CZ442199A3 - Deriváty 4"-substituovaného-9-deoxo-9a-aza-9a-homoerythromycinu A - Google Patents

Description

Deriváty 4-substituovaného-9-deoxo-9a-aza-9a-homoerythromycinu A

Vynález se týká nových C-4 substituovaných derivátů 9-deoxo-9a-aza-9a-homoerythromycinu A, které jsou užitečné jako antibakteriální a antiprotozoické prostředky u savců včetně člověka, stejně jako u ryb a ptáků. Vynález se také týká farmaceutických kompozic obsahujících nové sloučeniny a způsobů léčení bakteriálních infekcí a protozoických infekcí u savců, ryb a ptáků, podáváním nových sloučenin savcům, rybám a ptákům vyžadujícím takovéto léčení.

Makrolidová antibiotika jsou známa jako vhodná pro léčení širokého spektra bakteriálních infekcí a protozoických infekcí u savců, ryb a ptáků. Takováto antibiotika zahrnují různé deriváty etythromycinu A jako je azithromycin, který je komerčně dostupný a je uváděn v US patentech číslo 4 474 763 a 4 517 359, které jsou zde oba začleněny formou odkazu v celé své celistvosti. Jako azithromycin a jiná makrolidová antibiotika, nové makrolidové sloučeniny tohoto vynálezu mají silný účinek vůči různým bakteriálním infekcím a protozoickýrm, infekcím, jak je dále popsáno.

Podstata vynálezu

Předložený vynález se týká sloučenin vzorce 1_

o • « · ·

- 2 a jejich farmaceuticky akceptovatelných solí, kde r! je H, hydroxy nebo methoxy,

R je hydroxy,

R³ je (C₁~C₁₀)alkyl, (C₂~C₁₀)alkenyl, (C₂“C₁₀)alkinyl, kyan,

-CH₂S(O)_nR³, kde n je celé číslo v rozmezí od 0 do 2,

-CH₂OR⁸, -CH2N(OR^{9 * * *})R⁸, -CH2NR⁸R¹⁵, “(CH₂)_m((Cg-C_1Q)aryl) nebo -(CH₂)_m(5-10členný heteroaryl), kde m je celé číslo v rozmezí od 0 do 4 a kde předcházející R³ skupiny jsou připadne substituovaný 1 az 3 R skupinami,

3 nebo R a R jsou vzaty dohromady k vytvoření oxazolylového kruhu jak je znázorněno níže

9 9 q 1 Π

R je H, -C(O)R , -C(O)OR , -C(O)NR R nebo chránící skupina hydroxy,

R^{4 5 6 *} je -SR⁸, -(CH2)nC(O)R⁸, kde n je 0 nebo 1, (C^-C^g)alkyl, (^c2-^cig)a¹kenyl, (C₂~C₁₀)alkinyl, -(CH₂)_m((C_g-C₁₀)aryl) , nebo -(CH,) (5-10členný heteroaryl), kde m je celé číslo v rozmezí od 0 do 4 a kde předcházející R⁸ skupiny jsou případně substituovány 1 až 3 R^⁸ skupinami,

7 každý R a R^z je nezávisle H, hydroxy, (C^-C_g)alkoxy, (^Cl^_C6)^alkyl, (C₂-C_g)alkenyl, (C₂~C_g)alkinyl, -(CH₂^m^^C6~^C10 aryl) nebo -(CH₂) (5-10členný heteroaryl), kde m je celé číslo v rozmezí od 0 do 4, každý R° je nezávisle H, (C.,-C., θ)alkyl, (C^-C^q Jalkenyl, ‘llAA, , „„13„I4 ^(C2^-C10^)alkiny1' ^(CH2^{) CR R} (^CH2>r^{NR R} ' ^kde S ^a ···· · · · «·«« • ···· ····*· • · ···· ···· ······ · · ·· ·· ··

- 3 r jsou každý nezávisle celé číslo v rozmezí od 0 do 3 s výjimkou, že q a r nejsou oba 0, -(CH₂ )_m((Cg-C^_Q aryl) nebo -(CH₂) (5-10členný heteroaryl), kde m je celé číslo v rozmezí od 0 do 4 a kde předcházející R& skupiny T 6 s výjimkou H jsou případně substituovány 1 až 3 R skupinami , nebo kde R^ je jako -CH^NR^R^, a R^ mohou být vzaty dohromady, čímž se vytvoří 4-10členný nasycený monocyklický nebo polycyklický nasycený kruh nebo 5-10členný heteroarylový kruh, kde uvedené nasycené a heteroarylové kruhy případně 8 zahrnují 1 až 2 heteroatomy vybraná z O, S a -N(R )- navíc 15 8 k dusíku, ke kterému jsou R^x a R° připojeny, přičemž nasycený kruh případně zahrnuje 1 až 2 dvojné nebo trojné vazby uhlík-uhlík, a tyto nasycené a heteroarylové kruhy jsou případně substituovány 1-3 R^ skupinami, „ 9 10 každý R a R je nezávisle H nebo (C^-Cg)alkyl,

12 12 14 každý R , R , R a R jsou nezávisle vybrány z H, (C^-C^^) alkyl, -(CH_) ((C_r-C,_n)aryl), a -(CH„) (5-10členný heteroaryl), kde m je celé číslo v rozmezí od 0 do 4 a kde před, . .. . _11 12 „13 „14 . . .... „ .

chazejici R , R , R a R skupiny, s výjimkou H, jsou případně substituovány 1-3 R^ skupinami,

13 nebo R a R jsou vzaty dohromady, čímž se vytvoří

-(CH„) -, kde p je celé číslo od 0 do 3, takže se vytvoří z p až 7členný nasycený kruh, který případně zahrnuje 1 až 2 dvojné nebo trojné vazby uhlík-uhlík,

14 nebo R a R * jsou vzaty dohromady, cimž se vytvoří 4 až lOčlenný monocyklický nebo polycyklický nasycený kruh nebo až lOčlenný heteroarylový kruh, přičemž tyto nasycené a heteroarylové kruhy případně zahrnují 1 až 2 heteroatomy vybrané z O, Ξ a -N(R )- navíc k dusíku, ke kterému jsou připojeny R^A a R^A , přičemž tento nasycený kruh případně zahrnuje 1 nebo 2 dvojné nebo trojné vazby uhlík-uhlík a tento nasycený a heteroarylový kruh jsou případně substi- 4 • · ··· · · · • · · · ·· ·· tuovány 1 až 3 skupinami,

R·^{1 5} je H, (C^-C^g )alkyl, (Ο₂~Ο^θ)alkenyl, nebo (C^-C^g )alkinyl, kde předcházející R^ skupiny jsou případně substituovány 1 až 3 substituenty nezávisle vybranými z halogenu a -OR⁹, každý R je nezávisle vybrán z halogen, kyan, nitro, trifluormethyl, azido, -C(O)R¹⁷, -C(O)OR¹⁷, -C(O)OR¹⁷, -OC(O)OR¹⁷, -NR⁶C(O)R⁷, -C(O)NR⁶R⁷, -NR⁶R⁷, hydroxy, (C^-Cg) alkyl, (C.-C_c)alkoxy, -(CH_) ((C,-C,_n)aryl) a -(CH„) (5-10členný heteroaryl), kde m je celé číslo v rozmezí od 0 do 4 a kde arylové a heteroarylové substituenty jsou případně substituovány 1 nebo 2 substituenty nezávisle vybranými z halo17 17 gen, kyan, nitro, trifluormethyl, azido, -C(O)R , -C(O)OR , -C(O)OR¹⁷, -OC(O)OR¹⁷, -nr⁶c(o)r⁷, -c(o)nr⁶r⁷, -NR⁶R⁷, hydroxy, (C^-Cg)alkyl a (C^-Cg)alkoxy, každý R je nezávisle vybrán z H(C^-C^g)alkyl, (^C2^-Cio^ alkenyl, (0₂~0_1θ)alkinyl, -(CH₂)^((Cg-C₁₀)aryl) a (5-10členný heteroaryl), kde m je celé číslo v rozmezí od 0 do 4,

3 8 s podmínkou, že R není H, když R je -CH₂S(O)_nR .

Výhodné sloučeniny vzorce 1 zahrnují sloučeniny,

2 ’ 3 815 kde R³ je hydroxy, R^z je hydroxy, R^J je -CH_?NR R nebo

4. ^Z

-CH₂SR a R je H.

Jiné výhodné sloučeniny vzorce 1 zahrnují sloučeniny,

-, λ «> QIC A kde R¹ je hydroxy, R^Z je hydroxy, R^J je -CH„NR R , R je

J C Q

H, R a R jsou každý vybrán z H, (C^-C^g)alkyl, (C₂~C^g)alkenyl a (C₂~C^q)alkínyl, kde _a r® skupiny s výjimkou H, jsou případně substituovány 1 nebo 2 substituenty nezávisle vybranými z hydroxy, halogen a (C^-Cg)alkoxy. Specifické výhodné sloučeniny mající předcházející obecnou strukturu zahrnují ty sloučeniny, kde R je bud H nebo je vybrán g

z následujících skupin, ze kterých je R také nezávisle vybrán: methyl, ethyl, allyl, n-butyl, isobutyl, 2-methoxyethyl, cyklopentyl, 3-methoxypropyl, 3-ethoxypropyl, n-propyl, isopropyl, 2-hydroxyethyl, cyklopropyl, 2,2,2-trifluorethyl, 2-propinyl, sek.butyl, terč.butyl a n-hexyl.

Jiné výhodné sloučeniny vzorce 1^ zahrnují ty, kde r! je hydroxy, R^ je hydroxy, R^ je -CH₀NHR^, je H a 8

R je -(CH„) ((C,-C._n)aryl), kde m je celé číslo v rozmezní o iU zí od 0 do 4. Specificky výhodné sloučeniny mající předchá8 zející obecnou strukturu zahrnují ty, kde R je fenyl nebo benzyl.

Jiné výhodné sloučeniny vzorce 1 zahrnují ty slouče1 2 3 158 niny, kde R je hydroxy, R je hydroxy, R^J je -CH_NR'^L'^>R^O,

15 8

R je H a R^x a R° jsou vzaty dohromady, čímž se vytvoří nasycený kruh. Zvlášt výhodné sloučeniny mající předcházející obecnou strukturu zahrnují ty sloučeniny, kde g

a R jsou vzaty dohromady k vytvoření piperidino, trimethylen imino, nebo morfolinového kruhu.

Jiné výhodné sloučenny vzorce 1_ zahrnují ty, kde 1 9 3 τ c o ^1

R je hydroxy, R je hydroxy, R je -CH„NR R , R* je H 15 8 a R a R jsou vzaty dohromady k vytvoření heteroarylového kruhu, případně substiutovaného 1 nebo 2 (C^-Cg)alkylovými skupinami. Zvlášt výhodné sloučeniny mající předcházející 15 8 obecnou strukturu zahrnují ty, kde R a R jsou vzaty dohromady k vytvoření pyrrolidino, triazolyl nebo imidazolylového kruhu, kde uvedené heteroarylové skupiny jsou případně substituovány 1 nebo 2 methylovými skupinami.

Jiné výhodné sloučeniny vzorce 1 zahrnují ty, kde 1 9 3 fí 4 8

R je hydroxy, R je hydroxy, R je -CH^SR , R je H a R je vybrán z (C^-C^q)alkyl, (^C2^_ciq)alkenyl a (C₂ ^_C^q)alkinyl, kde uvedené Πθ skupiny jsou případně substituovány 1 nebo 2 substituenty nezávisle vybranými z hydroxy, halogen a (^Cl^-C6)alkoxy.

* to ·· ··» · * ·»»<

• · · to ·« t to to · to* · «««» to < · » « »»»<»♦ * to ···« ·*<<

• · · · r · ·· ·· i to «·

- 6 Zvlášť výhodné sloučeniny mající předcházející obecnou strukturu zahrnují sloučeniny, kde R je methyl, ethyl nebo

2- hydroxyethyl.

Jiné výhodné sloučeniny vzorce 1 zahrnují sloučeniny, kde r! je hydroxy, R² je hydroxy, R⁴ je H a R² je vybrán z (C^-C^g)alkyl, (C₂-C^g)alkenyl a (C₂~C^g)alkinyl, kde uvedené R² skupiny jsou případně substituovány 1 nebo 2

6 7 substituenty nezávisle vybranými z hydroxy, -C(O)R , -NR R , halogen, kyan, azido, 5 až lOčlenný heteroaryl a (C^-Cg)alkoxy

Zvlášť výhodné sloučeniny mající předcházející obec, „ 3 nou strukturu zahrnuji sloučeniny, kde R je methyl, allyl, vinyl, ethinyl, 1-methyl-l-propenyl, 3-methoxy-l-propinyl,

3- dimethylamino-l-propinyl, 2-pyridylethinyl, 1-propinyl, 3-hydroxy-l-propinyl, 3-hydroxy-lpropenyl, 3-hydroxypropyl, 3-methoxy-l-propenyl, 3-methoxypropyl, 1-propinyl, n-butyl, ethyl, propyl, 2-hydroxyethyl, formyl^.methyl, 6-kyan-l-pentinyl, 3-dimethylamino-l-propenyl nebo 3-dimethylaminopropyl.

Jiné výhodné sloučeniny vzorce 1^ zahrnují ty, kde r! je hydroxy, R² je hydroxy, R⁴ je H a R² je -(CH₂)_m(5lOčlenný heteroaryl), kde m je celé číslo v rozmezí 0 až 4. Zvlášť výhodné sloučeniny mající předcházející obecnou , 3 strukturu zahrnuji ty, kde R je 2-thienyl, 2-pyridyl, 1methyl-2-imidazolylj2-f uryl nebo l-methyl-2-pyrrolyl.

Jiné výhodné sloučeniny vzorce 1 zahrnují ty, kde

2 4 3

R je hydroxy, R je hydroxy, R je H a R je ^-(^CH2^m~ ((Cg-C^g)aryl), kde m je celé číslo v rozmezí od 0 do 4.

Zvlášť výhodné sloučeniny mající předcházející obecnou stru> 3 kturu zahrnuji ty, kde R je fenyl.

Specifické sloučeniny vzorce 1 zahrnují ty, kde

3 _v

R a R jsou vzaty dohromady k vytvoření oxazolyloveho kruhu jak je uvedeno níže

kde r5 má výše uvedený význam.

R‘

Specifické sloučeniny vzorce 1 je vybrán z následujícího vzorce zahrnují ty, kde

15 o kde X je 0, S nebo -N(R )- a kde -OR^-7 skupina může být připojena k jakémukoli dostupnému uhlíku na fenylové skupině.

Vynález se také týká farmaceutické kompozice pro léčení bakteriální infekce nebo protozoické infekce u savců, ryb nebo ptáků, která obsahuje terapeuticky účinné množství sloučeniny vzorce 1_ nebo její farmaceutiacky akceptovatelné soli a farmaceuticky akceptovatelný nosič.

Vynález se také týká způsobu léčení bakteriální infekce nebo protozoické infekce u savců, ryb nebo ptáků, který zahrnuje podávání těmto savcům, rybám nebo ptákům, terapeuticky účinného množství sloučeniny vzorce ]L nebo její farmaceuticky akceptovatelné soli.

Výraz léčení jak je zde použit, pokud není označeno jinak, zahrnuje léčení nebo prevenci bakteriální infekce nebo protozoické infekce, jak je zajištěno ve způsobu tohoto vynálezu.

Jak je zde použito, pokud není stanoveno jinak, výrazy bakteriální infekce a protozoické infekce zahrnují bakteriální infekce a protozoické infekce, které se vyskytují u savců, ryb a ptáků, stejně jako poruchy vztažené k bakteriálním infekcím a protozoickým infekcím, které mohou být léčeny nebo předcházeny podáváním antibiotik jako jsou sloučeniny tohoto vynálezu.

Takovéto bakteriální infekce a protozoické infekce a poruchy vztažené k těmto infekcím zahrnují následující, jako je pneumonie, zánět středního ucha, sinusitida, bronchitida, tonsilitida a mastoiditida vztažené k infekci vyvolanou Streptococcus pneumoniae, Haemophilus influenzae, Moraxella catarrhalis, Staphylococcus aureus nebo Peptostreptococcus spp., faryngitida, reumatická horečka a glomerulonefritida vztažené k infekci vyvolané Streptococcus pyogenes, skupiny C a G streptokoků, Clostridium diptheriae, nebo Actinobacillus haemolyticum, infekce respiračního traktu vztažené k infekci vyvolané Mycoplasma pneumoniae, Legionella pneumophila, Streptococcus pneumoniae, Haemophilus influenzae, neboChlamydia pneumoniae, nekomplikované kožní infekce a infekce měkkých tkání, abscesy a osteomyelitidy a puerperální horečka, vztažené k infekci vyvolané Staphylococcus aureus, koagulasopozitivními stafylokoky (to je S. epidermidis, S. hemolyticus atd.), Streptococcus pyogenes, Streptococcus agalactiae, streptokokálními skupinami C-F (malobuněčnými streptokoky), viridantními streptokoky, Corynebacterium minutissimum, Clostridium spp. nebo Bartonella henselae, nekomplikované infekce močového traktu vztažené k infekci vyvolané Staphylococcus saprophyticus nebo Enterococcus spp., uretritida a cervicitida a sexuálně přenášené nemoci vztažené k infekci vyvolané Chlamydia trachomatis, Haemophilus ducreyi, Treponema pallidum, Ureaplasmá urealyticum nebo Neiserria gonorrheae, toxinové nemoci vztažené k infekci vyvolané S. aureus (otrava potravinami a syrd.rom toxického šoku) nebo skkupinami A, B a C streptokoků, vředy vztažené i infekci vyvolané Helicobacter pylori, systemické

- 9 febrilní syndromy vztažené k infekci vyvolané Borrelia recurrentis, Lymeská nemoc vztažená k infekci vyvolané Borrelia burgdorferi, konjuktivitida, keratitida a dakrocystitida, vztažené k infekci vyvolané Chlamydia trachomatis, Neisseria gonorrhoeae, S. aureus, S. pneumoniae, S. pyogenes, H. influenzae nebo Listeria spp., rozsevná mycobacterium avium komplexní (MAC) nemoc vztažená k infekci vyvolané Mycobacterium avium nebo Mycobacterium intracellulare, gastroenteritida vztažená k infekci vyvolané Campylobacter jejuni, intestinální protozoa vztažená k infekci Cryptosporidium spp, odontogenická infekce vztažená k infekci viridantními streptokoky, trvalý kašel vztažený k infekci vyvolné Bordetella pertussis, plynová gangréna vyvolaná infekcí Clostridium perfringens nebo Bacteroides spp., a aterosklerosa vztažená k infekci vyvolané Helicobacter pylori nebo Chlamydia pneumoniae.

