DE3227262C3 - Verfahren zur Herstellung von menschlichem Tumor-Nekrose-Faktor und menschlicher Tumor-Nekrose-Faktor - Google Patents
Verfahren zur Herstellung von menschlichem Tumor-Nekrose-Faktor und menschlicher Tumor-Nekrose-FaktorInfo
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Description
- (a) eine oder mehrere Zellinien aus der aus BALL-1-, Namalva-, M-7002-, B-7101-, JBL-, EBV-Sa-, CCRF-SB- (=ATCC CCL 120), EBV-Wa-, TALL-1-, MOLT-3-, Nall-1- und EBV-HO-Zellen, CCRF-CEM-Zellen und Balm-2-Zellen, und anderen etablierten Zellinien, die man durch Transfor mieren von normalen Monozyten oder Granulozyten unter Verwendung eines beliebigen karzinogenen Virus, Mittels oder karzinogener Strahlung erhalten hat, bestehenden Gruppe einem oder mehreren alpha-Interferon- und/oder gamma-Interferonauslösern aussetzt und dadurch eine menschliche Tumor-Nekrose-Faktor-Erzeugung induziert,
- (b) die Kultur bei 4°C und 1000 xg zentrifugiert, die über stehende Flüssigkeit gegen eine physiologische Kochsalz lösung mit einem Gehalt von 0,01 M Phosphatpuffer (pH-Wert 7,2) dialysiert, die erhaltene Lösung unter Verwendung eines Membranfilters filtriert und dann lyophilisiert,
- (c) aus dem so erhaltenen pulvrigen Produkt durch Adsorption und Desorption an einem Ionenaustauscher, Molekulargewichtsfraktionierung unter Anwendung der Gelfiltration, Einengen und Filtrieren unter Verwendung eines Membranfilters, das Humaninterferon entfernt und
- (d) das humaninterferonfreie Produkt durch Aussalzen unter Verwendung von Ammoniumsulfat und durch Affinitätschroma trographie unter Verwendung von Con A-Sepharose reinigt.
- (1) eine Methode, worin man die vermehrten menschlichen Zellen einem hTNF-Auslöser in dem Tier aussetzt, das man als Wirt für die Zellvermehrung verwendet hat, die mensch lichen Zellen danach aus einem oder mehreren bestimmten Körperteilen des Tieres oder aus seinem gesamten Körper gewinnt und danach die menschlichen Zellen einem hTNF- Auslöser in vitro aussetzt;
- (2) eine Methode, worin man menschliche Zellen wiederholt in vitro und/oder in vivo einem hTNF-Auslöser aussetzt; und/oder
- (3) eine Methode, worin man die Diffusionskammer, die man in das Tier eingebettet oder auf dem Tier angebracht hat, wiederholt durch eine frische Kammer ersetzt.
Untersuchung der Wirksamkeit und Toxizität von TNF:
Claims (2)
- a) eine oder mehrere Zellinien aus der aus BALL-1-, Namalva-, M-7002-, B- 7101-, JBL-, EBV-Sa, CCRF-SB- (=ATCC CL 120), EBV-Wa-, TALL-1-, MOLT-3-, Nall-1-, EBV-HO-Zellen, CCRF-CEM-Zellen und Balm-2-Zellen und anderen etablierten Zellinien, die man durch Transformieren von normalen Monozyten oder Granulozyten unter Verwendung eines beliebigen karzinogenen Virus, Mittels oder karzinogener Strahlung erhalten hat, bestehenden Gruppe einem oder mehreren α-Interferon- und/oder γ-Interferonauslösern aussetzt und dadurch eine Tumor-Nekrose-Faktor-Erzeugung induziert,
- (b) die Kultur bei 4°C und 1000 x/g zentrifugiert, die überstehende Flüssigkeit gegen eine physiologische NaCl-Lösung mit einem Gehalt von 0,01 M Phosphatpuffer (pH 7,2) dialysiert, die erhaltene Lösung unter Verwendung eines Membranfilters filtriert und dann lyophilisiert,
- (c) aus dem so erhaltenen pulvrigen Produkt durch Adsorption und Desorption an einem Ionenaustauscher, Molekulargewichtsfraktionierung unter Anwendung der Gelfiltration, Einengen und Filtrieren unter Verwendung eines Membranfilters, das Humaninterferon entfernt und
- (d) das hIFN-freie Produkt durch Aussalzen unter Verwendung von Ammoniumsulfat und durch Affinitätschromatographie unter Verwendung von ConA-Sepharose reinigt.
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