DE102022000456B3

DE102022000456B3 - Plattenmäander- Bioreaktor für die Isolierung und Vermehrung von Zellen, insbesondere von adhärent wachsenden mesenchymalen Stoma-Zellen

Info

Publication number: DE102022000456B3
Application number: DE102022000456.9A
Authority: DE
Inventors: Hans Hoffmeister; Rainer Mausolf
Original assignee: ZELLWERK GmbH
Current assignee: ZELLWERK GmbH
Priority date: 2022-02-05
Filing date: 2022-02-05
Publication date: 2023-04-20
Anticipated expiration: 2042-02-06

Abstract

Die Erfindung betrifft einen Plattenmäander- Bioreaktor für die Isolierung und Vermehrung von Zellen, insbesondere von adhärent wachsenden mesenchymalen Stroma-Zellen, wobei die Mäanderströmung des Kulturmediums im Platten-Bioreaktor horizontal geführt wird, über Überläufe 12 auf eine in engem Abstand darunter angeordnete nächste Platte fließt, von dort in gleicher Weise auf die übernächste Platte läuft usw. Die Kultivierungsplatten 6 mit ihren Überläufen 12 sind gegeneinander um 180 ° verdreht angeordnet. Viele Mäander-Rinnen befinden sich nebeneinander auf jeder Platte. Auf diese Weise wird eine große Fläche mit mäandrierendem Gerinnen hergestellt werden, auf der Zellen in laminar strömendem Medium gezüchtet werden können.

Description

Die Erfindung betrifft einen Plattenmäander- Bioreaktor für die Isolierung und Vermehrung von Zellen, insbesondere von adhärent wachsenden mesenchymalen Stroma-Zellen, wobei die Mäanderströmung des Kulturmediums im Bioreaktor horizontal geführt wird, über einen Überlauf auf eine in engem Abstand darunter angeordnete nächste Kultivierungsplatte fließt, von dort in gleicher Weise auf die übernächste Platte läuft usw. Viele Mäander-Gerinne befinden sich nebeneinander auf jeder Platte. Auf diese Weise wird eine große Fläche mit mäandrierendem Gerinnen hergestellt, auf der Zellen in laminar strömendem Medium gezüchtet werden können.
Die CN 10 806 0081 A beschreibt einen mehrschichtigen Flachplatten- Bioreaktor. Der mehrschichtige Bioreaktor für flache Platten besteht aus einem Hohlraum und einem Kulturmechanismus, wobei der Kulturmechanismus in einem Behälter angeordnet ist und aus mehreren Schichten flacher Platten besteht. Ein Kulturflüssigkeitseinlassrohr und ein Kulturflüssigkeitsaustragsrohr sind auf dem Behälter angeordnet. Der Behälter ist in einen Kultivierungsraum und einen Pufferraum unterteilt. Der Kulturmechanismus ist in dem Kultivierungsraum angeordnet. Ein Auslass des Kulturflüssigkeitseinlassrohrs erstreckt sich bis zu einer Position unterhalb des mittleren Teils des Pufferraums. Der obere Teil des Pufferraums kommuniziert mit dem Kulturhohlraum. Die Erfindung zielt darauf ab, den Bioreaktor bereitzustellen, der für zellgroße In-vitro-Kultur verwendet werden kann und eine gleichmäßigere Fließfeldscherkraftumgebung für die Zellkultur bietet.
In der WO 2017 025 620 A1 wird ein Bioreaktor zur Kultivierung und/oder Züchtung künstlicher oder natürlicher Gewebe offenbart, der eine obere Platte und eine Bodenplatte aufweist. Die obere und die untere Platte bilden zusammen eine Perfusionskammer zur Aufnahme und Unterstützung eines künstlichen oder natürlichen Gewebes, wobei die obere Platte eine Vielzahl von Einlassstrukturen und eine Vielzahl von Auslassstrukturen umfasst. Die Einlass- und Auslassstrukturen stehen in flüssiger Kommunikation mit der Perfusionskammer, um den Fluss von mindestens einem Medium durch die Perfusionskammer zu ermöglichen. Die Bodenplatte umfasst weiter einen höhenverstellbaren Teil zur Einstellung des Volumens der Perfusionskammer.
Die US 49 31 401A beschreibt einen Bioreaktor zur biochemischen Behandlung von Flüssigkeiten, die organische Stoffe enthalten. Er besteht aus einem Behälter mit einem Einlass zur Aufnahme von Flüssigkeit, die mit mindestens einer horizontalen Platte behandelt werden soll, um ein Bett von Mikroorganismenzellen zu unterstützen, die mit der organischen Substanz reagieren, um ein flüchtiges Gas zu bilden. Eine Öffnung ist in der Platte vorgesehen, um die Flüssigkeitsflusskommunikation zwischen den oberen und unteren Fächern auf beiden Seiten der Platte zu gewährleisten. Ein Blockierungselement erstreckt sich über die Öffnung, um zu verhindern, dass die Flüssigkeit und die Mikroorganismenzellen durch die Öffnung in das untere Kompartiment zurückkehren. Ein Auslass ist für die Freisetzung des Gases aus dem Behälter vorgesehen, während ein weiterer Auslass für die Freisetzung der behandelten Flüssigkeit verwendet wir
In der US 10 590 374 B2 wird ein Bioreaktorsystem offenbart, bestehend aus