Bakteriální infekce a protozoické infekce a poruchy vztažené k tomto infekcím, které mohou být léčeny nebo předcházeny u zvířat zahrnují následující infekce a poruchy: bovinní respirační nemoc vztaženou k infekci vyvolané P. haem., P. multocida, flycoplasma bovis nebo Bordetella spp., kravská enterická nemoc vztažená k infekci vyvolané E. coli nebo protozoy (to je kokcidii, kryptosporidii atd.), mastitida kravského vemene vztažená k infekci vyvolané Staph. aureus, Střep, ubejris, Střep, agalactiae, Střep, dysgalactiae, Klebsiella spp., Corynebacterium nebo Enterococcus spp., respirační nemoc vepřů vztažená k infekci vyvolané A. pleuro., P. multocida nebo Mycoplasma spp., enterická nemoc vepřů vztažená k infekci vyvolané E. coli, Lawsonia intracellularis, Salmonella nebo Serpulina hyodyisinteriae, kulhavka krav vztažená k infekci vyvolané Fusobacterium spp., metritida krav vztažená k infekci vyvolané E.coli, • · · · • » kravské bradavice vztažené k infekci vyvolané Fusobacterium necrophorum nebo Bacteroides nodosus, zánět spojivek krav vztažený k infekci vyvolané Moraxella bovis, předčasná aborce krav vztažená k infekci protozoy (například neosporium), infekce urinárního traktu u psů a koček vztažené k infekci vyvolané E. coli, infekce kůže a měkkých tkání u psů a koček vztažené k infekci vyvolané Staph. epidermidis, Staph. intermedius, coagulase neg. Staph. nebo P. multocida, a infekce zubů nebo dutiny ústní u psů a koček, vztažené k infekci vyvolané Alcaligenes spp., Bacteroides spp., Clostridium spp., Enterobacter spp., Eubacterium, Peptostreptococcus, Porphyromonas nebo Prevotella.

Jiné bakteriální infekce a protozoické infekce a poruchy vztažené k těmto infekcím, které mohou být léčeny nebo předcházeny způsobem tohoto vynálezu, jsou odkázány na J. P. Sanford a j., The Sanford Guide To Antimicrobial Therapy, 26. vydání, (Antimicrobial Therapy, lne., 1996).

Předložený vynález se také týká způsobu přípravy výše uvedené sloučeniny vzorce ,1 nebo její farmaceuticky o 8 8 akceptovatelné soli, kde R je -CH„S(O) R , -CH„OR nebo

15 15 8 ^{z 11}

-CH_NR°R^J’³, kde η , R a R mají výše uvedený význam,

3 8 za podmínky, že R není H, když R je -Cl^SÍO)^ , který zahrnuje zpracování sloučeniny vzorce 5

o • » • ·

- 11 1 4 , kde R a R mají výše uvedený význam

8 15 8 se sloučeninou vzorce HSR , HOR nebo HNR R , kde n ,

R a R mají výše uvedený význam,

Q načež případně následuje oxidace -SR substituentu, čímž se vytvoří -S(O)R® nebo -S(O)₂R^.

V dalším aspektu výše uvedeného způsobu přípravy sloučeniny vzorce 1 nebo její farmaceuticky akceptovatelné soli, se výše uvedená sloučenina vzorce 5_ připraví zpracováním sloučeniny vzorce 4_

kde

R a R mají výše uvedený význam,

2 s(CH₃)₃S(O)_nX , kde n je 0 nebo 1 a X je halogen, -BF^ nebo -ΡΓθ, výhodně jod nebo -BF^, v přítomnosti zásady jako je terc.butoxia draselný, tec.butoxid sodný, ethoxid sodný, hydrid sodný, 1,1,3,3-tetramethyl guanidin, l,8-diazabicyklo[5,4,cQundec-7-en, 1,5-diazabicyklo [4,3,θ]non-5-en, hexamethyldisilazid draselný (KHMDS), ethoxid draselný nebo methoxid sodný, výhodně KHMDS nebo zásady obsahující sodík jako je hydrid sodný.

Předložený vynález se také týká výše uvedených slou9 ·

- 12 cenin vzorců 4 a _5 které, jak je označeno výše, jsou užitečné při přípravě výše uvedených sloučenin vzorce _1 a jejich farmaceuticky akceptovatelných solí.

Výraz chránící skupina hydroxy jak je zde použit, pokud není označeno jinak, zahrnuje acetyl, benzyloxykarbonyl a různé chránící skupiny hydroxy, dobře známé odborníkům v oboru, včetně skupin uvedených v T.W.Greene, P.G.M.Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, (J.Wiley and Sons, 1991) .

Výraz halogen jak je zde použit, pokud není stanoveno jinak, zahrnuje fluor, chlor, brom nebo jod.

Výraz alkyl, jak je zde použit, pokud není označeno jinak, zahrnuje nasycené monovalentní uhlovodíkové skupiny mající nerozvětvenou, cyklickou nebo rozvětvenou část, nebo jejich směsi. Je třeba rozumět, že když jsou uvažovány cyklické skupiny, alespoň 3 uhlíky v uvedeném alkylu musí být přítomny. Takové cyklické skupiny zahrnují cyklopropyl, cyklobutyl a cyklopentyl. Výraz alkoxy jak je zde použit, pokud není označeno jinak, zahrnuje -O-alkylové skupiny, kde alkyl má výše uvedený význam.

Výraz aryl jak je zde použit, pokud není označeno jinak, zahrnuje organickou skupinu odvozenou od aromatického uhlovodíku odstraněním vodíku, jako je fenyl nebo naftyl.

Výraz 5 až lOčlenný heteroaryl jak je zde použit, pokud není označeno jinak, zahrnuje aromatické heterocyklické skupiny obsahující 1 nebo více heteroatomů, z nichž každý je vybrán z O, S a N, přičemž každá heterocyklické skupina má od 5 do 10 atomů ve svém kruhovém systému. Příklady vhodných 5 až lOčlenných heteroarylových skupin zahrnují pyridinyl, imidazolyl, pyrimidinyl, pyrazolyl, (1,2,3)- a (1,2,4)— triazolyl, pyrazinyl, tetrazolyl, furyl, thienyl, isoxazolyl, oxazolyl, pyrrolyl a thiazolyl.

Výraz farmaceuticky akceptovatelná sůl nebo farmaceuticky akceptovatelné soli jak je zde použit, pokud není označeno jinak, zahrnuje soli kyselých nebo zásaditých skupin, které mohou být přítomny ve sloučeninách tohoto vynálezu.

Sloučeniny tohoto vynálezu, které jsou ve své podstatě zásadité, jsou schopny tvořit širokou rozmanitost sloučenin s různými organickými a anorganickými kyselinami. Kyseliny, které mohou být použity k přípravě farmaceuticky akceptovatelných adičních solí s kyselinou těchto zásaditých sloučenin jsou ty, které tvoří netoxické adiční soli s kyselinou, to je soli obsahující farmakologicky akceptovatelné anionty, jako je hydrochloria, hydrobromid, hydrojodid, nitrát, sulfát, bisulfat, fosfát, kyselý fosfát, isonikotinat, acetat, laktat, salicylat, citrát, kyselý citrát, tartarat, pantothenat, bitartarat, askorbat, sukcinat, maleat, gentisinat, fumarat, glukonat, glukaronat, sacharat, formát, benzoat, glutamat, methansulfonat, ethansulfonat, benzensulfonat, p-toluensulfonat a pamoatové (to je 1,1'-methylenbis(2-hydroxy-3-naftoatové)) soli. Sloučeniny tohoto vynálezu, které zahrnují aminoskupiny, mohou tvořit farmaceuticky akceptovatelné soli s různými aminokyselinami, navíc k výše uvedeným kyselinám.

Ty sloučeniny tohoto vynlezu, které jsou ve své povaze kyselé, jsou schopny tvořit zásadité soli s různými farmakologicky akceptovatelnými kationty. Příklady takovýchto solí zahrnují soli alkalických kovů nebo kovů alkalických zemin a zejména vápníku, hořčíku, sodíku a draslíku pro sloučeniny tohoto vynálezu.

Určité sloučeniny tohoto vynálezu mohou mít asymetrická centra a tudíž existují v různých enantiomerních a diastereoisomerních formách. Tento vynález se týká použití • · · · • · · · ♦ · • · všech optických isomerů a stereoisomerů sloučenin tohoto vynálezu a jejich směsí a všech farmaceutických kompozic a způsobů léčení, které je mohou využívat a obsahovat.

Předložený vynález zahrnuje sloučeniny tohoto vynálezu a jejich farmaceuticky akceptovatelné soli, kde jeden nebo více vodíků, uhlík nebo jiné atomy jsou nahrazeny jejich isotopy. Takovéto sloučeniny mohou být užitečné jako výzkumné a diagnostické nástroje při farmakokinetických studiích metabolismu a při vazebních zkouškách.

Detailní popis vynálezu

Sloučeniny tohoto vynálezu mohou být připraveny podle schématu 1 až 3 uvedených dále a popisu, který následuje.

• ·

- 15 Schéma 1

• · pokračování schématu 1

o • · · · • · » ·

- 17 Schéma 2

• «

- 18 Schéma 3

• · ·

- 19 pokračování schématu 3

^,ř

• ·

- 20 pokračování schématu 3

SH

o

Sloučeniny předloženého vynálezu se snadno připraví. Pokud jde o schémata uvedená výše, výchozí sloučenina vzorce 2_ může být připravena podle jedné nebo více metod dobře známých odborníkům v oboru včetně syntézních metod popsaných v US patentech 4 474 758 a 4 517 359, které byly uvedeny výše.

Ve stupni 1 schématu 1, C-2' hydroxy skupina může být selektivně chráněna zpracováním sloučeniny vzorce 2_ s jedním ekvivalentem acetanhydridu v dichlormethanu v nepřítomnosti vnější zásady, čímž se vytvoří sloučenina vzorce 3_, kde R¹ je acetyl. Chrániči skupina acetylu může být odstraněna zpracováním sloučeniny vzorce 3_ s methanolem při 23 až 65 °C po dobu 10 až 48 hodin. C-2' hydroxyskupina může být také chráněna jinými chránícími skupinami hydroxy dobře známými odborníkům v oboru, jako je benzyloxykarbonylová (Cbz) skupina

C-9a aminoskupina může také vyžadovat ochranu před provedením dalších syntézních modifikací. Vhodné chránící skupiny pro aminoskupinu jsou Cbz a t-butyloxykarbonylové (Boc) skupiny. X chránění C-9a aminoskupiny může být makrolid zpracován s t-butyldikarbonatem v bezvodém tetrahydrofuranu (TI-IF) nebo benzyloxykarbonyl-N-hydroxysukcinimidesterem nebo benzylchlorformatem k ochraně aminoskupiny jako jejího tbutyl nebo benzylkarbamatu. Jak C-9a amino, tak C-2' hydroxy skupina mohou být chráněny Cbz skupinou v jednom stupni zpraco váním sloučeniny vzorce 2_ s benzylchlorformatem v THF a vodě.

Boc skupina může být odstraněna kyselým zpracováním a Cbz skupina může být odstraněna konvenční katalytickou hydrogenací. V následujícím popisu se předpokládá, že C-9a aminoskupina a C-2' hydroxyskupina jsou chráněny a deprotektovány jak by považovali za vhodné odborníci v oboru.

Ve stupni 2 schématu 1 C-4 hydroxyskupina sloučeniny vzorce 3 se oxiduje na odpovídající keton způsoby známými

- 22 odborníkům v oboru včetně jedné nebo více metod popsaných v Journal of Antibiotics, 1988, str. 1029-1047.

Například keton vzorce £ může být připraven s DMSO a vhodným aktivačním prostředkem. Typické reakční podmínky pro oxidaci zahrnují:

(a) Moffattovu oxidaci, která využívá N-ethyl-N'-(N,N-dimethyl aminopropyl)karbodiimid a DMSO v přítomnosti pyridiniumtrifluoracetátu, nebo (b) Swernovu oxidaci, při které oxalylchlorid a DMSO v Cí-^C^ je následován přídavkem triethylaminu nebo alternativně anhydrid kyseliny octové a DMSO v Cí^C^ je následováno přídavkem triethylaminu.

Ve stupni 3 schématu 1 se sloučenina vzorce 4_ zpracuje

13 1 1

R MgX nebo R -Li a Mg(X ) kde X je halogenid jako je chlorid nebo bromid v rozpouštědle jako je THF, ethylenglykoldimethylether (DME), diisopropylether, toluen, diethylether nebo tetramethylethylendiamin (TMEDA), hexany nebo směs dvou nebo více předcházejících rozpouštědel, výhodně etherovém rozpouštědle, při teplotě v rozmezí od asi -78 °C do asi teploty místnosti (20 až 25 °C), čímž se vytvoří sloučenina vzorce 1, kde R² je hydroxy a r\ R^ a R⁴ mají výše uvedený význam.

Schéma 2 znázorňuje přípravu sloučenin vzorce £ za použití epoxidového meziproduktu. Ve stupni 1 schématu 2 může být sloučenina vzorce _5 vytvořena dvěma způsoby.

Při jednom způsobu (způsob A) se sloučenina vzorce 2 2 zpracuje s (CH^)^ s (O)X , kde X je halogen, -BF^ nebo -PFg, výhodně jod, v přítomnosti zásady jako je terc.butoxid draselný, ethoxid sodný, terc.butoxid sodný, hydrid sodný, 1,1,3,3-tetramethylguanidin, 1,8-diazabicyklo[5,4,0]undec7-en, 1,5-diazabicyklo[4,3,0]non-5-en, ethoxid draselný, nebo methoxid sodný, výhodně sodík obsahující zásada, jako • · ·

- 23 je hydrid sodný, v rozpouštědle jako je THF, etherové rozpouštědlo, dimethylformamid (DMF) nebo methylsulfoxid (DMSO) nebo směs dvou nebo více předcházejících rozpouštědel při teplotě v rozmezí asi 0 °C až asi 60 °C, čímž se vytvoří sloučenina vzorce 5 ve které převažuje následující konfigurace epoxidové skupiny

Při druhém způsobu (způsob Β) , sloučenina vzorce 2 2

4_ se zpracuje s (CHg)gSX , kde X je halogen, -BF^ nebo -PFg, výhodně -BF^, v přítomnosti zásady, jako je terc.butoxid draselný, terc.butoxid sodný, ethoxid sodný, hydrid sodný, 1,1,3,3-tetramethylguanidin, 1,8-diazabicyklo [5,4,o]undefr-7-en, l,5-diazabicyklo[4,3,0jnon-5-en, ethoxid draselný, hexamethyldisilazid draselný (KHMDS) nebo methoxid sodný, výhodně KHMDS, v rozpouštědle jako je THF, etherové rozpouštědlo, DMF nebo DMSO nebo směs dvou nebo více předcházejících rozpouštědel, při teplotě v rozmezí-78 °C až asi 60 °C, čímž se vytvoří sloučenina vzorce 5 kde převažuje následující uspořádání epoxidové skupiny

X. ,O..CH_S ...o

H.CO CH,

Ve stupni 2 schématu 2 sloučenina vzorce 5 může být 2 ^— převedena na sloučeninu vzorce _1, kde R je hydroxy a , , „

R je skupina, která je připojena k C-4 uhlíku pres methy3 15 8 lenovou skupinu, stejně jako kde R je -CH,NR R nebo 8 15 8

-CH2S(O)_nR , kde n , R a R mají výše uvedený význam.

15 8

K přípravě sloučeniny vzorce 1^, kde R je -CH^NR R sloučenina vzorce 5 může být zpracována se sloučeninou vzorce ΗΝΕ^Κθ, kde R^±5 a R⁸ mají výše uvedený význam, v nepřítomnosti nebo přítomnosti polárního rozpouštědla jako je voda, methanol nebo THF nebo směs předcházejících rozpouštědel, při teplotě v rozmezí od asi teploty místnosti do asi 100 °C, výhodně asi 60 °C, případně v přítomnosti halogenidového reagentu, jako je jodid draselný, chloristan lithný, chloristan hořečnatý, tetrafluorborat lithný, pyridiniumhydrochlorid nebo tetraalkyamoniumhalogenidové činidlo jako je tetrabutylamoniumjodid.

8

K přípravě sloučeniny vzorce 1^, kde R je -CÍI„S(O) R , 8 2 n kde II a R mají výše uvedený význam, se sloučenina vzorce g

_5 může zpracovat se sloučeninou vzorce IISR v přítomnosti I^CO^, XI nebo methoxidu sodného v aromatickém rozpouštědle jako je methanol, benzen nebo toluen při teplotě v rozmezí asi teploty místnosti do asi 120 °C. Jak je vhodné, sírová skupina může být oxidována na -SO- nebo -SC>2“ způsoby známými odborníkům v oboru.

