DE1670324B2

DE1670324B2 - 7-cyanacetylamino-cephalosporansaeurederivate

Info

Publication number: DE1670324B2
Application number: DE1966C0037856
Authority: DE
Inventors: Hans Dr. Binningen; Bosshardt Rolf Dr. Ariesheim; Fechtig Bruno Dr.; Schenker Karl Dr.; Binningen; Urech Jakob Dr. Basel; Bickel (Schweiz)
Original assignee: Ciba Geigy AG
Current assignee: Novartis AG
Priority date: 1965-01-18
Filing date: 1966-01-08
Publication date: 1977-03-10
Also published as: CH480365A; AT266317B; CH507292A; FR5299M; DE1670324A1; BR6676490D0; FR5318M; ES321847A1; CY558A; NL148611B; BE675221A; FR5298M; FR5300M; NL6600586A; SE359840B; IT1049252B; DK126256B; GB1109525A; FR1463651A; CH542236A

Description

« ³ 4

!Gegenstand der Erfindung sind 7-Cyanacetylamino-cephalosporansäurederivate der allgemeinen

Formel

N=C-C-CO-NH-CH-CH ^XCH₂

/ \ I I I

Ri R₂ C N C-CH₂-R₃

(D

COOH

ι R₁ für ein Wasserstoffatom, R₂ für ein Wassertom, eine Niederalkyl- oder Phenylgruppe oder und R₂ zusammen für die Cyclohexyliden- oder

spropylidengruppe stehen, worin R₃ ein Niederylcarboayloxy-, Niederalkylcarbamoyloxy- oder iorätbylcarbamoyloxyrest ist, und ihre Salze.

Eine Niederalkylcarbonyloxygruppe ist z. B. eine Propionyloxy- oder vorzugsweise die Acetoxygruppe.

Die Salze der neuen Verbindungen sind Metallsalze, vor allem solche von therapeutisch anwendbaren Alkali- oder Erdalkalimetallen, wie Natrium, Kalium, Ammonium, Calcium, oder Salze mit organischen Basen, z. B. Triäthylamin, N-Äthyl-piperidin, Dibenzyläthylendiamin, Procain.

Die neuen Verbindungen weisen eine besonders gute antibakterielle Wirkung auf. Sie sind sowohl gegenüber grampositiven wie vor allem auch gegenüber gramnegativen Bakterien wirksam, z. B. gegen Staphylococcus aureus penicillin-resistent, Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Salmonella typhosa und Bacterium proteus, wie sich auch im Tierversuch, z. B. an Mäusen, zeigt. Sie können daher zur Bekämpfung von Infektionen, die durch solche Mikroorganismen hervorgerufen werden, verwendet werden. Besonders wertvoll sind Verbindungen, in denen der Acylrest in 7-Stellung ein Cyanacetyl- oder Phenylcyanacetylrest und R₃ die Acetoxygruppe oder die jS-Chloräthylcarbamoylgruppe ist.

In der nachstehenden Tabelle 1 sind die minimalen Hemakonzentrationen (MHK) von 7-Cyanacetylamino-cephalosporansäure(l) und deren Derivaten (2-10) im Vergleich zu Cefalothin (11) gegenüber Escherichia coli, Stamm 205, angegeben. Als Testmethode diente der Gradienten-Platten test von B r ysonundSzybalski, Science 116,45 bis 51 (1952).

