CZ16099A3 - Syntetické polysacharidy, způsob jejich přípravy a farmaceutické kompozice s jejich obsahem - Google Patents

Description

Fť/40 • · · · · « • 4 • · · · · · ·· • « · ·

Syntetické pólysacharidy,· způsob jejich přípravy a farmaceutické kompozice s jejich obsahem

Oblast techniky

Vynález se týká nových syntetických polysacharidů s antikoagulačními a antithrombotickými farmakologickými vlastnostmi heparinu. Heparin patří do skupiny glykosami-noglykanů (GAG) a to jsou heterogenní přírodní pólysacharidy s navázaným zbytkem kyseliny sírové.

Dosavadní stav techniky

Heparinové přípravky jsou směsmi řetězců, obsahující počet jednotek mónosacharidů od 10 až do 100 i více* A tato heterogenita v celé sestavě se vztahuje k heterogenitě na úrovni povahy manosacharidů, které ji tvoří, ale právě tak je ve vztahu k substituentům, které obsahuje, viz Hoden L. v "The Biochemistry of Glycoproteins and Glycosami-noglycans", vyd.Lennarz W.J., Phénum Press, Hew York a London, 267-37L (1980).

Každá skupina přírodních glykosaminoglykanů je spojena obvykle s celým vějířem farmakologických vlastností. Všechny jsou spojeny v přípravcích, které lze získat z přírodních látek. Takže například hepariny a heparany jako estery kyseliny sírové se vyznačují antithrombolitickou účinností, jež je spo- γ v ” jena selspolečným působenímjyíce faktorů na koagulaci.

Heparin katalyzuje, zvláště působením antithrombinu III (AT III) inhibování dvou enzymů, které zasahují do této koagu-lační kaskády krve, tj. faktor Xa a faktor Ha (čili throm-bin). Heparinové přípravky s níikou molekulární hmotností (HBPM héparines de bas poids moléculaire) obsahují řetězce, tvořené čtyřmi až třiceti monosacharidy a jejich vlastností je to, že reagují selektivněji s faktorem Xa než s thrombinem. Kěkteré syntetické oligosacharidy, zvláště ty, které byly popsány v EP 84 999?se vyznačují vlastností, že inhibují selektivně cestou antithrombinu III faktor Xa bez jakékoli účinnosti na thrombin. -2 -2 • · • Φ · · · • · · · · · · ···· • · ··· » · · · · ι«· ··· ·»···· · · ·· ·· ·· ···· ·· ··

Je známo, že inhibování faktoru Xa vyžaduje fixaci he-parinu na antithrombin III v oblasti vazby antithrombinu (DLA, domaine de liaison a 1"antithrombine) a že inhibování faktoru Ha (thrombinu) vyžaduje fixac^na antithrombin III cestou DLa (viz výše), jakož lína thrombin použitím vazné oblasti, jež je méně dobře definována (DLT, liaison moins bien défini).

Syntetické oligosacharidy, odpovídající oblasti DLA he-parinu,známé jsou, a vyznačují se antithrombotickou účinností u vénové thrombosy. Tyto látky jsou popsány v EP 529 715, 621 282 a v kanadském pat.spisu 2 040 905. Účinnost těhhto oligosachridů při prevenci arteriální thrombosy je omezena jejich neschopností inhibovat zhrombin.

Syntéza glykosaminoglykanů typu heparinu schopných inhibovat thrombin cestou aktivátoru antithrombinu III je spojena s velkými obtížemi a ve skutečnosti nebyla nikdy provedena. S cílem docílit aktivitu produktů jako inhibitorů thrombinu a faktoru Xa bylo navrženo spojit navzájem dva oligosacharidy s malým řetězcem (jeden DLA a jeden DLT) vhodnou jednotkou (distanční jednotka, "spacer"), nezasahující vůbec do biologických aktivit.

Podstata vynálezu

Nyní bylo zjištěno, že lze syntetizovat nové deriváty polysacharidů poměrně jednoduchým postupem s tím, že jsou biologicky aktivní a zvláště pak jsou antikoagulačními a anti-thrombotickými činidly. Navíc pak se zřetelem na provádění syntézy takových polysacharidů je možno modifikovat selektivně jejich strukturu a zvláště pak eliminovat substituce zbytkem kyseliny sírové, zasahující nežádoucím způsobem do interakcí s některými proteiny. Právě tak lze připravit polysacharidy, které jsou účinnými antithrombolytickými a antikoagulačními činidly, a které navíc mohou uniknout in vivo účinkům takových -3- • · ·· ·· ·· · · · · « · · * · » · ι · · · · • ♦ · · ·· · · · · · • · ··♦ « · · · · ··* ··· «· · · · « · · ·♦ «* ·· ·«·· ·· ·· proteinů, jako je destičkový faktor 4 (FP4, facteur plaque-taire 4), které ruší účinek heparinu, zvláště na thrombin.

Takže bylo s překvapením zjištěno, že polysacharidy se zbytky kyseliny sírové a alkylované mohou být mocnými anti-throbickými a antikoagulačními činidly podle rozložení alkylových skupin a zbytků kyseliny sírové, jak jsou na cukerném základním řetězci.

Obecněji řečeno bylo zjištěno, že uspořádáním pólysachari-dických sekvencí je možno modulovat velmi přesně aktivity tgípu glykosaminoglykanů, aby se tak získaly produkty, a to velmi aktivní, mající vlastnosti heparinu. Takže podle jednoho z předmětů tohoto vynálezu se to týká nového syntetického polysacharidu, obsahujícího vaznou oblast na antithrombin III, kterou představuje řetězení pěti monosacharidů, na nichž jsou celkem dvě funkce karboxylových kyselin a nejméně 4 skupiny kyseliny sírové s tím, že tato oblast je přímo vázána neredukč-ní koncovkou na oblast vazby na thrombin, obsahující řetězení 10 až 25 monosacharidických jednotek, zvolených mezi hexesami, pentosami a desoxycukry, jejichž všechny hydroxylové skupiny jsou nezávisle etherifikovány alkylovou skupinou s jedním až šesti atomy uhlíku nebo esterifikovány ve formě esteru kyseliny sírové . To se týká i jejich solí, zvláště těch, které jsou farmaceuticky přijatelné S výhodou se vynález týká polysacharidu, jak byl výše definován, charakterizovaného tím, že všechny jeho hydroxylové skupiny jsou methylovány nebo esterifikovány kyselinou sírovou, a jejich solí, zvláště farmaceuticky přijatelných.

Produkty dle tohoto vynálezu jsou zvláště polysacharidy, 4- 4- WO 98/03554 ·· ···· · · · · PCT/FR97/01344

jejichž struktura je vyjádřena následujícím obecným vzorcem I

Pe n (i) kde vlnovkou je vyznačena vazba, sutiovaná nad nebo pod pyranosovým cyklem,

s tím, že vzorec -vyjadřuje polysacharid Po, obsahujících n-po-čet monosacharidických jednotek totožných Či různých, vázaných anomerním atomem na Pe

a je to schematické vykádření monosacharidické jednotky pyranosové struktury, zvolené mezi hexosami, pentosami a desoxycukry s tím, že tato jednotka je vázána svým anomerním atomem na jinou monosacharidickou jednotku s tím, že hydroxylové skupiny této jednotky jsou substituovány skupinami X, totožnými či různými § zvolenými mezi skupinami alkylovými s jedním až šesti uhlíky a skupinami sulfonovými, n znamená celé číslo od 10 do 25, Pe znamená pemtasacharid struktury

R-^ znamená alkylovou skupinu s jedním až šesti atomy uhlíku, nebo sulfoskupinu, R^a znamená R^ nebo představuje s kyslíkovým atomem, na kterém je vázána a nosným atomem uhlíku karboxylovou funkci ne témže cyklu, tedy skupinu c_ch2-o R znamená alkylovou skupinu s jedním až šesti atomy uhlíku, W znamená kyslík nebo methylenovou skupinu, rovněž se to týká odpovídajících solí, zvláště farmaceuticky přijatelných.

Je třeba poznamenat, že zcela obecně v tomto popisu vlnovka znamená vazbu, situovanou nad nebo pod rovinou pyranosového cyklu.

Monosacharidy, obsažené v Po mohou být totožné nebo se mohou lišit jeden od druhého, meziglykosidické vazby mohou být typu d nebo fy .

Monosacharidy jsou s výhodou zvoleny z hexos řady D nebo L, tedy allosy, altrosy, glukosy, mannosy,gulosy, idosy, ga-laktosy a talosy (v případě, že h = 2), z pentos řady D nebo L, tedy ribosy, arabinosy, xylosy a lysoxy (v případě, že h = 2) a mohou se použít i jiné monosachyiidy, jako jsou napřík&ad desoxycukry (h = 1 a/nebo -CH20X = CH^).

Když v pentasacharidech Pe znamená W kyslík a R^a má význam, jak byl uveden pro R^, jsou takové pentasacharidy známými látkami, popsanými zvláště v patent.spisech EP 300 099, EP 529 715, BP 621 282, a EP 649 854, jakož i v literatuře. Získávají se ze synthonů popsaných rovněž v literatuře, viz Van Boeckel C., Petitou M., Angew.Chem.,Intern-*Ed.(V.Brit), 22, 1671-1690 (1993).

Když v pentasacharidech Pe se R^a liší od R^ a/nebo W znamená atom uhlíku, pak se takové pentasacharidy připravují použitím nových synthonů, které představzjí další předmět dle tohoto vynálezu.

Když v pentasacharidech Pe je jednotka typu kyseliny L-iduronové nahrazena jedntkou, jejíž konformace je dána přemostěním, pak takové pentasacharidy se připravují použitím ·· ·· ♦ * · «

·· ·· » · · 4 » I · 4 nových synthonů, předtavujících další předmět dle tohoto vynálezu.

Rovněž podle dalšího z těchto předmětů se tento vynález týká nových meziproduktů, použitelných při přípravě sloučenin vzorce I.

Polysacharidická část Po může být představována 10 až 25 jednotkami monosacharidů, alkylovanými nebo di·» či tri-substituovanými zbytkem kyseliny sírové.

Polysacharidická část Po může být představována 10 až 25 jednotkami monosacharidů,alkylovanými nebo mono-či tri-substituovanými zbytkem kyseliny sírové,

Polysacharidická část Po může být představována 10 až 25 jednotkami monosacharidů alkylovanými plně substituovanými a/nebo částečně substituovanými a/nebo nebubstituovanými.

Jednotky substituované nebo nesubstituované mohou být rozptýleny po;celé délce řetězce, nebo mohou být naopak seskupeny v sacharidických oblastech substituovaných či nesubstituova ných.

Vazby mohou být povahy 1,2, 1,3, 1,4, 1,5 , 1,6 a typu </>nebo fy · V tomto popise bylo zvoleno použít konformace pro ky- 4 ^ selinu L-iduronovou, pro kyselinu D-glukuronovou, ale je zcela běžně známo, že obecně je konformace jednotek monosacha- ridických v roztoku proměnná.

Takže kyselina L-iduronová múze mít konformace C,, s Δ 4' o nebo C^.

WO 98/03554

·· ·· ♦ · · · • · · · • · ··· • · · ·· ·· ·· ·· • · · • · • ♦ ·· ··♦· ·· ·· rfcT^S^J/oivu

má významy, jak byly uvedeny pro vzorec I, skupiny OX mají význam, jak to bylo uvedeno u vzorce I a u téhož monosacharidu mohou být totožné či různé, monosacharidy, obsažené v (tvoří disacharid, opakovaný m-krát, monosacharidy obsažené v£ jt, tvoří trisacharid, opakovaný t-krát, m může činit 1 až 8, t může činit 0 až 5 a p znamená nulu nebo 1 za předpokladu že 5 ^ m+1 ^ 12 a jejich soli, zvláště farmaceuticky přijatelné. Výhodnými sloučeninami jsou soli, jejichž anion odpovídá vzorci Id.

kde t znamená 5, 6 nebo 7 a kationtem je jednovazný kation, farmaceuticky přijatelný, jakož i odpovídající kyseliny.

Právě tak výhodnými jsou soli, jejichž anion odpovídá vzorce 1.2:

tt.2) kde každé t znamená 5, 6 nebo 7 a kationtem je jednovazný kation, farmaceuticky přijatelný, jakož i odpovídající kyseliny.

Zvláště výhodnými jsou soli, jejichž anion má vzorce 1.3

(1.3) I i WO 98/03554 • · · • ··· • · i »· · · · i · · M «··· ·· ·· PCT/FR97/01344 kde m znamená X, 2 nebo 3 a t znamená 2, 3, 4 nebo 5 a ke-tiontem je jednovazný kation, farmaceuticky přijatelný, jakož i odpovídající soli* Dalšími výhodnými sloučeninami dle tohoto vynálezu jsou ty vzorce II AΓ<οχ\ O <°x)h 5 kde

(OX|h

Pe P' m’ (II.A) (OX)h °x (OX!h P* m znamená specielně skupinu polysacharidů Po, vázaných anomerním uhlíkovým atomem na Pe, jak to bylo uvedeno u vzorce I 10 ox XX, <°x)h

má významy, jak to bylo uvedeno u vzorce I skupiny OX mají významy, jak to bylo uvedeno u vzorce I a v případě tohož monosacharidu mohou být totožné Či různé monosacharid, obsažený v EV se opakuje iX-krát, monosacharid obsažený v 'se opakuje t -krát a monosacharid obsažený v l\^'se opakuje p'~krát, M kolísá od 1 do 5, t kolísá od nuly do 24 a p^kolísá od nuly do 24 za přepokladu, že 10 + ť + p'625, jakož i jejich soli, zvláště farmaceuticky přijatelné. 20 Mezi výhodné soli dle tohoto vynálezu patří ty, jejichž -10- -10- ·· ·· • · » · • · · • · · • · · ·· 9999 ·· ·· • · · · • · · · • · ··· · • · · ·· »· 99 t· 9 ·9 9 9 9 9 · 9·9 999 9 · lf ·· kationtem je kation alkalického kovu, zvláště pak sodíku nebo draslíku.

Zvláště výhodnými pólysacharidy jsou tyto látky: sodná sůl methyl-0-(3-0-methyl-2,4,6-tri-0-sulfo-o(-D-glukopyrano-syl)-(l->4)-0-(3-0-methy1-2,é-di-O-sulfo-^3-D-glukopyra- nosýQrCl;—74)- Γθ-C3-O-methy 1-2,6-di-O-sulfo-U -D-glukopy- ranosyl)-(l-^4)-0-(3-0-methyl-2j6-di-0-sulfo-^rD-gluko-pyranosyl)-(l~74)J4-0-(2,3-di-0-myethyl-6-0-sulfo-c^D-gluko pyr a no syl)-(l~>4)-0-(2,3-di-0-methyl-^l-D-gluko pyraru-nosy 1)-(1<-Ή)-0-£, 3,6-tri-O-sulf o-o( -D-giukpyranoyl)-(l"';4)-0-(2,3-di-0-methyl-L-idopyrarunosyl)-(l’'^4)~2,3,6-tr i-0-sulfoD-gluko py r a no sgL^u, sodná sůl methyl-2-(3-0-mij?thyl~2,4,6—tri—O— sulfo— °Í-D—glukopyrano— sy 1) -(1 4) -O-(3-0-methy 1-2,6-di-0-sulfo- (P-D-glukopyrá no syl)-(l-^?4)- j0-(3-0-methyl—2,6-di-O-sulfo- c^-D-gluko-py r a no sy 1) - (1 4)-O-(3-O-me thy1—2, 6 -d i-0-sulfo— ^-D-glu-kopyra nosy l)-( l—v4)j ^o-(2,3~di-0-me thy 1-6-0-sulfo-o^ -D-glůkopy ra no sy 1) - (1—74 ) -2,3-di-O-me thyl-/^>-D-glukopyraruno-sy 1)-(1 —74) -O- (2,3,6-d i-O-sulf o- d. -D-gluko py ra no sy 1) -(1 --74)-0-( 2,3-di-O-me thy l-L-idopyrarunosyl )-(1-^4 )-2,3,6-tr i-O-sulf o nyl-o( -D-glukopyranosidu, sodná sůl me thyl-0-(3-0-rne thy 1-2,4,6-tri-O-sulf o- -D-gluko py ráno syl)--(l—34)-0-(3-0-methyl-2,6-di-0-sulfo-^-D-glukopyranosyl)-(l"^4)-0-(3-0-methyl~2,6-di~0-sulfo~<^-D-glukopyranosyl)~(i-;74)--0-(3-0-methyl-2,6-di-0-sulfo-^-D-glukopyranog5yl)-(l—5>4)Jg--B-(2,3-di-0-methyl-6-0-Sulfo)^ -D-glukopyranosy1-(1-^4)--0-(2,3-di-0-me thy 1-|β-D-gluko pyr a nurosyl)-(l—;25-)-(-(2,3,6^ ri-O-sulfo-o( -D-glukopyranosyl)-(l—>4)-2,3-di-0-methyl-o{-L-idopyranurosyl)-(l- 4)-2,3,6-tri-O-sulfo-«^-D-glukopyrano-sidu, sodná sůl me thy 1-0- (2,3-d i-O-me t jy X-4,6-d i-O-sulf o- ^(-D-glukopyrano-syl)-(l 4)- 0-(2,3-di-0-methyl-6-0_sulfo- K-D-glukopyra- -11- ·· ·♦ ♦♦ ·· ·· ···· ·#·· · · • · · · ·· · · · • · ·«· · · · · · ··· • · · · ♦ · * • · ·· · · · · ♦ · · *

nosy 1-( 1--^4)-3-^-0-(2,3-di-0-methy 1-^ -D-glukopyranuro-syl)-(l*-74)-0-(2,3,6-trisulfo-o(-D-glukopyranosyl-(l-;?4)-0-(2,3-di-0-methyl- (Á-L-(idopyranurosyl)-(l 4)-2,3,6-tri-0-sulfo--D-glukopyra nosidu, sodná sůl methyl-(2,3-di-0-methyl-4,6-di~0-suldo-í>( -D-glukopyrano-syl)-(1-^4)- 0-(2,3-di-0-methyl-6-0-sulfo-cí -D-glukopyranosyl- (1 4)- ^-0-(2,3-di-0-methyl-jJ^-D-glukopyranurosyl)-(l‘'‘’'’4)--0-(2,3,6-tri-O-sulfo- A -D-glukopy r a no sy 1) - (1 ~74) -Θ- (2,3-di--O-methyl-^—L-idopyranurosy 1)-(1 -^)-2,3,6-tri-O-sulfo--^D-glukopyranosidu. sodná sůl methyl-0-(2,3-di-0-methyl-4,6-di-0-sulfo- A-D-glukopyranosy 1~(1~H0~ 0-(2,3-di-0-methyl-6-0-sulfo-c^ -D-glůkopyrano-syl-)-(l~^^^-*0-(2,3-di-0-methyl-/$-D-glukopyranurosyl)-~(1-^4)-0-(2,3,6-tri-O-sulfo-4-D-glukopyranosyl)-(l 4)-0-(2,3-di-O-methy l-<Á-L-idopy ranurosyl)-(l-^)-2,3,6-tri-O-sulfo-tf^-D-pyranosidu, sodná sůl methyl-3-0-methyl-2,4,6-tri-0-sulfo-c^-D-glukopyranosyl)~ (ly-'4)-0-(3-0-methyl-2,6-di-0-sulfo-^-D-glukopyranosyl-(l~^)rjo-(3~0-methyl-2,6-disulfo-o( D-glukopyranosyl- -(1—74), 2-Jj0-(2,3,6-tri-0-methyl-°( -D-glukopyranosyl-(l— 0-(2,3,6-trl-O-methy 1-^» -D-glukopyra no syl^d—^/J^-O-^^-di-O-me thyl-6-0~sulfo-o(,-D-glukopyra no syl)-(l—“4 )-0-(2,3-di-O-methyl- /jVD-glukopyranurosyl)-(l—*4)-0-(2,3,6-tri-O-sulfo- o(-D-glukopyranosyl)-(l^'74)-0(2,3-di-0-methyl-o('L-idopyranurosyl)-(l-74)-2,3,6-tri-0-sulfo- °(-D-glukopyra-nosidu, Šodná sůl methyl-0-(3-0-methyl-2,4,6-tri-0-sulfo- *(-D-glukopyranosy 1 )-(1)-0-(3-0-me thy1-2,6-di-0-sulfo- J^-D-glukopyra-nosy 1-(1-^)- (^(3-0-methyl-2,6-di-0-sulfo- <^-D-glukopy- -12- -12- • · · • · · ·· ·-» • » · « « • ♦ ♦ « ♦ * · ··· » · • · · ♦ ·· ·· ra nosy 1-( 1—94)—0-(3-0-methyl-2,6-di-0-sulfo-o(-D-glu~ ko py r a no sy 1) - (1—[o- (2,3ψβ-tr i-O-me thy1-^0-D-glukopyra nosyl)-(l~-94)_o-(2,3,6-tri-0-methyl-|?) -D-glukopyrano-syl )-(1-74)] ^-0-(2,3-di-0-ciethyl-6-0-sulfo-Á-D“glukopy-ranosyl)-(i—^4)-0-(2,3-di-0-methyl- |P-D-glukopyranurosyl)-(1-^4)-(2,3,β-tri-O-sulfo- c^-D-glukopyranosyl-(l“^74-)-(2,3-di-0 -methyl-*^ -L-idopyranurosyl)-(1-^4)-2,3,6-tri-0-sulfo- d^-D -glukopyranosidu, sodná sůl me thy1-0-(3-0-me thy1-2, 4,6 -1 r isulf o - <^ -D-gluko pyrano sy1-(1 —‘^4)-0-(3-0-methy 1-2,6-di-0-sulfo- (Jb-D-glukopyranosy ]}-(1”*^4) -0-( 3-0-me thy 1-2,6-d i-0- sulf o- λ -D-glukopy r a no sy 14- 4*"°~ .-^4)-

(I—74)—í)-(3-0-methy 1-2,6-di-0-sulfo- ^>-D~glukopyranosyl)-fo-(2,3,6-tri-0 -me thyl-^-D-glukopyranosy1)-(1-^4)-0-(2,3,6 - tr i-0-m__e t hy 1- -D-gluko py r a no sy 1) - (1 —^) (2,3-di-Q-methyl-6-0-sulfo- </\-D-glukopyranosyl-C 0-(2,3-di-0-ma thy l-f>-D-gluko py ramn,osyl)-(i-J^l.)-0-(2,3,6- tri-O-sulfo- ^D-glukopyranosy1)-(1-94)-2,3-di-0-methyl-^--L-id o py r a nur o sy 1) - (1 )-2,3,6-1r i-0- sulf o- o^-D-gluko- pyranosidu, sodná sůl methyl-0-(3-0-methyl-2,4,6-ti,i-0-sulfo-^-D-glukopyranosyl4-(l—'4)-0-(3-0-methyl-2,6-di-0-sulfo-^-D-glukopyranosyl)-(l^"74)-0-(3-0-methyl-2,6-di-0-sulfo- «(-D-glukopyranosyl)-(1-94)- jo-(2;3,6-tri-0-methyl-^-D-glukopyranosyl)-(l-^4)-0-(2,3, β-tri-O-methy 1~tf? D-gluko pyra nosyl)-(i -*4 ýj^-O- (2,3-di-0-methyl-6 -0-sulfo- -D-glikopyranosyD-d—^)-0-(2,3-di-O-methyl- |^~D-glukopyranurosyl)-(l—?4-(0-(2,3,6-tri-0- s ul f o - oC-D -gluko py r a no sy 1)-(1 -94) - (2,3 - d i-O-me t hy 1- -1- idopyranurosyl^-d—?4)-2,3,6-tr i-O-sulf o-Jf-D-glukopyra- nosidu, sodná sůl me thy 1-0-( 3-0-me thy 1-2,4,6-tr i-O-sulf o- -D-gluko pyra no-sy1)-(1 -94 )-0-(3-0-methy1-2,6-d i-O-sulfo-^-D-glukopyra- • t WO 98/03554 -13- • i* ·· • · · · • · · ♦

• · * · *·* •*í*CT/FR97/01344 nosylj-íl-··^)-jo-(2,3,6-tri-0-methyl-*( -D-glukopyrano-syl)-(l-^%)-0-(2,3,6-tri-0-methyl~(j!>-iy-glukopyranosyl)-(1—74)j^-0-(2>3-di-0-methyl-6-0-sulfo- </i-D-glukopyrano-syl)-(4^4 )-0-(2,3-di-0-methyl-^ D-glukopyranurosyl)-(l'-2>4)~ 0-(2,3,6-tri-0-sulfo- <^-D-glukopyranosyl)-(l -^)-(3,3-31-0-me thy 1- o^-L-idopy ra nor o sy 1) - ()-2,3,6- tr i-0-sulf ο-θ( -D-gluko pyranosidu, sodná sůl me thy1-0-(3-0-methy1-2, 4,6-tri-O-sulf o-°/ -D-glukopyra nosy 1)-(1-¾ )-0-(3-0-methy 1-2 ,β-di-O-sulfo- (P>-D-glukopyra-nosyl)-(1--^4)- |0-(2,3,6-tri-0-methyl-c?í-D-glukopyranosyl)-(l-^)-0-(2,3,6-tri-0-methyl-|J^>-D-glukopyranosyl)-(l-^4)3^-0-(2,3-di-0-methyl-6-0-sulfo- o(-D-glukopyranosyl)-(l~?4)-0-(2,3-di-0-methyl-$ -D-glukopyranurosyl)-(l—-?4)-0-(2,3,6-tri-0~sulfo-</ -D-glukopyranos3Ll)-(l~4)-2,3-di-0-inethyl-í?( --L-idopyranurosyl)-(l~74)-2,3,6-tri-0-sulfo-<j{ -D-glukopy-ranosidu.

Tento vynález zahrnuje rovněž způsob přípravy sloučenin vzorce I, vyznačující se tím, že se v prvém stupni prodlouží dokonale chráněný prekursor polysacharidu I, obsahující chráněný prekursor oblasti Pe (tato oblast je zachycena na schématu 1), a to na sváto neredukujícím konci chráněným prekursorem se síranovými skupinami polysacharidu Po a potom se v druhém stupni zavedou a/nebo demaskují skupiny v negativním nábojem.

Schéma 1

Struktura pentasachridu Pe, znamená-li W kyslík nebo uhlík (písmena "DEFGK" jsou použita v textu k označení příslušných monosacharidů')

·· ·· ·· ·· #· • ·· · · · · · · ·· · • · · · ♦ · · · · ♦ · • « ··· · · · « · ··· ··· ··' ‘ · · · · · · ·

Podle prvé z možných cest se může použít prekursor dokonale chráněný v části DFGH tetrasacharidu odpovídajícího pentasacharidu. Potom se přidá polysacharid Po, obsahující na svém redukujícím konci chybějící část Pe,aby se po spojení získal celek DLA, který je takto sestaven.

Podle druhé z možných cest se dá použít dokonale chráněný prekursor disacharidické části GH pentasacharidu. Potom se přidá prekursot póly sacharidu Po DLT, obsahující na svém redukujícím konci chybějtící část DEP z Pe, a tak se získá po spojení celek DLA, který je takto sestaven.

Syntéza těchto prekursorů látky Pe se provede, jak to byl zde již dříve uvedeno, použitím synthonů popsaných v literatuře nebo tvořících část tohoto vynálezu.

Syntéza části polysacharidového prekursoru látky Po se provede použitím reakcí, které jsou odborníkům dobře známé, to za použití způsobů syntézy oligosacharidů, viz Boons G.J., Tetra-hedron 52, 1095-1121, nebo některého oligosacharidů, pokud se oligosacharid, použitý k vytvoření glykosidické vazby spojuje s oligosacharidem jako akceptorem glykosidické vazby pro získání jiného oligosacharidů, jehož sestava se rovná některé ze sestav těchto dvou reaktivních celků.

Tento sekvenční postup se opakuje, až se tak získá potřebná látka vzorce I. Povaha a profil náboje konečné žádoucí sloučeniny jsou rozhodující pro povahu chemických složek, použitých v různých etapách syntézy, to vše podle pravidel, jak jsou odborníkům na tomto úseku známa. Výhodný postup přípravy prekursoru látky Po podle tohoto vynálezu je zachycen na následujícím schématu 2« WO 98/03554 -15- ' • • « · ·· M ·♦ ·· • • • « • · · · • · • · • • • · • · · • · • · • • • · · • · · · * · ♦ · • · · • » • • · · • • ·· ·· ·· ·ΙΜ |· ·» PCT/FR97/01344

Schéma 2

Syntéza chráněného prekursoru pro DLT OTn | + OTn OTn •L. OTn OTn ,.o HO^ | ^M.OT, OTn

—P 20 t ’^ν'ΛΟ'^# I ^v^OT, OTn OTn (a) (b) (c) OTn OTnzo-^l^o-^l^x OTn OTn (d) OTn * OTn HO^I^o-^I^OT, OTn OTn (e) ZO* OTn OTn OTn OTn (f) OTnzo-i| OTn OTn OTn OTn Λ^Ρ OTn λ,ο ^ OTn OTn OTn OTn ^^orwi ^-o-il ^wvot, Tn OTn --- 1 OTn m Čas od času je uvažován substituent, který zůstává zatahován během určitého počtu reakčních stupňů, jako semipermanentní se označuje substituent, který je zachováván během většího počtu reakčních stupňů a jeko permantntní substituent takový, který . je zachován až do konce. Tyto permanentní substituenty se odstraní během zcela posledního stupně. Některé ze skupin permanéntních mohou být hachovány v konečné molekule.

Ve schématu 2 znamená (a) monosacharid, který je původcem glykosidické vazby, kde Z znamená dočasnou chránící skupinu hydro-xylové skupiny a Y je aktivátorem anomerního uhlíku. Tg ΐθ významech totožných či různých jsou dočasné substituenty, semipermanentní nebo permanentní všech dalších hydroxylových skupin.

Sloučenina (b) s nesubstituovanou hydroxylovou skupinou, představuje monosacharid jako akceptor glykosidické vazby, kde Th, totožné či různé, jsou substituenty dočasné, semipermanentní nebo permanentní hydroxylových skupin. T^ znamená chránící skupi- Μ ·· «· ·· ·♦ ·· • · · · ♦ ·· · ι · · « • · · · ·· · · · · · • · ··· « · · · · ··· ··· ·»···· · · ·» ·· ·· ···· ·♦ ·· -16- nu, dočasnou, semipermamentní nebo permanentní anomerní polohy. Tato skupina se eliminuje, $ktivuje-li se anomerní uhlíkový atom.

Jako cíl získání sloučenin dle tohoto vynálezu reagují apolu původce glykosidické vazby (a) a akceptor glykosidické vazby (b) za Tržníku disacharidu (c).

Takto získaný disacharia (c) se převede specifickým způsobem na disacharid (d) s obnažením jeho glykosidické vazby odstraněním chránící skupiny T^ a zavedením Y a/nebo přijetím akceptora glykosidické vazby (e) eliminováním Z.

Konečně původcé glykosidické vazby (d) a akceptor glykosidické vazby (e) reagují spolu navzájem za vzniku tetrasa-charidu (f), kde t znamená 1. Opakováním této řetězovací reakce se takto připraví oligo- nebo polysacharid (f), ve kfcerégj t znamená číslo větší než 1.

Také je možno za použití postupu ze schématu. 2 získat velké množství oligo- nebo polysacharidů dokonale chráněných jako (g), ve kterém oligosacharidy a znamenají prekursory dokonale chráněné v oblastech, lišících se nábojem, sloučenin dle tohoto vynálezu. V následujícím stupni celého postupu se sloučeniny jako (f) a (g) převádějí na dárce glykosidické vazby a spojují se pak s neredukující koncovkou prekursoru Pe, dokonale chráněného.

Jak o tom zde již byla zmínka, mohou oligosacharidy neredukující koncovky polysacharidů jako dárci glykosidické vazby (g) představovat část Pe, to v případě, kdy se (g) navazuje na neredukující koncovku dokonale chráněného oligosacharidu, který je prekursorem zbytku struktury Pe.

Sloučeniny dle tohoto vynálezu se získávají z jejich polysacharidických prekursorů dokonale chráněných použitím řetězení dle těchto reakcí* alkoholické funkce se převedou na skupiny 0-sulfo, a kar-boxylové kyseliny de odkryjí odstraněním Tn, použitých k jejich chránění během vypracovávání celé sestavy, potom se zavedou sulfo-skupiny.

Sloučeniny dle tohoto vynálezu se mohou pochopitelně připravovat za použití dalších postupů, které jsou známé odborníkům z oboru syntézy oligosacharidů* -17- ·· ·» WO 98/03554 ·· ···· PCT/FR97/01344

Zde popisovaný postup je výhodným postupem dle tohoto vynálezu. V každém případě je možno sloučeniny vzorce I připravovat jinými postupy, dobře známými z chemie cukrů, jak jsou popsány například v knize "Monosaccharides’·· Chemie těchto látek a jejich úlohy v přírodních produktech viz Collins P.M., Perrier R.J.,,J.Wiley and Sons, 1995, dále Boons G.J., Tetrahedron 52, 1095-1121.

Prekursor části pentasacharidu Pe, pokud W znamená kyslík a R^a znamená R^, se připravuje dle postupů syntézy oligosacharidů a zvláště pak dle postupů, popisovaných v pat. spisech EP 84 999 301 618, 454 220 a 529^715 a v pat.přihl. EP 930 4769 a 942 02470. Dokončí-li se kompletní chránění, je možno za použití vhodných chránících skupin získat volnou hydroxylovou skupinu s poloze 4 koncové neredukující části (D). Dokonale chráněný prekursor Pe se pak spojí v této poloze za použití postupů, známých z chemie oligosacharid.

Pentasacharid Pe, kde W znamená atom uhlíku a R-^a znamená R^ vzorce:

(II. 1) 25 -18- ·· ·· ·· ··

kde T^ a TQ, totožné nebo různé, znamenají dočasný dubstituent, nebo semipermanentní či permanentní, Z znamená skupinu, chránící hydroxylovou funkci, jež byla získána syntézou použitím radikálové reakce mezi monosacharidem jako zdrojem volných radikálů a monosacharidem s dvojnou vazbou,a C-disacharid, takto připravený, byl převeden na synthon II 1 použitím klasických postupů, jak je popsali zde již zmínění Van Boeckel C a Petitou M.

Synthon vzorce II 1, který se zvláště hodí pro syntézu sloučenin vzorce II, má vzorec

OAc / O COOBn O OMg CH: OMe OCNHCCI, II.l.

LevO MeO __ _____ nebo 10 ",ww MeO sloučenina 90

Tento synthon se připravuje dle reakčního schématu, popsaného ve schématu 22 zde ještě dále.

Pentasacharid Pe, který obsahuje substituent R^a a který představuje jednotku kyseliny L-iduronové konfigurace dle dále uvedeného vzorce

kde R a R^ mají významy, jak byly uveden-y u vzorce I a W znamená kyslík, se připravují ze synthonu vzorce

Tn Tn

20 kde T^ a T , totožné či různé znamenají substituent dočasný, semipermanentní nebo permanentní, Z znamená skupinu, chránící hydro-xylovou funkci, jež byla získána synteticky podle popsaných WO 98/03554 -19- ·· ·# ·· ·· • · · · · · · • · · · · · • ······ · · • · · · · · ·· Μ ·· ··· ·· ·· • · · • · · «·· ··♦ • · « í

*· ‘PCT/FR97/0I344 postupů, viz Gurjar M.K. a spol., Tetrahdr.Letters 36, 11, 1933-1936, 1937-1940 a 1994 (1995), 21, 14. 2241-2244 (1994).

Synthon vzorce III,1 je zvláště vhodný pro syntézu sloučenin III vzorce

Bn Bn

Tento synthon se připravuje podle reakčního schématu, zachyceného ve schématu 34 zde ještě dále.

Meziprodukty II,1, a III.1. jsou látkami novými a jsou zvláště vhodné pro přípravu sloučenin vzorce I dle tohoto vy nálezu.

Pentasacharidy Pe lze tedy připravit z těchto dvou disa-charidických synthonů II.1 nebo III.1 podle postupu, který popsal Van Boeckel C.A.A. a Petitou M., Ingew.Chem., ang.vydání, citováno již dříve.

Semipermanentními skupinami, použitelnými zde výše,lze ro-zomnět skupiny eliminovatelné na prvém místě po glykosylační reakci, když glucidická sestava má již počet žádaných motivů, aniž by se odstranily či měnily ostatní přítomné skupiny, umožňující vestavění funkčních skupin, předpokládaných v postaveních, která zaujmou.

Permanentními skupinami jsou skupiny schopné trvale chránit hydroxylové funkce během zavádění funkčních skupin místo seskupení pemipermanentních.

Tyto skupiny se volí z těch, které jsou kompatibilní s funkčními skupinami, zavevedenými po eliminaci skupin semipermanentních. Kromě jiných faktorů jde o skupiny, které jsou inertními za reakč-ních podmínek, nutných pro zavedení těchto funkčních skupin a které jsou eliminovatelné, aniž by takové funkční skupiny doznaly změnu.

Podle tohoto vynálezu jsou výhodnými permanentními skupinami skupiny alkylové s jedním až šesti atomy uhlíku. ·· 99 99 9 9 99 99 • • • · 9 9 9 9 9 9 9 9 • • • · 9 9 9 9 9 9 ' 9 • • • · · 9 9 9 9 9 999 9 99 • • 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 99 9 9 99 9 9 -20.

Jako příklad semipermanentních skupin a/nebo dočasných lze citovat skupiny benzylovou, acetylovou, levulinylovou, p-methoxybenzylovou apod,

Substituenty v poloze 3 složky uronové kyseliny cílové sloucenin^iohou být již přítomny ve výchozích synthonech, právě tak jako substituent R^,

Chránícími skupinami, používanými při přípravě sloučenin vzorce I, jsou ty, které jsou jinak zcela běžně používány v chemii cukrů, viz například "Protective Groups in Organic syntheses, TW Green, John Wiley and Sond, New York 1981.

Chránící skupiny jsou zvoleny s výhodou z těch, jako jsou skupiny acetylové, halogenmethýlové, benzoylové, levulinylové, benzylové, případně substituované benzylové, tritylové, rovněž případně substituované, tetrahydropyranylové, allylové, pente-nylové, terc.-butyldimethylsilylové (BDMS) nebo trlethylsilyl-ethylové.

Aktivačními skupinami jsou rovněž ty, které se klasicky použístgjí v chemii cukrů, viz například Boons G.J., Tetrahedron 52, 1Θ95-1121 (1996)·* Tyto aktivujícímskupiny se zvolí například z imidatů, thioglykosidů, pentenylglykosidů, xanthátů, fosfitů nebo halogenovaných derivátů

Zde dále popisovaný způsob umožňuje přípravu solí dle tohoto vynálezu sloučenin dle tohoto vynálezu. Mají-li se získat odpovídající kyseliny, pak se sloučeniny dle tohoto vynálezu ve formě solí uvedenou do styku s výměnnou pryskyřicí typu katexu ve formě kyseliny.

Sloučeniny dle tohoto vynálezu ve formě kyselin lze potom neutralizovat vhodnou bází se zřetelem na získání vhodné soli. Při přípravě solí sloučenin dle tohoto vynálezu vzorce I lze použít báze anorganické či organické, poskytující se sloučeninami vzorce I farmaceuticky přijatelné soli. S výhodou se použije jako báze roztok hydroxidu sodného, draselného, vápenatého nebo hořečnatého s tím, že sodné a vápenaté soli sloučenin vzorce I jsou pokládány za výhodné. -21- »· ·· ·· ·· ·· ·· ···· · · « · ♦ · · · ···· · · · ·φ·« • ♦ ··· · · · · · ··· ··· ······ · # ·· ·· ·· ···· ·· ·· Při stupni (a) tohoto postupu jsou použitelnými chránícími skupinami ty, které obvykle použije odborník na tomto úseku chemie cukrů, například dle EP 84 999 nebo dle "Protective Groups in Organic Syntheses, ZW Greene, J.Wiley and Sons, 1995,

Takto získané sloučeniny vzorce I mohou být případně zmýdelně-ny.

Sloučeniny výše již uvedeného vzorce I zahrnují rovněž i ty, kde jeden či více atomů vodíku nebo uhlíku byXy nahrazen/y odpovídajícím radioaktivním isotopem, například tritiem nebo použitím ^Ci. Takto značené sloučeniny jsou vhodné při výzkumných pracech, dále při pracech týkajících se metabélizmu nebo farmako-kinetiky, při biochemických testech jako je problém ligandů.

