DE2658977A1 - Verfahren zur herstellung von mocimycin - Google Patents

Description

DIPL-CHEM. DR. VOLKER VOSSIUS

PATENTANWALT

MOiJCHSN 86, P.O. ECX 86 07 67 SIEBERTSTRASSE 4 PHONE: (O 89] 47 40 ψ CABLE ADDRESS: B TELEX 5-29453 VOPAT D

u.Z.:. L 689 Div. I Case: DUI-2042

Ausscheidung aus P'26 21 615.9-44

GIST - BROCADES N.V. Delft, Niederlande

Als Anmeldetag gilt der 14.Mai 1976

" Verfahren zur Herstellung von Mocimycin "

Priorität: 16. Mai 1975, Großbritannien, ITr. 20926/1975 22. Juli 1975,Großbritannien, Hr. 30646/1975

Die Erfindung betrifft den in den Ansprüchen gekennzeichneten Gegenstand.

Das verfahrensgemäß eingesetzte Dihydromocimycin hat die Formel

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Dihydromocimycin kann durch Züchten von Mikroorganismen des Stammes Streptomyces ramocissimus (CBS 190.69) oder nach üblichen Methoden daraus erhaltenen, das Antibiotikum bildenden Mutanten oder Varianten in einem wäßrigen, verwertbare Kohlenstoff- und Stichstoffquellen und anorganische Salze enthaltenden Nährmedium, Filtrieren der Kulturbrühe, Ansäuern des FiI-trats auf einen pH-Wert von 5 bis 6, Extraktion des angesäuerten Filtrats mit Methylisobutylketon, Behandeln des Extraktes mit einer Base, Abtrennen des ausgefällten Mocimycins und Aufarbeiten der Lösung auf Dihydromocimycin hergestellt v/erden.

Mocimycin ist bekannt. Es wird nach dem in der DT-OS 21 kO 673 beschriebenen Verfahren unter Verwendung der gleichen Mikroorganismen hergestellt. Die Struktur von Mocimycin wurde von Vos und Verwiel, Tetrahedron Letters, Bd. 52 (1973), S. 5173 bis 5176, angegeben.

Zur Trennung von Dihydromocimycin von Mocimycin benützt man die Löslichkeitsunterschiede dieser Verbindungen in alkalischem Medium. Beim Einleiten von gasförmigem Ammoniak in eine Lösung, die durch Extraktion einer auf einen pH-Wert von 5 bis 6 angesäuerten Kulturflüssigkeit mit Methylisobutylketon erhalten worden ist, fällt zunächst das Mocimycin praktisch vollständig aus. Das Dihydromocimycin bleibt dabei praktisch vollständig in Lösung. Nach dem Abtrennen, beispielsweise durch Abfiltrieren, des Mocimycinniederschlags aus der Lösung wird weiter Ammoniak eingeleitet, bis das Dihydromocimycin praktisch vollständig ausgefällt ist. Das Dihydromocimycin kann anschlie-

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ßend ebenfalls abgetrennt werden, beispielsweise durch Filtrieren. Ammoniak wird dabei beispielsweise etwa 1 bis ^ Minuten mit einer Geschwindigkeit von 150 Liter pro Liter Lösung pro Stunde (d, h. etwa 2,5 bis etwa 10 Liter gasförmiges Ammoniak pro Liter Lösung) bei einer Temperatur von etwa -12 bis etwa +15⁰C, vorzugsweise -5 bis +8⁰C, eingeleitet. Durch weiteres Einleiten von gasförmigem Ammoniak nimmt die Wasserstoffionenkonzentration so weit ab, daß Dihydromocimycin unlöslich wird. Beispielsweise leitet man unter den vorgenannten Bedingungen 10 bis 15 Minuten lang ein (entsprechend etwa 25 bis etwa kO Liter gasförmiges Ammoniak). Neben Ammoniak können allgemein alle alkalisch reagierenden Verbindungen zur Abtrennung von Mocimycin und Dihydromocimycin verwendet werden» Als Beispiele seien Natriummethylat und Triäthylamin genannt.