Tabelle 1

Verbindung der allgemeinen	R, R₂	Formel 1	R,	MHI
Nr.	H H	R₃	OH	(r/ml
1	H Phenyl	Acetoxy	OH	7,5
2	Isopropyliden	Acetoxy	OH	4
3	H Methyl	Acetoxy	OH	10
4	Cyclo	Acetoxy	OH	12,5
5	hexyliden	Acetoxy		10
	H		OH
6		0-Chlor-		2
		äthylcarb-
	Isopropyliden	amoyloxy	OH
7	Cyclo-	Acetoxy	OH	3
8	hexvliden	Acetoxy		3,5

Verbindung der allgemeinen Formel I Nr. R, R₂ R₃

MHK

(r/ml)

OH

10 11 Methylcarb-

amoyloxy
H H Pivaloyloxy OH

7-Thienyl(2)-acetylamino-cephalosporansäure (Cefalothin)

4,5 30

Die Toxität der neuen Verbindungen ist gering; so ist z. B. die LD₅₀ der 7-Cyanacetylamino-cephalosporansäure an der Maus, intravenös angewendet, 3700 mg/kg, während die ED₅₀ an der Maus, z. B. gegenüber Staph. aureus, 1 mg/kg ist (einmalige Dosis, subkutan direkt nach der Infektion der Mäuse mit einer Letaldosis von Staph. aureus). Beim Menschen beträgt die wirksame Dosis gegen Infektionen durch Mikroorganismen etwa 500 mg/Tag. Die Verbindungen können nicht nur parenteral, z. B. intravenös oder subkutan, sondern auch peroral angewendet werden, besonders z. B. 7-(Phenylcyanacetylamino)-cephalosporansäure.

Die eine Alkylidengruppe aufweisenden Verbindungen können auch als Zwischenprodukte zur Reindarstellung der Verbindungen mit unsubstituiertem Cyanacetylrest verwendet werden, da die Alkylidengruppe in wäßrigem Medium, insbesondere bei erhöhter Temperatur und bei alkalischem pH, hydrolytisch abgespalten werden kann.

Die neuen Verbindungen werden erhalten, wenn man eine Verbindung der allgemeinen Formel

NH₂-CH-CH CH₂

-N

55

C-CH₂-R₃

(II)

COOH

oder ein Salz davon, worin R₃ die für Formel I genannte Bedeutung hat, in an sich bekannter Weise mit einem Acylierungsmittel, das einen Acylrest der allgemeinen Formel

enthält, umsetzt und, wenn erwünscht, eine erhaltene

Verbindung der allgemeinen Formel

N=C-CH₂-CO-NH-CH-CH CH₂

C N C-CH₂-R₃

Ii ν

ο ι

zweckmäßig in Gegenwart von Katalysatoren, mit Aceton oder Cyclohexanon umsetzt, und, wenn erwünscht, in erhaltenen Verbindungen, in denen R₃ für eine Acetpxygruppe steht, diese Gruppe in an sich bekannter Weise durch eine Niederalkyl- oder ß-Chloräthylcarbamoyloxygruppe ersetzt, und, wenn erwünscht, die erhaltenen Verbindungen in ihre Metallsalze oder Salze mit Ammoniak oder organischen Basen überfuhrt oder aus erhaltenen Salzen die freien Carbonsäuren bildet.

Die Acylieiung wird beispielsweise mittels eines Säurehalogenids, z. B. Säurechlorids, oder eines gemischten Anhydrids, z. B. eines solchen mit monoveresterter Kohlensäure oder mit Pivalinsäure oder vorzugsweise mit Trichloressigsäure oder Mit der freien Säure selbst in Gegenwart eines Kondensalionsmittels, wie eines Carbodiimids, z. B. Dicyclohexylcarbodiimid, vorgenommen.

Als Katalysatoren für die Umsetzung mit den Carbonylverbindungen kommen vor allem Salze in Betracht, besonders Acetate von Ammoniak oder Aminen, z. B. Ammoniumacetat, Amylaminacetat, Piperidinacetat, Triäthylammoniuniacetat, einem schwach basischen Anionenaustauscher auf Styrolharzbasis (freie Base und Essigsäure-Salz), ferner Verbindungen die gleichzeitig saure und basische Gruppen aufweisen, z. B. p-Aminophenol. Weiter können als Katalysatoren die Salze von Verbindungen der allgemeinen Formel III mit den genannten Basen dienen.

Vorzugsweise verwendet man solche Ausgangsstoffe, die zu den erwähnten besonders wirksamen Endprodukten führen.

