DE1795523A1

DE1795523A1 - Tetrahydropyranylderivate von N-Carboxy- oder N-Thiocarboxyanhydriden von aromatischen Hydroxy- alpha-Aminosaeuren und Verfahren zu ihrer Herstellung

Info

Publication number: DE1795523A1
Application number: DE19661795523
Authority: DE
Inventors: Harvey Schwam
Original assignee: Merck and Co Inc
Current assignee: Merck and Co Inc
Priority date: 1965-07-02
Filing date: 1966-07-01
Publication date: 1972-01-13
Also published as: IL34876A; DE1795519A1; IL25974A; IL34877A; AT290490B; SE364716B; IL34878A; YU31197B; GB1158724A; DK138369B; SE347512B; GB1158723A; IL34879A; DE1795529A1; FI48184C; DE1793597A1; BR6680930D0; DE1795528A1; SE349038B; NO128326B

Description

Tetrahydropyranylderivate Ton N-Carboxy- oder N-Thiocarboxyanhyäriden von aromatischen Hydroxy-a-Aminosäuren und Verfahren

zu ihrer Herstellung

Die vorliegende Erfindung betrifft Tetrahydropyranylderivate von If-Carboxy- oder Ä-Thiocarboxyanhydriden von aromatischen Hydroxy-a-Arainoeäuren und Verfahren »u ihrer Herstellung, insbesondere die Blockierung von Hydroxylgruppen, die eher phenolischen als alkoholischen Charakter haben, mit Tetrahydropyronylgruppen.

Polypeptide sind eine grosse Klasse von chemischen Verbindungen, solche Dipeptide, Tripeptide, Tetrapeptide und höhere Peptide umfassen, in welchen Aminosäuren miteinander durch /uTidbinduYigen (Peptidbindun^en) verbunden sind, Eine sehr ßroMiis Anzahl von ihnen wurde durch teilweise Hydrolyse von Vm'r.-öj.nen. isoliert. Einige Polypeptide mit hohem Molekular- £öwj.ehfe wurden chemloch hergeekellt. Auch viele verhältnis-

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massig niedrig molekulare Peptide, die beispielsweise bis su 6 oder β Aminosäuren enthalten, wurden hergestellt. Proteine sind groeeenteils Polypeptide, die gewöhnlich 100 oder mehr miteinander verbundene ABlnos&uresegmente enthalten·

Polypeptide sind nicht nur als Bausteine zur Synthese τοη Proteinen wertvoll, sondern auch deswegen, weil gewisse von ihnen therapeutisch aktiv sind. Sie sind auch wertvoll bei der Untersuchung und Analyse von Proteinen. Einer der frucntbar-φ sten Ansätze sur Untersuchung der Proteinstruktur war die teilweise Hydrolyse des Proteins und ansohliessende Isolierung und Analyse der erzeugten Polypeptidfragmente. Solche Arbeitsweisen ergeben eine sehr begrenste Menge an Information bezüglich der »trukturellen-funktionelleu Verhältnisse und Anforderungen in Polypeptiden und Proteinen. Sine genaue Information dieser Art könnte nur durch die Synthese von Polypeptiden auf gesteuerte bsw. kontrollierte stufenweise Art erbalten werden.

Überdies ergeben derartige Untersuchungen, wie sie durchgeführt wurden, keinen Einblick in die Wirkungsweise τοη Enzymen, Hormonen und anderen Proteinen mit wichtigen Körperfunk-W tionen. Sie liefern weder Information, welche die Herstellung von brauchbaren Varianten der natürlichen Proteine gestatten würde, noch irgendeine Infonuttion, die die Herstellung τοη therapeutischen Mitteln sulamsen würde, die epeeifiech derart nach Hase hergestellt sind, das« sie Kit natürlichen proteinen in brauchbarer Weise in Wechselwirkung treten.