Sloučeniny dle tohoto vynálezu jsou určeny jako předmět biochemických a farmakologických studií s tím, že bylo nalezeno, že mají v tomto sm+ru velmi zajímavé vlastnosti. Sloučeniny dle tohoto vynálezu, které se vážou selektivně na AT II s afinitou stejnou či vyšší než v případě heparinu, mají antikoagulační a antithrombotické vlastnosti heparinu.

Globální antithrombotická účinnost produktů vzorce I byla vyhodnocena intravenozním nebo subkutánním podáváním krysám na modelu venozní stáze a indukování thromboplastinem dle postupu, který popsali Reyers a spol., Thrombosis Research 18, 669-674 (1980), jakož i na modelu arterielní thro&bosy, vyvolané implantovaným shlukem mezi arteriální karotidu a jugulární vénu krysy, jak to popsali Umetsu a spol., Thromb.Haumost. 39, 74-83 (1978). Při těchto dvou experimentálních modelech je hodnota DE^q sloučenin dle tohoto vynálezu nejméně stejná či nižší ve srovnání s ostatními, dosud známými syntetickými heparinoidy (DE^Q se pohybuje mezi 5 až 500 ug/kg). Sloučeniny dle tohoto vynálezu jsou tedy charakterizovány specifickou účinností a zvláště zajímevým antikoagulačním a antithrombotickým působením. V důaledku jejich účinností biochemických a farmaceutických jsou sloučeniny dle tohoto vynálezu velmi zajímavými léčivy.

Jejich toxicita je dokonale kompatibilní s využitím v tomto smyslu. Rovněž jsou to látky velmi stálé a proto se zcela zvláště -22- Μ ·« » · I · I · · · I I ··· · · Μ ·· • I I * «· ·« «· #··» Μ ·· • · · * • · · · ··· ··· • · • f ·· hodí k použití jako hlavní účinná složka farmaceutických specialit.

Navíc sloučeniny dle tohoto vynálezu nejsou neutralizovány silnými dávkami destičkových kationtových proteinů, jako je destičkový faktor R (PP4, facteur 4 plaquetaire), uvolňovaný při aktivování uvedených destiček během postupu thromfeosy. Sloučenin^ dle tohoto vynálezu se proto jeví být ve^mi zajímavými při léčení a prevenci thrombos původu arterielního nebo venozního.

Mohou se využít při různých pathologických stavech v důsledku modifikace hemostaze soustavy krevní a její koagulace, které se projevují zvláště během svízelí soustavy kardiovaskulární a cerebrovaskulární jako thrombolytické potíže, spojené s arthero-sklerosou nebo cukrovkou,,jako je tomu v případě nestabilní angíny, mozkové příhody, restenosy po angioplastice, endarterek-tomii, zavedení endovaskulárních protéz, nebo jako je tomu v případě thromboembolytických potíží ve spojitosti s rethrombo-sou po thrombolyze, infarktu, dementních stavech ischemického půsodu,periferních arterielních onemocnění, hemodialyse, auri-kulárních fibrilacích nebo během využití vaskulárních protéz přemostění aorto~koronárních. Tyto produkty lze proto kromě jiného využít při léčení nebo prevenci pathologických thrombo-embolických stavů venozního původu, jako jsou plicní embolie.

Mohou se použít, nebo předcházet či léčit thrombotické komplikace, jak se projevují během chirurgických zákroků nebo ve spojitosti s jinými pathologickými stavy, jako je rakovina a infekce jak bakterielní, tak i virové. V případě jejich využití při zavádění protéz mohou sloučeniny dle tohoto vynálezu být použity při zavádění protéz a upravit tak jejich hemokompa-tibilitu. Zvláště pak mohou být fixovány na intravaskulární protézy ("stents")· V takovém případě mohou být případně chemicky modifikovány zavedením na koncovce neredukující či redukující bhodného větvené, viz EP 649 854,

Sloučeniny dle tohoto vynálezu se právě tak mohou využít jako adjuvantia při endarterektomii, realizované porézními vzduchovými měchy. -23- -23- • β Φ · · Ψ 9 · 4 t · • · «·♦ · 4 · ' • · · * · ·

·· ♦···

Sloučeniny dle tohoto vynálezu jsou velmi stálými látkami a hodí se proto zcela obzvláště k tomu, aby představovaly aktivní princip léčiva·

Podle dálšího svého předmětu se vynález rovněž týká farmaceutické kompozice, obsahující jako hlavní podíl syntetický polysacharid, jak zde byl výše definován.

Vynález se s výhodou týká farmaceutických kompozic, obsahujících jako aktivní složku sloučeninu vzorce I, I.l, 1,2, 1.3 nebo některou z jejich solí, farmaceuticky přijatelných, případně spolu s jedním či více inertních a vhodných excipientií. V každé dávkované jednotce je účinná látka obsažena v množstvích uzpůsobených předpokládaným denním dávkám. Obecně je každá dávkovaná jednotka vhodně upravena se zřetelem na dávkování a typu předpokládaného podávání, například ve formě lisované, kapslí a pod.., sáčků, ampulek, sirupů a pod., kapek, mastí transdermálních nebo transmuskulárnich takovým způsobem, že taková jednotka dávky obsahuje 0,1 až 100 mg účinné složky, s výhodou 0,5 až 50 mg. Sloučeniny dle tohoto vynálezu se mohou právě tak použít spolu s jinou účinnou látkou, vhodnou pro předpokládané therapeutické využití, jako jsou například antithrombolytická a antikoagulační Činidla, anti-agregační destičková činidla, jako je například dipyridamol, aspirin, ticlopidin, clopidogrel nebo antogonisti komplexu glykoproteinu Ilb/lIIa.

Kompozice farmaceutické jsou upraveny pro podávání savcům, čítaje v to lidi, a to pro léčení výše uvedených nemocí. Takto připravené farmaceutické kompozice jsou v různých formách, jako jsou například injekční roztoky či kompozice k pití, rftražé* lisované produkty nebo pastilky. Výhodnými formami jsou injikovatelné farmaceutické roztoky, farmaceutické kompozice podle tohoto vynálezu jsou zvláště vhodné pro podávání, preventivní nebo léčebné při potížích vaskulárního ústrojí, jako je atherosklerosa, stavy hyperkoagulability, pozorované například v důsledku chirurgických zákroků, vývoje tumorů, nebo deregulace 9 9 9 4 » 9 9 999 • · *· 44 ♦ · * · • · · · • · ···

99 99 9 4 9 9 9 9 9 9 999 949 4 4 ·* *4 koagulování, způsobené aktivátory bakterielními, virovými nebo enzymovými* Posologii lze široce měnit ve funkci věku, hmotnosti a zdravotního stavu pacienta, povahy a obtížnosti afekce jakož i se zřetelem na způsob podávání. Taková posologie zahrnuje podávání jene či více dávek denně od 0,1 mg až do 100 mg,s výhodou mezi 0,5 až 50 mg denně, a to in|;ramuskulárně nebo subkutánně s tím, že podávání se provádí v stanovených časových odstapech.

Tento vynález se rovměž týká farmaceutických kompozic, obsahujících hlavní účinnou složku jednu z výše zde uvedených sloučenin, případně spoiu s další účinnou látkou. Takové přípravky se připravují tak, že se mohou podávat cestou zažívacího ústrojí nebo parenterálně.

Ve farmaceutických kompozicích dle tohoto vynálezu pro podávání orální, sublinguální, subkutánní, intramuskulární intravenozní, transdermální, lokální nebo rektální mohou být aktivní složky podávány v jednotných dávkách ve směsi s klasickými farmaceutickými podklady jak zvířatům, tak i lidem. Jednotky pro podávání mohou mít obvyklé formy, tedy jako jsou pro podávání orální lisované teblety, kapsle, prášky, granulky, roztoky či suspenze pro orální podávání, mohou se podávat sublinguálně, nebo subkutánně, intramuskulárně, intravenozně, intranasélně nebo intraokulárně, nebo může jít o formy podávání cestou rektální.

Pokud se připravuje kompozice pevná pro podávání ve slisované formě, smíchá se účinná složky s farmaceutickým vehikulem, jako je želatina, škrob, laktosa, hořečnatá sůl kyseliny stearo-vé, talek, arabská guma ap2>áe zapracovat do směsi sacharosu nebo jiné hodící se složky, nebo lze směs upravit tak, že se docílí prodloužená či opožděná aktivita složky, jak se uvolňuje v předem určeném množství této hlavní složky. Přípravek v kapslích se získá tak, že se smíchá účinná složka s ředidlem a získaná směs se vnese do kapslí měkkých či tvrdých.

Prášky nebo granulky, dispergovatelné ve vodě, lze získat -25- -25- ♦ · *Φ 4 · ο 1 *· ·* » · · I 4 4 Μ #· * · * · • Φ · 4 « » • · · · fe» ♦·*♦ smícháním účinné složky se směsí disperzních činidel nebo činidel, určených k semletí nebo činidel pro udržení aktivní,látky v suspen zi, jako je pyrrolidon, a právě tak lze přidat barviva nebo látky upravující cht.

Pro podávání rektální se připravují čípky, které tají za teploty v rektu, jako je například kakaové máslo nebo poly-ethylenglykoly·

Pro podávání parenterální,,intranasální nebo intraokulární se používají vodné suspenze, isotonické roztoky v solance, nebo jiné sterilní roztoky s tím,že injikovatelné roztoky obsahují dispergující činidla a/nebo smáčedla, farmakologicky kompatibilní, jako je například propylenglykol nebo butylengly-kol.

Pro podávání cestou sliznic se může účinná látka zpracovat za přítomnosti promotorů, jako je sůl některé z žlučových kyselin, hydrofilní polymér, jako je například hydroxypropylcelulosa, hydroxypropylmethylcelulosa, hydroxyethylcelulosa, ethylcelulosa, karboxymethylcelulosa, dextran, polyvinylpyrrolidon, pektiny, škroby, želatina, kasein, akrylové kyseliny a jejich estery i kopolymery, vinylové polymery či kopolymery, vinylalkoholy, alkoxylované polymery, polymery polyethylenoxidu, polyethery nebo jejich směsi* Účinnou látku lze rovněž zapracovat do formy mikrokapslí, případně s jedním či více podklady nebo přísadami. Účinná látka se může prezentovat právě tak ve formě komplexu s cyklodextrinem, například ^ nebo jj^-cyklodextrinem, 2-hydro-xypropyl—^cyklodextrinem nebo methyl-^-cyklodextrinem. Účinnou látku lze rovněž uvolnit z balónku, který ji obsahuje nebo endovaskulárním zařízením, který ji zavede do krevního oběhu. Parmakolégická účinnost hlavní účinné látky tím není jakkoli ovlivněna. Výhodnou formou podávání je určitě forma subkutánní.

Způsoby, přípravy a následující schémata popisují syntézy různých meziproduktů, vhodných k přípravě polysacharidů dle tohoto vynálezu. Příklady blíže popisují vynález, aniž by jeho rozsah -26- «4 #· • · • · • · 4 4 • e • · • • • · • 4 4 4 • • • · • • • • * • 4 • • • · · 4 ♦ • • 4 ··· 4 4 4 4 • * • • 4 4 4 4 4 «* • · • · ·· • 4 4 4 jakkoli omezovaly.

Jsou používány tyto zkratky: TBDMS: terco-butyldimethylsulyl,

Lev: levulinyl Bn: benzyl

Bz: benzoyl, CCM chromatografie na tenké vrstvě Olm: trichloracetimidyl LSIMS: je zkratkou anglického výrazu "Liauid Secondary Ion

Mass Spectrometry" ESIMS: :" "Electron Spray lonisation

Mass Spectrometry TMS: trimethylsilyl TSP: sodná sůl trimethylsilyltetradeuteriopropionové kyseliny Tf: trifláqfc", tedy derivát kys.trifluoroctové, MS: molekulární síto AU: allyl PMB: p-methoxybenzyl SE: trimethylsilylethyl,

Dowex, Sephades, Chelex a Toyopearlf jsou chráněné obchodní známky o Při všech způsobech, přípravách a ve všech zde popisovaných příkladech se mohou všechny uvedené pracovní postupy, týkající se katalytického zdvojení imidátů, štěpení esterů levulové , kyseliny, katalytického zdvojení tfaioglykosidů, zmýdělnění, methylace a selektivního odstranění chránění skupinou p-methó-xy benzylovou, delektivního odstranění a sulfatace oligosacharidů a polysacharidů hydrogenolyzou esterů nebo benzyletherů, zmýdel-nění esterů či dokonce sulfátaniontů provést použitím obecných postupů, popsaných zde dále použitím vhodných meziproduktů.

Obecné způsoby

Způsob 1: Katalytické spojení imidátů použitím terc.-butyldi-methyltriflátu

Pod argonem a za chlazení na -20°C se přidává roztok tere.-butyldimethylsulyltriflátu v dichlormethanu(1M, 0,2 mol/mol imidátu) k roztoku imidátu a glykosylového akceptoru v dichlormethanu (17,5 ml/mmol) za přítomnosti molekulárního síta 4 &· Po 10 až 20 minutých za sledování chromatografií na tenké vrstvě se přidá pevný hydrogenuhličitan sodný, roztok se filtruje, promyje se vodou, vysuší a zahustí do sucha.

Způsob 2: Odštěpení skupiny kyseliny levulové

Sloučenina, jež se má zbavit chránících skupiny, se rozpustí ve směsi ethanolu a toluenu 2:1 (42 ml/mmol) a přidá se octan hydrazinu (5 mol/mol). Směs se ponechá reagovat 15 až 30 minut( kontrola chromatografií na tenké vrstvě) a zahustí se.

Způsob 3: Navázání na thioglykosidy za katalýzy H-jodimidem kyseliny jantarové (složka A) a stříbrnou solí kyseliny tri-fluoroctové (složka B)

Ve skleněné nádobce se rozpustí thioglykosid a glykosylový akceptor v bezvodéra toluenu (18 ml/mmol thioglykosidu) za přítomnosti mol.síta 4 $. Po protřepávání hodinu za teplozy místnosti se reakční směs ochladí na 0°c, přidá se složka A (3 mol/mol thioglykosidu) a pak složka B (0,28 mol/mol thioglykosidu). Za 10-15 minut (kontrola chromatografií na tenké vrstvě) se přidá pevný hydrogenuhličitan sodný, po filtraci se roztok promyje 1 M vodným roztokem thiosíranu sodného, vodou, vysuší se a zahustí.

Způsob 4: Zmýdelnění, methylace a selektivní odstranění p-me thoxy be nzykové skupiny:

Zmýselnění esteru: Sloučenina, jež se má zmýdelnit, se rozpustí ve směsi dichlormethanu a methanolu 1 : 1 (4 ml/mmol), přidá se natriummethoxid, směs se protřepává 20 minut a pak se neutralizuje pomocí kryskyřice Dowex 50 H+. Po zahuštění se získaná látka použije v dalším stupni bez jakéhokoli čistění.

Methylace: V malých množství se přidává hydrid sodíku za 0°C ke směsi surového produktu z předchozího stupně a methyljodidu v N,N-dimethylformamidu (7 ml/mmol). Po skončení reakce se reakční ·· »· ·« 4Φ • * · · · ·· · ψ · · · ·#·· f « · · · · · • # ··· # · · I · ·♦· ·** *· «· ·· ···· *♦ ·· -28- vlije do vody, po extrakci ethylesterem kyseliny octové se organický roztok promyje vodou, vysuší se a zahustí do sucha.

Odštěpení p-methoxybenzylové skupiny: Surový předchozí produkt se rozpustí ve směsi acetonitrilu a vody 9 : 1 (20 ml/mmol).

Za chlazení na 0°C se přidává dusičnan ceričito-amonný (0,5 molCmol), reakční směs se míchá 2 hodiny za kontroly chromátografováním na tenké vrstvš, přidá se nasycený roztok hydrogenuhličitanu sodného, organická látka se extrahuje do ethylesteru kyseliny octové, roztok se vysuší a zahustí.

Způsob 5: Odtranění chránících skupin a sulfatace oligo- i poly-sacharidů

Hydrogenolyza benzyletherů a benzylesterů: Za kontroly chromato-grafováním na tenké vrstvě reaguje 6 až 12 hodin roztok právě uvedené látky v ledové kyselině octové za přítomnosti katalyzátoru, tedy palladia na uhlí 5% ( dvojnásobek hmotnosti sloučeniny) s vodíkem za tlaku 400.10^ Pa. Po filtraci se produkt použije přímo v dalším stupni.

Zmýselnění esterů : K roztoku esteru v methgnolu ($50 mlýmmol) se přidá 5 M vodný roztok hydroxidu sodného(v takovém množství, že po skončeném přidávání má odpovídat koncentrace hydroxidu sodného 0,5 M). Za 2 až 5 hodin se vše vlije do vody a prolije kolonou Sefadex«.ového G-25 gelu (1,6 na 115 cm), eluov&nou vodou.

Po zahuštění se vše prolije kolonou Dowex 50 H+ (2 ml a lyo- •j filizuje. V tomto stadiu se ověří použitím H ITMR, že došlo k odstranění všech chránících skupin. Je-li to třeba, pak se produkt znovu hydrogenuje a/nebo zmýdelňuje.

Sulfatace: K roztoku látky, jež se má sulfátovat^v dimethyl- formamidu (5mg/ml) se přidá komplex triethylaminu a oxidu sírového (5 mol/mol hydroxylové funkce) a po stání den při 55°C se roztok nanese na kolonu Sephadexu G-25 (1,6 na 115 cm) eluovanou 0,2 M chloridem sodným. Prakce, obsahující produkt se zahustí a zbaví soli na téže koloně za eluování vodou. Lyofilizováním se získá konečný produkt.

Schéma 3 : Syntéza monosacharidů

-30- *· ·« 94 «· • C 9 9 ♦ · • ♦ • 9 9 · • 9 9 9 • · • · • · ♦ • 9 9 9 • * ··· 9 • · · 9 99 9 999 • · • • · · 9 9 »· +» ···· 9 9 9 9 Příprava 1

Ethyl-2,4-6-tri~0-acetyl-3-0-methyl-l~thio- |^-D-glukopyráno sid (2) V 580 ml toluenu se rozpustí 69 g (0,19 mmol) 1,2,4,6-tetra-0~acetyl-3-0-methyl~j^-D-glukopyranosy 1, viz Helfe-rich B a spolo, J.prakt.Chem. 132, 322 (1932), přidá se 28 ml (0,38 mmol) ethanthiolu a potom se přikapává roztok diethyletherátu trifluorboranu v toluenu (190 ml, 1 M). Vše se nechá reagovat pod kontrolou chromátografováním na tenké vrstvě 1,5 hodin, přidá se pevný hydrogenuhličitan sodný, po filtrací a promytí vodou se roztok vysuší a zahustí. Chromátografováním na koloně oxidu křemičitého (cyklohexan §i ethylester kyseliny octové, 3 : 1) se získá 37 g (54%) sloučeniny vzorce 2, * 26 (c = 1, dichlormethan). % mm (CDC13): 5" 5,05-4,96 (m, 2H, H-§, H-4), 4,39 (d, 1H, J = 9,5 Hz, H-l), 4,18-4,12 (m, 2H, H-6~ H-6 *) 3,60 (m, 1H, H-5, 3,50 (dd, 1H, J = 9,3 Hz, H-3), 3,41 (s, 3H, 0CH3), 2,65-2,53 (m, 2H, SCHgCH^, 2,12, 2,11, 2,09 (3s, 9H, 3 Ac), 1,25 (t, 1H, SCHgCH^). Příprava 2 E t hy1-4,6-0-be nzylide n-3-O-me thyl-1-thio-^-D-glukopyra nosid2 (2) Ve směsi methanolu a dichlormethanu 1 : 2 (1,5 1) se rozpustí 37 g (0,1 mmol) látky 2, přidá se 150 ml 2 M roztoku natriummethoxidu, po 30ti minutách stání za teploty místnosti se reakční směs neutralizuje na pryskyřici Dowex 50 H+, filtruje a zahustí, Tatojgurová látka se rozpustí v litru bezvodého acetonitrilu, přidá se 30 ml (0,2 9101) <%, ol.-dimethoxytoluenu a 2,3 g (10 rnrnol) kyseliny kafrsulfonové, reakčr.í směs se ponechá 1,5 hodin za míchání a kontroly chromatografovéním na " tenko vrstvě, po přidání 1,4 ml triethylaminu se reakční směs zahustí. Ze získaného zbytku se vysrážením etherem získá;1/ 27 g (81%) látky 2* ÍÁlj) -60 (c = 1,63, dichlormethan). 99 99 99 99 99 ** 9 · · 9 ♦ 9 9 9 9 ·· 9 9999 99 9 9999 9 9 999 999 99 999 999 99 9999 9 9 99 9* 99 9999 9« 99 -31- XH NMR (CDC13) cf 7m51-7,34 (m, 3H, C^), 5,53 (s, 1H, C^CH), 4,56 (d, lij,, J.= 9,2 Hz, H-l), 2,75 (m, 2H, SCHgC&j), 1,32 (t, 3H, SCH2CH3).

Analýza pro C^HjgOgS (326,41(

vypočteno: 58,58 % C, 6,79 % H, 9,82 % S nalezeno: 58,99 % C, 6,741:% H, 9,75 % S Příprava 3

Ethy1-2-0-benzy1-4,6-0-benzyliden-3-0-methy1-1-thio-^>-D-glu-kopyranosid (4.)

Za teploty 0°C se přidává 2,00 g (83,3 mol) hydridu sodíku do roztoku 23 g (71,0 mmol) látky 2 8 Π nil (93,0 mmol) benzylbromidu v 200 ml Η,ΐί-dimethylformamidu. Reakční směs se míchá 2 hodiny za kontroly CCM, přidá se methanol a reakční směs se vlije do vody. Vše se extrahuje do ethylesteru kyseliny octové, extrakt se promyje vodou, vysuší a zahustí. Vysrážením zbytku etherem se takto připraví 18,8 g (63%) látky 4, t.t. . 14- -35 (c = 0j63, dichlormethan).

123°G ‘‘H 1-JMR (CDC13):& 7,50-7,25 )m, 10H, 2x C^), 5,55 (s, 1H, C6H5CH), 4,54 (d, 1H, J = 9,7 Hz, H-l), 4,34 (m, 1H, H-$), 3,75 (t, 1H, J = 10,2 Hz, H-6'), 3,65 (s, 3H, 0CH3), 3,60-3,33 (m, 4H, H-5, H-4, H-3, H-2), 2,75 (m,’2H, SCHgCEj), 1,32 (t, 3H, SCH2GH3).

Analýza P^o ^23^28^5^ (416,54)

vypočteno: 66,32 % 0, 6,78 % H, 7,70 % S nalezeno: 66,25 % 0, 7,28 % H, 7,84 % S Příprava 4

Ethyl-2,6~di-0-benzyl-3~0-methyl-l-thio-p‘ -D-glukopyranosid (5.)

Pod argonem se přidává 0,65 ml (4,50 mmol)^roztoku an-hydridu kyseliny trifluoroctové v 16 ml (0,21 'ih} kyseliny trifluoroctové k roztoku 28,8 g (69,0 mmol) látky 4 a 33 ml (0,21 mol) triethylsilanu v 120 ml dichlormethanu. Po dvouhodinovém míchání se reakční směs zředí ethylesterem kyseliny -32- ·» ·· • · ΦΦ • • · • · * · • · • Φ • • · • · · • » • Φ • ··· · • · * * ΦΦ Φ • ♦ · • • * · · ♦ • • · • » « · · · ·♦ ΦΦ octové a přidává se 1 M roztok hydroxidu sodného až do dosažení hodnoty pH 9. Po extrakci do ethylesteru kyseliny octové se získaný extrakt promyje vodou, vysuší a zahustí do sucha. Čistěním na koloně oxidu křemičitého (cyklohexan a ethylester kyseliny octové 3 : 1, potom 2 : 1) se získá 17,4 g (60%) látky 5., lA^-47 (c = 1, dichlormethan. 1H mm (GD013)í š 7,45.7,25 (m, 10H, 2x C^), 4,47 (d, 1H, J = 9,3 Hz, H-l), 3,66 (s, 3H, 0CH3), 3,61-3,40 (m, 2H, H-4 a H-5), 3,38-3^.19 (m, 2H, H-2 a H-3), 2m73 (m, 2H, SCI^CH^, l,3k (tm 3H, sCH2CH3).

Analýza pro C23H3005S (418,55) vypočteno__ 66,00 % G, 7,22 % H, 7,66 % S nalezeno: 65,62 % C, 7,28 % H, 7,21 % S. Příprava 5

Ethyl-2,6-di-0-benzyl~4-0-levulinyl-3-0~methyl-l-thio-j^-D-glukopyranosid (6)

Ve 400 ml bezvodého dioxanu se rozpustí 17,3 g (41,4 mmol) látky 5., přidá se 9,60 g kyseliny levulové (83,0 mmol), 16 g (88 mmol) hydrochloridu l-(3-dimethylaminopropyl)-3-ethylkarbo-diimidu a 1 g (9,3 mmol) 4-dimethylaminopyridinu. Reakční směs se míchá 4 hodiny, zředí se přidáním ethylesteru kyseliny octové, tento roztok se promyje postupně 5%ním vodným roztokem hydrogensíranu draselného, vodou, nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného, opět vodou, vysuší se a zahustí. Čistěním na koloně oxidu křemičitého (toluen a ethylester kyseliny octové, 6 : 1) se získá 19,9 g (93%) čisté látky 6, ['A-5 (c = 1,46, dichlormethan). LSIMS, positiv.způsob: m/z thioglycerol + chlorid sodný 539 (M + Ha)+, thioglycerol + fluorid draselný 555 (M+K)+.

ΧΗ NMR (CDC13): $ 7,40-7,20 (m, 10H, 2x C^), 2,8 - 2,4 (m, 6H, 30¾0^a [0(00)0¾GH2(C0)GHg] , 2^16 (s, 3H,[0(00)0¾¾(C0)CHJ 1,32 (t, 1H, J = 7,3 Hz, SCHgCE^). ·· *· ♦ ·· · · · ♦ # · ·· · ···· · · ♦ ···· • · ··· · · · « · ··· ··· ······ ·· »1» · · · · f ··· · · · · -33-

Analyza pro C28H36°7S (516,65)

vypočteno: 65,09'% C, 7,02 % h, 6,21 % S nalezeno: 65,30 % C, 7,03 % H, 5,75 % S. Příprava 6

Ally 1-4,6-0-be nzyliden-3-0~me thyl-/^-D-glukopyra nosid (7) Přidává se 1,10 ml (0,012 mol) kyseliny triřluormethan-sulfonové so suspenze 135 g (0,7 mol) běžné 3-0-methyl-D-glukosy a litru allylalkoholp, reakční směs se vyhřídá 2 hodiny na 120°C, po neutralizování přidáním triethylaminu (2 ml) se vše zahustí do sucha0 K tomuto surovému produktu, rozpuštěnému v 2 litrech Η,Η-dimethylformamidu se přidá 136 ml (0,^ mol -dimethoxy-

toluenu a 25 g (0,13 mmol) kyseliny kafrsulfonové. S^akční směs se zahřívá hodinu na 80° G ve vakuu, neutralizuje se přidáním 21 ml methylaminu a vše se extrahuje do ethylesteru kyseliny octové, extrakt se promyje vodou, vysuší a zahuštěním se získá pevný podíl, směs ol/p = 3/2. Výtěžek celkem 144· g (57%). Krystalováním z ethanolu se získá 60 g (26%) čisté látky 7-JL. Chromatografováním části matečných louhů na koloně oxidu křemičitého (cyklohexan a ethylester kyseliny octové 3 : 1) se dá získat 7,8 g .čistého anoméru 7- 6,8 g směsi 7 /^, a ^->4 S čistí látky 7'°^.

Sloučenina 7-P : -43 (c = 1, dichlormethan), t.t. 131°C. 1H WMR (CDCl.): í 7,50-7,26 (m, 5H, C6H5), 6,01-5,90 I m, 1H, 0CH2(CH%CH2)j , 5,55 (s, 1H, C^CH), 5,38-5,32 \m, 2H, 0CH2(GH=CH2) 4,47 (d, 1H, J= 7,5 Hz, H-l), 4,42-4,32, (m, 2H, H-6'a OCH^C^CI^)’! , 4,21-4,15 [m, 1H, 00¾(CH^CHg) J , 3,80(dd, 1H, J = 10,2 Hz, H-6), 3,67 (s, 3H, 0CH3).

Analýza

pro C^HggOg (322,36) vypočteno: 63,34 % G, 6,88 % H nalezeno: 63,23 % C, 7,12 % H -34- -34- ·· ·· ·· • · · · · • · * · I • » ·«· ··· • · · ···· ·· Μ ·· Μ ·« • · · « · · · • · · · · · • · ··· · t * • · · · · ·· ·* ·· Přínrava 7

Allyl-2-0-acetyl-4,6-0-benzyliden-3f-0-methyl-j£-D-glukopy-ranosid (8). v 100 ml dichlormethanu se rozpustí 11,5 g (35,7 mmol) látky 1, přidá se 4,0 ml (42,8 mmol) anhydridu kyseliny octové, 6,40 ml (46,4 mmol) triethylaminu a 440 mg (3,80 mmol) 4-dimethylaminopyridinu, směs se ponechá za míchání 2 hodiny (kontrola pomocí CCM), promyje se potom následně 5%ním vodným roztokem hydrogensíranu draselného, vodou, nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného, opět vodou, a zahustí se až do získání 12,3 g (95%) pevné látky 8, t.t. 115° 0, £^)-68 (c = 1, dichlormethan. LSIMS posit.tvar m/z thioglycerol + chlorid sodný 387 (M+Ua)+, thioglycerél + fluorid draselný 403 (M+IÍ+, hl mm (CDCI^)í & 7,51-7,34 (m, 5H, C^), 5,98-5,78 (jn, 1H OCH^CH-CH^J , 5,56 (s, 1H, CgHgGHfiJ 5,32-5,17 £m, 2H, ©CH^-(015=0¾)} , 4,99 (dd, J = 8 Hz, 1H, H-2), 4,55 (d, J = 7,9 Hz, 1H, H-l), 4,39-4,29 (m, 2H, H-6 a 0CH2 (CH^Hg )J , 4,14-4,04 [m, 1H, OCHg(CHssGHg>3,3,82 (t, J = 10,2 Hz, 1H, H-6'), 3,80 (s, 3H, 0CH3), 2,12 (s, 3H, Ac).

Analýza

pro G19H2407 (366,39) vypočteno 62,83 % C, 6,64 % H nalezeno: 62,63 % C, 6,64 % H Příprava 8

Allyl-2-0-acetyl-6-0-benzyl-3-0-methyl-jjfr -D-glukopyranosid (9) Za teploty 0°0 se přidává do roztoku 12,0 g (33,3 mmol) látky 8 a 21,3 ml (Ů33 mmol) triethylsilanu v 50 ml bezvodého dichlormethanu roztok 306 ul (2,10 mmol) anhydridu kyseliny trifluoroctové v 10 ml kyseliny trifluoroctové. Směs se ponechá 4 hodiny za míchání (kontrola CCM), zředí se ethylesterem kyše- φφ φφ φφ ·· φφ φφ φφφφ φφφφ φ φ φ · φ φ φ φ φ φ φ φ φ φ φ φ · φφφ φ φ φ φ φ φφφ φφφ φ φ φφφφ φ · φφ φφ φφ φφφφ φφ φφ -35- liny octové a až do dosažení hodnoty pH 9 se přidává 1 M vodný roztok hydroxidu sodného. Směs se extrahuje do ethylesteru kyseliny octové, roztok se po promytí vodou vysuší a zahustí. Čistěním na koloně oxidu křemičitého (cyklohexan a aceton, 8 : 5) se získá 10,0 g (82%) čisté látky % -40 (c - 1,06, dichlormethan). ljj NMR (CDCl3): & 7,35-7,28 (m, 5H, C6H5), 5,87-5,79 jm, 1H, 00¾($11=0¾)] , 5,28-5,14 {m, 2H, 00¾(0^0¾)], (d, 1H, 7,9 Hz, Ή-1), 4,41-4,28 m, 1H, 00^011=0¾) , 4,10-4,02 jjn, 1H, 0(^(011=0¾ )j, 3,77-3,75 (m, ^H, H-6 a H-6'), 3,51 (s, 3H, 0CH3, 3,30 (dd, 1H, J = 8,9 Hz, H-3), 2,8 (d, 1H, OH). Analýza

pro C Η^Ογ (366,39) vypočteno: 62,28 % C, 7,15 % H nalezeno: 61,73 % C, 7,19 % H ·· " ' '#-*-· - «* ··* var • · · « ♦ · · · · · · · ···· · · · · * · · • · ··· · · · · · ··· ··· • · ···· * · ·· ·· ·· ···· ·· ·· WO 98/03554 •36 PCT/FR97/01344 ‘

< O C 03 O

o c CO o o c ca o s

o e S

O) <o I—l 03

O O c m

Schéma 4: Syntéza disacharidů 13 e ooo o 9 a

e <23 O

Olmldate ·· ·· Μ ·· ·» ·· ···· ···· · · · · » · · · ·· · ···· • · ··· · · · · · ·»· ··· • · « φ · * · ♦ • · ·· ·· ···· f · ·· -37- Připrava 9 A llyl-2 -0-a c e tyl-6-O-be n zy 1-3-0-me thy 1-4-0- (2,6-d i-0- be n-zyl-4-0~levulinyl-3-0-methyl-dl -D-glukopyranosyl)-f>-D-glu-kopyranosid (10). V 150 ml dichlorethanu se rozpustí 17,4 g (33,7 mmol) thio glykosidu 6 a glykosylový akceptor j) v množství 10,3 g (28,1 mmol). Po přidání molekulárního síta A se reakční směs míchá hodinu při -20°C a pod argonem za přidávání roztoku 8,30 g (33,7 mmol) N-jodimidu kyseliny jantarové a 0,30 ml (3,30 mmol) kyseliny trifluormethansulfonové ve směsi dichlorethanu a ethyletheru (415 ml, 1 : 1).Reakční směs se dále míchá 10 minut za kontroly CCM, přidá se hydrogenuhličitan sodný, a po filtraci se organický roztok promýy£ postupně 1 M vodným roztokem thiosíranu sodného, vodou, nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a opět vodou, po vysušení se zahustí Zbytek se čistí chromátografováním na oxidu křemičitém v koloně za použití směsi dichlormethanu a ethylesteru kyseliny octové (11 : 1) a získá se tak 11,7 g (52%) 10- dishcharidu v čisté formě, + 38 (c = 1, dichlormethan). lR NMR (CDC13): ^7,35-7,23 (m, 15 H, 3x C6H5), 5,90-5,80 (m, 1H, OCH^CHtCHg)), 5,47 (d, 1H, J = 3,6 Hz, H-l'), 5,27-5,14 (m,' 2H, 0CH2(CH=CH2)), 5,05-4,90 (m, 2H, H-4'a H-2, 4,42 (d, 1H J = 7,6 Hz, H-l), 4,38-4,32 (m, 1H, 00^(^=0¾)), 4,15-4,0 (m, 1H, 0CH2(CH=CH2)), 3,90 (dd, lil, J = 8,8 Hz, H-4). ^-54, 3,34 (2s, 6H, 2 00H3), 2,75-2,40 (m, 4H, 0(0=0)0¾¾ (0^))0¾), 2,16, 2,10 (2s, 6H, Ac a 0(C=0)CH2C¾(0=0)0¾.

Analýza

pro C45H56014 (820,94) vypočteno: 65,84 % C, 6,88 % H nalezeno: 65,74 % C, 6,90 % H Příprava 10

Prop-l'-enyl-2-0-acetyl-6-0-benzyl-3-0-methyl-4-0-(2,6-di-0-benzyl-4-0-levulinyl-3-0-methyl-dL ~D-glukopyranosyl)-|J-D-gkukopyranásid (ll). -38- . -.. ¢¢.. • · · · • · · · • · · ·· • · * ·» ·· ··' ♦ · · ♦ • · · • · · · • · · • · ···· ·· ·· · • · · · • · · ♦ • ··· ··· • ♦

Do roztoku 1,36 g (1,66 mmol) látky 10 v 4,30 ml tetra-hydrofuranu, prostého peroxidů, se přidá 5,80 mg (0,70 pmol) hexafluorfosforečnánu l,5-cyklooktadien-bis-(methyldifenyl-fosfin)-iridia, roztok se zbaví vzduchu, prostor se naplní argonem a zavádí se vodík* Vše se pomechá za míchání po dobu 10 minut (kontrola CCM), zahustí se, zbytek se rozpustí v dichlormethanu, roztok se promyje nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného, vodou, vysuší se a zahustí. Čistěním na koloně oxidu křemičitého za použití směsi toluenu a ethylesteru kyseliny octové (3 : 1) se takto izoluje 1,04 h (76%) čisté látky 11, 47 (c = 1,1, dichlormethan, LSIMS U ' p 1 kladný způsob: m/z thioglycerol + chlorid sodný, 951 (M + Na) , thioglycerol + fluorid draselný, 967 (M + K)+. ΧΗ NMR (CDC13): 5*7,34-7,23 (m, 15 H, 3 x C^), 6,21-6,16 (m, 1H, 0(0H^0H)-CH3), 5,45 (d, 1H, J = 3,5 Hz, H-l), 5,13-4,97 (m, 3H, H-4,' H-2 a 0(CH=CH)-CH3), 4,6 (d, 1H, J = 7,55 Hz, H-l), 3,96 (dd, 1H, J = 8,9 Hz, H-4'), 3,54, 3,34 (2s, 6H, 2 0CI-I3), 2,74-2,36 (m, 4H, C(C=0)CH2CH2(C=0)CH3), 2,15, 2,08 (2s, 6H, Ac a 0(0=0)0Η20Η2(0^0)0Η3), 1,56-1,51 (dd, 3H, 0(CH=CH)GH3).

Analýza

pro C45H56014 (820,94) vypočteno: 65,84 % C, 6,88 % H nalezeno: 66,21 % G, 6,92 % H Příprava 11 2-0-Acety1-6-0-benzyl-3-0-methy1-4-0-(2,6-di-0-benzyl-4-0-levu-linyl-3-0-methyl-oL'D-glukopyranosyl)-oí , p -D-glukopyranosa (12 ).

Roztok 3,9 g (14,3 mmol) chloridu rtutnatého v 26 ml směsi acetonu a vody (5 : 1) se vkapává do roztoku 7,8 g (9,53 mmol) látky 11 a oxidu rtutnatého v 80 ml stejné směsi rozpouštědel.

Po míchání 1 hodinu se směs filtruje a zahustí, extrahuje di-chlormethanem, roztok se promyje vodným roztokem, nasyceným, jodidu draselného, vodou, vysuší se a zahustí. Čistěním na koloně oxidu křemičitého za použití soustavy dichlormethan a aceton, 10 : 1, potom 4 : 1 se získá 6,70 g (90%) látky 12, ^<£)+ 92 (c = 1,37, dichlormethan.

Chromátografie na tenké vrstvě, dichlormethan/aceton 14 : 1,

Rf = 0,31. -39- -39- ·· ·· • · 99 • • t · • • 9 9 • • • · • · • • • ··· • · 9 • é 9 • • 9 • ·· ·· ·· ···· ' ·· * :: : ·· ·· ·· XH NMR (CDOl^) S* 7,37-7,24 Cm, 15H, 3 x C^), 5,46 (d/ lH» J = 3,5 Hz, Η-1Ί, 5,37 (d, J = 3,6 Hz, H-LdO, 4,58 (d, J = 8 Hz, H-X/ř), 3,54, 3,39, 3!,36 (3s, 6H, 2 OCH3), 2,7_5-2?i4 (m, 4H, 0(0=0)01^01^(0=0)0¾^ 2,16, 2^15 (2s, 6H, Ac a 0(0=0)0^,0¾ (0=0)0¾). Analýza

pro C^2H52014(780,83) bypočteno: 64,60 % C, 6,71 % H nalezeno: 65,09 % C, 6,82 % H Příprava 12 2-0-Acetyl-6-0-benzyl~3-0~methyl-4-0-(í$,6-di-0-benzyl-4--0-levu-linyl-3-0-methyl~^-D-glukopyranosylJ-d , ^ -D-glukoranosyl-trichloracetimidát (13)

Rozpustí se 5,0G g (6,4 mmol) látky 12 v< 50 ml dichlor-methanu a pod argonem se přikapává 3,9 ml (38,8 mmol) trichlor-acetonitrilu a 1,6 g (11,5 mmol) uhličitanu draselného také.