Die als Ausgangsstoffe verwendeten Cephalosporinderivate sind bekannt oder können nach an sich bekannten Verfahren hergestellt werden.

Der Ersatz der Acetoxygruppe durch eine Carbamoyloxygruppe ist im belgischen Patent 6 54 039 beschrieben.

Die neuen Verbindungen können als Heilmittel, z. B. in Form pharmazeutischer Präparate, Verwendung finden. Diese enthalten die Verbindungen in Mischung mit einem für die enterale, topicale oder parenterale Applikation geeigneten pharmazeutischen organischen oder anorganischen, festen oder flüssigen Trägermaterial. Für die Bildung desselben kommen solche Stoffe in Frage, die mit den neuen Verbindungen nicht reagieren, wie z. B. Wasser, Gelatine, Lactose, Stärke, Stearylalkohol, Magnesiumstearat, Talk, pflanzliche öle, Benzylalkohol, Gummi, Propylenglykol, Polyalkylenglykole, Vaseline, Cholesterin oder andere bekannte Arzneimittelträger. Die pharmazeutischen Präparate können z. B. als Tabletten, Dragees, Salben, Cremen, Kapseln oder in flüssiger Form als Lösungen, Suspensionen oder Emulsionen vorliegen. Gegebenenfalls sind sie sterilisiert und/oder enthalten Hilfsstoffe, wie Konservierungs-, Stabilisierungs-, Netz- oder Emulgiermittel, Lösungsvermittler oder Salze zur Veränderung des osmotischen Druckes oder Puffer. Sie können auch andere übliche therapeutisch wertvolle Substanzen enthalten. Die Präparate werden nach üblichen- Methoden erhalten. Die Erfindung wird in den folgenden Beispielen beschrieben. Die Temperaturen sind in Celsiusgraden angegeben.

Beispiel 1

13,6 g (0.05 Mol) 7-Aminocephalosporansäure werden in einem Gemisch von 150 ml Methylenchlorid und 19,5 ml Tributylamin (0,12MoI) aufgenommen und unter Rühren bei O¹ mit einer Lösung von 8.4 g Cyanacetylchlorid (0,07 Mol) in 100 ml Methylenchlorid versetzt. Man rührt anschließend eine' I₂ Stunde bei 0 und eine ¹Z₂ Stunde bei 20°. Die Reaktionslösung wird im Vakuum eingedampft und der resultierende Rückstand in 10%iger wäßriger Dikaliumhydrogenphosphatlösung aufgenommen. Diese wäßrige Phase wird mit Essigester gewaschen, mit konzentrierter Salzsäure auf pH 2,0 angesäuert und mit Essigester extrahiert. Der Extrakt gibt nach Trocknen über Natriumsulfat und Eindampfen im Vakuum als festen Rückstand 14,7 g rohe 7-Cyanacetylaminocephalosporansäure, die durch Chromatographie an der 30fachen Menge Silicagel gereinigt wird. Aus den mit Chloroform-Aceton (7:3) eluierten Fraktionen erhält man ein Produkt, das aus Aceton-Äther in Nadeln kristallisiert, F. 168 bis 170' (Zers.).

Die Substanz hat im Dünnschichtchromatogramm an Silicagel im System n-Butanol-Eisessig (10: 1) gesättigt mit Wasser einen R_f-Wert von 0,27; im System η - Butanol - Pyridin - Eisessig - Wasser (30 :20:6:24) einen solchen von 0,56. Das UV-Absorptionsspektrum in 0.1 n-Natriumbicarbonatlösung gibt ein Absorptionsmaximum bei 260 ηΐμ U = 9300). Die Substanz ist gegen gramnegative Mikroorganismen in vitro gleich oder besser wirksam als Cefalothin (direkter Vergleich, Tab. 2b).

