DE2754326A1 - Antibiotikum am-2282, verfahren zu seiner herstellung und arzneimittel - Google Patents
Antibiotikum am-2282, verfahren zu seiner herstellung und arzneimittelInfo
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Description
n Antibiotikum AM-2282, Verfahren zu seiner Herstellung und
Arzneimittel w
Die Erfindung betrifft den in den Patentansprüchen gekennzeichneten
Gegenstand.
Das Antibiotikum AM-2282 zeigt antibiotische Wirkung gegenüber Hefen und Pilzen sowie pharmakologische Aktivität bei
Hochdruck, Ödemen und Ulcus. Die Verbindung kann somit zur
Bekämpfung verschiedener, durch Hefen und Pilze hervorgerufener
Infektionen und zur Behandlung von Hochdruck eingesetzt werden. Die Eigenschaften des Antibiotikums AM-2282 sind verschieden
von denen bekannter Antibiotika, wie Oxamicetin und
25 u-24 544.
Unter den verschiedenen, in Anspruch 1 aufgeführten Parametern
wird das UV-Absorptionsspektrum in erster Linie zur Identifizierung der Verbindung verwendet. Verschiedene bekann
te Antibiotika mit ähnlichen Eigenschaften, wie Oxamicetin (J. Antibiotics, Bd. 26 (1973), S. 752, 757 und 765) und
U-24544 (Appl. Microbiol., Bd. 15 (1967), S. 1142) haben ein UV-Absorptionsmaximum bei 280 bis 310 nm. Das UV-Maximum von
Oxamicetin bei 305 nm liegt im alkalischen pH-Bereich bei 322 nm und im sauren pH-Bereich bei 316 nm. Außer dem Maximum
bei 322 nm hat Oxamicetin im alkalischen pH-Bereich ein weiteres Maximum bei 265 nm.
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U-24544 hat ein Absorptionsmaximum bei 303 nm, das im alkalischen pH-Bereich bei 331 nm liegt.
Das IR-Absorptionsspektrum von AM-2282 ist verschieden von
dem des Oxamicetins und U-24544. Daraus folgt, daß Oxamicetin und U-24544 nicht identisch mit dem Antibiotikum AM-2282 sind.
Die Summenformel C28H26N4°3 für das Antibiotikum AM-2282 ergibt
sich aus dem gefundenen Wert für das Massenspektrum m/e = 466,199 (ber.: 466,200), ferner aus der Zahl von 25-27 Protonen
im NMR-Sprektrum und der Zahl von 26-28 Kohlenstoffatomen im C-NMR-Spektrum sowie den Werten der Elementaranalyse.
Das NMR-Spektrum des Antibiotikums AM-2282 ist in der Zeitschrift The Journal of Antibiotics, Bd. 30 (1977), S. 276 bis
282 wiedergegeben.
In Tabelle I ist die minimale Hemmkonzentration (MHK) des Antibiotikums AM-2282 gegenüber verschiedenen Bakterien und
Pilzen zusammengestellt. Die Werte wurden nach der Agar-Verdünnungsmethode bestimmt.
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Tabelle I Testkeim
Staphylococcus aureus FDA 209P Bacillus subtilis PCI
Sarcina lutea PCI 1001 Mycobacterium smegmatis ATCC
Escherichia coli NIJH Pseudomonas aeruginosa P-3 Proteus vulgaris IFO 3167
Xanthomonas oryzae Candida albicans Candida pseudotropicalis
Saccharomyces sake Aspergillus niger
Aspergillus brevipus Aspergillus fumigatus Trichophyton rubrum
Trichophyton mentagrophytes Cryptococcus neoformans Microsponam gipseum
Sclerotinia cinerea Piricularia oryzae
MHK, γ/ml |
Medium* |
-200 | N |
ν 200 | N |
25 | N |
50 | N |
>200 | N |
>200 | N |
>200 | N |
200 | N |
6,25 | P |
3,12 | P |
3,12 | P |
25 | P |
3,12 | P |
12,5 | P |
6,25 | P |
25 | P |
50 | P |
>100 | P |
0,78 | P |
0,78 | P |
* N: Pepton 0,5 % Gew./Vol., Fleischextrakt 0,5 % Gew./Vol.,
Agar 1,2 % Gew./Vol., pH 7,0.