➢ einem geschlossenen Kulturgefäß, wobei das Kulturgefäß mehrere Schalen besitzt, die mindestens zwei rechteckige Zellkulturfächer mit einem Deckel, einem Boden, zwei Seiten und zwei Enden umfasst, die in einer gestapelten Ausrichtung zueinander angeordnet und so konfiguriert sind, dass sich Zellen als Monoschicht auf der Unterseite anheften und wachsen können. Das Kulturgefäß weist mindestens einen Anschluss für Medium oder Gas in und aus dem Behälter auf, wobei für jedes Zellkulturfach die Gas/FluidKommunikation zwischen allen Zellkulturfächern über einen Gas/Fluid-Strömungsweg erfolgt, damit Gas/Flüssigkeit durch einen Verteiler und in jedes Zellkulturfach fließen kann;
➢ einem Längsstützgefäß, wobei ein Rohr so positioniert ist, dass es entlang einer Längsachse des Rohres liegt und das Rohr Enden mit mindestens einer Endöffnung hat, damit Kulturmaterial oder-gas in das Rohr ein- oder ausströmen können;
➢ einer Plattform, die so konfiguriert ist, dass sie mindestens ein geschlossenes Kulturgefäß hält, sichert und manipuliert, wobei die Plattform eine Wippenplattform ist, die entlang der Achse senkrecht zum Drehpunkt mit einem Neigungswinkel von weniger als 90 Grad auf jeder Seite des Drehpunktes geschwenkt ist und der Drehpunkt auf dem Rohr befestigt ist

➢ eine treibende und rotierende Baugruppe, die so konfiguriert ist, dass die Position des Stützgefäßes und des Kulturgefäßes um die Längsachse des Rohrs in einer Winkelposition von weniger als 360 Grad und während einer Haltezeit gedreht und geändert wird, wobei die Achse senkrecht zur ersten Achse steht, die von der Wippenplattform geschwungen wird.

In der DE 42 06 585 A1 wird ein Gerät zur Behandlung von Zellkulturen, insbesondere Hepatozyten beschrieben, wobei auf plattenartigen Kulturobjektträgern zumindest ein Teil der Oberflächen dieser Objektträger gaspermeabel ist und Sauerstoff in sie eingebracht werden kann. Auf den Kulturträgern wird eine Beschichtung aus Kollagen aufgetragen, auf oder in der sich die Zellkultur befindet. Der nächste Zellkulturträger ist dicht über der Kollagenbeschichtung angeordnet. Das Kulturmedium kann in den Raum zwischen der Kollagenbeschichtung und dem nächsten Kulturträger eingebracht werden.
Die DE 69 434 052 T2 offenbart eine Vorrichtung für das Abscheiden von Säugetier-Zellen aus einer Zellüberstandsflüssigkeit unter aseptischen oder sterilen Bedingungen, wobei die Vorrichtung aus einem Kastenelement besteht, das