Reakční směs se ponechá za míchání 16 hodin (kontrola CCM), po filtraci se filtrát čistí na koloně oxidu křemičitého za použití soustavy dichlormethan/aceton, 6 : 1, potom 4 : 1 a získá se tak 5,22 g (87%) směsi imidátů 13 (d/p = 60/40). Ghromatografie na tenko vrstvě, dichlormethan/aceton 20 ϊ 1 Rf 0,66 a 0,51. % NMR (CDC13) í 8,62-8,59 (23, 1H, NíH-^aft), 7,37-7,23 (m 15 H, 3 x C6H5), 6,51 (d, J = 3,7 Hz, H-láO, 5,81 (d, J = Hz, H-ip>). 5,50 (d, 1H, J = 3,5 Hz, H-l'), 3,55, 3,41, 3,37 (3s, 9H, 3 00¾^ 2,75-2,40 (m, 4H? 0(0=0^^¾ (0=0)0¾ ), 2,16, 2,07, 2 ,04 (3s, 6H, Ac a (0=0)0^01^(0=0)0¾).

Analýza

Pro G44H52G131014

vypočteno 57,12 % C, 5,66 % H, 1,51 % H nalezeno: 57,31 % C, 5,87 % H, 1,55 % XX -40- ·· ♦♦ • · · · « · * ι • · ··· • » · ·· ♦♦ ·· ·· • · * ® • · · • · · • · · •9 ···· ·· ·♦ • · · ♦ • I· « Φ ·*· ··· • · ·· Μ Příprava 13

Ally1-2-0-aoetyl-6-0-benzyl-3-0-methy1-(2,6-di-0-benzyl- 3-0-11^113/1-^-D-glukopyranosyl)-jjž> -D-glukopyrsnosid (14)

Zpracováním 3,11 g (3,80 ramol) sloučeniny 10 podle způsobu 2 se získá 2,70 g (97%) sloučeniny 14, +25 (c = 1,7, di chlormethan. LSIMS, kladný modul ^m/z thioglycerol + chlorid sodný 745 (M+Na)+, thioglycerol + fluorid draselný, 761 (M+K)+. XH MÍR (CDC13)^ 7,33-7,20 (m, 15 H, 3x C6H5, 5,87-5,78 (m, 1H, 0CH2(CH=C^), 5,50 (d, 1H, J = 3,5 Hz, H-l'), 5,30-5,17 (m, 2H, OCH^CH^CHg)), 5,02 (dd, 1H, H-2), 4,43 (d, 1H, J = 7,6 Hz, H-i), 4^4-4,28 (m, 1H, 00¾(011=0¾)), 4,12-4,02 (m, 1H, 0CH2(011=0¾)), 3,63, 3,36 (2β, 6H, _2 00¾ ), 2,10 (s, 3H, Ac).

Analýza

Pro C40H50°l2 (722,84 ) vypočteno: 66,4/ % 0, 6,97 % H

nalezeno: 66,31 %.G, 7,24 % H e··* «»·· *··· · * · ···· • * · · · · · · · «k · · · ,·»· ···*»· · * • 4 «· 44 ···· ♦· * · VVO 98/03554 41- ; PCT/FR97/01344 '

< - o

o o

δ < * z +

e e O >

o

Sc&ema 5 Syntéza oligosacharidu 19 o

* >

B O o o

D O o o

o

<? ffi o <?

»

42- « · * · · Příprava 14

Allyl-0-(2,6-di-0-benzyÍ-4-0-levulinyl43-0-methyl-J-D-gluko-pyranosyl^l-Hj-O-^-O-acetyl-ó-O-benzyl-S-O-methyl-^ -D~ glukopyranosy 1)-(1-7 4)-0-(2,6-di-0-benzyl-3-0-methyl- ol -D-glukopyranosyl)-(l-$>4)-2-0-acetyl-6~0-benzyl-3-0-methyl-j2> -D-glukopyranosid (15 )

Směs 4,22 g (4,56 mmol) imidátu 13. a 2,65bg (3,64 mmol) glykosyloveho akceptoru 14 se zpracovává dle způsobu 1. Čistěním na koloně oxidu křemičitého za použití soustavy toluen/ diethylether, 3 : 2, potom 1 : 1 se získá tetrasacharid 15. ve výtěžku 4,31 g (80%), U)D +52 (c = 0,66, dichlormethan). 1H NMR (CDC13) ¢^7,35-7,23 (m, 30 H, 6 χ C^), 5,83-5,79 (m, 1H, 00H2(CH=CH2)), 5,47 (d, 2H,. J = 3,5 Hz, H-l "'a H-l'), 5,25-5,14 (m, 2H, 00¾ (GH=GH2)), 4,38 (d, 1H, J = 7,7 Hz, H-l "), 4,30 (d, 1H, J = 8 Hz,, H-l), 4,32-4,25 (m, 1H, OCHg(CH=CH2)), 4,08-4,02 (m, 1H, 0CH2(CH=CH2)), 3,56, 3m53, 3,34,3,27 (4s, 4 0CH3), 2,78-2,40 (m, 4H, 0(0=0)0^01^(0=0)0¾ ), 2,15, 2,D9, 1,85 (3s, 9H, 2 Ac a 0(0=0)0¾0¾£0=0)0¾).

Analýza

pro ^02^x00^25 (^485,7) vypočteno: 66,29 % C, 6,78 % H

nalezeno: 66,10 % 0, 6,79 % H Příprava íéf 0-(2,6,Di-0-benzyl-4-0-levuliny1-3-0-methyl- J.-D-glukopyrano-syl)-(l-T4)-0-(2-0-acetyl-6-0-benzyl-3-0-methyl- j^D-glukopyra-nosyl)-(l‘-^4)-0-(2,6-di-0-benzyl-3-0-methyl- sk-D-glukopyrano-syl)-(l-74)-2-0-ace#yl-6-0-benzyl~3-0-methyl~ β> -D-glukopyra-nosa 16)

Zpracuje se 2,30 g (1,54 mmol) sloučeniny 1£ právě tak, jak to bylo popsáno v přípravě 10, Za 10 minut se přidá do reakční směsi roztok 0,30 g (1,70 mmol) N-bromimidu kyseliny jantarové v 15 ml dichlormethanu a 5,50 ml vody. Vše se míchá 5 minut (kontrola CGM), po zředění směsi dichlormethanem se organický roztok promyje nasyceným vodným roztokem hydrogen- II ·· -43- II ·· -43- «· « 9 • · · · • · · » « · • · · ·· ··*· »· *· • · Λ · • I « * • · · · · t • 9 · «· « · • · * * • m · · « «ι· ··· • · «* ·* síranu draselného, potom vodou a po vysušení se zahustí·

Zbytek se čistí chromátografováním na koloně oxidu křemičitého za eluování směsí toluenu a ethylesteru kyseliny octové (3 : 2) a získá se tím 1,57 g (71%, přepočteno na obě dvě etapy) čisté látky 16, jjjQjj + 69 (c = 0,87, dichlormethan). % NMR (CDC13):Í 7,38-7,20 (m, 30H, 6 x C^), 5,47 (d, 1H, J = 3,5 Hz, H-l"'a H-l'), 5,36 (d, 1H, J = 3,5 Hz, H-loL), 4,55 (d, 1H, J = 8 Hz, H-l), 4,36 (d, 1H, J = 8 Hz, H-l"). 3,56, 3,54, 3,39, 3,36, 3,28 (5s, 9H, 3 0CH3), 2,75-2,35 (m, 4H, 0(0=0)0^0^.(0=0)01^), 2,16, 2,12, 1,86 (4s, 9H, 2 Ac a 0(0=0)0^0^(0=0)0^). Příprava 16 0-(2,6-Di-0-benzyl-4-0-levulinyl-3-0-methyl-d -D-glukopyra-nosyl)-(l 4)-0-(2-0-acetyl-6-0-benzyl-3-0-methyl-ý^ -D-gluko-pyranosy 1)-(1-^)-(2, $-di-0-benzyl-3-methyl- c(-D-glukopyra-nosyl-(lrJ^4)-2-0-acetyl-6-0-benzyl-3-0-methyl- λ ^-D-glůkopy-ranosyltrichloracetamidát (17)

Za teploty místnosti se 16 hodin míchá směs 1,5 g (1,04 mmol) látky 16, 0,63 ml (8,22 mmol) trichloracetonitrilu a 0,26 g (1,87 mmol) uhličitanu draselného v prostředí 15 ml dichlormet-hanu, po filtraci se filtrát zahustí. Zbytek se čistí na koloně oxidu křemičitého s použitím soustavy toluen/aceton 4:1 + hmotnostně 1 %o triethylaminii. Získá se tím 1,47 g (89,6%) sloučeniny 17, chromátografie na tenké vrstvě toluen/aceton 7 : 2, Rf 0,5. Příprava 17

Allyl-0-(2,6-di-0-bsnzyl-3-0-methyl-ci.-D-glukopyranosyj-^-(2-0-acetyl-6-0-benzyl~3-0-methyl-í^-D-glukopyranosyl)-(1-^4)-0-(2,6-d i-0- be nzy 1-3 -0-me thy 1- d\-D-glukopy r a no sy 1) - (1 ) -2-0-a cetyl- 6-0-benzyl-3-0_methyl-^ -D-glukopyranosid (18)

Odstranění zbytku kyseliny levulové z !£. se provede za použití 1,3 g této látky (0,87 mmol) použitím způsobu 2; získá -44- M * t * · · * • « ·· * · « * • · · · • · • · • » Φ Φ ♦ · · • · • · • · • · · * 1 · · • · # · • · · • · • • · · • * φ» «« »1 «*»· ** *» se tak 1,05 g (86%) sloučeniny 18, + 40 (c = 0,6, dichlormet- han. ^ NMR (CDC13)Í 7,36-7,23 (m, 30 H, 6 x 0^),5,83-5,78 (m, 1H, OCH^CH-CIL,)), 5,50 (d, 1H, J = 3,5 Ha, H-l"'). 5,47 (d, 1H, J = 3,5 Ha, H-l'), 5,25.5,21 (ad, 1H, J = 1,6 Ha, J = 17 Ha, 0CH2(CH=CH2)), 5,16-5,13 (dd, 1H, J = 1,4 Ha, J = 10 Ha, 0CH2(CH=CH2)), 4,38 (d, 1H, J = 6,5 Ha, H-l"), 4,31 (d, 1H, J = 6,5 Ha, H-l), 4,08-4,02 (m, 1H, OCHg(CH^CHg)), 3,59 (m, 1H, H-4"'), 3,67, 3,53, 3,39, 3,29 (4s, 12H, 4 0CH3), 2,09, 1,86 (2s, 6H, 2 Ac). Příprava 18

Ally1-0-(2,6-di-0-benzyl-4-0-levulinyl-3-0-methyl- .^-D-glukopyra-nosy1)-(1—A )-|θ-(2-0-ac e tyl-6-0-be nzy1-3-0-me thyl- P -D-glukopy-r a no sy 1) - (4)-0-(2,6 -d i-0- b e n ay 1-3 -0-me thyl- cí—D-gluko py ra no-sy 1) -(1 4 Tj 3 -2 -0-acetyl-6-0- be n z;y 1-3-0-me thyl- p -D-glukopy rá no sid (19)

Směs 842 mg (0,53 mmol) látky 18 a 1,17 g (0,74 mmol) látky 17 se zpracuje podle postupu způsobu 1. Produkt se čistí na koloně

Toyopearl HW-50 (110 na 3,2 cm, soustava dichlormethan/ethanol, 1 : 1) a získá se tak 1,44 g (85%) látky 19, +57 (c =1,01 dichlormethan, hí NMR (CDC13) ξ 7,35-7,20 (m, 60 H, 12 χ C^), 5,83-5,78 (m, 1H, 0CH2 (CH=CH2)), 5,24.5,21 (dd, 1H, 0CH2(CHsCKp)), 5,16-5,13 (dd, 1H, 0CH2(CH=GH2)), 3,59, 3,56, 3,51, 3,47, 3,33, 3,26 (6s, 24 H, 8 0CH3), 2,75-2,25 (m, 4H, 0(0^0)0^01^(080)0^, 2,15, 2,09, 1,85, 1,84 (4s, 15H, 4 Ac a 0(C%0)CH2CH2(C=0)CH3), úhlavních anomerních protonů: 5,48, 4,37, 4,23 ppm Anály za

pr° G156°47H188^2815,51^ vypočteno 66,56 % C, 6,73 % H

nalezeno: 66,22 % 0, 6,75 % H

-46- • t ♦* • · · * 9 · ♦ t 9 9 ··· « · * ·» ·* M ·♦ • · * · • · · • · · M 9 · · · M ** • · · 9 9 · 999 ··· 9 · 9 9 9* Příprava 19 0-(2,6-Di-0-benzyl-4-0~levulinyl-3-0-methyl-4-*D-glukopyrano-syl)-(1^4)- j0-(2-0-acetvl-6-0-benzyl-3,0-meth3?l-p>-D-gluko-pyranosyl)-(l^h4)-.0-(2,6-di-0-benzyl-3-0-methyl- c^-D-gluko-pyranosyl)-(r-^4)j[ 3-.2-0-acetyl~6-0-benzyl~3-0~methyl-<*· - D~glukopyranosa (20).

Postupem, jak to bylo uvedeno v přípravě 15, se zpracuje 720 mg (0,25 mrnol) sloučeniny 19.. Látka se čistí na koloně oxidu křemičitého použitím soustavy toluen a ethylester kyseliny octové 3 : 2, potom 4:3a získá se tak 555 mg (78%) látky 20, [a!^ +70 (c = 0,94, dichlormethan.

Chromátigrafie ba tenko vrstva, toluen, ethylester kyseliny octové, 0,43· Příprava 20 0-(2,6-Li-0-benzyl-4-0-levulinyl-3-0-methyl-dD-glukopyra-nosyl)-(l-*4)-|0-(2-0~acetyl-6-0-benzyl-3_0-methyl- -D- glukopyranosyl)-(l";?4)-0-(2,6-di-0-benzyl-3-0-methyl-c^-D-glukfepyranosyl)-(l«^4)j3-2-0-acetyl-6-0~benzyl-3-0-methyl-- Jsf |>-D-glukopyranosyltrichlorimidát (21).

Postupem jako v přípravě 16 se zpracuje 540 mg (0,195 mrnol) sloučeniny 20. Produkt se čistí na koloně oxidu křemičitého za použití soustavy toluen/ethylester kyseliny octové 3:2+ l%0 triethylaminu. Získá se tím 455 mg (80%) imidátové směsi 21 s poměrem anomérů d-/ {5 - 27/73.

Chromátografie na tenké vrstvě, toluen/ethylester kyseliny octové 3 : 2, = 0,48. lim jtGDGl3) ř 8,60, 8,59 (2S, 1H, N H «U β), 7,35-7,'zí (m, 60 H, 12 x C6H5, 2,75-2,40 (m, 4H, 0(0=0)0^01^(0=0)0^), 2,16, 2,06, 2,04, 1,85, 1,84 (5s, 15H, 4 Ac a 0(0=0)01^^(0=0)0^). MMR (CDCl^, úhlavních anomerních protonů 6,50, 5,79, 5,51, 5,48, §,29, 4,25 ppm. • » * · • ♦ · · • · ♦ · • * «·· « · · ♦ * ·· *» ·♦ * ♦ * z ♦ · · # ♦ / • * · «· ···· ·» ♦· ··» ·«· • · • · «· -46-Λ/ Příprava £1

Penyl-2,4,6-tri-0-acetyl-3-0-methyl-l-thio-ní-D-glukopyrsnosid (22) V 45 ml toluenu se rozpustí 5,23 g (14,4 mmol) 1,2,4,6-tetra-O-acetyl-3-O-methyl-P-D-glukopyranosy, a po přidání 3,0 ml (28,8 mmol) thiofenolu se přikapává 1,77 ml (14,4 mmol) diethyletherátu trifluorboranu, načež se reakční směs vyhřívá 30 minut na 50° C. Po zředěné dichlormethanem se organický roztok promyje nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodné- v* ho, vodou, vysuší se a zahustí. Čistěním na koloně oxidu křemičitého za použití soustavy cyklohexan a ethylester kyseliny octové, 5 : 2 se takto získá 1,00 ig (17%^22-j a 2,71 g (46%) &rp o 22- cl.» Rf 0,44, cyklohexan/ethylester kyseliny octové 3 : 2, T°0d + 2^0 = dichlormethan.ISIMS kladný modul m/z + chlorid sodný, 435 (M+Na)+, + fluorid draselný 451 (M+K)+ ^ mm. (CDCI3) S 7,46-7,27 (m, 5H, C^), 5.89 (d, 1H, J = 5,6 Hz, H-l), 5,05-4,97 (m, 2H, H-2 a H-4), 4,49-4,42 (m, 1H, H-5), 4,25.4,18 (m, 1H, H-6), 4,0§-4,00 (m, 1H H-6'), 3,66 (<jd, 1H, J = 9,5 Hz, H-3), 3,51 (s, 3H, 0CH3), 2,16, 2*12, 2,00 (3s, 9H, 3 Ac),

Anály za pro C^^H^^OgS (412,46) vypočteno: 55,33 % C, 5,87 % H, 7,77 % 3

nalezeno: 55,25 % C, 5,90 % H, 7,75 % S

Schéma 7: Syntéza oligosacharidu 28

-48- Příprava 22

Feny1-4,β-0-benzyliden-2,3~di~0-methyl-l-thio-cL-D-gluko-pyranosid (23) V 18 ml směsi methanolu a dichlormethsnu (2 : l) se rozpustí 970 mg (2,35 mmol) sloučeniny 22., přidá se 150 ml 2 M roztoku methoxidu sodného a po 30ti minutách stání za teploty místnosti se směs neutralizuje na pryskyřici Dowex 50 (H’h), filtruje a filtrát se zahustí. K roztoku tohoto surového produktu v 22 ml acetonitrilu se přidá 0,7 ml (4,0 mmol) <k , -dimethoxytoluenu a 51 mg kyseliny kafrsulfonové (0,22 mmol), reakční směs se míchá hodinu, neutralizuje se přidáním triethylaminu (0,50ml) a zahustí se.

Za chlazení na 0°C se přidává do roztoku předchozí surové sloučeniny a 163 jul (4,0 mmol) methyljodiau v .9 ml ϊί,Ν-dimethylformamidu 73,0 mg (2,80 mmol) hydridu sodíku, po hodinovém míchání reakční směsi se přidá methanol, produkt se extrahuje do ethylesteru kyseliny octové, tento roztok se promyje vodiu, vysuší a zahustí. V pevné formě se takto získá 840 mg (94%) sloučeniny 2£, t.t. 178° C, 0¾ +330 (c = 1, di-chlormethan. ESIMS, kladný-modul m/z + chlorid sodný 411,4 (M + Ea)+, + fluorid draselný 427,4 (M+K)+. XH NMR (CDC13) £ 7,50-7,24 (m, 10H, 2 x C^), 5,71 (d, 1H, J = 3,4 Hz, H-l), 5,52 (s, 1H, CgE^CH ), 3,62 (s, 3H, 0CH3). .A naly za '

pro Cg^Hg^Og ® (388,48 vypočteno 64,92 % C, 6,23 % H, 8,25 % S nalezeno: 64,87 % C, 6,17 % H, 7,85 % S Příprava 23

Fejayl-6-0~benzyl~2,3-di-0-methyl-l-thio- tk-D-glukopyranosid (24)

Jako to bylo popsáno v přípravě 4, zpracuje se 792 mg (0,47 mmol) sloučeniny 23*Produkt se čistí na koloně oxidu křemičitého použitím soustavy cyklohexan/ethylester kyseliny octové 7:2, potom 2 : 1, a získá se tak 318 mg (80%‘| sloučeniny 24. ·· ♦· ·· ·· *» ·· -50- • · « · ··· ♦ · ♦ · • · · · ·· ·· ···· [4 + 243 (c = 1, dichlormethan). ISIMS, hladný modul m/z!~ + chlorid sodný, 4.k3 (M + Ha)+, +"fluorid draselný (M + K)+ 429. XH NMR (GDC13) á 7,52-7,22 (m, 10H, 2x Cg^), 5,71 (d, 1H, J = 5,3, Hz, H-l), 3,64 a 3,49 (2s, 6H, 2 OCH3), 3,36 (dd, 1H, H-3).

Analýza pro C^H^S (390,50) vypočteno: 64,50 % C, 6,71 % H, 8,21 % S nalezeno: 64,05 % C, 6,88 % H, 7,74 % S. Příprava 24

Feny1-0-(2,6-di-0-benzyl-4~0-levulinyl-3-0-methyl- ^-D-gluko-pyranosyl)-(l—=t4)-0-(2-0-acety1-6-0-benzy1-3-0-methyl-^b -D-glu-kopyranosyl)-(l—74)-6-0-benzyl-2,34di-0-methyl-l-thio- o^-D-glu-kopyranosid (25)

Směs 436 mg (0,47 mmol) sloučeniny a 153 mg (0,39 mmol) sloučeniny 24 se zpracuje dle způsobu 1. Čistění se provádí na koloně Sephadex LH20, soustava ethanol/dichlormethan, 1 : 1, tiská se tím 309 mg (68%) čisté látky 2£, + 144 (c = 1, dichlormethan). ESIMS, kladný modul e/z + chlorid sodný 1175 (M+Na)+, + fluorid draselný (M+K)+ 1191. xh mm (odgi3) <S,51-7,21 (m, 25 h, 5 x c6h5), 5,73 (a, ih, j = 5,2 Hz, H-l), 5,48 (d, 1H, J = 3,5 Hz, W-l"), 4,4é (d, 1H, J = 8 Hz, H-l), 3,7, 3,54, 3,5, 3,31 (4s, 12 H, 4 0CH3), 2,70-2,41 (m, 4H, 0(0=0)0^01^(0=0)0^), 2,16, 2,01 (2s, 6H, 1 Ac a 0(C=0)CH2CH2(C=03CH3).

Anály za

pro c63H76°1qS

vypočteno: 65,61 % C, 6,64 % H, 2,78 % S nalezeno: 65,02 % C, 6,60 % h, 2,72 % S Příprava 25

Methy1-0-(2,6-di-0-banzyl-4~0-levuliny1-3-0-methyl- Λ-D-glukopy-ranosy1)-(1-^4)-0-( 2-0-acetyi-6-0-benzyl-3-0-methyl-^-D-glukopy-ranosyl)-(l-^4)-0-(6-0-benzyi-2,3-di-0-methyl-o( -D-glukopyrano-syl)-(1-^4)-(0-benzy1-2,3-di-0-methyl-^ D-giukoV#anurosyl)-(l-?4)- -51- • · ♦·· · · · · · ··· ··· ······ » φ ·♦ ·· ·· ·♦·♦ ·· φφ -0-(3,6-di-0-acetyl-3-0-benzyl- d -D~glukopyranosyl)-( l_y|.)-0-(benzyl-2,3-di-0-methyl-dl L->idopyranurosyl)-(.l“'*'4)-2,3,6-tri--O-benzyl-J^-D-glukopyranosid (27)

Pod argonem a za chlazení na -25°C se přidává roztok 92 mg (0,38 mmol) N-jodimidu kyseliny jantarové a 37,5 yl (0,38 mmol) kyseliny trifluoroctové v 22 ml směsi 1,2-dichlorethanu a diethyl-etheru (l : 1) ke směsi 451 mg (0,39 mmol) sloučeniny 25 a 434 mg (0,31 mmol) sloučeniny 26 v 7,5 ml 1,2-dichlorethanu za přítomnosti 400 mg molekulárního síta 4$, viz Westerduin a spol·, BioOrg.Med.Chem. 2, 1267 (1994). Po 30 minutách se přidá pevný hydrogenuhličitan sodný, roztok se filtruje, promyje roztokem thiosíranu sodného, vodou, po vysušení se zahustí. Zbytek se čistí na koloně Sephadexu LH-20, dichlorrnethan a ethanol (1 : 1), potom na koloně oxidu křemičitého, cyklohexan a ethyl-ester kyseliny octové 1 : 1, potom 2:3. Získá, se tím 487 mg (64%) čisté látky 2_7, řýpp +63 (c = O,54dichlormethan). Chromatografie na tenké vrstvě, cyklohexan/ethylester kyseliny octové 2 ϊ 1, Rf = 0,28. ESIMS, kladný modul,: m/z + chlorid sodný 2454 (M + Ha)+, + fluorid draselný 2469 (M+K)+. XG MR (CD013) 5*7,38-7,2 (m, 50H, 10 x C^), 3,65, 3,52, 3,48, 3,46, 3,44, 3,42, 3,39, 3,30, 3,17 (9s, 27H, 9 0CH3), 2,75»2,4 (m, 4H, 0(C=0)CIi2CH2(C=0)CH3), 2,15, 1,98, 1,97, 1,87 (4s, 12H, 3 Ac a 0(C=0)CH2CH2(C=0)CH3).

Hlavní anomerní protony: 5,57, 5,47, 5,30, 5,15, 4,57, 4,29, 491Ο8. Příprava 26

Methy 1-0-(2,5-di-0-benzyl-3-0-methyl-^ -D-glukopyranosyl)-(l-?4)--0-(2-0-acetyl-6-0-benzyl-3-0-methyl-J> -D~&lukopyranosyl)-(l-74)-0-(6-0-benzyl-2,3-'di-0-methyl-ý^ D-glukopyranosyl)-(l->4)-0-(ben-zyl-2,3-di-0-methyl- p~B-glukopyranurosyl)-(l-*4)-0-(3,6-di-0-pcety 1-2-0-benzy 1- 4D-glukopyranosyl)-(1^4)-0-benzyl-2,3-di-0-me thyl- dJL-idopyra nur osyl) - (1-44)-2,3,6-tr i-O-be nzy 1- JL -D-gluko-pyranosid (28). K odstranění kyseliny levulové z 498mg (0,2 mmol) sloučeniny -52- ·· #♦ ·· ·♦ ·» ♦· ···· · · · · ···· • ••· ·· · ···· • · ··· · · · · # ··· ··♦ «····· · · ·♦ #· ·· ···♦ ·· ♦· 2? se použije postup dle způsobu 2, získá se tak 402 mg (84%) sloučeniny 28. f4) + 64 (c = 1, methylenchlorid). ESIMS, kladný modul . 2352.9 (M + amoniový kation)+. XH NMR jfCDCl^): 7,38-7,20 (m, 50 H, 10 x C^), 3,67, 3,52, 3,48, 3,46, 3,44, 3,41, 3,40, 3,28, 3,17 (9s, 27 H, 9 Ac), 2,65 (d, 1H, J = 2,14 Hz, OH), 1,98, 1,96, l,87(3s, 9H, 3 ac). Hlavní anomerní protony: 5,55, 5,49, 5,30, 5,18, 4,45, 4,31, 4ψ08. Anály ta

pro c127H±52°41 2334,48) vypočteno: 65,34 % C, 6,56 % H nalezeno: 65,40 % C, 6,62 % H Příprava 27

Methyl-0-(2, ó-di-O-benzyl^-O-levulinyl^-O-methyl-^-D-gluko-pyranosy^-(1--)4)-0-(2-0-acety 1-6-0-benzy 1-3-0-methyl~p> -D-gluko-pyranosyl)-(l-> 4)-[0-(2,6-di-0-benzyl-3-0-methyl-°l -D-glukopy-ranosyl)-(l-* 4)-0-(2-0-acetyl-6-0-benzyl-3-0-methyl-$> -D-gluko-pyranosyl)-(l-^ 4)^-0-(6-0-benzyl-2,3-di-0-methyl-cí -O-glukopyra-nosylj-d-v' 4)-0-(benzyl-2,3-di-0-methyl-^D-glukopyranurosyl)-(l-^4)-0~(3,6-di-0-acetyl-2-0-benzyl-^-D-glukopyranosyl)-(lnř 4)„ 0—(benzy1-2,3-di-0-methyl-^-L-idopyranurosyl)-(1-^4)-2,3,6~tri-O-benzyl-c^-D-glukopyranosid (29).

Směs 340 mg (1,16 mmol) sloučeniny 21 a 256 mg (1,09 mmol) sloučeniny 28 se zpracuje dle způsobu 1· Zbytek se čistí na koloně Toyopearl HW-40 ( 3,2 na 70 cm, dichlormethan a ethanol, 1 : 1) a získá se tak 421 mg (78%) čistého 15ti-méru 2_9, + 65 (c = 1, dichlormethan. ESIMS, kladný modul^ m/z + fluorid draselný 2584,3 (M+2K)+, 1736 (M+3K)+. XH NMR (CDC13) í 7,35-7,18 (m, 105 H, 21 x C6H5), 2,75-2,4 (m, 4H, 0(0=0)0^0^(0=0)0¾^ 2,15, l,f* , 1,95, 1,87, 1,83(6S, 24 H, 7 Ac + Ο(0=0)0Η2ΟΗ2(0=Ο)0Η3).

Hlavní anomerní protony: 5,55, 5,48, 5,30, 5,13, 4,56, 4,29, 4,22 4,08.

Schéma 8, Syntéza polysacharidu 91 (příklad 1)

-54- ·· ·· ·· ·· ·· ·· ···· · · · · · · · ♦ ···· · · » ···· • · ··· · · ♦ · · ··· ··♦ ····♦· · ♦ ·· ·· ·· ··♦· ·· ·· Příprava 28

Methyl 0-(2,6~di-0-benzyl-3-0-methy 1-^ -D-glukopyranosyl)-~(2-0-acetyl-6-0-benzyl-3-0-methyl-p -D-glukopyrano-syl) (1-^4)-^0-(2,6-di-0-benzyl-3~0-methyl-ť)rD-glukopyrano-syl (l"^ 4)-(2-0-acetyl-6-0-heiizyl-3-0-inethyl-{í> -D-glukopyra-nosyl )-(1-=94 jJ^-O- (6-0-be nzy 1-2,3 -di-O-me thy 1-ýL, -D-glukopy-rano^yl)-(i-^4)_o-(benzyl-2,3-di-0-methyl- £?-D-glukopyranuro-syl)-(1^4)-0-(^>6-di-0-acetyl-2-0-benzyl- c^D-glukopyranosyl)--(1—^4)-0-benzyl~2,3-di-O-raethyl- (k-L-idopyranurosyl)-(l—^4)--2,3m6-tri-0-benzyl-<^D-giukopyranosid (30)

Použitím způsobu 2 se zpracováním 342 mg (0,087 mmol) sloučeniny 29 získá 253 mg (75%) sloučeniny 30,^¾ +59 (c = 0,92 (dichlormethan). ESIMS, kladný modul m^z + ^luori^ draselný 2535,6 (M+K2+. NMR (CDCL^) § hlavních anomerních protonů: 5,55, 5,50, 5,48, 5,30, 4,56, 4,30, 4,22, 4,08.

Analýza

pro C275H328°65 (4993,37 vypočteno: 65,57 % C, 6,60 % H nalezeno: 65,09 % C, 6,57 % H Příprava 29

Methy1-0-(2,6.di-0-benzyl-4-0-levulinyl-3-0-methyl-^ -D-gluko-pyranosyl)-( 1^4)-0-(2-0-acety 1-6-0-benzy 1-3-O-methyl- f^-D-íglu-kopyranosyl)-(l~>4)-(2,6-di-0-benzyl-3-0-methyl- <K-D-glukopyrano-gy 1)-.(1^4)-0-(2-0-ace ty l-6-0-benzyl-3-0-me thyl- jS-D-glykopyranosyl)-(1*^4))^-0-(6-0-benzy 1-2,3-di-O-methyl- J,-D-glikopyranosyl)-( 1 ^>4)-0- (benzy 1-2,3-di-O-me thyl- Ď-D-glukopyranurosyl)-(l-*4)~ -.0-(3,6-di-0-acetyl-2-0-benzyl-<k-I>-glukopyranosyl)-(l^:74)- ( benzyl-2,3-di-0-methyl-^-l-idopyranurosyl)-( 1^4)-2,3y.6-tri-0- benzyl-^-D-glukopyranosid (31).

Postupem dle,způsobu 1 se zpracuje směs 32,7 mg (20,8 mmol) sloučeniny 11 a 80,7 mg (16,3 ramol) sloučeniny J30. čistění na koloně Toyopearl HW-40, dichlormethan/ethanol, 1 : 1: výtěžek 19ti-méru sloučeniny 31: 60 mg (89%), [,^ + 6l (c = 0,82, di-chlormethan. ISIMS, kladný modul' : m/z + chlorid sodný, 2162,4 (M + 3 íía)^+, + fluorid draselný 2178,5 (M+RK)^+. UMR /CDCl^) hlavních anomerních protonů: 5,55, Jí,48, 5,30, 5,17, 4,56, 4,28, 4,22, 4,08.

Sshema 3: Syntéza disacharidu 37

-57- * i »· e ♦ · · • * • «1 • · • * 0 · · # O · • » • · • * « · · a m • · • · ··· 9 « · · • o c · ·«» • · • • 4 ♦ • • · ·· ···· • * ·· Příprava 30

Ethyl-0-(4,6-0-benzyliden- -D-giukopyranosyl)-(l 4)-6-0-tri-tyl-l-thio- fc -D-glukopyranosid (33.) · K suspenzi 50,0 g (0,105 mmol) sloučeniny 32., viz Westman J. a Nilsson M., J.Carbohydr.Chem. 14, 949-960 (1995) v 520 ml dichlormethanu >se pod argonem přidá:35 ml (0,252 mol) triethyl-aminu, 29,3 g (0,105 910!) tritylchloridu, a 1,28 g (10 mmol) 4-dimethylaminopyridinu. Reakční směs se zahřívá 2 hodiny do varu pod zpětným chladičem za kontroly CCM, po ochlazení na teplotu místnosti a zředění přidáním 500 ml dichlormethanu se organický roztok promývá postupně 10%ním vodným roztokem hydrogensíranu draselného, vodou a nr,syceným roztokem chloridu sodného. Po vysušení a zahuštění se filtrováním na koloně oxidu křemičitého za použití soustavy toluen/aceton, 65 : 35, později 50 : 50 získá surový produkt 3^., dostatečně čistý k použití v tomto stavu v následujícím stupni. Analytický vzorek se chromátografuje, £.0¾ + 53 (c = 0,74, dichlormethan)- ISIMS, negativní modgl; m/z 715 (M-H)~. XH NMR (CDgCl J 7,52-7,25 (m, 20H, 4 x C6H5), 5,42 (á, C^CH), 4,97 (d J = 3,5 Hz, H-l'), 4,40 (d, J = 9,6 Hz, H-l), 3,82 (t, J = 9,3 Hz, H-R'), 3,70, 3,68 (m, 2H, H-3, H-4), 3,60 (dd, J = 2,0, 11,0 Hz, H-6a), 3,55 (td, J = 5,2, 9,7, 9,7 Hz, H-5'), 3,49-3,45 (m, 3H, H-2, H-2',H-5), 3,38 (dd, J = 10,5 Hz, H-6'a), 3,33 (dd, H_6'b), 3,30-3,27 (m, 2HT H-4'-, H-6b), 2,90-2,77 (m, 2H, SířHgCH^, 1,40-1,37 (t, 3H, CH2GH3).

Analýza:

Pro °40H44°ioS vypočteno 67,02 % C, 6,19 % H, 4,47 % S nalezeno: 66,83 % C, 6,19 % H, 4,19 % S. Příprava 31

Ethyl-0-(4,6~0-benzyliden-2,3-di-0-methyl- Á-D-glukopyranosyl)-(1 ~H)~2,3-di-0-methyl-6-0-trityl-l-thio- β-D-glukopyranosid (3,4)

Pod argonem se přidává po kapkách 34 ml (0,537 mol) methyl- -58- • · ·· ♦··· • · • · « • · · ··· ··♦ + ♦ «· *# ·· jodidu do roztoku 64,1 g sloučeniny 32 v 600 ml dimethylform-amidu, po ochlazení na 0° C se přidává pomalu 13,5 g (0,536 mol) hydridu sodíku, reakční směs či lépe suspenze se míchá za teploty místnosti po 2 hodiny, ochladí se na 0°C, přikapává se 35 ml methanolu a po dvouhodinovém míchání se reakční směs zředí přidáním 500 ml ethylesteru kyseliny octové, potom 600 ml vody. Vodný podíl se extrahuje do ethylesteru kyseliny octové, organický roztok se promyje vodou, vysuší se a zahustí. Zbytek 34 je dostatečně čistý k použití v dalším stupni. Analyticky čistý vzorek se získá chromátografováním na koloně oxidu křemičitého za použití soustavy cyklohexan a aceton, 70 : 30, jjCj-Q +45 (c = 0,83, dichlormethan). ESIMS, kladný modul m/z + chlorid sodný, 795 (M+Ha)+, + fluorid draselný 811 (M+K)+. ΧΗ NMR (CDC13): í 7,52-7,19 (m, 20 H, $ x C6H5), 5,51 (d, J = 3,3 Hz, H-l'4T 5,43 (s, C^CH), 4,45 (d, J = 9,8 Hz, H-l), 3,60, 3,59, 3,49, 3,51 (4s, 12 H, 4 OCI-y, 2,86 (q, 2H, j = 7,5 Hz, SCHgCH^), 1,40 (t, 3H, SCH2CH3).

Analýza

Pro C44H52°10 S

vypočteno: 68,37 % C, 6,78 % H, 4,15 % S nalezeno: 68,28 % C, 6,98 % K, 4,09 % S Příprava 32

Bthyl-0-(2,3-di-0-niethyl-<* -D-glukopyranosyl)-(l->4)-2,3-di-0~ methyl-l-thio-|)-D-glukopyranosid (35.). 2 hodiny se zahřívá 67,4 g surového produktu 34_ v suspenzi v 470 ml 60%ního vodného roztoku kyseliny octové na 80°C, po ochlazení a filtraci se reakční směs zahustí. Ke zbytku se přidá roztok 940 mg natriummethoxidu v 200 ml methanolu během hodiny, roztok se potom neutralizuje na pryskyřici Dowex 50WX4 (H+), filtruje, filtrát se zahustí a čistí na koloně oxidu křemičitého za použití soustavy toluen/aceton, 60 : 40. Získá se tak látka 35 ve výtěžku 27,9 g, tj. 60%, a to ve třech etapách. +26 (c = 1,07,di- -59- 4 · • · • « M ·· • 4 · * • 4 • · • · * · # · • · • * • · • · 4 4 « • · · • · · · • · 4 · • ··· • • · • « • é · #44 #· 4 #4 # 0 « 4 · chlormethan)* ESIMS, kladný modul : m/z + chlorid sodný 465 (m+ha)+í + fluorid draselný 481 (M+K)+. XH HMR (CDC13) §,S2 (d, J = 3,9 Hz, H-l), 4,35 (d, J = 9,8 Hz, H-l), 3,64,3,64, 3,59, 3,58 (4s, 12 H, 4 OCH3), 1,29 (t, 3H, J = 7,4 Hz, SCHgC^). A naly za pro C18H340l0S.H20

vypočteno: 46,94 % C, 7,87 % H, 6.96 % S nalezeno: 47,19 % C, 7,72 % H, 6,70 % S Příprava 33

Ethy 1-0-(6-0-ace ty 1-2,3-di-O-methyl-Á-H-glukopyranosy 1)-(1^4) . 6-0-acetyl~2,3-d.i-O-methyl-l-thio-^ -D-glukopyranosid (3.6)

Roztok 5,86 g (13,2 mraol) triolu a 3,21 g (29,1 mmol) H-acetylimidazolu v 120 ml dichlorethanu se zahřívá 16 hodin do varu pod zpětným chladičem. Po přidání 440 mg (3,96 mmol) H-acetylirriidazolu se směs míchá 4 hodinx, nechá se ochladit na teplotu místnosti, po přidání 2 ml methanolu se znovu míchá hodinu a zředí se přidáním litru dichlormethanu. Organický roztok se promývá postupně 1 M vodným studeným roztokem kyseliny chlorovodíkové, studenou vodou, vodným nasyceným roztokem hydrogenuhlicitanu sodného, opět vodou a po vysušení se zahuptí. Chromatografováním zbytku za použití soustavy toluen/aceton 3,5 : 1 se získá diacetylderivát 36 ve výtěžku 3,97 g (57%), 13¾ +33 (c = 1,90, d.ichlormethan). ESIMS, kladný m/z + chlorid sodný 549 (M+Ha)+, + fluorid draselný 565 (M+K)+, XH NMR (CDC13) čT5,51 (d, J = 3,9 Hz, H-l'), 4,34 (d, J =ra9,8 Hz, H-l), 3,64, 3,63, 3,59, 3,56 (4s, 12H, 4 OGH35? 2,u, 2,06 (2s, 6H, 2 Ac), 1,31 (t, 3H, J = 7,4 Hz, SCE^CEj).