8

K přípravě sloučeniny vzorce 1^, kde R je -Cí^SR a R⁸ je -(CH9) CR¹¹R'^L2 (CH9) NR¹³R'^L4, kde substituenty skupi8 *5 O t ny R jsou definovány výše, může být sloučenina vzorce 5 1112 ~' zoracovana se sloučeninou vzorce HS-(CH_O) CR “R (CH„) * 2 q 2 r

HPhth, kde NPhth představuje ftalimido, a jodidem draselným, cimz se vytvoří sloučenina vzorce 1_, kde R je -CH2S(Ch^T2)gCR^'''R^²(CH2)_rIIK2< P° odstranění ftalimidové skupiny, může být dále modifikována jak je potřeba.

Při analogickém způsobu sloučenina vzorce 1 • ·9 · • · • ·

- 25 kde R³ je -CH2NR¹⁵R⁸ a R⁸ je -(CH2)_gCR¹¹R¹²(CH₂)_rNR¹³R¹⁴, může být připravena zpracováním sloučeniny vzorce 5_ s bučí sloučeninou vzorce HNR⁹-(CH„) CR¹^¹² (CH₉) -NR¹³R¹⁴ nebo

- 11 12 ^r se sloučeninou vzorce H_nN-(CH„) CR R (CH„) -NII_n, načež z . zq z r z následuje redukční alkylace atomů dusíku.

Za použití stejné nebo analogické metody může být 3 8 8 připravena sloučenina vzorce 1_, kde R je -CH₂OR a R má výše uvedený význam, zpracování sloučeniny vzorce 5_ se sloug čeninou vzorce HOR .

Schéma 3 znázorňuje přípravu sloučenin vzorce 1, _ 2 3 ve kterem R a R jsou vzaty dohromady k vytvoření oxazolylové skupiny. Ve stupni 1 schématu 3 se sloučenina vzorce 5^ zpracuje s azidem sodným v přítomnosti NH Cl v methanolu nebo vodě nebo ve směsi dvou rozpouštědel při teplotě v rozmezí od asi 0 °C do asi 100 °C, výhodně asi 80 °C, čímž se vytvoří sloučenina vzorce J5

Ve stupni 2 schématu 3 může být sloučenina vzorce

6_ převedena na odpovídající amin vzorce 7_ pomocí běžné kataly· tické hvdrogenace. Výhodně se tato hydrogenace provede za použití Pd (10%ní na uhlíku) prášku pod H₂ atomosférou /latm/

Výsledný amin vzorce 7 může být převeden na různé sloučeniny 3 15 8 vzorce 1, kde R je -CH^JR R za použití konvenčních syntezních metod jako je redukční aminace.

Ve stupni 3 schématu 3 sloučenina vzorce 1_ může být 2 3 převedena na sloučeninu vzorce 1, kde R a R jsou vzaty dohromady, jak je znázorněno při zpracování sloučeniny vzorce 5 5 5 se sloučeninou vzorce R -CN, R -C=N(OCH^), R -C=N(OC₉He),

R -C(O)C1, nebo R -COOH, kde R má výše uvedený význam, s výjimkou, že není NH₂, v přítomnosti nebo nepřítomnosti kyseliny jako je HC1 nebo Lewisova kyselina, jako je ZnCl₂ • · * · » · * «

·· ·· ·· ··

- 25 nebo BF^EtgO nebo zásady jako je NaOH nebo TEA v rozpouštědle jako je THF, chlorovaný uhlovodík (jako je CH2CI2 nebo chlorbenzen) při teplotě v rozmezí od asi teploty místnosti k refluxu.

Při přípravě odpovídající sloučeniny, kde R je amino, sloučenina vzorce Í5 se zpracuje s BrCN a octanem sodným v methanolu při teplotě v rozmezí od asi teploty místnosti k refluxu.

V alternativním případě se sloučenina vzorce 7_ může zpracovat jak je označeno ve stupních 4 a 5 schématu 3.

Ve stupni 4 schématu 3 se sloučenina vzorce 1_ zpracuje s thiokarbonyldiimidazolem v methylenchloridu při teplotě v rozmezí od asi 0 °C do teploty místnosti, čímž se vytvoří sloučenina vzorce 13 . Ve stupni 5 schématu 3 se sloučenina

1 1 vzorce 13 zpracuje s R -X , kde X je halogenid jako je brom nebo jod, a zásadou jako je methoxid sodný v rozpouštědle jako je methanol nebo aceton nebo jejich směs, při teplotě v rozmezí od 0 °C_do teploty místnosti.

Sloučeniny předloženého vynálezu mohou mít asymetrické atomy uhlíku a tudíž existují v různých enantiomerních a diastereoisomerních formách. Diastereoisomerní směsi mohou být odděleny na své jednotlivé diastereoisomery na základě jejich fyzikálně chemických rozdílů způsoby známými odborníkům v oboru, například chromatografií nebo frakční krystalizací. Enantiomery mohou být odděleny převedením enantiomerních směsí na diastereoisomerní směs reakcí s vhodnou opticky aktivní sloučeninou, (například alkoholem), čímž se oddělí diastereoisomery a jednotlivé diastereoisomery se převedou (například hydrolýzou) na odpovídající čisté enantiomery.

- 27 Využití všech takovýchto isomerů, včetně diastereoisomerních směsí a čistých enantiomerů, se považuje za součást předloženého vynálezu.

Sloučeniny tohoto vynálezu, které jsou svou povahou zásadité, jsou schopné vytvářet rozsáhlé množství rozdílných solí s různými anorganickými a organickými kyselinami. Ačkoli takovéto soli musí být farmaceuticky akceptovatelné pro podávání savcům, je často žádoucí v praxi zpočátku izolovat sloučeninu tohoto vynálezu z reakční směsi jako farmaceuticky neakceptovatelnou sůl a pak jednoduše převést tuto sůl zpět na sloučeninu ve formě volné báze zpracováním s alkalickým reagentem a následně převést tuto volnou bázi na farmaceuticky akceptovatelnou adiční sůl s kyselinou.

Adiční soli s kyselinou zásaditých sloučenin tohoto vynálezu se snadno připraví zpracováním zásadité sloučeniny s v podstatě ekvivalentním množstvínizvolené minerální nebo organické kyseliny ve vodném rozpouštědlovém mediu nebo ve vhodném organickém rozpouštědle jako je methanol nebo ethanol. Po pečlivém odpaření rozpouštědla se snadno získá požadovaná tuhá sůl. Požadovaná sůl může být také vysrážena z roztoku volné báze v organickém rozpouštědle přídavkem roztoku ve vhodné minerální nebo organické kyselině.

Ty sloučeniny předloženého vynálezu, které mají kyselou povahu, jsou schopny tvořit zásadité soli s různými kationty. Pro sloučeniny, které mají být podávány savcům, rybám nebo ptákům musí být takovéto soli farmaceuticky akceptovatelné .

Tam, kde se požaduje farmaceuticky akceptovatelná sůl, může být žádoucí zpočátku izolovat sloučeninu tohoto vynálezu z reakční směsi jako farmaceuticky neakceptovatelnou sůl a pak jednoduše převést tuto sůl na farmaceuticky akceptovatelnou sůl v postupu analogickému postupu popsanému

- 28 4444 * * ···· 99 ·9 · ·».·*♦ « 9 4 4 * · ’ * ««· i, fc · · < w · « * r · * « » * • 4 9 *4 *4 » · 9 9 výše ve vztahu ke konverzi farmaceuticky neakcetovatelné adiční soli s kyselinou na farmaceuticky akceptovatelnou sůl.

Příklady zásaditých solí zahrnují soli alkalického kovu nebo soli kovu alkalických zemin a zejména sodné, aminové a draselné soli. Tyto soli se všechny připraví konvenčními postupy. Chemické báze, které se použijí jako reagenty k přípravě farmaceuticky akceptovatelných zásaditých solí tohoto vynálezu jsou ty, které tvoří netoxické zásadité soli s kyselými sloučeninami tohoto vynálezu. Takovéto netoxické zásadité soli zahrnují ty, které jsou odvozeny od farmaceuticky akceptovatelných kationtů, jako jsou sodík, draslík, vápník, hořčík, různé aminové kationty atd.

Tyto soli mohou být snadno připraveny zpracováním odpovídajících kyselých sloučenin s vodným roztokem obsahujícím požadované farmaceuticky akceptovatelné báze s kationty jako je sodík, draslík, vápník, hořčík, různé aminové kationty atd., a pak se výsledný roztok odpaří do sucha, výhodně za sníženého tlaku.

Alternativně mohou být připraveny smícháním nižších alkanolických roztoků kyselých sloučenin a společně požadovaného alkoxidu alkalického kovu a pak odpařením výsledného roztoku do sucha stejným způsobem jako dříve. V každém případě stechiometrická množství reagentů se výhodně použijí, aby se zajistila kompletnost reakce a maximální výtěžky požadovaného finálního produktu.

Antibakteriální a antiprotozoická aktivita sloučenin tohoto vynálezu vůči bakteriálním a protozoálním patogenům je demonstrována schopností sloučenin inhibovat růst definovaných kmenů lidských (zkouška I) nebo živočišných (zkoušky II a III) patogenů.

-29 Zkouška I

Zkouška I popsaná dále, využívá konvenční metodologie a interpretačních kritérií a je určena k zajištění usměrnění pro chemické modifikace, které mohou vést ke sloučeninám, které obcházejí definované mechanizmy makrolidové rezistence.

Ve zkoušce I je ustaven panel bakteriálních kmenů k zajištění různých cílových patogenních druhů včetně reprezentantů mechanizmů makrolidové rezistence, které byly vyznačeny. Použití tohoto panelu umožňuje určení vztahu chemická struktura/aktivita s ohledem na potenci, spektrum aktivity a strukturální elementy nebo modifikace, které mohou být nutné k odstranění rezistenčních mechanizmů.

Bakteriální patogeny, které zahrnují skríningový panel jsou uvedeny v následující tabulce. V mnoha případech jak makrolidové citlivý mateřský kmen a makrolidové rezistentní kmen z něho odvozené jsou dostupné k vytvoření přesnějšího vyzkoušení schopnosti sloučenin obejít rezistenční mechanizmus. Kmeny, které obsahují gen s označením ermA/ermB/ermC jsou rezistentní vůči makrolidům, linkosamidům a streptograminu B, jako antibiotikum, vlivem modifikací (methylace) 23S rRNA molekul Erm methylasou, čímž se obecné zabrání vazbě všech tří strukturálních tříd.

Byly popsány dva typy makrolidového efluxu, msrA kóduje komponentu efluxního systému u stafylokoků, který brání vstupu makrolidů a streptograminů, zatímco mefA/E kóduje transmembránový protein, který vede jen k efluxu makrolidů. Inaktivace makrolidových antibiotik se může vyskytnout a může být zprostředkována buá fosforylaci 2'-hydroxylu (mph) nebo štěpením makrocyklického laktonu (esterasou).

Tyto kmeny mohou být charakterizovány pomocí konven- 30 ční polymerasové řetězové reakční (PCR) technologie a/nebo sekvencováním rezistenčního determinantu. Použití PCR technologie v této přihlášce je popsáno v J. Sutcliffe a j., Detection oř Erythromycin-Resistant Determinants by PCR, Antimicrobial Agents and Chemotherapy, 40(11), 2562-2566 (1966) .

Zkouška se provádí v mikrotitračních miskách a je interpretována podle Performance Standards for Antimicrobial Disk Susceptibility Tests - 6. vydání, Approved Standard, publikované The National Committee for Clinical Laboratory Standards (NCCLS) Guidelines, přičemž se používá minimální koncentrace inhibitoru (MIC) pro porovnání kmenů. Sloučeniny se nejdříve rozpustí v dimethylsulfoxidu (DMSO) jako 40 mg/nl zásobní roztoky.

Označení kmene

Mechanizmy makrolidové rezistence

Staphylococcus

Staphylococcus

Staphylococcus

Staphylococcus

Staphylococcus

Staphylococcus

Streptococcus

Streptococcus

Streptococcus

Streptococcus

Streptococcus

Streptococcus

Streptococcus

Streptococcus

Streptococcus

Streptococcus

aureus 1116	citlivý mateřský
aureus 1117	ermB
aureus 0052	citlivý mateřský
aureus 1120	ermC
aureus 1032	msrA, mph, estera
hemolyticus 1006	msrA, mph
pyogenes 0203	citlivý mateřský
pyogenes 1079	ermB
pyogenes 1062	citlivý mateřský
pyogenes 1061	ermB
pyogenes 1064	ermB
agalactiae 1024	citlivý mateřský
agalactiae 1023	ermB
pneumoniae 1016	citlivý
pneumoniae 1046	ermB
pneumoniae 1095	ermB

• · · ·

- 31 pokračování tabulky

Označení kmene

Mechanizmy makrolidové rezistence

Streptococcus pneumoniae 1175 Streptococcus pneumoniae 0085 I-Iaemophylus influenzae 0131 Moraxella catarrhalis 0040 Moraxella catarrhalis 1055 Escherichia coli 0266 mef E citlivý citlivý citlivý erythrcmycinová střední rezistence citlivý

Zkouška II je použita k testování aktivity vůči Pasteurella multocida a zkouška III je využita k testování aktivity vůči Pasteurella haemolytica.

Zkouška II

Tato zkouška je založena na kapalinové zřeóovací metodě v mikrolitrovšm formátu. Jedna kolonie P.multocida (kmen 59A067) se inokuluje do 5 ml mozkosrdečního infuzního (BHI) bujónu. Zkoušené sloučeniny se připraví rozpuštěním mg sloučeniny ve 125 mikrolitrech dimethylsulfoxidu (DMSO).

Zředění testované sloučeniny se připraví pomocí inokulovaného

BHI bujónu. Použitý rozsah koncentrací zkoušené sloučeniny je od 200 mikrogramů/ml do 0,098 mikrogramu/ml dvojnásobným postupným zředěním. BHI inokulovaný P. multocida se zředí 4 neinokulovaným BHI bujónem, čímž se získá suspenze 10 buněk na 200 mikrolitrů. BHI buněčné suspenze se smíchají s ohledem na postupná zředění zkoušené sloučeniny a inkubují při 37°C po dobu 18 hodin. Minimální inhibiční koncentrace (MIC) je rovná koncentraci sloučeniny vykazující 100%ní inhibici růstu P. multocida, jak je určeno srovnáním s neinokulovanou kontrolou.

Zkouška III

Tato zkouška je založena na agarové zřečlovací metodě ♦ · · • ♦ ·

za použití Steers Replicatoru. Dva až pět kolonií izolovaných z agarové plotny se inokuluje do BHI bujónu a inkubuje přes noc při 37 °C za třepání (200 otáček/min). Příští ráno se inokuluje 300 mikrolitrů plně narostlé prekultury P. haemolytica do 3 ml čerstvého BHI bujónu a inkubuje se při 37°C za třepání (200 otáček za minutu).

Příslušné množství testovaných sloučenin se rozpustí v ethanolu a připraví se série dvojnásobných postupných zředění. Dva ml příslušného postupného zředění se smíchají s 18 ml roztaveného BHI agaru a nechají ztuhnout. Když inokulovaná kultura P. heamolytica dosáhne 0,5 Mc Farlandovy standardní hustoty, asi 5 mikrolitrů kultury P. haemolytica se inokuluje na BHI agarové plotny obsahující různé koncentrace testované sloučeniny za použití Steers Replicatoru a inkubuje se po dobu 18 hodin při teplotě 37 °C. Počáteční koncentrace testované sloučeniny je v rozmezí od 100 do 200 mikrogramů/ml. MIC odpovídá koncentraci testované sloučeniny vykazující 100%ní inhibici růstu P. haemolytica jak je určeno srovnáním s neinokulovanou kontrolou.

In vivo aktivita sloučenin vzorce 1 může být určena konvenčními živočišnými ochrannými studiemi dobře známými odborníkům v oboru, obvykle prováděnými na myších.

Myši se rozdělí do klecí (10 na klec) po jejich dodání a ponechají se aklimatizovat po dobu minimálně 48 hodin předtím, než se použijí. Zvířata se naočkují 0,5 ml 3.10 CFU/ml bakteriální suspenze (P.multocida kmen 59A006) intraperitoneálně. Každý experiment má alespoň 3 nemedikované kontrolní skupiny včetně jedné infikované 0,lnásobnou podnětnou dávkou a dvou infikovaných lnásobnou podnětnou dávkou, skupina s lOnásobnou podnětnou dávkou může být také použita.

Obecně všechny myši v dané studii mohou být podníceny během 30 až 90 minut, zejména když se použije opětovné

- 33 R injekční stříkačky jako je Cornwall stříkačka k podávání podnětu.

minut po zahájení podnětu se podává první léčebná sloučenina. Může být nutné, aby druhá osoba začala dávkování této sloučeniny, když všechna zvířata nebyla podnícena na konci 30 minut. Cesty podávání jsou subkutánní nebo orální dávky. Subkutánní dávky se podávají do volné kůže vzadu na krku, zatímco orální dávky se podávají krmnou jehlou.

V obou případech se použije objem 0,2 ml na myš. Sloučeniny se podávají 30 minut, 4 hodiny a 24 hodiny po podnětu. Kontrolní sloučenina známé účinnosti se podává stejnou cestou a je začleněna v každém testu. Zvířata se prohlížejí denně a počet přeživších v každé skupině se zaznamená. P.multocida modelové monitorování pokračuje po dobu 95 hodin (4 dny) po podnětu.

Ρϋ,-θ je vypočtená dávka, při které zkoušená sloučenina chrání 50 £ skupiny myší od úmrtí vlivem bakteriální infekce, která by byla letální v nepřítomnosti léčení touto drogou.

Sloučeniny vzorce 1_ a jejich farmaceuticky akceptovatelné soli (zde aktivní sloučeniny) mohou být podávány orální , parenterální, topickou, nebo rektální cestou při léčení bakteriálních a protozoických infekcí. Obecně tyto sloučeniny se nejlépe podávají v dávkách v rozmezí od asi 0,2 mg na kg tělesné hmotnosti za den (mg/kg/den) do asi 200 mg/kg/den v jedné nebo rozdělených dávkách (to je od 1 do 4 dávek na den), ačkoli se nutně vyskytnou změny v závislosti na druhu, hmotnosti a stavu subjektu, který má být léčen a na příslušném způsobu zvoleného podávání. Avšak dávkovači úroveň, která je v rozmezí asi 4 mg/kg/den do asi 50 mg/kg/den se využívá nejčastěji.