• aus Mitteln, die mehrere entfernbare, aus spiegelpoliertem rostfreiem Stahl erzeugte Platten bilden und die zur Vertikalen geneigt sind, besteht und
• Mittel aufweist, die bewirken, dass Flüssigkeit, in der die Zellen enthalten sind, nach oben über die Platten mit einer solchen Geschwindigkeit fließt, dass die Zellen von der Flüssigkeit abgeschieden werden können, um Sedimentschichten auf den Platten zu bilden und an diesen hinunterzugleiten,
• wobei die Platten in einem Gehäuse enthalten sind, das mit einem am Boden der Platten angeordneten Einlass für Flüssigkeiten, in der die abzuscheidenden Zellen enthalten sind, einem Auslass für Flüssigkeit, aus den Zellen ausgeschieden wurden und einem Sammelauslass für abgeschiedene Zellen ausgestattet ist

• wobei jeder Einlass und jeder Auslass mit einem Sanitärverbinder versehen ist,

Die DE 10 2018 000 561 B4 beschreibt einen Mäander- Bioreaktor bestehend aus einen rechteckigen Bioreaktorgefäß aus vorzugsweise klarem Polymermaterial, das mit einem Deckel steril verschlossen ist, wobei dass das Bioreaktorgefäß in drei übereinander angeordneten Kammern unterteilt ist und die unterste Kammer als Underlay- Kammer, die über der Underlay-Kammer angeordnete Kammer als Mäander- Perfusions- Kammer und die über der Mäander- Perfusions- Kammer angeordnete Kammer als Overlay- Kammer ausgebildet sind. Die Underlay- Kammer und die Mäander- Perfusions- Kammer sind durch eine gelochte Bodenplatte mit einer unten an der gelochten Bodenplatte angeordneten semipermeablen Folie voneinander getrennt, wobei Sauerstoff bevorzugt gegenüber anderen Gasen durch die Folie diffundiert.
Bei diesem Mäander- Bioreaktor fließt das Kulturmedium horizontal durch die parallel liegenden Mäander- Gerinne, wobei die Züchtung der Anzahl von Zellen begrenzt ist. Um eine hohe Anzahl von Zellen, insbesondere von T- Lymphozyten für eine therapeutische Behandlung zur züchten, ist es erforderlich mehrere Bioreaktoren hintereinander oder parallel zu schalten. Dies erfordert einen hohen apparativen Aufwand mit einem hohen Aufwand zur Erreichung der erforderlichen Sterilität.
Die Aufgabe der Erfindung ist es einen Mäander- Bioreaktor zu entwickeln, der in der Lage ist, eine für therapeutische Zwecke erforderliche hohe Anzahl von Zellen, insbesondere von mesenchymalen Stroma-Zellen zu züchten.
Die Aufgabe der Erfindung wird durch einen Plattenmäander- Bioreaktor gelöst, bei dem das Kulturmedium über mehrere, aber mindestens zwei mit Überläufen 12 versehene Kultivierungsplatten 6 geführt wird, wobei die Kultivierungsplatten 6 mit Ihren Überläufen 12 senkrecht übereinander und jede zweite Kultivierungsplatte 6 um 180° zu der über ihr liegenden Kultivierungsplatte 6 gedreht angeordnet sind, so dass der Strom des Kulturmedium von den oberen Überläufen 12 erst über die Gerinne 14 der darunter liegende Kultivierungsplatte 6 zu den Überlauföffnungen 12 dieser unten liegenden Kultivierungsplatte 6 fließen muss.
