DE3280408T2 - Krebshemmende heilmittel fuer die behandlung von t-leukaemien, bestehend aus der a-kette des rizinus und einem spezifischen monoklonalen antikoerper. - Google Patents

Krebshemmende heilmittel fuer die behandlung von t-leukaemien, bestehend aus der a-kette des rizinus und einem spezifischen monoklonalen antikoerper.

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Description

  • In ihren französischen Patenten Nr. 2 437 213 und 2 466 252 hat die Anmelderin die Herstellung von krebshemmenden Produkten, sogenannten Konjugaten, beschrieben, die durch Kopplung mittels kovalenter Bindung der A-Kette von Ricin an eine Proteinstruktur, wie einen Antikörper, ein Immunglobulin oder ein Immunglobulinfragment, die in der Lage ist, ein an der Oberfläche der zu erreichenden Trägerzellen, wie Krebszellen, gegebenes Antigen selektiv zu erkennen, erhalten werden. Die Haupteigenschaft dieser Konjugate besteht darin, daß sie spezifische zytotoxische Mittel für die angepeilten Zielzellen sind.
  • Weiterhin sind in den nachstehenden Dokumenten Immunotoxine beschrieben, die aus Antikörpern oder Antikörperfragmenten erhalten werden, welche von Tiergattungen, nämlich Ratten und Mäusen, abstammen. Diese Immunotoxine können beim Menschen nicht verwendet werden:
  • - Nature, Band 290, 12. März 1981, S. 145-146;
  • - Chemical Abstracts, Band 95, 1981, Nr. 21489g, Columbus, Ohio (USA);
  • - Chemical Abstracts, Band 94, 1981, S. 41, Nr. 132084f, Columbus, Ohio (USA);
  • - Biological Abstracts, Band 71, Nr. 7, 1981, Nr. 46810, Philadelphia (USA);
  • - Chemical Abstracts, Band 93, 1980, S. 197, Nr. 232191 m, Columbus Ohio (USA);
  • - EP-A-O 023 401;
  • - Biological Abstracts, Band 71, 1981, Nr. 32655, Philadelphia (USA);
  • - Chemical Abstracts, Band 95, 1981, S. 568, Nr. 78306k, Columbus, Ohio (USA).
  • Trowbridge et al. beschreiben in Nature, Band 294, Nr. 5837, 12. November 1981, S. 171-173, Macmillan Journals, Chesham, Bucks., (GB), Immunotoxine, die aus einem gegen Transferrinrezeptoren gerichteten Antikörper erhalten werden. Diese Rezeptoren treten besonders zahlreich an bestimmten Tumorzellen auf, sie kommen aber auch bei anderen sich rasch vermehrenden Zellen vor, insbesondere den Erythroidvorstufen. Die in diesem Dokument beschriebenen Immunotoxine können somit nicht in der Humantherapie eingesetzt werden.
  • Die Verwendung von gegen die Differenzierungsantigene von Krebszellen gerichteten Antikörpern ermöglichte bereits die Herstellung von Konjugaten mit einer bemerkenswerten Spezifität gegenüber Zielzellen.
  • Die vorliegende Erfindung bezweckt als Medikamente neue Produkte, sogenannte Konjugate, die aus der A-Kette von Ricin und einem monoklonalen anti-humane-T-Zellen-Antikörper erhalten werden.
  • Unter Konjugaten werden künstliche gemischte Moleküle verstanden, in denen die A-Kette von Ricin in einer kovalenten Bindung vom Disulfidtyp mit einem anti-humane-T-Zellen- Antikörper kombiniert ist, der selektiv ein zu Krebszellen gehörendes Antigen erkennen kann.
  • Die Gewinnung der reinen A-Kette von Ricin ist in unseren früheren Patenten beschrieben. Die Herstellung von monoklonalen Antikörpern, die gegen menschliche T-Leukämiezellen gerichtet sind, wurde in der wissenschaftlichen Literatur erwähnt. (Es sei insbesondere auf Journal of Immunology 125 (2), 725-737, (1980) verwiesen).
  • Zur Herstellung der Konjugate ist es notwendig, daß die zu koppelnden Proteine jeweils mindestens ein Schwefelatom enthalten, das von Natur aus fähig ist oder künstlich fähig gemacht wurde, die gewünschte Disulfidbindung zu schaffen.