Obwohl eine Anzahl τοη synthetischen Methoden Torgeechl^ge» wurde, ist bis jetst keine Idealaethode sur Synthese τοη Polypeptiden gefunden worden. Ss wurde keine erfolgreiche Methode »ur Synthese entwickelt» welche die Bildung τοη aufeinanderfolgenden Peptldbindumgen In einer wachsenden Peptid-

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kette gestattet und die oft schwierige Stufe der eelektiren Entfernung der Schutzgruppe ohne Erfordernis der Isolierung der Zwischenprodukte bei jeder aufeinanderfolgenden Stufe vermeidet. Solche Methoden, wie sie verwendet wurden, sind mühsam, kostspielig und zeitraubend. Zur Bildung eines einfachen Dipeptide durch Umsetzung sswischen zwei verschiedenen Aminosäuren erfordern die besten bekannten Methoden die Blockierung der Aminogruppe einer Aminosäure und der Carboxylgruppe der anderen, eo dass eine selektive Reaktion zur Bildung nur des gewünschten Dipeptide unter den vier möglichen Produkten erfolgt, Ausserdem erfordert im allgemeinen die Carboxylgruppe, die umgesetzt werden soll, eine Aktivierung durch Überführung in ein Säurehalogenid oder eine andere Modifikation» die reaktiver ist als die Carboxylgruppe. Die zwei Moleküle werden dann kondensiert, um das Dipeptld zu bilden, und schlieaslich werden die Schutzgruppen entfernt· Die Reaktionen erfordern desmaeh 1) das Anbringen der Schutzgruppe^ 2) die Aktivierung der Carboxylgruppe, 3) die Kondensation, und 4) die Entfernung der Schutzgruppeu. Das ganze Verfahren muss wiederholt werden, um nur eine weitere Aminosäure an das Dipeptid anzufügen, und immer wieder wiederholt werden, um aufeinanderfolgende Aminosäuresegmente anzufügen, überdies ist es zur Herstellung von Polypeptiden für eine wirklich oiTinvolle Untersuchung gewöhnlich notwendig, die Racemisierung der Aminosäuren und Peptide während dieser Reaktionen zu vermeiden, so dass optisch reine Produkte hergestellt werden, man dieses Raceiiisierungsproblem zusammen mit der Tatsche betrachtet, dass die Gesamtausbeuten in der Peptidaynthese sehr gering sind, sowie die Tatsache, dass es über 10 *.n »gliche Polypeptide gibt, die nur 20 verschiedene Aminosäure-Bograente enthalten, ist es nicht verwunderlich, dass trotz c. er anerkannten Wichtigkeit solcher Produkte sehr wenig ßrocsae Polypeptide und einfache Proteine tatsächlich hergestellt wurden. Solche Produkte, wie sie hergestellt wurden,

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erforderten eine mehrjährige Arbeitszeit eines Mannes zur Fertigstellung. Über Insulin wurde von mehreren Gruppen von Wissenschaftlern auf der gansen Welt gearbeitet♦ und seine erfolgreiche Synthese war das Ergebnis 10Jähriger Bemühungen seitens einer dieser Gruppen.

Eine Methode, die beträchtliche Aufmerksamkeit säur unkontrollierten Synthese von Homopolymer en, wie Polyalauin und Polyglutaminsäure von weeheelnden Molekulargewichten und zur unkontrollierten Synthese von Heteropolymeren mit regellos angeordneten Aminoa&uresegmenten gefunden hat, ist das N-Carboxyanhydrid-Verfahren, das hier als HCA-Methode bezeichnet wird. Diese Polymerisationarθaktionen wurden in organischen Lösungsmitteln unter Verwendung katalytischer Mengen an Base durchgeführt. Die hergestellten Produkte haben eine oberflächliche Ähnlichkeit mit natürlichen Proteinen in einigen ihrer physikalischen Eigenschaften, sind jedoch praktisch ohne Wert bei der untersuchung der chemischen und physiologischen Eigenschaften von Proteinen, überdies sind die Arbeitsweisen nicht auf die Herstellung von Heteropeptiden bekannter Struktur und bekannten Molekulargewichtes anwendbar, die spezifisch definierte Aminosäuren in vorbestimmten Stellungen in der Peptidkette enthalten.

