에서, 임플란트 가능한 약물 전달 장치가 바람직한 분자를 도입하기 위해 사용될 수 있다.

추가의 제약 조성물은 지속된- 또는 조절된-전달 제형 중에서 적어도 하나의 추가의 치료제의 존재 또는 부재 하에 RANKL에 대한 특이적 결합제, TNF에 대한 특이적 결합제, 및/또는 IL-1R1에 대한 특이적 결합제에 연루된 제형을 포함하여, 당업계의 숙련자들에게 명백할 것이다. 특정한 구체예에서, 리포좀 담체, 생체-침식성 마이크로입자 또는 다공성 비즈 및 데포 주사와 같은 다양한 다른 지연된- 또는 조절된-전달 비히클의 제형 기술은 당업계의 숙련자들에게 공지되어 있다. [예를 들면, 제약 조성물의 전달을 위한 다공성 중합성 마이크로 입자의 조절된 방출을 기재하는 PCT 출원 제PCT/US93/00829호] 참조. 특정한 구체예에서, 지연-방출 제제는 성형된 입자, 예를 들면 필름 또는 마이크로캡슐 형태의 반투과성 중합체 매트릭스를 포함한다. 지연된 방출 매트릭스는 폴리에스테르, 하이드로겔, 폴리락티드 (U.S. 3,773,919 및 EP 058,481), L-글루탐산과 감마 에틸-L-글루타메이트의 공중합체 (Sidman et al ., Biocopolymers, 22:547-556 (1983)), 폴리 (2-하이드록시에틸-메타크릴레이트) (Langer et al ., J. Biomed . Mater . Res., 15:167-277 (1981) and Langer, Chem . Tech., 12:98-105 (1982)), 에틸렌 비닐 아세테이트 (Langer et al ., supra) 또는 폴리-D(-)-3-하이드록시부티르산 (EP 133,988). 특정한 구체예에서, 지연된 방출 조성물은 리포좀을 포함할 수도 있고, 이는 당업계에 공지된 임의의 여러 방법에 의해 제조될 수 있다. [예, Gabizon et al., Cancer Research 42:4734-4739 (1982); Eppstein et al ., Proc . Natl . Acad . Sci . USA, 82:3688-3692 (1985); Szoka et al., Ann . Rev . Biophys . Eng. 9:467-508 (1980); EP 036,676; EP 088,046 and EP 143,949] 참조. 특정한 구체예에서, 당업계에 공지된 약물 전달 시스템이 사용된다. 그러한 약물 전달 시스템은 문헌[예를 들면, Poznansky et al., Drug Delivery Systems , R.L. Juliano, ed., Oxford, N.Y., pp. 253-315 (1980); Poznansky et al., Pharmacol Rev. 36:277-336 (1984)]에 기재되어 있다.

생체내 투여를 위해 사용되어야 할 제약 조성물은 통상적으로 멸균된다. 특정한 구체예에서, 이는 멸균 여과막을 통해 여과함으로써 수행될 수 있다. 특정한 구체예에서, 비경구 조성물은 일반적으로 멸균 액세스 포트를 갖는 용기, 예를 들면, 정맥내 용액 백 또는 피하 주사 니들에 의해 뚫릴 수 있는 마개를 갖는 바이알 내에 배치된다. 특정한 구체예에서, 비경구 조성물은 이 조성물로 미리 충전하기에 적합한 주사기 내에 배치된다.

특정한 구체예에서, 적어도 하나의 추가의 치료제의 존재 또는 부재 하에 치료적으로 사용되어야 할 RANKL에 대한 특이적 결합제, TNF에 대한 특이적 결합제, 및/또는 IL-1R1에 대한 특이적 결합제를 포함하는 효과적인 양의 제약 조성물은 예를 들면, 치료 내용 및 대상체에 좌우될 것이다. 당업계의 숙련자는 특정한 구체예에 따라 치료를 위한 적합한 복용량 레벨이 적어도 전달된 분자에 좌우되어 변화할 것이고, 적어도 하나의 추가의 치료제의 존재 또는 부재 하에 RANKL에 대한 특이적 결합제, TNF에 대한 특이적 결합제, 및/또는 IL-1R1에 대한 특이적 결합제가 사용되고 있는 것에 대한 지시자는 투여 경로, 및 환자의 체격 (체중, 신장, 신체 표면 및/또는 장기 크기) 및/또는 상태 (연령, 신체적 상태, 및/또는 일반적 건강)임을 인식할 것이다. 특정한 구체예에서, 임상학자는 적어도 하나의 추가의 치료제의 존재 또는 부재 하에 RANKL에 대한 특이적 결합제, TNF에 대한 특이적 결합제, 및/또는 IL-1R1에 대한 특이적 결합제가 사용되고 있는 질병의 중증도 및 병력을 고려할 것이다. 특정한 구체예에서, 임상학자는 최적의 치료 효과를 획득하기 위해 복용량을 적정하거나 투여 경로를 변경할 수 있다. 특정한 구체예에서, 전형적인 복용량은 상기 인자들에 따라 약 0.1 μg/kg 내지 약 100 mg/kg 이상의 범위일 수 있다. 특정한 구체예에서, 더 큰 복용량의 RANKL에 대한 특이적 결합제, TNF에 대한 특이적 결합제, 및/또는 IL-1R1에 대한 특이적 결합제가 치료중인 환자의 체중이 증가함에 따라 사용된다. 특정한 구체예에서, 복용량은 0.1 μg/kg 내지 약 100 mg/kg; 또는 1 μg/kg 내지 약 100 mg/kg; 또는 5 μg/kg 내지 약 100 mg/kg 범위일 수 있다.

특정한 구체예에서, 복용 빈도는 RANKL에 대한 특이적 결합제, TNF에 대한 특이적 결합제, 및/또는 IL-1R1에 대한 특이적 결합제 및/또는 사용된 제형 내의 임의의 추가의 치료제의 약물 동력학적 파라메터들을 고려한다. 특정한 구체예에서, 임상학자는 바람직한 효과를 달성하는 복용량에 도달할 때까지 조성물을 투여할 것이다. 특정한 구체예에서, 조성물은 시간이 경과함에 따라 단일 복용량으로서, 또는 2개 이상의 복용량으로서 (동일한 양의 바람직한 분자를 함유할 수 있거나 또는 함유할 수 없음), 또는 이식 장치 또는 카테테르를 통한 연속 주입으로서 투여될 수 있다. 적절한 복용량의 추가의 정제는 당업계의 통상의 기술을 가진 자들에 의해 통상적으로 이루어지고, 그들에 의해 통상적으로 수행되는 업무 영역에 속한다. 특정한 구체예에서, 치료를 위해 사용된 효과적인 복용량의 RANKL에 대한 특이적 결합제, TNF에 대한 특이적 결합제, 및/또는 IL-1R1에 대한 특이적 결합제는 환자의 치료 과정에 걸쳐 증가한다. 특정한 구체예에서, 치료를 위해 사용된 효과적인 복용량의 RANKL에 대한 특이적 결합제, TNF에 대한 특이적 결합제, 및/또는 IL-1R1에 대한 특이적 결합제는 환자의 치료 과정에 걸쳐 감소한다. 특정한 구체예에서, 적절한 복용량은 적절한 복용량-반응 데이터의 사용을 통해 확실해질 수 있다.

특정한 구체예에서, 투약 레지멘은 적어도 하나의 추가의 치료제의 존재 또는 부재 하에, 1, 7, 14, 및 21일의 치료 기간에 대해 RANKL에 대한 특이적 결합제, TNF에 대한 특이적 결합제, 및/또는 IL-1R1에 대한 특이적 결합제의 치료적으로 효과적인 복용량의 초기 투여를 포함한다. 특정한 구체예에서, 투약 레지멘은 치료 기간 내에 1주당 1, 2, 3, 4, 5, 6, 및 7일에 대해 적어도 하나의 추가의 치료제의 존재 또는 부재 하에 치료적으로 효과적인 복용량의 RANKL에 대한 특이적 결합제, TNF에 대한 특이적 결합제, 및/또는 IL-1R1에 대한 특이적 결합제의 초기 투여를 포함한다. 특정한 구체예에서, 투약 레지멘은 치료 기간 내에 1주당 1, 3, 5, 및 7일에 대해 적어도 하나의 추가의 치료제의 존재 또는 부재 하에 치료적으로 효과적인 복용량의 RANKL에 대한 특이적 결합제, TNF에 대한 특이적 결합제, 및/또는 IL-1R1에 대한 특이적 결합제의 초기 투여를 포함한다. 특정한 구체예에서, 투약 레지멘은 치료 기간 내에 1주당 1일 및 3일에 대해 적어도 하나의 추가의 치료제의 존재 또는 부재 하에 치료적으로 효과적인 복용량의 RANKL에 대한 특이적 결합제, TNF에 대한 특이적 결합제, 및/또는 IL-1R1에 대한 특이적 결합제의 초기 투여를 포함한다. 특정한 구체예에서, 투약 레지멘은 치료 기간 내에 1주당 1일에 대해 적어도 하나의 추가의 치료제의 존재 또는 부재 하에 치료적으로 효과적인 복용량의 RANKL에 대한 특이적 결합제, TNF에 대한 특이적 결합제, 및/또는 IL-1R1에 대한 특이적 결합제의 초기 투여를 포함한다. 특정한 구체예에서, 치료 기간은 1주, 2주, 3주, 1개월, 3개월, 6개월, 1 년, 또는 그 이상을 포함한다. 특정한 구체예에서, 치료 기간이 후속되거나 또는 1일, 1주, 2주, 1개월, 3개월, 6개월, 1 년 또는 그 이상 만큼 서로 분리된다

특정한 구체예에서, 동일한 치료적으로 효과적인 복용량의 RANKL에 대한 특이적 결합제, TNF에 대한 특이적 결합제, 및/또는 IL-1R1에 대한 특이적 결합제가 치료 기간에 걸쳐 각각의 복용량으로 투여된다. 특정한 구체예에서, 상이한 치료적으로 효과적인 복용량의 RANKL에 대한 특이적 결합제, TNF에 대한 특이적 결합제, 및/또는 IL-1R1에 대한 특이적 결합제가 치료 기간에 걸쳐 각각의 복용량으로 투여된다. 특정한 구체예에서, 동일한 치료적으로 효과적인 복용량의 RANKL에 대한 특이적 결합제, TNF에 대한 특이적 결합제, 및/또는 IL-1R1에 대한 특이적 결합제가 치료 기간에 걸쳐 특정한 복용량으로 투여되고, 상이한 치료적으로 효과적인 복용량이 특정한 다른 복용량으로 투여된다.