Das auf diese Weise abgetrennte Dihydromocimycin kann von Verunreinigungen an Mocimycin weiter gereinigt werden, indem man den Niederschlag in einer stark verdünnten ammoniakalischen Lösung von pH-Wert 9 löst und diese Lösung mit einem Lösungsmittel, wie Chloroform oder Methylenchlorid, extrahiert. In derartigen Lösungsmitteln ist Mocimycin nur wenig löslich. Gießt man den dabei erhaltenen Extrakt in ein im Überschuß vorhandenes inpolares Lösungsmittel, wie Petroläther, Cyclohexan oder Pentan, so bildet sich ein Dihydromocimycinniederschlag, der weniger als 5 % Mocimycin enthält.

Hochgereinigtes Dihydromocimycin erhält man durch Chromatographie an dreidimensional vernetztem Dextran, wobei man sich der

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Adsorptionsunterschiede von Mocimycin und Dihydromocimycin bedient. Dabei wird das Dextran in lOOprozentigem Methanol suspendiert und vorsichtig in die Säule geschüttet. Nach Verdrängung des Methanols durch Chloroform wird der Dihydromocimycinniederschlag auf die Säule aufgebracht. Als Elutionsmittel wird Chloroform verwendet. Dabei erhält man zunächst Dihydromocimycin und anschließend Mocimycin. Beide Verbindungen können im Eluat nachgewiesen werden, da sie im UV-Bereich bei 350 nm absorbieren. Die reinen Verbindungen können aus der Chloroformlösung durch Fällung mit einemunpolaren Lösungsmittel, wie Cyclohexan oder Pentan, gewonnen werden.

Die Identität der Verbindungen läßt sich dünnschichtehromatographisch bestätigen. Dazu werden Kieselgel P 254-Platten der Abmessungen 20 χ 5 cm verwendet . Als lauf mittel dient ein 60:42:10-Gemisch aus Chloroform, Äthanol und 25prozentigem Ammoniak. Die Laufzeit beträgt 2 Stunden. Mocimycin zeigt einen R_f-Wert von. 0,3 (H.aupttautomeres) und Dihydromocimycin von 0,4 (Haupttautomeres).

Es wurde erfindungsgemäß festgestellt, daß sich Dihydromocimycin mit Selendioxid zu Mocimycin dehydrieren läßt» Chinone, wie 2,3-Dicyano-5j6-dichlor-l,4-chinon, p-Chloranil und o-Chloranil eignen sich nicht zur Dehydrierung von Dihydromocimycin, da bei deren Verwendung andere Produkte gebildet werden. Auch Halogenierung mit Kupfer(II)-bromid, Brom, Jod oder H~Bromsuccinimid unter anschließender Dehydrohalogenierung führte nicht zu dem gewünschten Ergebnis, und zwar auch nicht in Gegen-

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wart von Katalysatoren, wie Benzoylperoxid oder Or,<X-Azobisisobutyronitril. Zur katalytisehen Dehydrierung von Dihydromocimycin sind zu hohe Temperaturen notwendig, so daß die Gefahr einer Zersetzung von Dihydromocimycin besteht.

Das erfindungsgemäße Verfahren läßt sich auch auf Gemische von Dihydromocimycin und Mocimycin anwenden, die beispielsweise bei der Aufarbeitung von Mocimycin.aus Kulturflüssigkeiten erhalten werden« Dies ist vorteilhaft, da die Gewinnung beider Verbindungen aus Kulturflüssigkeiten wesentlich einfacher ist, als die Trennung des Dihydromocimycins von Mocimycin·