  • Die A-Kette von Ricin hat von Natur aus ein einziges Schwefelatom, das die gewünschte Kopplung ermöglicht. Es ist jenes der Thiolfunktion des in der A-Kette enthaltenen Cysteinrestes, das im vollständigen Toxin die Bindung dieser A-Kette an die B-Kette gewährleisten würde.
  • Der ganze Antikörper mit anti-humane-T-Zellen-Spezifität hat weder eine freie Thiolfunktion noch andere Schwefelatome, die zur Kopplung verwendet werden können. Verwendet man diesen ganzen Antikörper, so ist es zweckmäßig, am Immunoglobulin ein oder mehrere Schwefelatome künstlich einzuführen, die später an der mit einem oder mehreren Molekülen der A-Kette von Ricin herzustellenden Disulfidbindung mitwirken können.
  • Wenn man hingegen das Fragment Fab' dieses Antikörpers verwendet, wie es klassischerweise durch beschränkte Proteolyse in Gegenwart von Pepsin mit anschließender Reduktion des (oder der) Disulfidbrücke(n) zwischen schweren Ketten erhalten wird, dann weist dieses Fragment mindestens eine Thiolgruppe auf, die für die Bildung der Disulfidbrücke mit der A-Kette von Ricin verfügbar ist. In diesem Fall wird die am Antikörperfragment vorhandene Thiolgruppe erfindungsgemäß im allgemeinen mittels bekannter Verfahren in das aktivierte gemischte Disulfid übergeführt, bevor es mit dem Thiol der A-Kette zwecks Bildung der gewünschten Disulfidgruppe reagieren gelassen wird.
  • Verwendet man den ganzen Antikörper, erfolgt erfindungsgemäß die Herstellung des Konjugats, indem die A-Kette von Ricin als Trägerin ihrer freien SH-Gruppe mit dem Antikörper, in den die SH-Gruppe in aktivierter Form, insbesondere in Form eines gemischten Disulfids, mit einem geeigneten organischen Schwefelrest künstlich eingeführt wurde, in Kontakt gebracht wird.
  • Die Herstellung des Konjugats kann dann durch das folgende Schema veranschaulicht werden:
  • RA-SH + AC-R-S-S-X→RA-S-S-R-AC+XSH
  • worin:
  • - RA die A-Kette von Ricin bezeichnet,
  • - AC den Antikörper bezeichnet, und
  • - X den Aktivatorrest bezeichnet.
  • Der durch ein aktiviertes Schwefelatom substituierte Antikörper wird aus dem Antikörper selbst durch Substitution mit Hilfe eines Reagens (das selbst Träger eines aktivierten Schwefelatoms ist) nach dem folgenden Schema erhalten:
  • AC+Y-R-S-S-X→AC-R-S-S-X
  • worin:
  • - AC den Antikörper bezeichnet,
  • - Y eine Funktion darstellt, die die kovalente Fixierung des Reagens am Protein ermöglicht,
  • - R eine Gruppe bezeichnet, die gleichzeitig die Substituenten AC und -S-S-X tragen kann und
  • - X den Aktivatorrest darstellt.
  • Die funktionelle Gruppe Y ist eine Funktion, die sich auf kovalente Weise mit irgendeiner der an den Seitenketten der das zu substituierende Protein bildenden Aminosäuren befindlichen Funktionen binden kann. Darunter sind die terminalen Aminfunktionen der im Protein enthaltenen Lysinreste besonders angezeigt. In diesem Fall kann Y insbesondere darstellen:
  • - eine Carboxylgruppe, die sich mit den Aminfunktionen des Proteins in Gegenwart eines Kopplungsmittels, wie eines Carbodiimids und insbesondere eines wasserlöslichen Derivats, wie 1- Ethyl-3-(3-diethylaminopropyl)-carbodiimid, binden kann,
  • - ein Carbonsäurechlorid, das mit den Aminfunktionen direkt reagieren kann, um diese zu acylieren,
  • - einen sogenannten "aktivierten" Ester, wie einen orthooder para-, Nitro- oder Dinitrophenylester oder auch einen N- Hydroxysuccinimidester, der mit den Aminfunktionen direkt reagieren kann, um diese zu acylieren,
  • - ein inneres Anhydrid einer Carbonsäure, wie z. B. das Bernsteinsäureanhydrid, das mit den Aminfunktionen spontan reagiert, um Amidverbindungen zu bilden,
  • - eine Imidoestergruppe
  • worin R&sub1; eine Alkylgruppe
  • ist, die mit den Aminogruppen des Proteins gemäß der Reaktion
  • reagiert.