특정한 구체예에서, 초기 치료적으로 효과적인 복용량의 RANKL에 대한 특이적 결합제, TNF에 대한 특이적 결합제, 및/또는 IL-1R1에 대한 특이적 결합제는 더 낮은 복용량 범위, 예를 들면, 0.1 μg/kg 내지 20 mg/kg에 있고, 단, 후속 복용량은 더 큰 복용량 범위, 예를 들면, 20 mg/kg 내지 100 mg/kg에 있다. 특정한 구체예에서, 초기 치료적으로 효과적인 복용량의 RANKL에 대한 특이적 결합제, TNF에 대한 특이적 결합제, 및/또는 IL-1R1에 대한 특이적 결합제는 더 큰 복용량 범위, 예를 들면, 20 mg/kg 내지 100 mg/kg에 있고, 단, 후속 복용량은 더 낮은 복용량 범위, 예를 들면, 0.1 μg/kg 내지 20 mg/kg에 있다. 본원에 고찰된 그들 범위 및 임의의 범위는 종말점 및 종말점들 사이의 모든 값을 포함한다.

특정한 구체예에서, 초기 치료적으로 효과적인 복용량의 RANKL에 대한 특이적 결합제, TNF에 대한 특이적 결합제, 및/또는 IL-1R1에 대한 특이적 결합제가 "적정 복용량"으로서 투여된다. "적정 복용량"은 환자에게 투여되는 RANKL에 대한 특이적 결합제, TNF에 대한 특이적 결합제, 및/또는 IL-1R1에 대한 특이적 결합제의 초기 복용량을 의미하고, 여기서 투여되는 RANKL에 대한 특이적 결합제, TNF에 대한 특이적 결합제, 및/또는 IL-1R1에 대한 특이적 결합제의 복용량은 더 큰 복용량 범위, 예를 들면, 20 mg/kg 내지 100 mg/kg에 속한다. 본원에서 고찰되는 그러한 범위 및 임의의 범위는 종말점 및 종말점들 사이의 모든 값을 포함한다. 특정한 구체예에서, 적정 복용량은 예를 들면, 정맥내로 투여되는 단일 주입을 포함하지만 이것으로만 제한되지 않는 단일 투여로서 투여된다. 특정한 구체예에서, 적정 복용량은 정맥내로 투여되는 다중 주입을 포함하지만 이것으로만 제한되지 않는 다중 투여로서 투여된다. 특정한 구체예에서, 적정 복용량은 24-시간에 걸쳐 투여된다. 특정한 구체예에서, 적정 복용량의 투여 후, 환자는 1개 이상의 추가의 치료적으로 효과적인 복용량의 RANKL에 대한 특이적 결합제, TNF에 대한 특이적 결합제, 및/또는 IL-1R1에 대한 특이적 결합제를 투여받는다. 특정한 그러한 구체예에서, 후속 치료적으로 효과적인 복용량의 RANKL에 대한 특이적 결합제, TNF에 대한 특이적 결합제, 및/또는 IL-1R1에 대한 특이적 결합제는 예를 들면, 2주 마다 1회, 3주 마다 1회, 또는 4주 마다 1회를 포함하지만, 이들로만 제한되지 않는 주단위 복용 스케줄에 따라 투여된다. 특정한 그러한 구체예에서, 후속 치료적으로 효과적인 복용량은 더 낮은 복용량 범위, 예를 들면, 0.1 μg/kg 내지 20 mg/kg에 속한다.

특정한 구체예에서, 적정 복용량의 투여 후, 환자는 1개 이상의 추가의 치료적으로 효과적인 복용량의 RANKL에 대한 특이적 결합제, TNF에 대한 특이적 결합제, 및/또는 IL-1R1에 대한 특이적 결합제를 "유지 스케줄"에 따라 투여받았다. 예시적인 유지 스케줄은 1개월 마다 1회, 6주 마다 1회, 2개월 마다 1회, 10주 마다 1회, 3개월 마다 1회, 14주 마다 1회, 4개월 마다 1회, 18주 마다 1회, 5개월 마다 1회, 22주 마다 1회, 6개월 마다 1회, 7개월 마다 1회, 8개월 마다 1회, 9개월 마다 1회, 10개월 마다 1회, 11개월 마다 1회, 또는 12개월 마다 1회 투여를 포함하지만, 이들로만 제한되지 않는다. 특정한 구체예에서, 후속 복용량은 더욱 빈번한 간격, 예를 들면, 2주 마다 1회 내지 매달 1회 투여된다. 특정한 그러한 구체예에서, RANKL에 대한 특이적 결합제, TNF에 대한 특이적 결합제, 및/또는 IL-1R1에 대한 특이적 결합제의 후속 복용량은 더 낮은 복용량 범위, 예를 들면, 0.1 μg/kg 내지 20 mg/kg에 속한다. 특정한 구체예에서, 후속 복용량은 덜 빈번한 간격으로, 예를 들면, 매달 1회 내지 12개월 마다 1회 투여된다. 특정한 그러한 구체예에서, RANKL에 대한 특이적 결합제, TNF에 대한 특이적 결합제, 및/또는 IL-1R1에 대한 특이적 결합제의 후속 복용량은 더 큰 복용량 범위, 예를 들면, 20 mg/kg 내지 100 mg/kg에 속한다.

특정한 구체예에서, 제약 조성물의 투여 경로는 공지된 방법, 예 경구로, 주사를 통해 정맥내, 복강내, 대뇌내 (조직실질내), 뇌혈관내, 근육내, 안구내, 동맥내, 포털내, 또는 병변내 경로로; 서방형 시스템으로 또는 이식 장치에 의해 이루어진다. 특정한 구체예에서, 조성물은 볼루스 주사에 의해 또는 연속적 주입에 의해, 또는 이식 장치에 의해 투여될 수 있다.

특정한 구체예에서, 정맥내 투여는 주입에 의해 1 내지 10시간의 기간에 걸쳐 발생한다. 특정한 구체예에서, 정맥내 투여는 주입에 의해 1 내지 8시간의 기간에 걸쳐 발생한다. 특정한 구체예에서, 정맥내 투여는 주입에 의해 2 내지 7시간의 기간에 걸쳐 발생한다. 특정한 구체예에서, 정맥내 투여는 주입에 의해 4 내지 6시간의 기간에 걸쳐 발생한다. 본원에 고찰된 이들 범위 및 임의의 범위는 종말점 및 종말점들 간의 모든 값을 포함한다. 특정한 구체예에서, 주입 기간은 투여될 RANKL에 대한 특이적 결합제, TNF에 대한 특이적 결합제, 및/또는 IL-1R1에 대한 특이적 결합제에 좌우된다. 특정한 적절한 주입 기간의 결정은 당업계의 기술 범위에서 이루어진다. 특정한 구체예에서, 초기 주입은 4 내지 6시간의 기간에 걸쳐 주어지고, 단 후속 주입이 더욱 신속히 전달된다. 특정한 그러한 구체예에서, 후속 주입은 1 내지 6시간의 기간에 걸쳐 투여된다.

특정한 구체예에서, RANKL에 대한 특이적 결합제, TNF에 대한 특이적 결합제, 및/또는 IL-1R1에 대한 특이적 결합제 및/또는 임의의 추가의 치료제는 미리 충전된 주사기가 최소화된 공간 부분을 갖도록 주사기 내로 배치되고 마개 닫힐 수 있다. 특정한 구체예에서, RANKL에 대한 특이적 결합제는 RANKL에 특이적으로 결합하는 항체이다. 특정한 구체예에서, 항체는 αRANKL-1이다. 특정한 구체예에서, TNF에 대한 특이적 결합제는 가용성 TNF 수용체이다. 특정한 구체예에서, 가용성 TNF 수용체는 sTNFR:Fc이다. 특정한 구체예에서, IL-1R1에 대한 특이적 결합제는 IL-1R1에 특이적으로 결합하는 항체이다. 특정한 구체예에서, 항체는 미국 특허 공고 제2004/0097712호에 기재된 바와 같이 15C4, 26F5 및 27F2로부터 선택된다. 특정한 구체예에서, RANKL에 대한 특이적 결합제, TNF에 대한 특이적 결합제, 및/또는 IL-1R1에 대한 특이적 결합제를 함유하는 조성물은 예를 들면, 아래 기재되는 바와 같이 진공 마개 배치법 또는 기계적 마개 배치법을 용하여 Daikyo/West (Becton Dickinson, 부품 번호 47165910 및 47165919) 및 듀퐁(Dupont) (Becton Dickinson, 부품 번호 5080958 및 5115079)를 포함하지만, 이들로만 제한되지 않는 플런저로 코팅된 플루로테크/B2로 마개 닫혀진다.

특정한 구체예에서, 진공 마개 배치법은 예를 들면, 오토클레이브 가능한 마개 배치 유니트 (ASPU)인 임프로시스템 하이팩(Improsystem Hypak) 충전제 (카탈로그 번호 897400)를 포함하지만 이것으로만 제한되지 않는 진공 마개 배치 유니트의 사용을 포함한다. 특정한 구체예에서, RANKL에 대한 특이적 결합제, TNF에 대한 특이적 결합제, 및/또는 IL-1R1에 대한 특이적 결합제를 함유하는 주사기는 유니트 내에 배치되어 FC1-21" Hg, FC2-6.5" Hg, FC3 26.5" Hg로 설정된 진공 주기로 평방 인치 입구 압력당 75파운드로 마개 닫힌다. 특정한 구체예에서, 그들 설정치는 적어도 3mm의 공간 부분을 초래한다. 특정한 구체예에서, 최소화된 공간 부분을 갖는 마개 닫힌 미리 충전된 주사기는 적어도 3mm의 공간 부분을 갖는 마개 닫힌 미리 충전된 주사기로부터 니들의 베이스로 공기 방울이 발생되도록 상단에 니들을 갖는 주사기를 배치하고, 니들 밖으로 공기를 축출하고, 니들을 다시 쉴딩함으로써 니들로부터 공기를 짜내도록 그러한 마개 닫힌 미리 충전된 주사기를 수동으로 조작함으로써 생산된다.

특정한 구체예에서, 기계적 마개 배치법은 예를 들면, 그로닝겐(Groninger), 모델 SVH200를 포함하지만 이것으로만 제한되지 않는 기계적 마개 배치 유니트의 사용을 포함한다. 특정한 구체예에서, RANKL에 대한 특이적 결합제, TNF에 대한 특이적 결합제, 및/또는 IL-1R1에 대한 특이적 결합제를 함유하는 주사기는 유니트 내에 배치되고 마개는 기계적으로 위치한다. 특정한 구체예에서, 마개는 진공을 사용하여 위치한다. 특정한 구체예에서, 벤트 튜브가 마개 닫힘 과정 중에 사용된다. 최소화된 공간 부분을 갖는 마개 닫힌 미리 충전된 주사기를 생산하기 위해, 마개가 마개의 바닥 표면과 액체의 상부 표면 사이에서 최대로 접촉하는 액체 표면에 가능한 한 근접하도록 RANKL에 대한 특이적 결합제, TNF에 대한 특이적 결합제, 및/또는 IL-1R1에 대한 특이적 결합제를 함유하는 액체의 조성물의 상부 표면에 반하여 마개가 위치한다. 특정한 구체예에서, 마개의 바닥 표면과 메니스커스 사이의 거리가 최소화된다.