liegen der Leichtigkeit, mit welcher Homopeptide gebildet werden, wurde von anderen vermutet, dass die KCA-Methode auf die kontrollierte, stufenweise Synthese von Heteropeptiden anwendbar sein könnte. Tatsächlich wurden frühe Versuche unternommen, um die Methode auf die Synthese von niedrigmolekularen Heteropeptiden in organischen Lösungemitteln anzupassen. Die Methode wurde niamals in wässrigen Medien bei der kontrollierten, ntufenweissn Synthese von Heteropeptiden angewandt, bei welcher »wei odsr mehr Aminosäuren in aufeinanderfolgenden Stufen an eine wachsende Peptidkette angefügt

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wurden» Tatsächlich wurde von denjenigen, welche diese aufeinanderfolgenden Reaktionen vorschlugen, der Schluss gesogen, dass die stufenweise Synthese von Polypeptiden durch die ICA-Methode unmöglich wäre, well die relativen Geschwindigkeiten der Hauptreaktion und der Bebenreaktionen nicht kontrolliert werden könnten.

Das Grundverfahren zur kontrollierten Synthese von Peptiden und Derivaten derselben mit mindestens zwei Amidbindungen in der Peptidkette umfasst die Umsetzung einer Aminoverbindung als AuBgangematerial₁ nämlich von Aminosäuren, Peptiden und Derivaten derselben, die eine freie Amlnogruppierung enthält, mit einem ff-Carboxyaminosäureanhydrid oder Derivat desselben durch Zusammenbringen der Reaktionskomponenten in einem wässrigen Medium unter solchen kontrollierten Bedingungen, dass die einzige, in beträchtlicher Konzentration in reaktiver Form während des Verlaufs der Reaktion vorliegende Aminogruppe die Aminogruppe der Aminosäure, des Peptide oder Derivates ist, die bzw. das zur Bildung des gewünschten Produktes reagieren sollte, und dass bei jeder anderen vorhandenen Aminogruppe, einschliesslich derjenigen in dem Peptidprodufct, wie es gebildet ist, lies nicht der Pell ist. Unter den sorgfältig kontrollierten Bedingungen verläuft die Reaktion zwischen dem Anhydrid und der Aminosäure, dem Peptid oder Derivat bei jeder Stufe der Synthese mit minimaler Bildimg derjenigen Hebenprodukte, welche die nächste Anhydridreaktion oder die Reinigung des gewünschten Produktes stören würden. Unter den kontrollierten Bedingungen wird die als Zwißchenprodukt gebildete Ä-Carboxyverbindung vor der Decarboxylierung bewahrt, oder, *enn eine Decarboxylierung erfolgt, wird die erhaltene Aminogruppe durch Protonierung geschützt, bis praktisch alles Ausgangsmaterial mit dem Anhydrid reagiert hat. Das Ergebnis dieser sorgfältigen Kontrolle besteht darin, dass die Reaktion mit der grussten Geschwindigkeit diejenige ist, welche das gewünschte Produkt erzeugt,

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und die Bildung von unerwünschten lebenprodukten, insbesondere denjenigen, die eich aus ttberreaktion und Polymerisation ergeben, innerhalb Grenzen gehalten wird, welche die aneohlieasenden Stufen in der kontrollierten Synthese nloht stören. Nach der Zersetzung des W-Carboxyswisohenproduktes und jeglichen nioht umgesetzten Anhydrids kann das so gebildete Peptid produkt weiter mit einem anderen Anhydrid unter ähnlichen Reaktionsbedingungen ohne Isolierung der Zwischenprodukte umgesetzt werden. Das Verfahren 1st allgemein auf Ale Herstellung von Dipeptiden in Ausbeuten, die normalerweise 90 bis , W 98 ?S betragen und oft im wesentlichen quantitativ sind, sowie auf die Herstellung von Polypeptiden and Proteinen vorbestimmter Struktur anwendbar.

