DE3889845T2 - Verfahren zur Massanalyse von Wasserstoff-Peroxyd und Reagens dafür. - Google Patents
Verfahren zur Massanalyse von Wasserstoff-Peroxyd und Reagens dafür.Info
- Publication number
- DE3889845T2 DE3889845T2 DE3889845T DE3889845T DE3889845T2 DE 3889845 T2 DE3889845 T2 DE 3889845T2 DE 3889845 T DE3889845 T DE 3889845T DE 3889845 T DE3889845 T DE 3889845T DE 3889845 T2 DE3889845 T2 DE 3889845T2
- Authority
- DE
- Germany
- Prior art keywords
- hydrogen peroxide
- peroxidase
- indicator
- compound
- trivalent cobalt
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 80
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 20
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 title claims description 8
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 title description 6
- 238000004445 quantitative analysis Methods 0.000 claims abstract description 26
- 229910017052 cobalt Inorganic materials 0.000 claims abstract description 20
- 239000010941 cobalt Substances 0.000 claims abstract description 20
- GUTLYIVDDKVIGB-UHFFFAOYSA-N cobalt atom Chemical compound [Co] GUTLYIVDDKVIGB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 20
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 claims abstract description 18
- 150000001869 cobalt compounds Chemical class 0.000 claims abstract description 18
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 claims abstract description 18
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims abstract description 9
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 19
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 claims description 15
- 125000004435 hydrogen atom Chemical group [H]* 0.000 claims description 15
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 claims description 14
- 125000005843 halogen group Chemical group 0.000 claims description 5
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 5
- 125000004964 sulfoalkyl group Chemical group 0.000 claims description 5
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 abstract description 10
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 abstract description 7
- BPYKTIZUTYGOLE-IFADSCNNSA-N Bilirubin Chemical compound N1C(=O)C(C)=C(C=C)\C1=C\C1=C(C)C(CCC(O)=O)=C(CC2=C(C(C)=C(\C=C/3C(=C(C=C)C(=O)N\3)C)N2)CCC(O)=O)N1 BPYKTIZUTYGOLE-IFADSCNNSA-N 0.000 abstract description 6
- 102000001554 Hemoglobins Human genes 0.000 abstract description 4
- 108010054147 Hemoglobins Proteins 0.000 abstract description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 4
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 abstract description 4
- 239000000758 substrate Substances 0.000 abstract description 4
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 abstract description 3
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 abstract description 3
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 abstract description 3
- 239000005515 coenzyme Substances 0.000 abstract description 2
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 13
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 12
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 10
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 7
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 7
- RLFWWDJHLFCNIJ-UHFFFAOYSA-N 4-aminoantipyrine Chemical compound CN1C(C)=C(N)C(=O)N1C1=CC=CC=C1 RLFWWDJHLFCNIJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- LEHOTFFKMJEONL-UHFFFAOYSA-N Uric Acid Chemical compound N1C(=O)NC(=O)C2=C1NC(=O)N2 LEHOTFFKMJEONL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- TVWHNULVHGKJHS-UHFFFAOYSA-N Uric acid Natural products N1C(=O)NC(=O)C2NC(=O)NC21 TVWHNULVHGKJHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 description 6
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 description 6
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 6
- UFMZWBIQTDUYBN-UHFFFAOYSA-N cobalt dinitrate Chemical compound [Co+2].[O-][N+]([O-])=O.[O-][N+]([O-])=O UFMZWBIQTDUYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 229940116269 uric acid Drugs 0.000 description 6
- 230000008033 biological extinction Effects 0.000 description 5
- 239000012496 blank sample Substances 0.000 description 5
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 5
- ZIDGWNWSQFOYHF-UHFFFAOYSA-N 4-methyl-5-(sulfomethylamino)-2-(1,3-thiazol-2-yldiazenyl)benzoic acid Chemical compound C1=C(NCS(O)(=O)=O)C(C)=CC(N=NC=2SC=CN=2)=C1C(O)=O ZIDGWNWSQFOYHF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 4
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 102000004316 Oxidoreductases Human genes 0.000 description 4
- 108090000854 Oxidoreductases Proteins 0.000 description 4
- CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L Sodium Carbonate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C([O-])=O CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 4
- WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N benzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC=C1 WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 4
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 4
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- BAWFJGJZGIEFAR-NNYOXOHSSA-N NAD zwitterion Chemical compound NC(=O)C1=CC=C[N+]([C@H]2[C@@H]([C@H](O)[C@@H](COP([O-])(=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]3[C@H]([C@@H](O)[C@@H](O3)N3C4=NC=NC(N)=C4N=C3)O)O2)O)=C1 BAWFJGJZGIEFAR-NNYOXOHSSA-N 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 3
- 239000003613 bile acid Substances 0.000 description 3
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 3
- 238000011088 calibration curve Methods 0.000 description 3
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 3
- XLJKHNWPARRRJB-UHFFFAOYSA-N cobalt(2+) Chemical compound [Co+2] XLJKHNWPARRRJB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- NUHXWPRATKOXDB-UHFFFAOYSA-L diazanium;cobalt(2+);disulfate Chemical compound [NH4+].[NH4+].[Co+2].[O-]S([O-])(=O)=O.[O-]S([O-])(=O)=O NUHXWPRATKOXDB-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 3
- 229950006238 nadide Drugs 0.000 description 3
- 229930027945 nicotinamide-adenine dinucleotide Natural products 0.000 description 3
- SZUVGFMDDVSKSI-WIFOCOSTSA-N (1s,2s,3s,5r)-1-(carboxymethyl)-3,5-bis[(4-phenoxyphenyl)methyl-propylcarbamoyl]cyclopentane-1,2-dicarboxylic acid Chemical compound O=C([C@@H]1[C@@H]([C@](CC(O)=O)([C@H](C(=O)N(CCC)CC=2C=CC(OC=3C=CC=CC=3)=CC=2)C1)C(O)=O)C(O)=O)N(CCC)CC(C=C1)=CC=C1OC1=CC=CC=C1 SZUVGFMDDVSKSI-WIFOCOSTSA-N 0.000 description 2
