CS236798B2

CS236798B2 - Processing of cefalosporine

Info

Publication number: CS236798B2
Application number: CS835791A
Authority: CS
Inventors: Toyonari Oine; Hiroshi Sugano; Yoshihisa Yamada; Totaro Yamaguchi; Satoshi Ohshima
Original assignee: Tanabe Seiyaku Co
Priority date: 1982-08-07
Filing date: 1983-08-04
Publication date: 1985-05-15
Also published as: ES531296A0; NO161068C; EP0101265B1; DK361587A; JPS62294615A; JPH0246588B2; US4598154A; EP0101265A3; EP0245619A1; PL249964A1; BG40967A3; PT77166A; PT77166B; DD210053A5; PL139932B1; CS243484B2; US4727071A; ES8506707A1; JPH0360803B2; FI74972B

Description

Vynález se týká nových derivátů cefalosporinů a způsobu jejich přípravy. Zejména se týká sloučenin obecného vzorce (I)

kde

R1 znamená vodík nebo nižší alkyl s 1 až 4 atomy uhlíku,

R² znamená acetoxy nebo (1-methyl-lH-tetrazol-5-yl) thioskupinu a

R³ znamená karboxyskupinu, nebo

R2 znamená skupinu obecného vzorce —COO~ a Y znamená vodík, hydroxymethyl- nebo karbamoyl a n znamená celé číslo 2 nebo 3, nebo jejich farmaceuticky přijatelných solí. Rovněž jsou popsány farmaceutické prostředky používané jako antimikrobiální činidla, obsahující cefalosporinový derivát obecného vzorce I nebo· jeho sůl jako aktivní složku spolu s inertním nosičem.

Nový cefalosporinový derivát obecného vzorce I a jeho farmaceuticky přijatelná sůl vykazují antimikrobiální aktivitu vůči různým mikroorganismům včetně grampozitivkde R3 znamená

nich a gramnegativních bakterií a jsou použitelné jako antlbakterlální činidla, přísady do krmiv pro zvířata nzba jako chemoterapeutické prostředky pro teplokrevné živočichy, včetně lidí, při léčení infekcí způsobených uvedenými grampozitivními a gramnegativními bakteriemi.

Ze sloučenin podle vynálezu jsou výhodnými ty sloučeniny obecného vzorce I, kde R¹ znamená vodík, nižší alkyl s 1 až 4 atomy uhlíku, jako methyl, ethyl nebo propyl, R²znamená acetoxy nebo (1-methyl-lH-tetrazol-5-yl)thioskup.'.nu a R³ znamená karboxylovou skupinu, nebo R² znamená skupinu obecného vzorce

R³ znamená skupinu —COO“ a Y znamená vodík, hydroxymethyl nebo karbamoyl a n je celé číslo 2 nebo 3. Výhodnějšími jsou ty sloučeniny obecného vzorce I, kde R¹ znamená vodík nebo methyl, R² znamená [1-methyl-lH-tetrazol-5-yl)thioskupinu a R³ znamená karboxyl, nebo R² je skupina obecného vzorce

R³ je —COO“ a Y znamená vodík, hydroxymethyl nebo karbamoyl; a n je celé číslo 2 nebo 3. Ještě výhodnější jsou ty sloučeniny obecného vzorce I, kde R¹ znamená vodík nebo methyl, R² znamená (1-methyl-lH-tetrazol-5-yl)thioskupinu, a R³ znamená karboxylovou skupinu, nebo R² znamená skupinu obecného vzorce

R³ znamená —COO“ a Y znamená vodík, 4-hydroxymethyl, 3-hydroxymethyl nebo 4-karbamoyl; a n je celé číslo 2 nebo 3. Dalšími výhodnými sloučeninami jsou sloučeniny obecného vzorce I, kde R¹ znamená vodík, R² znamená skupinu obecného vzorce

R³ znamená skupinu —COO^-, Y znamená vodík a n znamená celé číslo 2. Mimoto strukturální vzorec I uvedený výše má vždy isomerickou konfiguraci oxyiminoskupiny Z (tj. syn)-konfiguraci. Ačkoliv Z-(tj. syn-isomery) připravené postupem podle vynálezu jsou výhodnější a mají nejlepší biologické vlastnosti, mohou existovat spolu s malým množstvím E-(nebo anti-)-isomerů, který se může vytvořit během chemického procesu isomerizací.

Podle vynálezu se sloučeniny obecného vzorce I připraví tak, že se

i) kondenzuje sloučenina vzorce II

kde

R⁴ znamená chránící skupinu a

R¹ a n mají výše uvedený význam, nebo její reaktivní derivát, se sloučeninou obecného vzorce III

kde

R⁵ znamená karboxylovou skupinu, nebo chráněnou karboxylovou skupinu, znamená-li R² acetoxyskupinu nebo (1-methyl-lH-tetrazol-5-yl)thioskupinu; nebo R⁵ znamená —COO“, jestliže R² znamená skupinu obecného vzorce

R³ znamená skupinu -—COO, Y je vodík a n je celé číslo 2. Nejvýhodnější sloučeninou je levotočivý isomer sloučeniny vzorce I, kde R¹ znamená vodík, R² znamená skupinu obecného vzorce kde

Y má výše uvedený význam, nebo solí této sloučeniny za vzniku sloučeniny obecného vzorce IV

R¹ (IV) kde

R², R¹, R⁴, R⁵ a n mají výše uvedený význam a ii) ze získané sloučeniny se odstraní chránící skupina.

Ve výše uvedených reakcích mohou být použity různé chránící skupiny používané v syntéze peptidů ve významu chránících skupin subsťtuentu R⁴. Příklady takových chrámcích skupin jsou nižší alkanoyl, jako je fcrmyl, acetyl a pivaloyl, mono-, di- nebo trihaiogen-nižší alkyl jako je chloracetyl a trfluoracetyl; nižší alkoxykarbonyl jako je methoxykarbonyl, ethoxykarbonyl a terc.butoxykarbonyl; substituovaný nebo nesubstituovaný benzyloxykarbonyl jako je benzyloxykarbonyl a p-methoxybenzyloxykarbonyl; substituovaný nebo nesubstituovaný fenylnižší alkyl jako je p-methoxybenzyl a 3,4-dimethoxybenzyl; a di- nebo trifenyl-nižší alkyl jako je benzhydryl a trityl. Jestliže R⁵ ve sloučenině obecného vzorce III nebo IV znamená chrámci skupinu karboxylové skupiny, má být tato chránicí skupina na karboxylové skupině snadno odstranitelná běžnými způsoby, jako je hydrolýza, působení kyseliny nebo redukce. Příklady takových chránících, skupin jsou nižší alkyl jako je methyl, ethyl nebo terc.butyl; substituovaný nebo nesubsť.tuovaný fenyl-nižší alkyl jako je benzyl, p-methoxybenzyl a p-nitrobenzyl; benzhydryl; tri-nižší alkylsilyl jako je trimethylsilyl; a podobně. Jestliže R⁵ znamená karboxylovou skupinu je výhodné převést sloučeninu obecného vzorce III na její sůl před prováděním kondenzační reakce. Vhodnými příklady těchto solí sloučenin obecného vzorce III jsou anorganické soli, jako sodná, draselná sůl nebo organické soh, jako sůl trimethylaminu, triethylaminu.

Jelikož sloučenina obecného vzorce II může existovat ve formě dvou optických isomerů v důsledku asymetrického atomu uhlíku ve skupině vzorce x 1

-Ch N-R

CO kde x vyznačuje asymetrický atom uhlíku, může se pro účely vynálezu používat bud opt ekého isomeru sloučeniny obecného vzorce II nebo její racemické modifikace. „Levotočivým isomerem“ sloučeniny obecného vzorce I, II ,IV nebo V, kde R¹ znamená atom vodíku a n celé číslo 2 se vždy míní, že absolutní konfigurace sloučeniny na uvedeném asymetrickém atomu uhlíku je S-kon•figuvace a také výrazem „pravotočivý isomer“ se vždy míní, že absolutní konfigurace takové sloučeniny na asymetrickém atomu uhlíku je R-konfigurace.

Kondenzační reakce sloučeniny obecného vzorce II nebo jejího reaktivního derivátu se sloučeninou obecného vzorce III nebo s její solí se může provádět o sobě známými způsoby. Například kondenzace sloučeniny obecního vzorce II, v její volné formě, se sloučeninou obecného vzorce III se provádí v přítomnosti dehydratačního činidla v rozpouštědle. Jakožto příklady vhodných dehydrat-ačních činidel se uvádějí d^:cyklohexylkarbodiimid,

N-cyklohsxyl-N‘-morfolmkarbodiimid,

N-ethyl-N‘-(3-dimethylaminopropyl)karbodiimid, oxychlorid fosforu, chlorid fosforečný, tlronylchlorid, cxalylchlorid, trifenylfosfin a podobná sloučeniny.