Der Platten- Mäander besteht aus einem Behälter 1 aus glasklaren Polymermaterial, vorzugsweise aus Polycarbonat. Der Behälter 1 weist zwei Seitenwände 3, zwei Stirnseiten 4,5, einen Deckel 3 und einen Boden 1 mit Fußleisten 8 auf. Zwischen dem Deckel 2 und dem Boden 3 sind Spannbügel 9 zur Aufnahme der Kultivierungsplatten 6 angeordnet. Über den Kultivierungsplatten 6 ist eine obere Auffangkammer 16 angeordnet und unter den Kultivierungsplatten 6 befindet sich eine untere Auffangkammer 17 für das Kulturmedium. An der Stirnseite 5 sind im oberen Bereich Schnellverschlusskupplungen 10 und 11 für das Einbringen des Kulturmediums und der Overlay- Atmosphäre und im unteren Bereich die Schnellverschlusskupplung 7 zum Abpumpen des Kulturmediums angeordnet. Die Kultivierungsplatten 6 weisen an einem Ende mehrere, aber mindestens eine Überläufe 12 auf. Auf den Kultivierungspalten 6 sind Stege 13 zur Bildung mehrerer Gerinne 14 in einem Abstand a voneinander angeordnet, wobei der Abstand a der Stege 13 voneinander so gewählt ist, dass sich in dem Stromfaden, in dem durch die Stege 13 gebildeten Gerinne 14, eine gemittelte laminare Oberströmung mit einer Froudezahl von 0,1 bis < 0,005 gewählt werden kann. Die Bodenströmung verbleibt dabei nahe einer Froudezahl 0, wodurch eine Aufwirbelung der Zellen vermieden wird. Die beschriebenen Strömungsverhältnisse verhindern Zellstress und sorgen für eine homogene Versorgung mit Nährstoffen über die gesamte am Boden des Gerinnes aufwachsende Zellschicht.
Der Abstand b der Stege 13 mit dem Gerinne 14 von den Stirnwänden 4,5 des Mäander- Bioreaktorgefäßes 1 beträgt das 1,0 bis 1,5 fache der Breite a der Gerinne 14.
Die Kultivierungsplatten 6 mit den Überläufen 12 sind übereinander in den Spannbügel 9 angeordnet, wobei jede zweite Kultivierungsplatte 6 mit den Überläufen 12 um 180° gegenüber der über ihr liegenden Kultivierungsplatte 6 gedreht ist, so dass jede nur zweite Kultivierungsplatte 6 die Überläufe 12 am gleichen Ende aufweist. Dadurch wird eine senkrechte, umgekehrt kaskadenartige Mäanderströmung des Kulturmediums erzeugt.
In einer Auslegung der Erfindung bestehen die Kultivierungsplatte 6 aus einem hydrophilen mit Niedertemperatur- Plasma behandelten Trägerkörper mit einer zelladhäsiven Beschichtung, wobei in die zelladhäsive Beschichtung aktivierende Antikörper eingearbeitet sind.
Als aktivierende Antikörper sind Immunglobuline, Lymphozyten, Anti CD 16, Anti CD3, Anti CD28, Anti137, Anti CD39, Anti CD103 und/oder aus Kombinationen davon in die zelladhäsive Beschichtung 22 eingearbeitet.
In einer weiteren Auslegung der Erfindung ist als aktivierender Antikörper der Antikörper 4-1 bb in Kombination mit den Cykinen Interleukin 12 oder mit einem Gemisch aus Interleukin 12 und Interleukin 2 in die zelladhäsive Beschichtung eingearbeitet.
Die zelladhäsive Beschichtung besteht aus Flbronektin, RetroNectin, Collagen, Gelatine, Laminin, Chitin und/oder aus Kombinationen davon.
Mit diesem Plattenmäander- Bioreaktor ist es möglich, notwendige Mengen an Zellen für eine therapeutische Behandlung zu züchten
Die Erfindung wird nun anhand eines Beispiels näher erläutert, wobei die 1 eine Schnittdarstellung des Plattenmäander- Bioreaktor 1, die 2 eine schematische Skizze mit dem Mäanderfluss des Kulturmediums, die 3 eine dreidimensionale Draufsicht des Plattenmäander- Bioreaktors 1, die 4 eine Darstellung der Kultivierungsplatte 6 und die 5 eine Ansicht der Seite 5 mit den Schnellverschlusskupplungen 7, 10, 11 zeigt, wobei