- HSINOMROUCMIEA-FGVHQWLLSA-N (2s,4r)-4-[(3r,5s,6r,7r,8s,9s,10s,13r,14s,17r)-6-ethyl-3,7-dihydroxy-10,13-dimethyl-2,3,4,5,6,7,8,9,11,12,14,15,16,17-tetradecahydro-1h-cyclopenta[a]phenanthren-17-yl]-2-methylpentanoic acid Chemical compound C([C@@]12C)C[C@@H](O)C[C@H]1[C@@H](CC)[C@@H](O)[C@@H]1[C@@H]2CC[C@]2(C)[C@@H]([C@H](C)C[C@H](C)C(O)=O)CC[C@H]21 HSINOMROUCMIEA-FGVHQWLLSA-N 0.000 description 2
- MFIPFYVHTJNYGB-UHFFFAOYSA-N 2-(1,3-benzothiazol-2-yldiazenyl)-5-(dimethylamino)benzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC(N(C)C)=CC=C1N=NC1=NC2=CC=CC=C2S1 MFIPFYVHTJNYGB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- GBVMILNGUVSXII-UHFFFAOYSA-N 2-[(3,5-dibromopyridin-2-yl)diazenyl]-5-(3-sulfopropylamino)benzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC(NCCCS(O)(=O)=O)=CC=C1N=NC1=NC=C(Br)C=C1Br GBVMILNGUVSXII-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JKIYPXKCQBHOLY-UHFFFAOYSA-N 5-(dimethylamino)-2-(1,3-thiazol-2-yldiazenyl)benzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC(N(C)C)=CC=C1N=NC1=NC=CS1 JKIYPXKCQBHOLY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PAYRUJLWNCNPSJ-UHFFFAOYSA-N Aniline Chemical compound NC1=CC=CC=C1 PAYRUJLWNCNPSJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000005711 Benzoic acid Substances 0.000 description 2
- 102100036504 Dehydrogenase/reductase SDR family member 9 Human genes 0.000 description 2
- 108091006149 Electron carriers Proteins 0.000 description 2
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LCTONWCANYUPML-UHFFFAOYSA-N Pyruvic acid Chemical compound CC(=O)C(O)=O LCTONWCANYUPML-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010092464 Urate Oxidase Proteins 0.000 description 2
- POJWUDADGALRAB-UHFFFAOYSA-N allantoin Chemical compound NC(=O)NC1NC(=O)NC1=O POJWUDADGALRAB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000010233 benzoic acid Nutrition 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- BKFAZDGHFACXKY-UHFFFAOYSA-N cobalt(II) bis(acetylacetonate) Chemical compound [Co+2].CC(=O)[CH-]C(C)=O.CC(=O)[CH-]C(C)=O BKFAZDGHFACXKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229940126543 compound 14 Drugs 0.000 description 2
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 2
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 2
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- MHYFEEDKONKGEB-UHFFFAOYSA-N oxathiane 2,2-dioxide Chemical compound O=S1(=O)CCCCO1 MHYFEEDKONKGEB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910000029 sodium carbonate Inorganic materials 0.000 description 2
- LPXPTNMVRIOKMN-UHFFFAOYSA-M sodium nitrite Chemical compound [Na+].[O-]N=O LPXPTNMVRIOKMN-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 2
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 2
- QOJSIZLNPFGXCS-UHFFFAOYSA-N 1,3-thiazol-3-ium-2-ylazanium;sulfate Chemical compound OS(O)(=O)=O.NC1=NC=CS1 QOJSIZLNPFGXCS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UAYGAVYRAKJBSE-UHFFFAOYSA-N 2-[(3,5-dibromopyridin-2-yl)diazenyl]-5-[ethyl(3-sulfopropyl)amino]benzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC(N(CCCS(O)(=O)=O)CC)=CC=C1N=NC1=NC=C(Br)C=C1Br UAYGAVYRAKJBSE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101710081849 3-alpha-hydroxysteroid dehydrogenase/carbonyl reductase Proteins 0.000 description 1
- XFDUHJPVQKIXHO-UHFFFAOYSA-N 3-aminobenzoic acid Chemical compound NC1=CC=CC(C(O)=O)=C1 XFDUHJPVQKIXHO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101710172561 3alpha-hydroxysteroid dehydrogenase Proteins 0.000 description 1
- IZXARQNXBXACHW-UHFFFAOYSA-N 4-methyl-5-(2-sulfoethylamino)-2-(1,3-thiazol-2-yldiazenyl)benzoic acid Chemical compound C1=C(NCCS(O)(=O)=O)C(C)=CC(N=NC=2SC=CN=2)=C1C(O)=O IZXARQNXBXACHW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HHHSUASQIKUVDB-UHFFFAOYSA-N 4-methyl-5-(3-sulfopropylamino)-2-(1,3-thiazol-2-yldiazenyl)benzoic acid Chemical compound C1=C(NCCCS(O)(=O)=O)C(C)=CC(N=NC=2SC=CN=2)=C1C(O)=O HHHSUASQIKUVDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QAECRACXCIKODK-UHFFFAOYSA-N 5-(sulfomethylamino)-2-(1,3-thiazol-2-yldiazenyl)benzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC(NCS(O)(=O)=O)=CC=C1N=NC1=NC=CS1 QAECRACXCIKODK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VQBOWHXPDONGSA-UHFFFAOYSA-N 5-[bis(2-hydroxy-3-sulfopropyl)amino]-2-[(3,5-dibromopyridin-2-yl)diazenyl]benzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC(N(CC(O)CS(O)(=O)=O)CC(O)CS(O)(=O)=O)=CC=C1N=NC1=NC=C(Br)C=C1Br VQBOWHXPDONGSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- POJWUDADGALRAB-PVQJCKRUSA-N Allantoin Natural products NC(=O)N[C@@H]1NC(=O)NC1=O POJWUDADGALRAB-PVQJCKRUSA-N 0.000 description 1
- 102000003914 Cholinesterases Human genes 0.000 description 1
- 108090000322 Cholinesterases Proteins 0.000 description 1
- 229910021580 Cobalt(II) chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 102000018832 Cytochromes Human genes 0.000 description 1
- 108010052832 Cytochromes Proteins 0.000 description 1
- 101710088194 Dehydrogenase Proteins 0.000 description 1
- 101710194435 Dehydrogenase/reductase SDR family member 9 Proteins 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 239000006173 Good's buffer Substances 0.000 description 1
- JVTAAEKCZFNVCJ-REOHCLBHSA-N L-lactic acid Chemical class C[C@H](O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- 102000010909 Monoamine Oxidase Human genes 0.000 description 1
- 108010062431 Monoamine oxidase Proteins 0.000 description 1
- 102000019197 Superoxide Dismutase Human genes 0.000 description 1
- 108010012715 Superoxide dismutase Proteins 0.000 description 1
- 102000003929 Transaminases Human genes 0.000 description 1
- 108090000340 Transaminases Proteins 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- 229960000458 allantoin Drugs 0.000 description 1
- 102000004139 alpha-Amylases Human genes 0.000 description 1
- 108090000637 alpha-Amylases Proteins 0.000 description 1
- 229940024171 alpha-amylase Drugs 0.000 description 1
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- KGBXLFKZBHKPEV-UHFFFAOYSA-N boric acid Chemical compound OB(O)O KGBXLFKZBHKPEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004327 boric acid Substances 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- GGCLNOIGPMGLDB-GYKMGIIDSA-N cholest-5-en-3-one Chemical compound C1C=C2CC(=O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 GGCLNOIGPMGLDB-GYKMGIIDSA-N 0.000 description 1