  • Die Gruppe -S-S-X bezeichnet ein aktiviertes gemischtes Disulfid, das mit einer freien Thiolgruppe reagieren kann. Insbesondere bei diesem gemischten Disulfid kann X eine 2- Pyridyl- oder 4-Pyridylgruppe, gegebenenfalls durch eine oder mehrere Alkyl-, Halogen, Carboxylgrupp(e) substituiert, darstellen. X kann auch eine Phenylgruppe, die vorzugsweise durch eine oder mehrere Nitro- oder Carboxylgruppe(n) substituiert ist, bedeuten. X kann auch noch eine Alcoxycarbonylgruppe, wie Methoxycarbonyl, darstellen.
  • Der Rest R bezeichnet jede Gruppe, die gleichzeitig die Substituenten AC und S-S-X tragen kann. Er wird so gewählt, daß er keine Funktionen umfaßt, die im Verlauf der späteren Reaktionen mit den verwendeten Reagenzien und den synthetisierten Produkten interferieren kann. Insbesondere kann die Gruppe R eine Gruppe -(CH&sub2;)n sein, wobei n zwischen 1 und 10 ist, oder auch eine Gruppe:
  • worin R&sub4; Wasserstoff oder eine Alkylgruppe mit 1 bis 8 Kohlenstoffatomen bezeichnet und R&sub3; einen gegenüber den später verwendeten Reagenzien inerten Substituenten bedeutet, wie eine Carbamatgruppe
  • worin R&sub5; eine gerade oder verzweigte Alkylgruppe mit 1 bis 5 Kohlenstoffatomen, insbesondere tert.Butyl, darstellt.
  • Die Umsetzung der Verbindung Y-R-S-S-X mit dem Immunglobulin erfolgt in homogener flüssiger Phase, am häufigsten in Wasser oder einer Pufferlösung. Wenn es die Löslichkeit der Reagenzien verlangt, ist es möglich, dem Reaktionsmedium bis zu 20 Vol.% eines mit Wasser mischbaren organischen Lösungsmittels, wie eines Alkohols, insbesondere tert.Butanol, zuzugeben.
  • Die Umsetzung erfolgt bei Umgebungstemperatur während eines Zeitraums von einigen Stunden bis zu 24 Stunden. Danach gestattet eine Dialyse die Entfernung der Produkte geringer Molmasse und insbesondere der Reagenzienüberschüsse. Dieses Verfahren gestattet die Einführung einer Anzahl von Substituentengruppen pro Mol Protein zwischen 1 und 5, wenn das Protein ein Immunglobulin der G-Klasse ist, und zwischen 1 und 15, wenn das Protein ein Immunglobulin der M-Klasse ist.
  • Bei Verwendung solcher Verbindungen erfolgt die Kopplung mit der A-Kette von Ricin, indem sie in wässerige Lösung bei einer Temperatur nicht über 30ºC während eines Zeitraums von einigen Stunden bis zu einem Tag mit den beiden Proteinen zusammengebracht wird. Die erhaltene Lösung wird zur Entfernung der Produkte geringer Molmasse dialysiert, dann kann das Konjugat mittels verschiedener bekannter Methoden gereinigt werden.
  • Das folgende Beispiel gestattet ein besseres Verständnis der Erfindung, ohne jedoch ihren Umfang einzuschränken.
    • BEISPIEL 1:
  • Konjugat, erhalten durch Reaktion zwischen einem durch eine aktivierte Disulfidgruppe substituierten antihumane-T-Zellen-Antikörper (gegen das Antigen T 65 gerichteten Antikörper) und der A-Kett von Ricin.
    • a) Anti-humane-T-Zellen-Antikörper (oder Antikörper T101)
  • Dieser Antikörper wurde nach dem in Journal of Immunology 125 (2), 725-737 (1980) beschriebenen Verfahren erhalten.
  • Er wird einer letzten Reinigung mittels Dialyse gegen PBS- Puffer (10 mM Phosphat, 140 mM Natriumchlorid, pH 7,4) unterzogen.
    • b) A-Kette von Ricin
  • Die A-Kette von Ricin wurde hergestellt und gereinigt, wie in unseren früheren Anmeldungen (Patent No. 78/27838 und Zusatz Nr. 79/24655) ausgeführt.