1: Mäander- Bioreaktorgefäß
2: Deckel
3: Seitenwand
4: Stirnwand
5: Stirnwand
6: Kultivierungsplatten
7: Schnellverschlusskupplung
8: Fußleisten
9: Spannbügel
10: Schnellverschlusskupplung
11: Schnellverschlusskupplung
12: Überlauf
13: Steg
14: Gerinne
15: Boden
16: obere Auffangvorrichtung
17: Untere Auffangvorrichtung

Beispiel:
Ausgangsmaterial für die Herstellung von Zellen, insbesondere von TIL oder TINK und anderen Zellen sind Gewebeanteile, die z.B. bei der operativen Entfernung solider Organtumore, ihrer Metastasen oder ihres unmittelbar umgebenden Gewebes anfallen oder für diesen Zweck entnommen werden. Eine Gewebemenge mit etwa 1 ml Volumen ist in der Regel ausreichend als Ausgangsmaterial. Die Gewebeproben werden in ein Transportgefäß mit Medium verbracht. Das Gefäß wird verschlossen bei Raumtemperatur gehalten und vom Ort der Gewebeentnahme in den Reinraumbereich für die Herstellung der Immunzell-Präparate transportiert. Die OP-Gewebestücke werden in einem Reinraum unter einer LFB in Stücke von 1 bis 2 mm' Größe zerkleinert und in einen Plattenmäander- Bioreaktor transferiert. Die zerkleinerten Gewebestücke werden im Plattenmäander-Bioreaktor 1, gleichmäßig verteilt und im Perfusionsbetrieb kultiviert.
Dabei wird das Kulturmedium über mehrere, aber mindestens zwei mit Überläufen 12 versehene Kultivierungsplatten 6 geführt, wobei die Kultivierungsplatten 6 mit Ihren Überläufen 12 senkrecht übereinander und jede zweite Kultivierungsplatte 6 um 180° zu der über ihr liegenden Kultivierungsplatte 6 gedreht angeordnet sind, so dass der Strom des Kulturmediums von den oberen Überläufen 12 erst über die Gerinne 14 der darunter liegende Kultivierungsplatte 6 zu den Überläufen12 dieser unten liegenden Kultivierungsplatte 6 fließen muss und so fort.
Der Platten- Mäander besteht aus einem Behälter 1 aus glasklaren Polymermaterial, vorzugsweise aus Polycarbonat. Der Behälter 1 weist zwei Seitenwände 3, zwei Stirnseiten 4,5 einen Deckel 3 und einen Boden 1 mit Fußleisten 8 auf. Zwischen dem Deckel 2 und dem Boden 3 sind Spannbügel 9 zur Aufnahme der Kultivierungsplatten 6 angeordnet. An der Stirnseite 5 sind im oberen Bereich Schnellverschlusskupplungen 10 und 11 für das Einbringen des Kulturmediums und der Overlay- Atmosphäre und im unteren Bereich die Schnellverschlusskupplung 7 zum Abpumpen des Kulturmediums angeordnet.
Die Kultivierungsplatten 6 weisen einem Ende mehrere, aber mindestens einen Überlauf 12 auf. Auf den Kultivierungspalten 6 sind Stege 13 zur Bildung mehrerer Gerinne 14 in einem Abstand a voneinander angeordnet, wobei der Abstand a der Stege 13 voneinander so gewählt ist, dass sich in dem Stromfaden, in dem durch die Stege 13 gebildeten Gerinne 14, eine gemittelte laminare Oberströmung mit einer Froudezahl von 0,1 bis < 0,005 gewählt werden kann. Die Bodenströmung verbleibt dabei nahe einer Froudezahl 0, wodurch eine Aufwirbelung der Zellen vermieden wird. Die beschriebenen Strömungsverhältnisse verhindern Zellstress und sorgen für eine homogene Versorgung mit Nährstoffen über die gesamte am Boden des Gerinnes aufwachsende Zellschicht.