- NYOXRYYXRWJDKP-UHFFFAOYSA-N cholestenone Natural products C1CC2=CC(=O)CCC2(C)C2C1C1CCC(C(C)CCCC(C)C)C1(C)CC2 NYOXRYYXRWJDKP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010023417 cholesterol dehydrogenase Proteins 0.000 description 1
- 229940048961 cholinesterase Drugs 0.000 description 1
- GVPFVAHMJGGAJG-UHFFFAOYSA-L cobalt dichloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Co+2] GVPFVAHMJGGAJG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- KTVIXTQDYHMGHF-UHFFFAOYSA-L cobalt(2+) sulfate Chemical compound [Co+2].[O-]S([O-])(=O)=O KTVIXTQDYHMGHF-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- QAHREYKOYSIQPH-UHFFFAOYSA-L cobalt(II) acetate Chemical compound [Co+2].CC([O-])=O.CC([O-])=O QAHREYKOYSIQPH-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910000335 cobalt(II) sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000004737 colorimetric analysis Methods 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- PSLWZOIUBRXAQW-UHFFFAOYSA-M dimethyl(dioctadecyl)azanium;bromide Chemical compound [Br-].CCCCCCCCCCCCCCCCCC[N+](C)(C)CCCCCCCCCCCCCCCCCC PSLWZOIUBRXAQW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000000921 elemental analysis Methods 0.000 description 1
- 235000021588 free fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- 230000035876 healing Effects 0.000 description 1
- 125000000623 heterocyclic group Chemical group 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 108010029942 microperoxidase Proteins 0.000 description 1
- LNOPIUAQISRISI-UHFFFAOYSA-N n'-hydroxy-2-propan-2-ylsulfonylethanimidamide Chemical compound CC(C)S(=O)(=O)CC(N)=NO LNOPIUAQISRISI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- BOPGDPNILDQYTO-NNYOXOHSSA-N nicotinamide-adenine dinucleotide Chemical compound C1=CCC(C(=O)N)=CN1[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]2[C@H]([C@@H](O)[C@@H](O2)N2C3=NC=NC(N)=C3N=C2)O)O1 BOPGDPNILDQYTO-NNYOXOHSSA-N 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 1
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 1
- BHAAPTBBJKJZER-UHFFFAOYSA-N p-anisidine Chemical compound COC1=CC=C(N)C=C1 BHAAPTBBJKJZER-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 1
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 description 1
- 150000003018 phosphorus compounds Chemical class 0.000 description 1
- 229940107700 pyruvic acid Drugs 0.000 description 1
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 1
- 238000001953 recrystallisation Methods 0.000 description 1
- KRHNEDFLAPDLJN-UHFFFAOYSA-N sodium cobalt(2+) ethane-1,2-diamine Chemical compound [Na+].[Co+2].NCCN KRHNEDFLAPDLJN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000010288 sodium nitrite Nutrition 0.000 description 1
- 239000012086 standard solution Substances 0.000 description 1
- 108010085346 steroid delta-isomerase Proteins 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 1
- 150000004992 toluidines Chemical class 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DTEDQOVEULTFFI-UHFFFAOYSA-K trisodium 5-(4,4-disulfobutylamino)-2-(1,3-thiazol-2-yldiazenyl)benzoate Chemical compound S1C(=NC=C1)N=NC1=C(C(=O)[O-])C=C(C=C1)NCCCC(S(=O)(=O)O)S(=O)(=O)O.[Na+].[Na+].[Na+].S1C(=NC=C1)N=NC1=C(C(=O)[O-])C=C(C=C1)NCCCC(S(=O)(=O)O)S(=O)(=O)O.S1C(=NC=C1)N=NC1=C(C(=O)[O-])C=C(C=C1)NCCCC(S(=O)(=O)O)S(=O)(=O)O DTEDQOVEULTFFI-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/26—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving oxidoreductase
- C12Q1/28—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving oxidoreductase involving peroxidase
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/54—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving glucose or galactose
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/62—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving uric acid
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2326/00—Chromogens for determinations of oxidoreductase enzymes
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/81—Packaged device or kit
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10T—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER US CLASSIFICATION
- Y10T436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10T436/20—Oxygen containing
- Y10T436/206664—Ozone or peroxide
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Emergency Medicine (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Investigating Or Analyzing Non-Biological Materials By The Use Of Chemical Means (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Investigating Or Analysing Materials By The Use Of Chemical Reactions (AREA)
Description
- Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur quantitativen Analyse von Wasserstoffperoxid und ein Reagenz zur Verwendung bei einer derartigen quantitativen Analyse.
- In Körperflüssigkeiten wie Blut und Urin enthaltene meßbare Bestandteile erlangten in den letzten Jahren starke Bedeutung für die Diagnose von Krankheiten und zur Bestimmung von Heilwirkungen und Krankheitsursachen.
- Unter zahlreichen Verfahren zur Messung von Bestandteilen in Körperflüssigkeit, die bislang entwickelt und übernommen wurden, sind quantitative Analysen von Wasserstoffperoxid in breitem Maße verwendet worden und erlangten starke Bedeutung. Ein übliches anerkanntes quantitatives Analysenverfahren für Wasserstoffperoxid umfaßt die Umsetzung einer geeigneten Oxidase mit einem zu analysierenden Bestandteil, Erzeugen von Wasserstoffperoxid entsprechend der enthaltenen Bestandteilsmenge in der Probe, die ein Reagenz enthält, das sich bei der Analyse von Wasserstoffperoxid verfärbt, und anschließend Ausführen der colorimetrischen Analyse zur Bestimmung der Bestandteilsmenge. Dieses Verfahren wird zur quantitativen Analyse von Cholesterin, Neutralfett, Glucose, Phospholipid, freier Fettsäure, Harnsäure, anorganischen Phosphorverbindungen, Brenztraubensäure, L-Milchsäuren, Aminosäuren und dergleichen, die beispielsweise im Blut oder Urin enthalten sind, verwendet. Das Verfahren wird ebenfalls zur quantitativen Analyse enzymatischer Aktivitäten, einschließlich Aktivitäten von Cholinesterase, α-Amylase, Monoaminoxidase, Transaminase oder dergleichen, angewendet.