Jako dehydratačního činidla se rovněž může použít Vilsmeierova činidla, připraveného z d/methylformamidu a z oxychloridu fosforu, z d^;methylformamidu a z oxalylchlo•ridu., z dimethylformamidu a z fosgenu nebo z dimethylformamidu a z thionylchloridu. Je výhodné provádět reakci při teplotě —50 až + 50 °C, zvláště při teplotě —30 až +20 °C. Vhodnými rozpouštědly pro tuto reakci jsou dioxan, tetrahydrofuran, acetonitril, chloro236798 form, methylenchlorid, dimethylformamid, Ν,Ν-dimethylacetamid, ethylacetát, pyridin, aceton a voda.

Kondenzační reakce reaktivního ' derivátu sloučeniny obecného vzorce II se sloučeninou obecného vzorce III nebo s její solí se také může provádět buď v přítomnosti nebo nepřítomnosti akceptoru kyseliny ve vhodném rozpouštědle. Jakožto vhodné příklady reaktivního derivátu sloučeniny obecného vzorce II se uvádějí odpovídající halogenidy kyseliny, například chlorid, bromid; směsné anhydridy, . například směsný anhydrid sloučeniny obecného· vzorce II s alkylkarbonátem; aktivní estery, například p-nitrofenylester, 2,4-dinitrofenylester, sukcinimidester, ftalimidester, benzotriazolester, 2-pyrrolidon-l-ylester; azid kyseliny a amidy kyselin, . například imidazolamid, v poloze 4 substituovaný imidazolamid, triazolamid. Jakožto vhodná rozpouštědla pro· tuto reakci se uvádějí dioxan, tetrahydroíuran, acetonitril, chloroform, methylenchlorid, dimethylformamid, Ν,Ν-dimethylacetamid, ethylacetát, pyridin, aceton a voda. Jakožto vhodné příklady akceptorů kyseliny se uvádějí hydroxidy alkalických kovů, například hydroxid draselný a hydroxid sodný; uhličitany nebo hydrogenuhličitany alkalických kovů, například uhličitan sodný, hydrogenuhličitan sodný, uhličitan draselný, hydrogenuhličitan draselný; trialky laminy, například trimethylamin a triethylamin; Ν,Ν-dialkylaniliny, například Ν,Ν-dřmethylanilin a N,N-dlethylanilin; pyridin a N-alkylmorfoliny, například N-methylmorfolin. Je výhodné provádět reakci při teplotě —50 až + 50°C, zvláště —30 až +20 °C.

Odstraňování chránící skupiny nebo chráničích skupin z takto připravených sloučenin obecného vzorce IV · se může provádět o· sobě známými způsoby, například hydrolysou, solvolysou, zpracováním . kyselinou nebo redukcí. Jestliže je například chránící skupinou symbolu R⁴ skupina formylová, acetylová, terc.butoxykarbonylová, benzhydrylová nebo· tritylová a chránící skupinou na karboxyskupině je terc.-butylová skupina nebo· benzhydrylová skupina, může se tato chránicí skupina nebo se mohou tyto chránící. skupiny odstraňovat zpracováním sloučeniny obecného vzorce IV kyselinou. Jakožto vhodné příklady kyselin pro toto použití se uvádějí kyselina mravenčí, trifluoroctová kyselina, benzensulfonová kyselina, p-toluensulfonová kyselina, chlorovodíková kyselina nebo bromovodík, přičemž obzvláště výhodnou je kyselina trifluoroctová. Tato reakce se provádí buď v přítomnosti rozpouštědla nebo v nepřítomnosti rozpouštědla. Jakožto příklady rozpouštědel se uvádějí voda, methanol, · ethanol, kyselina octová nebo dioxan. Je výhodné provádět reakci při teplotě —30 až +70 °C, především při teplotě 0 až 30 °C. Jestliže se jako kyseliny použije kyseliny trifluoroctové, je výhodné provádět reakci v přítomnosti anisolu.

Jestliže je chránící skupinou symbolu R4 skupina benzyloxykarbonylová, p-methoxybenzyloxykarbonylová, benzylová, p-methoxybenzylová nebo skupina 3,4-dimethoxybenzylová a chránící skupinou na karboxyskupině je skupina benzylová, p-methoxybenzylová nebo skupina p-nitrobenzylová, může se tato chránící skupina nebo se mohou tyto chránící skupiny odstraňovat katalytickou hydrogenací sloučeniny obecného vzorce IV plynným vodíkem v přítomnosti katalyzátoru. Katalytická hydrogenace se s výhodou provádí při teplotě 0 až 100 °C, zvláště při teplotě 10 až 40 °C za atmosférického tlaku nebo za zvýšeného tlaku. Jakožto vhodné příklady katalyzátorů pro tento účel se uvádějí palladium na uhličitanu barnatém, palladium na aktivním uhlí a palladium na uhlí. Vhodnými rozpouštědly pro tuto redukci jsou methanol, ethanol, tetrahydroíuran a voda.

Jestliže je chránící skupinou symbolu R4 skupina trifluoracetylová, pivaloylová, methoxykarbonylová nebo ethoxykarbonylová skupina a chránící skupinou karboxyskupiny je methylová nebo ethylová skupina, odstraňuje se tato skupina nebo se odstraňují · tyto skupiny hydrolýzou sloučeniny obecného vzorce IV. Hydrolýza sloučeniny obecného vzorce IV se může provádět o sobě známými působy, například zpracováním alkaTckým činidlem, například hydroxidem sodným nebo hydroxidem draselným nebo kyselinou, například chlorovodíkovou nebo bromovodíkovou kyselinou. Je výhodné provádět takovou hydrolýzu při · teplotě 0 až 70 stupňů Celsia, zvláště při teplotě 10 až 30 stupňů Celsia.

Jestliže je chránící skupinou symbolu R4 chloracetylová skupina, může se tato skupina odstraňovat zpracováním · sloučeniny obecného vzorce IV thíomočovinou v rozpouštědle. Vhodnými rozpouštědly pro tento účel je methanol, ethanol a voda. Je výhodné provádět tuto reakci při teplotě 20 až 80 °C, zvláště při teplotě 40 až 80 °C.

Výchozí sloučenina obecného vzorce II, používaná při způsobu podle vynálezu, se může připravovat například · reakcí sloučeniny obecného vzorce VI ll · - ^u

OH , (V/) kde

R4 má shora uvedený význam,

znamená X atom halogenu a

Ri a n mají shora uvedený význam, v přítomnosti alkalického činidla, například uhlič ' tanu draselného, v rozpouštědle, například v dimethylsulfoxidu, při teplotě ' 10 až 50 °C za vzniku sloučeniny obecného vzorce VII

C~CO,C,H_s l| ** ³ o=c—nS (VII) kde

R1, R⁴ a n mají shora uvedený význam a pak hydrolýzou sloučeniny obecného· vzorce VII. Nebo se výchozí sloučenina obecného vzorce II může připravovat hydrolýzou sloučeniny obecného vzorce VI za vzniku sloučeniny obecného vzorce VIII

R~NH

(Vili) kde . ·· R⁴ má shora uvedený význam · a pak reakcí sloučeniny obecného· vzorce VIII se sloučeninou obecného vzorce

kde

R1, n a X mají shora uvedený význam, v přítomnosti akceptoru kyseliny, například hydridu sodíku, při teplotě 10 · až 40 °C v rozpouštědle, například v dimethylsulfoxidu. Jak shora uvedeno, zahrnuje sloučenina obecného vzorce II dva optické isomery v důsledku asymetrického atomu uhlíku ve skupině obecného vzorce

kde znamená x vyznačení asymetrického atomu uhlíku. Popřípadě se však takové isomery mohou rozštěpit na jednotlivé optické isomery. Například sloučeniny obecného vzorce II, kde znamená

R1 atom vodíku, n celé číslo 2 a

R4 tritylovou skupinu, je možné snadné rozštěpení na optické isomery reakcí racemické modifikace sloučen‘ny obecného· vzorce II s methylesterem L-fenylalanmu nebo Drienylalaninu ve vhodném rozpouštědle, jako je například směs methanolu a dioxanu za vzniku jejich diastereomerních solí a rozdělením těchto diastereoisomerů na jednotlivé složky selektivním překrystalováním. Při takovém selektivním překrystalování se nejméně rozpustný diastereoisomer získá ve formě krystalů z reakční směsi a rozpustnější diastereoisomer zůstává v roztoku. Je výhodné provádět takovou selektivní krystalizací při teplotě 10 až 40 °C.