Anály z§. pro C22^38^12^ vypočteno: 50,17 % G, 7,27 % H, 6,09 % S nalezeno: 50,15 % C, 7,49 % H, 5,89 % S Příprava 34

Ethyl-0-(6-0-acetyl-4-0-levulinyl~2,3-di-0-methyl-d. -D-gluko-pyranosy1)-(1--¾ )-6-0-acetyl-2,3-di-0-methy1-1-thio-/fl-D-gluko_ pyranosid (37). —60— 91 ·* ·· • I ’Ι · · · • * ··· * · # · t 9 · • f ·· · ··· • · · ···» ·· ·*

Do roztoku 19,4 g (36,8 mmol) diacetylaerivátu 3j6 v 400 ml dioxanu se přidá pod argonem 7,53 ml (73,5 mmol) kyseliny levulové, 14,1 g (73,5 mmol) hydrochloridu l-(3-dimethylamino-propyl)-3-ethylkarbodiimidu a 900 g (7,35 mmol) 4-dimethylami-nopyridinu, reakční směs se míchá 3,5 hodin, zředí se potom přidáním 1,5 1 dicnlormethanu, roztok se pi^iývá postupně vodou, 10%ním vodným roztokem hydrogensíranu draselného, opět vodou, vodným roztokem (2%ním) hydrogenuhličitanu sodného, znovu vodou, a po vysušení se zahustí. Chromatografováním zbytku za použití soustavy dichlormethan/aceton 97 : 3, potom 79 : 21 se izoluje takto 21,8 g (9^%) derivátu 37» (c = 2, dichlormethan. ESIMS, kladný : m/z + chlorid spdný 6&7 (M+Na)+, + fluorid draselný 663 (M+K)+. % Hffl (GDC13) $*5,56 (d, J = 3,9 Kz, H-l), 4,35 (d, J = 9,8 Hz, H-l), 3,64, 3,60, 3,58, 3,55 (4s, 12H, 4 OCH-j), 2,76-2,71 (m, 4H, 0(0=0)CH2CH2(C=0)CH3), 2,19, 2,08, 2,07 (3s. 9H. 2 Ac a 0(0=0)0^0^.(0=0)0^), 1,31 (t, 3H, J é 7,4 Hz, SCHgCE^

Anály za

pro C27H44°14S vypočteno: 51,91 % C, 7,10 % Η, 5,13 % S nalezeno: 51,88 % 0,,,7,05 % H, 4,96 % S,

Schéma 10

Syntéza disacharidů 38 a 40 25

38 40 V# »« ♦· ·* ·* ·· • · · +·«· · · · ♦ • · 9 · · · · · · · • «·· · · · * * ··· ··· -6l- f · · · 4 · * • t ·· ·· ···· *· ** Příprava 35 0-(6~0~Acetyl-4-0-levulinyl-2,3-di-O-methyl-ol-D-glukopyranosyl)-(1 4)-6-0~acetyl-2,3-di-0-methyl-^> -D-glukopyranosyl-trichlor-acetimidát (38)

Do roztoku 9,53 (15,3 mraol) thioglykosidu 37 ve směsi 180 ml dichlormethanu a diethyletheru (1:1), 1,4 ml (76,3 mmol) vody, 6,84 g (30,5 mmol) N-jodimidu kyseliny jantarové se přidá 0,51 g (1,98 mmol) stříbrné soli kyseliny trifluoroctové. Po 15ti minutách (kontrola CCM) se přidá 5 ml nasyceného vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného, reakční směs se zředí přidáním 1,5 litru dichlormethanu, vše se promyje vodou, 1 M vodným roztokem thiosíranu sodného a 2%ním vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného. Po vysušení a zahuštění se zbytek chromatografie na koloně oxidu křemičitého (ethylester' kyseliny octové/cyklohexan, 80:40, pak 100:0), získaný pevný zbytek se hned použije v dalším stupni bez charakterizování. K roztoku 7,88 g (13,6 mmol) právě popsané látky v 150 ml dichlormethanu se pod argonem přidá 7,08 g (21,7 mmol) uhličitanu česného a 6,81 ml(67,9 mmol) trichloracetonitrilu, po 40ti minutách (kontrola CCM) se směs filtruje, zahustí a Čistí: toluen/aceton 85:15, získá se tak 9,16 g imidátu 38 (83% ve dvou stupních). ift + 118 (c = 100, dichlormethan. ESIMS, kladný modul m/z + chlorid sodný 746 (M+Na)+, 741 (M + DH^)+. -4-1 mm (CDC13): ^8,66, 8,65 (2s, 1H, «Α a^ íN:H), 6,52(d, J = 3,6 Hz H-lck), 5,70 (d, J = 7,5 Hz, H-lf>), 5,58 (d, J = 3,7 Hz, H-l), 2,78 2,57 (m, 4H, 0(C=0)X5H2CH2(C=0)CH3), 2,18, 2,07, 2,06 (3s, 9H, 2 Ac a o(c=o)ch2ch2)(c=o)ch3),

Anály ta pro C27H40C13N015.0,5 HgO Vypočteno: 44,18 % C, 5,63 % H, 1,98 % H nalezeno: 44,14 % C, 5,61 % H, 1,97 % Η Příprava 36 2-(Trimethylsilyl)-ethyl-0-(6-0-acetyl-4-0-levulinyl-2,3-di-0-met-hyl- (jjj-D-glukopyra nosy 1)-(1 -^4 )-6-0-8čety l-2p3--di-0-m9thyl-e/y® -D~ glukopyranosid (3,9)

Podle způsobu 3 se provede reakce 10,6 g (16,94 mmol) thiogly-kosidu yj_ s 4,8 ml (33,90 mmol) 2-(trimethylsil:/l)-ethanolu v 105 ml směsi dichlormethanu a diethyletherz 1:2. Zbytek se čistí chromato- -62- Μ ·♦ ·· ·· ·· ** • · · · #·♦· * * * * ···· ·· · ···· • · ·«· » · · · · ·*· ··· * » #··♦ · · Μ «· ·· ···· ·· ·· graficky za použití soustavy aceton/dichlormethan, 1:1a získá se tímto způsobem 9,80 g (85%) sloučeniny 39 ve formě směsi čhbou možných anomerů, <=*· / ft 65:35. ESIMS, kladný modul m/z + chlorid sodný 703 (M + Ha)+. XH NMR (CDC13): £ 5,58 (d, J = 3,9 Hz, H-l'), 4,94 (d, J = 3,5 Hz, H-lcjL), 4,26 (d, J = 7,7 Hz, H-l f ), 2,76-2,56 (m, 4H 0(0=0)^01^(0=0)0^), 2,17, 2,08, 2,05 (3s, 9H, 2 Ac a 0(C=0)CH2CH2(G=0)CH3), 1,18-0,88 (m, 2H, OCHgCHgSifCEj )3 , 0,02 (s, 9H, GH2CH2Si(GH3)3)0 Analýza pro C3qH320^3Sí vypočteno: 52,92 % G, 7,69 % H nalezeno: 53,29 % C, 7,75 % H. -63- -63- » ·« • « ♦ • · · • · ► · · « ► · · · ··· ··· Příprava 37 2-(Trimethylsilyl)-ethy 1-0-(6-0-acety 1-2$i3-di-0-methy 1-ά -D-gluko-pyranosyl)-(l 4)-6-0-acetyl-2,3-di-0-methyl-dl φ -D-glukopyrano-sid (40)«

Podle způsobu 2 se působí na 9,41 g (13,82 mmol) sloučeniny 29 octanem hydrazinu (10 mol/mol/ ve směsi toluenu a etha-noiu 1 : 2 (21 ml/mmol)· Chromatografováním zbytku v soustavě aceton/toluen 60 : 40 se takto připraví 4,81 g (60%) sloučeniny &© ď, jakož i 3,06 g (37%) směsi 40 4>/. 40 d. : jyMp + 132 (c = 0,6l, dichlormethan), ESIMS, kladný modul: m/z + chlorid sodný 605 (M+Na)+, + fluorid draselný 621 (M+K)+ hí NMR (CDC13) ζ 5$i55(d, J = 3,8 Hz, H-l'), 4,95 (d, J = 3,6 Hz, H-l), 2,10, 2,08 (2s, 6H, 2 Ac$, 1,16-0,89 (m, 2H, OCHgCHgSiCCH^)^), 0,02 (s, 9H, ΟΟΙ^ΟΗ^ΚΟ^^*»

Analýza

pro C25H48°l3Si vypočteno 51,53 % C, 7,96 % H nalezeno: 51,37 % 0, 8,06 % H

Schéma 11

Syntéza tetrasacharidu 41 OAc

SĚt 37

1

OAC

3 -64-

Příprava 38 2~(Trimethylsilyl)-ethyl-0~(6-0--acetyl-4-0-levulinyl-2,3-di- O-me thy 1- -x -D -gluko py r a no sy 1) - (1—7 4) -£θ- (6-0-ac e ty 1-2 , 3-d i-O-methyl- ^ -D-glukopyranosyl)-(l'^?4) O-methyl-^-D-glukopyranosidu (4l2

Podle způsobu 3 se zpracuje 4,21 g (6,74 mmol) thioglyko-sidu 37 a 3,57 g (6,13 mmol) glykosylového akceptoru ve směsi 105 ml dichlormethanu a diethyletheru (1 : 2), Reakční zbylý produkt se čistí chromatografováním na oxidu křemičitém za použití soustavy aceton/cyklohexan 3 : 1, potom 9:1a získá se tak 4,81 g (69%) sloučeniny 41,10¾ + 143 (c = 0,56, dichlor-methan. ISIMS, kladný modul m/z + chlorid sodný 1167 (M+Ia)+, + fluorid draselný 1183 (M+K)+. XH Kli: (GDC13) % 5,57 (d, J = 3,9 Hz, H-l"T, 5,44, 5,41 (2d, J = 3,8 Hz, H-l", H-l' ), 4,96 (d, J = 3,6 Hz, H-l), 2,78-2,58 (m, 4H, 0(0=0)0^0^(0=0)0^), 2,18, 2,12, 2^.12, 2,09, 2,06 (5s, 15 H, 4 Ac a 0(C=0)CH2CH2(0=0)0¾), 1,21-0,67 (m, 2H, 0CH2CH2Si(GH3)3), 0,03 (s, 9H, OOHgCHgSKC^ )3).

Analýza pro C50H6402?Si

vypočteno: 52,54 % G, 7,39 % H nalezeno: 52,29 % 0, 7,48 % H w -65.- • · t « · ···· · · · · · · · • · ·«· · · · · · ··#··· ·..· pcjynwjnud/i' 5

Schéma 12

Syntéza tatrasacharidu 42. OAe

38

36 OAc

OAc

10 Příprava 38

Bthyl-0-(6-0-acetyl-4-0-levulinyl-2,3-di-0~methyl~o( -D-gluko-pyranosy 1)-(1-^40 -{jC-( 6-O-acety 1-2,3-d i-O-me thy1- ^ -D-gluko-pyranosyl-(l-*4)^2-6“0-acetyl-2,3-di-0-methyl-l-thio-p>~D~ glukopyranosid (42)

Podle způsobu 1 se provede reakce roztoku 1,10 g (1,52 mmol) imidátu a 806 mg (1,38 mmol) glykosylového akceptoru 36 ve 22 ml směsi dichlotmethynu a diethyletheru. Čistění chro-matografováním na oxidu křemičitém, soustava ethylester kyselí- ·· ♦· ♦· ·· ·· ·· • # · t · ♦ · · · · t · • · · · · · · · · · · • # ··· · · · · · ··· ··· «····· · · ·· ·· ·· ···· ·· ·· -66- ny octové a cyklohexan 2,5 : 1, potom 3 i· 1. Získá se tak 1,12 g (71/5) sloučeniny 42. +95 (c = 1,00, dichlormethan). ESIMS, kladný i modul m/z + chlorid sodný 1111 (M+Ha)+, + fluorid, draselný 112 7 (M+K)+. xh mm (cdci3) £55 (a, j= 3,9 Hz, h-i'", 5,39, 5,37 (2a, j = 3,8 a 3,9 Hz, H-l" a H-l'), 4,34 (d, J = 9,7 Hz, H-l), 2,84-2,51 (m, 6H, SCI^CE^ 0(0=0)0^01^(.0=0)0^), 2,17, 2,10, 2,08, 2,09, 2,04 (5s, 15 H, 4 Ac a 0(0=0)0^01^(0=0)01^), 1,30 (t, 3H, J = 7,4 Hz, SCH2CH3).

Analýza

pro 047H76O26S

vypočteno: 51,83 % C, 7,03 % H, 2,94 % S nalezeno: 51,66 % C, 7,02 % H, 2,94 % S

Schéma 13 Syntéza pólysacharidu 47 -68- ·· Μ ·· « « · Φ · · Φ · · Φ · · • ···+·· · • · · · · ·· ·· ΦΦ Μ ΦΦ ·· • · Φ Φ · • · · · · • · · · · Φ· · • · · ···· ΦΦ ΦΦ Příprava 40 2-(Trimethylsilyl)-ethyl-j0-6-B-acetyl-2,3-di-0-methyl-c/ -D-glukopyranosyl-(l—?4)-33“6-0-acetyl-2,3-di-0-methyl-o(-D-gluko-pyranosid (43). .se zpracuje

Podobným způsobem/ jak to bylo popsáno v přípravě .37^4,71 g (4,11 mmol) sloučeniny 41, aby se tak získal po chromátografování na koloně zs použití soustavy cyklohexan/aceton, 3:2, derivát vzorce 43 ve výtěžku 4,11 g (95%). + 154 (c = 0,63, dichlor- methan ). BSIMS modul kladný, m/Z + chlorid sodný 1069 (M+lTa)~, + fluorid draselný 1085 (M+K)*’. 1H NMR (CDCl.) J 5,46, 5,45, 5,41,(2d, 3H, J = 3,9 Hz, H-l', H-l", fr-1 J, 4,95 (d, J = 3,5 Kz, H-l), 2,81 (d, J = 4,4 Hz, OH), 2,11, 2,09, 2,08 (3s, 12H, 4 Ac), 1,19-0,97 (m, 2H, OCHgCr^SKC^^), 0,03 (s, 9H, OCHgCHggKCH^).

Analýza pro

vypočteno: 51,61 % C, 7,51 % H nalezeno: 51,39 % C, 7,54 % H Příprava 41 2-(Trirnethylsilyl)~ethyl-0-(6~0-acetyl-4-0-levulinyl-2,3-di--0-methyl-c/.-D-glukopyranosyl)-(l—:í4)-^0-(6-0-acetyl-2,3-di-0-methyl-</.-D-glukopyranosyl)-(l—74)-3g-6-0-acetvl-2,3-di-0-met-hyl-c^ D-glukopyranosid (44)

Podle postupu 38 se provede reakce 3,86 g (3,54 mmol) thioglykosidu 42 a glykosylového akceptoru 43. v množství 3,60 g (3,44 mmol)o Ohromatografováním za použití soustavy dichlormet-han/aceton 7 : 2, potom 2 : 1 se získá 5,71 g látky 44 (80%), + l6l (c = L,65, dichlormethan)- BSIMS, modus kladný: mono-isotopická hmotnost = 2072,8, hmotnost chemická = 2074,2, hmot nost expatimantální = 2074 * 1 u.m.a. XH M (CDC13) <f 5,54 (d, J = 3,8 Hz, H-l, jednotka MR), 5,47-5,40 (m, 6H, H-l), 4,95 (d, J = 3,7 Hz, H-l,,jednotka R), 2,84- 2,51 ), 4H, 0(C=0)CH2CH2(C=0)CH3), 2,17, 2,13, 2,12, 2,11, 2,11, 2,08, 2,05 (7s, 27H, 8 Ac a 0(0=0)01^0^(0=0)0¾ h 1,18-0,97 (m, 2H, 0CH2CH2Si(CH3)3), 0,03 (s, 9H, OC^CHgSK^ )3)·

Analýza pro C9oHi4605tSi

vypočteno: 52,12 % C, 7,19 % H

nalezeno: 51,98 % C, 7,25 % H Příprava 42 2-(Trimethylsil;va)-ethyl-|0-(6-0-acetyl~2,3-ái-0-methyl- cl-D-glukopyranosy^-(l-H)-\7-6-0-acetyl-2,3-di-0-.methyl-«l-D-glu- lcopyranosid (45)

Za chlazeni na 0 C se přidává 7,3 ml 1 M roztoku hydrazin-hydrátu ve směsi kyseliny octové a pyridinu (3 : 2) k roztoku 3,00 g (1,45 mmol) sloučeniny 4£ v 5 ml pyridinu· Reakční směs se míchá 20 minut, zahustí se, zbytek se zředí přidáním 400 ml dichlormethanu, tento roztok se promyje 10%ním vodným roztokem hydrogensíranu draselného, vodou, 2%ním vodným roztokem hydro-genuhličitanu sodného, opět vodou, vysuší se, zahustí a chromá-tografováním zbytku se takto získá 2,43 g (85%) sloučeniny 45, yJjj + 167 íío = 0,57, dichlormethan), ESIMS, modus kladný: mono-isotopiclcá hmotnost = 1974,8,, hmotnost chemická = 1976,1, hmotnost experimentální = 1975,4 i 2 u.m.a* λΕ MÍR (GDCl3)á 5,47-5,40 (m, 7H, H-l), 4,95 (d, J = 3,7, H-l, jednotka R), 2,80 (d, J = 4,4 Hz, OH), 2,13, 2,11, W,10, 2,08, 2,07 (5s, 24H, BÁQ), 1.18-0,97 ( m, 2H, OCHgCí^SKCEj )3), 0,03 (s, 9H, OCHgCHgSiíCH^).

Analýza pro °85κΐ42°4θ"±

vypočteno: 51,66 % C, 7,24 % H nalezeno: 51,32 % G, 7,26 % H Příprava 43 2-(Trimethylsilyl)-ethyl-0-(6-0~acetyl-4-0-levulinyl-2,3~di-0-me thy 1--Drglukopy r a no sy 1) - (1—>4)-|θ-(6-0-a c e ty 1-2,3-d i-O-me t-hyl-<^-D-glukopyranosyl)-(l•^•4)-J^q -6-0-acetyl-2,3-di-0-met~ hyl-X-D-glukopyranosid (46) -70-

Podobně, jako v přípravě 38, se provede reakce 1,35 g (1,24 mmol) sloučeniny 42 s 2,38 g (1,20 mmol) sloučeniny álo Ohromatografováním reakčního zbytku za použití soustavy cyklohexan/aceton (4:3) se získá 2,56 g (71%) sloučeniny 46,

Kli) + ^ = °>88> dichlormethan), ESIMS, modus kladný: monoisotopická hmotnost = 3001,3, hmotnost chemická * 3003,2, hmotnost experimentální = 3004 ± 1 u.m.a. H líMR (CDCl^) $ 5,54 (d, J = 3.8 Hz, H-l, jednotka NR), 5,47-5,40 (m, 10H, H-l), 4,95 (d, J = 3,7 Hz, H-l jednotky NR), 2,81-2,51 (m, 4H, 0(0=0)0^01^(0=0)0^), 2,17, 2,13, 2,12, 2,11, 2,11, 2,08, 2,05 (7s, 39H, 12 Ac a 0(C=0)CH2CH2(G=0)CH3), 1,17-0,96 (m, 2H, OCHgCHgSKCH^)^), 0,03 (s, 9H, OCHgCHgSKCH^ ). Analýza

pro °130%12075S:L

vypočteno: 51,99 % C, 7,12 % H nalezeno: 51,63 % C, 7,12 % H Příprava 44 (6_0~A čety 1—4-0-le vůli ny 1-2,3-di-0-me thyl— d —D-glukopyrano.. sy 1)-(1-74)- O-(6-0-ace ty 1-2,3-d.i-O-methyl- o^D-glukopyra-nosyl)-(l-^4)-j10-6-0-acetyl-2,3-di-0-methyl- -Dglukopyra-nosyl-trichloracetimidát (47). (a) Pó dobu 1,5 hodin se míchá za kontroly CCM roztok 400 mg (0,1333 mmol) glykosidu 46 v 2 ml směsi kyseliny trifluor-octové a dichlormethanu 2:1, Směs se zředí přidáním 12 ml směsi toluenu a n-propylesteru kyseliny octové 2 : 1, zahustí se a znovu odpaří přidáním 10 ml toluenu a to se opakuje celkem 5x. Ohromatografickým čistěním zbytku za použití soustavy aceton/cyklohexan 4 : 3 se získá 364 mg pevné látky. (b) Takto získaná pevná látka se rozpustí v 2,5 ml dichlor-mehanu, přidá se 65 mg (0,200 mmol) uhličitanu česného a 63 ml (0,620 mmol) trichloracetonitrilu, reakční směs se míchá 2,5 ho- -71- • ♦ · η· s β ; i* : 0 · Λ f * · · 1 • '· ··: · t 1 .· • ·»· ··· • • © ·· #· ·♦#· *♦ ·« diny, po filtraci celitem se zahustí a zbytek se čisti na koloně oxidu křemičitého za použití soustavy cyklolaexan/aceton/tri-ethylamin 50 : 50 ; 0^1. Připraví se tak 348 mg (86%) imidátu 41» ΓΌρ + 185 (c = 0,91, dichlormethan). ISIMS, modul kladný: monoisotopická hmotnost = 3044,1, hmotnost chemická 3047,3, hmotnost experimentální 3046,9 ± 0,2 u-m-aT. lpI imr (CDC13) $ 8,61, 8,58 (2s, 1H ol a JMTÍH), 6,35 (d, S = 3,7 Hz, H-l cL jednotky R), 5,59 (á, J = 7,5 Hz, H-l jednotky R), 5,38 (d, J = 3,8 Hz, H-l jednotky NH), 5,32-5,25 (m, 10H, H-l)-2,64-2,40 (m, 4H, 0(0=0)0^0^(0=0)0^), 2,02, 1,96, 1,95, 1,94 1,93, 1,89 (6s, 39 H, 12 Ac a 0(0=0)0^0^(0=0)0113).

Analýza pro ¢127^0°1^¾

vypočteno: 50,06 % c, 6,6l % H, 0,46 % N nalezeno: 49,93 % C, 6,52 % H, 0,42 % H WO 98/03554 -72 ♦ · *f « I * » · · · · <« · » f J« · « · * · ·

It « ··»<*« · « ·«· ·«· • 4 ♦ · · · · · ·· M ♦* ···» c· ·· PCT/FR97/01344 '

Q O

o a

BnOOC-V^ O β„α\/ β"° OM« 6 o

Schéma 14Syntéza oligosacharidu 50 í

0 1 O s

o -73« -73« «# :* s l ·* · · I « · · o«* ·♦» * · : j: í í • I «·* # » · · »4 · · · · ·· «♦ M ··«· Příprava 45 (6-0-A c e ty 1-4-O-levuliny 1-2,3 -d i-O-me thy 1- d -D-glukopyra-nosyl-(l—Ή)- (Ó-(6-0-acetyl-2,3-ái-0-methyl-cA -D-glukopyrano-sy1)-(1-^4)^2“^*“°“ace^3^4-2,3-di-O-methyl-4 ,j^-D4glukopyrano-syl-trichloracetamidát (48)

Podobně jako při’postupu 44 se zpracuje 200 mg (0,174 mmol) sloučeniny 41, Rea£ční směs se čistí chromátografováním na koloně oxidu křemičitého s použitím soustavy toluen-aceton 3:2 a získá se tak 230 mg (77%) imidátu 48. ESIMS, modul kladný: rn/z + chlorid sodný 1210 (M+Ha)+, + fluorid draselný 1226 (M+K)+. ΧΗ HMR (CDC13) 5* 8,66-8,64 (2s, III, 41 a b I=H), 6,51 (d,J= 3,6 Hz, H-loO, 5,71 (d, J = 7,5 Hz, H-lp), 2,90-2,52 (m, 4H, 0(0=0)0^,011,(0=0)0¾¾ 2,17, 2,11, 2,11, 2,09, 2,05 (5s, 4 Ac a 0(0=0)0^0^)0=0)0¾). Příprava 46

Methyl-0-(6-0-acetyl-4-0-levulinyl-2,3-di-0-methyl-dt -D-gluko-pyra nosy1)-(1-^4)- [0-(6-0-acetyl-2,3-di-0~methyl-i -D-glukopy-ranosyl-( 1-=^4-))^-0-(benzyl-2,3-di-0-methyl-β -D-glukopyra-nurosyl)-(l-'34)-0-(3,6-di-0-acetyl-2-0-benzyl-eí -D-glukopyra-nosy 1)-(1^4)-0-( benzyl—2,3-di-0-methyl— d. -L-idopyranurosyl)- (1—;4)-2,3,6-tri-0-benzyl-i-D-glukopyranosid (49).

Podobně jako to bylo popsáno v přípravě 39 se zpracuje 73 mg (0,061 mmol) imidátu 48 a 82 mg (0,059 mmol) glykosylevého akceptoru, produkt se čistí na koloně §ep£adexu LH-20 chromatografováním za použití soustavy dichlormethan/etha-nol 1 : 1, potom na koloně oxidu křemičitého soustavou toluen/aceton 3:1a získá se tak 98 mg (69%) sloučeniny + 95 (c = 1,01, dichlormethan), ESISS, modul kladný: monoisotopická hmotnost 2414,97, hmotnost chemická =2416,54, hmotnost experimentální * 2416,2. -74- * · m « ** »· • * « * • · » · « · « · • · • · • * • « < · · « * • * • Ϊ ··· * 9 · # « · * ··· ♦ 1 • « · · • • • % • · • · * · * 9 %·' ·« 1H NMR (CDG13) í 7,43-7,20 (m, 30 H, 6x CgH^), 5,55 (d, J = 3,9 Hz, H-l-jednotky UR), 5,50 (d, J = 3,9 Hz, H-l jednotky I'TR-3), 5m44, 5,38 (2á, J = 3,7 a 3,9 Hz, H-l- jednotky HR—1), jednotky NR2), 5,29 (d, J = 6,8 Hz, H-l-jednotky NR-1), 5,17 (d, J 3,5 Hz, H-l jednotky R-2), 4,56 (d, J = 3,7 Hz, H-l jednotky R), 4,10 (d, J = 7,9 Hz, H-l-jednotky R-3), 2,8.1-2,50 (m, 4H, 0(C=0)CH2CH2(C=0)CH3), 2,17, 2,15, 2,11, 2,09, 251Ο5, 2,00 (7s, 21H, 6 Ac a 0(C=0)CH2CH2(G=0)CH3).

Analýza pro 012^Η158051

vypočteno: 59,63 % C, 6,59 % H nalezeno: 59,23 % C, 6,58 % H Příprava 47

Methyl-|0-(6-0-acetyl-2,3-di-0-methyl-ci-D-glukopyranosyl)- (1-74)^-0-( benzyl-2,3-di-O-rnethyl-j^ -D-glukopyranurosyl)-(1—)-0-(3,6-d i-0-a čety 1-2-0-benzyl—^» -D-glukkpyranosyl)-(1-^4)-(benzyl-2,3-di-0-methyl-4s-L-idopyranurosy!)-(!’—4)-2,3,6-tri-O-benzyl- <^v-D~glukopyranosid (50).

Postupem jako v přípravě 37 se zpracuje 120 mg (0,050 mmol) oktasacharidu 49, Čistěním na koloně oxidu křemičitého v soustavě toluen/aceton 3 : 1 se získá takto 95 mg (83%) sloučeniny 50, 14 +80 (c = 0,62, dichlormethan, ISIMS, modul kladný : mono-isotolická hmotnost = 2316,9, hmotnost chemická = 2318,4, hmotnost experimentální = 2318,2 í 0,4 u.m.a. hi NMR (CDC13) 7,42-7,12 (m, 30 H, 6 X C^, 5,50, 5,46, 5,40 (4d, J = 3,9, 3,9, 3,7, 3,7 Hz, H-l-jednotky NR, jednotky NR-1, jednotky HR-2, jednotky HR-3), 2,14, 2,10, 2,09, 2,08, 2,00, 1,88 (6s, 18 H, 6 ac).

Analýza pro G115H152°49

vypočteno: 59,57 % G, 6,60 % H nalezeno: 59,49 % 0, 6,6l % H WO 98/03554 • 9 • 9 9 9 * 9 9 9 * · tí 9 9 9 % 9 9 9 9 9 « 9 • 9 9 f 9 | · · · 4 9 9 • « til 9 9 9 « 9 9 '9 9 « 9 9 9 9 9 9 0 # 9 9 9 PCT/FR97/01344

effl O

Schéma 15Syntéza pólysacharidu 97 (příklad 4)

Příprava 48

Methy1-0-(6-0-soety1-4-0-levuliny1-2,3-di-0-methyl-J( -D-gluko-pyranosyl)-(i-94)-jo-(6-0-acetyl-2,3-di-0-methyl-^ -D-glukopy-ranosyl)-(l->4)j be n zy1-2,3-di-O-me thy1-β-D-glukopyra- r únosy 1)-(1·-^. 4 )-0-(3,6-di-0-ace ty 1-2 -0-benzyl- <k-D-giukopy ráno syl-(l -^4)-O-(be n zy1-2,3-d i-0-me thy 1-J[- L- id o py r a nur o ay 1) -(1-^4)-2,3,6-tri-O-benzyl-cL -D-glukopyranosid (51)

Podle přípravy 39 se zpracuje 84 mg (0,027 mmol) imidátu 47 s 62 mg (0,027 mmol) glykosylového akceptoru 5J0. Zbytek se čistí nejprve na koloně Toyopearl 1IW-40, potom na koloně oxidu křemičitého v soustavě cyklohexan/aceton 1:1a získá se tak 71 mg ( 51%) derivátu £JL, L0^ + 136 (c = 0,95, dichlormethan) · ESIMS, kladný modul :isotopická hmotnost = 5200,11, hmotnost chemická = 5203,39, hmotnost experimentální = 5203,5* XH NMR (CDC13) ^7,42-7,18 (m, 30 H 6 x CgH^), 5,54 (d, J = 3,8 Hz, H-l jednotky NR), 5,51-5,40 (m, 15-H-l), 5,30 (d, J = 6,8 Hz, H-l jednotky R-l), 5,17 (d, S = 3,5 Hz, H-l jednotky R-2), 4,56 (d, J = 3,7 Hz,¢-1 jednotky R), 4,09 (d, J = 7,9 Hz, H-l jednotky R-3), 2,85-2,53 (m, 4H, 0(G=0)CH2GH2(C=0)0H3), 2,17, 2,16, 2,13, 2,11, 2,08, 2,05, 2,00, 1,88 ( 8s, 57 H, 18 ac a 0(0=0)0^01^(0=0)01^).

Analýza

pro G24ůH3500123,4H2° vypočteno: 54,64 % C, 6,84 % H nalezeno: 54,51 % 0, 6,79 % H

Schéma l6 Syntéze disacharidu 57

PMBO -78- « I I • * · • * * # • t ♦ • * 9 : 2 « * « • · « * 4» · · · i* · · · • · · · · * · • · vf · · 4t Příprava 49

Bthyl~0-(4,6~0-p-methoxybenzyliden- ol -D-glukopyra nosy )- 1-thio- j3-D-glukopyra no sid

Pod argonem se přidává za teploty + 5° C 35,8 ml (0,21 mol) dimethylacetalu anisaldehydu a 4,44 g (19,1 mmol kyseliny ' kafrsulfonové do roztoku 73,89 g (0,19 mol) sloučeniny 52., viz Dick W.E.Dir a Hodge J.E., Methods in Carbohydrste Chemistry 7, 15-18 (1976) ve směsi 990 ml acetonitrilu a ϊϊ,Η-dimethyl-formamidu 3,5 : 1. Za teploty místnosti se reakční směs míchá 1,5 hodin, neutralizuje se přidáním 2,96 ml (21,0 ekv) triethyl-aminu, zahustí se a získaný sirup se čistí chromátografováním na koloně oxidu křemičitého v soustavě dichlormethan/methanol 100 : 0 potom 50 : 50 a získá se tak 58,6 g (61%) sloučeniny 53., [oOp +47 (c = 1,03, methanolú. ESIMS, modul negativní: m/z 503 (M+H)+. XH NMR (CD30D) J 7,41, 6,89 (2d, 4H, CH30g6H4), 5,51 (s, GHC6H4), 5,20 (d, J = 3,6 Hz, H-l'), 4,39'(d, J = 7,1 Hz, H-l), 3,78 (s, 3H, CÍ^OCgH^, 2,75 (q, 2H, J = 7,0 Hz, SCI^CE^), 1,29 (t, 3H, SCH2CH3), A nalyza

pro C22H32°11S vypočteno: 52,37 % C, 6,39 % H, 6,35 % S nalezeno: 52,15 % C,.6,61 % H, 5,84 % S Příprava 50

Ethy 1-0-(2,3-di-0-acetyl-4,6-p-ijiethoxybenzyliden- J, -D-gluko-pyra nosy 1)-(1--+ 4)-2,3,6-tri-O-acetyl-l-thio- ^3-D-glukopyranosid (i4)

Do suspenze 47,22 g (93,6 mmol) látky 53. v 450 ml dichlor-methanu se pfikapává za chlazení na 0°C 65 ml (0,47 mol) tri-ethylaminu a 89 ml (0,94 mol) anhydridu kyseliny octové. Dále se přidá 5,71 g (46,8 mmol) 4-dimethylaminopyridinu a reakční směs se míchá za teploty místnosti 90 minut. Přeruší se přidáním 45 ml (1,12 mol) methanolu, následuje promytí použitím postupně 10%ního vodného roztoku hydrogensíranu draselného, vodou, nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a opět vodou. Po vysušení se směs zahustí a krystalováním zbytku ze směsi cyklohexanu a ethylesteru kyseliny octové se izoluje 64,9 g (97%) sloučeniny 54., L-% + 21 (c = 1,00, dichlotmerhan), t.t. 213 - 215° C. 18IMS, modul kladný : m/z + chlorid sodný 737 (M+Na)+, + fluorid draselný 753 (M+K)+. XH MMR (CDC13) & 7,34, 6,86 (2d, 4H, CH3OC6H4), 5,43 (s, CHC6H4), 5,34 (d, J = 4,1 Hz, H-l'), 4,54 (d, J = 9,9 Hz, H-l), 3,78 (s, 3H, CH30C6H4), 2,74-2,60 (m, 2H, SCHgC^), 2,10, 2,06, 2,03, 2,01, (4s, 15 H, 5 4c),' 1,26 (t, 3H, SCHgCI^).

Analyza

pro 032H42iDl6S

vypočteno: 53,78 % C, 5,92 % H, 4,49 % D nalezeno: 53,74 % C, 6,08 % H, 4,40 % S Příprava 51

Ethyl-0-(2,3-di-0-acetyl-4-p-methoxybenzyl- cj^-D-glukopyráno syl )-(1^4)-2 ,3,6-tri-0-acetyl-l-±hio- &_D-glukopyrano sid (5.5.) ' a ethyl-0-(2,3-di-0-acetyl-4-p-methoxybenzyl-ols -D-glukopy-ra nosy 1-(1-^4)-2,3-di-rO-acetyl-l-thio-ft'D-glukopyranosid (56)

Hodinu se pod argonem v prostředí 610 ml toluenu pro-třepává suspenze 25,0 g (35,0 mmol) látky 54, 20,4 g (0,28 mol) komplexu boranu s trimethylaminem a 33 g molekulárního síta 4$. Po ochlazení na 0°G se pomalu přidává 14,0 g (0,11 mol) chloridu hlinitého, za kontroly pomocí CCM se vše míchá 25 minut, potom se reakční prostředí vlije do studeného vodného 20%ního roztoku hydrogensíranu draselného, vše se promíchává -80- ♦ · • · • 9 • · • · • « f • 0 ♦ • • * » t · 0 1 • 0 • * • • 1 · t 9 » • • • 0 9M «Μ ě · • • • * . 9 • • · * · ···* • « • * za chlazení na 0° C hodinu, filtruje dále přes celit0 Organická fáze se promyje vodou, vodným 2%ním roztokem hydrogenuhličita-nu sodného, znovu vodou, vysuší se a roztok se zahustí. Čistěním zbytku na koloně oxidu křemičitého se získá takto 7,37 g (29%) látky £5. a 1,36 g (6%) látky 56. Analyticky čistý vzorek látky 51 se získá krystalováním ze směsi cyklohexanu a ethyl-estwru kyseliny octové, + 30 (c = 1,00, dichlormethan), t.t. 151-153° C. ESIMS, modul kladný: m/z + chlorid sodný 739 (M+Na)+, + fluorid draselný 755 (M+K)+. τΕ HMR (DDCl^) cf 7,19, 6,87 (2d, 4H, CH3OC6H4), 5,36 (d, J = 3.5 Hz, Η-1Ί, 4,54 (s, 2H, Cgl^CH^), 4,53 (d, J = 9,0 Hz, H-l), 2,70-2,65 (m, 2H, SCHgCEj).

Analy za

pro O^H^O^gS

vypočteno: 53,62 % C, 6,19 % H, 4,47 % S

nalezeno: 53,57 fo C, 6,21 % H, 4,43 % S sloučenina 56« + 19 (c = 1,11, dichlormethan), ESIMS, modul kladný : m/z + chlorid sodný 697 (M+lía)+, + fluorid draselný 713 (M+K)+. hí NMR (CDClo) cT 7,17, 6,84 (2d, 4H, CH30C6H4), 5,36 (d, J = 4.5 Hz, H-l ;,4,54 (d, J = 10,1 Hz, H-l), 4,49 (s, 2H, C^Cí^), 2,69-2,64 (m, 2H, SCHgCH^, 2,02, 2,01, 2,00,1,96 (4s, 12H, 4 Ac), 1,25) t, 3H, SCHgCH^o

Analýza

pro C30H42°15S

vypočteno: 53,40 % C, 6,27 % H, 4,75 % S

nalezeho: 53,29 % C, 6,39 % H, 4,53 % S Příprava 52

Etgyl-0-(2,3-tri~0-acetyl-4~p-methoxybenzyl-tL~D-glukopyranosyl)-(l-ř4)-2,3,6-tri-0-acetyl-l-thio-p-D-glukopyranosid (57)

Za teploty 0°G se přidává 1,47 ml (15,5 ramol) anhydridu kyseliny octové do směsi 5,6 g (7,77 rnmol) látky 55., 1,19 ml (8,54 , mmol) triethylaminu a 190 mg (1,55 mmol 4-dimethylaminopyridinu v 40 ml dichlormethanu. Reakčnímsměs se míchá 40 minut (kontrola CCM) za teploty místnosti, zředí se přidáním 50 ml dichlormethanu a promyje se studeným vodným 10%ním roztokem hydrogensíranu draselného, vodou, nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a v · * · · * · ♦» -81- # * » · · » * «·· • ·#···· · · ft ft ft · ···«·* » · »· *« ♦ · 4··· «· ff · • · · opět vodou. Po vysušení a zahuštění se čistěním na koloně oxidu křemičitého (ethylester kys.ocíové a cyklohexan, 35:65) získá 5,66 g (96%) látky £7, 1¾ +44 (c = 1,03, dichlormethan). ESIMS, kladnýmodul:m/z + chlorid sodný 781 (M+Ha)+, + fluorid draselný 797 (M+K)+. i 1H HMR (CDC13) ^ 7,15, 6,85 (2d, 4H, CH-^OC^), 5,30 (d, J = 4,2 Hz, H-l'). 4,53 (d, J = 10,0 Hz, h-1), 2,69-2,64 (m, 2H, SCHgCl·^), 2,09, 2,07, 2,04, 2,01, 2,00, 1,98 (6s, 18 H, 6 Ac), 1,25 (t, 3H, SCH2CH3).