- Ein zur quantitativen Analyse von Wasserstoffperoxid verwendetes Farbreagenz ist im allgemeinen eine Kombination von 4-Aminoantipyrin und Phenol, Anilin, Toluidin, Anisidin oder Derivaten dieser Verbindungen [beispielsweise Biochemistry, 6, 24-27 (1969) und FR-A-2 413 660]. Oxidationskondensate, die durch eine solche Kombination von Verbindungen erzeugt werden, haben jedoch eine ziemlich kurzwellige maximale Absorptionswellenlänge (λmax), beispielsweise in der Nähe von 500 nm, und aus diesem Grunde können sie durch gefärbte Substanzen, die üblicherweise in Körperflüssigkeiten vorliegen, wie Hämoglobin, Bilirubin oder dergleichen, beeinflußt werden. Sie werden auch größtenteils durch Trübung beeinflußt. Zusätzlich ist ihre Empfindlichkeit gering, so daß das Verfahren nicht zur Analyse eines Bestandteils, der in einer Probe in einer sehr kleinen Menge enthalten ist, wirksam ist.
- Die Autoren der vorliegenden Erfindung haben Untersuchungen zur Entwicklung der quantitativen Analyse ausgeführt, um diese Problematik zu überwinden und im Ergebnis fanden sie, daß die kombinierte Verwendung einer zweiwertigen Kobaltverbindung und eines Indikators für dreiwertiges Kobalt eine hochempfindliche quantitative Analyse für Wasserstoffperoxid bei einer Wellenlänge von mehr als 600 nm bereitstellt. Auf dieser Grundlage wurde die Erfindung ausgeführt.
- Folglich ist es eine Aufgabe dieser Erfindung, ein Verfahren zur quantitativen Analyse von Wasserstoffperoxid, wie in Anspruch 1 definiert, bereitzustellen, umfassend die Umsetzung einer zweiwertigen Kobaltverbindung mit Wasserstoffperoxid in Gegenwart von Peroxidase oder einer Substanz ähnlich zu Peroxidase (Peroxidase und Substanzen ähnlich zu Peroxidase werden forthin gemeinsam als "POD" bezeichnet) unter Herstellung einer dreiwertigen Kobaltverbindung, Umsetzen der so erhaltenen dreiwertigen Kobaltverbindung mit einem Indikator für dreiwertiges Kobalt unter Herstellen eines farbigen Komplexes und colorimetrische quantitative Analyse des farbigen Komplexes.
- Insbesondere ist es eine Aufgabe der vorliegenden Erfindung, das vorstehend genannte Verfahren zur quantitativen Analyse von Wasserstoffperoxid bereitzustellen, wobei der Indikator für dreiwertiges Kobalt eine Verbindung der nachstehenden Formel (I) wiedergibt oder ein Salz davon verwendet wird als Indikator für dreiwertiges Kobalt:
- worin R&sub1;
- darstellt (wobei X und Y gleich oder verschieden sein können und Wasserstoffatome, Halogenatome oder halogenierte Alkylgruppen bedeuten), R&sub2; und R&sub3; gleich oder verschieden sein können und Wasserstoffatome, Niederalkylgruppen, Sulfoalkylgruppen oder ω-Sulfohydroxyalkylgruppen bedeuten und R&sub4; ein Wasserstoffatom oder eine Niederalkylgruppe darstellt.
- Eine weitere Aufgabe der vorliegenden Erfindung ist die Bereitstellung eines Reagenz es zur quantitativen Analyse von Wasserstoffperoxid, definiert gemäß Anspruch 2, umfassend eine zweiwertige Kobaltverbindung, einen Indikator für dreiwertiges Kobalt und POD.
- Andere Aufgaben, Merkmale und Vorteile der Erfindung werden leicht aus der nachstehenden Beschreibung ersichtlich.
- Die quantitative Bestimmung gemäß vorliegender Erfindung verwendet die nachstehende Reaktion: Wasserstoffperoxid Co(II) farbiger Komplex POD Wasser Co(III) Indikator für dreiwegiges Co
- Gemäß vorstehendem Reaktionsschema wird die zu analysierende Verbindung Wasserstoffperoxid mit einer zweiwertigen Kobaltverbindung in Gegenwart von POD umgesetzt, das bei dieser Umsetzung erzeugte dreiwertige Kobalt wird mit einem Indikator für dreiwertiges Kobalt umgesetzt und dann der erzeugte Farbkomplex quantitativ unter Bestimmung der Wasserstoffperoxidmenge analysiert.
- Es gibt keine speziellen Einschränkungen hinsichtlich der bei der Analyse verwendeten zweiwertigen Kobaltverbindungen. Insbesondere schließen sie Kobalt(II)chlorid, Kobalt- (II)sulfat, Kobalt(II)nitrat, Kobalt(II)ammoniumsulfat, Kobalt(II)acetat, Bis(acetylacetonato)kobalt(II), Kobalt(II)natriumethylendiamin und andere Kobalt(II)verbindungen mit ähnlicher Reaktivität wie diese Verbindungen ein.
- Es gibt auch keine speziellen Beschränkungen hinsichtlich der Indikatoren, die bei der erfindungsgemäßen Analyse für dreiwertiges Kobalt verwendet werden, solange ein Indikator in der rage ist, einen gefärbten Komplex durch Umsetzung mit dreiwertigem Kobalt zu erzeugen und ein heterocyclisches Azoaminobenzoesäurederivat der nachstehenden Formel (I) oder ein Salz einer solchen Verbindung ist:
- worin R&sub1;
- darstellt (wobei X und Y gleich oder verschieden sein können und Wasserstoffatome, Halogenatome oder halogenierte Alkylgruppen bedeuten), R&sub2; und R&sub3; gleich oder verschieden sein können und Wasserstoffatome, Niederalkylgruppen, Sulfoalkylgruppen oder ω-Sulfohydroxyalkylgruppen bedeuten und R&sub4; ein Wasserstoffatom oder eine Niederalkylgruppe darstellt.