Der Abstand b der Stege 13 mit dem Gerinne 14 von den Stirnwänden 4,5 des Mäander- Bioreaktorgefäßes 1 beträgt das 1,0 bis 1,5 fache der Breite a der Gerinne 14.
Die Kultivierungsplatten 6 mit den Überlauföffnungen 12 sind übereinander in den Spannbügeln 9 angeordnet, wobei jede zweite Kultivierungsplatte 6 mit den Überläufen 12 um 180° gegenüber der über ihr liegenden Kultivierungsplatte 6 gedreht ist, so dass jede zweite Kultivierungsplatte 6 die Überläufen 12 am gleichen Ende aufweist. Dadurch fliest das Kulturmedium horizontal und am Ende der Rinne kaskardenartig auf die darunter angeordnete nächste Mäander-Rinne und immer so weiter bis in die gemeinsame untere Auffangkammer 17, von wo das Kulturmedium in die obere Auffangkammer 16 gepumpt wird. Von dort beginnt ein erneuter Durchlauf durch die Mäandergerinne, wobei ausgerichtet an einem vorgewählten Glukose-Gehalt automatisch Frischmedium zugeführt und verbrauchtes Medium über die Schnellverschlusskupplung 7 abgeführt werden.
Kultiviert wird in geeignetem Medium, das mit einem spezifischen Gemisch aus AB Humanserum, Cytokinen, Antikörpern und irradiierten humanen Feederzellen zeitweilig supplementiert ist. Schnellere Vermehrung und Aktivierungen gelingen fallweise durch Supplemente, die auf den Oberflächen des Bioreaktorgerinnes fixiert sind. Im Fall von TIL und anderen Immunzellen werden die vermehrten und separierten TIL zentrifugiert, in Einfriermedium resuspendiert und aliquotiert (rund 50 Mio. TIL pro Vial). Die Proben werden in der Gasphase über flüssigem Stickstoff gelagert.
Für klinische Anwendungen werden kryokonservierte Vials zeitlich so aufgetaut, dass therapeutisch sinnvolle Mengen an TIL termingerecht produziert werden. Nach 12 bis 20 Tagen Expansionsdauer wachsen im Mäander- Bioreaktor regelmäßig mehr als 500 Mio. TIL hoch. Die TIL werden geerntet, gewaschen und in NaCl Lösung mit Human-Albumin resuspendiert. Die TIL-Suspension wird in einen Infusionsbeutel abgefüllt. Viablilität und Zellzahl werden am Tag der Zellernte bestimmt und weiter nach Vorgabe der Pharmakopoe Sterilität, Markerprofil, parakrine Produktion der Zellen analysiert. Die TIL-Suspension wird bei Raumtemperatur gehalten und sofort zum klinischen Partner transportiert. Die Applikation der TIL muss spätestens nach 12 bis 24 Stunden erfolgen.
Überschüssige Mengen an TIL werden kryokonserviert. Sie stehen für später notwendige werdende Herstellung von weiteren Dosen an TIL zur Verfügung, Für 500 Mio. TIL werden max.100 ml NaCl- Lösung mit Human-Albumin eingesetzt.