Cefalosporinová sloučenina obecného vzorce I, připravená způsobem podle vynálezu, a její farmaceuticky vhodná sůl vykazuje ant⁵m^:krobiální aktivitu se zřetelem na nejrůznější mikroorganismy včetně mikroorganismů kmene Streptococcus (například Streptococcus faecalis, Streptococcus pneumoniae) a Pseudomonas (například Pseudomonas aeruginosa, Pseudomonas putida, Pseudomonas stutzeri) a Staphylococcus (například Staphylococcus aureus, · Staphylococcus epiderm!dis) a zvláště vykazuje antimikrobiální aktivitu proti grapozitivním a gram-negativním bakteriím. Například 7-bet^a^{ (Z ] -2- (2-aminothiazol-4-yl )-2-(( 2-pyrr olid on-3-yl ] oxy imino ] acetamido]-3~(1-pyridiniomethyl ) -3-cefem-4-karboxylát (1-isomor) a 7-beta{ (Z j -2- (2-ammothiazol-4-yl )-2-((1-mcthyl-2-pyrrolidon-3-y.l )-oxyimino]acetamidoj-3-[ (l-methyl-lH-tetrazol-5-yl).thiomethyl]-3-cefem-4-karboxylová kyselina vykazující minimální inhibiční koncentraci (Μ. I. C.) (agarová zřeďovací metoda, kultivace po dobu 20 hodin při teplotě 37 °C) 12,5 a 25 jíg/ml se zřetelem na Streptococcus faecalis Cn 478, zatímco Μ. I. C. Cefmenoximu/chemické složení: 7-beta-[ (Z)-2-(2-aminoth 'azol-4-yl )-2-( methoxyimino )acetamido )-3-(( l-methyl-lH-tetrazol-5-yl]thiomethyl]-3-cefem-4-karboxylová kyselina a Ceftazidimu / chemické složení: 7-beta-[ (Z)-2- (2-amlnothiazol-4-yl) -2- (2-karboxyprop-2-y 1-o xy 1ш ino) acetamido ] 3- (1-pyridiniomethyl)-3-cefem-4-karboxylát (je větší než 100 μ/ml. Antimikrobiální účinnost 7-beta-{(Z)-2-(2-aminothiazol-4-yl )-2-( (2-pyrrolidon-3yl)oxyimino]acetamido{-3-[ (1-methyl- H-tetrazol-5-yl) thiomethyl ] -3-cef em-4-karboxylové kyseliny proti Staphylococcus aureus 252R je rovněž více než lLO^irát větší než účinnost Cefmenoximu a Ceftazidimu. Kromě toho sloučenina obecného vzorce I a její farmaceuticky vhodná sůl vykazují · antibakteriální aktivitu proti bakteriím kmene Bacillus (například Bacillus subtilis), Escherichia (například Escherichia coli), Klebsiella (například Klebsiella pneumo.niae), Enterobactoer (například Enterobacter aerogenes, Enterobacter cloacae) a Serratia (například Serratia mercescens).

Cefalosporinová sloučenina obecného vzorce I, připravená způsobem podle vynálezu, může mít dále antimikrobiální účinnost proti jiným bakteriím patřícím clo kmene Citrobacter, Próteus, Singcll-a, Hcmophilus a Salmonella. Cefalosporinová sloučenina obecného vzorce I a její farmaceuticky vhodné soli jsou kromě toho charakteristické tím, že mají chránící působení proti mikrobiálním infekcím působeným různými bakteriemi včetně Staphylococcus aureus a Pseudomonas aeruginosa pro svoji vysokou absorpční schopnost nebo dlouhodobé terapeutické působení v živých tkáních; to je způsobeno tím, že jsou velmi stálé proti nejrůznějším mikroorganismům produkujícím beta-laktamasu, zvláště proti beta-laktamasám, které produkuje Próteus vulgaris. Jsou důležité také tím, že mají nízkou toxicitu. Například žádná krysa nezahynula ani po podávání 7-beta-j (Z ) -2- (2-aminothiazol-4-y 1 )-2-(( 2-pyrrolidon-3-yl)oxyimino]acetamido}-3-(l-pyridiniomethyl)-3-cef em-4-karboxylátu (1-isomeru) subkutáně samečkovi krysy SD v dávce 1000 mg/kg po dobu 14 po sobě jdoucích dnů.

Cefalosporinová sloučenina obecného vzorce I, připravená způsobem podle vynálezu, se může pro farmaceutické účely používat bud¹ ve volné formě, nebo ve formě svých solí. Farmaceuticky vhodné soli sloučeniny obecného vzorce I zahrnují například netoxlcké kovové soli, jako sodné, draselné, vápenaté nebo hlinité soli, amoniové soli, soli s netoxlckými aminy, jako například s trialkylaminy (například s triethylaminem a s procainem); soli s anorganickými kyselinami, jako jsou kyselina chlorovodíková nebo kyselina bromovodíková/ soli s organickými kyselinami, jako jsou kyselina šťavelová nebo kyselina vinná; a podobné soli. Tyto soli se snadno připravují reakcí sloučenin obecného vzorce I se stechiometricky ekvimotárním množstvím odpovídajícího alkalického činidla nebo odpovídající kyseliny při teplotě odpovídající přibližně teplotě místnosti a ve vodném rozpouštědle. Cefalosporinová sloučenina obecného vzorce I a její farmaceuticky vhodná sůl se může podávat buď orálně, nebo parenterálně (například intravenózně, intramuskulárně, subkutánně). Denní dávka cefalosporinová sloučeniny obecného vzorce I nebo její soli závisí na věku, hmotnosti nemocného nebo stavu nemocného a na závažnosti ošetřovaného onemocnění. Obecně však je výhodou denní dávkou dávka sloučeniny obecného vzorce I nebo její soli přibližně 0,002 až přibližně 0,2 g, zvláště 0,01 až 0,04 g na kg tělesné hmotnosti a na den.

Sloučenin obecného vzorce I a jejich solí se kromě toho může používat ve formě farmaceutických prostředků obsahujících sloučeninu obecného vzorce I nebo její sůl spolu nebo ve směsi s farmaceutickými excipienty vhodnými pro orální nebo parenterální podávání. Vhodné excipienty zahrnují například želatinu, laktozu, glukózu, chlorid sodný, škrob, stearát horečnatý, mastek, rostlinný olej a jiné známé excipienty používané v lékařství. Farmaceutické prostředky mohou být v pevné forě, například tablety, povlečené tablety, pilulky nebo kapsle; nebo mohou být v kapalné formě, jako například roztoky, suspenze nebo emulze. Mohou se sterilizovat a/nebo mohou dále obsahovat pomocné přísady, například stabilizační, smáčecí nebo emulgační látky.

Vynález blíže objasňují následující příklady praktického provedení. Výrazem „nižší aíkylová skupina“ se vždy míní alkylová skupina s 1 až 4 atomy uhlíku.

Příklad A (Antimikroblální aktivita in vitro)

Stanovuje se minimální inhibiční koncentrace (MIC, ^g/ml) zkoušené sloučeniny za použití standardní zřeďovací metody s agarovou destičkou (podle standardní metody společnosti Japan Society of Chemotherapy). Používaným prostředím při této zkoušce Je Mueller-Hintonův agar MHA, společnosti Nissui).

Výsledky jsou uvedeny v tabulce I. V tabulce I mají poznámky tento význam:

Poznámka

1J 7-beta-j(Z)-2-(2-aminothiazol-4-yl)-2-[ (2-pyrrolidon-3-yl)oxyimino]acetamido}-3- (1-pyridiniomethyl)-3-cefem-4- karboxylát (1-isomer)

2) chemické složení je 7-beta-[ (Z)-2-(2-aminothiazol-4-yl )-2-( methoxyimino) acetamido ] -3- [ (l-methyl-lH-tetrazol-5-yl) thiomethyl ] -3-cef em-4-karboxylová kyselina

3) chemické složení je 7-beta-[ (Z)-2-(2-aminothiazol-4-y 1) -2- (2-karboxy prop-2-yl-oxyimino )acetamido ] -3- (1-pyridiniomethyl ) -3-cef em-4-karboxy lát

Tablka I

Zkoušený mikroorganismus	Sloučenina podle vynálezu (poznámka 1)	Μ. I. C. (iUg/ml) Cefmenoxim (poznámka 2)	Ceftazidim (poznámka 3]
Stafylococcus aureus Terajima	0,78	1,56	12,5
Stafylococcus aureus 252R	25	větší než 100	větší než 100
Streptococcus faecalis CN-478	12,5	větší než 100	100
Bacillus subtilis ATCC 6633	0,2	1,56	3,13
Klebsiella pneumoniae 5038	0,05	0,1	0,1
Enterobacter cloacae TU-680	menší nebo rovno 0,05	0,1	0,2
Serratia marcescens 7006	menší nebo rovno· 0,05	0,2	0,2
Pseudomonas aeruginosa 4096	0,39	6,25	0,78
Pseudomonas putida ATCC 12633	1,56	100,0	12,5

Příklad B (Chránící působení na bakteriální infekce myší)

Použije se 10 myšších samců o hmotnosti 20 + g pro každou zkoušenou dávku. Myši se . ošetří intraperitoneální cestou množstvím bakterií dostatečným k zabití všech netečených myší v průběhu 24 hodin. Všechny bakterie se suspendují v 6% mucinu. Zkou šená sloučenina se podává intramuskulárně jednu hodinu po infekci. Po 7 dnech po infekci se stanovuje počet přežitých myší. Stanovuje se střední účinná dávka (EDso, mg/kg) zkoušené sloučeniny.

Výsledky jsou uvedeny v tabulce II spolu s M. I.C. (/zg/ml) zkoušené sloučeniny, která se stanoví obdobně jako při pokusu podle příkladu A.