- Insbesondere schließen die Verbindungen, beispielsweise die nachstehenden Verbindungen, ein:
- 2-(2-Thiazolylazo)-4-methyl-5-sulfomethylaminobenzoesäure (TAMSMB)
- 2-(2-Thiazolylazo)-5-dimethylaminobenzoesäure (TAMB)
- 2-(2-Benzothiazolylazo)-5-dimethylaminobenzoesäure (BTAMB)
- 2-[(3,5)-Dibrom -2-pyridylazo]-5-dimethylaminobenzoesäure (PAMB)
- 2-(2-Thiazolylazo)-5-sulfomethylaminobenzoesäure (TASMB)
- 2-(3,5-Dibrom-2-pyridylazo)-5-(N-ethyl-N-sulfopropylamino)benzoesäure (DSAB)
- 2-(3,5-Dibrom-2-pyridylazo)-5-(N-sulfopropylamino)benzoesäure
- 2-(3,5-Dibrom-2-pyridylazo)-5-(N-2-hydroxy-3-sulfopropylamino)benzoesäure
- 2-(3,5-Dibrom-2-pyridylazo)-5-(N-ethyl-N-2-hydroxy-3- sulfopropylamino)benzoesäure
- 2-(3,5-Dibrom-2-pyridylazo)-5-(N-sulfopropylamino)benzoesäure
- 2-(3,5-Dibrom-2-pyridylazo)-5-[N,N-di(2-hydroxy-3- sulfopropyl)amino]benzoesäure
- 2-(2-Thiazolylazo)-4-methyl-5-sulfopropylaminobenzoesäure (TAMSPB)
- 2-(2-Thiazolylazo)-4-methyl-5-sulfoethylaminobenzoesäure (TAMSEB)
- Trinatrium 2-(2-thiazolylazo)-5-disulfobutylaminobenzoeat (TASBB)
- Von den vorstehenden Verbindungen sind (1) bis (4) handelsüblich. Verbindung (5) kann gemäß dem Verfahren, beispielsweise beschrieben in Analytical Chemistry, 28, 535-540 (1979), hergestellt werden. Verbindungen (6) bis (11) können gemäß dem Verfahren, beschrieben in Analytical Science, I, 461-465 (1985), hergestellt werden. Verbindungen (12) und (13) können gemäß dem in Mikrochimica Acta [Wien], 1983 III, 235-244, beschriebenen Verfahren hergestellt werden. Das Verfahren zur Synthese der Verbindung (14) wird als ein Beispiel der bevorzugten Ausführungsform der vorliegenden Erfindung beschrieben.
- Als ein Peroxidase-ähnlicher Stoff können beliebige Verbindungen, die ein Reaktionsverhalten ähnlich Peroxidase aufweisen, ohne spezielle Begrenzung verwendet werden. Beispiele einer solchen Verbindung, die verwendet werden kann, sind Cytochrom C, Hämoglobin, Mikroperoxidase und dergleichen.
- Die quantitative Analyse gemäß dieser Erfindung wird durch Umsetzung der zu analysierenden Probe, eines Indikators für dreiwertiges Kobalt, einer zweiwertigen Kobaltverbindung und POD in einer Pufferlösung mit einem pH-Wert von 5 bis 10 und bei Einhalten der vorgeschriebenen Temperatur (beispielsweise bei einer Temperatur zwischen Raumtemperatur und 40ºC), gefolgt von Messen des in dem Reaktionsgemisch erzeugten farbigen Komplexes mit einer optischen Vorrichtung, ausgeführt.
- Die zweiwertige Kobaltverbindung wird in einer Konzentration in dem Reaktionsgemisch von 0,01 bis 10 mMol/l, vorzugsweise 0,05 bis 1 mMol/l, verwendet. Der Indikator für dreiwertiges Kobalt wird bei einer Konzentration in dem Reaktionsgemisch von 0,01 bis 200 mMol/l, vorzugsweise 0,05 bis 1 mMol/l, verwendet. POD wird bei einer Konzentration in dem Reaktionsgemisch von 1 bis 10 000 U/l, vorzugsweise 500 bis 5 000 U/l, verwendet.
- Eine beliebige Pufferlösung, die den vorstehend genannten pH-Wert beibehalten kann, kann ohne spezielle Beschränkung verwendet werden. Beispiele einer solchen Pufferlösung sind Essigsäurepuffer, Phosphorsäurepuffer, Borsäurepuffer, Trispuffer, Glycinpuffer, Good's Puffer und dergleichen.
- Um die Menge an Wasserstoffperoxid zu bestimmen, wird zunächst die Änderung der Extinktion bei einer für die erzeugte Farbe geeigneten Wellenlänge gemessen. Alternativ dazu wird die Extinktion bei derselben Wellenlänge nach einem vorgeschriebenen Zeitraum nach Beendigung der Reaktion durch Zugabe von Säure, einem alkalischen Mittel oder einem Tensid gemessen. Anschließend wird der durch Subtraktion der Extinktion der Blindprobe von der gemessenen Extinktion oder die Extinktionsänderung mit der Extinktion oder der Extinktionsänderung der Standardlösung zur Bestimmung der in der Probe enthaltenen Wasserstoffperoxidmenge verglichen.
- Die quantitative Analyse der vorliegenden Erfindung kann auf eine Reaktion angewendet werden, bei der Wasserstoffperoxid in dem Reaktionsgemisch erzeugt wird, beispielsweise zur Bestimmung der Wasserstoffperoxidmenge verschiedener Reaktionen, in die Oxidoreduktasen einbezogen sind. Dies ermöglicht eine quantitative Analyse von Enzymen und deren Substraten. Nachstehend einige dieser Beispiele:
- (1) Analyse eines Bestandteils in der Körperflüssigkeit (Harnsäure) unter Verwendung von Oxidase. Harnsäure Wasser Co(III) Co(III) Indikator Uricase POD Allantoin Wasserstoffperoxid Co(II) farbiger Komplex
- (2) Analyse eines Bestandteils in der Körperflüssigkeit (Gallensäure) unter Verwendung von Reduktase. Gallensäure Wasser Indikator Elektronenträger 3-Keto-gallensäure Wasserstoffperoxid farbiger Komplex
- 3-α-HSD: 3-α-Hydroxysteroiddehydrogenase
- NAD: Nicotinamidadenindinucleotid
- NADH: reduzierte Form von Nicotinamidadenindinucleotid
- SOD: Superoxiddismutase
- (3) Analyse eines Bestandteils in der Körperflüssigkeit (Cholesterin) unter Verwendung von Dehydrogenase. Cholesterin Wasserstoffperoxid farbiger Komplex Elektronenträger Cholestenon Indikator
- CHD: Cholesterindehydrogenase
- Es ist ebenfalls möglich, POD durch die Verwendung eines Reagenzes, das eine zweiwertige Kobaltverbindung enthält, einen Indikator für dreiwertiges Kobalt und Wasserstoffperoxid, quantitativ zu analysieren.