Analýza pro C^H^gO^S

vypočteno: 53,82 % C, 6,11 % H, 4,22 % S nalezeno: 53,77 % C, 6,24 % H, 4,09 % S

Schéma 17

Syntéza trisacharidu 62

62 ·· *· ·« • · · ♦ 0 i • ·

► · · # » I * · ··· * · · » « · · « • · t « « · -82- Příprava 53

Sthyl-4,6-0-benzyliden-2,3-di-0-methyl-l-thio-|3~D-glukopyrano- sid ¢39)

Za teploty 0°C se vnese 500 mg (19*9 mmol) hydridu sodíku do směsi 2,59 g (8,29 mmol) sloučeniny £8, vis Bočkov A.F., Izvest.Akad.Nauk SSSR, Ser.Ohim. 1968, Č.l, 179, a 1,70 ml (19,9 mmol) methyljodidu v 25 ml H-H-dimethylformamidu, teplota reakční směsi se nechá vystoupit na 20° C, směs se míchá za kontroly CCM 30 minut, přidá se methanol a vše se vlije do vody. Po extrakci do ethylesteru kyseliny octové se org.roztok promývá postupně 1 M vodným roztokem thiosíranu sodného, vodou, vysuší se a zahustí. Triturováním zbytku s diethyletherem se získá takto 0,42 g (15$) sloučeniny 5_9. Látka se čistí chromátografováním na sloupci oxidu křemičitého za použití směsi toluenu a acetonu (12 : 1) s tím, že matečné louhy po krystalizaci umožňují získání ještě jedné frakce látky 59 v množství 1,6 g), což,odpovídá celkovému vý. těžku 71$, t.t. 108°C, (4JD -78 (c = 1,00 dichlormethan). LSIMS, kladný modul :m/z thioglycerol + chlorid sodný 363 (M+Na)+, thioglycerol.+ fluoridl draselný 379 (M+K)+. XH NMR (CD013) S 7,51-7,33 (m, 5H, c6h5), 5,52 (s, 1H, C6H5CH), 4,45 (d, 1H, J = 9,8 Hz, H-l), 3,64 (s, 3H, 0CH3), 3,62 (s, 3H, 00H3), 2,78-2,88 (m, 2H) SCt^CH^, 1,31 (t, 3H, J = 2,7 Hz, SCH2CH3). A VMil v r?n

Xi U.C* J-J dJ CA pro ClTH2405S (340,44)

vypočteno: 59,98H% G, 7,11 % H, 9,42 % S nalezeno: 59,91 % 0, 7,15 % H, 8,96 $ S Příprava 54 2*-(Drimethylsilyl)-ethxl-4,6-0-benzyliden-2,3-di-0-méthyl--cLD-glukopyranosid (60).

Ve směsi diethyletheru a dichlormethanu, 345 ml, 2 : 1, se rozpustí 23,0 g (67,5 mmol) sloučeniny 59, a 19,4 ml (435 mmol) 2-(trimethylsilyl)-ethanolu; po přidání molekulárního síta 4 $ -83- • · » I · * * · · · » » « ·«· · ♦ · # · ··· *·· ♦ *·*♦· · t 00 »« ·· *··» *♦ ·« se reakční směs míchá hodinu při 25°C, přidá se 49,7 g (220 mmol) N-jodimidu kyseliny jantarové, potom za 0° C 2,20 g (8,78 mmol) stříbrné soli kyseliny trifluoroctové a směs se ponechá za míchání 20 minut (kontrola CCM). Po přidání hydro-genuhličitanu sodného a zředění dichlormethanem se směs filtruje přes celit, filtrát se promývá postupně 1 M vodným roztokem thiosíranu sodného, vodou, vysuší se a zahustí. Čistěním na koloně oxidu křemičitého za použití soustavy cyklo-hexan a ethylester kyseliny octové 15 : 1, potom. 5 : 1 se takto připraví 4,20 g (15%) 60 β a 8,40 g (31%) 60 ^ . Sloučenina 60^ : + 96 (c = 0,4, dichlormethan), ESIMS kladný modul : m/z 419 (M+Ha)+, 435 (M+K)+. 1HNSE (CDC13) 7,52-7,35 (m, 5H, C^), 5,54 (s, 1H, Cgl^CH), 4,98 (d, 1H, J = 3,7 Hz, H-l), 3,64 (s, 3H, 0CH3), 3,62 (s, 3H, 0CH3), 1,24-0,96 (m, 2H, OCHgCI^SiíCH^),. 0,00 (s, 9H, OCHgCHgSKCH^).

Anály za pro C20H3206S (396,50)

vypočteno: 60,08 % C, 8,13 % H nalezeno: 60,26 % C, 8,39 % H Příprava 55 i 2-(Trimethylsilyl)-6-0-benzyl-2,3-di-O-methyl- ď- -D-glukopyra-nosid (6l), v 154 ml dichlormethanu se rozpustí 21,1 g sloučeniny 60. a za teploty místnosti se přidá 34 ml (213 mmol) trimethylsi-lanu, načež se přikapává směs 16,3 ml (2JJ mmol) kyseliny trifluoroctové a 0,49 ml (3,47 mmol) anhydridu kyseliny trifluor-octové. Po dvou hodinách stání se přidává 1 M vodný roztok hydroxidu sodného až k dosažení alkalické oblasti pH; po dekantování se extřahuje vodný fáze do ethylesteru kyseliny octové, orggnic-ke roztoky se spojí, celek se vysuší a zahustí. Zbytek se čistí -83- -83- ·· ·· • · # * I · * · • » ·♦· * · · • i ** ·« »» »« » Φ ♦ I f · Φ * · · · · · • $ * · * · ♦ · · • · · * «·«* φ · »· na koloně oxidu křemičitého použitím soustavy dichlormethan a aceton, 14 : 1, potom 12 : 1 a získá se tak 12,5 g (59%) sloučeniny 6l, + 100 (c = 1,45 dichlormethan). ^ NMR S 7,40-7,20 (m, 5H, CgHg), 4,98 (d, 1H, J = 3,5 Hz,H-l) 3,63 (s, 3H, 0GH3), 3,49 (s, 3H, OCH^, 1,14-0,91 (m, 2H, CH2CH23i(CH3)3). 0,00 (s, 9H, CK2CH2Si(CH3)3).

Analýza pro C20H30063i (398,58)

vypočteno: 60,27 % C, 8,80 % H nalezeno: 60,15 % C, 8,6l % H Příprava 56 2-(Trimethylsilyl)-®thy1-0-(2,3,6-tri-0-acetyl-4-0-p-methoxy-benzy 1-<^-D-glukop;/ra nosy 1) -(l-?4)-0-(2,3,6- tr i-O-ace tyl- β-D-glukopyránosy1)-(1—4)-6-0-benzy1-2,3-di-0-methyl- <-D-gluko-pyranosid (62),

Ze směsi 19,1 g (25,1 rnmol) thioglykosiiíu £7 a 7,5 g (18,7 mmol) glykosylového akceptoru 6l se získá podle způsobu 3 po přečištění na koloně oxidu křemičitého (dichlormethan a aceton 20 : 1, potom 10 : 1) 19,7 g (95%) sloučeniny 62, + 90 (c 1,15 (dichlormethan)*

Analýza pro %2H74023Si (1095,24)

vypočteno: 57,03 % C, 6,81 % H nalezeno: 57,38 % C, 6,85 % H WO 98/03554

• I ι * · · · * φ · · · · · · • « ··· ♦ · · ě · • · » · Φ I ·« · · ·Φ ft · · · • · ψ • · * ··· ··¥ • # ¥CT/PR97/01344 '

Schéma 18

Syntéza oligosacharidu 66 62

Příprava 57 ^2-(Trimethylsilyl)-ethyl-0-(2,3?6-tri-0-rnethyl-d--D-glukopyra-nosyl)-(l->4)-0-(2,3,6-tri-O-Riethyl--B-grukopyranosyl)-(l<~-?4) 6-0-benzyl~2,3~di-0-methyl-<L -D-glukopyranosid (63)

Podle způsobu 4 se získá z 19,7 g (18,0 rnmol) sloučeniny 62 po Čistění na koloně oxidu křemičitého (toluen/aceton 3 > 1, potom 2 : 1) sloučenina 63, výtěžek 11,2 g (79%, počítáno na 3 postupné ^stupně), 1¾ + 95 (c = 1,15, dichlormethan). ESIMS, kladný modul m/z + chlorid sodný 829 (M+Na)+, + fluorid draselhý 845 (M+K)+. -86- -86- • · · · • · · · • · · · • · * · · • · · »· *·

··»« ·· *« • · · · • · · · • · · * · · • « »* ·· τΕ mm (CDCl·^) <£,34-7,25 (rn, 5H, CgH^), 5,60 (d, 1H, J = 3,8 Hz, H-l '), 4,36 (d, 1H, j = 3,8,Hzm H-l), 4,29 (d, 1H, J = 8,0 Hz, H-l'), 1,08-0,91 (m, 2H, CH2CH2Si(CH3)3), 0,00 (s, 9H, Cí^CHgSiCCI^^). Příprava 58. 2-(Trimethylsilyl)-ethyl-0—(2,3,6-tri-0-acetyl-4—0-p-metho-xybenzyl-^-D-glukopyranosyl)«(i-i>4).o-(2,3,6-tri-0-acetyl--p>-D-glukopyranosyl)-(l~*4)-0-(2,3,6-tri-0-methyl-4-D-glu-ko py r a no sy 1) - (1 "^4) -0—( 2,3,6 - tr i-0-me t hy 1— D -glukoppra nosy 1) - ( 1^4 )-6—0-benzy 1-2,3-di-O-me thy 1— d\-D-glukopy ra nosid (64)

Postupem podle způsobů 3 se zjbracuje směs 6,87 g (9*10 mmol) thioglykosidu 57 a 6,67 g (8,30 mmol) glykosylového akceptoru 6j3. Produkt se čistí chromá tograf o váním na koloně oxidu křemičitého v soustavě toluen/aceton, 2:5a získá se tak 10,7 g (86%) sloučeniny 64, + 90 (c = 0,83, dichlor- methan· ESIMS, kladný modul: m/z + chlorid sodný 1525 (M+Ha)+, + fluorid draselný 1541 (M+K)+. XH mm (CD013) £ 7,33-7,25 (m, 5H, C6H5), 7,15-6,84 (a, 4H, c6H40CIV» 5^56 1H> J s 3,9 Hz, H-l"), 5,29 (d, 1H, J * 4,0 HZ, H-l'"), 4,97 (d, 1H, J = 3,7 Hz, H-l), 4,71 (d, 1H, J = 8,1 Hz, H-l'"), 4,27 (d, 1H, J = 7,9 Hz, H-l'), 1,08-0,91 (m, 2H, CH2CH2Si(CH3)3), 0,00 (s, 9H, CHgCHgsKCH^).

Analýza pro ®γο^ΐθ6^33^^· ^503,69

vypočteno; 55,91 % C, 7,11 % H nalezeno: 56,05 % C, 7,24 % H Příprava 59 2-(Trimethylsilyl)-ethyl-jo-{2#3m6-tri-0-methyl-X-D-glukopy- ranosyl)-(1^4)-0-(2,3-6»tri-0-methyl-|?>-D-glukopyranosyl)- (1~H)] o~6-0-benzyl-2,3-di-0-methyl- í-D-glukopyranosid (65) / , —..... ... . .

Za použití způsobu 4 se zpracuje 10,7 g (7,2 mmol) slouče-niny 6£, produkt se čistí chromátografováním na sloupci oxidu -87- -87- $ ·«« ♦ • *

Μ ·« • * · ·

·♦ ·♦ • · • I · • · · • « * · křemičitého v soustavě toluen/aceton, 2 : 1, potom 6:5a získá se tak 6,50 g (74%# ve třech etapách) sloučeniny 6£. + 102 (c - 0,68, dichlormethan· XH KMR (CDClu) <f 7,33-7,25 (a, 5H, CgHg), 5,65 (d, 1H, J « з, 8 Hz, H-l _), 5,62 (d, 1H, J = 3,8 Hz, H-l"), 4,98 (d, 1H, J * 3,7 Hz, H-l), 4,31 (d, 1H, J = 8,1 Hz, H-l'"), 4.29 (d, 1H, J = 7,9 Hz, H-l O, 1,08-0,91 Cm, 2H, CI^CHgSiíCBg^), 0,00 (s, 9H, CHgCHgSiCCH^^).

Analýza pro %6H98026Si (1215,48)

vypočteno: 55,34 % C, 8,13 % H nalezeno: 55,31 % C, 8,19 % H Příprava 60 2-(Trime thyIsily1)-ethy L»0-(2,3,6-tri-0-ace tyl-4-0-p-me thoxy-benzyl-oiN-D-gluittopyranosyl)-(l-^4)-0-(2,3,6-tri-0-acetyl-p-D-glukopyra no sy 1)-(1^4)-to-( 2,3,6-tri-0-me thyl-^-D-glukopyra- ^ no sy 1) -(1 -^4) -0- (2,3,6-tri-O-me thyl-j3 D-glukoy pra nosy l-( 1-^4) J, .. 6-0-benzyl-2,3-di-0-methyl-cL-D-glukopyranosid (66)»

Podle způsobu 3 se zpracuje směs 4,03 g (5,31 mmol) thio-glykosidu £2 a 5,78 g (4,75 mmol) glykosylového akceptoru 6£, produkt se čistí ohromatografováním na koloně oxidu křemičitého v soustavě toluen/aceton, 2:5a získá se tím 8,63 g (95%) sloučeniny 66, + 94 (c « 0,74, dichlormethan). ESIMS kladný modul : monoisotopická hmotnost * 1910,83, chemická hmotnost « 1912,14, experimentální hmotnost * 1911,61 t 0,12 и. m.a· % HUS (0D013) <T 7,33-7,25 (m, 5H, CgHj), 7,15-6,83 (ffl, 4H, 06H4OOH3), 5,62 (d, 1H, J « 3,8 Hz, H-l Jednotky H-2), 5,60 (d, 1H, J - 3,8 Hz, H-l jednotky H-2), 5,30 (d, 1H, J * 4,0 Hz, H-l jednotky TO), 4,98 (d, 1H, J * 3,7 Hz, H-l jednotky H), 4,71 (d, 1H, J = 7,9 Hz, H-l jednotky HR-l), 4,30 (d, m, Já 8,1 Hz, H-l jednotky G), 4,29 (d, 1H, J - 8,4 Hz, H-l jednotký ·· ·· ·· ·· ·· ·· * ♦ · ♦ ···· · » · · ···· t ♦ ♦ · · · · • · ··· · 6 · · * ··« ··· ·♦#·♦♦ ·· ·· ·· ·· ···· *· ·* -88- R-l), 2,08 (b, 3H, Ac), 2,07 (s, 3H, Ac), 2,03 (s, 3H, Ac), 1,99 <s, 3H, Ac), 1,98 (s, 3H, Ac), 1,96 (s, 3H, Ac), 1,08-0,91 (m, 2Ή, CHgCHgSiCC^^), 0,00 (s, 9H, CH^SKCE^).

Anály za

Pro C88H138°43Si ^^-912-14 vypočteno: 55,28 % C, 7,27 % H nalezeno: 55,61 % C, 7,35 % H WO 98/03554

Schéma 19

Syntéza oligosacharidu 72

90- ·· ·· *· ·· ·· ·· • I · · · · · · · ·· · • · · · · · · » * · · • · ··· · · · · · ··· ··· ····«· · · Μ ·* ·· ···· ·· ·· Příprsva 6l 2-(TBimethylsilyl)-ethyl- [o-(2,3,6-tri-0-methyl-o(-D-glukopy-ranosyl)-(l-^4)-0-(2,3,6-tri-()-methyl-[b -D-glukopyranosy1)-(1-/4^3-6-0-benzy1-2,3-di-0-methyl-d -B-glukopyranosid (67)

Podle způsobu 4 se zpracuje 8,63 g (4,50 mmol) sloučeniny 66 a produkt se čistá na koloně oxidu křemičitého s eluováním soustavou toluen/aceton 3 : 2, potom 4:3a získá se tím ve třech etapách 5,67 g (77%) látky 6χ, + 102 (c * 0,70, di- chlormethan. LSIMS, kladný modul m/z thioglycerol + chlorid sodný 1645,9" '(M+Na)+. XH NMR (CDC13) &,33-7,32 (m, 5H, C^), 5,65 (d, 2H, J = 3,8 HZ, H-l jednotky NR a H-l nednotky HR-2), 5,62 (d, 1H, J = 3,8 Hz, H-l jednotky R-2), 4,98 (d, 1H, J = 3,7 Hz, H-l jednotky R), 4,31 (d, 1H, J = 8,1 Hz, H-l jednotky HR-1), 4,30 (d, 1H, J = 7,9 Hz, H-l jednotky C), 4,29 (d, 1H, J » 7,9 Hz, H-l jednot ky R-l), 1,08-0,91 (m, 2H, 01^0¾ Si(CH3 )3), 0,00 (s, 9H, CH^SKCE^c Analýza pro (1912,14)

vypočteno: 54,73 % C, 8,07 % H nalezeno: 54,6l % C, 8,07 % H < Příprava 62 2-( Trimethylsilyl)-ethy 1-0-(2 ,3,6-tri-0-acetyl-4—O-p-me thoxy-be n zy l-c^-D-gluko py ráno sy 1)-(1 -Ή·) -0~£2,3536 -tr i-O-a c e t y 1- -D-glukopyranosyl)-(l—74)-[o-(2,3m6-tri-0-methyl- p>D-gluko-pyranosyl)-(l-\4 )-0-(2,3,6-tri-O-methy l-(y-D-glukopyranosyl)-(l‘^?4)"|3-6-0-benzyl«-2>3-di-0-methyl- <KD-glukopyranosid (68) 'J*

Podle způsobu 3 se zpracuje směs 1,47 g (1,95 mmol) thioglykosidu 22 a 2,89 g (1,77 mmol) glykosylového akcepto-ru 6χ. Ohromatografováním na koloně oxidu křemičitého s použitím soustavy cyklohexan/aceton 3 : 2 se získá 3,71 g ίψ.%) sloučeniny 68. Analyticky čištěný vzorek na koloně oxidu kře- 91- mičitého (toluen/aceton, 3 : 2):^^+ 99 (c « 0,58, dichlormet-han· BSIMS, kladný modul: monoisotopická hmotnost * 2319,03, chemická hmotnost * 2320,59, experimentální hmotnost » 2319,03 * 0,12 UoBua* •hí NMR (CDCXj) 5* 7,33-7,32 (m, 5H, 7,15-6,83 (m, 4H, C6*V^3^* 5,βδ (d, 1H, J « 3,8 Ha, H-l jednotky R-2), 5,60 (d, 2H, J « 3,8 Hz, H-l jednotky UB-2 a jednotky C), 5,29 (d, IH* J e 4,0 Hz, H-l jednotky HR), 4,97 (d, 1H, J « 3,7 Hz, H-l jednotky R), 4,70 (d, 1H, J a 7,9 Hz, H-l jednotky NR-1), 4,30 (d, 2H, J * 8,1 Hz, H-l jednotky UR-3 a jednotky R-3), 4,29 (d, 1H, J * 7,9 Hz, H-l jednotky R_l), 2,08 (s, 3H, Ac), 2,06 (s, 3H, Ac), 2,02 (s, 3H, Ac), 1,99 (b, 3H, Ac), 1,98 (s, 3H, Ac), 1,96 (s, 3H, Ac), 1,08-0,91 (m, 2H, CHgOHgSKCH^)^), 0,00 (s, 9H, ch2ch2sí(ch3)3)0

Analýza

pro ^06^.70^53^ (2320,59) vypočteno: 54,86 % C, 7,38 % H nalezeno:" 54,76 % C, 7.45 % H PříprHva 63 2-(0?rimethylsilyl)-ethy 1-^0-(2,3,6-tri-0-methyl-c( -D-glukopyra-nosyl)-(l-ý-4)-0-(2,3,6-tri-0-methyl- P-D-glukopyranosyl)-(li4) 6-0-benzyl-2,3-di-0-methyl-^-D-glukopyranosid (69)

Zpracuje se podle způsobu 4 3,6l g (1,55 mmol) sloučeniny 6§ a získá se tak 2,22 g (7P% ve třech etapách) látky 69 po chromátografickém Čistění na koloně oxidu křemičitého (toluen-aceton, 4 .: 5)· [.15¾ + 103 (c = 0,80, dichlormethan. BSIMS, kladný modul: monoisotopícká hmotnost = 2031,01, chemická hmotnost * 2032,38, experimentální hmotnost * 2032,38 u.nua, XH HMR (CDCi3) 5^7,33-7,32 (m, $ H, C^), 5,65 (d, IH, J * 3,8 Hz, H-l jednotky UR), 5,64 (d, 1H, J = 3,8 Hz, H-l j£fío«ky UR-2)? 5,62 (d, 2H, J » 3,8 Hz, H-í jednotky C a jednotky R-2), 4,97 (d, 1H, J a 3,7 Hz, H-l jednotky R), 4,30 (d, 1H, J a 7,9 Hz, H-l -92- ·· ·« ·« ·· ·♦ ·· ···· · · ♦ · · · · · ·«·· ·· · ···· • · ··· » · ♦ · ι ··· ♦·· ·····* · · ·· ·· ·· ···♦ ·· ·· jednotky NR-l), 4,29 (d, 3H, J » 7,9 Hz, H-l jednotky H-l, jednotky R-3 a jednotky NR-3), 1,08-0,91 (m, 2H, CHgCHgSiíC^^), 0,00 (s, 9H, C&jCHgSiÍGRj)^),

Analýza

pro ®92^162°48^^· (2°32*38) vypočteno: 54,37 % C, 8,03 % H nalezeno: 54,51 % C, 8,04 % H Příprava 64 2-( Trirae thylsily 1)-e thy 1-0-( 4-0-levuliny 1-2^3,6-tr i-0-me thyl-íf -4x-D-gltikopyranosyl)-(l“'>4)-0-(2,3,6^tri-0-methyl-^-D-gluko-py r a nosy 1) - (1-). 4 )-jjo-( 2,3516-1 r i-0-me t hy 1-<k-D-gluko py r a no sy 1)--(l“?4)-(-(2,3,6 - tr i-O-me t hy 1- -E-glukopy r a no sy 1) - (1 -ř 4 - 6-0-:b^enzyl-2,3-di-0-methyl- c^-B-glukopyranosid (70)

Roztok 855 mg (0,42 mmol) látky §2 v 8 ml dichlormethanu se vyhřeje na 25° C a přidá se : 83 fxl (0,59 mmol) triethylarainu, 5,14 g (0,04 mmol) 4-dimethylaminopyridinu a 117 mg (0,55 mmol) anhydridu kyseliny levulové, směs se míchá 2 hodiny za kontroly COM, zředí se přidáním dichlormethami, roztok se promyje 10%ním vodným roztokem hydrogenuhličitanu draselného, vodou, vysuší se a zahustí do sucha. Látku lze použít v tomto surovém stavu pro další stupen bez jakéhokoli čistění. Analyticky ěistý vzorek se získá na koloně oxidu křemičitého, cyklohexan/aoeton, 5 : 4; čistá látka ZQ má j^jj + 101 (c » 0,89, dichlormethan)· BSIMS, modul kladný : monoisotopická hmotnost * 2129,05, chemická hmotnost « 2130,48, experimentální hmotnost * 2130,00 u.m.a. XH NMR (CDC13) Í 7,33-7,32 (a, 5H, C^), 5,65 (d, 3H, J » 3,8 Hz, H-l jednotky NR, jednotky NR-2 a jednotky C), 5^63 (d, 2H, J « 3,8 Hz, H-l jednotky R-2), 5,02 (t, 1H, J » 10,1 Hz, H-4 jednotky NR), 4,98 (d, 1H, J = 3,7 Hz, H-l jednotky R), 4,32 (d, 1H, J = 7,9 Hz, H-l jednotky NR-1), 4,30 (d, 2H, J » 7,9 Hz, H-l jednotky NR-3 a jednotky R«Q 4,29 (d, 1H, J = /,9 Hz, H-l i·· t jednotky R-l), 2,80-2,50 (m, 4H, 0(0^0)0¾¾(C=0)CH3), 2,18 (s, 3H, 0(0=0)01¾ 0^(0=0)01^), 1,08-9,91 (m, 2H, CHgCHgSKCH^), 0,00 (s, 9H, CHgCHgSKGH^ )^) ·

Analýza

pro C97Hi66°48Si ^032,38) vypoStěno: 34,69 % 0, 7,95 % H nalezeno: 54,55 % 0, 8,07 % H Příprava 6Í ,0-(4-0-levuliny1-2,3,6-tri-0-methy1-Á-D-glukopyranosyl)--(1-^4)-0-(2,3,6-iri-O-methyl-p -D-glukopyranosyl)-(l 4)-(0- (2,3,6 -tri-O-me t hy 1- cK -D-glukopy r a no sy 1) - (1—~>4 )-0-(2,3,6-tri-O-methy^-p» -D-glukopyranosyl-(l->4)| 2“6-0-benzyl-(2,3-di-0-me thyl- <h , -D-giukopyranosa (71)

Zpracuje se 876 mg (0,41 mmol) sloučeniny χθ, jak to bylo popsáno v přípravě 44(a). Zbytek se čistí na koloně oxidu křemičitého a získá se tím směs anomerčt ot /(3 = 60/40 látky XI ve výtěžku 600 mg /80% ve dvou etapách)^ fj/)-Q + 89 (c = 0,74, dichlormethan· ESIMS kladný modul: monoisotolická hmotnost * 2028, 97, chemická hmotnost = 2030,24, experimentální hmotnost = 2030,19 * 0,09 u,m,ao XH NMR (CDC13) $7,33-7,32 (m, 5Hm C^), 5,65. (d, 3H, J * B,8 Hz, H-l jednotky NR, jednotky HR-2 a jednotky C), 5,63 (d, 1H, J = 3,8 Hz, H-l jednotky R-2), 5,33 (d, 1H$l J * 3,2 Ha, H-l(^ jednotky R, 5,02 (t, 1H, J = 10;1 Hz, H-4 jednotky UR), 4,59 (d, 1H, J = 5,3 Hz, H-lf? jednotky R), 4,32 (d, 1H, J = 7,9 Hz, H-l jednotky NR-l), 4,30 (d, 2H, J = 7,9 Hz, H-l jednotky NR-3 a jednotky R-3), 4,29 (d, 1H, J = 7,9 Hz, H-l jednotky R-l), 2,80-2,50 (m, 4H, 0(0=0)0^0^(0=0)0^), 2,18 (s, 3H, 0(0=0)01^0^(0=0)0^), Příprava 66 0-(4-0-levulinyl-2,3,6-tri-0-methyl-«(-D-glukopyranosyl)-(l—^) -0-(2,3,6-tri-0-methyl- P-D-glukopyranosyl)-(l~74)-[o-(2,3,6-tr i-O-me thyl- c^-D -gluko py r a no sy 1) - (1—74) -0- (2,3,6-tr i-O-me t hy 1-- p>-D-glukopyranosy 1-(1-^ )J3*-6-0-benzyl-2,3-di-0-inethyl-o( ,fi> -D-glukopyranosyltrichloracetmidát (72), ·· ·· *» ·· ·· ·« « • • · • • • · • · • a • • • · • • • • · • · • • «14 ft · • • • «4« «·· • · • • • • • * ·· · + ·· ···· • · ·· -94-

Do roztoku 593 mg (0,29 mmol) sloučeniny li v 7 ml dichlormethanu se přidá 72,2 mg (0,52 mmol) uhličitanu draselného a 176 pl (1,75 raraol) trichloracetonitrilu, reakční směs se míchá 16 hodin, po filtraci se filtrát zahustí. Filtrací na gelu z oxidu křemičitého za použití soustavy cyklohe-xan/aceton, 5 * 4 pro 1%« triethylaminu se získá 414 mg (46$) směsi anomerů. ds f p«* 47/53, tedy sloučeniny 72. jjjQp + 86 (c as 0,54, dichlorméthan. % HMR (CD013)^ 7,33-7,32 (m, 5H, C^), 6,50 (d, 1H,J % * 3,5 Hz, Η-1<λ jednotky R), 5,65 (d, 1H, J = 8,2 Hz, H-^j-jb jednotky R), 5,65 (d, 1H, J * 3,8 Hz, H-l jednotky UR), 5,64 (d, 2H, J * 3,8 Hz, H-l jednotky UR-2 a jednotky C), 5,61 (d, 1H, J b 3,8 Ha, H-l jednotky R-2, 5,02 (t, 1H, J b 10,1 Hz, H-4 jednotky NR, 4,37 (d, 1H, J » 7,9 Hz, H-l jednotky R-l), 4,30 (d, 3H, J e 7,9 Hz, H-l jednotky UR-1, jednotky HR-3 a jednotky K-3). 2,80-2,50 (m, 4H, 0(0-0)0^01^(0=:0)0^), 2,18 (s, 3H , C(C*0>Č^CíDj(C«0)CH3), WO 98/03554 • · · · Μ 99 φ*'* φ : «:t/fr97/oi344 • · · · · ·· ·.··<! * · · »

Schéma 20Syntéza pólysacharidu 73 -96- Příprava 67

Methyl-0-(4-0-levulinyl-2,3,6-tri-Q-methyl-í -D-glukopyrano-syl)-(l—7 4)-0-(2,3,6-tri-0-methylí»/> -D-glukopyranosyl)-(l-^4)T -jj|0-(2,3,6-tri-0-methyl-<^!>I>-glukopyranosyl)-(l--:?4)-0-(2,3,6~ tri~0-methyl-(^č.-B-glukopyranosyl)-(l~s>43j 3~0-(6-0-benzyl-2,3~ di-O-methyl-c^D-glukopyranosyl)^ 1-^.4 )-0-( benzyl-2,3-di-0-methyX-JVD-gXukopyraaurosyX)-(X-;>4)*-0-(3,6-di-0-acetyX-2T0-b e n zy 1- dt, D-gluko py r a no sy 1) - (1 —>4)-0- (b e n zy X-2,3 ~d i-O-me t hy X-- Xr\L-id o py r a nur o sy X) - (X <-> 4 ) -2,3,6 -1 r i-0- b e n zy 1- J,* D-gluko py- ranosid (32)· V 5 ml směsi dichlormethanu a diethyletheru (1 : 2) se rozpustí 220 mg (0,18 mmol) glykosylového akceptoru 26 a 344 mg (0,16 mmol) imidótu J2,, a po přidání 750 rag/mmol molekulárního síta 4 ^ se reakční směs za teploty 25°C míchá hodinu· Po ochlazení na -25°C se přidává roztok 1 M terc.-butyldimethylsi-lyl-trifluoracetátu v dichlormsthanu (0,20 mol/mol imidátu), směs se míchá 15 minut, přidá se pevný hydrogenuhličitan sodný, směs se filtruje a filtrát zahustí* Nanese se na kolonu Toyopearl HW-50, použije se dále směs dichlormethanu a ethanolu 1 : 1, frakce obsahující glykosylový akceptor se vrátí do reakce a pracuje se jako předtím. Následujícím čistěním na koloně oxidu křemičitého za použití soustavy toluen/aceton 5 : 4, potom 1 : 1 se takto získá 107 mg frakce JI 7/3 a frakce 201 mg 73/j = 9/1 s celkovým výtěžkem 308 mg (57^)· % NMR (GD013) % 7,33-7*25 (m, 35H, 7 x C^), 5,65 (d, 3H, J = 3.5 Hz, H-l jednotky A, jednotky G a jednotky E), 5,57 (d, 1H, J = 3,9 Hz, H-l jednotky G), 5,52 (d, 1H, J = 3,3 Hz, H-l jednotky I, 5,29 (d, 1H, J = 8,8 Hz, H-l jednotky L), 5,17 (d, 1H, J = 73.5 Hz, H-l jednotky K), 4,56 (d, 1H, J = 3ip5 Hz, H-l jednotky M), 4,31 (d, 3H, J « 7,9 Hz, H-l jednotky B, jednotky D a jednotky F), 4*27 (d, 1H, J = 8,0 Hz, H-l jednotky H), 4,08 (d, 1H, J = 8,0

Hz, H-l jednotky J), 2,80-2,50 (m, L· H, 0(0=0)0^01^(0=0)0^), 2^18 (s, 3H, 0(C=0CH2CH2(C=0)CH3), 1,97 (s, 3H, Ac), 1,81 (s, 3H, Ac).

Schéma 21

Syntéza polysacharidů 74

O -98 • 9 • · 9 9 99 ·· 99 « • • 9 9 9 • 9 9 » 9 9 • • 9 9 9 9 9 9 9 9 9 • • • 9 9 9 9 9 9 9 99 9 9 9 9 • 9 9 9 9 9 9 9 99 99 99 99*9 99 99 Příprava 68

Methyl- [θ-(2,3,6-tri-O-methyl- jN-D-glukopyranosyl)-(1^4)-0-(2,3,6-tri-0-methyl-p -D-glukopyranosyl)-(l—74)^[ 4-0~(6-0-be nzyl-2,3-di-0-me thyl- <j&-D-grukopyranosyl)~C\-->4 )-0- (benzyl-2,3~di-O-methyl- |&-D-glukopyranurosyl)-(1-**4)-S-(3,6 di-O-acetyl-2-0-benzyl-^s-D-glukopyranosyl)-(l—>4)-(-benzyl-2,3-di-O-methyl-J^L-idopyranurosyl)-(l·"*? 4)-2,3,6-tri-0-benzyl- - ^sr-D-glukopyranosid (74)

Postupem podle způsobu 2 se zpracuje 130 mg (38,2 mmol) sloučeniny 22. a čistěním surového produktu na koloně oxidu křemičitého se takto získá 118 mg (93%) sloučeniny 24, + 78 (c » 0,48, dichlormethan)· ESIMS modul kladný : monoisotopická hmotnost ** 3301,49, chemická hmotnost = 3303,65, experimentální hmotnost = 3302 u.m.a. ΧΗ MMR (CDC13)3" 7,33-7,25 (a, 35H, 7 x C^), 5,64 (d, 3H, J * 3,5 Hz, H-l jednotky A, jednotky C a jednotky E), 5,57 (d, 1H, J a 3,9 Hz, Η -1 jednotky G), 5,52 (d, 1H, J = 3,3 Hz, H-l jednotky I), 5,29 (d, 1H, J 55s 6,8 Hz, H-l jednotky L), 5,17 (d, 1H, J =* 3,5 Hz, H-l jednotky K), 4,56 (d, 1H, I » 3,8 Hz, H-l jednotky M, 4,31 (d, 3H, J = 7,9 Hz, H-l jednotky B, jednotky D a jednotky F), 4,27 (d, 1H, J = 8,0 Hz, H-l jednotky H, 4,08 (d, 1H, J = 8,0 Hz, H-l jednotky J), 1,97 (s,.3H, Ac), 1,81 (s, 3H, Ac)· Příprava 69

Methy1-0-(2,6-di-0-benzyl-4-0-levulinyl-3-0-methyl- o(-D-gluko-pyranosyl)-(l^»4)-0-(2-0-acetyl-6-0-benzyl-3-0-methylý^-D-gluko py r a no sy 1) - (I—74 ) ~0- (2,6 -d i-0- b e n zy 1-3 -0-me t hy l~c< -D-glukopyranosy 1)-1--^4)-0—(2—0-acetyl—6-0-benzyl—3-0—me thyl- - ^.B-glukopyianosyl )-(1--4)- [0-(2,3,6-tr i-O-me thyl- -D-glu-kopyranosyl)-(1-^4)-0-(2,3,6-tri-O-methyl-o(-D-glukopyrano-syl)-(l”:74)^4-0-(6-0-benzyl-2,3-di-0-methyl-/3-D-glukopyra-nosyl)-(l-—T4 )-0-( be nzyl-2,3-di-0-me thyl-t/"X>-glukoy panurosyl)-(1-^4)-0-(3,6-di-0-acetyl-2-0-benzyl- <{ -D-glukoyparnosy1)- (1“^4)—0—(benzyl—2,3—di—0—me thyl— ¢(-L-idopyranorosyl)—(1 4)-2,3,6-tri-0-benzyl-'A^X)«.giui5:opyranosid (75)·

·* ·· ·* ·· ·· ·♦ • * · · · · · · 4fe » · · * · · · · # · ···· • # ··· 4 · · « · ··· ··» ··*··· · « *· ·· ·· «··· «· «#

Ve 2 ml toluenu se rozpustí 112 mg (33,9 pnol) glykosylové-ho akceptoru JA a 59,1 mg (37,2 jamol imidátu 17. viz příprava 16, a po přidání 42 mg molekulárního síta 4J? se reakční směs míchá při 25° C hodinu· Po ochlazení na -20° C se přidá 1 M roztok terč.butyldimethylsályl-trifluoraeetátu v toluenu (0,20 mg/mol imidátu), směs se míchá 15 minut, dále se přidá hydrogenuhličitan sodný v pevném stavu, směs se filtruje a filtrát se zahustí.

Nanese se na kolonu Poyopearl HW-50 s použitím soustavy dichloa?-methan/ethanol, 1 : 1, frakce, obsahující glykosylový akceptor se vrátí zpět do reakce s 17-mérem, vše se zpracuje jako předešle. Potom se vše čistí postupně na koloně Toyopearl HW-50 a na koloně oxidu křemičitého, získá se tak 71 mg (44%) sloučeniny 25.» p + 80 (c = 0,26, dichlormethan. ESIMS, modul klad-nýiisotopická hmotnost « 4728,10, chemická hmotnost = 4731,26, experimentální hmotnost 4731 * 0,39 u.m.a. .½ NMR (CDCl^) ^ hlavních anomerních protonů: 5,64, 5,57, 5,52, 5,48, 5,47, 5,29, 5,17, 4,56, 4,50, 4,29, 4,27, 4,08 ppm.

Schéma 22: Příprava synthonu, použitelného pro syntézu pentasacharidu Pe jednou C-interglykosidovou vazbou , sloučenina (11*1.)

-101 ·· «· »* · · Μ Μ • #· · · · · * · * · » • · · · · · · · · ·· • · Μ· 4 · 4 · * 4·· 444 φ · 4 4 4 4 0 4 ·· ·· 04 ···« ·* ·· Příprava 70

Methyl-2,3»di-0-methyl-6-0-terc.butyldimethylsilyl- (jt-D-giu- kopyranosid (22)

Pod argonem se přidává 14,0 g (92,9 mmol) terc.-butyl-dimethylsilylchloridu, 15 ml (108 mmol) triethylaminu a 260 mg 4-dimethylaminopyridinu (2,10 mmol) do roztoku 15,84 g (71,3 mmol) sloučeniny 76 -viz Trimell D., Doane W.M. a Russel C.R., C ar bohy dr .Research JL1, 497 (1969) v 300 ml dichlormethanu. Reakční směs se míchá za normální teploty 15 hodin, zředí se dichlormethanem, roztok se prorayje nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného, vysuší se bezvodým síranem hořečnatým a po filtraci se filtrát zahustí. Zbytek se čistí bleskovou chromát©grafií (cyklohexan a ethylester kyseliny octové, 1,3 : 1) a získá se tak 22,79 g (95%) sloučeniny 22 ve formě bezbarvého sirupu, +87 (c * 1,2, chloroform). Příprava 71

Methyl-2,3-di-0-methyl-6-0-terc.butyldimethylsilyl- ot-D-xylo-4-hexulopyranosid (78)

Pod argonem a za chlazení na -70°C se přidá roztok 8,7ml (123 mmol) dimethylsulfoxidu v 20 ml dichlormethanu k roztoku 5,4 ml (61,9 mmol) dichloridu oxalové kyseliny v 120 ml dichlormethanu· Po 15ti minutách se přikapává dále roztok 18,78 g (55,8 mmol) sloučeniny 22 v dichlormethanu, po 15ti minutovém magnetickém míchání se přidá 37 ml (265 mmol) triethylaminu a za 15 minut se nechá reakční teploty vastoupit na normální.

Po zředění přidáním 150 ml vody se oddělený vodný podíl extrahuje do 150 ml dichlormethanu, organické roztoky se spojí, celek se promyje nasyceným vodným roztokem chloridu sodného, a po vysušení bezvodým síranem sodným se filtrát zahustí.