Die Dehydrierung von Dihydromocimycin mit Selendioxid kann bei normaler Umgebungstemperatur durchgeführt werden. Vorzugsweise wird die Reaktion jedoch bei erhöhten Temperaturen, beispielsweise etwa 65 bis etwa 110 C und vorzugsweise bei 80 bis 95 G durchgeführt. Die Reaktionszeit kann etwa 10 Stunden bis etwa 2Ö Minuten bei einem Temperaturbereich von etwa 65 bis etwa 110 C betragen. Vorzugsweise beträgt die Reaktionszeit etwa 3 Stunden bis etwa 1 Stunde im bevorzugten Temperaturbereich. Bei Hormaltemperaturen beträgt die Reaktionszeit etwa 1 Woche.

Die Umsetzung wird vorzugsweise in einem Lösungsmittel durchgeführt. Beispiele für entsprechende Lösungsmittel sind Hexamethylphosphortriamid (HMPT), Dimethylsulfoxid' _" (DMSO), tert.-Butanol, tert.-Amylalkohol, see.-Butanol, Hexylehglykol, n-Buta-

Isopropanol,
nol, /Athylenglykolmonomethyläther, Dimethylformamid, Wasser; Phenylmethylcarbinol und Propanol sowie Gemische von zwei oder

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mehr dieser Lösungsmittel. Bevorzugt werden HMPT,'DMSO und tert. Butanol. Besonders bevorzugt ist HMPT.

Vorzugsweise wird das Selendioxid in mindestens stöchiometrischen Mengen, bezogen auf Dihydromocimycin, eingesetzt.

Die Beispiele erläutern die Erfindung.

Beispiel 1

Eine Lösung von 1 g Dihydromocimycin in 15 ml HMPT (technisches Produkt über einem Molekularsieb 3 A getrocknet) wird mit 139mg

(1,25 raMol) ,Selendioxid versetzt. Das Gemisch wird 100 Minuten auf einem Dampfbad erwärmt und nach 60 Minuten mit

'weiteren 139 mg Selendioxid versetzt. Das nach dem Abkühlen ausgefallene Selen wird durch ein G4-Glasfilter abfiltriert.

Der Niederschlag wird mit einer geringen Menge Methanol gewaschen. Das Piltrat wird in 350 ml destilliertes Wasser gegossen. Der Niederschlag wird abfiltriert und mit destilliertem Wasser gewaschen. Das Piltrat wird aufbewahrt.

Der Niederschlag wird in Methanol gelöst und mit MIBK verdünnt. Die Lösung wird bei 4O⁰C unter vermindertem Druck zur Entfernung von Methanol und Wasser eingedampft. Dünn-¹schichtchromatographisch. läßt sich feststellen, daß der Niederschlag kein Mocimycin enthält und nur aus polaren Verunreinigungen, besteht. Der Niederschlag wird abfiltriert und mit MIBK gewaschen. Das Piltrat wird tropfenweise mit überschüssigem Petroläther vom Siedebereich 40 bis 6O⁰C versetzt. Der

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entstandene Niederschlag wird abfiltriert, mit Petroläther gewaschen und getrocknet. Ausbeute 500 mg Produkt·

Das aufbewahrte Filtrat wird mit MIBK extrahiert. Der Extrakt wird tropfenweise zu Petroläther gegeben. Man erhält weitere 100 mg Produkt der gleichen Qualität. Die G-esamtausbeute beträgt 650 mg. Dünnschichtchromatographisch läßt sich feststellen, daß das Endprodukt aus Mocimycin besteht, das nur Spuren an Dihydromocimycin enthält.

Beispiel 2

Dieser Versuch wird in einem doppelten Ansatz durchgeführt. 2,4 g eines Produktes mit einem Gehalt an 22,8 % Mocimycin und 35,5 Prozent Dihydromocimycin werden in 50 inl HMPT gelöst. Sodann werden 350 mg Selendioxid zugegeben. Das Gemisch wird 45 Minuten bei 105°C gerührt. Durch eine dünnschichtchromatographische Untersuchung läßt sich feststellen, daß nunmehr kein Dihydromocimycin mehr vorhanden ist. Das Gemisch wird auf Raumtemperatur abgekühlt und zur Entfernung des Selens und einer geringen Menge an nicht umgesetztem Selendioxid durch ein G4-Glasfliter filtriert.