    • c) Aktivierter anti-humane-T-Zellen-Antikörper
  • Zu 0,5 ml einer Lösung von 14,2 mg/ml 3-(2-Pyridyldisulfanyl)-propionsäure in tert.Butanol gibt man 0,1 ml einer Lösung mit 42,7 mg/ml 1-Ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)-carbodiimid und läßt 3 min bei Umgebungstemperatur stehen.
  • Man gibt 180ul der so erhaltenen Lösung zu 5,6 ml einer Antikörperlösung mit 3,6 mg/ml in PBS-Puffer. Man läßt die Inkubation 20 Stunden lang bei 30ºC ablaufen.
  • Danach dialysiert man die Lösung kontiniuerlich 3 Tage lang gegen 21 Liter PBS-Puffer bei 4ºC. Man erhält so 16 mg aktivierten Antikörper in einer Konzentration von 2,6 mg/ml.
  • Durch spektrofotometrische Bestimmung bei 343 nm des durch Austausch mit reduziertem Glutathion freigesetzten 2-Thionpyridins stellt man fest, daß man einen Antikörper erhalten hat, der 3,1 Aktivatorgruppen pro Mol Antikörper trägt.
    • d) Konjugat
  • Zu 4,6 ml einer Lösung von aktiviertem Antikörper in PBS- Puffer (Konzentration 2,6 mg/ml = 12 mg aktivierter Antikörper) gibt man 0,87 ml einer Lösung der A-Kette von Ricin im selben Puffer (Konzentration 6,6 mg/ml) und bewirkt die Inkubation 20 Stunden lang bei 25ºC.
  • Man chromatografiert die Reaktionsmischung auf einer "Sephadex G100"®-Gelsäule. Bei jeder Fraktion bestimmt man die Konzentration an Antikörpern durch Spektrofotometrie bei 280 nm und jene der A-Kette durch ihr an einem azellulären System gemessenes Proteinsynthese-Inhibitionsvermögen. Man vereinigt die das Konjugat enthaltenden identischen Fraktionen und erhält so etwa 11 mg Konjugat mit einer Konzentration von 0,8 mg/ml.
  • Anhand der durchgeführten analytischen Bestimmungen konnte gezeigt werden, daß die Lösung 140 ug/ml biologisch aktive A- Kette, d.s. etwa 1,1 Mol A-Kette pro Mol Antikörper, enthält.
  • Anhand einer mittels Zytofluorometrie durchgeführten Studie konnte weiterhin nachgewiesen werden, daß der verwendete anti-humane-T-Zellen-Antikörper, der entsprechende aktivierte Antikörper und das Konjugat dieses Antikörpers mit der A-Kette von Ricin überlagerbare Fluoreszenzhistogramme aufwiesen, mit denen bestätigt werden konnte, daß der Antikörper im Verlauf der Aktivierungs- und Kopplungsreaktionen, denen er unterzogen wurde, keine bedeutende Veränderung mitgemacht hat und insbesondere sogar innerhalb des Konjugats in der Lage bleibt, das humane-T-Antigen, gegen das er gerichtet ist, zu erkennen.
  • Das zuvor erhaltene, erfindungsgemäße Konjugat wurde hinsichtlich seiner biologischen Eigenschaften, genauergesagt seiner krebshemmenden Wirkung, untersucht.
    • 1) - INHIBITION DER PROTEINSYNTHESE
  • Die fundamentale biologische Eigenschaft der A-Kette von Ricin besteht in der Inhibition der zellulären Proteinsynthese durch Veränderung der ribosomalen Untereinheit 60S.
  • Hierbei wurde ein Zellmodell verwendet. Dieser Test mißt die Wirkung der Untersuchungssubstanzen auf die Inkorporation von ¹&sup4;C-Leucin in kultivierten Krebszellen.
  • Die verwendeten Zellen gehören zur Zellinie CEM, die von einer humanen Leukämie T stammt, welche das Antigen T65 trägt. Die Zellen werden in Gegenwart der Untersuchungssubstanz inkubiert, und am Ende der Inkubation nimmt man die Messung des Grades der Inkorporation von ¹&sup4;C-Leucin durch die so behandelten Zellen vor.
  • Diese Messung erfolgt nach einer Technik, die aufgrund der in Journal of Biological Chemistry 1974, 249 (11), 3557-62 beschriebenen Technik adaptiert wurde, u.zw. unter Verwendung des Tracers ¹&sup4;C-Leucin zur Bestimmung des Grades der Proteinsynthese. Die Bestimmung der inkorporierten Radioaktivität erfolgt hier an den mittels Filtration isolierten ganzen Zellen.