Die Substanz zeigt im Gegensatz zu Cefalothin bei Escherichia coli im Verdünnungstest keine oder nur eine sehr geringe Abhängigkeit von der Inokulum-Größe (Tab. 2). Sie hat eine bessere In-vivo-Wirksamkeit als Cefalothin, wie Tabelle I b zeigt, in der die ln-vivo-Wirkung von 7-Cyanacetylamino-cephalosporansäure (1) im Vergleich zu Cefalothin (II) bei mit Staphylococcus aureus oder Escherichia coli infizierten Mäusen dargestellt ist. Pro Versuch wurden

7 8

40 Mäuse verwendet. Nichl mil Antibiotikum be- mg/kg an, die bei subkutaner Anwendung bewirken, handelte Mäuse starben sämtlich innert 1 bis 2 Tagen. daß 40 bis 50% der Mäuse überleben (Testperiode Die Zahlen geben die Menge des Antibiotikums in 5 Tage).

Tabelle 2

Minimale Hemmkonzenlrationen (//ml) von 7-Cyanacelylamino-caphalosporansäure (I) und Cefalothin(ll) gegenüber E. coli (Slannn 203. 205 und 209) in Abhängigkeit von der lnokuluni-Größe.

Inokuluni-	1	205	209	Il	205	21«
Größe		15	15		125	30
	203	15	15	203	60	30
Reinkultur	15			125
1 :10-Ver	15	8	8	30	15	8
dünnung
1 : 100-Ver	15			15
dünnung
Tabelle 2 a

Suph.

auiuus coil 205

(CN 49 h I= CN 348)

I in mg/kg Maus s. c. 0,25 250

II in mg/kg Maus s. c. 2 KXX) Tabelle 2 b

Minimale Hemmkonzentrationen (r/ml) von 7-Cyanacetylainino-cephalosporansäure (1) und Cefalothin {= T-Thienylacetylamino-cephalosporansäure,! 1) gegenüber Bakterien (Inokulum-Größe - 1 : lü-Verdünnung)

Staph. aureus Esch. toll Salmonella Klebsiciia Pseudo- i'roleus

14 2999 203 205 209 27! 273 27^ 327 330 313 25?

12 2 8 15 8 4 8 30 15 15 >50Ü 250

II 0,25 0,5 15 30 15 4 H 60 15 15 >500 5(X)

Die Stammnummern bedeuten:

14 = Sl. aureus Smiih.
2999 = Sl. aureus Penicillin G-resisicni
2? I = SaJm. typhosa.

-I₇] = Salm, typhimurium

327 = Kl pDcumoniae Typ A
330 = KL pneumonias
313 = Psemtoamnaii «crugmot-a
253 = Prouass valgam

Beispie) 2

14,0? g Triätaylaminoniuia&alz roher Desauetyl- kabumhydxoge&pho&phat aufgenommen und mit

T-cyanacetyiaouno-cephalosporansäure werden in Essigester aufgeschüttelt. Die wäßrige Phase wird mn

140 ml bisch entgastem DunethyKormamid aufge- koozentnerter Salzsäure auf pH 2,0 gesleüt, mit Kocis Bönaaeo. out 16 ml Tnbuiylamin ued 1OS ml einer 55 salz gesättigt uad nut Eusigester eurahkrt Der über

10%igai l.ö£Wi£ von ^-Qilorslhybsotyaaat in Di- Natnumsuöai geuodiaeie Estraki gibt beim tin

methySermatmd versetrt und 4 Stunden bei 22 ge- dampfen nahezu reise 0-Desaceiy!-0-(p-chlocäthyl-

rabrt Man dampft den Aasat/ bei 0.1 ram Hg ein carbaiaoyl) - 7 - cyaaacetylaimno - cephalokporansäurc

Der Rückstand wird m 10*!e^em wäßrigem Di- der Formel

S
NsC-CH₁-CO-NH-—

~^N /-—CH₅O -CONH CH₁CH₂CI O "■

COOH
Das Produkt wird durch Chromatographie an Silkagei gereioift. Die dabei mit Essige&ter eluierbare Sub