Der Niederschlag wird mit MIBK gewaschen. Das Filtrat und die MIBK-Waschflüssigkeit werden vereinigt und mit 350 ml Wasser, 10 g Natriumchlorid und 5 ml 4 η Salzsäure versetzt. Das Gemisch wird dreimal mit je 10σ ml MIBK extrahiert. Die vereinigten MIBK-Extrakte werden mit 100 ml Wasser gewaschen. Die Wasserphase wird entfernt und die MIBK-Phase über Magnesiumsulfat ge-

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trocknet« Das Magnesiumsulfat wird mit einer geringen Menge an MIBK gewaschen. Die MIBK-Phase wird sodann unter vermindertem Druck bei etwa 2O⁰C bis auf ein Volumen von 25 ml eingeengt. Der Rückstand wird tropfenweise unter Rühren mit Petroläther vom Siedebereich ^O bis 6O⁰C versetzt. Der entstandene Niederschlag wird abfiltriert, mit Petroläther vom Siedebereich 4-0 bis 60 gewaschen und über Uacht bei Raumtemperatur unter vermindertem Druck getrocknet.

Die Ausbeute im ersten Ansatz beträgt 1,64 g Produkt mit einem Gehalt an 41,2 Prozent Mocimycin und an <_ 2 Prozent Dihydromocimycin (bestimmt durch Hochdruck-Jlüssigkeitschromatograpnie) Im zweiten Ansatz beträgt die Ausbeute 1,79. g Produkt mit einem Gehalt an 41,6 Prozent Mocimycin und £ 1 Prozent Dihydromocimycin.

Beispiel 3

Dieses Beispiel erläutert den Einfluß verschiedener Lösungsmittel auf die Dehydrierung von Dihydromocimycin. Es werden jeweils 50 mg eines technischen Produktes mit einem Gehalt an Dihydromocimycin und Mocimycin mit 20 mg (0,18 mMol) Selendioxid in 3 ml Lösungsmittel bei einer Temperatur von 80°C umgesetzt. Nach zwei., vier und sieben Stunden werden Proben entnommen und dünnschichtchromatographisch an Kieselgel 60-Scheiben un ter Verwendung eines 50 : 45 : 5-Gemlsches aus MIBK, Aceton und Wasser als Laufmittel untersucht. Der Nachweis wird durch Aufsprühen eines Gemisches aus Schwefelsäure und Diäthyläther

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durchgeführt. Dadurch läßt sich der Reaktionsverlauf qualitativ verfolgen.

Bei Verwendung folgender Lösungsmittel ergibt sich eine Zersetzung oder keine Umsetzung: Propargylalkohol, Diacetonalkohol, .Nitromethan,""Propylencarbonat, Acetonitril, Pyridin, SuIf ο lan, Benzylalkohol, Mesityloxid, Äthylencarbonat, H-Methyl-2-pyrrolidon, Ιϋί,Ν-Dimethylacetamid, Dioxan, MIBK, · Butylacetat, Amylacetat, H-Methylacetamid, Anisol, Diäthylenglykolmethylather und 1,2-Dichloräthan. Einen geringen Umsetzungsgrad erhält man bei Verwendung von Tetramethylharnstoff, 0,1 m NaHC0,,/Na₂C!0,-Puffer vorn pH-Wert 9,1, n-Propanol, PhenyImethylcarbinol,'Wasser und Dimethylformamid. Einen etwas besseren Umsetzungsgz'ad erreicht man bei Verwendung von Äthylenglykolmonomethyläther, Isopropanol, n-Butanol, Hexylenglykol, sec.-Butanol und tert.-Amylalkohol. Eine mäßige Umsetzung erreicht man in tert.-Butanol und Dimethylsulfoxid. Die besten Ergebnisse werden bei Verwendung von HMPT erhalten. - ■