P: Kartoffelextrakt mit 1,0 % Gew./Vol. Glucose und 30 1/2 % Gew./Vol. Agar, pH 6,8.
Die Bestimmung der blutdrucksteigernden Wirkung wurde folgendermaßen
durchgeführt:
35 Weiblichen Ratten mit einem Körpergewicht von 200 bis 250 g,
die zur Erzeugung von spontanem Hochdruck unter bestimmten
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Bedingungen gezüchtet wurden, wird das Hydrochlorid von AM-2282 oral in den in Tabelle II angegebenen Dosen gegeben.
Im Verlauf von 1, 3 und 5 Stunden nach Verabreichung der Verbindung wird in der Schwanzarterie der systolische Blutdruck
bestimmt. Die Ergebnisse sind in Tabelle II zusammengefaßt.
Dosis,
mg/kg |
Ausmaß des Hochdrucks (50
nach |
3 Std. | - 5 Std. | |
Hydrochlorid
von AM-2282 |
[0,16
L0,16 .0,3 ^,3 [0,63 10,63 l1,25 |
1 Std. |
2
13 23 13 24 23 25 |
1
2 12 11 25 24 31 39 |
a-Methyl-DOPA | 100 |
-2
2 6 17 13 17 15 18 |
13 | 13 |
7 |
Aus der Tabelle ist ersichtlich, daß bei einer Dosis von 0,3 mg/kg eine hypertensive Wirkung eintritt.
Weitere Versuche an Ratten haben ergeben, daß die Verbindung zur Bekämpfung von Ödemen und Ulcus geeignet ist. Die minimale wirksame Konzentration beträgt 1,0 mg/kg.
Die akute Toxizität von AM-2282 bei intraperitonealer Verabreichung an Mäuse, berechnet nach der Methode von Behrens
und Kärber, beträgt 6,6 mg/kg.
Das Antibiotikum AM-2282 wird erfindungsgemäß durch aerobe Züchtung eines das Antibiotikum bildenden Mikroorganismus der
Gattung Streptomyces und Isolierung des Antibiotikums aus der Gärmaische hergestellt. Im erfindungsgemäßen Verfahren kön-
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nen nach üblichen Methoden erhaltene Mutanten und Varianten
von das Antibiotikum bildenden Mikroorganismen der Gattung Streptomyces eingesetzt werden.
Vorzugsweise wird im erfindungsgemäßen Verfahren ein Mikroorganismus
der Art Streptomyces staurosporeus eingesetzt. Ein bevorzugter Mikroorganismus ist Streptomyces sp. AM-2282
(FERM-P Nr. 3725; NRRL 11184). Dieser Stamm hat folgende Eigenschaften:
1. Morphologische Eigenschaften:
Auf Malzagar-Medium bildet sich Substratmycel mit einfacher Verzweigung. Auf Malzagar-Medium, ausgenommen verschiedene
synthetische Medien, bildet sich ein Luftmyce].
Sporenkettenmorphologie wird zur Sektion Re c&TTexI bliest
Sporangien und begeiselte Sporen werden nicht beobachtet.
Die Sporen sind zylindrisch oder länglich mit den Abmessungen 0,4 bis 0,6 um χ 1,8 bis 2,4 pm, mit glatter Oberfläche.
Auf einigen organischen Agarmedien, wie Hefe-Malzagar,
werden sclerotische Granulate gebildet, deren Durchmesser 10 bis 30 ^im beträgt.
2. Kulturcharakteristika in verschiedenen Medien:
In Tabelle III sind die Kulturcharakteristika nach 10-bis
14-tägiger Züchtung bei 27°C zusammengestellt. Die Farbwerte wurden durch Vergleich mit dem Color Harmony Manual
(Container Corporation of America, Chicago, 1958) bestimmt.