(ο

10

stanz kristallisiert aus Aceton-Äther (1 :2); F. 147 bis 150° (Zersetzung). Sie hat folgende Eigenschaften: UV-Absorptionsspektrum in 0,1 n-Natriumbicarbo- nat: Ä_max 260 ΐημ (f = 9200); Dünnschichtchromatographie an Silicagel (System 1: n-Butanol-Eisessig [10:1] gesättigt mit Wasser; System 2: n-Butanol-Pyridin-Eisessig-Wasser [38 :20 :8 : 30]).

R_rWerte System 1 System 2

Ausgangsmaterial Produkt 0,21
0,39

0,62
0,72

In Tabelle 3 ist die minimale Hemmkonzentration falothin (111) gegenüber Bakterien (24stündige. unver-(in y/ml) von O-Desacetyl-O-iß-chloräthylcarbamoyl)- 15 dünnte Kulturen) angegeben. 7-cyanacetylamino-cephalosporansäure (II) und Ce-

Tabelle 3

Staph. aureus	2999	Esch.	coli	209	Salmonella	273	277	Klebsie!
14	15	203	205	4	271	15	125	327
II <0,25	0,5	4	8	30	4	8	—	125
III <0.06	125	125	4		>500

330

Pseudo-

monas

313

Proteus

>500 >500

In Tabelle 4 ist die In-vivo-Wirkung der obigen Verbindungen II und III bei mit Staph. aureus oder 30 Esch. coli infizierten Mäusen dargestellt. Die Zahlen geben die Menge des Antibiotikums in mg/kg Maus an, die bei subkutaner Anwendung bewirken, daß bis 50% der Tiere überleben. Nicht mit Antibiotikum behandelte Tiere sterben innert 1 bis 2 Tagen. 35 Pro Versuchsreihe wurden 10 Mäuse verwendet.

Tabelle 4

Staph. aureus Esch. coli CN 491 CN 348

II in mg/kg Maus s. c. 0,7 250

III in ma/kg Maus s. c. 1 '000

Beispiel 3

14? e Triäthylammoniumsalz roher Desacetyl- äthyl-isocyanat umgesetzt. Man erhält so O-Desacetyl-7-(*rcy"ano-3-dimethyl-acrylamino)-cephalosporan-O-(f?-chloräthylcarbamoyl)-7-(«-cyano-^-dimeth >lsäure werden wie in Beispiel 2 beschrieben mit /ϊ-Chlor- acrylaminoj-cephalosporansäure der Formel

CH₃-C=C-CONH -r—/

CH₃

CN

Γ¹X J-CH₂O

ο γ )—CONH-CH₂CH₂Q

COOH

Im Säulenchromatogramm an Silicagel wird die reine Substanz mit Chlorofbnn-Aceton (9:1) duiert.

UV-Absorptionsspektrum in 0,1 n-Natriumbicarbonat: 1^_x 224 ναμ U = 17000). Dünnschichtchromatogramm an Silicagel (Systeme wie in Beispiel 2\ Ausgangsmaterial Produkt

System I

0,31 0,46

System 2

Beispiel 4

S g kristalline 7-Cyanacetylamino-cephalosporansäure und 1 g Ammoniumacetat werden in 100 ml Cyclohexanon 16 Standen bei Zimmertemperatur vibriert. Man dampft im Vakuum ein, nimmt in 10%iger wäßriger Dikaliumhydrogenphosphatlösung auf und wäscht mit Essigester. Die wäßrige Phase wird auf pH 2,0 angesäuert und nach Sättigen mit Kochsalz mit Essigester extrahiert. Trocknen des Auszugs über Natriumsulfat und Eindampfen gibt 6,18 g Rohprodukt, das durch Chromatographie an der 3Ofachen Menge Sflicage! gereinigt wird. Die mit Chloroform-Methanol 99:1 ehnerten Fraktionen enthalten die

reine 7 - (Cyclohexyliden - cyanacetylamino) - cephalosporansäure der Formel

C=C-CO-NHt—/ \

CN Il *\ J-CH₂OCOCH₃

o y

UV-Absorptionsspektrum in 0,1 n-Natriumbicarbonatlösung: k_max 230 ηΐμ (f = 16900).