Beispiel 4

Die Eignung von Lösungsmittelgemischen mit HMPT. als einem Bestandteil wird untersucht. Es werden jeweils 2,4 g des Ausgangsmaterials von Beispiel 3 eingesetzt. Hach der dünnschichtchromatographisch festgestellten Umsetzung des gesamten Dihydromocimycins wird das Reaktionsgemisch jeweils folgendermaßen aufgearbeitet: Hach dem Abkühlen wird das entstandene Selen durch ein D4-Glasfilter abfiltriert· " ^{und mit} einer

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kleinen Menge an Methanol gewaschen. Das Filtrat wird in einen Überschuß an Wasser gegossen und auf den pH-Wert 3 angesäuert. Anschließend wird 3 mal mit . j'eweils "einem Viertel-"des Volumens an MIBK "' 'extrahiert. Eine teerartige Zwischenschicht wird mit MIBK extrahiert,- indem man wieder zunächst in Methanol löst und anschließend mit MIBK und Wasser verdünnt. Die vereinigten MIBK-Extrakte werden J mal mit jeweils einem ~ .Drittel des Volumens an Wasser "" ' gewaschen.. Die organische Phase wird bei etwa 4O⁰C unter vermindertem Druck eingeengt. In allen Fällen besteht der Niederschlag im wesentlichen aus Zersetzungsprodukten, wie sich dünnschichtchromatographisch zeigen läßt. Der Niederschlag wird abfil-triert und mit MIBK gewaschen. Die vereinigten MIBK-Konzentrate werden langsam unter Rühren zu einem Überschuß an Petroläther vom Siedebereich 40 bis 6O⁰C gegeben. Der entstandene Niederschlag wird abfiltriert, mit Petroläther gewaschen und getrocknet. Die Ergebnisse sind in Tabelle I zusammengefaßt.

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Tabelle I

Menge an Lösungs mittel	ieaktions bemperatu (0C)	- Gesamte r Reaktions zeit· (sta.)	SeOp-Zusatz in g; Zeit nach Reaktions beginn	.usbeute Gewichts- Dr ο ζ ent)	Mol SeO2 pro Mol Gemisch
HMPT 25 ml H2O 35 ml	90	2 ·	0,5 am Anfang +0,5 nach 55 Minuten	42	3:1
HMPT 15 ml 0,1 m ITaHCO,- Ka9CO^ Puffer1 όΗ 9,1 25 ml	90	2 3/4	0,1 am Anfang 0,1 nach 20 Minuten 0,1 nach 85 Minuten 0,1 nach 130 Minut en	50	1,2:1
t-BÜÖH"" 20 ml HMPT 10 ml	84	3	0,1 am Anfang 0,1 nach 25 Minuten 0,1 nach 45 Minuten 0,1 nach 75 Minuten 0,1 nach 120 Minut en	42	. 1,5:1
t-AmOH 100 ml HMPT 50 ml	96	3	0,35 am Anf. 0,35 nach 70 Minuten 0,35 nach 110 Minuten	71	3,2:1
t-AmOH 150 ml	96	3	0·, 35 am Anf. 0,35 nach 75 Minuten 0,35 nach 150 Minuten	• 55	3,2:1
t-BuOH 100 ml ' HMPT 50 ml	80	2	1,0 am Anfang 1,0 nach 35 Minuten	42	6:1
HMPT 1 50 · ml	95	Ende der Reaktions zeit nach 1 Std.	0,4 am Anfang	79	1,2:1

HMPT = Hexamethylphosphortriamid t-BuOH = tert.-Butanol
t-AmOH = tert.-Amy!alkohol

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Aus der Tabelle ergibt sich, daß die höchste Ausbeute (79 Prozent) bei Verwendung von reinem HEiPT als Lösungsmittel erhalten wird. Eine hohe Ausbeute erhält man auch bei Verwendung eines Gemisches aus HMPT und tert.-Amylalkohol.