Gegenstand der Erfindung sind Tetrahydropyranylderivate Ton H-Carboxy- oder V-Thiocarboxyanhydrideu von aromatischen Hydroxy~a-Aminosäuren und ein Verfahren «ur Herstellung dieser Verbindungen, das dadurch gekennzeichnet ist» dass man das entsprechende V-Carboxy- oder I-Tniocarboxyenhydrid mit Dihydropyran bei einer Temperatur von etwa SfO⁰ 0 bis etwa 40° C umsetzt.

Sk Bs wurde gefunden» dass die Tetrahydropyranylgruppe spontan und gleichseitig wahrend der Decarboxylierung*- oder Dethiccarboxylierungsreaktlon abgespalten wird und dass «war freie phenoliache Hydroxylgruppen die ureprtingliche Kupplumgereaktion, in welcher Tyrosin oder dgl* mit einer Aminoefture oder einem Peptid in einer waohsenden Polypeptidkette verbanden wird_t wesentlich stören, jedoch nicht die nachfolgenden Kupplungsreaktionen, in welchen weitere /mtnoeöuren an die Kette angefügt werden.

Die neuen erfindungsgemJlBS erhältlichen Verbindungen werden durch Umsetzung zwischen Blhydropyran and dem geeigneten

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N-Carboxy- oder ϊ-ITfclooarböxyai^nosSureanhydrld in Gegenwart eines saueren Katalysator» hergestellt.

In einer typischen Reaktion, die gemäss der Erfindimg durchgeführt wird, wird das S-Oarboxy- oder S-Thiocarboxyanhydrid von Tyrosin in Dihydropyran aufgenommen _f das eine katalyti« öche Menge Säure enthilt. Das Dihydropyran wirkt sowohl als Beaktionskomponente ale auoh ale Reaktionsmedium· jedoch ißt das Produkt unlöslich. Demgemttse wird das Gemisch einfach gerührt, vorzugsweise bei Zimmertemperatur, z. B. 25 Die 35° C, bie praktisch das gesamte Ausgangsmaterial gelöst 1st. Dieses Produkt wird dann duroh irgendeine sweokmässlge Arbeitsweise isoliert.

Uewünschtenfalls können Lösungsmittel, insbesondere oyolieche Äther, wie Diczan oder Tetrahydrofuran, verwendet werden. Lösungsmittel werden itt allgemeinen in den Pollen verwendet, wo eine äquiaelare Menge oder nur ein geringer Übersohuss, a. B. ein 10biger molarer überschuss, an Dihydropyran verwendet wird· Sa überschüssige« Dihyaropyran sur Erzielung hes'ter Ausbeuten hilft, wird voreugsweise die Verwendung von LcaungBÄittel vermieden und die Reaktion unter Verwandung von j)ihydropyrau sowohl als Reaktionskomponente als auch als ReaktlonBttedium durchgeführt.

Die Reaktion«temperatur sollte Yoreugsweise nioht beträohtlioh über 40° C liegen, wegen der leigung von Dihydropyran, bei höheren Temperaturen eu polyaerisieren. Die Reaktionsseit kfinn Innerhalb welter Grenaen sehwanken, z. B. von 10 bis 60 Stunden. Es 1st am besten, wenn van Temperaturen beträchtlich unter 20° C anwendet. Bei Zimmertemperatur, die bevorzugt let, ist die Reaktion im allgemeinen innerhalb 30 "bis 50 Stunden beendet.

Der eauere Katalysator ist voreugeweise eine organische Säure, BAD ORIGfNAL

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wie p-Toluolsulfoneäure, Sulfonsäure oder die entsprechenden SuIfony!halogenide, insbesondere SuIfonylohloride. Anorganische Säuren, insbesondere Mineraleäuren, wie Schwefelsäure oder Salzsäure, können verwendet werden. Der gewählte Katalysator wird in katalytieohen Mengen verwendet, beispielsweise in Mengen von etwa 40 bis etwa 100. mg/g Anhydrid oder Thioanhydrid. Die bevoreugte Menge im Hinbliok auf die wirtschaftliche Erzielung optimaler Ausbeuten beträgt 40 bis 60 mg/g Aminosäure&erivat.