Zbytek se čistí bleskovou chromátografií (cyklohexan a ethylester kyseliny octové 9 s 1» potom 4 : 1 a ve formě bezbarvého oleje se takto připraví 17,3 g (93%) sloučeniny 28» Wp + 98

♦· • ♦ · « • · · · • · ··· ♦ · · • · ·» Μ ·Φ • · · · · · · · • « · · · · · • · · « ··· ·« · • · * · · ·· ···« ·· ·· (ο = 1,0, chloroform)· Příprava 72

Me thy1-4-d e soxy-2,3 -di-O-me thy1-4-C-methyle n-6-0-1er c · buty1-dimethylsilyl- Λ-D-xylo-hexopyranosid (79)·

Pod argonem se přikapává 1,6 M roztok n-butyllithia v n-hexanu (75 mol) k suspenzi 43,3 g (127 mmol) methyltri-fenylfosfoniumbromidu v 250 ml tetrahydrofuranu. Za 30 minut stání při teplotě místnosti se reakční směs vychladí na -70° 0 a přidá se roztok 13,97 g (41,0 mmol) sloučeniny 78 v 60 ml tetrahydrofuranu. Po třicetiminutovém stání pči -70° C se teplota nechá vystoupit na normální, po hodině se přidá 300 ml nasyceného vodného roztoku chloridu amonného a vodný podíl se extrahuje do etheru. Roztok v etheru se po vysušení bezvodým síranem hořečnatým filtruje, filtrát se zahustí a zbytek se čistí bleskovou chromatografií, cyklohexan a ethylester kyseliny octové 7 i 1, pak 4 : 1· Sloučenina 22 se získá v množství 8,30 g (60%) ve formě bezbarvého oleje, + 151 (c = 1,3, chlóroform. Příprava 73 t

Me thyl-4-de soxy-2,3-di-O-methy 1-4-C-methylen- <š.-D-xylo-hexo-pyranosid (80)

Do roztoku 8,50 g (25,6 mmol) sloučeniny 22 ve 250 ml směsi dichlormethanu a methanolu 5 i 1 se přidává kyselin* kafrsulfonová až k dosažení hodnoty pH 1· Jakmile zcela vymizí použitá výchozí sloučenina(kontrola CCM, cyklohexan a ethylester kyseliny octové 1 : 1),neutralizuje se reakční směs přidáváním triethylaminu. Zbytek, získaný zahuštěním, se čistá bleskovou chromatografií za použití směsi cyklohexa-nu a ethylesteru kyseliny octové 1 : 1, potom 1:2a" získá se tak 5,32 g (95%) sloučeniny 80 ve formě bezbarvého sirupu, 1¾ + 239 (c « 1,0, chloroform· Příprava 74

Eenyl-2,4,6-tri-0-acetyl-3-0-methyl~l-seleno-^-.D-glukopy-ranosid (83)

Způsob 1 í Pod argonem se přidává 5,7 ml (53,7 mmol) sele-nofenolu k roztoku sloučeniny 81, viz Hirst E*L., Percival E,, Methods Carbohydr,Chem· 2, 145 (1963) v 120 ml dichlor-methanu Této látky, což je směs anomérů 1 : 1, se použije 13,05 g (36,0 mmol). Po ochlazení reakční směsi na 0°C se přikapává pomalu 8,8 ml (71,9 mmol) 48%ního roztoku diethyl-etherátu trifluorbotanu. Po 3 hodinách stání za teploty místnosti se reakční směs zředí přidáním 100 ml dichlormethanu, rozok se promyje nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličita-nu sodného, a po vysušení bezvodým síranem hořečnatým a filtraci se filtrát zahustí. Použije se přímo získaná surová sloučenina 83 (8,17 g, 68%, přepočteno na 81) při desace-tylační reakci.

Způsob 2 : Pod argonem a za teploty 0 6 se přidává 510 mg (14,6 mmol) hydridu boritosodného k suspenzi 2,27 g (7,27 mmol) difenylselenidu v ethanolu. Pokud barva reakčního prostředí, žlutá se nezmění během 15 minut, přidá se další podíl diethyletherátu trifluorboranu a roztok se potom přepraví pod argonem do roztoku 4,22 g (11,0 mmol sloučeniny 82 ve 25 ml dichlormeth8nu, vifc Sen A.K., Sakař K.K., Banerji N., J.Car-bohydr.Chem. 2 645 (1988), v 25 ml dichlormethanu· Reakční směs se zahřívá 3 hodiny do varu pod zpětným chladičem, po ochlazení na teplotu místnosti se odfiltruje bromid sodný, filtrát se zahustí, zbytek se rozpustí v dichlormethanu (100 ml) a tento roztok se promyje použitím 50 ml 1 M vodného roztoku hydroxidu sodného, 50 ml nasyceného vodného roztoku chloridu amonného, organické podíly se extrahují do 20 ml dichlormethanu, potom se organická fáze vysuší bezvodým síranem hořečnatým a po filtraci se filtrát zahustí. Zbytek se čistí bleskovou chromátografií za použití směsi cyklohexanu a ethylesteru kyseliny octové 1,7 : 1, a potom se krystalováním z ethylesteru kyseliny octové získá 4,35 g (86%) látky 83. -104- ·· ·· ·· #» «· ·♦ • · · · · · · · ·#·· • · · · · · · « · · · • · ··· · · · · · ··· ··· • · · » · · · ♦ ·· ♦· ·· ···· ·« ·♦ t.t. 101 - 102° 0,¾ -20 (c = 1,0, chloroform). Příprava 75

Fenyl-3-0-methyl~l-seleno- j^-D-glukopyranosid (84)

Surová sloučenina 8^., jak byla získána z 32,3 g (84,3 mmol) látky 82. se rozpustí v 500 ml methanolu a do roztoku se pomalu přidává 1,2 g sodíku. Za hodinu se roztok neutralizuje pryskyřicí IR-120 (H±) a po filtraci se zahustí.

Takto připravený zbytek se čistí bleskovou chromatografií za použiti směsi cyklohexan, ethylester kyseliny octové a aceton 1,5 t 1 : 1 a ve výtěžku 22,7 g (tj. 81%, přepočteno na 82 se získá sirupovitá látka 8£, [fjp -58 (c * 1,0, methanol). Příprava 76

Penyl-4,6-0-benzyliden-3-0-methyl-l-seleno-j^-D-gkukopyra-nosid (85)

Po roztoku 7,65 g (23,0 mmol) sloučenina 84 v 150 ml acetonitrilu se přidává pod argonem 45 mg kyseliny p-toluen-sulfonové a 5,4 ml (36,0 mmol) dimethylacetalu benzaldehydu.

Po dvouhodinovém míchání za teploty místnosti se přidá 1,5 g uhličitanu draselného, za 30 minut se roztok filtruje a filtrát zahustí. Zbytek se čistí bleskovou chromatografií v soustavě cyklohexan a ethylester kyseliny octové 3,5 :1a získá se tím 8,55 g (88%) sloučeniny 85· ve formě bilích krystalků, t.t. 123 až 124° C po krystalování z ethylesteru kyseliny octové, [djp - 38 (c = ip, chloroform). Příprava 77

Feny1-4,6-0~benzyliden-3-0-methyl-2-0-(methyl-4-desoxy-6-0-dimethylsilyl-2,3-di-0-methyl-4-C-methylen-c^-D-xylo-hexopy-ranosid)-l-seleno-^ -D-glukopyranosid (86)

Pod argonem a za chlazení na -70° C se přidává 7,0 ml (11,2 mmol) 1,6 M roztoku n-butyllithia k roztoku 4,30 g (10,2 mmol) sloučeniny §£ v 30 ml tetrahydrofuranu, umístěného v zařízení dle Schlenck-a. Za 10 minut se přidá 5,0 ml (41,2 mmol) -105 ·· ·* ·« ·· • · · · · · · é • · · ·· ·· • · · t · · · • · · · ·· · ··· • · · · · ·· ··»· ·· ·· dichlordimethylsilanu a tepldta reakční směsi se nechá vystoupit na teplotu místnosti. Po 3 hodinách a zahuštění potom se přidá roztok 2,10 g (9,62 mmol) sloučeniny 80 a 985 mg (14,4 mmol) imidazolu v 20 ml tetrahydrofuranu. Po třicetimiautovém stání za teploty místnosti se roztok zahustí, přidá se 50 ml vody s následnou extrakcí do dichlormethanu· Organický roztok se vysuší bezvodým síranem hořečnatým, po filtraci se filtrát zahustí. Analyticky čistý vzorek 86 se získá čistěním bleskovou chromátografií s použitím směsi toluenu a acetonu 25 : 1 s obsahem 0,5 % triethylaminu.

Ve cýteřku 90% se takto připraví bezbarvý sirup· HMR (400M Hz, C gDg) d 7,77-6,99 (m, 10H, aromatické, 5,51 (m, 1H, CeCHg), 5,24 Cm, 1H, 0=0¾), ^^ (s> 1H^ CHCgH^), 4,85 (d, 1H, J = 3,7 Hz, H-l), 4,81 (d, 1H, J = 9,8 Hz, H-l*), 4,45 (m, 1H, H-5), 4,38 (dd, 1H, J = 10,8 Hz, 4,8 Hz, H-6a), 4,33 (dd, 1H, J =6,2 Hz, H-6b), 4,20 (m, 1H, J = 9,2 Hz, H-3), 4,05 (dd, 1H, J = 10,3 Hz, 4,9 Hz, H-6a'), 3,87 (dd, 1H, J =8,1,

Hz, H-2*), 3,52, 3,38, 3,31 a 3,27 (s, 3H, OOH3), 3,37 (t, 1H, J = 10,3 Hz, H-6b#), 3,35 (t, 1H, H-4*), 3,32 (dd, 1H, H-2), 3,22 (dd, 1H, J = 9,3 Hz, H-R*), 3,05 (ddd, 1H, J = 9,3 Hz, H-5'), 0,38 a 0,37 (s, 3H , Si(CH3)2). MS (m/u): 714 (M+NH^)+. Příprava 78

Cyklizační radikálová reakce (příprava 8£) a odštěpení tetheru (88) Během osmi hodin se pomalu přidává roztok 6,1 ml (22,7 mml) hydridu tributylcínu a 200 mg (1,22 mmol) 2,2 '-azobisisobutyro-nitrilu v 14 ml odplyněného toluenu k roztoku surové látky 86 v 850 ml toluenu za doplnění 10,2 mmol látky 8£ a 9,62 mmol látkx 80.

Po průběhu radikálové reakce se reakční směs zahustí a zbytek se rozpustí v tetrahydrofuranu. Přidá se nadbytek (20 ekvivalentů 40%ního vodné^q roztoku fluorovodíku a po dokonalém průběhu desilylování (kontrola CCM, toluen/aeeton, 4 : 1) se roztok neutralizuje přidáváním pevného hydrogenuhličitanu -106- ·· ·* ·♦ ·· ·· ·· • » « · · · · · ♦ · ♦ · • « · ♦ · · · ♦ · · ♦ • · ··♦ ♦ · · · · ··· ··· ··♦»«· ·· ·· ·♦ ·· ···· ·· ·· sodného, filtruje se a zahustí* Převládající látku 88 lze vyčistit krystalováním, t.t. 105° C, + 119 (c *= l,i, chlo-řoform)· 13C NMR (62.896 M Hz, CD013> d 137,29 (kvart.arom.uhlíky), 128,88-125,96 (aromatické uhlíky), 101,11 (CHC6H5), 97,64 (C-l), 83,52 (c-2). 82,76, 81,95, 80,84, 72,01 71,92 a 64,31 (G-3, C-5, C-2',C-3',C-4', C-5T, 75,19 (C-l'), 69,41 (C_6'), 62,69 (C-6), 60,93, 60,70, 58,31 a 55,20 ( OCH-j), 38,80 (C-4), 25,58 (uhlík methylenové skupiny)*

Analýza pro C24H36°10eH20 ¢502,558)

vypočtenoí 57,36 % C, 7,62 % H nalezeno: 57,31 % C, 7,54 % H Příprava 79

Methyl-6-0-acety1-4-0—(2—0—acetyl—4,6—O-benzyliden—3y0-met— hy1-^-D-glukopyranésylmethyl)-4-desoxy-2,3-di-O-methyl-^ -D-glukoýyranosid (89)

Sloučenina 88 se kvantitativně acetyluje ve směsi anhyd-ridu kyseliny octové a pyridinu 1 : 1 za přítomnosti katalytického množství 4-dimethylaminopyridinu* produkt se získá zahuštěním reakční směsi a chromátografováním, + 87 (c = 1,0, chlo roform* NMR (500 M Hz, CDCl3), viz tabulka 1* ^C NMR (62*896 M Hz, CDC13) d 1^0,81, 169,80 (C«0), 137,18 (kvarterní aromatické uhlíky), 128,92-125,95 (aromatické uhlíky), 101,31 (CHCgH^, 97,51 (cTL), 83,22 (C~2, 81,94, 69,25, a 63,83 (C-5, C-4,' C-5'), 81,81 (C=3), 78,78 (do'), 72,74 (C-2') 71,97 (C-l'), 69,49 (C—6/, 64,17 (C-6), 60,64, 59,83, 58,30 a 55,19 (0CH3), 38,00 (C-4), 26,47 ( uhlík methylenové skupiny), 20,91, 20,76 (0C0CH3).

Hmotnostní spektrum (m/z)j. 586 (M+H)1 569 M+H)+, 554 (M-OMe + NH3)+, 537 (M-OMe)+*

Analýza pro ^28^40^12-¾^ ¢586,632) -107 ·· ·· ·· ·· ·· «» • · · · · · · · • * · · · · · • · ··· « · · · • · · · · · ·· ·· β« ·♦··

vypočteno: 57,33 % C, 7,22 % Η nalezeno: 57,28 % C, 7,07 % H

PrÝá část syntézy záleží v přeměně 8£ na imidát 90* K tomuto učelu se benzylidenová skupina ětevře použitím natriumkyanborohydridu a kyseliny chlorovodíkové* Takto obnažená hydroxylová skupina je dočasně chráněna tvorbou p-methoxybenzyl-etheru· Po desacetylování je primární alkoholická funkce chráněna selektivní tvorbou etheru s terc*-butyldimethyl-silylovou skupinou a takto získaná sloučenina se methyluje*

Oxidace za podmínek dle Jones-e vede k uronové kyselině, ta se benzyluje* p-Methoxybenzyl-ether se takto rozruší a do této polohy se zavede ester levulové kyseliny* Soustava za použití směsi kyseliny sírové, kyseliny octové a anhydridu kyseliny octové vede k acetplyze anomerní methylové skupiny, jakož i benzyletheru v poloze 6*a vznikne tak směs dvou acetylovených monomérů. Selektivní desacetylace v poloze 1 se provede použitím hydrazinu v dimethylformamidu a směs anomérů, rozpuštěná v dichlormethanu, se převede na látku jK) trichloraceto-nitrilem za přítomnosti 1,8-diazabicyklo[5*4*0^undec-7-enu* wo 98/03554 -1084.* »· Μ » · · · i · · · • »· ·# ·· ···· • · ·# • · ♦ · • · · ·· · • · W»T/FR97/01344 ' #·

Schéma 23f syntéza pantasacharidu ,22

Příprava 80 E thy 1-0-.(2,3-di-O-be nzoyl-4,6-0-benzyliden-cí, D-glukopy ra no-syl l~^4)«2,3»6-tri-.o-benzoyl-l-thio-p-D-glukopyranosy (92j 109· .·· ·· • o ♦ · #♦ o • • · « • • · • · • · • • • · • • • • · • · • · ··· * · • • · ··· ··· • · • • • • • • ·· ·· ·· ···· ·· ··

Do roztoku 16,7 g (35>3 mmol) sloučeniny, kterou připravili Westman3& Nilsson M·, J.Carbohydr.Chem# 14, 949-960 (1995) v 202 ml pyridinu, ochlazeného na 0°C, se přikapává během 20 ti minut 24,5 ml (211 mmol) benzoy_JLehloridu. Reakční směs se potom míchá za teploty místnosti 20 hodin, chroaatografií na tenké vrstvě se ukáže, že reakce proběhla asi z 50%* Směs se zředí přidáním vody a dichlormethanu, po extrakci do rozpouštědla se organická fáze promyje l0%ním roztokem hydrofeenuhličitanu sodného, vodou, vysuší se bezvodým síranem hořečnatým a po filtraci se filtrát zahustí· Podle výše uvedeného pochodu se na zbytek působí znovu benzoylchloridem. Surový produkt se čistí chromátografováním na lélu oxidu křemičitého a získá se tak 22 g sloučeniny CCM: Rf = 0,80, silikagel, toluen/ethanol 9/1 objemově0 Příprava 81 0-(2,3-Dl-0-benzoyl-4,6-0-benzyliden-‘Í-D-glukopyranosyl)-(l-H)~ -0-(2 ,3,6-tr i-O-be nzy ol- /JV-D-glukopyranosy 1-9-(1 )-l, 6-a nhydro- 2,3-di-0-methyl-^ -D-glukopyranosa (94)·

Směs 1,05 g (1,05 mmol) thioglykosidu 2, 200 mg (1,08 mmol) sloučeniny 22.» viz Jeanloz a spol., J*0rg*Chem. 26. 3939-3944 (1961) a 1,1 g práškovaného molekulárního síta 4$ se míchá v prostředí 18 ml toluenu pod dusíkem 15 minut, potom se ochladí na -20° C a přidá se čerstvě připravený roztok 1,11 mmol N-jodimidu kyseliny jantarové a 0,125 mmol kyseliny trifluor-methansulfonové ve směsi dichlormethanu a dioxanu, 1/1, obj·, celkem 6 mlo Po 10ti minutách se červená směs filtruje, zředí dichlormethanem, po extrakci §e organický roztok postupně promyje 10%ním vodným roztokem thiosíranu sodného, 10%ním vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a vodou, a po vysušení bezvodým síranem hořečnatým a filtraci se filtrát zahustí ve vakuu· Zbytek se čistí chromatografováním na koloně silikagelu a získá se tak 1,25 g sloučeniny 94· CCM, Rf =0,55, silikagel, heptan a ethylester kyseliny octo-vé, 4/6 obj*

·· ·· » · · i » · · I #· ·♦ ► · · * ··· · * -110-* • · · • · Příprava 82 0-.(4,6-0-benzyliden-dt-D-giTakopyranosyl)-.(x~-^)-o-(p>~D-glu-kopyranosyl)-(l ^4)-1,6-anhydro-2,3-di-0-methyl-j?> -D-glukops-ranosa (95).

Do roztoku 1,24 g (1,11 mmol) sloučeniny J94 v 7 ml směsi methanolu a dioxanu, 1/1 obj. se přidá asi 50 mg kalium-terc·-butoxidu, reakční směs se míchá hodinu, přidá se dslší dávka 50 mg kalium-terc.-butoxidu a v míchání se pokračuje ještě 60 minut. Reakční směs se neutralizuje na pryskyřici Dowex 50WX8 H+, filtruje se a zahustí ve vakuu* Chromátografováním na koloně silikagelu pe takto získá 665 mg sloučeniny ^5 ve formě oleje. CCM: Rf = 0,50, silikagel, dichlormethan/,ethanol, 85/15 obj. Příprava 83 0-(4,6 —0—B e n zyliden-2,3—di-0—methy1— A—D-glukopy r a no sy 1)— (1 ”/4 ) -B- (2,3,6- tr i-O-me t hy 1- (jb -D-glukopy r a no sy 1) - (1 -~?4 ) -l,6-anhydro-2,3-di-0-methyl-^ -D-glukopyxanosa (96).

Do roztoku 660 mg (1 xnmol) sloučeniny v 8 ml suchého tetrahydrofuranu se po ochlazení na 5° G přidá pod dusíkem 387 mg (9,65 mmol) hydridu sodíku, potom se přikapává 0,51 ml (0,22 mmol) methyljodidu a za teploty místnosti se reakční směs míchá 20 hodino Nadbytek hydridu sodíku se rozruší přidáním methanolu, vše se vlije do 50 ml ledové vody, směs se extrahuje třikrát vždy do 20 ml ethylesteru kyseliny octové, organický roztok se promyje roztokem chloridu sodného a po vysušení síranem hořečnatým se zahuštěním filtrátu získá 690 mg čisté látky 96. CCM, Rf s 0,25, silikagel, diohlormethan/methanol 95/5 obj. Příprava 84 0-(2 ,3-D i-O-me thy 1-j^-D-glukopyr a no sy 1) - (1--7 4 )-0-2,3,6-tr i-O-me t hy 1- j>-D-glukopy r a no sy 1) - (1-^ 4)-l, 6-amhy dro-2 , 3-d i-Q-me t-hyl-p-D-glukopyranosa (97) -111- -111- Μ ·· • · ·

♦ · • 9 99 • · 9 · 9 1 9 9 1 * # * • 9 9 • · • 9 •9 W · ·* • · · 9 · ii • • • · 9 999 • 9 • · V 7*3 ml QO%ní kyseliny octové se rozpustí 690 mg (1,03 mmol) čisté sloučeniny £6 a za teploty 40°C se směs míchá 20 hodin, dále se zahustí ve vakuu a znovu se zahustí po zředění toluenem* Chromátografováním na koloně silikagelu v prostředí dichlormethanu/octanu ethylnatého a methanolu 8/1/1 se takto získává 569 mg sloučeniny 97* CCM, Rf m 0,40, silikagel, dichlormethan/methanol 9/1 obj* Příprava 85 0—(6-0-Be nzoy 1-2 ,3 -d i-0-me thy 1- cí^-9-glukopy r a no sy 1)- (1-^ 4)--0-(2,3,6-tri-0-me thy 1-J> -D-glukopyranosyl)-(l-^4)-Í,6-an-hydro-3*3-di-0-methyl-^>-D-glukopyranosa (j)8) ·

Do roztoku 560 mg (0,96 mmol) sloučeniny ▼ dichlor-methanu se přidá 227 mg (1,05 mmol) l-benzoyloxy-lH-benzotri-azolu a 1,15 mmol triethylaminu, reakční směs se míchá 20 hodin za normální teploty, zředí se potom dichlormethanem, roztok se promyje 10%ním roztokem hydrogenuhličitanu sodného a vodou, organická fáze se vysuší bezvodým síranem horečnatým, a po filtraci se filtrát zahustí do sucha* Produkt se čistí chroma-tografováním na kolona silikagelu s výsledkem: 600 mg sloučeniny 98* Příprava 86 0-(2,3-Di-0-benzoyl-4,6 O-benzyliden-oí -D-glukopyranosyl)--(l—>4)-0-(2,3,6-tri-0-benzoyl-fc>-D-glukopyranosyl)-( 1-^4)-0--(6-0-benzoyl-2,3-di-0-me thy1-ck -B-glukopyránosy1)-(1 -?4)-0- -(2,3,6-tri-0-methyl— ____-|b-D-glukopyranosyl)- (1**H)-1,6-anhydro-2,3-di-0-methyl-p-D-glukopyranosa (9£).

Sloučenina vzorce j[8 se převede na látku vzorce ^ postupem, jak byl popsán při přípravě látky 94"Kopulační reakce se provádí za teploty 5°C. CCM, Rf » 0,50, silikagel, heptan a ethylester kyseliny octové, 2/8, obj* • · · 9 • · · 9 • · * * 9 · · 3 · · * * 9 9 9 9 9 9 · · • 9999*9 * • 4 · * · · «9 *9 *· ·· * · · 9 PCTrFiyi/01344 ' 9 9 9 9 • i 1 WO 98/03554 -112

Schéma 24 Syntéza heptasacharidu 104 99

104 -113- ·* ·· • · • · · • · * • · • · • « ··· ♦ • · • • · • · • *· • · 9 · · ·· ·« • · e * * · « # ··· *·· • · Příprava 87 O- (4 , 6 -O-B e n zy lid e n- </ -B-glukopyr a nosy1) -(1—74 ) -0-( fb -B-gluko-pyranosyl)-(l-^4)-0-(2,3-di-0-methyl-<^-B-glukopyra nosyl)-(l—"4)--0-(2,3,6-tri-0-methyl-P-B-gluk^pyranosyl)-(l-"‘'4)-l,6-anhydro-2,3-di-O-methyl-^-B-glukopyranosa (100)·

Sloučenina se převede na sloučeninu 100 stejným způsobem, jak byl popsán pro přípravu sloučeniny 95« CCM, Rf = 0,38, silikagel, dichlormethan/methanol 9/1 obj. Příprava 88 0-(4,6-0-Benzyliden-2,3-di-0-methyl-o(-B-glukopyranosyl)-(1--^4)- 0-(2,3,6-<&±i-0-methyl-^-D-glukopyranosyl)-(l—74)-0-|> ,3,6- tri-0-methyl-s( -B-glukonvranosvl)-( 1-74)-0-(2.3.6-tri-0-methyl)- (1—74) -0-(2,3,6-tri-0-methyl-/3-B-glukopyranosyl)-(l—=4)-1.6-l_ anhydro-2 ,3-di-0-meJ;hyl-/9 -B-glukopyranosa (101) Sloučenina 100 se převede na*"sloučeninu 101 šTejnym způsobem, jak to bylo popsáno přippřípravě látky 96· CCM, Rf >s 0,50, silikagel, dichlormethan/methanol 9/1, obj. Příprava 89 0-(2,3-Di-0-methyl-o( -B-glukopyranosyl)-( 1^4)-0-(2.,3,6-^1-0-methyl-(P-B»glukopyranosyl)-(l'^'74)-0-(2,3,6-tri-0-methyl--j^-B-glukopjř3Danosyl)-(l—74)-0-(2,3,6-tri-0-methyl-^-D-glu-kopyranosyl)-(l—74)-1,6-anhydro-2,3-di-0-methyl- -D-giuko-pyranosa (102)·

Sloučenina í01 se převede na sloučeninu 102 týmž způsobem, jak to bylo popsáno pro přípravu sloučeniny 97· CCM, Rf * 0,35, silikagel, dichlormethan/methanol 9/1 obj* Příprava 90 0-(6-0-Benzoyl-2,3édi-0-methyl-í!(-B-glukopyranosyl)- (1-74).0-(2,3,6-tri-0-methyl-^ -B-glukopyranosyl)-(l-*4)-0-(2,3,6-tri-O-methyl-v^ -B-glukopyranosyl)-( 1^4)-0-(2,3,6-tri-0-methy 1-^¾. -D-glukopyranosyl-( 1-:74)-1,6-anhydro-2,3-di-O-methyl-/0-l>-glukopyranosa 103.

Sloučenina 102 se převede na sloučeninu 103 podle postupu, popsaného pro.přípravu sloučeniny 98» CCM, Rf « 0,40, silikagel, toluen/ethylester kyseliny octo-vé/ethanol 7,0/1,5/1,5 obj· Příprava 91 0-(2,3-I>i-0-I>enzoyl~4,6-0-benzyliden-0(-D-glukopyra- nosyl)-(l-?4)-0-(2,3,6-tri-0-benzoyl-^3-D-glukopyranosyl)~ (1—4)-0~(6-0-benzoyl-2,3-di-0-methyl-o( -D-glukopyranosyl)-Cl—74)-0-(2,3,6-tri-0-methyl-$ -D-glukopyranosyl)-(l-^4)« 0-(2,3,6-tri-0-methyl-c/-D-glukopyranosyl)-(l‘-í^)-0-(2,3,6-tri-0-methyl-j>~í>-glukopyranosyl)-(l 4)-l,6-anhydro-2,3-ai-0~met-hyl-^ -D-glukopyranosa (104)·

Reakce spojování sloučeniny 103 s ..disacharidemnS se provede použitím postupu, popsaného pro přípravu sloučeniny aa. CCM, Rf = 0,40, silikagel, toluen/ethylester kyseliny octo-vé/ethanol, 7,0/1,5/1,5 obj· ·· ·ι ·· ·· ·· ·« ···· · · · * · · · · • · · · · ♦ · · * · · 115- : ;··:·: : .· ·ρε*ρ^κ9^οΐ344 * ·· ·· ·· ···· ·· ··

Schéma 25 Syntéza oligosacharidu 109« TU*

I

105

-116- ·· Μ ·· ·· ·· ·· • · · · ···· t · · · ···· · · · · · · · • « ··« m · · t · ··· ··* ··«··· ♦ * mm ·· mm ···· ·· ·· Příprava 92 0-( 4,6-0-Benzyliden-o( -D-glukopyra no syl)-(1 —?4) -0-(/¾ -D-glu-kopyranosyl)—(l—?4)-0-(2,3-di-0—methyl—o(-D-glukopyranosyl)— (1-¾ ) —0—( 2,3,6-tr i-O-me thy 1- ^-D-giukopy r a no sy 1) - (1 -^4 ) -(2,3,6-tr i-O-me thy 1- Á -D-glukopyra nosyl)-(l-?4)-0-(2,3,6-tr i-O-me thy 1-(^ -D-giukopyranosyl)-(l—74)-l,6-anhydro-2,3-di-O-methyl-^ D-glukopy ranosa (105),

Sloučenia 104 se převede na sloučeninu 105 stejným způsobem, jak byl popsán pro přípravu sloučeniny 95# CCM, Rř e 0,60, silikagel, dichlormethan/methanol 9/1 obj· Příprava 93 0-(4,6-0-Benzyliden-2,3-di-0—methyl-^-D-glukopyranosyl)-( 1-^)-0-(2,3,6-tri-0-me thy 1-^3» -D-glukopy ranosyl)-(1—=4) - j~0-( 2,3,6-tri-O-methyl-^-D-glukopyrajiosyD-d—74 )-0-(2,3,6-tri-0~me thy 1--ýVh-glukopy r a no sy 1) -() | ^-1, 6-a nhy dro-2,3-d i-O-me thy 1-fb -D-glukopyranosa (106).

Sloučenina 105 se převede na sloučeninu 106 použitím postupu, popsaného pro přípravu sloučeniny 96, CCM, Rf m 0,70, silikagel, dichlormethan/methanol, 9/1 obj. Příprava 94 0-( 2,3-D i-O-me thy l-o( -D-glukopyranosyl)-(l—74)-0-(2,3,6-tri--O-methyl- jj^-D-glukopyranosyl)-( 1-^4)-^0-(2,3,6-.tri-0-methyl--D-glukopyranosyl)-(1^4)-0-(2^3,6-tri-0-me thyl-^3>-D-glu-kopyranosy 1)-(1—74 )^2“’·ί» 6-a nhy dro-2,3-di-0-me thy l-|^>-D-gluko-pyranosa (107),

Roztok 5,05 g (2,0 ramol) sloučeniny 106 v 50 ml 80%ní kyseliny octové se míchá 20 hodin za teploty 40°C. Po zahuštění ve vakuu a novém zahuštění po přidání toluenu se zbytek rozpustí v ethylesteru kyseliny octové a roztok se extrahuje vodou# Vodný podíl se vytřepá do dichlormethanu a spojené organické roztoky se vysuší bezvodým síranem horečnatým. Zahuštěním po -117- ·· ·· ·· M • · • · ♦ * · • · • · ♦ · • · ··· t • · · • · • • · · ·· ·· • · · · • · · · · + · · · · filtraci do sucha se takto připraví 2,68 g sloučeniny 107 CCM, Rf a 0,50, silikagel, richlormethan/,ethanol 9/1, obj. Příprava 95 0-(6-0-Benzoyl-2,3-di-0-methyl—<^-D-glukfepyranosyl)-(l-^::^)-0-(2,3»6-tri-0-methyl-^>'D-glukopyranosyl)-(l-^:5í)-jr0-(2,3,6-tri-0-methy1-c^-D-glukopyranosyl)-(1-^4)-0-(2,3,6-tri-O-methyl- - |)D-glukopyranosyl)-(l —4)) 2»l,6-amhydro-2,3-di-0-methyl- - |S-D -gluko py r a no sa (108) ,

Sloučenina 107 se převede na sloučeninu 108 použitím téhož postupu, jak byl popsán pro přípravu sloučeniny 98. CCM, Rf b 0,80, silikagel, toluen/ethylester kyseliny octové /ethanol 7,0/1,5/1,5 obj. Příprava 96 0-(2,3-Di-0~benzoyl-4,6-0-benzyliden-o(-D-glukopyranosyl)-(1--^4)-0-(2,3,6-tri-0-benzoy 1-^3»-D-glukopyranosyl)-(l'—^4)-0-(6-0-benzoyl-2,3-di-0-methyl- c?(-D-glukopyranosyl)-(l—74)-0-(2,3,6-tri-0-methy 1-{β> -D-glukopyranosy 1)-(1-^4)- [o-(2,3,6-tri-0-methyl-$ -D-glukopyranosyl)-(l~^4)-0-(2,3,6-tri-0-met-hyl4*^3>-D-glukopyranosyl)-(l'^l·) Jí>-l,6-anhydro-2,3-di-0-met-hyl- j|)~D-glukopyranosa (109).

Směs 1,97 g (2,0 mmol, 3,5 ekv.) thioglykosidu 92, 0,86 g (0,57 mmol) heptasacharidu 108 a práškovaného molekulárního síta 4$ se v prostředí 22 ml toluenu míchá pod,dusíkem 15 minut.

Za teploty místnosti se potom přikapává čerstvě připravený roztok 496 mg (2,2 mmol) N-jodimidu kyseliny jantarové a 0,808 mmol kyseliny trifluormethansulfonové v 12 ml směsi dichlormethanu a dioxanu, 1/1, obj. Po 10ti minutách se reakční směs filtruje, filtrát se zředí dichlormethanem, extrahuje, promyje 10%ním roztokem thiosíranu sodného a 10%ním roztokem hydrogenuhličitanu sodného a po vysušení bezvodý# síranem hořečnatýra se filtrát zahustí ve vakuu. Surový produkt se čistí chromatografováním na

·» ·« ♦· ·* • · · t · · · · • · · · · · · • ······ · · -118- • « · · · · ·· ·· ·· ··♦·

koloně silikagelu a získá se tak 1,00 g sloučeniny 109 CCM, Rf » 0,80, silikagel, toluen/ethylester kyseliny octo-vé/ethanol 8/2/2, ob;U WO 98/03554 ·» ·· ·· ·· ·· ·· II·· ···· #··· : i .·* ·ρ«$ιτΜί/οΐ344 119-

Schama 26 ; Syntéza oligosacharidu 115

Příprava 97 0-( 4,6-0-Benzy lide n-c(-D-glukopyranosy 1)-(1--^4 )-0-(^ -D-gluko-pyr ano syl)-(l.~=>4 )-0-(2,3—di-Q-methyl— —D—glukopyranosyl-(l—74)- 0-(2,3,6-tri-0-methyl-^-D-glukopyranosyl)-[( 1-^4)-0-3,3,6-tri- O-met hyl- <Λ -D~gluko pyr a no sy 1) - (1-? 4) -0-(2,3, β-tr i-O-me thyl-^-D- glukopy ranosy 1 )^)2 (1—74)-1,6-a nhy dr o-2,3-di-O-me t hy 1-Λ-D-gluko- pyranosa (110)

Sloučenina 10^ 30 převede na sloučeninuŽ-10 stejným způsobem, jak to bylo popsáno při přípravě látky 95. CCM, Rf « 0,25, silikagel, toluen/ethylester kyseliny octové/-ethanol 5,0/2,5/2,5 obj. Příprava 98 0-(4,6-0-Benzyliden-2,3-di-0-methyl-<*-D-glukopyranosyl)-(1^4)-. 0-(2,3,6-tri-0-methyl-|b-D-glukopyranosyl)-(l--^4)-^-(2,3,6-tri-0-methyl- <^-D-glukopyranosyl)-(S~*4)-0-(2,3,6-tri-0-methyl-/ --D-glukopyranosyl)-(l-H4yj 3-l, 6-anhydro-2,3-di-O -methyl-β -D-glukopyranosa (ill)

Sloučenina 110 se převede na sloučeninu 111 tjpnž postupem, jak to bylo popisováno pro přípravu sloučeniny $6 DDM, Rf » 0,50, silikagel, toluen/ethylesterlckyseliny octové/-ethanol 6/2/2 obj. Příprava 99 0-(2,3-Di-O-methyl- <?(-D-glukopyranosyl)-(l~^4)-0-(2,3,6-tri-0-methyl-j^ -D-glukopyranosy1)-(1-^4)- |0-(2,3,6-tri-O-methyl--/-D -glukopy r a no sy 1) - (1 -^4 )-0-(2,3,6-tr i-O-me t hy 1- -D-gluko py r a no-syl)-(l“74)^3~l,6-anhydro~2,3-di-0-methyl-^y>D-glukopyranosa (112)

Sloučenina 111 se převede na sloučenina 112 stejným pracovním postupem, jak to bylo popsáno při přípravě sloučeniny J5j[ CCM, Rf » 0,20, silikagel, toluen,/ethylesterkyyeliny octové/-ethanol 6/2/2, obj* Příprava 100 0-(6-0-Be nzoy1-2,3-di-O-me thy1- ^-D-glukopyrano sy1)-(1-Ό4)-0-(2,3,6-tr i-O-me thyl- $-D-glukopyranosyl)~(l [p- (3,3,6-tr i-O- me t hy l-c( -D-gluko py ráno sy 1) - (1 -^*4 )-0- (2,3,6-tr i-O-me thyl- ^--D-gluko pyranosyl)-(l'-^)^)3-l,6-anhydro-2,3-di-0-methyl-Λ-D-glukopyrano- sa(113)· -12 i-

Sloučenina 112 se převede na sloučeninu 113 stejným postupem, jak to bylo popsáno při přípravě sloučeniny ^8 CCM, Rf * 0,20, silikagel, toluen/ethylester kyseliny octové/-ethanol 6/2/2 Příprava lOl 0-( 6-0~Benzoyl«»4-0~le vuliny 1-2,3-di-0-methyl-<A-D-glukopyra nosy 1)-(1--/4 )-0-(2,3,6-tri-0-methyl-/p>-D-glukopyranosyl)-(l—Ή)--'[0-(2,3,6-tri-0-methyl-«sÍv-D-glukopyranosyl)-(l—»4)-0-(2^3,6^-tri-O-methyl-^-D-glukopyranosylMl—TO^-l^-anhydro-Sd-di-O-methyl-jj^JD-glukopyranosa (114)

Do roztoku 320 mg (0,167 mmol) sloučeniny 113 v 1 ml dioxa-nu se přidá 48 mg (0,25 mmol) hyárochloridu l-(3Tdimethýlamino-propyl)-3-ethylkarbodiimidu, 29 mg (0,25 mmol) kyseliny levulové a 4 mg (0,033 mmol) dimethylaminopyridinu, reakční směs se míchá za normální teploty 3 hodiny pod dusíkem, zředí se přidáním dichlormethanu a vody, po extrakci se organický roztok promyje vodou, vysuší se bezvodým síranem horečnatým a po filtraci se filtrát zahustí. Surový produkt se čistí chromátografováním na koloně silikagelu s výsledkem: 312 mg sloučeniny 114. CCM, Rf ss 0,50, silikagel, toluen/ethylester kyseliny octo-vé/ethanol 6/2/2 obj. Příprava 102 0-(6-0-Benzoyl-4-0-levuliny1-2,3-di-O-methyl--D-glukopyráno-sy 1) - (1 —74) -0- (2,3,6-1ri-0-me thy 1-^ -D-glukopy ra nosy 1)- (l-~?4)--Cp-(2,3,6-tri-0-methyl- 0{-D-glukopyranosyl)-(l-=*4)-O-(2,3,6-tri-0-methyl-^-D~glukopyranosyl)-(i~54)j3-l,6-di-0-acetyl-2(3-di~0-methyl- -D-glukopyranosa (115),

Za teploty místnosti se 4 "hodiny míchá roztok 312 mg (0,155 mmol) sloučeniny 114 ve směsi 2,25 ml anhydridu kyseliny octové, 50 pl kyseliny octové a 0,14 ml kyseliny trifluoroctové, po přidání 10 ml toluenu se směs odpaří a třikrát se ještě oddestiluje po přidání vždy 10 ml toluenu. Po chromá to graf o vání na koloně silikagelu se izoluje takto 324. mg sloučeniny 115 CCM: Rf *= 0,65, silikagel, toluen/ethylester kygseliny octové a ethanol 6/2/2 obj. \V0 98/03554 -X22 • · · ♦ • · ··· • · · ·# t# • # · • · · ·· ···· * PČfň'F$$?ř/01344 '

Schéma 27, Příprava oligosacharidu 117

Příprava X03 0-( 6-QJBenzoyi-4-0-ievuiinyi-2,3 -d i-O-me t hy X- o(-D-giukopyrano-syX)-(X-J74)-0-(2,3,6-tri-0-methyX- jVD-gXukopyranosyÍ)-(i—=4)--[o-(2,3,6-tr i-Q-me thy X-o(-D-giuko pyrano syX)-(i"^4)-O-(2,3,6-tri-O-methyX-(p> -D-gXiikopyranosyX)-(X"^)J^-6-0-acetyX-2,3-di-0-methyX-o^,^>-D-gXukopyranosa (XX6)

Roztok 324 mg (0,X53 mmoX) iátky XX5 a 22,3 jii morfoXinu (0,256 mmoX) v 2 mi toiuenu se míchá 4 hodiny za tepioty 35° C. Po přidání daiší dávky 22,3 jii morfoXinu se pokračuje v míchání reakční směsi 20 hodin při 35° C. Dáie se reakční směs prudce ochiadí vodou, extrahuje dichiormethanem, organický roztok se postupně promyje O,i N roztokem kyseiiny chXorovodíkové a vodou, po vysušeni se zahustí do sucha· Po chromátografování na koXoně siXikageXu se takto připraví 280 mg sioučeniny XX6, CCM, Rf * 0,45, siiikagei, toiuen/ethyiester kyseiiny octo-vé/ethanol 6/2/2 objo -123- -123- « · • · 9 · ♦ · · ♦ · « • ♦ · * * ♦ • « ····« · C « · · · ·· ** ·· ·· ·· «· • · · · · » · · 9 · # · *· · ··· • · · ···· β· · * Příprava 104 0-(6_0-Benzoyl-4-0-levulinyl-2,3-di-Q-methyl-o( -D-glukopy» ranosyl)-(l-H)-0-(2,3,6-tri-0-m9thyljB> -D-glukopyranosyi).. (1-^4)-^0-(2,3,6-tri- 0-me t hyl-c/ -D-glukoy par no sy 1) ~ (1--¾) 0-(2,3,6-tri-0-methyl-j^>-D-glukopyranosyl)-(l—':4)]^-6-o-ace-tyl-2,3-di-0-methyl-^ ,/Jb -D<rglukopyranosyl-triehloraeetimi-dát (117)

Do roztoku 138 mg (0,066 mmol) sloučeniny 116 v 1,5 ml dichlormethanu se přidá 39 pl (0,39 mmol) trichloracetonitrilu, dále 4,7 mg uhličitanu česného, reakční směs se míchá 2 hodiny, filtruje, filtrát se zahustí a zbytek se chromátografije na koloně silikagelu. Získá se tak 152 mg imidátu 117* CCM, Rf « 0,35, silikagel, toluen/ethylěster kyseliny octo-vé/ethanol, 8/1/1, obj* WO 98/03554 Μ ·· ·» « » * * « • · » · £ « « ·· » ·

• · · · * · * * PC5/FR97/01344 ' 124

Schéma 28, Syntéza disacharidu 128

AcO OMe OAc

AcO OAc123 ▼ ▼

AcO OM· Jo-? SEt +

AcO OAc

HO MBnO OM· \ OM· 3 OBn

OH *

HO MBnO 3 OBn 124 122 121

AcO.