특정한 구체예에서, 미리 충전된 마개 닫힌 주사기의 공간 부분은 눈금있는 캘리퍼에 의해 수동으로 측정된다. 캘리퍼를 검정하는 예시적인 방법은 제조업자의 설명서에 따라 그것을 완전히 근접한 위치 (0.00")에 배치하고, 이어서 게이지 블록 0.050" 및 4.000"으로 검정하는 것이다. 특정한 구체예에서, 미리 충전된 마개 닫힌 주사기의 공간 부분은 현미경 및 현미경 자로 측정된다. 특정한 그러한 구체예에서, 캘리퍼는 이 캘리퍼를 사용하여 메니스커스의 상단에서 플런저의 편평한 몸체의 바닥까지 사이의 거리를 기록하기 위해 사용된다. 특정한 구체예에서, 미리 충전된 마개 닫힌 주사기의 공간 부분은 광학 콤퍼레이터에 의해 측정된다. 예시적인 광학 콤퍼레이터는 델트로닉 DH 216인 수평 광학 콤퍼레이터이다. 특정한 그러한 구체예에서, 측정은 주사기를 수직 위치에서 광학 렌즈와 병렬로 배치함으로써 이루어진다. 확대된 이미지는 점검하기 위해 스크린 상으로 투사된다. 광학 콤퍼레이터 상의 캘리퍼는 메니스커스의 상단에서 플런저의 편평한 몸체의 바닥까지 사이의 거리를 기록하기 위해 사용된다. 특정한 구체예에서, 공간 부분은 메니스커스의 상단으로부터 플런저의 편평한 몸체의 바닥까지의 밀리미터 단위의 거리이다.

특정한 미리 충전된 주사기에서, 공간 부분은 2 mm 내지 5 mm로 변화한다. 특정한 미리 충전된 주사기에서, 공간 부분은 3 mm±0.00254 mm이다. 최소화된 공간 부분을 갖는 특정한 미리 충전된 주사기에서, 공간 부분은 2.9 mm 이하, 또는 2.7 mm 이하, 또는 2.5 mm 이하, 또는 2.3 mm 이하, 또는 2 mm 이하, 또는 1.5 mm 이하, 또는 1.0 mm 이하이거나, 또는 어떠한 검출 가능한 공간 부분도 존재하지 않는다.

특정한 구체예에서, 주사기 배럴은 유리, 사이클릭 올레핀 중합체 ("COP"), 또는 사이클릭 올레핀 공중합체 ("COC")를 포함하지만 이들로만 제한되지 않는 물질을 포함한다. 특정한 구체예에서, 실리콘 코팅제가 주사기 배럴에 도포된다. 특정한 그러한 구체예에서, 실리콘 코팅제는 가교된 실리콘, 베이킹된 고점성 실리콘, 또는 분무형 실리콘 오일이다. 특정한 구체예에서, 실리콘 코팅제는 주사기 제조업자에 의해 주사기로 도포된다. 특정한 주사기 제조업자는 Daikyo, Schott-Forma Vitrum, 번더, 및 Becton-Dickinson을 포함하지만, 이들로만 제한되지 않는다. 특정한 구체예에서, 주사기 배럴은 실리콘 코팅제를 포함하지 않는다.

특정한 구체예에서, 주사기 플런저는 코팅된다. 예시적인 주사기 플런저 코팅제는 폴리테트라플루오로에틸렌 (PTFE), Teflon^® 및 에틸렌 테트라플루오로에틸렌 (ETFE), Flurotec^®을 포함하지만, 이들로만 제한되지 않는다. 특정한 구체예에서, 코팅제제는 제조업자에 의해 도포된다. 특정한 제조업자는 Daikyo 및 Becton-Dickinson을 포함하지만, 이들로만 제한되지 않는다.

다음 실험은 특정한 조건하에 용기 내에 저장된 특이적 결합제 조성물의 안정성을 평가하기 위해 수행되었다. 안정성은 정적 저장 조건 하에 선적 후 모니터링되었다. 특이적으로, 주사기의 특정한 국면은 특정한 조건 하에 조성물 중에서 가시적 입자 형성을 유도하는 단백질 집합체화에 영향을 미치는 파라메터를 식별하기 위해 조사하였다. 용기의 여러 가지 실리콘 코팅제 및 미리 충전된 주사기의 클로저가 조사되었다. 아래 실험에 사용된 특이적 결합제는 αRANKL-1였다.

일반적 방법

다음 실험에서 αRANKL-1의 농도는 30 mg/ml 내지 105 mg/ml로 변화하였다. αRANKL-1는 10 mM 아세트산 나트륨 중에서, 5% 소르비톨, pH 5.2로 제형화되었다. 바이알을 사용하는 실험을 위해, 조성물은 ml의 최종 부피까지 3cc 바이알 내로 배치되었다. 주사기를 사용하는 실험을 위해, 1 ml 주사기가 사용되었다. 용기 내의 조성물은 24개월에 이르기까지 저장되었다. 용기 내의 조성물은 항체 단량체, 고분자량 종 (집합체), 또는 저분자량 종 (예를 들면, 클리핑에 의해 생성된 분자)에 대해 네이티브 SEC-HPLC 또는 비-환원성, 변성 SEC-HPLC에 의해 모리터링되었다. 가시적 입자는 아래 기재된 바와 같이 용기의 외관 검사에 의해 용기 내의 조성물 중에서 평가되었다.

네이티브 SEC-HPLC는 5 μm 입자 크기 및 250Å의 공극 크기를 갖는 앞뒤로 사용된 2개의 TSKgel G3000-SWxL 7.8 mm×300 mm 칼럼 (Tosoh Bioscience)을 사용하여, 다이오드 어레이 검출에 의해 애질런트(Agilent) 1100 시리즈 HPLC 상에서 수행되었다. 이동상은 100 mM 인산 나트륨, 500 mM 염화 나트륨, 5% 에탄올, pH 7.0였다. 유동 속도는 0.5 ml/분이었다. 샘플 하중은 120 g 단백질이고, 컬럼 용출물은 235 nm에서 및 280 nm에서 모니터링되었다. 크로마토그램에서 통합된 피크 영역은 메인 피크로 용출되는 단량체, 및 프리-피크로 용출되고, 집합체라 칭하기도 하는 고분자량 종의 양을 정량화하기 위해 사용되었다.

가시적 입자에 대한 용기의 외관 검사는 외관 검사 캐비넷인 피닉스 이미지화 매뉴얼 검사 부쓰(Phoenix Imaging Manual Inspection Booth), 카탈로그 번호 MIB-100에서 수행되었다. 외관 검사 캐비넷은 별개의 비-반사성 흑백 표면을 갖는다. 흑백 표면은 검사 과정 동안 전체 용기에 대한 배경으로서 작용하기에 충분한 크기이다. 외관 검사 캐비넷은 또한 샘플의 위치에 적어도 2000 Lux의 조명을 제공하는 광원을 갖는다.

가시적 입자를 조사하기 위해, 용기는 외관 검사 캐비넷에서 육안 수준으로 샘플을 곧추서게 유지하면서 부드럽게 빙빙 돌리거나 또는 뒤집었다. 용기를 빙빙 돌리거나 뒤집으면서 공기 방울이 도입되지 않도록 보장하기 위해 주의가 기울여진다. 각각의 용기는 백색 표면 앞에서 대략 5초 동안 육안으로 관찰되었다. 이어서 각각의 용기는 흑색 표면 앞에서 대략 5초 동안 육안으로 관찰되었다. 몇몇 경우에, 가시적 입자의 존재 또는 부재를 확인하기 위해 광원 외에 확대경이 사용되었다.

가시적 입자의 존재 또는 부재는 상기한 바와 같이 관찰되었다. 이어서 입자 스코어가 다음과 같이 각각의 용기에 할당되고 기록되었다. 스코어 0은 어떠한 입자도 관찰되지 않았음을 지시하고; 스코어 1은 1개 또는 2개의 입자가 관찰되었음을 지시하고; 스코어 2는 3개 내지 9개의 입자가 관찰되었음을 지시하고; 스코어 3은 10개 내지 49개의 입자가 관찰되었음을 지시하고; 스코어 4는 50개 이상의 입자가 관찰되었음을 지시한다.

정적 저장 조건 하에 유리 바이알 내의 안정성

도 1은 정상 상태 하에 24개월 동안 유리 바이알 내에 저장되고, 도면에 지시된 바와 같이 여러 시점에서 분석된, 70 mg/ml 또는 105 mg/ml의 단백질 농도에서 αRANKL-1 조성물의 네이티브 SEC-HPLC 분석의 결과를 보여준다. 3가지 상이한 구역이 분석되었다 (구역 A, B, 및 C). 도 1a는 메인 피크 (단량체) %를 보여주고 도 1b는 집합체 (프리-피크) %를 보여준다. 그 결과는 RANKL-1이 정상 상태 하에 4℃에서 24개월 동안 유리 바이알 내에 저장되는 경우 집합체 형성을 거의 보이지 않음을 시사한다. 이 도면은 또한 70 mg/ml의 단백질을 함유하는 제형 및 105 mg/ml의 단백질을 함유하는 제형에 대해 유사한 결과가 획득되었음을 보여준다.

정적 저장 조건 하에 미리 충전된 유리 주사기 내의 안정성

정상 상태 하에 24개월 동안 미리 충전된 유리 루어 락 주사기 또는 미리 충전된 유리 지주 받침된-니들 주사기 내에 저장되고, 도면에 지시된 바와 같이 여러 시점에서 분석된, 여러 가지 단백질 농도에서 αRANKL-1 조성물의 네이티브 SEC-HPLC 분석의 결과를 보여준다. 그 결과는 αRANKL-1이 정상 상태 하에 4℃에서 24주 동안 미리 충전된 유리 루어 락 주사기 또는 미리 충전된 유리 지주 받침된-니들 주사기 내에 저장되는 경우 집합체 형성을 거의 보이지 않음을 시사한다. 이 도면은 또한 30 mg/ml의 단백질, 70 mg/ml의 단백질 및 105 mg/ml의 단백질을 함유하는 제형들에 대해 유사한 결과가 획득되었음을 보여준다.

선적 후 미리 충전된 유리 주사기 내의 안정성

상기 고찰된 안정성 결과와 대조적으로, 60 mg/ml의 단백질로 αRANKL-1을 함유하는 미리 충전된 유리 지주 받침된 니들 주사기는 2℃ 내지 8℃의 온도에서 1050 마일의 거리 동안 항공으로 선적되어, 외관 검사에 의해 평가되는 바와 같이 (데이터가 도시되지 않음) 선적 후 가시적 입자를 보였다.