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co
cn
ro cn
N>
O
Sucrose-Nitrat-Agar
Glucose-Nitrat-Agar
Glycerin-CaIciummalat-Agar
Glucos e-Asparagin-Agar (ISP)
Glycerin-Asparagin-Agar (ISP)
anorganische Salze-Stärke- Agar (ISP)
Tyrosin-Agar (ISP)
Nähragar
Glucose-Pepton-Agar
Hefeextrakt-Malzextrakt-Agar (ISP)
Wachsturn
gut,
melonengelb (3ga)
gut, gerunzelt, melonengelb (3ga)
gut, hellmelonengelb (3ea)
gut, aprikosenfarben (4ga)
gut, hellmelonengelb (3ea)
gut, hellmelonengelb (3ea)
gut, hellmelonengelb (3ea)
gut, bambusfarben
mäßig, gerunzelt, hellmaisgelb (2ea)
gut, bernsteinfarben (3pc)
hellmelonen· gelb (3ea)
rosa (3ca)
hellaprikosenfarben (4ea)
hellmelonengelb (3ea)
rosa bis hellgelb (3gc)
hellelfenbeinfarben (2ca)
maisgelb (2hb)
melonengelb (3ga)
melonengelb (3ia)
löslichem ———— Pigment
schlecht, samt- hellmelonen· artig, hellme- gelb (3ea)
lonengelb (3ea)
mäßig, samtartig, rosa (3ca)
mäßig, samtartig, rosa (4ca)
mäßig, samtartig, weiß
kräftig, samt- - <8 artig, weiß bis
rosa (3ca)
mäßig, samtartig,
rosa, (3ca)
gering, samtartig, bambusfarben elfenbeinfarben (2fb) (2cb) bis rosa
(3ca)
mäßig, samtartig,
rosa, (4ca)
mäßig, samtartig,
weiß bis perlfarben
(3ba)
co cn
co O
cn
cn
Nährmedium
Hafermehl-Agar (ISP)
Wachstum
Tabelle III - Fortsetzung Unterseite
gut, hellmelonengelb, (3ea)
Pepton-Hefe-Extrakt-gut, elfenbein-Eisen-Agar
(ISP) farben (2db)
QO O CO 00
Trypton-Hefeextraktbrühe (ISP)
Oberflächenwachstum
hellelfenbein
(2oa)
hellmelonengelb (3ea)
maisgelb (2hb)
Luftmycel
mäßig, samtartig,
weiß bis rosa
(3ca)
weiß bis rosa
(3ca)
hellelfenbeinfarben (2ca)
Bildung von
löslichem
Pigment
gelb (2ga)
ISP: Vom International Streptomyces Project empfohlenes Nährmedium
1 3. Physiologische Eigenschaften:
1) Wachstumstemperaturbereich: 20 bis AO0C (Hefeextrakt-
2) Bildung von melanoiden negativ (Trypton-Hefe-Pi gmenten: extrakt,
Agar, Tyrosin-Agar)
3) Gelatineverflüssigung: positiv
4) Stärkehydrolyse: positiv
5) Coagulierung von Nagermilch: vermutlich positiv
10 6) Peptonisierung von Mager« positiv
milch:
7) Schwefelwasserstoffbildung: negativ
8) Bildung von salpetriger negativ Säure:
9) Hydrolyse von Cellulose: vermutlich positiv.
4. Verwertung von Kohlenstoffquellen im Pridham-Gottlief-Medium:
Verwertbar: D-Glucose, L-Arabinose, Sucrose, L-Inosit und
D-Mannit;
Mehr oder weniger verwertbar: D-Fructose, D-Xylose,
L-Rhamnose und Cellulose.
Die morphologischen und physiologischen Eigenschaften des Stammes AM-2282 lassen sich wie folgt zusammenfassen:
Die Kultur ist von braunstichig-weißer bis hellgelbstichigoranger oder rotstichig-gelber Farbe.Die Farbe des Luftmycels
ist Je nach den Agarmedien weiß, gelb oder rosa. Auf Pepton-Hefe-Eisen-Agar, Tyrosin-Agar und Trypton-HefebrUhe werden
3Q keine melanoiden Pigmente gebildet. Beim Vergleich dieser
Eigenschaften mit denen der bekannten Stämme von Streptomyces,
die in Bergey's Manual of Determinative Bacteriology, 8. Auflage und in anderen Veröffentlichungen beschrieben sind, besteht Übereinstimmung mit folgenden fünf Arten:
Streptomyces roseofulvus Pridham et al. 1958,
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Streptomyces moderatus Reusser I967, Streptomyces baarnensis
Pridham et al. 1958 und Streptomyces tolypophorus Shibata et
al. 1971. Diese Stämme unterscheiden sich jedoch vom Stamm
AM-2282 hinsichtlich folgender morphologischer und physiolo-
5 giseher Eigenschaften.