Dünnschichtchromatogramm an Silicagel (System wie in Beispiel 2 angegeben):

15

Rf-Werte

System 1 System 2

Ausgangsmaterial
Produkt

0,25
0,44

0,56
0,67

C=C-CO-NH

CN

Dünnschichtchromatogramm
wie in Beispiel 2):

an Silicagel (System

R_f-Wertc

System 1 System 2

Ausgangsmaterial
Produkt

0,30
0,47

Beispiel 6

0,59
0,65

COOH

Beispiel 5

2 g O - (Desacetyl -ß- chloräthylcarbamoyl) - 7 - cyanacetylamino-cephalosporansäure, 400 mg Ammoniumacetat und 40 ml Cyclohexanon werden wie in Beispiel 4 reagieren gelassen und aufgearbeitet. Im Silicagel-Chromatogramm geben die mit Chloroform-Methanol 99:1 eluierten Fraktionen die reine O - Desacetyl - O - (β - chloräthylcarbamoyl) - 7 - (cyclohexyliden - cyanacetylamino) - cephalosporansäure der Formel

CH₂O-CONHCH₂CH₂Cl

COOH Reaktionsgemisch langsam zu einer eiskalten Lösung von 150 g (0,55 Mol) 7-Amino-cephalosporansäure und 393 ml (1,6 Mol) Tributylamin in 2 Liter Methylenchlorid gerührt. Nach V₂ Stunde Rühren bei 0° dampft man den Ansatz im Vakuum ein und arbeitet analog Beispiel 1 auf. Man erhält so 163,0 g rohe 7-Cyanacetylammo-cephalosporansäure.

35

40

Man nimmt 27,2 g (0,1 Mol) 7-Amino-cephslosporansäure in einem Gemisch von 250 ml absolutem Methylenchlorid und 71,5 ml (0,3 Mol) Tributylamin auf und versetzt bei 0° bis —10° unter Rühren innerhalb ¹Z₂ Stunde mit einer Lösung von 14,7 g (0,125 Mol) a-Cyanpropionylohlorid in 100 ml Methylenchlorid. Nach der Zugabe wird der Ansatz ¹I₂ Stunde bei 0° und 1 Stunde bei 20° gerührt und hierauf bei 0,1 Torr eingedampft. Der Rückstand wird in 10%iger wäßriger Dikaliumhydrogenphosphatlösung aufgenommen und mit Essigester ausgewaschen. Die wäßrige Phase extrahiert man bei pH 2,0 mit Essigester. Der Rohextrakt wird an Silicagel chromatographiert und dabei das Produkt mit Chloroform-Aceton 8: 2 eluiert. Durch Kristallisation aus Aceton-Äther erhält man reine 7-(ix-Cyanpropionylamino)-cephalosporansäure, F. 160 bis 164° (Zersetzung).

UV-Absorptionsspektrum in 0,1 n-Natriumbicarbonatlösung: k_wa 260 πΐμ (f = 9300).

60

Beispiel 7

Eine Lösung von 62,6 g (0,73 Mol) Cyanessigsäure und 185 ml (0776 Mol) Tributylamin in 600 ml absolutem Methylenchlorid wird bei -10* unter Rühren mit 865 ml einer 10%igen Lösung von Pivalylchlorid (0,72MoI) in Methylenchlorid versetzt. Man läßt v. Stunde in der Kälte reagieren. Dann wird das