용기 및 클로저의 실리콘 코팅제의 선적 안정성에 대한 효과

선적 후 미리 충전된 주사기 내에서 여러 가지 주사기 및 플런저 물질 및 코팅제의 입자 형성에 대한 효과를 조사하기 위해, 다음 실험이 수행되었다. 60 mg/ml 단백질로 αRANKL-1 조성물은 표 1 및 2에 지시된 바와 같이 각각 상이한 실리콘 및 다른 코팅제를 갖는 상이한 타입의 클로저를 갖는 상이한 타입의 용기 내로 배치되었다. 이 실험에 사용된 용기 및 클로저에 대한 제조업자 및 카탈로그 번호가 표 1 및 2에 제공된다. 유리, 사이클릭 올레핀 중합체 ("COP"; [Resin CZ^®]), 또는 사이클릭 올레핀 공중합체 ("COC")로 구성된 용기가 시험되었다. 3가지 상이한 실리콘 코팅제가 시험되었다: 굽기형 고점성 실리콘, 가교된 실리콘, 및 분무형 실리콘 오일. 특정 용기는 실리콘 코팅제를 포함하지 않았다. 2가지 상이한 클로저 코팅제가 시험되었다: 폴리테트라플루오로에틸렌 (PTFE), Teflon^® 및 에틸렌 테트라플루오로에틸렌 (ETFE), Flurotec^®.

표 3에 열거된 각각의 실험 그룹은 10개의 용기로 이루어져 있다. 이 용기는 선적 조건에 적용되기 전 1주일 동안 4℃에서 저장되었다. 선적 조건은 미국 재료 시험 협회 (ATSM)에 의해 명시된 조건에 따라 C167 폴리우레탄 선박 내에서 2℃ 내지 8℃ 범위의 온도에서 항공으로 이루어졌다. 미리 충전된 주사기는 캘리포니아주 싸우전드 오크스(Thousand Oaks)로부터 콜로라도주 볼더(Boulder)로, 이어서 콜로라도주 볼더로부터 캘리포니아주 싸우전드 오크스로 전체 2대의 항공기편으로 (2개의 기압 주기; 각각의 비행편은 이륙 및 착륙을 위해 하나의 기압 주기를 가짐) 항공으로 선적되었다. 선적 후, 가시적 입자는 외관 검사에 의해 각각의 용기 내에서 평가되었다. 검사 후, 입자 스코어는 일반적 방법 하에 상기한 바의 각각의 용기에 할당되었다. 그 결과는 (각각의 그룹에서 모두 10개의 용기에 대해) 표 3에 나타낸다.

그 결과는 입자 스코어가 COP 주사기들에서 0 또는 1이었고, 그들 각각은 실리콘이 결여된 고분자량 플라스틱 물질로 제조된 배럴을 포함하였음을 지시한다. 표 3, 그룹 1. 그룹 1 주사기 클로저는 PTFE로 코팅되었고, 이는 실리콘이 결여되었다. 표 3, 그룹 1. 또한, 입자 스코어는 COC 주사기들에서 0 또는 1이었고, 그들 각각은 가교된 실리콘으로 코팅된 배럴을 포함하였다. 표 3, 그룹 2. 그룹 2 주사기 클로저는 Flurotec B2로 코팅되었고, 이는 실리콘이 결여되었다. 입자 스코어는 또한 유리 주사기들에서 0 또는 1이었고, 그들 각각은 실리콘이 결여되었거나, 또는 굽기형 고점성 실리콘으로 코팅된 배럴을 포함하고, 실리콘이 결여된 Flurotec B2, 또는 Flurotec B2 및 가교된 실리콘으로 코팅된 클로저를 갖는다. 표 3, 그룹 3 및 5. 또한, 입자 스코어는 실리콘 결여되고, Flurotec B2 및 가교된 실리콘으로 코팅된 클로저를 갖는 유리 바이알에서 0 또는 1이었다. 표 3, 그룹 6. 이와 대조적으로, 분무형 실리콘 오일로 코팅된 배럴을 포함하고 Flurotec B2 및 가교된 실리콘으로 코팅된 클로저를 갖는 유리 주사기는 가시적 입자의 가장 많은 양에 대응하는 입자 스코어 4를 가졌다. 표 3, 그룹 4. 따라서, 그들 결과는 분무형 실리콘 오일로 코팅된 미리 충전된 주사기 배럴로부터 실리콘이 선적 중에 가시적 입자의 형성에 기여함을 시사한다.

또한, 2가지 상이한 살균 방법이 당업계에 공지된 표준 절차에 따라 수행되었다. 그들 방법은 다음: E-비임 (감마 조사선) 및 증기였다. 2가지 상이한 레벨의 E-비임 살균이 시험되었다, 15 kGy 및 25 kGy. 어떠한 살균 방법이나 E-비임 살균 레벨도 입자 스코어에 영향을 미치지 않는 것으로 밝혀졌다 (데이터는 도시되지 않음).

용기

용기 타입	제조업자	카탈로그 번호
1. 실리콘이 결여된 사이클릭 올레핀 중합체 [Crystal Zenith (Resin CZ^®] 플라스틱 주사기	Daikyo (West, 배급업자)	2601468
2. 실리콘이 결여된 사이클릭 올레핀 공중합체 플라스틱 주사기	Schott-Forma Vitrum	PG130002
3. 굽기형 고점성 실리콘화된 유리 주사기	번더	61650004
4. 분무형 실리콘화된 유리 주사기	Becton-Dickinson	47217010
5. 실리콘이 결여된 유리 주사기	Becton-Dickinson	47217010 (실리콘 오일 부재의 특별 주문)
6. 실리콘이 결여된 유리 바이알	Alcan	2702B67B

클로저

클로저 타입	제조업자	카탈로그 번호
1. 실리콘이 결여된 PTFE 코팅된 마개	Daikyo (West, 배급업자)	26014619
2. 실리콘이 결여된 Flurotec B2 플런저 (ETFE)	Daikyo/West (Becton-Dickinson, 배급업자)	47205410 (실리콘 오일 부재의 특별 주문)
3. 실리콘화된 Flurotec B2 플런저 (ETFE)	Daikyo/West (Becton-Dickinson, 배급업자)	47205410
4. 실리콘화된 Flurotec 바이알 마개	Daikyo (West, 배급업자)	19500039

그룹	용기			클로저			입자 스코어
그룹	용기 타입	물질	윤활제	클로저 타입	코팅제	윤활제	입자 스코어
1	1 (주사기)	COP	없음	1 (마개)	PTFE	없음	0-1
2	2 (주사기)	COC	가교된 실리콘	2 (플런저)	Flurotec B2	없음	0-1
3	3 (주사기)	유리	굽기형 고점성 실리콘	2 (플런저)	Flurotec B2	없음	0-1
4	4 (주사기)	유리	분무형 실리콘 오일	3 (플런저)	Flurotec B2	가교된 실리콘	4
5	5 (주사기)	유리	없음	3 (플런저)	Flurotec B2	가교된 실리콘	0-1
6	6 (바이알)	유리	없음	4 (마개)	Flurotec B2	가교된 실리콘	0-1

미리 충전된 플라스틱 주사기 내의 안정성

다음 실험에서, αRANKL-1의 농도는 60 mg/ml 또는 120 mg/ml이었다. αRANKL-1은 10 mM 아세트산 나트륨 중에서, 5% 소르비톨, pH 5.2로 제형화되었다. αRANKL-1 조성물은 0.2 μM 셀룰로스 필터를 통해 용액을 통과시킴으로써 멸균 여과되었다. 이어서, 샘플 (1.0 ml)은 1 ml COP (Resin CZ^®) 플라스틱 주사기 내로 수동으로 첨가되었다 (표 1 참조). 내부에 샘플을 갖는 주사기는 아래 기재되는 바의 진공 마개 배치법에 따라 Flurotec코팅된 플런저로 마개 닫혀졌다 (표 2 참조).

진공 마개 배치법을 위해, 진공 마개 배치 유니트 (HYPAK^® 오토클레이브 가능한 마개 배치 유니트, 임프로시스템, 카탈로그 번호 897400)가 사용되었다. 주사기는 유니트 내에 배치되어 FC1-21" Hg, FC2-6.5" Hg, FC3 26.5" Hg의 진공 주기 설정치로 평방 인치 입구 압력당 75파운드로 마개 닫혔다. 특정한 구체예에서, 그들 설정치는 > 3 mm의 공간 부분을 초래하였고, 이는 최소화되지 않았다.

또한, 2가지 상이한 살균 방법이 당업계에 공지된 표준 절차에 따라 수행되었다. 그들 방법은 다음: 2가지 상이한 에너지 레벨, 15 kGy 또는 25 kGy에서 전자 비임 (E-비임), 및 증기였다.

내부에 샘플을 무균성으로 배치하고, 마개 닫기 절차 후, 미리 충전된 주사기는 정상 상태 하에 저장되거나 또는 정상 상태 하에 저장 후 선적 조건에 적용되었다. 정적 저장 조건은 52주 동안 4℃에서 저장되었다. 선적 조건은 미국 재료 시험 협회 (ATSM)에 의해 명시된 조건에 따라 C167 폴리우레탄 선박 내에서 2℃ 내지 8℃ 범위의 온도에서 항공으로 이루어졌다. 미리 충전된 주사기는 캘리포니아주 싸우전드 오크스로부터 테네시주 멤피스(Memphis)로, 이어서 테네시주 멤피스로부터 푸에르토 리코(Puerto Rico)로, 이어서 푸에르토 리코로부터 테네시주 멤피스로, 마지막으로 테네시주 멤피스로부터 캘리포니아주 싸우전드 오크스로 전체 4대의 항공기편으로 (4개의 기압 주기; 각각의 비행편은 이륙 및 착륙을 위해 하나의 기압 주기를 가짐) 항공으로 선적되었다. 선적 후, 미리 충전된 주사기는 4℃에서 52주 동안 정적 저장 조건 하에 저장되었다.

도 3에 지시된 바의 각각의 시점에서, 샘플은 네이티브 SEC-HPLC에 의해 항체 단량체, 고분자량 종 (집합체), 또는 저분자량 종 (예를 들면, 이량체 분자)를 모니터링하기 위해 각각의 미리 충전된 주사기로부터 제거되었다. 네이티브 SEC-HPLC는 5 μm 입자 크기 및 250Å의 공극 크기를 갖는 앞뒤로 사용된 2개의 TSKgel G3000-SWxL 7.8 mm×300 mm 칼럼 (Tosoh Bioscience)을 사용하여, 다이오드 어레이 검출에 의해 애질런트 1100 시리즈 HPLC 상에서 수행되었다. 이동상은 100 mM 인산 나트륨, 500 mM 염화 나트륨, 5% 에탄올, pH 7.0였다. 유동 속도는 0.5 ml/분이었다. 샘플 하중은 120 g 단백질이고, 컬럼 용출물은 235 nm에서 및 280 nm에서 모니터링되었다. 크로마토그램에서 통합된 피크 영역은 메인 피크로 용출되는 단량체, 및 프리-피크로 용출되고, 집합체라 칭하기도 하는 고분자량 종의 양을 정량화하기 위해 사용되었다.