Claims

Plattenmäander- Bioreaktor zur Isolierung und Vermehrung von Zellen, insbesondere von adhärent wachsenden mesenchymalen Stroma-Zellen, bestehend aus einem Mäander- Bioreaktorgefäß (1) mit einem Deckel (2), zwei Seitenwänden (3), zwei Stirnseiten (4, 5), einem Boden (15) mit Fußleisten (8), wobei in dem Plattenmäander- Bioreaktorgefäß (1) mehrere, aber mindestens zwei übereinander, in engen Abstand zueinander, angeordnete, Kultivierungsplatten (6) angeordnet sind, dadurch gekennzeichnet, dass • auf den Kultivierungsplatten (6) Stege (13) zur Bildung eines oder mehrerer Gerinne (14) in einem Abstand a voneinander und in einem Abstand b von Stirnwänden (4,5) angeordnet sind, • die Kultivierungsplatten (6) ein oder mehrere Überläufe (12) aufweisen, • die Kultivierungsplatten (6) in im Plattenmäander- Bioreaktorgefäß angeordnete Spannbügeln (9) gehalten werden, • jede zweite Kultivierungsplatte (6) um 180° mit ihren Überläufen (12) zu der über ihr liegenden Kultivierungsplatte (6) gedreht angeordnet ist. und • über und unter den Kultivierungsplatten (6) eine obere (16) und eine untere (17) Auffangkammer für das Kulturmedium angeordnet sind.
Plattenmäander- Bioreaktor nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass an der Stirnseite (5) unten, mittig eine Schnellverschlusskupplung (7) für das Ableiten des verbrauchten Kulturmediums angeordnet ist.
Plattenmäander- Bioreaktor nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass an der Stirnseite (5) oben seitlich Schnellverschlusskupplungen (10) für die Zuführung des Kulturmediums und (11) für die Zuführung der Overlay-Atmosphäre angeordnet sind.
Plattenmäander- Bioreaktor nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass der Abstand a der Stege (13) voneinander so gewählt ist und die zugeführte und abgeführte Menge an Kulturmedium so eingestellt ist, dass sich in dem Stromfaden, in dem durch die Stege (13) gebildeten Gerinne (14), eine gemittelte laminare Oberströmung mit einer Froudezahl von 0,1 bis < 0,005 bildet und die Bodenströmung dabei nahe einer Froudezahl 0 verbleibt.
Plattenmäander- Bioreaktor nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass der Abstand b der Stege 13 von den Stirnwänden (4,5) das 1,4 bis 2,5 fache des Abstand a der Stege (13) voneinander beträgt.
Plattenmäander- Bioreaktor nach Anspruch 1 bis 3, dadurch gekennzeichnet, dass das Plattenmäander- Bioreaktorgefäß (1) und die Kultivierungsplatten (6) mit den Stegen (13) und dem Gerinne (14) aus glasklarem Polymermaterial bestehen.
Plattenmäander- Bioreaktor nach Anspruch1 bis 5, dadurch gekennzeichnet, dass die Kultivierungsplatten (6) mit den Stegen (13) und den Gerinnen (14) aus einem hydrophilen mit Niedertemperatur- Plasma behandelten Kunstostoff mit einer zelladhäsiven Beschichtung bestehen und in die zelladhäsive Beschichtung aktivierende Antikörper eingearbeitet sind.
Plattenmäander- Bioreaktor nach Anspruch 6, dadurch gekennzeichnet, das als aktivierende Antikörper Immunglobuline, Lymphozyten, Anti CD 16, Anti CD3, Anti CD28, Anti137, Anti CD39, Anti CD103 und/oder aus Kombinationen davon in die zelladhäsive Beschichtung (22) eingearbeitet sind.
Plattenmäander- Bioreaktor nach Anspruch 6 bis 7, dadurch gekennzeichnet, dass die zelladhäsive Beschichtung aus Flbronektin, RetroNectin, Collagen, Gelatine, Laminin, Chitin und/oder aus Kombinationen davon besteht.
Plattenmäander- Bioreaktor nach Anspruch 6, dadurch gekennzeichnet, dass in die zelladhäsive Beschichtung, als aktivierende Antikörper der Antikörper 4-1 bb in Kombination mit den Cykinen Interleukin 12 oder mit einem Gemisch aus Interleukin 12 und Interleukin 2 in die zelladhäsive Beschichtung eingearbeitet ist