23G798

Tabulka 11 _x

Zkoušený mikroorganismus	Sloučenina podle vynálezu (poznámka 1)	ED50 (ng/kg) Cefmenoxim (poznámka 2]	Ceftazidim (poznámka 3)
Stafylococcus aureus	1,71	5,32	7,85
Smith	(1,56)	(1,56)	(12,5)
Escherichia coli	0,05	0,16	0,08
KC-14	(0,05)	(0,025)	(0,05)
Serratia marcescens	0,14	0,88	0,54
7006	(0,05)	(0,20)	(0,20)
Citrobacter freundii	0,06	0,19	0,15
916	0,1	(0,05)	(0,39)
Enterobacter aerogenes	1,37	23,85	26,38
816	(0,39)	(1,56)	(6,25)

^x Číselné hodnoty v závorkách udávají Μ. I. C. (minimální inhibiční koncentraci v jug/ml každé sloučeniny, která se zkouší

Poznámky 1, 2 a 3 mají stejný význam jako v tabulce I.

Příklad 1

1) V 60 ml tetrahydrofuranu se suspenduje 3,2 g (Z)-2-(2-tritylaminothiazol-4-yl)-2-[ (2-pyrrolidon-3-yl)oxyimino] octové kyseliny a přidá se 2,05 g terc.-butyl-7-aminocefalosporanátu, 1,27 g l-hydroxybenzotriazolu a 1,93 g dicyklohexylkarbodiimidu. Směs se míchá při teplotě místnosti po dobu tří hodin. Nerozpustné podíly se odfiltrují a filtrace se odpaří do sucha za sníženého tlaku. Zbytek se rozpustí v ethylacetátu a roztok se promyje 1% chlorovodíkovou kyselinou, 5% vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a nakonec vodou. Ethylacetátový roztok se vysuší a odpaří se к suchu za sníženého tlaku. Pak se takto získaný zbytek přečistí chromatografií na silikagelu (rozpouštědlo: systém chloroform: methanol v poměru 98,5:1,5). Ve formě bledě žlutého prášku se získá 4,3 g terc.-butyl-7-beta-((Z)-2- (1-trity laminothiazol-4-yl )-2-(( 2-pyrrolidon-3-yl) oxyimino ]acetamido|cefalosporanátu. Teplota tání je 135 až 145 °C (za rozkladu).

NMR (CDC13) <5:

1,52 (9H, s), 2,02 (3H, s), 2,2-2,7 (2H,m), 3,0-3,5 (4H, m) 4,5-5,3 (4H, m),

5,6-6,0 (1H, m), 6,70 (1H, s),

6,9-7,5 (17H„ m), 8,4-8,7 (1H, široké)

2) Přidá se 1,0 g terc.-butyl-7-beta-((Z)-2- [ 2-tritylaminothiazol-4-yl )-2-(( 2-pyrrolidon-3-yl) oxyimino ] acetamidojcef alosporanátu do směsi 20 ml trifluoroctové kyseliny a 1 ml anisolu a směs se míchá při teplotě místnosti po dobu 20 minut. Směs se zkoncentruje za sníženého tlaku к odstranění trifluoroctové kyseliny. Do zbytku se přidá ether a vzniklý prášek se oddělí filtrací. Roztok se promyje ethylacetátem a chromatografuje se na neiontové polymerní pryskyřici Amber lit XAD-2 (obchodní označení společnosti Rohm and Haas Co., Sp. st. a) za použití vody jako elučního činidla. Frakce, obsahující cefalosporinovou sloučeninu, se oddělí a zkoncentruje se za sníženého tlaku к odstranění rozpouštědla. Pak se do zbytku přidá aceton a vzniklý prášek se odfiltruje. Tak se získá ve formě bezbarvého prášku 320 mg 7-beta-|(Z)-2-(2-aminothiazol-4-yl)-2-[ (2-pyrr olidon-3-yl) oxyimino jacetamido}cefalosporanátu.

NHR (D2) δ

2,10 (3H, s), 2,2—2,7 (2H,m),

3,15—3,85 (4H,m), 4,6—5,00 [2H, m),

5,1 (1H, t, J = 7Hz), 5,16 (1H, d, J = 5Hz),

6,98 (1H, s)

Příklad 2

1) Rozpustí se 4,0 g (Z)-2-(2-tritylaminothiazol-4-y 1 )-2-(( 2-pyrr olidon-3-yl) oxoimino] octové kyseliny ve směsi 30 ml tetrahydthiazO'l-4-yl )-2- (2-pyrr olidon-3-yl )oxyimipřidá se 1,27 g l-hydroxybenzotriazolu a

1,93 g dicyklohexylkarbodlimidu. Směs se míchá po dobu dvou hodin při teplotě 0 až 5 stupňů Celsia a pak se vnese do 30 ml směsi Ν,Ν-dimethylacetamidu a vody (s obsahem vody 15%), obsahující 2,12 g 7-aminocefalosporanové kyseliny a 4 g triethylaminu. Toto přidávání se provádí za současného chlazení ledem. Směs se pak míchá při téže teplotě po dobu 1,5 hodin. Nerozpustné podíly se odfiltrují a filtrát se zkoncentruje za sníženého tlaku к odstranění rozpouštědla. Zby236798 tek se vlije do 300 ml vody. Hodnoty pH směsi se upraví na 8 hydrogenuhličitanem sodným, směs se promyje ethylacetátem, hodnota pH se upraví na 3 2N chlorovodíkovou kyselinou a pak se extrahuje ethylacetátem. Extrakt se vysuší a odpaří se za sníženého tlaku k suchu. Do takto získaného zbytku se přidá ether a vzniklý prášek se oddělí filtrací. Tak se získá 3,1 g 7-beta-{Z)-2-(2-tritylaminoth^;azol-4-yl )-2-[( 2-pyrrolidon-3-y 1) oxyimino ] acetamidojcefalosporanové kyseliny.

NMR (DMSO-de) S:

2,03 (3H, s),

2,1-2,5 (2H, m),

3,0-3,7 (4H, m),

4.4— 5,2 (4H, m),

5.5— 5,9 Í1H, s),

7,0-7,3 (15H, m],

7,84 (1H, s),

8,80 (1H, široké s),

9,50 (1H, široké d).

2) 40 ml 80% vodné kyseliny mravenčí se přidá do 3,0 g 7-beta-{(Z)-2-(2-tritylammothia.zol-4-y 1 )-2-(( 2-pyrroll don-3-y 1) oxy i mino] acetamido;lcefaiosporanové kyseliny a směs se míchá při teplotě místnosti po dobu dvou hod'n. Nerozpustné podíly se odfiltrují a filtrát se odpaří k suchu za sníženého tlaku. Do zbytku se přidá voda a vodná směs se neutralizuje hydrogenuhličitanem sodným a promyje se etherem. Pak se vodná směs chromatografuje na sloupci neiontové polymerní pryskyřice Diaion HP-20 (obchodní označení produktu společnosti Mitsubishi Chemical Industries Ltd., Japonsko) za použ.tí vody jako elučního prostředku. Frakce, obsahující cefalosporinovou sloučeninu, se oddělí a odpaří se k suchu za sníženého tlaku. Tak se získá 1,5 g 7-bet.a-!(Z)-2-(2-aminothiazol-4-yl )-2-(( 2-pyrr olidon-3-y 1) oxyimino ] acetamido’ cefasporanátu sodného.

Fyzikálně chemické vlastnosti produktu jsou stejné jako produktu získaného podle příkladu 1, odstavec (2).

Příklad 3

Rozpustí se 3.25 g (Z)-2-(trítylaminoth-iazoI-4-yl )-2-(( 2-pyrroIidon-3-yl) oxyimino ] octové kyseliny ve 200 ml tetrahydrofuranu a přidá se 3,14 g benzhydryl^-beta.amino^[ [l-meth^yll^tH-tetrazol-⁵-^yl ^hmme^yl] -3-cefem^-karboxylátu, 1,03 g 1-hydroxybenzotríazolu a 1,57 g dicyktohexylkarbodíimil du. Směs se míchá při teplotě místnosti po dobu dvou hodin. Nerozpustné materiály se odfiltrují a filtrát se odpaří k suchu za sníženého tlaku. Zbytek se rozpustí v ethylacetátu, promyje se 1% chlorovodíkovou kyselinou, 5% vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a nasyceným vodným roztokem C^l^l^iridu sodného. Ethylacetátový roztok se pak vysuší a ' za sníženého tlaku se odpaří k suchu. Takto získaný zbytek se pročistí chromatografií na silikagelu (rozpouštědlem je systém ethylacetát : benzen v poměru 5 : :2). Získá se 3,7 g benzhydryl-7-beta-[[Z)-2l - (2-tritylamlnothiazotl4-y1 )-2-(( 2-pyrr oli- . don-3-yl) oxyimino- ] acetamido}^- [ (1-methyl-lH-te trazol-5-yl) thiomethy 1 ] -3-cef em^-karboxylátu.

Teplota tání jo 122 až 126 °C (za rozkladu)

NMR (CDC13) 5:

2,2-2,7 (2H, m),

30.....-3,5 (2H, m ],

3.6— 3,75 (2H, m),

3,79 (3H, s),

2--4,4 (2H, m),

5,03 (2H, m),

5.7— 6,05 (1H, m),

6.75 (1H, s),

6,88 (1H, s),

7.1- 7,5 (27H, m),

0.30 (1H, široké).