도 3는 네이티브 SEC-HPLC에 의해 분석된 바의 실험의 결과를 나타낸다. 도 3에서, 메인 피크 (단량체)%는 시험된 각각의 조건에 대해 각각의 시점에 나타난다. 그 결과는 RANKL-1가 COP (Resin CZ^®) 플라스틱 주사기 내로 배치되고, 진공 마개 배치법에 따라 마개 닫혀 > 3 mm 공간 부분을 형성하고, 정상 상태 하에 저장되거나 또는 선적 조건에 적용되는 경우 집합체 형성을 거의 보이지 않았다. 또한, 2가지 상이한 살균 방법이 당업계에 공지된 표준 절차에 따라 수행되었다. 그들 방법은 다음: E-비임 (감마 조사선) 및 증기였다. 2가지 상이한 레벨의 E-비임 살균이 시험되었다, 15 kGy 및 25 kGy. 이들 실험에 사용된 살균 방법은 그 결과에 영향을 미치지 않았다

실시예 1에서 상기 고찰된 결과는 특정한 미리 충전된 용기의 선적 동안 플런저 이동은 단백질 집합체화에 기여하고, 이는 조성물 중의 가시적 입자의 형성을 유도할 수 있음을 시사한다. 따라서, 선적 동안 플런저 이동에 기여하는 파라메터들이 고려되었다. 하나의 그러한 파라메터는 공간 부분이다. 공간 부분이 더 작을수록, 플런저 이동량이 더 적은 것으로 가설되고, 결과적으로 그 가설에 따라, 선적 후 조성물에서 더 적은 가시적 입자가 관찰될 수 있었다. 그러한 가설을 시험하기 위해, 다음 실험이 수행되었다.

다음 실험은 특이적 결합제 조성물이 들어있는 미리 충전된 주사기의 선적 동안 가시적 입자의 형성에 대한 최소화된 공간 부분의 효과를 평가하기 위해 수행되었다. 최소화된 공간 부분을 생산하기 위해 조성물을 주사기 내에 배치하고 주사기를 마개 닫는 상이한 방법들이 조사되었다. 아래 실험에 사용된 특이적 결합제는 sTNFR:Fc 또는 αRANKL-1이었다.

가시적 입자 분석

다음 실험에서, 조성물 중의 sTNFR:Fc의 농도는 50 mg/ml였다. sTNFR:Fc는 25 mM 포스페이트, 25 mM 아르기닌 HCl, 100 mM NaCl, 1% 자당에서, pH 6.3로 제형되었다. αRANKL-1의 농도는 60 mg/ml였다. αRANKL-1은 10 mM 아세트산 나트륨, 5% 소르비톨, 0.01% 폴리소르베이트-20에서, pH 5.2로 제형되었다.

특이적 결합제 조성물은 0.2 μM 셀룰로스 필터를 통해 용액을 통과시킴으로써 멸균 여과되었다. 이어서, 샘플 (1.0 ml)은 1 ml 하이팩 유리 주사기 내로 수동으로 첨가되었다 (표 1 참조). 내부에 샘플을 갖는 주사기는 아래 기재되는 바와 같이 진공 마개 배치법 또는 기계적 마개 배치법을 사용하여 Flurotec코팅된 플런저에 의해 마개 닫혀졌다 (표 2 참조).

진공 마개 배치법을 위해, 진공 마개 배치 유니트 (오토클레이브 가능한 마개 배치 유니트 (ASPU), 임프로시스템, 카탈로그 번호 897400)가 사용되었다. 샘플을 함유하는 주사기는 유니트 내에 배치되어 FC1-24" Hg, FC2-22.5" Hg, FC3 26.3" Hg의 진공 주기 설정치로 평방 인치 입구 압력당 75파운드로 마개 닫혔다. 챔버 진공은 23.5" Hg였다. 그들 설정치는 > 3 mm의 공간 부분을 초래하였다. 도 6a는 4.5 mm의 공간 부분을 보인다. 최소화된 공간 부분을 갖는 마개 닫힌 미리 충전된 주사기를 생산하기 위해, 샘플을 함유하는 주사기는 유니트 내에 배치되어 FC1-24" Hg, FC2-22.5" Hg, FC3 29.2" Hg의 진공 주기 설정치로 평방 인치 입구 압력당 75파운드로 마개 닫혔다. 챔버 진공은 27.5" Hg였다. 그들 설정치는 최소화된 공간 부분을 초래하였다. 도 6b는 1.5 mm의 공간 부분들을 보이고, 하나는 메니스커스를 갖고 (도 6b의 좌측) 하나는 공기 방울을 갖는다 (도 6b의 우측).

최소화된 공간 부분을 갖는 마개 닫힌 미리 충전된 주사기를 수동으로 생산하기 위해, 유니트로부터 마개 닫힌 미리 충전된 주사기는 니들의 베이스로 공기 방울이 발생되도록 상단에 니들을 갖는 주사기를 배치하고, 니들 밖으로 공기를 축출하고, 니들을 다시 쉴딩함으로써 니들로부터 공기를 짜내도록 수동으로 조작되었다. 그러한 절차에 대한 대조군으로서, 마개 닫힌 미리 충전된 주사기의 대조 그룹은 니들로부터 공기를 짜내도록 수동을 조작되었고, 이어서 플런저는 원래의 마개 위치에 근사하게 도로 눌려지고, 니들을 다시 쉴딩함으로써 > 3 mm 공간 부분을 형성하였다.

기계적 마개 배치법을 위해, 기계적 마개 배치 유니트 (그로닝겐, 모델 SVH200)가 사용되었다. 샘플을 함유하는 주사기는 유니트 내에 배치되고 마개가 기계적으로 배치되었다. 이 방법을 수행하기 위해, 주사기보다 더 작은 직경의 마개 배치 튜브가 마개를 주사기 배럴 내로 배치하였다. 이어서, 마개 배치 튜브는 움추러들었고, 마개는 팽창되어 주사기 배럴을 채웠다. 최소화된 공간 부분을 갖는 마개 닫힌 미리 충전된 주사기를 생산하기 위해, 마개는 이 마개가 마개의 바닥 표면과 액체의 상부 표면 사이에서 최대로 접촉하는 액체 표면에 가능한 한 근접하도록 액체 조성물의 상부 표면에 반하여 배치되었다.

각각의 미리 충전된 마개 닫힌 주사기에 대한 공간 부분은 눈금있는 캘리퍼에 의해 수동으로 측정되었다. 캘리퍼는 제조업자의 설명서에 따라 그것을 완전히 근접한 위치 (0.00")에 배치하고, 이어서 게이지 블록 0.050" 및 4.000"으로 검정함으로써 검정되었다. 공간 부분은 메니스커스의 상단으로부터 플런저의 편평한 몸체의 바닥까지 밀리미터 단위의 거리이다. 특정한 미리 충전된 주사기에서, 공간 부분은 2 mm 내지 5 mm로 변화하였다. 특정한 미리 충전된 주사기에서, 공간 부분은 3 mm±0.001 0.00254 mm였다. 최소화된 공간 부분을 갖는 특정한 미리 충전된 주사기에서, 공간 부분은 2 mm 미만이었다. 최소화된 공간 부분을 갖는 특정한 미리 충전된 주사기에서, 공간 부분은 1.3 mm 미만이었다.

미리 충전된 주사기는 상자 내에 포장되고, 미국 재료 시험 협회 (ATSM)에 의해 명시된 조건에 따라 C167 폴리우레탄 선박 내에서 2℃ 내지 8℃ 범위의 온도에서 항공으로 이루어졌다. 미리 충전된 주사기는 캘리포니아주 싸우전드 오크스로부터 테네시주 멤피스로, 이어서 테네시주 멤피스로부터 푸에르토 리코로, 이어서 푸에르토 리코로부터 테네시주 멤피스로, 마지막으로 테네시주 멤피스로부터 캘리포니아주 싸우전드 오크스로 전체 4대의 항공기편으로 (4개의 기압 주기; 각각의 비행편은 이륙 및 착륙을 위해 하나의 기압 주기를 가짐) 항공으로 선적되었다. 전체 수송 시간은 4일 이하였다.

가시적 입자를 위한 용기의 외관 검사는 외관 검사 캐비넷인 피닉스 이미지화 매뉴얼 검사 부쓰, 카탈로그 번호 MIB-100에서 수행되었다. 외관 검사 캐비넷은 각각 용기의 외관 검사를 위해 배경으로서 사용되는 2개의 별개의 표면을 갖는다. 하나의 표면은 비-반사성 백색 표면이고, 제2 표면은 비-반사성 흑색 표면이다. 흑백 표면은 그것이 검사 과정 동안 전체 용기에 대한 배경으로서 사용될 수 있도록 하기에 충분한 크기이다. 외관 검사 캐비넷은 또한 샘플의 위치에 적어도 2000 Lux의 조명을 제공하는 광원을 갖는다.

가시적 입자에 대해 검사하기 위해, 용기는 외관 검사 캐비넷에서 육안 수준으로 샘플을 곧추서게 유지하면서 부드럽게 빙빙 돌리거나 또는 뒤집었다. 용기를 빙빙 돌리거나 뒤집으면서 공기 방울이 도입되지 않도록 보장하기 위해 주의가 기울여졌다. 각각의 용기는 백색 표면 앞에서 대략 5초 동안 육안으로 관찰되었다. 이어서 각각의 용기는 흑색 표면 앞에서 대략 5초 동안 육안으로 관찰되었다. 몇몇 경우에, 가시적 입자의 존재 또는 부재를 확인하기 위해 광원 외에 확대경이 사용되었다.

αRANKL-1 조성물이 들어있는 미리 충전된 주사기에 의한 실험 결과는 아래 표 4에 나타낸다. 그 결과는 αRANKL-1 조성물을 함유하고 진공 마개 배치법에 따라 마개 닫혀져 > 3 mm 공간 부분 또는 최소화된 공간 부분을 형성하는 어떠한 주사기도 선적 후 가시적 입자를 갖지 않았음을 나타낸다. 그 결과는 또한 RANKL-1 조성물을 함유하고 기계적 마개 배치법에 따라 마개 닫혀져 최소화된 공간 부분을 형성하는 어떠한 주사기도 선적 후 가시적 입자를 갖지 않았음을 나타낸다.

RANKL -1 이 들어 있는 미리 충전된 주사기.