Das Dihydromycin wird folgendermaßen hergestellt.

Versuch A

Mikroorganismen des Stammes Streptomyces ramocissimus (CBS 190·69) werden in 2 000 Liter eines Nährmediums, das pro Liter 20 g Gerstenmalzpaste, 10 g Hefeextrakt und 5 g Maisquellwasser-Peststoffe enthält, bei einem pH-Wert von etwa 7 unter Rühren und Belüftung gezüchtet. Nach der Züchtung wird die Kulturflüssigkeit mit etwa 2 % expandiertem Perlit als Filtrierhilfe versetzt und filtriert. Das Filtrat wird mit 8 η Schwefelsäure auf einen pH-Wert von 6,0 angesäuert und zweimal mit einem Fünftel seines Volumens an Methylisobutylketon (MIBK) extrahiert. Die entstandenen Emulsionen werden mit Diatomeenerde als Filtrierhilfe gebrochen. Die organischen Phasen werden vereinigt und unter vermindertem Druck in einem Rotationsverdampfer auf ein Volumen von etwa 1 Liter eingeengt. Das Konzentrat wird langsam zu 5 Liter Petroläther (Siedebereich 40 bis 6O⁰C) gegeben. Der dabei entstandene Niederschlag wird mit einer Glasfilterfritte (G 3) abfiltriert. Der Filterrückstand wird mit frischem Petrol-

äther gewaschen und getrocknet. Man erhält ein gelbgefärbtes Pulver, das Mocimycin und Dihydromocimycin enthält.

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Gereinigtes Dihydromocimycin mit einem Mociinycingehalt von höchstens 5 Prozent wird auf folgende Weise erhalten: In das Konzentrat wird X Minute lang bei einer Temperatur von 2⁰C₁SaS-förmiges Ammoniak mit einer Geschwindigkeit von 150 liter/Liter Konzentrat/Stunde eingeleitet. Dabei entsteht ein Niederschlag, der Mocimycin enthält. Das nach dem Abfiltrieren des Niederschlags erhaltene Filfrat wird weitere 10 bis 15 Minuten mit gasförmigem Ammoniak behandelt. Der nunmehr gebildete Niederschlag wird abfiltriert und in verdünnter Ammoniaklösung vom pH-Wert 9,0 gelöst. Me erhaltene Lösung wird mit dem gleichen Volumen Methylenchlorid extrahiert. Der Extrakt wird in die 3- bis 5-fache Volumenmenge Cyclohexan gegossen. Der erhaltene Niederschlag wird abfiltriert, getrocknet und pulverisiert.

Versuch B

Eine lyophilisierte Kultur von Mikroorganismen des Stammes Streptomyces ramocissimus (CBS 190.69) oder eine gut sporulierende Agar-Kultur dieser Mikroorganismen wird in einen 500 ml-Erlenmeyerkolben überimpft, der 100 ml eines sterilisierten Nährmediums folgender Zusammensetzung enthält: 20 g Gerstenmalzpaste, 10 g Hefeextrakt und 5 g Maisquellwasser-Peststoffe pro"Liter Leitungswasser (pH-Wert 7,0).