Variace se mohou přesto vyskytnout v závislosti • ·

- 34 na druhu savce, ryby nebo ptáka, kteří mají být léčeni a na jejich individuální odezvě k uvedenému léčivu, stejně jako na typu farmaceutické formulace, která byla zvolena a časové periodě a intervalu, při kterých se takovéto podávání provádí. V některých případech dávkovači úrovně pod spodní limit výše uvedeného rozmezí mohou být více než odpovídající, zatímco v jiných případech ještě větší dávky mohou být použity bez vyvolání jakýchkoli škodlivých postranních účinků za předpokladu, že takovéto větší dávky jsou nejdříve rozděleny do několika malých dávek pro podávání během dne.

Aktivní sloučeniny mohou být podávány samotné nebo v kombinaci s farmaceuticky akceptovatelnými nosiči nebo ředidly dříve uvedenými způsoby a takovéto podávání se může provádět v jedné nebo více dávkách. Zejména tyto aktivní sloučeniny mohou být podávány v široké rozmanitosti různých dávkovačích forem, to znamená, že mohou být kombinovány s různými farmaceuticky akceptovatelnými inertními nosiči ve formě tablet, tobolek, pastilek, pilulek, tvrdých bonbonů, prášků, postřiků, krémů, balzámů, čípků, želé, gelů, past, roztoků, mastí, vodných suspenzí, injektovatelných roztoků, elixírů, sirupů a podobně. Takovéto nosiče zahrnují tuhá ředidla nebo plniva, sterilní vodná media a různá netoxická organická rozpouštědla a tak dále. Navíc orální farmaceutické kompozice mohou být vhodně oslazeny a/nebo ochuceny. Obecně aktivní sloučeniny jsou přítomny v takových dávkovačích formách a koncentračních úrovních v rozmezí od asi 5,0 % do asi 70 % hmotnostních.

Pro orální podávání se mohou použít tablety obsahující různé excipienty, jako je mikrokrystalická celulosa, citran sodný, uhličitan vápenatý, fosforečnan dvojvápenatý

- 35 a glycin, spolu s různými dezintegranty jako je škrob (a výhodně kukuřičný, bramborový nebo tapiokový škrob), alginová kyselina a různé komplexní silikáty, spolu s granulačními pojivý jako je polyvinylpyrrolidon, sacharosa, želatina a akácie. Navíc jsou užitečné lubrikační prostředky jako je stearan hořečnatý, laurylsíran sodný a talek pro tabletovací účely. Tuhé kompozice podobného typu mohou být také použity jako plniva v želatinových tobolkách, výhodné látky v tomto spojení také zahrnují laktosu nebo mléčný cukr stejně jako vysokomolekulární polyethylenglykoly.

Když jsou požadovány vodné suspenze a/nebo elixíry pro orální podávání, aktivní sloučenina může být kombinována s různými sladidly nebo vonnými prostředky, barvicími látkami nebo barvivý a když je třeba, emulgačními a/nebo suspsndačními prostředky společně s takovými ředidly jako je voda, ethanol, propylenglykol, glycerin a různé jejich kombinace.

Pro parenterální podávání mohou být použity roztoky aktivní sloučeniny v bučí sezamovém nebo arašídovém oleji nebo ve vodném propylenglykolu.

Vodné roztoky by měly být vhodně pufrovány (výhodně pH vyšší než 8), když je to nutné, a kapalné ředidlo by mělo nejdříve být isotonizováno. Tyto vodné roztoky jsou vhodné pro intravenózní injekční účely. Olejové roztoky jsou vhodné pro intraartikulární, intramuskulární a subkutánní injekční účely. Příprava všech těchto roztoků za steril nich podmínek se snadno provádí standardními farmaceutickými technikami dobře známými odborníkům v oboru.

Dále je možné podávat aktivní sloučeniny tohoto vynálezu topicky a to může být prováděno pomocí krémů, rosolů, gelů, past, váčků, mastí a podobně podle standardní farmaceutické praxe.

• «

- 36 Pro podávání živočichům jiným než je člověk, jako je dobytek nebo domácí zvířata, aktivní sloučeniny mohou být podávány v krmivu zvířat nebo orálně v picích směsích.

Aktivní sloučeniny mohou být také podávány ve formě liposomních dávkovačích systémů, jako jsou malé unilamelární vesikuly, velké unilamelární vesikuly a multilamelární vesikuly. Liposomy mohou být vytvořeny z různých fosfolipidů jako je cholesterol, stearylamin nebo fosfatidylcholiny.

Aktivní sloučeniny mohou být také sdruženy s rozpustnými polymery jako cílenými nosiči léčiva. Takovéto polymery mohou zahrnovat polyvinylpyrrolidon, pyranový kopolymer, polyhydroxypropylmethakrylamid-fenol, polyhydroxyethylaspartamid-fenol nebo polyethylenoxidpolylysin substituovaný palmitoylovými residui.

Dále mohou být aktivní sloučeniny sdruženy do třídy biodegradovatelných polymerů užitečných při dosahování řízeného uvolňování léčiva, například s polymléčnou kyselinou, polyglykolovou kyselinou, kopolymery polymléčné a polyglykolové kyseliny, polyepsylon-kaprolaktonem, polyhydroxybutyrovou kyselinou, polyorthoestery, polyacetaly, polydihydropyrany, polykyanakrylaty a zesítěnými a amfipatickými blokovými kopolymery hydrogelů.

Příklady provedení vynálezu

Následující příklady provedení dále ilustrují způsob a meziprodukty tohoto vynálezu. Je třeba vědět, že předložený vynález není omezen na konkrétní detaily příkladů uvedených níže.

• « « ·

- 37 Tabulka 1

Sloučeniny z příkladu 1 až 32 mají obecný vzorec který je uveden níže s R substituenty označenými v následující tabulce. Sloučeniny byly připraveny níže jak je popsáno v přípravách 1 až 7. V tabulce jsou výtěžky a hmotnostní spektra (hmotn. spektrum) aplikovány ny konečný produkt.

• ·

R substituant	příprava	výtěžek Q, 'O	hmotn. spektrum
n-butylamino	1	48	820
2-methoxyethylamino	1	52	822
piparidino	1	51	832
morfolino	1	39	834
t-butylamino	1	23	821
banzylamino	1	34	854
cyklopantylamino	2	23	832
propylamino	2	11	806
anilino	1	21	841
2 -metho:rypropy lamino	1	46	835
azido	0	45	790
hexylamino	1	55	847
3-athoxypropylamino	1	52	851
diethylamino	2	53	821
N-methylbuty lamino	1	76	835
N-methylpropylamino	2	59	819
ethylamino	5	18	792
cyklopropylamino	2	50	804
ethylmethy lamino	2	92	806
2,2,2-trifluorethylamino	2	57	845
allylamino	1	59	804
2-hydroxyethylthio	5	44	825
dimathylamino	1	71	793
imidazol-l-yl	t\	42	315
bis (2-hydroxyethyl) amino	7	21	853
pyrrolidino	2	40	818
2 -hydro:cyethylmethy lamino	2	23	822
1,2,3-triazol-l-yl	4	59	817
2-propinylamino	2	51	802
2-methylimidazol-l-yl	£	14	829
diallylamino	2	29	844
1,2,4-triazol-l-yl	.1 5:	34	816

- 39 Způsoby přípravy pro tabulku 1

S odkazem na výše uvedené schéma sloučenina vzorce 11, kde R je H a R* je H (25 g (34,01 mmol, 1,0 ekviv.)) byla smíchána v roztoku s fenolovou červení v 250 ml THF a 125ml vody. Do tohoto růžového roztoku bylo pomalu přidáno 29 ml (204,1 mmol, 5,0 ekviv.) benzylchlorformatu a 2N NaOH, aby se udržel roztok zásaditý. Reakce byla ponechána míchat při teplotě místnosti přes noc. Reakční směs byla koncentrována k odstranění THF a vodná fáze byla nastavena na pH 9,5 a extrahována 3 x 500 ml EtOAc. Sloučené organické vrstvy byly promyty 500 ml solanky a pak vysušeny nad uhličitanem sodným. Filtrace, koncentrace filtrátu a vysušení poskytly surovou látku.

Další čištění bylo provedeno sloupcovou chromatografií (lOOSní methylenchlorid k odstranění nečistot a pak 5%ní

MeOH/CH₂Cl₂ k získání produktu), čímž se získalo 32,5 g (95 %) žlutavé tuhé látky, která byla sloučeninou vzorce 11 kde R a R⁴ byly oba Cbz (MS (FA3) m/z 1 003). 32,5 g (32,49 mmol, 1,0 ekv.) tohoto produktu bylo rozpuštěno v 215,5 ml methylenchloridu a 27,3 ml DMSO. Do tohoto roztoku bylo přidáno

21,2 g (110,5 mmol, 3,4 ekv.) EDC a 24,1 g (124,3 mmol, 3,3 ekv.) PTFA. Po míchání přes noc byla reakce zchlazena 150 ml vody a pH nastaveno na 9,5 přídavkem 2N NaOH. Organická vrstva byla extrahována 3 x 150 ml CH₂C1₂ a vysušena nad síranem sodným. Filtrace, koncentrace filtrátu a vysušení poskytly surový žlutý olej. Další vyčištění na silikagelovém sloupci (2%ní IleOH/CHCl^) poskytlo 25,5 g (79 5) žlutavé tuhé látky, která byla sloučeninou vzorce 12, kde oba R a δ.

R * byly Cbz.

g (13,93 mmol, 1,0 ekv.) sloučeniny vzorce 12 přijaravené jak bylo uvedeno výše, bylo rozpuštěno v 1 Z 2-propanolu a do toho bylo přidáno 14 g 10%ního Pd/C.

- 40 Směs byla hydrogenována při 345 kPa po dobu 3 dnů. 14 g 10%ního Pd/C bylo přidáno do reakce a ponecháno míchat po dobu dalšího dne. To bylo znovu zopakováno a mícháno po další den. Katalyzátor byl odstraněn filtrací přes Celit a minimální promytí 2-propanolem vedlo k výtěžku 4,8 g (47 %) „ 4 sloučeniny vzorce 12, kde oba R a R byly H (MS (APCi) m/z 734).

6,7 g (169,17 mmol, 6,2 ekv.) Halí (60%ní disperze v oleji) bylo promytu dvakrát 150 ml hexanů k odstranění minerál ního oleje. Tuhá látka byla zředěna ve 335 ml DMSO a 38,4g (174,62 mmol, 6,4 ekv.) Me^SOI bylo přidáno ve 3 podílech.

Roztok byl míchán po dobu 1 hodiny nebo dokud se nestal čirým.

g (27,29 mmol, 1,0 ekv.) sloučeniny vzorce 12, kde oba 4

R a R byly H, bylo rozpuštěno ve 200 ml THF. Keton byl převeden pomocí kanyly do reakční baňky a ponechán míchat po dobu 20 minut. Reakce byla zchlazena 500 ml nasyceného hydrogenuhli čitanu sodného, extrahována 4 x 500 ml EtOAc a vysušena nad síranem sodným. Filtrace, koncentrace filtrátu a vysušení poskytly surový olej.

Další čištění na 750 g silikagelu (5%ní MeOH/CíICl^,

0,3 % NII^OII) poskytlo 8,8 g (43 5) bílé tuhé látky, která byla sloučeninou vzorce 13 (MS (TS) m/z 747).

Příprava 1

250 až 500 mg výše uvedené sloučeniny vzorce 13 bylo rozpuštěno v 1 až 2 ml aminu odpovídájícíhoR substituentu specifikovanému v tabulce 1. Sylo přidáno katalytické množství (20 mg) pyridiniumhydrochloridu a roztok byl zahříván na 50 až 85 °C po dobu 1 až 7 dnů. Reakce byla zpracována zchlazením 50 ml nasyceného hydrogenuhliěitanu sodného, extrahována 3 x 50 ml methylenchloridu a vysušena nad síranem sodným.

• ·

- 41 Filtrace, koncentrace filtrátu a vysušení poskytly surový olej nebo tuhou látku. Další čistění na silikagelovém sloupci (2 až 4%ní MeOH/CHCl^, 0,2 % KH^OH) poskytlo konečný produkt.

Příprava 2

250 až 500 mg výše uvedené sloučeniny vzorce 13 bylo rozpuštěno v 1 až 2 ml aminu odpovídajícího R substituentu specifikovanému v tabulce 1 v utěsněné zkumavce. Bylo přidáno katalytické množství pyridiniumhydrochloridu a roztok byl zahřát na 50 až 75 °C po dobu 1 až 5 dnů. Reakce byla zpracována zchlazením 50 ml nasyceného hydrogenuhličitanu sodného, extrahována 3 x 50 ml methylenchloridu a vysušena nad síranem sodným. Filtrce, koncentrace filtrátu a vysušení poskytly surový olej nebo tuhou látku. Další čištění na silikagelovém sloupci (2 až 4%ní MeOH/CHCl-, 0,2 % NH.OH) poskytlo konečný produkt.

Příprava 3

100 mg výše uvedené sloučeniny vzorce 13 bylo rozpuštěno v IleOH/í^O (8:1). Byly přidány azid sodný (7 ekv.) a chlorid amonný (5,5 ekv.) a roztok byl zahříván na 50 °C po dobu 2 dnů. Reakce byla zpracována zchlazením 50 ml nasyceného NaHCOg, extrahována 3 x 50 ml methylenchloridu a vysušena nad síranem sodným. Filtrace, koncentrace filtrátu a vysušení poskyly surový olej nebo tuhou látku. Další čištění na silikagelovém sloupci (2%ní MeOH/CKCl^, 0,2 % NH^OH) poskytlo konečný produkt.

Pří prava 4

150 až 250 mg výše uvedené sloučeniny vzorce 13 bylo rozpuštěno v 1 až 2 ml MeOH/I^O nebo MeOH. Do toho byl přidán heteroaromatický reagent odpovídající R substituentu specifikovanému v tabulce 1 (10 až 50 ekv.) a katalytické množství

- 42 (20 mg) pyridiniumhydrochloridu. Reakční směs byla zahřívána při 45 až 50 °C po dobu 1 až 3 dnů. Reakce pak byla zchlazena 100 ml nasyceného NalICO^, extrahována 3 x 25 ml methylenchloridu, vysušena nad síranem sodným, zfiltrována a koncentrová na na tuhou látku. Tuhá látka byla znovu rozpuštěna ve lOOml EtOAc a promyta 3 x 25 ml 2N NaOH k odstranění přebytku reagentu Další čištění na silikagelovém sloupci (2 až 5%ní MeOH/CHCl^,

0,2 % NH^OI-I) poskytlo konečný produkt.

Příprava 5 mg výše uvedené sloučeniny vzorce 13 bylo rozpuštěno v 1 ml aminu odpovídajícího R substituentu specifikovanému v tabulce 1. Byla přidána malá lžička neutrální aluminy a směs byla míchána při teplotě místnosti po dobu 7 dnů.

Reakce byla zpracována filtrací Celitem (rozsivková zemina) a koncentrována na surovou tuhou látku. Další čištění na silikagelovém sloupci (5 % MeOH/CHCl^, 0,2 % NH^OH) poskytlo konečný produkt.

PřÍDrava 6

270mg výše uvedené sloučeniny vzorce 13 bylo rozpuštěno ve 4 ml benzenu. K tomu byl přidán přebytek uhličitanu draselného a 0,5 ml thiolu. Směs byla míchána při teplotě místnosti po dobu 16 hodin. Reakce byla zchlazena 100 ml nasyceného NaKCOg, extrahována 3 x 25 ml methylenchloridu, vysušena nad síranem sodným, zfiltrována a koncentrována na tuhou látku. Další čištění na silikagelovém sloupci (2%ní MeOII/CHCl,, 0,2 % NII^OH) poskytlo konečný produkt.

Příprava 7

250 mg výše uvedené sloučeniny vzorce 13 bylo rozpuštěno

V-0,5 ml bis(2-hydroxyethyl)aminu a 2 ml 2-propanolu v utěš“Glic 2^Um3.VCvj· • · * ·

Bylo přidáno katalytické množství (20 mg) pyridiniumhydrochloridu a roztok byl zahříván na 75 °C po dobu 7 dnů. Reakce byla zpracována zchlazením 50 ml nasyceného MaHCO^, extrahována 3 x 50 ml methylenchloridu a vysušena nad síranem sodným. Filtrace, koncentrace filtrátu a vysušení poskytly surový olej nebo tuhou látku. Další čištění na silikagelovém sloupci (2%ní MeOII/CKCl^, 0,2 % LIH^OH) poskytlo konečný produkt.

Následující příklady popisují přípravu sloučenin majícíc obecnou strukturu vzorce 9_, kde R je definováno v jednotlivých příkladech.

Příklad 33 v 4

Do roztoku sloučeniny vzorce £, kde R* je H (0,059 g, 0,08 mmol) v THF (2 ml) při 0 °C byl přidán allylmagnesiumbromid v Et_?O (1,0 i-í, 0,5 ml). Po 2 hodinách míchání při 0 °C, pokračovalo míchání při teplotě místnosti po dobu 12 hodin. Reakce byla zředěna nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (10 ml) a EtOAc (20 ml). Po oddělení vodné vrstvy byla tato promyta EtOAc (2 x 15 ral). Sloučené organické extrakty byly promyty nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (20 ml) a solankou (25 ml), vyušeny nad síranem sodným a koncentrovány za vakua.