Am Ende der Reaktionszeit kann das Produkt gewünsohtenfalls ohromat©graphisch isoliert werden. Die bevorzugte Arbeitsweise besteht jedoch darin, das Reaktionsgemisch durch Zugabe einer ausfällenden Flüssigkeit, wie eines Kohlenwasserstoffs oder eines Gemisches von Kohlenwassarstoffen, die bis ssu etwa θ Kohlenstoffatome enthalten, zu verdünnen. Es eignet sich Petroläther, doch kann auch eia aromatischer Kohlenwasserstoff, wie Benaol, verwendet wsrden.

Die Reaktion ist wertvoll but Herstellung von Polypeptiden, die Tyrosin und andere hydroiylierte aromatische Aminos&tLren, wie 3t5-Dibromtyrosin und 3_t5-Dijoätyrosin, enthalten.

Die erhaltenen Produkte können zur Herstellung einer grossen Vielzahl von Heteropeptiden gemäss den in den Beispielen beschriebenen Arbeitsweisen verwandet werden. Gewünsohtenfalls können sie auch zur Herstellung von hoohmolekularen Homopolymer en, wie Polytyrosin, durch Polymerisation in einem organischen Lösungsmittel in Gegenwart einer Base, verwendet werden. Solohe polymeren Verbindungen werden in weitem Umfang als Modellverbindungen für die Untersuchung der physikalischen Eigenschaften von proteinähnli3hen Strukturen verwendet.

Obwohl der gröeete Teil des Tebrahydropyranylsegaentee während dor Decarboxylierung oder DethLocarboxylierungeetufe entfernt

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wird, die, wie gezeigt, unter saueren Bedingungen erfolgt, int es nicht wesentlich, die Reaktion während der ersten Kupplungsreaktion zu beenden, Sie kann ebenso leicht während anaohliessender Kupplungsreaktionen beendet werden. Tatsächlich kann es unter einigen Bedingungen vorzuziehen sein, derart zu arbeiten. Bei der Herstellung eines Decapeptide beispielsweise, worin Tyrosin das aweite Segment in der Kette ist, kann beträohtlioh Reaktionszeit gespart werden, wenn die Decarboxylierung oder die Dethiooarboxylierung möglichst schnell durchgeführt wird« Während dieser Zeit wird die Hauptmenge des Tetrahydropyranylteils entfernt, diejenige Menge jedoch, die bei dieeer Stufe nioht entfernt wird, wird in späteren Kupplungsreaktionen entfernt.

Beispiel 1 Tetrahydropyranyltyrosin-i^üarboxyanhydria

Insgesamt 1 g N-Oarboxytyrosinanhydrid wird in 20 ml Dihydropyran aufgenommen, das 60 mg p-Toluolsulfonylohlorid enthält, und da« Gemisch bei etwa 25° C 48 Stunden lang gerührt. Am Ende dieeer Zeitspanne ist der grösste Teil des Anhydride gelöst, was anzeigt, dass die Reaktion praktisoh beendet ist. Das Reaktionsgeminoh wird durch Zugabe von 30 ml Petroläther verdünnt und das gewünschte PTodukt fällt aus.

BeiBpial.g.

TetrahyaropyranyltyroBin-lf-oarboxyanhydrid

Insgesamt 1 g H-Oarboxytyrosiniinhydrid und 1 Moläquivalent Bihydropyran werden in 20 ml Dloxan aufgenommen, das 40 ag P-Tcluolßulfoneäure enthält, und das Gemisoh wird bei 35° C 10 Stunden gerührt. Am Ende dieser Zeitspanne wird die Lösung bei vermindertem Druok auf das halbe Volumen konaentriert und

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mit Äthylaoetat wieder auf da β ursprüngliche Volumen eurüok gebraoht, und 0,25 g Silioagel werden zugefügt. Dae ö©miflöh wird dann filtriert und auf das halte Volumen kemeentriert und das gewünschte Produkt durch Zugabe von Petrolather aue gefällt. .'■■■■