Nach 3tägiger Inkubation bei 30⁰C auf einer Drehschüttelmaschine (300 U/min, Hub 2,5 cm) wird die erhaltene Kultur in kleine Fermenter überimpft, die 2 000 ml des Nährmediums und zusätzlich 20 mg CoCl₂,6H₂O pro Liter enthalten. Zur Verbesserung der Bildung von Dihydromocimycin wird diese Wachstumsphase bei 30⁰C

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unter sehr guter Belüftung durchgeführt. Dazu werden mindestens 2 Liter sterilisierte Luft pro Minute bei einer Rührgeschwindigkeit von 1 000 U/min eingeleitet. Die Bildung von Dihydromocimyein setzt etwa 12 Stunden nach Züchtungsbeginn ein und er reicht nach etwa 120 Stunden das Maximum. Eine Züchtung in größerem Maßstab ist möglich, indem man eine 'i8 Stunden lang in den kleinen Fermentern gezüchtete Kultur als Inokulum für große Fermenter verwendet.

Aus der Kulturflüssigkeit wird Dihydromocimycin auf folgende Weise gewonnen: Nach Zusatz von 2 % Diatomeenerde als Filtrierhilfe wird die Kulturflüssigkeit filtriert. Das Filtrat wird mit 8 η Schwefelsäure auf einen pH-Wert von 5 his 6 angesäuert und zweimal mit einem Fünftel seines Volumens an MIBK extrahiert. Eine gegebenenfalls entstandene Emulsion wird mit Diatomeenerde als Filtrierhilfe gebrochen. Die organischen Phasen werden vereinigt und unter vermindertem Druck auf etwa ein Zehntel des ursprünglichen Volumens eingeengt« Sodann wird in das Filtrat 1 Minute lang gasförmiges Ammoniak mit einer Geschwindigkeit von 150 Liter/Liter Konzentrat/Stunde eingeleitet. Der dabei entstandene Niederschlag wird abfiltriert.. Das Filtrat wird weitere 10 bis 15 Minuten mit gasförmigem Ammoniak behandelt. Der dabei erhaltene Niederschlag wird in verdünnter Ammoniaklösung vom pH-Wert 9»0 gelöst, Durch Extraktion der Ammoniaklösung mit einem gleichen Volumen Methylenchlorid wird gereinigtes Dihydromocimycin (mit einem Gehalt an Mocimycin von höchstens 5 %) erhalten. Der Extrakt wird in das 3- bis 5fache Volumen Cyclohexan gegossen. Der entstandene Niederschlag wird ab filtriert, getrocknet und pulverisiert.

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Claims (1)

1. F at e η t a η s ρ r ü c h e

   1. Verfahren zur Herstellung von Mocimycin, dadurch gekennzeichnet , daß man Dihydromocimycin mit Selendioxid dehydriert.

   2. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß man ein Gemisch aus Mocimycin und Dihydromocimycin als Ausgangsmaterial einsetzt.

   3» Verfahren nach Anspruch 1 oder 2, dadurch gekennzeichnet, daß man die Umsetzung bei erhöhten Temperaturen durchführt,

   4, Verfahren nach Anspruch 3, dadurch gekennzeichnet, daß man die Umsetzung bei Temperaturen von etwa 65 bis etwa 110⁰C durchführt,

   5. Verfahren nach Anspruch 4, dadurch gekennzeichnet, daß man die Umsetzung bei Temperaturen von 80 bis 95°C durchführt.

   6t Verfahren nach Anspruch 1 bis 5* dadurch gekennzeichnet„ daß man die Umsetzung in Hexamethylphosphortriamid, Dimethylsulfoxidj tert.—Butanol, tert.-Amylalkohol, sek.-Butanol, Hexylenglykol, n-Butanol, Isopropanol, Äthylenglykolmonomethyläther, Dimethylformamid, Wasser, Phenylmethylcarbinol, Propanol oder Gemischen aus zwei oder mehreren dieser Lösungsmittel durchführt,

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   7. Verfahren nach Anspruch 6, dadurch gekennzeichnet, daß man die Umsetzung in Hexamethylphosphortriamid, Dimethylsulfoxid oder tert.-Butanol durchführt.

   8» Verfahren nach Anspruch 7, dadurch gekennzeichnet, daß man die Umsetzung in Hexamethylphosphortriamid als Lösungsmittel durchführt.

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