- 44 Silikagelová chromatografie pomocí MeOH:CH₂C1₂zNH^OH (6:93:1 až 10:89:1) poskytla 0,011 g (18%ní výtěžek) sloučeniny vzorce 9_, kde R je allyl. MS: 776 (TS).

Příklad 34

Do roztoku sloučeniny vzorce £, kde R' je II (0,059 g, 0,08 mmol) v DME (3 ml) při 0 °C byl přidán vinylmagenesiumbromid v THF (1,0 M, 0,55 ml). Po míchání při 0 °C po dobu 1 hodiny a při teplotě místnosti po dobu 1 hodiny byla reakční směs zředěna nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (10 ml) a EtOAc (10 ml). Po separaci byla vodná vrstva promyta EtOAc (3 x 10 ml). Sloučené organické extrakty byly promyty nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (50 ml) a solankou (20 ml), vysušeny nad síranem sodným a koncentrovány za vakua. Silikagelová chromatografie pomocí MeOII:CH₂Cl :NH₄OI-I (6:93:1) poskytla 0,016 g (26%ní výtěžek) sloučeniny vzorce kde R je vinyl. MS:762 (FAB).

Příklad 35

Do baňky obsahující MgCl₂ (0,095 g, 1 mmol) a DME (lml) při teplotě 0 °C bylo přidáno 2-thienyllithium (1,0 M, l,0ml).

Po 0,5 hodině byl zaveden roztok sloučeniny vzorce 4_, kde z. .

R* je II (0,073 g, 0,1 mmol) v DME (2 ml) a míchání pokračovalo při 0 °C po dobu 1 hodiny, pak při teplotě místnosti po dobu 0,5 h. Reakční směs byla zředěna nasyceným vodným roztok hydrogenuhličitanu sodného (10 ml) a EtOAc (15 ml). Po separaci byla vodná vrstva promyta EtOAc (3x10 ml). Sloučené organic extrakty byly promyty nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličř tanu sodného (15 ml) a solankou (20 ml), vysušeny nad síranem sodným a koncentrovány za vakua. Silikagelová chromatografie pomocí MeOH :CH₂C1₂:1111^011 (6:93:1) poskytla 0,012 g (15%ní výtěžek) sloučeniny vzorce 9_, kde R je 2-thienyl.

MS: 817 (TS).

• *

- 45 Příklad 36

Do roztoku sloučeniny vzorce 4_, kde R¹ je H (0,147 g, 0,2 mmol) v DME (10 ml) při 0 °C byl přidán ethinylmagnesium bromid v THF (0,5 M, 2,8 ml). Po míchání při 0 °C po dobu 1 hodiny a při teplotě místnosti po dobu 1 hodiny byla reakční směs zředěna vodou (20 ml) a EtOAc (35 ml). Po separaci byla vodní vrstva promyta EtOAc (3 x 25 ml). Sloučené organické extrakty byly promyty nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (30 ml) a solankou (30 ml), vysušeny nad síranem sodným a koncentrovány za vakua. Silikagelová chromatografie pomocí MeOH:CH₂Cl₂ sllíI^OH (6:93:1 až 10:89:1) poskytla 0,068 g (45Sní výtěžek) sloučeniny vzorce £, kde R je ethinyl. MS: 759 (API).

Příklad 37 „ 4

Do sloučeniny vzorce 4_, kde R je H (0,220 g, 0,3 mmol) v DME (15 ml) při 0 °C byl přidán 1-methyl-l-propenylmagnesiumbromid v THF (0,5 M, 4,2 ml). Po míchání při teplotě místnosti po dobu 3 hodin byla reakční směs zředěna nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (20 ml) a EtOAc (30 ml).

Po separaci byla vodná vrstva promyta EtOAc (3 x 10 ml). Sloučené organické extrakty byly promyty nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (25 ml) a solankou (30ml) vysušeny nad síranem sodným a koncentrovány za vakua. Silikagelová chromatograf ie pomocí MeOII :CH₂C1₂ :NH^OH (6:93:1 až 10:89:1) poskytla 0,068 g (25%ní výtěžek) sloučeniny vzorce 9_, lede R je 1-methyl-l-propenyl. MS: 790 (API).

Příklad 38

Do roztoku butylmagnesiumbromidu v THF (2,0 M, l,0ml) při 0 °C byl přidán roztok methylpropargyletheru (0,154 g,

0,2 mmol) v DME (3 ml). Po míchání při 0 °C po dobu 0,5 h, < » · · · *

4δ

Λ byl přidán roztok sloučeniny vzorce 4_, kde R* je H (0,147 g, 0,2 mnol) v DME (7 ml). Po míchání při 0 °C po dobu 0,5 hodiny a teplotě místnosti po dobu 4 hodin byla reakční směs zředěna vodou (20 ml) a EtOAc (25 ml). Po separaci byla vodná vrstva promyta EtOAc (3 x 20 ml). Sloučené organické extrakty byly promyty nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (20 ml) a solankou (25 ml), vysušeny nad síranem sodným a koncentrovány za vakua. Silikagelová chromatografie pomocí MeOH:CH₂Cl₂:NH₄OH (5:93:1 až 10:39:1) poskytla 0,031 g (50%ní výtěžek) sloučeniny vzorce 9_, kde R je 3-methoxy-l-propinyl. MS: 803 (API).

Příklad 39

Do roztoku methylmagnesiumbromidu v Et₂O (3,0 II, l,8ml) oři 0 °C byl přidán roztok l-dimethylamino-2-propinu (0,154 g, 0,2 mmol) v THF (5 ml).

Po míchání při 0 °C po dobu 5 hodin byl přidán roztok sloučeniny vzorce 4_, kde R^^ je H (0,147 g, 0,2 mmol) v DME (lOml) při teplotě místnosti. Po míchání při teplotě místnosti po dobu 3 hodin byla reakční směs zředěna vodou (40 ml) a EtOAc (50 ml). Po separaci byla vodná vrstva promyta EtOAc (3x50ml). Sloučené organické extrakty byly promyty nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (40 ml) a solankou (50ml), vysušeny nad síranem sodným a koncentrovány za vakua. Silikagelová chromatograf ie pomocí MeOI-I :C1I₂C1₂ Mkl^OH (6:93:1 ač 8:31:1) poskytla 0,140 g (57%ní výtěžek) sloučeniny vzorce 9_, kde R je 3-dimethylamino-l-propinyl. MS: 817 (API).

Příklad 40

Do roztoku methylmagnesiumbromidu v Et₂O (3,0 M, 1,8 ml) a DME (1 ml) při 0 °C byl přidán roztok 2-ethinylpyridinu (0,186 g, 1,8 mmol) v DME (2 ml). Po míchání při 0 °C po dobu 1 hodiny a při teplotě místnosti po dobu 1 hodiny byl přidán roztok sloučeniny vzorce 4 kde R je K (0,110 g, « · · · » · • ·

- 47 0,15 mmol) v DME (7 ml) při teplotě místnosti. Po míchání při teplotě místnosti po dobu 3 hodiny byla reakční směs zředěna vodou (20 ml) a EtOAc (40 ml). Po separaci byla vodná vrstva promyta EtOAc (3 x 30 ml). Sloučené organické extrakty byly promyty nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (50 ml) a solankou (50 ml), vysušeny nad síranem sodným a koncentrovány za vakua. Silikagelová chromatografie pomocí MeOH :CH₂C1₂ zMÍI^OH (5:33:1 aš 10:39:1) poskytla 0,055 g (53%ní výtěžek) sloučeniny vzorce £ kde R je 2-pyridylethinyl. MS: 335 (API).

Příklad 41

Do baňky s kulatým dnem obsahující MgDr₂ (0,552 g,

3,0 mmol) a propinyllithium (0,059 g, 1,5 mmol) při 0 °C byl přidán Ti-IF (5 ml). Po 4 hodinách byl zaveden roztok sloučeniny vzorce i_, kde ?/' je H (0,110 g, 0,15 mmol) v DME (lOml) při teplotě místnosti a míchání pokračovalo po dobu 3 hodin. Reakční směs byla zředěna vodou (30 ml) a EtOAc (30 ml).

Po separaci byla vodná vrstva promyta EtOAc (3 . 40 ml). Sloučené organické extrakty byly promyty nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (50 ml) a solankou (50ml), vysušeny nad síranem sodným a koncentrovány za vakua. Silikagelová chromatograf ie pomocí MeOH :CH₂C1_? íIÍH^OH (5:93:1 aš 7:92:1) poskytla 0,050 g (52%ní výtěžek) sloučeniny vzorce 9_, kde R je 1-propinyl. MS:817 (TS).

Příklad 42

Do roztoku methylmagnesiumbrcmidu v Et₂O (3,0 M, 0,50ml) při 0 C byl přidán roztok propargylalkoholu (0,346 ml,

0,239 g, 2,25 mol) v THF (5 ml). Po míchání při 0 °C po dobu 3 hodin byl přidán roztok sloučeniny vzorce 4_, kde R* je H (0,110 g, 0,15 mmol) v DME (10 ml) při teplotě místnosti.

- 48 Po míchání při teplotě místnosti po dobu 2 hodin byla reakční směs zředěna vodou (35 ml) a EtOAc (50 ml). Po separaci byla vodná vrstva promyta EtOAc (3 x 40 ml). Sloučené organické extrakty byly promyty nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (50 ml) a solankou (50 ml), vysušeny nad síranem sodným a koncentrovány za vakua. Silikagslová chromatografie s MeOH :CH₂C1₂ :HII_?OH (5:93:1 až 15:34:1) poskytla 0,038 g (32%ní výtěžek) sloučeniny vzorce kde R je 3-hydroxy-l-propinyl. MS: 790 (.API).

Příklad 43

Palladiový katalyzátor (20 mg, 10%ní Pd/C) byl přidán do roztoku sloučeniny z příkladu 42 v isopropanolu (8 ml). Reakční nádoba byla promyta a naplněna vodíkem (345 kPa) a třepána při teplotě místnosti po dobu 24 hodin. Filtrace alikvotu reakční směsi přes Celit a koncentrace za vakua poskytly sloučeninu vzorce 9_, kde R je 3-hydroxy-l-propenyl. MS: 791 (API).

Příklad 44 lOSní Ρά/C) byl přidán a rakční nádoba byla a třepána při teplotě směs byla zfiltrována Silikagslová chromatoPalladiový katalyzátor (20 mg, ke zbývajícímu roztoku z příkladu 43 promyta a naplněna vodíkem (345 kPa) místnosti po dobu 48 hodin. Reakční přes Celit a koncentrována za vakua.

graf ie s MeOH:CH₂Cl₂zNH^OH (57%ní výtěžek) sloučeniny (5:93:1 až 8:91:1) poskytla C,018g vzorce 9_, kde R je 3-hydroxypropyl

MS: 793 (API).

Příklad 45

Palladiový katalyzátor (15 mg, 10%ní Pd/C) byl přidán do roztoku nadepsané sloučeniny z příkladu 38 v isopropanolu (8 ml). Reakční nádoba byla promyta a naplněna vodíkem (345 kPa) a třepána při teplotě místnosti po dobu 24 hodin.

« · ···*

- 49 • · · 1 * « • · ř* I • · ··

Filtrace alikvotu reakční směsi přes Celit a koncentrace za vakua poskytly sloučeninu vzorce 9_, kde R je 3-met'noxyl-propenyl. MS: 306 (API).

Příklad 46

Palladiový katalyzátor (15 mg, do zbývajícího roztoku z příkladu 45 promyta a naplněna vodíkem (345 kPa)

10%ní Pd/C) byl přidán a reakční nádoba byla a třepána při teplotě místnosti po dobu 43 hodin. Reakční směs byla zfiltrována přes Celit a koncentrována za vakua. Silikagelová chromatografie za pomoci MeOH íCÍ-^C^ :NK^OH (6:93:1 až 7:92:1) poskytla 0,017 g (73%ní výtěžek) sloučeniny vzorce 9_ kde R je 3-methoxypropyl. MS: 808 (API).

Příklad 47 „ 4

Do roztoku sloučeniny vzorce 4_, kde R je benzyloxykarbcnyl (0,520 g, 0,6 mmol) v DME (6 ml) a TMEDA (2 ml) při -40 °C bylo přidáno propinyllithium (0,414 g, 9,0 mmol).

Po míchání při -40 °C po dobu 2,5 hodiny byla reakční směs zředěna nasyceným vodným roztokem chloridu amonného (30 ml) a EtOAc (30 ml). Po separaci byla vodná vrstva promyta EtOAc (3 x 10 ml). Sloučené organické extrakty byly promyty nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (25 ml) a solankou (30 ml), vysušeny nad síranem sodným a koncentrová ny za vakua.

Silikagelová chromatograf ie s MeOH :CH₂Cl 2 (4:95,5:0,4 až 6:93,6:0,4) poskytla 0,157 g (29%ní výtěžek) rychleji eluujícího diastereoisomaru spolu s 0,071 g (13%ní výtěžek) pomaleji eluujícího diastereoisomaru a 0,070 g (13%ní výtěžek) směsi diastereoisomerů.

Roztok rychleji eluujícího diastereoisomaru (0,157 g, 0,17 mmol) v MeOH (5 ml) byl ponechán míchat při 30 °C po dobu 6 dnů. Po koncentraci za vakua, silikagelová

- 50 chromatograf ie s MeOIIzCí^C^ :ΝΗ_ΛΟΗ (4:95,6:0,4 až 6:93,6:0,4) poskytla 0,102 g (78%ní výtěžek) sloučeniny vzorce 9_, kde R je 1-propinyl s následující konfigurací v C-4 uhlíku.

(MS: 774 (API)).

A.

h₃co ch₃

Roztok pomaleji eluujícího diastereoisomeru (0,071g, 0,073 mmol) v MeOH (3 ml) byl ponechán míchat při 30 °C po dobu 5 hodin. Po koncentraci za vakua, silikagelová chromatografie s MeOH: CI-^Cl? :iTH_?0iI (4:95,6:0,4 až 6:93,6:0,4) poskytla 0,041 g (58£ní výtěžek) látky identické látce popsané sloučeninou z příkladu 41, která odpovídá sloučenině vzorce 9_, kde R je 1-propinyl, s následující konfigurací v C-4 uhlíku. (MS: 774 (API)).

H3CO CH₃

OH

-CH,

Příklad 43

Do suspenze trimethylsulfoniumtetrafluorboratu (l,03g, 5,3 mmol) v THF (40 ml) při -10 °C byl přidán KHMDS (l,20g,

6,0 mmol). Po míchání pod 0 °C po dobu 0,5 hodiny byla reakční nádoba ochlazena na -78 °C a byl přidán roztok sloučeniny vzorce 4, kde ρ3*' je benzyloxykarbonyl (2,50 g, 3 mmol) v DME (10 ml). Po 0,5 hodině byla reakční směs zředěna nasyceným vodným roztokem chloridu amonného (40 ml) a EtOAc (50 ml).

Po separaci byla vodná vrstva promyta EtOAc (3 x 30 ml).

Sloučené organické extrakty byly promyty solankou (40 ml) vysušeny nad síranem sodným a koncentrovány za vakua.

Silikagelová chromatografie s MeOH:CH₂C1₂(2:97,6:0,4 ač 4:95,5:0,4) poskytla 0,834 g (32%ní výtěžek) sloučeniny z.

vzorce 5_, kde R je benzyloxykarbonyl. MS: 881 (API).

Příklad 49

Roztok sloučeniny z příkladu 48 (0,176 g, 0,2 mmol) v MeOH (5 ml) byl ponechán míchat při 50 °C po dobu 4 dnů.

Po koncentraci, silikagelová chromatografie s MeOH:CK₂C1₂.

:ΝΚ_ΖΟΗ (4:95,6:0,4 až 5:93,5:0,4) poskytla 0,107 g (72%ní J „ /!

vytezek) sloučeniny vzorce kde R' je vodík a epoxidová Sjíupina v C-4 má následující uspořádání. MS: 743 (API).

Příklad 50

Roztok sloučeniny z příkladu 48 (0,176 g, 0,2 mmol), jodidu draselného (2,32 g, 14 mmol) a cyklopropylaminu (2,43 ml, 2,00 g, 35 mmol) v MeOH (30 ml) byla ponechána míchat při 50 °C po dobu 2 dnů. Po koncentraci byl zbytek rozpuštěn ve vodě (25 ml) a EtOAc (100 ml). Po separaci byla vodná vrstva promyta EtOxAc (3 x 50 ml). Sloučené organické extrakty byly promyty nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (50 ml) a solankou (40 ml), vysušeny nad síranem sodným a koncentrovány za vakua. Silikagelová chromatografie s MeOH:CH₂Cl₂:íIH_?OH (4:95,6:0,4 až 6:93,5:0,4) poskytla 0,377 g (59%ní výtěžek) sloučeniny vzorce 9_, kde R je cyklopropylaninomethyl, následující konfigurace v C-4 uhlíku.

MS: 805 (API).

Příklad 51

Roztok sloučeniny z příkladu 43 (0,175 g, 0,2 mmol), tetrabutylamoniumjodidu (0,739 g, 2,0 mmol) a butylaminu (0,395 ml, 0,293 g, 4 mmol) v MeOH (5 ml) byl ponechán míchat při 50 °C po dobu 2 dnů. Po koncentraci byl zbytek rozpuštěn ve vodě (20ml) a EtOAc (20 ml). Po separaci byla vodná vrstva promyta EtOAc (3 x 20 ml). Sloučené organické extrakty byly promyty solankou (40 ml),vysušeny nad síranem sodným a koncentrovány za vakua. Silikagelová chromatografia s

MeOH:CH₂Cl₂:NH₄OII (4:95,5:0,4 až 5:93,5:0,4) poskytla 0,038 g (54%ní výtěžek) sloučeniny vzorce 2/ kde ^R j^s propylaminornethyl, s následující konfigurací v C-4 uhlíku.

MS: 321 (API).