Beispiel 8

15 g 7-Cyanacetylamino-cephalosporansäure und 3 g wasserfreies Ammoniumacetat werden in einem Gemisch von 300 ml Aceton und 200 ml Dimethylformamid gelöst und 16 Stunden bei 24° stehengelassen. Man dampft im Vakuum ein, nimmt den Rückstand in 10%igem Dikaliumhydrogenphosphat auf und wäscht mit Essigester. Die wäßrige Phase wird bei pH 2,0 in der Kälte mit Essigester extrahiert und der Extrakt getrocknet und eingedampft.' Das Rohprodukt (15,4 g) wird durch Chromatographie an df χ 30fachen Menge Silicagel gereinigt. Durch ein G *- misch Chlorofonn-Aceton (98:2) wird dabei rei ne 7 - (α - Cyano - β - dimethylacrylamino) - cephalospoi -ansäure (II) eluiert

Dünnschichtchromatographie an Silicagel (Sys- teme wie in Beispiel 2 angegeben):

Rj-Werte	Beisp	System 1	System 2
Ausgangsmaterial Produkt	0,24 0,33	0,53 0,61
	iel 9

27,2 g (0,1 Mol) 7-Amino-cephalosporansäure werden in einem Gemisch von 250 ml absolutem Me-

thylenchlorid 71,5 ml (0,3 Mol) Tributylamin gelöst und unter Rühren bei -10° mit einer Lösung von 14,7 g (0,125 Mol) a-Cyanpropionylchlorid in 120 ml Methylenchlorid versetzt. Man läßt ¹I₂ Stunde bei -10° und eine Stunde bei 22° rühren. Der Ansatz wird bei 0,1 mm Quecksilbersäule eingedampft, der Rückstand in 500 ml 10%iger wäßriger Dikaliumhydrogenphosphatlösung aufgenommen und mit Essigester gewaschen. Die wäßrigen Phasen werden bei pH 2,0 mit Essigester extrahiert. Trocknen des Auszugs über Natriumsulfat und Eindampfen im Vakuum gibt 19,18 g rohe 7-(«-Cyanpropionamido)-cephalosporansäure. Das Produkt wird durch Chromatographie an der 30fachen Menge Silicagel gereinigt. Es wird durch Chloroform-Aceton 8 : 2 eluiert und kristallisiert dann aus Aceton-Äther, F. 160 bis 164° (Zersetzung). UV-Absorptionsspektrum in 0,1 n-Natriumbicarbonatlösung gibt ein Absorptionsmaximum bei 260 ηΐμ (f = 9500). Dünnschichtchromatographie an Silicagel (Systeme wie in Beispiel 2 angegeben):

R,-Werte	System 1	System 2
Ausgangsmaterial Produkt	0,08 0,27	0,43 0,56
	Beispiel 10

8,1 g (30 m Mol) 7-Amino-cephalosporansäure werden in einem Gemisch von 150 ml absolutem Methylenchlorid und 22 ml (90 mMol) Tributylamin gelöst und unter Rühren bei —10" mit einer Lösung von 5,4 g (30 mMol) Phenylcyanacetylchlorid in 30 ml Methylenchlorid wie in Beispiel 9 acyiien und aufgearbeitet. Das Rohprodukt wird an der 3fachen Menge Silicagel chromatographiert. Die reine 7-Phenylcyanacetylamino-cephalosporansäure wird dabei durch Chloroform-Aceton 98:2 eluiert.

Dünnschichtchromatogramm an Silicagel (Systeme wie in Beispiel 2 angegeben):

Rf-Werte

System 1

System 2

Ausgangsmaterial
Produkt

0,09
0,48

0,42
0,80

Beispiel 11

100 mg 7-Cyclohexyliden-cyanacetylamino-cephalosporansäure werden in 3 ml Pyridin-Wasser 1:4 gelöst und 16 Stunden bei 37° hydrolysiert. Man dampft im Vakuum ein und erhält so 75 mg 7-Cyanacetylamino-cephalosporansäure.