Die Sporen von S. roseofulvus haben eine Größe von etwa 1 Mikron und in Hefeextrakt-Malzextrakt-Agar, Hafermehl-Agar
und anorganische Salze-Stärke-Agar wird ein hellgraustichiggelbes oder hellbraunsticfrg-graues Pigment gebildet.
Dieser Stamm verwertet D-Xylose, D-Fructose und Rhamnose. Die Sporen von S. pluricolorescens sind ebenfalls kurz (etwa
1 Mikron) und die Unterseite der Kolonie ist von graustichiggelber oder gelbstichig-brauner Farbe auf Hefe-Malz-Agar,
Hafermehl-Agar, anorganische Salze-Stärke-Agar und Glycerin-Asparagin-Agar.
Das Luftmycel von S. moderatus ist auf Hefe-Malz-Agar, Hafermehl-Agar und anorganische Salze-Stärke-Agar
graustichig-gelbrosa, und es bildet ein purpurfarbenes lösliches Pigment. S. baarnensis und S. tolypophorus haben ähnlieh
wie Streptomyces sp. AM-2282 lange Sporen. S. baarnensis bildet jedoch ein spärliches Luftmycel, seine Farbe ist auf
verschiedenen organischen Medien weiß bis grau und die Unterseite der Kolonie ist hellelfenbeinfarben. S. tolypophorus
bildet spärliches Luftmycel von weißer Farbe, und die Unterseite der Kolonie bildet kein erkennbares Pigment auf anorganische
Salze-Stärke-Agar und es bildet ein orange-gelbes Pigment auf Glycerin-Calciummalat-Agar. Der Stamm verwertet
Fructose, Xylose und Rhamnose als Kohlenstoffquelle.
Aufgrund der vorstehend angegebenen Eigenschaften kann man schließen, daß der Stamm AM-2282 eine neue Art von Streptomyces
ist, für die der Name Streptomyces staurosporeus nov. sp. vorgeschlagen wird. Der Stamm wurde als Streptomyces sp.
AM-2282 beim Fermentation Research Institute, Agency of Industrial Science and Technology, Chiba-ken, Japan unter
der Hinterlegungsbezeichnung FERM-P Nr. 3725 sowie bei der
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ARS-Kultursammlung in Peoria, V.St.A. unter der Hinterlegungsbezeichnung NRRL 11 184 hinterlegt.
Aus diesem Stamm können nach üblichen Methoden beispielsweise
durch Bestrahlung mit UV-Licht, Röntgenstrahlen bzw. anderen Strahlen oder chemischen Mutagenen Mutanten hergestellt werden. Eine durch Bestrahlung mit UV-Licht hergestellte Mutante
zeichnet sich durch besonders hohe Produktivität aus. Der Stamm AM-228 2 bildet das Antibiotikum AM-2282 sowohl intracellulär
als auch extracellular.
Im erfindungsgemäßen Verfahren kann Jedes synthetische oder organische Nährmedium verwendet werden, das Kohlenstoff- und
Stickstoffquellen sowie anorganische Salze enthält. Gegebenenfalls
können dem Nährmedium noch andere übliche Nährstoffe zur ZUchtung von Mikroorganismen der Gattung Streptomyces
einverleibt werden.
Als Kohlenstoffquelle kommen verschiedene Substanzen in Frage, die assimilierbaren Kohlenstoff enthalten. Bevorzugte
Kohlenstoffquellen sind Glucose, Maltose, Lactose, Saccharose, Stärke, Dextrin, Glycerin und Melasse.
Als Stickstoffquellen kommen verschiedene Substanzen in Frage, die assimilierbaren Stickstoff enthalten. Bevorzugte Stickstoff
quellen sind Sojabohnenmehl, Maisquellwasser, Baumwollsamenkuchen, Pepton, Fleischextrakt, Hefeextrakt, Hefe,
Caseinhydrolysat, Ammoniumsalze und Salze der Salpetersäure.
Beispiele für verwendbare anorganische Salze sind Phosphate und Sulfate von Calcium, Natrium, Eisen und Mangan.