  • Ausgehend von diesen Bestimmungen, kann man die Wirkung/ Dosis-Kurven erstellen, die an der Abszisse die molare Konzentration der Untersuchungssubstanzen an A-Kette und an der Ordinate die Inkorporation von ¹&sup4;C-Leucin, ausgedrückt in Prozent Inkorporation der Kontrollzellen ohne jede die Proteinsynthese beeinflussende Substanz, aufweisen.
  • Man kann so für jede untersuchte Substanz die Konzentration, die 50% der Inkorporation von ¹&sup4;C-Leucin inhibiert, oder auch "Inhibitionskonzentration 50" (CI 50) ermitteln.
  • Fig. 1 stellt die Kurven dar, die bei ein- und demselben Versuch mit Ricin, mit dessen freier A-Kette und mit dem Konjugat RT2 (der nach Beispiel 1 hergestellten Verbindung) in Gegenwart und in Abwesenheit von 10 mM Ammoniumchlorid im Inkubationsmedium erhalten wurden.
  • Anhand dieser Figur kann man feststellen, daß das untersuchte Konjugat RT2 sogar in Abwesenheit von Ammoniumchlorid und nach 48-stündiger Inkubation eine starke zytotoxische Aktivität aufweist (CI50 = 7·10&supmin;¹²M), die etwa 7000mal höher als jene der A-Kette von Ricin ist.
    • 2) - POTENZIERUNG DER AKTIVITÄT DES KONJUGATS RT2 MITTELS AMMONIUMCHLORID
  • Wie Fig. 1 auch zeigt, erhöht die Anwesenheit von 10 mM Ammoniumchlorid im Inkubationsmedium der Zellen mit dem Konjugat RT2 die zytotoxische Aktivität des Konjugats auf die Zielzellen ganz enorm, nämlich etwa 80mal. Diese Potenzierungswirkung wird weder mit Ricin noch mit der A-Kette und auch nicht mit einem für die untersuchten Zellen nicht spezifischen Konjugat erreicht. So wird die zytotoxische Aktivität des Konjugats in Gegenwart von Ammoniumchlorid als Potenzierungsmittel (CI 50 = 8,5·10&supmin;¹&sup4;M) etwa 600.000mal höher als jene der A-Kette allein und übertrifft in der Potenz sogar die Aktivität von Ricin, was noch niemals für irgendein Konjugat zwischen der A-Kette von Ricin und irgendeinem Antikörper beschrieben wurde.
  • Die erfindungsgemäß hergestellten Konjugate weisen selbst eine starke spezifische zytotoxische Aktivität gegenüber menschlichen T-Leukämiezellinien auf. Sie können somit in der Humantherapie bei der Behandlung von T-Leukämien oder jeder anderen, gegebenenfalls krebsartigen Erkrankung, bei der es gilt, für das erfindungsgemäß hergestellte Konjugat empfindliche Zellen selektiv zu zerstören, eingesetzt werden. Dies gilt für Transplantationen oder bestimmte Autoimmunkrankheiten zur Verringerung der Aktivität der T-Lymphozyten oder von so mancher Subpopulation von T-Lymphozyten.
  • Zieht man weiter die sehr starke potenzierende Wirkung von Ammoniumchlorid auf die Aktivität dieser Konjugate gegenüber den entsprechenden Zielzellen in Betracht, so ist es möglich, diese neue Eigenschaft zur Erhöhung der therapeutischen Wirksamkeit des Konjugats bei der Behandlung von Krankheiten, für die es angebracht ist, vorteilhaft zu nützen. Diese Verbesserung kann entsprechend zwei verschiedenen Therapieschemen genutzt werden.
  • a) in vitro kann man mit dem Konjugat RT2 in Gegenwart von Ammoniumchlorid menschliche Knochenmarksproben von insbesondere leukämischen Patienten behandeln. Da diese Kombination eine stark erhöhte und stark spezifische zytotoxische Wirksamkeit aufweist, ist es möglich, aus dem so behandelten Knochenmark jede Zelle, die das vom Konjugat erkannte Antigen trägt, insbesondere jede Tumorzelle, zu entfernen. Außerdem kann der Patient mit jeder geeigneten Therapie, wie Radiotherapie und/ oder Chemotherapie, in supralethaler Dosis behandelt werden, so daß diese Tumorzellen aus seinem Organismus entfernt werden. Schließlich wird das wie ausgeführt gereinigte Knochenmark als autologes implantat zur Ermöglichung der Wiederherstellung der Populationen an durch die supralethale Behandlung zerstörten Blutzellen wieder in den Organismus des Patienten eingepflanzt.