마개 배치 방법	공간 부분	미리 충전된 주사기의 총수	가시적 입자를 가진 수
진공	> 3 mm	100	0
진공	최소화됨 (< 1 mm)	20	0
진공 (최소화된 공간 부분 방법에 대한 대조군)	> 3 mm	20	0
기계적	최소화됨 (< 1 mm)	35	0

sTNFR:Fc 이 들어 있는 미리 충전된 주사기에 의한 실험 결과는 표 5에 나타낸다. 그 결과는 sTNFR:Fc 조성물을 함유하고 진공 마개 배치법에 따라 마개 닫혀 > 3 mm 공간 부분을 형성하는 모든 주사기가 선적 후 가시적 입자를 가졌음을 보인다. (전체 30중) 29개의 미리 충전된 주사기는 입자 스코어 3을 가졌고, 하나의 미리 충전된 주사기는 입자 스코어 2를 가졌다. 그 결과는 또한 진공 마개 배치법에 따라 마개 닫혀 최소화된 공간 부분을 형성하는 주사기가 선적 후 관찰되는 가시적 입자의 수를 감소시켰다. 그러한 실험에서, 29개의 미리 충전된 주사기는 입자 스코어 0을 갖는 한편, 2개의 미리 충전된 주사기는 입자 스코어 2를 가졌다. 입자 스코어 2를 갖는 2개의 미리 충전된 주사기는 또한 공기가 빼내어진 후 남아있는 작은 공기 방울을 가졌고, 이는 그들 주사기에 대한 공간 부분이 최소화되지 않았음을 시사한다. 또한, 10개의 미리 충전된 대조용 주사기가 시험되었다. 미리 충전된 대조용 주사기는 먼저 진공 마개 배치법에 따라 마개 닫혀져 최소화된 공간 부분을 형성하였다. 이어서, 그 방법에는 플런저를 재배치함으로써 > 3 mm 공간 부분을 형성하는 것이 수반된다. 표 5에 나타낸 바와 같이, 10개의 미리 충전된 대조용 주사기 모두는 선적 후 가시적 입자를 가졌고 각각은 입자 스코어 3을 가졌다.

표 5에서의 결과는 또한 sTNFR:Fc 조성물을 함유하고 기계적 마개 배치법에 따라 마개 닫혀 > 3 mm 공간 부분을 형성하는 모든 주사기가 선적 후 가시적 입자를 가졌음을 보인다. (전체 10 중) 6개의 미리 충전된 주사기는 입자 스코어 3을 가졌고, 4개의 미리 충전된 주사기는 입자 스코어 2를 가졌다. 또한, 표 5에서의 결과는 기계적 마개 배치법에 따라 마개 닫혀 최소화된 공간 부분을 형성하는 주사기가 선적 후 관찰되는 가시적 입자의 수를 감소시켰다. 그 실험에서, 30개의 미리 충전된 주사기 모두 입자 스코어 0을 가졌다.

요약하자면, 최소화된 공간 부분을 형성하기 위해 2가지 상이한 방법에 따라 주사기를 마개 닫은 결과는 특이적 결합제 조성물을 함유하고 최소화된 공간 부분을 형성하는 일 방법에 따라 마개를 닫는 조성물을 제조하는 것은 선적 동안 가시적 입자의 형성을 감소시키거나 또는 제거하는 것이 바람직할 수 있음을 시사한다.

sTNFR : Fc 이 들어 있는 미리 충전된 주사기

			입자 스코어
마개 배치 방법	공간 부분	미리 충전된 주사기의 총수	0	1	2	3
진공	> 3 mm	30	0	0	1	29
진공	최소화됨 (< 1 mm)	31	29	0	2*	0
진공 (최소화된 공간 부분 방법에 대한 대조군)	> 3 mm	10	0	0	0	10
기계적	> 3 mm	10	0	0	4	6
기계적	최소화됨 (< 1 mm)	30	30	0	0	0
* 이들 2개의 미리 충전된 주사기 각각 내에는 작은 공기 방울이 있었다.

부분-가시적 입자 분석

가시적 입자에 대한 용기의 외관 검사 외에, 맬버른 제타사이저 기구 (Malvern, Zetasizer Nano ZS, 모델 번호 ZEN3600)를 사용하는 부분-가시적 입자 분석이 여러 가지 조건 하에 sTNFR:Fc 조성물이 들어있는 미리 충전된 주사기 상에서 수행되었다.

다음 실험에서, 조성물 중의 sTNFR:Fc의 농도는 50 mg/ml였다. sTNFR:Fc는 25 mM 포스페이트, 25 mM 아르기닌 HCl, 100 mM NaCl, 1% 자당 중에서, pH 6.3으로 제형화되었다.

sTNFR:Fc 조성물은 0.2 μM 셀룰로스 필터를 통해 용액을 통과시킴으로써 멸균 여과되었다. 이어서, 샘플 (1.0 ml)은 1 ml 하이팩 유리 주사기 내로 수동으로 첨가되었다 (표 1 참조). 샘플을 함유하는 주사기는 아래 기재되는 바와 같이 진공 마개 배치법 또는 기계적 마개 배치법을 사용하여 Flurotec코팅된 플런저에 의해 마개 닫혀졌다 (표 2 참조).

진공 마개 배치법을 위해, 진공 마개 배치 유니트 (오토클레이브 가능한 마개 배치 유니트 (ASPU), 임프로시스템, 카탈로그 번호 897400)가 사용되었다. 샘플을 함유하는 주사기는 유니트 내에 배치되어 FC1-24" Hg, FC2-22.5" Hg, FC3 26.3" Hg의 진공 주기 설정치로 평방 인치 입구 압력당 75파운드로 마개 닫혔다. 챔버 진공은 23.5" Hg였다. 그들 설정치는 > 3 mm의 공간 부분을 초래하였다.

각각의 미리 충전된 마개 닫힌 주사기에 대한 공간 부분은 상기 "가시적 입자 분석"이라는 표제의 섹션에 기재된 바와 같이 눈금있는 캘리퍼에 의해 수동으로 측정되었다.

3개의 미리 충전된 주사기는 각각 상이한 조건 하에 시험되었다. sTNFR:Fc 조성물은 하나의 주사기에 첨가되었고, 이 주사기는 진공 마개 배치법에 따라 마개 닫혀 > 3 mm 공간 부분을 형성하고 정상 상태 하에 저장되었다 (도 4, 녹색선, "선적되지 않은 대조군"으로 지명됨). sTNFR:Fc 조성물은 또한 제2 주사기에 첨가되었고, 이 주사기는 진공 마개 배치법에 따라 마개 닫혀 > 3 mm 공간 부분을 형성하고 아래 기재되는 바의 선적 조건에 적용되었다 (도 4, 청색선, "선적된 대조군"으로 지명됨). sTNFR:Fc 조성물은 또한 제3 주사기에 첨가되었고, 이 주사기는 기계적 마개 배치법에 따라 마개 닫혀지고, "가시적 입자 분석"이라는 표제 하에 상기한 절차에 따라 최소화된 공간 부분을 형성하고 (표 4, 적색선, "선적된, 최소화된 공간 부분"이라 지명됨), 다음과 같이 선적 조건에 적용되었다. 선적을 위해, 미리 충전된 주사기는 상자 내에 포장되고, 미국 재료 시험 협회 (ATSM)에 의해 명시된 조건에 따라 C167 폴리우레탄 선박 내에서 2℃ 내지 8℃ 범위의 온도에서 항공으로 선적되었다. 미리 충전된 주사기는 캘리포니아주 싸우전드 오크스로부터 테네시주 멤피스로, 이어서 테네시주 멤피스로부터 푸에르토 리코로, 이어서 푸에르토 리코로부터 테네시주 멤피스로, 마지막으로 테네시주 멤피스로부터 캘리포니아주 싸우전드 오크스로 전체 4대의 항공기편으로 (4개의 기압 주기; 각각의 비행편은 이륙 및 착륙을 위해 하나의 기압 주기를 가짐) 항공으로 선적되었다. 전체 수송 시간은 4일 이하였다.

맬버른 제타사이저 기구를 사용하여 부분-가시적 입자 크기를 측정하기 위해, 1 ml 샘플 부피량이 일회용 크벳 내에 놓였고, 측정은 25℃에서 수행되었다. 각각의 1 ml 샘플은 10초마다 5 서브-런에 의해 분석되었다. 서브-런은 각각의 샘플의 중복 측정이다. 수력학적 직경 및 다분산성 값은 분산제 매니저 소프트웨어를 사용하고, 0.939 cP의 분산제 점성을 사용하여 산출되었다.

세기 가중된 크기 분포는 도 4에 나타낸다. 세기-가중된 크기 분포는 산란된 광 세기에 기초한 시그널이다. 그 결과는 도 4 (청색선)에서 "선적된 대조군"으로 지명된 미리 충전된 주사기로부터의 샘플이 큰 수력학적 크기의 독특한 새로운 피크를 갖는 바이모달 분포를 갖는 것을 보여준다. 그 결과는 또한 도 4 (녹색선)에서 "선적되지 않은 대조군"으로 지명된 미리 충전된 주사기로부터의 샘플, 및 도 4 (적색선)에서 "선적된, 최소화된 공간 부분"으로 지명된 미리 충전된 주사기로부터의 샘플이 큰 수력학적 크기의 독특한 새로운 피크를 갖지 않았음을 보여준다.

동일한 실험의 수치적 결과는 표 6에 나타낸다. 그들 결과는 "선적된 대조군"으로 지명된 미리 충전된 주사기로부터의 샘플이 "선적되지 않은 대조군"로 지명된 미리 충전된 주사기로부터의 샘플 및 "선적된, 최소화된 공간 부분"로 지명된 미리 충전된 주사기로부터의 샘플에 비해 더 큰 z-평균 수력학적 직경 및 더 큰 다분산성을 가짐을 보인다.

샘플	Z-평균 수력학적 직경 ( nm )	다분산성 지수
"선적되지 않은 대조군"	14.5	0.206
"선적된 대조군"	17.4	0.360
"선적된, 최소화된 공간 부분"	14.7	0.210

이들 실험의 결과는 주사기가 최소화된 공간 부분을 형성하도록 기계적 마개 배치법에 따라 마개 닫혀지는 경우, 선적 후 미리 충전된 주사기 내에 부분-가시적 입자들이 존재하지 않음을 시사한다. 따라서, 그 결과는 특이적 결합제 조성물을 함유하는 주사기를 제조하고, 최소화된 공간 부분을 형성하는 하나의 방법에 따라 그들을 마개 닫는 것이 선적하는 동안 가시적 및 부분-가시적 입자를 포함하는 입자의 형성을 감소시키거나 또는 제거하는데 바람직할 수 있음을 시사한다.