- Gemäß dem Verfahren der vorliegenden Erfindung kann Wasserstoffperoxid quantitativ mit sehr hoher Genauigkeit bestimmt werden. Zusätzlich ermöglicht das Verfahren die Bestimmung verschiedener enzymatischer Wasserstoffperoxid erzeugender Aktivitäten durch Umsetzung mit Substraten sowie die Bestimmung der Menge oder der Aktivität von Substanzen (Substraten), die bekannte enzymatischen Reaktionen gekoppelt mit solchen enzymatischen Reaktionen einbeziehen und von quantitativ zu ermittelnden Enzymen und Coenzymen, sehr leicht bei hoher Empfindlichkeit bei einer Wellenlänge oberhalb 600 nm ohne Störung durch Hämoglobin, Bilirubin oder Trübung.
- Andere Merkmale der Erfindung werden natürlich aus der nachstehenden Beschreibung der beispielhaften Ausführungsformen ersichtlich, die zur Erläuterung der Erfindung angeführt werden.
- In 12 ml Wasser wurden 0,756 g m-Aminobenzoesäure suspendiert. Zu der Suspension wurden 0,795 g Natriumcarbonat gegeben und das Gemisch bei 95ºC erhitzt. Dann wurden 1,83 g Butansulton tropfenweise unter Rühren zugegeben. Zu diesem Gemisch wurden zusätzlich 1,06 g Natriumcarbonat, 2,44 g Butansulton und anschließend 0,4 g Natriumhydroxid zugegeben. Nach Erhitzen des Reaktionsgemisches für 30 Minuten unter Rühren wurde Salzsäure zur Einstellung des pH-Wertes des Gemisches auf 4 zugegeben. Das Gemisch wird hier als "Reaktionsgemisch A" bezeichnet.
- Getrennt dazu wurde eine Lösung durch Auflösen von 0,746 g 2-Aminothiazolsulfat in 3 ml 3N Salzsäurelösung hergestellt und dann zu dieser Lösung Natriumnitritplätzchen unter Eiskühlen zugegeben, gefolgt von weiterer Zugabe einer Spatelspitze Sulfaminsäure. Diese Lösung wurde tropfenweise zum Reaktionsgemisch A unter Eiskühlung gegeben. Das Gemisch schlug nach tiefviolett um. Dieses wurde zur Trockne eingedampft und die Zielverbindung aus dem Rückstand mit Hilfe einer Umkehr-ODS-Säule getrennt. Die rohen Kristalle wurden in Methanol gelöst und zu der Lösung wurde Aceton gegeben zur Umkristallisation der reinen Verbindung 14, die als rote Kristalle anfiel.
- Elementaranalyse: als C&sub1;&sub8;H&sub2;&sub1;N&sub4;O&sub8;S&sub3;Na&sub3;·H&sub2;O
- Berechnet: C: 35,76% H: 3,83% N: 9,26% Gefunden: C: 36,04% H: 3,89% N: 9,21%
- In 1 ml 50 mMol/l Phosphatpuffer (pH 7,0) mit 0,025 mMol/l Kobalt(II)ammoniumsulfat, 0,04 mMol/l TASBB und 2 000 U/l Peroxidase wurden 10 ul Wasserstoffperoxid enthaltende Probe gegeben. Nach Erhitzen des Gemisches auf 37ºC für 5 Minuten wurde die Extinktion bei einer Wellenlänge von 678 nm gemessen mit einer Blindprobe als Kontrolle. Die Ergebnisse sind in Tabelle 1 dargestellt.
- 50 0,127
- 100 0,254
- 150 0,382
- 200 0,508
- Die Kalibrierkurve war eine Gerade, die durch den Ursprung verlief.
- In 3 ml 20 mMol/l Phosphatpuffer (pH 5,0) mit 0,1 mMol/l Bis(acetylacetonato)kobalt(II), 0,07 mMol/l TAMSMB und 1 000 U/l Peroxidase wurden 20 ul Wasserstoffperoxid enthaltende Probe gegeben. Nach Erhitzen des Gemisches auf 37ºC für 5 Minuten wurde die Extinktion bei einer Wellenlänge von 655 nm gemessen mit einer Blindprobe als Kontrolle. Die Ergebnisse sind in Tabelle 2 dargestellt.
- 10 0,124
- 25 0,309
- 50 0,618
- 75 0,928
- 100 1,236
- Die Kalibrierkurve war eine Gerade, die durch den Ursprung verlief.
- In 1 ml 50 mMol/l Phosphatpuffer (pH 7,0) mit 0,05 mMol/l Kobalt(II)ammoniumsulfat, 0,04 mMol/l TASBB und 2 000 U/l Peroxidase wurden 10 ul Glucose enthaltende Probe gegeben. Nach Erhitzen des Gemisches auf 37ºC für 5 Minuten wurde die Extinktion bei einer Wellenlänge von 678 nm gemessen mit einer Blindprobe als Kontrolle. Die Ergebnisse sind in Tabelle 3 dargestellt.
- 50 0,074
- 100 0,149
- 200 0,297
- 300 0,445
- 400 0,593
- 500 0,742
- Die Kalibrierkurve war eine Gerade, die durch den Ursprung verlief und zeigte somit eine gute quantitative Messung.
- In 10 ul einer Harnsäure enthaltenden Probe wurden 0,5 ml 50 mMol/ml Phosphatpuffer (pH 6,5) mit 0,08 mMol/l TASBB und 200 U/l Uricase zugegeben. Nach Erhitzen des Gemisches auf 37ºC für 5 Minuten wurden 0,5 ml 50 mMol/l Phosphatpuffer (pH 6,5) mit 0,1 mMol/l Kobalt(II)nitrat und 4 000 U/l Peroxidase zugegeben. Das Gemisch wurde bei 37ºC für weitere 5 Minuten erhitzt und die Extinktion bei einer Wellenlänge von 678 nm gemessen mit einer Blindprobe als Kontrolle. Die Ergebnisse sind in Tabelle 4 dargestellt.