Zur Produktion großer Mengen an Antibiotikum AM-2282 wird die ZUchtung vorzugsweise in einem flüssigen Nährboden durchgeführt,
doch können auch feste Nährböden verwendet werden. Vorzugsweise hat das Einsaatmedium die gleiche Zusammenset-
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zung wie das Hauptfermentationsmedium. Die Einsaatkultur wird
vorzugsweise durch 24- bis 48stündige Züchtung unter aeroben Bedingungen bei Temperaturen von etwa 27° C unter Verwendung
eines Sakaguchi-Kolbens hergestellt. 5
Die Hauptfermentation wird vorzugsweise 50 bis 120 Stunden unter aeroben Bedingungen und unter Schütteln bei Temperaturen
von 15 bis 400C, insbesondere 25 bis 300C, und bei einem
pH-Wert von 6 bis 10, insbesondere 6 bis 7, durchgeführt. Nach beendeter Züchtung hat sich eine große Menge Antibiotikum
AM-2282 in der Gärmaische und den Zellen angesammelt. Das Antibiotxkun wird in an sich bekannter Weise aus der Gärmaische
und den Zellen isoliert. Beispielsweise werden die Zellen von der Flüssigkeit durch Filtration getrennt. Das Antibiotikum
kann auch unmittelbar aus der Gärmaische isoliert werden, da es lipoidlöslich ist. Zu diesem Zweck wird die Gärmaische
einer Lösungsmittelextraktion unterworfen.
Ein bevorzugtes Verfahren zur Isolierung und Reinigung des Antibiotikums aus der Gärmaische wird nachstehend erläutert.
Die Gärmaische wird mit wäßriger Ammoniaklösung auf einen pH-Wert von etwa 10 eingestellt und sodann mit einem organischen
Lösungsmittel, wie n-Butylacetat, extrahiert. Der
erhaltene Extrakt wird unter vermindertem Druck stark eingeengt und sodann mit 0,1 η Salzsäure versetzt. Die wäßrige Phase
wird hierauf mit wäßriger Ammoniaklösung auf einen pH-Wert von 10 eingestellt und mit Ethylacetat extrahiert. Der erhaltene
Extrakt wird unter vermindertem Druck zur Trockene ein-
gedampft. Sodann wird der Rückstand an Kieselgel mit einem Gemisch von Chloroform und Methanol (60 : 1 V/V) chromatographiert.
Die das Antibiotikum enthaltenden Fraktionen, die eine positive Dragendorff-Reaktion zeigen, und deren Rf-Wert
bei der DUnnschichtchromatographie an Kieselgel und mit dem
System Chloroform-Methanol (10 : 1 V/V) einen Wert von 0,55 ergeben, werden vereinigt und unter vermindertem Druck ein-
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gedampft. Das erhaltene gelbliche Pulver wird aus einem Gemisch von Chloroform und Methanol (100 : 2 V/V) umkristallisiert. Das Antibiotikum AM-2282 kristallisiert in hellgelben
Nadeln aus.
Die Bestimmung des Antibiotikums erfolgt durch den Präcipitationstest
mit Dragendorff-Reagens und die Messung der Absorption bei 292 nm.
10 Die Beispiele erläutern die Erfindung.
In einen Sakaguchi-Kolben werden 500 ml eines Nährmediums (pH 7,0) mit 2,0 Gewichtsprozent/Volumen Glucose, 0,5 Gewichtsproζent/Volumen
Pepton, 0,5 Gewichtsprozent/Volumen Fleischextrakt, 0,3 Gewichtsprozent/Volumen Trockenhefe,
0,5 Gewichtsprozent/Volumen Natriumchlorid und 0,3 Gewichtsprozent/Volumen Calciumcarbonat vorgelegt. Das Nährmedium
wird 15 Minuten bei 120°C sterilisiert. Sodann wird aus einer Schrägkultur mit einer Pletinuse Streptomyces sp. AM-2282
(FERM-P Nr. 3725; NRRL 11 184) in das Nährmedium überimpft
und 48 Stunden auf einer DrehschUttelmaschine bei 110 U/min und 27°C gezüchtet.