2) 860 mg benzhydryl-7-beta-[[Z)l2-(2-trltylaninoth^:azol-4-yI )-2-(( 2-pyrrolidon-3-yl) oxy'mino ^cetarnido^-í [1-meth^yl-lH-teΐrazol-5-yl) thiomethyl ] -3-cef em-4-karboxylátu se přidá do směsí 10 ml trifluoroctové kyseliny a 0,5 ml -amisolu a směs se míchá při teplotě místnosti po dobu 20 minut. Směs se odpaří za sníženého- tlaku k odstranění trifluoroctové kyselmy. Do zbytku se přidá ether a vzniklý prášek se oddělí filtrací. Prášek se suspenduje ve vodě a pak se k jeho rozpuštění přidá hydrogenuhličitan sodný. Roztok se promyje ethylacetátem a chromatografuje se na sloupci neiontové polymerní pryskyřice Amherlit XAD-2 (obchodní označení společnosti Rohm & Haas Co., Sp. st. a.) za použití vody jakožto elučního prostředku. Oddělí se frakce obsahující cefalosporinovou sloučeninu a odpaří se k suchu za sníženého tlaku. Tak se získá 7-beta-{(Z ] -2- (2-aminothiazol-4lyl )-2-(( 2-pyrrolidon-3-yl j · oxyimino) acetamďdo}^- [ (^methyl-lH-tetrazol-5-yl) thiomethyl j -3-cef em-4-karboxyiát sodný v množství 0,3 g.

NMR ^MSO-de) í:

2Д—2,5 (2H, m),

3.1- 3,5 (2H, m),

3,94 (3H, s),

4.2- 4,5 (2H, m), 4,0-4,8 (1H, m),

5,:)3 (1H, d, J = 5Hz),

5,5-5,8 (J.H, m),

6.76 (1H, s),

7,3 (2H, široké s),

8,00 (1H, s),

9,55 (1H, široké)

Příklad 4

Přidá se 0,57 g oxalylehloridu . při teplotě —5 až 0 °C do· 15 ml chloroformu obsahujícího 0,35 g dimethylformamidu a směs se míchá při uvedené teplotě po dobu 15 minut. Do této směsi se při teplotě —30 °C až —35 stupňů Celsia přidá směs 1,54 g (Z)-2-(2-tritylaminothiazol-4-yl) -2- [ (2-pyrrolidon-3-yl )oxyimino] octové kyseliny, 0,3 g triethylaminu a 15 ml chloroformu a směs se dále míchá při uvedené teplotě po dobu 5 minut. Do této směsi se pak přidá při teplotě —35 až —30' °C roztok 7-bi^i^'a-.am:^no-^-^-(l-pyrridiniomethyl)-3-cefem-4-karboxylátu v chloroformu (přičemž se tento roztok připraví suspendováním 1,82 g dichloridu uvedené cefemové sloučeniny v 10 ml chloroformu a přidáním 4 ml N,O-bis(trimethylsilyl)acetamidu k rozpuštění uvedené soli} a směs se míchá při uvedené teplotě po dobu 10 minut a pak při teplotě —30 až —10 °C po dobu jedné hodiny. Směs se odpaří k suchu za sníženého tlaku. Do zbytku se přidá 60 ml 80% vodné mravenčí kyseliny a vodná směs se míchá při teplotě místnosti po dobu jedné hodiny. Do vodné směsi se přidá 50 ml vody. Nerozpustné materiály se pak odfiltrují a filtrát ss promyje ethylacetátem a odpaří se za sníženého tlaku k suchu. Takto získaný zbytek se rozpustí ve vodě a chromatografuje se na sloupci neiontové polymerní pryskyřice Diaion HP-20 (obchodní označení produktu společnosti Mitsubishi Chemical Industries Ltd., Japonsko). Sloupec se promyje vodou a pak se eluuje 20% methanolem. Shromáždí se frakce obsahující cefalosporinovou sloučeninu a odpaří se k suchu za sníženého tlaku. Do zbytku se přidá aceton a vzniklý prášek se oddělí filtrací. Tak se získá 0,84 g · 7-beta-j(Z)-2-(2-aminothiazol-4-yl )-2-(( pyrrolidon-3-yl) oxyimino] -acetamido}-3- (l-pyridiniomethyl) -3-cef em-4-karboxylátu.

Teplota tání je vyšší než 250 °C.

NMR (D2O) S:

2,2-2.7 (2H, m),

3,1-3,7 (4H, m), 59-5,5 (4H, m), 5,80 (1H, d, J = 5Hz), 6,92 (1H, s),

7,8-9,1 (5H, m).

[«]d²⁰ + 13,4° (C = l,0 H2O)

Příklad 5

Při teplotě —5 až 0 °C se přidá 1,56 g oxalylchloridu do 39 ml chloroformu obsahujícího 0,99 ml dimethylformamidu a směs se míchá při uvedené teplotě po dobu 15 minut.

Přidá se roztok 4,23 g (Z)-2-(2-tritylaminothiazol-4-yl )-2-(( 2-py rr olidon-3-yl) oxyimino] octové kyseliny (d-isomer) a 0,84. g triethylaminu v 39 ml chloroformu do uvedené · směsi při teplotě —30 °C. Směs se při uvedené teplotě míchá po dobu 5 minut. Pak se do uvedené směsi při teplotě —30 až —10 °C přidá roztok 7-beta-amino-3-(l-pyridiniomethyl )-3-cefem-4-karboxylátu v chloroformu (přičemž se tento roztok připraví suspendováním 5,0 g dihydrochloridu uvedené cefemové sloučeniny v 39 ml chloroformu a přidáním 11 ml N,O-bis(trimethylsilyl)acetamidu k rozpuštění uvedené soli). Směs se míchá při uvedené teplotě po dobu 30 minut a pak se odpaří k suchu za sníženého tlaku. Do zbytku se přidá 100 ml ''80% vodného roztoku kyseliny mravenčí a vodná směs se míchá při teplotě místnosti po dobu jedné hodiny. Do směsi se přidá 100 ml vody a nerozpuštěný materiál se odfiltruje. Filtrát se promyje ethylacetátem a odpaří se za sníženého tlaku k suchu. Takto získaný zbytek se rozpustí ve vodě a chromatografuje se na sloupci neiontové polymerní pryskyřice Diaion HP-20 (obchodní produkt společnosti Mitsubishi Chemical Industries Ltd, Japonsko).

Sloupec se promyje vodou a eluuje se vodným 20% methanolem. Shromáždí · se frakce obsahujísí cefalosporinovou sločeninu a odpaří se za sníženého tlaku k suchu. Do zbytku se přidá aceton .a vzniklý prášek se oddělí fdtrací. Tak se získá 2,14 g 7-beta-((Z)-2- (2-aminothi azol-4-yl )-2-(( 2-pyrr olidon-3-y 1) oxyimino ] acetamidoj-3- (l-pyridiniomethyl) -3-cefem-4-karboxylátu (d-isomer). Tento pravotočivý isomer se také může označovat jako 7-beta-[(Z)-2-(2-aminothiazol-4-yl)-2- [ (/3R/-2-pyrrolidon-3-yi) oxyimino J acetamido}-3- (l-pyridiniomethyl )-3-cefem-4-karboxylát.

NMR (D20):

2.1— 2,7 (2H, m),

3.1— 3,7 (4H, m), 4,9-5,5 (4H, m),

5,79 (1H, d, J = 5Hz),

6,92 (1H, s),

7,8-9,1 [5H, m).

[alfajo²⁰ + 45,7° (C = l, H2O)

Příklad 6

Přidá se 1,81 g oxalylchloridu při teplotě —5 až 0 °C do 45 ml chloroformu obsahujícího 1,15 ml dimethylformamidu a směs se míchá při uvedené teplotě po dobu 15 minut. Do této směsi se při teplotě —30 °C přidá roztok 4,90 g (Zj^-U-tritylaminothiazol^-yl )-2-(( 2-pyrr ohdon-3-yl) oxyimino ] octové kyseliny (Hsomer) a 0,97 g triethylaminu ve 45 ml chloroformu. Směs se míchá při uvedené teplotě po dobu 5 minut. Pak se při teplotě —30 až —10 °C přidá do uvedené směsi roztok 7-beta-amino-3-( l-pyridiniomethyl )-3-cefem-4-karboxylátu v chloroformu (prčemž se tento roztok připraví suspendováním 5,8 g díhydrochloridu uvedené cefemové sloučeniny ve 45 ml chloroformu a přidáním 12,7 ml NjOHbistrimethylsilyiyacetaordu k rozpuštění uvedené soli). Směs se pak míchá při uvedené teplotě po dobu 30 m nvt, a odpaří se k suchu za sníženého tlaku. Do zbytku, se přidá 100 ml 80‘% vodného roztoku kyseliny mravenčí a vodná směs se míchá při teplotě místnosti po dobu jedné hodiny. Do· směsi se přidá 110 ml vody a nerozpustné podíly se odfiltrují. Filtrát se promyje ethylacetátem a odpaří se za sníženého tlaku k suchu. Takto získaný zbytek se rozpustí ve vodě a chromatografuje se na sloupci neOntové polymerní pryskyřice Diaion HP-20 (obchodní produkt společnosti Mitsubishi Chernical Industries Ltd., Japonsko). Sloupec se promyje vodou a shromáždí se frakce obsahující cefalosporinovou sloučeninu a odpaří se za sníženého tlaku k suchu. Do zbytku se přidá aceton, .a vzniklý prášek se oddělí filtrací. Tak se získá 2,22 g 7-bcta-{Z ]-2- (2-.ammothiazol-4-yl )-2-(( 2-pyrrolidon-3yi) oxyim.no ] acetamido}3- (1-pyridiniomethyl) -3-cef em-4-karboxylá tu (1-isomer). Tento levotočivý isomer se také označuje jako 7-beta-'(Z)-2-(2-aminothiazol-4-y 1) -2- [ (3S/-2-pyrrolidon-3-yl) oxyímino ] acetamí dc,’-3- (1-pyridiniomethyl) -3-cefem-4-karboxylát.