- 2,5 0,319
- 5,0 0,639
- 7,5 0,958
- 10,0 1,277
- In 1,0 ml 50 mMol/l Phosphatpuffer (pH 6,5) mit 0,03 Gew.-% 4-Aminoantipyrin, 0,02 Gew.-% Phenol und 2 000 U/l Peroxidase wurden 10 ul einer Probe mit Wasserstoffperoxid gegeben. Nach Erhitzen des Gemisches auf 37ºC für 5 Minuten wurde die Extinktion bei einer Wellenlänge von 505 nm gemessen mit einer Blindprobe als Kontrolle.
- Die quantitative Analyse wurde in gleicher Weise wie in Beispiel 1 ausgeführt unter Verwendung verschiedener Arten von Indikatoren für dreiwertiges Kobalt. Relative Empfindlichkeiten bei der Verwendung dieser Indikatorarten wurden durch Heranziehen der Empfindlichkeit der vorstehend genannten Messung als 1 bestimmt. Die Wellenlängen der Absorptionsmaxima wurden hinsichtlich dieser Indikatoren bestimmt. Die Ergebnisse sind in Tabelle 5 dargestellt. Tabelle 5 Indikator relative Empfindlichkeit Absorptionsmaximum (nm) 4-Aminoantipyrin und Phenol
- In 100 ul einer Peroxidase enthaltenden Probe wurden 1,0 ml 30 mMol/l Phosphatpuffer (pH 4,0) mit 0,06 mMol/l TAMSMB, 0,06 mMol/l Kobalt(II)nitrat und 0,625 mMol/l Wasserstoffperoxid gegeben. Nach Erhitzen des Gemisches auf 37ºC für 5 Minuten wurde die Extinktion bei einer Wellenlänge von 654 nm gemessen mit einer Blindprobe als Kontrolle. Die Ergebnisse sind in Tabelle 6 dargestellt.
- 0,10 0,195
- 0,25 0,488
- 0,50 0,975
- 0,75 1,463
- 1,00 1,951
Claims (3)
1. Verfahren zur quantitativen Analyse von
Wasserstoffperoxid, umfassend:
Umsetzen einer zweiwertigen Kobaltverbindung bei
einer Konzentration im Reaktionsgemisch von 0,01 bis 10 mMol/l
mit Wasserstoffperoxid in Gegenwart von Peroxidase oder einem
Peroxidase-ähnlichen Stoff bei einer Konzentration in dem
Reaktionsgemisch von 1 bis 10 000 U/l unter Herstellung einer
dreiwertigen Kobaltverbindung, Umsetzen der so hergestellten
dreiwertigen Kobaltverbindung mit einem Indikator für
dreiwertiges Kobalt bei einer Konzentration in dem
Reaktionsgemisch von 0,01 bis 200 mMol/l unter Herstellung eines
farbigen Komplexes und quantitative kolorimetrische Analyse des
farbigen Komplexes, wobei der Indikator für dreiwertiges
Kobalt eine Verbindung nachstehender Formel (I) oder eines
Salzes davon ist:
worin R&sub1;
darstellt (wobei X und Y gleich oder verschieden sein
können und Wasserstoffatome, Halogenatome oder halogenierte
Alkylgruppen bedeuten), R&sub2; und R&sub3; gleich oder verschieden
sein können und Wasserstoffatome, Niederalkylgruppen,
Sulfoalkylgruppen oder ω-Sulfohydroxyalkylgruppen bedeuten und
R&sub4; ein Wasserstoffatom oder eine Niederalkylgruppe darstellt.
2. Reagenz zur quantitativen Analyse von
Wasserstoffperoxid, umfassend eine zweiwertige Kobaltverbindung einer
Konzentration von 0,01 bis 10 mMol/l in dem Reaktionsgemisch,
einen Indikator für dreiwertiges Kobalt mit einer
Konzentration von 0,01 bis 200 mMol/l in dem Reaktionsgemisch und
Peroxidase oder einen Peroxidase-ähnlichen Stoff mit einer
Konzentration im Reaktionsgemisch von 1 bis 10 000 U/l, wobei
der Indikator für dreiwertiges Kobalt eine Verbindung,
dargestellt durch nachstehende Formel (I), oder einem Salz davon
ist:
worin R&sub1;
bedeutet (wobei X und Y gleich oder verschieden sein
können und Wasserstoffatome, Halogenatome oder halogenierte
Alkylgruppen bedeuten), R&sub2; und R&sub3; gleich oder verschieden
sein können und Wasserstoffatome, Niederalkylgruppen,
Sulfoalkylgruppen oder ω-Sulfohydroxyalkylgruppen bedeuten und
R&sub4; ein Wasserstoffatom oder eine Niederalkylgruppe darstellt.
3. Verfahren zur quantitativen Analyse von Peroxidase
unter Verwendung eines Reagenzes, das eine zweiwertige
Kobaltverbindung, einen Indikator für dreiwertiges Kobalt und
Wasserstoffperoxid enthält, wobei der Indikator für
dreiwertiges Kobalt eine Verbindung nachstehender Formel (I) oder
ein Salz davon ist:
worin R&sub1;
darstellt (wobei X und Y gleich oder verschieden sein
können und Wasserstoffatome, Halogenatome oder halogenierte
Alkylgruppen bedeuten), R&sub2; und R&sub3; gleich oder verschieden
sein können und Wasserstoffatome, Niederalkylgruppen,
Sulfoalkylgruppen oder ω-Sulfohydroxyalkylgruppen bedeuten und
R&sub4; ein Wasserstoffatom oder eine Niederalkylgruppe darstellt.