OM· MBnO. AcO

OBn OM· OAc

HO

OM· \—7/ a V OBnOM· OH 125

12S

-125- »· ·· 4 « · ♦ • · · · • · ·«♦ · • · · 9· *· • · · * » · * • * to * · · «· ·«#· t* ♦· • » · t β t · * ··· ttt • * «· ♦* Příprava 105

Methyl-2-0-benzyl-4,6-0-benzyliden- cL -D-glukopyranosid (119) V 858 ral dimethylformamidu se rozpustí společně 60 g sloučeniny 118, jež je běžně obchodně dostupná a 50,5 ml benzylbromidu. Po ochlazení na 10° C se přikapává pomalu 20%ní vodný roztok hydroxidu sodného, reakční směs se míchá hodinu, teplota se nechá vystoupit na 20° C s následujícím mícháním po dobu 20 hodin. Roztok se vlije na směs vody a ledu, a po extrakci toluenem se organický roztok zahustí; krystalováním surového produktu se takto připraví 30,0 g sloučeniny 119. CCM Rf » 0,60, silikagel, toluen/ethylester kyseliny octové 7/3 obj. Příprava 106

Me t hy 1-2-0- be n zy 1-4 φ -0- b e nzy lid e n-3 -0-p-me t hoxy be n zy l-c^-D-glukopyranosid (120). V 2>11 ml dimethylformamidu se rozpustí 26,4 g sloučeni-ny 119. a po ochlazení roztoku na 5° C se pod dusíkem přidává 2,5 g hydridu sodíku. Potom se přikapává do reakční směsi 13,3 g 4-methoxybenzylchloridu, směs se dále míchá za teploty místnosti hodinu, zředí se ethylesterem kyseliny octové, roztok se promyje dvakrát vodou a zahuštěbím se takto připraví 40,7 g sloučeniny 120. CCM, Rf a 0,80, silikagel, toluen/ethylester kyseliny octové 7 /3 obj. Příprava 107

Methyl-2-0~benzyl-3-0-p-methoxybenzyl-^-D-glukopyranosid (121) V 60%ní vodné kyselině octové se rozpustí 34,9 g sloučeniny 120 a roztok se míchá 4 hodiny při 60° G. Dále se zředí toluenem, zahugtí a dalším čistěním chromátografií na silika-gelu se připraví tímto způsobem 26,4 g sloučeniny 121. CCM, Rf = 0,07, silikagel, toluen/ethylester kyseliny octové 7/3 obj. 126·· 126·· 4 44 4 4 4 4 « 4 4 4 9 • * • 4 4 t · 4 9 4 4 ··· ♦ 4 9 • a 4 • 4 4 • 4 4 ♦ » « t ««· • · • · e • · · ··· ··· • « * ·· Příprava 108

Methy 1-2 -0- be n zy 1-3 -0-p-me t hoxy b e n zy1-6 -0-me t hy 1- cL -D-gluko-pyranosid (122).

Pod dusíkem se rozpustí 26,4 g sloučeniny 121 v 263 ml dichlormethanu a za teploty místnosti se přidá 11,6 g tri-ethylóxpniumtetrafluorborátu a 17,4 g 2,6-di-terc.-butyl-4-methylpyridinu. Po 4 hodinách se reakční směs vlije do ledová vody, po extrakci do dichlormethanu se organický roztok promyje roztokem hydrogenuhličitanu sodného a zahustí. Čistěním surového produktu chromátografováním na koloně silikagelu se připraví takto 18,5 g sloučeniny 122. OCM Rf 0,25, silikagel, toluen/ethylester kyseliny octové /7/3, obj. Příprava 109

Ethyl-2,4,6~tri-0-acetyl-3~0-methyl-l-thio-C^-L~idopyrano- eid(124) V 175 ml toluenu se rozpustí 48,4 g sloučeniny 123. t.j. l,2,4,6-tetra-0-acetyl-3-0-methyl-Js-L-idopyranosy, viz Jaurand a spol·, Bio.Med.Chem.Lett. 2, 897-900 (1992); dále se pod dusíkem přidává 20 ml ethanthiolu a 134 ml etherátu fluoridu boritéhoí v toluenu). Po hodinovém míchání a přidání 400 ml vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného se směs míchá ještě další hodinu.

Po vlití do ethylesteru kyseliny octové se oddělená organická fáze promyje dvakrát vodou, zahustí se a dalším čistěním na koloně silikagelu se získá 29,6 g sloučeniny 124 CCM Rf » 0,45, silikagel, toluen/ethylester kyseliny octové, 6/4, obj. Příprava 110

Me thy 1-0-(2 ,4,6-tri-O-ace tyl-3-0-me thyl- A-l-idopyra nosy 1)- (1 ~?4 )-a-O-benzyl^-O-p-methoxybenzyl-ó-O-methyl-cl^-D-glukopyranosid (125).

Pod dusíkem se rozpustí v 525 ml toluenu 17,5 g sloučeniny 122 a 28,2 g sloučeniny, 124. přidá se molekulární síto 4-8 a reakční směs se vychladí na -20° C. Přikapává se pod nepřetržitým proudem dusíku čerstvě připravený roztok 17,4 g 0,1 M N-jodimidu-kyseliny jantarové a 1,38 ml kyseliny trifluormethansulfonové ve • 0 00 0 0 0 0 0 0 0 0 00 0 0 00 0 0 0 0 0 0 ·· ·· #« ·· • ♦ · * ♦ * · • » · · · · • 0 ··· · * · · 0 0 0 0 0 0 00 00 00 000 -127- směsi dioxanu a dichlormethanu, 1/1, obj. Po 10ti minutách se Servaná reakční směs filtruje, filtrát se promyje postupně vodným roztokem thiosíranu sodného a vodným roztokem hydro-genuhliČitanu sodného, zahuštěním vysušeného filtrátu se získá 30.0 g sloučeniny 125 CCM Rf e 0,45, silikagel, dichloimethan/ethylester kyseliny octové, 8/2, objo Příprava 111

Methyl-0-(3-0-methyl-tsL -l-idopyranosyl)-(l-^4)-2-0-benzyl-3-0-p-methoxybenzyl-6-0-methyl- J^-D-glukopyranosid (126). V 460 ml směsi methanolu a dioxanu 1/1 obj* se rozpustí 30.0 g sloučeniny 128 a přidá se kalium-terc.-butoxid. Za 15 minut se reakční siiěs neutralizuje na pryskyřici Dowex 50WX8H+, zahustí se ve vakuu a zbytek se čistí chromátografováním na koloně silikagelu s výsledkem 17,4 g sloučeniny 126. 0GM, Rf * 0,25, silikagel, dichlormethan/methanol 95/5 obj. Příprava 112

Methyl-0-(4,6-0-isopropyliden-3-0-methyl-í>(-L-idopyranosyl)-(1 -^4)-2-0-benzyl~3-0-p-methoxybenzyl-6-0~methyl- ^-D-gluko-pyranosid (127).

Pod dusíkem se rozpustí 17,4 g sloučeniny 126 v 77 ml dimethylformamidu a po přidání 26 ml 2,2-dimethoxypropanu a kyseliny p-toluensulfonové se reakční směs míchá 30 m5,nut. Následuje zředění reakční směsi vodným roztokem hydrogenuhli-čitanu sodného s následující extrakcí do ethylesteru kyseliny octové. Po oddestilování rozpouštědla se takto získá 19,7 g sloučeniny 127. CCM, Rf s 0,45, silikagel, dichlormethan/methanol, 9$%5 obj. Příprava 113

Methyl-0-(4#6-0-isopropyliden-2,3-di-0-methyl- ol-I»-idopyrano-syl)-(l«^4)-2-0-benzyl-3-0-p-methoxybenzyl-6-0-methyl—Λ-D-glukopyranosid (128).

Roztok 18,5 g sloučeniny 127 v 24,4 ml dimethylformamidu «· ·· I # « « I · · « ·· ·· I ♦ ♦ « -12 8-» se vychladí na 0° C a pod dusíkem se přidá 1,47 g hydridu sodíku, (disperze v oleji, 60%) a 2,36 ml methyljodidu. Po hodině se nadbytek natriumhydridu rozruší methanolem, a extrakcí do dichlormethanu s obvyfclým dalším zpracováním se získá 20,0 g sloučeniny 128, CCM, Rf m 0,85, silikagel, dichlormethan/^iethanol, 95/5, obj. *· *· • · · ••:PCTCTR97/01344 ' • · * · WO 98/03554 ; ;; ; : ί* • » · · · · · · • · · · · · «I ·· ** ·· -129-

Schema 29* Syntéza disacharidu 138 128 i

OAc *

T

OH

NH CCI, 138 137 -130- ·· ·♦ » φ · « I · · * Μ ·· > ♦ # < ··· ··· «.» ···· Příprava 114

Methyl-0-(4,6-0-isopropyliden-2,3-di-0-methyl- (K-L-idopyrano-syl)-(l^4)-2-0-beazyl-6-0-mQthyl-ckD**glukopyranosid 129

Ve směsi 838 ml dichlormethanu a 168 ml vody se rozpustí 18,4 g sloučeniny 128. přidá se 7,1 g 2,3-dichlor-5$.6-dikyan-1,4-brnzochinonu a reakční směs se míchá za teploty 4°G 18 hodin, vlije se dále do vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného a směs se extrahuje do dichlormethanu. Zahuštěním organického ^sušeného roztoku se takto získá 12/7 g sloučeniny 129. CCM, Rf » 0,40, silikagel, dichlormethan/methanol 95/5 obj. Příprava 115

Methy-0-(4,6-isopropyliden-2g3-di-0-methyl-el-L-idopyranosyl)-(1 4)-2,3-di-0-benzyl-6-0-methyl-d-D-glukopyranosid (130).

Ve 178 ml suchého dimethylformamidu se rozpustí 10,5 g sloučeniny 129 a po ochlazen^na 0°C se přidá pod dusíkem 1,91 g hydridu sodíku (60%ní disperze v oleji) s následným přikapáváním 3,3 ml benzylbromidu. Za 30 minut je reakce skončena, nadbytek hydridu sodíku se rozruší methanolem, přidá se voda a směs se extrahuje dvakrát do ethylesteru kyseliny octové. Po zahuštění roztoku se takto připraví 13,6 g sloučeniny 130. CCM, Rf ss 0,50, silikagel, toluen/ethylester kyseliny octové 1/1, obj. Příprava 116

Methyl-0-(2,3-di-0-methyl-d-l~idopyranosyl)-(1^4)-2,3-di-0-benzyl-6-0-methyl-«l-D-glukopyranosid (131)

Ve směsi kyseliny octové a vody 77/33 se rozpustí sloučenina 130. reakční směs se. míchá po dobu noci, zahustí se dvakrát po přidání toluenu a zbytek se čistí chromátografováním na koloně silikageluí 11,5 g sloučeniny 131. CCM, Rf « 0,09, silikagel, toluen/ethylester kyseliny octové, 1/1, obj.

Rf » 0,68, silikagel, dichlormethan/methanol 9/1, obj. .131- .131- ·# ·· > ♦ · ·· ·· • · · ·

• ··· · · • · · • · ··· ··* Příprava 117

Methyl-0-(3,3-di-0-methyl- <i-Ir*idopyram»osyl)«(l—?4)-2,3-di-O-benzyl-6-O-methyl- d-IWglukopyranosid (132)« K roztoku 116 g sloučeniny 131 v 60 ml dichlormethanu se ? přidá 33 mg 2,2,6,6-tetramethyl-l-piperidinyloxy 40 ml roztoku hydrogenuhličitanu sodného, 218 mg bromidu sodného a 289 mg tetrabutylamoniumchloridu, směs se ochladí na 0°C, a během 15 minut se přidá 44 ml nasyceného roztoku chloridu sodného, 21,8 ml nasyceného roztoku hydrogenuhličitanu sodného^a 50 ml 1,3 M roztoku chlornanu sodného. Po hodinovém míchání se reakční směs zředí vodou a vše se extrahuje třikrát do dichlormethanu# Spojený organický roztok se promyje vodným roztokem chloridu sodného, vysuší se bezvodým síranem horečnatým a filtrát se zahustí. Získá se tak 13,4 g surového produktu 132# CCM, Rf = 0,14, silikagel, dichlormethan/methanol 9/1, obj# Příprava 118

Methy1-0-(benzyl-2,3-di-0-methyl-eί-L-idopyranurosyl)-(1-*4)-2,3-di-0-benzyl-6-0-methyl-ol-D-glukopyranosid (133)«

Pod dusíkem se rozpustí sloučenina 132 v 110 ml dimethyl-formamidu, přidá se 6,7 g hydrogenuhličitanu draselného, 10,7 ml benzylbromidu a reakční směs se 90 minut míchá# Po přidání ethylesteru kyseliny octové a vody se oddělená organická fáze po extrakci zahustí# Čistěním chromátografií na silikagelu se takto připraví 9,9 g sloučeniny 133 > CCM, Rf « 0,43, silikagel, toluen/ethylesterjkyseliny octové, 4/6, obj. Příprava 119

Methy1-0-(benzyl-2,3-di-0-methyl~ ^-D-glukopyranurosy1)-(1~}4)-2,3-di-0-benzyl-6-0-methyl-ck -D-glukopyranosid (134)

Roztok 9,9 g sloučeniny 133/ v 300 ml methanolu se vyhřeje pod dusíkem do varu pod zpětným chladičem, přikapává se 1 M roztok natriummethoxidu v methanolu (65,2 ml) a reakční směs se za míchání zahřívá 3 hodiny do varu pod zpětným chladičem#

Po ochlazení na teplotu místnosti se přidá 22,2 ml 1 H roztoku hydroxidu sodného a reakční smě se míchá dalších 90 minut. -132- -132- ·· ► ♦ » · «· · • I ·· • ♦ · · • · · • · · »» ·· • · · · • · · · • ♦ ··· ·· ··

Po neutralizování na pryskyřici Dowex 5QWX8H+ a filtraci se směs zahustí, produkt se rozpustí v dimethylformamidu (192 ml) a pod dusíkem se přidá molekulární síto. Ke směsi se přidá dále 3#2 g hydrogenuhličitanu draselného a 4,8 ml benzylbromidu, směs se míchá 5 hodin, přidá se ethylester kyseliny octové a voda, po extrakci se obě fáze oddělí a organický roztok se zahustí. Surový produkt se čistí chromatografováním na koloně silikagelu: 6,19 g sloučeniny 134 a 1,88 g výchozí látky 133 CCM, Rf b 0,55, silikagel, toluen/ethylester kyseliny octové 4/6, obj. Příprava 120

Methy1-0-(benzyl-4-0-levulinyl-2,3-di-0-methyl- p>-D-glukopyra nurosyl)-(l-^?4)-2,3-di-0-benzyl-6-0-methyl-íí -D-glukopyrano-sid (135) V 40 ml dioxanu se rozpustí 6,2 g sloučeniny 134, přidá se 2,1 g kyseliny levulové, 3,75 g dicyklohexylkarbodiimidu a 0,2 g 4-dimethylaminopyridinu, načež se reakční směs míchá pod dusíkem 2 hodiny. Přidáním 95 ml diethyletheru vyloučená sraženina se odfiltruje, filtrát se promyje vodným roztokem hydrogensíranu sodného, vysuší se bezvodým síranem horečnatým, a po filtraci se filtrát zahustí. Krystalováním ze směsi etheru a heptanu se izoluje 6,2 g sloučeniny 135. CCM, Rf * 0,26, silikagel, dichlormethan/aceton 95/5 obj. Příprava 121 0-(Benzyl-4-0-levulinyl-2,3-di-0-methyl-í^-D-glukopyranurosyl)-(l'-iř4)-l,3-di-0-Bcetyl-2-0-benzyl-6-0-methyl- -D-glukopy-ranosid (136).

Pod dusíkem se rozpustí 6,1 g sloučeniny 135 v 256 ml anhydridu kyseliny octové a po ochlazení na -20°C se přikapává během 30 minut směs 4,9 ml kyseliny sírové a 49 ml anhydridu kyseliny octové. Po 60ti minutách se přidává octan sodný tak clouho, až směs má neutrální hodnotu pH. Přidá se pak voda a ethylester kyseliny octové, oddělená organická fáze se zahustí. čistěním na koloně silikagelu se chromatografováním -133- ·· • 4 4 4 • · • 4 • · • · ··· • 4 4 44 44 ·«

·· • · · • · • · · • · ···· ··· ··· izoluje sloučenina 1^8 ve výtěžku 4,2 g* CCM, Rf e 0,24, silikagel, dichlormethan/ethylester kyseliny octové 8/2, ob;}· Příprava 122 0-(Benzyl-4-0-levulinyl~2,3-di-0-methyl- p?-D-glukopyranurosyl)~ (l-^4)-3-0~acetyl-2-0-benzyl-6~0--methyl-</ ,^-D-glukopyranosa (137)

Do roztoku 4,2 g sloučeniny 136 v 42 ml tetrahydrofuranu se přidá 4,1 ml piperidinu a směs se míchá za teploty místnosti poadobu noci. Po zředění ethylesterem kyseliny octové se roztok promyje přidáním 0,5 N kyseliny chlorovodíkové, organický roztok se zahustí a zbytek se čistí chromátografováním na koloně silikagelu: 3,2 g sloučeniny 137» CCM, Rf = 0,33, silikagel, dichlormethan/ethylester kyseliny octové 1/1, obj. Příprava 123 0-(Benzyl-4-0-levulinyl-2,3-di-0-methyl- ck-D-glukopyranurosyl)-(l-*>4)-3-0-acetyl-2-0-benzyl-6-0-methyl- ©U-D-glukopyranosyl-trichloracetimidát (138).

Pod dusíkem se rozpustí v dichlormethanu 1,59 g sloučeniny 137. přidá se 1,1 ml trichloracetonitrilu a 72 mg uhličitanu česného, směs se potom míchá hodinu. Po odfiltrování uhličitanu česného se filtrát zahustí a čistěním chromátografo-váním na koloně silikagelu se takto připraví 1,57 g sloučeniny 128. CCM, Rf * 0,60, silikagel, toluen/etgylester kyseliny octové, 3/7, obj.

Schéma 30

Syntéza tetrasacharidu 140 138 + 133 ▼

139

MeO HQ

COOBn OMd p .a OMe / o η V OBnOM· Ac0 OB" OM? 140 Příprava 124

Me t hy1-0-(be n zy1-4-0-1evůliny1-2, 3 -d i-O-me thy1-β -B-glukopyra-nurosyl)-(l—'’4)-0-(3-0-acety1-2-0-benzyl-6-0-methyl-«/ -D-gluko-pyranosyl)-(l—^)-0-(benzyl-2,3-di-0-methyl-^-L-idopyranurosyl)-(1.—^)-2,3-di-0-benzy 1-6-0-methyl- <j[~D-glukopytfflfnosid (139)»

Směs 300 mg sloučeniny 133 a 455,6 mg sloučeniny 138 se společně zahustí po přidání toluenu, a zbytek se rozpustí

-135- pod dusíkem v 6 ml dichlormethanu. Po přidání molekulárního síta 4$° se směs ochladí na -20°0, míchá se takto 20 minut a v množství 15 mol%, přepočteno na sloučeninu 138« se přidá trimethylsilyltrifluormethansulfonát. Za 10 minut se reakce přeruší přidáním vodného roztoku hydrogenuhlicitanu sodného, molekulární síto se odfiltruje, filtrát se zředí dichlormetha-nem, roztok se promyje vodou a po zahuštění se čistí chroma-tografováním na koloně silikagelu: 560 mg sloučeniny 139· CCM, Rf « 0,50, silikagel, toluen/ethylester kyseliny octové 3/7 obj. Příprava 125

Methy 1-0-( benzyl-2,3-di-0-methyl- ^,~D-glukopyranurosyl)-(l'—'4)-0-(3-10-acety 1-2-0—benzy 1-6—O-methíjfl—ol—D-glukopyranosyl)—(1 —v4)— 0-(benzyl-2,3-di-0-methyl- cL-L*-idopyranurosyl)-(l-^4)-2,3-di-0-benzy1-6-O-methyl-^í -D-glukop#»anosid (140). V 1,9 ml pyridinu se rozpustí 532,6 mg sloučeniny 139 a za teploty místnosti se přidá směs 2,4 ml kyseliny octové a 0,3 ml hydrazinhydrátu v 1,9 ml pyridinu. Po míchání 9 minut se přidá dichlormethan a voda, organická fáze se po oddělení promývá postupně 0,11 roztokem kyseliny chlorovodíkové, vodným roztokem hydrogenuhlicitanu sodného a vodou, po vysušení se zahustí a zbytek se čistí chromátografováním na koloně silikagelu: 451 mg sloučeniny 140 GCM, Rf » 0*45, silikagel, toluen/ethylester kyseliny octové 3%7, obj.,

Seherna 31 Syntéza pólysacharidu 142

i 037 10 • · · • · · • · • * ·· ·· ··· ·· ·« «1 • · · · * · · • · · ·· ···· ·· ·· • · · • · · ··· ··· • · ·· Příprava 126

Methyl-0-(6-0-benzoyl-4-0-levulinyl-2,3-di-0-methyl- <A-D-glu-kopyranosyl)-(l~-74)-0-(2,3,6-tri-0-methyl- ^-B-gl^opyranosyl)-(1~74)- jo-(2,3,6-tri-O-methyl-0( -D-glukopyranosyl)-(l -^4)-0-(2,3,6-tri-0-me thy 1--B-glukopyranosyl)-( 1-^4 )^3-0-( 6-0-ace-ty 1-2,3-di-O-methy 1- íA-D-glukopyranosyl)-(l-"74)-0-b e n zy 1-2,3-d i-O-me thy 1- J^-D-glukofpyranuros^lý-d )-0-( 3 -0-a ce ty 1-2 -0- benzyl-6-O-methyl-of - D-glukopyranosyl)-(l-^ 4)-0-(benzyl-2,3-di~0-methyl-^-L-idopyranurosyl)-(l—"74)-2,3-di-0-benzyl-6-0-methyl-^-B-élukopyranosid (141)«

Směs 144 mg (0,086 mmol) sloučeniny 117 a 76 mg (0,058 xnmol) se společně oddestiluje po přidání toluenu a zbytek se rozpustí v 3,0 ml směsi dichlormethanu a etheru 1/2 obj./obj·.

Po přidání 140 mg molekulárního, síta 4& se pod dusíkem směs vychladí na 0° C, přidá se 128 pl 0,1 M roztoku terc.-hutyl-dimethylsilyltrifluérmethansulfonátu v dichlormethanu a za 15 minut se reakce přeruší přidáním roztoku hydrogenuhliči-tanu sodného· Po extrakci vodou a dichlormethanem se oddělená organická fáze po vysušení zahustí· Zbytek se nejprve čistí chromatografováním na Sephadex-u LH 20, dichlormethan a metha-nol, 1/1 obj., potom chromatografováním na koloně oxidu křemičitého: 124 mg sloučeniny 141, poměr anomerů <£,/ p = 8/2 GCM, Rf m 0,80, silikggel, toluen/acetpn, 1/1 obj· Příprava 127

Methyl-0-(6-0-benzoyl-2,3-dimethyl- </-D-glukopyranosyl)-(l—-M-)-0-(2,3,6-tri-0-methyl- ρ-D-glukopyranosy1)-(1-^4)-|θ-(2,3,6-tr i-0-me thy 1- o^-D-glukopy r a no sy 1) - (1 -^4) -0-(2,3,6-tr i-O-me thy 1-~ ^-D-glukopyranosyl)-(r-'74)^2-0“(6-0''acetyl-2,3-di-0-methyl--^*D-glukopyranosyl)-(l^?4)-benzyl-2,3-di-0-methyl-1/i-D-giuko-pyranurosyl)-(1-^4 )-0-(3-Q-acetyl-2-0-benzyl-6-0-methyl-<A~D-glukopyr ano sy 1) - (1)-0-( be nzy 1-2,3-d i-O-me t hyl-^-id opy r a nur 0-^1)-(1-^4)-2,3-di-0-benzyl-6-0-methyl-^-D-glukopyranosid (142), Sloučenina 141 se převede na 142podle postupu přípravy látky 140· Sloučenina 142 je směs anomerů 8/2 CCM, Rf a 0,45, silikagel, toluen/aceton l/l, obj·

• · ·· ·· Μ ·· ·* ···· ···· ···· • · · « · · · ··· · -ΐ|8-Schéma 32, Syntéza trisacharidu 147 ·· ·« » · · · i

OH OH

SEt

BzO 147 -139 -139 ·· ·· t · · • · · tM ··· • · ·· ·· »« · · • · · · · • · · · · • ······ • · · · »φ ·* Příprava 128 0-( 2,3,4,6-0? etra-O-ac etyl-^ -B-glukopyranosyl)-(1-¾)-0-(2,3,6-tri-O-a ce tyl—^-B-glukopyra no sy 1) - (1 —1% )-1,2,3,6-tetra-0-acetyl--β-B-glukopyranosa (1444 V malých dávkách se přidává 7 g (13,9 mmol) maltotriosy (obchodně dostupná látka) do suspenze 7 g (85,mmol) oétanu sodného v 70 ml anhydridu kyseliny octové za teploty 155° C.

Po 15ti minutách se čirý roztok ochladí, reakce se přeruší přidáním 700 ml levodé vody, a po extrakci do ethylesteru kyseliny octové se organický roztok promyje vodou, vysuší se bezvodým síranem hořečnatým a po filtraci se zahuštěhím filtrátu získá 13,1 g sloučeniny 144 CCM, Rf * 0,53, silikagel, dichlormethan/ethylester kyseliny octové 7/3, obj. Příprava 129 E thy1-0- (2,3,4,6-te tr a-O-ace ty 1-ck -B-glukopyra no sy 1) - (1—^4 )-0.(2,3,6-tri-0-ece ty l-</-B-glukopyranosyl)-( 1,-^4)-2,3,6-tri-0-ačety 1-1-thio- jj^-B-glukopyranosid (145)· V 80 ml toluenu se rozpustí 13 g (13,5 mmol) sloučeniny pod dusíkem se přidává do roztoku 1,97 ml (26,9 mmol) ethanthiolu a Ů3.7 ml molárního roztoku diethyletherátu fluoridu boritého v toluenu. Reakční směs se 60 hodin míchá, zředí se vodou a dichlormethanem, organická fáze se po oddělení promyje 10%ním roztokem hydrogenuhličitanu sodného, vodou, vysuší, filtruje a zahustí. Surový produkt reakce se čistí chromatografováním na koloně silikagelu: 8,6 g sloučeniny m CCM, Rf s 0,60, silikagel, dichlormethan/ethylester kyseliny octové 7/3 obj. Příprava 130 E thy 1-0-( -B-glukopyra no sy 1) - (1-9 4 )-0- (-Drglukopyranosyl)-(1^4)-l-thio-^>-B-glukopyranosid (146),

Sloučenina vzorce 145 se převede na látku 146 postupem, -140« ·· • · » m • · ·· • • · • « • · • · • • • · • · • • · • « ··· • « · m ♦ ·*♦ • · • • • · • • • · ·· ···· ·· ·♦ který byl popsán pro přípravu sloučeniny OCM, Rf * 0,80, silikagel, ethylesterkyseliny octové/pyridin/-kyselina octová/voda 13/7/1,6/4, obj. Příprava 131

Ethyl-0~(2,3,4,6-tetra-0«-benzoyl-o(-'D-glukopyranosyl)-(l-4)-. Q-(2,3,6-tri-Q-benzoyl- ^-.D-glukopyranosyD-d—aiO-S^je-.tri- O-benzQyl-l-tliio-·/f2>-I)-glukopyranosid (147)«

Sloučenina vzorce 146 se převede na látku 147 postupem, popsaným pro přípravu sloučeniny 920 UCM, Rf * 0,50, silikagel, toluen/ethylester kyseliny octové 9/1, obj.

Schema 33» Syntéza polysaoharidu 180

-142- ·· ·« Μ • · · · · * • · t · · · • ·#···· · • · · · · #» ·» ·* • · ·· • e • • · • · • • · • · • • ··· • · · • • ··· • · ·· Příprava 132

Me t hy 1-0- (2,3,4,6-te tra-O-ac e t y 1- d -D-gluko py r a no sy 1) - ( χ—7¾.) . -0-( 2,3,6-tri-O-be nzoyl- o(_D-glukopy r a no syl) - (1-^4)-0-(2,3,6-tr i-O-be nzoyl- //^-glukopy ráno sy 1)-( 1--^)-0- (6-0- be n zoyl-2,3-d i- 0-xa.a t hy 1- ^ -D-gluko py ra no sy 1) - (1-^4) -®- (2 ,3,6-tri-O-met-h hy 1- A-D-gluko.osyl*-(l-?4)-[θ-(2,3,6-tri-0-methyl-^-D- glukopyranosyl)-(lw4)-0-(2,3,6-tri-0-methyl-^-D-glukopy- ranosy^-d-^ 4)jJ-2-0-(6-0-acetyl-2,3-di-0-inethyl- ^-D-giuko-pyranosyl)-(1^4)-0-(benzyl-2,3-di-0-methyl-^-D-glukopyranuro-sy1)-(1-^ 4)-0-(3-0-acetyl-2-0-benzyl-6-0-methyl-c^-D-giukopyra-nosyl)-(l -y4)-0-f5enzyl-2,3-di-O-nethyl- A-L-idopyranurosyl)-(1—^)-2,3-di-0-benzyl-6-0-methyl-^-D-glukopyranosid (148).

Podle postupu, popsaného pro přípravu sloučeniny 109. se spojí spolu dohrokady 105 mg (0,066 mmol) thioglykosidu 147 a 55 mg (0,017 mmol) glykosidového akoeptoru 142. poměr Jl/j2>* 8/2v Surový reakoní produkt se vyčistí nejprve chromato-grafováním na Sephadex-u LH 20 za použití soustavy dichlormethan a methanol, 1/1, potom chromátografováním na koloně silikagelu se soustavou diethylether/ethylester kyseliny octové/ethanol 0/0,5/0^5 obj# Sloučenina 148 se získá ve výtěžku 49 mg· CCM, Rf » 0,30, silikagel, diethylether/ethylester kyseliny octové/ethanol, 85/7,5/7,5, obj· Příprava 133

Methyl-0-(2,3,4,6-tetra-0-benzoyl-»?( -D-glukopyrattosyl)-(l—^4)-0-(2,3,6-tri-0-benzoyl-o< -D-glukopyranosyl)-(l-;:4)-0-(2,3,6-tri-0-benzoyl-^3-D-glub:opyranosyl)-( 1-^4)-0-( 6-0-benzoy 1-2,3-d i-0-me t hy 1- c(-D -fcluko py r a no sy 1) - (1 —4 )-(2,3,6-1 r i-0- me thy 1--^-D-rglukopyranosyl)-(l—^)-(0-(2,3,6-tri-0-methyl-c/ -D-gluko-py r a no sy 1) - (1—94) -0-( 2,3,6-tr i-0 -me t hy A -D-gluko py r a noy 1) -(1—4)J2-0-(6-0-acetyl-2,3-di-0-methyl-c<-D-glukopyranosyl)-(1 —?)-(2,3-di-0-methyl-/?-D-glukapyranurosyl)-( 1-^4^-0-(3-0-a c e tyl-6-0-me thy \-(k -D-glukopyra no sy 1)-(l )-0-(2,3-di-0-me t- hyl—«(-L-idopyranurosyl)-(l—74)-6-0-methyl- ^-D-glukopyrano-sid (149) -143 ·· «· ·· ·· ·· ·· • · · · · ·· · * ·· · • · · · · · · ···· • · ··· * · · · * ··· ··· ···#·· · · ·· ·· ·· ···# ·· ··

Roztok 47 mg (0,01 mmol) sloučeniny 148 v 10 ml ethyl-esteru kyseliny octové se protřepává v atmosféře dusíku 3 hodiny s 10% palladia na uhlí (90% hmotnostně se zřetelem na látku MS) • Zahuštěním filtrátu se získá 42 mg sloučeniny 149 CCM, Rf « 0,35, silikagel, ethylester kyseliny octové/pyri-din/kyselina octová/voda 20/7/1,6/4, obj# Příprava 134

Methy 1-0-( J, -D-glukopyra no syl )-(1-4)-0-(^ -D-giukopyranosyl)-(1—^4)-( p-D-glukopyr a nosy 1)-(1 -^4)-0-(2,3-di-0-methyl- <?{-D-glukopyranosyl)-(l -4)-0-(2,3,6-tri-0-methyl-^3 -D-glukopyra-no sy 1) -(l -v4 ) - [θ-( 2,3,6- tr i-O-me thy 1- -D-gluko pyr a no sy1)-(1-4^-0-(2,3-di- 0-methyl-x^-D-glukopyranosyl4-11 -4)-2,3-31-0-me t hy1-^-D-glukopy r uro no sy 1) - (1-74 ) -Φ-( 6-0-me t hyl-o/ -D-gluko-pyranosyl)-( 1—4)-0^2,3-dimethyl-o( -L-idopyrarunosyl)-(l—'4)-6-0-raethyl-5{-D-glukopyranosid (150).

Směs 0,22 ml methanolu a 0,66 ml 0,66 N roztoku hydroxidu sodného se vlije na 41 mg /0,01 mmol) sloučeniny 149 a směs se míchá 20 hodin za teploty místnosti. Potom se zředí vodou a okyselí přidáváním 0,5 N roztoku kyseliny chlorovodíkové až do dosa· žení hodnoty pH 6,5. Po zahuštění se roztok zbaví soli na koloně Sephadex-u G-25 za použití soustavy voda a acetonitril 9/1 obj. Prakce s obsahem hexadekasacharidu se spojí a lyofilizováním se takto získá 26 mg sloučeniny 150 ve formě amorfního bílého prášku. CCM, Rf « 0,35, silikagel, ethylester kyseliny octové/pyridin/-kyselina octová/voda: 8/7 /1,6/4 obj. Příprava 135 6-0-terc.-Butyldimethylsilyl-l,2-0-isopropyliden-3-0-methylr> d-D-glukofuranosa (152) V 100 ml bezvodého dichlormethanu se rozpustí 10 g (42,7 mmol diolu JL§jL, přidá se 7,1 g (47,3 mmol) terc.-butyldimethyl-silylchloridu a 5,8 g (85,3 mraok) imidazolu, reakční směs se ·· ♦· -144- ·· ·· ·· ·· % % · ♦ ♦ ♦ · • · • · • · • · • »·* • · · • · • • ···· • I »· míchá za teploty místnosti, po dvou hodinách se zředí přidáním dichlormethanu, roztok se promyje vodou, organická fáze se vysuší bezvodým síranem hořečnatým, filtrát se zahustí a zbytek se čistí chromátografováním na koloně silikagelu za použití soustavy ethylester kyseliny octové a cyklohexan 1/9 obj.

Ve formě sirupu se zoská očekávaný produkt 152 ve výtěžku 11,9 g (80%), -34° (c e 1,9, chloroform). Příprava 136 6-0-terč,-ButyldimethyIsily1-1,2-0-isopropyliden-3-0-methy1-5-C-vinyl-d-D-glukofuranosa (154)·

Za chlazení na -78° C se přidá do 40 ml bezvodého dichlormethanu 3,2 ml (36,8 mmol) dichloridu kyseliny oxalové a 5,2 ml (73,4 mmol) dimethylsulfoxidu, směs se míchá 30 minut, přidá se jěště 8,4 g (18,4 mmol) sloučeniny 152 a v míchání reakční směsi se pokračuje ještě hodinu. Potom se přidá 15,3 ml (110,0 mmol) triethylaminu a po JSOti minutách se reakční směs zředí dichlormethanem. Klasickým postupem se pak získá 5-ulosa (153), jež se přímo použije při další reakci. Surový keton 153 se rozpustí v 100 ml bezvodého tetrahydrofuranu a přidá se 1 M roztok vinylmagnesiumbromidu v tetrahydrofuranu, 28 ml (27,6 mmol) za chlazení na 0° C, Po hodině se směs zředí chloridem amonným, promyje se vodou, organický roztok se vysuší bezvodým síranem horečnatým, filtrát se zahustí a zbytek se čistí chroma-tografováním na koloně silikagelu za použití soustavy ethylester kyseliny octové a cyklohexan, 1/9 obj. Ve formě sirupu se takto připraví 4,8 g (70%) sloučeniny 154, [/¾) )40°, C « 1,3, chloroform.

Analýza

vypočteno: 57,72 % 0, 9,15 % H nalezeno: 57,77 % C, 9,23 % H Příprava 137 l,2,4,6-Tetra-0-acetyl-3-0-methyl-5-C-vinyl“[^-D-glukopyranosa (156) Ve vodě /50 mlfll se rozpustí 3,5 g (9,4 mmol) sloučeniny 154 a po,přidání 1 g pryskyřice IR-120 se vše zahřívá 6 hodin na.80° C, Pryskyřice se odfiltruje a filtrát se zahustí; produkt 155 se acety-luje za použití 12 ml anhydridu kyseliny octové a 13 ml pyridinu. -145- ·· ·· *t ·· ·· ·· ···· · · · · · · · · ···· ♦ · · ···· • · ··· · · · · ♦ ··· ··· ······ · · «· »f M ···· ·· ··

Nadbytek anhydridu kyseliny octové se rozruší přidáním metha-nolu, rozpouštědla se oddestilují, zbytek se extrahuje do směsi vody a dichlormethanu, oddělená organická fáze se vysuší bezvodým síranem horečnatým, filtrát se zahustí a po přečištění na koloně oxidu křemičitého chromátografováním v soustavě ethylester kyseliny octové/cyklohexan, 3/2 obj· se získá ve výtěžku 2,7 g (75%) tetraacetylderivát 156 ve formě pevné látky, t.t, 50° C. -84°, Ce * 1,6, chloroform Analýza vypočteno: 52,47 % C, 6,19 % H nalezeno: 52,51 % C, 6,19 % H Cl-MS: 406 (M+NH^), S89 (M + 1). Příprava 138

Methy1-2,3,6-tri-O-benzy1-4-0-(2,4,6-tri-O-acetyl-3-0-methyl-5-C-vinyl- |3-D-glukopyranosyl)-cíNi-D-glukopyranosid (158) V 50 ml bezvodého dichlormethanu se rozpustí 1,6 g (4,1 mmol) sloučeniny 156 a 2,1 g (4,5 mmol) sloučenin^ 157. viz Garegg P.J. a Hultberg H·, Carbohydr.Res. ,92., CIO (1981).