NMR (DzO) 5:

2,2-2,7 (2H, m),

3,1-3,8 (4H, m), 5,05 (lH, t, J = 7Hz), 5,28 (1H, d, J = 5Hz),

5,36 (1H, d, J — 14 Hz),

5,63 (1H, d, J = 14 Hz),

5,87 (1H, d, J = 5 Hz),

6.98 (1H, s),

8,10 (2H, t, J = 7,5 Hz),

8,57 t, ) = 7,5 Hz),

8.98 (1H, d, J = 7,5 Hz).

[ alfa ]_в20—38,0° (C = 1, HzO)

Příklad 7

1) Rozpustí se 1,5 g (Z)-2-(2-tritylamrnothiazol-4-yl )-2-(( l-methyl-2-pyrrolidon-3- ’ -yl)oxyimino]octové kyseliny v 50 ml tetrahydrofuranu a do roztoku se přidá 1,4 g benzhydryl-7-betaamino-3- [ (1-methyl-lH-tetrazol-5-yl Jthiomethyl]-3-cef em-4-karboxylátu, 0,6 g 1-hydroxybenzotriazolu a 0,92 g dicyklohexylkarbodiímidu. Směs se míchá při teplotě místnosti po dobu dvou hodin. Pak se reakční směs zpracovává stejným způsobem, jako je popsáno v příkladu 3, odstavec 1). Získá se 1,58 g benzhydryl-7-beta{ Z) -2- (2-tritylaminothiazol-4-yl )-2-(( 1-met^hyl-2-^pyrr o^lidon-3-^yl) ox^yimmo íacetanndo}-3- [ (l-methyl-lH-tetrazol-5-yl) thiomethyl ] -3-cefem-4-karboxylátu.

NMR (CDC13) <5:

212—2,6 (2H, m),

2.75 (3H, s),

31-3,5 (2H, m),

3,5—3,8 (2H, m),

3,81 (3H, sl,

4_r2— 4,4 (2H, m), . 3—5,2 (2H, m),

5,8—6,1 i IH, m),

6.72 flH, s),

6,33 (1H, s),

7,0—7.5 (25H, m),

8.5 —3,8 (2H, š^?roké).

2) Přidá se 1,5 g benzhydryl-7-beta-((Z)-2-(2^tt.ri^t^il^j^n^:noth:azol-4-^-^l)-2-[ (1-methyl-2-pyrrol.ldon-3-yi) oxyinrno jacetamíd o}-3- [ (ltLntthyltlHIttΌtrгιzol-5tyl) thiomethyl ] t3-ceftm-4-kaгboxyIátu do směsi 1,5 ml anisolu ·a 13 ml trlfluo-octové kyseliny .a směs se míchá při teplotě místnosti po dobu 30 mmut. Směs se zkoncentruje za sníženého tlaku k odstranění trifluoroctové kyseliny. Do· zbyiku se přidá ether a vzniklý prášek se oddělí filtrací. Prášek se suspenduje v 15 ml vody a do suspenze se přidá hydrogenuhličitan sodný k rozpuštění prášku. Roztok se promyje ethylacetátem a chromatografuje se na sloupci ne iontové pryskyřice polymerní Amberlit XAD-2 (obchodní produkt společnost! Rohm & Haas Co., Sp. st. a.) za použití vody jako elučního prostředku. Shromáždí se frakce obsahující cefalosporinovou sloučeninu a odpaří se k suchu za sníženého tlaku. Získá se 0,61 g 7-beta-((ZJ-2-(2-aminothia.zolt4ty 1 )-2-(( ltmethyЬ2tpyrrolidon-3-yl) oxy .· mino ] . acetamido,t3-[ (1-methyltlHttet trazol-B-yl )thiometh^yl]-^3-cef em-4-karboxylátu sodného.

NMR (DzO) í:

2,1.....BB,7 (2H, ni),

2,89 (311, s),

3,2-3 8 (4H, m),

4,05 (3H, sl,

4.05—4,3 (2H, m),

49- 5,3 (2H, m),

5.73 [1H, d, J = 5 Hz),

7,00 (1H, s).

F ř í k 1 a d 8

1) Rozpustí se 0,5 g (Z)-2-(2-tritylammOt thia.zol-4-yl )-2-(( 2-piperidon-3-yl) oxyimino] octové kyseliny v 10 ml tetrahydrofuranu a do roztoku se přidá 0,47 g benzhydrylt7t -beta-amino-3-[ (ltmeth^yl-lHttetrazol-5-yl )thiomethyl]-3-cefemt4tkarboxylátu, 0,15 gramu 1-!hy(droxybe^izo^riazolu a 0,24 g dicyklohexylkarbodiimidu. Směs se míchá při teplotě místnosti po dobu 2,5 hodin. Reakční směs se zpracuje stejným způsobem, jako je popsáno v příkladu 3, odstavec 1). Získá se

3 β 7 Π β

0,47 g benzhydryl-7-beta-{(Z)-2-(2-tritylaminothiazol-4-y 1) -2- [ (2-piperidon-3-y 1) oxyirnino ] acetamidoj-3- [ (1-methyl-lH-tetrazol-5-y 1 ] thiomethyl ] -3-cef em-4-karboxylátu.

NMR (DMSO-d6) 0:

2,00—2,5 (4I-I, m),

3,0-3,3 (2I-I, m),

3.6- 3,8 (2H, m),

3,8 (311, s),

4,1-4,3 (2H, m),

4.6- 4,8 (1H, m),

4,9-5,4 (III, m),

5,85 (1H, d, J = 8 Hz J = 5 Hz),

6,71 (1H, s),

6,81 (1H, s),

7,0-7,6 (2H, m),

9.63 (1H, d, J = 9 Hz).

2) Přidá se 0,4 g benzliydryl-7-beta-((Z)-2- (2-tritylaminothiazol-4-y 1) -2- [ [ 2-piperidon-3-yl)oxyimino].acetamido}-3-[ (1-methyl-lH-tetrazol-5-y I) thiomethyl ] -3-cef em-4-karboxylátu do směsi 10 ml trifluoroctové kyseliny a 0,8 ml anisolu a směs se nechá stát při teplotě místnosti po dobu 30 minut. Směs se odpaří za sníženého tlaku к odstranění trifluoroctové kyseliny. Do zbytku se přidá ether a vzniklý prášek se oddělí filtrací. Prášek se suspenduje ve vodě a do suspenze se přidá hydrogenuhličitan sodný к rozpuštění prášku.

Roztok se promyje ethylacetátem a chromatografuje se na sloupci neiontové polymerní pryskyřice Amberlit XAD-2 (obchodní produkt společnosti Rohm & Haas Co., Sp. st. a.). Sloupec se promyje vodou a eluuje se 10% vodným methanolem. Shromáždí se frakce obsahující cefalosporinovou sloučeninu a odpaří se к suchu za sníženého tlaku. Získá se 0,9 g 7-beta-((Z)-2-(2-aminothiazol-4-yl )-2- [ (2-piperidon-3-yl)oxyimino ] acetamido)-3- [ (l-methyl-lH-tetrazol-5-yl)thiomethyl]-3-cefem-4-karboxylátu sodného.

NMR (D2O) δ:

1,5-2,3 (4H, m),

3,0-3,4 (2H, m),

3,4—3,6 (2H, m),

3,90 (3H, m),

4,0-4,2 (2H, m),

5,03 (1H, d, f = 5 Hz),

5.63 (1H, d, J = 5 Hz),

5,85 (1H, s).

Příklad 9

1) Po kapkách se přidává 18,2 g oxychloridu fosforečného do 9,2 ml dimethylformamidu za chlazení ledem a směs se míchá při teplotě 25 až 35 °C po dobu 30 minut. Po 0chlazení na teplotu 0 °C se do směsi přidá 100 ml chloroformu a směs se dále ochladí na teplotu —35 °C. Do směsi se při teplotě —35 až — 25 °C přidává po kapkách roztok g (Z) -2- (2-tritylaminothiazol-4-yl )-2-((2-pyrrolidon-3-yl) oxyimino] octové kyseliny (1-isomer) a 5,6 ml triethylaminu ve 160 ml Ν,Ν-dimethylacetamidu a směs se míchá při uvedené teplotě po dobu 20 minut. Pak se do reakční směsi při teplotě —35 až —20 °C za míchání po kapkách přidává roztok 7-aminocefalosporanové kyseliny (přičemž se tento roztok připraví mícháním směsi 16 g

7-ammocefalosporanové kyseliny, 48 g trimethylchlorsilanu, 35,6 ml pyridinu a 160 ml Ν,Ν-dimethylacetamidu při teplotě 10 až 20 stupňů Celsia po dobu dvou hodin). Míchá se při uvedené teplotě ještě po dobu 20 minut a pak se reakční směs vlije do dvou litrů ledové vody a intenzívně se míchá. Krystalická sraženina se odstraní filtrací, promyje se vodou, ethylacetátem a etherem a vysuší se ve vakuu. Tak se ve formě bezbarvého prášku získá 26,5 g 7-beta-{(Z)-2-(2-tritylaminothiazol-4-yl) -2- [ (2-pyrrolidon-3-yl) oxyimino jacetamidoj-cefalosporanové kyseliny (l-'somer).