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP62269987A JP2516381B2 (ja) | 1987-10-26 | 1987-10-26 | 過酸化水素の定量方法及びその定量用試薬 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
DE3889845D1 DE3889845D1 (de) | 1994-07-07 |
DE3889845T2 true DE3889845T2 (de) | 1995-01-26 |
Family
ID=17479990
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
DE3889845T Expired - Fee Related DE3889845T2 (de) | 1987-10-26 | 1988-10-24 | Verfahren zur Massanalyse von Wasserstoff-Peroxyd und Reagens dafür. |
Country Status (6)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US4933277A (de) |
EP (1) | EP0314046B1 (de) |
JP (1) | JP2516381B2 (de) |
AT (1) | ATE106453T1 (de) |
DE (1) | DE3889845T2 (de) |
ES (1) | ES2056870T3 (de) |
Families Citing this family (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
SE9003496D0 (sv) * | 1990-11-02 | 1990-11-02 | Eka Nobel Ab | Analysmetod |
DE10105528A1 (de) | 2001-02-07 | 2002-08-08 | Basf Ag | Verfahren zur Online-Bestimmung von Wasserstoffperoxid |
JPWO2005049858A1 (ja) * | 2003-11-19 | 2007-11-29 | 第一化学薬品株式会社 | ヘモグロビン含有試料中の基質の測定方法 |
US7534394B1 (en) | 2005-07-11 | 2009-05-19 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Navy | Potentiometric titration method for quantitative determination of hydrogen peroxide |
TWI411467B (zh) * | 2010-08-02 | 2013-10-11 | Ind Tech Res Inst | 金屬孔洞材料、其製備方法及含氮化合物之檢測方法 |
Family Cites Families (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
SU433394A1 (de) * | 1972-01-03 | 1974-06-25 | Способ Кинетического Определения | |
DE2856487A1 (de) * | 1977-12-29 | 1979-07-12 | Wako Pure Chem Ind Ltd | Verfahren zur bestimmung von peroxidischen substanzen und hierfuer brauchbare verbindungen |
JPS54145189A (en) * | 1978-05-02 | 1979-11-13 | Masaomi Tsuchiya | Method of measuring quantity of metal ions by complex consisting of metal and 44hydroxyydimethylaminoo55nitrosoo66 aminopyrimidine |
JPS6091997A (ja) * | 1983-10-22 | 1985-05-23 | Wako Pure Chem Ind Ltd | モノアミンオキシダ−ゼ活性の測定方法 |
JPH0654318B2 (ja) * | 1986-02-24 | 1994-07-20 | 第一化学薬品株式会社 | 還元性物質の定量方法及びその定量用試薬 |
DE3618752A1 (de) * | 1986-06-04 | 1987-12-10 | Bayer Ag | 4,6-dinitrobenzthiazolonhydrazone(2) |
EP0255089A3 (de) * | 1986-07-28 | 1989-10-11 | EASTMAN KODAK COMPANY (a New Jersey corporation) | Kobalt enthaltende Reagenzien und Verfahren zur Bestimmung von Analyten in wässrigen Flüssigkeiten |
-
1987
- 1987-10-26 JP JP62269987A patent/JP2516381B2/ja not_active Expired - Fee Related
-
1988
- 1988-10-24 DE DE3889845T patent/DE3889845T2/de not_active Expired - Fee Related
- 1988-10-24 ES ES88117687T patent/ES2056870T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1988-10-24 EP EP88117687A patent/EP0314046B1/de not_active Expired - Lifetime
- 1988-10-24 AT AT88117687T patent/ATE106453T1/de not_active IP Right Cessation
- 1988-10-26 US US07/262,720 patent/US4933277A/en not_active Expired - Lifetime
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
EP0314046A3 (en) | 1990-11-28 |
EP0314046B1 (de) | 1994-06-01 |
JPH01112155A (ja) | 1989-04-28 |
JP2516381B2 (ja) | 1996-07-24 |
US4933277A (en) | 1990-06-12 |
DE3889845D1 (de) | 1994-07-07 |
EP0314046A2 (de) | 1989-05-03 |
ATE106453T1 (de) | 1994-06-15 |
ES2056870T3 (es) | 1994-10-16 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
DE60018300T2 (de) | 8-(anilino)-1-naphthalinsulfonatanaloge und ihre verwendung in analytendetektions-tests | |
DE2833612C3 (de) | Mittel und Verfahren zur Bestimmung von Wasserstoffperoxyd | |
DE69713601T2 (de) | Wasserlösliche tetrazoliumsalz-verbindungen | |
DE3851265T2 (de) | Hydrolysierbare Verbindungen, die elektronübertragende Mittel freigeben und ihre analytische Verwendung. | |
DE3012368A1 (de) | Diagnostische mittel und verfahren | |
DE3780205T2 (de) | Verfahren zur messung von lipidgebundener sialinsaeure und dabei zu verwendender reagenssatz. | |
DE2818603A1 (de) | Kinetisches glucosereagens und dessen verwendung in einem kinetischen nachweisverfahren | |
DE2653537A1 (de) | Verfahren und mittel zur bestimmung von hydroperoxiden | |
DE3889845T2 (de) | Verfahren zur Massanalyse von Wasserstoff-Peroxyd und Reagens dafür. | |
DE69124780T2 (de) | Oxidierbares, farbproduzierendes Reagenz | |
DE3408062A1 (de) | Verfahren zur bestimmung von ss-hydroxibuttersaeure und eine zusammensetzung zur bestimmung von ss-hydroxibuttersaeure | |
DE69119399T2 (de) | Reagens und verfahren für serum eisenproben | |
DE3443415A1 (de) | Zusammensetzung zur bestimmung von wasserstoffperoxid | |
DE69433003T2 (de) | Assayverfahren für biologische Komponenten | |
DE2944498C2 (de) | Methode zur quantitativen Bestimmung von Acyl-Coenzym A und Reagens hierfür | |
DE4306278C2 (de) | Verfahren zur quantitativen Analyse von 1,5-Anhydroglucitol | |
DE2906732B1 (de) | Verfahren und Reagenz zur Bestimmung der Peroxidase | |
DE69709485T2 (de) | Reagenszusammensetzung, Teststück und Testkit | |
EP0863995A1 (de) | Verbessertes verfahren zur bestimmung von lipase | |
DE69201786T2 (de) | Wasserlösliche Methylenbis(dialkylanilin)-Derivate und ihre Verwendung. | |
DE69430305T2 (de) | Reagenz zur bestimmung der kreatinkinase | |
DE19742117B4 (de) | Verfahren zur Messung von Harnstoffstickstoff und Untersuchungssets dafür | |
DE60022961T2 (de) | Verfahren zur quantitativen Bestimmung von Mannose und Reagenz hierzu | |
DE3114935C2 (de) | Verfahren zur Bestimmung von Wasserstoffperoxid | |
DE3851316T2 (de) | Verfahren zur Messung der Menge der Polyamine in einer biologischen Probe. |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
8364 | No opposition during term of opposition | ||
8339 | Ceased/non-payment of the annual fee |