B e i sp i e 1 12

Eine 0,5%ige Lösung von O-Desacetyl-O-(/i-chloräthylcarbamoyl)-7-(A-cyano-/S-dimethyl-acrylamino)-cephalosporansäure in 0,1 m-Phosphatpuffer pH 7 wird 16 Stunden auf 37° erwärmt. Man erhält O-Desacetyl-0-(/3-chloräthylcarbamoyl)-7-cyanacetylamino- cephalosporansäure, die einen R_f-Wert = 0,31 im System 1 (Beispiel 2) aufweist. Im gleichen System hat das Ausgangsmaterial den R_f-Wert 0,40.

B ei sp i e 1 13

75 g Cyanessigsäure und 112 ml Triäthylamin werden in 500 ml Tetrahydrofuran gelöst und bei etwa - 40^p mit 272 ml einer 50%igen Lösung von Trichloracetylchlorid in Tetrahydrofuran versetzt. Man läßt 20 Minuten in der Kälte reagieren. Zu dem Gemisch gibt man hierauf bei —40° eine Lösung von 109 g 7-Amino-cephalosporansäure und 196 ml Triäthylamin in 1,6 Liter Methylenchlorid. Der Ansatz wird 45 Minuten bei - 20° gerührt und dann auf neutralen Phosphatpuffer gegossen. Man entfernt die organischen Lösungsmittel im Vakuum· und wäscht die verbliebene wäßrige Phase mit Essigester. Die wäßrige Phase wird schließlich bei pH 2,0 mit Essigester extrahiert und der erhaltene Extrakt mit Natriumsulfat getrocknet und eingedampft. Der rohe Eindampfrückstand wird wie in Beispiel 1 chromatographiert und das reine Produkt kristallisiert. Man erhält so 7-Cyanacetamido-cephalosporansäure in nahezu quantitativer Ausbeute.

Claims

Patentansprüche: JL T-Cyanacetylammo-cephalosporansäurederivate der allgemeinen Formel

N=C-C-CO-NH-CH-CH CH₂

r{ \ C N ..C-CH₂-R₃

COOH

worin R₁ for ein Wasserstoffatom, R₂ für ein Wasserstoffatom, eine Niederälkyl- öder Phenylgruppe oder R₁ und R₂ zusammen für die Cyclohexyliden- oder Isopropylidengruppe stehen, worin R₃ ein Niederalkylcarbonyloxy-, Niederalkylcarbamoyloxy- oder /J-Chloräthylcarbamoyloxyrest ist und ihre Salze.
2. T-Cyanacetylamino-cephalosporansäure und

ihre Salze.

3. Pharmazeutische Präparate, bestehend aus Verbindungen gemäß Anspruch 1 und üblichen Hilfs- und/oder Trägerstoffen.

4. Verfahren zur Herstellung der Verbindungen nach Anspruch. 1, dadurch gekennzeichnet, daß man Verbindungen der allgemeinen Formel

NH₂-CH-CH
I I CH₂ C I I
C N
Il \
O C-CH₂-R₃ COOH

oder ein Salz davon in an sich bekannter Weise mit einem Acylierungsmittel, das einen Acylrest der allgemeinen Formel

N=C-C-CO-

/ \ R₁ R₂

enthält, umsetzt und, wenn erwünscht, eine erhaltene Verbindung der allgemeinen Formel

N=C-CH₂-CO-NH-CH-CH CH₂

I I I

C N C-CH₂-R₃

II γ ο T

COOH (III)

zweckmäßig in Gegenwart von Katalysatoren, mit Aceton oder Cyclohexanon umsetzt, und, wenn erwünscht, in erhaltenen Verbindungen, in denen R₃ für eine Acetoxygruppe steht, diese Gruppe in an sich bekannter Weise durch eine Niederalkyl- oder /7-Chloräthylcarbamoyloxygruppe ersetzt und, wenn erwünscht, die erhaltenen Verbindungen in ihre Metallsalze oder Salze mit organischen Basen überführt oder aus erhaltenen Salzen die freien Carbonsäuren bildet.