Beispiel }

Insgesamt 1 g li-Carboxytyroeinanhydriä und 1 Molstuivalent Dihydropyran werden in 2G ml Tetrahydrofuran aufgenommen, dae 60 mg p-ToluQlsulfonylohlorid enthält, und das Gemieoh wird 60 Stunden hei 20° 0 gerührt. Am Ende diener Zeitspanne wird die Lösung hei vermindertem Druok auf das halte Volumen konzentriert und mit Ithylaoetat wieder auf das ursprüngliche Volumen zurückgebracht, und 0,25 g Silicate1 werden sugefügt. Bas Gemleoh wird dann filtriert und auf das halte Volumen konzentriert und das gewünschte Produkt duroh Zugabe von Petroläther ausgefällt.

Die folgenden Verbindungen werden in entsprechender Welse hergestellt, indem dae Tyroeinderivat duroh eine äquivalente Menge der geeigneten Ausgangsverblndung ersetzt wird«

Tetrahydropyranyl-3,5-dibromtyroein-I-oarboxyanhydriä Tetrahydropyranyl-3»5-di jodtjrroeiii-S-oarboacyanhydrid

Beispiel 4_r Tetrahydropyranyltyroain-g^thiaoi

Insgesamt 14Sg Tyrosin werden in 75 «1 Äthanol aufgenommen, das 18 al Wasser und 68 ml 11,7n laliumhydroxid enthält. Zum Gemisch werden unter Stiokstoff und unter BÜhren 97,5 g

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Methyläthylxanthat gegeben, während die Temperatur duroh ein Kühlbad bei etwa 25 bis 30° C gehalten wird. Die Reaktion wird bei dieser Temperatur 2 Stunden fortgesetzt, und dann wird auf 45° C erwärmt, und es wird unter andauerndem Rühren weitere 0,5 Stunden bei dieser Temperatur gehalten. Der gröBste Teil, des Alkohole wird bei geringem Druok entfernt, und 180 ml Wasser werden zugefügt. Das Gemisoh wird dann zweimal mit je 100 ml Äther extrahiert, um nicht umgesetztes Xanthat zu entfernen. Die alkalische wässrige Sohioht wird mit 100 ml Äthylacetat übersehiohtet, und 73 ml 12n Salzsäure und ansohliessend 70 ml Wasser werden zugegeben. Das Gemisch wird geschüttelt und die organische Sohioht abgetrennt. Die wässrige Schicht wird wieder mit 100 ml Äthylaoetat extrahiert und die vereinigten organischen Schichten werden zweimal mit je 50 ml gesättigter flatriumchloridlösung gewaschen. Die organische Schicht wird abgetrennt, über natriumsulfat getrocknet und bei vermindertem Druck konzentriert, um das gewünschte Methylthionourethantyrosin auszufällen.

Insgesamt 8 g Methylthionourethantyroein werden in 40 ml Tetrahydrofuran aufgenommen und 6,1 ml Phosphortribromid unter Rühren zugefügt, während die Temperatur bei 0° C bis 5° G gehalten wird. Das Reakt ions gemisch wird in 200 ml 1Obigem wUesrigem Katriumbio&rbonat abgesohreokt und dreimal mit je 100 ml Äthylacet&t extrahiert» Die vereinigten organischen SoM Gilt en werden zweimal mit je 50 ml konzentrierter Hatriumohloridlösung gewaschen und über Natriumsulfat getiookaot. Das gewünschte Produkt, H-Thiocarboxytyrosinanhydrid, vird duroh Entfernung des Lösungsmittels bei vermindertem Druck erhalten.

Insgesamt 5,8 g des oben hergestellten Produktes werden in Dihydropyran gemäss der Arbeitsweise von Beispiel 2 in die gewünschte Verbindung überführt.