NMR (DMSO-de) δ:

2,06 (ЗН, s),

2.1- 2,5 (2H, m),

3.1- 3,4 (2H, m),

3,45 (1H, d, J = 18 Hz), 3,75 (1H, d, J = 18 Hz),

4.6— 5,02 (3H, m), 5,17 (1H, d, J = 5 Hz),

5.6- 5,9 (1H, m),

6..81 (1H, s),

7.1- 7,6 (15H, m), ⁷,07 (1H, s),

8,88 (1H, s),

9,64 (1H, d, J = 6 Hz).

2) 2,5 g 1-isomeru kyseliny 7β-((Ζ)-2-(2-trity la.mlnoth i azol-4-yl )-2-(( 2-pyrrolidon-3-yl)oxyiminoJacetamidojcefalosporanové získané v odstavci 1) se rozpustí v 50 ml 80% kyseliny mravenčí a roztok se míchá při teplotě místnosti jednu hodinu. Nerozpustná látka se odfiltruje. Filtrát se zahustí za sníženého tlaku, přidá se voda a vodná směs se neutralizuj e hydrogenuhličitanem sodným. Pak se vodná směs promyje ethylacetátem, zahustí se za sníženého tlaku a nanese se na kolonu plněnou 200 ml neionogenní pryskyřice („Dtaion HP-20“). Po promytí kolony vodou se kolona zpracuje postupem popsaným dříve. Získá se 1,0 g světle žlutého prášku 1-isomeru sodné soli kyseliny 7/?-((Z)-2- (2-aminothiazol-4-y 1 )-2-(( 2-pyrrolidon-3-yl) oxyimino ]acetamidoj-cefalosporanové. Jiný název této sloučeniny je levotočivý isomer 7/2-(- (Z) -2- (2-aminothiazol-4-yl) -2-[ (/3S/-2-pyrrolidon-3-yl)-oxyimino]acetamidoj-cefalosporanátu sodného.

NMR (D2O) δ:

2,12 (ЗН, s),

2,3-2,6 (2H, m],

3.8— 3,9 (4H,m),

4,75 (1H, d, J = 13 Hz),

4,95 (1H, d, ) = 13 Hz),

5,10 (1H, t, J = 7 Hz),

5,25 (1H, d, J = 5 Hz),

5.85 (1H, d, J = 5 Hz),

7,08 (1H, s).

Příklady 10 až 12

Následující sloučeniny se připraví způsobem popsaným v předchozích příkladech.

10. Jako světle žlutý prášek se získá 7β- (Z) -2- (2-aminothiazol-4-yl j-2-[ (2-pyrrolidon-3-yl) -oxy imino ] acetamidoj-3- (4-karbamoyl-l-pyridmiomethyl)-3-cefem-4-karboxylát.

Teplota tání 163 až 166 °C (rozklad)

NMR (CF3CO2D) 6:

2.5— 3,0 (2H, m),

3.5— 4,0 (4H, m),

5.2- -5,5 (3H, m),

5,^c)—5,8 (1H, m),

5.9— 0,2 · (1H, m),

7,35 (1H, s),

8,4-8,7 (2H, m),

9.1— 9,4 (2H, m).

11. Jako · světle žlutý prášek se získá 7β-J(Z)-2-(2-ami.noth,azol-4-yl)-2-[ (2-pyrrolidon-3-yl) oxyimíno ] -acetamido}-3- (4-hydroxyimehyllLq3yridiinomeLhyl)-3-cefem-4-karboxylát.

Teplota tání 162 až 184 °C [rozklad)

NMR (DzO) δ:

2.3- 2,7 (2H, m),

3!^-3,7 (4H, m),

4.8— 5,0 (2H, m),

5,03 (2H, s),

5,24 Í1H, d, J = 5 Hz),

5.3- 5,6 (11-1, m),

5,83 (1H, d, J = 5 Hz),

6,81 (1H, s),

7.8 — 8.2 (2H, m),

8,.-9,0 (2H, m).

12. 7/-{(Z))2--2-ammothřazol-4-уl)-2-[ (2-pyrroli don-3-yl) oxyimíno JacetamidO-3“(3-hydroxymethyl-l-pyrldin'omethyl)-3-cefem-4-karboxylát

Teplota tání 128 až 135 °C (rozklad)

NMR (DžO) δ:

2.1— 2,8 (2H, m),

3.^-3,8 (4H, m),

4.86 (2H, s),

4.9— 5,1 (2H, m),

5,27 (1H, d, J = 5 Hz),

5.3- 5,6 (1H, m),

5,83 (1H, d, J — 5 Hz),

6,96 (1H, s),

7,7—8,2 (1H, m),

8.3- 8,6 [1H, m),

9,6-9,1 (2H, m).

Příprava výchozích sloučenin

1) V 70 ml dimethylsulfoxidu se rozpustí 15,8 g ethyl-[Z)-2-(2-tritylaminothiazol-4-yl)-24iydrcxylm;noacetátii a přidá se 5,8 g bezvodého uhličitanu draselného. Směs se míchá při teplotě místnosti po dobu 20 minut. Do směsi se přidá 6,6 g 3-brom-2-pyrrolidonu. Směs se vlije do 800 ml vody a krystalická sraženina se oddělí filtrací a promyje se vodou. Krystaly se rozpustí ve chloroformu, promyjí se vodou a vysuší se. Pak se chloroformový roztok odpaří za sníženého tlaku k odstranění rozpouštědla. Do zbytku se přidá 100 ml ethylacetátu a nechá se stát při teplotě místnosti. Takto· získaná krystalická sražen·’na se oddělí filtrací a vysuší se. Získá se 16,0 g etbyl-(Z)-2-(2-^ritylaM]nothiazol-4-yi-2·' [ (2-pyrrol.idon-3-yl) oxyimíno j acetátu.

Teplo · · a tání je 299 až 210 °C.

NMR [CDC1.3) δ:

1,30 (3H, t, J = 7 Hz), 2Д — 2.6 (2H, m), 3^-3,6 (2H, m),

4,34 (2H, q, J = 7Hz),

4,90 (1H, t, J = 7Hz),

6,53 ' (111, s), 7,0—76 (17H, m)

Přidá · se 16,0 g tthyl-(Z)-2-(2-tritylaminothiazol-4-y 1) -2- [ ^-руг^Шси-Э-у-) oxyimlnojacetátu do směsi 160 ml methanolu a 30 mililitrů vodného ·roztoku 2N hydroxidu sodného a směs se vaří pod zpětným chladičem po dobu 30 minut. Po ochlazení se krystalická sraženina oddělí filtrací a promyje se methanolem. Krystaly se suspendují ve 30 ml vody. Hodnota pH se upraví na 3 přidáním 2N chlorovodíkové kyseliny. Krystalická sraženina se oddělí filtrací a vysuší se. Tak · se z · ská 11,4 g (Z)-2-(2-trity1aminothazol-4-y 1) -2- [ (2-pyrrolidon-3-yl) oxyimíno ] octové kyseliny.

Teplota tání je 150 až 153 °C (za · rozkladu).

NMR (DMSO-ds δ;

1.8— 2,4 (2H,m),

2.9— 3,4 (2H, m),

4,63 (1H, t, J = 7Hz),

6,76 (1H, s),

6.9— 7,6 (15H, m),

7,85 (1H, s),

8,70 (1H, široké s)

2) Přidá se 30 g (Z)-2-(2-tritylaminothia zol-4-yl )-2-(( 2-pyrrolidon-3-yl) oxyimino ] octové kyseliny a 60 ml methanolu do 100 ml dioxanu obsahujícího 10,5 g methyl-L-fenylalaninátu a směs se udržuje na teplotě 50 °C к rozpuštění shora uvedené kyseliny. Do roztoku se přidá 700 ml dioxanu a směs se míchá při teplotě místnosti po dobu 5 hodin. Krystalická sraženina se oddělí filtrací (filtrát se nadále označuje jako „filtrát I“) a 14,3 g takto získaného surového produktu se rozpustí ve 24 ml methanolu. Do methanolového roztoku se přidá 280 ml dioxanu. Směs se míchá při teplotě místnosti po dobu 4 hodin a krystalická sraženina se oddělí filtrací (filtrát se nadále označuje jako „filtrát II“). Získá se 12,2 g (Z)-2-(2-tritylaminothi.azol-4-yl )-2-(( 2-pyrrolidon-3-yl) oxyimino ] octové kyseliny (1-isomer) ve formě methyl-L-fenylalaninátové soli.