Příklad 52

Do roztoku sloučeniny vzorce 4_, kde R¹ je benzyloxykarbonyl a vodík připojený k C-9a dusíku je nahrazen benzyloxykarbonylem (0,500 g, 0,499 mmol) v THF (15 ml) při 0°C byl přidán methylmagnesiumbromid v Et₂O (3,0 M, 1,2 ml).

Po 20 minutách byla reakční směs zřednča EtOAc (30 ml) a vodou (50 ml). Po separaci byla vodná vrstva promyta EtOAc (3 x 35 ml). Sloučená organické extrakty byly promyty 10%ním vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (100 ml) a solankou (120 ml), vysušeny nad síranem sodným a koncentrovány za vakua, čímž se získalo 0,500 g (93%ní výtěžek) našedlé pěny. MS: 1 017, 845 (API).

Do roztoku sloučeniny výše popsané (0,500 g, 0,491 mmol) v isopropanolu (50 ml) byl přidán palladiový katalyzátor (0,250 g, lOSní Pd/C). Reakční nádoba byla vymyta a naplněna vodíkem (345 kPa) a třepána při teplotě místnosti po dobu 48 hodin. Další palladiový katalyzátor (0,250 g, 10%ní Pd/C) byl přidán a hydrogenace pokračovala při 345 kPa po dobu 24 hodin. Reakční směs byla zfiltrována přes Celit a koncentrována za vakua. Výsledný olej byl rozpuštěn v isopropanolu (50 ml), byl přidán palladiový katalyzátor (0,312 g, 10%ní Pd/C) a hydrogenace pokračovala při 345 kPa po dobu 24 hodin. Byl přidán další palladiový katalyzátor (0,170 g, ΙΟΐηί Pd/C) a hydrogenace pokračovala při 345 kPa po dobu 24 hodin. Reakční směs byla zfiltrována přes Celit a koncentrována za vakua.

Silikagelová chromatografie s MeOH : Cl^C^ (8:91:1 až 10:89:1) poskytla 0,120 g (33δηί výtěžek) sloučeniny vzorce 9_, kde R je methyl, s následujícím uspořádáním v C-4 uhlíku. MS: 749 (API).

Příklad 53

Do roztoku sloučeniny vzorce 4_, kde R' je benzyloxykarbonyl a vodík připojený k C-9a dusíku je nahrazen benzyloxykarbonylem (0,101 g, 0,101 mmol) v TrIF (2 ml) při -78°C byl přidán fenylmagnesiumbromid v TIIF (1,01 M, 1,0 ml).

Po 15 minutách míchání pokračovalo při 0 °C po dobu 1 hodiny, pak při teplotě místnosti po dobu 12 hodin. Reakce byla zředěna 10%ním vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (lOml) a EtOAc (20 ml). Po separaci byla vodná vrstva promyta EtOAc (3 x 15 ml). Sloučené organické extrakty byly promyty 10%ním vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (20 ml) a solankou (25 ml), vysušeny nad síranem sodným a koncentrovány za vakua. Silikagelová chromatografie s MeOH:CH₂Cl₂xMH^OH (5:94:1 až 25:74:1) poskytla 0,048 g (45%ní výtěžek) bílé pěny.

MS: 1030 (LSIMS).

Palladiový katalyzátor (0,024 g, 10%ní Pd/C) byl přidán do roztoku sloučeniny popsané výše (0,024 g, 0,022 mmol) v methanolu (15 ml). Reakční nádoba byla vymyta a naplněna vodíkem (345 kPa) a třepána při teplotě místnosti po dobu 24 hodin. Reakční směs byla zfiltrována přes Celit a koncentro· vána za vakua. Silikagelová chromatograf ie s MeOH :Cií₂Cl₂:

(5:94,5:1 až 10:39:1) poskytla 0,010 g (23%ní výtěžek) sloučeniny vzorce 9_, kde R je fenyl. MS: 811 (LSIMS).

Přiklad a 4

Do roztoku výchozí sloučeniny použité v příkladu 53 (0,300 g, 0,30 mmol) v THF (3 ml) při 0 °C byl přidán n-butylmagnesiumchlorid v THF (2,0 M, .1,5 ml). Po 20 minutách byla reakční směs zředěna vodou a EtOAc (20 ml). Po separaci byla vodná vrstva promyta EtOAc (3 x 50 ml). Sloučené organické extrakty byly promyty 10%ním vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (50 ml) a solankou (55 ml), vysušeny nad síranem sodným a koncentrovány za vakua, čímž se získalo 0,295 g (93Iní výtěžek) našedlé pěny. MS: 1050 (FAD).

Palladiový katalyzátor (0,087 g, lOšní Pd/C) byl přidán do roztoku sloučeniny popsané výše (0,087 g, 0,082 mmol) v isopropanolu (15 ml). Reakční nádoba byla promyta a naplněna vodíkem (345 kPa) a třepána při teplotě místnosti po dobu 24 hodin.

- 55 Další palladiový katalyzátor (0,087 g, 10%ní Pd/C) byl přidán a hydrogenace pokračovala při 345 kPa po dobu 60 hodin.

Reakční směs byla zfiltrována přes Celit a koncentrována za vakua- Silikagelová chromatografie s MeOH:CH₂Cl₂:NH₄OH (5:94,5:0,5 až 10:89:1) poskytla 0,010 g (28%ní výtěžek) sloučeniny vzorce £, kde R je n-butyl. MS: 792 (API).

Příklad 55

Do roztoku výchozí sloučeniny použité v příkladu 53 (0,200 g, 0,20 mmol) v TIIF (2 ml) při 0 °C byl přidán ethylmagnesiumbromid v THF (1,0 M, 2,0 ml). Po 20 minutách byla reakční směs zředěna vodou a EtOAc (20 ml). Po separaci byla vodná vrstva promyta EtOAc (3 x 30 ml). Sloučené organické extrakty byly promyty 10%ním vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (50 ml) a solankou (55 ml), vysušeny nad síranem sodným a koncentrovány za vak.ua. Silikagelová chromatografie s ÍIeOH:CH Cl₂:NH₄0iI (5:94,5:0,5 až 20:79:1) poskytla 0,079 g (38%ní výtěžek) bílé pěny. MS: 1033 (LSIMS).

Palladiový katalyzátor (0,035 g, 10%ní Pd/C) byl přidán do roztoku sloučeniny výše popsané (0,079 g, 0,77 mmol) v ethanolu (20 ml). Reakční nádoba byla promyta a naplněna vodíkem (345 kPa) a třepána při teplotě místnosti po dobu 24 hodin. Další palladiový katalyzátor (0,035 g, ΙΟϊηί Pd/C) byl přidán a hydrogenace pokračovala při 345 kPa po dobu 24 hodin. Reakční směs byla zfiltrována přes Celit a koncentrována za vakua, čímž se získalo 0,055 g (96%ní výtěžek) sloučeniny vzorce 9_, kde R je ethyl. MS: 763 (TS).

Příklad 55

Do roztoku výchozí sloučeniny použité v příkladu 53 (0,300 g, 0,30 mmol) v THF (3 ml) při 0 °C byl přidán isopropenylmagnesiumchlorid v THF (0,5 II, 6,0 ml). Po 20 minutách byla reakce zředěna vodou a EtOAc (20 ml).

δ

Po separaci byla vodná vrstva promyta EtOAc (3 x 30 ml). Sloučené organické extrakty byly promyty 10%ním vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (50 ml) a solankou (50 ml), vysušeny nad síranem sodným a koncentrovány za vakua. Silikagelová chromatografie s MeOHzCI^C^:NH^OH (3:95,9:0,1 až 20:79,9:0,1) poskytla 0,063 g (20%ní výtěžek) bílé pěny.

MS: 1045 (LSIMS).

Palladiový katalyzátor (0,075 g, 10%ní Pd/C) byl přidán do roztoku sloučeniny výše popsané (0,150 g, 0,165 mmol) v ethanolu (30 ml). Reakční nádoba byla promyta a naplněna vodíkem (345 kPa) a třepána při teplotě místnosti po dobu 24 hodin. Další palladiový katalyzátor (0,075 g, 10%ní Pd/C) byl přidán a hydrogenace pokračovala při 345 kPa po dobu 24 hodin. Reakční směs byla zfiltrována přes Celit a koncentrována za vakua. Silikagelová chromatografie s MeOH:CH2Cl2. MH^OH (6:93:1 až 10:89:1) poskytla 0,024 g (19%ní výtěžek) sloučeniny vzorce , kde R je isopropenyl. MS: 775 (TS).

Příklad 57

Do roztoku výchozí sloučeniny použité v příkladu 53 (0,750 g, 0,75 mmol) v THF (12 ml) při 0 °C byl přidán allylmagnesiumchlorid v THF (2,0 M, 3,0 ml). Po 15 minutách byla reakce zředěna vodou a EtOAc (40 ml). Po separaci byla vodná vrstva promyta EtOAc (3 x 50 ml). Sloučené organické extrakty byly promyty 10%ním vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (100 ml) a solankou (100 ml), vysušeny nad síranem sodným a koncentrovány za vakua. Silikagelová chromatografie s MeOHzCI^Cl^zMH^OH (6:93:1 až 15:84:1) poskytla 0,530 (68%ní výtěžek) našedlé pěny. MS: 1044, 910 (API).

Palladiový katalyzátor (0,075 g, 10%ní Pd/C) byl přidán do roztoku sloučeniny výše popsané (0,350 g, 0,335 mmol) v isopropanolu (10 ml). Reakční nádoba byla promyta a naplněna vodíkem (345 kPa) a třepána při teplotě místnosti po dobu 24 hodin. Další palladiový katalyzátor (0,150 g, 10%ní Pd/C) • · · ·

- 57 byl přidán a hydrogenace pokračovala při 345 kPa po dobu 24 hodin. Reakční směs byla zfiltrována přes Celit a koncentrována za vakua. Silikagelová chromatografie s MeOH: CH₂C1₉:NH₄OH (6:33:1 až 10:89:1) poskytla 0,148 g (57%ní výtěžek) sloučeniny vzorce 9_, kde R je propyl. MS:778 (API).

Příklad 58

Do roztoku sloučeniny použité jako výchozí látky v příkladu 53 (0,750 g, 0,75 mmol) v THE (12 ml) při 0 °C byl přidán allylmagnesiumchlorid v THE (2,0 M, 3,0 ml). Po 15 minutách byla reakce zředěna vodou a EtOAc (40 ml). Po separaci byla vodná vrstva promyta EtOAc (3 x 50 ml). Sloučené organické extrakty byly promyty 10%ním vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (10 ml) a solankou (100 ml), vysušeny nad síranem sodným a koncentrovány za vakua. Silikagelová chromatografie s MeOH:CH₂C1₂:NH₄OH (6:93:1 až 15:84:1) poskytl? 0,530 g (68%ní výtěžek) našedlé pěny. MS: 1044 (API).

Roztok výše popsané sloučeniny (0,104 g, 0,100 mmol) a (1S)-(+)-10-kamforsulfonové kyseliny (0,046 g, 0,200 mmol) v MeOH (4 ml) byl ochlazen na -78 °C a zpracován s ozonem až zůstávala sytě modrá barva. Reakce byla pročištěna kyslíkem, byl přidán dimethylsulfid (0,13 ml, 1,76 mmol) a pyridin (0,20 ml, 2,42 mmol) a míchání pokračovalo po dobu 12 hodin.

Byl přidán methylenchlorid (30 ml) a 10%ní vodný roztok hydrogenuhličitanu sodného, vrstvy byly odděleny a vodná vrstva byla extrahována methylenchloridem (3 x 30 ml). Sloučené organické extrakty byly promyty 10%ním vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (50 ml) a solankou (50 ml), vysušeny nad síranem sodným a koncentrovány za vakua. Silikagelová chromatografie s MeOH:CH₂C1₂:MH_dOH (6:93:1 až 10:89:1) poskytla 0,024 g (23%ní výtěžek) našedlé pěny. MS:S12 (API).

Do roztoku sloučeniny výše popsané (0,22 g, 0,024 mmol) v MeOH (1 ml) byl přidán tetrahydroborat sodný (0,001 g,

0,024 mmol). Další tetrahydroborat sodný (0,004 g, 1,0 mmol) byl přidán bohem periody 3 hodin. Reakční směs byla zředěna mothylenchloridem (30 ml) a lOSním roztokem hydrogenuhličitanu sodného (20 ml). Po separaci byla vodná vrstva extrahována methylenchloridem (3 x 30 ml). Sloučené organické extrakty byly promyty 10%ním vodným roztokem hydroganuhlčitanu sodného (50 ml) a solankou (50 ml), vysušeny nad síranem sodným a koncentrovány za vakua, čímž se získalo 0,022 g (100%ní výtěžek) žluté pěny. MS: 914 (API).

Palladiový katalyzátor (0,012 g, 10%ní Pd/C) byl přidán do roztoku sloučeniny výše popsané (0,022 g, 0,24 mmol) v isopropanolu (10 ml). Reakční nádoba byla promyta a naplněna vodíkem (345 kPa) a třepána při teplotě místnosti po dobu 24 hodin. Byl přidán další palladiový katalyzátor (0,20 g, 10%ní Pd/C) a hydrogenace pokračovala při 345 kPa po dobu 24 hodin. Reakční směs byla zfiltrována přes Celit a koncentrována za vakua. Silikagelová chromatografie s MeOH: CL^Cl^NH^OH (8:91:1 až 10:89:1) poskytla 0,005 mg (23%ní výtěžek) sloučeniny vzorce 9_, kde R je 2-hydroxyethyl.

MS: 779 (API).

Příklad 59

Do roztoku výchozí sloučeniny použité v příkladu 53 (0,750 g, 0,75 mmol) v THF (12 ml) při 0 °C byl přidán allylmagnesiumchlorid v THF (2,0 M, 3,0 ml). Po 15 minutách byla reakce zředěna vodou a EtOAc (40 ml). Po separaci byla vodná vrstva promyta EtOAc (3 x 50 ml). Sloučené organické extrakty byly promyty lOSním vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (10 ml) a solankou (10 ml), vysušeny nad síranem sodným a koncentrovány za vakua. Silikagelová chromatografie s MeOH:CH₂Cl₂:MH₄OH (6:93:1 až 15:84:1) poskytla 0,530 g (63^?óní výtěžek) našedlé pěny. MS: 1044 (API).

Roztok výše popsané sloučeniny (0,104 g, 0,100 mmol) a (1S)-( + )-10-kamforsulfonové kyseliny (0,045 g, 0,200 mmol) v EieOH (4 ml) byl ochlazen na -78 °C a zpracován s ozonem, dokud nevytrvávala sytě modrá barva. Reakce byla pročištěna kyslíkem, byl přidán dimethylsulfid (0,13 ml, 1,76 mmol) a pyridin (0,20 ml, 2,42 mmol) a míchání pokračovalo po dobu 12 hodin. Byl přidán methylenchlorid (30 ml) a 10%ní vodný roztok hydrogenuhličitanu sodného (10 ml), vrstvy byly odděleny a vodná vrstva byla extrahována methylenchloridem (3 x 30 ml). Sloučené organické extrakty byly promyty 10%ním vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (50 ml) a solankou (50 ml), vysušeny nad síranem sodným a koncentrovány za vakua. Silikagelová chromatografie s MeOH :CII₂C1₂ :HH_Z.OH (6:93:1 až 10:39:1) poskytla 0,024 g (23%ní výtěžek) našedlé pěny.

MS: 912 (API).

Palladiový katalyzátor (0,040 g, 10%ní Pd/C) byl přidán do roztoku sloučeniny výše popsané (0,057 g, 0,053 mmol) v isopropanolu (15 ml). Reakční nádoba byla promyta a naplněna vodíkem (345 kPa) a třepána při teplotě místnosti po dobu 24 hodin. Byl přidán další palladiový katalyzátor (0,040 g, 10£ní Pd/C) a hydrogenace pokračoavala při 345 kPa po dobu 24 hodin. Reakční směs byla zfiltrována přes Celit a koncentro vána za vakua. Silikagelová chromatografie s MeOH:CH₂C1_OzNH^OH (5:93:1 až 10:83:1) poskytla 0,010 g (15S>ní výtěžek) sloučeniny vzorce S_, kde R je formylmethyl. MS: 777 (API).

Příklad 60

Do roztoku 2-brompyridinu (0,474 g, 3,0 mmol) v THF (5 ml) při -78 °C bylo přidáno n-butyllithium (3,0 M, l,20ml) při -78 °C. Po 40 minutách byl roztok převeden pomocí kanyly chlazené pláštěm suchého ledu do baňky obsahující MgCl₂ (0,428 g, 4,5 mmol) a ether (4 ml) při -78 °C.

Po 15 minutách byl zaveden roztok sloučeniny vzorce £, kde 4

R je benzyloxykarbonyl (0,250 g, 0,3 mmol) v THF (3 ml)

- 60 při -78 °C a míchání pokračovalo, přičemž bylo dovoleno, aby se reakce ohřála na teplotu místnosti během několika hodin. Po 3,5 hodinách byla reakční směs zředěna nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (20 ml) a EtOAc (30 ml). Po separaci byla vodná vrstva promyta EtOAc (3x50ml)

Sloučené organické extrakty byly promyty nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (50 ml) a solankou (60 ml), vysušeny nad síranem sodným a koncentrovány za vakua Silikagelová chromatografie s IleOH:CH„C1_ONH,OH (6:33,3:0,7 až 10:89:1) poskytla 0,023 g (9,5%ní výtěžek) sloučeniny vzorce 9., kde R je 2-pyridyl. I-IS: 312 (API).