Die erhaltene Einsaatkultur wird in 20 Liter eines Produktionsmediums (pH 7,0), das 2,0 Gewichtsprozent/Volumen Stärke,
1,0 Gewichtsprozent/Volumen Glucose, O,5 Gewichtsprozent/Volumen
Pepton, 0,5 Gewichtsprozent/Volumen Hefeextrakt und 0,4 Gewichtsprozent/Volumen
Calciumcarbonat enthält, in einen 30 Liter fassenden Fermenter überimpft. Die Fermentation wird
75 Stunden unter Schütteln (250 U/min) bei 270C und einer Belüftungsgeschwindigkeit
von 10 Liter/min durchgeführt. Nach beendeter Züchtung wird die Gärmaische (17 Liter) mit wäßriger
Ammoniaklösung auf einen pH-Wert von 10 eingestellt, mit 8 Liter n-Butylacetat versetzt und 30 bis 60 Minuten bei Raumtemperatur
ausgeschüttelt. Sodann wird der n-Butylacetatex-
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trakt abgetrennt und in 2 Liter 1 η Salzsäure gegossen. Die
wäßrige Phase wird abgetrennt, mit 28prozentiger wäßriger Ammoniaklösung auf einen pH-Wert von 10 eingestellt und zweimal
mit jeweils 1 Liter Ethylacetat extrahiert. Der Ethylacetatextrakt
wird unter vermindertem Druck eingedampft. Es hinterbleiben etwa 1,3 g eines bräunlich gefärbten Rückstands,
der mit 50 ml Diethylether zur Abtrennung fettartiger Verunreinigungen gewaschen wird. Die getrocknete Substanz wird sodann
auf eine mit 12g Kieselgel 60 gefüllte Säule aufge-
10 setzt und mit 400 ml einen Gemisches von
Chloroform und Methanol (60 : 1 V/V) entwickelt. Das Eluat
wird in Fraktionen von jeweils 2,5 ml unterteilt. Jede Fraktion wird mittels Dragendorff-Reagens und dünnschichtchromatographisch
an 0,3 mm Kieselgel G mit dem Lösungsmittelsystem
Chloroform-Methanol (10 : 1 V/V) untersucht. Die Fraktionen Nr. 61 bis 140 werden als aktive Fraktionen vereinigt
und unter vermindertem Druck zur Trockene eingedampft. Es hinterbleiben 170 mg eines gelben Pulvers. Das Pulver wird
in 7 ml eines Gemisches von Chloroform und Methanol (ge : 2 V/V) gelöst und 15 Stunden im Kühlschrank stehengelassen.
Die Kristalle werden abfiltriert. Es werden 110 mg hellgelbe Nadeln in einer Reinheit von oberhalb 99 % erhalten.
Diese Nadeln haben die vorstehend angegebenen Eigenschaften.
50 mg der erhaltenen hellgelben Nadeln werden in Chloroform
gelöst. In die Chloroformlösung wird gasförmiger Chlorwasserstoff eingeleitet. Nach dem Aufarbeiten werden 42 mg des
Antibiotikums AM-2282 als Hydrochlorid erhalten.
30 Beispiel 2
Gemäß Beispiel 1 wird eine Einsaatkultur von Streptomyces staurosporeus FERM-P Nr. 3725, NRRL 11 184 hergestellt. 600 ml
der erhaltenen Einsaatkultur werden gemäß Beispiel 1 in 70 Liter eines Produktionsmediums in einen 100 Liter fassenden
Fermenter überimpft. Die Fermentation wird 68 Stunden bei 270C unter Schütteln (200 U/min) und einer Belüftungsgeschwin-
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digkeit von 30 Liter/min durchgeführt. Nach beendeter Fermentation
wird die Gärmaische (63 Liter) mit 28prozentiger wäßriger Ammoniaklösung auf einen pH-Wert von 10 eingestellt
und mit 30 Liter n-Butylacetat extrahiert. Der n-Butylacetatextrakt
wird abgetrennt und in 8 Liter 0,1 η Salzsäure gegossen. Die wäßrige Phase wird mit 28prozentiger wäßriger
Ammoniaklösung auf einen pH-Wert von 10 eingestellt und erneut zweimal mit jeweils 4 Liter Ethylacetat extrahiert.
Der εthylacetatextrakt wird unter vermindertem Druck eingedampft.
Es werden 1,4 g eines bräunlichen Rückstandes erhalten, der mit 100 ml Diethylether zur Abtrennung fettartiger
Verunreinigungen gewaschen wird. Die getrocknete Substanz wird gemäß Beispiel 1 chromatographisch gereinigt. Es werden
Fraktionen von jeweils 15 ml aufgefangen. Die Fraktionen 41 bis 80 enthalten das Antibiotikum, und sie ergeben eine
positive Dragendorff-Reaktion und bei der Dünnschichtchromatographie
gemäß Beispiel 1 wird ein Rf-Wert von 0,55 erhalten.