SEQUENCE LISTING <110> Amgen Inc. Bonk, Roberta Eu, Mingda Huinker, Amy Pallitto, Monica Ricci, Margaret Stackhouse, Nicole <120> STABILIZED PROTEIN COMPOSITIONS <130> 6843.123-304 <140> PCT/US2009/000759 <141> 2009-02-05 <150> US 61/065,065 <151> 2008-02-07 <160> 4 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 1426 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> DNA sequence encoding the alpha-RANKL-1 antibody heavy chain <400> 1 aagcttgacc accatggagt ttgggctgag ctggcttttt cttgtggcta ttttaaaagg 60 tgtccagtgt gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc 120 cctgagactc tcctgtgcag cctctggatt cacctttagc agctatgcca tgagctgggt 180 ccgccaggct ccagggaagg ggctggagtg ggtctcaggt attactggga gtggtggtag 240 tacatactac gcagactccg tgaagggccg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa 300 cacgctgtat ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtat attactgtgc 360 gaaagatcca gggactacgg tgattatgag ttggttcgac ccctggggcc agggaaccct 420 ggtcaccgtc tcctcagcct ccaccaaggg cccatcggtc ttccccctgg cgccctgctc 480 caggagcacc tccgagagca cagcggccct gggctgcctg gtcaaggact acttccccga 540 accggtgacg gtgtcgtgga actcaggcgc tctgaccagc ggcgtgcaca ccttcccagc 600 tgtcctacag tcctcaggac tctactccct cagcagcgtg gtgaccgtgc cctccagcaa 660 cttcggcacc cagacctaca cctgcaacgt agatcacaag cccagcaaca ccaaggtgga 720 caagacagtt gagcgcaaat gttgtgtcga gtgcccaccg tgcccagcac cacctgtggc 780 aggaccgtca gtcttcctct tccccccaaa acccaaggac accctcatga tctcccggac 840 ccctgaggtc acgtgcgtgg tggtggacgt gagccacgaa gaccccgagg tccagttcaa 900 ctggtacgtg gacggcgtgg aggtgcataa tgccaagaca aagccacggg aggagcagtt 960 caacagcacg ttccgtgtgg tcagcgtcct caccgttgtg caccaggact ggctgaacgg 1020 caaggagtac aagtgcaagg tctccaacaa aggcctccca gcccccatcg agaaaaccat 1080 ctccaaaacc aaagggcagc cccgagaacc acaggtgtac accctgcccc catcccggga 1140 ggagatgacc aagaaccagg tcagcctgac ctgcctggtc aaaggcttct accccagcga 1200 catcgccgtg gagtgggaga gcaatgggca gccggagaac aactacaaga ccacacctcc 1260 catgctggac tccgacggct ccttcttcct ctacagcaag ctcaccgtgg acaagagcag 1320 gtggcagcag gggaacgtct tctcatgctc cgtgatgcat gaggctctgc acaaccacta 1380 cacgcagaag agcctctccc tgtctccggg taaatgataa gtcgac 1426 <210> 2 <211> 467 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence of the alpha-RANKL-1 antibody heavy chain <400> 2 Met Glu Phe Gly Leu Ser Trp Leu Phe Leu Val Ala Ile Leu Lys Gly 1 5 10 15 Val Gln Cys Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln 20 25 30 Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe 35 40 45 Ser Ser Tyr Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu 50 55 60 Glu Trp Val Ser Gly Ile Thr Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala 65 70 75 80 Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn 85 90 95 Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val 100 105 110 Tyr Tyr Cys Ala Lys Asp Pro Gly Thr Thr Val Ile Met Ser Trp Phe 115 120 125 Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr 130 135 140 Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser 145 150 155 160 Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu 165 170 175 Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His 180 185 190 Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser 195 200 205 Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr Tyr Thr Cys 210 215 220 Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu 225 230 235 240 Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala 245 250 255 Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 260 265 270 Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 275 280 285 Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 290 295 300 His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe 305 310 315 320 Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 325 330 335 Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro Ile 340 345 350 Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 355 360 365 Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser 370 375 380 Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 385 390 395 400 Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 405 410 415 Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val 420 425 430 Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 435 440 445 His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 450 455 460 Pro Gly Lys 465 <210> 3 <211> 728 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> DNA sequence encoding the alpha-RANKL-1 antibody kappa light chain <400> 3 tctagaccac catggaaacc ccagcgcagc ttctcttcct cctgctactc tggctcccag 60 ataccaccgg agaaattgtg ttgacgcagt ctccaggcac cctgtctttg tctccagggg 120 aaagagccac cctctcctgt agggccagtc agagtgttcg cggcaggtac ttagcctggt 180 accagcagaa acctggccag gctcccaggc tcctcatcta tggtgcatcc agcagggcca 240 ctggcatccc agacaggttc agtggcagtg ggtctgggac agacttcact ctcaccatca 300 gcagactgga gcctgaagat tttgcagtgt tttactgtca gcagtatggt agttcacctc 360 ggacgttcgg ccaagggacc aaggtggaaa tcaaacgaac tgtggctgca ccatctgtct 420 tcatcttccc gccatctgat gagcagttga aatctggaac tgcctctgtt gtgtgcctgc 480 tgaataactt ctatcccaga gaggccaaag tacagtggaa ggtggataac gccctccaat 540 cgggtaactc ccaggagagt gtcacagagc aggacagcaa ggacagcacc tacagcctca 600 gcagcaccct gacgctgagc aaagcagact acgagaaaca caaagtctac gcctgcgaag 660 tcacccatca gggcctgagc tcgcccgtca caaagagctt caacagggga gagtgttgat 720 aagtcgac 728 <210> 4 <211> 235 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence of the alpha-RANKL-1 antibody kappa light chain <400> 4 Met Glu Thr Pro Ala Gln Leu Leu Phe Leu Leu Leu Leu Trp Leu Pro 1 5 10 15 Asp Thr Thr Gly Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser 20 25 30 Leu Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser 35 40 45 Val Arg Gly Arg Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala 50 55 60 Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro 65 70 75 80 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile 85 90 95 Ser Arg Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Phe Tyr Cys Gln Gln Tyr 100 105 110 Gly Ser Ser Pro Arg Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 115 120 125 Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu 130 135 140 Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe 145 150 155 160 Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln 165 170 175 Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser 180 185 190 Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu 195 200 205 Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser 210 215 220 Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 225 230 235