Příklad 61

Do baňky s kulatým dnem obsahující n-butyllithium (3,0 M, 1,62 ml) v diethyletheru (15 ml) při -78 °C byl přidá:

zchlazený (-73 °C) 3-brompyridin (0,790 g, 5 mmol) pomocí kanyly chlazené pláštěm suchého ledu. Míchání pokračovalo při -78 °C pc dobu 35 minut. Syla přidána suspenze MgSr₂ diethyletheratu (0,114 g, 0,440 mmol) v diethyletheru (3 ml) při -78 °C pomocí kanyly chlazené pláštěm suchého ledu, do roztoku 3-pyridyllithia. Roztok sloučeniny vzorce 4_, kde Λ

R'* je benzyloxykarbonyl (0,347 g, 0,400 mmol) v diethyletheru (3 ml) při -73 °C byl zaveden pomocí kanyly. Míchání pokra čovalo při -78 °C po dobu 2 hodin a pomalu docházelo k oteplo vání na 0 °C během 3 hodin. Reakční směs byla zředěna nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (20 ml) a EtOAc (30 ml). Po separaci byla vodná vrstva promyta EOAc (3 x 50 ml).

Sloučené organické extrakty byly promyty nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (50 ml) a solankou (60 ml), vysušeny nad síranem sodným a koncentrovány za vakua • · ·

Silikagelová chromatograf ie s MeOH :CH„C1„ :NH ,011 (4:95,4:0,5 Z Z Q až 20:79:1) poskytla 0,075 g (25%ní výtěžek) bílé pěny.

MS: 947, 812 (API).

Palladiový katalyzátor (0,073 g, 10%ní Pd/C) byl přidán do roztoku sloučeniny výše popsané (0,073 g, 0,077 mmol) v isopropanolu (30 ml). Reakční nádoba byla promyta a naplněna vodíkem (345 kPa) a třepána při teplotě místnosti po dobu 43 hodin. Reakční směs byla zfiltrována přes Celit a koncentro vána za vakua. Silikagelová chromatografie s MeOH:CH₂Cl₉:

(6:93:1 až 3:91:1) poskytla 0,032 g (51%ní výtěžek) sloučeniny vzorce 9_, kde R je 3-pyridyl. IIS: 812 (API).

Příklad 52

Do roztoku methylmagnesiumbromidu v diethyletheru (3,0 II, 1,8 ml) při 0 °C byl přidán roztok 5-hexylennitrilu (0,53 ml, 5,00 mmol) v THF (5 ml). Po míchání při teplotě 0 °C po dobu 6 hodin byl přidán roztok sloučeniny vzorce 4_ kde R*‘ je II (0,220 g, 0,300 mmol) v DME (10 ml) a míchání pokračovalo při 0 °C po dobu 0,5 hodiny, pak při teplotě místnosti po dobu 4 hodin. Reakční směs byla zředěna vodou, (20 ml) a EtOAc (25 ml), vrstvy byly odděleny a vodná vrstva byla promyta EtOAc (3 x 20 ml).

Sloučené organické extrakty byly promyty nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (20 ml) a solankou (25 ml), vysušeny nad síranem sodným a koncentrovány za vakua. Silikagelová chromatograf ie s MeOH :CH₂C1₂ zíIH^OH (6:93:1 až 10:39:1) poskytla 0,035 g (14Sní výtěžek) sloučeniny vzorce 9_, kde R je 5-kyan-l-pentinyl. MS: 827 (API).

Příklad 53

Do roztoku sloučeniny z příkladu 49 s výjimkou, že R⁴ je benzyloxykarbonyl (0,101 g, 0,115 mmol) v DME (3 ml) • ·

byl přidán LiAlH^ (1,0 1-1, 2,1 ml) po kapkách. Po 10 minutách byla reakční směs postupně zpracována vodou (0,04 ml),15£ním roztokem NaOII (0,044 ml) a vodou (0,132 ml), pak míchána při teplotě místnosti po dobu 0,5 hodiny. Směs byla zředěna EtOAc (20 ml) a vodou (20 ml). Po separaci byla vodná vrstva extrahována EtOAc (3 x 30 ml).

Sloučené organické extrakty byly promyty nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (50 ml) a solankou (50 ml), vysušeny nad síranem sodným a koncentrovány za vakua Silikagelová chromatograf ie s ΙΙβΟΗζΟΗ,Οΐ, ζΝΗ^,ΟΙΙ (3:95,5:0,5 až 3,5:95:0,5) poskytla 0,042 g (49%ní výtěžek) sloučeniny vzorce 9_, kde R je methyl, s následující konfigurací v C-4 uhlíku. MS: 749 (API).

Příklad 54

Do roztoku 1-methylimidazolu (0,41 g, 4,99 mmol) v THE (5 ml) při -78 °C bylo přidáno n-butyllithium (2,5 II, 2,02ml) Po 45 minutách při -73 °C byl přidán roztok pomocí kanyly do baňky obsahující MgCl₂ (0,71 g, 7,49 mmol) a THE (5 ml) při 0 °C. Po 1,5 hodiny při 0 °C byl zaveden roztok výchozí sloučeniny použité v příkladu 53 (0,500 g, 0,499 mmol) v DME (2 ml) a míchání pokračaaovalo při 0 °C po dobu 1 hodiny. Reakční směs byla zředěna nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (100 ml) a EtOAc (100 ml). Po separaci byla vodná vrstva promyta EtOAc (3 x 100 ml).

Sloučené organické eaxtrakty byly promyty nasycený vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (100 ml) a solankou (100 ml), vysušeny nad síranem sodným a koncentrovány za vakua, čímž se získalo 0,650 g žluté pěny. ílS:S4S (API).

Palladiový katalyzátor (0,700 g, 10?;ní Pd/C) byl přidán do roztoku sloučeniny výše popsané v isopropanolu (60 ml). Reakční nádoba byla propláchnuta a naplněna vodíkem (345 kPa) a třepána při teplotě místnosti po dobu 24 hodin. Další palladiový katalyzátor (0,500 g, 10%ní Pd/C) byl přidán a hydrogenace pokračovala při 345 kPa po dobu 24 hodin. Reakční směs byla zfiltrována přes Celit a koncentrována za vakua. Silikagelová chromatografie s MeOH:CH₂C1₂:MH^OH (1:98:1 až 8:91:1) poskytla 0,052 g (13%ní výtěžek) sloučeniny vzorce 9_, kde R je l-methylimidazol-2-yl. MS: 816 (API).

Příklad 55

Do roztoku furanu (0,34 g, 4,99 mmol) v THF (5 ml) při -78 °C bylo přidáno n-butyllithium (2,5 M, 1,98 ml). Po 0,5 hodiny při

-78 C byl přidán roztok do banky obsahující MgCl, (0,71 g, 7,49 mmol) a THF (5 ml) při 0 C. Po 1,5 hodině při 0 °C byl zaveden roztok výchozí sloučeniny použité v příkladu 53 (0,500 g, 0,499 mmol) v DME (2 ml) a míchání pokračovalo při 0 °C po dobu 1 hodiny, pak při teplotě místnosti po dobu 1 hodiny. Reakční směs byla zředěna nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (100 ml) a EtOAc (100 ml). Po separaci byla vodná vrstva promyta EtOAc (SxlOOml)

Sloučené organické extrakty byly promyty nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (100 ml) a solankou (100 ml), vysušeny nad síranem sodným a koncentrovány za vakua. Silikagelová chromatograf ie s MeOH :CH₂C1₂ :iíH__zOH (1:98:1 až 8:91:1) poskytla 0,095 g (24%ní výtěžek) bílé pěny. IIS: 935 (API).

Palladiový katalyzátor (0,100 g, 10%ní Pd/C) byl přidán co roztoku sloučeniny popsané výše v isopropanolu (15 ml). Reakční nádoba byla propláchnuta a naplněna vodíkem (345 kPa) a třepána při teplotě místnosti po dobu 72 hodin.

- 64 • 9 9 9 9 9 9 ··· • · · 9 9 • 9 · » 9 · · · 9 9 ·

Reakční směs byla zfiltrována přes Celit a koncentrována za vakua. Silikagelová chromatograf ie s MeOH :CH₂C1₂ :NH_z,OH (1:98:1 aš 8:91:1) poskytla 0,053 g (13%ní výtěže];) sloučeniny vzorce £, kde R je 2-furyl. ÍIS: 802 (API).

Příklad 65

Do roztoku M-methylpyrrolu (0,184 g, 2,31 mmol) v TKF (4 ml) při -7S °C bylo přidáno n-butyllithium (2,5 M, 0,93 ml) Roztok byl ohřát na teplotu místnosti během 1 hodiny a pak byl přidán pomocí kanyly do baňky roztok obsahující MgCl₂ (0,329 g, 8,45 mmol) a Et„O (4 ml) při teplotě místnosti.

Po 1 hodině byl zaveden roztok sloučeniny vzorce 4_, kde R' je benzyloxykarbonyl (0,200 g, 0,231 mmol) v THF (2 ml) a míchání pokračovalo při teplotě místnosti po dobu 45 minut. Reakční směs byla zředěna nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (50 ml) a EtOAc (50 ml). Po separaci byla vodná vrstva promyta EtOAc (3 x 50 ml). Sloučené organické extrakty byly promyty nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (50 ml) a solankou (50 ml), vysušeny nad síranem sodným a koncentrovány za vakua, čímž se získalo 0,293g žluté pěny. i'S: 94 9 (API).

Palladiový katalyzátor (0,324 g, 10%ní Pd/C) byl přidán do roztoku sloučeniny výše popsané v isopropanolu (30 ml). Reakční nádoba byla propláchnuta a naplněna vodíkem (345 k?a) a třepána při teplotě místnosti po dobu 24 hodin. Byl přidán další palladiový katalyzátor (0,300 g, lO^ní Pd/C) a hydrogenace pokračovala při 345 kPa po dobu 24 hodin. Reakční směs byla zfiltrována přes Celit a koncentrována za vakua. Silikagelová chromatograf ie s MeOH :CH₂Cl_? :IiH_?OH (5:93:1 aš 8:31:1) poskytla 0,033 g (13%ní výtěže];) sloučeniny vzorce 3, kde R je l-methyl-2-pyrrolyl. MS: 814 (API).

Příklad 67

Do roztoku nečištěné sloučeniny připravené jak je • · · · • · · ·

- S5 popsáno v příkladu 39 (0,430 g) v isopropanolu (40 ml) byl přidán oxid platiny (0,115 g, 0,505 mmol). Reakční nádoba byla propláchnuta a naplněna vodíkem (345 kPa) a třepána při teplotě místnosti po dobu 24 hodin. Filtrace alikvotu reakční směsi přes Celit a .koncentrace za vakua poskytla sloučeninu vzorce 9_, kde R je 3-dimethylamino-l-propenyl. MS: 019 (API).

Příklad SO

Oxid platiny (0,075 g, 0,335 mmol) byl přidán do zbývajícího roztoku z příkladu 57 a reakční nádoba byla propláchnuta a naplněna vodíkem (345 kPa) a třepána při teplotě místnosti po dobu 95 hodin. Reakční směs byla zfiltrována přes Celit a koncentrována za vakua. Silikagelová chromatografie s MeOII:CH₂Cl₉:IIH_?OII (4:95:1 až 5:93:1) poskytla 0,059 g (15%ní výtěžek) sloučeniny vzorce 9_, kde R je 3-dimethylpropyl. MS: 821 (API).

Tabull·

Sloučeniny z příkladů 59 - 81 mají obecnou strukturu vzorce 10 uvedenému níže, s R substituenty označenými v této tabulce. Sloučeniny z příkladů 59-32 byly připraveny podle postupů z příkladů 50 a 51 uvedených výše, s reakční periodou specif ik.ovanou vníže uvedené tabulce. V tabulce jsou výtěžek a hmotnostní spektra (hmotn.spektra) , pokud jde o jejich údaje, aplikovány k finálnímu produktu.

• · · · • *

Příklad reakční výtěže); hmotn. doba (li) (%) spektrum

69	1-imidazolyl	72	60	816
70	n-prcpy lamino	43	55	807
71	dimethy lamino	24	42	793
72	methylamino	120	55	779
73	ethylamino	120	53	793
74	isopropy lamino	A Π ‘xO	44	306
75	isobutylamino	43	27	321
75	trimethy1snimino	24	31	834
77	allvlamino	24	22	804
73	cyl ;lopropy lmethy lamino	24	34	313
79	N-ethylmethylamino	43	15	820
30	t-butylamino	96	30	321
31	diethylamino	163	25	320
81(a)		48	75	813,5

31(b)

332,6 ♦· »·*· ··· ··*

- 67 polcračování tabulky 2

'říklad	R	reakční doba(h)	výtěžek (¾)	hmotn. spektrum
82	4-mathoxybanzy lamino	43	21,7	834,5
33	4 -nitrobanzy lamino	48	Q C	899,7
84	4-chlorbenzylamino	Z o uu	25,5	838,5
85	3,4-difluorbanzylamino	43	14,5	890,5
85	3 -pyridylmathy lamino	43	21,0	355,5
85	4 -tri f luormathylbanzy lamino	43	15,5	922,5
87	2,5-difluorbanzylamino	48	11,0	890,5
83	hanzylamino	95	52	854,7
89	4-fluorbanzylarnino	43	50,9	872,7
90	3-f luorbanzylamino	43	32,7	872,7
91	2 -f luorbanzy lamino	43	39,5	372,7
92	2,4-difluorbanzylamino	43	24,5	890,1
93	2,5-difluorbanzylamino	43	23,1	890,1
94	3,5-difluorbanzylamino	43	35,5	890,1
95	1- (4-f luorf anyDpiparazin	43	44,7	927,5
95	2-tr if luormathylbanzy lamino	/ o	32,7	922,5
97	4-trif luormathylbanzylamino	48	23,5	933,1
93	3 -trif luormathylbanzy lamino	43	25,2	922,5
99	2-fluorfenylethylamino	/	33,5	335,2
100	3-fluorfenylsthylamino	.·. o ‘-.-O	23,7	835,1
101	4-pyridylmathylamino	43	45	855,2
102	methyl-3-pyridylmethy lamino	72	23,3	859,5
103	4-hydro:^-3-metho:rybenzylamino 43	12,0	900,1
104	piparony lamino	Z o ‘íU	14,0	898,1
105	3 -metho: rybenzy lamino	Z O ‘20	33,0	884,1
105	2-matho:ybanzy lamino	fZkJ	24,0	834,5
107	2-pyridylmathy lamino	/9 ‘iU	23,9	855,1

Claims (5)

1. PATENTOVÉ NÁROKY nebo její farmaceuticky akceptovatelná sůl, kde r! je H, hydroxy nebo methoxy,

   R je hydroxy,

   R je (C₁-C₁₀)alkyl, (C^-C·^) alkenyl, (^c2“^cio(alkinyl, kyan, -CH2S(O)nR^, kde n je celé číslo v rozmezí od 0 do 2, -CH2OR⁸, -CH2N(OR⁹)R⁸, -CH2NR⁸R¹⁵, -(CH2)_m((C₆-C₁₀)aryl) nebo - (CH₂) (5-10členný heteroaryl), kde m je celé číslo v rozmezí od 0 do 4 a kde předcházející R⁸ skupiny jsou případně substituovány 1 až 3 R^ro skupinami,
2. 2 3 _x nebo R a R jsou vzaty dohromady k vytvoření oxazolyloveho kruhu jak je znázorněno níže

   A Q Q Q Ί Π

   R je H, -C(O)R , -C(O)OR , -C(O)NR R nebo chránící skupina hydroxy,

   - 69 R⁵ je -SR⁸, -(CH2)nC(O)R⁸, kde n je 0 nebo 1, (C^-C^g)alkyl ^C2^_cio^al^^en7¹' (C2-C₁₀)alkinyl, -(CH₂)_m( (Cg-C^aryl) , nebo -(CH₂)_m(5-10členný heteroaryl), kde m je celé číslo v rozmezí od 0 do 4 a kde předcházející R⁸ skupiny jsou případně substituovány 1 až 3 R¹⁶ skupinami,

   6 7 každý R a R je nezávisle H, hydroxy, (C^-Cg)alkoxy, ^(Cl“^C6^)alky1' (C2-Cg)alkenyl, (C2-Cg)alkinyl, ~(CH2)m((^c6^_cio aryl) nebo -(CH₂) (5-10členný heteroaryl), kde m je celé číslo v rozmezí od 0 do 4, g

   každý R je nezávisle H, (C_n-C_n θ )alkyl, (CA-C^)alkenyl,

   ^(C2~^C10^)alkiny1' ^-(^cH2)q^{CR R} (^CH2)_r ^{NR R} , ^kde 9 ^a r jsou každý nezávisle celé číslo v rozmezí od 0 do 3 s výjimkou, že q a r nejsou oba 0, -(CH₂)_m( (^cs“^cio^- aryl) nebo -(CH_) (5-10členný heteroaryl), kde m je celé z m θ číslo v rozmezí od 0 do 4 a kde předcházející R° skupiny s výjimkou H jsou případně substituovány 1 až 3 R^ skupinami , nebo kde R⁸ je jako -CH₂NR⁸R''^>, R^⁸ a R⁸ mohou být vzaty dohromady, čímž se vytvoří 4-10členný nasycený monocyklický nebo polycyklický nasycený kruh .nebo 5-10členný heteroarylový kruh, kde uvedené nasycené a heteroarylové kruhy případně g

   zahrnují 1 až 2 heteroatomy vybrány z O, S a -N(R )- navíc 15 8 k dusíku, ke kterému jsou R a R připojeny, přičemž nasycený kruh případně zahrnuje 1 až 2 dvojné nebo trojné vazby uhlík-uhlík, a tyto nasycené a heteroarylové kruhy jsou případně substituovány 1-3 R^^ skupinami,

   9 10 každý R a R je nezávisle H nebo (C^-Cg)alkyl, každý R¹¹, R³², R^³ a R¹⁴ jsou nezávisle vybrány z H, (C^-C^g) alkyl, -(CH₂)^((Cg-C^g)aryl), a -(CH₂) (5-10členný heteroaryl), kde m je celé číslo v rozmezí od 0 do 4 a kde předcházející R^xx, R^x , R^-1 a R^x skupiny, s výjimkou H, jsou případně substituovány 1-3 R^⁸ skupinami,