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Die Tetrahydropyranyl-K-thiooarboxyaiihydride τοη 3,5-3)1-bromtyroein und 3»5~Dijodtyrosln werden In entsprechender Welse hergestellt» indem das Tyrosin duroh eine äquivalente Menge der geeigneten Aminosäure ere β tat wird.

Beispiel 5 Tyroayl~t>ro^yl~nhenylalanyl-arginin

Insgesamt 15»75 g Argininhydroohlorid werden in 2,62 1 Netriumtetrfiboratpttffsrlöeung bei pH 10 gelöst. Der pH-Wert wird mit konaentrierter Schwefelsäure auf 3 eingestellt und 10 Minuten lang Stickstoff durchhieltet. Der pH-Wert wird alt 50#igem wässrigem Hatriuahydroxid auf 10 »2 erhöht und die Lösung auf.' 0° 0 abgekühlt. Zu diese« öeoieoh werden 400 g Eis und ensohliessend 82,5 «Mol Phenylalanin-I-oarboxyanhydrid, gelÖBt in 200 al Aoeton» augefügt. Das Gemisch wird kräftig bei diener Temperatur 1 Minute gerührt und alt kousentrierter Schwefelsäure auf pH 2 angesäuert, während Stickstoff 10 Minuten lang durohgeleittit wird« Dann Wird der pH-Wert alt 509&igea wässrigem Natriumhydroxid auf 9*5 eingestellt und 400 g Eis und ansohliessend 112,5 mMol Prolin-H~oarboxyanhydrld in 150 ml Aceton werden eugefügt. Die Lösung wird krlif tig 1 Minute bei p^ö 0 gsriihrt und wie ooen deoarhoxyliert. Die Arbeitsweise wird bsi pH 9»3 unter Zugabe voa 15,0 mMol Tetrahydropyranyltyroain-H-oarboxyanhydrid in 150 al Aoeton wiederholt, tfach elnmlntttigem Mischen wird der pH-Wert auf 7 eingestellt und das Garnison gefriergetrocknet. Der Rüokstand v/ird in Methanol auf genommen und daa Produkt aua der It8aung auf Silioagel absorbiert. Das Silloagel mit dem absorbierten Produkt wird dann in siner Sllioagelsäule gegeben, die vorher in Isopropanol subertltst wuräo. Me Säule wird mit Methanol t Wasser ι Ammoniak 80 ι 18 t P. «ntwlokelt, und das gewünschte Tetrapeptid, das frei τοη der üfetrahydropyranylgruppe ist, wird isoliert.

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Die folgenden Verbindungen werden In enteprechender Welse unter Vervendung dee Xetrahydropyranylderivates sowohl des geeigneten H-Carboxy- als awüi dee H-Thiooarboxyaminoeäureanhyctrläa. hergestellt. In jeden Fall wird das Produkt frei von der Tetrahydropyranyl~8ohutBgruppe isoliert. Bei den V-Thiocarboxyτerbindungen beträgt der Kupplunge-pH-Wert θ,θ anstatt 9,3 und die Beaktlonseeit 40 Minuten.

515-DibΓoatyΓOsyl-pΓolyl-.phenylalanyl-βΓginln 3,5-Di J od tyr oeyl-pr olyl-plienyl ^lany !-arginin.

Claims

P *5 45 767, 9 - Tr.A. 7 Mer«k 4 Co., Inc. 4I| 1*. Januar 1970 Pate r> tans prileh e

1. TetΓahydropyΓanyldeΓi^■ate von N-Carboxy- oder M-Thio« oarboxyanhydrlden von aromatischen

2. Verfahren zur Herateilung der Verbindungen nach Anspruch 1, dadurch gelcennzelohnet, dass nan das entsprechende N-Carboxy- oder N-Thlocarboxyanhydrld mit Oihydropyran bei einer Temperatur von etwa 20 ⁰C bis etwa' 40 ⁰C umsetzt.

. Verfahren nach Anspruch 2, dadurch gekennzeichnet« daea man als Aminosäure Tyrosin, 3,5-Dljodtyroain oder 3,5-Oibromtyrosln verwendet.

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