  • b) In vivo kann die Anwendung der Potenzierungseigenschaft des Ammoniumchlorids beim Patienten auch zur Erlangung der maximalen Wirksamkeit des Konjugats genutzt werden. Es hat sich nämlich gezeigt, daß Mäuse, denen zuvor Tumorzellen eingepflanzt worden sind und denen man das Konjugat gleichzeitig mit drei Injektionen von 7 mg Ammoniumchlorid in Abständen von 15 Minuten verabreicht, eine bessere Überlebensrate und eine bessere Wachstumshemmung des Tumors haben als die Kontrollmäuse, die nur das Konjugat erhalten haben.
  • Diese Konjugate sind zur Verwendung auf Injektionsweg konditioniert. Sie können entweder alleine oder in Verbindung mit Ammoniumchlorid oder in Kombination mit einer anderen Behandlung der betreffenden Krebserkrankung, insbesondere in Kombination mit anderen Immunpassivierungsmitteln zur Verzögerung oder Schwächung der natürlichen Immunreaktion des Patienten gegenüber dem Fremdprotein in seinem Organismus, welches das Konjugat enthält, verwendet werden.
  • Bezweckt man eine vollständige Entfernung aller Krebszellen, ist die Behandlung mit einer ausreichenden Dosis des Konjugats durchzuführen, und die Behandlungsdauer ist in jedem Fall in Abhängigkeit von der Person und der Beschaffenheit der zu behandelnden Krankheit festzulegen.

Claims (9)

1. Verfahren zur Herstellung eines krebshemmenden Medikaments für den Menschen, dadurch gekennzeichnet, daß es darin besteht, mindestens ein durch Kopplung mittels einer Disulfidbrücke der A-Kette von Ricin mit einem monoklonalen anti-humane-T-Zellen-Antikörper oder einem Fragment eines solchen Antikörpers erhaltenes Konjugat zu verwenden, wobei das genannte Konjugat ein spezifisches zytotoxisches Mittel für diese T-Zellen ist.
2. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß der monoklonale Antikörper ein ganzer monoklonaler Antikörper ist, an dem die aktivierte SH-Gruppe eingeführt wurde.
3. Verfahren nach Anspruch 2, dadurch gekennzeichnet, daß die aktivierte SH-Gruppe in Form einer Disulfidbrücke vorliegt, die den Antikörper und eine bekannte organische Aktivatorgruppe verbindet.
4. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß das Fragment des monoklonalen Antikörpers das Fragment Fab' desselben ist.
5. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 4, dadurch gekennzeichnet, daß man weiterhin Ammoniumchlorid zugibt.
6. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 6, dadurch gekennzeichnet, daß man den Antikörper T101 als anti-humane-T- Zellen-Antikörper verwendet.
7. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 6, dadurch gekennzeichnet, daß
- man einen Antikörper verwendet, der durch ein aktiviertes Schwefelatom der Formel:
AC-R-S-S-X
worin AC der gewählte monoklonale Antikörper ist, S für Schwefel steht, X eine Aktivatorgruppe bezeichnet und R eine Aktivatorgruppe ist, die gleichzeitig die Substituenten AC und -S-S-X tragen kann, substituiert ist;
- und man das genannte Produkt mit dem Thiol der A-Kette von Ricin reagieren läßt.
8. Verfahren nach Anspruch 4, dadurch gekennzeichnet, daß man zunächst nach bekannten Verfahren das Fragment Fab' des Antikörpers herstellt und dann das Fragment in ein aktiviertes gemischtes Disulfid überführt, welches man mit dem Thiol der A- Kette von Ricin reagieren läßt.
9. Verwendung von Ammoniumchlorid zur Herstellung eines Mittels zur Potenzierung der Aktivität von Konjugaten, die durch die mittels einer Disulfidbrücke mit einem monoklonalen antihumane-T-Zellen-Antikörper oder einem Fragment eines solchen Antikörpers gekoppelte A-Kette von Ricin gebildet sind, wobei das genannte Konjugat ein spezifisches zytotoxisches Mittel für diese T-Zellen ist.
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