Die aktiven Fraktionen werden vereinigt und unter vermindertem Druck eingedampft. Es werden 520 mg eines gelben Pulvers
erhalten, das in einer geringen Menge Chloroform gelöst und 15 Stunden im Kühlschrank stehengelassen wird. Die entstandenen
Kristalle werden abfiltriert. Es werden 370 mg des Antibiotikums AM-2282 in hellgelben Nadeln und mit einer Reinheit
von mehr als 99 % erhalten. Das Produkt hat die gleichen Eigenschaften wie das in Beispiel 1 hergestellte Produkt.
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Claims (7)
1. Antibiotikum AM-2282, gekennzeichnet
20 durch folgende Parameter:
20 durch folgende Parameter:
a) Elementaranalyse gef.: C 70,03 %, H 6,03 %, N 11,21 %;
b) Molekulargewicht, bestimmt durch Massenspektroskopie
25 (m/e): 466;
25 (m/e): 466;
c) Summenforme1: C00H0^-N.0-;
d) spezifischer Drehwert: /ö/jp = +35,0 (c = 1,0 in Methanol);
e) Schmelzpunkt: kein scharfer Schmelzpunkt, die Verbindung
färbt sich bei 208°C braun und verwandelt sich bei 260°C in ein teeriges Produkt;
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1 f) UV-Absorptionsspektrum (Fig. 1):
^ma20Hnm (E1cm): 2h3 (337)' 267 (Schulter 552),
292 (1228), 322 (Schulter 537),
335 (313), 356 (220),372 (254).
Diese Maxima werden weder im alkalischen noch im sauren pH-Bereich verschoben;
g) IR-Absorptionsspektrum (Fig. 2) als Kaliumbromid-Preßling:
3450 cm" (Amin- und Hydroxy-Gruppen), 2960 cm" (Methyl und
Methylengruppen), 1675 cm" (Carbonyl- und Doppelbindungs-Gruppen),
1588, 1460, 1356, 1322, 1285, 1230, 1123 und 752 cm" ;
-I5 h) Farbreaktionen: positive Dragendorff-, Molisch-,
Rydon-Smith- und Ninhydrin-Reaktion; negative Beilstein-,
Eisen(lII)-chlorid-und Anilinphthalat-Reaktion;
i) Löslichkeit in verschiedenen Lösungsmitteln: löslich in Dimethylsulfoxid und Dimethylformamid; schwer löslich in
Chloroform, Ethylacetat, n-Butylacetat und Methanol; unlöslich in Petrolether, η-Hexan und Wasser;
k) Rf-Werte bei der DünnschichtChromatographie an Kieaelgel
(Kieselgel G, 0,3 nun):
Chloroform-Methanol (10 : 1 V/V) 0,55 Benzol-Aceton (1:2 V/V) 0,43
n-Butanol-Essigsäure-Wasser 0,24
(8 : 1 : 0,5 V/V)
2. Verfahren zur Herstellung des Antibiotikums nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß man einen das Antibiotikum
AM-2282 bildenden Mikroorganismus der Gattung Streptomyces unter aeroben Bedingungen in einem Nährmedium
züchtet und aus der Gärmaische das Antibiotikum isoliert.
809824/0751
Γ - 3 -
3. Verfahren nach Anspruch 2, dadurch gekennzeichnet, daß
man einen Mikroorganismus der Art Streptomyces staurosporeus
einsetzt.
4. Verfahren nach Anspruch 3» dadurch gekennzeichnet, daß
man als Mikroorganismus Streptomyces sp. AM-2282 (FERM-P Nr. 3725; NRRL 11 184) oder eine daraus nach üblichen Verfahren
gewonnene, das Antibiotikum bildende Mutante oder Variante einsetzt.
5. Verfahren nach Anspruch 2 bis 4, dadurch gekennzeichnet, daß man ein Kohlenstoff- und Stickstoffquellen sowie anorganische Salze enthaltendes Nährmedium einsetzt.
6. Verfahren nach Anspruch 2 bis 4, dadurch gekennzeichnet, daß man die Züchtung 50 bis 120 Stunden bei Temperaturen von
25 bis 30°C und einem pH-Wert von 6 bis 7 durchführt.
7. Arzneimittel, gekennzeichnet durch einen Gehalt an dem Antibiotikum gemäß Anspruch 1.
809824/0751
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