Claims

특이적 결합제를 포함하는 조성물이 들어 있는 미리 충전된 주사기 (prefilled syringe)에 있어서, 상기 미리 충전된 주사기에 들어 있는 상기 특이적 결합제가 안정되어 있는, 미리 충전된 주사기.
제1항에 있어서, 상기 특이적 결합제는 RANKL 에 대한 특이적 결합제, TNF 에 대한 특이적 결합제, 및 IL-1R1 에 대한 특이적 결합제로부터 선택되는, 미리 충전된 주사기.
제2항에 있어서, 상기 특이적 결합제는 항체, 다클론성 항체, 단클론성 항체, 중쇄 및 경쇄가 유동 링커에 의해 연결되는 항체, Fv 분자, 맥시바디(maxibody), 항원 결합 단편, Fab 단편, Fab' 단편, F(ab')₂ 분자, 완전 인간 항체, 인간화 항체, 및 키메라 항체로부터 선택되는, 미리 충전된 주사기.
제3항에 있어서, 상기 특이적 결합제는 RANKL 의 RANK 에의 결합을 실질적으로 억제하는 항체, TNF 의 TNF-R 에의 결합을 실질적으로 억제하는 항체, 및 IL-1 의 IL-1R1 에의 결합을 실질적으로 억제하는 항체로부터 선택되는 항체인, 미리 충전된 주사기.
제4항에 있어서, 상기 항체는 RANKL 의 RANK 에의 결합을 실질적으로 억제하는 항체이고, 여기서 상기 항체는 αRANKL-1 이고, 여기서 αRANKL-1 은 중쇄 및 경쇄를 포함하고, 여기서 상기 중쇄는 SEQ ID NO: 2 로 나타낸 아미노산 서열 또는 그의 단편을 포함하고, 상기 경쇄는 SEQ ID NO: 4 로 나타낸 아미노산 서열 또는 그의 단편을 포함하는, 미리 충전된 주사기.
제4항에 있어서, 상기 항체는 IL-1 의 IL-1R1 에의 결합을 실질적으로 억제하는 항체인, 미리 충전된 주사기.
제1항에 있어서, 상기 조성물은 적어도 하나의 추가의 약제학적 제제를 추가로 포함하는, 미리 충전된 주사기.
제1항에 있어서, 상기 조성물은 적어도 하나의 안정화제 및 완충제를 추가로 포함하는, 미리 충전된 주사기.
제8항에 있어서, 적어도 하나의 안정화제는 계면활성제인, 미리 충전된 주사기.
제9항에 있어서, 상기 계면활성제는 폴리소르베이트 및 폴리옥시프로필렌-폴리옥시에틸렌 에스테르 (Pluronic®)로부터 선택되는, 미리 충전된 주사기.
제10항에 있어서, 상기 계면활성제는 폴리소르베이트인, 미리 충전된 주사기.
제11항에 있어서, 상기 폴리소르베이트는 폴리소르베이트 20 및 폴리소르베이트 80 로부터 선택되는, 미리 충전된 주사기.
제9항에 있어서, 상기 계면활성제는 0.001% 내지 1% 의 농도로 존재하는, 미리 충전된 주사기.
제13항에 있어서, 상기 계면활성제는 0.002% 내지 0.5% 의 농도로 존재하는, 미리 충전된 주사기.
제14항에 있어서, 상기 계면활성제는 0.004% 의 농도로 존재하는, 미리 충전된 주사기.
제14항에 있어서, 상기 계면활성제는 0.01% 의 농도로 존재하는, 미리 충전된 주사기.
제8항에 있어서, 상기 조성물의 pH 는 6.6 미만인, 미리 충전된 주사기.
제17항에 있어서, 상기 조성물의 pH 는 5.5 내지 6.5 인, 미리 충전된 주사기.
제18항에 있어서, 상기 조성물의 pH 는 6.3 인, 미리 충전된 주사기.
제17항에 있어서, 상기 조성물의 pH 는 4.5 내지 5.5 인, 미리 충전된 주사기.
제20항에 있어서, 상기 조성물의 pH 는 5.2 인, 미리 충전된 주사기.
제1항에 있어서, 상기 주사기는 실리콘을 포함하는 물질을 포함하고, 여기서 상기 실리콘은 가교결합되어 있는, 미리 충전된 주사기.
제1항에 있어서, 상기 주사기는 실리콘을 포함하는 물질을 포함하고, 여기서 상기 실리콘은 베이킹(baking)되어 있는, 미리 충전된 주사기.
제1항에 있어서, 상기 주사기는 실리콘이 없고, 여기서 주사기 클로저(closure)는 실리콘이 없는, 미리 충전된 주사기.
제1항에 있어서, 상기 주사기는 고분자량 플라스틱 물질을 포함하고, 여기서 상기 고분자량 플라스틱 물질은 실리콘이 없는, 미리 충전된 주사기.
제25항에 있어서, 상기 고분자량 플라스틱 물질은 환형 올레핀 중합체를 포함하는, 미리 충전된 주사기.
제25항에 있어서, 상기 고분자량 플라스틱 물질은 환형 올레핀 공중합체를 포함하는, 미리 충전된 주사기.
특이적 결합제를 포함하는 조성물이 들어 있는 미리 충전된 주사기에 있어서, 상기 조성물과 주사기 클로저(closure) 사이의 공간 부분이 최소로 되어 있고, 상기 미리 충전된 주사기에 들어 있는 상기 특이적 결합제는 안정되어 있는, 미리 충전된 주사기.
제28항에 있어서, 상기 최소 공간 부분은 2.5 mm 내지 3.0 mm 인, 미리 충전된 주사기.
제28항에 있어서, 상기 최소 공간 부분은 2.0 mm 내지 2.5 mm 인, 미리 충전된 주사기.
제28항에 있어서, 상기 최소 공간 부분은 1.5 mm 내지 2.0 mm 인, 미리 충전된 주사기.
제28항에 있어서, 상기 최소 공간 부분은 1.0 mm 내지 1.5 mm 인, 미리 충전된 주사기.
제28항에 있어서, 상기 특이적 결합제는 RANKL 에 대한 특이적 결합제, TNF 에 대한 특이적 결합제, 및 IL-1R1 에 대한 특이적 결합제로부터 선택되는, 미리 충전된 주사기.
제33항에 있어서, 상기 특이적 결합제는 항체, 다클론성 항체, 단클론성 항체, 중쇄 및 경쇄가 유동 링커에 의해 연결되는 항체, Fv 분자, 맥시바디, 항원 결합 단편, Fab 단편, Fab' 단편, F(ab')₂ 분자, 완전 인간 항체, 인간화 항체, 및 키메라 항체로부터 선택되는, 미리 충전된 주사기.
제34항에 있어서, 상기 특이적 결합제는 RANKL 의 RANK 에의 결합을 실질적으로 억제하는 항체, TNF 의 TNF-R 에의 결합을 실질적으로 억제하는 항체, 및 IL-1 의 IL-1R1 에의 결합을 실질적으로 억제하는 항체로부터 선택되는 항체인, 미리 충전된 주사기.
제35항에 있어서, 상기 항체는 RANKL 의 RANK 에의 결합을 실질적으로 억제하는 항체이고, 여기서 상기 항체는 αRANKL-1 이고, 여기서 αRANKL-1 은 중쇄 및 경쇄를 포함하고, 여기서 상기 중쇄는 SEQ ID NO: 2 로 나타낸 아미노산 서열 또는 그의 단편을 포함하고, 상기 경쇄는 SEQ ID NO: 4 로 나타낸 아미노산 서열 또는 그의 단편을 포함하는, 미리 충전된 주사기.
제35항에 있어서, 상기 항체는 IL-1 의 IL-1R1 에의 결합을 실질적으로 억제하는 항체인, 미리 충전된 주사기.
제28항에 있어서, 상기 조성물은 적어도 하나의 추가의 약제학적 제제를 추가로 포함하는, 미리 충전된 주사기.
제28항에 있어서, 상기 조성물은 적어도 하나의 안정화제 및 완충제를 추가로 포함하는, 미리 충전된 주사기.
제39항에 있어서, 상기 적어도 하나의 안정화제는 계면활성제인, 미리 충전된 주사기.
제40항에 있어서, 상기 계면활성제는 폴리소르베이트 및 폴리옥시프로필렌-폴리옥시에틸렌 에스테르 (Pluronic®)로부터 선택되는, 미리 충전된 주사기.
제41항에 있어서, 상기 계면활성제는 폴리소르베이트인, 미리 충전된 주사기.
제42항에 있어서, 상기 폴리소르베이트는 폴리소르베이트 20 및 폴리소르베이트 80 로부터 선택되는, 미리 충전된 주사기.
제40항에 있어서, 상기 계면활성제는 0.001% 내지 1% 의 농도로 존재하는, 미리 충전된 주사기.
제44항에 있어서, 상기 계면활성제는 0.002% 내지 0.5% 의 농도로 존재하는, 미리 충전된 주사기.
제45항에 있어서, 상기 계면활성제는 0.004% 의 농도로 존재하는, 미리 충전된 주사기.
제45항에 있어서, 상기 계면활성제는 0.01% 의 농도로 존재하는, 미리 충전된 주사기.
제39항에 있어서, 상기 조성물의 pH 는 6.6 미만인, 미리 충전된 주사기.
제48항에 있어서, 상기 조성물의 pH 는 5.5 내지 6.5 인, 미리 충전된 주사기.
제49항에 있어서, 상기 조성물의 pH 는 6.3인, 미리 충전된 주사기.
제48항에 있어서, 상기 조성물의 pH 는 4.5 내지 5.5 인, 미리 충전된 주사기.
제51항에 있어서, 상기 조성물의 pH 는 5.2 인, 미리 충전된 주사기.
제28항에 있어서, 상기 주사기는 실리콘을 포함하는 물질을 포함하고, 여기서 상기 실리콘은 가교결합되어 있는, 미리 충전된 주사기.
제28항에 있어서, 상기 주사기는 실리콘을 포함하는 물질을 포함하고, 여기서 상기 실리콘은 베이킹(baking)되어 있는, 미리 충전된 주사기.
제28항에 있어서, 상기 주사기는 실리콘이 없고, 여기서 상기 주사기 클로저(closure)는 실리콘이 없는, 미리 충전된 주사기.
제28항에 있어서, 상기 주사기는 고분자량 플라스틱 물질을 포함하고, 여기서 상기 고분자량 플라스틱 물질은 실리콘이 없는, 미리 충전된 주사기.
제56항에 있어서, 상기 고분자량 플라스틱 물질은 환형 올레핀 중합체를 포함하는, 미리 충전된 주사기.
제56항에 있어서, 상기 고분자량 플라스틱 물질은 환형 올레핀 공중합체를 포함하는, 미리 충전된 주사기.
주사기에 특이적 결합제를 포함하는 조성물을 도입하는 것을 포함하는 미리 충전된 주사기의 제조 방법에 있어서, 상기 조성물과 주사기 클로저(closure) 사이의 공간 부분이 최소로 되어 있고, 상기 미리 충전된 주사기에 들어 있는 상기 특이적 결합제는 안정되어 있는, 미리 충전된 주사기의 제조 방법.
제59항에 있어서, 상기 특이적 결합제는 RANKL 에 대한 특이적 결합제, TNF 에 대한 특이적 결합제, 및 IL-1R1 에 대한 특이적 결합제로부터 선택되는, 미리 충전된 주사기의 제조 방법.
제60항에 있어서, 상기 특이적 결합제는 항체, 다클론성 항체, 단클론성 항체, 중쇄 및 경쇄가 유동 링커에 의해 연결되는 항체, Fv 분자, 맥시바디, 항원 결합 단편, Fab 단편, Fab' 단편, F(ab')₂ 분자, 완전 인간 항체, 인간화 항체, 및 키메라 항체로부터 선택되는, 미리 충전된 주사기의 제조 방법.
제61항에 있어서, 상기 특이적 결합제는 RANKL 의 RANK 에의 결합을 실질적으로 억제하는 항체, TNF 의 TNF-R 에의 결합을 실질적으로 억제하는 항체, 및 IL-1 의 IL-1R1 에의 결합을 실질적으로 억제하는 항체로부터 선택되는 항체인, 미리 충전된 주사기의 제조 방법.
제62항에 있어서, 상기 항체는 RANKL 의 RANK 에의 결합을 실질적으로 억제하는 항체이고, 여기서 상기 항체는 αRANKL-1 이고, 여기서 αRANKL-1 은 중쇄 및 경쇄를 포함하고, 여기서 상기 중쇄는 SEQ ID NO: 2 로 나타낸 아미노산 서열 또는 그의 단편을 포함하고, 상기 경쇄는 SEQ ID NO: 4 로 나타낸 아미노산 서열 또는 그의 단편을 포함하는, 미리 충전된 주사기의 제조 방법.
제62항에 있어서, 상기 항체는 IL-1 의 IL-1R1 에의 결합을 실질적으로 억제하는 항체인, 미리 충전된 주사기의 제조 방법.
제59항에 있어서, 상기 조성물은 적어도 하나의 추가의 약제학적 제제를 추가로 포함하는, 미리 충전된 주사기의 제조 방법.
제59항에 있어서, 상기 조성물은 적어도 하나의 안정화제 및 완충제를 추가로 포함하는, 미리 충전된 주사기의 제조 방법.
제66항에 있어서, 상기 적어도 하나의 안정화제는 계면활성제인, 미리 충전된 주사기의 제조 방법.
제67항에 있어서, 상기 계면활성제는 폴리소르베이트 및 폴리옥시프로필렌-폴리옥시에틸렌 에스테르 (Pluronic®)로부터 선택되는, 미리 충전된 주사기의 제조 방법.
제68항에 있어서, 상기 계면활성제는 폴리소르베이트인, 방법.
제69항에 있어서, 상기 폴리소르베이트는 폴리소르베이트 20 및 폴리소르베이트 80 로부터 선택되는, 미리 충전된 주사기의 제조 방법.
제67항에 있어서, 상기 계면활성제는 0.001% 내지 1% 의 농도로 존재하는, 미리 충전된 주사기의 제조 방법.
제71항에 있어서, 상기 계면활성제는 0.002% 내지 0.5% 의 농도로 존재하는, 미리 충전된 주사기의 제조 방법.
제72항에 있어서, 상기 계면활성제는 0.004% 의 농도로 존재하는, 미리 충전된 주사기의 제조 방법.
제72항에 있어서, 상기 계면활성제는 0.01% 의 농도로 존재하는, 미리 충전된 주사기의 제조 방법.
제66항에 있어서, 상기 조성물의 pH 는 6.6 미만인, 미리 충전된 주사기의 제조 방법.
제75항에 있어서, 상기 조성물의 pH 는 5.5 내지 6.5 인, 미리 충전된 주사기의 제조 방법.
제76항에 있어서, 상기 조성물의 pH 는 6.3 인, 미리 충전된 주사기의 제조 방법.
제75항에 있어서, 상기 조성물의 pH 는 4.5 내지 5.5 인, 미리 충전된 주사기의 제조 방법.
제78항에 있어서, 상기 조성물의 pH 는 5.2 인, 미리 충전된 주사기의 제조 방법.
제59항에 있어서, 상기 주사기는 실리콘을 포함하는 물질을 포함하고, 여기서 상기 실리콘은 가교결합되어 있는, 미리 충전된 주사기의 제조 방법.
제59항에 있어서, 상기 주사기는 실리콘을 포함하는 물질을 포함하고, 여기서 상기 실리콘은 베이킹(baking)되어 있는, 미리 충전된 주사기의 제조 방법.
제59항에 있어서, 상기 주사기는 실리콘이 없고, 여기서 상기 주사기 클로저(closure)는 실리콘이 없는, 미리 충전된 주사기의 제조 방법.
제59항에 있어서, 상기 주사기는 고분자량 플라스틱 물질을 포함하고, 여기서 상기 고분자량 플라스틱 물질은 실리콘이 없는, 미리 충전된 주사기의 제조 방법.
제83항에 있어서, 상기 고분자량 플라스틱 물질은 환형 올레핀 중합체를 포함하는, 미리 충전된 주사기의 제조 방법.
제83항에 있어서, 상기 고분자량 플라스틱 물질은 환형 올레핀 공중합체를 포함하는, 미리 충전된 주사기의 제조 방법.
제1항 또는 제28항에 있어서, 상기 특이적 결합제는 1 mg/ml 내지 150 mg/ml 의 농도인, 미리 충전된 주사기.
제59항에 있어서, 상기 특이적 결합제는 1 mg/ml 내지 150 mg/ml 의 농도인, 미리 충전된 주사기의 제조 방법.
조성물과 주사기 클로저(closure) 사이의 공간 부분이 최소로 되도록 미리 충전된 주사기 내에 조성물을 위치시키는 것을 포함하며 상기 미리 충전된 주사기에 들어 있는 상기 특이적 결합제는 안정되어 있는, 미리 충전된 주사기에 들어 있는 조성물 중 특이적 결합제를 안정시키는 방법.