(alfa]_D ²⁵ —14,0° C»l, methanol)

Rozpustí se 12,2 g shora uvedené soli ve 120 ml methanolu a přidá se 176 ml 0,lN chlorovodíkové kyseliny. Směs se míchá po dobu dvou hodin za chlazení ledem. Krystalická sraženina se oddělí a promyje se methanolem. Získá se 7,5 g (Z)-2-(2-tritylaminothiazol-4-yl )-2-(( 2-pyrrolidon-3-yl) oxyimino] octové kyseliny (1-isomer). Tento levotočivý isomer se také označuje jako (Z)-2- (2-trity laminothiazol-4-yl) -2-( [ (3S) -2-py rrolidon-3-yl] oxyímino|octová kyselina. Teplota tání je 142 až 143 °C (za rozkladu).

[alfa ] _D ²⁵ — 38,8° ( =1, dimethylformamid)

3) Filtrát I a filtrát II, získaný podle odstavce 2) se odpaří к suchu za sníženého tlaku. Zbytek se rozpustí ve 250 ml methanolu a pak se po kapkách přidá 450 ml 0,lN chlorovodíkové kyseliny do tohoto roztoku. Směs se míchá po dobu dvou hodin za chlazení ledem. Vzniklá krystalická sraženina se oddělí filtrací, promyje se methanolem a usuší se. Tak se získá 20 g (Z )-2-( 2-trity laminothiazol-4-y 1 )-2-(( 2-py rrolidon-3-yl) oxyimino] octové kyseliny (obsahující nadbytek d-isomeru). Přidá se 20,0 g takto získané (Z)1-2- (2-tritylaminothiazol-4-yl )-2-(( 2-pyrrolidon-3-yl)oxyimino]octové kyseliny a 40 mililitrů methanolu do 70 ml dioxanu obsahujícího 7,0 g methyl-D-fenylalaninátu a směs se udržuje na teplotě 50 °C к rozpuštění uvedené kyseliny. Do získaného roztoku se přidá 450 ml dioxanu. Pak se směs míchá při teplotě místnosti po dobu 4 hodin a krystalická sraženina se oddělí filtrací. Rozpustí se 13,3 g takto získaného surového produktu v 20 ml methanolu a přidá se 260 ml dioxanu. Směs se míchá při teplotě místnosti po dobu 4 hodin. Krystalická sraženia se oddělí filtrací. Tak se získá methyl-D-fenylalaninátová sůl (Z)-2-(2-tritylaminothiazol-4-yl)-2-[ (2-pyrrolidon-3-yl)oxyimino]octové kyseliny v množství 12,0 g.

[alfa]_D ²⁵ +13,9° (C = l, methanol)

Rozpustí se 12,0 g soli, připravené shora popsaným způsobem, ve 120 ml methanolu a přidá se 174 ml 0,lN chlorovodíkové kyseliny. Směs se míchá po dobu dvou hodin za chlazení ledem. Krystalická sraženina se oddělí filtrací a promyje se methanolem. Tak se získá 7,3 g (Z )-2-( 2-trity laminothiazol-4-y 1) -2- [ [ 2-pyrrolidon-3-y 1) oxyimino] octové kyseliny (d-isomer). Tento pravotočivý isomer se také označuje jako (Z)-2-(2-trity laminothiazol-4-y 1) -2-{( (3R) -2-pyrrolidon-3-y 1 ] oxyiminojoctová kyselina.

Teplota tání je 143 až 144 °C (za rozkladu).

[alfajp²⁵ + 37,4° (C = l, dimethylformamid)

4) Rozpustí se 2,7 g ethyl-(Z)-2-(2-tritylaminothiazol-4-yl )-2-hydroxyiminoacetátu ve 12 ml dimethylsulfoxidu a v prostředí plynného dusíku se přidá 1,0 g bezvodého uhliё^!1апи draselného. Směs se míchá při teplotě místnosti po dobu 10 minut. Do směsi se přidá 1,2 g l-methyl-3-brom-2-pyrrolidon a směs зз míchá při teplotě místnosti po dobu 5 hodin. Reakční směs se vlije do 100 ml vody a krystalická sraženina se oddělí filtrací. Krystaly se rozpustí v ethylacetátu, roztok se promyje vodou a pak se vysuší. Roztok se pak zkoncentruje к odstranění rozpouštědla za sníženého tlaku. Zbytek se překrystaluje z isopropyletheru a produkt se oddělí filtrací. Tak se získá 2,1 g ethyl-(Z)-2-(2-tritylaminoth^;azol-4-yl )-2-(( l-methyl-2-pyrrolidon-3-y 1) oxyimino ]acetát.

NHR (CDC13) δ:

1,30 (ЗН, t, J = 7Hz),

2,2-2,7 (2H, m),

2,88 (3H, s),

3,0--3,6 (2H, m),

4,34 (2H, q, J = 7Hz),

4,92 (1H, t, J = 7Hz),

6,54 (1H, s),

6,87 (1H, s),

7,0-7,5 (15H, m)

Suspenduje se 2,7 g ethyl-(Z)-2-(2-tritylaminothiazol-4-yl)-2-[ (l-methyl-2-pyrrolldon-3-yl)oxyiminojacetátu ve 27 ml methanolu a do suspenze se přidá 4,9 ml 2N roztoku hydroxidu sodného. Směs se udržuje na teplotě zpětného toku vařením pod zpětným chladičem po dobu 20 minut. Po ochlazení se směs zkoncentruje za sníženého tlaku к odstranění methanolu. Hodnota pH se upraví na 3 přidáním 2N chlorovodíkové kyseliny a provede se extrakce ethylacetátem. Extrakt sa vysuší a odpaří se za sníženého tlaku к odstranění rozpouštědla. Takto získaný zbytek se překrystaluje s etherem a oddělí se filtrací. Získá se 2,15 g (Z)-2-(2-tritylamonothiazol-4-yl )-2-(( l-methyl-2-pyrrolidon-3-yl)oxyimino]octové kyseliny.

Teplota tání je 142 až 145 °C (za rozkladu].

NMR (DMSO-de) 5:

2,0-2,5 (2H, m),

2.77 (3H, s),

3.1-3,4 (2H,m), /

4.78 (1H, t, J = 8Hz),

6,87 (1H, s],

6,9-7,5 (16H, m]

5) Roopputí s e 1 13 g ( Z]-2-(2-tritylaminnthiazol-4-yl]-2-hydroxyim'lnooctové kyseliny v 10 ml dimethylformamidu a do roztoku se přidá 0,24 g . hydridu sodíku (ve formě 60% olejové disperze]. Směs se míchá při teplotě místnosti po dobu 15 minut. Do směsi se přidá 0,65 g 3-brom-2-piperidonu a směs se míchá při teplotě místnosti po dobu 1,5 hodiny. Reakční směs se vlije do vody a promyje se směsí ethylacetátu a tetrahydrofuranu ( (v poměru 1:1). Hodnota pH vodné vrstvy se upraví na 3 přidáním 10% kyseliny chlorovodíkové a extrahuje se směsí ethylacetátu a tetrafuranu (v poměru 1:1]. Extrakt se vysuší a odpaří se k suchu za sníženého tlaku. Do zbytku se přidá ether a vzniklý prášek se oddělí filtrací. Prášek (1,3 g] se čistí chromatografií na silikagelu (rozpouštědlo: systém methanol: chloroform v poměru 1:4). Získá se 0,85 g (Z)-2-(2-tritylaminothíazol-4-yl )-2-(( 2-piperidon-3-yl ] oxyimino] octové kyseliny.

Teplota tání je 145 až 150 °C (za rozkladu).

Claims

PŘEDMĚT VYNALEZU

Způsob výroby derivátů 7/3-( (Z]-2-(2-aminothiazol-4-yl ] -2-oxyimrnoacetamído ] -3-cefem-4-karboxylové kyseliny obecného vzorce I .

kde

R¹ znamená vodík nebo Cn až C4 alkyl,

R² znamená acetoxyskupinu nebo (1-methyl-lH-tetrazol-5-yl]thioekupinu a

R3 znamená karboxylovou skupinu nebo

R² znamená skupinu obecného vzorce

R3 znamená -COO~ . a Y znamená vodík, hydroxymethyl nebo karbamoyl a n znamená celé číslo 2 nebo 3, nebo jejích farmaceuticky přijatelných solí, vyznačujcí se tím, že se nechá kondenzovat sloučenina obecného vzorce II

R4 znamená chránící skupinu a

R¹ a n mají dříve uvedený význam, nebo její reaktivní derivát, se sloučeninou obecného vzorce III kde

R⁵ znamená karboxylovou nebo chráněnou karboxylovou skupinu, jestliže R2 znamená acetoxyskupinu nebo (1-methyl-lH-tetrazol-5-yl)thioskupínu, nebo

R⁵ znamená -COO-, jestliže R2 znamená skupinu obecného vzorce \=7 kde a Y má dříve uvedený význam, nebo s její solí, za vzniku sloučeniny obecného vzorce

IV

Ri dv) kde

R1, R² R4, r5 a n mají dříve uvedený význam, odstraní se chránící skupiny z připra vených sloučenin a je-li to žádoucí převede se získaná sloučenina na svoji farmaceuticky přijatelnou sůl.