   1113 - , nebo R a R jsou vzaty dohromady, cimz se vytvoří -(CH₂) -, kde p je celé číslo od 0 do 3, takže se vytvoří 4 až 7členný nasycený kruh, který případně zahrnuje 1 až 2 dvojné nebo trojné vazby uhlík-uhlík,

   - 70 nebo R a R jsou vzaty dohromady, čímž se vytvoří 4 až lCclenný monocyklický nebo polycyklický nasycený kruh nebo

   5 až lOčlenný heteroarylový kruh, přičemž tyto nasycené a heteroarylové kruhy případně zahrnují 1 až 2 heteroatomy vybrané z O, S a -N(R )- navíc k dusíku, ke kterému jsou , . . 13 14 - . . připojeny R a R , pricemz tento nasycený kruh případně zahrnuje 1 nebo 2 dvojné nebo trojné vazby uhlík-uhlík a tento nasycený a heteroarylový kruh jsou případně substituovány 1 až 3 R^6 skupinami,

   R¹⁵ je Η, (Ο^-Ο^θ)alkyl, (C2-C^0)alkenyl, nebo (C2^-C10)alkinyl, kde předcházející R^ skupiny jsou případně substituovány 1 až 3 substituenty nezávisle vybranými z halogenu a -OR⁹, každý R^č j_e nezávisle vybrán z halogen, kyan, nitro, trifluormethyl, azido, -C(O)R¹⁷, -C(O)OR¹⁷, -C(O)OR¹⁷, -OC(O)OR¹⁷, -NR⁶C(O)R⁷, -C(O)NR⁶R⁷, -NR⁶R⁷, hydroxy, (C^-Cg) alkyl, (^C1^_C6)alkoxy, -(CH₂)_m((C_g-C₁₀)aryl) a -(CH₂)_m(5-10členný heteroaryl), kde m je celé číslo v rozmezí od 0 do 4 a kde arylové a heteroarylové substituenty jsou případně substituovány 1 nebo 2 substituenty nezávisle vybranými z halo17 17 gen, kyan, nitro, trifluormethyl, azido, -C(O)R , -C(O)OR , -C(O)OR¹⁷, -OC(O)OR¹⁷, -nr⁶c(o)r⁷, -c(o)nr⁶r⁷, -nr⁶r⁷, hydroxy, (C^-Cg)alkyl a (C^-Cg)alkoxy, každý R je nezávisle vybrán z H(C^-C^g)alkyl, (^C2~^C10^~ alkenyl, (^c2“^cio)alkinyl, -(CH₂)_m((Cg-C_1Q)aryl) a -(CH₂)_m~ (5-10členný heteroaryl), kde m je celé číslo v rozmezí od 0 do 4, o 3 8 s podmínkou, že R není H, když R je -CH₂S(O)_nR . ²

   2. Sloučenina podle nároku 1, kde R⁴ je K, acetyl nebo benzyloxykarbonyl.

   9 9

   9 9··

   9 9 9 9 ·

   - 71 3. Sloučenina podle nároku 2, kde R je hydroxy, R je hydroxy, R³ je -CH₂NR¹⁵R⁸ nebo -CH SR³.

   Sloučenina oodle nároku 3, kde R'

   J-CH₂KR¹⁵R⁸ ,15 a R jsou nezávisle vybrány z H, (C₁-C_1Q)alkyl, (C_?-C^g)alkenyl a (C₉-C_qn)alkinyl, přičemž předcházející '2 10

   R a R skupiny s výjimkou H jsou případně substituovány

   1 nebo 2 substituenty nezávisle vybranými z hydroxy, halogen a (C.-C_r)alkoxy.

   η c p

   5. Sloučenina podle nároku 4, kde R^x a R° jsou každý nezávisle vybrán z H, methyl, ethyl, allyl, n-butyl, isobutyl, 2-meťnoxyethyl, cyklopentyl, 3-methoxypropyl, 3-ethoxypropyl, n-propyl, isopropyl, 2-hydroxyethyl, cyklopropyl, 2,2,2-trifluorethyl, 2-propinyl, sek.butyl, terc.butyl a n-hexyl.

   - 12 Sloučenina podle nároku 2, kde R je hydroxy, R je hydroxy, R^{3 * * *} je -CK2KHR⁸ a R⁸ je -(Crť )m((C^-Cg)aryl), kde m je celé číslo v rozmezí od 0 do 4.

   7. Sloučenina podle nároku 6, kde R⁸ je fenyl nebo benzyl.

   Sloučenina podle nároku 2, kde R je hydroxy, R ^? ,15„3 „15 J je hydroxy, R je -CÍ-I₂NR R a R a R jsou vzaty dohromady k vytvoření 4 až lOčlenného nasyceného kruhu.

   15 8

   9. Sloučenina podle nároku 8, kde R a R jsou vzaty dohromady k vytvoření piperidino, trimethylenimino nebo mcrfolinováho kruhu.

   „ , i 2

   10. Sloučenina podle nároku 2, kde R je hydroxy, R
3. 3 15 ^p 15 3 je hydroxy, R je -CI^NR^R'“’ a R^x a R° jsou vzaty dohromady k vytvoření 5 až lOčlenného heteroarylcvého kruhu případně substituovaného 1 nebo 2 (C^-Cg)alkylovými skupinami.

   • · · ·

   15 8

   11. Sloučenina podle nároku 10, kde R a R jsou vzaty dohromady k vytvoření pyrrolidino, triazolyl nebo imidazolyloveho kruhu, kde uvedené heteroarylové skupiny jsou případně substituovány 1 nebo 2 methylovými skupinami.

   je ,1

   Sloučenina podle nároku 2, kde R 3; .3 . ' _8 „8 hydroxy, R hydroxy, P⁷ je -CH₉SR^W a R^u je vybrán z (C^-C-^θ) alkyl, (C₂-C^^)alkenyl a (C₂~C^₀)alkinyl, kde uvedené R° skupiny jsou případně substituovány 1 nebo 2 substituenty nezávisle vybranými z hydroxy, halogen a (C^-Cg)alkoxy.

   13. Sloučenina podle nároku 12, kde R⁸ je methyl, ethyl, nebo 2-hydroxyethyl.

   1 2

   14. Sloučenina podle nároku 2, kde R je hydroxy, R □

   je hydroxy a R⁷ je vybrán z ( C-^-C^q ) alkyl, (C₂-C^g ) alkenyl a (C„-C,„)alkinyl, kde P^ skupiny jsou případně substituovány z 1J

   1 nebo 2 substituenty nezávisle vybranými z hydroxy, -C(O)P , o *7

   -LIP P , halogen, kyan, azido, 5 až lOčlenný heteroaryl a (C.—)alkoxy.

   J. o x 3

   15. Sloučenina podle nároku 14, kde R je methyl, allyl, vinyl, ethinyl, 1-methyl-l-propenyl, 3-methoxy-l-propinyl, 3-dimethylamino-l-propinyl, 2-pyridylethinyl, 1-propinyl, 3-hydroxy-l-propinyl, 3-hydroxy-l-propeny1, 3-hydroxypropyl, 3-methoxy-l-propenyl, 3-methoxypropyl, 1-propinyl, n-butyl, ethyl, propyl, 2-hydroxyethyl, azidomethyl, formylmethyl, 6-kyan-l-pentinyl, 3-dimethylamino-l-propenyl neabo 3-dimethyl aminopropyl.

   1 2

   15. Sloučenina .'.podle nároku 2, kde P je hydroxy, P je hydroxy a P je -(CP„) (5 až lOčlenný heteroaryl), kde Z ΠΊ m je celé číslo v rozmezí od 0 do 4.

   17. Sloučenina podle nároku 15, kde P je 2-thienyl,

   2-pyridyl, l-methyl-2-imidazolyl, 2-furyl nebo 1-mathyl2-pyrrolyl.

   • ·

   - 73 „ 12

   18. Sloučenina podle nároku 2, kde R je hydroxy, R je hydroxy a R“ je -(CH₂)_m( (Cg-C^g) aryl), kde m je cele číslo v rozmezí od 0 do 4.

   19 .

   Sloučenina kpodle nároku 18, kde R je fenyl.

   ~ z 2 3

   20. Sloučenina podle nároku 2, kde R a R jsou vzaty dohromady k vytvoření oxazolylovcho kruhu níže uvedeného vzorce

   O ^:N

   21. Sloučenina podle nároku 2, kde R^J je vybrán z následujícího vzorce kde X³ je O, S nebo -N(R¹⁵)-, R⁹ a .15 mají význam uveaený ,9 v nároku 1 a -OR skupina může být připojena ke kterémukoli dostupnému uhlíku na fenylové skupině.

   22. Farmaceutická kompozice pro léčení bakteriálních infekcí nebo protozoických infekcí u savců, ryb nebo ptáků vyznačená tím, že obsahuje terapeuticky účinné množství sloučeniny z nároku 1 a farmaceuticky akceptovatelný nosič .j.rk

   23. Způsob léčení bakteriální infekce nebo protozoéckéi fekce u savců, ryb nebo ptáků vy^naěený^Eim, že se podává savci, rybě nebo-^téktí^terapeuticky účinné množství sloučeni -nv^Z^ríaroku 1.

   - 74 24. Způsob přípravy sloučeniny vzorce 1 nebo její farmaceuticky akceptovatelná soli, kde je H, hydroxy nebo methoxy,.

   R je hydroxy,

   R je (C₁~C₁₀)alkyl, (C₂~C₁₀)alkenyl, (C₂~C₁₀)alkinyl, kyan,

   -CH₂S(O)_nR⁸, kde n je celé číslo v rozmezí od 0 do 2,

   -CH₂OR⁸, -CH2N(OR⁹)R⁸, -CH2NR⁸R¹⁵, “(CH₂)_m((C₆-C_1Q)aryl) nebo -(CH₂) (5-10členný heteroaryl), kde m je celé číslo v rozmezí od 0 do 4 a kde předcházející R³ skupiny jsou - 16 případně substituovány 1 az 3 R skupinami,

   2 3 x nebo R a R jsou vzaty dohromady k vytvoření oxazolylového kruhu jak je znázorněno níže

   R⁴ je H, —C(O)R⁹, pina hydroxy, —C(O)OR⁹, nebo chránící sku- 75 R⁵ je -SR⁸, -(CH2 )nC(O)R⁸, kde n je O nebo 1, (C^-C·^) alkyl, ^(C2~^C10^^alkeny1' (C2-C₁₀)alkinyl, -(CH₂)_m((C_g-C₁₀)aryl), nebo -(CH₂) (5-10členný heteroaryl), kde m je celé číslo v rozmezí od 0 do 4 a kde předcházející R⁸ skupiny jsou případně substituovány 1 až 3 skupinami,

   6 7 každý R a R je nezávisle H, hydroxy, (C^-Cg)alkoxy, (C^-Cg ) alkyl, (C₂~CgJalkenyl, (C₂~Cg)alkinyl, -(CH₂)^((Cg-C₁₀) aryl) nebo -(CH₂) (5-10členný heteroaryl), kde m je celé číslo v rozmezí od 0 do 4, g

   každý R je nezávisle H, (C.-C._Q)alkyl, (C₂~C₁₀)alkenyl, ^(C2~^C10^)alkÍny1' “^(CH2)q^CRlÍRlŽ(^CH2)_rNR^13RÍ4· kde q a r jsou každý nezávisle celé číslo v rozmezí od 0 do 3 s výjimkou, že q a r nejsou oba 0, -(CH„) ((C,-C.„)z m o iu aryl) nebo -(CH₂) (5-10členný heteroaryl), kde m je celé číslo v rozmezí od 0 do 4 a kde předcházející R⁸ skupiny s výjimkou H jsou případně substituovány 1 až 3 skupinami ,

   Q O 7 C 7 C O nebo kde R je jako -CH₂NR R , R^x a R° mohou být vzaty dohromady, čímž se vytvoří 4-10členný nasycený monocyklický nebo polycyklický nasycený kruh nebo 5-10členný heteroarylový kruh, kde uvedené nasycené a heteroarylové kruhy případně g

   zahrnují 1 až 2 heteroatomy vybrané z O, S a -N(R )- navíc 15 8 k dusíku, ke kterému jsou R a R připojeny, přičemž nasycený kruh případně zahrnuje 1 až 2 dvojné nebo trojné vazby uhlík-uhlík, a tyto nasycené a heteroarylové kruhy jsou případně substituovány 1-3 R''^-8 skupinami,

   9 10 každý R a R je nezávisle H nebo (C^-Cg)alkyl, každý R , R^1Z, R¹ a R¹ jsou nezávisle vybrány z H, (^cy^_C]_Q) “ alkyl, -(CH_n) ((C_r-C._n)aryl), a -(CH„) (5-10členný heteroaryl), kde m je celé číslo v rozmezí od 0 do 4 a kde předli 12 13 14 - . .

   cházející R , R , R a R skupiny, s výjimkou H, jsou případně substituovány 1-3 R^1<3 skupinami,

   1113 nebo R a R jsou vzaty dohromady, čímž se vytvoří

   -, kde p je celé číslo od 0 do 3, takže se vytvoří z p
4. 4 až 7členný nasycený kruh, který případně zahrnuje 1 až 2 dvojné nebo trojné vazby uhlík-uhlík, • · · · nebo R a R jsou vzaty dohromady, čímž se vytvoří 4 až lOčlenný monocyklický nebo polycyklický nasycený kruh nebo 5 až lOčlenný heteroarylový kruh, přičemž tyto nasycené a heteroarylové kruhy případně zahrnují 1 až 2 heteroatomy g

   vybrané z O, S a -N(R )- navíc k dusíku, ke kterému jsou 13 14 - připojeny R a R , pncemz tento nasycený kruh případně zahrnuje 1 nebo 2 dvojné nebo trojné vazby uhlík-uhlík a tyento nasycený a heteroarylový kruh jsou případně substituovány 1 až 3 R^ skupinami,

   R¹⁵ je H, (C₁-C₁₀)alkyl, (C₂~C^q)alkenyl, nebo (C^-C^g)alkinyl, kde předcházející R^^ skupiny jsou případně substituovány 1 až 3 substituenty nezávisle vybranými z halogenu a

   -OR , každý R·^ je nezávisle vybrán z halogen, kyan, nitro, trifluormethyl, azido, -C(O)R¹⁷, -C(O)OR¹⁷, -C(O)OR¹⁷, -OC(O)OR¹⁷, -NR⁶C(O)R⁷, -C(O)NR⁶R⁷, -NR⁶R⁷, hydroxy, (C^-Cg)alkyl, (^Cl-Cg)alkoxy, -(CH₂)_m((Cg-C_1Q)aryl) a -(CH₂)_m(5-10členný heteroaryl), kde m je celé číslo v rozmezí od 0 do 4 a kde arylové a heteroarylové substituenty jsou případně substituovány 1 nebo 2 substituenty nezávisle vybranými z halo17 17 gen, kyan, nitro, trifluormethyl, azido, -C(O)R , -C(O)OR , -C(O)OR¹⁷, -OC(O)OR¹⁷, -nr⁶c(o)r⁷, -c(o)nr⁶r⁷, -nr⁶r⁷, hydroxy, (C^-Cgjalkyl a (C^-Cg)alkoxy, každý R je nezávisle vybrán z HÍC^-C^q)alkyl, (^C2“^cio^ alkenyl, (^C2^-c10 ) alkinyl, - (CH₂ >_m( (Cg-C^ ) aryl) a ^-(^CH2^_in“ (5-10členný heteroaryl), kde m je celé číslo v rozmezí od 0 do 4,
5. 8 3 8 s podmínkou, že R° není H, když R^J je -CH₂S(O)_nR ' vyznačený tím, že se zpracuje sloučenina vzorce 5_ • · · · • · • · • · · · kde R a R* mají výše uvedený význam, se sloučeninou vzorce HOR^, IISR^ nebo HNR^1jR⁸, kde η ,

   15 8

   R a R mají výše uvedený význam, přičemž když se použije 8 . x 3 sloučenina vzorce HSR , výsledná R skupina vzorce

   -C^SrS sc případně oxiduje na -CH_QS(O)R^ nebo -CH₂S(O)₂R^.

   25. Způsob podle nároku 24 vyznačený tím, že sloučenina vzorce 5. se připraví zpracováním sloučeniny vzorce 4_

   1 Λ , kde R a R* mají význam uvedený v nároku 24,

   - 78 2 se sloučeninou vzorce (CH_o)_S(0) X , kde n je 0 nebo 1 2 3 3 n ^J a X je halogen, -BF^ nebo -PFg, v přítomnosti zásady.

   25. Způsob podle nároku 25 vyznačený tím, že X je jod, nebo BF^ a uvedenázásada se vybere z terč.butoxidu draselného, terč.butoxidu sodného, ethoxidu sodného, hydridu sodného, 1,1,3,3-tetramethylguanidinu, 1,8-diazabicyklo[5,4,0]undec7-enu, 1,5-diazabicyklo[4,3,0]non-5-enu, hexamethyldisilazidu draselného (XKMDS), ethoxidu draselného a methoxidu sodnáhc

   27.

   Sloučenina vzorce 5

   CH,

   N(CH₃)

   Z>2 h₃co ch₃ a 9 9 9i

   R* je II, -C(O)R , -C(O)OR , -C(O)NR^R^J nebo její farmaceuticky akceptovatelná sůl, kde

   R·' je M, hydroxy nebo methoxy, a a

   R* je II, -C hydroxy, a nebo skuoina chránící caždý R^ a R je nezávisle H nebo (C.-C,)alkyl 1 G

   28.

   Sloučenina vzorce 4

   - 79 ···· • · · nebo její farmaceuticky akceptovatelná sůl, kde je H, hydroxy nebo methoxy, a je η, hydroxy, a každý A a Γ

   -C(O)R⁹, -CCOjOR'', -CÍOjlíR^R^^ nebo skupina chránící nezávisle II nebo (C,-C,.) alkyl.