Po přidáníí 4,0 g molekulárního síta se reakční směs míchá hodinu za teploty místnosti, potom se po vychlazení na -78° C přidá 0,95 ml (5,2 mmol) TMSO.Tf

Teplota reakční směsi se nechá vystoupit pomalu na teplotu míatnosti a za 2 hodiny se reakční směs neutralizuje triethyl-aminem, filtruje přes celit, filtrát se promyje vodou, organická fáze se potom vysuší bezvodým síranem hořečnatým a zahuštěním filtrátu se získá zbytek. Ten chromatografiekým čistěním na oxidu křemičitém v soustavě ethylester kyseliny octové/cyklohexan, 4/1, obj, poskytne 2,77 g (85%) sloučeniny 158 v pevné formě, t.t, 47° C. <«*360, C « 0,6, chloroform. Příprava 139

Methyl-2,3,6-tri-O-benzy1-4-0-(4,6-0-isopropyliden-3-0-met-hyl-5-C-vinyl- (3-B-glukopyranosyl)- d-D-glukopy ra no sid (l60). V 40 ml methanolu se rozpustí 2,7 g (3,4 mmol) sloučeniny -146- • · · · · • · · » · • · · · · · · • · · · ·· ·· • · · ··· ··· Μ Φ·Μ 158« Za teploty 0° C se přidá katalytické množství sodíku a vše se potom míchá za teploty místnosti 3 hodiny· Po oddestilování rozpouštědla se zbytek 159 rozpustí v 40 ml bezvodého acetonu, přidá se v množství 2 ml 2,2-dimethoxypropan a katalytické množství kyseliny p-toluensulfonové· Reakční směs se míchá za pokojové teploty přes noc, rozpouštědlo se oddestiluje, zbytek se rozpustí v chloroformu a roztok se promyje vodou. Organická fáze se vysuší bezvodým síranem hořečnatým, zahustí se a zbytek se čistí chromátografováním na koloně oxidu křemičitého v soustavě ethylester kyseliny octové/cyklohexan, l/J, obj. a získá se tak 1,7 g (700) 4',6'-isopropylidenového derivátu, pevná látka, t.t. 55°C* + 13° , c = 0,8, chloroform

Analýza vypočteno: 67,97 % C, 7,13 % H nalezeno: 67,87 % C, 7,16 % H CI-MS: 707 (M+l), 724 (M + NH^). Příprava 140

Methy1-2,3,6-tri-O-benzy1-4-0-(4,6-0-isopropyliden-3-0-methyl-5-C-vinyl- ^-D-mannopyrahosy1)-0^-D-glukopyrahosid (162) V prostředí 10 ml bezvodého dichlormethanu se protřepává 30 minut za chlazení na -78° C směs 0,35 ml (4,0 mmol) dichlo-ridu kyseliny oxalové a 0,57 ml (8,0 mmol) bezvodého dimethy1-sulfoxidu. Přidá se 1,4 g (2,0 mmol) sloučeniny l6Q, rozpuštěné v 10 ml bezvodého dichlormethanu a vše se míchá dalších 45 minut. Reakční směs se neutralizuje přidáním 1,7 ml (12,00 mmol) bezvodého triethylaminu, zředí se dichlormethanem, roztok se pro-myje vodou, vysuší se bezvodým síranem horečnatým a- filtrát se zahustí. Zbytek, látka l6]jse použije přímo pro další reakci bez čistění. Keton l6l se rozpustí v 15 ml bezvodého tetra-hydrofuranu, přidá se 1 K roztok superhydridu v tetrahydrofuranu (4 ml, 4,0 mmol) za chlazení na -78° C, potom se reakční směs míchá hodinu za teploty místnosti a zředí se přidáním 2 ml 5%ního roztoku hydroxidu sodného a 1 ml peroxidu vodíku. Po oddestilování rozpouštědel se zbytek rozpustí v ethylesteru kyseliny octové, tento roztok se promyje vodou, vysuší se bezvodým síranem horečnatým a -147- ·· ·« ·· • 9 ·· ·· • • • · • • • · • · • · • · • · • • • • * • · • · ··# « ♦ • • • ··· Ml • • • • • • • • ·» ·· ·· ···· ·· • · filtrát se zahustí. Zbytek se čistí chromátografováním za použití soustavy ethylester kyseliny octové a cyklohexan, 2/1, obj. Takto se připraví 1,0 g (70%) sloučeniny 162. LXJjj «11°» c « 0,5, chloroform Cl-MS : 724 (M+18), 707 (M+l). Příprava 141

Methyl—2,3,6-tri—0-benzyl-4-0-(2—0-acetyl—3-0—methyl—5—C—vinyl- f^-D-mannopyranosyl)-c^-D-glukopyranosid (164) V 3 ml pyridinu se rozpustí 940 mg (1,3 mmol) sloučeniny 162, přidá se 0,3 ml anhydridu kyseliny octové a reakční směs se míchá za normální teploty 3 hodiny· Nadbytek pyridinu i anhydridu kyseliny octové se oddestiluje, zbytek, látka 163 v / / se přímo použije při odstranP^·®^ isopropy lide nové skupiny za použití 5 ml 80%ní kyseliny octové, 2 hodiny, 60° C. Nadbytek kyseliny octové se vydestiluje, a zbytek se čistí chromátografo-váním na koloně silikagelu v soustavě ethylester kyseliny octové a cyklohexan, 4/1 objo Získá se tak 660 mg (70%) diolu 164 vw formě pevné látky, t.t. 53° 0. “1°°» C “0,8, chloroform CI-MS 709 (M+l), 726 (m+18) Příprava 142

Methyl-2,3,6-tri-0-benzyl-4-(2-0-acetyl-3-0-methyl-6-0-tosyl-5-C-vinyl-j^-D-mannopyrabosyl)«s>[ř-D-glukopyranása (165) V 3 ml pyridinu se rozpustí 600 mg (0,9 mmol) látky 164 a přidá se 240 mg (1,2 mmol) p-toluensulfonylchloridu; reakční směs se míchá za teploty místnosti 3 hodiny, rozpouštědlo se vydestiluje, zbytek se zředí chloroformem, a roztok po promytí vodou se vysuší bezvodým síranem hořečnatým· Zbytek po zahuštění filtrátu se čistí chromátografováním na koloně silikagelu v sousta vě ethylester kyseliny octové a cyklohexan, 1/1, obj· Získá se tak tosyl-derivát 165 ve výtěžku 297 mg (80%) ve formě sirupu. -26°, C « 0,8, chloroform· -148- ·· tl ·» • 1 II • · • · e • t · • · • · • • • · • e • • « • · • · III · • • • • ··♦ lil • • • • • • • • • * • · • · ···· • · ·· Příprava 143

Methyl-2,3$i6-tri-0-benzyl-4-(2,6-anhydro-3-0-methyl-5-C-vinyl -jb-D-mannopyranosyD-drD-glukopyranosid (l£6)*

Ve 3 ml ethanolu se rozpustí 550 mg (0,8 mmol) sloučeniny 165« přidá se 5 ml 0,1 N ethanolického roztoku hydroxidu sodného, reakční směs se vyhřívá 3 hodiny na 70° C, potom se neuzralizuje na pryskyřici IS-12-0 ve vodíkovém cyklu a filtruje se celitem. Zbytek po zahuštění se čistí chromatogra-fováním na koloně silikagelu v soustavě ethylester kyseliny octové/cyklohexan 1/1 obj. a získá se tak 292 mg (70%) slouče-niny 166 ve formě sirupu. + 13° (c = 0,5, chloroform).

Cl-MS t 666 (M+18) Příprava 144

Methy1-2,3,6-tri-O-be nzy1-4-(be nzy1-3-0-me thyl-2-0-5-K-methy-liden-JfL-idopyrarunosyl)-^ -D-glukopyranosid (167)

Ve 20 ml dichlormethanu se rozpustí 260 mg (0,4 mmol) sloučeniny 166. roztok se míchá za chlazení na -78°C a potom se 30 sekund roztok probublává ozonem, barva roztoku se změní na bledě žlutou. Do roztoku se přidá dimethylaulfid, potom se reakční směs promyje vodou, organická fáze se vysuší bezvodým síranem horečnatým, zahustí a přímo bez jakéhokoli čistění použije v další reakci. Surový aldehyd se rozpustí v l6 ml terc-butylalkoholu, přidá se 5 ml 2-methyl-2-butenu a 16 ml vody. Do směsi se dále postupně přidává 700 mg di-hydrogenfosforečnanu sodného a 700 ml chloritanu sodného. Suspenze se energicky míchá za obvyklé teploty po dobu noci, zředí se vodou a produkt se extrahuje do ethylesteru kyseliny octové. Organický roztok po vysušení bezvodým síranem hořeč-natým se použije přímo v další reakci. Surová kyselina se rozpustí v 25 ml dimethylformamidu, přidá se 0,7 g (2,0 mmol) tetrabutylamoniumjodidu, 0,25 g (2,5 mmol) hydrogenuhlicitanu draselného a 0,250 ml (2,1 mmol) benzy1bromidu. Reakční směs se míchá za pokojové teploty 5 hodin, extrahuje se vodou a etherem, roztok v etheru se vysuší bezvodým síranem hořečna- tým, filtrát se zahustí a zbytek se chromátografuje na koloně silikagelu v soustavě ethylester kyseliny octové a cyklohexan 2/1 obj. Získá se tím 236 mg (80$) derivátu 167 ve formě sirupu, Cl—MSi 774 (M+18) Φ9 · * ·· WO 98/03554 150-

• · *t » * »

Schéma 34 Příprava synthonu použitelného pro syntézu pentgsachridu jehož konfigurace kyseliny L-iduronové je uzanřena (III*1 • · *gf{FR97Hf34&

H 'Φ ▲

O •P O o taI? Λ a OJ a •H Ό •H ř>5P,

io O X o X •v O < OAc ϋ o . < o U|| 33 v-° \ |lg -o co ΙΛ u < Λ o 'td .Pc es -P Φ 3 O > Ό a> t> in

70% ve dvou etapách

Schéma 34, 1#pokračování Příprava a prve přeměny disacharidu WO 98/03554 I « «I» I «> · tt i «* ; P£Ť/FI&?/Í)13.>*'

A -152- O +» Oo m £ co O Ό O O £3 O CD {Λ 8 <0 ř3 w o o ΙΓ»« o CM O O t- Ό O £í C- ΓΛ Ή . C '03 > O >o co 34 0 P. o CM « *4* (Λ CO1 Λ oco I '<D P 0} & O £5 '0) 34 o •H H 34o •H £> Ή a oj >§ u +» ca ůo ΓΛ <u

M (O ur\ CO OJ o

U) (O

r·» «3

ooco t- I c ® 4» 3 £> r4 CM +» O S W fa?1 * S o cm m o i « Η · (Λϋ O O ti h 5¾ Φ +» P4s « Λo W trs W C- u s /—s H CM $ PQ ^—\ (Λ

to (O -153- ·*·· ···· * « · « • 9 9 · «· · ···» • · 99« · * · · ♦ ··· 999 ·♦··*· ·· ι·» ·» ·* ···· ·♦ φψ Příklady provedení vynálezu Příklad 1

Sodná sůl methyl-G-(3-Q-methyl-2,4,6-tri-O--sulfo-0(-D-gluko-py ra no sy 1) -(l-> 4 ) - (3-0-®e t hy í-2, 6 . d i. 0 . sulfo- fr -D-gluko py r a-nosyl)-(l-^ 4)-Lp-(3-0-methyl-2,6~di—O-sulfo- ď -D-gluko pyr a nosy 1)-(1^4) -O-(3-0-me thy1-2,6-di-Q-sulfo-^-D-glukopyranosyl)-(l~3ř4 )^-0-(2,3-di-0-methyl—6-0-sulf o-<X-D-glukopyranosyl)~ (1 -?4 ) —O—( 2,3 -d 1-0-me t hy\-β> -D^gluko py r a nur o sy 1)-(1^4)-(2,3,6 -tri-O-sulfo-^ -D-glukopyranosyl)-( 1 -^4)-2,3-di-O-me thy 1- $( -L-idopyranurosyl)-(1-74)-1,3,6-tri-O-sulfo·^/ -D-glukopyranosidu (168)

Ze sloučeniny 21 zpracováním dle způsobu 5 se získá látka ^68 (80$ ve 3 etapách), + 41, c * 0,8, voda. ESIMS, modul záporný: monoisotopická hmotnost a 7133,28, chemická hmotnost « 7138,90, experimentální hmotnost « 7137^26 ± 0,0 u.m.a. NMR (Dg®) (í hlavních anomerních protonů: 5,71, 5,48, 5,46, 5,44, 5,17, 5,08, 4,81, 4,78, S,67 ppm.

Totožným postupem lze připravit sloučeniny 169 a 170,

H

Tabulka WO 98/03554

9« · · • « · · • * ♦ · • * 9 · · t 9 · ϊ» » · a •« M ♦♦ *· • # · I» I * ♦ *♦ j ; ^TffiwjdVst^ «· · 9 · 9 9 # *9

<u S

to fí o f—1 £ + 39 + 38 m (O g OJ P Ό as ts as a a sá *H fi C2 Ή >34 >o >o P, o o O H H H co 03 03 Ή A >o (M <n

O -155- Příklad 4

Sodná sůl methyl-0-(2,3-di-0-methyl-4,6-di-Q..sulfo-0(~:D..glu-kopyranosyl)-( 1 -74)-'[θ-(2,3-di-O-methyl-6-.O-sulfo-^ -D-glu-kopyranosyl)-(l-^4]jr| ^..o—(2,3—di—O—methyl-·^ D—glukopyrsnuro— syl)-(l-74)-0~(2,3,6-.tri-0-sulfo- °( -D-glukopyra nosy l)-(l-*4 )-0-(2,3-di-0-methyl-<^ -L-idopyranurosyl)-(l--*4)-2,3,6-tri-0-sulfo-cj^D-glukopyranosidu (171)

Podle způsobu 5 se zpracuje 55 mg (10,5 mmol) sloučeniny £1 a po lyofilizování se připraví 50 mg (77% ve 3 etapách) produktu typu esteru sírové kyseliny, L£)D + 107 (c « 0,52, voda)· ESIMS, modul kladný: hmotnost monoisotopická » 6194,16, hmotnost chemická « 6198,83, hmotnost experimentální « 6195,33 ± 1,79 lK NMR (D2d) úhlavních anomerních protonů: 5,71, 5,67, 5,48, 5,43, 5,17, 5,10, 4,68 ppm.

Podobným postupem je možno připravit sloučeniny JL72 a 121 WO 98/03554 2 156-

*· * · ·· · · ·· · · .··· ·····!·!

: : *··: ·: : *ctrk§i/oi$H at ·· «····* ·* ·* ,Ο o o o

a + 119 + 124 w co d OJ H E"1 ca h| r-í H M ca ta M d d iU •H •H P4 d d φ φ Ό >o >o r-í d d w o o M H H >o CQ <9 4% • i in VO • 51· Příklad 7

Sodná sůl methyl-Q-(3-0-methyl-2,4,6-tri-0-sulfo-o(-D-giukopyra-no sy1-(1 —>4)-O-(3-Q-me thy1-2,6-d isulfo-^-D-gluko py r a no sy 1) - (i 4 ) -0-(3-0-methyl-2,6-di-0-sulfo-<Λ-D-glukopyranosyl)-(l -^4)-0-(3-0-methy 1-2,6-di-O-sulfo-^X-D-glukoypar nosy 1)-(1 -?4)-jo-(2,3,6-tri-O-methyl-'Λ -D-glukopyranosyl)-( 1^4)-0-(2,3,6-tri-0-methy 1-^-D-glukoppra no sy 1) -(1—>4 )] 0- (2 ,3-d i-O-me thy1-6-0-sulfo- -D-glu ko pyr a no sy 1) - (1 -aA ) -O- (2,3-d i-O-me thyl- φ> -D-glukopyra nur o sy 1) -(l-iA)“0-(2,3,6-tri-0-sulfo- ¢(-D-glukopyra nosyl)-(l 4)-|2,3-di-0-methyl-c^-I»-idopyranurosyl)-(lH?4)-2,3,6-tri-0-sulfo- -D-glu-koovranosiduo (174)«

Zpracováním sloučeniny 75 podle způsobu 5 se získá ve výtěžku 84% (ve třech etapách) sloučenina 174. £«(] D +62 (c = 0,46, voda)· ESIMS, modul kladný: monoisotopická hmotnost = 4966,39, chemécká hmothost.» 4970,04, experimentální hmotnost = 4969,63 ± 0,78 u*m*a· NMR (Β2°) ^ hlavníuh an&nerních protonů: 5,69, 5,63, 5,46, 5,44, 5,41, 5,15, 5,06, 4,79, 3,66, 4,62, 4,41 ppm·

Postupem podle příkladu 7 a za použití vhodných meziproduktů lze připravit látky z příkladů 8 až 12, popsané v další tabulce III*

Tabulka III

-159 -159 ·· ·· • · · | • · · * ι·» ··< ·· ·· ·· ·· «··· · * · · • · · « * · · ι ·····# · · • · ··· 9 Μ ·· ·* ···· Příklad 13

Methy1-0-(2,3,4,6-tetra-0-sulfo-<Á-D-glukopyranosyl)-(l-^4)-0- (2,3,6. tri-O-sulřo- d\-D-glukopyranosyl)-( l·-3 4)-0-(2,3,6-tri-O-sulfo-|3> -D-glukopyranosy 1)-(1 -94)-0-(2,3-di-0-methyι-6-O-silfo-- J^-D-glukopyra no sy 1)- (1 -^4)^0- (2,3,6-tri-O-me t hy l-d -D-gluko-pyranosyl)-(l -94)-]o-(2,3,6-tri-O-methyl-0( -D-glukopyranosyl)-(1 -94)-0-(2,3,6-tri-0-methyl-J^ -D-glukopyranosyl)-(l-^4)J^-0-2,3-di-O-me thy1-6-0-sulfo- d -D-gluko py ra no sy 1) - (1-^4 ) -(2 , 3 -d i-0-methyl-j> -D-glukopyranurosyl)-(l-*4 J^(6-0-raethy1-2,3-di-0-sulf o- d, -D-glukopy ra nosy 1) -(1 -?4 )-0- (2,3-di-0-me thy 1-d. -L-idopy-_‘ ranurosyl)-(l-H)-0-6-methyl-2,3-di-0-sulfo-A-D-glukopyrano-sid (180)o V 0,87 ral dimethylformamidu se rozpustí 26 mg (0,0084 mmol) hexadekasáchridu 150 . dokonale zbaveného chránících skupin, a pod dusíkem se přidává 125 mg (0,67 mmol, 80 ekv) komplexu oxidu sírového s triethylaminam. Reakční směs se míchá 16 hodin za teploty 50° C, po ochlazení na 0° G se přidá 227 mg (2,6 mmol) vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného, směs se zahustí na malý objem a ten se nanese na kolonu Sephadex-u G-25 za eluování směsí vody a acetonitrilu 9/1, obj. Vhodné frakce se oddělí, zahustí na malý objem, ten se nanese na kolonu Dowex-u XW4 Na+ charakteru výměníku iontů za použití malého objemu vody a eluát se lyofilizuje, získá se tím 37 mg sloučeniny 151 ve formě bílého prášku, + 67,6° (c = 1,vo da). MS ESI : molekulární hmotnost 4370,6 (forma H+) C128%22°113S16 (vyp°°tená mol.hmotnost = 4370,14). NMR, anomerní protony (ppm), poloha 1.jednotka: 5,17, 2.,jednotka 5,03, 3.jednotka 5,41, 4.jednotka 4,42, 5.jednotka 5,49m 6.jednotka 4,66, 7«, 9. a 11.jednotka 5,67, 8., 10. a 12*jednotka: 4,46 # ;p· jednotka: 5ř6l, 14.jednotka: 4,94, 15ojednotka 5,59, 16.jednotka 5,69.

WO 98/03554 160. ·♦ *# • · i · • · · * • · · · · • · · ·* ·· • · • · ·· ·· ·· I « I · · t • · · · · • · ··· ··· • * fiCT/F«97/(>ř344

S O 0^0 </>

O-co

Claims (6)

1. -161 ?ťJéí>- 1 ·· ·· ·· ·· ·*«.,·· . , . « · · · · · *·’··· > · · ♦♦·· i · ··· · « · · · ··· ··· φ · · · · · ·· • t ·· ······ ·· · · PATBNIOVé N/ROKY 1· Syntetický polysacharid, obsahující oblast vázající se na antithrombin III, představovanou seřetězením pěti monosacharidů, obsahujícím celkově dvě karboxylové funkce a nejméně Čtyři sulfonové skupiny s tím, že tato oblast je přímo vázána neredukující koncovkou na oblast vazby na thrombin, obsahující seřetězení 10 až 25 jednotek monosacharidů, zvolených z hexos, pentos a desoxycukrů, jejichž hydroxylové skupiny jsou nezávisle etherifikovány alkylovými skupinami s jedním až šesti atomy uhlíku nebo esterifikovány do formy sulfonových skupin, jakož i jejich soli, zvláště farmaceuticky přijatelné· 2* Pólysacharid podle nároku 1 vzorce xo ox

   <°x>h 0 Pe n (i) ve kterém vlnovka značí vazbu nad či pod rovinou pyranosového cyklu

   výše uvedený vzorec znamená polysacharid Po, obsahující n jednotek monosacharidických, totožných či různých, vázaných anomerním atomem na Pe OX \ .0. o 20 , (°x>h , je příkladné schéma monosacharidické jednotky pyranosové struktury, zvolené mezi hexesami, pentosami a desoxyeukrý *s‘Tím, že taková jednotka je vázána anomérním uhlíkovým atomem na jinou monosacharidickou jednotku a hydroxylové skupiny této jednotky jsou substituovány skupinami X, totožnými či různými s tím, že τΐ62- skupiny X jsou zvoleny z alkylových skupin s jedním až šesti atomy uhlíku a sulfoskupin n znamená číslo od 10 až do 25 Pe znamená pentasacharid struktury

   kde R^ znamená alkylovou skupinu s jedním až šesti atomy uhlíku nebo sulfoskupinu, R^a znamená R^, nebo znamená s atomem kyslíku, na kterém je uvedená skupina vázána a s uhlíkovým atomem, na kterém je skupina kaa?-boacylová na téraže cyklu skupinu C-CI^O, R znamená alkylovou skupinu s jedním ažlšesti atomy uhlíku, W znamená kyslík nebo methylenovou skupinu,nebo některou ze solí, zvláště farmaceuticky přijatelnýcho 3· Sůl polysachaiidu podle nároku 2, kde kation je zvo len z kationtů alkalických kovů, zvláště sodíku či draslíku· 4o Pólysacharid podle nároků 2 nebo 3 vzorce

   Pe <I.A) P kde

   znamená zvláštní skupinu polysacharidů Po, vázanýanomerním uhlíkovým atomem na Pe, jak je to uvedeno pro (I), WO 98/03554 -163- .PCŤ/FŘW/o!$*4 ' ·· ···· WO 98/03554 -163- .PCŤ/FŘW/o!$*4 ' ·· ···· οχ

   má význam, jak to bylo uvedeno pro vzorec (I) OX mají význam, jak to bylo uvedeno pro (I) a v případě téhož monosacharidu mohou být totožné či různé monosacharidy, obsažené v tvoří disacharid, opakující se m-krát, monosacharidy, obsažené v tvoří disacharid, opakující se t-k®át, m znamená 1 až 8, t znamená 0 až 5, p znamená 0 až 1 za předpokladu, že 5j£m + t<12, a jejich soli, zvláště farmaceuticky přijatelné. 5· Pólysacharid podle nároku 2 nebo 3 vzorce ox ox OX V xo (0X)h (OX)h (OX)h _ m' ť kde (ΠΆ) ox ox .OX '<*<v (OX)h (0X)h (OX)h ť znamená zvlášní skupinu polysacharidů Po, vázaných anomerním uhlí kovým atomem na Pe, jak to bylo uvedeno pro (I) xo ox «Wh má význam, jak to bylp uvedeno pro (I), OX mají významy, jak to bylo uvedeno pro (I) a v případě jednoho monosacharidu mohou být totožné či různé, WC) 98/03554 -164- ·· ·· • · · · • · · · • · ··· t • · · ·· ·· ·· ♦· I · · · ♦ · ·* • · · * : : · · ··· ··: monosacharid, obsažený v ^_se opakuje m*-krát, monosacharid obsažený v ^'se ěpakuje t -krát, monosacharid obsažený v p*se opakuje p'-krát, m'kolisá od 1 do 5* í^kolíná od O do 24 a p kolísá od 0 do 24 za přepokladu, že 10 m*+ t%- p* 25, jakož i jejich soli, zvláště farmaceuticky přijatelné# 6, Sůl podle nároku 2 nebo 3, jejíž anion má vzorec

   kde t znamená 5, 6 nebo 7, kationtem je jednovazný kation, farmaceuticky přijatelný, jakož i jijich odpovídající soli kyselin· 7# Sůl podle nároku 2 nebo 3, jejíž anion má vzorec

   0 (1.2) Γ··\ kde t znamená 5,6 nebo 7 a kde kationtem je jednovazný kation, farmaceuticky přijatelný, jakož i jejich odpovídající soli kyselin· 8. Sůl podle nároku 2 nebo 3, jejíž anion má vzorec

   kde m znamená 1, 2 nebo 3 a t znamená 2, 3, 4 nebo 5 a kde kationtem je jednovazný kation, farmaceuticky přijatelný, jakož i jejich odpovídající soli kyselin. \ 20 -165- ·· ·« * · * · • · · · · • · ··· · · Μ ·· * · · · ·· ·· • · · · • · · · ··· ··· ·· ·· ·* ···· Polýsacharidy, zvolené z těchto dále uvedených sodná sůl methyl-0-(3*0-aQthyl-2 ,4»6-tri-O-suÍ£0*4 -D^sl^opyrano-syl)-d~H)-O*(3-Q-methyl-2,6-di-Q*sdf0^-D-glukopyra-nosyQríI”^ 4)-TQ-(3-.o-sQtiayl-2,6-di~G-sul£o«4 -D-glukopy- Γ8^05ί)*(^4)^<3^Ο^®«^1*2^^#1^8ΐαίΟ^?Β^1ηΐ£θ-pyranosyl)-(l·-’ 4 Ji ^-0-(2,3-di-O-my e thy l-6-0~Sulfo*·^ D-glukopyranosyl)-(2H? 4)-0*(2,3-di-Q-methyl··^ -D-glukopyraru-nosyl)*( £^4)-0-(^,3,6-tri-O-sulfo*0^ -D-glukpyranoy1)-(l-? 4 )-0-( 2,3-di-0-me thyl-L-idopy xarunoayl)-(V* 4)-2,3,6-tri-Q-sulřo«4 33-glukopyranos$du, sodná sůl B0thyl**2»(3-O-m^thyl-*2,4,6-txi>Q-shlfo- ^D-glukopyxano-flyl)-d“9 4)-0-(3-0-methy1-2,6-di-O-sulfo-^-D-glukopyra-nosyl)*(1^4)4{o^C3*0-aethyl-^,6-dÍ^-sulfO-^ ^-gluko-pyxanosyl)-(l-} 4)^-(3-G-methýl^řd-di-D-sulfo^^MÍi-glu-kopyrenosyl)-(l-^4)j ^0^(2,3^di^*métJb^l-6*0-sulřó-oř -D- gl*kopyxan<>syl)-d'-? 4)-2,3-di-0-Bethýl^-D-gluko^raruno- syl)-d^4)-0-(2, 3,6-dl-0-sulfo-^ #3)^glia3topyranosýl)-(X"~?4 ) -0-* (2,3-d i-Q-ma thyl-l-idopyrarunosyl}-(1^4 )-2,3,6-tri*0-sulfónyl«ol -D-gliikopyranosldu/ sodná sůl msthy 1-0-(3-Q-methyl-2,4,6-tri-0-sulfo-o( -2>-glukopyranosyl)--(1^4)*0-(3-Q-mothy 1-2,6-di-0-sulfo-/^ -P-glukopyranosyl)-( 1*^4 )-Ó-( 3-0-me thy 1*2, 6 -d i-0- sulřo-^A -D-glukopyr a no sy 1) - (1~^ 4 U. -0-(3-0-raethyl-2 , 6-d i-O- sulfo-^-D-gluko py r a nopy 1) - (1 “Ηΐ! g--B-(2,3-di-Q-mathyl-6-0-Sulfo)^ -D-glukopyranosyl-d"”*4)--0-(2,3-di-0-me thyl-/3> -D-gluko py r a nur o sy 1) - (1"“74 )-(-(2,3,64 ri-0-sulfo-o( -D-glukopyra nosy 1)-(l'-'’ 4 )-2,3-di-O-me thyl-<?( -I»-idopyrantixosyl)-(l*- 4)-2*3,6-txi-O-súlfo-^-D-glukopyrano- sidu, *' ! sodriá sůl p·"' me thy1-0-(2,3-di-O-matj y 1-4,6-di-O-sulfo-A-P-glukopyrano-syl)-(l 4)- 0-(2,3-di-O-methy 1-6-0_sulf o- °i -D-glukopyra-

   -166- • · · · · · · • · · · · · • · · ··· ··· ·· ♦··· ·· ·· nosyl-(l ^)^^0-( 2^3*di-0-mathyl- /^-glidsó^rarao?©·* syl)-(l )-0-(2 ,3,6-txisuIfo- </-J)-glukopyrenosyl-(l 0—(2, 3-di-0-rnet hy 1- cfcli—(idopyranurosy 1)-(1 4)^2 ,3 ,6-tri-Q- sulfo- ^-D-glukopyranosidu, sodná sůl me t hy l-( 2,3 ~<3 l—O—mo t hy 1-4 ,6-d1-0-sul d. o - <Á -h-glukopyrano-syl)-(l *^!·)-Jo-(2,3~di-0-msthyl-ó-0-sulfo- <A -D-glukopyranosy 1- (1 4)-Ji} -0-( 2,2 -d 1-0-methy 1- p-D-glukopyra n«rosy 1 )-(1^)--0-(2,3,6-tri-0~sulřo- ^-D-gIvJ£opyxanosyl)-(l ^4)-0-(203-di-*0-ffiethyl-^*~-L-idopyraniirosyl)-(l "4)-2 ,3,6-tri-0-sulfo~ -AD-glukopyranosidu· sodná sůl msthy1-0-(2,3-di-0~raethyl-4,6-di-0-aulfo- -glukopyranosy 1-(1 0-(2, 3 -cl i-O-mc t hy 1-6 -0-s ul ťc - cA -D-gluko py ra nosy 1-)-( 1“*^· *3-di-C-me thy 1- ^-D-gluko py r a mír o sy 1) - -(1 —^)-0-(2,3,6-tri-O-sulfo- ^-D-glukopyranosy 1)-(1 4)-0-(2 ,3-dÍ«0-methyl« c^-L-Idopyramn,osyl)-( 1 --4)--2 ,3,6-tri-0-sulřo- -py ra no c idu, sodná sůl methyl-3-Q-methyl-2,4,6-tri-O-sulřo- ^-P-glukopyranosyl)-(1 Γ~4 )-0^ (3-Q-me thyl-2,6-di-O-sulřo- ^-D-glukopyranosyl-(1 ~4)<^lp*(3-0-mefchyl-2,6-d±sulfo-c^D-glukopyranosyl- -(1 7^y2-ío-(2,3»6-t3fi-0-inethyl-<^-D-glukopyx-anosyl-(l 4)-0-(2,3 , 6-tri-O-me thy 1-^*-D-glukopy ra no sy 1)-(1 -~4 )j2 -0- (2,3-di-0-me thyl-6-O-sulřo- °^-D-glukopy r a nosyl >-( 1 —4 )-0- (2,3-d i-O-me thy 1- (f^D-gluko py ra nuro sy 1) - (1 *^4 ) -O- (2,3,6-tri-0-sulfo- ^í-D-giukopyranosy 1)-(1^4 )-0(2,3 -d i-O-me t hy 1-idopyranurosyl)-(1 -74)-2,3,6-tri-G-sulfo- ^D-glpkopyra-nosidu, Sodná sůi / matljyl-0-(3-6-mathyl-2,4,6-trl-O-sulfo- Ú-D-glukopyrano-syl)-(l ) —0— (3—G-me thy 1-2,6-di-O-sulfo- (^-D-glukopyjpa- no{áýl—^5»(3«,.0-inethyl-2,6"*dl-0-sulfO- ^-D-glukopy- -167 ·· ·· *· • t ·· ·· • · • · • · ♦ · • • • · • • • · • · • » • • ♦ • · + * · · • · • • ♦ · • • · ♦ • • • • · • i • • • · ·· • · • · · · • · • · ranosyl-(l ^)--0-(3-0-mathy1-2 ||6^ái^£>»siilfó-o( -D-gluko pyranosyl £q-(2,3^6*tyÍ*CNmotl^l-i^-^D»gl«^|^· l*aao«yar)-(i-^4)^(2>3^triw0 -methyl-β -D-glukopyrano- ': syl) -(*-** ÍJ 3-o —(2 , 3—d i-O-me t hy 1-6-Q-sulfo*f —D—glukopý— ráno syl)—(i—**>4)*0—(2 ,3-di-O-methyl— jP*D—glukppyra huro syl)— (l-^·)-( 2 > 3,6-tr i-o-sulfo-^D-glulsopyra ηοε^1-( 1-^4-)- (2,3-di-O-ma thy i-c^ -ir-idopyranurosyl)-(l-^l-2,3,6^tr±-0-siafo- c\-D-giukopyranósiau, sodná sůl \ \ t \ ma thy 1-0-( 3-0-methy 1-2,4,6-trisulfo- Á -D -glukopyra nó sy i-(1 -^4 )-0-(3-0-mathyl-2 , 6-di-0-sul:fo- φ> -D-glukopyra no sy )}-(1 -^4)-0-(3-0-1^8 thyl-2,6-di-0~sulío- ck -D-glukopyranosyl4-(l--74)-0-(3-0-netiiyl-2,6 - d i-Q - sul řo - |*?-D ~gluko pyra nosy!) -LP-C:2 » 3»6-tri-O-me t hy 1-^ -D -gluko py ráno syl)-(1—94 ) -O- * (2 # 3 > 6- tr I-p-m^s t hy 1-(jb -D-glukopyra nosyl) -(1-¾ )| ^-o~' (2 •3-di-0-mathyl-6-0-sulfo-<^-I>-glukój||'řai^3yl*(l·—«43-0**(2,3-di-0-methyl-(p> -D-gluko pyr a aur osy 1)-(1 -¾ )-0-( 2 , 3 »6- \ tri-o^siOřo^^-giukoivranoeylJ-íl^i^f^di^O-taatliaft.-^·* -I»-idopyra nuro sy 1) -(1 -?0 -2,3,6-t jři-O-sul^o-^ -D-giuko-pyranosidu, - sodná sůl ι^;···ν.;. msthyl-0-(3—Q—mathyl-2,4»6—tri—0—sulfo^^jD—glukopyranosyl·)-(l—'4)-0-(3-0-mathyl-2 jé-di-O-sulfo——D—glukopyr8nGsyl}— ( 1—^?4 )-Q-(3-0-me thy 1-2 r 6-di-0-aulfa— o( —D-glukopýra nosy! )-(l-^4)-JjD-(2,3,6-tri-0 -ma thyl-(jb -p^gluko py r ano syl)- (1-^4 ) -0-(2,3,6-tri-O-mathyl-^ D-glukopyranosy 1)-{l ^E^-q-(2,3-di-O-methy 1-6 -0-sulfo-p( -D-glikopyranosyl)-(!-%)-o-(S,3- dl-0-mathyl-|b-D-glukopyranurosyl)-(l-^4-(0-(2#3ř6-fri*0- sulfo-c^ -D-glukopyráno syl)- (1-54 ) -(2,3-di-Q-methyl- 4 -L-idopy r a nur osy 1)-(1—*4) -2 ,3 » 6— tr 1-0—sulfo—D-gluko pyra-. nosidu, ·/, sodná sůl \ ma thyl-0—(3-0-ma thy 1—2,4,6—tr±-0—sulfo—^ -D—glukopyrano— syl)-(l -74)-0-( 3-0-methy 1-2,6-di-0-sulJPo-|^ -D-glukopy^a- i ). i; ;·' / K -168 • · a· • a M • a a a • • • · • • • · • · • a • • • · • • • a · a a • • aaa · • • • • a · a a · · • • • • • • a • ·· aa • · ···· • a a a nosyl)-(l—94 )-jj)-(2,3,6-tri-O-me thy1-^ -D-glukopyrano-syl)-(l*-**4)*0-(2,3,6-tři-0-me t hy l-$> -D-gluko py r a no sy 1) -(1-^4)1 ^-0-(2,3-di-0-methyl-6-0-sulfo- Á -D-glukopyra no-syl 4 )-0-( 2,3-di-O-methyl·^ D-glukopyranurosyl)-( 1~>4).. 0^C2 , 3, 6-tri-O-sulfo- <*ν-D-gluko pyra nosy 1)-(1 ^)-(3,3-(31-0-1110^1-0^--1-1^0^^80^03^1)^(3^94)-2 š3, 6-tr i-O-sulfο-θ( -D-glukopyranosidu, sodná sůl motby1-0-(3-O-met hy 1-2,4,6-tr i-O-sulf o-** -D-glukopyra no-syl)-(l—9Φ )-Q-(3-0-methyl-2,6-di-0-sulfo-(í':>-D-glukopyra- I " no3yl)-(l-^4)-|θ-(2,3,6-tr i-O-mathyl-a -D-glukopyranosyl)-(1-=54)-0-(2,3,6-tri-0-mothyl-^-D-glukopyranosyl)-(l-^4)] g-0-(2,3 -d i-O-ma thy1-6-0-sulf o- o(-D-gluko py r a no sy 1) - (1-^4)«. 0-(2,3-di-0-mothyl-(P -D-glukopyranurosyl)-( 1--^4 )-0-(2,3,6-tri-0-sulfo-</ -D-gluko py r a nosy 1) - (1-=54) -2,3 -d i-O-ma t hy 1-<X, --L-ldopyranurosyl)-(1-^4)-2,3,6-tri-0-sulfo-í( -D-glukopy-ranoBidu·
2. 10, Způsob přípravy sloučenin obecného vzorce I, vyznačující se tím, že se v prvém stupni syntetizuje dokonale chráněný prekursor polysacharidu (I), s obsahem chráněného prekursoru prodloužené oblasti Pe na své neredukující koncovce chráněným prekursorem sulfátovaného polysacharidu Po a potom se ve druhém stupni zavenou a/nebo odkryjí negativně nabité skupiny, llo Sloučenina vzorce

   nebo substituent semipermanentní či permanentní a Z je skupina, chránící skupinu hydroxylovou. WO 98/03554 ·· ·· • · · · « · · · • · ··· ·

   ·· t# • · · · • ♦ · • · · · • · · ·· ···· ·· ·· • · · · *.Ρ5Λ/ϊίΐ97/01344 ·· ♦♦ 12 o Sloučenina vzorce Tn Tn

   kde a Ttotožné či různé, znamenají substituent dočasný, semipermanentní nebo permanentní, Z je skupina, chránící hydroxylovou funkci,
3. 13. Farmaceutické kompozice, obsahující jako účinnou složku polysacharid podle kteréhokoli z nároků 1 až 9 ve formě soli s farmaceuticky přijatelnou hází, nebo ve formě kyseliny, spolu nebo ve směsi s inertním netoxickým excipiens, farmaceuticky přijatelným.
4. 14. Farmacwutická kompozice podle nároku 13 ve formě dávkované jednotky, ve které je účinná složka smíchána nejméně s jedním farmaceutickým excipiens.
5. 15. Kompozice podle nároku 14, kdy každá dávkovaná jednotka obsahuje 0,1 až 100 mg účinné složky.
6. 16. Kompozice podle nároku 15, ve které každá dávkovaná jednotka obsahuje 0,5 až 50 mg účinné složky. rý

   ' Μ,-Ϊ! i'H "i í f-^ V a ,v - μ·ό no i :ř:-! να ?!